(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2022188416
(43)【公開日】2022-12-21
(54)【発明の名称】酢酸菌を有効成分とするビフィズス菌増殖促進剤
(51)【国際特許分類】
C12N 1/20 20060101AFI20221214BHJP
【ＦＩ】
C12N1/20 A
【審査請求】未請求
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2021096423
(22)【出願日】2021-06-09
(71)【出願人】
【識別番号】000001421
【氏名又は名称】キユーピー株式会社
(72)【発明者】
【氏名】梶山 大地
(72)【発明者】
【氏名】稲見 翔子
【テーマコード（参考）】
4B065
【Ｆターム（参考）】
4B065AA01X
4B065AA21X
4B065BB08
4B065BB24
4B065BB28
4B065BB29
4B065BB34
4B065BC05
4B065BC11
4B065CA41
4B065CA44
(57)【要約】 （修正有）
【課題】ビフィズス菌増殖促進剤を提供する。
【解決手段】酢酸菌を有効成分として含有する、ビフィズス菌増殖促進剤。
【選択図】なし
【解決手段】酢酸菌を有効成分として含有する、ビフィズス菌増殖促進剤。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
酢酸菌を有効成分として含有する、
ビフィズス菌増殖促進剤。
ビフィズス菌増殖促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、酢酸菌を有効成分として含有するビフィズス菌増殖促進剤に関する。
【背景技術】
【0002】
酢酸菌は、醸造酢の生産に用いられる、乳酸菌、ビフィズス菌、麹菌、酵母に並ぶ発酵微生物である。
その有用性から、近年、生理機能研究が進んでおり、例えば、酢酸菌由来のアルデヒドデヒドロゲナーゼを活用して、アルデヒドを除去できること（特許文献１）や、酢酸菌体に含まれる糖脂質が花粉症等のアレルギー疾患を予防する効果があること（特許文献２）が報告されている。
しかしながら、酢酸菌の生理機能については未だ解明されていないものも多く、本発明のビフィズス菌増殖促進作用については全く知られていない。
その有用性から、近年、生理機能研究が進んでおり、例えば、酢酸菌由来のアルデヒドデヒドロゲナーゼを活用して、アルデヒドを除去できること（特許文献１）や、酢酸菌体に含まれる糖脂質が花粉症等のアレルギー疾患を予防する効果があること（特許文献２）が報告されている。
しかしながら、酢酸菌の生理機能については未だ解明されていないものも多く、本発明のビフィズス菌増殖促進作用については全く知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0003】
【特許文献1】国際公開第２０１１／１４５５１８号
【特許文献2】特開２０１３－１８０９６３号公報
【0004】
ところで、ビフィズス菌は、酢酸や酪酸等の短鎖脂肪酸を産生し腸内ｐＨを低下させ、善玉菌として腸内環境を整え、免疫バランスの維持に働くことが知られている。また、ビフィズス菌は加齢に伴い減少することが知られている。
これらのことから、特に昨今の高齢者社会においては、効率的なビフィズス菌増殖促進因子の開発が求められている。
これらのことから、特に昨今の高齢者社会においては、効率的なビフィズス菌増殖促進因子の開発が求められている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
そこで、本発明の目的は、酢酸菌を含有するだけで、ビフィズス菌の増殖を促進させるビフィズス菌増殖促進剤を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明者らが鋭意研究を重ねた結果、偏性嫌気性菌のビフィズス菌の培養時に、嫌気性下では生きられない偏性好気性菌の酢酸菌を配合したところ、意外にもビフィズス菌が増殖促進されることを見出し、本発明を完成するに至った。
つまり、本願発明は、
（１）酢酸菌を有効成分として含有する、
ビフィズス菌増殖促進剤、
である。
つまり、本願発明は、
（１）酢酸菌を有効成分として含有する、
ビフィズス菌増殖促進剤、
である。
