特許 6095014 浮腫抑制用経口剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6095014

(24)【登録日】2017年2月24日

(45)【発行日】2017年3月15日

(54)【発明の名称】浮腫抑制用経口剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/728 20060101AFI20170306BHJP

   A61P 7/10 20060101ALI20170306BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20170306BHJP

【ＦＩ】

   A61K31/728

   A61P7/10

   A61P29/00

【請求項の数】2

【全頁数】19

(21)【出願番号】特願2014-502371(P2014-502371)

(86)(22)【出願日】2013年2月28日

(86)【国際出願番号】JP2013055431

(87)【国際公開番号】WO2013129577

(87)【国際公開日】20130906

【審査請求日】2015年8月28日

(31)【優先権主張番号】特願2012-45954(P2012-45954)

(32)【優先日】2012年3月1日

(33)【優先権主張国】JP

(31)【優先権主張番号】特願2012-45955(P2012-45955)

(32)【優先日】2012年3月1日

(33)【優先権主張国】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】000001421

【氏名又は名称】キユーピー株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100088155

【弁理士】

【氏名又は名称】長谷川 芳樹

(74)【代理人】

【識別番号】100128381

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 義憲

(74)【代理人】

【識別番号】100176773

【弁理士】

【氏名又は名称】坂西 俊明

(72)【発明者】

【氏名】栗原 仁

(72)【発明者】

【氏名】釣木 隆弘

(72)【発明者】

【氏名】浅利 晃

【審査官】 小堀 麻子

(56)【参考文献】

【文献】 特開２００９−１０２２７８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２００９／１１３５１２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特開２００９−０５１８４９（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２００１−２３１５０３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 食用ヒアルロン酸(ECM・E)の鎮痛作用および創傷治癒促進効果，医学と生物学，１９９９年，Vol.139, No.6，p.253-258

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３１／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有し、かつ、血漿中でのＴＧＦ−βの発現を促進する、浮腫抑制用経口剤。

【請求項2】

ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有し、痛み物質であるＰＧＥ２及び／又はブラジキニンの産生を抑制する、浮腫抑制用経口剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＴＧＦ−β発現促進経口剤、痛み物質産生抑制経口剤及び浮腫抑制経口剤に関する。

【背景技術】

【0002】

ヒアルロン酸は、生体、特に皮下組織に存在するムコ多糖類であり、その高い保湿機能により、化粧料の原料として広く利用されてきた（特許文献１）。また、ヒアルロン酸は、医薬品としても利用されており、例えば、ヒアルロン酸を関節に注射することにより、生体本来の持つヒアルロン酸含量の低下を補い、関節の炎症を抑える治療が行われている。

【0003】

しかしながら、ヒアルロン酸を関節に注射する場合、定期的に病院に通院して施術を受ける必要があるため、患者にとって負担が大きい。また、注射した部位に局所疼痛、腫脹、発赤が生じる場合がある。さらに、関節の痛みがさほど大きくない場合、予防も含めて適切な治療が行われることが少ないと考えられる。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【特許文献1】特開昭６３−５７６０２号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

本発明は、患者のＱＯＬ向上に寄与する、ＴＧＦ−β発現促進経口剤、痛み物質産生抑制経口剤及び浮腫抑制経口剤を提供する。

【課題を解決するための手段】

【0006】

本願発明者は、痛み（炎症性疼痛）について鋭意研究した結果、意外にも、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩が血漿中でのＴＧＦ−βの発現を促進することを見出し、本発明を完成するに至った。また、本願発明者は、痛み（炎症性疼痛）について鋭意研究した結果、意外にも、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩が痛み物質であるＰＧＥ２及び／又はブラジキニンの産生を抑制することを見出し、本発明を完成するに至った。

【0007】

本発明の一態様に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤は、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有し、かつ、血漿中でのＴＧＦ−βの発現を促進する。

【0008】

本発明の別の一態様に係る痛み物質産生抑制経口剤は、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有し、かつ、血漿中におけるＴＧＦ−βの発現を促進することにより、痛み物質の産生を抑制する。この場合、前記痛み物質がブラジキニンであることができる。

【0009】

本発明の他の一態様に係る浮腫抑制経口剤は、上記ＴＧＦ−β発現促進経口剤を含有する。

【0010】

本発明の他の一態様に係る痛み物質産生抑制経口剤は、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有し、痛み物質であるＰＧＥ２及び／又はブラジキニンの産生を抑制する。

【0011】

本発明の他の一態様に係る浮腫抑制経口剤は、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有し、痛み物質であるＰＧＥ２及び／又はブラジキニンの産生を抑制する。

【発明の効果】

【0012】

上記ＴＧＦ−β発現促進経口剤及び上記痛み物質産生抑制経口剤によれば、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩が血漿中でのＴＧＦ−βの発現を促進することにより、痛み物質の産生が抑制されるため、痛みを低減することができる。また、上記浮腫抑制経口剤によれば、上記ＴＧＦ−β発現促進経口剤を含有することにより、浮腫を抑制することができる。

【0013】

上記痛み物質産生抑制経口剤によれば、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩によって痛み物質であるＰＧＥ２及び／又はブラジキニンの産生が抑制されるため、痛みを低減することができる。また、上記浮腫抑制経口剤によれば、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有し、痛み物質であるＰＧＥ２及び／又はブラジキニンの産生を抑制することにより、浮腫を抑制することができる。

【0014】

また、上記ＴＧＦ−β発現促進経口剤、上記痛み物質産生抑制経口剤及び上記浮腫抑制経口剤は経口剤であることから、患者が容易に摂取することができるため、治療のために患者が通院する必要がなく、患者のＱＯＬ向上に寄与することができる。したがって、患者の負担を小さくできるとともに、痛みを低減することができる。

【図面の簡単な説明】

【0015】

【図1】図１は、本発明の実施例１のヒアルロン酸の痛み抑制作用確認試験において、カラギーナン惹起から６時間後の左後足の状態を示す写真を示す。

【図2】図２は、本発明の実施例１のヒアルロン酸の痛み抑制作用確認試験において、カラギーナン惹起による左後足の足蹠容積の経時変化を表すグラフである。

【図3】図３は、本発明の実施例１のヒアルロン酸の痛み抑制作用確認試験において、カラギーナン惹起から０時間後、３時間後、６時間後の浸出液量を表すグラフである。

【図4】図４は、本発明の実施例１のヒアルロン酸の痛み抑制作用確認試験において、カラギーナン惹起から０時間後、３時間後、６時間後の血漿中のＴＧＦ−β１の濃度を表すグラフである。

