特開 2024-138235 抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の薬学的組成物及び使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2024138235

(43)【公開日】2024-10-08

(54)【発明の名称】抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の薬学的組成物及び使用方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20241001BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 47/20 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20241001BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20241001BHJP

   C07K 19/00 20060101ALN20241001BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20241001BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20241001BHJP

   C12N 15/62 20060101ALN20241001BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 N ZNA

A61P35/00

A61K9/08

A61K47/20

A61K47/22

A61K47/18

A61K47/02

A61K47/26

A61K39/395 N

C07K19/00

C07K16/28

C12N15/13

C12N15/62 Z

【審査請求】未請求

【請求項の数】32

【出願形態】ＯＬ

【外国語出願】

(21)【出願番号】P 2024081582

(22)【出願日】2024-05-20

(62)【分割の表示】P 2023542559の分割

【原出願日】2023-04-12

(31)【優先権主張番号】63/330,748

(32)【優先日】2022-04-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(71)【出願人】

【識別番号】514099673

【氏名又は名称】エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】デュブッフ， ジェレミー ジャン－ピエール

(72)【発明者】

【氏名】ムー， エレン ドロテー

(72)【発明者】

【氏名】ラヴリ， サティヤ クリシュナ キショール

(72)【発明者】

【氏名】シェーンハンマー， カリン

(72)【発明者】

【氏名】ヴォルラース， イローナ エリーザベト

(72)【発明者】

【氏名】ファスト， ラース

(72)【発明者】

【氏名】イルンガルティンガー， マイク

(72)【発明者】

【氏名】プリンツ， ミリアム

(72)【発明者】

【氏名】クィヴェ ネ ボイヨン， アデリン ヴァレンティン

(57)【要約】      （修正有）

【課題】抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の薬学的組成物及びその使用方法を提供する。
【解決手段】液体薬学的組成物であって、約５．０から約６．０の範囲のｐＨで、約１から２５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体；約１０から５０ｍＭの緩衝剤；約≧２００ｍＭの等張化剤；約０～１５ｍＭのメチオニン；及び約≧０．２ｍｇ／ｍｌの界面活性剤；を含み、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、ａ）ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、を含む、液体薬学的組成物とする。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

液体薬学的組成物であって、
約５．０から約６．０の範囲のｐＨで、
約１から２５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体；
約１０から５０ｍＭの緩衝剤；
約≧２００ｍＭの等張化剤；
約０～１５ｍＭのメチオニン；及び
約≧０．２ｍｇ／ｍｌの界面活性剤；
を含み、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、
ａ）ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
を含む、液体薬学的組成物。

【請求項2】

抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の濃度が、約１から５ｍｇ／ｍｌの範囲である、請求項１に記載の液体薬学的組成物。

【請求項3】

抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の濃度が、約０．９～１．１ｍｇ／ｍｌの範囲である、請求項１又は２に記載の液体薬学的組成物。

【請求項4】

抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の濃度が約１ｍｇ／ｍｌである、請求項１から３のいずれか一項に記載の液体薬学的組成物。

【請求項5】

抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、
ａ）配列番号７の重鎖可変領域配列及び配列番号８の軽鎖可変領域配列を含む、ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
ｂ）配列番号１５の重鎖可変領域配列及び配列番号１６の軽鎖可変領域配列を含む、ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の液体薬学的組成物。

【請求項6】

抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、
ａ）ＣＤ３、特にＣＤ３イプシロンに特異的に結合する第１のＦａｂ分子であって、Ｆａｂ軽鎖とＦａｂ重鎖の可変ドメインＶＬとＶＨが互いによって交換されている第１のＦａｂ分子と；
ｂ）ＣＤ２０に特異的に結合する第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子であって、第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬでは、１２４位のアミノ酸がリジン（Ｋ）により置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、１２３位のアミノ酸がリジン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）により、特にアルギニン（Ｒ）により置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＨ１では、１４７位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されており（ＥＵ番号付け）、２１３位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されている（ＥＵ番号付け）、第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子と；
ｃ）安定な会合が可能な第１のサブユニットと第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインと；
を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の液体薬学的組成物。

【請求項7】

抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体がグロフィタマブである、請求項１から６のいずれか一項に記載の液体薬学的組成物。

【請求項8】

緩衝剤が、ヒスチジンバッファー、任意選択的にはヒスチジンＨＣｌバッファーである、請求項１から７のいずれか一項に記載の液体薬学的組成物。

【請求項9】

緩衝剤の濃度が約１５から２５ｍＭである、請求項１から８のいずれか一項に記載の液体薬学的組成物。

【請求項10】

緩衝剤の濃度が約２０ｍＭである、請求項１から９のいずれか一項に記載の液体薬学的組成物。

【請求項11】

緩衝剤が約５．２から約５．８のｐＨを提供する、請求項１から１０のいずれか一項に記載の液体薬学的組成物。

【請求項12】

等張化剤が、塩、糖類、及びアミノ酸の群より選択される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の液体薬学的組成物。

【請求項13】

等張化剤がスクロース又は塩化ナトリウムのいずれかである、請求項１２に記載の液体薬学的組成物。

【請求項14】

等張化剤が約２００ｍＭ以上の濃度のスクロースである、請求項１３に記載の液体薬学的組成物。

【請求項15】

等張化剤が約２００ｍＭ～２８０ｍＭの濃度のスクロースである、請求項１３又は１４に記載の液体薬学的組成物。

【請求項16】

等張化剤が約２４０ｍＭの濃度のスクロースである、請求項１３から１５のいずれか一項に記載の液体薬学的組成物。

【請求項17】

メチオニンの濃度が約５～１５ｍＭである、請求項１から１６のいずれか一項に記載の液体薬学的組成物。

【請求項18】

メチオニンの濃度が約１０ｍＭである、請求項１７に記載の液体薬学的組成物。

【請求項19】

界面活性剤の濃度が約０．２～０．８ｍｇ／ｍｌである、請求項１から１８のいずれか一項に記載の液体薬学的組成物。

【請求項20】

界面活性剤が、ポリソルベート２０又はポロキサマー１８８である、請求項１から１９のいずれか一項に記載の液体薬学的組成物。

【請求項21】

界面活性剤が、０．２～０．８ｍｇ／ｍｌの濃度のポリソルベート２０である、請求項２０に記載の液体薬学的組成物。

【請求項22】

界面活性剤が、約０．５ｍｇ／ｍｌの濃度のポリソルベート２０である、請求項２１に記載の液体薬学的組成物。

【請求項23】

液体薬学的組成物であって、
約５から約６のｐＨで、
約１から５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と；
約１５～２５ｍＭのヒスチジンバッファーと；
約２００～２８０ｍＭのスクロースと；
約０～１５ｍＭのメチオニンと；
約０．２～０．８ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０と；
を含む、請求項１から２２のいずれか一項に記載の液体薬学的組成物。

【請求項24】

液体薬学的組成物であって、
約５．５のｐＨで、
約１ｍｇ／ｍｌのグロフィタマブと；
約２０ｍＭのヒスチジンバッファーと；
約２４０ｍＭのスクロースと；
約１０ｍＭのメチオニンと；
約０．５ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０と；
を含む、請求項１から２３のいずれか一項に記載の液体薬学的組成物。

【請求項25】

抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体に対するＰＳ２０のモル比が１００未満である、請求項１から２４のいずれか一項に記載の液体薬学的組成物。

【請求項26】

抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体に対するＰＳ２０のモル比が５０と１００の間である、請求項２５に記載の液体薬学的組成物。

【請求項27】

抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体に対するＰＳ２０のモル比が約７９である、請求項２６に記載の液体薬学的組成物。

【請求項28】

細胞増殖性障害を治療するのに有用な医薬の調製のための、請求項１から２７のいずれか一項に記載の液体薬学的組成物の使用。

【請求項29】

細胞増殖性障害の治療又はその進行の遅延を必要とする対象において、それに使用するための請求項１から２７のいずれか一項に記載の薬学的組成物。

【請求項30】

細胞増殖性障害の治療又はその進行の遅延を必要とする対象における、その治療方法又は遅延方法であって、対象に有効量の請求項１から２７のいずれか一項に記載の液体薬学的組成物を投与することを含む、方法。

【請求項31】

細胞増殖性障害ががんである、請求項２８から３０のいずれか一項に記載の、使用、使用のための液体薬学的組成物、又は方法。

【請求項32】

上に記載された発明。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の薬学的組成物及びその使用方法に関する。

【背景技術】

【0002】

バイオテクノロジー治療法の開発における主要な課題の１つはタンパク質の安定性であり、市場に投入されるまでの複数のプロセス工程でタンパク質の安定性を維持する必要がある。さらに、タンパク質の安定性は、保存中だけでなく、患者への投与中も維持されなければならない。治療用抗体は、例えば静脈内投与又は皮下投与によって、対象に投与するために水性担体に製剤化することができる。このような薬学的組成物の保存、取り扱い、投与の際には、フィルタ、保存用キャニスター、チューブ、シリンジ、点滴液バッグ、その他の容器の表面へのタンパク質の吸着など、分解及び表面吸着によって起こり得る治療用抗体の損失を軽減する必要がある。低濃度製剤及び高濃度製剤はどちらも、研究開発時及び製造時にそれぞれの課題をもたらす。例えば、低濃度では表面吸着の影響を強く受けるのに対して、高濃度では高い粘度を示すことがある。

【0003】

薬学的組成物が比較的低濃度の治療用タンパク質を含有する場合、タンパク質の損失はこれらの要因によって劇的に増加することがあり、その結果、薬学的組成物の治療効果が低下する。

【0004】

したがって、当分野では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、低用量の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体、例えば、低用量の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ Ｔ細胞エンゲージング二重特異性抗体、例えば、グロフィタマブ）が安定であるとともに吸着による損失から保護された薬学的製剤を開発する必要がある。

【発明の概要】

【0005】

本発明は、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ Ｔ細胞エンゲージング二重特異性抗体（ＴＣＢ）、例えば、グロフィタマブ、ＲＯ７０８２８５９、又はＲＧ６０２６）の薬学的組成物、及びその使用方法に関する。開示された組成物及び関連する方法は、低濃度で製剤化された抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）を送達するという問題に対処し、保存中及び投与中にタンパク質をほとんど又は全く損失させることなく、意図した用量の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）を患者が受け取れるようにする。

【0006】

一態様では、本発明は、液体薬学的組成物であって、
約５．０から約６．０の範囲のｐＨで、
約１から２５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体；
約１０から５０ｍＭの緩衝剤；
約≧２００ｍＭの等張化剤；
約０～１５ｍＭのメチオニン；及び
約≧０．２ｍｇ／ｍｌの界面活性剤；
を含み、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、
ａ）ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
を含む、液体薬学的組成物を特徴とする。

【0007】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）の濃度は、約１から５ｍｇ／ｍｌの範囲である。一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）の濃度は、約０．９から１．１ｍｇ／ｍｌの範囲である。一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）の濃度は約１ｍｇ／ｍｌである。

【0008】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、
ａ）配列番号７の重鎖可変領域配列及び配列番号８の軽鎖可変領域配列を含む、ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
ｂ）配列番号１５の重鎖可変領域配列及び配列番号１６の軽鎖可変領域配列を含む、ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
を含む。

【0009】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、
ａ）ＣＤ３、特にＣＤ３イプシロンに特異的に結合する第１のＦａｂ分子であって、Ｆａｂ軽鎖とＦａｂ重鎖の可変ドメインＶＬとＶＨが互いによって交換されている第１のＦａｂ分子と；
ｂ）ＣＤ２０に特異的に結合する第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子であって、第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬでは、１２４位のアミノ酸がリジン（Ｋ）により置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、１２３位のアミノ酸がリジン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）により、特にアルギニン（Ｒ）により置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＨ１では、１４７位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されており（ＥＵ番号付け）、２１３位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されている（ＥＵ番号付け）、第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子と；
ｃ）安定な会合が可能な第１のサブユニットと第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインと
を含む。

【0010】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、グロフィタマブである。

【0011】

一実施態様では、緩衝剤は、ヒスチジンバッファー、任意選択的にヒスチジンＨＣｌバッファーである。一実施態様では、緩衝剤は、約１５から２５ｍＭの濃度である。一実施態様では、緩衝剤は、約２０ｍＭの濃度である。一実施態様では、緩衝剤は、約５．２から約５．８のｐＨを提供する。

【0012】

一実施態様では、等張化剤は、塩、糖、アミノ酸の群から選択される。一実施態様では、等張化剤は、スクロース又は塩化ナトリウムのいずれかである。一実施態様では、等張化剤は、約２００ｍＭ以上の濃度のスクロースである。一実施態様では、等張化剤は、約２００ｍＭ～２８０ｍＭの濃度のスクロースである。一実施態様では、等張化剤は、約２４０ｍＭの濃度のスクロースである。

【0013】

一実施態様では、メチオニンは、約５～１５ｍＭの濃度である。

【0014】

一実施態様では、メチオニンは、約１０ｍＭの濃度である。一実施態様では、界面活性剤は、約０．２～０．８ｍｇ／ｍｌの濃度である。一実施態様では、界面活性剤は、ポリソルベート２０又はポロキサマー１８８である。一実施態様では、界面活性剤は、０．２～０．８ｍｇ／ｍｌの濃度のポリソルベート２０である。一実施態様では、界面活性剤は、約０．５ｍｇ／ｍｌの濃度のポリソルベート２０である。

【0015】

一実施態様では、液体薬学的組成物は、
約５から約６のｐＨで、
約１から５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）であって、
ａ）ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
を含む約１から５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と；
約１５～２５ｍＭのヒスチジンバッファーと；
約２００～２８０ｍＭのスクロースと；
約０～１５ｍＭのメチオニンと；
約０．２～０．８ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０と
を含む。

【0016】

一実施態様では、液体薬学的組成物は、
約５．５のｐＨで、
約１ｍｇ／ｍｌのグロフィタマブと；
約２０ｍＭのヒスチジンバッファーと；
約２４０ｍＭのスクロースと；
約１０ｍＭのメチオニンと；
約０．５ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０と
を含む。

【0017】

一実施態様では、本発明は、細胞増殖性障害の治療に有用な医薬の調製のための、先述の態様及び実施態様のいずれかの液体薬学的組成物の使用を提供する。

【0018】

別の態様では、本発明は、それを必要とする対象における細胞増殖性障害の治療又は進行遅延に使用するための、先述の態様及び実施態様のいずれかの薬学的組成物を特徴とする。

【0019】

別の態様では、本発明は、先述の態様及び実施態様のいずれかの有効量の薬学的組成物を対象に投与することを含む、それを必要とする対象における細胞増殖性障害の治療又は進行遅延に使用するための、先述の態様及び実施態様のいずれかの薬学的組成物を特徴とする。

【0020】

特定の実施態様では、細胞増殖性障害はがんである。

【0021】

本発明のさらなる態様は、本明細書に記載される発明に関連する。

【0022】

各実施態様及びいずれの実施態様も、文脈から明らかにそうでないことが示唆されない限り、組み合わせることができる。各実施態様及びいずれの実施態様も、文脈から明らかに異なることが示唆されない限り、本発明の各態様及びいずれの態様にも適用することができる。

【0023】

本発明の特定の実施態様は、特定の好ましい実施態様及び特許請求の範囲の、以下のより詳細な説明より明らかになるであろう。

【0024】

本出願ファイルの内容は、カラーで作成された少なくとも１つの図面を含有する。カラー図面付きの本特許又は本特許出願のコピーは、要請と必要な手数料を支払うことにより、特許庁から提供される。

【図面の簡単な説明】

【0025】

【図1A-F】例示的な抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の構成を示す概略図。

【図1G-N】例示的な抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の構成を示す概略図。

【図2】グロフィタマブの構造を示す概略図。

【図3】製剤開発ＧＬＰ Ｔｏｘ及びヒト研究への導入。製剤Ｆ１からＦ５の界面活性剤含量、初期と５、２５、又は４０℃で６週間保存後との比較。

【図4A】製剤開発ＧＬＰ Ｔｏｘ及びヒト研究への導入、製剤Ｆ１からＦ５のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、初期と５、２５、又は４０℃で６週間保存後との比較。図４Ａ：メインピーク。

【図4B】製剤開発ＧＬＰ Ｔｏｘ及びヒト研究への導入、製剤Ｆ１からＦ５のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、初期と５、２５、又は４０℃で６週間保存後との比較。図４Ｂ：高分子量（ＨＭＷ）。

【図4C】製剤開発ＧＬＰ Ｔｏｘ及びヒト研究への導入、製剤Ｆ１からＦ５のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、初期と５、２５、又は４０℃で６週間保存後との比較。図４Ｃ：低分子量（ＬＭＷ）。

【図5A】製剤開発ＧＬＰ Ｔｏｘ及びヒト研究への導入、製剤Ｆ１からＦ５のイオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）、初期と５、２５、又は４０℃で６週間保存後との比較。図５Ａ：メインピーク。

【図5B】製剤開発ＧＬＰ Ｔｏｘ及びヒト研究への導入、製剤Ｆ１からＦ５のイオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）、初期と５、２５、又は４０℃で６週間保存後との比較。図５Ｂ．ＨＭＷ。

【図5C】製剤開発ＧＬＰ Ｔｏｘ及びヒト研究への導入、製剤Ｆ１からＦ５のイオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）、初期と５、２５、又は４０℃で６週間保存後との比較。図５Ｃ．ＬＭＷ。

【図6】製剤開発８４週までの製剤Ｆ１の分析結果。Ｆ１＝５ｍｇ／ｍｌ ＲＯ７０２２８５９（すなわち、グロフィタマブ）、２０ｍＭのヒスチジンＨＣｌ ｐＨ５．５、２４０ｍＭのスクロース、１０ｍＭのメチオニン、０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０。

【図7A】製剤開発ＧＬＰ Ｔｏｘ及びヒト研究への導入、製剤Ｆ１からＦ５のｈｕＣＤ２０結合、初期と５、２５、又は４０℃で３週間及び６週間保存後との比較

【図7B】製剤開発ＧＬＰ Ｔｏｘ及びヒト研究への導入、Ｆ１からＦ５のｈｕＣＤ３結合、初期と５、２５、又は４０℃で３週間及び６週間保存後との比較。

【図8A-B】第ＩＩＩ相及び市販製剤のための開発研究。５℃で１０４週間保存後のタンパク質濃度に応じた、グロフィタマブのサイズ排除（ＳＥ）－ＨＰＬＣ ％ ＨＭＷＳ（図８Ａ）及びイオン交換（ＩＥ）－ＨＰＬＣ ％ 酸性領域（図８Ｂ）。

【図9A-B】第ＩＩＩ相及び市販製剤のための開発研究。４０℃で６ｗ保存後のｐＨ及び安定剤（メチオニン）添加に応じた、グロフィタマブＳＥ－ＨＰＬＣ ％ ＨＭＷＳ（図９Ａ）及び％ 酸性領域（図９Ｂ）。

【図10A-B】第ＩＩＩ相及び市販製剤のための開発研究。２５℃で２６週間保存後の等張化剤に応じた、可視粒子形成を含むグロフィタマブのＳＥ－ＨＰＬＣ ％ ＨＭＷＳ及びＩＥ－ＨＰＬＣ ％ 酸性領域。

【図11A-B】第ＩＩＩ相及び市販製剤のための開発研究。２５℃で７日間の振とう後の界面活性剤に応じた、可視粒子形成を含むグロフィタマブのＳＥ－ＨＰＬＣ ％ ＨＭＷＳ（図１１Ａ）及びＩＥ－ＨＰＬＣ ％ 酸性領域（図１１Ｂ）。

【図12】第ＩＩＩ相及び市販製剤のための開発研究。初期及び５℃で１０４週間保存後のタンパク質濃度に応じた、グロフィタマブＰＳ２０含量［ｍｇ／ｍｌ］及び可視粒子形成。

【図13】長期安定性データ：安定性に関するグロフィタマブＤＰバッチ例のＰＳ２０含量（２－８℃での保存）。

【発明を実施するための形態】

【0026】

本発明は、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の薬学的組成物及びその使用方法に関する。開示された組成物及び関連する方法は、低濃度で製剤化された抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体を送達するとい問題に対処し、保存中及び投与中に二重特異性抗体をほとんど又は全く損失させることなく、意図した用量の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体を患者が受け取れるようにする。

【0027】

Ｉ．一般技法
本開示の実施は、別途記載がない限り、分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、及び免疫学の従来の技術を使用し、これらは当業者の技術範囲内である。このような技術は、例えば「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、， 第二版 （Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， １９８９）； 「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｍ． Ｊ． Ｇａｉｔ， ｅｄ．， １９８４）； 「Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ」（Ｒ． Ｉ． Ｆｒｅｓｈｎｅｙ， ｅｄ．， １９８７）；「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」（Ｆ． Ｍ． Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９８７，及び定期的更新版）；「ＰＣＲ： Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ」， （Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， １９９４）；「Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ」（Ｐｅｒｂａｌ Ｂｅｒｎａｒｄ Ｖ．， １９８８）；「Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」（Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．， ２００１）等の文献に十分に説明されている。

【0028】

ＩＩ．定義
本明細書の用語は、以下で特に定義されない限り、当技術分野で一般に使用されるように使用される。

【0029】

本明細書で使用される場合、「分化２０のクラスター」又は「ＣＤ２０」という用語は、別途指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）等の哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源に由来する任意の天然ＣＤ２０を指す。ＣＤ２０（Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１、Ｌｅｕ－１６、Ｂｐ３５、ＢＭ５、及びＬＦ５としても知られ；ヒトタンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔデータベースエントリー番号Ｐ１１８３６を特徴とする）は、プレＢ及び成熟Ｂリンパ球ＣＤ２０で発現される分子量約３５ｋＤの疎水性膜貫通タンパク質である（Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ， Ｍ．Ａ． ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６４ （１９８９）１１２８２－１１２８７； Ｔｅｄｄｅｒ， Ｔ．Ｆ．， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． ８５ （１９８８）２０８－２１２； Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃ， Ｉ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １６７ （１９８８）１９７５－１９８０； Ｅｉｎｆｅｌｄ， Ｄ．Ａ．， ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ． ７ （１９８８）７１１－７１７； Ｔｅｄｄｅｒ， Ｔ．Ｆ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４２ （１９８９）２５６０－２５６８）。対応するヒト遺伝子は、ＭＳ４Ａ１としても知られる膜貫通４ドメイン、サブファミリーＡ、メンバー１である。この遺伝子は、膜貫通４Ａ遺伝子ファミリーのメンバーをコードする。この新生タンパク質ファミリーのメンバーは、共通の構造的特徴及び類似のイントロン／エクソンスプライス境界によって特徴付けられ、造血細胞及び非リンパ組織の間で固有の発現パターンを示す。この遺伝子は、Ｂ細胞の形質細胞への発達及び分化において役割を果たすＢリンパ球表面分子をコードする。このファミリーメンバーは、ファミリーメンバーのクラスターの中で１１ｑ１２に局在している。この用語は、「完全長」の、未処理のＣＤ２０、並びに細胞内でのプロセシングから生じた任意の形態のＣＤ２０を包含する。この用語は、ＣＤ２０の天然に存在するバリアント、例えばスプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントも包含する。この遺伝子の選択的スプライシングは、同じタンパク質をコードする２つの転写変異体をもたらす。一実施態様では、ＣＤ２０はヒトＣＤ２０である。

【0030】

「抗ＣＤ２０抗体」及び「ＣＤ２０に結合する抗体」という用語は、抗体がＣＤ２０の標的化において診断剤及び／又は治療剤として有用であるような充分な親和性で、ＣＤ２０に結合可能である抗体を指す。一実施態様では、無関係な非ＣＤ２０タンパク質に対する抗ＣＤ２０抗体の結合度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される、ＣＤ２０に対する抗体の結合の約１０％未満である。特定の実施態様では、ＣＤ２０に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば１０^－８Ｍ以下、例えば、１０^－８から１０^－１３Ｍ、例えば１０^－９から１０^－１３Ｍ）の解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。特定の実施態様では、抗ＣＤ２０抗体は、異なる種に由来するＣＤ２０間で保存されているＣＤ２０のエピトープに結合する。

【0031】

「ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体」は、Ｃｒａｇｇ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ １０３ （２００４） ２７３８－２７４３； Ｃｒａｇｇ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ １０１ （２００３） １０４５－１０５２， Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．， ｍＡｂｓ ５ （２０１３）， ２２－３３に記載され、以下の表１にまとめられたＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の結合特性及び生物活性を有する抗ＣＤ２０抗体を意味する。

【0032】

ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の例には、例えば、オビヌツズマブ（ＧＡ１０１）、トシツモマブ（Ｂ１）、ヒト化Ｂ－Ｌｙ１抗体ＩｇＧ１（国際公開第２００５／０４４８５９号に開示されるようなキメラヒト化ＩｇＧ１抗体）、１１Ｂ８ ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０３５６０７号に開示）及びＡＴ８０ ＩｇＧ１が含まれる。

【0033】

Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の例には、例えば、リツキシマブ、オファツムマブ、ベルツズマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ、ＰＲＯ１３１９２１、ウブリツキシマブ、ＨＩ４７ ＩｇＧ３（ＥＣＡＣＣ、ハイブリドーマ）、２Ｃ６ ＩｇＧ１（国際公開第２００５／１０３０８１号に開示）、２Ｆ２ ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０３５６０７号及び同第２００５／１０３０８１号に開示）、及び２Ｈ７ ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０５６３１２号に開示）が含まれる。

【0034】

別途指示がない限り、「ＣＤ３」は、霊長類（例えばヒト）、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）といった哺乳動物を含む任意の脊椎動物源由来の任意の天然ＣＤ３を指す。この用語は、「完全長」の、未処理のＣＤ３、並びに細胞内でのプロセシングから生じた任意の形態のＣＤ３を包含する。この用語は、ＣＤ３の天然に存在するバリアント、例えばスプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントも包含する。一実施態様では、ＣＤ３は、ヒトＣＤ３、特にヒトＣＤ３のイプシロンサブユニット（ＣＤ３ε）である。ヒトＣＤ３εのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）のアクセッション番号Ｐ０７７６６（バージョン１４４）、又はＮＣＢＩ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／） ＲｅｆＳｅｑ ＮＰ＿０００７２４．１に示されている。カニクイザルサル［Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ］のアミノ酸配列ＣＤ３εは、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋ番号ＢＡＢ７１８４９．１に示されている。

【0035】

「抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体」、「抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体」及び「ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体」という用語は、抗体がＣＤ２０及び／又はＣＤ３を標的とする際に診断剤及び／又は治療剤として有用であるように、十分な親和性によってＣＤ２０及びＣＤ３に結合することができる二重特異性抗体を指す。一実施態様では、無関係の非ＣＤ３タンパク質及び／又は非ＣＤ２０タンパク質への、ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体の結合の程度は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）等によって測定される場合、ＣＤ３及び／又はＣＤ２０への抗体の結合の約１０％未満である。特定の実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０^－８Ｍ以下、例えば、１０^－８Ｍから１０^－１３Ｍ、例えば１０^－９Ｍから１０^－１３Ｍ）の解離定数（Ｋ_Ｄ）を有するＣＤ２０及び／又はＣＤ３のそれぞれに結合する。特定の実施態様では、ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する二重特異性抗体は、異なる種由来のＣＤ３の間で保存されているＣＤ３のエピトープ及び／又は異なる種由来のＣＤ２０の間で保存されているＣＤ２０のエピトープに結合する。抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の一例は、グロフィタマブ（ＷＨＯ Ｄｒｕｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（医薬品の国際一般名）、推奨ＩＮＮ：リスト８３， ２０２０， ｖｏｌ． ３４， ｎｏ． １， ｐ． ３９、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ Ｔ細胞エンゲージング二重特異性抗体（ＴＣＢ）、ＣＤ２０－ＴＣＢ、ＲＯ７０８２８５９、又はＲＧ６０２６； ＣＡＳ ＃： ２２２９０４７－９１－８）である。

【0036】

本明細書で使用される用語「アミノ酸変異」は、アミノ酸置換、欠失、挿入及び修飾を包含することを意味する。置換、欠失、挿入及び修飾の任意の組合せは、最終構築物が、所望の特徴、例えば、Ｆｃ受容体に対する結合の、低下を有する限り、最終構築物に到達するように行うことができる。アミノ酸配列の欠失及び挿入には、アミノ末端及び／又はカルボキシ末端の欠失、並びにアミノ酸の挿入が含まれる。特にアミノ酸の変異は、アミノ酸置換である。例えばＦｃ領域の結合特性を変化させる目的で、非保存的アミノ酸置換、すなわち１つのアミノ酸を異なる構造及び／又は化学特性を有する別のアミノ酸に置き換えることが特に好ましい。アミノ酸置換には、天然に存在しないアミノ酸による置き換え、又は２０種類の一般的なアミノ酸の天然に存在するアミノ酸誘導体による置き換えが含まれる（例えば、４－ヒドロキシプロリン、３－メチルヒスチジン、オルニチン、ホモセリン、５－ヒドロキシリジン）。アミノ酸変異は、当技術分野で周知の遺伝学的方法又は化学的方法を用いて生じさせることができる。遺伝学的方法には、部位特異的変異誘発、ＰＣＲ、遺伝子合成等が含まれ得る。遺伝子工学以外の方法、例えば化学修飾によるアミノ酸の側鎖基を変化させる方法も有用であり得ると考えられる。本明細書では、同じアミノ酸変異を示すために、様々な表記が使用される。例えば、Ｆｃ領域の３２９位のプロリンからグリシンへの置換は、３２９Ｇ、Ｇ３２９、Ｇ_３２９、Ｐ３２９Ｇ、又はＰｒｏ３２９Ｇｌｙと示すことができる。

【0037】

「親和性」は、分子（例えば受容体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えばリガンド）との間の非共有結合的相互作用の総和の強度を指す。本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、別途指示がない限り、結合対（例えば、受容体及びリガンド）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのパートナーＹに対する親和性は、通常、解離定数（Ｋ_Ｄ）で表すことができ、これは解離速度定数と会合速度定数（それぞれｋ_ｏｆｆ及びｋ_ｏｎ）の比である。したがって、速度定数の比が同じままである限り、同等の親和性は異なる速度定数を含み得る。親和性は、当該技術分野で既知の十分に確立された方法によって測定され得る。親和性を測定するための特定の方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）である。

【0038】

「親和性成熟」抗体とは、改変等を有しない親抗体と比較して、１つ又は複数の超可変領域（ＨＶＲ）に１つ又は複数の改変を有し、このような改変により抗体の抗原に対する親和性が改善される抗体を指す。

【0039】

本明細書で使用される用語「抗原結合部分」は、抗原決定基に特異的に結合するポリペプチド分子を指す。一実施態様では、抗原結合部分は、それが結合する実体（例えば、サイトカイン又は第２の抗原結合部分）を標的部位へ、例えば特定の型の腫瘍細胞又は抗原決定基を有する腫瘍間質へと方向付けることができる。抗原結合部分には、本明細書でさらに定義する抗体及びその断片が含まれる。好ましい抗原結合部分には、抗体重鎖可変領域と抗体軽鎖可変領域とを含む、抗体の抗原結合ドメインが含まれる。一部の実施態様では、抗原結合部分は、後述でさらに定義される、当技術分野で既知の抗体定常領域を含む。有用な重鎖定常領域は、α、δ、ε、γ又はμの５つのアイソタイプのいずれかを含む。有用な軽鎖定常領域は、κ及びλの２つのアイソタイプのいずれかを含む。

【0040】

「特異的結合」とは、その結合が抗原選択性であり、望ましくない相互作用又は非特異的な相互作用とは判別できることを意味する。抗原結合部分の、特定の抗原決定基への結合能は、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）又は当業者によく知られた他の技術、例えば、表面プラズモン共鳴技術（ＢＩＡＣＯＲＥ（商標登録）計器での解析）（Ｌｉｌｊｅｂｌａｄ ｅｔ ａｌ．， Ｇｌｙｃｏ Ｊ．１７， ３２３－３２９ （２０００））、及び古典的結合アッセイ（Ｈｅｅｌｅｙ， Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｓ．２８， ２１７－２２９ （２００２））により測定することができる。一実施態様では、抗原結合部分の無関係なタンパク質への結合の程度は、例えばＳＰＲによって測定した場合、抗原結合部分の抗原への結合の約１０％未満である。特定の実施態様では、抗原に結合する抗原結合部分、又は抗原結合部分を含む抗原結合分子は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば１０^－８Ｍ以下、例えば１０^－８Ｍから１０^－１３Ｍ、例えば１０^－９Ｍから１０^－１３Ｍ）の解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。

【0041】

「結合の低減」、例えばＦｃ受容体への結合の低減は、例えばＳＰＲによって測定した場合の、それぞれの相互作用に対する親和性の低下を指す。明確性のために、本用語はまた、親和性がゼロ（又は分析方法の検出限界を下回る）までの低減、すなわち、相互作用の完全な終止も含む。逆に、「結合の増加」とは、それぞれの相互作用に対する結合親和性の増加を指す。

【0042】

本明細書で使用される場合、用語「抗原結合分子」は、その最も広い意味で、抗原決定基に特異的に結合する分子を指す。抗原結合分子の例は、免疫グロブリン及び誘導体、例えばそれらの断片である。

