特許 6018235 ＣＤ３８を特異的に認識する抗体とシクロホスファミドとを含有する抗腫瘍組合せ

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6018235

(24)【登録日】2016年10月7日

(45)【発行日】2016年11月2日

(54)【発明の名称】ＣＤ３８を特異的に認識する抗体とシクロホスファミドとを含有する抗腫瘍組合せ

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20161020BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20161020BHJP

   A61K 31/675 20060101ALI20161020BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20161020BHJP

【ＦＩ】

   A61K39/395 NZNA

   A61P35/00

   A61K31/675

   A61P43/00 121

【請求項の数】8

【全頁数】11

(21)【出願番号】特願2015-19931(P2015-19931)

(22)【出願日】2015年2月4日

(62)【分割の表示】特願2011-538095(P2011-538095)の分割

【原出願日】2009年11月27日

(65)【公開番号】特開2015-120729(P2015-120729A)

(43)【公開日】2015年7月2日

【審査請求日】2015年3月5日

(31)【優先権主張番号】08291119.9

(32)【優先日】2008年11月28日

(33)【優先権主張国】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】504456798

【氏名又は名称】サノフイ

(74)【代理人】

【識別番号】100127926

【弁理士】

【氏名又は名称】結田 純次

(74)【代理人】

【識別番号】100140132

【弁理士】

【氏名又は名称】竹林 則幸

(72)【発明者】

【氏名】パスカル・ルジユヌ

(72)【発明者】

【氏名】パトリシア・ブリニヨー

【審査官】 小森 潔

(56)【参考文献】

【文献】 特表２００８−５３３９７７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００８／０４７２４２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 Ｃａｎｃｅｒ，２００６年，Ｖｏｌ．１０６，Ｎｏ．７，ｐ１５６９−１５８０

【文献】 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２００６年，Ｖｏｌ．２４，Ｎｏ．２５，ｐ４１２３−４１２８

【文献】 Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ，２００５年，Ｖｏｌ．９０，Ｎｏ．Ｓｕｐｐｌ．１，ＥＣＲ３７（ｐ１０４−１０５）

【文献】 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２００５年，Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．１８，ｐ４０７９−４０８８

【文献】 Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００６年，Ｖｏｌ．１２，Ｎｏ．１１−１２，ｐ３４５−３４６

【文献】 Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００８年 ５月，Ｖｏｌ．１４，Ｎｏ．５，ｐ２１０−２１８

【文献】 Ｒｅｓｅａｒｃｈ（福岡大学総合研究所ニュース＆レポート），２００６年，Ｖｏｌ．１１，Ｎｏ．３，ｐ１５−１６

【文献】 Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００６年，Ｖｏｌ．２６，Ｎｏ．２Ａ，ｐ１０５７−１０６３

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３９／３９５

Ａ６１Ｋ ３１／６７５

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＣＤ３８を特異的に認識する抗体と少なくともシクロホスファミドとを含む医薬組合せであって、前記抗体が少なくとも１つの重鎖および少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖が配列番号１３、８１および１５により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号１６、１７および１８により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む、医薬組合せ。

【請求項2】

前記抗体がキメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項１記載の組合せ。

【請求項3】

前記重鎖が、配列番号６６により表されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号６２および６４よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２記載の組合せ。

【請求項4】

癌治療用医薬の製造のための請求項１記載の医薬組合せの製造のための、ＣＤ３８を特異的に認識する抗体の使用であって、前記抗体が少なくとも１つの重鎖および少なくとも１つの軽鎖を含み、前記重鎖が配列番号１３、８１および１５により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含み、前記軽鎖が配列番号１６、１７および１８により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む、使用。

【請求項5】

前記抗体がキメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項４記載の使用。

【請求項6】

前記重鎖が、配列番号６６により表されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号６２および６４よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項４または５記載の使用。

【請求項7】

ＣＤ３８を特異的に認識する抗体と少なくともシクロホスファミドとを含む医薬組合せであって、前記抗体は、
−配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖と
−配列番号６６のアミノ酸配列を含む重鎖と
を含む、医薬組合せ。

