特許 6784963 ビタミンＤ３誘導体及びその薬学的用途

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6784963

(24)【登録日】2020年10月28日

(45)【発行日】2020年11月18日

(54)【発明の名称】ビタミンＤ３誘導体及びその薬学的用途

(51)【国際特許分類】

   C07C 401/00 20060101AFI20201109BHJP

   A61K 31/593 20060101ALI20201109BHJP

   C07D 495/04 20060101ALI20201109BHJP

   C07D 209/48 20060101ALI20201109BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20201109BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20201109BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20201109BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20201109BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20201109BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20201109BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20201109BHJP

【ＦＩ】

   C07C401/00CSP

   A61K31/593

   C07D495/04 103

   C07D209/48

   A61P3/00

   A61P1/16

   A61P3/04

   A61P3/10

   A61P9/00

   A61P35/00

   A61P43/00 111

【請求項の数】12

【全頁数】92

(21)【出願番号】特願2017-534365(P2017-534365)

(86)(22)【出願日】2015年12月24日

(65)【公表番号】特表2018-502100(P2018-502100A)

(43)【公表日】2018年1月25日

(86)【国際出願番号】JP2015006462

(87)【国際公開番号】WO2016103722

(87)【国際公開日】20160630

【審査請求日】2018年12月21日

(31)【優先権主張番号】62/096,575

(32)【優先日】2014年12月24日

(33)【優先権主張国】US

【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成２７年度、国立研究開発法人日本医療研究開発機構、「革新的先端研究開発支援事業 ユニットタイプ「疾患における代謝産物の解析および代謝制御に基づく革新的医療基盤技術の創出」研究領域」「ケミカルバイオロジーによる脂質内因性分子の新機能研究」委託研究開発、産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願。 平成２７年度、国立研究開発法人日本医療研究開発機構、「次世代がん研究シーズ戦略的育成プログラム（０１）」「「転写機能をターゲットとした創薬」（転写を標的とした革新的抗がん化合物シーズ）」委託研究開発

(73)【特許権者】

【識別番号】504132272

【氏名又は名称】国立大学法人京都大学

(73)【特許権者】

【識別番号】504132881

【氏名又は名称】国立大学法人東京農工大学

(74)【代理人】

【識別番号】100079108

【弁理士】

【氏名又は名称】稲葉 良幸

(74)【代理人】

【識別番号】100108213

【弁理士】

【氏名又は名称】阿部 豊隆

(74)【代理人】

【識別番号】100152331

【弁理士】

【氏名又は名称】山田 拓

(74)【代理人】

【識別番号】100134876

【弁理士】

【氏名又は名称】白石 真琴

(72)【発明者】

【氏名】渡邉 瑞貴

(72)【発明者】

【氏名】浅野 理沙

(72)【発明者】

【氏名】長澤 和夫

(72)【発明者】

【氏名】上杉 志成

【審査官】 伊佐地 公美

(56)【参考文献】

【文献】 特開昭６０−０６４９２４（ＪＰ，Ａ）

【文献】 OVES, D. et al.，The Journal of Organic Chemistry，２００３年，Vol. 68，pp. 1154-1157

【文献】 OVES, D. et al.，Bioorganic & Medicinal Chemistry，２００６年，Vol. 14，pp. 928-937

【文献】 GLEBOCKA, A. et al.，Archives of Biochemistry and Biophysics，２０１２年，Vol. 523，pp48-57

【文献】 SHIMAZAKI, M. et al.，Bioorganic & Medicinal Chemistry，２００６年，Vol. 14，pp. 4645-4656

【文献】 MICHALAK, K. et al.，The Journal of Organic Chemistry，２０１１年，Vol. 76，pp. 6906-6911

【文献】 MARCZAK, S. et al.，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，２００１年，Vol. 11，pp. 63-66

【文献】 FUJISHIMA, T. et al.，Bioorganic & Medicinal Chemistry，２０００年，Vol. 8，pp. 123-134

【文献】 WANG, X. X. et al.，American Journal of Physiology Renal Physiology，２０１１年，Vol. 300，pp. F801-F810

【文献】 領田 優太、他，日本薬学会第１３３年会 予稿集，公益社団法人日本薬学会，２０１３年，29K-pm09S

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

一般式（Ｉ）：

【化1】

（Ｉ）
［式中、
Ｒ^A及びＲ^Bの一方はヒドロキシルであり、他方はＮＲ¹Ｒ²であり；
Ｒ¹及びＲ²はそれぞれ独立して：水素；Ｃ_1-4アルキル；同一又は異なる少なくとも１つのハロゲンで置換されていてもよいＣ_1-4アルキルカルボニル；Ｃ_1-4アルキルスルホニル；ベンジルオキシカルボニル；３〜６員シクロアルキル−Ｃ_1-4アルキル；ハロゲン、ハロ−Ｃ_1-4アルキル、−Ｓ−ハロ−Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_1-4アルコキシ、ハロ−Ｃ_1-4アルコキシ、ニトロ、シアノ、Ｃ_1-4アルコキシカルボニル及びＣ_6-10アリールからなる群から独立して選択される少なくとも１つの基で置換されていてもよいＣ_6-10アリールカルボニル；Ｃ_1-4アルキル、ニトロ及びジ−（Ｃ_1-4アルキル）アミノからなる群から独立して選択される少なくとも１つの基で置換されていてもよいＣ_6-10アリールスルホニル；ハロゲン及びヒドロキシルからなる群から独立して選択される少なくとも１つの基で置換されていてもよい５〜６員飽和ヘテロシクリル−Ｃ_1-4アルキル；５〜６員ヘテロアリール；及び以下の式：

【化2】

で示される基から選択されるか；或いは
Ｒ¹及びＲ²は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、Ｃ_6-10アリール環と縮合していてもよい含窒素オキソ置換飽和５〜６員ヘテロ環を形成していてもよく；
Ｒ³は水素又は＝ＣＨ₂であり、但し、Ｒ¹及びＲ²が同時に水素ではない］
で示される化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項2】

Ｒ³が＝ＣＨ₂である、請求項１記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項3】

Ｒ³が水素である、請求項１記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項4】

以下の式のいずれか：

【化3】

［式中、Ｒ¹及びＲ²は請求項１で定義されたとおりであり、Ｒ³は請求項１〜３のいずれかに定義されたとおりである］
で示される、請求項１〜３のいずれか記載の化合物。

【請求項5】

Ｒ²が水素である、請求項１〜４のいずれか記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【請求項6】

以下の化合物から選択される、請求項１記載の化合物：

【化4-1】

【化4-2】

【化4-3】

【化4-4】

【請求項7】

治療を必要とする対象における、代謝性疾患、肝疾患、肥満、糖尿病、心血管疾患及びがんからなる群から選択される疾患の治療用医薬組成物であって、治療的有効量の請求項１〜６のいずれか記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む、医薬組成物。

【請求項8】

疾患が、肥満、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、脂肪肝又はがんである、請求項７記載の医薬組成物。

【請求項9】

化合物が、以下の化合物から選択される、請求項７又は８に記載の医薬組成物。

【化5-1】

【化5-2】

【化5-3】

【請求項10】

それを必要とする対象における、ＳＲＥＢＰ活性の阻害用医薬組成物であって、治療的有効量の請求項１〜６のいずれか記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む、医薬組成物。

【請求項11】

化合物が、以下の化合物から選択される、請求項１０に記載の医薬組成物。

【化6-1】

【化6-2】

【化6-3】

【請求項12】

有効成分としての請求項１〜６のいずれか記載の化合物又はその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、新規ビタミンＤ_３誘導体及びそれを必要とする対象における代謝性疾患、肝疾患、糖尿病、がん、肥満又は心血管疾患から選択される疾患を治療するための薬学的又は医学的用途を対象とする。

【背景技術】

【0002】

ステロール調節エレメント結合タンパク質（ＳＲＥＢＰ）は脂質ホメオスタシスに関与する転写因子のファミリーの一つである。ＳＲＥＢＰは脂肪酸、トリグリセリド、コレステロール及びリン脂質の生合成及び摂取と関連する遺伝子の発現を調整することによりすべての組織における脂質代謝を制御する。その脂質代謝における重要な役割のため、ＳＲＥＢＰはメタボリック・シンドロームと強く関連している。例えば、高カロリーの食事又は肥満により誘発される高インスリンレベルは、ＳＲＥＢＰを過剰に活性化し、これによりトリグリセリドの蓄積を引き起こし、脂肪肝疾患を誘発する。ＳＲＥＢＰの過剰な活性化はまた、コレステロールレベルを増加させ、インスリン受容体基質−２を抑制し、脂質異常症、動脈硬化及びインスリン耐性を引き起こす。さらに、ＳＲＥＢＰの活性化はがんの増殖及び肝炎ウイルスが脂肪肝疾患を引き起こすことと相関することが多い（非特許文献１）。ＳＲＥＢＰ活性化が複数の疾患に関与することから、その転写因子は重要な薬剤標的とされてきた。今日までＳＲＥＢＰ活性化経路を直接阻害する「内因性」分子として知られているものはステロールだけである。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0003】

【非特許文献1】J. A. Menendez and R. Lupu, Nat. Rev. Cancer, 2007, 7, 763-777; A. J. Brown, Biochem. J., 2008, 416, e15-e17

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

本発明の目的は、ＳＲＥＢＰ阻害剤として有用であり、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）などの代謝性疾患；脂肪肝などの肝疾患；糖尿病；がん；肥満；心血管疾患などの疾患の治療に有用な化合物を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0005】

本発明者らはＳＲＥＢＰ阻害剤として新規ビタミンＤ_３誘導体を見いだした。本発明におけるビタミンＤ_３誘導体は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）などの代謝性疾患；脂肪肝などの肝疾患；糖尿病；がん；肥満；心血管疾患などの疾患の治療に有用である。

【0006】

ある側面において、本発明は、一般式（Ｉ）：

【化1】

（Ｉ）
［式中、
Ｒ^Ａ及びＲ^Ｂはそれぞれ独立してヒドロキシル、ＮＲ^１Ｒ^２又はハロゲンから選択され；
Ｒ^１及びＲ^２はそれぞれ独立して水素、Ｃ_１−４アルキル、適宜置換されていてもよいＣ_１−４アルキルカルボニル、Ｃ_１−４アルキルスルホニル、Ｃ_１−４アルコキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、３〜６員シクロアルキル−Ｃ_１−４アルキル、適宜置換されていてもよいＣ_６−１０アリールカルボニル、適宜置換されていてもよいＣ_６−１０アリールスルホニル、適宜置換されていてもよい５〜６員飽和ヘテロシクリル−Ｃ_１−４アルキル、５〜６員ヘテロアリール又は以下の式：

【化2】

で示される基から選択されるか；或いは
Ｒ^１及びＲ^２は、適宜、それらが結合する窒素原子と一緒になって、適宜Ｃ_６−１０アリール環と縮合していてもよい含窒素オキソ置換飽和５〜６員ヘテロ環を形成していてもよく；
Ｒ^３は水素又は＝ＣＨ_２である］
で示される化合物又はその薬学的に許容される塩を対象とする。

【0007】

別の側面において、本発明はまた、治療を必要とする対象に、治療的有効量の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与する工程、又はビタミンＤ、ビタミンＤ３、及び２５−ＯＨＶｉｔＤ３、１，２５−ジ−ＯＨＶｉｔＤ３及び２４，２５−ジ−ＯＨＶｉｔＤ３などのビタミンＤ３の既知の誘導体を投与する工程を含む、対象における代謝性疾患、肝疾患、肥満、糖尿病、心血管疾患又はがんから選択される疾患の治療方法も対象とする。

【0008】

別の側面において、本発明はまた、治療を必要とする対象に、治療的有効量の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与する工程、又はビタミンＤ、ビタミンＤ３、及び２５−ＯＨＶｉｔＤ３、１，２５−ジ−ＯＨＶｉｔＤ３及び２４，２５−ジ−ＯＨＶｉｔＤ３などのビタミンＤ３の既知の誘導体を投与する工程を含む、対象におけるＳＲＥＢＰの阻害方法も対象とする。

【0009】

さらに別の側面において、本発明はまた、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分とし、薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物も対象とする。

【0010】

さらに別の側面において、本発明はまた、非アルコール性脂肪性肝炎などの代謝性疾患；脂肪肝などの肝疾患；糖尿病；がん；肥満；又は心血管疾患の治療のための医薬の製造における式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用も対象とする。

【0011】

さらに別の側面において、本発明はまた、非アルコール性脂肪性肝炎などの代謝性疾患；脂肪肝などの肝疾患；糖尿病；がん；肥満；又は心血管疾患の治療に用いるための式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩も対象とする。

【発明の効果】

【0012】

式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩はＳＲＥＢＰ阻害活性を有し、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）などの代謝性疾患；脂肪肝などの肝疾患；糖尿病；がん；肥満；心血管疾患などの疾患の治療に有用でありうる。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】図１は、ＰＬＡＰ−ＢＰアッセイによるビタミンＤ_３（ＶＤ）誘導体の評価を示す。ＶＤ誘導体の濃度を１０μＭに設定した。ステロールは１０μｇ／ｍＬコレステロール及び１．０μｇ／ｍＬ ２５−ヒドロキシコレステロール（２５−ＨＣ）の混合物であった。細胞をＤＭＳＯで処理した場合、ＰＬＡＰの分泌はトランスフェクトされたＳＲＥＢＰ開裂活性化タンパク質（ＳＣＡＰ）の量に比例して増大した。ステロール、既知のＳＲＥＢＰ阻害剤の添加により、ＰＬＡＰの分泌の増大が抑制された。２５（ＯＨ）Ｄ及び１，２５（ＯＨ）_２ＤはステロールよりもＰＬＡＰの分泌を阻害した。各値は二つの独立した実験の平均を示す。２５−ＯＨＶｉｔＤ３は２５−ヒドロキシビタミンＤ_３［２５（ＯＨ）Ｄ］を意味し；１，２５−ジ−ＯＨＶｉｔＤ３は１α，２５−ジ−ヒドロキシビタミンＤ_３［１，２５（ＯＨ）_２Ｄ］を意味し；２４，２５−ジ−ＯＨＶｉｔＤ３は２４，２５−ジ−ヒドロキシビタミンＤ_３を意味する。

【0014】

【図2】図２は、レポーターアッセイにおけるＳＲＥＢＰの活性化における２５（ＯＨ）Ｄの効果を示す。トランスフェクトされた細胞は、脂質フリー血清を含む培地にてＤＭＳＯのみ、ステロール（１０μｇ／ｍＬ コレステロール及び１．０μｇ／ｍＬ ２５−ＨＣ）又は種々の濃度の２５（ＯＨ）Ｄで処理した。ルシフェラーゼ活性は２０時間インキュベーション後に測定し、データをβ−ガラクトシダーゼ活性に正規化した。値は三つの独立した実験の平均値±標準偏差である。

【0015】

【図3】図３は、ＶＤ誘導体のＳＲＥＢＰ−２への効果を示す。ＣＨＯ−Ｋ１細胞はＤＭＳＯのみ又は各化合物（５μＭ）で１８時間処理した。ＳＲＥＢＰ−２の前駆体及び成熟型のレベルをウェスタン・ブロットで分析した。アクチンのウェスタン・ブロットをローディング対照として下方パネルに示す。

【0016】

【図4】図４は、２５（ＯＨ）Ｄの添加後、異なる時間にてＳＣＡＰ及びＳＲＥＢＰ−２への２５（ＯＨ）Ｄの効果を示す。ＣＨＯ−Ｋ１細胞をＤＭＳＯのみ又は２５（ＯＨ）Ｄ（５μＭ）で処理した。示された時間のインキュベーションの後、ＳＣＡＰ並びにＳＲＥＢＰ−２の前駆体及び成熟型のレベルをウェスタン・ブロットにより分析した。アクチンのウェスタン・ブロットをローディング対照として下方パネルに示す。

【0017】

【図5】図５は、ＭＧ−１３２の存在下又は非存在下でのＭｙｃ−ＳＣＡＰへの２５（ＯＨ）Ｄの効果を示す。ＣＨＯ−Ｋ１細胞は、ＭＧ−１３２（１０μＭ）の存在下又は非存在下にてＤＭＳＯのみ又は２５（ＯＨ）Ｄ（５μＭ）で５時間処理した。Ｍｙｃ−ＳＣＡＰのレベルをウェスタン・ブロットにより分析した。アクチンのウェスタン・ブロットをローディング対照として下方パネルに示す。

【0018】

【図6】図６は、ＳＣＡＰのユビキチン化への２５（ＯＨ）Ｄの効果を示す。ＣＨＯ−Ｋ１細胞をＤＭＳＯのみ（−）又は２５（ＯＨ）Ｄ（５μＭ、＋）で処理した。２時間のインキュベーションの後、ディッシュにＭＧ−１３２（１０μＭ）を加えた。２時間インキュベーションした後、細胞を採取し、モノクローナル抗ｃ−Ｍｙｃ結合アガロースビーズで免疫沈降させた。ＳＣＡＰのユビキチン化をウェスタン・ブロットで分析した。

【0019】

【図7】図７は、化合物２２ａ、２２ｂ、２８、３２、３６、３８及び３９のＳＲＥＢＰ−２への効果を示す。ＣＨＯ−Ｋ１細胞をＤＭＳＯのみ又は各分子（５μＭ）で１６時間処理した。ＳＲＥＢＰ−２の前駆体及び成熟型レベルをウェスタン・ブロットで分析した。アクチンのウェスタン・ブロットをローディング対照として下方パネルに示す。細胞を実施例化合物で処理した場合、ＳＲＥＢＰの成熟型レベルはＤＭＳＯのものよりも低かった。

【0020】

【図8】図８は、化合物７２−７４、７６、７７、８５−８７、８９−９１及び９８のＳＲＥＢＰ−２への効果を示す。ＣＨＯ−Ｋ１細胞をＤＭＳＯのみ又は各分子（５μＭ）で１６時間処理した。ＳＲＥＢＰ−２の前駆体及び成熟型レベルをウェスタン・ブロットで分析した。アクチンのウェスタン・ブロットをローディング対照として下方パネルに示す。細胞を実施例化合物で処理した場合、ＳＲＥＢＰの成熟型レベルはＤＭＳＯのものよりも低かった。

【発明を実施するための形態】

【0021】

本明細書において用いられる用語「アルキル」は、好ましくは１〜４の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖炭化水素基を意味し、例えばメチル、エチル、ノルマル−プロピル、イソプロピル、ノルマル−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチルなどが挙げられる。

【0022】

本明細書において用いられる用語「アルコキシ」は、上記アルキル基が酸素原子に結合した一価基を意味し、好ましくは１〜４の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖の基であってもよい。アルコキシ基としては、例えばメトキシ、エトキシ、ノルマル−プロポキシ、イソプロポキシ、ノルマル−ブトキシ、イソブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシなどが挙げられる。

【0023】

本明細書において用いられる用語「アルキルカルボニル」は、上記アルキル基がカルボニル基に結合した基を意味し、好ましくはＣ_１−４アルキルカルボニルである。アルキルカルボニル基としては、例えばアセチル、エチルカルボニル、ノルマル−プロピルカルボニル、イソプロピルカルボニル、ノルマル−ブチルカルボニル、イソブチルカルボニル、ｔｅｒｔ−ブチルカルボニルなどが挙げられる。

【0024】

本明細書において用いられる用語「アルキルスルホニル」は、上記アルキル基がスルホニル基に結合した基を意味し、好ましくはＣ_１−４アルキルスルホニルである。アルキルスルホニル基としては、例えばメチルスルホニル、エチルスルホニル、ノルマル−プロピルスルホニル、イソプロピルスルホニル、ノルマル−ブチルスルホニル、イソブチルスルホニル、ｔｅｒｔ−ブチルスルホニルなどが挙げられる。