【発明の効果】
【0007】
本発明によれば、酢酸菌を含有することで、ビフィズス菌の増殖を促進させるビフィズス菌増殖促進剤を提供できる。
【発明を実施するための形態】
【0008】
以下、本発明を詳細に説明する。
なお、本発明において、「％」は「質量％」を意味する。
なお、本発明において、「％」は「質量％」を意味する。
【0009】
＜本発明の特徴＞
本発明のビフィズス菌増殖促進剤は、酢酸菌を含有することで、ビフィズス菌の増殖を促進させることに特徴を有する。
また、同一又は対応する特別な技術的特徴を有した発明として、酢酸菌を添加することを特徴とする、ビフィズス菌増殖促進方法とすることができる。
本発明のビフィズス菌増殖促進剤は、酢酸菌を含有することで、ビフィズス菌の増殖を促進させることに特徴を有する。
また、同一又は対応する特別な技術的特徴を有した発明として、酢酸菌を添加することを特徴とする、ビフィズス菌増殖促進方法とすることができる。
【0010】
＜ビフィズス菌＞
本発明に用いるビフィズス菌は、代表的なビフィズス菌の種類として、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム、ビフィドバクテリウム・アドレッセンティス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・インファンティス等を挙げることができる。特に、本発明の効果を発揮し易いことから、ビフィドバクテリウム・ビフィダム又はビフィドバクテリウム・ロンガムを用いるとよい。
本発明に用いるビフィズス菌は、代表的なビフィズス菌の種類として、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム、ビフィドバクテリウム・アドレッセンティス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・インファンティス等を挙げることができる。特に、本発明の効果を発揮し易いことから、ビフィドバクテリウム・ビフィダム又はビフィドバクテリウム・ロンガムを用いるとよい。
【0011】
＜酢酸菌＞
本発明に用いる酢酸菌は、代表的な酢酸菌の種類として、グルコンアセトバクタ－（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属、アセトバクタ－（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属、グルコノバクター（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ）属等を挙げることができる。
特に、本発明の効果を発揮し易いことから、グルコンアセトバクター属の酢酸菌を用いるとよい。
グルコンアセトバクター属の菌としては例えば、グルコンアセトバクター・コンブチャ（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｋｏｍｂｕｃｈａe）、グルコンアセトバクター・スウィングシ（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｓｗｉｎｇｓｉｉ）、グルコンアセトバクター・キシリヌス（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｘｙｌｉｎｕｓ）、グルコンアセトバクター・ユーロペウス（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｅｕｒｏｐａｅｕｓ）、グルコンアセトバクター・マルタセティ（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｍａｌｔａｃｅｔｉ）、グルコンアセトバクター・ハンゼニイ（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｈａｎｓｅｎｉｉ）、及びグルコンアセトバクター・リックウェフェシエンス（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）等をあげることができる。
さらに、グルコンアセトバクター属の酢酸菌の中でも、グルコンアセトバクター・コンブチャ、グルコンアセトバクター・スウィングシ、グルコンアセトバクター・キシリヌス、グルコンアセトバクター・ユーロペウス、グルコンアセトバクター・ハンゼニイ及びグルコンアセトバクター・マルタセティ等の１種又は２種以上を用いるとよく、特にグルコンアセトバクター・ハンゼニイを用いるとよい。
