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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】6561984
(24)【登録日】2019年8月2日
(45)【発行日】2019年8月21日
(54)【発明の名称】３環性化合物及びＪＡＫ阻害剤
(51)【国際特許分類】
C07D 471/14 20060101AFI20190808BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20190808BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20190808BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20190808BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20190808BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20190808BHJP
A61K 31/519 20060101ALI20190808BHJP
A61K 31/4375 20060101ALI20190808BHJP
【ＦＩ】
C07D471/14 101
A61P19/02
A61P29/00 101
A61P43/00 111
A61P29/00
A61P37/06
A61P37/08
C07D471/14 102
C07D471/14CSP
A61K31/519
A61K31/4375
【請求項の数】37
【全頁数】49
(21)【出願番号】特願2016-519246(P2016-519246)
(86)(22)【出願日】2015年5月11日
(86)【国際出願番号】JP2015063504
(87)【国際公開番号】WO2015174376
(87)【国際公開日】20151119
【審査請求日】2018年4月27日
(31)【優先権主張番号】特願2014-100712(P2014-100712)
(32)【優先日】2014年5月14日
(33)【優先権主張国】JP
(73)【特許権者】
【識別番号】000003986
【氏名又は名称】日産化学株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100090918
【弁理士】
【氏名又は名称】泉名 謙治
(74)【代理人】
【識別番号】100082887
【弁理士】
【氏名又は名称】小川 利春
(72)【発明者】
【氏名】渡辺 恒夫
(72)【発明者】
【氏名】▲高▼橋 啓治
(72)【発明者】
【氏名】林 圭史
(72)【発明者】
【氏名】中村 隆典
(72)【発明者】
【氏名】南 昌孝
(72)【発明者】
【氏名】栗原 一典
(72)【発明者】
【氏名】山本 明生
(72)【発明者】
【氏名】西村 拓也
(72)【発明者】
【氏名】宇仁 巳由紀
(72)【発明者】
【氏名】神山 利彦
(72)【発明者】
【氏名】岩本 俊介
【審査官】
伊藤 幸司
(56)【参考文献】
【文献】
国際公開第２０１３／０２４８９５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】
特表２０１３−５１７２２０（ＪＰ，Ａ）
【文献】
国際公開第２０１２／０８５１７６（ＷＯ，Ａ１）
【文献】
特表２０１３−５１２２８２（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）
Ｃ０７Ｄ
Ａ６１Ｋ
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）で表される化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
［式中、
Ａ１は、Ｃ３−７シクロアルキレン基を意味し、
Ｌ１は、Ｃ１−６アルキレン基を意味し、
Ｘ１は、Ｏ、又はＮＨを意味し、
Ｒ１は、Ｘ１がＯのとき、Ｃ１−６ハロアルキル基、シアノＣ１−６ハロアルキル基、又はシアノＣ１−６アルキル基を意味し、
Ｘ１がＮＨのとき、シアノＣ１−４ハロアルキル基を意味する。］
【化1】
Ａ１は、Ｃ３−７シクロアルキレン基を意味し、
Ｌ１は、Ｃ１−６アルキレン基を意味し、
Ｘ１は、Ｏ、又はＮＨを意味し、
Ｒ１は、Ｘ１がＯのとき、Ｃ１−６ハロアルキル基、シアノＣ１−６ハロアルキル基、又はシアノＣ１−６アルキル基を意味し、
Ｘ１がＮＨのとき、シアノＣ１−４ハロアルキル基を意味する。］
【請求項2】
Ｌ１がメチレン基である、請求項１に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項3】
Ａ１がシクロヘキサンジイル基である、請求項１又は２に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項4】
Ｘ１がＯである、請求項１乃至３の何れか一項に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項5】
Ｒ１がＣ１−４ハロアルキル基である、請求項４に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項6】
Ｒ１が３，３，３−トリフルオロプロピル基である、請求項４に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項7】
１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（３，３，３−トリフルオロプロポキシ）メチル］シクロヘキシル｝−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−２，４（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項8】
Ｘ１がＮＨである、請求項１乃至３の何れか一項に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項9】
Ｒ１が３−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基である、請求項８に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項10】
３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（２，４−ジオキソ−２，３，４，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−４，４，４−トリフルオロブタンニトリル、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項11】
（Ｒ）−３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（２，４−ジオキソ−２，３，４，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−４，４，４−トリフルオロブタンニトリル、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項12】
式（ＩＩ）で表される化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
［式中、
Ａ２は、Ｃ３−７シクロアルキレン基を意味し、
Ｌ２は、Ｃ１−６アルキレン基を意味し、
Ｒ２は、５−１０員芳香族複素環基（該複素環基は、ハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基及びＣ１−４ハロアルキル基からなる群より単独に若しくは異なって選ばれる１個又は２個の置換基で置換されていてもよい。）を意味する。］
【化2】
Ａ２は、Ｃ３−７シクロアルキレン基を意味し、
Ｌ２は、Ｃ１−６アルキレン基を意味し、
Ｒ２は、５−１０員芳香族複素環基（該複素環基は、ハロゲン原子、Ｃ１−４アルキル基及びＣ１−４ハロアルキル基からなる群より単独に若しくは異なって選ばれる１個又は２個の置換基で置換されていてもよい。）を意味する。］
【請求項13】
Ｌ２がメチレン基である、請求項１２に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項14】
Ａ２がシクロヘキサンジイル基である、請求項１２又は１３に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項15】
Ｒ２が窒素原子を含む５−６員芳香族複素環基（該複素環基は、ハロゲン原子、メチル基及びトリフルオロメチル基からなる群より単独に若しくは異なって選ばれる１個又は２個の置換基で置換されていてもよい。）である、請求項１２乃至１４の何れか一項に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項16】
Ｒ２がピラゾリル基（該ピラゾリル基は、ハロゲン原子、メチル基及びトリフルオロメチル基からなる群より単独に若しくは異なって選ばれる１個又は２個の置換基で置換されていてもよい。）である、請求項１２乃至１５の何れか一項に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項17】
１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（４−メチル−１Ｈ−ピラゾル−１−イル）メチル］シクロヘキシル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項18】
式（ＩＩＩ）で表される化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
［式中、
Ａ３は、Ｃ３−７シクロアルキレン基を意味し、
Ｌ３は、Ｃ１−６アルキレン基を意味し、
Ｘ３は、Ｏ、又はＮＨを意味し、
Ｒ３は、Ｘ３がＯのとき、Ｃ１−６ハロアルキル基、シアノＣ１−６ハロアルキル基、又はシアノＣ１−６アルキル基を意味し、
Ｘ３がＮＨのとき、シアノＣ１−６ハロアルキル基、又はシアノＣ１−６アルキル基を意味する。］
【化3】
Ａ３は、Ｃ３−７シクロアルキレン基を意味し、
Ｌ３は、Ｃ１−６アルキレン基を意味し、
Ｘ３は、Ｏ、又はＮＨを意味し、
Ｒ３は、Ｘ３がＯのとき、Ｃ１−６ハロアルキル基、シアノＣ１−６ハロアルキル基、又はシアノＣ１−６アルキル基を意味し、
Ｘ３がＮＨのとき、シアノＣ１−６ハロアルキル基、又はシアノＣ１−６アルキル基を意味する。］
【請求項19】
Ｌ３がメチレン基である、請求項１８に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項20】
Ａ３がシクロヘキサンジイル基である、請求項１８又は１９に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項21】
Ｘ３がＯである、請求項１８乃至２０の何れか一項に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項22】
Ｒ３がＣ１−４ハロアルキル基、又はシアノＣ１−４ハロアルキル基である、請求項２１に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項23】
Ｒ３が２，２，２−トリフルオロエチル基、又は３，３，３−トリフルオロプロピル基である、請求項２１に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項24】
Ｒ３が３−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基、又は２−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基である、請求項２１に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項25】
１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（２，２，２−トリフルオロエトキシ）メチル］シクロヘキシル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項26】
１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（３，３，３−トリフルオロプロポキシ）メチル］シクロヘキシル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項27】
４，４，４−トリフルオロ−３−｛［ｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキシル］メトキシ｝ブタンニトリル、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項28】
（Ｒ）−４，４，４−トリフルオロ−３−｛［ｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキシル］メトキシ｝ブタンニトリル、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項29】
Ｘ３がＮＨである、請求項１８乃至２０の何れか一項に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項30】
Ｒ３がシアノＣ１−４ハロアルキルである、請求項２９に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項31】
Ｒ３が３−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基である、請求項２９に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項32】
４，４，４−トリフルオロ−３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）ブタンニトリル、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項33】
（Ｒ）−４，４，４−トリフルオロ−３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）ブタンニトリル、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【請求項34】
請求項１乃至３３の何れか一項に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有するＪＡＫ阻害剤。
【請求項35】
請求項１乃至３３の何れか一項に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有するＪＡＫ阻害作用が有効な疾患の予防薬、治療薬又は改善薬。
【請求項36】
請求項１乃至３３の何れか一項に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有する関節リウマチ治療薬。
【請求項37】
請求項１乃至３３の何れか一項に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有する医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明はＪＡＫ阻害作用を示す新規３環性化合物に関する。【背景技術】
【0002】
ＪＡＫ（Ｊａｎｕｓ ｋｉｎａｓｅ）ファミリーはチロシンキナーゼの一種であり、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３及びＴｙｋ（Ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ）２の４種類が知られており、ＳＴＡＴｓ(ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒｓ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｏｒｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ)をリン酸化することでサイトカインシグナルの伝達に重要な役割を果たしている。ＪＡＫ１は、ＪＡＫ１ノックアウトマウスやＪＡＫ１欠損細胞の解析から、ＩＦＮ（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ）α、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＩＬ（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ）−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１５等の多様な受容体を介したシグナル伝達に関与していることが示されている（非特許文献１）。従って、これらのシグナル伝達を介した炎症応答の制御により、自己免疫疾患や臓器移植時の急性及び慢性拒絶のようなマクロファージやリンパ球の活性化が関与する疾患の治療が見込まれる。
【0003】
ＪＡＫ２は、ＪＡＫ２ノックアウトマウスやＪＡＫ２欠損細胞の解析から、ＥＰＯ（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ）、ＴＰＯ（Ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ）、ＩＦＮγ、ＩＬ−３、ＧＭ−ＣＳＦ(Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ)等の多様な受容体を介したシグナル伝達に関与していることが示されている（非特許文献２、３、４）。これらのシグナル伝達は、骨髄中の赤血球、血小板などの前駆細胞の分化に関与すると考えられる。なお、ＪＡＫ２の６１７番塩基のバリンがフェニルアラニンに置き換わっている場合があり、骨髄増殖性疾患との関与が示唆されている（非特許文献２）。従って、これらのメカニズムを通じた骨髄前駆細胞の分化の制御により、慢性骨髄増殖性疾患の治療が見込まれる。
【0004】
ＪＡＫ３はＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１等の多様な受容体を介したシグナル伝達に、共通γ鎖と非共有結合的に会合することにより重要な役割を果たす（非特許文献５、６）。また、Ｘ連鎖重症複合免疫不全症（ＸＳＣＩＤ）と呼ばれる免疫不全症の患者集団においては、ＪＡＫ３タンパクレベルの低下、若しくは共通γ鎖の遺伝子欠損が見られる。このことは、免疫抑制がＪＡＫ３を介したシグナル経路を遮断することにより生じていることを示唆する（非特許文献７及び８）。
動物実験では、ＪＡＫ３がＢ−及びＴ−リンパ球の成熟に重要な役割を果たすだけでなく、Ｔ−リンパ球の機能維持にも重要であることが示されている。従って、このメカニズムを通じた免疫応答の制御により、臓器移植時の拒絶や自己免疫疾患のようなＴ−リンパ球の増殖異常が関与する疾患の治療が見込まれる。
【0005】
また、白血病やリンパ腫、多くの固形がんのがん細胞では，ＪＡＫやＳＴＡＴｓが恒常的に活性化されている（非特許文献９）。このことから、ＪＡＫ阻害薬は、がん細胞の増殖の抑制から，癌や白血病の治療が見込まれる。また、ＪＡＫ阻害剤であるＣＰ−６９０，５５０が、臨床試験において、関節リウマチ及び乾癬において病態改善効果を示すこと（非特許文献１０及び１１）、さらに、サル腎移植モデルにおける拒絶効果及びマウス喘息モデルにおける気道炎症抑制効果を示すことが報告されている（非特許文献１２及び１３）。
これらの知見から、ＪＡＫ阻害剤により免疫活性を抑制することは、臓器移植時の拒絶、移植後の対宿主性移植片反応、自己免疫疾患及びアレルギー性疾患の予防又は治療に有益であると考えられている。ＣＰ−６９０，５５０以外のＪＡＫ阻害作用を有する化合物についても、すでにいくつかの報告がなされているが（例えば、特許文献１乃至１５参照）、さらなる薬剤の開発が望まれている。
また、特許文献１５には、ある種の３環性ヘテロ環化合物がＪＡＫ阻害作用を示すことが報告されているが、本発明化合物に関する具体的な記載は無い。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0006】
【特許文献1】国際公開第２００１／０４２２４６号
【特許文献2】国際公開第２００７／００７９１９号
【特許文献3】国際公開第２００７／０７７９４９号
【特許文献4】国際公開第２００８／０８４８６１号
【特許文献5】国際公開第２００９／１５２１３３号
【特許文献6】国際公開第２０１０／１１９８７５号
【特許文献7】国際公開第２０１１／０４５７０２号
【特許文献8】国際公開第２０１１／０６８８８１号
【特許文献9】国際公開第２０１１／０６８８９９号
【特許文献10】国際公開第２０１１／０７５３３４号
【特許文献11】国際公開第２０１１／０８６０５３号
【特許文献12】国際公開第２０１２／０８５１７６号
【特許文献13】国際公開第２０１２／１２７５０６号
【特許文献14】国際公開第２０１２／１４９２８０号
【特許文献15】国際公開第２０１３／０２４８９５号
【非特許文献】
【0007】
【非特許文献1】ジャーナル オブ イムノロジー、第１７８巻、２６２３−２６２９ページ、２００７年（Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００７，１７８，ｐｐ．２６２３−２６２９）
【非特許文献2】パソロジー バイオロジー、第５５巻、８８−９１ページ、２００７年（Ｐａｔｈｏｌ． Ｂｉｏｌ．，２００７，５５，ｐｐ．８８−９１）
【非特許文献3】キャンサー ジェネティクス アンド サイトジェネティクス、第１８９巻、４３−４７ページ、２００９年（Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅｔ． Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ．，２００９，１８９，ｐｐ．４３−４７）
【非特許文献4】セミナーズ イン セル アンド デベロップメンタル バイオロジー、第１９巻、３８５−３９３ページ、２００８年（Ｓｅｍｉｎ． Ｃｅｌｌ． Ｄｅｖ． Ｂｉｏｌ．，２００８，１９，ｐｐ．３８５−３９３）
【0008】
【非特許文献5】セル、第１０９巻（ｓｕｐｐｌ．）、Ｓ１２１−１３１ページ、２００２年（Ｃｅｌｌ，２００２，１０９，ｐｐ．Ｓ１２１−１３１）
【非特許文献6】サイエンス、第２９８巻、１６３０−１６３４ページ、２００２年（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２，２９８，ｐｐ．１６３０―１６３４）
【非特許文献7】ネイチャー、第３７７巻、６５−６８ページ、１９９５年（Ｎａｔｕｒｅ，１９９５，３７７，ｐｐ．６５−６８）
【非特許文献8】サイエンス、第２７０巻、７９７−８００ページ、１９９５年（Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９５，２７０，ｐｐ．７９７−８００）
【0009】
【非特許文献9】ジャック―スタット、第２巻、ｅ２３８２８、２０１３年（ＪＡＫ−ＳＴＡＴ．，２０１３，２，ｅ２３８２８）
【非特許文献10】アースライティス アンド リウマチズム、第６０巻、１８９５−１９０５ページ、２００９年（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．，２００９，６０，ｐｐ．１８９５―１９０５）
