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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023145882
(43)【公開日】2023-10-12
(54)【発明の名称】ＩＡＰ活性化用組成物
(51)【国際特許分類】
A23K 10/18 20160101AFI20231004BHJP
A61K 35/744 20150101ALI20231004BHJP
A61K 35/747 20150101ALI20231004BHJP
A61P 1/14 20060101ALI20231004BHJP
A23L 33/135 20160101ALI20231004BHJP
【ＦＩ】
A23K10/18
A61K35/744
A61K35/747
A61P1/14
A23L33/135
【審査請求】未請求
【請求項の数】5
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022052771
(22)【出願日】2022-03-29
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】711002926
【氏名又は名称】雪印メグミルク株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110000774
【氏名又は名称】弁理士法人 もえぎ特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】河野 通生
(72)【発明者】
【氏名】冠木 敏秀
【テーマコード（参考）】
2B150
4B018
4C087
【Ｆターム（参考）】
2B150AC06
2B150AC07
2B150AD04
4B018MD86
4B018ME14
4C087AA01
4C087AA02
4C087BC58
4C087BC61
4C087CA09
4C087CA10
4C087MA52
4C087NA14
4C087ZA69
(57)【要約】
【課題】新たなＩＡＰ活性化組成物を提供することを課題とする。
【解決手段】Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓによる培養物を有効成分とすることにより、ＩＡＰ活性化作用を有する飲食品および飼料を提供する
【選択図】図３
【解決手段】Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓによる培養物を有効成分とすることにより、ＩＡＰ活性化作用を有する飲食品および飼料を提供する
【選択図】図３
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属またはストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する菌体およびその培養物を有効成分とするＩＡＰ活性化用組成物。
【請求項2】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属またはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属に属する菌が、ラクトバチルス ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）及びストレプトコッカス サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）から成る群から選択される少なくとも１つであることを特徴とする請求項１に記載のＩＡＰ活性化用組成物。
【請求項3】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属またはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属に属する菌が、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０５（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６２８）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０７（ＮＩＴＥ Ｐ－０２９８２）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０９（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６２９）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ２０８２（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６３２）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ＳＢＴ０８０３（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６３０）及びＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＳＢＴ１０１６（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６３１）から成る群から選択される少なくとも１つであることを特徴とする請求項２に記載のＩＡＰ活性化用組成物。
【請求項4】
請求項１～３のいずれか一項に記載のＩＡＰ活性化用組成物を含む、ＩＡＰ活性化用飼料組成物、ＩＡＰ活性化用医薬組成物、又はＩＡＰ活性化用食品組成物。
【請求項5】
新規乳酸菌Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０５（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６２８）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０９（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６２９）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ＳＢＴ０８０３（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６３０）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＳＢＴ１０１６（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６３１）、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ２０８２（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６３２）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、小腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＰ）活性を増強する乳酸菌に関する。
【背景技術】
【0002】
小腸型アルカリホスファターゼ（Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ａｌｋａｌｉｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ； ＩＡＰ）は、小腸刷子縁上に発現する脱リン酸化酵素である。ＩＡＰ活性の低下は、糖尿病、慢性腎不全、メタボリックシンドローム、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病（ＣＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、壊死性腸炎（ＮＥＣ）、敗血症、抗生物質関連下痢等、様々な疾患と関与していることが報告されている（非特許文献１、２）。したがって、ＩＡＰを活性化することにより、これらの疾患に対する予防・改善効果が期待される。
【0003】
ＩＡＰを活性化させる物質には様々なものが報告されている。例えば、副腎皮質刺激ホルモンや甲状腺ホルモンのようなホルモン、長鎖・中鎖トリアシルグリセロールのような脂質、デンプンやセルロース、オリゴ糖のような炭水化物、その他、アミノ酸、ペプチド、ビタミン、ミネラル等が挙げられる（非特許文献１、２）。これらの成分の一部は、前述の種々の疾患に対して抑制的に働くことが示唆されている（非特許文献１、２）。食品成分にＩＡＰ活性化能が報告されていることから、普段の食事の栄養組成を改善することによって、ＩＡＰ活性を高く維持することができ、様々な疾患を予防できると考えられる。
