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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公開特許公報(A)
(11)【公開番号】P2025024719
(43)【公開日】2025-02-21
(54)【発明の名称】乳酸吸着剤
(51)【国際特許分類】
B01J 20/22 20060101AFI20250214BHJP
C07C 63/28 20060101ALI20250214BHJP
C07C 63/30 20060101ALI20250214BHJP
C07C 51/47 20060101ALI20250214BHJP
C07C 59/08 20060101ALI20250214BHJP
B01D 15/00 20060101ALI20250214BHJP
C07F 5/06 20060101ALN20250214BHJP
C12N 5/10 20060101ALN20250214BHJP
C12N 15/09 20060101ALN20250214BHJP
【ＦＩ】
B01J20/22 C
C07C63/28
C07C63/30
C07C51/47
C07C59/08
B01D15/00 M
C07F5/06 D
C12N5/10
C12N15/09 Z
【審査請求】未請求
【請求項の数】7
【出願形態】ＯＬ
(21)【出願番号】P 2023128923
(22)【出願日】2023-08-08
(71)【出願人】
【識別番号】000003300
【氏名又は名称】東ソー株式会社
(71)【出願人】
【識別番号】000173762
【氏名又は名称】公益財団法人相模中央化学研究所
(72)【発明者】
【氏名】宮崎 高則
(72)【発明者】
【氏名】大石 拓実
(72)【発明者】
【氏名】伊藤 博之
(72)【発明者】
【氏名】荒木 啓介
(72)【発明者】
【氏名】大塚 信彦
(72)【発明者】
【氏名】高山 亮
【テーマコード（参考）】
4B065
4D017
4G066
4H006
4H048
【Ｆターム（参考）】
4B065AA93X
4B065AA93Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA01
4B065BB31
4B065BC02
4B065BD14
4B065CA44
4D017AA20
4D017BA04
4D017CA11
4D017CA14
4D017CB01
4D017CB05
4D017CB10
4D017DA01
4D017DA07
4G066AA20C
4G066AA22C
4G066AA53A
4G066AA61C
4G066AB07A
4G066AB24B
4G066AC01C
4G066AC11B
4G066AC17C
4G066BA20
4G066BA26
4G066BA32
4G066BA36
4G066CA56
4G066DA07
4G066FA37
4H006AA02
4H006AA03
4H006AB90
4H006AD17
4H006BC53
4H006BJ50
4H006BS10
4H006BS70
4H048AA03
4H048AB90
4H048VA80
4H048VB10
(57)【要約】
【課題】 本発明は、中性条件下で、細胞培養液中の乳酸を効率良く除去する乳酸吸着剤、及びその用途を提供することを目的とする。
【解決手段】 細胞培養液中の乳酸を吸着する乳酸吸着用組成物であって、下記一般式（１）
【化１】
（式中、Ｍ３＋は、３価の金属イオンを表し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１～４のアルキル基、炭素数１～４のアルキルオキシ基、ハロゲン原子、アミノ基、又はヒドロキシ基を表す。）
で示される金属有機構造体を含むことを特徴とする、乳酸吸着用組成物を用いる。
【選択図】 なし
【解決手段】 細胞培養液中の乳酸を吸着する乳酸吸着用組成物であって、下記一般式（１）
【化１】
で示される金属有機構造体を含むことを特徴とする、乳酸吸着用組成物を用いる。
【選択図】 なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
細胞培養液中の乳酸を吸着する乳酸吸着用組成物であって、下記一般式（１）
（式中、Ｍ３＋は、３価の金属イオンを表し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１～４のアルキル基、炭素数１～４のアルキルオキシ基、ハロゲン原子、アミノ基、又はヒドロキシ基を表す。）
で示される金属有機構造体を含むことを特徴とする、乳酸吸着用組成物。
【化1】
で示される金属有機構造体を含むことを特徴とする、乳酸吸着用組成物。
【請求項2】
前記のＭ３＋が、鉄（ＩＩＩ）イオン、又はアルミニウム（ＩＩＩ）イオンであり、前記金属有機構造体が、ＭＩＬ－５３型金属有機構造体である、請求項１に記載の乳酸吸着用組成物。
【請求項3】
さらに、水に不溶性の担体を含み、前記金属有機構造体が前記担体上に形成されて、前記担体と前記金属有機構造体が複合体を形成している、請求項１に記載の乳酸吸着用組成物。
【請求項4】
前記の水に不溶性の担体が、アルミナ、シリカゲル、ゼオライト、メソポーラスシリカ、メソポーラスアルミナ、多糖類、及び合成高分子からなる群より選ばれる単一又は複数の担体である、請求項３に記載の乳酸吸着用組成物。
【請求項5】
乳酸吸着用組成物の全量を１００質量％としたときの前記の金属有機構造体の含有量が、１～９０質量％である、請求項１に記載の乳酸吸着用組成物。
【請求項6】
請求項１乃至５のいずれかに記載の乳酸吸着用組成物と、水素イオン濃度指数（ｐＨ）が６．０～８．０の範囲にある乳酸含有細胞培養液とを接触させ、前記細胞培養液中の乳酸の一部又は全部を吸着除去することを特徴とする、細胞培養液からの乳酸の除去方法。
【請求項7】
請求項１乃至５のいずれかに記載の乳酸吸着用組成物と、水素イオン濃度指数（ｐＨ）が６．０～８．０の範囲にある乳酸含有細胞培養液とを接触させ、前記細胞培養液中の乳酸の一部又は全部を吸着除去し、それ以外の処理を行うことなく、水素イオン濃度指数（ｐＨ）が６．０～８．０の範囲にある細胞培養液を取得することを特徴とする、細胞培養液からの乳酸の除去方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、細胞培養液等から高選択的に乳酸を除去することができる乳酸吸着剤、及びその用途に関する。
【背景技術】
【0002】
近年、再生医療に関する研究開発が活発化している。中でもヒトｉＰＳ細胞やＥＳ細胞等の多能性幹細胞より誘導した治療用細胞又は治療用細胞組織等を利用した再生医療の実用化が期待されている（特許文献１）。このような再生医療の実用化に向けて、様々なヒトｉＰＳ細胞の高密度大量培養方法が検討されているが、培養時に老廃物として発生する乳酸がｉＰＳ細胞の増殖を阻害するため、細胞培養液中の乳酸を効率的に除去する技術の開発が求められている（非特許文献１）。
【0003】
細胞培養液中の乳酸を除去する技術としては、例えば、乳酸やアンモニア等の低分子量化合物のみが透過可能な中空糸膜を用いた透析法（非特許文献２）、又は層状複水酸化物、層状複酸化物、弱塩基性陰イオン交換樹脂、及び強塩基性陰イオン交換樹脂からなる群から選択される少なくとも一種の物質を含む乳酸吸着剤を用いる方法（特許文献２）等が報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0004】
【特許文献1】国際公開第２０１６／０４３１６８号
【特許文献2】国際公開第２０２０／０５００６８号
【非特許文献】
【0005】
【非特許文献1】Ｈｏｒｉｇｕｃｈｉ，Ｉ．等，Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２０２１，７，１４４－１５２
【非特許文献2】Ｎａｔｈ，Ｓ．Ｃ．等，Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉｏｓｙｓｔ Ｅｎｇ．，２０１７，４０，１２３－１３１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
非特許文献１に開示された中空糸膜を用いた透析法による乳酸の除去方法については、中空糸膜が培養細胞との接触によって目詰まりを起こすため、その目詰まりの解消作業が非常に煩雑である点が課題であった。
【0007】
特許文献２に開示された方法は、所謂イオン交換法であり、乳酸の除去に伴って細胞培養液の液性（ｐＨ、水素イオン濃度指数）がアルカリ側に変動する性質のものである。一方で、細胞培養液のｐＨについては、培養細胞に対する毒性の観点から中性が好ましく、これを維持することが極めて重要である。このため、イオン交換法による乳酸の除去では、事前に細胞培養液のｐＨを酸性化する、あるいは乳酸の除去後に速やかに細胞培養液を中和する必要があるが、いずれの場合も細胞培養液のｐＨを中性領域に保つことが困難である点が課題であった。
【0008】
上記背景と課題を鑑み、本発明は、中性条件下で、細胞培養液中の乳酸を効率良く除去する乳酸吸着剤、及びその用途を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0009】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、下記の細胞培養液用乳酸吸着剤、及びその用途を見出すに至った。
【0010】
すなわち、本発明の一態様は以下に示す細胞培養液用乳酸吸着剤、及びその用途に関するものである。
【0011】
［１］ 細胞培養液中の乳酸を吸着する乳酸吸着用組成物であって、下記一般式（１）
【0012】
【化1】
【0013】
（式中、Ｍ３＋は、３価の金属イオンを表し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１～４のアルキル基、炭素数１～４のアルキルオキシ基、ハロゲン原子、アミノ基、又はヒドロキシ基を表す。）
で示される金属有機構造体を含むことを特徴とする、乳酸吸着用組成物。
で示される金属有機構造体を含むことを特徴とする、乳酸吸着用組成物。
【0014】
［２］ 前記のＭ３＋が、鉄（ＩＩＩ）イオン、又はアルミニウム（ＩＩＩ）イオンであり、前記金属有機構造体が、ＭＩＬ－５３型金属有機構造体である、［１］に記載の乳酸吸着用組成物。
【0015】
［３］ さらに、水に不溶性の担体を含み、前記金属有機構造体が前記担体上に形成されて、前記担体と前記金属有機構造体が複合体を形成している、［１］又は［２］に記載の乳酸吸着用組成物。
【0016】
［４］ 前記の水に不溶性の担体が、アルミナ、シリカゲル、ゼオライト、メソポーラスシリカ、メソポーラスアルミナ、多糖類、及び合成高分子からなる群より選ばれる単一又は複数の担体である、［３］に記載の乳酸吸着用組成物。
【0017】
［５］ 乳酸吸着用組成物の全量を１００質量％としたときの前記の金属有機構造体の含有量が、１～９０質量％である、［１］乃至［４］のいずれかに記載の乳酸吸着用組成物。
【0018】
［６］ ［１］乃至［５］のいずれかに記載の乳酸吸着用組成物と、水素イオン濃度指数（ｐＨ）が６．０～８．０の範囲にある乳酸含有細胞培養液とを接触させ、前記細胞培養液中の乳酸の一部又は全部を吸着除去することを特徴とする、細胞培養液からの乳酸の除去方法。
【0019】
［７］ ［１］乃至［５］のいずれかに記載の乳酸吸着用組成物と、水素イオン濃度指数（ｐＨ）が６．０～８．０の範囲にある乳酸含有細胞培養液とを接触させ、前記細胞培養液中の乳酸の一部又は全部を吸着除去し、それ以外の処理を行うことなく、水素イオン濃度指数（ｐＨ）が６．０～８．０の範囲にある細胞培養液を取得することを特徴とする、細胞培養液からの乳酸の除去方法。
【発明の効果】
【0020】
本発明の乳酸吸着剤は、従来技術では困難であった「中性条件を保持しながら、細胞培養液中の乳酸を吸着し、高選択的に除去する」という課題を解決するものであり、ｐＨ変動による細胞培養液への悪影響を最小限に抑えることができるという効果を奏する。
【発明を実施するための形態】
【0021】
以下、本発明について具体的に説明する。
【0022】
本発明は、上述した乳酸吸着用組成物、及びその用途に係る。
【0023】
