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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024057646
(43)【公開日】2024-04-25
(54)【発明の名称】デバイス、システム、方法、および薬剤評価方法
(51)【国際特許分類】
C12M 1/00 20060101AFI20240418BHJP
C12M 1/34 20060101ALI20240418BHJP
C12M 3/00 20060101ALI20240418BHJP
C12Q 1/02 20060101ALI20240418BHJP
G01N 33/15 20060101ALI20240418BHJP
G01N 1/10 20060101ALI20240418BHJP
【ＦＩ】
C12M1/00 A
C12M1/34
C12M3/00
C12Q1/02
G01N33/15 Z
G01N1/10 B
【審査請求】未請求
【請求項の数】15
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2022164421
(22)【出願日】2022-10-13
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）令和３年度、国立研究開発法人日本医療研究開発機構、再生医療・遺伝子治療の産業化に向けた基盤技術開発事業／再生医療技術を応用した創薬支援基盤技術の開発、研究開発課題名「階層的共培養を基礎とするＬｉｖｅｒ／Ｇｕｔ ｏｎ－ａ－ｃｈｉｐの開発：インビトロ腸肝循環評価を目指した高度な代謝と極性輸送の再現」、産業技術力強化法第１７条の適用を受ける特許出願
(71)【出願人】
【識別番号】504137912
【氏名又は名称】国立大学法人 東京大学
(74)【代理人】
【識別番号】100165179
【弁理士】
【氏名又は名称】田▲崎▼ 聡
(74)【代理人】
【識別番号】100188558
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 雅人
(74)【代理人】
【識別番号】100140774
【弁理士】
【氏名又は名称】大浪 一徳
(74)【代理人】
【識別番号】100175824
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 淳一
(74)【代理人】
【識別番号】100194250
【弁理士】
【氏名又は名称】福原 直志
(72)【発明者】
【氏名】酒井 康行
(72)【発明者】
【氏名】西川 昌輝
(72)【発明者】
【氏名】時任 文弥
【テーマコード（参考）】
2G052
4B029
4B063
【Ｆターム（参考）】
2G052AB16
2G052BA22
2G052DA06
4B029AA07
4B029AA27
4B029BB11
4B029CC01
4B029CC02
4B029DG08
4B029FA12
4B029GA03
4B029GB05
4B029GB10
4B029HA05
4B063QA01
4B063QA18
4B063QR77
4B063QR81
4B063QS36
4B063QX02
(57)【要約】
【課題】ターゲット物質に対する処理効率を向上させることができるデバイス、システム、方法、および薬剤評価方法を提供する。
【解決手段】本開示に係るデバイスは、試料を支持し、流路構造が形成された基部と、使用時に流路構造と連通する蓄積空間を有する蓄積部と、を備え、試料からの液状物が、流路構造を通って蓄積空間に蓄積される。
【選択図】図５
【解決手段】本開示に係るデバイスは、試料を支持し、流路構造が形成された基部と、使用時に流路構造と連通する蓄積空間を有する蓄積部と、を備え、試料からの液状物が、流路構造を通って蓄積空間に蓄積される。
【選択図】図５
【特許請求の範囲】
【請求項1】
試料を支持し、流路構造が形成された基部と、
使用時に前記流路構造と連通する蓄積空間を有する蓄積部と、
を備え、
前記試料からの液状物が、前記流路構造を通って前記蓄積空間に蓄積される、
デバイス。
使用時に前記流路構造と連通する蓄積空間を有する蓄積部と、
を備え、
前記試料からの液状物が、前記流路構造を通って前記蓄積空間に蓄積される、
デバイス。
【請求項2】
前記流路構造の一端が前記試料によって塞がれ、
前記流路構造の他端が前記蓄積空間と連通している、
請求項１に記載のデバイス。
前記流路構造の他端が前記蓄積空間と連通している、
請求項１に記載のデバイス。
【請求項3】
前記流路構造は、前記基部に形成された溝を含む、
請求項１または２に記載のデバイス。
請求項１または２に記載のデバイス。
【請求項4】
前記溝の幅は、前記試料が通過できない大きさである、
請求項３に記載のデバイス。
請求項３に記載のデバイス。
【請求項5】
前記溝の幅は、０．１μｍ以上１０μｍ以下である、
請求項３に記載のデバイス。
請求項３に記載のデバイス。
【請求項6】
前記流路構造は、前記基部上に放射状に配置された複数の溝を含み、
前記蓄積部は、前記基部の中央部に設けられる、
請求項１または２に記載のデバイス。
前記蓄積部は、前記基部の中央部に設けられる、
請求項１または２に記載のデバイス。
【請求項7】
前記蓄積部は、上部開口および下部開口を有し、
前記液状物は、前記下部開口から蓄積空間に流入する、
請求項１または２に記載のデバイス。
前記液状物は、前記下部開口から蓄積空間に流入する、
請求項１または２に記載のデバイス。
【請求項8】
前記流路構造は、使用時に前記液状物を含む液体で満たされる、
請求項１または２に記載のデバイス。
請求項１または２に記載のデバイス。
【請求項9】
前記試料は、細胞および／または組織である、
請求項１または２に記載のデバイス。
請求項１または２に記載のデバイス。
【請求項10】
前記試料は、肝細胞を含み、
前記液状物は、胆汁酸を含む、
請求項９に記載のデバイス。
前記液状物は、胆汁酸を含む、
請求項９に記載のデバイス。
【請求項11】
前記基部は、前記細胞および／または組織が培養される培養空間を少なくとも部分的に画定する、
請求項９に記載のデバイス。
請求項９に記載のデバイス。
【請求項12】
前記試料は、前記培養空間と前記蓄積空間との連通を遮断するように配置される、
請求項１１に記載のデバイス。
請求項１１に記載のデバイス。
【請求項13】
請求項１または２に記載のデバイスと、
前記デバイスを収容するウェルを有するウェルデバイスと、
を備える、システム。
前記デバイスを収容するウェルを有するウェルデバイスと、
を備える、システム。
【請求項14】
流路構造が形成された基部と、使用時に前記流路構造と連通する蓄積空間を有する蓄積部と、を備えるデバイスを用意するステップと、
前記基部上に試料を配置するステップと、
前記試料からの液状物を、前記流路構造を通して前記蓄積空間に蓄積するステップと、
を含む、方法。
前記基部上に試料を配置するステップと、
前記試料からの液状物を、前記流路構造を通して前記蓄積空間に蓄積するステップと、
を含む、方法。
【請求項15】
請求項１または２に記載のデバイスを用いた薬剤評価方法であって、
前記基部に支持された前記試料または前記蓄積された液状物に薬剤を接触させるステップと、
前記薬剤の接触による刺激に対する前記試料もしくは前記液状物の応答、または前記試料に対する前記薬剤の浸透性もしくは透過性を測定するステップと、
を含む、薬剤評価方法。
前記基部に支持された前記試料または前記蓄積された液状物に薬剤を接触させるステップと、
前記薬剤の接触による刺激に対する前記試料もしくは前記液状物の応答、または前記試料に対する前記薬剤の浸透性もしくは透過性を測定するステップと、
を含む、薬剤評価方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明の実施形態は、デバイス、システム、方法、および薬剤評価方法に関する。
【背景技術】
【0002】
細胞や組織などの試料から放出されるターゲット物質の回収および分析を行う手法が知られている（特許文献１など）。たとえば、肝細胞からの胆汁成分は、肝臓から排泄される肝代謝化合物を含む。このような胆汁を回収して、肝代謝化合物の排泄経路を理解することは、医薬品開発などの分野において非常に重要である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0003】
【特許文献1】特表２０１１－５２０８３９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
しかしながら、ターゲット物質に対する回収、分析などの処理効率が十分でない場合があった。
【0005】
