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特開2024-165887ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ細胞性急性リンパ性白血病の治療剤
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024165887
(43)【公開日】2024-11-28
(54)【発明の名称】ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ細胞性急性リンパ性白血病の治療剤
(51)【国際特許分類】
A61K 45/00 20060101AFI20241121BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20241121BHJP
A61K 45/06 20060101ALI20241121BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20241121BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20241121BHJP
A61K 31/7088 20060101ALI20241121BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20241121BHJP
【ＦＩ】
A61K45/00
A61P35/02
A61K45/06
A61P43/00 121
A61K39/395 D
A61K31/7088
A61K39/395 U
A61K48/00
【審査請求】未請求
【請求項の数】3
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023082464
(22)【出願日】2023-05-18
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）令和４年度国立研究開発法人日本医療研究開発機構医療研究開発推進事業費補助金橋渡し研究プログラム研究開発課題名：シーズＡ２０－１０難治性急性リンパ性白血病に対する新規予防・治療薬の開発に関する委託研究、産業技術力強化法第１７条の適用を受ける特許出願
(71)【出願人】
【識別番号】000125370
【氏名又は名称】学校法人東京理科大学
(74)【代理人】
【識別番号】100106002
【弁理士】
【氏名又は名称】正林 真之
(74)【代理人】
【識別番号】100136939
【弁理士】
【氏名又は名称】岸武 弘樹
(72)【発明者】
【氏名】伊川 友活
(72)【発明者】
【氏名】鈴木 藍彩
【テーマコード（参考）】
4C084
4C085
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C084AA17
4C084AA20
4C084MA02
4C084MA52
4C084MA66
4C084NA14
4C084ZB27
4C084ZC75
4C085AA13
4C085AA14
4C085BB31
4C085CC22
4C085CC23
4C085DD62
4C085EE01
4C085EE03
4C085GG01
4C085GG08
4C086AA01
4C086AA02
4C086EA16
4C086MA01
4C086MA02
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZB27
4C086ZC75
(57)【要約】
【課題】本発明の課題は、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ細胞性急性リンパ性白血病（ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ）に対する新規な治療剤を提供することである。
【解決手段】本発明は、インターロイキン－１βの機能、及び／又は発現を阻害する有効成分を含む、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ細胞性急性リンパ性白血病の治療剤を提供する。
【選択図】図１
【解決手段】本発明は、インターロイキン－１βの機能、及び／又は発現を阻害する有効成分を含む、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ細胞性急性リンパ性白血病の治療剤を提供する。
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
インターロイキン－１βの機能、及び／又は発現を阻害する有効成分を含む、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ細胞性急性リンパ性白血病の治療剤。
【請求項2】
前記有効成分が、抗インターロイキン－１β抗体、インターロイキン－１レセプターアンタゴニスト、低分子化合物、及び核酸から選択される１以上を含む、請求項１に記載の治療剤。