本発明の乳酸吸着用組成物は、細胞培養液中の乳酸を吸着するものであって、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体を含むことを特徴とする。
【0024】
細胞培養液は、未使用時は乳酸を含有しないが、細胞培養の時間経過とともに細胞代謝によって乳酸が生産され、細胞培養液中に分泌される。乳酸は細胞にとって有毒であり、その濃度が細胞培養液の全質量に対して０．１質量％以上になると、培養速度が低下するなどの悪影響が生じる。このため、定期的に細胞培養液を交換する必要がある。
【0025】
本発明の乳酸吸着用組成物は、ｐＨが６．０から８．０の条件下、乳酸を含む細胞培養液から乳酸を効率良く除去する乳酸吸着剤として使用することができる。
【0026】
本発明の乳酸吸着用組成物は、細胞や微生物の栄養源であるグルコースやアミノ酸の除去率が低く、乳酸以外の細胞培養液組成物の組成濃度変化が小さい乳酸吸着剤として使用することができる。
【0027】
このため、本発明の乳酸吸着用組成物は、培養細胞へのストレス負荷が少なく、尚且つ乳酸除去後の培養液成分調整が原則不要な環境負荷の小さい乳酸除去方法を提供できるという効果を奏する。
【0028】
本発明の乳酸吸着用組成物は、細胞代謝によって生産された乳酸を細胞培養液から高選択的に吸着することができ、細胞培養液の酸性度を中性に調整することができるという効果を奏するものである。
【0029】
本発明の乳酸吸着用組成物は、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体を含むことを特徴とする。
【0030】
紙面上では、立体構造を示していないが、上記の金属有機構造体は、強直有機配位子と金属原子で構成される金属クラスターの間で錯体が形成され、金属原子が互いに有機部位で架橋された構造を有する３次元繰返し立体構造を有する結晶性化合物を表す。
【0031】
上記の一般式（１）において、Ｍ３＋は、３価の金属イオンを表す。
【0032】
当該Ｍ３＋で表される３価の金属イオンとしては、特に限定するものではないが、例えば、３価の第８族元素イオン、３価の第１３族元素イオン、３価の第６族元素イオン、又は３価の第５族元素イオンを挙げることができ、より具体的には、例えば、鉄（ＩＩＩ）イオン、ルテニウム（ＩＩＩ）イオン、オスミウム（ＩＩＩ）イオン、ホウ素（ＩＩＩ）イオン、アルミニウム（ＩＩＩ）イオン、ガリウム（ＩＩＩ）イオン、インジウム（ＩＩＩ）、クロム（ＩＩＩ）イオン、モリブデン（ＩＩＩ）イオン、タングステン（ＩＩＩ）イオン、バナジウム（ＩＩＩ）イオン、ニオブ（ＩＩＩ）イオン、又はタンタル（ＩＩＩ）イオン等が挙げられる。
【0033】
前記のＭ３＋は、中性条件下での乳酸の除去効率に優れる点で、３価の第８族元素イオン、及び３価の第１４族元素イオンからなる群より選ばれる１種以上であることが好ましく、鉄（ＩＩＩ）イオン、及び／又はアルミニウム（ＩＩＩ）イオンであることが好ましく、アルミニウム（ＩＩＩ）イオンであることがより好ましい。
【0034】
上記の一般式（１）において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１～４のアルキル基、炭素数１～４のアルキルオキシ基、ハロゲン原子、アミノ基、又はヒドロキシ基を表す。
【0035】
前記の炭素数１～４のアルキル基としては、特に限定するものではないが、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、イソブチル基、又はｔｅｒｔ－ブチル基等を挙げることができる。
【0036】
前記の炭素数１～４のアルキルオキシ基としては、特に限定するものではないが、例えば、メトキシ、エトキシ基、プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、シクロプロピルオキシ基、ブトキシ基、イソブチルオキシ基、又はｔｅｒｔ－ブチルオキシ基等を挙げることができる。
【0037】
前記のハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子が挙げられる。
【0038】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、中性条件下での乳酸の除去効率に優れる点で、それぞれ独立して、水素原子、メチル基、エチル基、メトキシ基、エトキシ基、アミノ基、又はヒドロキシ基であることが好ましく、水素原子、メチル基、又はメトキシ基であることがより好ましく、水素原子であることがより好ましい。
【0039】
上記の一般式（１）で表される金属有機構造体については、中性条件下での乳酸の除去効率に優れる点で、ＭＩＬ－５３型金属有機構造体であることが好ましい。
【0040】
次にＭＩＬ－５３型金属有機構造体について説明する。
【0041】
ＭＩＬ－５３型金属有機構造体におけるＭＩＬ－５３は、金属有機構造体（ＭＯＦ）材料のクラスを表し、その構造を規定するものである。
【0042】
ＭＩＬ－５３型金属有機構造体の構造は、従来公知の製造方法に従って合成することができ、ＸＲＤ（Ｘ線回折）構造解析やＩＲ（赤外線分光）分析等を用いて同定することができる。
【0043】
前記のＭＩＬ－５３型金属有機構造体については、その典型例として、金属中心としての３価の金属イオンと、リンカー分子としてのテレフタル酸類によって構成されるものを例示することができる。
【0044】
ＭＩＬ－５３型金属有機構造体としては、例えば、ＭＩＬ－５３（Ｖ）、ＭＩＬ－５３（Ｃｒ）、ＭＩＬ－５３（Ａｌ）、ＭＩＬ－５３（Ｆｅ）、ＭＩＬ－５３（Ｉｎ）、又はＭＩＬ－５３（Ｇａ）等を挙げることができる。
【0045】
前記のテレフタル酸類としては、限定するものではないが、例えば、テレフタル酸、２－アミノベンゼン－１，４－ジカルボキシレート、２－フルオロベンゼン－１，４－ジカルボキシレート、２－クロロベンゼン－１，４－ジカルボキシレート、２－ブロモベンゼン－１，４－ジカルボキシレート、２－ヨードベンゼン－１，４－ジカルボキシレート、２－メチルベンゼン－１，４－ジカルボキシレート、２－エチルベンゼン－１，４－ジカルボキシレート、２－メトキシベンゼン－１，４－ジカルボキシレート、２－エトキシベンゼン－１，４－ジカルボキシレート、２－ヒドロキシベンゼン－１，４－ジカルボキシレート、２，５－ジメチルベンゼン－１，４－ジカルボキシレート、２，５－ジメトキシベンゼン－１，４－ジカルボキシレート、又は２，５－ジヒドロキシベンゼン－１，４－ジカルボキシレート等が挙げられる。
【0046】
一般式（１）で表される金属有機構造体については、一般的には粉末状のものが入手可能であるが、当該粉末状のものについては、そのまま乳酸吸着用組成物として用いることができる。また、当該粉末状のものを押し固めてタブレット状、又はペレット状に成形したものを、本発明の乳酸吸着用組成物として用いることもできる。
【0047】
一般式（１）で示される金属有機構造体は、市販のものを用いることもできるし、従来公知の製造方法に基づいて製造したものを用いることもできる。
【0048】
当該乳酸吸着用組成物は、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体を含むことを特徴とする。すなわち、本発明の乳酸吸着用組成物は、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体以外の成分を含んでいてもよい。
【0049】
上記の一般式（１）で表される金属有機構造体を含む乳酸吸着用組成物としては、例えば、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体からなる乳酸吸着用組成物、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体を含む乳酸吸着用組成物、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体と担体からなる乳酸吸着用組成物、又は上記の一般式（１）で表される金属有機構造体と担体を含む乳酸吸着用組成物等が挙げられる。
【0050】
前記の上記の一般式（１）で表される金属有機構造体からなる乳酸吸着用組成物としては、例えば、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体の粉末からなる乳酸吸着用組成物、又は前記粉末がタブレット状若しくはペレット状に成型されたものからなる乳酸吸着用組成物等が挙げられる。
【0051】
前記の上記の一般式（１）で表される金属有機構造体を含む乳酸吸着用組成物としては、例えば、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体とバインダーを含む組成物、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体とそれを包み込む多孔質膜を含む組成物、又は上記の一般式（１）で表される金属有機構造体とそれを閉じ込める包袋を含む組成物等が挙げられる。
【0052】
前記のバインダーとしては、例えば、スチレンブタジエンゴム、ポリビニリデンフルオライド、ポリテトラフルオロエチレン、水溶性ケイ酸塩、酸性金属リン酸塩、オルガノポリシロキサン、アルミナゾル、合成雲母、粘土、又はセメント等が挙げられる。
【0053】
前記の多孔質膜としては、例えば、ポリエチレン多孔質膜、フッ素樹脂多孔質膜、ポリアクリレート多孔質膜、ポリアミド多孔質膜、ポリウレタン多孔質膜、又は多孔質ガラス等が挙げられる。
【0054】
前記の包袋としては、例えば、ティーバッグ等が挙げられる。
【0055】
上記の一般式（１）で表される金属有機構造体と担体からなる乳酸吸着用組成物、又は上記の一般式（１）で表される金属有機構造体と担体を含む乳酸吸着用組成物については、担体を必須とする。
【0056】
前記の担体については、水不溶性の担体が好ましく、当該担体としては、特に限定するものではないが、例えば、アルミナ、シリカゲル、ゼオライト、メソポーラスシリカ、メソポーラスアルミナ、多糖類、又は合成高分子等が挙げられる。
【0057】
前記の多糖類としては、特に限定するものではないが、例えば、アガロース、セルロース、キチン、若しくはキトサン、又はそれらの架橋物等が挙げられる。
【0058】
前記の合成高分子としては、例えば、ポリ（メタ）アクリレート、ポリ（メタ）アクリレート共重合体、ポリ（メタ）アクリルアミド、ポリ（メタ）アクリルアミド共重合体、ポリスチレン、ポリスチレン共重合体、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、若しくはポリカーボネート、又はそれらの架橋物等が挙げられる。
【0059】
前記の担体の形状としては、特に限定するものではないが、例えば、粒子状、繊維状、スポンジ状、平膜状、平板状、又は中空糸状等が挙げられる。当該形状については、中性条件下での乳酸の除去効率に優れる点、及び吸着処理後の細胞培養液と吸着剤との分離に優れる点で、粒子状、又は繊維状であることが好ましく、粒子状であることがより好ましい。
【0060】
なお、前記の担体については、多孔質であってもよいし、無孔質であってもよいが、中性条件下での乳酸の除去効率に優れる点で、多孔質であることが好ましい。
【0061】
前記の多孔質の孔については、培養細胞が侵入しない大きさであることが好ましく、中性条件下での乳酸の除去効率に優れる点、及び吸着処理後の細胞培養液と吸着剤との分離に優れる点で、ガス吸着法で測定される平均細孔径が、１０～１０００ｎｍであることが好ましく、２０～５００ｎｍであることがより好ましい。
【0062】
前記の担体の大きさについては、特に限定するものではないが、粒子状、又はスポンジ状等であれば、顕微鏡写真の画像解析によって求められる平均粒子径（Ｄ５０）が、０．１μｍ～５０００μｍであることが好ましく、１０μｍ～１０００μｍであることがより好ましい。繊維状、又は中空糸であれば、その平均長さが１００μｍ～１００ｃｍであることが好ましく、１～１０ｃｍであることがより好ましく、その平均直径が０．１～１ｍｍであることが好ましい。なお、前記平均直径については、前記平均長さより短い。
【0063】