【0025】

本明細書において用いられる用語「アルコキシカルボニル」は、上記アルコキシ基がカルボニル基に結合した基を意味し、好ましくはＣ_１−４アルコキシカルボニルである。アルコキシカルボニル基としては、例えばメトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ノルマル−プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ノルマル−ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルなどが挙げられる。

【0026】

本明細書において用いられる用語「シクロアルキル」は、好ましくは３〜６の炭素原子を有する飽和脂肪族単環式炭化水素環を意味する。シクロアルキル基としては、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどが挙げられる。好ましいシクロアルキル基は３〜６員シクロアルキルであり、より好ましくはシクロプロピルである。

【0027】

本明細書において用いられる用語「アリール」は、好ましくは６〜１０の炭素原子を有する単環式芳香族炭化水素環又は多環式芳香族炭化水素環の一価基を意味する。アリール基としては、例えばフェニル、ナフチルなどが挙げられる。好ましいアリールはＣ_６−１０アリールであり、より好ましくはフェニル又はナフチルである。

【0028】

本明細書において用いられる用語「アリールカルボニル」は、上記アリール基がカルボニル基に結合した基を意味し、好ましくはＣ_６−１０アリールカルボニルである。アリールカルボニル基としては、例えばベンゾイル、ナフチルカルボニルなどが挙げられる。好ましいアリールカルボニルとしては、ベンゾイルなどが挙げられる。

【0029】

本明細書において用いられる用語「アリールスルホニル」は、上記アリール基がスルホニル基に結合した基を意味し、好ましくはＣ_６−１０アリールスルホニルである。アリールスルホニル基としては、例えばフェニルスルホニル、ナフチルスルホニルなどが挙げられる。好ましいアリールスルホニルとしては、フェニルスルホニルなどが挙げられる。

【0030】

本明細書において用いられる用語「ヘテロシクリル」又は「ヘテロ環」は、独立して窒素、酸素又は硫黄から選択される少なくとも１つのヘテロ原子、好ましくは１又は２のヘテロ原子及び炭素原子を有する飽和又は一部不飽和５〜６員単環式基の一価基を意味する。ヘテロシクリル基としては、例えばピロリジニル、オキサゾリニル、ピラゾリジニル、ピペリジル、ピペラジニル、モルホリニルなどが挙げられる。好ましいヘテロシクリル基としては、ピロリジニル、ピペリジル、モルホリニルなどが挙げられる。

【0031】

本明細書において用いられる用語「ヘテロアリール」は、独立して窒素、酸素又は硫黄から選択される少なくとも１つのヘテロ原子及び炭素原子を有する芳香環式基の一価基を意味し、好ましくは５〜６員ヘテロアリール基である。ヘテロアリール基としては、例えばピロリル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、ピリジル、ピリミジニルなどが挙げられる。好ましいヘテロアリール基としては、チアゾリル、ピリジルなどが挙げられる。

【0032】

本明細書において用いられる用語「適宜Ｃ_６−１０アリール環と縮合していてもよい含窒素オキソ置換飽和５〜６員ヘテロ環」は、少なくとも１つのオキソ基で置換された環に少なくとも１つの窒素原子を含む上記ヘテロシクリル環を意味し、例えばγ−ラクタム、δ−ラクタム、フタルイミジルなどが挙げられる。

【0033】

本明細書において用いられる用語「ハロゲン」又は「ハロ」は、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子などを意味する。

【0034】

適宜置換されていてもよいアルキルカルボニルは、同一又は異なる少なくとも１つのハロゲンで適宜置換されていてもよい上記アルキルカルボニルを意味する。適宜置換されていてもよいアルキルカルボニルにおける置換基としては、同一又は異なる１〜９、好ましくは１〜３のハロゲン原子が挙げられ、具体的には３つのフッ素原子である。

【0035】

適宜置換されていてもよいアリールカルボニルは、ハロゲン、ハロ−Ｃ_１−４アルキル、−Ｓ−ハロ−Ｃ_１−４アルキル、Ｃ_１−４アルコキシ、ハロ−Ｃ_１−４アルコキシ、ニトロ、シアノ、Ｃ_１−４アルコキシカルボニル及びＣ_６−１０アリールからなる群から選択される同一又は異なる少なくとも１つの基で適宜置換されていてもよい上記アリールカルボニルを意味する。適宜置換されていてもよいアリールカルボニルにおける好ましい置換基としては、クロロ、フルオロ、ブロモ、メチル、メトキシ、トリフルオロメチル、メトキシカルボニル、トリフルオロメトキシ、ニトロ、シアノ、−Ｓ−ＣＦ_３、フェニルなどからなる群から選択される同一又は異なる１〜４の基が挙げられる。

【0036】

適宜置換されていてもよいアリールスルホニルは、Ｃ_１−４アルキル及びニトロからなる群から選択される同一又は異なる少なくとも１つの基で適宜置換されていてもよい上記アリールスルホニルを意味する。適宜置換されていてもよいアリールスルホニルにおける好ましい置換基としては、メチル、ニトロなどが挙げられる。

【0037】

適宜置換されていてもよい５〜６員飽和ヘテロシクリル-アルキルは、ハロゲン及びヒドロキシルからなる群から選択される同一又は異なる少なくとも１つの基で適宜置換されていてもよい上記ヘテロシクリルで置換された上記アルキルを意味する。適宜置換されていてもよい５〜６員飽和ヘテロシクリル-アルキルにおける好ましい置換基としては、フルオロ、ヒドロキシなどが挙げられる。

【0038】

ある側面において、本発明は以下の項又は実施態様に向けられる。
項１：一般式（Ｉ）：

【化3】

（Ｉ）
［式中、
Ｒ^Ａ及びＲ^Ｂはそれぞれ独立してヒドロキシル、ＮＲ^１Ｒ^２又はハロゲンから選択され；
Ｒ^１及びＲ^２はそれぞれ独立して水素、Ｃ_１−４アルキル、適宜置換されていてもよいＣ_１−４アルキルカルボニル、Ｃ_１−４アルキルスルホニル、Ｃ_１−４アルコキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、３〜６員シクロアルキル−Ｃ_１−４アルキル、適宜置換されていてもよいＣ_６−１０アリールカルボニル、適宜置換されていてもよいＣ_６−１０アリールスルホニル、適宜置換されていてもよい５〜６員飽和ヘテロシクリル−Ｃ_１−４アルキル、５〜６員ヘテロアリール又は以下の式：

【化4】

で示される基から選択されるか；或いは
Ｒ^１及びＲ^２は、適宜、それらが結合する窒素原子と一緒になって、適宜Ｃ_６−１０アリール環と縮合していてもよい含窒素オキソ置換飽和５〜６員ヘテロ環を形成していてもよく；
Ｒ^３は水素又は＝ＣＨ_２である］
で示される化合物又はその薬学的に許容される塩。

【0039】

項２：Ｒ^１及びＲ^２がそれぞれ独立して水素、Ｃ_１−４アルキル、同一又は異なる少なくとも１つのハロゲンで適宜置換されていてもよいＣ_１−４アルキルカルボニル、Ｃ_１−４アルキルスルホニル、Ｃ_１−４アルコキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、３〜６員シクロアルキル−Ｃ_１−４アルキル、適宜ハロゲン、ハロ−Ｃ_１−４アルキル、−Ｓ−ハロ−Ｃ_１−４アルキル、Ｃ_１−４アルコキシ、ハロ−Ｃ_１−４アルコキシ、ニトロ、シアノ、Ｃ_１−４アルコキシカルボニル及びＣ_６−１０アリールからなる群から選択される同一又は異なる少なくとも１つの基で置換されていてもよいＣ_６−１０アリールカルボニル、適宜Ｃ_１−４アルキル、ニトロ及びジ−（Ｃ_１−４アルキル）アミノからなる群から選択される同一又は異なる少なくとも１つの基で置換されていてもよいＣ_６−１０アリールスルホニル、適宜ハロゲン及びヒドロキシルからなる群から選択される同一又は異なる少なくとも１つの基で置換されていてもよい５〜６員飽和ヘテロシクリル−Ｃ_１−４アルキル、５〜６員ヘテロアリール又は以下の式：

【化5】

で示される基から選択されるか；或いは
Ｒ^１及びＲ^２が、適宜、それらが結合する窒素原子と一緒になって、適宜Ｃ_６−１０アリール環と縮合していてもよい含窒素オキソ置換飽和５〜６員ヘテロ環を形成していてもよく；
但し、Ｒ^１及びＲ^２が同時に水素ではない、項１記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【0040】

項３：Ｒ^３が＝ＣＨ_２である、項１又は２のいずれか記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
項４：Ｒ^３が水素である、項１又は２のいずれか記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
項５：以下の式のいずれか：

【化6】

［式中、Ｘはハロゲンであり、その他の記号は項１と同義である］
で示される、項１〜４のいずれか記載の化合物。
項６：Ｒ^２が水素である、項１〜５のいずれか記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【0041】

項７：Ｘがフルオロであり；
Ｒ^１がｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、アセチル、ｐ−メチルフェニルスルホニル、ｏ−ニトロフェニルスルホニル、ｐ−トリフルオロメチルベンゾイル、ｐ−ブロモベンゾイル、エチルカルボニル、プロピルカルボニル、ｐ−メトキシベンゾイル、ｐ−フルオロベンゾイル、ｐ−［（トリフルオロメチル）チオ］ベンゾイル、２，３，４，５−テトラフルオロベンゾイル、２，４，５−トリフルオロベンゾイル、３，４−ジメトキシベンゾイル、２，３，４−トリフルオロベンゾイル、３，４−ジフルオロベンゾイル、２，４−ジフルオロベンゾイル、３−クロロ−４−フルオロベンゾイル、２−クロロ−４−フルオロベンゾイル、ｐ−ニトロベンゾイル、２−トリフルオロメチル−４−フルオロベンゾイル、３−トリフルオロメチル−４−フルオロベンゾイル、ｐ−トリフルオロメトキシベンゾイル、ｐ−シアノベンゾイル、ｐ−メトキシカルボニルベンゾイル、ｐ−フェニルベンゾイル、２−モルホリニルエチル、２−（４−フルオロピペリジニル）エチル、２−（４−ヒドロキシピペリジニル）エチル、２−ピリジル、２−チアゾリル、シクロプロピルメチル、エチル、ブチル、メチルスルホニル、トリフルオロメチルカルボニル、５−ジメチルアミノ−１−ナフチルスルホニル又は以下の構造：

【化7】

で示される基から選択され、
Ｒ^２が水素であるか；或いは
Ｒ^１及びＲ^２がそれらが結合する窒素原子と一緒になってγ−ラクタム、δ−ラクタム又はフタルイミジルを形成していてもよい、項１〜５のいずれか記載の化合物。
項８：Ｘがフルオロであり；
Ｒ^１がアセチル、トリフルオロメチルカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、メチルスルホニル、５−ジメチルアミノ−１−ナフチルスルホニル、ｐ−メチルフェニルスルホニル、ｏ−ニトロフェニルスルホニル、ｐ−トリフルオロメチルベンゾイル、ｐ−ブロモベンゾイル、ｐ−［（トリフルオロメチル）チオ］ベンゾイル又は以下の構造：

【化8】

で示される基から選択され、
Ｒ^２が水素であるか；或いは
Ｒ^１及びＲ^２がそれらが結合する窒素原子と一緒になってフタルイミジルを形成していてもよい、項５記載の化合物。

【0042】

項９：以下の構造を有する、項１記載の化合物：

【化9-1】

【化9-2】

【化9-3】

【化9-4】

【0043】

項１０：治療を必要とする対象に、治療的有効量の項１〜９のいずれか記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与する工程、又はビタミンＤ、ビタミンＤ３、及び２５−ＯＨＶｉｔＤ３、１，２５−ジ−ＯＨＶｉｔＤ３及び２４，２５−ジ−ＯＨＶｉｔＤ３などのビタミンＤ３の既知の誘導体を投与する工程を含む、対象における代謝性疾患、肝疾患、肥満、糖尿病、心血管疾患又はがんの治療方法。
項１１：疾患が体重減少の誘導による肥満（obesity through the induction of weight loss）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、脂肪肝又はがんである、項１０記載の方法。

【0044】

項１２：治療を必要とする対象に、治療的有効量の項１〜９のいずれか記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与する工程、又はビタミンＤ、ビタミンＤ３、及び２５−ＯＨＶｉｔＤ３、１，２５−ジ−ＯＨＶｉｔＤ３及び２４，２５−ジ−ＯＨＶｉｔＤ３などのビタミンＤ３の既知の誘導体を投与する工程を含む、対象におけるＳＲＥＢＰの阻害方法。
項１３：項１〜９のいずれか記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分とし、薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
項１４：非アルコール性脂肪性肝炎などの代謝性疾患、脂肪肝などの肝疾患、糖尿病、がん、肥満又は心血管疾患の治療薬の製造における項１〜９のいずれか記載の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用。
項１５：非アルコール性脂肪性肝炎などの代謝性疾患、脂肪肝などの肝疾患、糖尿病、がん、肥満又は心血管疾患の治療に用いるための項１〜９のいずれか記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。

【0045】

ある態様において、Ｒ^Ａ及びＲ^Ｂの一方はヒドロキシルであり、他方はＮＲ^１Ｒ^２又はハロゲンである。

【0046】

ある態様において、Ｒ^１及びＲ^２としては、それぞれ独立して、水素、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、アセチル、ｐ−メチルフェニルスルホニル、ｏ−ニトロフェニルスルホニル、ｐ−トリフルオロメチルベンゾイル、ｐ−ブロモベンゾイル、エチルカルボニル、プロピルカルボニル、ｐ−メトキシベンゾイル、ｐ−フルオロベンゾイル、ｐ−［（トリフルオロメチル）チオ］ベンゾイル、２，３，４，５−テトラフルオロベンゾイル、２，４，５−トリフルオロベンゾイル、３，４−ジメトキシベンゾイル、２，３，４−トリフルオロベンゾイル、３，４−ジフルオロベンゾイル、２，４−ジフルオロベンゾイル、３−クロロ−４−フルオロベンゾイル、２−クロロ−４−フルオロベンゾイル、ｐ−ニトロベンゾイル、２−トリフルオロメチル−４−フルオロベンゾイル、３−トリフルオロメチル−４−フルオロベンゾイル、ｐ−トリフルオロメトキシベンゾイル、ｐ−シアノベンゾイル、ｐ−メトキシカルボニルベンゾイル、ｐ−フェニルベンゾイル、２−モルホリニルエチル、２−（４−フルオロピペリジニル）エチル、２−（４−ヒドロキシピペリジニル）エチル、２−ピリジル、２−チアゾリル、シクロプロピルメチル、エチル、ブチル、メチルスルホニル、トリフルオロメチルカルボニル、５−ジメチルアミノ−１−ナフチルスルホニル、及び以下のプローブ構造：

【化10】

で示される基などが挙げられる。

【0047】

別の態様において、Ｒ^１及びＲ^２はそれらが結合する窒素原子と一緒になって、例えばγ−ラクタム、δ−ラクタム又はフタルイミジルを形成していてもよい。

【0048】

さらに別の態様において、Ｒ^３は＝ＣＨ_２である。
さらに別の態様において、Ｒ^３は水素である。

【0049】

本明細書において用いられる薬学的に許容される塩は、当分野において知られた、過剰な毒性を有しない、任意の塩を意味する。具体的には、薬学的に許容される塩としては、無機酸、有機酸、無機塩基又は有機塩基との塩を挙げることができる。そのような無機酸としては、フッ化水素酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、硫酸及びリン酸が挙げられる。そのような有機酸としては、酢酸、トリフルオロ酢酸、安息香酸、ｐ−トルエンスルホン酸、クエン酸、シュウ酸、マレイン酸、フマル酸、乳酸、リンゴ酸、コハク酸及び酒石酸が挙げられる。そのような無機塩基としては、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム及び亜鉛が挙げられる。そのような有機塩基としては、アルギニン及びリジンが挙げられる。好ましい薬学的に許容される塩は無機酸との塩であり、具体的には塩酸酸である。

【0050】

本明細書において用いられる薬学的に許容される担体としては、種々の慣用の有機又は無機の担体物質、例えば当分野において通常用いられる賦形剤、崩壊剤、結合剤、流動促進剤及び滑沢剤などの固形製剤における物質、及び当分野において通常用いられる溶剤、可溶化剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤及び無痛化剤などの液体製剤における物質が挙げられる。本発明の医薬組成物には、防腐剤、抗酸化剤、着色剤及び甘味料などの当分野において通常用いられる添加物を適宜加えてもよい。

【0051】

式（Ｉ）の化合物は、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ウマ、ヒツジ、サル及びヒトなどの哺乳類に治療的有効量にて経口又は非経口投与してもよい。式（Ｉ）の化合物の治療的有効量は対象、疾患、投与形態、投与経路などに応じて変化しうるが、式（Ｉ）の化合物の治療的有効量は一般に、例えば１日あたり約０．０１ｍｇ〜約０．１ｍｇから約１ｇ〜約１０ｇの範囲であり、一度に又は分けて数回で投与してもよい。

【0052】

誤解を避けるために、上記一般的な記載において、化合物、方法、使用及び組成物の異なる特徴に関する一般的な好ましい態様及び選択肢の提示により、それらが矛盾することなく組合せ可能であり、同じ文脈において示される限り、通常、異なる特徴についての一般的な好ましい態様及び選択肢の一般的な組合せの提示を構成することを確認する。

【0053】

式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩の製造方法を以下に示すが、これらに限定されない。例えば、以下に示すスキームは本発明の典型的な化合物のための例示の製法を示す。各工程で得られた化合物は、適宜、蒸留、再結晶、カラムクロマトグラフィーなどの既知の方法により単離又は精製してもよく、単離又は精製しないで次の工程に用いてもよい。

【0054】

本明細書において、例えば以下の略語を用いることがある：
Ac: アセチル
Bz: ベンゾイル
Ts: トルエンスルホニル
TMS: トリメチルシリル
TES: トリエチルシリル
Tf: トリフルオロメチルスルホニル
Boc: tert-ブトキシカルボニル
Ns: o-ニトロベンゼンスルホニル
Cbz: ベンジルオキシカルボニル
TBS: tert-ブチルジメチルシリル
HMDS: ビス(トリメチルシリル)アミド
PPTS: ピリジニウム p-トルエンスルホネート
NPhTh: フタルイミド
TBAF: フッ化テトラブチルアンモニウム
McCl: 塩化クロロメチルスルホニル
TPAP: テトラプロピルアンモニウム過ルテニウム酸塩
DIBAL: ジイソブチルアルミニウムヒドリド
TFAA: 無水トリフルオロ酢酸
DMAP: ジメチルアミノピリジン
HOBt: 1-ヒドロキシベンゾトリアゾール
TFA: トリフルオロ酢酸
NHS: N-ヒドロキシスクシンイミド
DCC: N,N'-ジシクロヘキシルカルボジイミド
EDC: 1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド
DMT-MM: 4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド
DIPEA: N,N-ジイソプロピルエチルアミン
TEA: トリエチルアミン
THF: テトラヒドロフラン
DMSO: ジメチルスルホキシド
DMF: ジメチルホルムアミド
NMM: N-メチルモルホリン
NMO: N-メチルモルホリン N-オキシド
DIAD: ジイソプロピルアゾジカルボキシレート
DAST: 三フッ化N,N-ジエチルアミノ硫黄