なお、酢酸菌の生死は問わないが、菌体の扱いやすさの点で、死菌を用いるとよい。
本発明に用いる酢酸菌は、代表的な酢酸菌の種類として、グルコンアセトバクタ－（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属、アセトバクタ－（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属、グルコノバクター（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ）属等を挙げることができる。
特に、本発明の効果を発揮し易いことから、グルコンアセトバクター属の酢酸菌を用いるとよい。
グルコンアセトバクター属の菌としては例えば、グルコンアセトバクター・コンブチャ（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｋｏｍｂｕｃｈａe）、グルコンアセトバクター・スウィングシ（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｓｗｉｎｇｓｉｉ）、グルコンアセトバクター・キシリヌス（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｘｙｌｉｎｕｓ）、グルコンアセトバクター・ユーロペウス（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｅｕｒｏｐａｅｕｓ）、グルコンアセトバクター・マルタセティ（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｍａｌｔａｃｅｔｉ）、グルコンアセトバクター・ハンゼニイ（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｈａｎｓｅｎｉｉ）、及びグルコンアセトバクター・リックウェフェシエンス（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）等をあげることができる。
さらに、グルコンアセトバクター属の酢酸菌の中でも、グルコンアセトバクター・コンブチャ、グルコンアセトバクター・スウィングシ、グルコンアセトバクター・キシリヌス、グルコンアセトバクター・ユーロペウス、グルコンアセトバクター・ハンゼニイ及びグルコンアセトバクター・マルタセティ等の１種又は２種以上を用いるとよく、特にグルコンアセトバクター・ハンゼニイを用いるとよい。
なお、酢酸菌の生死は問わないが、菌体の扱いやすさの点で、死菌を用いるとよい。
【0012】
＜酢酸菌の調製方法＞
酢酸菌の調製方法は、特に限定されないが、醸造酢製造の常法に基づき発酵により調製すればよい。
常法に基づけば、酢酸菌体が０．００１～０．０１％に増殖して、酢酸を４～２０％と高濃度に生成し、この他に、アミノ酸や多糖類等を生成する。
酢酸菌の調製方法は、特に限定されないが、醸造酢製造の常法に基づき発酵により調製すればよい。
常法に基づけば、酢酸菌体が０．００１～０．０１％に増殖して、酢酸を４～２０％と高濃度に生成し、この他に、アミノ酸や多糖類等を生成する。
【0013】
＜酢酸菌とビフィズス菌の菌体数割合＞
本発明において、ビフィズス菌増殖促進効果が得られ易いことから、酢酸菌添加時の酢酸菌とビフィズス菌の菌体数割合は、１０７：１～１０－２：１とするとよく、さらに１０６：１～１：１とするとよく、さらに１０４：１～５００：１とするとよい。
また、本発明において、費用対ビフィズス菌増殖促進効果が得られ易いことから、酢酸菌添加時の酢酸菌数については、１０４ｃｆｕ／ｍＬ以上１０１５ｃｆｕ／ｍＬ以下とするよく、さらに１０５ｃｆｕ／ｍＬ以上１０１３ｃｆｕ／ｍＬ以下とするとよく、さらに１０６ｃｆｕ／ｍＬ以上１０１２ｃｆｕ／ｍＬ以下とするとよい。
また、本発明において、費用対ビフィズス菌増殖促進効果が得られ易いことから、酢酸菌添加時のビフィズス数については、１０２ｃｆｕ／ｍＬ以上１０１２ｃｆｕ／ｍＬ以下とするよく、さらに１０３ｃｆｕ／ｍＬ以上１０１１ｃｆｕ／ｍＬ以下とするとよく、さらに１０６ｃｆｕ／ｍＬ以上１０１０ｃｆｕ／ｍＬ以下とするとよい。