【請求項3】
Ｂ細胞性リンパ腫阻害剤と併用される、請求項１又は２に記載の治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ細胞性急性リンパ性白血病の治療剤に関する。
【背景技術】
【0002】
急性リンパ性白血病（ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ；ＡＬＬ）は血液がんの一種であり、小児期に発症する悪性腫瘍のうち最も頻度が高い（非特許文献１等）。
急性リンパ性白血病は、Ｂ細胞性リンパ性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）、及びＴ細胞性リンパ性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）に分類される。そのうち、難治性Ｂ－ＡＬＬは、ＴＣＦ３（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ ３）融合遺伝子の発現を特徴とし、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ、及びＴＣＦ３－ＰＢＸ１型Ｂ－ＡＬＬ等に分類される。
急性リンパ性白血病は、Ｂ細胞性リンパ性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）、及びＴ細胞性リンパ性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）に分類される。そのうち、難治性Ｂ－ＡＬＬは、ＴＣＦ３（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ ３）融合遺伝子の発現を特徴とし、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ、及びＴＣＦ３－ＰＢＸ１型Ｂ－ＡＬＬ等に分類される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0003】
【非特許文献1】伊川 友活、「１９． 急性リンパ性白血病の新規治療薬の開発」、上原記念生命科学財団研究報告集、３５（２０２１）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
他方で、難治性Ｂ－ＡＬＬには、未だ有効な治療方法が見出されていない。このような状況を踏まえ、本発明者らは、難治性Ｂ－ＡＬＬのうち、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬに着目し、その有効な治療標的の探索を行った。
【0005】
本発明は以上の実情に鑑みてなされたものであり、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ細胞性急性リンパ性白血病（ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ）に対する新規な治療剤の提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明者らは、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ細胞性急性リンパ性白血病の新規な治療標的として、インターロイキン－１βを見出し、本発明を完成するに至った。より具体的には、本発明は以下を提供する。
【0007】
（１） インターロイキン－１βの機能、及び／又は発現を阻害する有効成分を含む、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ細胞性急性リンパ性白血病の治療剤。
【0008】
（２） 前記有効成分が、抗インターロイキン－１β抗体、インターロイキン－１レセプターアンタゴニスト、低分子化合物、及び核酸から選択される１以上を含む、（１）に記載の治療剤。
【0009】
（３） Ｂ細胞性リンパ腫阻害剤と併用される、（１）又は（２）に記載の治療剤。
【発明の効果】
【0010】
本発明によれば、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ細胞性急性リンパ性白血病（ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ）に対する新規な治療剤が提供される。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【図1】ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞におけるＩＬ－１βの発現の影響を示す図である。
【図2】ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞における、抗ＩＬ－１β抗体存在下でのＩＬ－１βの発現の影響を示す図である。