上記の一般式（１）で表される金属有機構造体と担体からなる乳酸吸着用組成物としては、特に限定するものではないが、例えば、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体が担体に担持された乳酸吸着用組成物、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体が担体上に形成された乳酸吸着用組成物、又は上記の一般式（１）で表される金属有機構造体が担体の内部で形成された乳酸吸着用組成物等が挙げられる。
【0064】
前記の上記の一般式（１）で表される金属有機構造体が担体に担持された乳酸吸着用組成物、担体上に形成された乳酸吸着用組成物、又は担体の内部で形成された乳酸吸着用組成物を製造する方法としては、例えば、前記担体と前記金属有機構造体を共有結合により化学的に担持する方法、水素結合や疎水結合等を利用して物理的に担持する方法、又は担体の表面上、細孔内、若しくは空孔内に前記金属有機構造体を生成させる方法を挙げることができる。
【0065】
本発明の乳酸吸着用組成物が担体を含有する場合、当該担体の含有量としては、前記の乳酸吸着用組成物の全量を１００質量％として、３０～９５質量％であることが好ましく、４０～９２質量％であることがより好ましく、５０～９０質量％であることがより好ましい。
【0066】
本発明の乳酸吸着用組成物が担体を含有する場合、当該乳酸吸着用組成物における前記の金属有機構造体の含有量については、中性条件下での乳酸の除去効率に優れる点で、乳酸吸着用組成物の全量を１００質量％として、１～９０質量％であることが好ましく、５～８０質量％であることがより好ましく、５～７０質量％であることがより好ましく、８～６０質量％であることがより好ましく、８～５０質量％であることがより好ましく、１０～５０質量％であることがより好ましい。
【0067】
なお、前記の金属有機構造体と担体の含有量比については、特に限定するものではないが、例えば、前記の担体 １０質量部に対して、前記の金属有機構造体が０．１～３０質量部であることが好ましく、０．５～２０質量部であることがより好ましく、０．５～１５質量部であることがより好ましい。
【0068】
上記の一般式（１）で表される金属有機構造体を含む乳酸吸着用組成物については、操作性に優れる点で、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体からなる乳酸吸着用組成物、又は上記の一般式（１）で表される金属有機構造体が担体上に形成された乳酸吸着用組成物であることが好ましい、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体がポリ（メタ）アクリレート共重合体からなる担体上に形成された乳酸吸着用組成物であることがより好ましい。
【0069】
乳酸吸着用組成物上記の一般式（１）で表される金属有機構造体を含む乳酸吸着用組成物については、中性条件下での乳酸の除去効率に優れる点、及び培養細胞との接触による細胞への悪影響を小さく抑えられる点で、さらに、高親水性樹脂、生体適合性ポリマー、又は生体由来成分によって被覆されていてもよい。これらは、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体と担体を含む乳酸吸着用組成物に該当する。
【0070】
前記の高親水性樹脂、生体適合性ポリマー、又は生体由来成分としては、特に限定するものではないが、例えば、ポリビニルアルコール、アルギン酸、ポリビニルアルコール、カルボキシメチルセルロース、ゼラチン、又はコラーゲン等が挙げられる。
【0071】
次いで、本発明の乳酸吸着用組成物を用いた細胞培養液からの乳酸の除去方法について説明する。
【0072】
本発明の乳酸吸着用組成物については、乳酸含有細胞培養液と接触させることによって、前記細胞培養液から乳酸の一部又は全部を吸着除去することができる。
【0073】
本発明の細胞培養液からの乳酸の除去方法は、上記の乳酸吸着用組成物と、水素イオン濃度指数（ｐＨ）が６．０～８．０である乳酸含有細胞培養液とを接触させ、前記細胞培養液中の乳酸の一部又は全部を吸着除去することを特徴とする。
【0074】
なお、本発明の細胞培養液からの乳酸の除去方法については、上記の乳酸吸着用組成物と、水素イオン濃度指数（ｐＨ）が６．０～８．０である乳酸含有細胞培養液とを接触させ、前記細胞培養液中の乳酸の一部又は全部を吸着除去し、それ以外の処理を行うことなく、水素イオン濃度指数（ｐＨ）が６．０～８．０である細胞培養液を取得するものであることが好ましい。
【0075】
吸着除去の対象となる前記の乳酸としては、具体的には、Ｌ－乳酸、Ｌ－乳酸塩、Ｄ－乳酸、Ｄ－乳酸塩、Ｌ－乳酸とＤ－乳酸の混合物、又はＬ－乳酸塩とＤ－乳酸塩の混合物を例示することができる。これらのうち、吸着除去されるべき物質としては、Ｌ－乳酸、又はＬ－乳酸塩が好ましい。
【0076】
一般に、乳酸は強い酸性を示す化合物であり、その水溶液は酸性を示す。ｐＨが６．０から８．０の中性水溶液条件下における乳酸は、一般に乳酸塩の形態をとっており、この乳酸塩についても、吸着除去の対象となる前記の乳酸の概念に含まれる。
【0077】
前記の乳酸塩としては、例えば、乳酸ナトリウム、乳酸カリウム、又は乳酸カルシウム等が挙げられる。
【0078】
吸着除去の対象となる前記乳酸は、細胞培養液に溶解している。
【0079】
なお、当該乳酸は、後述する細胞、又は微生物の増殖（培養）に伴って、当該細胞、又は微生物によるグルコース代謝物（老廃物）として培養液中に排出される。
【0080】
前記の水素イオン濃度指数（ｐＨ）が６．０～８．０である乳酸含有細胞培養液としては、例えば、水素イオン濃度指数（ｐＨ）が６．０～８．０である動物細胞培養液（例えば、ヒト由来細胞培養液）、水素イオン濃度指数（ｐＨ）が６．０～８．０である植物細胞培養液、又は水素イオン濃度指数（ｐＨ）が６．０～８．０である微生物培養液を挙げることができる。このうち、乳酸により細胞の増殖が阻害されやすいヒト由来細胞培養液が好ましい。
【0081】
前記のヒト由来細胞培養液としては、例えば、ヒトｉＰＳ細胞若しくはヒトＥＳ細胞を市販の多能性幹細胞用培地（例えば、味の素社製ＳｔｅｍＦｉｔＴＭ）を用いて培養した培養液、ヒト間葉系幹細胞（ｈＭＳＣ）を市販のｈＭＳＣ用無血清培地（例えば、細胞科学研究所社製ＣｉＭＳＴＭ）を用いて培養した培養液、ヒト間葉系幹細胞若しくはヒト胎児腎細胞（ＨＥＫ２９３細胞）を動物細胞用血清含有培地（例えば、基礎培地であるＤ－ＭＥＭにウシ胎児血清を添加した培地）を用いて培養した培養液、又は神経前駆細胞、血管内皮細胞、間葉系前駆細胞、心筋細胞、骨格筋芽細胞、骨格筋細胞、平滑筋細胞、角膜上皮細胞、角膜内皮細胞、網膜色素上皮細胞、軟骨細胞、若しくは線維芽細胞等のヒト由来細胞を適切な培地を用いて培養した培養液等を挙げることができる。
【0082】
さらに、ヒト由来以外の細胞を培養した細胞培養液としては、例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）を市販の抗体産生細胞株用培地（例えば、ＳＡＦＣ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社製ＥＸ－ＣＥＬＬ Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣＨＯ Ｆｅｄ－Ｂａｔｃｈ ＭｅｄｉｕｍＴＭ）を用いて培養した培養液、アフリカミドリザル腎臓上皮由来細胞（Ｖｅｒｏ細胞）を市販のＶｅｒｏ細胞用無血清培地（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社製ＮｕｔｒｉＶｅｒｏ Ｆｌｅｘ１０ＴＭ）を用いて培養した培養液、又は昆虫細胞（例えば、Ｓｆ９細胞）を昆虫細胞用培地（例えば、富士フイルム和光純薬製ＩＳ Ｓｆ ＩｎｓｅｃｔＴＭ）を用いて培養した培養液等を挙げることができる。
【0083】
なお、上述した培地はいずれも、良好な細胞増殖を達成するため、ｐＨが６．０～８．０に調整されている。
【0084】
上記の乳酸吸着用組成物と、水素イオン濃度指数（ｐＨ）が６．０～８．０である乳酸含有細胞培養液とを接触させる方法については、高効率に乳酸が吸着除去出来れば特に限定するものではないが、例えば、前記の乳酸含有細胞培養液に前記の乳酸吸着用組成物を直接添加して撹拌する方法、前記の乳酸吸着用組成物を充填したカラムに前記の乳酸含有細胞培養液を通液する方法、又は前記の乳酸吸着用組成物が壁面や底面に固定化された容器に前記の乳酸含有細胞培養液を流し込む方法等を挙げることができる。
【0085】
前記の乳酸吸着用組成物と前記の乳酸含有細胞培養液とを接触させるときの温度としては、特に限定するものではないが、中性条件下での乳酸の除去効率に優れる点で、０～８０℃の範囲であることが好ましく、前記の乳酸含有細胞培養液が細胞又は微生物を含有する場合は、中性条件下での乳酸の除去効率に優れる点で、１５～４５℃の範囲が好ましく、２５～４０℃の範囲がより好ましい。
【0086】
また、前記の乳酸吸着用組成物と前記の乳酸含有細胞培養液とを接触させることによって、乳酸の一部又は全部が除去された細胞培養液を取得することができる。当該乳酸の一部又は全部が除去された細胞培養液について、そのｐＨは、特に限定するものではないが、３～１０の範囲が好ましく、５～９の範囲がより好ましく、６～８の範囲がより好ましい。
【0087】
前記の乳酸含有細胞培養液、及び前記の乳酸の一部又は全部が除去された細胞培養液が細胞、又は微生物を含有する場合は、当該乳酸の一部又は全部が除去された細胞培養液のｐＨが、６～８の範囲であることが好ましい。
【0088】
さらに、前記の乳酸含有細胞培養液、及び前記の乳酸の一部又は全部が除去された細胞培養液が細胞、又は微生物を含有する場合は、乳酸を吸着除去する前後のｐＨ変化が、１以内であることが好ましく、０．５以内であることがより好ましい。
【0089】
本発明の乳酸の除去方法は、従来公知のイオン交換材料を用いる方法とは異なり、乳酸除去前後における細胞培養液のｐＨ変動が小さいという特長を有する。このため、本発明の細胞培養液用乳酸吸着剤、及びそれを用いた乳酸の除去方法については、細胞へのストレス影響を小さく抑えることができ、細胞培養の速度及び効率を向上させることができるという効果を奏する。
【0090】
本発明の乳酸の除去方法については、従来公知のイオン交換材料を用いる方法において必須のｐＨ調整装置が不要になる、又は当該装置を小規模化、又は簡略化することができる。このため、本発明の実施形態によれば、細胞培養装置のさらなる簡略化を図ることができる。
【図面の簡単な説明】
【0091】
【実施例0092】
以下、本発明を実施例によって具体的に記述する。しかし、これらによって本発明は制限されるものではない。
［イオンクロマト分析］
測定装置：東ソー社製 ＩＣ－２００１
カラム ：ＴＳＫｇｅｌ（登録商標） ＳｕｐｅｒＩＣ－ＡＰ
ガードカラム ： ＴＳＫｇｅｌ ｇｕａｒｄｃｏｌｕｍｎ ＳｕｐｅｒＩＣ－ＡＰ
溶離液 ：２．７ｍＭ炭酸水素ナトリウム、１．８ｍＭ炭酸ナトリウムの水溶液
検出器 ：電気伝導度
流速 ：０．８ｍＬ／ｍｉｎ
温度 ：４０℃
［ＨＰＬＣ分析１］
測定装置：東ソー社製 ８０２０
カラム ：ＴＳＫｇｅｌ ＳＣＸ（７．８ｍｍ×３０ｃｍ）
溶離液 ：１％リン酸水溶液
検出器 ：ＲＩ
流速 ：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
温度 ：４０℃
［ＨＰＬＣ分析２］
測定装置：東ソー社製 ８０２０
カラム ：ＴＳＫｇｅｌ ＳＣＸ（７．８ｍｍ×３０ｃｍ）
溶離液 ：１％リン酸水溶液
検出器 ：ＵＶ（２１０ｎｍ）
流速 ：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
温度 ：４０℃
［金属分析］
測定装置：ＩＣＰ－ＡＥＳ（パーキンエルマー社製）
測定条件：硝酸で希釈
［粉末Ｘ線回折］
Ｘ線回折装置（装置名：ＵｌｔｉｍａＩＶ Ｐｒｏｔｅｃｔｕｓ，リガク製）を使用し、試料のＸＲＤパターンを測定した。測定条件は以下のとおりである。
［イオンクロマト分析］
測定装置：東ソー社製 ＩＣ－２００１
カラム ：ＴＳＫｇｅｌ（登録商標） ＳｕｐｅｒＩＣ－ＡＰ
ガードカラム ： ＴＳＫｇｅｌ ｇｕａｒｄｃｏｌｕｍｎ ＳｕｐｅｒＩＣ－ＡＰ
溶離液 ：２．７ｍＭ炭酸水素ナトリウム、１．８ｍＭ炭酸ナトリウムの水溶液
検出器 ：電気伝導度
流速 ：０．８ｍＬ／ｍｉｎ
温度 ：４０℃
［ＨＰＬＣ分析１］
測定装置：東ソー社製 ８０２０
カラム ：ＴＳＫｇｅｌ ＳＣＸ（７．８ｍｍ×３０ｃｍ）
溶離液 ：１％リン酸水溶液
検出器 ：ＲＩ
