ホーム > 特許ランキング > 富士フイルム株式会社
知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024166601
(43)【公開日】2024-11-29
(54)【発明の名称】アルブミン測定用試験片及びアルブミンの測定方法
(51)【国際特許分類】
G01N 33/52 20060101AFI20241122BHJP
G01N 21/78 20060101ALI20241122BHJP
【ＦＩ】
G01N33/52 B
G01N21/78 A
【審査請求】未請求
【請求項の数】10
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023082800
(22)【出願日】2023-05-19
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
２．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】306037311
【氏名又は名称】富士フイルム株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110000109
【氏名又は名称】弁理士法人特許事務所サイクス
(72)【発明者】
【氏名】油屋 吉宏
(72)【発明者】
【氏名】村上 正樹
(72)【発明者】
【氏名】小山 枝里子
(72)【発明者】
【氏名】松野 忠宏
【テーマコード（参考）】
2G045
【Ｆターム（参考）】
2G045BB36
2G045DA38
2G045FB17
2G045GC12
(57)【要約】
【課題】測定時の湿度の影響を受けないアルブミン測定用試験片及びアルブミンの測定方法を提供すること。
【解決手段】
支持体と、支持体上に設けられた試薬保持層とを含む、アルブミン測定用試験片であって、試薬保持層は、タンパク質変性剤、ＳＨ試薬、ブロモクレゾールパープル、非イオン性界面活性剤、及び、下記式（１）で表される少なくとも１種の化合物を含む、アルブミン測定用試験片。
【化１】
式中、Ｒ１～Ｒ８は、明細書に定義した意味を示す。
【選択図】なし
【解決手段】
支持体と、支持体上に設けられた試薬保持層とを含む、アルブミン測定用試験片であって、試薬保持層は、タンパク質変性剤、ＳＨ試薬、ブロモクレゾールパープル、非イオン性界面活性剤、及び、下記式（１）で表される少なくとも１種の化合物を含む、アルブミン測定用試験片。
【化１】
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
支持体と、前記支持体上に設けられた試薬保持層とを含む、アルブミン測定用試験片であって、前記試薬保持層は、タンパク質変性剤、ＳＨ試薬、ブロモクレゾールパープル、非イオン性界面活性剤、及び、下記式（１）で表される少なくとも１種の化合物を含む、アルブミン測定用試験片。
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの２つは水素原子を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの２つはそれぞれ独立にアルキル基を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの２つはヒドロキシ基を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの２つはそれぞれ独立にハロゲンを表し、これらは置換基を有していてもよい。
【化1】
【請求項2】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つは水素原子を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つはアルキル基を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つはヒドロキシ基を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つはハロゲンを表し、これらは置換基を有していてもよく、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つは水素原子を示し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つはアルキル基を示し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つはヒドロキシ基を示し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つはハロゲンを表し、これらは置換基を有していてもよい、請求項１に記載のアルブミン測定用試験片。
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つは水素原子を示し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つはアルキル基を示し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つはヒドロキシ基を示し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つはハロゲンを表し、これらは置換基を有していてもよい、請求項１に記載のアルブミン測定用試験片。
【請求項3】
前記アルキル基がメチル基である、請求項１又は２に記載のアルブミン測定用試験片。
【請求項4】
前記ハロゲンが臭素である、請求項１又は２に記載のアルブミン測定用試験片。
【請求項5】
Ｒ１及びＲ８が水素であり、Ｒ３及びＲ６がヒドロキシ基であり、Ｒ２及びＲ４の一方が臭素であり、他方がメチル基であり、Ｒ５及びＲ７の一方がメチル基であり、他方が臭素である、請求項１又は２に記載のアルブミン測定用試験片。
【請求項6】
式（１）で表される化合物の含有量が、ブロモクレゾールパープルの含有量の０．８質量％以上２５質量％以下である、請求項１又は２に記載のアルブミン測定用試験片。
【請求項7】
タンパク質変性剤が、ドデシル硫酸ナトリウムである、請求項１又は２に記載のアルブミン測定用試験片。
【請求項8】
ＳＨ試薬が、５,５’－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）である、請求項１又は２に記載のアルブミン測定用試験片。
【請求項9】
非イオン性界面活性剤が、ポリオキシエチレン基を有する非イオン性界面活性剤である、請求項１又は２に記載のアルブミン測定用試験片。
【請求項10】
請求項１又は２に記載のアルブミン測定用試験片に、アルブミン含有試料を点着し、試薬保持層における発色を測定することを含む、アルブミンの測定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ブロモクレゾールパープルを用いた、アルブミン測定用試験片及びアルブミンの測定方法に関する。
【背景技術】
【0002】
