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特開2025-17142化合物、蛍光色素剤、キット、細胞膜の検出方法、及び、染色用材料
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2025017142
(43)【公開日】2025-02-05
(54)【発明の名称】化合物、蛍光色素剤、キット、細胞膜の検出方法、及び、染色用材料
(51)【国際特許分類】
C07D 211/62 20060101AFI20250129BHJP
C07D 403/14 20060101ALI20250129BHJP
C07D 295/155 20060101ALI20250129BHJP
A61K 49/00 20060101ALI20250129BHJP
C09K 11/06 20060101ALI20250129BHJP
G01N 1/30 20060101ALI20250129BHJP
G01N 21/64 20060101ALI20250129BHJP
【ＦＩ】
C07D211/62
C07D403/14 CSP
C07D295/155
A61K49/00
C09K11/06
G01N1/30
G01N21/64 F
【審査請求】未請求
【請求項の数】24
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023120050
(22)【出願日】2023-07-24
(71)【出願人】
【識別番号】504174180
【氏名又は名称】国立大学法人高知大学
(71)【出願人】
【識別番号】504147254
【氏名又は名称】国立大学法人愛媛大学
(74)【代理人】
【識別番号】110000729
【氏名又は名称】弁理士法人ユニアス国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】仁子 陽輔
(72)【発明者】
【氏名】上村 拓巳
(72)【発明者】
【氏名】関 仁望
(72)【発明者】
【氏名】川上 良介
(72)【発明者】
【氏名】村上 正基
(72)【発明者】
【氏名】津田 照子
(72)【発明者】
【氏名】今村 健志
【テーマコード（参考）】
2G043
2G052
4C063
4C085
【Ｆターム（参考）】
2G043AA03
2G043BA16
2G043CA04
2G043CA06
2G043DA02
2G043EA01
2G043FA01
2G043FA02
2G043FA03
2G043JA01
2G043KA02
2G043LA03
2G052AA33
2G052AD32
2G052AD52
2G052FA09
2G052GA32
2G052JA03
4C063AA05
4C063BB03
4C063CC42
4C063DD06
4C063EE10
4C085HH11
4C085KB56
(57)【要約】 （修正有）
【課題】蛍光色素剤等に好適に用いることができる化合物を提供する。
【解決手段】スクアライン構造、カルボシアニン構造、メロシアニン構造、又は、多環式芳香族構造を有し、かつ、少なくとも１つ以上の下記式（１）で表される構造（１）を有する化合物。
【選択図】なし
【解決手段】スクアライン構造、カルボシアニン構造、メロシアニン構造、又は、多環式芳香族構造を有し、かつ、少なくとも１つ以上の下記式（１）で表される構造（１）を有する化合物。
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
スクアライン構造、カルボシアニン構造、メロシアニン構造、又は、多環式芳香族構造を有し、かつ、少なくとも１つ以上の下記式（１）で表される構造（１）を有する化合物。
（式（１）中、
Ｒ１は、置換又は非置換の、炭素数４～３０のアルキル基、炭素数４～３０のアルケニル基、又は、炭素数４～３０のアルキニル基である。
Ｒ２は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ２が複数存在する場合、同一又は異なる。
Ｘ－は、１価のアニオンである。Ｘ－が複数存在する場合、各基は同一又は異なる。
Ｙ＋は、１価のカチオンである。Ｙ＋が複数存在する場合、各基は同一又は異なる。
ｎ２は、１～１０の整数である。ｎ２が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ３は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ２が複数存在する場合、同一又は異なる。
ｎ３は、１～１０の整数である。ｎ３が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
＊は、結合箇所を示す。）
【化1】
Ｒ１は、置換又は非置換の、炭素数４～３０のアルキル基、炭素数４～３０のアルケニル基、又は、炭素数４～３０のアルキニル基である。
Ｒ２は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ２が複数存在する場合、同一又は異なる。
Ｘ－は、１価のアニオンである。Ｘ－が複数存在する場合、各基は同一又は異なる。
Ｙ＋は、１価のカチオンである。Ｙ＋が複数存在する場合、各基は同一又は異なる。
ｎ２は、１～１０の整数である。ｎ２が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ３は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ２が複数存在する場合、同一又は異なる。
ｎ３は、１～１０の整数である。ｎ３が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
＊は、結合箇所を示す。）
【請求項2】
少なくとも１つのＸ－は、－ＳＯ３
－、又は、－ＣＯＯ－である、請求項１に記載の化合物。
【請求項3】
少なくとも１つのＹ＋は、Ｈ＋、アルカリ金属カチオン、又は、アンモニウムカチオンである、請求項１に記載の化合物。
【請求項4】
分子中に、上記構造（１）は、１つ又は２つ含まれる、請求項１に記載の化合物。
【請求項5】
Ｌは、置換又は非置換の、炭素数１～２０の炭化水素基（一部ヘテロ原子で置換されているものも含む）である、請求項１に記載の化合物。
【請求項6】
ｎ２は、１～４の整数である、請求項１に記載の化合物。
【請求項7】
ｎ３は、１～４の整数である、請求項１に記載の化合物。
【請求項8】
前記多環式芳香族構造は、ナフタレン構造、アントラセン構造、フェナンスレン構造、ピレン構造、テトラセン構造、トリフェニレン構造、ペリレン構造、又は、フルオレン構造である、請求項１に記載の化合物。
【請求項9】
下記式（２）で表される構造（２）を有する、請求項１に記載の化合物。
（式（２）中、
Ｒ４は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ｎ４は、それぞれ独立して、０～４の整数である。ｎ４が２以上の場合、Ｒ４は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
【化2】
【化3】
Ｒ４は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ｎ４は、それぞれ独立して、０～４の整数である。ｎ４が２以上の場合、Ｒ４は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
【請求項10】
下記式（４）で表される構造（４）を有する、請求項１に記載の化合物。
（式（４）中、
Ｒ５は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ｎ５は、それぞれ独立して、０～４の整数である。ｎ５が２以上の場合、Ｒ５は同一又は異なる。
ｌは、それぞれ独立して、１～４の整数である。
Ｚ－は、アニオンである。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
【化4】
【化5】
Ｒ５は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ｎ５は、それぞれ独立して、０～４の整数である。ｎ５が２以上の場合、Ｒ５は同一又は異なる。
ｌは、それぞれ独立して、１～４の整数である。
Ｚ－は、アニオンである。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
【請求項11】
下記式（５）で表される構造（５）を有する、請求項１に記載の化合物。
（式（５）中、
ｎ６は、１～４の整数である。ｎが２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｎ７は、０～４の整数である。ｎ２が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、置換又は非置換の、炭素数１～６のアルキル基、炭素数２～６のアルケニル基、又は、炭素数２～６のアルキニル基であり、Ｒ７及びＲ８は、ともに１つの環構造を形成してもよい。
Ｒ７、又はＲ８、少なくとも１つ以上の親水性置換基を含み、前記親水性置換基は、カルボキシル基、水酸基、スルホ基、アミノ基、アミド基、ハロゲン原子、及び、これらの塩である基からなる群より選ばれる。前記親水性置換基が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｍは、１～４の整数である。ｍが２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ６は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ａは、それぞれ独立して、０～４の整数である。ａが２以上の場合、Ｒ６は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
【化6】
【化7】
ｎ６は、１～４の整数である。ｎが２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｎ７は、０～４の整数である。ｎ２が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、置換又は非置換の、炭素数１～６のアルキル基、炭素数２～６のアルケニル基、又は、炭素数２～６のアルキニル基であり、Ｒ７及びＲ８は、ともに１つの環構造を形成してもよい。
Ｒ７、又はＲ８、少なくとも１つ以上の親水性置換基を含み、前記親水性置換基は、カルボキシル基、水酸基、スルホ基、アミノ基、アミド基、ハロゲン原子、及び、これらの塩である基からなる群より選ばれる。前記親水性置換基が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｍは、１～４の整数である。ｍが２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ６は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ａは、それぞれ独立して、０～４の整数である。ａが２以上の場合、Ｒ６は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
【請求項12】
下記式（６）で表される構造（６）を有する、請求項１に記載の化合物。
（式（６）中、
Ｒ９は、置換又は非置換の、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、又は、炭素数２～１２のアルキニル基である。
Ｒ１０は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ１０が複数存在する場合、同一又は異なる。
ｎ８は、１～４の整数である。ｎ８が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｎ９は、０～４の整数である。ｎ９が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｎ１０は、０～４の整数である。ｎ１０が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ６は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ａは、それぞれ独立して、０～４の整数である。ａが２以上の場合、Ｒ６は同一又は異なる。
Ｒ７及びＲ１１は、それぞれ独立して、置換又は非置換の、炭素数１～６のアルキル基、炭素数２～６のアルケニル基、又は、炭素数２～６のアルキニル基であり、Ｒ７及びＲ１１は、ともに１つの環構造を形成してもよい。Ｒ１１は、１つの水素原子が－Ｌ－Ｒ基に置換されている。
Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１１、又はその複数において、少なくとも１つ以上の親水性置換基を含み、前記親水性置換基は、カルボキシル基、水酸基、スルホ基、アミノ基、アミド基、ハロゲン原子、及び、これらの塩である基からなる群より選ばれる。前記親水性置換基が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｍは、１～４の整数である。ｍが２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
【化8】
【化9】
Ｒ９は、置換又は非置換の、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、又は、炭素数２～１２のアルキニル基である。
Ｒ１０は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ１０が複数存在する場合、同一又は異なる。
ｎ８は、１～４の整数である。ｎ８が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｎ９は、０～４の整数である。ｎ９が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｎ１０は、０～４の整数である。ｎ１０が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ６は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ａは、それぞれ独立して、０～４の整数である。ａが２以上の場合、Ｒ６は同一又は異なる。
Ｒ７及びＲ１１は、それぞれ独立して、置換又は非置換の、炭素数１～６のアルキル基、炭素数２～６のアルケニル基、又は、炭素数２～６のアルキニル基であり、Ｒ７及びＲ１１は、ともに１つの環構造を形成してもよい。Ｒ１１は、１つの水素原子が－Ｌ－Ｒ基に置換されている。
Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１１、又はその複数において、少なくとも１つ以上の親水性置換基を含み、前記親水性置換基は、カルボキシル基、水酸基、スルホ基、アミノ基、アミド基、ハロゲン原子、及び、これらの塩である基からなる群より選ばれる。前記親水性置換基が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｍは、１～４の整数である。ｍが２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
【請求項13】
請求項１～１２のいずれか１項に記載の化合物を含む、蛍光色素剤。
【請求項14】
細胞及び／又は組織の形態学検出用である、請求項１３に記載の蛍光色素剤。
【請求項15】
生体中の細胞及び／又は組織の形態学検出用である、請求項１３に記載の蛍光色素剤。
【請求項16】
生物試料の染色又は可視化用である、請求項１３に記載の蛍光色素剤。
【請求項17】
生体組織中の細胞膜の染色又は可視化用である、請求項１３に記載の蛍光色素剤。
【請求項18】
蛍光イメージング用である、請求項１３に記載の蛍光色素剤。
【請求項19】
ｉｎ ｖｉｖｏ観察用である、請求項１３に記載の蛍光色素剤。
【請求項20】
請求項１～１２のいずれか１項に記載の化合物を含む、キット。
【請求項21】
請求項１～１２のいずれか１項に記載の化合物を含む蛍光色素剤で、細胞膜を染色する工程（１）を含む、細胞膜の検出方法。
【請求項22】
前記工程（１）の後に、２種類以上の溶媒中で各々測定した蛍光スペクトルを用いて評価する工程（２）を含む、請求項２１に記載の細胞膜の検出方法。
【請求項23】
前記工程（２）は、蛍光イメージングを用いて行われる、請求項２２に記載の細胞膜の検出方法。
【請求項24】
請求項１～１２のいずれか１項に記載の化合物を含む、細胞中に存在する、又は、細胞環境をモデルとした脂質二重膜油滴若しくはタンパク質凝集体の染色用材料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、細胞の検出に用いられる蛍光色素剤、それに用いることが可能な化合物、キット、細胞膜の検出方法、及び、染色用材料等に関する。
【背景技術】
【0002】
細胞や組織等に検出において、例えば、腫瘍細胞の検出には、種々の染色法が用いられている。例えば、ヘマトキシリン・エオジン（ＨＥ）染色は、病理診断で最も広く使用され、多くの診断法でゴールドスタンダートとされている。しかし、ＨＥ染色では、腫瘍細胞の他に正常組織も染色されて光透過性が悪くなるため、組織標本の薄切が必要となる。薄切標本は二次元的な情報しか持たないため、腫瘍細胞の分布範囲を確定するためには、多くの切片の作製と観察が必要となる。また、組織標本の作製は、高度なスキルが必要であり、煩雑で長時間を要するものである。
【0003】
さらに、ＨＥ染色では、腫瘍細胞と正常組織の境界が低コントラストで不明瞭となるケースもある。
【0004】
また、蛍光色素、放射性核種、金属粒子等を結合した抗体で特定組織を染色し、高コントラストな腫瘍細胞像を得る方法も知られている。しかし、抗体部分は細胞膜を通過しないため、膜透過性を上げるための処理が必要であり、操作が煩雑である。また、試薬も高価である。
【0005】
一方、染色用の色素を使用せずに光を照射して、異常組織と正常組織のラマン散乱の違いを利用して皮膚疾患を検出する手段も報告されている（（たとえば、特許文献１参照））。しかし、ラマン散乱法では、腫瘍の領域を細胞レベルで確定することは困難であると推測される。
【0006】
また、従来の細胞膜（形質膜）を染色できる蛍光プローブは、そのほとんどは培養細胞を用いた ｉｎ ｖｉｔｒｏ 実験に利用されおり、生体、特にマウスを用いた ｉｎ ｖｉｖｏ 実験に利用された例は現状では極めて少ない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0007】
【特許文献1】特開２０１８－２０１６７８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0008】
本発明は、蛍光色素剤等に好適に用いることできる化合物を提供することを目的とする。
【0009】
また、本発明は、細胞、細胞膜（形質膜）等を簡便に検出するための新たな蛍光色素剤及びキットを提供することを目的とする。
【0010】
また、本発明は、細胞、細胞膜（形質膜）等を簡便に検出するための新たな方法を提供することを目的とする。
【0011】
また、本発明は、細胞中に存在する、又は、細胞環境をモデルとした脂質二重膜、油滴若しくはタンパク質凝集体等の新たな染色用材料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0012】
本発明者らは、新規の化合物を新たに創出し、またそれらを含有する蛍光色素剤を、細胞、細胞膜や組織の染色に適用することにより、細胞、細胞膜等が簡便に検出できること等を見出し、本発明を完成させた。
【0013】
すなわち、本発明は以下の化合物を提供する。
【0014】
［１］
スクアライン構造、カルボシアニン構造、メロシアニン構造、又は、多環式芳香族構造を有し、かつ、少なくとも１つ以上の下記式（１）で表される構造（１）を有する化合物。
（式（１）中、
Ｒ１は、置換又は非置換の、炭素数４～３０のアルキル基、炭素数４～３０のアルケニル基、又は、炭素数４～３０のアルキニル基である。
Ｒ２は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ２が複数存在する場合、同一又は異なる。
Ｘ－は、１価のアニオンである。Ｘ－が複数存在する場合、各基は同一又は異なる。
Ｙ＋は、１価のカチオンである。Ｙ＋が複数存在する場合、各基は同一又は異なる。
ｎ２は、１～１０の整数である。ｎ２が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ３は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ２が複数存在する場合、同一又は異なる。
ｎ３は、１～１０の整数である。ｎ３が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
＊は、結合箇所を示す。）
スクアライン構造、カルボシアニン構造、メロシアニン構造、又は、多環式芳香族構造を有し、かつ、少なくとも１つ以上の下記式（１）で表される構造（１）を有する化合物。
【化1】
Ｒ１は、置換又は非置換の、炭素数４～３０のアルキル基、炭素数４～３０のアルケニル基、又は、炭素数４～３０のアルキニル基である。
Ｒ２は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ２が複数存在する場合、同一又は異なる。
Ｘ－は、１価のアニオンである。Ｘ－が複数存在する場合、各基は同一又は異なる。
Ｙ＋は、１価のカチオンである。Ｙ＋が複数存在する場合、各基は同一又は異なる。
ｎ２は、１～１０の整数である。ｎ２が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ３は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ２が複数存在する場合、同一又は異なる。
ｎ３は、１～１０の整数である。ｎ３が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
＊は、結合箇所を示す。）
【0015】
［２］
少なくとも１つのＸ－は、－ＳＯ３ －、又は、－ＣＯＯ－である、［１］に記載の化合物。
少なくとも１つのＸ－は、－ＳＯ３ －、又は、－ＣＯＯ－である、［１］に記載の化合物。
【0016】
［３］
少なくとも１つのＹ＋は、Ｈ＋、アルカリ金属カチオン、又は、アンモニウムカチオンである、［１］又は［２］に記載の化合物。
少なくとも１つのＹ＋は、Ｈ＋、アルカリ金属カチオン、又は、アンモニウムカチオンである、［１］又は［２］に記載の化合物。
【0017】
［４］
分子中に、上記構造（１）は、１つ又は２つ含まれる、［１］～［３］のいずれかに記載の化合物。
分子中に、上記構造（１）は、１つ又は２つ含まれる、［１］～［３］のいずれかに記載の化合物。
【0018】
［５］
Ｌは、置換又は非置換の、炭素数１～２０の炭化水素基（一部ヘテロ原子で置換されているものも含む）である、［１］～［４］のいずれかに記載の化合物。
Ｌは、置換又は非置換の、炭素数１～２０の炭化水素基（一部ヘテロ原子で置換されているものも含む）である、［１］～［４］のいずれかに記載の化合物。
【0019】
［６］
ｎ２は、１～４の整数である、［１］～［５］のいずれかに記載の化合物。
ｎ２は、１～４の整数である、［１］～［５］のいずれかに記載の化合物。
【0020】
［７］
ｎ３は、１～４の整数である、［１］～［６］のいずれかに記載の化合物。
ｎ３は、１～４の整数である、［１］～［６］のいずれかに記載の化合物。
【0021】
［８］
