特許 6927259 吸着材、カラム、精製装置及び吸着材の製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】6927259

(24)【登録日】2021年8月10日

(45)【発行日】2021年8月25日

(54)【発明の名称】吸着材、カラム、精製装置及び吸着材の製造方法

(51)【国際特許分類】

   B01J 20/26 20060101AFI20210812BHJP

   B01J 20/281 20060101ALI20210812BHJP

   B01J 20/28 20060101ALI20210812BHJP

   B01J 20/30 20060101ALI20210812BHJP

   B01D 15/38 20060101ALI20210812BHJP

   B01J 20/285 20060101ALI20210812BHJP

   A61K 39/395 20060101ALN20210812BHJP

【ＦＩ】

   B01J20/26 H

   B01J20/26 L

   B01J20/28 Z

   B01J20/30

   B01D15/38

   B01J20/281 X

   B01J20/281 R

   B01J20/285 S

   B01J20/285 M

   B01J20/281 G

   !A61K39/395 H

   !A61K39/395 A

【請求項の数】7

【全頁数】23

(21)【出願番号】特願2019-159875(P2019-159875)

(22)【出願日】2019年9月2日

(65)【公開番号】特開2021-37459(P2021-37459A)

(43)【公開日】2021年3月11日

【審査請求日】2020年3月18日

(73)【特許権者】

【識別番号】000004455

【氏名又は名称】昭和電工マテリアルズ株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】110001807

【氏名又は名称】特許業務法人磯野国際特許商標事務所

(72)【発明者】

【氏名】山下 七重

(72)【発明者】

【氏名】丸山 優史

【審査官】 瀧 恭子

(56)【参考文献】

【文献】 特開２０１９−０５８８８５（ＪＰ，Ａ）

【文献】 特開昭６３−０７７４５７（ＪＰ，Ａ）

【文献】 国際公開第２０１８／０３７７４２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】 特表平１０−５００６１５（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】（Int.Cl.，ＤＢ名）

Ｂ０１Ｊ ２０／００−２０／３４

Ｂ０１Ｄ １５／００−１５／４２

Ａ６１Ｋ ３９／００−５１／００

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

担体と、
標的物質を吸着する吸着部位及び前記吸着部位が導入されるアミノ基を含むとともに、前記担体に固定化された刺激応答性高分子と、
を含む吸着材であり、
前記担体は、誘電率の異なるオクタノール及びエタノールに分散させた際、それぞれの溶媒に対する前記担体の分散性を示す評価値から算出される指標Ａが０以上１．０以下であり、
前記刺激応答性高分子は、分配係数ＣＬｏｇＰが−０．４６以上１．３以下であり、
前記指標Ａは、前記オクタノール及び前記エタノールのそれぞれの溶媒に前記担体を分散させた分散液をシャーレに展開し、室温で１０分静置した後、光学顕微鏡で撮像し得られた画像中の凝集体部分を黒色に、その他を白色に処理する二値化処理を行い、前記黒色で得られた凝集体部分の長さを１つの前記担体の直径で割った値をφとし、当該φの値に従って、評価値５：φ＝０．２μｍ以上８．３μｍ未満、評価値４：φ＝８．３μｍ以上１７μｍ未満、評価値３：φ＝１７μｍ以上２７μｍ未満、評価値２：φ＝２７μｍ以上４０μｍ未満、評価値１：φ＝４０μｍ以上と評価し、これを１つのサンプルにつき５箇所の前記画像から得られた値の平均値を採用したものであり、さらに、これを１つのサンプルに対して２回繰り返して求めた平均値であって、前記オクタノールに分散させたときの評価値から、前記エタノールに分散させたときの評価値を差し引いた値を指標値とするものであり、
前記担体は、合成樹脂で形成されており、
前記吸着部位は、ベンゾチアゾール−２−酢酸、４−メルカプトベンゾチアゾール−２−酢酸エチル、５−メルカプトベンゾチアゾール−２−酢酸エチル、２−メルカプトチアゾール、３−（ベンゾチアゾール−２−イルチオ）プロパン−１−スルホン酸ナトリウム、２−メルカプト−６−ニトロベンゾチアゾール、３−（２−ベンゾチアゾリルチオ）プロピオン酸、２−メルカプト−１，３，４−チアジアゾール、Ｎ−メチル−２−メルカプトイミダゾール、ピリジルチオ酢酸、２−ベンゾチアゾリルチオ酢酸のうちから選択される少なくとも１種が、前記アミノ基にアミド結合したものである
ことを特徴とする吸着材。

【請求項2】

請求項１に記載の吸着材において、
前記担体が、ポリメタクリレート、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、アクリルの群から選択される一種以上であることを特徴とする吸着材。

【請求項3】

請求項１に記載の吸着材において、
前記刺激応答性高分子が、前記吸着部位を複数個有するとともにアミノ基を複数個有することを特徴とする吸着材。

【請求項4】

請求項１に記載の吸着材において、
前記担体の平均粒子径が３μｍ以上１００μｍ以下であることを特徴とする吸着材。

【請求項5】

請求項１から請求項４のいずれか１項に記載の吸着材が充填されていることを特徴とするカラム。

【請求項6】

請求項１から請求項４のいずれか１項に記載の吸着材が充填されたカラムを備えていることを特徴とする精製装置。

【請求項7】

請求項１から請求項４のいずれか１項に記載の吸着材を製造する製造方法であり、
誘電率の異なるオクタノール及びエタノールに分散させた際、それぞれの溶媒に対する分散性を示す評価値から算出される指標Ａが０以上１．０以下である担体に、分配係数ＣＬｏｇＰが−０．４６以上１．３以下である刺激応答性高分子を固定させるものであり、
前記刺激応答性高分子は、標的物質を吸着する吸着部位及び前記吸着部位が導入されるアミノ基を含むとともに、前記担体に固定化されており、
前記指標Ａは、前記オクタノール及び前記エタノールのそれぞれの溶媒に前記担体を分散させた分散液をシャーレに展開し、室温で１０分静置した後、光学顕微鏡で撮像し得られた画像中の凝集体部分を黒色に、その他を白色に処理する二値化処理を行い、前記黒色で得られた凝集体部分の長さを１つの前記担体の直径で割った値をφとし、当該φの値に従って、評価値５：φ＝０．２μｍ以上８．３μｍ未満、評価値４：φ＝８．３μｍ以上１７μｍ未満、評価値３：φ＝１７μｍ以上２７μｍ未満、評価値２：φ＝２７μｍ以上４０μｍ未満、評価値１：φ＝４０μｍ以上と評価し、これを１つのサンプルにつき５箇所の前記画像から得られた値の平均値を採用したものであり、さらに、これを１つのサンプルに対して２回繰り返して求めた平均値であって、前記オクタノールに分散させたときの評価値から、前記エタノールに分散させたときの評価値を差し引いた値を指標値とするものであり、
前記担体は、合成樹脂で形成されており、
前記吸着部位は、ベンゾチアゾール−２−酢酸、４−メルカプトベンゾチアゾール−２−酢酸エチル、５−メルカプトベンゾチアゾール−２−酢酸エチル、２−メルカプトチアゾール、３−（ベンゾチアゾール−２−イルチオ）プロパン−１−スルホン酸ナトリウム、２−メルカプト−６−ニトロベンゾチアゾール、３−（２−ベンゾチアゾリルチオ）プロピオン酸、２−メルカプト−１，３，４−チアジアゾール、Ｎ−メチル−２−メルカプトイミダゾール、ピリジルチオ酢酸、２−ベンゾチアゾリルチオ酢酸のうちから選択される少なくとも１種が、前記アミノ基にアミド結合したものである
ことを特徴とする吸着材の製造方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、標的物質の精製に使用される吸着材、カラム、精製装置及び吸着材の製造方法に関する。

【背景技術】

【0002】

タンパク質や抗体のような生体分子を標的物質としたアフィニティ精製は、アフィニティ吸着材（以下、単に「吸着材」ということがある）への標的物質の吸着、非吸着成分の洗浄、溶離液による標的物質の吸着材からの回収を経て行われる。吸着材は、多糖類や樹脂、無機酸化物などからなる担体の表面上に、標的物質と相互作用を示す吸着部位を固定化することで構成されている。特に、抗体と特異的に吸着する低分子量の化合物（低分子化合物）を吸着部位として用いた吸着材は、プロテインＡなどのタンパク質を用いた吸着材と比較して吸着材自身が低コストであること、及び化学薬品耐性が高く強アルカリ洗浄等の工程で吸着部位の劣化を低減できることから広く注目されている。

【0003】

そのような吸着材が、例えば、特許文献１や非特許文献１〜３に記載されている。
具体的に、特許文献１には、免疫グロブリンを選択的に吸着するのに用いるシュドバイオアフィニティクロマトグラフィ吸着剤（吸着材に相当）であって、（ａ）固形支持材料、及び（ｂ）この固形支持材料の表面に固定されたリガンド（吸着部位に相当）を含んでなり、前記リガンドが所定の化学構造のメルカプト五員複素環を有する化合物であることを特徴とするシュドバイオアフィニティクロマトグラフィ吸着剤が記載されている。

【0004】

また、非特許文献１〜３には、吸着材にチオフィリック（thiophilic）なリガンドを用いたクロマトグラフィによる抗体精製などについて報告されている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【特許文献1】特表平１０−５００６１５号公報

【非特許文献】

【0006】

【非特許文献1】E. Boschetti et al., J. Biochem. Biophys. Methods, 2001, 49, pp.361-389.

【非特許文献2】A. Schwarz et al., React. Polym., 1995, 22, pp.259-266.

【非特許文献3】P. Kumplume et al., J. Chromato. A, 2004, 1022, pp.41-50.