【0043】

本明細書において使用される用語「抗原決定基」は、「抗原」及び「エピトープ」と同義であり、抗原結合部分が結合し、抗原結合部分－抗原複合体を形成するポリペプチド巨大分子上の部位（例えば、アミノ酸の連続的広がり又は非連続的アミノ酸の異なる領域から形成される立体配座構造）を指す。有用な抗原決定基は、例えば、腫瘍細胞の表面上に、ウイルス感染細胞の表面上に、その他の疾患細胞の表面上に、血清中に遊離して、及び／又は細胞外マトリックス（ＥＣＭ）中に、見出すことができる。別途指示がない限り、本明細書において抗原と呼ばれるタンパク質（例えば、ＣＤ３）は、霊長類（例えば、ヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源由来のタンパク質の任意の天然型を指す。特定の実施態様では、抗原は、ヒトタンパク質である。この用語は、本明細書における特定のタンパク質を指す場合、「全長」、未加工のタンパク質も、細胞内でのプロセシングから得られるいかなる形態のタンパク質も包含する。この用語は、タンパク質の天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントも包含する。抗原として有用な例示的なヒトタンパク質は、ＣＤ３、特にＣＤ３のイプシロンサブユニットである（ヒト配列についてはＵｎｉＰｒｏｔ ｎｏ．Ｐ０７７６６（バージョン１３０）、ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ ｎｏ． ＮＰ＿０００７２４．１を；カニクイザル［Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ］ 配列についてはＵｎｉＰｒｏｔ ｎｏ．Ｑ９５ＬＩ５（バージョン４９）、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋ ｎｏ． ＢＡＢ７１８４９．１を参照）。特定の実施態様では、本明細書に記載されるＴ細胞活性化二重特異性抗原結合分子は、様々な種由来のＣＤ３又は標的細胞抗原の中でも保存された、ＣＤ３又は標的細胞抗原のエピトープに結合する。

【0044】

本明細書において使用される用語「ポリペプチド」は、アミノ結合（ペプチド結合としても知られる）により線形に結合したモノマー（アミノ酸）からなる分子を指す。用語「ポリペプチド」は、２つ以上のアミノ酸から成る鎖を指すのであって、該生成物の特定の長さのものを指すのではない。したがって、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」、又は２つ以上のアミノ酸の鎖を指す他のいかなる用語も「ポリペプチド」の定義の範囲内に含まれ、用語「ポリペプチド」は、これらのいずれの用語の代わりに、又はそれらと互換的に使用することができる。用語「ポリペプチド」は、ポリペプチドの発現後修飾の産物を指すことも意図されており、このような産物には、限定されないが、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質切断、又は天然に存在しないアミノ酸による修飾が含まれる。ポリペプチドは、天然の生物学的供給源から得られるものでも組換え技術により生産されるものでもよいが、必ずしも指定された核酸配列から翻訳されたものであるとは限らない。ポリペプチドは、化学合成を含むあらゆる手法で製造することができる。本発明のポリペプチドは、約３以上、５以上、１０以上、２０以上、２５以上、５０以上、７５以上、１００以上、２００以上、５００以上、１０００以上、又は２０００以上のアミノ酸から成るサイズのものである。ポリペプチドは、明確に定義された三次元構造を有する場合もあるが、必ずしもそのような構造を有するとは限らない。明確に定義された三次元構造を有するポリペプチドは、「フォールディングされた」と言われ、明確に定義された三次元構造を有せずに多数の異なるコンフォメーションを採り得るポリペプチドは、「フォールディングされていない」と言われる。

【0045】

「単離された」ポリペプチド若しくは変異体、又はその誘導体は、その自然の環境にないポリペプチドであることが意図される。特に精製は必要ではない。例えば、単離ポリペプチドは、その天然又は自然の環境から取り出すことができる。宿主細胞で発現した組換え生産ポリペプチド及びタンパクは、任意の適切な技術により分離、画分化又は部分的若しくは実質的に精製された天然又は組換えポリペプチドと同様に、本発明のために単離されたものと見なされる。

【0046】

基準となるポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列同一性最大パーセントが得られるように、配列をアライメントし、必要に応じてギャップを導入した後に、いかなる保存的置換も配列同一性の部分として考慮せずに、基準となるポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、当分野の技術の範囲内にある様々な方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ又はＭＥＧＡＬＩＧＮ（登録商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ（登録商標））ソフトウェアのような一般に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して得ることができる。当業者であれば、比較される配列の完全長に対して最大の整列を達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列を整列させるための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書の目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．が作成したものであり、ソースコードは、使用者用書類と共に、米国著作権局、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．、２０５５９に提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７として登録されている。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から公的に入手可能であり、又はそのソースコードからコンパイルすることができる。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ（登録商標）Ｖ４．０Ｄを含め、ＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステムで使用するためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ－２プログラムによって設定されており、変わらない。アミノ酸配列比較にＡＬＩＧＮ－２が用いられる状況では、所与のアミノ酸配列Ａの、所与のアミノ酸配列Ｂとの（又はこれに対する）アミノ酸配列同一性％（或いは、所与のアミノ酸配列Ａは、所与のアミノ酸配列Ｂと（又はこれに対して）特定のアミノ酸配列同一性％を有するか又は含む所与のアミノ酸配列Ａ、ということもできる）は次のように計算される：
１００×分数Ｘ／Ｙ
ここで、Ｘは配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ－２により、ＡとＢのそのプログラムのアラインメントにおいて同一と一致したスコアのアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと異なる場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。別途明記しない限り、本明細書で使用されるすべての％アミノ酸配列同一性値が、ＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムを使用し、直前の段落で説明したように、得られる。

【0047】

本明細書における「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、様々な抗体構造を包含し、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及び所望の抗原結合活性を示す限り、抗体断片を含む。

【0048】

「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書で、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、又は本明細書に定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指すように同義に使用される。

【0049】

「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部分を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨは、Ｆ（ａｂ’）_２、ダイアボディ、直鎖状抗体、一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）、及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。本明細書で使用される場合の用語「抗体断片」は、単一ドメイン抗体も包含する。

【0050】

「免疫グロブリン分子」という用語は、天然に存在する抗体の構造を有するタンパク質を指す。例えば、ＩｇＧクラスの免疫グロブリンは、ジスルフィド結合している２つの軽鎖及び２つの重鎖から構成される約１５００００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端にかけて、各重鎖は、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続いて重鎖定常領域とも呼ばれる３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端に、各軽鎖は可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、その後に、軽鎖定常領域とも呼ばれる定常軽鎖（ＣＬ）ドメインが続いている。免疫グロブリンの重鎖は、α（ＩｇＡ）、δ（ＩｇＤ）、ε（ＩｇＥ）、γ（ＩｇＧ）又はμ（ＩｇＭ）と呼ばれる５つのクラスのうちの１つに割り当てることができ、そのうちのいくつかはサブクラス、例えば、γ_１（ＩｇＧ_１）、γ_２（ＩｇＧ_２）、γ_３（ＩｇＧ_３）、γ_４（ＩｇＧ_４）、α_１（ＩｇＡ_１）及びα_２（ＩｇＡ_２）にさらに分類することができる。免疫グロブリンの軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）とラムダ（λ）と呼ばれる２種類のうちの１つに割り当てることができる。免疫グロブリンは、本質的に、免疫グロブリンのヒンジ領域を介して結合された２つのＦａｂ分子とＦｃドメインからなる。

【0051】

用語「抗原結合ドメイン」は、抗原の一部又は全部に特異的に結合し且つ抗原の一部又は全部に相補的な領域を含む、抗体の部分を指す。抗原結合ドメインは、例えば、１又は複数の抗体可変ドメイン（抗体可変領域ともいう）によって提供されてもよい。好ましくは、抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）と、抗体重鎖可変領域（ＶＨ）とを含む。

【0052】

「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然型抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、一般に、各々が四つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と三つの超可変領域（ＨＶＲ）とを含む類似構造を有する。例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．， Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ６^ｔｈ ｅｄ．， Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．， ｐａｇｅ ９１ （２００７）を参照されたい。抗原結合特異性を与えるために、単一のＶＨ又はＶＬドメインで十分な場合がある。

【0053】

「ヒト抗体」は、ヒト若しくはヒト細胞により産生された抗体の、又はヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト源に由来する抗体のアミノ酸配列、あるいは他のヒト抗体をコードする配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。このヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。

【0054】

「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基、及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。所定の実施態様において、ヒト化抗体は、少なくとも一つ、典型的には２つの可変ドメインの全てを実質的に含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが、非ヒト抗体のものに対応し、全て又は実質的にＦＲの全てが、ヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意選択的に、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を受けた抗体を指す。

【0055】

「超可変領域」又は「ＨＶＲ」という用語は、本明細書で使用される場合、配列において超可変性であり（「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」）、及び／又は構造的に所定のループ（「超可変ループ」）を形成し、及び／又は抗原に接触する残基（「抗原接触」）を含有する抗体可変ドメインのそれぞれの領域を指す。通常、抗体は、６つのＨＶＲ：ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、及びＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）を含む。本発明の例示的なＨＶＲとして、以下のものが挙げられる：
（ａ）アミノ酸残基２６－３２（Ｌ１）、５０－５２（Ｌ２）、９１－９６（Ｌ３）、２６－３２（Ｈ１）、５３－５５（Ｈ２）及び９６－１０１（Ｈ３）に生じる超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６：９０１－９１７ （１９８７））；
（ｂ）アミノ酸残基２４－３４（Ｌ１）、５０－５６（Ｌ２）、８９－９７（Ｌ３）、３１－３５ｂ（Ｈ１）、５０－６５（Ｈ２）、及び９５－１０２（Ｈ３）に生じるＣＤＲ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ （１９９１））；
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ－３６（Ｌ１）、４６－５５（Ｌ２）、８９－９６（Ｌ３）、３０－３５ｂ（Ｈ１）、４７－５８（Ｈ２）、及び９３－１０１（Ｈ３）に生じる抗原コンタクト（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２６２： ７３２－７４５ （１９９６））；並びに
（ｄ）ＨＶＲアミノ酸残基４６－５６（Ｌ２）、４７－５６（Ｌ２）、４８－５６（Ｌ２）、４９－５６（Ｌ２）、２６－３５（Ｈ１）、２６－３５ｂ（Ｈ１）、４９－６５（Ｈ２）、９３－１０２（Ｈ３）、及び９４－１０２（Ｈ３）を含む（ａ）、（ｂ）及び／又は（ｃ）の組み合わせ。

【0056】

別途指示がない限り、ＨＶＲ残基及び可変ドメイン内の他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書において、上記のＫａｂａｔらに従って番号付けされている。

【0057】

「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４で構成される。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般的に、ＶＨ（又はＶＬ）中において以下の配列で現れる：ＦＲ１－Ｈ１（Ｌ１）－ＦＲ２－Ｈ２（Ｌ２）－ＦＲ３－Ｈ３（Ｌ３）－ＦＲ４で現れる。

【0058】

「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２， Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ （１９９１）， ｖｏｌｓ． １－３のサブグループである。一実施態様では、ＶＬについては、サブグループは、Ｋａｂａｔら（上記参照）におけるサブグループカッパＩである。一実施態様において、ＶＨについて、該サブグループは上記のＫａｂａｔらにあるようなサブグループＩＩＩである。

【0059】

本明細書の目的では、「アクセプターヒトフレームワーク」とは、以下に定義するように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークに由来する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「由来の」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでいてもよく、又はアミノ酸配列の変更を含んでいてもよい。いくつかの実施態様では、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。いくつかの実施態様では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列に対して、配列が同一である。

【0060】

抗体の「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメイン又は定常領域の型を指す。抗体の５つの主なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのいくつかは、更にサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、及びＩｇＡ_２に分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。

【0061】

本明細書で使用される場合、ＩｇＧ「アイソタイプ」又は「サブクラス」という用語は、それらの定常領域の化学的及び抗原的特性によって定義される免疫グロブリンのサブクラスのうちのいずれかを意味する。

【0062】

「Ｆｃドメイン」又は「Ｆｃ領域」という用語は、本明細書において、定常領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及びバリアントＦｃ領域を含む。ＩｇＧ重鎖のＦｃ領域の境界はわずかに変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は通常、重鎖のＣｙｓ２２６から又はＰｒｏ２３０から、カルボキシル末端までと定義される。しかしながら、宿主細胞によって産生された抗体は、重鎖のＣ末端から１つ又は複数、特に１つ又は２つのアミノ酸の翻訳後切断を受けることがある。したがって、完全長重鎖をコードする特定の核酸分子の発現により、宿主細胞によって産生される抗体は、完全長重鎖を含むことも、完全長重鎖の切断されたバリアント（本明細書では「切断されたバリアント重鎖」とも呼ぶ）を含むこともある。これは、重鎖の最後の２つのＣ末端アミノ酸がグリシン（Ｇ４４６）とリジン（Ｋ４４７、ＥＵ番号付け）である場合に当てはまる。したがって、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）、又はＣ末端グリシン（Ｇｌｙ４４６）とリジン（Ｋ４４７）は、存在してもしなくてもよい。本明細書に明記されていない限り、Ｆｃ領域又は定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，配列ｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ， １９９１に記載されるように、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ， １９９１ （上記も参照）。本明細書において使用されるＦｃドメインの「サブユニット」は、二量体Ｆｃドメインを形成する二つのポリペプチドの一方、即ち、免疫グロブリン重鎖のＣ末端定常領域を含み、安定な自己会合能を有するポリペプチドを指す。例えば、ＩｇＧ Ｆｃドメインのサブユニットは、ＩｇＧ ＣＨ２及びＩｇＧ ＣＨ３定常ドメインを含む。

【0063】

「Ｆｃドメインの第１のサブユニットと第２のサブユニットとの会合を促進する修飾」は、Ｆｃドメインサブユニットを含むポリペプチドと同一のポリペプチドとの会合によるホモダイマーの形成を低減又は防止する、ペプチド骨格の操作又はＦｃドメインサブユニットの翻訳後修飾である。ここで使用される会合を促進する修飾は、会合することが望ましい二つのＦｃドメインサブユニット（即ちＦｃドメインの第１及び第２のサブユニット）の各々に対して行われる別々の修飾を特に含み、これらの修飾は、二つのＦｃドメインサブユニットの会合を促進するために、互いに対して相補的である。例えば、会合を促進する修飾は、これらＦｃドメインサブユニットの一方又は両方の構造又は電荷を、それらの会合がそれぞれ立体的に又は静電気的に望ましいものになるように変化させる。したがって、（ヘテロ）二量体化が第１のＦｃドメインサブユニットを含むポリペプチドと第２のＦｃドメインサブユニットを含むポリペプチドとの間に起こり、これは、サブユニットの各々に融合したさらなる成分（例えば、抗原結合部分）が同じでないという意味で非同一であり得る。いくつかの実施態様では、会合を促進する修飾は、Ｆｃドメイン内のアミノ酸変異、具体的にはアミノ酸置換を含む。特定の実施態様では、会合を促進する修飾は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの各々における別々のアミノ酸変異、具体的にはアミノ酸置換を含む。

【0064】

「活性化Ｆｃ受容体」は、抗体のＦｃ領域による関与に続いて、受容体保有細胞を刺激してエフェクター機能を実行するシグナル伝達事象を誘発するＦｃ受容体である。活性化Ｆｃ受容体には、ＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩａ（ＣＤ３２）、及びＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）が含まれる。

【0065】

用語「エフェクター機能」とは、抗体についての言及に使用される場合、抗体のアイソタイプにより変わる、抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例には：Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）；サイトカイン分泌；抗原提示細胞による免疫複合体媒介抗原取り込み；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；及びＢ細胞の活性化が含まれる。

【0066】

本明細書において使用される場合、「エフェクター細胞」という用語は、エフェクター部分受容体、例えばサイトカイン受容体、及び／又はＦｃ受容体を表面上に発現し、それによりエフェクター部分、例えばサイトカイン、及び／又は抗体のＦｃ領域に結合して標的細胞、例えば腫瘍細胞の破壊に貢献するリンパ球の集団を指す。エフェクター細胞は、例えば細胞傷害性又は食作用効果を媒介する。エフェクター細胞には、限定されないが、エフェクターＴ細胞、例えばＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ４^＋ヘルパーＴ細胞、γδＴ細胞、ＮＫ細胞、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞、及びマクロファージ／単球が含まれる。

【0067】

本明細書で使用される場合、「工学（的に）操作（する）」、「工学（的に）操作された（る）」、及び「工学（的に）操作すること」という用語は、天然に存在するポリペプチド又は組換えポリペプチド又はそれらの断片の、ペプチド骨格の任意の操作又は翻訳後修飾を含むと考えられる。工学的操作には、アミノ酸配列の修飾、グリコシル化パターンの修飾又は個々のアミノ酸の側鎖基の修飾と、これらの手法の組み合わせとが含まれる。特に接頭語「グリコ」を伴う「操作」、並びに用語「グリコシル化操作」は、細胞内で発現される糖タンパク質のグリコシル化の変化を達成するためのオリゴ糖合成経路の遺伝子操作を含む、細胞のグリコシル化機構の代謝操作を含む。さらに、グリコシル化操作には、グリコシル化に対する変異及び細胞環境の影響が含まれる。一実施態様では、グリコシル化操作は、グリコシルトランスフェラーゼ活性の変化である。特定の実施態様では、操作は、グルコサミニルトランスフェラーゼ活性及び／又はフコシルトランスフェラーゼ活性の変化をもたらす。グリコシル化操作を使用して、「増大したＧｎＴＩＩＩ活性を有する宿主細胞」（例えばβ（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）活性を有する上昇したレベルの１つ又は複数のポリペプチドを発現するように操作された宿主細胞）、「増大したＭａｎＩＩ活性を有する宿主細胞」（例えばα－マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）活性を有する上昇したレベルの１つ又は複数のポリペプチドを発現するように操作された宿主細胞）、又は「低減したα（１，６）フコシルトランスフェラーゼ活性を有する宿主細胞」（例えば低下したレベルのα（１，６）フコシルトランスフェラーゼを発現するように操作された宿主細胞）を得ることができる。

【0068】

「宿主細胞」、「宿主細胞株」及び「宿主細胞培養物」という用語は互換的に使用され、外因性の核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫を含む。宿主細胞には、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれ、これらは、継代数によらず、一次形質転換細胞及びそれに由来する子孫を含む。子孫は、核酸の含有量が親細胞と完全に同一でなくてもよく、変異を含んでいてもよい。元の形質転換細胞においてスクリーニング又は選択されたのと同じ機能又は生物学的活性を有する変異子孫が本明細書に含まれる。宿主細胞は、本発明に使用されるタンパク質を生成するために使用できる任意の種類の細胞系である。一実施態様では、宿主細胞は修飾オリゴ糖を有する抗体の産生を可能にするように操作される。特定の実施態様では、宿主細胞は、β（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）活性を有する１つ又は複数のポリペプチドの発現レベルが増加するように操作されている。特定の実施態様では、宿主細胞は、α－マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）活性を有する１つ又は複数のポリペプチドの発現レベルを増加させるようにさらに操作されている。宿主細胞は、培養細胞、例えば、哺乳動物培養細胞、例えばＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、ＮＳ０細胞、ＳＰ２／０細胞、ＹＯ骨髄腫細胞、Ｐ３Ｘ６３マウス骨髄細胞、ＰＥＲ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞又はハイブリドーマ細胞、酵母細胞、昆虫細胞、及び植物細胞だけでなく、トランスジェニック動物、トランスジェニック植物又は培養植物若しくは動物組織内に含まれる細胞も含む。

【0069】

本明細書で使用される場合、「ＧｎＴＩＩＩ活性を有するポリペプチド」という用語は、Ｎ結合型オリゴ糖のトリマンノシルコアのβ結合型マンノシドへのβ－１，４の結合中のＮ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）残基の付加を触媒できるポリペプチドを指す。これには、特定の生物学的アッセイで測定した場合に、用量依存性あり又はなしで、Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＮＣ－ＩＵＢＭＢ）によればβ－１，４－マンノシル－糖タンパク質 ４－ベータ－Ｎ－アセチルグルコサミニル－トランスフェラーゼ（ＥＣ ２．４．１．１４４）としても知られる、β（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩの活性に必ずしも同一ではないが類似の酵素活性を呈する融合ポリペプチドが含まれる。用量依存性が存在する場合には、ＧｎＴＩＩＩのものと同一である必要はなく、むしろＧｎＴＩＩＩと比較したとき、所与の活性おける用量依存性と実質的に類似している必要がある（即ち候補ポリペプチドは、より大きな活性を呈するか又はＧｎＴＩＩＩの約２５分の１以下、好ましくは約１０分の１以下、最も好ましくは約３分の１以下の活性を呈することになる）。特定の実施態様では、ＧｎＴＩＩＩ活性を有するポリペプチドは、ＧｎＴＩＩＩの触媒ドメイン及び異種ゴルジ常在ポリペプチドのゴルジ局在化ドメインを含む融合ポリペプチドである。特に、ゴルジ局在化ドメインはマンノシダーゼＩＩ又はＧｎＴＩの局在化ドメインであり、最も具体的にはマンノシダーゼＩＩの局在化ドメインである。あるいは、ゴルジ局在化ドメインは、マンノシダーゼＩの局在化ドメイン、ＧｎＴＩＩの局在化ドメイン、及びα１，６コアフコシルトランスフェラーゼの局在化ドメインからなる群より選択される。このような融合ポリペプチドを生成し、それを用いてエフェクター機能を高めた抗体を産生する方法は、国際公開第２００４／０６５５４０号、米国仮特許第６０／４９５１４２号、米国特許公開第６０／４９５１４２号に開示されており、それらの全内容は参照により本明細書に明示的に援用される。

【0070】

本明細書で使用される場合、「ゴルジ局在化ドメイン」という用語は、ポリペプチドをゴルジ複合体内のある位置に固定する役割を担う、ゴルジ常在ポリペプチドのアミノ酸配列を指す。概して、局在化ドメインは酵素のアミノ末端「テール」を構成する。

【0071】

本明細書で使用される場合、「ＭａｎＩＩ活性を有するポリペプチド」という用語は、Ｎ－結合オリゴ糖の分岐ＧｌｃＮＡｃＭａｎ_５ＧｌｃＮＡｃ_２マンノース中間体の末端１，３－及び１，６－結合α－Ｄ－マンノース残基の加水分解を触媒することができるポリペプチドを指す。これには、Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＮＣ－ＩＵＢＭＢ）によればマンノシルオリゴ糖１，３－１，６－α－マンノシダーゼＩＩ（ＥＣ ３．２．１．１１４）としても知られる、ゴルジα－マンノシダーゼＩＩの活性と必ずしも道津ではないが類似の活性を示すポリペプチドが含まれる。

【0072】

抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）は、免疫エフェクター細胞による抗体でコーティングされた標的細胞の溶解につながる免疫メカニズムである。標的細胞は、Ｆｃ領域を含む抗体又はその断片が通常Ｆｃ領域に対するＮ末端であるタンパク質部分を介して特異的に結合する細胞である。本明細書で使用される用語「増加した／減少したＡＤＣＣ」は、標的細胞を囲む媒質中の所定の抗体濃度において、上記に定義したＡＤＣＣの機構により所定の時間内に溶解する標的細胞数の増加／減少、及び／又はＡＤＣＣの機構により所定の時間内に所定の数の標的細胞を溶解させるために必要な、標的細胞を囲む媒質中の抗体濃度の低下／上昇のいずれかと定義される。増加した／減少したＡＤＣＣは、同じ標準的な生成、精製、製剤化、及び貯蔵方法（当業者に既知の）を用いて、但し操作されていない、同じ型の宿主細胞により生成される同じ抗体により媒介されるＡＤＣＣと相対的なものである。例えば、本明細書に記載される方法により操作されたグリコシル化パターン（例えばグリコシルトランスフェラーゼ、ＧｎＴＩＩＩ、又はその他のグリコシルトランスフェラーゼ）を有するように操作された宿主細胞により生成される抗体が媒介するＡＤＣＣの増加は、同じ種類の非操作宿主細胞により生成された同じ抗体によって媒介されるＡＤＣＣに対するものである。

【0073】

「増加した／減少した抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有する抗体」とは、当業者に知られた任意の適切な方法によって決定されるＡＤＣＣの増加／減少を有する抗体を意味する。許容されるｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイの一つは以下の通りである：
１）アッセイは、抗体の抗原結合領域によって認識される標的抗原を発現することが知られている標的細胞を使用する；
２）アッセイは、エフェクター細胞として、無作為に選択された健常ドナーの血液から単離されたヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用する；
３）アッセイは、以下のプロトコルに従って行われる。
ｉ）ＰＢＭＣを標準的な密度遠心分離手順を用いて単離し、５×１０^６細胞／ｍｌでＲＰＭＩ細胞培養培地に懸濁させる；
ｉｉ）標的細胞を標準的な組織培養法によって増殖させ、９０％より高い生存率で指数増殖期から回収し、ＲＰＭＩ細胞培養培地で洗浄し、１００マイクロキュリーの^５１Ｃｒで標識し、細胞培養培地で２回洗浄し、１０^５細胞／ｍｌの密度で細胞培養培地に再懸濁する；
ｉｉｉ）上の最終的な標的細胞懸濁液１００マイクロリットルを、９６ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに移す；
ｉｖ）抗体を細胞培養培地中で４０００ｎｇ／ｍｌから０．０４ｎｇ／ｍｌに連続希釈し、得られた抗体溶液５０マイクロリットルを９６ウェルマイクロタイタープレート中の標的細胞に添加し、上記の全濃度範囲をカバーする様々な抗体濃度を三連で試験する；
ｖ）最大放出（ＭＲ）コントロールのために、標識された標的細胞を含有するプレート中の３つの更なるウェルに、非イオン性洗浄剤（Ｎｏｎｉｄｅｔ， Ｓｉｇｍａ， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ）の２％（ｖ／ｖ）水溶液５０マイクロリットルを、抗体溶液（上記ｉｖ）の代わりに入れる；
ｖｉ）自然放出（ＳＲ）対照として、標識された標的細胞を含有するプレート中の３つの更なるウェルに、抗体溶液の代わりに（上記ｉｖ）、５０マイクロリットルのＲＰＭＩ細胞培養培地を入れる；
ｖｉｉ）その後、９６ウェルマイクロタイタープレートを５０×ｇで１分間遠心分離し、４℃で１時間インキュベートする；
ｖｉｉｉ）５０マイクロリットルのＰＢＭＣ懸濁液（上記ｉ）を各ウェルに添加して、２５：１のエフェクター：標的細胞比を得て、プレートを５％ＣＯ_２雰囲気下のインキュベーター内に３７℃で４時間置く；
ｉｘ）各ウェルから無細胞上清を回収し、実験的に放出された放射能（ＥＲ）をガンマカウンターを用いて定量する；
ｘ）特異的溶解のパーセンテージを、各抗体濃度について、式（ＥＲ－ＭＲ）／（ＭＲ－ＳＲ）×１００（ＥＲは、その抗体濃度について定量化された平均放射能（上記ｉｘ参照）であり、ＭＲはＭＲコントロール（上記ｖ参照）について定量化された平均放射能（上記ｉｘ参照）であり、ＳＲはＳＲ コントロール（上記ｖｉ参照）について定量化された平均放射能（上記ｉｘ参照）である）に従って算出する；
４）「増加／減少したＡＤＣＣ」は、上記試験した抗体濃度範囲内で観察される特異的溶解の最大パーセンテージの増加、及び／又は上記試験した抗体濃度範囲内で観察される特異的溶解の最大パーセンテージの２分の１／を達成するのに必要な抗体濃度の減少／増加のいずれかと定義される。上記のアッセイで測定された、増加した／減少したＡＤＣＣは、当業者に知られている、同じ標準的な生成、精製、製剤化、及び貯蔵方法を用いて、但し操作されていない、同じ型の宿主細胞により生成される同じ抗体により媒介されるＡＤＣＣと相対的なものである。

【0074】

本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味し、すなわち該集団を構成する個々の抗体が、可能性の或る変異体抗体（これらは例えば天然に存在する変異を含むか又はモノクローナル抗体調製物の製造中に生じ、そのような変異体は通常少量存在する）を除き、同一であり及び／又は同じエピトープに結合する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を通常含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。したがって、修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の製造を必要とするものとして解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組み換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むが、これらに限定されない多様な技法によって作製することができ、モノクローナル抗体を作製するためのこのような方法及び他の例示的な方法が、本明細書に記載されている。

【0075】

「ネイキッド抗体」とは、異種の部分（例えば細胞傷害性部分）又は放射性標識にコンジュゲートしていない抗体を指す。ネイキッド抗体は、薬学的製剤中に存在してもよい。

【0076】

「天然抗体」は、様々な構造を有する天然に生じる免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している２つの同一の軽鎖と２つの同一の重鎖から構成される約１５００００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端に向かって、各重鎖は、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる、可変領域（ＶＨ）、それに続く３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）と、それに続く１つの定常軽（ＣＬ）ドメインとを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２種類の１つに割り当てられてもよい。

【0077】

本明細書で使用される、抗原結合部分又はドメインに関する「第１」、「第２」、「第３」等の用語は、各タイプの部分又はドメインが１つを超えて存在するときに区別の便宜のために使用される。これらの用語の使用は、そのように明示的に示されていない限り、特定の順序又は向きを与えることを意図していない。

【0078】

用語「多重特異性」及び「二重特異性」とは、抗原結合分子が、少なくとも２つの別個の抗原決定基に特異的に結合することができることを意味する。典型的には、二重特異性抗原結合分子は２つの抗原結合部位を含み、それらの各々が異なる抗原決定基に対して特異的である。特定の実施態様では、二重特異性抗原結合分子は、２つの抗原決定基（特に、２つの別個の細胞で発現する２つの抗原決定基）に同時に結合することができる。

【0079】

本明細書で使用する用語「価（「ｖａｌｅｎｔ」又は「ｖａｌｅｎｃｙ」）」は、抗原結合分子中の特定数の抗原結合部位の存在を意味する。したがって、「抗原への一価の結合」という用語は、抗原結合分子中の抗原に特異的な１つの（かつ、１つを超えない）抗原結合部位の存在を意味する。

【0080】

「抗原結合部位」は、抗原との相互作用を与える抗原結合分子の部位、すなわち、１つ又は複数のアミノ酸残基を指す。例えば、抗体の抗原結合部位は、相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸残基を含む。天然免疫グロブリン分子は、典型的には２つの抗原結合部位を有し、Ｆａｂ分子は、典型的には単一の抗原結合部位を有する。

【0081】

本明細書において使用される「活性化Ｔ細胞抗原」は、Ｔリンパ球、特に細胞傷害性Ｔリンパ球によって発現される抗原決定基を指し、抗原結合分子との相互作用時にＴ細胞活性化を誘導又は増強することができる。具体的には、抗原結合分子のＴ細胞活性化抗原との相互作用は、Ｔ細胞受容体複合体のシグナル伝達のカスケードをトリガーすることによりＴ細胞活性化を誘導することができる。例示的な活性化Ｔ細胞抗原はＣＤ３である。特定の一実施態様では、Ｔ細胞活性化抗原は、ＣＤ３、特にＣＤ３のエプシロンサブユニットである（ヒト配列についてＵｎｉＰｒｏｔ ｎｏ． Ｐ０７７６６（バージョン１３０）， ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ ｎｏ． ＮＰ＿０００７２４．１を；カニクイザル［Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ］ 配列についてはＵｎｉＰｒｏｔ ｎｏ． Ｑ９５ＬＩ５（バージョン４９）， ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋ ｎｏ． ＢＡＢ７１８４９．１を参照）。

【0082】

本明細書で使用する「Ｔ細胞活性化」は、Ｔリンパ球、特に細胞傷害性Ｔリンパ球の、増殖、分化、サイトカイン分泌、細胞傷害性エフェクター分子の放出、細胞傷害性活性、及び活性化マーカーの発現から選択される１又は複数の細胞応答を指す。本発明で使用されるＴ細胞活性化治療剤は、Ｔ細胞活性化を誘導することができる。Ｔ細胞活性化を測定するための適切なアッセイは、当技術分野で既知であり、本明細書に記載されている。

【0083】

本明細書で使用される場合、「標的細胞抗原」は、標的細胞、例えば、癌細胞又は腫瘍間質の細胞等の腫瘍内の細胞の表面に提示される抗原決定基を指す。特定の実施態様では、標的細胞抗原はＣＤ２０、特にヒトＣＤ２０（ＵｎｉＰｒｏｔ番号Ｐ１１８３６を参照されたい）である。

【0084】

本明細書において使用される「Ｂ細胞抗原」は、Ｂリンパ球、特に悪性Ｂリンパ球の表面上に存在する抗原決定基を指す（この場合、抗原は「悪性Ｂ細胞抗原」とも呼ばれる）。

【0085】

本明細書において使用される「Ｔ細胞抗原」は、Ｔリンパ球、特に細胞傷害性Ｔリンパ球の表面に提示される抗原決定基を指す。

【0086】

「Ｆａｂ分子」は、免疫グロブリンの重鎖のＶＨ及びＣＨ１ドメイン（「Ｆａｂ重鎖」）と軽鎖のＶＬ及びＣＬドメイン（「Ｆａｂ軽鎖」）とからなるタンパク質を指す。

【0087】

「融合した」とは、成分同士（例えばＦａｂ分子とＦｃドメインサブユニット）が、ペプチド結合により、直接又は１つ若しくは複数のペプチドリンカーを介して結合されていることを意味する。

