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特許7008920血漿カリクレイン阻害剤および遺伝性血管浮腫発作を予防するためのその使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2022-01-14
(45)【発行日】2022-01-25
(54)【発明の名称】血漿カリクレイン阻害剤および遺伝性血管浮腫発作を予防するためのその使用
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20220118BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20220118BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20220118BHJP
A61K 47/22 20060101ALI20220118BHJP
A61K 47/10 20060101ALI20220118BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20220118BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20220118BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 N ZNA
A61K47/02 ZMD
A61K47/12
A61K47/22
A61K47/10
A61K9/08
A61P9/00
【請求項の数】
14
(21)【出願番号】P 2017549388
(86)(22)【出願日】2016-03-30
(65)【公表番号】
(43)【公表日】2018-06-07
(86)【国際出願番号】 US2016024921
(87)【国際公開番号】W WO2016160926
(87)【国際公開日】2016-10-06
【審査請求日】2019-03-27
(31)【優先権主張番号】62/214,293
(32)【優先日】2015-09-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/140,289
(32)【優先日】2015-03-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】62/140,277
(32)【優先日】2015-03-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(73)【特許権者】
【識別番号】000002934
【氏名又は名称】武田薬品工業株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100114775
【弁理士】
【氏名又は名称】高岡 亮一
(74)【代理人】
【識別番号】100121511
【弁理士】
【氏名又は名称】小田 直
(74)【代理人】
【識別番号】100202751
【弁理士】
【氏名又は名称】岩堀 明代
(74)【代理人】
【識別番号】100208580
【弁理士】
【氏名又は名称】三好 玲奈
(74)【代理人】
【識別番号】100191086
【弁理士】
【氏名又は名称】高橋 香元
(72)【発明者】
【氏名】チユン，ヤン
(72)【発明者】
【氏名】アデルマン，ブルト
(72)【発明者】
【氏名】セクストン，ダニエル ジェイ．
【審査官】渡邊 倫子
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１４／１５２２３２（ＷＯ，Ａ２）
【文献】特表２０１４－５１５７６３（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２００６－５０１１６８（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１３／１８６７００（ＷＯ，Ａ１）
【文献】Ann Allergy Asthma Immunol，2014年，Vol.113，pp.460-466
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ ３９／００
Ａ６１Ｋ ４７／００
Ａ６１Ｋ ９／００
Ａ６１Ｐ ９／００
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
対象の遺伝性血管浮腫を治療するための、活性血漿カリクレインに結合する３００ｍｇの抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物であって、前記薬学的に許容される担体は、３０ｍＭの濃度のリン酸ナトリウム、クエン酸、５０ｍＭの濃度のヒスチジン、９０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムおよび０．０１％のＴｗｅｅｎ８０からなり、前記抗体は、配列番号１に記載の重鎖（ＨＣ）配列および配列番号２に記載の軽鎖（ＬＣ）配列を含み、前記医薬組成物は２週間ごとに１回または４週間ごとに１回前記対象に投与され、前記対象は前記抗体の投与前の１年間に少なくとも２回の遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）発作を経験しているヒトの患者である、医薬組成物。
【請求項2】
皮下に投与するための、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項3】
前記医薬組成物は、ｐＨ約６．０である、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項4】
前記医薬組成物は、最初に負荷投与期間のために、次いで維持期間のために投与し、前記負荷投与期間では、前記医薬組成物を毎週１回投与し、前記維持期間では前記抗体を２～４週間ごとに１回投与する、請求項１～３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項5】
