特開2023-75657ＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023075657
(43)【公開日】2023-05-31
(54)【発明の名称】ＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤
(51)【国際特許分類】
A61K 8/9789 20170101AFI20230524BHJP
A61Q 19/08 20060101ALI20230524BHJP
A61K 36/185 20060101ALI20230524BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20230524BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20230524BHJP
【ＦＩ】
A61K8/9789
A61Q19/08
A61K36/185
A61P17/00
A61P43/00 111
A61P43/00 105
【審査請求】未請求
【請求項の数】3
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2021188696
(22)【出願日】2021-11-19
(71)【出願人】
【識別番号】591082421
【氏名又は名称】丸善製薬株式会社
(72)【発明者】
【氏名】佐藤 日向子
【テーマコード（参考）】
4C083
4C088
【Ｆターム（参考）】
4C083AA111
4C083AA112
4C083AC122
4C083CC02
4C083EE10
4C083EE12
4C083EE13
4C088AB13
4C088AC11
4C088BA08
4C088CA08
4C088MA63
4C088NA14
4C088ZA89
4C088ZC41
4C088ZC52
(57)【要約】
【課題】天然物の中からＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進作用、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制作用及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を有する物質を見出し、それを有効成分として含有するＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤を提供する。
【解決手段】本発明のＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤に、ビロードアオイの抽出物を有効成分として含有せしめる。
【選択図】なし
【解決手段】本発明のＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤に、ビロードアオイの抽出物を有効成分として含有せしめる。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ビロードアオイの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤。
【請求項2】
ビロードアオイの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤。
【請求項3】
ビロードアオイの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ビロードアオイの抽出物を含有するＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤に関する。
【背景技術】
【0002】
皮膚は、表皮、基底膜及び真皮から構成されている。真皮は、線維芽細胞と該細胞から分泌されるコラーゲン、エラスチン及びヒアルロン酸等の細胞外マトリックスにより構成されている。基底膜は、表皮と真皮との境界部に存在し、表皮と真皮とを繋ぎ止めるだけでなく、皮膚機能の維持に重要な役割を果たしている（非特許文献１参照）。
【0003】
若い皮膚においては、線維芽細胞の増殖が活発であり、線維芽細胞とコラーゲン等の皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより、また、基底膜の働きにより、表皮と真皮との相互作用が恒常性を保つことで、水分保持力、柔軟性、弾力性等が確保され、外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
【0004】
ところが、皮膚が紫外線、著しい空気の乾燥、過度の皮膚洗浄、ストレス、喫煙等の外的因子の影響を受けたり、加齢が進んだりすると、細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲンの分解や変質が生じたり、線維芽細胞の増殖が遅くなったりする。その結果、皮膚の保湿機能や弾力性が低下し、角質の異常剥離が起こり、皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワ、くすみ、きめの消失等が生じる。
【0005】
コラーゲンの中でもＩ型コラーゲンは、最も多く体内に含まれるコラーゲンであり、皮膚の真皮にも多く含まれ、皮膚の強さを生み出す役割を果たしていることが知られている。Ｉ型コラーゲンは、ペプチド鎖のα１鎖及びα２鎖から形成されており、各ペプチド鎖はそれぞれＣＯＬ１Ａ１遺伝子、ＣＯＬ１Ａ２遺伝子から転写されたｍＲＮＡを基に合成される。
【0006】
したがって、ＣＯＬ１Ａ１のｍＲＮＡの発現を促進することは、Ｉ型コラーゲンの合成を高め、皮膚の老化を防止又は改善することができると考えられる。
【0007】
コラーゲン産生促進作用を有する物質を安全性の高い天然物から入手することが望まれており、これまで、コラーゲンの産生促進作用を有するものとしては、例えば、スターフルーツ葉抽出物（特許文献１）、クスノハガシワ抽出物（特許文献２）等が知られている。また、ＣＯＬ１Ａ１のｍＲＮＡの発現を促進する物質としては、トレハンジェリン（特許文献３）、ＵＶＢによるＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現減少を抑制するリンゴポリフェノール（特許文献４）等が知られている。
【0008】
近年、真皮マトリックス成分の減少乃至変性を誘導する因子として、マトリックスメタロプロテアーゼ類（以下、「ＭＭＰｓ」と称することもある）と呼ばれるタンパク質分解酵素群の分解及び再構築がある。
前記ＭＭＰｓは、その一次構造と基質特異性の違いから、（１）コラゲナーゼ群（ＭＭＰ－１、ＭＭＰ－８及びＭＭＰ－１３）、（２）ゼラチナーゼ群（ＭＭＰ－２及びＭＭＰ－９）、（３）ストロメライシン群（ＭＭＰ－３及びＭＭＰ－１０）、（４）膜結合型マトリックスメタロプロテアーゼ群（ＭＭＰ－１４、ＭＭＰ－１５、ＭＭＰ－１６、及びＭＭＰ－１７）、（５）その他（ＭＭＰ－７、ＭＭＰ－１１、及びＭＭＰ－１２）の５つのグループに分類されている（例えば、特許文献５参照）。
前記ＭＭＰｓの中でも、ＭＭＰ－１は、皮膚の真皮マトリックスの主な構成成分であるＩ型コラーゲン、ＩＩ型コラーゲン、ＩＩＩ型コラーゲンを分解する酵素として知られている。また、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、紫外線によるコラーゲンの減少乃至変性の一因となり、皮膚のシワ形成等の大きな要因であると考えられる。
前記ＭＭＰｓは、その一次構造と基質特異性の違いから、（１）コラゲナーゼ群（ＭＭＰ－１、ＭＭＰ－８及びＭＭＰ－１３）、（２）ゼラチナーゼ群（ＭＭＰ－２及びＭＭＰ－９）、（３）ストロメライシン群（ＭＭＰ－３及びＭＭＰ－１０）、（４）膜結合型マトリックスメタロプロテアーゼ群（ＭＭＰ－１４、ＭＭＰ－１５、ＭＭＰ－１６、及びＭＭＰ－１７）、（５）その他（ＭＭＰ－７、ＭＭＰ－１１、及びＭＭＰ－１２）の５つのグループに分類されている（例えば、特許文献５参照）。
前記ＭＭＰｓの中でも、ＭＭＰ－１は、皮膚の真皮マトリックスの主な構成成分であるＩ型コラーゲン、ＩＩ型コラーゲン、ＩＩＩ型コラーゲンを分解する酵素として知られている。また、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、紫外線によるコラーゲンの減少乃至変性の一因となり、皮膚のシワ形成等の大きな要因であると考えられる。