【非特許文献11】ジャーナル オブ インヴェスティゲイティブ ダーマトロジー、第１２９巻、２２９９−２３０２ページ、２００９年（J Ｉｎｖｅｓｔ． Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，２００９，１２９，ｐｐ．２２９９−２３０２）
【非特許文献12】サイエンス、第３０２巻、８７５−８７８ページ、２００３年（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００３，３０２，ｐｐ．８７５−８７８）
【非特許文献13】ヨーロピアン ジャーナル オブ ファーマコロジー、第５８２巻、１５４−１６１ページ、２００８年（Ｅｕｒ． J． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２００８，５８２巻，ｐｐ．１５４−１６１）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0010】
本発明は、優れたＪＡＫ阻害活性を有し、特に自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー疾患の予防、治療又は改善に有用な、新規な医薬化合物を提供することを目的とする。【課題を解決するための手段】
【0011】
本発明者らはＪＡＫ阻害活性を有する新規な低分子化合物を見出すべく、鋭意検討したところ、ラット又はヒト全血中において、本発明化合物がＪＡＫファミリーを経由するサイトカインシグナルに対して、高い阻害活性を有することを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は以下を特徴とするものである。（１）式（Ｉ）で表される化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【化1】
Ｒ１は、Ｘ１がＯのとき、Ｃ１−６ハロアルキル基、シアノＣ１−６ハロアルキル基、又はシアノＣ１−６アルキル基を意味し、Ｘ１がＮＨのとき、シアノＣ１−６ハロアルキル基、又はシアノＣ１−６アルキル基を意味する。］
【0012】
（２）Ｌ１がメチレン基である、上記（１）に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。（３）Ａ１がシクロヘキサンジイル基である、上記（１）又は（２）に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（４）Ｘ１がＯである、上記（１）乃至（３）の何れかに記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（５）Ｒ１がＣ１−４ハロアルキル基である、上記（４）に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（６）Ｒ１が３，３，３−トリフルオロプロピル基である、上記（４）に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（７）１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（３，３，３−トリフルオロプロポキシ）メチル］シクロヘキシル｝−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−２，４（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【0013】
（８）Ｘ１がＮＨである、上記（１）乃至（３）の何れかに記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。（９）Ｒ１がシアノＣ１−４ハロアルキル基である、上記（８）に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（１０）Ｒ１が３−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基である、上記（８）に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（１１）３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（２，４−ジオキソ−２，３，４，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−４，４，４−トリフルオロブタンニトリル、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（１２）（Ｒ）−３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（２，４−ジオキソ−２，３，４，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−４，４，４−トリフルオロブタンニトリル、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【0014】
（１３）式（ＩＩ）で表される化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。【化2】
を意味する。］
【0015】
（１４）Ｌ２がメチレン基である、上記（１３）に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。（１５）Ａ２がシクロヘキサンジイル基である、上記（１３）又は（１４）に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（１６）Ｒ２が窒素原子を含む５−６員芳香族複素環基（該複素環基は、ハロゲン原子、メチル基及びトリフルオロメチル基からなる群より単独に若しくは異なって選ばれる１個又は２個の置換基で置換されていてもよい。）である、上記（１３）乃至（１５）の何れかに記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（１７）Ｒ２がピラゾリル基（該ピラゾリル基は、ハロゲン原子、メチル基及びトリフルオロメチル基からなる群より単独に若しくは異なって選ばれる１個又は２個の置換基で置換されていてもよい。）である、上記（１３）乃至（１６）の何れかに記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（１８）１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（４−メチル−１Ｈ−ピラゾル−１−イル）メチル］シクロヘキシル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【0016】
（１９）式（ＩＩＩ）で表される化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。【化3】
Ｒ３は、Ｘ３がＯのとき、Ｃ１−６ハロアルキル基、シアノＣ１−６ハロアルキル基、又はシアノＣ１−６アルキル基を意味し、Ｘ３がＮＨのとき、シアノＣ１−６ハロアルキル基、又はシアノＣ１−６アルキル基を意味する。］
【0017】
（２０）Ｌ３がメチレン基である、上記（１９）に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。（２１）Ａ３がシクロヘキサンジイル基である、上記（１９）又は（２０）に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（２２）Ｘ３がＯである、上記（１９）乃至（２１）の何れかに記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（２３）Ｒ３がＣ１−４ハロアルキル基、又はシアノＣ１−４ハロアルキル基である、上記（２２）に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（２４）Ｒ３が２，２，２−トリフルオロエチル基又は３，３，３−トリフルオロプロピル基である、上記（２２）に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（２５）Ｒ３が３−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基又は２−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基である、上記（２２）に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【0018】
（２６）１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（２，２，２−トリフルオロエトキシ）メチル］シクロヘキシル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。（２７）１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（３，３，３−トリフルオロプロポキシ）メチル］シクロヘキシル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（２８）４，４，４−トリフルオロ−３−｛［ｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキシル］メトキシ｝ブタンニトリル、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（２９）（Ｒ）−４，４，４−トリフルオロ−３−｛［ｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキシル］メトキシ｝ブタンニトリル、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【0019】
（３０）Ｘ３がＮＨである、上記（１９）乃至（２１）の何れかに記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。（３１）Ｒ３がシアノＣ１−４ハロアルキルである、上記（３０）に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（３２）Ｒ３が３−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基である、上記（３０）に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（３３）４，４，４−トリフルオロ−３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）ブタンニトリル、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（３４）（Ｒ）−４，４，４−トリフルオロ−３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）ブタンニトリル、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【0020】
（３５）上記（１）乃至（３４）の何れかに記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有するＪＡＫ阻害剤。（３６）上記（１）乃至（３４）の何れかに記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有するＪＡＫ阻害作用が有効な疾患の予防薬、治療薬又は改善薬。
（３７）上記（１）乃至（３４）の何れかに記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有する関節リウマチ治療薬。
（３８）上記（１）乃至（３４）の何れかに記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有する医薬。
【発明の効果】
【0021】
本発明により、優れたＪＡＫ阻害作用を有し、特に、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー疾患の予防、治療又は改善に有用な、新規な３環性化合物を提供することができる。【発明を実施するための形態】
【0022】
以下、更に詳細に本発明を説明する。尚、本発明中、「ｎ−」はノルマル、「ｉ−」はイソ、「ｓ−」及び「ｓｅｃ−」はセカンダリー、「ｔ−」及び「ｔｅｒｔ−」はターシャリー、「ｃ−」はシクロ、「ｏ−」はオルト、「ｍ−」はメタ、「ｐ−」はパラ、「ｃｉｓ−」はシス体、「ｔｒａｎｓ−」はトランス体、「ｒａｃ−」及び「ｒａｃｅｍａｔｅ」はラセミ体を意味し、「Ｐｈ」はフェニル、「Ｐｙ」はピリジル、「Ｍｅ」はメチル、「Ｅｔ」はエチル、「Ｐｒ」はプロピル、「Ｂｕ」はブチル、「Ｂｏｃ」はターシャリーブトキシカルボニル、「Ｍｓ」はメタンスルホニル、「Ｔｆ」はトリフルオロメタンスルホニル、「Ｔｓ」はｐ−トルエンスルホニル、「ＳＥＭ」は［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル、「ＴＩＰＳ」はトリイソプロピルシリル、「ＴＭＳ」はトリメチルシリル、「Ａｃ」はアセチルを意味する。
【0023】
まず、本明細書における化学構造の記載に用いる用語を説明する。「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子を意味する。
「Ｃ１−４アルキル基」とは、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基又はｔ−ブチル基を意味する。
「Ｃ１−６アルキル基」とは、炭素数が１乃至６個である直鎖又は分岐鎖状のアルキル基を意味し、前記定義の「Ｃ１−４アルキル基」の具体例の他に、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基などが挙げられる。
「シアノＣ１−６アルキル基」とは、前記定義の「Ｃ１−６アルキル基」の任意の位置の水素原子が、１個以上のシアノ基で置換された基を意味する。具体例としては、シアノメチル基、２−シアノエチル基、１−シアノプロパン−２−イル基、２−シアノプロパン−２−イル基、３−シアノプロピル基、１，３−ジシアノプロパン−２−イル基、１−シアノブタン−２−イル基、４−シアノブチル基、５−シアノペンチル基、６−シアノヘキシル基などが挙げられる。
【0024】
「Ｃ１−４ハロアルキル基」とは、前記定義の「Ｃ１−４アルキル基」の任意の位置の水素原子が、フッ素原子、塩素原子、臭素原子及びヨウ素原子からなる群より単独に若しくは異なって選ばれる１個以上のハロゲン原子で置換された基を意味する。具体例としては、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、２，２，２−トリフルオロエチル基、３，３，３−トリフルオロプロピル基、４，４，４−トリフルオロブチル基、４，４，４−トリフルオロブタン−２−イル基、２，２−ジフルオロエチル基、２，２−ジフルオロプロピル基、２−クロロエチル基、３−ブロモプロピル基、４−ヨードブチル基などが挙げられる。「Ｃ１−６ハロアルキル基」とは、前記定義の「Ｃ１−６アルキル基」の任意の位置の水素原子が、フッ素原子、塩素原子、臭素原子及びヨウ素原子からなる群より単独に若しくは異なって選ばれる１個以上のハロゲン原子で置換された基を意味する。具体例としては、前記定義の「Ｃ１−４ハロアルキル基」の具体例の他に、５，５，５−トリフルオロペンチル基、６，６，６−トリフルオロヘキシル基、５−クロロペンチル基、６−ブロモヘキシル基などが挙げられる。
【0025】
「シアノＣ１−４ハロアルキル基」とは、前記定義の「Ｃ１−４ハロアルキル基」の任意の位置の水素原子が、１個以上のシアノ基で置換された基を意味する。具体例としては、１−シアノ−２，２，２−トリフルオロエチル基、３−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基、２−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基、４−シアノ−１，１，１−トリフルオロブタン−２−イル基などが挙げられる。「シアノＣ１−６ハロアルキル基」とは、前記定義の「Ｃ１−６ハロアルキル基」の任意の位置の水素原子が、１個以上のシアノ基で置換された基を意味する。具体例としては、前記定義の「シアノＣ１−４ハロアルキル基」の具体例の他に、５−シアノ−１,１,１−トリフルオロペンタン−２−イル基、６−シアノ−１，１，１−トリフルオロヘキサン−２−イル基等が挙げられる。
【0026】
「Ｃ３−７シクロアルカン」とは、環の骨格を構成する炭素原子数が３乃至７個である、単環系、縮合環系、橋架け環系又はスピロ環系の脂肪族炭化水素環を意味する。具体例としては、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘプタン、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン等が挙げられる。「Ｃ３−７シクロアルキル基」とは、前記定義の「Ｃ３−７シクロアルカン」から任意の位置の水素原子を１個取り除いた１価の基を意味する。具体例としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−１−イル基、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル基、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル基等が挙げられる。
【0027】
「Ｃ１−６アルキレン基」とは、前記定義の「Ｃ１−６アルキル基」から任意の位置の水素原子を１個取り除いた２価の基を意味する。具体例としては、メチレン基、エチレン基、プロパン−１，３−ジイル基、プロパン−１，２−ジイル基、２，２−ジメチル−プロパン−１，３−ジイル基、ヘキサン−１，６−ジイル基、３−メチルブタン−１，２−ジイル基等が挙げられる。「Ｃ３−７シクロアルキレン基」とは、前記定義の「Ｃ３−７シクロアルキル基」から任意の位置の水素原子を１個取り除いた２価の基を意味する。具体例としては、シクロプロパン−１，２−ジイル基、シクロブタン−１，３−ジイル基、シクロペンタン−１，３−ジイル基、シクロヘキサン−１，４−ジイル基、シクロヘキサン−１，３−ジイル基、シクロペンタン−１，４−ジイル基等が挙げられる。
【0028】
「５−１０員芳香族複素環」とは、環の骨格を構成する原子が、炭素原子及び１つ以上のヘテロ原子（該ヘテロ原子は、窒素原子、酸素原子又は硫黄原子を意味する。）であり、環の骨格を構成する原子の数が、５乃至１０個である単環系又は縮合環系の芳香族複素環を意味する。具体例としては、フラン、チオフェン、ピロール、イミダゾール、トリアゾール、テトラゾール、チアゾール、ピラゾール、オキサゾール、イソキサゾール、イソチアゾール、チアジアゾール、オキサジアゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、ピリミジン、トリアジン、プリン、プテリジン、キノリン、イソキノリン、ナフチリジン、キノキサリン、シンノリン、キナゾリン、フタラジン、イミダゾピリジン、イミダゾチアゾール、イミダゾオキサゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾオキサゾール、ベンズイミダゾール、インドール、ピロロピリジン、チエノピリジン、フロピリジン、ベンゾチアジアゾール、ベンゾオキサジアゾール、ピリドピリミジン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、チエノフラン等が挙げられる。また、この「５−１０員芳香族複素環」がＣ＝Ｎ二重結合を有する場合は、そのＮ−オキシド体も含む。
【0029】
「５−１０員芳香族複素環基」とは、前記定義の「５−１０員芳香族複素環」から任意の位置の水素原子を１個取り除いた１価の置換基を意味する。「５−６員芳香族複素環」とは、前記定義の「５−１０員芳香族複素環」のうち、環の骨格を構成する原子数が５又は６個であり、単環系であるものを意味する。具体例としては、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、テトラゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、トリアジン、フラン、チオフェン、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、イソキサゾール、オキサジアゾール、チアジアゾール等が挙げられる。
【0030】
「窒素原子を含む５−６員芳香族複素環」とは、前記定義の「５−６員芳香族複素環」のうち、環の骨格を構成する原子の少なくとも１つ以上が窒素原子からなるものを意味する。具体例としては、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、テトラゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、トリアジン、チアゾール、イソチアゾール、オキサゾール、イソキサゾール、オキサジアゾール、チアジアゾール等が挙げられる。「窒素原子を含む５−６員芳香族複素環基」とは、前記定義の「窒素原子を含む５−６員芳香族複素環」から任意の位置の水素原子を１個取り除いた１価の基を意味する。
【0031】
次に本発明における各置換基の好ましい構造を挙げる。Ａ１は、好ましくはシクロペンタンジイル基、シクロヘキサンジイル基又はシクロヘプタンジイル基であり、より好ましくはシクロヘキサンジイル基であり、さらに好ましくはシクロヘキサン−１，４−ジイル基である。
Ｌ１は、好ましくはメチレン基又はエチレン基であり、より好ましくはメチレン基である。
Ｘ１は、好ましくはＯ、又はＮＨである。
Ｘ１がＯのとき、Ｒ１は、好ましくは２，２，２−トリフルオロエチル基、３，３，３−トリフルオロプロピル基、３−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基又は２−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基であり、より好ましくは３，３，３−トリフルオロプロピル基である。
【0032】
Ｘ１がＮＨのとき、Ｒ１は、好ましくは３−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基又は１−シアノプロパン−２−イル基であり、より好ましくは、３−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基である。Ａ２は、好ましくはシクロペンタンジイル基、シクロヘキサンジイル基又はシクロヘプタンジイル基であり、より好ましくはシクロヘキサンジイル基であり、さらに好ましくはシクロヘキサン−１，４−ジイル基である。
Ｌ２は、好ましくはメチレン基又はエチレン基であり、より好ましくはメチレン基である。
【0033】
Ｒ２は、好ましくはピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラゾリル基、イミダゾリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、オキサゾリル基、イソキサゾリル基、１Ｈ−１，２，４−トリアゾリル基、４Ｈ−１，２，４−トリアゾリル基、ピリジル基、ピリダジニル基、ピリミジニル基、ピラジニル基又は１，３，５−トリアジニル基（該ピロリル基から１，３，５−トリアジニル基までの各基は、それぞれ、ハロゲン原子、メチル基及びトリフルオロメチル基からなる群より単独に若しくは異なって選ばれる１個又は２個の基で置換されていてもよい。）であり、より好ましくは、ピラゾリル基、イミダゾリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、オキサゾリル基又はイソキサゾリル基（該ピラゾリル基からイソキサゾリル基までの各基は、それぞれ、ハロゲン原子、メチル基及びトリフルオロメチル基からなる群より単独に若しくは異なって選ばれる１個又は２個の基で置換されていてもよい。）であり、さらに好ましくは、ピラゾリル基（該ピラゾリル基は、ハロゲン原子、メチル基及びトリフルオロメチル基からなる群より単独に若しくは異なって選ばれる１個又は２個の基で置換されていてもよい。）であり、特に好ましくは、一つのメチル基で置換されたピラゾリル基である。【0034】