【0055】

カップリング反応を経由した製法
Ｒ^３が＝ＣＨ_２である式（Ｉ）の化合物は、以下の手順に従い製造してもよい：

【化11】

式中、Ｘ’’はハロゲンであり、その他の記号は項１と同義である。

【0056】

工程１ａ
式［ａ１］の化合物を、トルエンなどの溶媒中、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（すなわち、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４）などのパラジウム触媒及びトリエチルアミンなどの塩基の存在下、式［ａ２］の化合物とカップリングさせて式［ａ３］の化合物を得ることができる。反応温度は室温〜約１００℃の範囲、好ましくは約９０℃であってもよい。
化合物［ａ１］及び化合物［ａ２］は以下の中間体化合物の製法のいずれかに従い製造してもよい。
工程２ａ
式［ａ３］の化合物におけるｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル及びトリエチルシリル基などの保護基は、テトラヒドロフランなどの溶媒中、３ＨＦ・Ｅｔ_３Ｎ及びＨＦ・ピリジンなどのフッ化水素などの塩基で処理することにより脱保護して式［ａ４］の化合物を得ることができる。反応温度は反応が進行しうる任意の温度であってもよく、好ましくは室温である。
工程３ａ
Ｒ^１及びＲ^２は同時に水素ではない（例えばＲ^１はアリールスルホニルであり、Ｒ^２は水素である）式［ａ３］の化合物は、トリフェニルホスフィンなどの有機ホスフィン化合物及びジイソプロピルアゾジカルボキシレートなどのアゾカルボン酸エステルをテトラヒドロフランなどの溶媒中で用いて、光延反応を行ってもよい。得られた化合物を続けて処理するか、又は式［ａ３］の化合物を、ジエチルエーテルなどのエーテルなどの溶媒中、ナトリウムヒドリドなどの塩基の存在下、１−ドデカンチオールなどのチオールで処理して、式［ａ５］の化合物を得ることができる。反応温度は０℃から室温の範囲、好ましくは室温であってもよく、又は０℃から始めて室温まで上昇させて段階的に変化させてもよい。
工程４ａ
式［ａ５］の化合物をジクロロメタンなどの溶媒中、トリエチルアミンなどの塩基存在下、Ｒ^１Ｘ’（ここに、Ｘ’はハロゲン又はヒドロキシルである）で処理して、式［ａ３］の化合物を得ることができる。反応温度は、反応が進行しうる任意の温度であってもよく、好ましくは０℃である。次いで、得られた化合物［ａ３］は工程２ａに従い脱保護されて、式［ａ４］の化合物を得ることができる。

【0057】

ジュリア・カップリング反応を経由した製法
Ｒ^３が水素である式（Ｉ）の化合物は、以下の手順に従い製造してもよい：

【化12】

式中、Ｒ^Ｂ１はフタルイミジル又はベンジルオキシであり、Ｒ^Ｂ２はアミノ又はヒドロキシルであり、その他の記号は項１と同義である。

【0058】

工程１ｂ
式［ｂ１］の化合物をテトラヒドロフランなどの溶媒中、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（すなわち、ＬｉＨＭＤＳ）などの塩基の存在下、式［ｂ２］の化合物で処理し、式［ｂ３］の化合物を得ることができる。反応温度は−７８℃から室温の範囲であってもく、好ましくは−７８℃から始めて室温まで上昇させて段階的に変化させてもよい。
化合物［ｂ１］及び化合物［ｂ２］は以下の中間体化合物の製法のいずれかに従い製造してもよい。
工程２ｂ
式［ｂ３］の化合物をメタノール及びエタノールなどの溶媒中、ヒドラジン水和物及び炭酸カリウムなどの塩基で処理して、式［ｂ４］の化合物を得てもよい。反応温度は室温から約６０℃の範囲であってもよい。
工程３ｂ
式［ｂ４］の化合物はジクロロメタンなどの溶媒中、トリエチルアミンなどの塩基の存在下、Ｒ^１Ｘ’（ここに、Ｘ’はハロゲン又はヒドロキシル）で処理し、次いで工程２ａに従い、脱保護して式［ｂ５］の化合物を得ることができる。Ｒ^１Ｘ’との反応温度は、反応が進行しうる任意の温度であってもよく、好ましくは０℃である。
工程４ｂ
あるいは、式［ｂ４］の化合物を、ジクロロメタンなどの溶媒中、三フッ化Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ硫黄（すなわち、ＤＡＳＴ）などのフッ素化剤で処理し、次いで工程２ａに従って脱保護し、式［ｂ６］の化合物を得ることができる。フッ素化反応の温度は、反応が進行しうる任意の温度であってもよく、好ましくは−７８℃である。

【0059】

中間体化合物１４ａ及び１４ｂの製法

【化13】

式中、Ｒ^１は項１と同義であり、Ｘ’はハロゲン又はヒドロキシルである。

【0060】

中間体化合物１６の製法

【化14】

反応式において、化合物５７は、Antonio MourinoらChem. Eur. J. 2010, 16, 1432-1435に記載の方法などの当分野で一般的な方法に従い、化合物５６から製造してもよい。

【0061】

特に、本発明におけるＲ^３が＝ＣＨ_２である式（Ｉ）の化合物の製造方法を、上記で製造した中間体化合物又は上記反応式と同様に製造することができる。その誘導体を用いた以下の反応式に例示する。

【0062】

化合物１８ａ、１８ｂ、１９ａ及び１９ｂの製造方法

【化15】

化合物１８ａ及び１８ｂの誘導体もまた、上記と同様の方法で製造することができる。

【化16-1】

【化16-2】

反応式において、Ｒ^１は項１と同義である。

【0063】

化合物２８、３２、３６及び３９の製造方法

【化17-1】

【化17-2】

反応式において、Ｒ^１は項１と同義であり、Ｘ’はハロゲン又はヒドロキシルである。

【0064】

あるいは、本発明におけるＲ^１が以下の式の基である式（Ｉ）の化合物：

【化18】

は、以下の反応式に従い製造してもよい。

【0065】

化合物１０６の製造方法

【化19】

【0066】

さらに、本発明におけるＲ^３が水素である式（Ｉ）の化合物の製造方法を以下の反応式に例示する。

【0067】

中間体化合物６６の製造方法

【化20】

反応式において、化合物６１は、John H. WhiteらProc. Natl. Acad. Soc. 2008, 105, 8250-8255に記載の方法などの当分野に一般的な方法に従い、化合物６０から製造してもよい。

【0068】

中間体化合物６７の製造方法

【化21】

【0069】

中間体化合物８１及び９３の製造方法

【化22-1】

【化22-2】

【化23】

【化24】

【0070】

中間体化合物７２〜７７及びその誘導体の製造方法

【化25】

反応式において、Ｒ^１は項１と同義であり、Ｘ’はハロゲン又はヒドロキシルである。

【0071】

化合物８２〜８４及びその誘導体の製造方法

【化26】

反応式において、Ｒ^１は項１と同義であり、Ｘ’はハロゲン又はヒドロキシルである。

【0072】

化合物９８の製造方法

【化27】

【実施例】

【0073】

特に明記しなければ、アルゴン雰囲気下、新鮮な乾燥溶媒を用いて製造を実施した。すべての製造は、Merckシリカゲル60 F₂₅₄プレコートプレート（0.25 mm）を用いた薄層クロマトグラフィーによりモニターし、ＵＶ及びｐ−アニスアルデヒド染色により視覚化した。フラッシュカラムクロマトグラフィーは、Cicaから購入したシリカゲル（粒径40-100 μm）又はFUJI SILYSIA CHEMICAL LTDから購入したNHシリカゲル（NH-DM1020）を用いて加圧下で行った。¹H NMRスペクトルをJNM-ECX 400又はJNM-AL 300で記録した。スペクトルはCDCl₃（¹H NMR; δ = 7.26 ppm）又はCD₃OD（¹H NMR; δ = 3.34 ppm）の残留溶媒シグナルに従い内部標準化した。¹H NMRスペクトルデータは以下のとおり記録する：ケミカルシフト（δ ppm）（多重度、カップリング定数（Hz）、積分）。多重度及び修飾子の略語は以下のとおりである：s = シングレット, d = ダブレット, t = トリプレット, q = カルテット, m = マルチプレット, br = ブロード。質量スペクトルは、メタノールを溶媒として用いたESI-MS型JEOL JMS-T100X分光計又はDMSOを溶媒として用いたFAB-MS型JEOL JMS-MS700V分光計で記録した。

【0074】

参考例１

【化28】

BH₃-SMe₂（100 mL, 1.05 mol）のTHF（200 mL）溶液に、L-リンゴ酸（50 g, 0.37 mol；東京化成工業株式会社から購入）のTHF（400 mL）溶液を0℃にて滴加した後、反応混合物を室温まで昇温した。16時間撹拌した後、反応混合物を0℃まで冷却し、次いでMeOH（400 mL）を添加した。さらに室温で30分後、混合物を溶媒留去した。さらに、残渣をMeOH（200 mL）で6回及びアセトン（200 mL）で2回溶媒留去した。

【0075】

参考例２

【化29】

アセトン（600 mL）中の粗製トリオール1にp-TsOH・H₂O（4.0 g）を添加した。21時間撹拌した後、Et₃N（2 mL）を添加した。さらに30分後、混合物を溶媒留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル；3:1〜1:1）、アセタール2（31.0 g, 57%, 2工程）を無色油状物として得た。

【0076】

参考例３

【化30】

塩化オキサリル（2.1 mL, 24.1 mmol）のCH₂Cl₂（110 mL）溶液を-78℃まで冷却し、乾燥DMSO（4.3 mL, 60.24 mmol）を滴加した。同温にて30分間撹拌した後、アセタール2（1.8 g, 12.1 mmol）のCH₂Cl₂（10 mL）溶液を滴加し、反応混合物を1時間撹拌した。懸濁液にEt₃N（16.8 mL, 120 mmol）を滴加した後、反応混合物を室温まで昇温した。さらに1時間後、エチル(トリフェニルホスホラニリデン)アセテート（8.4 g, 24.1 mmol）を添加し、1日間撹拌した。H₂Oを加えて反応を停止し、水層をCH₂Cl₂で3回抽出した。集めた混合物をMgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル；15:1〜5:1）、エチルエステル3（2.38 g, 91%）を黄色油状物として得た。

【0077】

参考例４

【化31】

エチルエステル3（2.55 g, 11.9 mmol）のCH₂Cl₂（120 mL）溶液にヘキサン中のジイソブチルアルミニウムヒドリド（27.4 mL, 27.4 mmol, 1.0 M）を添加した。2時間撹拌した後、MeOH（19 mL）を注意深く加えて反応を停止した。混合物に飽和ロッシェル塩水溶液（33 mL）を添加し、30分間撹拌した。有機層を飽和ロッシェル塩水溶液で3回洗浄し、水層をCHCl₃で3回抽出した。集めた混合物をMgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル；6:1〜2:1）、アルコール4（1.80 g, 88%）を無色油状物として得た。

【0078】

参考例５

【化32】

アリルアルコール4（636 mg, 3.69 mmol）のピリジン（3.7 mL）溶液に、塩化ベンゾイル（0.64 mL, 5.54 mmol）を0℃にて滴加した後、反応混合物を室温まで昇温した。2時間撹拌した後、反応混合物にH₂Oを添加した。水層を酢酸エチルで3回抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。集めた混合物をMgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル；30:1）、ベンゾエートエステル5（991 mg, 97%）を無色油状物として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.05-7.40 (m, 5H), 5.90-5.74 (m, 2H), 4.78 (d, J = 4.80 Hz, 1H), 4.21-4.12 (m, 1H), 4.03 (dd, J = 7.89, 6.18 Hz, 1H), 1.98 (dd, J = 7.89, 7.20 Hz, 1H), 2.48-2.28 (m, 2H), 1.41 (s, 3H), 1.35 (s, 3H).
¹³C NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 166.26, 132.89,z 130.64, 129.54, 128.28, 126.98, 109.00, 74.95, 68.75, 65.18, 36.45, 26.81, 25.56.
HR-MS ESI C₁₆H₂₀Na₁O₄ [M+Na]⁺ 計算値: 299.12593, 実測値: 299.12835.
[α]²⁵ _D = +5.40 (CHCl₃中c = 2.1)

【0079】

参考例６

【化33】

ベンゾエートエステル5（991 mg, 3.59 mmol）に、酢酸（15.4 mL）及びH₂O（2.6 mL）を添加した。室温にて12時間撹拌した後、反応混合物を溶媒留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル；1:1）、ジオール6（825 mg, 97%）を無色油状物として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.04-7.39 (m, 5H), 5.91-5.72 (m, 2H), 4.77 (d, J = 5.49 Hz, 1H), 4.17 (dddd, J = 6.53, 6.53, 6.53, 3.09 Hz, 1H), 3.64 (dd, J = 11.31, 3.09 Hz, 1H), 3.46 (dd, J = 11.31, 7.23 Hz, 1H), 2.25 (dd, J = 6.54 Hz, 2H).
¹³C NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 166.49, 133.00, 131.11, 130.03, 129.55, 128.32, 127.18, 71.28, 66.13, 65.27, 36.24.
HR-MS ESI C₁₃H₁₆Na₁O₄ [M+Na]⁺ 計算値: 259.09463, 実測値: 259.09503.
[α]²⁵ _D = -6.18 (CHCl₃中c = 2.0)

【0080】

参考例７

【化34】

ジオール6（3.81 g, 16.1 mmol）のピリジン（32 mL）溶液に、p-トルエンスルホニルクロリド（3.69 g, 19.3 mmol）を0℃にて添加した後、反応混合物を室温までゆっくりと昇温させた。4時間撹拌した後、H₂Oで反応を停止した。水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物をブラインで洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル；5:1〜1:1）、トシレート7（4.93 g, 78%）を無色油状物として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.04-7.31 (m, 9H), 5.85-5.69 (m, 2H), 4.74 (d, J = 4.80 Hz, 2H), 4.04 (dd, J = 12.69, 6.51 Hz, 1H), 3.96-3.91 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.42-2.26 (m, 2H).
¹³C NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 166.30, 145.09, 132.98, 132.43, 130.01, 129.91, 129.70, 129.55, 128.32, 128.02, 127.90, 72.92, 68.60, 64.97, 35.82, 21.60.
HR-MS ESI C₂₀H₂₂Na₁O₆S₁ [M+Na]⁺ 計算値: 413.10348, 実測値: 413.10279.
[α]²⁵ _D = +5.36 (CHCl₃中c = 2.0)

【0081】

参考例８

【化35】

トシレート7（4.93 g, 12.6 mmol）のTHF（120 mL）溶液にNaH（1.01 g, 25.2 mmol, 60%）を0℃にて添加した後、反応混合物を室温まで昇温した。8時間撹拌した後、飽和NH₄Cl水溶液で反応を停止した。水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル；1:0〜6:1）、エポキシド8（2.55 g, 93%）を無色油状物として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.06-7.40 (m, 5H), 5.92-5.77 (m, 2H), 4.79 (d, J = 4.80 Hz, 2H), 3.03-2.98 (m, 1H), 2.76 (dd, J = 4.83 Hz, 1H), 2.51 (dd, J = 4.83, 2.76 Hz, 1H), 2.36-2.33 (m, 2H).
¹³C NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 166.24, 132.89, 130.10, 129.82, 129.54, 128.27, 126.97, 65.09, 50.99, 46.51, 35.00.
HR-MS ESI C₁₃H₁₄Na₁O₃ [M+Na]⁺ 計算値: 241.08406, 実測値: 241.08341.
[α]²⁵ _D = -2.69 (CHCl₃中c = 2.1)

【0082】

参考例９

【化36】

トリメチルシリルアセチレン（3.60 mL, 25.7 mmol）のTHF（18 mL）溶液にn-BuLiのヘキサン溶液（8.1 mL, 21.05 mmol, 2.6 M）を-78℃にて滴加し、30分間撹拌した。エポキシド8（2.55 g, 11.7 mmol）のTHF（5 mL）溶液及びBF₃-OEt₂（1.8 mL, 14 mmol）を同温にて滴加した後、反応混合物を室温まで2時間かけて昇温させた。飽和NH₄Cl水溶液で反応を停止し、水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル；30:1〜10:1）、アルコール9（3.61 g, 98%）を無色油状物として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.05-7.39 (m, 5H), 5.93-5.74 (m, 2H), 4.78 (d, J = 5.85 Hz, 2H), 3.82-3.78 (m, 1H), 2.51-2.26 (m, 4H), 0.14 (s, 9H).
¹³C NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 166.28, 132.87, 131.08, 130.06, 129.52, 128.25, 127.37, 102.74, 87.67, 69.04, 65.19, 38.93, 28.12, -0.03.
HR-MS ESI C₁₈H₂₄Na₁O₃Si₁ [M+Na]⁺ 計算値: 339.13924, 実測値: 339.14268.
[α]²⁵ _D = -2.89 (CHCl₃中c = 3.5)

【0083】

参考例１０

【化37】

アルコール9（3.61 g）にイミダゾール（4.67 g, 68.48 mmol）及びtert-ブチルジメチルシリルクロリド（6.88 g, 45.65 mmol）を室温にて添加した後、DMFを試薬が溶解するまで添加した。4時間撹拌した後、反応混合物をジエチルエーテルで希釈し、飽和NaHCO₃水溶液を加えることで反応を停止した。水層をジエチルエーテルで3回抽出した。集めた有機抽出物をH₂O及び飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 100:1〜20:1）、シリルエーテル10（4.52 g, 92%）を無色油状物として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.07-7.41 (m, 5H), 5.92-5.70 (m, 2H), 4.78 (d, J = 5.85 Hz, 2H), 3.91-3.83 (m, 1H), 2.49-2.24 (m, 4H), 0.88 (s, 9H), 0.15 (s, 9H), 0.08 (s, 3H), 0.06 (s, 3H).
¹³C NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 166.46, 132.98, 131.88, 130.38, 129.71, 128.41, 126.90, 104.36, 86.51, 70.78, 65.53, 39.91, 28.60, 25.90, 18.16, 0.17, -4.36, -4.51.
HR-MS ESI C₁₈H₂₄Na₁O₃Si₁ [M+Na]⁺ 計算値: 453.22572 , 実測値: 453.22357.
[α]²⁵ _D = -5.34 (CHCl₃中c = 2.4)

【0084】

参考例１１

【化38】

アリルアルコール10（8.28 g, 19.22 mmol）のMeOH（64 mL）溶液に炭酸カリウム（7.97g, 57.67 mmol）を0℃にて添加した後、反応混合物を室温まで冷却した。18時間撹拌した後、H₂Oで反応を停止した。水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 10:1〜5:1）、アリルアルコール11（4.74 g, 97%）を無色油状物として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 5.72-5.69 (m, 2H), 4.1 (d, J = 4.1 Hz, 2H), 3.89-3.81 (m, 1H), 2.43-2.24 (m, 2H), 2.31 (dd, J = 6.18, 2.73 Hz, 2H), 1.98 (t, J = 2.76 Hz, 1H), 0.88 (s, 9H), 0.07 (s, 3H), 0.05 (s, 3H).