流速 ：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
温度 ：４０℃
［ＨＰＬＣ分析２］
測定装置：東ソー社製 ８０２０
カラム ：ＴＳＫｇｅｌ ＳＣＸ（７．８ｍｍ×３０ｃｍ）
溶離液 ：１％リン酸水溶液
検出器 ：ＵＶ（２１０ｎｍ）
流速 ：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
温度 ：４０℃
［金属分析］
測定装置：ＩＣＰ－ＡＥＳ（パーキンエルマー社製）
測定条件：硝酸で希釈
［粉末Ｘ線回折］
Ｘ線回折装置（装置名：ＵｌｔｉｍａＩＶ Ｐｒｏｔｅｃｔｕｓ，リガク製）を使用し、試料のＸＲＤパターンを測定した。測定条件は以下のとおりである。
【0093】
加速電流・電圧 ： ５０ｍＡ・４０ｋＶ
線源 ： ＣｕＫα線（λ＝１．５４０５Å）
測定モード ： 連続スキャン
スキャン条件 ： ５０°／分
測定範囲 ： ２θ＝５°から４５°
発散縦制限スリット： １０ｍｍ
発散／入射スリット： １°
受光スリット ： ｏｐｅｎ
受光ソーラースリット ： ５°
検出器 ： 半導体検出器（Ｄ／ｔｅＸ Ｕｌｔｒａ）
フィルター ： Ｎｉフィルター
［ＩＲ測定］
フーリエ変換赤外分光光度計（装置名：ＦＴ／ＩＲ－４６００，日本分光製）を使用し、試料をＡＴＲ法で測定し、ＩＲスペクトルを取得した。
［熱分析］
示差熱・熱重量同時測定装置（装置名：ＴＧ／ＤＴＡ６２００，日立ハイテクサイエンス社製）を使用し、大気中で昇温速度１０℃／分にて４０℃から７００℃まで昇温してＴＧ－ＤＴＡ曲線を測定した。
［窒素吸脱着試験］
ガス吸着量測定装置（装置名：ＦＴ／ＩＲ－４６００，マイクロトラック・ベル製）を使用し、サンプルを事前に減圧下１５０℃５時間乾燥させた後に、－７８℃での窒素吸脱着等温線を測定した。
［Ｄ５０平均粒子径測定］
以下の条件で取得したＳＥＭ観察図（装置名：ＪＳＭ－ＩＴ１００，日本電子製）において輪郭が途切れることなく観察される一次粒子１００±５個を抽出し、抽出した一次粒子の最長径及び最短径を測定し、その平均値（＝（最長径［μｍ］＋最短径［μｍ］）÷２）を求め、各一次粒子の粒径を得た。次に、各一次粒子について、粒径分布を求め、これからＤ５０平均粒径を導き出した。なお、一つのＳＥＭ観察図で、一次粒子が１００±５個抽出できない場合には、観察位置が異なる複数のＳＥＭ観察図を使用した。
線源 ： ＣｕＫα線（λ＝１．５４０５Å）
測定モード ： 連続スキャン
スキャン条件 ： ５０°／分
測定範囲 ： ２θ＝５°から４５°
発散縦制限スリット： １０ｍｍ
発散／入射スリット： １°
受光スリット ： ｏｐｅｎ
受光ソーラースリット ： ５°
検出器 ： 半導体検出器（Ｄ／ｔｅＸ Ｕｌｔｒａ）
フィルター ： Ｎｉフィルター
［ＩＲ測定］
フーリエ変換赤外分光光度計（装置名：ＦＴ／ＩＲ－４６００，日本分光製）を使用し、試料をＡＴＲ法で測定し、ＩＲスペクトルを取得した。
［熱分析］
示差熱・熱重量同時測定装置（装置名：ＴＧ／ＤＴＡ６２００，日立ハイテクサイエンス社製）を使用し、大気中で昇温速度１０℃／分にて４０℃から７００℃まで昇温してＴＧ－ＤＴＡ曲線を測定した。
［窒素吸脱着試験］
ガス吸着量測定装置（装置名：ＦＴ／ＩＲ－４６００，マイクロトラック・ベル製）を使用し、サンプルを事前に減圧下１５０℃５時間乾燥させた後に、－７８℃での窒素吸脱着等温線を測定した。
［Ｄ５０平均粒子径測定］
以下の条件で取得したＳＥＭ観察図（装置名：ＪＳＭ－ＩＴ１００，日本電子製）において輪郭が途切れることなく観察される一次粒子１００±５個を抽出し、抽出した一次粒子の最長径及び最短径を測定し、その平均値（＝（最長径［μｍ］＋最短径［μｍ］）÷２）を求め、各一次粒子の粒径を得た。次に、各一次粒子について、粒径分布を求め、これからＤ５０平均粒径を導き出した。なお、一つのＳＥＭ観察図で、一次粒子が１００±５個抽出できない場合には、観察位置が異なる複数のＳＥＭ観察図を使用した。
【0094】
実施例１
リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、富士フイルム和光純薬株式会社製）を超純水で１０倍に希釈し、次いで、乳酸ナトリウムを、その濃度が０．１００質量％となるように添加して試験液（以下、「ＰＢＳ試験液」と略記）を調製した。ＰＢＳ試験液のｐＨは７．２４であった。２０ｍＬのシュレンク管に、ＰＢＳ試験液 １０ｍＬ、本発明のＭＩＬ－５３型金属有機構造体に該当するＢａｓｏｌｉｔｅ（登録商標） Ａ１００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製） ０．５ｇ、及び撹拌子を仕込み、密閉条件とし、３７℃で２４時間撹拌した。その後、室温まで冷却し、ろ過操作によってＢａｓｏｌｉｔｅ Ａ１００を分離した。上記の手順で処理した後のＰＢＳ試験液のｐＨは７．０１であった。また、上記の［イオンクロマト分析］による乳酸濃度測定結果は、０．０２５質量％であり、乳酸の吸着除去率は７５％と算出された。結果を表１に纏めた。
リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、富士フイルム和光純薬株式会社製）を超純水で１０倍に希釈し、次いで、乳酸ナトリウムを、その濃度が０．１００質量％となるように添加して試験液（以下、「ＰＢＳ試験液」と略記）を調製した。ＰＢＳ試験液のｐＨは７．２４であった。２０ｍＬのシュレンク管に、ＰＢＳ試験液 １０ｍＬ、本発明のＭＩＬ－５３型金属有機構造体に該当するＢａｓｏｌｉｔｅ（登録商標） Ａ１００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製） ０．５ｇ、及び撹拌子を仕込み、密閉条件とし、３７℃で２４時間撹拌した。その後、室温まで冷却し、ろ過操作によってＢａｓｏｌｉｔｅ Ａ１００を分離した。上記の手順で処理した後のＰＢＳ試験液のｐＨは７．０１であった。また、上記の［イオンクロマト分析］による乳酸濃度測定結果は、０．０２５質量％であり、乳酸の吸着除去率は７５％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0095】
ＰＢＳ試験液中のアルミニウムイオン濃度を、上記の［金属分析］に基づいて測定したところ、処理前で０．１ｐｐｍ未満であり、処理後においても０．１ｐｐｍ未満であった。このことから、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ａ１００の分解や溶出がないことを確認した。即ち、細胞培養液を用いた際は、培養液成分に与える影響は小さいと予測された。
【0096】
実施例２
実施例１における撹拌条件について、３７℃で２４時間を、２５℃で１時間に変更した以外は、実施例１と同じ操作を行った。処理後のＰＢＳ試験液のｐＨは６．５０であった。処理後の乳酸濃度測定結果は０．０２２質量％であり、乳酸の吸着除去率は７８％と算出された。結果を表１に纏めた。
実施例１における撹拌条件について、３７℃で２４時間を、２５℃で１時間に変更した以外は、実施例１と同じ操作を行った。処理後のＰＢＳ試験液のｐＨは６．５０であった。処理後の乳酸濃度測定結果は０．０２２質量％であり、乳酸の吸着除去率は７８％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0097】
実施例３
基礎培地Ｄ－ＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地、富士フイルム和光純薬株式会社製 コード番号０４４－２９７６５９）に、乳酸ナトリウムを０．１００質量％となるように添加して試験液（以下、「Ｄ－ＭＥＭ試験液」と略記）を調製した。Ｄ－ＭＥＭ試験液のｐＨは７．４９であった。２０ｍＬのシュレンク管に、Ｄ－ＭＥＭ試験液 ５ｍＬ、本発明のＭＩＬ－５３型金属有機構造体に該当するＢａｓｏｌｉｔｅ Ａ１００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製）０．２５ｇ、及び撹拌子を仕込み、密閉条件とし、３７℃で２４時間撹拌した。その後、室温まで冷却し、ろ過操作によってＢａｓｏｌｉｔｅ Ａ１００を分離回収した。上記の手順で処理した後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは７．４９であった。また、上記の［イオンクロマト分析］による乳酸濃度測定結果は、０．０３３質量％であり、乳酸の吸着除去率は６７％と算出された。結果を表１に纏めた。
基礎培地Ｄ－ＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地、富士フイルム和光純薬株式会社製 コード番号０４４－２９７６５９）に、乳酸ナトリウムを０．１００質量％となるように添加して試験液（以下、「Ｄ－ＭＥＭ試験液」と略記）を調製した。Ｄ－ＭＥＭ試験液のｐＨは７．４９であった。２０ｍＬのシュレンク管に、Ｄ－ＭＥＭ試験液 ５ｍＬ、本発明のＭＩＬ－５３型金属有機構造体に該当するＢａｓｏｌｉｔｅ Ａ１００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製）０．２５ｇ、及び撹拌子を仕込み、密閉条件とし、３７℃で２４時間撹拌した。その後、室温まで冷却し、ろ過操作によってＢａｓｏｌｉｔｅ Ａ１００を分離回収した。上記の手順で処理した後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは７．４９であった。また、上記の［イオンクロマト分析］による乳酸濃度測定結果は、０．０３３質量％であり、乳酸の吸着除去率は６７％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0098】
実施例５
５０ｍＬの遠沈管に、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標） ＣＭ－６５０Ｃ（アクリル系合成高分子、東ソー株式会社製、Ｄ５０平均粒子径１００μｍ） ２．００ｇ（乾燥質量）、超純水 １６．８ｍＬ、及びテレフタル酸二ナトリウム ２０２ｍｇ（９６１μｍｏｌ）を投入し、室温で５分間振盪した。前記遠沈管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 ７２１ｍｇ（１．９２ｍｍｏｌ）を投入し、密閉条件とし、室温で７２時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で３時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体の粗生成物（２．２１ｇ）の白色粉末を得た。
５０ｍＬの遠沈管に、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標） ＣＭ－６５０Ｃ（アクリル系合成高分子、東ソー株式会社製、Ｄ５０平均粒子径１００μｍ） ２．００ｇ（乾燥質量）、超純水 １６．８ｍＬ、及びテレフタル酸二ナトリウム ２０２ｍｇ（９６１μｍｏｌ）を投入し、室温で５分間振盪した。前記遠沈管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 ７２１ｍｇ（１．９２ｍｍｏｌ）を投入し、密閉条件とし、室温で７２時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で３時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体の粗生成物（２．２１ｇ）の白色粉末を得た。
【0099】
得られた粗生成物（２．００ｇ）とＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（以下、ＤＭＦと略す。）（７０．０ｍＬ）を混合し、室温で２１時間浸漬した後、デカンテーションにてＤＭＦを除去した。前記の浸漬デカンテーション手順を、浸漬時間を２４時間に変更してさらに２回行った。得られた固体を６０℃で８時間減圧下乾燥することで、本発明の細胞培養液用乳酸吸着剤に該当するＭＩＬ－５３／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体（１．７８ｇ）の白色粉末を得た（以下、「実施例５化合物」と称す）。［熱分析］測定より測定した実施例５化合物におけるＭＩＬ－５３担持量は１１質量％であった。また、得られた粉末（実施例５化合物）については、ＸＲＤパターン、及びＩＲスペクトルによって同定した。
