特開 2025-9364 β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公開特許公報(A)

(11)【公開番号】P2025009364

(43)【公開日】2025-01-20

(54)【発明の名称】β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 8/63 20060101AFI20250110BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20250110BHJP

   A61K 8/9789 20170101ALI20250110BHJP

【ＦＩ】

A61K8/63

A61Q19/00

A61K8/9789

【審査請求】未請求

【請求項の数】3

【出願形態】ＯＬ

(21)【出願番号】P 2023112321

(22)【出願日】2023-07-07

(71)【出願人】

【識別番号】591082421

【氏名又は名称】丸善製薬株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100107766

【弁理士】

【氏名又は名称】伊東 忠重

(74)【代理人】

【識別番号】100070150

【弁理士】

【氏名又は名称】伊東 忠彦

(72)【発明者】

【氏名】林 祥太

(72)【発明者】

【氏名】平中 夏海

【テーマコード（参考）】

4C083

【Ｆターム（参考）】

4C083AA082

4C083AA111

4C083AA112

4C083AA122

4C083AB032

4C083AC022

4C083AC072

4C083AC102

4C083AC122

4C083AC182

4C083AC242

4C083AC422

4C083AC442

4C083AC482

4C083AD092

4C083AD282

4C083AD352

4C083AD392

4C083AD512

4C083AD531

4C083AD532

4C083CC04

4C083CC05

4C083DD23

4C083DD27

4C083DD31

4C083EE12

(57)【要約】

【課題】優れたβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有し、かつ安全性が高いβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤の提供。
【解決手段】グリチルリチン酸ジカリウムを含むβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤である。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

グリチルリチン酸ジカリウムを含むことを特徴とするβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤。

【請求項2】

ユキノシタ抽出物を更に含む請求項１に記載のβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤。

【請求項3】

ユキノシタ抽出物と併用する請求項１に記載のβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤に関する。

【背景技術】

【0002】

皮膚は体の最外層に位置し、生体を外部の刺激から保護する重要な組織であり、有害な微生物が体内に侵入するのを防ぐ防御機能が備わっている。その中の１つとして抗菌ペプチド（ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ：ＡＭＰｓ）がある。皮膚には２０種類以上のＡＭＰｓが確認されており、代表的なものとしてはβ－ディフェンシン－３（β－Ｄｅｆｅｎｓｉｎ－３）が知られている。ＡＭＰｓは表皮細胞で産生され、層板顆粒に貯蔵されて角層細胞へ放出される（例えば、非特許文献１参照）。ＡＭＰｓは抗菌剤として有害な微生物の生育を阻害することで生体を外部の刺激から保護していると考えられている。

【0003】

これまでに、β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有するものとして、ブッチャーブルーム抽出物（例えば、特許文献１参照）等が知られている。

【0004】

しかしながら、優れたβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有し、かつ安全性が高く、そのため、化粧料等の外用組成物や研究用試薬などの成分として広く利用が可能な新たな素材に対する要望は依然として強く、その速やかな開発が求められているのが現状である。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【特許文献1】特開２０１８－１０４３６４号公報

【非特許文献】

【0006】

【非特許文献1】化粧品の効能を考えるときに読む皮膚科学，２０２０年，ｐ．３７－３９

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、優れたβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有し、かつ安全性が高いβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0008】

前記課題を解決するために本発明者らが鋭意検討を重ねた結果、グリチルリチン酸ジカリウムが、優れたβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有し、かつ安全性が高く、β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進に有用な素材であることを知見した。

【0009】

本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞ グリチルリチン酸ジカリウムを含むことを特徴とするβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤である。
＜２＞ ユキノシタ抽出物を更に含む前記＜１＞に記載のβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤である。
＜３＞ ユキノシタ抽出物と併用する前記＜１＞に記載のβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤である。

【発明の効果】

【0010】

本発明のβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れたβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有し、かつ安全性が高いβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤を提供することができる。