その必要がある対象に遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）の発作を予防するかＨＡＥ発作率を低下させるための医薬の製造における、請求項１～３のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用。
【請求項6】
前記対象はＩ型またはＩＩ型遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）を有するヒトの患者である、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項7】
前記ヒトの患者は初回投与前の６ヶ月以内に少なくとも１回のＨＡＥ発作を有したものであるか、前記ヒトの患者は初回投与前の３ヶ月以内に少なくとも２回のＨＡＥ発作を有したものであるか、
前記ヒトの患者は初回投与前の３ヶ月以内に少なくとも９回のＨＡＥ発作を有したものである、請求項１～４および６のいずれか１項に記載の医薬組成物または請求項５に記載の使用。
【請求項8】
前記抗体を２週間ごとに前記対象に投与する、請求項１～４、６および７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項9】
前記抗体を４週間ごとに前記対象に投与する、請求項１～４、６および７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項10】
前記抗体の投与により前記対象の切断されたキニノーゲンを健康な対象に匹敵するレベルまで減少させる、請求項１～４および６～９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項11】
前記対象はＨＡＥを有するかその疑いまたはリスクのあるヒトの患者である、および／またはＨＡＥ発作を予防するかＨＡＥ発作率を低下させるために前記抗体を投与する、請求項１～４および８～１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項12】
前記負荷投与期間に前記抗体を３００ｍｇで前記対象に投与する、および／または前記負荷投与期間は２週間であり、前記抗体を０日目、７日目および１４日目に投与する、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項13】
前記維持期間は１０週間であり、前記抗体を２８日目、４２日目、５６日目、７０日目および８４日目に投与する、請求項４または１２に記載の医薬組成物。
【請求項14】
前記維持期間の後に、２～４週間ごとに１回、前記抗体を前記対象にさらに投与する、請求項４、１２、または１３に記載の医薬組成物。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
（関連出願の相互参照）
本出願は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）の下で、２０１５年３月３０日に出願された米国仮出願第６２／１４０，２７７号、２０１５年９月２４日に出願された米国仮出願第６２／２１４，２９３号および２０１５年３月３０日に出願された米国仮出願第６２／１４０，２８９号の利益を主張するものであり、その各開示内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）の下で、２０１５年３月３０日に出願された米国仮出願第６２／１４０，２７７号、２０１５年９月２４日に出願された米国仮出願第６２／２１４，２９３号および２０１５年３月３０日に出願された米国仮出願第６２／１４０，２８９号の利益を主張するものであり、その各開示内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0002】
血漿カリクレインは接触系のセリンプロテアーゼ成分であり、異なる炎症性疾患、心疾患、感染症（敗血症）および腫瘍疾患のための薬物標的候補である(Sainz I.M.ら, Thromb Haemost 98, 77-83, 2007)。この接触系は、異物面すなわち陰性荷電表面に接触した際に第ＸＩＩａ因子によって、あるいは内皮細胞表面でプロリルカルボキシペプチダーゼによって活性化される(Sainz I.M.ら, Thromb Haemost 98, 77-83, 2007)。血漿カリクレインの活性化は、第ＸＩＩ因子のそのフィードバック活性化により内因系凝固を増幅させ、かつ炎症誘発性ノナペプチドのブラジキニンの産生により炎症を促進させる。循環中の主要なキニノゲナーゼとして、血漿カリクレインは血管系におけるブラジキニンの産生に大きく寄与している。血漿カリクレインの主要な天然阻害剤であるＣ１インヒビタータンパク質（Ｃ１－ＩＮＨ）の遺伝的欠損により遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）が生じる。ＨＡＥを有する患者は、未知の誘因によって引き起こされることが多い疼痛性浮腫の急性発作に悩まされている(Zuraw B.L.ら, N Engl J Med 359, 1027-1036, 2008)。
【発明の概要】
【0003】
本開示は一つには、ヒト血漿カリクレインの活性型に結合する抗体であるＤＸ－２９３０の投与（例えば、２週間ごとに投与される３０ｍｇ、１００ｍｇ、３００ｍｇまたは４００ｍｇ）がヒトの患者におけるＨＡＥ発作の予防またはＨＡＥ発作率の低下において予期せぬ有効性を示したことを証明する臨床研究から得られた結果に基づいている。さらに、ＤＸ－２９３０治療は、ヒトに投与した際に用量を制限する毒性の証拠を示さなかった。全体として、ＤＸ－２９３０はＨＡＥ治療において高い有効性を示した最初の完全に特異的な血漿カリクレイン阻害剤であるため、本研究から得られた結果は予期せぬものであった。これは、血漿カリクレインが疾病病因の中心をなすものであることを実証している。