【図5】図５は、本発明の実施例１のヒアルロン酸の痛み抑制作用確認試験において、カラギーナン惹起から０時間後、３時間後、６時間後の浸出液中のブラジキニンの総量を表すグラフである。

【図6】図６は、本発明の実施例１のヒアルロン酸の痛み抑制作用確認試験において、カラギーナン惹起から０時間後、３時間後、６時間後の浸出液中のブラジキニンの濃度を表すグラフである。

【図7】図７は、本発明の実施例１のヒアルロン酸の痛み抑制作用確認試験において、カラギーナン惹起から０時間後、３時間後、６時間後のＰＧＥ２（プロスタグランジンＥ２）の総量を表すグラフである。

【図8】図８は、本発明の実施例１のヒアルロン酸の痛み抑制作用確認試験において、カラギーナン惹起から０時間後、３時間後、６時間後の浸出液中のＰＧＥ２の濃度を表すグラフである。

【図9】図９は、本発明の実施例１のヒアルロン酸の痛み抑制作用確認試験において、血漿中のヒアルロン酸の濃度の測定結果を示すグラフである。

【図10】図１０は、本発明のＴＧＦ−β発現促進経口剤の作用機序を模式的に説明する図である。

【図11】図１１は、本発明の実施例２において、ヒト結腸由来ＨＴ２９細胞におけるヒアルロン酸のＴＧＦ−β発現促進作用を評価するために、ＴＧＦ−βのｍＲＮＡ発現量を測定した結果を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0016】

以下、図面を参照しつつ、本発明を詳細に説明する。なお、本発明において、格別に断らない限り、「部」は「質量部」を意味し、「％」は「質量％」を意味する。

【0017】

１．ＴＧＦ−β発現促進経口剤
本発明の一実施形態に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤は、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有し、かつ、血漿中でのＴＧＦ−βの発現を促進することを特徴とする。

【0018】

１．１．ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩
本発明において、「ヒアルロン酸」とは、β−Ｄ−グルクロン酸とβ−Ｄ−Ｎ−アセチルグルコサミンとの二糖からなる繰り返し構成単位を１以上有する多糖類である。すなわち、ヒアルロン酸は、β−Ｄ−グルクロン酸の１位とβ−Ｄ−Ｎ−アセチル−グルコサミンの３位とが結合した２糖単位を少なくとも１個含む２糖以上のものである。また、「ヒアルロン酸の薬学的に許容される塩」としては、特に限定されないが、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、亜鉛塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩等が挙げられる。

【0019】

ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩は、動物等の生体組織（例えば鶏冠、さい帯、皮膚、関節液等）から抽出されたものでもよく、あるいは、微生物、動物細胞または植物細胞を培養して得られたもの（例えばストレプトコッカス属の細菌等を用いた発酵法）、化学的または酵素的に合成されたもの等を使用することができる。

【0020】

なお、本発明において使用するヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の純度は、医薬品で使用できるレベルであればよく、好ましくは９０％以上であればよく、より好ましくは９５％以上であればよい。この純度は、カルバゾール硫酸法（例えば日本薬局方）にて測定されたグルクロン酸定量値から算出された値である。

【0021】

カルバゾール硫酸法は、ホウ酸ナトリウム・硫酸溶液中にヒアルロン酸水溶液を加えて混和し、ヒアルロン酸を加熱分解した後冷却し、カルバゾール・エタノール溶液を加えて混和し、加熱後放冷した試料液の吸光度（５３０ｎｍ）を測定する方法である。同様に処理したＤ−グルクロノラクトンを用いて検量線を作成し、Ｄ−グルクロノラクトン換算値を算出した後、１．１０２を乗じてグルクロン酸定量値を求める。得られたグルクロン酸定量値に（ヒアルロン酸の分子量／グルクロン酸の分子量）を乗じてヒアルロン酸の含有量を算出する。

【0022】

また、本実施形態に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤で使用するヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の平均分子量は好ましくは５０万以上であり、より好ましくは６０万以上、さらに好ましくは６０万〜１６０万である。ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の平均分子量が５０万未満であると、ＴＧＦ−β発現を促進するのが困難になる場合がある。また、ヒアルロン酸及び／またはその塩の平均分子量が１６０万を超えると、溶解し難く、その効果を十分に発揮できない場合がある。

【0023】

なお、本発明で規定されるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の平均分子量は、以下の方法により測定される。

【0024】

即ち、約０．０５ｇの精製ヒアルロン酸を精密に量り、０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液に溶かし、正確に１００ｍＬとした溶液及びこの溶液８ｍＬ、１２ｍＬ並びに１６ｍＬを正確に量り、それぞれに０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液を加えて正確に２０ｍＬとした溶液を試料溶液とする。この試料溶液及び０．２ｍｏｌ／Ｌ濃度の塩化ナトリウム溶液につき、日本薬局方（第十四改正）一般試験法の粘度測定法（第１法 毛細管粘度測定法）により３０．０±０．１℃で比粘度を測定し（式（１））、各濃度における還元粘度を算出する（式（２））。還元粘度を縦軸に、本品の換算した乾燥物に対する濃度（ｇ／１００ｍＬ）を横軸にとってグラフを描き、各点を結ぶ直線と縦軸との交点から極限粘度を求める。ここで求められた極限粘度をＬａｕｒｅｎｔの式（式（３））に代入し、平均分子量を算出する（Ｔ．Ｃ． Ｌａｕｒｅｎｔ， Ｍ． Ｒｙａｎ， Ａ． Ｐｉｅｔｒｕｓｚｋｉｅｗｉｃｚ，：Ｂ．Ｂ．Ａ．， ４２， ４７６−４８５（１９６０））。
（式１）
比粘度 ＝ ｛（試料溶液の所要流下秒数）／（０．２ｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム溶液の所要流下秒数）｝−１
（式２）
還元粘度 ＝ 比粘度／（本品の換算した乾燥物に対する濃度（ｇ／１００ｍＬ））
（式３）
極限粘度 ＝ ３．６×１０^−４Ｍ^０．７８
Ｍ：平均分子量

【0025】

本実施形態に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤におけるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の含有量は、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩が有効成分として機能しうる量であればよく、通常１質量％以上であり、好ましくは５〜９５質量％である。