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

しかしながら、特許文献１や非特許文献１〜３に記載されているような低分子化合物をリガンドとして用いる吸着材は、担体と低分子化合物とを繋ぐリンカー分子によって吸着材としての機能が大きく左右される。そのため、低分子化合物には、用いることのできる担体が限られているという問題がある。また、低分子化合物をリガンドとして用いる吸着材は、担体の界面性質によって大きな影響を受けるのでリガンドの配向制御が困難であり、抗体などの標的物質の吸着容量を高くするのが困難であるという問題がある。なお、本明細書において、担体の界面性質とは、親水性・疎水性などの表面性質をいう。

【0008】

本発明はこのような状況に鑑みてなされたものであり、吸着部位として低分子化合物を用いることができるとともに、従来よりも多くの種類の担体を用いることができ、かつ、標的物質の吸着容量が高い吸着材、カラム、精製装置及び吸着材の製造方法を提供することを課題とする。

【課題を解決するための手段】

【0009】

本発明者らは前記課題を解決するため鋭意研究開発したところ、１分子の高分子鎖に対する吸着部位（低分子化合物）の導入量を制御することで刺激応答性高分子全体の親水性・疎水性のバランスを制御しつつこれを所定の指標を満たす担体上へ固定化することによって標的物質の吸着容量を高くできることを見出し、本発明を完成するに至った。つまり、本発明は、刺激応答性高分子のある特定の条件範囲と、様々な界面性質を有する担体とを組み合わせることで、標的物質を含有する溶液から標的物質を極めて多く吸着することのできる吸着材を見出し、本発明を完成するに至ったものである。

【0010】

前記課題を解決した本発明に係る吸着材は、担体と、標的物質を吸着する吸着部位及び前記吸着部位が導入されるアミノ基を含むとともに、前記担体に固定化された刺激応答性高分子と、を含む吸着材であり、前記担体は、誘電率の異なるオクタノール及びエタノールに分散させた際、それぞれの溶媒に対する前記担体の分散性を示す評価値から算出される指標Ａが０以上１．０以下であり、前記刺激応答性高分子は、分配係数ＣＬｏｇＰが−０．４６以上１．３以下であり、前記指標Ａは、前記オクタノール及び前記エタノールのそれぞれの溶媒に前記担体を分散させた分散液をシャーレに展開し、室温で１０分静置した後、光学顕微鏡で撮像し得られた画像中の凝集体部分を黒色に、その他を白色に処理する二値化処理を行い、前記黒色で得られた凝集体部分の長さを１つの前記担体の直径で割った値をφとし、当該φの値に従って、評価値５：φ＝０．２μｍ以上８．３μｍ未満、評価値４：φ＝８．３μｍ以上１７μｍ未満、評価値３：φ＝１７μｍ以上２７μｍ未満、評価値２：φ＝２７μｍ以上４０μｍ未満、評価値１：φ＝４０μｍ以上と評価し、これを１つのサンプルにつき５箇所の前記画像から得られた値の平均値を採用したものであり、さらに、これを１つのサンプルに対して２回繰り返して求めた平均値であって、前記オクタノールに分散させたときの評価値から、前記エタノールに分散させたときの評価値を差し引いた値を指標値とするものであり、前記担体は、合成樹脂で形成されており、前記吸着部位は、ベンゾチアゾール−２−酢酸、４−メルカプトベンゾチアゾール−２−酢酸エチル、５−メルカプトベンゾチアゾール−２−酢酸エチル、２−メルカプトチアゾール、３−（ベンゾチアゾール−２−イルチオ）プロパン−１−スルホン酸ナトリウム、２−メルカプト−６−ニトロベンゾチアゾール、３−（２−ベンゾチアゾリルチオ）プロピオン酸、２−メルカプト−１，３，４−チアジアゾール、Ｎ−メチル−２−メルカプトイミダゾール、ピリジルチオ酢酸、２−ベンゾチアゾリルチオ酢酸のうちから選択される少なくとも１種が、前記アミノ基にアミド結合したものであることとしている。なお、刺激応答性高分子とは、吸着部位を高分子鎖に導入した構造体をいう。

【発明の効果】

【0011】

本発明によれば、吸着部位として低分子化合物を用いることができるとともに、従来よりも多くの種類の担体を用いることができ、かつ、標的物質の吸着容量が高い吸着材、カラム、精製装置及び吸着材の製造方法を提供できる。
前記した以外の課題、構成及び効果は以下の実施形態の説明により明らかにされる。

【図面の簡単な説明】

【0012】

【図1】本実施形態に係る吸着材の構成を説明する概略図である。

【図2】本実施形態に係るカラムの構成を説明する概略図である。

【図3】本実施形態に係る精製装置の構成を説明する概略図である。

【図4】実施例１〜９及び比較例１〜３に係る各吸着材における指標Ａと１０％ＤＢＣとの関係を示すグラフである。なお、横軸は指標Ａを示し、縦軸は１０％ＤＢＣ（ｍｇ／ｍＬ）を示す。なお、ＤＢＣとは、動的吸着容量をいう。同図中、実施例を「■」でプロットし、比較例を「○」でプロットしている。

【発明を実施するための形態】

【0013】

以下、適宜図面を参照して本発明に係る吸着材、カラム、精製装置及び吸着材の製造方法の一実施形態について詳細に説明する。
なお、本明細書に記載される「〜」は、その前後に記載される数値を下限値及び上限値として有する意味で使用する。本明細書に段階的に記載されている数値範囲において、一つの数値範囲で記載された下限値又は上限値は、他の段階的に記載されている下限値又は上限値に置き換えてもよい。本明細書に記載される数値範囲の下限値又は上限値は、実施例中に示されている値に置き換えてもよい。

【0014】

本明細書で説明している各要素は、各要素を構成する材料群の中から選択された材料を単独で又は複数組み合わせて使用してもよい。また、本明細書で説明している各要素や材料は、本明細書で記載した材料のみで構成されていてもよく、本発明の効果を損なわない範囲で本明細書に記載していない他の材料を有していてもよい。

【0015】

＜吸着材１＞
図１は、本実施形態に係る吸着材１の構成を説明する概略図である。
図１に示すように、吸着材１は、担体２と、標的物質Ｏを吸着する吸着部位３を含むとともに、前記担体２に固定化された刺激応答性高分子４と、を含んでいる。刺激応答性高分子４は、高分子鎖５を備えており、当該高分子鎖５に吸着部位３を複数導入するとともに、刺激応答性高分子４全体の親水性・疎水性のバランスを制御する官能基Ｒが導入されている。

【0016】

標的物質Ｏとしては、例えば、生理活性物質や工業的に有用なタンパク質などが挙げられる。生理活性物質としては、特に、抗体（抗体分子・抗体タンパク質）が挙げられる。本実施形態における抗体とは、ガンマグロブリン及び免疫グロブリンのことをいうが、特に、医薬品としてヒトに対して投与可能なもの、又は分析試薬に導入するようなヒトに対して投与しないもののいずれも含まれる。医薬品として適用できる抗体は、クラスやサブクラスに限定されない。例えば、定常領域の構造が異なるＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥの５種類が挙げられるが、各免疫グロブリンのいずれであってもよい。ヒト抗体においては、ＩｇＧ１〜ＩｇＧ４の４つのサブクラスがあり、またＩｇＡにおいてもＩｇＡ１、ＩｇＡ２と２つのサブクラスがあるが本実施形態では特に限定されない。さらに、抗体は、由来や製造方法によっても分類することができ、天然のヒト抗体や遺伝子組み換え技術により生産された組み換えヒト抗体、あるいはモノクローナル抗体やポリクローナル抗体のいずれであってもよい。特にこれらの抗体の中でも、医薬品原料として重要性が最も大きいヒトＩｇＧへの適用が有意義である。また、抗体は、ヒト化抗体、ヒトＩｇＧとのキメラなどであってもよい。なお、ヒト化抗体とは可変領域のうち、相補性決定領域がヒト以外の生物由来で、その他のフレームワーク領域をヒト由来にしたものをいう。ヒトＩｇＧとのキメラとは、可変領域はマウスなどのヒト以外の生物由来であるが、その他の定常領域をヒト由来の免疫グロブリンに置換したものをいう。なお、生理活性物質は抗体に限定されるものではなく、生物に対して生理作用や薬理作用を発現する物質単体及び化合物群であればどのようなものも含まれる。生物に対して生理作用や薬理作用を発現する物質単体及び化合物群としては、例えば、アルカロイド、サイトカイン、植物ホルモン、神経伝達物質、フェロモン、ホルモン（動物のホルモン）などのほか、成長因子、成長調節因子、成長阻害因子などが挙げられる。生物に対して生理作用や薬理作用を発現する物質単体及び化合物群の一例として、例えば、血栓溶解剤として利用される組織型プラスミノーゲン活性化因子やインスリンなどのバイオ医薬品が挙げられる。また、工業的に有用なタンパク質としては、例えば、酸化還元酵素、転移酵素、加水分解酵素、除去付加酵素、異性化酵素、合成酵素などが挙げられる。さらに、標的物質Ｏとしては、例えば、β−カロテンやアスタキサンチンなどのカロチノイド、クロロフィルやバクテリオクロロフィルなどの色素、食品又は化粧品などの着色などに使用されるフィコシアニンなどのフィコビリンタンパク質、脂肪酸などの生理活性物質が挙げられる。

【0017】

医薬品などの抗体は、例えば、原料となる抗体を細胞培養によって産生する産生工程、培養時に含まれる複数の夾雑物の中から抗体を選択的に回収し純度を高める精製工程、そしてウイルスを除去するウイルス除去工程、ウイルスを除去した抗体を含む溶液を濃縮したり、緩衝液を交換したりする濃縮・液交換工程、適宜の薬剤形態に製剤する製剤化工程などを経て製造される。前記フローは一般的な工程として知られているものであり、これに限定されない。

【0018】

前記工程の中で、本実施形態に係る吸着材１は特に精製工程で用いられる。吸着材１の役割は、溶液中に含まれている抗体と夾雑物とを分けて抗体を精製して回収することにある。精製工程の一例として、アフィニティクロマトグラフィを用いた初期精製、その後イオン交換体を用いた中期、後期精製工程などがあるが、これらに限定されるものではない。なお、以下の説明において、本実施形態に係る吸着材１を用いる精製工程（初期工程）に投入する直前の溶液を抗体含有溶液ということがある。

【0019】

吸着材１について説明を続ける。
担体２は、多孔質及び非多孔質のいずれであってもよい。担体２の態様としては、例えば、板状、ビーズ（粒子）状、不織布や織物などの繊維状、膜状、モノリス状、中空糸状などが挙げられる。また、担体２は、コアシェル構造のものであってもよい。