【0100】
実施例６
実施例３において、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ａ１００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製）０．２５ｇの代わりに、実施例５化合物 １．１ｇ、を用いた以外は実施例３と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．８０であった。乳酸濃度測定結果は０．０７４質量％であり、乳酸の吸着除去率は２６％と算出された。結果を表１に纏めた。
実施例３において、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ａ１００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製）０．２５ｇの代わりに、実施例５化合物 １．１ｇ、を用いた以外は実施例３と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．８０であった。乳酸濃度測定結果は０．０７４質量％であり、乳酸の吸着除去率は２６％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0101】
実施例７
１００ｍＬの遠沈管に、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ ＣＭ－６５０Ｃ ２．００ｇ（乾燥質量）、超純水 ４２．０ｍＬ、及びテレフタル酸二ナトリウム １．０１ｇ（４．８１ｍｍｏｌ）を投入し、室温で５分間振盪した。前記遠沈管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 ３．６１ｇ（９．６２ｍｍｏｌ）を投入し、密閉条件とし、室温で７２時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で３時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体の粗生成物（３．０５ｇ）の白色粉末を得た。
１００ｍＬの遠沈管に、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ ＣＭ－６５０Ｃ ２．００ｇ（乾燥質量）、超純水 ４２．０ｍＬ、及びテレフタル酸二ナトリウム １．０１ｇ（４．８１ｍｍｏｌ）を投入し、室温で５分間振盪した。前記遠沈管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 ３．６１ｇ（９．６２ｍｍｏｌ）を投入し、密閉条件とし、室温で７２時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で３時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体の粗生成物（３．０５ｇ）の白色粉末を得た。
【0102】
得られた粗生成物（２．７１ｇ）とＤＭＦ（４０．０ｍＬ）を混合し、室温で２４時間浸漬した後、デカンテーションにてＤＭＦを除去した。前記の浸漬デカンテーション手順をさらに３回繰り返した。得られた固体を６０℃で９時間減圧下乾燥することで、本発明の細胞培養液用乳酸吸着剤に該当するＭＩＬ－５３／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体（２．３０ｇ）の白色粉末を得た（以下、「実施例７化合物」と称す）。［熱分析］測定より測定した実施例７化合物におけるＭＩＬ－５３担持量は２２質量％であった。また、得られた粉末（実施例７化合物）については、ＸＲＤパターン、及びＩＲスペクトルによって同定した。
【0103】
実施例８
実施例６において、実施例５化合物 １．１ｇの代わりに、実施例７化合物 ０．３ｇを用いた以外は、実施例６の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．４４であった。また、乳酸濃度測定結果は０．０７７質量％であり、乳酸の吸着除去率は２３％と算出された。結果を表１に纏めた。
実施例６において、実施例５化合物 １．１ｇの代わりに、実施例７化合物 ０．３ｇを用いた以外は、実施例６の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．４４であった。また、乳酸濃度測定結果は０．０７７質量％であり、乳酸の吸着除去率は２３％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0104】
実施例９
２５０ｍＬの遠沈管に、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ ＣＭ－６５０Ｃ ２．００ｇ（乾燥質量）、超純水（８４．０ｍＬ）、及びテレフタル酸二ナトリウム ２．０２ｇ（９．６１ｍｍｏｌ）を投入し、室温で５分間振盪した。前記遠沈管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 ７．２１ｇ（１９．２ｍｍｏｌ）を投入し、密閉条件とし、室温で７２時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で３時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体の粗生成物（４．３４ｇ）の白色粉末を得た。
２５０ｍＬの遠沈管に、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ ＣＭ－６５０Ｃ ２．００ｇ（乾燥質量）、超純水（８４．０ｍＬ）、及びテレフタル酸二ナトリウム ２．０２ｇ（９．６１ｍｍｏｌ）を投入し、室温で５分間振盪した。前記遠沈管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 ７．２１ｇ（１９．２ｍｍｏｌ）を投入し、密閉条件とし、室温で７２時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で３時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体の粗生成物（４．３４ｇ）の白色粉末を得た。
【0105】
得られた粗生成物（１．５０ｇ）とＤＭＦ（２０．０ｍＬ）を混合し、室温で２３時間浸漬した後、デカンテーションにてＤＭＦを除去した。さらに、ＤＭＦ（３０．０ｍＬ）、浸漬時間を６３時間に条件を変えて再度、浸漬デカンテーション操作を行った。得られた固体をＤＭＦ（３０．０ｍＬ）でさらに洗浄した後、６０℃で４時間減圧下乾燥することで、本発明の細胞培養液用乳酸吸着剤に該当するＭＩＬ－５３／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体（８７６ｍｇ）の白色粉末を得た（以下、「実施例９化合物」と称す）。［熱分析］測定より測定した実施例９化合物におけるＭＩＬ－５３担持量は２９質量％であった。また、得られた粉末（実施例９化合物）については、ＸＲＤパターン、及びＩＲスペクトルによって同定した。また、上記の［窒素吸脱着試験］により測定した実施例９化合物のＢＥＴ比表面積は、１５９ｍ２／ｇであった。また、上記の［Ｄ５０平均粒子径測定］により測定したＤ５０平均粒子径は、６０μｍであった。
【0106】
実施例１０
実施例６において、実施例５化合物 １．１ｇの代わりに、実施例９化合物 ０．１ｇを用いた以外は、実施例６の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは７．０７であった。乳酸濃度測定結果は０．０７７質量％であり、乳酸の吸着除去率は２３％と算出された。結果を表１に纏めた。
実施例６において、実施例５化合物 １．１ｇの代わりに、実施例９化合物 ０．１ｇを用いた以外は、実施例６の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは７．０７であった。乳酸濃度測定結果は０．０７７質量％であり、乳酸の吸着除去率は２３％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0107】
実施例１１
実施例１０において、３７℃で２４時間撹拌の条件を、３７℃で１時間撹拌の条件に変更した以外は、実施例１０の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．９８であった。乳酸濃度測定結果は０．０７７質量％であり、乳酸の吸着除去率は２３％と算出された。結果を表１に纏めた。
実施例１０において、３７℃で２４時間撹拌の条件を、３７℃で１時間撹拌の条件に変更した以外は、実施例１０の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．９８であった。乳酸濃度測定結果は０．０７７質量％であり、乳酸の吸着除去率は２３％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0108】
実施例１２
実施例１０において、実施例９化合物 ０．１ｇの代わりに、実施例９化合物 ０．２ｇを用いた以外は、実施例１０の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．２８であった。乳酸濃度測定結果は０．０８３質量％であり、乳酸の吸着除去率は１７％と算出された。結果を表１に纏めた。
実施例１０において、実施例９化合物 ０．１ｇの代わりに、実施例９化合物 ０．２ｇを用いた以外は、実施例１０の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．２８であった。乳酸濃度測定結果は０．０８３質量％であり、乳酸の吸着除去率は１７％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0109】
実施例１３
２００ｍＬの遠沈管に、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ ＣＭ－６５０Ｃ ２．００ｇ（乾燥質量）、超純水 ８４．０ｍＬ、及びテレフタル酸二ナトリウム ２．０２ｇ（９．６１ｍｍｏｌ）を投入し、室温で５分間振盪した。前記遠沈管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 ７．２１ｇ（１９．２ｍｍｏｌ）を投入し、密閉条件とし、室温で７２時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で３時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体の粗生成物（４．０７ｇ）の白色粉末を得た。
２００ｍＬの遠沈管に、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ ＣＭ－６５０Ｃ ２．００ｇ（乾燥質量）、超純水 ８４．０ｍＬ、及びテレフタル酸二ナトリウム ２．０２ｇ（９．６１ｍｍｏｌ）を投入し、室温で５分間振盪した。前記遠沈管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 ７．２１ｇ（１９．２ｍｍｏｌ）を投入し、密閉条件とし、室温で７２時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で３時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体の粗生成物（４．０７ｇ）の白色粉末を得た。
【0110】
得られた粗生成物（１．５０ｇ）を水（５０．０ｍＬ）に投入し、８０℃で２０時間加熱した。室温に放冷後、吸引ろ取し、得られた固体を熱水で洗浄した。得られた固体を６０℃で２時間減圧下乾燥することで、本発明の細胞培養液用乳酸吸着剤に該当するＭＩＬ－５３／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体（１．３６ｇ）の白色粉末を得た（以下、「実施例１３化合物」と称す）。［熱分析］測定より測定した実施例１３化合物におけるＭＩＬ－５３担持量は２５質量％であった。また、得られた粉末（実施例１３化合物）については、ＸＲＤパターン、及びＩＲスペクトルによって同定した。ＸＲＤパターンを図１に、ＩＲスペクトルを図２にそれぞれ示した。