【請求項8】

癌の治療において同時にまたは別々に使用するための請求項７記載の医薬組合せ。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＣＤ３８に対するモノクローナル抗体と、商品名シトキサン（ｃｙｔｏｘａｎ）（またはネオサール（ｎｅｏｓａｒ））として公知のシクロホスファミドとの組合せに関する。これは腫瘍疾患の治療において治療上有用である。

【背景技術】

【0002】

ＣＤ３８は、長いＣ末端細胞外ドメインと短いＮ末端細胞質ドメインとを有する４５ｋＤａのＩＩ型膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ３８タンパク質は、ＮＡＤ^＋から環状ＡＤＰ−リボース（ｃＡＤＰＲ）への変換を触媒しうる、そしてまた、ｃＡＤＰＲをＡＤＰ−リボースへと加水分解しうる二官能性エクト酵素である。ＣＤ３８はアップレギュレーションされ、多数の造血悪性疾患に関連づけられている。

【0003】

ＣＤ３８を特異的に認識するモノクローナル抗体３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１および３８ＳＢ３９はＰＣＴ出願ＷＯ２００８／０４７２４２に記載されている。前記抗ＣＤ３８抗体は、３つの異なる細胞傷害メカニズム、すなわち、アポトーシスの誘導、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）により、ＣＤ３８^＋細胞を殺しうる。また、これらの抗体は、ストロマ細胞またはストロマ由来サイトカインの存在を伴わない場合であっても、ＣＤ３８^＋細胞のアポトーシスを直接的に誘導しうる。シクロホスファミドは、化学療法において使用されるアルキル化剤である。癌の治療に使用されうる新規かつ有効な医薬が尚も必要とされている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【特許文献1】国際公開第２００８／０４７２４２号

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

ヒト化抗ＣＤ３８抗体が少なくとも１つの物質と組合されて投与されると、ヒト化抗ＣＤ３８抗体の効力が相当に改善されうることが、今回、本発明で見出された。前記の少なくとも１つの物質は抗癌治療において治療上有用な物質であり、ヒト化抗ＣＤ３８抗体の１つと同じ又は異なるメカニズムを有し、本発明においてはシクロホスファミドに限定される。

【課題を解決するための手段】

【0006】

「抗体」なる語は本明細書においては最も広い意味で用いられ、特に、例えばＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥのような任意のイソタイプのモノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体、キメラ抗体および抗体フラグメントを含む。典型的なＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合により連結された２つの同一重鎖および２つの同一軽鎖から構成される。各重鎖および軽鎖は定常領域および可変領域を含有する。各可変領域は、主として抗原のエピトープへの結合をもたらす「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）または「超可変領域」と称される３つのセグメントを含有する。それらは通常、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３（Ｎ末端から順次番号付けされている）と称される。ＣＤＲ以外の可変領域の、より高度に保存された部分は、「フレームワーク領域」と称される。

【0007】

本明細書中で用いる「Ｖ_Ｈ」または「ＶＨ」は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’またはＦ（ａｂ’）２フラグメントの重鎖を含む、抗体の免疫グロブリン重鎖の可変領域を意味する。「Ｖ_Ｌ」または「ＶＬ」に対する言及は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’またはＦ（ａｂ’）２フラグメントの軽鎖を含む抗体の免疫グロブリン軽鎖の可変領域を意味する。

【0008】

３８ＳＢ１３抗体は、配列番号５０よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と、配列番号３８よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖は、配列番号１、２および３よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含み、前記軽鎖は、配列番号４、５および６よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含む。

【0009】

３８ＳＢ１８抗体は、配列番号５２よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と、配列番号４０よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖は、配列番号７、８および９よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含み、前記軽鎖は、配列番号１０、１１および１２よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含む。

【0010】

３８ＳＢ１９抗体は、配列番号５４よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と、配列番号４２よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖は、配列番号１３、８１および１５よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含み、前記軽鎖は、配列番号１６、１７および１８よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含む。

【0011】

３８ＳＢ３０抗体は、配列番号５６よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と、配列番号４４よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖は、配列番号１９、２０および２１よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含み、前記軽鎖は、配列番号２２、２３および２４よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含む。