【0088】

薬剤の「有効量」は、その薬剤が投与される細胞又は組織において生理学的変化を引き起こすために必要な量を指す。

【0089】

作用剤、例えば、医薬組成物の「治療有効量」は、所望の治療結果又は予防結果を達成するための、必要な薬用量かつ必要な時間で、有効な量を指す。薬剤の治療的有効量は、例えば、疾患の副作用を除去し、低下させ、遅延させ、最小限にし、又は予防する。

【0090】

「治療剤」とは、例えば薬学的組成物の、活性成分を意味し、薬剤は、治療されている対象における疾患の自然経過を変えることを目的として対象に投与され、予防のために、又は臨床病理の過程の中で実施され得る。「免疫療法剤」とは、例えば腫瘍に対する対象の免疫応答を回復又は増強する目的で対象に投与される治療剤のことである。

【0091】

「医薬組成物」との用語は、その中に含まれる有効成分の生体活性を有効にし、組成物が投与される被験体に対して受け入れられないほど毒性である追加の構成要素を含まないような形態での製剤を指す。

【0092】

「薬学的に許容される担体」は、薬学的組成物中の活性成分以外の成分であって、対象にとって非毒性である成分を指す。薬学的に許容される担体には、緩衝剤、添加物、安定剤、又は防腐剤が含まれるが、これらに限定されない。

【0093】

「添付文書」又は「使用説明書」という用語は、治療製品の商品包装に通例含まれる説明書を指すのに用いられ、適応症、用法、用量、投与、併用療法、当該治療製品の使用に関する禁忌及び／又は注意事項についての情報を含む。

【0094】

本明細書で述べる「併用治療」という用語は、併用投与（２つ以上の治療剤が同じ又は別個の製剤に含まれる場合）及び別個の投与を包含し、その場合、本明細書で報告する抗体の投与は、１つ又は複数の追加の治療剤、好ましくは１つ又は複数の抗体の投与の前、同時に及び／又は後に起こり得る。

【0095】

「クロスオーバー」Ｆａｂ分子（「Ｃｒｏｓｓｆａｂ」とも称される）とは、Ｆａｂ重鎖と軽鎖の可変ドメイン又は定常ドメインが交換されている（即ち互いによって置き替えられている）Ｆａｂ分子を意味し、即ちクロスオーバーＦａｂ分子は、軽鎖可変ドメインＶＬ及び重鎖定常ドメイン１ ＣＨ１（ＶＬ－ＣＨ１、Ｎ末端からＣ末端の方向に）から構成されるペプチド鎖と、重鎖可変ドメインＶＨ及び軽鎖定常ドメインＣＬ（ＶＨ－ＣＬ、Ｎ末端からＣ末端の方向に）から構成されるペプチド鎖とを含む。簡潔には、Ｆａｂ軽鎖とＦａｂ重鎖の可変ドメインが交換されているクロスオーバーＦａｂ分子において、重鎖定常ドメイン１ ＣＨ１を含むペプチド鎖を、本明細書では（クロスオーバー）Ｆａｂ分子の「重鎖」と呼ぶ。逆に、Ｆａｂ軽鎖とＦａｂ重鎖の定常ドメインが交換されているクロスオーバーＦａｂ分子において、重鎖可変ドメインＶＨを含むペプチド鎖を、ここでは（クロスオーバー）Ｆａｂ分子の「重鎖」と呼ぶ。

【0096】

これに対して、「従来の」Ｆａｂ分子とは、天然フォーマットのＦａｂ分子、すなわち重鎖の可変ドメイン及び定常ドメイン（Ｎ末端からＣ末端方向に、ＶＨ－ＣＨ１）からなる重鎖と、軽鎖の可変ドメイン及び定常領域（Ｎ末端からＣ末端方向に、ＶＬ－ＣＬ）からなる軽鎖とを含むＦａｂ分子を意味する。

【0097】

用語「ポリヌクレオチド」は、単離された核酸分子又はコンストラクト、例えばメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ウイルス由来のＲＮＡ、又はプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ）を指す。ポリヌクレオチドは、一般的なホスホジエステル結合又は一般的ではない結合（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）に見られるようなアミド結合）を含み得る。用語「核酸分子」とは、ポリヌクレオチドに存在する、任意の１つ又は複数の核酸セグメント、例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ断片を指す。

【0098】

「単離された」核酸分子又はポリヌクレオチドとは、その天然環境から取り出された核酸分子、ＤＮＡ又はＲＮＡを意図する。例えば、ベクターに含有されるポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチドは、本発明のために単離されたものと見なされる。単離されたポリヌクレオチドの更なる例には、異種宿主細胞内に維持される組換えポリヌクレオチド、又は溶液中の（部分的に又は実質的に）精製されたポリヌクレオチドが含まれる。単離ポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチド分子を通常含む細胞に含まれるポリヌクレオチド分子を含むが、そのポリヌクレオチド分子は、染色体外に、又はその本来の染色体上の位置とは異なる染色体上の位置に存在している。単離されたＲＮＡ分子は、ｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏでの本発明のＲＮＡ転写物、及びポジティブ及びネガティブの鎖形態、二本鎖形態を含む。本発明の単離ポリヌクレオチド又は核酸は、合成により製造されたそのような分子を更に含む。また、ポリヌクレオチド又は核酸は、プロモーター、リボソーム結合部位又は転写ターミネーター等の調節エレメントを含んでも含まなくてもよい。

【0099】

本発明の参照ヌクレオチド配列と、例えば、少なくとも９５％「同一」であるヌクレオチド配列を有する核酸又はポリヌクレオチドとは、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、参照ヌクレオチド配列の各１００ヌクレオチドあたり５つまでの点突然変異を含み得ること以外は、参照配列と同一であることを意味する。換言すれば、参照ヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るために、参照配列中最大５％のヌクレオチドが削除されるか又は別のヌクレオチドで置換されてもよく、或いは参照配列中の全ヌクレオチドの最大５％の数のヌクレオチドが参照配列に挿入されてよい。参照配列のこのような改変は、参照ヌクレオチド配列の５’若しくは３’末端位置で発生しても、これらの末端位置の間の任意の位置で発生してもよく、参照配列内の残基間に個別に散在しているか又は参照配列内に１若しくは複数の連続したグループで散在しているかのいずれかである。実際問題として、任意の特定のポリヌクレオチド配列が、本発明のヌクレオチド配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるかは、ポリペプチドについて上述されるものなどのコンピュータプログラム（例えば、ＡＬＩＧＮ－２）を使用して決定することができる。

【0100】

用語「発現カセット」とは、標的細胞内の特定の核酸の転写を可能にする一連の特定の核酸エレメントを用いて、組換え又は合成により生成されたポリヌクレオチドを指す。組換え発現カセットは、プラスミド、染色体、ミトコンドリアＤＮＡ、プラスチドＤＮＡ、ウイルス又は核酸断片に組み込むことができる。典型的には、発現ベクターの組換え発現カセット部分には、他の配列の中でも、転写される核酸配列及びプロモーターが含まれる。特定の実施態様では、本発明の発現カセットは、本発明の二重特異性抗原結合分子をコードするポリヌクレオチド配列又はその断片を含む。

【0101】

用語「ベクター」又は「発現ベクター」は、「発現コンストラクト」と同義であり、ＤＮＡ分子であって、それが標的細胞内で作用可能に結合する特定の遺伝子の発現を導入し、指示するために使用されるＤＮＡ分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造物としてのベクター、及び導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。本発明の発現ベクターは、発現カセットを含む。発現ベクターは、大量の安定なｍＲＮＡの転写を可能にする。発現ベクターが標的細胞内部に入ると、遺伝子によってコードされているリボ核酸分子又はタンパク質が、細胞転写及び／又は翻訳機構によって産生される。ある実施態様では、本発明の発現ベクターは、本発明の二重特異性抗原結合分子又はその断片をコードするポリヌクレオチド配列含む発現カセットを含む。

【0102】

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、この技術分野の当業者であれば容易に理解する、それぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書中の「約」の値又はパラメータへの言及は、その値又はパラメータ自体に対する実施態様を含む（記載する）。

【0103】

「Ｂ細胞増殖性障害」とは、患者のＢ細胞の数が健常者のＢ細胞の数と比較して増加する疾患、特にＢ細胞数の増加が疾患の原因又は証明である疾患を意味する。「ＣＤ２０陽性Ｂ細胞増殖性疾患」は、Ｂ細胞、特に悪性Ｂ細胞（通常のＢ細胞に加えて）がＣＤ２０を発現するＢ細胞増殖性疾患である。

【0104】

例示的なＢ細胞増殖障害には、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ；例えば、他に特定されない再発性又は難治性のＤＬＢＣＬ（ＮＯＳ））、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫（ＨＧＢＣＬ；例えば、ＨＧＢＣＬ ＮＯＳ、二重適合ＨＧＢＣＬ及び三重適合ＨＧＢＣＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、及びＦＬから発生したＤＬＢＣＬ形質転換ＦＬ；ｔｒＦＬ））；濾胞性リンパ腫（ＦＬ）（Ｇｒａｄｅ １－３ｂ ＦＬを含む）；マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）；並びに辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）（脾臓、結節又は結節外ＭＺＬを含む）。一実施態様では、ＣＤ２０陽性Ｂ細胞増殖性障害は、再発性又は難治性のＮＨＬ（例えば、再発性若しくは難治性のＤＬＢＣＬ、再発性若しくは難治性のＦＬ、又は再発性若しくは難治性のＭＣＬ）である。

【0105】

「難治性疾患」は、一次療法に対する完全寛解なしと定義される。一実施態様では、難治性疾患は、先行する治療に対する応答がないこと、又は先行する治療の６ヶ月以内に再発することとして定義される。一実施態様では、難治性疾患は以下の１つ又は複数によって特徴づけられる：一次療法に対する最良の応答としての進行性疾患（ＰＤ）、少なくとも４サイクルの一次療法（例えば、リツキシマブ、シクロホスファミド、塩酸ドキソルビシン（ヒドロキシダウノルビシン）、硫酸ビンクリスチン（オンコビン）、及びプレドニゾン（Ｒ－ＣＨＯＰとも略される）の４サイクル）後の最良の反応としての安定性疾患（ＳＤ）、又は少なくとも６サイクル後の最良の応答としての部分応答（ＰＲ）、及び部分応答後の生検で証明された残存疾患若しくは疾患進行。「再発性疾患」は、一次療法に対する完全寛解と定義される。一実施態様では疾患の再発は生検によって証明される。一実施態様では、患者は、少なくとも２つの以前の全身治療レジメン（アントラサイクリンを含む少なくとも１つの事前レジメン、及び抗ＣＤ２０指向性療法を含む少なくとも１つの事前レジメンを含む）の後に再発したか、又はそれに応答しなかった。

【0106】

「個体」又は「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物には、限定されないが、家畜動物（例えばウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ウマ）、霊長類（例えばヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、及びげっ歯類（例えばマウス及びラット）が含まれる。好ましくは、個体又は対象はヒトである。一例では、対象集団中の各対象はヒトである。一例では、基準対象集団中の各対象はヒトである。

【0107】

本明細書で用いられる場合、「治療」（及び「治療する」又は「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」などの文法的変形）は、治療されている個体の疾患の自然経過を変えようと試みる臨床的介入を指し、予防のために、又は臨床病理の過程の中で実施され得る。治療の望ましい効果には、限定されないが、疾患の発症又は再発を予防すること、症状の緩和、疾患の直接的又は間接的な病理学的帰結の縮小、転移の予防、疾患の進行の速度を遅らせること、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解又は予後の改善が含まれる。いくつかの実施態様において、本発明の方法は、疾患の発症を遅延させるか、又は疾患の進行を遅らせるために使用される。

【0108】

本明細書で使用される場合、障害又は疾患の「進行を遅延させること」とは、疾患又は障害（例えば、ＣＤ２０陽性Ｂ細胞増殖性障害、例えば、ＮＨＬ、例えば、ＤＬＢＣＬ）の発症を延期する、妨げる、減速させる、遅滞させる、安定化させる、及び／又は延滞させることを意味する。このような遅延は、治療される疾患及び／又は個体の病歴に応じて、様々な期間であり得る。当業者には明らかであるように、十分な又は有意な遅延は、事実上、個体が疾患を発症しないという点で予防を包含することができる。例えば、後期のがんでは、中枢神経系（ＣＮＳ）転移の発症が遅延され得る。

【0109】

「低減させる」又は「阻害する」とは、例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又はそれを超える全体的な低減を引き起こす能力を意味する。明確にするために、この用語は、０への低減（又は分析方法の検出限界未満）、すなわち完全な消失又は排除も含む。特定の実施態様では、低減又は阻害は、二重特異性抗体の標的用量を変更せずに予め設定して投与した場合と比較して、本発明のステップアップ投与レジメンを用いた抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体による治療後の、サイトカイン主導型毒性（例えば、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ））、点滴関連反応（ＩＲＲ）、マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）、神経毒性、重度の腫瘍溶解症候群（ＴＬＳ）、好中球減少症、血小板減少症、肝臓酵素の上昇、及び／又は中枢神経系（ＣＮＳ）毒性などの望ましくない事象の低減又は阻害を指し得る。他の実施態様では、低減する又は阻害するとは、抗体Ｆｃ領域によって媒介される抗体のエフェクター機能を指すことができ、かかるエフェクター機能は、具体的に補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、及び抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を含む。他の実施態様において、低減又は阻害は、治療されるＣＤ２０陽性Ｂ細胞増殖性障害（例えば、ＮＨＬ（例えば、ＤＬＢＣＬ）、ＦＬ（例えば、再発性及び／又は難治性ＦＬ、又は形質転換ＦＬ）、ＭＣＬ、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、又はＰＭＬＢＣＬ）の症状、転移の存在若しくは大きさ、又は原発腫瘍の大きさを指し得る。

【0110】

本明細書で使用される場合、「投与」とは、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の薬学的組成物の投与量を対象に与える方法を意味する。本明細書に記載の薬学的組成物は、静脈内投与（例えば、静脈内点滴）することができる。

【0111】

本明細書で使用される場合、「バッファー」は、その酸塩基コンジュゲート成分の作用によりｐＨの変化に抵抗する緩衝液（本明細書では「緩衝剤」とも呼ばれる）を指す。いくつかの実施態様では、本発明のバッファーは、約５から約６の範囲のｐＨを有する。本発明で使用するための例示的な緩衝剤には、ヒスチジン（例えば、ヒスチジンＨＣｌ）、酢酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、又はそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施態様において、ヒスチジンは、ヒスチジン塩酸塩（ヒスチジンＨＣｌ）、ヒスチジン酢酸塩、リン酸一塩基性ナトリウム、リン酸二塩基性ナトリウム、リン酸三塩基性ナトリウム、リン酸一塩基性カリウム、リン酸二塩基性カリウム、リン酸三塩基性カリウム、又はこれらの混合物である。

【0112】

本発明による薬学的組成物はまた、１つ又は複数の等張化剤を含んでもよい。「等張化剤」という用語は、製剤の張度を調節するために使用される薬学的に許容される添加物を示す。製剤は、低張性、等張性又は高張性であってもよい。概して、等張性は、通常はヒト血清（約２５０－３５０ ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）の浸透圧に対する溶液の浸透圧に関する。本発明の製剤は、低張性、等張性又は高張性であってもよいが、好ましくは等張性である。高張性製剤は、液体であるか、又は固体形態（例えば、凍結乾燥した形態）から再構築された液体であり、比較されるいくつかの他の溶液、例えば、生理学的塩溶液及び血清と同じ張度を有する溶液を示す。適切な等張化剤は、塩化ナトリウム若しくは塩化カリウムなどの塩、グリセリン及びアミノ酸又は糖類由来のいずれかの成分、特にグルコースを含むがこれらに限定されない。等張化剤は、概して、≧２００ｍＭの量で使用される。

【0113】

安定剤及び等張化剤の中に、両方に機能し得る、即ち同時に安定剤及び等張化剤となり得る化合物のグループが存在する。その例は、糖類、アミノ酸類、ポリオール類、シクロデキストリン類、ポリエチレングリコール類及び塩類の群に見出すことができる。同時に安定剤及び等張化剤であり得る糖の一例は、トレハロースである。

【0114】

本明細書で使用される場合、「界面活性剤」とは、表面活性剤、好ましくは、非イオン性界面活性剤を指す。本明細書における界面活性剤の例には、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０、ポリソルベート８５）；ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８）；ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）；オクチルグリコシドナトリウム；ラウリルスルホベタイン、ミリスチルスルホベタイン、リノレイルスルホベタイン、又はステアリルスルホベタイン；ラウリルサルコシン、ミリスチルサルコシン、リノレイルサルコシン、又はステアリルサルコシン；リノレイルベタイン、ミリスチルベタイン、又はセチルベタイン；ラウロアミドプロピルベタイン、コカミドプロピルベタイン、リノールアミドプロピルベタイン、ミリスタミドプロピルベタイン、パルミドプロピルベタイン、又はイソステアラミドプロピルベタイン（例えば、ラウロアミドプロピル）；ミリスタミドプロピルジメチルアミン、パルミドプロピルジメチルアミン、又はイソステアラミドプロピルジメチルアミン；メチルココイルタウリンナトリウム、又はメチルオレイルタウリン二ナトリウム；及びＭＯＮＡＱＵＡＴ^ＴＭシリーズ（ニュージャージー州パターソンのＭｏｎａ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）；ポリエチルグリコール、ポリプロピレングリコール、及びエチレン及びプロピレングリコールのコポリマー（例えば、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）タイプのブロックコポリマー、例えば、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ－６８）；などが含まれる。一実施態様では、本明細書における界面活性剤は、ポリソルベート２０（ＰＳ２０）である。さらに別の実施態様では、本明細書における界面活性剤は、ポロキサマー１８８（Ｐ１８８）である。

【0115】

「防腐剤」は、製剤中の細菌作用を実質的に低減し、したがって例えば多用途製剤の生産を容易にするために、任意選択的に製剤に含めることができる化合物である。可能性のある保存剤の例としては、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ヘキサメトニウムクロリド、ベンザルコニウムクロリド（アルキル基が長鎖化合物であるアルキルベンジルジメチルアンモニウムクロリドの混合物）及びベンゼトニウムクロリドが挙げられる。他の種類の防腐剤には、フェノール、ブチル、及びベンジルアルコールなどの芳香族アルコール、メチル又はプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール；３－ペンタノール、及びｍ－クレゾールが含まれる。一実施態様では、本明細書の防腐剤はベンジルアルコールである。いくつかの実施態様では、製剤は保存剤を含まない。

【0116】

「安定な」薬学的組成物は、その中の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）が、保存時に物理的安定性及び／又は化学的安定性及び／又は生物学的活性を本質的に保持する薬学的製剤である。好ましくは、製剤は、保存時（例えば、凍結貯蔵時）に、その物理的及び化学安定性、並びにその生物学的活性を本質的に保持する。保存期間は、一般に、製剤の意図される貯蔵寿命に基づいて選択される。タンパク質の安定性を測定するための種々の分析技術が当技術分野で利用可能であり、例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ， ２４７－３０１， Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ Ｅｄ．， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｎ．Ｙ．， Ｐｕｂｓ． （１９９１）及びＪｏｎｅｓ， Ａ． Ａｄｖ． Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ． １０： ２９－９０ （１９９３）に概説がある。安定性は、選択された期間にわたり、選択された量の光暴露及び／又は温度で測定される。安定性は、凝集体形成の評価（例えば、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、濁度を測定することにより、かつ／又は目視検査により）；ＲＯＳ形成の評価（例えば、光ストレスアッセイ又は２，２’－アゾビス（２－アミジノプロパン）二塩酸塩（ＡＡＰＨ）ストレスアッセイを使用することにより）；抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の特定のアミノ酸残基の酸化（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）のＭｅｔ残基）；カチオン交換クロマトグラフィー、画像キャピラリー等電点電気泳クロマトグラフィー、又はキャピラリゾーン電気泳動を使用した電荷不均一性の評定；アミノ末端又はカルボキシ末端配列分析；質量分光分析；還元されたインタクトな抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体を比較するためのＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析；ペプチドマップ（例えば、トリプシン又はＬＹＳ－Ｃ）分析；抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の生物学的活性又は標的結合機能（例えば、Ｔ細胞及び／又はＢ細胞への結合）の評価等を含む様々な異なる方法で質的及び／又は量的に評価され得る。不安定性は、凝集、脱アミド（例えば、Ａｓｎ脱アミド）、酸化（例えば、Ｍｅｔ酸化及び／又はＴｒｐ酸化）、異性化（例えば、Ａｓｐ異性化）、クリッピング／加水分解／断片化（例えば、ヒンジ領域断片化）、スクシンイミド形成、不対システイン、Ｎ末端伸長、Ｃ末端プロセシング、及びグリコシル化差異などのうちのいずれか１つ又は複数を伴い得る。

【0117】

本発明による製剤との関連においてここで使用される用語「液体」は、気圧下において少なくとも約２から約８℃の温度で液体である製剤を意味する。

【0118】

本出願において、別途明記されない限り、利用される技術は、以下のようないくつかのよく知られた参考文献のいずれかに見出すことができる：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （Ｓａｍｂｒｏｏｋ， ｅｔ ａｌ．， １９８９， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）、ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ： Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ （Ｉｎｎｉｓ， ｅｔ ａｌ． １９９０． Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ）、及びＨａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ （１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４ （Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， ＮＹ）。

【0119】

必要に応じて、市販のキット及び試薬の使用を含む手順は、別途明記されない限り、一般に、製造業者が定義したプロトコル及び／又はパラメータに従って実施される。したがって、本方法及び使用を記載する前に、本発明は、特定の方法論、プロトコル、細胞株、動物種又は属、構築物、及びそのように記載された試薬に限定されず、当然ながら、変化し得ることを理解されたい。本明細書で使用される用語は、特定の実施態様を説明することのみを目的とし、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定することを意図しないことも理解されるべきである。

【0120】

ＩＩＩ．薬学的組成物
本発明は、例えばＢ細胞増殖性障害（例えば、非ホジキンリンパ腫、ＮＨＬ）の治療のための、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）を低濃度で含む薬学的組成物、及びその使用を提供する。本発明の医薬組成物は、低濃度の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）を担持するように製剤化することができ、保存中及び臨床投与中の吸着によるタンパク質の損失に対して安定である。吸着は、臨床投与前にさらなる希釈と取り扱いを必要とする低濃度の抗体では重大な問題となり、低い力価をもたらす可能性がある。グロフィタマブは、２．５ｍｇ及び１０ｍｇの用量（段階分割投与）と、３０ｍｇの維持量（目標量、一律投与）で投与される。グロフィタマブは、０．９％又は０．４５％の塩化ナトリウムで希釈した後、ＩＶバッグ点滴によるＩＶ投与が意図されている。投与量は、０．０５ｍｇ／ｍｌから０．６ｍｇ／ｍｌの投与溶液濃度によってＩＶバッグ内で可能になる。

【0121】

一実施態様では、以下を含む液体薬学的組成物が提供される：
約５．０から約６．０の範囲のｐＨで、
約１から２５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えばグロフィタマブ）；
約１０から５０ｍＭの緩衝剤；
約≧２００ｍＭの等張化剤；
約０～１５ｍＭのメチオニン；及び
約≧０．２ｍｇ／ｍｌの界面活性剤。

【0122】

一実施態様では、以下を含む液体薬学的組成物が提供される：
約５．０から約６．０の範囲のｐＨで、
約５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えばグロフィタマブ）；
約１０から５０ｍＭの緩衝剤；
約≧２００ｍＭの等張化剤；
約０～１５ｍＭのメチオニン；及び
約≧０．２ｍｇ／ｍｌの界面活性剤。

【0123】

一実施態様では、以下を含む液体薬学的組成物が提供される：
約５．０から約６．０の範囲のｐＨで、
約０．９から１．１ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えばグロフィタマブ）；
約１０から５０ｍＭの緩衝剤；
約≧２００ｍＭの等張化剤；
約０～１５ｍＭのメチオニン；及び
約≧０．２ｍｇ／ｍｌの界面活性剤。

【0124】

一実施態様では、以下を含む液体薬学的組成物が提供される：
約５．０から約６．０の範囲のｐＨで、
約１ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えばグロフィタマブ）；
約１０から５０ｍＭの緩衝剤；
約≧２００ｍＭの等張化剤；
約０～１５ｍＭのメチオニン；及び
約≧０．２ｍｇ／ｍｌの界面活性剤。

【0125】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の濃度は、約１から５ｍｇ／ｍｌの範囲である。一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の濃度は、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１ｍｇ／ｍｌ、約１．１ｍｇ／ｍｌ、約１．５ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ、約３ｍｇ／ｍｌ、約４ｍｇ／ｍｌ、又は約５ｍｇ／ｍｌである。一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の濃度は、約６ｍｇ／ｍｌ、約７ｍｇ／ｍｌ、約８ｍｇ／ｍｌ、約９ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ、約１１ｍｇ／ｍｌ、約１２ｍｇ／ｍｌ、約１３ｍｇ／ｍｌ、約１４ｍｇ／ｍｌ、約１５ｍｇ／ｍｌ、約１６ｍｇ／ｍｌ、約１７ｍｇ／ｍｌ、約１８ｍｇ／ｍｌ、約１９ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約２１ｍｇ／ｍｌ、約２２ｍｇ／ｍｌ、約２３ｍｇ／ｍｌ、約２４ｍｇ／ｍｌ、約２５ｍｇ／ｍｌ、約２６ｍｇ／ｍｌ、約２７ｍｇ／ｍｌ、約２８ｍｇ／ｍｌ、約２９ｍｇ／ｍｌ、又は約３０ｍｇ／ｍｌである。

【0126】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の濃度は、約０．９－１．１ｍｇ／ｍｌの範囲である。一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の濃度は、約１ｍｇ／ｍｌである。

【0127】

一実施態様では、液体薬学的組成物は、ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインを含む抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）であって、
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含む抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体を含む。

【0128】

一実施態様では、液体薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、配列番号７の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号８の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域配列とを含む、少なくとも１つの抗原結合ドメインを含む。さらなる実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、配列番号７の重鎖可変領域配列と、配列番号８の軽鎖可変領域配列とを含む、ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインを含む。

【0129】

一実施態様では、液体薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインを含む。

【0130】

一実施態様では、液体薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、配列番号１５の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号１６の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域配列とを含む、少なくとも１つの抗原結合ドメインを含む。さらなる実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、配列番号１５の重鎖可変領域配列と、配列番号１６の軽鎖可変領域配列とを含む、ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインを含む。

【0131】

一実施態様では、液体薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、
ａ）ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
を含む。

【0132】

一実施態様では、液体薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、
（ｉ）配列番号７の重鎖可変領域配列及び配列番号８の軽鎖可変領域配列を含む、ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
（ｉｉ）配列番号１５の重鎖可変領域配列及び配列番号１６の軽鎖可変領域配列を含む、ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
を含む。

【0133】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）のＣＤ３に特異的に結合する抗原結合ドメインは、抗体断片、特にＦａｂ分子又はｓｃＦｖ分子、より具体的にはＦａｂ分子である。特定の実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）のＣＤ３に特異的に結合する抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖の可変ドメイン又は定常ドメインが交換される（すなわち、互いに置き換えられる）クロスオーバーＦａｂ分子である。

【0134】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）のＣＤ２０に特異的に結合する抗原結合ドメインは、抗体断片、特にＦａｂ分子又はｓｃＦｖ分子、より具体的にはＦａｂ分子である。特定の実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）のＣＤ２０に特異的に結合する抗原結合ドメインは、従来のＦａｂ分子である。

【0135】

一実施態様では、液体薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインとを含む。一実施態様では、液体薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３抗体は、ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、ＣＤ２０に特異的に結合する第２及び第３の抗原結合ドメインとを含む。一実施態様では、第１の抗原結合ドメインはクロスオーバーＦａｂ分子であり、第２及び第３の抗原結合ドメインはそれぞれ、従来のＦａｂ分子である。一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、Ｆｃドメインをさらに含む。液体薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、本明細書に記載されるように、Ｆｃ領域及び／又は抗原結合ドメインにおける修飾を含み得る。一実施態様では、液体薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、Ｆｃ受容体への結合及び／又はエフェクター機能を低下させる１つ又は複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む。一実施態様では、液体薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ（ＥＵ番号付け）を含むＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む。

【0136】

一実施態様では、液体薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、
（ｉ）Ｆａｂ重鎖のＣ末端において、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しているＣＤ３に特異的に結合する抗原結合ドメインと；
（ｉｉ）Ｆａｂ重鎖のＣ末端において、ＣＤ３に特異的に結合する抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しているＣＤ２０に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと；
（ｉｉｉ）Ｆａｂ重鎖のＣ末端において、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合しているＣＤ２０に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインと；
を含む。

【0137】

特定の実施態様では、液体薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二、特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、
ａ）ＣＤ３、特にＣＤ３イプシロンに特異的に結合する第１のＦａｂ分子であって、Ｆａｂ軽鎖とＦａｂ重鎖の可変ドメインＶＬとＶＨが互いによって交換されている第１のＦａｂ分子と；
（ｂ）ＣＤ２０に特異的に結合する第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子であって、第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬでは、１２４位のアミノ酸がリジン（Ｋ）により置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、１２３位のアミノ酸がリジン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）により、特にアルギニン（Ｒ）により置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＨ１では、１４７位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されており（ＥＵ番号付け）、２１３位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されている（ＥＵ番号付け）、第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子と；
ｃ）安定な会合が可能な第１のサブユニットと第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインと
を含む。

【0138】

一実施態様では液体薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、ＣＤ２０に特異的に結合する２つの抗原結合ドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する１つの抗原結合ドメインとを含む。

【0139】

一実施態様では、液体薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、ＣＤ２０については二価であり、ＣＤ３については一価である。

【0140】

一実施態様では、ａ）の第１のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてｃ）のＦｃドメインのサブユニットの一方のＮ末端に融合しており、ｂ）の第２のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてａ）の第１のＦａｂ分子の重鎖のＮ末端に融合しており、ｂ）の第３のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてｃ）のＦｃドメインの他方のサブユニットのＮ末端に融合している。一実施態様では、ａ）の第１のＦａｂ分子は、配列番号１５の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域と、配列番号１６の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域とを含む。

【0141】

またさらなる実施態様では、ａ）の第１のＦａｂ分子は、配列番号１５の重鎖可変領域配列と、配列番号１６の軽鎖可変領域配列とを含む。

【0142】

一実施態様では、ｂ）の第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子はそれぞれ、配列番号７の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域と、配列番号８の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域とを含む。

【0143】

一実施態様では、ｂ）の第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子はそれぞれ、配列番号７の重鎖可変領域配列と、配列番号８の軽鎖可変領域配列とを含む。

【0144】

特定の実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、配列番号１７の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドと、配列番号１８の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドと、配列番号１９の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドと、配列番号２０の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドとを含む。さらなる特定の実施態様では、二重特異性抗体は、配列番号１７のポリペプチド配列と、配列番号１８のポリペプチド配列と、配列番号１９のポリペプチド配列と、配列番号２０のポリペプチド配列とを含む。さらに特定の実施態様では、二重特異性抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含む１つのポリペプチド鎖と、配列番号１８のアミノ酸配列を含む１つのポリペプチド鎖と、配列番号１９のアミノ酸配列を含む１つのポリペプチド鎖と、それぞれ配列番号２０のアミノ酸配列を含む２つのポリペプチド鎖とを含む。

【0145】

特定の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ＰＣＴ公報国際公開第２０１６／０２０３０９号並びに欧州特許出願番号ＥＰ１５１８８０９３及びＥＰ１６１６９１６０（それぞれ、参照によりその全体が本明細書に援用される）に記載されている。

【0146】

一実施態様では、液体薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、ＣＤεに特異的に結合する。

【0147】

一実施態様では、液体薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ＣＤ３抗体は、抗体Ｈ２Ｃ（国際公開第２００８／１１９５６７号）、抗体Ｖ９（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｕｐｐｌ ７， ４５－５０ （１９９２）及び米国特許第６０５４２９７号）、抗体ＦＮ１８（Ｎｏｏｉｊ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９， ９８１－９８４ （１９８６））、抗体ＳＰ３４（Ｐｅｓｓａｎｏ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ ４， ３３７－３４０ （１９８５））、抗体ＯＫＴ３（Ｋｕｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０６， ３４７－３４９ （１９７９））、抗体ＷＴ３１（Ｓｐｉｔｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５， １９２２ （１９８５））、抗体ＵＣＨＴ１（Ｂｕｒｎｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２９， １４５１－１４５７ （１９８２））、抗体７Ｄ６（Ｃｏｕｌｉｅ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１－１７０９ （１９９１））、又は抗体Ｌｅｕ－４と結合について競合し得る。いくつかの実施態様では、液体薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、国際公開第２００５／０４０２２０号、同第２００５／１１８６３５号、同第２００７／０４２２６１号、同第２００８／１１９５６７号、同第２００８／１１９５６５号、同第２０１２／１６２０６７号、同第２０１３／１５８８５６号、同第２０１３／１８８６９３号、同第２０１３／１８６６１３号、同第２０１４／１１０６０１号、同第２０１４／１４５８０６号、同第２０１４／１９１１１３号、同第２０１４／０４７２３１号、同第２０１５／０９５３９２号、同第２０１５／１８１０９８号、同第２０１５／００１０８５号、同第２０１５／１０４３４６号、同第２０１５／１７２８００号、同第２０１６／０２０４４４号、又は同第２０１６／０１４９７４号に記載されるようにＣＤ３に特異的に結合する抗原結合部分も含み得る。