【0009】
したがって、マトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）のｍＲＮＡ発現を抑制することは、ＭＭＰ－１の産生を低くし、皮膚のしわの形成、弾力性低下等の皮膚の老化を防止又は改善することができると考えられる。
【0010】
これまで、ＭＭＰ－１の活性阻害作用を有するものとしては、例えば、ギンコウボク抽出物（特許文献６）、ネムノキ抽出物（特許文献７）等が知られている。
【0011】
近年、コラーゲン産生の調節に関わる因子として見出されたシステインリッチプロテイン６１（ＣＹＲ６１）は加齢や光老化により増加することが報告されている（非特許文献２参照）。また、線維芽細胞では、ＣＹＲ６１を高発現させることにより、Ｉ型コラーゲン前駆体が減少するとともに、コラーゲン分解酵素であるＭＭＰ－１が増加することが確認されており、ＣＹＲ６１はコラーゲン産生抑制因子及びコラーゲン分解促進因子としての機能を有すると考えられている。このため、ＣＹＲ６１は加齢や紫外線によるコラーゲンの減少乃至変性の一因となり、皮膚のシワ形成等の要因となると考えられる。
【0012】
したがって、ＣＹＲ６１のｍＲＮＡ発現を抑制することは、ＣＹＲ６１の産生を低くし、皮膚のしわの形成、弾力性低下等の皮膚の老化を防止又は改善することができると考えられる。
【0013】
これまで、ＣＹＲ６１タンパク質の産生抑制作用を有するものとして、例えば、ランブータン抽出物（特許文献８）、ＵＶＢによるＣＹＲ６１タンパク質の発現亢進を抑制するリンゴポリフェノール（特許文献４）等が知られている。
【0014】
ビロードアオイ（Ａｌｔｈａｅａ Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の抽出物は、エラスチン産生促進作用（特許文献９）、近赤外線によるＭＭＰ－１発現亢進を抑制する作用（特許文献１０）、ＡＧＥｓ分解促進作用及び脱糖化酵素遺伝子産生促進作用（特許文献１１）、ミトコンドリアトランスファー促進作用（特許文献１２）等の抗老化作用を有することが知られているが、ＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進作用、外的刺激による発現誘導がなされていない状態でのＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制作用、ＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を有することは知られていない。
【0015】
前述したように、ＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進作用、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制作用及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を有する物質はいずれもコラーゲンの産生促進に寄与し、皮膚のしわの形成、弾力性低下等の予防に高い効果を有すると考えられる。これらの作用の少なくともいずれかを有し、安全性及び生産性が高く、安価で日常的に使用可能な天然物由来の製剤に対する要望は依然として強く、その速やかな開発が求められているのが現状である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0016】
【特許文献1】特開２００２－２２６３２３号公報
【特許文献2】特開２００３－１４６８３７号公報
【特許文献3】特開２０１５－０２４９８５号公報
【特許文献4】特開２０１６－０５３００７号公報
【特許文献5】特開２０００－３４４６７２号公報
【特許文献6】特開２０１３－１７７４３９号公報
【特許文献7】特開２０１０－２３５５４８号公報
【特許文献8】特表２０２０－５１８５９３号公報
【特許文献9】特開２０１２－０５６９３３号公報
【特許文献10】特開２０１５－０８６１８３号公報
【特許文献11】特開２０１６－１３８１４８号公報
【特許文献12】特開２０１８－１２３１３０号公報
【非特許文献】
【0017】
【非特許文献1】Ｍａｒｉｎｋｏｖｉｃｈ ＭＰ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．， １９９２， Ｖｏｌ．１９９, ｐ.６９５－７０３
【非特許文献2】Ｑｕａｎ Ｔ ｅｔ ａｌ．， Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ．， ２００６， Ａｕｇ； １６９（２）： ４８２－４９０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0018】
本発明は、従来における問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。すなわち、本発明は、安全性及び生産性が高く、安価で日常的に使用可能でありながら、優れたＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進作用を有するＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤を提供することを目的とする。
本発明は、第２に、優れたＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を有するＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤を提供することを目的とする。
本発明は、第３に、優れたＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を有するＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤を提供することを目的とする。
本発明は、第２に、優れたＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を有するＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤を提供することを目的とする。
本発明は、第３に、優れたＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を有するＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0019】
上記課題を解決するため、本発明者らが鋭意検討を重ねた結果、ビロードアオイの抽出物が、優れたＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤として有用であることを知見した。
【0020】
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、ビロードアオイの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤を提供する。
【発明の効果】
【0021】
本発明によれば、安全性及び生産性が高く、安価で日常的に使用可能でありながら、優れたＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進作用を有するＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤を提供することができる。
本発明によれば、第２に、優れたＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を有するＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤を提供することができる。
本発明によれば、第３に、優れたＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を有するＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤を提供することができる。
また、これらのＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤は、皮膚の老化、すなわち、シワやくすみ、きめの消失、弾力性の低下等を予防、治療又は改善することができる。