【0012】

３８ＳＢ３１抗体は、配列番号５８よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と、配列番号４６よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖は、配列番号２５、２６および２７よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含み、前記軽鎖は、配列番号２８、２９および３０よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含む。

【0013】

３８ＳＢ３９抗体は、配列番号６０よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と、配列番号４８よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖は、配列番号３１、３２および３３よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含み、前記軽鎖は、配列番号３４、３５および３６よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含む。

【0014】

３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１および３８ＳＢ３９マウス抗ＣＤ３８抗体を産生するハイブリドーマ細胞系はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｉｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，２０１１０−２２０９，ＵＳＡ）に２００６年６月２１日付けでそれぞれＰＴＡ−７６６７、ＰＴＡ−７６６９、ＰＴＡ−７６７０、ＰＴＡ−７６６６、ＰＴＡ−７６６８およびＰＴＡ−７６７１の寄託番号として寄託されている（ＷＯ２００８／０４７２４２に記載されているとおり）。

【0015】

本明細書中で用いる「ヒト化抗体」なる語は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ抗体を意味する。ヒト化の目的は、ヒト体内への導入のために、異種抗体、例えばマウス抗体の免疫原性を、前記抗体の完全抗原結合アフィニティおよび特異性を維持しながら、軽減することである。ヒト化抗体、または他の哺乳類による非拒絶に適合化された抗体は、例えばリサーフィシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）およびＣＤＲグラフティングのような幾つかの技術を用いて製造されうる。本明細書中で用いるリサーフィシング技術は、標的宿主の既知抗体の表面に類似したものとするために抗体可変領域の非ＣＤＲ表面を改変するために分子モデリング、統計解析および突然変異誘発の組合せを利用する。ＣＤＲグラフティング技術は、例えばマウス抗体の相補性決定領域をヒトフレームワークドメイン内に置換することを含む（例えば、ＷＯ ９２／２２６５３を参照されたい）。ヒト化キメラ抗体は、好ましくは、対応ヒト抗体領域に実質的または排他的に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）およびヒト以外の哺乳類に実質的また排他的に由来するＣＤＲ以外の可変領域および定常領域を有する。

【0016】

抗体のリサーフィシングのための戦略および方法、ならびに異なる宿主における抗体の免疫原性を軽減するための他の方法は、米国特許第５，６３９，６４１号（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に開示されている。抗体は、ＣＤＲグラフティング（ＥＰ ０ ２３９ ４００；ＷＯ ９１／０９９６７；米国特許第５，５３０，１０１号および第５，５８５，０８９号）、ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）またはリサーフィシング（ＥＰ ０ ５９２ １０６；ＥＰ ０ ５１９ ５９６；Ｐａｄｌａｎ Ｅ．Ａ．，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ Ｇ．Ｍ．ら，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５−８１４；Ｒｏｇｕｓｋａ Ｍ．Ａ．ら，１９９４，ＰＮＡＳ，９１：９６９−９７３）、鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）および柔軟性残基の特定（ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７４３８１）を含む種々の他の技術を用いてヒト化されうる。ヒト抗体は、ファージディスプレイ法を含む当技術分野で公知の種々の方法により製造されうる。米国特許第４，４４４，８８７号、第４，７１６，１１１号、第５，５４５，８０６号および第５，８１４，３１８号；ならびに国際特許出願公開第ＷＯ ９８／４６６４５、ＷＯ ９８／５０４３３、ＷＯ ９８／２４８９３、ＷＯ ９８／１６６５４、ＷＯ ９６／３４０９６、ＷＯ ９６／３３７３５およびＷＯ ９１／１０７４１号（前記文献の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）も参照されたい。

【0017】

本発明の医薬組合せの抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤ３８を認識しＣＤ３８^＋細胞をアポトーシス、ＡＤＣＣおよびＣＤＣにより殺すヒト化抗体である。もう１つの実施形態においては、本発明のヒト化抗体はストロマ細胞またはストロマ由来サイトカインの非存在下であってもアポトーシスにより前記ＣＤ３８^＋細胞を殺しうる。