【0148】

いくつかの実施態様では、液体薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、リツキシマブ、オビヌツズマブ、オクレリズマブ、オファツムマブ、オカラツズマブ、ベルツズマブ、及びブリツキシマブからの抗体又は抗原結合部分を含み得る。

【0149】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、グロフィタマブである。

【0150】

いくつかの実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、本明細書で命名された抗体のジェネリック、バイオシミラー、又は比較できない生物学的バージョンから構成され得る。

【0151】

一実施態様では、本明細書で提供される液体薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、グロフィタマブである。グロフィタマブ（ＷＨＯ医薬品情報（医薬品の国際非専有名称）、推奨ＩＮＮ：リスト８３、２０２０年、３４巻、１号、ｐ．３９、別名：ＣＤ２０－ＴＣＢ、ＲＯ７０８２８５９、又はＲＧ６０２６；ＣＡＳ番号：２２２９０４７－９１－８）は、Ｂ細胞上のＣＤ２０に２価で結合し、Ｔ細胞上のＣＤ３、特にＣＤ３イプシロン鎖（ＣＤ３ｅ）に１価で結合する２：１の分子構成を有する新規のＴ細胞エンゲージング二重特異性（ＴＣＢ）完全長抗体である。そのＣＤ３結合領域は、可動性リンカーを介して、ＣＤ２０結合領域のうちの１つに頭からテールまで融合している。この構造により、グロフィタマブは、１：１構成の他のＣＤ２０－ＣＤ３二重特異性抗体に対して優れたｉｎ ｖｉｔｒｏ効力を有し、前臨床ＤＬＢＣＬモデルにおいて大きな抗腫瘍効果をもたらす。ＣＤ２０の二価性は、競合する抗ＣＤ２０抗体の存在下でこの効力を保全し、これらの薬剤による前治療又は共治療の機会を提供する。グロフィタマブは、ＦｃｇＲ及びＣ１ｑとの結合が完全に消失した、操作されたヘテロ二量体Ｆｃ領域を含む。Ｔ細胞上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体のＣＤ３ｅとヒトＣＤ２０発現腫瘍細胞とに同時に結合することにより、Ｔ細胞の活性化、増殖、及びサイトカイン放出に加えて、腫瘍細胞の溶解を誘導する。グロフィタマブによるＢ細胞の溶解はＣＤ２０特異的であり、ＣＤ２０が発現していない場合又はＴ細胞のＣＤ２０発現細胞への結合（架橋）が同時に起こらない場合には生じない。死滅に加えて、Ｔ細胞は、Ｔ細胞活性化マーカー（ＣＤ２５及びＣＤ６９）の増加、サイトカイン放出（ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－１０）、細胞傷害性顆粒放出（グランザイムＢ）、及びＴ細胞増殖によって検出されるＣＤ３架橋による活性化を受ける。グロフィタマブの分子構造の概略図を図２に示す。グロフィタマブの配列を表２にまとめる。

【0152】

いくつかの実施態様では、緩衝剤は、ヒスチジン、酢酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、又はそれらの組み合わせである。いくつかの実施態様では、ヒスチジンは、酢酸ヒスチジンである。代替的な緩衝剤には、ヒスチジン塩酸塩（ヒスチジンＨＣｌ）、ヒスチジン酢酸塩、リン酸一塩基性ナトリウム、リン酸二塩基性ナトリウム、リン酸三塩基性ナトリウム、リン酸一塩基性カリウム、リン酸二塩基性カリウム、リン酸三塩基性カリウム、又はこれらの混合物が含まれる。特定の実施態様では、液体薬学的組成物は、ヒスチジンバッファー、すなわち、緩衝剤として、ヒスチジン、概してＬ－ヒスチジンを有するバッファーを含む。特定の実施態様では、緩衝剤は、Ｌ－ヒスチジン、すなわち、Ｌ－ヒスチジン、又はＬ－ヒスチジンとＬ－ヒスチジンＨＣｌとの混合物を含み、ｐＨ調整が塩酸を用いて達成されているバッファーを含む。Ｌ－ヒスチジンＨＣｌバッファーは、適量のＬ－ヒスチジン及びＬ－ヒスチジン塩酸塩を水に溶解することにより、又は適量のＬ－ヒスチジンを水に溶解し、塩酸の付加によりｐＨを所望の値に調整することにより、調製することができる。

【0153】

特定の実施態様では、緩衝剤（例えば、ヒスチジン、例えば、Ｌ－ヒスチジンＨＣｌ）は、１０ｍＭから５０ｍＭの濃度である。例えば、緩衝剤は、１０ｍＭから１５ｍＭ、又は１５ｍＭから２０ｍＭ、例えば、６ｍＭから１８ｍＭ、７ｍＭから１６ｍＭ、８ｍＭから１５ｍＭ、又は９ｍＭから１２ｍＭ、例えば、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、又は約２０ｍＭであり得る。特に、緩衝剤（例えば、ヒスチジン、例えば、Ｌ－ヒスチジンＨＣｌ）の濃度は、約１５から２５ｍＭである。一実施態様では、緩衝剤（例えば、ヒスチジン、例えば、Ｌ－ヒスチジンＨＣｌ）は、約２０ｍＭの濃度である。

【0154】

使用されるバッファーに関係なく、ｐＨは、当技術分野で既知の酸又は塩基、例えば、塩酸、酢酸、リン酸、硫酸、及びクエン酸、水酸化ナトリウム、及び水酸化カリウムを用いて、約５．０から約６．０の範囲、好ましくは約５．２から約５．８のｐＨの値に調整され得る。

【0155】

本発明の発明者によって、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）であって、
ａ）ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
を含む、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、約５．２から約５．８のｐＨの組成物中で特に安定していることを発見した。一実施態様では、緩衝剤は、約５．２から約５．８のｐＨ、特に約５．５のｐＨを提供する。

【0156】

いくつかの実施態様では、薬学的組成物は、糖、アミノ酸、塩などの等張化剤を含む。等張化剤が糖である実施態様では、糖は、例えば、スクロース、グルコース、グリセロール又はトレハロースであり得る。特定の実施態様では、糖は、スクロース、任意選択的にＤ－スクロースである。いくつかの実施態様では、等張化剤は、スクロース又は塩化ナトリウムのいずれかである。等張化剤（例えば、糖、例えばスクロース）は、少なくとも約≧２００ｍＭの濃度であり得る。例えば、等張化剤（例えば、糖、例えば、スクロース）は、例えば、２００ｍＭから２２０ｍＭ、２２０ｍＭから２４０ｍＭ、２４０ｍＭから２６０ｍＭ、２６０ｍＭから２８０ｍＭ、２８０ｍＭから３００ｍＭ、３００ｍＭから３２０ｍＭ、３２０ｍＭから３４０ｍＭ、３４０ｍＭから３６０ｍＭ、３６０ｍＭから３８０ｍＭ、３８０ｍＭから４００ｍＭ、４００ｍＭから４２０ｍＭ、４２０ｍＭから４４０ｍＭ、４４０ｍＭから４６０ｍＭ、４６０ｍＭから４８０ｍＭ、又は４８０ｍＭから５００ｍＭ、例えば、２００ｍＭから３００ｍＭ、例えば、約２００ｍＭ、約２１０ｍＭ、約２２０ｍＭ、約２３０ｍＭ、約２４０ｍＭ、約２５０ｍＭ、約２６０ｍＭ、約２７０ｍＭ、約２８０ｍＭ、約２９０ｍＭ、約３００ｍＭ、約３５０ｍＭ、約４００ｍＭ、約４５０ｍＭ、又は約５００ｍＭであり得る。いくつかの実施態様では、等張化剤の濃度は約２００ｍＭから２８０ｍＭである。いくつかの実施態様では、等張化剤の濃度は約２４０ｍＭである。特定の一実施態様では、等張化剤はスクロースであり、少なくとも約２００ｍＭの濃度、すなわち≧約２００ｍＭの濃度で存在する。他の特定の実施態様では、等張化剤はスクロース（例えば、Ｄ－スクロース）であり、約２００ｍＭ～２８０ｍＭの濃度で存在する。特定の一実施態様では、等張化剤はスクロース（例えば、Ｄ－スクロース）であり、約２４０ｍＭの濃度で存在する。

【0157】

いくつかの実施態様では、液体薬学的組成物は、安定剤としてメチオニンを含む。

【0158】

任意の適切な濃度の安定剤メチオニンが使用され得る。例えば、先述の薬学的組成物のいずれかのいくつかの実施態様では、安定剤（例えば、メチオニン）の濃度は、約０．０１ｍＭから約１５ｍＭ、例えば、約０．０１ｍＭ、約０．０５ｍＭ、約０．１ｍＭ、約０．２ｍＭ、約０．３ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．５ｍＭ、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、又は約１５ｍＭである。

【0159】

特定の実施態様では、メチオニンの濃度は約５ｍＭから１５ｍＭである。特定の実施態様では、メチオニンの濃度は約１０ｍＭである。

【0160】

本明細書に記載される薬学的組成物はいずれも、界面活性剤を含み得る。任意の適切な界面活性剤が使用され得る。いくつかの実施態様では、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート（ポリオキシエチレン（ｎ）ソルビタンモノラウレート）、ポロキサマー、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、アルキルフェニルポリオキシエチレンエーテル、又はそれらの組み合わせ）である。いくつかの実施態様では、非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート（ＰＳ２０）、ＴＷＥＥＮ ２０（商標登録）；例えば、特に精製されたＰＳ２０（独自のフラッシュクロマトグラフィーププロセスにより純度を高めたＰＳ２０であり、Ａｖａｎｔｏｒ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ， ＬＬＣ（Ｃｅｎｔｅｒ Ｖａｌｌｅｙ， ＰＡ， ＵＳ）から入手可能））又はポリソルベート８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート（ＰＳ８０）、例えば、ＴＷＥＥＮ ８０（登録商標）；例えば、特に精製されたＰＳ８０（Ａｖａｎｔｏｒ））である。特定の実施態様では、ポリソルベートは、ポリソルベート２０である。他の実施態様では、非イオン性界面活性剤は、ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１８８、ポリ（エチレングリコール）－ブロック－ポリ（プロピレングリコール）－ブロック－ポリ（エチレングリコール））である。

【0161】

薬学的界面活性剤は、少なくとも約≧０．２ｍｇ／ｍｌ、すなわち少なくとも≧約０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度であり得る。

【0162】

本明細書に記載される薬学的組成物のいずれかのいくつかの実施態様では、界面活性剤（例えば、ＰＳ２０又はＰ１８８）の濃度は、約０．０１％（ｗ／ｖ）から約２％（ｗ／ｖ）、例えば、約０．０１％、約０．０２％、約０．０３％、約０．０４％、約０．０５％、約０．０６％、約０．０７％、約０．０８％、約０．０９％、約０．１％、約０．１５％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約１．１％、約１．２％、約１．３％、約１．４％、約１．５％、約１．６％、約１．７％、約１．８％、約１．９％、又は約２％（ｗ／ｖ）である。

【0163】

いくつかの実施態様では、界面活性剤（例えば、ＰＳ２０又はＰ１８８）の濃度は、約０．１から１ｍｇ／ｍｌ、すなわち、０．０１％（ｗ／ｖ）から約０．１％（ｗ／ｖ）である。いくつかの実施態様では、界面活性剤（例えば、ＰＳ２０又はＰ１８８）の濃度は、約０．２から１ｍｇ／ｍｌ、すなわち、０．０２％（ｗ／ｖ）から約０．１％（ｗ／ｖ）である。いくつかの実施態様では、界面活性剤（例えば、ＰＳ２０又はＰ１８８）の濃度は、約０．２から０．８ｍｇ／ｍｌ、すなわち、０．０２％（ｗ／ｖ）から約０．０８％（ｗ／ｖ）である。いくつかの実施態様では、界面活性剤（例えば、ＰＳ２０又はＰ１８８）の濃度は、約０．５ｍｇ／ｍｌ、すなわち、約０．０５％（ｗ／ｖ）である。

【0164】

特定の実施態様では、界面活性剤はＰ１８８であり、Ｐ１８８の濃度は約０．０５％（ｗ／ｖ）、０．０７％（ｗ／ｖ）、又は０．１％（ｗ／ｖ）である。

【0165】

特定の実施態様では、界面活性剤はＰＳ２０であり、ＰＳ２０の濃度は少なくとも約≧０．２ｍｇ／ｍｌ、すなわち、少なくとも約≧０．０２％（ｗ／ｖ）ＰＳ２０の濃度である。

【0166】

特定の実施態様では、界面活性剤はＰＳ２０であり、ＰＳ２０の濃度は約０．２～０．８ ｍｇ／ｍｌ、すなわち、約０．０２％（ｗ／ｖ）から約０．０８％（ｗ／ｖ）である。特定の実施態様では、界面活性剤はＰＳ２０であり、ＰＳ２０の濃度は約０．５ｍｇ／ｍｌ、すなわち、約０．０５％（ｗ／ｖ）である。特定の実施態様では、界面活性剤はＰＳ２０であり、ＰＳ２０の濃度は少なくとも約≧０．０２％（ｗ／ｖ）ＰＳ２０である。特定の実施態様では、界面活性剤はＰＳ２０であり、ＰＳ２０の濃度は約約０．０２％（ｗ／ｖ）から約０．０８％（ｗ／ｖ）である。特定の実施態様では、界面活性剤はＰＳ２０であり、ＰＳ２０の濃度は約約０．０５％（ｗ／ｖ）である。

【0167】

一実施態様では、本発明による液体薬学的組成物は、
約５から約６のｐＨで、
約１から５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）であって、
ａ）ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
を含む約１から５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と；
約１５～２５ｍＭのヒスチジンバッファーと；
約２００～２８０ｍＭのスクロースと；
約０～１５ｍＭのメチオニンと；
約０．２～０．８ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０と
を含む。

【0168】

一実施態様では、本発明による液体薬学的組成物は、
約５．２から約５．８のｐＨで、
約１から５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）であって、
ａ）ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
を含む約１から５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と；
約１５～２５ｍＭのヒスチジンバッファーと；
約２００～２８０ｍＭのスクロースと；
約０～１５ｍＭのメチオニンと；
約０．２～０．８ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０と
を含む。

【0169】

一実施態様では、本発明による液体薬学的組成物は、
約５．２から約５．８のｐＨで、
約０．９から１．１ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）であって、
ａ）ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
を含む約１ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と；
約１５～２５ｍＭのヒスチジンバッファーと；
約２００～２８０ｍＭのスクロースと；
約０～１５ｍＭのメチオニンと；
約０．２～０．８ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０と
を含む。

【0170】

一実施態様では、液体薬学的組成物は、
約５．２から約５．８のｐＨで、
約１ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）であって、
ａ）ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
を含む約１ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と；
約１５～２５ｍＭのヒスチジンバッファーと；
約２００～２８０ｍＭのスクロースと；
約０～１５ｍＭのメチオニンと；
約０．２～０．８ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０と
を含む。

【0171】

一実施態様では、液体薬学的組成物は、
約５．５のｐＨで、
約１ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）であって、
ａ）ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
を含む約１ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と；
約２０ｍＭのヒスチジンバッファーと；
約２４０ｍＭのスクロースと；
約１０ｍＭのメチオニンと；
約０．５ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０と
を含む。

【0172】

一実施態様では、本発明による液体薬学的組成物は、
約５．２から約５．８のｐＨで、
約１から５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）であって、
（ｉ）配列番号７の重鎖可変領域配列及び配列番号８の軽鎖可変領域配列を含む、ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
（ｉｉ）配列番号１５の重鎖可変配列及び配列番号１６の軽鎖可変領域配列を含む、ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
を含む約１から５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と；
約１５～２５ｍＭのヒスチジンバッファーと；
約２００～２８０ｍＭのスクロースと；
約０～１５ｍＭのメチオニンと；
約０．２～０．８ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０と
を含む。

【0173】

一実施態様では、本発明による液体薬学的組成物は、
約５．２から約５．８のｐＨで、
約０．９から約１．１ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体であって、
（ｉ）配列番号７の重鎖可変領域配列及び配列番号８の軽鎖可変領域配列を含む、ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
（ｉｉ）配列番号１５の重鎖可変領域配列及び配列番号１６の軽鎖可変領域配列を含む、ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
を含む約０．９から約１．１ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と；
約１５～２５ｍＭのヒスチジンバッファーと；
約２００～２８０ｍＭのスクロースと；
約０～１５ｍＭのメチオニンと；
約０．２～０．８ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０
とを含む。

【0174】

一実施態様では、本発明による液体薬学的組成物は、
約５．２から約５．８のｐＨで、
約１ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）であって、
（ｉ）配列番号７の重鎖可変領域配列及び配列番号８の軽鎖可変領域配列を含む、ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
（ｉｉ）配列番号１５の重鎖可変領域配列及び配列番号１６の軽鎖可変領域配列を含む、ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
を含む約１ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と；
約１５～２５ｍＭのヒスチジンバッファーと；
約２００～２８０ｍＭのスクロースと；
約０～１５ｍＭのメチオニンと；
約０．２～０．８ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０と
を含む。

【0175】

一実施態様では、本発明による液体薬学的組成物は、
約５．５のｐＨで、
約１ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）であって、
（ｉ）配列番号７の重鎖可変領域配列及び配列番号８の軽鎖可変領域配列を含む、ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
（ｉｉ）配列番号１５の重鎖可変領域配列及び配列番号１６の軽鎖可変領域配列を含む、ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
を含む約１ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と；
約２０ｍＭのヒスチジンバッファーと；
約２４０ｍＭのスクロースと；
約１０ｍＭのメチオニンと；
約０．５ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０と
を含む。

【0176】

一実施態様では、本発明による液体薬学的組成物は、
約５．２から約５．８のｐＨで、
約１から５ｍｇ／ｍｌのグロフィタマブと；
約１５～２５ｍＭのヒスチジンバッファーと；
約２００～２８０ｍＭのスクロースと；
約０～１５ｍＭのメチオニンと；
約０．２～０．８ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０と
を含む。

【0177】

一実施態様では、本発明による液体薬学的組成物は、
約５．２から約５．８のｐＨで、
約０．９から約１．１ｍｇ／ｍｌのグロフィタマブと；
約１５～２５ｍＭのヒスチジンバッファーと；
約２００～２８０ｍＭのスクロースと；
約０～１５ｍＭのメチオニンと；
約０．２～０．８ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０と
を含む。

【0178】

一実施態様では、本発明による液体薬学的組成物は、
約５．２から約５．８のｐＨで；
約１ｍｇ／ｍｌのグロフィタマブと；
約１５～２５ｍＭのヒスチジンバッファーと；
約２００～２８０ｍＭのスクロースと；
約０～１５ｍＭのメチオニンと；
約０．２～０．８ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０と
を含む。

【0179】

一実施態様では、本発明による液体薬学的組成物は、
約５．５のｐＨで、
約１ｍｇ／ｍｌのグロフィタマブと；
約２０ｍＭのヒスチジンバッファーと；
約２４０ｍＭのスクロースと；
約１０ｍＭのメチオニンと；
約０．５ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０と
を含む。

【0180】

製剤は、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤といったアジュバントも含有し得る。微生物の存在は、滅菌手順と、種々の抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などを含めることとの両方により、確実に防止することができる。防腐剤は、概して約０．００１から約２％（ｗ／ｖ）の量で使用される。防腐剤は、エタノール、ベンジルアルコール、フェノール、ｍ－クレゾール、ｐ－クロル－ｍ－クレゾール、メチル又はプロピルパラベン、及びベンザルコニウムクロライドを含むがこれらに限定されない。

【0181】

ＩＶ．本発明の薬学的組成物における使用のための治療剤
Ａ．抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体
本発明は、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ Ｔ細胞エンゲージング二重特異性抗体（ＴＣＢ）、例えば、グロフィタマブ）の新規の薬学的組成物に関する。一実施態様では、抗体は、モノクローナル抗体である。一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ポリクローナル抗体である。一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒト抗体である。一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、ヒト化抗体である。一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、キメラ抗体である。一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、完全長抗体である。一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、ＩｇＧクラス抗体、特にＩｇＧ１サブクラス抗体である。一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、組み換え抗体である。

【0182】

特定の実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒト抗体を含む。抗体断片は、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片と、下記の他の断片とを含む。特定の抗体断片の総説としては、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の総説については、例えば、Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ， ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， ｖｏｌ． １１３， Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．， （Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）， ｐｐ． ２６９－３１５ （１９９４）を参照のこと。また、国際公開第９３／１６１８５号並びに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号を参照のこと。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、インビボ半減期が長くなったＦａｂ及びＦ（ａｂ’）_２断片の説明については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照のこと。一実施態様では、抗体断片は、Ｆａｂ断片又はｓｃＦｖ断片である。

【0183】

ダイアボディは、二価又は二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第１９９３／０１１６１号、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照のこと。トリアボディ及びテトラボディもＨｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｍｅｄ． ９：１２９－１３４ （２００３）に記載されている。

【0184】

単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部若しくは一部又は軽鎖可変ドメインの全部若しくは一部を含む抗体断片である。特定の実施態様では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、米国特許第６，２４８，５１６号を参照）。

【0185】

抗体断片は、本明細書に記載されるように、組み換え宿主細胞（例えばＥ．ｃｏｌｉ又はファージ）による、インタクトな抗体のタンパク分解、及び産生を含むがこれらに限定されない各種技術により作製され得る。

【0186】

特定の実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、キメラ抗体である。あるキメラ抗体が、例えば米国特許第４８１６５６７号及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８１：６８５１－６８５５ （１９８４）に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ又は非ヒト霊長類（サルなど）由来の可変領域）とヒト定常領域とを含む。更なる例では、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のそれらから変更されている「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。

【0187】

特定の実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減するために、親の非ヒト抗体の特異性と親和性を保持したままヒト化されている。概して、ヒト化抗体は、ＨＶＲ（例えばＣＤＲ）（又はその一部）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（又はその一部）がヒト抗体配列に由来する、１つ又は複数の可変ドメインを含む。ヒト化抗体はまた、任意選択的にヒト定常領域の少なくとも一部を含む。いくつかの実施態様では、ヒト化抗体のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性又は親和性を回復するか、又は改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換されている。

【0188】

ヒト化抗体及びそれらの製造方法は、例えばＡｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ， Ｆｒｏｎｔ． Ｂｉｏｓｃｉ． １３：１６１９－１６３３ （２００８）にて総説されており、さらに、例えばＲｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９ （１９８８）； Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８６：１００２９－１００３３ （１９８９）、米国特許第５８２１３３７号、第７５２７７９１号、第６９８２３２１号及び第７０８７４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５－３４ （２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）のグラフティングを記述）、Ｐａｄｌａｎ， Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２８：４８９－４９８ （１９９１）（「リサーフェシング」を記述）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３－６０ （２００５）（「ＦＲシャッフリング」を記述）、並びにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１－６８ （２００５）及びＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ， ８３：２５２－２６０ （２０００）（ＦＲシャッフリングに対する「誘導選択」アプローチを記述）に記載されている。

【0189】

ヒト化に用いることのできるヒトフレームワーク領域には、限定されないが、「ベストフィット」法を用いて選択されるフレームワーク領域（例えばＳｉｍｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５１：２２９６ （１９９３）を参照）；軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えばＣａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８９：４２８５ （１９９２）；及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １５１：２６２３ （１９９３）を参照）；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域又はヒトの生殖細胞系フレームワーク領域（例えばＡｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ， Ｆｒｏｎｔ． Ｂｉｏｓｃｉ． １３：１６１９－１６３３ （２００８）を参照）；及びＦＲライブラリのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えばＢａｃａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７２：１０６７８－１０６８４ （１９９７）及びＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７１：２２６１１－２２６１８ （１９９６）を参照）が含まれる。

【0190】

特定の実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体を、当技術分野で公知の様々な技術を使用して製造することができる。ヒト抗体は、概して、ｖａｎ Ｄｉｊｋ及びｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ５： ３６８７４ （２００１）、並びにＬｏｎｂｅｒｇ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０：４５０４５９ （２００８）に記載されている。

【0191】

ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答して、インタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製してもよい。このような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座に取って代わるか、又は染色体外に存在するか、又は動物の染色体にランダムに組み込まれるヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含有する。このようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般的に不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． ２３：１１１７－１１２５ （２００５）を参照のこと。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載する米国特許第６，０７５，１８１号及び米国特許第６，１５０，５８４号、ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載する米国特許第５，７７０，４２９号、Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する米国特許第７，０４１，８７０号、及び、ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載する米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照されたい。このような動物によって生成されたインタクトな抗体からのヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、更に修飾されてもよい。

【0192】

ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法によっても作製することができる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫細胞株及びマウス－ヒト異種骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １３３： ３００１ （１９８４）； Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， ｐｐ． ５１－６３ （Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８７）；及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １４７： ８６ （１９９１）を参照のこと。）ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体は、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １０３：３５５７－３５６２ （２００６）にも記載されている。さらなる方法は、例えば、米国特許第７１８９８２６号 （ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載）及びＮｉ， Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ， ２６（４）：２６５－２６８ （２００６）（ヒト－ヒトハイブリドーマを記載）に記載されるものを含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）は、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ， Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ， ２０（３）：９２７－９３７ （２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ， Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ， ２７（３）：１８５－９１ （２００５）にも記載されている。

【0193】

ヒト抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによっても作製され得る。その後、そのような可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わせられ得る。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技術を以下に記載する。

【0194】

抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）に含まれる結合ドメインは、所望の活性を有する結合部位についてコンビナトリアルライブラリをスクリーニングすることにより単離することができる。例えば、ファージディスプレイライブラリを作成し、所望の結合特性を有する抗体についてこのようなライブラリをスクリーニングするための様々な方法が当技術分野で知られている。このような方法については、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）で概説し、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９２）；Ｍａｒｋｓ ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１－１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）；Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． ３３８（２）：２９９－３１０（２００４）；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． ３４０（５）：１０７３－１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）；及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１－２）：１１９－１３２（２００４）に更に記載されている。

【0195】

特定のファージディスプレイ法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別個にクローニングされ、ファージライブラリ中でランダムに再結合され、次いで、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３－４５５（１９９４）に記載されているように抗原結合ファージのスクリーニングを行うことができる。ファージは、典型的には単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片又はＦａｂ断片のいずれかとして抗体断片を提示する。免疫源からのライブラリは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対する高親和性抗体を提供する。代替的に、ナイーブレパートリーは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１２：７２５－７３４（１９９３）によって記載されているように、免疫化を行わずに、広範囲の非自己抗原及びまた自己抗原に対する抗体の単一の供給源を提供するために、（例えば、ヒトから）クローン化することができる。最後に、ナイーブライブラリは、幹細胞から再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダムな配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、非常に可変的なＣＤＲ３領域をコードし、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１－３８８（１９９２）に記載されているように、ｉｎ ｖｉｔｒｏで再配列を達成することによって、合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリについて記載する特許公報としては、例えば：米国特許第５，７５０，３７３号、並びに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が挙げられる。

【0196】

ヒト抗体ライブラリから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書においてヒト抗体又はヒト抗体の断片とみなされる。

【0197】

二重特異性抗体を作製するための技術には、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の組換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ， Ｎａｔｕｒｅ ３０５： ５３７（１９８３）））、国際公開第９３／０８８２９号、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ． １０： ３６５５（１９９１）を参照）、及び「ノブ・イントゥ・ホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照）が含まれるが、これらに限定されるものではない。多重特異性抗体はまた、静電ステアリング効果を操作して抗体Ｆｃ－ヘテロ二量体分子を作製すること（国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号）；２つ以上の抗体又は断片を架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２２９： ８１ （１９８５）を参照）；ロイシンジッパを使用して二重特異性抗体を産生すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １４８（５）：１５４７－１５５３ （１９９２）を参照）；「ダイアボディ」技術を使用して二重特異性抗体断片を作製すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９０：６４４４－６４４８ （１９９３）を参照）；並びに、一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １５２：５３６８ （１９９４）を参照）；並びに、例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４７： ６０ （１９９１）に記載されるような三重特異性抗体を調製することによって作製してもよい。

【0198】

「オクトパス抗体」を含む、３つ以上の機能性抗原結合部位を持つ操作抗体もまた本明細書に含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００６／００２５５７６Ａ１号を参照）。

【0199】

本明細書における抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、２つの異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用性ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」も含む（例えば、米国特許公開第２００８／００６９８２０号参照）。

【0200】

「Ｃｒｏｓｓｍａｂ」抗体も本明細書に含まれる（例えば、国際公開第２００９０８０２５１号、同第Ｏ２００９０８０２５２号、同第２００９０８０２５３号、同第２００９０８０２５４号を参照）。

【0201】

二重特異性抗体断片を作製するための別の技術は、「二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー」又はＢｉＴＥ（登録商標）手法である（例えば、国際公開第２００４／１０６３８１号、同第２００５／０６１５４７号、同第２００７／０４２２６１、及び同第ＷＯ２００８／１１９５６７号を参照）。このアプローチは、単一のポリペプチド上に配列された２つの抗体可変ドメインを利用する。例えば、単一ポリペプチド鎖は、各々が、二つのドメイン間の分子内会合を可能にするために十分な長さのポリペプチドリンカーにより分離された可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを有する、二つの短鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片を含む。この単一のポリペプチドは、２つのｓｃＦｖ断片間のポリペプチドスペーサー配列をさらに含む。各ｓｃＦｖは異なるエピトープを認識し、これらのエピトープは異なる細胞タイプに特異的である可能性があるため、各ｓｃＦｖがその同族のエピトープに関与するとき、二つの異なる細胞タイプの細胞が近接又は係留される。このアプローチの１つの特定の実施態様は、免疫細胞によって発現される細胞表面抗原を認識するｓｃＦｖ、例えば、Ｔ細胞上のＣＤ３ポリペプチドを含み、これは、悪性又は腫瘍細胞などの標的細胞によって発現される細胞表面抗原を認識する別のｓｃＦｖに結合される。

【0202】

それは単一ポリペプチドであるため、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーは、当該技術分野で知られる任意の原核生物又は真核生物細胞発現系、例えばＣＨＯ細胞株、を使用して発現され得る。しかしながら、特定の精製技術（例えばＥＰ１６９１８３３を参照）は、モノマーの意図した活性以外の生物活性を有し得る他の多量体種からモノマーの二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーを分離する必要がある可能性がある。１つの例示的な精製スキームにおいて、分泌ポリペプチドを含有する溶液はまず、金属親和性クロマトグラフィーにかけられ、ポリペプチドは、イミダゾール濃度の勾配を用いて溶出される。この溶出物は、アニオン交換クロマトグラフィーを使用してさらに精製され、ポリペプチドは、塩化ナトリウム濃度の勾配を用いて使用して溶出される。最後に、この溶出物は、サイズ排除クロマトグラフィーにかけられ、多量体種から単量体が分離される。

【0203】

特定の実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、当技術分野で既知であるとともに容易に入手可能な更なる非タンパク質性部分を含有するように更に修飾され得る。抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）の誘導体化に適した部位には、水溶性ポリマーが含まれるが、これらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール、並びにこれらの混合物が含まれる（ただし、これらに限定されない）。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造時に有利であり得る。ポリマーは、任意の分子量であってよく、分枝状でも非分枝状でもよい。抗体に結合するポリマーの数は変化してもよく、複数のポリマーが結合する場合、それらは同じ分子でも異なる分子でもよい。一般に、誘導体化のために使用されるポリマーの数及び／又は種類は、限定するものではないが、改良される抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が定義される条件下で治療に使用されるかどうか等を含む考慮事項に基づいて判定することができる。

【0204】

抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、１つ又は複数の細胞傷害剤、例えば、化学療法薬剤又は薬物、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、又は細菌、真菌、植物若しくは動物由来の酵素的に活性な毒素、又はその断片）、又は放射性同位体にコンジュゲートされ得る。

【0205】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含み、ここで、抗体は、限定されるわけではないが、マイタンシノイド（米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号、及び欧州特許第０４２５２３５Ｂ１号を参照）；モノメチルオーリスタチン薬剤部分ＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）等のオーリスタチン（米国特許第５，６３５，４８３号、同第５，７８０，５８８号、及び同第７，４９８，２９８号を参照）；ドラスタチン；カリケアマイシン又はその誘導体（米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、及び同第５，８７７，２９６号；Ｈｉｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５３：３３３６－３３４２ （１９９３）；並びにＬｏｄｅ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５８：２９２５－２９２８ （１９９８）を参照）；ダウノマイシン及びドキソルビシン等のアントラサイクリン（例えばＫｒａｔｚ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． １３：４７７－５２３ （２００６）； Ｊｅｆｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔｅｒｓ １６：３５８－３６２ （２００６）； Ｔｏｒｇｏｖ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｏｎｊ． Ｃｈｅｍ． １６：７１７－７２１ （２００５）； Ｎａｇｙ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９７：８２９－８３４ （２０００）； Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｏｒｇ． ＆ Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔｅｒｓ １２：１５２９－１５３２ （２００２）； Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ４５：４３３６－４３４３ （２００２）；及び米国特許第６，６３０，５７９号を参照）；メトトレキサート；ビンデシン；ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセル等のタキサン；トリコテセン；並びにＣＣ１０６５を含む１つ又は複数の薬剤にコンジュゲートしている。