【0026】

１．２．ＴＧＦ−βの発現促進
本実施形態に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤は、ヒトまたはヒト以外の動物の血漿中でのＴＧＦ−βの発現を促進する。また、本実施形態に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤は、ヒトまたはヒト以外の細胞または組織でのＴＧＦ−βの発現を促進する。

【0027】

ヒトまたはヒト以外の動物の血漿中、細胞または組織におけるＴＧＦ−βの発現促進は、例えば、ノーザンブロッティング、ＤＮＡアレイ、ＤＮＡチップ等によるＴＧＦ−βｍＲＮＡの検出または定量、ならびに、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、アフィニティクロマトグラフィー等によるＴＧＦ−β蛋白質の検出または定量等の公知の生化学的分析方法により確認することができる。

【0028】

ヒト以外の動物としては、非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、イヌ、ネコ、ラット及びマウス）及び霊長類（例えばサル）を含む哺乳類が挙げられる。ヒトまたはヒト以外の動物としては、好ましくはヒトである。

【0029】

ＴＧＦ−β（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ−β）はサイトカイン（細胞の働きを調節する分泌性蛋白）の一種であり、β１〜β５の５つのサブタイプが存在することが判明している。また、ＴＧＦ−βは、多くの組織で、細胞外基質蛋白を産生し、分解酵素を抑制し、創傷治癒を促進することが知られており、また、上皮細胞の増殖や新生を促進することが知られている。

【0030】

本実施形態に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤をヒトまたはヒト以外の動物に経口的に摂取させることによって、ヒトまたはヒト以外の動物において血漿中でのＴＧＦ−β発現を促進することができる。これにより、炎症性疾患（例えば、リウマチ関節炎（ＲＡ）；喘息；鼻炎等のアレルギー性疾患；血管疾患；血栓症または有害な血小板凝集；血栓溶解後の再閉塞；再潅流傷害；乾癬、湿疹、接触皮膚炎及びアトピー性皮膚炎等の皮膚炎症性疾患；糖尿病（例えば、インスリン依存型糖尿病、自己免疫型糖尿病）；多発性硬化症；潰瘍性大腸炎、クローン病（局所性腸炎）等の炎症性腸疾患；非熱帯性スプルー、血清反応陰性関節症に関連した腸疾患、リンパ球性または膠原性大腸炎、及び好酸球性胃腸炎等の胃腸管への白血球浸潤が関与する疾患；皮膚、尿路、気道及び関節滑膜等の他の上皮皮膜組織への白血球浸潤に関連した疾患；膵炎；乳腺炎（乳腺）；肝炎；胆嚢炎；胆管炎または胆管周囲炎（胆管及び肝臓の周囲組織）；気管支炎；副鼻腔炎；過敏性肺炎等の間質性線維症を生じる肺の炎症性疾患；膠原病；サルコイドーシス；骨粗鬆症；骨関節症；アテローム性動脈硬化症；新生物の転移または癌性増殖を含む新生物疾患；外傷（外傷治癒強化）；網膜剥離、アレルギー性結膜炎；自己免疫性、ブドウ膜炎等のある種の眼病；シェーグレン症候群；臓器移植後の拒絶反応（慢性及び急性）；宿主対移植片または移植片対宿主疾患；内膜肥厚；動脈硬化症（移植後の移植片動脈硬化症を含む）；腫瘍血管新生；悪性腫瘍；多発性骨髄腫；骨髄腫誘発骨吸収；外傷性脳損傷及び脊髄損傷等の中枢神経傷害；及びメニエール病からなる群から選ばれる病態）に罹患した患者（ヒトまたはヒト以外の動物）における痛みを改善することができる。特に、リウマチ関節炎（ＲＡ）、膠原病等の自己免疫性疾患や膝変形性関節炎などの関節炎における痛みを緩和することができ、特に、膝や肩等の関節における痛みを緩和することができる。

【0031】

本実施形態に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤を経口摂取することによって血漿中でのＴＧＦ−βの発現が促進される作用機序については必ずしも明らかではないが、ヒアルロン酸を経口摂取したマウスの腸管上皮表面の受容体にヒアルロン酸が結合することを本願発明者が報告している（Ａｋｉｒａ Ａｓａｒｉ， Ｔｏｍｏｙｕｋｉ Ｋａｎｅｍｉｔｓｕ， Ｈｉｔｈｏｓｈｉ Ｋｕｒｉｈａｒａ， Ｏｒａｌ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｉｇｈ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｗｅｉｇｈｔ Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ （９００ ＫＤａ） Ｃｏｎｔｒｏｌｓ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｖｉａ Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４ ｉｎ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ）。したがって、本実施形態に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤の有効成分であるヒアルロン酸またはその薬学的に許容できる塩を経口摂取すると、該ヒアルロン酸またはその薬学的に許容できる塩が腸管上皮表面の受容体に結合し、その結果、血漿中におけるＴＧＦ−βの発現が促進されることによるものであると推察される（図１０参照）。また、血漿中におけるＴＧＦ−βの発現が促進される結果、痛み抑制作用が発揮されると推察される。

【0032】

なお、本発明において「患者」とは、本実施形態に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤（ならびに、後述する痛み物質産生抑制経口剤及び浮腫抑制経口剤）が投与されるヒトまたはヒト以外の動物のことをいい、通常は、上記疾患及び／又は痛みを有するヒトまたはヒト以外の動物、あるいは上記疾患の疑いがありかつ痛みを有するヒトまたはヒト以外の動物である。

【0033】

本実施形態に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤（ならびに、後述する痛み物質産生抑制経口剤及び浮腫抑制経口剤）は経口的に投与されるため、治療を受けるために患者が通院する必要がないので、患者のＱＯＬを向上させることができる。

【0034】

本実施形態に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤（ならびに、後述する痛み物質産生抑制経口剤及び浮腫抑制経口剤）は、上記炎症性疾患における痛み（炎症性疼痛）の緩和及び／または予防に好適に使用することができる。例えば、本実施形態に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤を、上記疾患に起因する軽度〜重度の痛みを有する患者に使用することができる。

【0035】

例えば、上記疾患による軽度の痛みを有する患者の場合、痛みに対して適切な治療が施されていない場合もある。これに対して、本実施形態に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤（ならびに、後述する痛み物質産生抑制経口剤及び浮腫抑制経口剤）を、上記疾患に起因する軽度の痛みを有する患者に投与することにより、患者の負担を増やすことなく、痛みを軽減及び／または予防することができる。

