特許 6705628 形質細胞様樹状細胞誘導剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6705628

(24)【登録日】2020年5月18日

(45)【発行日】2020年6月3日

(54)【発明の名称】形質細胞様樹状細胞誘導剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/747 20150101AFI20200525BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20200525BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20200525BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20200525BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20200525BHJP

   A23L 33/135 20160101ALI20200525BHJP

   A23K 20/00 20160101ALI20200525BHJP

【ＦＩ】

   A61K35/747

   A61P37/04

   A61P37/02

   A61P29/00

   A61P31/12

   A23L33/135

   A23K20/00

【請求項の数】3

【全頁数】8

(21)【出願番号】特願2015-153961(P2015-153961)

(22)【出願日】2015年8月4日

(65)【公開番号】特開2017-31109(P2017-31109A)

(43)【公開日】2017年2月9日

【審査請求日】2018年7月20日

【微生物の受託番号】IPOD  FERM BP-5445

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】711002926

【氏名又は名称】雪印メグミルク株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】110000774

【氏名又は名称】特許業務法人 もえぎ特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】小川 哲弘

(72)【発明者】

【氏名】細谷 知広

(72)【発明者】

【氏名】酒井 史彦

【審査官】 長谷川 茜

(56)【参考文献】

【文献】 特開２００７−０９９６２８（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開２０１１−１２１９２３（ＪＰ，Ａ）

【文献】 佐藤克明，ｐＤＣｓと免疫応答，医学のあゆみ，２０１５年 ８月１８日，Vol.242 No.6,7，p.541

【文献】 GOUBIER ANNE, et al.，Plasmacytoid dendritic cells mediate oral tolerance，Immunity，２００８年，Vol.29 No.3，pp.464-475

【文献】 DASGUPTA SURYASARATHI, et al.，Plasmacytoid dendritic cells mediate anti-inflammatory responses to a gut commensal molecule via both innate and adaptive mechanisms，Cell host & microbe，２０１４年，Vol.15 No.4，pp.413-423

【文献】 城内健太ら，ウイルス感染防御を担うプラズマサイトイド樹状細胞を活性化する乳酸菌の発見１，日本農芸化学会大会講演要旨集，２０１１年，Vol.2011，p.215

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ａ６１Ｋ ３５／７４７

Ａ２３Ｌ ３３／１３５

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ラクトバチルス・ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）ＳＢＴ２１７１（ＦＥＲＭ ＢＰ−５４４５）の菌体又はその培養物を有効成分とする形質細胞様樹状細胞増加剤。

【請求項2】

請求項１に記載の剤を添加した形質細胞様樹状細胞増加用の栄養組成物、飲食品又は飼料。

【請求項3】

ラクトバチルス・ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）ＳＢＴ２１７１（ＦＥＲＭ ＢＰ−５４４５）の菌体又はその培養物をヒト又は動物に接種させることにより形質細胞様樹状細胞を増加する方法（ただし医療行為を除く）。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）に属する乳酸菌を有効成分とする、形質細胞様樹状細胞増加剤、飲食品、栄養組成物および飼料に関する。

【背景技術】

【0002】

免疫は、多くの動物に備わった生体防御機構であり、外部より侵入する細菌やウイルスなどの病原体や生体内で生じた腫瘍細胞を排除する役割を担う。免疫系には、自然免疫系と獲得免疫系の２つのシステムが存在し、生体防御機能を担っている。自然免疫系は，先天的に備わった免疫系であり、獲得免疫系は，後天的に外来異物の刺激に応じて形成される免疫系である。細菌やウイルスなどの異物が体内に進入すると、まず自然免疫系を担うマクロファージ、ＮＫ細胞、樹状細胞が異物の除去に向けて働く。引き続いて樹状細胞は、異物の情報をＴ細胞やＢ細胞に伝達することで、異物を特異的に攻撃するＣＤ８＋Ｔ細胞や抗体産生を誘導して獲得免疫系を活性化させる。