【0020】

担体２は、例えば、多糖類、合成樹脂、無機化合物及びそれらの複合材料を含む材料で形成されたものであってよい。多糖類は、架橋された多糖類であってもよい。多糖類又は架橋された多糖類としては、例えば、アガロース、架橋アガロース、疎水化アガロース、セルロースなどが挙げられる。合成樹脂としては、例えば、アクリル樹脂（例えば、ポリアルキルアクリレート、ポリアルキルメタクリレート、ポリグリシジルアクリレート、ポリグリシジルメタクリレートなど）、ポリスチレン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリシロキサン、ポリフッ化エチレンなどが挙げられる。無機化合物としては、例えば、シリカ、金属酸化物（例えば、アルミナ、チタニア、ジルコニア、酸化鉄など）、フェライト、ハイドロキシアパタイト、シリケートなどが挙げられる。担体２は、多糖類、架橋された多糖類、合成樹脂、シリカ又は金属酸化物を有することが好ましく、多糖類又は架橋された多糖類を有することがより好ましい。なお、担体２は、これらの材料を少なくとも担体２の表面に有していればよい。すなわち、担体２の表面が、多糖類、架橋された多糖類、合成樹脂、シリカ又は金属酸化物、好ましくは多糖類又は架橋された多糖類を有するコアシェル構造のものであってもよい。よって、担体２又は担体２の表面が、多糖類、架橋された多糖類、合成樹脂、シリカ又は金属酸化物を有するものが好ましく、多糖類又は架橋された多糖類を有するものがより好ましい。

【0021】

また、担体２の表面は、カルボキシル基、アミノ基、水酸基、エポキシ基、エステル基などの反応性基によって修飾されていてもよい。刺激応答性高分子４をより多く導入できるという観点、すなわち吸着部位３をより多く導入できるという観点から、担体２の表面はカルボキシル基によって修飾されていることが好ましい。

【0022】

担体２の平均粒子径は、３μｍ以上１００μｍ以下であることが好ましい。このようにすると、担体２の表面積が十分得られるので、動的吸着容量（ＤＢＣ）がより増大化する。なお、ＤＢＣとは、標的物質Ｏが流れている状態で、標的物質Ｏがどれだけ吸着材１に吸着されるか（吸着材１の結合容量）を表す指標をいい、単位体積当たりの吸着量（例えば、「ｍｇ／ｍＬ」）で表すことができる。

【0023】

平均粒子径は、例えば、ＪＩＳ Ｚ ８８１５に準拠した手法で測定できる。また、平均粒子径は、例えば、振動式ふるい分け装置やレーザー回折式粒度分布測定装置、光子相関法式粒度分布測定装置で測定できる。担体が、例えば、ポリスチレンの場合は振動式ふるい分け装置で測定でき、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）の場合はレーザー回折式粒度分布測定で測定でき、磁性微粒子の場合は光子相関法式粒度分布測定装置で測定できる。さらに、平均粒子径が４０μｍ〜数ｍｍであるものは振動式ふるい分け装置で測定でき、１００〜１０００μｍであるものはレーザー回折式粒度分布測定装置で測定できる。

【0024】

本実施形態における吸着部位３は、低分子化合物に由来する部位である。吸着部位３は、例えば、標的物質Ｏが抗体であって、これを精製するカラムがアフィニティカラムであるときにおけるリガンドに相当する。

【0025】

吸着部位３は、例えば、アミド結合などの任意の化学結合を介して高分子鎖５の側鎖に導入されている。吸着部位３を導入するために用いられる化合物は、高分子鎖５の官能基Ｒ（例えば、アミノ基など）と結合可能な部分を有するものであれば特に限定されない。このような化合物としては、例えば、アミド結合を形成するためのカルボキシル基、アズラクトン基、イミダゾール基、シアノエステル基、エポキシ基、アセチル基、アセトキシ基、アクリロイル基、アルコキシ基を有する化合物が挙げられる。また、このような化合物としては、例えば、カルボン酸無水物、カルボン酸ハロゲン化物、尿素結合を形成するためのイソシアネート基を有する化合物、チオ尿素結合を形成するためのイソチオシアネート基を有する化合物、スルホンアミド結合を形成するための塩化スルホニル基を有する化合物、アミドエステル結合を形成するためのオキサゾリン基を有する化合物などが挙げられる。

【0026】

吸着部位３を導入するために用いられる化合物として、具体的には、メルカプトイミダゾール、メルカプトベンゾチアゾール、メルカプトテトラゾール、メルカプトチアジアゾールなどが挙げられる。より具体的には、ベンゾチアゾール−２−酢酸、４−メルカプトベンゾチアゾール−２−酢酸エチル、５−メルカプトベンゾチアゾール−２−酢酸エチル、２−メルカプトチアゾール、３−（ベンゾチアゾール−２−イルチオ）プロパン−１−スルホン酸ナトリウム、２−メルカプト−６−ニトロベンゾチアゾール、３−（２−ベンゾチアゾリルチオ）プロピオン酸、２−メルカプト−１，３，４−チアジアゾール、Ｎ−メチル−２−メルカプトイミダゾール、ピリジルチオ酢酸（例えば、２−ピリジルチオ酢酸、４−ピリジルチオ酢酸）、２−ベンゾチアゾリルチオ酢酸などが挙げられる。

【0027】

刺激応答性高分子４における吸着部位３の導入量は、複数のアミノ基などの官能基Ｒを有する高分子鎖５中に含まれる官能基数に対して５％以上であれば十分であり、最大９５％程度導入できる。なお、吸着材１の高い抗体吸着特性の観点から、好ましくは７％以上である。単量体を重合させて高分子鎖５を形成する場合、単量体が有している吸着部位３を導入可能な官能基Ｒを把握しておけば、高分子鎖５中の官能基数も容易に把握することができる。従って、例えば、１分子の高分子鎖５が、吸着部位３を導入可能な官能基Ｒを３０個有している場合、吸着部位３の導入量は、そのうちの５％〜９５％（官能基数１．５個〜２８．５個）とすることができる。すなわち、本実施形態において、刺激応答性高分子４は、吸着部位３を複数個有するとともに官能基Ｒを複数個有していることが好ましい。このようにすると、刺激応答性高分子４全体の親水性・疎水性のバランスがより制御し易くなり、ＤＢＣをより増大化することができる。

【0028】

本実施形態において、吸着材１における吸着部位３の導入量は、^１Ｈ−ＮＭＲで１分子あたりの刺激応答性高分子４内に導入された吸着部位３の導入率を求め、その後、担体２上に固定化した刺激応答性高分子４の量を同定することによって求められる。すなわち、吸着材１における吸着部位３の導入量は、担体２上に固定化した刺激応答性高分子４について、１分子当たりの吸着部位導入率（量）と１ｍＬの担体２上に固定化された刺激応答性高分子４の量との積によって求められる。

【0029】

担体２上に固定化した刺激応答性高分子４の量の同定は次のようにして行う。まず、担体２に縮合剤と刺激応答性高分子４を溶解させた溶液を接触させ、固定化反応を行う。その後、溶媒で複数回洗浄し、回収してきた上澄み溶液中の吸着部位３を含む溶液を高速液体クロマトグラフィで分析する。仕込時の刺激応答性高分子４から、洗浄時に溶出した吸着部位３の量を差し引くことで担体２上に固定化された刺激応答性高分子４の量を見積もることができる。

【0030】

また、刺激応答性高分子４は、複数の官能基Ｒを有する高分子鎖５と、吸着部位３を導入するための化合物を、高分子鎖５：吸着部位３を導入するための化合物が、１：０．０１〜１０のモル比で、好ましくは１：０．１〜５のモル比で、より好ましくは１：０．１〜２のモル比で反応させることで得られる。

【0031】

官能基Ｒは、任意の水溶液中や緩衝液中で正の電荷を帯びるもの又は負の電荷を帯びるものを適宜選択して用いることができる。官能基Ｒが帯びる電荷の価数は１〜３であればよい。つまり、このような官能基Ｒを備える刺激応答性高分子４は、イオン性高分子であるため、強酸などを用いることなく標的物質Ｏの回収が可能である。

【0032】

官能基Ｒは、刺激応答性高分子４全体の親水性・疎水性のバランスを制御できればよく、特に限定されない。従って、官能基Ｒとしては、例えば、アミノ基、イミノ基、各種含窒素芳香族基（ピロール基、イミダゾリル基、ピリジル基、ピリミジル基、オキサゾリル基、チアゾリル基及びトリアゾリル基等）、グアニジル基、フェノール性水酸基、ヒドロキシ基、アルデヒド基、カルボニル基、カルボキシル基、アゾ基、ニトロ基、ニトロソ基、チオール基、スルホ基、エーテル基、ボロン酸基、フルオロ基、クロロ基、ブロモ基、ヨード基、ホスホリル基、ホスフィニル基、シリケート基、リン酸基及びそれらの誘導体の基などを挙げることができる。官能基Ｒは、これらのうちの１種類のみを用いてもよいし、複数種を組み合わせて用いてもよい。なお、官能基Ｒとしては、これらの中でもアミノ基を好適に用いることができる。すなわち、高分子鎖５はアミノ基を複数有するポリアミンを好適に用いることができる。

【0033】

また、官能基Ｒは、標的物質Ｏと水素結合を形成できるものであってもよい。このようにすると、標的物質Ｏの選択性を向上できるため、高い分離能が得られる。そのような官能基Ｒとしては、例えば、スルホ基、カルボキシル基、水酸基、アミノ基などが挙げられる。

【0034】

高分子鎖５は、デンドリマーであってもよい。高分子鎖５としては、例えば、ポリリジン（α−ポリリジン、ε−ポリリジン）、ポリエチレンイミン（直鎖ポリエチレンイミン、分岐ポリエチレンイミン）、ポリアリルアミン、ポリビニルアミン並びにそれらを部分構造として有する誘導体及び共重合体などが挙げられるが、ε−ポリリジン、ポリエチレンイミン、ポリアリルアミン又はそれらを部分構造として含むものが好ましく、より多くの吸着部位３を導入できるという観点から、ε−ポリリジンがより好ましい。