【0036】

本実施形態に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤（ならびに、後述する痛み物質産生抑制経口剤及び浮腫抑制経口剤）は、有効成分であるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩以外に、本発明の効果を損なわない範囲で、その他の原料を含むことができる。そのような原料の例としては水、賦形剤、抗酸化剤、防腐剤、湿潤剤、粘稠剤、緩衝剤、吸着剤、溶剤、乳化剤、安定化剤、界面活性剤、滑沢剤、水溶性高分子、甘味料、矯味剤、酸味料、アルコール類等が挙げられる。

【0037】

本実施形態に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤（ならびに、後述する痛み物質産生抑制経口剤及び浮腫抑制経口剤）の剤形は特に限定されないが、本実施形態に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤（ならびに、後述する痛み物質産生抑制経口剤及び浮腫抑制経口剤）を経口摂取する場合、例えば錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤等の固形製剤、水剤、懸濁剤、シロップ剤、乳剤等の液剤等の経口投与剤が挙げられる。

【0038】

ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩は生体物質であるため、多量に摂取しても副作用がない、またはきわめて低いと考えられるが、本実施形態に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤（ならびに、後述する痛み物質産生抑制経口剤及び浮腫抑制経口剤）として摂取するヒアルロン酸及び／またはその塩の量は、一日当たり１０ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは１００〜５００ｍｇを目安とすることができる。投与回数は、症状に応じて一日当たり一回もしくは複数回を選択できる。

【0039】

２．痛み物質産生抑制経口剤
本発明の一実施形態に係る痛み物質産生抑制経口剤は、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有し、かつ、血漿中におけるＴＧＦ−βの発現を促進することにより、痛み物質の産生を抑制することを特徴とする。本発明の一実施形態に係る痛み物質産生抑制経口剤において、有効成分として含まれるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩としては、上記実施形態に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤において有効成分として使用されるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を使用することができる。また、本発明の一実施形態に係る痛み物質産生抑制経口剤におけるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の含有量及び投与量ならびに他の成分もまた、上記実施形態に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤におけるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の含有量及び投与量ならびに他の成分と同様である。

【0040】

例えば、生体内組織が損傷されて該組織に炎症が生じると、痛みが発生する。また、生体内組織の損傷が治癒した後にも痛みが感じられることがある。一般に、代表的な発痛物質として、ブラジキニンが知られている。組織損傷時に血漿から遊離したブラジキニンが知覚神経を興奮させることにより、痛みを発生させる。より具体的には、ブラジキニンは、組織が損傷された際に生じる侵害刺激を伝える受容体（ポリモーダル受容体）を刺激する作用を有する。すなわち、ブラジキニンは発痛物質として最も重要な役割を果たしている。一方、ＰＧＥ２は、ブラジキニンによって該受容体への作用が増強されることによって、間接的に発痛作用を示す物質である。ＰＧＥ２はブラジキニンと比較して直接的な発痛作用は弱いが、ブラジキニンによる発痛を増強させる作用を有する。

【0041】

本実施形態に係る痛み物質産生抑制経口剤が産生を抑制する痛み物質は例えば、ブラジキニンであることができ、ブラジキニン及びＰＧＥ２の両方であってもよい。すなわち、本実施形態に係る痛み物質産生抑制経口剤の有効成分であるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩がブラジキニンの産生を抑制する結果、ＰＧＥ２の産生も抑制することができ、その結果、痛み物質の産生を効果的に抑制することができる。

【0042】

本実施形態に係る痛み物質産生抑制経口剤によれば、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩が血漿中でのＴＧＦ−βの発現を促進することにより、痛み物質の産生が抑制されるため、炎症性疼痛を低減することができる。また、本実施形態に係る痛み物質産生抑制経口剤は経口剤であることから、患者が容易に摂取することができ、治療のために患者が通院する必要がないため患者の負担を減らすことができるため、患者のＱＯＬ向上に寄与することができる。

【0043】

３．浮腫抑制経口剤
本発明の一実施形態に係る浮腫抑制経口剤は、上記ＴＧＦ−β発現促進経口剤を含有する。本発明において「浮腫」とは、生体内の組織において、血管外に余分な水分（血しょう成分）が溜まっている状態のことをいう。浮腫は通常、細胞組織の液体（細胞間質液）と血液との圧力バランスが崩れることにより生じる。本実施形態に係る浮腫抑制経口剤の投与対象となる浮腫としては、例えば局所性浮腫、炎症性浮腫が挙げられる。このうち、本実施形態に係る浮腫抑制経口剤の投与により、例えば、上肢（手を含む）、下肢（足を含む）、頭部、背部、腹部、臀部に生じる炎症性浮腫を効果的に抑制することができる。

【0044】

本実施形態に係る浮腫抑制経口剤において、有効成分として含まれるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩としては、上記実施形態に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤において有効成分として使用されるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を使用することができる。また、本実施形態に係る浮腫抑制経口剤におけるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の含有量及び投与量ならびに他の成分もまた、上記実施形態に係るＴＧＦ−β発現促進経口剤におけるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の含有量及び投与量ならびに他の成分と同様である。

【0045】

本実施形態に係る浮腫抑制経口剤によれば、上記ＴＧＦ−β発現促進経口剤を含有することにより、上記ＴＧＦ−β発現促進経口剤の経口摂取によって、血漿中におけるＴＧＦ−βの発現が促進される結果、浮腫（特に、炎症時の浮腫）を抑制することができる（図１０参照）。また、本実施形態に係る浮腫抑制経口剤は経口剤であるので、容易に摂取することができることから、治療のために患者が通院する必要がないため、患者のＱＯＬ向上に寄与することができる。

【0046】

４．痛み物質産生抑制経口剤
４．１．痛み物質産生抑制経口剤
本発明の一実施形態に係る痛み物質産生抑制経口剤は、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有し、痛み物質であるＰＧＥ２及び／又はブラジキニンの産生を抑制することを特徴とする。

【0047】

本実施形態に係る痛み物質産生抑制経口剤で使用するヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の平均分子量は好ましくは５０万以上であり、より好ましくは６０万以上、さらに好ましくは６０万〜１６０万である。ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の平均分子量が５０万未満であると、痛み物質の産生を抑制するのが困難になる場合がある。また、ヒアルロン酸及び／またはその塩の平均分子量が１６０万を超えると、溶解し難く、その効果を十分に発揮できない場合がある。