本発明において、ビフィズス菌増殖促進効果が得られ易いことから、酢酸菌添加時の酢酸菌とビフィズス菌の菌体数割合は、１０７：１～１０－２：１とするとよく、さらに１０６：１～１：１とするとよく、さらに１０４：１～５００：１とするとよい。
また、本発明において、費用対ビフィズス菌増殖促進効果が得られ易いことから、酢酸菌添加時の酢酸菌数については、１０４ｃｆｕ／ｍＬ以上１０１５ｃｆｕ／ｍＬ以下とするよく、さらに１０５ｃｆｕ／ｍＬ以上１０１３ｃｆｕ／ｍＬ以下とするとよく、さらに１０６ｃｆｕ／ｍＬ以上１０１２ｃｆｕ／ｍＬ以下とするとよい。
また、本発明において、費用対ビフィズス菌増殖促進効果が得られ易いことから、酢酸菌添加時のビフィズス数については、１０２ｃｆｕ／ｍＬ以上１０１２ｃｆｕ／ｍＬ以下とするよく、さらに１０３ｃｆｕ／ｍＬ以上１０１１ｃｆｕ／ｍＬ以下とするとよく、さらに１０６ｃｆｕ／ｍＬ以上１０１０ｃｆｕ／ｍＬ以下とするとよい。
【0014】
次に、本発明を実施例、比較例及び試験例に基づき、さらに説明する。なお、本発明はこれに限定するものではない。
【0015】
［調製例１］（酢酸菌の調製方法）
エタノール４％、酵母エキス０．２％、及び清水９５．７％に酢酸菌グルコンアセトバクター・ハンゼニイ（ＮＢＲＣ１４８１７）０．１％を添加し、品温３０℃、通気量０．４Ｌ／ｍｉｎの条件で、４８時間培養を行った。
得られた酢酸菌溶液に遠心濃縮処理を施した後、培地を清水洗浄で除去し、１０％酢酸菌溶液を調製した。
次に、得られた１０％酢酸菌溶液を、凍結乾燥機（東京理化器械株式会社製）を用いて、真空度４０Ｐａ、棚温度６５℃で凍結乾燥し、粒径０．５～５μｍの酢酸菌粉末を調製した。最後に、得られた酢酸菌粉末を５０℃で加熱殺菌した。
なお、前述の酢酸菌粉末について、加熱処理前に菌体数を測定したところ、１．０×１０９ｃｆｕ／ｍＬであった。
エタノール４％、酵母エキス０．２％、及び清水９５．７％に酢酸菌グルコンアセトバクター・ハンゼニイ（ＮＢＲＣ１４８１７）０．１％を添加し、品温３０℃、通気量０．４Ｌ／ｍｉｎの条件で、４８時間培養を行った。
得られた酢酸菌溶液に遠心濃縮処理を施した後、培地を清水洗浄で除去し、１０％酢酸菌溶液を調製した。
次に、得られた１０％酢酸菌溶液を、凍結乾燥機（東京理化器械株式会社製）を用いて、真空度４０Ｐａ、棚温度６５℃で凍結乾燥し、粒径０．５～５μｍの酢酸菌粉末を調製した。最後に、得られた酢酸菌粉末を５０℃で加熱殺菌した。
なお、前述の酢酸菌粉末について、加熱処理前に菌体数を測定したところ、１．０×１０９ｃｆｕ／ｍＬであった。
【0016】
＜酢酸菌の菌体数測定方法＞
なお、DAPI染色して蛍光顕微鏡により計測するＤＡＰＩ染色法にて酢酸菌体数を測定した。以下、調整例、実施例、比較例及び試験例についても同様の方法で酢酸菌体数を測定した。
なお、DAPI染色して蛍光顕微鏡により計測するＤＡＰＩ染色法にて酢酸菌体数を測定した。以下、調整例、実施例、比較例及び試験例についても同様の方法で酢酸菌体数を測定した。
【0017】
［調製例２］（酢酸菌の調製方法）
酢酸菌グルコンアセトバクター・コンブチャ（ＮＲＢＣ１４８１６）に変更した以外は、調製例１と同様の方法により、加熱殺菌した酢酸菌粉末を調製した。なお、前述の酢酸菌粉末について、加熱処理前に菌体数を測定したところ、１．０×１０９ｃｆｕ／ｍＬであった。
酢酸菌グルコンアセトバクター・コンブチャ（ＮＲＢＣ１４８１６）に変更した以外は、調製例１と同様の方法により、加熱殺菌した酢酸菌粉末を調製した。なお、前述の酢酸菌粉末について、加熱処理前に菌体数を測定したところ、１．０×１０９ｃｆｕ／ｍＬであった。
【0018】
［実施例１］
ビフィズス菌は、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＢＲＣ１０００１５）を用いた。まず、１０％スキムミルクおよび０．５％酵母エキス培地（１００ｍＬ）に、調製例１の酢酸菌粉末を０．１％（菌体数：１．０×１０６ｃｆｕ／ｍＬ）、ビフィズス菌を１％（菌数：７．４×１０２ｃｆｕ／ｍＬ）になるように加え、嫌気条件で３７℃、２４時間培養した。
得られた培養液を適宜希釈し、ビフィズス菌の菌体数を測定したところ、菌数１．０×１０７ｃｆｕ／ｍＬであった。