【0004】
従って、本開示の一態様は、ＨＡＥ発作を予防するかＨＡＥ（例えば、Ｉ型、ＩＩ型またはＩＩＩ型ＨＡＥ）発作率を低下させる方法であって、それを必要とする対象にヒト血漿カリクレインの活性型に結合する抗体（例えばＤＸ－２９３０）を有効量（例えば、約３０ｍｇ～４００ｍｇ、約１００ｍｇ～４００ｍｇ、約１００ｍｇ～３００ｍｇまたは約３００ｍｇ～４００ｍｇ）で投与する工程を含む方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、当該抗体を２～４週間ごとに少なくとも２回投与する。いくつかの実施形態では、当該抗体を２～４週間ごと（例えば、２週間または４週間ごと）に３００ｍｇまたは４００ｍｇで投与する。
【0005】
本明細書に記載されている方法のいずれか１つにおいて、当該抗体を皮下投与によって投与することができる。いくつかの実施形態では、当該対象は１年間に少なくとも２回のＨＡＥ発作（例えば、初回投与前の６ヶ月以内に少なくとも１回のＨＡＥ発作、初回投与前の３ヶ月以内に少なくとも２回のＨＡＥ発作または初回投与前の３ヶ月以内に少なくとも９回のＨＡＥ発作）を経験しているヒトの患者である。ＨＡＥはＩ型ＨＡＥであってもＩＩ型ＨＡＥであってもよい。例えば、本明細書に記載されている方法はＨＡＥの予防的治療のためのものである。
【0006】
本明細書に記載されている方法のいずれかで使用される抗体は、ＤＸ－２９３０と同じエピトープに結合するか活性ヒト血漿カリクレインに結合するためにＤＸ－２９３０と競合する抗体（例えば、完全長抗体または抗原結合断片）であってもよい。いくつかの実施形態では、当該抗体は同じ重鎖および軽鎖ＣＤＲを含む。一例では、当該抗体はＤＸ－２９３０である。本明細書に記載されている抗体のいずれか（例えばＤＸ－２９３０）を薬学的に許容される担体を含む医薬組成物として製剤化してもよい。いくつかの例では、当該医薬組成物は、リン酸ナトリウム、クエン酸、ヒスチジン、塩化ナトリウムおよびＴｗｅｅｎ８０を含む。一例では、当該抗体（例えばＤＸ－２９３０）を３０ｍＭのリン酸ナトリウム、８．６ｍＭのクエン酸、５０ｍＭのヒスチジン、９０ｍＭの塩化ナトリウムおよび０．０１％のＴｗｅｅｎ８０（ｐＨ６．０）中で製剤化する。
【0007】
さらに他の態様では、本開示は、ＨＡＥ（例えばＩ型、ＩＩ型またはＩＩＩ型）を治療する方法であって、それを必要とする対象にヒト血漿カリクレインの活性型に結合する抗体（例えばＤＸ－２９３０）を有効量（例えば、１００～４００ｍｇ、１００～３００ｍｇ、１５０ｍｇまたは３００ｍｇ）で投与する工程を含み、負荷投与期間（例えば、最初に少なくとも１週間などにわたって毎週投与）と、維持期間（例えば、その後に２～４週間ごとに投与）と、任意で追加期間とを有する投与レジメンでＤＸ－２９３０抗体を投与する方法を特徴とする。
【0008】
いくつかの実施形態では、当該抗体を負荷投与期間中に１００～３００ｍｇ（例えば１５０ｍｇまたは３００ｍｇ）で当該対象に投与する。負荷投与期間は２週間であってもよい。当該抗体を例えば１５０ｍｇまたは３００ｍｇで０日目、７日目および１４日目に投与してもよい。
【0009】
代わりまたは追加として、当該抗体を維持期間中に１００～３００ｍｇ（例えば１５０ｍｇまたは３００ｍｇ）で当該対象に投与する。維持期間は１０週間続いてもよい。当該抗体を２８日目、４２日目、５６日目、７０日目および８４日目に投与してもよい。
【0010】
本明細書に記載されている方法のいずれかにおいて、本方法は、当該抗体を維持期間後２～４週間ごと（例えば、２週間または４週間ごと）に１回当該対象に投与する工程をさらに含んでもよい。いくつかの例では、当該抗体を１００～４００ｍｇ（例えば１００ｍｇ～３００ｍｇ、例えば１５０ｍｇまたは３００ｍｇ）で投与する。
【0011】
本明細書に記載されている方法のいずれか１つのいくつかの実施形態では、当該抗体を皮下投与によって投与することができる。いくつかの実施形態では、当該対象はＨＡＥ発作に悩まされているかその疑いまたはリスクのあるヒトの患者である。例えば、本明細書に記載されている方法はＨＡＥの予防的治療のためのものである。当該対象は、治療前の１年間に少なくとも２回の発作（例えば、４週間の間に少なくとも１回の発作）を経験したヒトの患者であってもよい。いくつかの実施形態では、ＨＡＥ発作を予防するかＨＡＥ発作率を低下させるために当該抗体を投与する。
【0012】
いくつかの実施形態では、当該抗体（例えばＤＸ－２９３０）を最初に１、２または３週間にわたって毎週投与し、その後に２、３または４週間ごとに投与する。いくつかの実施形態では、当該抗体（例えばＤＸ－２９３０）をその後に１０週間にわたって２週間ごとに投与する。いくつかの実施形態では、当該対象は初回投与前に４週間の間に少なくとも１回の発作を有する。
【0013】
本明細書に記載されている方法のいずれかで使用される抗体は、ＤＸ－２９３０と同じエピトープに結合するか活性ヒト血漿カリクレインに結合するためにＤＸ－２９３０と競合する抗体であってもよい。いくつかの実施形態では、当該抗体は同じ重鎖および軽鎖ＣＤＲを含む。一例では、当該抗体はＤＸ－２９３０である。
【0014】
（ａ）ＨＡＥを治療する（例えば、ＨＡＥ発作を予防するかＨＡＥ発作率を低下させる）際に使用される医薬組成物であって、本明細書に記載されている抗カリクレイン抗体のいずれかと薬学的に許容される担体とを含み、本明細書に記載されている治療レジメンのいずれかに従って対象に投与される医薬組成物、および（ｂ）ＨＡＥの治療薬の製造のための当該医薬組成物の使用も本開示の範囲に含まれる。本明細書に記載されている治療レジメンに従い、意図される目的のために当該抗体の使用を実施することができる。
【0015】
本発明の１つ以上の実施形態の詳細を以下の「発明を実施するための形態」に記載する。本発明の他の特徴または利点は、いくつかの実施形態の以下の図面および詳細な説明から明らかになると共に、添付の特許請求の範囲からも明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【0016】
