知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
▶ 栗田工業株式会社の特許一覧 ▶ 国立大学法人信州大学の特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2022135004
(43)【公開日】2022-09-15
(54)【発明の名称】脂質膜の製造方法
(51)【国際特許分類】
B01J 19/00 20060101AFI20220908BHJP
C12N 5/00 20060101ALN20220908BHJP
【ＦＩ】
B01J19/00 M
C12N5/00
【審査請求】未請求
【請求項の数】7
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2021034558
(22)【出願日】2021-03-04
(71)【出願人】
【識別番号】000001063
【氏名又は名称】栗田工業株式会社
(71)【出願人】
【識別番号】504180239
【氏名又は名称】国立大学法人信州大学
(74)【代理人】
【識別番号】100086911
【弁理士】
【氏名又は名称】重野 剛
(74)【代理人】
【識別番号】100144967
【弁理士】
【氏名又は名称】重野 隆之
(72)【発明者】
【氏名】川勝 孝博
(72)【発明者】
【氏名】藤村 侑
(72)【発明者】
【氏名】佐伯 大輔
(72)【発明者】
【氏名】栃谷 一樹
(72)【発明者】
【氏名】奥村 幸久
【テーマコード（参考）】
4B065
4G075
【Ｆターム（参考）】
4B065AA99X
4B065CA14
4B065CA44
4G075AA25
4G075BD15
4G075CA51
4G075DA18
4G075EB01
4G075EC12
4G075FB02
4G075FB04
4G075FB06
4G075FB12
(57)【要約】
【課題】均質で面積の大きい脂質膜を形成することができる脂質膜の製造方法を提供する。
【解決手段】脂質溶解液よりなる第１液と、該脂質溶解液と非混和性の第２液とを槽に収容し、第１液と第２液との界面に脂質膜を形成し、基材を第１液及び第２液の一方から他方に移動させることにより、該基材の表面に前記脂質膜を担持させる工程を有する脂質膜の製造方法であって、該脂質溶解液中の脂質の量が、前記槽内の第１液と第２液との界面の全体に脂質膜を形成するのに必要な最少必要量の４倍以上４０倍未満である脂質膜の製造方法。
【選択図】図１
【解決手段】脂質溶解液よりなる第１液と、該脂質溶解液と非混和性の第２液とを槽に収容し、第１液と第２液との界面に脂質膜を形成し、基材を第１液及び第２液の一方から他方に移動させることにより、該基材の表面に前記脂質膜を担持させる工程を有する脂質膜の製造方法であって、該脂質溶解液中の脂質の量が、前記槽内の第１液と第２液との界面の全体に脂質膜を形成するのに必要な最少必要量の４倍以上４０倍未満である脂質膜の製造方法。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
脂質溶解液よりなる第１液と、該脂質溶解液と非混和性の第２液とを槽に収容し、第１液と第２液との界面に脂質膜を形成し、
基材を第１液及び第２液の一方から他方に移動させることにより、該基材の表面に前記脂質膜を担持させる
工程を有する脂質膜の製造方法であって、
該脂質溶解液中の脂質の量が、前記槽内の第１液と第２液との界面の全体に脂質膜を形成するのに必要な最少必要量の４倍以上４０倍未満である脂質膜の製造方法。