【0035】

高分子鎖５の重量平均分子量は１０００〜１０００００であることが好ましく、１０００〜６０００であることがより好ましい。本実施形態における高分子鎖５の重量平均分子量は、ゲル浸透クロマトグラフィによって測定したものをいう。

【0036】

高分子鎖５と吸着部位３の組合せとしては、吸着材１の高い標的物質吸着特性の観点から、ε−ポリリジン、ポリエチレンイミン又はポリアリルアミンと前記した吸着部位３との各組合せが好ましい。

【0037】

高分子鎖５への吸着部位３の導入は、高分子鎖５を担体２に固定化する前及び後のいずれで行ってもよい。すなわち、吸着部位３を高分子鎖５に導入し、その後、吸着部位３が導入された高分子鎖５を担体２に固定化してもよく、吸着部位３を有さない高分子鎖５を担体２に固定化した後に、固定化した高分子鎖５に吸着部位３を導入してもよい。

【0038】

次に、ＤＢＣの増大化が認められる刺激応答性高分子４の分配係数ＣＬｏｇＰの条件について述べる。なお、本実施形態において分配係数ＣＬｏｇＰとは、ＬｏｇＰの予測値の一つであり、コンピュータで計算することができる。分配係数ＣＬｏｇＰは、これを計算できる機能を有するソフトウェアを使用することによって算出できる。そのようなソフトウェアとしては、化学構造式作画ソフトウェアが挙げられる。そして、そのような化学構造式作画ソフトウェアとして、例えば、ＣｈｅｍＤｒａｗが挙げられる。また、前記したＬｏｇＰとは、化合物の疎水性、脂溶性を規定する無次元数の指標をいう。ＬｏｇＰは実験値であり、例えば、ｎ−オクタノールと水を用いた分配係数を用いることができる。

【0039】

本実施形態では前記したように、低分子化合物を吸着部位３とする刺激応答性高分子４を用いる。そして、本実施形態ではそのような刺激応答性高分子４を用いてＤＢＣを増大させるため、刺激応答性高分子４の疎水度合いを示す分配係数ＣＬｏｇＰが−０．４６以上１．３以下であることを要する。このようにすると、分配係数ＣＬｏｇＰがこの数値範囲内にある刺激応答性高分子４を担体２に固定化する際、後記する指標Ａを満たす種々の担体２に対してより最適な刺激応答性高分子４との組み合わせを行うことができ、ＤＢＣが大幅に向上する。

【0040】

本実施形態における刺激応答性高分子４の分配係数ＣＬｏｇＰは、高分子鎖５と吸着部位３の化学構造式からそれぞれの分配係数ＣＬｏｇＰを求め、１分子の高分子鎖５当たりの吸着部位導入量を変化させ、平均値を刺激応答性高分子４の分配係数ＣＬｏｇＰとするとよい。なお、分配係数ＣＬｏｇＰの値が大きいほど、刺激応答性高分子４がより疎水的な性質を示し、分配係数ＣＬｏｇＰが小さいほど、より親水的な性質を示す。

【0041】

次に、ＤＢＣの増大化が認められる担体２の条件について述べる。本実施形態では、低分子化合物を吸着部位３とする刺激応答性高分子４を用いる。そして、本実施形態ではそのような刺激応答性高分子４を用いてＤＢＣを増大させるため、担体２の溶媒に対する分散性を示す後記する指標Ａが１．０以下であることを要する。このように、指標Ａが１．０以下である担体２と、前記した分配係数ＣＬｏｇＰが−０．４６以上１．３以下である刺激応答性高分子４との組み合わせによりＤＢＣが大幅に向上する。下記に、指標Ａの算出方法を具体的に記載する。

【0042】

まず、誘電率の異なる有機溶媒相として、エタノール（誘電率ε：２４．３ファラド毎メートル（Ｆ／ｍ））及びオクタノール（誘電率ε：１０．３Ｆ／ｍ）を用意する。各溶媒へ担体２をそれぞれ分散させ、担体２と溶媒が混合するよう攪拌する。この際、担体２が溶媒中に充分分散するよう留意する。そして、各種担体２の分散液３ｍＬをガラス製シャーレ（長径＝３５ｍｍ）に展開し、室温で１０分静置する。その後、光学顕微鏡の倍率２０倍のレンズで各種担体２に焦点を合わせ、１サンプルにつき５箇所撮像する。得られた像（２０ｍｍ×２７ｍｍ）の視野中に観測される担体２の凝集体部分を画像ソフトウェア（ＩｍａｇｅＪ）で二値化処理する。前記画像の凝集体部分を黒色に処理するとともに、その他を白色に処理し、黒色で得られた凝集体部分の長さ、特に長軸の長さを１つの担体２の担体径（直径）で割った値をφと定義する。そして、当該φの値に従って下記評価値１〜５までの５段階で分類する。但し、本実施形態では、担体２の担体径が３〜２００μｍのものを用いた場合を想定している。φの値は、１つのサンプルにつき５箇所撮像した画像から得られた値の平均値を採用する。さらに、上記の実験を１つのサンプルに対して２回繰り返し、各回について求めた評価値の２回の平均値をその担体２の評価値とする。すなわち、０．５などの値は、中間的な評価値を意味し、例えば、評価値３と評価値４の中間の評価値として３．５が位置づけられる。

【0043】

評価値５：φ＝０．２μｍ以上８．３μｍ未満（所見：溶媒に対し担体２が安定して良く分散している。）
評価値４：φ＝８．３μｍ以上１７μｍ未満（所見：担体２をよく混合することによって溶媒に対し一部が分散し、小さな凝集体及び孤立した粒子の双方が混在している。）
評価値３：φ＝１７μｍ以上２７μｍ未満（所見：溶媒に対し担体２の一部が分散し、小さな凝集体を形成している。）
評価値２：φ＝２７μｍ以上４０μｍ未満（所見：溶媒に対し担体２がほとんど分散せず、大きな凝集体を形成している。）
評価値１：φ＝４０μｍ以上（所見：溶媒に対し担体２が分散せず、大きな凝集体を形成している。）

【0044】

そして、上記の基準に沿って溶媒に分散させた際の担体２の分散性を次のようにして評価する。なお、検討の結果、オクタノールに分散させたときの評価値から、エタノールに分散させたときの評価値を差し引いた値が、担体２の性質を示す値（前記した指標Ａ）として最適であることが分かった。そこで、誘電率の値が異なるオクタノール（誘電率ε：１０．３Ｆ／ｍ）及びエタノール（誘電率ε：２４．３Ｆ／ｍ）に担体２をそれぞれ分散させて求められる評価値（評価値ε_{オクタノール}、評価値ε_{エタノール}と記載する）から、以下の式（１）に従い、指標Ａを定義する。
Ａ＝評価値ε_{オクタノール}−評価値ε_{エタノール} （１）

【0045】

指標Ａが１．０以下である担体２に、分配係数ＣＬｏｇＰが−０．４６以上１．３以下である刺激応答性高分子４を固定化して吸着材１を製造する。そして、一実施形態として、標的物質Ｏである抗体を精製する場合、吸着材１が充填されたカラム２０（図２参照）を用いて実施される。具体的には、カラム２０の内部に充填された吸着材１へ抗体含有溶液を通液させ、必要に応じて、非特異的に吸着した成分を洗浄し、その後に溶離液を用いて吸着材１に吸着した抗体を回収することにより精製を行うことができる。通液する抗体含有溶液は、ｐＨが７〜８の範囲であることが好ましい。本実施形態では、刺激応答性高分子４の分散性を示す指標Ａが１．０以下になるように制御しているので、刺激応答性高分子４全体の親水性・疎水性のバランスを適切に制御でき、吸着部位３が担体２の表面から離間するように配置される。そのため、標的物質Ｏが吸着部位３に吸着し易くなり、ＤＢＣが向上する。従って、吸着材１を用いると、実際の医薬品製造プロセスや分析試薬製造プロセスなどにおいて生産性を高くすることができる。

【0046】

次に、本実施形態に係る吸着材１について推定される標的物質Ｏの吸着・脱離メカニズムについて、抗体を例にして説明する。
刺激応答性高分子４の電荷が多い状態では、水中で官能基Ｒはより電荷を有した状態であり、電荷を有した部位どうしの電荷反発により、刺激応答性高分子４の高分子鎖５は比較的伸長した状態となる。このとき、刺激応答性高分子４に導入されている吸着部位３が疎水性の場合、親水性の刺激応答性高分子４と疎水性の吸着部位３との相互作用は比較的弱いため、吸着部位３は抗体（標的物質Ｏ）を吸着する（図１参照）。そして、溶離液が通液されるなどして外部環境の変化により刺激応答性高分子４の電荷が少なくなると、高分子鎖５の疎水性が増大する。そのため、吸着部位３が疎水性の場合、刺激応答性高分子４と吸着部位３の相互作用が強くなる方向に平衡が移動する。その結果、吸着部位３が抗体を吸着する吸着力が弱くなり、抗体が吸着部位３から脱離する。なお、ある条件で刺激応答性高分子４の電荷が少ない状態では、刺激応答性高分子４の高分子鎖５は、電荷反発が小さいため比較的収縮した状態になっている。

【0047】

外部環境の変化は、刺激応答性高分子４の電荷密度及び吸着部位３と抗体との間の相互作用を変化させることができるものであれば特に限定されない。外部環境の変化は、例えば、吸着材１が接触している溶液の塩濃度、誘電率、ｐＨ、温度などの変化が挙げられる。外部環境の変化は、例えば、塩濃度が変化すると静電遮蔽効果が変化し、溶媒や溶質の種類の変化により誘電率が変化し、また、ｐＨが変化すると電荷の平衡移動が起こり、これらによって電荷密度が変化する。外部環境の変化は、好ましくは、吸着材１が接触している溶液の塩濃度、温度、誘電率、ｐＨの変化であり、塩濃度の変化及びｐＨの変化がより好ましい。これらの外部環境の変化を組み合わせてもよい。外部環境の変化により刺激応答性高分子４の電荷密度及び吸着部位３と抗体との間の相互作用が変化し、抗体が吸着又は脱離する。従って、本実施形態に係る吸着材１は、外部環境の変化に応答性の吸着材１であり、例えば、外部環境の変化がｐＨの変化である場合には、吸着材１はｐＨ応答性吸着材となり、外部環境の変化が塩濃度、誘電率、温度の変化である場合には、それぞれ、塩濃度応答性吸着材、誘電率応答性吸着材、温度応答性吸着材となる。