血清アルブミン測定用試験片として、ブロモクレゾールグリーン法（ＢＣＧ法）を用いた試験片が普及している。ＢＣＧ法は、グロブリンの影響を受けグロブリンの存在で発色するため、グロブリンの影響を受けずアルブミンとの特異性が高いブロモクレゾールパープル法（ＢＣＰ法）を用いた試験片が望まれている。
【0003】
ＢＣＰ法を用いたアルブミン試験片として特許文献１で示される試験片が開示されているが、ＢＣＰ法は血清中の共存物質の影響を受けやすい弊害が知られている。一方、血清アルブミン測定試薬として、血清中の共存物質の影響を受けないＢＣＰ測定試薬を用いて溶液法によりアルブミンを測定することが特許文献２に開示されている。さらに、血清中の共存物質の影響を受けやすい弊害を克服する試験片としては、蛋白変性剤、ＳＨ試薬を含ませることで還元型アルブミンを酸化型アルブミンに変化させたのち、ＢＣＰと反応させる試験片が特許文献３に開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0004】
【特許文献1】特開２００３－２７０２４９号公報
【特許文献2】特開平１０－２３２２３３号公報
【特許文献3】特開２０２２－０８５８７６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
このような試験片は血清中の共存物質の影響を受けにくい試験片として有用であるが、このような試験片は、様々な温度湿度範囲で測定されることが想定されるため、試験片の環境温度湿度による測定値に与える影響や、測定前に一時的に維持する環境温度湿度から受ける測定値への影響は可能な限り小さく抑えることが望まれる。しかしながら、ブロモクレゾールパープル（以下、ＢＣＰとも表示する）と反応させる試験片を用いてアルブミンを測定する場合において、測定前に一時的に維持される環境温度湿度で測定値が影響を受けること、特に環境湿度の影響を受けることがわかり、環境温度湿度の影響を受けない、ＢＣＰと反応させるアルブミン試験片を作製することが課題である。即ち、本発明は、測定時の湿度の影響を受けないアルブミン測定用試験片及びアルブミンの測定方法を提供することを解決すべき課題とする。
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明者らは上記の課題の解決のための検討の中で、ＢＣＰ粉末のロット違いによりアルブミンの試験片の環境温度湿度による影響、特に環境湿度による影響を受ける程度が異なることがわかり、更に鋭意検討を続けた結果、下記の式（１）に示す化合物を有するアルブミン測定用試験片において、環境湿度の影響を受け難くなることを見出した。本発明は上記の知見に基づいて完成したものである。本発明によれば、以下の発明が提供される。
【0007】
＜１＞ 支持体と、支持体上に設けられた試薬保持層とを含む、アルブミン測定用試験片であって、試薬保持層は、タンパク質変性剤、ＳＨ試薬、ブロモクレゾールパープル、非イオン性界面活性剤、及び、下記式（１）で表される少なくとも１種の化合物を含む、アルブミン測定用試験片。
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの２つは水素原子を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの２つはそれぞれ独立にアルキル基を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの２つはヒドロキシ基を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの２つはそれぞれ独立にハロゲンを表し、これらは置換基を有していてもよい。
＜２＞ Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つは水素原子を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つはアルキル基を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つはヒドロキシ基を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つはハロゲンを表し、これらは置換基を有していてもよく、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つは水素原子を示し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つはアルキル基を示し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つはヒドロキシ基を示し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つはハロゲンを表し、これらは置換基を有していてもよい、＜１＞に記載のアルブミン測定用試験片。
＜３＞ 上記アルキル基がメチル基である、＜１＞又は＜２＞に記載のアルブミン測定用試験片。
＜４＞ 上記ハロゲンが臭素である、＜１＞～＜３＞の何れか一に記載のアルブミン測定用試験片。
＜５＞ Ｒ１及びＲ８が水素であり、Ｒ３及びＲ６がヒドロキシ基であり、Ｒ２及びＲ４の一方が臭素であり、他方がメチル基であり、Ｒ５及びＲ７の一方がメチル基であり、他方が臭素である、＜１＞～＜４＞の何れか一に記載のアルブミン測定用試験片。
＜６＞ 式（１）で表される化合物の含有量が、ブロモクレゾールパープルの含有量の０．８質量％以上２５質量％以下である、＜１＞～＜５＞の何れか一に記載のアルブミン測定用試験片。
＜７＞ タンパク質変性剤が、ドデシル硫酸ナトリウムである、＜１＞～＜６＞の何れか一に記載のアルブミン測定用試験片。
＜８＞ ＳＨ試薬が、５,５’－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）である、＜１＞～＜７＞の何れか一に記載のアルブミン測定用試験片。
＜９＞ 非イオン性界面活性剤が、ポリオキシエチレン基を有する非イオン性界面活性剤である、＜１＞～＜８＞の何れか一に記載のアルブミン測定用試験片。
＜１０＞ ＜１＞～＜９＞の何れか一に記載のアルブミン測定用試験片に、アルブミン含有試料を点着し、試薬保持層における発色を測定することを含む、アルブミンの測定方法。
【化1】
＜２＞ Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つは水素原子を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つはアルキル基を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つはヒドロキシ基を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つはハロゲンを表し、これらは置換基を有していてもよく、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つは水素原子を示し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つはアルキル基を示し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つはヒドロキシ基を示し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つはハロゲンを表し、これらは置換基を有していてもよい、＜１＞に記載のアルブミン測定用試験片。