【図3】ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞における、抗ＩＬ－１β抗体、及び白血病治療剤存在下でのＩＬ－１βの発現の影響を示す図である。
【図4】ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞における、低分子化合物存在下でのＩＬ－１βの発現の影響を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0012】
以下、本発明の実施形態について説明するが、本発明はこれに限定されない。
【0013】
＜本発明の治療剤＞
本発明は、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ細胞性急性リンパ性白血病の治療剤に係る発明である。
本発明の治療剤は、インターロイキン－１βの機能、及び／又は発現を阻害する有効成分を含む点に主要な技術的特徴がある。
本発明は、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ細胞性急性リンパ性白血病の治療剤に係る発明である。
本発明の治療剤は、インターロイキン－１βの機能、及び／又は発現を阻害する有効成分を含む点に主要な技術的特徴がある。
【0014】
本発明者らは、後述の実施例のとおり、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬを発症するモデルマウスを確立し、遺伝子解析による発症メカニズムの特定を試みた。
その結果、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞と、ＴＣＦ３－ＰＢＸ１型Ｂ－ＡＬＬ細胞とでは、発現変動遺伝子が大きく異なることを見出した。
そして、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞では、インターロイキン－１β（ＩＬ－１β）の発現が顕著に高いという特有の特徴を見出した。
その結果、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞と、ＴＣＦ３－ＰＢＸ１型Ｂ－ＡＬＬ細胞とでは、発現変動遺伝子が大きく異なることを見出した。
そして、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞では、インターロイキン－１β（ＩＬ－１β）の発現が顕著に高いという特有の特徴を見出した。
【0015】
さらに、本発明者らは、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞においてＩＬ－１β遺伝子を欠損させると細胞増殖が顕著に抑制されたことから、ＩＬ－１βが、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞の増殖を促進することを見出した。
【0016】
以上の結果から、ＩＬ－１βは、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬの有効な治療標的であることがわかった。この知見に基づけば、ＩＬ－１βの機能、及び／又は発現を阻害することで、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ細胞性急性リンパ性白血病の治療効果が期待できる。
【0017】
本発明において「治療」とは、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ細胞性急性リンパ性白血病の症状の治癒、緩和、寛解、進行抑制等を包含する。
本発明において「治療剤」とは、上記のような治療効果を実現する医薬品を包含する。
本発明において「治療剤」とは、上記のような治療効果を実現する医薬品を包含する。
【0018】
以下、本発明の治療剤の構成について詳述する。
【0019】
（１）有効成分
本発明の治療剤は、インターロイキン－１βの機能、及び／又は発現を阻害する成分を有効成分として含む。
本発明の治療剤は、インターロイキン－１βの機能、及び／又は発現を阻害する成分を有効成分として含む。
【0020】
インターロイキン－１βの機能、及び／又は発現を阻害する成分は、１種の成分であってもよく、２種以上の成分の組み合わせであってもよい。
【0021】
本発明において、「インターロイキン－１βの機能を阻害する成分」とは、インターロイキン－１βタンパク質が有する任意の生理的機能を阻害する成分を包含する。
インターロイキン－１βの機能を阻害する成分としては、抗インターロイキン－１β抗体、インターロイキン－１レセプターアンタゴニスト、インターロイキン－１βの機能を阻害する低分子化合物等が挙げられる。
インターロイキン－１βの機能を阻害する成分としては、抗インターロイキン－１β抗体、インターロイキン－１レセプターアンタゴニスト、インターロイキン－１βの機能を阻害する低分子化合物等が挙げられる。
【0022】
本発明において、「インターロイキン－１βの発現を阻害する成分」とは、インターロイキン－１β遺伝子の発現を抑制、又は遮断する成分を包含する。