【0085】

参考例１２

【化39】

アリルアルコール11（1.46 g, 5.73 mmol）のCH₂Cl₂（57 mL）溶液にトリクロロアセチルイソシアネート（1.4 mL, 11.46 mmol）を0℃にて添加した。反応はシリカゲルプレートの薄層クロマトグラフィー（溶離液: 4:1 酢酸エチル〜ヘキサン）によりモニターした。15分後、出発物質のスポットが完全に新たなスポットに変換した後、反応混合物を減圧濃縮した。残渣のMeOH（36 mL）溶液にH₂O（8.2 mL）及び炭酸カリウム（3.2 g, 22.93 mmol）を0℃で添加した後、反応混合物を室温まで昇温させた。2時間撹拌した後、反応混合物にH₂Oを添加し、水層をCH₂Cl₂で3回抽出し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルパッドを通してろ過し、カーバメート12を得た。

【0086】

参考例１３

【化40】

カーバメート12（5.73 mmol）及びEt₃N（3.2 mL, 22.93 mmol）のCH₂Cl₂（230 mL）溶液に無水トリフルオロ酢酸（1.2 mL, 8.60 mmol）を0℃にて滴加した。1時間撹拌した後、有機層をH₂O及び飽和食塩水で洗浄した。集めた有機抽出物をNa₂SO₄で乾燥し、減圧濃縮して粗製イソシアネート13とした。

【0087】

参考例１４

【化41】

t-BuOK（0.64 g, 5.73 mmol）及びt-BuOH（1.1 mL, 11.46 mmol）のTHF（30 mL）懸濁液を0℃まで冷却した。THF（8 mL）中の粗製イソシアネート13（5.73 mmol）をゆっくり滴加した。反応はシリカゲルプレートの薄層クロマトグラフィー（溶離液: 4:1 酢酸エチル〜ヘキサン）によりモニターした。25分撹拌した後、出発物質のスポットが完全に新たなスポットに変換した。反応混合物に酢酸（0.33 mL, 5.73 mmol）及びH₂O（19 mL）を添加した後、Boc₂Oをアミンが消失するまで添加した。13時間撹拌した後、アミンが完全に生成物に変換した後、反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物をブラインで洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 100:1〜20:1）、Bocアミン14をジアステレオマー混合物（14a：14bの比は¹H NMRで2：1と決定した）として得た。

【0088】

参考例１５

【化42】

ジアステレオマー混合物14（5.73 mmol）のTHF（11 mL）溶液にフッ化テトラブチルアンモニウムのTHF溶液（5.7 mL, 1 M）を添加した。2.5時間撹拌した後、反応混合物を溶媒留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 50:1〜1:1）、アルコール15a（0.72 g, 52%）及びアルコール15b（0.39 g, 28%）単一ジアステレオマーとして得た。
15a: ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 5.90-5.78 (m, 1H), 5.24-5.12 (m, 2H), 4.76 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.42 (br, 1H), 3.82 (br, 1H), 2.51-2.33 (m, 2H), 2.04 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 1.79-1.60 (m, 2H), 1.45 (s, 9H).
15b: ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 5.84-5.72 (m, 1H), 5.24-5.11 (m, 2H), 4.72 (br, 1H), 4.25 (br, 1H), 3.93-3.85 (m, 1H), 2.51-2.35 (m, 2H), 2.06 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 1.78-1.65 (m, 2H), 1.44 (s, 9H).

【0089】

参考例１６

【化43】

アルコール15a（35 mg, 0.146 mmol）にイミダゾール（60 mg, 0.875 mmol）及びtert-ブチルジメチルシリルクロリド（88 mg, 0.583 mmol）を室温にて添加した後、DMFを試薬が溶解するまで添加した。2時間撹拌した後、反応混合物をジエチルエーテルで希釈し、飽和NaHCO₃水溶液を加えることで反応を停止した。水層をジエチルエーテルで3回抽出した。集めた有機抽出物をH₂O及び飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 30:1）、14a（52 mg, q.y.）を無色油状物として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 5.83-5.72 (m, 1H), 5.18-5.07 (m, 2H), 4.26 (br, 1H), 4.01-3.93 (m, 1H), 2.43-2.27 (m, 2H), 2.01 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 1.79-1.72 (br, 2H), 1.42 (s, 9H), 0.90 (s, 9H), 0.10 (s, 3H), 0.09 (s, 3H).
14aについて記載した手順と同様にして、14b（35 mg, q.y.）を15b（23 mg, 0.094 mmol）から無色油状物として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 5.83-5.72 (m, 1H), 5.21-5.08 (m, 2H), 4.75 (br, 1H), 4.22-4.13 (m, 1H), 3.94-3.86 (m, 1H), 2.40-2.37 (m, 2H), 2.00 (t, J = 2.8 Hz, 1H), 1.86-1.59 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 0.91 (d, J = 3.5 Hz, 9H), 0.09 (s, 3H), 0.08 (d, J = 1.7 Hz, 3H).

【0090】

参考例１７

【化44】

塩化アセチル（1.1 mL, 15.09 mmol）をEtOH（5.0 mL）に0℃にてゆっくり滴加した。30分間撹拌した後、この溶液をアルコール15（0.12 g, 0.50 mmol）に添加した。さらに2時間撹拌した後、反応混合物を溶媒留去した。残渣をEt₂Oで洗浄し、アミンを黄色固体として得た。上記アミン（0.50 mmol）のH₂O（5 mL）溶液に酢酸（0.086 mL, 1.5 mmol）、DMT-MM（0.60 g, 2.01 mmol）、N-メチルモルホリン（0.33 mL, 3.01 mmol）を添加し、2時間撹拌した。水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 1:2〜0:1）、アセトアミドα及びβを単一ジアステレオマーとして得た。α-アセトアミド（約0.33 mmol）にイミダゾール（92 mg, 1.34 mmol）及びtert-ブチルジメチルシリルクロリド（102 mg, 0.67 mmol）を室温にて添加した後、DMFを試薬が溶解するまで添加した。1時間撹拌した後、反応混合物をジエチルエーテルで希釈し、飽和NaHCO₃水溶液を加えることで反応を停止した。水層をジエチルエーテルで3回抽出した。集めた有機抽出物をH₂O及び飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 4:1〜2:1）、20a（82.0 mg, 55%, 3工程）を無色油状物として得た。
20aについて記載した手順と同様にして、20b（37.2 mg, 25%, 3工程）をβ-アセトアミド（約0.17 mmol）から無色油状物として得た。

【0091】

参考例１８

【化45】

アルコール15a（0.62 g, 2.61 mmol）のピリジン（2.5 mL）溶液に無水酢酸（2.5 mL）を室温にて添加した。5.5時間撹拌した後、反応混合物を溶媒留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 10:1〜5:1）、アセテートエステル23（0.72 g, 99%）を得た。

【0092】

参考例１９

【化46】

塩化アセチル（2.8 mL, 38.58 mmol）をEtOH（13.0 mL）に0℃にてゆっくりと滴下した。30分間撹拌した後、この溶液をアセテートエステル23（0.72 g, 2.57 mmol）に添加した。さらに3時間撹拌した後、反応混合物を溶媒留去した。残渣をEt₂Oで洗浄し、アミン24を黄色固体として得た。

【0093】

参考例２０

【化47】

粗製アミン24（2.57 mmol）のCH₂Cl₂（13 mL）溶液にEt₃N（0.9 mL, 6.17 mmol）、o-ニトロベンゼンスルホニルクロリド（0.68 g, 3.09 mmol）を0℃にて添加した後、反応混合物を室温まで昇温させた。6.5時間撹拌した後、H₂Oを加えることで反応を停止した。水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルパッドを通してろ過し、アセテートエステルを無色油状物として得た。アセテートエステル（2.57 mmol）のMeOH（9 mL）溶液に炭酸カリウム（0.53 g, 3.86 mmol）を0℃にて添加した後、反応混合物を室温まで昇温させた。15時間撹拌した後、H₂Oを添加し、水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物をブラインで洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 4:1〜1:1）、ノシレート25（0.82 g, 99%）を無色油状物として得た。

【0094】

参考例２１

【化48】

ノシレート25（0.82 g, 2.53 mmol）にイミダゾール（0.69 g, 10.14 mmol）及びtert-ブチルジメチルシリルクロリド（0.77 g, 5.07 mmol）を室温にて添加した後、DMFを試薬が溶解するまで添加した。3時間撹拌した後、反応混合物をジエチルエーテルで希釈し、飽和NaHCO₃水溶液で反応を停止した。水層をジエチルエーテルで3回抽出した。集めた有機抽出物をH₂O及び飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 15:1〜5:1）、26（1.03 g, 93%）を無色油状物として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.08-7.68 (m, 4H), 5.73 (d, J = 6.18 Hz, 1H), 5.55 (ddd, J = 13.08, 7.56, 5.52 Hz, 1H), 5.05 (dd, J = 12.72, 0.69 Hz, 1H), 4.90 (dd, J = 7.56, 0.69 Hz, 1H), 4.24-4.15 (m, 1H), 4.09-4.03 (m, 1H), 2.40 (ddd, J = 12.36, 3.09, 2.40 Hz, 1H), 2.32 (ddd, J = 12.36, 5.85, 2.07 Hz, 1H), 2.00 (t, J = 2.07 Hz, 1H), 1.89 (ddd, J = 10.65, 6.87, 2.07 Hz, 1H), 1.76 (ddd, J = 10.65, 5.85, 2.73 Hz, 1H), 0.92 (s, 9H), 0.17 (s,3H), 0.13 (s, 3H).

【0095】

参考例２２

【化49】

粗製アミン24（21.9 mg, 0.105 mmol）のCH₂Cl₂（0.8 mL）溶液にEt₃N（0.035 mL, 0.25 mmol）、p-トルエンスルホニルクロリド（24.2 mg, 0.126 mmol）を0℃にて添加した後、反応混合物を室温まで昇温させた。14時間撹拌した後、H₂Oで反応を停止した。水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルパッドを通してろ過し、アセテートエステル（23.9 mg、純粋でない）を無色油状物として得た。アセテートエステル（0.071 mmol）のMeOH（0.7 mL）溶液に炭酸カリウム（15 mg, 0.11 mmol）を0℃にて添加した後、反応混合物を室温まで昇温させた。3時間撹拌した後、H₂Oを添加し、水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 4:1〜1:1）、トシレート29（19.9 mg, 95%）を無色油状物として得た。

【0096】

参考例２３

【化50】

トシレート29（19.9 mg, 0.068 mmol）にイミダゾール（19 mg, 0.271 mmol）及びtert-ブチルジメチルシリルクロリド（21 mg, 0.135 mmol）を室温にて添加した後、DMFを試薬が溶解するまで添加した。3時間撹拌した後、反応混合物をジエチルエーテルで希釈し、飽和NaHCO₃水溶液で反応を停止した。水層をジエチルエーテルで3回抽出した。集めた有機抽出物をH₂O及び飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 6:1〜3:1）、30（26.8 mg, 97%）を無色油状物として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.73-7.27 (m, 4H), 5.70 (d, J = 5.16 Hz, 1H), 5.63 (ddd, J = 17.19, 10.29, 6.54 Hz, 1H), 5.12 (dd, J = 17.19, 1.05 Hz, 1H), 5.01 (dd, J = 10.29, 1.05 Hz, 1H), 4.04-3.90 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.25 (ddd, J = 16.83, 4.80, 2.73 Hz, 1H), 2.10 (ddd, J = 16.83, 8.22, 2.73 Hz, 1H), 1.95 (t, J = 2.73 Hz, 1H), 1.85- 1.67 (m, 2H), 0.92 (s, 9H), 0.12 (s,3H), 0.10 (s, 3H).

【0097】

参考例２４

【化51】

粗製アミン24（26.7 mg, 0.122 mmol）のCH₂Cl₂（1.0 mL）溶液にEt₃N（0.041 mL, 0.293 mmol）、クロロギ酸ベンジル（0.021 mL, 0.147 mmol）を0℃にて添加した後、反応混合物を室温まで昇温させた。14時間撹拌した後、反応をH₂Oで停止した。水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 4:1〜1:1）、NHCbz 33（18.6 mg, 56%）を無色油状物として得た。

【0098】

参考例２５

【化52】

NHCbz 33（16.0 mg, 0.059 mmol）のCH₂Cl₂（0.6 mL）溶液に2,6-ルチジン（0.041 mL, 0.351 mmol）及びtert-ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（0.046 mL, 0.176 mmol）を室温にて添加した。2時間撹拌した後、飽和NaHCO₃水溶液を加えることで反応を停止した。水層をCH₂Cl₂で3回抽出した。集めた有機抽出物をMgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 10:1〜3:1）、34（21.4 mg, 94%）を無色油状物として得た。

【0099】

参考例２６

【化53】

イミダゾール（12.0 mg, 0.0461 mmol）、TBSCl（4μL, 0.0690 mmol）を続けて4-ヒドロキシピペリジン（306.7 mg, 3.032 mmol）のジクロロメタン（10.0 mL）溶液に室温にて添加し、1日間撹拌した。反応混合物をH₂O、飽和NaHCO₃水溶液及び飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残留試薬を除去するために、残渣をトルエンで共沸し、粗生成物（692.3 mg, 純粋でない）を得た。当該粗生成物（692.3 mg）のアセトニトリル（1.5 mL）溶液に2-ブロモエタノール（0.45 mL, 6.367 mmol）及び炭酸カリウム（0.67 g, 4.851 mmol）を室温にて添加した後、混合物を4時間還流下加熱した。反応混合物をセライトパッドを通してろ過し、得られたろ液を濃縮した。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（NHシリカゲル, ヘキサン/酢酸エチル; 10:0〜1:1）で精製し、51（500.9 mg, 64%）を得た。

【0100】

参考例２７

【化54】

ビタミンD2（8.0 g, 20.2 mmol；東京化成工業株式会社から購入）のジクロロメタン（270 mL）溶液にメタノール（112 mL）を添加し、溶液を-78℃まで冷却した。オゾンを-78℃にて3時間溶液に通過させた。溶液に窒素を流して残留オゾンを除去した後、得られた混合物をNaBH₄（4.56 g, 120 mmol）で処理し、30分間-78℃にて撹拌した後、室温まで昇温させた。0.5 M HCl水溶液を添加して反応を停止し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 6:1〜2:1）、ジオール55（4.46 g, >99%）を得た。
¹H NMR (CDCl₃) δ 4.09 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 3.64 (dd, J = 3.3, 10.6 Hz, 1H), 3.39 (dd, J = 6.6, 10.6 Hz, 1H), 1.99 (dd, J = 2.6, 13.2 Hz, 1H), 1.88-1.76 (m, 3H), 1.63-1.29 (m. 9H), 1.20-1.12 (m. 2H), 1.03 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.95 (s, 3H)

【0101】

参考例２８

【化55】

ジオール55（1.00 g, 4.71 mmol）のTHF（20 mL）溶液にイミダゾール（960 mg, 14.14 mmol）、トリフェニルホスフィン（1.20 g, 5.65 mmol）、ヨージド（1.32 g, 5.18 mmol）を-20℃にて続けて添加し、15分間撹拌した。反応混合物を室温まで昇温させた。さらに2時間撹拌した後、混合物を0℃まで冷却し、次いで飽和NaHCO₃水溶液を添加した。水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和Na₂S₂O₃水溶液及びH₂Oで洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 10:1）、ヨージド56（1.41 g, 93%）を得た。

【0102】

参考例２９

【化56】

Antonio MourinoらChem. Eur. J. 2010, 16, 1432-1435に記載の方法に従い、本工程を実施した。活性化亜鉛（8.32 g, 127.26 mmol）のピリジン（90 mL）懸濁液にアクリル酸メチル（13.3 mL, 148 mmol）及びNiCl₂・6H₂O（3.78 g, 15.91 mmol）を室温にて続けて添加した。混合物を60℃にて1時間撹拌した後、0℃まで冷却した。ヨージド56（3.42 g, 10.61 mmol）のピリジン（10 mL）溶液を滴下した。反応混合物を2時間撹拌した後、酢酸エチルで希釈した。混合物をセライトパッドを通してろ過した。ろ液を1M HCl水溶液で2回洗浄し、水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物をH₂O及び飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。ピリジン塩酸塩を綿栓でろ過することで除去し、ろ液を溶媒留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 8:1〜4:1）、メチルエステル57（2.77 g, 93%）を得た。

【0103】

参考例３０

【化57】

乾燥ジエチルエーテル (46 mL)中の活性化マグネシウム（2.91 g, 119.6 mmol）にヨウ化メチル（5.7 mL, 92 mmol）を0℃にて滴加した。メチルエステル57（5.17 g, 18.30 mmol）の乾燥ジエチルエーテル（90 mL）溶液に上記グリニャール試薬（46 mL, 2 m）を-78℃にて滴加した。混合物を同温にて15分間撹拌した後、室温まで昇温させた。2.5時間撹拌した後、飽和NH₄Cl水溶液を注意深く添加することにより反応を停止した。水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 4:1〜2:1）、ジオール58（4.59 g, 89%）を得た。

【0104】

参考例３１

【化58】

ジオール58（300 mg, 1.06 mmol）の乾燥アセトニトリル（10 mL）溶液にモレキュラー・シーブス4オングストローム（530 mg）及びN-メチルモルホリンN-オキシド（250 mg, 2.12 mmol）を添加し、30分間撹拌した。テトライソプロピルアンモニウム過ルテニウム酸塩（15 mg, 0.043 mmol）を添加した後、反応混合物を室温まで昇温させた。2.5時間撹拌した後、混合物をシリカゲルパッドを通してろ過し、ろ液を溶媒留去して粗製ケトンを得た。(ブロモメチル)トリフェニルホスホニウムブロミド（2.32 g, 5.31 mmol）のトルエン（50 mL）懸濁液を室温にて30分間超音波処理し、トルエン（50 mL）で50℃にて3回エバポレーションした。懸濁液に乾燥THF（7 mL）を添加し、0℃まで冷却した。ナトリウムビス(トリメチルシリル)アミドのTHF（2.8 mL, 5.20 mmol, 1.9 M）溶液を滴加した。30分間撹拌した後、上記粗製ケトン（1.06 mmol）のTHF（1.2 mL）溶液を滴加した。さらに3時間後、飽和NH₄Cl水溶液を数滴添加して反応を停止した。混合物をろ過し、ろ液を溶媒留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 20:1〜10:1）、ブロモオレフィン59（239 mg, 63%, 2工程）を得た。

【0105】

参考例３２

【化59】

ブロモオレフィン59（0.51 g, 1.45 mmol）のCH₂Cl₂（7.2 mL）溶液に2,6-ルチジン（0.34 mL, 2.89 mmol）を添加し、トリエチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（0.42 mL, 1.88 mmol）を滴加した。2.5時間撹拌した後、飽和NaHCO₃水溶液を加えることで反応を停止した。水層をCH₂Cl₂で3回抽出した。集めた有機抽出物をMgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／ジクロロメタン; 10:1）、ジオール16（0.62 g, 91%）を得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 5.64 (s, 1H), 2.89-2.84 (m, 1H), 2.04-1.15 (m, 18H), 1.18 (s, 6H), 0.97-0.62 (m, 12H), 0.56 (s, 3H), 0.56 (q, J = 7.89 Hz, 2H).

