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特開2023-8538痛風改善剤及び痛風改善用組成物、肝機能向上剤及び肝機能向上用組成物、免疫賦活剤及び免疫賦活用組成物、抗老化剤及び抗老化用組成物、抗炎症剤及び抗炎症用組成物、育毛剤及び育毛用組成物、並びに抗酸化剤及び抗酸化用組成物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2023008538
(43)【公開日】2023-01-19
(54)【発明の名称】痛風改善剤及び痛風改善用組成物、肝機能向上剤及び肝機能向上用組成物、免疫賦活剤及び免疫賦活用組成物、抗老化剤及び抗老化用組成物、抗炎症剤及び抗炎症用組成物、育毛剤及び育毛用組成物、並びに抗酸化剤及び抗酸化用組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 36/23 20060101AFI20230112BHJP
A61P 19/06 20060101ALI20230112BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20230112BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20230112BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20230112BHJP
A61P 39/06 20060101ALI20230112BHJP
A61K 8/9789 20170101ALI20230112BHJP
A61Q 19/08 20060101ALI20230112BHJP
A61Q 7/00 20060101ALI20230112BHJP
【ＦＩ】
A61K36/23
A61P19/06
A61P1/16
A61P37/04
A61P29/00
A61P39/06
A61K8/9789
A61Q19/08
A61Q7/00
【審査請求】未請求
【請求項の数】21
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2021112180
(22)【出願日】2021-07-06
(71)【出願人】
【識別番号】591082421
【氏名又は名称】丸善製薬株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100107766
【弁理士】
【氏名又は名称】伊東 忠重
(74)【代理人】
【識別番号】100070150
【弁理士】
【氏名又は名称】伊東 忠彦
(74)【代理人】
【識別番号】100107515
【弁理士】
【氏名又は名称】廣田 浩一
(74)【代理人】
【識別番号】100107733
【弁理士】
【氏名又は名称】流 良広
(74)【代理人】
【識別番号】100115347
【弁理士】
【氏名又は名称】松田 奈緒子
(72)【発明者】
【氏名】金澤 まい
(72)【発明者】
【氏名】小方 美幸
(72)【発明者】
【氏名】佐藤 日向子
【テーマコード（参考）】
4C083
4C088
【Ｆターム（参考）】
4C083AA082
4C083AA111
4C083AA112
4C083AB032
4C083AC022
4C083AC072
4C083AC102
4C083AC122
4C083AC182
4C083AC242
4C083AC342
4C083AC422
4C083AC442
4C083AC472
4C083AC532
4C083AC642
4C083AC772
4C083AC782
4C083AC792
4C083AC852
4C083AD092
4C083AD212
4C083AD282
4C083AD352
4C083AD392
4C083AD532
4C083AD662
4C083CC04
4C083CC37
4C083CC38
4C083DD31
4C083EE12
4C083EE22
4C088AB40
4C088AC11
4C088MA35
4C088NA14
4C088ZA75
4C088ZA96
4C088ZB09
(57)【要約】
【課題】優れた痛風改善作用を有し、かつ安全性が高い痛風改善剤及び痛風改善用組成物、優れた肝機能向上作用を有し、かつ安全性が高い肝機能向上剤及び肝機能向上用組成物、優れた免疫賦活作用を有し、かつ安全性が高い免疫賦活剤及び免疫賦活用組成物、優れた抗老化作用を有し、かつ安全性が高い抗老化剤及び抗老化用組成物、優れた抗炎症作用を有し、かつ安全性が高い抗炎症剤及び抗炎症用組成物、優れた育毛作用を有し、かつ安全性が高い育毛剤及び育毛用組成物、並びに優れた抗酸化作用を有し、かつ安全性が高い抗酸化剤及び抗酸化用組成物の提供。
【解決手段】ボタンボウフウ抽出物を含有する、痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤である。
【選択図】なし
【解決手段】ボタンボウフウ抽出物を含有する、痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤である。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ボタンボウフウ抽出物を含有することを特徴とする痛風改善剤。
【請求項2】
キサンチンオキシダーゼ活性阻害作用を有する請求項１に記載の痛風改善剤。
【請求項3】
請求項１から２のいずれかに記載の痛風改善剤を含有することを特徴とする痛風改善用組成物。
【請求項4】
ボタンボウフウ抽出物を含有することを特徴とする肝機能向上剤。
【請求項5】
グルタチオン産生促進作用及びＡＴＰ産生促進作用の少なくともいずれかを有する請求項４に記載の肝機能向上剤。
【請求項6】
請求項４から５のいずれかに記載の肝機能向上剤を含有することを特徴とする肝機能向上用組成物。
【請求項7】
ボタンボウフウ抽出物を含有することを特徴とする免疫賦活剤。
【請求項8】
腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）産生促進作用を有する請求項７に記載の免疫賦活剤。
【請求項9】
請求項７から８のいずれかに記載の免疫賦活剤を含有することを特徴とする免疫賦活用組成物。
【請求項10】
ボタンボウフウ抽出物を含有することを特徴とする抗老化剤。
【請求項11】
ＶＩＩ型コラーゲン産生促進作用、ラミニン－３３２産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ－１（ＴＧＭ－１） ｍＲＮＡ発現促進作用、フィラグリン（ＦＬＧ） ｍＲＮＡ発現促進作用、アクアポリン３（ＡＱＰ３） ｍＲＮＡ発現促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３） ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン４（ＣＬＤＮ４） ｍＲＮＡ発現促進作用、オクルディン（ＯＣＬＮ） ｍＲＮＡ発現促進作用、最終糖化産物（ＡＧＥｓ）形成抑制作用、及び最終糖化産物（ＡＧＥｓ）分解促進作用の少なくともいずれかを有する請求項１０に記載の抗老化剤。
【請求項12】
請求項１０から１１のいずれかに記載の抗老化剤を含有することを特徴とする抗老化用組成物。
【請求項13】
ボタンボウフウ抽出物を含有することを特徴とする抗炎症剤。
【請求項14】
腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）産生抑制作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、及びプロスタグランジン（ＰＧ）Ｅ２産生抑制作用の少なくともいずれかを有する請求項１３に記載の抗炎症剤。
【請求項15】
請求項１３から１４のいずれかに記載の抗炎症剤を含有することを特徴とする抗炎症用組成物。
【請求項16】
ボタンボウフウ抽出物を含有することを特徴とする育毛剤。
【請求項17】
毛乳頭細胞増殖促進作用を有する請求項１６に記載の育毛剤。
【請求項18】
請求項１６から１７のいずれかに記載の育毛剤を含有することを特徴とする育毛用組成物。
【請求項19】
ボタンボウフウ抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤。
【請求項20】
スーパーオキサイド消去作用及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有する請求項１９に記載の抗酸化剤。
【請求項21】
請求項１９から２０のいずれかに記載の抗酸化剤を含有することを特徴とする抗酸化用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、痛風改善剤及び痛風改善用組成物、肝機能向上剤及び肝機能向上用組成物、免疫賦活剤及び免疫賦活用組成物、抗老化剤及び抗老化用組成物、抗炎症剤及び抗炎症用組成物、育毛剤及び育毛用組成物、並びに抗酸化剤及び抗酸化用組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
キサンチンオキシダーゼは、核酸代謝においてヒポキサンチンからキサンチン、さらに尿酸への変換を触媒する酵素である。
近年、食生活が急速に変化し、高カロリー、高タンパク、高脂肪の食事を摂る人の増加等に伴い、痛風の患者数は年々増加している。生活習慣病の１つとして知られている痛風は、プリン体の代謝異常による高尿酸血症を原因とし、足の親指等の関節に激しい痛みを伴う疾患である。このような痛みは、血液中で増加した尿酸が結晶化し、関節に沈着するために起こることから、血液中の尿酸を正常値内にコントロールすることが、痛風、高尿酸血症等の病気に対する予防及び治療の基本とされている。
近年、食生活が急速に変化し、高カロリー、高タンパク、高脂肪の食事を摂る人の増加等に伴い、痛風の患者数は年々増加している。生活習慣病の１つとして知られている痛風は、プリン体の代謝異常による高尿酸血症を原因とし、足の親指等の関節に激しい痛みを伴う疾患である。このような痛みは、血液中で増加した尿酸が結晶化し、関節に沈着するために起こることから、血液中の尿酸を正常値内にコントロールすることが、痛風、高尿酸血症等の病気に対する予防及び治療の基本とされている。
【0003】
これまでに、血中尿酸値調整用薬剤として、尿酸合成抑制剤「アロプリノール」等が提供されている。しかしながら、アロプリノールが有するキサンチンオキシダーゼ阻害活性は一過性であること、また、副作用を伴うこと等の問題点がある。
また、レスベラトロール誘導体を有効成分とするキサンチンオキシダーゼ阻害剤も提案されている（例えば、特許文献１参照）。
また、レスベラトロール誘導体を有効成分とするキサンチンオキシダーゼ阻害剤も提案されている（例えば、特許文献１参照）。
【0004】
また、キサンチンオキシダーゼ阻害剤は、その活性酸素種発生阻害活性により、活性酸素種が関与する疾患の治療への有用性、例えば、血管機能改善作用を通じた心血管疾患の治療への有用性、が期待されている（例えば、非特許文献１参照））。
【0005】
肝臓は、腸で吸収された様々な栄養素を代謝、貯蔵する他、胆汁の生成や分泌、及び解毒や排泄など、生命の維持に必要な多くの働きを行っており、ヒトにとって極めて重要な臓器である。しかし、肝臓は、不規則な生活、ストレス、ウイルス、薬物、アルコール、栄養不良、肝循環系障害などの様々な因子により、急性的または慢性的な障害が生じやすく、急性肝炎、慢性肝炎、脂肪肝、黄疸、肝硬変などの疾患（肝機能障害）を起こす場合がある。
【0006】
グルタチオンは、グルタミン酸、システイン及びグリシンの３つのアミノ酸からなるトリペプチドであり、細胞内の主要なシステイン残基を有する化合物である。肝臓においてグルタチオンは、多様な酸化ストレスから肝細胞を保護するほか、薬物や反応性化合物等の有害物質と抱合体を形成してそれらが細胞外に排出されるなど、薬物代謝などの肝機能の発現に直接的に寄与している。しかし、グルタチオンの作用が発揮されることは、同時にグルタチオンが消費されることでもあり、実際にラットにおいてガラクトサミン等により肝障害を誘導すると、肝細胞内のグルタチオン量が減少することが知られている。そのため、肝臓において、グルタチオンの産生を促進することができれば、肝臓の障害が抑えられ、ひいては肝機能の向上につながると考えられる。グルタチオン産生促進作用を有するものとして、琥珀熱水抽出物（例えば、特許文献２参照）等が知られている。
【0007】
また、細胞の増殖を促進するためには、細胞分裂に必要なエネルギーを細胞に補給することが重要である。生体のエネルギー物質としては、ＡＴＰが挙げられ、このＡＴＰの産生量を上げることにより、細胞内のエネルギー代謝が促進され、細胞増殖につながると考えられる。しかし、機能の低下した細胞や老化した細胞では、エネルギー物質であるＡＴＰ量が正常細胞より減少することが報告されている（例えば、特許文献３参照）。
そのため、細胞におけるＡＴＰの産生を促進することができれば、その細胞を活性化して細胞分裂を促し、その細胞の増殖能を回復することができると考えられる。
そのため、細胞におけるＡＴＰの産生を促進することができれば、その細胞を活性化して細胞分裂を促し、その細胞の増殖能を回復することができると考えられる。
【0008】
近年、消費者の健康に対する意識はますます高まりを見せている。一方で、現代社会には、不規則な生活習慣、食事の偏り、精神的ストレス等、免疫機構にダメージを与える要因が氾濫している。このようにして免疫力が低下することにより、癌、感染症、アレルギー症状等の各種疾患を誘発することが知られており、逆に免疫力が賦活されると、発癌抑制、制癌作用、抗感染症、抗アレルギー作用、更には体調リズムの回復・恒常性維持など様々な効果が期待できる。
【0009】
免疫機構には、多くの種類の細胞が関与しているが、特に白血球の役割は大きく、なかでもマクロファージは全動物に普遍的に存在しており、免疫応答の特に初期段階での働きを含め、あらゆる段階に関与している重要な白血球の一種である。近年、白血球の働きが物質レベルで解明されてきており、白血球の機能や細胞間相互作用は、白血球が分泌する微量タンパク質（サイトカイン）によって担われていることが分かってきている。
【0010】
サイトカインには多くの種類があり、なかでも腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）やインターロイキン（ＩＬ）類が注目されている。それらのなかでも、ＴＮＦ－αに代表される炎症性サイトカインは、主にマクロファージから放出され、最終的には抗腫瘍作用等を示すことが報告されている。したがって、ＴＮＦ－αの産生機能を亢進させることにより、悪性腫瘍の増殖を抑制できるものと考えられる。このような考えに基づき、ＴＮＦ－α産生促進作用を有するものとして、ユキノシタ科スグリ属に属する植物からの抽出物（例えば、特許文献４参照）等が提案されている。
【0011】
皮膚は角層、表皮、基底膜、及び真皮から構成されている。基底膜は、表皮と真皮との境界部に存在し、表皮と真皮とを繋ぎ止めるだけでなく、皮膚機能の維持に重要な役割を果たしている（例えば、非特許文献２参照）。基底膜の主要骨格は、ＩＶ型コラーゲンからなる網目構造をしている。基底膜と表皮との境界に存在し、基底膜と表皮とを繋ぎとめているのがラミニン－３３２（ラミニン－５と称することもある。）を主成分とする各種糖蛋白質で、かかるラミニン－３３２は、表皮に存在する表皮角化細胞より産生される。若い皮膚においては、基底膜の働きにより表皮、真皮の相互作用が恒常性を保つことで、水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
【0012】
皮膚の表皮及び真皮は、表皮細胞、線維芽細胞及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸等の細胞外マトリックスにより構成されている。若い皮膚においては線維芽細胞の増殖は活発であり、線維芽細胞、細胞外マトリックス成分等の皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより、水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
【0013】
ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、基底膜の主要構成成分であるラミニン－３３２は分解・変質を起こし、基底膜構造が破壊される（例えば、非特許文献３参照）。また、細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸等の産生量が減少するとともに、分解や変質を引き起こす。
【0014】
その結果、皮膚の保湿機能や弾力性が低下し、角質の異常剥離が生じるため、肌は張りや艶を失い、肌荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。このように、皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、基底膜成分の減少、基底膜の構造変化や、コラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸等の細胞外マトリックス成分の減少・変性等が関与している。
【0015】
したがって、ラミニン、コラーゲン、ヒアルロン酸の産生を促進することは、皮膚の老化を予防、治療または改善する上で重要である。
【0016】
ラミニンは、α鎖、β鎖、及びγ鎖の種々の組み合わせからなり、現在のところ１７種類が知られている。これらのα鎖、β鎖、及びγ鎖が長鎖（ｌｏｎｇ ａｒｍ）と呼ばれる部位でコイル状３本鎖構造を形成することで、巨大なラミニン分子が構成されている。その中でα３鎖、β３鎖、及びγ２鎖からなるラミニン－３３２は、皮膚、消化器、腎臓、肺等の上皮組織の基底膜に多量に存在する。ラミニン－３３２の各鎖をコードする遺伝子の先天的な異常に起因する遺伝子疾患（致死型先天性表皮水疱症，Ｈｅｒｌｉｔｚ ｊｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｅｐｉｄｅｒｍｏｌｙｓｉｓ ｂｕｌｌｏｓａ）においては、全身の表皮が剥離する致死性の症状を示すことが知られている。そして、ラミニン－３３２は、他の細胞外マトリックス分子と比べ、強度に細胞を接着させ（細胞接着活性が高く）、細胞運動を強く促進する（細胞運動活性が高い）ことが知られている（例えば、非特許文献４参照）。
【0017】
このように、ラミニン－３３２は、細胞運動活性が高いことから、損傷皮膚中の細胞移動を促進し、損傷治癒を促すことが知られている（例えば、特許文献５参照）。即ち、ラミニン－３３２の産生を促進することは、基底膜の構造が破壊されるような皮膚損傷の治癒を促す上で重要である。
【0018】
従来、ラミニン－３３２を含有する皮膚外用剤（例えば、特許文献６参照）が知られており、また、ラミニン－３３２産生促進作用を有するものとして、大豆抽出物（例えば、特許文献７参照）、フェニルプロパノイド類（例えば、特許文献８参照）、パントテン酸（例えば、特許文献９参照）、リゾホスファチジルコリン又はリゾホスファチジン酸（例えば、特許文献１０参照）、コエンザイムＱ１０（例えば、特許文献１１参照）等が知られている。
【0019】
上述の細胞外マトリックス成分のうち、ＶＩＩ型コラーゲンは、表皮基底膜と真皮とを結合させるアンカリング線維の主要成分である。ＶＩＩ型コラーゲンは表皮角化細胞及び真皮線維芽細胞により生合成され、細胞外に輸送された後、アンカリング線維を形成する。アンカリング線維は表皮基底膜と真皮との結合を強固にし、皮膚の構造を維持するうえで重要な役割を担っていると考えられている。
【0020】
ここで、アンカリング線維を構成するＶＩＩ型コラーゲンは、生理的老化及び光老化のいずれにおいても減少することが知られており（例えば、非特許文献５参照）、これに伴う皮膚の構造変化が、しわ、たるみなどの老徴の発現、老化に伴う皮膚機能低下の一因となっていると考えられている。したがって、ＶＩＩ型コラーゲンの産生を促進させることができれば、しわ、たるみ等の皮膚の老化症状や、これに伴う皮膚機能低下を予防・改善することができると考えられる。
【0021】
また、皮膚に強い外力や摩擦が加わると、皮膚構造そのものが損傷を受けた創傷や、真皮と表皮との結合が破壊された水疱等が生じる。これらの治癒には、基底膜の修復及び安定化が不可欠であるが、ＶＩＩ型コラーゲンの産生を促進させることができれば、このような創傷や水疱等の治療にも有用であると考えられる。
【0022】
従来、ＶＩＩ型コラーゲン産生促進作用を有するものとしては、例えば、ゆずの種子の溶媒抽出物（例えば、特許文献１２参照）、オクラエキス（例えば、特許文献１３参照）等が知られている。
【0023】
前述した細胞外マトリックス成分のうち、ヒアルロン酸は、ムコ多糖の一種であり、細胞間の間隙に充填されることにより細胞を保持する機能を有し、さらに細胞間隙への水分の保持、組織への潤滑性や柔軟性の付与、機械的障害等の外力に対する抵抗等、数多くの機能を有している。ヒアルロン酸の産生を促進することができれば、皮膚の荒れ、しわ、くすみ、きめの変化、弾力性の低下及び保湿機能の低下等といった皮膚の老化症状を予防、治療または改善できると考えられる。また、表皮ヒアルロン酸の合成促進に関与するヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）の発現を促進することで、皮膚の老化を予防、治療または改善することができるものと考えられる。
【0024】
さらに、ヒアルロン酸は、皮膚組織の他にも、軟骨、関節液、臍帯、眼硝子体、その他の結合組織に存在する。このうち、関節液に含まれるヒアルロン酸は、関節軟骨の表面を覆い、ヒアルロン酸が有する潤滑機能、軟骨に対する被覆・保護機能等により、関節の円滑な作動に役立っている。一方、慢性関節リウマチ等の関節炎において、関節液におけるヒアルロン酸の濃度が低下していることが知られている。したがって、ヒアルロン酸の産生を促進することで、慢性関節リウマチ、変形性関節炎、化膿性関節炎、痛風性関節炎、外傷性関節炎、または骨関節炎等の関節炎を予防または治療することができると考えられる。さらに、創傷または熱傷の治癒過程において、肉芽（組織）が形成するが、肉芽中にヒアルロン酸が著しく増加することが知られている。そのため、ヒアルロン酸の産生を促進することで、創傷または熱傷の治癒を促進することができると考えられる。ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３）ｍＲＮＡ発現促進作用を有するものとして、甘草葉部抽出物（例えば、特許文献１４参照）等が知られている。
【0025】
表皮は、外部刺激を緩和し、水分等の体内成分の逸失を制御する働きをしており、最下層である基底層から始まって、有棘層、顆粒層、角質層へと連なる４層構造から構成されている。各層に存在する大部分の細胞は、基底層から分化した角化細胞である。基底層で分裂、増殖した角化細胞は、有棘層、顆粒層を通過しながら分化し角質細胞となって、強固な架橋結合をもったケラチン蛋白線維で構成された角質層を構成し、最終的には垢として角質層から脱落する。
【0026】
表皮を構成する基底層、有棘層、顆粒層、及び角質層のうち、特に、顆粒層においては、細胞膜が肥厚して肥厚細胞膜を形成するとともに、トランスグルタミナーゼ－１（ＴＧＭ－１）の作用により、蛋白分子間がグルタミル－リジン架橋され、強靭なケラチン蛋白線維が形成される。さらに、その一部にセラミド等が共有結合し、疎水的な構造をとることで、細胞間脂質のラメラ構造の土台を供給し、角質バリア機能の基礎が形成される。
【0027】