【0003】

このように樹状細胞は、自身が自然免疫系を担当する細胞であり、かつ獲得免疫系にも関与する細胞であることから、免疫全体の司令塔として機能している。樹状細胞には様々な種類が存在するが、大きく分けて古典的樹状細胞（conventional dendritic cell:ｃＤＣ）と形質細胞様樹状細胞（plasmacytoiddendritic cell:ｐＤＣ）に分類される。古典的樹状細胞は強い抗原提示能を有することから、獲得免疫系の誘導に重要な役割を果たす。一方、形質細胞様樹状細胞は抗原提示能は弱いものの、異物の排除に向かう免疫賦活系だけではなく、過剰な免疫応答を抑制する免疫制御系をも調節することから、免疫系の恒常性を保つための要となっている細胞である。

【0004】

異物排除における形質細胞様樹状細胞の特徴として、ウイルス感染時に大量のＩ型およびIII型インターフェロン（ＩＦＮ）を産生することがあげられる。Ｉ型およびIII型ＩＦＮは、ウイルスの増殖を阻止するために生体が本来保有している抗ウイルス因子の産生を誘導するサイトカインであり、ウイルス感染が組織全体へ拡大するのを防ぐ役割がある。この反応では、ウイルス由来のＲＮＡまたはＤＮＡが細胞のＴＬＲ７またはＴＬＲ９と結合することでＩ型ＩＦＮの産生が強く刺激される。したがって、これまでにも抗ウイルス剤としてＴＬＲ７またはＴＬＲ９を刺激するようなＩ型ＩＦＮ誘導剤が広く研究されてきた。特許文献１に記載されるインターフェロン産生誘導剤は乳酸菌を有効成分とするものであるが、当該特許文献では形質細胞様樹状細胞を活性化してＩＦＮ産生を誘導するものであり、本発明が示す形質細胞様樹状細胞数を増加させるものとは本質的に異なるものである。また、当該特許文献で形質細胞様樹状細胞を活性化させる乳酸菌として示されているのはラクトコッカス・ラクティス（Lactococcus lactis）のみであり、ラクトバチルス（Lactobacillus）属の乳酸菌にはその活性化作用は無いことが示されている。また、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）については一切検討されてこなかった。

【0005】

一方、免疫制御系における形質細胞様樹状細胞の特徴は、ＩＬ−１０産生型Ｔ細胞や制御性Ｔ細胞を誘導することであり、炎症性疾患の抑制に大きく寄与している。一般的に免疫賦活剤で生体防御機能を高めると、生態防御機能が行き過ぎたことによる炎症の惹起が懸念される。逆に抗炎症剤などを使用すると、行き過ぎた生体防御機能の低下による感染リスクの上昇が懸念されてきた。しかし、形質細胞様樹状細胞は、免疫賦活剤と抗炎症剤の機能を併せ持ち、ウイルス感染からの重要な防御機能でありながら、同時に免疫制御系に働きかける機能を有しており、まさしく免疫機能の恒常性維持に関わる要の細胞である。したがって、生体内で形質細胞様樹状細胞の数が低下すると、ウイルス感染リスクが高まるばかりでなく炎症性疾患のリスクも高まることから、生体内での形質細胞様樹状細胞の数を増やすような薬剤または食品成分が期待されてきた。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【特許文献1】再公表２０１２−９１０８１号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