インターロイキン－１βの発現を阻害する成分としては、インターロイキン－１β遺伝子の発現を抑制、又は遮断する低分子化合物や核酸等が挙げられる。
インターロイキン－１βの発現を阻害する成分としては、インターロイキン－１β遺伝子の発現を抑制、又は遮断する低分子化合物や核酸等が挙げられる。
【0023】
本発明において、「低分子化合物」とは、分子量が１０００以下である医薬用化合物を包含する。
本発明において有効な低分子化合物として、免疫プロテアソーム阻害剤として知られる「ＯＮＸ－０９１４」（ＣＡＳ番号：９６０３７４－５９－８、分子量：５８０．７０）が挙げられる。
本発明において有効な低分子化合物として、免疫プロテアソーム阻害剤として知られる「ＯＮＸ－０９１４」（ＣＡＳ番号：９６０３７４－５９－８、分子量：５８０．７０）が挙げられる。
【0024】
本発明において、「核酸」とは、核酸医薬として用いられ得る任意の形態の核酸（ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド等）を包含する。
【0025】
本発明における有効成分の好ましい形態は、抗インターロイキン－１β抗体、インターロイキン－１レセプターアンタゴニスト、低分子化合物、及び核酸から選択される１以上である。これらのうち、本発明の効果が奏されやすいという観点から、抗インターロイキン－１β抗体が特に好ましい。
【0026】
（２）その他の有効成分
本発明の治療剤において、本発明の効果を阻害しない範囲で、上記以外の有効成分を配合してもよく、配合しなくてもよい。
また、本発明の治療剤は、本発明の効果を阻害しない範囲で、上記以外の有効成分と併用してもよく、併用しなくてもよい。
本発明の治療剤において、本発明の効果を阻害しない範囲で、上記以外の有効成分を配合してもよく、配合しなくてもよい。
また、本発明の治療剤は、本発明の効果を阻害しない範囲で、上記以外の有効成分と併用してもよく、併用しなくてもよい。
【0027】
本発明の治療剤は、例えば、従来の白血病治療剤とともに併用し得る。
このような白血病治療剤として、Ｂ細胞性リンパ腫－２（ＢＣＬ－２）阻害剤として知られる「ベネトクラクス」（ＣＡＳ番号：１２５７０４４－４０－８）が挙げられる。
本発明者らの検討の結果、本発明の治療剤（特に、抗ＩＬ－１β抗体）とともに、ベネトクラクスを併用すると、抗ＩＬ－１β抗体単独投与、及びベネトクラクス単独投与に対して、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞の増殖を有意に抑制できることがわかった。
このような白血病治療剤として、Ｂ細胞性リンパ腫－２（ＢＣＬ－２）阻害剤として知られる「ベネトクラクス」（ＣＡＳ番号：１２５７０４４－４０－８）が挙げられる。
本発明者らの検討の結果、本発明の治療剤（特に、抗ＩＬ－１β抗体）とともに、ベネトクラクスを併用すると、抗ＩＬ－１β抗体単独投与、及びベネトクラクス単独投与に対して、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞の増殖を有意に抑制できることがわかった。
【0028】
本発明の治療剤と、その他の有効成分との使用比率は特に限定されないが、質量比で１４３．９４：１～２８７．８７：１であり得る。
【0029】
（３）その他の配合成分
本発明の治療剤は、本発明の効果を阻害しない範囲で、通常の医薬品に含まれ得る任意の成分を配合してもよく、配合しなくてもよい。
このような成分として、溶媒、賦形剤、安定化剤、抗酸化剤、色素等が挙げられる。これらの成分の種類や量は、本発明の治療剤の形態等に応じて適宜選択できる。
本発明の治療剤は、本発明の効果を阻害しない範囲で、通常の医薬品に含まれ得る任意の成分を配合してもよく、配合しなくてもよい。
このような成分として、溶媒、賦形剤、安定化剤、抗酸化剤、色素等が挙げられる。これらの成分の種類や量は、本発明の治療剤の形態等に応じて適宜選択できる。
【0030】
（４）本発明の治療剤の形態
本発明の治療剤の形態は特に限定されず、注射剤、経口剤等であり得る。
本発明の治療剤の形態は特に限定されず、注射剤、経口剤等であり得る。
【0031】
（５）本発明の治療剤の投与対象
本発明の治療剤の投与対象は、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ細胞性急性リンパ性白血病を発症し得る任意の生体を包含する。例えば、本発明の治療剤の投与対象は、ヒト、及びヒト以外の哺乳類等を包含する。
本発明の治療剤の投与対象は、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ細胞性急性リンパ性白血病を発症し得る任意の生体を包含する。例えば、本発明の治療剤の投与対象は、ヒト、及びヒト以外の哺乳類等を包含する。
【0032】
（６）本発明の治療剤の投与量
本発明の治療剤の投与量は、症状や、投与対象の状態（年齢、体重等）に応じて適宜設定できる。
本発明の治療剤の投与量は、症状や、投与対象の状態（年齢、体重等）に応じて適宜設定できる。
【実施例0033】
