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特開2023-149486アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物及び該組成物を含む食品、医薬品、飼料
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023149486
(43)【公開日】2023-10-13
(54)【発明の名称】アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物及び該組成物を含む食品、医薬品、飼料
(51)【国際特許分類】
A23L 33/10 20160101AFI20231005BHJP
A23L 29/231 20160101ALI20231005BHJP
A23L 2/52 20060101ALI20231005BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20231005BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20231005BHJP
A61K 31/688 20060101ALI20231005BHJP
A61K 31/685 20060101ALI20231005BHJP
【ＦＩ】
A23L33/10
A23L29/231
A23L2/00 F
A23L2/52
A61P25/28
A61P43/00 121
A61K31/688
A61K31/685
【審査請求】未請求
【請求項の数】6
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022058086
(22)【出願日】2022-03-31
(71)【出願人】
【識別番号】711002926
【氏名又は名称】雪印メグミルク株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110000774
【氏名又は名称】弁理士法人 もえぎ特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】高梨 直也
(72)【発明者】
【氏名】中川 久子
(72)【発明者】
【氏名】森田 如一
【テーマコード（参考）】
4B018
4B041
4B117
4C086
【Ｆターム（参考）】
4B018LB01
4B018LB07
4B018LB08
4B018LE01
4B018LE02
4B018LE05
4B018LE06
4B018MD01
4B018MD10
4B018MD28
4B018MD29
4B018MD30
4B018MD34
4B018MD45
4B018ME10
4B018ME14
4B041LC10
4B041LD01
4B041LH05
4B041LK02
4B041LK05
4B041LK07
4B041LK12
4B041LK37
4B041LP01
4B041LP17
4B041LP18
4B041LP25
4B041LP27
4B117LE10
4B117LK06
4B117LK12
4B117LL01
4B117LP14
4B117LP17
4B117LP20
4B117LT05
4C086AA01
4C086AA02
4C086DA41
4C086DA42
4C086MA02
4C086MA04
4C086MA52
4C086NA05
4C086ZA15
4C086ZA16
4C086ZC75
(57)【要約】
【課題】本発明は、新たなアミロイドβによる神経細胞死を抑制する組成物、該組成物を含む食品、医薬品、及び飼料を提供することを課題とする。
【解決手段】本発明は、ホスファチジルセリン及びスフィンゴミエリンを含むアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物を提供する。また、ホスファチジルセリンと、前記スフィンゴミエリンとの合計が１重量％以上１００重量％以下であるアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物を提供する。また、ホスファチジルセリンの重量％の値を、前記スフィンゴミエリンの重量％の値で除することで得られる値が０．１以上１０以下であるアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物を提供する。さらにまた、これらの組成物を含む食品、医薬品、及び飼料を提供する。
【選択図】図１
【解決手段】本発明は、ホスファチジルセリン及びスフィンゴミエリンを含むアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物を提供する。また、ホスファチジルセリンと、前記スフィンゴミエリンとの合計が１重量％以上１００重量％以下であるアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物を提供する。また、ホスファチジルセリンの重量％の値を、前記スフィンゴミエリンの重量％の値で除することで得られる値が０．１以上１０以下であるアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物を提供する。さらにまた、これらの組成物を含む食品、医薬品、及び飼料を提供する。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ホスファチジルセリン及びスフィンゴミエリンを有効成分として含むアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物。
