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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2024009870
(43)【公開日】2024-01-23
(54)【発明の名称】抗ＰＨＦ－タウ抗体及びその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20240116BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20240116BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20240116BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20240116BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20240116BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20240116BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240116BHJP
C07K 16/18 20060101ALI20240116BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240116BHJP
A61P 21/00 20060101ALI20240116BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20240116BHJP
A61P 25/16 20060101ALI20240116BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20240116BHJP
G01N 33/53 20060101ALI20240116BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13 ZNA
C12P21/08
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C07K16/18
A61K39/395 N
A61P21/00
A61P25/00
A61P25/16
A61P25/28
G01N33/53 D
【審査請求】有
【請求項の数】1
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023172494
(22)【出願日】2023-10-04
(62)【分割の表示】P 2020546389の分割
【原出願日】2019-03-04
(31)【優先権主張番号】62/638,535
(32)【優先日】2018-03-05
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】397060175
【氏名又は名称】ヤンセン ファーマシューティカ エヌ．ベー．
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100095360
【弁理士】
【氏名又は名称】片山 英二
(74)【代理人】
【識別番号】100093676
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 純子
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(74)【代理人】
【識別番号】100153693
【弁理士】
【氏名又は名称】岩田 耕一
(72)【発明者】
【氏名】ヴァン コルン，クリストフ
(72)【発明者】
【氏名】メルケン，マーク
(72)【発明者】
【氏名】バロン，リンダ
(72)【発明者】
【氏名】レーシー，エイリン アール．
(72)【発明者】
【氏名】ナンジュンダ，ルペシュ
(72)【発明者】
【氏名】ホイーラー，ジョン
(72)【発明者】
【氏名】ルォ，ジンカン
(72)【発明者】
【氏名】ボージャース，マリアンヌ
(57)【要約】 （修正有）
【課題】抗ＰＨＦ－タウ抗体、並びにその製造方法及び使用方法を提供する。
【解決手段】モノクローナル抗タウ抗体及びその抗原結合断片を提供する。抗体をコードしている核酸、抗体を含む組成物、並びに抗体の製造方法、及びタウ異常症などの状態を治療又は予防するための、抗体の使用方法についてもまた提供する。本発明の抗体はまた、生体サンプル中のタウを定量するために使用することもできる。
【選択図】なし
【解決手段】モノクローナル抗タウ抗体及びその抗原結合断片を提供する。抗体をコードしている核酸、抗体を含む組成物、並びに抗体の製造方法、及びタウ異常症などの状態を治療又は予防するための、抗体の使用方法についてもまた提供する。本発明の抗体はまた、生体サンプル中のタウを定量するために使用することもできる。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
相補的決定領域１（ＨＣＤＲ１）、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（
ＶＨ）と、相補的決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可
変領域（ＶＬ）とを含む、ＰＨＦ－タウに結合する単離抗体又はその抗原結合断片であっ
て、
（ａ）前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号１のＨＣＤＲ１、配列番号２のＨＣ
ＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、並びに配列番号４のＬＣＤＲ１、配列番号５のＬ
ＣＤＲ２、及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含むか；
（ｂ）前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号７のＨＣＤＲ１、配列番号８のＨＣ
ＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、並びに配列番号９のＬＣＤＲ１、配列番号５のＬ
ＣＤＲ２、及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含むか；
（ｃ）前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号７のＨＣＤＲ１、配列番号１０のＨ
ＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、並びに配列番号１１のＬＣＤＲ１、配列番号５
のＬＣＤＲ２、及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含むか；
（ｄ）前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号７のＨＣＤＲ１、配列番号１２のＨ
ＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、並びに配列番号１１のＬＣＤＲ１、配列番号５
のＬＣＤＲ２、及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含むか；
（ｅ）配列番号７のＨＣＤＲ１、配列番号１３のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤ
Ｒ３、並びに配列番号１１のＬＣＤＲ１、配列番号５のＬＣＤＲ２、及び配列番号６のＬ
ＣＤＲ３；あるいは
（ｆ）前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号７のＨＣＤＲ１、配列番号１４のＨ
ＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、並びに配列番号１１のＬＣＤＲ１、配列番号５
のＬＣＤＲ２、及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含む、
前記単離抗体又はその抗原結合断片。
ＶＨ）と、相補的決定領域１（ＬＣＤＲ１）、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可
変領域（ＶＬ）とを含む、ＰＨＦ－タウに結合する単離抗体又はその抗原結合断片であっ
て、
（ａ）前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号１のＨＣＤＲ１、配列番号２のＨＣ
ＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、並びに配列番号４のＬＣＤＲ１、配列番号５のＬ
ＣＤＲ２、及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含むか；
（ｂ）前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号７のＨＣＤＲ１、配列番号８のＨＣ
ＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、並びに配列番号９のＬＣＤＲ１、配列番号５のＬ
ＣＤＲ２、及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含むか；
（ｃ）前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号７のＨＣＤＲ１、配列番号１０のＨ
ＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、並びに配列番号１１のＬＣＤＲ１、配列番号５
のＬＣＤＲ２、及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含むか；
（ｄ）前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号７のＨＣＤＲ１、配列番号１２のＨ
ＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、並びに配列番号１１のＬＣＤＲ１、配列番号５
のＬＣＤＲ２、及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含むか；
（ｅ）配列番号７のＨＣＤＲ１、配列番号１３のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤ
Ｒ３、並びに配列番号１１のＬＣＤＲ１、配列番号５のＬＣＤＲ２、及び配列番号６のＬ
ＣＤＲ３；あるいは
（ｆ）前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号７のＨＣＤＲ１、配列番号１４のＨ
ＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、並びに配列番号１１のＬＣＤＲ１、配列番号５
のＬＣＤＲ２、及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含む、
前記単離抗体又はその抗原結合断片。
【請求項2】
（ａ）配列番号１５と少なくとも９５％同一である配列を含む重鎖可変領域及び配列番
号１６と少なくとも９５％同一である配列を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号１７と少なくとも９５％同一である配列を含む重鎖可変領域及び配列番
号１８と少なくとも９５％同一である配列を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号１９と少なくとも９５％同一である配列を含む重鎖可変領域及び配列番
号２０と少なくとも９５％同一である配列を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号２１と少なくとも９５％同一である配列を含む重鎖可変領域及び配列番
号２２と少なくとも９５％同一である配列を含む軽鎖可変領域；
（ｅ）配列番号２３と少なくとも９５％同一である配列を含む重鎖可変領域及び配列番
号２０と少なくとも９５％同一である配列を含む軽鎖可変領域；又は
（ｆ）配列番号２４と少なくとも９５％同一である配列を含む重鎖可変領域及び配列番
号２５と少なくとも９５％同一である配列を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１に記載の単離抗体又は抗原結合断片。
号１６と少なくとも９５％同一である配列を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号１７と少なくとも９５％同一である配列を含む重鎖可変領域及び配列番
号１８と少なくとも９５％同一である配列を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号１９と少なくとも９５％同一である配列を含む重鎖可変領域及び配列番
号２０と少なくとも９５％同一である配列を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号２１と少なくとも９５％同一である配列を含む重鎖可変領域及び配列番
号２２と少なくとも９５％同一である配列を含む軽鎖可変領域；
（ｅ）配列番号２３と少なくとも９５％同一である配列を含む重鎖可変領域及び配列番
号２０と少なくとも９５％同一である配列を含む軽鎖可変領域；又は
（ｆ）配列番号２４と少なくとも９５％同一である配列を含む重鎖可変領域及び配列番
号２５と少なくとも９５％同一である配列を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１に記載の単離抗体又は抗原結合断片。
【請求項3】
（ａ）配列番号１５の重鎖可変領域及び配列番号１６を含む軽鎖可変領域；
（ｂ）配列番号１７を含む重鎖可変領域及び配列番号１８を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号１９を含む重鎖可変領域及び配列番号２０を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号２１を含む重鎖可変領域及び配列番号２２を含む軽鎖可変領域；
（ｅ）配列番号２３を含む重鎖可変領域及び配列番号２０を含む軽鎖可変領域；又は
（ｆ）配列番号２４を含む重鎖可変領域及び配列番号２５を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１又は２に記載の単離抗体又は抗原結合断片。
（ｂ）配列番号１７を含む重鎖可変領域及び配列番号１８を含む軽鎖可変領域；
（ｃ）配列番号１９を含む重鎖可変領域及び配列番号２０を含む軽鎖可変領域；
（ｄ）配列番号２１を含む重鎖可変領域及び配列番号２２を含む軽鎖可変領域；
（ｅ）配列番号２３を含む重鎖可変領域及び配列番号２０を含む軽鎖可変領域；又は
（ｆ）配列番号２４を含む重鎖可変領域及び配列番号２５を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１又は２に記載の単離抗体又は抗原結合断片。
【請求項4】
請求項１～３のいずれかに記載の抗体又は抗原結合断片をコードしている、単離核酸。
【請求項5】
請求項４に記載の単離核酸を含む、ベクター。
【請求項6】
請求項４に記載の核酸又は請求項５に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項7】
請求項１～３のいずれか一項に記載の単離抗体又は抗原結合断片と、医薬的に許容され
る担体とを含む、医薬組成物。
る担体とを含む、医薬組成物。
【請求項8】
病理学的タウ凝集又はタウ異常症の拡散の低減を必要とする対象における、病理学的タ
ウ凝集又はタウ異常症の拡散を低減する方法であって、請求項７に記載の医薬組成物を前
記対象に投与することを含む、前記方法。
ウ凝集又はタウ異常症の拡散を低減する方法であって、請求項７に記載の医薬組成物を前
記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項9】
タウ異常症の治療を必要とする対象における、タウ異常症を治療する方法であって、請
求項７に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
求項７に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項10】
タウ異常症の治療を必要とする対象における、タウ異常症を治療する方法であって、請
求項７に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含み、前記タウ異常症が、アルツ
ハイマー病（家族性アルツハイマー病及び散発性アルツハイマー病を含む）、染色体１７
に関連したパーキンソン症候群による前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、進行性核上
性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、神経原線維型認知症
、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症／パ
ーキンソン認知症複合、ダウン症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、ハ
ラーフォルデン－シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多系統萎縮
症、Ｃ型ニーマン・ピック病、プリオンタンパク質脳アミロイド血管障害、亜急性硬化性
全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維変化を伴う非グアム型運動ニューロン疾患
、脳炎後パーキンソン症候群、慢性外傷性脳症、及び拳闘家認知症（ボクサー病）からな
る群から選択される、前記方法。
求項７に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含み、前記タウ異常症が、アルツ
ハイマー病（家族性アルツハイマー病及び散発性アルツハイマー病を含む）、染色体１７
に関連したパーキンソン症候群による前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、進行性核上
性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、神経原線維型認知症
、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症／パ
ーキンソン認知症複合、ダウン症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、ハ
ラーフォルデン－シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多系統萎縮
症、Ｃ型ニーマン・ピック病、プリオンタンパク質脳アミロイド血管障害、亜急性硬化性
全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維変化を伴う非グアム型運動ニューロン疾患