＜３＞ 上記アルキル基がメチル基である、＜１＞又は＜２＞に記載のアルブミン測定用試験片。
＜４＞ 上記ハロゲンが臭素である、＜１＞～＜３＞の何れか一に記載のアルブミン測定用試験片。
＜５＞ Ｒ１及びＲ８が水素であり、Ｒ３及びＲ６がヒドロキシ基であり、Ｒ２及びＲ４の一方が臭素であり、他方がメチル基であり、Ｒ５及びＲ７の一方がメチル基であり、他方が臭素である、＜１＞～＜４＞の何れか一に記載のアルブミン測定用試験片。
＜６＞ 式（１）で表される化合物の含有量が、ブロモクレゾールパープルの含有量の０．８質量％以上２５質量％以下である、＜１＞～＜５＞の何れか一に記載のアルブミン測定用試験片。
＜７＞ タンパク質変性剤が、ドデシル硫酸ナトリウムである、＜１＞～＜６＞の何れか一に記載のアルブミン測定用試験片。
＜８＞ ＳＨ試薬が、５,５’－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）である、＜１＞～＜７＞の何れか一に記載のアルブミン測定用試験片。
＜９＞ 非イオン性界面活性剤が、ポリオキシエチレン基を有する非イオン性界面活性剤である、＜１＞～＜８＞の何れか一に記載のアルブミン測定用試験片。
＜１０＞ ＜１＞～＜９＞の何れか一に記載のアルブミン測定用試験片に、アルブミン含有試料を点着し、試薬保持層における発色を測定することを含む、アルブミンの測定方法。
【発明の効果】
【0008】
本発明のアルブミン測定用試験片及びアルブミンの測定方法によれば、測定前の環境温度湿度、特に湿度による影響を小さく抑えられ、正確なアルブミンの測定を行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【0009】
【発明を実施するための形態】
【0010】
以下、本発明について詳細に説明する。
本明細書において「～」は、その前後に記載される数値をそれぞれ最小値及び最大値として含む範囲を示す。
本明細書において「～」は、その前後に記載される数値をそれぞれ最小値及び最大値として含む範囲を示す。
【0011】
本発明は、支持体と、支持体上に設けられた試薬保持層とを含む、アルブミン測定試験片であって、試薬保持層は、タンパク質変性剤、ＳＨ試薬、ＢＣＰ、非イオン性界面活性剤、及び、式（１）で表される化合物とを含むアルブミン測定用試験片である。
【0012】
【化2】
【0013】
好ましくは、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つは水素原子を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つはアルキル基を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つはヒドロキシ基を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つはハロゲンを表し、これらは置換基を有していてもよく、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つは水素原子を示し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つはアルキル基を示し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つはヒドロキシ基を示し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つはハロゲンを表し、これらは置換基を有していてもよい。
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つは水素原子を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つはアルキル基を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つはヒドロキシ基を示し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のうちの１つはハロゲンを表し、これらは置換基を有していてもよく、
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つは水素原子を示し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つはアルキル基を示し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つはヒドロキシ基を示し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のうちの１つはハロゲンを表し、これらは置換基を有していてもよい。
【0014】
本明細書における置換基としては、ハロゲン、炭素数１～６のアルコキシ基、ヒドロキシル基などを挙げることができるが、特に限定されない。
【0015】
本明細書におけるアルキル基は、直鎖、分岐又は環状のいずれでもよく、好ましくは炭素数１から６のアルキル基であり、より好ましくは炭素数１から４のアルキル基であり、特に好ましくはメチル基である。
本明細書におけるハロゲンとしては、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素が挙げられ、好ましくは臭素である。
本明細書におけるハロゲンとしては、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素が挙げられ、好ましくは臭素である。
【0016】
より好ましくは、Ｒ１及びＲ８が水素であり、Ｒ３及びＲ６がヒドロキシ基であり、Ｒ２及びＲ４の一方が臭素であり、他方がメチル基であり、Ｒ５及びＲ７の一方がメチル基であり、他方が臭素である。
【0017】
式（１）で表される化合物としては、具体的には、以下の構造を有する化合物がさらに好ましい。
【0018】
【化3】
【0019】
これらの化合物は、ＢＣＰ粉末に含まれる合成副生成物と予想される化合物であり、ＢＣＰ粉末を解析し、以下の情報をもとに構造を特定し、分画して回収することにより得ることができる。
【0020】
構造の特定方法は、一般に行われている方法で行うことができる。具体的には、ＢＣＰ粉末を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分画し、ＢＣＰ以外の画分に対して、液体クロマトグラフィー／質量分析（ＬＣ／ＭＳ）、１Ｈ－ＮＭＲ等で構造を特定することが可能である。
【0021】