Ａ３は、好ましくはシクロペンタンジイル基、シクロヘキサンジイル基又はシクロヘプタンジイル基であり、より好ましくはシクロヘキサンジイル基であり、さらに好ましくはシクロヘキサン−１，４−ジイル基である。Ｌ３は、好ましくはメチレン基又はエチレン基であり、より好ましくはメチレン基である。
Ｘ３は、好ましくはＯ、又はＮＨである。
Ｘ３がＯのとき、Ｒ３は、好ましくは２，２，２−トリフルオロエチル基、３，３，３−トリフルオロプロピル基、３−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基又は２−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基である。
Ｘ３がＮＨのとき、Ｒ３は、好ましくは３−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基又は１−シアノプロパン−２−イル基であり、より好ましくは、３−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基である。
【0035】
本発明の、ＪＡＫ阻害剤、ＪＡＫ阻害作用が有効な疾患の予防薬、治療薬又は改善薬に用いる好ましい化合物としては、以下に示すものが挙げられる。（１）Ａ１が、シクロペンタンジイル基又はシクロヘキサンジイル基であり、
Ｌ１が、メチレン基又はエチレン基であり、
Ｘ１が、Ｏであり、
Ｒ１が、Ｃ１−６ハロアルキル基、シアノＣ１−６ハロアルキル基又はシアノＣ１−６アルキル基である、
式（Ｉ）で表される化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（２）Ｒ１が、２，２，２−トリフルオロエチル基、３，３，３−トリフルオロプロピル基、４，４，４−トリフルオロブチル基、３，３−ジフルオロプロピル基又は２−シアノエチル基である、上記（１）に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【0036】
（３）Ａ１が、シクロペンタンジイル基又はシクロヘキサンジイル基であり、Ｌ１が、メチレン基又はエチレン基であり、
Ｘ１が、ＮＨであり、
Ｒ１が、シアノＣ１−６ハロアルキル基又はシアノＣ１−６アルキル基である、
式（Ｉ）で表される化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（４）Ｒ１が、３−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基、４−シアノ−１，１，１−トリフルオロブタン−２−イル基、３−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基、２−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−３−イル基、２−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基、２−シアノエチル基又は１−シアノ−プロパン−２−イル基である、上記（３）に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【0037】
（５）Ｌ１が、メチレン基である、上記（１）乃至（４）の何れかに記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。（６）Ａ１が、シクロヘキサンジイル基である、上記（１）乃至（５）の何れかに記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（７）Ａ２が、シクロペンタンジイル基又はシクロヘキサンジイル基であり、
Ｌ２が、メチレン基又はエチレン基であり、
Ｒ２が、５−１０員芳香族複素環基（該複素環基は、ハロゲン原子、メチル基、エチル基、トリフルオロメチル基又は２，２，２−トリフルオロエチル基で置換されている。）である、
式（ＩＩ）で表される化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（００３８）
（８）Ａ２が、シクロヘキサンジイル基である、上記（７）に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（９）Ｌ２が、メチレン基である、上記（７）又は（８）に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（１０）Ｒ２が、ピロリル基、チエニル基、フリル基、ピラゾリル基、イミダゾリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、オキサゾリル基、イソキサゾリル基、１Ｈ−１，２，４−トリアゾリル基、４Ｈ−１，２，４−トリアゾリル基、ピリジル基、ピリダジニル基、ピリミジニル基、ピラジニル基又は１，３，５−トリアジニル基（該ピロリル基から１，３，５−トリアジニル基までの各基は、それぞれ、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、メチル基又はトリフルオロメチル基で置換されている。）である、上記（７）乃至（９）の何れかに記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【0038】
（１１）Ａ３が、シクロペンタンジイル基又はシクロヘキサンジイル基であり、Ｌ３が、メチレン基又はエチレン基であり、
Ｘ３が、Ｏであり、
Ｒ３が、Ｃ１−６ハロアルキル基、シアノＣ１−６ハロアルキル基又はシアノＣ１−６アルキル基である、
式（ＩＩＩ）で表される化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（１２）Ｒ３が、２，２，２−トリフルオロエチル基、３，３，３−トリフルオロプロピル基、４，４，４−トリフルオロブチル基、２，２−ジフルオロエチル基、３，３−ジフルオロプロピル基、３−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基、２−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基、２−シアノエチル基又は１−シアノプロパン−２−イル基である、上記（１１）に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（１３）Ａ３が、シクロペンタンジイル基又はシクロヘキサンジイル基であり、
Ｌ３が、メチレン基又はエチレン基であり、
Ｘ３が、ＮＨであり、
Ｒ３が、シアノＣ１−６ハロアルキル基又はシアノＣ１−６アルキル基である、
式（ＩＩＩ）で表される化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
【0039】
（１４）Ｒ３が、３−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基、２−シアノ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基、２−シアノエチル基又は１−シアノプロパン−２−イル基である、上記（１３）に記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。（１５）Ａ３が、シクロヘキサンジイル基である、上記（１１）乃至（１４）の何れかに記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（１６）Ｌ３が、メチレン基である、上記（１１）乃至（１５）の何れかに記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物。
（１７）上記（１）乃至（１６）の何れかに記載の化合物、該化合物の互変異性体若しくはその医薬的に許容され得る塩又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有する医薬。
【0040】
本発明は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）で示される化合物が、例えば、環内、環外を問わず、それらの互変異性又は幾何異性を経由して存在することに加えて、その混合物或いはそれぞれの異性体の混合物として存在することも含む。又、不斉中心が存在する場合、或いは異性化の結果、不斉中心が生じる場合は、それぞれの光学異性体及び任意の比率の混合物として存在することも含む。また、不斉中心を２個以上持つ化合物の場合には、さらに、それぞれの光学異性によるジアステレオマーも存在する。本発明の化合物は、これらすべての型を、任意の割合で含んだものも含む。例えば、ジアステレオマーは、当業者によく知られた方法、例えば、分別結晶法等によって分離することができる。また、光学活性体は、この目的のためによく知られた有機化学的手法によって分離して得ることができる。
【0041】
本発明は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）で示される化合物の医薬的に許容され得る塩も含む。本発明の式（Ｉ）、式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）で示される化合物は、必要に応じて、医薬的に許容され得る塩に変換することも、又は生成した塩から遊離させることもできる。
本発明の医薬的に許容され得る塩としては、例えば、アルカリ金属（リチウム、ナトリウム、カリウムなど）、アルカリ土類金属（マグネシウム、カルシウムなど）、アンモニウム、有機塩基、アミノ酸、無機酸（塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸など）又は有機酸（酢酸、クエン酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、ベンゼンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸など）との塩が挙げられる。
【0042】
本発明の式（Ｉ）、式（ＩＩ）若しくは式（ＩＩＩ）で示される化合物又はその製薬上許容される塩は、製造条件により任意の結晶形として存在することができる。これらの結晶形は、本発明の範囲に含有される。本発明の式（Ｉ）、式（ＩＩ）若しくは式（ＩＩＩ）で示される化合物又はその製薬上許容される塩は、任意の水和物又はアセトン、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノールなどの有機溶媒を含む溶媒和物として存在することもできるが、これらの水和物、溶媒和物及びそれらの混合物も本発明の範囲に含有される。
【0043】
本発明は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）又は式（ＩＩＩ）で示される化合物のプロドラッグも含む。プロドラッグとは、化学的又は代謝的に分解できる基を有する医薬品化合物の誘導体であり、加溶媒分解により又は生理的条件下のインビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）において分解され、薬理学的に活性な医薬品化合物へと誘導される化合物である。 適当なプロドラッグ誘導体を選択する方法及び製造する方法は、例えば デザイン オブ プロドラッグス（エルゼビア、アムステルダム １９８５）(Design of Prodrugs (Elsevier, Amsterdam 1985)）に記載されている。
【0044】
プロドラッグとしては、本発明の化合物が水酸基を有する場合は、その化合物と適当なアシルハライド、適当な酸無水物又は適当なハロゲン化アルキルオキシカルボニル化合物とを反応させることによって製造される、アシルオキシ誘導体のようなプロドラッグが例示される。プロドラッグとして特に好ましい構造としては、−Ｏ−ＣＯＣ２Ｈ５、−Ｏ−ＣＯ（ｔ−Ｂｕ）、−Ｏ−ＣＯＣ１５Ｈ３１、−Ｏ−ＣＯ［ｍ−（ＣＯ２Ｎａ）−Ｃ６Ｈ４］、−Ｏ−ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｎａ、−ＯＣＯＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ３、−Ｏ−ＣＯＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２又は−Ｏ−ＣＨ２ＯＣＯＣＨ３が挙げられる。本発明の化合物がアミノ基を有する場合は、アミノ基を有する化合物と、適当な酸ハロゲン化物、適当な混合酸無水物又は適当なハロゲン化アルキルオキシカルボニル化合物とを反応させることにより製造されるプロドラッグが例示される。アミノ基に結合してプロドラッグを形成する、特に好ましい置換基としては、−ＣＯ(ＣＨ２)２０ＯＣＨ３、−ＣＯＣＨ(ＮＨ２)ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＣＯＣＨ３等が挙げられる。
【0045】
本発明の薬剤を使用する場面としては、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２及びＪＡＫ３が、それぞれ単独で若しくは互いに組み合わさって関与する疾患の病態改善が期待できる場面が挙げられる。当該疾患のうち、ＪＡＫ１が関与するものとしては、関節リウマチが挙げられる。また、当該疾患のうち、ＪＡＫ１及びＪＡＫ３が関与するものとしては、関節リウマチの他、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎、湿疹様皮膚炎、脂漏性皮膚炎、扁平苔癬、天疱瘡、類天疱瘡、表皮水疱症、蕁麻疹、血管性水腫、脈管炎、紅斑、皮膚の好酸球増多症、紅斑性狼瘡、ニキビ、円形脱毛等の炎症性又は高増殖性皮膚病、若しくは免疫系を介した皮膚病の発現、可逆閉塞性気道病、粘膜又は脈管炎症が挙げられる。【0046】
また、喘息、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、癌、白血病、器官又は組織（心臓、腎臓、肝臓、骨髄、皮膚、角質、肺、すい臓、小島、小腸、手足、筋肉、神経、椎間、気管、筋芽細胞、軟骨等）の移植に対する拒絶反応、骨髄移植後の対宿主性移植片反応、リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、橋本病、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病と糖尿病合併症等のような自己免疫疾患が挙げられる。更に、当該疾患のうち、ＪＡＫ１及びＪＡＫ２が関与するものとしては、例えば、癌、白血病、慢性骨髄増殖性疾患や骨髄異形成症候群が挙げられる。
以上に示す疾患の治療、予防又は改善を行う場面が想定されるが、これらに限定されることはない。
【0047】
本発明化合物は、以下に示す方法によって合成することができるが、下記製造法は一般的な製造例を示すものであり、製造法を限定するものではない。本発明化合物は、通常は、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、高速液体クロマトグラフィー／質量分析（LC/MS）系などにより精製することが可能であり、必要に応じて、再結晶や溶媒による洗浄により高純度のものを得ることができる。
【0048】
本発明化合物の一般的な製造方法の記載における溶媒とは、当該反応条件下にて安定であり、かつ、不活性で、反応を妨げないものであれば特に制限されない。例えば、スルホキシド系溶媒（例えば、ジメチルスルホキシドなど）、アミド系溶媒（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド又はＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドなど）、エーテル系溶媒（例えば、エチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン又はシクロペンチルメチルエーテルなど）、ハロゲン系溶媒（例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、又は１，２−ジクロロエタンなど）、ニトリル系溶媒（例えば、アセトニトリル又はプロピオニトリルなど）、芳香族炭化水素系溶媒（例えば、ベンゼン、トルエンなど）、脂肪族炭化水素系溶媒（例えば、ヘキサン、ヘプタンなど）、エステル系溶媒（例えば、酢酸エチルなど）、アルコール系溶媒（例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、エチレングリコールなど）、又は水が挙げられる。又、上記溶媒を任意に混合した条件や無溶媒の条件で反応を行うこともできる。【0049】
本発明化合物の製造は、常圧下、加圧下、減圧下又はマイクロウェーブ照射下等で実施することができる。本発明化合物の一般的な製造方法における反応温度は、−７８℃から反応に用いる溶媒の沸点の範囲で適切な温度を選択することができる。
【0050】
本発明化合物の一般的な製造方法において用いられる酸の例としては、有機酸（例えば、酢酸、トリフルオロ酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸等）又は無機酸（例えば、硫酸、塩酸等）が挙げられる。本発明化合物の一般的な製造方法において用いられる塩基の例としては、有機金属化合物（例えば、ｎ−ブチルリチウム、ｓ−ブチルリチウム、リチウムジイソプロピルアミド、イソプロピルマグネシウムブロミド等）、有機塩基（例えば、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ，Ｎ-ジメチルアミノピリジン等）又は無機塩基（例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水素化ナトリウム等）が挙げられる。
【0051】
以下に示す本発明化合物の一般的製造法の中では、各工程における中間体及び最終生成物の一般式が示されるが、それらの中間体及び最終生成物の一般式の概念には、保護基で保護された誘導体も含まれる。ここにおいて、保護基で保護された誘導体とは、必要に応じて、加水分解、還元、酸化、アルキル化などを行うことにより、目的物に誘導可能な化合物のことを意味し、例えば、化合物を有機合成化学上許容な保護基で保護したものが含まれる。
保護及び脱保護は、一般的に知られている保護基を用いて、保護・脱保護反応（例えば、プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス第４版（Protective Groups in Organic Synthesis, Fourth edition）、グリーン（T.W.Greene）著、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ・インコーポレイテッド（John Wiley & Sons Inc.)（2006年）など参照）を行うことにより実施することができる。
【0052】
加水分解、還元、及び酸化は、一般的に知られている、官能基変換法（例えば、コンプリヘンシブ・オーガニック・トランスフォーメーションズ第2版（Comprehensive Organic Transformations, Second Edition）、ラロック（R.C.Larock）著、ワイリー−ブイシーエイチ（Wiley-VCH)（1999年）など参照）を行うことにより、実施することができる。【0053】
本発明の式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）で示される化合物は、例えば、下記のスキーム（２）又は（３）により製造することができる。下記スキーム（２）において、化合物（２）−２は、化合物（２）−１に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなどの塩基存在下、等量若しくは過剰量のユニット（１）−３等を用い、適切な溶媒中、又は無溶媒下、室温から加熱還流下で合成することができる。
化合物（２）−３は、化合物（２）−２に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなどの塩基存在下、等量若しくは過剰量の１，１’−カルボニルジイミダゾールを用い、適切な溶媒中、又は無溶媒下、室温から加熱還流下で合成することができる。
【0054】
また、下記スキーム（３）において、化合物（３）−２は、化合物（３）−１に、等量若しくは過剰量の化合物（４）−１等を用い、適切な溶媒中、−７８℃から加熱還流下で合成することができる。化合物（３）−３は、化合物（３）−２に、リン酸三カリウムなどの塩基存在下、等量若しくは過剰量のユニット（１）−３等を用い、適切な溶媒中、又は無溶媒下、室温から加熱還流下で合成することができる。
ここで用いるユニット（１）−３は、例えば、下記スキーム（１）により製造することができる。
下記スキーム（１）において、化合物（１）−２は、カルボン酸（１）−１をトリエチルアミンなどの塩基存在下、等量若しくは過剰量のジフェニルリン酸アジドを用い、適切な溶媒中、又は無溶媒下、室温から加熱還流下で作用させ、等量若しくは過剰量のベンジルアルコール又はｔｅｒｔ−ブチルアルコール等を作用させることで合成することができる。さらに適切な脱保護を行うと、ユニット（１）−３を得ることができる。
【0055】
下記スキーム中、Ｒprは水素原子又はＴｓ基、ＴＩＰＳ基若しくはＳＥＭ基等の保護基を示す。水素原子以外の場合は、適切な脱保護を行うことで、水素原子に変換可能である。Ａは、前記定義のＡ１、Ａ２又はＡ３と同じであり、例えば、シクロプロパン−１,２−ジイル基、シクロブタン−１,３−ジイル基、シクロペンタン−１，３−ジイル基、シクロヘキサン−１,４−ジイル基又はシクロヘプタン−１，４−ジイル基等を示す。
Ｌは前記定義のＬ１、Ｌ２又はＬ３と同じであり、Ｘは単結合又は前記定義Ｘ１若しくはＸ３と同じであり、Ｒは前記定義のＲ１、Ｒ２又はＲ３と同じである。
Ｒｂは、ベンジル基又はｔ−ブチル基等を示す。
Ｑは、水素原子、ＴＭＳ基等の保護基を示す。水素原子以外の場合は、適切な脱保護を行うことで、水素原子に変換可能である。
Ｔは、リチウム、臭化マグネシウム等のアルキン末端に炭素アニオンを発生させうる基を示す。
【0056】
【化4】
【実施例】
【0057】
以下に参考合成例、合成例、試験例、製剤例を示し、本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、実施例中、「NMR」は核磁気共鳴を、「LC/MS」は高速液体クロマトグラフィー／質量分析を、「(v/v)」は（体積／体積）を、「(v/v/v)」は（体積／体積／体積）を、「Ｍ」はmol/Lを、表中の「Rf」との記載は、参考合成例を、「Ex」との記載は合成例を、「Data」は物理的データを、「Yield」は合成した化合物の収率を、「quant」は定量的を、「min」は分を意味する。
【0058】
1H-NMRデータが記載してある場合には、300MHz（ＪＮＭ−ＥＣＰ３００；日本電子（ＪＥＯＬ）社製、又はＪＮＭ−ＥＣＸ３００；日本電子（ＪＥＯＬ）社製）で測定し、テトラメチルシランを内部標準としたシグナルの化学シフトδ（単位：ｐｐｍ）（分裂パターン、積分値）を表す。「s」はシングレット、「d」はダブレット、「t」はトリプレット、「q」はカルテット、「quint」はクインテット、「sextet」はセクステット、「septet」はセプテット、「dd」はダブレット オブ ダブレット、「dt」はダブレット オブ トリプレット、「td」はトリプレット オブ ダブレット、「dq」はダブレット オブ カルテット、「qd」はカルテット オブ ダブレット、「tt」はトリプレット オブ トリプレット、「ddd」はダブレット オブ ダブレット オブ ダブレット、「m」はマルチプレット、「br」はブロード、「J」はカップリング定数、「CDCl3」は重クロロホルム、「CD3OD」は重メタノール、「DMSO-d6」は重ジメチルスルホキシドを意味する。【0059】