本発明が解決しようとする課題は、ターゲット物質に対する処理効率を向上させることができるデバイス、システム、方法、および薬剤評価方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明は、以下の態様を含み得る。
［１］試料を支持し、流路構造が形成された基部と、使用時に前記流路構造と連通する蓄積空間を有する蓄積部と、を備え、前記試料からの液状物が、前記流路構造を通って前記蓄積空間に蓄積される、デバイス。
［２］前記流路構造の一端が前記試料によって塞がれ、前記流路構造の他端が前記蓄積空間と連通している、［１］に記載のデバイス。
［３］前記流路構造は、前記基部に形成された溝を含む、［１］または［２］に記載のデバイス。
［４］前記溝の幅は、前記試料が通過できない大きさである、［３］に記載のデバイス。
［５］前記溝の幅は、０．１μｍ以上１０μｍ以下である、［３］または［４］に記載のデバイス。
［６］前記流路構造は、前記基部上に放射状に配置された複数の溝を含み、前記蓄積部は、前記基部の中央部に設けられる、［１］～［５］のいずれかに記載のデバイス。
［７］前記蓄積部は、上部開口および下部開口を有し、前記液状物は、前記下部開口から蓄積空間に流入する、［１］～［６］のいずれかに記載のデバイス。
［８］前記流路構造は、使用時に前記液状物を含む液体で満たされる、［１］～［７］のいずれかに記載のデバイス。
［９］前記試料は、細胞および／または組織である、［１］～［８］のいずれかに記載のデバイス。
［１０］前記試料は、肝細胞を含み、前記液状物は、胆汁酸を含む、［９］に記載のデバイス。
［１１］前記基部は、前記細胞および／または組織が培養される培養空間を少なくとも部分的に画定する、［９］または［１０］に記載のデバイス。
［１２］前記試料は、前記培養空間と前記蓄積空間との連通を遮断するように配置される、［１１］に記載のデバイス。
［１３］［１］～［１２］のいずれかに記載のデバイスと、前記デバイスを収容するウェルを有するウェルデバイスと、を備える、システム。
［１４］流路構造が形成された基部と、使用時に前記流路構造と連通する蓄積空間を有する蓄積部と、を備えるデバイスを用意するステップと、前記基部上に試料を配置するステップと、前記試料からの液状物を、前記流路構造を通して前記蓄積空間に蓄積するステップと、を含む、方法。
［１５］［１］～［１２］のいずれかに記載のデバイスを用いた薬剤評価方法であって、前記基部に支持された前記試料または前記蓄積された液状物に薬剤を接触させるステップと、前記薬剤の接触による刺激に対する前記試料もしくは前記液状物の応答、または前記試料に対する前記薬剤の浸透性もしくは透過性を測定するステップと、を含む、薬剤評価方法。
［１］試料を支持し、流路構造が形成された基部と、使用時に前記流路構造と連通する蓄積空間を有する蓄積部と、を備え、前記試料からの液状物が、前記流路構造を通って前記蓄積空間に蓄積される、デバイス。
［２］前記流路構造の一端が前記試料によって塞がれ、前記流路構造の他端が前記蓄積空間と連通している、［１］に記載のデバイス。
［３］前記流路構造は、前記基部に形成された溝を含む、［１］または［２］に記載のデバイス。
［４］前記溝の幅は、前記試料が通過できない大きさである、［３］に記載のデバイス。
［５］前記溝の幅は、０．１μｍ以上１０μｍ以下である、［３］または［４］に記載のデバイス。
［６］前記流路構造は、前記基部上に放射状に配置された複数の溝を含み、前記蓄積部は、前記基部の中央部に設けられる、［１］～［５］のいずれかに記載のデバイス。
［７］前記蓄積部は、上部開口および下部開口を有し、前記液状物は、前記下部開口から蓄積空間に流入する、［１］～［６］のいずれかに記載のデバイス。
［８］前記流路構造は、使用時に前記液状物を含む液体で満たされる、［１］～［７］のいずれかに記載のデバイス。
［９］前記試料は、細胞および／または組織である、［１］～［８］のいずれかに記載のデバイス。
［１０］前記試料は、肝細胞を含み、前記液状物は、胆汁酸を含む、［９］に記載のデバイス。
［１１］前記基部は、前記細胞および／または組織が培養される培養空間を少なくとも部分的に画定する、［９］または［１０］に記載のデバイス。
［１２］前記試料は、前記培養空間と前記蓄積空間との連通を遮断するように配置される、［１１］に記載のデバイス。
［１３］［１］～［１２］のいずれかに記載のデバイスと、前記デバイスを収容するウェルを有するウェルデバイスと、を備える、システム。
［１４］流路構造が形成された基部と、使用時に前記流路構造と連通する蓄積空間を有する蓄積部と、を備えるデバイスを用意するステップと、前記基部上に試料を配置するステップと、前記試料からの液状物を、前記流路構造を通して前記蓄積空間に蓄積するステップと、を含む、方法。
［１５］［１］～［１２］のいずれかに記載のデバイスを用いた薬剤評価方法であって、前記基部に支持された前記試料または前記蓄積された液状物に薬剤を接触させるステップと、前記薬剤の接触による刺激に対する前記試料もしくは前記液状物の応答、または前記試料に対する前記薬剤の浸透性もしくは透過性を測定するステップと、を含む、薬剤評価方法。
【発明の効果】
【0007】
本発明によれば、ターゲット物質に対する処理効率を向上させることができるデバイス、システム、方法、および薬剤評価方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【0008】
【図1】第１実施形態に係る回収システム１の斜視図である。
【図2】第１実施形態に係る回収デバイス１００の斜視図である。
【図3】第１実施形態に係る回収デバイス１００の上面図である。
【図5】第１実施形態に係る回収デバイス１００の使用方法を示す断面図である。
【図6】第２実施形態に係る回収デバイス２００の断面図である。
【図7】第３実施形態に係る回収デバイス３００の斜視図である。
【図9】第４実施形態に係る回収デバイス４００の斜視図である。
【図11】第４実施形態に係る回収デバイス４００の使用方法の変形を示す断面図である。
【図12】第５実施形態に係る回収デバイス５００の斜視図である。
【図14】流路構造の変形例を示す断面図である。
【図15】流路構造の変形例を示す断面図である。
【図16】実験例１で撮影された試料面の明視野写真（左）、細胞レイヤの蛍光写真（中央）、および溝レイヤの蛍光写真（右）である。
【図17】実験例２で撮影された試料面の明視野写真（左）、細胞レイヤの蛍光写真（中央）、および溝レイヤの蛍光写真（右）である。
【図18】実験例５で撮影された回収デバイスの蛍光写真である。
【図19】実験例６で撮影された試料面上の肝細胞の明視野写真である。
【図20】実験例６で撮影された、基部の外側部分における細胞レイヤの明視野写真（上）および溝レイヤの蛍光写真（下）である。
【図21】実験例６で撮影された、基部の外側部分と蓄積部の周壁との境界付近における細胞レイヤの明視野写真（上）および溝レイヤの蛍光写真（下）である。
【図22】実験例６において培養空間から回収した上澄み液の蛍光強度を示す。
【図23】実験例６において蓄積空間から回収した上澄み液の蛍光強度を示す。
【図24】実験例７における、従来技術および作製した回収デバイスによって回収された上澄み液のＣＬＦ濃度を示す。
【図25】実験例７における、従来技術および作製した回収デバイスによって回収された上澄み液のＣＬＦ量を示す。
【発明を実施するための形態】
【0009】
以下、実施形態のデバイス、システム、方法、および薬剤評価方法を、図面を参照して説明する。なお、図面は模式的または概念的なものであり、各部分の厚みと幅との関係、部分間の大きさの比率などは、必ずしも現実のものと同一とは限らない。また、同じ部分を表す場合であっても、図面により互いの寸法や比率が異なって表される場合もある。また、図面に示すＸＹＺ座標は、説明の便宜上定義されたものであり、発明を限定するものではない。
【0010】
＜概要＞
一実施形態によれば、試料を支持し、流路構造が形成された基部と、使用時に流路構造と連通する蓄積空間を有する蓄積部と、を備え、試料からの液状物が、流路構造を通って蓄積空間に蓄積される、デバイスが提供される。
別の実施形態によれば、流路構造が形成された基部と、使用時に流路構造と連通する蓄積空間を有する蓄積部と、を備えるデバイスを用意するステップと、基部上に試料を配置するステップと、試料からの液状物を、流路構造を通して蓄積空間に蓄積するステップと、を含む方法が提供される。
一実施形態によれば、試料を支持し、流路構造が形成された基部と、使用時に流路構造と連通する蓄積空間を有する蓄積部と、を備え、試料からの液状物が、流路構造を通って蓄積空間に蓄積される、デバイスが提供される。