基材を第１液及び第２液の一方から他方に移動させることにより、該基材の表面に前記脂質膜を担持させる
工程を有する脂質膜の製造方法であって、
該脂質溶解液中の脂質の量が、前記槽内の第１液と第２液との界面の全体に脂質膜を形成するのに必要な最少必要量の４倍以上４０倍未満である脂質膜の製造方法。
【請求項2】
前記脂質溶解液の溶媒がヘキサン、クロロホルム又はパーフルオロヘキサンであり、前記第２液は水である請求項１の脂質膜の製造方法。
【請求項3】
前記第１液中の脂質の量が最少必要量の４～３０倍である請求項１又は２の脂質膜の製造方法。
【請求項4】
前記脂質がリン脂質である請求項１～３のいずれかの脂質膜の製造方法。
【請求項5】
前記第１液と第２液との界面に形成する脂質膜にタンパク質を含有させる請求項１～４のいずれかの脂質膜の製造方法。
【請求項6】
前記基材を、前記一方の液から他方の液に移動させた後、該他方の液から該一方の液に移動させる請求項１～５のいずれかの脂質膜の製造方法。
【請求項7】
前記最少必要量は、前記第１液と第２液との界面の面積を脂質一分子あたり占有面積で除算することにより求めた値である請求項１～６のいずれかの脂質膜の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は脂質膜の製造方法に関する。詳しくは、本発明は、脂質溶解液と、該脂質溶解液に対して非混和性の液との界面に脂質膜を形成する方法を利用した脂質膜の製造方法に関する。
【背景技術】
【0002】
脂質膜を製造する方法として、脂質溶解液と、これに対して非混和性の液とを槽に収容して両液の界面に脂質膜を形成し、この脂質膜をプローブ先端に付着させて脂質膜をプローブ表面に形成する方法が特許文献１に記載されている。
【0003】
即ち、特許文献１の方法は、「水溶液の液面に脂質が溶媒に溶解した脂質溶解液を積層して、前記水溶液と前記脂質溶解液との界面に沿って前記脂質が並列した第１脂質層を形成し、先端部分の表面を親水膜で覆うとともに、前記親水膜に膜輸送タンパク質を結合した前記金属プローブの先端部分を、前記脂質溶解液に浸漬させて、前記親水膜に沿って前記脂質が並列した第２脂質層を形成し、前記第１脂質層に前記第２脂質層を結合して脂質二重層を形成すると同時に、前記脂質二重層に前記膜輸送タンパク質を組み込んで人工生体膜を形成する人工生体膜の製造方法。」である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0004】
【特許文献1】特開２０１７－２９０９０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
本発明は、均質で面積の大きい脂質膜を形成することができる脂質膜の製造方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明の脂質膜の製造方法は、脂質溶解液よりなる第１液と、該脂質溶解液と非混和性の第２液とを槽に収容し、第１液と第２液との界面に脂質膜を形成し、基材を第１液及び第２液の一方から他方に移動させることにより、該基材の表面に前記脂質膜を担持させる工程を有する脂質膜の製造方法であって、該脂質溶解液中の脂質の量が、前記槽内の第１液と第２液との界面の全体に脂質膜を形成するのに必要な最少必要量の４倍以上４０倍未満である。
【0007】
本発明の一態様では、前記脂質溶解液の溶媒がヘキサン、クロロホルム又はパーフルオロヘキサンであり、前記第２液は水である。
【0008】
本発明の一態様では、前記第１液中の脂質の量が最少必要量の４～３０倍である。
【0009】
本発明の一態様では、前記脂質がリン脂質である。
【0010】
