特許 6853537 人工ヌクレオシド及び人工ヌクレオチド並びに人工オリゴヌクレオチド

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6853537

(24)【登録日】2021年3月16日

(45)【発行日】2021年3月31日

(54)【発明の名称】人工ヌクレオシド及び人工ヌクレオチド並びに人工オリゴヌクレオチド

(51)【国際特許分類】

   C07H 19/067 20060101AFI20210322BHJP

   C07H 21/02 20060101ALI20210322BHJP

   A61P 21/04 20060101ALI20210322BHJP

   A61K 31/712 20060101ALI20210322BHJP

   C12N 15/00 20060101ALI20210322BHJP

   C12N 15/113 20100101ALI20210322BHJP

【ＦＩ】

   C07H19/067CSP

   C07H21/02

   A61P21/04

   A61K31/712

   C12N15/00ZNA

   C12N15/113

【請求項の数】17

【全頁数】53

(21)【出願番号】特願2018-500218(P2018-500218)

(86)(22)【出願日】2017年2月17日

(86)【国際出願番号】JP2017005835

(87)【国際公開番号】WO2017142054

(87)【国際公開日】20170824

【審査請求日】2019年10月9日

(31)【優先権主張番号】特願2016-28109(P2016-28109)

(32)【優先日】2016年2月17日

(33)【優先権主張国】JP

(31)【優先権主張番号】特願2016-211476(P2016-211476)

(32)【優先日】2016年10月28日

(33)【優先権主張国】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】304021417

【氏名又は名称】国立大学法人東京工業大学

(73)【特許権者】

【識別番号】000003986

【氏名又は名称】日産化学株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】110001508

【氏名又は名称】特許業務法人 津国

(72)【発明者】

【氏名】清尾 康志

(72)【発明者】

【氏名】正木 慶昭

(72)【発明者】

【氏名】山本 恵士

(72)【発明者】

【氏名】吉田 圭汰

(72)【発明者】

【氏名】入山 友輔

(72)【発明者】

【氏名】中嶋 宏之

(72)【発明者】

【氏名】金木 達朗

【審査官】 三上 晶子

(56)【参考文献】

【文献】 特表平０５−５０４５５２（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１４／１３１８９２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表２０１２−５０６７０１（ＪＰ，Ａ）

【文献】 MILTON,S. et al，Synthesis and Stability of a 2'-O-[N-(Aminoethyl)carbamoyl]methyladenosine- Containing Dinucleotide，European Journal of Organic Chemistry，２０１３年，Vol.2013, No.31，pp.7184-7192

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｃ０７Ｈ １／００−９９／００

Ａ６１Ｋ ３１／３３−３３／４４

Ａ６１Ｐ １／００−４３／００

Ｃ１２Ｎ １５／００

Ｃ１２Ｎ １５／１１３

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記式（Ｉ）：

【化1】

（式中、Ｂｘは、プリン−９−イル基、２−オキソ−ピリミジン−１−イル基又は２−チオキソ−ピリミジン−１−イル基（該プリン−９−イル基、２−オキソ−ピリミジン−１−イル基及び２−チオキソ−ピリミジン−１−イル基はそれぞれ独立して、無置換であるか、又はハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基、アミノ基、アミノ基保護基により置換されたアミノ基、ヒドロキシ基、ヒドロキシ基保護基により置換されたヒドロキシ基、スルファニル基及びスルファニル基保護基により置換されたスルファニル基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）であり、
Ｚ^１及びＺ^２はそれぞれ独立して、水素原子、ヒドロキシ基保護基又はリン含有基であり、
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４はそれぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、シアノ基又はＣ１−６アルキル基若しくはＣ２−６アルケニル基（該Ｃ１−６アルキル基及びＣ２−６アルケニル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシ基及びシアノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）であり、
Ｙは、ＮＲ^５Ｒ^６
（該Ｒ^５及びＲ^６は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、３−１１員含窒素非芳香族ヘテロ環基（該３−１１員含窒素非芳香族ヘテロ環基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６ハロアルキル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）を形成している）、又は
Ｃ２−９芳香族複素環式基（該Ｃ２−９芳香族複素環式基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６ハロアルキル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）であり、
ｎは、１から３の整数である。ここで、ｎが２又は３であるとき、２又は３のＲ^３及びＲ^４はそれぞれ同一でも異なっていてもよい。）で示される化合物又はその塩。

【請求項2】

Ｂｘが、６−アミノプリン−９−イル基、２−アミノ−６−ヒドロキシプリン−９−イル基、２−オキソ−４−アミノ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、２−オキソ−４−アミノ−５−メチル−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、２−オキソ−４−ヒドロキシ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基又は２−オキソ−４−ヒドロキシ−５−メチル−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基である、請求項１に記載の化合物又はその塩。

【請求項3】

Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４が、水素原子である、請求項１又は２に記載の化合物又はその塩。

【請求項4】

Ｙが、ＮＲ^５Ｒ^６であり、該Ｒ^５及びＲ^６は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、４−８員含窒素非芳香族ヘテロ環であって、メチレン基を４乃至６個含む環を形成するか、又は
Ｙが、Ｃ２−９芳香族複素環式基である、請求項１から３の何れか一項に記載の化合物又はその塩。

【請求項5】

Ｙが、ＮＲ^５Ｒ^６であり、該Ｒ^５及びＲ^６は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、モルホリンを形成している、請求項１から３の何れか一項に記載の化合物又はその塩。

【請求項6】

Ｙが、ピリジル基、イミダゾリル基又はベンゾイミダゾリル基である、請求項１から３の何れか一項に記載の化合物又はその塩。

【請求項7】

ｎが２である、請求項１から６の何れか一項に記載の化合物又はその塩。

【請求項8】

Ｚ^１が、水素原子又はヒドロキシ基保護基である、請求項１から７の何れか一項に記載の化合物又はその塩。

【請求項9】

Ｚ^２が、水素原子又はリン含有基である、請求項１から８の何れか一項に記載の化合物又はその塩。

【請求項10】

Ｚ^２が、ヒドロキシ基保護基である、請求項１から８の何れか一項に記載の化合物、又はその塩。

【請求項11】

下記式（II）：

【化2】

（式中、Ｂｘは、プリン−９−イル基、２−オキソ−ピリミジン−１−イル基又は２−チオキソ−ピリミジン−１−イル基（該プリン−９−イル基、２−オキソ−ピリミジン−１−イル基及び２−チオキソ−ピリミジン−１−イル基はそれぞれ独立して、無置換であるか、又はハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基、アミノ基、アミノ基保護基により置換されたアミノ基、ヒドロキシ基、ヒドロキシ基保護基により置換されたヒドロキシ基、スルファニル基及びスルファニル基保護基により置換されたスルファニル基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）であり、
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４はそれぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、シアノ基又はＣ１−６アルキル基若しくはＣ２−６アルケニル基（該Ｃ１−６アルキル基及びＣ２−６アルケニル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシ基及びシアノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）であり、
Ｙは、ＮＲ^５Ｒ^６
（該Ｒ^５及びＲ^６は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、３−１１員含窒素非芳香族ヘテロ環基（該３−１１員含窒素非芳香族ヘテロ環基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６ハロアルキル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）を形成している）、又は
Ｃ２−９芳香族複素環式基（該Ｃ２−９芳香族複素環式基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６ハロアルキル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）であり、
ｎは、１から３の整数である。ここで、ｎが２又は３であるとき、２又は３のＲ^３及びＲ^４はそれぞれ同一でも異なっていてもよい。）で示されるヌクレオシド構造を１以上含む人工オリゴヌクレオチド、又はその製薬上許容される塩。

【請求項12】

Ｂｘが、６−アミノプリン−９−イル基、２−アミノ−６−ヒドロキシプリン−９−イル基、２−オキソ−４−アミノ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、２−オキソ−４−アミノ−５−メチル−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、２−オキソ−４−ヒドロキシ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基又は２−オキソ−４−ヒドロキシ−５−メチル−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基である、請求項１１に記載の人工オリゴヌクレオチド、又はその製薬上許容される塩。

【請求項13】

Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４が、水素原子である、請求項１１又は１２に記載の人工オリゴヌクレオチド、又はその製薬上許容される塩。

【請求項14】

Ｙが、ＮＲ^５Ｒ^６であり、該Ｒ^５及びＲ^６は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、４−８員含窒素非芳香族ヘテロ環であって、メチレン基を４乃至６個含む環を形成するか、又は
Ｙが、Ｃ２−９芳香族複素環式基である、請求項１１から１３の何れか一項に記載の人工オリゴヌクレオチド、又はその製薬上許容される塩。

【請求項15】

Ｙが、ＮＲ^５Ｒ^６であり、該Ｒ^５及びＲ^６は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、モルホリンを形成している、請求項１１から１３の何れか一項に記載の人工オリゴヌクレオチド、又はその製薬上許容される塩。

【請求項16】

Ｙが、ピリジル基、イミダゾリル基又はベンゾイミダゾリル基である、請求項１１から１３の何れか一項に記載の人工オリゴヌクレオチド、又はその製薬上許容される塩。

【請求項17】

ｎが２である、請求項１１から１６の何れか一項に記載の人工オリゴヌクレオチド、又はその製薬上許容される塩。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、人工ヌクレオシド及び人工ヌクレオチド並びに人工オリゴヌクレオチドに関する。

【背景技術】

【0002】

核酸医薬は、標的となるＤＮＡ又はＲＮＡと相補的塩基対を形成する核酸（オリゴヌクレオチド）からなる医薬品であり、新規な医薬品として期待されている。そして、核酸医薬に用いられる核酸単位として、天然型の核酸の構造を変化させた種々の人工核酸単位（人工ヌクレオシド又はそのリン酸付加体である人工ヌクレオチド）が開発されている。例えば、リボヌクレオチドの糖部２’位の酸素原子をメトキシエチル（ＭＯＥ）化することで、標的核酸鎖への親和性とヌクレアーゼへの耐性が向上することが知られている（例えば、特許文献１参照）。このＭＯＥ化ヌクレオチドを含有するオリゴヌクレオチドは、ホモ接合型家族性高コレステロール血症（ｈｏＦＨ）の治療薬としてアメリカ食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認されている他、高トリグリセリド血症やＴＴＲアミロイドーシスなど各種疾病に対する治療薬として臨床治験が実施されている。さらに、リボヌクレオチドの糖部２’位の酸素原子の修飾体としてメチルカルバモイルエチル（ＭＣＥ）化ヌクレオチドが報告された（例えば、特許文献２、非特許文献１参照）。ＭＣＥ化することで、そのオリゴヌクレオチドのヌクレアーゼへの耐性が大幅に向上するとされている。このＭＣＥ化ヌクレオチドを含有するオリゴヌクレオチドは、デュシェンヌ型筋ジストロフィーのモデルマウスでのエキソンスキップ効果が非常に高まることが示されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0003】

【特許文献1】特開平７−２８８９号公報

【特許文献2】特許第５１９４２５６号公報

【非特許文献】

【0004】

【非特許文献1】ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー、第７６巻、３０４２ページ（２０１１年）

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

前述したＭＯＥ化ヌクレオチド、ＭＣＥ化ヌクレオチドを含有するオリゴヌクレオチドは、生体内に存在する分解酵素であるヌクレアーゼへの耐性が十分ではなく、医薬品としての安定性の点で課題があった。そこで、さらに新しい糖部２’位修飾人工核酸が求められていた。

【0006】

本発明の目的は、ヌクレアーゼ耐性に優れる糖部２’位修飾人工オリゴヌクレオチド並びにこれを構成可能な人工ヌクレオシド及び人工ヌクレオチドを提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0007】

本発明者らは、カルバモイルエチル基の窒素原子にアルキル基を介してアミノ基あるいは複素環基を導入することで、非常に高いヌクレアーゼ耐性が得られることを見出し、本発明を完成した。すなわち、本発明は以下の態様を包含する。
１．下記式（Ｉ）：

【0008】

【化1】

【0009】

（式中、Ｂｘは、プリン−９−イル基、２−オキソ−ピリミジン−１−イル基又は２−チオキソ−ピリミジン−１−イル基（該プリン−９−イル基、２−オキソ−ピリミジン−１−イル基及び２−チオキソ−ピリミジン−１−イル基はそれぞれ独立して、無置換であるか、又はハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基、アミノ基、アミノ基保護基により置換されたアミノ基、ヒドロキシ基、ヒドロキシ基保護基により置換されたヒドロキシ基、スルファニル基及びスルファニル基保護基により置換されたスルファニル基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）であり、
Ｚ^１及びＺ^２はそれぞれ独立して、水素原子、ヒドロキシ基保護基又はリン含有基であり、
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４はそれぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、シアノ基又はＣ１−６アルキル基若しくはＣ２−６アルケニル基（該Ｃ１−６アルキル基及びＣ２−６アルケニル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシ基及びシアノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）であり、
Ｙは、ＮＲ^５Ｒ^６
（該Ｒ^５及びＲ^６はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル基若しくはＣ２−６アルケニル基（該Ｃ１−６アルキル基及びＣ２−６アルケニル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）又はＣ７−１０アラルキル基（該Ｃ７−１０アラルキル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６ハロアルキル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）であるか、又は
Ｒ^５及びＲ^６は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、３−１１員含窒素非芳香族ヘテロ環基（該３−１１員含窒素非芳香族ヘテロ環基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６ハロアルキル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）を形成している）、又は
Ｃ２−９芳香族複素環式基（該Ｃ２−９芳香族複素環式基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６ハロアルキル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）であり、
ｎは、１から３の整数である。ここで、ｎが２又は３であるとき、２又は３のＲ^３及びＲ^４はそれぞれ同一でも異なっていてもよい。）で示される化合物、又はその塩。

【0010】

２．Ｂｘが、６−アミノプリン−９−イル基、２−アミノ−６−ヒドロキシプリン−９−イル基、２−オキソ−４−アミノ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、２−オキソ−４−アミノ−５−メチル−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、２−オキソ−４−ヒドロキシ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基又は２−オキソ−４−ヒドロキシ−５−メチル−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基である、１．に記載の化合物、又はその塩。
３．Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４が、水素原子である、１．又は２．に記載の化合物又はその塩。
４．Ｙが、ＮＲ^５Ｒ^６であり、該Ｒ^５及びＲ^６はそれぞれ独立して、水素原子又はＣ１−３アルキル基である、１．から３．の何れか一つに記載の化合物又はその塩。
５．Ｙが、ＮＲ^５Ｒ^６であり、該Ｒ^５及びＲ^６は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、モルホリンを形成している、１．から３．の何れか一つに記載の化合物又はその塩。
６．Ｙが、ピリジル基、イミダゾリル基又はベンゾイミダゾリル基である、１．から３．の何れか一つに記載の化合物又はその塩。
７．ｎが２である、１．から６．の何れか一つに記載の化合物又はその塩。
８．Ｚ^１が、水素原子又はヒドロキシ基保護基である、１．から７．の何れか一つに記載の化合物又はその塩。
９．Ｚ^２が、水素原子又はリン含有基である、１．から８．の何れか一つに記載の化合物又はその塩。
１０．Ｚ^２が、ヒドロキシ基保護基である、１．から８．の何れか一つに記載の化合物、又はその塩。

【0011】

１１．下記式（II）：

【化2】

【0012】

（式中、Ｂｘは、プリン−９−イル基、２−オキソ−ピリミジン−１−イル基又は２−チオキソ−ピリミジン−１−イル基（該プリン−９−イル基、２−オキソ−ピリミジン−１−イル基及び２−チオキソ−ピリミジン−１−イル基はそれぞれ独立して、無置換であるか、又はハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基、アミノ基、アミノ基保護基により置換されたアミノ基、ヒドロキシ基、ヒドロキシ基保護基により置換されたヒドロキシ基、スルファニル基及びスルファニル基保護基により置換されたスルファニル基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）であり、
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４はそれぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、シアノ基又はＣ１−６アルキル基若しくはＣ２−６アルケニル基（該Ｃ１−６アルキル基及びＣ２−６アルケニル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシ基及びシアノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）であり、
Ｙは、ＮＲ^５Ｒ^６（該Ｒ^５及びＲ^６はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル基若しくはＣ２−６アルケニル基（該Ｃ１−６アルキル基及びＣ２−６アルケニル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）又はＣ７−１０アラルキル基（該Ｃ７−１０アラルキル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６ハロアルキル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）であるか、又はＲ^５及びＲ^６は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、３−１１員含窒素非芳香族ヘテロ環基（該３−１１員含窒素非芳香族ヘテロ環基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６ハロアルキル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）を形成している）、又は
Ｃ２−９芳香族複素環式基（該Ｃ２−９芳香族複素環式基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６ハロアルキル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）であり、
ｎは、１から３の整数である。ここで、ｎが２又は３であるとき、２又は３のＲ^３及びＲ^４はそれぞれ同一でも異なっていてもよい。）で示されるヌクレオシド構造を１以上含む人工オリゴヌクレオチド又はその製薬上許容される塩。

【0013】

１２．Ｂｘが、６−アミノプリン−９−イル基、２−アミノ−６−ヒドロキシプリン−９−イル基、２−オキソ−４−アミノ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、２−オキソ−４−アミノ−５−メチル−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基、２−オキソ−４−ヒドロキシ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基又は２−オキソ−４−ヒドロキシ−５−メチル−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基である、１１．に記載の人工オリゴヌクレオチド又はその製薬上許容される塩。
１３．Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４が、水素原子である、１１．又は１２．に記載の人工オリゴヌクレオチド又はその製薬上許容される塩。
１４．Ｙが、ＮＲ^５Ｒ^６であり、該Ｒ^５及びＲ^６はそれぞれ独立して、水素原子又はＣ１−３アルキル基である、１１．から１３．の何れか一つに記載の人工オリゴヌクレオチド又はその製薬上許容される塩。
１５．Ｙが、ＮＲ^５Ｒ^６であり該Ｒ^５及びＲ^６は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、モルホリンを形成している、１１．から１３．の何れか一つに記載の人工オリゴヌクレオチド又はその製薬上許容される塩。
１６．Ｙが、ピリジル基、イミダゾリル基又はベンゾイミダゾリル基である、１１．から１３．の何れか一つに記載の人工オリゴヌクレオチド又はその製薬上許容される塩。
１７．ｎが２である、１１．から１６．の何れか一つに記載の人工オリゴヌクレオチド又はその製薬上許容される塩。

【発明の効果】

【0014】

本発明により、ヌクレアーゼ耐性に優れる人工オリゴヌクレオチド及びこれを構成可能な人工ヌクレオシド及び人工ヌクレオチドが提供される。

【図面の簡単な説明】

【0015】

【図1】本実施形態に係る人工オリゴヌクレオチドのエキソヌクレアーゼ耐性を示す図である。

【図2】本実施形態に係る人工オリゴヌクレオチドのエキソヌクレアーゼ耐性を示す図である。

【図3】本実施形態に係る人工オリゴヌクレオチドのヒト肝癌由来細胞におけるＡｌｄｏｌａｓｅ Ａの発現レベルへの影響を示すグラフである。

【図4】本実施形態に係る人工オリゴヌクレオチドのヒト肝癌由来細胞におけるＢＣＫＤＫの発現レベルへの影響を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0016】