【0206】

別の実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ－サルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンシンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ－Ｓ）、ツルレイシ（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サポンソウ（Ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びトリコテセンを含むがこれらに限定されない酵素活性毒素又はその断片にコンジュゲートしている。

【0207】

別の実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、放射性原子にコンジュゲートされ、放射性コンジュゲートを形成する。種々の放射性同位体が、放射性コンジュゲートの産生のために入手可能である。例としては、Ａｔ^２１１、Ｉ^１３１、Ｉ^１２５、Ｙ^９０、Ｒｅ^１８６、Ｒｅ^１８８、Ｓｍ^１５３、Ｂｉ^２１２、Ｐ^３２、Ｐｂ^２１２、及びＬｕの放射性同位元素が挙げられる。放射性コンジュゲートは、検出に使用されるとき、シンチグラフ検査のための放射性原子、例えばＴｃ^９９ｍ若しくはＩ^１２３、又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴画像法、ＭＲＩとしても知られる）のためのスピン標識、例えば、再びヨウ素－１２３、ヨウ素－１３１、インジウム－１１１、フッ素－１９、炭素－１３、窒素－１５、酸素－１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄を含み得る。

【0208】

抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体及び細胞傷害性剤のコンジュゲートは、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、アジプイミド酸ジメチルＨＣｌ）、活性エステル（例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビス－アジド化合物（例えば、ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス－ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トルエン２，６－ジイソシアネート）、及びビス－活性フッ素化合物（例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン）などの多様な二官能性タンパク質カップリング剤を使用して作製され得る。例えば、リシンイムノトキシンは、Ｖｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８ （１９８７）に記載されているようにして調製することができる。炭素－１４－標識１－イソチオシアナトベンジル－３－メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体へのコンジュゲーションのための例示的キレート剤である。国際公開第９４／１１０２６号を参照されたい。リンカーは、細胞内での細胞傷害性薬物の放出を促進する「開裂性リンカー」であってもよい。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、光不安定性リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５２：１２７－１３１（１９９２）；米国特許第５２０８０２０号）が使用され得る。

【0209】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、細胞増殖性障害（例えば、がん）の治療に適応される。一実施態様では、細胞増殖性障害はがんである。一実施態様では、がんは、Ｂ細胞増殖性障害である。一実施態様では、がんは、ＣＤ２０陽性Ｂ細胞増殖性障害である。一実施態様では、がんは、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。一実施態様では、ＮＨＬは、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫（ＨＧＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）［形質転換ＦＬ；ｔｒＦＬ］から生じたＤＬＢＣＬ、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、又は辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）である。ＭＺＬは、脾性ＭＺＬ、結節性ＭＺＬ、結節外ＭＺＬに分類される。一実施態様では、ＮＨＬは、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である。一実施態様では、ＮＨＬは、グレード１～３ａの濾胞性リンパ腫（ＦＬ）である。いくつかの実施態様では、ＣＤ２０陽性Ｂ細胞増殖性障害は、再発性又は難治性Ｂ細胞増殖性障害である。一実施態様では、再発性又は難治性Ｂ細胞増殖性障害は、再発性又は難治性ＮＨＬ（例えば、再発性若しくは難治性ＤＬＢＣＬ、再発性若しくは難治性ＦＬ、又は再発性若しくは難治性ＭＣＬ）である。

【0210】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、ＣＤ３εに特異的に結合する。

【0211】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ＣＤ３抗体は、抗体Ｈ２Ｃ（国際公開第２００８／１１９５６７号）、抗体Ｖ９（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｕｐｐｌ ７， ４５－５０ （１９９２）及び米国特許第６０５４２９７号）、抗体ＦＮ１８（Ｎｏｏｉｊ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９， ９８１－９８４ （１９８６））、抗体ＳＰ３４（Ｐｅｓｓａｎｏ ｅｔ ａｌ．， ＥＭＢＯ Ｊ ４， ３３７－３４０ （１９８５））、抗体ＯＫＴ３（Ｋｕｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０６， ３４７－３４９ （１９７９））、抗体ＷＴ３１（Ｓｐｉｔｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５， １９２２ （１９８５））、抗体ＵＣＨＴ１（Ｂｕｒｎｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２９， １４５１－１４５７ （１９８２））、抗体７Ｄ６（Ｃｏｕｌｉｅ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１－１７０９ （１９９１））、又は抗体Ｌｅｕ－４と結合について競合し得る。いくつかの実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、国際公開第２００５／０４０２２０号、同第２００５／１１８６３５号、同第２００７／０４２２６１号、同第２００８／１１９５６７号、同第２００８／１１９５６５号、同第２０１２／１６２０６７号、同第２０１３／１５８８５６号、同第２０１３／１８８６９３号、同第２０１３／１８６６１３号、同第２０１４／１１０６０１号、同第２０１４／１４５８０６号、同第２０１４／１９１１１３号、同第２０１４／０４７２３１号、同第２０１５／０９５３９２号、同第２０１５／１８１０９８号、同第２０１５／００１０８５号、同第２０１５／１０４３４６号、同第２０１５／１７２８００号、同第２０１６／０２０４４４号、又は同第２０１６／０１４９７４号に記載されるようにＣＤ３に特異的に結合する抗原結合部分も含み得る。

【0212】

いくつかの実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、リツキシマブ、オビヌツズマブ、オクレリズマブ、オファツムマブ、オカラツズマブ、ベルツズマブ、及びブリツキシマブからの抗体又は抗原結合部分を含み得る。

【0213】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、グロフィタマブである。

【0214】

いくつかの実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、本明細書で命名された抗体のジェネリック、バイオシミラー、又は比較できない生物学的バージョンから構成され得る。

【0215】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含む少なくとも１つの抗原結合ドメインを含む。

【0216】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、配列番号７の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号８の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域配列とを含む、少なくとも１つの抗原結合ドメインを含む。さらなる実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、配列番号７の重鎖可変領域配列と、配列番号８の軽鎖可変領域配列とを含む、ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインを含む。

【0217】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１１アミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含む少なくとも１つの抗原結合ドメインを含む。

【0218】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、配列番号１５の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号１６の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域配列とを含む、少なくとも１つの抗原結合ドメインを含む。さらなる実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、配列番号１５の重鎖可変領域配列と、配列番号１６の軽鎖可変領域配列とを含む、ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインを含む。

【0219】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、
ａ）ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号３アミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１１アミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインとを含む。

【0220】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、
（ｉ）配列番号７の重鎖可変領域配列及び配列番号８の軽鎖可変領域配列を含む、ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
（ｉｉ）配列番号１５の重鎖可変領域配列及び配列番号１６の軽鎖可変領域配列を含む、ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
を含む。

【0221】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体のＣＤ３に特異的に結合する抗原結合ドメインは、抗体断片、特にＦａｂ分子又はｓｃＦｖ分子、より具体的にはＦａｂ分子である。特定の実施態様では、ＣＤ３に特異的に結合する、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ重鎖及び軽鎖の可変ドメイン又は定常ドメインが交換される（すなわち、互いに置き換えられる）クロスオーバーＦａｂ分子である。

【0222】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインとを含む。一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと、ＣＤ２０に特異的に結合する第２及び第３の抗原結合ドメインとを含む。一実施態様では、第１の抗原結合ドメインはクロスオーバーＦａｂ分子であり、第２及び第３の抗原結合ドメインはそれぞれ、従来のＦａｂ分子である。一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、Ｆｃドメインをさらに含む。抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、本明細書に記載されるように、Ｆｃ領域及び／又は抗原結合ドメインの修飾を含み得る。一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、Ｆｃ受容体への結合及び／又はエフェクター機能を低下させる１つ又は複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む。一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ（ＥＵ番号付け）を含むＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む。

【0223】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、
（ｉ）Ｆａｂ重鎖のＣ末端において、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しているＣＤ３に特異的に結合する抗原結合ドメインと；
（ｉｉ）Ｆａｂ重鎖のＣ末端において、ＣＤ３に特異的に結合する抗原結合ドメインのＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しているＣＤ２０に特異的に結合する第１の抗原結合ドメインと；
（ｉｉｉ）Ｆａｂ重鎖のＣ末端において、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合しているＣＤ２０に特異的に結合する第２の抗原結合ドメインと；
を含む。

【0224】

特定の実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、：
ａ）ＣＤ３、特にＣＤ３イプシロンに特異的に結合する第１のＦａｂ分子であって、Ｆａｂ軽鎖とＦａｂ重鎖の可変ドメインＶＬとＶＨが互いによって交換されている第１のＦａｂ分子と；
ｂ）ＣＤ２０に特異的に結合する第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子であって、第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬでは、１２４位のアミノ酸がリジン（Ｋ）により置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、１２３位のアミノ酸がリジン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）により、特にアルギニン（Ｒ）により置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＨ１では、１４７位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されており（ＥＵ番号付け）、２１３位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されている（ＥＵ番号付け）、第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子と；
ｃ）安定な会合が可能な第１のサブユニットと第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインと
を含む。

【0225】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、ＣＤ２０に特異的に結合する２つの抗原結合ドメインと、ＣＤ３に特異的に結合する１つの抗原結合ドメインとを含む。

【0226】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、ＣＤ２０については二価であり、ＣＤ３については一価である。

【0227】

一実施態様では、ａ）の第１のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてｃ）のＦｃドメインのサブユニットの一方のＮ末端に融合しており、ｂ）の第２のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてａ）の第１のＦａｂ分子の重鎖のＮ末端に融合しており、ｂ）の第３のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてｃ）のＦｃドメインの他方のサブユニットのＮ末端に融合している。一実施態様では、ａ）の第１のＦａｂ分子は、配列番号１５の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域と、配列番号１６の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域とを含む。

【0228】

またさらなる実施態様では、ａ）の第１のＦａｂ分子は、配列番号１５の重鎖可変領域配列と、配列番号１６の軽鎖可変領域配列とを含む。

【0229】

一実施態様では、ｂ）の第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子はそれぞれ、配列番号７の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である重鎖可変領域と、配列番号８の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一である軽鎖可変領域とを含む。

【0230】

一実施態様では、ｂ）の第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子はそれぞれ、配列番号７の重鎖可変領域配列と、配列番号８の軽鎖可変領域配列とを含む。

【0231】

特定の実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、配列番号１７の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドと、配列番号１８の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドと、配列番号１９の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドと、配列番号２０の配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドとを含む。さらなる特定の実施態様では、二重特異性抗体は、配列番号１７のポリペプチド配列と、配列番号１８のポリペプチド配列と、配列番号１９のポリペプチド配列と、配列番号２０のポリペプチド配列とを含む。さらに特定の実施態様では、二重特異性抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含む１つのポリペプチド鎖と、配列番号１８のアミノ酸配列を含む１つのポリペプチド鎖と、配列番号１９のアミノ酸配列を含む１つのポリペプチド鎖と、それぞれ配列番号２０のアミノ酸配列を含む２つのポリペプチド鎖とを含む。

【0232】

特定の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ＰＣＴ公報国際公開第２０１６／０２０３０９号並びに欧州特許出願番号ＥＰ１５１８８０９３及びＥＰ１６１６９１６０（それぞれ、参照によりその全体が本明細書に援用される）に記載されている。一実施態様では、本発明の薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、グロフィタマブである。

【0233】

Ｂ．抗体フォーマット
１．抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の構造
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の構成要素を、様々な構造で互いに融合させることができる。例示的な構造を図１に示す。

【0234】

特定の実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体に含まれる抗原結合部分はＦａｂ分子である。このような実施態様では、第１、第２、第３などの抗原結合部分は、本明細書において、それぞれ第１、第２、第３などのＦａｂ分子と呼ばれることがある。さらに、特定の実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、安定に会合することのできる第１のサブユニットと第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインを含む。

【0235】

いくつかの実施態様では、第１のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１又は第２のサブユニットのＮ末端に融合している。

【0236】

このような一実施態様では、第２のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合している。具体的なそのような実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、第１及び第２のＦａｂ分子と、第１及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインと、任意選択的に１つ又は複数のペプチドリンカーとから本質的になり、第１のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１又は第２のサブユニットのＮ末端に融合しており、第２のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合している。このような構造は、図１Ｇ及び１Ｋに概略的に示されている。任意選択的に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖及び第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖は、さらに互いに融合され得る。

【0237】

別の実施態様では、第２のＦａｂ分子はＦａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１又は第２のサブユニットのＮ末端に融合している。具体的なそのような実施態様では、抗体は、第１及び第２のＦａｂ分子と、第１及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインと、任意選択的に１つ又は複数のペプチドリンカーとから実質的になり、第１及び第２のＦａｂ分子は、各々がＦａｂ重鎖のＣ末端でＦｃドメインのサブユニットの１つのＮ末端に融合している。そのような構造は、図１Ａ及び１Ｄに概略的に示されている。第１及び第２のＦａｂ分子は、直接又はペプチドリンカーを介してＦｃドメインに融合され得る。特定の実施態様では、第１及び第２のＦａｂ分子は、免疫グロブリンヒンジ領域によって、それぞれＦｃドメインに融合する。具体的な実施態様では、免疫グロブリンヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ_１ヒンジ領域であり、特に、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ_１Ｆｃドメインである。

【0238】

他の実施態様では、第２のＦａｂ分子はＦａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１又は第２のサブユニットのＮ末端に融合している。このような一実施態様では、第１のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しいている。具体的なそのような実施態様では、抗体は、第１及び第２のＦａｂ分子と、第１及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインと、任意選択的に１つ又は複数のペプチドリンカーとから本質的になり、第１のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第２のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端でＦｃドメインの第１又は第２のサブユニットのＮ末端に融合している。このような構造は、図１Ｈ及び１Ｌに概略的に示されている。任意選択的に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖及び第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖は、さらに互いに融合され得る。

【0239】

Ｆａｂ分子は、Ｆｃドメインに、又は、互いに直接又は一若しくは複数のアミノ酸、典型的には約２～２０のアミノ酸を含むペプチドリンカーを通じて融合され得る。ペプチドリンカーは当技術分野で知られており、本明細書に記載されている。適切な非免疫原性ペプチドリンカーには、例えば、（Ｇ_４Ｓ）_ｎ（配列番号２１）、（ＳＧ_４）_ｎ（配列番号２２）、又はＧ_４（ＳＧ_４）_ｎ（配列番号２３）ペプチドリンカーが含まれる。「ｎ」は通常１から１０、典型的には２から４の整数である。一実施態様では、前記ペプチドリンカーは、少なくとも５のアミノ酸長を、一実施態様では５から１００、さらなる実施態様では１０から５０のアミノ酸長を有する。一実施態様では、前記ペプチドリンカーは、（ＧｘＳ）_ｎ又は（ＧｘＳ）_ｎＧ_ｍ［式中、Ｇ＝グリシン、Ｓ＝セリン、（ｘ＝３、ｎ＝３、４、５又は６、ｍ＝０、１、２又は３）又は（ｘ＝４、ｎ＝２、３、４又は５、ｍ＝０、１、２又は３）］であり、一実施態様では、ｘ＝４、ｎ＝２又は３であり、さらなる実施態様ではｘ＝４、ｎ＝２である。一実施態様では、前記ペプチドリンカーは、（Ｇ_４Ｓ）_２（配列番号２４）である。第１及び第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖を互いに融合させるのに特に適切なペプチドリンカーは（Ｇ_４Ｓ）_２（配列番号２４）である。第１及び第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖を接続するのに適切な例示的ペプチドリンカーは、配列（Ｄ）－（Ｇ_４Ｓ）_２（配列番号２４及び２５）を含む。別の適切なそのようなリンカーは、配列（Ｇ_４Ｓ）_４（配列番号２６）を含む。加えて、リンカーは免疫グロブリンヒンジ領域（の一部）を含み得る。特にＦａｂ分子がＦｃドメインサブユニットのＮ末端に融合している場合、追加のペプチドリンカーの有無にかかわらず、免疫グロブリンヒンジ領域又はその一部を介して融合され得る。

【0240】

標的細胞抗原に特異的に結合することができる単一の抗原結合部分（例えばＦａｂ分子）を有する抗体（例えば図１Ａ、１Ｄ、１Ｇ、１Ｈ、１Ｋ、又は１Ｌに示すようなもの）は、特に高親和性抗原結合部分の結合に続いて標的細胞抗原の内在化が予想される場合に有用である。このような場合、標的細胞抗原に特異的な１つより多い抗原結合部分の存在は、標的細胞抗原の内部移行を促進し、それによってその利用可能性を低下させ得る。

【0241】

しかしながら、他の多くの場合では、例えば、標的部位への標的化を最適化するために、又は標的細胞抗原の架橋を可能にするために、標的細胞抗原（図１Ｂ、１Ｃ、１Ｅ、１Ｆ、１Ｉ、１３Ｊ、１Ｍ又は１Ｎに示す例を参照のこと）に特異的な２つ以上の抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ分子）を含む抗体を有することが有利であろう。

【0242】

したがって、特定の実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、２つの抗ＣＤ２０結合部分、例えば、ＣＤ２０を標的とする２つのＦａｂ分子を含む。一実施態様では、ＣＤ２０を標的とする２つのＦａｂ分子は、従来のＦａｂ分子である。一実施態様では、ＣＤ２０を標的とする２つのＦａｂ分子は、同じ重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を含み、同じドメイン構成を有する（すなわち、従来の又はクロスオーバー）。

【0243】

代替的な実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、２つの抗ＣＤ３結合部分、例えば、ＣＤ３を標的とする２つのＦａｂ分子を含む。このような一実施態様では、ＣＤ３を標的とする２つのＦａｂ分子はどちらもクロスオーバーＦａｂ分子（Ｆａｂ重鎖と軽鎖の可変ドメインＶＨ及びＶＬ又は定常ドメインＣＬとＣＨ１が交換されている／互いによって置き換えられているＦａｂ分子）である。このような一実施態様では、ＣＤ３を標的とする２つのＦａｂ分子は、同じ重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を含み、同じドメイン構成を有する（すなわち、従来の又はクロスオーバー）。

【0244】

一実施態様では、第３のＦａｂ分子はＦａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１又は第２のサブユニットのＮ末端に融合している。

【0245】

特定の実施態様では、第２及び第３のＦａｂ分子は、それぞれＦａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインのサブユニットのうちの一つのＮ末端に融合しており、第１のＦａｂ分子はＦａｂ重鎖のＣ末端において第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合している。具体的なそのような実施態様では、抗体は、第１、第２及び第３のＦａｂ分子と、第１及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインと、任意選択的に１つ又は複数のペプチドリンカーとから本質的になり、第１のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第２のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端でＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、第３のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端でＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している。このような構造は、図１Ｂ及び図１Ｅ（第３のＦａｂ分子が従来のＦａｂ分子であり、第２のＦａｂ分子と同一である実施態様）と、図１Ｉ及び図１Ｍ（第３のＦａｂ分子がクロスオーバーＦａｂ分子であり、好ましくは第１のＦａｂ分子と同一である実施態様）に概略的に示されている。第２及び第３のＦａｂ分子は、直接又はペプチドリンカーを介してＦｃドメインに融合され得る。特定の実施態様では、第２及び第３のＦａｂ分子は、免疫グロブリンヒンジ領域を介して、それぞれＦｃドメインに融合している。具体的な実施態様では、免疫グロブリンヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ_１ヒンジ領域であり、特に、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ_１Ｆｃドメインである。任意選択的に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖及び第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖は、さらに互いに融合され得る。

【0246】

別の実施態様では、第２及び第３のＦａｂ分子は、それぞれＦａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインのサブユニットのうちの一つのＮ末端に融合しており、第１のＦａｂ分子はＦａｂ重鎖のＣ末端において第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合している。具体的なそのような実施態様では、抗体は、第１、第２及び第３のＦａｂ分子と、第１及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインと、任意選択的に１つ又は複数のペプチドリンカーとから本質的になり、第１のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第２のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端でＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、第３のＦａｂ分子は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端でＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している。このような構造は、図１Ｃ及び図１Ｆ（第３のＦａｂ分子が従来のＦａｂ分子であり、第２のＦａｂ分子と同一である実施態様）と、図１Ｊ及び図１Ｎ（第３のＦａｂ分子がクロスオーバーＦａｂ分子であり、第１のＦａｂ分子と同一である実施態様）に概略的に示されている。第１及び第３のＦａｂ分子は、直接又はペプチドリンカーを介してＦｃドメインに融合され得る。特定の実施態様では、第２及び第３のＦａｂ分子は、免疫グロブリンヒンジ領域を介して、それぞれＦｃドメインに融合している。具体的な実施態様では、免疫グロブリンヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ_１ヒンジ領域であり、特に、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ_１Ｆｃドメインである。任意選択的に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖及び第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖は、さらに互いに融合され得る。

【0247】

Ｆａｂ分子がＦａｂ重鎖のＣ末端で免疫グロブリンヒンジ領域を介してＦｃドメインのサブユニットのそれぞれのＮ末端に融合されている抗体の構造では、２つのＦａｂ分子、ヒンジ領域、及びＦｃドメインが、免疫グロブリン分子を本質的に形成する。特定の実施態様では、免疫グロブリン分子はＩｇＧクラスの免疫グロブリンである。さらに特定の実施態様では、免疫グロブリンはＩｇＧ_１サブクラスの免疫グロブリンである。別の実施態様では、免疫グロブリンはＩｇＧ_４サブクラスの免疫グロブリンである。さらなる特定の実施態様では、免疫グロブリンはヒト免疫グロブリンである。他の実施態様では、免疫グロブリンは、キメラ免疫グロブリン又はヒト化免疫グロブリンである。

【0248】

抗体のいくつかにおいて、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖及び第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖は、任意選択的にペプチドリンカーを介して互いに融合される。第１及び第２のＦａｂ分子の構成に応じて、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖は、そのＣ末端で第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖のＮ末端に融合され得るか、又は第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖は、そのＣ末端で第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖のＮ末端に融合され得る。第１及び第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖の融合は、合致しないＦａｂ重鎖及び軽鎖の誤対合をさらに低減し、また、抗体のいくつかの発現に必要なプラスミドの数を減少させる。

【0249】

特定の実施態様では、抗体は、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域と共有し（すなわち、第１のＦａｂ分子が、クロスオーバーＦａｂ重鎖を含み、重鎖可変領域が軽鎖可変領域によって置き換えられている）、次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域が、カルボキシ末端ペプチド結合をＦｃドメインサブユニットと共有する（ＶＬ_（１）－ＣＨ１_（１）－ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））ポリペプチド、並びに第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、カルボキシ末端ペプチド結合をＦｃドメインサブユニットと共有する（ＶＨ_（２）－ＣＨ１_（２）－ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））ポリペプチドを含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有するポリペプチド（ＶＨ_（１）－ＣＬ_（１））及び第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（２）－ＣＬ_（２））をさらに含む。特定の実施態様では、ポリペプチドは、例えばジスルフィド結合により、共有結合している。

【0250】

特定の実施態様では、抗体は、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有し（すなわち、第１のＦａｂ分子が、クロスオーバーＦａｂ重鎖を含み、重鎖定常領域が軽鎖定常領域によって置き換えられている）、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域が、カルボキシ末端ペプチド結合をＦｃドメインサブユニットと共有する（ＶＨ_（１）－ＣＬ_（１）－ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））ポリペプチド、並びに第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、カルボキシ末端ペプチド結合をＦｃドメインサブユニットと共有する（ＶＨ_（２）－ＣＨ１_（２）－ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））ポリペプチドを含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域と共有するポリペプチド（ＶＬ_（１）－ＣＨ１_（１））及び第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（２）－ＣＬ_（２））をさらに含む。特定の実施態様では、ポリペプチドは、例えばジスルフィド結合により、共有結合している。

【0251】

いくつかの実施態様では、抗体は、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域と共有し（すなわち、第１のＦａｂ分子が、クロスオーバーＦａｂ重鎖を含み、重鎖可変領域が軽鎖可変領域によって置き換えられている）、次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖と共有し、次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、カルボキシ末端ペプチド結合をＦｃドメインサブユニットと共有する（ＶＬ_（１）－ＣＨ１_（１）－ＶＨ_（２）－ＣＨ１_（２）－ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））ポリペプチドを含む。他の実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、カルボキシ末端ペプチド結合を第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域と共有し、次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域と共有し（すなわち、第１のＦａｂ分子が、クロスオーバーＦａｂ重鎖を含み、重鎖可変領域が軽鎖可変領域によって置き換えられている）、次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域が、カルボキシ末端ペプチド結合をＦｃドメインサブユニットと共有する（ＶＨ_（２）－ＣＨ１_（２）－ＶＬ_（１）－ＣＨ１_（１）－ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））ポリペプチドを含む。

【0252】

これらの実施態様のいくつかでは、抗体は、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有する第１のＦａｂ分子のクロスオーバーＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＨ_（１）－ＣＬ_（１））と、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（２）－ＣＬ_（２））をさらに含む。これらの実施態様の他では、適切であれば、抗体は、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有し、次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチドと共有する（ＶＨ_（１）－ＣＬ_（１）－ＶＬ_（２）－ＣＬ_（２））ポリペプチド、又は第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチドが、カルボキシ末端ペプチド結合を第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域と共有し、次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有する（ＶＬ_（２）－ＣＬ_（２）－ＶＨ_（１）－ＣＬ_（１））ポリペプチドをさらに含む。

【0253】

これらの実施態様による抗体は、（ｉ）Ｆｃドメインサブユニットポリペプチド（ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））、又は（ｉｉ）第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖がカルボキシ末端ペプチド結合をＦｃドメインサブユニットと共有するポリペプチド（ＶＨ_（３）－ＣＨ１_（３）－ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））及び第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（３）－ＣＬ_（３））を更に含み得る。特定の実施態様では、ポリペプチドは、例えばジスルフィド結合により、共有結合している。

【0254】

いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有し（すなわち、第１のＦａｂ分子が、クロスオーバーＦａｂ重鎖を含み、重鎖定常領域が軽鎖定常領域と置き換えられている）、次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖と共有し、次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、カルボキシ末端ペプチド結合をＦｃドメインサブユニットと共有する（ＶＨ_（１）－ＣＬ_（１）－ＶＨ_（２）－ＣＨ１_（２）－ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））ポリペプチドを含む。他の実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、カルボキシ末端ペプチド結合を第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域と共有し、次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有し（すなわち、第１のＦａｂ分子が、クロスオーバーＦａｂ重鎖を含み、重鎖定常領域が軽鎖定常領域によって置き換えられている）、次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域が、カルボキシ末端ペプチド結合をＦｃドメインサブユニットと共有する（ＶＨ_（２）－ＣＨ１_（２）－ＶＨ_（１）－ＣＬ_（１）－ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））ポリペプチドを含む。

【0255】

これらの実施態様の一部では、抗体は、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域と共有する第１のＦａｂ分子のクロスオーバーＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（１）－ＣＨ１_（１））及び第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（２）－ＣＬ_（２））をさらに含む。これらの実施態様の他では、適切であれば、抗体は、第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域と共有し、次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチドと共有する（ＶＬ_（１）－ＣＨ１_（１）－ＶＬ_（２）－ＣＬ_（２））ポリペプチド、又は第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチドが、カルボキシ末端ペプチド結合を第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域と共有し、次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有する（ＶＬ_（２）－ＣＬ_（２）－ＶＨ_（１）－ＣＬ_（１））ポリペプチドをさらに含む。

【0256】

これらの実施態様による抗体は、（ｉ）Ｆｃドメインサブユニットポリペプチド（ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））、又は（ｉｉ）第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖がカルボキシ末端ペプチド結合をＦｃドメインサブユニットと共有するポリペプチド（ＶＨ_（３）－ＣＨ１_（３）－ＣＨ２－ＣＨ３（－ＣＨ４））及び第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（３）－ＣＬ_（３））を更に含み得る。特定の実施態様では、ポリペプチドは、例えばジスルフィド結合により、共有結合している。

【0257】

特定の実施態様では、抗体は、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域と共有し、次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域と共有する（すなわち、第２のＦａｂ分子がクロスオーバーＦａｂ重鎖を含み、重鎖可変領域が軽鎖可変領域によって置き換えられている）ポリペプチド（ＶＨ_（１）－ＣＨ１_（１）－ＶＬ_（２）－ＣＨ１_（２））を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有するポリペプチド（ＶＨ_（２）－ＣＬ_（２））及び第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（１）－ＣＬ_（１））をさらに含む。

【0258】

特定の実施態様では、抗体、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域と共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子がクロスオーバーＦａｂ重鎖を含み、重鎖可変領域が軽鎖可変領域によって置き換えられている）、次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖と共有するポリペプチド（ＶＬ_（２）－ＣＨ１_（２）－ＶＨ_（１）－ＣＨ１_（１））を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有するポリペプチド（ＶＨ_（２）－ＣＬ_（２））及び第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（１）－ＣＬ_（１））をさらに含む。

【0259】

特定の実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子がクロスオーバーＦａｂ重鎖を含み、重鎖定常領域が軽鎖定常領域によって置き換えられている）、次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖と共有するポリペプチド（ＶＨ_（２）－ＣＬ_（２）－ＶＨ_（１）－ＣＨ１_（１））を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域と共有するポリペプチド（ＶＬ_（２）－ＣＨ１_（２））及び第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（１）－ＣＬ_（１））をさらに含む。

【0260】

特定の実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖と共有し、次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域と共有し、次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域と共有する（すなわち、第２のＦａｂ分子がクロスオーバーＦａｂ重鎖を含み、重鎖可変領域が軽鎖可変領域によって置き換えられている）ポリペプチド（ＶＨ_（３）－ＣＨ１_（３）－ＶＨ_（１）－ＣＨ１_（１）－ＶＬ_（２）－ＣＨ１_（２））を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有するポリペプチド（ＶＨ_（２）－ＣＬ_（２））及び第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（１）－ＣＬ_（１））をさらに含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（３）－ＣＬ_（３））をさらに含む。

【0261】

特定の実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖と共有し、次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域と共有し、次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有する（すなわち、第２のＦａｂ分子がクロスオーバーＦａｂ重鎖を含み、重鎖定常領域が軽鎖定常領域によって置き換えられている）ポリペプチド（ＶＨ_（３）－ＣＨ１_（３）－ＶＨ_（１）－ＣＨ１_（１）－ＶＨ_（２）－ＣＬ_（２））を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域と共有するポリペプチド（ＶＬ_（２）－ＣＨ１_（２））及び第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（１）－ＣＬ_（１））をさらに含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（３）－ＣＬ_（３））をさらに含む。

【0262】

特定の実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域と共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子が、クロスオーバーＦａｂ重鎖を含み、重鎖可変領域が、軽鎖可変領域によって置き換えられている）、次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖と共有し、次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖と共有するポリペプチド（ＶＬ_（２）－ＣＨ１_（２）－ＶＨ_（１）－ＣＨ１_（１）－ＶＨ_（３）－ＣＨ１_（３））を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有するポリペプチド（ＶＨ_（２）－ＣＬ_（２））及び第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（１）－ＣＬ_（１））をさらに含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（３）－ＣＬ_（３））をさらに含む。

【0263】

特定の実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子が、クロスオーバーＦａｂ重鎖を含み、重鎖定常領域が、軽鎖定常領域によって置き換えられている）、次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖と共有し、次に、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖と共有するポリペプチド（ＶＨ_（２）－ＣＬ_（２）－ＶＨ_（１）－ＣＨ１_（１）－ＶＨ_（３）－ＣＨ１_（３））を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域と共有するポリペプチド（ＶＬ_（２）－ＣＨ１_（２））及び第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（１）－ＣＬ_（１））をさらに含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（３）－ＣＬ_（３））をさらに含む。

【0264】

特定の実施態様では、抗体は、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、カルボキシ末端ペプチド結合を第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域と共有し、次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域と共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子が、クロスオーバーＦａｂ重鎖を含み、重鎖可変領域が軽鎖可変領域によって置き換えられている）、次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域と共有し、次に、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域と共有する（すなわち、第３のＦａｂ分子がクロスオーバーＦａｂ重鎖を含み、重鎖可変領域が軽鎖可変領域によって置き換えられている）（ＶＨ_（１）－ＣＨ１_（１）－ＶＬ_（２）－ＣＨ１_（２）－ＶＬ_（３）－ＣＨ１_（３））ポリペプチドを含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有するポリペプチド（ＶＨ_（２）－ＣＬ_（２））及び第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（１）－ＣＬ_（１））をさらに含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有するポリペプチド（ＶＨ_（３）－ＣＬ_（３））をさらに含む。