本発明の一態様では、前記第１液と第２液との界面に形成する脂質膜にタンパク質を含有させる。
【0011】
本発明の一態様では、前記基材を、前記一方の液から他方の液に移動させた後、該他方の液から該一方の液に移動させる。
【0012】
本発明の一態様では、前記最少必要量は、前記第１液と第２液との界面の面積を脂質一分子あたり占有面積で除算することにより求めた値である。
【発明の効果】
【0013】
本発明の脂質膜の製造方法では、第１液（脂質溶解液）中の脂質量を、第１液と第２液との界面の全体に脂質膜を形成するのに必要な最少必要量の４倍以上４０倍未満としたことにより、均質で面積の大きな脂質膜を形成することができる。
【0014】
基材に担持させる脂質膜は、第１液と第２液の界面に形成され、疎水性の溶媒から脂質が供給されるため、欠陥の無い大型の脂質膜を作製することができる。
【0015】
本発明によると、生体機能を利用した反応場、分離場の構築に必要な脂質膜を製造することができ、センサー、反応器、選択性透過膜等の製造に適用することができる。
【図面の簡単な説明】
【0016】
【発明を実施するための形態】
【0017】
以下、本発明についてさらに詳細に説明する。
【0018】
本発明の脂質膜の製造方法は、脂質溶解液よりなる第１液と、該脂質溶解液と非混和性の第２液とを槽に収容し、第１液と第２液との界面に脂質膜を形成し、基材を第１液及び第２液の一方から他方に移動させることにより、該基材の表面に前記脂質膜を担持させる工程を有する脂質膜の製造方法であって、該脂質溶解液中の脂質の量が、前記槽内の第１液と第２液との界面の全体に脂質膜を形成するのに必要な最少必要量の４倍以上４０倍未満である。
【0019】
第１液中の脂質の最少必要量は、第１液と第２液との界面の面積を脂質一分子あたりの占有面積で除算する方法により求めることができる。例えば、第１液と第２液との界面の面積を脂質一分子あたりの占有面積で除算し、これをアボガドロ数で除算することにより、第１液中の脂質の最少必要量（モル量）を求めることができる。
【0020】
第１液に用いられる疎水性の溶媒としては、ヘキサン、クロロホルム、パーフルオロヘキサン等が挙げられる。第２液の溶媒としては親水性の溶媒が挙げられ、具体的には水が挙げられる。
【0021】
本発明の一態様では、第２液としての親水性の溶媒と、疎水性の溶媒に脂質を溶解させた第１液とを一つの槽に収容して、２相を形成させて、脂質膜を界面に形成させる。そして、脂質膜を担持させる基材を一方の相から他方の相に移動させることで脂質膜を基材表面に担持させる。
【0022】
本発明では、予め脂質膜が界面に形成されているため、欠陥が少なくなる。また、脂質は疎水性の溶媒から補充されるため、大型の脂質膜を作製することができる。
【0023】
本発明では、疎水性の溶媒に溶解させる脂質の量は、界面の全体に脂質膜を形成するのに必要な量（最少必要量）の４０倍未満であり、それよりも多いと多層の脂質膜が形成されてしまう。
【0024】
第１液中の脂質の量は、最少必要量の４～４０倍、特に１０～３０倍であることが好ましい。
【0025】
脂質としては、リン脂質、糖脂質、グリセロール、セラミド、脂肪酸、ステロイド等が挙げられる。
【0026】
リン脂質としては、中性リン脂質、アニオン性リン脂質のいずれでもよい。
【0027】
中性リン脂質としては、１－パルミトイル－２－オレオイルホスファチジルコリン、１，２－ジオレオイルホスファチジルコリン、１，２－ジパルミトイルホスファチジルコリン、１－パルミトイル－２－オレオイルホスファチジルエタノールアミンなどが挙げられる。
【0028】
