特開2023-72963肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、毛髪のハリコシ向上剤、及び外用組成物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023072963
(43)【公開日】2023-05-25
(54)【発明の名称】肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、毛髪のハリコシ向上剤、及び外用組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 8/49 20060101AFI20230518BHJP
A61K 8/63 20060101ALI20230518BHJP
A61K 8/9789 20170101ALI20230518BHJP
A61Q 19/00 20060101ALI20230518BHJP
A61K 36/484 20060101ALI20230518BHJP
A61Q 5/00 20060101ALI20230518BHJP
【ＦＩ】
A61K8/49
A61K8/63
A61K8/9789
A61Q19/00
A61K36/484
A61Q5/00
【審査請求】未請求
【請求項の数】10
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2021185725
(22)【出願日】2021-11-15
(71)【出願人】
【識別番号】591082421
【氏名又は名称】丸善製薬株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100107766
【弁理士】
【氏名又は名称】伊東 忠重
(74)【代理人】
【識別番号】100070150
【弁理士】
【氏名又は名称】伊東 忠彦
(74)【代理人】
【識別番号】100107515
【弁理士】
【氏名又は名称】廣田 浩一
(74)【代理人】
【識別番号】100107733
【弁理士】
【氏名又は名称】流 良広
(74)【代理人】
【識別番号】100115347
【弁理士】
【氏名又は名称】松田 奈緒子
(72)【発明者】
【氏名】木曽 昭典
(72)【発明者】
【氏名】エン チグン
【テーマコード（参考）】
4C083
4C088
【Ｆターム（参考）】
4C083AA082
4C083AA111
4C083AA112
4C083AA122
4C083AB032
4C083AC022
4C083AC072
4C083AC102
4C083AC122
4C083AC182
4C083AC242
4C083AC422
4C083AC442
4C083AC472
4C083AC482
4C083AC532
4C083AC642
4C083AC712
4C083AC782
4C083AC792
4C083AC841
4C083AC852
4C083AD092
4C083AD282
4C083AD332
4C083AD352
4C083AD392
4C083AD412
4C083AD512
4C083AD531
4C083AD532
4C083AD552
4C083AD662
4C083BB51
4C083BB53
4C083CC04
4C083CC05
4C083CC31
4C083CC38
4C083DD23
4C083DD31
4C083EE10
4C083EE12
4C083EE28
4C083EE29
4C088AB60
4C088AC01
4C088BA08
4C088BA11
4C088CA03
4C088CA13
4C088MA02
4C088MA17
4C088MA22
4C088ZA89
4C088ZA92
(57)【要約】
【課題】優れた肌の質改善作用を有し、かつ安全性が高い肌の質改善剤、優れたむくみの予防及び／又は改善作用を有し、かつ安全性が高いむくみの予防及び／又は改善剤、優れた表皮機能向上作用を有し、かつ安全性が高い表皮機能向上剤、優れた毛髪のハリコシ向上作用を有し、かつ安全性が高い毛髪のハリコシ向上剤、並びに優れた肌の質改善作用、むくみの予防及び／又は改善作用、表皮機能向上作用、及び毛髪のハリコシ向上作用の少なくともいずれかを有し、かつ安全性が高い外用組成物の提供。
【解決手段】（Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を併用する、肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤、並びにこれらを用いる外用組成物である。
【選択図】なし
【解決手段】（Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を併用する、肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤、並びにこれらを用いる外用組成物である。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を併用することを特徴とする肌の質改善剤。
【請求項2】
角層タンパク質のカルボニル化抑制作用を有する請求項１に記載の肌の質改善剤。
【請求項3】
（Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を併用することを特徴とするむくみの予防及び／又は改善剤。
【請求項4】
リンパ管活性化因子（ＶＥＧＦ－Ｃ） ｍＲＮＡ発現促進作用を有する請求項３に記載のむくみの予防及び／又は改善剤。
【請求項5】
（Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を併用することを特徴とする表皮機能向上剤。
【請求項6】
前記表皮機能が、保湿機能及びバリア機能の少なくともいずれかである請求項５に記載の表皮機能向上剤。
【請求項7】
セルピンｂ３（ＳＣＣＡ１） ｍＲＮＡ発現抑制作用、ナトリウム／水素イオン交換輸送体１（ＮＨＥ１） ｍＲＮＡ発現促進作用、アクアポリン３（ＡＱＰ３） ｍＲＮＡ発現促進作用、インボルクリン（ＩＶＬ） ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン－１（ＣＬＤＮ１） ｍＲＮＡ発現促進作用、及びクローディン－４（ＣＬＤＮ４） ｍＲＮＡ発現促進作用、並びにこれらの２種以上の組合せからなる群から選択されるいずれかを有する請求項５から６のいずれかに記載の表皮機能向上剤。
【請求項8】
（Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を併用することを特徴とする毛髪のハリコシ向上剤。
【請求項9】
ヘアケラチンタンパク質（ＫＡＰ５．１） ｍＲＮＡ発現促進作用を有する請求項８に記載の毛髪のハリコシ向上剤。
【請求項10】
請求項１から２のいずれかに記載の肌の質改善剤、請求項３から４のいずれかに記載のむくみの予防及び／又は改善剤、請求項５から７のいずれかに記載の表皮機能向上剤、及び請求項８から９のいずれかに記載の毛髪のハリコシ向上剤、並びにこれらの２種以上の組合せからなる群から選択されるいずれかを用いることを特徴とする外用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、毛髪のハリコシ向上剤、及び外用組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
近年、皮膚の加齢に伴う老化や光老化との関係で、角層カルボニル化タンパク質の研究が盛んに行われている。カルボニル化タンパク質としては、一般に、タンパク質におけるＬｙｓ、Ａｒｇ、Ｐｒｏといったアミノ酸残基のＮＨ２基が直接酸化されてカルボニル基となった結果生成されるものと、脂質が酸化して過酸化脂質、さらには分解して反応性の高いアルデヒドとなり、それがタンパク質と結合することで生成されるものとがある（例えば、特許文献１参照）。
【0003】
皮膚においては、タンパク質が直接的に酸化される場合、また皮膚表面の皮脂がフリーラジカルによって酸化し、過酸化脂質が生成されることでタンパク質の酸化は開始される場合があると考えられる。いったん過酸化脂質が生成されると、酸化は連鎖的に進行し、肌表面に刺激を与えるだけにとどまらず、角質層の奥まで入り込んで細胞にダメージを与える。
【0004】
また、皮膚の最表層である角層は角層細胞からなり、その８５％がタンパク質であるケラチンから構成されている。近年、このケラチンが、日常的に皮膚が受ける酸化的ストレス（紫外線、タバコの煙）等によってカルボニル化されることが知られている（例えば、非特許文献１参照）。通常、ケラチンは水分子を多く取り込んでいるが、カルボニル化されることによって水分子を排除してしまい、カルボニル化された後のケラチンは水分子を取り込むことができなくなり、さらに、このことが皮膚を乾燥させ、皮膚の外観を損なうことが知られている（例えば、特許文献２参照）。
【0005】
このように角層中のカルボニル化タンパク質が増加することによって、肌の透明性・保水性が失われるとともに（例えば、特許文献３参照）、肌の柔軟性・弾力性が失われてしまうことが知られている（例えば、特許文献４参照）。
【0006】
皮脂、皮膚タンパク質のカルボニル化は、潤い、張り、明るさ等を維持することのできる、肌本来が有する機能をことごとく低下させると考えられ、外界の影響による角層タンパク質のカルボニル化が、肌の透明感の低下の一因と考えられている（例えば、非特許文献２参照）。
【0007】
したがって、表皮の角層タンパク質のカルボニル化を予防したり、そのカルボニル化度を低減させたりすることが、肌の質の改善に必要とされる。すなわち、タンパク質のカルボニル化を抑制することは、肌の質の改善に有用であると考えられる。
【0008】
皮膚脈管系は真皮中に存在し、血管とリンパ管から構成される。ホメオスタシスを保つためには、血管外に移動した組織液は、再び静脈に還流しなければならない。皮膚の静脈は、中枢へ効率良く血流を送る。しかし、静脈自体が組織液を取り込む能力は乏しい。このことから、組織液を取り込む組織、すなわちリンパ管が皮膚においても必須の構造であることが理解されてきた。
【0009】
リンパ管は、皮膚中に存在する不要物や血管から恒常的に漏れ出す水分、たんぱく質の回収を行うことにより、細胞周囲の微小環境を一定の状態を保つために重要な役割を担っている。また、外界からの感染因子や外的因子に対してＴリンパ球の輸送を介して抵抗する役割を担っていると考えられてきた。
【0010】
リンパ管の機能不全の病態として、むくみやリンパ浮腫などの症状が知られている（例えば、非特許文献３参照）。
【0011】
これまでの研究から、リンパ管に特異的に存在する膜貫通型受容体としてＶＥＧＦＲ－３が同定され、そのリガンドの１つとしてリンパ管活性化因子（ＶＥＧＦ－Ｃ）（「血管内皮増殖因子Ｃ」と称することもある。）が見つかっている。ＶＥＧＦ－Ｃはリンパ管に作用してリンパ管内皮細胞の増殖、遊走そして管腔形成を促進してリンパ管の機能を活性化する（例えば、非特許文献３参照）。また、むくみの病的状態としての浮腫にＶＥＧＦ－Ｃの導入による遺伝子治療の可能性が模索されている（例えば、非特許文献４参照）。
【0012】
皮膚中のＶＥＧＦ－Ｃは表皮に強く発現している。ＶＥＧＦ－Ｃを表皮で高発現したマウスは真皮中に存在するリンパ管の数が増加しており（例えば、非特許文献５参照）、一方でＶＥＧＦ－Ｃの受容体であるＶＥＧＦＲ－３の中和抗体を表皮で高発現して表皮にあるＶＥＧＦ－Ｃの効果をブロックしたところ、真皮のリンパ管の数が極端に減少し、浮腫が形成する知見が得られている（例えば、非特許文献６参照）。これらのことから、皮膚真皮内に存在するリンパ管の機能は表皮に発現するＶＥＧＦ－Ｃによって制御されており、ＶＥＧＦ－Ｃが機能しなくなることでむくみ（浮腫）を呈することがわかっている。
【0013】
したがって、ＶＥＧＦ－Ｃの発現を促進することは、むくみの予防及び／又は改善に有用であると考えられる。
【0014】
表皮の最外層に位置する角層は表皮細胞の核が分解することによって消失する過程を経て完成するが、何らかの要因により角層細胞に核が残存し、角層での有核細胞の出現を特徴とする不全角化の状態となると、表皮のバリア機能が著しく低下することが知られている。これまでの研究から、核の分解に関するメカニズムの一つとして、セルピンｂ３（ＳＣＣＡ１）が正常な角層形成を阻害する因子として見いだされている。正常な表皮にはセルピンｂ３（ＳＣＣＡ１）はほとんど認められないが、肌荒れを生じた表皮では、正常な表皮と比較して、アトピー性皮膚炎では１６倍、露光部皮膚では９０倍、花粉症アレルギー性皮膚炎では２３２倍、乾癬皮膚では４６６倍も発現が増加しているという知見が得られている（例えば、非特許文献７参照）。
【0015】
したがって、セルピンｂ３（ＳＣＣＡ１）の発現を抑制することは、保湿機能やバリア機能といった表皮機能の向上に有用であると考えられる。
【0016】
健常な皮膚表面のｐＨは通常４．５～６．０の弱酸性に保たれており、ブドウ球菌、真菌、アクネ菌などの異常な増殖を阻止する役割を果たしている。ｐＨの弱酸性化には、汗や皮脂に含まれる成分の影響が考えられていたが、近年、内因性のｐＨ調節因子として、ナトリウム／水素イオン交換輸送体１（Ｎａ＋／Ｈ＋ ｅｘｃｈａｎｇｅｒ１；ＮＨＥ１）が重要な役割を果たしていることが明らかとなった。これまでの研究から、ＮＨＥ１ノックアウトマウスでは皮膚表面のｐＨが高く、バリア回復能が低下していることや、老齢マウスでは若齢マウスと比較して、皮膚ｐＨの値が高く、表皮のＮＨＥ１発現量が少ないことが明らかとなっており、ヒトの皮膚でもＮＨＥ１タンパク質量が少ないほど、皮膚表面のｐＨの値が上昇し、肌荒れが進行する可能性が示唆されている（例えば、非特許文献８参照）。
【0017】
したがって、ナトリウム／水素イオン交換輸送体１（ＮＨＥ１）の発現を促進することは、保湿機能やバリア機能といった表皮機能の向上に有用であると考えられる。
【0018】
皮膚細胞では、水チャンネルとして知られるアクアポリンが、細胞膜上に発現して、細胞間隙の水をはじめとする低分子物質を細胞内へ取り込む役割を担っていることが知られている。ヒトでは、１３種類のアクアポリン（ＡＱＰ０～ＡＱＰ１２）の存在が知られている。表皮細胞においては、主としてＡＱＰ３が存在しており、水に加えて、水分保持作用に関与するグリセロールや尿素等の低分子化合物をも取り込む役割を担っていると考えられている。
【0019】
しかしながら、ＡＱＰ３は加齢とともに減少し、このことが水分保持機能の低下の一因であることが示唆されている。そのため、ＡＱＰ３の発現を促進することは、保湿機能やバリア機能といった表皮機能の向上に有用であると考えられる。
【0020】
角質細胞は、ケラチン線維を主成分とし、それを包む角化外膜細胞（ｃｏｒｎｉｆｉｅｄ ｅｎｖｅｌｏｐｅ，ＣＥ）から構成される。このＣＥは、表皮角化細胞の分化に従って産生される複数のＣＥ前駆体蛋白質が、酵素トランスグルタミナーゼにより架橋され、不溶化することで形成される。さらに、セラミド等が共有結合して疎水的な構造をとることで、ＣＥの一部に細胞間脂質のラメラ構造の土台が供給され、これにより角層バリア機能の基礎が形成される。