別の実施形態によれば、流路構造が形成された基部と、使用時に流路構造と連通する蓄積空間を有する蓄積部と、を備えるデバイスを用意するステップと、基部上に試料を配置するステップと、試料からの液状物を、流路構造を通して蓄積空間に蓄積するステップと、を含む方法が提供される。
【0011】
本明細書において、「流路構造」とは、流体が通過可能である構造を意味する。流路構造の例として、孔、開口、溝、メッシュ、管などが挙げられるが、これらに限定されない。
【0012】
【0013】
［回収システム１の全体構成］
図１は、第１実施形態に係る回収システム１の斜視図である。
図１に示すように、回収システム１は、ウェルアレイ１０（「ウェルデバイス」の一例）および１以上の回収デバイス１００を備える。
図１は、第１実施形態に係る回収システム１の斜視図である。
図１に示すように、回収システム１は、ウェルアレイ１０（「ウェルデバイス」の一例）および１以上の回収デバイス１００を備える。
【0014】
ウェルアレイ１０は、本体１２および本体１２上にマトリックス状に配列された多数のウェル１４を有する。ウェル１４は、本体１２の上面に、ウェル底面１６およびウェル側面１８を有する凹部として形成される。図１に示す例では、ウェル１４は、本体１２を貫通せずウェル底面１６を有しているが、ウェル１４が本体１２を貫通してもよい。図１に示すように、各ウェル１４は、回収デバイス１００を収容可能である。なお、ウェル１４の形状、大きさ、配置などは上記例に限定されない。なお、ウェル底面１６が酸素透過膜で形成されていると、後述のように試料として肝細胞を使用する場合に、肝細胞の機能や単層形成能の点で好ましいが、ウェルアレイ１０（ウェル底面１６を含む）の材質は特に限定されない。
【0015】
（回収デバイス１００の構成）
図２は、第１実施形態に係る回収デバイス１００の斜視図である。
図３は、第１実施形態に係る回収デバイス１００の上面図である。
図４は、第１実施形態に係る回収デバイス１００を図３の線ＩＶ－ＩＶで切断した断面図である。
図２は、第１実施形態に係る回収デバイス１００の斜視図である。
図３は、第１実施形態に係る回収デバイス１００の上面図である。
図４は、第１実施形態に係る回収デバイス１００を図３の線ＩＶ－ＩＶで切断した断面図である。
【0016】
図２に示すように、回収デバイス１００は、基部１１０および蓄積部１２０を有する。基部１１０は、上面１１０Ａおよび下面１１０Ｂを有する円盤状の部材である。蓄積部１２０は、周壁１２２を有する中空の管状部材である。蓄積部１２０は、上部開口および下部開口を有する。蓄積部１２０は、基部１１０の中央部において、上面１１０Ａに設けられている。基部１１０および蓄積部１２０は、別々に成形された後で任意の方法で接合されてもよく、一体成形されてもよい。
【0017】
図２および図３に示すように、基部１１０は、外側部分１１０Ｃおよび内側部分１１０Ｄを有する。外側部分１１０Ｃは、基部１１０のうち、周縁から蓄積部１２０の内周面に対応する位置までの部分である。内側部分１１０Ｄは、基部１１０のうち、蓄積部１２０の内部に対応する部分である。図２に示すように、内側部分１１０Ｄでは、基部１１０の上面１１０Ａに円形の凹部が形成されている。凹部の直径は、蓄積部１２０の内部空間の直径と略等しい。
【0018】
図２および図３に示すように、外側部分１１０Ｃでは、基部１１０の上面１１０Ａに、放射状に配置された複数の溝１１２（「流路構造」の一例）が形成されている。複数の溝１１２の各々は、その一端を蓄積部１２０に向けるように配置される。具体的には、溝１１２は、基部１１０の周縁から基部１１０の中心部に向かって直線状に延在する。図３および図４に示すように、溝１１２の一端は、流出口１１４を形成し、内側部分１１０Ｄに形成された凹部と連通している。すなわち、図２に示すように、複数の溝１１２からの流出口１１４が、内側部分１１０Ｄの凹部を囲むように配置される。溝１１２の他端は、図２および図３に示す例では基部１１０の周縁の直前で終端しているが、完全に周縁まで延在してもよい。
【0019】
図４に示すように、溝１１２は、蓄積部１２０の下端１２４の下を通過して、基部１１０の内側部分１１０Ｄの凹部と連通する。このため、基部１１０の外側部分１１０Ｃの上の空間と、内側部分１１０Ｄの上の空間（すなわち、蓄積部１２０の内部空間）とは、溝１１２を介して連通している。このようにして、溝１１２は、蓄積部１２０の外部空間と内部空間との間の流路構造として機能する。
【0020】
図１に示すように、回収デバイス１００は、一般的なウェルアレイ１０に挿入できるように構成される。これにより、既存のウェルアレイ１０を使用することができるので、回収デバイス１００は、高い汎用性を有する。
【0021】
［回収システム１の使用方法］
図５は、第１実施形態に係る回収デバイス１００の使用方法を示す断面図である。
図５に示すように、使用時には、回収デバイス１００がウェルアレイ１０のウェル１４内に挿入される。基部１１０の下面１１０Ｂは、ウェル底面１６に支持される。
図５は、第１実施形態に係る回収デバイス１００の使用方法を示す断面図である。
図５に示すように、使用時には、回収デバイス１００がウェルアレイ１０のウェル１４内に挿入される。基部１１０の下面１１０Ｂは、ウェル底面１６に支持される。
【0022】
図５に示すように、基部１１０の外側部分１１０Ｃにわたって上面１１０Ａ上に細胞Ｃまたは組織（「試料」の一例）を播種することにより、外側部分１１０Ｃにおける基部１１０の上面１１０Ａの全体が、細胞Ｃによって覆われる。その結果、溝１１２によって形成される流路構造の一端は、細胞Ｃによって塞がれる。流路構造の他端は、内側部分１１０Ｄの凹部および蓄積部１２０の内部空間と連通している。このようにして、溝１１２を介して連通していた蓄積部１２０の外部空間および内部空間は、上面１１０Ａを覆う細胞Ｃによって空間的に分離される。なお、上面１１０Ａには、細胞を上面１１０Ａに接着させるための接着剤が塗布されてよい。接着剤は、生体適合性を有するものが好ましくは、たとえばコラーゲンなどが挙げられる。
【0023】
細胞Ｃは、トランスポーターの作用などにより、液状物を放出することができる。たとえば、細胞Ｃは、極性輸送を行う機能を有する。細胞Ｃに溝１１２が隣接しているので、細胞Ｃからの液状物が、溝１１２の内部空間に放出され得る。なお、試料から液状物が放出される原理は上記例に限定されず、本発明は、任意の種類の試料から任意の原理で放出される液状物に対して適用可能である。
【0024】
溝１１２は、細胞Ｃが通過できない大きさを有する。ここで、細胞Ｃの大きさにはばらつきがあるので、本明細書において「通過できない」とは、添加した試料の少なくとも８０体積％が通過しないことを意味する。たとえば、溝１１２の幅は、０．１μｍ以上１０μｍ以下、０．３μｍ以上８μｍ以下、０．５μｍ以上６μｍ以下、または１μｍ以上５μｍ以下である。溝１１２の幅が０．１μｍ未満である場合には、細胞Ｃからの液状物の輸送に必要な圧力が増加し、圧力損失が大きくなる可能性がある。溝１１２の幅が１０μｍを超える場合には、細胞Ｃが溝１１２の内部に入ってしまう可能性がある。たとえば、肝細胞は１０μｍ～２０μｍ程度であるので、１０μｍを超える幅を有する溝１１２の内部に入ってしまう可能性がある。
【0025】
溝１１２の深さは、特に限定されないが、たとえば、０．１μｍ以上２０μｍ以下、０．３μｍ以上１５μｍ以下、０．５μｍ以上１０μｍ以下、または１μｍ以上５μｍ以下である。隣接する溝１１２の間の間隔（ピッチ）は、特に限定されないが、たとえば、０．１μｍ以上１００μｍ以下、０．５μｍ以上７０μｍ以下、１μｍ以上５０μｍ以下、または３μｍ以上３０μｍ以下である。
【0026】
基部１１０の上面１１０Ａに細胞Ｃを配置する場合には、図５に示すように、上面１１０Ａを覆う細胞Ｃ、蓄積部１２０の周壁１２２、およびウェル底面１６が、ドーナツ型の培養空間Ｓ１を画定する。培養空間Ｓ１は、培養液（培地）ＣＬで満たされる。培養空間Ｓ１では、細胞Ｃの培養を行うことができる。一方、上部が細胞Ｃによって覆われた複数の溝１１２は、回収空間Ｓ２を画定する。基部１１０の内側部分１１０Ｄに形成された凹部および蓄積部１２０の周壁１２２は、蓄積空間Ｓ３を画定する。回収空間Ｓ２および蓄積空間Ｓ３は、互いに連通した状態で、回収液ＲＬで満たされる。回収液ＲＬは、たとえば、培養液ＣＬと同じ種類の培地である。たとえば、蓄積部１２０の上部開口から回収液ＲＬを添加することにより、溝１１２の内部空間（すなわち、回収空間Ｓ２）および蓄積部１２０の内部空間（すなわち、蓄積空間Ｓ３）を回収液ＲＬで満たすことができる。このように、使用時に溝１１２の内部を回収液ＲＬで満たすことにより、細胞Ｃが乾燥するのを防止することができる。
【0027】