【請求項2】
前記ホスファチジルセリンと、前記スフィンゴミエリンとの合計が１重量％以上１００重量％以下である請求項１に記載のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物。
【請求項3】
前記ホスファチジルセリンの重量％の値を、前記スフィンゴミエリンの重量％の値で除することで得られる値が０．１以上１０以下である請求項１に記載のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物。
【請求項4】
請求項１から請求項３のいずれかに記載したアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物を含む食品。
【請求項5】
請求項１から請求項３のいずれかに記載したアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物を含む医薬品。
【請求項6】
請求項１から請求項３のいずれかに記載したアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物を含む飼料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物及び該組成物を含む食品、医薬品、飼料に関する。
【背景技術】
【0002】
認知症は記憶障害や見当識障害、失語等の中核症状に合わせて、徘徊や不安、睡眠障害等の周辺症状も現れる。症状の進行に伴い患者は日常生活を送ることが困難になり、介護する家族にも大きな負担になる。今後日本では高齢化に伴い、認知症の患者数が急増することが予想される。九州大学 二宮教授による「日本における認知症の高齢者人口の将来推計に関する研究」では、２０１２年時点での日本の認知症の罹患者数は４６２万人とされており、２０２５年には７００万人、２０４０年には９５０万人に達すると試算された。
【0003】
アルツハイマー型認知症は認知症の中で最も割合が高く、その原因の１つがアミロイドβ（Ａβ）ペプチドである。このペプチドはアミロイド前駆ペプチド（ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ）からタンパク質分解酵素によって生じ、神経細胞死を引き起こし、脳の萎縮や認知能力の低下につながる。
【0004】
アルツハイマー型を含めた認知症の治療剤には、ドネペジル、ガランタミン、リバスチグミン、メマンチンなどがある。しかし、これらの投与は対症療法であり、認知症を根治するものではない。また、治療薬であるため、健常者が予防を目的として摂取することはできない。したがって、日常的に摂取できる食品等でアミロイドβによる神経細胞死を抑制し、認知症を予防することは重要である。
【0005】
ホスファチジルセリンは細胞膜を構成する成分の１つで、脳や神経細胞に多く含まれている。ホスファチジルセリンの摂取が、アルツハイマー型認知症患者や高齢者の認知機能の低下を抑制することが報告されている（非特許文献１、２）また、ホスファチジルセリンが海馬の神経細胞死を抑制することも示唆されている（非特許文献３）。
【0006】
スフィンゴミエリンは神経細胞のミエリン鞘の主要成分である。これまでに、加齢に伴って脳内のスフィンゴミエリン量が減少すること、また、認知の処理速度がミエリン鞘の健常性と相関することが報告されている（非特許文献４）。スフィンゴミエリンの摂取が学習能力の向上にも有効であることが示唆されている（特許文献１）
【0007】
しかし、ホスファチジルセリンとスフィンゴミエリンを組み合わせることでアミロイドβによる神経細胞死に対する有効性が増強するとする文献等はない。さらに該組成物を含む食品、医薬品、飼料を開示した文献等もない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0008】
【特許文献1】特開２００３－１４６８８３号公報
【非特許文献】
【0009】
【非特許文献1】Ｒｏｌｆ Ｒ．Ｅ， ｅｔ ａｌ， Ｅｕｒ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．， ２， ２， １４９－５５， １９９２
【非特許文献2】Ｔ． Ｃｅｎａｃｃｈｉ， ｅｔ ａｌ， Ａｇｉｎｇ Ｃｌｉｎ． Ｅｘｐ． Ｒｅｓ．， ５， ２， １２３－１３３， １９９３
【非特許文献3】Ｓ． Ｓｕｚｕｋｉ， ｅｔ ａｌ， Ｊｐｎ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ８１， ２３７－２８９， １９９９
【非特許文献4】Ｐｏ Ｈ． Ｌｕ， ｅｔ ａｌ， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌ．， ３３， １０， １０５９－１０６８， ２０１１．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0010】
本発明は、アミロイドβによる神経細胞死（本明細書において、「アミロイドβ誘発性神経細胞死」と言うことがある）を抑制する新たな組成物、該組成物を含む食品、医薬品、及び飼料を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【0011】