式（１）で表される化合物の使用量に関しては、本発明の効果が発揮できる範囲においては特に制限はないが、ＢＣＰ量に対して０．４質量％以上含有することが好ましく、０．８質量％以上含有することがより好ましく、１質量％以上含有することが更に好ましく、２質量％以上含有することが特に好ましく、３質量％以上含まれることが最も好ましい。また、使用量の上限としては、ＢＣＰ量に対して、２５質量％以下が好ましく、２０質量％以下がより好ましく、１５質量％以下が更に好ましく、１２質量％以下が最も好ましい。
【0022】
式（１）で表される化合物は、市販されているＢＣＰの購入物から精製して入手することが可能である。また、有機合成により合成したものを使用することも可能である。さらには、式（１）で表される化合物が、本発明の効果を発揮する程度に含まれているＢＣＰの購入物をそのまま使用することも可能である。
【0023】
本発明における試薬保持層は、ＢＣＰと式（１）で表される化合物以外には、タンパク質変性剤、ＳＨ試薬、及び非イオン性界面活性剤を含有する。
【0024】
タンパク質変性剤としては、陰イオン性界面活性剤が好ましい。陰イオン性界面活性剤しては、一又は複数の実施形態において、アルキル硫酸エステル系界面活性剤、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸エステル塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸エステル塩、及びアルキルベンゼンスルホン酸塩等が挙げられる。アルキル硫酸エステル系界面活性剤としては、一又は複数の実施形態において、ドデシル硫酸ナトリム（ＳＤＳ）及びセチル硫酸ナトリウム等が挙げられる。ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸エステル塩としては、一又は複数の実施形態において、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸ナトリウム等が挙げられる。
【0025】
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸エステル塩としては、一又は複数の実施形態において、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム及びポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸トリエタノールアミン等が挙げられる。アルキルベンゼンスルホン酸塩としては、一又は複数の実施形態において、ラウリルベンゼンスルホン酸ナトリウム及びセチルベンゼンスルホン酸ナトリウム等が挙げられる。これらの中でドデシル硫酸ナトリウムが特に好ましい。
試薬保持層におけるタンパク質変性剤の使用量としては、０．０７５ｇ／ｍ２～７．５ｇ／ｍ２が好ましい。
試薬保持層におけるタンパク質変性剤の使用量としては、０．０７５ｇ／ｍ２～７．５ｇ／ｍ２が好ましい。
【0026】
ＳＨ試薬としては、例えば５，５’－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）（５，５’－Ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（２－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｉｃ Ａｃｉｄ）：ＤＴＮＢ）、２，２’－ジチオビス（５－ニトロピリジン）（２，２’－ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ（５－ｎｉｔｒｏｐｙｒｉｄｉｎ）：ＤＴＮＰ）、２，２’－ジチオジピリジン（２，２’－Ｄｉｔｈｉｏｄｉｐｙｒｉｄｉｎｅ：２－ＰＤＳ）、４，４’－ジチオジピリジン（４，４’－ｄｉｔｈｉｏｄｉｐｙｒｉｄｉｎｅ：４－ＰＤＳ）、４，４’－ジチオビス（１－アジドベンゼン）（４，４’－Ｄｉｔｈｉｏｂｉｓ－（ｐｈｅｎｙｌａｚｉｄｅ）：ＤＴＢＰＡ）、酸化型グルタチオン等のジスルフィド体、例えばヨウ素、フェリシアン化物、ヨードソ安息香酸、ヨウ素酸塩、亜塩素酸塩類、水銀、亜鉛等の酸化剤、例えばヨード酢酸、クロロ酢酸、ヨードアセトアミド、クロロアセトフェノン等のアルキル化剤、マレイミド、例えばＮ－メチルマレイミド、Ｎ－エチルマレイミド、Ｎ，Ｎ’－ｐ－フェニレンジマレイミド等のマレイミド誘導体、チオフタルイミド等が挙げられる。これらの中でも特に例えばＤＴＮＢ、２－ＰＤＳ、４－ＰＤＳ等のジスルフィド体、マレイミド、Ｎ－エチルマレイミド等のマレイミド誘導体等が好ましく用いられる。ＳＨ試薬としては、ＤＴＮＢが特に好ましい。また、これらは単独で用いても、適宜組み合わせて用いてもよい。
試薬保持層におけるＳＨ試薬の使用量としては、０．０１ｇ／ｍ２～１ｇ／ｍ２が好ましい。
試薬保持層におけるＳＨ試薬の使用量としては、０．０１ｇ／ｍ２～１ｇ／ｍ２が好ましい。
【0027】
ブロモクレゾールパープル（ＢＣＰ）としては、通常市販されているものを使用することができる。ＢＣＰは、アルブミン測定のための発色剤として使用される。
本発明においては、試薬保持層におけるブロモクレゾールパープルの含有量が０．７８ｇ／ｍ２～３．８１ｇ／ｍ２であり、好ましくは０．７８ｇ／ｍ２～２．２１ｇ／ｍ２である。
本発明においては、試薬保持層におけるブロモクレゾールパープルの含有量が０．７８ｇ／ｍ２～３．８１ｇ／ｍ２であり、好ましくは０．７８ｇ／ｍ２～２．２１ｇ／ｍ２である。
【0028】
非イオン性界面活性剤としては、ポリオキシエチレン基を有する非イオン性界面活性剤が好ましい。より好ましくは、非イオン性界面活性剤としては、ポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンtert-オクチルフェニルエーテル、及びポリオキシエチレンイソオクチルフェニルエーテルからなる群から選択される１以上の非イオン性界面活性剤を使用することができる。
【0029】
ポリオキシエチレンオレイルエーテルとしては、ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテル、ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル（Ｂrij３５）、ポリオキシエチレン（５０）オレイルエーテルなどが挙げられる。
【0030】
非イオン性界面活性剤としては、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－４０５、エマルゲン１０８、エマルゲン１２０、エマルゲン１５０、又はエマルゲン４３０などを使用することもできる。
【0031】
アルブミン測定用試験片における非イオン性界面活性剤の塗設量は、０．０１ｇ／ｍ２～０．４ｇ／ｍ２であることが好ましい。
【0032】
本発明においては、ブロモクレゾールパープルの含有量に対する非イオン性界面活性剤の含有量の比率が、０．０１～０．３であり、好ましくは０．０１～０．２である。
【0033】
本発明のアルブミン測定用試験片は、支持体と、上記支持体上に設けられた試薬保持層を含む。
好ましくは、本発明のアルブミン測定用試験片は、支持体と試薬保持層との間に、中間層をさらに含む。この場合、本発明のアルブミン測定用試験片は、支持体、中間層及び試薬保持層を含む。