本明細書において使用される用語は、特に言及する場合を除いて、当該分野で通常用いられる意味で用いられる。以下に、本明細書中で使用する各用語を説明する。なお、本明細書中、各用語は単独で使用されている場合も、又は他の用語と一緒になって使用されている場合も、特に記載の無い限り、同一の意義を有する。
本明細書中「ｎ−」はノルマル、「ｉ−」はイソ、「ｓｅｃ−」はセカンダリー、「ｔｅｒｔ−」はターシャリー、「ｍ−」はメタ、「ｐ−」はパラを意味する。「Ｐｈ」はフェニル、「Ｍｅ」はメチル、「Ｐｒ」はプロピル、「Ｂｕ」はブチル、「ＤＭＴｒ」はジメトキシトリチルを意味する。
また、本明細書において「２−オキソ−ピリミジン−１−イル基」及び「２−チオキソ−ピリミジン−１−イル基」とは、「２−オキソ−１Ｈ−ピリミジン−１−イル基」及び「２−チオキソ−１Ｈ−ピリミジン−１−イル基」の「１Ｈ」を省略して記載したものであり、「２−オキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基」及び「２−チオキソ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基」、並びに「１Ｈ−ピリミジン−２−オン−１−イル」及び「１Ｈ−ピリミジン−２−チオン−１−イル」とそれぞれ同義である。さらにこれらの部分構造に互変異性体が存在する場合、そのうちの一つの名称ですべての互変異性体を代表するものとする。
保護基により置換された官能基とは、官能基が有する水素原子が保護基により置換された官能基を意味する。

【0017】

「Ｃ２−９芳香族複素環」とは、酸素原子、硫黄原子及び窒素原子から任意に選択される同一又は異なるヘテロ原子を環内に１以上有し、環を構成する炭素原子数が２から９である芳香族の単環又は縮合環を意味する。Ｃ２−９芳香族複素環としては、例えば、プリン、ピリミジン、チオフェン、フラン、イソベンゾフラン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、チオフェン、チアゾール、イソチアゾール、イソキサゾール、オキサジアゾール、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、インドリジン、インドール、イソインドール、イソキノリン、キノリン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、プテリジン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、ベンゾイミダゾール等が挙げられる。

【0018】

「Ｃ６−１０芳香族炭素環」とは、環を構成する原子が全て炭素原子であり、環を構成する原子数が６から１０である芳香族の単環又は縮合環を意味する。Ｃ６−１０芳香族炭素環としては、例えば、ベンゼン、ナフタレン等が挙げられる。

【0019】

「Ｃ２−９芳香族複素環式基」とは、前記「Ｃ２−９芳香族複素環」から、任意の位置の水素原子を１個取り除いた１価の置換基を意味する。Ｃ２−９芳香族複素環式基としては、例えば、フリル基、チエニル基、ピリジル基、ピリミジニル基、ピリダジニル基、ピラジニル基、ピロリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、オキサゾリル基、イソキサゾリル基、オキサジアゾリル基（１，２，４−オキサジアゾリル基、１，３，４−オキサジアゾリル基）、チアジアゾリル基（１，２，４−チアジアゾリル基、１，３，４−チアジアゾリル基）、トリアゾリル基（１，２，４−トリアゾリル基、１，２，３−トリアゾリル基）、テトラゾリル基、トリアジニル基、キノリル基、イソキノリル基、キナゾリル基、キノキサリル基、ベンゾフラニル基、ベンゾチエニル基、ベンズオキサゾリル基、ベンズイソオキサゾリル基、ベンゾチアゾリル基、ベンゾイソチアゾリル基、ベンズイミダゾリル基、ベンゾトリアゾリル基、インドリル基、インダゾリル基、ピロロピリジル基、ピラゾロピリジル基、イミダゾピリジル基、チエノピリジル基、ピロロピラジニル基、ピラゾロピラジニル基、イミダゾピラジニル基、チエノピラジニル基、ピロロピリミジニル基、ピラゾロピリミジニル基、イミダゾピリミジニル基、チエノピリミジニル基、ピラゾロチエニル基等が挙げられ、好ましくはピリジル基、イミダゾリル基、ベンゾイミダゾリル基等が挙げられる。

【0020】

「Ｃ６−１０芳香族炭素環式基」とは、前記「Ｃ６−１０芳香族炭素環」から、任意の位置の水素原子を１個取り除いた１価の置換基を意味する。Ｃ６−１０芳香族炭素環式基としては、例えば、フェニル基、ナフチル基等が挙げられる。

【0021】

「３−１１員含窒素非芳香族ヘテロ環」とは、少なくとも１個以上の窒素原子を含有する、環を構成する原子数が３乃至１１個である単環系、縮合環系（該縮合環系では、非芳香族環が非芳香族環又は芳香族環に縮合していてもよい。）、橋架け環系又はスピロ環系の非芳香族性の複素環を意味する。ここで、環中にカルボニル基、チオカルボニル基、二重結合又は三重結合を含んでいてもよく、環を構成する原子中に硫黄原子が含まれる場合、その硫黄原子はスルフィニル基又はスルホニル基であってもよい。３−１１員含窒素非芳香族ヘテロ環の具体例としては、アゼチジン、ピロリジン、ピロリジノン、ピペリジン、ピペリジノン、アゼパン、アゾカン、オキサゾリジン、イソキサゾリジン、チアゾリジン、イソチアゾリジン、ピペラジン、ピペラジノン、モルホリン、チオモルホリン、ホモモルホリン、ホモピペラジン、６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ（３，２−ｄ）ピリミジン、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ（２，３−ｄ）ピリダジン、５，６，７，８−テトラヒドロ−（１，２，４）トリアゾロ（１，５−ａ）ピラジン、２，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン、６−オキサ−２，９−ジアザスピロ［４．５］デカン、１，８−ジアザスピロ［５．５］ウンデカン、３−アザビシクロ［３．３．１］ノナン等が挙げられる。

【0022】

「４−８員含窒素非芳香族ヘテロ環」とは、前記「３−１１員含窒素非芳香族ヘテロ環」のうち、環を構成する原子数が４乃至８個であるヘテロ環を意味する。４−８員含窒素非芳香族ヘテロ環の具体例としては、アゼチジン、ピロリジン、ピロリジノン、ピペリジン、ピペリジノン、アゼパン、アゾカン、オキサゾリジン、イソキサゾリジン、チアゾリジン、イソチアゾリジン、ピペラジン、ピペラジノン、モルホリン、チオモルホリン、ホモモルホリン、ホモピペリジン、ホモピペラジン等が挙げられる。

【0023】

「３−１１員含窒素非芳香族ヘテロ環基」とは、前記「３−１１員含窒素非芳香族ヘテロ環」から、任意の位置の水素原子を１個取り除いた１価の置換基を意味する。

【0024】

「４−８員含窒素非芳香族ヘテロ環基」とは、前記「４−８員含窒素非芳香族ヘテロ環」から、任意の位置の水素原子を１個取り除いた１価の置換基を意味する。

【0025】

「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子を意味する。

【0026】

「Ｃ１−１８アルキル基」とは、炭素数が１から１８の直鎖又は分枝状の飽和の炭化水素基を意味する。Ｃ１−１８アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｎ−ヘキシル基、ｎ−へプチル基、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−デカニル基、ｎ−ウンデカニル基、ｎ−ドデカニル基、ｎ−オクタデカニル基等が挙げられる。

【0027】

「Ｃ１−６アルキル基」とは、前記「Ｃ１−１８アルキル基」のうち、炭素数が１から６の直鎖又は分枝状の飽和の炭化水素基を意味する。Ｃ１−６アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｎ−ヘキシル基、イソヘキシル基等が挙げられる。同様に「Ｃ１−４アルキル基」とは、炭素数が１から４の直鎖又は分枝状の飽和の炭化水素基を意味し、「Ｃ１−３アルキル基」とは、炭素数が１から３の直鎖又は分枝状の飽和の炭化水素基を意味する。

【0028】

「Ｃ２−１８アルケニル基」とは、任意の位置に１以上の二重結合を有する、炭素数が２から１８の直鎖又は分枝状の炭化水素基を意味する。Ｃ２−１８アルケニル基としては、例えば、ビニル基、アリル基、プロペニル基、イソプロペニル基、ブテニル基、イソブテニル基、３−メチル−２−ブテニル基、ブタジエニル基、ペンテニル基、イソペンテニル基、ペンタジエニル基、ヘキセニル基、イソヘキセニル基、ヘキサジエニル基、ヘプテニル基、オクテニル基、ノネニル基、デカネニル基、ウンデカネニル基、ドデカネニル基、オクタデカネニル基等が挙げられる。

【0029】

「Ｃ２−６アルケニル基」とは、前記「Ｃ２−１８アルケニル基」のうち、任意の位置に１以上の二重結合を有する、炭素数が２から６の直鎖又は分枝状の炭化水素基を意味する。Ｃ２−６アルケニル基としては、例えば、ビニル基、アリル基、プロペニル基、イソプロペニル基、ブテニル基、イソブテニル基、ブタジエニル基、３−メチル−２−ブテニル基、ペンテニル基、イソペンテニル基、ペンタジエニル基、ヘキセニル基、イソヘキセニル基、ヘキサジエニル基等が挙げられる。

【0030】

「Ｃ７−１０アラルキル基」とは、Ｃ６−１０芳香族炭素環式基又はＣ２−９芳香族複素環式基で置換された、Ｃ１−４アルキル基を意味する。Ｃ７−１０アラルキル基としては、例えば、ベンジル基、フェネチル基、１−フェニルエチル基、３−フェニルプロピル基、４−フェニルブチル基等が挙げられる。「Ｃ７−１０アラルキル基」は、「Ｃ２−１０芳香族アラルキル基」等ともいうことができる。
前記「Ｃ７−１０アラルキル基」に置換基が置換されている場合、特に限定がない限り、該置換基は独立して、Ｃ６−１０芳香族炭素環又はＣ２−９芳香族複素環部分に置換されていても、Ｃ１−４アルキル部分に置換されていても、両方に置換されていてもよい。

【0031】

「Ｃ１−６アルコキシ基」とは、前記「Ｃ１−６アルキル基」がオキシ基に結合した基を意味する。Ｃ１−６アルコキシ基としては、例えば、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、イソペンチルオキシ基、ｎ−へキシルオキシ基等が挙げられる。

【0032】

「Ｃ２−６アルケニルオキシ基」とは、前記「Ｃ２−６アルケニル基」がオキシ基に結合した基を意味する。Ｃ２−６アルケニルオキシ基としては、例えば、ビニルオキシ基、アリルオキシ基、１−プロペニルオキシ基、イソプロペニルオキシ基、ブテニルオキシ基、イソブテニルオキシ基、３−メチル−２−ブテニルオキシ基、ブタジエニルオキシ基、ペンテニルオキシ基、イソペンテニルオキシ基、ペンタジエニルオキシ基、ヘキセニルオキシ基、イソヘキセニルオキシ基、ヘキサジエニルオキシ基等が挙げられる。

【0033】

「Ｃ１−６アルコキシカルボニル基」とは、前記「Ｃ１−６アルコキシ基」がカルボニル基に結合した基を意味する。Ｃ１−６アルコキシカルボニル基としては、例えば、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ｎ−プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、ｎ−ブトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基、イソブトキシカルボニル基、ｓｅｃ−ブトキシカルボニル基、ペンチルオキシカルボニル基、イソペンチルオキシカルボニル基、ｎ−へキシルオキシカルボニル基等が挙げられる。

【0034】

「Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基」とは、前記「Ｃ２−６アルケニルオキシ基」がカルボニル基に結合した基を意味する。Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基としては、例えば、ビニルオキシカルボニル基、アリルオキシカルボニル基、１−プロペニルオキシカルボニル基、イソプロペニルオキシカルボニル基、ブテニルオキシカルボニル基、イソブテニルオキシカルボニル基、３−メチル−２−ブテニルオキシカルボニル基、ブタジエニルオキシカルボニル基、ペンテニルオキシカルボニル基、イソペンテニルオキシカルボニル基、ペンタジエニルオキシカルボニル基、ヘキセニルオキシカルボニル基、イソヘキセニルオキシカルボニル基、ヘキサジエニルオキシカルボニル基等が挙げられる。

【0035】

「Ｃ１−６アルキルカルボニル基」とは、前記「Ｃ１−６アルキル基」がカルボニル基に結合した基を意味する。Ｃ１−６アルキルカルボニル基としては、例えば、アセチル基、エチルカルボニル基、ｎ−プロピルカルボニル基、イソプロピルカルボニル基、ｎ−ブチルカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブチルカルボニル基、イソブチルカルボニル基、ｓｅｃ−ブチルカルボニル基、ペンチルカルボニル基、イソペンチルカルボニル基、ｎ−へキシルカルボニル基等が挙げられる。

【0036】

「Ｃ１−６ハロアルキル基」とは、１以上の前記「ハロゲン原子」で前記「Ｃ１−６アルキル基」の任意の位置の水素原子が置換されてなる基を意味する。Ｃ１−６ハロアルキル基としては、例えば、モノフルオロメチル基、モノフルオロエチル基、モノフルオロプロピル基、２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル基、モノクロロメチル基、トリフルオロメチル基、トリクロロメチル基、２，２，２−トリフルオロエチル基、２，２，２−トリクロロエチル基、１，２−ジブロモエチル基、１，１，１−トリフルオロプロパン−２−イル基等が挙げられる。

【0037】

「Ｃ１−６アルキルアミノ基」は、Ｃ１−６モノアルキルアミノ基及びＣ１−６ジアルキルアミノ基を含む。「Ｃ１−６モノアルキルアミノ基」とは、１個の前記「Ｃ１−６アルキル基」がアミノ基に結合した基を意味する。Ｃ１−６モノアルキルアミノ基としては、例えば、メチルアミノ基、エチルアミノ基、ｎ−プロピルアミノ基、イソプロピルアミノ基、ｎ−ブチルアミノ基、ｎ−ペンチルアミノ基、ｎ−ヘキシルアミノ基等が挙げられる。「Ｃ１−６ジアルキルアミノ基」とは、２個の前記「Ｃ１−６アルキル基」がアミノ基に結合した基を意味する。２個のアルキル基は、同一でも異なっていてもよい。Ｃ１−６ジアルキルアミノ基としては、例えば、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ基、Ｎ−メチル−Ｎ−エチルアミノ基、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ｎ−ブチル−Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−メチル−Ｎ−ｎ−ペンチルアミノ基、Ｎ−ｎ−ヘキシル−Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−エチルアミノ基等が挙げられる。

【0038】

「Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基」は、前記「Ｃ１−６アルキルアミノ基」がカルボニル基に結合した基を意味する。

【0039】

「Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基」は、前記「Ｃ１−６アルキルカルボニル基」がオキシ基に結合した基を意味する。

【0040】

「Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基」は、１つの前記「Ｃ１−６アルキルカルボニル基」がアミノ基に結合した基を意味する。

【0041】

「Ｃ１−６アルコキシカルボニルアミノ基」は、１つの前記「Ｃ１−６アルコキシカルボニル基」がアミノ基に結合した基を意味する。

【0042】

「ヒドロキシ基保護基」は、核酸合成の際に安定してヒドロキシ基を保護し得る保護基であれば、特に限定されない。具体的には、酸性又は中性条件で安定であり、加水素分解、加水分解、電気分解及び光分解のような化学的方法により開裂し得る保護基である。ヒドロキシ基保護基としては例えば、Ｃ１−６アルキル基及びＣ２−６アルケニル基（Ｃ１−６アルキル基及びＣ２−６アルケニル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシ基（Ｃ１−６アルコキシ基は、無置換であるか、又は下記置換基群Ａから単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）、Ｃ６−１０芳香族炭素環式基及びＣ２−９芳香族複素環式基（Ｃ６−１０芳香族炭素環式基及びＣ２−９芳香族複素環式基は、無置換であるか、又は下記置換基群Ｂから単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）、並びにシリル基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１から３の置換基により置換されている。ここで２以上の置換基で置換されている場合、２以上の置換基は互いに単結合、酸素原子を介して結合していてもよい）、ホルミル基、脂肪族アシル基、芳香族アシル基、シリル基、テトラヒドロピラニル基、テトラヒドロチオピラニル基、テトラヒドロフラニル基、テトラヒドロチオフラニル基、Ｃ６−１０芳香族炭素環式基、Ｃ２−９芳香族複素環式基（テトラヒドロピラニル基、テトラヒドロチオピラニル基、テトラヒドロフラニル基、テトラヒドロチオフラニル基、Ｃ６−１０芳香族炭素環式基及びＣ２−９芳香族複素環式基は、無置換であるか、又は下記置換基群Ｂから単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基（Ｃ１−６アルコキシカルボニル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子又はトリアルキルシリル基で置換されている）、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、アラルキルオキシカルボニル基（アラルキルオキシカルボニル基は、無置換であるか、又は下記置換基群Ｂから単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で芳香族炭素環部分が置換されている）、脂肪族スルホニル基、芳香族スルホニル基並びにＣ６−１０アリールオキシ基で置換されたＣ１−６アルキルカルボニル基が挙げられる。

【0043】

ここで、置換基群Ａは、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、シアノ基、ニトロ基、カルボキシ基、カルバモイル基、アミノ基、ヒドロキシ基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニルアミノ基及びＣ６−１０芳香族炭素環式基により構成される置換基群である。

【0044】

ここで置換基群Ｂは、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６ハロアルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、シアノ基、ニトロ基、カルボキシ基、カルバモイル基、アミノ基、ヒドロキシ基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニルアミノ基及びＣ６−１０芳香族炭素環式基により構成される置換基群である。
またＣ６−１０アリールオキシ基は、「Ｃ６−１０芳香族炭素環式基」がオキシ基に結合した基を意味する。

【0045】

「脂肪族アシル基」とは、前記Ｃ１−１８アルキル基又はＣ２−１８アルケニル基（Ｃ１−１８アルキル基及びＣ２−１８アルケニル基は、無置換であるか、又は前記置換基群Ａより単独に若しくは異なって選ばれる１つ以上の置換基で置換されている）がカルボニル基に結合した基を意味する。脂肪族アシル基としては例えば、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、ペンタノイル基、ピバロイル基、バレリル基、イソバレリル基、オクタノイル基、ノナノイル基、デカノイル基、３−メチルノナノイル基、８−メチルノナノイル基、３−エチルオクタノイル基、３，７−ジメチルオクタノイル基、ウンデカノイル基、ドデカノイル基、トリデカノイル基、テトラデカノイル基、ペンタデカノイル基、ヘキサデカノイル基、１−メチルペンタデカノイル基、１４−メチルペンタデカノイル基、１３，１３−ジメチルテトラデカノイル基、ヘプタデカノイル基、１５−メチルヘキサデカノイル基、オクタデカノイル基、スクシノイル基、グルタロイル基、アジポイル基、クロロアセチル基、ジクロロアセチル基、トリクロロアセチル基、トリフルオロアセチル基、メトキシアセチル基、ベンジルカルボニル基、（Ｅ）−２−メチル−２−ブテノイル基等が挙げられる。