カチオン性リン脂質としては、１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリンなどが例示される。
【0029】
アニオン性リン脂質としては、１－パルミトイル－２－オレオイルホスファチジルグリセロール、１－パルミトイル－２－オレオイルホスファチジン酸、１－パルミトイル－２－オレオイルホスファチジルセリンなどを挙げることができる。
【0030】
ステロイドとしては、コレステロール、エルゴステロール、３β－［Ｎ－（Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノエタン）－カルバモイル］コレステロール塩酸塩などを挙げることができる。
【0031】
脂質膜を担持させる基材の形状は、板状、膜状、立方体、直方体、棒状、球状などのいずれもよい。基材の材料としては、ガラス、プラスチック、金属、セラミック等が挙げられ、選択性透過膜のような機能性の材料を用いても良い。なお、脂質が表面に展開し易いようにするために、表面にカチオン基やアニオン基等の親水基やオクチル基やオクタデシル基等の疎水基を導入しても良い。
【0032】
生体機能材料としては、チャネル物質、センシング物質、生体触媒物質等が挙げられる。チャネル物質としては、アクアポリン、グラミシジン、アムホテリシンＢ、あるいはそれらの誘導体などを用いることができる。
【0033】
本発明における脂質膜の作製方法においては、基材を第１液及び第２液の一方から他方に移動させて脂質膜を基材表面に担持させるが、その後、該他方から該一方に移動させてもよく、これを繰り返してもよい。
【0034】
基材の移動速度は０．１～５．０ｍｍ／ｍｉｎ、特に０．５～２．０ｍｍ／ｍｉｎ程度が好適であるが、これに限定されない。
【実施例0035】
［製膜材料］
第１液及び第２液収容用容器：５０ｍＬビーカー（直径４ｃｍ）
第２液（親水性溶媒）：水
第１液の疎水性溶媒：ヘキサン（富士フィルム和光純薬）
脂質：１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（重量平均分子量＝７６０．１：ＰＯＰＣ，ＮＯＦ）
１，２－ジオレオイロキシ－３－トリメチルアンモニウムプロパンクロリド（重量平均分子量＝６９８．５：ＤＯＴＡＰ，ＮＯＦ）
基材：カバーガラス（Ｃ２１８１８１，松浪硝子工業株式会社 １８ｍｍ×１８ｍｍ×０．１３～０．１７ｍｍを１０ｍｍ×５ｍｍ×０．１３～０．１７ｍｍにカットして使用）
第１液及び第２液収容用容器：５０ｍＬビーカー（直径４ｃｍ）
第２液（親水性溶媒）：水
第１液の疎水性溶媒：ヘキサン（富士フィルム和光純薬）
脂質：１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（重量平均分子量＝７６０．１：ＰＯＰＣ，ＮＯＦ）
１，２－ジオレオイロキシ－３－トリメチルアンモニウムプロパンクロリド（重量平均分子量＝６９８．５：ＤＯＴＡＰ，ＮＯＦ）
基材：カバーガラス（Ｃ２１８１８１，松浪硝子工業株式会社 １８ｍｍ×１８ｍｍ×０．１３～０．１７ｍｍを１０ｍｍ×５ｍｍ×０．１３～０．１７ｍｍにカットして使用）
【0036】
［最少必要量及び脂質濃度の算出方法］
５０ｍＬビーカーに脂質（ＰＯＰＣ）溶解液１５ｍＬと水を収容した際に脂質分子が単分子膜状態で界面全体に存在するために必要な脂質量（最少必要量）は次の通り求められる。
５０ｍＬビーカーに脂質（ＰＯＰＣ）溶解液１５ｍＬと水を収容した際に脂質分子が単分子膜状態で界面全体に存在するために必要な脂質量（最少必要量）は次の通り求められる。
【0037】