【発明を実施するための形態】

【0011】

（β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤）
本実施形態に係るβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤は、グリチルリチン酸ジカリウムを有効成分として含み、更に必要に応じてその他の成分を含む。

【0012】

本明細書において、β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡの発現を促進するとは、前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進を使用しない場合と比較して、β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡの発現レベルを高めることをいう。β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進の程度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

【0013】

前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤は、β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用を増強し、より優れたβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用を奏することができる点で、ユキノシタ抽出物と組み合わせて用いることが好ましい。
ユキノシタ抽出物と組み合わせて用いる態様としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤が更にユキノシタ抽出物を含む態様、前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤をユキノシタ抽出物と併用する態様などが挙げられる。

【0014】

前記グリチルリチン酸ジカリウムが、優れたβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有し、β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤として有用であること、前記グリチルリチン酸ジカリウムと、前記ユキノシタ抽出物とを組み合わせて用いると、β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用が増強されることは、従来は全く知られておらず、本発明者らによる新たな知見である。

【0015】

＜グリチルリチン酸ジカリウム＞
グリチルリチン酸ジカリウムは、Ｃ_４２Ｈ_６０Ｋ_２Ｏ_１６で表される分子量８９９．１の化合物である。
グリチルリチン酸ジカリウムは、化学合成により調製したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。

【0016】

前記化学合成の方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、グリチルリチン酸と、水酸化カリウム（ＫＯＨ）などとを反応させる方法などが挙げられる。

【0017】

前記グリチルリチン酸を入手する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、市販品を用いる方法、グリチルリチン酸を含有する植物抽出物から単離及び精製の少なくともいずれかの方法により得る方法などが挙げられる。

【0018】

前記グリチルリチン酸を含有する植物抽出物は、グリチルリチン酸を含有する植物を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれであってもよい。

【0019】

前記グリチルリチン酸を含有する植物抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法によって得ることができる。グリチルリチン酸を含有する植物としては、例えば、カンゾウなどが挙げられる。

【0020】

前記グリチルリチン酸ジカリウムは、優れたβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有しているため、その作用を利用して、前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤の有効成分として用いることができる。

【0021】

＜ユキノシタ抽出物＞
前記ユキノシタ抽出物は、ユキノシタ（学名：Ｓａｘｉｆｒａｇａ ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒａ）を抽出原料とするものである。

【0022】

ユキノシタ（Ｓａｘｉｆｒａｇａ ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒａ）は、日本の本州、四国、九州および国外では中国に分布するユキノシタ科ユキノシタ属に属する常緑の多年草であり、これらの地域から容易に入手可能である。

【0023】

前記ユキノシタ抽出物は、抽出原料から調製したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。

【0024】

抽出原料として使用し得る部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、葉、茎、花、蕾、種子、根、地上部又はこれらの混合物が挙げられる。これらの中でも全草が好ましい。
前記抽出原料の形状、構造、大きさとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

【0025】

ユキノシタ抽出物に含まれるβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有する物質の詳細は不明であるが、植物の抽出等に一般に用いられている抽出方法によって、ユキノシタからβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有する抽出物を得ることができる。

【0026】

本発明において、「抽出物」には、抽出処理によって抽出原料から得られる抽出液、抽出液の希釈液もしくは濃縮液、抽出液を乾燥して得られる乾燥物、またはこれらの粗精製物もしくは精製物のいずれもが含まれる。

【0027】

上記抽出物は、抽出原料を乾燥した後、そのまま、または粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、上記抽出原料の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。

【0028】

抽出に用いられる溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性有機溶媒、又はこれらの混合物等が挙げられる。
前記溶媒は、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
抽出原料に含まれるβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有する成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって容易に抽出することができる。

【0029】

抽出溶媒として使用し得る水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本実施形態において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。

【0030】

抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１～５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３－ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２～５の多価アルコール等が挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。