【図1】第１ｂ相試験におけるＨＡＥ患者の皮下投与後のＤＸ－２９３０血漿中薬物濃度を示す。
【図2】第１ｂ相試験から得られたＨＡＥ患者試料の蛍光発生（ｆｌｕｏｒｏｇｅｎｉｃ）活性アッセイを示す。
【図3】第１ｂ相試験から得られたＨＡＥ患者のＳＣＡＴ１６９血漿のウェスタンブロット分析である。
【図4】第１ｂ相試験から得られたＨＡＥ患者のクエン酸添加血漿のウェスタンブロット分析である。
【図5】第１ｂ相試験から得られたＨＡＥ患者のＦＸＩＩａによって生体外で活性化されたクエン酸添加血漿のウェスタンブロット分析である。
【図6】異なる投薬コホートにおける患者の一次有効性評価期間を示す。Ａ．：３００ｍｇのコホート。Ｂ．：４００ｍｇのコホート。赤い棒は有効性について評価される間隔を示す。
【図7】３００ｍｇ、４００ｍｇ、組み合わせ（３００ｍｇおよび４００ｍｇ）またはプラセボで治療した患者におけるＨＡＥ発作率の低下を示す。ベースラインは投薬前の最近３ヶ月間の過去に生じたＨＡＥ発作として定めた。当該データは、最近３ヶ月間に２回以上のベースライン発作率を有する患者を含む。８～５０日目の発作率はベースライン率に対して補正しなかった。分散分析（ベースライン発作率を共変量とした）による混合モデル反復測定に基づき、かつポアソン分布を推定して、プラセボよりも高いＨＡＥ発作率の低下率（％）およびｐ値を計算した。
【図8】プラセボで治療した対象におけるＨＡＥ発作の発生率を示す。Ｘ軸は試験日数を示す。
【図9】３０ｍｇの投与後の平均ＤＸ－２９３０濃度およびＨＡＥ発作の発生率を示す。
【図10】１００ｍｇの投与後の平均ＤＸ－２９３０濃度およびＨＡＥ発作の発生率を示す。
【図11】３００ｍｇの投与後の平均ＤＸ－２９３０濃度およびＨＡＥ発作の発生率を示す。
【図12】４００ｍｇの投与後の平均ＤＸ－２９３０濃度およびＨＡＥ発作の発生率を示す。１回しか用量を摂取しなかった１人の患者を除外する（平均薬物動態曲線を導出するため）。
【図13】３ヶ月間に９回以上の発作の過去の発作率を有する患者におけるＤＸ－２９３０濃度およびＨＡＥ発作を示す。Ａ．：プラセボ患者。Ｂ．：３００ｍｇで治療した患者およびＣ．～Ｆ．：４００ｍｇで治療した患者。
【図14】治療期間の延長または休薬期間がその後に続く場合もある、負荷投与期間および維持期間を含む例示的な投薬レジメンを示す。
【発明を実施するための形態】
【0017】
定義
便宜上、本発明のさらなる説明の前に、本明細書、実施例および添付の特許請求の範囲で用いられている特定の用語についてここで定義する。他の用語については本明細書中に出てきた際に定義する。
便宜上、本発明のさらなる説明の前に、本明細書、実施例および添付の特許請求の範囲で用いられている特定の用語についてここで定義する。他の用語については本明細書中に出てきた際に定義する。
【0018】
単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａ）」および「前記（ｔｈｅ）」は、その文脈が明らかに別の意を示していない限り複数の指示対象を含む。
【0019】
「抗体」という用語は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変ドメイン（可変領域）または免疫グロブリン可変ドメイン（可変領域）配列を含むタンパク質を指す。例えば、抗体は、重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書ではＶＨまたはＨＶと略す）と、軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書ではＶＬまたはＬＶと略す）とを含んでもよい。別の例では、抗体は２つの重（Ｈ）鎖可変領域と２つの軽（Ｌ）鎖可変領域とを含む。「抗体」という用語は、抗体の抗原結合断片（例えば、一本鎖抗体、ＦａｂおよびｓＦａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖおよびドメイン抗体（ｄＡｂ）断片(de Wildtら, Eur J Immunol. 1996; 26(3):629-39))ならびに完全抗体を包含する。抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭ（ならびにそれらのサブタイプ）の構造的特徴を有し得る。抗体は任意の供給源からのものであってもよいが、霊長類（ヒトおよび非ヒト霊長類）ならびに霊長類化抗体が好ましい。
【0020】
ＶＨおよびＶＬ領域は、「フレームワーク領域」（「ＦＲ」）と呼ばれるより保存された領域が散在する「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細かく分けることができる。フレームワーク領域およびＣＤＲの程度は定義されている（Kabat, E.A.ら (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242, およびChothia, C.ら (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917を参照）。本明細書ではカバットの定義が使用されている。ＶＨおよびＶＬはそれぞれ、典型的にアミノ末端からカルボキシ末端に向かってＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配列された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなる。
【0021】