特許文献１に記載されるインターフェロン産生誘導材は、ウイルス感染に一定の効果を有する。しかし、全身性エリスマトーデスのように血清中のＩ型ＩＦＮ高値が憎悪因子となる疾病も存在することから、特許文献１のようなインターフェロン産生誘導剤を用いると、必要以上に形質細胞様樹状細胞を刺激して過剰なＩ型ＩＦＮの産生を促してしまい好ましくない。ウイルス感染時には形質細胞様樹状細胞から相当量のＩ型ＩＦＮが産生されることから、平時には形質細胞様樹状細胞を活性化させるよりも、ウイルス感染時に対応できるだけの細胞数を保つことが重要と考えられる。そこで、本発明は、形質細胞様樹状細胞を増加させることで、感染症の予防と炎症疾患の予防の両者の効果をもたらすことができる形質細胞様樹状細胞の増加を誘導する医薬品や栄養組成物、飲食品および飼料を提供することを課題とする。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本発明者らは、生体内で形質細胞様樹状細胞を増加させる因子を鋭意探索した結果、乳酸菌のLactobacillus helvetivcusを見出し、本発明を完成させるに至った。
即ち本発明は以下の構成を有する
（１）ラクトバチルス・ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）に属する乳酸菌又はその培養物を有効成分とする形質細胞様樹状細胞誘導剤。
（２）前記ラクトバチルス・ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）に属する乳酸菌がラクトバチルス・ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）ＳＢＴ２１７１株（ＦＥＲＭ ＢＰ−５４４５）であることを特徴とする、（１）に記載の形質細胞様樹状細胞誘導剤。
（３）（１）又は（２）に記載の剤を有効成分として含む免疫賦活剤。
（４）（１）又は（２）に記載の剤を有効成分として含むウイルス感染予防または治療剤。
（５）（１）又は（２）に記載の剤を有効成分として含む免疫寛容誘導剤。
（６）（１）又は（２）に記載の剤を有効成分として含む抗炎症剤。
（７）（１）〜（６）のいずれかに記載の剤を添加した栄養組成物、飲食品又は飼料。

【発明の効果】

【0009】

Lactobacillus helvetiusを摂取する事で、生体内で形質細胞様樹状細胞の増加が誘導され、ウイルスなどに対する感染予防効果とともに、過剰な免疫応答を予防、改善することができる。また、該乳酸菌を含有するチーズまたは乳酸菌飲料を食することで、形質細胞様樹状細胞を増加させることも可能となる

【図面の簡単な説明】

【0010】

【図1】マウスにラクトバチルス・ヘルベティカス ＳＢＴ２１７１株の菌体を経口投与し、腸間膜リンパ節における形質細胞様樹状細胞数を比較した図である。

【図2】マウスにラクトバチルス・ヘルベティカス ＳＢＴ２１７１株の菌体培養物を経口投与し、腸間膜リンパ節における形質細胞様樹状細胞数を比較した図である。

【発明を実施するための形態】

【0011】

本発明における乳酸菌としては、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）に属する乳酸菌を用いることができる。特に、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）ＳＢＴ２１７１株（ＦＥＲＭ ＢＰ−５４４５として寄託）、ＳＢＴ−２１６１株（ＮＩＴＥ ＢＰ−０１７０７として寄託）、ＳＢＴ２１９５株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１５３８として寄託）、ＳＢＴ２１９６株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１６７６として寄託）、ＳＢＴ００６４株（ＦＥＲＭ Ｐ−２１０７９として寄託）、ＳＢＴ０４０２株（ＦＥＲＭ Ｐ−２１５５９として寄託）等が好ましいが、これらに限定されるものではない。
ラクトバチルス・ヘルベティカスは、乳酸菌培養の常法に従って培養することができる。培養培地には、乳培地又は乳成分を含む培地、これを含まない半合成培地など種々の培地を用いることができる。このような培地としては、還元脱脂乳培地などを例示することができる。
得られた培養物から遠心分離などの集菌手段によって分離された菌体をそのまま本発明の有効成分として用いることができる。濃縮、乾燥、凍結乾燥などした菌体を用いることもできるし、加熱乾燥などにより死菌体にしてもよい。
菌体として純粋に分離されたものだけでなく、培養物、懸濁物、その他の菌体含有物や、菌体を酵素や物理的手段を用いて処理した細胞質や細胞壁画分も用いることができる。
培養物などの形態としては、合成培地であるＭＲＳ培地（ＤＩＦＣＯ社製）、還元脱脂乳培地など一般的に乳酸菌の培養に用いられる培地を用いた培養物だけでなく、チーズ、発酵乳、乳製品乳酸菌飲料などの乳製品などを例示することができるが特に限定されるものではない。
さらに、得られた培養物から遠心分離、濾過操作などの方法を用いて、乳タンパク質沈殿や菌体成分を除去することによって調製した培養上清なども用いることができる。固形分が少ない上清であるため、飲食品などへの適用範囲が広くなる。例えば、還元脱脂乳培養物を５，０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離することにより培養上清を調製することができる。
本発明における形質細胞様樹状細胞誘導作用とは、形質細胞様樹状細胞の増加を誘導する作用をいう。形質細胞様樹状細胞数を増加させることで当該細胞が有する免疫賦活剤と抗炎症剤の機能を発揮させることができるからである。