【0004】
ところで、乳酸菌およびビフィズス菌は、古来より発酵食品の製造に使用される細菌であるが、近年の研究で様々な健康機能の増進に寄与することが明らかとなりつつある。乳酸菌やビフィズス菌等で発酵した食品によるＩＡＰ活性化作用についても報告されており、例えば非特許文献３には、ヨーグルト及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉを用いた発酵乳に刷子縁酵素活性化作用があることが記載されている。また、特許文献１は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍを投与することでブタのＩＡＰを活性化する方法を記載している（請求項６）。しかしながら、これらの文献においては、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓのＩＡＰ活性化作用については検討されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0005】
【特許文献1】ＷＯ１９９３／００００１２
【非特許文献】
【0006】
【非特許文献1】Ｌａｌｌｅｓ ＪＰ． Ｒｅｃｅｎｔ ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ， ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ， ａｎｄ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ． Ｎｕｔｒ Ｒｅｖ．２０１９ Ｏｃｔｏｂｅｒ；７７（１０）：７１０－７２４．
【非特許文献2】Ｌａｌｌｅｓ ＪＰ． Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ： ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ａｎｄ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｄｉｅｔ． Ｎｕｔｒ Ｒｅｖ． ２０１０ Ｊｕｎ；６８（６）：３２３－３２．
【非特許文献3】Ｔｈｏｒｅｕｘ Ｋ， Ｂａｌａｓ Ｄ， Ｂｏｕｌｅｙ Ｃ， Ｓｅｎｅｇａｓ－Ｂａｌａｓ Ｆ． Ｄｉｅｔ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｗｉｔｈ ｙｏｇｈｕｒｔ ｏｒ ｍｉｌｋ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｂｙ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ＤＮ－１１４ ００１ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｂｒｕｓｈ－ｂｏｒｄｅｒ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ． Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ． １９９８ Ｊｕｌ－Ａｕｇ；５９（４）：３４９－５９．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
本発明は、新たなＩＡＰ活性化用組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【0008】
本発明者らは、上記課題を解決するべく鋭意研究を重ねた結果、ＩＡＰ活性化作用を増強する乳酸菌を見出し、これらの乳酸菌を用いて培養物を調製することでＩＡＰ活性化能の高い組成物が得られることを見出した。
【0009】
本発明は、具体的には以下のとおりである。ここにいう「組成物」には、製剤、飲食品ならびに飼料等の動物（ヒトを含む）が摂取し得る物が含まれる。
［実施態様１］
ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属またはストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する菌体およびその培養物を有効成分とするＩＡＰ活性化用組成物。
［実施態様２］
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属またはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属に属する菌が、ラクトバチルス ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）及びストレプトコッカス サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）から成る群から選択される少なくとも１つであることを特徴とする実施態様１に記載のＩＡＰ活性化用組成物。
［実施態様３］
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属またはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属に属する菌が、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０５（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６２８）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０７（ＮＩＴＥ Ｐ－０２９８２）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０９（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６２９）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ２０８２（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６３２）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ＳＢＴ０８０３（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６３０）及びＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＳＢＴ１０１６（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６３１）から成る群から選択される少なくとも１つであることを特徴とする実施態様２に記載のＩＡＰ活性化用組成物。
［実施態様４］
実施態様１～３のいずれか一項に記載のＩＡＰ活性化用組成物を含む、ＩＡＰ活性化用飼料組成物、ＩＡＰ活性化用医薬組成物、又はＩＡＰ活性化用食品組成物。
［実施態様５］
新規乳酸菌Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０５（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６２８）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０９（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６２９）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ＳＢＴ０８０３（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６３０）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＳＢＴ１０１６（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６３１）、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ２０８２（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６３２）。
［実施態様１］
ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属またはストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する菌体およびその培養物を有効成分とするＩＡＰ活性化用組成物。
［実施態様２］