しかし、加齢とともに表皮におけるトランスグルタミナーゼ－１の産生量が減少すると、角質バリア機能及び皮膚の保湿機能が低下するため、肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状を呈したり、乾燥性皮膚疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、乾癬、魚鱗癬等）を発症したりするようになる。そのため、表皮におけるトランスグルタミナーゼ－１の産生を促進することにより、皮膚の老化症状や乾燥性皮膚疾患等を予防、治療または改善することができると考えられる。トランスグルタミナーゼ－１産生促進作用を有するものとして、湖南甜茶からの抽出物（例えば、特許文献１５参照）等が知られている。
【0028】
角質層は皮膚の最外殻に存在しており、外界からの刺激に対する物理的なバリアとしての役割を果たしている。皮膚ではこのバリア機能を持たせるため、角化細胞が基底層で産生されてから垢となって剥がれ落ちるまでのサイクル（角化）を通常４週間の周期で繰り返し、表皮の新陳代謝を行っている。しかしながら、この角質層も加齢によって新陳代謝機能が衰え、こじわ、くすみ、色素沈着、肌荒れ等の皮膚トラブルを発生することになる。そのため、角化細胞の増殖を促進し、肌の新陳代謝機能を回復させることにより、こじわ、くすみ、色素沈着等の皮膚の老化を改善できるものと考えられる。従来、表皮角化細胞増殖促進作用を有するものとして、土貝母抽出物（例えば、特許文献１６参照）等が知られている。
【0029】
皮膚細胞では、水チャンネルとして知られるアクアポリンが、細胞膜上に発現して、細胞間隙の水をはじめとする低分子物質を細胞内へ取り込む役割を担っていることが知られている。ヒトでは、１３種類のアクアポリン（ＡＱＰ０～ＡＱＰ１２）の存在が知られている。表皮細胞においては、主としてＡＱＰ３が存在しており、水に加えて、水分保持作用に関与するグリセロールや尿素等の低分子化合物をも取り込む役割を担っていると考えられている。
【0030】
しかしながら、ＡＱＰ３は加齢とともに減少し、このことが水分保持機能の低下の一因であることが示唆されているため、ＡＱＰ３の発現を促進することにより、加齢による水分保持能やバリア機能等を制御することが可能であると考えられる（例えば、非特許文献６参照）。ＡＱＰ３発現促進作用を有するものとして、例えば、スターフルーツの葉部からの抽出物（例えば、特許文献１７参照）等が知られている。
【0031】
フィラグリンは、皮膚の構成成分であり、皮膚におけるバリア機能に関与し、アレルゲン、毒素、感染性生物の侵入を防ぐ機能を有していると考えられている。フィラグリンの遺伝子の変異等による機能の低下は、アトピー性皮膚炎（湿疹、皮膚の炎症、皮膚のかゆみ等）、アレルギー、喘息等を包含するアトピー性疾患の発症リスクと関連し、さらに重篤な場合は尋常性魚鱗癬等の皮膚疾患につながることが知られている（例えば、非特許文献７参照）。
【0032】
一方、天然保湿因子（Ｎａｔｕｒａｌ Ｍｏｉｓｔｕｒｉｚｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ；ＮＭＦ）の主成分であるアミノ酸は、ケラトヒアリン顆粒に由来するフィラグリンが角質層内で分解されて産生される。このフィラグリンは、角質層直下の顆粒層に存在する表皮ケラチノサイトでプロフィラグリンとして発現する。その後、直ちにリン酸化し、ケラトヒアリン顆粒に蓄積され、脱リン酸、加水分解を経てフィラグリンへと分解され、角質層に移行して、ケラチンフィラメントの凝集効率を高め、角質細胞の内部構築に関与することが知られている（例えば、非特許文献８参照）。近年、このフィラグリンが、皮膚の水分保持に非常に重要かつ必要不可欠であること、及び乾燥等の条件によってフィラグリンの合成力が低下し、角質層におけるアミノ酸量が低下することが知られている（例えば、非特許文献９参照）。
【0033】
したがって、表皮ケラチノサイトにおいて、フィラグリンの産生を促進することにより、アトピー性皮膚炎（湿疹、皮膚の炎症、皮膚のかゆみ等）、アレルギー、喘息等を包含するアトピー性疾患を予防・治療または改善できると考えられる。また、フィラグリンの産生を促進し、それにより角質層内のアミノ酸量を増大させることで、角質層の水分環境を本質的に改善できることが期待される。
【0034】
また、従来は、皮膚のバリア機能は角層のみが担っていると考えられていたが、表皮顆粒層に存在するタイトジャンクション（以下、ＴＪと略記することがある。）の構成タンパク質を遺伝子レベルで欠損させると皮膚のバリア機能が崩壊することから、近年、ＴＪも皮膚のバリア機能に重要な役割を担うと考えられている（例えば、非特許文献１０参照）。ＴＪは、隣接する細胞同士を密着させるだけでなく、細胞と細胞の隙間をシールすることで物質の透過を制御する結合装置である。このＴＪを構成しているタンパク質には、クローディン（ＣＬＤＮ）、オクルディン（ＯＣＬＮ）、ＺＯ－１及びＺＯ－２などがあり、これらのタンパク質はＴＪストランドの骨格を構成し、ＴＪのバリア機能を制御すると考えられている（例えば、非特許文献１１参照）。以上のことから、クローディン、オクルディン、ＺＯ－１、ＺＯ－２の発現が何らかの原因で減少した場合、ＴＪの構造的な破壊が起こり、物質の透過バリアとして機能しなくなることによって、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎や各種感染症などの皮膚症状の原因となると予想される。
【0035】
したがって、表皮においてクローディン、オクルディン、ＺＯ－１、及びＺＯ－２の産生を促進することにより表皮角化細胞のＴＪ形成を促すことで、皮膚のバリア機能及び水分保持機能を高め、前記皮膚症状を予防又は改善することができると考えられる。このような考えに基づき、ＴＪ形成促進作用を介して皮膚バリア機能を向上させるものとして、天然物由来のオウレン抽出物（例えば、特許文献１８参照）、トウヒ抽出物（例えば、特許文献１９参照）などが開示されている。
【0036】
皮膚の細胞においてＡＴＰの産生を促進することは、皮膚のターンオーバーを促進し、肌の新陳代謝機能を回復させ、シワ、くすみ、きめの消失等の皮膚の老化を予防・改善する上で重要である。従来、ＡＴＰ産生促進作用を有するものとして、グリコーゲン（例えば、上述した特許文献３参照）、ウコン等の天然物からの抽出物（例えば、特許文献２０参照）等が知られている。
【0037】
細胞内におけるグルタチオンは、ラジカルの捕捉、酸化還元による細胞機能の調節、異物代謝、各種酵素のＳＨ供与体としての機能を果たすものであり、活性酸素等に対する抗酸化成分としても知られている。その作用発現は、システイン残基に由来すると考えられている。しかしながら、過剰な酸化ストレスや異物の付加、加齢などにより、細胞内のグルタチオン量が欠乏または低下することが報告されており、このことが細胞の酸化ストレスに対する防御能を低下させ、細胞のＤＮＡ及びタンパク質等の構成成分にダメージを与える一因であると考えられている。
【0038】
このような、細胞内のグルタチオン量の低下または欠乏が病態と関連することが知られている疾患として、皮膚のシミ等の色素沈着、皮膚の老化、酸化ストレスが原因となって誘発される前述した疾患群のほか、肝障害（アルコールの多飲、または重金属や化学物質等の異物の摂取が原因となる）等が知られている。すなわち、グルタチオンの産生を促進することは、細胞の酸化ストレスに対する防御能を高め、細胞内のグルタチオン量が低下または欠乏することに起因する上記の疾患群を予防・治療することができると考えられる。グルタチオン産生促進作用を有するものとして、琥珀熱水抽出物（例えば、上述した特許文献２参照）等が知られている。
【0039】
アミノ酸、ペプチド、タンパク質のアミノ基と、ケトン、アルデヒド、特にグルコースなどの還元糖が反応して褐色色素を生成する反応をメイラード反応という。このメイラード反応の最終産物として生成する物質を最終糖化産物（ａｄｖａｎｃｅｄ ｇｌｙｃａｔｉｏｎ ｅｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ、以下、「ＡＧＥｓ」と称することもある。）という。メイラード反応は、アミノ基とグルコースが非酵素的に反応しシッフ塩基を形成し、ついでアマドリ転位を起こす早期反応、更に３－デオキシグルコソン（３－ＤＧ）などのジカルボニル基を有する活性中間体を生成する中期反応、活性中間体が更にアミノ基と非酵素的に反応し、脱水、縮合反応を繰り返してＡＧＥｓ形成する後期反応からなる。
【0040】
ＡＧＥｓとしては、例えば、イミダゾロン（例えば、非特許文献１２参照）、Ｎε－カルボキシメチルリシン（ＣＭＬ）（例えば、非特許文献１３参照）、ペントシジン、ピラリン、クロスリン、Ｎε－カルボキシエチルリシン、メチルグリオキサールリシンダイマー、グリオキサールリシンダイマーなどが同定されている。イミダゾロンは３－ＤＧがアルギニンと反応して生成することが報告されている（例えば、上述した非特許文献１２参照）。
【0041】
ＡＧＥｓが発症、進展に関与している病態の１つして、老化症状がある。生体組織におけるメイラード反応の進行により、皮膚組織においては皮膚弾性繊維の架橋などによる老化（弾性低下）を招き、また、血管壁組織や神経原線維へのＡＧＥｓの沈着により動脈硬化やアルツハイマー病を招くともいわれている。
【0042】
ＡＧＥｓ形成抑制作用を有する天然物由来のものとしては、例えば、マメ科ディアリウムインダムの果皮抽出物が開示されている（例えば、特許文献２１参照）。
また、ＡＧＥｓ形成抑制作用を有する化合物として、例えば、アミノグアニジン、ＯＰＢ－９１９５、ピリドキサミンなどの化合物が知られているが、これら化合物は副作用等の問題を有している（例えば、非特許文献１２～１４参照）。
また、ＡＧＥｓ形成抑制作用を有する化合物として、例えば、アミノグアニジン、ＯＰＢ－９１９５、ピリドキサミンなどの化合物が知られているが、これら化合物は副作用等の問題を有している（例えば、非特許文献１２～１４参照）。
【0043】
炎症性疾患、例えば、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、アトピー性皮膚炎、その他肌荒れを伴う各種皮膚炎症性疾患、関節リウマチ、変形性関節症、喘息等の原因及び発症機構は、多種多様である。その原因として、主にマクロファージから産生される腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）によるもの、ヒアルロニダーゼの活性の亢進によるもの、ヒスタミンの遊離によるもの、プロスタグランジン（ＰＧ）Ｅ２の産生の亢進（シクロオキシゲナーゼ－２（ＣＯＸ－２）の活性の亢進）によるものなどが知られている。
【0044】
ＴＮＦ－αは、腫瘍を壊死させる因子として見出されたが、最近では腫瘍に対してだけでなく、正常細胞の機能を調節するメディエーター的な役割を担うサイトカインであると考えられている。ＴＮＦ－αは、炎症の初発から終息までの過程において重要な役割を担っているが、その持続的かつ過剰な産生は、皮膚を含む組織の障害を引き起こし、全身的には発熱やカケクシアの原因となり、炎症の悪化を引き起こす。したがって、病的な炎症においては、ＴＮＦ－αの過剰な産生を抑制することが重要となる。ＴＮＦ－α産生抑制作用を有するものとして、例えば、土貝母からの抽出物（例えば、上述した特許文献１６参照）等が知られている。
【0045】
ヒスタミン遊離は、肥満細胞内のヒスタミンが細胞外に遊離する現象であり、遊離されたヒスタミンが炎症反応を引き起こす。そのため、ヒスタミン遊離を阻害または抑制する物質により、アレルギー性疾患及び炎症性疾患を予防または治療する試みがなされている。しかし、ヒスタミンの遊離を直接的に評価することは困難であり、ヒスタミンの遊離と同時に遊離されることが確認されているヘキソサミニダーゼの遊離を指標にヒスタミンの遊離を評価することができる。したがって、ヘキソサミニダーゼの遊離を抑制することにより、同時にヒスタミンの遊離も抑制でき、これにより炎症性疾患等の予防、治療または改善に効果があるものと考えられる。
【0046】
また、ヒスタミンは局所伝達物質として細胞間の情報伝達を仲介しており、消化器官においては胃酸分泌を亢進し、中枢神経系における神経伝達物質として機能し、覚醒状態の維持に寄与することが知られている。ここで、ヒスタミン遊離が過剰となると、消化器官においては胃酸過多による潰瘍の原因となり、中枢神経系においては睡眠障害の一因となる。前述したように、ヘキソサミニダーゼの遊離を抑制することにより、同時にヒスタミンの遊離も抑制できることから、これにより、胃酸過多を原因とする胃潰瘍、睡眠障害等を予防、治療または改善できると考えられる。ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有するものとして、例えば、藤茶からの抽出物（例えば、特許文献２２参照）等が知られている。
【0047】
炎症は、発赤、浮腫、発熱、痛み、機能障害等の症状を示す複雑な反応である。微視的に見ると、炎症は、血漿漏出を起こす血管反応、白血球の浸潤、炎症性細胞による組織破壊等の共通する反応からなり、発熱反応や痛覚過敏等の中枢神経系も関与する、全身反応も引き起こす場合もある。このような炎症の個々の反応には、プロスタグランジンが重要な役割を果たしており、この炎症時におけるプロスタグランジンの産生には、主として誘導型のシクロオキシゲナーゼであるシクロオキシゲナーゼ－２が関与することが明らかとなっている。このため、炎症反応の防止及び予防を図る目的で、アスピリンに代表される多くのシクロオキシゲナーゼ阻害剤が用いられている（例えば、非特許文献１５参照）。
【0048】
毛髪は、成長期、退行期及び休止期からなる周期的なヘアサイクル（毛周期）に従って成長及び脱落を繰り返している。このヘアサイクルのうち、休止期から成長期にかけての新たな毛包が形成されるステージが、発毛に最も重要であると考えられており、このステージにおける毛包上皮系細胞の増殖・分化に重要な役割を果たしているのが、毛乳頭細胞であると考えられている。毛乳頭細胞は、毛根近傍にある外毛根鞘細胞とマトリックス細胞とからなる毛包上皮系細胞の内側にあって、基底膜に包まれている毛根の根幹部分に位置する細胞であり、毛包上皮系細胞に働きかけてその増殖を促進する等、毛包上皮系細胞の増殖・分化及び毛髪の形成において重要な役割を担っている（例えば、非特許文献１６参照）。
【0049】
このように、毛乳頭細胞は、毛包上皮系細胞の増殖・分化及び毛髪の形成において重要な役割を果たしており、毛乳頭細胞の増殖を促進することで、脱毛症を予防ないし改善することができると考えられる。これまでに、毛乳頭細胞増殖促進作用を有するものとしては、例えば、ワイルドタイム抽出物（例えば、特許文献２３参照）等が知られている。
【0050】
生体成分を酸化させる要因として、活性酸素が注目されており、その生体への悪影響が問題となっている。活性酸素は、生体細胞内のエネルギー代謝過程で生じるものであり、スーパーオキサイド〔即ち、酸素分子の一電子還元で生じるスーパーオキシドアニオン（・Ｏ２
－）、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、一重項酸素（１Ｏ２）、ヒドロキシラジカル（・ＯＨ）〕等がある。このような活性酸素は食細胞の殺菌機構にとって必須であり、ウイルスや癌細胞の消去に重要な働きを果たしている。
【0051】
しかし、活性酸素の過剰な生成は生体内の膜及び組織を構成する生体内分子を攻撃し、各種疾患を誘発する。生体内で生産され、他の活性酸素の出発物質ともなっているスーパーオキサイドは、通常、細胞内に含まれているスーパーオキシドディスムターゼ（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ；ＳＯＤ）の触媒作用により逐次消去されている。
【0052】
スーパーオキサイドの産生が過剰な場合、あるいはＳＯＤの作用が低下している場合には、スーパーオキサイドの消去が不十分になってスーパーオキサイド濃度が高くなる。このことが、関節リウマチ、ベーチェット病等の組織障害、心筋梗塞、脳卒中、白内障、シミ、ソバカス、しわ、糖尿病、動脈硬化、肩凝り、冷え性、皮膚の老化などを起こす原因の１つであると考えられている。
【0053】
以上のように、これまでに様々な研究がなされている。しかしながら、上述した少なくともいずれかの作用を有し、かつ安全性が高く、そのため、飲食品、化粧料、研究用試薬などの成分として広く利用が可能な新たな素材に対する要望は依然として強く、その速やかな開発が求められているのが現状である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0054】
【特許文献1】特開２０２０－０９４０２１号公報
【特許文献2】特開２０１０－２３５５５１号公報
【特許文献3】特開２００３－３２１３７３号公報
【特許文献4】特開２００４－１０７６６０号公報
【特許文献5】特開２００６－０６３０３３号公報
【特許文献6】特開平１０－１４７５１５号公報
【特許文献7】特開２００４－２１７６１８号公報
【特許文献8】特開２００７－０７７１６９号公報
【特許文献9】特開２００５－１７９２４３号公報
【特許文献10】特開２０００－２２６３０８号公報
【特許文献11】特開２００７－０６３１６０号公報
【特許文献12】特開２００６－２０６５７１号公報
【特許文献13】特開２００９－２２１１１０号公報
【特許文献14】特開２０１０－０９００３５号公報
【特許文献15】特開２００７－０９９６９８号公報
【特許文献16】特開２００６－０５６８５４号公報
【特許文献17】特開２００９－１９１０３９号公報
【特許文献18】特開２００７－１７６８３０号公報
【特許文献19】特開２００７－１７６８３５号公報
【特許文献20】特開２００９－２５６２７２号公報
【特許文献21】特開２０１０－１１１６１５号公報
【特許文献22】特開２００３－０１２５３２号公報
【特許文献23】特開２００６－２１９４０７号公報
【非特許文献】
【0055】
【非特許文献1】Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ． ２００６；１１４：２５０８－２５１６
【非特許文献2】Ｍａｒｉｎｋｏｖｉｃｈ ＭＰ ｅｔ ａｌ．，「Ｊ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．」，１９９２年，第１９９巻，ｐ．６９５‐７０３
【非特許文献3】Ｌａｖｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，「Ｊ． Ｉｎｖｅｓｔ． Ｄｅｒｍａｔｏｌ．」，１９７９年，第７３巻，ｐ．５９‐６６
【非特許文献4】宮崎 香，「細胞接着分子ラミニン５の機能解析と応用」，［ｏｎ ｌｉｎｅ］，横浜市立大学第３回産学連携セミナー，［平成１９年８月１日検索］，インターネット＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｙｏｋｏｈａｍａ‐ｃｕ．ａｃ．ｊｐ／ｓａｎｇａｋｕ／ｓｅｍｉｎａｒ３／ｓｕｍｍａｒｙ＿ｍｉｙａｚａｋｉ．ｐｄｆ＞
【非特許文献5】辻卓夫，日皮会誌，１９９５年，Ｖｏｌ．１０５，Ｎｏ．７，ｐ．９６３－９７５
【非特許文献6】「フレグランスジャーナル」，２００６年，Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．１０，ｐ．１９－２３
【非特許文献7】Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ．，２００６年，Ｖｏｌ．３８，Ｎｏ．４，ｐ．４４１－４４６
【非特許文献8】「フレグランスジャーナル臨時増刊」，２０００年，Ｖｏｌ．１７，ｐ．１４－１９
【非特許文献9】Ａｒｃｈ． Ｄｅｒｍａｔｏｌ． Ｒｅｓ．，１９９６年，Ｖｏｌ．２８８，ｐ．４４２－４４６
【非特許文献10】Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，ｖｏｌ．１５６，ｐｐ．１０９９－１１１１（２００２）
【非特許文献11】日本香粧品科学会誌，ｖｏｌ．３１，ｐｐ．２９６－３０１（２００７）
【非特許文献12】Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，ｖｏｌ．９９，ｐｐ．１２７２－１２８０（１９９７）
【非特許文献13】Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．，ｖｏｌ．５０，ｐｐ．１３０３－１３０９（１９９６）
【非特許文献14】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，ｖｏｌ．２７５，ｐｐ．２１１７７－２１１８４（２０００）
【非特許文献15】「薬理学アトラス」，福原武彦監訳，文光堂，１９９５年，ｐ．１８４
【非特許文献16】Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．，１９９２年，Ｖｏｌ．８，Ｉｓｓｕｅ ２，ｐ．５５－６１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0056】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、優れた痛風改善作用を有し、かつ安全性が高い痛風改善剤及び痛風改善用組成物を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた肝機能向上作用を有し、かつ安全性が高い肝機能向上剤及び肝機能向上用組成物を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた免疫賦活作用を有し、かつ安全性が高い免疫賦活剤及び免疫賦活用組成物を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた抗老化作用を有し、かつ安全性が高い抗老化剤及び抗老化用組成物を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた抗炎症作用を有し、かつ安全性が高い抗炎症剤及び抗炎症用組成物を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた育毛作用を有し、かつ安全性が高い育毛剤及び育毛用組成物を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた抗酸化作用を有し、かつ安全性が高い抗酸化剤及び抗酸化用組成物を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた肝機能向上作用を有し、かつ安全性が高い肝機能向上剤及び肝機能向上用組成物を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた免疫賦活作用を有し、かつ安全性が高い免疫賦活剤及び免疫賦活用組成物を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた抗老化作用を有し、かつ安全性が高い抗老化剤及び抗老化用組成物を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた抗炎症作用を有し、かつ安全性が高い抗炎症剤及び抗炎症用組成物を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた育毛作用を有し、かつ安全性が高い育毛剤及び育毛用組成物を提供することを目的とする。
また、本発明は、優れた抗酸化作用を有し、かつ安全性が高い抗酸化剤及び抗酸化用組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0057】