好ましくは、本発明のアルブミン測定用試験片は、支持体と試薬保持層との間に、中間層をさらに含む。この場合、本発明のアルブミン測定用試験片は、支持体、中間層及び試薬保持層を含む。
【0034】
より好ましくは、本発明のアルブミン測定用試験片は、支持体；中間層；及び試薬保持層を含む展開層を含む。
【0035】
中間層は、好ましくは、水を吸収して膨潤する水溶性ポリマーを主成分として構成される層（吸水層）である。
展開層は、アルブミン測定用試験片の上側表面に点着供給された水性液体試料を、水性液体試料中に含有されている成分を実質的に偏在させることなしに横方向に広げ、単位面積当たりほぼ一定容量の割合で吸水性の水溶性ポリマーを含む中間層に供給する作用（メータリング作用）を有する層である。
展開層は、アルブミン測定用試験片の上側表面に点着供給された水性液体試料を、水性液体試料中に含有されている成分を実質的に偏在させることなしに横方向に広げ、単位面積当たりほぼ一定容量の割合で吸水性の水溶性ポリマーを含む中間層に供給する作用（メータリング作用）を有する層である。
【0036】
また、支持体とその上に設ける層との間、並びに支持体の上に設けられる各層の間には、接着層などの層を設けることもできる。
【0037】
また、上記した中間層及び展開層はそれぞれ別個の層として設けてもよいが、同一の層に上記した２以上の機能を同時に持たせることにより、一つの層として設けることもできる。即ち、中間層と展開層は、同一の層として設けてもよい。
【0038】
支持体としては、水不透過性支持体が好ましい。水不透過性支持体の材料としては、ポリエチレンテレフタレート、ビスフエノールＡのポリカーボネート、ポリスチレン、セルロースエステル（例えば、セルロースジアセテート、セルローストリアセテート、セルロースアセテートプロピオネート等）等のポリマーが好ましく、ポリエチレンテレフタレートが特に好ましい。支持体としては、厚さ約５０μｍから約１ｍｍ、好ましくは約８０μｍから約３００μｍの範囲の透明な、例えば、波長約２００ｎｍから約９００ｎｍの範囲内の少なくとも一部の範囲の波長の電磁輻射線を透過させる、平滑平面状の支持体を用いることができる。支持体の表面には公知の下塗層又は接着層を設けて中間層との接着を強くすることができる。
【0039】
中間層は、好ましくは、水に接触して膨潤し水を吸収できる水溶性ポリマーを含有する層である。中間層は分析操作時に展開層に点着された水性液体試料中の水がこの層の上側表面に到達した時に、展開層での水性液体試料の展開を良好にする作用を有している。
【0040】
中間層における水溶性ポリマーの含有量は、好ましくは１０～１００ｇ／ｍ２であり、より好ましくは２０～７０ｇ／ｍ２である。
【0041】
中間層に用いられる水溶性ポリマーは、好ましくは、水との接触時に膨潤して吸水する性質を有する非蛋白性の水溶性ポリマーである。非蛋白性の水溶性ポリマーの例として、ポリアクリルアミド、アガロース、特開昭５７－５０６６０、特開昭５８－７７６６４等に記載のアクリルアミド－Ｎ－ビニルピロリドンコポリマー等のアクリルアミド系コポリマー、特開昭６２－１３７５６４に記載のメタリルアルコールとアクリルアミド又はその誘導体、アクリル酸又はその誘導体、メタクリル酸又はその誘導体、又はＮ－ビニル－２－ピロリドンとの２元又は３元コポリマー等のメタリルアルコール系コポリマー（メタリルアルコール系コポリマーは架橋硬化可能である。例えば、アクリルアミド－Ｎ－ビニル－２－ピロリドン－メタリルアルコール３元コポリマー）等がある。
【0042】
これらの非蛋白性水溶性ポリマーのうちでは、アクリルアミド－Ｎ－ビニルピロリドンコポリマー等のアクリルアミド系コポリマー、又はアクリルアミド－Ｎ－ビニル－２－ピロリドン－メタリルアルコール３元コポリマー等のメタリルアルコール含有コポリマーが好ましい。
【0043】
中間層には、ＢＣＰの能力に悪影響を及ぼさない諸種の成分を含有させることができる。その例として非イオン性界面活性剤がある。非イオン性界面活性剤の具体例として、試薬保持層に含有させることができる界面活性剤と同様のものがある。非イオン性界面活性剤を中間層に含有させることにより分析操作時に水性液体試料中の水が中間層に実質的に一様に吸収されやすくなり、また展開層との液体接触が迅速にかつ実質的に一様になる。また、中間層には後述する緩衝剤を含有させることができる。
【0044】
中間層には架橋剤（硬化剤又は硬膜剤ともいわれる）を含有させることができる。架橋剤としては、有機ポリマー化学分野で周知の諸種の無機及び有機架橋剤を用いることができる。ポリビニルアルコール用の有機架橋剤の例としてジメチル尿素、メタリルアルコール含有ポリマー用の有機架橋剤の例としてホルムアルデヒドがある。架橋剤の中間層中での含有量は、架橋硬化させる中間層の被覆量と硬化の程度に応じて選択しうるが、一般的に被覆量で約５０ｍｇ／ｍ２～約５０００ｍｇ／ｍ２、好ましくは約１００ｍｇ／ｍ２～約２０００ｍｇ／ｍ２の範囲である。
【0045】
展開層としては、例えば、特開昭５５－１６４３５６、特開昭５７－６６３５９等に記載の織物展開層（例えば、ブロード、ポプリン等の平織物）、特開昭６０－２２２７６９等に記載の編み物展開層（例えば、トリコット編み物布地、ダブルトリコット編み物布地、ミラニーズ編み物布地等）、特開昭５７－１４８２５０に記載の有機ポリマー繊維パルプ含有抄造紙からなる展開層、特公昭５３－２１６７７、米国特許第３，９９２，１５８等に記載のメンブランフィルタ（ブラッシュポリマー層）、ポリマーミクロビーズ、ガラスミクロビーズ、珪藻土が水溶性ポリマーバインダーに保持されてなる連続微空隙含有多孔性層等の非繊維等方的多孔性展開層、特開昭５５－９０８５９に記載のポリマーミクロビーズが水で膨潤しないポリマー接着剤で点接触状に接着されてなる連続微空隙含有多孔性層（三次元格子状粒状構造物層）からなる非繊維等方的多孔性展開層等を用いることができる。展開層としては、編み物展開層（例えば、トリコット編み物布地、ダブルトリコット編み物布地、ミラニーズ編み物布地等）が好ましい。
【0046】
展開層には、タンパク質変性剤、ＳＨ試薬、ブロモクレゾールパープル、非イオン性界面活性剤、及び式（１）で表される化合物を含む試薬保持層が含まれている。試薬保持層には、さらに、ｐＨ調整剤、及び水溶性ポリマーを含めることができる。
【0047】
試薬保持層に含めることができる水溶性ポリマーとしては、アクリル系（ポリアクリルアミドなど）、セルロース系（カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロースなど）などが挙げられる。水溶性ポリマーとしては、好ましくは、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン等を使用することができる。
【0048】
試薬保持層における水溶性ポリマーの被覆量は約０．１ｇ／ｍ２から約３０ｇ／ｍ２、好ましくは約０．５ｇ／ｍ２から約２０ｇ／ｍ２の範囲である。
【0049】
試薬保持層の液ｐＨは、好ましくは４．５～５．８であり、より好ましくは４．６～５．７であり、さらに好ましくは４．７～５．６である。アルブミンとブロモクレゾールパープルとの反応は、ｐＨが７に近づく方が反応量が増えるが、ブロモクレゾールパープル体の呈色（バックグラウンド）も増加するため、上記の範囲が好ましいと考えられる。試薬保持層の液ｐＨとは、試薬保持層を形成するために使用する塗布液のｐＨを意味する。