以下に、実施例により本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【0034】
（１）ＴＣＦ３融合遺伝子発現ｉＬＳ細胞の作製
Ｂ６マウス骨髄のＬＳＫ（Ｌｉｎｅａｇｅ ｍａｒｋｅｒ－ Ｓｃａ－１＋ｃｋｉｔ＋）細胞へレトロウイルスを用いてヒトＩＤ３および改変型エストロゲン受容体（ＥＲＴ２）融合遺伝子「ｈＩＤ３－ＥＲＴ２」を導入し、これをＢ細胞分化誘導条件で培養することにより、ｉＬＳ細胞（ｉｎｄｕｃｅｄ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）を作製した。
また、ＰＬＡＴ－Ｅパッケージング細胞（東京大学医科学研究所 北村俊雄教授より取得）から、常法によりレトロウイルスを作製した。
次いで、ｉＬＳ細胞へ、レトロウイルスを用いて、ＴＣＦ３－ＰＢＸ１遺伝子又はＴＣＦ３－ＨＬＦ遺伝子を導入した。
遺伝子導入２日後に、遺伝子導入細胞の選択マーカーであるヒトＮＧＦＲ陽性の細胞をソーティングし、ＴＣＦ３融合遺伝子発現ｉＬＳ細胞として、「ＴＣＦ３－ＨＬＦ陽性ｉＬＳ細胞」、及び「ＴＣＦ３－ＰＢＸ１陽性ｉＬＳ細胞」を得た。
Ｂ６マウス骨髄のＬＳＫ（Ｌｉｎｅａｇｅ ｍａｒｋｅｒ－ Ｓｃａ－１＋ｃｋｉｔ＋）細胞へレトロウイルスを用いてヒトＩＤ３および改変型エストロゲン受容体（ＥＲＴ２）融合遺伝子「ｈＩＤ３－ＥＲＴ２」を導入し、これをＢ細胞分化誘導条件で培養することにより、ｉＬＳ細胞（ｉｎｄｕｃｅｄ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）を作製した。
また、ＰＬＡＴ－Ｅパッケージング細胞（東京大学医科学研究所 北村俊雄教授より取得）から、常法によりレトロウイルスを作製した。
次いで、ｉＬＳ細胞へ、レトロウイルスを用いて、ＴＣＦ３－ＰＢＸ１遺伝子又はＴＣＦ３－ＨＬＦ遺伝子を導入した。
遺伝子導入２日後に、遺伝子導入細胞の選択マーカーであるヒトＮＧＦＲ陽性の細胞をソーティングし、ＴＣＦ３融合遺伝子発現ｉＬＳ細胞として、「ＴＣＦ３－ＨＬＦ陽性ｉＬＳ細胞」、及び「ＴＣＦ３－ＰＢＸ１陽性ｉＬＳ細胞」を得た。
【0035】
なお、ｉＬＳ細胞の作製は、Ｉｋａｗａらの方法（“Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ａｒｒｅｓｔ ｏｆ Ｅａｒｌｙ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ Ｌｅａｄｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ．”、Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ． ２０１５ Ｎｏｖ １０；５（５）：７１６－７２７． ｄｏｉ： １０．１０１６／ｊ．ｓｔｅｍｃｒ．２０１５．０９．０１２． ＰＭＩＤ： ２６６０７９５０）に基づいて実施した。
【0036】
（２）ＴＣＦ３融合遺伝子発現ｉＬＳ細胞の発がん評価
上記で得られたＴＣＦ３融合遺伝子発現ｉＬＳ細胞を、放射線照射した野生型マウスの尾静脈から、２．０×１０６細胞ずつ移植した。
その結果、移植後３～４ヶ月で全ての個体が死亡した。これらの個体では、脾臓やリンパ節が肥大し、骨髄や脾臓において、「ｐｒｏ－Ｂ細胞」（ＣＤ１９＋Ｂ２２０＋ＩｇＭ－ＣＤ４３＋ｃＫｉｔ＋）段階にある「Ｂ－ＡＬＬ様細胞」の浸潤を確認した。
上記で得られたＴＣＦ３融合遺伝子発現ｉＬＳ細胞を、放射線照射した野生型マウスの尾静脈から、２．０×１０６細胞ずつ移植した。
その結果、移植後３～４ヶ月で全ての個体が死亡した。これらの個体では、脾臓やリンパ節が肥大し、骨髄や脾臓において、「ｐｒｏ－Ｂ細胞」（ＣＤ１９＋Ｂ２２０＋ＩｇＭ－ＣＤ４３＋ｃＫｉｔ＋）段階にある「Ｂ－ＡＬＬ様細胞」の浸潤を確認した。
【0037】
この結果から、ＴＣＦ３融合遺伝子発現ｉＬＳ細胞が、マウス生体内において、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型又は、ＴＣＦ３－ＰＢＸ１型のＢ－ＡＬＬを発症させることを確認した。
【0038】
なお、以下、ＴＣＦ３－ＨＬＦ陽性ｉＬＳ細胞の移植の結果得られたＢ－ＡＬＬ様細胞を「ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞」という。また、ＴＣＦ３－ＰＢＸ１陽性ｉＬＳ細胞の移植の結果得られたＢ－ＡＬＬ様細胞を「ＴＣＦ３－ＰＢＸ１型Ｂ－ＡＬＬ細胞」という。
【0039】
（３）遺伝子発現解析
ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞、及びＴＣＦ３－ＰＢＸ１型Ｂ－ＡＬＬ細胞について、遺伝子発現解析を行った。対照として、正常ｐｒｏ－Ｂ細胞の解析も併せて行った。
ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞、及びＴＣＦ３－ＰＢＸ１型Ｂ－ＡＬＬ細胞について、遺伝子発現解析を行った。対照として、正常ｐｒｏ－Ｂ細胞の解析も併せて行った。
【0040】
（３－１）ＰＣＡ解析