前記課題を解決するために本発明者らが鋭意検討を重ねた結果、ボタンボウフウ抽出物が、優れた痛風改善作用、肝機能向上作用、免疫賦活作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、及び抗酸化作用を有し、かつ安全性が高く、痛風改善、肝機能向上、免疫賦活、抗老化、抗炎症、育毛、及び抗酸化に有用であることを知見し、本発明を完成したものである。
【0058】
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞ ボタンボウフウ抽出物を含有することを特徴とする痛風改善剤である。
＜２＞ キサンチンオキシダーゼ活性阻害作用を有する前記＜１＞に記載の痛風改善剤である。
＜３＞ 前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の痛風改善剤を含有することを特徴とする痛風改善用組成物である。
＜４＞ ボタンボウフウ抽出物を含有することを特徴とする肝機能向上剤である。
＜５＞ グルタチオン産生促進作用及びＡＴＰ産生促進作用の少なくともいずれかを有する前記＜４＞に記載の肝機能向上剤である。
＜６＞ 前記＜４＞から＜５＞のいずれかに記載の肝機能向上剤を含有することを特徴とする肝機能向上用組成物である。
＜７＞ ボタンボウフウ抽出物を含有することを特徴とする免疫賦活剤である。
＜８＞ 腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）産生促進作用を有する前記＜７＞に記載の免疫賦活剤である。
＜９＞ 前記＜７＞から＜８＞のいずれかに記載の免疫賦活剤を含有することを特徴とする免疫賦活用組成物である。
＜１０＞ ボタンボウフウ抽出物を含有することを特徴とする抗老化剤である。
＜１１＞ ＶＩＩ型コラーゲン産生促進作用、ラミニン－３３２産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ－１（ＴＧＭ－１） ｍＲＮＡ発現促進作用、フィラグリン（ＦＬＧ） ｍＲＮＡ発現促進作用、アクアポリン３（ＡＱＰ３） ｍＲＮＡ発現促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３） ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン４（ＣＬＤＮ４） ｍＲＮＡ発現促進作用、オクルディン（ＯＣＬＮ） ｍＲＮＡ発現促進作用、最終糖化産物（ＡＧＥｓ）形成抑制作用、及び最終糖化産物（ＡＧＥｓ）分解促進作用の少なくともいずれかを有する前記＜１０＞に記載の抗老化剤である。
＜１２＞ 前記＜１０＞から＜１１＞のいずれかに記載の抗老化剤を含有することを特徴とする抗老化用組成物である。
＜１３＞ ボタンボウフウ抽出物を含有することを特徴とする抗炎症剤である。
＜１４＞ 腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）産生抑制作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、及びプロスタグランジン（ＰＧ）Ｅ２産生抑制作用の少なくともいずれかを有する前記＜１３＞に記載の抗炎症剤である。
＜１５＞ 前記＜１３＞から＜１４＞のいずれかに記載の抗炎症剤を含有することを特徴とする抗炎症用組成物である。
＜１６＞ ボタンボウフウ抽出物を含有することを特徴とする育毛剤である。
＜１７＞ 毛乳頭細胞増殖促進作用を有する前記＜１６＞に記載の育毛剤である。
＜１８＞ 前記＜１６＞から＜１７＞のいずれかに記載の育毛剤を含有することを特徴とする育毛用組成物である。
＜１９＞ ボタンボウフウ抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤である。
＜２０＞ スーパーオキサイド消去作用及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有する前記＜１９＞に記載の抗酸化剤である。
＜２１＞ 前記＜１９＞から＜２０＞のいずれかに記載の抗酸化剤を含有することを特徴とする抗酸化用組成物である。
＜１＞ ボタンボウフウ抽出物を含有することを特徴とする痛風改善剤である。
＜２＞ キサンチンオキシダーゼ活性阻害作用を有する前記＜１＞に記載の痛風改善剤である。
＜３＞ 前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の痛風改善剤を含有することを特徴とする痛風改善用組成物である。
＜４＞ ボタンボウフウ抽出物を含有することを特徴とする肝機能向上剤である。
＜５＞ グルタチオン産生促進作用及びＡＴＰ産生促進作用の少なくともいずれかを有する前記＜４＞に記載の肝機能向上剤である。
＜６＞ 前記＜４＞から＜５＞のいずれかに記載の肝機能向上剤を含有することを特徴とする肝機能向上用組成物である。
＜７＞ ボタンボウフウ抽出物を含有することを特徴とする免疫賦活剤である。
＜８＞ 腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）産生促進作用を有する前記＜７＞に記載の免疫賦活剤である。
＜９＞ 前記＜７＞から＜８＞のいずれかに記載の免疫賦活剤を含有することを特徴とする免疫賦活用組成物である。
＜１０＞ ボタンボウフウ抽出物を含有することを特徴とする抗老化剤である。
＜１１＞ ＶＩＩ型コラーゲン産生促進作用、ラミニン－３３２産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ－１（ＴＧＭ－１） ｍＲＮＡ発現促進作用、フィラグリン（ＦＬＧ） ｍＲＮＡ発現促進作用、アクアポリン３（ＡＱＰ３） ｍＲＮＡ発現促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３） ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン４（ＣＬＤＮ４） ｍＲＮＡ発現促進作用、オクルディン（ＯＣＬＮ） ｍＲＮＡ発現促進作用、最終糖化産物（ＡＧＥｓ）形成抑制作用、及び最終糖化産物（ＡＧＥｓ）分解促進作用の少なくともいずれかを有する前記＜１０＞に記載の抗老化剤である。
＜１２＞ 前記＜１０＞から＜１１＞のいずれかに記載の抗老化剤を含有することを特徴とする抗老化用組成物である。
＜１３＞ ボタンボウフウ抽出物を含有することを特徴とする抗炎症剤である。
＜１４＞ 腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）産生抑制作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、及びプロスタグランジン（ＰＧ）Ｅ２産生抑制作用の少なくともいずれかを有する前記＜１３＞に記載の抗炎症剤である。
＜１５＞ 前記＜１３＞から＜１４＞のいずれかに記載の抗炎症剤を含有することを特徴とする抗炎症用組成物である。
＜１６＞ ボタンボウフウ抽出物を含有することを特徴とする育毛剤である。
＜１７＞ 毛乳頭細胞増殖促進作用を有する前記＜１６＞に記載の育毛剤である。
＜１８＞ 前記＜１６＞から＜１７＞のいずれかに記載の育毛剤を含有することを特徴とする育毛用組成物である。
＜１９＞ ボタンボウフウ抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤である。
＜２０＞ スーパーオキサイド消去作用及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有する前記＜１９＞に記載の抗酸化剤である。
＜２１＞ 前記＜１９＞から＜２０＞のいずれかに記載の抗酸化剤を含有することを特徴とする抗酸化用組成物である。
【発明の効果】
【0059】
本発明の痛風改善剤及び痛風改善用組成物によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた痛風改善作用を有し、安全性の高い痛風改善剤及び痛風改善用組成物を提供することができる。
本発明の肝機能向上剤及び肝機能向上用組成物によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた肝機能向上作用を有し、安全性の高い肝機能向上剤及び肝機能向上用組成物を提供することができる。
本発明の免疫賦活剤及び免疫賦活用組成物によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた免疫賦活作用を有し、安全性の高い免疫賦活剤及び免疫賦活用組成物を提供することができる。
本発明の抗老化剤及び抗老化用組成物によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた抗老化作用を有し、安全性の高い抗老化剤及び抗老化用組成物を提供することができる。
本発明の抗炎症剤及び抗炎症用組成物によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた抗炎症向上作用を有し、安全性の高い抗炎症剤及び抗炎症用組成物を提供することができる。
本発明の育毛剤及び育毛用組成物によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた育毛作用を有し、安全性の高い育毛剤及び育毛用組成物を提供することができる。
本発明の抗酸化剤及び抗酸化用組成物によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた抗酸化作用を有し、安全性の高い抗酸化剤及び抗酸化用組成物を提供することができる。
本発明の肝機能向上剤及び肝機能向上用組成物によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた肝機能向上作用を有し、安全性の高い肝機能向上剤及び肝機能向上用組成物を提供することができる。
本発明の免疫賦活剤及び免疫賦活用組成物によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた免疫賦活作用を有し、安全性の高い免疫賦活剤及び免疫賦活用組成物を提供することができる。
本発明の抗老化剤及び抗老化用組成物によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた抗老化作用を有し、安全性の高い抗老化剤及び抗老化用組成物を提供することができる。
本発明の抗炎症剤及び抗炎症用組成物によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた抗炎症向上作用を有し、安全性の高い抗炎症剤及び抗炎症用組成物を提供することができる。
本発明の育毛剤及び育毛用組成物によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた育毛作用を有し、安全性の高い育毛剤及び育毛用組成物を提供することができる。
本発明の抗酸化剤及び抗酸化用組成物によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れた抗酸化作用を有し、安全性の高い抗酸化剤及び抗酸化用組成物を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【0060】
（痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、及び抗酸化剤）
本発明の痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、及び抗酸化剤は、ボタンボウフウ抽出物を有効成分として含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
本発明の痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、及び抗酸化剤は、ボタンボウフウ抽出物を有効成分として含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
【0061】
前記ボタンボウフウ抽出物が含有する、痛風改善作用、肝機能向上作用、免疫賦活作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、及び抗酸化作用の少なくともいずれかを発揮する物質の詳細については不明であるが、前記ボタンボウフウ抽出物がこのような優れた作用を有し、痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、及び抗酸化剤として有用であることは、従来は全く知られておらず、本発明者らによる新たな知見である。
【0062】
＜ボタンボウフウ抽出物＞
前記ボタンボウフウ（学名：Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ Ｔｈｕｎｂ．）は、セリ科カワラボウフウ属（Ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒａｅ）の植物であり、海岸に生える多年草で、関東以西、四国、九州、沖縄、朝鮮、中国大陸、フィリピンなどに分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
前記ボタンボウフウ（学名：Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ Ｔｈｕｎｂ．）は、セリ科カワラボウフウ属（Ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒａｅ）の植物であり、海岸に生える多年草で、関東以西、四国、九州、沖縄、朝鮮、中国大陸、フィリピンなどに分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
【0063】
前記ボタンボウフウ抽出物は、抽出原料として使用する抽出部位から調製したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。
【0064】
前記ボタンボウフウの抽出部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、地上部、花部、葉部、茎部、根茎部、根部、種、又はこれらの混合物などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。これらの中でも、根部、地上部が好ましく、根部がより好ましい。
前記ボタンボウフウの抽出原料の形状、構造、大きさとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記ボタンボウフウの抽出原料の形状、構造、大きさとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【0065】
前記ボタンボウフウの抽出部位の調製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出部位を乾燥させた後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕する方法などが挙げられる。前記乾燥させたものをそのまま又は粉砕したものを溶媒抽出に供することができる。前記乾燥は、天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。
【0066】
前記ボタンボウフウ抽出物は、植物の抽出に一般に用いられる方法により容易に得ることができる。前記ボタンボウフウ抽出物の態様としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出液そのもの、抽出液の希釈液、抽出液の濃縮液、これらの乾燥物、粗精製物、精製物などが挙げられる。
【0067】
前記抽出の方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出する方法などが挙げられ、より具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料である前記ボタンボウフウの前記抽出部位を投入し、必要に応じて適宜撹拌しながら、例えば、３０分間～４時間静置して可溶性成分を溶出した後、濾過して抽出残渣を除くことにより抽出液を得る方法などが挙げられる。前記抽出液は、更に、抽出溶媒を留去し、乾燥してもよい。
また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【0068】
前記ボタンボウフウの抽出における条件（抽出時間及び抽出温度）、抽出溶媒及び抽出溶媒の使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【0069】
前記抽出溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性溶媒、又は水と親水性溶媒との混合溶媒などが挙げられる。
【0070】
前記水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水などの他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。なお、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水なども含まれる。前記水は、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【0071】
前記親水性溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１～５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３－ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２～５の多価アルコールなどが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【0072】
前記混合溶媒における前記水に対する前記親水性溶媒の使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、低級アルコールを使用する場合は、水１０容量部に対して１容量部～９０容量部、低級脂肪族ケトンを使用する場合は、水１０容量部に対して１容量部～４０容量部、多価アルコールを使用する場合は、水１０容量部に対して１容量部～９０容量部添加することが好ましい。
【0073】
前記抽出溶媒の温度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。
【0074】
得られた前記ボタンボウフウ抽出物は、前記ボタンボウフウ抽出物の希釈物、濃縮物、乾燥物、粗精製物、精製物などを得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製などの処理を施してもよい。
【0075】
前記ボタンボウフウ抽出物の精製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理などの精製方法が挙げられる。前記精製方法により精製することで、有効成分の濃度を高めたり、不要物を除去したりすることができる。
【0076】
得られた前記ボタンボウフウ抽出物は、そのままでも前記痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤として使用することができるが、利用しやすい点で、前記濃縮液、前記乾燥物が好ましい。前記乾燥物を得るに当たって、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリンなどのキャリアーを加えてもよい。
【0077】
前記ボタンボウフウ抽出物の前記痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤における含有量としては、特に制限はなく、前記抽出物の生理活性等によって適宜調整することができる。前記痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤は、前記ボタンボウフウ抽出物のみからなるものであってもよい。
【0078】
＜その他の成分＞
前記その他の成分としては、特に制限はなく、前記痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤の利用形態に応じて適宜選択することができ、例えば、賦形剤、防湿剤、防腐剤、強化剤、増粘剤、乳化剤、酸化防止剤、甘味料、酸味料、調味料、着色料、香料、美白剤、保湿剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、皮膚栄養剤などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
前記その他の成分としては、特に制限はなく、前記痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤の利用形態に応じて適宜選択することができ、例えば、賦形剤、防湿剤、防腐剤、強化剤、増粘剤、乳化剤、酸化防止剤、甘味料、酸味料、調味料、着色料、香料、美白剤、保湿剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、皮膚栄養剤などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【0079】
前記その他の成分の前記痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤における含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【0080】
＜用途＞
前記痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤の用途としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、医薬品、医薬部外品、飲食品、化粧品などが挙げられる。
前記痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤は、優れた痛風改善作用、肝機能向上作用、免疫賦活作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、及び抗酸化作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高いので、例えば、痛風改善用組成物、肝機能向上用組成物、免疫賦活用組成物、抗老化用組成物、抗炎症用組成物、育毛用組成物、又は抗酸化用組成物の有効成分として好適に用いることができる。
前記痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤の用途としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、医薬品、医薬部外品、飲食品、化粧品などが挙げられる。
前記痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤は、優れた痛風改善作用、肝機能向上作用、免疫賦活作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、及び抗酸化作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高いので、例えば、痛風改善用組成物、肝機能向上用組成物、免疫賦活用組成物、抗老化用組成物、抗炎症用組成物、育毛用組成物、又は抗酸化用組成物の有効成分として好適に用いることができる。
【0081】
本発明の痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなど）に対して適用することもできる。