【0048】

本実施形態に係る痛み物質産生抑制経口剤におけるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の含有量は、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩が有効成分として機能しうる量であればよく、通常１質量％以上であり、好ましくは５〜９５質量％である。

【0049】

４．２．痛み物質産生抑制
ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する本実施形態に係る痛み物質産生抑制経口剤をヒトまたはヒト以外の動物が経口摂取することにより、ヒトまたはヒト以外の動物の細胞、組織及び器官において、痛み物質であるＰＧＥ２及び／又はブラジキニンの産生が抑制される。

【0050】

本実施形態に係る痛み物質産生抑制経口剤が産生を抑制する痛み物質は例えば、ブラジキニン及び／またはＰＧＥ２であることができ、ブラジキニン及びＰＧＥ２の一方または両方であってもよい。例えば、本実施形態に係る痛み物質産生抑制経口剤の有効成分であるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩がブラジキニンの産生を抑制する結果、ＰＧＥ２の産生も抑制することができ、その結果、痛み物質の産生を効果的に抑制することができる。

【0051】

本実施形態に係る痛み物質産生抑制経口剤によれば、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩が痛み物質の産生を抑制することにより、炎症性疼痛を低減することができる。また、本実施形態に係る痛み物質産生抑制経口剤は経口剤であることから、患者が容易に摂取することができ、治療のために患者が通院する必要がないため患者の負担を減らすことができるため、患者のＱＯＬ向上に寄与することができる。

【0052】

本実施形態に係る痛み物質産生抑制経口剤をヒトまたはヒト以外の動物に経口的に摂取させることによって、ヒトまたはヒト以外の動物において痛み物質であるＰＧＥ２及び／又はブラジキニンの産生を抑制することができる。これにより、炎症性疾患（例えば、リウマチ関節炎（ＲＡ）；喘息；鼻炎等のアレルギー性疾患；血管疾患；血栓症または有害な血小板凝集；血栓溶解後の再閉塞；再潅流傷害；乾癬、湿疹、接触皮膚炎及びアトピー性皮膚炎等の皮膚炎症性疾患；糖尿病（例えば、インスリン依存型糖尿病、自己免疫型糖尿病）；多発性硬化症；潰瘍性大腸炎、クローン病（局所性腸炎）等の炎症性腸疾患；非熱帯性スプルー、血清反応陰性関節症に関連した腸疾患、リンパ球性または膠原性大腸炎、及び好酸球性胃腸炎等の胃腸管への白血球浸潤が関与する疾患；皮膚、尿路、気道及び関節滑膜等の他の上皮皮膜組織への白血球浸潤に関連した疾患；膵炎；乳腺炎（乳腺）；肝炎；胆嚢炎；胆管炎または胆管周囲炎（胆管及び肝臓の周囲組織）；気管支炎；副鼻腔炎；過敏性肺炎等の間質性線維症を生じる肺の炎症性疾患；膠原病；サルコイドーシス；骨粗鬆症；骨関節症；アテローム性動脈硬化症；新生物の転移または癌性増殖を含む新生物疾患；外傷（外傷治癒強化）；網膜剥離、アレルギー性結膜炎；自己免疫性、ブドウ膜炎等のある種の眼病；シェーグレン症候群；臓器移植後の拒絶反応（慢性及び急性）；宿主対移植片または移植片対宿主疾患；内膜肥厚；動脈硬化症（移植後の移植片動脈硬化症を含む）；腫瘍血管新生；悪性腫瘍；多発性骨髄腫；骨髄腫誘発骨吸収；外傷性脳損傷及び脊髄損傷等の中枢神経傷害；及びメニエール病からなる群から選ばれる病態）に罹患した患者（ヒトまたはヒト以外の動物）における痛みを改善することができる。特に、リウマチ関節炎（ＲＡ）、膠原病等の自己免疫性疾患や膝変形性関節炎などの関節炎における痛みを緩和することができ、特に、膝や肩等の関節における痛みを緩和することができる。

【0053】

５．浮腫抑制経口剤
本発明の一実施形態に係る浮腫抑制経口剤は、ヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有し、痛み物質であるＰＧＥ２及び／又はブラジキニンの産生を抑制することを特徴とする。本実施形態に係る浮腫抑制経口剤において、有効成分として含まれるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩としては、上記実施形態に係る痛み物質産生抑制経口剤において有効成分として使用されるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を使用することができる。また、本実施形態に係る浮腫抑制経口剤におけるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の含有量及び投与量ならびに他の成分もまた、上記実施形態に係る痛み物質産生抑制経口剤におけるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の含有量及び投与量ならびに他の成分と同様である。本実施形態に係る浮腫抑制経口剤の投与対象となる浮腫としては、例えば局所性浮腫、炎症性浮腫が挙げられる。このうち、本実施形態に係る浮腫抑制経口剤の投与により、例えば、上肢（手を含む）、下肢（足を含む）、頭部、背部、腹部、臀部に生じる炎症性浮腫を効果的に抑制することができる。

【0054】

本実施形態に係る浮腫抑制経口剤において、有効成分として含まれるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩としては、上記実施形態に係る痛み物質産生抑制経口剤において有効成分として使用されるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩を使用することができる。また、本実施形態に係る浮腫抑制経口剤におけるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の分子量、含有量及び投与量ならびに他の成分もまた、上記実施形態に係る痛み物質産生抑制経口剤におけるヒアルロン酸またはその薬学的に許容される塩の分子量、含有量及び投与量ならびに他の成分と同様である。

【0055】

本実施形態に係る浮腫抑制経口剤によれば、上記痛み物質産生抑制経口剤を含有することにより、上記痛み物質産生抑制経口剤の経口摂取によって、痛み物質であるＰＧＥ２及び／又はブラジキニンの産生が抑制される結果、浮腫（特に、炎症時の浮腫）を抑制することができる。また、本実施形態に係る浮腫抑制経口剤は経口剤であるので、容易に摂取することができることから、治療のために患者が通院する必要がないため、患者のＱＯＬ向上に寄与することができる。

【0056】

６．実施例
以下、実施例によって本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は実施例に限定されない。

【0057】

６．１．実施例１（ヒアルロン酸の痛み抑制作用の確認試験（ｉｎ ｖｉｖｏ））
実施例１では、ヒアルロン酸の痛み抑制作用を確認し、該作用機序を解明するために、カラギーナン誘発炎症疼痛モデルラットにヒアルロン酸を蒸留水に溶解させた水溶液を飲水投与させた。