【0111】
実施例１４
実施例６において、実施例５化合物 １．１ｇの代わりに、実施例１３化合物 ０．２ｇを用いた以外は、実施例６の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．３４であった。乳酸濃度測定結果は０．０８３質量％であり、乳酸の吸着除去率は１７％と算出された。結果を表１に纏めた。
実施例６において、実施例５化合物 １．１ｇの代わりに、実施例１３化合物 ０．２ｇを用いた以外は、実施例６の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．３４であった。乳酸濃度測定結果は０．０８３質量％であり、乳酸の吸着除去率は１７％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0112】
実施例１５
１００ｍＬの遠沈管に、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ ＣＭ－６５０Ｃ ２．００ｇ（乾燥質量）、超純水 ２５．０ｍＬ、及びテレフタル酸二ナトリウム ６０６ｍｇ（２．８８ｍｍｏｌ）を投入し、室温で５分間振盪した。前記遠沈管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 ２．１６ｇ（５．７７ｍｍｏｌ）を投入し、密閉条件とし、室温で７２時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で９時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体の粗生成物（２．６４ｇ）の白色粉末を得た。
１００ｍＬの遠沈管に、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ ＣＭ－６５０Ｃ ２．００ｇ（乾燥質量）、超純水 ２５．０ｍＬ、及びテレフタル酸二ナトリウム ６０６ｍｇ（２．８８ｍｍｏｌ）を投入し、室温で５分間振盪した。前記遠沈管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 ２．１６ｇ（５．７７ｍｍｏｌ）を投入し、密閉条件とし、室温で７２時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で９時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体の粗生成物（２．６４ｇ）の白色粉末を得た。
【0113】
得られた粗生成物（２．６４ｇ）を水（５０．０ｍＬ）に投入し、６０℃で９時間加熱した。室温に放冷後、吸引ろ取し、得られた固体を熱水で洗浄した。得られた固体を６０℃で２時間減圧下乾燥することで、本発明の細胞培養液用乳酸吸着剤に該当するＭＩＬ－５３／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体（２．３２ｇ）の白色粉末を得た（以下、「実施例１５化合物」と称す）。［熱分析］測定より測定した実施例１５化合物におけるＭＩＬ－５３担持量は１５質量％であった。また、得られた粉末（実施例１５化合物）については、ＸＲＤパターン、及びＩＲスペクトルによって同定した。
【0114】
実施例１６
実施例６において、実施例５化合物 １．１ｇの代わりに、実施例１５化合物 ０．４３ｇを用いた以外は、実施例６の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．４３であった。乳酸濃度測定結果は０．０８０質量％であり、乳酸の吸着除去率は２０％と算出された。結果を表１に纏めた。
実施例６において、実施例５化合物 １．１ｇの代わりに、実施例１５化合物 ０．４３ｇを用いた以外は、実施例６の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．４３であった。乳酸濃度測定結果は０．０８０質量％であり、乳酸の吸着除去率は２０％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0115】
実施例１７
２５０ｍＬの遠沈管に、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ ＣＭ－６５０Ｃ ２．００ｇ（乾燥質量）、超純水 １６８ｍＬ、及びテレフタル酸二ナトリウム ４．０４ｇ（１９．２ｍｍｏｌ）を投入し、室温で５分間振盪した。前記遠沈管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 １４．４３ｇ（３８．５ｍｍｏｌ）を投入し、密閉条件とし、室温で７２時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で９時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体の粗生成物（６．６３ｇ）の白色粉末を得た。
２５０ｍＬの遠沈管に、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ ＣＭ－６５０Ｃ ２．００ｇ（乾燥質量）、超純水 １６８ｍＬ、及びテレフタル酸二ナトリウム ４．０４ｇ（１９．２ｍｍｏｌ）を投入し、室温で５分間振盪した。前記遠沈管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 １４．４３ｇ（３８．５ｍｍｏｌ）を投入し、密閉条件とし、室温で７２時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で９時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体の粗生成物（６．６３ｇ）の白色粉末を得た。
【0116】
得られた粗生成物（６．４７ｇ）をＤＭＦ（５０．０ｍＬ）に投入し、室温で２４時間浸漬した。前記の手順を、さらに３回浸漬洗浄を繰り返した。得られた固体を６０℃で９時間減圧下乾燥することで、本発明の細胞培養液用乳酸吸着剤に該当するＭＩＬ－５３／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体（４．５１ｇ）の白色粉末を得た（以下、「実施例１７化合物」と称す）。［熱分析］測定より測定した実施例１７化合物におけるＭＩＬ－５３担持量は３７質量％であった。また、得られた粉末（実施例１７化合物）については、ＸＲＤパターン、及びＩＲスペクトルによって同定した。ＸＲＤパターンを図３に、ＩＲスペクトルを図４にそれぞれ示した。また、上記の［窒素吸脱着試験］により測定した実施例１７化合物のＢＥＴ比表面積は、２７２ｍ２／ｇであった。
【0117】
実施例１８
実施例６において、実施例５化合物 １．１ｇの代わりに、実施例１７化合物 ０．１５ｇを用いた以外は、実施例６の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．５５であった。乳酸濃度測定結果は０．０７０質量％であり、乳酸の吸着除去率は３０％と算出された。結果を表１に纏めた。
実施例６において、実施例５化合物 １．１ｇの代わりに、実施例１７化合物 ０．１５ｇを用いた以外は、実施例６の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．５５であった。乳酸濃度測定結果は０．０７０質量％であり、乳酸の吸着除去率は３０％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0118】
実施例１９
２５０ｍＬの遠沈管に、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ ＣＭ－６５０Ｃ ２．００ｇ（乾燥質量）、超純水 ８４．０ｍＬ、及びテレフタル酸二ナトリウム ２．０１ｇ（９．５７ｍｍｏｌ）を投入し、室温で５分間振盪した。前記遠沈管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 ７．２１ｇ（１９．２ｍｍｏｌ）を投入しれ、密閉条件とし、室温で４８時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で３９時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体の粗生成物（３．９１ｇ）の白色粉末を得た。
２５０ｍＬの遠沈管に、ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ ＣＭ－６５０Ｃ ２．００ｇ（乾燥質量）、超純水 ８４．０ｍＬ、及びテレフタル酸二ナトリウム ２．０１ｇ（９．５７ｍｍｏｌ）を投入し、室温で５分間振盪した。前記遠沈管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 ７．２１ｇ（１９．２ｍｍｏｌ）を投入しれ、密閉条件とし、室温で４８時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で３９時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体の粗生成物（３．９１ｇ）の白色粉末を得た。
【0119】
得られた粗生成物（１．０６ｇ）をＤＭＦ（２０．０ｍＬ）に投入し、室温で２４時間浸漬した。前記の手順を、さらに２回浸漬洗浄を繰り返した。得られた固体を６０℃で４時間減圧下乾燥することで、本発明の細胞培養液用乳酸吸着剤に該当するＭＩＬ－５３／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体（６７５ｍｇ）の白色粉末を得た（以下、「実施例１９化合物」と称す）。［熱分析］測定より測定した実施例１９化合物におけるＭＩＬ－５３担持量は３６質量％であった。また、得られた粉末（実施例１９化合物）については、ＸＲＤパターン、及びＩＲスペクトルによって同定した。また、上記の［窒素吸脱着試験］により測定した実施例１９化合物のＢＥＴ比表面積は、３９７ｍ２／ｇであった。
【0120】
実施例２０
実施例６において、実施例５化合物 １．１ｇの代わりに、実施例１９化合物 ０．２８ｇを用いた以外は、実施例６の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．６８であった。乳酸濃度測定結果は０．０７９質量％であり、乳酸の吸着除去率は２１％と算出された。結果を表１に纏めた。
実施例６において、実施例５化合物 １．１ｇの代わりに、実施例１９化合物 ０．２８ｇを用いた以外は、実施例６の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．６８であった。乳酸濃度測定結果は０．０７９質量％であり、乳酸の吸着除去率は２１％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0121】
実施例２１
２５０ｍＬの遠沈管に、２－ブロモテレフタル酸 １．７１ｇ（６．９５ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウム ５９３ｍｇ（１４．８ｍｍｏｌ）、超純水 ６５．０ｍＬ、及びＴＯＹＯＰＥＡＲＬ ＣＭ－６５０Ｃ ２．０１ｇ（乾燥質量）を投入し、室温で５分間振盪した。前記遠沈管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 ５．２０ｇ（１３．９ｍｍｏｌ）を投入し、密閉条件とし、室温で２２時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で４７時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３－Ｂｒ／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体の粗生成物（３．８５ｇ）の白色粉末を得た。