細胞Ｃからの液状物が溝１１２の内部へ排出されると、液状物は、回収液ＲＬ中を拡散し、溝１１２を通過して、蓄積部１２０の下部開口から蓄積空間Ｓ３へ流入する。このようにして、細胞Ｃからの液状物が、回収空間Ｓ２を通過して蓄積空間Ｓ３に輸送される。その結果、液状物を含む回収液ＲＬが蓄積空間Ｓ３に蓄積される。これにより、ユーザは、蓄積部１２０の上部開口から液状物を含む回収液ＲＬを回収することができる。このように、蓄積部１２０が上部開口を有すると、回収液ＲＬの回収が容易になる。
【0028】
細胞Ｃは、溝１１２の上部を覆うことによって、培養空間Ｓ１と回収空間Ｓ２および蓄積空間Ｓ３とが連通しないように、培養空間Ｓ１と回収空間Ｓ２および蓄積空間Ｓ３とを仕切る。すなわち、細胞Ｃは、培養空間Ｓ１と回収空間Ｓ２および蓄積空間Ｓ３との連通を遮断するように配置される。これにより、細胞Ｃから溝１１２に放出された液状物が移動できる範囲が限定される。すなわち、細胞Ｃからの液状物は、培養空間Ｓ１に移動できないので、回収空間Ｓ２を通って蓄積空間Ｓ３に輸送されることになる。
【0029】
なお、図５に示すように、培養空間Ｓ１における培養液ＣＬの液面高さと、蓄積空間Ｓ３における回収液ＲＬの液面高さとは異なってよい。理論によって本発明を拘束するものではないが、培養空間Ｓ１における液面高さよりも蓄積空間Ｓ３における液面高さが小さい場合には、水圧によって細胞Ｃからの液状物の放出が促進される可能性がある。
【0030】
たとえば、細胞Ｃは、肝細胞を含み、好ましくは肝細胞である。この場合、液状物は、胆汁酸を含み、好ましくは胆汁である。肝細胞は、肝トランスポーターの作用によって胆汁を排泄する。図５に示す細胞Ｃが肝細胞である場合、肝細胞から排泄された胆汁は、溝１１２を通過して蓄積空間Ｓ３に輸送される。ユーザは、肝細胞から排泄された胆汁を蓄積空間Ｓ３から回収することができる。この場合、溝の幅が毛細胆管程度（数μｍ）であれば、生態環境を良好に再現することができる。
【0031】
肝臓は、生体代謝反応の中心を担う臓器である。肝臓で生成した肝代謝化合物は、血液中または胆汁中に排泄される。このような肝代謝化合物の排泄経路を理解することは、医薬品開発において極めて重要である。しかしながら、従来技術において、肝細胞から胆汁を回収する方法は限定的であった。たとえば、肝細胞を細胞外マトリックスでサンドイッチするサンドイッチ培養法を使用する手法では、胆汁中の代謝化合物を回収するためには、緩衝液中の二価イオンの有無によって肝細胞間の結合を弛緩させて胆汁成分を回収する方法か（Ｂ－ＣＬＥＡＲ法）、肝細胞から胆汁成分を物理的に吸引する方法が知られている。しかしながら、肝細胞間の結合を弛緩させる方法は、二価イオンの有無における条件間の差分をとるといった間接的な手法であり、また二価イオンが存在しないことで活性が下がるトランスポーターも存在し、必ずしも体内動態を反映しているとは言い難く、更には肝細胞の破壊を伴う。肝細胞から胆汁成分を物理的に吸引する方法も、肝細胞の破壊を伴い、断続的かつ煩雑な操作が必要となる。
【0032】
これに対し、回収デバイス１００を使用して肝細胞から胆汁を回収する場合、肝細胞は、基部１１０の上面１１０Ａに非破壊状態で残存する。肝細胞から排泄された胆汁成分は、連続的に蓄積空間Ｓ３に蓄積される。このような胆汁の回収および蓄積は、ほぼ自動的に進行するので、煩雑な操作を必要としない。さらに、従来技術における肝細胞間の結合を弛緩させる方法は、細胞溶解のための液体を比較的大量に使用するので、胆汁の回収液の濃度が比較的小さくなる。これに対し、上記の回収デバイス１００を使用する場合には、最初に加える回収液ＲＬの量は少量で十分であるので、十分な量の胆汁を含む回収液ＲＬを得ることができる。このように、回収デバイス１００は、細胞Ｃからの液状物を効率的に回収することができる。
【0033】
［薬剤評価方法］
一実施形態によれば、上記のデバイスを用いた薬剤評価方法であって、基部に支持された試料または蓄積された液状物に薬剤を接触させるステップと、薬剤の接触による刺激に対する試料もしくは液状物の応答、または試料に対する薬剤の浸透性もしくは透過性を測定するステップと、を含む、薬剤評価方法が提供される。
一実施形態によれば、上記のデバイスを用いた薬剤評価方法であって、基部に支持された試料または蓄積された液状物に薬剤を接触させるステップと、薬剤の接触による刺激に対する試料もしくは液状物の応答、または試料に対する薬剤の浸透性もしくは透過性を測定するステップと、を含む、薬剤評価方法が提供される。
【0034】
本明細書における「薬剤」は、医薬品などの薬物のほか、化粧品や医薬部外品なども含む。たとえば、薬剤を細胞Ｃまたは基部１１０の上面１１０Ａに塗布したり、培養空間Ｓ１、回収空間Ｓ２、または蓄積空間Ｓ３に薬剤を導入したりすることにより、薬剤を細胞Ｃに接触させることができる。また、回収空間Ｓ２または蓄積空間Ｓ３に薬剤を導入することにより、蓄積された液状物に薬剤を接触させることができる。薬剤を添加した後の細胞Ｃまたは細胞Ｃからの液状物の変化、薬剤の細胞Ｃへの拡散や透過の様子、薬剤が細胞Ｃを通過して培養空間Ｓ１から回収空間Ｓ２および蓄積空間Ｓ３へ（または、回収空間Ｓ２および蓄積空間Ｓ３から培養空間Ｓ１へ）拡散する様子などを既知の任意の手法で評価することにより、薬剤の接触による刺激に対する細胞Ｃもしくは液状物の応答、または細胞Ｃに対する薬剤の浸透性もしくは透過性を測定することができる。
【0035】
このような薬剤評価方法によれば、細胞Ｃが液状物を放出している環境を再現した状態で、各種薬剤の評価を行うことができる。また、細胞Ｃから放出された液状物に対して、各種薬剤の評価を行うこともできる。
【0036】
＜第２実施形態＞
図６を参照して、第２実施形態に係る回収デバイス２００について説明する。第２実施形態は、ウェルアレイ１０を使用しなくても回収デバイス２００だけで培養空間Ｓ１が形成される点で第１実施形態と相違する。以下では、主に上記実施形態との相違点について説明し、上記実施形態と共通する点についての説明は繰り返さない。
図６は、第２実施形態に係る回収デバイス２００の断面図である。
図６を参照して、第２実施形態に係る回収デバイス２００について説明する。第２実施形態は、ウェルアレイ１０を使用しなくても回収デバイス２００だけで培養空間Ｓ１が形成される点で第１実施形態と相違する。以下では、主に上記実施形態との相違点について説明し、上記実施形態と共通する点についての説明は繰り返さない。
図６は、第２実施形態に係る回収デバイス２００の断面図である。
【0037】
［回収デバイス２００の構成］
図６に示すように、回収デバイス２００は、基部２１０および蓄積部２２０を有する。基部２１０は、底壁２１２および側壁２１８を有する。底壁２１２は、上面２１２Ａおよび下面２１２Ｂを有し、上面２１２Ａには複数の溝２１４が形成される。溝２１４は、蓄積部２２０の内部空間（蓄積空間Ｓ３）と連通する流出口２１６を形成する。側壁２１８は、第１実施形態におけるウェル１４のウェル側面１８の役割を果たす。したがって、底壁２１２の上面２１２Ａを覆うように細胞Ｃが配置された場合、上面２１２Ａを覆う細胞Ｃと、基部２１０の側壁２１８と、蓄積部２２０の周壁２２２とが、培養空間Ｓ１を画定する。溝２１４は、蓄積空間Ｓ３と連通する回収空間Ｓ２を画定する。細胞Ｃからの液状物が溝２１４の内部に放出されると、液状物は、回収空間Ｓ２から周壁２２２の下端２２４の下を通って蓄積空間Ｓ３に輸送される。ユーザは、液状物を含む回収液ＲＬを蓄積空間Ｓ３から回収することができる。
図６に示すように、回収デバイス２００は、基部２１０および蓄積部２２０を有する。基部２１０は、底壁２１２および側壁２１８を有する。底壁２１２は、上面２１２Ａおよび下面２１２Ｂを有し、上面２１２Ａには複数の溝２１４が形成される。溝２１４は、蓄積部２２０の内部空間（蓄積空間Ｓ３）と連通する流出口２１６を形成する。側壁２１８は、第１実施形態におけるウェル１４のウェル側面１８の役割を果たす。したがって、底壁２１２の上面２１２Ａを覆うように細胞Ｃが配置された場合、上面２１２Ａを覆う細胞Ｃと、基部２１０の側壁２１８と、蓄積部２２０の周壁２２２とが、培養空間Ｓ１を画定する。溝２１４は、蓄積空間Ｓ３と連通する回収空間Ｓ２を画定する。細胞Ｃからの液状物が溝２１４の内部に放出されると、液状物は、回収空間Ｓ２から周壁２２２の下端２２４の下を通って蓄積空間Ｓ３に輸送される。ユーザは、液状物を含む回収液ＲＬを蓄積空間Ｓ３から回収することができる。
【0038】
以上のような回収デバイス２００によれば、ウェルアレイ１０を使用せずとも、回収デバイス２００単独で細胞Ｃからの液状物を回収することができる。
【0039】
＜第３実施形態＞
図７および図８を参照して、第３実施形態に係る回収デバイス３００について説明する。以下では、主に上記実施形態との相違点について説明し、上記実施形態と共通する点についての説明は繰り返さない。
図７は、第３実施形態に係る回収デバイス３００の斜視図である。