【0046】

「芳香族アシル基」とは、Ｃ６−１０芳香族炭素環式基又はＣ２−９芳香族複素環式基（Ｃ６−１０芳香族炭素環式基及びＣ２−９芳香族複素環式基は、無置換であるか、又は前記置換基群Ｂから単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）がカルボニル基に結合した１価の置換基を意味する。芳香族アシル基としては、例えば、ベンゾイル基、α−ナフトイル基、β−ナフトイル基、２−ブロモベンゾイル基、４−クロロベンゾイル基、２，４，６−トリメチルベンゾイル基、４−トルオイル基、４−アニソイル基、２−カルボキシベンゾイル基、３−カルボキシベンゾイル基、４−カルボキシベンゾイル基、４−ニトロベンゾイル基、２−ニトロベンゾイル基、２−（メトキシカルボニル）ベンゾイル基、４−フェニルベンゾイル基、２−ピリジルカルボニル基、４−メトキシ−２−ピリジルカルボニル基、３−ピリジルカルボニル基、４−ピリジルカルボニル基、２−ピリミジルカルボニル基、４−ピリミジルカルボニル基、５−ピリミジルカルボニル基、３−ピリダジニルカルボニル基、４−ピリダジニルカルボニル基等が挙げられる。

【0047】

「シリル基」とは、ケイ素原子に、水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ６−１０芳香族炭素環式基及びＣ２−９芳香族複素環式基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる３個の置換基が結合した一価の置換基を意味する。シリル基としては、例えば、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、イソプロピルジメチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基、メチルジイソプロピルシリル基、メチルジ−ｔｅｒｔ−ブチルシリル基、トリイソプロピルシリル基、ジフェニルメチルシリル基、ジフェニル−ｔｅｒｔ−ブチルシリル基、ジフェニルイソプロピルシリル基、フェニルジイソプロピルシリル基等が挙げられる。ここで、シリル基が２個以上のヒドロキシ基を有する分子の１個のヒドロキシ基の酸素原子に結合するとき、シリル基を構成する３個の置換基のうち１個の置換基は、その分子の別のヒドロキシ基の酸素原子に置き換わっていてもよい。また、シリル基が２個以上のヒドロキシ基を有する分子の１個のヒドロキシ基の酸素原子に結合し、その分子の別のヒドロキシ基の酸素原子にも別のシリル基が結合するとき、該２つのシリル基を構成する３個の置換基のうちそれぞれ１個の置換基が１つの酸素原子に置き換わり、下記式（III）で示される基を形成してもよい。

【0048】

【化3】

【0049】

式中、Ｒ_Ｓｉは、それぞれ独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ６−１０芳香族炭素環式基又はＣ２−９芳香族複素環式基を意味し、Ｏ^＊は、該シリル基が結合するヒドロキシ基の酸素原子を意味する。

【0050】

前記式（III）で示される基としては、例えば、下記式（ＩＶ−１）から（ＩＶ−４）で示される基等が挙げられる。

【0051】

【化4】

【0052】

式中、Ｏ^＊は、該シリル基が結合するヒドロキシ基の酸素原子を意味する。

【0053】

「トリアルキルシリル基」とは、前記「シリル基」のうち、ケイ素原子に３個のＣ１−６アルキル基が結合した、一価の置換基を意味し、例えば、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、イソプロピルジメチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基、メチルジイソプロピルシリル基、メチルジ−ｔｅｒｔ−ブチルシリル基及びトリイソプロピルシリル基等が挙げられる。

【0054】

「テトラヒドロピラニル基」としては、テトラヒドロピラン−２−イル基等が挙げられる。前記置換基群Ｂから単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されているテトラヒドロピラニル基としては、３−ブロモテトラヒドロピラン−２−イル基、４−メトキシテトラヒドロピラン−４−イル基等が挙げられる。
「テトラヒドロチオピラニル基」としては、テトラヒドロチオピラン−２−イル基等が挙げられる。前記置換基群Ｂから単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されているテトラヒドロチオピラニル基としては、４−メトキシテトラヒドロチオピラン−４−イル基等が挙げられる。

【0055】

「テトラヒドロフラニル基」としては、テトラヒドロフラン−２−イル基等が挙げられる。「テトラヒドロチオフラニル基」としては、テトラヒドロチオフラン−２−イル基等が挙げられる。

【0056】

「脂肪族スルホニル基」とは、Ｃ１−１８アルキル基又はＣ２−１８アルケニル基（該Ｃ１−１８アルキル基及びＣ２−１８アルケニル基は、無置換であるか、又は前記置換基群Ａより単独に若しくは異なって選ばれる１つ以上の置換基で置換されている）がスルホニル基に結合した基を意味する。脂肪族スルホニル基としては、例えば、メタンスルホニル基、トリフルオロメタンスルホニル基等が挙げられる。
「芳香族スルホニル基」とは、Ｃ６−１０芳香族炭素環式基又はＣ２−９芳香族複素環式基（該Ｃ６−１０芳香族炭素環式基及びＣ２−９芳香族複素環式基は、無置換であるか又は、前記置換基群Ｂより単独に若しくは異なって選ばれる１つ以上の置換基で置換されている）がスルホニル基に結合した１価の置換基を意味する。芳香族スルホニル基としては、例えば、ベンゼンスルホニル基、ｐ−トルエンスルホニル基等が挙げられる。

【0057】

Ｃ１−６アルコキシ基で置換されたＣ１−６アルキル基としては、メトキシメチル基、１，１−ジメチル−１−メトキシメチル基、エトキシメチル基、ｎ−プロポキシメチル基、イソプロポキシメチル基、ブトキシメチル基、ｔｅｒｔ−ブトキシメチル基、１−エトキシエチル基、１−（イソプロポキシ）エチル基等が挙げられる。
Ｃ１−６アルコキシ基で置換されたＣ１−６アルコキシ基で置換されたＣ１−６アルキル基としては、２−メトキシエトキシメチル基等が挙げられる。
ハロゲン原子で置換されたＣ１−６アルコキシ基で置換されたＣ１−６アルキル基としては、２，２，２−トリクロロエトキシメチル基、ビス（２−クロロエトキシ）メチル基等が挙げられる。

【0058】

前記置換基群Ｂから単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されているＣ６−１０芳香族炭素環式基としては、４−クロロフェニル基、２−フルオロフェニル基、４−メトキシフェニル基、４−ニトロフェニル基、２，４−ジニトロフェニル基等が挙げられる。
ハロゲン原子又はトリアルキルシリル基で置換されたＣ１−６アルコキシカルボニル基としては、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル基、２−トリメチルシリルエトキシカルボニル基等が挙げられる。

【0059】

アラルキルオキシカルボニル基とは、Ｃ６−１０芳香族炭素環式基又はＣ２−９芳香族複素環式基がＣ１−６アルコキシカルボニル基のアルキル基部分に結合した１価の置換基を意味する。アラルキルオキシカルボニル基に置換基が置換されている場合、特に限定がない限り、該置換基は独立して、Ｃ６−１０芳香族炭素環又はＣ２−９芳香族複素環部分に置換されていても、Ｃ１−６アルコキシカルボニル部分に置換されていても、両方に置換されていてもよい。
無置換であるか、又は前記置換基群Ｂから単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基でＣ６−１０芳香族炭素環部分が置換されているアラルキルオキシカルボニル基としては、ベンジルオキシカルボニル基、４−メトキシベンジルオキシカルボニル基、３，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、２−ニトロベンジルオキシカルボニル基、４−ニトロベンジルオキシカルボニル基等が挙げられる。

【0060】

Ｂｘにおける好ましいヒドロキシ基保護基としては、Ｃ１−６アルキル基及びＣ２−６アルケニル基（該Ｃ１−６アルキル基及びＣ２−６アルケニル基は、無置換であるか、又は１から３個のＣ６−１０芳香族炭素環式基（該Ｃ６−１０芳香族炭素環式基は、無置換であるか又は前記置換基群Ｂから単独に若しくは異なって選ばれる１つ以上の置換基で置換されている）により置換されている）、テトラヒドロピラニル基、脂肪族アシル基、芳香族アシル基、シリル基並びにＣ６−１０芳香族炭素環式基（該Ｃ６−１０芳香族炭素環式基は、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシ基及びニトロ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）が挙げられる。さらに好ましいヒドロキシ基保護基としては、Ｃ１−６アルキル基（該Ｃ１−６アルキル基は、無置換であるか、又は１から３個のＣ６−１０芳香族炭素環式基（該Ｃ６−１０芳香族炭素環式基は、無置換であるか又は、メトキシ基及びニトロ基から独立して選ばれる１つ以上の置換基で置換されている）により置換されている）、脂肪族アシル基、芳香族アシル基及びシリル基が挙げられ、さらにより好ましいヒドロキシ基保護基には、ベンゾイル基及びベンジル基が挙げられ、特に好ましいヒドロキシ基保護基には、ベンゾイル基が挙げられる。

【0061】

「スルファニル基保護基」は、核酸合成の際に安定してスルファニル基を保護し得る保護基であれば、特に限定されない。具体的には、酸性又は中性条件で安定であり、加水素分解、加水分解、電気分解及び光分解のような化学的方法により開裂し得る保護基である。
例えば、前記「ヒドロキシ基保護基」として挙げられたものの他、ジスルフィド結合を形成する基も含む。ジスルフィド結合を形成する基としては、アルキルチオ基（メチルチオ基、エチルチオ基、ｔｅｒｔ−ブチルチオ基）及びＣ６−１０芳香族炭素環式基で置換されたアルキルチオ基（ベンジルチオ等）等が挙げられる。
好ましいスルファニル基保護基は、脂肪族アシル基又は芳香族アシル基である。さらに好ましくは、ベンゾイル基である。

【0062】

「アミノ基保護基」は、核酸合成の際に安定してアミノ基を保護し得る保護基であれば、特に限定されない。具体的には、酸性又は中性条件で安定であり、加水素分解、加水分解、電気分解及び光分解のような化学的方法により開裂し得る保護基である。
例えば、前記「ヒドロキシ基保護基」の保護基として挙げられたものが挙げられる。
Ｂｘにおける好ましいアミノ基保護基は、脂肪族アシル基、芳香族アシル基又はＣ６−１０アリールオキシ基で置換されたＣ１−６アルキルカルボニル基である。より好ましくは、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、ピバロイル基、ベンゾイル基、モノメトキシベンゾイル基、ジメトキシベンゾイル基、トリメトキシベンゾイル基又はフェノキシアセチル基であり、さらに好ましくは、アセチル基、イソブチリル基又はベンゾイル基であり、特に好ましくはベンゾイル基である。

【0063】

本発明における「ヒドロキシ基保護基」、「スルファニル基保護基」及び「アミノ基保護基」の導入及び脱保護については、当業者に良く知られた、プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス第４版（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｆｏｕｒｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ）、グリーン（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ）著、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ・インコーポレイティッド（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．）（２００６年）等を参照可能である。

【0064】

［人工ヌクレオシド及び人工ヌクレオチド］
本実施形態の人工ヌクレオシド及び人工ヌクレオチドは、下記式（Ｉ）で示される化合物、又はその塩である。２’位酸素原子上のカルバモイルエチル基窒素原子に、アルキル基を介してアミノ基あるいは複素環基が導入されていることで、ヌクレアーゼ耐性に非常に優れるオリゴヌクレオチドを構成することができる。

【0065】

【化5】

【0066】

Ｂｘは、プリン−９−イル基、２−オキソ−ピリミジン−１−イル基又は２−チオキソ−ピリミジン−１−イル基であり、該プリン−９−イル基、２−オキソ−ピリミジン−１−イル基及び２−チオキソ−ピリミジン−１−イル基はそれぞれ独立して、無置換であるか、又はハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基、アミノ基、アミノ基保護基により置換されたアミノ基、ヒドロキシ基、ヒドロキシ基保護基により置換されたヒドロキシ基、スルファニル基及びスルファニル基保護基により置換されたスルファニル基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている。

【0067】

Ｚ^１及びＺ^２はそれぞれ独立して、水素原子、ヒドロキシ基保護基又はリン含有基である。
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４はそれぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基又はＣ２−６アルケニル基であり、該Ｃ１−６アルキル基及びＣ２−６アルケニル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシ基及びシアノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている。

【0068】

Ｙは、ＮＲ^５Ｒ^６又はＣ２−９芳香族複素環式基である。ＮＲ^５Ｒ^６におけるＲ^５及びＲ^６はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル基若しくはＣ２−６アルケニル基（該Ｃ１−６アルキル基及びＣ２−６アルケニル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）又はＣ７−１０アラルキル基（該Ｃ７−１０アラルキル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６ハロアルキル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）であるか、又はＲ^５及びＲ^６は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、３−１１員含窒素非芳香族ヘテロ環基（該３−１１員含窒素非芳香族ヘテロ環基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６ハロアルキル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）を形成している。
Ｃ２−９芳香族複素環式基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６ハロアルキル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている。

【0069】

ｎは、１から３の整数である。ここで、ｎが２又は３であるとき、２又は３のＲ^３及びＲ^４はそれぞれ同一でも異なっていてもよい。

【0070】

なお、本実施形態における人工ヌクレオシドとは、式（Ｉ）で示される化合物のうち、Ｚ^１及びＺ^２が水素原子の化合物を意味し、人工ヌクレオチドとは、式（Ｉ）で示される化合物のうち、Ｚ^１及びＺ^２の少なくとも一方がリン含有基の化合物を意味する。

【0071】

Ｂｘは、プリン−９−イル基、２−オキソ−ピリミジン−１−イル基又は２−チオキソ−ピリミジン−１−イル基を表す。プリン−９−イル基、２−オキソ−ピリミジン−１−イル基及び２−チオキソ−ピリミジン−１−イル基は、無置換でもよく、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基、アミノ基、ヒドロキシ基及びスルファニル基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されていてもよい。ここでアミノ基は、無置換でもよく、アミノ基保護基により置換されていてもよい。またヒドロキシ基は、無置換でもよく、ヒドロキシ基保護基により置換されていてもよい。スルファニル基は、無置換でもよく、スルファニル基保護基により置換されていてもよい。

【0072】

プリン−９−イル基、２−オキソ−ピリミジン−１−イル基及び２−チオキソ−ピリミジン−１−イル基は、人工ヌクレオシド又は人工ヌクレオチドの塩基部分を構成する置換もしくは無置換の複素環式基であり、核酸塩基の残基又はその類縁体を含む置換基を意味する。天然の核酸塩基としては、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）が挙げられる。核酸塩基は、それらに限定されず、他の人工又は天然の核酸塩基も含まれる。例えば、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、２−チオチミン等が挙げられる。
Ｂｘの具体例としては、下記式（Ｖ−１）から（Ｖ−１０）で示される基が挙げられる。

【0073】

【化6】

【0074】

Ｒ^ａは、水素原子又はアミノ基保護基であり、Ｒ^ｂは、水素原子又はアミノ基保護基である。
Ｒ^ａにおけるアミノ基保護基は、好ましくは、Ｃ１−６アルキル基、脂肪族アシル基、芳香族アシル基、Ｃ６−１０アリールオキシ基で置換されたＣ１−６アルキルカルボニル基である。
Ｒ^ｂにおけるアミノ基保護基は、好ましくは、Ｃ１−６アルキル基、脂肪族アシル基、芳香族アシル基、Ｃ６−１０アリールオキシ基で置換されたＣ１−６アルキルカルボニル基である。

【0075】

Ｒ^ａは、好ましくは、水素原子、イソブチリル基、アセチル基、ベンゾイル基、フェノキシアセチル基であり、特に好ましくは水素原子である。Ｒ^ｂは、好ましくは、水素原子、イソブチリル基、アセチル基、ベンゾイル基、フェノキシアセチル基であり、特に好ましくは水素原子である。

【0076】

Ｂｘは、好ましくは、プリン−９−イル基又は２−オキソ−ピリミジン−１−イル基である。プリン−９−イル基及び２−オキソ−ピリミジン−１−イル基は、無置換でもよく、ハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基、アミノ基、ヒドロキシ基及びスルファニル基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されていてもよい。ここでアミノ基は、無置換でもよく、アミノ基保護基により置換されていてもよい。またヒドロキシ基は、無置換でもよく、ヒドロキシ基保護基により置換されていてもよい。スルファニル基は、無置換でもよく、スルファニル基保護基により置換されていてもよい。

【0077】

Ｂｘは、より好ましくは、６−アミノプリン−９−イル基（アデニン残基；Ｖ−９においてＲ^ｂ＝Ｈ）、２−アミノ−６−ヒドロキシプリン−９−イル基（グアニン残基；Ｖ−１０においてＲ^ｂ＝Ｈ）、２−オキソ−４−アミノ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基（シトシン残基；Ｖ−４においてＲ^ａ＝Ｈ）、２−オキソ−４−アミノ−５−メチル−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基（５−メチルシトシン残基；Ｖ−３においてＲ^ａ＝Ｈ）、２−オキソ−４−ヒドロキシ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基（ウラシル残基；Ｖ−２においてＲ^ａ＝Ｈ）及び２−オキソ−４−ヒドロキシ−５−メチル−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基（チミン残基；Ｖ−１においてＲ^ａ＝Ｈ）からなる群から選択される少なくとも１種であり、さらにより好ましくは、２−オキソ−４−ヒドロキシ−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基又は２−オキソ−４−ヒドロキシ−５−メチル−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基であり、特に好ましくは、２−オキソ−４−ヒドロキシ−５−メチル−１，２−ジヒドロピリミジン−１−イル基である。

【0078】

Ｚ^１及びＺ^２はそれぞれ独立して、水素原子、ヒドロキシ基保護基又はリン含有基を表す。
Ｚ^１及びＺ^２におけるヒドロキシ基保護基としては、既述の「核酸合成の際に安定してヒドロキシ基を保護し得る保護基」であるヒドロキシ基保護基が挙げられる。好ましくはＣ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、脂肪族アシル基、芳香族アシル基、テトラヒドロピラニル基、シリル基、脂肪族スルホニル基、芳香族スルホニル基等が挙げられる。ここで、Ｃ１−６アルキル基及びＣ２−６アルケニル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシ基（Ｃ１−６アルコキシ基は、無置換であるか、又は前記置換基群Ａから単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）、Ｃ６−１０芳香族炭素環式基及びＣ２−９芳香族複素環式基（Ｃ６−１０芳香族炭素環式基及びＣ２−９芳香族複素環式基は、無置換であるか、又は前記置換基群Ｂから単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１から３個の置換基により置換されている。また、Ｚ^１がシリル基であるとき、シリル基を構成する１個の置換基は、３’位の酸素原子に置き換わっていてもよく、Ｚ^２がシリル基であるとき、シリル基を構成する１個の置換基は、５’位の酸素原子に置き換わっていてもよい。また、Ｚ^１及びＺ^２がシリル基であるとき、Ｚ^１及びＺ^２は、それらがそれぞれ結合する酸素原子と一緒になって、下記式（III）で示される基を形成してもよい。

【0079】

【化7】

【0080】

式中、Ｒ_Ｓｉは、それぞれ独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ６−１０芳香族炭素環式基又はＣ２−９芳香族複素環式基を意味し、Ｏ^＊は、該シリル基が結合するヒドロキシ基の酸素原子を意味する。

