特許 6131500 リスペリドン及びパリペリドンのハプテン

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6131500

(24)【登録日】2017年4月28日

(45)【発行日】2017年5月24日

(54)【発明の名称】リスペリドン及びパリペリドンのハプテン

(51)【国際特許分類】

   C07D 471/04 20060101AFI20170515BHJP

【ＦＩ】

   C07D471/04 117A

   C07D471/04CSP

【請求項の数】29

【全頁数】51

(21)【出願番号】特願2015-528572(P2015-528572)

(86)(22)【出願日】2013年8月20日

(65)【公表番号】特表2015-526470(P2015-526470A)

(43)【公表日】2015年9月10日

(86)【国際出願番号】US2013055729

(87)【国際公開番号】WO2014031601

(87)【国際公開日】20140227

【審査請求日】2016年1月29日

(31)【優先権主張番号】61/691,469

(32)【優先日】2012年8月21日

(33)【優先権主張国】US

(73)【特許権者】

【識別番号】397060175

【氏名又は名称】ヤンセン ファーマシューティカ エヌ．ベー．

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 浩

(74)【代理人】

【識別番号】100093676

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 純子

(74)【代理人】

【識別番号】100120134

【弁理士】

【氏名又は名称】大森 規雄

(74)【代理人】

【識別番号】100153693

【弁理士】

【氏名又は名称】岩田 耕一

(74)【代理人】

【識別番号】100104282

【弁理士】

【氏名又は名称】鈴木 康仁

(72)【発明者】

【氏名】ハスペスラッハ，ピーター リク

(72)【発明者】

【氏名】ブリーゲン，マーティン

(72)【発明者】

【氏名】フライホレンコ，エリック

(72)【発明者】

【氏名】デコリー，トーマス アール．

(72)【発明者】

【氏名】サンカラン，バヌマシ

【審査官】 黒川 美陶

(56)【参考文献】

【文献】 国際公開第２０１１／１１５７３３（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 SERGEEVA, Masha V., et al.，Israel Journal of Chemistry，１９９６年，36，177-183

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｄ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記式Ｉの化合物。

【化1】

（式中、
Ｒ^１は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ^２は、Ｏ（ＣＨ_２）_ｒＮＨ_２、

【化2】

Ｏ（ＣＨ_２）_ｒＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＣＯ_２Ｈ、又はＺ−（Ｙ）_ｐ−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、−Ｎ（Ｒ^４）−、−Ｏ−、−Ｓ−、及び−Ｏ（ＣＨ_２）_ｒＮＨ−からなる群から選択され；
Ｒ^４は、Ｈ、アルキル基、シクロアルキル基、アラルキル基、又は置換若しくは非置換アリール基であり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である。）

【請求項2】

Ｒ^１は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ^２は、Ｏ（ＣＨ_２）_ｒＮＨ_２、

【化3】

Ｏ（ＣＨ_２）_ｒＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＣＯ_２Ｈ、又はＺ−（Ｙ）_ｐ−Ｇであり；
ここで、
ＺはＯであり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である、
請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

Ｒ^１は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ^２は、Ｏ（ＣＨ_２）_ｒＮＨ_２、

【化4】

Ｏ（ＣＨ_２）_ｒＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＣＯ_２Ｈ、又はＺ−（Ｙ）_ｐ−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、Ｏ（ＣＨ_２）_ｒＮＨであり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である、
請求項１に記載の化合物。

【請求項4】

ｐは１であり；
ｒは２であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である、
請求項３に記載の化合物。

【請求項5】

Ｒ^１は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ^２は、Ｏ（ＣＨ_２）_ｒＮＨ_２、

【化5】

又はＯ（ＣＨ_２）_ｒＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ_２）_ｍＣＯ_２Ｈであり；
ここで、
ｒは２であり；
ｍは、１、２、３、又は４であり；
ｎは、１、又は２である、
請求項３に記載の化合物。

【請求項6】

Ｒ^１は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ^２は、Ｏ（ＣＨ_２）_ｒＮＨ_２、又は

【化6】

であり；
ｒは２であり；
ｍは１である、
請求項５に記載の化合物。

【請求項7】

【化7】

からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。

【請求項8】

請求項１に記載の化合物と、免疫原性担体とのコンジュゲート。

【請求項9】

前記免疫原性担体はタンパク質である、請求項８に記載のコンジュゲート。

【請求項10】

前記タンパク質は、キーホールリンペットヘモシアニン、オボアルブミン又はウシサイログロブリンである、請求項９に記載のコンジュゲート。

【請求項11】

請求項２に記載の化合物と、免疫原性担体とのコンジュゲート。

【請求項12】

請求項３に記載の化合物と、免疫原性担体とのコンジュゲート。

【請求項13】

請求項４に記載の化合物と、免疫原性担体とのコンジュゲート。

【請求項14】

請求項５に記載の化合物と、免疫原性担体とのコンジュゲート。

【請求項15】

請求項６に記載の化合物と、免疫原性担体とのコンジュゲート。

【請求項16】

前記化合物は、

【化8】

である、請求項８に記載のコンジュゲート。

【請求項17】

前記免疫原性担体はタンパク質である、請求項１６に記載のコンジュゲート。

【請求項18】

前記タンパク質は、キーホールリンペットヘモシアニン、オボアルブミン又はウシサイログロブリンである、請求項１７に記載のコンジュゲート。

【請求項19】

請求項１に記載の化合物と免疫原性担体とを接触させることを含む、請求項８に記載のコンジュゲートの製造方法。

【請求項20】

請求項２に記載の化合物と免疫原性担体とを接触させることを含む、請求項１１に記載のコンジュゲートの製造方法。

【請求項21】

請求項３に記載の化合物と免疫原性担体とを接触させることを含む、請求項１２に記載のコンジュゲートの製造方法。

【請求項22】

請求項４に記載の化合物と免疫原性担体とを接触させることを含む、請求項１３に記載のコンジュゲートの製造方法。

【請求項23】

請求項５に記載の化合物と免疫原性担体とを接触させることを含む、請求項１４に記載のコンジュゲートの製造方法。

【請求項24】

請求項６に記載の化合物と免疫原性担体とを接触させることを含む、請求項１５に記載のコンジュゲートの製造方法。

【請求項25】

前記免疫原性担体はタンパク質である、請求項１９に記載の方法。

【請求項26】

前記タンパク質は、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシサイログロブリン、又はオボアルブミンである、請求項２５に記載の方法。

【請求項27】

前記化合物は、

【化9】

である、請求項１９に記載の方法。

【請求項28】

前記免疫原性担体はタンパク質である、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記タンパク質は、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシサイログロブリン、又はオボアルブミンである、請求項２８に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１２年８月２１日に出願された米国特許仮出願第６１／６９１，４６９号の出願の優先権の利益を主張する。上述の関連する米国特許出願の全開示は、全ての目的において、本明細書中に参照として組み込まれる。

【0002】

（発明の分野）
本発明は、ヒト体液中のリスペリドン及びパリペリドンの有無を決定するイムノアッセイの分野に関する。

【背景技術】

【0003】

精神分裂病は、世界人口の約０．４５〜１％が罹患する、慢性かつ消耗性の精神疾患である（ｖａｎ Ｏｓ，Ｊ．；Ｋａｐｕｒ，Ｓ．「Ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ」Ｌａｎｃｅｔ ２００９，３７４，６３５〜６４５）。治療の主要な目的は、精神病の症状の寛解の持続性達成、再発の危険性及び影響を削減し、患者機能及び全体的な生活の質を向上することである。精神分裂病の患者の多くは、入手可能な抗精神病薬によって症状の安定を得ることができるが、再発の主な原因は、毎日服用する経口薬の服薬アドヒアランスの欠如である。不遵守の結果を検討するいくつかの研究（Ａｂｄｅｌ−Ｂａｋｉ，Ａ．；Ｏｕｅｌｌｅｔ−Ｐｌａｍｏｎｄｏｎ，Ｃ．；Ｍａｌｌａ，Ａ．「Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｆｉｒｓｔ−Ｅｐｉｓｏｄｅ Ｐｓｙｃｈｏｓｉｓ」Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｆｆｅｃｔｉｖｅ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ２０１２，１３８，Ｓ３〜Ｓ１４）によって、定められたように服薬しない精神分裂病の患者では、再発率、入院率及び自殺率が高く、並びに死亡率が上昇することが示されている。精神分裂病の患者の４０〜７５％は、日常的な経口治療計画の遵守が困難であると見込まれている（Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｊ．Ａ．；Ｓｔｒｏｕｐ，Ｔ．Ｓ．；ＭｃＥｖｏｙ，Ｊ．Ｐ．；Ｓｗａｒｔｚ，Ｍ．Ｓ．；Ｒｏｓｅｎｈｅｃｋ，Ｒ．Ａ．；Ｐｅｒｋｉｎｓ，Ｄ．Ｏ．；Ｋｅｅｆｅ，Ｒ．Ｓ．Ｅ．；Ｄａｖｉｓ，Ｓ．Ｍ．；Ｄａｖｉｓ，Ｃ．Ｅ．；Ｌｅｂｏｗｉｔｚ，Ｂ．Ｄ．；Ｓｅｖｅｒｅ，Ｊ．；Ｈｓｉａｏ，Ｊ．Ｋ．「Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ Ａｎｔｉｐｙｓｃｈｏｔｉｃ Ｄｒｕｇｓ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ」Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２００５，３５３（１２），１２０９〜１２２３）。治療薬物モニタリング（ＴＤＭ）は、治療をモニタリング及び最適化するための、抗精神病薬などの薬物の血清又は血漿濃度を定量化するものである。かかるモニタリングによって、例えば、投薬計画を遵守しない患者、治療用量を達成していない患者、治療用量において非反応である患者、認容性が最適ではない患者、薬物動態学的な薬物−薬物間相互作用を有する患者、又は、不適切な血漿濃度をもたらす異常代謝を呈する患者、の同定が可能となる。患者における抗精神病薬の吸収能力、分配能力、代謝能力、及び排出能力には、大きな個体差がある。かかる違いは、併発症、年齢、併用薬又は遺伝特性によって生じ得る。製剤の違いも、抗精神病薬の代謝に影響を与え得る。ＴＤＭによって、個別の患者において用量の最適化が可能となり、治療転帰及び機能的転帰が改善する。ＴＤＭによって、更に、処方する医師は、定められた服用量の服薬遵守及び有効血清中濃度の達成を確保することができる。