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属またはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属に属する菌が、ラクトバチルス ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス デルブリッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）及びストレプトコッカス サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）から成る群から選択される少なくとも１つであることを特徴とする実施態様１に記載のＩＡＰ活性化用組成物。
［実施態様３］
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属またはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属に属する菌が、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０５（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６２８）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０７（ＮＩＴＥ Ｐ－０２９８２）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０９（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６２９）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ２０８２（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６３２）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ＳＢＴ０８０３（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６３０）及びＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＳＢＴ１０１６（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６３１）から成る群から選択される少なくとも１つであることを特徴とする実施態様２に記載のＩＡＰ活性化用組成物。
［実施態様４］
実施態様１～３のいずれか一項に記載のＩＡＰ活性化用組成物を含む、ＩＡＰ活性化用飼料組成物、ＩＡＰ活性化用医薬組成物、又はＩＡＰ活性化用食品組成物。
［実施態様５］
新規乳酸菌Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０５（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６２８）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０９（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６２９）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ＳＢＴ０８０３（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６３０）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＳＢＴ１０１６（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６３１）、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ２０８２（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６３２）。
【発明の効果】
【0010】
本発明によれば、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓよりなる群から選択される少なくとも一種の乳酸菌およびその培養物を含有するＩＡＰ活性化用組成物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【図1】２週間培養したヒト大腸癌由来細胞株Ｃａｃｏ－２に、乳酸菌・ビフィズス菌培養物を１ ｍｇ／ｍｌで添加して１週間培養した時のＩＡＰ活性（Ｕ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）を示したグラフである。
【図2】２週間培養したヒト大腸癌由来細胞株Ｃａｃｏ－２に、図１で強い効果の認められた乳酸菌・ビフィズス菌培養物を１または１０ ｍｇ／ｍｌで添加して１週間培養した時のＩＡＰ活性（Ｕ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）を示したグラフである。
【図3】２週間培養したヒト大腸癌由来細胞株Ｃａｃｏ－２に、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓによる培養物を５ ｍｇ／ｍｌで添加して１週間培養した時のＩＡＰ活性（Ｕ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【0012】
（ラクトバチルス属またはストレプトコッカス属に属する菌の菌体）
本発明のＩＡＰ活性化用組成物では、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属およびストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属に分類される乳酸菌であり、且つＩＡＰ活性化能を有するものであればどのようなものでも用いることができる。尚、ここで述べるラクトバチルス属には、旧来ラクトバチルス属として分類されていたリジラクトバチルス（Ｌｉｇｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、レビラクトバチルス（Ｌｅｖｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、リモシラクトバチルス（Ｌｉｍｏｓｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、レンチラクトバチルス（Ｌｅｎｔｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクチカゼイバチルス（Ｌａｃｔｉｃａｓｅｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクチプランチバチルス（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラチラクトバチルス（Ｌａｔｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ロイゴラクトバチルス（Ｌｏｉｇｏｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、シュレイフェリラクトバチルス（Ｓｃｈｌｅｉｆｅｒｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属等を含む。
本発明のＩＡＰ活性化用組成物では、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属およびストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属に分類される乳酸菌であり、且つＩＡＰ活性化能を有するものであればどのようなものでも用いることができる。尚、ここで述べるラクトバチルス属には、旧来ラクトバチルス属として分類されていたリジラクトバチルス（Ｌｉｇｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、レビラクトバチルス（Ｌｅｖｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、リモシラクトバチルス（Ｌｉｍｏｓｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、レンチラクトバチルス（Ｌｅｎｔｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクチカゼイバチルス（Ｌａｃｔｉｃａｓｅｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクチプランチバチルス（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラチラクトバチルス（Ｌａｔｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ロイゴラクトバチルス（Ｌｏｉｇｏｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、シュレイフェリラクトバチルス（Ｓｃｈｌｅｉｆｅｒｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属等を含む。