２５０ｍＬの遠沈管に、２－ブロモテレフタル酸 １．７１ｇ（６．９５ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウム ５９３ｍｇ（１４．８ｍｍｏｌ）、超純水 ６５．０ｍＬ、及びＴＯＹＯＰＥＡＲＬ ＣＭ－６５０Ｃ ２．０１ｇ（乾燥質量）を投入し、室温で５分間振盪した。前記遠沈管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 ５．２０ｇ（１３．９ｍｍｏｌ）を投入し、密閉条件とし、室温で２２時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で４７時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３－Ｂｒ／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体の粗生成物（３．８５ｇ）の白色粉末を得た。
【0122】
得られた粗生成物（１．０４ｇ）をＤＭＦ（２０．０ｍＬ）に投入し、室温で２４時間浸漬した。前記の手順を、さらに３回浸漬洗浄を繰り返した。得られた固体を６０℃で４時間減圧下乾燥することで、本発明の細胞培養液用乳酸吸着剤に該当するＭＩＬ－５３－Ｂｒ／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体（１．１５ｇ）の白色粉末を得た（以下、「実施例２１化合物」と称す）。［熱分析］測定より測定した実施例２１化合物におけるＭＩＬ－５３－Ｂｒ担持量は３９質量％であった。また、得られた粉末（実施例２１化合物）については、ＸＲＤパターン、及びＩＲスペクトルによって同定した。また、上記の［窒素吸脱着試験］により測定した実施例２１化合物のＢＥＴ比表面積は、２９６ｍ２／ｇであった。また、上記の［Ｄ５０平均粒子径測定］により測定したＤ５０平均粒子径は、６９μｍであった。
【0123】
実施例２２
実施例６において、実施例５化合物 １．１ｇの代わりに、実施例２１化合物 ０．２６ｇを用いた以外は、実施例６の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．０４であった。乳酸濃度測定結果は０．０５４質量％であり、乳酸の吸着除去率は４６％と算出された。結果を表１に纏めた。
実施例６において、実施例５化合物 １．１ｇの代わりに、実施例２１化合物 ０．２６ｇを用いた以外は、実施例６の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．０４であった。乳酸濃度測定結果は０．０５４質量％であり、乳酸の吸着除去率は４６％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0124】
実施例２３
２５０ｍＬの遠沈管に、２－ブロモテレフタル酸 １．７１ｇ（６．９５ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウム ５９３ｍｇ（１４．８ｍｍｏｌ）、超純水 ６５．０ｍＬ、及びＴＯＹＯＰＥＡＲＬ ＣＭ－６５０Ｃ ２．０１ｇ（乾燥質量）を投入し、室温で５分間振盪した。前記遠沈管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 ５．２０ｇ（１３．９ｍｍｏｌ）を投入し、密閉条件とし、室温で２２時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で４７時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３－Ｂｒ／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体の粗生成物（３．８５ｇ）の白色粉末を得た。
２５０ｍＬの遠沈管に、２－ブロモテレフタル酸 １．７１ｇ（６．９５ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウム ５９３ｍｇ（１４．８ｍｍｏｌ）、超純水 ６５．０ｍＬ、及びＴＯＹＯＰＥＡＲＬ ＣＭ－６５０Ｃ ２．０１ｇ（乾燥質量）を投入し、室温で５分間振盪した。前記遠沈管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 ５．２０ｇ（１３．９ｍｍｏｌ）を投入し、密閉条件とし、室温で２２時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で４７時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３－Ｂｒ／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体の粗生成物（３．８５ｇ）の白色粉末を得た。
【0125】
得られた粗生成物（１．０３ｇ）をＤＭＦ（２０．０ｍＬ）に入れ、１５０℃で２４時間浸漬した。固体をろ取し、ＤＭＦで洗浄した。得られた固体を６０℃で４時間減圧下乾燥することで、本発明の細胞培養液用乳酸吸着剤に該当するＭＩＬ－５３－Ｂｒ／ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ複合化体（１．０１ｇ）の白色粉末を得た（以下、「実施例２３化合物」と称す）。［熱分析］測定より測定した実施例２３化合物におけるＭＩＬ－５３－Ｂｒ担持量は４２質量％であった。また、得られた粉末（実施例２３化合物）については、ＸＲＤパターン、及びＩＲスペクトルによって同定した。また、上記の［窒素吸脱着試験］により測定した実施例２３化合物のＢＥＴ比表面積は、２８０ｍ２／ｇであった。
【0126】
実施例２４
実施例６において、実施例５化合物 １．１ｇの代わりに、実施例２３化合物 ０．２３ｇを用いた以外は、実施例６の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．２０であった。乳酸濃度測定結果は０．０５５質量％であり、乳酸の吸着除去率は４５％と算出された。結果を表１に纏めた。
実施例６において、実施例５化合物 １．１ｇの代わりに、実施例２３化合物 ０．２３ｇを用いた以外は、実施例６の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．２０であった。乳酸濃度測定結果は０．０５５質量％であり、乳酸の吸着除去率は４５％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0127】
実施例２５
２００ｍＬの遠沈管に、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＭＡＣ－３Ｈ（シグマアルドリッチ社製、Ｄ５０平均粒子径７４０μｍ） ２００ｍｇ（乾燥重量）、超純水 １００ｍＬ、及びテレフタル酸二ナトリウム ２．４０ｇ（１１．４ｍｍｏｌ）を投入し、室温で５分間振盪した。前記遠沈管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 ８．５５ｇ（２２．８ｍｍｏｌ）を投入し、密閉条件とし、室温で７２時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で１３時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３／ＡｍｂｅｒｌｉｔｅＭＡＣ－３Ｈ複合化体の粗生成物（２．５２ｇ）の白色粉末を得た。
２００ｍＬの遠沈管に、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＭＡＣ－３Ｈ（シグマアルドリッチ社製、Ｄ５０平均粒子径７４０μｍ） ２００ｍｇ（乾燥重量）、超純水 １００ｍＬ、及びテレフタル酸二ナトリウム ２．４０ｇ（１１．４ｍｍｏｌ）を投入し、室温で５分間振盪した。前記遠沈管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 ８．５５ｇ（２２．８ｍｍｏｌ）を投入し、密閉条件とし、室温で７２時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で１３時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３／ＡｍｂｅｒｌｉｔｅＭＡＣ－３Ｈ複合化体の粗生成物（２．５２ｇ）の白色粉末を得た。
【0128】
得られた粗生成物（２．００ｇ）をＤＭＦ（５０．０ｍＬ）に入れ、室温で２４時間浸漬した。前記の手順を、さらに２回浸漬洗浄を繰り返した。得られた固体を６０℃で７間減圧下乾燥することで、本発明の細胞培養液用乳酸吸着剤に該当するＭＩＬ－５３／ＡｍｂｅｒｌｉｔｅＭＡＣ－３Ｈ複合化体（３７８ｍｇ）の白色粉末を得た（以下、「実施例２５化合物」と称す）。［熱分析］測定より測定した実施例２５化合物におけるＭＩＬ－５３担持量は７１質量％であった。また、得られた粉末（実施例２５化合物）については、ＸＲＤパターン、及びＩＲスペクトルによって同定した。
【0129】
実施例２６
実施例６において、実施例５化合物 １．１ｇの代わりに、実施例２５化合物 ０．１４ｇを用いた以外は、実施例６の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．００であった。乳酸濃度測定結果は０．０７６質量％であり、乳酸の吸着除去率は２４％と算出された。結果を表１に纏めた。
実施例６において、実施例５化合物 １．１ｇの代わりに、実施例２５化合物 ０．１４ｇを用いた以外は、実施例６の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．００であった。乳酸濃度測定結果は０．０７６質量％であり、乳酸の吸着除去率は２４％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0130】
実施例２７
２００ｍＬのシュレンク管に、ＡｍｂｅｒｌｉｔｅＣＧ５０（シグマアルドリッチ社製、Ｄ５０平均粒子径６２５μｍ） １００ｍｇ（乾燥質量）、超純水 ８７．０ｍＬ、及びテレフタル酸二ナトリウム ２．１０ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）を投入し、室温で５分間振盪した。前記シュレンク管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 ７．５０ｇ（２０．０ｍｍｏｌ）を投入し、密閉条件とし、室温で７２時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で１３時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３／ＡｍｂｅｒｌｉｔｅＣＧ５０複合化体の粗生成物（２．２６ｇ）の白色粉末を得た。
２００ｍＬのシュレンク管に、ＡｍｂｅｒｌｉｔｅＣＧ５０（シグマアルドリッチ社製、Ｄ５０平均粒子径６２５μｍ） １００ｍｇ（乾燥質量）、超純水 ８７．０ｍＬ、及びテレフタル酸二ナトリウム ２．１０ｇ（１０．０ｍｍｏｌ）を投入し、室温で５分間振盪した。前記シュレンク管に、さらに硝酸アルミニウム九水和物 ７．５０ｇ（２０．０ｍｍｏｌ）を投入し、密閉条件とし、室温で７２時間振盪した。その後遠心分離し、上澄み液を除去した後、固体を水（４０．０ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体を６０℃で１３時間減圧下乾燥することで、ＭＩＬ－５３／ＡｍｂｅｒｌｉｔｅＣＧ５０複合化体の粗生成物（２．２６ｇ）の白色粉末を得た。
【0131】
得られた粗生成物（２．００ｇ）をＤＭＦ（５０．０ｍＬ）に入れ、室温で２４時間浸漬した。前記の手順を、さらに２回浸漬洗浄を繰り返した。得られた固体を６０℃で７間減圧下乾燥することで、本発明の細胞培養液用乳酸吸着剤に該当するＭＩＬ－５３／ＡｍｂｅｒｌｉｔｅＣＧ５０複合化体（７１６ｍｇ）の白色粉末を得た（以下、「実施例２７化合物」と称す）。［熱分析］測定より測定した実施例２７化合物におけるＭＩＬ－５３担持量は７３質量％であった。また、得られた粉末（実施例２７化合物）については、ＸＲＤパターン、及びＩＲスペクトルによって同定した。
【0132】
実施例２８
実施例６において、実施例５化合物 １．１ｇの代わりに、実施例２７化合物 ０．１４ｇを用いた以外は、実施例６の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．４５であった。乳酸濃度測定結果は０．０７３質量％であり、乳酸の吸着除去率は２７％と算出された。結果を表１に纏めた。