【0106】

参考例３３

【化60】

4-[3-(トリフルオロメチル)-3H-ジアジリン-3-イル]安息香酸（0.500 g, 2.17 mmol；東京化成工業株式会社から購入）及びN-ヒドロキシスクシンイミド（0.250 g, 2.17 mmol）のジクロロメタン（15 mL）溶液にN,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド（0.450 g, 2.17 mmol）を0℃にて添加し、混合物を室温にて終夜撹拌した。沈殿物をろ別し、ろ液を減圧濃縮し、粗生成物を得た。5-メチル L-グルタメート（0.380 g, 2.36 mmol）のアセトニトリル／H₂O（10:3, 13 mL）溶液に粗生成物及びトリエチルアミン（0.660 g, 6.52 mmol）を添加し、混合物を室温にて終夜撹拌した。混合物を溶媒留去し、残渣を酢酸エチルに溶解し、HCl水溶液（1 M）、水、飽和食塩水で洗浄し、乾燥した（MgSO₄）。溶媒を留去し、粗生成物102（0.890 g）を得、次の工程にさらなる精製をせずに用いた。

【0107】

参考例３４

【化61】

粗製物102（0.890 g）及びN-Boc-4,7,10-トリオキサ-1,13-トリデカンジアミン（0.690 g, 2.15 mmol）のジクロロメタン（10 mL）中の混合物に1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩（0.50 g, 2.6 mmol）、4-ジメチルアミノピリジン（0.32 g, 2.85 mmol）及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物（0.35 g, 2.59 mmol）を0℃にて添加し、混合物を室温にて終夜撹拌した。混合物を飽和NaHCO₃水溶液、水及び飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル:ヘキサン; 2:1）で精製し、103（0.760 g, 1.13 mmol, 3工程で52%）を得た。

【0108】

参考例３５

【化62】

103（0.760 g, 1.13 mmol）のジクロロメタン（10 mL）溶液にトリフルオロ酢酸（2 mL）を0℃にて添加し、混合物を室温にて2時間撹拌した。溶媒を留去し、残渣をクロロホルムに溶解し、飽和Na₂CO₃水溶液、水及び飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮し、粗生成物（0.60 g）を得た。粗生成物（0.60 g）のN,N’-ジメチルホルムアミド（5 mL）溶液にNHS-ビオチン（0.36 g, 1.04 mmol）及びトリエチルアミン（0.32 g, 3.12 mmol）を添加し、混合物を室温にて終夜撹拌した。溶媒を留去し、残渣をカラムクロマトグラフィーで精製し（メタノール:クロロホルム; 1:10）、104（0.70 g, 0.87 mmol, 複数工程で77%）を得た。

【0109】

参考例３６

【化63】

104（0.56 g, 0.70 mmol）のテトラヒドロフラン（3 mL）及び水（1 mL）中の混合物に水酸化リチウム一水和物（59 mg, 1.4 mmol）を0℃にて添加し、混合物を室温にて2時間撹拌した。混合物をHCl水溶液（1 M）で酸性化し、クロロホルムで3回抽出した。集めた抽出物を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーで精製し（メタノール:クロロホルム; 1:3）、105（0.46 g, 0.59 mmol, 84%）を得た。

【0110】

参考例３７

【化64】

John H. WhiteらProc. Natl. Acad. Soc. 2008, 105, 8250-8255に記載の方法に従い、本工程を実施した。1,2-ジオール61（3.69 g, 9.442 mmol）をD-(-)-キナ酸60（4.72 g, 24.562 mmol）から39%収率で得た。

【0111】

参考例３８

【化65】

ジオール61（7.69 g, 19.680 mmol）のCH₂Cl₂（190 mL）溶液にベンズアルデヒドジメチルアセタール及びピリジニウムp-トルエンスルホネートを室温にて添加した。7時間撹拌した後、飽和NaHCO₃水溶液で反応をクエンチした。水層をCH₂Cl₂で3回抽出した。集めた有機抽出物をMgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／ジクロロメタン; 50:1）、残留試薬（ベンズアルデヒドジメチルアセタール）を含むベンジリデンアセタール（12.76 g）を得た。上記ベンジリデンアセタール（12.76g）のTHF（480 mL）溶液にTBAF・3H₂Oの溶液（65 mL, THF中1.0 M）を0℃にて添加した。5時間撹拌した後、反応混合物を飽和NH₄Cl水溶液で反応停止した。水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 50:1〜2:1）、アルコール62（5.38 g, 75%）を得た。

【0112】

参考例３９

【化66】

アルコール62（0.57 g, 1.556 mmol）のCH₂Cl₂（5.0 mL）溶液にピリジン（0.50 mL, 6.222 mmol）及びクロロメチルスルホニルクロリド（0.28 mL, 3.111 mmol）を0℃にて添加した。2時間撹拌した後、飽和NH₄Cl水溶液で反応を停止した。水層をCH₂Cl₂で3回抽出した。集めた有機抽出物をMgSO₄で乾燥し、減圧濃縮し、粗製モノキレート（monochlate）を得た。粗製モノキレートのDMF（7.8 mL）溶液にナトリウムアジド（0.51 mg, 7.778 mmol）を室温にて添加した後、混合物を60℃まで昇温させ、4.5時間撹拌した。反応混合物をH₂Oで反応停止した。水層をエチルエーテルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 50:1）、アジド63（0.35 g, 62からの収率58%）を得た。

【0113】

参考例４０

【化67】

トリメチルホスフィン（1.40 mL, 1.355 mmol, トルエン中1.0 M）及び蒸留水（0.23 mL）の溶液をアジド63（0.35 g, 0.903 mmol）のTHF（9.0 mL）溶液に室温にて添加した。21時間撹拌した後、混合物を50℃にて濃縮し、粗製アミンを得た。粗製アミンのTHF（9.0 mL）溶液にN-カルボエトキシフタルイミド（0.50 mg, 2.258 mmol）を室温にて添加した。22時間撹拌した後、混合物に飽和Na₂CO₃水溶液（1 mL）を添加し、激しく撹拌した。さらに10分後、水層をエチルエーテルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 10:1〜6:1）、アジド64（0.31 g, 63からの収率69%）を得た。

【0114】

参考例４１

【化68】

フタルイミド64（334.0 mg, 1.355 mmol）のエタノール（6.8 mL）溶液に水酸化パラジウム（34 mg, 10 wt%, 東京化成工業株式会社から20%／約50%含水炭素）を室温にて添加した。反応容器をパージし、水素下に置き、15時間激しく撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通してろ過し、ろ液を濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 10:1〜1:1）、ジオール65（177.8 mg, 53%）及び出発物質（92.6 mg, 34%回収）を得た。

【0115】

参考例４２

【化69】

65（155.2 mg, 0.383 mmol）のメタノール（16.7 mL）溶液に過ヨード酸ナトリウム（368 mg, 1.722 mmol）の蒸留水（2.4 mL）溶液を0℃にて滴加した。17時間撹拌した後、反応混合物を水で希釈し、水層をジクロロメタンで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 15:1〜1:1）、ケトン66（114.7 mg, 80%）及び出発物質65（18.2 mg, 12%回収）を得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.88-7.82 (m, 2H), 7.77-7.71 (m, 2H), 4.43 (dddd, J = 13.07, 12.73, 4.47, 4.13 Hz, 1H), 3.94 (dddd, J = 11.01, 10.66, 6.19, 4.47 Hz, 1H), 3.35 (dd, J = 14.10, 13.07 Hz, 1H), 2.75-2.63 (m, 2H), 2.58-2.43 (m, 2H), 2.19-2.10 (m, 1H), 0.87 (s, 9H), 0.07 (s, 3H), 0.06 (s, 3H).

【0116】

参考例４３

【化70】

ジオール58（0.91 g, 3.211 mmol）の乾燥ジクロロメタン（11 mL）溶液にモレキュラー・シーブス4A（1.61 g）及びN-メチルモルホリンN-オキシド（0.75 g, 6.422 mmol）を添加し、30分間撹拌した。テトライソプロピルアンモニウム過ルテニウム酸塩（45 mg, 0.128 mmol）を添加した後、反応混合物を室温まで昇温させた。2時間撹拌した後、混合物をシリカゲルパッドを通してろ過し、ろ液を溶媒留去し、粗製ケトンを得た。ナトリウムヒドリド（0.77 g, 19.266 mmol, 60% オイルで安定化）のTHF（20 mL）懸濁液にトリエチルホスホノアセテート（5.8 mL, 28.900 mmol）を0℃にて添加し、室温まで昇温させた。当該溶液に上記ケトン（3.211 mmol）のTHF（12 mL）溶液を添加した。3日間撹拌した後、H₂Oで反応を停止し、水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 15:1〜10:1）、α,β-不飽和エステル99（1.09 g, 97%）を無色油状物として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 5.45 (s, 1H), 4.14 (q, J = 7.22 Hz, 2H), 3.87-3.82 (m, 1H), 2.13-1.20(m, 18H), 1.28 (t, J = 7.22 Hz, 3H), 1.21 (s, 6H), 0.94 (d, J = 6.19 Hz, 3H), 0.57 (s, 3H).

【0117】

参考例４４

【化71】

α,β-不飽和エステル99（0.80 g, 2.278 mmol）のCH₂Cl₂（23 mL）溶液にジイソブチルアルミニウムヒドリドのヘキサン（6.8 mL, 6.835 mmol, 1.0 M）溶液を添加した。2時間撹拌した後、MeOH（5 mL）を注意深く添加して反応を停止した。混合物に飽和ロッシェル塩水溶液（8 mL）を添加し、30分間撹拌した。有機層を飽和ロッシェル塩水溶液で3回洗浄し、水層をCHCl₃で3回抽出した。集めた混合物をMgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 5:1〜1:1）、アリルアルコール100（0.77 g, q.y.）を無色油状物として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 5.21 (dd, J = 7.22, 6.88 Hz, 1H), 4.20 (dd, J = 6.19, 5.85 Hz, 2H), 2.64-2.59 (m, 1H), 2.01-1.20(m, 18H), 1.21 (s, 6H), 0.93 (d, J = 6.19 Hz, 3H), 0.54 (s, 3H).

【0118】

参考例４５

【化72】

トリフェニルホスフィン（104.0 mg, 0.395 mmol）、2-メルカプトベンゾチアゾール（66 mg, 0.395 mmol）をアリルアルコール100（75.5 mg, 0.247 mmol）のジクロロメタン（0.80 mL）溶液に0℃にて添加した後、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（77μL, 0.395 mmol）を滴加した。1時間撹拌した後、反応混合物にH₂Oを加えることで反応を停止した。水層をジクロロメタンで3回抽出した。集めた有機抽出物をMgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 10:1〜5:1）、残留試薬を含むチオエーテル（0.247 mmol）とした。チオエーテル（0.247 mmol）のエタノール（3.3 mL）溶液に過酸化水素（1.3 mL, 30%水溶液）及び七モリブデン酸六アンモニウム四水和物（97 mg, 0.079 mmol）を室温にて添加した。3時間撹拌した後、10% Na₂S₂O₃水溶液で反応を停止した。水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物をブラインで洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 5:1〜3:1）、アルコール101（0.18 g, 94%）を得た。

【0119】

参考例４６

【化73】

アルコール101（1.04 g, 2.127 mmol）のN,N-ジメチルホルムアミド（7 mL）溶液にイミダゾール（0.43 g, 6.382 mmol）及びN,N-ジメチルアミノ-4-ピリジン（52 mg, 0.425 mmol）を室温にて添加した後、クロロトリエチルシラン（0.89 mL, 5.318 mmol）を滴加した。6時間撹拌した後、反応混合物をH₂Oで反応停止した。水層をエチルエーテルで3回抽出した。集めた有機抽出物をH₂O及び飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 40:1〜20:1）、ベンゾチアゾリルスルホン67（1.28 g, 100%）を得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.22-7.56 (m, 4H), 5.01 (dd, J = 7.79, 7.79 Hz, 1H), 4.43 (dd, J = 14.20, 8.70 Hz, 1H), 4.20 (dd, J = 14.20, 6.87 Hz, 1H), 2.56-2.53 (m, 1H), 1.90-1.81 (m, 3H), 1.62-1.15(m, 15H), 1.17 (s, 6H), 0.93 (t, J = 7.79 Hz, 9H), 0.84 (d, J = 6.41 Hz, 3H), 0.55 (q, J = 7.79 Hz, 6H), 0.25 (s, 3H).

【0120】

参考例４７

【化74】

アルコール62（1.22 g, 3.353 mmol）のCH₂Cl₂（190 mL）溶液にモレキュラー・シーブス4A及びN-メチルモルホリンN-オキシドを室温にて添加した。15分間撹拌した後、テトラプロピルアンモニウム過ルテニウム酸塩を0℃にて添加した。さらに1時間後、反応混合物をシリカゲルパッドを通してろ過し、ろ液を濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／ジクロロメタン; 15:1〜5:1）、ケトン78a（0.48 g, 39%）及び78b（0.63 g, 52%）を得た。

【0121】

参考例４８

【化75】

ケトン78a（130.5 mg, 0.360 mmol）のエタノール（3.6 mL）溶液に水素化ホウ素ナトリウム（27.2 mg, 0.720 mmol）を添加した。3.5時間撹拌した後、反応混合物をH₂O及び飽和食塩水で反応停止し、次いで水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 15:1〜5:1）、cis-アルコール79a（16.5 mg, 21%）及びtrans-アルコール62a（41.8 mg, 52%）を無色油状物として得た。
79aについて記載した方法と同様にして、cis-アルコール79b（47.8 mg, 36%）及びtrans-アルコール62b（61.5 mg, 47%）を78b（79.5 mg, 0.219 mmol）から無色油状物として得た。

【0122】

参考例４９

【化76】

64について記載した方法と同様にして、79a及び79b（0.84 g, 2.291 mmol）からフタルイミド80（0.70 g, 62%）を泡状非晶質固体として得た。

【0123】

参考例５０

【化77】

フタルイミド80（46.4 mg, 0.094 mmol）のエタノール（1.0 mL）溶液に水酸化パラジウム（5 mg, 10 wt%, 東京化成工業株式会社から20%／約50%含水炭素）を室温にて添加した。反応容器を水素でパージし、5.5時間激しく撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通してろ過し、ろ液を濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 10:1〜1:1）、ジオール（19.2 mg, 50%）及び出発物質（12.7 mg, 27%回収）を得た。上記ジオール（19.2 mg, 0.047 mmol）のメタノール（2.1 mL）溶液に過ヨード酸ナトリウム（46 mg, 0.213 mmol）の蒸留水（0.3 mL）溶液を0℃にて滴加した。7時間撹拌した後、反応混合物を水で希釈し、水層をジクロロメタンで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 15:1〜2:1）、ケトン81（13.9 mg, 79%）を無色固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.87-7.70 (m, 4H), 5.05 (dddd, J = 12.38, 12.04, 4.47, 4.47 Hz, 1H), 4.52-4.46 (m, 1H), 3.31 (dd, J = 13.76, 12.73 Hz, 1H), 2.75-2.47 (m, 3H), 2.02-1.94 (m, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.08 (s, 6H).

【0124】

参考例５１

【化78】

アルコール79a及び79b（0.82 g, 2.2436 mmol）のCH₂Cl₂（22.0 mL）溶液にトリエチルアミン（0.94 mL, 6.735 mmol）、N,N-ジメチル-4-アミノピリジン（60.5 mg, 0.495 mmol）及び塩化ベンゾイル（0.52 mL, 4.513 mmol）を0℃にて添加した後、混合物を室温まで昇温し、2時間撹拌した。飽和NaHCO₃水溶液で反応を停止した。水層をCH₂Cl₂で3回抽出した。集めた有機抽出物をMgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 20:1）、92（0.96 mg, 91%）を無色固体として得た。

【0125】

参考例５２

【化79】

ベンゾエートエステル92（0.96 g, 2.047 mmol）の酢酸エチル（41 mL）溶液に水酸化パラジウム（97.8 mg, 10 wt%, 東京化成工業株式会社から20%／約50%含水炭素）を室温にて添加した。反応容器をパージし、水素下に置き、2時間激しく撹拌した。反応混合物をセライトパッドを通してろ過し、ろ液を濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 5:1〜2:1）、ジオール（0.77 g, 99%）を無色固体として得た。上記ジオール（0.77 g, 2.017 mmol）のメタノール（84 mL）溶液に過ヨード酸ナトリウム（2.00 g, 9.335 mmol）の蒸留水（12 mL）溶液を0℃にて滴加した。1.5時間撹拌した後、反応混合物を水で希釈し、水層をジクロロメタンで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 10:1〜5:1）、ケトン93（0.68 g, 97%）を無色固体として得た。

【0126】

実施例１
NHBoc VD3 18a及び18b

【化80】

16（109 mg, 0.231 mmol）及び14a（36 mg, 0.101 mmol）のトルエン（1.0 mL）及びEt₃N（1.0 mL）の溶液にPd(PPh₃)₄（10-20 mol%）を室温にて添加した後、反応混合物を90℃にて加熱した。3.5時間撹拌した後、反応混合物をシリカゲルカラムのパッドを通してろ過し、ろ液を溶媒留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 100:1）、17a（19 mg, 0.025 mmol, 純粋でない）を得た。17a（19 mg, 0.025 mmol）のTHF（1 mL）溶液に3HF-Et₃N（0.050 mL, 0.299 mmol）を室温にて添加した。シリカゲルプレートの薄層クロマトグラフィー（溶離液: 1:1 酢酸エチル〜ヘキサン）により反応をモニターした。飽和NaHCO₃により反応を停止し、水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 5:2〜2:1）、1α-NHBoc VD₃ 18a（7.2 mg, 2工程14%）を得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 6.35 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 5.99 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 5.22 (s, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.51-4.08 (m, 3H), 2.81 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 2.56 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 2.35-0.85 (m, 39H), 1.45 (s, 9H), 1.21 (s, 6H), 0.93 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 0.53 (s, 3H);
HRMS (ESI) C₃₂H₅₃N₁Na₁O₄ [M+Na]⁺ 計算値: 538.3872, 実測値: 538.3882.
18aについて記載した手順と同様にして、16（59 mg, 0.124 mmol）及び14b（19 mg, 0.054 mmol）から1β-NHBoc VD₃ 18b（3.5 mg, 13%）を無色油状物として得た。

【0127】

実施例２
1-アミノ-25(OH)D 19a及び19b

【化81】

塩化アセチル（0.080 mL, 1.13 mmol）をEtOH（1.1 mL）に0℃にてゆっくりと滴加した。30分間撹拌した後、この溶液をジオール18a（15.9 mg, 0.0308 mmol）に添加した。さらに6時間撹拌した後、反応混合物を溶媒留去した。残渣をEt₂Oで洗浄し、19a（13.01 mg, 93%）を黄色固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, MeOH-d₄) δ 6.45 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 6.04 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 5.28 (s, 1H), 5.17 (s, 1H), 4.19-4.11 (m, 1H), 4.07-4.02 (m, 1H), 2.89 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 2.57 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 2.41-1.13 (m, 27H), 0.97 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 0.58 (s, 3H);
HRMS (ESI) C₂₇H₄₆N₁O₂ [M+H]⁺ 計算値: 416.3529, 実測値: 416.3532.
19aについて記載した手順と同様にして、19b（2.82 mg, 92%）を18b（3.5 mg, 0.00678 mmol）から黄色固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, MeOH-d₄) δ 6.50 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 6.01 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 5.38 (s, 1H), 5.19 (s, 1H), 4.11-4.01 (m, 1H), 3.92-3.86 (m, 1H), 2.89 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 2.57 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 2.42-1.14 (m, 27H), 0.97 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 0.57 (s, 3H).

【0128】

実施例３
NHAc VD3 22a及び22b

【化82】

16（106 mg, 0.225 mmol）及び20a（40.6 mg, 0.137 mmol）のトルエン（1.4 mL）及びEt₃N（1.4 mL）の溶液にPd(PPh₃)₄（10〜20 mol%）を室温にて添加した後、反応混合物を90℃にて加熱した。5時間撹拌した後、反応混合物をシリカゲルカラムパッドを通してろ過し、ろ液を溶媒留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 6:1〜3:1）、21a（9.7 mg, 10%）を得た。21a（9.7 mg, 0.014 mmol）のTHF（0.3 mL）溶液に3HF-Et₃N（0.030 mL, 0.18 mmol）を室温にて添加した。シリカゲルプレートの薄層クロマトグラフィー（溶離液: 3:2:1 クロロホルム：酢酸エチル：メタノール）により反応をモニターした。反応混合物に飽和NaHCO₃水溶液を加えることで反応を停止した。水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 1:10〜0:1）、1α-NHAc VD₃ 22a（5.87 mg, 90%）を得た。
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.38 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 5.97 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 5.37 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 5.20 (s, 1H), 4.96 (s, 1H), 4.77 (dd, J = 13.7, 6.0 Hz, 1H), 4.10-4.05 (m, 1H), 2.81 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 2.57 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 2.35-0.83 (m, 32H), 1.99 (s, 3H), 1.21 (s, 6H), 0.93 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 0.52 (s, 3H);
HRMS (ESI) C₂₉H₄₇N₁Na₁O₃ [M+Na]⁺ 計算値: 480.3454, 実測値: 480.3458.
22aについて記載した手順と同様にして、1β-NHAc VD3 22b（10.6 mg, 79%）を16（104 mg, 0.221 mmol）及び20b（37.2 mg, 0.126 mmol）から無色油状物として得た。
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.46 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.36 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 5.95 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 5.27 (s, 1H), 4.95 (s,1H), 4.70-4.65 (m, 1H), 4.18-4.13 (m, 1H), 2.81 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 2.59 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 2.36-0.81 (m, 32H), 1.94 (s, 3H), 1.21 (s, 6H), 0.92 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.52 (s, 3H).