図８は、第３実施形態に係る回収デバイス３００を図７の線ＶＩＩＩ－ＶＩＩＩで切断した断面図である。
図７および図８を参照して、第３実施形態に係る回収デバイス３００について説明する。以下では、主に上記実施形態との相違点について説明し、上記実施形態と共通する点についての説明は繰り返さない。
図７は、第３実施形態に係る回収デバイス３００の斜視図である。
図８は、第３実施形態に係る回収デバイス３００を図７の線ＶＩＩＩ－ＶＩＩＩで切断した断面図である。
【0040】
【0041】
基部３１０は、底壁３１２、側壁３１４、仕切り部３１６、および流出口３１９を有する。側壁３１４は、底壁３１２の周縁部から上方に延在する。仕切り部３１６は、底壁３１２から高さ方向（Ｚ方向）に離間した位置に設けられる。仕切り部３１６は、側壁３１４と一体に成形されてもよく、側壁３１４に結合されてもよく、側壁３１４に設けられた支持部材（図示せず）によって支持されてもよい。仕切り部３１６の上方では、側壁３１４および仕切り部３１６が培養空間Ｓ１を画定する。底壁３１２と仕切り部３１６との間には、回収空間Ｓ２が形成される。流出口３１９は、回収空間Ｓ２と連通して設けられる。
【0042】
図７に示すように、仕切り部３１６は、複数の溝３１８が形成された平面状の部材である。たとえば、仕切り部３１６は、板状部材、膜、フィルムなどであってよい。溝３１８は、仕切り部３１６を高さ方向に貫通するように形成される。溝３１８の数、大きさ、形状、および配置は、図示される例に限定されない。あるいは、溝３１８の代わりに、仕切り部３１６を高さ方向に貫通する多数の孔など、試料を通さず試料からの液状物のみを通過させる任意の流路構造が採用されてよい。
【0043】
図７および図８に示すように、蓄積部３２０は、底壁および側壁を有する容器である。底壁および側壁によって蓄積空間Ｓ３が形成される。蓄積部３２０は、流入口３２２を有する。図８に示すように、流出口３１９と流入口３２２とが接続されることにより、回収空間Ｓ２と蓄積空間Ｓ３とが連通する。
【0044】
［回収デバイス３００の使用方法］
図８に示すように、細胞Ｃが、仕切り部３１６の上面を覆うように播種される。上記の実施形態と同様に、培養空間Ｓ１は、細胞Ｃを培養するための培養液ＣＬで満たされる。回収空間Ｓ２および蓄積空間Ｓ３は、回収液ＲＬで満たされる。細胞Ｃからの液状物は、溝３１８を通過して回収空間Ｓ２に放出され、流出口３１９および流入口３２２を通過して蓄積空間Ｓ３に拡散される。ユーザは、蓄積空間Ｓ３から、液状部を含む回収液ＲＬを回収することができる。
図８に示すように、細胞Ｃが、仕切り部３１６の上面を覆うように播種される。上記の実施形態と同様に、培養空間Ｓ１は、細胞Ｃを培養するための培養液ＣＬで満たされる。回収空間Ｓ２および蓄積空間Ｓ３は、回収液ＲＬで満たされる。細胞Ｃからの液状物は、溝３１８を通過して回収空間Ｓ２に放出され、流出口３１９および流入口３２２を通過して蓄積空間Ｓ３に拡散される。ユーザは、蓄積空間Ｓ３から、液状部を含む回収液ＲＬを回収することができる。
【0045】
以上のような回収デバイス３００によれば、基部３１０と蓄積部３２０とを互いに取り外し可能に連結できるので、回収デバイス３００の取り扱い性が向上し得る。また、試料に接触する仕切り部３１６を基部３１０の本体部分から独立した部材として設ければ、回収デバイス３００の取り扱い性がさらに向上し得る。
【0046】
＜第４実施形態＞
図９～図１１を参照して、第４実施形態に係る回収デバイス４００について説明する。以下では、主に上記実施形態との相違点について説明し、上記実施形態と共通する点についての説明は繰り返さない。
図９は、第４実施形態に係る回収デバイス４００の斜視図である。
図１０は、第４実施形態に係る回収デバイス４００を図９の線Ｘ－Ｘで切断した断面図である。
図９～図１１を参照して、第４実施形態に係る回収デバイス４００について説明する。以下では、主に上記実施形態との相違点について説明し、上記実施形態と共通する点についての説明は繰り返さない。
図９は、第４実施形態に係る回収デバイス４００の斜視図である。
図１０は、第４実施形態に係る回収デバイス４００を図９の線Ｘ－Ｘで切断した断面図である。
【0047】
【0048】
基部４１０は、底壁４１２、側壁４１４、およびフランジ４１６を有する。底壁４１２は、円筒状の側壁４１４の下端に取り付けられている。底壁４１２は、側壁４１４と一体に設けられてもよく、側壁４１４に取り付けられた板状部材、膜、フィルムなどとして設けられてもよい。フランジ４１６は、側壁４１４の上端に設けられ、側壁４１４から周方向外側に突出している。底壁４１２には、放射状に配置された複数の溝４１８が形成されている。溝４１８は、底壁４１２を高さ方向（Ｚ方向）に貫通するように形成される。溝４１８の数、大きさ、形状、および配置は、図示される例に限定されない。あるいは、溝４１８の代わりに、底壁４１２を高さ方向に貫通する多数の孔など、試料を通さず試料からの液状物のみを通過させる任意の流路構造が採用されてよい。
【0049】
蓄積部４２０は、底壁４２２、側壁４２４、および支持部４２６を有する。側壁４２４は、底壁４２２の周縁部から上方に延在する。支持部４２６は、円筒状の側壁４２４の上端に設けられ、側壁４２４から周方向内側に突出している。支持部４２６の内径は、基部４１０の側壁４１４の外径と略一致することが好ましい。
【0050】
図１０に示すように、基部４１０は、蓄積部４２０に上から挿入されて蓄積部４２０に装着される。支持部４２６は、フランジ４１６を下から支持する。支持部４２６は、蓄積部４２０に対する基部４１０の水平方向（ＸＹ面内方向）の位置合わせをガイドすることができる。底壁４１２の上で側壁４１４に囲まれた空間として、培養空間Ｓ１が形成される。底壁４１２の下面および蓄積部４２０の内面によって、回収空間Ｓ２および蓄積空間Ｓ３が形成される。本実施形態では、回収空間Ｓ２および蓄積空間Ｓ３は一致する。なお、基部４１０が蓄積部４２０に装着された状態で空間Ｓ２、Ｓ３に回収液ＲＬを添加したり、空間Ｓ２、Ｓ３内の回収液ＲＬを回収したりするために、空間Ｓ２、Ｓ３と外部空間とを連通させる開口部が蓄積部４２０に（必要であれば基部４１０にも）形成されてもよい。
【0051】
［回収デバイス４００の使用方法］
図１０に示すように、細胞Ｃが、基部４１０の底壁４１２の上面を覆うように播種される。上記の実施形態と同様に、培養空間Ｓ１は、細胞Ｃを培養するための培養液ＣＬで満たされる。回収空間Ｓ２および蓄積空間Ｓ３は、回収液ＲＬで満たされる。細胞Ｃからの液状物は、溝４１８を通過して空間Ｓ２、Ｓ３に放出される。ユーザは、空間Ｓ２、Ｓ３から、液状部を含む回収液ＲＬを回収することができる。
図１０に示すように、細胞Ｃが、基部４１０の底壁４１２の上面を覆うように播種される。上記の実施形態と同様に、培養空間Ｓ１は、細胞Ｃを培養するための培養液ＣＬで満たされる。回収空間Ｓ２および蓄積空間Ｓ３は、回収液ＲＬで満たされる。細胞Ｃからの液状物は、溝４１８を通過して空間Ｓ２、Ｓ３に放出される。ユーザは、空間Ｓ２、Ｓ３から、液状部を含む回収液ＲＬを回収することができる。
【0052】
【0053】
図１１に示す例では、細胞Ｃが、基部４１０の底壁４１２の下面を覆うように播種される。底壁４１２の下面に細胞Ｃを播種するためには、たとえば、次のような方法が使用可能である。まず、基部４１０を上下引っくり返して、底壁４１２の下面に細胞Ｃを播種する。蓄積部４２０に培養液ＣＬを投入した後、底壁４１２の下面に細胞Ｃが播種された状態の基部４１０を再び上下引っくり返して、蓄積部４２０に装着する。次いで、基部４１０に回収液ＲＬを投入する。
【0054】
図１１に示す例では、上記の例とは逆に、底壁４１２の上で側壁４１４に囲まれた空間として、回収空間Ｓ２および蓄積空間Ｓ３が形成される。底壁４１２の下面および蓄積部４２０の内面によって、培養空間Ｓ１が形成される。培養空間Ｓ１は、細胞Ｃを培養するための培養液ＣＬで満たされる。回収空間Ｓ２および蓄積空間Ｓ３は、回収液ＲＬで満たされる。細胞Ｃからの液状物は、溝４１８を通過して空間Ｓ２、Ｓ３に放出される。ユーザは、空間Ｓ２、Ｓ３から、液状部を含む回収液ＲＬを回収することができる。
【0055】
以上のような回収デバイス４００によれば、基部４１０と蓄積部４２０とを互いに取り外し可能に連結できるので、回収デバイス４００の取り扱い性が向上し得る。また、試料に接触する底壁４１２を基部４１０の側壁４１４から独立した部材として設ければ、回収デバイス４００の取り扱い性がさらに向上し得る。さらに、具体的な用途に応じて、培養空間Ｓ１と回収空間Ｓ２および蓄積空間Ｓ３との配置関係を逆転させることができる。
【0056】
＜第５実施形態＞
図１２および図１３を参照して、第５実施形態に係る回収デバイス５００について説明する。以下では、主に上記実施形態との相違点について説明し、上記実施形態と共通する点についての説明は繰り返さない。