本明細書で使用される「免疫グロブリン可変ドメイン配列」とは、１つ以上のＣＤＲ領域が抗原結合部位に適した立体構造に配置されるように免疫グロブリン可変ドメインの構造を形成することができるアミノ酸配列を指す。例えば、その配列は天然に生じる可変ドメインのアミノ酸配列の全てまたは一部を含んでいてもよい。例えば、当該配列は１つ、２つまたはそれ以上のＮ末端またはＣ端末アミノ酸、内部アミノ酸を含んでいなくてもよく、１つ以上の挿入または追加の末端アミノ酸を含んでいてもよく、あるいは他の変化を含んでいてもよい。一実施形態では、免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むポリペプチドは別の免疫グロブリン可変ドメイン配列と結合して抗原結合部位、例えば血漿カリクレインと優先的に相互作用する構造を形成することができる。
【0022】
抗体のＶＨ鎖またはＶＬ鎖は、重鎖または軽鎖の定常領域の全てまたは一部をさらに含み、それにより免疫グロブリン重鎖または軽鎖をそれぞれ形成することができる。一実施形態では、抗体は２本の免疫グロブリン重鎖および２本の免疫グロブリン軽鎖からなる四量体であり、この免疫グロブリン重鎖および軽鎖は、例えばジスルフィド結合によって相互接続されている。ＩｇＧでは、重鎖定常領域は３つの免疫グロブリンドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。軽鎖定常領域はＣＬドメインを含む。重鎖および軽鎖の可変領域は抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は典型的に、免疫系の各種細胞（例えばエフェクター細胞）および古典的な補体系の第１成分（Ｃｌｑ）を含む宿主組織または因子への抗体の結合を媒介する。免疫グロブリン軽鎖はκ型であってもλ型であってもよい。一実施形態では、抗体はグリコシル化されている。抗体は抗体依存性細胞傷害および／または補体媒介性細胞傷害に関して機能的であってもよい。
【0023】
抗体の１つ以上の領域はヒト型または事実上ヒト型であってもよい。例えば可変領域の１つ以上がヒト型または事実上ヒト型であってもよい。例えばＣＤＲの１つ以上、例えば、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、ＨＣ－ＣＤＲ３、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２および／またはＬＣ－ＣＤＲ３がヒト型であってもよい。軽鎖（ＬＣ）および／または重鎖（ＨＣ）ＣＤＲのそれぞれがヒト型であってもよい。ＨＣ－ＣＤＲ３がヒト型であってもよい。フレームワーク領域の１つ以上、例えばＨＣおよび／またはＬＣのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３および／またはＦＲ４がヒト型であってもよい。例えばＦｃ領域がヒト型であってもよい。一実施形態では、全てのフレームワーク領域がヒト型であり、例えばヒトの体細胞、例えば免疫グロブリンを産生する造血細胞または非造血細胞由来である。一実施形態では、ヒトの配列は、例えば生殖系列核酸によってコードされる生殖系列配列である。一実施形態では、選択されたＦａｂのフレームワーク（ＦＲ）残基を最も類似する霊長類の生殖系列遺伝子、特にヒトの生殖系列遺伝子中の対応する残基のアミノ酸型に変換することができる。定常領域の１つ以上はヒト型または事実上ヒト型であってもよい。例えば、免疫グロブリン可変ドメイン、定常領域すなわち定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３および／またはＣＬ１）の少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９２、９５、９８または１００％あるいは抗体全体がヒト型または事実上ヒト型であってもよい。
【0024】
抗体の全てまたは一部を免疫グロブリン遺伝子またはそのセグメントによってコードすることができる。例示的なヒト免疫グロブリン遺伝子としては、κ、λ、α（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、γ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、δ、εおよびμ定常領域遺伝子ならびに多くの免疫グロブリン可変領域遺伝子が挙げられる。完全長免疫グロブリン「軽鎖」（約２５ＫＤａまたは約２１４個のアミノ酸）は、ＮＨ２末端（約１１０個のアミノ酸）の可変領域遺伝子およびＣＯＯＨ末端のκもしくはλ定常領域遺伝子によってコードされる。完全長免疫グロブリン「重鎖」（約５０ＫＤａまたは約４４６個のアミノ酸）は同様に可変領域の遺伝子（約１１６個のアミノ酸）および他の上記定常領域遺伝子のうちの１つ、例えばγ（約３３０個のアミノ酸をコードする）によってコードされる。ＨＣ－ＣＤＲ３は約３個のアミノ酸残基から３５個超のアミノ酸残基まで変動するため、ヒトＨＣの長さは大きくに変動する。
【0025】
完全長抗体の「抗原結合断片」という用語は、目的の標的に特異的に結合する能力を保持する完全長抗体の１つ以上の断片を指す。完全長抗体の「抗原結合断片」という用語に包含され、かつ機能性を保持する結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、すなわちＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価の断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、すなわちヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって結合された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片(Wardら, (1989) Nature 341:544-546)、および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインすなわちＶＬおよびＶＨは別個の遺伝子によってコードされるが、組換え方法を用いて、ＶＬおよびＶＨ領域が対になって単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている一価の分子を形成する単一のタンパク質鎖として作製することができる合成リンカーでそれらを連結することができる。例えば、米国特許第５，２６０，２０３号、第４，９４６，７７８号および第４，８８１，１７５号ならびにBirdら (1988) Science 242:423-426およびHustonら (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883を参照されたい。