【0013】
具体的には、リジラクトバチルス アシディピスシス（Ｌｉｇｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｉｐｉｓｃｉｓ）、ラクトバチルス アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス アミロボラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｖｏｒｕｓ）、レビラクトバチルス ブレビス（Ｌｅｖｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバチルス クリスパタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）、ラクトバチルス デルブルッキー サブスピーシーズ デルブルッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ラクトバチルス デルブルッキー サブスピーシーズ ラクティス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチルス デルブルッキー サブスピーシーズ ジャコブセニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｊａｋｏｂｓｅｎｉｉ）、リモシラクトバチルス ファーメンタム（Ｌｉｍｏｓｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトバチルス ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバチルス パラガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバチルス ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルス ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、レンチラクトバチルス ケフィリ（Ｌｅｎｔｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｋｅｆｉｒｉ）、リモシラクトバチルス ムコサエ（Ｌｉｍｏｓｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｕｃｏｓａｅ）、リモシラクトバチルス オリス（Ｌｉｍｏｓｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｏｒｉｓ）、レンチラクトバチルス パラブチネリ（Ｌｅｎｔｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｂｕｃｈｎｅｒｉ）、ラクチカゼイバチルス パラカゼイ（Ｌａｃｔｉｃａｓｅｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクチプランチバチルス プランタラム（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、リモシラクトバチルス ロイテリ（Ｌｉｍｏｓｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクチカゼイバチルス ラムノーサス（Ｌａｃｔｉｃａｓｅｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラチラクトバチルス サケイ（Ｌａｔｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｋｅｉ）、リジラクトバチルス サリバリウス（Ｌｉｇｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、リモシラクトバチルス バジナリス（Ｌｉｍｏｓｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、ロイゴラクトバチルス コリニフォルミス（Ｌｏｉｇｏｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏｒｙｎｉｆｏｒｍｉｓ）、ラチラクトバチルス クルバタス（Ｌａｔｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｕｒｖａｔｕｓ）、シュレイフェリラクトバチルス ハルビネンシス（Ｓｃｈｌｅｉｆｅｒｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈａｒｂｉｎｅｎｓｉｓ）、ストレプトコッカス サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ストレプトコッカス オラリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｏｒａｌｉｓ）、ストレプトコッカス パラウベリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐａｒａｕｂｅｒｉｓ）、ストレプトコッカス サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）等を例示できるが、これらに限定されるものではない。
【0014】
本発明に使用するラクトバチルス属の菌は、ラクトバチルス デルブルッキー、ラクトバチルス ジョンソニーであることが好ましく、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０５（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６２８）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０７（ＮＩＴＥ Ｐ－０２９８２）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０９（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６２９）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ２０８２（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６３２）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ＳＢＴ０８０３（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６３０）であることが特に好ましい。本発明に使用するストレプトコッカス属の菌は、ストレプトコッカス サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）であることが好ましく、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＳＢＴ１０１６（ＮＩＴＥ Ｐ－０３６３１）であることが特に好ましい。
【0015】
上記の菌株は、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 バイオテクノロジーセンター 特許微生物寄託センター（日本、千葉県、木更津市）から入手することができる。
【0016】
（ラクトバチルス属またはストレプトコッカス属に属する菌の培養物の調製）
本発明のＩＡＰ活性化用組成物において使用する、ラクトバチルス属またはストレプトコッカス属に属する菌は、各菌の培養の常法に従って培養し、所望の量を調製すればよい。調製の一例を以下に示す。ラクトバチルス属に属する乳酸菌はＭＲＳ培地（Ｄｉｆｃｏ）を用いて、ストレプトコッカス属に属する乳酸菌は１％グルコース含有Ｍ１７培地（Ｄｉｆｃｏ）を用いてそれぞれ培養し、１０％還元脱脂乳（ＳＭ、雪印メグミルク）、０．５％ミーストパウダーＮ（アサヒグループ食品）、１％グルコース（Ｗａｋｏ）、０．１％アスコルビン酸ナトリウム（Ｗａｋｏ）０．０４％ Ｌ－システイン塩酸塩を含む培地（ＳＭ培地）で３代継代培養することで培養物を得る。得られた培養物をそのまま用いてもよいし、濃縮、乾燥、凍結乾燥処理に供したものを用いることもできる。