【0021】
このＣＥ前駆体蛋白質の１つとして、インボルクリン（ＩＶＬ）が知られている。そのため、ＩＶＬの発現を促進することは、保湿機能やバリア機能といった表皮機能の向上に有用であると考えられる。
【0022】
生体においてその内と外とを隔てる構造の１つに、上皮細胞から構成される上皮組織がある。上皮組織は、物質透過を制御するバリア機能を有しており、これにより生体において外界とは異なる内部環境を作り上げている。このようなバリア機能は、主に細胞間の接着により形成されるが、かかる接着の１つがタイトジャンクション（以下、「ＴＪ」と称することがある。）である。ＴＪは、隣接する上皮細胞同士を密着させるだけでなく、細胞と細胞との隙間をシールすることで物質の透過を制御する細胞間接着構造である。ＴＪを構成しているのは、細胞膜タンパク質であるクローディンやオクルディン、裏打ちタンパク質であるＺＯ－１やＺＯ－２等であり、これらのタンパク質はＴＪストランドの骨格を構成し、ＴＪのバリア機能を制御すると考えられている（例えば、非特許文献９参照）。
【0023】
現在までクローディンは２０種以上のクローディン分子が報告され、クローディンファミリーを形成している。これらは組織特異的な発現パターンを示すことが分かっており、表皮においてはクローディン－１（ＣＬＤＮ１）及びクローディン－４（ＣＬＤＮ４）が発現している。クローディン－４は粘膜上皮においても多く発現しており、身体の内外で異物の侵入を防ぐバリアとして機能している。
【0024】
クローディンやオクルディンの発現が何らかの原因で減少した場合、ＴＪの機能低下を引き起こす。例えば、従来は、皮膚のバリア機能は角層のみが担っていると考えられていたが、近年、表皮顆粒層に存在するＴＪの構成タンパク質を遺伝子レベルで欠損させると皮膚のバリア機能が崩壊することが見いだされ、ＴＪも皮膚のバリア機能に重要な役割を担うと考えられるようになっている（例えば、非特許文献１０参照）。
【0025】
そのため、ＣＬＤＮ１やＣＬＤＮ４の発現を促進することは、保湿機能やバリア機能といった表皮機能の向上に有用であると考えられる。
【0026】
毛髪は人々の印象に多大なる影響を与えることから、その変化や異常は古来より人々の重大な関心事となっている。毛髪に関する問題としては、抜け毛、薄毛等といった毛根・毛包の状態に関するものの他に、毛髪が硬い、柔らかい、細い、ハリやコシがない、枝毛、くせ毛等といった毛髪の髪質に関するもの等があり、実に様々である。さらに、毛髪の髪質に関する問題としても、日常のヘアケア、ヘアメイク、紫外線暴露等による毛髪の損傷に起因するものや、毛幹形成における問題に起因するものなどがあり、極めて多様な要因が関与している。
【0027】
従来、毛髪の細さや、ハリやコシのなさを改善するために、例えば育毛有効成分を配合した育毛剤や養毛剤などが利用されてきた。しかしながら、従来の育毛剤や養毛剤では、髪は太くならず、ハリやコシを与えるほどの効果は期待できないという問題があった。これらを改善するため、アルコキシシランの加水分解で生成したシラノール化合物を毛髪に浸透させ、かつ毛髪内部で重合させる方法が提案されている（例えば、特許文献５参照）。しかし、化学物質を用いて毛髪を改質するこの方法では、毛髪に自然なハリやコシを付与するという点で十分とはいえなかった。
【0028】
一方、生化学的・分子生物学的に髪質を改善する試みもなされている。毛髪は、その表面を覆うキューティクル（毛小皮）、その内部にある毛皮質（コルテックス）、及び毛髪の中心を占める毛髄質（メデュラ）から構成されている。このうち、毛髪の損傷においては、その表面を覆うキューティクルがもっとも影響を受けやすく、また毛髪の硬さ、ハリやコシ等にはキューティクルが重要な役割を担っていることが知られている（例えば、非特許文献１１参照）。そのため、キューティクルを効果的に再生することができれば、毛髪の硬さ、ハリやコシ等の髪質の改善が可能になると考えられる。
【0029】
ここで、ケラチン関連タンパク質（Ｋｅｒａｔｉｎ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ；ＫＡＰ）のうち、ＫＡＰ５ファミリー遺伝子のｍＲＮＡ発現量と毛髪のハリやコシの強さとの間に相関関係があることが明らかにされている（例えば、特許文献６参照）。また、ＫＡＰ５ファミリーの１つであるＫＡＰ５．１が、成長過程にあるキューティクルに局在することも報告されている（例えば、非特許文献１２参照）。
【0030】
そのため、ＫＡＰ５．１の発現を促進することは、毛髪のハリやコシの向上に有用であると考えられる。
【0031】
以上のように、これまでに様々な研究がなされている。しかしながら、上述した少なくともいずれかの作用を有し、かつ安全性が高く、そのため、化粧料等の外用組成物や研究用試薬などの成分として広く利用が可能な新たな素材に対する要望は依然として強く、その速やかな開発が求められているのが現状である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0032】
【特許文献1】特開２００４－３４０９３５号公報
【特許文献2】特開２００４－１０７２６９号公報
【特許文献3】特開２００５－２４９６７２号公報
【特許文献4】特開２００６－３４９３７２号公報
【特許文献5】特開２００５－３２０３１４号公報
【特許文献6】特開２００６－０１４７２１号公報
【非特許文献】
【0033】
【非特許文献1】Ｊｅｎｓ Ｊ． Ｔｈｉｅｌｅ ｅｔ ａｌ．， ＴＨＥ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＩＮＶＥＳＴＩＧＡＴＩＶＥ ＤＥＲＭＡＴＯＬＯＧＹ， Ｖｏｌ．１１３， Ｎｏ．３， １９９９年， ｐ．３３５， ３３９
【非特許文献2】Ｉｃｈｉｒｏ Ｉｗａｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｓｏｃ． Ｃｏｓｍｅｔ． Ｃｈｅｍ． Ｊｐｎ．， Ｖｏｌ．４２， Ｎｏ．１， ２００８年， ｐ．１６－２１
【非特許文献3】Ｊｕｓｓｉｌａ， Ｌ． ＆ Ａｌｉｔａｌｏ， Ｋ．（２００２） Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｖ ８２， ６７３－７００
【非特許文献4】Ｓａａｒｉｓｔｏ， Ａ．， Ｔａｍｍｅｌａ， Ｔ．， Ｔｉｍｏｎｅｎ， Ｊ．， Ｙｌａ－Ｈｅｒｔｔｕａｌａ， Ｓ．， Ｔｕｋｉａｉｎｅｎ， Ｅ．， Ａｓｋｏ－Ｓｅｌｊａｖａａｒａ， Ｓ． ＆ Ａｌｉｔａｌｏ， Ｋ．（２００４） Ｆａｓｅｂ Ｊ １８， １７０７－９
【非特許文献5】Ｊｅｌｔｓｃｈ， Ｍ．， Ｋａｉｐａｉｎｅｎ， Ａ．， Ｊｏｕｋｏｖ， Ｖ．， Ｍｅｎｇ， Ｘ．， Ｌａｋｓｏ， Ｍ．， Ｒａｕｖａｌａ， Ｈ．， Ｓｗａｒｔｚ， Ｍ．， Ｆｕｋｕｍｕｒａ， Ｄ．， Ｊａｉｎ， Ｒ． Ｋ． ＆ Ａｌｉｔａｌｏ， Ｋ． （１９９７） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７６， １４２３－５
【非特許文献6】Ｍａｋｉｎｅｎ， Ｔ．， Ｊｕｓｓｉｌａ， Ｌ．， Ｖｅｉｋｋｏｌａ， Ｔ．， Ｋａｒｐａｎｅｎ， Ｔ．， Ｋｅｔｔｕｎｅｎ， Ｍ． Ｉ．， Ｐｕｌｋｋａｎｅｎ， Ｋ． Ｊ．， Ｋａｕｐｐｉｎｅｎ， Ｒ．， Ｊａｃｋｓｏｎ， Ｄ． Ｇ．， Ｋｕｂｏ， Ｈ．， Ｎｉｓｈｉｋａｗａ， Ｓ．， Ｙｌａ－Ｈｅｒｔｔｕａｌａ， Ｓ． ＆ Ａｌｉｔａｌｏ， Ｋ．（２００１） Ｎａｔ Ｍｅｄ ７， １９９－２０５
【非特許文献7】Ｃ．，Ｋａｔａｇｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１０） Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｃｉ．， ５７， ９５－１０１
【非特許文献8】日本香粧品科学会誌，２０１８年，ｖｏｌ．４２，ｐｐ．７９－８４
【非特許文献9】日本香粧品科学会誌，２００７年，ｖｏｌ．３１，ｐｐ．２９６－３０１
【非特許文献10】Ｊ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，２００２年，ｖｏｌ．１５６，ｐｐ．１０９９－１１１１
【非特許文献11】曽我部敦ら，日本化粧品技術者会誌，２００２年，第３６巻，第３号，ｐ．２０７－２１６
【非特許文献12】Ｊｏｎｅｓ ＬＮ． ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｔｒｉｃｈｏｌｏｇｙ，２０１０年，Ｖｏｌ．２，Ｎｏ．２，ｐ．８９－９５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0034】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、優れた肌の質改善作用を有し、かつ安全性が高い肌の質改善剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れたむくみの予防及び／又は改善作用を有し、かつ安全性が高いむくみの予防及び／又は改善剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた表皮機能向上作用を有し、かつ安全性が高い表皮機能向上剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた毛髪のハリコシ向上作用を有し、かつ安全性が高い毛髪のハリコシ向上剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた肌の質改善作用、むくみの予防及び／又は改善作用、表皮機能向上作用、及び毛髪のハリコシ向上作用の少なくともいずれかを有し、かつ安全性が高い外用組成物を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れたむくみの予防及び／又は改善作用を有し、かつ安全性が高いむくみの予防及び／又は改善剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた表皮機能向上作用を有し、かつ安全性が高い表皮機能向上剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた毛髪のハリコシ向上作用を有し、かつ安全性が高い毛髪のハリコシ向上剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた肌の質改善作用、むくみの予防及び／又は改善作用、表皮機能向上作用、及び毛髪のハリコシ向上作用の少なくともいずれかを有し、かつ安全性が高い外用組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0035】
前記課題を解決するために本発明者らが鋭意検討を重ねた結果、（Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を組み合わせると、より一層優れた肌の質改善作用、むくみの予防及び／又は改善作用、表皮機能向上作用、及び毛髪のハリコシ向上作用の少なくともいずれかの作用が得られることを知見し、本発明を完成したものである。
【0036】
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞ （Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を併用することを特徴とする肌の質改善剤である。
＜２＞ 角層タンパク質のカルボニル化抑制作用を有する前記＜１＞に記載の肌の質改善剤である。
＜３＞ （Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を併用することを特徴とするむくみの予防及び／又は改善剤である。
＜４＞ リンパ管活性化因子（ＶＥＧＦ－Ｃ） ｍＲＮＡ発現促進作用を有する前記＜３＞に記載のむくみの予防及び／又は改善剤である。
＜５＞ （Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を併用することを特徴とする表皮機能向上剤である。
＜６＞ 前記表皮機能が、保湿機能及びバリア機能の少なくともいずれかである前記＜５＞に記載の表皮機能向上剤である。
＜７＞ セルピンｂ３（ＳＣＣＡ１） ｍＲＮＡ発現抑制作用、ナトリウム／水素イオン交換輸送体１（ＮＨＥ１） ｍＲＮＡ発現促進作用、アクアポリン３（ＡＱＰ３） ｍＲＮＡ発現促進作用、インボルクリン（ＩＶＬ） ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン－１（ＣＬＤＮ１） ｍＲＮＡ発現促進作用、及びクローディン－４（ＣＬＤＮ４） ｍＲＮＡ発現促進作用、並びにこれらの２種以上の組合せからなる群から選択されるいずれかを有する前記＜５＞から＜６＞のいずれかに記載の表皮機能向上剤である。
＜８＞ （Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を併用することを特徴とする毛髪のハリコシ向上剤である。
＜９＞ ヘアケラチンタンパク質（ＫＡＰ５．１） ｍＲＮＡ発現促進作用を有する前記＜８＞に記載の毛髪のハリコシ向上剤である。
＜１０＞ 前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の肌の質改善剤、前記＜３＞から＜４＞のいずれかに記載のむくみの予防及び／又は改善剤、前記＜５＞から＜７＞のいずれかに記載の表皮機能向上剤、及び前記＜８＞から＜９＞のいずれかに記載の毛髪のハリコシ向上剤、並びにこれらの２種以上の組合せからなる群から選択されるいずれかを用いることを特徴とする外用組成物である。
＜１＞ （Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を併用することを特徴とする肌の質改善剤である。
＜２＞ 角層タンパク質のカルボニル化抑制作用を有する前記＜１＞に記載の肌の質改善剤である。
＜３＞ （Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を併用することを特徴とするむくみの予防及び／又は改善剤である。
＜４＞ リンパ管活性化因子（ＶＥＧＦ－Ｃ） ｍＲＮＡ発現促進作用を有する前記＜３＞に記載のむくみの予防及び／又は改善剤である。
＜５＞ （Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を併用することを特徴とする表皮機能向上剤である。
＜６＞ 前記表皮機能が、保湿機能及びバリア機能の少なくともいずれかである前記＜５＞に記載の表皮機能向上剤である。