本発明によれば、第２に、優れたＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を有するＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤を提供することができる。
本発明によれば、第３に、優れたＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を有するＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤を提供することができる。
また、これらのＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤は、皮膚の老化、すなわち、シワやくすみ、きめの消失、弾力性の低下等を予防、治療又は改善することができる。
【発明を実施するための形態】
【0022】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明のＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤は、ビロードアオイの抽出物を有効成分として含有する。
本発明のＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤は、ビロードアオイの抽出物を有効成分として含有する。
【0023】
ここで、本発明において「抽出物」には、ビロードアオイを抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【0024】
前記ビロードアオイ（学名：Ａｌｔｈａｅａ Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）は、ノルウェーからスペインにかけてのヨーロッパの湿地、西アジア、北アジアの温暖な地域、小アジア、オーストラリア、北アメリカ東部等に自生する多年生草本であり、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば葉部、茎部、花部、根部又はこれらの混合物が挙げられるが、これらの中でも根部が好ましい。
【0025】
ビロードアオイの抽出物に含まれるＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進作用、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制作用及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を有する物質の詳細は不明であるが、天然物の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、ビロードアオイからＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進作用、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制作用及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を有する抽出物を得ることができる。
【0026】
例えば、上記抽出原料を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより、ＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進作用、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制作用及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を有する抽出物を得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【0027】
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【0028】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【0029】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１～５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３－ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２～５の多価アルコール等が挙げられる。
【0030】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して低級脂肪族アルコール１～９０質量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して低級脂肪族ケトン１～４０質量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して多価アルコール１～９０質量部を混合することが好ましい。
【0031】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５～１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を溶出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【0032】
精製は、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。得られた抽出液はそのままでもＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進作用、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制作用及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制作用の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。
【0033】
上記抽出物は、特有の匂いと味とを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、皮膚化粧料等に配合する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。
【0034】
以上のようにして得られるビロードアオイの抽出物は、ＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進作用、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制作用及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を有しているため、その作用を利用してＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤の有効成分として使用することができる。
【0035】
本発明のＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤は、ビロードアオイの抽出物のみからなるものでもよいし、ビロードアオイの抽出物を製剤化したものでもよい。
【0036】
ビロードアオイの抽出物は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化して提供することができ、他の組成物（例えば、皮膚化粧料等）に配合して使用できるほか軟膏剤、外用液剤、貼付剤等として使用することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯臭剤等を用いることができる。
【0037】
なお、本発明のＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤は、必要に応じてＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進作用、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制作用及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を有する他の天然抽出物等を、ビロードアオイの抽出物とともに配合して有効成分として用いることができる。