【0058】

６．１．１．試験液の調製
試料（ヒアルロン酸（平均分子量９０万、白色粉末、キユーピー株式会社製））が、投与量２００ｍｇ／ｋｇ／日となるように、ラットの平均体重及び平均飲水量から濃度を算出して、試験液を調製した。

【0059】

６．１．２．試験方法
ラット（Ｗｉｓｔａｒ（ＳＰＦ）、雄性、入手時４週齢、日本エスエルシー株式会社から入手）を７日間馴化飼育した後、体重による群分けを投与前日に行った。上記試験液の自由摂取による飲水投与を４週間行った。４週間の前記飲水投与の後、カラギーナン惹起時の体重が群間で差のない様にラットを選抜及び群分けしたうえで（表１参照）、後述する疼痛モデルに供した。

【0060】

【表1】

【0061】

［疼痛モデルラット］
疼痛モデルラットは、大内ら（大内和雄、「生物薬科学実験講座（第１２巻）炎症とアレルギーＩ−１」、第１章、異物による炎症モデル：３０−５１頁）、Ｍａｓａｈｉｒｏ Ｎｏｇｕｃｈｉら（Ｍａｓａｈｉｒｏ Ｎｏｇｕｃｈｉ， ｅｔ ａｌ ：Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｉｃ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃ ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ ｌｏｘｏｐｒｏｆｅｎ ｓｏｄｉｕｍ ａｎｄ ｉｔｓ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ．Ｂｉｏｌ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｕｌｌ． ２００５． ２８． ２０７５−２０７９．）の方法を参照して、１％λカラギーナン（ＳＩＧＭＡ社製）溶液０．１ｍＬをラットの後肢足蹠皮下に注入することにより作製された。なお、１％λカラギーナン溶液は、使用（惹起）直前までスターラーで攪拌させておいた。その後、足容積測定装置を用いて足蹠容積を計測した。また、疼痛モデルラットからイソフルラン麻酔下にて採血した後、後肢から浸出液を採取して、該浸出液中のＰＧＥ２及びブラジキニンの測定を実施した。

【0062】

［陽性対照］
陽性対照薬であるイブプロフェンの調製及び投与の条件は以下の通りである。
調製：イブプロフェンを電子天秤で必要量測り、メノウ乳鉢を用いて０．５％ＣＭＣ（カルボキシメチルセルロース）溶液に懸濁させた。
投与経路：強制経口投与
投与容量：１０ｍＬ／ｋｇ
投与用量：１００ｍｇ／ｋｇ
投与回数：１回（カラギーナン投与の１時間前）
投与方法：２．５ｍＬシリンジ（テルモ株式会社製）及びラット用ソフトゾンデを用いて強制経口投与した。

【0063】

［足蹠容積の測定］
カラギーナン惹起前（０時間）及び３時間目、６時間目に、足容積測定装置（プレシスモメーター１０１Ｐ（Ｒ）（室町機械））を用いて、疼痛モデルラットの足蹠容積を計測した。ラット右後肢外側の豆状骨の隆起部にマジックインキで目印を付け、容積測定が一定となるようにした。足容積測定装置の計測槽の目標水面まで蒸留水を入れ、測定者がラットを保定し、測定する足の大腿部を軽く押さえながら、目印が水平となり、且つ目標水面となる位置まで足を入れ、装置に接続されているフットスイッチを用いて足蹠容積を記録した。なお、各足蹠容積の測定は３回実施し、その平均値を求めた。

【0064】

足蹠容積測定値については、各動物個体につき変化量ΔｍＬを以下の計算式により求め、群平均値（ｍｅａｎ）とその標準誤差（ＳＥ）を算出した。
変化量ΔｍＬ＝カラギーナン投与後の各測定時点の値−カラギーナン投与前（０時間）の値

【0065】

［採血及び血漿の採取］
イソフルラン（マイラン製薬株式会社製）による麻酔下の疼痛モデルラットを開腹し、腹部の後大静脈より採血した。採血には、ヘパリンナトリウム（和光純薬工業株式会社）入りの５ｍＬディスポーザブル注射筒及び２２Ｇ注射針を用いた。採取した血液は、遠心器を用いて速やかに血漿を分離し、チューブに分注し、使用時まで凍結保存した。

【0066】

（血漿中のＴＧＦ−β１測定）
血漿中のＴＧＦ−β１の測定は、「ＴＧＦ−β１ Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（Ｒ ＆ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）」を用いて実施した。操作は、キット添付のプロトコールに準じて実施した。

【0067】

（血漿中のＩＬ−１０測定）
血漿中のＩＬ−１０の測定は、「Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ Ｒａｔ ＩＬ−１０（Ｒ ＆ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）」を用いて実施した。操作は、キット添付のプロトコールに準じて実施した。

【0068】

（血漿中のヒアルロン酸濃度の測定）
血漿中のヒアルロン酸濃度の測定は、「Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（生化学バイオビジネス社）」を用いて実施した。

【0069】

［浸出液の採取］
あらかじめ風袋を測定した１５ｍＬの遠心管を準備し、その中に先端を切断した２ｍＬのピペットチップを入れた容器を用意した。骨切剪刀等を用いて、採血が終了した動物の惹起足の踝１ｃｍ上から切断し、重量を測定した。メスを用いて、ラットの足蹠部位の皮膚に大きく縦２箇所、横４箇所の切り込みを加えた。前述の容器の中にこの足皮膚組織をつま先が下になるように入れ、遠心機を用いて３，０００ｒｐｍで１５分間冷却遠心して浸出液を採取した。また、無処置群は左右の後肢から採取した。回収した浸出液の質量は、電子天秤を用いて測定した。質量測定終了後の浸出液に２０ｍＭアスピリン含有生理食塩液１００μＬ、２０ユニット／ｍＬヘパリン含有生理食塩液２５０μＬを加え、遠心後、上澄み液を浸出液試料とした。また、浸出液はチューブに分注した。浸出液試料は液体窒素で凍結し、使用時まで凍結保存した。

【0070】

（浸出液中のＰＧＥ２測定）
浸出液中のＰＧＥ２（ＥＬＩＳＡ）の測定は、「Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２ Ｋｉｔ−Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ、ＡＣＥ社」を用いて実施した。操作は、キット添付のプロトコールに準じて実施した。