＜７＞ セルピンｂ３（ＳＣＣＡ１） ｍＲＮＡ発現抑制作用、ナトリウム／水素イオン交換輸送体１（ＮＨＥ１） ｍＲＮＡ発現促進作用、アクアポリン３（ＡＱＰ３） ｍＲＮＡ発現促進作用、インボルクリン（ＩＶＬ） ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン－１（ＣＬＤＮ１） ｍＲＮＡ発現促進作用、及びクローディン－４（ＣＬＤＮ４） ｍＲＮＡ発現促進作用、並びにこれらの２種以上の組合せからなる群から選択されるいずれかを有する前記＜５＞から＜６＞のいずれかに記載の表皮機能向上剤である。
＜８＞ （Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を併用することを特徴とする毛髪のハリコシ向上剤である。
＜９＞ ヘアケラチンタンパク質（ＫＡＰ５．１） ｍＲＮＡ発現促進作用を有する前記＜８＞に記載の毛髪のハリコシ向上剤である。
＜１０＞ 前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の肌の質改善剤、前記＜３＞から＜４＞のいずれかに記載のむくみの予防及び／又は改善剤、前記＜５＞から＜７＞のいずれかに記載の表皮機能向上剤、及び前記＜８＞から＜９＞のいずれかに記載の毛髪のハリコシ向上剤、並びにこれらの２種以上の組合せからなる群から選択されるいずれかを用いることを特徴とする外用組成物である。
【発明の効果】
【0037】
本発明の肌の質改善剤によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた肌の質改善作用を有し、かつ安全性が高い肌の質改善剤を提供することができる。
本発明のむくみの予防及び／又は改善剤によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れたむくみの予防及び／又は改善作用を有し、かつ安全性が高いむくみの予防及び／又は改善剤を提供することができる。
本発明の表皮機能向上剤によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた表皮機能向上作用を有し、かつ安全性が高い表皮機能向上剤を提供することができる。
本発明の毛髪のハリコシ向上剤によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた毛髪のハリコシ向上作用を有し、かつ安全性が高い毛髪のハリコシ向上剤を提供することができる。
本発明の外用組成物によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた肌の質改善作用、むくみの予防及び／又は改善作用、表皮機能向上作用、及び毛髪のハリコシ向上作用の少なくともいずれかを有し、かつ安全性が高い外用組成物を提供することができる。
本発明のむくみの予防及び／又は改善剤によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れたむくみの予防及び／又は改善作用を有し、かつ安全性が高いむくみの予防及び／又は改善剤を提供することができる。
本発明の表皮機能向上剤によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた表皮機能向上作用を有し、かつ安全性が高い表皮機能向上剤を提供することができる。
本発明の毛髪のハリコシ向上剤によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた毛髪のハリコシ向上作用を有し、かつ安全性が高い毛髪のハリコシ向上剤を提供することができる。
本発明の外用組成物によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた肌の質改善作用、むくみの予防及び／又は改善作用、表皮機能向上作用、及び毛髪のハリコシ向上作用の少なくともいずれかを有し、かつ安全性が高い外用組成物を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【0038】
（肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、及び毛髪のハリコシ向上剤）
本発明の肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、及び毛髪のハリコシ向上剤は、（Ａ）グリチルレチン酸ステアリル（以下、「（Ａ）成分」と称することがある。）と、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物（以下、「（Ｂ）成分」と称することがある。）と、（Ｃ）甘草葉抽出物（以下、「（Ｃ）成分」と称することがある。）と、を少なくとも併用し、更に必要に応じてその他の成分を用いる。
本発明の肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、及び毛髪のハリコシ向上剤は、（Ａ）グリチルレチン酸ステアリル（以下、「（Ａ）成分」と称することがある。）と、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物（以下、「（Ｂ）成分」と称することがある。）と、（Ｃ）甘草葉抽出物（以下、「（Ｃ）成分」と称することがある。）と、を少なくとも併用し、更に必要に応じてその他の成分を用いる。
【0039】
前記（Ａ）成分と、前記（Ｂ）成分と、前記（Ｃ）成分とを併用することにより、飛躍的に向上した、肌の質改善作用、むくみの予防及び／又は改善作用、表皮機能向上作用、及び毛髪のハリコシ向上作用を発揮する詳細については不明であるが、前記（Ａ）成分と、前記（Ｂ）成分と、前記（Ｃ）成分と、の併用がこのような優れた作用を有し、肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、及び毛髪のハリコシ向上剤として非常に有用であることは、従来は全く知られておらず、本発明者らによる新たな知見である。
【0040】
本明細書において、肌の質の改善とは、失われた肌の透明性や保水性を高めたり、失われた肌の柔軟性や弾力性を高めることをいう。なお、肌の透明感があるとは、皮膚がくもりなく透き通ったように見える状態のことをいう。
【0041】
本明細書において、むくみとは、皮膚又は皮膚の下に水分が溜まった状態のことをいう（「浮腫」と称することもある。）。本明細書において、むくみの予防とは皮膚又は皮膚の下に水分が溜まることを防ぐことをいい、むくみの改善とは皮膚又は皮膚の下に水分が溜まった状態を緩和又は解消することをいう。
【0042】
本明細書において、表皮機能としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、保湿機能、バリア機能が好適に挙げられる。前記保湿機能とは肌の水分を保つ機能のことをいい、前記バリア機能とは体内の水分の蒸発、ならびに外部からの刺激物の侵入を防ぐ機能のことをいう。本明細書において、表皮機能向上とは、低下した表皮機能を高めることをいう。
【0043】
本明細書において、毛髪のハリとは引っ張ったときの毛髪の強度のことをいい、毛髪のコシとは毛髪の弾力のことをいう。本明細書において、毛髪のハリコシ向上とは、低下した毛髪のハリ又はコシを高めることをいう。
【0044】
本発明の肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、及び毛髪のハリコシ向上剤は、有効成分である前記（Ａ）成分と、前記（Ｂ）成分と、前記（Ｃ）成分とが同一の組成物中に含まれる態様であってもよいし、前記（Ａ）成分と、前記（Ｂ）成分と、前記（Ｃ）成分とが２種以上の異なる組成物中に含まれ、使用時に組み合わせて用いる態様であってもよい。すなわち、使用時に組み合わせて用いる態様では、前記（Ａ）成分と、前記（Ｂ）成分と、前記（Ｃ）成分とが、それぞれ別の組成物に含まれているものを組み合わせて用いてもよいし、前記成分のうち２種を含む組成物と、１種を含む組成物を組み合わせて用いてもよい。
【0045】
＜（Ａ）成分：グリチルレチン酸ステアリル＞
前記グリチルレチン酸ステアリルは下記構造式で表される化合物である。前記グリチルレチン酸ステアリルは、グリチルレチン酸にステアリルアルコールをエステル結合させることで、軟膏やクリーム等に使用される油脂類に対する溶解性を向上させた成分で、薬用スキンケア製品の抗炎症有効成分として汎用されている。前記グリチルレチン酸ステアリルは、塩の態様であってもよい。
前記グリチルレチン酸ステアリルは下記構造式で表される化合物である。前記グリチルレチン酸ステアリルは、グリチルレチン酸にステアリルアルコールをエステル結合させることで、軟膏やクリーム等に使用される油脂類に対する溶解性を向上させた成分で、薬用スキンケア製品の抗炎症有効成分として汎用されている。前記グリチルレチン酸ステアリルは、塩の態様であってもよい。
【化1】
【0046】
前記グリチルレチン酸ステアリルは、合成したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。
【0047】
前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤における前記（Ａ）成分の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【0048】
＜（Ｂ）成分：グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物＞
前記（Ｂ）成分は、グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物である。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
前記（Ｂ）成分は、グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物である。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【0049】
－油溶性甘草抽出物－
甘草は、マメ科グリチルリーザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属に属する多年生草本植物である。該甘草としては、中国・東北～内蒙古～西北地方などに産する東北甘草、西北甘草（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）、中国・新疆地方などに産する新疆甘草（脹果甘草、Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｉｎｆｌａｔａ）、旧ソ連、アフガニスタン、トルコ、パキスタン、スペインなどに産するスペイン甘草（光果甘草、Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｇｌａｂｒａ）などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
これらの中でも、グリチルリーザ・グラブラ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｇｌａｂｒａ）が好ましい。
甘草は、マメ科グリチルリーザ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ）属に属する多年生草本植物である。該甘草としては、中国・東北～内蒙古～西北地方などに産する東北甘草、西北甘草（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）、中国・新疆地方などに産する新疆甘草（脹果甘草、Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｉｎｆｌａｔａ）、旧ソ連、アフガニスタン、トルコ、パキスタン、スペインなどに産するスペイン甘草（光果甘草、Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｇｌａｂｒａ）などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
これらの中でも、グリチルリーザ・グラブラ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｇｌａｂｒａ）が好ましい。
【0050】
前記油溶性甘草抽出物は、抽出原料として使用する抽出部位から調製したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。
【0051】
前記甘草の抽出部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、根部、根茎部、葉部、葉部などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。これらの中でも、根部、根茎部が好ましい。
前記甘草の抽出原料の形状、構造、大きさとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記甘草の抽出原料の形状、構造、大きさとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【0052】
前記甘草の抽出部位の調製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出部位を乾燥させた後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供する方法などが挙げられる。前記乾燥は、天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。また、抽出原料としては、工業的に製造されているグリチルリチンの抽出原料となっている乾燥根部及び乾燥根茎部、又はグリチルリチン等を得るために水で抽出した後の水抽出残渣を原料として使用することもできる。
【0053】
前記油溶性甘草抽出物は、抽出溶媒として有機溶媒を使用する植物の抽出に一般に用いられる方法により容易に得ることができる。前記抽出物の態様としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出液そのもの、抽出液の希釈液、抽出液の濃縮液、これらの乾燥物、粗精製物、精製物などが挙げられる。
【0054】
前記抽出の方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出原料に対し２～１０倍量の有機溶媒を加え、攪拌しながら常温で抽出する方法、加熱還流して抽出する方法等が挙げられる。前記抽出の方法は、１種単独で行ってもよいし、２種以上を組み合わせて行ってもよい。また、前記抽出は、１回でもよいし、２回以上繰り返し行ってもよい。
【0055】
前記抽出における条件（抽出時間及び抽出温度）、抽出溶媒及び抽出溶媒の使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【0056】