【0038】
本発明のＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤は、ビロードアオイの抽出物が有するＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進作用を通じて、コラーゲンの産生を促進することができ、これにより皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等を予防又は改善することができる。ただし、本発明のＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤は、これらの用途以外にもＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【0039】
本発明のＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤は、ビロードアオイの抽出物が有するＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を通じて、コラーゲンの分解を抑制することができ、これにより皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等を予防又は改善することができる。ただし、本発明のＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤は、これらの用途以外にもＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【0040】
本発明のＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤は、ビロードアオイの抽出物が有するＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を通じて、コラーゲンの産生促進及びコラーゲンの分解抑制に寄与することができ、これにより皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等を予防又は改善することができる。ただし、本発明のＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤は、これらの用途以外にもＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【0041】
なお、本発明のＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例0042】
以下、本発明の実施例を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら制限されるものではない。
【0043】
〔製造例１〕ビロードアオイの根の抽出物の製造
ビロードアオイの根の粗粉砕物１００ｇを抽出溶媒１５００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら還流抽出器を用いて約２時間、８０～９０度に保った。３０％１，３－ブチレングリコール、５０％１，３－ブチレングリコール又は８０％１，３－ブチレングリコールの３種類の抽出溶媒を用いて上記抽出処理を行った後、ろ過し、乾燥機で乾燥させ抽出物を得た。抽出溶媒として３０％１，３－ブチレングリコール、５０％１，３－ブチレングリコール又は８０％１，３－ブチレングリコールを用いたときの各抽出率を表１に示す。なお、抽出溶媒が混合物の場合、その混合比は容量基準によるものである。
ビロードアオイの根の粗粉砕物１００ｇを抽出溶媒１５００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら還流抽出器を用いて約２時間、８０～９０度に保った。３０％１，３－ブチレングリコール、５０％１，３－ブチレングリコール又は８０％１，３－ブチレングリコールの３種類の抽出溶媒を用いて上記抽出処理を行った後、ろ過し、乾燥機で乾燥させ抽出物を得た。抽出溶媒として３０％１，３－ブチレングリコール、５０％１，３－ブチレングリコール又は８０％１，３－ブチレングリコールを用いたときの各抽出率を表１に示す。なお、抽出溶媒が混合物の場合、その混合比は容量基準によるものである。
【0044】
【表1】
【0045】
〔試験例１〕ＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進作用試験
製造例１の各抽出物を試料として用い、以下のようにしてＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
製造例１の各抽出物を試料として用い、以下のようにしてＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
【0046】
正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を１０％ ＦＢＳ含有α－ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により回収した。回収した細胞を上記培地で希釈し、３５ ｍｍシャーレ１枚あたり３５×１０４ ｃｅｌｌｓ／２ ｍＬになるように播種し、２４時間培養した。
【0047】
培養後、培養液を捨て、無血清α－ＭＥＭ ２ ｍＬに置き換え、２４時間培養した。
【0048】
培養後、無血清α－ＭＥＭで必要濃度に溶解した試料溶液を各シャーレに２ ｍＬずつ添加し、２４時間培養した。
【0049】
培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ＮＩＰＰＯＮ ＧＥＮＥ社製）にてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌ ＲＮＡを調製した。 このｔｏｔａｌ ＲＮＡを鋳型とし、ＣＯＬ１Ａ１及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（Ｒ） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ （タカラバイオ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（ＴＭ） ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ （Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（Ｒ） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ （タカラバイオ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＣＯＬ１Ａ１のｍＲＮＡ発現量は、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの発現量で補正し算出した。
得られた結果から、下記式によりＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表２に示す。
ＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 試料溶液添加時の補正値
Ｂ ： 試料溶液無添加時の補正値
得られた結果から、下記式によりＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表２に示す。
ＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 試料溶液添加時の補正値
Ｂ ： 試料溶液無添加時の補正値
【0050】
【表2】
【0051】
表２に示すように、ビロードアオイの根の各抽出物は、優れたＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認された。
【0052】
〔試験例２〕ＭＭＰ-１ ｍＲＮＡ発現抑制作用試験