【0081】

Ｚ^１及びＺ^２におけるヒドロキシ基保護基は、より好ましくは、Ｃ１−６アルキル基、テトラヒドロピラニル基、脂肪族アシル基、芳香族アシル基又はシリル基である。ここで、Ｃ１−６アルキル基は、無置換であるか、又はハロゲン、Ｃ１−６アルコキシ基及びＣ６−１０芳香族炭素環式基（Ｃ６−１０芳香族炭素環式基は、無置換であるか、又は前記置換基群Ｂから単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１から３個の置換基により置換されている。
Ｚ^１及びＺ^２におけるヒドロキシ基保護基は、さらに好ましくは、Ｃ１−６アルキル基又はシリル基である。
ここで、Ｃ１−６アルキル基は、Ｃ６−１０芳香族炭素環式基（Ｃ６−１０芳香族炭素環式基は、無置換であるか、又は前記置換基群Ｂから単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１から３個の置換基により置換されている。またＺ^１及びＺ^２は、それらがそれぞれ結合する酸素原子と一緒になって、前記式（III）で示される基を形成してもよい。

【0082】

Ｚ^１及びＺ^２におけるリン含有基とは、リン原子を含有する基であり、ホスホジエステル構造又はホスホロチオエート構造が含まれるヌクレオシド間結合を形成するために有用な基を意味する。Ｚ^１及びＺ^２におけるリン含有基としては、当該分野で公知のリン含有基を用いることができ、例えば、ホスホロアミダイトに由来する基、Ｈ−ホスホネートに由来する基、リン酸ジエステルに由来する基、リン酸トリエステルに由来する基等が挙げられる。

【0083】

具体的には、以下に記載の式(Ｚ^２−１)から式（Ｚ^２−３)のいずれかで示される基が挙げられる。
式（Ｚ^２−１）：−Ｐ（ＯＲ^Ｘ１）（ＮＲ^Ｘ２_２）
式中、Ｒ^Ｘ１及びＲ^Ｘ２は、それぞれ独立してＣ１−６アルキル基であり、該アルキル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシ基、シアノ基、Ｃ６−１０芳香族炭素環式基及びＣ２−９芳香族複素環式基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている。

【0084】

式（Ｚ^２−２）：−Ｐ（＝Ｒ^Ｘ３）（ＯＲ^Ｘ４）_２
式中、Ｒ^Ｘ３は酸素原子又は硫黄原子であり、Ｒ^Ｘ４はそれぞれ独立して、水素原子、ヒドロキシ基保護基、Ｃ１−６アルキル基、又はＣ６−１０芳香族炭素環式基であり、該アルキル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシ基、シアノ基、Ｃ６−１０芳香族炭素環式基及びＣ２−９芳香族複素環式基からなる置換基群から単独に若しくは異なって選ばれる１つ以上の置換基で置換されており、該芳香族炭素環式基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ１−６アルキル基及びシアノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている。

【0085】

式（Ｚ^２−３）：−Ｐ（＝Ｒ^Ｘ５）Ｈ（ＯＲ^Ｘ６）
式中、Ｒ^Ｘ５は、酸素原子又は硫黄原子である。Ｒ^Ｘ６は水素原子、ヒドロキシ基保護基、又はＣ６−１０芳香族炭素環式基である。

【0086】

Ｒ^Ｘ４及びＲ^Ｘ６中の「ヒドロキシ基保護基」は、好ましくは、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、脂肪族アシル基、芳香族アシル基、１から３個のＣ６−１０芳香族炭素環式基で置換されたメチル基又はＣ６−１０芳香族炭素環式基であり、該Ｃ６−１０芳香族炭素環式基は、ハロゲン原子、アルコキシ基又はニトロ基から単独に若しくは異なって選ばれる置換基で置換されている。より好ましい保護基は、ベンゾイル基、ベンジル基、２−クロロフェニル基、４−クロロフェニル基又は２−プロペニル基（アリル基）である。

【0087】

リン含有基は、好ましくは、式（Ｚ^２−４）から式（Ｚ^２−６)で示される基のいずれかである。
式（Ｚ^２−４）：−Ｐ（ＯＲ^Ｘ１）（ＮＲ^Ｘ２_２）
式中、Ｒ^Ｘ１はＣ１−６アルキル基又は、シアノ基で置換されたＣ１−６アルキル基であり、Ｒ^Ｘ２はＣ１−６アルキル基である。
式（Ｚ^２−５）：−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）_２
式（Ｚ^２−６）：−Ｐ（＝Ｏ）Ｈ（ＯＨ）
リン含有基は、より好ましくは、シアノエトキシ（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ基（式：−Ｐ（ＯＣ_２Ｈ_４ＣＮ）（Ｎ（ｉ−Ｐｒ）_２）で示される基）又はヒドロキシホスフィニル基（式：−Ｐ（＝Ｏ）Ｈ（ＯＨ）で示される基）である。

【0088】

Ｚ^１は、好ましくは水素原子又はヒドロキシ基保護基である。Ｚ^１がヒドロキシ基保護基である場合、当該ヒドロキシ基保護基は、脱保護され、本実施形態の人工オリゴヌクレオチドの製造に使用されることが想定される。そのため、ヒドロキシ基保護基は、核酸合成の際に安定してヒドロキシ基を保護し得るものであれば限定されず、保護基の種類、構造は、それぞれの人工ヌクレオチド及び人工ヌクレオシドにおいて同一でも異なっていてもよい。Ｚ^１は、より好ましくは、水素原子、アセチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブトキシメチル基、メトキシメチル基、テトラヒドロピラニル基、１−エトキシエチル基、１−（２−クロロエトキシ）エチル基、２−トリメチルシリルエチル基、ｐ−クロロフェニル基、２，４−ジニトロフェニル基、ベンジル基、ベンゾイル基、ｐ−フェニルベンゾイル基、２，６−ジクロロベンジル基、レブリノイル基、ジフェニルメチル基、ｐ−ニトロベンジル基、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基、トリフェニルシリル基、トリイソプロピルシリル基、ギ酸ベンゾイル基、クロロアセチル基、トリクロロアセチル基、トリフルオロアセチル基、ピバロイル基、イソブチリル基、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基、メタンスルホニル基、ｐ−トルエンスルホニル基、トリフルオロメタンスルホニル基、トリフェニルメチル基（トリチル基）、モノメトキシトリチル基、ジメトキシトリチル基（ＤＭＴｒ基）、トリメトキシトリチル基、９−フェニルキサンテン−９−イル基（Ｐｉｘｙｌ基）又は９−（ｐ−メトキシフェニル）キサンテン−９−イル基（ＭＯＸ基）である。Ｚ^１は、さらに好ましくは、水素原子、ベンジル基、トリエチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基、トリイソプロピルシリル基、トリチル基、モノメトキシトリチル基、ジメトキシトリチル基又はトリメトキシトリチル基であり、さらにより好ましくは、水素原子、トリチル基、モノメトキシトリチル基、ジメトキシトリチル基又はトリメトキシトリチル基であり、特に好ましくは、水素原子又はトリチル基である。Ｚ^１として、ジメトキシトリチル基も特に好ましい。

【0089】

Ｚ^２は、好ましくは水素原子又はリン含有基であり、より好ましくは水素原子、式：−Ｐ（ＯＣ_２Ｈ_４ＣＮ）（Ｎ（ｉ−Ｐｒ）_２）で示される基又は式：−Ｐ（＝Ｏ）Ｈ（ＯＨ）で示される基である。
その他の様態として、上記式（Ｉ）で示される化合物、又はその塩を製造する過程においては、その中間体としてＺ^２がヒドロキシ基保護基であることが好ましい。そのため、ヒドロキシ基保護基は、核酸合成の際に安定してヒドロキシ基を保護し得るものであれば限定されず、保護基の種類、構造は、それぞれの人工ヌクレオチド及び人工ヌクレオシドにおいて同一でも異なっていてもよい。Ｚ^２がヒドロキシ基保護基である場合には、当該ヒドロキシ基保護基は、好ましくは、アセチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブトキシメチル基、メトキシメチル基、テトラヒドロピラニル基、１−エトキシエチル基、１−（２−クロロエトキシ）エチル基、２−トリメチルシリルエチル基、ベンジル基、ベンゾイル基、ｐ−フェニルベンゾイル基、２，６−ジクロロベンジル基、レブリノイル基、ジフェニルメチル基、ｐ−ニトロベンジル基、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基、トリフェニルシリル基、トリイソプロピルシリル基、ギ酸ベンゾイル基、クロロアセチル基、トリクロロアセチル基、トリフルオロアセチル基、ピバロイル基、イソブチリル基、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基、メタンスルホニル基、ｐ−トルエンスルホニル基又はトリフルオロメタンスルホニル基である。当該ヒドロキシ基保護基は、より好ましくは、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基、トリフェニルシリル基又はトリイソプロピルシリル基である。

【0090】

その他の態様として、Ｚ^１とＺ^２は、好ましくはＺ^１及びＺ^２がそれぞれ結合する酸素原子と一緒になって、下記式（ＩＶ−１）から（ＩＶ−４）のいずれかで示される基を形成し、特に好ましくは、下記式（ＩＶ−３）で示される基を形成する。

【0091】

【化8】

【0092】

式中、Ｏ^＊は、該シリル基が結合するヒドロキシ基の酸素原子を意味する。

【0093】

Ｒ^１及びＲ^２はそれぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基又はＣ２−６アルケニル基を表す。ここでＣ１−６アルキル基及びＣ２−６アルケニル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシ基及びシアノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている。
Ｒ^１は、好ましくは水素原子又はＣ１−３アルキル基であり、より好ましくは水素原子である。Ｒ^２は、好ましくは水素原子又はＣ１−３アルキル基であり、より好ましくは水素原子である。

【0094】

Ｒ^３及びＲ^４はそれぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基又はＣ２−６アルケニル基を表す。ここでＣ１−６アルキル基及びＣ２−６アルケニル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシ基及びシアノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている。ここで、ｎが２又は３であるとき、Ｒ^３はそれぞれ同一でも異なっていてもよく、Ｒ^４はそれぞれ同一でも異なっていてもよい。
Ｒ^３は、好ましくは水素原子又はＣ１−３アルキル基であり、より好ましくは水素原子である。Ｒ^４は、好ましくは水素原子又はＣ１−３アルキル基であり、より好ましくは水素原子である。

【0095】

Ｙが、ＮＲ^５Ｒ^６のとき、Ｒ^５及びＲ^６はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基又はＣ７−１０アラルキル基を表す。ここでＣ１−６アルキル基及びＣ２−６アルケニル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されており、Ｃ７−１０アラルキル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６ハロアルキル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている。
Ｒ^５は、好ましくは水素原子又はＣ１−３アルキル基であり、より好ましくはメチル基である。
Ｒ^６は、好ましくは水素原子又はＣ１−３アルキル基であり、より好ましくはメチル基である。

【0096】

その他の様態として、Ｒ^５及びＲ^６はこれらが結合している窒素原子と一緒になって、３−１１員含窒素非芳香族ヘテロ環を形成していてもよい。ここで該３−１１員含窒素非芳香族ヘテロ環は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６ハロアルキル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている。
Ｒ^５及びＲ^６がこれらが結合している窒素原子と一緒になって形成する３−１１員含窒素非芳香族ヘテロ環は、好ましくは４−８員含窒素非芳香族ヘテロ環のうち、メチレン基を４乃至６個含む環であり、ピペリジン、ピロリジン、モルホリン、チオモルホリン、ホモピペリジン、ホモモルホリン等が挙げられる。より好ましくは、さらに、環を構成する原子に酸素原子又は硫黄原子を含む環であり、モルホリン、チオモルホリン、ホモモルホリンが挙げられる。特に好ましくは、モルホリンである。また、該４−８員含窒素非芳香族ヘテロ環は無置換であることが好ましい。

【0097】

その他の様態として、ＹはＣ２−９芳香族複素環式基であってもよい。好ましくはピリジル基、イミダゾリル基又はベンゾイミダゾリル基であり、より好ましくは、２−ピリジル、イミダゾール−１−イル又は（ベンゾイミダゾ−ル）−１−イルであり、特に好ましくは、２−ピリジル又は（ベンゾイミダゾ−ル）−１−イルである。

【0098】

ｎは、繰り返し単位構造の数であって、１から３の整数であり、好ましくは２である。

【0099】

式（Ｉ）で示される化合物には異性体が存在する場合がある。その場合、本実施形態の化合物は特定の異性体に限定されるものではなく、全ての可能な異性体（例えば、ケト−エノール異性体、イミン−エナミン異性体、ジアステレオ異性体、光学異性体、回転異性体等）、ラセミ体及びそれらの混合物を含む。

【0100】

式（Ｉ）で示される化合物の１以上の水素原子、炭素原子及び／又は他の原子は、それぞれ水素原子、炭素原子及び／又は他の原子の同位体で置換され得る。そのような同位体の例としては、それぞれ^２Ｈ、^３Ｈ、^１１Ｃ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^１８Ｏ、^１７Ｏ、^３１Ｐ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^１８Ｆ、^１２３Ｉ及び^３６Ｃｌが挙げられ、同位体には水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、ヨウ素及び塩素が包含される。式（Ｉ）で示される化合物は、そのような同位体で置換された化合物も包含する。該同位体で置換された化合物は、医薬品としても有用であり、式（Ｉ）で示される化合物のすべての放射性標識体を包含する。また該「放射性標識体」を製造するための「放射性標識化方法」も本発明に包含され、代謝薬物動態研究、結合アッセイにおける研究及び／又は診断のツールとして有用である。

【0101】

式（Ｉ）で示される化合物の放射性標識体は、当該技術分野で周知の方法で調製できる。例えば、式（Ｉ）で示される化合物のトリチウム標識化合物は、例えば、トリチウムを用いた触媒的脱ハロゲン化反応によって、式（Ｉ）で示される特定の化合物にトリチウムを導入することで調製できる。この方法は、適切な触媒、例えばＰｄ／Ｃの存在下、塩基の存在下又は非存在下で、式（Ｉ）で示される化合物が適切にハロゲン置換された前駆体とトリチウムガスとを反応させることを包含する。他のトリチウム標識化合物を調製するための適切な方法としては、文書Ｉｓｏｔｏｐｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｐｈｙｓｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．１，Ｌａｂｅｌｅｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ （Ｐａｒｔ Ａ），Ｃｈａｐｔｅｒ ６ （１９８７年）を参照できる。また、^１４Ｃ−標識化合物は、^１４Ｃ炭素を有する原料を用いることによって調製できる。

【0102】

本発明は、式（Ｉ）で示される化合物の生成可能な塩を包含する。該塩としては、例えば、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩等）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩等）、その他の金属塩（例えば、アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩等）、アンモニウム塩、アミン塩（例えば、ｔｅｒｔ−オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ−メチルグルカミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ−ベンジル−フェネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニウム塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩等）、無機酸塩（例えば、フッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩等のハロゲン原子化水素酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、リン酸塩等）、アルキルスルホン酸塩（例えば、メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩等）、アリールスルホン酸塩（例えば、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩等）、有機酸塩（例えば、酢酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩等）、アミノ酸塩（例えば、グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩等）等が挙げられる。これらの塩は、通常行われる方法によって形成させることができる。

【0103】

本発明の式（Ｉ）で示される化合物又はその塩は、溶媒和物（例えば、水和物等）及び／又は結晶多形を形成する場合があり、本発明はそのような各種の溶媒和物及び結晶多形も包含する。「溶媒和物」は、式（Ｉ）で示される化合物に対し、任意の数の溶媒分子（例えば、水分子等）と配位していてもよい。式（Ｉ）で示される化合物又はその塩を、大気中に放置することにより、水分を吸収し、吸着水が付着する場合や、水和物を形成する場合がある。また、式（Ｉ）で示される化合物又はその塩を、再結晶することでそれらの結晶多形を形成する場合がある。

【0104】

本実施形態の人工ヌクレオシドは、例えば、式（Ｉ）におけるＺ^１及びＺ^２が水素原子である化合物を包含する。また、本実施形態の人工ヌクレオチドは、例えば、式（Ｉ）におけるＺ^２がリン含有基である化合物を包含する。

【0105】

［人工オリゴヌクレオチド］
本実施形態の人工オリゴヌクレオチドは、下記式（II）で示されるヌクレオシド構造を１以上含む人工オリゴヌクレオチド又はその製薬上許容される塩である。

【0106】

【化9】

【0107】

Ｂｘは、プリン−９−イル基、２−オキソ−ピリミジン−１−イル基又は２−チオキソ−ピリミジン−１−イル基である。該プリン−９−イル基、２−オキソ−ピリミジン−１−イル基及び２−チオキソ−ピリミジン−１−イル基はそれぞれ独立して、無置換であるか、又はハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基、アミノ基、アミノ基保護基により置換されたアミノ基、ヒドロキシ基、ヒドロキシ基保護基により置換されたヒドロキシ基、スルファニル基及びスルファニル基保護基により置換されたスルファニル基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている。

【0108】

Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４はそれぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、シアノ基又はＣ１−６アルキル基若しくはＣ２−６アルケニル基である。該Ｃ１−６アルキル基及びＣ２−６アルケニル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシ基及びシアノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている。

【0109】

Ｙは、ＮＲ^５Ｒ^６又はＣ２−９芳香族複素環式基である。ＮＲ^５Ｒ^６におけるＲ^５及びＲ^６はそれぞれ独立して、水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基（該Ｃ１−６アルキル基及びＣ２−６アルケニル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）又はＣ７−１０アラルキル基（該Ｃ７−１０アラルキル基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６ハロアルキル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）であるか、又はＲ^５及びＲ^６は、これらが結合している窒素原子と一緒になって、３−１１員含窒素非芳香族ヘテロ環基（該３−１１員含窒素非芳香族ヘテロ環基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６ハロアルキル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている）を形成している。
ＹがＣ２−９芳香族複素環式基である場合、該Ｃ２−９芳香族複素環式基は、無置換であるか、又はハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、カルバモイル基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ２−６アルケニルオキシ基、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基、Ｃ２−６アルケニルオキシカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニル基、Ｃ１−６ハロアルキル基、Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル基、Ｃ１−６アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ１−６アルキルカルボニルアミノ基及びＣ１−６アルコキシカルボニルアミノ基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されている。

【0110】

ｎは、１から３の整数である。

【0111】

式（II）におけるＲ^１〜Ｒ^６、Ｂｘ、Ｙ及びｎは、式（Ｉ）におけるＲ^１〜Ｒ^６、Ｂｘ、Ｙ及びｎと同義であり、好ましい態様も同様である。

【0112】

本実施形態の人工オリゴヌクレオチドは、式（II）で示されるヌクレオシド構造を任意の位置に少なくとも１つ含有する。人工オリゴヌクレオチドを構成する塩基数は特に制限されず、例えば、２から５０塩基であり、好ましくは８から３０塩基であり、より好ましくは１５から２５塩基であり、さらにより好ましくは、１９から２３塩基であり、特に好ましくは１９又は２０塩基である。
人工オリゴヌクレオチドにおける式（II）で示されるヌクレオシド構造の位置及び数は特に限定されず、目的に応じて適宜設計され得る。例えば式（II）で示されるヌクレオシド構造を、オリゴヌクレオチドの３’末端又は５’末端に含有してもよい。３’末端に含まれる場合、例えば、以下の式（VI）で示される構造となる。