、脳炎後パーキンソン症候群、慢性外傷性脳症、及び拳闘家認知症（ボクサー病）からな
る群から選択される、前記方法。
【請求項11】
請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合断片を生成する方法であって、
前記抗体又は抗原結合断片を生成する条件下で前記抗体又は抗原結合断片をコードしてい
る核酸を含む細胞を培養することと、前記細胞又は細胞培養物から前記抗体又は抗原結合
断片を回収することとを含む、前記方法。
前記抗体又は抗原結合断片を生成する条件下で前記抗体又は抗原結合断片をコードしてい
る核酸を含む細胞を培養することと、前記細胞又は細胞培養物から前記抗体又は抗原結合
断片を回収することとを含む、前記方法。
【請求項12】
請求項１～３のいずれか一項に記載のヒト化抗体又は抗原結合断片を含む医薬組成物を
生成する方法であって、前記抗体又は抗原結合断片を医薬的に許容される担体と組み合わ
せて前記医薬組成物を得ることを含む、前記方法。
生成する方法であって、前記抗体又は抗原結合断片を医薬的に許容される担体と組み合わ
せて前記医薬組成物を得ることを含む、前記方法。
【請求項13】
対象由来の生体サンプルにおけるＰＨＦ－タウの存在を検出する方法であって、前記生
体サンプルを請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合断片と接触させるこ
とと、前記対象由来の前記サンプル中のＰＨＦ－タウへの前記抗体又は抗原結合断片の結
合を検出することとを含む、前記方法。
体サンプルを請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合断片と接触させるこ
とと、前記対象由来の前記サンプル中のＰＨＦ－タウへの前記抗体又は抗原結合断片の結
合を検出することとを含む、前記方法。
【請求項14】
前記生体サンプルが、血液、尿、又は脳脊髄液のサンプルである、請求項１３に記載の
方法。
方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、抗ＰＨＵ－タウ抗体、並びにその製造方法及び使用方法に関する。
【背景技術】
【0002】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、徐々に激しい精神機能低下を導き、最終的には死に至ら
しめる、記憶、認知、論理的思考、判断力、及び情動安定性の進行性喪失を臨床的特徴と
する、退行性脳障害である。ＡＤは、高齢者の進行性精神機能不全（認知症）の非常に一
般的な原因であり、米国では４番目に多い医学的死亡原因を表すと考えられている。ＡＤ
は、世界中の民族で観察され、現在及び未来の、主たる公衆の健康上の問題を提示する。
しめる、記憶、認知、論理的思考、判断力、及び情動安定性の進行性喪失を臨床的特徴と
する、退行性脳障害である。ＡＤは、高齢者の進行性精神機能不全（認知症）の非常に一
般的な原因であり、米国では４番目に多い医学的死亡原因を表すと考えられている。ＡＤ
は、世界中の民族で観察され、現在及び未来の、主たる公衆の健康上の問題を提示する。
【0003】
ＡＤ個体の脳は、老人性（又はアミロイド）斑、アミロイド血管症（血管におけるアミ
ロイド沈着）及び神経原線維変化と呼ばれる特徴的な病変を呈する。これら病変の大多数
、特にアミロイド斑及び対らせん状細線維の神経原線維変化は、一般にＡＤ患者の記憶及
び認知機能に重要なヒトの脳のいくつかの領域で見られる。
ロイド沈着）及び神経原線維変化と呼ばれる特徴的な病変を呈する。これら病変の大多数
、特にアミロイド斑及び対らせん状細線維の神経原線維変化は、一般にＡＤ患者の記憶及
び認知機能に重要なヒトの脳のいくつかの領域で見られる。
【0004】
ＡＤ及びいくつかの他の神経変性疾患における神経原線維変性の主なタンパク質成分は
、高リン酸化形態の微小管結合タンパク質タウである。タウの凝集を予防又は排除する治
療法の開発は、長年にわたる関心事であるが、抗凝集化合物及びキナーゼ阻害剤を含む候
補薬物は、臨床試験に入ったばかりである（Ｂｒｕｎｄｅｎ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｒｅ
ｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ ８：７８３－９３，２００９）。
、高リン酸化形態の微小管結合タンパク質タウである。タウの凝集を予防又は排除する治
療法の開発は、長年にわたる関心事であるが、抗凝集化合物及びキナーゼ阻害剤を含む候
補薬物は、臨床試験に入ったばかりである（Ｂｒｕｎｄｅｎ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｒｅ
ｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ ８：７８３－９３，２００９）。
【0005】
最近、トランスジェニックタウマウスモデルにおいて、タウについての能動及び受動免
疫が治療可能性を有している可能性があるという前臨床的エビデンスが得られた（Ｃｈａ
ｉ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８６：３４４５７－６７，２０１１、Ｂｏ
ｕｔａｊａｎｇｏｕｔ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ １１８：６５８－６７，
２０１１、Ｂｏｕｔａｊａｎｇｏｕｔ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ３０：１６
５５９－６６，２０１０、Ａｓｕｎｉ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ２７：９１
１５－２９，２００７）。最近、タウ異常症の伝播及び拡散仮説が報告されたが、これは
、ヒト脳におけるタウ異常症進行のＢｒａａｋステージと前臨床的タウモデルにおけるタ
ウ凝集体を注入した後のタウ異常症の拡散に基づいている（Ｆｒｏｓｔ，ｅｔ ａｌ．Ｊ
Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８４：１２８４５－５２，２００９、Ｃｌａｖａｇｕｅｒａ，
ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １１：９０９－１３，２００９）。したがっ
て、ＡＤ及び他の神経変性疾患を治療するためにタウ凝集体及びタウ異常症進行を防ぐ治
療法が必要とされている。
疫が治療可能性を有している可能性があるという前臨床的エビデンスが得られた（Ｃｈａ
ｉ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８６：３４４５７－６７，２０１１、Ｂｏ
ｕｔａｊａｎｇｏｕｔ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ １１８：６５８－６７，
２０１１、Ｂｏｕｔａｊａｎｇｏｕｔ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ３０：１６
５５９－６６，２０１０、Ａｓｕｎｉ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ２７：９１
１５－２９，２００７）。最近、タウ異常症の伝播及び拡散仮説が報告されたが、これは
、ヒト脳におけるタウ異常症進行のＢｒａａｋステージと前臨床的タウモデルにおけるタ
ウ凝集体を注入した後のタウ異常症の拡散に基づいている（Ｆｒｏｓｔ，ｅｔ ａｌ．Ｊ
Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８４：１２８４５－５２，２００９、Ｃｌａｖａｇｕｅｒａ，
ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １１：９０９－１３，２００９）。したがっ
て、ＡＤ及び他の神経変性疾患を治療するためにタウ凝集体及びタウ異常症進行を防ぐ治
療法が必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0006】
一般的な一態様では、本発明は、単離抗体、好ましくは単離モノクローナル抗体、又は
その抗原結合断片であって、ＰＨＦ－タウ、好ましくはヒトＰＨＦ－タウに結合する、抗
体又はその抗原結合断片に関する。
その抗原結合断片であって、ＰＨＦ－タウ、好ましくはヒトＰＨＦ－タウに結合する、抗
体又はその抗原結合断片に関する。
【0007】
一実施形態では、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１又
は７のＨＣＤＲ１；配列番号２、８、１０、１２、１３、又は１４のＨＣＤＲ２；及び配
列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖を有する。別の実施形態では、本発明のモノクローナル
抗体は、配列番号４、９又は１１のＬＣＤＲ１；配列番号５のＬＣＤＲ２；及び配列番号
６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖を有する。他の実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は
、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、及び１４の
いずれかのＣＤＲと少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、又は少なくとも９９
％同一であるＣＤＲを含む。
は７のＨＣＤＲ１；配列番号２、８、１０、１２、１３、又は１４のＨＣＤＲ２；及び配
列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖を有する。別の実施形態では、本発明のモノクローナル
抗体は、配列番号４、９又は１１のＬＣＤＲ１；配列番号５のＬＣＤＲ２；及び配列番号
６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖を有する。他の実施形態では、本発明のモノクローナル抗体は
、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、及び１４の
いずれかのＣＤＲと少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、又は少なくとも９９
％同一であるＣＤＲを含む。
【0008】
別の実施形態では、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１
５、１７、１９、２１、２３、及び２４のいずれかと少なくとも８０％、少なくとも８５
％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少な
くとも９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。別の実
施形態では、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１６、１８
、２０、２２、及び２５のいずれかと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも
９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、
又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
５、１７、１９、２１、２３、及び２４のいずれかと少なくとも８０％、少なくとも８５
％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少な
くとも９９％、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。別の実
施形態では、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１６、１８
、２０、２２、及び２５のいずれかと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも
９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、
又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0009】
別の実施形態では、本発明の単離抗体又はその抗原結合断片は、定常領域、例えばヒト
又はマウス重鎖ＩｇＧ定常領域、及びヒト又はマウス抗体軽鎖カッパ若しくはラムダ定常
領域を更に含む。
又はマウス重鎖ＩｇＧ定常領域、及びヒト又はマウス抗体軽鎖カッパ若しくはラムダ定常
領域を更に含む。
【0010】
別の一般的な態様では、本発明は、本発明の抗体又はその抗原結合断片をコードしてい
る単離核酸に関する。
る単離核酸に関する。
【0011】
別の一般的な態様では、本発明は、本発明の抗体又はその抗原結合断片をコードしてい
る単離核酸を含むベクターに関する。
る単離核酸を含むベクターに関する。
【0012】
別の一般的な態様では、本発明は、本発明の抗体又はその抗原結合断片をコードしてい
る単離核酸を含む宿主細胞に関する。
る単離核酸を含む宿主細胞に関する。
【0013】
別の一般的な態様では、本発明は、本発明の単離抗体又はその抗原結合断片と、医薬的
に許容される担体とを含む医薬組成物に関する。
に許容される担体とを含む医薬組成物に関する。
【0014】
別の一般的な態様では、本発明は、病理学的タウ凝集又はタウ異常症の拡散の低減を必
要とする対象における、病理学的タウ凝集又はタウ異常症の拡散を低減する方法であって
、本発明の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法に関する。タウ異常症としては
、アルツハイマー病（家族性アルツハイマー病及び散発性アルツハイマー病を含む）、染
色体１７に関連したパーキンソン症候群による前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、進
行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、神経原線維
型認知症、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬
化症／パーキンソン認知症複合、ダウン症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカ
ー病、ハラーフォルデン－シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多
系統萎縮症、Ｃ型ニーマン・ピック病、プリオンタンパク質脳アミロイド血管障害、亜急
性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維変化を伴う非グアム型運動ニュー
ロン疾患、脳炎後パーキンソン症候群、慢性外傷性脳症、及び拳闘家認知症（ボクサー病
）からなる群から選択される１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。
要とする対象における、病理学的タウ凝集又はタウ異常症の拡散を低減する方法であって
、本発明の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法に関する。タウ異常症としては
、アルツハイマー病（家族性アルツハイマー病及び散発性アルツハイマー病を含む）、染
色体１７に関連したパーキンソン症候群による前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、進
行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、神経原線維
型認知症、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬
化症／パーキンソン認知症複合、ダウン症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカ
ー病、ハラーフォルデン－シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多
系統萎縮症、Ｃ型ニーマン・ピック病、プリオンタンパク質脳アミロイド血管障害、亜急
性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維変化を伴う非グアム型運動ニュー
ロン疾患、脳炎後パーキンソン症候群、慢性外傷性脳症、及び拳闘家認知症（ボクサー病
）からなる群から選択される１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。
【0015】
好ましくは、タウ異常症は、アルツハイマー病（家族性アルツハイマー病及び散発性ア
ルツハイマー病を含む）、ＦＴＤＰ－１７、又は進行性核上麻痺である。
ルツハイマー病を含む）、ＦＴＤＰ－１７、又は進行性核上麻痺である。
【0016】
最も好ましくは、タウ異常症は、アルツハイマー病（家族性アルツハイマー病及び散発
性アルツハイマー病を含む）である。
性アルツハイマー病を含む）である。
【0017】
別の一般的な態様では、本発明は、本発明の抗体又はその抗原結合断片を生成する方法
であって、当該抗体又はその抗原結合断片を生成する条件下で当該抗体又はその抗原結合
断片をコードしている核酸を含む細胞を培養することと、当該細胞又は細胞培養物から当
該抗体又はその抗原結合断片を回収することとを含む、方法に関する。
であって、当該抗体又はその抗原結合断片を生成する条件下で当該抗体又はその抗原結合
断片をコードしている核酸を含む細胞を培養することと、当該細胞又は細胞培養物から当
該抗体又はその抗原結合断片を回収することとを含む、方法に関する。
【0018】
別の一般的な態様では、本発明は、本発明の抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成
物を生成する方法であって、当該抗体又はその抗原結合断片を医薬的に許容される担体と
組み合わせて医薬組成物を得ることを含む、方法に関する。
物を生成する方法であって、当該抗体又はその抗原結合断片を医薬的に許容される担体と
組み合わせて医薬組成物を得ることを含む、方法に関する。
【0019】
別の一般的な態様では、本発明は、本発明の抗体又はその抗原結合断片を用いて、対象
におけるＰＨＦ－タウの存在を検出する方法、又は対象におけるＰＨＦ－タウの存在を検
出することによって当該対象におけるタウ異常症を診断する方法に関する。
におけるＰＨＦ－タウの存在を検出する方法、又は対象におけるＰＨＦ－タウの存在を検
出することによって当該対象におけるタウ異常症を診断する方法に関する。
【0020】
本発明の他の態様、特徴、及び利点は、発明の詳細な説明、並びにその好ましい実施形
態及び添付の特許請求の範囲を含む以下の開示より明らかとなろう。
態及び添付の特許請求の範囲を含む以下の開示より明らかとなろう。
【図面の簡単な説明】
【0021】
上述の「課題を解決するための手段」及び以降の「発明を実施するための形態」は、添
付の図面と併せて読むことでより良好に理解されるであろう。本発明は、図面に示される
実施形態そのものに限定されない点は理解されるべきである。