上記多環式芳香族構造は、ナフタレン構造、アントラセン構造、フェナンスレン構造、ピレン構造、テトラセン構造、トリフェニレン構造、ペリレン構造、又は、フルオレン構造である、［１］～［７］のいずれかに記載の化合物。
上記多環式芳香族構造は、ナフタレン構造、アントラセン構造、フェナンスレン構造、ピレン構造、テトラセン構造、トリフェニレン構造、ペリレン構造、又は、フルオレン構造である、［１］～［７］のいずれかに記載の化合物。
【0022】
［９］
下記式（２）で表される構造（２）を有する、［１］～［８］のいずれかに記載の化合物。
（式（２）中、
Ｒ４は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ｎ４は、それぞれ独立して、０～４の整数である。ｎ４が２以上の場合、Ｒ４は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
下記式（２）で表される構造（２）を有する、［１］～［８］のいずれかに記載の化合物。
【化2】
【化3】
Ｒ４は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ｎ４は、それぞれ独立して、０～４の整数である。ｎ４が２以上の場合、Ｒ４は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
【0023】
［１０］
下記式（４）で表される構造（４）を有する、［１］～［８］のいずれかに記載の化合物。
（式（４）中、
Ｒ５は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ｎ５は、それぞれ独立して、０～４の整数である。ｎ５が２以上の場合、Ｒ５は同一又は異なる。
ｌは、それぞれ独立して、１～４の整数である。
Ｚ－は、アニオンである。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
下記式（４）で表される構造（４）を有する、［１］～［８］のいずれかに記載の化合物。
【化4】
【化5】
Ｒ５は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ｎ５は、それぞれ独立して、０～４の整数である。ｎ５が２以上の場合、Ｒ５は同一又は異なる。
ｌは、それぞれ独立して、１～４の整数である。
Ｚ－は、アニオンである。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
【0024】
［１１］
下記式（５）で表される構造（５）を有する、［１］～［８］のいずれかに記載の化合物。
（式（５）中、
ｎ６は、１～４の整数である。ｎが２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｎ７は、０～４の整数である。ｎ２が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、置換又は非置換の、炭素数１～６のアルキル基、炭素数２～６のアルケニル基、又は、炭素数２～６のアルキニル基であり、Ｒ７及びＲ８は、ともに１つの環構造を形成してもよい。
Ｒ７、又はＲ８、少なくとも１つ以上の親水性置換基を含み、上記親水性置換基は、カルボキシル基、水酸基、スルホ基、アミノ基、アミド基、ハロゲン原子、及び、これらの塩である基からなる群より選ばれる。上記親水性置換基が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｍは、１～４の整数である。ｍが２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ６は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ａは、それぞれ独立して、０～４の整数である。ａが２以上の場合、Ｒ６は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
下記式（５）で表される構造（５）を有する、［１］～［８］のいずれかに記載の化合物。
【化6】
【化7】
ｎ６は、１～４の整数である。ｎが２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｎ７は、０～４の整数である。ｎ２が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、置換又は非置換の、炭素数１～６のアルキル基、炭素数２～６のアルケニル基、又は、炭素数２～６のアルキニル基であり、Ｒ７及びＲ８は、ともに１つの環構造を形成してもよい。
Ｒ７、又はＲ８、少なくとも１つ以上の親水性置換基を含み、上記親水性置換基は、カルボキシル基、水酸基、スルホ基、アミノ基、アミド基、ハロゲン原子、及び、これらの塩である基からなる群より選ばれる。上記親水性置換基が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｍは、１～４の整数である。ｍが２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ６は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ａは、それぞれ独立して、０～４の整数である。ａが２以上の場合、Ｒ６は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
【0025】
［１２］
下記式（６）で表される構造（６）を有する、［１］～［８］のいずれかに記載の化合物。
（式（６）中、
Ｒ９は、置換又は非置換の、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、又は、炭素数２～１２のアルキニル基である。
Ｒ１０は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ１０が複数存在する場合、同一又は異なる。
ｎ８は、１～４の整数である。ｎ８が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｎ９は、０～４の整数である。ｎ９が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｎ１０は、０～４の整数である。ｎ１０が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ６は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ａは、それぞれ独立して、０～４の整数である。ａが２以上の場合、Ｒ６は同一又は異なる。
Ｒ７及びＲ１１は、それぞれ独立して、置換又は非置換の、炭素数１～６のアルキル基、炭素数２～６のアルケニル基、又は、炭素数２～６のアルキニル基であり、Ｒ７及びＲ１１は、ともに１つの環構造を形成してもよい。Ｒ１１は、１つの水素原子が－Ｌ－Ｒ基に置換されている。
Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１１、又はその複数において、少なくとも１つ以上の親水性置換基を含み、上記親水性置換基は、カルボキシル基、水酸基、スルホ基、アミノ基、アミド基、ハロゲン原子、及び、これらの塩である基からなる群より選ばれる。上記親水性置換基が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｍは、１～４の整数である。ｍが２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
下記式（６）で表される構造（６）を有する、［１］～［８］のいずれかに記載の化合物。
【化8】
【化9】
Ｒ９は、置換又は非置換の、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、又は、炭素数２～１２のアルキニル基である。
Ｒ１０は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ１０が複数存在する場合、同一又は異なる。
ｎ８は、１～４の整数である。ｎ８が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｎ９は、０～４の整数である。ｎ９が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｎ１０は、０～４の整数である。ｎ１０が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ６は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ａは、それぞれ独立して、０～４の整数である。ａが２以上の場合、Ｒ６は同一又は異なる。
Ｒ７及びＲ１１は、それぞれ独立して、置換又は非置換の、炭素数１～６のアルキル基、炭素数２～６のアルケニル基、又は、炭素数２～６のアルキニル基であり、Ｒ７及びＲ１１は、ともに１つの環構造を形成してもよい。Ｒ１１は、１つの水素原子が－Ｌ－Ｒ基に置換されている。
Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１１、又はその複数において、少なくとも１つ以上の親水性置換基を含み、上記親水性置換基は、カルボキシル基、水酸基、スルホ基、アミノ基、アミド基、ハロゲン原子、及び、これらの塩である基からなる群より選ばれる。上記親水性置換基が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｍは、１～４の整数である。ｍが２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
【0026】
また、本発明は以下の蛍光色素剤等を提供する。
［１３］
［１］～［１２］のいずれかに記載の化合物を含む、蛍光色素剤。
［１３］
［１］～［１２］のいずれかに記載の化合物を含む、蛍光色素剤。
【0027】
［１４］
細胞及び／又は組織の形態学検出用である、［１３］に記載の蛍光色素剤。
細胞及び／又は組織の形態学検出用である、［１３］に記載の蛍光色素剤。
【0028】
［１５］
生体中の細胞及び／又は組織の形態学検出用である、［１３］に記載の蛍光色素剤。
生体中の細胞及び／又は組織の形態学検出用である、［１３］に記載の蛍光色素剤。
【0029】
［１６］
生物試料の染色又は可視化用である、［１３］に記載の蛍光色素剤。
生物試料の染色又は可視化用である、［１３］に記載の蛍光色素剤。
【0030】
［１７］
生体組織中の細胞膜の染色又は可視化用である、［１３］に記載の蛍光色素剤。
生体組織中の細胞膜の染色又は可視化用である、［１３］に記載の蛍光色素剤。
【0031】
［１８］
蛍光イメージング用である、［１３］に記載の蛍光色素剤。
蛍光イメージング用である、［１３］に記載の蛍光色素剤。
【0032】
［１９］
ｉｎ ｖｉｖｏ観察用である、［１３］に記載の蛍光色素剤。
ｉｎ ｖｉｖｏ観察用である、［１３］に記載の蛍光色素剤。
【0033】
また、本発明は以下のキットを提供する。
【0034】
［２０］
［１］～［１２］のいずれかに記載の化合物を含む、キット。
［１］～［１２］のいずれかに記載の化合物を含む、キット。
【0035】
また、本発明は以下の細胞の検出方法を提供する。
【0036】
［２１］
［１］～［１２］のいずれかに記載の化合物を含む蛍光色素剤で、細胞膜を染色する工程（１）を含む、細胞膜の検出方法。
［１］～［１２］のいずれかに記載の化合物を含む蛍光色素剤で、細胞膜を染色する工程（１）を含む、細胞膜の検出方法。
【0037】
［２２］
上記工程（１）の後に、２種類以上の溶媒中で各々測定した蛍光スペクトルを用いて評価する工程（２）を含む、［２１］に記載の細胞膜の検出方法。
上記工程（１）の後に、２種類以上の溶媒中で各々測定した蛍光スペクトルを用いて評価する工程（２）を含む、［２１］に記載の細胞膜の検出方法。
【0038】
［２３］
上記工程（２）は、蛍光イメージングを用いて行われる、［２２］に記載の細胞膜の検出方法。
上記工程（２）は、蛍光イメージングを用いて行われる、［２２］に記載の細胞膜の検出方法。
【0039】
また、本発明は以下の染色用材料を提供する。
【0040】
［２４］
［１］～［１２］のいずれかに記載の化合物を含む、細胞中に存在する、又は、細胞環境をモデルとした脂質二重膜油滴若しくはタンパク質凝集体の染色用材料。
［１］～［１２］のいずれかに記載の化合物を含む、細胞中に存在する、又は、細胞環境をモデルとした脂質二重膜油滴若しくはタンパク質凝集体の染色用材料。
【発明の効果】
【0041】
本発明の化合物は、蛍光色素剤等に好適に用いることができる。
【0042】
また、本発明の蛍光色素剤及びキットを用いることにより、細胞等を鮮明、簡便かつ迅速に染色することができる。
【0043】
また、本発明の細胞等の検出方法を用いることにより、細胞中に存在する、又は、細胞環境をモデルとした脂質二重膜、油滴若しくはタンパク質凝集体等を鮮明、簡便、好適に染色することができる。
【0044】
また、本発明の染色用材料を用いることにより、細胞中に存在する、又は、細胞環境をモデルとした脂質二重膜、油滴若しくはタンパク質凝集体等を鮮明、簡便かつ迅速に染色することができる。
【図面の簡単な説明】
【0045】
【図1】実施例における化合物１の１Ｈ ＮＭＲスペクトル測定（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）のチャートである。
【図2】実施例における化合物２の１Ｈ ＮＭＲ測定スペクトル（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）のチャートである。
【図3】実施例における化合物３の１Ｈ ＮＭＲスペクトル測定（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）のチャートである。
【図4】実施例における化合物Ａの１Ｈ ＮＭＲスペクトル測定（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）のチャートである。
【図5】実施例における化合物５の１Ｈ ＮＭＲスペクトル測定（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）のチャートである。
【図6】実施例における化合物６の１Ｈ ＮＭＲスペクトル測定（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）のチャートである。
【図7】実施例における化合物７の１Ｈ ＮＭＲスペクトル測定（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）のチャートである。
【図8】実施例における化合物８の１Ｈ ＮＭＲスペクトル測定（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）のチャートである。
【図9】実施例における化合物４の１Ｈ ＮＭＲスペクトル測定（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）のチャートである。
【図10】実施例における化合物９の１Ｈ ＮＭＲスペクトル測定（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）のチャートである。
【図11】実施例における化合物Ｂの１Ｈ ＮＭＲスペクトル測定（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）のチャートである。
【図12】実施例における人工脂質二重膜（リポソーム）存在下における化合物Ａ（左）及び化合物Ｂ（右）の吸収スペクトル。 黄：リン酸緩衝液に色素のみを添加した際の吸収スペクトル。赤：ＤＯＰＣからなるＬｄ ｐｈａｓｅを形成するリポソーム存在下における吸収スペクトル。青：ＳＭ／ＣｈｏｌからなるＬｏ ｐｈａｓｅを形成するリポソーム存在下における吸収スペクトル。緑：ＤＰＰＣ／ＣｈｏｌからなるＬｏ ｐｈａｓｅを形成するリポソーム存在下における吸収スペクトルのチャートである。 化合物Ａ（左）の図では、吸光度の極大値の高い順に、赤、青、緑、黄である。 化合物Ｂ（右）の図では、吸光度の極大値の高い順に、赤、青、緑、黄である。 色素濃度：０．４μＭ、脂質濃度：８０μＭ、使用したリン酸緩衝液（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｂｕｆｆｅｒ）は濃度２０ｍＭ、ｐＨ＝７．２。
【図13】実施例における人工脂質二重膜（リポソーム）存在下における化合物Ａ（左）およびＢ（右）の蛍光スペクトルのチャートである。 黄：リン酸緩衝液に色素のみを添加した際の蛍光スペクトル。赤：ＤＯＰＣからなるＬｄ ｐｈａｓｅを形成するリポソーム存在下における蛍光スペクトル。青：ＳＭ／ＣｈｏｌからなるＬｏ ｐｈａｓｅを形成するリポソーム存在下における蛍光スペクトル。緑：ＤＰＰＣ／ＣｈｏｌからなるＬｏ ｐｈａｓｅを形成するリポソーム存在下における蛍光スペクトル。 化合物Ａ（左）の図では、発光強度の極大値の高い順に、青、赤、緑、黄である。 化合物Ｂ（右）の図では、発光強度の極大値の高い順に、赤、青、緑、黄である。 色素濃度：０．４μＭ、脂質濃度：８０μＭ、励起波長：６３０ｎｍ、使用したリン酸緩衝液（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｂｕｆｆｅｒ）は濃度２０ｍＭ、ｐＨ＝７．２。
【図14】実施例における化合物１１ａ及び１１ｂの混合物の１Ｈ ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）のチャートである。
【図15】実施例における化合物１２の１Ｈ ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）のチャートである。
【図16】実施例における化合物１３の１Ｈ ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）のチャートである。
【図17】実施例における化合物Ｃの１Ｈ ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）のチャートである。
【図18】実施例における化合物１４ａ及び１４ｂの混合物の１Ｈ ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）のチャートである。
【図19】実施例における化合物１５の１Ｈ ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）のチャートである。
【図20】実施例における化合物１６の１Ｈ ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）のチャートである。
【図21】実施例における化合物２１の１Ｈ ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）のチャートである。
【図22】実施例におけるＤＭＳＯ中における化合物Ｃ（赤）及びＤ（緑）の吸収（実線）・蛍光（点線）スペクトルのチャートである。 吸収スペクトル（実線）の図では、極大値が相対的に長波長側である実線が、赤である。 蛍光スペクトル（点線）の図では、極大値が相対的に長波長側である点線が、緑である。 色素濃度：１０μＭ（吸収スペクトル）、５μＭ（蛍光スペクトル）。励起波長：４００ｎｍ。
【図23】実施例における２０ｍＭリン酸緩衝液中における化合物Ｃ（赤）及びＤ（緑）の蛍光スペクトル。 蛍光スペクトルの極大値が相対的に長波長側である線が、緑である。 色素濃度：５μＭ。励起波長：４００ｎｍ。
【図24】実施例における人工脂質二重膜（リポソーム）存在下における化合物Ｃの蛍光スペクトルのチャートである。 緑：ＳＭ／ＣｈｏｌからなるＬｏｐｈａｓｅを形成するリポソーム存在下における蛍光スペクトル。赤：ＤＯＰＣからなるＬｄｐｈａｓｅを形成するリポソーム存在下における蛍光スペクトル。黄：ＤＯＰＣ／ＣｈｏｌからなるＬｄｐｈａｓｅを形成するリポソーム存在下における蛍光スペクトル。 発光強度の極大値の高い順に、緑、黄色、赤である。 脂質濃度：２００μＭ、色素濃度：２μＭ。励起波長：４００ｎｍ。
【図25】実施例における人工脂質二重膜（リポソーム）存在下における化合物Ｄの蛍光スペクトルのチャートである。 緑：ＳＭ／ＣｈｏｌからなるＬｏｐｈａｓｅを形成するリポソーム存在下における蛍光スペクトル。赤：ＤＯＰＣからなるＬｄｐｈａｓｅを形成するリポソーム存在下における蛍光スペクトル。黄：ＤＯＰＣ／ＣｈｏｌからなるＬｄｐｈａｓｅを形成するリポソーム存在下における蛍光スペクトル。 発光強度の極大値の高い順に、赤、緑、黄色である。 脂質濃度：２００μＭ、色素濃度：２μＭ。励起波長：４００ｎｍ。
【図26】実施例における生体マウスの組織の多光子蛍光イメージング画像である。スクアラインをコア構造に有する色素であり、頭蓋骨の骨髄を染色し、観察している画像である。骨髄組織の膜や、骨髄中の血管を走る血球細胞の膜が染色されていることが分かる。
【図27】実施例における生体マウスの組織の多光子蛍光イメージング画像である。カルボシアニンをコア構造に有する色素で、皮膚組織を染色し、観察している画像である。皮膚組織中の細胞の細胞膜が観察される。
【図28】実施例における生体マウスの組織の多光子蛍光イメージング画像である。ピレンをコア構造に有する色素であり、皮膚組織を染色し、レシオメトリック法による画像解析をしたものである。
【図29】実施例における生体マウスの組織の多光子蛍光イメージング画像である。ピレンをコア構造に有する色素であり、皮膚組織を染色し、レシオメトリック法による画像解析をしたものである。
【発明を実施するための形態】
【0046】
以下、本発明の実施形態について、詳細に説明するが、本発明はこれらの実施形態に限定されるものではない。
【0047】
〔化合物〕
本発明の化合物は、スクアライン構造、カルボシアニン構造、メロシアニン構造、又は、多環式芳香族構造（（以下、「コア構造」ともいう））を有し、かつ、少なくとも１つ以上の下記式（１）で表される構造（１）（以下、「側鎖構造（１）」ともいう）を有する化合物（以下、「化合物（１）」ともいう）である。
（式（１）中、
Ｒ１は、置換又は非置換の、炭素数１～３０のアルキル基、炭素数２～３０のアルケニル基、又は、炭素数２～３０のアルキニル基である。
Ｒ２は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ２が複数存在する場合、同一又は異なる。
Ｘ－は、１価のアニオンである。Ｘ－が複数存在する場合、各基は同一又は異なる。
Ｙ＋は、１価のカチオンである。Ｙ＋が複数存在する場合、各基は同一又は異なる。
ｎ２は、１～１０の整数である。ｎ２が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ３は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ２が複数存在する場合、同一又は異なる。
ｎ３は、１～１０の整数である。ｎ３が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
＊は、結合箇所を示す。）
本発明の化合物は、スクアライン構造、カルボシアニン構造、メロシアニン構造、又は、多環式芳香族構造（（以下、「コア構造」ともいう））を有し、かつ、少なくとも１つ以上の下記式（１）で表される構造（１）（以下、「側鎖構造（１）」ともいう）を有する化合物（以下、「化合物（１）」ともいう）である。
【化10】
Ｒ１は、置換又は非置換の、炭素数１～３０のアルキル基、炭素数２～３０のアルケニル基、又は、炭素数２～３０のアルキニル基である。