【0018】

そのようなヒト化抗体の好ましい実施形態はヒト化３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１もしくは３８ＳＢ３９抗体またはそれらのエピトープ結合性フラグメントである。

【0019】

３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１および３８ＳＢ３９抗体のＣＤＲはモデリングにより特定され、それらの分子構造が推定されている。したがって、１つの実施形態においては、本発明は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６および８１よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有する１以上のＣＤＲを含むヒト化抗体またはそのエピトープ結合性フラグメントを提供する。好ましい実施形態においては、少なくとも１つの重鎖（前記重鎖は、配列番号１、２および３により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）と少なくとも１つの軽鎖（前記軽鎖は、配列番号４、５および６により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）とを含む３８ＳＢ１３のヒト化形態を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、少なくとも１つの重鎖（前記重鎖は、配列番号１、２および３により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）と少なくとも１つの軽鎖（前記軽鎖は、配列番号４、５および６により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）とを含む３８ＳＢ１３のヒト化形態を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、少なくとも１つの重鎖（前記重鎖は、配列番号７、８および９により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）と少なくとも１つの軽鎖（前記軽鎖は、配列番号１０、１１および１２により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）とを含む３８ＳＢ１８のヒト化形態を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、少なくとも１つの重鎖（前記重鎖は、配列番号１３、８１および１５により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）と少なくとも１つの軽鎖（前記軽鎖は、配列番号１６、１７および１８により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）とを含む３８ＳＢ１９のヒト化形態を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、少なくとも１つの重鎖（前記重鎖は、配列番号１９、２０および２１により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）と少なくとも１つの軽鎖（前記軽鎖は、配列番号２２、２３および２４により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）とを含む３８ＳＢ３０のヒト化形態を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、少なくとも１つの重鎖（前記重鎖は、配列番号２５、２６および２７により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）と少なくとも１つの軽鎖（前記軽鎖は、配列番号２８、２９および３０により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）とを含む３８ＳＢ３１のヒト化形態を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、少なくとも１つの重鎖（前記重鎖は、配列番号３１、３２および３３により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）と少なくとも１つの軽鎖（前記軽鎖は、配列番号３４、３５および３６により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）とを含む３８ＳＢ３９のヒト化形態を提供する。

【0020】

１つの好ましい実施形態においては、本発明は、配列番号６６および７２よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶ_Ｈを含むヒト抗体またはそのフラグメントを提供する。好ましい実施形態においては、配列番号６６により表されるアミノ酸配列を有するＶ_Ｈを含むヒト化３８ＳＢ１９抗体を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、配列番号７２により表されるアミノ酸配列を有するＶ_Ｈを含むヒト化３８ＳＢ３１抗体を提供する。

【0021】

もう１つの実施形態においては、本発明は、配列番号６２、６４、６８および７０よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含むヒト抗体またはそのフラグメントを提供する。好ましい実施形態においては、配列番号６２および６４よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含むヒト化３８ＳＢ１９抗体を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、配列番号６８および７０によりなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶ_Ｌを含むヒト化３８ＳＢ３１抗体を提供する。

【0022】

前記３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１および３８ＳＢ３９抗体のヒト化形態のそれぞれは抗癌剤として特に有利であることが示されている。それらの製造、物理特性および有益な薬理学的特性はＷＯ ２００８／０４７２４２（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されている。一般に、ヒトを治療するために使用される用量は、治療対象に特有の要因に左右され、経口投与で１〜１５０ｍｇ／ｋｇ、または静脈内投与で１〜１５０ｍｇ／ｋｇである。

【0023】

シクロホスファミド（ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））は、種々の癌を治療するために使用されるナイトロジェンマスタードアルキル化剤である。それは、化学療法活性を有する活性形態へと肝臓内で変換されるプロドラッグである。アルキル化剤として、シクロホスファミドは主としてＤＮＡ鎖を架橋することにより細胞分裂を妨げて、最終的に細胞死をもたらす。シクロホスファミドは経口製剤および非経口製剤の両方で入手可能である。