【0026】
抗体断片は、当業者に知られている従来の技術を含む任意の適当な技術を用いて得ることができる。「単一特異性抗体」という用語は、特定の標的、例えばエピトープに対する単一の結合特異性および親和性を示す抗体を指す。この用語は、「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」を含み、本明細書で使用されるその言葉は、抗体の産生方法に関係なく、単一分子組成物の抗体またはその断片の調製物を指す。
【0027】
抗体は、結合特性が実質的に保持される限り、フレームワーク領域内の１つ以上の非生殖系列アミノ酸を当該抗体の対応する生殖系列アミノ酸に復帰突然変異させることにより「生殖系列化（ｇｅｒｍｌｉｎｅｄ）」される。
【0028】
阻害定数（Ｋｉ）は阻害剤の効力の尺度を提供する。この定数は酵素活性を半分まで低下させるのに必要な阻害剤の濃度であり、酵素または基質濃度に依存しない。見かけのＫｉ（Ｋｉ，ａｐｐ）は、異なる濃度の阻害剤（例えば阻害性結合タンパク質）の反応（例えば酵素活性）の程度に対する阻害効果を測定することによって異なる基質濃度において得られ、阻害剤濃度の関数としての擬一次速度定数の変化をモリソン式（式１）に当てはめることにより見かけのＫｉ値の推定を得る。Ｋｉは、基質濃度に対するＫｉ，ａｐｐのプロットの線形回帰分析から引き出されるｙ切片から得られる。
式１
（式中、ｖ＝測定された速度、ｖ０＝阻害剤の非存在下での速度、Ｋｉ，ａｐｐ＝見かけの阻害定数、Ｉ＝総阻害剤濃度、Ｅ＝総酵素濃度）。
【数1】
（式中、ｖ＝測定された速度、ｖ０＝阻害剤の非存在下での速度、Ｋｉ，ａｐｐ＝見かけの阻害定数、Ｉ＝総阻害剤濃度、Ｅ＝総酵素濃度）。
【0029】
本明細書で使用される「結合親和性」とは、見かけの結合定数すなわちＫＡを指す。ＫＡは解離定数（ＫＤ）の逆数である。例えば結合抗体は、特定の標的分子（例えば血漿カリクレイン）に対して少なくとも１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０および１０１１Ｍ－１の結合親和性を有していてもよい。第２の標的と比べて第１の標的に対する結合抗体のより高い親和結合は、第２の標的に結合するためのＫＡ（または数値ＫＤ）よりも高い第１の標的に結合するためのＫＡ（またはより小さい数値ＫＤ）によって示すことができる。そのような場合、結合抗体は、第２の標的（例えば、第２の立体構造の同じタンパク質またはその模倣物あるいは第２のタンパク質）と比べて第１の標的（例えば、第１の立体構造のタンパク質またはその模倣物）に対して特異性を有する。結合親和性（例えば、特異性または他の比較物）における差は、少なくとも１．５、２、３、４、５、１０、１５、２０、３７．５、５０、７０、８０、９１、１００、５００、１０００、１０，０００または１０５倍であってもよい。
【0030】
結合親和性は、平衡透析、平衡結合、ゲル濾過、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴または分光法（例えば蛍光アッセイを用いる）などの様々な方法によって決定することができる。結合親和性を評価するための例示的な条件は、ＨＢＳ－Ｐ緩衝液（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．００５％（ｖ／ｖ）の界面活性剤Ｐ２０）中である。これらの技術を使用して、結合タンパク質（または標的）濃度の関数として結合されている結合タンパク質および遊離している結合タンパク質の濃度を測定することができる。以下の方程式により、結合されている結合タンパク質（［Ｂｏｕｎｄ］）の濃度は、遊離している結合タンパク質（［Ｆｒｅｅ］）の濃度および標的上の結合タンパク質の結合部位の濃度に関係している。
［Ｂｏｕｎｄ］＝Ｎ・［Ｆｒｅｅ］／（（１／ＫＡ）＋［Ｆｒｅｅ］）
（式中、（Ｎ）は、標的分子当たりの結合部位の数である）
［Ｂｏｕｎｄ］＝Ｎ・［Ｆｒｅｅ］／（（１／ＫＡ）＋［Ｆｒｅｅ］）
（式中、（Ｎ）は、標的分子当たりの結合部位の数である）
【0031】
但し、ＫＡの正確な決定を行うことは必ずしも必要ではなく、その理由は、例えばＥＬＩＳＡまたはＦＡＣＳ分析などの方法を用いて測定される親和性の定量的測定値を得るだけで十分な場合もあり、それはＫＡに比例するため、より高い親和性が例えば２倍より高いか否かの決定などの比較のためにそれを使用して、例えば機能的アッセイ、例えば生体外または生体内アッセイにおける活性によって親和性の定性的測定値を得るか親和性の推論を得ることができるからである。
【0032】
「結合抗体」（または本明細書において同義で使用される「結合タンパク質」）という用語は、標的分子と相互作用することができる抗体を指す。この用語は「リガンド」と同義で使用される。「血漿カリクレイン結合抗体」は、血漿カリクレインと相互作用する（例えば結合する）ことができる抗体を指し、特に血漿カリクレインと優先的または特異的に相互作用し、かつ／またはそれを阻害する抗体を含む。抗体は、当該抗体の非存在下および同じ条件下での血漿カリクレインの活性と比較して血漿カリクレインの活性の低下を生じている場合、血漿カリクレインを阻害している。
【0033】