Ｒ２は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ２が複数存在する場合、同一又は異なる。
Ｘ－は、１価のアニオンである。Ｘ－が複数存在する場合、各基は同一又は異なる。
Ｙ＋は、１価のカチオンである。Ｙ＋が複数存在する場合、各基は同一又は異なる。
ｎ２は、１～１０の整数である。ｎ２が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ３は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ２が複数存在する場合、同一又は異なる。
ｎ３は、１～１０の整数である。ｎ３が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
＊は、結合箇所を示す。）
【0048】
上記化合物（１）は、ソルバトクロミズム（ｓｏｌｖａｔｏｃｈｒｏｍｉｓｍ）を呈する化合物であり得、例えば、蛍光色素剤等に好適に用いることができる。なお、本明細書におけるソルバトクロミズムを呈する化合物とは、その化合物の周囲の極性（疎水性）の変化によって、その吸収極大波長若しくは蛍光極大波長、又はその両方が変化する化合物を表す。
【0049】
上記化合物（１）は、当該分子中に、コア構造として、スクアライン構造、カルボシアニン構造、メロシアニン構造、又は、多環式芳香族構造を有する。上記各構造は、主として、蛍光発光の中心的作用を有する部位である。
【0050】
上記コア構造としてのスクアライン構造、カルボシアニン構造、メロシアニン構造、及び、多環式芳香族構造は、上記側鎖構造（１）を有する限り、公知の各構造を有することができる。
【0051】
上記多環式芳香族構造は、例えば、ナフタレン構造、アントラセン構造、フェナンスレン構造、ピレン構造、テトラセン構造、トリフェニレン構造、ペリレン構造、又は、フルオレン構造等をあげることができる。
【0052】
上記化合物（１）は、当該分子中において、少なくとも１つ以上の上記側鎖構造（１）が、そのリンカー部位Ｌを介して上記コア構造に結合している。
【0053】
上記化合物（１）は、少なくとも１つ以上の下記式（１）で表される構造（１）（側鎖構造（１））を有する。
（式（１）中、
Ｒ１は、置換又は非置換の、炭素数４～３０のアルキル基、炭素数４３０のアルケニル基、又は、炭素数４～３０のアルキニル基である。
Ｒ２は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ２が複数存在する場合、同一又は異なる。
Ｘ－は、１価のアニオンである。Ｘ－が複数存在する場合、各基は同一又は異なる。
Ｙ＋は、１価のカチオンである。Ｙ＋が複数存在する場合、各基は同一又は異なる。
ｎ２は、１～１０の整数である。ｎ２が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ３は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ２が複数存在する場合、同一又は異なる。
ｎ３は、１～１０の整数である。ｎ３が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
＊は、結合箇所を示す。）
【化11】
Ｒ１は、置換又は非置換の、炭素数４～３０のアルキル基、炭素数４３０のアルケニル基、又は、炭素数４～３０のアルキニル基である。
Ｒ２は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ２が複数存在する場合、同一又は異なる。
Ｘ－は、１価のアニオンである。Ｘ－が複数存在する場合、各基は同一又は異なる。
Ｙ＋は、１価のカチオンである。Ｙ＋が複数存在する場合、各基は同一又は異なる。
ｎ２は、１～１０の整数である。ｎ２が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ３は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ２が複数存在する場合、同一又は異なる。
ｎ３は、１～１０の整数である。ｎ３が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
＊は、結合箇所を示す。）
【0054】
上記化合物（１）は、適宜、当該構造の一部又は全部が置換された置換体、水和物等の溶媒和物等の誘導体も含む。
【0055】
上記式（１）において、Ｒ１は、置換又は非置換の、炭素数４～３０のアルキル基、炭素数４～３０のアルケニル基、又は、炭素数４～３０のアルキニル基である。
【0056】
上記Ｒ１で表される炭素数４～３０のアルキル基としては、直鎖状又は分岐鎖状のアルキル基があげられ、例えば、ｎ－ブチル基、ｉｓｏ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｎ－ヘキシル基、ｎ－ヘプチル基、ｎ－オクチル基、ｎ－ノニル基、ｎ－デカニル基、ｎ－ウンデカニル基、ｎ－ドデカニル基等をあげることができる。
【0057】
上記Ｒ１で表される炭素数４～３０のアルケニル基としては直鎖状又は分岐鎖状のアルケニル基があげられる。また、上記アルケニル基において、その一部が炭素炭素二重結合であるものを含む。
【0058】
上記Ｒ１で表される炭素数４～３０のアルキニル基としては直鎖状又は分岐鎖状のアルキニル基があげられる。また、上記アルキニル基において、その一部が炭素炭素三重結合であるものを含む。
【0059】
また、上記Ｒ１で表されるアルキル基等の置換基として、例えば、カルボキシル基、水酸基、スルホ基、アミノ基、アミド基、ハロゲン原子、及び、これらの塩等をあげることができる。置換基が複数存在する場合、これらは単独で置換されていてもよく、また２種以上を組み合わせて置換されていてもよい。
【0060】
上記式（１）において、例えば、使用目的や用途に応じて、少なくとも１つのＲ１は、置換又は非置換の、炭素数が８～２０の直鎖アルキル構造を含むことが好ましい。
【0061】
上記式（１）において、Ｒ２は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ２が複数存在する場合、同一又は異なる。
【0062】
また、上記Ｒ２で表されるメチレン基の置換基として、例えば、カルボキシル基、水酸基、スルホ基、アミノ基、アミド基、ハロゲン原子、及び、これらの塩である基等をあげることができる。置換基が複数存在する場合、これらは単独で置換されていてもよく、また２種以上を組み合わせて置換されていてもよい。
【0063】
上記式（１）において、ｎ２は、１～１０の整数である。ｎ２が２以上の場合、各基は同一又は異なる。上記ｎ２は、１～４である場合を好適な例としてあげることができる。
【0064】
上記式（１）において、Ｘ－は、１価のアニオンである。Ｘ－が複数存在する場合、各基は同一又は異なる。Ｘ－は、公知の１価のアニオンを適宜用いることができる。
【0065】
上記Ｘ－で表される、１価のアニオンは、例えば、－ＳＯ３
－、又は、－ＣＯＯ－等をあげることができる。上記式（１）において、少なくとも１つのＸ－は、－ＳＯ３
－、又は、－ＣＯＯ－であることが好ましい。
【0066】
上記式（１）において、Ｙ＋は、１価のカチオンである。Ｙ＋が複数存在する場合、各基は同一又は異なる。Ｙ＋は、公知の１価のカチオンを適宜用いることができる。
【0067】
上記Ｙ＋で表される、１価のカチオンは、例えば、Ｈ＋、アルカリ金属カチオン、又は、アンモニウムカチオン等をあげることができる。上記式（１）において、少なくとも１つのＹ＋は、Ｈ＋、アルカリ金属カチオン、又は、アンモニウムカチオンであることが好ましい。
【0068】
上記式（１）において、Ｒ３は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ２が複数存在する場合、同一又は異なる。
【0069】
上記Ｒ３で表される、置換又は非置換の、メチレン基は、上記Ｒ２における、置換又は非置換の、メチレン基等をあげることができる。
【0070】
上記式（１）において、ｎ３は、１～１０の整数である。ｎ３が２以上の場合、各基は同一又は異なる。上記ｎ３は、１～４である場合を好適な例としてあげることができる。
【0071】
上記式（１）において、Ｌは、リンカーを示す。
【0072】
Ｌは、例えば、置換又は非置換の、炭素数１～２０の炭化水素基（一部ヘテロ原子で置換されているものも含む）である。
【0073】
上記Ｌで表される、置換又は非置換の、炭素数１～２０の炭化水素基は、上記Ｒ１における基のうち、置換又は非置換の、炭素数１～２０のアルキル基、炭素数２～２０のアルケニル基、及び、炭素数２～２０のアルキニル基等をあげることができる。また、上記炭化水素基は一部ヘテロ原子で置換されているものも含み、例えば、トリアゾール環等を含むものをあげることができる。
【0074】
上記式（１）において、＊は、結合箇所を示す。上記結合は、例えば、共有結合である。
【0075】
上記式（１）において、上記構造（１）は、使用目的や用途に応じて、例えば、１～４つ等含み得るが、１つ又は２つ含まれることが好ましい。
【0076】
上記化合物（１）は、下記式（２）で表される構造（２）を有する化合物（（以下、「化合物（２）」ともいう））であることが好ましい。
（式（２）中、
Ｒ４は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ｎ４は、それぞれ独立して、０～４の整数である。ｎ４が２以上の場合、Ｒ４は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）（以下、「側鎖構造（３）」ともいう）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
【化12】
【化13】
Ｒ４は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ｎ４は、それぞれ独立して、０～４の整数である。ｎ４が２以上の場合、Ｒ４は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）（以下、「側鎖構造（３）」ともいう）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
【0077】
上記化合物（２）は、スクアライン構造をコア構造として含む化合物である。上記化合物（２）における各基に関する事項は、下記の他、適宜本明細書中記載を参酌する。
【0078】
上記化合物（２）は、当該分子中において、少なくとも１つ以上の上記側鎖構造（３）が、そのリンカー部位Ｌを介して上記コア構造に結合している。
【0079】
上記式（２）において、Ｒ４は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
【0080】
上記Ｒ４で表される炭素数１～１２のアルキル基としては、直鎖状又は分岐鎖状のアルキル基があげられ、例えば、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、ｉｓｏ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｎ－ヘキシル基、ｎ－ヘプチル基、ｎ－オクチル基、ｎ－ノニル基、ｎ－デカニル基、ｎ－ウンデカニル基、ｎ－ドデカニル基等をあげることができる。
【0081】
上記Ｒ４で表される炭素数２～１２のアルケニル基としては直鎖状又は分岐鎖状のアルケニル基があげられ、例えば、ビニル基、アリル基等をあげることができる。
【0082】
上記Ｒ４で表される炭素数２～１２のアルキニル基としては直鎖状又は分岐鎖状のアルケニル基があげられ、例えば、エチニル基、プロパルギル基等をあげることができる。
【0083】
上記Ｒ４で表される炭素数５～１２のアリール基としては、炭素数５～１２の芳香族炭化水素基等があげられ、例えば、フェニル基、トリル基、キシリル基、ナフチル基、メチルナフチル、アントラシル、又はインデニル等をあげることができる。
【0084】
上記Ｒ４で表される炭素数５～１２のヘテロアリール基としては、炭素数５～１２の芳香族炭化水素基等があげられ、芳香環中の１つ以上の炭素原子が窒素原子、酸素原子、硫黄原子等の原資に置換されたもの等あげることができる。例えば、ピロリル基、ピリジニル基、イミダゾリル基、チエニル基、フラニル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基等をあげることができる。
【0085】
上記Ｒ４で表されるハロゲン原子としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子をあげることができる。
【0086】
上記Ｒ４で表される親水性置換基は、例えば、カルボキシル基、水酸基、スルホ基、アミド基、ハロゲン原子、及び、これらの塩である基からなる群より選ばれる。上記親水性置換基が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
【0087】
上記式（２）において、Ｒ４は、それぞれ独立して、例えば、メチル基、エチル基、又は、水酸基である場合を好適な例としてあげることができる。
【0088】
上記式（２）において、ｎ４は、それぞれ独立して、０～４の整数である。ｎ４が２以上の場合、Ｒ４は同一又は異なる。また、Ｒ４は、環中の任意の環上でありうる。
【0089】
上記式（２）において、Ｌは、リンカーを示す。Ｌは、式（１）と同様である。
【0090】
上記式（２）において、Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
【0091】
上記式（２）及び（３）において、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）等と同様である。
【0092】
上記化合物（１）は、下記式（４）で表される構造（４）を有する化合物（（以下、「化合物（４）」ともいう））であることが好ましい。
（式（４）中、
Ｒ５は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ｎ５は、それぞれ独立して、０～４の整数である。ｎ５が２以上の場合、Ｒ５は同一又は異なる。
ｌは、それぞれ独立して、１～４の整数である。
Ｚ－は、アニオンである。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
【化14】
【化15】
Ｒ５は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ｎ５は、それぞれ独立して、０～４の整数である。ｎ５が２以上の場合、Ｒ５は同一又は異なる。
ｌは、それぞれ独立して、１～４の整数である。
Ｚ－は、アニオンである。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
【0093】
上記化合物（４）は、カルボシアニン構造をコア構造として含む化合物である。上記化合物（４）における各基に関する事項は、下記の他、適宜本明細書中記載を参酌する。
【0094】
上記化合物（４）は、当該分子中において、少なくとも１つ以上の上記側鎖構造（３）が、そのリンカー部位Ｌを介して上記コア構造に結合している。
【0095】
上記式（４）において、Ｒ５は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
【0096】
Ｒ５は、例えば、上記式（２）における上記Ｒ４と同様の基を用いることができる。
【0097】
ｎ５は、それぞれ独立して、０～４の整数である。ｎ５が２以上の場合、Ｒ５は同一又は異なる。また、Ｒ５は、環中の任意の環上でありうる。
【0098】
上記式（４）において、ｌは、それぞれ独立して、１～４の整数である。上記ｌは、１又は２を好適な例としてあげることができる。
【0099】
上記式（４）において、上記式（３）で表される構造（３）は、上記化合物（２）の側鎖構造（３）と同様である。
【0100】
上記式（４）及び（３）において、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊、Ｌ、Ｚ－は、それぞれ、式（１）等と同様である。
【0101】
上記化合物（１）は、下記式（５）で表される構造（５）を有する化合物（（以下、「化合物（５）」ともいう））であることが好ましい。
（式（５）中、
ｎ６は、１～４の整数である。ｎが２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｎ７は、０～４の整数である。ｎ２が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、置換又は非置換の、炭素数１～６のアルキル基、炭素数２～６のアルケニル基、又は、炭素数２～６のアルキニル基であり、Ｒ７及びＲ８は、ともに１つの環構造を形成してもよい。
Ｒ７、又はＲ８、少なくとも１つ以上の親水性置換基を含み、上記親水性置換基は、カルボキシル基、水酸基、スルホ基、アミノ基、アミド基、ハロゲン原子、及び、これらの塩である基からなる群より選ばれる。上記親水性置換基が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｍは、１～４の整数である。ｍが２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ６は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ａは、それぞれ独立して、０～４の整数である。ａが２以上の場合、Ｒ６は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
【化16】
【化17】
ｎ６は、１～４の整数である。ｎが２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｎ７は、０～４の整数である。ｎ２が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、置換又は非置換の、炭素数１～６のアルキル基、炭素数２～６のアルケニル基、又は、炭素数２～６のアルキニル基であり、Ｒ７及びＲ８は、ともに１つの環構造を形成してもよい。
Ｒ７、又はＲ８、少なくとも１つ以上の親水性置換基を含み、上記親水性置換基は、カルボキシル基、水酸基、スルホ基、アミノ基、アミド基、ハロゲン原子、及び、これらの塩である基からなる群より選ばれる。上記親水性置換基が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｍは、１～４の整数である。ｍが２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ６は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ａは、それぞれ独立して、０～４の整数である。ａが２以上の場合、Ｒ６は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
【0102】
上記化合物（５）は、ピレン構造をコア構造として含む化合物である。上記化合物（５）における各基に関する事項は、下記の他、適宜本明細書中記載を参酌する。
【0103】
上記化合物（５）は、当該分子中において、少なくとも１つ以上の上記側鎖構造（３）が、そのリンカー部位Ｌを介して上記コア構造に結合している。
【0104】
上記式（５）において、ｎ６は、１～４の整数である。ｎ６が２以上の場合、各基は同一又は異なる。また、当該基（側鎖構造を含む基）は、環中の任意の環上でありうる。
【0105】
上記式（５）において、ｎ６は、１～４の整数である。ｎが２以上の場合、各基は同一又は異なる。
【0106】
上記式（５）において、ｎ７は、０～４の整数である。ｎ２が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
【0107】
上記式（５）において、Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、置換又は非置換の、炭素数１～６のアルキル基、炭素数２～６のアルケニル基、又は、炭素数２～６のアルキニル基であり、Ｒ７及びＲ８は、ともに１つの環構造を形成してもよい。
【0108】
上記式（５）において、上記Ｒ７及びＲ８は、ともに１つの環構造を形成してもよい。上記Ｒ７及びＲ８がともに１つの環構造を形成する場合、上記環構造は、例えば、ピロリジン環構造、イミダゾリジン環構造、オキサゾリジン環構造、ピペリジン環構造、ピペラジン環構造、モルホリン環構造等があげられる。また、上記環構造上に上記親水性置換基を有していてもよい。
【0109】
上記式（５）において、Ｒ７、又はＲ８、少なくとも１つ以上の親水性置換基を含み、上記親水性置換基は、カルボキシル基、水酸基、スルホ基、アミノ基、アミド基、ハロゲン原子、及び、これらの塩である基からなる群より選ばれる。上記親水性置換基が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
【0110】
また、上記式（５）において、例えば、少なくとも１組のＲ７及びＲ８は、ともに１つのピロリジン環、又は、ピペリジン環を形成していることが好ましい。
【0111】
上記式（５）において、ｍは、１～４の整数である。ｍが２以上の場合、各基は同一又は異なる。また、当該基は、環中の任意の環上でありうる。
【0112】
上記式（５）において、Ｒ６は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
【0113】
Ｒ６は、例えば、上記式（２）における上記Ｒ４と同様の基を用いることができる。
【0114】
上記式（５）において、ａは、それぞれ独立して、０～４の整数である。ａが２以上の場合、Ｒ６は同一又は異なる。また、Ｒ６は、環中の任意の環上でありうる。
【0115】
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
【0116】
上記式（５）において、上記式（３）で表される構造（３）は、上記化合物（２）の側鎖構造（３）と同様である。
【0117】
上記式（５）及び（３）において、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊、Ｌは、それぞれ、式（１）等と同様である。
【0118】
上記化合物（１）は、下記式（６）で表される構造（６）を有する化合物（（以下、「化合物（６）」ともいう））であることが好ましい。
（式（６）中、
Ｒ９は、置換又は非置換の、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、又は、炭素数２～１２のアルキニル基である。
Ｒ１０は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ１０が複数存在する場合、同一又は異なる。
ｎ８は、１～４の整数である。ｎ８が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｎ９は、０～４の整数である。ｎ９が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｎ１０は、０～４の整数である。ｎ１０が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ６は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ａは、それぞれ独立して、０～４の整数である。ａが２以上の場合、Ｒ６は同一又は異なる。
Ｒ７及びＲ１１は、それぞれ独立して、置換又は非置換の、炭素数１～６のアルキル基、炭素数２～６のアルケニル基、又は、炭素数２～６のアルキニル基であり、Ｒ７及びＲ１１は、ともに１つの環構造を形成してもよい。Ｒ１１は、１つの水素原子が－Ｌ－Ｒ基に置換されている。
Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１１、又はその複数において、少なくとも１つ以上の親水性置換基を含み、上記親水性置換基は、カルボキシル基、水酸基、スルホ基、アミノ基、アミド基、ハロゲン原子、及び、これらの塩である基からなる群より選ばれる。上記親水性置換基が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｍは、１～４の整数である。ｍが２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
【化18】
【化19】
Ｒ９は、置換又は非置換の、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、又は、炭素数２～１２のアルキニル基である。
Ｒ１０は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ１０が複数存在する場合、同一又は異なる。
ｎ８は、１～４の整数である。ｎ８が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｎ９は、０～４の整数である。ｎ９が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｎ１０は、０～４の整数である。ｎ１０が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｒ６は、それぞれ独立して、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、炭素数２～１２のアルキニル基、炭素数５～１２のアリール基、炭素数５～１２のヘテロアリール基、ハロゲン原子、又は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む親水性置換基である。
ａは、それぞれ独立して、０～４の整数である。ａが２以上の場合、Ｒ６は同一又は異なる。
Ｒ７及びＲ１１は、それぞれ独立して、置換又は非置換の、炭素数１～６のアルキル基、炭素数２～６のアルケニル基、又は、炭素数２～６のアルキニル基であり、Ｒ７及びＲ１１は、ともに１つの環構造を形成してもよい。Ｒ１１は、１つの水素原子が－Ｌ－Ｒ基に置換されている。
Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１１、又はその複数において、少なくとも１つ以上の親水性置換基を含み、上記親水性置換基は、カルボキシル基、水酸基、スルホ基、アミノ基、アミド基、ハロゲン原子、及び、これらの塩である基からなる群より選ばれる。上記親水性置換基が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
ｍは、１～４の整数である。ｍが２以上の場合、各基は同一又は異なる。
Ｌは、リンカーを示す。
Ｒは、上記式（３）で表される構造（３）である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊は、それぞれ、式（１）と同様である。）
【0119】
上記化合物（６）は、ピレン構造をコア構造として含む化合物である。上記化合物（６）における各基に関する事項は、下記の他、適宜本明細書中記載を参酌する。
【0120】
上記化合物（６）は、当該分子中において、少なくとも１つ以上の上記側鎖構造（３）が、そのリンカー部位Ｌを介して上記コア構造に結合している。
【0121】
上記式（６）において、Ｒ９は、置換又は非置換の、炭素数１～１２のアルキル基、炭素数２～１２のアルケニル基、又は、炭素数２～１２のアルキニル基である。
【0122】
上記Ｒ９で表される炭素数１～１２のアルキル基としては、直鎖状又は分岐鎖状のアルキル基があげられ、例えば、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、ｉｓｏ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｎ－ヘキシル基、ｎ－ヘプチル基、ｎ－オクチル基、ｎ－ノニル基、ｎ－デカニル基、ｎ－ウンデカニル基、ｎ－ドデカニル基等をあげることができる。
【0123】
上記Ｒ９で表される炭素数２～１２のアルケニル基としては直鎖状又は分岐鎖状のアルケニル基があげられ、例えば、ビニル基、アリル基等をあげることができる。
【0124】
上記Ｒ９で表される炭素数２～１２のアルキニル基としては直鎖状又は分岐鎖状のアルケニル基があげられ、例えば、エチニル基、プロパルギル基等をあげることができる。
【0125】
また、上記Ｒ９で表されるアルキル基等の置換基として、例えば、カルボキシル基、水酸基、スルホ基、アミド基、ハロゲン原子、及び、これらの塩である基等をあげることができる。置換基が複数存在する場合、これらは単独で置換されていてもよく、また２種以上を組み合わせて置換されていてもよい。
【0126】
上記Ｒ９で表される親水性置換基は、水溶性を向上させ、細胞膜及び細胞内への分散を促進する観点、又は経皮吸収性を向上させる観点から、例えば、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄若しくはハロゲンからなる群より選ばれる原子を１種以上含む基であることが好ましい。中でも、生体分子との反応を抑える観点から、上記親水性置換基は、例えば、カルボニル基（アルデヒド基を除く）を含むことが好ましい。
【0127】
上記式（６）において、例えば、少なくとも１つのＲ９は、メチル基、エチル基、ｎ－ピロピル基、ｉ－プロピル基、ｎ－ブチル基、ｉ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔ－ブチル基、エチニル基、プロパルギル基、又は、炭素数１～４のアルキル基で置換又は非置換の１，２，３－トリアゾール若しくは１，２，４－トリアゾール基であることが好ましい。
【0128】
上記式（６）において、Ｒ１０は、置換又は非置換の、メチレン基である。Ｒ１０が複数存在する場合、同一又は異なる。
【0129】
上記Ｒ１０で表される、置換又は非置換の、メチレン基は、上記式（１）の上記Ｒ２における、置換又は非置換の、メチレン基等をあげることができる。
【0130】
上記式（６）において、ｎ８は、１～４の整数である。ｎ８が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
【0131】
上記式（６）において、ｎ９は、０～４の整数である。ｎ９が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
【0132】
上記式（６）において、ｎ１０は、０～４の整数である。ｎ１０が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
【0133】
上記式（６）において、Ｒ７及びＲ１１は、それぞれ独立して、置換又は非置換の、炭素数１～６のアルキル基、炭素数２～６のアルケニル基、又は、炭素数２～６のアルキニル基であり、Ｒ７及びＲ１１は、ともに１つの環構造を形成してもよい。Ｒ１１は、１つの水素原子が－Ｌ－Ｒ基に置換されている。
【0134】
上記式（６）において、上記Ｒ７及びＲ１１は、ともに１つの環構造を形成してもよい。上記Ｒ７及びＲ１１がともに１つの環構造を形成する場合、上記環構造は、例えば、ピロリジン環構造、イミダゾリジン環構造、オキサゾリジン環構造、ピペリジン環構造、ピペラジン環構造、モルホリン環構造等があげられる。また、上記環構造上に上記親水性置換基を有していてもよい。また、この場合も、１つの水素原子が－Ｌ－Ｒ基に置換されている。
【0135】
上記式（６）において、Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１１、又はその複数において、少なくとも１つ以上の親水性置換基を含み、上記親水性置換基は、カルボキシル基、水酸基、スルホ基、アミド基、ハロゲン原子、及び、これらの塩である基からなる群より選ばれる。上記親水性置換基が２以上の場合、各基は同一又は異なる。
【0136】
上記式（６）において、ｍは、１～４の整数である。ｍが２以上の場合、各基は同一又は異なる。また、当該基（側鎖構造を含む基）は、環中の任意の環上でありうる。
【0137】
上記式（６）において、上記式（３）で表される構造（３）は、上記化合物（２）の側鎖構造（３）と同様である。
【0138】
上記式（６）において、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ－、Ｙ＋、ｎ２、Ｒ３、ｎ３、＊、Ｒ６、ａは、それぞれ、式（１）、式（５）等と同様である。
【0139】
また、上記化合物（１）の吸収極大波長は、例えば、２５℃の２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中において、例えば、３００～１２００ｎｍの間にあるものが好ましい。上記化合物の吸収極大波長は、使用目的や用途に応じて、例えば、３００ｎｍ、３１０ｎｍ、３２０ｎｍ、３３０ｎｍ、３４０ｎｍ、３５０ｎｍ、３６０ｎｍ、３７０ｎｍ、３８０ｎｍ、３９０ｎｍ、４００ｎｍ、４１０ｎｍ、４２０ｎｍ、４３０ｎｍ、４４０ｎｍ、４５０ｎｍ、４６０ｎｍ、４７０ｎｍ、４８０ｎｍ、４９０ｎｍ、５００ｎｍ、５１０ｎｍ、５２０ｎｍ、５３０ｎｍ、５４０ｎｍ、５５０ｎｍ、６００ｎｍ、６５０ｎｍ、７００
ｎｍ、７５０ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１０００ｎｍ、１１００ｎｍ、及び１２００ｎｍからなる群より選ばれるいずれか２つの数値の間の範囲内であるものが好適な例としてあげることができる。
ｎｍ、７５０ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１０００ｎｍ、１１００ｎｍ、及び１２００ｎｍからなる群より選ばれるいずれか２つの数値の間の範囲内であるものが好適な例としてあげることができる。
【0140】
また、上記化合物がソルバトクロミズムを呈する化合物の場合、上記化合物の２５℃のメタノール中での蛍光極大波長をλＭｅｔ、２５℃のｎ－ヘプタン中での蛍光極大波長をλＨｅｐとしたとき、化合物のλＭｅｔとλＨｅｐの差は、例えば５０ｎｍ以上、６０ｎｍ以上、７０ｎｍ以上、８０ｎｍ以上、９０ｎｍ以上、１００ｎｍ以上、又は１１０ｎｍ以上であるものが好ましい。λＭｅｔとλＨｅｐの差が大きいほど、例えば、腫瘍組織を健常組織に対して高コントラストで検出しやすくなり、又は、がん細胞を正常細胞に対して高コントラストで検出しやすくなり、好ましい。また、化合物のλＭｅｔとλＨｅｐの差は、３００ｎｍ以下、２００ｎｍ以下又は１５０ｎｍ以下であり得る。
【0141】
また、上記化合物の二光子吸収極大波長は、２５℃の２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中において、例えば、６００～１６００ｎｍの間にあることが好ましい。なかでも、９００ｎｍより長波長であるとより好ましい。このような化合物は、組織中の生体物質によって吸収されにくい波長の光で励起することができるため、二光子顕微鏡観察での使用に適する。
【0142】
また、上記化合物は、水溶性に優れる。上記化合物は、例えば、水に対しての濃度は、１ｎＭ～１００ｍＭであるものが好ましい。上記化合物の水に対しての濃度は、使用目的や用途に応じて、下限値としては、例えば、１ｎＭ、２ｎＭ、３ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、１５ｎＭ、２０ｎＭ、３０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、３００ｎＭ、５００ｎＭ、７００ｎＭ、１μＭ、２μＭ、３μＭ、５μＭ、１０μＭ、１５μＭ、２０μＭ、３０μＭ、５０μＭ、１００μＭ、２００μＭ、３００μＭ、５００μＭ、７００μＭ、８００μＭ、１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ、３０ｍＭ、５０ｍＭ、８０ｍＭ、又は、１００ｍＭ等とすることが可能である。上記化合物の水に対しての濃度は、使用目的や用途に応じて、上限値としては、例えば、１００ｍＭ、８０ｍＭ、５０ｍＭ、３０ｍＭ、２０ｍＭ、１０ｍＭ、５ｍＭ、３ｍＭ、２ｍＭ、１ｍＭ、７００μＭ、５００μＭ、３００μＭ、２００μＭ、１００μＭ、５０μＭ、３０μＭ、２０μＭ、１５μＭ、１０μＭ、５μＭ、３μＭ、２μＭ、１μＭ、７００ｎＭ、５００ｎＭ、３００ｎＭ、２００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、又は、１０ｎＭ等とすることが可能である。上記の上限値と下限値はいずれの組み合わせであってもよい。複数種の化合物を併用する場合は、化合物の濃度はその合計量である。また、細胞及び／又は組織のイメージングに使用する際は、上記化合物の水に対しての濃度は、上記数値範囲内となるように用いることが好ましい。
【0143】
また、上記化合物は、皮膚等の組織イメージングの場合には、例えば、水に対しての濃度は、１００μＭ～１ｍＭであるものが好ましい。上記用途の場合の上記化合物の水に対しての濃度は、使用目的や用途に応じて、下限値としては、例えば、１００μＭ、２００μＭ、３００μＭ、５００μＭ、７００μＭ、又は、８００μＭ等とすることが可能である。上記化合物の水に対しての濃度は、使用目的や用途に応じて、上限値としては、例えば、１ｍＭ、７００μＭ、５００μＭ、３００μＭ、２００μＭ、１００μＭ、５０μＭ、３０μＭ、２０μＭ、１５μＭ、１０μＭ、５μＭ、３μＭ、２μＭ、１μＭ、７００ｎＭ、５００ｎＭ、３００ｎＭ、又は、２００ｎＭ等とすることが可能である。上記の上限値と下限値はいずれの組み合わせであってもよい。複数種の化合物を併用する場合は、化合物の濃度はその合計量である。また、組織のイメージングに使用する際は、上記化合物の水に対しての濃度は、上記数値範囲内となるように用いることが好ましい。
【0144】
また、上記化合物は、細胞イメージングの場合には、例えば、水に対しての濃度は、１ｎＭ～１００μＭであるものが好ましい。上記用途の場合の上記化合物の水に対しての濃度は、使用目的や用途に応じて、下限値としては、例えば、１ｎＭ、２ｎＭ、３ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、１５ｎＭ、２０ｎＭ、３０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ、３００ｎＭ、５００ｎＭ、７００ｎＭ、１μＭ、２μＭ、３μＭ、５μＭ、１０μＭ、１５μＭ、２０μＭ、３０μＭ、又は、５０μＭ等とすることが可能である。上記化合物の水に対しての濃度は、使用目的や用途に応じて、上限値としては、例えば、１００ｍＭ、８０ｍＭ、５０ｍＭ、３０ｍＭ、２０ｍＭ、１０ｍＭ、５ｍＭ、３ｍＭ、２ｍＭ、１ｍＭ、７００μＭ、５００μＭ、３００μＭ、２００μＭ、１００μＭ、５０μＭ、３０μＭ、２０μＭ、１５μＭ、１０μＭ、５μＭ、３μＭ、２μＭ、１μＭ、７００ｎＭ、５００ｎＭ、３００ｎＭ、２００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、又は、１０ｎＭ等とすることが可能である。上記の上限値と下限値はいずれの組み合わせであってもよい。複数種の化合物を併用する場合は、化合物の濃度はその合計量である。また、細胞のイメージングに使用する際は、上記化合物の水に対しての濃度は、上記数値範囲内となるように用いることが好ましい。
【0145】
また、上記化合物の分子量は、例えば、３０００以下であり、２８００以下、２６００以下、２５００以下、２４００以下、２２００以下、２０００以下、１８００以下、１５００以下、１３００以下、１０００、９００以下、８００以下、７００以下、６５０以下、６００以下、５００以下とすることができ得る。また、下限値は、１００以上、１５０以上等とすることができ得る。
【0146】
また、本発明において、上記化合物には、分子内の小部分の化学変化によって生成する誘導体も含み、簡易な構造置換体、付加体、水和物等を含み、また類縁体とよばれるものも含む。
〔化合物の製造方法〕
本発明の化合物は、本発明に記載の手法以外に、公知の手法を適宜用いて製造してもよい。
〔化合物の製造方法〕
本発明の化合物は、本発明に記載の手法以外に、公知の手法を適宜用いて製造してもよい。
【0147】
例えば、上記化合物（２）、化合物（４）～化合物（６）にそれぞれ相当する、下記化合物Ａ～化合物Ｄの場合、実施例に記載の各スキーム１～５のように合成することができる。
【0148】
〔蛍光色素剤〕
本発明の蛍光色素剤は、上記化合物を含む。
本発明の蛍光色素剤は、上記化合物を含む。
【0149】
本発明の蛍光色素剤を用いることにより、細胞膜（ないし細胞）や生体組織等を簡便かつ迅速に染色することができる。
【0150】
上記蛍光色素剤は、例えば、生体に由来する組織中の細胞（例えば、腫瘍細胞等）及び／又は組織（例えば、皮膚組織等）の検出に用いられる。
【0151】
上記蛍光色素剤は、例えば、細胞及び／又は組織の形態学検出用に用いられる。例えば、腫瘍細胞の形態学検出用や、皮膚癌細胞の形態学検出用に好適に用いることができる。また、上記蛍光色素剤は、例えば、生体中の細胞及び／又は組織の形態学検出に好適に用いられる。
【0152】
上記蛍光色素剤は、例えば、生物試料の染色又は可視化用に用いられる。また、上記蛍光色素剤は、例えば、生体組織中の細胞膜の染色又は可視化用に好適に用いられる。
【0153】
上記蛍光色素剤は、例えば、蛍光イメージング用に用いられる。
【0154】
上記蛍光色素剤は、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ観察用に用いられる。上記蛍光色素剤は、ｉｎ ｖｉｖｏ観察において特に好適に用いることができ、従来には見られない鮮明なイメージング等を、簡易かつ迅速に行うことができ得る。上記蛍光色素剤は、水溶性に優れた上記化合物を用いるため、従来非常に困難であった生体そのものに、例えば静脈注射等で導入することにより、血管内で析出する等の不具合を起こすことなく、ｉｎ ｖｉｖｏ観察を行うことができる。
【0155】
上記蛍光色素剤は、例えば、経皮吸収用に用いられる。上記蛍光色素剤は、高い皮膚組織浸透性を有しており、経皮吸収させて観察する系において特に好適に用いることができ、従来には見られない鮮明なイメージング等を、簡易かつ迅速に行うことができ得る。
【0156】
また、上記蛍光色素剤は、例えば、静脈注射用等の血管投与用や経口投与用等に用いられる。上記蛍光色素剤は、高い水溶性を有しており、体内投与させて観察する系において特に好適に用いることができ、従来には見られない鮮明なイメージング等を、簡易かつ迅速に行うことができ得る。
【0157】
本発明の蛍光色素剤が適用される組織や細胞は、動物・植物、生細胞・死細胞等を問わず、例えば、生体由来又は人工合成や培養したもの等、特に限定されない。
【0158】
上記生体は、多細胞動物であれば特に限定されず、好ましくは哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。
【0159】
上記組織は、例えば、皮膚、脳、脊髄、食道、胃、小腸、大腸、十二指腸、直腸、肝臓、膵臓、胆嚢、膀胱、腎臓、心臓、脾臓、胸腺、前立腺、子宮、卵巣、精巣、乳房、肺、気管支、眼球、鼻、副鼻腔、口腔、咽頭、唾液腺、甲状腺、副甲状腺、副腎、筋肉、骨髄、血管、神経、リンパ節、腹膜、横隔膜、血液等をあげることができる。一実施形態では、本発明の蛍光色素剤が適用される組織は、皮膚であり、例えば、表皮若しくは真皮、又はそれら両方の組み合わせである。
【0160】
本発明の蛍光色素剤は、例えば、摘出、切除、穿刺、採血等の外科的処置によって生体から分離された組織、又は便、尿、汗その他の体液等から得られた組織等に適用することができる。
【0161】
本明細書において、生体に由来する組織には、生体から分離された組織の他に、生体そのもの、又は、生体の一部であって、生体から分離されていない組織等が包含される。
【0162】
一実施形態では、組織の形態は、検出方法によって適宜選択され得るが、例えば、臓器若しくは器官そのもの、又はそれらの薄切切片若しくは三次元断片等であってもよい。
【0163】
組織等は、その形態によっては、例えば、ホルマリン等による固定処理、パラフィン包埋、脱パラフィン処理、脱水処理、透明化処理等の処理を経ていてもよい。
【0164】
一実施形態では、腫瘍細胞は、皮膚の腫瘍に由来する細胞である。そのような腫瘍細胞としては、例えば、汗腺系腫瘍（乳房外パジェット病、乳房パジェット病、エクリン汗孔癌、微小嚢胞性付属器癌、皮膚粘液癌等）、悪性黒色腫、表皮・毛包系腫瘍（基底細胞癌、有棘細胞癌、日光角化症、ボーエン病、白板症、ケラトアカントーマ等）、神経系腫瘍（メルケル細胞癌、悪性末梢神経鞘腫瘍等）、間葉系腫瘍（隆起性皮膚線維肉腫、孤立性線維性腫瘍、筋肉系腫瘍、脂肪肉腫、血管肉腫、カポジ肉腫、紡錘細胞血管内皮腫、異系線維黄色腫、類上皮肉腫、滑膜肉腫、未分化多形細胞肉腫等）の細胞等をあげることができる。
【0165】
本発明の蛍光色素剤において、上記化合物は、組織等に適用可能なものであれば特に限定されない。
【0166】
一実施形態では、上記化合物は、細胞膜及び細胞内及び分泌物に分布し得るものであり、さらに特定の実施形態では、上記化合物は、細胞膜に挿入され得るものである。
【0167】
上記分泌物としては、例えば、胆汁、ホルモン、消化酵素、エクソソームやアミロイド、インスリン等をあげることができる。
【0168】
一実施形態では、上記化合物は、細胞膜において強い蛍光異方性を示す。
【0169】
一実施形態では、上記化合物は、細胞膜及び／又は細胞内に比べて、細胞外で蛍光強度が低くなる性質を有する。特定の実施形態では、上記化合物は、細胞外では実質的に蛍光が観察されない。特に限定されないが、例えば、上記化合物の細胞外の蛍光強度は、細胞内の蛍光強度の５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１０％以下、５％以下又は１％以下であり得る。ここで、細胞内外の蛍光強度の比較は、本発明の対象となる組織由来の細胞を、当該化合物を励起し得る波長の光で励起したうえで、蛍光極大波長の光を検出できる条件で蛍光顕微鏡画像を取得し、細胞内と細胞外の蛍光の平均シグナル強度を比較することによって行われる。
【0170】
また、本発明の蛍光色素剤は、単独で使用してもよく、また２種以上を混合して使用してもよい。
【0171】
また、本発明の蛍光色素剤は、上記化合物の他、公知の蛍光色素剤に使用される他の成分等を適宜組み合わせて用いることができる。
【0172】
上記他の成分として、例えば、ｐＨ緩衝剤、界面活性剤、塩、溶媒、化合物（１）とは別の色素組成物等のいずれか１種単独又は２種以上の組み合わせを含んでいてもよい。
【0173】
ｐＨ緩衝剤としては、例えば、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン；グッド緩衝剤（ＨＥＰＥＳ、ＭＯＰＳ等）；及び、クエン酸、酢酸、乳酸、シュウ酸、フタル酸、イミダゾール、トリエタノールアミン、ジエタノールアミン、グリシン、ホウ酸、リン酸、又は炭酸を含むｐＨ緩衝剤；からなる群より選ばれる１種単独又は２種以上の組み合わせ等をあげることができる。
【0174】
溶媒としては、例えば、水、エタノール、メタノール、２－プロパノール、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、アセトン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、１，２－ジクロロエタン、リン酸緩衝液からなる群より選ばれる１種単独又は２種以上の組み合わせ等をあげることができる。中でも、例えば、水、水溶液、リン酸緩衝液等を好適なものとして例示することができる。