【0012】

製剤化に際しては製剤上許可されている賦型剤、安定剤、矯味剤などを適宜混合して濃縮、凍結乾燥するほか、加熱乾燥して死菌体にしてもよい。これらの乾燥物、濃縮物、ペースト状物も含有される。また、ラクトバチルス・ヘルベティカスの形質細胞様樹状細胞誘導作用を妨げない範囲で、賦型剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、懸濁剤、コーティング剤、その他の任意の薬剤を混合して製剤化することもできる。剤形としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、粉剤、シロップ剤などが可能であり、これらを経口的に投与することが望ましい。

【0013】

本発明の形質細胞様樹状細胞誘導剤はどのような飲食品に配合しても良く、飲食品の製造工程中に原料に添加しても良い。飲食品の例としては、チーズ、発酵乳、乳製品乳酸菌飲料、乳酸菌飲料、バター、マーガリンなどの乳製品、乳飲料、果汁飲料、清涼飲料などの飲料、ゼリー、キャンディー、プリン、マヨネーズなどの卵加工品、バターケーキなどの菓子・パン類、さらには、各種粉乳の他、乳幼児食品、栄養組成物などを挙げることができるが特に限定されるものではない。

【0014】

本発明の形質細胞様樹状細胞誘導剤は、これを有効成分とする免疫賦活剤、ウイルス感染予防または治療剤、免疫寛容誘導剤、または抗炎症剤として利用することができる。
さらに、本発明の形質細胞様樹状細胞誘導剤を飼料に配合することができる。前記飲食品と同様にどのような飼料に配合しても良く、飼料の製造工程中に原料に添加しても良い。

【0015】

ラクトバチルス・ヘルベティカスの菌体又は培養物を配合して、形質細胞様樹状細胞誘導剤あるいは、形質細胞様樹状細胞誘導用飲食品、栄養組成物、飼料などの素材又はそれら素材の加工品に配合させて使用する場合、ラクトバチルス・ヘルベティカスの配合割合は特に限定されず、製造の容易性や好ましい一日投与量にあわせて適宜調節すればよい。投与対象者の症状、年齢などを考慮してそれぞれ個別に決定されるが、通常成人の場合、ラクトバチルス・ヘルベティカスの培養物などを１０〜２００ｇ、あるいはその菌体自体を０．１〜５，０００ｍｇ摂取できるように配合量などを調整すればよい。このようにして摂取することにより所望の効果を発揮することができる。

【0016】

以下に、実施例及び試験例を示し、本発明についてより詳細に説明するが、これらは単に例示するのみであり、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。