【0004】

今日まで、抗精神病薬の血清及び血漿濃度のレベルを決定する方法は、紫外線検出又は質量分析検出による液体クロマトグラフィ（ＬＣ）、及びラジオイムノアッセイの使用を含む（例えば、以下を参照のこと：Ｗｏｅｓｔｅｎｂｏｒｇｈｓ ｅｔ ａｌ．，１９９０「Ｏｎ ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｓｏｍｅ ｒｅｃｅｎｔｌｙ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ＲＩＡ’ｓ」ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｕｒｖｅｙｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ ２０：２４１〜２４６．Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ，Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ａｎｔｉ−ｉｎｆｅｃｔｉｖｅ Ａｇｅｎｔｓ；Ｈｅｙｋａｎｔｓ ｅｔ ａｌ．，１９９４「Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｒｉｓｐｅｒｉｄｏｎｅ ｉｎ Ｈｕｍａｎｓ：Ａ Ｓｕｍｍａｒｙ」，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ５５／５，ｓｕｐｐｌ：１３〜１７；Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９３「Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｎｏｖｅｌ ａｎｔｉ−ｐｓｙｃｈｏｔｉｃ ａｇｅｎｔ ｒｉｓｐｅｒｉｄｏｎｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｌａｃｔｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｉｎ ｈｅａｌｔｈｙ ｓｕｂｊｅｃｔｓ」，Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ ５４：２５７〜２６８）。ラジオイムノアッセイは、リスペリドン及びパリペリドンのうちの１つ又は両方を検出する。Ｓａｌａｍｏｎｅらの米国特許第８，０８８，５９４号は、リスペリドン及びパリペリドンの両方を検出するが、薬理学的に不活性な代謝産物を検出しない抗体を使用するリスペリドンの競合的イムノアッセイを開示している。競合的イムノアッセイに使用される抗体は、特定の免疫原に対して作製される。ＩＤ Ｌａｂｓ Ｉｎｃ．（Ｌｏｎｄｏｎ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）は、別の抗精神病薬であるオランザピン用のＥＬＩＳＡを販売しているが、これも競合的フォーマットを利用している。この取扱説明書には、このアッセイはスクリーニングを目的として設計されており、科学捜査又は研究における使用を意図し、特に治療用途を意図するものではないことが示されている。この説明書は、全陽性サンプルをガスクロマトグラフィー／質量分析法（ＧＣ−ＭＳ）で確認すべきであることを推奨しており、使用される抗体は、オランザピン及びクロザピンを検出することを示している（ＩＤ Ｌａｂｓ Ｉｎｃ．，「Ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｓ Ｆｏｒ Ｕｓｅ Ｄａｔａ Ｓｈｅｅｔ ＩＤＥＬ−Ｆ０８３」，Ｒｅｖ．Ｄａｔｅ Ａｕｇ．８，２０１１を参照のこと）。これらの方法のうちのいくつか、すなわちＨＰＬＣ及びＧＣ／ＭＳは、高価で労働集約的でありうることから、一般的に、適切な設備を有する大規模又は専門的研究室に限って行われる。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

抗精神病薬のレベルを決定する他の方法、特に処方医の診療所（この場合は、個々の患者の処置をより一層タイミングよく調節することができる）、及びＬＣ又はＧＣ／ＭＳ設備がないか、又は迅速に試験結果を必要とする他の医療機関において実施することができる方法が必要である。

【0006】

リスペリドンは：

【0007】

【化1】

である。

【0008】

パリペリドンは：

【0009】

【化2】

である。

【課題を解決するための手段】

【0010】

本発明は、抗精神病薬であるリスペリドンのレベルを決定するためのそのような改善された方法を可能にする化合物及びコンジュゲートを提供する。

【0011】

本発明は、式Ｉの化合物：

【0012】

【化3】

（式中、
Ｒ¹は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

【0013】

【化4】

Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈ、又はＺ−（Ｙ）_p−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、
−Ｎ（Ｒ⁴）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ヘテロアルキル−、からなる群から選択され；
Ｒ⁴は、Ｈ、アルキル基、シクロアルキル基、アラルキル基又は置換若しくは非置換アリール基であり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）を含む。

【0014】

本発明は、本発明の化合物とタンパク質などの免疫原性担体とのコンジュゲート、及び本発明の化合物と免疫原性担体とを接触させるプロセスによって生成された生成物、を含む。

【図面の簡単な説明】

【0015】

【図1】ハイブリドーマ５−９から得られた競合的ＥＬＩＳＡの結果を示しており。

【図2】ハイブリドーマ５−９から得られた競合的ＥＬＩＳＡの結果を示しており。

【図3】リスペリドンクローン２Ａ５から得られた競合的ＥＬＩＳＡの結果を示しており。

【図4】ラテラルフローアッセイデバイスで使用される競合的イムノアッセイフォーマットを示しており。

【図5】リスペリドンクローン５−９から得られた典型的な用量反応曲線を示している。

【発明を実施するための形態】

【0016】

本発明は、抗精神病薬のレベルの決定を可能にする化合物及びコンジュゲートを提供する。かかる方法によって、臨床医は、診察の際に、患者の症状悪化の原因が、服薬アドヒアランスの欠如でありうる可能性がどの程度かを客観的に評価することが可能となる。あるいは、遵守されている場合には、臨床医は異なる治療を選択することができる。かかる方法によって可能となる治療薬物モニタリングは、最も有効な治療選択肢を特定する上で鍵となる。更には、臨床医は、かかるＴＤＭは、患者との関係が全く異なったものに移行する、すなわち、治療を遵守していないのではないかという仮定的な議論から、治療計画を最適化するうえで患者に積極的に主導権をもたせることによって、より協力的な関係へと移行するのに役立つと考える。

【0017】

この方法の開発には、タンパク質と連結する合成ハプテンを含む、いくつかの免疫原の合成が第一に必要である。ハプテンは、タンパク質などの大きな担体に結合すると、免疫応答を誘発することができる低分子である。ハプテンは、その大部分が低分子量であって、タンパク質を含まない物質であり、単独では抗体形成を刺激することはできないが、抗体と反応する。ハプテン−タンパク質コンジュゲートは、抗体の生成を刺激することができる。低分子に対して特異的な抗体の産生は、イムノアッセイの開発において有用である（Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．１９９２，９（１１）：１３７５〜９，Ａｎｎａｌｉ Ｄｅｌｌ'Ｉｓｔｉｔｕｔｏ Ｓｕｐｅｒｉｏｒｅ ｄｉ Ｓａｎｉｔａ．１９９１，２７（１）：１６７〜７４，Ａｎｎａｌｉ Ｄｅｌｌ’Ｉｓｔｉｔｕｔｏ Ｓｕｐｅｒｉｏｒｅ ｄｉ Ｓａｎｉｔａ．１９９１，２７（１）：１４９〜５４，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ．１９９１，２８（１）：７９〜８３）。

【0018】

本発明は、式Ｉの化合物：

【0019】

【化5】

（式中、
Ｒ¹は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

【0020】

【化6】

Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈ、又はＺ−（Ｙ）_p−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、
−Ｎ（Ｒ⁴）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ヘテロアルキル−、からなる群から選択され；
Ｒ⁴は、Ｈ、アルキル基、シクロアルキル基、アラルキル基又は置換若しくは非置換アリール基であり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）を含む。

【0021】

本発明は、式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ¹は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

【0022】

【化7】

Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈ、又はＺ−（Ｙ）_p−Ｇであり；
ここで、
ＺはＯであり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）を含む。

【0023】

本発明は、式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ¹は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

【0024】

【化8】

Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈ、又はＺ−（Ｙ）_p−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨであり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）を含む。

【0025】

本発明は、式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ¹は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

【0026】

【化9】

Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈ、又はＺ−（Ｙ）_p−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨであり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは１であり；
ｒは２であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）を含む。

【0027】

本発明は、式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ¹は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

【0028】

【化10】

又は
Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈであり；
ここで、
ｒは２であり；
ｍは、１、２、３、又は４であり；
ｎは、１、又は２である）を含む。

【0029】

本発明の別の実施形態では：
Ｒ¹は、Ｈ、又はＯＨ；及び
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、又は

【0030】

【化11】

であり；
ここで、ｒは２であり；
ｍは、１である。

【0031】

本発明の別の実施形態は、以下の化合物である：

【0032】

【化12】

【0033】

本発明は、上述の化合物と免疫原性担体とのコンジュゲート、上述の化合物とタンパク質とのコンジュゲート及び上述の化合物とキーホールリンペットヘモシアニン、オボアルブミン、及びウシサイログロブリンであるタンパク質とのコンジュゲート、並びに、本発明の化合物と免疫原性担体とを接触させるプロセスによって生成される生成物を更に提供する。

【0034】

本発明の式Ｉの化合物：

【0035】

【化13】

（式中、
Ｒ¹は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

【0036】

【化14】

Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈ、又はＺ−（Ｙ）_p−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、
−Ｎ（Ｒ⁴）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ヘテロアルキル−、からなる群から選択され；
Ｒ⁴は、Ｈ、アルキル基、シクロアルキル基、アラルキル基又は置換若しくは非置換アリール基であり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）と、免疫原性担体とのコンジュゲートを含む。

【0037】

本発明の式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ¹は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

【0038】

【化15】

Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈ、又はＺ−（Ｙ）_p−Ｇであり；
ここで、
ＺはＯであり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）と、免疫原性担体とのコンジュゲートを含む。

【0039】

本発明の式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ¹は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

【0040】

【化16】

Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈ、又はＺ−（Ｙ）_p−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨであり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）と、免疫原性担体とのコンジュゲートを含む。

【0041】

本発明の式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ¹は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

【0042】

【化17】

Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈ、又はＺ−（Ｙ）_p−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨであり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは１であり；
ｒは２であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）のコンジュゲートを含む。

【0043】

本発明の式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ¹は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

【0044】

【化18】

又は
Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈであり；
ここで、
ｒは２であり；
ｍは、１、２、３、又は４であり；
ｎは１、又は２である）と、免疫原性担体とのコンジュゲートを含む。

【0045】

本発明の式Ｉの化合物：
Ｒ¹は、Ｈ、又はＯＨ；及び
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、又は

【0046】

【化19】

であり；
ここで、ｒは２であり；
ｍは１である）と、免疫原性担体とのコンジュゲートを含む。
本発明の式Ｉの化合物：

【0047】

【化20】

と、免疫原性担体とのコンジュゲートを含む。

【0048】

本発明の別の実施形態は、上述の式Ｉの化合物のいずれかとタンパク質とのコンジュゲートである。

【0049】

本発明の別の実施形態は、上述の式Ｉの化合物とタンパク質とのコンジュゲートであり、このタンパク質は、キーホールリンペットヘモシアニン、オボアルブミン、又はウシサイログロブリンである。

【0050】

本発明はまた、上述の化合物と免疫原性担体とを接触させるプロセスから生成される生成物を提供する。

【0051】

したがって、本発明の別の実施形態は、以下の式Ｉの化合物：

【0052】

【化21】

（式中、
Ｒ¹は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

【0053】

【化22】

Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈ、又はＺ−（Ｙ）_p−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、
−Ｎ（Ｒ⁴）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ヘテロアルキル−、からなる群から選択され；
Ｒ⁴は、Ｈ、アルキル基、シクロアルキル基、アラルキル基又は置換若しくは非置換アリール基であり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）と、免疫原性担体とを接触させるプロセスによって生成される生成物である。

【0054】

本発明の別の実施形態は、以下の式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ¹は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

【0055】

【化23】

Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈ、又はＺ−（Ｙ）_p−Ｇであり；
ここで、
ＺはＯであり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）と、免疫原性担体とを接触させるプロセスによって生成される生成物である。

【0056】

本発明の別の実施形態は、以下の式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ¹は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

【0057】

【化24】

Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈ、又はＺ−（Ｙ）_p−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨであり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは０、又は１であり；
ｒは１、２、３、４、又は５であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）と、免疫原性担体とを接触させるプロセスによって生成される生成物である。