前記抽出溶媒として使用し得る有機溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ベンゼン、トルエン、キシレン、エチルエーテル、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル、アセトン、メタノール、エタノール、プロパノール、含水メタノール、含水エタノール、含水プロパノールなどが挙げられる。さらには、超臨界流体として二酸化炭素を用いることもできる。これらの有機溶媒の中では、エタノール又は含水エタノールを使用するのが食品衛生法上の問題が少なく、好ましい。
【0057】
前記抽出溶媒の温度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。
【0058】
得られた抽出液は、遠心分離及び濾過等により不溶物を取り除いた後、油溶性甘草抽出物として、そのまま使用することもできるし、更に常法により、濃縮して使用することもできる。また、適当な方法で抽出液を乾燥させれば、油溶性甘草抽出物として、黄褐色の抽出物粉末を得ることもできる。
得られた液状抽出物をそのまま、又は液状抽出物を濃縮したもの、更には液状抽出物の粉末或いは固形の乾燥物が油溶性甘草抽出物として利用される。前記乾燥物を得るに当たって、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリンなどのキャリアーを加えてもよい。
得られた液状抽出物をそのまま、又は液状抽出物を濃縮したもの、更には液状抽出物の粉末或いは固形の乾燥物が油溶性甘草抽出物として利用される。前記乾燥物を得るに当たって、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリンなどのキャリアーを加えてもよい。
【0059】
得られた油用性甘草抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【0060】
－グラブリジン－
前記グラブリジンは、前記油溶性甘草抽出物を精製することにより調製することができる。
前記グラブリジンは、前記油溶性甘草抽出物を精製することにより調製することができる。
【0061】
前記油溶性甘草抽出物の精製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、活性炭を用いる方法、多孔性樹脂を用いる方法、吸着剤を用いる方法、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）などが挙げられる。これらは、１種単独で行ってもよいし、２種以上を組み合わせて行ってもよい。
【0062】
前記多孔性樹脂としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、芳香族系又は芳香族系修飾型のものが挙げられる。使用可能な多孔性樹脂の具体例としては、ダイヤイオンＨＰ、同２０、同２１、セパビーズＳＰ２０７、同８２５、同８５０（以上、三菱化学社製）、アンバーライトＸＡＤ２、同４、同７（以上、オルガノ社製）などが挙げられる。
前記吸着剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、オクタデシルシリカゲル（ＯＤＳ）などが挙げられる。
前記吸着剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、オクタデシルシリカゲル（ＯＤＳ）などが挙げられる。
【0063】
前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤における前記（Ｂ）成分の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記グラブリジンと、前記油溶性甘草抽出物との質量比としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記グラブリジンと、前記油溶性甘草抽出物との質量比としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【0064】
＜（Ｃ）成分：甘草葉抽出物＞
甘草は、上記した（Ｂ）成分の油溶性甘草抽出物の甘草と同様である。
前記甘草葉抽出物に用いる甘草の種類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、グリチルリーザ・グラブラ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｇｌａｂｒａ）が好ましい。
甘草は、上記した（Ｂ）成分の油溶性甘草抽出物の甘草と同様である。
前記甘草葉抽出物に用いる甘草の種類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、グリチルリーザ・グラブラ（Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ ｇｌａｂｒａ）が好ましい。
【0065】
前記甘草葉抽出物は、抽出原料として使用する葉から調製したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。
【0066】
前記甘草の抽出部位は、葉部である。
前記甘草の抽出原料の形状、構造、大きさとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記甘草の抽出原料の形状、構造、大きさとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【0067】
前記甘草の抽出部位の調製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出部位を乾燥させた後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供する方法などが挙げられる。前記乾燥は、天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。
【0068】
前記甘草葉抽出物は、植物の抽出に一般に用いられる方法により容易に得ることができる。前記甘草葉抽出物の態様としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出液そのもの、抽出液の希釈液、抽出液の濃縮液、これらの乾燥物、粗精製物、精製物などが挙げられる。
【0069】
前記抽出の方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出する方法などが挙げられ、より具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料である前記甘草の前記抽出部位を投入し、必要に応じて適宜撹拌しながら、例えば、３０分間～４時間静置して可溶性成分を溶出した後、濾過して抽出残渣を除くことにより抽出液を得る方法などが挙げられる。前記抽出液は、更に、抽出溶媒を留去し、乾燥してもよい。
また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【0070】
前記甘草葉部の抽出における条件（抽出時間及び抽出温度）、抽出溶媒及び抽出溶媒の使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【0071】
前記抽出溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性溶媒、又は水と親水性溶媒との混合溶媒などが挙げられる。
【0072】
前記水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水などの他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。なお、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水なども含まれる。前記水は、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【0073】
前記親水性溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１～５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３－ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２～５の多価アルコールなどが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【0074】
前記混合溶媒における前記水に対する前記親水性溶媒の使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、低級アルコールを使用する場合は、水１０容量部に対して１容量部～９０容量部、低級脂肪族ケトンを使用する場合は、水１０容量部に対して１容量部～４０容量部、多価アルコールを使用する場合は、水１０容量部に対して１容量部～９０容量部添加することが好ましい。
【0075】
前記抽出溶媒の温度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。
【0076】
得られた前記甘草葉抽出物は、前記甘草葉抽出物の希釈物、濃縮物、乾燥物、粗精製物、精製物などを得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製などの処理を施してもよい。
【0077】
前記甘草葉抽出物の精製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理などの精製方法が挙げられる。前記精製方法により精製することで、有効成分の濃度を高めたり、不要物を除去したりすることができる。
【0078】
得られた前記甘草葉抽出物は、そのままでも前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤の有効成分として使用することができるが、利用しやすい点で、前記濃縮液、前記乾燥物が好ましい。前記乾燥物を得るに当たって、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリンなどのキャリアーを加えてもよい。
【0079】
前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤における前記（Ｃ）成分の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【0080】
前記（Ａ）成分と前記（Ｂ）成分との使用量の比（以下、「配合比」と称することもある。）としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、質量比（（Ａ）成分：（Ｂ）成分）として、５０：１～１：１０などが挙げられる。
なお、前記（Ａ）成分と前記（Ｂ）成分との質量比は、固形分換算した値である。
なお、前記（Ａ）成分と前記（Ｂ）成分との質量比は、固形分換算した値である。
【0081】
前記（Ａ）成分と前記（Ｃ）成分との使用量の比（以下、「配合比」と称することもある。）としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、質量比（（Ａ）成分：（Ｃ）成分）として、５０：１～１：５０などが挙げられる。
なお、前記（Ａ）成分と前記（Ｃ）成分との質量比は、固形分換算した値である。
なお、前記（Ａ）成分と前記（Ｃ）成分との質量比は、固形分換算した値である。
【0082】
前記（Ｂ）成分と前記（Ｃ）成分との使用量の比（以下、「配合比」と称することもある。）としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、質量比（（Ｂ）成分：（Ｃ）成分）として、２０：１～１：１０などが挙げられる。
なお、前記（Ｂ）成分と前記（Ｃ）成分との質量比は、固形分換算した値である。
なお、前記（Ｂ）成分と前記（Ｃ）成分との質量比は、固形分換算した値である。
【0083】
前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤は、前記（Ａ）成分、前記（Ｂ）成分、及び前記（Ｃ）成分のみからなるものであってもよい。
【0084】
＜その他の成分＞
前記その他の成分としては、特に制限はなく、前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤の利用形態に応じて適宜選択することができ、例えば、賦形剤、防湿剤、防腐剤、強化剤、増粘剤、乳化剤、酸化防止剤、着色料、香料、美白剤、保湿剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、皮膚栄養剤などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
前記その他の成分としては、特に制限はなく、前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤の利用形態に応じて適宜選択することができ、例えば、賦形剤、防湿剤、防腐剤、強化剤、増粘剤、乳化剤、酸化防止剤、着色料、香料、美白剤、保湿剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、皮膚栄養剤などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【0085】
前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤における前記その他の成分の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【0086】
前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤は、上記した各成分を組み合わせた混合物としてもよいし、上記した各成分の組合せを製剤化してもよい。製剤化する場合は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤等を用いることができる。
【0087】
＜用途＞
前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤の用途としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、医薬品、医薬部外品、化粧品などが挙げられる。
前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤の用途としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、医薬品、医薬部外品、化粧品などが挙げられる。
【0088】