【0071】

（浸出液中のブラジキニン測定）
浸出液中のブラジキニンの測定は、「Ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ， ＥＩＡ Ｋｉｔ， Ｈｉｇｈ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ、Ｂａｃｈｅｍ Ａｍｅｒｉｃａｎｓ社」を用いて実施した。操作は、キット添付のプロトコールに準じて実施した。

【0072】

６．１．３．試験結果
［足浮腫］
陰性対照（蒸留水投与群）においては、時間経過とともに足浮腫の増大が認められた（図２参照）。試験液（ヒアルロン酸水溶液）投与群及び陽性対照（イブプロフェン投与群）では、カラギーナン惹起後６時間時点において、陰性対照と比較して浮腫はより軽度であった（図１参照）。

【0073】

［足蹠容積］
陰性対照（蒸留水）群においては、時間経過とともに足蹠容積の増加が認められた（図２参照）。なお、図２において、縦軸は、カラギーナン惹起前の足蹠容積に対する足蹠容積を左後足の足蹠容積変化量として表す。試験液（ヒアルロン酸水溶液）投与群では、カラギーナン惹起後６時間時点において、陰性対照より有意に小さい足蹠容積であった。陽性対照（イブプロフェン投与）群では、カラギーナン惹起後３時間時点及び６時間時点において、陰性対照より有意に小さい足蹠容積であった。

【0074】

［浸出液量］
図３に示されるように、カラギーナン惹起前後の足蹠の浸出液量は、足蹠容積とほぼ同様の傾向を示した。すなわち、陰性対照（蒸留水）群においては、時間経過とともに足蹠の浸出液量の増加が認められた（図３参照）。一方、試験液（ヒアルロン酸水溶液）投与群では、カラギーナン惹起後６時間時点において、陰性対照より足蹠の浸出液量が少なかった。また、陽性対照（イブプロフェン投与）群では、カラギーナン惹起後３時間時点及び６時間時点において、陰性対照より足蹠の浸出液量が有意に少なかった。

【0075】

［血漿中のＴＧＦ−β濃度］
試験液（ヒアルロン酸水溶液）投与群における血漿中のＴＧＦ−βの濃度は、カラギーナン惹起後６時間時点で大きく上昇し、同時間における陽性対照（イブプロフェン）よりも高いＴＧＦ−β濃度であったことが確認された（図４参照）。これに対して、陰性対照（蒸留水投与群）における血漿中のＴＧＦ−βの濃度は、カラギーナン惹起後３時間時点及び６時間時点においてカラギーナン惹起直後とほとんど変化がみられなかった。このように、ヒアルロン酸の経口投与により、血漿中のＴＧＦ−βの産生が促進されたことが確認された。

【0076】

［浸出液中のブラジキニン］
ブラジキニン総量は、陰性対照（蒸留水投与群）においては、時間経過とともに増加が認められた（図５参照）。試験液（ヒアルロン酸水溶液）投与群では、カラギーナン惹起後６時間時点では陰性対照より有意に小さいブラジキニン総量であった。陽性対照（イブプロフェン投与群）では、カラギーナン惹起後３時間時点及び６時間時点で陰性対照より小さい総量（カラギーナン惹起後６時間時点は統計学的に有意）であった。

【0077】

ブラジキニン濃度は、陰性対照においては、時間経過とともに増加が認められた（図６参照）。試験液投与群では、カラギーナン惹起後３時間時点及び６時間時点とも蒸留水群より有意に小さいブラジキニン濃度であり、陽性対照より低いブラジキニン濃度が確認された。陽性対照では、カラギーナン惹起後６時間時点でのみ、陰性対照より有意に小さいブラジキニン濃度が確認された。

【0078】

［浸出液中のＰＧＥ２］
浸出液中のＰＧＥ２総量は、陰性対照（蒸留水投与群）においては、時間経過とともに増加が認められた（図７参照）。試験液（ヒアルロン酸水溶液）投与群では、カラギーナン惹起後６時間時点では、陰性対照より有意に小さいＰＧＥ２総量が確認された。陽性対照（イブプロフェン投与群）では、カラギーナン惹起後３時間時点及び６時間時点で陰性対照より小さいＰＧＥ２総量（６時間時点は統計学的に有意）であった。

【0079】

ＰＧＥ２濃度は、陰性対照においては、惹起直後と惹起後３時間時点では差は認められなかったが、カラギーナン惹起後３時間時点及び６時間時点を比較すると、時間経過とともに増加が認められた（図８参照）。試験液投与群では、カラギーナン惹起後６時間時点では陰性対照より有意に小さい濃度であった。陽性対照では、カラギーナン惹起後３時間時点及び６時間時点で陰性対照より有意に小さいＰＧＥ２濃度であった。

【0080】

［血漿中ヒアルロン酸濃度］
陰性対照（蒸留水投与群）および試験液投与群の血漿中のヒアルロン酸濃度を測定した。血漿中のヒアルロン酸濃度は、カラギーナン惹起前、カラギーナン惹起後６時間及び８時間の時点で測定した。

【0081】

図９に示されるように、陰性対照（蒸留水投与群）および試験液（ヒアルロン酸水溶液）投与群ともに、ヒアルロン酸を４週間連続摂取することによる血漿中のヒアルロン酸濃度の変化はみられなかった（図９左図参照）。また、カラギーナンによる惹起後６時間及び８時間においては、蒸留水投与群および試験液投与群ともに、血漿中のヒアルロン酸濃度の変化が殆どみられなかったことから（図９中央図及び右図参照）、ヒアルロン酸の摂取、非摂取にかかわらず、カラギーナン惹起による血漿中ヒアルロン酸濃度への影響はみられなかったといえる。以上のことから、血漿中のヒアルロン酸は、血漿中のＴＧＦ−β発現促進にあまり関与していないことが推察される。

【0082】

６．１．４．考察
図１に示されるように、試験液（ヒアルロン酸水溶液）の投与により、カラギーナン惹起による足蹠浮腫の抑制が認められた。また、図５，図６，図７及び図８に示されるように、試験液（ヒアルロン酸水溶液）の投与により、足蹠の浸出液におけるブラジキニン及びＰＧＥ２の産生の抑制が認められたことから、足蹠浮腫の抑制は、足蹠におけるブラジキニン産生抑制および該ブラジキニン産生抑制に起因するＰＧＥ２産生抑制に関連した変化と考えられる。

【0083】

特に、足蹠の浸出液におけるブラジキニンの濃度が、試験液（ヒアルロン酸水溶液）投与群において陽性対照（イブプロフェン群）より低値であったことから、ヒアルロン酸の経口投与により、ブラジキニンの産生を効果的に抑制できることが確認された。