【0129】

実施例４
1α-NHNs VD₃ 28

【化83】

16（64.0 mg, 0.136 mmol）及び26（39.3 mg, 0.090 mmol）のトルエン（0.9 mL）及びEt₃N（0.9 mL）溶液にPd(PPh₃)₄（10-20 mol%）を室温にて添加した後、反応混合物を90℃にて加熱した。5時間攪拌した後、反応混合物をシリカゲルカラムパッドに通してろ過し、ろ液を溶媒留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 10:1）、27（12.4 mg, 47%）を得た。27（12.4 mg, 0.015 mmol）のTHF（0.3 mL）溶液に3HF-Et₃N（0.31 mL, 1.92 mmol）を室温にて添加した。反応はシリカゲルプレート上の薄層クロマトグラフィー（溶離液: 1:1 酢酸エチル：ヘキサン）によりモニターした。反応は飽和NaHCO₃水溶液により停止した。水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 3:1〜1:2）、1α-NHNs VD₃ 28（6.51 mg, 90%）を得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.20-7.24 (m, 4H), 6.36 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 5.74 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 5.41 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.04 (s, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.37-4.09 (m, 2H), 2.78 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 2.55 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 2.31-0.80 (m, 30H), 1.23 (s, 6H), 0.93 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.51 (s, 3H);
HRMS (ESI) C₃₃H₄₈N₂Na₁O₆S₁ [M+Na]⁺ 計算値: 623.3131, 実測値: 623.3161.

【0130】

実施例５
1α-NHTs VD₃ 32

【化84】

16（47.0 mg, 0.099 mmol）及び30（26.8 mg, 0.066 mmol）のトルエン（0.65 mL）及びEt₃N（0.65 mL）溶液にPd(PPh₃)₄（10-20 mol%）を室温にて添加した後、反応混合物を90℃にて加熱した。6時間撹拌した後、反応混合物をシリカゲルカラムパッドに通してろ過し、ろ液を溶媒留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 10:1）、31（5.1 mg, 10%）を得た。31（5.1 mg, 0.00639 mmol）のTHF（0.13 mL）溶液に3HF-Et₃N（0.091 mL, 0.556 mmol）を室温にて添加した。反応はシリカゲルプレート上の薄層クロマトグラフィー（溶離液: 1:1 酢酸エチル：ヘキサン）によりモニターした。反応混合物に飽和NaHCO₃水溶液を加えることで反応を停止した。水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 2:1〜1:1）、1α-NHTs VD₃ 32（2.20 mg, 60%）を得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.73 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.29 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.33 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 5.80 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.64 (s, 1H), 4.37 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.16-4.01 (m, 2H), 2.79-2.73 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 2.24-0.80 (m, 30H), 1.22 (s, 6H), 0.94 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 0.54 (s, 3H);
HRMS (FAB) C₃₄H₅₁NNaO₄S [M+Na]⁺ 計算値: 592.3437, 実測値: 592.3433.

【0131】

実施例６
1α-NHCbz VD₃ 36

【化85】

16（45.7 mg, 0.097 mmol）及び34（21.4 mg, 0.055 mmol）のトルエン（0.55 mL）及びEt₃N（0.55 mL）溶液にPd(PPh₃)₄（10-20 mol%）を室温にて添加した後、反応混合物を90℃にて加熱した。6時間撹拌した後、反応混合物をシリカゲルカラムパッドに通してろ過し、ろ液を溶媒留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 75:1〜40:1）、35（5.6 mg, 13%）を得た。35（5.6 mg, 0.0072 mmol）のTHF（0.145 mL）溶液に3HF-Et₃N（0.13 mL, 0.818 mmol）を室温にて添加した。反応はシリカゲルプレート上の薄層クロマトグラフィー（溶離液: 1:1 酢酸エチル：ヘキサン）によりモニターした。反応混合物を飽和NaHCO₃水溶液でクエンチした。水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 2:1〜1:1）、1α-NHCbz VD₃ 36（1.16 mg, 29%）を得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.36 (s, 5H), 6.36 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 5.97 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 5.23 (s, 1H), 5.12-5.09 (m, 2H), 4.97 (s, 1H), 4.57-4.46 (m, 1H), 4.12-4.06 (m, 1H), 2.84-0.81 (m, 32H), 1.22 (s, 6H), 0.93 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 0.51 (s, 3H).
HRMS (FAB) Calcd for C₃₅H₅₁NNaO₄ [M+Na]⁺: 572.3716, 実測値: 572.3717.

【0132】

実施例７
アミン37

【化86】

1-ドデカンチオール（0.0040 mL, 0.01411 mmol）のジエチルエーテル（0.10 mL）溶液にNaH（1.00 mg, 0.01881 mmol, オイルにより安定化 60%）を0℃にて添加し、30分間撹拌した。その懸濁液にジエチルエーテル（0.10 mL）中のノシレート27（7.8 mg, 0.00941 mmol）を添加した後、反応混合物を室温まで昇温させた。さらに2時間後、H₂Oにより反応を停止した。水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 4:1〜1:1）、アミン 37（4.6 mg, 76%）を得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 6.27 (d, J = 11.34 Hz, 1H), 5.98 (d, J = 11.34 Hz, 1H), 5.17 (s, 1H), 4.91 (s, 1H), 4.16-4.08 (m, 1H), 3.76-3.69 (m, 1H), 2.85-2.77 (m, 1H), 2.49-0.80 (m, 25H), 1.18 (s, 6H), 0.94 (t, J = 7.89 Hz, 9H), 0.86 (s, 9H), 0.56 (q, J = 7.89 Hz, 6H), 0.54 (s, 3H), 0.59 (s, 6H).

【0133】

実施例８
1α-NH(p-CF₃Bz) VD₃ 38

【化87】

アミン 37（5.2 mg, 0.00807 mmol）のCH₂Cl₂（0.20 mL）溶液にEt₃N（0.0028 mL, 0.02018 mmol）を添加し、p-(トリフルオロメチル)ベンゾイルクロリド（0.0014 mL, 0.00969 mmol）を-20℃にて注意深く滴下した。1.5時間撹拌した後、飽和NaHCO₃水溶液により反応を停止した。水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 30:1〜15:1）、ベンズアミド（6.0 mg, 91%, 純粋でない）を得た。ベンズアミド（6.0 mg, 7.35 μmol）のTHF（0.20 mL）溶液に3HF-Et₃N（0.14 mL, 0.878 mmol）を室温にて添加した。反応はシリカゲルプレート上の薄層クロマトグラフィー（溶離液: 2:1 酢酸エチル：ヘキサン）によりモニターした。反応混合物に飽和NaHCO₃水溶液を加えることで反応を停止した。水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 2:1〜1:a1）、1α-NH(p-CF₃Bz) VD₃ 38（2.0 mg, 46%）を得た。
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.83 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.67 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.45 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 6.03 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.99 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 5.31 (s, 1H), 5.03 (s, 1H), 5.00-4.95 (m, 1H), 4.12-4.06 (m, 1H), 2.84 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 2.65 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 2.39-0.81 (m, 30H), 1.21 (s, 6H), 0.93 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.46 (s, 3H);
HRMS (ESI) C₃₅H₄₈F₃N₁Na₁O₃ [M+Na]⁺ 計算値: 610.3484, 実測値: 610.3458.

【0134】

実施例９
1α-NH(p-BrBz) VD₃ 39

【化88】

38について記載した手順と同様にして、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／EtOAc; 1:3〜1:10）により精製した1α-NH(p-CF₃Bz) VD₃ 39（1.77 mg, 19%）を37（7.3 mg, 11.33 μmol）から固体として得た。
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.59-7.52 (m, 4H), 6.45 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 5.99 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 5.96 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 5.29 (s, 1H), 5.01 (s, 1H), 4.98-4.92 (m, 1H), 4.10-4.02 (m, 1H), 2.83 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 2.64 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 2.38-0.83 (m, 30H), 1.21 (s, 6H), 0.94 (d, J = 5.9 Hz, 3H), 0.49 (s, 3H);
HRMS (ESI) C₃₄H₄₈Br₁N₁Na₁O₃ [M+Na]⁺ 計算値: 622.2695, 実測値: 622.2683.

【0135】

実施例１０
1α-NH(p-OMeBz) VD₃ 40

【化89】

38について記載した手順と同様にして、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル; 1:3〜1:10）により精製した1α-NH(p-OMeBz) VD₃ 40（2.46 mg, 52%）を37（5.6 mg, 8.69 μmol）から固体として得た。
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.68 (d, J = 8.72 Hz, 2H), 6.89 (d, J = 8.72 Hz, 2H), 6.44 (d, J = 11.44 Hz, 1H), 6.01 (d, J = 11.44 Hz, 1H), 5.93 (d, J = 8.28 Hz, 1H), 5.30 (s, 1H), 5.00 (s, 1H), 4.97-4.92 (m, 1H), 4.13-4.04 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 2.86-0.83 (m, 22H), 2.35 (dd, J = 12.80, 7.80 Hz, 1H) 1.20 (s, 6H), 0.93 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.51 (s, 3H);
HR-MS ESI C₃₅H₅₁N₁Na₁O₄ [M+Na]⁺ 計算値: 572.37158, 実測値: 572.36923.

【0136】

実施例１１
1α-NH(p-SCF₃Bz) VD₃ 41

【化90】

38について記載した手順と同様にして、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル; 3:1〜1:1）により精製した1α-NH(p-SCF₃Bz) VD₃ 41（118.88 mg, 74%）を37（166.2 mg, 0.258 mmol）から固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.75 (d, J = 8.25 Hz, 2H), 7.68 (d, J = 8.25 Hz, 2H), 6.45 (d, J = 10.98 Hz, 1H), 6.07 (d, J = 7.92 Hz, 1H), 5.99 (d, J = 10.98 Hz, 1H), 5.30 (s, 1H), 5.01 (s, 1H), 4.95 (dd, J = 11.67, 6.87 Hz, 1H), 4.12-4.04 (m, 1H), 2.86-1.15 (m, 23H), 1.21 (s, 6H), 0.93 (d, J = 5.82 Hz, 3H), 0.48 (s, 3H);
HR-MS ESI C₃₅H₄₈F₃N₁Na₁O₃S₁ [M+Na]⁺ 計算値: 642.32047, 実測値: 642.31973.

【0137】

実施例１２
1α-NH(2,3,4,5-テトラフルオロBz) VD₃ 42

【化91】

38について記載した手順と同様にして、フラッシュクロマトグラフィー（NH シリカゲル, ヘキサン／酢酸エチル; 1:1）により精製した1α-NH(2,3,4,5-テトラフルオロBz) VD₃ 42（2.21 mg, 61%）を37（3.8 mg, 5.899μmol）から固体として得た。
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.80-7.72 (m, 1H), 6.52 (dd, J = 11.92, 7.32 Hz, 1H), 6.46 (d, J = 11.44 Hz, 1H), 5.97 (d, J = 11.44 Hz, 1H), 5.30 (s, 1H), 5.03 (s, 1H), 4.98-4.92 (m, 1H), 4.11-4.04 (m, 1H), 2.86-1.15 (m, 22H), 2.35 (dd, J = 13.28, 7.80 Hz, 1H), 1.21 (s, 6H), 0.93 (d, J = 5.52 Hz, 3H), 0.48 (s, 3H);
HR-MS ESI C₃₄H₄₅F₄N₁Na₁O₃ [M+Na]⁺ 計算値: 614.32333, 実測値: 614.32730.

【0138】

実施例１３
1α-NH(2,4,5-トリフルオロBz) VD₃ 43

【化92】

38について記載した手順と同様にして、フラッシュクロマトグラフィー（NH シリカゲル, ヘキサン／酢酸エチル; 1:1）により精製したを37（23.5 mg, 0.037 mmol）から固体として得た。
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.00-7.93 (m, 1H), 6.98-6.92 (m, 1H), 6.62 (dd, J = 13.28, 8.24 Hz, 1H), 6.44 (d, J = 11.00 Hz, 1H), 5.97 (d, J = 11.00 Hz, 1H), 5.29 (s, 1H), 5.01 (s, 1H), 4.99-4.92 (m, 1H), 4.12-4.04 (m, 1H), 2.85-1.15 (m, 22H), 2.35 (dd, J = 12.84, 7.80 Hz, 1H), 1.21 (s, 6H), 0.93 (d, J = 6.44 Hz, 3H), 0.47 (s, 3H);
HR-MS ESI C₃₄H₄₆F₃N₁Na₁O₃ [M+Na]⁺ 計算値: 596.33275, 実測値: 596.33404.

【0139】

実施例１４
1α-NH(3,4-ジメトキシBz) VD₃ 44

【化93】

38について記載した手順と同様にして、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル; 1:3）により精製した1α-NH(3,4-ジメトキシBz) VD₃ 44（1.76 mg, 78%）を37（2.5 mg, 3.881 μmol）から固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.46-7.44 (m, 1H), 7.17-7.13 (m, 1H), 6.80 (d, J = 8.58 Hz, 1H), 6.44 (d, J = 10.65 Hz, 1H), 6.01 (d, J = 10.65 Hz, 1H), 5.96 (d, J = 8.25 Hz, 1H), 5.30 (s, 1H), 5.01 (s, 1H), 5.00-4.92 (m, 1H), 4.16-4.05 (m, 1H), 3.94 (s, 3H), 3,91 (s,3H), 2.86-1.15 (m, 23H), 1.21 (s, 6H), 0.93 (d, J = 6.18 Hz, 3H), 0.50 (s, 3H);
HR-MS ESI C₃₆H₅₃N₁Na₁O₅ [M+Na]⁺ 計算値: 602.38214, 実測値: 602.38563.

【0140】

実施例１５
1α-NH(プロピオニル) VD₃ 45

【化94】

38について記載した手順と同様にして、フラッシュクロマトグラフィー（クロロホルム／酢酸エチル／メタノール; 18:1:1）により精製した1α-NH(プロピオニル) VD₃ 45（1.31 mg, 72%）を37（2.5 mg, 3.881 μmol）から固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 6.39 (d, J = 11.34 Hz, 1H), 5.96 (d, J = 11.34 Hz, 1H), 5.33 (d, J = 8.58 Hz, 1H), 5.20 (s, 1H), 4.96 (s, 1H), 4.85-4.74 (m, 1H), 4.10-4.01 (m, 1H), 2.85-1.15 (m, 23H), 2.21 (q, J = 7.56 Hz, 2H), 1.21 (s, 6H), 1.15 (t, J = 7.56 Hz, 3H), 0.93 (d, J = 6.18 Hz, 3H), 0.51 (s, 3H);
HR-MS ESI C₃₀H₄₉N₁Na₁O₃ [M+Na]⁺ 計算値: 494.36101, 実測値: 494.36202.

【0141】

実施例１６
1α-NH(ブチリル) VD₃ 46

【化95】

38について記載した手順と同様にして、フラッシュクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール; 20:1）により精製した1α-NH(ブチリル) VD₃ 46（1.84 mg, 98%）を37（2.5 mg, 3.881 μmol）から固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 6.39 (d, J = 11.34 Hz, 1H), 5.96 (d, J = 11.34 Hz, 1H), 5.33 (d, J = 8.25 Hz, 1H), 5.21 (s, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.84-4.75 (m, 1H), 4.10-4.00 (m, 1H), 2.84-1.15 (m, 23H), 2.16 (t, J = 7.56 Hz, 2H), 1.66 (q, J = 7.56 Hz, 2H), 1.21 (s, 6H), 0.95 (t, J = 7.56 Hz, 3H), 0.93 (d, J = 6.18 Hz, 3H), 0.52 (s, 3H);
HR-MS ESI C₃₁H₅₁N₁Na₁O₃ [M+Na]⁺ 計算値: 508.37666, 実測値: 508.37541.

【0142】

実施例１７
1α-NHEt VD₃ 47

【化96】

トリフェニルホスフィン（12.0 mg, 0.0461 mmol）、エタノール（4μL, 0.0690 mmol）及びジイソプロピルアゾジカルボキシレート（9.0μL, 0.0461 mmol）をノシルアミド28（19.1 mg, 0.0230 mmol）のTHF（0.43 mL）溶液に室温にて添加し、12時間撹拌した。反応混合物にH₂Oを加えることで反応を停止した。水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 20:1）、エチル化ノシルアミド（13.0 mg, 66%, 純粋でない）を得た。1-ドデカンチオール（7.2μL, 0.0303 mmol）のジエチルエーテル（100μL）溶液にナトリウムヒドリド（1.2 mg, 0.0288 mmol, オイルにより安定化 60%）を0℃にて添加し、30分間撹拌した。その懸濁液を上記エチル化ノシルアミド（13.0 mg, 0.0152 mmol）のジエチルエーテル（200μL）溶液に添加した。さらに8時間後、反応をH₂Oで停止した。水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物をブラインで洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 10:1〜1:1）、エチルアミン（5.8 mg, 57%）を得た。HF・Py（83.5 mg, 0.842 mmol）をエチルアミン（5.8 mg, 8.628μmol）のTHF（0.50 mL）溶液に室温にて添加した。反応はシリカゲルプレート上の薄層クロマトグラフィー（溶離液: 3:2:1 クロロホルム：酢酸エチル：メタノール）によりモニターした。反応混合物に飽和NaHCO₃水溶液を加えることで反応を停止した。水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（NH シリカゲル, クロロホルム／メタノール; 100:1）、1α-NHEt VD₃ 47（3.93 mg, 86%）を得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 6.38 (d, J = 11.31 Hz, 1H), 5.99 (d, J = 11.31 Hz, 1H), 5.12 (d, J = 2.04 Hz, 1H), 4.97 (d, J = 2.04 Hz, 1H), 4.13-4.04 (m, 1H), 3.33 (t, J = 4.47 Hz,, 1H), 2.81 (dd, J = 11.67, 3.78 Hz, 1H), 2.68 (dd, J = 11.34, 7.23 Hz, 1H), 2.65-1.15 (m, 22H), 2.52 (dd, J = 11.34, 7.23 Hz, 1H), 1.21 (s, 6H), 1.08 (t, J = 7.20 Hz, 3H), 0.93 (d, J = 6.18 Hz, 3H), 0.51 (s, 3H);
HR-MS ESI C₂₉H₅₀N₁O₂ [M+H]⁺ 計算値: 444.38415, 実測値: 444.38318.

【0143】

実施例１８
1α-NHBu VD₃ 48

【化97】

47について記載した手順と同様にして、フラッシュクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール; 200:1）により精製した1α-NHBu VD₃ 48（4.70 mg, 36%）を28（20.4 mg, 0.0246 mmol）から固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 6.38 (d, J = 11.31 Hz, 1H), 5.98 (d, J = 11.31 Hz, 1H), 5.13 (d, J = 2.40 Hz, 1H), 4.98 (d, J = 2.40 Hz, 1H), 4.13-4.02 (t, J = 4.11 Hz. 1H), 2.84-1.15 (m, 29H), 1.21 (s, 6H), 0.93 (d, J = 6.51 Hz, 3H), 0.89 (t, J = 7.20 Hz, 3H), 0.51 (s, 3H);
HR-MS ESI C₃₁H₅₄N₁O₂ [M+H]⁺ 計算値: 472.41545, 実測値: 472.41701.