ＰＣＡ（ｐｒｉｎｃｉｐａｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ）解析を行った結果、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞、及びＴＣＦ３－ＰＢＸ１型Ｂ－ＡＬＬ細胞の遺伝子発現パターンは大きく異なっていた。
ＰＣＡ（ｐｒｉｎｃｉｐａｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ）解析を行った結果、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞、及びＴＣＦ３－ＰＢＸ１型Ｂ－ＡＬＬ細胞の遺伝子発現パターンは大きく異なっていた。
【0041】
（３－２）パスウェイ解析
Ｍｅｔａｓｃａｐｅ（ｈｔｔｐｓ：／／ｍｅｔａｓｃａｐｅ．ｏｒｇ／ｇｐ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ＃／ｍａｉｎ／ｓｔｅｐ１）により発現変動遺伝子のパスウェイ解析を行った結果、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞では、リンパ球の活性化、サイトカイン産生、炎症反応等に関連する遺伝子の発現増加が認められた。
これらの遺伝子の発現を制御する転写因子を解析したところ、発がんに関与する因子（ＴＰ５３、ＭＹＣ等）や、ＴＣＦ３－ＨＬＦとの関連が示唆されてきた因子（Ｐ３００、ＢＣＬ６等）だけではなく、炎症反応に関わる因子（ＮＦＫＢ１、ＳＴＡＴ３等）も見出された。
また、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞における上記遺伝子の発現量は、正常ｐｒｏ－Ｂ細胞やＴＣＦ３－ＰＢＸ１型Ｂ－ＡＬＬ細胞と比較して顕著に高かった。
Ｍｅｔａｓｃａｐｅ（ｈｔｔｐｓ：／／ｍｅｔａｓｃａｐｅ．ｏｒｇ／ｇｐ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ＃／ｍａｉｎ／ｓｔｅｐ１）により発現変動遺伝子のパスウェイ解析を行った結果、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞では、リンパ球の活性化、サイトカイン産生、炎症反応等に関連する遺伝子の発現増加が認められた。
これらの遺伝子の発現を制御する転写因子を解析したところ、発がんに関与する因子（ＴＰ５３、ＭＹＣ等）や、ＴＣＦ３－ＨＬＦとの関連が示唆されてきた因子（Ｐ３００、ＢＣＬ６等）だけではなく、炎症反応に関わる因子（ＮＦＫＢ１、ＳＴＡＴ３等）も見出された。
また、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞における上記遺伝子の発現量は、正常ｐｒｏ－Ｂ細胞やＴＣＦ３－ＰＢＸ１型Ｂ－ＡＬＬ細胞と比較して顕著に高かった。
【0042】
（３－３）定量的逆転写ＰＣＲ解析
上記（３－２）の結果を踏まえて、各遺伝子の発現を、定量的逆転写ＰＣＲ（ＲＴ－ｑＰＣＲ）解析したところ、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞ではＩＬ－１βの発現量が特に高く、ＴＣＦ３－ＰＢＸ１型Ｂ－ＡＬＬ細胞での発現量に対して１００倍以上の値を示した。
この結果を踏まえ、以下、ＩＬ－１βに着目して検討を進めた。
上記（３－２）の結果を踏まえて、各遺伝子の発現を、定量的逆転写ＰＣＲ（ＲＴ－ｑＰＣＲ）解析したところ、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞ではＩＬ－１βの発現量が特に高く、ＴＣＦ３－ＰＢＸ１型Ｂ－ＡＬＬ細胞での発現量に対して１００倍以上の値を示した。
この結果を踏まえ、以下、ＩＬ－１βに着目して検討を進めた。
【0043】
（４）ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞におけるＩＬ－１βの発現の検討
上記（２）と同様にマウスへの細胞移植を行い、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ発症マウスを得た。
マウスから得られた、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ発症前及び発症後の細胞のそれぞれにおいて、ＩＬ－１βのｍＲＮＡ、及びタンパク発現量を解析した。解析は、ＲＴ－ｑＰＣＲとウェスタンブロッティングによって行った。
その結果、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ発症前の細胞では、ＩＬ－１βの発現が検出されなかった。
これに対し、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ発症後の細胞では、ＩＬ－１βの顕著な発現が検出された。
上記（２）と同様にマウスへの細胞移植を行い、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ発症マウスを得た。