【0058】

本発明の別の実施形態は、以下の式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ¹は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

【0059】

【化25】

Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈ、又はＺ−（Ｙ）_p−Ｇであり；
ここで、
Ｚは、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨであり；
Ｙは有機スペーサ基であり；
Ｇは、担体と結合することができる官能性連結基であり；
ｐは１であり；
ｒは２であり；
ｍは１、２、３、４、又は５であり；
ｎは１、２、３、４、又は５である）と、免疫原性担体とを接触させるプロセスによって生成される生成物である。

【0060】

本発明の別の実施形態は、以下の式Ｉの化合物：
（式中、
Ｒ¹は、Ｈ、又はＯＨであり；
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、

【0061】

【化26】

又は
Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ₂）_mＣＯ₂Ｈであり；
ここで、
ｒは２であり；
ｍは、１、２、３、又は４であり；
ｎは１、又は２である）と、免疫原性担体とを接触させるプロセスによって生成される生成物である。

【0062】

本発明の別の実施形態は、以下の式Ｉの化合物：
Ｒ¹は、Ｈ、又はＯＨ；及び
Ｒ²は、Ｏ（ＣＨ₂）_rＮＨ₂、又は

【0063】

【化27】

であり；
ここで、ｒは２であり；
ｍは１である）と、免疫原性担体とを接触させるプロセスによって生成される生成物である。

【0064】

本発明の別の実施形態は、以下の化合物である：

【0065】

【化28】

と、免疫原性担体との接触である。

【0066】

本発明の好ましい実施形態は、上述の式Ｉの化合物のいずれかとタンパク質である免疫原性担体とを接触させるプロセスによって生成される生成物である。

【0067】

本発明のより好ましい実施形態は、上述の式Ｉの化合物のいずれかと免疫原性担体とを接触させるプロセスによって生成される生成物であって、ここで、タンパク質はキーホールリンペットヘモシアニン、ウシサイログロブリン又はオボアルブミンである。

【0068】

略語
本明細書中及び本出願を通して、以下の略語が使用され得る。

【0069】

【表1】

【0070】

定義
用語「コンジュゲート」は、個別の部分が一緒に結合することで形成される任意の物質を指す。本発明による代表的なコンジュゲートとしては、式Ｉの化合物などの低分子と、担体又はポリアミンポリマー（特にタンパク質）などの高分子とを一緒に結合することで形成されるものが挙げられる。コンジュゲートにおいて、低分子は、高分子上の１つ以上の活性部位に結合し得る。

【0071】

用語「ハプテン」は、部分的又は不完全な抗原を指す。ハプテンは、タンパク質非含有物質であり、抗体形成を刺激することはできないが、抗体と反応する。抗体は、ハプテンと高分子量の免疫原性担体とをカップリングした後、このカップリングした生成物（すなわち、免疫原）をヒト又は動物被検体に注射することで形成される。

【0072】

用語「免疫原」は、生物において免疫応答を誘発、生成、又は産生させることができる物質を指す。

【0073】

本明細書で使用するとき、「免疫原性担体」は、ハプテンと１つ以上の位置で結合することによって、これらのハプテンに特異的に結合し得る抗体を生成できる、一般的にはタンパク質である免疫原性物質である。免疫原性担体物質の例としては、限定されないが、異物であると認識され、それによって宿主の免疫応答を誘発する、タンパク質、糖タンパク質、ポリアミノ−多糖類複合体、粒子、及び核酸が挙げられる。ポリアミノ−多糖類は、本調製においては従来の既知の任意の手段を使用して、多糖類から調製され得る。

【0074】

免疫原性担体として、アルブミン、血清タンパク質、リポタンパク質などの様々な種類のタンパク質を用い得るが、これらに限定されない。タンパク質の実例としては、ウシ血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、卵オボアルボミン、ウシサイログロブリン、フラクションＶヒト血清アルブミン、ウサギアルブミン、パンプキンシードグロブリン、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、ボツリヌス毒素、サクシニル化タンパク質、及びポリリジンなどの合成ポリ（アミノ酸）が挙げられる。

【0075】

免疫原性担体はまた、単糖類の縮合を繰り返すことによって構築される高分子量ポリマーであるポリアミノ−多糖類も含み得る。多糖類の例は、デンプン、グリコーゲン、セルロース、アラビアゴムなどの炭水化物ガム、寒天などである。多糖類は、ポリ（アミノ酸）残基及び／又は脂質残基も含む。

【0076】

免疫原性担体は、ポリ（核酸）単体でありうるか、又は、上述のポリ（アミノ酸）又は多糖類のどちらか１つとコンジュゲートされていてもよい。

【0077】

免疫原性担体は、固体粒子を含んでもよい。粒子の直径は、一般的には少なくとも約０．０２マイクロメートル（μｍ）かつ約１００μｍ以下であり、通常約０．０５μｍ〜１０μｍである。粒子は、有機又は無機、膨潤性又は非膨潤性で、多孔質又は非孔質、最適には水に近い密度、一般的には約０．７〜１．５ｇ／ｍＬの粒子でありえて、透明であるか、部分的に透明又は不透明であり得る材料から構成されうる。粒子は、限定されないが、赤血球、白血球、血小板、ハイブリドーマ、連鎖球菌、黄色ブドウ球菌、大腸菌、及びウィルスのような細胞及び微生物などの生体物質であり得る。粒子は、有機又は無機ポリマー、リポソーム、ラテックス、リン脂質小胞、又はリポタンパク質からもなり得る。

【0078】

用語「誘導体」は、１つ以上の化学反応により親化合物から作製される化合物又は分子を指す。

【0079】

化合物の「類似体」という用語は、炭素原子の鎖及び参照化合物と同じ特定の官能基を含有する化合物を指すが、類似体の炭素鎖は、参照化合物の炭素鎖よりも長いか、又は短い。

【0080】

「標識」「検出分子」、又は「リポーター」は、検出可能なシグナルを生成するか、生成するのを誘導され得る。「標識」は、検体、免疫原、抗体、又はリガンド（特にハプテン又は抗体）などの受容体と結合し得る受容体又は分子などの別の分子とコンジュゲートされ得る。標識の非限定的な例としては、放射能アイソトープ（例えば、１２５Ｉ）、酵素（例えば、β−ガラクトシダーゼ、ペルオキシダーゼ）、酵素フラグメント、酵素基質、酵素インヒビター、コエンザイム、触媒、蛍光物質（例えば、ローダミン、フルオレセインイソチオシアネート又はＦＩＴＣ、又はＤｙｌｉｇｈｔ ６４９）、染料、化学発光物質及び発光物質（例えば、ジオキセタン、ルシフェリン）、又は増感剤が挙げられる。

【0081】

本明細書で使用するとき、「スペーサ」は、ハプテン、担体、免疫原、標識又は結合パートナーなどの下部構造のうちの２つ以上と、官能性連結基を介して連結する化学構造の一部分を指す。これらのスペーサは、典型的に有機化合物中で見られるような形で典型的に存在して組み立てられる原子によって構成されるため、「有機スペーシング基」とも称される。スペーサを組み立てるのに使用される化学的なビルディングブロックは、本出願中、以下で記載されるであろう。その中で、好ましいスペーサは、直鎖状又は分枝状の飽和又は不飽和の炭素鎖である。これらの炭素鎖は、鎖内に１つ以上のヘテロ原子を含んでもよく、１つ以上のヘテロ原子は、鎖中又は鎖の末端の任意の炭素原子における１つ以上の水素原子と代わる。「ヘテロ原子」は、酸素、窒素、リン及び硫黄からなる群から選択される、炭素以外の原子を意味しており、窒素、リン及び硫黄は、任意の酸化状態で存在してよく、炭素又は他のヘテロ原子が結合していてもよい。スペーサは、鎖の一部分として、又は鎖中の原子の１つにおける置換体として、環式基又は芳香族基を含んでもよい。

【0082】

スペーシング基中の原子数は、水素以外の原子を計数することで決定される。スペーシング基内の鎖中の原子数は、連結される下部構造間の最短ルートに沿った水素以外の原子数を計数することで決定される。好ましい鎖長は、１〜２０原子である。

【0083】

「官能性連結基」は、ハプテン上に存在する反応基を指し、ハプテンと別の部分（標識又は担体など）とのコンジュゲートを生成するための共有化学結合を形成することで、ハプテン部分が別の部分と連結され得る使用可能な反応部位を提供するのに使用され得る。ハプテンは、このようにしてビオチンなどの部分と連結し、ハプテンの競合的結合パートナーを形成し得る。

【0084】

スペーサ基は、ハプテンを担体に結合させるのに使用され得る。スペーサの長さが異なることによって、抗体形成プロセスが最適となるように免疫される動物又はヒトの免疫系に提示されるように、担体から異なる距離でハプテンを結合させることが可能となる。ハプテン分子中の異なる位置で結合することで、ハプテン上の特異的部位を免疫系に提示する機会が与えられ、抗体認識に影響を及ぼす。スペーサは、水性媒体中でより可溶性が高いハプテン誘導体を作成するために、親水性可溶化基を含有し得る。親水性可溶化基の例としては、ポリオキシアルキルオキシ基、例えば、ポリエチレングリコール鎖、ヒドロキシル基、カルボキシレート基及びスルホネート基が挙げられるが、これらに限定されない。

【0085】

用語「求核基」又は「求核剤」は、反応において化学結合を形成する電子対を供与する種を指す。用語「求電子基」又は「求電子物質」は、反応において化学結合を形成する電子対を受容する種を指す。

【0086】

用語「置換された」は、親分子上の任意の位置で炭素原子上の水素原子の代わりに原子又は原子基が置換されることを指す。置換基の非限定的な例としては、ハロゲン原子、アミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、アルキル、アリール、ヘテロアルキル、ヘテロアリール、シアノ、アルコキシ、ニトロ、アルデヒド及びケトン基が挙げられる。

【0087】

用語「アルキル」は、別途記載のない限り、最大で１２個の炭素原子の直鎖状及び分枝鎖状ラジカルの両方を指し、特に、任意の度合い又はレベルの飽和を有するラジカルを含むことを意図している。アルキルとしては、限定されないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、オクチル、２，２，４−トリメチルペンチル、ノニル、デシル、ウンデシル及びドデシルが挙げられる。用語「シクロアルキル」は、３〜１０個の炭素原子から構成される、飽和又は部分的に飽和された単環式又は二環式の炭化水素環ラジカルを指す。アルキル置換基は、環上に任意で存在し得る。例としては、シクロプロピル、１，１−ジメチルシクロブチル、１，２，３−トリメチルシクロペンチル、シクロヘキシル及びシクロヘキセニルが挙げられる。

【0088】

用語「へテロ原子」は、任意の許容された酸化状態で存在しうる窒素原子、酸素原子、リン原子又は硫黄原子を指す。

【0089】

用語「ヘテロアルキル」は、鎖内に１つ以上のヘテロ原子を含むアルキル基を指し、１つ以上のヘテロ原子は、鎖中又は鎖の末端の任意の炭素原子における１つ以上の水素原子と代わる。