付の図面と併せて読むことでより良好に理解されるであろう。本発明は、図面に示される
実施形態そのものに限定されない点は理解されるべきである。
【図1A】表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって分析した、組換え的に発現させたＰＴ８２ｍＡｂ又はそのＦａｂ断片のＰＨＦ－タウ及び可溶性タウへの結合を示し、抗体又はＦａｂの濃度を、それぞれのセンサーグラムの隣りに示す（７５ｎＭ、１５ｎＭ、３ｎＭ、０．６ｎＭ）。（Ａ）ｍＡｂのＰＨＦへの結合を示す。
【図1B】表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって分析した、組換え的に発現させたＰＴ８２ｍＡｂ又はそのＦａｂ断片のＰＨＦ－タウ及び可溶性タウへの結合を示し、抗体又はＦａｂの濃度を、それぞれのセンサーグラムの隣りに示す（７５ｎＭ、１５ｎＭ、３ｎＭ、０．６ｎＭ）。（Ｂ）ＦａｂのＰＨＦへの結合を示す。
【図1C】表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって分析した、組換え的に発現させたＰＴ８２ｍＡｂ又はそのＦａｂ断片のＰＨＦ－タウ及び可溶性タウへの結合を示し、抗体又はＦａｂの濃度を、それぞれのセンサーグラムの隣りに示す（７５ｎＭ、１５ｎＭ、３ｎＭ、０．６ｎＭ）。（Ｃ）Ｆａｂの２Ｎ４Ｒタウへの結合を示す。
【図2】１０ｎｇ／ｍＬ又は１ｎｇ／ｍＬにおける２Ｎ４Ｒタウの２つのコーティング濃度を用いてＥＬＩＳＡによって分析された、ハイブリドーマ上清由来のＰＴ８２及び組換え的に発現させたＰＴ８２の組換え２Ｎ４Ｒタウへの結合を示す。
【図3A】ＦＲＥＴアッセイにおいてタウ凝集体の形成をブロックするＰＴ８２ｍＡｂの能力を示す。（Ａ）使用した細胞モデルにおけるＦＲＥＴアッセイの図を示す。
【図3B】ＦＲＥＴアッセイにおいてタウ凝集体の形成をブロックするＰＴ８２ｍＡｂの能力を示す。（Ｂ）陰性対照ｍＡｂ（ＣＮＴＯ１０３７／Ｃ１８Ａ抗体）と比較したＦＲＥＴアッセイにおけるＰＴ８２の有効性を示す。
【図4A】免疫枯渇アッセイにおいてタウ凝集体の形成をブロックするＰＴ８２ｍＡｂの能力を示す。（Ａ）ＰＴ８２ｍＡｂを使用してヒトＡＤ脳又はＰ３０１Ｓマウス脊髄抽出物由来のホモジネートのいずれかを免疫枯渇させた、免疫枯渇アッセイの図を示す。
【図4B】免疫枯渇アッセイにおいてタウ凝集体の形成をブロックするＰＴ８２ｍＡｂの能力を示す。ＰＴ８２ｍＡｂは、（Ｂ）ＦＲＥＴアッセイによってアッセイしたとき、ＡＤ脳及びＰ３０１Ｓ脊髄抽出物の両方においてタウ種を減少させることができた。
【図4C】免疫枯渇アッセイにおいてタウ凝集体の形成をブロックするＰＴ８２ｍＡｂの能力を示す。ＰＴ８２ｍＡｂは、（Ｃ）タウ凝集選択性ＭＳＤアッセイによってアッセイしたとき、ＡＤ脳及びＰ３０１Ｓ脊髄抽出物の両方においてタウ種を減少させることができた。
【図5A】（Ａ）全ホモジネートを分析したときの、インビボｅＰＨＦ注射モデルにおけるＡＴ１８０及びＰＴ３抗体と比較したＰＴ８２の有効性を示す。
【図5B】（Ｂ）不溶性画分を分析したときの、インビボｅＰＨＦ注射モデルにおけるＡＴ１８０及びＰＴ３抗体と比較したＰＴ８２の有効性を示す。
【図6A】（Ｂ）抗体及びＰＨＦの頭蓋内への同時注射と比較した、（Ａ）抗体を末梢投与（ＩＰ注射）した際のＰＴ８２及びＰＴ３の有効性を示す。（Ｃ）全ホモジネート及び（Ｄ）不溶性画分で有効性を分析した。
【図6B】（Ｂ）抗体及びＰＨＦの頭蓋内への同時注射と比較した、（Ａ）抗体を末梢投与（ＩＰ注射）した際のＰＴ８２及びＰＴ３の有効性を示す。（Ｃ）全ホモジネート及び（Ｄ）不溶性画分で有効性を分析した。
【図6C】（Ｂ）抗体及びＰＨＦの頭蓋内への同時注射と比較した、（Ａ）抗体を末梢投与（ＩＰ注射）した際のＰＴ８２及びＰＴ３の有効性を示す。（Ｃ）全ホモジネート及び（Ｄ）不溶性画分で有効性を分析した。
【図6D】（Ｂ）抗体及びＰＨＦの頭蓋内への同時注射と比較した、（Ａ）抗体を末梢投与（ＩＰ注射）した際のＰＴ８２及びＰＴ３の有効性を示す。（Ｃ）全ホモジネート及び（Ｄ）不溶性画分で有効性を分析した。
【図7】ＰＴ８２の線形ペプチドマッピングを使用したエピトープマッピングデータを示す。
【図8】ＥＬＩＳＡによって測定したときの、可溶性タウへのヒト化ＰＴ８２ｍＡｂの結合を示す。
【発明を実施するための形態】
【0022】
本明細書で使用するとき、用語「抗体」は、広義に用いられ、ポリクローナル抗体、マ
ウス、ヒト、ヒト適合化、ヒト化及びキメラモノクローナル抗体を含むモノクローナル抗
体、並びに抗体フラグメントを含む、免疫グロブリン又は抗体分子を含む。
ウス、ヒト、ヒト適合化、ヒト化及びキメラモノクローナル抗体を含むモノクローナル抗
体、並びに抗体フラグメントを含む、免疫グロブリン又は抗体分子を含む。
【0023】
一般に抗体とは、特定の抗原に対する結合特異性を示すタンパク質又はペプチド鎖であ
る。抗体の構造は、公知である。免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に
応じて５つの主なクラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭに割
り当てられ得る。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプのＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、
ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４として更に細分類される。いずれの脊椎動物種の抗体軽
鎖も、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて２つの明確に異なるタイプ、すな
わちカッパ（κ）及びラムダ（λ）のうちの一方に割り当てられ得る。
る。抗体の構造は、公知である。免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に
応じて５つの主なクラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭに割
り当てられ得る。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプのＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、
ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４として更に細分類される。いずれの脊椎動物種の抗体軽
鎖も、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて２つの明確に異なるタイプ、すな
わちカッパ（κ）及びラムダ（λ）のうちの一方に割り当てられ得る。
【0024】
用語「抗体断片」は、インタクトな抗体の部分を意味する。抗体断片の例としては、Ｆ
ａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、ＣＤＲ、抗原結合部位、重鎖又は軽鎖
可変領域、ダイアボディ、単鎖抗体分子、並びに少なくとも２つのインタクトな抗体又は
その断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。
ａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、ＣＤＲ、抗原結合部位、重鎖又は軽鎖
可変領域、ダイアボディ、単鎖抗体分子、並びに少なくとも２つのインタクトな抗体又は
その断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。
【0025】
免疫グロブリン軽鎖又は重鎖可変領域は、「抗原結合部位」が割り込んだ「フレームワ
ーク」領域からなる。抗原結合部位は、以下のとおり様々な用語を使用して定義される：
（ｉ）相補的決定領域（ＣＤＲ）は、配列多様性に基づいている（Ｗｕ ａｎｄ Ｋａｂ
ａｔ Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １３２：２１１－５０，１９７０）。一般に、抗原結合部位
は、各可変領域に３つのＣＤＲ（重鎖可変領域（ＶＨ）にＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及び
ＨＣＤＲ３、並びに軽鎖可変領域（ＶＬ）にＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）
を有する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ
ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ
Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅ
ａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１）。（ｉｉ）用語「超可変領域」、「Ｈ
ＶＲ」、又は「ＨＶ」は、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅ
ｓｋ，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－１７，１９８７）によって定義されてい
るように、構造中の超可変性である抗体可変ドメインの領域を指す。一般的に、抗原結合
部位は、各ＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）に３つの超可変領域
を有する。Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋは、構造的に保持されているＨＶを「カノニカル
構造」と呼ぶ。付番システム、並びにＣＤＲ及びＨＶのアノテーションは、Ａｂｈｉｎａ
ｎｄａｎ及びＭａｒｔｉｎ（Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ Ｍｏｌ Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．４５：３８３２－９，２００８）により最近改訂された。（ｉｉｉ）抗原
結合部位を形成する領域の別の定義が、免疫グロブリン及びＴ細胞受容体由来のＶドメイ
ンの比較に基づいて、Ｌｅｆｒａｎｃ（Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ Ｃｏｍ
ｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５－７７，２００３）によって提案されている。Ｉｎｔｅ
ｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベースが、標準
化したこれらの領域の付番及び定義を提供している。ＣＤＲ、ＨＶ、及びＩＭＧＴの記述
間の対応については、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，同上に記載されている。（ｉｖ）
抗原結合部位は、「特異性決定残基の使用」（Specificity Determining Residue Usage
、ＳＤＲＵ）（Ａｌｍａｇｒｏ Ｊ Ｍｏｌ Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．１７：１３２－４３，
２００４）に基づいて記述することもでき、この場合、特異性決定残基（Specificity De
termining Residues、ＳＤＲ）は、抗原接触に直接関与する免疫グロブリンのアミノ酸残
基を指す。
ーク」領域からなる。抗原結合部位は、以下のとおり様々な用語を使用して定義される：
（ｉ）相補的決定領域（ＣＤＲ）は、配列多様性に基づいている（Ｗｕ ａｎｄ Ｋａｂ
ａｔ Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １３２：２１１－５０，１９７０）。一般に、抗原結合部位
は、各可変領域に３つのＣＤＲ（重鎖可変領域（ＶＨ）にＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及び
ＨＣＤＲ３、並びに軽鎖可変領域（ＶＬ）にＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）
を有する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ
ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ
Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅ
ａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１）。（ｉｉ）用語「超可変領域」、「Ｈ
ＶＲ」、又は「ＨＶ」は、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅ
ｓｋ，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－１７，１９８７）によって定義されてい
るように、構造中の超可変性である抗体可変ドメインの領域を指す。一般的に、抗原結合
部位は、各ＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）に３つの超可変領域
を有する。Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋは、構造的に保持されているＨＶを「カノニカル
構造」と呼ぶ。付番システム、並びにＣＤＲ及びＨＶのアノテーションは、Ａｂｈｉｎａ
ｎｄａｎ及びＭａｒｔｉｎ（Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ Ｍｏｌ Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．４５：３８３２－９，２００８）により最近改訂された。（ｉｉｉ）抗原
結合部位を形成する領域の別の定義が、免疫グロブリン及びＴ細胞受容体由来のＶドメイ
ンの比較に基づいて、Ｌｅｆｒａｎｃ（Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ Ｃｏｍ
ｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５－７７，２００３）によって提案されている。Ｉｎｔｅ
ｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベースが、標準
化したこれらの領域の付番及び定義を提供している。ＣＤＲ、ＨＶ、及びＩＭＧＴの記述
間の対応については、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，同上に記載されている。（ｉｖ）
抗原結合部位は、「特異性決定残基の使用」（Specificity Determining Residue Usage
、ＳＤＲＵ）（Ａｌｍａｇｒｏ Ｊ Ｍｏｌ Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．１７：１３２－４３，
２００４）に基づいて記述することもでき、この場合、特異性決定残基（Specificity De
termining Residues、ＳＤＲ）は、抗原接触に直接関与する免疫グロブリンのアミノ酸残
基を指す。
【0026】
「フレームワーク」又は「フレームワーク配列」は、抗原結合部位の配列であると定義
されるもの以外の、抗体の可変領域内の残りの配列である。抗原結合部位の正確な定義は
、上述したような様々な描写により決定され得るため、正確なフレームワーク配列は、抗
原結合部位の定義に依存する。
されるもの以外の、抗体の可変領域内の残りの配列である。抗原結合部位の正確な定義は
、上述したような様々な描写により決定され得るため、正確なフレームワーク配列は、抗
原結合部位の定義に依存する。
【0027】
本明細書で使用するとき、用語「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）とは、ほぼ均質な抗
体の集団から得られる抗体（又は抗体フラグメント）を意味する。モノクローナル抗体は
極めて特異性が高く、通常、単一の抗原決定基を標的とする。
体の集団から得られる抗体（又は抗体フラグメント）を意味する。モノクローナル抗体は
極めて特異性が高く、通常、単一の抗原決定基を標的とする。
【0028】
本明細書で使用するとき、用語「エピトープ」とは、抗体が特異的に結合する抗原の部
分を意味する。エピトープは、通常、アミノ酸、リン酸化アミノ酸、又は多糖類側鎖など
の部分の化学的に活性な（例えば、極性、非極性、又は疎水性の）表面基からなり、特定
の３次元構造特性及び特定の帯電特性を有し得る。エピトープは、事実上線状であっても
よく、又は線状の一連のアミノ酸ではなく、抗原の隣接していないアミノ酸間の空間的関
係によって形成される不連続エピトープ、例えば、立体構造エピトープであってもよい。
立体構造エピトープには、抗原の線状配列の異なる部分のアミノ酸同士が３次元空間で近
接するような抗原の折畳みによって生じるエピトープが含まれる。
分を意味する。エピトープは、通常、アミノ酸、リン酸化アミノ酸、又は多糖類側鎖など
の部分の化学的に活性な（例えば、極性、非極性、又は疎水性の）表面基からなり、特定
の３次元構造特性及び特定の帯電特性を有し得る。エピトープは、事実上線状であっても
よく、又は線状の一連のアミノ酸ではなく、抗原の隣接していないアミノ酸間の空間的関
係によって形成される不連続エピトープ、例えば、立体構造エピトープであってもよい。
立体構造エピトープには、抗原の線状配列の異なる部分のアミノ酸同士が３次元空間で近
接するような抗原の折畳みによって生じるエピトープが含まれる。
【0029】
タウは、多数の周知のアイソフォームを有する豊富な中枢及び末梢神経系タンパク質で
ある。ヒトのＣＮＳでは、オルタナティブスプライシングによって３５２～４４１のサイ
ズの６つの主なタウアイソフォームが存在する（Ｈａｎｇｅｒ，ｅｔ ａｌ．Ｔｒｅｎｄ
ｓ Ｍｏｌ Ｍｅｄ １５：１１２－９，２００９）。これらアイソフォームは、０～２
個のＮ末端挿入、及び３又は４個のタンデムに配置された微小管結合反復配列が制御され
て含まれることにより互いに異なっており、０Ｎ３Ｒ（配列番号２６）、１Ｎ３Ｒ（配列
番号２７）、２Ｎ３Ｒ（配列番号２８）、０Ｎ４Ｒ（配列番号２９）、１Ｎ４Ｒ（配列番
号３０）、及び２Ｎ４Ｒ（配列番号３１）と称される。用語「対照タウ」及び「可溶性タ
ウ」とは、本明細書で互換的に使用されるとき、リン酸化及び他の翻訳後修飾されていな
い、配列番号３１のタウアイソフォームを指す。
ある。ヒトのＣＮＳでは、オルタナティブスプライシングによって３５２～４４１のサイ
ズの６つの主なタウアイソフォームが存在する（Ｈａｎｇｅｒ，ｅｔ ａｌ．Ｔｒｅｎｄ
ｓ Ｍｏｌ Ｍｅｄ １５：１１２－９，２００９）。これらアイソフォームは、０～２
個のＮ末端挿入、及び３又は４個のタンデムに配置された微小管結合反復配列が制御され
て含まれることにより互いに異なっており、０Ｎ３Ｒ（配列番号２６）、１Ｎ３Ｒ（配列
番号２７）、２Ｎ３Ｒ（配列番号２８）、０Ｎ４Ｒ（配列番号２９）、１Ｎ４Ｒ（配列番