【0144】

実施例１９
1α-NH(シクロプロピルメチル) VD₃ 49

【化98】

47について記載した手順と同様にして、フラッシュクロマトグラフィー（クロロホルム／酢酸エチル／メタノール; 6:4:1〜3:2:2）により精製した1α-NH(シクロプロピルメチル) VD₃ 49（8.95 mg, 38%）を28（41.2 mg, 0.0497 mmol）を固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 6.41 (d, J = 11.34 Hz, 1H), 5.92 (d, J = 11.34 Hz, 1H), 5.13 (d, J = 2.07 Hz, 1H), 5.01 (d, J = 2.07 Hz, 1H), 4.20-4.09 (m, 1H), 3.39 (t, J = 4.11 Hz, 1H), 2.85-1.15 (m, 30H), 1.21 (s, 6H), 0.93 (d, J = 6.51 Hz, 3H), 0.52 (s, 3H);
HR-MS ESI C₃₁H₅₂N₁O₂ [M+H]⁺ 計算値: 470.39980, 実測値: 470.39797.

【0145】

実施例２０
1α-NH(2-モルホリノエチル) VD₃ 50

【化99】

47について記載した手順と同様にして、フラッシュクロマトグラフィー（クロロホルム／酢酸エチル／メタノール; 6:4:1〜クロロホルム／メタノール; 1:1）により精製した1α-NH(2-モルホリノエチル) VD₃ 50（2.56 mg, 15%）を28（38.9 mg, 0.0469 mmol）から固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 6.38 (d, J = 11.34 Hz, 1H), 5.98 (d, J = 11.34 Hz, 1H), 5.21 (s, 1H), 5.04 (s, 1H), 4.18-4.08 (m, 1H), 3.68 (t, J = 4.47 Hz, 4H), 3.48-3.42 (m, 1H), 2.83-1.15 (m, 31H), 1.21 (s, 6H), 0.93 (d, J = 6.18 Hz, 3H), 0.50 (s, 3H);
HR-MS ESI C₃₃H₅₇N₂O₃ [M+H]⁺ 計算値: 529.43692, 実測値: 529.43542.

【0146】

実施例２１
1α-NH(2-(4-ヒドロキシ ピペリジル)エチル) VD₃ 52

【化100】

47について記載した手順と同様にして、フラッシュクロマトグラフィー（NH シリカゲル, クロロホルム／酢酸エチル／メタノール; 18:1:1）により精製した1α-NH(2-(4-ヒドロキシ ピペリジル)エチル) VD₃ 52（4.22 mg, 20%）を28（43.5 mg, 0.0525 mmol）から固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 6.36 (d, J = 11.34 Hz, 1H), 6.01 (d, J = 11.34 Hz, 1H), 5.16 (d, J = 2.07 Hz, 1H), 4.98 (d, J = 2.07 Hz, 1H), 4.16-4.05 (m, 1H), 3.72-3.62 (m, 1H), 3.34 (t, J = 4.47 Hz, 1H), 2.83-1.15 (m, 34H), 1.21 (s, 6H), 0.93 (d, J = 5.82 Hz, 3H), 0.51 (s, 3H);
HR-MS ESI C₃₄H₅₉N₂O₃ [M+H]⁺ 計算値: 543.45257, 実測値: 543.44912.

【0147】

実施例２２
1α-NHMs VD₃ 53

【化101】

38について記載した手順と同様にして、フラッシュクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール; 15:1）により精製した1α-NHMs VD₃ 53（1.49 mg, 70%）を37（2.8 mg, 4.347μmol）から固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 6.41 (d, J = 11.34 Hz, 1H), 5.95 (d, J = 11.34 Hz, 1H), 5.36 (s, 1H), 5.06 (s, 1H), 4.34-4.25 (m, 1H), 4.14-4.04 (m, 1H), 2.83 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 2.98 (s, 3H), 2.83-1.15 (m, 23H), 1.21 (s, 6H), 0.93 (d, J = 6.18 Hz, 3H), 0.52 (s, 3H);
HR-MS ESI C₂₈H₄₇N₁Na₁O₄S₁ [M+Na]⁺ 計算値: 516.31235, 実測値: 516.31391.

【0148】

実施例２３
1α-NH(p-フルオロBz) VD₃ 54

【化102】

38について記載した手順と同様にして、フラッシュクロマトグラフィー（NHシリカ, ヘキサン／酢酸エチル; 20:1）により精製した1α-NH(p-フルオロBz) VD₃ 54（1.89 mg, 48%）を37（4.7 mg, 7.296μmol）から固体として得た。
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.72 (dd, J = 8.72, 5.04 Hz,, 2H), 7.08 (t, J = 8.72 Hz, 2H), 6.45 (d, J = 11.00 Hz, 1H), 6.00 (d, J = 11.00 Hz, 1H), 5.94 (d, J = 7.80 Hz, 1H), 5.30 (s, 1H), 5.01 (s, 1H), 4.98-4.91 (m, 1H), 4.12-4.04 (m, 1H), 2.84 (dd, J = 12.84, 3.68 Hz, 1H), 2.64 (dd, J = 12.84, 3.68 Hz, 1H), 2.35 (dd, J = 12.84, 7.80 Hz, 1H), 2.21-1.15 (m, 20H), 1.21 (s, 6H), 0.94 (d, J = 5.96 Hz, 3H), 0.50 (s, 3H);
HR-MS ESI C₃₄H₄₈F₁N₁Na₁O₃ [M+Na]⁺ 計算値: 560.35159, 実測値: 560.35351.

【0149】

実施例２４

【化103】

105（4.9 mg, 0.0062 mmol）及び19a（1.4 mg, 0.0031 mmol）のメタノール（1.0 mL）撹拌溶液に4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド（1.7 mg, 0.0062 mmol）及びN,N-ジイソプロピルエチルアミン（0.54μL, 0.0031 mmol）を0℃にて添加し、混合物を室温にて終夜撹拌した。溶媒を留去し、残渣をHPLCにより精製し、106（1.9 mg, 0.0016 mmol, 51%）を得た。
¹H NMR (CD₃OD) δ 0.51 (s, 3H), 0.94-3.36 (m, 47H), 3.48-3.64 (m, 20H), 4.03-4.81 (m, 4H), 4.88 (s, 1H), 5.15 (s, 1H), 5.96 (d, 1H), 6.32 (d, 1H), 7.35 (d, 2H), 8.01 (d, 2H);
HRMS (FAB) C₆₁H₉₀F₃N₈NaO₁₀S [M+Na]⁺ 計算値: 1207.6429, 実測値: 1207.6427.

【0150】

実施例２５
19-ノル 1β-NPhth-3β-OTBS VD₃ 68及び1α-OTBS-3α-NPhth VD₃ 69

【化104】

ベンゾチアゾリルスルホン67（61.9 mg, 0.102 mmol）のTHF（1.0 mL）溶液にリチウム ビス(トリメチルシリル)アミド（90μL, 0.116 mmol, 1.3 M／THF）を-78℃にて滴加した。1時間撹拌した後、ケトン66（29.0 mg, 0.078 mmol）のTHF（1.0 mL）溶液を添加した。混合物を2時間同温にて撹拌した後、室温まで昇温させ、3時間撹拌した。反応混合物に水を加えることで反応を停止し、水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 15:1）、68（12.2 mg, 21%）、69（24.0 mg, 40%）及び出発物質67（26.9 mg, 44%回収）を得た。
68; ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.85-7.81 (m, 2H), 7.73-7.69 (m, 2H), 6.23 (d, J = 11.45 Hz, 1H), 5.73 (d, J = 11.45 Hz, 1H), 4.20-4.10 (m, 1H), 3.67 (dddd, J = 10.99, 10.76, 5.95, 4.58 Hz, 1H), 2.82-1.15 (m, 25H), 1.18 (s, 6H), 0.95-0.91 (m, 12H), 0.88 (s, 9H), 0.57 (s, 3H), 0.55 (q, J = 7.79 Hz, 6H), 0.08 (s,3H), 0.05 (s, 3H).
69; ¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.84-7.80 (m, 2H), 7.72-7.68 (m, 2H), 6.23 (d, J = 11.45 Hz, 1H), 5.85 (d, J = 11.45 Hz, 1H), 4.14 (dddd, J = 12.82, 12.36, 4.12, 4.12 Hz, 1H), 3.58 (dddd, J = 10.99, 10.53, 6.42, 4.12 Hz, 1H), 3.03-2.97 (m, 2H), 2.79-2.74 (m, 1H), 2.49 (ddd, J = 12.36, 12.36, 10.99 Hz , 1H), 2.22 (dd, J = 12.36, 3.66 Hz, 1H), 2.02-1.15 (m, 20H), 1.19 (s, 6H), 0.95 (t, J = 7.79 Hz, 9H), 0.93 (d, J = 6.41 Hz, 3H), 0.89 (s, 9H), 0.56 (q, J = 7.79 Hz, 6H), 0.56 (s, 3H), 0.09 (s,3H), 0.06 (s, 3H).

【0151】

実施例２６
19-ノル 1β-アミノ-3β-OTBS VD₃ 70及び1α-OTBS-3α-アミノ VD₃ 71

【化105】

68（16.7 mg, 0.0219 mmol）のエタノール（0.55 mL）溶液にヒドラジン水和物（5.3μL, 0.110 mmol）を室温にて添加した。混合物を1.5時間60℃にて撹拌した。反応混合物を綿栓プラグに通してろ過し、ろ液を濃縮して粗製の70を得た。
70について記載した手順と同様にして、粗製の71を37（19.5 mg, 0.0256 mmol）から得た。

【0152】

実施例２７
19-ノル 1β-NHTs-3β-OH VD₃ 72及び1α-OH-3α-NHTs VD₃ 73

【化106】

粗製の70（約0.011 mmol）のCH₂Cl₂（0.60 mL）溶液にトリメチルアミン（4.0μL, 0.028 mmol）及びp-トルエンスルホニルクロリド（2.5 mg, 0.013 mmol）を0℃にて添加した。2.5時間撹拌した後、反応混合物に水を加えることで反応を停止し、水層をジクロロメタンで3回抽出し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（NHシリカゲル, ヘキサン／酢酸エチル; 30:1〜4:1）、1β-NHTs-3β-OTBS VD₃（6.4 mg, 73%）を無色油状物として得た。HF・Py（121.0 mg, 1.221 mmol）を上記1β-NHTs-3β-OTBS VD₃（6.4 mg, 8.139μmol）のTHF（0.60 mL）溶液に添加し、混合物を20時間撹拌した。反応混合物に飽和NaHCO₃水溶液を加えることで反応を停止し、水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 3:1〜1:2）、1β-NHTs-3β-OH VD₃ 72（4.29 mg, 94%）を白色固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.76 (d, J = 8.26 Hz, 2H), 7.29 (d, J = 8.26 Hz, 2H), 6.26 (d, J = 11.35 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 11.35 Hz, 1H), 5.20 (d, J = 8.94 Hz, 1H), 3.95-3.87 (m, 1H), 3.54-3.44 (m, 1H), 2.76 (dd, J = 11.70, 3.78 Hz, 1H), 2.45-2.36 (m, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.28 (dd, J = 13.42, 6.88 Hz, 1H), 2.15 (dd, J = 11.42, 6.54 Hz, 1H), 2.05-1.20 (m, 21H), 1.23 (s, 6H), 0.94 (d, J = 6.19 Hz, 3H), 0.54 (s, 3H).
HR-MS ESI C₃₃H₅₁N₁Na₁O₄S₁ [M+Na]⁺ 計算値: 580.34365, 実測値: 580.34011.
72について記載した手順と同様にして、1α-OTBS-3α-NHTs VD₃ 73（131.4 mg, 83%）を71（約0.283 mmol）から白色固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.76 (d, J = 8.26 Hz, 2H), 7.30 (d, J = 8.26 Hz, 2H), 6.10 (d, J = 11.01 Hz, 1H), 5.76 (d, J = 11.01 Hz, 1H), 5.20 (d, J = 8.60 Hz, 1H), 3.88-3.81 (m, 1H), 3.48-3.40 (m, 1H), 2.74-2.70 (m, 1H), 2.53 (dd, J = 13.07, 3.44 Hz, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.34-1.20 (m, 23H), 1.22 (s, 6H), 0.94 (d, J = 6.19 Hz, 3H), 0.56 (s, 3H).
HR-MS ESI C₃₃H₅₁N₁Na₁O₄S₁ [M+Na]⁺ 計算値: 580.34365, 実測値: 580.34781.

【0153】

実施例２８
19-ノル 1β-NH(p-SCF₃Bz)-3β-OH VD₃ 74及び1α-OH-3α-NH(p-SCF₃Bz) VD₃ 75

【化107】

粗製70（約0.011 mmol）のCH₂Cl₂（0.60 mL）溶液にトリメチルアミン（4.0μL, 0.028 mmol）及び(p-トリフルオロメチルチオ)塩化ベンゾイル（2.2μL, 0.013 mmol）を0℃にて添加した。1時間撹拌した後、反応混合物に水を加えることで反応を停止し、水層をジクロロメタンで3回抽出し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 10:1〜6:1）、1β-NH(p-SCF₃Bz)-3β-OTBS VD₃（7.6 mg, 82%）を無色油状物として得た。HF・Py（129.3 mg, 1.304 mmol）を上記1β-NH(p-SCF₃Bz)-3β-OTBS VD3（7.6 mg, 9.087μmol）のTHF（0.60 mL）溶液に添加し、混合物を20時間撹拌した。反応混合物を飽和NaHCO₃水溶液で反応停止し、水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 3:1〜1:2）、1β-NH(p-SCF₃Bz)-3β-OH VD₃ 74（3.24 mg, 59%）を白色固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.73-7.64 (m, 4H), 7.50 (d, J = 8.26 Hz, 1H), 6.34 (d, J = 11.35 Hz, 1H), 5.72 (d, J = 11.35 Hz, 1H), 4.51-4.46 (m, 1H), 3.31-3.27 (m, 1H), 2.94 (dd, J = 13.42, 3.78 Hz, 1H), 2.79-2.74 (m, 1H), 2.60-2.56 (m, 1H), 2.35-1.20 (m, 22H), 1.21 (s, 6H), 0.90 (d, J = 6.54 Hz, 3H), 0.50 (s, 3H).
HR-MS ESI C₃₄H₄₈F₃N₁Na₁O₃S₁ [M+Na]⁺ 計算値: 630.32047, 実測値: 630.31864.
74について記載した手順と同様にして、1α-OTBS-3α-NHTs VD3 75（5.06 mg, 65%）を71（約0.013 mmol）から白色固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.80-7.67 (m, 4H), 7.33 (d, J = 8.26 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 11.01 Hz, 1H), 5.84 (d, J = 11.01 Hz, 1H), 4.40-4.32 (m, 1H), 4.23-4.18 (m, 1H), 2.76-2.68 (m, 1H), 2.60 (dd, J = 14.10, 5.85 Hz, 1H), 2.54-1.21 (m, 22H), 2.37 (dd, J = 14.10, 5.85 Hz, 1H), 1.22 (s, 6H), 0.94 (d, J = 6.19 Hz, 3H), 0.55 (s, 3H).
HR-MS ESI C₃₄H₄₈F₃N₁Na₁O₃S₁ [M+Na]⁺ 計算値: 630.32047, 実測値: 630.32327.

【0154】

実施例２９
19-ノル 1β-NPhth-3β-OH VD₃ 76及び1α-OH-3α-NHPhth VD₃ 77

【化108】

HF・Py（150.0 mg, 1.513 mmol）を上記1β-NPhth-3β-OTBS VD₃ 68（12.2 mg, 16.005μmol）のTHF（0.60 mL）溶液に添加し、混合物を20時間撹拌した。反応混合物に飽和NaHCO₃水溶液を加えることで反応を停止し、水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 3:1〜1:1）、1β-NPhth-3β-OH VD₃ 76（8.54 mg, 100%）を白色固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.86-7.70 (m, 4H), 6.27 (d, J = 11.35 Hz, 1H), 5.72 (d, J = 11.35 Hz, 1H), 4.24-4.13 (m, 1H), 3.72 (dddd, J = 11.01, 10.66, 6.88, 4.47 Hz, 1H), 2.81-2.74 (m, 2H), 2.61 (dd, J = 12.07, 4.13 Hz, 1H), 2.39 (ddd, J = 12.04, 11.70, 11.70 Hz, 1H), 2.25-1.19 (m, 21H), 1.20 (s, 6H), 0.93 (d, J = 6.54 Hz, 3H), 0.56 (s, 3H).
HR-MS ESI C₃₄H₄₇N₁Na₁O₄ [M+Na]⁺ 計算値: 556.34028, 実測値: 556.34468.
76について記載した手順と同様にして、1α-OH-3α-NHPhth VD₃ 77（8.76 mg, 94%）を69（13.3 mg, 17.448μmol）から白色固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.85-7.69 (m, 4H), 6.25 (d, J = 11.35 Hz, 1H), 5.86 (d, J = 11.35 Hz, 1H), 4.17 (dddd, J = 12.38, 12.38, 4.13, 3.78 Hz, 1H), 3.72 (dddd, J = 11.01, 11.01, 6.54, 4.13 Hz, 1H), 3.16 (dd, J = 12.73, 4.13 Hz, 2H), 3.00 (dd, J = 12.38, 12.38 Hz, 1H), 2.77 (dd, J = 12.04, 3.78 Hz, 1H), 2.46 (ddd, J = 12.04, 11.70, 11.70 Hz, 1H), 2.77 (dd, J = 12.38, 3.78 Hz, 1H), 2.17-1.21 (m, 19H), 1.22 (s, 6H), 0.94 (d, J = 6.19 Hz, 3H), 0.55 (s, 3H).
HR-MS ESI C₃₄H₄₇N₁Na₁O₄ [M+Na]⁺ 計算値: 556.34028, 実測値: 556.34111.

【0155】

実施例３０
19-ノル 1α-NPhth-3β-OTBS VD₃ 82及び1α-OTBS-3β-NPhth VD₃ 83

【化109】

ベンゾチアゾリルスルホン67（202.0 mg, 0.334 mmol）のTHF（2.0 mL）溶液にリチウム ビス(トリメチルシリル)アミド（0.28 mL, 0.336 mmol, 1.3 M／THF）を-78℃にて滴加した。1時間撹拌した後、ケトン81（72.4 mg, 0.194 mmol）のTHF（1.0 mL）溶液を添加した。混合物を2時間同温にて撹拌した後、室温まで昇温させ、0.5時間撹拌した。反応混合物を水で反応停止し、水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 30:1〜15:1）、82（21.5 mg, 15%）、83（33.8 mg, 22%）及び出発物質67（98.7 mg, 49%回収）を得た。
82; ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.84-7.68 (m, 4H), 6.14 (d, J = 10.99 Hz, 1H), 5.77 (d, J = 10.99 Hz, 1H), 4.64 (dddd, J = 11.91, 11.91, 4.58, 44.12 Hz, 1H), 4.26-4.22 (m, 1H), 2.89-1.14 (m, 25H), 1.17 (s, 6H), 0.93(t, J = 10.99 Hz, 9H), 0.91 (d, J = 6.41 Hz, 3H), 0.89 (s, 9H), 0.54 (q, J = 8.24 Hz, 6H), 0.51 (s, 3H), 0.06 (s,3H), 0.05 (s, 3H).