ＰＯＰＣ一分子あたり占有面積（ａ）：約７×１０－１ｎｍ２
脂質溶液の界面の面積（ｂ）：π（４／２）２ｃｍ２＝約１２×１０１４ｎｍ２
界面に単分子膜を形成するのに必要な脂質のモル量は、（ｂ）／（（ａ）×６×１０２３）＝約３×１０－９ｍｏｌとなる。
脂質溶液の界面の面積（ｂ）：π（４／２）２ｃｍ２＝約１２×１０１４ｎｍ２
界面に単分子膜を形成するのに必要な脂質のモル量は、（ｂ）／（（ａ）×６×１０２３）＝約３×１０－９ｍｏｌとなる。
【0038】
上記最少必要モル量（３×１０－９ｍｏｌ）の脂質を１５ｍＬのヘキサンに溶解させた溶液の脂質濃度（以下、最小濃度ということがある。）は、３×１０－９ｍｏｌ／１５ｍＬ≒２×１０－４ｍｍｏｌ／Ｌとなる。
【0039】
＜実験１：界面張力の測定及びそれに基づく単分子膜形成のための脂質量の算出＞
ヘキサンに脂質を溶解させた脂質溶解液と水の界面に脂質分子が単分子膜状態で界面全体を被覆している場合、界面張力が低下すると考えられる。そこで、４×１０－４、６×１０－４、７×１０－４、８×１０－４、１×１０－３、４×１０－３ｍｍｏｌ／Ｌの各脂質濃度のヘキサン溶液と水の間の界面張力を界面張力計（ＤＹ－３００，Ｋｙｏｗａ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｏ．， ＬＴＤ，Ｓａｉｔａｍａ，Ｊａｐａｎ）を用いてＷｉｌｈｅｌｍｙ法により測定した。結果を図１に示す。
ヘキサンに脂質を溶解させた脂質溶解液と水の界面に脂質分子が単分子膜状態で界面全体を被覆している場合、界面張力が低下すると考えられる。そこで、４×１０－４、６×１０－４、７×１０－４、８×１０－４、１×１０－３、４×１０－３ｍｍｏｌ／Ｌの各脂質濃度のヘキサン溶液と水の間の界面張力を界面張力計（ＤＹ－３００，Ｋｙｏｗａ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｏ．， ＬＴＤ，Ｓａｉｔａｍａ，Ｊａｐａｎ）を用いてＷｉｌｈｅｌｍｙ法により測定した。結果を図１に示す。
【0040】
図１の通り、８×１０－４ｍｍｏｌ／Ｌ付近の濃度で界面張力が急激に低下しており、単分子膜が形成されるためには、８×１０－４ｍｍｏｌ／Ｌ以上、すなわち上記の計算から得られる最小濃度（２×１０－４ｍｍｏｌ／Ｌ）の４倍以上の濃度である必要があることが認められた。なお、ＤＯＴＡＰの重量平均分子量はＰＯＰＣとほぼ同等であるところから、ＤＯＴＡＰの場合も最小濃度はＰＯＰＣの場合と同様であると考えられる。
【0041】
＜実施例１＞
［脂質溶液の調製］
脂質としてＤＯＴＡＰを用い、６×１０－３ｍｍｏｌ／Ｌ（界面に脂質単分子膜が形成される最小濃度の３０倍）の脂質溶液を調製した。
［脂質溶液の調製］
脂質としてＤＯＴＡＰを用い、６×１０－３ｍｍｏｌ／Ｌ（界面に脂質単分子膜が形成される最小濃度の３０倍）の脂質溶液を調製した。
【0042】
［基材表面への脂質膜形成］
上記カバーガラスよりなる基材を、小型プラズマ装置（ＰＲ２００；ヤマト科学株式会社，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）を用いて１５０Ｗで１０分間プラズマ処理を行い、製膜直前まで純水中に浸漬した。次に、５０ｍＬビーカーへ純水（第２液）を３０ｍＬ入れて水相とし、基材を水平状態にて浸漬させた。その後、上記の脂質溶液３０ｍＬを静かに水相の上側に注ぎ、５分間静置し、界面に脂質膜を形成した。