【0031】

２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を抽出溶媒として使用する場合には水１０容量部に対して低級脂肪族アルコール１～９０容量部を混合することが好ましい。水と低級脂肪族ケトンとの混合液を抽出溶媒として使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族ケトン１～４０容量部を混合することが好ましい。水と多価アルコールとの混合液を抽出溶媒として使用する場合には、水１０容量部に対して多価アルコール１～９０容量部を混合することが好ましい。
これらの中でも、水５０容量％と、１，３－ブチレングリコール５０容量％との混合液を抽出溶媒として用いることが好ましい。

【0032】

抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り、特に制限はなく、常法に従って行うことができ、例えば、室温または還流加熱下で抽出することができる。例えば、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料を投入し、必要に応じて撹拌しながら、３０分～４時間静置して可溶性成分を溶出した後、濾過して固形物を除去することにより抽出物を得ることができる。得られた抽出液から抽出溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥することにより乾燥物が得られる。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には５０～９５℃で１～４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、４０～８０℃で３０分～４時間程度である。また、抽出溶媒として水と１，３－ブチレングリコールとの混合溶媒を用いた場合には、８０～９０℃で２時間程度である。
なお、上記した抽出時間及び抽出温度は一例であり、適宜変更してもよい。また、抽出溶媒の使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

【0033】

以上のようにして得られた抽出液は、該抽出液の希釈液もしくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、またはこれらの粗精製物もしくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。

【0034】

なお、得られた抽出液はそのままでも前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤に配合する成分として、又は前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤と併用する剤として使用することができるが、濃縮液または乾燥物としたもののほうが好ましい。乾燥物を得るにあたっては、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。

【0035】

また、ユキノシタは特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、化粧料に添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。精製は、例えば活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。

【0036】

以上のようにして得られるユキノシタ抽出物は、優れたβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有しているため、その作用を利用して、前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤に配合する成分として、又は前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤と併用する剤の有効成分として用いることができる。

【0037】

前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤は、前記グリチルリチン酸ジカリウムのみからなるものであってもよいし、前記グリチルリチン酸ジカリウムと、必要に応じて前記ユキノシタ抽出物とを製剤化したものであってもよい。
前記ユキノシタ抽出物を用いる場合の、前記グリチルリチン酸ジカリウムと、前記ユキノシタ抽出物との質量比としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

【0038】

前記グリチルリチン酸ジカリウムと、必要に応じて用いる前記ユキノシタ抽出物は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、安定剤、矯臭剤等を用いることができる。前記製剤化したβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤の形態としては、例えば、軟膏剤、外用液剤等が挙げられる。

【0039】

前記製剤化したβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤におけるグリチルリチン酸ジカリウムの含有量、及びユキノシタ抽出物の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

【0040】

＜その他の成分＞
前記その他の成分としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤の利用形態などに応じて適宜選択することができ、例えば、上記した製剤化する際に用いることができる成分などが挙げられる。前記その他の成分は、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。

【0041】

前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤における前記その他の成分の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

【0042】

前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤の対象に対する投与方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、経皮投与などが挙げられる。

【0043】

前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤の対象に対する投与量、投与期間、投与間隔、投与部位などとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

【0044】

前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤は、前記グリチルリチン酸ジカリウムが有するβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用を通じて、β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡの発現を促進することができる。また、前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤は、前記ユキノシタ抽出物と組み合わせて用いることで、β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡの発現の促進を増強し、より一層優れたβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用が得られる。これにより、有害な微生物の生育を抑制することで感染症の予防や皮膚バリアの強化ができる。一例としては、ニキビの抑制に用いることができる。ただし、前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤は、これらの用途以外にもβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用を発揮する意義のあるすべての用途に用いることができる。