【0090】

用語「ヘテロシクリル」は、３〜７個の炭素原子、及びＮ、Ｏ又はＳから選択される少なくとも１つのヘテロ原子から構成される非芳香族（すなわち、飽和又は不飽和）環を指す。アルキル置換基は、環上に任意で存在し得る。例としては、テトラヒドロフリル、ジヒドロピラニル、ピペリジル、２，５−ジメチルピペリジル、モルホリニル、ピペラジニル、チオモルホリニル、ピロリジニル、ピロリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、イミダゾリジニル及びイミダゾリニルが挙げられる。

【0091】

用語「ヒドロキシアルキル」は、アルキル鎖に沿った任意の炭素原子と結合する少なくとも１つのヒドロキシル基を指す。

【0092】

用語「アミノアルキル」は、アルキル鎖に沿った任意の炭素原子と結合する少なくとも１つの第一級又は第二級アミノ基を指す。

【0093】

用語「アルコキシアルキル」は、アルキル鎖に沿った任意の炭素原子と結合する少なくとも１つのアルコキシ基を指す。

【0094】

用語「ポリアルコキシアルキル」は、長鎖アルコキシ化合物を指し、及び単一分子量（discreet）又は単分散サイズのポリエチレングリコールを含む。

【0095】

用語「チオアルキルは」、アルキル鎖に沿った任意の炭素原子と結合する少なくとも１つの硫黄基を指す。硫黄基は、任意の酸化状態であってよく、スルホキシド、スルホン及びサルフェートを含む。

【0096】

用語「カルボキシアルキル」は、アルキル鎖に沿った任意の炭素原子と結合する少なくとも１つのカルボキシレート基を指す。用語「カルボキシレート基」としては、カルボン酸及びアルキル、シクロアルキル、アリール又はアラルキルカルボキシレートエステルが挙げられる。

【0097】

用語「アルキルカルボニル」は、アルキル鎖に沿った任意の炭素原子と結合するカルボニル基を有する基を指す。

【0098】

用語「ヘテロアリール」は、５〜７員の単環式、又は８〜１０員の二環式芳香環ラジカルを指し、これらの環はいずれも、Ｎ、Ｏ、又はＳから選択される１〜４個のヘテロ原子からなり、窒素及び硫黄原子は、許容される任意の酸化状態で存在し得る。例としては、ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、ベンズオキサゾリル、フリル、イミダゾリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、オキサゾリル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリル、キノリニル、チアゾリル及びチエニルが挙げられる。

【0099】

用語「ヘテロアルキル」は、ヘテロアリール置換基を有するＣ_1〜6アルキル基を指す。例として、フリルエチル及び２−キノリニルプロピルが挙げられる。

【0100】

用語「アルコキシ」は、別途記載のない限り、酸素原子と結合する最大で１２個の炭素原子の直鎖状又は分枝鎖状ラジカルを指す。例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ及びブトキシが挙げられる。

【0101】

用語「アリール」は、環中に６〜１２個の炭素を含有する単環式又は二環式の芳香環ラジカルを指す。アルキル置換基は、環上に任意で存在し得る。例としては、フェニル、ビフェニル及びナフタレンが挙げられる。

【0102】

用語「アラルキル」は、アリール置換基を含有するＣ_1〜6アルキル基を指す。例として、ベンジル、フェニルエチル又は２−ナフチルメチルが挙げられる。

【0103】

用語「ヘテロアルキル」は、ヘテロアリール置換基を含有するＣ_1〜6アルキル基を指す。例としては。フリルメチル及びピリジルプロピルが挙げられる。

【0104】

用語「アリールオキシ」は、アリール置換基と結合する酸素原子を指す。例としては、フェノキシ及びベンジルオキシが挙げられる。

【0105】

用語「アリールアルコキシ」は、アリール置換基に結合するアルコキシ基を指す。例としては、フェニルメチルエーテルが挙げられる。

【0106】

用語「アシル」は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ_aを指し、式中、Ｒ_aは、アルキル、アリール、ヘテロアリール及びヘテロアラルキルである。「アシル化剤」は、分子に、−Ｃ（Ｏ）Ｒ_a基を付加する。

【0107】

用語「スルホニル」は、−Ｓ（Ｏ）₂Ｒ_aを指し、Ｒ_aは、水素、アルキル、シクロアルキル、ハロアルキル、アリール、ヘテロアリール及びヘテロアラルキルである。「スルホニル化剤」は、分子に、−Ｓ（Ｏ）₂Ｒ_aを付加する。

【0108】

ハプテンの担体部分への結合において、反応性官能性連結基を担持するスペーサは、様々な方法によって調製され得る。スペーサは、いずれかの末端の基によって異なるように官能化されるか又は活性化され、これによってハプテン及び担体と選択的に連続反応することができる基を用いて形成されうるが、両端で同じ反応部分を使用してもよい。ハプテンと、担体に結合する官能性連結基との反応において選択される基は、ハプテンと、ハプテンが結合する担体における官能基の種類によって決定される。スペーサ並びにハプテン及び担体との結合方法は、Ｂｒｉｎｋｌｅｙ，Ｍ．，Ａ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１９９２，３：２〜１３，Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇｒｅｇ Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ，．２００８及びＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｈａｎｄｂｏｏｋ；（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ３７４７ Ｎ Ｍｅｒｉｄｉａｎ Ｒｄ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ ＵＳＡ ６１１０１，ｐｈ ８００−８７４−３７２３又は：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｉｅｒｃｅｎｅｔ．ｃｏｍ／からのダウンロード又は印刷出力から入手可能）、及びその参考文献に記載されるものを含むが、これらに限定されない。スペーサ基の形成において、異なるように活性化される多くの分子は、例えば、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃなどの供給メーカーから市販されている。

【0109】

アミノ基を担持するハプテンにおいて、スペーサとハプテンとの結合様式は、ハプテン上のアミンと、ハロゲン化アシル又は活性エステルを担持するスペーサビルディングブロックとの反応を含む。「活性エステル」は、安定した結合を形成する穏やかな条件下で、例えばアミノ基のような求核基と反応するエステルとして定義される。安定した結合は、例えば、後に続く合成工程のような更なる使用条件、免疫原としての使用、又は生化学アッセイにおいて損傷を受けない結合として定義される。安定した結合の好ましい例は、アミド結合である。活性エステル及び形成方法は、Ｂｅｎｏｉｔｏｎ，Ｎ．Ｌ．によって、Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｔｈｉｅｍｅ Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｖｏｌ Ｅ２２ ｓｅｃｔｉｏｎ ３．２：４４３ ａｎｄ Ｂｅｎｏｉｔｏｎ，Ｎ．Ｌ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔａｙｌｏｒ ａｎｄ Ｆｒａｎｃｉｓ，ＮＹ，２００６に記載されている。好ましい活性エステルとしては、ｐ−ニトロフェニルエステル（ＰＮＰ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）及びテトラフルオロフェニルエステル（ＴＦＰ）が挙げられる。ハロゲン化アシルは、例えば、カルボン酸と塩化チオニル又は塩化オキサリルとの反応（Ｆｉｅｓｅｒ，Ｌ．Ｆ．ａｎｄ Ｆｉｅｓｅｒ，Ｍ．Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，１９６７及びこの参考文献を参照のこと）のような、当業者に既知の多くの方法によって調製され得る。これらは、ＷｕらによるＯｒｇａｎｉｃ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００４，６（２４）：４４０７に記載されるように、活性二官能性スペーサにおいても使用され得るｐ−ニトロフェニルエステル（ＰＮＰ）などの他の活性エステルに変換され得る。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステルは、国際特許第２０１２０１２５９５号の実施例３５に記載されるように、無水条件下で、非プロトン性溶媒中トリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミンなどの有機塩基の存在下で、炭酸Ｎ，Ｎ−ジスクシンイミジル（ＣＡＳ ７４１２４−７９−１）と化合物のカルボン酸との反応によって、又は、無水条件下で、Ｎ−ヒドロスクシンイミド及びジシクロヘキシカルボジイミド（ＤＣＣ）又は他の脱水剤を使用することで調製され得る。テトラフルオロフェニルエステル（ＴＦＰ）は、ＷｉｌｂｕｒらによってＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，２００４，１５（１）：２０３で報告されるように、無水条件下で、非プロトン性溶媒中、トリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミンなどの有機塩基の存在下で、カルボン酸と２，３，５，６−テトラフルオロフェニルトリフルオロ酢酸塩との反応により調製され得る。当業者は、表１に示されるスペーサは、特に、既知の方法を使用して得られ、反応条件のルーチンの最適化を用いてアミノ担持ハプテンと結合することができることを認識するであろう。これらのスペーサによって、ハプテンと担体上のチオール基の結合が可能となる。

【0110】

【表2】

【0111】

カップリング剤の存在下、ハプテン上のアミンとスペーサビルディングブロック上のカルボン酸官能基との直接的なカップリングは、１つの結合様式としても使用され得る。好ましい試薬は、典型的にはペプチド合成に使用される試薬である。ペプチドカップリング試薬としては、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ，ＣＡＳ ＃１２５７００−６７−６）（Ｐｒｕｈｓ，Ｓ．，Ｏｒｇ．Ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．２００６，１０：４４１を参照のこと）；カルボジイミド脱水剤を含むＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ，ＣＡＳ ＃２５９２−９５−２）（例えば、Ｎ−Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、又は１−エチル−３（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ））（Ｋｏｎｉｇ Ｗ．，Ｇｅｉｇｅｒ，Ｒ．Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，１９７０，１０３（３）：７８８を参照のこと）；３−（ジエトキシホスホリルオキシ）−１，２，３−ベンゾトラジン−４（３Ｈ）−オン（ＤＥＰＢＴ，ＣＡＳ＃１６５５３４−４３−０）（Ｌｉｕ，Ｈ．ｅｔ．ａｌ．，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００２，１３（７）：６０１を参照のこと）；ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド；ＢＯＰ−Ｃｌ（ＣＡＳ ＃６８６４１−４９−６）（Ｄｉａｇｏ−Ｍｅｓｅｇｕｅｒ，Ｊ，ｅｔ．ａｌ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９８０，７：５４７〜５１を参照のこと）、及び他の、ＢｅｎｏｉｔｏｎｂによってＣｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，２００５，Ｃｈａｐｔｅｒ ２に詳しく記載されており、技術告知は、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ （ａａｐｐｔｅｃ），６３０９ Ｓｈｅｐａｒｄｓｖｉｌｌｅ Ｒｄ．，Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ ＫＹ ４０２２８，ｐｈ ８８８ ６９２ ９１１１；ｗｗｗ．ａａｐｐｔｅｃ．ｃｏｍ，によって提供されるもの、及びこれらの参考文献が挙げられるが、限定されない。これらの方法は、ハプテンをスペーサに結合させる安定なアミド結合を生成する。既知の方法を使用して得られ、上述及び引用される方法を用いて反応条件のルーチンの最適化を利用してアミノ担持ハプテンに結合され得るスペーサの例を表２に示すが、表２に示されるものに限定されない。これらのスペーサによって、ハプテンと担体上のチオール基の結合が可能となる。

【0112】

【表3】

【0113】

スペーサはまた、担体への結合が可能である官能性連結基の形成工程などの、適切な化学基がハプテンに連続的に結合することによる、段階的な様式で構成され得る。以下の一般的な反応スキームにおいて実例を参照のこと。