【0265】

特定の実施態様では、抗体は、第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖が、カルボキシ末端ペプチド結合を第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域と共有し、次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子が、クロスオーバーＦａｂ重鎖を含み、重鎖定常領域が軽鎖定常領域によって置き換えられている）、次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域と共有し、次に、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有する（すなわち、第３のＦａｂ分子がクロスオーバーＦａｂ重鎖を含み、重鎖定常領域が軽鎖定常領域によって置き換えられている）（ＶＨ_（１）－ＣＨ１_（１）－ＶＨ_（２）－ＣＬ_（２）－ＶＨ_（３）－ＣＬ_（３））ポリペプチドを含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域と共有するポリペプチド（ＶＬ_（２）－ＣＨ１_（２））及び第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（１）－ＣＬ_（１））をさらに含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域と共有するポリペプチド（ＶＬ_（３）－ＣＨ１_（３））をさらに含む。

【0266】

特定の実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域と共有し（すなわち、第３のＦａｂ分子が、クロスオーバーＦａｂ重鎖を含み、重鎖可変領域が軽鎖可変領域によって置き換えられている）、次に、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域と共有し、次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域と共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子がクロスオーバーＦａｂ重鎖を含み、重鎖可変領域が軽鎖可変領域によって置き換えられている）、次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖と共有する（ＶＬ_（３）－ＣＨ１_（３）－ＶＬ_（２）－ＣＨ１_（２）－ＶＨ_（１）－ＣＨ１_（１））ポリペプチドを含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有するポリペプチド（ＶＨ_（２）－ＣＬ_（２））及び第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（１）－ＣＬ_（１））をさらに含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有するポリペプチド（ＶＨ_（３）－ＣＬ_（３））をさらに含む。

【0267】

特定の実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有し（すなわち、第３のＦａｂ分子が、クロスオーバーＦａｂ重鎖を含み、重鎖定常領域が軽鎖定常領域によって置き換ええられている）、次に、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域と共有し、次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域と共有し（すなわち、第２のＦａｂ分子がクロスオーバーＦａｂ重鎖を含み、重鎖定常領域が軽鎖定常領域によって置き換えられている）、次に、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖定常領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を第１のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖と共有する（ＶＨ_（３）－ＣＬ_（３）－ＶＨ_（２）－ＣＬ_（２）－ＶＨ_（１）－ＣＨ１_（１））ポリペプチドを含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第２のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第２のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域と共有するポリペプチド（ＶＬ_（２）－ＣＨ１_（２））及び第１のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖ポリペプチド（ＶＬ_（１）－ＣＬ_（１））をさらに含む。いくつかの実施態様では、抗体は、第３のＦａｂ分子のＦａｂ軽鎖可変領域が、カルボキシ末端ペプチド結合を、第３のＦａｂ分子のＦａｂ重鎖定常領域と共有するポリペプチド（ＶＬ_（３）－ＣＨ１_（３））をさらに含む。

【0268】

上記の実施態様のいずれかによれば、抗体の構成要素（例えば、Ｆａｂ分子、Ｆｃドメイン）は、直接的に融合されていてもよく、又は、種々のリンカー、特に、本明細書に記載されている若しくは当技術分野で知られている１若しくは複数のアミノ酸（典型的には約２－２０アミノ酸）を含むペプチドリンカーを介して融合されていてもよい。適切な非免疫原性ペプチドリンカーには、例えば、（Ｇ_４Ｓ）_ｎ（配列番号２１）、（ＳＧ_４）_ｎ（配列番号２２）、又はＧ_４（ＳＧ_４）_ｎ（配列番号２３）ペプチドリンカーが含まれ、ここで、ｎは、概して１から１０、典型的には２から４の整数である。

【0269】

２．Ｆｃドメイン
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、抗体分子の重鎖ドメインを含む一対のポリペプチド鎖からなるＦｃドメインを含み得る。例えば、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）分子のＦｃドメインは二量体であり、その各サブユニットはＣＨ２及びＣＨ３ ＩｇＧ重鎖定常ドメインを含む。Ｆｃドメインの２つのサブユニットは、互いに安定した結合が可能である。

【0270】

一実施態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ Ｆｃドメインである。特定の実施態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ_１ Ｆｃドメインである。別の実施態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ_４ Ｆｃドメインである。より具体的な態様において、Ｆｃドメインは、Ｓ２２８位（Ｋａｂａｔ番号付け）にアミノ酸置換、特にアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むＩｇＧ_４ Ｆｃドメインである。このアミノ酸置換は、ＩｇＧ_４抗体のｉｎ ｖｉｖｏでのＦａｂアーム交換を減少させる（Ｓｔｕｂｅｎｒａｕｃｈ ｅｔ ａｌ．， Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ ３８， ８４－９１ （２０１０）を参照）。さらに特定の実施態様では、Ｆｃドメインはヒトである。

【0271】

（ｉ）ヘテロ二量体化を促進するＦｃドメイン修飾
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの一方又は他方に融合した異なる成分（例えば、抗原結合ドメイン）を含んでもよく、したがって、Ｆｃドメインの２つのサブユニットは、典型的には２つの非同一なポリペプチド鎖に含まれている。これらのポリペプチドの組換え共発現及びその後の二量体化により、２つのポリペプチドのいくつかの可能な組み合わせが生じる。したがって、組み換え生成においてこのような抗体の収率及び純度を高めるために、抗体のＦｃドメインに、所望のポリペプチドの会合を促す修飾を含めることが有利であろう。

【0272】

したがって、特定の実施態様では、Ｆｃドメインは、Ｆｃドメインの第１のサブユニットと第２のサブユニットの会合を促す修飾を含む。ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインの２つのサブユニット間のタンパク質間相互作用が最も広範囲に及ぶ部位は、ＦｃドメインのＣＨ３ドメインにある。したがって、ある実施態様では、前記修飾はＦｃドメインのＣＨ３ドメイン内にある。

【0273】

ヘテロ二量体化を強化するための、ＦｃドメインのＣＨ３ドメインにおける修飾のためのいくつかの手法が、例えば、国際公開第９６／２７０１１号、同第９８／０５０４３１号、ＥＰ１８７０４５９、国際公開第２００７／１１０２０５号、同第２００７／１４７９０１号、同第２００９／０８９００４号、同第２０１０／１２９３０４号、同第２０１１／９０７５４号、同第２０１１／１４３５４５号、同第２０１２０５８７６８号、同第２０１３１５７９５４号、同第２０１３０９６２９１号に十分説明されている。典型的には、全てのこのような手法では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメインと、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメインは両方とも、各ＣＨ３ドメイン（又はそれを含む重鎖）が、それ自体とホモ二量体化せず、相補的に操作された他のＣＨ３ドメインとヘテロ二量体化するように仕向けられている相補的な様式で操作されている（その結果、第１のＣＨ３ドメイン及び第２のＣＨ３ドメインがヘテロ二量体化し、２つの第１のＣＨ３ドメイン又は２つの第２のＣＨ３ドメインの間のホモ二量体は形成されない）。重鎖ヘテロ二量体化の改善のためのこれらの異なる手法は、重鎖－軽鎖修飾（例えば、１つのＦａｂアームにおける可変又は定常領域の交換／置き換え、又はＣＨ１／ＣＬ接触面における反対の電荷を持つ荷電アミノ酸の置換の置換の導入）と組み合わせた、異なる代替例として考慮され、軽鎖の誤対合及びベンス・ジョーンズ型の副産物を低減させる。

【0274】

具体的な実施態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニット及び第２のサブユニットの会合を促進する前記修飾は、いわゆる「ノブ・イントゥ・ホール」修飾であり、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの１つに「ノブ」修飾と、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの他の１つに「ホール」修飾とを含む。

【0275】

「ノブ・イントゥ・ホール」技術は、例えば米国特許第５７３１１６８号；同第７６９５９３６号；Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔ Ｅｎｇ． ９， ６１７－６２１ （１９９６）、及びＣａｒｔｅｒ， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ． ２４８， ７－１５ （２００１）に記載されている。一般的に、この方法は、第１のポリペプチドの接触面に突起（「ノブ」）を、第２のポリペプチドの接触面に対応する空洞（「ホール」）を導入し、その結果突起が空洞内に配置することができ、ヘテロ二量体形成を促進しホモ二量体形成を妨げるようにする。突起は、第１のポリペプチドの接触面からの小さなアミノ酸側鎖を、より大きな側鎖（例えばチロシン又はトリプトファン）で置き換えることによって構築される。大きなアミノ酸側鎖をより小さなアミノ酸側鎖（例えばアラニン又はスレオニン）で置き換えることにより、突起と同じ又は同様の大きさの相補的な空洞が第２のポリペプチドの接触面に作られる。

【0276】

したがって、特定の一実施態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメインにおいて、アミノ酸残基がそれよりも大きな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置き換えられ、それにより、第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内部に、第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内部の空洞内に配置可能な突起が生成され、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメインにおいて、アミノ酸残基がそれよりも小さな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置き換えられ、それにより、第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内部に、第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内部の突起を配置可能な空洞が生成される。

【0277】

好ましくは、より大きな側鎖体積を有する前記アミノ酸残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、及びトリプトファン（Ｗ）からなる群から選択される。

【0278】

好ましくは、より小さな側鎖体積を有する前記アミノ酸残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、及びバリン（Ｖ）からなる群から選択される。

【0279】

突起及び空洞は、例えば部位特異的（ｓｉｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ）変異導入又はペプチド合成などでポリペプチドをコードする核酸を変化させることにより、作製することができる。

【0280】

特定の実施態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニット（「ノブ」サブユニット）のＣＨ３ドメインでは、３６６位のスレオニン残基がトリプトファン残基と置き換えられ（Ｔ３６６Ｗ）、Ｆｃドメインの第２のサブユニット（「ホール」サブユニット）のＣＨ３ドメインでは、４０７位のチロシン残基がバリン残基と置き換えられる（Ｙ４０７Ｖ）。一実施態様では、Ｆｃドメインの第２のサブユニットにおいてさらに、３６６位のスレオニン残基がセリン残基と置き換えられ（Ｔ３６６Ｓ）、３６８位のロイシン残基がアラニン残基と置き換えられる（Ｌ３６８Ａ）（ＥＵ番号付け）。

【0281】

さらなる実施態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットにおいてさらに、３５４位のセリン残基がシステイン残基と置き換えられる（Ｓ３５４Ｃ）か、又は３５６位のグルタミン酸残基がシステイン残基と置き換えられ（Ｅ３５６Ｃ）、Ｆｃドメインの第２のサブユニットにおいてさらに、３４９位のチロシン残基がシステイン残基で置き換えられる（Ｙ３４９Ｃ）（ＥＵ番号付け）。これら２つのシステイン残基の導入により、Ｆｃドメインの２つのサブユニット間にジスルフィド架橋が形成され、さらにダイマーを安定させる（Ｃａｒｔｅｒ， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４８， ７－１５ （２００１））。

【0282】

特定の一実施態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットは、アミノ酸置換Ｓ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗを含み、Ｆｃドメインの第２のサブユニットは、アミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含む（ＥＵ番号付け）。

【0283】

特定の実施態様では、本明細書に記載されるＣＤ３抗原結合部分は、Ｆｃドメインの第１のサブユニット（「ノブ」修飾を含む）に融合される。理論に縛られることを望まないが、ＣＤ３抗原結合部分の、Ｆｃドメインのノブ含有サブユニットへの融合は（さらに）、２つのＣＤ３抗原結合部分を含む二重特異性抗体の生成を最小化する（２つのノブ含有ポリペプチドの立体的衝突）。

【0284】

ヘテロ二量体を強化するためのＣＨ３修飾の他の技術は、代替例として考慮されており、例えば、国際公開第９６／２７０１１号、同第９８／０５０４３１号、ＥＰ１８７０４５９、国際公開第２００７／１１０２０５号、同第２００７／１４７９０１号、同第２００９／０８９００４号、同第２０１０／１２９３０４号、同第２０１１／９０７５４号、同第２０１１／１４３５４５号、同第２０１２／０５８７６８号、同第２０１３／１５７９５４号、同第２０１３／０９６２９１号に記載されている。

【0285】

一実施態様では、ＥＰ１８７０４５９号Ａ１に記載されるヘテロ二量体化手法を代わりに使用する。この手法は、Ｆｃ ドメインの２つのサブユニット間のＣＨ３／ＣＨ３ ドメイン接触面の特定のアミノ酸位置に反対の電荷を有する荷電アミノ酸を導入することに基づいている。１つの好ましい実施態様は、（Ｆｃドメインの）２つのＣＨ３ドメインの一方にあるアミノ酸変異Ｒ４０９Ｄ及びＫ３７０Ｅと、ＦｃドメインのＣＨ３ドメインの他方にあるアミノ酸変異Ｄ３９９Ｋ及びＥ３５７Ｋとである（ＥＵ番号付け）。

【0286】

別の実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸変異Ｔ３６６Ｗと、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖとを含み、さらにはＦｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸変異Ｒ４０９Ｄ及びＫ３７０Ｅと、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸変異Ｄ３９９Ｋ及びＥ３５７Ｋとを含む（ＥＵ番号付け）。

【0287】

別の実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸変異Ｓ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗと、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸変異Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含むか、又は抗体は、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸変異Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗと、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸変異Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖと、さらにＦｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸変異Ｒ４０９Ｄ及びＫ３７０Ｅと、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸変異Ｄ３９９Ｋ及びＥ３５７Ｋとを含む（すべてＥＵ番号付け）。

【0288】

一実施態様では、国際公開第２０１３／１５７９５３号に記載されるヘテロ二量体化手法が代替的に使用される。一実施態様では、第１のＣＨ３ドメインはアミノ酸変異Ｔ３６６Ｋを含み、第２のＣＨ３ドメインはアミノ酸変異Ｌ３５１Ｄを含む（ＥＵ番号付け）。さらなる実施態様では、第１のＣＨ３ドメインは、さらなるアミノ酸変異Ｌ３５１Ｋを含む。さらなる実施態様では、第２のＣＨ３ドメインは、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｄ、及びＬ３６８Ｅより選択されるアミノ酸変異（好ましくはＬ３６８Ｅ）をさらに含む（ＥＵ番号付け）。

【0289】

一実施態様では、国際公開第２０１２／０５８７６８号に記載されるヘテロ二量体化手法が代替的に使用される。一実施態様では、第１のＣＨ３ドメインは、アミノ酸変異Ｌ３５１Ｙ、Ｙ４０７Ａを含み、第２のＣＨ３ドメインは、アミノ酸変異Ｔ３６６Ａ及びＫ４０９Ｆを含む。さらなる実施態様では、第２のＣＨ３ドメインは、Ｔ４１１、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｆ４０５、Ｎ３９０、又はＫ３９２の位置に、例えば、（ａ）Ｔ４１１Ｎ、Ｔ４１１Ｒ、Ｔ４１１Ｑ、Ｔ４１１Ｋ、Ｔ４１１Ｄ、Ｔ４１１Ｅ又はＴ４１１Ｗ；（ｂ）Ｄ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｗ、Ｄ３９９Ｙ又はＤ３９９Ｋ；（ｃ）Ｓ４００Ｅ、Ｓ４００Ｄ、Ｓ４００Ｒ、又はＳ４００Ｋ；（ｄ）Ｆ４０５Ｉ、Ｆ４０５Ｍ、Ｆ４０５Ｔ、Ｆ４０５Ｓ、Ｆ４０５Ｖ又はＦ４０５Ｗ；（ｅ）Ｎ３９０Ｒ、Ｎ３９０Ｋ又はＮ３９０Ｄ；（ｆ）Ｋ３９２Ｖ、Ｋ３９２Ｍ、Ｋ３９２Ｒ、Ｋ３９２Ｌ、Ｋ３９２Ｆ又はＫ３９２Ｅから選択される、さらなるアミノ酸変異を含む（ＥＵ番号付け）。さらなる実施態様では、第１のＣＨ３ドメインは、アミノ酸変異Ｌ３５１Ｙ及びＹ４０７Ａを含み、第２のＣＨ３ドメインは、アミノ酸変異Ｔ３６６Ｖ及びＫ４０９Ｆを含む。さらなる実施態様では、第１のＣＨ３ドメインは、アミノ酸変異Ｙ４０７Ａを含み、第２のＣＨ３ドメインは、アミノ酸変異Ｔ３６６Ａ及びＫ４０９Ｆを含む。さらなる一実施態様では、第２のＣＨ３ドメインは、アミノ酸変異Ｋ３９２Ｅ、Ｔ４１１Ｅ、Ｄ３９９Ｒ、及びＳ４００Ｒをさらに含む（ＥＵ番号付け）。

【0290】

一実施態様では、例えば、３６８及び４０９からなる群より選択される位置にアミノ酸修飾を伴う、国際公開第２０１１／１４３５４５号に記載されたヘテロ二量体化の手法が代替的に使用される（ＥＵ番号付け）。

【0291】

一実施態様では、上に記載するノブ・イントゥ・ホール技術も使用する、国際公開第２０１１／０９０７６２号に記載されるヘテロ二量体化手法が、代替的に使用される。一実施態様では、第１のＣＨ３ドメインは、アミノ酸変異Ｔ３６６Ｗを含み、第２のＣＨ３ドメインは、アミノ酸変異Ｙ４０７Ａを含む。一実施態様では、第１のＣＨ３ドメインはアミノ酸変異Ｔ３６６Ｙを含み、第２のＣＨ３ドメインはアミノ酸変異Ｙ４０７Ｔを含む（ＥＵ番号付け）。

【0292】

一実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体、又は抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体のＦｃドメインは、ＩｇＧ_２サブクラスであり、国際公開第２０１０／１２９３０４号に記載のヘテロ二量体化手法が使用される。

【0293】

代替的な実施態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニット及び第２のサブユニットの会合を促進する修飾は、例えば、ＰＣＴ国際公開第２００９／０８９００４号に記載されるような静電ステアリング効果を媒介する修飾を含む。通常、この方法は、ホモ二量体形成が静電的に望ましくなくなり、ヘテロ二量体化が静電的に望ましくなるような、荷電アミノ酸残基による２つのＦｃドメインサブユニットの接触面における１つ又は複数のアミノ酸残基の置き換えを伴う。このような一実施態様では、第１のＣＨ３ドメインは、負に帯電したアミノ酸でのＫ３９２又はＮ３９２のアミノ酸置換（例えばグルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）、好ましくはＫ３９２Ｄ又はＮ３９２Ｄ）を含み、第２のＣＨ３ドメインは、正に帯電したアミノ酸でのＤ３９９、Ｅ３５６、Ｄ３５６又はＥ３５７のアミノ酸置換（例えばリジン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）、好ましくはＤ３９９Ｋ、Ｅ３５６Ｋ、Ｄ３５６Ｋ又はＥ３５７Ｋ、より好ましくはＤ３９９Ｋ及びＥ３５６Ｋ）を含む。さらなる実施態様では、第１のＣＨ３ドメインは、負に帯電したアミノ酸でのＫ４０９又はＲ４０９のアミノ酸置換（例えばグルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）、好ましくはＫ４０９Ｄ又はＲ４０９Ｄ）をさらに含む。さらなる一実施態様では、第１のＣＨ３ドメインは、負に帯電したアミノ酸（例えばグルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ））でのＫ４３９及び／又はＫ３７０のアミノ酸置換を、さらに又は代替的に含む（ＥＵ番号付け）。

【0294】

なおさらなる実施態様では、国際公開第２００７／１４７９０１号に記載されるヘテロ二量体化手法が、代替的に使用される。一実施態様では、第１のＣＨ３ドメインはアミノ酸変異Ｋ２５３Ｅ、Ｄ２８２Ｋ、及びＫ３２２Ｄを含み、第２のＣＨ３ドメインはアミノ酸変異Ｄ２３９Ｋ、Ｅ２４０Ｋ、及びＫ２９２Ｄを含む（ＥＵ番号付け）。

【0295】

さらに別の実施態様では、国際公開第２００７／１１０２０５号に記載されるヘテロ二量体化手法が使用され得る。

【0296】

一実施態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットは、アミノ酸置換Ｋ３９２Ｄ及びＫ４０９Ｄを含み、Ｆｃドメインの第２のサブユニットは、アミノ酸置換Ｄ３５６Ｋ、及びＤ３９９Ｋを含む（ＥＵ番号付け）。

【0297】

（ｉｉ）Ｆｃ受容体の結合及び／又はエフェクター機能を低下させるＦｃドメイン修飾
Ｆｃドメインは、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性などの抗体に対して、標的組織中への良好な蓄積に貢献する長い血清半減期、及び望ましい組織－血液分布比を含む望ましい薬物動態特性を付与する。しかしながら、同時に、Ｆｃドメインは、好ましい抗原保有細胞ではなく、Ｆｃ受容体を発現する細胞への抗体の望ましくない標的化の原因となることがある。さらに、Ｆｃ受容体シグナル伝達経路の同時活性化はサイトカイン放出につながる場合があり、サイトカイン放出は、抗体が有し得る他の免疫賦活特性及び抗体の長い半減期と組み合わさって、サイトカイン受容体の過剰な活性化をもたらし、全身投与されると重い副作用を引き起こし得る。

【0298】

したがって、特定の実施態様では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体のＦｃドメインは、負のＩｇＧ_１ Ｆｃドメインと比較した場合に、Ｆｃ受容体に対する結合親和性の低下及び／又はエフェクター機能の低下を呈する。このような一実施態様では、Ｆｃドメイン（又は前記Ｆｃドメインを含む分子、例えば抗体）は、天然のＩｇＧ_１ Ｆｃドメイン（又は天然のＩｇＧ_１ Ｆｃドメインを含むそれに対応する分子）と比較して、５０％未満、好ましくは２０％未満、さらに好ましくは１０％未満、最も好ましくは５％未満の、Ｆｃ受容体への結合親和性を呈し、且つ／又は、天然のＩｇＧ_１ Ｆｃドメイン（又は天然のＩｇＧ_１ Ｆｃドメインを含むそれに対応する分子）と比較して、５０％未満、好ましくは２０％未満、さらに好ましくは１０％未満、最も好ましくは５％未満の、エフェクター機能を呈する。一実施態様では、Ｆｃドメイン（又は前記Ｆｃドメインを含む分子、例えば、抗体）は、Ｆｃ受容体に実質的に結合しない、及び／又はエフェクター機能を誘導しない。特定の実施態様において、該Ｆｃ受容体は、Ｆｃγ受容体である。ある実施態様において、該Ｆｃ受容体は、ヒトＦｃ受容体である。ある実施態様において、該Ｆｃ受容体は、活性化Ｆｃ受容体である。具体的な実施態様では、該Ｆｃ受容体は、活性化ヒトＦｃγ受容体、更に具体的にはヒトＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩ又はＦｃγＲＩＩａ、最も具体的にはヒトＦｃγＲＩＩＩａである。ある実施態様において、エフェクター機能は、ＣＤＣ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ及びサイトカイン分泌の群から選択される１又は複数である。特定の一実施態様では、エフェクター機能はＡＤＣＣである。一実施態様では、Ｆｃドメインは、天然ＩｇＧ_１ Ｆｃドメインと比較して実質的に同様の、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する結合親和性を呈する。実質的に同様の、ＦｃＲｎに対する結合親和性は、Ｆｃドメイン（又は前記Ｆｃドメインを含む分子、例えば、抗体）が、天然ＩｇＧ_１ Ｆｃドメイン（又は天然ＩｇＧ_１ Ｆｃドメインを含むそれに対応する分子）の約７０％、特に約８０％、さらには特に約９０％を上回る、ＦｃＲｎに対する結合親和性を呈するとき、達成される。

【0299】

特定の実施態様では、該Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体に対する結合親和性及び／又はエフェクター機能が非工学操作型Ｆｃドメインと比較して低下するように工学的に操作されている。特定の実施態様では、該Ｆｃドメインは、ＦｃドメインのＦｃ受容体に対する結合親和性及び／又はエフェクター機能を低下させる１又は複数のアミノ酸変異を含む。典型的には、同じ１又は複数のアミノ酸変異がＦｃドメインの２つのサブユニットの各々に存在する。一実施態様では、アミノ酸変異はＦｃドメインのＦｃ受容体に対する結合親和性を低下させる。ある実施態様において、アミノ酸変異は、Ｆｃ受容体へのＦｃドメインの結合親和性を、少なくとも２分の１、少なくとも５分の１又は少なくとも１０分の１低下させる。Ｆｃ受容体へのＦｃドメインの結合親和性を低下させる、１つより多いアミノ酸変異が存在する実施態様において、これらのアミノ酸変異の組み合わせは、Ｆｃ受容体へのＦｃドメインの結合親和性を少なくとも１０分の１、少なくとも２０分の１又は更には少なくとも５０分の１低下させ得る。一実施態様では、操作されたＦｃドメインを含む分子、例えば、抗体は、非操作Ｆｃドメインを含むそれに対応する分子と比較して、２０％未満、特に１０％未満、さらには５％未満のＦｃ受容体に対する結合親和性を呈する。特定の実施態様において、Ｆｃ受容体は、Ｆｃγ受容体である。いくつかの実施態様では、Ｆｃ受容体は、ヒトＦｃ受容体である。いくつかの実施態様では、Ｆｃ受容体は、活性化Ｆｃ受容体である。具体的な実施態様では、該Ｆｃ受容体は、活性化ヒトＦｃγ受容体、更に具体的にはヒトＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩ又はＦｃγＲＩＩａ、最も具体的にはヒトＦｃγＲＩＩＩａである。好ましくは、これらの各受容体への結合が低下する。いくつかの実施態様では、相補性構成要素に対する結合親和性（具体的にはＣ１ｑに対する結合親和性）も低下する。一実施態様では、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する結合親和性は低下しない。ＦｃＲｎに対する実質的に同様の結合、即ち、前記受容体に対するＦｃドメインの結合親和性の保存は、Ｆｃドメイン（又は前記Ｆｃドメインを含む分子、例えば、抗体）が、Ｆｃドメインの非操作型形態（又はＦｃドメインの前記非操作型形態を含むそれに対応する分子）のＦｃＲｎに対する結合親和性の約７０％を上回る親和性を呈するとき、達成される。Ｆｃドメイン、又は前記Ｆｃドメインを含む分子（例えば抗体）は、このような親和性の約８０％、及び場合によっては約９０％を上回る親和性を呈し得る。特定の実施態様では、Ｆｃドメインは、非操作Ｆｃドメインと比較して、低下したエフェクター機能を有するように操作される。エフェクター機能の低下は、限定されないが、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の低下、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の低下、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）の低下、サイトカイン分泌の低下、抗原提示細胞による免疫複合体媒介性抗原取り込みの減少、ＮＫ細胞への結合の低下、マクロファージへの結合の低下、単球への結合の低下、多形核細胞への結合の低下、アポトーシスを誘導する直接的シグナル伝達の減少、標的結合抗体の架橋の減少、樹状細胞成熟の低下、又はＴ細胞プライミングの低下のうちの１又は複数を含み得る。一実施態様では、エフェクター機能の低下は、ＣＤＣの低下、ＡＤＣＣの低下、ＡＤＣＰの低下及びサイトカイン分泌の低下の群から選択される１つ又は複数である。特定の一実施態様では、エフェクター機能の低下はＡＤＣＣの低減である。一実施態様では、低減したＡＤＣＣは、非操作Ｆｃドメイン（又は非操作Ｆｃドメインを含むそれに対応する分子）によって誘導されるＡＤＣＣの２０％未満である。

【0300】

一実施態様では、Ｆｃ受容体に対するＦｃドメインの結合親和性及び／又はエフェクター機能を低下させるアミノ酸変異は、アミノ酸置換である。一実施態様では、Ｆｃドメインは、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７、Ｐ３３１、及びＰ３２９の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む（ＥＵ番号付け）。より具体的な実施態様では、Ｆｃドメインは、Ｌ２３４、Ｌ２３５、及びＰ３２９の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む（ＥＵ番号付け）。いくつかの実施態様では、Ｆｃドメインは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａを含む（ＥＵ番号付け）。このような実施態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ_１ Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ_１ Ｆｃドメインである。一実施態様では、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９位にアミノ酸置換を含む。より具体的な実施態様では、アミノ酸置換は、Ｐ３２９Ａ又はＰ３２９Ｇ、特にＰ３２９Ｇである（ＥＵ番号付け）。一実施態様では、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９位にアミノ酸置換を、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７、及びＰ３３１から選択される位置にさらなるアミノ酸置換を含む（ＥＵ番号付け）。より具体的な実施態様では、さらなるアミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、又はＰ３３１Ｓである。特定の実施態様では、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９、Ｌ２３４、及びＬ２３５の位置にアミノ酸置換を含む（ＥＵ番号付け）。より具体的な実施態様では、Ｆｃドメインは、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ（「Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ」）を含む。このような実施態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ_１ Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ_１ Ｆｃドメインである。アミノ酸置換の「Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ」の組み合わせは、国際公開第２０１２／１３０８３１号に記載のように、ヒトＩｇＧ_１ ＦｃドメインのＦｃγ受容体（及び補体）結合をほぼ完全に無効にする。この文献は、参照によりその全体が本明細書に援用される。国際公開第２０１２／１３０８３１号には、このような変異体Ｆｃドメインを調製する方法及びその特性（Ｆｃ受容体結合又はエフェクター機能など）を決定する方法も記載されている。

【0301】

ＩｇＧ_４抗体は、ＩｇＧ_１抗体と比較して、Ｆｃ受容体に対する結合親和性の低下及びエフェクター機能の低下を呈する。したがって、いくつかの実施態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ_４ Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ_４ Ｆｃドメインである。一実施態様では、ＩｇＧ_４ Ｆｃドメインは、Ｓ２２８の位置におけるアミノ酸置換、具体的にはアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含む（ＥＵ番号付け）。Ｆｃ受容体に対するその結合親和性及び／又はそのエフェクター機能をさらに低下させるために、一実施態様では、ＩｇＧ_４Ｆｃドメインは、Ｌ２３５の位置におけるアミノ酸置換、具体的にはアミノ酸置換Ｌ２３５Ｅを含む（ＥＵ番号付け）。別の実施態様では、ＩｇＧ_４ Ｆｃドメインは、Ｐ３２９の位置におけるアミノ酸置換、具体的にはアミノ酸置換Ｐ３２９Ｇを含む（ＥＵ番号付け）。特定の実施態様では、ＩｇＧ_４ Ｆｃドメインは、位置Ｓ２２８、Ｌ２３５、及びＰ３２９にアミノ酸置換、具体的にはアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３２９Ｇを含む（ＥＵ番号付け）。このようなＩｇＧ_４ Ｆｃドメイン変異体及びそれらのＦｃγ受容体結合特性は、ＰＣＴ国際公開第２０１２／１３０８３１号に記載されており、その全体が参照により本明細書に援用される。

【0302】

特定の実施態様では、天然ＩｇＧ_１ Ｆｃドメインと比較して、Ｆｃ受容体に対する結合親和性の低下及び／又はエフェクター機能の低下を呈するＦｃドメインは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及び任意選択的にＰ３２９Ｇを含むヒトＩｇＧ_１ Ｆｃドメインであるか、又はアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ及び任意選択的にＰ３２９Ｇを含むヒトＩｇＧ_４ Ｆｃドメインである（ＥＵ番号付け）。

【0303】

特定の実施態様では、ＦｃドメインのＮ－グリコシル化は、除去されている。このような一実施態様では、ＦｃドメインはＮ２９７の位置におけるアミノ酸置換、特にアラニン（Ｎ２９７Ａ）又はアスパラギン酸（Ｎ２９７Ｄ）又はグリシンＮ２９７Ｇ）によりアスパラギンを置き換えるアミノ酸置換を含む（ＥＵ番号付け）。

【0304】

本明細書及び国際公開第２０１２／１３０８３１号において記載されるＦｃドメインに加えて、Ｆｃ受容体結合及び／又はエフェクター機能が低下したＦｃドメインは、Ｆｃドメイン残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９の１つ又は複数の置換を有するものも含む（米国特許第６７３７０５６号）（ＥＵ番号付け）。そのようなＦｃ変異体は、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含め、アミノ酸位２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７のうちの２つ以上に置換を有するＦｃ変異体を含む（米国特許第７３３２５８１号）。

【0305】

変異体Ｆｃドメインは、当技術分野で周知の遺伝学的又は化学的方法を使用して、アミノ酸の欠失、置換、挿入又は修飾によって調製することができる。遺伝学的方法は、コード化ＤＮＡ配列の部位特異的変異誘発、ＰＣＲ、遺伝子合成等を含み得る。正確なヌクレオチドの変化は、例えば配列決定により検証することができる。

【0306】

Ｆｃ受容体への結合は、例えばＥＬＩＳＡによって、又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）などの標準的な装置を用いた表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって容易に決定することができ、そのようなＦｃ受容体は組換え発現によって得ることができる。代替的に、Ｆｃドメイン、又はＦｃドメインを含む分子のＦｃ受容体に対する結合親和性は、特定のＦｃ受容体を発現することが知られている細胞株、例えばＦｃγＩＩＩａ受容体を発現するヒトＮＫ細胞を用いて評価してもよい。