マウスから得られた、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ発症前及び発症後の細胞のそれぞれにおいて、ＩＬ－１βのｍＲＮＡ、及びタンパク発現量を解析した。解析は、ＲＴ－ｑＰＣＲとウェスタンブロッティングによって行った。
その結果、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ発症前の細胞では、ＩＬ－１βの発現が検出されなかった。
これに対し、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ発症後の細胞では、ＩＬ－１βの顕著な発現が検出された。
【0044】
（５）ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞におけるＩＬ－１βの発現の影響－１
ＩＬ－１β遺伝子を高発現するＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞（ＹＣＵＢ２細胞）において、ＩＬ－１β遺伝子を欠損させ、その影響を検討した。
なお、ＩＬ－１β遺伝子欠損細胞の作製には、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９システムを用いた。
ＩＬ－１β遺伝子を高発現するＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞（ＹＣＵＢ２細胞）において、ＩＬ－１β遺伝子を欠損させ、その影響を検討した。
なお、ＩＬ－１β遺伝子欠損細胞の作製には、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９システムを用いた。
【0045】
ＩＬ－１β遺伝子欠損細胞においては、対照（ＩＬ－１β遺伝子を欠損していないＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞）に対して、細胞増殖が顕著に抑制された（図１、＊＊＊ｐ値＜０．００１）。なお、アポトーシス細胞の増加は見られず、アポトーシス細胞の増殖速度を抑制していることが示唆された。
他方で、ＩＬ－１β欠損細胞に、組み換えヒト（ｒｈ）ＩＬ－１βを添加して培養すると、濃度依存的に細胞増殖が回復した。
以上の結果から、ＩＬ－１βは、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞の増殖を促進することが示された。
他方で、ＩＬ－１β欠損細胞に、組み換えヒト（ｒｈ）ＩＬ－１βを添加して培養すると、濃度依存的に細胞増殖が回復した。
以上の結果から、ＩＬ－１βは、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞の増殖を促進することが示された。
【0046】
（６）ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞におけるＩＬ－１βの発現の影響－２
ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞（ＹＣＵＢ２細胞）に、５０μｇ／ｍＬの抗ＩＬ－１β抗体（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、＃ｍａｂｇ－ｈｉｌ１ｂ－３）を添加し、６日間にわたって培養した結果、対照（抗体未添加）と比較して、細胞増殖が有意に抑制された（図２、＊＊＊ｐ値＜０．００１）。
ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞（ＹＣＵＢ２細胞）に、５０μｇ／ｍＬの抗ＩＬ－１β抗体（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、＃ｍａｂｇ－ｈｉｌ１ｂ－３）を添加し、６日間にわたって培養した結果、対照（抗体未添加）と比較して、細胞増殖が有意に抑制された（図２、＊＊＊ｐ値＜０．００１）。
【0047】
（７）ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞におけるＩＬ－１βの発現の影響－３
ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞（ＹＣＵＢ２細胞）に、５０μｇ／ｍＬの抗ＩＬ－１β抗体とともに、３００ｎＭのベネトクラクスを添加することで、細胞増殖が有意に抑制された（図３、＊ｐ値＜０．０５、＊＊ｐ値＜０．０１）。ベネトクラクスは、白血病治療剤として知られるＢ細胞性リンパ腫－２（ＢＣＬ－２）阻害剤である。
この抑制効果は、対照（抗体未添加）に対してだけではなく、抗ＩＬ－１β抗体単独投与、及びベネトクラクス単独投与に対しても有意だった。
ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞（ＹＣＵＢ２細胞）に、５０μｇ／ｍＬの抗ＩＬ－１β抗体とともに、３００ｎＭのベネトクラクスを添加することで、細胞増殖が有意に抑制された（図３、＊ｐ値＜０．０５、＊＊ｐ値＜０．０１）。ベネトクラクスは、白血病治療剤として知られるＢ細胞性リンパ腫－２（ＢＣＬ－２）阻害剤である。