【0113】

【化10】

【0114】

式（VI）におけるＲ^１〜Ｒ^４、Ｚ^２、Ｂｘ、Ｙ及びｎは、式（Ｉ）におけるＲ^１〜Ｒ^４、Ｚ^２、Ｂｘ、Ｙ及びｎと同義である。
また、５’末端に含まれる場合、例えば、以下の式（VII）で示される構造となる。

【0115】

【化11】

【0116】

式（VII）におけるＲ^１〜Ｒ^４、Ｚ^１、Ｂｘ、Ｙ及びｎは、式（Ｉ）におけるＲ^１〜Ｒ^４、Ｚ^１、Ｂｘ、Ｙ及びｎと同義である。

【0117】

本実施形態の人工オリゴヌクレオチドの３’末端及び／又は５’末端は、修飾されていてもよい。末端修飾されることで、オリゴヌクレオチドの追跡が可能になったり、オリゴヌクレオチドの薬物動態又は薬力学を改善することが可能になったり、オリゴヌクレオチドの安定性又は結合親和性を向上させることが可能になる。末端の修飾基は、当該分野で公知の修飾基から目的等に応じて適宜選択して利用することができる。末端の修飾基としては例えば、ヒドロキシ基の保護基、レポーター分子に由来する基、コレステロールに由来する基、リン脂質に由来する基、色素分子に由来する基、蛍光分子に由来する基等が挙げられる。
ここで「由来する基」とは、対象となる分子から水素原子、ヒドロキシ基等を取り除いて形成される基を意味する。

【0118】

また、本実施形態の人工オリゴヌクレオチドの３’末端のヌクレオチドの３’位は、ヒドロキシ基、ヒドロキシ基保護基で置換されたヒドロキシ基又はリン酸エステル部分を含むヒドロキシ基であり、５’末端のヌクレオチドの５’位は、ヒドロキシ基、ヒドロキシ基保護基で置換されたヒドロキシ基又はリン酸エステル部分を含むヒドロキシ基である。「リン酸エステル部分」は、リン酸エステル構造及び修飾リン酸エステル構造を含む末端リン酸基を意味する。リン酸エステル部分は、いずれの末端に位置してもよいが、５’末端であることが好ましい。

【0119】

リン酸エステル部分は、具体的には、式：−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）_２で示される基又はその修飾基である。その修飾基においては、リン酸エステル部分の−Ｏ−及び＝Ｏの１以上が硫黄原子又は−Ｎ（Ｒ^Ｘ）−で置換されていてもよく、ＯＨの１以上が、水素原子、−ＳＨ、−Ｎ（Ｒ^Ｘ）_２、又はアルキル基で置換されていてもよい。ここでＲ^Ｘは、水素原子又はアミノ基保護基である。５’及び／又は３’末端基は、それぞれ独立して置換又は無置換の１から３のリン酸エステル部分を含んでいてもよい。

【0120】

人工オリゴヌクレオチドの３’末端のヌクレオチドの３’位及び５’末端のヌクレオチドの５’位は、それぞれ独立して好ましくは、ヒドロキシ基又はリン酸エステル部分を含むヒドロキシ基であり、より好ましくは、ヒドロキシ基、式：−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）_２で示される基、シアノエトキシ（ジイソプロピルアミノ）ホスフィノ基又はヒドロキシホスフィニル基であり、特に好ましくは、ヒドロキシ基である。

【0121】

本実施形態の人工オリゴヌクレオチドは、式（II）で示されるヌクレオシド構造を少なくとも１つ含有していれば、他の部分が天然のヌクレオシド構造であっても、塩基部分、糖部分及びリン酸エステル部分の少なくとも１つが修飾されたヌクレオシド構造であってもよい。
例えば、人工オリゴヌクレオチドのリン酸エステル部分は、天然の核酸が有するホスホジエステル結合が挙げられるが、それに限らず、修飾されたホスホジエステル結合でもよい。ホスホジエステル結合の修飾の例としては、例えば、ホスホロチオエート化、メチルホスホネート化、キラル−メチルホスホネート化、ホスホロジチオエート化、ホスホロアミデート化、ボラノホスフェート化等が挙げられる。

【0122】

人工オリゴヌクレオチド中の式（II）で示されるヌクレオシド構造以外の塩基部分は、前記「Ｂｘ」について定義した任意の核酸塩基であってよい。
人工オリゴヌクレオチド中の式（II）で示されるヌクレオシド構造以外の糖部分を有するヌクレオシドとしては、天然のリボース若しくはデオキシリボース、修飾されたリボース若しくはデオキシリボース等が挙げられる。公知の修飾としては、例えば、特開平１０−３０４８８９号公報国際公開第２００５／０２１５７０号、特開平１０−１９５０９８号公報、特表２００２−５２１３１０号公報、国際公開第２００７／１４３３１５号、国際公開第２００８／０４３７５３号、国際公開第２００８／０２９６１９号、国際公開第２００８／０４９０８５号、国際公開第２０１１／０５２４３６号において、開示されているヌクレオチド等が挙げられる。前記文献には下記のヌクレオチドが開示されている。：ヘキシトールヌクレオチド（ＨＮＡ）、シクロヘキセンヌクレオチド（ＣｅＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、トレオヌクレオチド（ＴＮＡ）、モルホリノ核酸、トリシクロ−ＤＮＡ（ｔｃＤＮＡ）、２’−Ｏ−メチル化ヌクレオシド、２’−ＭＯＥ（２’−Ｏ−メトキシエチル）化ヌクレオチド、２’−ＡＰ（２’−Ｏ−アミノプロピル）化ヌクレオチド、２’−フルオロ化ヌクレオチド、２’−Ｆ−アラビノヌクレオチド（２’−Ｆ−ＡＮＡ）、４’−ＣＨ_２−Ｏ−２’ 化ヌクレオチド（ＬＮＡ、Ｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）、架橋化ヌクレオチド（ＢＮＡ（Ｂｒｉｄｇｅｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ））、２’−Ｏ−メチルカルバモイルエチル化ヌクレオチド（ＭＣＥ）。

【0123】

人工オリゴヌクレオチド中の式（II）で示されるヌクレオシド構造以外のヌクレオシドの糖部分は、好ましくは、リボース、デオキシリボース、２’−Ｏ−メチル化リボース、２’−Ｏ−メチルカルバモイルエチル化リボース、２’−Ｏ−メトキシエチル化リボース及び４’−ＣＨ_２−Ｏ−２’化ヌクレオチドが有する糖部分からなる群から独立して選択され、より好ましくは、デオキシリボース、２’−Ｏ−メチル化リボース、２’−Ｏ−メチルカルバモイルエチル化リボース及び２’−Ｏ−メトキシエチル化リボースから独立して選択され、さらに好ましくは、デオキシリボース及び２’−Ｏ−メチル化リボースから独立して選択される。

【0124】

また、人工オリゴヌクレオチドに含有されるヌクレオシド間の結合は、当該分野で公知の結合であれば、リン原子を有していない結合であってもよい。ヌクレオシド間の結合は、例えば、アルカンジイル基、非芳香族炭素環に由来する２価基、ハロアルカンジイル基、ハロゲンで置換された非芳香族炭素環に由来する２価基等を含むが、これらに限定されない。ヌクレオシド間の結合は例えば、シロキサンに由来する２価基、スルフィド基、スルホキシド基、スルホン基、アセチル基に由来する２価基、アルケニル基に由来する２価基、スルファマートに由来する２価基、メチレンイミノ基、メチレンヒドラジノ基、スルホナートに由来する２価基、スルホンアミド基、アミド基を含む。

【0125】

ここで、アルカンジイル基は、炭素数が１から３０の直鎖又は分枝状の飽和の炭化水素から、任意の位置の水素原子を２個取り除いた２価の置換基を意味する。アルカンジイル基としては、例えば、メチレン基、エチレン基（エタンジイル基）、プロパン−１，３−ジイル基、プロパン−２，２−ジイル基、２，２−ジメチル−プロパン−１，３−ジイル基、ヘキサン−１，６−ジイル基、３−メチルブタン−１，２−ジイル基などが挙げられる。
ハロアルカンジイル基は、前記アルカンジイル基の任意の位置の水素原子が、１以上の前記ハロゲン原子で置換されてなる基を意味する。
非芳香族炭素環とは、環を構成する原子が全て炭素原子であり、環を構成する原子数が３から１０である芳香族の単環、縮合環、スピロ環又は橋掛け環であり、環中に二重結合又は３重結合を含んでいてもよい環を意味する。非芳香族炭素環としては、例えば、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘプタン、シクロオクタン、シクロヘキセン、シクロヘキサジエン、ビシクロ［４．４．０］デカン、アダマンタン等が挙げられる。

【0126】

人工オリゴヌクレオチドに含有されるヌクレオシド間の結合は、好ましくは、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合、メチルホスホネート結合、メチルチオホスホネート結合、ホスホロジチオエート結合、ホスホロアミデート結合、ホスホロジアミデート結合、ホスホロアミドチオエート結合及びボラノホスフェート結合からなる群からそれぞれ独立して選ばれ、特に好ましくは、ホスホジエステル結合及びホスホロチオエート結合からなる群から独立して選ばれる。

【0127】

本実施形態の人工オリゴヌクレオチドには異性体が存在する場合がある。その場合に本実施形態は特定の異性体に限定されるものではなく、全ての可能な異性体（例えば、ケト−エノール異性体、イミン−エナミン異性体、ジアステレオ異性体、光学異性体、回転異性体等）、ラセミ体及びそれらの混合物を含む。

【0128】

人工オリゴヌクレオチドの１以上の水素、炭素及び／又は他の原子は、それぞれ水素、炭素及び／又は他の原子の同位体で置換され得る。同位体の例、調製方法等は既述の人工ヌクレオシド及び人工ヌクレオチドと同様である。
本実施形態の人工オリゴヌクレオチドは、その製薬上許容される塩を含有する。該塩の具体例、調製方法等は既述の人工ヌクレオシド及び人工ヌクレオチドにおける塩と同様である。
人工オリゴヌクレオチド又はその製薬上許容される塩は、溶媒和物（例えば、水和物等）及び／又は結晶多形を形成する場合があり、本発明はそのような各種の溶媒和物及び結晶多形も包含する。溶媒和物の具体例は既述の人工ヌクレオシド及び人工ヌクレオチドと同様である。

【0129】

人工オリゴヌクレオチド又はその製薬上許容される塩は、プロドラッグを形成する場合があり、本発明はそのような各種のプロドラッグも包含する。プロドラッグは、化学的又は代謝的に分解できる基を有する人工オリゴヌクレオチドの誘導体であり、加溶媒分解により又は生理学的条件下でインビボにおいて薬学的に活性な人工オリゴヌクレオチドとなる化合物である。プロドラッグは、生体内における生理条件下で酵素的に酸化、還元、加水分解等を受けて人工オリゴヌクレオチドに変換される化合物、胃酸等により加水分解されて人工オリゴヌクレオチドに変換される化合物等を包含する。適当なプロドラッグ誘導体を選択する方法及び製造する方法は、例えばＤｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ， Ａｍｓｔｅｒｄａｍ １９８５に記載されている。プロドラッグは、それ自身が活性を有する場合がある。

【0130】

人工オリゴヌクレオチド又はその製薬上許容される塩がヒドロキシ基を有する場合、例えば、ヒドロキシ基を有する化合物と適当なアシルハライド、適当な酸無水物、適当なスルホニルクロライド、適当なスルホニルアンハイドライド及びミックスドアンハイドライドとを反応させることにより或いは縮合剤を用いて反応させることにより製造されるアシルオキシ誘導体やスルホニルオキシ誘導体のようなプロドラッグが例示される。そのような誘導体の部分構造としては、例えば、ＣＨ_３ＣＯＯ−、Ｃ_２Ｈ_５ＣＯＯ−、ｔｅｒｔ−ＢｕＣＯＯ−、Ｃ_１５Ｈ_３１ＣＯＯ−、ＰｈＣＯＯ−、（ｍ−ＮａＯＯＣＰｈ）ＣＯＯ−、ＮａＯＯＣＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯ−、ＣＨ_３ＣＨ（ＮＨ_２）ＣＯＯ−、ＣＨ_３Ｎ（ＣＨ_３）ＣＯＯ−、ＣＨ_３ＳＯ_３−、ＣＨ_３ＣＨ_２ＳＯ_３−、ＣＦ_３ＳＯ_３−、ＣＨ_２ＦＳＯ_３−、ＣＦ_３ＣＨ_２ＳＯ_３−、ｐ−ＣＨ_３Ｏ−ＰｈＳＯ_３−、ＰｈＳＯ_３−、ｐ−ＣＨ_３ＰｈＳＯ_３−が挙げられる。

【0131】

人工オリゴヌクレオチドは、式（Ｉ）で示される化合物を用いて、常法によって合成することができる。例えば、市販の核酸自動合成装置（例えば、ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製、（株）ジーンデザイン社製等）によって容易に合成することができる。合成法はホスホロアミダイトを用いた固相合成法、ハイドロジェンホスホネートを用いた固相合成法等がある。例えば、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ ２２，１８５９−１８６２ （１９８１）、国際公開第２０１１／０５２４３６号等に開示されている。

【0132】

式（II）で示されるヌクレオシド構造中のＢｘは、Ｂｘが置換基を有する場合、置換基が保護基で保護されていないことが好ましい。Ｂｘとしては、例えば、以下で示される基が挙げられる。

【0133】

【化12】

【0134】

よって、式（Ｉ）で示される化合物中のＢｘが、保護基で保護された置換基を有する場合、オリゴヌクレオチド合成の際に、脱保護を行うことが好ましい。

【0135】

人工オリゴヌクレオチドは、一本鎖ＲＮＡに対する優れた結合親和性とヌクレアーゼ耐性とを示す。従って、人工オリゴヌクレオチドは体内での持続性が非常によいと考えられる。よって、本実施形態の式（Ｉ）で示される化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチド等の核酸医薬品を合成するための材料として非常に有用である。本実施形態の人工オリゴヌクレオチドを利用した核酸医薬品は、無修飾、すなわち、天然の核酸由来の核酸医薬品と比較して、標的分子への親和性が高く、生体内で分解されにくくなり、より安定して効果を発揮する。人工オリゴヌクレオチドは標的遺伝子に応じた発現抑制配列を有するように作製されることで、例えば標的遺伝子の発現を抑制することができる。

【0136】

人工オリゴヌクレオチドを利用した核酸医薬品が治療、予防、改善できる疾患は、特に制限されず、例えば、代謝性疾患、循環器疾患、腫瘍、感染症、眼疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患、遺伝性希少疾患等、遺伝子の発現が原因となる疾患等が挙げられる。より具体的には、コレステロール血症、高トリグリセリド血症、脊髄性筋委縮症、筋ジストロフィー（デュシェンヌ型筋ジストロフィー、筋強直性ジストロフィー、先天性筋ジストロフィー（福山型先天性筋ジストロフィー、ウールリッヒ型先天性筋ジストロフィー、メロシン欠損型先天性筋ジストロフィー、インテグリン欠損症、ウォーカーワールブルグ症候群等）、ベッカー型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、三好型筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー等）、ハンチントン病、アルツハイマー症、トランスサイレイチン型アミロイドーシス、家族性アミロイド性心筋症、多発性硬化症、クローン病、炎症性大腸疾患、先端巨大症、２型糖尿病、慢性腎症、ＲＳウイルス感染症、エボラ出血熱、マールブルグ熱、ＨＩＶ、インフルエンザ、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、肝硬変、慢性心不全、心筋線維化、心房細動、前立腺がん、メラノーマ、乳がん、膵臓癌、大腸癌、腎細胞癌、胆管癌、子宮頸癌、肝癌、肺癌、白血病、非ホジキンリンパ腫、アトピー性皮膚炎、緑内障、加齢性黄斑変性症等が挙げられる。前記疾患の種類に応じて、その疾患の原因となる遺伝子を前記標的遺伝子に設定し、さらに、前記標的遺伝子の配列に応じて、前記発現抑制配列を適宜設定することができる。人工オリゴヌクレオチドを利用した核酸医薬品は、前記疾患の中でも特に、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、筋強直性ジストロフィー及び福山型先天性筋ジストロフィーに用いられる。

【0137】

ヒトなどの霊長類に加えて、様々な他の哺乳類の疾患を、人工オリゴヌクレオチドを利用した核酸医薬品により治療、予防、改善することができる。例えば、それだけに限らないが、齧歯類（例えば、マウスなど）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、又はネコなどを含めた哺乳類の種の疾患を治療することができる。また、人工オリゴヌクレオチドを利用した核酸医薬品は、鳥類（例えば、ニワトリ）などの他の種においても適用することができる。

【0138】

人工オリゴヌクレオチドを利用した核酸医薬品は、局所的あるいは全身的な治療、予防、改善のいずれかが望まれるか、又は治療、予防、改善すべき領域に応じて、様々な方法により投与することができる。投与方法としては、例えば、局所的（点眼、膣内、直腸内、鼻腔内、経皮を含む）、経口的、又は、非経口的であってもよい。非経口的投与としては、静脈内注射もしくは点滴、皮下、腹腔内もしくは筋肉内注入、吸引もしくは吸入による肺投与、硬膜下腔内投与、脳室内投与等が挙げられる。

【0139】

人工オリゴヌクレオチドを利用した核酸医薬品を局所投与する場合、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、滴下剤、坐剤、噴霧剤、液剤、散剤等の製剤を用いることができる。
経口投与用組成物としては、散剤、顆粒剤、水もしくは非水性媒体に溶解させた懸濁液又は溶液、カプセル、粉末剤、錠剤等が挙げられる。
非経口、硬膜下腔、又は、脳室内投与用組成物としては、バッファー、希釈剤及びその他の適当な添加剤を含む無菌水溶液等が挙げられる。

【0140】

人工オリゴヌクレオチドを利用した核酸医薬品は、核酸の有効量にその剤型に適した賦形剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤等の各種医薬用添加剤を必要に応じて混合して得ることができる。注射剤の場合には適当な担体と共に滅菌処理を行なって製剤とすればよい。

【0141】

賦形剤としては乳糖、白糖、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、結晶セルロース等が挙げられる。結合剤としてはメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチン、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。崩壊剤としてはカルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラウリル硫酸ナトリウム等が挙げられる。滑沢剤としてはタルク、ステアリン酸マグネシウム、マクロゴール等が挙げられる。坐剤の基剤としてはカカオ脂、マクロゴール、メチルセルロース等を用いることができる。また、液剤又は、乳濁性若しくは懸濁性の注射剤として調製する場合には通常使用されている溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、安定化剤、保存剤、等張剤等を適宜添加してもよい。経口投与の場合には嬌味剤、芳香剤等を加えてもよい。

【0142】

投与は、治療される病態の重度と反応度に依存し、治療コースは、数日から数ヶ月、あるいは、治癒が実現されるまで、又は、病状の減退が達成されるまで持続する。最適投与スケジュールは、生体における薬剤蓄積の測定から計算が可能である。当該分野の当業者であれば、最適用量、投与法、及び、繰り返し頻度を定めることができる。最適用量は、個々の核酸医薬品の相対的効力に応じて変動するが、一般に、インビトロ及びインビボの動物実験におけるＩＣ_５０又はＥＣ_５０に基づいて計算することが可能である。例えば、核酸の分子量（核酸配列及び化学構造から導かれる）と、例えば、ＩＣ_５０のような効果的用量（実験的に導かれる）が与えられたならば、ｍｇ／ｋｇで表される用量が通例に従って計算される。
さらに、本発明の人工オリゴヌクレオチドは、前記標的遺伝子の発現が原因となる疾患等を改善又は予防するために、改善又は予防に有効な用量レベルで投与することができる。