【0045】

また、前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤は、優れたβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有するため、皮膚化粧料、頭皮化粧料、頭髪化粧料等の化粧料等に配合するのに好適である。この場合に、グリチルリチン酸ジカリウムと、必要に応じてユキノシタ抽出物とをそのまま配合してもよいし、グリチルリチン酸ジカリウムと、必要に応じてユキノシタ抽出物とを製剤化したものを配合してもよい。

【0046】

前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤を配合可能な化粧料としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、軟膏、クリーム、乳液、化粧水、ローション、美容液、パック、ファンデーション、ヘアトニック、ヘアローション、シャンプー、リンス、石鹸などが挙げられる。

【0047】

前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤を化粧料に配合する場合、その配合量としては、特に制限はなく、化粧料の種類などに応じて適宜調整することができるが、グリチルリチン酸ジカリウムの量に換算して、約０．０００１～１０質量％が好ましく、約０．００１～１質量％がより好ましい。

【0048】

化粧料は、グリチルリチン酸ジカリウムが有するβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用を妨げない限り、通常の化粧料の製造に用いられる主剤、助剤またはその他の成分、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料等を併用することができる。このように併用することで、より一般性のある製品となり、また、併用された他の有効成分との間の相乗作用が通常期待される以上の優れた効果をもたらすことがある。

【0049】

前記化粧料の製造方法としては、特に制限はなく、公知の方法を適宜選択することができる。

【0050】

前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなど）に対して適用することも可能である。

【0051】

また、前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤は、β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用機構に関する研究のための試薬としても好適に利用することができる。

【0052】

上述したように、前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤は、β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有する。
したがって、本発明は、対象に、前記β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進剤を投与することを特徴とするβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進方法にも関する。

【実施例0053】

以下、試験例、製造例、配合例を示して本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は、下記試験例、製造例、配合例に何ら制限されるものではない。

【0054】

〔試験例１〕β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用試験
被験試料としてグリチルリチン酸ジカリウム（外原規グリチルリチン酸ジカリウム、丸善製薬株式会社製）を用い、下記の方法によりβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用の試験を実施した。

【0055】

＜試験方法＞
正常ヒト新生児表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地（ＫＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、ＫＧＭを用いて６ウェルプレートに３．０×１０^５細胞／２ｍＬずつ播き、３７℃、５％ＣＯ_２下で一晩培養した。
培養後、増殖因子を添加していない培地（ＫＢＭ）に交換した。２４時間後に培養液を捨て、ＫＢＭで必要濃度に溶解した被験試料（濃度は下記表１を参照）を各ウェルに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ_２下で２４時間培養した。なお、コントロールとして、被験試料無添加のＫＢＭを用いて同様に培養した。
培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ ＩＩ（ニッポンジーン社製； Ｃａｔ． ｎｏ． ３１１－０７３６１）にてトータルＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるようにトータルＲＮＡを調製した。
このトータルＲＮＡを鋳型とし、β－ディフェンシン－３（ｈ－ＢＤ３）及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出は、リアルタイムＰＣＲ装置Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ Ｄｉｃｅ（登録商標） Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ Ｓｙｓｔｅｍ ＩＩＩ（タカラバイオ社製）を用いて、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ^ＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）（タカラバイオ社製）及びＴＢ Ｇｒｅｅｎ（登録商標） Ｆａｓｔ ｑＰＣＲ Ｍｉｘ（タカラバイオ社製）による２ステップリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ反応により行った。β－ディフェンシン－３のｍＲＮＡの発現量は、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量で補正し、算出した。
得られた結果から、下記式によりβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進率（以下、「ｈ－ＢＤ３ ｍＲＮＡ発現促進率」と称することがある。）を算出した。結果を表１に示す。なお、下記式において、被験試料無添加のβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進率は１００％となる。
β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中のＡ～Ｂは、それぞれ以下を表す。
Ａ ： 被験試料添加時の補正値
Ｂ ： 被験試料無添加時の補正値

【0056】

【表1】

【0057】

表１に示すように、グリチルリチン酸ジカリウムは、優れたβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用を有することが確認された。