図１２は、第５実施形態に係る回収デバイス５００の斜視図である。
図１３は、第５実施形態に係る回収デバイス５００を図１２の線ＸＩＩＩ－ＸＩＩＩで切断した断面図である。
図１２および図１３を参照して、第５実施形態に係る回収デバイス５００について説明する。以下では、主に上記実施形態との相違点について説明し、上記実施形態と共通する点についての説明は繰り返さない。
図１２は、第５実施形態に係る回収デバイス５００の斜視図である。
図１３は、第５実施形態に係る回収デバイス５００を図１２の線ＸＩＩＩ－ＸＩＩＩで切断した断面図である。
【0057】
［回収デバイス５００の構成］
図１２および図１３に示すように、回収デバイス５００は、基部５１０および蓄積部５２０を有する。基部５１０は、蓄積部５２０と一体に形成されてもよく、別体として形成されて互いに接合されてもよい。
図１２および図１３に示すように、回収デバイス５００は、基部５１０および蓄積部５２０を有する。基部５１０は、蓄積部５２０と一体に形成されてもよく、別体として形成されて互いに接合されてもよい。
【0058】
基部５１０は、底壁５１２および側壁５１４を有する。蓄積部５２０は、底壁５２２、側壁５２４、および動力源５２６を有する。基部５１０の底壁５１２は、円筒状の側壁５１４の下端に設けられるとともに、蓄積部５２０の底壁５２２上に配置されている。底壁５１２は、側壁５１４および／または底壁５２２と一体に設けられてもよく、側壁５１４および／または底壁５２２に取り付けられた板状部材、膜、フィルムなどとして設けられてもよい。底壁５１２には、放射状に配置された複数の溝５１６が形成されている。溝５１６の数、大きさ、形状、および配置は、図示される例に限定されない。底壁５１２は、溝５１６を画定するように、底壁５２２上の突出部として設けられてもよい。蓄積部５２０の側壁５２４は、底壁５２２の周縁部から上方に延在する。動力源５２６は、側壁５２４の底面に結合されている。動力源５２６は、回転運動をすることによって回収デバイス５００全体を回転させることができる。たとえば、動力源５２６は、モータである。なお、動力源５２６は、基部５１０のみに結合され、蓄積部５２０には結合されなくてもよい。
【0059】
図１３に示すように、基部５１０の底壁５１２の上で側壁５１４に囲まれた空間として、培養空間Ｓ１が形成される。側壁５１４の外周面および蓄積部５２０の側壁５２４の内周面によって、蓄積空間Ｓ３が形成される。培養空間Ｓ１および蓄積空間Ｓ３は、溝５１６を介して連通している。溝５１６は、回収空間Ｓ２を形成する。
【0060】
［回収デバイス５００の使用方法］
図１３に示すように、細胞Ｃが、基部５１０の底壁５１２の上面を覆うように播種される。これにより、溝５１６の上側開口の全体が細胞Ｃによって覆われる。上記の実施形態と同様に、培養空間Ｓ１は、細胞Ｃを培養するための培養液ＣＬで満たされる。回収空間Ｓ２および蓄積空間Ｓ３は、回収液ＲＬで満たされる。細胞Ｃからの液状物は、溝５１６内に放出され得る。動力源５２６が回転すると、回収デバイス５００全体が回転し、溝５１６内部の液状物が、遠心力によって蓄積空間Ｓ３に輸送される。ユーザは、蓄積空間Ｓ３から、液状部を含む回収液ＲＬを回収することができる。
図１３に示すように、細胞Ｃが、基部５１０の底壁５１２の上面を覆うように播種される。これにより、溝５１６の上側開口の全体が細胞Ｃによって覆われる。上記の実施形態と同様に、培養空間Ｓ１は、細胞Ｃを培養するための培養液ＣＬで満たされる。回収空間Ｓ２および蓄積空間Ｓ３は、回収液ＲＬで満たされる。細胞Ｃからの液状物は、溝５１６内に放出され得る。動力源５２６が回転すると、回収デバイス５００全体が回転し、溝５１６内部の液状物が、遠心力によって蓄積空間Ｓ３に輸送される。ユーザは、蓄積空間Ｓ３から、液状部を含む回収液ＲＬを回収することができる。
【0061】
以上のような回収デバイス５００によれば、基部５１０の中心を基準とする回転によって生じる遠心力により、液状物が回収空間Ｓ２から蓄積空間Ｓ３へ強制的に輸送される。これにより、液状物の回収効率を向上させることができる。
【0062】
＜変形例＞
上記実施形態では、流路構造の一例として溝が形成される例を説明したが、流路構造の構成は上記例に限定されない。たとえば、第３実施形態および第４実施形態のような構成では、複数の孔が流路構造として設けられてもよい。図１４は、流路構造の変形例を示す断面図である。図１４に示す例では、流路構造として、基部の底壁Ｂに複数の孔Ｈが形成されている。孔Ｈの各々は、試料（細胞Ｃ）が通過できない大きさを有する一方、液状物を通過させることができる。その他、流路構造は、試料が通過せず、試料からの液状物が通過できる構成であれば、特に限定されない。
上記実施形態では、流路構造の一例として溝が形成される例を説明したが、流路構造の構成は上記例に限定されない。たとえば、第３実施形態および第４実施形態のような構成では、複数の孔が流路構造として設けられてもよい。図１４は、流路構造の変形例を示す断面図である。図１４に示す例では、流路構造として、基部の底壁Ｂに複数の孔Ｈが形成されている。孔Ｈの各々は、試料（細胞Ｃ）が通過できない大きさを有する一方、液状物を通過させることができる。その他、流路構造は、試料が通過せず、試料からの液状物が通過できる構成であれば、特に限定されない。
【0063】
たとえば、流路構造が培養面に対して垂直な方向にあってもよく、三次元的に配備されたものであってもよい。図１５は、流路構造の変形例を示す断面図である。図１５に示す例では、流路構造として、基部の底壁Ｂの内部に、多数の細孔の集合である複雑な流路ＦＰが形成されている。底壁Ｂが１０μｍ～１ｍｍ程度である場合、流路ＦＰを構成する細孔は、サブミクロンオーダーの内径を有し得る。細胞Ｃからの液状物は、流路ＦＰを通過し、底壁Ｂの細胞Ｃが配置された面とは別の面に形成された出口から放出される。たとえば、サブミクロン流路ＦＰが内部に形成された底壁Ｂは、スポンジのような多孔質担体であってもよい。一例として、このような多孔質担体は、ＰＤＭＳなどの硬化性樹脂によって形成することができる。具体的には、ナノファイバーを硬化前の樹脂中に分散させた後、樹脂を硬化させ、その後ナノファイバーを除去することにより、硬化後の樹脂内部にサブミクロン流路構造を形成することができる。
【0064】
流路構造として溝が設けられる場合において、溝の形状および配置は、上記例に限定されない。たとえば、非直線状の溝が形成されてもよく、溝の幅および深さが変化してもよい。複数の溝が、互いに平行に配置されてもよく、互いに交差してもよい。たとえば、複数の溝が格子状に配置されてもよい。溝に加えて、孔などの別の流路構造が設けられてもよい。
【0065】
上記実施形態では、細胞や組織などの生体試料を対象とする例を説明したが、試料の種類は上記例に限定されない。たとえば、無機材料や人工有機材料などの非生体試料、臓器や生物自体といったより大きな生体試料など、任意の試料を対象としてよい。同様に、液状物の種類も上記例に限定されない。たとえば、上記の回収デバイスは、リンパ、細胞間質液、血液、尿、溶出物、化学反応の生成物、抽出物など、任意の液状物に対して適用可能である。たとえば、回収デバイスは、様々な組織または臓器からリンパを回収する用途で使用可能である。培養空間Ｓ１、蓄積空間Ｓ３、流路構造によって形成される回収空間Ｓ２などの大きさおよび構成は、対象の試料または液状物に応じて、適宜変更されてよい。
【0066】
上記実施形態では、試料からの液状物を回収する例を説明したが、実施形態に係るデバイスの用途は上記例に限定されない。たとえば、上記デバイスは、液状物を回収せずに、液状物の観察または分析のみを行う場合などにも適用可能である。
【実施例0067】
以下、実験例により本発明を説明するが、本発明は以下の実験例に限定されるものではない。
【0068】
＜実験例１：ＣＤＦの溝内蓄積実験＞