ビフィズス菌は、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（ＮＢＲＣ１０００１５）を用いた。まず、１０％スキムミルクおよび０．５％酵母エキス培地（１００ｍＬ）に、調製例１の酢酸菌粉末を０．１％（菌体数：１．０×１０６ｃｆｕ／ｍＬ）、ビフィズス菌を１％（菌数：７．４×１０２ｃｆｕ／ｍＬ）になるように加え、嫌気条件で３７℃、２４時間培養した。
得られた培養液を適宜希釈し、ビフィズス菌の菌体数を測定したところ、菌数１．０×１０７ｃｆｕ／ｍＬであった。
【0019】
［試験例１］
酢酸菌によるビフィズス菌増殖促進効果を調べるため、実施例１の方法に準じて、表１に従って酢酸菌の配合条件を変更した以外は、実施例１の方法と同様にして、ビフィズス菌（ビフィドバクテリウム・ビフィダム）の培養後菌体数を測定した。
酢酸菌によるビフィズス菌増殖促進効果を調べるため、実施例１の方法に準じて、表１に従って酢酸菌の配合条件を変更した以外は、実施例１の方法と同様にして、ビフィズス菌（ビフィドバクテリウム・ビフィダム）の培養後菌体数を測定した。
【0020】
＜ビフィズス菌の菌体数測定方法＞
段落番号［００１８］に記載の２４時間培養液から１ｍＬ取り、適宜希釈してＢＬ培地に混釈し、嫌気的条件下で３７℃、７２時間以上培養し、菌体数を測定した。
段落番号［００１８］に記載の２４時間培養液から１ｍＬ取り、適宜希釈してＢＬ培地に混釈し、嫌気的条件下で３７℃、７２時間以上培養し、菌体数を測定した。
【0021】
［試験例１］
酢酸菌添加の有無による、ビフィズス菌増殖促進効果について調べるため、表１に従い、実施例１の方法に準じて、表１に従って酢酸菌の配合条件を変更し（比較例１、実施例２～３）、ビフィズス菌の培養後菌体数を測定した。
また、下記評価基準に従って、ビフィズス菌の増殖促進効果について評価した。
酢酸菌添加の有無による、ビフィズス菌増殖促進効果について調べるため、表１に従い、実施例１の方法に準じて、表１に従って酢酸菌の配合条件を変更し（比較例１、実施例２～３）、ビフィズス菌の培養後菌体数を測定した。
また、下記評価基準に従って、ビフィズス菌の増殖促進効果について評価した。
【0022】
［表１］
【0023】
なお、表１において、「ビフィズス菌の増殖促進効果」の評価基準は以下の通りである。
◎：比較例１の増殖試験後のビフィズス菌生菌数を１とした時の、実施例の増殖試験後のビフィズス菌増殖促進率が１００以上であり、ビフィズス菌の増殖促進効果に大変優れている。
〇：比較例１の増殖試験後のビフィズス菌生菌数を１とした時の、実施例の増殖試験後のビフィズス菌増殖促進率が１.５以上であり、ビフィズス菌の増殖促進効果に優れている。
×：比較例１の増殖試験後のビフィズス菌生菌数を１とした時の、実施例の増殖試験後のビフィズス菌増殖促進率が１.５未満であり、ビフィズス菌の増殖促進効果がほとんどない、または、ない。
◎：比較例１の増殖試験後のビフィズス菌生菌数を１とした時の、実施例の増殖試験後のビフィズス菌増殖促進率が１００以上であり、ビフィズス菌の増殖促進効果に大変優れている。
〇：比較例１の増殖試験後のビフィズス菌生菌数を１とした時の、実施例の増殖試験後のビフィズス菌増殖促進率が１.５以上であり、ビフィズス菌の増殖促進効果に優れている。
×：比較例１の増殖試験後のビフィズス菌生菌数を１とした時の、実施例の増殖試験後のビフィズス菌増殖促進率が１.５未満であり、ビフィズス菌の増殖促進効果がほとんどない、または、ない。
【0024】
表１より、酢酸菌を含有すると、ビフィズス菌の増殖が促進されることが理解できる（実施例１、２）。
【0025】
［試験例２］
酢酸菌によるビフィズス菌増殖促進効果を調べるため、実施例１の方法に準じて、表２に従って酢酸菌の配合条件と培養時間を２４時間から１２時間に変更した以外は、実施例１の方法と同様にして、ビフィズス菌（ビフィドバクテリウム・ビフィダム）の培養後菌体数を測定した。
また、前述の評価基準に従って、ビフィズス菌の増殖促進効果について評価した。
酢酸菌によるビフィズス菌増殖促進効果を調べるため、実施例１の方法に準じて、表２に従って酢酸菌の配合条件と培養時間を２４時間から１２時間に変更した以外は、実施例１の方法と同様にして、ビフィズス菌（ビフィドバクテリウム・ビフィダム）の培養後菌体数を測定した。
また、前述の評価基準に従って、ビフィズス菌の増殖促進効果について評価した。
【0026】
［表２］
【0027】
表より、酢酸菌を含有すると、ビフィズス菌の増殖が促進されることが理解できる（実施例３、４）。