【0058】

〔試験例２〕β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用試験
グリチルリチン酸ジカリウムと、ユキノシタ抽出物とを併用した場合のβ－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用について、下記の方法により試験を実施した。
なお、グリチルリチン酸ジカリウムは試験例１と同じものを用い、ユキノシタ抽出物は下記の製造例１で製造したものを用いた。

【0059】

＜製造例１＞ユキノシタ抽出物の製造
ユキノシタ全草の乾燥物１００ｇに５０容量％ブチレングリコール１，５００ｍＬを加え、還流抽出器で８０～９０℃にて２時間加熱抽出を行い熱時濾過した。得られた抽出液を乾燥し、ユキノシタ抽出物（１０ｇ）を得た。

【0060】

＜試験方法＞
下記の表２に記載の被験試料を用いた以外は、試験例１と同様にして、β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進率を求めた。結果を表２に示す。

【0061】

【表2】

【0062】

表２に示すように、グリチルリチン酸ジカリウムと、ユキノシタ抽出物とを併用することで、β－ディフェンシン－３ ｍＲＮＡ発現促進作用の増強が認められた。

【0063】

〔配合例１〕
下記組成のクリームを常法により製造した。
・ グリチルリチン酸ジカリウム ０．０５ｇ
（試験例１で用いたものと同じ）
・ クジンエキス ０．１ｇ
・ オウゴンエキス ０．１ｇ
・ 流動パラフィン ５．０ｇ
・ サラシミツロウ ４．０ｇ
・ スクワラン １０．０ｇ
・ セタノール ３．０ｇ
・ ラノリン ２．０ｇ
・ ステアリン酸 １．０ｇ
・ オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） １．５ｇ
・ モノステアリン酸グリセリル ３．０ｇ
・ 油溶性甘草エキス ０．１ｇ
・ １，３－ブチレングリコール ６．０ｇ
・ パラオキシ安息香酸メチル １．５ｇ
・ 香料 ０．１ｇ
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）

【0064】

〔配合例２〕
下記組成の乳液を常法により製造した。
・ グリチルリチン酸ジカリウム ０．０５ｇ
（試験例１で用いたものと同じ）
・ ユキノシタ抽出物（製造例１） ０．０５ｇ
・ ホホバオイル ４．００ｇ
・ １，３－ブチレングリコール ３．００ｇ
・ アルブチン ３．００ｇ
・ ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ２．５０ｇ
・ オリーブオイル ２．００ｇ
・ スクワラン ２．００ｇ
・ セタノール ２．００ｇ
・ モノステアリン酸グリセリル ２．００ｇ
・ オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） ２．００ｇ
・ パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
・ グリチルレチン酸ステアリル ０．１０ｇ
・ 黄杞エキス ０．１０ｇ
・ イチョウ葉エキス ０．１０ｇ
・ コンキオリン ０．１０ｇ
・ オウバクエキス ０．１０ｇ
・ カミツレエキス ０．１０ｇ
・ 香料 ０．０５ｇ
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）

【0065】

〔配合例３〕
下記組成の美容液を常法により製造した。
・ グリチルリチン酸ジカリウム ０．０８ｇ
（試験例１で用いたものと同じ）
・ ユキノシタ抽出物（製造例１） ０．０３ｇ
・ カミツレエキス ０．１ｇ
・ ニンジンエキス ０．１ｇ
・ キサンタンガム ０．３ｇ
・ ヒドロキシエチルセルロース ０．１ｇ
・ カルボキシビニルポリマー ０．１ｇ
・ １，３－ブチレングリコール ４．０ｇ
・ グリセリン ２．０ｇ
・ 水酸化カリウム ０．２５ｇ
・ 香料 ０．０１ｇ
・ 防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル） ０．１５ｇ
・ エタノール ２．０ｇ
・ 精製水 残部（全量を１００ｇとする）