号３０）、及び２Ｎ４Ｒ（配列番号３１）と称される。用語「対照タウ」及び「可溶性タ
ウ」とは、本明細書で互換的に使用されるとき、リン酸化及び他の翻訳後修飾されていな
い、配列番号３１のタウアイソフォームを指す。
【0030】
タウは、微小管に結合しており、タウのリン酸化によって調節され得るプロセスである
、細胞を通じたカーゴの輸送を制御する。ＡＤ及び関連する疾患においては、タウの異常
リン酸化が広く生じ、これは、タウの対らせん状細線維（ＰＨＦ）と呼ばれる原線維への
凝集の前に生じるか又はその凝集を誘発すると考えられる。ＰＨＦの主な成分は、高リン
酸化タウである。用語「対らせん状細線維－タウ」又は「ＰＨＦ－タウ」は、本明細書で
使用するとき、対らせん状細線維における周知のタウ凝集体を指す。ＰＨＦ構造における
２つの主要な領域は、電子顕微鏡、ファジーコート、及びコア細線維により明らかであり
、ファジーコートはタンパク質分解に対して感受性であり、フィラメントの外側に位置し
、当該フィラメントのプロテアーゼ耐性コアが、ＰＨＦの主鎖を形成する（Ｗｉｓｃｈｉ
ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ ８５：４８８４
－８，１９８８）。
、細胞を通じたカーゴの輸送を制御する。ＡＤ及び関連する疾患においては、タウの異常
リン酸化が広く生じ、これは、タウの対らせん状細線維（ＰＨＦ）と呼ばれる原線維への
凝集の前に生じるか又はその凝集を誘発すると考えられる。ＰＨＦの主な成分は、高リン
酸化タウである。用語「対らせん状細線維－タウ」又は「ＰＨＦ－タウ」は、本明細書で
使用するとき、対らせん状細線維における周知のタウ凝集体を指す。ＰＨＦ構造における
２つの主要な領域は、電子顕微鏡、ファジーコート、及びコア細線維により明らかであり
、ファジーコートはタンパク質分解に対して感受性であり、フィラメントの外側に位置し
、当該フィラメントのプロテアーゼ耐性コアが、ＰＨＦの主鎖を形成する（Ｗｉｓｃｈｉ
ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ ８５：４８８４
－８，１９８８）。
【0031】
本明細書で使用するとき、「ＰＨＦ－タウに結合する抗体」は、ウエスタンブロットで
評価したときにＰＨＦ－タウに結合する抗体を指す。典型的に、ＰＨＦ－タウに結合する
抗体は、５％（ｗ／ｖ）脱脂粉乳（ＮＦＤＭ）ＴＢＳ－Ｔ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２
０で１時間ブロッキングした後、約５００ｎｇのＰＨＦ－タウをクマシー染色した後に評
価することができる。対照タウ及びＰＨＦ－タウの両方がＰＨＦ－タウエピトープに対す
る選択性を有しないタウ抗体（例えば、抗体ＨＴ７（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ
（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ））によって等しく検出される抗原負荷条件下で試験した場合
、ウエスタンブロットによって測定したとき、ＰＨＦ－タウに結合する抗体は、対照タウ
（配列番号３１）には結合しない場合がある（Ｍｅｒｃｋｅｎ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｎｅｕ
ｒｏｃｈｅｍ ５８：５４８－５３，１９９２）。このような例示的な抗原ローディング
条件は、５００ｎｇのＰＨＦ－タウ及び２００ｎｇの対照タウである。
評価したときにＰＨＦ－タウに結合する抗体を指す。典型的に、ＰＨＦ－タウに結合する
抗体は、５％（ｗ／ｖ）脱脂粉乳（ＮＦＤＭ）ＴＢＳ－Ｔ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２
０で１時間ブロッキングした後、約５００ｎｇのＰＨＦ－タウをクマシー染色した後に評
価することができる。対照タウ及びＰＨＦ－タウの両方がＰＨＦ－タウエピトープに対す
る選択性を有しないタウ抗体（例えば、抗体ＨＴ７（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ
（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ））によって等しく検出される抗原負荷条件下で試験した場合
、ウエスタンブロットによって測定したとき、ＰＨＦ－タウに結合する抗体は、対照タウ
（配列番号３１）には結合しない場合がある（Ｍｅｒｃｋｅｎ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｎｅｕ
ｒｏｃｈｅｍ ５８：５４８－５３，１９９２）。このような例示的な抗原ローディング
条件は、５００ｎｇのＰＨＦ－タウ及び２００ｎｇの対照タウである。
【0032】
本明細書では、従来周知のアミノ酸の１文字表記及び３文字表記を用いる。
【0033】
物質の組成
本発明は、抗ＰＨＦ－タウ抗体及びこのような抗体の使用に関する。このような抗ＰＨ
Ｆ－タウ抗体は、ＰＨＦ－タウにてリン酸化エピトープを結合させる特性、又はＰＨＦ－
タウにて非リン酸化エピトープを結合させる特性を有することができる。抗ＰＨＦ－タウ
抗体は治療薬として有用であり得、また、生体サンプル、例えば組織又は細胞中のＰＨＦ
－タウを検出するための研究又は診断試薬としても有用であり得る。
本発明は、抗ＰＨＦ－タウ抗体及びこのような抗体の使用に関する。このような抗ＰＨ
Ｆ－タウ抗体は、ＰＨＦ－タウにてリン酸化エピトープを結合させる特性、又はＰＨＦ－
タウにて非リン酸化エピトープを結合させる特性を有することができる。抗ＰＨＦ－タウ
抗体は治療薬として有用であり得、また、生体サンプル、例えば組織又は細胞中のＰＨＦ
－タウを検出するための研究又は診断試薬としても有用であり得る。
【0034】
好ましい実施形態では、本発明の抗体は、表１に示す配列を有する。ＰＴ８２は、マウ
スモノクローナル抗体であり、ＰＴ１Ｂ７７８、ＰＴ１Ｂ７７９、ＰＴ１Ｂ７８０、ＰＴ
１Ｂ７８１、及びＰＴ１Ｂ７８２は、ＰＴ８２のヒト化バージョンである。可変領域配列
におけるＣＤＲには下線を付している。ヒト化モノクローナル抗体のＣＤＲにおける太字
のアミノ酸は、ＰＴ８２ ＣＤＲ配列と比較したときの置換を示す。
スモノクローナル抗体であり、ＰＴ１Ｂ７７８、ＰＴ１Ｂ７７９、ＰＴ１Ｂ７８０、ＰＴ
１Ｂ７８１、及びＰＴ１Ｂ７８２は、ＰＴ８２のヒト化バージョンである。可変領域配列
におけるＣＤＲには下線を付している。ヒト化モノクローナル抗体のＣＤＲにおける太字
のアミノ酸は、ＰＴ８２ ＣＤＲ配列と比較したときの置換を示す。
【0035】
【表1-1】
【0036】
【表1-2】
【0037】
一実施形態では、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１又
は７のＨＣＤＲ１；配列番号２、８、１０、１２、１３、又は１４のＨＣＤＲ２；及び配
列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖を有する。別の実施形態では、本発明のモノクローナル
抗体は、配列番号４、９又は１１のＬＣＤＲ１；配列番号５のＬＣＤＲ２；及び配列番号
６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖を有する。
は７のＨＣＤＲ１；配列番号２、８、１０、１２、１３、又は１４のＨＣＤＲ２；及び配
列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖を有する。別の実施形態では、本発明のモノクローナル
抗体は、配列番号４、９又は１１のＬＣＤＲ１；配列番号５のＬＣＤＲ２；及び配列番号
６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖を有する。
【0038】
好ましい実施形態では、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、
配列番号１のＨＣＤＲ１；配列番号２のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、並
びに配列番号４のＬＣＤＲ１、配列番号５のＬＣＤＲ２；及び配列番号６のＬＣＤＲ３；
配列番号７のＨＣＤＲ１；配列番号８のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、並
びに配列番号９のＬＣＤＲ１；配列番号５のＬＣＤＲ２；及び配列番号６のＬＣＤＲ３；
配列番号７のＨＣＤＲ１；配列番号１０のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、
並びに配列番号１１のＬＣＤＲ１；配列番号５のＬＣＤＲ２；及び配列番号６のＬＣＤＲ
３；
配列番号７のＨＣＤＲ１；配列番号１２のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、
並びに配列番号１１のＬＣＤＲ１；配列番号５のＬＣＤＲ２；及び配列番号６のＬＣＤＲ
３；
配列番号７のＨＣＤＲ１；配列番号１３のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、
並びに配列番号１１のＬＣＤＲ１；配列番号５のＬＣＤＲ２；及び配列番号６のＬＣＤＲ
３；又は
配列番号７のＨＣＤＲ１；配列番号１４のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、
並びに配列番号１１のＬＣＤＲ１；配列番号５のＬＣＤＲ２；及び配列番号６のＬＣＤＲ
３を含む。
配列番号１のＨＣＤＲ１；配列番号２のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、並
びに配列番号４のＬＣＤＲ１、配列番号５のＬＣＤＲ２；及び配列番号６のＬＣＤＲ３；
配列番号７のＨＣＤＲ１；配列番号８のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、並
びに配列番号９のＬＣＤＲ１；配列番号５のＬＣＤＲ２；及び配列番号６のＬＣＤＲ３；
配列番号７のＨＣＤＲ１；配列番号１０のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、
並びに配列番号１１のＬＣＤＲ１；配列番号５のＬＣＤＲ２；及び配列番号６のＬＣＤＲ
３；
配列番号７のＨＣＤＲ１；配列番号１２のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、
並びに配列番号１１のＬＣＤＲ１；配列番号５のＬＣＤＲ２；及び配列番号６のＬＣＤＲ
３；
配列番号７のＨＣＤＲ１；配列番号１３のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、
並びに配列番号１１のＬＣＤＲ１；配列番号５のＬＣＤＲ２；及び配列番号６のＬＣＤＲ
３；又は
配列番号７のＨＣＤＲ１；配列番号１４のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３、
並びに配列番号１１のＬＣＤＲ１；配列番号５のＬＣＤＲ２；及び配列番号６のＬＣＤＲ
３を含む。
【0039】
他の実施形態では、ＰＨＦ－タウに結合する本発明のモノクローナル抗体は、配列番号
１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、及び１４のいずれかの
ＣＤＲと少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、又は少なくとも９９％同一であ
る１つ以上のＣＤＲを含む。
１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、及び１４のいずれかの
ＣＤＲと少なくとも９７％同一、少なくとも９８％同一、又は少なくとも９９％同一であ
る１つ以上のＣＤＲを含む。
【0040】
別の実施形態では、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１
５、１７、１９、２１、２３、及び２４のいずれかを含む重鎖可変領域と、配列番号１６
、１８、２０、２２及び２５のいずれかを含む軽鎖可変領域とを含む。
５、１７、１９、２１、２３、及び２４のいずれかを含む重鎖可変領域と、配列番号１６
、１８、２０、２２及び２５のいずれかを含む軽鎖可変領域とを含む。
【0041】
別の実施形態では、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、
配列番号１５を含む重鎖可変領域及び配列番号１６を含む軽鎖可変領域；
配列番号１７を含む重鎖可変領域及び配列番号１８を含む軽鎖可変領域；
配列番号１９を含む重鎖可変領域及び配列番号２０を含む軽鎖可変領域；
配列番号２１を含む重鎖可変領域及び配列番号２２を含む軽鎖可変領域；
配列番号２３を含む重鎖可変領域及び配列番号２０を含む軽鎖可変領域；又は
配列番号２４を含む重鎖可変領域及び配列番号２５を含む軽鎖可変領域を含む。
配列番号１５を含む重鎖可変領域及び配列番号１６を含む軽鎖可変領域；
配列番号１７を含む重鎖可変領域及び配列番号１８を含む軽鎖可変領域；
配列番号１９を含む重鎖可変領域及び配列番号２０を含む軽鎖可変領域；
配列番号２１を含む重鎖可変領域及び配列番号２２を含む軽鎖可変領域；
配列番号２３を含む重鎖可変領域及び配列番号２０を含む軽鎖可変領域；又は
配列番号２４を含む重鎖可変領域及び配列番号２５を含む軽鎖可変領域を含む。
【0042】
別の実施形態では、ＰＨＦ－タウに結合する本発明のモノクローナル抗体又はその抗原
結合断片は、配列番号１５、１７、１９、２１、２３、及び２４のいずれかと少なくとも
８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、
少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％同一であるアミノ酸配列を含む
重鎖可変領域及び／又は配列番号１６、１８、２０、２２及び２５のいずれかと少なくと
も８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％
、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％同一であるアミノ酸配列を含
む軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲ領域は、アミノ酸変化が可変領域の
非ＣＤＲ領域に存在するように、表１に記載のとおりである。
結合断片は、配列番号１５、１７、１９、２１、２３、及び２４のいずれかと少なくとも
８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、
少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％同一であるアミノ酸配列を含む
重鎖可変領域及び／又は配列番号１６、１８、２０、２２及び２５のいずれかと少なくと
も８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％
、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％同一であるアミノ酸配列を含
む軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲ領域は、アミノ酸変化が可変領域の
非ＣＤＲ領域に存在するように、表１に記載のとおりである。
【0043】
別の実施形態では、本発明の単離抗体又はその抗原結合断片は、ヒトタウタンパク質の
１１９～１２６を含むエピトープに結合し、アミノ酸の付番は、配列番号３１に記載のア
ミノ酸配列を参照する。
１１９～１２６を含むエピトープに結合し、アミノ酸の付番は、配列番号３１に記載のア
ミノ酸配列を参照する。
【0044】
実施例で説明する実施形態は、一方が重鎖に由来し、一方が軽鎖に由来する可変領域の
対を含むが、当業者であれば、別の実施形態が、単一の重鎖又は軽鎖の可変領域を含んで
いてもよいことを理解するであろう。１つの可変領域を用いて、例えばＰＨＦ－タウに結
合することが可能な２ドメイン特異的抗原結合断片を形成することが可能な可変ドメイン
についてスクリーニングすることができる。スクリーニングは、例えば、国際公開第９２
／０１０４７号に開示されている階層的デュアルコンビナトリアルアプローチを用いたフ
ァージディスプレイスクリーニング法によって実現することができる。このアプローチで
は、Ｈ鎖又はＬ鎖のいずれかのクローンを含む個別のコロニーを用いて他方の鎖（Ｌ又は
Ｈ）をコードしているクローンの完全なライブラリを感染させ、得られた二本鎖特異的抗
原結合ドメインを記載されるようなファージディスプレイ法に従って選択する。
対を含むが、当業者であれば、別の実施形態が、単一の重鎖又は軽鎖の可変領域を含んで
いてもよいことを理解するであろう。１つの可変領域を用いて、例えばＰＨＦ－タウに結
合することが可能な２ドメイン特異的抗原結合断片を形成することが可能な可変ドメイン
についてスクリーニングすることができる。スクリーニングは、例えば、国際公開第９２
／０１０４７号に開示されている階層的デュアルコンビナトリアルアプローチを用いたフ
ァージディスプレイスクリーニング法によって実現することができる。このアプローチで
は、Ｈ鎖又はＬ鎖のいずれかのクローンを含む個別のコロニーを用いて他方の鎖（Ｌ又は
Ｈ）をコードしているクローンの完全なライブラリを感染させ、得られた二本鎖特異的抗
原結合ドメインを記載されるようなファージディスプレイ法に従って選択する。
【0045】
本発明の別の実施形態は、配列番号１５、１７、１９、２１、２３、及び２４のいずれ
かの重鎖可変領域（ＶＨ）並びに／又は配列番号１６、１８、２０、２２及び２５のいず
れかのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する抗原結合部位を含む、ＰＨＦ－タウに結
合する単離抗体である。一実施形態では、本発明の単離抗体又はその抗原結合断片は、Ｉ
ＧＨＶ６－３＊０１のＩＭＧＴ生殖系列識別子（Ｂａｒｂｉｅ ａｎｄ Ｌｅｆｒａｎｃ
，１９９８、Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔ，１５：１７１－１８３）を有
するＶＨと、ＩＧＫＶ６－１３＊０１のＩＭＧＴ生殖系列識別子を有するＶＬとを含む。
かの重鎖可変領域（ＶＨ）並びに／又は配列番号１６、１８、２０、２２及び２５のいず
れかのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する抗原結合部位を含む、ＰＨＦ－タウに結
合する単離抗体である。一実施形態では、本発明の単離抗体又はその抗原結合断片は、Ｉ
ＧＨＶ６－３＊０１のＩＭＧＴ生殖系列識別子（Ｂａｒｂｉｅ ａｎｄ Ｌｅｆｒａｎｃ
，１９９８、Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔ，１５：１７１－１８３）を有
するＶＨと、ＩＧＫＶ６－１３＊０１のＩＭＧＴ生殖系列識別子を有するＶＬとを含む。
【0046】
前述の実施形態のいずれかでは、ＰＨＦ－タウに結合する単離抗体は、ヒト化され得る
。
。
【0047】
本発明の抗体は、様々な技術により、例えばハイブリドーマ法（Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ
Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ．２５６：４９５－７，１９７５）により生成するこ
とができる。アクセプター抗体（典型的にはヒトなどの別の哺乳類種）に由来する軽鎖及
び重鎖定常領域と会合しているドナー抗体（典型的にはマウス）に由来する軽鎖及び重鎖
可変領域を含有するキメラｍＡｂは、米国特許第４，８１６，５６７号に開示されている
方法により調製することができる。非ヒトドナー免疫グロブリン（典型的にはマウス）に
由来するＣＤＲと１つ以上のヒト免疫グロブリンに由来する分子の残りの免疫グロブリン
由来部分とを有するＣＤＲグラフトｍＡｂは、米国特許第５，２２５，５３９号に開示さ
れているような当業者に公知の技術によって調製することができる。
Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ．２５６：４９５－７，１９７５）により生成するこ
とができる。アクセプター抗体（典型的にはヒトなどの別の哺乳類種）に由来する軽鎖及
び重鎖定常領域と会合しているドナー抗体（典型的にはマウス）に由来する軽鎖及び重鎖
可変領域を含有するキメラｍＡｂは、米国特許第４，８１６，５６７号に開示されている
方法により調製することができる。非ヒトドナー免疫グロブリン（典型的にはマウス）に
由来するＣＤＲと１つ以上のヒト免疫グロブリンに由来する分子の残りの免疫グロブリン
由来部分とを有するＣＤＲグラフトｍＡｂは、米国特許第５，２２５，５３９号に開示さ
れているような当業者に公知の技術によって調製することができる。
【0048】
非ヒト配列を全く有しない完全ヒトｍＡｂは、（Ｌｏｎｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ
ｕｒｅ ３６８：８５６－９，１９９４、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｂｉ
ｏｔｅｃｈｎｏｌ １４：８４５－５１，１９９６、Ｍｅｎｄｅｚ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ
Ｇｅｎｅｔ １５：１４６－５６，１９９７）において言及されている技術によって、
ヒト免疫グロブリントランスジェニックマウスから調製することができる。また、ヒトｍ
Ａｂは、ファージディスプレイライブラリから調製及び最適化することもできる（Ｋｎａ
ｐｐｉｋ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９６：５７－８６，２０００、Ｋｒｅ
ｂｓ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２５４：６７－８４，２００
１、Ｓｈｉ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９７：３８５－９６，２０１０）。
ｕｒｅ ３６８：８５６－９，１９９４、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｂｉ
ｏｔｅｃｈｎｏｌ １４：８４５－５１，１９９６、Ｍｅｎｄｅｚ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ
Ｇｅｎｅｔ １５：１４６－５６，１９９７）において言及されている技術によって、
ヒト免疫グロブリントランスジェニックマウスから調製することができる。また、ヒトｍ
Ａｂは、ファージディスプレイライブラリから調製及び最適化することもできる（Ｋｎａ
ｐｐｉｋ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９６：５７－８６，２０００、Ｋｒｅ
ｂｓ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２５４：６７－８４，２００
１、Ｓｈｉ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９７：３８５－９６，２０１０）。
【0049】
抗体のヒト化は、特異性決定残基リサーフェシング（ＳＤＲＲ）（米国特許出願公開第
２０１０／０２６１６２０号）、リサーフェシング（Ｐａｄｌａｎ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９－９８，１９９１）、超ヒト化（国際公開第０４／００
６９５５号）、及びヒトストリング含有量の最適化（米国特許第７，６５７，３８０号）
などの周知の方法を使用して達成することができる。グラフト化／ヒト化に有用なヒトフ
レームワーク配列は、当業者であれば関連するデータベースから選択することができる。
選択されたフレームワークは、Ｑｕｅｅｎら（Ｑｕｅｅｎ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａ
ｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ ８６：１００２９－３３，１９８９）又は米国特
許出願公開第２０１１／００９２３７２号に開示されているものなどの技術によって、結
合親和性を保持又は増強するために更に修飾されてもよい。
２０１０／０２６１６２０号）、リサーフェシング（Ｐａｄｌａｎ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９－９８，１９９１）、超ヒト化（国際公開第０４／００
６９５５号）、及びヒトストリング含有量の最適化（米国特許第７，６５７，３８０号）
などの周知の方法を使用して達成することができる。グラフト化／ヒト化に有用なヒトフ
レームワーク配列は、当業者であれば関連するデータベースから選択することができる。
選択されたフレームワークは、Ｑｕｅｅｎら（Ｑｕｅｅｎ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａ
ｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ ８６：１００２９－３３，１９８９）又は米国特
許出願公開第２０１１／００９２３７２号に開示されているものなどの技術によって、結
合親和性を保持又は増強するために更に修飾されてもよい。
【0050】
免疫用抗原又は単離抗体として用いるためのＰＨＦ－タウのファージディスプレイライ
ブラリからの調製は、任意の好適な技術を用いて行うことができる。例示的な方法では、
ＰＨＦ－タウは、Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ及びＤａｖｉｅｓ（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ ａｎｄ
Ｄａｖｉｅｓ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ ８７：５８２７－
３１，１９９０）に記載されているような周知のプロトコールを用いて、ＡＤを有する患
者の脳から単離される。ＰＨＦ－タウは、アルツハイマー患者の死後皮質から単離しても
よい。単離ＰＨＦ－タウは、その純度及びＰＨＦ－タウと反応することが知られている抗
体による過剰リン酸化状態を特徴とする。典型的なＰＨＦ－タウの調製では、ウエスタン
ブロットにおいて約６０、６４、６８、及び７２ｋＤａで移動する高リン酸化バンド（Ｓ
ｐｉｌｌａｎｔｉｎｉ ａｎｄ Ｇｏｅｄｅｒｔ Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ２
１：４２８－３３，１９９８）は、高リン酸化ＰＨＦ－タウに特異的に結合するが、脱リ
ン酸化ＰＨＦ－タウには結合しないＡＴ８抗体によって検出される。
ブラリからの調製は、任意の好適な技術を用いて行うことができる。例示的な方法では、
ＰＨＦ－タウは、Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ及びＤａｖｉｅｓ（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ ａｎｄ
Ｄａｖｉｅｓ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ ８７：５８２７－
３１，１９９０）に記載されているような周知のプロトコールを用いて、ＡＤを有する患
者の脳から単離される。ＰＨＦ－タウは、アルツハイマー患者の死後皮質から単離しても
よい。単離ＰＨＦ－タウは、その純度及びＰＨＦ－タウと反応することが知られている抗
体による過剰リン酸化状態を特徴とする。典型的なＰＨＦ－タウの調製では、ウエスタン
ブロットにおいて約６０、６４、６８、及び７２ｋＤａで移動する高リン酸化バンド（Ｓ
ｐｉｌｌａｎｔｉｎｉ ａｎｄ Ｇｏｅｄｅｒｔ Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ２
１：４２８－３３，１９９８）は、高リン酸化ＰＨＦ－タウに特異的に結合するが、脱リ
ン酸化ＰＨＦ－タウには結合しないＡＴ８抗体によって検出される。
【0051】
本発明の抗体は、配列番号３１の対照タウには結合しないという特徴を有し得る。この
ような抗体は、上記方法、及びウエスタンブロットにおいて対照タウに結合しないことに
ついて抗体を試験し、次いで、上記のとおりクマシー染色することを用いて生成すること
ができる。対照タウは、組換え的に発現させ、標準的な方法を用いて精製することができ
る。
ような抗体は、上記方法、及びウエスタンブロットにおいて対照タウに結合しないことに
ついて抗体を試験し、次いで、上記のとおりクマシー染色することを用いて生成すること
ができる。対照タウは、組換え的に発現させ、標準的な方法を用いて精製することができ
る。
【0052】
本発明の抗体又はその抗原結合断片は、例えば、対照及びＡＤの脳切片に対する免疫組
織化学的検査を用いて、その特異性について更に評価してもよい。
織化学的検査を用いて、その特異性について更に評価してもよい。
【0053】
本発明の抗体は、ＰＨＦ－タウに対する親和性を有し得、解離定数（ＫＤ）は、約１０
－７、１０－８、１０－９、１０－１０、１０－１１、又は１０－１２Ｍ以下である。Ｐ
ＨＦ－タウに対する所与の分子の親和性は、任意の好適な方法を用いて実験的に判定する
ことができる。このような方法は、当業者に公知のＢｉａｃｏｒｅ、ＰｒｏｔｅＯｎ若し
くはＫｉｎＥｘＡ装置、ＥＬＩＳＡ、又は競合的結合アッセイを利用し得る。
－７、１０－８、１０－９、１０－１０、１０－１１、又は１０－１２Ｍ以下である。Ｐ
ＨＦ－タウに対する所与の分子の親和性は、任意の好適な方法を用いて実験的に判定する
ことができる。このような方法は、当業者に公知のＢｉａｃｏｒｅ、ＰｒｏｔｅＯｎ若し
くはＫｉｎＥｘＡ装置、ＥＬＩＳＡ、又は競合的結合アッセイを利用し得る。
【0054】
本発明の別の態様は、配列番号１５、１７、１９、２１、２３、及び２４のいずれかの
重鎖可変領域と、配列番号１６、１８、２０、２２及び２５のいずれかのアミノ酸配列を
含む軽鎖可変領域とを有する抗原結合部位を含む、ＰＨＦ－タウ結合についてモノクロー
ナル抗体と競合する単離抗体又はその抗原結合断片である。
重鎖可変領域と、配列番号１６、１８、２０、２２及び２５のいずれかのアミノ酸配列を
含む軽鎖可変領域とを有する抗原結合部位を含む、ＰＨＦ－タウ結合についてモノクロー
ナル抗体と競合する単離抗体又はその抗原結合断片である。
【0055】
本発明の別の態様は、配列番号１５の重鎖可変領域及び配列番号１６のアミノ酸配列を
含む軽鎖可変領域；配列番号１７の重鎖可変領域及び配列番号１８のアミノ酸配列を含む
軽鎖可変領域；配列番号１９の重鎖可変領域及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖
可変領域；配列番号２１の重鎖可変領域及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変
領域；配列番号２３の重鎖可変領域及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
；又は配列番号２４の重鎖可変領域及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を有する抗原結合部位を含む、ＰＨＦ－タウ結合についてモノクローナル抗体と競合する
単離抗体又はその抗原結合断片である。
含む軽鎖可変領域；配列番号１７の重鎖可変領域及び配列番号１８のアミノ酸配列を含む
軽鎖可変領域；配列番号１９の重鎖可変領域及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖
可変領域；配列番号２１の重鎖可変領域及び配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変
領域；配列番号２３の重鎖可変領域及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
；又は配列番号２４の重鎖可変領域及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を有する抗原結合部位を含む、ＰＨＦ－タウ結合についてモノクローナル抗体と競合する
単離抗体又はその抗原結合断片である。
【0056】
ＰＨＦ－タウに対する結合間の競合は、周知の方法を用いてインビトロでアッセイする
ことができる。例えば、未標識抗体の存在下におけるＭＳＤ Ｓｕｌｆｏ－タグ（商標）
ＮＨＳ－エステル標識抗体のＰＨＦ－タウに対する結合は、イムノアッセイ、続いて、電
気化学発光検出を用いて評価することができる。
ことができる。例えば、未標識抗体の存在下におけるＭＳＤ Ｓｕｌｆｏ－タグ（商標）
ＮＨＳ－エステル標識抗体のＰＨＦ－タウに対する結合は、イムノアッセイ、続いて、電
気化学発光検出を用いて評価することができる。
【0057】
競合的結合に加えて、いくつかの周知の方法を用いて、本発明の抗体の結合エピトープ
を決定することができる。例えば、両方の個々の構成要素の構造が知られている場合、イ
ンシリコでタンパク質－タンパク質ドッキングを行って、適合する相互作用部位を特定す
ることができる。抗原抗体複合体を用いて水素－重水素（Ｈ／Ｄ）交換を行って、抗体が
結合し得る抗原の領域をマッピングすることができる。抗原のセグメント及び点変異誘導
を用いることにより、抗体の結合に重要なアミノ酸の位置を特定することができる。抗体
－抗原複合体の共結晶構造を使用して、エピトープ及びパラトープに寄与する残基を特定
することができる。
を決定することができる。例えば、両方の個々の構成要素の構造が知られている場合、イ
ンシリコでタンパク質－タンパク質ドッキングを行って、適合する相互作用部位を特定す
ることができる。抗原抗体複合体を用いて水素－重水素（Ｈ／Ｄ）交換を行って、抗体が
結合し得る抗原の領域をマッピングすることができる。抗原のセグメント及び点変異誘導
を用いることにより、抗体の結合に重要なアミノ酸の位置を特定することができる。抗体
－抗原複合体の共結晶構造を使用して、エピトープ及びパラトープに寄与する残基を特定
することができる。
【0058】
本発明の抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、又はＩｇＭアイソタイプのモノクローナル
抗体であってよい。本発明の抗体は、二重特異的又は多重特異的であってよい。例示的な
二重特異性抗体は、ＰＨＦ－タウ上の２つの異なるエピトープに結合することができるか
、又はＰＨＦ－タウ及びアミロイドベータ（Ａβに結合することができる。別の例示的な
二重特異性抗体は、ＰＨＦ－タウ及び内因性血液脳関門トランスサイトーシス受容体、例
えば、インスリン受容体、トランスフェリング受容体（transferring receptor）、イン
スリン様増殖因子－１受容体、及びリポタンパク質受容体に結合することができる。例示
的な抗体は、ＩｇＧ１タイプである。
抗体であってよい。本発明の抗体は、二重特異的又は多重特異的であってよい。例示的な
二重特異性抗体は、ＰＨＦ－タウ上の２つの異なるエピトープに結合することができるか
、又はＰＨＦ－タウ及びアミロイドベータ（Ａβに結合することができる。別の例示的な
二重特異性抗体は、ＰＨＦ－タウ及び内因性血液脳関門トランスサイトーシス受容体、例
えば、インスリン受容体、トランスフェリング受容体（transferring receptor）、イン
スリン様増殖因子－１受容体、及びリポタンパク質受容体に結合することができる。例示
的な抗体は、ＩｇＧ１タイプである。
【0059】
本発明の抗体の免疫エフェクターの特性は、当業者には既知の技術により、Ｆｃ修飾に
よって強化又はサイレンシングすることが可能である。例えば、Ｃ１ｑ結合、補体依存性
細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、貧食、細胞表面受容
体（例えば、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ））の下方制御などのＦｃエフェクター機能は、これ
らの活性を担うＦｃの残基を修飾することによって提供及び／又は制御され得る。例えば
、Ｆｃ領域は、エフェクター機能を排除する置換を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含有
し得る。したがって、単離抗体は、以下の置換のうちの１つ以上を含有する修飾されたヒ
トＩｇＧ４ Ｆｃ領域を有するＦｃ領域を更に含む：残基２３３におけるグルタミン酸の
プロリンでの置換、残基２３４におけるフェニルアラニンのアラニン又はバリンでの置換
、及びに残基２３５におけるロイシンのアラニン又はグルタミン酸での置換（ＥＵ付番、
Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅ
ｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｕ．Ｓ
． Ｄｅｐｔ． ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ， Ｂｅ
ｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ｎｏ．９１－３２４２）。残
基２９７（ＥＵ番号付け）においてＡｓｎの代わりにＡｌａを使用することによって、Ｉ
ｇＧ４ Ｆｃ領域におけるＮ連結グリコシル化部位を除去することは、残留エフェクター
活性が排除されることを確実にする別の方法である。また、抗体の半減期を延長するＦｃ
ドメインの残基を変異させることによって、薬物動態特性を増強することができる（Ｓｔ
ｒｏｈｌ Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２０：６８５－９１，２００９
）。
よって強化又はサイレンシングすることが可能である。例えば、Ｃ１ｑ結合、補体依存性
細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、貧食、細胞表面受容
体（例えば、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ））の下方制御などのＦｃエフェクター機能は、これ
らの活性を担うＦｃの残基を修飾することによって提供及び／又は制御され得る。例えば
、Ｆｃ領域は、エフェクター機能を排除する置換を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含有