シリカゲルカラムクロマトグラフィーでの精製は、特に記述がない場合は、山善社製のＨｉ−Ｆｌａｓｈ（登録商標）カラム、メルク社製のシリカゲル６０又は富士シリシア化学社製のＰＳＱ６０Ｂの何れかを用いた。シリカゲル薄層クロマトグラフィーでの精製は、特に記述がない場合は、メルク社製のＰＬＣプレートを用いた。
マイクロウェーブ反応装置は、バイオタージ社製のInitiator sixtyを用いた。
絶対配置が記載してある場合、その絶対配置は、既知化合物若しくは既知化合物から誘導されるもの、又は単結晶Ｘ線結晶構造解析（装置：SMART APEX II ULTRA（ブルカーエイエックスエス社製）、X線：CuKα (50 kV, 24 mA)、測定温度：-50 ℃）により決定した。
【0060】
LC/MSは、以下の条件で、ESI（エレクトロスプレーイオン化）法を用いて測定した。「ESI+」はESI正イオンモード、「ESI-」はESI負イオンモードを意味する。LC/MS 測定条件１：
使用した装置：Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ
Ｗａｔｅｒｓ ＺＱ
使用したカラム：Ｗａｔｅｒｓ ＳｕｎＦｉｒｅ Ｃ１８（３．５μｍ、２．１×２０ｍｍ）
カラム温度：４０℃
使用した溶媒：
Ａ液：0.1重量%ギ酸水溶液
Ｂ液：0.1重量%ギ酸−アセトニトリル溶液
使用した溶離条件：
流速0.4 mL/min、Ａ液とＢ液の混合比を90/10(v/v)で測定開始後、３分間で15/85(v/v)に直線的に変えた。その後、2分間Ａ液とＢ液の混合比を15/85(v/v)に固定し、流速を0.5 mL/minに直線的に変えた。その後、0.5分間でＡ液とＢ液の混合比を90/10(v/v)に直線的に変えた。その後、2.5分間Ａ液とＢ液の混合比を90/10(v/v)に固定した。
【0061】
LC/MS 測定条件２：使用した装置：Ｗａｔｅｒｓ ＡＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ−ＰＤＡ／ＣＡＤ
Ｔｈｅｒｍｏ ＬＴＱ ＸＬ
使用したカラム：Ｗａｔｅｒｓ ＡＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８（１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ）
カラム温度：４０℃
使用した溶媒：
Ａ液：0.1重量%ギ酸水溶液
Ｂ液：0.1重量%ギ酸−アセトニトリル溶液
使用した溶離条件：
流速0.6 mL/min、Ａ液とＢ液の混合比を90/10(v/v)に固定して測定開始し、0.5分後に2.5分間でＡ液とＢ液の混合比を10/90(v/v)に直線的に変えた。その後、0.7分間Ａ液とＢ液の混合比を10/90(v/v)に固定し、その後、0.1分間でＡ液とＢ液の混合比を90/10(v/v)、流速0.8 mL/minに直線的に変え、その後、1分間固定した。
【0062】
LC/MS 測定条件３：使用した装置：Ｗａｔｅｒｓ ＡＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ−ＰＤＡ／ＣＡＤ
Ｔｈｅｒｍｏ ＬＴＱ ＸＬ
使用したカラム：Ｗａｔｅｒｓ ＡＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８（１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ）
カラム温度：４０℃
使用した溶媒：
Ａ液：0.1重量%ギ酸水溶液
Ｂ液：0.1重量%ギ酸−アセトニトリル溶液
使用した溶離条件：
流速0.6 mL/min、Ａ液とＢ液の混合比を80/20(v/v)に固定して測定開始し、2.5分間でＡ液とＢ液の混合比を0/100(v/v)に直線的に変えた。その後、1.2分間Ａ液とＢ液の混合比を0/100(v/v)に固定し、その後、0.1分間でＡ液とＢ液の混合比を80/20(v/v)、流速0.8 mL/minに直線的に変え、その後、1.0分間固定した。
【0063】
LC/MS 測定条件４：使用した装置：Ｗａｔｅｒｓ ＡＱＵＩＴＹ Ｈ−Ｃｌａｓｓ／ＰＤＡ
Ｗａｔｅｒｓ ＳＱ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ ２
使用したカラム：Ｗａｔｅｒｓ ＡＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８（１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ）
カラム温度：４０℃
使用した溶媒：
Ａ液：0.1重量%ギ酸水溶液
Ｂ液：0.1重量%ギ酸−アセトニトリル溶液
使用した溶離条件：
流速0.6 mL/min、Ａ液とＢ液の混合比を90/10(v/v)で測定開始後、３分間で10/90(v/v)に直線的に変えた。その後、0.7分間Ａ液とＢ液の混合比を10/90(v/v)に固定し、その後、0.1分間でＡ液とＢ液の混合比を90/10(v/v)、流速0.8 mL/minに直線的に変え、その後、1.0分間固定した。
【0064】
参考合成例１ｔｒａｎｓ−４−｛［（ベンジロキシ）カルボニル］アミノ｝シクロヘキサンカルボン酸メチル
市販のｔｒａｎｓ−４−（メトキシカルボニル）シクロヘキサンカルボン酸（15.7 g, 84.3 mmol）のトルエン（160 mL）溶液に、１１０℃でトリエチルアミン（35.0 mL, 253.0 mmol）を加え、撹拌した後、ジフェニルリン酸アジド（20.0 mL, 92.7 mmol）を３０分間で滴下した。反応液を１１０℃で３時間撹拌した後、ベンジルアルコール（11.3 ml, 109.6 mmol）を１０分間で滴下し、さらに、１時間３０分撹拌した。室温まで放冷後、反応混合物に１０重量％クエン酸水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、次いで、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下濃縮した。残渣をヘキサン／酢酸エチル（＝９／１(v/v)）の混合溶媒で洗浄し、表題化合物を含む混合物を白色固体として得た（18.0 g）。
【0065】
参考合成例２ｔｒａｎｓ−４−｛［（ベンジロキシ）カルボニル］アミノ｝シクロヘキサンカルボン酸
参考合成例１で得られたｔｒａｎｓ−４−｛［（ベンジロキシ）カルボニル］アミノ｝シクロヘキサンカルボン酸メチルを含む混合物（18.0 g）のメタノール（180 mL）溶液に、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（100 ml）を加え、１日間撹拌した。反応混合物に濃塩酸を酸性になるまで加え、析出した固体を酢酸エチルと水で洗浄して、表題化合物を含む混合物を白色固体として得た（13.0 g）。さらに、ろ液を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。その後、減圧下で濃縮し、表題化合物を含む混合物を白色固体として得た（6.7 g）。得られた白色固体は、さらなる精製を行わずに、あわせて次の工程に用いた。
【0066】
参考合成例３［ｔｒａｎｓ−４−（ヒドロキシメチル）シクロヘキシル］カルバミン酸ベンジル
参考合成例２で得られたｔｒａｎｓ−４−｛［（ベンジロキシ）カルボニル］アミノ｝シクロヘキサンカルボン酸（6.0 g）のテトラヒドロフラン（30 ml）溶液に、氷冷下、ボラン−テトラヒドロフランコンプレックス（8.5重量％テトラヒドロフラン溶液, 30 mL）を滴下し、室温で１日間撹拌した。その後、反応混合物に酢酸を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、次いで、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下で濃縮した。得られた固体を、ヘキサン／酢酸エチル（＝１０／１（ｖ／ｖ））の混合溶媒で洗浄し、表題化合物を含む混合物を白色固体として得た（6.0 g）。
【0067】
参考合成例４｛ｔｒａｎｓ−４−［（３，３，３−トリフルオロプロポキシ）メチル］シクロヘキシル｝カルバミン酸ベンジル
参考合成例３で得られた［ｔｒａｎｓ−４−（ヒドロキシメチル）シクロヘキシル］カルバミン酸ベンジル（630 mg, 2.39 mmol）のジクロロメタン（5 mL）溶液に、１，１，１−トリフルオロ−３−ヨードプロパン（250 μL, 2.20 mmol）、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルピリジン（500 μL, 2.27 mmol）及びトリフルオロメタンスルホン酸銀（500 mg, 1.99 mmol）を加え、５時間撹拌した。さらに、１，１，１−トリフルオロ−３−ヨードプロパン（100 μL, 0.880 mmol）、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルピリジン（200μL, 0.909 mmol）及びトリフルオロメタンスルホン酸銀（200 mg, 0.797 mmol）を加え、１日間撹拌した。その後、反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１０／１→３／１(v/v)）で精製し、表題化合物を含む混合物を白色無定形物として得た（478 mg）。
【0068】
参考合成例５ｔｒａｎｓ−４−［（３，３，３−トリフルオロプロポキシ）メチル］シクロヘキサンアミン
参考合成例４で得られた｛ｔｒａｎｓ−４−［（３，３，３−トリフルオロプロポキシ）メチル］シクロヘキシル｝カルバミン酸ベンジルを含む混合物（478 mg）のメタノール（5 mL）溶液に、１０重量％パラジウム−炭素（50重量%含水品, 200 mg）を加え、水素雰囲気下で２時間撹拌した。その後、反応混合物をろ過し、残渣を酢酸エチルで洗浄した。得られたろ液を減圧下で濃縮し、表題化合物を含む混合物を灰色無定形物として得た（308 mg）。
【0069】
参考合成例６１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（ベンジルアミノ）メチル］シクロヘキシル｝−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−２，４（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン
国際公開第２０１３／０２４８９５号に記載の参考合成例ｂ１６８の方法で得られたｔｒａｎｓ−４−（２，４−ジオキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−２，３，４，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル）シクロヘキサンカルバルデヒド（300 mg, 0.678 mmol）、メタノール（10 mL）及び酢酸（1 mL）の混合物に、ベンジルアミン（141 μL, 2.03 mmol）を加え、室温で１時間撹拌した。その後、２−ピコリンボラン（109 mg, 1.02 mmol）を加え、室温で１日間撹拌した。その後、反応溶液に水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層は飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後に、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール＝１００／１(v/v)）で精製し、表題化合物を白色固体として得た（274 mg, 収率 76%）。
【0070】
参考合成例７１−［ｔｒａｎｓ−４−（アミノメチル）シクロヘキシル］−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−２，４（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン 酢酸塩
参考合成例６で得られた１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（ベンジルアミノ）メチル］シクロヘキシル｝−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−２，４（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン（270 mg, 0.506 mmol）と、５重量％パラジウム−炭素（50重量%含水品, 27 mg）のメタノール（3 mL）、テトラヒドロフラン（3 mL）及び酢酸（0.1 mL）の混合物を、水素雰囲気下、室温で１日間撹拌した。その後、反応混合物をろ過し、ろ液を減圧下で濃縮した。残渣を酢酸エチルとヘキサンで洗浄し、表題化合物を白色固体として得た（232 mg, 収率 90%）。
【0071】
参考合成例８３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（２，４−ジオキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−２，３，４，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−４，４，４−トリフルオロブタンニトリル
参考合成例７で得られた１−［ｔｒａｎｓ−４−（アミノメチル）シクロヘキシル］−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−２，４（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン 酢酸塩（52.5 mg, 0.1 mmol）のアセトニトリル（1.2 mL）溶液に、１，８−ジアザビシクロ[５．４．０]ウンデカ−７−エン（15.6 μL, 1.0 mmol）と４，４，４−トリフルオロクロトノニトリル（50.0 mg, 0.5 mmol）を加え、室温で３日間撹拌した。その後、反応混合物に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層は飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後に無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。得られた残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（山善社製のＨｉＦｌａｓｈ（登録商標）カラムアミノタイプ：ヘキサン／酢酸エチル＝２／１(v/v)→酢酸エチル→酢酸エチル／メタノール＝１０／１(v/v)）で精製し、表題化合物を淡褐色固体として得た（25.2 mg, 収率 43%）。
【0072】
参考合成例９（Ｒ）−３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（２，４−ジオキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−２，３，４，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−４，４，４−トリフルオロブタンニトリル
参考合成例８で得られた３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（２，４−ジオキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−２，３，４，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−４，４，４−トリフルオロブタンニトリル（126.8 mg, 0.2 mmol）を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（中圧用キラルカラム；ＣＨＩＲＡＬＦＬＡＳＨ（登録商標）ＩＡ：ヘキサン／エタノール＝９／１→７／３(v/v)）で精製し、保持時間４９−５８分で溶出した画分を濃縮することにより、表題化合物を淡褐色固体として得た（35.4 mg, 収率 28%）。
【0073】
参考合成例１０［ｔｒａｎｓ−４−（２，４−ジオキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−２，３，４，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル １Ｈ−イミダゾール−１−カルボキシラート
国際公開第２０１３／０２４８９５号に記載の参考合成例ｂ１６６の方法で得られた４−｛［ｔｒａｎｓ−４−（ヒドロキシメチル）シクロヘキシル］アミノ｝−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボキサミド（6.03 g, 14.4 mmol）と、１，１’−カルボニルジイミダゾール（11.7 g, 72.0 mmol）のＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（30 mL）溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（30 mL）を加え、１２０℃で２時間２０分撹拌した。室温まで放冷した後、酢酸エチル（150 mL）、飽和塩化アンモニウム水溶液（30 mL）及び水を加えて抽出した。次いで、水層を酢酸エチルで抽出した。得られた有機層をあわせて、飽和塩化アンモニウム水溶液で３回洗浄し、さらに飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をろ過し、得られた固体をヘキサンで洗浄した後、減圧下で乾燥させて、表題化合物を淡黄色固体として得た（7.56 g, 収率 97%）。
【0074】
参考合成例１１１−［ｔｒａｎｓ−４−（ヒドロキシメチル）シクロヘキシル］−３，７−ビス｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−２，４（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン
参考合成例１０で得られた［ｔｒａｎｓ−４−（２，４−ジオキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−２，３，４，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル １Ｈ−イミダゾール−１−カルボキシラート（7.56 g, 14.0 mmol）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（140 mL）溶液を０℃に冷却し、水素化ナトリウム（鉱油中55重量%分散物, 760 mg, 18.2 mmol）と［２−（クロロメトキシ）エチル］トリメチルシラン（3.50 mL, 19.6 mmol）を加え、２時間撹拌した。その後、反応混合物に水と飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。得られた有機層を、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。次いで、残渣に１，４−ジオキサン（100 mL）と１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（30 mL）を加えて、室温で２時間撹拌した。その後、反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて、酢酸エチルで抽出した。得られた有機層を、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝７０／３０→４７／５３(v/v)）で精製し、表題化合物を黄色無定形物として得た（5.87 g, 収率 73%）。
【0075】
参考合成例１２１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（３，３，３−トリフルオロプロポキシ）メチル］シクロヘキシル｝−３，７−ビス｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−２，４（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン
参考合成例１１で得られた１−［ｔｒａｎｓ−４−（ヒドロキシメチル）シクロヘキシル］−３，７−ビス｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−２，４（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン（1.35 g, 2.35 mmol）のジクロロメタン（14 mL）溶液に、１，１，１−トリフルオロ−３−ヨードプロパン（1.34 mL, 11.8 mmol）、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルピリジン（2.38 mL, 10.8 mmol）及びトリフルオロメタンスルホン酸銀（2.60 g, 10.1 mmol）を加え、１１３時間撹拌した。その後、反応混合物をろ過し、得られたろ液にクロロホルムと水を加えて抽出した。得られた有機層を、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１回目：ヘキサン／酢酸エチル＝１／０→７８／２２(v/v)、２回目：ヘキサン／酢酸エチル＝１／０→４／１(v/v)、３回目：ヘキサン／酢酸エチル＝１／０→４／１(v/v)）で３回精製し、表題化合物を無色無定形物として得た（1.34 g, 収率 85%）。
【0076】
参考合成例１３４−クロロ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボキサミド
国際公開第２０１３／０２４８９５号に記載の参考合成例ｂ８７の方法で得られた４−クロロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボン酸（27.7 g, 84.8 mmol）のジクロロメタン（280 mL）溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（43.2 mL, 254 mmol）とＮ−ヒドロキシベンズトリアゾール（4.58 g, 33.9 mmol）を加え、１５分間撹拌した。続いて、Ｎ，О−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（24.8 g, 254 mmol）と１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（48.7 g, 254 mmol）を加え、室温にて１８時間撹拌した。その後、反応混合物に水を加え、クロロホルムで２回抽出した。有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和塩化ナトリウム水溶液で、順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝４／１→３／１(v/v)）で精製し、表題化合物を黄色油状物として得た（30.5 g, 収率 97%）。
【0077】