前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤の用法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、外用などの用法が挙げられる。
【0089】
前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤の投与部位、投与量、用法、及び剤型としては、その使用目的に応じて適宜選択することができる。
【0090】
前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤の剤型としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、化粧水、乳液、クリーム、軟膏、美容液、ローション、ジェル、美容オイル、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、ファンデーション、入浴剤、石鹸、ボディーソープ、アストリンゼント、ヘアトニック、ヘアローション、ヘアクリーム、ヘアリキッド、ポマード、シャンプー、リンス、コンディショナー等の外用剤などが挙げられる。
前記各剤型の肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤の製造方法としては、特に制限はなく、公知の方法を適宜選択することができる。
前記各剤型の肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤の製造方法としては、特に制限はなく、公知の方法を適宜選択することができる。
【0091】
本発明の肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなど）に対して適用することもできる。
【0092】
前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤の使用量、使用期間等の使用方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【0093】
前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤は、優れた肌の質改善作用、むくみの予防及び／又は改善作用、表皮機能向上作用、又は毛髪のハリコシ向上作用を有し、安全性が高いので、例えば、外用組成物、より具体的には、肌の質改善用外用組成物、むくみの予防及び／又は改善用外用組成物、表皮機能向上用外用組成物、又は毛髪のハリコシ向上用外用組成物などの有効成分として好適に用いることができる。
【0094】
前記肌の質改善剤が奏する肌の質改善作用は、例えば、角層タンパク質のカルボニル化抑制作用によって発揮される。そのため、前記肌の質改善剤は、角層タンパク質のカルボニル化抑制作用を有することが好ましい。なお、前記肌の質改善剤が奏する肌の質改善作用は、角層タンパク質のカルボニル化抑制作用に基づいて発揮される肌の質改善作用に限定されるものではない。
また、本発明は、前記（Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を併用することを特徴とする角層タンパク質のカルボニル化抑制剤にも関する。
また、本発明は、前記（Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を併用することを特徴とする角層タンパク質のカルボニル化抑制剤にも関する。
【0095】
上述したように、本発明の肌の質改善剤は、優れた肌の質改善作用を奏する。したがって、本発明は、個体に前記肌の質改善剤を投与することを特徴とする、肌の質改善方法にも関する。
また、本発明は、個体に前記角層タンパク質のカルボニル化抑制剤を投与することを特徴とする、角層タンパク質のカルボニル化抑制方法にも関する。
また、本発明は、個体に前記角層タンパク質のカルボニル化抑制剤を投与することを特徴とする、角層タンパク質のカルボニル化抑制方法にも関する。
【0096】
前記むくみの予防及び／又は改善剤が奏するむくみの予防及び／又は改善作用は、例えば、リンパ管活性化因子（ＶＥＧＦ－Ｃ） ｍＲＮＡ発現促進作用によって発揮される。そのため、前記むくみの予防及び／又は改善剤は、リンパ管活性化因子（ＶＥＧＦ－Ｃ） ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが好ましい。なお、前記むくみの予防及び／又は改善剤が奏するむくみの予防及び／又は改善作用は、リンパ管活性化因子（ＶＥＧＦ－Ｃ） ｍＲＮＡ発現促進作用に基づいて発揮されるむくみの予防及び／又は改善作用に限定されるものではない。
また、本発明は、前記（Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を併用することを特徴とするリンパ管活性化因子（ＶＥＧＦ－Ｃ） ｍＲＮＡ発現促進剤にも関する。
また、本発明は、前記（Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を併用することを特徴とするリンパ管活性化因子（ＶＥＧＦ－Ｃ） ｍＲＮＡ発現促進剤にも関する。
【0097】
上述したように、本発明のむくみの予防及び／又は改善剤は、優れたむくみの予防及び／又は改善作用を有する。したがって、本発明は、個体に前記むくみの予防及び／又は改善剤を投与することを特徴とする、むくみの予防及び／又は改善方法にも関する。
また、本発明は、個体に前記リンパ管活性化因子（ＶＥＧＦ－Ｃ） ｍＲＮＡ発現促進剤を投与することを特徴とする、リンパ管活性化因子（ＶＥＧＦ－Ｃ） ｍＲＮＡ発現促進方法にも関する。
また、本発明は、個体に前記リンパ管活性化因子（ＶＥＧＦ－Ｃ） ｍＲＮＡ発現促進剤を投与することを特徴とする、リンパ管活性化因子（ＶＥＧＦ－Ｃ） ｍＲＮＡ発現促進方法にも関する。
【0098】
前記表皮機能向上剤が奏する表皮機能向上作用は、例えば、セルピンｂ３（ＳＣＣＡ１） ｍＲＮＡ発現抑制作用、ナトリウム／水素イオン交換輸送体１（ＮＨＥ１） ｍＲＮＡ発現促進作用、アクアポリン３（ＡＱＰ３） ｍＲＮＡ発現促進作用、インボルクリン（ＩＶＬ） ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン－１（ＣＬＤＮ１） ｍＲＮＡ発現促進作用、及びクローディン－４（ＣＬＤＮ４） ｍＲＮＡ発現促進作用、並びにこれらの２種以上の組合せからなる群から選択されるいずれかによって発揮される。そのため、前記表皮機能向上剤は、セルピンｂ３（ＳＣＣＡ１） ｍＲＮＡ発現抑制作用、ナトリウム／水素イオン交換輸送体１（ＮＨＥ１） ｍＲＮＡ発現促進作用、アクアポリン３（ＡＱＰ３） ｍＲＮＡ発現促進作用、インボルクリン（ＩＶＬ） ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン－１（ＣＬＤＮ１） ｍＲＮＡ発現促進作用、及びクローディン－４（ＣＬＤＮ４） ｍＲＮＡ発現促進作用、並びにこれらの２種以上の組合せからなる群から選択されるいずれかを有することが好ましい。なお、前記表皮機能向上剤が奏する表皮機能向上作用は、セルピンｂ３（ＳＣＣＡ１） ｍＲＮＡ発現抑制作用、ナトリウム／水素イオン交換輸送体１（ＮＨＥ１） ｍＲＮＡ発現促進作用、アクアポリン３（ＡＱＰ３） ｍＲＮＡ発現促進作用、インボルクリン（ＩＶＬ） ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン－１（ＣＬＤＮ１） ｍＲＮＡ発現促進作用、及びクローディン－４（ＣＬＤＮ４） ｍＲＮＡ発現促進作用、並びにこれらの２種以上の組合せからなる群から選択されるいずれかに基づいて発揮される表皮機能向上作用に限定されるものではない。
【0099】
前記表皮機能としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、保湿機能及びバリア機能の少なくともいずれかが好ましい。
【0100】
また、本発明は、前記（Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を併用することを特徴とする、セルピンｂ３（ＳＣＣＡ１） ｍＲＮＡ発現抑制剤、ナトリウム／水素イオン交換輸送体１（ＮＨＥ１） ｍＲＮＡ発現促進剤、アクアポリン３（ＡＱＰ３） ｍＲＮＡ発現促進剤、インボルクリン（ＩＶＬ） ｍＲＮＡ発現促進剤、クローディン－１（ＣＬＤＮ１） ｍＲＮＡ発現促進剤、クローディン－４（ＣＬＤＮ４） ｍＲＮＡ発現促進剤、保湿機能向上剤、又はバリア機能向上剤にも関する。
【0101】
上述したように、本発明の表皮機能向上剤は、優れた表皮機能向上作用を奏する。したがって、本発明は、個体に前記表皮機能向上剤を投与することを特徴とする、表皮機能向上方法にも関する。前記表皮機能としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、保湿機能及びバリア機能の少なくともいずれかが好ましい。
【0102】
また、本発明は、個体に前記セルピンｂ３（ＳＣＣＡ１） ｍＲＮＡ発現抑制剤を投与することを特徴とする、セルピンｂ３（ＳＣＣＡ１） ｍＲＮＡ発現抑制方法；個体に前記ナトリウム／水素イオン交換輸送体１（ＮＨＥ１） ｍＲＮＡ発現促進剤を投与することを特徴とする、ナトリウム／水素イオン交換輸送体１（ＮＨＥ１） ｍＲＮＡ発現促進方法；個体に前記アクアポリン３（ＡＱＰ３） ｍＲＮＡ発現促進剤を投与することを特徴とする、アクアポリン３（ＡＱＰ３） ｍＲＮＡ発現促進方法；個体に前記インボルクリン（ＩＶＬ） ｍＲＮＡ発現促進剤を投与することを特徴とする、インボルクリン（ＩＶＬ） ｍＲＮＡ発現促進方法；個体に前記クローディン－１（ＣＬＤＮ１） ｍＲＮＡ発現促進剤を投与することを特徴とする、クローディン－１（ＣＬＤＮ１） ｍＲＮＡ発現促進方法；個体に前記クローディン－４（ＣＬＤＮ４） ｍＲＮＡ発現促進剤を投与することを特徴とする、クローディン－４（ＣＬＤＮ４） ｍＲＮＡ発現促進方法；個体に前記保湿機能向上剤を投与することを特徴とする、保湿機能向上方法；個体に前記バリア機能向上剤を投与することを特徴とする、バリア機能向上方法にも関する。
【0103】
前記毛髪のハリコシ向上剤が奏する毛髪のハリコシ向上作用は、例えば、ヘアケラチンタンパク質（ＫＡＰ５．１） ｍＲＮＡ発現促進作用によって発揮される。そのため、前記毛髪のハリコシ向上剤は、ヘアケラチンタンパク質（ＫＡＰ５．１） ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが好ましい。なお、前記毛髪のハリコシ向上剤が有する毛髪のハリコシ向上作用は、ヘアケラチンタンパク質（ＫＡＰ５．１） ｍＲＮＡ発現促進作用に基づいて発揮される毛髪のハリコシ向上作用に限定されるものではない。
また、本発明は、前記（Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を併用することを特徴とするヘアケラチンタンパク質（ＫＡＰ５．１） ｍＲＮＡ発現促進剤にも関する。
また、本発明は、前記（Ａ）グリチルレチン酸ステアリルと、（Ｂ）グラブリジン及び／又は油溶性甘草抽出物と、（Ｃ）甘草葉抽出物と、を併用することを特徴とするヘアケラチンタンパク質（ＫＡＰ５．１） ｍＲＮＡ発現促進剤にも関する。
【0104】
上述したように、本発明の毛髪のハリコシ向上剤は、優れた毛髪のハリコシ向上作用を奏する。したがって、本発明は、個体に前記毛髪のハリコシ向上剤を投与することを特徴とする、毛髪のハリコシ向上方法にも関する。
また、本発明は、個体に前記ヘアケラチンタンパク質（ＫＡＰ５．１） ｍＲＮＡ発現促進剤を投与することを特徴とする、ヘアケラチンタンパク質（ＫＡＰ５．１） ｍＲＮＡ発現促進方法にも関する。
また、本発明は、個体に前記ヘアケラチンタンパク質（ＫＡＰ５．１） ｍＲＮＡ発現促進剤を投与することを特徴とする、ヘアケラチンタンパク質（ＫＡＰ５．１） ｍＲＮＡ発現促進方法にも関する。
【0105】
また、本発明の肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤は、肌の質改善作用、むくみの予防及び／又は改善作用、表皮機能向上作用、又は毛髪のハリコシ向上作用の作用機構に関する研究のための試薬としても用いることができる。
【0106】
（外用組成物）
本発明の外用組成物は、本発明の肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、及び毛髪のハリコシ向上剤、並びにこれらの２種以上の組合せからなる群から選択されるいずれかを用い、更に必要に応じてその他の成分を用いる。
前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、及び毛髪のハリコシ向上剤は、１種単独で用いてもよいし、２種以上を併用してもよい。
本発明の外用組成物は、本発明の肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、及び毛髪のハリコシ向上剤、並びにこれらの２種以上の組合せからなる群から選択されるいずれかを用い、更に必要に応じてその他の成分を用いる。
前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、及び毛髪のハリコシ向上剤は、１種単独で用いてもよいし、２種以上を併用してもよい。
【0107】
＜肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、及び毛髪のハリコシ向上剤、並びにこれらの２種以上の組合せからなる群から選択されるいずれか＞
前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、及び毛髪のハリコシ向上剤は、上述した本発明の肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、及び毛髪のハリコシ向上剤である。
前記外用組成物に配合する前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、及び毛髪のハリコシ向上剤、並びにこれらの２種以上の組合せからなる群から選択されるいずれかは、前記（Ａ）成分、前記（Ｂ）成分、及び前記（Ｃ）成分の混合物をそのまま配合してもよいし、前記混合物を製剤化したものを配合してもよいし、前記（Ａ）成分、前記（Ｂ）成分、及び前記（Ｃ）成分をそれぞれ単独で又は複数種類を異なる外用組成物に配合し、使用時に前記各外用組成物を組み合わせて使用してもよい。
前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、及び毛髪のハリコシ向上剤は、上述した本発明の肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、及び毛髪のハリコシ向上剤である。