【実施例】

【0017】

［試験例１］マウスへのラクトバチルス・ヘルベティカス生菌体の経口投与試験
１．試験方法
２０匹のＢａｌｂ／ｃマウス（７週齢、雄）を対照群（ｃｏｎｔｒｏｌ群）とＬＨ２１７１群の２群（ｎ＝１０）に分け、対照群には標準食（ＡＩＮ９３Ｇ）を、ＬＨ２１７１群には標準食（ＡＩＮ９３Ｇ）にラクトバチルス・ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）ＳＢＴ２１７１株の凍結乾燥粉末を１％添加した食餌を自由に摂取させた。摂取開始から５週間後に解剖し、腸間膜リンパ節を摘出し細胞懸濁液を調製した。細胞を蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）解析するために、ＡＰＣ標識抗マウスＣＤ１１ｃ抗体、ＰＥ標識抗マウスＰＤＣＡ−１抗体、ＦＩＴＣ標識抗マウスＭＨＣ抗体、ＰＢ標識抗マウスＢ２２０抗体で細胞表面を染色した。ＦＡＣＳで検出されたＰＤＣＡ−１＋，ＣＤ１１ｃｉｎｔ，Ｂ２２０＋，ＭＨＣ＋である細胞群を形質細胞様樹状細胞としてカウントし、全細胞数に対する割合を測定し図１に示した。

【0018】

２．試験結果
図１より、ラクトバチルス・ヘルベティカスを添加した食餌を摂取した群（ＬＨ２１７１群）の方が、添加しない食餌を摂取した群（ｃｏｎｔｒｏｌ群）よりも腸間膜リンパ節における形質細胞様樹状細胞の割合が高いことが分かった。すなわち、ラクトバチルス・ヘルベティカス菌体の摂取によって、形質細胞様樹状細胞が増加することが示された。

【0019】

［実施例１］ラクトバチルス・ヘルベティカスの培養物の製造
原料乳を加熱殺菌（７５℃、１５秒間）した後、３０℃まで冷却し、０．０１％塩化カルシウムを添加した。さらに、市販乳酸菌スターター（ＬＤスターター、クリスチャン・ハンセン社）０．７％及びラクトバチルス・ヘルベティカスＳＢＴ２１７１株（ＦＥＲＭ ＢＰ−５４４５）１％を添加し、さらにレンネット０．００３％を添加して、乳を凝固させた。このようにして得られた凝乳をカッティングし、ｐＨが６．２〜６．１となるまで撹拌してホエーを排出して、カード粒を得た。そして、このカード粒を型詰めして圧搾し、さらに加塩して、１０℃で熟成させ、ゴーダチーズタイプの硬質ナチュラルチーズを調製した。この硬質ナチュラルチーズ（６ヶ月熟成）をミンチ器（ＧＭ‐ＤＸ、日本キャリア社製）を用いてミンチし、凍結乾燥を行った。その後、コーヒーミルにより微細化し、ラクトバチルス・ヘルベティカスの培養物であるチーズ粉を得た。

【0020】

［試験例２］マウスへのラクトバチルス・ヘルベティカス培養物の経口投与試験
１．試験方法
実施例１で得られたラクトバチルス・ヘルベティカスＳＢＴ２１７１の培養物を用いて経口投与試験を行った。試験方法は試験例１に準じて行った。解剖後の腸間膜リンパ節における形質細胞様樹状細胞の全細胞数に対する割合を測定し、その結果を図２に示した。
２．試験結果
図２より、ラクトバチルス・ヘルベティカスＳＢＴ２１７１の培養物を添加した食餌を摂取した群（ＬＨ２１７１群）の方が、添加しない食餌を摂取した群（ｃｏｎｔｒｏｌ群）よりも腸間膜リンパ節における形質細胞様樹状細胞の割合が高いことが分かった。すなわち、ラクトバチルス・ヘルベティカス培養物の摂取によって、形質細胞様樹状細胞が増加することが示された。