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されている置換である。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが当該技術分野において定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、極性無電荷側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分岐鎖側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が挙げられる。
【0034】
結合タンパク質の１つ以上のフレームワークおよび／またはＣＤＲアミノ酸残基は、本明細書に記載されている結合タンパク質に対して１つ以上の突然変異（例えば、置換（例えば、保存的置換または非必須アミノ酸の置換）、挿入または欠失）を含むことができる。血漿カリクレイン結合タンパク質は、本明細書に記載されている結合タンパク質に対して、突然変異（例えば、置換（例えば、保存的置換または非必須アミノ酸の置換）、挿入または欠失）（例えば、少なくとも１、２、３または４つおよび／または１５、１２、１０、９、８、７、６、５、４、３または２つ未満の突然変異）、例えばタンパク質機能に対して大きな影響を有しない突然変異を有していてもよい。突然変異はフレームワーク領域、ＣＤＲおよび／または定常領域に存在していてもよい。いくつかの実施形態では、突然変異はフレームワーク領域に存在している。いくつかの実施形態では、突然変異はＣＤＲに存在している。いくつかの実施形態では、突然変異は定常領域に存在している。特定の置換が許容されるか否か、すなわち結合活性などの生物学的特性に悪影響を与えるか否かを、例えばその突然変異が保存的であるか否かを評価することにより、あるいはBowie,ら (1990) Science 247:1306-1310の方法によって予測することができる。
【0035】
「事実上ヒト型」の免疫グロブリン可変領域は、免疫グロブリン可変領域が正常なヒトにおいて免疫原性応答を誘発しないような十分な数のヒトフレームワークアミノ酸位置を含む免疫グロブリン可変領域である。「事実上ヒト型」の抗体は、当該抗体が正常なヒトにおいて免疫原性応答を誘発しないような十分な数のヒトアミノ酸位置を含む抗体である。
【0036】
「エピトープ」とは、結合タンパク質（例えば、Ｆａｂまたは完全長抗体などの抗体）によって結合される標的化合物上の部位を指す。標的化合物がタンパク質である場合、当該部位は完全にアミノ酸成分からなるか、完全にタンパク質のアミノ酸の化学修飾部分（例えばグリコシル部分）からなるか、あるいはそれらの組み合わせからなっていてもよい。重複するエピトープは、少なくとも１つの一般的なアミノ酸残基、グリコシル基、リン酸基、硫酸基または他の分子的特徴を含む。
【0037】
第１の結合抗体は、第１の結合抗体が第２の結合抗体が結合する標的化合物上の同じ部位に結合するか、第２の結合抗体が結合する部位と重複する（例えば、アミノ酸配列または他の分子的特徴（例えばグリコシル基、リン酸基または硫酸基）に関して、例えば５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％重複する）部位に結合する場合に、第２の結合抗体と「同じエピトープに結合する」。
【0038】
第１の結合抗体は、第１の結合抗体のそのエピトープへの結合によりそのエピトープに結合する第２の結合抗体の量を（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれ以上）減少させる場合に、第２の結合抗体と「結合のために競合する」。この競合は直接的（例えば、第１の結合抗体は第２の結合抗体によって結合されるエピトープと同じであるかそれに重複するエピトープに結合する）、または間接的（例えば、第１の結合抗体のそのエピトープへの結合により、第２の結合抗体がそのエピトープに結合する能力を低下させる標的化合物の立体構造変化を引き起こす）であってもよい。
【0039】
２つの配列間の「相同性」または「配列同一性」の計算（これらの用語は本明細書において同義で使用される）は以下のように行う。最適な比較のためにこれらの配列をアラインメントする（例えば、最適なアラインメントのために第１および第２のアミノ酸または核酸配列の一方または両方にギャップを導入することができ、比較のために非相同な配列を無視することができる）。ギャップペナルティ＝１２、ギャップ伸長ペナルティ＝４およびフレームシフトギャップペナルティ＝５にして、ＢＬＯＳＳＵＭ６２スコア行列を含むＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログラムを用いて、最適なアラインメントを最良のスコアとして決定する。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置にあるアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第１の配列中の位置が第２の配列中の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占められている場合、当該分子はその位置において同一である（本明細書で使用されるアミノ酸または核酸の「同一性」はアミノ酸または核酸の「相同性」に相当する）。２つの配列間の同一性の割合は、当該配列によって共有される同一の位置の数の関数である。
【0040】
好ましい実施形態では、比較のためにアライメントされる参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、さらにより好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％または１００％である。例えば、参照配列は免疫グロブリン可変ドメイン配列の長さであってもよい。
【0041】
「ヒト化」免疫グロブリン可変領域は、免疫グロブリン可変領域が正常なヒトにおいて免疫原性応答を誘発しないように十分な数のヒトフレームワークアミノ酸位置を含むように修飾された免疫グロブリン可変領域である。「ヒト化」免疫グロブリンの説明としては、例えば、米国特許第６，４０７，２１３号および米国特許第５，６９３，７６２号が挙げられる。