【0143】

本実施形態に係る人工オリゴヌクレオチド等は、以下に示す方法によって製造することができるが、下記製造方法は一般的な製造方法の一例を示すものであり、本実施形態に係る人工オリゴヌクレオチド等の製造方法を限定するものではない。

【0144】

【化13】

【0145】

式中、Ｐ^１はヒドロキシ基保護基を表し、Ｚ^２はリン含有基を表し、Ｑは水素原子又はＣ１−Ｃ６アルキル基を表し、その他の記号は前記定義に同じである。

【0146】

工程Ｉの出発物質である化合物Ａは、例えば、特許第５１９４２５６号又はジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー、第７６巻、３０４２ページ（２０１１年）オーガニック・アンド・バイオモレキュラー・ケミストリー、第１２巻、６４５７ページ（２０１４年）等に記載の方法に準じて合成できる。具体的に、多様なＲ^１、Ｒ^２、Ｂｘを有する化合物Ａは、以下に記載の化合物Ａ−１から、当業者に公知の保護・脱保護反応（例えば、前記プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス第４版に記載されている反応）、酸化反応、還元反応（酸化反応、還元反応は、例えば、コンプリヘンシブ・オーガニック・トランスフォーメーションズ第２版（Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ， Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ）、ラロック（Ｒ．Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ）著、ワイリー−ブイシーエイチ（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ）（１９９９年）等を参照できる）を組み合わせて用い、合成することができる。

【0147】

【化14】

【0148】

式中、Ｐ^１及びＢｘは前記定義に同じである。
例えば、Ｒ^１及びＲ^２の少なくとも一方がアルキル基である化合物Ａを合成するためには、まず、ヒドロキシ基の保護・脱保護反応により３’位のヒドロキシ基が保護され５’位のヒドロキシ基が脱保護された化合物（化合物Ａ−２）を得る。次に、化合物Ａ−２の５’位のヒドロキシ基を酸化し、Ｒ^１に対応するアルキル金属試薬又はグリニャール試薬などを用いて所望のＲ^１を導入できる。また必要であれば、もう一度５’位のヒドロキシ基を酸化し、Ｒ^２に対応するアルキル金属試薬又はグリニャール試薬などを用いて所望のＲ^２を導入できる。得られた化合物の３’位の保護されたヒドロキシ基を脱保護することで、Ｒ^１及びＲ^２の少なくとも一方がアルキル基である化合物Ａを合成できる。

【0149】

所望のＢｘを有する化合物Ａ−１は、所望のＢｘに対応するリボヌクレオシドを用いて、特許第５１９４２５６号又はジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー、第７６巻、３０４２ページ（２０１１年）に記載の方法等、当業者に公知な方法に準じて合成できる。化合物Ａ−１から化合物Ａを合成するまでの反応部位は、Ｂｘと空間的に離れているため、前記の化合物Ａ−１から化合物Ａを合成するまでの反応は、多様なＢｘの構造に対して適用することができる。

【0150】

また、多様なＲ^１、Ｒ^２及びＢｘを有する化合物Ａは、多様なＲ^１、Ｒ^２及びＢｘを有する以下に記載の化合物Ａ−３から、特許第５１９４２５６号又はジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー、第７６巻、３０４２ページ（２０１１年）に記載の方法に準じて合成することもできる。具体的には、化合物Ａ−３とアクリル酸エステル（例えばアクリル酸メチル等）とを、溶媒中、塩基（炭酸セシウム等）の存在下反応させて、化合物Ａを得ることができる。

【化15】

【0151】

式中、Ｐ^１及びＰ^２はそれぞれ独立してヒドロキシ基保護基を表し、その他の記号は前記定義に同じである。

【0152】

多様なＲ^１、Ｒ^２及びＢｘを有する化合物Ａ−３は、前述の化合物Ａ−１から化合物Ａを合成する方法と同様にして、化合物Ａ−４から合成できる。Ｂｘが２−チオキソ−ピリミジン−１−イル基（該２−チオキソ−ピリミジン−１−イル基は無置換であるか、又はハロゲン原子、Ｃ１−６アルキル基、アミノ基、アミノ基保護基により置換されたアミノ基、ヒドロキシ基、ヒドロキシ基保護基により置換されたヒドロキシ基、スルファニル基及びスルファニル基保護基により置換されたスルファニル基からなる群から単独に若しくは異なって選ばれる１以上の置換基で置換されているである）である化合物Ａ−４は、Ｂｘが対応する２−オキソ−ピリミジン−１−イル基である化合物から、ケミカル・コミュニケーションズ、第４８巻、 ７３１３ページ（２０１２年）に記載の方法に準じて合成できる。

【化16】

【0153】

式中、Ｐ^１、Ｐ^２及びＢｘは前記定義に同じである。

【0154】

（工程Ｉ）一級アミンとのアミド化反応
１又は複数のＲ^３、１又は複数のＲ^４、及びＹがアルキル基部分に結合した一級アルキルアミンを用いて、エステル−アミド交換反応により化合物Ｂを得ることができる。エステル−アミド交換反応としては、例えば、溶媒中、１〜１００当量の該一級アルキルアミンを反応させる方法が挙げられる。
また、当業者に公知の方法により化合物Ａを加水分解してカルボン酸誘導体とした後に、該カルボン酸誘導体と、１又は複数のＲ^３、１又は複数のＲ^４、及びＹがアルキル基部分に結合した一級アルキルアミンとの縮合反応により得ることができる。
例えば、化合物Ａをアルコール溶媒中、１〜２０当量の水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の塩基を反応させて、カルボン酸誘導体とした後、該カルボン酸誘導体を、溶媒中、塩酸１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール存在下、１〜１０当量の該一級アルキルアミンを反応させる方法が挙げられる。

【0155】

（工程ＩＩ）リン酸化反応
化合物Ｂのヒドロキシ基を、当業者に公知な反応（例えば、モノ置換−クロロ（アルコキシ）ホスフィン類又はジ置換−アルコキシホスフィン類を用いる反応）によりリン酸化することにより、化合物Ｃを得ることができる。リン酸化反応の具体的な例としては、溶媒中、２−シアノエチルジイソプロピルクロロホスホロアミダイトを反応させる方法、及び、溶媒中、トリス−（１，２，４−トリアゾリル）ホスファイトを反応させる方法等が挙げられる。
リン酸化反応の反応部位は、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｙ及びＢｘと空間的に離れたヒドロキシ基であるため、多様なＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｙ及びＢｘの構造に対して、上記のリン酸化反応は適用可能である。

【0156】

なお化合物Ｂは、工程Ｉとは異なる方法で得られたものであってもよい。化合物Ｂは、公知のリボヌクレオシド及びその誘導体（例えば、塩基部のアミノ基がアミノ保護基により置換され、及び／又は、糖部のヒドロキシ基の一部がヒドロキシ保護基により置換された誘導体等）を原料とし、当業者に公知な方法に準じて合成できる。そのような工程Ｉの別法の具体例は、後述の実施例４−２から４−６である。

【0157】

人工オリゴヌクレオチドは、化合物Ｃ及び所望のヌクレオチド配列のオリゴヌクレオチド類縁体を製造するのに必要な市販のホスホロアミダイト試薬等を使用して、核酸自動合成装置（例えば、ｎＳ−８II（ジーンデザイン社製））により合成することができる。

【実施例】

【0158】

次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。なお、実施例中、ＮＭＲは核磁気共鳴スペクトルを、ＭＳは質量分析を意味する。

【0159】

^１Ｈ−ＮＭＲデータが記載されている場合には、５００ＭＨｚ（Ｖａｒｉａｎ ＡＳ５００；Ｖａｒｉａｎ社製）で測定し、テトラメチルシランあるいは測定溶媒に由来するシグナルを内部標準としたシグナルの化学シフトδ（単位：ｐｐｍ）（分裂パターン、積分値）を表す。「ｓ」はシングレット、「ｄ」はダブレット、「ｔ」はトリプレット、「ｍ」はマルチプレット、「ｂｒｓ」はブロードシングレット、「ｄｄ」はダブレットオブダブレット、「ｄｔ」はダブレットオブトリプレット、「ｄｑ」はダブレットオブカルテット、「ｄｄｄ」はダブレットオブダブレットオブダブレット、「ｄｄｔ」はダブレットオブダブレットオブトリプレット、「ＣＤＣｌ_３」は重クロロホルム、「ＣＤ_３ＯＤ」は重メタノールを、「ＤＭＳＯ−ｄ_６」は重ジメチルスルホキシドを、「Ｂｚ」はベンゾイルを意味する。
^１３Ｃ−ＮＭＲデータが記載されている場合には、１２５ＭＨｚ（Ｖａｒｉａｎ ＡＳ５００；Ｖａｒｉａｎ社製）で測定し、測定溶媒に由来するシグナルを内部標準としたシグナルの化学シフトδ（単位：ｐｐｍ）を表す。
^３１Ｐ−ＮＭＲデータが記載されている場合には２０２ＭＨｚ（Ｖａｒｉａｎ ＡＳ５００；Ｖａｒｉａｎ社製）で測定し、リン酸を内部標準としたシグナルの化学シフトδ（単位：ｐｐｍ）を表す。

【0160】

ＭＳは、特に記述がない場合は、以下の条件１で、ＥＳＩ（エレクトロスプレーイオン化）法を用いて測定した。「ＥＳＩ^＋」はＥＳＩ正イオンモード、「ＥＳＩ⁻」はＥＳＩ負イオンモードを意味する。
条件１：
装置：Ｂｒｕｋｅｒ ｍｉｃｒｏＴＯＦ II
測定溶媒：メタノール
測定モード：陽イオン又は陰イオン

【0161】

ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＡＳＳ測定を用いたＭＳの測定では、以下の条件２で測定した。
条件２：
装置：Ｂｒｕｋｅｒ ｕｌｔｒａｆｌｅＸｔｒｅｍｅ
Ｍａｔｒｉｘ：１０ ｍｇ／ｍＬクエン酸水素二アンモニウムを含む飽和３−ヒドロキシピコリン酸アセトニトリル溶液
Ｔａｒｇｅｔ ｐｌａｔｅ：ＭＴＰ ３８４ ｔａｒｇｅｔ ｐｌａｔｅ ｐｏｌｉｓｈｅｄ ｓｔｅｅｌ ＢＣ
測定モード：Linear ＋ 陽イオン
シリカゲルカラムクロマトグラフィーでの精製は、特に記述がない場合は、関東化学（株）製シリカゲルＮ６０を用いた。

【0162】

実施例１
ヌクレオシド類縁体：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（[ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ］メチル）−５−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）− イル）−４−（３−オキソ −３−（（２−（ピリジン−２−イル）エチル）アミノ）プロポキシ）テトラヒドロフラン−３−イル （２−シアノエチル）ジイソプロピルホスホロアミダイト（化合物３）の合成

【0163】

【化17】

【0164】

実施例１−１ 化合物２の合成
化合物１（オーガニック・アンド・バイオモレキュラー・ケミストリー、第１２巻、６４５７ページ（２０１４年））に記載の方法に準じて合成した）（１５０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を脱水メタノール（１．６ｍｌ）に溶解させた。その溶液に２−（２−アミノエチル)ピリジン（０．４ｍｌ）を加え、５５℃で42時間反応させた。反応後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて酢酸エチルで抽出した。その有機層を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒：ジクロロメタン−メタノール）により精製し、化合物２を得た（７３ ｍｇ、収率 ５０％）。
ＭＳ （ＥＳＩ）：［Ｍ−Ｈ］⁻ ７３５．３０２２.
^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３, ５００ ＭＨｚ）：δ１．３４ （１Ｈ, ｓ）, ２．２９−２．５６ （２Ｈ, ｍ）, ２．９０−３．０３ （２Ｈ, ｍ）, ３．３５−３．５１ （２Ｈ, ｍ）, ３.５２−３．６２ （２Ｈ, ｍ）, ３．６３−３．８５ （８Ｈ, ｍ）, ３．９０−３．９６ （１Ｈ, ｍ）, ４．０２ （１Ｈ, ｔ, Ｊ ＝ ４．７）, ４．０７−４．１５ （１Ｈ, ｍ）, ４．５０ （１Ｈ, ｔ, Ｊ ＝ ４．８）, ５．０２−５．１９ （１Ｈ, ｂｒｓ）, ６．０１ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ４．６）， ６．８１ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ８．４）， ７．１１−７．２５ （４Ｈ， ｍ）， ７．２７−７．４３ （９Ｈ， ｍ）， ７．５５−７．６６ （２Ｈ， ｍ）， ８．５４ （１Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ５．０）， １０．４８−１０．６０ （１Ｈ， ｂｒｓ）．
^１３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３, １２５ ＭＨｚ）：δ１７１．５, １６４．５, １５９．３, １５８.８, １５８．８, １５１．０, １４８．８, １４４．４, １３７．３, １３５．６, １３５.５， １３５．４， １３０．２， １２８．３， １２８．１， １２７．２， １２３．７， １２２．０， １１３．４， １１１．２， ８７．０， ８４．０， ８２．５， ７７．４， ７７．２， ７６．９， ６９．５， ６６．０， ６３．０， ５５．４， ５５．３， ３９．５， ３６．８， ３５．７， １１．９．

【0165】

実施例１−２ 化合物３の合成
化合物２ （７３ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の脱水ピリジン、脱水トルエン及び脱水ジクロロメタン溶液を共沸により脱水し、その後脱水ジクロロメタン（１ｍｌ）に溶解させた。その溶液にＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３０μｌ、０．１３ｍｍｏｌ）、２−シアノエチルジイソプロピルクロロホスホロアミダイト（３０μｌ、０．１７ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間反応させた。反応後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、ジクロロメタンで抽出した。その有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒：ジクロロメタン−メタノール）により精製し、化合物３を得た（５０ｍｇ、収率 ５４％）。
ＭＳ （ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｎａ］^＋ ９５９．４０７９.
^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３, ５００ ＭＨｚ） ：δ０．８７−０．９７ （３Ｈ, ｍ）, ０．９９−１．１３ （９Ｈ, ｍ）, １．２７−１．４２ （３Ｈ, ｍ）, ２．２１−２．３２ （１Ｈ, ｍ）, ２．３３−２．４７ （２Ｈ, ｍ）, ２．５０−２．６３ （１Ｈ, ｍ）,２．８０−２.９４ （１Ｈ, ｍ）, ３．００−３．１４ （１Ｈ, ｍ）, ３．１７−３．２９ （１Ｈ, ｍ）, ３.３２−４．０５ （１７Ｈ, ｍ）, ４．０７−４．２６ （１Ｈ, ｍ）, ４．２９−４．４３ （１Ｈ, ｍ）, ５．８１−６．０３ （１Ｈ, ｍ）, ６．６３−６．８９ （５Ｈ, ｍ）, ７．００−７．２４ （８Ｈ, ｍ）, ７．２９−７．４１ （２Ｈ, ｍ）, ７．４６−７．５６ （１Ｈ, ｍ）, ７．５６−７．６８ （１Ｈ, ｍ）, ８．４１−８．５９ （１Ｈ, ｍ）, ９．８６−１０．７８ （１Ｈ, ｍ）．
^１３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３, １２５ ＭＨｚ）：δ１７１．２, １７１．１, 164.1, １６４．１, １５９．３, １５９．３, １５８．８, １５１．０, １４９．２, １４４．３, １４４．２, １３６．８, １３６．８, １３５．４, １３５．４, １３５．３, １３５．０, １３４．９, １３０．２, １２８．４, １２８．３, １２８．１, １２７．３, １２３．５, １２１．７, １１７．９, １１７．５, １１３．４, １１１．５, ８７．７, ８７．６, ８７．１, ８７．０, ８３．７, ８３．２, ８２．６, ８２．１, ７７．４, ７７．２, ７６．９, ７０．８, ７０．７, ７０．６, ７０．５, ６７．８, ６７．３, ６２．４, ６２.２, ５８．７, ５８．５, ５７．９, ５７．７, ５５．４, ５５．４, ５５．３, ４３．４, ４３．３, ４３．３, ４３．２, ３９．６, ３９．５, ３７．４, ３７．３, ２４．８, ２４．８, ２４．７, ２４．７, ２４．６, ２０．６, ２０．５, ２０．３, ２０．２, １２.０, １１．９．
^３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３, ２０２ ＭＨｚ）：δ１５１．０, １５０．７．

【0166】

実施例２
ヌクレオシド類縁体：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（[ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ］メチル）−４−（３−（（２−（ジメチルアミノ）エチル）アミノ）−３−オキソプロポキシ）−５−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）テトラヒドロフラン−３−イル（２−シアノエチル）ジイソプロピルホスホロアミダイト（化合物５）の合成

【0167】

【化18】

【0168】

実施例２−１ 化合物４の合成
化合物１（オーガニック・アンド・バイオモレキュラー・ケミストリー、第１２巻、６４５７ページ（２０１４年））に記載の方法に準じて合成した） （６６０ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）のメタノール（６．８ｍｌ）溶液にＮ,Ｎ−ジメチルエチレンジアミン（１．７ｍｌ、１５．６ｍｍｏｌ）を加え、５５℃で２４時間撹拌した。反応後、水を加えジクロロメタンで抽出した。その有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒：ジクロロメタン−メタノール）により精製し、化合物４を得た（２８６ｍｇ、収率 ４８％）。
ＭＳ （ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｈ］^＋ ７０３．３３３１.
^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３, ５００ ＭＨｚ） ：δ１．３８ （３Ｈ, ｓ）, ２．２３ （６Ｈ, ｓ）, ２．３３ （１Ｈ, ｄ, Ｊ ＝ １６．３）, ２．３８−２．６８ （３Ｈ, ｍ）,３．２１−３．３２ （１Ｈ, ｍ）,３．３６−３．５９ （３Ｈ, ｍ）,３．７１−３．８９ （７Ｈ, ｍ）,３．９６−４．１０ （２Ｈ, ｍ）,４．１３−４．１８ （１Ｈ, ｍ）,４．５５ （１Ｈ, ｔ, Ｊ ＝ ４．６）,６．０４ （１Ｈ, ｄ, Ｊ ＝ ４．６）,６．８４ （４Ｈ, ｄ, Ｊ ＝ ８.５）, ７．２６−７．３３ （７Ｈ, ｍ）, ７．３８−７．４４ （２Ｈ, ｍ）, ７．６５ （１Ｈ, ｓ）．
^１３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３, １２５ ＭＨｚ） ：δ１７１．６, １６４．５, １５８．８, １５８．８, １５２．１, １４４．５, １３５．５, １３５．４, １３５．３, １３０．２, １３０．２, １２８．２, １２８．１, １２７．３, １１３．４, １１１．８, ８７．１, ８６.７, ８４．５, ８３．１, ６９．６, ６５．７, ６３．３, ５７．６, ５５．４, ４４．３, ３６．７, ３４．８, １１．９．