【0021】

［実施例２］ 形質細胞様樹状細胞誘導剤（顆粒）の製造
ラクトバチルス・ヘルベティカスＳＢＴ２１７１株を食用可能な合成培地（０．５％酵母エキス、０．１％トリプチケースペプトン添加）に５重量％接種し、３８℃で１５時間培養後、遠心分離で菌体を回収した。回収した菌体を凍結乾燥し、前記菌体の凍結乾燥粉末を得た。この凍結乾燥粉末１ｇを乳糖５ｇと混合し、顆粒状に成形して本発明の形質細胞様樹状細胞誘導剤を得た。

【0022】

［実施例３］ 形質細胞様樹状細胞誘導剤（顆粒）の製造
ラクトバチルス・ヘルベティカスＪＣＭ−１１２０株を食用可能な合成培地（０．５％酵母エキス、０．１％トリプチケースペプトン添加）に５重量％接種し、３８℃で１５時間培養後、遠心分離で菌体を回収した。回収した菌体を凍結乾燥し、前記菌体の凍結乾燥粉末を得た。この凍結乾燥粉末１ｇを乳糖５ｇと混合し、顆粒状に成形して本発明の形質細胞様樹状細胞誘導剤を得た。

【0023】

［実施例４］形質細胞様樹状細胞誘導剤（散剤）の製造
第１３改正日本薬局方解説書製剤総則「散剤」の規定に準拠し、上記実施例２で得られたラクトバチルス・ヘルベティカスＳＢＴ２１７１株の凍結乾燥粉末１０ｇに乳糖（日局）４００ｇ、バレイショデンプン（日局）６００ｇを加えて均一に混合し、本発明の形質細胞様樹状細胞誘導剤を製造した。

【0024】

［実施例５］形質細胞様樹状細胞誘導剤（散剤）の製造
第１３改正日本薬局方解説書製剤総則「散剤」の規定に準拠し、上記実施例３で得られたラクトバチルス・ヘルベティカスＪＣＭ−１１２０株の凍結乾燥粉末１０ｇに乳糖（日局）４００ｇ、バレイショデンプン（日局）６００ｇを加えて均一に混合し、本発明の形質細胞様樹状細胞誘導剤を製造した。

【0025】

［実施例６］スティック状栄養健康食品の製造
ビタミンＣ４０ｇまたはビタミンＣとクエン酸の等量混合物４０ｇ、グラニュー糖１００ｇ、コーンスターチと乳糖の等量混合物６０ｇに、上記実施例２で得られたラクトバチルス・ヘルベティカスＳＢＴ２１７１株の凍結乾燥粉末４０ｇを加えて混合した。混合物を袋に詰め、本発明のスティック状栄養健康食品を１５０袋製造した。

【0026】

［実施例７］飼料の製造
大豆粕１２ｋｇ、脱脂粉乳１４ｋｇ、大豆油４ｋｇ、コーン油２ｋｇ、パーム油２３．２ｋｇ、トウモロコシ澱粉１４ｋｇ、小麦粉９ｋｇ、ふすま２ｋｇ、ビタミン混合物５ｋｇ、セルロース２．８ｋｇ、ミネラル混合物２ｋｇを配合し、１２０℃、４分間殺菌して、実施例２で得られたラクトバチルス・ヘルベティカスＳＢＴ２１７１株１０ｋｇを配合して、飼料を製造した。

【産業上の利用可能性】

【0027】

ラクトバチルス・ヘルベティカスの菌体、該乳酸菌を含有するチーズまたは乳酸菌飲料を摂取する事で、形質細胞様樹状細胞を増加させ、ウイルスなどに対する感染予防効果とともに、過剰な免疫応答を予防、改善することができ、免疫疾患に有効な医薬品となる。

【受託番号】

【0028】

[寄託生物材料への言及]
（１）ラクトバチルス・ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）ＳＢＴ２１７１
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター
日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
平成６年６月２２日（１９９４年６月２２日）（原寄託日）
平成８年３月６日（１９９６年３月６日）（原寄託によりブタペスト条約に基づく寄託への移管日）
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＦＥＲＭ ＢＰ−５４４５

【図1】

【図2】