上記課題を解決するため、本発明者らは、アミロイドβによる神経細胞死を抑制する有用な方法について検討を進めた結果、ホスファチジルセリンとスフィンゴミエリンを組み合せることで神経細胞死を相乗的に抑制することが可能であることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明には以下の構成が含まれる。
（１）ホスファチジルセリン及びスフィンゴミエリンを有効成分として含むアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物。
（２）前記ホスファチジルセリンと、前記スフィンゴミエリンとの合計が１重量％以上１００重量％以下である（１）に記載のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物
（３）前記ホスファチジルセリンの重量％の値を、前記スフィンゴミエリンの重量％の値で除することで得られる値が０．１以上１０以下である（１）に記載のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物。
（４）（１）から（３）のいずれかに記載したアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物を含む飲食品。
（５）（１）から（３）のいずれかに記載したアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物を含む医薬品。
（６）（１）から（３）のいずれかに記載したアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物を含む飼料。
（１）ホスファチジルセリン及びスフィンゴミエリンを有効成分として含むアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物。
（２）前記ホスファチジルセリンと、前記スフィンゴミエリンとの合計が１重量％以上１００重量％以下である（１）に記載のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物
（３）前記ホスファチジルセリンの重量％の値を、前記スフィンゴミエリンの重量％の値で除することで得られる値が０．１以上１０以下である（１）に記載のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物。
（４）（１）から（３）のいずれかに記載したアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物を含む飲食品。
（５）（１）から（３）のいずれかに記載したアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物を含む医薬品。
（６）（１）から（３）のいずれかに記載したアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物を含む飼料。
【発明の効果】
【0012】
本発明は、アミロイドβによる神経細胞死を抑制する組成物として、ホスファチジルセリンとスフィンゴミエリンとを含む組成物と該組成物を含む食品、医薬品、及び飼料を提供することを提供するものである。本発明の組成物の摂取によりアミロイドβによる神経細胞死を安全かつ簡易に抑制することが可能となった。
【図面の簡単な説明】
【0013】
【図1】アミロイドβを加えた各培地でヒト神経芽細胞腫（ＳＨ－ＳＹ５Ｙ）を処理した場合の細胞生存率亢進効果（％）（＝（アミロイドβと試料を添加した群の細胞生存率）－（アミロイドβを添加した群の生存率））を示すグラフである。左からホスファチジルセリン（８０μｇ／ｍｌ）（ＳＰＭ ０／ＰＳ ８０）、スフィンゴミエリン（４０μｇ／ｍｌ）（ＳＰＭ ４０／ＰＳ ０）、スフィンゴミエリン（４０μｇ／ｍｌ）＋ホスファチジルセリン（８０μｇ／ｍｌ）（ＳＰＭ ４０／ＰＳ ８０）、スフィンゴミエリン（８０μｇ／ｍｌ）（ＳＰＭ ８０／ＰＳ ０）、スフィンゴミエリン（８０μｇ／ｍｌ）＋ホスファチジルセリン（８０μｇ／ｍｌ）（ＳＰＭ ８０／ＰＳ ８０）、スフィンゴミエリン（１６０μｇ／ｍｌ）（ＳＰＭ １６０／ＰＳ ０）、スフィンゴミエリン（１６０μｇ／ｍｌ）＋ホスファチジルセリン（８０μｇ／ｍｌ）（ＳＰＭ １６０／ＰＳ ８０）。
【発明を実施するための形態】
【0014】
本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死用組成物について以下に詳細に説明する。
【0015】
（アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物）
本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物は、ホスファチジルセリンとスフィンゴミエリンとを含むものである。アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物におけるホスファチジルセリンとスフィンゴミエリンの含量は、ホスファチジルセリンとスフィンゴミエリンとの合計がアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物の１重量％以上１００重量％以下であればよく、１０重量％以上１００重量％以下が好ましく、２０重量％以上１００重量％以下がさらに好ましく、３０重量％以上１００重量％以下が最も好ましい。