上記カバーガラスよりなる基材を、小型プラズマ装置（ＰＲ２００；ヤマト科学株式会社，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）を用いて１５０Ｗで１０分間プラズマ処理を行い、製膜直前まで純水中に浸漬した。次に、５０ｍＬビーカーへ純水（第２液）を３０ｍＬ入れて水相とし、基材を水平状態にて浸漬させた。その後、上記の脂質溶液３０ｍＬを静かに水相の上側に注ぎ、５分間静置し、界面に脂質膜を形成した。
【0043】
その後、基材を鉛直上方に１ｍｍ／ｍｉｎの速度で移動させて脂質溶液中に移行させ、脂質溶液中に５分間静置した。その後、基材を１ｍｍ／ｍｉｎの速度で下方移動させて水中に移行させた。その後、パスツールピペットを用いて脂質溶液を吸い出すことにより、脂質溶液を除去し、水相から基材を回収した。なお、基材の移動にはディップコーター（ＮＤ－０４０７，ＳＤＩ，Ｋｙｏｔｏ，Ｊａｐａｎ）を用いた。
【0044】
［構造評価］
ＦＲＡＰにより脂質膜の構造を評価した。ＦＲＡＰとは、平面基板上に存在する脂質分子の流動性を見る手法で、基板上の脂質分子が平面二分子膜を形成しているか、リポソームとして吸着しているかどうかを判別する事ができる。まず、蛍光物質（３，３－ｄｉｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘａｃａｒｂｏ－ｃｙａｎｉｎｅ ｐｅｒｃｈｌｏｒａｔｅ；ＤｉＯ，Ｍ．Ｗ．＝８８２．０，Ｂｉｏｔｉｕｍ，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＵＳＡ）で標識した脂質分子を用いて平面基板上に脂質を吸着させる。その後、レーザーで局所的に脂質分子の蛍光を消光させ、消光した領域の蛍光強度の経時変化を測定する。平面基板上に脂質が平面的な二分子膜を形成した場合は、非消光領域から蛍光分子が供給されるため蛍光強度が回復するが、リポソームとして吸着した場合は脂質分子の移動が起こらず蛍光強度は回復しない。
ＦＲＡＰにより脂質膜の構造を評価した。ＦＲＡＰとは、平面基板上に存在する脂質分子の流動性を見る手法で、基板上の脂質分子が平面二分子膜を形成しているか、リポソームとして吸着しているかどうかを判別する事ができる。まず、蛍光物質（３，３－ｄｉｏｃｔａｄｅｃｙｌｏｘａｃａｒｂｏ－ｃｙａｎｉｎｅ ｐｅｒｃｈｌｏｒａｔｅ；ＤｉＯ，Ｍ．Ｗ．＝８８２．０，Ｂｉｏｔｉｕｍ，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＵＳＡ）で標識した脂質分子を用いて平面基板上に脂質を吸着させる。その後、レーザーで局所的に脂質分子の蛍光を消光させ、消光した領域の蛍光強度の経時変化を測定する。平面基板上に脂質が平面的な二分子膜を形成した場合は、非消光領域から蛍光分子が供給されるため蛍光強度が回復するが、リポソームとして吸着した場合は脂質分子の移動が起こらず蛍光強度は回復しない。
【0045】
共焦点レーザー走査型顕微鏡（ＦＶ１０００－Ｄ，Ｏｌｙｍｐｕｓ Ｃｏ．，Ｌｔｄ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）を用いて、直径約２０μｍの円形スポットにレーザーを照射し、試料の蛍光を部分的に消光させた後、その部分の蛍光の回復を観察した。励起波長４８４ｎｍ、蛍光波長５０１ｎｍにおける蛍光強度をそれぞれＩｂ、Ｉｒとし、消光ｔ分後における相対蛍光強度ＲＩ（ｔ）＝Ｉｂ／Ｉｒを求め、以下の式によって蛍光回復率ＦＲ（ｔ）を算出した。
【0046】
ＦＲ（ｔ）＝（ＲＩ（ｔ）－ＲＩ（０））／（１－ＲＩ（０））
その結果、回復率は９１．１％であった。
その結果、回復率は９１．１％であった。
【0047】
［実施例２］