【0082】
前記痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤の用法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、経口、非経口、外用などの用法が挙げられる。
【0083】
前記痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤の剤型としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、錠剤、粉剤、カプセル剤、顆粒剤、エキス剤、シロップ剤等の経口投与剤；注射剤、点滴剤、坐剤等の非経口投与剤；化粧水、乳液、クリーム、軟膏、美容液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、ファンデーション、入浴剤、石鹸、ボディーソープ、アストリンゼント、ヘアトニック、ヘアローション、ヘアクリーム、ヘアリキッド、ポマード、シャンプー、リンス、コンディショナー等の外用剤などが挙げられる。
前記各剤型の痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤の製造方法としては、特に制限はなく、公知の方法を適宜選択することができる。
前記各剤型の痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤の製造方法としては、特に制限はなく、公知の方法を適宜選択することができる。
【0084】
前記痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤の使用量、使用期間等の使用方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【0085】
また、本発明の痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤は、痛風改善作用、肝機能向上作用、免疫賦活作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、又は抗酸化作用の作用機構に関する研究のための試薬としても用いることができる。
【0086】
前記ボタンボウフウ抽出物が有する痛風改善作用は、例えば、キサンチンオキシダーゼ活性阻害作用によって発揮される。そのため、前記痛風改善剤は、キサンチンオキシダーゼ活性阻害作用を有することが好ましい。なお、前記ボタンボウフウ抽出物が有する痛風改善作用は、キサンチンオキシダーゼ活性阻害作用に基づいて発揮される痛風改善作用に限定されるものではない。
また、本発明は、前記ボタンボウフウ抽出物を含有するキサンチンオキシダーゼ活性阻害剤にも関する。
また、本発明は、前記ボタンボウフウ抽出物を含有するキサンチンオキシダーゼ活性阻害剤にも関する。
【0087】
前記ボタンボウフウ抽出物が有する肝機能向上作用肝機能向上作用（例えば、二日酔いの予防または改善；有害物質の蓄積に起因する症状（肌荒れ、疲労感等）の予防、治療または改善；代謝亢進など）は、例えば、グルタチオン産生促進作用及びＡＴＰ産生促進作用の少なくともいずれかによって発揮される。そのため、前記肝機能向上剤は、グルタチオン産生促進作用及びＡＴＰ産生促進作用の少なくともいずれかを有することが好ましい。なお、前記ボタンボウフウ抽出物が有する肝機能向上作用は、グルタチオン産生促進作用及びＡＴＰ産生促進作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される肝機能向上作用に限定されるものではない。
また、本発明は、前記ボタンボウフウ抽出物を含有するグルタチオン産生促進剤又はＡＴＰ産生促進剤にも関する。
また、本発明は、前記ボタンボウフウ抽出物を含有するグルタチオン産生促進剤又はＡＴＰ産生促進剤にも関する。
【0088】
前記ボタンボウフウ抽出物が有する免疫賦活作用は、例えば、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）産生促進作用によって発揮される。そのため、前記免疫賦活剤は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）産生促進作用を有することが好ましい。なお、前記ボタンボウフウ抽出物が有する免疫賦活作用は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）産生促進作用に基づいて発揮される免疫賦活作用に限定されるものではない。
また、本発明は、前記ボタンボウフウ抽出物を含有する腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）産生促進剤にも関する。
また、本発明は、前記ボタンボウフウ抽出物を含有する腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）産生促進剤にも関する。
【0089】
前記ボタンボウフウ抽出物が有する抗老化作用は、例えば、ＶＩＩ型コラーゲン産生促進作用、ラミニン－３３２産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ－１（ＴＧＭ－１） ｍＲＮＡ発現促進作用、フィラグリン（ＦＬＧ） ｍＲＮＡ発現促進作用、アクアポリン３（ＡＱＰ３） ｍＲＮＡ発現促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３） ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン４（ＣＬＤＮ４） ｍＲＮＡ発現促進作用、オクルディン（ＯＣＬＮ） ｍＲＮＡ発現促進作用、最終糖化産物（ＡＧＥｓ）形成抑制作用、及び最終糖化産物（ＡＧＥｓ）分解促進作用の少なくともいずれかによって発揮される。そのため、前記抗老化剤は、ＶＩＩ型コラーゲン産生促進作用、ラミニン－３３２産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ－１（ＴＧＭ－１） ｍＲＮＡ発現促進作用、フィラグリン（ＦＬＧ） ｍＲＮＡ発現促進作用、アクアポリン３（ＡＱＰ３） ｍＲＮＡ発現促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３） ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン４（ＣＬＤＮ４） ｍＲＮＡ発現促進作用、オクルディン（ＯＣＬＮ） ｍＲＮＡ発現促進作用、最終糖化産物（ＡＧＥｓ）形成抑制作用、及び最終糖化産物（ＡＧＥｓ）分解促進作用の少なくともいずれかを有することが好ましい。なお、前記ボタンボウフウ抽出物が有する抗老化作用は、ＶＩＩ型コラーゲン産生促進作用、ラミニン－３３２産生促進作用、表皮角化細胞増殖促進作用、ＡＴＰ産生促進作用、グルタチオン産生促進作用、トランスグルタミナーゼ－１（ＴＧＭ－１） ｍＲＮＡ発現促進作用、フィラグリン（ＦＬＧ） ｍＲＮＡ発現促進作用、アクアポリン３（ＡＱＰ３） ｍＲＮＡ発現促進作用、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３） ｍＲＮＡ発現促進作用、クローディン４（ＣＬＤＮ４） ｍＲＮＡ発現促進作用、オクルディン（ＯＣＬＮ） ｍＲＮＡ発現促進作用、最終糖化産物（ＡＧＥｓ）形成抑制作用、及び最終糖化産物（ＡＧＥｓ）分解促進作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される抗老化作用に限定されるものではない。
また、本発明は、前記ボタンボウフウ抽出物を含有するＶＩＩ型コラーゲン産生促進剤、ラミニン－３３２産生促進剤、表皮角化細胞増殖促進剤、ＡＴＰ産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ－１（ＴＧＭ－１） ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン（ＦＬＧ） ｍＲＮＡ発現促進剤、アクアポリン３（ＡＱＰ３） ｍＲＮＡ発現促進剤、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３） ｍＲＮＡ発現促進剤、クローディン４（ＣＬＤＮ４） ｍＲＮＡ発現促進剤、オクルディン（ＯＣＬＮ） ｍＲＮＡ発現促進剤、最終糖化産物（ＡＧＥｓ）形成抑制剤、又は最終糖化産物（ＡＧＥｓ）分解促進剤にも関する。
また、本発明は、前記ボタンボウフウ抽出物を含有するＶＩＩ型コラーゲン産生促進剤、ラミニン－３３２産生促進剤、表皮角化細胞増殖促進剤、ＡＴＰ産生促進剤、グルタチオン産生促進剤、トランスグルタミナーゼ－１（ＴＧＭ－１） ｍＲＮＡ発現促進剤、フィラグリン（ＦＬＧ） ｍＲＮＡ発現促進剤、アクアポリン３（ＡＱＰ３） ｍＲＮＡ発現促進剤、ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３） ｍＲＮＡ発現促進剤、クローディン４（ＣＬＤＮ４） ｍＲＮＡ発現促進剤、オクルディン（ＯＣＬＮ） ｍＲＮＡ発現促進剤、最終糖化産物（ＡＧＥｓ）形成抑制剤、又は最終糖化産物（ＡＧＥｓ）分解促進剤にも関する。
【0090】
前記ボタンボウフウ抽出物が有する抗炎症作用は、例えば、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）産生抑制作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、及びプロスタグランジン（ＰＧ）Ｅ２産生抑制作用の少なくともいずれかによって発揮される。そのため、前記抗炎症剤は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）産生抑制作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、及びプロスタグランジン（ＰＧ）Ｅ２産生抑制作用の少なくともいずれかを有することが好ましい。なお、前記ボタンボウフウ抽出物が有する抗炎症作用は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）産生抑制作用、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用、及びプロスタグランジン（ＰＧ）Ｅ２産生抑制作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される抗炎症作用に限定されるものではない。
また、本発明は、前記ボタンボウフウ抽出物を含有する腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）産生抑制剤、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤、又はプロスタグランジン（ＰＧ）Ｅ２産生抑制剤にも関する。
また、本発明は、前記ボタンボウフウ抽出物を含有する腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）産生抑制剤、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤、又はプロスタグランジン（ＰＧ）Ｅ２産生抑制剤にも関する。
【0091】
前記ボタンボウフウ抽出物が有する育毛作用は、例えば、毛乳頭細胞増殖促進作用によって発揮される。そのため、前記育毛剤は、毛乳頭細胞増殖促進作用を有することが好ましい。なお、前記ボタンボウフウ抽出物が有する育毛作用は、毛乳頭細胞増殖促進作用に基づいて発揮される育毛作用に限定されるものではない。
また、本発明は、前記ボタンボウフウ抽出物を含有する毛乳頭細胞増殖促進剤にも関する。
また、本発明は、前記ボタンボウフウ抽出物を含有する毛乳頭細胞増殖促進剤にも関する。
【0092】
前記ボタンボウフウ抽出物が有する抗酸化作用は、例えば、スーパーオキサイド消去作用及びラジカル消去作用の少なくともいずれかによって発揮される。そのため、前記抗酸化剤は、スーパーオキサイド消去作用及びラジカル消去作用の少なくともいずれかを有することが好ましい。なお、前記ボタンボウフウ抽出物が有する抗酸化作用は、スーパーオキサイド消去作用及びラジカル消去作用の少なくともいずれかに基づいて発揮される抗酸化作用に限定されるものではない。
また、本発明は、前記ボタンボウフウ抽出物を含有するスーパーオキサイド消去剤、又はラジカル消去剤にも関する。
また、本発明は、前記ボタンボウフウ抽出物を含有するスーパーオキサイド消去剤、又はラジカル消去剤にも関する。
【0093】
（痛風改善用組成物、肝機能向上用組成物、免疫賦活用組成物、抗老化用組成物、抗炎症用組成物、育毛用組成物、及び抗酸化用組成物）
本発明の痛風改善用組成物は、本発明の痛風改善剤を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
本発明の肝機能向上用組成物は、本発明の肝機能向上剤を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
本発明の免疫賦活用組成物は、本発明の免疫賦活剤を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
本発明の抗老化用組成物は、本発明の抗老化剤を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
本発明の抗炎症用組成物は、本発明の抗炎症剤を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
本発明の育毛用組成物は、本発明の育毛剤を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
本発明の抗酸化用組成物は、本発明の抗酸化剤を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
本発明の痛風改善用組成物は、本発明の痛風改善剤を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
本発明の肝機能向上用組成物は、本発明の肝機能向上剤を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
本発明の免疫賦活用組成物は、本発明の免疫賦活剤を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
本発明の抗老化用組成物は、本発明の抗老化剤を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
本発明の抗炎症用組成物は、本発明の抗炎症剤を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
本発明の育毛用組成物は、本発明の育毛剤を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
本発明の抗酸化用組成物は、本発明の抗酸化剤を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有する。
【0094】
＜痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、及び抗酸化剤＞
前記痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、及び抗酸化剤は、上述した本発明の痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、及び抗酸化剤である。
前記痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、及び抗酸化剤は、上述した本発明の痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、及び抗酸化剤である。
【0095】
前記痛風改善用組成物、肝機能向上用組成物、免疫賦活用組成物、抗老化用組成物、抗炎症用組成物、育毛用組成物、又は抗酸化用組成物における前記痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤の含有量としては、特に制限はなく、前記痛風改善用組成物、肝機能向上用組成物、免疫賦活用組成物、抗老化用組成物、抗炎症用組成物、育毛用組成物、又は抗酸化用組成物の形態や前記ボタンボウフウ抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、前記ボタンボウフウ抽出物に換算して、０．０００１質量％～２０質量％が好ましく、０．０００１質量％～１０質量％がより好ましい。前記痛風改善用組成物、肝機能向上用組成物、免疫賦活用組成物、抗老化用組成物、抗炎症用組成物、育毛用組成物、又は抗酸化用組成物は、前記痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤のみからなるものであってもよい。
【0096】
＜その他の成分＞
前記痛風改善用組成物、肝機能向上用組成物、免疫賦活用組成物、抗老化用組成物、抗炎症用組成物、育毛用組成物、又は抗酸化用組成物におけるその他の成分としては、特に制限はなく、前記痛風改善用組成物、肝機能向上用組成物、免疫賦活用組成物、抗老化用組成物、抗炎症用組成物、育毛用組成物、又は抗酸化用組成物の利用形態に応じて適宜選択することができ、例えば、上記した痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤の項目に記載しその他の成分と同様のものなどが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
前記痛風改善用組成物、肝機能向上用組成物、免疫賦活用組成物、抗老化用組成物、抗炎症用組成物、育毛用組成物、又は抗酸化用組成物におけるその他の成分としては、特に制限はなく、前記痛風改善用組成物、肝機能向上用組成物、免疫賦活用組成物、抗老化用組成物、抗炎症用組成物、育毛用組成物、又は抗酸化用組成物の利用形態に応じて適宜選択することができ、例えば、上記した痛風改善剤、肝機能向上剤、免疫賦活剤、抗老化剤、抗炎症剤、育毛剤、又は抗酸化剤の項目に記載しその他の成分と同様のものなどが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【0097】
前記その他の成分の前記痛風改善用組成物、肝機能向上用組成物、免疫賦活用組成物、抗老化用組成物、抗炎症用組成物、育毛用組成物、又は抗酸化用組成物における含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【0098】
＜態様＞
前記痛風改善用組成物、肝機能向上用組成物、免疫賦活用組成物、抗老化用組成物、抗炎症用組成物、育毛用組成物、又は抗酸化用組成物の態様としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、医薬品、医薬部外品、飲食品、化粧品などが挙げられる。
本発明の痛風改善用組成物、肝機能向上用組成物、免疫賦活用組成物、抗老化用組成物、抗炎症用組成物、育毛用組成物、又は抗酸化用組成物は、日常的に使用することが可能であり、有効成分であるボタンボウフウ抽出物の働きによって、痛風改善作用、肝機能向上作用、免疫賦活作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、又は抗酸化作用をはじめとする様々な生理活性作用を極めて効果的に発揮させることができる。
前記痛風改善用組成物、肝機能向上用組成物、免疫賦活用組成物、抗老化用組成物、抗炎症用組成物、育毛用組成物、又は抗酸化用組成物の態様としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、医薬品、医薬部外品、飲食品、化粧品などが挙げられる。
本発明の痛風改善用組成物、肝機能向上用組成物、免疫賦活用組成物、抗老化用組成物、抗炎症用組成物、育毛用組成物、又は抗酸化用組成物は、日常的に使用することが可能であり、有効成分であるボタンボウフウ抽出物の働きによって、痛風改善作用、肝機能向上作用、免疫賦活作用、抗老化作用、抗炎症作用、育毛作用、又は抗酸化作用をはじめとする様々な生理活性作用を極めて効果的に発揮させることができる。
【0099】
本発明の痛風改善用組成物、肝機能向上用組成物、免疫賦活用組成物、抗老化用組成物、抗炎症用組成物、育毛用組成物、又は抗酸化用組成物は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなど）に対して適用することもできる。
【0100】
前記本発明の痛風改善用組成物、肝機能向上用組成物、免疫賦活用組成物、抗老化用組成物、抗炎症用組成物、育毛用組成物、又は抗酸化用組成物の用法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、経口、非経口、外用などの用法が挙げられる。
【0101】
前記経口用の組成物としては、例えば、上述した経口投与剤や飲食品が挙げられる。ここで、飲食品とは、人の健康に危害を加えるおそれが少なく、通常の社会生活において、経口又は消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品などの区分に制限されるものではない。したがって、前記飲食品は、経口的に摂取される一般食品、健康食品（機能性飲食品）、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品）、医薬部外品、医薬品等を構成する飲食品を幅広く含むものを意味する。
【0102】
前記経口用の組成物の種類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、茶飲料、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料、アルコール飲料、コーヒー飲料、コーヒー入り清涼飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調整用粉末を含む）；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類；カニ、サケ、アサリ、マグロ、イワシ、エビ、カツオ、サバ、クジラ、カキ、サンマ、イカ、アカガイ、ホタテ、アワビ、ウニ、イクラ、トコブシ等の水産物；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、うな丼、ハヤシライス、おでん、マーボドーフ、牛丼、ミートソース、玉子スープ、オムライス、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール等のレトルトパウチ食品；サラダ、漬物等の惣菜；種々の形態の健康・美容・栄養補助食品；錠剤、顆粒剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチ、うがい薬等の医薬品、医薬部外品；口中清涼剤、口臭防止剤等の口腔内で使用する口腔清涼剤、歯磨剤などが挙げられる。
【0103】
前記経口用以外の組成物としては、例えば、上述した非経口投与剤、外用剤が挙げられる。例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ファンデーションなどは皮膚化粧料として、ヘアトニック、ヘアクリーム、ヘアリキッド、シャンプー、ポマード、リンスなどは頭髪化粧料として用いることができる。
【0104】
前記痛風改善用組成物、肝機能向上用組成物、免疫賦活用組成物、抗老化用組成物、抗炎症用組成物、育毛用組成物、又は抗酸化用組成物の製造方法としては、特に制限はなく、前記痛風改善用組成物、肝機能向上用組成物、免疫賦活用組成物、抗老化用組成物、抗炎症用組成物、育毛用組成物、又は抗酸化用組成物の利用形態などに応じて適宜選択することができる。