【0114】

更に、ハプテンが、例えば、チオール基、アミノ基又はヒドロキシル基のような、スペーサとの結合位置になる求核基を有する際、スペーサは、チオール、アミン又はヒドロキシル基のアルキル化によっても構成され得る。アルキルハライド、又はスルホン酸エステル（ｐ−トルエンスルホネートなど）のような、置換反応を受けることができる部分で適切に置換される任意のアルキル基は、スペーサを結合させるのに使用され得る。アルキル化反応の多くの例が当業者に既知であって、具体例は、一般的な化学文献中で見出され、ルーチンな実験を通して最適化され得る。多くの参考文献におけるアルキル化反応の議論は、Ｍａｒｃｈ'ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．，ａｎｄ Ｍａｒｃｈ，Ｊ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．ＮＹ，２００１のチャプター１０で見出すことができる。ハプテン上の例えばアミンのような求核部分とイソシアネートとの反応による尿素の形成、又はイソチオシアネートとの反応によるチオ尿素結合の形成などの他の結合も用いられ得る（Ｌｉ，Ｚ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ，Ｓｕｌｆｕｒ ａｎｄ Ｓｉｌｉｃｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，２００３，１７８（２）：２９３〜２９７を参照のこと）。イソシアネート基との反応を介して、ヒドロキシル基を担持するハプテンにスペーサを結合させて、カルバメート又はウレタン結合を形成してもよい。スペーサは、一方の末端上のイソシアネート官能基、及び担体と反応することができる官能性連結基によって異なるように活性化され得る（Ａｎｎｕｎｚｉａｔｏ，Ｍ．Ｅ．，Ｐａｔｅｌ，Ｕ．Ｓ．，Ｒａｎａｄｅ，Ｍ．ａｎｄ Ｐａｌｕｍｂｏ，Ｐ．Ｓ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，１９９３，４：２１２〜２１８を参照のこと）。

【0115】

カルボン酸基を担持するハプテンにおいて、ハプテンへのスペーサ部分の結合様式には、その調製が前述されているハロゲン化アシル又は活性エステル（その例を表３で示す）としてのカルボン酸基の活性化の後に、スペーサ部分上のアミノ（−ＮＨ₂−）、ヒドラジノ（−ＮＨ−ＮＨ₂−）、ヒドラジド（−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ₂−）もしくはヒドロキシル基（−ＯＨ）との反応によるアミド、ヒドラジド、ジアシルヒドラジンもしくはエステル結合の形成、またはカルボン酸基とスペーサ部分上のアミノ基との直接カップリング、又は前述のペプチドカップリング試薬及び／又はカルボジイミド脱水試薬（その例を表４及び５で示す）による担体との直接カップリングが挙げられる。活性化エステルの形成及びペプチドカップリング剤の使用に関して上記で引用された参考文献で見られる手順は、反応条件のルーチンの最適化を用いて、カルボン酸担持ハプテンをスペーサビルディングブロック及び利用可能なアミノ基を含むタンパク質担体に結合させるために使用され得る。

【0116】

【表4】

【0117】

【表5】

【0118】

【表6】

【0119】

スペーサと結合させるために、他の求電子基、例えばハロゲン化スルホニル

【0120】

【化29】

又は求電子亜リン酸基、例えば：

【0121】

【化30】

【0122】

（Ｍａｌａｃｈｏｗｓｋｉ，Ｗｉｌｌｉａｍ Ｐ．，Ｃｏｗａｒｄ，Ｊａｍｅｓ Ｋ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９４，５９（２５）：７６１６を参照のこと）
又は：

【0123】

【化31】

Ｒ_cはアルキル、シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキルである求電子基がハプテン上に存在してもよい。

【0124】

Ａｌｉｏｕａｎｅ，Ｌ．，ｅｔ．ａｌ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０１１，５２（２８）：８６８１を参照のこと。

【0125】

アルデヒド基又はケトン基を担持するハプテンは、限定されないが、スペーサ上のヒドラジド基Ｈ₂Ｎ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−との反応によるアシルヒドラゾンの形成を含む方法を使用してスペーサに結合され得る（Ｃｈａｍｏｗ，Ｓ．Ｍ．，Ｋｏｇａｎ，Ｔ．Ｐ．，Ｐｅｅｒｓ，Ｄ．Ｈ．，Ｈａｓｔｉｎｇｓ，Ｒ．Ｃ．，Ｂｙｒｎ，Ｒ．Ａ．ａｎｄ Ａｓｋｅｎａｓｚｉ，Ａ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９２，２６７（２２）：１５９１６を参照のこと）。担体上でチオール基と結合することが可能な二官能性ヒドラジドスペーサの例が表６で示されている。

【0126】

【表7】

【0127】

ハプテンは、担体がチオールと反応しうる基を提供するように修飾されている場合には、担体と反応し得るチオール基を含有していてもよい。担体基は、担体上におけるアミノ基とマレイミド酢酸Ｎ−スクシンイミジル（ＡＭＡＳ，ＣＡＳ＃ ５５７５０−６１−３）、ヨード酢酸スクシンイミジル（ＣＡＳ＃ １５１１９９−８１−４）、又は表１で示される二官能性スペーサ基のいずれかとの反応によるマレイミド官能基を含有する基の結合、反応を受け得る基を組み込んでハプテンと担体との結合をもたらす方法によって修飾され得るが、これに限定されない。

【0128】

担体との結合を形成することができる官能性連結基は、安定的な結合を形成することができる任意の基であってよく、担体上の多くの異なる基と反応性があってよい。官能性連結基は、好ましくは、担体上のアミノ基、カルボン酸基、又はチオール基、又はその誘導体と反応し得る。官能性連結基の非限定例としては、カルボン酸基、ハロゲン化アシル、活性エステル（上記で定義した通りである）、イソシアネート、イソチオシアネート、アルキルハライド、アミノ基、チオール基、マレイミド基、アクリレート基（Ｈ₂Ｃ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）−）又はビニルスルホン基Ｈ₂Ｃ＝ＣＨ−ＳＯ₂−）があり、Ｐａｒｋ，Ｊ．Ｗ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，２０１２，２３（３）：３５０を参照のこと。官能性連結基は、ハプテンと段階的に反応し得る異なるように活性化されたスペーサビルディングブロックの一部として存在してもよく、生じたハプテン誘導体が、その後に担体と反応し得る。あるいは、ハプテンは、後続反応によって官能性連結基に変換され得る前駆体基を担持するスペーサによって誘導体化され得る。スペーサ上の官能性連結基がアミン又はカルボン酸基である際、担体上のカルボン酸基又はアミンとのカップリング反応は、これらの試薬に関して上記で引用される参考文献における手順に従って、ペプチドカップリング試薬を用いることにより直接行われうる。

【0129】

特定のジスルフィド基（例えば、ピリジルジスルフィド）は、担体上でチオール基との交換がなされ得るスペーサ上の官能性連結基として使用され、混合ジスルフィド結合が形成され得る（Ｇｈｅｔｉｅ，Ｖ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，１９９０，１：２４〜３１を参照のこと）。これらのスペーサは、アミン担持ハプテンと、限定はされないが、その例が表７に示されるものであるピリジルジスルフィド基を担持するスペーサに結合する活性エステルとの反応によって結合し得る。

【0130】

【表8】

【0131】

ほとんどの場合、担体はタンパク質であり、リジン残基のε−アミノ基は、アミン反応性官能性連結基との反応によって直接、あるいは、チオール含有基（Ｓ−アセチルチオ酢酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＡＴＡ，ＣＡＳ ７６９３１−９３−６）又はこれらの誘導体など）による誘導化後に、アセテート基をヒドロキシルアミンで開裂し、ハプテン上で官能性連結基と反応させるためにチオール基を露出することで、結合のために用いられうる。チオール基は、また、タンパク質担体内のジスルフィド結合を、限定はしないが、２−メルカプトエチルアミンなどの中程度の還元剤で還元することで担体に導入され得る（Ｂｉｌａｈ，Ｍ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１０，８０（１）：４９を参照のこと、ホスフィン試薬に関してはＫｉｒｌｅｙ，Ｔ．Ｌ．，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８９，１８０（２）：２３１ ｏｒ ｄｉｔｈｉｏｅｒｙｔｈｒｉｔｏｌ （ＤＴＴ，ＣＡＳ ３４８３−１２−３） Ｃｌｅｌａｎｄ，Ｗ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９６４，３：４８０〜４８２を参照のこと。

【0132】

一般的な反応スキーム
本発明の代表的な化合物は、以下に記載される一般的合成方法に従って合成することができる。式（Ｉ）の化合物は、当業者に既知の方法により調製することができる。以下の反応スキームは、本発明の実施例を表すことのみを意味し、決して本発明の限定であることを意味しない。

【0133】

リスペリドンの親環状構造へのスペーサの結合は、その調製が実施例１に記載されるスキーム１で示されるシリル保護開始化合物を使用して行われうる。Ｎ保護ハロアルキル誘導体によるアルキル化は、実施例１にも記載されている。様々な鎖長のＮ保護ハロアルキル誘導体は、市販されているか、又は当業者に既知の標準的な有機反応によって生成され得る。ｒの好ましい値は、１〜５である。実施例１に記載される脱保護によって、アミノ化合物が提供され、これを追加のスペーサ原子に結合するように更に合成してもよく、または担体に直接連結してもよい。最終生成物中にヒドロキシル基がないアミノ化合物の誘導体は、実施例３に記載されるようにして生成され得る。

【0134】

【化32】

【0135】

リスペリドンのアルキル化はまた、Ｗａｎｇ，Ｊ．，Ｌ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ａｎｄ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０１０，２０：７１５９の方法を使用して、例えば、３−メルカプトメチルプロピオネートのようなチオールを使用して行ってもよく、この場合、スキーム２で示されるように、ＤＭＦ中でＫ₂ＣＯ₃を使用した後にＮａＯＨのＴＨＦ水溶液による加水分解を行うと、末端のカルボキシ基にチオアルキル結合を担持するハプテンの類似体が得られ、これを担体に直接結合させてもよく、またはスペーサー部分を伸長させるためにさらに合成してもよい。アミンによるアルキル化もまた、スキーム２で示されるように、米国特許第２０１１０２４５２２４号の中間体５３５を生成するのに使用される方法に従って行われうる。スキーム２のアミノアルキル又はチオアルキル類似体（ここで、Ｒ１はＯＨ若しくはＨである）版は、当業者の化学者が、上述の参考文献に教示される化学的手法をルーチンで最適化することによって生成され得る。

【0136】

【化33】

【0137】

スキーム３で示される開始物質のフェノール性ヒドロキシル基（式中、Ｒ₁は、Ｈ若しくはシリル保護アルコールのいずれかである）は、担体に結合するための官能性連結基を担持する基の導入部位であり得る。フェノール化合物を、スキーム３に示され、米国特許第２００６０２５１５９２号に記載されるように無水コハク酸と直接反応させて、カルボキシ担持中間体を得てもよく、又は、スキーム４に示されるように、本開示中の他所で提供されるＡｎｎｕｎｚｉａｔｏの参考文献に従って、イソシアネート二官能性スペーサと反応させて、チオール反応性リンカーを担持するハプテンを得てもよい。以下の実施例に記載されるように、Ｒ₁がシリル保護アルコールである場合、脱保護が必要である。