【0024】

本発明の１つの態様は、少なくともシクロホスファミドと共に、抗ＣＤ３８抗体を含む医薬組成物である。前記産物の活性は使用用量に左右されるため、より低い用量を使用すること、および毒性現象を軽減すると同時に活性を増強することが可能である。本発明の組合せの改善された効力は治療相乗作用の決定により示されうる。組合せが治療相乗作用を現すのは、それが、単独で使用された試験用最良物質より、その最高許容用量において又は動物種で毒性がもたらされ得ない場合の試験されたその最高用量において、治療上優れている場合である。

【0025】

この効力は、例えば、ｌｏｇ_１０ 殺細胞により定量可能であり、これは以下の式により決定される。
ｌｏｇ_１０ 殺細胞＝Ｔ−Ｃ（日）／３．３２×Ｔ_ｄ
（ここで、Ｔ−Ｃは腫瘍成長遅延を表し、これは、治療群（Ｔ）の腫瘍および対照群（Ｃ）の腫瘍が所定値（例えば１ｇ）に達するまでの日数の中央値であり、Ｔ_ｄは、対照動物において腫瘍体積が２倍になるのに要する日数を表す）［Ｔ．Ｈ．Ｃｏｒｂｅｔｔら，Ｃａｎｃｅｒ，４０：２６６０−２６８０（１９７７）；Ｆ．Ｍ．Ｓｃｈａｂｅｌら，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｐａｒｔ Ｂ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１７：３−５１，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．（１９７９）］。ｌｏｇ_１０ 殺細胞が０．７以上である場合、産物は活性だとみなされる。ｌｏｇ_１０ 殺細胞が２．８以上である場合、産物は非常に活性だとみなされる。

【0026】

治療持続期間が１０日以上となり、前記組合せにおける２つの評価化合物の間で異なる幾つかの場合には、ｌｏｇ殺細胞正味値が、
ｌｏｇ_１０ 殺細胞正味値＝（Ｔ−Ｃ）−治療持続期間／３．３２×Ｔ_ｄ
により計算される。ｌｏｇ殺細胞正味値が０以上の場合に活性が宣言される。

【0027】

前記ｌｏｇ_１０ 殺細胞が、単独で投与された最良成分のその最高許容用量またはその最高試験用量におけるｌｏｇ_１０ 殺細胞の値より大きい場合、前記組合せは治療相乗作用を現すであろう。

【0028】

充実性腫瘍に対する前記組合せの効力は以下の方法で実験的に決定されうる。

【0029】

前記実験に付された動物（一般にはマウス）の両側に３０〜６０ｍｇの腫瘍断片を第０日に皮下移植する。前記腫瘍担持動物を、種々の治療および対照に付す前に、それらの腫瘍サイズに基づいてランダム化する。腫瘍のタイプに応じた移植後所定サイズに腫瘍が達したら、化学療法を開始し、前記動物を毎日観察する。最大体重減少に達し、ついで完全な体重回復が生じるまで、それらの異なる動物群を治療中に毎日秤量する。ついでそれらの群を試験終了まで週１回または２回秤量する。

【0030】

腫瘍が約２ｇに達するまで、または前記動物が死亡するまで（腫瘍が２ｇに達するまでにこれが生じた場合）、前記腫瘍を、腫瘍倍加時間に応じて週１〜５回測定する。安楽死または死亡の直後に前記動物を剖検する。

【0031】

記録した種々のパラメーターにより抗腫瘍活性を決定する。

【0032】

ｈｕ３８ＳＢ１９およびシクロホスファミドの組合せによりそれらの最適用量で得られた結果を後記実施例として示す。

【0033】

したがって、本発明はまた、本発明の組合せを含有する医薬組成物に関する。

【0034】

前記組合せを構成する成分は、前記組合せの最大効力が得られるよう、同時に、半同時に、別々に、または或る期間を隔てて投与されることが可能であり、各投与は、その持続時間において、急速投与から連続的な潅流まで、様々であることが可能である。