【0105】
前記痛風改善用組成物、肝機能向上用組成物、免疫賦活用組成物、抗老化用組成物、抗炎症用組成物、育毛用組成物、又は抗酸化用組成物の使用量、使用期間等としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【0106】
上述したように、本発明の痛風改善剤及び痛風改善用組成物は優れた痛風改善作用を有し、肝機能向上剤及び肝機能向上用組成物は優れた肝機能向上作用を有し、免疫賦活剤及び免疫賦活用組成物は優れた免疫賦活作用を有し、抗老化剤及び抗老化用組成物は優れた抗老化作用を有し、抗炎症剤及び抗炎症用組成物は優れた抗炎症作用を有し、育毛剤及び育毛用組成物は優れた育毛作用を有し、抗酸化剤及び抗酸化用組成物は優れた抗酸化作用を有する。
したがって、本発明は、個体に前記痛風改善剤及び痛風改善用組成物の少なくともいずれかを投与することを特徴とする痛風改善方法、個体に前記肝機能向上剤及び肝機能向上用組成物の少なくともいずれかを投与することを特徴とする肝機能向上方法、個体に前記免疫賦活剤及び免疫賦活用組成物の少なくともいずれかを投与することを特徴とする免疫賦活方法、個体に前記抗老化剤及び抗老化用組成物の少なくともいずれかを投与することを特徴とする抗老化方法、個体に前記抗炎症剤及び抗炎症用組成物の少なくともいずれかを投与することを特徴とする抗炎症方法、個体に前記育毛剤及び育毛用組成物の少なくともいずれかを投与することを特徴とする育毛方法、又は個体に前記抗酸化剤及び抗酸化用組成物の少なくともいずれかを投与することを特徴とする抗酸化方法にも関する。
したがって、本発明は、個体に前記痛風改善剤及び痛風改善用組成物の少なくともいずれかを投与することを特徴とする痛風改善方法、個体に前記肝機能向上剤及び肝機能向上用組成物の少なくともいずれかを投与することを特徴とする肝機能向上方法、個体に前記免疫賦活剤及び免疫賦活用組成物の少なくともいずれかを投与することを特徴とする免疫賦活方法、個体に前記抗老化剤及び抗老化用組成物の少なくともいずれかを投与することを特徴とする抗老化方法、個体に前記抗炎症剤及び抗炎症用組成物の少なくともいずれかを投与することを特徴とする抗炎症方法、個体に前記育毛剤及び育毛用組成物の少なくともいずれかを投与することを特徴とする育毛方法、又は個体に前記抗酸化剤及び抗酸化用組成物の少なくともいずれかを投与することを特徴とする抗酸化方法にも関する。
【実施例0107】
以下、本発明の製造例、試験例、配合例を説明するが、本発明は、これらの製造例、試験例、配合例に何ら限定されるものではない。
【0108】
（製造例１）
ボタンボウフウの根部の３０容量％エタノールによる抽出物を以下のようにして製造した。
ボタンボウフウの根部１０ｇに３０容量％エタノール２００ｍＬを加え、還流冷却器を用いて、８０℃にて１時間抽出を行った後、濾紙にて濾過し、抽出液を得た。
得られた抽出液を減圧下で濃縮、乾燥を行い、ボタンボウフウの根部の３０容量％エタノール抽出物（粉末）を２．２８ｇ得た。
ボタンボウフウの根部の３０容量％エタノールによる抽出物を以下のようにして製造した。
ボタンボウフウの根部１０ｇに３０容量％エタノール２００ｍＬを加え、還流冷却器を用いて、８０℃にて１時間抽出を行った後、濾紙にて濾過し、抽出液を得た。
得られた抽出液を減圧下で濃縮、乾燥を行い、ボタンボウフウの根部の３０容量％エタノール抽出物（粉末）を２．２８ｇ得た。
【0109】
（製造例２）
製造例１において、３０容量％エタノールを５０容量％エタノールに代えた以外は、製造例１と同様にして、ボタンボウフウの根部の５０容量％エタノール抽出物（粉末）を２．２３ｇ得た。
製造例１において、３０容量％エタノールを５０容量％エタノールに代えた以外は、製造例１と同様にして、ボタンボウフウの根部の５０容量％エタノール抽出物（粉末）を２．２３ｇ得た。
【0110】
（製造例３）
製造例１において、３０容量％エタノールを８０容量％エタノールに代えた以外は、製造例１と同様にして、ボタンボウフウの根部の８０容量％エタノール抽出物（粉末）を１．９０ｇ得た。
製造例１において、３０容量％エタノールを８０容量％エタノールに代えた以外は、製造例１と同様にして、ボタンボウフウの根部の８０容量％エタノール抽出物（粉末）を１．９０ｇ得た。
【0111】
（製造例４）
製造例１において、ボタンボウフウの根部１０ｇをボタンボウフウの地上部３０ｇに代え、３０容量％エタノール２００ｍＬを３０容量％エタノール６００ｍＬに代えた以外は、製造例１と同様にして、ボタンボウフウの地上部の３０容量％エタノール抽出物（粉末）を１０．４８ｇ得た。
製造例１において、ボタンボウフウの根部１０ｇをボタンボウフウの地上部３０ｇに代え、３０容量％エタノール２００ｍＬを３０容量％エタノール６００ｍＬに代えた以外は、製造例１と同様にして、ボタンボウフウの地上部の３０容量％エタノール抽出物（粉末）を１０．４８ｇ得た。
【0112】
（製造例５）
製造例４において、３０容量％エタノールを５０容量％エタノールに代えた以外は、製造例４と同様にして、ボタンボウフウの地上部の５０容量％エタノール抽出物（粉末）を１０．２８ｇ得た。
製造例４において、３０容量％エタノールを５０容量％エタノールに代えた以外は、製造例４と同様にして、ボタンボウフウの地上部の５０容量％エタノール抽出物（粉末）を１０．２８ｇ得た。
【0113】
（製造例６）
製造例４において、３０容量％エタノールを８０容量％エタノールに代えた以外は、製造例４と同様にして、ボタンボウフウの地上部の８０容量％エタノール抽出物（粉末）を９．２７ｇ得た。
製造例４において、３０容量％エタノールを８０容量％エタノールに代えた以外は、製造例４と同様にして、ボタンボウフウの地上部の８０容量％エタノール抽出物（粉末）を９．２７ｇ得た。
【0114】
（試験例１：キサンチンオキシダーゼ活性阻害作用試験）
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、キサンチンオキシダーゼ活性阻害作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、キサンチンオキシダーゼ活性阻害作用を試験した。
【0115】
９６ウェル石英マイクロプレートに、０．１ｍｏｌ／Ｌ リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）７５μＬ、蒸留水４０μＬ、メタノール５μＬ、及び被験試料溶液（終濃度は下記表１－１及び１－２を参照）５μＬを加え、これに、キサンチンオキシダーゼ溶液（０．１２Ｕ／ｍＬ）２５μＬを添加して３７℃で１５分間加温した。加温後、０．１ｍｏｌ／Ｌ キサンチン溶液１５０μＬを加え素早く攪拌し、３７℃で１５分間反応した。反応後、波長２９５ｎｍにおける吸光度を測定した。また、コントロールとして、被験試料無添加の溶媒のみ（コントロール溶液）を加えて同様の操作を行った。
得られた結果から、下記式によりキサンチンオキシダーゼ活性阻害率を算出した。結果を表１－１及び１－２に示す。
キサンチンオキシダーゼ活性阻害率（％）＝１００－｛（Ａ－Ｂ）／（Ｃ－Ｄ）×１００｝
上記式中のＡ～Ｄは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加、酵素溶液添加時の波長２９５ｎｍにおける吸光度
Ｂ ： 被験試料添加、酵素溶液無添加時の波長２９５ｎｍにおける吸光度
Ｃ ： 被験試料無添加（コントロール）、酵素溶液添加時の波長２９５ｎｍにおける吸光度
Ｄ ： 被験試料無添加（コントロール）、酵素溶液無添加時の波長２９５ｎｍにおける吸光度
得られた結果から、下記式によりキサンチンオキシダーゼ活性阻害率を算出した。結果を表１－１及び１－２に示す。
キサンチンオキシダーゼ活性阻害率（％）＝１００－｛（Ａ－Ｂ）／（Ｃ－Ｄ）×１００｝
上記式中のＡ～Ｄは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加、酵素溶液添加時の波長２９５ｎｍにおける吸光度
Ｂ ： 被験試料添加、酵素溶液無添加時の波長２９５ｎｍにおける吸光度
Ｃ ： 被験試料無添加（コントロール）、酵素溶液添加時の波長２９５ｎｍにおける吸光度
Ｄ ： 被験試料無添加（コントロール）、酵素溶液無添加時の波長２９５ｎｍにおける吸光度
【0116】
【表1-1】
【0117】
【表1-2】
【0118】
表１－１及び１－２の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、優れたキサンチンオキシダーゼ活性阻害作用を有することが確認された。
【0119】
（試験例２：グルタチオン産生促進作用試験（ヒト正常肝細胞））
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ヒト正常肝細胞におけるグルタチオン産生促進作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ヒト正常肝細胞におけるグルタチオン産生促進作用を試験した。
【0120】
正常ヒト肝細胞を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５細胞／ｍＬの濃度になるように１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地で希釈した後、４８ウェルプレートに１ウェル当たり２００μＬ播種し、一晩培養した。
一晩培養後、１％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地に溶解した被験試料（試料濃度は下記表２－１及び２－２を参照）を各ウェルに２００μＬ添加し、さらに２４時間培養した。なお、対照として、被験試料無添加の１％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて同様に培養した。
培養終了後、各ウェルから培地を除去し、４００μＬのＰＢＳ（－）緩衝液にて洗浄した後、１５０μＬのＭ－ＰＥＲ（ＰＩＥＲＣＥ社製）を用いて細胞を溶解した。
このうちの１００μＬを用いて総グルタチオンの定量を行った。すなわち、９６ウェルプレートに、溶解した細胞抽出液１００μＬ、０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液５０μＬ、２ｍｍｏｌ／Ｌ ＮＡＤＰＨ ２５μＬ、及び３．２ｕｎｉｔs／ｍＬのグルタチオンレダクターゼ２５μＬを加え、３７℃で１０分間加温した後、１０ｍｍｏｌ／Ｌ ５，５’－ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（２－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ）２５μＬを加え、５分後までの波長４１２ｎｍにおける吸光度を測定し、ΔＯＤ／ｍｉｎを求めた。総グルタチオン濃度は、酸化型グルタチオンを用いて作成した検量線をもとに算出した。
得られた値を総タンパク量当たりのグルタチオン量に補正した後、下記式によりグルタチオン産生促進率（％）を算出した。結果を表２－１及び２－２に示す。
グルタチオン産生促進率（％）＝Ｂ／Ａ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料を添加しなかった場合の細胞中における総タンパク量当たりのグルタチオン量（対照）
Ｂ ： 被験試料を添加した場合の細胞中における総タンパク量当たりのグルタチオン量
一晩培養後、１％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地に溶解した被験試料（試料濃度は下記表２－１及び２－２を参照）を各ウェルに２００μＬ添加し、さらに２４時間培養した。なお、対照として、被験試料無添加の１％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて同様に培養した。
培養終了後、各ウェルから培地を除去し、４００μＬのＰＢＳ（－）緩衝液にて洗浄した後、１５０μＬのＭ－ＰＥＲ（ＰＩＥＲＣＥ社製）を用いて細胞を溶解した。
このうちの１００μＬを用いて総グルタチオンの定量を行った。すなわち、９６ウェルプレートに、溶解した細胞抽出液１００μＬ、０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液５０μＬ、２ｍｍｏｌ／Ｌ ＮＡＤＰＨ ２５μＬ、及び３．２ｕｎｉｔs／ｍＬのグルタチオンレダクターゼ２５μＬを加え、３７℃で１０分間加温した後、１０ｍｍｏｌ／Ｌ ５，５’－ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（２－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ）２５μＬを加え、５分後までの波長４１２ｎｍにおける吸光度を測定し、ΔＯＤ／ｍｉｎを求めた。総グルタチオン濃度は、酸化型グルタチオンを用いて作成した検量線をもとに算出した。
得られた値を総タンパク量当たりのグルタチオン量に補正した後、下記式によりグルタチオン産生促進率（％）を算出した。結果を表２－１及び２－２に示す。
グルタチオン産生促進率（％）＝Ｂ／Ａ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料を添加しなかった場合の細胞中における総タンパク量当たりのグルタチオン量（対照）
Ｂ ： 被験試料を添加した場合の細胞中における総タンパク量当たりのグルタチオン量
【0121】
【表2-1】
【0122】
【表2-2】
【0123】
表２－１及び２－２の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、肝細胞における優れたグルタチオン産生促進作用を有することが確認された。
【0124】
（試験例３：ヒト正常肝細胞を用いたＡＴＰ産生促進作用試験）
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＡＴＰ産生促進作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＡＴＰ産生促進作用を試験した。
【0125】
正常ヒト肝細胞を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０５細胞／ｍＬの濃度に１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェル当たり１００μＬ播種し、一晩培養した。
一晩培養後、培地を除去し、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭに溶解した被験試料（試料濃度は下記表３－１及び３－２を参照）を各ウェルに１００μＬ添加し、２時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加の１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭを用いて同様に培養した。
ＡＴＰ産生促進作用は、ホタルルシフェラーゼ発光法を用いて細胞内のＡＴＰ量を測定した。すなわち、培養終了後、『「細胞の」ＡＴＰ測定試薬』（東洋ビーネット社製）を各ウェルに１００μＬ添加し、ルシフェラーゼによる化学発光反応を行った。反応後、細胞内ＡＴＰ量に比例した化学発光量を、化学発光測定装置（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製，製品名：Ｖａｒｉｏｓｋａｎ ＬＵＸ）を用いて測定した。
得られた結果から、下記式によりＡＴＰ産生促進率（％）を算出した。結果を表３－１及び３－２に示す。
ＡＴＰ産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料を添加した場合の細胞での化学発光量
Ｂ ： 被験試料を添加しなかった場合の細胞での化学発光量
一晩培養後、培地を除去し、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭに溶解した被験試料（試料濃度は下記表３－１及び３－２を参照）を各ウェルに１００μＬ添加し、２時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加の１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭを用いて同様に培養した。
ＡＴＰ産生促進作用は、ホタルルシフェラーゼ発光法を用いて細胞内のＡＴＰ量を測定した。すなわち、培養終了後、『「細胞の」ＡＴＰ測定試薬』（東洋ビーネット社製）を各ウェルに１００μＬ添加し、ルシフェラーゼによる化学発光反応を行った。反応後、細胞内ＡＴＰ量に比例した化学発光量を、化学発光測定装置（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製，製品名：Ｖａｒｉｏｓｋａｎ ＬＵＸ）を用いて測定した。
得られた結果から、下記式によりＡＴＰ産生促進率（％）を算出した。結果を表３－１及び３－２に示す。
ＡＴＰ産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料を添加した場合の細胞での化学発光量
Ｂ ： 被験試料を添加しなかった場合の細胞での化学発光量
【0126】
【表3-1】
【0127】
【表3-2】
【0128】
表３－１及び３－２の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、肝細胞における優れたＡＴＰ産生促進作用を有することが確認された。
【0129】
（試験例４：腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）産生促進作用試験）
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＴＮＦ－α産生促進作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＴＮＦ－α産生促進作用を試験した。
【0130】
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭを用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０６細胞／ｍＬの濃度になるように１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェル当たり１００μＬ播種し、４時間培養した。
培養終了後、終濃度０．５％のＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで溶解した被験試料（濃度は下記表４－１及び４－２を参照）を各ウェルに１００μＬ添加し、２４時間培養した。なお、被験試料を添加しない以外は同様にして処理したものをコントロールとした。
培養終了後、各ウェルの培養上清中のＴＮＦ－α量を、サンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いて測定した。
得られた結果から、下記式によりＴＮＦ－α産生促進率を算出した。結果を表４－１及び４－２に示す。
ＴＮＦ－α産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時のＴＮＦ－α量
Ｂ ： 被験試料無添加時のＴＮＦ－α量
培養終了後、終濃度０．５％のＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで溶解した被験試料（濃度は下記表４－１及び４－２を参照）を各ウェルに１００μＬ添加し、２４時間培養した。なお、被験試料を添加しない以外は同様にして処理したものをコントロールとした。
培養終了後、各ウェルの培養上清中のＴＮＦ－α量を、サンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いて測定した。
得られた結果から、下記式によりＴＮＦ－α産生促進率を算出した。結果を表４－１及び４－２に示す。
ＴＮＦ－α産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時のＴＮＦ－α量
Ｂ ： 被験試料無添加時のＴＮＦ－α量
【0131】
【表4-1】
【0132】
【表4-2】
【0133】
表４－１及び４－２の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、優れたＴＮＦ－α産生促進作用を有することが確認された。
【0134】
（試験例５：ＶＩＩ型コラーゲン産生促進作用試験）
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＶＩＩ型コラーゲン産生促進作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＶＩＩ型コラーゲン産生促進作用を試験した。
【0135】
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１×１０５細胞／ｍＬの濃度になるようにＢＰＥ無添加ＫＧＭ（ＫＧＭ－ＢＰＥ）で希釈した後、２４ウェルプレートに１ウェル当たり５００μＬ播種し、１日間培養した。
培養終了後、培地を除去し、ＫＧＭ－ＢＰＥで溶解した被験試料（試料濃度は下記表５を参照）又は被験試料無添加のＫＧＭ－ＢＰＥ（コントロール）を各ウェルに５００μＬ添加し、４８時間培養した。培養終了後、各ウェルの培地中のＶＩＩ型コラーゲン量をＥＬＩＳＡ法により測定した。
得られた結果から、下記式によりＶＩＩ型コラーゲン産生促進率を算出した。結果を表５に示す。
ＶＩＩ型コラーゲン産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度
Ｂ ： 被験試料無添加時（コントロール）の波長４０５ｎｍにおける吸光度
培養終了後、培地を除去し、ＫＧＭ－ＢＰＥで溶解した被験試料（試料濃度は下記表５を参照）又は被験試料無添加のＫＧＭ－ＢＰＥ（コントロール）を各ウェルに５００μＬ添加し、４８時間培養した。培養終了後、各ウェルの培地中のＶＩＩ型コラーゲン量をＥＬＩＳＡ法により測定した。
得られた結果から、下記式によりＶＩＩ型コラーゲン産生促進率を算出した。結果を表５に示す。
ＶＩＩ型コラーゲン産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度
Ｂ ： 被験試料無添加時（コントロール）の波長４０５ｎｍにおける吸光度
【0136】
【表5】
【0137】
表５の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、優れたＶＩＩ型コラーゲン産生促進作用を有することが確認された。
【0138】
（試験例６：ラミニン－３３２（ラミニン－５）産生促進作用試験）
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ラミニン－３３２（ラミニン－５）産生促進作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ラミニン－３３２（ラミニン－５）産生促進作用を試験した。
【0139】
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０５細胞／ｍＬの濃度となるようにＢＰＥ無添加ＫＧＭ（ＫＧＭ－ＢＰＥ）で希釈した後、２４ウェルプレートに１ウェル当たり５００μＬ播種し、１日間培養した。
培養終了後、培地を抜き、ＫＧＭ－ＢＰＥで溶解した被験試料（濃度は下記表６－１及び６－２参照）又は被験試料無添加のＫＧＭ－ＢＰＥ（コントロール）を各ウェルに５００μＬ添加し、４８時間培養した。培養終了後、各ウェルの培地中のラミニン－３３２量をＥＬＩＳＡ法により測定した。