【0307】

Ｆｃドメイン、又はＦｃドメインを含む分子（例えば抗体）のエフェクター機能は、当技術分野で既知の方法により測定することができる。ＡＤＣＣを測定するための適切なアッセイは、本明細書に記載されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイの他の例が、米国特許第５５００３６２号；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ． ８３， ７０５９－７０６３ （１９８６）ａｎｄ Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ． ８２， １４９９－１５０２ （１９８５）；米国特許第５８２１３３７号；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １６６， １３５１－１３６１ （１９８７）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を利用してもよい（例えば、フローサイトメトリー用のＡＣＴＩ^ＴＭ非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｉｎｃ． Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ， ＣＡ）；及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ， Ｍａｄｉｓｏｎ， ＷＩ）を参照のこと）。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。代替的又は追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、ｉで、例えば動物モデル（Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９５， ６５２－６５６（１９９８）に開示されているものなど）において評価されてもよい。

【0308】

いくつかの実施態様では、補体成分に対するＦｃドメインの結合、具体的にはＣ１ｑに対する結合が低下する。したがって、Ｆｃドメインが低下したエフェクター機能を有するようにｓ操作されているいくつかの実施態様では、前記エフェクター機能の低下はＣＤＣの低下を含む。Ｃ１ｑ結合アッセイが、Ｆｃドメイン、又はＦｃドメインを含む分子（例えば抗体）がＣ１ｑに結合できるかどうか、それによりＣＤＣ活性を有するかどうかを決定するために実行され得る。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２， １６３ （１９９６）；Ｃｒａｇｇ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２ （２００３）；及びＣｒａｇｇ ａｎｄ Ｇｌｅｎｎｉｅ， Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３ （２００４）を参照）。

【0309】

３．置換、挿入、及び欠失
特定の例では、本明細書で提供される薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体バリアントは、１つ又は複数のアミノ酸置換を有する。置換による変異導入のための目的の部位には、ＨＶＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換は、表３において、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表３において、「例示的な置換」の見出しの下に提供され、またアミノ酸側鎖クラスを参照して以下に更に記載される通りである。アミノ酸置換は、目的の抗体中に導入され得、その産物は、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、又は改善されたＡＤＣＣ若しくはＣＤＣについてスクリーニングされ得る。

【0310】

アミノ酸は、一般的な側鎖特性に従って分類され得る。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

【0311】

非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。

【0312】

ある種の置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化抗体又はヒト抗体）の１つ又は複数の超可変領域残基を置換することを含む。概して、さらなる研究のために選択された、結果として得られたバリアントは、親抗体と比較して特定の生物学的特性（例えば、親和性の増加、免疫原性の低下）において修飾（例えば、改善）を有し、及び／又は親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持することになるであろう。例示的な置換型バリアントは、親和性成熟した抗体であり、例えば、本明細書に記載されるようなファージディスプレイに基づく親和性成熟技法を使用して、簡便に生成され得る。要するに、１つ又は複数のＨＶＲ残基が変異され、バリアント抗体がファージにディスプレイされ、特定の生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。

【0313】

改変（例えば、置換）は、抗体親和性を改善するために、例えば、ＨＶＲにおいて行われてもよい。このような改変は、ＨＶＲ内の「ホットスポット」、すなわち体細胞成熟過程中に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされた残基（例えばＣｈｏｗｄｈｕｒｙ， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２０７：１７９－１９６ （２００８）を参照）、及び／又は抗原に接する残基内で行うことができ、結果として得られたバリアントＶＨ又はＶＬの結合親和性が試験される。二次ライブラリの構築及びそこからの再選択による親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．， ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．， ｅｄ．， Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ， Ｔｏｔｏｗａ， ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの例では、多様な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド指向性変異誘発）のいずれかによって、成熟のために選択される可変遺伝子に多様度が導入される。次いで、二次ライブラリが作製される。その後、このライブラリがスクリーニングされて、所望の親和性を有する任意の抗体バリアントを同定する。多様性を導入するための別の方法は、複数のＨＶＲ残基（例えば、一度に４～６個の残基）がランダム化されるＨＶＲを対象とする手法を含む。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発又はモデリングを使用して、特異的に同定され得る。特にＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ３が標的とされることが多い。

【0314】

特定の例では、置換、挿入、又は欠失は、このような改変が抗体の抗原に結合する能力を実質的に低減させない限り、１つ又は複数のＨＶＲ内で生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的改変（例えば、本明細書に記載される保存的置換）が、ＨＶＲ中で行われてもよい。このような改変は、例えば、ＨＶＲ内の抗原接触残基の外側であり得る。上述のバリアントＶＨ及びＶＬ配列の特定の例では、各ＨＶＲは、改変されていないか、又は１つ、２つ、若しくは３つ以下のアミノ酸置換を有するかのいずれかである。

【0315】

変異導入の標的となり得る抗体の残基又は領域を同定するための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２４４：１０８１－１０８５に記載されているように「アラニンスキャニング変異導入」と呼ばれる。この方法では、標的残基の残基又はグループ（例えばＡｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ及びＧｌｕ等の荷電残基）が同定され、中性又は負に荷電したアミノ酸（例えばアラニン又はポリアラニン）によって置き換えられて抗原と抗体との相互作用が影響を受けるかどうかが判定される。更なる置換が、初期置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置に導入されてもよい。これに代えて、又はこれに加えて、抗体と抗原との間の接点を同定するための抗原－抗体複合体の結晶構造。このような接触残基及び隣接残基は、置換の候補として標的にしても排除してもよい。バリアントは、所望の特性を有するか否かを決定するためにスクリーニングされてもよい。

【0316】

アミノ酸配列挿入には、１個の残基から１００個以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端及び／又はカルボキシル末端融合、並びに１個又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入バリアントには、抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのための）又はポリペプチドへの抗体のＮ末端又はＣ末端の融合が含まれる。

【0317】

４．グリコシル化
特定の例では、本発明の薬学的組成物に含まれる抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、抗体がグリコシル化する程度を増加又は減少させるために改変され得る。抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、１つ又は複数のグリコシル化部位を作り出すか又は除去するように、アミノ酸配列を改変することによって、簡便に達成され得る。

【0318】

抗体がＦｃ領域を含む場合、それに付着した炭水化物が改変され得る。哺乳動物細胞によって産生された天然型抗体は、典型的には、Ｎ結合によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に一般に付着される分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．， ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６－３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖には、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、並びに二分岐オリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに付着したフコースが含まれ得る。いくつかの例では、特定の特性が改善された抗体バリアントを作製するために、抗体中におけるオリゴ糖の修飾が行われ得る。

【0319】

一例では、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体バリアントは、Ｆｃ領域に（直接的に又は間接的に）付着したフコースを欠く炭水化物構造を有する。例えば、このような抗体内のフコースの量は、１％から８０％、１％から６５％、５％から６５％、又は２０％から４０％であり得る。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析法によって測定されたＡｓｎ２９７（例えば、複合体構造、ハイブリッド構造、及び高マンノース構造）に付着した全ての糖鎖構造の合計に対するＡｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域の約２９７位に位置するアスパラギン残基を指す（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）；ただし、Ａｓｎ２９７はまた、抗体のマイナーな配列変化のために、位置２９７の上流又は下流、すなわち位置２９４と３００の間の約±３個のアミノ酸に位置していてもよい。このようなフコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；同第２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」又は「フコース欠乏」抗体バリアントに関する刊行物の例としては：米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；国際公開第２０００／６１７３９号；同第２００１／２９２４６号；米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号；同第２００２／０１６４３２８号；同第２００４／００９３６２１号；同第２００４／０１３２１４０号；同第２００４／０１１０７０４号；同第２００４／０１１０２８２号；同第２００４／０１０９８６５号；国際公開第２００３／０８５１１９号；同第２００３／０８４５７０号；同第２００５／０３５５８６号；同第２００５／０３５７７８号；同第２００５／０５３７４２号；同第２００２／０３１１４０号；Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ３３６：１２３９－１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｂｉｏｅｎｇ． ８７： ６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生する能力を有する細胞株の例には、タンパク質フコシル化が欠乏したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．， Ａｒｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． ２４９：５３３－５４５ （１９８６）；米国特許公開第２００３／０１５７１０８号、Ｐｒｅｓｔａ， Ｌ；及び国際公開第２００４／０５６３１２号、Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．特にＥｘａｍｐｌｅ １１）、及びノックアウト細胞株、例えば、アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｂｉｏｅｎｇ． ８７： ６１４ （２００４）； Ｋａｎｄａ， Ｙ． ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． Ｂｉｏｅｎｇ．， ９４（４）：６８０－６８８ （２００６）；及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照のこと）。

【0320】

上記の観点から、いくつかの実施態様では、本発明の薬学的組成物は、アグリコシル化部位変異を含む抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体バリアントを含む。いくつかの例では、アグリコシル化部位突然変異は、抗体のエフェクター機能を低下させる。いくつかの例では、アグリコシル化部位の突然変異は、置換突然変異である。いくつかの例では、抗体は、エフェクター機能を低下させるＦｃ領域における置換突然変異を含む。いくつかの例では、置換突然変異は、アミノ酸残基Ｎ２９７、Ｌ２３４、Ｌ２３５、及び／又はＤ２６５（ＥＵ番号付け）におけるものである。いくつかの例では、置換突然変異は、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｄ２６５Ａ、及びＰ３２９Ｇからなる群から選択される。いくつかの例では、置換突然変異は、アミノ酸残基Ｎ２９７におけるものである。好ましい例では、置換突然変異は、Ｎ２９７Ａである。

【0321】

抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体バリアントは、二分されたオリゴ糖類、例えば、抗体のＦｃ領域に付着した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている。このような抗体バリアントは、低減されたフコシル化及び／又は改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。そのような抗体バリアントの例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号；米国特許第６，６０２，６８４号；及び米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号に記載されている。その他の抗体バリアントは、Ｆｃ領域に付着したオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を含む。このような抗体バリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。このような抗体バリアントの例は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号；同第１９９８／５８９６４号；及び同第１９９９／２２７６４号に記載されている。

【0322】

５．抗体誘導体
特定の例では、本明細書で提供される薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、当技術分野で既知であるとともに容易に入手可能な追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾される。抗体の誘導体化に適した部位としては、水溶性ポリマーが挙げられるが、これらに限定されるものではない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ：ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレン（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）グリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、並びにそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造時に有利であり得る。ポリマーは、任意の分子量であってもよく、分岐していても、分岐していなくてもよい。抗体に付着しているポリマーの数は様々であり、複数のポリマーが付着している場合には、それらは同じ分子であっても、異なった分子であってもよい。一般に、誘導体化のために使用されるポリマーの数及び／又は種類は、限定するものではないが、改良される抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が定義される条件下で治療に使用されるかどうか等を含む考慮事項に基づいて判定することができる。

【0323】

別の例では、抗体及び非タンパク質性部分のコンジュゲートは、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る。一例では、非タンパク質性部分はカーボンナノチューブである（Ｋａｍ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ １０２： １１６００－１１６０５ （２００５））。放射線は、任意の波長であってもよく、通常の細胞に害を与えないが、抗体非保護性部位に近位の細胞が死滅する温度まで非保護性部位を加熱する波長を含むが、これらに限定されない。

【0324】

Ｃ．組換え産生方法
本発明の薬学的組成物の抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、例えば、参照によりその全体が本明細書に援用される米国特許第４，８１６，５６７号に記載されるような組換え方法及び組成物を使用して産生され得る。

【0325】

抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の組換え産生のために、抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内での更なるクローニング及び／又は発現のために、１つ又は複数のベクター内に挿入される。このような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離され、配列決定され得る。

【0326】

抗体コード化ベクターのクローニング又は発現のための適切な宿主細胞には、本明細書に記載される原核細胞又は真核細胞が含まれる。例えば、抗体は、特に、グリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされていない場合には、細菌中で産生されてもよい。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（Ｅ． ｃｏｌｉ．における抗体断片の発現について記載するＣｈａｒｌｔｏｎ， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ． ２４８ （Ｂ．Ｋ．Ｃ． Ｌｏ， ｅｄ．， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ， Ｔｏｔｏｗａ， ＮＪ， ２００３）， ｐｐ． ２４５－２５４も参照のこと。）発現後、本発明の抗体は、細菌細胞ペーストから可溶性画分で単離されてもよく、更に精製されてもよい。

【0327】

原核生物に加えて、糸状菌や酵母等の真核生物は、抗体をコードするベクターのクローニング又は発現宿主として適しており、その中には、グリコシル化経路が「ヒト化」された菌株や酵母株が含まれ、その結果、部分的又は完全にヒトのグリコシル化パターンを有する抗体が産生される。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４（２００４）及びＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５（２００６）を参照されたい。

【0328】

また、グリコシル化抗体を発現させるのに適した宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。多数のバキュロウイルス株が同定されており、これを昆虫細胞と組み合わせて使用することができ、特にスポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞のトランスフェクションに使用され得る。

【0329】

植物細胞培養物も、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物で抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載している）を参照されたい。

【0330】

脊椎動物細胞も、宿主として使用される。例えば、懸濁液中で増殖するように適合されている哺乳動物細胞株は有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）で形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胚腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ． ３６：５９ （１９７７）に記載される２９３細胞又は２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスのセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ， Ｂｉｏｌ． Ｒｅｐｒｏｄ． ２３：２４３－２５１ （１９８０）に記載されるＴＭ４細胞）；サル腎細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頚癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２）；マウス乳腺腫瘍細胞（ＭＭＴ０６０５６２）；例えばＭａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ３８３：４４－６８ （１９８２）に記載されるＴＲＩ細胞；ＭＲＣ ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては（ＤＨＦＲ^－ ＣＨＯ細胞を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０）；及びＹ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が挙げられる。抗体産生に好適な特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５－２６８（２００３）を参照のこと。

【0331】

Ｖ．治療方法及び使用
本明細書に記載される抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体を含む薬学的組成物は、さまざまな疾患及び障害を治療するための医薬としての使用のために製剤化され得る。したがって、本発明は、それを必要とする対象、例えば、がんなどの疾患又は障害を有する対象への薬学的組成物の静脈内投与を含む方法を特徴とする。本発明の薬学的組成物は、それを必要とする対象（例えば、それを必要とするヒト対象）における細胞増殖性障害の治療する若しくはその進行を遅延させるため、又は細胞増殖性障害（例えば、がん）を有する対象における免疫機能を増強するために使用され得る。

【0332】

一態様では、本発明は、細胞増殖性障害の治療又はその進行遅延に使用するための、本明細書に記載の薬学的組成物を提供する。一態様では、本発明は、細胞増殖性障害の治療又は進行遅延のための医薬の製造における、本明細書に記載の薬学的組成物の使用を提供する。一態様では、本発明は、本明細書に記載の薬学的組成物を対象に投与することを含む、それを必要とする対象における細胞増殖性障害の治療又は進行を遅延させる方法を提供する。

【0333】

一実施態様では、細胞増殖性障害は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）であるがんである。いくつかの実施態様では、ＮＨＬは、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞リンパ腫、脾びまん性赤脾髄小型Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫とバーキットリンパ腫との中間の特徴を有するＢ細胞リンパ腫、１１ｑ異常を伴うバーキット様リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫と古典的ホジキンリンパ腫との中間の特徴を有するＢ細胞リンパ腫、胚中心Ｂ細胞様（ＧＣＢ）びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、活性化Ｂ細胞様（ＡＢＣ）ＤＬＢＣＬ、原発性皮膚濾胞中心リンパ腫、Ｔ細胞／組織球リッチ大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、中枢神経系原発性ＤＬＢＣＬ、原発性皮膚ＤＬＢＣＬ（下腿型）、高齢者のエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）陽性ＤＬＢＣＬ、慢性炎症に伴うＤＬＢＣＬ、原発性縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＨＨＶ８関連多中心性キャッスルマン病に発生した大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞白血病、乳がん、大腸がん、非小細胞肺がん、多発性骨髄腫、腎臓がん、前立腺がん、肝臓がん、頭頸部がん、黒色腫、卵巣がん、中皮腫、膠芽腫、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ｉｎ ｓｉｔｕ濾胞性新生物、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ｉｎ ｓｉｔｕマントル細胞新生物、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＬ）、中枢神経系リンパ腫（ＣＮＳＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、Ｂ細胞性リンパ球性白血病、脾縁縁帯リンパ腫、毛様細胞白血病、脾リンパ腫／白血病、毛様細胞白血病変種、α重鎖症、γ重鎖症、μ重鎖症、形質細胞骨髄腫、孤立性骨形質細胞腫、骨外形質細胞腫、粘膜関連リンパ組織の節外辺縁帯リンパ腫（ＭＡＬＴリンパ腫）、結節性辺縁帯リンパ腫、小児結節性辺縁帯リンパ腫、小児濾胞性リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、形質芽球性リンパ腫、原発性胸水リンパ腫からなる群より選択される。特定の実施態様では、がんは、胚中心Ｂ細胞様（ＧＣＢ）ＤＬＢＣＬ、活性化Ｂ細胞様（ＡＢＣ）ＤＬＢＣＬ、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、リンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＬ）、ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症（ＷＭ）、中枢神経系リンパ腫（ＣＮＳＬ）、又はバーキットリンパ腫（ＢＬ）である。

【0334】

いくつかの実施態様では、がんは、乳がん、結腸直腸がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、多発性骨髄腫、腎臓がん、前立腺がん、肝臓がん、頭頸部がん、黒色腫、卵巣がん、中皮腫、及び膠芽腫からなる群より選択される。

【0335】

抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体は、０．５ｍｇ、２．５ｍｇ、１０ｍｇ、又は３０ｍｇの用量で対象に投与するために製剤化され得る。

【0336】

本明細書に記載される方法及び薬学的製剤のすべてについて、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、良好な医療行為と一致する様式で製剤化され、投薬され、投与されることになる。これに関連して考慮すべき要因としては、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医療従事者に既知である他の要因が挙げられる。抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）は、問題の疾患を予防又は治療するために現在使用されている１つ又は複数の薬剤とともに製剤化される必要はないが、任意選択的には、ともに製剤化される。これらのような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）の量、障害又は治療の種類、及び上で考察される他の要因に依存する。抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢは、例えば、グロフィタマブ）は、一連の治療にわたって患者に適切に投与され得る。

【0337】

Ｖ．製造品
本発明の別の態様では、上述した障害の処置、予防及び／又は診断に有用な物質を含有する製造品が提供される。製造品は、容器と、容器上又は容器に付随するラベル又は添付文書を含む。好適な容器は、例としてボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどを含む。容器はガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器は、症状を処置、予防、及び／又は診断するのに有効な別の組成物と単独で又は組み合わせて使用される薬学的組成物を保持し、無菌アクセスポートを有していてもよい（例えば、容器は、静脈内溶液バッグ又は皮下注射針によって穿孔可能なストッパーを有するバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本明細書に記載されるような抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）である。ラベル又は添付文書は、組成物が選択された症状（例えば、がん）を治療するために使用されることを示し、本明細書に記載される投与レジメンのうちの少なくとも１つに関連する情報をさらに含む。

【0338】

薬学的組成物は、１ｍｌから１００ｍｌ（例えば、１ｍｌから５ｍｌ、５ｍｌから１０ｍｌ、１０ｍｌから１５ｍｌ、１５ｍｌから２０ｍｌ、２０ｍｌから２５ｍｌ、２５ｍｌから３０ｍｌ、３０ｍｌから４０ｍｌ、４０ｍｌから５０ｍｌ、５０ｍｌから６０ｍｌ、６０ｍｌから７０ｍｌ、７０ｍｌから８０ｍｌ、８０ｍｌから９０ｍｌ、又は９０ｍｌから１００ｍｌ、例えば、約５ｍｌ、約１０ｍｌ、約１５ｍｌ、約２０ｍｌ、約２５ｍｌ、約３０ｍｌ、約４０ｍｌ、約５０ｍｌ、約６０ｍｌ、約７０ｍｌ、約８０ｍｌ、約９０ｍｌ、又は約１００ｍｌ）の容積を有する容器内に供給され得る。

【0339】

いくつかの実施態様では、容器は、タンク、ミニタンク、キャニスター、缶などのステンレス鋼容器又はニッケル鋼合金容器（例えば、ＨＡＳＴＥＬＬＯＹ（登録商標）である。いくつかの例では、このような容器内の薬学的組成物は原薬（ＤＳ）であり、使用前にさらに希釈して、例えば、医薬品（ＤＰ）（例えば、最終バイアル構成）にすることができる。あるいは、容器内の薬学的組成物はＤＰである。いくつかの実施態様では、ＤＰはＩＶバッグ又はシリンジ（例えば、シリンジポンプを介した送達用）などの容器に入っている。

【0340】

いくつかの実施態様では、製造品は、約１ｍｌ以上、例えば、約１ｍｌ、約２ｍｌ、約３ｍｌ、約４ｍｌ、約５ｍｌ、約６ｍｌ、約７ｍｌ、約８ｍｌ、約９ｍｌ、約１０ｍｌ、約１１ｍｌ、約１２ｍｌ、約１３ｍｌ、約１４ｍｌ、約１５ｍｌ、約１６ｍｌ、約１７ｍｌ、約１８ｍｌ、約１９ｍｌ、約２０ｍｌ、約２５ｍｌ、約３０ｍｌ、約３５ｍｌ、約４０ｍｌ、約５０ｍｌ、又はそれを超える容積を有するバイアルを含む。いくつかの実施態様では、容器は約１０ｍｌの容積を有するバイアルである。いくつかの実施態様では、バイアルは使い捨てである。いくつかの実施態様では、バイアルは、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、又はそれを超える抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）を含有する。いくつかの実施態様では、容器閉鎖システムは、ガラスバイアル、ストッパー、及びキャップのうちの１つ又は複数、又はすべてを含む。

【0341】

さらに、製造品は、（ａ）本明細書に記載される抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体（例えば、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ ＴＣＢ、例えば、グロフィタマブ）を含む組成物を中に含有する第１の容器と、（ｂ）さらなる細胞傷害性薬剤又はその他の治療剤を含む組成物を中に含有する第２の容器とを含み得る。代替的に又は追加的に、製造品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル溶液、及びデキストロース溶液などの薬学的に許容されるバッファーを含む第２の（又は第３の）容器をさらに含んでもよい。製造品は、他のバッファー、希釈剤、フィルタ、針及びシリンジを含む、商業的及びユーザーの観点から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。

【0342】

本発明のさらなる態様は、本明細書に記載される発明に関連する。

【0343】

実施態様
本明細書に記載の技術のいくつかの実施態様は、以下の番号付き実施態様のいずれかに従って定義することができる。

【0344】

Ｉ．液体薬学的組成物であって、
約５．０から約６．０の範囲のｐＨで、
約１から２５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体；
約１０から５０ｍＭの緩衝剤；
約≧２００ｍＭの等張化剤；
約０－１５ｍＭのメチオニン；及び
約≧０．２ｍｇ／ｍｌの界面活性剤；
を含み、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、：
ａ）ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
ｂ）ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインであって、
（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；
（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３
を含む重鎖可変領域と、
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；
（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び
（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３
を含む軽鎖可変領域と、
を含むＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
を含む、液体薬学的組成物。

【0345】

ＩＩ．抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の濃度が、約１から５ｍｇ／ｍｌの範囲である、実施態様Ｉに記載の液体薬学的組成物。

【0346】

ＩＩＩ．抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の濃度が、約０．９－１．１ｍｇ／ｍｌの範囲である、実施態様Ｉ又はＩＩに記載の液体薬学的組成物。

【0347】

ＩＶ．抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体の濃度が約１ｍｇ／ｍｌである、実施態様ＩからＩＩＩのいずれか一つに記載の液体薬学的組成物。

【0348】

Ｖ．抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、
ａ）配列番号７の重鎖可変領域配列及び配列番号８の軽鎖可変領域配列を含む、ＣＤ２０に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
ｂ）配列番号１５の重鎖可変領域配列及び配列番号１６の軽鎖可変領域配列を含む、ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合ドメインと、
を含む、実施態様ＩからＩＶのいずれか一つに記載の液体薬学的組成物。

【0349】

ＶＩ．抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体が、
ａ）ＣＤ３、特にＣＤ３イプシロンに特異的に結合する第１のＦａｂ分子であって、Ｆａｂ軽鎖とＦａｂ重鎖の可変ドメインＶＬとＶＨが互いによって交換されている第１のＦａｂ分子と；
ｂ）ＣＤ２０に特異的に結合する第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子であって、第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬでは、１２４位のアミノ酸がリジン（Ｋ）により置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、１２３位のアミノ酸がリジン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）により、特にアルギニン（Ｒ）により置換されており（Ｋａｂａｔによる番号付け）、第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＨ１では、１４７位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されており（ＥＵ番号付け）、２１３位のアミノ酸がグルタミン酸（Ｅ）により置換されている（ＥＵ番号付け）、第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子と；
ｃ）安定な会合が可能な第１のサブユニットと第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインと；
を含む、実施態様ＩからＶのいずれか一つに記載の液体薬学的組成物。

【0350】

ＶＩＩ．抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体がグロフィタマブである、実施態様ＩからＶＩのいずれか一つに記載の液体薬学的組成物。

【0351】

ＶＩＩＩ．緩衝剤が、ヒスチジンバッファー、任意選択的にはヒスチジンＨＣｌバッファーである、実施態様ＩからＶＩＩのいずれか一つに記載の液体薬学的組成物。

【0352】

ＩＸ．緩衝剤の濃度が約１５から２５ｍＭである、実施態様ＩからＶＩＩＩのいずれか一つに記載の液体薬学的組成物。

【0353】

Ｘ．緩衝剤の濃度が約２０ｍＭである、実施態様ＩからＩＸのいずれか一つに記載の液体薬学的組成物。

【0354】

ＸＩ．緩衝剤が約５．２から約５．８のｐＨを提供する、実施態様ＩからＸのいずれか一つに記載の液体薬学的組成物。

【0355】

ＸＩＩ．等張化剤が、塩、糖類、及びアミノ酸の群より選択される、実施態様ＩからＸＩのいずれか一つに記載の液体薬学的組成物。

【0356】

ＸＩＩＩ．等張化剤がスクロース又は塩化ナトリウムのいずれかである、実施態様ＸＩＩに記載の液体薬学的組成物。

【0357】

ＸＩＶ．等張化剤が約２００ｍＭ以上の濃度のスクロースである、実施態様ＸＩＩＩに記載の液体薬学的組成物。

【0358】

ＸＶ．等張化剤が約２００ｍＭ～２８０ｍＭの濃度のスクロースである、実施態様ＸＩＩＩ又はＸＩＶに記載の液体薬学的組成物。

【0359】

ＸＶＩ．等張化剤が約２４０ｍＭの濃度のスクロースである、実施態様ＸＩＩＩからＸＶのいずれか一つに記載の液体薬学的組成物。

【0360】

ＸＶＩＩ．メチオニンの濃度が約５～１５ｍＭである、実施態様ＩからＸＶＩのいずれか一つに記載の液体薬学的組成物。

【0361】

ＸＶＩＩＩ．メチオニンの濃度が約１０ｍＭである、実施態様ＸＶＩＩに記載の液体薬学的組成物。

【0362】

ＸＩＸ．界面活性剤の濃度が約０．２～０．８ｍｇ／ｍｌである、実施態様ＩからＸＶＩＩＩのいずれか一つに記載の液体薬学的組成物。

【0363】

ＸＸ．界面活性剤が、ポリソルベート２０又はポロキサマー１８８である、実施態様ＩからＸＩＸのいずれか一つに記載の液体薬学的組成物。

【0364】

ＸＸＩ．界面活性剤が、０．２～０．８ｍｇ／ｍｌの濃度のポリソルベート２０である、実施態様ＸＸに記載の液体薬学的組成物。

【0365】

ＸＸＩＩ．界面活性剤が、約０．５ｍｇ／ｍｌの濃度のポリソルベート２０である、実施態様ＸＸＩに記載の液体薬学的組成物。

【0366】

ＸＸＩＩＩ．液体薬学的組成物であって、
約５から約６のｐＨで、
約１から５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３二重特異性抗体と；
約１５～２５ｍＭのヒスチジンバッファーと；
約２００～２８０ｍＭのスクロースと；
約０～１５ｍＭのメチオニンと；
約０．２～０．８ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０と；
を含む、実施態様ＩからＸＸＩＩのいずれか一つに記載の液体薬学的組成物。

【0367】

ＸＸＩＶ．液体薬学的組成物であって、
約５．５のｐＨで、
約１ｍｇ／ｍｌのグロフィタマブと；
約２０ｍＭのヒスチジンバッファーと；
約２４０ｍＭのスクロースと；
約１０ｍＭのメチオニンと；
約０．５ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０と；
を含む、実施態様ＩからＸＸＩＩＩのいずれか一つに記載の液体薬学的組成物。

【0368】

ＸＸＶ．細胞増殖性障害を治療するのに有用な医薬の調製のための実施態様ＩからＸＸＩＶのいずれか一つに記載の液体薬学的組成物の使用。

【0369】

ＸＸＶＩ．細胞増殖性障害の治療又はその進行の遅延を必要とする対象において、それに使用するための実施態様ＩからＸＸＩＶのいずれか一つに記載の薬学的組成物。

【0370】

ＸＸＶＩＩ．細胞増殖性障害の治療又はその進行の遅延を必要とする対象における、その治療方法又は遅延方法であって、対象に実施態様ＩからＸＸＩＶのいずれか一つに記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。

【0371】

ＸＸＶＩＩＩ．細胞増殖性障害ががんである、実施態様ＸＸＶからＸＸＶＩＩのいずれか一つに記載の、使用、使用のための液体薬学的組成物、又は方法。

【0372】

ＸＸＩＸ．上に記載された発明。

【実施例0373】

以下は、本発明の方法及び組成物の実施例である。上に提供された一般的な説明を前提として、他の様々な実施態様が実施され得ることが理解される。

【0374】

実施例１：グロフィタマブのｉｎ ｓｉｌｉｃｏ分析
ＲＯ７０８２８５９／グロフィタマブは、腫瘍細胞のヒトＣＤ２０と、Ｔ細胞のＴ細胞受容体複合体（ＴＣＲ）のヒトＣＤ３イプシロンサブユニット（ＣＤ３ε）とに結合するＴ細胞二重特異性ヒト化モノクローナル抗体（ＴＣＢ）である。これは、２つの異なる重鎖と２つの異なる軽鎖から構成されている。ＣＨ３ドメイン中の点変異（「ノブ・イントゥ・ホール」）は、２つの異なる重鎖のアセンブリを促進させる。ＣＤ３結合ＦａｂにおけるＶＨドメインとＶＬドメインの交換（「ＣｒｏｓｓＭａｂアプローチ」）と、ＣＤ２０結合ＦａｂにおけるＣＨドメイン及びＣＬドメイン内の点変異（「荷電バリアント」）は、二つの異なる軽鎖と対応する重鎖の正確なアセンブリを促進させる。「ノブ・イントゥ・ホール」変異は、重鎖ＨＣ１におけるアミノ交換Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖと、重鎖ＨＣ２におけるアミノ交換Ｓ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗとからなる（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス番号付け）。「荷電バリアント」の変異は、軽鎖ＬＣ２におけるアミノ酸交換Ｅ１２３Ｒ及びＱ１２４Ｋ（Ｋａｂａｔ番号付け）と、重鎖ＨＣ１及びＨＣ２におけるアミノ酸交換Ｋ１４７Ｅ及びＫ２１３Ｅ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス番号付け）とからなる。

【0375】

ヒトＣＤ２０への結合は高い親和性で二価の結合様式で起こるのに対して、ＣＤ３εへの結合は一価で低親和性である。ＲＯ７０８２８５９は、Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）へのｉｎ ｖｉｔｒｏでの結合を阻害するとともにナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球／マクロファージ、及び好中球を含む先天的な免疫エフェクター細胞のＦｃγＲを介した共活性化を防止する修飾（「ＰＧ ＬＡＬＡ」変異）をＦｃ領域に有するヒトＩｇＧ１であり、ＦｃＲｎ（新生児Ｆｃ受容体）への機能的結合は変化しない。「ＰＧ ＬＡＬＡ」変異は、重鎖ＨＣ１及び重鎖ＨＣ２におけるアミノ酸交換Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ（「ＰＧ ＬＡＬＡ」、Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス番号付け）からなる。

【0376】

組換え抗体は、ＣＨＯ細胞で産生され、図２に示すように、２つの重鎖（それぞれ４４９及び６７４アミノ酸残基）と３つの軽鎖（それぞれ２３２及び２１９（２コピー）アミノ酸残基）とからなり、非対称に配置されている。

【0377】

活性ホットスポットの概要
分子のＣＤ３結合部分について、ｉｎ ｓｉｌｉｃｏ予測では、重鎖のＣＤＲ３に分解されやすいＡｓｎ残基が２つ、露出したＴｒｐ残基が１つあることが示された。１４日間にわたるストレス実験では、ｐＨ６．０でのインキュベーション後、標的結合活性に大きな変化は見られなかったが、生理的ｐＨ（ＰＢＳ ｐＨ７．４、データは示さず）でのインキュベーション後、標的結合活性の強い低下が観察された。

【0378】

実施例２：グロフィタマブ製剤開発ＧＬＰ Ｔｏｘ及びヒト研究への導入
表４に示されたスキームに従ってスクリーンを実施した。スクリーンの間、製剤を以下の条件に曝露させた：３週間及び６週間の保存（５℃、２５℃、及び４０℃）、５℃及び２５℃での１週間の振とう及び凍結／融解（Ｆ／Ｔ）ストレス（５サイクル）。指定された製剤をその後５２週間まで追跡する。