また、アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物に含まれるホスファチジルセリンとスフィンゴミエリンとの重量比は、アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物中のホスファチジルセリンの重量％をアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物中のスフィンゴミエリンの重量％で除した値が０．１以上１０以下であればよく、０．２以上２以下が好ましく、０．５以上２以下が最も好ましい。本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物は、後述するホスファチジルセリンを含む素材とスフィンゴミエリンを含む素材を用いて上記した組成物を調製することができる。また、乳などから上記した組成となるよう調製した組成物をそのまま用いてもよい。
本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物は、ホスファチジルセリンとスフィンゴミエリンとを含むものである。アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物におけるホスファチジルセリンとスフィンゴミエリンの含量は、ホスファチジルセリンとスフィンゴミエリンとの合計がアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物の１重量％以上１００重量％以下であればよく、１０重量％以上１００重量％以下が好ましく、２０重量％以上１００重量％以下がさらに好ましく、３０重量％以上１００重量％以下が最も好ましい。また、アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物に含まれるホスファチジルセリンとスフィンゴミエリンとの重量比は、アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物中のホスファチジルセリンの重量％をアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物中のスフィンゴミエリンの重量％で除した値が０．１以上１０以下であればよく、０．２以上２以下が好ましく、０．５以上２以下が最も好ましい。本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物は、後述するホスファチジルセリンを含む素材とスフィンゴミエリンを含む素材を用いて上記した組成物を調製することができる。また、乳などから上記した組成となるよう調製した組成物をそのまま用いてもよい。
【0016】
（ホスファチジルセリン）
本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物に用いるホスファチジルセリンについて説明する。本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物に用いるホスファチジルセリンは不純物の少ない試薬グレードのホスファチジルセリンだけでなく、ホスファチジルセリンを含む素材をそのまま用いることもできる。本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物に用いるホスファチジルセリンは、大豆由来のものが好ましく、獣乳由来のホスファチジルセリンがさらに好ましい。
本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物に用いるホスファチジルセリンについて説明する。本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物に用いるホスファチジルセリンは不純物の少ない試薬グレードのホスファチジルセリンだけでなく、ホスファチジルセリンを含む素材をそのまま用いることもできる。本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物に用いるホスファチジルセリンは、大豆由来のものが好ましく、獣乳由来のホスファチジルセリンがさらに好ましい。
【0017】
（スフィンゴミエリン）
本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物に用いるスフィンゴミエリンは試薬グレードのものだけでなく、鶏卵、乳等から調製したスフィンゴミエリンをそのまま用いることもできる。本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物に用いるスフィンゴミエリンは、鶏卵由来のものが好ましく、獣乳由来のスフィンゴミエリンがさらに好ましい。
本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物に用いるスフィンゴミエリンは試薬グレードのものだけでなく、鶏卵、乳等から調製したスフィンゴミエリンをそのまま用いることもできる。本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物に用いるスフィンゴミエリンは、鶏卵由来のものが好ましく、獣乳由来のスフィンゴミエリンがさらに好ましい。
【0018】
（アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物の摂取量）