得られた結果から、下記式によりラミニン－３３２産生促進率を算出した。結果を表６－１及び６－２に示す。
ラミニン－３３２産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度
Ｂ ： 被験試料無添加時（コントロール）の波長４０５ｎｍにおける吸光度
培養終了後、培地を抜き、ＫＧＭ－ＢＰＥで溶解した被験試料（濃度は下記表６－１及び６－２参照）又は被験試料無添加のＫＧＭ－ＢＰＥ（コントロール）を各ウェルに５００μＬ添加し、４８時間培養した。培養終了後、各ウェルの培地中のラミニン－３３２量をＥＬＩＳＡ法により測定した。
得られた結果から、下記式によりラミニン－３３２産生促進率を算出した。結果を表６－１及び６－２に示す。
ラミニン－３３２産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度
Ｂ ： 被験試料無添加時（コントロール）の波長４０５ｎｍにおける吸光度
【0140】
【表6-1】
【0141】
【表6-2】
【0142】
表６－１及び６－２の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、優れたラミニン－３３２（ラミニン－５）産生促進作用を有することが確認された。
【0143】
（試験例７：表皮角化細胞増殖促進作用試験）
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、表皮角化細胞増殖促進作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、表皮角化細胞増殖促進作用を試験した。
【0144】
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を３．０×１０４細胞／ｍＬの濃度になるようにＫＧＭで希釈した後、コラーゲンコートした９６ウェルプレートに１ウェル当たり１００μＬ播種し、一晩培養した。
培養終了後、ＫＧＭで溶解した被験試料（濃度は下記表７－１及び７－２を参照）を各ウェルに１００μＬ添加し、３日間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＧＭを用いて同様に培養した。
表皮角化細胞増殖促進作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。すなわち、３日間培養後、培地を除去し、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（－）緩衝液に溶解したＭＴＴを各ウェルに１００μＬ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２－プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。
得られた結果から、下記式により表皮角化細胞増殖促進率を算出した。結果を表７－１及び７－２に示す。
表皮角化細胞増殖促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の細胞でのブルーホルマザン生成量
Ｂ ： 被験試料無添加時の細胞でのブルーホルマザン生成量
培養終了後、ＫＧＭで溶解した被験試料（濃度は下記表７－１及び７－２を参照）を各ウェルに１００μＬ添加し、３日間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＧＭを用いて同様に培養した。
表皮角化細胞増殖促進作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。すなわち、３日間培養後、培地を除去し、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（－）緩衝液に溶解したＭＴＴを各ウェルに１００μＬ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２－プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。
得られた結果から、下記式により表皮角化細胞増殖促進率を算出した。結果を表７－１及び７－２に示す。
表皮角化細胞増殖促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の細胞でのブルーホルマザン生成量
Ｂ ： 被験試料無添加時の細胞でのブルーホルマザン生成量
【0145】
【表7-1】
【0146】
【表7-2】
【0147】
表７－１及び７－２の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、優れた表皮角化細胞増殖促進作用を有することが確認された。
【0148】
（試験例８：ＡＴＰ産生促進作用試験）
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、表皮角化細胞におけるＡＴＰ産生促進作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、表皮角化細胞におけるＡＴＰ産生促進作用を試験した。
【0149】
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０５細胞／ｍＬの濃度にＫＧＭで希釈した後、コラーゲンコートした９６ウェルプレートに１ウェル当たり１００μＬ播種し、一晩培養した。
一晩培養後、培地を除去し、ＫＧＭに溶解した被験試料（試料濃度は下記表８を参照）を各ウェルに１００μＬ添加し、２時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＧＭを用いて同様に培養した。
ＡＴＰ産生促進作用は、ホタルルシフェラーゼ発光法を用いて細胞内のＡＴＰ量を測定した。すなわち、培養終了後、『「細胞の」ＡＴＰ測定試薬』（東洋ビーネット社製）を各ウェルに１００μＬ添加し、ルシフェラーゼによる化学発光反応を行った。反応後、細胞内ＡＴＰ量に比例した化学発光量を、化学発光測定装置（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製，製品名：Ｖａｒｉｏｓｋａｎ ＬＵＸ）を用いて測定した。
得られた結果から、下記式によりＡＴＰ産生促進率（％）を算出した。結果を表８に示す。
ＡＴＰ産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料を添加した場合の細胞での化学発光量
Ｂ ： 被験試料を添加しなかった場合の細胞での化学発光量
一晩培養後、培地を除去し、ＫＧＭに溶解した被験試料（試料濃度は下記表８を参照）を各ウェルに１００μＬ添加し、２時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＧＭを用いて同様に培養した。
ＡＴＰ産生促進作用は、ホタルルシフェラーゼ発光法を用いて細胞内のＡＴＰ量を測定した。すなわち、培養終了後、『「細胞の」ＡＴＰ測定試薬』（東洋ビーネット社製）を各ウェルに１００μＬ添加し、ルシフェラーゼによる化学発光反応を行った。反応後、細胞内ＡＴＰ量に比例した化学発光量を、化学発光測定装置（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製，製品名：Ｖａｒｉｏｓｋａｎ ＬＵＸ）を用いて測定した。
得られた結果から、下記式によりＡＴＰ産生促進率（％）を算出した。結果を表８に示す。
ＡＴＰ産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料を添加した場合の細胞での化学発光量
Ｂ ： 被験試料を添加しなかった場合の細胞での化学発光量
【0150】
【表8】
【0151】
表８の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、表皮角化細胞における優れたＡＴＰ産生促進作用を有することが確認された。
【0152】
（試験例９：グルタチオン産生促進作用試験（線維芽細胞））
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、線維芽細胞におけるグルタチオン産生促進作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、線維芽細胞におけるグルタチオン産生促進作用を試験した。
【0153】
正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を、１０％ＦＢＳ含有α－ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０５細胞／ｍＬの濃度になるように１０％ＦＢＳ含有α－ＭＥＭで希釈した後、４８ウェルプレートに１ウェル当たり２００μＬ播種し、４８時間培養した。
培養後、１％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭに溶解した被験試料（試料濃度は下記表９－１及び９－２を参照）を各ウェルに２００μＬ添加し、さらに２４時間培養した。なお、対照として、被験試料無添加の１％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭを用いて同様に培養した。
培養終了後、各ウェルから培地を除去し、３００μＬのＰＢＳ（－）緩衝液にて洗浄した後、１５０μＬのＭ－ＰＥＲ（ＰＩＥＲＣＥ社製）を用いて細胞を溶解した。
このうちの１００μＬを用いて総グルタチオンの定量を行った。すなわち、９６ウェルプレートに、溶解した細胞抽出液１００μＬ、０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液５０μＬ、２ｍｍｏｌ／Ｌ ＮＡＤＰＨ ２５μＬ、及び３．２ｕｎｉｔｓ／ｍＬのグルタチオンレダクターゼ２５μＬを加え、３７℃で１０分間加温した後、１０ｍｍｏｌ／Ｌ ５，５’－ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（２－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ）２５μＬを加え、５分後までの波長４１２ｎｍにおける吸光度を測定し、ΔＯＤ／ｍｉｎを求めた。総グルタチオン濃度は、酸化型グルタチオンを用いて作成した検量線をもとに算出した。
得られた値を総タンパク量当たりのグルタチオン量に補正した後、下記式によりグルタチオン産生促進率（％）を算出した。結果を表９－１及び９－２に示す。
グルタチオン産生促進率（％）＝Ｂ／Ａ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料を添加しなかった場合の細胞中における総タンパク量当たりのグルタチオン量（対照）
Ｂ ： 被験試料を添加した場合の細胞中における総タンパク量当たりのグルタチオン量
培養後、１％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭに溶解した被験試料（試料濃度は下記表９－１及び９－２を参照）を各ウェルに２００μＬ添加し、さらに２４時間培養した。なお、対照として、被験試料無添加の１％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭを用いて同様に培養した。
培養終了後、各ウェルから培地を除去し、３００μＬのＰＢＳ（－）緩衝液にて洗浄した後、１５０μＬのＭ－ＰＥＲ（ＰＩＥＲＣＥ社製）を用いて細胞を溶解した。
このうちの１００μＬを用いて総グルタチオンの定量を行った。すなわち、９６ウェルプレートに、溶解した細胞抽出液１００μＬ、０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液５０μＬ、２ｍｍｏｌ／Ｌ ＮＡＤＰＨ ２５μＬ、及び３．２ｕｎｉｔｓ／ｍＬのグルタチオンレダクターゼ２５μＬを加え、３７℃で１０分間加温した後、１０ｍｍｏｌ／Ｌ ５，５’－ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（２－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｉｃ ａｃｉｄ）２５μＬを加え、５分後までの波長４１２ｎｍにおける吸光度を測定し、ΔＯＤ／ｍｉｎを求めた。総グルタチオン濃度は、酸化型グルタチオンを用いて作成した検量線をもとに算出した。
得られた値を総タンパク量当たりのグルタチオン量に補正した後、下記式によりグルタチオン産生促進率（％）を算出した。結果を表９－１及び９－２に示す。
グルタチオン産生促進率（％）＝Ｂ／Ａ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料を添加しなかった場合の細胞中における総タンパク量当たりのグルタチオン量（対照）
Ｂ ： 被験試料を添加した場合の細胞中における総タンパク量当たりのグルタチオン量
【0154】
【表9-1】
【0155】
【表9-2】
【0156】
表９－１及び９－２の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、皮膚線維芽細胞における優れたグルタチオン産生促進作用を有することが確認された。
【0157】
（試験例１０：トランスグルタミナーゼ－１（ＴＧＭ－１） ｍＲＮＡ発現促進作用試験）
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＴＧＭ－１ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＴＧＭ－１ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
【0158】
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、ＫＧＭを用いて６ウェルプレートに３．０×１０５細胞／２ｍＬずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩培養した。
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表１０－１及び１０－２を参照）を各ウェルに２ｍＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培地を除去し、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＴＧＭ－１及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅｓ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＴＧＭ－１ ｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＴＧＭ－１ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表１０－１及び１０－２に示す。
ＴＧＭ－１ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表１０－１及び１０－２を参照）を各ウェルに２ｍＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培地を除去し、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＴＧＭ－１及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅｓ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＴＧＭ－１ ｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＴＧＭ－１ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表１０－１及び１０－２に示す。
ＴＧＭ－１ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
【0159】
【表10-1】
【0160】
【表10-2】
【0161】
表１０－１及び１０－２の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、優れたＴＧＭ－１ ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認された。
【0162】
（試験例１１：フィラグリン（ＦＬＧ） ｍＲＮＡ発現促進作用試験）
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＦＬＧ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＦＬＧ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
【0163】
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、ＫＧＭを用いて６ウェルプレートに３．０×１０５細胞／２ｍＬずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩養した。
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表１１－１及び１１－２を参照）を各ウェルに２ｍＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培地を除去し、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＦＬＧ及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅｓ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＦＬＧ ｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＦＬＧ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表１１－１及び１１－２に示す。
ＦＬＧ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表１１－１及び１１－２を参照）を各ウェルに２ｍＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培地を除去し、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＦＬＧ及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅｓ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＦＬＧ ｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＦＬＧ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表１１－１及び１１－２に示す。
ＦＬＧ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
【0164】
【表11-1】
【0165】
【表11-2】
【0166】
表１１－１及び１１－２の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、優れたＦＬＧ ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認された。
【0167】
（試験例１２：アクアポリン３（ＡＱＰ３） ｍＲＮＡ発現促進作用試験）
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
【0168】
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、ＫＧＭを用いて６ウェルプレートに３．０×１０５細胞／２ｍＬずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩養した。
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表１２－１及び１２－２を参照）を各ウェルに２ｍＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培地を除去し、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＡＱＰ３及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅｓ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＡＱＰ３ ｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表１２－１及び１２－２に示す。
ＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表１２－１及び１２－２を参照）を各ウェルに２ｍＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培地を除去し、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＡＱＰ３及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅｓ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＡＱＰ３ ｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表１２－１及び１２－２に示す。
ＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
【0169】
【表12-1】
【0170】
【表12-2】
【0171】
表１２－１及び１２－２の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、優れたＡＱＰ３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認された。
【0172】
（試験例１３：ヒアルロン酸合成酵素３（ＨＡＳ３） ｍＲＮＡ発現促進作用試験）
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
【0173】
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、ＫＧＭを用いて６ウェルプレートに３．０×１０５細胞／２ｍＬずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩養した。
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表１３－１及び１３－２を参照）を各ウェルに２ｍＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培地を除去し、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＨＡＳ３及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅｓ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＨＡＳ３ ｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表１３－１及び１３－２に示す。
ＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表１３－１及び１３－２を参照）を各ウェルに２ｍＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培地を除去し、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＨＡＳ３及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅｓ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＨＡＳ３ ｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表１３－１及び１３－２に示す。
ＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
【0174】
【表13-1】
【0175】
【表13-2】
【0176】
表１３－１及び１３－２の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、優れたＨＡＳ３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認された。
【0177】
（試験例１４：クローディン４（ＣＬＤＮ４） ｍＲＮＡ発現促進作用試験）
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＣＬＤＮ４ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＣＬＤＮ４ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
【0178】
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、ＫＧＭを用いて６ウェルプレートに３．０×１０５／２ｍＬずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩養した。
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表１４－１及び１４－２を参照）を各ウェルに２ｍＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培地を除去し、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＣＬＤＮ４及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅｓ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＣＬＤＮ４ ｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＣＬＤＮ４ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表１４－１及び１４－２に示す。
ＣＬＤＮ４ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表１４－１及び１４－２を参照）を各ウェルに２ｍＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培地を除去し、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＣＬＤＮ４及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅｓ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＣＬＤＮ４ ｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＣＬＤＮ４ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表１４－１及び１４－２に示す。
ＣＬＤＮ４ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
【0179】
【表14-1】
【0180】
【表14-2】
【0181】
表１４－１及び１４－２の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、優れたＣＬＤＮ４ ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認された。
【0182】
（試験例１５：オクルディン（ＯＣＬＮ） ｍＲＮＡ発現促進作用試験）
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＯＣＬＮ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＯＣＬＮ ｍＲＮＡ発現促進作用を試験した。
【0183】
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、ＫＧＭを用いて６ウェルプレートに３．０×１０５細胞／２ｍＬずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２下で一晩養した。
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表１５－１及び１５－２を参照）を各ウェルに２ｍＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培地を除去し、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＯＣＬＮ及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅｓ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＯＣＬＮ ｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＯＣＬＮ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表１５－１及び１５－２に示す。
ＯＣＬＮ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
一晩培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表１５－１及び１５－２を参照）を各ウェルに２ｍＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培地を除去し、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製）にてトータルＲＮＡを抽出し、波長２６０ｎｍにおける吸光度からＲＮＡ量を計算し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、ＯＣＬＮ及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅｓ ＳｙｓｔｅｍＩＩＩ（Ｔａｋａｒａ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。ＯＣＬＮ ｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりＯＣＬＮ ｍＲＮＡ発現促進率を算出した。結果を表１５－１及び１５－２に示す。
ＯＣＬＮ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値
【0184】
【表15-1】
【0185】
【表15-2】
【0186】
表１５－１及び１５－２の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、優れたＯＣＬＮ ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認された。
【0187】
（試験例１６：最終糖化産物（ＡＧＥｓ）形成抑制作用試験）
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＡＧＥｓ形成抑制作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＡＧＥｓ形成抑制作用を試験した。
【0188】
９６ウェルのＩ型コラーゲンコートプレートにＰＢＳ（－）にて調製した０．２ｍｏｌ／ＬのＤ（－）－リボース及び各濃度の被験試料（濃度は下記表１６－１及び１６－２を参照）の混合液を１００μＬ添加し、３７℃で２０日間静置し、ＡＧＥｓを形成させた。このとき、陰性対照としてＰＢＳ（－）のみを添加したもの、陽性対照としてＤ（－）－リボースのみを添加したものを同様に静置した。
静置後、抗ＡＧＥｓ抗体（トランスジェニック社製）を用いたＥＬＩＳＡ法によりＡＧＥｓ量を測定した。
得られた結果から、下記式によりＡＧＥｓ形成抑制率を算出した。結果を表１６－１及び１６－２に示す。
ＡＧＥｓ形成抑制率（％）＝｛（Ｂ－Ｃ）／（Ｂ－Ａ）｝×１００
上記式中のＡ～Ｃは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 陰性対照の波長４０５ｎｍにおける吸光度
Ｂ ： 陽性対照の波長４０５ｎｍにおける吸光度
Ｃ ： 被験試料添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度
静置後、抗ＡＧＥｓ抗体（トランスジェニック社製）を用いたＥＬＩＳＡ法によりＡＧＥｓ量を測定した。
得られた結果から、下記式によりＡＧＥｓ形成抑制率を算出した。結果を表１６－１及び１６－２に示す。
ＡＧＥｓ形成抑制率（％）＝｛（Ｂ－Ｃ）／（Ｂ－Ａ）｝×１００
上記式中のＡ～Ｃは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 陰性対照の波長４０５ｎｍにおける吸光度
Ｂ ： 陽性対照の波長４０５ｎｍにおける吸光度
Ｃ ： 被験試料添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度
【0189】
【表16-1】
【0190】
【表16-2】
【0191】
表１６－１及び１６－２の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、優れたＡＧＥｓ形成抑制作用を有することが確認された。
【0192】
（試験例１７：最終糖化産物（ＡＧＥｓ）分解促進作用試験）
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＡＧＥｓ分解促進作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＡＧＥｓ分解促進作用を試験した。
【0193】
９６ウェルのＩ型コラーゲンコートプレートにＰＢＳ（－）にて調製した０．２ｍｏｌ／ＬのＤ（－）－リボースを１００μＬ添加し、３７℃で２週間静置し、ＡＧＥｓを形成させた。このとき、陰性対照としてＰＢＳ（－）のみを添加したものを同様に静置した。
２週間静置後、ＰＢＳ（－）にて調製した被験試料（濃度は下記表１７－１及び１７－２を参照）を１００μＬずつ添加し、さらに２０日間静置した。このとき、陽性対照としてＤ（－）－リボース処理後、被験試料の代わりにＰＢＳ（－）を添加したものを同様に静置した。また、陰性対照は引続きＰＢＳ（－）を処理した。
２０日間静置後、抗ＡＧＥｓ抗体（トランスジェニック社製）を用いたＥＬＩＳＡ法によりＡＧＥｓ量を測定した。
得られた結果から、下記式によりＡＧＥｓ分解促進率を算出した。結果を表１７－１及び１７－２に示す。
ＡＧＥｓ分解促進率（％）＝｛（Ｂ－Ｃ）／（Ｂ－Ａ）｝×１００
上記式中のＡ～Ｃは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 陰性対照の波長４０５ｎｍにおける吸光度
Ｂ ： 陽性対照の波長４０５ｎｍにおける吸光度
Ｃ ： 被験試料添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度
２週間静置後、ＰＢＳ（－）にて調製した被験試料（濃度は下記表１７－１及び１７－２を参照）を１００μＬずつ添加し、さらに２０日間静置した。このとき、陽性対照としてＤ（－）－リボース処理後、被験試料の代わりにＰＢＳ（－）を添加したものを同様に静置した。また、陰性対照は引続きＰＢＳ（－）を処理した。
２０日間静置後、抗ＡＧＥｓ抗体（トランスジェニック社製）を用いたＥＬＩＳＡ法によりＡＧＥｓ量を測定した。
得られた結果から、下記式によりＡＧＥｓ分解促進率を算出した。結果を表１７－１及び１７－２に示す。
ＡＧＥｓ分解促進率（％）＝｛（Ｂ－Ｃ）／（Ｂ－Ａ）｝×１００
上記式中のＡ～Ｃは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 陰性対照の波長４０５ｎｍにおける吸光度
Ｂ ： 陽性対照の波長４０５ｎｍにおける吸光度
Ｃ ： 被験試料添加時の波長４０５ｎｍにおける吸光度
【0194】
【表17-1】
【0195】
【表17-2】
【0196】
表１７－１及び１７－２の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、優れたＡＧＥｓ分解促進作用を有することが確認された。
【0197】
（試験例１８：腫瘍壊死因子（ＴＮＦ－α）産生抑制作用試験）
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＴＮＦ－α産生抑制作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ＴＮＦ－α産生抑制作用を試験した。
【0198】
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭを用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０６細胞／ｍＬの濃度になるように１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェル当たり１００μＬ播種し、４時間培養した。
培養終了後、終濃度０．５％のＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで溶解した被験試料（濃度は下記表１８－１及び１８－２を参照）を各ウェルに１００μＬ添加し、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ、Ｅ． ｃｏｌｉ ０１１１；Ｂ４、ＤＩＦＣＯ社製）を１００μＬ加え、２４時間培養した。なお、被験試料を添加しない以外は同様にして処理したものをコントロールとした。
培養終了後、各ウェルの培養上清中のＴＮＦ－α量を、サンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いて測定した。
得られた結果から、下記式によりＴＮＦ－α産生抑制率を算出した。結果を表１８－１及び１８－２に示す。
ＴＮＦ－α産生抑制率（％）＝（Ｂ－Ａ）／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時のＴＮＦ－α量
Ｂ ： 被験試料無添加時のＴＮＦ－α量
培養終了後、終濃度０．５％のＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで溶解した被験試料（濃度は下記表１８－１及び１８－２を参照）を各ウェルに１００μＬ添加し、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ、Ｅ． ｃｏｌｉ ０１１１；Ｂ４、ＤＩＦＣＯ社製）を１００μＬ加え、２４時間培養した。なお、被験試料を添加しない以外は同様にして処理したものをコントロールとした。
培養終了後、各ウェルの培養上清中のＴＮＦ－α量を、サンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いて測定した。
得られた結果から、下記式によりＴＮＦ－α産生抑制率を算出した。結果を表１８－１及び１８－２に示す。
ＴＮＦ－α産生抑制率（％）＝（Ｂ－Ａ）／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時のＴＮＦ－α量
Ｂ ： 被験試料無添加時のＴＮＦ－α量
【0199】
【表18-1】
【0200】
【表18-2】
【0201】
表１８－１及び１８－２の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、優れたＴＮＦ－α産生抑制作用を有することが確認された。
【0202】
（試験例１９：ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用試験）
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を試験した。
【0203】
ラット好塩基球白血病細胞（ＲＢＬ－２Ｈ３）を、１５％ＦＢＳ含有Ｓ－ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を４．０×１０５細胞／ｍＬの濃度になるように１５％ＦＢＳ含有Ｓ－ＭＥＭで希釈し、終濃度０．５μＬ／ｍＬとなるようにＤＮＰ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＩｇＥを添加した後、９６ウェルプレートに１ウェル当たり１００μＬ播種し、一晩培養した。
培養後、培地を除去し、シラガニアン緩衝液１００μＬにて洗浄を２回行った。次に、同緩衝液３０μＬ及び同緩衝液にて調製した被験試料（濃度は下記表１９－１及び１９－２を参照）１０μＬを加え、３７℃にて１０分間静置した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のシラガニアン緩衝液４０μＬを用いて同様の操作を行った。
その後、１００ｎｇ／ｍＬ ＤＮＰ－ＢＳＡ溶液１０μＬを加え、３７℃にて１５分間静置し、ヘキソサミニダーゼを遊離させた。その後、９６ウェルプレートを氷上に静置することにより遊離を停止した。
各ウェルの細胞上清１０μＬ及び１ｍｍｏｌ／Ｌ ｐ－ＮＡＧ（ｐ－ニトロフェニル－Ｎ－アセチル－β－Ｄ－グルコサミニド）溶液１０μＬを、新たな９６ウェルプレートに添加し、３７℃で１時間反応させた。
反応終了後、各ウェルに０．１ｍｏｌ／Ｌ Ｎａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３ ２５０μＬを加え、波長４１５ｎｍ及び６５０ｎｍにおける吸光度を測定した。また、空試験として、細胞上清１０μＬと、０．１ｍｏｌ／Ｌ Ｎａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３ ２５０μＬとの混合液の波長４１５ｎｍ及び６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、補正した。
得られた結果から、下記式によりヘキソサミニダーゼ遊離抑制率を算出した。結果を表１９－１及び１９－２に示す。
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）＝｛１－（Ｂ－Ｃ）／Ａ｝×１００
上記式中のＡ～Ｃは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料無添加での波長４１５ｎｍ及び６５０ｎｍにおける吸光度
Ｂ ： 被験試料添加での波長４１５ｎｍ及び６５０ｎｍにおける吸光度
Ｃ ： 被験試料添加、ｐ－ＮＡＧ無添加での波長４１５ｎｍ及び６５０ｎｍにおける吸光度
培養後、培地を除去し、シラガニアン緩衝液１００μＬにて洗浄を２回行った。次に、同緩衝液３０μＬ及び同緩衝液にて調製した被験試料（濃度は下記表１９－１及び１９－２を参照）１０μＬを加え、３７℃にて１０分間静置した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のシラガニアン緩衝液４０μＬを用いて同様の操作を行った。
その後、１００ｎｇ／ｍＬ ＤＮＰ－ＢＳＡ溶液１０μＬを加え、３７℃にて１５分間静置し、ヘキソサミニダーゼを遊離させた。その後、９６ウェルプレートを氷上に静置することにより遊離を停止した。
各ウェルの細胞上清１０μＬ及び１ｍｍｏｌ／Ｌ ｐ－ＮＡＧ（ｐ－ニトロフェニル－Ｎ－アセチル－β－Ｄ－グルコサミニド）溶液１０μＬを、新たな９６ウェルプレートに添加し、３７℃で１時間反応させた。
反応終了後、各ウェルに０．１ｍｏｌ／Ｌ Ｎａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３ ２５０μＬを加え、波長４１５ｎｍ及び６５０ｎｍにおける吸光度を測定した。また、空試験として、細胞上清１０μＬと、０．１ｍｏｌ／Ｌ Ｎａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３ ２５０μＬとの混合液の波長４１５ｎｍ及び６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、補正した。
得られた結果から、下記式によりヘキソサミニダーゼ遊離抑制率を算出した。結果を表１９－１及び１９－２に示す。
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）＝｛１－（Ｂ－Ｃ）／Ａ｝×１００
上記式中のＡ～Ｃは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料無添加での波長４１５ｎｍ及び６５０ｎｍにおける吸光度
Ｂ ： 被験試料添加での波長４１５ｎｍ及び６５０ｎｍにおける吸光度
Ｃ ： 被験試料添加、ｐ－ＮＡＧ無添加での波長４１５ｎｍ及び６５０ｎｍにおける吸光度
【0204】
【表19-1】
【0205】
【表19-2】
【0206】
表１９－１及び１９－２の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、優れたヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有することが確認された。
【0207】
（試験例２０：マウスマクロファージにおけるＰＧＥ２産生抑制作用試験（ＣＯＸ－２活性阻害作用試験））
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）産生抑制作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）産生抑制作用を試験した。
【0208】
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭを用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０５細胞／ｍＬの濃度になるように１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェル当たり１００μＬ播種し、１８時間培養した。