この抑制効果は、対照（抗体未添加）に対してだけではなく、抗ＩＬ－１β抗体単独投与、及びベネトクラクス単独投与に対しても有意だった。
【0048】
（８）ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞におけるＩＬ－１βの発現の影響－４
上記（２）と同様にマウスへの細胞移植を行い、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ発症マウスを得た。このマウスへ、１日あたり１５ｍｇ／ｋｇの「ＯＮＸ－０９１４」を、１０日間にわたって毎日静脈投与した。ＯＮＸ－０９１４（ＣＡＳ番号：９６０３７４－５９－８）は、免疫プロテアソーム阻害剤として知られる低分子化合物である。
その結果、ＯＮＸ－０９１４を投与したマウスは、対照（ＯＮＸ－０９１４未投与）と比較して、生存期間が顕著に長かった。
上記（２）と同様にマウスへの細胞移植を行い、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ発症マウスを得た。このマウスへ、１日あたり１５ｍｇ／ｋｇの「ＯＮＸ－０９１４」を、１０日間にわたって毎日静脈投与した。ＯＮＸ－０９１４（ＣＡＳ番号：９６０３７４－５９－８）は、免疫プロテアソーム阻害剤として知られる低分子化合物である。
その結果、ＯＮＸ－０９１４を投与したマウスは、対照（ＯＮＸ－０９１４未投与）と比較して、生存期間が顕著に長かった。
【0049】
この結果を踏まえ、ＯＮＸ－０９１４を添加して培養したＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞の定量的逆転写ＰＣＲ解析を行ったところ、対照（ＯＮＸ－０９１４未添加）と比較して、ＩＬ－１βの発現量が有意に低かった（図４、＊＊＊ｐ値＜０．００１）。
したがって、ＯＮＸ－０９１４は、ＩＬ－１βの発現を阻害し、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬの治療に有用であることが見出された。
したがって、ＯＮＸ－０９１４は、ＩＬ－１βの発現を阻害し、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬの治療に有用であることが見出された。
【0050】
（９）結論
まず、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞においては、ＩＬ－１βの発現が顕著に高いという新規な知見が見出された。さらに、ＩＬ－１βはＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞の増殖を促進することもわかった。
そして、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞に対する抗ＩＬ－１β抗体や、ＯＮＸ－０９１４の添加により、細胞増殖が抑制されることを確認した。
したがって、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬにおいて、ＩＬ－１βは、新規な治療標的である。そのため、ＩＬ－１βの機能を阻害する成分（抗ＩＬ－１β抗体、ＩＬ－１レセプターアンタゴニスト等）、及び、ＩＬ－１βの発現を阻害する成分（ＯＮＸ－０９１４等の低分子化合物や、核酸等）等は、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬの有効な治療剤となり得る。
まず、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞においては、ＩＬ－１βの発現が顕著に高いという新規な知見が見出された。さらに、ＩＬ－１βはＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞の増殖を促進することもわかった。
そして、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬ細胞に対する抗ＩＬ－１β抗体や、ＯＮＸ－０９１４の添加により、細胞増殖が抑制されることを確認した。
したがって、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬにおいて、ＩＬ－１βは、新規な治療標的である。そのため、ＩＬ－１βの機能を阻害する成分（抗ＩＬ－１β抗体、ＩＬ－１レセプターアンタゴニスト等）、及び、ＩＬ－１βの発現を阻害する成分（ＯＮＸ－０９１４等の低分子化合物や、核酸等）等は、ＴＣＦ３－ＨＬＦ型Ｂ－ＡＬＬの有効な治療剤となり得る。
【0051】
また、抗ＩＬ－１β抗体と、従来知られる、Ｂ細胞性リンパ腫阻害剤（ベネトクラクス等）等の白血病治療剤との併用により、細胞増殖の抑制効果はさらに高まり得る。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】