【0379】

５℃、２５℃、及び４０℃で６週間保存した後、すべての製剤は、試験したほとんどの物理的特性、つまり可視粒子及び肉眼では見えない粒子、色、濁度、ｐＨ、並びにタンパク質含量に大きな変化はなかった。ＣＥ－ＳＤＳ（キャピラリー電気泳動ドデシル硫酸ナトリウム）のデータは、指定に重要ではなかったので示していない。

【0380】

Ｓｅｉｄｅｎａｄｅｒ法による可視粒子分析では、いずれの製剤もすべての保存条件下で可視粒子の形成は見られなかった。肉眼では見えない粒子の数は少なかった（図示せず）。機械的応力条件下では、Ｆ２－Ｆ５は５℃と２５℃の両方で多くの粒子を示した。Ｆ１はどちらの条件でも粒子が存在しなかった。ＥＰ及びＯｐｔｉｍａを使用すると、Ｆ３とＦ４（ともにＰ１８８あり）以外は、すべての組成物に事実上粒子がほとんどなく（粒子０）、粒子はみられるが限界値を下回っている（図示せず）。５℃での振とうでは、肉眼では見えない粒子はＦ３（Ｐ１８８＋Ｍｅｔ）の方がＦ４（Ｐ１８８）よりも有意に悪かった。他のすべての製剤は各条件で同様の数を示した（図示せず）。

【0381】

濁度及び色は、６週間後、すべての条件下ですべての製剤に有意な変化は見られなかった。界面活性剤の含量は、５℃及び２５℃で安定で、Ｐ１８８を含有する製剤（Ｆ３、Ｆ４）については４０℃でも安定であった。すべてのＰＳ２０含有活性製剤（Ｆ１、Ｆ２、及びＦ５）では、製剤がメチオニンを含有していたか否かにかかわらず、４０℃で界面活性剤の含量の低下が観察された。

【0382】

メチオニンの有益な効果は、ＰＳ２０を含有するプラセボ製剤においてのみ見られ、４０℃でＰＳの含量が低下したのはＰ２のみであった（図３）。生化学的特性評価では、４０℃で保存した後でのみ製剤の違いが明らかになった。

【0383】

サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）では、モノマーの損失はＦ２及びＦ５でより顕著であり、ＨＭＷ（高分子量）面積の増加と相関していた。新たなＨＭＷ種が出現し、Ｆ３及びＦ４ではわずかであったが、Ｆ１ではより強く、Ｆ２及びＦ５では非常に大きかった。ＬＭＷ（低分子量）種は、すべての製剤でもほぼ同じ割合で増加することがわかった（図４）。同様の傾向はイオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）で観察され、塩基性ピーク面積は全体的に増加し、酸性面積の増加はＦ２及びＦ５でより顕著であった（図５）。

【0384】

まとめると、データはＦ２とＦ５を明確に除外し、Ｆ１、Ｆ３、及びＦ４が同等に安定していることを示し、３つのどれかが明確に優先されることはなかった。Ｆ１（５ｍｇ／ｍｌのグロフィタマブ、２０ｍＭのヒスチジン／ヒスチジンＨＣｌ、ｐＨ５．５、２４０ｍＭのスクロース、１０ｍＭのメチオニン、０．０５％（ｗ／ｖ）のＰＳ２０）を指定した。Ｆ１についてのすべての分析結果の概要は図６で見ることができる。

【0385】

実施例３：ＧＬＰ Ｔｏｘ ／ヒト研究への導入
ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）による結合
前述の純度の結果は、Ｆ２及びＦ５の４０℃におけるＣＤ２０結合の損失と、それらの製剤におけるＣＤ３結合の５０％までの強い損失にも反映されており、これに対して残りの製剤の損失は１０から２０％の間であった（図７Ａ及び図７Ｂ）。

【0386】

実施例４：第ＩＩＩ相及び市販製剤のための開発研究
本実施例では、グロフィタマブ製剤の薬学的開発の概要を提供する。この開発の結果、グロフィタマブ医薬品は、ＩＶ点滴用の無菌の濃縮液として提供される。医薬品は、ｐＨ５．５の、２０ｍＭのＬ－ヒスチジン／Ｌ－ヒスチジン塩酸塩（ＨＣｌ）バッファー中１ｍｇ／ｍｌのグロフィタマブ、２４０ｍＭのスクロース、１０ｍＭのＬ－メチオニン、０．５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０からなる。グロフィタマブは、原薬及び医薬品中の唯一の活性成分である。製剤開発研究により、剤形及び製剤が使用目的に適していることが確認された。製剤は、製造、保存、輸送、及び投与中に医薬品が安定であることを保証するために十分に頑丈である。

【0387】

より高いタンパク質濃度を有する製剤（例えば、５、２５、又は５０ｍｇ／ｍｌのグロフィタマブ）についても試験したが、ＰＳ２０の分解による肉眼では見えない粒子及び可視粒子の形成のため、その後追跡しなかった。タンパク質濃度とともに増加するレベルでの遊離脂肪酸（ラウリン酸及びミリスチン酸）の放出は、肉眼では見えない粒子及び可視粒子の形成の根本原因がＰＳ２０の加水分解によるものであることが確認された。

【0388】

液体剤形が選択されたことにより、製造中及び医薬品の保存期間終了まで製品の品質を確保しながら、取り扱い手順が少なくなった。

【0389】

グロフィタマブ医薬品は、製品の無駄を最小限に抑えつつ、２．５ｍｇ、１０ｍｇ、及び３０ｍｇの必要臨床用量に適合させるために、２．５ｍｇ／バイアルを６ｍｌの使い捨てガラスバイアルに充填する、及び１０ｍｇ／バイアルを１５ｍｌの使い捨てガラスバイアルに充填する、２種類の強度の２つのバイアル構成で市販されることになる。市販の医薬品製剤では、添加物組成を変更せずにグロフィタマブの濃度を１ｍｇ／ｍｌに低下させた。

【0390】

製剤開発研究は、医薬品の適切な剤形、タンパク質濃度、界面活性剤濃度、バッファー種、溶液ｐＨ、安定剤、等張化剤、及びバイアル構成を選択する根拠となった。原薬の配合は、施設への適合、希釈、及び保存の考慮事項を考慮して最適化された。

【0391】

剤形の選択
液体剤形が選択されて点滴用の濃縮液が提供されることにより、製造中及び医薬品の保存期間終了まで製品の品質を確保しながら、取り扱い手順が少なくなった。

【0392】

タンパク質濃度の選択
第Ｉ相では５ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度を選択し、第ＩＩＩ相まで保持した。その後、製剤開発研究及び最新の臨床投与要件に基づいて、１ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度を市販製剤として選択した。

【0393】

タンパク質濃度を臨床上の必要性に適合させるように調製するために、２０ｍＭのＬ－ヒスチジン／Ｌ－ヒスチジン塩酸塩、１０ｍＭのＬ－メチオニン、２４０ｍＭのＤ－スクロース及び０．５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０（ＰＳ２０）を含有するｐＨ５．５の製剤の安定性を、１ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、及び２５ｍｇ／ｍｌのグロフィタマブ濃度で試験した。これらの製剤を、ＳＥ－ＨＰＬＣ及びＩＥ－ＨＰＬＣによるグロフィタマブの純度、ＰＳ２０含量、可視粒子／肉眼では見えない粒子の形成を評価することにより、初期時点（Ｔ０）、いくつかの中間時点、及び２℃～８℃で１０４週間保存した後の研究終了時点で、評価した。

【0394】

ＳＥ－ＨＰＬＣ及びＩＥ－ＨＰＬＣによる純度は、研究全体を通して１ｍｇ／ｍｌ製剤と５ｍｇ／ｍｌ製剤の間で同等であった（図８Ａ及び図８Ｂ）。肉眼では見えない粒子の数も同程度であった。さらに、１ｍｇ／ｍｌ製剤は、５ｍｇ／ｍｌ製剤及び２５ｍｇ／ｍｌ製剤と比較して、方法のばらつきを超えるＰＳ２０分解を示さない（図１２、下記「ポリソルベート２０分解の評価」も参照）。これらの結果と、２．５ｍｇ、１０ｍｇ、及び３０ｍｇの最新の臨床用量レジメンとに基づき、１ｍｇ／ｍｌ製剤が市販製剤として選択された。

【0395】

０．９～１．１ｍｇ／ｍｌタンパク質の濃度範囲を、その後の多変量製剤頑強性研究でさらに評価した（実施例５、製剤頑強性研究参照）。この研究では、この濃度範囲で許容できる安定挙動が確認された。

【0396】

ｐＨ、バッファー、安定剤、及び等張化剤の選択
製剤開発研究に基づき、ｐＨ５．５のＬ－ヒスチジン／Ｌ－ヒスチジン塩酸塩の２０ｍＭ溶液をバッファーとして選択し、安定剤として１０ｍＭのＬ－メチオニン、等張化剤として２４０ｍＭのＤ－スクロースを第Ｉ相で併用し、第ＩＩＩ相及び市販製剤のために保持した。

【0397】

５ｍｇ／ｍｌのグロフィタマブでの研究を、２０ｍＭのＬ－ヒスチジン／Ｌ－ヒスチジン塩酸塩バッファーのｐＨ範囲を５．５から６．０、Ｌ－メチオニンのレベルを０及び１０ｍＭに設定して試験した。さらに、２４０ｍＭのＤ－スクロースと１３０ｍＭの塩化ナトリウムの比較も実施した。

【0398】

ｐＨ及び安定化剤の影響を、初期時点（Ｔ０）及び４０℃で６週間保存後に、ＳＥ－ＨＰＬＣ及びＩＥ－ＨＰＬＣによるグロフィタマブの純度と、可視粒子／肉眼では見えない粒子の形成とを評価することにより評価した。等張化剤の選択は、初期時点（Ｔ０）及び２５℃で２６週間保存後に、ＳＥ－ＨＰＬＣ及びＩＥ－ＨＰＬＣによって測定し、可視粒子／肉眼では見えない粒子の形成を決定することによって評価した。２０ｍＭのＬ－ヒスチジン／Ｌ－ヒスチジン塩酸塩バッファー（ｐＨ５．５）と１０ｍＭのＬ－メチオニンの組み合わせは、安定剤無添加の対応する製剤又は２０ｍＭのＬ－ヒスチジン／Ｌ－ヒスチジン塩酸塩バッファー／１０ｍＭのＬ－メチオニンの組み合わせ（ｐＨ６）と比較して、高分子量種（ＨＭＷＳ）の形成（図９Ａ）と、荷電バリアントの変化（図９Ｂ）とが最も少ないことを示した。２０ｍＭのＬ－ヒスチジン／Ｌ－ヒスチジン塩酸塩一水和物の濃度は、医薬品の製造中並びに原薬及び医薬品の保存中に維持するのに十分であることが示された。

【0399】

２４０ｍＭのＤ－スクロースは、２４０ｍＭのＤ－スクロースと１３０ｍＭの塩化ナトリウムの比較に基づいて選ばれた。肉眼では見えない粒子の数は、製剤間で同程度であった。Ｄ－スクロース含有製剤では、２５℃で２６週間保存後に肉眼では見えない粒子の形成は観察されなかったが、ＮａＣｌ含有製剤では可視粒子が観察された（図１０）。

【0400】

界面活性剤の選択
０．５ｍｇ／ｍｌ濃度のＰＳ２０が、安定性研究の結果に基づいて、第Ｉ相用に選択され、商業的製剤化まで保持された。２０ｍＭのＬ－ヒスチジン／Ｌ－ヒスチジン塩酸塩バッファー、ｐＨ５．５、１０ｍＭのＬ－メチオニン及び２４０ｍＭのＤ－スクロース中、５０ｍｇ／ｍｌのグロフィタマブの研究で、ＰＳ２０に対するポロキサマー１８８（Ｐ１８８）の安定化効果を検討した。Ｐ１８８を０．５、０．７、及び１．０ｍｇ／ｍｌのレベルで、ＰＳ２０を０．１、０．３、及び０．５ｍｇ／ｍｌのレベルで試験した。

【0401】

添加した界面活性剤の影響を、初期時点（Ｔ０）及び２５℃で７日間振とう後に、ＳＥ－ＨＰＬＣ及びＩＥ－ＨＰＬＣによるグロフィタマブの純度と、可視粒子／肉眼では見えない粒子の形成とを評価することにより評価した。

【0402】

すべてのＰ１８８濃度で可視粒子の形成が観察された。したがって、Ｐ１８８はグロフィタマブの適切な界面活性剤としては除外した（図１１）。２５℃で７日間の振とう後、ＰＳ２０含有製剤では可視粒子は検出されなかった（図１１）。２５℃で７日間の振とう後の０．５ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０含有製剤と比較して、０．１ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０含有製剤では、ＨＭＷＳ及び荷電バリアントの大幅な増加が観察されたが、０．３ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０含有製剤では、ＨＭＷＳ及び荷電バリアントのレベルのわずかな増加が観察された（図１１）。肉眼では見えない粒子の数は、異なるＰＳ２０の濃度間で同程度であった。２５℃で７日間の振とう後の０．５ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０含有製剤と比較して、０．１ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０含有製剤では、ＨＭＷＳ及び荷電バリアントの大幅な増加が観察されたが、０．３ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０含有製剤では、ＨＭＷＳ及び荷電バリアントのレベルのわずかな増加が観察された（図１１）。したがって、０．５ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０含有製剤が選択された。０．５ｍｇ／ｍｌのレベルのポリソルベート２０は、加工中（撹拌、凍結融解、又はせん断応力など）、取り扱い中、保存中、及び輸送中に起こり得るストレスからグロフィタマブを保護するのに十分であることが示された。０．２～０．８ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０の濃度範囲を、その後の多変量製剤頑強性研究でさらに評価した（実施例５、製剤頑強性研究参照）。この研究では、この濃度範囲で許容できる安定挙動が確認された。

【0403】

実施例５：製剤頑強性研究
原薬及び医薬品の組成は、バッファー成分の計量公差などの製造要因に基づく範囲内で変動し得る。多変量製剤頑強性研究を実施し、グロフィタマブの関連する品質特性（ＱＡ）は、これらの組成範囲の境界で許容されることが実証された。医薬品の保存中に重要な品質特性（ＣＱＡ）に影響を及ぼす可能性があると同定された３つの因子について、２つのレベルでの多変量安定性研究を実施した。以下の３つの製剤パラメータを評価した：
１．タンパク質濃度
２．ｐＨ
３．ＰＳ２０濃度。
さらに、単変量安定性研究において、３つの製剤パラメータを個別に評価した：
４．バッファー強度
５．Ｌ－メチオニン濃度
６．Ｄ－スクロース濃度。

【0404】

多変量製剤頑強性研究により、グロフィタマブの関連ＣＱＡは、特許請求した製剤組成の全範囲において許容されることが実証された。

【0405】

研究デザイン
リスク評価を実施して、保存期間中に製品の品質を維持するために重要な原薬及び医薬品の製剤パラメータを同定した。それに応じて多変量解析及び単変量解析を設定した。

【0406】

多変量解析（Ｆ６からＦ１２）
タンパク質濃度、ｐＨ、及びＰＳ２０濃度の３つの製剤パラメータを入力因子として使用し、２つのレベルでの一部実施要因計画（ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ＩＩＩ）安定性研究を実施した。

【0407】

単変量解析（Ｆ１３からＦ２０）
Ｌ－メチオニンとＤ－スクロースの濃度（低濃度及び高濃度）、並びにバッファーの強度（低レベル及び高レベル）を試験した。

【0408】

低タンパク質濃度、低ｐＨ、及び低ＰＳ２０濃度の１つの製剤を、高ｐＨ、高タンパク質濃度、及び高ＰＳ２０濃度の対応する製剤と直接比較して評価した。

【0409】

許容基準の設定をサポートするために、０．３ｍｇ／ｍｌのＰＳ２０濃度の１つの製剤が含まれていた。

【0410】

試験された製剤パラメータ範囲は、表５に記載されているように、医薬品規格の許容基準及び／又は製造許容範囲のいずれかをカバーするように定義されている。表６は、３つの中心点を含む１５の実験を含むデザイン計画を示しており、３つの中心点は目標とする市販製剤組成に対応している。

【0411】

表６に記載した製剤組成物中のグロフィタマブの安定性を以下のように評価した：
● 安定性研究：
〇 保存条件：リアルタイム（２℃～８℃）、加速（２５℃）
〇 試験頻度：上記保存条件での０、４、１３、２６（２５℃保存終了）、３９、５２、７８、及び１０４週間の保存
● 応力試験：
〇 ５回の凍結融解サイクル、
〇 ２－８℃で１週間の振とう、及び２５℃で１週間の振とう
● ＤＳをサポートする安定性：－４０℃で、０、２６、５２、及び１０４週間保存
評価されたＱＡ：
〇 ＳＥ－ＨＰＬＣによるＨＭＷＳ（高分子量種）及びメインピーク
〇 非還元型ＣＥ－ＳＤＳによるＬＭＷＳ（低分子量種）及びメインピーク
〇 ＩＥ－ＨＰＬＣによる酸性ピーク２及び３、酸性領域、塩基性領域、及びメインピーク
〇 紫外可視分光法によるタンパク質含有量
〇 ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤによるポリソルベート２０含有量
〇 ＲＰ－ＨＰＬＣによるＬ－メチオニン及びＬ－ヒスチジンの濃度
〇 ペプチドマッピング（ＬＣ－ＭＳ）による酸化及び異性化
〇 バイオアッセイによる力価
〇 可視粒子
〇 肉眼では見えない粒子
〇 色、透明度／タンパク光
〇 ｐＨ
〇 浸透圧
〇 密度

【0412】

全体的なデータ分析手順
各製剤について、すべての品質属性のデータを経時的に収集した。各ＱＡの経時的な相対的変化を評価した。

【0413】

多変量解析：
各品質属性と各製剤について、単純な線形回帰を経時的に当てはめる。こうして、各品質属性と各製剤の分解率が算出される。明記されていない場合、分解率は１週間あたりの分解率として報告されている。これらの分解率を実験計画法（ＤｏＥ）研究において応答として評価し、タンパク質濃度、ｐＨ、及びＰＳ２０濃度の３つのパラメータがこれらの分解に及ぼす影響を調べた。品質属性が経時的に目標製剤と比較して意味のある変化を示さなかった場合、回帰分析及び効果推定は実施しなかった。経時的に意味のある変化を示した品質属性については、線形回帰を用いて、分解率に対する３つの要因の主効果を推定した。さらに、主効果プロットを示し、これらの効果をグラフで示した。

【0414】

単変量解析：
単変量解析で試験したパラメータについて、２℃～８℃で３９週間保存後の結果をＴ０と比較して評価し、潜在的な変化を同定した。変化が同定された場合、境界での調査した製剤パラメータの影響を推定するために、分解率を計算し、目標製剤の分解率と比較する。場合によっては、１週間あたりの分解率を、それに１０４の係数をかけることにより１０４週間で観察された分解率に変換した。回帰分析は、ＪＭＰ（登録商標）ソフトウェア（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， Ｃａｒｙ， ＮＣ， Ｖｅｒｓｉｏｎ １０．０以上）を用いて行った。

【0415】

推奨保存条件（２℃～８℃）における頑強な製剤の安定性：
２℃～８℃で３９週間保存した後の目標製剤と比較した相対的変化の評価の概要を表７に示す。ｐＨ６で製剤化したすべての製剤（Ｆ８、Ｆ９、Ｆ２０）について、酸性バリアントレベルの増加（ＩＥ－ＨＰＬＣによる酸性領域及び酸性ピーク２）が観察された。観察された酸性バリアントの増加は、影響を受けた製剤におけるＩＥ－ＨＰＬＣメインピークの対応する減少によって反映されている。２℃～８℃で３９週間保存した後、他のすべての製剤の他のすべてのＣＱＡに変化は観察されなかった。結論として、ｐＨは重要な製剤パラメータであることが確認された。他のすべての製剤パラメータ、タンパク質含量、ＰＳ２０、Ｌ－メチオニン及びＤ－スクロースの濃度、並びにバッファー強度は、調査した範囲において、試験したＣＱＡに影響を与えなかった。

【0416】

加速保存条件（２５℃）における頑強な製剤の安定性：
２℃～８℃のデータと同様に、脱アミド化による酸性バリアントレベルの増加（ＩＥ－ＨＰＬＣによる酸性領域及び酸性ピーク２）が、ｐＨ６で製剤化されたすべての製剤（Ｆ８、Ｆ９、Ｆ２０）で観察され、これは影響を受けた製剤におけるＩＥ－ＨＰＬＣメインピークの減少に反映されている。さらに、ｐＨ５で製剤化されたＦ１及びＦ２では、ＣＥ－ＳＤＳによるＬＭＷＳの増加によって断片化レベルの増加が観察された。この増加はＣＥ－ＳＤＳメインピークの減少に反映されている。２５℃で２６週間保存した後、他のすべての製剤の他のいずれのＣＱＡでも変化は観察されなかった。

【0417】

結論として、２５℃のデータは、ｐＨが重要な製剤パラメータであることを裏付けた。その他の製剤パラメータはすべて、ＣＱＡに影響を与えなかった。

【0418】

推奨原薬保存条件（－４０℃）における頑強な製剤の安定性：
特許請求する製剤組成範囲全体にわたる原薬の安定性をサポートするために、－４０℃で保存された原薬頑強性製剤の安定性研究を実施した。研究結果は、製剤を－４０℃で２６週間の推奨原薬保存条件で保存したとき、試験した品質属性に有意な変化は観察されなかったことを裏付けた。

【0419】

振とう及び凍結／融解ストレス後の頑強な製剤の安定性：
製剤を２℃～８℃、又は２５℃で１週間振とうした。さらに、製剤を－４０℃と５℃の間の凍結／融解サイクルを５回行った後に評価した。すべてのサンプルは、振とう又は凍結／融解ストレスにより、可視粒子が事実上なくなった。

【0420】

すべての製剤において、振とう及び凍結／融解ストレスにより、肉眼では見えない粒子は変化しなかった。ＰＳ２０の含有量が低い製剤（０．２ｍｇ／ｍｌ、Ｆ７、Ｆ８、Ｆ１３）は、０．３～０．８ｍｇ／ｍｌのレベルのＰＳ２０を含有する他のすべての製剤と比較して、振とう及び凍結／融解ストレス後に製品の品質への影響を示さなかった。

【0421】

この結果は、≧０．２ｍｇ／ｍｌのレベルのポリソルベート２０が、振とう及び凍結融解ストレスからタンパク質を保護するのに十分であることを裏付けている。同様に、Ｄ－スクロース含量が低い製剤（２００ｍＭ、Ｆ１９）は、２４０～２８０ｍＭのレベルのＤ－スクロースを含有する他のすべての製剤と比較して、振とう及び凍結／融解ストレス後の製品の品質への影響を示さなかった。この結果は、≧２００ｍＭのレベルのＤ－スクロースが、凍結／融解ストレスからタンパク質を保護するのに十分であることを裏付けている。その他の品質特性には、対照サンプルと比較して、振とう又は凍結／融解ストレスによる大きな変化は見られなかった。

【0422】

推奨保存条件（２℃～８℃）におけるデータに基づく、同定されたＣＱＡの線形回帰分析：
影響を受けたＣＱＡ（溶液ｐＨ、タンパク質濃度、及びＰＳ２０濃度）について、単純な線形回帰分析を実施した。ｐＨが主な影響を与えることが確認された。算出された１週間あたりの分解率は、１０４週間（＝２４ヶ月）をかけることにより、保存期限（ＥｏＳ）まで外挿された。外挿された結果を表８に要約する。

【0423】

線形回帰分析は、すべてのＣＱＡが安定性の許容基準内であるため、試験したｐＨ範囲が同定されたＣＱＡに与える意味のある影響はないことを実証した。しかし、酸性領域の増加を制御するために、医薬品放出時のｐＨ許容基準を５．２～５．８に厳格化した。

【0424】

結論：
外挿されたデータは、２４ヶ月後（特許請求された医薬品の保存期間）の酸性バリアントのレベルに対する６．０の高いｐＨの影響を示唆している。したがって、医薬品放出時のｐＨ許容基準を５．２～５．８に厳格化し、医薬品安定時の酸性製剤の形成を制限した。

【0425】

この製剤は保存期限終了時まで頑強であると考えられる：
● ＣＱＡは、製剤範囲の境界のすべての製剤について、ｔ＝０と、２℃～８℃で９ヵ月間保存した後とで放出許容基準を満たす。
● ＣＱＡは、製剤範囲の境界のすべての製剤について、ＥｏＳへの外挿に分解率を用いた場合、安定性の許容基準を満たす。

【0426】

実施例６：ポリソルベート２０の分解評価
ポリソルベート２０は酸化的又は加水分解的なメカニズムを介して分解し得る。ポリソルベート２０の加水分解は、ラウリン酸などの遊離脂肪酸（ＦＦＡ）の形成をもたらす。特定の高濃度では、ＦＦＡは、肉眼では見えない粒子又は可視粒子を形成し得る。さらに、ポリソルベート２０の分解は、製剤中のポリソルベートが撹拌ストレスからタンパク質を保護するのに必要な量より少なくなる場合にも懸念される。

【0427】

これらの懸念から、ポリソルベート２０の分解を製剤開発中にモニターした。ＰＳ２０の分解は、製剤開発中のグロフィタマブ製剤において、タンパク質濃度に依存して観察された。２５ｍｇ／ｍｌ製剤ではＰＳ２０の顕著な分解が観察され（図１２）、２℃～８℃で可視粒子が観察された。５ｍｇ／ｍｌ製剤では、ＰＳ２０の分解はそれほど顕著ではなく、２０ヵ月後に可視粒子が観察された。肉眼では見えない粒子の数には影響が及ばなかった。可視粒子を単離し、フーリエ変換赤外（ＦＴＩＲ）分析によって特性評価すると、ＦＦＡであることが判明した。１ｍｇ／ｍｌ製剤は、２４ヶ月の研究期間全体を通して、ＰＳ２０の分解は見られず（方法の精度を超えている）、可視粒子の形成も見られなかった。肉眼では見えない粒子の数は一貫して少なかった。４つの異なる原薬（ＤＳ）バッチから得られた９つの医薬品（ＤＰ）バッチの長期安定性データは、可視粒子が存在しないことを裏付けた。図１３は、例示のＤＰバッチの長期安定性データの視覚化を提供する。

【0428】

実施例７：物理化学的使用安定性の研究
グロフィタマブ医薬品は、ＩＶ点滴用の無菌の濃縮液として提供される。医薬品は、ｐＨ５．５の、２０ｍＭのＬ－ヒスチジン／Ｌ－ヒスチジン塩酸塩バッファー中１ｍｇ／ｍｌのグロフィタマブ、２４０ｍＭのスクロース、１０ｍＭのＬ－メチオニン、０．５ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０からなる。グロフィタマブは、使い捨ての２．５ｍｌ及び１０ｍｌのガラスバイアルで供給される、防腐剤を含まない医薬品である。グロフィタマブは、０．９％又は０．４５％の塩化ナトリウムで希釈した後、ＩＶバッグ点滴によるＩＶ投与が意図されている。ステップアップ投与スケジュールに基づく提案された登録用量及びスケジュールは、２．５／１０／３０ｍｇである。投与量は、０．０５ｍｇ／ｍｌから０．６ｍｇ／ｍｌの投与溶液濃度でＩＶバッグに入れることが可能である。ブラケッティング法では、０．０５ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌ、及び０．６ｍｇ／ｍｌの投与溶液を、全用量範囲をカバーするための適合性について試験した（表９）。

【0429】

推奨される使用条件下での点滴用溶液の物理化学的安定性を裏付けるため、安定性及び適合性研究を実施した。これらの研究では、グロフィタマブの点滴用溶液は典型的な調製及び投与手順中安定であり、周囲室内光の条件下で２℃～８℃で７２時間、３０℃でさらに２４時間保持することができ、その後２５℃での点滴にかかる時間は１６時間以内であることが実証された。点滴用溶液が安定であることが証明されている公称タンパク質濃度範囲は、０．０５から０．６ｍｇ／ｍｌである。

【0430】

研究材料及びセットアップ：
グロフィタマブの物理化学的安定性を、商業環境で使用される取り扱い手順を模倣して、０．９％塩化ナトリウム溶液及び０．４５％塩化ナトリウム溶液を含有する１００ｍｌ又は２５０ｍｌのＩＶバッグに希釈した後に評価した。各希釈剤について、グロフィタマブの製品品質は、表９に概説されている製品の予想濃度範囲に相当する約０．０５ｍｇ／ｍｌ（低用量、０．９％塩化ナトリウムのみで試験）、０．１ｍｇ／ｍｌ（低用量）、及び０．６ｍｇ／ｍｌ（高用量）の希釈濃度で評価した。

【0431】

０．９％ 塩化ナトリウムの場合、医薬品接触面がポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）又はポリオレフィン－ポリエチレン－ポリプロピレン（ＰＯ－ＰＥ－ＰＰ）でできている２つの異なるタイプのバッグを試験した。０．４５％ 塩化ナトリウムの場合は、医薬品接触面がＰＶＣでできているバッグを試験した。この安定性評価のために、各希釈剤について３つの医薬品バッチをマトリックスアプローチで設定した。医薬品バッチは、２℃～８℃で２０か月又は７か月保存した。

【0432】

投与溶液の点滴を、希釈したグロフィタマブ溶液を以下のように通すことでシミュレートした：
１．ポリスルホン又はポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）製の０．２μｍインラインフィルタの有無にかかわらず、製品接触面が、ＰＶＣ、ポリエチレン（ＰＥ）、ポリブタジエン（ＰＢＤ）、ポリウレタン（ＰＵＲ）、シリコーン、及びアクリロニトリルブタジエンスチレン（ＡＢＳ）の点滴セット。
２．ポリカーボネート（ＰＣ）製の三方活栓点滴補助器具。
３．ポリエーテルウレタン（ＰＥＵ）又はポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）製のカテーテル。

【0433】

模擬点滴を１６時間にわたって実施した。これは、点滴セット及び補助器具の構成材料と長時間接触する際の投与溶液の適合性を確保するために、意図された点滴時間の４～８時間よりも長い。

【0434】

希釈後、累積保持時間後、及び模擬点滴終了時に、各ＩＶバッグから分析用にサンプルを採取した。

【0435】

ＳＥ－ＨＰＬＣ、ＩＥ－ＨＰＬＣ、及びＣＥ－ＳＤＳによる純度、ＵＶによるタンパク質の含有量、遮光による肉眼では見えない粒子、色、透明度／タンパク光、ｐＨ、及びバイオアッセイによる力価を含む、適切な安定性を示す方法を用いて、サンプルを試験した。ＣＥ－ＳＤＳによるＬＭＷは、高用量（０．６ｍｇ／ｍｌ）のみで測定された。これは、サンプル濃度≦０．１ｍｇ／ｍｌでは、シグナル強度が低すぎて、データを有意義に解釈することができなかったためである。しかし、製品の品質は提示された力価データによって保証された。

【0436】

結果：
使用中の研究では、グロフィタマブは、０．９％又は０．４５％の塩化ナトリウム溶液に希釈後、及び周囲室内光条件で２℃～８℃で７２時間保持し、さらに周囲室内光条件で３０℃で２４時間保持した後、続いて２５℃で１６時間以内の模擬点滴の後、物理化学的に安定であることが実証された。≦０．５ｍｇ／ｍｌ投与溶液の場合、インラインフィルタは使用しない。

【0437】

これらの適合性研究で使用された医薬品バッチは、推奨保存温度（２℃～８℃）で７～２０か月間保存されており、医薬品の年数が使用中の取り扱い及び投与中の安定性に影響を与えないことが実証された。

【0438】

実施例８：微生物学的安定性
医薬品は、投与前に無菌技術を使用して希釈する必要がある。グロフィタマブのＩＶ投与用溶液は、０．９％塩化ナトリウム又は０．４５％塩化ナトリウムを含有する点滴バッグに医薬品を希釈して調製される。調製された点滴溶液は、直ちに使用されるべきである。医薬品は抗菌防腐剤を含有しない。したがって、使用中の取り扱いにおいては、適切な無菌状態を維持することにより、溶液の無菌性を確保する必要がある。

【0439】

偶発的な汚染が発生した場合に備えて、微生物の増殖をサポートする溶液の傾向を評価するために、微生物負荷研究を実施した。２℃～８℃で９６時間まで、及び２０℃～２５℃で４８時間までの７つの異なる試験微生物（ＵＳＰ＜５１＞に列挙）の増殖を評価した。初期値よりも０．５ｌｏｇ_１０単位以下の差が測定されたとき、結果は「成長なし」の許容基準を満たした。

【0440】

他の実施態様
理解を明確にするために、上記発明は図示及び例示によって程度詳細に説明されているが、これらの説明及び例示は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に引用されるすべての特許及び科学文献の開示は、参照によりその全体が明示的に援用される。

【図1A-F】

【図1G-N】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図8A-B】

【図9A-B】

【図10A-B】

【図11A-B】

【図12】

【図13】

【配列表】

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【外国語明細書】