培養終了後、既に存在するシクロオキシゲナーゼ－１（ＣＯＸ－１）及び少量発現しているシクロオキシゲナーゼ－２（ＣＯＸ－２）をアセチル化し失活させるため、培地を５００μｍｏｌ／Ｌアスピリン含有培地に交換し４時間培養した。その後、細胞をＰＢＳ（－）緩衝液で３回洗浄し、終濃度０．５％のＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで溶解した被験試料（濃度は下記表２０－１及び２０－２を参照）を各ウェルに１００μＬ添加した後、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ、Ｅ． ｃｏｌｉ ０１１１；Ｂ４、ＤＩＦＣＯ社製）を１００μＬ添加し、１６時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加の終濃度０．５％のＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて同様に培養した。
培養終了後、各ウェルの培養上清中のプロスタグランジンＥ２量を、ＰＧＥ２ ＥＩＡ Ｋｉｔ（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ社製）を用いて定量した。
得られた結果から、下記式によりＰＧＥ２産生抑制率を算出した。結果を表２０－１及び２０－２に示す。
ＰＧＥ２産生抑制率（％）＝｛１－（Ａ－Ｃ）／（Ｂ－Ｃ）｝×１００
上記式中のＡ～Ｃは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加・ＬＰＳ刺激時のプロスタグランジンＥ２量
Ｂ ： 被験試料無添加・ＬＰＳ刺激時のプロスタグランジンＥ２量
Ｃ ： 被験試料無添加・ＬＰＳ無刺激時のプロスタグランジンＥ２量
培養終了後、既に存在するシクロオキシゲナーゼ－１（ＣＯＸ－１）及び少量発現しているシクロオキシゲナーゼ－２（ＣＯＸ－２）をアセチル化し失活させるため、培地を５００μｍｏｌ／Ｌアスピリン含有培地に交換し４時間培養した。その後、細胞をＰＢＳ（－）緩衝液で３回洗浄し、終濃度０．５％のＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭで溶解した被験試料（濃度は下記表２０－１及び２０－２を参照）を各ウェルに１００μＬ添加した後、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ、Ｅ． ｃｏｌｉ ０１１１；Ｂ４、ＤＩＦＣＯ社製）を１００μＬ添加し、１６時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加の終濃度０．５％のＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭ培地を用いて同様に培養した。
培養終了後、各ウェルの培養上清中のプロスタグランジンＥ２量を、ＰＧＥ２ ＥＩＡ Ｋｉｔ（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ社製）を用いて定量した。
得られた結果から、下記式によりＰＧＥ２産生抑制率を算出した。結果を表２０－１及び２０－２に示す。
ＰＧＥ２産生抑制率（％）＝｛１－（Ａ－Ｃ）／（Ｂ－Ｃ）｝×１００
上記式中のＡ～Ｃは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加・ＬＰＳ刺激時のプロスタグランジンＥ２量
Ｂ ： 被験試料無添加・ＬＰＳ刺激時のプロスタグランジンＥ２量
Ｃ ： 被験試料無添加・ＬＰＳ無刺激時のプロスタグランジンＥ２量
【0209】
【表20-1】
【0210】
【表20-2】
【0211】
表２０－１及び２０－２の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、優れたＰＧＥ２産生抑制作用（ＣＯＸ－２活性阻害作用）を有することが確認された。
【0212】
（試験例２１：毛乳頭細胞増殖促進作用試験）
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、毛乳頭細胞増殖促進作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、毛乳頭細胞増殖促進作用を試験した。
【0213】
正常ヒト頭髪毛乳頭細胞を、１％ＦＣＳ及び増殖添加剤を含有した毛乳頭細胞増殖培地（東洋紡社製）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコＭＥＭを用いて１．０×１０４細胞／ｍＬの濃度になるように希釈した後、コラーゲンコートした９６ウェルプレートに１ウェル当たり２００μＬ播種し、３日間培養した。
培養終了後、培地を除去し、無血清ＤＭＥＭに溶解した被験試料（濃度は下記表２１－１及び２１－２を参照）を各ウェルに２００μＬ添加し、さらに４日間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加の無血清ＤＭＥＭを用いて同様に培養した。
毛乳頭細胞増殖促進作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。すなわち、培養終了後、培地を除去し、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで無血清のＤＭＥＭに溶解したＭＴＴを各ウェルに１００μＬ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２－プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。
得られた結果から、下記式により毛乳頭細胞増殖促進率を算出した。結果を表２１－１及び２１－２に示す。
毛乳頭細胞増殖促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の細胞でのブルーホルマザン生成量
Ｂ ： 被験試料無添加時の細胞でのブルーホルマザン生成量
培養終了後、培地を除去し、無血清ＤＭＥＭに溶解した被験試料（濃度は下記表２１－１及び２１－２を参照）を各ウェルに２００μＬ添加し、さらに４日間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加の無血清ＤＭＥＭを用いて同様に培養した。
毛乳頭細胞増殖促進作用は、ＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。すなわち、培養終了後、培地を除去し、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで無血清のＤＭＥＭに溶解したＭＴＴを各ウェルに１００μＬ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２－プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。
得られた結果から、下記式により毛乳頭細胞増殖促進率を算出した。結果を表２１－１及び２１－２に示す。
毛乳頭細胞増殖促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の細胞でのブルーホルマザン生成量
Ｂ ： 被験試料無添加時の細胞でのブルーホルマザン生成量
【0214】
【表21-1】
【0215】
【表21-2】
【0216】
表２１－１及び２１－２の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、優れた毛乳頭細胞増殖促進作用を有することが確認された。
【0217】
（試験例２２：ＳＯＤ様作用試験）
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、スーパーオキシドディスムターゼ（ＳＯＤ）様作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、スーパーオキシドディスムターゼ（ＳＯＤ）様作用を試験した。
【0218】
試験管に、０．０５ｍｏｌ／Ｌの炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ１０．２）２．４ｍＬ、３ｍｍｏｌ／Ｌのキサンチン０．１ｍＬ、３ｍｍｏｌ／ＬのＥＤＴＡ ０．１ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン０．１ｍＬ、及び０．７５ｍｍｏｌ／Ｌのニトロブルーテトラゾリウム０．１ｍＬを加え、これに被験試料溶液（終濃度は下記表２２－１及び２２－２を参照）０．１ｍＬを添加し、２５℃で１０分間放置した。次いで、キサンチンオキシダーゼ溶液０．１ｍＬを加えて素早く攪拌し、２５℃で２０分間反応した。その後、６ｍｍｏｌ／Ｌの塩化銅０．１ｍＬを加えて反応を停止させ、波長５６０ｎｍにおける吸光度を測定した。また、コントロールとして、被験試料無添加の溶媒のみ（コントロール溶液）を添加して同様の操作を行った。
得られた結果から、下記式によりスーパーオキサイド消去率を算出した。結果を表２２－１及び２２－２に示す。
スーパーオキサイド消去率（％）＝｛１－（Ａ－Ｂ）／（Ｃ－Ｄ）｝×１００
上記式中のＡ～Ｄは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加、酵素溶液添加時の波長５６０ｎｍにおける吸光度
Ｂ ： 被験試料添加、酵素溶液無添加時の波長５６０ｎｍにおける吸光度
Ｃ ： 被験試料無添加（コントロール）、酵素溶液添加時の波長５６０ｎｍにおける吸光度
Ｄ ： 被験試料無添加（コントロール）、酵素溶液無添加時の波長５６０ｎｍにおける吸光度
得られた結果から、下記式によりスーパーオキサイド消去率を算出した。結果を表２２－１及び２２－２に示す。
スーパーオキサイド消去率（％）＝｛１－（Ａ－Ｂ）／（Ｃ－Ｄ）｝×１００
上記式中のＡ～Ｄは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加、酵素溶液添加時の波長５６０ｎｍにおける吸光度
Ｂ ： 被験試料添加、酵素溶液無添加時の波長５６０ｎｍにおける吸光度
Ｃ ： 被験試料無添加（コントロール）、酵素溶液添加時の波長５６０ｎｍにおける吸光度
Ｄ ： 被験試料無添加（コントロール）、酵素溶液無添加時の波長５６０ｎｍにおける吸光度
【0219】
【表22-1】
【0220】
【表22-2】
【0221】
表２２－１及び２２－２の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、優れたスーパーオキサイド消去作用を有することが確認された。
【0222】
（試験例２３：ＤＰＰＨラジカル消去作用試験）
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、非常に安定なラジカルであるｄｉｐｈｅｎｙｌ－ｐ－ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ（ＤＰＰＨ）を使用してラジカル消去作用を試験した。
前記ボタンボウフウ抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、非常に安定なラジカルであるｄｉｐｈｅｎｙｌ－ｐ－ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ（ＤＰＰＨ）を使用してラジカル消去作用を試験した。
【0223】
１５０μｍｏｌ／ＬのＤＰＰＨエタノール溶液３ｍＬに被験試料溶液３ｍＬ（濃度は下記表２３－１及び２３－２を参照）を加え、容器を密栓した後、振り混ぜ、３０分間放置した。放置後、波長５２０ｎｍにおける吸光度を測定した。また、コントロールとして、被験試料無添加の溶媒のみ（コントロール溶液）を加えて同様の操作を行った。
得られた結果から、下記式によりＤＰＰＨラジカル消去率（ＤＰＰＨ消去率と称することがある。）を算出した。結果を表２３－１及び２３－２に示す。
ＤＰＰＨ消去率（％）＝｛Ａ－（Ｂ－Ｃ）｝／Ａ×１００
上記式中のＡ～Ｃは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料無添加（コントロール）、ＤＰＰＨ溶液添加時の波長５２０ｎｍにおける吸光度
Ｂ ： 被験試料添加、ＤＰＰＨ溶液添加時の波長５２０ｎｍにおける吸光度
Ｃ ： 被験試料添加、ＤＰＰＨ溶液無添加時の波長５２０ｎｍにおける吸光度
得られた結果から、下記式によりＤＰＰＨラジカル消去率（ＤＰＰＨ消去率と称することがある。）を算出した。結果を表２３－１及び２３－２に示す。
ＤＰＰＨ消去率（％）＝｛Ａ－（Ｂ－Ｃ）｝／Ａ×１００
上記式中のＡ～Ｃは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料無添加（コントロール）、ＤＰＰＨ溶液添加時の波長５２０ｎｍにおける吸光度
Ｂ ： 被験試料添加、ＤＰＰＨ溶液添加時の波長５２０ｎｍにおける吸光度
Ｃ ： 被験試料添加、ＤＰＰＨ溶液無添加時の波長５２０ｎｍにおける吸光度
【0224】
【表23-1】
【0225】
【表23-2】
【0226】
表２３－１及び２３－２の結果から、ボタンボウフウ抽出物は、優れたラジカル消去作用を有することが確認された。
【0227】
（配合例１）
常法により、以下の組成を有する錠剤を製造した。
・ ボタンボウフウ抽出物 ５．０ｍｇ
（製造例３で製造した抽出物）
・ ドロマイト ８３．４ｍｇ
（カルシウム２０％、マグネシウム１０％含有）
・ カゼインホスホペプチド １６．７ｍｇ
・ ビタミンＣ ３３．４ｍｇ
・ マルチトール １３６．８ｍｇ
・ コラーゲン １２．７ｍｇ
・ ショ糖脂肪酸エステル １２．０ｍｇ
常法により、以下の組成を有する錠剤を製造した。
・ ボタンボウフウ抽出物 ５．０ｍｇ
（製造例３で製造した抽出物）
・ ドロマイト ８３．４ｍｇ
（カルシウム２０％、マグネシウム１０％含有）
・ カゼインホスホペプチド １６．７ｍｇ
・ ビタミンＣ ３３．４ｍｇ
・ マルチトール １３６．８ｍｇ
・ コラーゲン １２．７ｍｇ
・ ショ糖脂肪酸エステル １２．０ｍｇ
【0228】
（配合例２）
常法により、以下の組成を有する経口液状製剤を製造した。
＜１アンプル（１本１００ｍＬ）中の組成＞
・ ボタンボウフウ抽出物 ０．３質量％
（製造例５で製造した抽出物）
・ ソルビット １２．０質量％
・ 安息香酸ナトリウム ０．１質量％
・ 香料 １．０質量％
・ 硫酸カルシウム ０．５質量％
・ 精製水 残部
常法により、以下の組成を有する経口液状製剤を製造した。
＜１アンプル（１本１００ｍＬ）中の組成＞
・ ボタンボウフウ抽出物 ０．３質量％
（製造例５で製造した抽出物）
・ ソルビット １２．０質量％
・ 安息香酸ナトリウム ０．１質量％
・ 香料 １．０質量％
・ 硫酸カルシウム ０．５質量％
・ 精製水 残部
【0229】
（配合例３）
常法により、以下の組成を有する乳液を製造した。
・ ボタンボウフウ抽出物（製造例１で製造した抽出物） ０．０１ｇ
・ ホホバオイル ４．００ｇ
・ １，３－ブチレングリコール ３．００ｇ
・ アルブチン ３．００ｇ
・ ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ２．５０ｇ
・ オリーブオイル ２．００ｇ
・ スクワラン ２．００ｇ
・ セタノール ２．００ｇ
・ モノステアリン酸グリセリル ２．００ｇ
・ オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） ２．００ｇ
・ パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
・ グリチルリチン酸ステアリル ０．１０ｇ
・ 黄杞エキス ０．１０ｇ
・ グリチルリチン酸ジカリウム ０．１０ｇ
・ イチョウ葉エキス ０．１０ｇ
・ コンキオリン ０．１０ｇ
・ オウバクエキス ０．１０ｇ
・ カミツレエキス ０．１０ｇ
・ 香料 ０．０５ｇ
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）
常法により、以下の組成を有する乳液を製造した。
・ ボタンボウフウ抽出物（製造例１で製造した抽出物） ０．０１ｇ
・ ホホバオイル ４．００ｇ
・ １，３－ブチレングリコール ３．００ｇ
・ アルブチン ３．００ｇ
・ ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ２．５０ｇ
・ オリーブオイル ２．００ｇ
・ スクワラン ２．００ｇ
・ セタノール ２．００ｇ
・ モノステアリン酸グリセリル ２．００ｇ
・ オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） ２．００ｇ
・ パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
・ グリチルリチン酸ステアリル ０．１０ｇ
・ 黄杞エキス ０．１０ｇ
・ グリチルリチン酸ジカリウム ０．１０ｇ
・ イチョウ葉エキス ０．１０ｇ
・ コンキオリン ０．１０ｇ
・ オウバクエキス ０．１０ｇ
・ カミツレエキス ０．１０ｇ
・ 香料 ０．０５ｇ
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【0230】
（配合例４）
常法により、以下の組成を有するクリームを製造した。
・ ボタンボウフウ抽出物（製造例２で製造した抽出物） ０．０５ｇ
・ クジンエキス ０．１ｇ
・ オウゴンエキス ０．１ｇ
・ 流動パラフィン ５．０ｇ
・ サラシミツロウ ４．０ｇ
・ スクワラン １０．０ｇ
・ セタノール ３．０ｇ
・ ラノリン ２．０ｇ
・ ステアリン酸 １．０ｇ
・ オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） １．５ｇ
・ モノステアリン酸グリセリル ３．０ｇ
・ 油溶性甘草エキス ０．１ｇ
・ １，３－ブチレングリコール ６．０ｇ
・ パラオキシ安息香酸メチル １．５ｇ
・ 香料 ０．１ｇ
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）
常法により、以下の組成を有するクリームを製造した。
・ ボタンボウフウ抽出物（製造例２で製造した抽出物） ０．０５ｇ
・ クジンエキス ０．１ｇ
・ オウゴンエキス ０．１ｇ
・ 流動パラフィン ５．０ｇ
・ サラシミツロウ ４．０ｇ
・ スクワラン １０．０ｇ
・ セタノール ３．０ｇ
・ ラノリン ２．０ｇ
・ ステアリン酸 １．０ｇ
・ オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） １．５ｇ
・ モノステアリン酸グリセリル ３．０ｇ
・ 油溶性甘草エキス ０．１ｇ
・ １，３－ブチレングリコール ６．０ｇ
・ パラオキシ安息香酸メチル １．５ｇ
・ 香料 ０．１ｇ
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【0231】
（配合例５）
常法により、以下の組成を有する美容液を製造した。
・ ボタンボウフウ抽出物（製造例４で製造した抽出物） ０．０１ｇ
・ カミツレエキス ０．１ｇ
・ キサンタンガム ０．３ｇ
・ ヒドロキシエチルセルロース ０．１ｇ
・ カルボキシビニルポリマー ０．１ｇ
・ １，３－ブチレングリコール ４．０ｇ
・ グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ
・ グリセリン ２．０ｇ
・ 水酸化カリウム ０．２５ｇ
・ 香料 ０．０１ｇ
・ 防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル） ０．１５ｇ
・ エタノール ２．０ｇ
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）
常法により、以下の組成を有する美容液を製造した。
・ ボタンボウフウ抽出物（製造例４で製造した抽出物） ０．０１ｇ
・ カミツレエキス ０．１ｇ
・ キサンタンガム ０．３ｇ
・ ヒドロキシエチルセルロース ０．１ｇ
・ カルボキシビニルポリマー ０．１ｇ
・ １，３－ブチレングリコール ４．０ｇ
・ グリチルリチン酸ジカリウム ０．１ｇ
・ グリセリン ２．０ｇ
・ 水酸化カリウム ０．２５ｇ
・ 香料 ０．０１ｇ
・ 防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル） ０．１５ｇ
・ エタノール ２．０ｇ
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【0232】
（配合例６）
常法により、以下の組成を有するヘアトニックを製造した。
・ ボタンボウフウ抽出物（製造例６で製造した抽出物） ０．４ｇ
・ 酢酸トコフェロール 適量
・ セファラチン ０．００２ｇ
・ イソプロピルメチルフェノール ０．１ｇ
・ ヒアルロン酸ナトリウム ０．１５ｇ
・ グリセリン １５．０ｇ
・ エタノール １５．０ｇ
・ 香料 適量
・ キレート剤（エデト酸ナトリウム） 適量
・ 防腐剤（ヒノキチオール） 適量
・ 可溶化剤（ポリオキシエチレンセチルエーテル） 適量
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）
常法により、以下の組成を有するヘアトニックを製造した。
・ ボタンボウフウ抽出物（製造例６で製造した抽出物） ０．４ｇ
・ 酢酸トコフェロール 適量
・ セファラチン ０．００２ｇ
・ イソプロピルメチルフェノール ０．１ｇ
・ ヒアルロン酸ナトリウム ０．１５ｇ
・ グリセリン １５．０ｇ
・ エタノール １５．０ｇ
・ 香料 適量
・ キレート剤（エデト酸ナトリウム） 適量
・ 防腐剤（ヒノキチオール） 適量
・ 可溶化剤（ポリオキシエチレンセチルエーテル） 適量
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【0233】
（配合例７）
常法により、以下の組成を有するシャンプーを製造した。
・ ボタンボウフウ抽出物（製造例３で製造した抽出物） ０．５ｇ
・ マジョラム抽出物 １．０ｇ
・ ウメ果実部抽出物 ０．２ｇ
・ ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム １０．０ｇ
・ ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン １０．０ｇ
・ ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム ２０．０ｇ
・ ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド ４．０ｇ
・ プロピレングリコール ２．０ｇ
・ 香料 適量
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）
常法により、以下の組成を有するシャンプーを製造した。
・ ボタンボウフウ抽出物（製造例３で製造した抽出物） ０．５ｇ
・ マジョラム抽出物 １．０ｇ
・ ウメ果実部抽出物 ０．２ｇ
・ ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム １０．０ｇ
・ ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン １０．０ｇ
・ ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム ２０．０ｇ
・ ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド ４．０ｇ
・ プロピレングリコール ２．０ｇ
・ 香料 適量
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）