【0169】

実施例２−２ 化合物５の合成
化合物４ （９６０ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）の脱水ピリジン、脱水トルエン及び脱水ジクロロメタン溶液を共沸により脱水し、その後脱水ジクロロメタン（１３．４ｍｌ）に溶解させた。その溶液にＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（６９０μｌ、４．０ｍｍｏｌ）、２−シアノエチルジイソプロピルクロロホスホロアミダイト（７３０μｌ、３．３ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間反応させた。反応後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えジクロロメタンで抽出した。その有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒：ジクロロメタン−メタノール）により精製し、化合物５を得た（４０８ｍｇ、収率 ３３％）。
ＭＳ （ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｈ］^＋ ９０３．４４０１.
^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３, ５００ ＭＨｚ）：δ０．９５−１．０３ （３Ｈ, ｍ）, １．１１−１．２０ （９Ｈ, ｍ）, １．３３−１．４０ （３Ｈ, ｍ）, ２．１８−２．２６ （６Ｈ, ｍ）, ２．３３−２．５７ （５Ｈ, ｍ）, ２．６２−２．７０ （１Ｈ, ｍ）, ３．２４−３．３９ （３Ｈ, ｍ）, ３．４６−３．６９ （４Ｈ, ｍ）, ３．７３−３．８３ （７Ｈ, ｍ）, ３．８５−４．１５ （３Ｈ, ｍ）, ４．１７−４．３１ （１Ｈ, ｍ）, ４．４３−４．５５ （１Ｈ, ｍ）, ５．９９−６．０７ （１Ｈ, ｍ）, ６．６０−６．７４ （１Ｈ, ｍ）, ６．７６−６．９１ （４Ｈ, ｍ）, ７．２７−７．３５ （７Ｈ, ｍ）, ７．３７−７．４６ （２Ｈ, ｍ）, ７．６４−７．７３ （１Ｈ, ｍ）．
^１３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３, １２５ＭＨｚ）：δ１７１．０, １７０．９, １６４．１, １６４．１, １５８．９, １５１．０, １５０．９, １４４．４, １４４．３, １３５．４, １３５.４, １３５．４, １３５．３, １３５．３, １３０．４, １３０．３, １２８．５, １２８.４, １２８．１, １２８．１, １２７．３, １１８．０, １１７．６, １１３．４, １１１．５, １１１．３, ８８．１, ８８．１, ８７．１, ８７．０, ８３．０, ８２．９, ８２．３, ８１．６, ７０．８, ７０．７, ７０．６, ６７．８, ６７．４, ６２．３, ６１．９, ５８．７, ５８．６, ５８．１, ５８．０, ５７．８, ５５．４, ５５．４, ５５．４, ４５.１, ４５．１, ４３．５, ４３．４, ４３．３, ４３．２, ３７．２, ３７．１, ２４．８, ２４．８, ２４．７, ２４．７, ２０．６, ２０．６, ２０．４, ２０．３, １１．９, １１．９．
^３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３, ２０２ ＭＨｚ）：δ１５０．８, １５０．５．

【0170】

実施例３
ヌクレオシド類縁体：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（（ビス (４−メトキシフェニル)(フェニル) メトキシ］メチル)−５−(５−メチル−２,４−ジオキソ−３,４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）− イル)−４−（３−（（２−モルホリノエチル）アミノ）−３−オキソプロポキシ）テトラヒドロフラン−３−イル （２−シアノエチル） ジイソプロピルホスホロアミダイト（化合物７）の合成

【0171】

【化19】

【0172】

実施例３−１ 化合物６の合成
化合物１（（オーガニック・アンド・バイオモレキュラー・ケミストリー、第１２巻、６４５７ページ（２０１４年））に記載の方法に準じて合成した；２００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）のメタノール（２．２ｍｌ）溶液に、４−（２−アミノエチル）モルホリン（１．７ｍｌ、１５．６ｍｍｏｌ）を加え、５５℃で２３時間撹拌した。反応後、水を加え、ジクロロメタンで抽出した。その有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（富士シシリア社製アミンシリカＮＨ、展開溶媒：ジクロロメタン−メタノール）により精製し、化合物６を得た（１４０ｍｇ、収率 ７０％）。
ＭＳ （ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｈ］^＋ ７４５．３４３１．
^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３, ５００ ＭＨｚ）：δ１．３６ （３Ｈ, ｓ）, ２．２５−２．７０ （８Ｈ, ｍ）, ３．２６−３．５６ （４Ｈ, ｍ）, ３．６１−３．７５ （４Ｈ, ｍ）, ３.７５−３．８９ （７Ｈ, ｍ）, ４．０１−４．１２ （２Ｈ, ｍ）, ４．１２−４．２３ （１Ｈ, ｍ）, ４，５８ （１Ｈ, ｔ, Ｊ ＝ ４．４）, ４．６５−５．１５ （１Ｈ, ｂｒｓ）, ６.０７ （１Ｈ, ｄ, Ｊ ＝ ５．１）, ６．７１ （１Ｈ, ｔ, Ｊ ＝５．３）, ６．８４ （５Ｈ, ｄ, Ｊ ＝８．９）, ７．２６−７．３３ （６Ｈ, ｍ）, ７．３５−７．４４（２Ｈ, ｍ）, ７．６６ （１Ｈ, ｓ）, ９．０５−９．５７ （１Ｈ, ｂｒｓ）．
^１３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３, １２５ ＭＨｚ）：δ１７１．４, １６３．９, １５８．９, １５８．８, １５１．４, １４４．４, １３５．５, １３５．４, １３５．３, １３０．２, １３０．２, １２８．２, １２８．１, １２７．３, １１３．４, １１１．７, ８７．２, ８６．５, ８６．５, ８４．４, ８２．７, ７７．４, ７７．２, ７６．９, ６９．５, ６６．５, ６５．７, ６３．３, ５７．６, ５５．４, ５５．４, ５３．４, ３５．４, ３５．２, １１．８．

【0173】

実施例３−２ 化合物７の合成
化合物６ （２７０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）の脱水ピリジン、脱水トルエン及び脱水ジクロロメタンの溶液を共沸により脱水し、その後脱水ジクロロメタン（３．６ｍｌ）に溶解させた。その溶液にＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１９０μｌ、１．１ｍｍｏｌ）、２−シアノエチルジイソプロピルクロロホスホロアミダイト（１９０μｌ、０．８５ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間反応させた。反応後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えジクロロメタンで抽出した。その有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒：ジクロロメタン−メタノール）により精製し、化合物７を得た（２００ｍｇ、収率 ５８％）。
ＭＳ （ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｈ］^＋ ９４５．４４９６.
^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３, ５００ ＭＨｚ）：δ０．９０−１．０５ （２Ｈ, ｍ）,１．０６−１．２４ （１０Ｈ, ｍ）,１．２７−１．４２ （３Ｈ, ｍ）, ２．１７−２．７７ （１１Ｈ, ｍ), ３．２５−３．６０ （６Ｈ, ｍ）, ３．６０−４．００ （１２Ｈ, ｍ）, ４．００−４．１６ （２Ｈ, ｍ）, ４．１６−４．３３ （１Ｈ, ｍ）, ４．４２−４．５９ （１Ｈ, ｍ）, ５.９５−６．１２ （１Ｈ, ｍ）, ６．６２−６．９２ （５Ｈ, ｍ）, ７．２７−７．３６ （６Ｈ, ｍ）, ７．３７−７．４９ （２Ｈ, ｍ）, ７．６５−７．８６ （１Ｈ, ｍ）, ９．４１−９.９１ （１Ｈ, ｂｒｓ）．
^１３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３, １２５ ＭＨｚ）：δ１７１．０, １６３．９, １５８．９, １５０．７, １５０．６, １４４．３, １４４．３, １３５．４, １３５．３, １３５．２, １３０．４, １３０．３, １２８．４, １２８．４, １２８．１, １２８．１, １２７．４, １２７.３, １１７．９, １１７．６, １１３．５, １１３．２, １１１．３, １１１．３, ８８．７, ８８．６, ８８．５, ８８．４, ８７．１, ８７．０, ８２．９, ８２．７, ８２．４, ８２．２, ８１．７, ８１．５, ７７．４, ７７．２, ７６．９, ７０．６, ７０．４, ６８.０, ６７．７, ６７．０, ６１．８, ５７．５, ５７．５, ５５．５, ５５．５, ５５．３, ５５．３, ５３．５, ４３．４, ４３．３, ３７．２, ３６．０, ２４．８, ２４．７, ２０．６, ２０．６, ２０．４, ２０．３, １１．９, １１．９．
^３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３, ２０２ ＭＨｚ）：δ１５０．９, １５０．２．

【0174】

実施例４
ヌクレオシド類縁体：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−４−（３−（（２−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−１−イル）エチル）アミノ）−３−オキソプロポキシ）−２−（（ビス（４−メトキシフェニル）（フェニル）メトキシ］メチル）−５−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−テトラヒドロフラン−３−イル（２−シアノエチル）ジイソプロピルホスホロアミダイト（化合物９）の合成

【0175】

【化20】

【0176】

実施例４−１ 化合物９の合成
化合物１（オーガニック・アンド・バイオモレキュラー・ケミストリー、第１２巻、６４５７ページ（２０１４年）に記載の方法に準じて合成した） （１．１ｇ、１．４ ｍｍｏｌ）のメタノール（１４ｍｌ）溶液に、Ｎ−（２−アミノエチル）ベンゾイミゾール（８．３ｇ、５０．４ｍｍｏｌ）を加え、５５℃で２２時間撹拌した。反応後、水を加え、ジクロロメタンで抽出した。その有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒：ジクロロメタン−メタノール）により精製し、化合物８を得た（１７０ｍｇ，収率 １６％）。
得られた化合物８ （１７０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を脱水ピリジン、脱水トルエン及び脱水ジクロロメタン溶液を共沸により脱水し、その後脱水ジクロロメタン（２．２ｍｌ）に溶解させた。その溶液にＮ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１１３μｌ、０．６６ ｍｍｏｌ）、２−シアノエチルジイソプロピルクロロホスホロアミダイト（１１８μｌ、０．５３ｍｍｏｌ）を加え、室温で０．５時間反応させた。反応後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えジクロロメタンで抽出した。その有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（富士シリシア社製アミンシリカＮＨ、展開溶媒：ジクロロメタン−メタノール）により精製し、化合物９を得た（１４３ｍｇ、収率 ６７％）。
ＭＳ （ＥＳＩ）：［Ｍ＋Ｈ］^＋ ９７６．４３７２.
^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３, ５００ ＭＨｚ）：δ０．９４−１．１６ （３Ｈ, ｍ）,１．０８−１．１６ （９Ｈ, ｍ）,１．２９−１．３５ （３Ｈ, ｍ）, ２．２７−２．６１ （４Ｈ, ｍ), ３．２４−３．２９ （１Ｈ, ｍ）, ３．３８−３．８５ （１６Ｈ, ｍ）, ３．９２−４．４８ （７Ｈ, ｍ）, ５．６６−５．７０ （１Ｈ, ｍ）, ６．８０−６．９６ （４Ｈ, ｍ）, ６.９６−７．０６ （１Ｈ, ｍ）, ７．２３−７．４８ （２２Ｈ, ｍ）, ７．６４−７．７０ （１Ｈ, ｍ）, ７．７５−７．８１ （１Ｈ, ｍ）, ７．９１−７．９５ （１Ｈ, ｍ）, ８．３４−８.４３ （１Ｈ, ｍ）．
^１３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３, １２５ ＭＨｚ）：δ１７２．０，１７１．８，１６４．０，１６３．９，１５８．９，１５８．８，１５０．９，１５０．７，１４４．４，１４４．２，１４３．８，１４３．５，１３５．４，１３５．３，１３５．０，１３４．９，１３０．５，１３０．３，１２８．５，１２８．３，１２８．２，１２８．０，１２３．１，１２３．０，１２２．３，１２２．２，１２０．４，１２０．２，１１８．０，１１７．９，１１７．７，１１７．６，１１３．４，１１３．２，１１１．４，１１１．３，１０９．９，１０９．８，８９．１，８９．０，８８．９，８８．８，８７．０，８６．９，８２．４，８２．２，７７．１，７０．７，７０．５，７０．３，７０．０，６７．８，６７．５，６７．２，６１．６，６１．５，６１．３，６１．２，５８．１，５８．０，５７．９，５７．８，５５．５，５５．３，４４．３，４４．１，４３．４，４３．３，４３．２，４３．１，３９．４，３９．３，３９．３，３９．２，３７．１，３６．９，２５．０，２４．５，２０．６，２０．５，２０．４，２０．２，１２．０，１１．８．
^３１Ｐ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３, ２０２ ＭＨｚ）：δ１５０．２, １５０．８．

【0177】

【化21】

【0178】

実施例４−２ 化合物１８の合成
化合物１７（ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー、第５４巻、２３２１ページ（１９８９年）に記載の方法に準じて合成した）（１．２１ｇ、２．０ｍｍｏｌ）をピリジンに溶解し減圧下濃縮、トルエンに溶解し減圧下濃縮及びジクロロメタンに溶解し減圧下濃縮する操作を３回ずつ実施した後、ｔｅｒｔ−ブチルアルコールとジクロロメタンの混合溶媒（２０ ｍｌ、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール／ジクロロメタン＝３／１（体積比））に溶解した。その溶液に炭酸セシウム（６５０ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）、アクリル酸アリル（４．８ｍｌ、４０ｍｍｏｌ）を加え、室温で５時間撹拌した。反応終了後、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣に酢酸エチルを加え、水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒：ヘキサン−酢酸エチル）により精製し、化合物１８を得た（１．１ｇ、収率 ７５％）。
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３, ５００ ＭＨｚ）： δ７．９３（ｄｄ，２Ｈ），７．７１（ｄ，１Ｈ），７．６８−７．６２（ｍ，１Ｈ），７．５０（ｄｄ，２Ｈ），５．８６（ｄｄｔ，１Ｈ），５．７２（ｓ，１Ｈ），５．２６（ｄｑ，１Ｈ），５．１７（ｄｑ，１Ｈ），４．５９−４．４９（ｍ，２Ｈ），４．２６（ｄ，１Ｈ），４．２２（ｄｄ，１Ｈ），４．１１（ｄｄ，１Ｈ），４．０５（ｔ，２Ｈ），３．９８（ｄｄ，１Ｈ），３．９０（ｄ，１Ｈ），２．６７−２．５４（ｍ，２Ｈ），１．９５（ｄ，３Ｈ），１．１４-０．９６（ｍ，２８Ｈ）．

【0179】

実施例４−３ 化合物１９の合成
化合物１８（６８４ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を脱水テトラヒドロフラン（１１ｍｌ）に溶解した。その溶液にテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム（０価）（１４１ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）及びモルホリン（０．９６ｍｌ、１１ ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分間撹拌した。反応終了後、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒：ヘキサン−酢酸エチル）により精製した後、ダウエックス ＨＣＲ−Ｓ 強酸性イオン交換樹脂（Ｎａ形）に通してナトリウム塩とすることで、化合物１９を得た（４５０ ｍｇ、収率 ６９％）。
１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３ , ５００ ＭＨｚ）： δ１０．７４（ｓ，１Ｈ），７．６４（ｓ，１Ｈ），５．７１（ｓ，１Ｈ），４．３０−４．１８（ｍ，３Ｈ），４．１２（ｄｄ，１Ｈ），４．０２（ｄｔ，１Ｈ），３．９７（ｄｄ，１Ｈ），３．９４（ｄ，１Ｈ），２．７４−２．６４（ｍ，１Ｈ），２．６０−２．５０（ｍ，１Ｈ），１．９１（ｓ，３Ｈ），１．１８−０．９２（ｍ，２８Ｈ）．

【0180】

実施例４−４ 化合物２０の合成
化合物１９（１９０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）をＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（２．６ｍｌ）に溶解した。その溶液にＯ−ベンゾトリアゾリル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート［ＨＢＴＵ］（１８７ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）、１−（２−アミノエチル）ベンゾイミダゾール（８３ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を加え、室温で２．５時間撹拌した。反応終了後、酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒（酢酸エチル／ヘキサン＝１／１（体積比））を加え、水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒：ヘキサン−酢酸エチル）により精製し、化合物２０を得た（１５０ｍｇ、収率 ８１％）。
ＭＳ （ＥＳＩ）：［Ｍ−Ｈ］⁻ ７１４．３４５３．
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３, ５００ ＭＨｚ）：δ９．６２（ｓ，１Ｈ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．７９−７．７０（ｍ，１Ｈ），７．４８（ｄ，１Ｈ），７．４５−７．４１（ｍ，１Ｈ），７．２９−７．２０（ｍ，２Ｈ），５．３４（ｓ，１Ｈ），４．４０（ｄｄｄ，１Ｈ），４．３３（ｄｔ，１Ｈ），４．２３−４．１４（ｍ，２Ｈ），４．０９（ｄｄ，１Ｈ），３．９１−３．７３（ｍ，４Ｈ），３．６５（ｄ，１Ｈ），３．５７（ｄｄｔ，１Ｈ），２．５５（ｄｄｄ，１Ｈ），２．４８（ｄｄｄ，１Ｈ），１．８６（ｄ，３Ｈ），１．１１−０．８６（ｍ，２８Ｈ）．

【0181】

実施例４−５ 化合物２１の合成
化合物２０（５５５ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）を脱水テトラヒドロフラン（７．８ｍｌ）に溶解した。その溶液にトリエチルアミン（１６１μｌ、１．２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン三フッ化物水素酸塩（３７０μｌ、２．３ｍｍｏｌ）を加え、室温で２．５時間撹拌した。反応後、反応混合物にトリメチルエトキシシラン（７２３μｌ、４．７ｍｍｏｌ）を加えて３０分間撹拌し、濾過後、得られた固体を減圧下乾燥し、化合物２１を得た（３３０ｍｇ, 収率 ９０％）。
ＭＳ （ＥＳＩ）：［Ｍ−Ｈ］⁻ ４７２．１８３１．
^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６, ５００ ＭＨｚ）δ１１．３４（ｓ，１Ｈ），８．１６−８．０９（ｍ，２Ｈ），７．７８（ｄ，１Ｈ），７．６４（ｄ，１Ｈ），７．５８（ｄ，１Ｈ），７．２６（ｔ，１Ｈ），７．１９（ｔ，１Ｈ），５．８３（ｄ，１Ｈ），５．２１−５．１６（ｍ，２Ｈ），４．２９（ｔ，２Ｈ），４．１７（ｑ，１Ｈ），３．９３（ｔ，１Ｈ），３．８４（ｑ，１Ｈ），３．７４−３．５２（ｍ，４Ｈ），３．４８−３．３８（ｍ，２Ｈ），２．３５−２．２４（ｍ，２Ｈ），１．７６（ｄ，３Ｈ）．