試薬保持層のｐＨを上記した範囲のｐＨに調整するｐＨ調整剤としては、コハク酸、コハク酸二ナトリウム、水酸化ナトリウムが好ましく、コハク酸がより好ましい。
試薬保持層のｐＨを上記した範囲のｐＨに調整するｐＨ調整剤としては、コハク酸、コハク酸二ナトリウム、水酸化ナトリウムが好ましく、コハク酸がより好ましい。
【0050】
中間層及び展開層には、緩衝剤を含有させることができる。
【0051】
緩衝剤としてはヒドロキシカルボン酸及びジカルボン酸からなる群から選択される少なくとも１種の有機酸が用いられる。ヒドロキシカルボン酸の例としては、リンゴ酸、乳酸、クエン酸、酒石酸がある。ジカルボン酸の例としては、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、３，３－ジメチルグルタル酸がある。上記の中でもコハク酸が好ましい。
【0052】
緩衝剤の含有量は、１ｍ２当り約３０ミリ当量から約５００ミリ当量、好ましくは約５０ミリ当量から約３００ミリ当量の範囲である。緩衝剤は他の試薬と一緒に水溶性ポリマー中に分散させ、中間層、試薬保持層及び展開層のうちの一以上の層に分散保持させることが好ましい。
【0053】
展開層に試薬保持層を含有させる方法としては、タンパク質変性剤、ＳＨ試薬、ブロモクレゾールパープル、及び非イオン性界面活性剤を含む、水溶液、水－有機溶媒混合溶媒溶液又は有機溶媒溶液（有機溶媒の例：メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール等の脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等のジアルキルケトン；ジメチルエーテル等のジアルキルエーテル；テトラヒドロフラン、ジオキサン等の脂肪族環状エーテル；アセトニトリル；ヘキサン；β－メトキシエタノール；エチレングリコール等）を公知の方法により実質的に一様に展開層の上から塗布又は噴霧し乾燥する方法、並びに、タンパク質変性剤、ＳＨ試薬、ブロモクレゾールパープル、及び非イオン性界面活性剤を含む溶液に展開層用の素材を浸漬し乾燥又は半乾燥状態で中間層（水溶性ポリマーバインダー層）の上に積層し一体化する方法等がある。
【0054】
本発明のアルブミン測定用試験片は、当業者に公知の方法により調製することができる。例えば、支持体上に、中間層塗布液として調合した塗布液を塗布して乾燥し、４０μｍ厚程度の乾燥膜を作製し、その後、展開層の織布を貼合したものを作製する。その後、展開層の織布側から、試薬保持層液として調合した塗布液を塗布して乾燥することによってアルブミン測定用試験片を作製することができる。アルブミン測定用試験片は一辺約１５ｍｍから約３０ｍｍの正方形又はほぼ同サイズの同形等の小片に裁断し、特公昭５７－２８３３１、実開昭５６－１４２４５４、特開昭５７－６３４５２、実開昭５８－３２３５０、特表昭５８－５０１１４４等に記載のスライド枠に収めて化学分析スライドとして用いることが、製造、包装、輸送、保存、測定操作等諸種の観点から好ましい。使用目的によっては、長いテープ状でカセット又はマガジンに収めて用いること、又は小片を開口のあるカードに貼付又は収めて用いることなどもできる。
【0055】
本発明によれば、本発明のアルブミン測定用試験片に、アルブミン含有試料を点着し、試薬保持層における発色を測定することを含む、アルブミンの測定方法が提供される。
【0056】
例えば、約５μＬから約３０μＬ、好ましくは約８μＬから約１５μＬの範囲の全血、血漿、血清、リンパ液、尿等の水性液体試料を展開層に点着し、約２０℃から約４０℃の範囲の実質的に一定の温度で、好ましくは３７℃近傍の実質的に一定の温度で約１分から約１０分、好ましくは約２分から約７分の範囲でインキュベーションし、支持体側から、アルブミン測定用試験片内の色変化、発色などの検出可能な変化を反射測光し、比色測定法の原理により液体試料中のアルブミンの含有量を求めることができる。本発明においては、アルブミン－ＢＣＰ結合の吸収極大波長又はその近傍の波長の光を用いて展開層の光学濃度を反射測光し、予め作成した検量線を用いて比色測定法の原理により液体試料中のアルブミン含有量を求めることができる。点着する水性液体試料の量、インキュベーション時間と温度を一定にすることによりアルブミンの定量分析を高精度で実施できる。測定操作は特開昭６０－１２５５４３、特開昭６０－２２０８６２、特開昭６１－２９４３６７、特開昭５８－１６１８６７等に記載の化学分析装置により極めて容易な操作で高精度の定量分析を実施できる。
【0057】
次に、本発明について実施例を挙げて説明するが、本発明は、これらに限定されるものではない。
【実施例0058】
＜参考例１＞
ゼラチン下塗りされている１８０μｍのポリエチレンテレフタレート無色透明平滑フィルムに下記組成の水溶液を塗布し乾燥した。
（中間層）
ポリマーＡＡｍ－ＶＰ－ＭＡＯＨ ４４．０ｇ／ｍ２
コハク酸 ３ｇ／ｍ２
ゼラチン下塗りされている１８０μｍのポリエチレンテレフタレート無色透明平滑フィルムに下記組成の水溶液を塗布し乾燥した。
（中間層）
ポリマーＡＡｍ－ＶＰ－ＭＡＯＨ ４４．０ｇ／ｍ２
コハク酸 ３ｇ／ｍ２
【0059】
水溶液のｐＨは５．０とした。
ポリマーＡＡｍ－ＶＰ－ＭＡＯＨは、ポリアクリルアミド－Ｎ－ビニル－２－ピロリドン－メタリルアルコール３元コポリマー（モノマーモル比５７：３８：５（富士フイルム（株）社製））を示す（以下、同様）。
ポリマーＡＡｍ－ＶＰ－ＭＡＯＨは、ポリアクリルアミド－Ｎ－ビニル－２－ピロリドン－メタリルアルコール３元コポリマー（モノマーモル比５７：３８：５（富士フイルム（株）社製））を示す（以下、同様）。
【0060】
次に上記フィルム上に約３０ｇ／ｍ２の供給量で水を全面に供給して湿潤させた後５０デニール相当のポリエチレンテレフタレート紡績糸を３６ゲージ編みしたトリコット編み物布地を軽く圧力をかけて積層し、乾燥させた。
【0061】
次に下記組成のエタノール（３０質量％）水溶液（ｐＨ４．７）を各々の成分が下記の量となるように塗布し乾燥させ、一体型多層分析要素を作製した。
【0062】
（試薬保持層）
コハク酸 ３．５ｇ／ｍ２
ポリビニルピロリドン ８ｇ／ｍ２
ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＡ） １．７ｇ／ｍ２
界面活性剤Ｂｒｉｊｉ３５ ０．３ｇ／ｍ２
蛋白質変性剤（成分Ａ）ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ） ０．７６ｇ／ｍ２
ＳＨ試薬（成分Ｂ）５,５’－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）０．１ｇ／ｍ２
コハク酸 ３．５ｇ／ｍ２
ポリビニルピロリドン ８ｇ／ｍ２
ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＡ） １．７ｇ／ｍ２
界面活性剤Ｂｒｉｊｉ３５ ０．３ｇ／ｍ２
蛋白質変性剤（成分Ａ）ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ） ０．７６ｇ／ｍ２