本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物の有効摂取量は、ホスファチジルセリンとスフィンゴミエリンの合計量として摂取量が２ｍｇ／日以上となるように摂取すればよい。また、本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物は、以下に記載のとおり、飲食品、医薬品、飼料に添加することができるが、その際のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物の添加量は前記した有効量が摂取できるよう適宜調製すればよい。
本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物の有効摂取量は、ホスファチジルセリンとスフィンゴミエリンの合計量として摂取量が２ｍｇ／日以上となるように摂取すればよい。また、本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物は、以下に記載のとおり、飲食品、医薬品、飼料に添加することができるが、その際のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物の添加量は前記した有効量が摂取できるよう適宜調製すればよい。
【0019】
（アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物を含む飲食品、医薬品、及び飼料）
本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物はそのまま使用してもよいが、食品、医薬品、及び飼料に通常含まれる他の原材料とともに使用できることから、常法に従い、粉末剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤等に用いることも出来る。また、ヨーグルト、乳飲料、ウエハース等の飲食品、及び飼料に配合することも可能である。
本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物はそのまま使用してもよいが、食品、医薬品、及び飼料に通常含まれる他の原材料とともに使用できることから、常法に従い、粉末剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤等に用いることも出来る。また、ヨーグルト、乳飲料、ウエハース等の飲食品、及び飼料に配合することも可能である。
【0020】
（アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物中のホスファチジルセリンとスフィンゴミエリンの定量方法）
本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物中のスフィンゴミエリン含量は、春田らの方法（Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ＆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００８）７２、８、２１５１－２１５７）により測定することができる。
本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物中のスフィンゴミエリン含量は、春田らの方法（Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ＆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００８）７２、８、２１５１－２１５７）により測定することができる。
【0021】
（アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用組成物のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制作用の評価）
本発明組成物のアミロイドβによる神経細胞死の抑制作用は、例えば、動物脳内や培養細胞にアミロイドβを投与あるいは添加した場合において、本発明組成物を付与した場合と付与しなかった場合における神経細胞死を比較することにより評価できる。神経細胞死の評価指標は、細胞生存率、アミロイドβ誘発性神経細胞死応答関連遺伝子やタンパク質の発現などが挙げられる。より具体的には、実施例に示したｉｎ ｖｉｔｒｏにおける方法で評価することができる。
本発明組成物のアミロイドβによる神経細胞死の抑制作用は、例えば、動物脳内や培養細胞にアミロイドβを投与あるいは添加した場合において、本発明組成物を付与した場合と付与しなかった場合における神経細胞死を比較することにより評価できる。神経細胞死の評価指標は、細胞生存率、アミロイドβ誘発性神経細胞死応答関連遺伝子やタンパク質の発現などが挙げられる。より具体的には、実施例に示したｉｎ ｖｉｔｒｏにおける方法で評価することができる。
【実施例0022】
以下、本発明の実施例を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
〔試験例１〕アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制効果確認試験
培養した神経細胞にアミロイドβ添加を負荷した場合に、ホスファチジルセリンあるいはスフィンゴミエリン単独添加よりも、それらを混合することで、アミロイドβによる細胞生存率の低下がより強く抑制されることを確認するための試験を行った。