【0182】

実施例４−６ 化合物８の合成
化合物２０（３１０ｍｇ, ０．６５ｍｍｏｌ）をピリジンに溶解後減圧下濃縮する操作を３回実施した後、ピリジン（６．５ｍｌ）に溶解した。その溶液に４，４’−ジメトキシトリチルクロリド（２６６ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応終了後、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣にジクロロメタンを加え、炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒：ジクロロメタン−メタノール）により精製し、化合物８を得た（３２０ｍｇ、収率 ６３％）。
ＭＳ （ＥＳＩ）：［Ｍ−Ｈ］⁻ ７７４．３１４０．
^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３, ５００ ＭＨｚ）：δ９．５６（ｓ，１Ｈ），７．８０（ｓ，１Ｈ），７．６１−７．５８（ｍ，１Ｈ），７．５１（ｄ，１Ｈ），７．４３−７．１２（ｍ，１１Ｈ），６．８９−６．７７（ｍ，４Ｈ），５．９９（ｄ，１Ｈ），４．４６（ｔ，１Ｈ），４．３７−４．２９（ｍ，２Ｈ），４．１５−４．１０（ｍ，１Ｈ），４．０７−３．９６（ｍ，２Ｈ），３．８６（ｄｔ，１Ｈ），３．８３−３．７３（ｍ，７Ｈ），３．５９−３．４６（ｍ，２Ｈ），３．３９（ｄｄ，１Ｈ），２．６２−２．５３（ｍ，１Ｈ），２．５０−２．４２（ｍ，１Ｈ），１．３５（ｓ，３Ｈ）．

【0183】

実施例４−７ 化合物９の合成
化合物１の代わりに化合物８（３２０ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を用い、実施例４−１に記載の方法と同様に反応を行い、化合物９を得た（３２５ｍｇ、収率 ８０％）。

【0184】

実施例５ 人工オリゴヌクレオチドの合成及び精製
実施例１から４で得た化合物３、５、７及び９に由来するヌクレオシド構造を含有する人工オリゴヌクレオチド（化合物１０−１６；配列番号１から７：以下の表１に示す）を、核酸自動合成装置ｎＳ−８II（ジーンデザイン社製）を用いて、１．０μｍｏｌスケールで合成した。
アミダイトユニット（化合物３、５、７及び９）は、アセトニトリルに溶解して用いた。なお、表１において、化合物３、５、７及び９に由来するヌクレオチド構造は順にＸ₁、Ｘ_２、Ｘ_３及びＸ_４と表記した。また、表１において、「（Ｍ）」は２’−Ｏ−メチル化リボヌクレオシドを意味し、大文字のアルファベットはデオキシリボヌクレオチドを意味し、「＾」はホスホロチオエート結合を意味し、「５」は、ヌクレオチドの塩基が５−メチルシトシンであることを意味する。

【0185】

アミダイトユニット（化合物３、５、７及び９）と５’−末端のヒドロキシ基とのカップリング時間は、５分とした。５’−末端がＤＭＴｒ基により保護されかつ固相支持されたオリゴヌクレオチド類縁体を、飽和アンモニア水で処理した後、Ｓｅｐ−Ｐａｋ（Ｗａｔｅｒｓ社製）により粗精製した。これを、逆相ＨＰＬＣ（ＳＨＩＭＡＤＺＵ ＬＣ−６ＡＤ，ＳＨＩＭＡＤＺＵ ＳＰＤ−Ｍ２０Ａ、分取カラムとしてＷａｔｅｒｓＸＢｒｉｄｇｅ^ＴＭ Ｐｒｅｐ Ｃ１８ ５μｍ（１０ｍｍ×２５０ｍｍ））により精製した。
合成した人工オリゴヌクレオチド（化合物１０−１２）の純度は、イオン交換クロマトグラフィーにより確認したところ、９７％（化合物１０）、９６％（化合物１１）、９６％（化合物１２）、９４％（化合物１４）、９７％（化合物１５）、９６％（化合物１６）であった。化合物１３の純度は、ＨＰＬＣにより確認したところ、９９％であった。

【0186】

（イオン交換クロマトグラフィー分析条件）
カラム：ＤＮＡＰａｃ ＰＡ−１００ （ＤＩＯＮＥＸ,４ｘ２５０ｍｍ）
カラム温度: ５０℃
溶離液 ２５ｍＭ リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）／１Ｍ塩化ナトリウム−２５ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液 （ｐＨ６．０）＝１００／０→（４５分）→４０／６０
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ

【0187】

（ＨＰＬＣ分析条件）
溶離液：０．１Ｍのヘキサフルオロイソプロピルアルコールと８ｍＭのトリエチルアミンとを含む水溶液／メタノール＝９５／５（１分）→（１４分）→７５／２５（３．５分）
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
カラム：ＷａｔｅｒｓＸＢｒｉｄｇｅ^ＴＭ Ｃ１８ ２．５μｍ，４．６ｍｍ×７５ｍｍ
カラム温度：６０℃
検出：ＵＶ（２６０ｎｍ）

【0188】

合成した人工オリゴヌクレオチド（化合物１０から１６）の分子量は、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＡＳＳにより測定した。結果を表１に示す。

【0189】

【表1】

【0190】

参考例１ ＭＯＥオリゴヌクレオチド、ＭＣＥオリゴヌクレオチド及び２’−О−メチル化オリゴヌクレオチドの合成
実施例５と同様にして、下記の式（Ｑ_１）で表されるＭＯＥ化ヌクレオシド構造を含む人工オリゴヌクレオチド（化合物Ｃ１）、式（Ｑ_２）で表されるＭＣＥ化ヌクレオシド構造を含む人工オリゴヌクレオチド（化合物Ｃ２及びＣ３）、２’−О−メチル化リボヌクレオシド構造を含む人工オリゴヌクレオチド（化合物Ｃ４）を合成した。分子量はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＡＳＳにより測定した。結果を表２に示す。なお、表２において、式（Ｑ_１）で表されるヌクレオチド構造をＱ_１、（Ｑ_２）で表されるヌクレオチド構造をＱ_２と表記した。また、表２において、「（Ｍ）」は２’−Ｏ−メチル化リボヌクレオシドを意味し、大文字のアルファベットはデオキシリボヌクレオチドを意味し、「＾」はホスホロチオエート結合を意味し、「５」は、ヌクレオチドの塩基が５−メチルシトシンであることを意味する。

【0191】

【化22】

【0192】

【化23】

【0193】

【表2】

【0194】

実施例６ 人工オリゴヌクレオチドのヌクレアーゼ耐性の評価
実施例５で合成した人工オリゴヌクレオチド化合物１０（ＰｙＥＣＥ）、化合物１１（ＤＭＡＥＣＥ）及び化合物１２（ＭｏｒＥＣＥ）、参考例１で合成した人工オリゴヌクレオチド化合物Ｃ１（ＭＯＥ）及び化合物Ｃ２（ＭＣＥ）について、オリゴヌクレオチドを３’側から分解するエキソヌクレアーゼに対する耐性を検討した。

【0195】

７５０ｐｍｏｌの人工オリゴヌクレオチドを含むバッファー溶液（８０μＬ）を３７℃で５分間保持した後、０．２μｇのホスホジエステラーゼＩ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社）を含むバッファー溶液（２０μＬ）を混合した。人工オリゴヌクレオチドの残存量を逆相ＨＰＬＣによって経時的に測定した。尚、各時間においては、サンプルを直ちに９０℃のオイルバスに移し、５分間保持することで酵素を不活性化した後、人工オリゴヌクレオチドの残存量を測定した。
用いたバッファーの組成（終濃度）は、Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩、ｐＨ８．０）５０ｍＭ、ＭｇＣｌ_２ １０ｍＭであり、測定前に十分に脱気した。ＨＰＬＣによる定量条件は以下に示すとおりである。

【0196】

（ＨＰＬＣ分析条件）
溶離液：０．１Ｍのヘキサフルオロイソプロピルアルコールと８ｍＭのトリエチルアミンとを含む水溶液／メタノール＝９５／５（１分）→（１４分）→７５／２５（３．５分）
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
カラム：ＷａｔｅｒｓＸＢｒｉｄｇｅ^ＴＭ Ｃ１８ ２．５μｍ，４．６ｍｍ×７５ｍｍ
カラム温度：６０℃
検出：ＵＶ（２６０ｎｍ）

【0197】

結果を図１に示す。図１中、「Ｆｕｌｌ Ｌｅｎｇｔｈ Ｏｌｉｇｏ（％）」は、０時点における未分解オリゴヌクレオチド（１９ｍｅｒ）に対する、測定時点における未分解オリゴヌクレオチド（１９ｍｅｒ）の残存率を示す。また、「Ｔｉｍｅ［ｍｉｎ］」は、測定時点の時間（単位は分である）を示す。
この結果、ＭＯＥオリゴヌクレオチド（ＭＯＥ）は６０分後にはすべて分解している。ＭＣＥオリゴヌクレオチド（ＭＣＥ）においても１２０分後の残存率は１０％であり、１８０分後の残存率は２％である。一方で、化合物１０（ＰｙＥＣＥ）、化合物１１（ＤＭＡＥＣＥ）及び化合物１２（ＭｏｒＥＣＥ）における１２０分後の残存率は、それぞれ３８％、２９％、５０％であり、１８０分後の残存率は、それぞれ２４％、１４％、３６％である。従って、化合物１０（ＰｙＥＣＥ）、化合物１１（ＤＭＡＥＣＥ）及び化合物１２（ＭｏｒＥＣＥ）は、公知の人工ヌクレオチドから調製される人工オリゴヌクレオチド（ＭＯＥ及びＭＣＥ）を大きく上回る酵素耐性を有することが分かった。

【0198】

実施例７ 人工オリゴヌクレオチドのヌクレアーゼ耐性の評価
実施例５で合成した人工オリゴヌクレオチド化合物１３（ＢｉｍＥＣＥ）及び参考例１で合成した人工オリゴヌクレオチド化合物Ｃ２（ＭＣＥ）について、オリゴヌクレオチドを３’側から分解するエキソヌクレアーゼに対する耐性を検討した。処理条件、分析条件は実施例６と同じである。

【0199】

結果を図２に示す。図２中、「Ｆｕｌｌ Ｌｅｎｇｔｈ Ｏｌｉｇｏ（％）」とは、０時点における未分解オリゴヌクレオチド（１９ｍｅｒ）に対する、測定時点における未分解オリゴヌクレオチド（１９ｍｅｒ）の残存率を示す。また、「Ｔｉｍｅ［ｍｉｎ］」は、測定時点の時間（単位は分である）を示す。
この結果、ＭＣＥオリゴヌクレオチド（ＭＣＥ）は１２０分後にはほぼすべて分解している。一方で、化合物１３（ＢｉｍＥＣＥ）における１２０分後の残存率は、５０％であり、１８０分後の残存率は、２４％であった。従って、ＢｉｍＥＣＥオリゴヌクレオチド（ＢｉｍＭＣＥ）は公知の人工ヌクレオチドから調製される人工オリゴヌクレオチド（ＭＣＥ）を大きく上回る酵素耐性を有することが分かった。

【0200】

実施例８ 融解温度（Ｔｍ）の測定
実施例５で合成した人工オリゴヌクレオチドである化合物１４−１６（アンチセンス鎖）とＲＮＡセンス鎖（３’−ＵＣＡＡＡＵＣＣＡＧＡＧＧＣＵＡＧＣＡＧ−５’）とをアニーリング処理した後、Ｔｍ値を測定することにより、アンチセンスのハイブリッド形成能を調べた。
コントロールとしては、ＭＣＥ化ヌクレオシド構造を含む人工オリゴヌクレオチド（化合物Ｃ３）及び２’−О−メチル化リボヌクレオシド構造を含む人工オリゴヌクレオチド（化合物Ｃ４）
を利用した。

【0201】

合成したオリゴヌクレオチドの一本鎖（センス鎖及びアンチセンス鎖）それぞれをＭｉｌｌｉＱ水（超純水製造装置Ｍｉｌｌｉ−Ｑ（登録商標）で製造された超純水）で溶解し２μＭの濃度に調製した。濃度調製したセンス鎖及びアンチセンス鎖それぞれ１９０μＬを採取し混合することにより、終濃度１μＭの溶液を３８０μＬ調製した。次に、ＭｉｌｌｉＱ水を減圧留去した。このサンプルを、１００ｍＭの塩化ナトリウムと、０．１ｍＭのエチレンジアミンテトラ酢酸とを含む１０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ７．０）１９０μｌに溶解させ、終濃度を２μＭとした。次にサーマルサイクラーを用いて加熱及び冷却を行った。まず９５℃まで上昇させそのまま５分間置いた後に、毎分１℃ずつ３０℃まで下げることによりアニーリングを行った。
次に、アニーリングしたサンプルを２６０ｎｍの吸光度が２になるように注射用水で希釈した。この吸光度が２のサンプルを１５０ｕＬ、１０ｘＰＢＳ（−）を３０μＬ、注射用水を１２０μＬ混合し、３００μＬの測定溶液を作製した。
分光光度計（Ｓｈｉｍａｄｚｕ，Ｐｈａｒｍａ Ｓｐｅｃ ＵＶ−１７００）内にサンプルを入れたセルを固定した後、サンプル溶液を９０℃まで加熱し、さらに１０分間９０℃に保った後測定を開始した。温度は５℃まで毎分０．５℃ずつ下降させ、１℃間隔で２６０ｎｍにおける紫外部吸収を測定した。その後、次は逆に５℃から毎分０．５℃ずつ上昇させて、９０℃まで０．５℃間隔で２６０ｎｍにおける紫外部吸収を測定した。測定は3回行った。表３には昇温測定時のＴｍ値の平均値と標準偏差を記した。なお、温度上昇による濃度変化を防止するため、セルは蓋付きのものを用い、セル室内には結露防止のために脱水した空気を通した。

【0202】

【表3】

【0203】

表３から明らかなように、本実施形態の人工オリゴヌクレオチドの一本鎖ＲＮＡに対する親和性は、公知の人工ヌクレオチド（ＭＣＥヌクレオチド及び２’−О−メチル化リボヌクレオシド）から調製される人工オリゴヌクレオチドと同程度であることが分かった。

【0204】

実施例９ 人工オリゴヌクレオチドの合成及び精製
実施例４で得た化合物９に由来するヌクレオシド構造を含有する人工オリゴヌクレオチド（化合物１７；配列番号１２：以下の表４に示す）を、核酸自動合成装置ｎＳ−８II（ジーンデザイン社製）を用いて、１．０μｍｏｌスケールで合成した。
アミダイトユニット（化合物９）は、アセトニトリルに溶解して用いた。なお、表４に
おける配列表記は、表１と同じである。

【0205】

アミダイトユニット（化合物９）と５’−末端のヒドロキシ基とのカップリング時間は、１５分とした。５’−末端がＤＭＴｒ基により保護されかつ固相支持されたオリゴヌクレオチド類縁体を、飽和アンモニア水で処理した後、Ｇｌｅｎ−Ｐａｋ（Ｇｌｅｎ Ｒｅｓａｒｃｈ社製）により粗精製した。これを、逆相ＨＰＬＣ（ＳＨＩＭＡＤＺＵ ＬＣ−６ＡＤ，ＳＨＩＭＡＤＺＵ ＳＰＤ−Ｍ２０Ａ、分取カラムとしてＷａｔｅｒｓＸＢｒｉｄｇｅ^ＴＭ Ｐｒｅｐ Ｃ１８ ５μｍ（１０ｍｍ×２５０ｍｍ））により精製した。
合成した人工オリゴヌクレオチド（化合物１７）の純度は、ＨＰＬＣによりにより確認したところ、９９％であった。

【0206】

（ＨＰＬＣ分析条件）
溶離液：０．１Ｍのヘキサフルオロイソプロピルアルコールと８ｍＭのトリエチルアミンとを含む水溶液／メタノール＝９５／５（１分）→（１４分）→７５／２５（３．５分）
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
カラム：ＷａｔｅｒｓＸＢｒｉｄｇｅ^ＴＭ Ｃ１８ ２．５μｍ，４．６ｍｍ×７５ｍｍ
カラム温度：６０℃
検出：ＵＶ（２６０ｎｍ）

【0207】

合成した人工オリゴヌクレオチド（化合物１７）の分子量は、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＡＳＳにより測定した。結果を表４に示す。

【0208】

【表4】

【0209】

参考例２ ＭＣＥオリゴヌクレオチドの合成
実施例９と同様にして、式（Ｑ_２）で表されるＭＣＥ化ヌクレオシド構造を含む人工オリゴヌクレオチド（化合物Ｃ５）を合成した。分子量はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＡＳＳにより測定した。結果を表５に示す。なお、表５において、（Ｑ_２）で表されるヌクレオチド構造をＱ_２と表記した。また、表５における配列表記は、表２と同じである。

【0210】

【化23】

【0211】

【表5】

【0212】

実施例１０ アンチセンス活性の評価
ヒト肝癌由来細胞株ＨｕＨ−７の細胞を３０００細胞／ウェルとなるように９６ウェルプレートに播き、５％ＣＯ_２下３７℃にて２４時間培養した。化合物１７及び化合物Ｃ５を、その最終濃度が０．１ｎＭとなるようにＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標） ＲＮＡｉＭａｘ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて各ウェルに添加した（トランスフェクション）。４時間後に培地を交換し、さらに７日後に細胞を回収し、細胞からＲＮｅａｓｙ ｍｉｎｉ ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いてＴｏｔａｌ ＲＮＡを抽出した。
Ｔｏｔａｌ ＲＮＡからＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（タカラバイオ株式会社製）を用いてｃＤＮＡを得た。得られたｃＤＮＡ及びＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＩＤ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて７５００ Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）によりリアルタイムＰＣＲを行い、ｍｉＲＮＡ−１２２の標的遺伝子であるＡｌｄｏｌａｓｅ ＡおよびＢｒａｎｃｈｅｄ ｃｈａｉｎ ｋｅｔｏａｃｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ｋｉｎａｓｅ（ＢＣＫＤＫ）のｍＲＮＡ量を定量した。リアルタイムＰＣＲでは、ハウスキーピング遺伝子のＧＡＰＤＨ（Ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ−３−Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）のｍＲＮＡ量も同時に定量した。ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ量に対するＡｌｄｏｌａｓｅ ＡのｍＲＮＡ量を、Ａｌｄｏｌａｓｅ Ａの発現レベルとして評価し、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ量に対するＢＣＫＤＫのｍＲＮＡ量を、ＢＣＫＤＫの発現レベルとして評価した。トランスフェクション操作を行わなかった細胞をコントロールとして用いた。結果を図３及び図４に示す。この際、Ａｌｄｏｌａｓｅ Ａ及びＢＣＫＤＫの発現量が高いほど、アンチセンス効果が高いことを示す。
なお、用いたプライマーは、ＴａｑＭａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）であり、Ａｓｓａｙ ＩＤは、以下のとおりであった：
ヒトＡｌｄｏｌａｓｅ Ａ定量用： Ｈｓ００６０５１０８＿ｇ１
ヒトＢＣＫＤＫ定量用： Ｈｓ００１９５３８０＿ｍ１
ヒトＧＡＰＤＨ定量用： Ｈｓ９９９９９９０５＿ｍ１

【0213】

図３及び図４から明らかなように、化合物１７は化合物Ｃ５より高いアンチセンス効果を示すことが確認された。

【産業上の利用可能性】

【0214】

本発明のヌクレオシド類縁体又はヌクレオチド類縁体から調製されるオリゴヌクレオチドは、非常に優れたヌクレアーゼ耐性を示す。従って、該オリゴヌクレオチドは体内での持続性が非常によいと考えられることから、本発明のヌクレオシド類縁体又はヌクレオチド類縁体は、アンチセンスオリゴヌクレオチド等の核酸医薬品を合成するための材料として非常に有用である。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【配列表】

[この文献には参照ファイルがあります.J-PlatPatにて入手可能です(IP Forceでは現在のところ参照ファイルは掲載していません)]