ＳＨ試薬（成分Ｂ）５,５’－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）０．１ｇ／ｍ２
【0063】
ここで、界面活性剤は非イオン性の界面活性剤であるポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル（Ｂｒｉｊ３５ 富士フイルム和光純薬（株）社製）を用いた。試薬保持層を形成するために使用する塗布液のｐＨが４．８となるようにコハク酸で調整した。
【0064】
上記の一体型多層分析要素を１２ｍｍ×１３ｍｍ四方のチップに切断し、スライド枠（特開昭５７－６３４５２号公報に記載）に収めて、本発明によるアルブミン測定用試験片１（参考例１）を作製し、低湿（２０％ＲＨ）環境で防湿袋に密閉した。
【0065】
＜参考例２＞
参考例１で作製したアルブミン測定用試験片１において、ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＡ）を、ＢＣＰ（東京化成工業（株）社製、ロットＢ）に変更した以外は同様にして、アルブミン測定用試験片２（参考例２）を作製し、低湿（２０％ＲＨ）環境で防湿袋に密閉した。
参考例１で作製したアルブミン測定用試験片１において、ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＡ）を、ＢＣＰ（東京化成工業（株）社製、ロットＢ）に変更した以外は同様にして、アルブミン測定用試験片２（参考例２）を作製し、低湿（２０％ＲＨ）環境で防湿袋に密閉した。
【0066】
＜アルブミン量の評価＞
アルブミン（ＡＬＢ）４ｇ／ｄＬを含む検査液を作成し、参考例１及び参考例２で作製したアルブミン試験片１及びアルブミン試験片２を防湿袋から取り出した後、直ぐに、検査液を試験片に１０μＬ点着して富士ドライケム７０００（富士フイルム株式会社製）を用いてアルブミン量を測定した。測定結果は、３回繰り返し測定した時の平均値で評価した。
アルブミン（ＡＬＢ）４ｇ／ｄＬを含む検査液を作成し、参考例１及び参考例２で作製したアルブミン試験片１及びアルブミン試験片２を防湿袋から取り出した後、直ぐに、検査液を試験片に１０μＬ点着して富士ドライケム７０００（富士フイルム株式会社製）を用いてアルブミン量を測定した。測定結果は、３回繰り返し測定した時の平均値で評価した。
【0067】
＜環境依存性の評価＞
アルブミン量の評価を行う過程で、アルブミン試験片１、２を防湿袋から取り出した後、３２℃８０％ＲＨの環境下で１時間保存した後に、同様にして、アルブミン量を測定し、環境依存性を評価した。結果は、防湿袋から取り出した後直ぐに評価したときのアルブミンの値に対する、３２℃８０％ＲＨの環境下で１時間保存した後に評価した値の割合として、変化の度合いを示した。結果を表１に示した。
アルブミン量の評価を行う過程で、アルブミン試験片１、２を防湿袋から取り出した後、３２℃８０％ＲＨの環境下で１時間保存した後に、同様にして、アルブミン量を測定し、環境依存性を評価した。結果は、防湿袋から取り出した後直ぐに評価したときのアルブミンの値に対する、３２℃８０％ＲＨの環境下で１時間保存した後に評価した値の割合として、変化の度合いを示した。結果を表１に示した。
【0068】
【表1】
【0069】
表１より、ＢＣＰのロット違いで、測定前の環境温度湿度に影響の受けやすさが異なることが分かった。
【0070】
（ＢＣＰ純度の測定）
参考例１及び参考例２で使用したＢＣＰの純度を解析した。解析はＨＰＬＣを用いて行った。
参考例１及び参考例２で使用したＢＣＰの純度を解析した。解析はＨＰＬＣを用いて行った。
【0071】
その結果、参考例１で使用した測定前の環境温度湿度に対して影響が少ないＢＣＰの純度（ＢＣＰ粉末全体に対するＢＣＰ量）は９０％であり、参考例２で使用した測定前の環境温度湿度に対して影響が大きいＢＣＰの純度は９７％であり、測定前の環境温度湿度に影響を受けにくいＢＣＰの純度が低いことが分かった。
【0072】
（ＢＣＰに含まれるＢＣＰ以外の化合物の特定）
参考例１及び参考例２で用いたＢＣＰ粉末をエタノールに十分に溶解し、０．４５μｍフィルターで１回ろ過することで測定試料を得た。測定試料は、等量の水で希釈したのち、測定に用いることもできる。ＨＰＬＣ測定条件は以下の通りとした。
参考例１及び参考例２で用いたＢＣＰ粉末をエタノールに十分に溶解し、０．４５μｍフィルターで１回ろ過することで測定試料を得た。測定試料は、等量の水で希釈したのち、測定に用いることもできる。ＨＰＬＣ測定条件は以下の通りとした。
【0073】
分析装置：Ａｇｉｌｅｎｔ ＨＰ１１００ｓｅｒｉｅｓ （アジレント・テクノロジー社製）
逆相カラム：Ｔｓｋｇｅｌ ＯＤＳ １００Ｖ（東ソー株式会社製）粒子径３μｍ、内径２．０ｍｍ×長さ１５０ｍｍ
溶離液：Ａ液：１０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウムを含む水 Ｂ液：１０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウムを含むアセトニトリル／水＝９５／５（体積％）
０ｍｉｎ（Ａ液：Ｂ液＝１０：９０）から３０ｍｉｎ（Ａ液：Ｂ液＝０：１００）まで直線濃度勾配
カラム温度：４０℃
流速：０．２ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：２μＬ
検出器ＵＶ：２５４ｎｍ
逆相カラム：Ｔｓｋｇｅｌ ＯＤＳ １００Ｖ（東ソー株式会社製）粒子径３μｍ、内径２．０ｍｍ×長さ１５０ｍｍ
溶離液：Ａ液：１０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウムを含む水 Ｂ液：１０ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウムを含むアセトニトリル／水＝９５／５（体積％）
０ｍｉｎ（Ａ液：Ｂ液＝１０：９０）から３０ｍｉｎ（Ａ液：Ｂ液＝０：１００）まで直線濃度勾配
カラム温度：４０℃
流速：０．２ｍＬ／ｍｉｎ
注入量：２μＬ
検出器ＵＶ：２５４ｎｍ
【0074】
下記に示すように、ＨＰＬＣの３つのピークが示すＢＣＰ以外の化合物を特定したところ、参考例１において以下の化合物４つのうち３つ（以下、化合物１、２、３と称する）が、混入していることが分かった。
【0075】
【化4】
【0076】
混入物の構造式の同定はＥＳＩ－ＭＳと１Ｈ－ＮＭＲの情報により特定した。
【0077】
ＢＣＰと分離した混入物をエタノールに溶解し、等量の水で希釈したのち、０．４５μｍフィルターで１回ろ過することで測定試料を得た。ＨＰＬＣ測定条件は、前述のＨＰＬＣの測定で記載した条件と同様であり、検出はＥＳＩ－ＭＳ（陽イオンモード及び負イオンモード）にて行った。
【0078】
分離した化合物１、２、３の混合物のＨＰＬＣクロマトグラム（２５４ｎｍ）を図１に示した。分子式はいずれもＣ２１Ｈ１４Ｂｒ２Ｏ６Ｓであった。
ＭＳ：ｍ／ｚ ５５２．８９６（［Ｍ＋Ｈ］＋）、ｍ／ｚ ５５０．８８１（［Ｍ－Ｈ］－）
ＭＳ：ｍ／ｚ ５５２．８９６（［Ｍ＋Ｈ］＋）、ｍ／ｚ ５５０．８８１（［Ｍ－Ｈ］－）