〔試験例１〕アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制効果確認試験
培養した神経細胞にアミロイドβ添加を負荷した場合に、ホスファチジルセリンあるいはスフィンゴミエリン単独添加よりも、それらを混合することで、アミロイドβによる細胞生存率の低下がより強く抑制されることを確認するための試験を行った。
【0023】
１．試験方法
ヒト神経芽細胞腫（ＳＨ―ＳＹ５Ｙ）を１×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で９６ウェルプレートに播種し、３７℃で２４時間培養後、
（ｉ）アミロイドβ（ペプチド研究所、１０μＭ）を混合した血清１０％添加培地（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、
（ｉｉ）アミロイドβ（１０μＭ）およびホスファチジルセリン（長良サイエンス；８０μｇ／ｍｌ）を混合した血清１０％添加培地、
（ｉｉｉ）アミロイドβ（１０μＭ）およびホスファチジルセリン（０、８０μｇ／ｍｌ）およびスフィンゴミエリン（長良サイエンス；４０、８０、１６０、８００μｇ／ｍｌ）を混合した血清１０％添加培地、
にそれぞれ培地交換した。
その後、３７℃で２４時間培養し、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ ９６（登録商標） Ｎｏｎ－Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ （Ｐｒｏｍｅｇａ）に供し、細胞生存率（％）を測定した。
細胞生存亢進率（％）はアミロイドβと試料を添加した群の細胞生存率（％）（ｉｉあるいはｉｉｉ）からアミロイドβのみを添加した群（ｉ）を引いて算出した（各群Ｎ＝３）。
実験結果を図１に示す。
ヒト神経芽細胞腫（ＳＨ―ＳＹ５Ｙ）を１×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で９６ウェルプレートに播種し、３７℃で２４時間培養後、
（ｉ）アミロイドβ（ペプチド研究所、１０μＭ）を混合した血清１０％添加培地（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、
（ｉｉ）アミロイドβ（１０μＭ）およびホスファチジルセリン（長良サイエンス；８０μｇ／ｍｌ）を混合した血清１０％添加培地、
（ｉｉｉ）アミロイドβ（１０μＭ）およびホスファチジルセリン（０、８０μｇ／ｍｌ）およびスフィンゴミエリン（長良サイエンス；４０、８０、１６０、８００μｇ／ｍｌ）を混合した血清１０％添加培地、
にそれぞれ培地交換した。
その後、３７℃で２４時間培養し、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ ９６（登録商標） Ｎｏｎ－Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ （Ｐｒｏｍｅｇａ）に供し、細胞生存率（％）を測定した。
細胞生存亢進率（％）はアミロイドβと試料を添加した群の細胞生存率（％）（ｉｉあるいはｉｉｉ）からアミロイドβのみを添加した群（ｉ）を引いて算出した（各群Ｎ＝３）。
実験結果を図１に示す。
【0024】
２．試験結果
図１では、細胞生存亢進率はホスファチジルセリン８０μｇ／ｍｌのみでは８．４％、スフィンゴミエリン４０μｇ／ｍｌのみでは ２．７％であるが、ホスファチジルセリン８０μｇ／ｍｌとスフィンゴミエリン４０μｇ／ｍｌ（ホスファチジルセリン／スフィンゴミエリン＝２）を共添加すると２３．１％であり、各リン脂質単体よりも相乗的に効果が強くなった。
スフィンゴミエリン８０μｇ／ｍｌのみでは１４．６％であるが、ホスファチジルセリン８０μｇ／ｍｌとスフィンゴミエリン８０μｇ／ｍｌ（ホスファチジルセリン／スフィンゴミエリン＝１）を共添加すると４０．７％であり、各リン脂質単体よりも相乗的に効果が強くなった。
スフィンゴミエリン１６０μｇ／ｍｌのみでは１１．５％であるが、ホスファチジルセリン８０μｇ／ｍｌとスフィンゴミエリン１６０μｇ／ｍｌ（ホスファチジルセリン／スフィンゴミエリン＝０．５）を共添加すると４０％であり、各リン脂質単体よりも相乗的に効果が強くなった。
また、ホスファチジルセリン８０μｇ／ｍｌとスフィンゴミエリン８００μｇ／ｍｌ（ホスファチジルセリン／スフィンゴミエリン＝０．１）を共添加した場合にも、同様の効果が認められた。
図１では、細胞生存亢進率はホスファチジルセリン８０μｇ／ｍｌのみでは８．４％、スフィンゴミエリン４０μｇ／ｍｌのみでは ２．７％であるが、ホスファチジルセリン８０μｇ／ｍｌとスフィンゴミエリン４０μｇ／ｍｌ（ホスファチジルセリン／スフィンゴミエリン＝２）を共添加すると２３．１％であり、各リン脂質単体よりも相乗的に効果が強くなった。
スフィンゴミエリン８０μｇ／ｍｌのみでは１４．６％であるが、ホスファチジルセリン８０μｇ／ｍｌとスフィンゴミエリン８０μｇ／ｍｌ（ホスファチジルセリン／スフィンゴミエリン＝１）を共添加すると４０．７％であり、各リン脂質単体よりも相乗的に効果が強くなった。
スフィンゴミエリン１６０μｇ／ｍｌのみでは１１．５％であるが、ホスファチジルセリン８０μｇ／ｍｌとスフィンゴミエリン１６０μｇ／ｍｌ（ホスファチジルセリン／スフィンゴミエリン＝０．５）を共添加すると４０％であり、各リン脂質単体よりも相乗的に効果が強くなった。
また、ホスファチジルセリン８０μｇ／ｍｌとスフィンゴミエリン８００μｇ／ｍｌ（ホスファチジルセリン／スフィンゴミエリン＝０．１）を共添加した場合にも、同様の効果が認められた。