【0048】

外部環境の変化による刺激応答性高分子４の電荷密度の変化に起因するコンフォメーション変化は、抗体と吸着部位３の相互作用の強さを変化させて、吸着特性を変化させることができる程度の変化であればよい。
特に、中性付近のｐＨから外部刺激としてｐＨを上昇させた場合、担体２上の刺激応答性高分子４のコンフォメーションは伸張した形態から、徐々に収縮した形態をとると推測される。この刺激応答性高分子４のコンフォメーション変化が、物理的に抗体を吸着材１から脱離させる一助となる。またｐＨの変化に伴い、刺激応答性高分子４及び抗体の電荷が変化する。そのため、電荷の効果で刺激応答性高分子４に吸着していた抗体も電荷反発又は電荷の中性化によって刺激応答性高分子４、すなわち吸着材１から脱離すると考えられる。標的物質Ｏが抗体以外の場合も同様のメカニズムで吸着・脱離すると考えられる。

【0049】

以上から、刺激応答性高分子４中の吸着部位導入量、すなわち官能基量を変化させることで電荷の帯電量をコントロールすることができ、刺激応答性高分子４の親水性・疎水性を制御することができる。前述したように、刺激応答性高分子４の親水性・疎水性を示す指標は分配係数ＣＬｏｇＰで表される。

【0050】

一般的に、担体２の分散度を示す指標Ａが高い場合では、標的物質Ｏの界面と吸着部位３との間で相互作用が生じ、抗体の吸着が阻害されることで吸着能が大幅に低減することが知られている。しかし、本実施形態における刺激応答性高分子４は、担体２の界面性質、すなわち分散度を示す指標Ａが高い場合においても、刺激応答性高分子４の分配係数ＣＬｏｇＰを最適な範囲で適用することで、高効率に抗体を吸着することができる。

【0051】

具体的には、担体２の指標Ａが高い場合、例えば、担体２の指標Ａが０．５の場合に、分配係数ＣＬｏｇＰが０．１９程度の低い値の刺激応答性高分子４を組み合わせることで、抗体のＤＢＣを約３０ｍｇ／ｍＬとすることができる。これは、刺激応答性高分子４中の官能基量が多いため、分子間で電荷が反発し、担体２の界面の影響以上の相互作用で担体２の界面ではなく溶液界面側へ吸着部位３が露出することによって得られるものである。そして、これにより、抗体の吸着能が向上する。また、担体２の指標Ａが高い、すなわち疎水的な界面性質を有する担体２にアミノ基などの官能基量が多い刺激応答性高分子４を固定化することで担体２の表面の性質を改質でき、抗体の吸着能が向上する。

【0052】

一方、担体２の指標Ａが低い場合、すなわち担体２が親水性である場合は、標的物質Ｏの界面と吸着部位３との間で相互作用は生じないか又は生じ難い。そのため、担体２の指標Ａが高い場合と比較して高い自由度で刺激応答性高分子４を選択し、組み合わせることができる。例えば、担体２の指標Ａが−２．５〜−３．５の場合、分配係数ＣＬｏｇＰが１．３以下である刺激応答性高分子４であればどのようなものも用いることができる。

【0053】

他の使用態様として、吸着材１は懸濁液の状態で用いることができる。従来の溶解度の変化を利用する温度応答性の吸着材では、温度変化によって疎水性が増大して分散性が低下する。そして、懸濁状態の吸着材が凝集し、壁面に付着して界面に局在化等するリスクが高い。しかし、このような使用態様であっても、本実施形態に係る吸着材１は、温度変化に伴う溶解度の変化を抗体の吸着又は脱離に利用していないため、そのようなリスクはほぼない。

【0054】

＜カラム及び精製装置＞
図２は、本実施形態に係るカラム２０の構成を説明する概略図である。図３は、本実施形態に係る精製装置３０の構成を説明する概略図である。なお、カラム２０及び精製装置３０の説明において、吸着材１に関して既に詳述している要素についてはその説明を省略する。

【0055】

図２に示すように、カラム２０は、有底の筒状体２１内に吸着材１が充填されたものである。なお、筒状体２１の底部には図示しない排出口が設けられており、カラム２０内を通液した各種溶液がこの排出口から排出される。このカラム２０は、培養時に含まれる複数の夾雑物の中から抗体などの標的物質Ｏを選択的に回収し純度を高める装置である。

【0056】

また、図３に示すように、精製装置３０は、吸着材１が充填されたカラム２０を備えている。例えば、精製装置３０は、図３に示すように、培養槽３１と、カラム２０と、回収容器３２とを備えている。
なお、培養槽３１は、標的物質Ｏを細胞培養によって産生させる装置である。回収容器３２は、カラム２０で精製された標的物質Ｏを含む溶液を回収する容器である。培養槽３１や回収容器３２は公知のものを用いることができる。
なお、精製装置３０はこれら以外にも標的物質Ｏに応じた精製に必要な様々な装置を備えているが、それらの装置の説明は省略する。

【0057】

＜吸着材の製造方法＞
本実施形態に係る吸着材１は、刺激応答性高分子４を担体２に固定化することで製造できる。刺激応答性高分子４は、好ましくは、化学結合を介して担体２に結合させる。すなわち、一実施形態において、吸着材１は、刺激応答性高分子４と担体２とが化学結合を介して固定化されている。吸着部位３は、複数個の官能基Ｒを有する高分子鎖５を担体２に固定化する前又は固定化した後のいずれの時点で導入してもよい。すなわち、吸着部位３を複数個の官能基Ｒを有する高分子鎖５に導入した後、吸着部位３が導入された高分子鎖５を担体２に固定化してもよい。また、吸着部位３を有さない複数個の官能基Ｒを有する高分子鎖５を担体２に固定化した後、高分子鎖５に吸着部位３を導入してもよい。また、吸着部位３を導入した後の高分子鎖５中に残存する官能基Ｒに対して、親水もしくは疎水的な置換基をさらに導入してもよい。

【0058】

以上に説明した本実施形態に係る吸着材１、カラム２０及び精製装置３０は、担体２が、誘電率の異なるオクタノール及びエタノールに分散させた際、それぞれの溶媒に対する担体２の分散性を示す評価値から算出される指標Ａが１．０以下であり、かつ刺激応答性高分子４が、分配係数ＣＬｏｇＰが−０．４６以上１．３以下であることとしている。吸着材１、カラム２０及び精製装置３０は、このような構成としているので、親水性や疎水性など様々な界面性質を有する担体２に対して刺激応答性高分子４全体の親水性・疎水性のバランスを制御しつつ吸着部位３の吸着能を高く維持したまま固定化することができる。従って、吸着材１、カラム２０及び精製装置３０は、吸着部位３として低分子化合物を用いることができるとともに従来よりも多くの種類の担体２を用いることができ、かつ、標的物質Ｏの吸着容量を高くできる。そして、これにより、吸着材１、カラム２０及び精製装置３０を用いると、例えば、抗体医薬品や分析試薬の製造コストを低減することが可能であり、また、生産性を向上させることもできる。
また、本実施形態に係る吸着材１の製造方法は、前記した吸着材１を確実に製造することができる。

【実施例】

【0059】

以下、実施例を示して本発明について具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれに限定されるものではない。

【0060】

〔１〕刺激応答性高分子の合成
＜Ｎｏ．Ｐ１に係る刺激応答性高分子の合成＞
複数のアミノ基を有する高分子としてε−ポリリジン（ＥＰＬ）を用いた。また、前記アミノ基に導入する吸着部位としてメルカプトベンゾチアゾール酢酸（ＭＢＴＡ、２−ベンゾチアゾリルチオ酢酸）を用いた。なお、ＭＢＴＡは、抗体吸着能を有するチオフィリック系の化合物である。

【0061】

ＥＰＬ（一丸ファルコス社製、ポリリジン１０）の水／ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液（水：ＤＭＦ＝１：２（体積比））にＭＢＴＡ（０．７当量）及び脱水縮合剤の４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴ−ＭＭ）（１．２当量）を加え、室温で５時間攪拌し、ＥＰＬのアミノ基とＭＢＴＡのカルボキシル基との反応によりアミド結合を形成することで、ＥＰＬにＭＢＴＡを導入した。得られた反応液に塩酸を加えて酸性とし、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）により透析し、生じた沈殿を濾別した後にエバポレーターで乾燥させることにより、Ｎｏ．Ｐ１に係る刺激応答性高分子（以下、サンプルナンバーに応じて「刺激応答性高分子Ｐ１」などと呼称する）を固体として得た。

【0062】

＜刺激応答性高分子Ｐ２の合成＞
刺激応答性高分子Ｐ１と同様に、ＥＰＬの水／ＤＭＦ溶液にＭＢＴＡ（０．６当量）及びＤＭＴ−ＭＭ（１．２当量）を加え、室温で５時間攪拌した。そして、刺激応答性高分子Ｐ１と同様の手順で生じさせた沈殿を濾別し、これをエバポレーターで乾燥させることにより、刺激応答性高分子Ｐ２を得た。

【0063】

＜刺激応答性高分子Ｐ３の合成＞
刺激応答性高分子Ｐ１と同様に、ＥＰＬの水／ＤＭＦ溶液にＭＢＴＡ（０．４５当量）及びＤＭＴ−ＭＭ（１．２当量）を加え、室温で５時間攪拌した。そして、刺激応答性高分子Ｐ１と同様の手順で生じさせた沈殿を濾別し、これをエバポレーターで乾燥させることにより、刺激応答性高分子Ｐ３を得た。

【0064】

＜刺激応答性高分子Ｐ４の合成＞
刺激応答性高分子Ｐ１と同様に、ＥＰＬの水／ＤＭＦ溶液にＭＢＴＡ（０．３当量）及びＤＭＴ−ＭＭ（１．２当量）を加え、室温で５時間攪拌した。そして、刺激応答性高分子Ｐ１と同様の手順で生じさせた沈殿を濾別し、これをエバポレーターで乾燥させることにより、刺激応答性高分子Ｐ４を得た。