本発明のＩＡＰ活性化用組成物において使用する、ラクトバチルス属またはストレプトコッカス属に属する菌は、各菌の培養の常法に従って培養し、所望の量を調製すればよい。調製の一例を以下に示す。ラクトバチルス属に属する乳酸菌はＭＲＳ培地（Ｄｉｆｃｏ）を用いて、ストレプトコッカス属に属する乳酸菌は１％グルコース含有Ｍ１７培地（Ｄｉｆｃｏ）を用いてそれぞれ培養し、１０％還元脱脂乳（ＳＭ、雪印メグミルク）、０．５％ミーストパウダーＮ（アサヒグループ食品）、１％グルコース（Ｗａｋｏ）、０．１％アスコルビン酸ナトリウム（Ｗａｋｏ）０．０４％ Ｌ－システイン塩酸塩を含む培地（ＳＭ培地）で３代継代培養することで培養物を得る。得られた培養物をそのまま用いてもよいし、濃縮、乾燥、凍結乾燥処理に供したものを用いることもできる。
【0017】
（利用方法）
上記したとおり、本発明の組成物は濃縮、乾燥、凍結乾燥処理に供した培養物も有効成分とすることができることから、製剤、飲食品、飼料の原料として広く用いることができる。製剤、飲食品、又は飼料を培地として菌を培養して、当該培地、培養物、懸濁物、又はその他の培養物含有物をそのまま製剤、飲食品、又は飼料として用いてもよく、または、他の培地で培養した培養物を製剤、飲食品、又は飼料に添加してもよい。
上記したとおり、本発明の組成物は濃縮、乾燥、凍結乾燥処理に供した培養物も有効成分とすることができることから、製剤、飲食品、飼料の原料として広く用いることができる。製剤、飲食品、又は飼料を培地として菌を培養して、当該培地、培養物、懸濁物、又はその他の培養物含有物をそのまま製剤、飲食品、又は飼料として用いてもよく、または、他の培地で培養した培養物を製剤、飲食品、又は飼料に添加してもよい。
【0018】
培養物などの形態としては、合成培地であるＭＲＳ培地（Ｄｉｆｃｏ）、還元脱脂乳培地など一般的に乳酸菌の培養に用いられる培地を用いた培養物だけでなく、チーズ、発酵乳、乳製品乳酸菌飲料などの乳製品などを例示することができるが特に限定されるものではない。
【0019】
本発明のＩＡＰ活性化用組成物の製剤化に際しては製剤上許可されている賦型剤、安定剤、矯味剤などを適宜混合して濃縮、凍結乾燥することができる。これらの乾燥物、濃縮物、ペースト状物も含有される。また、培養物のＩＡＰ活性化作用を妨げない範囲で、賦型剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、懸濁剤、コーティング剤、その他の任意の薬剤を混合して製剤化することもできる。剤形としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、粉剤、シロップ剤などが可能であり、これらを経口的に投与することが望ましい。
【0020】
本発明のＩＡＰ活性化用組成物はどのような飲食品に配合しても良く、飲食品の製造工程中に原料に添加しても良い。飲食品の例としては、チーズ、発酵乳、乳製品乳酸菌飲料、乳酸菌飲料、バター、マーガリンなどの乳製品、乳飲料、果汁飲料、清涼飲料などの飲料、ゼリー、キャンディー、プリン、マヨネーズなどの卵加工品、バターケーキなどの菓子・パン類、さらには、各種粉乳の他、乳幼児食品、栄養組成物などを挙げることができるが特に限定されるものではない。
【0021】
本発明のＩＡＰ活性化用組成物は、飼料に配合することができる。前記飲食品と同様にどのような飼料に配合しても良く、飼料の製造工程中に原料に添加しても良い。
【0022】
本発明の組成物の投与対象は特に限定されず、ヒトに対して投与することができるが、投与対象はヒト以外の動物（例えば、イヌ、ネコ、ウマ又はウサギ等）であることもできる。投与対象がヒトである場合は、２０歳未満の未成年、成人、又は６５歳以上の高齢者などに投与することができる。本発明の組成物は、健康な対象に投与することで腸内環境を改善することが出来る。
【0023】
（ＩＡＰ活性の評価方法）
実施例に記載の方法、すなわち、ヒト大腸癌由来細胞株Ｃａｃｏ－２を用いた方法で評価が可能である。具体的には、以下の通りである。
（１）Ｃａｃｏ－２細胞は、コラーゲンコート（新田ゼラチン）した４８－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ上で培養する。培地は１０％ ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）、１％ ＮＥＡＡ（ナカライテスク）、１％ ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）を含むｈｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅ ＤＭＥＭ（ナカライテスク）を使用する。培養は３７°Ｃ、５％ＣＯ２条件下で行う。
（２）コラーゲンコートした４８－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅにＣａｃｏ－２細胞を０．５×１０５ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種し、コンフルエントになった日を培養０日とし、２－３日ごとに培地交換して２週間培養する。
（３）２週間後、２ ｍＭ酪酸ナトリウムあるいは各種濃度のサンプルを溶解した培地に培地交換し、２－３日ごとに培地交換しながら７日間培養する。
（４）サンプル添加後７日間培養した細胞を生理食塩水で３回洗浄し、１％ Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ、１ ｍＭ ＰＭＳＦ、１０ ｍＭ ＴＢＳ（ｐＨ ７．３）を２００ μｌ／ｗｅｌｌで添加して細胞を溶解させる。細胞溶解液を全量１．５ ｍｌチューブに回収し、氷上にて超音波破砕する（ｏｎ ｔｉｍｅ １５ ｓｅｃ， Ａｍｐ ３０％）。４，８００×ｇ、５ ｍｉｎ、４°Ｃで遠心し、上清を回収する。回収した上清を粗酵素抽出物とし、試験に供するまで－８０°Ｃで保存する。
（５）粗酵素抽出物のＩＡＰ活性を、ＰｉｅｒｃｅＴＭ ＰＮＰＰ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｋｉｔ（３７６２０，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）にて測定する。１％ Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ、１ ｍＭ ＰＭＳＦ、１０ ｍＭ ＴＢＳ（ｐＨ ７．３）で検量線用に段階希釈したＢａｃｔｅｒｉａｌ ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（ＢＡＰ，Ｔａｋａｒａ）、または１０倍希釈したサンプルを、９６－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに１０ μｌ／ｗｅｌｌで添加する。ＰＮＰＰ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎを９０ μｌ／ｗｅｌｌで添加し、プレートシェイカーにて撹拌した後、暗所にて室温で３０分間静置する。静置後、２Ｎ ＮａＯＨを５０ μｌ／ｗｅｌｌで添加して反応を停止し、Ｖａｒｉｏｓｋａｎ Ｆｌａｓｈ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）にて４０５ ｎｍ吸光度を測定する。ＢＡＰの測定結果から作出した検量線を用いて、ＩＡＰ活性（Ｕ／ｍｌ）を算出する。
（６）粗酵素抽出物のタンパク質濃度を、ＰｉｅｒｃｅＴＭ ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（２３２２５，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）にて測定する。ＩＡＰ活性（Ｕ／ｍｌ）をタンパク質濃度（ｍｇ／ｍｌ）にて補正し、補正値をＩＡＰ活性（Ｕ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）とする。
実施例に記載の方法、すなわち、ヒト大腸癌由来細胞株Ｃａｃｏ－２を用いた方法で評価が可能である。具体的には、以下の通りである。
（１）Ｃａｃｏ－２細胞は、コラーゲンコート（新田ゼラチン）した４８－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ上で培養する。培地は１０％ ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）、１％ ＮＥＡＡ（ナカライテスク）、１％ ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）を含むｈｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅ ＤＭＥＭ（ナカライテスク）を使用する。培養は３７°Ｃ、５％ＣＯ２条件下で行う。
（２）コラーゲンコートした４８－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅにＣａｃｏ－２細胞を０．５×１０５ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種し、コンフルエントになった日を培養０日とし、２－３日ごとに培地交換して２週間培養する。