し得る。したがって、単離抗体は、以下の置換のうちの１つ以上を含有する修飾されたヒ
トＩｇＧ４ Ｆｃ領域を有するＦｃ領域を更に含む：残基２３３におけるグルタミン酸の
プロリンでの置換、残基２３４におけるフェニルアラニンのアラニン又はバリンでの置換
、及びに残基２３５におけるロイシンのアラニン又はグルタミン酸での置換（ＥＵ付番、
Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅ
ｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｕ．Ｓ
． Ｄｅｐｔ． ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ， Ｂｅ
ｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ｎｏ．９１－３２４２）。残
基２９７（ＥＵ番号付け）においてＡｓｎの代わりにＡｌａを使用することによって、Ｉ
ｇＧ４ Ｆｃ領域におけるＮ連結グリコシル化部位を除去することは、残留エフェクター
活性が排除されることを確実にする別の方法である。また、抗体の半減期を延長するＦｃ
ドメインの残基を変異させることによって、薬物動態特性を増強することができる（Ｓｔ
ｒｏｈｌ Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２０：６８５－９１，２００９
）。
【0060】
更に、本発明の抗体は、グリコシル化、異性化、脱グリコシル化、又はポリエチレング
リコール部分の付加（ペグ化）及び脂質化などの自然界では生じない共有結合修飾などの
プロセスによって、翻訳後修飾してもよい。このような修飾はインビボ又はインビトロで
行われ得る。例えば、本発明の抗体はポリエチレングリコールとコンジュゲート（ＰＥＧ
化）することによって薬物動態的なプロファイルを向上させることができる。コンジュゲ
ーションは、当業者に既知の方法によって行うことができる。治療用抗体とＰＥＧとのコ
ンジュゲーションは、薬効を増強するが、機能には干渉しないことが示されている（Ｋｎ
ｉｇｈｔ，ｅｔ ａｌ．Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ １５：４０９－１８，２００４、Ｌｅｏｎ
ｇ，ｅｔ ａｌ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ １６：１０６－１９，２００１、Ｙａｎｇ，ｅｔ
ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ １６：７６１－７０，２００３）。
リコール部分の付加（ペグ化）及び脂質化などの自然界では生じない共有結合修飾などの
プロセスによって、翻訳後修飾してもよい。このような修飾はインビボ又はインビトロで
行われ得る。例えば、本発明の抗体はポリエチレングリコールとコンジュゲート（ＰＥＧ
化）することによって薬物動態的なプロファイルを向上させることができる。コンジュゲ
ーションは、当業者に既知の方法によって行うことができる。治療用抗体とＰＥＧとのコ
ンジュゲーションは、薬効を増強するが、機能には干渉しないことが示されている（Ｋｎ
ｉｇｈｔ，ｅｔ ａｌ．Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ １５：４０９－１８，２００４、Ｌｅｏｎ
ｇ，ｅｔ ａｌ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ １６：１０６－１９，２００１、Ｙａｎｇ，ｅｔ
ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ １６：７６１－７０，２００３）。
【0061】
本発明の別の実施形態は、本発明の抗体をコードしている単離ポリヌクレオチド、又は
その補体、又はその断片である。例示的な単離ポリヌクレオチドは、配列番号１又は７の
ＨＣＤＲ１；配列番号２、８、１０、１２、１３、又は１４のＨＣＤＲ２；及び配列番号
３のＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖を含むポリペプチドをコードしているポリヌク
レオチドであり、配列番号４、９、又は１１のＬＣＤＲ１；配列番号５のＬＣＤＲ２；及
び配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖を有する。更なる例示的な単離ポリヌクレオチドは
、配列番号１５、１７、１９、２１、２３、及び２４のいずれかの重鎖可変領域と配列番
号１６、１８、２０、２２、及び２５のいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを
含むポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドである。
その補体、又はその断片である。例示的な単離ポリヌクレオチドは、配列番号１又は７の
ＨＣＤＲ１；配列番号２、８、１０、１２、１３、又は１４のＨＣＤＲ２；及び配列番号
３のＨＣＤＲ３を含む免疫グロブリン重鎖を含むポリペプチドをコードしているポリヌク
レオチドであり、配列番号４、９、又は１１のＬＣＤＲ１；配列番号５のＬＣＤＲ２；及
び配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖を有する。更なる例示的な単離ポリヌクレオチドは
、配列番号１５、１７、１９、２１、２３、及び２４のいずれかの重鎖可変領域と配列番
号１６、１８、２０、２２、及び２５のいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを
含むポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドである。
【0062】
遺伝コードの縮重又は所与の発現系におけるコドンの選好性を考慮すると、本発明の抗
体をコードする他のポリヌクレオチドも本発明の範囲内に含まれる。本発明の単離核酸は
、公知の組換え又は合成技術を用いて作製することができる。モノクローナル抗体をコー
ドしているＤＮＡは、当該技術分野において公知の方法を用いて容易に単離され、配列決
定される。ハイブリドーマが生成される場合、そのような細胞はそれらのＤＮＡの供給源
として機能することができる。あるいは、例えばファージ又はリボソームディスプレイラ
イブラリなどのコード配列と翻訳産物とが連結しているディスプレイ技術を用いると、結
合剤及び核酸の選択が簡略化される。ファージの選択後、ファージからの抗体コード領域
が単離され、ヒト抗体、又は任意の他の所望の抗原結合断片を含む抗体全体の生成に使用
され、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、及び細菌を含む任意の所望の宿主内で
発現され得る。
体をコードする他のポリヌクレオチドも本発明の範囲内に含まれる。本発明の単離核酸は
、公知の組換え又は合成技術を用いて作製することができる。モノクローナル抗体をコー
ドしているＤＮＡは、当該技術分野において公知の方法を用いて容易に単離され、配列決
定される。ハイブリドーマが生成される場合、そのような細胞はそれらのＤＮＡの供給源
として機能することができる。あるいは、例えばファージ又はリボソームディスプレイラ
イブラリなどのコード配列と翻訳産物とが連結しているディスプレイ技術を用いると、結
合剤及び核酸の選択が簡略化される。ファージの選択後、ファージからの抗体コード領域
が単離され、ヒト抗体、又は任意の他の所望の抗原結合断片を含む抗体全体の生成に使用
され、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、及び細菌を含む任意の所望の宿主内で
発現され得る。
【0063】
本発明の別の実施形態は、少なくとも１つの本発明のポリヌクレオチドを含むベクター
である。このようなベクターは、プラスミドベクター、ウイルスベクター、トランスポゾ
ンに基づくベクター、又は任意の手段によって所与の生物若しくは遺伝子的バックグラウ
ンドに本発明のポリヌクレオチドを導入するのに好適な任意の他のベクターであってよい
。
である。このようなベクターは、プラスミドベクター、ウイルスベクター、トランスポゾ
ンに基づくベクター、又は任意の手段によって所与の生物若しくは遺伝子的バックグラウ
ンドに本発明のポリヌクレオチドを導入するのに好適な任意の他のベクターであってよい
。
【0064】
本発明の別の実施形態は、本発明のポリヌクレオチドのいずれかを含む宿主細胞である
。このような宿主細胞は、真核細胞、細菌細胞、植物細胞、又は古細菌細胞であってよい
。例示的な真核細胞は、哺乳動物、昆虫、鳥類、又は他の動物由来のものであってもよい
。哺乳類真核細胞としては、不死化細胞株（例えばハイブリドーマ）又は骨髄腫細胞株（
例えばＳＰ２／０（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏ
ｎ（ＡＴＣＣ）、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＣＲＬ－１５８１）、ＮＳ０（Ｅｕｒｏｐｅ
ａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）、Ｓａ
ｌｉｓｂｕｒｙ，Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ，ＵＫ、ＥＣＡＣＣ Ｎｏ．８５１１０５０３）、
ＦＯ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６４６）及びＡｇ６５３（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８０）マ
ウス細胞株）が挙げられる。例示的なヒト骨髄腫細胞株は、Ｕ２６６（ＡＴＴＣ ＣＲＬ
－ＴＩＢ－１９６）である。他の有用な細胞株としては、ＣＨＯ－Ｋ１ＳＶ（Ｌｏｎｚａ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）、ＣＨＯ－Ｋ１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－６１、Ｉｎｖｔｒｏｇｅｎ
）のようなチャイニーズハムスターに由来する卵巣（ＣＨＯ）細胞又はＤＧ４４が挙げら
れる。
。このような宿主細胞は、真核細胞、細菌細胞、植物細胞、又は古細菌細胞であってよい
。例示的な真核細胞は、哺乳動物、昆虫、鳥類、又は他の動物由来のものであってもよい
。哺乳類真核細胞としては、不死化細胞株（例えばハイブリドーマ）又は骨髄腫細胞株（
例えばＳＰ２／０（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏ
ｎ（ＡＴＣＣ）、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＣＲＬ－１５８１）、ＮＳ０（Ｅｕｒｏｐｅ
ａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）、Ｓａ
ｌｉｓｂｕｒｙ，Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ，ＵＫ、ＥＣＡＣＣ Ｎｏ．８５１１０５０３）、
ＦＯ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６４６）及びＡｇ６５３（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８０）マ
ウス細胞株）が挙げられる。例示的なヒト骨髄腫細胞株は、Ｕ２６６（ＡＴＴＣ ＣＲＬ
－ＴＩＢ－１９６）である。他の有用な細胞株としては、ＣＨＯ－Ｋ１ＳＶ（Ｌｏｎｚａ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）、ＣＨＯ－Ｋ１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－６１、Ｉｎｖｔｒｏｇｅｎ
）のようなチャイニーズハムスターに由来する卵巣（ＣＨＯ）細胞又はＤＧ４４が挙げら
れる。
【0065】
本発明の別の実施形態は、本発明の宿主細胞を培養し、当該宿主細胞によって産生され
た抗体を回収することを含む、ＰＨＦ－タウと結合する抗体を作製する方法である。抗体
を作製し、それを精製する方法は、当該技術分野において周知である。
た抗体を回収することを含む、ＰＨＦ－タウと結合する抗体を作製する方法である。抗体
を作製し、それを精製する方法は、当該技術分野において周知である。
【0066】
治療方法
Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、ｓｃＦｖ断片を含む本発明の抗ＰＨＦ－タウ抗体又はその抗
原結合断片、又は本発明の抗体の抗原結合部位を含む抗体を用いて、脳内にタウの病理学
的凝集を伴う神経変性疾患を有する患者における症状を治療、低減、又は予防することが
できる。
Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、ｓｃＦｖ断片を含む本発明の抗ＰＨＦ－タウ抗体又はその抗
原結合断片、又は本発明の抗体の抗原結合部位を含む抗体を用いて、脳内にタウの病理学
的凝集を伴う神経変性疾患を有する患者における症状を治療、低減、又は予防することが
できる。
【0067】
本発明の方法によって治療される疾患（タウ異常症）としては、アルツハイマー病（家
族性アルツハイマー病及び散発性アルツハイマー病を含む）、染色体１７に関連したパー
キンソン症候群による前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、進行性核上性麻痺、大脳皮
質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、神経原線維型認知症、石灰化を伴う
びまん性神経原線維変化病、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症／パーキンソン認知
症複合、ダウン症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、ハラーフォルデン
－シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多系統萎縮症、Ｃ型ニーマ
ン・ピック病、プリオンタンパク質脳アミロイド血管障害、亜急性硬化性全脳炎、筋強直
性ジストロフィー、神経原線維変化を伴う非グアム型運動ニューロン疾患、脳炎後パーキ
ンソン症候群、慢性外傷性脳症、及び拳闘家認知症（ボクサー病）からなる群から選択さ
れる１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。
族性アルツハイマー病及び散発性アルツハイマー病を含む）、染色体１７に関連したパー
キンソン症候群による前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、進行性核上性麻痺、大脳皮
質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、神経原線維型認知症、石灰化を伴う
びまん性神経原線維変化病、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症／パーキンソン認知
症複合、ダウン症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、ハラーフォルデン
－シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多系統萎縮症、Ｃ型ニーマ
ン・ピック病、プリオンタンパク質脳アミロイド血管障害、亜急性硬化性全脳炎、筋強直
性ジストロフィー、神経原線維変化を伴う非グアム型運動ニューロン疾患、脳炎後パーキ
ンソン症候群、慢性外傷性脳症、及び拳闘家認知症（ボクサー病）からなる群から選択さ
れる１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。
【0068】
好ましくは、疾患（タウ異常症）は、アルツハイマー病（家族性アルツハイマー病及び
散発性アルツハイマー病を含む）、ＦＴＤＰ－１７、又は進行性核上麻痺である。
散発性アルツハイマー病を含む）、ＦＴＤＰ－１７、又は進行性核上麻痺である。
【0069】
最も好ましくは、疾患（タウ異常症）は、アルツハイマー病（家族性アルツハイマー病
及び散発性アルツハイマー病を含む）である。
及び散発性アルツハイマー病を含む）である。
【0070】
任意の特定の理論に束縛されるものではないが、本発明の抗体又はその抗原結合断片は
、病理学的タウ凝集を低減し（例えば、凝集を予防及び／又は既に生じている凝集を減少
させ）、ひいては、脳内のＰＨＦ－タウの量を低減することによって、その有益な効果を
発揮することができる。本発明の抗体又はその抗原結合断片を用いて、任意の分類に属す
る動物患者を治療することができる。このような動物の例としては、ヒト、齧歯類、イヌ
、ネコ、及び家畜などの哺乳動物が挙げられる。例えば、本発明の抗体又はその抗原結合
断片は、ＡＤを治療するための医薬の調製において有用であり、当該医薬は、本明細書に
おいて規定される投薬量で投与するために調製される。
、病理学的タウ凝集を低減し（例えば、凝集を予防及び／又は既に生じている凝集を減少
させ）、ひいては、脳内のＰＨＦ－タウの量を低減することによって、その有益な効果を
発揮することができる。本発明の抗体又はその抗原結合断片を用いて、任意の分類に属す
る動物患者を治療することができる。このような動物の例としては、ヒト、齧歯類、イヌ
、ネコ、及び家畜などの哺乳動物が挙げられる。例えば、本発明の抗体又はその抗原結合
断片は、ＡＤを治療するための医薬の調製において有用であり、当該医薬は、本明細書に
おいて規定される投薬量で投与するために調製される。
【0071】
本発明の別の実施形態は、タウの凝集を低減するのに十分な時間、治療的に有効な量の
本発明の単離抗体又はその抗原結合断片を患者に投与することを含む、タウの凝集の低減
を必要としている患者における、タウの凝集を低減する方法である。
本発明の単離抗体又はその抗原結合断片を患者に投与することを含む、タウの凝集の低減
を必要としている患者における、タウの凝集を低減する方法である。
【0072】
本発明の別の実施形態は、タウの凝集を伴う神経変性疾患の症状を治療又は低減するの
に十分な時間、治療的に有効な量の本発明の単離抗体又はその抗原結合断片を患者に投与
することを含む、患者における当該神経変性疾患の症状を治療又は低減する方法である。
に十分な時間、治療的に有効な量の本発明の単離抗体又はその抗原結合断片を患者に投与
することを含む、患者における当該神経変性疾患の症状を治療又は低減する方法である。
【0073】
上記実施形態のいずれかでは、タウの凝集体を伴う神経変性疾患は、タウ異常症である
。
。
【0074】
本明細書で使用するとき、「タウ異常症」は、脳内のタウの病理学的凝集を伴う任意の
神経変性疾患を包含する。家族性及び散発性ＡＤに加えて、他の例示的なタウ異常症は、
染色体１７に関連したパーキンソン症候群による前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、
進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、神経原線