【0084】

また、血漿中のＩＬ−１０の上昇は認められなかった。このことから、ヒアルロン酸の経口投与が、ＴＧＦ−βの産生を直接的に抑制したことが示唆される。

【0085】

６．２．実施例２（ＨＴ２９細胞におけるヒアルロン酸のＴＧＦ−β発現促進作用（ｉｎ ｖｉｔｒｏ））
ヒト結腸腺癌由来ＨＴ２９細胞（ＤＳファーマバイオメディカル株式会社から入手）におけるヒアルロン酸のＴＧＦ−β発現促進作用を確認するために、ヒアルロン酸でＨＴ２９細胞を処理した場合におけるＴＧＦ−βのｍＲＮＡ産生量の測定を以下方法にて行った。

【0086】

ヒアルロン酸を培養上清に添加して、１時間後にリポポリサッカライド（ＬＰＳ）を２００ｎｇ／ｍＬの濃度で添加した。２３時間後に細胞のｍＲＮＡを回収して、リアルタイムＰＣＲ機器（Ｍｘ３００５、アジレントテクノロジー株式会社）を用いたＴＧＦ−β１のｍＲＮＡの定量を行った。まず、逆転写によってｍＲＮＡからｃＤＮＡを合成し、ｃＤＮＡを用いてＰＣＲ反応を行った。すなわち、熱変性（９５℃、１０秒）およびアニーリング（６０℃、２０秒）を４０回繰り返す増幅反応を行い、同時にＤＮＡに結合するＣｙｂｒＧｒｅｅｎの蛍光をモニタリングすることによってＤＮＡの増幅を測定し、対照のｍＲＮＡ量を１とした場合の定量を行った。用いたヒトＴＧＦ−β１プライマーはＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ：米国立生物工学情報センター）が公開しているソフトウェアＰｒｉｍｅｒ ＢＬＡＳＴで設計し、その配列は、５’−ＴＴＣＧＣＣＴＴＡＧＣＧＣＣＣＡＣＴＧＣ−３’（Ｆｏｒｗａｒｄ）、５’−ＣＡＧＧＧＣＣＡＧＧＡＣＣＴＴＧＣＴＧＴＡＣＴ−３’（Ｒｅｖｅｒｓｅ）である。ＧＡＰＤＨプライマーはＡｓａｒｉらの文献（Ａｋｉｒａ Ａｓａｒｉ， Ｔｏｍｏｙｕｋｉ Ｋａｎｅｍｉｔｓｕ， Ｈｉｔｈｏｓｈｉ Ｋｕｒｉｈａｒａ， Ｏｒａｌ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｉｇｈ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｗｅｉｇｈｔ Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ （９００ ＫＤａ） Ｃｏｎｔｒｏｌｓ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｖｉａ Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ４ ｉｎ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ）に準じて設計し、その配列は、５’−ＡＣＣＡＣＡＧＴＣＣＡＴＣＡＣ−３’（Ｆｏｒｗａｒｄ）、５’−ＴＣＣＡＣＣＡＣＣＣＴＧＴＴＧＣＴＧＴＡ−３’（Ｒｅｖｅｒｓｅ）である。

【0087】

使用したヒアルロン酸の平均分子量はそれぞれ、８，０００（８ｋ）、５万（５０ｋ）、８０万（８００ｋ）（いずれもキユーピー株式会社製）であり、各ヒアルロン酸を水に溶解させて、各ヒアルロン酸の濃度が０．０１ｍｇ／ｍｌとなるように調製されたヒアルロン酸水溶液を用いた。

【0088】

結果を図１１に示す。なお、図１１において、各ヒアルロン酸で処理した場合のＴＧＦ−β１のｍＲＮＡの産生量は、ヒアルロン酸無添加の場合（対照）のＴＧＦ−β１のｍＲＮＡ産生量に対する相対量として示す。なお、図中のｃｏｎｔｒｏｌ、ＨＡ８ｋ、ＨＡ５０ｋ、ＨＡ８００ｋはそれぞれ、対照、分子量８０００のヒアルロン酸、分子量５万のヒアルロン酸、分子量８０万のヒアルロン酸を意味する。

【0089】

図１１に示されるように、ヒアルロン酸を添加してから２４時間後のＨＴ２９細胞中のＴＧＦ−β１のｍＲＮＡ量は、ヒアルロン酸の分子量が増加するにつれて増加することが確認され、分子量８０万では対照の２．１４倍であった。

【0090】

６．３．実施例３
実施例１で使用したヒアルロン酸（平均分子量９０万のヒアルロン酸）をＴＧＦ−β発現促進経口剤（または痛み物質産生抑制経口剤、あるいは浮腫抑制経口剤）として使用して、内容物が下記の配合であるソフトカプセルを製した。

【0091】

［配合割合］
ＴＧＦ−β発現促進経口剤（実施例１のヒアルロン酸） ２０％
オリーブ油 ５０％
ミツロウ １０％
中鎖脂肪酸トリグリセリド １０％
乳化剤 １０％
――――――――――――――――――――――――――――――――
１００％

【0092】

６．４．実施例４
実施例１で使用したヒアルロン酸（平均分子量９０万のヒアルロン酸）をＴＧＦ−β発現促進経口剤（または痛み物質産生抑制経口剤、あるいは浮腫抑制経口剤）として使用して、下記の配合の散剤（顆粒剤）を製した。

【0093】

［配合割合］
ＴＧＦ−β発現促進経口剤（実施例１のヒアルロン酸） １０％
乳糖 ６０％
トウモロコシデンプン ２５％
ヒプロメロース ５％
――――――――――――――――――――――――――――――――
１００％

【0094】

６．５．実施例５
実施例１で使用したヒアルロン酸（平均分子量９０万のヒアルロン酸）をＴＧＦ−β発現促進経口剤（または痛み物質産生抑制経口剤、あるいは浮腫抑制経口剤）として使用して、下記の配合の錠剤を製した。

【0095】

［配合割合］
ＴＧＦ−β発現促進経口剤（実施例１のヒアルロン酸） ２５％
乳糖 ２４％
結晶セルロース ２０％
トウモロコシデンプン １５％
デキストリン １０％
乳化剤 ５％
二酸化ケイ素 １％
――――――――――――――――――――――――――――――――
１００％

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】