【0175】
上記蛍光色素剤は、溶液にする場合、例えば、上記蛍光色素剤全体に対して、化合物（１）の濃度は、１μＭ～１ｍＭとすることが好ましく、使用目的や用途に応じて、２μＭ～８００μＭ、３μＭ～７００μＭ、５μＭ～６００μＭ、１０μＭ～５００μＭ、３０μＭ～４５０μＭ、５０μＭ～４００μＭ、１００μＭ～３５０μＭ、２００μＭ～３００μＭであってもよい。複数種の化合物（１）を併用する場合は、化合物（１）の濃度はその合計量である。上記蛍光色素剤は、高い水溶性を有することにより、従来には見られない鮮明なイメージング等を、簡易かつ迅速に行うことができ得る。
【0176】
上記蛍光色素剤は、固体の場合、例えば、上記蛍光色素剤全体に対して、化合物（１）は、０．１質量％～１００質量％とすることが好ましく、使用目的や用途に応じて、１質量％～９５質量％、３質量％～９０質量％、５質量％～８５質量％、１０質量％～８０質量％、１５質量％～７５質量％、２０質量％～７０質量％、３０質量％～６０質量％、４０質量％～５０質量％であってもよい。複数種の化合物（１）併用する場合は、化合物（１）の量は、その合計量である。上記蛍光色素剤は、高い水溶性を有することにより、従来には見られない鮮明なイメージング等を、簡易かつ迅速に行うことができ得る。
【0177】
化合物（１）とは別の色素組成物としては、化合物（１）による細胞の検出を妨害するものでなければ特に限定されない。例えば、プロピジウムイオダイド（ＰＩ）、エチジウムブロマイド、アクリジンオレンジ、ＤＡＰＩ、Ｈｏｅｃｈｓｔ等の核染色色素は、上記化合物の染色を妨げにくく、好適に用いることができる。また、化合物（１）とは別の色素組成物として、例えば、ヘマトキシリン・エオジン（ＨＥ）染色、アザン染色、マッソン・トリクローム染色、エラスチカ・ワンギーソン染色、鍍銀染色、ビクトリア青染色、ＰＡＭ染色、ＰＴＡＨ染色、ズダンＩＩＩ染色、オイル赤Ｏ染色、ＰＡＳ染色、アルシアン青染色、トルイジン青染色、コロイド鉄染色、ムチカルミン染色、コンゴー赤染色、ダイロン染色、グリメリウス染色、フォンタナ・マッソン染色、コッサ染色、ベルリン青染色、ボディアン染色、クリューバー・バレラ染色、ギムザ染色等の各種組織染色に用いられる色素組成物を用いることができる。これらの別の色素組成物は、１種単独又は２種以上を組み合わせて用いることができる。
【0178】
また、本発明の蛍光色素剤は、粉末等の固体であっても、液体であってもよい。
【0179】
本発明の蛍光色素剤で組織を染色すると、例えば、細胞内脂質膜の各部位に化合物（１）が分布し得るが、脂質膜の相（組成）に応じて蛍光波長がシフトし得、蛍光色の変化が生じ得る。そのため、検出する蛍光の波長を適切に選択することにより、例えば、細胞内脂質膜の組成の変化や相状態の変化等が高コントラストで検出され得る。
【0180】
また、本発明の蛍光色素剤で組織を染色すると、例えば、腫瘍細胞及び正常組織の細胞の両方に化合物（１）が分布し得るが、腫瘍細胞における化合物（１）の蛍光波長が、正常組織の細胞における蛍光波長からシフトし得る。そのため、検出する蛍光の波長を適切に選択することにより、腫瘍細胞が正常組織と高コントラストで検出され得る。そして、本発明の蛍光色素剤は、腫瘍、特に悪性腫瘍の検査又は診断に使用することができ得る。
【0181】
また、本発明の蛍光色素剤は、生体に適用される場合、例えば、腫瘍、特に悪性腫瘍の診断に使用することができる。さらに、本発明の蛍光色素剤は、生体の腫瘍、特に癌の除去範囲を特定するため、又は、腫瘍の取り残しの有無を確認するために、当該除去処置の前、処置時、又は処置後に生体に適用されてもよい。
【0182】
本発明の蛍光色素剤は、例えば、臨床検査、基礎研究等に使用される試薬の他、医薬品、医薬部外品であり得る。
【0183】
〔染色用材料〕
本発明の染色用材料は、細胞中に存在する、又は、細胞環境をモデルとした脂質二重膜、油滴若しくはタンパク質凝集体の染色用であり、上記化合物を含む。
本発明の染色用材料は、細胞中に存在する、又は、細胞環境をモデルとした脂質二重膜、油滴若しくはタンパク質凝集体の染色用であり、上記化合物を含む。
【0184】
本発明の染色用材料は、例えば、アミロイド等のタンパク質凝集体を好適に染色することが可能である。
【0185】
上記染色用材料は、上述の化合物（１）ないし蛍光色素剤の欄に記載の事項を適宜準用することができる。
【0186】
上記染色用材料は、上記化合物及びこれらの塩以外の成分については、使用目的や用途に応じて、新規又は公知の手段を適宜用いることができる。
【0187】
〔キット〕
本発明のキットは、上記化合物を含む。
本発明のキットは、上記化合物を含む。
【0188】
本発明のキットを用いることにより、細胞等を簡便かつ迅速に染色することができる。特に、
【0189】
上記キットに含まれる構成は、例えば、上記蛍光色素剤の項の記載を適宜同様に採用することができ得る。
【0190】
上記キットは、例えば、上記化合物に、染色又は組織標本作製のための試薬や器具と組み合わせたものにすることもできる。
【0191】
また、一実施形態では、キットは、染色液調製用の試薬を含む。さらに特定の実施形態では、染色液調製用試薬は、例えば、上記のｐＨ緩衝剤、界面活性剤、塩、溶媒及び別の色素組成物からなる群より選ばれる１種単独又は２種以上の混合物を含み得る
【0192】
〔細胞・細胞膜の検出方法〕
本発明の細胞膜の検出方法は、上記化合物を含む蛍光色素剤で、細胞を染色する工程（１）を含む。
本発明の細胞膜の検出方法は、上記化合物を含む蛍光色素剤で、細胞を染色する工程（１）を含む。
【0193】
また、本発明の細胞の検出方法は、上記化合物を含む蛍光色素剤で、細胞を染色する工程（１’）を含む。本明細書において、上記工程（１’）に関しても、上記工程（１）に関する事項を適宜同様に採用することができ得る。
【0194】
また、本発明の細胞の検出方法を用いることにより、細胞等を簡便に検出することができる。
【0195】
上記工程（１）における蛍光色素剤としては、上述の蛍光色素剤を適宜同様に採用することができ得る。
【0196】
また、上述の蛍光色素剤の項等における各構成の記載を適宜同様に採用することができ得る。
【0197】
上記工程（１）における細胞膜を染色する工程は、公知の細胞染色工程に用いられる材料や手法等を適宜用いることができる。
【0198】
また、本発明の細胞の検出方法は、上記工程（１）の後に、２種類以上の溶媒中で各々測定した蛍光スペクトルを用いて評価する工程（２）を含むことができる。
【0199】
本発明の蛍光色素剤は、上述のソルバトクロミズムを呈する化合物である場合、その化合物ないし蛍光色素剤の周囲の極性（疎水性）の変化によって、その吸収極大波長若しくは蛍光極大波長、又はその両方が変化する。上記工程（２）においては、このような蛍光色素剤を用いる工程を採用することから、２種類以上の溶媒中で各々測定した蛍光スペクトルを用いて、例えば、細胞膜（ないし細胞等）及び／又は組織の形態学検出や生物試料の染色又は可視化等の評価を簡便に行うことができ得る。
【0200】
上記工程（２）における蛍光スペクトルを用いて評価する工程は、公知の化合物や組織等の物質の蛍光スペクトルを測定する手法を適宜用いることができる。
【0201】
また、上記工程（２）において用いられ得る溶媒としては、例えば、例えば、水、エタノール、メタノール、２－プロパノール、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、アセトン、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、１，２－ジクロロエタンからなる群より選ばれる１種単独又は２種以上の組み合わせ等をあげることができる。
【0202】
また、上記工程（２）は、例えば、蛍光イメージングを用いて行われることが好ましい。例えば、２光子蛍光イメージングも好適に用いることができ得る。
【0203】
また、一実施形態では、本発明の方法は、臓器若しくは器官そのもの又はそれらの三次元断片である組織に適用される。当該実施形態では、染色の前に組織を透明化する工程を含むことが好ましい。組織の透明化法には、例えばＴＤＥ法、ＬＵＣＩＤ法、ＣＬＡＲＩＴＹ法、ＰＡＣＴ／ＰＡＲＳ法、ＣＵＢＩＣ法、３ＤＩＳＣＯ法、Ｓｃａｌｅ法、ＳｃａｌｅＳ法、ＳｅｅＤＢ法、ＦｏｃｕｓＣｌｅａｒ法、Ｃｌｅａｒ法、ＢＡＢＢ法、ｉＤＩＳＣＯ法、ｕＤＩＳＣＯ法等をあげることができる。これらの透明化法は、例えば、Ｃｅｌｌ Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１６，Ｖｏｌ．２３，１３７－１５７、Ｌａｓｅｒ Ｐｈｏｔｏｎｉｃｓ Ｒｅｖ．２０１９，Ｖｏｌ．１３，１８００２９２に記載されている。
【0204】
一実施形態では、本発明の方法は、生体そのもの、又は、生体の一部であって生体から分離されていない組織等に適用される。
【0205】
本発明の方法は、水溶性に優れた上記化合物を含む蛍光色素剤を用いるため、従来非常に困難であった生体そのものに、例えば静脈注射等で導入することにより、血管内で析出する等の不具合を起こすことなく、ｉｎ ｖｉｖｏ観察を行うことができる。
【0206】
一実施形態として、本発明の方法は、薄切切片に適用される。薄切切片は、任意選択で、通常臨床検査で使用される固定、脱水、脱アルコール、パラフィン浸透、パラフィン包埋、脱パラフィン、浸水、上記の各種組織染色法を用いた染色等の処理を経てもよい。
【0207】
上記染色は、通常は組織等に上記化合物を含有する染色液を接触させることによって行う。染色液中の上記化合物の濃度は、染色液の全量に対して、例えば、０．００１ｍｇ／ｍＬ以上、０．０１ｍｇ／ｍＬ以上、０．１ｍｇ／ｍＬ以上、０．２ｍｇ／ｍＬ以上、０．３ｍｇ／ｍＬ以上、０．４ｍｇ／ｍＬ以上、０．５ｍｇ／ｍＬ以上、０．６ｍｇ／ｍＬ以上、０．７ｍｇ／ｍＬ以上、０．８ｍｇ／ｍＬ以上、０．９ｍｇ／ｍＬ以上又は１ｍｇ／ｍＬ以上に調整される。
【0208】
また、染色液中の上記化合物の濃度は、染色液の全量に対して、例えば、５００ｍｇ／ｍＬ以下、２００ｍｇ／ｍＬ以下、１００ｍｇ／ｍＬ以下、５０ｍｇ／ｍＬ以下、２０ｍｇ／ｍＬ以下、１０ｍｇ／ｍＬ以下、５ｍｇ／ｍＬ以下又は２ｍｇ／ｍＬ以下に調整される。
【0209】
染色時の温度としては、特に限定されないが、例えば、０～８０℃、４～５０℃、２０～４５℃、又は２５～４０℃であり、好ましくは３５℃～４２℃である。
【0210】
組織等に染色液を接触させる時間は、例えば、１分以上、１０分以上、２０分以上、１時間以上、２時間以上、１日以上又は２日以上であり、例えば、１４日以下又は７日以下である。
【0211】
一実施形態では、組織等に染色液を接触させる時間は、０～４０℃で、例えば、１２時間以下、６時間以下であり、好ましくは２時間以下、より好ましくは１時間以下、さらに好ましくは３０分以下、さらにより好ましくは１０分以下であり、また、例えば、１分以上、２分以上、５分以上又１０分以上であり得る。
【0212】
上記化合物を含有する染色液で染色された組織等は、そのまま細胞及び／又は組織の形態学検出や腫瘍細胞の検出等に用いることができるが、任意選択で、検出の前に他の色素組成物による染色等の処理を経てもよい。
【0213】
本発明の方法は、さらに腫瘍細胞等を検出する工程を含み得る。腫瘍細胞の検出は、例えば、上記化合物を適切な波長の光で励起し、放出される蛍光を検出することによって行われる。検出には、例えば共焦点レーザー走査型顕微鏡を用いることができ、切片の厚さによっては二光子顕微鏡等の多光子励起が可能なものが用いられる。例えば、上記化合物として１－アセチル－６－ピペリジルピレン（ＰＫ）を用いた場合は、実施例に示されるように二光子顕微鏡による測定に適する。
【0214】
一実施形態では、腫瘍細胞等の細胞は、当該腫瘍細胞と正常組織の細胞の間でコントラストが得られるような、１つの特定の波長を含む蛍光を選択し、その蛍光強度を測定することによって検出される。
【0215】
別の実施形態では、腫瘍細胞等の細胞の検出は、多波長測定によって行われる。即ち、細胞は、２以上の異なる特定の波長を含む蛍光を検出し、各々の蛍光強度を統合することによって検出される。
【0216】
一実施形態として、上記化合物として実施例における化合物Ｃ及び化合物Ｄを用いた場合、検出される蛍光は、例えば、３５０～７５０ｎｍ、５５０ｎｍ～７００ｎｍ、６００ｎｍ～７００ｎｍ、６５０～７５０ｎｍの範囲から選択される１又は２以上の波長を含む。
【0217】
本発明の検出方法によって、上述の蛍光色素剤の項に記載したように、腫瘍等の細胞の検査、診断又は腫瘍の除去範囲の特定を行うことができる。
【0218】
また、ソルバトクロミズムを活用した画像解析として、マージに加え、レシオメトリック解析（異なる２つの波長の蛍光を検出し、それらの蛍光強度の比をとる方法）も有効である。
【0219】
また、上記蛍光イメージングのほか、蛍光寿命イメージング等も適宜使用可能である。
【実施例0220】
次に、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【0221】
（１Ｈ－ＮＭＲ分析）
実施例における１Ｈ－ＮＭＲ分析は、核磁気共鳴装置（日本電子株式会社製：ＪＭＮ－ＬＡ５００）を用いて測定した。各化合物において得られた結果を図１～１１、１４～２１に示す。
実施例における１Ｈ－ＮＭＲ分析は、核磁気共鳴装置（日本電子株式会社製：ＪＭＮ－ＬＡ５００）を用いて測定した。各化合物において得られた結果を図１～１１、１４～２１に示す。
【0222】
（紫外可視吸収スペクトル測定・蛍光スペクトル測定）
紫外可視吸収スペクトル測定は、それぞれ分光蛍光光度計装置（日本分光株式会社製：Ｖ６７０）を用いて測定した。蛍光スペクトル測定は、それぞれ分光蛍光光度計装置（日本分光株式会社製：ＦＰ６６００）を用いて測定した。
紫外可視吸収スペクトル測定は、それぞれ分光蛍光光度計装置（日本分光株式会社製：Ｖ６７０）を用いて測定した。蛍光スペクトル測定は、それぞれ分光蛍光光度計装置（日本分光株式会社製：ＦＰ６６００）を用いて測定した。
【0223】
（化合物Ａの合成）
化合物Ａの合成は、下記のスキームのように行った。
スキーム１．化合物Ａの合成経路
化合物Ａの合成は、下記のスキームのように行った。
【化20】
【0224】
【化21】
【0225】
〔実施例１〕
化合物１の合成
二口ナスフラスコに４－ペンチン－１－オール（１ｍＬ，１０．８ｍｍｏｌ）を加え、フラスコ内をアルゴン雰囲気にした。続いて脱水ジクロロメタン（５４ｍＬ）を加え、溶液を－７８℃まで冷却した。冷却した溶液にトリフルオロメタンスルホン酸無水物（３．５６ｍＬ，２１．６ｍｍｏｌ）、脱水ピリジン（１．７４ｍＬ，２１．６ｍｍｏｌ）を加え－７８℃で２時間攪拌した後、室温で一晩攪拌させた。反応溶液をろ過し、ジクロロメタンに溶解しない不純物を除去した。その後ろ液を減圧濃縮し、ショートシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：ヘキサン＝１：４）で単離精製を行った。その結果、目的物である化合物１を無色～薄褐色の液体状化合物として得た（７２２ｍｇ，３１％、図１）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ ４．２８ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），２．８７ｐｐｍ（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝２．８Ｈｚ），２．２３ｐｐｍ（ｔｄ，２Ｈ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，６．３Ｈｚ），１．８１ｐｐｍ（ｑｕｉｎ，２Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ）．
化合物１の合成
二口ナスフラスコに４－ペンチン－１－オール（１ｍＬ，１０．８ｍｍｏｌ）を加え、フラスコ内をアルゴン雰囲気にした。続いて脱水ジクロロメタン（５４ｍＬ）を加え、溶液を－７８℃まで冷却した。冷却した溶液にトリフルオロメタンスルホン酸無水物（３．５６ｍＬ，２１．６ｍｍｏｌ）、脱水ピリジン（１．７４ｍＬ，２１．６ｍｍｏｌ）を加え－７８℃で２時間攪拌した後、室温で一晩攪拌させた。反応溶液をろ過し、ジクロロメタンに溶解しない不純物を除去した。その後ろ液を減圧濃縮し、ショートシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：ヘキサン＝１：４）で単離精製を行った。その結果、目的物である化合物１を無色～薄褐色の液体状化合物として得た（７２２ｍｇ，３１％、図１）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ ４．２８ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），２．８７ｐｐｍ（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝２．８Ｈｚ），２．２３ｐｐｍ（ｔｄ，２Ｈ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，６．３Ｈｚ），１．８１ｐｐｍ（ｑｕｉｎ，２Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ）．
【0226】
〔実施例２〕
化合物２の合成
二口ナスフラスコに２，３，３－トリメチルインドレニン（２５７μＬ，１．６ｍｍｏｌ）を加え、フラスコ内をアルゴン雰囲気にした。続いて脱水ジクロロエタン（８ｍＬ）、得られた化合物１（５１９ｍｇ，２．４ｍｍｏｌ）を加え７０℃で一晩攪拌した。反応溶液を減圧濃縮した後、中圧分取カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１００：０～９６：４）で単離精製を行った。その結果、目的物である化合物２を褐色の液体状化合物として得た（４２０ｍｇ，７０％、図２）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ７．７３－７．６９ｐｐｍ（ｍ，１Ｈ），７．６０－７．５２ｐｐｍ（ｍ，３Ｈ），４．７０ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），２．９２ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ），２．４０ｐｐｍ（ｔｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２．５Ｈｚ），２．１７ｐｐｍ（ｑｕｉｎ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），２．１１ｐｐｍ（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），１．５９ｐｐｍ（ｓ，６Ｈ）．
化合物２の合成
二口ナスフラスコに２，３，３－トリメチルインドレニン（２５７μＬ，１．６ｍｍｏｌ）を加え、フラスコ内をアルゴン雰囲気にした。続いて脱水ジクロロエタン（８ｍＬ）、得られた化合物１（５１９ｍｇ，２．４ｍｍｏｌ）を加え７０℃で一晩攪拌した。反応溶液を減圧濃縮した後、中圧分取カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１００：０～９６：４）で単離精製を行った。その結果、目的物である化合物２を褐色の液体状化合物として得た（４２０ｍｇ，７０％、図２）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ７．７３－７．６９ｐｐｍ（ｍ，１Ｈ），７．６０－７．５２ｐｐｍ（ｍ，３Ｈ），４．７０ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），２．９２ｐｐｍ（ｓ，３Ｈ），２．４０ｐｐｍ（ｔｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２．５Ｈｚ），２．１７ｐｐｍ（ｑｕｉｎ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），２．１１ｐｐｍ（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），１．５９ｐｐｍ（ｓ，６Ｈ）．
【0227】
〔実施例３〕
化合物３の合成
ナスフラスコに得られた化合物２（４２０ｍｇ，１．１２ｍｍｏｌ）、３，４－ジエトキシ－３－シクロブテン－１，２－ジオン（７５μＬ，０．５１ｍｍｏｌ）、１－ブタノール（１０ｍＬ）、ピリジン（１０ｍＬ）を加え１２０℃で一晩加熱還流した。エバポレーターで減圧濃縮を行い、ナスフラスコを真空管に繋ぎ、残留する溶媒を除去した。ナスフラスコ内に残った固形物にメタノールを加えてろ過し、ろ物を熱メタノール、熱ヘキサンで洗浄した。その結果、目的物である化合物３を緑色の粉末状固体として得た（１５０ｍｇ，５０％、図３）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ７．３５ｐｐｍ（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．３１ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，７．９Ｈｚ），７．１５ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，７．５Ｈｚ），７．１０ｐｐｍ（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），５．９６ｐｐｍ（ｓ，２Ｈ），４．１４ｐｐｍ（ｂｒ，４Ｈ），２．３４ｐｐｍ（ｔｄ，４Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２．６Ｈｚ），２．１４ｐｐｍ（ｂｒ，２Ｈ），２．０４ｐｐｍ（ｑｕｉｎ，４Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．７７ｐｐｍ（ｂｒ，１２Ｈ）．
化合物３の合成
ナスフラスコに得られた化合物２（４２０ｍｇ，１．１２ｍｍｏｌ）、３，４－ジエトキシ－３－シクロブテン－１，２－ジオン（７５μＬ，０．５１ｍｍｏｌ）、１－ブタノール（１０ｍＬ）、ピリジン（１０ｍＬ）を加え１２０℃で一晩加熱還流した。エバポレーターで減圧濃縮を行い、ナスフラスコを真空管に繋ぎ、残留する溶媒を除去した。ナスフラスコ内に残った固形物にメタノールを加えてろ過し、ろ物を熱メタノール、熱ヘキサンで洗浄した。その結果、目的物である化合物３を緑色の粉末状固体として得た（１５０ｍｇ，５０％、図３）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ７．３５ｐｐｍ（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．３１ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，７．９Ｈｚ），７．１５ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，７．５Ｈｚ），７．１０ｐｐｍ（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），５．９６ｐｐｍ（ｓ，２Ｈ），４．１４ｐｐｍ（ｂｒ，４Ｈ），２．３４ｐｐｍ（ｔｄ，４Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２．６Ｈｚ），２．１４ｐｐｍ（ｂｒ，２Ｈ），２．０４ｐｐｍ（ｑｕｉｎ，４Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．７７ｐｐｍ（ｂｒ，１２Ｈ）．