【0035】

したがって、本発明の目的においては、前記組合せは、前記構成成分の物理的会合により得られるもののみに限定されるものではなく、同時の又は或る期間を隔てたものでありうる別々の投与を可能にするものも含まれる。

【0036】

本発明の組成物は、好ましくは、非経口投与されうる組成物である。しかし、局所領域療法の場合、これらの組成物は経口、皮下または腹腔内投与されうる。

【0037】

非経口投与の組成物は、一般に、医薬上許容される無菌溶液または懸濁液であり、これは、場合によっては、使用時に必要に応じて製造（調製）されうる。非水性溶液または懸濁液の製造の場合、天然植物油、例えばオリーブ油、ゴマ油もしくは液体石油、または有機エステル、例えばオレイン酸エチルが使用されうる。前記無菌水溶液は水中の前記産物の溶液よりなることが可能である。ｐＨが適切に調節され前記溶液が例えば十分な量の塩化ナトリウムまたはグルコースで等張にされれば、前記水溶液は静脈内投与に適している。滅菌は、加熱により、または前記組成物に悪影響を及ぼさないいずれかの他の手段により行われうる。また、前記組合せは、リポソームの形態、またはシクロデキストリンもしくはポリエチレングリコールとしての担体に結合した形態をとりうる。

【0038】

経口、皮下または腹腔内投与用の組成物は、好ましくは、水性懸濁液または溶液である。

【0039】

成分の適用が同時に、別々に又は或る時間を隔てて行われうる本発明の組合せにおいては、ヒト化抗ＣＤ３８抗体が前記組成物の１０〜９０重量％に相当するのが特に有利であり、この含量は、関連物質の性質、求められる効力および治療すべき癌の性質によって様々となることが可能である。

【発明の効果】

【0040】

本発明の組合せは、以下のもの（それらに限定されるものではない）を含む幾つかのタイプの癌の治療において特に有用である：癌腫および腺癌、例えば膀胱、乳房、結腸、頭頚部、前立腺、腎臓、肝臓、肺、卵巣、膵臓、胃、子宮頚部、甲状腺および皮膚におけるもの、ならびに扁平上皮癌；リンパ球系の造血腫瘍、例えば多発性骨髄腫、白血病、急性および慢性リンパ球性（またはリンパ系）白血病、急性および慢性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（例えば、バーキットリンパ腫）；骨髄系の造血腫瘍、例えば急性および慢性骨髄性（骨髄球様または骨髄球性）白血病、および前骨髄球性白血病；間様由来の腫瘍、例えば線維肉腫、骨肉腫および横紋筋；中枢および末梢神経系の腫瘍、例えば星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫およびシュワン細胞腫；ならびに他の腫瘍、例えばメラノーマ、奇形癌、色素性乾皮症、角化棘細胞腫およびセミノーム、およびＣＤ３８が発現されることが未だ確認されていない他の癌。本発明の抗ＣＤ３８抗体は特有の作用メカニズムを有するため、それらは、主として、一般に使用される抗癌剤に抵抗性である白血病、リンパ腫および癌を治療するのに有用である。

【0041】

したがって、本発明は、癌治療用医薬の製造のための前記組合せの使用をも含む。

【実施例】

【0042】

本実施例においては、腫瘍成長抑制のための本発明の抗ＣＤ３８抗体／シクロホスファミド組合せの有効性をインビボで実証した。

【0043】

選択された腫瘍モデルは、ＳＣＩＤマウス内に移植された、移植可能なヒト・バーキットリンパ腫細胞系（Ｎａｍａｌｗａモデル）であった。

【0044】

ｈｕ３８ＳＢ１９を水中のグルコース５％中に配合した。ｈｕ３８ＳＢ１９を単独物質として、腫瘍移植後の第１１日から第１８日まで週２回、静脈内投与した。組合せ試験においては、ｈｕ３８ＳＢ１９処理を第３５日まで続行した（ただし、最高用量の組合せでは、毒性がもたらされた第１８日に処理を中止した）。