【0025】
〔実施例品１〕スフィンゴミエリン濃縮物の調製方法
特開平５－１３２４９０の方法を用いて、バターミルク粉（雪印メグミルク社製）より抽出、精製した。その結果、９８．１％純度のスフィンゴミエリンを得た。
特開平５－１３２４９０の方法を用いて、バターミルク粉（雪印メグミルク社製）より抽出、精製した。その結果、９８．１％純度のスフィンゴミエリンを得た。
【0026】
〔実施例品２〕ホスファチジルセリン濃縮物の調製方法
特開平５－１３２４９０の方法を用いて、バターミルク粉（雪印メグミルク社製）より抽出、精製した。その結果、９７．５％純度のホスファチジルセリンを得た。
特開平５－１３２４９０の方法を用いて、バターミルク粉（雪印メグミルク社製）より抽出、精製した。その結果、９７．５％純度のホスファチジルセリンを得た。
【0027】
〔実施例品３〕アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用カプセル剤の調製
表１に示す配合で原材料を混合後、常法により造粒し、カプセルに充填して、本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用カプセル剤を製造した。
表１に示す配合で原材料を混合後、常法により造粒し、カプセルに充填して、本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用カプセル剤を製造した。
【0028】
【表1】
【0029】
〔実施例品４〕
（アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用錠剤の調製）
表２に示す配合で原材料を混合後、常法により１ｇに成型、打錠して本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用錠剤を製造した。
（アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用錠剤の調製）
表２に示す配合で原材料を混合後、常法により１ｇに成型、打錠して本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用錠剤を製造した。
【0030】
【表2】
【0031】
〔実施例品５〕アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用ゲル状食品の調製
スフィンゴミエリン濃縮物（実施例品１）２．５ｇとホスファチジルセリン濃縮物（実施例品２）７．５ｇを７００ｇの脱イオン水に溶解し、５０℃まで加熱後、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ－ＴＵＲＲＡＸ Ｔ－２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、９５００ｒｐｍで３０分間撹拌混合した。この溶液に、ソルビトール４０ｇ、酸味料２ｇ、香料２ｇ、ペクチン５ｇ、乳清タンパク質濃縮物５ｇ、乳酸カルシウム１ｇ、脱イオン水２３５ｇを添加して、撹拌混合した後、２００ｍｌのチアパックに充填し、８５℃、２０分間殺菌後、密栓し、本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用ゲル状食品５袋（２００ｇ入り）を調製した。このようにして得られたアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用ゲル状食品は、すべて沈殿等は認められず、風味に異常は感じられなかった。
なお、このアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用ゲル状食品には、１００ｇあたりスフィンゴミエリンが２４５．３ｍｇとホスファチジルセリンが７３１．３ｍｇ含まれていた。
スフィンゴミエリン濃縮物（実施例品１）２．５ｇとホスファチジルセリン濃縮物（実施例品２）７．５ｇを７００ｇの脱イオン水に溶解し、５０℃まで加熱後、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ－ＴＵＲＲＡＸ Ｔ－２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、９５００ｒｐｍで３０分間撹拌混合した。この溶液に、ソルビトール４０ｇ、酸味料２ｇ、香料２ｇ、ペクチン５ｇ、乳清タンパク質濃縮物５ｇ、乳酸カルシウム１ｇ、脱イオン水２３５ｇを添加して、撹拌混合した後、２００ｍｌのチアパックに充填し、８５℃、２０分間殺菌後、密栓し、本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用ゲル状食品５袋（２００ｇ入り）を調製した。このようにして得られたアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用ゲル状食品は、すべて沈殿等は認められず、風味に異常は感じられなかった。
なお、このアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用ゲル状食品には、１００ｇあたりスフィンゴミエリンが２４５．３ｍｇとホスファチジルセリンが７３１．３ｍｇ含まれていた。
【0032】
〔実施例品６〕アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用飲料の調製