【0065】

＜刺激応答性高分子Ｐ５の合成＞
刺激応答性高分子Ｐ１と同様に、ＥＰＬの水／ＤＭＦ溶液にＭＢＴＡ（０．０７当量）及びＤＭＴ−ＭＭ（１．２当量）を加え、室温で５時間攪拌した。そして、刺激応答性高分子Ｐ１と同様の手順で生じさせた沈殿を濾別し、これをエバポレーターで乾燥させることにより、刺激応答性高分子Ｐ５を得た。

【0066】

＜刺激応答性高分子Ｐ６の合成＞
刺激応答性高分子Ｐ１と同様に、ＥＰＬの水／ＤＭＦ溶液にＭＢＴＡ（０．９当量）及びＤＭＴ−ＭＭ（１．２当量）を加え、室温で５時間攪拌した。そして、刺激応答性高分子Ｐ１と同様の手順で生じさせた沈殿を濾別し、これをエバポレーターで乾燥させることにより、刺激応答性高分子Ｐ６を得た。

【0067】

＜刺激応答性高分子Ｐ７の合成＞
刺激応答性高分子Ｐ１と同様に、ＥＰＬの水／ＤＭＦ溶液にＭＢＴＡ（０．０３当量）及びＤＭＴ−ＭＭ（１．２当量）を加え、室温で５時間攪拌した。そして、刺激応答性高分子Ｐ１と同様の手順で生じさせた沈殿を濾別し、これをエバポレーターで乾燥させることにより、刺激応答性高分子Ｐ７を得た。

【0068】

＜刺激応答性高分子Ｐ１〜７の化学組成評価と分配係数＞
刺激応答性高分子Ｐ１〜７の組成、吸着部位導入率、１分子当たりの吸着部位導入量及び分配係数ＣＬｏｇＰを表１に示す。表１において、組成については、吸着部位の導入に用いた原料化合物を記載している。吸着部位導入率は、複数のアミノ基を有する高分子のアミノ基量に対し吸着部位により占有された割合を示している。吸着部位導入率は、^１Ｈ−ＮＭＲ測定によって求めた。１分子当たりの吸着部位導入量は、用いたＥＰＬの有するアミノ基数と吸着部位導入率の積によって求めた。また、化学構造式作画ソフトウェアＣｈｅｍＤｒａｗで刺激応答性高分子Ｐ１〜７の分配係数ＣＬｏｇＰを算出した。

【0069】

【表1】

【0070】

〔２〕担体
Ｎｏ．Ｃ１〜９に係る担体（以下、サンプルナンバーに応じて「担体Ｃ１」などと呼称する）を用意した（表２参照）。なお、担体は、ポリスチレンやアクリル、メタクリレート系の樹脂担体、多糖類のＳｅｐｈａｒｏｓｅ担体、シリカ、磁性体の無機酸化物（磁性微粒子）などを用いた。また、誘電率の値が異なる有機溶媒相として、オクタノール（誘電率ε：１０．３Ｆ／ｍ）及びエタノール（誘電率ε：２４．３Ｆ／ｍ）を用意した。そして、各種担体をそれぞれこれらの有機溶媒相に分散させ、担体と溶媒とをよく混合させた。そして、各種担体の分散液３ｍＬをガラス製シャーレ（長径＝３５ｍｍ）に展開し、室温で１０分静置させた。その後、光学顕微鏡の倍率２０倍のレンズで各種担体に焦点を合わせ、１サンプルにつき５箇所撮像した。得られた像（２０ｍｍ×２７ｍｍ）の視野中に観測される担体の凝集体部分を画像ソフトウェア（ＩｍａｇｅＪ）で二値化処理した。前記画像の凝集体部分を黒色に処理し、その他を白色に処理し、黒色で得られた凝集体部分の長さ、特に長軸の長さを１つの担体の担体径（直径）で割った値をφと定義した。そして、当該φの値に従って下記評価値１〜５までの５段階で分類した。φの値は、１つのサンプルにつき５箇所撮像した画像から得られた値の平均値を採用した。さらに、上記の実験を１つのサンプルに対して２回繰り返し、各回について求めた評価値の２回の平均値をその担体の評価値とした。

【0071】

評価値５：φ＝０．２μｍ以上８．３μｍ未満（所見：溶媒に対し担体が安定して良く分散している。）
評価値４：φ＝８．３μｍ以上１７μｍ未満（所見：担体をよく混合することによって溶媒に対し一部が分散し、小さな凝集体及び孤立した粒子の双方が混在している。）
評価値３：φ＝１７μｍ以上２７μｍ未満（所見：溶媒に対し担体の一部が分散し、小さな凝集体を形成している。）
評価値２：φ＝２７μｍ以上４０μｍ未満（所見：溶媒に対し担体がほとんど分散せず、大きな凝集体を形成している。）
評価値１：φ＝４０μｍ以上（所見：溶媒に対し担体が分散せず、大きな凝集体を形成している。）

【0072】

そして、上記の基準に沿って溶媒に分散させた際の担体の分散性を次のようにして評価した。そして、誘電率の値が異なるオクタノール（誘電率ε：１０．３Ｆ／ｍ）及びエタノール（誘電率ε：２４．３Ｆ／ｍ）に担体をそれぞれ分散させて求められる評価値（評価値ε_{オクタノール}、評価値ε_{エタノール}）から、以下の式（１）に従い、指標Ａを定義した。
Ａ＝評価値ε_{オクタノール}−評価値ε_{エタノール} （１）
表２に担体Ｃ１〜９の材質と、平均粒子径（μｍ）、指標Ａに関する評価結果を示す。

【0073】

【表2】

【0074】

担体Ｃ１〜４、９（担体Ａ群）と比較して、担体Ｃ５〜８（担体Ｂ群）はエタノールに良く分散し、オクタノールでは凝集体を形成した。そのため、担体Ｂ群は、より親水的であることが判明した。

【0075】

〔３〕実施例１〜９及び比較例１〜３に係る吸着材の調製と抗体吸着能評価
担体Ｃ１〜９と刺激応答性高分子Ｐ１〜７とを後記する表３の組合せで固定化して抗体の吸着能評価を行った。刺激応答性高分子Ｐ１〜７を担体Ｃ１〜９に固定化するため、担体Ｃ１〜９の官能基としてエポキシ基、カルボキシル基を使用した。また、必要な場合にはこれらの官能基を修飾した。

【0076】

＜実施例１＞
＜担体Ｃ１（担体Ａ群）上へ刺激応答性高分子Ｐ３を固定化した吸着材の調製＞
ＴＨＦ／水混合溶液（ＴＨＦ：水＝４：１（体積比））を溶媒として用い、刺激応答性高分子Ｐ３の１質量％溶液を調製した。この刺激応答性高分子Ｐ３の溶液と、カルボキシル基を表面に有する平均粒子径１００μｍのポリスチレン担体（テクノケミカル社製、ポリビーズ ポリスチレンシリーズ）と、ＤＭＴ−ＭＭ（１０当量）とから得られた懸濁液を室温で一晩振盪させた。その後、ＴＨＦ／水混合溶媒で洗浄し、刺激応答性高分子Ｐ３が担体Ｃ１に固定化された実施例１に係る吸着材を得た。

【0077】

＜実施例１に係る吸着材の抗体吸着能評価＞
実施例１に係る吸着材の吸着部位の抗体吸着能を評価するため、以下の手順に従い実験を行った。具体的には、実施例１に係る吸着材を１ｍＬ分カラムに充填し、１質量％の所定のヒトＩｇＧを含むｐＨ７．４のリン酸緩衝液（ＰＢＳ緩衝液）を５ｍＬ通液した。そして、カラムから溶出される溶液内のヒトＩｇＧ濃度をモニタリングして、１０％の抗体溶液がカラムから漏れだす溶液量から抗体吸着能を算出した。ここでいう抗体吸着能とは、吸着材への動的抗体吸着容量（１０％ＤＢＣ）と定義する。その結果を後記表３及び図４に示す。なお、図４は、実施例１〜９及び比較例１〜３に係る各吸着材における指標Ａと１０％ＤＢＣとの関係を示すグラフである。
表３及び図４に示すように、実施例１に係る吸着材１ｍＬに対し、２４ｍｇの抗体が吸着することが確認された。実施例１に係る吸着材は、担体と刺激応答性高分子の組合せが良かったため、高効率で抗体を吸着できることが確認された。

【0078】

以上の結果から、分散度を示す指標Ａが０の担体Ｃ１と、分配係数ＣＬｏｇＰが０．６２の刺激応答性高分子Ｐ３とを組み合わせたとき、１０％ＤＢＣは２４ｍｇ／ｍＬであり、市販品として流通する吸着材の最低限の機能２０ｍｇ／ｍＬ以上が得られることが明らかとなった。これは、担体と刺激応答性高分子の組合せが良かったためと考えられた。

【0079】

＜実施例２＞
＜担体Ｃ２（担体Ａ群）上へ刺激応答性高分子Ｐ４を固定化した吸着材の調製＞
ＴＨＦ／水混合溶液（ＴＨＦ：水＝２：１（体積比））を溶媒として用い、刺激応答性高分子Ｐ４の１質量％溶液を調製した。この刺激応答性高分子Ｐ４の溶液と、カルボキシル基を表面に有する平均粒子径５０μｍのポリスチレン担体（テクノケミカル社製、ポリビーズ ポリスチレンシリーズ）と、ＤＭＴ−ＭＭ（１０当量）とから得られた懸濁液を室温で一晩振盪させた。その後、ＴＨＦ／水混合溶媒で洗浄し、刺激応答性高分子Ｐ４が担体Ｃ２に固定化された実施例２に係る吸着材を得た。

【0080】

＜実施例２に係る吸着材の抗体吸着能評価＞
実施例２に係る吸着材の吸着部位の抗体吸着能を評価するため、実施例１に係る吸着材と同様の手順で同様の実験を行った。その結果を後記表３及び図４に示す。
表３及び図４に示すように、実施例２に係る吸着材１ｍＬに対し、３０ｍｇの抗体が吸着することが確認された。