【0228】
〔実施例４〕
化合物Ａの合成
マイクロチューブに硫酸銅五水和物（７ｍｇ，０．０２８ｍｍｏｌ）、アスコルビン酸ナトリウム（０．０３９ｍｍｏｌ）、水（３００μＬ）を加え、溶液がオレンジ色になるまで攪拌した。続いて、ナスフラスコに得られた化合物３（３０ｍｇ，０．０５７ｍｍｏｌ）、得られた化合物４（５２ｍｇ，０．１２５ｍｍｏｌ）、ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）、マイクロチューブ内の水溶液をすべて加え、９０℃で４０分攪拌した。コンビニエバポを用いて反応溶媒を濃縮し、逆相カラムクロマトグラフィー（水：メタノール＝１：１～１：３）で単離精製を行った。その結果、目的物である化合物Ａを青色固体として得た（１４ｍｇ，１７％、図４）。１Ｈ ＮＭＲスペクトルが煩雑で、正確な帰属は行えなかった。トリアゾール環に由来するピークとスクアライン骨格特有のピークの存在により反応が進行していると判断し、質量分析によって目的物であることを確認している。また、化合物Ａは、リン酸緩衝液（２０ｍＭ，ｐＨ＝７．２）にも高い溶解性（＞５ｍｇ／ｍＬ）を示した。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ ７．８９ｐｐｍ（ｓ，２Ｈ），７．４３ｐｐｍ（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．３４ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．２０－７．１５ｐｐｍ（ｍ，４Ｈ），５．９５ｐｐｍ（ｓ，２Ｈ），４．４５ｐｐｍ（ｑ，４Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），４．１９ｐｐｍ（ｂｒ，４Ｈ，），３．４７－３．４０ｐｐｍ（ｍ，４Ｈ），３．２１ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），３．１６ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），２．９７ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），２．９３－２．８６ｐｐｍ（ｍ，６Ｈ），２．８０－２．７４ｐｐｍ（ｍ，４Ｈ），２．４５ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），２．３５ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），２．２５－２．０５ｐｐｍ（ｍ，１２Ｈ），２．０２－１．９３ｐｐｍ（ｍ，４Ｈ），１．７３ｐｐｍ（ｓ，１２Ｈ），１．６７－１．６０ｐｐｍ，（ｍ，２Ｈ），１．５５－１．４０ｐｐｍ（ｍ，６Ｈ），１．３４－１．１７ｐｐｍ（ｍ，６０Ｈ），０．８６ｐｐｍ（ｑｕｉｎ，１０Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）．
ＭＳ－ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：［Ｍ］２－ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｆｏｒ ６８１．３９２９（Ｃ７４Ｈ１１０Ｎ１０Ｏ１０Ｓ２），ｆｏｕｎｄ ６８１．３８９８．
化合物Ａの合成
マイクロチューブに硫酸銅五水和物（７ｍｇ，０．０２８ｍｍｏｌ）、アスコルビン酸ナトリウム（０．０３９ｍｍｏｌ）、水（３００μＬ）を加え、溶液がオレンジ色になるまで攪拌した。続いて、ナスフラスコに得られた化合物３（３０ｍｇ，０．０５７ｍｍｏｌ）、得られた化合物４（５２ｍｇ，０．１２５ｍｍｏｌ）、ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）、マイクロチューブ内の水溶液をすべて加え、９０℃で４０分攪拌した。コンビニエバポを用いて反応溶媒を濃縮し、逆相カラムクロマトグラフィー（水：メタノール＝１：１～１：３）で単離精製を行った。その結果、目的物である化合物Ａを青色固体として得た（１４ｍｇ，１７％、図４）。１Ｈ ＮＭＲスペクトルが煩雑で、正確な帰属は行えなかった。トリアゾール環に由来するピークとスクアライン骨格特有のピークの存在により反応が進行していると判断し、質量分析によって目的物であることを確認している。また、化合物Ａは、リン酸緩衝液（２０ｍＭ，ｐＨ＝７．２）にも高い溶解性（＞５ｍｇ／ｍＬ）を示した。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ ７．８９ｐｐｍ（ｓ，２Ｈ），７．４３ｐｐｍ（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．３４ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．２０－７．１５ｐｐｍ（ｍ，４Ｈ），５．９５ｐｐｍ（ｓ，２Ｈ），４．４５ｐｐｍ（ｑ，４Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），４．１９ｐｐｍ（ｂｒ，４Ｈ，），３．４７－３．４０ｐｐｍ（ｍ，４Ｈ），３．２１ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），３．１６ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），２．９７ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），２．９３－２．８６ｐｐｍ（ｍ，６Ｈ），２．８０－２．７４ｐｐｍ（ｍ，４Ｈ），２．４５ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），２．３５ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），２．２５－２．０５ｐｐｍ（ｍ，１２Ｈ），２．０２－１．９３ｐｐｍ（ｍ，４Ｈ），１．７３ｐｐｍ（ｓ，１２Ｈ），１．６７－１．６０ｐｐｍ，（ｍ，２Ｈ），１．５５－１．４０ｐｐｍ（ｍ，６Ｈ），１．３４－１．１７ｐｐｍ（ｍ，６０Ｈ），０．８６ｐｐｍ（ｑｕｉｎ，１０Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）．
ＭＳ－ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：［Ｍ］２－ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｆｏｒ ６８１．３９２９（Ｃ７４Ｈ１１０Ｎ１０Ｏ１０Ｓ２），ｆｏｕｎｄ ６８１．３８９８．
【0229】
〔実施例５〕
化合物５の合成
ナスフラスコにヨウ化ナトリウム（６．７ｇ，４４．８ｍｍｏｌ）を加え、アルゴン雰囲気にした。４－ブロモブタン酸ｔｅｒｔ－ブチル（５ｇ，２２．４ｍｍｏｌ）、アセトン（５６ｍＬ）を加えて室温で二時間攪拌した。反応溶液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。得られた有機層を飽和食塩水で一回洗浄し、硫酸ナトリウムで残留する水分を除去した。その結果、目的物である化合物５を黄色液体として得た（５．７ｇ，９４％、図５）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ３．１２ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），２．３１ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．０４ｐｐｍ（ｑｕｉｎ，２ＨＪ＝６．９Ｈｚ，７．２Ｈｚ），１．４１ｐｐｍ（ｓ，９Ｈ，）．
化合物５の合成
ナスフラスコにヨウ化ナトリウム（６．７ｇ，４４．８ｍｍｏｌ）を加え、アルゴン雰囲気にした。４－ブロモブタン酸ｔｅｒｔ－ブチル（５ｇ，２２．４ｍｍｏｌ）、アセトン（５６ｍＬ）を加えて室温で二時間攪拌した。反応溶液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。得られた有機層を飽和食塩水で一回洗浄し、硫酸ナトリウムで残留する水分を除去した。その結果、目的物である化合物５を黄色液体として得た（５．７ｇ，９４％、図５）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ３．１２ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），２．３１ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．０４ｐｐｍ（ｑｕｉｎ，２ＨＪ＝６．９Ｈｚ，７．２Ｈｚ），１．４１ｐｐｍ（ｓ，９Ｈ，）．
【0230】
〔実施例６〕
化合物６の合成
ナスフラスコに得られた化合物５（１ｇ，３．７ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（６００ｍｇ，９．３ｍｍｏｌ）、ジメチルホルムアミド（１２ｍＬ）を加え、８０℃で一時間攪拌した。反応溶液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。得られた有機相を多量の水で三回洗浄し、硫酸ナトリウムで残留する水分を除去した。その結果、目的物である化合物６を無色透明の液体として得た（６７７ｍｇ，ｑｕａｎｔ、図６）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ ３．２９ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），２．２３ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）１．６９ｐｐｍ（ｑｕｉｎ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，７．２Ｈｚ），１．３６ｐｐｍ，（ｓ，９Ｈ）．
化合物６の合成
ナスフラスコに得られた化合物５（１ｇ，３．７ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（６００ｍｇ，９．３ｍｍｏｌ）、ジメチルホルムアミド（１２ｍＬ）を加え、８０℃で一時間攪拌した。反応溶液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。得られた有機相を多量の水で三回洗浄し、硫酸ナトリウムで残留する水分を除去した。その結果、目的物である化合物６を無色透明の液体として得た（６７７ｍｇ，ｑｕａｎｔ、図６）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ ３．２９ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），２．２３ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）１．６９ｐｐｍ（ｑｕｉｎ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，７．２Ｈｚ），１．３６ｐｐｍ，（ｓ，９Ｈ）．
【0231】
化合物７の合成
ナスフラスコに得られた化合物６（６６７ｍｇ，３．６５ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（７．３ｍＬ）を加え、氷浴にて冷却した。トリフルオロ酢酸（７．３ｍＬ）を加え、０℃で一時間攪拌した。反応溶液にトルエン（２０ｍＬ）を加え、エバポレーターで減圧濃縮した。その結果、目的物である化合物７を無色透明の液体として得た（５０４ｍｇ，ｑｕａｎｔ、図７）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ ３．３０ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），２．２５ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．７０ｐｐｍ（ｑｕｉｎ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，７．２Ｈｚ）．
ナスフラスコに得られた化合物６（６６７ｍｇ，３．６５ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（７．３ｍＬ）を加え、氷浴にて冷却した。トリフルオロ酢酸（７．３ｍＬ）を加え、０℃で一時間攪拌した。反応溶液にトルエン（２０ｍＬ）を加え、エバポレーターで減圧濃縮した。その結果、目的物である化合物７を無色透明の液体として得た（５０４ｍｇ，ｑｕａｎｔ、図７）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ ３．３０ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），２．２５ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．７０ｐｐｍ（ｑｕｉｎ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，７．２Ｈｚ）．
【0232】
化合物８の合成
ナスフラスコにドデシルアミン（２ｇ，１０．８ｍｍｏｌ）、１，３－プロパンスルトン（１．６ｇ，１２．９ｍｍｏｌ）、アセトン（３０ｍＬ）を加え６０℃で一晩攪拌した。減圧濃縮後、残留物を酢酸とアセトンの両方で数回洗浄し、未反応のドデシルアミンとプロパンサルトンを除去した。この洗浄後、得られた生成物を、最小量のメタノールを加えたアセトンから再結晶させた。その結果、目的物である化合物８を白色粉末として得た（２ｇ，６０％、図８）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ ２．９５ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），２．８８ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），２．５５ｐｐｍ，（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），１．８９－１．８２ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ），１．５１－１．４４ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ），１．２８－１．１６ｐｐｍ（ｍ，１８Ｈ），０．８２ｐｐｍ（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）．
ナスフラスコにドデシルアミン（２ｇ，１０．８ｍｍｏｌ）、１，３－プロパンスルトン（１．６ｇ，１２．９ｍｍｏｌ）、アセトン（３０ｍＬ）を加え６０℃で一晩攪拌した。減圧濃縮後、残留物を酢酸とアセトンの両方で数回洗浄し、未反応のドデシルアミンとプロパンサルトンを除去した。この洗浄後、得られた生成物を、最小量のメタノールを加えたアセトンから再結晶させた。その結果、目的物である化合物８を白色粉末として得た（２ｇ，６０％、図８）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ ２．９５ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），２．８８ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），２．５５ｐｐｍ，（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），１．８９－１．８２ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ），１．５１－１．４４ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ），１．２８－１．１６ｐｐｍ（ｍ，１８Ｈ），０．８２ｐｐｍ（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）．
【0233】
化合物４の合成
ナスフラスコに化合物７（５０ｍｇ，０．３９ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（１３２μＬ，０．７７ｍｍｏｌ）を加え、アルゴン雰囲気にした。脱水ジメチルホルムアミド（９．５ｍＬ）を加え、室温で五分攪拌した後、化合物８（１２５ｍｇ，０．４１ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（１３２μＬ，０．７７ｍｍｏｌ）を溶解させた脱水ジメチルホルムアミド（９．５ｍＬ）溶液を加え、室温で一晩攪拌させた。反応溶液をろ過することで、未反応の化合物８を除去し、コンビニエバポでジメチルホルムアミドを除去した。その後ナスフラスコに飽和食塩水を加え、酢酸エチルで抽出した。硫酸マグネシウムで得られた有機相に残留する水分を除去した。最後に中圧分取シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１００：０～９０：１０）で単離精製を行った。その結果、目的物である化合物４を褐色の粘性固体として得た（４１ｍｇ，２５％、図９）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ ３．５３－３．４８ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ），３．４０－３．３１ｐｐｍ（ｍ，４Ｈ），２．８７－２．８０ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ）２．５１－２．４５ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ），２．０６－１．９６ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ），１．９２－１．８３ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ），１．６７－１．４８ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ），１．３８－１．２１ｐｐｍ（ｍ，１８Ｈ），０．８８ｐｐｍ（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）．
ナスフラスコに化合物７（５０ｍｇ，０．３９ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（１３２μＬ，０．７７ｍｍｏｌ）を加え、アルゴン雰囲気にした。脱水ジメチルホルムアミド（９．５ｍＬ）を加え、室温で五分攪拌した後、化合物８（１２５ｍｇ，０．４１ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（１３２μＬ，０．７７ｍｍｏｌ）を溶解させた脱水ジメチルホルムアミド（９．５ｍＬ）溶液を加え、室温で一晩攪拌させた。反応溶液をろ過することで、未反応の化合物８を除去し、コンビニエバポでジメチルホルムアミドを除去した。その後ナスフラスコに飽和食塩水を加え、酢酸エチルで抽出した。硫酸マグネシウムで得られた有機相に残留する水分を除去した。最後に中圧分取シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１００：０～９０：１０）で単離精製を行った。その結果、目的物である化合物４を褐色の粘性固体として得た（４１ｍｇ，２５％、図９）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ ３．５３－３．４８ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ），３．４０－３．３１ｐｐｍ（ｍ，４Ｈ），２．８７－２．８０ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ）２．５１－２．４５ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ），２．０６－１．９６ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ），１．９２－１．８３ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ），１．６７－１．４８ｐｐｍ（ｍ，２Ｈ），１．３８－１．２１ｐｐｍ（ｍ，１８Ｈ），０．８８ｐｐｍ（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）．
【0234】
（化合物Ｂの合成）
化合物Ｂの合成は、下記のスキームのように行った。
スキーム３．化合物Ｂの合成経路
化合物Ｂの合成は、下記のスキームのように行った。
【化22】
【0235】
〔実施例１０〕
化合物９の合成
ナスフラスコに化合物２（２００ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）、マロンアルデヒドジアニリド塩酸塩（６９ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）、酢酸ナトリウム（４４ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）、無水酢酸（２．７ｍＬ）を加え、１００℃で三時間攪拌した。反応溶液に水を加え、ジクロロメタンで抽出した。得られた有機相を１Ｍ過塩素酸水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで残留する水分を除去した。その後中圧分取シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１００：０～９５：５）で単離精製を行った。その結果、目的物である化合物９を青色固体として得た（６５ｍｇ，２１％、図１０）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ７．９７ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝１３．１Ｈｚ），７．５０ｐｐｍ（ｄ，２Ｈ，８．１Ｈｚ），７．４０－７．２７ｐｐｍ（ｍ，６Ｈ），７．２２ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．１７ｐｐｍ（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．０８ｐｐｍ（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），４．１７ｐｐｍ（ｂｒｓ，４Ｈ），２．４２－２．３４ｐｐｍ（ｍ，４Ｈ），２．２２ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），２．０８－１．９８ｐｐｍ（ｍ，４Ｈ），１．７２ｐｐｍ（ｓ，１２Ｈ）．
化合物９の合成