酸味料２ｇを７００ｇの脱イオン水に溶解した後、スフィンゴミエリン濃縮物（実施例品１）１．０ｇとホスファチジルセリン濃縮物（実施例品２）９．０ｇを溶解し、５０℃まで加熱後、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ－ＴＵＲＲＡＸ Ｔ－２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、９５００ｒｐｍで３０分間撹拌混合した。マルチトール１００ｇ、還元水飴２０ｇ、香料２ｇ、脱イオン水１６６ｇを添加した後、１００ｍｌのガラス瓶に充填し、９０℃、１５分間殺菌後、密栓し、アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用飲料１０本（１００ｍｌ入り）を調製した。このようにして得られたアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用飲料は、すべて沈殿は認められず、風味に異常は感じられなかった。
なお、このアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用飲料には、１００ｇあたりスフィンゴミエリンが９８．１ｍｇとホスファチジルセリンが８７７．５ｍｇ含まれていた。
酸味料２ｇを７００ｇの脱イオン水に溶解した後、スフィンゴミエリン濃縮物（実施例品１）１．０ｇとホスファチジルセリン濃縮物（実施例品２）９．０ｇを溶解し、５０℃まで加熱後、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ－ＴＵＲＲＡＸ Ｔ－２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、９５００ｒｐｍで３０分間撹拌混合した。マルチトール１００ｇ、還元水飴２０ｇ、香料２ｇ、脱イオン水１６６ｇを添加した後、１００ｍｌのガラス瓶に充填し、９０℃、１５分間殺菌後、密栓し、アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用飲料１０本（１００ｍｌ入り）を調製した。このようにして得られたアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用飲料は、すべて沈殿は認められず、風味に異常は感じられなかった。
なお、このアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用飲料には、１００ｇあたりスフィンゴミエリンが９８．１ｍｇとホスファチジルセリンが８７７．５ｍｇ含まれていた。
【0033】
〔実施例品７〕アミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用飼料の調製
スフィンゴミエリン濃縮物（実施例品１）１．８ｋｇとホスファチジルセリン濃縮物（実施例品２）０．２ｋｇを９８ｋｇの脱イオン水に溶解し、５０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＭＡＲＫＩＩ １６０型；特殊機化工業社製）にて、３６００ｒｐｍで４０分間撹拌混合してスフィンゴミエリン１７５７ｍｇ／１００ｇ、ホスファチジルセリン２００ｍｇ／ｍｌの混合溶液を得た。この溶液１０ｋｇに大豆粕１２ｋｇ、大豆タンパク質１４ｋｇ、大豆油４ｋｇ、コーン油２ｋｇ、パーム油２３．２ｋｇ、トウモロコシ澱粉１４ｋｇ、小麦粉９ｋｇ、ふすま２ｋｇ、ビタミン混合物５ｋｇ、セルロース２．８ｋｇ、ミネラル混合物２ｋｇを配合し、１２０℃、４分間殺菌して、本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用イヌ飼育飼料１００ｋｇを製造した。
なお、このアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用イヌ飼育飼料には、１００ｇあたりスフィンゴミエリンが１７６．６ｍｇとホスファチジルセリンが１９．５ｍｇ含まれていた。
スフィンゴミエリン濃縮物（実施例品１）１．８ｋｇとホスファチジルセリン濃縮物（実施例品２）０．２ｋｇを９８ｋｇの脱イオン水に溶解し、５０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＭＡＲＫＩＩ １６０型；特殊機化工業社製）にて、３６００ｒｐｍで４０分間撹拌混合してスフィンゴミエリン１７５７ｍｇ／１００ｇ、ホスファチジルセリン２００ｍｇ／ｍｌの混合溶液を得た。この溶液１０ｋｇに大豆粕１２ｋｇ、大豆タンパク質１４ｋｇ、大豆油４ｋｇ、コーン油２ｋｇ、パーム油２３．２ｋｇ、トウモロコシ澱粉１４ｋｇ、小麦粉９ｋｇ、ふすま２ｋｇ、ビタミン混合物５ｋｇ、セルロース２．８ｋｇ、ミネラル混合物２ｋｇを配合し、１２０℃、４分間殺菌して、本発明のアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用イヌ飼育飼料１００ｋｇを製造した。
なお、このアミロイドβ誘発性神経細胞死抑制用イヌ飼育飼料には、１００ｇあたりスフィンゴミエリンが１７６．６ｍｇとホスファチジルセリンが１９．５ｍｇ含まれていた。
【産業上の利用可能性】
【0034】
本発明は、アミロイドβによる神経細胞死を抑制する新たな組成物として、ホスファチジルセリンおよびスフィンゴミエリンを含む組成物と、該組成物を含む食品、医薬品、及び飼料を提供する。本発明の組成物等を摂取することによりアミロイドβによる神経細胞死を安全かつ簡易に抑制することが期待できる。
【図1】