機械加工によって作製した鋳型を使用して、溝（溝幅：１．４μｍ、深さ：１μｍ、隣接する溝の間のピッチ：２０μｍ）が形成されたＰＤＭＳ基板を作製した。このＰＤＭＳ基板をウェルアレイに装着し、ＰＤＭＳ基板の上面に細胞接着用のコラーゲンを塗布した（以下、同様にコラーゲンを塗布した面を「試料面」という。）。試料面全体に肝細胞を播種し、その上に培地を投入した。ここで、ＭＲＰ２阻害剤であるベンズブロマロン（以下、単に「阻害剤」ともいう。）を添加していない試料（－）と、阻害剤を添加した試料（＋）とを用意した。次いで、培地中にカルボキシジクロロフルオレセイン二酢酸塩（ＣＤＦＤＡ）を添加した。一般に、ＣＤＦＤＡは、肝細胞によって取り込まれた後、蛍光性物質であるカルボキシジクロロフルオレセイン（ＣＤＦ）としてＭＲＰ２トランスポーター経由で放出される。そこで、ＰＤＭＳ基板の試料面を明視野顕微鏡および蛍光顕微鏡により観察した。蛍光顕微鏡による観察は、（１）溝の高さ位置より上側の肝細胞が位置する高さ位置（以下、「細胞レイヤ」ともいう。）、および（２）溝の高さ位置（以下、「溝レイヤ」ともいう。）の各々を焦点位置に設定して行った。図１６は、試料面の明視野写真（左）、細胞レイヤの蛍光写真（中央）、および溝レイヤの蛍光写真（右）である。図１６の上側は、阻害剤なし（－）の実験結果を示し、図１６の下側は、阻害剤あり（＋）の実験結果を示す。溝レイヤの蛍光写真を参照すると、阻害剤なし（－）では溝の内部に蛍光性物質ＣＤＦが蓄積している一方、阻害内あり（＋）では溝の内部にＣＤＦが蓄積していないことが確認できる。すなわち、阻害剤を添加しなかった場合には、ＣＤＦＤＡが試料面上の肝細胞に取り込まれてＣＤＦが肝細胞から溝の内部に放出されたことが確認された。一方、阻害剤を添加した場合には、ＣＤＦの排泄が阻害され肝細胞内部に蓄積するのみで、肝細胞から溝の内部に放出されなかったことが確認された。
機械加工によって作製した鋳型を使用して、溝（溝幅：１．４μｍ、深さ：１μｍ、隣接する溝の間のピッチ：２０μｍ）が形成されたＰＤＭＳ基板を作製した。このＰＤＭＳ基板をウェルアレイに装着し、ＰＤＭＳ基板の上面に細胞接着用のコラーゲンを塗布した（以下、同様にコラーゲンを塗布した面を「試料面」という。）。試料面全体に肝細胞を播種し、その上に培地を投入した。ここで、ＭＲＰ２阻害剤であるベンズブロマロン（以下、単に「阻害剤」ともいう。）を添加していない試料（－）と、阻害剤を添加した試料（＋）とを用意した。次いで、培地中にカルボキシジクロロフルオレセイン二酢酸塩（ＣＤＦＤＡ）を添加した。一般に、ＣＤＦＤＡは、肝細胞によって取り込まれた後、蛍光性物質であるカルボキシジクロロフルオレセイン（ＣＤＦ）としてＭＲＰ２トランスポーター経由で放出される。そこで、ＰＤＭＳ基板の試料面を明視野顕微鏡および蛍光顕微鏡により観察した。蛍光顕微鏡による観察は、（１）溝の高さ位置より上側の肝細胞が位置する高さ位置（以下、「細胞レイヤ」ともいう。）、および（２）溝の高さ位置（以下、「溝レイヤ」ともいう。）の各々を焦点位置に設定して行った。図１６は、試料面の明視野写真（左）、細胞レイヤの蛍光写真（中央）、および溝レイヤの蛍光写真（右）である。図１６の上側は、阻害剤なし（－）の実験結果を示し、図１６の下側は、阻害剤あり（＋）の実験結果を示す。溝レイヤの蛍光写真を参照すると、阻害剤なし（－）では溝の内部に蛍光性物質ＣＤＦが蓄積している一方、阻害内あり（＋）では溝の内部にＣＤＦが蓄積していないことが確認できる。すなわち、阻害剤を添加しなかった場合には、ＣＤＦＤＡが試料面上の肝細胞に取り込まれてＣＤＦが肝細胞から溝の内部に放出されたことが確認された。一方、阻害剤を添加した場合には、ＣＤＦの排泄が阻害され肝細胞内部に蓄積するのみで、肝細胞から溝の内部に放出されなかったことが確認された。
【0069】
＜実験例２：ＣＬＦの溝内蓄積実験＞
胆汁酸取込・排泄阻害剤としてトログリタゾンを利用した点、及びＣＤＦＤＡに代えて蛍光性胆汁酸コリル－リシル－フルオレセイン（ＣＬＦ）を添加した点を除き、実験例１と同様にして、ＰＤＭＳ基板の溝への蓄積を検証した。図１７は、試料面の明視野写真（左）、細胞レイヤの蛍光写真（中央）、および溝レイヤの蛍光写真（右）である。図１７の上側は、阻害剤なし（－）の結果を示し、図１７の下側は、阻害剤あり（＋）の結果を示す。溝レイヤの蛍光写真を参照すると、阻害剤なし（－）では溝の内部に蛍光性物質ＣＬＦが蓄積している一方、阻害内あり（＋）では溝の内部にＣＬＦが蓄積していないことが確認できる。すなわち、阻害剤を添加しなかった場合には、ＣＬＦが肝細胞から溝の内部に放出されたことが確認された。一方、阻害剤を添加した場合には、ＣＬＦが肝細胞から溝の内部に放出されなかったことが確認された。
胆汁酸取込・排泄阻害剤としてトログリタゾンを利用した点、及びＣＤＦＤＡに代えて蛍光性胆汁酸コリル－リシル－フルオレセイン（ＣＬＦ）を添加した点を除き、実験例１と同様にして、ＰＤＭＳ基板の溝への蓄積を検証した。図１７は、試料面の明視野写真（左）、細胞レイヤの蛍光写真（中央）、および溝レイヤの蛍光写真（右）である。図１７の上側は、阻害剤なし（－）の結果を示し、図１７の下側は、阻害剤あり（＋）の結果を示す。溝レイヤの蛍光写真を参照すると、阻害剤なし（－）では溝の内部に蛍光性物質ＣＬＦが蓄積している一方、阻害内あり（＋）では溝の内部にＣＬＦが蓄積していないことが確認できる。すなわち、阻害剤を添加しなかった場合には、ＣＬＦが肝細胞から溝の内部に放出されたことが確認された。一方、阻害剤を添加した場合には、ＣＬＦが肝細胞から溝の内部に放出されなかったことが確認された。
【0070】
＜実験例３：溝の幅、深さ、およびピッチの検討＞
上記のＰＤＭＳ基板の他に、溝の幅が０．８μｍ、１．５μｍ、３μｍ、および５μｍのＰＤＭＳ基板を作製した。溝は、フォトリソグラフィによってＰＤＭＳ基板上に形成した。溝の幅が０．８μｍおよび１．５μｍのＰＤＭＳ基板では、溝の深さを１μｍとした。溝の幅が３μｍ、５μｍのＰＤＭＳ基板では、溝の深さを５μｍとした。隣接する溝の間のピッチはいずれも３μｍとした。また、隣接する溝の間のピッチを３０μｍとして、溝の幅が０．８μｍ、１．５μｍ、３μｍ、および５μｍのＰＤＭＳ基板を作製した。溝の幅が０．８μｍおよび１．５μｍのＰＤＭＳ基板では、溝の深さを１μｍとした。溝の幅が３μｍおよび５μｍのＰＤＭＳ基板では、溝の深さを５μｍとした。
上記のＰＤＭＳ基板の他に、溝の幅が０．８μｍ、１．５μｍ、３μｍ、および５μｍのＰＤＭＳ基板を作製した。溝は、フォトリソグラフィによってＰＤＭＳ基板上に形成した。溝の幅が０．８μｍおよび１．５μｍのＰＤＭＳ基板では、溝の深さを１μｍとした。溝の幅が３μｍ、５μｍのＰＤＭＳ基板では、溝の深さを５μｍとした。隣接する溝の間のピッチはいずれも３μｍとした。また、隣接する溝の間のピッチを３０μｍとして、溝の幅が０．８μｍ、１．５μｍ、３μｍ、および５μｍのＰＤＭＳ基板を作製した。溝の幅が０．８μｍおよび１．５μｍのＰＤＭＳ基板では、溝の深さを１μｍとした。溝の幅が３μｍおよび５μｍのＰＤＭＳ基板では、溝の深さを５μｍとした。
【0071】
これらのＰＤＭＳ基板について、上記と同様に蛍光性物質の蓄積実験を行った。その結果、いずれのＰＤＭＳ基板を用いても、蛍光性物質が溝に蓄積されたことが確認された。
【0072】
＜実験例４：回収デバイスの作製＞
第１実施形態として説明した構成の回収デバイスを作製した。具体的には、フォトリソグラフィで作製した多数の凸構造を有する鋳型へＰＤＭＳを流し込み焼成することで、放射状の溝を多数有する円盤状の基部を作製した。溝の幅は３μｍ、溝の深さは５μｍとした。次いで、Ｏ２プラズマ処理によってＰＤＭＳ製の円筒状蓄積部を基部の上面に結合させた。次いで、蓄積部の外側に位置する基部の外側部分の上面に、接着用のコラーゲンを塗布した（以下、コラーゲンを塗布した面を「試料面」という。）。これにより、図２に示すような回収デバイスを得た。作製した回収デバイスを、図１に示すようにウェルアレイに装着した。
第１実施形態として説明した構成の回収デバイスを作製した。具体的には、フォトリソグラフィで作製した多数の凸構造を有する鋳型へＰＤＭＳを流し込み焼成することで、放射状の溝を多数有する円盤状の基部を作製した。溝の幅は３μｍ、溝の深さは５μｍとした。次いで、Ｏ２プラズマ処理によってＰＤＭＳ製の円筒状蓄積部を基部の上面に結合させた。次いで、蓄積部の外側に位置する基部の外側部分の上面に、接着用のコラーゲンを塗布した（以下、コラーゲンを塗布した面を「試料面」という。）。これにより、図２に示すような回収デバイスを得た。作製した回収デバイスを、図１に示すようにウェルアレイに装着した。
【0073】
＜実験例５：回収デバイスの輸送性能の評価＞
作製した回収デバイスを使用して、蓄積部の外側の培養空間のみにＣＬＦを添加した場合に、ＣＬＦが溝を通って蓄積部に輸送されるかどうかを検討した。具体的には、基部の試料面への肝細胞の播種を行わずに、培養空間に１０μＭのＣＬＦを含む培地２０００μＬを添加するとともに、蓄積部の内側の蓄積空間にはＣＬＦを含まない培地１０μＬを添加した。その後、回収デバイスを静置して、蛍光顕微鏡を用いて、回収デバイスの溝レイヤにおける基部および蓄積部の経時的な変化を観察した。図１８は、ＣＬＦ添加後０分、１５分、６０分、１２０分、および２４０分が経過した時点での回収デバイスの蛍光写真である。時間が経つにつれて、蓄積部の内部の蓄積空間に蛍光性物質が蓄積されることが確認された。図１８の右下には、ＣＬＦ添加後２４０分が経過した時点での蛍光写真の拡大図を示す。この拡大図から、ＣＬＦが、培養空間と蓄積空間とを繋ぐ溝（すなわち、蓄積部の周壁の下の溝）を通過して培養空間から蓄積空間へ輸送されていることが確認された。