【0138】

【化34】

【0139】

スキーム５は、実施例１及び２などのアルキルアミン基を末端とするスペーサを有するハプテンが更にマレイミド基で官能化され得ることを示している。マレイミドは、当該技術分野で既知の任意の方法によって組み込まれ得る。例えば、ジクロロメタンなどの溶媒及びジイソプロピルエチルアミン及びシアノホスホン酸ジエチルなどのカップリング試薬中、Ｎ−マレオイル置換アルキルアミノ酸との反応によって、ハプテン上にマレイミド官能化されたスペーサーが生じる。ＤＭＦなどの溶媒中、トリブチルアミンなどの塩基の存在下、室温で、１時間、リスペリドン由来アミンと、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）酢酸塩などのアルキルマレイミド官能基とを反応させることで、マレイミド官能化スペーサを有するハプテンが産生される。

【0140】

【化35】

【0141】

アルキルアミン基を末端とするスペーサを有するハプテンは、スキーム６で示されるように、無水コハク酸又は無水グルタル酸などの環状無水化合物との反応によって合成され得る。反応は、ＴＨＦなどの溶媒中、室温で一晩行われ得る。

【0142】

【化36】

【0143】

マレイミド官能化ハプテンは、スキーム７に示される方法に従って、タンパク質とコンジュゲートされ得る。ε−窒素をＳ−アセチルチオ酢酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＡＴＡ）でアシル化することによるタンパク質リジン残基の活性化後に、続くヒドロキシルアミンによるＳ−アセチル基の加水分解により、求核性スルフヒドリル基が生成される。スルフヒドリル活性化タンパク質とマレイミド誘導体化ハプテン（一般的なスキーム５で記載したように調製した）とのコンジュゲーションは、マイケル付加反応を介して進行する。好適なタンパク質は当業者に既知であり、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシサイログロブリン、又はオボアルブミンが挙げられる。

【0144】

【化37】

【0145】

カルボン酸官能化ハプテンは、スキーム８に示される方法に従って、タンパク質とコンジュゲートされ得る。ＤＭＦなどの溶媒中、約２０℃の温度で約１８時間、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）などの好適なカップリング剤、並びにトリブチルアミンなどの塩基とを反応させることで、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド脱離基を有するカルボン酸が活性化される。活性化スペーサ及びハプテンは、次に、ｐＨ ７．５のリン酸塩緩衝液などの溶媒中で、約２０℃で約２．５時間、タンパク質とコンジュゲートされ得る。好適なタンパク質は当業者に既知であり、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシサイログロブリン、又はオボアルブミンが挙げられる。

【0146】

抗体生成
上述のコンジュゲートは、それらが産生される抗精神病薬（リスペリドン）と結合する抗体の生成に有用である。これらの抗体は、患者サンプル中の抗精神病薬の存在及び／又は量を検出するアッセイに使用され得る。かかる検出によって、治療薬物モニタリングがその利点を全て受けることが可能となる。抗精神病薬のレベルの検出は：パリペリドン、クエチアピン、オランザピン、アリピプラゾール、及びこれらの代謝産物からなる群から選択されるものなどである、他の抗精神病薬の検出と組み合わせた検出であって、かかる検出は、これらの抗精神病薬を同時に測定することが可能である；規定の療法に対する患者のアドヒアランス又は遵守の決定；患者を経口による抗精神病投薬計画から持続性注射剤による抗精神病投薬計画に変更すべきかどうかを決定する決定ツールとしての使用；有効又は安全な薬剤レベルを確実に達成又は維持するために、抗精神病薬抗精神病経口薬又は注射剤の投与レベル又は投与間隔を増加又は減少させるべきかを決定する決定ツールとしての使用；最小ｐＫレベルが得られるという証拠を提供することで、抗精神病薬による療法の開始に役立つものとしての使用；複数の処方又は複数の源からの抗精神病薬の生物学的同等性を決定するための使用；多剤併用及び薬剤−薬剤間の潜在的な相互作用による影響を評価するための使用；並びに、患者を臨床治験から除外するか、又は参加させるかの指標としての使用、次いで臨床治験における投薬要求に対するアドヒアランスのモニタリングに役立つものとしての使用；などの多くの目的において有用であり得る。

【0147】

本明細書中の化合物及び免疫原性担体を含む、本発明のコンジュゲートを提供することで、例えば、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、及びヒト化抗体のような、抗精神病薬と結合する抗体が産生され得る。特に想定されるかかる抗体としては、モノクローナル及びポリクローナル抗体並びにこれらのフラグメント、例えば、抗原結合ドメイン及び／又はこれらの抗体に対する１つ以上の相補性決定領域を含有する組み換えタンパク質が挙げられる。好ましくは、抗体は薬剤及び所望の薬理学的活性代謝産物と結合するであろう。薬剤コンジュゲートにおいて、免疫原性担体の結合位置を変更することで、抗体に対する代謝産物及び／又は関連薬剤の選択性及び交差反応性を操作することができる。リスペリドンに関して、９−ヒドロキシリスペリドン（パリペリドン、同様に抗精神病薬として投与される）、７−ヒドロキシリスペリドン、及びＮ−デアルキルリスペリドンなどのリスペリドン代謝産物との交差反応性は妥当でありうるか、または妥当とは限らない。７−ヒドロキシリスペリドン又はＮ−デアルキルリスペリドンとは反応しないが、リスペリドン及びパリペリドンに交差反応性がある抗体が妥当でありえて、リスペリドン及びその主要な薬理学的に活性な代謝産物を検出することができる。あるいは、抗体は、薬理学的に活性な代謝産物であるリスペリドン及びパリペリドンを個別に検出するが、不活性代謝産物である７−ヒドロキシリスペリドン及びＮ−デアルキルリスペリドンを検出しないことが妥当でありうる。これらの薬剤及び／又は代謝産物のうちの複数のものを検出する抗体が産生されるか、又は各々別個に検出する抗体が産生され得る（つまり、「特異的結合」特性を有する抗体と定義する）。抗体は、１つ以上の化合物の結合が等モル又は実質的に等モルで行われる場合、１つ以上の化合物に特異的に結合する。

【0148】

かかる抗体の生成方法には、本発明の特徴を具体化するコンジュゲート（化合物及び免疫原である免疫原性担体）を接種することを含む。好適な宿主としては、限定はされないが、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ニワトリ、ロバ、ウマ、サル、チンパンジー、オランウータン、ゴリラ、ヒト、及び、成熟免疫応答を開始することができる任意の種が挙げられる。免疫手順は、当該技術分野において確立しており、多くの学術論文及びＤａｖｉｄ Ｗｉｌｄによって編集された（Ｎａｔｕｒｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ，２０００）「Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ（第２版）」などの刊行物及び本明細書で引用される参照文献に記述されている。

【0149】

好ましくは、本発明の特徴を具体化する免疫原は、アジュバントと組み合わせて、例えば、動物又はヒトのような宿主被検体に投与される。好適なアジュバンドとしては、限定されないが、フロイントアジュバント、粉末水酸化アルミニウム（ミョウバン）、百日咳菌を加えた水酸化アルミニウム、及びモノホスホリル脂質Ａ合成トレハロースジコリノミコレート（ＭＰＬ−ＴＤＭ）が挙げられる。

【0150】

ポリクローナル抗体は、任意でアジュバントと一緒に投与され得る１回以上の免疫原の注射によって、哺乳類宿主中で作製され得る。典型的には、免疫原又は免疫原とアジュバントとの組み合わせを、１回又は複数回の皮下注射又は腹腔内注射によって哺乳類宿主に注射する。好ましくは、免疫プログラムは、少なくとも１週間にわたって、より好ましくは２週間以上にわたって実行される。このようにして生成されたポリクローナル抗体は、当該技術分野で周知の方法を用いて単離及び精製され得る。

【0151】

モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎの確立されたハイブリドーマ法（例えば、Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５〜４９７（１９７５））によって生成され得る。ハイブリドーマ法は、典型的には、宿主又は宿主のリンパ球を免疫すること、モノクローナル抗体分泌リンパ球または分泌能を有するリンパ球を採取すること、リンパ球を不死化細胞に融合すること、及び所望のモノクローナル抗体を分泌する細胞を選択することを含む。

【0152】

宿主を免疫すると、免疫原に対して特異的な抗体を生成するか、又は生成することができるリンパ球を誘発することができる。あるいは、リンパ球をインビトロで免疫することができる。ヒト細胞が望ましい場合、末梢血リンパ球が使用され得るが、脾臓細胞又は他の哺乳類源からのリンパ球が好ましい。

【0153】

リンパ球を不死化細胞株と融合するとハイブリドーマ細胞を形成することができ、そのプロセスは、例えばポリエチレングリコールのような融合剤を使用することで促進され得る。実例として、形質転換によって不死化された変異体げっ歯類、ウシ、又はヒト骨髄腫細胞が使用され得る。非融合不死化細胞とは対照的に、実質的に純粋なハイブリドーマ細胞の集団が好ましい。したがって、融合後、例えば、酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスファーゼ（ＨＧＰＲＴ）を欠いた変異体骨髄腫細胞を使用することで、非融合の不死化細胞の成長又は生存を阻害する好適な培地で細胞は成長することができる。このような例において、ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを培地（ＨＡＴ培地）に添加すると、ＨＧＰＲＴ−欠損細胞の成長が阻止されつつも、ハイブリドーマの成長は可能となる。

【0154】

好ましくは、効果的に融合した不死化細胞は、ＨＡＴなどの培地中での選択によって混合集団から単離され、安定した高レベルでの抗体発現を支持することができる。好ましい不死化細胞株としては、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡから入手可能な骨髄腫細胞株が挙げられる。

【0155】

ハイブリドーマ細胞は、典型的には抗体を細胞外に分泌することから、培地を抗精神病薬に対して特異的なモノクローナル抗体の存在に関してアッセイすることができる。例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）又は酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）酵素結合のようなインビトロ結合アッセイによる免疫沈降は、モノクローナル抗体の結合特異性を測定するのに使用され得る。

【0156】

モノクローナル抗体分泌ハイブリドーマ細胞は、限界希釈法及び継代培養することで、単一クローンとして単離され得る。好適な培地としては、限定されないが、ダルベッコ変法イーグル培地、ＲＰＭＩ−１６４０、及び、例えばＵｌｔｒａ ＤＯＭＡ ＰＦ又はＨＬ−１のようなポリペプチド非含有、ポリペプチド還元された、又は無血清の培地（Ｂｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤから入手可能）が挙げられる。又は、ハイブリドーマ細胞は、生体内で腹水として成長し得る。

【0157】

モノクローナル抗体は、限定はされないが、ポリペプチドＡ−セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィ、ゲル電気泳動、透析、硫酸アンモニウム沈殿、及びアフィニティクロマトグラフィなどの従来の免疫グロブリン（Ｉｇ）精製法によって培養培地又は腹水から単離及び／又は精製され得る。