（３）２週間後、２ ｍＭ酪酸ナトリウムあるいは各種濃度のサンプルを溶解した培地に培地交換し、２－３日ごとに培地交換しながら７日間培養する。
（４）サンプル添加後７日間培養した細胞を生理食塩水で３回洗浄し、１％ Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ、１ ｍＭ ＰＭＳＦ、１０ ｍＭ ＴＢＳ（ｐＨ ７．３）を２００ μｌ／ｗｅｌｌで添加して細胞を溶解させる。細胞溶解液を全量１．５ ｍｌチューブに回収し、氷上にて超音波破砕する（ｏｎ ｔｉｍｅ １５ ｓｅｃ， Ａｍｐ ３０％）。４，８００×ｇ、５ ｍｉｎ、４°Ｃで遠心し、上清を回収する。回収した上清を粗酵素抽出物とし、試験に供するまで－８０°Ｃで保存する。
（５）粗酵素抽出物のＩＡＰ活性を、ＰｉｅｒｃｅＴＭ ＰＮＰＰ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｋｉｔ（３７６２０，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）にて測定する。１％ Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ、１ ｍＭ ＰＭＳＦ、１０ ｍＭ ＴＢＳ（ｐＨ ７．３）で検量線用に段階希釈したＢａｃｔｅｒｉａｌ ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（ＢＡＰ，Ｔａｋａｒａ）、または１０倍希釈したサンプルを、９６－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに１０ μｌ／ｗｅｌｌで添加する。ＰＮＰＰ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎを９０ μｌ／ｗｅｌｌで添加し、プレートシェイカーにて撹拌した後、暗所にて室温で３０分間静置する。静置後、２Ｎ ＮａＯＨを５０ μｌ／ｗｅｌｌで添加して反応を停止し、Ｖａｒｉｏｓｋａｎ Ｆｌａｓｈ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）にて４０５ ｎｍ吸光度を測定する。ＢＡＰの測定結果から作出した検量線を用いて、ＩＡＰ活性（Ｕ／ｍｌ）を算出する。
（６）粗酵素抽出物のタンパク質濃度を、ＰｉｅｒｃｅＴＭ ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（２３２２５，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）にて測定する。ＩＡＰ活性（Ｕ／ｍｌ）をタンパク質濃度（ｍｇ／ｍｌ）にて補正し、補正値をＩＡＰ活性（Ｕ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）とする。
【0024】
（利用方法）
本発明の製造方法により得られる飲食品としては、例えば、発酵乳食品、発酵豆乳食品、漬物、納豆、酒類等が挙げられる。
本発明の製造方法により得られる飲食品としては、例えば、発酵乳食品、発酵豆乳食品、漬物、納豆、酒類等が挙げられる。
【0025】
乳類を含有する原材料にＩＡＰ活性増強菌を複数種接種して発酵する際にも、用いる菌の増殖や酵素反応等に好適な条件を設定すればよい。条件は、一般に１０～４２℃で数時間、または１～３日発酵すればよい。このようにして得られた食品はＩＡＰ活性化用組成物を含有する発酵乳食品である。
【0026】
乳類を含有する原材料を用いることにより、良好に発酵し、発酵時間を短くすることができ、得られる発酵乳食品の風味及び香り等は非常に良好なものとなる。このような発酵乳食品の例としては、チーズ、ヨーグルトや豆乳等が挙げられる。
【0027】
本発明の方法により得られる医薬品としては、例えば、得られるＩＡＰ活性化用組成物をそのまま用いてもよいし、また乾燥した粉末を有効成分としてもよい。乾燥方法に特に制限はないが、成分の変質を抑制できる凍結乾燥法が好ましい。これらの粉末は乳糖等の適当な賦形剤と混合し、粉剤、錠剤、丸剤、カプセル剤又はシロップ剤等として製剤化することができる。
【0028】
さらに、本発明の方法により得られる飼料としては、例えば、得られるＩＡＰ活性化用組成物をどのような飼料に配合しても良く、その製造工程中に原料に添加しても良い。
【0029】
また、本発明の方法により得られる飲食品は、機能性表示食品、特定保健用食品、栄養機能食品、又は美容用食品として使用することも可能である。
【0030】
以下、本発明を試験例、比較例、実施例をもとにさらに詳細に説明するが、本発明は係る実施例等に限定されて解釈されるものではない。なお、特に説明のない限り、％の表示は質量％を示す。
【実施例0031】
（実施例品１）
下記（１）の各供試菌を、ＭＲＳ培地（Ｄｉｆｃｏ）、１％グルコース含有ＧＡＭブイヨン（日水）、Ｍ１７培地（Ｄｉｆｃｏ）または１％グルコース含有Ｍ１７培地（Ｄｉｆｃｏ）にそれぞれ植菌し、３０－３７℃にて１６－２４時間静置培養を行った。各種菌株の培養物を、１０％還元脱脂乳（ＳＭ、雪印メグミルク）、０．５％ミーストパウダーＮ（アサヒグループ食品）、１％グルコース（Ｗａｋｏ）、０．１％アスコルビン酸ナトリウム（Ｗａｋｏ）０．０４％ Ｌ－システイン塩酸塩を含む培地（ＳＭ培地）で３代継代培養した。調製した各種菌株の脱脂乳培養物は、ｐＨを測定した後、凍結乾燥して粉末状に調製し、試験に供するまで－８０°Ｃで保管した。
下記（１）の各供試菌を、ＭＲＳ培地（Ｄｉｆｃｏ）、１％グルコース含有ＧＡＭブイヨン（日水）、Ｍ１７培地（Ｄｉｆｃｏ）または１％グルコース含有Ｍ１７培地（Ｄｉｆｃｏ）にそれぞれ植菌し、３０－３７℃にて１６－２４時間静置培養を行った。各種菌株の培養物を、１０％還元脱脂乳（ＳＭ、雪印メグミルク）、０．５％ミーストパウダーＮ（アサヒグループ食品）、１％グルコース（Ｗａｋｏ）、０．１％アスコルビン酸ナトリウム（Ｗａｋｏ）０．０４％ Ｌ－システイン塩酸塩を含む培地（ＳＭ培地）で３代継代培養した。調製した各種菌株の脱脂乳培養物は、ｐＨを測定した後、凍結乾燥して粉末状に調製し、試験に供するまで－８０°Ｃで保管した。
【0032】
（１）供試菌
各供試菌を表１に示す。
各供試菌を表１に示す。
【表1-1】
【表1-2】
【表1-3】
【表1-4】
【表1-5】
【0033】
（実施例品２）
下記（２）の各供試菌を、ＭＲＳ培地（Ｄｉｆｃｏ）、１％グルコース含有ＧＡＭブイヨン（日水）、Ｍ１７培地（Ｄｉｆｃｏ）、１％グルコース含有Ｍ１７培地（Ｄｉｆｃｏ）にそれぞれ植菌し、３０－３７℃にて１６－２４時間静置培養を行った。各種菌株の培養物を、１０％還元脱脂乳（ＳＭ、雪印メグミルク）、０．５％ミーストパウダーＮ（アサヒグループ食品）、１％グルコース（Ｗａｋｏ）、０．１％アスコルビン酸ナトリウム（Ｗａｋｏ）０．０４％ Ｌ－システイン塩酸塩を含む培地（ＳＭ培地）で３代継代培養した。調製した各種菌株の脱脂乳培養物は、ｐＨを測定した後、凍結乾燥して粉末状に調製し、試験に供するまで－８０°Ｃで保管した。
下記（２）の各供試菌を、ＭＲＳ培地（Ｄｉｆｃｏ）、１％グルコース含有ＧＡＭブイヨン（日水）、Ｍ１７培地（Ｄｉｆｃｏ）、１％グルコース含有Ｍ１７培地（Ｄｉｆｃｏ）にそれぞれ植菌し、３０－３７℃にて１６－２４時間静置培養を行った。各種菌株の培養物を、１０％還元脱脂乳（ＳＭ、雪印メグミルク）、０．５％ミーストパウダーＮ（アサヒグループ食品）、１％グルコース（Ｗａｋｏ）、０．１％アスコルビン酸ナトリウム（Ｗａｋｏ）０．０４％ Ｌ－システイン塩酸塩を含む培地（ＳＭ培地）で３代継代培養した。調製した各種菌株の脱脂乳培養物は、ｐＨを測定した後、凍結乾燥して粉末状に調製し、試験に供するまで－８０°Ｃで保管した。
【0034】
（２）供試菌
各供試菌を表２に示す。
各供試菌を表２に示す。
【表2-1】
【表2-2】
【0035】
上記（１）（２）の菌株は、独立行政法人 製品評価技術基盤機構 バイオテクノロジーセンター 特許微生物寄託センター（日本、千葉県、木更津市）から入手することができる。
【0036】
［試験例１］ＩＡＰ活性化能の高い乳酸菌・ビフィズス菌の選抜試験
ＩＡＰ活性化能高い乳酸菌を選抜するため、下記の評価を行った。コラーゲンコートした４８－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅにＣａｃｏ－２細胞を０．５×１０５ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種し、コンフルエントになった日を培養０日とし、２－３日ごとに培地交換して２週間培養した。