前記外用組成物に配合する前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、及び毛髪のハリコシ向上剤、並びにこれらの２種以上の組合せからなる群から選択されるいずれかは、前記（Ａ）成分、前記（Ｂ）成分、及び前記（Ｃ）成分の混合物をそのまま配合してもよいし、前記混合物を製剤化したものを配合してもよいし、前記（Ａ）成分、前記（Ｂ）成分、及び前記（Ｃ）成分をそれぞれ単独で又は複数種類を異なる外用組成物に配合し、使用時に前記各外用組成物を組み合わせて使用してもよい。
【0108】
前記外用組成物における前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、及び毛髪のハリコシ向上剤、並びにこれらの２種以上の組合せからなる群から選択されるいずれかの含有量としては、特に制限はなく、外用組成物の形態や前記各剤における有効成分（前記（Ａ）成分、前記（Ｂ）成分、及び前記（Ｃ）成分）の生理活性等によって適宜調整することができるが、前記（Ａ）成分、前記（Ｂ）成分、及び前記（Ｃ）成分の合計含有量（固形分換算した値）に換算して、０．０００１質量％～２０質量％が好ましく、０．００１質量％～２質量％がより好ましい。前記外用組成物は、前記肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、及び毛髪のハリコシ向上剤、並びにこれらの２種以上の組合せからなる群から選択されるいずれかのみからなるものであってもよい。
【0109】
＜その他の成分＞
前記外用組成物におけるその他の成分としては、特に制限はなく、前記外用組成物の利用形態に応じて適宜選択することができ、例えば、通常化粧料の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分などが挙げられる。前記通常化粧料の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分としては、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
前記外用組成物におけるその他の成分としては、特に制限はなく、前記外用組成物の利用形態に応じて適宜選択することができ、例えば、通常化粧料の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分などが挙げられる。前記通常化粧料の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分としては、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【0110】
前記外用組成物におけるその他の成分の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【0111】
前記外用組成物としては、その区分に制限はなく、経皮的に使用される皮膚化粧料、医薬部外品、医薬品などを幅広く含むものである。
【0112】
前記外用組成物の種類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、化粧水、乳液、クリーム、軟膏、美容液、ローション、ジェル、美容オイル、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、ファンデーション、入浴剤、石鹸、ボディーソープ、アストリンゼント、ヘアトニック、ヘアローション、ヘアクリーム、ヘアリキッド、ポマード、シャンプー、リンス、コンディショナーなどが挙げられる。
前記各外用組成物の製造方法としては、特に制限はなく、公知の方法を適宜選択することができる。
前記各外用組成物の製造方法としては、特に制限はなく、公知の方法を適宜選択することができる。
【0113】
前記外用組成物の使用部位、使用量、用法、使用期間、及び剤型としては、その使用目的に応じて適宜選択することができる。
【0114】
前記外用組成物は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、その作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなど）に対して適用することもできる。
【0115】
本発明の外用組成物は、安全性が高く、日常的に使用することが可能であり、有効成分の働きによって、肌の質改善作用、むくみの予防及び／又は改善作用、表皮機能向上作用、及び毛髪のハリコシ向上作用をはじめとする様々な生理活性作用を極めて効果的に発揮させることができる。
【0116】
上述したように、本発明の肌の質改善剤、むくみの予防及び／又は改善剤、表皮機能向上剤、又は毛髪のハリコシ向上剤は、優れた肌の質改善作用、むくみの予防及び／又は改善作用、表皮機能向上作用、又は毛髪のハリコシ向上作用を有する。
したがって、本発明は、個体に前記外用組成物を投与することを特徴とする、肌の質改善方法、むくみの予防及び／又は改善方法、表皮機能向上方法、又は毛髪のハリコシ向上方法にも関する。
したがって、本発明は、個体に前記外用組成物を投与することを特徴とする、肌の質改善方法、むくみの予防及び／又は改善方法、表皮機能向上方法、又は毛髪のハリコシ向上方法にも関する。
【0117】
また、本発明は、個体に前記外用組成物を投与することを特徴とする、角層タンパク質のカルボニル化抑制方法、リンパ管活性化因子（ＶＥＧＦ－Ｃ） ｍＲＮＡ発現促進方法、セルピンｂ３（ＳＣＣＡ１） ｍＲＮＡ発現抑制方法、ナトリウム／水素イオン交換輸送体１（ＮＨＥ１） ｍＲＮＡ発現促進方法、アクアポリン３（ＡＱＰ３） ｍＲＮＡ発現促進方法、インボルクリン（ＩＶＬ） ｍＲＮＡ発現促進方法、クローディン－１（ＣＬＤＮ１） ｍＲＮＡ発現促進方法、クローディン－４（ＣＬＤＮ４） ｍＲＮＡ発現促進方法、保湿機能向上方法、バリア機能向上方法、又はヘアケラチンタンパク質（ＫＡＰ５．１） ｍＲＮＡ発現促進方法にも関する。
【実施例0118】
以下、本発明の試験例、配合例を説明するが、本発明は、これらの試験例、配合例に何ら限定されるものではない。
【0119】
（被験試料）
後述の試験例で用いる被験試料として、下記のものを用意した。
（１） グリチルレチン酸ステアリル（丸善製薬社製）
（２） 油溶性甘草抽出物（油溶性甘草エキスＨＧ、丸善製薬社製）
（３） 甘草葉抽出物（甘草葉抽出液ＢＧ、丸善製薬社製）
（４） 上記（１）、（２）、及び（３）を固形分の質量比（（１）：（２）：（３））として、２００：１０：１で含む混合物（以下、「混合物」と称することがある。）
後述の試験例で用いる被験試料として、下記のものを用意した。
（１） グリチルレチン酸ステアリル（丸善製薬社製）
（２） 油溶性甘草抽出物（油溶性甘草エキスＨＧ、丸善製薬社製）
（３） 甘草葉抽出物（甘草葉抽出液ＢＧ、丸善製薬社製）
（４） 上記（１）、（２）、及び（３）を固形分の質量比（（１）：（２）：（３））として、２００：１０：１で含む混合物（以下、「混合物」と称することがある。）
【0120】
（試験例１：角層タンパク質カルボニル化抑制作用試験）
上記した被験試料を用い、下記の試験方法により、角層タンパク質カルボニル化抑制作用を試験した。
上記した被験試料を用い、下記の試験方法により、角層タンパク質カルボニル化抑制作用を試験した。
【0121】
非露光部である上腕内側の角層を、角質チェッカーを用いてテープストリッピング法により剥離・回収した。
剥離・回収した角層を、各種濃度の被験試料（濃度は下記表１を参照）と、次亜塩素酸ナトリウム水溶液（ＮａＣｌＯ）を４０μｍｏｌ／Ｌ含む又は含まない溶液１ｍＬ中に浸漬し、３７℃で１６時間反応させた。
その後、０．１ｍｏｌ／Ｌ ＭＥＳ（２－ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｅｔｈａｎｅ ｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ－Ｎａ）（ｐＨ５．５）緩衝液１ｍＬで２回洗浄し、２０μｍｏｌ／Ｌ蛍光ヒドラジド（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ－５－ｔｈｉｏｓｅｍｉｃａｒｂａｚｉｄｅ；ＦＴＳＣ）含有ＭＥＳ（ｐＨ ５．５）１ｍＬに浸漬して、室温・遮光下で１時間反応させ、角層タンパク質のカルボニル基をラベル化した。
その後、ＰＢＳ（－）１ｍＬで２回洗浄し、カバーガラス上に乗せ、オールインワン蛍光顕微鏡ＢＺ－Ｘ８００（キーエンス社製）で画像撮影し、付属の画像解析ソフトを用いて、角層面積あたりの蛍光輝度をカルボニル化レベルとした。
得られた結果から、下記式により角層タンパク質カルボニル化抑制率を算出した。結果を表１に示す。
角層タンパク質カルボニル化抑制率（％）＝［１－｛（Ａ－Ｃ）／（Ｂ－Ｃ）｝］×１００
上記式中のＡ～Ｃは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： ＮａＣｌＯ処理あり・被験試料処理ありのときのカルボニル化レベル
Ｂ ： ＮａＣｌＯ処理あり・被験試料処理なしのときのカルボニル化レベル（コントロール）
Ｃ ： ＮａＣｌＯ処理なし・被験試料処理なしのときのカルボニル化レベル（ノーマル）
剥離・回収した角層を、各種濃度の被験試料（濃度は下記表１を参照）と、次亜塩素酸ナトリウム水溶液（ＮａＣｌＯ）を４０μｍｏｌ／Ｌ含む又は含まない溶液１ｍＬ中に浸漬し、３７℃で１６時間反応させた。
その後、０．１ｍｏｌ／Ｌ ＭＥＳ（２－ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｅｔｈａｎｅ ｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ－Ｎａ）（ｐＨ５．５）緩衝液１ｍＬで２回洗浄し、２０μｍｏｌ／Ｌ蛍光ヒドラジド（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ－５－ｔｈｉｏｓｅｍｉｃａｒｂａｚｉｄｅ；ＦＴＳＣ）含有ＭＥＳ（ｐＨ ５．５）１ｍＬに浸漬して、室温・遮光下で１時間反応させ、角層タンパク質のカルボニル基をラベル化した。
その後、ＰＢＳ（－）１ｍＬで２回洗浄し、カバーガラス上に乗せ、オールインワン蛍光顕微鏡ＢＺ－Ｘ８００（キーエンス社製）で画像撮影し、付属の画像解析ソフトを用いて、角層面積あたりの蛍光輝度をカルボニル化レベルとした。
得られた結果から、下記式により角層タンパク質カルボニル化抑制率を算出した。結果を表１に示す。
角層タンパク質カルボニル化抑制率（％）＝［１－｛（Ａ－Ｃ）／（Ｂ－Ｃ）｝］×１００
上記式中のＡ～Ｃは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： ＮａＣｌＯ処理あり・被験試料処理ありのときのカルボニル化レベル
Ｂ ： ＮａＣｌＯ処理あり・被験試料処理なしのときのカルボニル化レベル（コントロール）
Ｃ ： ＮａＣｌＯ処理なし・被験試料処理なしのときのカルボニル化レベル（ノーマル）
【0122】
【表1】
【0123】
表１の結果から、グリチルレチン酸ステアリルと、油溶性甘草抽出物と、甘草葉抽出物とを併用すると、非常に優れた角層タンパク質カルボニル化抑制作用を示すことが確認された。
【0124】
（試験例２：リンパ管活性化因子（ＶＥＧＦ－Ｃ） ｍＲＮＡ発現促進作用試験）
上記した被験試料を用い、下記の試験方法により、ＶＥＧＦ－Ｃ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
上記した被験試料を用い、下記の試験方法により、ＶＥＧＦ－Ｃ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
【0125】
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、１．５×１０５細胞／ｍＬの濃度になるようにＫＧＭで希釈した後、６ウェルプレートに１ウェル当たり２ｍＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表２を参照）を各ウェルに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＶＥＧＦ－Ｃ及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）によるリアルタイム２ステップＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＶＥＧＦ－ＣのｍＲＮＡの発現量は、被験試料無添加又は被験試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で補正値を求め、さらに被験試料無添加時の補正値を１００としたときの被験試料添加時の補正値を算出した。
得られた結果から、下記式によりＶＥＧＦ－Ｃ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表２に示す。
ＶＥＧＦ－Ｃ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表２を参照）を各ウェルに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＶＥＧＦ－Ｃ及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）によるリアルタイム２ステップＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＶＥＧＦ－ＣのｍＲＮＡの発現量は、被験試料無添加又は被験試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で補正値を求め、さらに被験試料無添加時の補正値を１００としたときの被験試料添加時の補正値を算出した。
得られた結果から、下記式によりＶＥＧＦ－Ｃ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表２に示す。
ＶＥＧＦ－Ｃ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
【0126】
【表2】
【0127】
表２の結果から、グリチルレチン酸ステアリルと、油溶性甘草抽出物と、甘草葉抽出物とを併用すると、非常に優れたＶＥＧＦ－Ｃ ｍＲＮＡ発現促進作用を示すことが確認された。
【0128】
（試験例３：セルピン（Ｓｅｒｐｉｎ） ｂ３（ＳＣＣＡ１） ｍＲＮＡ発現抑制作用試験）
上記した被験試料を用い、下記の試験方法により、セルピンｂ３ ｍＲＮＡ発現抑制作用を試験した。
上記した被験試料を用い、下記の試験方法により、セルピンｂ３ ｍＲＮＡ発現抑制作用を試験した。
【0129】