【0158】

モノクローナル抗体は、米国特許第４，１６６，４５２号に記載されるような組み換え法によっても生成され得る。好ましくは、抗精神病薬に対して特異的な抗体を分泌するモノクローナル抗体ハイブリドーマ細胞株から単離されたＤＮＡをプロービングするために、従来の手順を使用して、例えば、ネズミの重鎖及び軽鎖抗体遺伝子、と特異的に結合するオリゴヌクレオチドプローブを使用して、モノクローナル抗体をコードするＤＮＡを単離及びシークエンスすることができる。

【0159】

イムノアッセイ
このようにして生成された抗体は、抗精神病薬を認識／結合し、それによって患者サンプル中の薬剤の存在及び／又は量を検出することができるイムノアッセイに使用され得る。好ましくは、アッセイフォーマットは、競合的イムノアッセイフォーマットである。かかるアッセイフォーマット及び他のアッセイは、他所でも記載されている（Ｈａｍｐｔｏｎら（Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ＡＰＳ Ｐｒｅｓｓ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ １９９０）及びＭａｄｄｏｘら（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５８：１２１１１，１９８３））。

【0160】

上述されるように、抗体を含む試薬キットも提供され得る。代表的な試薬キットは、抗精神病薬であるとリスペリドンに結合する抗体、標識部分に連結された抗精神病薬の類似体又はそれらの誘導体を含む複合体を含み、既知の量の抗精神病薬又は関連標準物質を含む１つ以上のキャリブレータを１つ以上含んでもよい。

【0161】

上述のように、試薬キットは、測定される既知量の検体を含むキャリブレータ及び／又は対照物質を含み得る。検体の濃度は、サンプルについて得られた結果と、標準物質について得られた結果とを比較することで算出され得る。較正曲線を作成して、これを用いて、一連の結果を関連付けて、サンプル中の検体の濃度を決定することができる。

【0162】

例えば、抗精神病薬のような検体を含有すると思われる任意のサンプルは、現状好ましい実施形態の方法に従って、分析され得る。所望であれば、サンプルは前処理されてよく、アッセイに影響を与えない任意の従来の培地で調製され得る。好ましくは、サンプルは、宿主からの体液などの水性媒体、最も好ましくは血漿または血清を含む。

【0163】

以下の同時継続出願：題目「Ｈａｐｔｅｎｓ ｏｆ Ａｒｉｐｉｐｒａｚｏｌｅ」（代理人整理番号：ＰＲＤ３２６５ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｒｅｍｍｅｒｉｅ）、題目「Ｈａｐｔｅｎｓ ｏｆ Ｏｌａｎｚａｐｉｎｅ」（代理人整理番号：ＰＲＤ３２６６ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｒｅｍｍｅｒｉｅ）、題目「Ｈａｐｔｅｎｓ ｏｆ Ｐａｌｉｐｅｒｉｄｏｎｅ」（代理人整理番号：ＰＲＤ３２６７ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｒｅｍｍｅｒｉｅ）、題目「Ｈａｐｔｅｎｓ ｏｆ Ｑｕｅｔｉａｐｉｎｅ」（代理人整理番号：ＰＲＤ３２６８ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｒｅｍｍｅｒｉｅ）、題目「Ｈａｐｔｅｎｓ ｏｆ Ｒｉｓｐｅｒｉｄｏｎｅ ａｎｄ Ｐａｌｉｐｅｒｉｄｏｎｅ」（代理人整理番号：ＰＲＤ３２６９ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｒｅｍｍｅｒｉｅ）、題目「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ Ａｒｉｐｉｐｒａｚｏｌｅ Ｈａｐｔｅｎｓ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号：ＣＤＳ５１２８ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｈｒｙｈｏｒｅｎｋｏ）、題目「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ Ｏｌａｎｚａｐｉｎｅ Ｈａｐｔｅｎｓ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号：ＣＤＳ５１３２ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｈｒｙｈｏｒｅｎｋｏ）、題目「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ Ｐａｌｉｐｅｒｉｄｏｎｅ Ｈａｐｔｅｎｓ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号：ＣＤＳ５１２６ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｈｒｙｈｏｒｅｎｋｏ）、題目「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ Ｑｕｅｔｉａｐｉｎｅ Ｈａｐｔｅｎｓ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号：ＣＤＳ５１３４ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｈｒｙｈｏｒｅｎｋｏ）、題目「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ Ｒｉｓｐｅｒｉｄｏｎｅ Ｈａｐｔｅｎｓ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号：ＣＤＳ５１３０ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名；Ｈｒｙｈｏｒｅｎｋｏ）、題目「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ Ａｒｉｐｉｐｒａｚｏｌｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号：ＣＤＳ５１２９ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｈｒｙｈｏｒｅｎｋｏ）、題目「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ Ｏｌａｎｚａｐｉｎｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号：ＣＤＳ５１３３ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｈｒｙｈｏｒｅｎｋｏ）、題目「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ Ｐａｌｉｐｅｒｉｄｏｎｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号：ＣＤＳ５１２７ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｈｒｙｈｏｒｅｎｋｏ）、題目「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ Ｑｕｅｔｉａｐｉｎｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号：ＣＤＳ５１３５ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｈｒｙｈｏｒｅｎｋｏ）、題目「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ Ｒｉｓｐｅｒｉｄｏｎｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号：ＣＤＳ５１３１ＵＳＰＳＰ号、代表発明者名：Ｈｒｙｈｏｒｅｎｋｏ）は、全て本明細書と同時に出願され、その内容は全て本明細書に組み込まれる。

【実施例】

【0164】

本発明の代表的な化合物は、以下に記載される一般的合成方法に従って合成することができる。式（Ｉ）の化合物は、当業者に既知の方法により調製することができる。以下の実施例は、本発明の実施例を表すことのみを意味し、決して本発明を限定することを意図しない。

【0165】

（実施例１）
工程Ａ
９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−３−（２−クロロエチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

【0166】

【化38】

【0167】

３−（２−クロロエチル）−９−ヒドロキシ−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（１．０ｇ、４．１２ミリモル）のＤＭＦ溶液（５ｍＬ）を、１Ｈ−イミダゾール（７０１．２４ｍｇ、６４．６６ミリモル）で処理した後、ｔ−ブチルジメチルクロロシラン（６８３．１２ｍｇ、４．５３ミリモル）のＤＭＦ溶液（１ｍＬ）で処理した。１８時間室温で撹拌した後、真空下で溶媒を除去し、残渣をスパチュラ１杯の炭酸カルシウムを含むジクロロメタン／水（１０ｍＬ／１０ｍＬ）に溶解した。ジクロロメタンで水層を抽出（１０ｍＬで３回）した。合わせた有機分画をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、濾過し、溶媒を真空下で除去した。粗混合物を、更に精製せずに次の工程に使用した。（ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）３５７）

【0168】

工程Ｂ
９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−３−（２−（４−（６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

【0169】

【化39】

【0170】

上述の工程に記載されるようにして調製した、９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−３−（２−クロロエチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（０．５ｇ、１．４０ミリモル）のメタノール（２５ｍＬ）及びジイソプロピルエチルアミン（７３２．８３μＬ、４．２０ミリモル）の溶液を、３−（ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−オール塩酸塩（３７４．６２ｍｇ、１．４７ミリモル）で処理し、反応混合物をアルゴン下で１７時間６０℃で撹拌した。ジイソプロピルエチルアミン（７３２．８３μＬ、４．２０ミリモル）を加え、混合物を更に４時間６０℃で撹拌した。反応混合物を真空下で蒸発させて、残渣を水（２５ｍＬ）に溶解し、クロロホルムで抽出（３×２５ｍＬ）した。合わせた有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥し、濾過し、溶媒を真空下で除去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーで精製（ジクロロメタン／メタノール（９８／２）で溶出）し、表題化合物を得た（ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）５３９）。

【0171】

工程Ｃ
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（（３−（１−（２−（９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）カルバメート

【0172】

【化40】

【0173】

上述の工程に記載されるようにして調製した、９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−３−（２−（４−（６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（５０ｍｇ、０．０９３ミリモル）のアセトン溶液（０．５ｍＬ）とＤＭＦ（０．５ｍＬ）を、炭酸カリウム（３３．３ｍｇ、０．２４ミリモル）及びＮ−Ｂｏｃ−２−ブロモアミノエタン（２７ｍｇ、０．１２ミリモル）で処理し、反応混合物をアルゴン下で１７時間６０℃で撹拌した。反応混合物を４０℃の減圧下で蒸発させ、水（１０ｍＬ）に溶解し、ジクロロメタンで抽出（３×１０ｍＬ）した。有機層を合わせて、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、濾過し、溶媒を蒸発させて粗表題化合物を生成した。（ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）６８２）

【0174】

工程Ｄ
３−（２−（４−（６−（２−アミノエトキシ）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−９−ヒドロキシ−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

【0175】

【化41】

【0176】

上述の工程に記載されるようにして調製したｔｅｒｔ−ブチル（２−（（３−（１−（２−（９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）カルバメート（７０ｍｇ、０．１０３ミリモル）のＨＣｌ／イソプロパノール溶液（１０ｍＬ、５Ｎ）を１時間６０℃で撹拌した。反応混合物を４０℃の減圧下で蒸発させ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５ｍＬ）にゆっくりと溶解し、ジクロロメタンで抽出（３ｘ１０ｍＬ）した。合わせた有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、濾過し、４０℃の減圧下で蒸発させた。水層には生成物がまだ含まれており、４０℃の減圧下で水層を蒸発乾固させることでて回収した。水層から生じた残渣を水で再溶解し、調整したＷａｔｅｒｓ Ｏａｓｉｓを使用するＳＰＥ（６ｃｃ）カラムにかけ、続けてメタノールで溶出した。メタノール溶出分画をジクロロメタン抽出の残渣と合わせて、４０℃の減圧下で蒸発乾固して表題化合物とともに副生成物を生成した（ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）４６８；副生成物は、５％の９−ヒドロキシ−３−（２−（４−（６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンである（Ｍ＋１）４２５）。混合物は、更に精製することなく次の工程で使用した。

【0177】

（実施例２）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（２−（９−ヒドロキシ−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド

【0178】

【化42】

【0179】

実施例１に記載されるようにして調製した３−（２−（４−（６−（２−アミノエトキシ）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−９−ヒドロキシ−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（４．０ｍｇ、８．５μモル）のＤＭＦ（２１５μＬ）及びトリブチルアミン（４．３μＬ）の溶液に、Ｎ−（α−マレイミドアセトキシ）スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ、１０ｍｇ／ｍＬ、２．１ｍｇ、８．５μモル）のＤＭＦ溶液（２１４μＬ）を加えた。生じた溶液を２０℃で６０分間撹拌した後、チオール活性化タンパク質とのコンジュゲーション反応にそのまま使用した。