【0156】

実施例３１
19-ノル 1α-アミノ-3β-OTBS VD₃ 84

【化110】

70について記載した手順と同様にして、粗製84を82（3.8 mg, 4.985μmol）から得た。

【0157】

実施例３２
19-ノル 1α-NHTs-3β-OH VD₃ 85

【化111】

72について記載した手順と同様にして、1α-NHTs-3β-OH VD₃ 85（1.58 mg, 52%）を粗製84（約5.422μmol）から白色固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.77-7.29 (m, 4H), 6.27 (d, J = 11.35 Hz, 1H), 5.59 (d, J = 11.35 Hz, 1H), 5.20 (d, J = 8.94 Hz, 1H), 4.00-3.93 (m, 1H), 3.69-3.60 (m, 1H), 2.44 (s, 3H), 2.28-1.20 (m, 24H), 1.23 (s, 6H), 0.95 (d, J = 6.19 Hz, 3H), 0.56 (s, 3H).
HR-MS FAB C₃₃H₅₁N₁Na₁O₄S₁ [M+Na]⁺ 計算値: 580.3437 , 実測値: 580.3435.

【0158】

実施例３３
19-ノル 1α-NH(p-SCF₃Bz)-3β-OH VD₃ 86

【化112】

74について記載した手順と同様にして、1α-NH(p-SCF₃Bz)-3β-OH VD₃ 86（1.70 mg, 56%）を粗製84（約4.985μmol）から白色固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.73-7.65 (m, 4H), 6.42 (d, J = 11.35 Hz, 1H), 6.03 (d, J = 8.26 Hz, 1H), 5.83 (d, J = 11.35 Hz, 1H), 4.55-4.48 (m, 1H), 3.97-3.88 (m, 1H), 2.85-1.20 (m, 25H), 1.21 (s, 6H), 0.93 (d, J = 5.85 Hz, 3H), 0.43 (s, 3H).
HR-MS FAB C₃₄H₄₈F₃N₁Na₁O₃S₁ [M+Na]⁺ 計算値: 630.3205, 実測値: 630.3207.

【0159】

実施例３４
19-ノル 1α-NPhth-3β-OH VD₃ 87

【化113】

76について記載した手順と同様にして、1α-NPhth-3β-OH VD₃ 87（1.46 mg, 52%）を粗製84（約5.248μmol）から白色固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.85-7.69 (m, 4H), 6.29 (d, J = 11.01 Hz, 1H), 5.80 (d, J = 11.01 Hz, 1H), 4.60-4.49 (m, 1H), 4.34-4.25 (m, 1H), 2.94-1.20 (m, 25H), 1.20 (s, 6H), 0.92 (d, J = 6.19 Hz, 3H), 0.51 (s, 3H).
HR-MS FAB C₃₄H₄₈N₁O₄ [M+H]⁺ 計算値: 534.3583, 実測値: 534.3567.

【0160】

実施例３５
19-ノル 1α-NHAc-3β-OH VD₃ 88

【化114】

76について記載した手順と同様にして、1α-NHAc-3β-OH VD₃ 88（2.15 mg, 76%）を粗製84（約5.422μmol）から白色固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CD₃OD) δ 6.25 (d, J = 10.32 Hz, 1H), 5.82 (d, J = 10.32 Hz, 1H), 4.70-4.55 (m, 1H), 4.06-3.96 (m, 1H), 2.87-1.15 (m, 28H), 1.16 (s, 6H), 0.97 (d, J = 5.50 Hz, 3H), 0.56 (s, 3H).
HR-MS FAB C₂₈H₄₇N₁Na₁O₃ [M+Na]⁺ 計算値: 468.3454, 実測値: 468.3454.

【0161】

実施例３６
19-ノル 1α-NHMs-3β-OH VD₃ 89

【化115】

76について記載した手順と同様にして、1α-NHMs-3β-OH VD3 89（1.64 mg, 55%）を粗製84（約5.422μmol）から白色固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 6.32 (d, J = 11.01 Hz, 1H), 5.81 (d, J = 11.01 Hz, 1H), 4.08-4.00 (m, 1H), 3.84-3.76 (m, 1H), 2.98 (s, 3H), 2.78 (dd, J = 13.42, 4.13 Hz, 1H), 2.69 (dd, J = 13.42, 4.13 Hz, 1H), 2.49 (dd, J = 13.42, 4.13 Hz, 1H), 2.29 (dd, J = 13.07, 7.22 Hz, 1H), 2.19 (dd, J = 13.07, 7.22 Hz, 1H), 2.05-1.20 (m, 20H), 1.22 (s, 6H), 0.94 (d, J = 6.19 Hz, 3H), 0.54 (s, 3H).
HR-MS FAB C₂₇H₄₇N₁Na₁O₄S₁ [M+Na]⁺ 計算値: 504.3124, 実測値: 504.3121.

【0162】

実施例３７
19-ノル 1α-NH(トリフルオロアセチル)-3β-OH VD₃ 90

【化116】

76について記載した手順と同様にして、1α-NH(トリフルオロアセチル)-3β-OH VD₃ 90（2.04 mg, 75%）を粗製84（約5.422μmol）から白色固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 6.38 (d, J = 11.35 Hz, 1H), 6.13 (d, J = 7.91 Hz, 1H), 5.77 (d, J = 11.35 Hz, 1H), 4.37-4.25 (m, 1H), 3.95 (dddd, J = 7.91, 7.91, 4.13, 4.13 Hz, 1H), 2.80 (dd, J = 11.70, 3.78 Hz, 1H), 2.57-1.20 (m, 24H), 1.22 (s, 6H), 0.94 (d, J = 6.19 Hz, 3H), 0.51 (s, 3H).
HR-MS FAB C₂₈H₄₅F₃N₁O₃ [M+H]⁺ 計算値: 500.3351, 実測値: 500.3340.

【0163】

実施例３８
19-ノル 1α-NHDns-3β-OH VD₃ 91

【化117】

76について記載した手順と同様にして、1α-NHDns-3β-OH VD₃ 91（1.72 mg, 51%）を粗製84（約5.422μmol）から白色固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.56-7.17 (m, 6H), 6.23 (d, J = 11.70 Hz, 1H), 5.60 (d, J = 11.70 Hz, 1H), 4.54 (d, J = 8.26 Hz, 1H), 3.92-3.85 (m, 1H), 3.65-3.54 (m, 1H), 2.90 (s, 6H), 2.76-1.23 (m, 25H), 1.24 (s, 6H), 0.95 (d, J = 6.19 Hz, 3H), 0.53 (s, 3H).
HR-MS FAB C₃₈H₅₆N₂Na₁O₄S₁ [M+Na]⁺ 計算値: 659.3859, 実測値: 659.3860.

【0164】

実施例３９
19-ノル 1-OBz-3-OTBS VD₃ 94

【化118】

ベンゾチアゾリルスルホン67（558.1 mg, 0.924 mmol）及びケトン93（214.7 mg, 0.616 mmol）のTHF（12.3 mL）溶液にリチウム ビス(トリメチルシリル)アミド（0.94 mL, 1.232 mmol, 1.3 M／THF）を-78℃にて滴加した。混合物を1時間同温にて撹拌した後、室温まで昇温させ、0.5時間撹拌した。反応混合物に水を加えることで反応を停止し、水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 75:1〜10:1）、異性体混合物として94（379.1 mg, 83%）、及び出発物質67（112.9 mg, 20%回収）を得た。

【0165】

実施例４０
19-ノル 1β-OBz-3β-OTBS VD₃ 95及び1α-OTBS-3α-OBz VD₃ 96

【化119】

94（496.7 mg, 0.674 mmol）をメタノール（13.5 mL）に溶解した後、溶液に炭酸カリウム（372.5 mg, 2.695 mmol）を室温にて添加し、13時間撹拌した。反応混合物を飽和NH₄Cl水溶液で反応停止し、水層をジクロロメタンで3回抽出した。集めた有機抽出物をMgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 15:1〜5:1）、95（118.0 mg, 44%）及び異性体96（192.6 mg, 45%）を得た。

【0166】

実施例４１
19-ノル 1α-F-3β-OTBS VD₃ 97

【化120】

95（87.2 mg, 0.138 mmol）のジクロロメタン（2.8 mL）溶液にN,N-ジエチルアミノサルファートリフルオリド（27.3μL, 0.207 mmol）を-78℃にて添加した。1時間撹拌した後、反応混合物に飽和NaHCO₃水溶液を加えることで反応を停止し、水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物をMgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 75:1〜50:1）、97（54.5 mg, 62%）を得た。

【0167】

実施例４２
19-ノル 1α-F-3β-OH VD₃ 98

【化121】

HF・Py（120.3 mg, 1.213 mmol）を97（54.5 mg, 0.085 mmol）のTHF（1.7 mL）溶液に添加し、混合物を16時間撹拌した。反応混合物を飽和NaHCO₃水溶液を加えることで反応停止し、水層を酢酸エチルで3回抽出した。集めた有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、MgSO₄で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーし（ヘキサン／酢酸エチル; 10:1〜1:1）、1α-F-3β-OH VD₃ 98（12.9 mg, 37%）を白色固体として得た。
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 6.31 (d, J = 11.35 Hz, 1H), 5.80 (q, J = 11.35 Hz, 1H), 4.66 (ddddd, J = 48.16, 7.91,7.57, 3.78, 3.78 Hz, 1H), 3.77 (dddd, J = 7.91, 7.57, 3.78, 3.78 Hz, 1H) 2.79-1.18(m, 25H), 1.19 (s, 6H), 0.92 (d, J = 6.54 Hz, 3H), 0.53 (s, 3H).
HR-MS ESI C₂₆H₄₃F₁Na₁O₂ [M+Na]⁺ 計算値: 429.31448, 実測値: 429.31441.

【0168】

実験例１：PLAP-BPアッセイ
280の内因性脂質関連化合物からなる化合物ライブラリー内の化合物を、レポーター遺伝子の発現を阻害する能力についてスクリーニングした。この遺伝子では、ステロール調節エレメント（SRE）を三回繰り返し、ルシフェラーゼの発現を制御する。脂質の枯渇は、SREドメインに結合し、転写因子として機能してルシフェラーゼを発現するSREBPを活性化する。SREBP応答レポーター構築物を、対照のβ-ガラクトシダーゼ（β-gal）レポーター遺伝子とともに、CHO-K1細胞（chinese hamster ovary cell）に同時遺伝子導入した。レポーター遺伝子における構成的に活性化したアクチンプロモーターはβ-galの発現を活発にする。SREBP応答レポーター遺伝子からのルシフェラーゼ発現レベルをβ-gal発現レベル正規化した。

【0169】

レポーター遺伝子の発現レベルを40%以上減少させた11の化合物をヒット化合物として最初のスクリーニングから選択した。Sakaiら（Mol. Cell 1998, 2, 505-514）により開発されたレポーターアッセイを用いて、選択したヒット化合物がER-ゴルジ移行及びSREBPのタンパク質分解プロセシングに影響するか否かを決定し、偽陽性の結果を与えた化合物を除外した。このアッセイにおいて、NH₂末端DNA結合ドメイン（PLAP-BP2_513-1141）が欠如したSREBP-2フラグメントと縮合した、分泌型アルカリホスファターゼを用い、蛍光ホスファターゼ基質の蛍光発光変化を通して、ゴルジ体への移行及びプロセシングをモニターした。細胞をPLAP-BP2_513-1141及びSCAPをコードしたプラスミドで同時遺伝子導入すると、PLAPホスファターゼが分泌し、蛍光発光シグナルが生成した。11のヒット化合物のうち、ビタミンD₃（VD）誘導体は、DMSO対照に比べて、分泌が有意に減少した（図１）。特に二つの化合物、25-ヒドロキシビタミンD₃ [25(OH)D]及び1α,25-ジヒドロキシビタミンD₃ [1,25(OH)₂D]は、コレステロールよりもPLAP分泌をより顕著に抑制した。

【0170】

実験例１−Ａ：細胞培養手順
CHO-K1細胞を培地A（100 units/mLペニシリン、100μg/mL硫酸ストレプトマイシン及び5%（v/v）ウシ胎仔血清を補充した、Ham's F-12培地及びDulbecco's modified Eagle培地の1:1混合培地）中、加湿5% CO₂下37℃にて維持した。

【0171】

実験例１−Ｂ：PLAP-BPアッセイ手順（図１）
0日目に、CHO-K1細胞を、培地A中、2.0×10⁴細胞／ウェルにて96ウェルプレートに添加した。1日目に、細胞にpCMV-PLAP-BP2_513-1141（0.1μg/ウェル）、pCMV-SCAP（0〜2.0μg/ウェル）及びβ-galレポーター遺伝子を同時に遺伝子導入した。β-ガラクトシダーゼの発現は、プロトコールに従い、FuGENE（登録商標）HDトランスフェクション試薬（Promega）を用いてアクチンプロモーター（pAc-β-gal, 0.1μg/ウェル）により制御した。培養の5時間後、PBSで細胞を洗浄した後、VD誘導体（10μM）又はステロール（10μg/mLのコレステロール及び1.0μg/mLの25-ヒドロキシコレステロール）の非存在下又は存在下、培地B（100 units/mLペニシリン、100μg/mL硫酸ストレプトマイシン、5% (v/v)脂質枯渇血清、50μMコンパクチン及び50μMメバロン酸リチウムを補充した、Ham's F-12培地及びDulbecco's modified Eagle培地の1:1混合培地）中にてインキュベーションした。20時間後、培地のアリコートを分泌アルカリホスファターゼ活性についてアッセイした。各ウェル中の細胞を溶解させ、β-ガラクトシダーゼ活性の測定に用いた。アルカリホスファターゼ活性をβ-ガラクトシダーゼの活性により正規化した。

【0172】

実験例２：ルシフェラーゼレポーターアッセイ
25(OH)Dは、レポーターアッセイにおいて濃度依存的にSREBPの活性化を阻害し、1.0μMのIC₅₀値を有した（図２、第１表）。VD誘導体により媒介されるSREBPの阻害はSREBP-2のウェスタン・ブロット分析により確認した（図３）。細胞を25-ヒドロキシコレステロール [25-HC]で処理すると、SREBPの成熟型が消失し、SREBPの前駆体が蓄積して、25-HCがSREBP-SCAP複合体のERからゴルジ体への輸送を阻害したことを示した。これに対し、25(OH)Dで処理すると、成熟型及び前駆体の両方の濃度が減少し、VD誘導体がSREBPの前駆体濃度を軽減したことが示され、結果的に成熟型の濃度が軽減し、SREBP活性化が阻害された。

【0173】

実験例２−Ａ：ルシフェラーゼレポーターアッセイ手順（図２及び第１表）
0日目にて、CHO-K1細胞を、培地A中、1.0×10⁴細胞／ウェルにて96ウェルプレートに添加した。1日目にて、プロトコールに従い、FuGENE（登録商標）HDトランスフェクション試薬（Promega）を用いて細胞にSRE-1活性化ルシフェラーゼレポーター遺伝子（pSRE-Luc）及びpAc-β-galで20/1比にて同時遺伝子導入した。8〜12時間インキュベーション後、細胞をPBS緩衝液で洗浄した後、特定の試験化合物を含む培地Bにてインキュベーションした。各化合物のDMSO中のストック溶液を調製し、培地Bに添加し、200倍（v/v）希釈した（0.5% DMSO）。20〜24時間のインキュベーション後、各ウェル中の細胞をレポーター溶解緩衝液（Promega）で凍結融解することにより溶解し、アリコートを用いてルシフェラーゼ及びβ-ガラクトシダーゼ活性を測定した。ルシフェラーゼ活性をSteady-Glo（登録商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（Promega）を用いて測定し、β-ガラクトシダーゼ活性をβ-ガラクトシダーゼ酵素アッセイシステム（Promega）を用いて測定した。ルシフェラーゼ活性をβ-ガラクトシダーゼ活性に正規化した。

【0174】

実験例２−Ｂ：ウェスタン・ブロット分析手順（図３，４，５，６，７及び８）
0日目にて、CHO-K1細胞を、培地A中、3.0×10⁵細胞／ウェルにて6ウェルプレートに添加した。1日目にて、細胞をPBSで洗浄した後、特定の試験化合物（5μM）の非存在下又は存在下、培地Bにてインキュベーションした。16時間のインキュベーション後、細胞を冷PBSで3回洗浄し、緩衝液A（50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 150 mM NaCl, 1% (v/v) Nonidet P40, 0.5% (w/v) デオキシコール酸ナトリウム, 8M尿素及びプロテアーゼ阻害剤カクテル（ナカライ））で溶解させた。細胞溶解物を25G針に16回通過させ、7,000 g、4℃にて10分間遠心分離した。上清を新たなチューブに移し、ペレットを緩衝液Aで抽出した。得られた緩衝液を7,000 g、4℃にて10分間遠心分離し、上清を先のものと合わせた。得られた溶解物を0.20容量の6×SDSサンプル緩衝液（ナカライ）と混合し、室温にて30分間インキュベーションした。サンプルを10% SDS-PAGEゲルにて分離し、SREBP-2（IgG-7D4）、SCAP（IgG-9D5）、c-Myc（IgG1-MC045）及びアクチン（AC-40）に対するマウスモノクローナル抗体を用いてブロットした。増強させた化学発光を用いて（ECLプライムウェスタンブロット検出試薬, GE Healthcare）、ImageQuant LAS 500（GE Healthcare）上に特異的なバンドを視覚化した。

【0175】

SREBP阻害メカニズム
25(OH)DのSCAPレベルに対する効果もまた、ウェスタンブロット分析により確認した（図４）。細胞を25(OH)Dで処理すると、SCAPレベル並びにSREBPレベルが減少した。さらに、SCAPレベルの減少は、25(OH)Dによって媒介され、一般的なプロテアーゼ阻害剤であるMG-132（図５）の添加によりキャンセルされ、25(OH)DはSCAPのユビキチン化を促進した（図６）。SREBPがSCAPと複合体を形成できない場合、SREBPの前駆体は急速に分解する（R. B. Rawsonら J. Biol. Chem. 1999, 274, 28549）。これらの結果により、25(OH)DがSCAPのユビキチン−プロテアーゼ分解を刺激し、SREBPの前駆体濃度が減少することが示唆された。

【0176】

ヒドロキシル化VD誘導体のSREBP阻害メカニズムの発見にもかかわらず、これらの内因性分子自体は、その従来から知られるカルシウムホメオスタシスに関する働きを持っているため、SREBPの特異的な薬理学的介入に用いることができない。例えば、活性VDRアゴニスト1,25(OH)₂Dに変換される25(OH)Dの過剰用量の投与により、血清カルシウム濃度が増大し、これにより腎臓結石が形成されやすい。そのVDR活性を排除する可能性のある方法の一つは、C1位の代謝ヒドロキシル化を防止することである。実施例化合物18a、22a、22b、28、32、36、38、39及び106はVDRアゴニスト又は変換されてVDRアゴニストとなる可能性は低い。

【0177】

レポーターアッセイにより、これらの実施例化合物は0.5〜16μMの範囲のIC₅₀値でSREBPの活性化を阻害したことが示された（第１表）。実施例化合物22a、22b、28、32、36、38及び39（図７）及び実施例化合物72-74、76、77、85-87、89-91及び98（図８）により媒介されるSREBP活性化の阻害は、SREBP-2のウェスタン・ブロット分析により確認した。細胞を誘導体で処理すると、DMSOで処理した場合に比べて、SREBPの成熟型の濃度が減少した。

【0178】

第１表．SREBPの活性化に対する1-N-VD誘導体の阻害効果

【表1】

a すべての値は3回の独立し実験の平均である。

【産業上の利用可能性】

【0179】

式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）などの代謝性疾患、脂肪肝などの肝疾患、糖尿病、がん、肥満、心血管疾患などの疾患の治療のために有用でありうる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】