ＩＡＰ活性化能高い乳酸菌を選抜するため、下記の評価を行った。コラーゲンコートした４８－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅにＣａｃｏ－２細胞を０．５×１０５ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種し、コンフルエントになった日を培養０日とし、２－３日ごとに培地交換して２週間培養した。
【0037】
２週間後、２ ｍＭ酪酸ナトリウムあるいは１－１０ ｍｇ／ｍｌの（実施例品１）を溶解した培地に培地交換し、２－３日ごとに培地交換しながら７日間培養した。
【0038】
サンプル添加後７日間培養した細胞を生理食塩水で３回洗浄し、１％ Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ、１ ｍＭ ＰＭＳＦ、１０ ｍＭ ＴＢＳ（ｐＨ ７．３）を２００ μｌ／ｗｅｌｌで添加して細胞を溶解させた。細胞溶解液を全量１．５ ｍｌチューブに回収し、氷上にて超音波破砕した（ｏｎ ｔｉｍｅ １５ ｓｅｃ， Ａｍｐ ３０％）。４，８００×ｇ、５ ｍｉｎ、４°Ｃで遠心し、上清を回収した。回収した上清を粗酵素抽出物とし、試験に供するまで－８０°Ｃで保存した。
【0039】
粗酵素抽出物のＩＡＰ活性を、ＰｉｅｒｃｅＴＭ ＰＮＰＰ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｋｉｔ（３７６２０，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）にて測定した。１％ Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ、１ ｍＭ ＰＭＳＦ、１０ ｍＭ ＴＢＳ（ｐＨ ７．３）で検量線用に段階希釈したＢａｃｔｅｒｉａｌ ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（ＢＡＰ，Ｔａｋａｒａ）、または１０倍希釈したサンプルを、９６－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに１０ μｌ／ｗｅｌｌで添加した。ＰＮＰＰ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎを９０ μｌ／ｗｅｌｌで添加し、プレートシェイカーにて撹拌した後、暗所にて室温で３０分間静置する。静置後、２Ｎ ＮａＯＨを５０ μｌ／ｗｅｌｌで添加して反応を停止し、Ｖａｒｉｏｓｋａｎ Ｆｌａｓｈ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）にて４０５ ｎｍ吸光度を測定した。ＢＡＰの測定結果から作出した検量線を用いて、ＩＡＰ活性（Ｕ／ｍｌ）を算出した。
【0040】
粗酵素抽出物のタンパク質濃度を、ＰｉｅｒｃｅＴＭ ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（２３２２５，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）にて測定した。ＩＡＰ活性（Ｕ／ｍｌ）をタンパク質濃度（ｍｇ／ｍｌ）にて補正し、補正値をＩＡＰ活性（Ｕ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）とした。
【0041】
同じ濃度のＳＭ添加群との群間比較はＤｕｎｎｅｔｔ‘ｓ ｔｅｓｔにて実施した。有意水準はＰ＝０．０５とした（＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１，＊＊＊Ｐ＜０．００１）。
【0042】
各種乳酸菌・ビフィズス菌培養物を１ ｍｇ／ｍｌで添加したＣａｃｏ－２細胞のＩＡＰ活性を図１に示した。試験を４回に分けて実施し（Ｅｘｐｔ．１～４）、各回の上位３位までの培養物をＩＡＰ活性化能の高い培養物として選抜した。
【0043】
Ｅｘｐｔ．１～４の上位３位までの各種乳酸菌・ビフィズス菌培養物を１または１０ ｍｇ／ｍｌで添加したＣａｃｏ－２細胞のＩＡＰ活性を図２に示した。１０ ｍｇ／ｍｌの添加条件において、ＳＭ添加群と比較して、Ｅｘｐｔ．１ではＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ＳＢＴ０８０３培養物、Ｅｘｐｔ．２ではＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０７培養物、Ｅｘｐｔ．３ではＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＳＢＴ１０１６培養物添加群がそれぞれ有意にＩＡＰ活性を亢進させた。Ｅｘｐｔ．４ではＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍｏｎｇｏｌｉｅｎｓｅ培養物が、ＳＭ添加群と比較して有意にＩＡＰ活性を亢進させたが、前述のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ＳＢＴ０８０３培養物、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０７培養物、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＳＢＴ１０１６培養物と比較すると活性は低かった。すなわち、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ＳＢＴ０８０３、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０７、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＳＢＴ１０１６は脱脂乳のＩＡＰ活性化能を増強する菌であることが示された。
【0044】
［試験例２］ＩＡＰ活性化能の高い菌種探索試験
試験例１において、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ＳＢＴ０８０３、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０７、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＳＢＴ１０１６に認められた効果が、菌株特異的な効果なのか、あるいは菌種に共通した効果なのかを検証するべく、下記の評価を行った。
試験例１において、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ＳＢＴ０８０３、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０７、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＳＢＴ１０１６に認められた効果が、菌株特異的な効果なのか、あるいは菌種に共通した効果なのかを検証するべく、下記の評価を行った。
【0045】
コラーゲンコートした４８－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅにＣａｃｏ－２細胞を０．５×１０５ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種し、コンフルエントになった日を培養０日とし、２－３日ごとに培地交換して２週間培養した。
【0046】
２週間後、２ ｍＭ酪酸ナトリウムあるいは５ ｍｇ／ｍｌの（実施例品２）を溶解した培地に培地交換し、２－３日ごとに培地交換しながら７日間培養した。
【0047】
サンプル添加後７日間培養した細胞を生理食塩水で３回洗浄し、１％ Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ、１ ｍＭ ＰＭＳＦ、１０ ｍＭ ＴＢＳ（ｐＨ ７．３）を２００ μｌ／ｗｅｌｌで添加して細胞を溶解させる。細胞溶解液を全量１．５ ｍｌチューブに回収し、氷上にて超音波破砕する（ｏｎ ｔｉｍｅ １５ ｓｅｃ， Ａｍｐ ３０％）。４，８００×ｇ、５ ｍｉｎ、４°Ｃで遠心し、上清を回収した。回収した上清を粗酵素抽出物とし、試験に供するまで－８０°Ｃで保存した。
【0048】
粗酵素抽出物のＩＡＰ活性を、ＰｉｅｒｃｅＴＭ ＰＮＰＰ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｋｉｔ（３７６２０，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）にて測定した。１％ Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ、１ ｍＭ ＰＭＳＦ、１０ ｍＭ ＴＢＳ（ｐＨ ７．３）で検量線用に段階希釈したＢａｃｔｅｒｉａｌ ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（ＢＡＰ，Ｔａｋａｒａ）、または１０倍希釈したサンプルを、９６－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに１０ μｌ／ｗｅｌｌで添加した。ＰＮＰＰ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎを９０ μｌ／ｗｅｌｌで添加し、プレートシェイカーにて撹拌した後、暗所にて室温で３０分間静置する。静置後、２Ｎ ＮａＯＨを５０ μｌ／ｗｅｌｌで添加して反応を停止し、Ｖａｒｉｏｓｋａｎ Ｆｌａｓｈ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）にて４０５ ｎｍ吸光度を測定した。ＢＡＰの測定結果から作出した検量線を用いて、ＩＡＰ活性（Ｕ／ｍｌ）を算出した。