参考合成例１４１−（４−クロロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）プロプ−２−イン−１−オン
参考合成例１３で得られた４−クロロ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボキサミド（47.4 g, 128 mmol）のテトラヒドロフラン（150 mL）溶液を、５０−５３℃で撹拌し、エチニルマグネシウムブロミド（0.5Mテトラヒドロフラン溶液, 310 mL, 153 mmol）を４６℃以上を維持しながら加え、３時間撹拌した。次いで、３０℃まで空冷した後、反応混合物を氷−１Ｍ塩酸（300 g−300 mL）へ注ぎ、１５分間撹拌した。その後、反応混合物を酢酸エチルで抽出した。得られた有機層を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をろ過し、得られた固体をヘキサンで洗浄後、減圧下で乾燥し、表題化合物を淡褐色固体として得た（35.4 g, 収率 83％）。
【0078】
参考合成例１５１−［ｔｒａｎｓ−４−（ヒドロキシメチル）シクロヘキシル］−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン
参考合成例１４で得られた１−（４−クロロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）プロプ−２−イン−１−オン（35.3 g, 105 mmol）に、国際公開第２０１３／０２４８９５号に記載の参考合成例ｂ１２２の方法で得られた（ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキシル）メタノール(16.4 g, 126 mmol)、リン酸三カリウム （44.7 g, 210 mmol）及びジメチルスルホキシド（175 mL）を加え、１００−１１０℃で２時間３０分撹拌した。その後、５０℃まで放冷した後、反応混合物に水を加えた。得られた固体をろ過し、酢酸エチルで洗浄した後、減圧下で乾燥し、表題化合物を淡黄色固体として得た（32.1 g, 収率 71％）。
【0079】
参考合成例１６１−（４−クロロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）プロプ−２−イン−１−オンと１−（４−クロロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−３−［メトキシ（メチル）アミノ］プロプ−２−エン−１−オンの混合物
エチニルマグネシウムブロミド（0.5Mテトラヒドロフラン溶液, 180 mL, 90.1 mmol）に、参考合成例１３で得られた４−クロロ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボキサミド（27.8 g, 75.1 mmol）のテトラヒドロフラン（84.0 mL）溶液を加え、室温にて３０分間撹拌した後、５０℃に昇温し、さらに１時間撹拌した。その後、氷冷した反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下で濃縮した。その後、残渣を５０℃で１時間減圧下で乾燥し、表題化合物を含む褐色油状物を得た（29.7 g）。得られた褐色油状物は、さらなる精製を行わずに次の工程に用いた。
【0080】
参考合成例１７１−［ｔｒａｎｓ−４−（ヒドロキシメチル）シクロヘキシル］−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン
参考合成例１６で得られた１−（４−クロロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）プロプ−２−イン−１−オンと１−（４−クロロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−３−［メトキシ（メチル）アミノ］プロプ−２−エン−１−オンの混合物（29.7 g）のジメチルスルホキシド（300 mL）溶液に、リン酸三カリウム（31.9 g, 150 mmol）と国際公開第２０１３／０２４８９５号に記載の参考合成例ｂ１２２の方法で得られた（ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキシル）メタノール（11.6 g, 90.1 mmol）を加え、９０℃で３時間撹拌した。その後、１１０℃に昇温し、さらに４時間撹拌した。次いで、反応混合物を室温まで放冷した後、水とヘキサンを加え、析出した固体をろ別した。得られた固体を、水、ヘキサン／酢酸エチル（＝１／１(v/v)）の混合溶媒及び酢酸エチルで順次洗浄した。その後、５０℃にて５時間減圧下で乾燥し、表題化合物を淡褐色固体として得た（24.1 g, 収率 75%）。 (参考合成例１５の別合成法)
【0081】
参考合成例１８ｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキサンカルバルデヒド
参考合成例１５で得られた１−［ｔｒａｎｓ−４−（ヒドロキシメチル）シクロヘキシル］−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン（1.07 g, 2.49 mmol）、ジメチルスルホキシド（21 mL）及びジクロロメタン（21 mL）の混合物に、２−ヨードキシ安息香酸（1.05 g, 3.74 mmol）を加え、４０℃で１時間３０分撹拌した。その後、反応混合物に飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。得られた有機層を、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後に無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル→酢酸エチル／メタノール＝１０／１(v/v)）で精製し、表題化合物を灰色固体として得た（827 mg, 収率 78%）。
【0082】
参考合成例１９１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（ベンジルアミノ）メチル］シクロヘキシル｝−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン
参考合成例１８で得られたｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキサンカルバルデヒド（500 mg, 1.17 mmol）、メタノール（10 mL）及び酢酸（1.0 mL）の混合物に、ベンジルアミン（384 μL, 3.52 mmol）と２−ピコリンボラン（188 mg, 1.78 mmol）を加えた後、室温で１日間撹拌した。次いで、反応混合物に１Ｍ塩酸を加え、酢酸エチルで抽出した後、水層に１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を加え、クロロホルム／２−プロパノール（＝１／１(v/v)）混合溶媒で抽出した。得られた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下で濃縮した。得られた残渣は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（山善社製ＨｉＦｌａｓｈ（登録商標）カラムアミノタイプ：ヘキサン／酢酸エチル＝１／１(v/v)→酢酸エチル→酢酸エチル／メタノール＝１０／１(v/v)）で精製し、表題化合物を淡黄色油状物として得た(390 mg、収率65%)。
【0083】
参考合成例２０１−［ｔｒａｎｓ−４−（アミノメチル）シクロヘキシル］−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン
参考合成例１９で得られた１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（ベンジルアミノ）メチル］シクロヘキシル｝−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン（390 mg, 0.755 mmol）、メタノール（5 mL）、テトラヒドロフラン（5 mL）及び酢酸（1 mL）の混合物に、１０重量％パラジウム−炭素（50重量%含水品, 59.0 mg）を加え、水素雰囲気下室温で、１日間撹拌した。その後、反応混合物をろ過し、残渣を酢酸エチルで洗浄した。得られたろ液を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（山善社製のＨｉＦｌａｓｈ（登録商標）カラムアミノタイプ：酢酸エチル／メタノール＝１０／１→クロロホルム／メタノール＝１０／１(v/v)）で精製し、表題化合物を白色固体として得た(271 mg、収率84%)。
【0084】
参考合成例２１４，４，４−トリフルオロ−３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）ブタンニトリル
参考合成例７で得られた１−［ｔｒａｎｓ−４−（アミノメチル）シクロヘキシル］−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−２，４（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン 酢酸塩の代わりに、参考合成例２０で得られた１−［ｔｒａｎｓ−４−（アミノメチル）シクロヘキシル］−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン（50.0 mg, 0.117 mmol）を用いる以外は、参考合成例８と実質的に同様の反応を実施して、表題化合物を褐色油状物として得た（54.5 mg, 収率 85%）。
【0085】
参考合成例２２（Ｒ）−４，４，４−トリフルオロ−３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）ブタンニトリル
参考合成例２１で得られた４，４，４−トリフルオロ−３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）ブタンニトリル（129 mg, 0.236 mmol）を分取高速液体クロマトグラフィー（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＩＥ 5 μm Φ20×250 mm：ヘキサン／エタノール／ジエチルアミン＝７０／３０／０．１(v/v/v)：流速8mL/min）にて精製し、保持時間７４．６４分で溶出した単一光学活性体を含む画分を濃縮することにより、表題化合物を淡褐色油状物として得た（53.9 mg, 収率 42%）。
【0086】
参考合成例２３［ｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル メタンスルホナート
参考合成例１５で得られた１−［ｔｒａｎｓ−４−（ヒドロキシメチル）シクロヘキシル］−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン（1.50 g, 3.51 mmol）のジクロロメタン（35 mL）溶液を０℃に冷却し、トリエチルアミン（1.47 mL, 10.5 mmol）を加え、メタンスルホン酸クロリド（326 μL, 4.21 mmol）をゆっくり滴下した後、室温に昇温して１時間撹拌した。その後、氷冷した反応混合物に水を加え、酢酸エチルで抽出した。得られた有機層を、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル→酢酸エチル／メタノール＝１０／１(v/v)）で精製し、表題化合物を黄色無定形物として得た（1.53 g, 収率 86%）。
【0087】
参考合成例２４１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（４−メチル−１Ｈ−ピラゾル−１−イル）メチル］シクロヘキシル｝−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン
参考合成例２３で得られた［ｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル メタンスルホナート（1.53 g, 3.03 mmol）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（30 mL）溶液を、０℃に冷却し、４−メチル−１Ｈ−ピラゾール（500 μL, 6.06 mmol）を加え、続いて、水素化ナトリウム（鉱油中55重量%分散物, 264 mg, 6.06 mmol）をゆっくり加えた。その後、室温に昇温して１２時間撹拌した。次いで、氷冷した反応混合物に水を加え、酢酸エチルで抽出した。得られた有機層を、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル→酢酸エチル／メタノール＝１０／１(v/v)）で精製し、表題化合物を無色無定形物として得た（1.33 g, 収率 89%）。
【0088】
参考合成例２５１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（２，２，２−トリフルオロエトキシ）メチル］シクロヘキシル｝−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン
参考合成例１５で得られた１−［ｔｒａｎｓ−４−（ヒドロキシメチル）シクロヘキシル］−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン（20 mg, 0.047 mmol）のテトラヒドロフラン（2 mL）溶液に、２，２，２−トリフルオロエチル トリフルオロメタンスルホネート（50 μL, 0.35 mmol）及び水素化ナトリウム（鉱油中５５重量％分散物、10 mg, 0.23 mmol）を加え、室温で２時間撹拌した。さらに、反応混合物に２，２，２−トリフルオロエチル トリフルオロメタンスルホネート（50 μL, 0.35 mmol）及び水素化ナトリウム（鉱油中５５重量％分散物、10 mg, 0.23 mmol）を加え、室温で２時間撹拌した。その後、反応混合物に飽和塩化ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。その後、得られた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝５／１→０／１→酢酸エチル／メタノール＝５／１(v/v)）で精製し、表題化合物を含む混合物を無色油状物として得た（9.2 mg）。得られた表題化合物を含む混合物は、さらなる精製を行わずに次の工程に用いた。
【0089】
参考合成例２６１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（３，３，３−トリフルオロプロポキシ）メチル］シクロヘキシル｝−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン
参考合成例１４で得られた１−（４−クロロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）プロプ−２−イン−１−オン（279 mg, 0.83 mmol）のジメチルスルホキシド（175 mL）溶液に、参考合成例５で得られたｔｒａｎｓ−４−［（３，３，３−トリフルオロプロポキシ）メチル］シクロヘキサンアミン（255 mg, 1.00 mmol）とリン酸三カリウム（528 mg, 2.49 mmol）を加え、１００℃で１時間撹拌した。その後、ｔｒａｎｓ−４−［（３，３，３−トリフルオロプロポキシ）メチル］シクロヘキサンアミン（51 mg, 0.2 mmol）を追加し、１００℃で２時間撹拌した。その後、反応混合物に水を加え、酢酸エチルで抽出した。その後、得られた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下で濃縮した。得られた表題化合物を含む赤褐色油状物（550 mg）のメタノール（5.5 mL）溶液に、５重量％パラジウム−炭素（50重量%含水品, 100 mg）を加え、水素雰囲気下、室温で２２時間撹拌した。その後、反応混合物をろ過し、ろ液を減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝２／１→１／１→０／１(v/v)）で精製し、表題化合物を淡黄色固体として得た（323 mg, 収率 74％）。
【0090】
参考合成例２７４，４，４−トリフルオロ−３−｛［ｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキシル］メトキシ｝ブタンニトリル
参考合成例１５で得られた１−［ｔｒａｎｓ−４−（ヒドロキシメチル）シクロヘキシル］−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン（14.5 g, 33.9 mmol）のジクロロメタン（290 mL）溶液に、１，８−ジアザビシクロ[５．４．０]ウンデカ−７−エン（20.3 mL, 135 mmol）を加え、４０℃で1時間撹拌した。その後、反応混合物を室温に冷却し、４，４，４−トリフルオロクロトノニトリル（7.13 mL, 67.7 mmol）を加え、さらに、３０℃で５時間撹拌した。その後、反応混合物に酢酸エチルを加えて減圧下で濃縮し、さらに、１０重量％クエン酸水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。得られた有機層を、飽和塩化アンモニウム水溶液と飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（山善社製Ｈｉ−Ｆｌａｓｈ（登録商標）カラム：酢酸エチル／ヘキサン＝１／１→２／１→１／０(v/v)、次いで、酢酸エチル／メタノール＝３５／１(v/v)）で２回精製した。さらに、得られた固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（富士シリシア化学製ＰＳＱ６０Ｂ：酢酸エチル／ヘキサン＝１／１→２／１→１／０(v/v)）で精製して、表題化合物を黄色固体として得た（15.7 g, 収率 85%）。
【0091】
参考合成例２８１−（４−クロロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−３−（トリメチルシリル）プロプ−２−イン−１−オンと１−（４−クロロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）プロプ−２−イン−１−オンの混合物
トリメチルシリルアセチレン（0.26 mL, 1.83 mmol）のテトラヒドロフラン（2.8 mL）溶液に、ｎ−ブチルリチウム（1.5Mノルマルヘキサン溶液, 1.1 mL, 1.67 mmol）を氷点下１５℃で滴下し、１５分間撹拌した。次いで、反応溶液に参考合成例１３で得られた４−クロロ−Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボキサミド（564 mg, 1.52 mmol）のテトラヒドロフラン（2.8 mL）溶液を氷点下１５℃で滴下した後、０℃にて３０分間撹拌した。その後、反応混合物を氷−１Ｍ塩酸（10 g−10 mL）混合物へ注ぎ、１５分間撹拌した。その後、反応混合物を酢酸エチルで抽出し、得られた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下で濃縮し、表題化合物を含む混合物を黄色油状物として得た（572 mg）。得られた表題化合物を含む混合物は、さらなる精製を行わずに次の工程に用いた。
【0092】
参考合成例２９１−［ｔｒａｎｓ−４−（ヒドロキシメチル）シクロヘキシル］−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン
参考合成例２８で得られた１−（４−クロロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）−３−（トリメチルシリル）プロプ−２−イン−１−オンと１−（４−クロロ−１−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イル）プロプ−２−イン−１−オンの混合物（572 mg）のジメチルスルホキシド（5 mL）溶液に、リン酸三カリウム（645 mg, 3.04 mmol）と国際公開第２０１３／０２４８９５号に記載の参考合成例ｂ１２２の方法で得られた（ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキシル）メタノール（237 mg, 1.82 mmol）を加え、１１０℃で３時間撹拌した。その後、反応混合物に水を加え、５０℃で２時間撹拌した後、析出した固体をろ別した。得られた固体を、水、及び酢酸エチルで順次洗浄した後、５０℃にて５時間減圧下で乾燥し、表題化合物を淡黄色固体として得た（340 mg, 収率 52%）。また、洗浄したろ液を、減圧下で濃縮して得られた褐色固体を酢酸エチルで洗浄した。その後、５０℃にて３時間減圧下で乾燥し、表題化合物を淡黄色固体として得た（68 mg, 収率 10%）。 (参考合成例１５の別合成法)
【0093】
合成例１（Ｒ）−３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（２，４−ジオキソ−２，３，４，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−４，４，４−トリフルオロブタンニトリル
参考合成例９で得られた（Ｒ）−３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（２，４−ジオキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−２，３，４，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−４，４，４−トリフルオロブタンニトリル（662 mg, 1.2 mmol）のジクロロメタン（13 mL）溶液に、トリフルオロ酢酸（1.3 mL）を加え、室温で１日間撹拌し、さらに、トリフルオロ酢酸（0.7 mL）を加え、室温で３時間撹拌した。その後、反応混合物を減圧下で濃縮し、（Ｒ）−４，４，４−トリフルオロ−３−［（｛ｔｒａｎｓ−４−［７−（ヒドロキシメチル）−２，４−ジオキソ−２，３，４，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］シクロヘキシル｝メチル）アミノ］ブタンニトリルを含む淡黄色油状物を反応中間体として得た（LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 1.88 min, LC/MS(ESI+) m/z; 465 [M+H]+）。得られた反応中間体に、メタノール（13 mL）とエチレンジアミン（1.3 mL）を加え、室温で１日間撹拌した。その後、反応混合物に水とメタノールを加え、ろ過した。得られた固体をメタノールで洗浄した後、減圧下で乾燥し、表題化合物を無色固体として得た（405 mg, 収率 80%）。
【0094】
合成例２１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（３，３，３−トリフルオロプロポキシ）メチル］シクロヘキシル｝−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−２，４（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン
参考合成例９で得られた（Ｒ）−３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（２，４−ジオキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−２，３，４，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−４，４，４−トリフルオロブタンニトリルの代わりに、参考合成例１２で得られた１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（３，３，３−トリフルオロプロポキシ）メチル］シクロヘキシル｝−３，７−ビス｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−２，４（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン（790 mg, 1.18 mmol）を用い、反応中間体として３，７−ビス（ヒドロキシメチル）−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（３，３，３−トリフルオロプロポキシ）メチル］シクロヘキシル｝−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−２，４（３Ｈ，７Ｈ）−ジオン（LC/MS: 測定条件３, 保持時間 = 1.31 min, LC/MS(ESI+) m/z; 471 [M+H]+）を経由する以外は、合成例１と実質的に同様の反応を実施した後、反応混合物をろ過した。得られた固体を、酢酸エチルで洗浄し、表題化合物を白色固体として得た（416 mg, 収率 86%）。
【0095】
合成例３（Ｒ）−４，４，４−トリフルオロ−３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）ブタンニトリル
参考合成例９で得られた（Ｒ）−３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（２，４−ジオキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−２，３，４，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−４，４，４−トリフルオロブタンニトリルの代わりに、参考合成例２２で得られた（Ｒ）−４，４，４−トリフルオロ−３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）ブタンニトリル（1.11 g, 1.85 mmol）を用い、反応中間体として（Ｒ）−４，４，４−トリフルオロ−３−［（｛ｔｒａｎｓ−４−［７−（ヒドロキシメチル）−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル］シクロヘキシル｝メチル）アミノ］ブタンニトリル（LC/MS: 測定条件４, 保持時間 = 1.76 min, LC/MS(ESI+) m/z; 448 [M+H]+）を経由する以外は、合成例１と実質的に同様の反応を実施した。その後、反応混合物にクロロホルム／イソプロパノール（＝１／１(v/v)）混合溶媒と水を加えて抽出し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール＝１／０→１／１(v/v)、次いで山善社製のＨｉ−Ｆｌａｓｈ（登録商標）カラムアミノタイプ：酢酸エチル／メタノール＝１／０→１０／１(v/v)）で精製することで、表題化合物を白色固体として得た（634 mg, 収率 82%）。
【0096】
合成例４１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（４−メチル−１Ｈ−ピラゾル−１−イル）メチル］シクロヘキシル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン
参考合成例９で得られた（Ｒ）−３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（２，４−ジオキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−２，３，４，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−４，４，４−トリフルオロブタンニトリルの代わりに、参考合成例２４で得られた１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（４−メチル−１Ｈ−ピラゾル−１−イル）メチル］シクロヘキシル｝−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン（1.33 g, 2.70 mmol）を用い、反応中間体として７−（ヒドロキシメチル）−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（４−メチル−１Ｈ−ピラゾル−１−イル）メチル］シクロヘキシル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン（LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 1.64 min, LC/MS(ESI+) m/z; 392 [M+H]+）を経由する以外は、合成例１と実質的に同様の反応を実施した。その後、反応混合物に酢酸エチルと水を加えて抽出し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。その後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（山善社製のＨｉ−Ｆｌａｓｈ（登録商標）カラムアミノタイプ：酢酸エチル）で２回精製した。得られた固体を酢酸エチルで洗浄し、表題化合物を白色固体として得た（521 mg, 収率 53%）。
【0097】
合成例５１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（２，２，２−トリフルオロエトキシ）メチル］シクロヘキシル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン
参考合成例９で得られた（Ｒ）−３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（２，４−ジオキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−２，３，４，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−４，４，４−トリフルオロブタンニトリルの代わりに、参考合成例２５で得られた１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（２，２，２−トリフルオロエトキシ）メチル］シクロヘキシル｝−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン（138 mg, 0.271 mmol）を含む混合物（9.2 mg）を用い、反応中間体として７−（ヒドロキシメチル）−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（２，２，２−トリフルオロエトキシ）メチル］シクロヘキシル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン（LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 1.95 min, LC/MS(ESI+) m/z; 410 [M+H]+）を経由する以外は、合成例１と実質的に同様の反応を実施した。その後、反応混合物を減圧下で濃縮した。次いで、残渣をシリカゲル薄層クロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝５／１(v/v)）で精製して、表題化合物を白色固体として得た（3.8 mg, 収率 21％ （２段階））。
【0098】
合成例６１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（３，３，３−トリフルオロプロポキシ）メチル］シクロヘキシル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン
参考合成例９で得られた（Ｒ）−３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（２，４−ジオキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−２，３，４，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−４，４，４−トリフルオロブタンニトリルの代わりに、参考合成例２６で得られた１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（３，３，３−トリフルオロプロポキシ）メチル］シクロヘキシル｝−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン（1.47 g, 2.80 mmol）を用い、反応中間体として７−（ヒドロキシメチル）−１−｛ｔｒａｎｓ−４−［（３，３，３−トリフルオロプロポキシ）メチル］シクロヘキシル｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−４（７Ｈ）−オン（LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 1.94 min, LC/MS(ESI+) m/z; 424 [M+H]+）を経由する以外は、合成例１と実質的に同様の反応を実施した。その後、反応混合物にクロロホルムと水を加えて抽出し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。その後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／メタノール＝１／０→９５／５(v/v)、ついでクロロホルム／メタノール＝９５／５→２０／８０(v/v)）で精製して、表題化合物を白色固体として得た（1.09 g, 収率 98％）。
【0099】
合成例７（Ｒ）−４，４，４−トリフルオロ−３−｛［ｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキシル］メトキシ｝ブタンニトリル
参考合成例２７で得られた４，４，４−トリフルオロ−３−｛［ｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキシル］メトキシ｝ブタンニトリル（1.29 g, 2.35 mmol）を、分取高速液体クロマトグラフィー（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＩＢ 5 μm Φ20×250 mm：ヘキサン／エタノール＝８０／２０→５０／５０(v/v)：流速12 mL/min）にて精製し、保持時間２７．４９分で溶出した単一光学活性体を含む画分を濃縮することにより、（Ｒ）−４，４，４−トリフルオロ−３−｛［ｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキシル］メトキシ｝ブタンニトリル（490 mg）を得た。続いて、参考合成例９で得られた（Ｒ）−３−（｛［ｔｒａｎｓ−４−（２，４−ジオキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−２，３，４，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３’，２’：５，６］ピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−４，４，４−トリフルオロブタンニトリルの代わりに、上記で得られた（Ｒ）−４，４，４−トリフルオロ−３−｛［ｔｒａｎｓ−４−（４−オキソ−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル）シクロヘキシル］メトキシ｝ブタンニトリル（490 mg, 0.893 mmol）を用い、反応中間体として（Ｒ）−４，４，４−トリフルオロ−３−（｛ｔｒａｎｓ−４−［７−（ヒドロキシメチル）−４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｈ］［１，６］ナフチリジン−１−イル］シクロヘキシル｝メトキシ）ブタンニトリル（LC/MS: 測定条件４, 保持時間 = 1.92 min, LC/MS(ESI+) m/z; 449 [M+H]+）を経由する以外は、合成例１と実質的に同様の反応を実施した。その後、反応混合物に酢酸エチルと水を加えて抽出し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（山善社製のＨｉ−Ｆｌａｓｈ（登録商標）カラムアミノタイプ：酢酸エチル／メタノール＝１／０→９２／８(v/v)）で精製することで、表題化合物を白色固体として得た（299 mg, 収率 30%（２段階））。
【0100】
以下に、参考合成例の各化合物の構造を示す。【化5】
【0101】
以下に、合成例の各化合物の構造を示す。【化6】
【0102】
以下に、参考合成例及び合成例の各化合物の物理的データを示す。Ｒｆ１
LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 2.25 min
LC/MS(ESI+) m/z; 292 [M+H]+
【0103】
Ｒｆ２LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 1.92 min
LC/MS(ESI+) m/z; 278 [M+H]+
【0104】
Ｒｆ３LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 1.93 min
LC/MS(ESI+) m/z; 264 [M+H]+
【0105】
Ｒｆ４LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 2.66 min
LC/MS(ESI+) m/z; 360 [M+H]+
【0106】
Ｒｆ５LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 1.29 min
LC/MS(ESI+) m/z; 226 [M+H]+
【0107】
Ｒｆ６1H-NMR (CDCl3) δ: 0.00 (s, 9H), 0.98 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 1.09-1.29 (m, 2H), 1.36-1.87 (m, 2H), 1.94-2.19 (m, 4H), 2.61 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 2.68-2.88 (m, 2H), 3.60 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 3.86 (s, 2H), 4.66-4.81 (m, 1H),5.78 (s, 2H), 6.73 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 7.36-7.41 (m, 5H), 7.46 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 9.09 (s, 1H).
【0108】
Ｒｆ７1H-NMR (DMSO-d6) δ: -0.07 (s, 9H), 0.84 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 1.05-1.21 (m, 2H), 1.27-1.45 (m, 1H), 1.88-1.97 (m, 4H), 2.35-2.69 (m, 4H), 3.54 (ｔ, J = 8.2 Hz, 2H), 4.51-4.68 (m, 1H), 5.69 (s, 2H), 6.69 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 8.79 (s, 1H).
【0109】
Ｒｆ８1H-NMR (DMSO-d6) δ: -0.07 (s, 9H), 0.84 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 1.05-1.21 (m, 2H), 1.37-1.52 (m, 1H), 1.86-2.03 (m, 4H), 2.51-2.65 (m, 2H), 2.82 (dd, J = 16.8, 8.2 Hz, 2H), 2.92 (dd, J = 16.8, 5.3 Hz, 2H), 3.54 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 3.67-3.80 (m, 1H), 4.54-4.67 (m, 1H), 5.69 (s, 2H), 6.69 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 8.79 (s, 1H), 11.53 (br s, 1H).
LC/MS: 測定条件１, 保持時間 = 4.59 min
LC/MS(ESI+) m/z; 565 [M+H]+
LC/MS(ESI-) m/z; 563 [M-H]-
【0110】
Ｒｆ９1H-NMR (CDCl3) δ: -0.05 (s, 9H), 0.87-0.98 (m, 2H), 1.10-1.28 (m, 3H), 1.96-2.06 (m, 2H), 2.07-2.20 (m, 2H), 2.56-2.89 (m, 6H), 3.39-3.48 (m, 1H), 3.52-3.59 (m, 2H), 4.64-4.76 (m, 1H), 5.73 (s, 2H), 6.69 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 8.06 (br s, 1H), 9.04 (s, 1H).
【0111】
Ｒｆ１０1H-NMR (CDCl3) δ: -0.04 (s, 9H), 0.94 (t, J = 8.3 Hz, 2H), 1.20-1.41 (m, 2H) , 1.60-1.72 (m, 1H), 1.98-2.19 (m, 4H), 2.81 (q, J = 11.9 Hz, 2H), 3.56 (t, J = 8.3 Hz, 2H), 4.34 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 4.67-4.82 (m, 1H), 5.74 (s, 2H), 6.66 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 7.09-7.10 (m, 1H), 7.44-7.45 (m, 2H), 8.13 (br s, 1H), 8.16 (s, 1H), 9.05 (s, 1H).
LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 2.47 min
LC/MS(ESI+) m/z; 539 [M+H]+
【0112】
Ｒｆ１１1H-NMR (CDCl3) δ: -0.05 (s, 9H), 0.00 (s, 9H), 0.88-1.07 (m, 4H), 1.14-1.40 (m, 2H), 1.64-1.79 (br m, 1H), 1.94-2.15 (m, 4H), 2.70-2.89 (m, 2H), 3.51-3.65 (m, 4H), 3.73 (t, J = 8.3 Hz, 2H), 4.62-4.77 (br m, 1H), 5.52 (s, 2H), 5.73 (s, 2H), 6.68 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 9.08 (s, 1H).
LC/MS: 測定条件３, 保持時間 = 2.41 min
LC/MS(ESI+) m/z; 575 [M+H]+
【0113】
Ｒｆ１２1H-NMR (CDCl3) δ: -0.05 (s, 9H), -0.01 (s, 9H), 0.87-1.03 (m, 2H), 1.16-1.30 (m, 4H), 1.71-1.84 (br m, 1H), 1.93-2.06 (m, 4H), 2.33-2.50 (m, 2H), 2.68-2.84 (m, 2H), 3.34 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.51-3.60 (m, 2H), 3.62-3.76 (m, 4H), 4.60-4.74 (br m, 1H), 5.51 (s, 2H), 5.72 (s, 2H), 6.67 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 9.07 (s, 1H).
LC/MS: 測定条件３, 保持時間 = 2.85 min
LC/MS(ESI+) m/z; 671 [M+H]+
【0114】
Ｒｆ１３1H-NMR (CDCl3) δ: -0.06 (s, 9H), 0.89-0.94 (m, 2H), 3.40-3.56 (m, 8H), 5.68 (s, 2H), 6.68 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H).
LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 2.62 min
LC/MS(ESI+) m/z; 370 [M+H]+
【0115】
Ｒｆ１４1H-NMR (CD3OD) δ: -0.05 (s, 9H), 0.91 (t, J = 8.5 Hz, 2H), 3.51 (s, 1H), 3.54 (t, J = 8.5 Hz, 2H), 5.69 (s, 2H), 6.78 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 9.14 (s, 1H).
LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 2.93 min
LC/MS(ESI+) m/z; 335 [M+H]+
【0116】
Ｒｆ１５LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 2.14 min
LC/MS(ESI+) m/z; 428 [M+H]+
【0117】
Ｒｆ１６Ｒｆ１６−１
LC/MS: 測定条件４, 保持時間 = 2.75 min
LC/MS(ESI+) m/z; 335 [M+H]+
Ｒｆ１６−２
LC/MS: 測定条件４, 保持時間 = 3.12 min
LC/MS(ESI+) m/z; 396 [M+H]+
【0118】
Ｒｆ１７1H-NMR (CDCl3) δ: -0.06 (s, 9H), 0.90-0.96 (m, 2H), 1.41 (qd, J = 12.3, 3.3 Hz, 2H), 1.66-1.71 (m,1H), 1.86 (qd, J = 12.3, 3.3 Hz, 2H), 2.12-2.17 (m, 2H), 2.30-2.33 (m, 2H), 3.53-3.59 (m, 2H), 3.63 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.93 (tt, J = 12.3, 3.3 Hz, 1H), 5.80 (s, 2H), 6.43 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 9.40 (s, 1H).
LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 2.16 min
LC/MS(ESI+) m/z; 428 [M+H]+
【0119】
Ｒｆ１８1H-NMR (CDCl3) δ: -0.06 (s, 9H), 0.90-0.96 (m, 2H), 1.67 (qd, J = 12.9, 3.3 Hz, 2H), 1.91 (qd, J = 12.9, 3.3 Hz, 2H), 2.34-2.52 (m, 5H), 3.53-3.60 (m, 2H), 4.94 (tt, J = 11.8, 2.9 Hz, 1H), 5.80 (s, 2H), 6.44 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 9.40 (s, 1H), 9.78 (s, 1H).
LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 2.30 min
LC/MS(ESI+) m/z; 426 [M+H]+
【0120】
Ｒｆ１９1H-NMR (CDCl3) δ: -0.06 (s, 9H), 0.88-0.96 (m, 2H), 1.33 (qd, J = 12.6, 3.3 Hz, 2H), 1.57-1.71 (m, 1H), 1.84 (qd, J = 12.6, 3.3 Hz, 2H), 2.11-2.21 (m, 2H), 2.23-2.33 (m, 2H), 2.62 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 3.52-3.59 (m, 2H), 3.83 (s, 2H), 4.91 (tt, J = 11.9, 3.3 Hz, 1H), 5.80 (s, 2H), 6.43 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.32-7.37 (m, 5H), 7.42 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 9.40 (s, 1H).
LC/MS: 測定条件１, 保持時間 = 3.19 min
LC/MS(ESI+) m/z; 517 [M+H]+
【0121】
Ｒｆ２０1H-NMR (CDCl3) δ: -0.06 (s, 9H), 0.89-0.96 (m, 2H), 1.29-1.56 (m, 3H), 1.85 (qd, J = 12.3, 2.9 Hz, 2H), 2.10-2.19 (m, 2H), 2.26-2.35 (m, 2H), 2.71 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 3.53-3.59 (m, 2H), 4.92 (tt, J = 11.9, 3.3 Hz, 1H), 5.79 (s, 2H), 6.42 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 9.40 (s, 1H).
LC/MS: 測定条件１, 保持時間 = 2.89 min
LC/MS(ESI+) m/z; 427 [M+H]+
【0122】
Ｒｆ２１1H-NMR (CDCl3) δ: -0.06 (s, 9H), 0.90-0.96 (m, 2H), 1.33-1.46 (m, 3H), 1.53-1.63 (m, 1H), 1.78-1.93 (m, 2H), 2.14-2.23 (m, 2H), 2.27-2.36 (m, 2H), 2.58-2.96 (m, 4H), 3.40-3.51 (m, 1H), 3.53-3.60 (m, 2H), 4.88-4.99 (m, 1H), 5.80 (s, 2H), 6.44 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 9.41 (s, 1H).
LC/MS: 測定条件１, 保持時間 = 4.40 min
LC/MS(ESI+) m/z; 548 [M+H]+
【0123】
Ｒｆ２２1H-NMR (CDCl3) δ: -0.06 (s, 9H), 0.89-0.97 (m, 2H), 1.30-1.48 (m, 3H), 1.54-1.67 (m, 1H), 1.77-1.94 (m, 2H), 2.14-2.23 (m, 2H), 2.26-2.36 (m, 2H), 2.58-2.96 (m, 4H), 3.40-3.51 (m, 1H), 3.52-3.61 (m, 2H), 4.93 (tt, J = 11.8, 2.9 Hz, 1H), 5.80 (s, 2H), 6.43 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 9.40 (s, 1H).
LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 2.68 min
LC/MS(ESI+) m/z; 548 [M+H]+
【0124】
Ｒｆ２３1H-NMR (CDCl3) δ: -0.06 (s, 9H), 0.93 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 1.41-1.56 (m, 2H), 1.82-1.97 (m, 3H), 2.15-2.20 (m, 2H), 2.32-2.36 (m, 2H), 3.07 (s, 3H), 3.56 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 4.18 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.94 (tt, J = 12.0, 3.3 Hz 1H), 5.80 (s, 2H), 6.43 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 9.39 (s, 1H).
LC/MS: 測定条件４, 保持時間 = 2.42 min
LC/MS(ESI+) m/z; 506 [M+H]+
【0125】
Ｒｆ２４1H-NMR (CDCl3) δ: -0.06 (s, 9H), 0.90-0.95 (m, 2H), 1.39 (qd, J = 12.3, 2.4 Hz, 2H), 1.83 (qd, J = 12.3, 3.0 Hz, 2H), 1.95-2.07 (m, 3H), 2.09 (s, 3H), 2.26-2.30 (m, 2H), 3.53-3.59 (m, 2H), 4.02 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 4.91 (tt, J = 12.0, 3.0 Hz, 1H), 5.80 (s, 2H), 6.42 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 7.17 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.43 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 9.39 (s, 1H).
LC/MS: 測定条件４, 保持時間 = 2.62 min
LC/MS(ESI+) m/z; 492 [M+H]+
【0126】
Ｒｆ２５LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 2.80 min
LC/MS(ESI+) m/z; 510 [M+H]+
【0127】
Ｒｆ２６1H-NMR (CDCl3) δ: -0.05 (s, 9H), 0.93 (t, J = 8.5 Hz, 2H), 1.33-1.45 (m, 2H), 1.76-1.91 (m, 3H), 2.11-2.15 (m, 2H), 2.27-2.31 (m, 2H), 2.43 (qt, J = 10.5, 6.0 Hz, 2H), 3.39 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.56 (t, J = 8.5 Hz, 2H), 3.68 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 4.88-4.96 (m, 1H), 5.81 (s, 2H), 6.43 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.78 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 9.41 (s, 1H).
【0128】
Ｒｆ２７1H-NMR (CDCl3) δ: -0.06 (s, 9H), 0.93 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 1.37-1.57 (m, 2H), 1.78-1.95 (m, 3H), 2.12-2.23 (m, 2H), 2.26-2.37 (m, 2H), 2.77 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 3.56 (t, J = 8.3 Hz, 2H), 3.65-3.76 (m, 1H), 3.77-3.87 (m, 1H), 4.01 (dt, J = 6.0, 12.1 Hz, 1H), 4.85-4.99 (m, 1H), 5.80 (s, 2H), 6.43 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 9.40 (s, 1H).
【0129】
Ｒｆ２８Ｒｆ２８−１
LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 2.93 min
LC/MS(ESI+) m/z; 335 [M+H]+
Ｒｆ２８−２
LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 3.45 min
LC/MS(ESI+) m/z; 406 [M+H]+
【0130】
Ｒｆ２９1H-NMR (CDCl3) δ: -0.06 (s, 9H), 0.90-0.96 (m, 2H), 1.41 (qd, J = 12.6, 3.3 Hz, 2H), 1.66-1.71 (m,1H), 1.86 (qd, J = 12.3, 3.3 Hz, 2H), 2.12-2.17 (m, 2H), 2.30-2.33 (m, 2H), 3.53-3.59 (m, 2H), 3.64 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.93 (tt, J = 12.3, 3.3 Hz, 1H), 5.80 (s, 2H), 6.44 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 9.40 (s, 1H).
LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 2.15 min
LC/MS(ESI+) m/z; 428 [M+H]+
【0131】
Ｅｘ１1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.00-1.21 (m, 2H), 1.34-1.52 (m, 1H), 1.80-2.07 (m, 4H), 2.48-2.69 (m, 4H), 2.72-2.98 (m, 2H), 3.63-3.81 (m, 1H), 4.55-4.72 (m, 1H), 6.62 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.73 (s, 1H), 10.80 (br s, 1H).
LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 1.91 min
LC/MS(ESI+) m/z; 435 [M+H]+
LC/MS(ESI-) m/z; 433 [M-H]-
【0132】
Ｅｘ２1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.16 (q, J = 11.8 Hz, 2H), 1.52-1.68 (br m, 1H), 1.89 (d, J = 10.2 Hz, 4H), 2.49-2.63 (m, 4H), 3.22-3.43 (m, 2H), 3.60 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.55-4.69 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 12.35 (br s, 1H).
LC/MS: 測定条件３, 保持時間 = 1.30 min
LC/MS(ESI+) m/z; 411 [M+H]+
LC/MS(ESI-) m/z; 409 [M-H]-
【0133】
Ｅｘ３1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.23-1.39 (m, 2H), 1.45-1.59 (m, 1H), 1.84-1.99 (m, 2H), 2.00-2.14 (m, 4H), 2.56-2.69 (m, 2H), 2.79-2.98 (m, 2H), 3.66-3.79 (m, 1H), 4.83-4.95 (m, 1H), 6.20 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.80 (dd, J = 3.3, 1.8 Hz, 1H), 7.58 (t, J = 3.3 Hz, 1H), 8.17 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 9.02 (s, 1H), 12.32 (s, 1H).
LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 1.83 min
LC/MS(ESI+) m/z; 418 [M+H]+
LC/MS(ESI-) m/z; 416 [M-H]-
【0134】
Ｅｘ４1H-NMR (CD3OD) δ: 1.41-1.55 (m, 2H), 1.86-2.05 (m, 5H), 2.10 (s, 3H), 2.23-2.28 (m, 2H), 4.06 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 5.05-5.15 (m, 1H), 6.45 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.44(s, 1H), 7.56 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 8.1 Hz, 1H) 9.20 (s, 1H).
LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 1.72 min
LC/MS(ESI+) m/z; 362 [M+H]+
【0135】
Ｅｘ５1H-NMR (CDCl3) δ: 1.35-1.47 (m, 2H), 1.75-1.91 (m, 3H), 2.10-2.22 (m, 2H), 2.30-2.40 (m, 2H), 3.58 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 3.87 (q, J = 8.6 Hz, 2H) 4.92-5.06 (m, 1H), 6.47 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.77-6.82 (m, 1H), 7.47-7.50 (m, 1H), 7.79 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 9.44 (s, 1H), 11.90 (bs, 1H).
LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 1.97 min
LC/MS(ESI+) m/z; 380 [M+H]+
【0136】
Ｅｘ６LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 1.99 min
LC/MS(ESI+) m/z; 394 [M+H]+
【0137】
Ｅｘ７1H-NMR (DMSO-d6) δ: 1.29-1.49 (m, 2H), 1.67-2.16 (m, 7H), 2.95-3.24 (m, 2H), 3.64 (dd, J = 6.5, 2.3 Hz, 2H), 4.47-4.61 (m, 1H), 4.82-4.97 (m, 1H), 6.21 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 9.01 (s, 1H), 12.31 (br s, 1H).
LC/MS: 測定条件２, 保持時間 = 1.88 min
LC/MS(ESI+) m/z; 419 [M+H]+
LC/MS(ESI-) m/z; 417 [M-H]-
【0138】
薬理学的評価本発明化合物の薬理学的評価を以下に示す。
１．酵素アッセイ
本発明化合物の、ＪＡＫに対する阻害活性を測定した。
各酵素（ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、及びＴｙｋ２）は、カルナバイオサイエンス社から購入したものを使用した。
酵素の基質（以下、基質という）は、ＬＡＮＣＥ Ｕｌｔｒａ ＵＬｉｇｈｔ―ＪＡＫ―１（Ｔｙｒ１０２３） Ｐｅｐｔｉｄｅ（パーキンエルマー社製）を使用した。
基質のリン酸化の検出抗体は、ＬＡＮＣＥ Ｕｌｔｒａ Ｅｕｒｏｐｉｕｍ−ａｎｔｉ−ｐｈｏｓｐｈｏ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ （ＰＴ６６） (パーキンエルマー社製）を使用した。
その他の試薬はそれぞれ以下の各社から購入したものを使用した。
アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）：シグマ社製
４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）： ドウジンドウ社製
グリコールエーテルジアミン四酢酸（ＥＧＴＡ）：ドウジンドウ社製
塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ２）：和光純薬社製
ジチオトレイトール（ＤＴＴ）：和光純薬社製
Ｔｗｅｅｎ２０：シグマ社製
エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）：ドウジンドウ社製
【0139】
本発明化合物、各酵素（ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、及びＴｙｋ２）、基質、及びＡＴＰは、それぞれアッセイバッファーで希釈してアッセイに用いた。アッセイバッファーとしては、以下の組成のものを用いた。
ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）：５０ｍＭ
ＥＧＴＡ：１ｍＭ
ＭｇＣｌ２：１０ｍＭ
ＤＴＴ：２ｍＭ
Ｔｗｅｅｎ２０ ：０．０１％（重量／重量）
【0140】
希釈の濃度、及び後述するウェルプレート上への添加量は、ウェルプレート上で、それぞれ以下の終濃度になるように調製した。化合物の濃度は、１μＭ、０．３μＭ、０．１μＭ、０．０３μＭ、０．０１μＭ、０．００３μＭ、０．００１μＭ、０．０００３μＭ、０．０００１μＭ、０．００００３μＭ、及び０．００００１μＭの１１濃度のうち、連続した６濃度を使用した。
酵素濃度及びＡＴＰ濃度は、各酵素（ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、及びＴｙｋ２）試験において、以下の通りである。