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、１．５×１０５細胞／ｍＬの濃度になるようにＫＧＭで希釈した後、６ウェルプレートに１ウェル当たり２ｍＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表３を参照）を各ウェルに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、セルピンｂ３及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）によるリアルタイム２ステップＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。セルピンｂ３のｍＲＮＡの発現量は、被験試料無添加又は被験試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で補正値を求め、さらに被験試料無添加時の補正値を１００としたときの被験試料添加時の補正値を算出した。
得られた結果から、下記式によりセルピンｂ３ ｍＲＮＡ発現抑制率を算出した。結果を表３に示す。
セルピンｂ３ ｍＲＮＡ発現抑制率（％）＝｛１－（Ａ／Ｂ）｝×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表３を参照）を各ウェルに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、セルピンｂ３及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）によるリアルタイム２ステップＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。セルピンｂ３のｍＲＮＡの発現量は、被験試料無添加又は被験試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で補正値を求め、さらに被験試料無添加時の補正値を１００としたときの被験試料添加時の補正値を算出した。
得られた結果から、下記式によりセルピンｂ３ ｍＲＮＡ発現抑制率を算出した。結果を表３に示す。
セルピンｂ３ ｍＲＮＡ発現抑制率（％）＝｛１－（Ａ／Ｂ）｝×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
【0130】
【表3】
【0131】
表３の結果から、グリチルレチン酸ステアリルと、油溶性甘草抽出物と、甘草葉抽出物とを併用すると、非常に優れたセルピンｂ３ ｍＲＮＡ発現抑制作用を示すことが確認された。
【0132】
（試験例４：ナトリウム／水素イオン交換輸送体１（ＮＨＥ１） ｍＲＮＡ発現促進作用試験）
上記した被験試料を用い、下記の試験方法により、ＮＨＥ１ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
上記した被験試料を用い、下記の試験方法により、ＮＨＥ１ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
【0133】
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、１．５×１０５細胞／ｍＬの濃度になるようにＫＧＭで希釈した後、６ウェルプレートに１ウェル当たり２ｍＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表４を参照）を各ウェルに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＮＨＥ１及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＴａＫａＲａ ＳＹＢＲ（登録商標） ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ－ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）（ｃｏｄｅ Ｎｏ．ＲＲ０６３Ａ）（Ｔａｋａｒａ社製）によるリアルタイム２ステップＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＮＨＥ１のｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＮＨＥ１ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表４に示す。
ＮＨＥ１ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表４を参照）を各ウェルに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＮＨＥ１及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＴａＫａＲａ ＳＹＢＲ（登録商標） ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ－ＰＣＲ Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）（ｃｏｄｅ Ｎｏ．ＲＲ０６３Ａ）（Ｔａｋａｒａ社製）によるリアルタイム２ステップＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＮＨＥ１のｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＮＨＥ１ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表４に示す。
ＮＨＥ１ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
【0134】
【表4】
【0135】
表４の結果から、グリチルレチン酸ステアリルと、油溶性甘草抽出物と、甘草葉抽出物とを併用すると、非常に優れたＮＨＥ１ ｍＲＮＡ発現促進作用を示すことが確認された。
【0136】
（試験例５：アクアポリン３（ＡＱＰ３） ｍＲＮＡ発現促進作用試験）
上記した被験試料を用い、下記の試験方法により、ＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
上記した被験試料を用い、下記の試験方法により、ＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
【0137】
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、１．５×１０５細胞／ｍＬの濃度になるようにＫＧＭで希釈した後、６ウェルプレートに１ウェル当たり２ｍＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表５を参照）を各ウェルに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＡＱＰ３及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）によるリアルタイム２ステップＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＡＱＰ３のｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表５に示す。
ＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表５を参照）を各ウェルに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＡＱＰ３及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）によるリアルタイム２ステップＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＡＱＰ３のｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表５に示す。
ＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
【0138】
【表5】
【0139】
表５の結果から、グリチルレチン酸ステアリルと、油溶性甘草抽出物と、甘草葉抽出物とを併用すると、非常に優れたＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進作用を示すことが確認された。
【0140】
（試験例６：インボルクリン（ＩＶＬ） ｍＲＮＡ発現促進作用試験）
上記した被験試料を用い、下記の試験方法により、ＩＶＬ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
上記した被験試料を用い、下記の試験方法により、ＩＶＬ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
【0141】
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、１．５×１０５細胞／ｍＬの濃度になるようにＫＧＭで希釈した後、６ウェルプレートに１ウェル当たり２ｍＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表６を参照）を各ウェルに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＩＶＬ及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）によるリアルタイム２ステップＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＩＶＬのｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＩＶＬ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表６に示す。
ＩＶＬ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表６を参照）を各ウェルに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＩＶＬ及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）によるリアルタイム２ステップＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＩＶＬのｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＩＶＬ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表６に示す。
ＩＶＬ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
【0142】
【表6】
【0143】
表６の結果から、グリチルレチン酸ステアリルと、油溶性甘草抽出物と、甘草葉抽出物とを併用すると、非常に優れたＩＶＬ ｍＲＮＡ発現促進作用を示すことが確認された。
【0144】
（試験例７：クローディン－１（ＣＬＤＮ１） ｍＲＮＡ発現促進作用試験）
上記した被験試料を用い、下記の試験方法により、ＣＬＤＮ１ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
上記した被験試料を用い、下記の試験方法により、ＣＬＤＮ１ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
【0145】
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、１．５×１０５細胞／ｍＬの濃度になるようにＫＧＭで希釈した後、６ウェルプレートに１ウェル当たり２ｍＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表７を参照）を各ウェルに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＣＬＤＮ１及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）によるリアルタイム２ステップＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＣＬＤＮ１のｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＣＬＤＮ１ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表７に示す。
ＣＬＤＮ１ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表７を参照）を各ウェルに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＣＬＤＮ１及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）によるリアルタイム２ステップＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＣＬＤＮ１のｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＣＬＤＮ１ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表７に示す。
ＣＬＤＮ１ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
【0146】
【表7】
【0147】
表７の結果から、グリチルレチン酸ステアリルと、油溶性甘草抽出物と、甘草葉抽出物とを併用すると、非常に優れたＣＬＤＮ１ ｍＲＮＡ発現促進作用を示すことが確認された。
【0148】
（試験例８：クローディン－４（ＣＬＤＮ４） ｍＲＮＡ発現促進作用試験）
上記した被験試料を用い、下記の試験方法により、ＣＬＤＮ４ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
上記した被験試料を用い、下記の試験方法により、ＣＬＤＮ４ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
【0149】
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、１．５×１０５細胞／ｍＬの濃度になるようにＫＧＭで希釈した後、６ウェルプレートに１ウェル当たり２ｍＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表８を参照）を各ウェルに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＣＬＤＮ４及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）によるリアルタイム２ステップＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＣＬＤＮ４のｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＣＬＤＮ４ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表８に示す。