ナスフラスコに化合物２（２００ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）、マロンアルデヒドジアニリド塩酸塩（６９ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）、酢酸ナトリウム（４４ｍｇ，０．５３ｍｍｏｌ）、無水酢酸（２．７ｍＬ）を加え、１００℃で三時間攪拌した。反応溶液に水を加え、ジクロロメタンで抽出した。得られた有機相を１Ｍ過塩素酸水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで残留する水分を除去した。その後中圧分取シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１００：０～９５：５）で単離精製を行った。その結果、目的物である化合物９を青色固体として得た（６５ｍｇ，２１％、図１０）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ７．９７ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝１３．１Ｈｚ），７．５０ｐｐｍ（ｄ，２Ｈ，８．１Ｈｚ），７．４０－７．２７ｐｐｍ（ｍ，６Ｈ），７．２２ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．１７ｐｐｍ（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．０８ｐｐｍ（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），４．１７ｐｐｍ（ｂｒｓ，４Ｈ），２．４２－２．３４ｐｐｍ（ｍ，４Ｈ），２．２２ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），２．０８－１．９８ｐｐｍ（ｍ，４Ｈ），１．７２ｐｐｍ（ｓ，１２Ｈ）．
【0236】
〔実施例１１〕
化合物Ｂの合成
マイクロチューブに硫酸銅五水和物（８ｍｇ，０．０３２ｍｍｏｌ）、アスコルビン酸ナトリウム（０．０４４ｍｍｏｌ）、水（３７５μＬ）を加え、溶液がオレンジ色になるまで攪拌した。続いて、ナスフラスコに化合物３（３８ｍｇ，０．０６４ｍｍｏｌ）、化合物４（５９ｍｇ，０．１４１ｍｍｏｌ）、ジメチルホルムアミド（１．２５ｍＬ）、マイクロチューブ内の水溶液をすべて加え、９０℃で４０分攪拌した。コンビニエバポを用いて反応溶媒を濃縮し、ジクロロメタン：メタノール＝１：１の混合溶媒を用いてセライトろ過を行った。ろ液を濃縮し、サイズ排除カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１：１）で単離精製を行った。その結果、目的物である化合物Ｂを青色固体として得た（４０ｍｇ，４１％、図１１）。質量分析によって目的物であることを確認している。また、化合物Ｂは、リン酸緩衝液（２０ｍＭ，ｐＨ＝７．２）にも高い溶解性（＞５ｍｇ／ｍＬ）を示した。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ ８．２０ｐｐｍ（ｂｒ，２Ｈ），８．１５－７．８４ｐｐｍ（ｂｒ，２Ｈ），７．４５ｐｐｍ（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），７．３７ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．３０－７．１９ｐｐｍ（ｍ，４Ｈ），６．６１ｐｐｍ（ｂｒ，１Ｈ），６．２８ｐｐｍ（ｂｒ，２Ｈ），４．４６ｐｐｍ（ｂｒ，４Ｈ），４．１８ｐｐｍ（ｂｒ，４Ｈ），３．４１ｐｐｍ（ｂｒ，４Ｈ），３．２０ｐｐｍ，（ｂｒ，２Ｈ），２．９７－２．６９ｐｐｍ（ｍ，８Ｈ），２．５０－２．３２ｐｐｍ（ｍ，４Ｈ），２．１７ｐｐｍ（ｂｒ，８Ｈ），１．９７ｐｐｍ（ｂｒ，４Ｈ），１．６８ｐｐｍ（ｓ，１２Ｈ），１．４７ｐｐｍ（ｂｒ，４Ｈ），１．２１ｐｐｍ，（ｂｒ，３８Ｈ），０．８８－０．８３ｐｐｍ（ｍ，６Ｈ）．
ＭＳ－ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：［Ｍ］－ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｆｏｒ １３２１．８１９０（Ｃ７３Ｈ１１３Ｎ１０Ｏ８Ｓ２），ｆｏｕｎｄ １３２１８１６４．
化合物Ｂの合成
マイクロチューブに硫酸銅五水和物（８ｍｇ，０．０３２ｍｍｏｌ）、アスコルビン酸ナトリウム（０．０４４ｍｍｏｌ）、水（３７５μＬ）を加え、溶液がオレンジ色になるまで攪拌した。続いて、ナスフラスコに化合物３（３８ｍｇ，０．０６４ｍｍｏｌ）、化合物４（５９ｍｇ，０．１４１ｍｍｏｌ）、ジメチルホルムアミド（１．２５ｍＬ）、マイクロチューブ内の水溶液をすべて加え、９０℃で４０分攪拌した。コンビニエバポを用いて反応溶媒を濃縮し、ジクロロメタン：メタノール＝１：１の混合溶媒を用いてセライトろ過を行った。ろ液を濃縮し、サイズ排除カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝１：１）で単離精製を行った。その結果、目的物である化合物Ｂを青色固体として得た（４０ｍｇ，４１％、図１１）。質量分析によって目的物であることを確認している。また、化合物Ｂは、リン酸緩衝液（２０ｍＭ，ｐＨ＝７．２）にも高い溶解性（＞５ｍｇ／ｍＬ）を示した。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ ８．２０ｐｐｍ（ｂｒ，２Ｈ），８．１５－７．８４ｐｐｍ（ｂｒ，２Ｈ），７．４５ｐｐｍ（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），７．３７ｐｐｍ（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．３０－７．１９ｐｐｍ（ｍ，４Ｈ），６．６１ｐｐｍ（ｂｒ，１Ｈ），６．２８ｐｐｍ（ｂｒ，２Ｈ），４．４６ｐｐｍ（ｂｒ，４Ｈ），４．１８ｐｐｍ（ｂｒ，４Ｈ），３．４１ｐｐｍ（ｂｒ，４Ｈ），３．２０ｐｐｍ，（ｂｒ，２Ｈ），２．９７－２．６９ｐｐｍ（ｍ，８Ｈ），２．５０－２．３２ｐｐｍ（ｍ，４Ｈ），２．１７ｐｐｍ（ｂｒ，８Ｈ），１．９７ｐｐｍ（ｂｒ，４Ｈ），１．６８ｐｐｍ（ｓ，１２Ｈ），１．４７ｐｐｍ（ｂｒ，４Ｈ），１．２１ｐｐｍ，（ｂｒ，３８Ｈ），０．８８－０．８３ｐｐｍ（ｍ，６Ｈ）．
ＭＳ－ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：［Ｍ］－ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｆｏｒ １３２１．８１９０（Ｃ７３Ｈ１１３Ｎ１０Ｏ８Ｓ２），ｆｏｕｎｄ １３２１８１６４．
【0237】
〔実施例１２〕
人工脂質二重膜存在下における化合物Ａ及び化合物Ｂの吸収・蛍光スペクトル挙動
二種類の秩序相（Ｌｏ ｐｈａｓｅ，脂質：スフィンゴミエリン－コレステロール（ＳＭ／Ｃｈｏｌ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン－コレステロール（ＤＰＰＣ／Ｃｈｏｌ））、および非秩序相（Ｌｄ ｐｈａｓｅ，脂質：ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ））を形成する三種類のリポソームを作製した。それらのリポソームが分散されているリン酸緩衝液に対し、脂質：色素のモル比が２００：１となるよう色素を添加し、３７℃で３０分間インキュベートした後、吸収蛍光スペクトルを測定した。得られた結果を表１～２、図１２～１３に示す。
人工脂質二重膜存在下における化合物Ａ及び化合物Ｂの吸収・蛍光スペクトル挙動
二種類の秩序相（Ｌｏ ｐｈａｓｅ，脂質：スフィンゴミエリン－コレステロール（ＳＭ／Ｃｈｏｌ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン－コレステロール（ＤＰＰＣ／Ｃｈｏｌ））、および非秩序相（Ｌｄ ｐｈａｓｅ，脂質：ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ））を形成する三種類のリポソームを作製した。それらのリポソームが分散されているリン酸緩衝液に対し、脂質：色素のモル比が２００：１となるよう色素を添加し、３７℃で３０分間インキュベートした後、吸収蛍光スペクトルを測定した。得られた結果を表１～２、図１２～１３に示す。
【0238】
【表1】
【0239】
【表2】
【0240】
（化合物Ｃの合成）
化合物Ｃの合成は、下記のスキームのように行った。
スキーム４．化合物Ｃの合成経路
化合物Ｃの合成は、下記のスキームのように行った。
【化23】
【0241】
〔実施例１３〕
（化合物１１ａ及び化合物１１ｂの合成）
二口ナスフラスコに１－ブロモピレン（２．００ｇ，７．１１ｍｍｏｌ）を加え、フラスコ内をアルゴン雰囲気にした。脱水ジクロロメタン（３６ｍＬ）を加え、氷浴にて冷却した。この溶液に対し塩化アルミニウム（１．０４ｇ，７．８２ｍｍｏｌ）を加えて１５分攪拌し、さらにプロピオン酸クロリド（０．７４４ｍＬ，８．５３ｍｍｏｌ）を滴下し室温にて１２時間攪拌した。水を加えて反応を停止し、ジクロロメタンで抽出した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで残留した水分を除去した。有機層を減圧濃縮した後、中圧分取シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ジクロロメタン＝７５：２５→７０：３０）にて分離精製を行った。その結果、目的物である１１ａと１１ｂの混合物を黄色固体として得た（１．６４ｇ，６８％、図１４）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ）：δ ８．９６－８．０５（ｍ，８Ｈ），３．２７－３．２２（ｍ，２Ｈ），１．３８－１．３４（ｍ，３Ｈ）．
（化合物１１ａ及び化合物１１ｂの合成）
二口ナスフラスコに１－ブロモピレン（２．００ｇ，７．１１ｍｍｏｌ）を加え、フラスコ内をアルゴン雰囲気にした。脱水ジクロロメタン（３６ｍＬ）を加え、氷浴にて冷却した。この溶液に対し塩化アルミニウム（１．０４ｇ，７．８２ｍｍｏｌ）を加えて１５分攪拌し、さらにプロピオン酸クロリド（０．７４４ｍＬ，８．５３ｍｍｏｌ）を滴下し室温にて１２時間攪拌した。水を加えて反応を停止し、ジクロロメタンで抽出した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで残留した水分を除去した。有機層を減圧濃縮した後、中圧分取シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ジクロロメタン＝７５：２５→７０：３０）にて分離精製を行った。その結果、目的物である１１ａと１１ｂの混合物を黄色固体として得た（１．６４ｇ，６８％、図１４）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ）：δ ８．９６－８．０５（ｍ，８Ｈ），３．２７－３．２２（ｍ，２Ｈ），１．３８－１．３４（ｍ，３Ｈ）．
【0242】
〔実施例１４〕
化合物１２の合成
二口ナスフラスコに化合物１１ａと化合物１１ｂの混合物（１．５３ｇ，４．５４ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（４．４０ｇ，１３．６ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（１０１ｍｇ，０．４５０ｍｍｏｌ）、ＲｕＰｈｏｓ（４２４ｍｇ，０．９１０ｍｍｏｌ）、撹拌子を加え、還流管装着後、フラスコ内をアルゴン雰囲気にした。４－ピペリジンカルボン酸エチル（１．０５ｍＬ，６．８１ｍｍｏｌ）とアルゴンバブリングをしたトルエン（２３ｍＬ）を加え、１００°Ｃのオイルバス中で２０時間加熱攪拌した。反応溶液に水を加え、ジクロロメタンで抽出した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで残留した水分を除去した。有機層を減圧濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ジクロロメタン＝８０：２０）にて分離精製を行った。その結果、目的物である１２を黄色固体として得た（１６４．２ｍｇ，１７％、図１５）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ）：δ ８．７５（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），８．４８（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），８．２８（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｄｄ，Ｊ＝８．４，９．５Ｈｚ，２Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２３（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．５６－３．５３（ｍ，２Ｈ），３．２５（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．００（ｍ，２Ｈ），２．５７（ｍ，１Ｈ），２．２３－２．１７（ｍ，４Ｈ），１．３８－１．３１（ｍ，６Ｈ）．
化合物１２の合成
二口ナスフラスコに化合物１１ａと化合物１１ｂの混合物（１．５３ｇ，４．５４ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（４．４０ｇ，１３．６ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（１０１ｍｇ，０．４５０ｍｍｏｌ）、ＲｕＰｈｏｓ（４２４ｍｇ，０．９１０ｍｍｏｌ）、撹拌子を加え、還流管装着後、フラスコ内をアルゴン雰囲気にした。４－ピペリジンカルボン酸エチル（１．０５ｍＬ，６．８１ｍｍｏｌ）とアルゴンバブリングをしたトルエン（２３ｍＬ）を加え、１００°Ｃのオイルバス中で２０時間加熱攪拌した。反応溶液に水を加え、ジクロロメタンで抽出した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで残留した水分を除去した。有機層を減圧濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ジクロロメタン＝８０：２０）にて分離精製を行った。その結果、目的物である１２を黄色固体として得た（１６４．２ｍｇ，１７％、図１５）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ）：δ ８．７５（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），８．４８（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），８．２８（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｄｄ，Ｊ＝８．４，９．５Ｈｚ，２Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２３（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．５６－３．５３（ｍ，２Ｈ），３．２５（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．００（ｍ，２Ｈ），２．５７（ｍ，１Ｈ），２．２３－２．１７（ｍ，４Ｈ），１．３８－１．３１（ｍ，６Ｈ）．
【0243】
〔実施例１５〕
化合物１３の合成
ナスフラスコに化合物１２（５３．３ｍｇ，０．１２９ｍｍｏｌ）を加えた。同フラスコに水酸化カリウムの０．２５Ｍエタノール溶液（２．５８ｍＬ）を加え、４０°Ｃオイルバス中で２１時間攪拌した。その後、希塩酸を滴下して反応を停止させ、ジクロロメタンで抽出した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで残留した水分を除去した。有機層を減圧濃縮した後、中圧分取シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン→ジクロロメタン：メタノール＝８８：１２）にて分離精製を行った。その結果、目的物である１３を黄色固体として得た（２５．２ｍｇ，５８％、図１６）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ８．５７（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），８．４５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．４０（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），８．２６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），３．４５（ｔ，２Ｈ），３．２５（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．９５（ｍ，２Ｈ），２．１０－１．９０（ｍ，４Ｈ），１．１９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．
化合物１３の合成
ナスフラスコに化合物１２（５３．３ｍｇ，０．１２９ｍｍｏｌ）を加えた。同フラスコに水酸化カリウムの０．２５Ｍエタノール溶液（２．５８ｍＬ）を加え、４０°Ｃオイルバス中で２１時間攪拌した。その後、希塩酸を滴下して反応を停止させ、ジクロロメタンで抽出した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで残留した水分を除去した。有機層を減圧濃縮した後、中圧分取シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン→ジクロロメタン：メタノール＝８８：１２）にて分離精製を行った。その結果、目的物である１３を黄色固体として得た（２５．２ｍｇ，５８％、図１６）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ８．５７（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），８．４５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．４０（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），８．２６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），３．４５（ｔ，２Ｈ），３．２５（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．９５（ｍ，２Ｈ），２．１０－１．９０（ｍ，４Ｈ），１．１９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．
【0244】
〔実施例１６〕
化合物Ｃの合成
ナスフラスコに化合物１３（８７．４ｍｇ，０．２３ｍｍｏｌ）、ｃｏｍｕ（１０２．８ｍｇ，０．２４ｍｍｏｌ）を加え、フラスコ内をアルゴン雰囲気にした。脱水ＤＭＦ（５．６ｍＬ）、ＤＩＥＰＡ（７８．２μＬ，０．４６ｍｍｏｌ）を加え、室温中で４５分間撹拌した。続いて、別の二口ナスフラスコにＣ１２Ｓｕｌ（７３．６ｍｇ，０．２４ｍｍｏｌ）を加えてフラスコ内をアルゴン雰囲気にし、脱水ＤＭＦ（６ｍＬ）、ＤＩＥＰＡ（７８．２μＬ，０．４６ｍｍｏｌ）を加えて室温中で撹拌した。この溶液を化合物１３が入ったナスフラスコに加え、室温中で２７．５時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮し、中圧分取シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン→ジクロロメタン：メタノール＝９２：８）にて分離精製を行った。その結果、目的物である１６を黄色固体として得た（１４８．９ｍｇ，８１％、図１７）。また、化合物Ｃは、リン酸緩衝液（２０ｍＭ，ｐＨ＝７．２）にも高い溶解性（＞５ｍｇ／ｍＬ）を示した。
※Ｃ１２Ｓｕｌ：Ｋ．Ｓａｋａｉ，ｅｔ．ａｌ．Ｃｏｌｌｏｉｄｓ Ｓｕｒｆ．Ａ Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍ．Ｅｎｇ．Ａｓｐ．２００９，３３３，２６－３１．
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ８．５６（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），８．４３（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），８．４１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｄｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，８．２Ｈｚ，２Ｈ），８．１８（ｂｒｓ，１Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．４７（ｂｒｓ，４Ｈ），３．３７－３．１８（ｍ，８Ｈ），３．１２－３．０１（ｍ，７Ｈ），２．０７－２．０５（ｍ，２Ｈ），１．８８－１．８０（ｍ，４Ｈ），１．５５（ｂｒｓ，１Ｈ），１．４６（ｍ，２Ｈ），１．２４－１．１８（ｍ，３５Ｈ）， ０．８３－ ０．７８ （ｍ， ３Ｈ）．
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ４０Ｈ５３Ｎ２Ｏ５Ｓ－：６７３．３６８１，Ｆｏｕｎｄ：６７３．３６５９（［Ｍ］－）．
化合物Ｃの合成
ナスフラスコに化合物１３（８７．４ｍｇ，０．２３ｍｍｏｌ）、ｃｏｍｕ（１０２．８ｍｇ，０．２４ｍｍｏｌ）を加え、フラスコ内をアルゴン雰囲気にした。脱水ＤＭＦ（５．６ｍＬ）、ＤＩＥＰＡ（７８．２μＬ，０．４６ｍｍｏｌ）を加え、室温中で４５分間撹拌した。続いて、別の二口ナスフラスコにＣ１２Ｓｕｌ（７３．６ｍｇ，０．２４ｍｍｏｌ）を加えてフラスコ内をアルゴン雰囲気にし、脱水ＤＭＦ（６ｍＬ）、ＤＩＥＰＡ（７８．２μＬ，０．４６ｍｍｏｌ）を加えて室温中で撹拌した。この溶液を化合物１３が入ったナスフラスコに加え、室温中で２７．５時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮し、中圧分取シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン→ジクロロメタン：メタノール＝９２：８）にて分離精製を行った。その結果、目的物である１６を黄色固体として得た（１４８．９ｍｇ，８１％、図１７）。また、化合物Ｃは、リン酸緩衝液（２０ｍＭ，ｐＨ＝７．２）にも高い溶解性（＞５ｍｇ／ｍＬ）を示した。
※Ｃ１２Ｓｕｌ：Ｋ．Ｓａｋａｉ，ｅｔ．ａｌ．Ｃｏｌｌｏｉｄｓ Ｓｕｒｆ．Ａ Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍ．Ｅｎｇ．Ａｓｐ．２００９，３３３，２６－３１．
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ８．５６（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），８．４３（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），８．４１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｄｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，８．２Ｈｚ，２Ｈ），８．１８（ｂｒｓ，１Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．４７（ｂｒｓ，４Ｈ），３．３７－３．１８（ｍ，８Ｈ），３．１２－３．０１（ｍ，７Ｈ），２．０７－２．０５（ｍ，２Ｈ），１．８８－１．８０（ｍ，４Ｈ），１．５５（ｂｒｓ，１Ｈ），１．４６（ｍ，２Ｈ），１．２４－１．１８（ｍ，３５Ｈ）， ０．８３－ ０．７８ （ｍ， ３Ｈ）．