【0081】

以上の結果から、分散度を示す指標Ａが０．５の担体Ｃ２と、分配係数ＣＬｏｇＰが０．１９の刺激応答性高分子Ｐ４とを組み合わせたとき、１０％ＤＢＣは３０ｍｇ／ｍＬと高い値が得られた。これは、担体と刺激応答性高分子の組合せが良かったためと考えられた。

【0082】

＜実施例３＞
＜担体Ｃ３（担体Ａ群）上へ刺激応答性高分子Ｐ４を固定化した吸着材の調製＞
ＴＨＦ／水混合溶液（ＴＨＦ：水＝２：１（体積比））を溶媒として用い、刺激応答性高分子Ｐ４の１質量％溶液を調製した。この刺激応答性高分子Ｐ４の溶液と、カルボキシル基を表面に有する平均粒子径３０μｍのアクリル担体（Ｓｏｋｅｎ社製、ＭＸシリーズ）と、ＤＭＴ−ＭＭ（１０当量）とから得られた懸濁液を室温で一晩振盪させた。その後、ＴＨＦ／水混合溶媒で洗浄し、刺激応答性高分子Ｐ４が担体Ｃ３に固定化された実施例３に係る吸着材を得た。

【0083】

＜実施例３に係る吸着材の抗体吸着能評価＞
実施例３に係る吸着材の吸着部位の抗体吸着能を評価するため、実施例１に係る吸着材と同様の手順で同様の実験を行った。その結果を後記表３及び図４に示す。
表３及び図４に示すように、実施例３に係る吸着材１ｍＬに対し、３２ｍｇの抗体が吸着することが確認された。

【0084】

以上の結果から、分散度を示す指標Ａが０．５の担体Ｃ３と、分配係数ＣＬｏｇＰが０．１９の刺激応答性高分子Ｐ４とを組み合わせたとき、１０％ＤＢＣは３２ｍｇ／ｍＬと高い値が得られた。これは、担体と刺激応答性高分子の組合せが良かったためと考えられた。

【0085】

＜実施例４＞
＜担体Ｃ４（担体Ａ群）上へ刺激応答性高分子Ｐ５を固定化した吸着材の調製＞
ＴＨＦ／水混合溶液（ＴＨＦ：水＝１：１（体積比））を溶媒として用い、刺激応答性高分子Ｐ５の１質量％溶液を調製した。この刺激応答性高分子Ｐ５の溶液と、カルボキシル基を表面に有する平均粒子径１００μｍのメタクリレート担体（東ソー社製、Ｔｏｙｏｐｅｒａｌ ＡＦ−Ｃａｒｂｏｘｙ ６５０Ｍ）と、ＤＭＴ−ＭＭ（１０当量）とから得られた懸濁液を室温で一晩振盪させた。その後、ＴＨＦ／水混合溶媒で洗浄し、刺激応答性高分子Ｐ５が担体Ｃ４に固定化された実施例４に係る吸着材を得た。

【0086】

＜実施例４に係る吸着材の抗体吸着能評価＞
実施例４に係る吸着材の吸着部位の抗体吸着能を評価するため、実施例１に係る吸着材と同様の手順で同様の実験を行った。その結果を後記表３及び図４に示す。
表３及び図４に示すように、実施例４に係る吸着材１ｍＬに対し、２３ｍｇの抗体が吸着することが確認された。

【0087】

以上の結果から、分散度を示す指標Ａが１．０の担体Ｃ４と、分配係数ＣＬｏｇＰが−０．４６の刺激応答性高分子Ｐ５とを組み合わせたとき、１０％ＤＢＣは２３ｍｇ／ｍＬであり、市販品として流通する吸着材の最低限の機能２０ｍｇ／ｍＬ以上が得られることが明らかとなった。これは、担体と刺激応答性高分子の組合せが良かったためと考えられた。

【0088】

＜実施例５＞
＜担体Ｃ５（担体Ｂ群）上へ刺激応答性高分子Ｐ１を固定化した吸着材の調製＞
ＴＨＦ／水混合溶液（ＴＨＦ：水＝５：１（体積比））を溶媒として用い、刺激応答性高分子Ｐ１の１質量％溶液を調製した。この刺激応答性高分子Ｐ１の溶液と、カルボキシル基を表面に有する平均粒子径１００μｍのＳｅｐｈａｒｏｓｅ担体（ＧＥヘルスケア社製、ＣＭ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ）と、ＤＭＴ−ＭＭ（１０当量）とから得られた懸濁液を室温で一晩振盪させた。その後、ＴＨＦ／水混合溶媒で洗浄し、刺激応答性高分子Ｐ１が担体Ｃ５に固定化された実施例５に係る吸着材を得た。

【0089】

＜実施例５に係る吸着材の抗体吸着能評価＞
実施例５に係る吸着材の吸着部位の抗体吸着能を評価するため、実施例１に係る吸着材と同様の手順で同様の実験を行った。その結果を後記表３及び図４に示す。
表３及び図４に示すように、実施例５に係る吸着材１ｍＬに対し、３８ｍｇの抗体が吸着することが確認された。

【0090】

以上の結果から、分散度を示す指標Ａが−２．５の担体Ｃ５と、分配係数ＣＬｏｇＰが１．３の刺激応答性高分子Ｐ１とを組み合わせたとき、１０％ＤＢＣは３８ｍｇ／ｍＬと高効率に抗体を吸着することが確認された。これは、担体と刺激応答性高分子の組合せが良かったためと考えられた。

【0091】

＜実施例６＞
＜担体Ｃ６（担体Ｂ群）上へ刺激応答性高分子Ｐ３を固定化した吸着材の調製＞
ＴＨＦ／水混合溶液（ＴＨＦ：水＝４：１（体積比））を溶媒として用い、刺激応答性高分子Ｐ３の１質量％溶液を調製した。この刺激応答性高分子Ｐ３の溶液と、カルボキシル基を表面に有する平均粒子径１００μｍのシリカ担体（ＡＧＣエスアイテック社製、Ｍ．Ｓ．ＧＥＬ、Ｄグレード）と、ＤＭＴ−ＭＭ（１０当量）とから得られた懸濁液を室温で一晩振盪させた。その後、ＴＨＦ／水混合溶媒で洗浄し、刺激応答性高分子Ｐ３が担体Ｃ６に固定化された実施例６に係る吸着材を得た。

【0092】

＜実施例６に係る吸着材の抗体吸着能評価＞
実施例６に係る吸着材の吸着部位の抗体吸着能を評価するため、実施例１に係る吸着材と同様の手順で同様の実験を行った。その結果を後記表３及び図４に示す。
表３及び図４に示すように、実施例６に係る吸着材１ｍＬに対し、３７ｍｇの抗体が吸着することが確認された。

【0093】

以上の結果から、分散度を示す指標Ａが−３．０の担体Ｃ６と、分配係数ＣＬｏｇＰが０．６２の刺激応答性高分子Ｐ３とを組み合わせたとき、１０％ＤＢＣは３７ｍｇ／ｍＬと高効率に抗体を吸着することが確認された。これは、担体と刺激応答性高分子の組合せが良かったためと考えられた。

【0094】

＜実施例７＞
＜担体Ｃ７（担体Ｂ群）上へ刺激応答性高分子Ｐ１を固定化した吸着材の調製＞
ＴＨＦ／水混合溶液（ＴＨＦ：水＝５：１（体積比））を溶媒として用い、刺激応答性高分子Ｐ１の１質量％溶液を調製した。この刺激応答性高分子Ｐ１の溶液と、カルボキシル基を表面に有する平均粒子径５０μｍのシリカ担体（ＡＧＣエスアイテック社製、Ｍ．Ｓ．ＧＥＬ、ＥＰ−ＤＭグレード）と、ＤＭＴ−ＭＭ（１０当量）とから得られた懸濁液を室温で一晩振盪させた。その後、ＴＨＦ／水混合溶媒で洗浄し、刺激応答性高分子Ｐ１が担体Ｃ７に固定化された実施例７に係る吸着材を得た。

【0095】

＜実施例７に係る吸着材の抗体吸着能評価＞
実施例７に係る吸着材の吸着部位の抗体吸着能を評価するため、実施例１に係る吸着材と同様の手順で同様の実験を行った。その結果を後記表３及び図４に示す。
表３及び図４に示すように、実施例７に係る吸着材１ｍＬに対し、４８ｍｇの抗体が吸着することが確認された。

【0096】

以上の結果から、分散度を示す指標Ａが−３．５の担体Ｃ７と、分配係数ＣＬｏｇＰが１．３の刺激応答性高分子Ｐ１とを組み合わせたとき、１０％ＤＢＣは４８ｍｇ／ｍＬと高効率に抗体を吸着することが確認された。これは、親水的かつ平均粒子径が小さい担体と、疎水的ではあるが、吸着部位として導入した低分子化合物（ＭＢＴＡ）の導入量が多い刺激応答性高分子との組合せが良かったためと考えられた。

【0097】

＜実施例８＞
＜担体Ｃ８（担体Ｂ群）上へ刺激応答性高分子Ｐ２を固定化した吸着材の調製＞
ＴＨＦ／水混合溶液（ＴＨＦ：水＝５：１（体積比））を溶媒として用い、刺激応答性高分子Ｐ２の１質量％溶液を調製した。この刺激応答性高分子Ｐ２の溶液と、カルボキシル基を表面に有する平均粒子径３μｍの磁性担体（タカラバイオ社製、Ｍａｇｎｏｓｐｅｒｅ ＭＳ３００／Ｃａｒｂｏｘｙｌ）と、ＤＭＴ−ＭＭ（１０当量）とから得られた懸濁液を室温で一晩振盪させた。その後、ＴＨＦ／水混合溶媒で洗浄し、刺激応答性高分子Ｐ２が担体Ｃ８に固定化された実施例８に係る吸着材を得た。

【0098】

＜実施例８に係る吸着材の抗体吸着能評価＞
実施例８に係る吸着材の吸着部位の抗体吸着能を評価するため、実施例１に係る吸着材と同様の手順で同様の実験を行った。その結果を後記表３及び図４に示す。
表３及び図４に示すように、実施例８に係る吸着材１ｍＬに対し、２７ｍｇの抗体が吸着することが確認された。