維型認知症、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索
硬化症／パーキンソン認知症複合、ダウン症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャイン
カー病、ハラーフォルデン－シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、
多系統萎縮症、Ｃ型ニーマン・ピック病、プリオンタンパク質脳アミロイド血管障害、亜
急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維変化を伴う非グアム型運動ニュ
ーロン疾患、脳炎後パーキンソン症候群、慢性外傷性脳症、及び拳闘家認知症（ボクサー
病）である。（Ｍｏｒｒｉｓ，ｅｔ ａｌ．Ｎｅｕｒｏｎ ７０：４１０－２６，２０１
１）。
神経変性疾患を包含する。家族性及び散発性ＡＤに加えて、他の例示的なタウ異常症は、
染色体１７に関連したパーキンソン症候群による前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、
進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、神経原線
維型認知症、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索
硬化症／パーキンソン認知症複合、ダウン症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャイン
カー病、ハラーフォルデン－シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、
多系統萎縮症、Ｃ型ニーマン・ピック病、プリオンタンパク質脳アミロイド血管障害、亜
急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維変化を伴う非グアム型運動ニュ
ーロン疾患、脳炎後パーキンソン症候群、慢性外傷性脳症、及び拳闘家認知症（ボクサー
病）である。（Ｍｏｒｒｉｓ，ｅｔ ａｌ．Ｎｅｕｒｏｎ ７０：４１０－２６，２０１
１）。
【0075】
タウ異常症に関連する行動的表現型としては、認知障害、初期人格変化及び脱抑制、感
情鈍麻、無為症、無言症、失行症、反復症、常同運動／挙動、口愛過度、混乱、連続タス
クを予定又は計画する能力の欠如、利己的行動／無神経、反社会的特徴、共感の欠如、言
葉のつかえ、錯誤的誤りは頻繁にあるが比較的理解力は保たれている失文症的な話し方、
理解障害及び換語欠陥、緩徐進行性歩行不安定性、後方突進、すくみ、頻繁な転倒、非レ
ボドパ反応性軸剛性、核上性注視麻痺、方形波痙攣、緩徐な垂直断続性運動、仮性球麻痺
、四肢失行症、筋緊張異常、皮質性感覚消失、及び振戦が挙げられる。
情鈍麻、無為症、無言症、失行症、反復症、常同運動／挙動、口愛過度、混乱、連続タス
クを予定又は計画する能力の欠如、利己的行動／無神経、反社会的特徴、共感の欠如、言
葉のつかえ、錯誤的誤りは頻繁にあるが比較的理解力は保たれている失文症的な話し方、
理解障害及び換語欠陥、緩徐進行性歩行不安定性、後方突進、すくみ、頻繁な転倒、非レ
ボドパ反応性軸剛性、核上性注視麻痺、方形波痙攣、緩徐な垂直断続性運動、仮性球麻痺
、四肢失行症、筋緊張異常、皮質性感覚消失、及び振戦が挙げられる。
【0076】
治療の影響を受けやすい患者としては、現在症状を示している患者に加えて、ＡＤ又は
他のタウ異常症のリスクを有する無症候性個体が挙げられる。治療の影響を受けやすい患
者としては、ＡＤの家族歴又はゲノムにおける遺伝的リスク因子の存在など、ＡＤの公知
の遺伝的リスクを有する個体が挙げられる。例示的なリスク因子は、特に、位置７１７、
並びに位置６７０及び６７１におけるアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の変異（そ
れぞれ、Ｈａｒｄｙ及びＳｗｅｄｉｓｈ変異）である。他のリスク因子は、プレセニリン
遺伝子、ＰＳ１及びＰＳ２、並びにＡｐｏＥ４における突然変異、高コレステロール血症
又は粥状硬化症の家族歴である。現在ＡＤに罹患している個体は、上記リスク因子の存在
によって特徴的な認知症から認識することができる。更に、ＡＤを有する個体を同定する
ために利用可能な多数の診断試験が存在する。これらとしては、脳脊髄液のタウ及びＡβ
４２レベルの測定が挙げられる。タウレベルの上昇及びＡβ４２レベルの低下が、ＡＤの
存在を表す。また、ＡＤに罹患している個体は、アルツハイマー病及び関連障害協会の基
準によって診断することもできる。
他のタウ異常症のリスクを有する無症候性個体が挙げられる。治療の影響を受けやすい患
者としては、ＡＤの家族歴又はゲノムにおける遺伝的リスク因子の存在など、ＡＤの公知
の遺伝的リスクを有する個体が挙げられる。例示的なリスク因子は、特に、位置７１７、
並びに位置６７０及び６７１におけるアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の変異（そ
れぞれ、Ｈａｒｄｙ及びＳｗｅｄｉｓｈ変異）である。他のリスク因子は、プレセニリン
遺伝子、ＰＳ１及びＰＳ２、並びにＡｐｏＥ４における突然変異、高コレステロール血症
又は粥状硬化症の家族歴である。現在ＡＤに罹患している個体は、上記リスク因子の存在
によって特徴的な認知症から認識することができる。更に、ＡＤを有する個体を同定する
ために利用可能な多数の診断試験が存在する。これらとしては、脳脊髄液のタウ及びＡβ
４２レベルの測定が挙げられる。タウレベルの上昇及びＡβ４２レベルの低下が、ＡＤの
存在を表す。また、ＡＤに罹患している個体は、アルツハイマー病及び関連障害協会の基
準によって診断することもできる。
【0077】
投与／医薬組成物
本発明の抗ＰＨＦ－タウ抗体又はその抗原結合断片は、ＡＤ又は他のタウ異常症など、
タウの病理学的凝集を伴う神経変性疾患を治療又は予防するための治療剤及び予防剤の両
方として好適である。無症候性患者では、治療は何歳から開始してもよい（例えば、約１
０、１５、２０、２５、３０歳）。しかし、通常、患者が約４０、５０、６０、又は７０
歳に達するまで治療を始める必要はない。治療は、典型的には、ある期間にわたる複数回
投与を伴う。治療は、経時的に治療剤に対する抗体、又は活性化Ｔ細胞若しくはＢ細胞の
応答を評価することによってモニタリングしてもよい。反応が低下した場合、追加投与が
指示される。
本発明の抗ＰＨＦ－タウ抗体又はその抗原結合断片は、ＡＤ又は他のタウ異常症など、
タウの病理学的凝集を伴う神経変性疾患を治療又は予防するための治療剤及び予防剤の両
方として好適である。無症候性患者では、治療は何歳から開始してもよい（例えば、約１
０、１５、２０、２５、３０歳）。しかし、通常、患者が約４０、５０、６０、又は７０
歳に達するまで治療を始める必要はない。治療は、典型的には、ある期間にわたる複数回
投与を伴う。治療は、経時的に治療剤に対する抗体、又は活性化Ｔ細胞若しくはＢ細胞の
応答を評価することによってモニタリングしてもよい。反応が低下した場合、追加投与が
指示される。
【0078】
予防用途では、医薬組成物又は薬剤は、疾患の生化学的、組織学的、及び／又は挙動的
症状、その合併症、並びに疾患の発現中に現れる中間病理学的表現型を含む、疾患のリス
クをなくす若しくは低減する、重症度を低下させる、又は発症を遅らせるのに十分な量で
、ＡＤ又は他のタウ異常症に罹患しやすいか又はそうでなければリスクを有する患者に投
与される。治療用途では、組成物又は薬剤は、疾患の症状（生化学的、組織学的、及び／
又は挙動的）のいずれかを低減、阻止、又は遅延させるのに十分な量で、かかる疾患が疑
われるか又は既に罹患している患者に投与される。治療薬の投与により、障害の特徴的な
病状を未だ発現していない患者における軽度認知障害を低減又はなくすことができる。治
療又は予防的処置を達成するのに適切な量は、治療的に又は予防的に有効な用量として定
義される。予防的及び治療的レジメンの両方において、組成物又は薬剤は、通常、十分な
免疫反応が得られるまで何回か投与される。
症状、その合併症、並びに疾患の発現中に現れる中間病理学的表現型を含む、疾患のリス
クをなくす若しくは低減する、重症度を低下させる、又は発症を遅らせるのに十分な量で
、ＡＤ又は他のタウ異常症に罹患しやすいか又はそうでなければリスクを有する患者に投
与される。治療用途では、組成物又は薬剤は、疾患の症状（生化学的、組織学的、及び／
又は挙動的）のいずれかを低減、阻止、又は遅延させるのに十分な量で、かかる疾患が疑
われるか又は既に罹患している患者に投与される。治療薬の投与により、障害の特徴的な
病状を未だ発現していない患者における軽度認知障害を低減又はなくすことができる。治
療又は予防的処置を達成するのに適切な量は、治療的に又は予防的に有効な用量として定
義される。予防的及び治療的レジメンの両方において、組成物又は薬剤は、通常、十分な
免疫反応が得られるまで何回か投与される。
【0079】
本発明の抗ＰＨＦ－タウ抗体又はその断片は、関連する神経変性疾患の治療に有効な他
の剤と併用投与してもよい。
の剤と併用投与してもよい。
【0080】
本発明の方法では、タウ異常症の治療又は症状の改善における抗体の「治療的に有効な
量」は、標準的な研究技術によって決定することができる。例えば、抗体の用量は、当該
技術分野において周知の関連する動物モデルに薬剤を投与することによって決定すること
ができる。
量」は、標準的な研究技術によって決定することができる。例えば、抗体の用量は、当該
技術分野において周知の関連する動物モデルに薬剤を投与することによって決定すること
ができる。
【0081】
更に、最適な用量範囲を特定するのに役立てるために、場合によりインビトロアッセイ
を用いてもよい。特定の有効量の選択は、当業者であればいくつかの因子の考慮に基づい
て（例えば臨床試験によって）決定することができる。このような要因としては、治療又
は予防しようとする疾患、疾患症状、患者の体重、患者の免疫状態、及び当業者に公知の
その他の要因が挙げられる。また、製剤に用いられる正確な用量は、投与経路及び疾患の
重篤度に応じて決まり、医師の判断及び各患者の状況に従って決定されなければならない
。有効量は、インビトロ又は動物モデル試験系から導かれる用量応答曲線から推定するこ
とができる。
を用いてもよい。特定の有効量の選択は、当業者であればいくつかの因子の考慮に基づい
て（例えば臨床試験によって）決定することができる。このような要因としては、治療又
は予防しようとする疾患、疾患症状、患者の体重、患者の免疫状態、及び当業者に公知の
その他の要因が挙げられる。また、製剤に用いられる正確な用量は、投与経路及び疾患の
重篤度に応じて決まり、医師の判断及び各患者の状況に従って決定されなければならない
。有効量は、インビトロ又は動物モデル試験系から導かれる用量応答曲線から推定するこ
とができる。
【0082】
本発明の抗体を治療的に使用するための投与様式は、薬剤を宿主に送達する任意の好適
な経路であってもよい。これら抗体の医薬組成物は、例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静
脈内、皮下、鼻内、又は頭蓋内等非経口投与に有用であるか、あるいは脳又は脊髄の脳脊
髄液に投与してもよい。
な経路であってもよい。これら抗体の医薬組成物は、例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静
脈内、皮下、鼻内、又は頭蓋内等非経口投与に有用であるか、あるいは脳又は脊髄の脳脊
髄液に投与してもよい。
【0083】
本発明の抗体又はその抗原結合断片は、医薬的に許容される担体における活性成分とし
て有効な量の抗体又は断片を含有する医薬組成物として調製することができる。「担体」
という用語は、抗体と一緒に投与される希釈剤、補助剤、賦形剤、又は溶媒を指す。この
ような医薬用溶媒は、落花生油、大豆油、鉱物油、ゴマ油などの、石油、動物、植物又は
合成物由来の水及び油などの液体であってよい。例えば、０．４％生理食塩水及び０．３
％グリシンを用いることができる。これらの溶液は滅菌され、一般には粒子状物質を含ま
ない。これらは、従来の周知の滅菌技術（例えば、濾過）によって滅菌することができる
。組成物は、生理的条件に近づけるために必要とされる医薬的に許容される補助物質、例
えば、ｐＨ調整及び緩衝剤、安定化剤、増粘剤、滑沢及び着色剤等を含有していてよい。
このような医薬製剤中の本発明の抗体の濃度は、幅広く、すなわち、約０．５重量％未満
、通常は約１重量％又は少なくとも約１重量％から最大で１５又は２０重量％まで変化し
得、そして、選択される具体的な投与様式に従って、主に、必要とされる用量、流体の体
積、粘度等に基づいて選択される。
て有効な量の抗体又は断片を含有する医薬組成物として調製することができる。「担体」
という用語は、抗体と一緒に投与される希釈剤、補助剤、賦形剤、又は溶媒を指す。この
ような医薬用溶媒は、落花生油、大豆油、鉱物油、ゴマ油などの、石油、動物、植物又は
合成物由来の水及び油などの液体であってよい。例えば、０．４％生理食塩水及び０．３
％グリシンを用いることができる。これらの溶液は滅菌され、一般には粒子状物質を含ま
ない。これらは、従来の周知の滅菌技術（例えば、濾過）によって滅菌することができる
。組成物は、生理的条件に近づけるために必要とされる医薬的に許容される補助物質、例
えば、ｐＨ調整及び緩衝剤、安定化剤、増粘剤、滑沢及び着色剤等を含有していてよい。
このような医薬製剤中の本発明の抗体の濃度は、幅広く、すなわち、約０．５重量％未満
、通常は約１重量％又は少なくとも約１重量％から最大で１５又は２０重量％まで変化し
得、そして、選択される具体的な投与様式に従って、主に、必要とされる用量、流体の体
積、粘度等に基づいて選択される。
【0084】
治療は、単回投与スケジュール、又は複数回投与スケジュールで行ってもよく、複数回
投与計画では、一次治療過程が１～１０回の別個の投与と、続いて、応答を維持しかつ／
又は強化するのに必要な後続の時間間隔で他の投与とを行い、例えば第２の投与を、１～
４ヶ月で行い、また必要であれば、次の投与を数ヶ月後に行う。好適な治療スケジュール
の例としては、（ｉ）０、１ヶ月及び６ヶ月、（ｉｉ）０、７日及び１ヶ月、（ｉｉｉ）
０及び１ヶ月、（ｉｖ）０及び６ヶ月、又は疾病の症候を軽減し、若しくは疾病の重症度
を低下させることが期待される、所望の応答を誘発するのに十分な他のスケジュールが挙
げられる。
投与計画では、一次治療過程が１～１０回の別個の投与と、続いて、応答を維持しかつ／
又は強化するのに必要な後続の時間間隔で他の投与とを行い、例えば第２の投与を、１～
４ヶ月で行い、また必要であれば、次の投与を数ヶ月後に行う。好適な治療スケジュール
の例としては、（ｉ）０、１ヶ月及び６ヶ月、（ｉｉ）０、７日及び１ヶ月、（ｉｉｉ）
０及び１ヶ月、（ｉｖ）０及び６ヶ月、又は疾病の症候を軽減し、若しくは疾病の重症度
を低下させることが期待される、所望の応答を誘発するのに十分な他のスケジュールが挙
げられる。
【0085】
このように、筋肉内注射用の本発明の医薬組成物は、１ｍＬの無菌緩衝水、及び約１ｎ
ｇ～約１００ｍｇ、約５０ｎｇ～約３０ｍｇ、又は約５ｍｇ～約２５ｍｇの本発明の抗体
を含有するように調製してよい。同様に、静脈内注射用の本発明の医薬組成物は、約２５
０ｍＬの滅菌リンガー液、及び約１ｍｇ～約３０ｍｇ又は約５ｍｇ～約約２５ｍｇの本発
明の抗体を含有するように構成してよい。非経口投与可能な組成物を調製するための実際
の方法が周知であり、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ
ｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ」、１５ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐ
ａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡに、より詳細に記載されている。
ｇ～約１００ｍｇ、約５０ｎｇ～約３０ｍｇ、又は約５ｍｇ～約２５ｍｇの本発明の抗体
を含有するように調製してよい。同様に、静脈内注射用の本発明の医薬組成物は、約２５
０ｍＬの滅菌リンガー液、及び約１ｍｇ～約３０ｍｇ又は約５ｍｇ～約約２５ｍｇの本発
明の抗体を含有するように構成してよい。非経口投与可能な組成物を調製するための実際
の方法が周知であり、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ
ｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ」、１５ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐ
ａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡに、より詳細に記載されている。
【0086】
本発明の抗体及びその断片は、保存のために凍結乾燥させ、使用前に好適な担体で再構
成することができる。この技術は、抗体及び他のタンパク質調製物に効果的であることが
示されており、当該技術分野において公知の凍結乾燥及び溶解技術を用いることができる
。
成することができる。この技術は、抗体及び他のタンパク質調製物に効果的であることが
示されており、当該技術分野において公知の凍結乾燥及び溶解技術を用いることができる
。
【0087】
診断方法及びキット
本発明の抗体は、対象におけるＡＤ又は他のタウ異常症を診断する方法において使用す
ることができる。この方法は、本発明の抗体又はその断片などの診断試薬を用いてＰＨＦ
－タウの存在を対象において検出することを含む。
本発明の抗体は、対象におけるＡＤ又は他のタウ異常症を診断する方法において使用す
ることができる。この方法は、本発明の抗体又はその断片などの診断試薬を用いてＰＨＦ
－タウの存在を対象において検出することを含む。
【0088】
対象由来の生体サンプルを診断抗体試薬と接触させ、対象由来のサンプルにおける当該
診断抗体試薬のＰＨＦ－タウに対する結合を検出することによって、当該生体サンプル（
例えば、血液、尿、脳脊髄液）中のＰＨＦ－タウを検出することができる。検出を実施す
るためのアッセイとしては、周知の方法、例えば、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学的方法、ウ
エスタンブロット、又はインビトロイメージングが挙げられる。
診断抗体試薬のＰＨＦ－タウに対する結合を検出することによって、当該生体サンプル（
例えば、血液、尿、脳脊髄液）中のＰＨＦ－タウを検出することができる。検出を実施す
るためのアッセイとしては、周知の方法、例えば、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学的方法、ウ
エスタンブロット、又はインビトロイメージングが挙げられる。
【0089】
診断抗体又は類似の試薬は、患者の体内に静脈内注射により投与することができるか、
あるいは、上に例示したとおり薬剤を宿主に送達する任意の好適な経路によって脳内に直
接投与することができる。抗体の用量は、治療方法と同じ範囲内であるべきである。典型
的に、抗体は標識されるが、同じ方法において、ＰＨＦ－タウに対して親和性を有する一
次抗体は未標識であり、二次標識剤は、一次抗体に結合させるために用いられる。標識の