【0049】
粗酵素抽出物のタンパク質濃度を、ＰｉｅｒｃｅＴＭ ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（２３２２５，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）にて測定した。ＩＡＰ活性（Ｕ／ｍｌ）をタンパク質濃度（ｍｇ／ｍｌ）にて補正し、補正値をＩＡＰ活性（Ｕ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）とした。
【0050】
同じ濃度のＳＭ添加群との群間比較はＤｕｎｎｅｔｔ‘ｓ ｔｅｓｔにて実施した。有意水準はＰ＝０．０５とした（＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１，＊＊＊Ｐ＜０．００１）。
【0051】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ２菌株、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ １１菌株、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ２２菌株による培養物を５ ｍｇ／ｍｌで添加したＣａｃｏ－２細胞のＩＡＰ活性を図３に示した。その結果、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓは２２菌株中１０菌株の培養物が、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉとＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉは試験に供したすべての菌株の培養物が、ＳＭ添加群と比較して有意にＩＡＰ活性を亢進させた。すなわち、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ 、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓの脱脂乳培養物はＩＡＰ活性化能を有することが示された。
【産業上の利用可能性】
【0052】
本発明によれば、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属またはストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する菌の培養物を有効成分とするＩＡＰ活性化用組成物を提供することができる。
【0053】
［寄託生物材料への言及］
（１）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０５
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２丁目５番地８（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関が生物材料を受領した日付
令和４年３月２３日（受領日）
ハ イの寄託機関が寄託について付した受領番号
ＮＩＴＥ ＡＰ－０３６２８
（２）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０９
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２丁目５番地８（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関が生物材料を受領した日付
令和４年３月２３日（受領日）
ハ イの寄託機関が寄託について付した受領番号
ＮＩＴＥ ＡＰ－０３６２９
（３）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ＳＢＴ０８０３
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２丁目５番地８（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関が生物材料を受領した日付
令和４年３月２３日（受領日）
ハ イの寄託機関が寄託について付した受領番号
ＮＩＴＥ ＡＰ－０３６３０
（４）Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＳＢＴ１０１６
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２丁目５番地８（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関が生物材料を受領した日付
令和４年３月２３日（受領日）
ハ イの寄託機関が寄託について付した受領番号
ＮＩＴＥ ＡＰ－０３６３１
（５）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ２０８２
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２丁目５番地８（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関が生物材料を受領した日付
令和４年３月２３日（受領日）
ハ イの寄託機関が寄託について付した受領番号
ＮＩＴＥ ＡＰ－０３６３２
（１）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０５
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２丁目５番地８（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関が生物材料を受領した日付
令和４年３月２３日（受領日）
ハ イの寄託機関が寄託について付した受領番号
ＮＩＴＥ ＡＰ－０３６２８
（２）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ０３０９
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２丁目５番地８（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関が生物材料を受領した日付
令和４年３月２３日（受領日）
ハ イの寄託機関が寄託について付した受領番号
ＮＩＴＥ ＡＰ－０３６２９
（３）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ＳＢＴ０８０３
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２丁目５番地８（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関が生物材料を受領した日付
令和４年３月２３日（受領日）
ハ イの寄託機関が寄託について付した受領番号
ＮＩＴＥ ＡＰ－０３６３０
（４）Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ ＳＢＴ１０１６
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２丁目５番地８（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関が生物材料を受領した日付
令和４年３月２３日（受領日）
ハ イの寄託機関が寄託について付した受領番号
ＮＩＴＥ ＡＰ－０３６３１
（５）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ２０８２
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２丁目５番地８（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関が生物材料を受領した日付
令和４年３月２３日（受領日）
ハ イの寄託機関が寄託について付した受領番号
ＮＩＴＥ ＡＰ－０３６３２
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図1D】
【図2A】
【図2B】
【図3】