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ４０Ｈ５３Ｎ２Ｏ５Ｓ－：６７３．３６８１，Ｆｏｕｎｄ：６７３．３６５９（［Ｍ］－）．
【0245】
（化合物Ｄの合成）
化合物Ｄの合成は、下記のスキームのように行った。
スキーム５．化合物Ｄの合成経路
化合物Ｄの合成は、下記のスキームのように行った。
【化24】
【0246】
〔実施例１７〕
化合物１４ａ及び化合物１４ｂの合成
二口ナスフラスコに１－ブロモピレン（１．００ｇ，３．５６ｍｍｏｌ）を加え、フラスコ内をアルゴン雰囲気にした。脱水ジクロロメタン（１５ｍＬ）を加え、氷浴にて冷却した。この溶液に対し塩化アルミニウム（１．１９ｇ，８．８９ｍｍｏｌ）を加えて２０分攪拌し、さらにコハク酸モノエチルクリド（１．２５ｍＬ，８．８９ｍｍｏｌ）を滴下し室温にて１３時間攪拌した。氷浴にて冷却しながら水を加えて反応を停止し、反応溶液を水と飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで残留した水分を除去した。有機層を減圧濃縮した後、中圧分取シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ジクロロメタン＝７０：３０→６０：４０）にて分離精製を行った。その結果、目的物である化合物１４ａと化合物１４ｂの混合物を黄色固体として得た（８２４．４ｍｇ，５７％、図１８）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ）：δ ８．９９－８．０５（ｍ，８Ｈ），４．２４－４．１９（ｍ，２Ｈ），３．５５－３．５２（ｍ，２Ｈ），２．９４－２．９１（ｍ，２Ｈ），１．３２－１．２５（ｍ，３Ｈ）．
化合物１４ａ及び化合物１４ｂの合成
二口ナスフラスコに１－ブロモピレン（１．００ｇ，３．５６ｍｍｏｌ）を加え、フラスコ内をアルゴン雰囲気にした。脱水ジクロロメタン（１５ｍＬ）を加え、氷浴にて冷却した。この溶液に対し塩化アルミニウム（１．１９ｇ，８．８９ｍｍｏｌ）を加えて２０分攪拌し、さらにコハク酸モノエチルクリド（１．２５ｍＬ，８．８９ｍｍｏｌ）を滴下し室温にて１３時間攪拌した。氷浴にて冷却しながら水を加えて反応を停止し、反応溶液を水と飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで残留した水分を除去した。有機層を減圧濃縮した後、中圧分取シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ジクロロメタン＝７０：３０→６０：４０）にて分離精製を行った。その結果、目的物である化合物１４ａと化合物１４ｂの混合物を黄色固体として得た（８２４．４ｍｇ，５７％、図１８）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ）：δ ８．９９－８．０５（ｍ，８Ｈ），４．２４－４．１９（ｍ，２Ｈ），３．５５－３．５２（ｍ，２Ｈ），２．９４－２．９１（ｍ，２Ｈ），１．３２－１．２５（ｍ，３Ｈ）．
【0247】
〔実施例１８〕
化合物１５の合成
二口ナスフラスコに化合物１４ａと化合物１４ｂの混合物（７８５．５ｍｇ，１．９２ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（８７５．８ｍｇ，２．６９ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（２１．６ｍｇ，０．０９６ｍｍｏｌ）、ＲｕＰｈｏｓ（８９．６ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）を加え、還流管を装着しフラスコ内をアルゴン雰囲気にした。アルゴンバブリングをしたトルエン（９．５ｍＬ）を加え、１００°Ｃのオイルバス中で２０分加熱攪拌し、さらにピペリジン（０．２３ｍＬ，２．３０ｍｍｏｌ）を滴下して２２．５時間加熱還流した。反応溶液をろ過し、得られたろ液を減圧濃縮した後、ジクロロメタンを加えた。その溶液を水と飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで残留した水分を除去した。有機層を減圧濃縮した後、中圧分取シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ジクロロメタン＝６０：４０→５０：５０）にて分離精製を行った。さらに、目的物である１５とその異性体を分離するため、リサイクルＧＰＣにて異性体分離を行った。その結果、目的物である１５を黄色固体として得た（２５５．０ｍｇ，３２％、図１９）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ）：δ ８．７９（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），８．５１（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３６（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｄｄ，Ｊ＝８．３，９．４Ｈｚ，２Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），４．２０（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．５４（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），３．２２（ｂｒｓ，４Ｈ），２．９０（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），１．９５－１．９１（ｍ，４Ｈ），１．７２（ｂｒｓ，２Ｈ），１．２９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．
化合物１５の合成
二口ナスフラスコに化合物１４ａと化合物１４ｂの混合物（７８５．５ｍｇ，１．９２ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（８７５．８ｍｇ，２．６９ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（２１．６ｍｇ，０．０９６ｍｍｏｌ）、ＲｕＰｈｏｓ（８９．６ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）を加え、還流管を装着しフラスコ内をアルゴン雰囲気にした。アルゴンバブリングをしたトルエン（９．５ｍＬ）を加え、１００°Ｃのオイルバス中で２０分加熱攪拌し、さらにピペリジン（０．２３ｍＬ，２．３０ｍｍｏｌ）を滴下して２２．５時間加熱還流した。反応溶液をろ過し、得られたろ液を減圧濃縮した後、ジクロロメタンを加えた。その溶液を水と飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで残留した水分を除去した。有機層を減圧濃縮した後、中圧分取シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ジクロロメタン＝６０：４０→５０：５０）にて分離精製を行った。さらに、目的物である１５とその異性体を分離するため、リサイクルＧＰＣにて異性体分離を行った。その結果、目的物である１５を黄色固体として得た（２５５．０ｍｇ，３２％、図１９）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ）：δ ８．７９（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），８．５１（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３６（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｄｄ，Ｊ＝８．３，９．４Ｈｚ，２Ｈ），８．０４（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），４．２０（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．５４（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），３．２２（ｂｒｓ，４Ｈ），２．９０（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），１．９５－１．９１（ｍ，４Ｈ），１．７２（ｂｒｓ，２Ｈ），１．２９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．
【0248】
〔実施例１９〕
化合物１６の合成
ナスフラスコにエタノールに溶かした０．２５Ｍ水酸化カリウム溶液（６ｍＬ）、化合物１５（８２．６ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）、水２滴を加えて４０°Ｃオイルバス中で６時間攪拌した。その後、希塩酸を滴下して反応を停止させ、ジクロロメタンで抽出した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで残留した水分を除去した。有機層を減圧濃縮した後、中圧分取シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン→ジクロロメタン：メタノール＝９０：１０）にて分離精製を行った。その結果、目的物である１６を黄色固体として得た（ｑｕａｎｔ．、図２０）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ８．５９（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．４８（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．４１（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２６（ｄｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，８．２Ｈｚ，２Ｈ），８．１７（ｄｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，９．３Ｈｚ，２Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），３．４３（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），３．１３（ｂｒｓ，４Ｈ），２．７０（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），１．８６－１．８４（ｍ，４Ｈ），１．６４（ｂｒｓ，２Ｈ）．
化合物１６の合成
ナスフラスコにエタノールに溶かした０．２５Ｍ水酸化カリウム溶液（６ｍＬ）、化合物１５（８２．６ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）、水２滴を加えて４０°Ｃオイルバス中で６時間攪拌した。その後、希塩酸を滴下して反応を停止させ、ジクロロメタンで抽出した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで残留した水分を除去した。有機層を減圧濃縮した後、中圧分取シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン→ジクロロメタン：メタノール＝９０：１０）にて分離精製を行った。その結果、目的物である１６を黄色固体として得た（ｑｕａｎｔ．、図２０）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ８．５９（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．４８（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．４１（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２６（ｄｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，８．２Ｈｚ，２Ｈ），８．１７（ｄｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，９．３Ｈｚ，２Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），３．４３（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），３．１３（ｂｒｓ，４Ｈ），２．７０（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），１．８６－１．８４（ｍ，４Ｈ），１．６４（ｂｒｓ，２Ｈ）．
【0249】
〔実施例２０〕
化合物Ｄの合成
ナスフラスコに得られた化合物１６（５６．１ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）、ｃｏｍｕ（６８．５ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）を加え、フラスコ内をアルゴン雰囲気にした。脱水ＤＭＦ（３．５ｍＬ）、ＤＩＥＰＡ（５１．０μＬ，０．３０ｍｍｏｌ）を加え、室温中で３０分間撹拌した。続いて、別の二口ナスフラスコにＣ１２Ｓｕｌ（５２．１ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）を加えてフラスコ内をアルゴン雰囲気にし、脱水ＤＭＦ（３．８ｍＬ）、ＤＩＥＰＡ（５１．０μＬ，０．３０ｍｍｏｌ）を加えて室温中で撹拌した。この溶液を化合物１６が入ったナスフラスコに加え、室温中で２５時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮し、中圧分取シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン→ジクロロメタン：メタノール＝９０：１０）にて分離精製を行った。その結果、目的物である６を黄色固体として得た（１００．６ｍｇ，８３％、図２１）。また、化合物Ｄは、リン酸緩衝液（２０ｍＭ，ｐＨ＝７．２）にも高い溶解性（＞５ｍｇ／ｍＬ）を示した。
※Ｃ１２Ｓｕｌ：Ｋ．Ｓａｋａｉ，ｅｔ．ａｌ．Ｃｏｌｌｏｉｄｓ Ｓｕｒｆ．Ａ Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍ．Ｅｎｇ．Ａｓｐ．２００９，３３３，２６－３１．
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ８．５５－８．５２（ｍ，１Ｈ），８．４５－８．４１（ｍ，２Ｈ），８．２４－８．２２（ｍ，２Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１１－８．０９（ｂｒｓ，１Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），３．９１（ｂｒｓ，２Ｈ），３．４４（ｂｒｓ，１Ｈ），３．３７（ｂｒｓ，２Ｈ），３．２９（ｂｒｓ，２Ｈ），３．２３－３．２０（ｍ，２Ｈ），３．１３－３．０５（ｂｒｓ，１２Ｈ），２．８２－２．８１（ｂｒｓ，２Ｈ），２．４４－２．３３（ｂｒｓ，６Ｈ），１．８６－１．８５（ｍ，６Ｈ），１．７５（ｂｒｓ，１Ｈ），１．６６（ｍ，２Ｈ），１．５３（ｂｒｓ，１Ｈ），１．４０（ｂｒｓ，１Ｈ），１．２１－１．１７（ｍ，２２Ｈ），０．８１－０．７９（ｍ，３Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ４０Ｈ５３Ｎ２Ｏ５Ｓ－：６７３．３６８１，Ｆｏｕｎｄ：６７３．３６６７（［Ｍ］－）．
化合物Ｄの合成
ナスフラスコに得られた化合物１６（５６．１ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）、ｃｏｍｕ（６８．５ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）を加え、フラスコ内をアルゴン雰囲気にした。脱水ＤＭＦ（３．５ｍＬ）、ＤＩＥＰＡ（５１．０μＬ，０．３０ｍｍｏｌ）を加え、室温中で３０分間撹拌した。続いて、別の二口ナスフラスコにＣ１２Ｓｕｌ（５２．１ｍｇ，０．１７ｍｍｏｌ）を加えてフラスコ内をアルゴン雰囲気にし、脱水ＤＭＦ（３．８ｍＬ）、ＤＩＥＰＡ（５１．０μＬ，０．３０ｍｍｏｌ）を加えて室温中で撹拌した。この溶液を化合物１６が入ったナスフラスコに加え、室温中で２５時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮し、中圧分取シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン→ジクロロメタン：メタノール＝９０：１０）にて分離精製を行った。その結果、目的物である６を黄色固体として得た（１００．６ｍｇ，８３％、図２１）。また、化合物Ｄは、リン酸緩衝液（２０ｍＭ，ｐＨ＝７．２）にも高い溶解性（＞５ｍｇ／ｍＬ）を示した。
※Ｃ１２Ｓｕｌ：Ｋ．Ｓａｋａｉ，ｅｔ．ａｌ．Ｃｏｌｌｏｉｄｓ Ｓｕｒｆ．Ａ Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍ．Ｅｎｇ．Ａｓｐ．２００９，３３３，２６－３１．
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ８．５５－８．５２（ｍ，１Ｈ），８．４５－８．４１（ｍ，２Ｈ），８．２４－８．２２（ｍ，２Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），８．１１－８．０９（ｂｒｓ，１Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），３．９１（ｂｒｓ，２Ｈ），３．４４（ｂｒｓ，１Ｈ），３．３７（ｂｒｓ，２Ｈ），３．２９（ｂｒｓ，２Ｈ），３．２３－３．２０（ｍ，２Ｈ），３．１３－３．０５（ｂｒｓ，１２Ｈ），２．８２－２．８１（ｂｒｓ，２Ｈ），２．４４－２．３３（ｂｒｓ，６Ｈ），１．８６－１．８５（ｍ，６Ｈ），１．７５（ｂｒｓ，１Ｈ），１．６６（ｍ，２Ｈ），１．５３（ｂｒｓ，１Ｈ），１．４０（ｂｒｓ，１Ｈ），１．２１－１．１７（ｍ，２２Ｈ），０．８１－０．７９（ｍ，３Ｈ）；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ４０Ｈ５３Ｎ２Ｏ５Ｓ－：６７３．３６８１，Ｆｏｕｎｄ：６７３．３６６７（［Ｍ］－）．
【0250】
〔実施例２１〕
化合物Ｃ及び化合物Ｄの有機溶媒中での吸収・蛍光スペクトル挙動
表３、図２２に、ＤＭＳＯ中における化合物Ｃ及び化合物Ｄの吸収（実線）・蛍光（点線）スペクトル測定をした結果を示す。色素濃度：１０μＭ（吸収スペクトル）、５μＭ（蛍光スペクトル）。励起波長：４００ｎｍ。
化合物Ｃ及び化合物Ｄの有機溶媒中での吸収・蛍光スペクトル挙動
表３、図２２に、ＤＭＳＯ中における化合物Ｃ及び化合物Ｄの吸収（実線）・蛍光（点線）スペクトル測定をした結果を示す。色素濃度：１０μＭ（吸収スペクトル）、５μＭ（蛍光スペクトル）。励起波長：４００ｎｍ。
【0251】
【表3】
【0252】
〔実施例２２〕
化合物Ｃ及び化合物Ｄの有リン酸緩衝溶液中での蛍光スペクトル挙動
表４、図２３に、２０ｍＭリン酸緩衝液中における化合物Ｃ及び化合物Ｄの蛍光スペクトル測定をした結果を示す。色素濃度：５μＭ。励起波長：４００ｎｍ。
化合物Ｃ及び化合物Ｄの有リン酸緩衝溶液中での蛍光スペクトル挙動
表４、図２３に、２０ｍＭリン酸緩衝液中における化合物Ｃ及び化合物Ｄの蛍光スペクトル測定をした結果を示す。色素濃度：５μＭ。励起波長：４００ｎｍ。
【0253】
【表4】
【0254】
〔実施例２３〕
人工脂質二重膜存在下における化合物Ｃ及び化合物Ｄの蛍光挙動
秩序相（Ｌｏ ｐｈａｓｅ，脂質：スフィンゴミエリン－コレステロール（ＳＭ／Ｃｈｏｌ））、および非秩序相（Ｌｄ ｐｈａｓｅ，脂質：ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ），ジオレオイルホスファチジルコリン－コレステロール（ＤＯＰＣ／Ｃｈｏｌ））を形成する３種類のリポソームを作製した。それらのリポソームが分散されているリン酸緩衝液に対し、脂質：色素のモル比が１００：１となるよう色素を添加し、蛍光スペクトルを測定した。得られた結果を表５、図２４～２５に示す。
人工脂質二重膜存在下における化合物Ｃ及び化合物Ｄの蛍光挙動
秩序相（Ｌｏ ｐｈａｓｅ，脂質：スフィンゴミエリン－コレステロール（ＳＭ／Ｃｈｏｌ））、および非秩序相（Ｌｄ ｐｈａｓｅ，脂質：ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ），ジオレオイルホスファチジルコリン－コレステロール（ＤＯＰＣ／Ｃｈｏｌ））を形成する３種類のリポソームを作製した。それらのリポソームが分散されているリン酸緩衝液に対し、脂質：色素のモル比が１００：１となるよう色素を添加し、蛍光スペクトルを測定した。得られた結果を表５、図２４～２５に示す。
【0255】
【表5】
【0256】
〔実施例２４〕
化合物Ａ～化合物Ｄを用いた生体マウス組織の経皮的染色と蛍光イメージング
各実施例で得られた化合物Ａ～化合物Ｄを用いた生体マウス皮膚組織の経皮的染色と蛍光イメージングを行った。より詳細には、実施例における化合物Ａ～化合物Ｄにより染色した生体マウス組織の多光子蛍光イメージング（化合物Ａ～化合物Ｄの濃度１０ｍｇ／ｍＬの水溶液をマウスの静脈に投与。励起波長：化合物Ａの場合は１１００ｎｍ、化合物Ｂ～Ｄの場合は９２０ｎｍ）を行った。なお、本発明の化合物Ａ～化合物Ｄはいずれも高い水溶性を有することから、このようにマウスの静脈に１０ｍｇ／ｍＬの水溶液を投与することが可能であった。
化合物Ａ～化合物Ｄを用いた生体マウス組織の経皮的染色と蛍光イメージング
各実施例で得られた化合物Ａ～化合物Ｄを用いた生体マウス皮膚組織の経皮的染色と蛍光イメージングを行った。より詳細には、実施例における化合物Ａ～化合物Ｄにより染色した生体マウス組織の多光子蛍光イメージング（化合物Ａ～化合物Ｄの濃度１０ｍｇ／ｍＬの水溶液をマウスの静脈に投与。励起波長：化合物Ａの場合は１１００ｎｍ、化合物Ｂ～Ｄの場合は９２０ｎｍ）を行った。なお、本発明の化合物Ａ～化合物Ｄはいずれも高い水溶性を有することから、このようにマウスの静脈に１０ｍｇ／ｍＬの水溶液を投与することが可能であった。
【0257】
顕微鏡観察には、二光子顕微鏡Ａ１Ｒ ＭＰ＋（ＮＩＫＯＮ）を用いた。測定において、化合物Ａについては励起のためのレーザー光源として９６０ｎｍを用いた。スキャンは試料の深さ２００μｍまで行われた。三次元再構成像は、得られたデータを付属のソフトウェアで処理することによって得られた。
【0258】
マウス個体を麻酔し、後趾を上記染色液に室温で２～３時間浸漬もしくは血中投与することによって、十分に染色することができた。
【0259】
【0260】
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