選択は、検出手段に依存する。例えば、蛍光標識は、光学検出に好適である。常磁性標識
の使用は、外科的介入のないトモグラフィー検出に好適である。また、放射標識は、ＰＥ
Ｔ又はＳＰＥＣＴを用いて検出され得る。
あるいは、上に例示したとおり薬剤を宿主に送達する任意の好適な経路によって脳内に直
接投与することができる。抗体の用量は、治療方法と同じ範囲内であるべきである。典型
的に、抗体は標識されるが、同じ方法において、ＰＨＦ－タウに対して親和性を有する一
次抗体は未標識であり、二次標識剤は、一次抗体に結合させるために用いられる。標識の
選択は、検出手段に依存する。例えば、蛍光標識は、光学検出に好適である。常磁性標識
の使用は、外科的介入のないトモグラフィー検出に好適である。また、放射標識は、ＰＥ
Ｔ又はＳＰＥＣＴを用いて検出され得る。
【0090】
診断は、対象由来のサンプル又は対象における、標識ＰＨＦ－タウ、タウ凝集体、及び
／又は神経原線維変化の数、大きさ、及び／又は強度を、対応するベースライン値と比較
することによって行われる。ベースライン値は、非罹患個体の集団における平均レベルを
表し得る。また、ベースライン値は、同じ対象において決定された以前の値を表す。
／又は神経原線維変化の数、大きさ、及び／又は強度を、対応するベースライン値と比較
することによって行われる。ベースライン値は、非罹患個体の集団における平均レベルを
表し得る。また、ベースライン値は、同じ対象において決定された以前の値を表す。
【0091】
また、上記診断方法は、治療前、治療中、又は治療後の対象におけるＰＨＦ－タウの存
在を検出することによって、治療に対する対象の応答をモニタリングするために用いるこ
ともできる。ベースラインに対する値の減少は、治療に対する陽性応答を示す。また、値
は、病理学的タウが脳からクリアランスされたとき、生物学的流体において一時的に増加
する場合がある。
在を検出することによって、治療に対する対象の応答をモニタリングするために用いるこ
ともできる。ベースラインに対する値の減少は、治療に対する陽性応答を示す。また、値
は、病理学的タウが脳からクリアランスされたとき、生物学的流体において一時的に増加
する場合がある。
【0092】
本発明は、更に、上記診断及びモニタリング方法を実施するためのキットに関する。典
型的には、このようなキットには、本発明の抗体などの診断試薬と、任意選択的に検出可
能な標識とが入っている。診断抗体自体は、直接検出可能であるか又は二次反応（例えば
、ストレプトアビジンとの反応）を介して検出可能である、検出可能な標識（例えば、蛍
光標識、ビオチン等）を含有してもよい。あるいは、検出可能な標識を含有する第２の試
薬を利用してもよく、この場合、当該第２の試薬は、一次抗体に対する結合特異性を有す
る。生体サンプルにおけるＰＨＦ－タウを測定するのに好適な診断キットでは、キットの
抗体は、マイクロタイターディッシュのウェルなどの固相に予め結合した状態で供給され
得る。
型的には、このようなキットには、本発明の抗体などの診断試薬と、任意選択的に検出可
能な標識とが入っている。診断抗体自体は、直接検出可能であるか又は二次反応（例えば
、ストレプトアビジンとの反応）を介して検出可能である、検出可能な標識（例えば、蛍
光標識、ビオチン等）を含有してもよい。あるいは、検出可能な標識を含有する第２の試
薬を利用してもよく、この場合、当該第２の試薬は、一次抗体に対する結合特異性を有す
る。生体サンプルにおけるＰＨＦ－タウを測定するのに好適な診断キットでは、キットの
抗体は、マイクロタイターディッシュのウェルなどの固相に予め結合した状態で供給され
得る。
【0093】
本出願全体で引用した全ての引用参考文献（論文参考文献、交付済み特許、公開された
特許出願、及び同時係属の特許出願を含む）の内容は、参照により本明細書に明示的に組
み込まれる。
特許出願、及び同時係属の特許出願を含む）の内容は、参照により本明細書に明示的に組
み込まれる。
【実施例0094】
対らせん状細線維－タウ（ＰＨＦ－タウ）の精製
Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ及びＤａｖｉｅｓ（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｄａｖｉｅｓ
Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ ８７：５８２７－３１，１９９０
）の変法によって、ＰＨＦ－タウを部分的に精製した。簡潔に述べると、組織学的に確認
されたアルツハイマー患者から得られた皮質の死後組織を部分的に精製した。典型的に、
１０００ｒｐｍでガラス／テフロンポッター組織ホモジナイザー（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，
Ｉｎｃ；Ｓｔａｕｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、前頭皮質５ｍｇを１０体積の冷バ
ッファＢｕｆｆｅｒ Ｈ（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ、８００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＧＴ
Ａ、及び１０％スクロース／ｐＨ７．４）中でホモジナイズした。ホモジナイズされた材
料を、ＳｏｒｖａｌｌローターＳＳ３４において２７０００ｇで２０分間遠心分離した。
ペレットを廃棄し、上清を１％（ｗ／ｖ）Ｎ－ラウロイルサルコシン及び１％（ｖ／ｖ）
２－メルカプトエタノールの最終濃度に調整し、３７℃で２時間インキュベートした。次
いで、上清を、Ｂｅｃｋｍａｎ ６０Ｔｉローターにおいて２０℃で３５分間１０８００
０ｇで遠心分離した。ペレットを慎重にＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳに懸濁させた。上記のと
おり上清を２回目の遠心分離にかけ、最後のペレットを溶解させ、分注し、－８０℃で冷
凍した。ＰＨＦ－タウ調製物の量を、１２％ ＳＤＳ－ＰＡＧＥと、抗タウ抗体ＡＴ８及
びＨＴ７（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を用いたウエ
スタンブロットとで評価した。優れた品質のＰＨＦ－タウ調製物は、ＡＴ８などの過剰リ
ン酸化ＰＨＦ－タウと反応する抗体で検出された、ウエスタンブロット上の約６０、６４
、６６、及び７２ｋＤａの分子量を有する４本のバンドからなる。同等の量及び純度を有
する２つの別々のＰＨＦ－タウ調製物を同じ脳サンプルから作製した。調製物１を免疫に
用いた。
Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ及びＤａｖｉｅｓ（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｄａｖｉｅｓ
Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ ８７：５８２７－３１，１９９０
）の変法によって、ＰＨＦ－タウを部分的に精製した。簡潔に述べると、組織学的に確認
されたアルツハイマー患者から得られた皮質の死後組織を部分的に精製した。典型的に、
１０００ｒｐｍでガラス／テフロンポッター組織ホモジナイザー（ＩＫＡ Ｗｏｒｋｓ，
Ｉｎｃ；Ｓｔａｕｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、前頭皮質５ｍｇを１０体積の冷バ
ッファＢｕｆｆｅｒ Ｈ（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ、８００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＧＴ
Ａ、及び１０％スクロース／ｐＨ７．４）中でホモジナイズした。ホモジナイズされた材
料を、ＳｏｒｖａｌｌローターＳＳ３４において２７０００ｇで２０分間遠心分離した。
ペレットを廃棄し、上清を１％（ｗ／ｖ）Ｎ－ラウロイルサルコシン及び１％（ｖ／ｖ）
２－メルカプトエタノールの最終濃度に調整し、３７℃で２時間インキュベートした。次
いで、上清を、Ｂｅｃｋｍａｎ ６０Ｔｉローターにおいて２０℃で３５分間１０８００
０ｇで遠心分離した。ペレットを慎重にＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳに懸濁させた。上記のと
おり上清を２回目の遠心分離にかけ、最後のペレットを溶解させ、分注し、－８０℃で冷
凍した。ＰＨＦ－タウ調製物の量を、１２％ ＳＤＳ－ＰＡＧＥと、抗タウ抗体ＡＴ８及
びＨＴ７（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を用いたウエ
スタンブロットとで評価した。優れた品質のＰＨＦ－タウ調製物は、ＡＴ８などの過剰リ
ン酸化ＰＨＦ－タウと反応する抗体で検出された、ウエスタンブロット上の約６０、６４
、６６、及び７２ｋＤａの分子量を有する４本のバンドからなる。同等の量及び純度を有
する２つの別々のＰＨＦ－タウ調製物を同じ脳サンプルから作製した。調製物１を免疫に
用いた。
【実施例0095】
ＰＨＦ－タウに対するモノクローナル抗体の作製
正常Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいて標準的なハイブリドーマ技術を用いて抗ＰＨＦ－タウ
抗体を作製した（Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４
９５－７，１９７５）。得られたハイブリドーマを９６ウェルプレートに播種し、１０日
後に、下記のとおり２５ｎｇ／ウェルでコーティングされたＰＨＦ－タウにおいて直接Ｅ
ＬＩＳＡでスクリーニングした。陽性細胞を、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）ＢＬ２１細胞で発
現させた対照タウ（配列番号３１）でコーティングされたウェルあたり１０ｎｇで交差反
応性について試験し、熱処理及び硫酸アンモニウム沈殿によって精製した。ＰＴ８２は、
ＰＨＦタウ及び対照タウ（配列番号３１）の両方に結合することが見出された。
正常Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいて標準的なハイブリドーマ技術を用いて抗ＰＨＦ－タウ
抗体を作製した（Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４
９５－７，１９７５）。得られたハイブリドーマを９６ウェルプレートに播種し、１０日
後に、下記のとおり２５ｎｇ／ウェルでコーティングされたＰＨＦ－タウにおいて直接Ｅ
ＬＩＳＡでスクリーニングした。陽性細胞を、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）ＢＬ２１細胞で発
現させた対照タウ（配列番号３１）でコーティングされたウェルあたり１０ｎｇで交差反
応性について試験し、熱処理及び硫酸アンモニウム沈殿によって精製した。ＰＴ８２は、
ＰＨＦタウ及び対照タウ（配列番号３１）の両方に結合することが見出された。
【0096】
陽性細胞を直ちにサブクローニングし、陽性クローンを液体窒素中で凍結させた。１０
％ウシ胎仔血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｅｕｒｏｐｅ）、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ Ｆｕｓｉｏｎ
Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（２％）（Ｒｏｃｈｅ，Ｂｒｕｓｓｅｌｓ，Ｂ
ｅｌｇｉｕｍ）、２％ＨＴ（Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、２
ｍＭのＬ－グルタミン及びペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ）、並びにストレプトマイシン（
５０ｍｇ／ｍＬ）を添加したダルベッコ変法イーグル培地において、全てのハイブリドー
マを増殖させた。
％ウシ胎仔血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｅｕｒｏｐｅ）、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ Ｆｕｓｉｏｎ
Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（２％）（Ｒｏｃｈｅ，Ｂｒｕｓｓｅｌｓ，Ｂ
ｅｌｇｉｕｍ）、２％ＨＴ（Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、２
ｍＭのＬ－グルタミン及びペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ）、並びにストレプトマイシン（
５０ｍｇ／ｍＬ）を添加したダルベッコ変法イーグル培地において、全てのハイブリドー
マを増殖させた。
【0097】
抗体可変領域を、選択したハイブリドーマ細胞からマウスＩｇＧ１／ＩｇＧ２／κバッ
クグラウンドにクローニングし、発現させ、常法を用いて精製した。簡潔に述べると、Ｐ
Ｔ／８２ハイブリドーマ細胞をＲＬＴバッファ（Ｑｉａｇｅｎカタログ番号７９２１６）
で溶解させ、－７０℃で凍結した。溶解物を３７℃で解凍し、ＲＮｅａｓｙ９６キット（
Ｑｉａｇｅｎカタログ番号７４１８２）を使用してＲＮＡを単離した。
クグラウンドにクローニングし、発現させ、常法を用いて精製した。簡潔に述べると、Ｐ
Ｔ／８２ハイブリドーマ細胞をＲＬＴバッファ（Ｑｉａｇｅｎカタログ番号７９２１６）
で溶解させ、－７０℃で凍結した。溶解物を３７℃で解凍し、ＲＮｅａｓｙ９６キット（
Ｑｉａｇｅｎカタログ番号７４１８２）を使用してＲＮＡを単離した。
【0098】
ＲＮＡのアリコートを使用して、マウスＩｇＧ重鎖、マウスカッパ軽鎖、及びマウスラ
ムダ軽鎖の定常領域にアニーリングするように設計されたプライマーを使用して、遺伝子
特異的リバースプライマーミックスを使用してｃＤＮＡを合成した。
ムダ軽鎖の定常領域にアニーリングするように設計されたプライマーを使用して、遺伝子
特異的リバースプライマーミックスを使用してｃＤＮＡを合成した。
【0099】
ＩｇＧ重鎖可変領域、カッパ軽鎖可変領域、又はラムダ軽鎖可変領域のいずれかを増幅
するように設計されたマウスプライマーセットを用いたＰＣＲ反応において、ｃＤＮＡの
アリコートを使用した。フォワードプライマーは、フレームワーク１にアニーリングする
ように設計された複数のプライマーからなっており、リバースプライマーは、定常領域に
アニーリングするように設計されていた。ＰＣＲ産物のアリコートを２％アガロースゲル
で泳動したところ、重及びカッパＰＣＲ産物は、正確なサイズの可視バンドを示した。
するように設計されたマウスプライマーセットを用いたＰＣＲ反応において、ｃＤＮＡの
アリコートを使用した。フォワードプライマーは、フレームワーク１にアニーリングする
ように設計された複数のプライマーからなっており、リバースプライマーは、定常領域に
アニーリングするように設計されていた。ＰＣＲ産物のアリコートを２％アガロースゲル
で泳動したところ、重及びカッパＰＣＲ産物は、正確なサイズの可視バンドを示した。
【0100】
それぞれの定常領域にアニーリングするように設計された重鎖又はカッパ軽鎖リバース
プライマーを使用して、重鎖及びカッパ軽鎖のＰＣＲ産物の配列を決定した（サンガー法
）。配列を分析し、アラインメントして、最も一致するマウス生殖系列を同定した。重鎖
及びカッパ鎖フレームワーク１配列の最初の１０個のアミノ酸を、一致する生殖系列配列
を用いて置換した。ＩｇＧ重鎖及びカッパ可変領域のアミノ酸配列を、コドン最適化及び
合成した。コドン最適化されたＩｇＧ重鎖及びカッパ軽鎖可変領域を合成し、断片をマウ
スＩｇＧ２ａアイソタイプ重鎖及びカッパ軽鎖アイソタイプ発現ベクターにクローニング
した。
プライマーを使用して、重鎖及びカッパ軽鎖のＰＣＲ産物の配列を決定した（サンガー法
）。配列を分析し、アラインメントして、最も一致するマウス生殖系列を同定した。重鎖
及びカッパ鎖フレームワーク１配列の最初の１０個のアミノ酸を、一致する生殖系列配列
を用いて置換した。ＩｇＧ重鎖及びカッパ可変領域のアミノ酸配列を、コドン最適化及び
合成した。コドン最適化されたＩｇＧ重鎖及びカッパ軽鎖可変領域を合成し、断片をマウ
スＩｇＧ２ａアイソタイプ重鎖及びカッパ軽鎖アイソタイプ発現ベクターにクローニング
した。
【0101】
抗体の可変領域を、選択されたハイブリドーマ細胞からクローニングし、標準的な方法
を用いて配列を決定し、ｍＡｂ及びＦａｂ用の発現ベクターにサブクローニングした。Ｍ
ａｂをマウスＩｇＧ２ａ／κバックグラウンドで生成し、発現させ、親和性クロマトグラ
フィー（プロテインＡ）によって精製した。ヒトＩｇＧ１／κ定常ドメインに融合したマ
ウス可変ドメイン及び重鎖のＣ末端におけるＨｉｓタグを有するキメラバージョンとして
、Ｆａｂを生成した。ＦａｂをＨＥＫ２９３Ｆ細胞で一過的に発現させ、親和性クロマト
グラフィー（ＨｉｓＴｒａｐ）によって精製した。
を用いて配列を決定し、ｍＡｂ及びＦａｂ用の発現ベクターにサブクローニングした。Ｍ
ａｂをマウスＩｇＧ２ａ／κバックグラウンドで生成し、発現させ、親和性クロマトグラ
フィー（プロテインＡ）によって精製した。ヒトＩｇＧ１／κ定常ドメインに融合したマ
ウス可変ドメイン及び重鎖のＣ末端におけるＨｉｓタグを有するキメラバージョンとして
、Ｆａｂを生成した。ＦａｂをＨＥＫ２９３Ｆ細胞で一過的に発現させ、親和性クロマト
グラフィー（ＨｉｓＴｒａｐ）によって精製した。
【実施例0102】
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）による結合評価
ＰＨＦ及び可溶性（２Ｎ４Ｒ）タウとＰＴ８２及びそのＦａｂ断片について、Ｐｒｏｔ
ｅＯｎ ＸＰＲ３６（Ｂｉｏ－Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）又はＢｉａｃｏｒｅ
Ｔ２００（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）機器においてＳＰＲによっ
てＰＨＦ－タウ及び組み換えタウとの相互作用を評価した。表２は、ＰＴ８２及びそのＦ
ａｂとＰＨＦ－タウ及び可溶性タウとの親和性評価の代表的な結果を示す。
ＰＨＦ及び可溶性（２Ｎ４Ｒ）タウとＰＴ８２及びそのＦａｂ断片について、Ｐｒｏｔ
ｅＯｎ ＸＰＲ３６（Ｂｉｏ－Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）又はＢｉａｃｏｒｅ
Ｔ２００（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）機器においてＳＰＲによっ
てＰＨＦ－タウ及び組み換えタウとの相互作用を評価した。表２は、ＰＴ８２及びそのＦ
ａｂとＰＨＦ－タウ及び可溶性タウとの親和性評価の代表的な結果を示す。
【0103】
【表2】
【0104】
ＰＴ８２及びそのＦａｂの両方がＰＨＦ－タウに結合した。一方、ＰＴ８２のＦａｂ断
片は、可溶性タウにも結合した（図１も参照）。この研究の結果は、ＰＴ８２がＰＨＦ－
タウ及び可溶性タウに結合することを実証した。
片は、可溶性タウにも結合した（図１も参照）。この研究の結果は、ＰＴ８２がＰＨＦ－
タウ及び可溶性タウに結合することを実証した。