【0180】

（実施例３）
工程Ａ
３−（２−（４−（６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

【0181】

【化43】

【0182】

３−（２−クロロエチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（１４．４ｇ、０．０５ミリモル）、３−（ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−オール（１４．０ｇ、０．０５ミリモル）、炭酸ナトリウム（１６．０ｇ、０．１５ミリモル）及びヨウ化カリウム（スパチュラの先端分）のＤＭＦ溶液（１５０ｍＬ）を８０℃で５時間撹拌した。混合物を室温まで放冷し、水を加えた。沈殿物を濾過で除去し、濾液をクロロホルムで抽出（３×１００ｍＬ）した。合わせた有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、濾過し、及び濃縮した。残渣をイソプロピルアルコール（７０ｍＬ）で結晶化し、濾過し、イソプロパノール／ジイソプロピルエーテル５０／５０混合物（１０ｍＬ）で洗浄した。残渣を１００℃で一晩乾燥させて、表題化合物を生成し、それを更に精製することなく次の工程に使用した。

【0183】

工程Ｂ
３−（２−（４−（６−（２−アミノエトキシ）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン

【0184】

【化44】

【0185】

上述の工程に記載されるようにして調製した３−（２−（４−（６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（６．６ｇ、０．０１５ミリモル）のＤＭＦ（５０ｍＬ）及びアセトン（５０ｍＬ）の溶液を、炭酸カリウム（３．０ｇ、０．０３ミリモル）及びエチル（２−ブロモエチル）カルバメート（２．４ｇ、０．０１５ミリモル）で処理した。６０℃で一晩撹拌した後、反応混合物を水（１５０ｍＬ）に注入し、クロロホルムで抽出（３×１００ｍＬ）した。合わせた有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製（ジクロロメタン／メタノール（９０／１０）で溶出）した。合わせた分画をＨＢｒ（１５０ｍＬ、４８％）で処理し、３０分間加熱還流した。混合物を室温まで放冷し、水酸化アンモニウム（２８％ ＮＨ₃（Ｈ₂Ｏ））で塩基性として、クロロホルムで抽出（３×１００ｍＬ）した。合わせた有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製し（ジクロロメタン／メタノール（９０／１０〜５０／５０の溶出勾配））、生じた固体をイソプロパノール（５０ｍＬ）に溶解し、イソプロパノール／ＨＣｌで処理した。沈殿物を濾過で除去し、ｉＰｒＯＨ／ジイソプロピルエーテル（５０／５０、３×２０ｍＬ）で洗浄した。沈殿物を減圧下で乾燥し、表題化合物を生成した（ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）４５２）。¹Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ ｐｐｍ １．７６〜１．８５（ｍ，１Ｈ）１．８７〜１．９６（ｍ，１Ｈ）２．１９（ｄ，Ｊ＝１２．８１Ｈｚ，１Ｈ）２．３７〜２．４８（ｍ，４Ｈ）２．９８〜３．１０（ｍ，３Ｈ）３．１０〜３．２８（ｍ，５Ｈ）３．３７〜３．４６（ｍ，３Ｈ）３．７２（ｄ，Ｊ＝１１．３４Ｈｚ，３Ｈ）３．７９〜３．８５（ｍ，２Ｈ）４．３１（ｔ，Ｊ＝４．９４Ｈｚ，１Ｈ）７．０５（ｄｄ，Ｊ＝８．７８，１．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．３５〜７．３９（ｍ，１Ｈ）８．０８（ｄ，Ｊ＝８．７８Ｈｚ，１Ｈ）。

【0186】

（実施例４）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（２−（２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド

【0187】

【化45】

【0188】

実施例３に記載されるようにして調製した３−（２−（４−（６−（２−アミノエトキシ）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（３．４ｍｇ、７．５８μモル）のＤＭＦ（１８５μＬ）及びトリブチルアミン（３．７μＬ）の溶液に、Ｎ−（α−マレイミドアセトキシ）スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ、１０ｍｇ／ｍＬ、１．９ｍｇ、７．５８μモル）のＤＭＦ溶液（１９０μＬ）を加えた。生じた溶液を２０℃で９０分間撹拌した後チオール活性化タンパク質とのコンジュゲーション反応にそのまま使用した。

【0189】

（実施例５）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（２−（９−ヒドロキシ−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド−キーホールリンペットヘモシアニン−コンジュゲート

【0190】

工程Ａ
キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ、１８．０ｍｇ、０．１８μモル）の１００ｍＭリン酸緩衝液溶液（０．４６Ｍ塩化ナトリウム、ｐＨ ７．４）（４．２２ｍＬ）に、Ｓ−アセチルチオ酢酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＡＴＡ、２５ｍｇ／ｍＬ、２．１ｍｇ、９．０μモル）のＤＭＦ溶液（８３．２μＬ）を加えた。生じた溶液を２０℃で１時間、ローラー式攪拌機でインキュベートした。反応液を、１００ｍＭリン酸緩衝液（０．４６Ｍ塩化ナトリウム、５ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ ６．０）を使用してＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５カラムで精製した。

【0191】

工程Ｂ
工程Ａに記載されるようにして調製したＫＬＨ−ＳＡＴＡ溶液（１７．１ｍｇ、０．１７１μモル）（９．３７ｍＬ）に、２．５Ｍヒドロキシルアミン（５０ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ ７．０））（９３７μＬ）を加えた。生じた溶液を２０℃で４０分間、ローラー式攪拌機でインキュベートした。この反応を、マレイミド活性化ハプテンとのコンジュゲーション反応においてそのまま使用した。

【0192】

工程Ｃ
工程Ｂに記載されるようにして調製した、生じたＫＬＨ−ＳＨ溶液のアリコート（３．４ｍＬ、０．０５８μモル）に、実施例２に記載されるようにして調製した２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（２−（９−ヒドロキシ−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド溶液のアリコート（２８２．８μＬ、５．０μモル）を加えた。生じた混濁混合物を２０℃で３時間、ローラー式攪拌機でインキュベートした。反応液を、０．２μｍシリンジフィルターを通して濾過した後、１００ｍＭリン酸緩衝液（０．４６Ｍ塩化ナトリウム、ｐＨ ７．４）を使用してＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５カラムで精製した。

【0193】

（実施例６）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（２−（９−ヒドロキシ−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド−ウシサイログロブリン−コンジュゲート

【0194】

工程Ａ
ウシサイログロブリン（ＢＴＧ、９．３ｍｇ、０．０１４μモル）の１００ｍＭリン酸緩衝溶液（ｐＨ ７．５）（１．０ｍＬ）に、Ｓ−アセチルチオ酢酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＡＴＡ、２５ｍｇ／ｍＬ、３．３ｍｇ、１４．１μモル）のＤＭＦ溶液（１３２μＬ）を加えた。生じた溶液を２０℃で１時間、ローラー式攪拌機でインキュベートした。反応液を、１００ｍＭリン酸緩衝液（５ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ ６．０）を使用して、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５カラムで精製した。

【0195】

工程Ｂ
工程Ａに記載されるようにして調製したＢＴＧ−ＳＡＴＡ溶液（７．４ｍｇ、０．０１１μモル）（２．１１ｍＬ）に２．５Ｍヒドロキシルアミン（５０ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ ７．０）（２１１μＬ）を加えた。生じた溶液を２０℃で６０分間、ローラー式攪拌機でインキュベートした。この反応を、マレイミド活性化ハプテンとのコンジュゲーション反応においてそのまま使用した。

【0196】

工程Ｃ
工程Ｂに記載されるようにして調製した、生じたＢＴＧ−ＳＨ溶液のアリコート（２．３ｍＬ、０．０１１μモル）に、実施例２に記載されるようにして調製した２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（２−（９−ヒドロキシ−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド溶液のアリコート（２８０．４μＬ、５．５μモル）を加えた。生じた混濁混合物を２０℃で２．５時間、ローラー式攪拌機でインキュベートした。反応液を、０．２μｍシリンジフィルターを通して濾過した後、１００ｍＭリン酸緩衝液（０．１４Ｍ塩化ナトリウム、ｐＨ ７．４）を使用してＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５カラムで精製した。

【0197】

（実施例７）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（２−（２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド−キーホールリンペットヘモシアニン−コンジュゲート
実施例５の工程Ｂに記載されるようにして調製した、生じたＫＬＨ−ＳＨ溶液のアリコート（１．５ｍＬ、０．０２５μモル）に、実施例４に記載されるようにして調製した２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（２−（２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド溶液のアリコート（１１３μＬ、２．２６μモル）を加えた。生じた混濁混合物を２０℃で２．５時間、ローラー式攪拌機でインキュベートした。反応液を、０．２μｍシリンジフィルターを通して濾過した後、１００ｍＭリン酸緩衝液（０．４６Ｍ塩化ナトリウム、ｐＨ ７．４）を使用してＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５カラムで精製した。

【0198】

（実施例８）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（２−（２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド−ウシサイログロブリン−コンジュゲート
実施例６の工程Ｂに記載されるようにして調製した、生じたＢＴＧ−ＳＨ溶液のアリコート（０．６３ｍＬ、０．００３３μモル）に、実施例４に記載されるようにして調製した２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（２−（２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾル−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド溶液のアリコート（８０μＬ、１．６μモル）を加えた。生じた混濁混合物を２０℃で２．５時間、ローラー式攪拌機でインキュベートした。反応液を、０．２μｍシリンジフィルターを通して濾過した後、１００ｍＭリン酸緩衝液（０．１４Ｍ塩化ナトリウム、ｐＨ ７．４）を使用してＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５カラムで精製した。

【0199】

（実施例９）
リスペリドンの競合的イムノアッセイ
リスペリドン免疫原による一連の免疫後、マウス尾出血を、ＥＬＩＳＡを使用して、反応性に関して試験した。ハイブリドーマ上清も試験を行い、以下の表１及び表２で示されるＥＬＩＳＡのデータは、いくつかのハイブリドーマの反応性を示している（融合パートナーは、ＮＳＯ細胞であった）。表２に示されるように、ハイブリドーマ２Ａ５及び５Ｇ１１の反応性が認められた。

【0200】

【表9】

【0201】

【表10】

【0202】

ＥＬＩＳＡ反応性によってクローンを同定した後、類似の化合物との親和性及び交差反応性を近似するために競合的ＥＬＩＳＡを行った。図１及び２は、ハイブリドーマサブクローン５＿９から得られたＥＬＩＳＡ交差反応性を示している。データは、リスペリドン、並びに代謝産物であるパリペリドン及び７−ヒドロキシリスペリドンに対する反応性を示している。

【0203】

次に、競合的ＥＬＩＳＡによって上清も試験し、シグナルが、リスペリドン若しくはパリペリドンのいずれに特異的であるかを決定した。図３は、ハイブリドーマサブクローン２Ａ５から得られた結果を示している。データは、リスペリドン及びパリピリドンの両方に対する反応性を示している。

【0204】

図４は、ラテラルフローアッセイデバイスに使用される競合的イムノアッセイフォーマットを示しており、このデバイスにおいて、捕捉抗体であるリスペリドンクローン５−９がフルオロフォアにコンジュゲートされたリスペリドンからなる検出コンジュゲートと共にチップに入っている。図４で示されるこの競合的フォーマットにおいて、検体（リスペリドン）のレベルが低いと高いシグナルを生じ、検体（リスペリドン）のレベルが高いと低いシグナルを生じる。サンプル中のリスペリドンの量は、薬剤が存在しない対照サンプルと比較した蛍光の喪失によって算出され得る。リスペリドンクローン５−９について得られた典型的な用量反応曲線を図５に示す。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】