ＪＡＫ１酵素試験；酵素濃度は０．５μｇ／ｍＬ、ＡＴＰ濃度は７０μＭ。
ＪＡＫ２酵素試験；酵素濃度は０．０１３μｇ／ｍＬ、ＡＴＰ濃度は１０μＭ。
ＪＡＫ３酵素試験；酵素濃度は０．０２０μｇ／ｍＬ、ＡＴＰ濃度は３μＭ。
Ｔｙｋ２酵素試験；酵素濃度は０．２５μｇ／ｍＬ、ＡＴＰ濃度は２０μＭ。
酵素の基質の濃度は、２５ｎＭとした。
ＥＤＴＡの濃度は、１５ｍＭとした。
ＰＴ６６の濃度は、２ｎＭとした。
【0141】
黒色３８４ウェルプレート（グライナー社製）に、化合物希釈液と酵素希釈液を添加し、室温で５分間プレインキュベーションした。その後、基質希釈液、次いでＡＴＰを添加し、室温で３０分インキュベーションした。
その後、ＥＤＴＡ希釈液、次いでＰＴ６６希釈液を添加し、室温で１時間インキュベーションした。
その後、ＡＲＶＯ―ＨＴＳにより蛍光を測定し、化合物濃度の対数値と阻害活性をプロットすることでＩＣ５０値を得た。
表１に、合成例１乃至７の化合物の、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３及びＴｙｋ２酵素アッセイの結果を示す。
下記表１に示すように、本発明化合物は、ＪＡＫに対して良好な酵素阻害作用を示した。
【0142】
【表1】
【0143】
２．ラット全血シグナルアッセイ本発明化合物である合成例１及び２の、ＪＡＫを経由するサイトカインシグナルに対する阻害活性を、ラット全血を用いたＳＴＡＴリン酸化アッセイにて測定した。
Ｌｅｗｉｓラット雌は、日本チャールス・リバー社より購入して使用した。
ラットＩＬ−６は、ペプロテック社より購入したものを使用した。
ＦＩＴＣ（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）蛍光標識された抗ＣＤ３抗体（以下、ＦＩＴＣ−ＣＤ３という）は、イ−バイオサイエンス社より購入したものを使用した。
ＢＤ Ｐｈｏｓｆｌｏｗ Ｌｙｓｅ／Ｆｉｘ Ｂｕｆｆｅｒ、
ＢＤ Ｐｈｏｓｆｌｏｗ Ｐｅｒｍ Ｂｕｆｆｅｒ ＩＩＩ、
ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒ、
及びＢＤ Ｐｈｏｓｆｌｏｗ ＳＴＡＴ−１（ｐＹ７０１）ＰＥ（Ｒ−Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ）蛍光標識（以下、ＢＤ Ｐｈｏｓｆｌｏｗ ＳＴＡＴ−１という）は、ＢＤ（ベクトンディキンソン）社より購入したものを使用した。
【0144】
希釈の濃度、及び後述するチューブ中への添加量は、チューブ中で、それぞれ以下の終濃度になるように調製した。化合物の濃度は、１ μＭ、０．１ μＭ、０．０１ μＭの３濃度、又は１０ μＭ、１ μＭ、０．１ μＭの３濃度とした。
ラットＩＬ−６の濃度は、１００ｎｇ／ｍＬとした。
ＦＩＴＣ−ＣＤ３の濃度は、１μｇ／ｍＬとした。
【0145】
Ｌｅｗｉｓラット雌の腹大静脈より血液を採取した。コースター社製アッセイブロックチューブに血液と化合物を添加し、３７℃で１５分間インキュベーションした。次いで、ＦＩＴＣ−ＣＤ３を添加し、３７℃で１５分間インキュベーションした。その後、ラットＩＬ−６を添加し、３７℃で１５分間インキュベーションした。次に、ＢＤ Ｐｈｏｓｆｌｏｗ Ｌｙｓｅ／Ｆｉｘ Ｂｕｆｆｅｒを血液の１０倍量添加し、３７℃で１２分間インキュベーションした。その後、遠心分離機にて５８８４ｍ／ｓ２で６分間の遠心分離を行い、細胞を沈降させ、上清を除去した。細胞沈査を１ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した後に、細胞沈査にＢＤ Ｐｈｏｓｆｌｏｗ Ｐｅｒｍ Ｂｕｆｆｅｒ ＩＩＩを０．６ｍＬ添加し、氷上で３０分間インキュベーションした。その後、遠心分離機にて５８８４ｍ／ｓ２で６分間の遠心分離を行い、細胞を沈降させ、上清を除去した。
【0146】
細胞沈査を０．３ｍＬのＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒで洗浄した後に、細胞沈査にＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒを０．1ｍＬ添加し、次いで、ＢＤ Ｐｈｏｓｆｌｏｗ ＳＴＡＴ−１を１０μＬ添加し、室温で３０分間インキュベーションした。その後、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒを０．1ｍＬ添加し、遠心分離機にて５８８４ｍ／ｓ２で６分間の遠心分離を行い、細胞を沈降させ、上清を除去した。細胞沈査を０．３ｍＬのＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒで洗浄した後に、細胞沈査にＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒを０．１２ｍＬ添加した。その後、ＦＡＣＳ ＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤ社製）を用いて、ＦＩＴＣ蛍光標識されたＣＤ３陽性Ｔ細胞を認識し、該細胞におけるリン酸化されたＳＴＡＴ―１蛋白質の量を、ＰＥ蛍光値として検出することで、サイトカインシグナル阻害を測定した。化合物濃度の対数値と阻害活性をプロットすることで、ＩＣ５０値を得た。
表２に、合成例１及び２の化合物のラット全血シグナルアッセイの結果を示す。
【0147】
【表2】
【0148】
ＪＡＫ阻害作用が有効である疾患のうち、特に関節リウマチで高い有効性を示すためには、ラット全血シグナルアッセイで良好な阻害作用を示すことがより好ましい。本発明化合物は、ＪＡＫ阻害活性を介してラット全血におけるサイトカイン刺激時のＪＡＫ経由シグナルに対して優れた阻害活性を示した。
また、国際公開第２０１３／０２４８９５号に記載のＣｏｍｐｏｕｎｄ Ａ（実施例ｂ１０２）、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｂ（実施例ｂ１１６）、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｃ（実施例ｂ１２２）及びＣｏｍｐｏｕｎｄ Ｄ（実施例ｂ１２７）の、ラット全血シグナルアッセイの結果を表３に示す。
【化7】
【0149】
【表3】
【0150】
３．ヒト全血シグナルアッセイ本発明化合物である合成例３乃至７の、ＪＡＫを経由するサイトカインシグナルに対する阻害活性を、ヒト全血を用いたＳＴＡＴリン酸化アッセイにて測定した。
ヒト全血は健常人より採血したものを使用した。
ヒトＩＬ−６は、Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ社より購入したものを使用した。
ＦＩＴＣ（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）蛍光標識された抗ヒトＣＤ３抗体（以下、ＦＩＴＣ−ｈＣＤ３）は、ＢＤ（ベクトンディキンソン）社より購入したものを使用した。
ＢＤ Ｐｈｏｓｆｌｏｗ Ｌｙｓｅ／Ｆｉｘ Ｂｕｆｆｅｒ、
ＢＤ Ｐｈｏｓｆｌｏｗ Ｐｅｒｍ Ｂｕｆｆｅｒ ＩＩＩ、
ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒ、
及びＢＤ Ｐｈｏｓｆｌｏｗ ＳＴＡＴ−１（ｐＹ７０１）ＰＥ（Ｒ−Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ）蛍光標識（以下、ＢＤ Ｐｈｏｓｆｌｏｗ ＳＴＡＴ−１）
は、ＢＤ社より購入したものを使用した。
【0151】
希釈の濃度、及び後述するチューブ中への添加量は、チューブ中で、それぞれ以下の終濃度になるように調製した。化合物の濃度は、３μＭ、１．５μＭ、０．７５μＭ、０．３８μＭ、０．１９ μＭ、及び０．０９３μＭの６濃度、２μＭ、１μＭ、０．５μＭ、０．２５μＭ、０．１３μＭ、及び０．０６３μＭの６濃度、又は１０μＭ、５μＭ、２．５μＭ、１．２５μＭ、０．６３μＭ、及び０．３１μＭの６濃度とした。
ヒトＩＬ−６の濃度は、１００ｎｇ／ｍＬとした。
【0152】
コースター社製アッセイブロックチューブにヒト血液と化合物を添加し、３７℃で３０分間インキュベーションした。次いで、ヒトＩＬ−６を添加し、３７℃で１５分間インキュベーションした。次に、ＢＤ Ｐｈｏｓｆｌｏｗ Ｌｙｓｅ／Ｆｉｘ Ｂｕｆｆｅｒを血液の１０倍量添加し、３７℃で１２分間インキュベーションした。その後、遠心分離機にて５８８４ｍ／ｓ２で６分間の遠心分離を行い、細胞を沈降させ、上清を除去した。細胞沈査を１ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した後に、細胞沈査にＢＤ Ｐｈｏｓｆｌｏｗ Ｐｅｒｍ Ｂｕｆｆｅｒ ＩＩＩを０．６ｍＬ添加し、氷上で３０分間インキュベーションした。その後、遠心分離機にて５８８４ｍ／ｓ２で６分間の遠心分離を行い、細胞を沈降させ、上清を除去した。
【0153】
細胞沈査を０．３ｍＬのＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒで洗浄した後に、細胞沈査にＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒを０．1ｍＬ添加し、次いで、ＢＤ Ｐｈｏｓｆｌｏｗ ＳＴＡＴ−１を１０μＬ、及びＦＩＴＣ−ｈＣＤ３を５μＬ添加し、室温で３０分間インキュベーションした。その後、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒを０．1ｍＬ添加し、遠心分離機にて５８８４ｍ／ｓ２で６分間の遠心分離を行い、細胞を沈降させ、上清を除去した。細胞沈査を０．３ｍＬのＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒで洗浄した後に、細胞沈査にＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒを０．１２ｍＬ添加した。その後、ＦＡＣＳ ＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤ社製）を用いて、ＦＩＴＣ蛍光標識されたＣＤ３陽性Ｔ細胞を認識し、該細胞におけるリン酸化されたＳＴＡＴ―１蛋白質の量を、ＰＥ蛍光値として検出することで、サイトカインシグナル阻害を測定した。化合物濃度の対数値と阻害活性をプロットすることでＩＣ５０値を得た。
表４に、合成例３乃至７の化合物のヒト全血シグナルアッセイの結果を示す。
【0154】
【表4】
【0155】
ＪＡＫ阻害作用が有効である疾患のうち、特に関節リウマチで高い有効性を示すためには、ヒト全血シグナルアッセイで良好な阻害作用を示すことがより好ましい。本発明化合物は、ＪＡＫ阻害活性を介してヒト全血におけるサイトカイン刺激時のＪＡＫ経由シグナルに対して優れた阻害活性を示した。
また、国際公開第２０１３／０２４８９５号に記載のＣｏｍｐｏｕｎｄ Ｅ（実施例ｂ２０）、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｆ（実施例ｂ６９）、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｇ（実施例ｂ７０））、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｈ（実施例ｂ１０６））、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｉ（実施例ｂ１０７）及びＣｏｍｐｏｕｎｄ Ｊ（実施例ｂ８６）の、ヒト全血シグナルアッセイの結果を表５に示す。
【0156】
【化8】
【0157】
【表5】
【0158】
４．赤白血病細胞株増殖阻害作用ＪＡＫシグナルを経由する細胞増殖に対する、本発明化合物の阻害活性は、ヒト赤白血病細胞株ＴＦ−１を用いて測定可能である。
ＴＦ−１細胞（ＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ））は、５重量％ウシ胎仔血清（以下、ＦＢＳ：Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍという）、及び１ｎｇ／ｍＬのＧＭ―ＣＳＦ（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ Ｃｏｌｏｎｙ―Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ）を添加したＲＰＭＩ１６４０培地でＣＯ２インキュベータ（５体積％ＣＯ２、３７℃）にて増殖維持する。試験時に、ＰＢＳで洗浄したＴＦ−１細胞を、５重量％ＦＢＳを添加したＲＰＭＩ１６４０培地に懸濁後、９６ウェル培養プレートに、１ウェルあたり１×１０４個を播種する。その培養プレートの各ウェルに化合物を添加し、３７℃にて３０分間インキュベーションする。その後、ＩＬ−４又はＩＬ−６などのサイトカインを、それぞれ添加する。その後、培養プレートは、ＣＯ２インキュベータ（５体積％ＣＯ２、３７℃）で３日間インキュベーションする。
【0159】
細胞増殖度はＷＳＴ−８試薬（キシダ化学社製）を用い、取扱説明書に従いアッセイ可能である。ＷＳＴ−８試薬を培養プレートの各ウェルに添加後、ＣＯ２インキュベータ（５体積％ＣＯ２、３７℃）で４時間インキュベーションする。発色したホルマザン色素は、マイクロプレートリーダーを用いて、４５０ｎｍの吸光度を測定することで検出可能である。化合物濃度の対数値と抑制活性をプロットすることで、ＩＣ５０値を算出することができる。【0160】
５．経口吸収性ＪＡＫ阻害作用が有効である疾患の薬物治療では、薬物化合物が経口吸収性を有することが好ましい。本発明化合物の経口吸収性は、例えば、ラットを用いた下記の方法により測定可能である。
化合物を０．６ｍｇ／ｍＬの濃度になるよう、０．５重量％メチルセルロース液に懸濁する。その懸濁液を３ｍｇ／ｋｇ／５ｍＬの用量で、Ｌｅｗｉｓラット雌（日本チャールス・リバー社）に、ゾンデを用いて強制経口投与する。その後、ヘパリンを抗凝血薬として用い、化合物投与後（０．５〜８時間後）、経時的にラット頚静脈より採血する。得られた血液を遠心分離機により１７６５２ｍ／ｓ２で１０分間遠心分離し、血漿を得る。得られた血漿を、液体クロマトグラフィータンデム質量分析装置（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ：ウォーターズ社製）を用いて分析することで、経口投与後（０．５〜８時間後）における、化合物の血漿中濃度推移を算出することができる。
【0161】
６．コラーゲン誘発ラット関節炎モデルでの作用ＪＡＫ阻害作用が有効である疾患のうち、特に、関節リウマチでの治療効果を実験動物モデルで確認するには、ラットを用いたコラーゲン誘発関節炎モデル（プロスタグランジン アンド アザー リピッド メディエータース、第６６巻、３１７−３２７ページ、２００１年（Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ ＆ ｏｔｈｅｒ Ｌｉｐｉｄ Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ，２００１，６６，ｐｐ．３１７−３２７）)を用いた、以下の測定方法を用いることができる。
ウシＩＩ型コラーゲン溶液（コンドレックス社製）と不完全フロイントアジュバント（ディフコ社製）を等量混合し、エマルジョン化して免疫溶液を作製する。次に、Ｌｅｗｉｓラット雌（日本チャールス・リバー社製）の背部４箇所及び尾の付け根部１箇所へ、ハミルトンシリンジを用いて、免疫溶液を１００μL／箇所で皮内投与する。免疫溶液投与７日後に、再度、免疫溶液を同様に皮内投与する。
投与する化合物は、上記２．の全血シグナルアッセイで得られたサイトカインシグナル阻害のＩＣ５０値と、上記５．の経口吸収性で得られた化合物の血漿中濃度より、適宜決めた濃度になるよう、０．５重量％メチルセルロース液に懸濁する。この化合物懸濁液を、２回目の免疫後から連日経口投与する。
２回目の免疫後、２〜３週間で腫れた後肢甲部の厚さをノギスにて測定することで、化合物による関節炎抑制度合いを算出することができる。
【0162】
以下に、本発明化合物を用いた製剤例を示す。なお、以下の製剤例１乃至５において、化合物（Ａ）とは、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）で表される化合物を意味する。製剤例１
以下の成分を含有する顆粒剤を製造する。
成分 化合物（Ａ） １０ｍｇ
乳糖 ７００ｍｇ
コーンスターチ ２７４ｍｇ
ＨＰＣ−Ｌ １６ｍｇ
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
計 １０００ｍｇ
化合物（Ａ）と乳糖を６０メッシュのふるいに通す。コーンスターチを１２０メッシュのふるいに通す。これらをＶ型混合機にて混合する。混合末に低粘度ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ−Ｌ）水溶液を添加し、練合し、造粒（押し出し造粒 孔径０．５〜１ｍｍ）した後、乾燥する。得られた乾燥顆粒を、振動ふるい（１２／６０メッシュ）で篩過し顆粒剤を得る。
【0163】
製剤例２以下の成分を含有するカプセル充填用散剤を製造する。
成分 化合物（Ａ） １０ｍｇ
乳糖 ７９ｍｇ
コーンスターチ １０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム １ｍｇ
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
計 １００ｍｇ
化合物（Ａ）と乳糖を６０メッシュのふるいに通す。コーンスターチを１２０メッシュのふるいに通す。これらとステアリン酸マグネシウムをＶ型混合機にて混合する。１０倍散１００ｍｇを５号硬ゼラチンカプセルに充填する。
【0164】
製剤例３以下の成分を含有するカプセル充填用顆粒剤を製造する。
成分 化合物（Ａ） １５ｍｇ
乳糖 ９０ｍｇ
コーンスターチ ４２ｍｇ
ＨＰＣ−Ｌ ３ｍｇ
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
計 １５０ｍｇ
化合物（Ａ）と乳糖を６０メッシュのふるいに通す。コーンスターチを１２０メッシュのふるいに通す。これらをＶ型混合機にて混合する。混合末に低粘度ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ−Ｌ）水溶液を添加し、練合して、造粒した後、乾燥する。得られた乾燥顆粒を、振動ふるい（１２／６０メッシュ）で篩過し整粒し、その１５０ｍｇを４号硬ゼラチンカプセルに充填する。
【0165】
製剤例４以下の成分を含有する錠剤を製造する。
成分 化合物（Ａ） １０ｍｇ
乳糖 ９０ｍｇ
微結晶セルロース ３０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ５ｍｇ
ＣＭＣ−Ｎａ １５ｍｇ
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計 １５０ｍｇ
化合物（Ａ）と乳糖と微結晶セルロース、ＣＭＣ−Ｎａ（カルボキシメチルセルロース ナトリウム塩）を６０メッシュのふるいに通し、混合する。混合末にステアリン酸マグネシウムを添加し、製剤用混合末を得る。本混合末を直打して、１５０ｍｇの錠剤を得る。
【0166】
製剤例５静脈用製剤は次のように製造する。
化合物（Ａ） １００ｍｇ
飽和脂肪酸グリセリド １０００ｍＬ
上記成分を含む溶液は、通常、１分間に１ｍＬの速度で患者に静脈内投与される。
【産業上の利用可能性】
【0167】
本発明化合物は、優れたＪＡＫ阻害活性を有し、特に関節リウマチなどの自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー疾患、癌、白血病の予防、治療又は改善に有用な化合物を提供することができる。なお、２０１４年５月１４日に出願された日本特許出願２０１４−１００７１２号の明細書、特許請求の範囲、及び要約書の全内容をここに引用し、本発明の明細書の開示として、取り入れるものである。