実施例６において、実施例５化合物 １．１ｇの代わりに、実施例２７化合物 ０．１４ｇを用いた以外は、実施例６の乳酸捕捉試験と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは６．４５であった。乳酸濃度測定結果は０．０７３質量％であり、乳酸の吸着除去率は２７％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0133】
比較例１
実施例１において、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ａ１００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製） ０．５ｇを使用しない以外は、実施例１と同じ操作を行った（本発明の細胞培養液用乳酸吸着剤を使用しない条件。バックグラウンド試験と位置づけ）。処理後のＰＢＳ試験液のｐＨは７．２９であった。乳酸濃度測定結果は０．１００質量％であり、乳酸の吸着除去率は０％と算出された。結果を表１に纏めた。
実施例１において、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ａ１００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製） ０．５ｇを使用しない以外は、実施例１と同じ操作を行った（本発明の細胞培養液用乳酸吸着剤を使用しない条件。バックグラウンド試験と位置づけ）。処理後のＰＢＳ試験液のｐＨは７．２９であった。乳酸濃度測定結果は０．１００質量％であり、乳酸の吸着除去率は０％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0134】
比較例２
実施例１において、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ａ１００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製） ０．５ｇの代わりに、ＺｒＭＯＦであるＵｉＯ－６６（ＳＴＲＥＭ社製、ジルコニウム（ＩＶ）、架橋酸素原子、水酸化物イオン、及び１，４－ジカルボキシベンゼンで構成される有機金属構造体であって、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体に該当しない） ０．５ｇを用いた以外は、実施例１と同じ操作を行った。処理後のＰＢＳ試験液のｐＨは３．８１であった。乳酸濃度測定結果は０．０９８質量％であり、乳酸の吸着除去率は２％と算出された。結果を表１に纏めた。
実施例１において、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ａ１００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製） ０．５ｇの代わりに、ＺｒＭＯＦであるＵｉＯ－６６（ＳＴＲＥＭ社製、ジルコニウム（ＩＶ）、架橋酸素原子、水酸化物イオン、及び１，４－ジカルボキシベンゼンで構成される有機金属構造体であって、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体に該当しない） ０．５ｇを用いた以外は、実施例１と同じ操作を行った。処理後のＰＢＳ試験液のｐＨは３．８１であった。乳酸濃度測定結果は０．０９８質量％であり、乳酸の吸着除去率は２％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0135】
比較例３
実施例１において、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ａ１００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製） ０．５ｇの代わりに、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ｚ１２００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、２－メチルイミダゾール 亜鉛塩で構成される有機金属構造体であって、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体に該当しない） ０．５ｇを用いた以外は、実施例１と同じ操作を行った。処理後のＰＢＳ試験液のｐＨは９．３５であった。乳酸濃度測定結果は０．１０１質量％であり、乳酸の吸着除去率は０％と算出された。結果を表１に纏めた。
実施例１において、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ａ１００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製） ０．５ｇの代わりに、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ｚ１２００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、２－メチルイミダゾール 亜鉛塩で構成される有機金属構造体であって、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体に該当しない） ０．５ｇを用いた以外は、実施例１と同じ操作を行った。処理後のＰＢＳ試験液のｐＨは９．３５であった。乳酸濃度測定結果は０．１０１質量％であり、乳酸の吸着除去率は０％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0136】
比較例４
実施例１において、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ａ１００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製） ０．５ｇの代わりに、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ｃ３００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、ベンゼン－１，３，５－トリカルボン酸銅で構成される有機金属構造体であって、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体に該当しない） ０．５ｇを用いた以外は、実施例１と同じ操作を行った。処理後のＰＢＳ試験液のｐＨは５．２２であった。乳酸濃度測定結果は０．０９９質量％であり、乳酸の吸着除去率は１％と算出された。結果を表１に纏めた。
実施例１において、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ａ１００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製） ０．５ｇの代わりに、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ｃ３００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、ベンゼン－１，３，５－トリカルボン酸銅で構成される有機金属構造体であって、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体に該当しない） ０．５ｇを用いた以外は、実施例１と同じ操作を行った。処理後のＰＢＳ試験液のｐＨは５．２２であった。乳酸濃度測定結果は０．０９９質量％であり、乳酸の吸着除去率は１％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0137】
比較例５
実施例１において、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ａ１００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製） ０．５ｇの代わりに、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ｆ３００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、１，３，５－ベンゼントリカルボン酸鉄で構成される有機金属構造体であって、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体に該当しない） ０．５ｇを用いた以外は、実施例１と同じ操作を行った。処理後のＰＢＳ試験液のｐＨは３．７９であった。乳酸濃度測定結果は０．０１２質量％であり、乳酸の吸着除去率は８８％と算出された。結果を表１に纏めた。
実施例１において、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ａ１００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製） ０．５ｇの代わりに、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ｆ３００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製、１，３，５－ベンゼントリカルボン酸鉄で構成される有機金属構造体であって、上記の一般式（１）で表される金属有機構造体に該当しない） ０．５ｇを用いた以外は、実施例１と同じ操作を行った。処理後のＰＢＳ試験液のｐＨは３．７９であった。乳酸濃度測定結果は０．０１２質量％であり、乳酸の吸着除去率は８８％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0138】
ＰＢＳ試験液中の鉄イオン濃度を、上記の［金属分析］に基づいて測定したところ、処理前で０．１ｐｐｍ未満であり、処理後で０．４ｐｐｍであった。このことから、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ｆ３００は分解によって一部溶出したことが分かった。即ち、細胞培養液を用いた際は、培養液成分に悪影響があると予測された。
【0139】
比較例６
実施例３において、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ａ１００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製） ０．２５ｇの代わりに、ＡＹＲＳＯＲＢＴＭ Ｔ１２５（ＳＴＲＥＭ社製、ＮＨ２－ＭＩＬ－１２５（Ｔｉ）で表されるチタンの有機金属構造体であって、上記の一般式（１）で表される有機構造体に該当しない） ０．２５ｇを使用した以外は、実施例３と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは５．１６であった。乳酸濃度測定結果は０．７５質量％であり、乳酸の吸着除去率は２５％と算出された。結果を表１に纏めた。
実施例３において、Ｂａｓｏｌｉｔｅ Ａ１００（Ａｌｄｒｉｃｈ社製） ０．２５ｇの代わりに、ＡＹＲＳＯＲＢＴＭ Ｔ１２５（ＳＴＲＥＭ社製、ＮＨ２－ＭＩＬ－１２５（Ｔｉ）で表されるチタンの有機金属構造体であって、上記の一般式（１）で表される有機構造体に該当しない） ０．２５ｇを使用した以外は、実施例３と同じ操作を行った。処理後のＤ－ＭＥＭ試験液のｐＨは５．１６であった。乳酸濃度測定結果は０．７５質量％であり、乳酸の吸着除去率は２５％と算出された。結果を表１に纏めた。
【0140】
【表1】
【0141】
表１から、本発明の細胞培養液用乳酸吸着剤が乳酸を高効率に吸着除去でき、更に処理後のｐＨを中性状態（６．０～８．０）に保持できていることが分かる。
【産業上の利用可能性】
【0142】
本発明によれば、従来技術では困難であった「細胞培養液のｐＨを中性領域内（ｐＨ６．０～８．０）にとどめながら細胞培養液中の乳酸を高効率で吸着除去すること」が可能となる。
【0143】
本発明の細胞培養液用乳酸吸着剤は、細胞培養液に好適な中性付近の水素イオン濃度環境下で使用可能であることから、特に、乳酸による増殖阻害が起こりやすいヒト多能性幹細胞の培養に使用することで、従来は困難であったヒト多能性幹細胞の高密度大量培養を達成することができる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