【0045】

シクロホスファミドを水中のグルコース５％中に配合した。シクロホスファミドを腫瘍移植後の第１１日および第１５日に１日１回、静脈内投与した。

【0046】

前記実験の結果を表１に示す。

【0047】

腫瘍倍加時間＝１．９日。

【0048】

以下のエンドポイントを用いた。
・２０％以上の体重減少または１０％以上の薬物死を誘発した投与量において毒性を宣言した。
・ｌｏｇ１０総細胞＝（Ｔ−Ｃ）／［３．２×（腫瘍倍加時間（日））］を計算することにより、抗腫瘍効力を決定した（Ｔは、前記処理マウスが１０００ｍｇに達するまでの時間の中央値を意味し、Ｃは、前記対照マウスが同一サイズに達するまでの時間の中央値（１５．７日）を意味する；腫瘍非含有生存体はこれらの計算から除外され、別々にまとめられる）。ｌｏｇ総殺細胞＜０．７の場合には抗腫瘍活性は宣言されず、ｌｏｇ殺細胞＞２．８の場合に、治療は高活性であると宣言された。
・腫瘍非含有生存体（ＴＦＳ）：前記研究の全持続期間（最終処理後１００日超）にわたる触診の限界（６３ｍｇ）未満の完全退縮に対応する。
・治療相乗作用：組合せは、それが前記研究の最良単独物質より（少なくとも１ ｌｏｇ殺細胞）活性である場合、治療相乗作用を有する。

【0049】

シクロホスファミド単独の毒性は２８６．１ｍｇ／ｋｇ／注射の用量で観察され、この場合、５匹中３匹のマウス（６０％）が死亡した。したがって、シクロホスファミドの最高無毒性用量（ＨＮＴＤ）は１７７．４ｍｇ／ｋｇ／注射（合計注射用量＝３５４．８ｍｇ／ｋｇ）であった。その１７７．４ｍｇ／ｋｇ／注射の用量は４．８のｌｏｇ総殺細胞の高い活性であると判明した。

【0050】

ｈｕ３８ＳＢ１９に関しては、前記産物は４０ｍｇ／ｋｇ／注射の用量（１２０．０ｍｇ／ｋｇの合計用量）で十分に許容された。毒性は観察されなかったが、これは、マウスＣＤ３８との前記抗体の交差反応性の欠如により説明されうる。ｌｏｇ殺細胞は０．４であったが、これは、ｈｕ３８ＤＢ１９がこれらの条件下で活性でなかったことを示している。

【0051】

２８６．１ｍｇ／ｋｇ／注射のシクロホスファミドと４０ｍｇ／ｋｇ／注射のｈｕ３８ＳＢ１９との組合せは毒性であった。この場合、６匹中３匹（５０％）の薬物関連死を伴っており、すなわち、シクロホスファミド単独の同一用量で観察されたものに非常に類似したものであった。ｈｕ３８ＳＢ１９の４０ｍｇ／ｋｇ／注射とのシクロホスファミドの１７７．４ｍｇ／ｋｇ／注射の用量がＨＮＴＤであるとみなされた。この用量は２０．０のｌｏｇ殺細胞および１／６のＴＦＳ（第１９６日）を示し、したがって高活性とみなされた。４０ｍｇ／ｋｇ／注射のｈｕ３８ＳＢ１９を伴う、より一層低い用量である１１０．０ｍｇ／ｋｇ／注射および６８．２ｍｇ／ｋｇ／注射のシクロホスファミドは、それぞれ１５．７および６．９のｌｏｇ総殺細胞を示し、高活性であった。注目すべきことに、評価した３つ全ての用量レベルにおいて、前記組合せの抗腫瘍活性は、前記最良物質であるシクロホスファミドで観察されたもの（ＨＮＴＤにおいて４．８ｌｏｇ殺細胞）より１ｌｏｇ細殺胞以上大きかった。本発明者らは、この組合せは治療相乗作用を示すと結論づけている。この治療相乗作用は、治療期間を考慮してｌｏｇ殺細胞正味値を用いて、明らかに確認される（シクロホスファミド単独では４ｌｏｇ殺細胞正味値、それに対して、前記組合せでは１６ｌｏｇ殺細胞正味値）。

【0052】

【表1】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]