製造例１の各抽出物を試料として用い、以下のようにしてＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を試験した。
製造例１の各抽出物を試料として用い、以下のようにしてＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を試験した。
【0053】
正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を１０％ ＦＢＳ含有α－ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により回収した。回収した細胞を上記培地で希釈し、３５ ｍｍシャーレ１枚あたり３５×１０４ ｃｅｌｌｓ／２ ｍＬになるように播種し、２４時間培養した。
【0054】
培養後、培養液を捨て、無血清α－ＭＥＭ ２ ｍＬに置き換え、２４時間培養した。
【0055】
培養後、無血清α－ＭＥＭで必要濃度に溶解した試料溶液を各シャーレに２ ｍＬずつ添加し、２４時間培養した。
【0056】
培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ＮＩＰＰＯＮ ＧＥＮＥ社製）にてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌ ＲＮＡを調製した。 このｔｏｔａｌ ＲＮＡを鋳型とし、ＭＭＰ－１及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（Ｒ） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ （タカラバイオ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（ＴＭ） ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ （Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（Ｒ） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ （タカラバイオ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＭＭＰ－１のｍＲＮＡ発現量は、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの発現量で補正し算出した。
得られた結果から、下記式によりＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制率を算出した。結果を表３に示す。
ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制率（％）＝（１－Ａ／Ｂ）×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 試料溶液添加時の補正値
Ｂ ： 試料溶液無添加時の補正値
得られた結果から、下記式によりＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制率を算出した。結果を表３に示す。
ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制率（％）＝（１－Ａ／Ｂ）×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 試料溶液添加時の補正値
Ｂ ： 試料溶液無添加時の補正値
【0057】
【表3】
【0058】
表３に示すように、ビロードアオイの根の各抽出物は、優れたＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を有することが確認された。
〔試験例３〕ＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制作用試験
製造例１の各抽出物を試料として用い、以下のようにしてＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を試験した。
〔試験例３〕ＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制作用試験
製造例１の各抽出物を試料として用い、以下のようにしてＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を試験した。
【0059】
正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を１０％ ＦＢＳ含有α－ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により回収した。回収した細胞を上記培地で希釈し、３５ ｍｍシャーレ１枚あたり３５×１０４ ｃｅｌｌｓ／２ ｍＬになるように播種し、２４時間培養した。
【0060】
培養後、培養液を捨て、無血清α－ＭＥＭ ２ ｍＬに置き換え、２４時間培養した。
【0061】
培養後、無血清α－ＭＥＭで必要濃度に溶解した試料溶液を各シャーレに２ ｍＬずつ添加し、２４時間培養した。
【0062】
培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ＮＩＰＰＯＮ ＧＥＮＥ社製）にてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにｔｏｔａｌ ＲＮＡを調製した。 このｔｏｔａｌ ＲＮＡを鋳型とし、ＭＭＰ－１及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（Ｒ） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ （タカラバイオ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（ＴＭ） ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ （Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（Ｒ） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ （タカラバイオ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＣＹＲ６１のｍＲＮＡ発現量は、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの発現量で補正し算出した。
得られた結果から、下記式によりＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制率を算出した。結果を表４に示す。
ＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制率（％）＝（１－Ａ／Ｂ）×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 試料溶液添加時の補正値
Ｂ ： 試料溶液無添加時の補正値
得られた結果から、下記式によりＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制率を算出した。結果を表４に示す。
ＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制率（％）＝（１－Ａ／Ｂ）×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 試料溶液添加時の補正値
Ｂ ： 試料溶液無添加時の補正値
【0063】
【表4】
【0064】
表４に示すように、ビロードアオイの根の各抽出物は、優れたＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制作用を有することが確認された。
【産業上の利用可能性】
【0065】
本発明のＣＯＬ１Ａ１ ｍＲＮＡ発現促進剤、ＭＭＰ－１ ｍＲＮＡ発現抑制剤及びＣＹＲ６１ ｍＲＮＡ発現抑制剤は、皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等の予防又は改善に大きく貢献できる。