ＣＬＤＮ４ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表８を参照）を各ウェルに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＣＬＤＮ４及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）によるリアルタイム２ステップＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＣＬＤＮ４のｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＣＬＤＮ４ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表８に示す。
ＣＬＤＮ４ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
【0150】
【表8】
【0151】
表８の結果から、グリチルレチン酸ステアリルと、油溶性甘草抽出物と、甘草葉抽出物とを併用すると、非常に優れたＣＬＤＮ４ ｍＲＮＡ発現促進作用を示すことが確認された。
【0152】
（試験例９：ヘアケラチンタンパク質（ＫＡＰ５．１） ｍＲＮＡ発現促進作用試験）
上記した被験試料を用い、下記の試験方法により、ＫＡＰ５．１ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
上記した被験試料を用い、下記の試験方法により、ＫＡＰ５．１ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
【0153】
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、１．５×１０５細胞／ｍＬの濃度になるようにＫＧＭで希釈した後、６ウェルプレートに１ウェル当たり２ｍＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表９を参照）を各ウェルに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＫＡＰ５．１及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）によるリアルタイム２ステップＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＫＡＰ５．１のｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＫＡＰ５．１ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表９に示す。
ＫＡＰ５．１ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表９を参照）を各ウェルに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＫＡＰ５．１及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）によるリアルタイム２ステップＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＫＡＰ５．１のｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＫＡＰ５．１ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表９に示す。
ＫＡＰ５．１ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
【0154】
【表9】
【0155】
表９の結果から、グリチルレチン酸ステアリルと、油溶性甘草抽出物と、甘草葉抽出物とを併用すると、非常に優れたＫＡＰ５．１ ｍＲＮＡ発現促進作用を示すことが確認された。
【0156】
（配合例１）
下記組成の乳液を常法により製造した。
・ グリチルレチン酸ステアリル（丸善製薬社製） ０．２０ｇ
・ 油溶性甘草抽出物（油溶性甘草エキスＨＧ、丸善製薬社製） ０．０１ｇ
・ 甘草葉抽出物（甘草葉抽出液ＢＧ、丸善製薬社製） ０．００１ｇ
・ ホホバオイル ４．００ｇ
・ １，３－ブチレングリコール ３．００ｇ
・ アルブチン ３．００ｇ
・ ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ２．５０ｇ
・ オリーブオイル ２．００ｇ
・ スクワラン ２．００ｇ
・ セタノール ２．００ｇ
・ モノステアリン酸グリセリル ２．００ｇ
・ オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） ２．００ｇ
・ パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
・ 黄杞エキス ０．１０ｇ
・ グリチルリチン酸ジカリウム ０．１０ｇ
・ イチョウ葉エキス ０．１０ｇ
・ コンキオリン ０．１０ｇ
・ オウバクエキス ０．１０ｇ
・ カミツレエキス ０．１０ｇ
・ 香料 ０．０５ｇ
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）
下記組成の乳液を常法により製造した。
・ グリチルレチン酸ステアリル（丸善製薬社製） ０．２０ｇ
・ 油溶性甘草抽出物（油溶性甘草エキスＨＧ、丸善製薬社製） ０．０１ｇ
・ 甘草葉抽出物（甘草葉抽出液ＢＧ、丸善製薬社製） ０．００１ｇ
・ ホホバオイル ４．００ｇ
・ １，３－ブチレングリコール ３．００ｇ
・ アルブチン ３．００ｇ
・ ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ２．５０ｇ
・ オリーブオイル ２．００ｇ
・ スクワラン ２．００ｇ
・ セタノール ２．００ｇ
・ モノステアリン酸グリセリル ２．００ｇ
・ オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） ２．００ｇ
・ パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
・ 黄杞エキス ０．１０ｇ
・ グリチルリチン酸ジカリウム ０．１０ｇ
・ イチョウ葉エキス ０．１０ｇ
・ コンキオリン ０．１０ｇ
・ オウバクエキス ０．１０ｇ
・ カミツレエキス ０．１０ｇ
・ 香料 ０．０５ｇ
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【0157】
（配合例２）
下記組成のクリームを常法により製造した。
・ グリチルレチン酸ステアリル（丸善製薬社製） ０．１ｇ
・ 油溶性甘草抽出物（油溶性甘草エキスＨＧ、丸善製薬社製） ０．０１ｇ
・ 甘草葉抽出物（甘草葉抽出液ＢＧ、丸善製薬社製） ０．００１ｇ
・ クジンエキス ０．１ｇ
・ オウゴンエキス ０．１ｇ
・ 流動パラフィン ５．０ｇ
・ サラシミツロウ ４．０ｇ
・ スクワラン １０．０ｇ
・ セタノール ３．０ｇ
・ ラノリン ２．０ｇ
・ ステアリン酸 １．０ｇ
・ オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） １．５ｇ
・ モノステアリン酸グリセリル ３．０ｇ
・ １，３－ブチレングリコール ６．０ｇ
・ パラオキシ安息香酸メチル １．５ｇ
・ 香料 ０．１ｇ
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）
下記組成のクリームを常法により製造した。
・ グリチルレチン酸ステアリル（丸善製薬社製） ０．１ｇ
・ 油溶性甘草抽出物（油溶性甘草エキスＨＧ、丸善製薬社製） ０．０１ｇ
・ 甘草葉抽出物（甘草葉抽出液ＢＧ、丸善製薬社製） ０．００１ｇ
・ クジンエキス ０．１ｇ
・ オウゴンエキス ０．１ｇ
・ 流動パラフィン ５．０ｇ
・ サラシミツロウ ４．０ｇ
・ スクワラン １０．０ｇ
・ セタノール ３．０ｇ
・ ラノリン ２．０ｇ
・ ステアリン酸 １．０ｇ
・ オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） １．５ｇ
・ モノステアリン酸グリセリル ３．０ｇ
・ １，３－ブチレングリコール ６．０ｇ
・ パラオキシ安息香酸メチル １．５ｇ
・ 香料 ０．１ｇ
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【0158】
（配合例３）
下記組成の美容液を常法により製造した。
・ グリチルレチン酸ステアリル（丸善製薬社製） ０．３ｇ
・ 油溶性甘草抽出物（油溶性甘草エキスＨＧ、丸善製薬社製） ０．０１ｇ
・ 甘草葉抽出物（甘草葉抽出液ＢＧ、丸善製薬社製） ０．０１ｇ
・ カミツレエキス ０．１ｇ
・ ニンジンエキス ０．１ｇ
・ キサンタンガム ０．３ｇ
・ ヒドロキシエチルセルロース ０．１ｇ
・ カルボキシビニルポリマー ０．１ｇ
・ １，３－ブチレングリコール ４．０ｇ
・ グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ
・ グリセリン ２．０ｇ
・ 水酸化カリウム ０．２５ｇ
・ 香料 ０．０１ｇ
・ 防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル） ０．１５ｇ
・ エタノール ２．０ｇ
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）
下記組成の美容液を常法により製造した。
・ グリチルレチン酸ステアリル（丸善製薬社製） ０．３ｇ
・ 油溶性甘草抽出物（油溶性甘草エキスＨＧ、丸善製薬社製） ０．０１ｇ
・ 甘草葉抽出物（甘草葉抽出液ＢＧ、丸善製薬社製） ０．０１ｇ
・ カミツレエキス ０．１ｇ
・ ニンジンエキス ０．１ｇ
・ キサンタンガム ０．３ｇ
・ ヒドロキシエチルセルロース ０．１ｇ
・ カルボキシビニルポリマー ０．１ｇ
・ １，３－ブチレングリコール ４．０ｇ
・ グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ
・ グリセリン ２．０ｇ
・ 水酸化カリウム ０．２５ｇ
・ 香料 ０．０１ｇ
・ 防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル） ０．１５ｇ
・ エタノール ２．０ｇ
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【0159】
（配合例４）
下記組成のヘアトニックを常法により製造した。
・ グリチルレチン酸ステアリル（丸善製薬社製） ０．０１ｇ
・ 油溶性甘草抽出物（油溶性甘草エキスＨＧ、丸善製薬社製） ０．０５ｇ
・ 甘草葉抽出物（甘草葉抽出液ＢＧ、丸善製薬社製） ０．１ｇ
・ 酢酸トコフェロール 適量
・ セファランチン ０．００２ｇ
・ イソプロピルメチルフェノール ０．１ｇ
・ ヒアルロン酸ナトリウム ０．１５ｇ
・ グリセリン １５．０ｇ
・ エタノール １５．０ｇ
・ 香料 適量
・ キレート剤（エデト酸ナトリウム） 適量
・ 防腐剤（ヒノキチオール） 適量
・ 可溶化剤（ポリオキシエチレンセチルエーテル） 適量
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）
下記組成のヘアトニックを常法により製造した。
・ グリチルレチン酸ステアリル（丸善製薬社製） ０．０１ｇ
・ 油溶性甘草抽出物（油溶性甘草エキスＨＧ、丸善製薬社製） ０．０５ｇ
・ 甘草葉抽出物（甘草葉抽出液ＢＧ、丸善製薬社製） ０．１ｇ
・ 酢酸トコフェロール 適量
・ セファランチン ０．００２ｇ
・ イソプロピルメチルフェノール ０．１ｇ
・ ヒアルロン酸ナトリウム ０．１５ｇ
・ グリセリン １５．０ｇ
・ エタノール １５．０ｇ
・ 香料 適量
・ キレート剤（エデト酸ナトリウム） 適量
・ 防腐剤（ヒノキチオール） 適量
・ 可溶化剤（ポリオキシエチレンセチルエーテル） 適量
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【0160】
（配合例５）
下記組成のシャンプーを常法により製造した。
・ グリチルレチン酸ステアリル（丸善製薬社製） ０．２０ｇ
・ 油溶性甘草抽出物（油溶性甘草エキスＨＧ、丸善製薬社製） ０．０２ｇ
・ 甘草葉抽出物（甘草葉抽出液ＢＧ、丸善製薬社製） ０．０１ｇ
・ マジョラム抽出物 １．０ｇ
・ ウメ果実部抽出物 ０．２ｇ
・ ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム １０．０ｇ
・ ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン １０．０ｇ
・ ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム ２０．０ｇ
・ ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド ４．０ｇ
・ プロピレングリコール ２．０ｇ
・ 香料 適量
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）
下記組成のシャンプーを常法により製造した。
・ グリチルレチン酸ステアリル（丸善製薬社製） ０．２０ｇ
・ 油溶性甘草抽出物（油溶性甘草エキスＨＧ、丸善製薬社製） ０．０２ｇ
・ 甘草葉抽出物（甘草葉抽出液ＢＧ、丸善製薬社製） ０．０１ｇ
・ マジョラム抽出物 １．０ｇ
・ ウメ果実部抽出物 ０．２ｇ
・ ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム １０．０ｇ
・ ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン １０．０ｇ
・ ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム ２０．０ｇ
・ ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド ４．０ｇ
・ プロピレングリコール ２．０ｇ
・ 香料 適量
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）