脂質溶解の濃度を４×１０－３ｍｍｏｌ／Ｌ（界面に脂質単分子膜が形成される最小濃度の２０倍）としたこと以外は、実施例１と同様にして、脂質膜を作製した。上記記載のＦＲＡＰにより脂質膜の流動性を評価したところ、回復率は５３．４％であった。
脂質溶解の濃度を４×１０－３ｍｍｏｌ／Ｌ（界面に脂質単分子膜が形成される最小濃度の２０倍）としたこと以外は、実施例１と同様にして、脂質膜を作製した。上記記載のＦＲＡＰにより脂質膜の流動性を評価したところ、回復率は５３．４％であった。
【0048】
［実施例３］
脂質溶解の濃度を２×１０－３ｍｍｏｌ／Ｌ（界面に脂質単分子膜が形成される最小濃度の１０倍）としたこと以外は、実施例１と同様にして、脂質膜を作製した。上記記載のＦＲＡＰにより脂質膜の流動性を評価したところ、回復率は４６．３％であった。
脂質溶解の濃度を２×１０－３ｍｍｏｌ／Ｌ（界面に脂質単分子膜が形成される最小濃度の１０倍）としたこと以外は、実施例１と同様にして、脂質膜を作製した。上記記載のＦＲＡＰにより脂質膜の流動性を評価したところ、回復率は４６．３％であった。
【0049】
［実施例４］
脂質としてＤＯＴＡＰとＰＯＰＣとをモル比で９５：５としたものを用いたこと以外は実施例１と同様にして、脂質膜を作製した。ＦＲＡＰによる回復率は９７．４％であった。
脂質としてＤＯＴＡＰとＰＯＰＣとをモル比で９５：５としたものを用いたこと以外は実施例１と同様にして、脂質膜を作製した。ＦＲＡＰによる回復率は９７．４％であった。
【0050】
［実施例５］
プラズマ処理したカバーガラスからなる基材のかわりにカチオン交換膜（ＣＭＢ、アストム株式会社）を用いたこと以外は実施例１と同様にして、脂質膜を作製した。ＦＲＡＰによる回復率は６６．３％であった。
プラズマ処理したカバーガラスからなる基材のかわりにカチオン交換膜（ＣＭＢ、アストム株式会社）を用いたこと以外は実施例１と同様にして、脂質膜を作製した。ＦＲＡＰによる回復率は６６．３％であった。
【0051】
［比較例１］
脂質溶解の濃度を８×１０－３ｍｍｏｌ／Ｌ（界面に脂質単分子膜が形成される最小濃度の４０倍）としたこと以外は、実施例１と同様にして、脂質膜を作製した。ＦＲＡＰによる回復率は０．６％であった。
脂質溶解の濃度を８×１０－３ｍｍｏｌ／Ｌ（界面に脂質単分子膜が形成される最小濃度の４０倍）としたこと以外は、実施例１と同様にして、脂質膜を作製した。ＦＲＡＰによる回復率は０．６％であった。
【0052】
［比較例２］
脂質溶解の濃度を１×１０－２ｍｍｏｌ／Ｌ（界面に脂質単分子膜が形成される最小濃度の５０倍）としたこと以外は、実施例１と同様にして、脂質膜を作製した。ＦＲＡＰによる回復率は２．７％であった。
脂質溶解の濃度を１×１０－２ｍｍｏｌ／Ｌ（界面に脂質単分子膜が形成される最小濃度の５０倍）としたこと以外は、実施例１と同様にして、脂質膜を作製した。ＦＲＡＰによる回復率は２．７％であった。
【0053】
［比較例３］
脂質溶解の濃度を４×１０－４ｍｍｏｌ／Ｌ（界面に脂質単分子膜が形成される最小濃度の２倍）とした以外は、実施例１と同様にして、脂質膜を作製した。ＦＲＡＰによる回復率は１４．６％であった。
脂質溶解の濃度を４×１０－４ｍｍｏｌ／Ｌ（界面に脂質単分子膜が形成される最小濃度の２倍）とした以外は、実施例１と同様にして、脂質膜を作製した。ＦＲＡＰによる回復率は１４．６％であった。
【0054】
＜考察＞
実施例１、２、３、４、５では、ＦＲＡＰの回復率が比較例１、２、３よりも高く、脂質膜が欠陥無く多層化せずに展開していることが認められた。
実施例１、２、３、４、５では、ＦＲＡＰの回復率が比較例１、２、３よりも高く、脂質膜が欠陥無く多層化せずに展開していることが認められた。
【図1】
【図2】