作製した回収デバイスを使用して、蓄積部の外側の培養空間のみにＣＬＦを添加した場合に、ＣＬＦが溝を通って蓄積部に輸送されるかどうかを検討した。具体的には、基部の試料面への肝細胞の播種を行わずに、培養空間に１０μＭのＣＬＦを含む培地２０００μＬを添加するとともに、蓄積部の内側の蓄積空間にはＣＬＦを含まない培地１０μＬを添加した。その後、回収デバイスを静置して、蛍光顕微鏡を用いて、回収デバイスの溝レイヤにおける基部および蓄積部の経時的な変化を観察した。図１８は、ＣＬＦ添加後０分、１５分、６０分、１２０分、および２４０分が経過した時点での回収デバイスの蛍光写真である。時間が経つにつれて、蓄積部の内部の蓄積空間に蛍光性物質が蓄積されることが確認された。図１８の右下には、ＣＬＦ添加後２４０分が経過した時点での蛍光写真の拡大図を示す。この拡大図から、ＣＬＦが、培養空間と蓄積空間とを繋ぐ溝（すなわち、蓄積部の周壁の下の溝）を通過して培養空間から蓄積空間へ輸送されていることが確認された。
【0074】
＜実験例６：胆汁酸の輸送実験＞
作製した回収デバイスを使用して、肝細胞存在下で胆汁酸が蓄積空間に輸送されるかを検討した。本実験例では、実験例２と同様に、胆汁酸取込・排泄阻害剤トログリタゾンを添加した場合（＋）と添加しなかった場合（－）とを比較した。具体的には、まず、回収デバイスの基部の試料面に２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２の肝細胞を播種した。試料面に播種した肝細胞の形態の経時的な変化を明視野顕微鏡で観察した。図１９は、播種から４時間後、１日後、２日後、および３日後の試料面上の肝細胞の明視野写真である。播種から１日程度で肝細胞が試料面に接着し、試料面全体を覆っていることが確認された。
作製した回収デバイスを使用して、肝細胞存在下で胆汁酸が蓄積空間に輸送されるかを検討した。本実験例では、実験例２と同様に、胆汁酸取込・排泄阻害剤トログリタゾンを添加した場合（＋）と添加しなかった場合（－）とを比較した。具体的には、まず、回収デバイスの基部の試料面に２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２の肝細胞を播種した。試料面に播種した肝細胞の形態の経時的な変化を明視野顕微鏡で観察した。図１９は、播種から４時間後、１日後、２日後、および３日後の試料面上の肝細胞の明視野写真である。播種から１日程度で肝細胞が試料面に接着し、試料面全体を覆っていることが確認された。
【0075】
肝細胞の播種から３日後、培地を吸引し、培地で２回洗浄した後、阻害剤あり（＋）の試料には、１０μＭのトログリタゾンを含む培地５００μＬを、基部の試料面の上側に形成された培養空間（すなわち、蓄積部の外側空間）へ添加し、５％ＣＯ２下、３７℃で１５分間インキュベートした。阻害剤なし（－）の試料にはトログリタゾンを添加しなかった。次いで、培地を吸引し、阻害剤あり（＋）の試料には１０μＭのトログリタゾンおよび５μＭのＣＬＦを含む培地２ｍＬを、阻害剤なし（－）の試料にはトログリタゾンを含まない５μＭのＣＬＦを含む培地２ｍＬを、基部の試料面の上側に形成された培養空間（すなわち、蓄積部の外側空間）に添加した。ＣＬＦを含まない１０μＬの培地を蓄積空間（すなわち、蓄積部の内側空間）に添加した。次いで、５％ＣＯ２下、３７℃で１２０分間インキュベートした。その後、阻害剤なし（－）および阻害剤あり（＋）の両試料について、共焦点顕微鏡を用いて細胞レイヤ及び溝レイヤを観察した。また、培養空間および蓄積空間の両方から上澄み液を回収し、回収した上澄み液の蛍光強度を、超微量分光光度計Ｎａｎｏｄｒｏｐ（サーモフィッシャー）を使用して測定した。なお本操作においては、ウシ胎児血清を含まない培地を使用した。
【0076】
図２０は、基部の外側部分における細胞レイヤの明視野写真（上）および溝レイヤの蛍光写真（下）である。図２０の左側は、阻害剤なし（－）の結果を示し、図２０の右側は、阻害剤あり（＋）の結果を示す。阻害剤を添加しなかった場合には、蛍光性胆汁酸ＣＬＦが溝内に蓄積しているのに対し、阻害剤を添加した場合には、ＣＬＦが溝内に蓄積していないことが確認された。この結果から、肝細胞の胆汁酸輸送機能によって胆汁酸が培養空間から溝内に輸送されることが確認された。
【0077】
図２１は、基部の外側部分と蓄積部の周壁との境界付近における細胞レイヤの明視野写真（上）および溝レイヤの蛍光写真（下）である。図２１の左側は、阻害剤なし（－）の結果を示し、図２１の右側は、阻害剤あり（＋）の結果を示す。阻害剤なし（－）の場合には、ＣＬＦが蓄積部の周壁の下の溝内に流入しているのに対し、阻害剤あり（＋）の場合には、阻害剤なし（－）の場合と比べて溝内に流入しているＣＬＦの量が少ないことが確認された。
【0078】
図２２は、培養空間から回収した上澄み液の蛍光強度を示す。図２３は、蓄積空間から回収した上澄み液の蛍光強度を示す。図中の縦軸は、相対蛍光単位（ＲＦＵ）のｎ＝４の平均値を表し、エラーバーは標準偏差を表す。培養空間の上澄み液の蛍光強度は、阻害剤の有無にかかわらず同程度であることが確認された。一方、蓄積空間の上澄み液の蛍光強度は、阻害剤なし（－）の場合の方が、阻害剤あり（＋）の場合よりも大きかった。
【0079】
＜実験例７：既往手法との比較実験＞
実験例６と同様にして、作製した回収デバイスを用いたＣＬＦアッセイを行うとともに、既存の胆汁酸回収方法であるＢ－ＣＬＥＡＲ試験（サンドイッチ培養肝細胞試験）を行い、両手法を比較した。ＣＬＦアッセイの詳細は実験例６と同様なので割愛する。Ｂ－ｃｌｅａｒ試験では、２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２で播種した肝細胞を３日間培養後、ＨＢＳＳ（＋）または１ｍＭのＥＧＴＡを含むＨＢＳＳ（－）で２回洗浄し、ＨＢＳＳ（＋）または１ｍＭのＥＧＴＡを含むＨＢＳＳ（－）で５％ＣＯ２下、３７℃の下１０分間インキュベートを行った。次いで、５μＭのＣＬＦを添加し、５％ＣＯ２下、３７℃で３０分間インキュベートを行った。次いで、氷冷したＨＢＳＳ（＋）で３回洗浄した。次いで、０．５％Ｔｒｉｒｏｎ Ｘ－１００を含むＰＢＳ（－）溶液５００μＬにより、肝細胞を溶解させた。次いで、１０分間１２０００ｒｐｍで遠心分離を行い、上澄み液を回収した。回収した上澄み液の蛍光強度を、超微量分光光度計Ｎａｎｏｄｒｏｐ（サーモフィッシャー）を使用して測定し、各条件の蛍光強度の平均値の差（ＨＢＳＳ（＋）－ ＨＢＳＳ（－））を計算した。また検量線を作製することでＣＬＦの濃度を算出した。
実験例６と同様にして、作製した回収デバイスを用いたＣＬＦアッセイを行うとともに、既存の胆汁酸回収方法であるＢ－ＣＬＥＡＲ試験（サンドイッチ培養肝細胞試験）を行い、両手法を比較した。ＣＬＦアッセイの詳細は実験例６と同様なので割愛する。Ｂ－ｃｌｅａｒ試験では、２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２で播種した肝細胞を３日間培養後、ＨＢＳＳ（＋）または１ｍＭのＥＧＴＡを含むＨＢＳＳ（－）で２回洗浄し、ＨＢＳＳ（＋）または１ｍＭのＥＧＴＡを含むＨＢＳＳ（－）で５％ＣＯ２下、３７℃の下１０分間インキュベートを行った。次いで、５μＭのＣＬＦを添加し、５％ＣＯ２下、３７℃で３０分間インキュベートを行った。次いで、氷冷したＨＢＳＳ（＋）で３回洗浄した。次いで、０．５％Ｔｒｉｒｏｎ Ｘ－１００を含むＰＢＳ（－）溶液５００μＬにより、肝細胞を溶解させた。次いで、１０分間１２０００ｒｐｍで遠心分離を行い、上澄み液を回収した。回収した上澄み液の蛍光強度を、超微量分光光度計Ｎａｎｏｄｒｏｐ（サーモフィッシャー）を使用して測定し、各条件の蛍光強度の平均値の差（ＨＢＳＳ（＋）－ ＨＢＳＳ（－））を計算した。また検量線を作製することでＣＬＦの濃度を算出した。
【0080】
【符号の説明】
【0081】
１…回収システム
１０…ウェルアレイ（ウェルデバイス）
１４…ウェル
１００、２００、３００、４００…回収デバイス（デバイス）
１１０、２１０、３１０、４１０…基部
１１２、２１４、３１８、４１８…溝（流路構造）
１２０、２２０、３２０、４２０…蓄積部
Ｓ１…培養空間
Ｓ２…回収空間
Ｓ３…蓄積空間
Ｃ…細胞
ＣＬ…培養液
ＲＬ…回収液
１０…ウェルアレイ（ウェルデバイス）
１４…ウェル
１００、２００、３００、４００…回収デバイス（デバイス）
１１０、２１０、３１０、４１０…基部
１１２、２１４、３１８、４１８…溝（流路構造）
１２０、２２０、３２０、４２０…蓄積部
Ｓ１…培養空間
Ｓ２…回収空間
Ｓ３…蓄積空間
Ｃ…細胞
ＣＬ…培養液
ＲＬ…回収液
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】