【0079】
分離した化合物１、２、３の混合物を重ＤＭＳＯに溶解し、５ｍｍ径のＮＭＲチューブに移した。チューブにキャップをし、パラフィルムを巻いて、１Ｈ－ＮＭＲ測定に用いた。
装置は、４００ＭＨｚの核磁気共鳴装置を使用した。
１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを図２に示した。
装置は、４００ＭＨｚの核磁気共鳴装置を使用した。
１Ｈ－ＮＭＲスペクトルを図２に示した。
【0080】
参考例１に関し、上記の３つの化合物が含有する割合を算出したところ、ＢＣＰに対して、５．８質量％の割合で含有していることが分かった。参考例２に関しては、上記の３つの化合物のＨＰＬＣ情報は得られなかった。
【0081】
（純粋なＢＣＰと、混入物の回収）
ＢＣＰ粉末に非アルコール系溶媒を添加し、ＢＣＰを溶解させた。その後、遠心分離して赤色の混入物を沈殿物として得た。上澄みを除去したのち、再度非アルコール系溶媒を添加し超音波処理にて沈殿物を分散させ、遠心分離後に上清を除去する操作を繰り返すことで化合物１、２、３の混合物を得た。これらをエタノールに溶解し、バイヤルビンに移したのち窒素パージにより溶媒を留去した。
ＢＣＰ粉末に非アルコール系溶媒を添加し、ＢＣＰを溶解させた。その後、遠心分離して赤色の混入物を沈殿物として得た。上澄みを除去したのち、再度非アルコール系溶媒を添加し超音波処理にて沈殿物を分散させ、遠心分離後に上清を除去する操作を繰り返すことで化合物１、２、３の混合物を得た。これらをエタノールに溶解し、バイヤルビンに移したのち窒素パージにより溶媒を留去した。
【0082】
このようにして、化合物１、２及び３（９８％以上の純度）が混合した粉末を取得した。
【0083】
（実施例１）
参考例１で、ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＡ）の代わりに、別途化合物１，２，３の量を特定したＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＣ（ＢＣＰの純度９７．１％：化合物１、２、３は０．１％））を使用した以外は同様にして、アルブミン測定用試験片３（実施例１）を作製した。
参考例１で、ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＡ）の代わりに、別途化合物１，２，３の量を特定したＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＣ（ＢＣＰの純度９７．１％：化合物１、２、３は０．１％））を使用した以外は同様にして、アルブミン測定用試験片３（実施例１）を作製した。
【0084】
（実施例２）
参考例１で、ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＡ）の代わりに、ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＣ（ＢＣＰの純度９７．１％：化合物１、２、３は０．１％））と、このＢＣＰ（ロットＣ）に対して０．４質量％の化合物１、２、３の混合物を使用した以外は同様にして、アルブミン測定用試験片４（実施例２）を作製した。
参考例１で、ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＡ）の代わりに、ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＣ（ＢＣＰの純度９７．１％：化合物１、２、３は０．１％））と、このＢＣＰ（ロットＣ）に対して０．４質量％の化合物１、２、３の混合物を使用した以外は同様にして、アルブミン測定用試験片４（実施例２）を作製した。
【0085】
（実施例３）
参考例１で、ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＡ）の代わりに、ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＣ（ＢＣＰの純度９７．１％：化合物１、２、３は０．１％））と、このＢＣＰ（ロットＣ）に対して１質量％の化合物１、２、３の混合物を使用した以外は同様にして、アルブミン測定用試験片５（実施例３）を作製した。
参考例１で、ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＡ）の代わりに、ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＣ（ＢＣＰの純度９７．１％：化合物１、２、３は０．１％））と、このＢＣＰ（ロットＣ）に対して１質量％の化合物１、２、３の混合物を使用した以外は同様にして、アルブミン測定用試験片５（実施例３）を作製した。
【0086】
（実施例４）
参考例１で、ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＡ）の代わりに、ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＣ（ＢＣＰの純度９７．１％：化合物１、２、３は０．１％））と、このＢＣＰ（ロットＣ）に対して５質量％の化合物１、２、３の混合物を使用した以外は同様にして、アルブミン測定用試験片６（実施例４）を作製した。
参考例１で、ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＡ）の代わりに、ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＣ（ＢＣＰの純度９７．１％：化合物１、２、３は０．１％））と、このＢＣＰ（ロットＣ）に対して５質量％の化合物１、２、３の混合物を使用した以外は同様にして、アルブミン測定用試験片６（実施例４）を作製した。
【0087】
（実施例５）
参考例１で、ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＡ）の代わりに、ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＣ（ＢＣＰの純度９７．１％：化合物１、２、３は０．１％））と、このＢＣＰ（ロットＣ）に対して１０質量％の化合物１、２、３の混合物を使用した以外は同様にして、アルブミン測定用試験片７（実施例５）を作製した。
参考例１で、ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＡ）の代わりに、ＢＣＰ（富士フイルム和光純薬社製、ロットＣ（ＢＣＰの純度９７．１％：化合物１、２、３は０．１％））と、このＢＣＰ（ロットＣ）に対して１０質量％の化合物１、２、３の混合物を使用した以外は同様にして、アルブミン測定用試験片７（実施例５）を作製した。
【0088】
（環境依存性の評価）
参考例と同様にして、環境依存性の評価を行った。結果は表２に示した
参考例と同様にして、環境依存性の評価を行った。結果は表２に示した
【0089】
【表2】
【0090】
表２より、式（１）で表される化合物を用いることで、測定前の環境温度湿度に影響の受けにくいアルブミン試験片を作製できることが確認された。
【図1】
【図2】