【0099】

以上の結果から、分散度を示す指標Ａが−１．０の担体Ｃ８と、分配係数ＣＬｏｇＰが１．１の刺激応答性高分子Ｐ２とを組み合わせたとき、１０％ＤＢＣは２７ｍｇ／ｍＬであり、市販製品と同等以上に抗体を吸着できることが確認された。

【0100】

＜実施例９＞
＜担体Ｃ５（担体Ｂ群）上へ刺激応答性高分子Ｐ２を固定化した吸着材の調製＞
ＴＨＦ／水混合溶液（ＴＨＦ：水＝５：１（体積比））を溶媒として用い、刺激応答性高分子Ｐ２の１質量％溶液を調製した。この刺激応答性高分子Ｐ２の溶液と、カルボキシル基を表面に有する平均粒子径１００μｍのＳｅｐｈａｒｏｓｅ担体（ＧＥヘルスケア社製、ＣＭ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ）と、ＤＭＴ−ＭＭ（１０当量）とから得られた懸濁液を室温で一晩振盪させた。その後、ＴＨＦ／水混合溶媒で洗浄し、刺激応答性高分子Ｐ２が担体Ｃ５に固定化された実施例９に係る吸着材を得た。

【0101】

＜実施例９に係る吸着材の抗体吸着能評価＞
実施例９に係る吸着材の吸着部位の抗体吸着能を評価するため、実施例１に係る吸着材と同様の手順で同様の実験を行った。その結果を後記表３及び図４に示す。
表３及び図４に示すように、実施例９に係る吸着材１ｍＬに対し、２６ｍｇの抗体が吸着することが確認された。

【0102】

以上の結果から、分散度を示す指標Ａが−２．５の担体Ｃ５と、分配係数ＣＬｏｇＰが１．１の刺激応答性高分子Ｐ２とを組み合わせたとき、１０％ＤＢＣは２６ｍｇ／ｍＬであり、市販品と同等程度の抗体吸着能が得られることが確認された。

【0103】

なお、実施例９に係る吸着材と実施例５に係る吸着材とを比較すると、これらは担体及び刺激応答性高分子の組成が近いにも関わらず、１０％ＤＢＣは実施例５に係る吸着材の方が優れていた。このことから、担体に対してより最適な分配係数ＣＬｏｇＰを有する刺激応答性高分子を固定化すると大幅に１０％ＤＢＣを向上できると考えられた。

【0104】

＜比較例１＞
＜担体Ｃ３（担体Ａ群）上へ刺激応答性高分子Ｐ６を固定化した吸着材の調製＞
ＴＨＦ／水混合溶液（ＴＨＦ：水＝５：１（体積比））を溶媒として用い、刺激応答性高分子Ｐ６の１質量％溶液を調製した。この刺激応答性高分子Ｐ６の溶液と、カルボキシル基を表面に有する平均粒子径３０μｍのアクリル担体（Ｓｏｋｅｎ社製、ＭＸシリーズ）と、ＤＭＴ−ＭＭ（１０当量）とから得られた懸濁液を室温で一晩振盪させた。その後、ＴＨＦ／水混合溶媒で洗浄し、刺激応答性高分子Ｐ６が担体Ｃ３に固定化された比較例１に係る吸着材を得た。

【0105】

＜比較例１に係る吸着材の抗体吸着能評価＞
比較例１に係る吸着材の吸着部位の抗体吸着能を評価するため、実施例１に係る吸着材と同様の手順で同様の実験を行った。その結果を後記表３及び図４に示す。
表３及び図４に示すように、比較例１に係る吸着材１ｍＬに対し、４ｍｇの抗体が吸着することが確認された。

【0106】

以上の結果から、分散度を示す指標Ａが０．５の担体Ｃ３と、分配係数ＣＬｏｇＰが１．９の刺激応答性高分子Ｐ６を組み合わせたとき、１０％ＤＢＣは４ｍｇ／ｍＬと低い値を示した。この結果から、疎水性の担体と疎水的な刺激応答性高分子の組合せでは、担体と刺激応答性高分子との間の相互作用が高まり、十分量の抗体吸着能が得られなかったと考えられた。

【0107】

＜比較例２＞
＜担体Ｃ５（担体Ｂ群）上へ刺激応答性高分子Ｐ７を固定化した吸着材の調製＞
ＴＨＦ／水混合溶液（ＴＨＦ：水＝１：１（体積比））を溶媒として用い、刺激応答性高分子Ｐ７の１質量％溶液を調製した。この刺激応答性高分子Ｐ７の溶液と、カルボキシル基を表面に有する平均粒子径１００μｍのＳｅｐｈａｒｏｓｅ担体（ＧＥヘルスケア社製、ＣＭ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ）と、ＤＭＴ−ＭＭ（１０当量）とから得られた懸濁液を室温で一晩振盪させた。その後、ＴＨＦ／水混合溶媒で洗浄し、刺激応答性高分子Ｐ７が担体Ｃ５に固定化された比較例２に係る吸着材を得た。

【0108】

＜比較例２に係る吸着材の抗体吸着能評価＞
比較例２に係る吸着材の吸着部位の抗体吸着能を評価するため、実施例１に係る吸着材と同様の手順で同様の実験を行った。その結果を後記表３及び図４に示す。
表３及び図４に示すように、比較例２に係る吸着材１ｍＬに対し、６ｍｇの抗体が吸着することが確認された。

【0109】

以上の結果から、分散度を示す指標Ａが−２．５の担体Ｃ５と、分配係数ＣＬｏｇＰが−０．６９の刺激応答性高分子Ｐ７とを組み合わせたとき、１０％ＤＢＣは６ｍｇ／ｍＬと低い値を示した。このことから、親水性の担体と、吸着部位として導入した低分子化合物（ＭＢＴＡ）の導入量が少なく、より親水的な刺激応答性高分子との組合せでは、十分量の抗体を吸着できないことが確認された。

【0110】

＜比較例３＞
＜担体Ｃ９（担体Ａ群）上へ刺激応答性高分子Ｐ３を固定化した吸着材の調製＞
ＴＨＦ／水混合溶液（ＴＨＦ：水＝４：１（体積比））を溶媒として用い、刺激応答性高分子Ｐ３の１質量％溶液を調製した。この刺激応答性高分子Ｐ３の溶液と、カルボキシル基を表面に有する平均粒子径４５μｍのメタクリレート担体（積水化成品社製、テクポリマー、ＭＢＸ−４０）と、ＤＭＴ−ＭＭ（１０当量）とから得られた懸濁液を室温で一晩振盪させた。その後、ＴＨＦ／水混合溶媒で洗浄し、刺激応答性高分子Ｐ３が担体Ｃ９に固定化された比較例３に係る吸着材を得た。

【0111】

＜比較例３に係る吸着材の抗体吸着能評価＞
比較例３に係る吸着材の吸着部位の抗体吸着能を評価するため、実施例１に係る吸着材と同様の手順で同様の実験を行った。その結果を後記表３及び図４に示す。
表３及び図４に示すように、比較例３に係る吸着材１ｍＬに対し、１５ｍｇの抗体が吸着することが確認された。

【0112】

以上の結果から、分散度を示す指標Ａが１．５の担体Ｃ９と、分配係数ＣＬｏｇＰが０．６２の刺激応答性高分子Ｐ３とを組み合わせたとき、１０％ＤＢＣは１５ｍｇ／ｍＬであり、市販品の基準である２０ｍｇ／ｍＬと比較して僅かに劣った。このことから、吸着能が出ることが確認されている刺激応答性高分子であっても、指標Ａが１．５以上であるような疎水性の担体との組み合わせ次第では、抗体の吸着能が僅かに低減することが判明した。比較例３に係る吸着材と実施例４に係る吸着材とを比較して、吸着材について、抗体の高効率吸着をかなえる担体の指標Ａは１．０以下とするのがよいと考えられた。

【0113】

【表3】

【0114】

以上の結果から、従来用いるのが困難であった疎水性の担体Ａ群の担体を用いた場合であっても、分配係数ＣＬｏｇＰが−０．４６以上１．３以下である刺激応答性高分子を組み合わせることで１０％ＤＢＣを高められることが分かった。また、親水性の担体Ｂ群に属する担体を用いた場合は、分配係数ＣＬｏｇＰが−０．４６以上１．３以下である刺激応答性高分子を用いて吸着材を製造することで高ＤＢＣが得られることが分かった。すなわち、本発明によれば、担体の前記指標Ａが１．０以下であり、刺激応答性高分子の分配係数ＣＬｏｇＰが−０．４６以上１．３以下の範囲にある最適な組み合わせとすることによって、吸着部位として低分子化合物を用いることができるとともに、従来よりも多くの種類の担体を用いることができ、かつ、標的物質の吸着容量が高い吸着材とこれを用いたカラム及び精製装置とを提供できることが分かった。

【0115】

このことから、本発明では、医薬品や分析試薬向けの抗体を生産する抗体生産性が優れる吸着材とこれを用いたカラム及び精製装置とを提供できる。そして、本発明によれば、抗体の吸着効率向上をかなえる低分子化合物を用いた吸着材による抗体の精製を可能にする。従って、本発明によれば、抗体医薬品及び分析試薬等の低コスト製造や生産性向上を実現できる。そのため、本発明によれば、従来治療が困難であったリュウマチや癌治療等に用いる治療用抗体はもちろん、分析、試験で用いられる生化学試薬や臨床検査試薬中の抗体をも含めて高効率に生産、提供が可能となるため、医療技術の進歩に大きく貢献できる。

【0116】

以上、本発明に係る吸着材、カラム、精製装置及び吸着材の製造方法について実施形態及び実施例により詳細に説明したが、本発明の主旨はこれに限定されるものではなく、様々な変形例が含まれる。例えば、前記した実施形態は本発明を分かり易く説明するために詳細に説明したものであり、必ずしも説明した全ての構成を備えるものに限定されるものではない。また、ある実施形態の構成の一部を他の実施形態の構成に置き換えることが可能であり、また、ある実施形態の構成に他の実施形態の構成を加えることも可能である。また、各実施形態の構成の一部について、他の構成の追加・削除・置換をすることが可能である。

【符号の説明】

【0117】

１ 吸着材
２ 担体
３ 吸着部位
４ 刺激応答性高分子
５ 高分子鎖
２０ カラム
３０ 精製装置
Ｏ 標的物質
Ｒ 官能基

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】