【0042】
「単離された」抗体とは、単離された抗体を得ることができる天然の試料の少なくとも１つの成分の少なくとも９０％から取り出された抗体を指す。抗体は、目的の生物種または生物種集団が重量／重量基準で少なくとも５、１０、２５、５０、７５、８０、９０、９２、９５、９８または９９％純粋であれば、「少なくとも」ある程度の純度のものであり得る。
【0043】
本主題の方法によって治療される「患者」、「対象」または「宿主」（これらの用語は同義で使用される）は、ヒトまたは非ヒト動物のどちらを意味してもよい。
【0044】
「プレカリクレイン」および「プレ血漿カリクレイン」という用語は本明細書において同義で使用され、プレカリクレインとしても知られている活性血漿カリクレイン酵素前駆体を指す。
【0045】
本明細書で使用される「実質的に同一の」（または「実質的に相同な」）という用語は、第１および第２のアミノ酸または核酸配列が同様の活性、例えば、結合活性、結合優先度（binding preference）または生物活性を有する（またはそれらを有するタンパク質をコードする）ように、第２のアミノ酸または核酸配列と同一または同等の（例えば同様の側鎖、例えば保存アミノ酸置換を有する）アミノ酸残基またはヌクレオチドを十分な数で含む第１のアミノ酸または核酸配列を指すように本明細書で使用される。抗体の場合、第２の抗体は同じ特異性を有し、かつ同じ抗原に対して少なくとも５０％、少なくとも２５％または少なくとも１０％の親和性を有する。
【0046】
本明細書に開示されている配列と同様または相同な（例えば、少なくとも約８５％の配列同一性の）配列も本出願の一部である。いくつかの実施形態では、配列同一性は約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上であってもよい。いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合抗体は、本明細書に記載されている抗体と約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有していてもよい。いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合抗体は、ＨＣおよび／またはＬＣフレームワーク領域（例えば、ＨＣおよび／またはＬＣ－ＦＲ１、２、３および／または４）において、本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）と約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有していてもよい。いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合抗体は、ＨＣおよび／またはＬＣ－ＣＤＲ（例えば、ＨＣおよび／またはＬＣ－ＣＤＲ１、２および／または３）において、本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）と約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有していてもよい。いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合抗体は、定常領域（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３および／またはＣＬ１）において、本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）と約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有していてもよい。
【0047】
また、実質的な同一性は、核酸セグメントが選択的ハイブリダイゼーション条件（例えば、高ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件）下で相補鎖とハイブリダイズする場合に存在する。核酸は全細胞または細胞溶解物として、あるいは部分的に精製された形態または実質的に純粋な形態として存在してもよい。
【0048】
統計的有意性は、あらゆる当業者に知られている方法によって決定することができる。例示的な統計的検定としては、ステューデントｔ検定、ノンパラメトリックなマン・ホイットニーのＵ検定およびノンパラメトリックなウィルコクソンの統計的検定が挙げられる。いくつかの統計的に有意な関係のｐ値は０．０５または０．０２未満である。特定の結合タンパク質は、例えば統計的に有意な特異性または結合における差（例えば、ｐ値＜０．０５または０．０２）を示す場合がある。例えば２つの状態の間の識別可能な定性的または定量的差を示す「誘発する」、「阻害する」、「増強する」、「上昇させる」、「増加させる」、「減少させる」などの用語は、２つの状態の間の差、例えば統計的有意差を指してもよい。
【0049】
「治療的に有効な投与量」は、測定可能なパラメーター、例えば血漿カリクレインの活性を未治療の対象に対して統計的に有意な程度または少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、さらにより好ましくは少なくとも約６０％、なおより好ましくは少なくとも約８０％調節することが好ましい。測定可能なパラメーター、例えば疾患関連パラメーターを調節する化合物の能力は、ヒトの疾患および病気における有効性を予測する動物モデル系で評価することができる。あるいは、組成物のこの特性は、生体外でパラメーターを調節する化合物の能力を調べることにより評価することができる。
【0050】
本明細書で使用される「治療する」という用語は、疾患、疾患の症状または疾患に対する素因を治療する、治癒させる、軽減させる、緩和させる、変化させる、修復する、寛解させる、改善するかそれに影響を及ぼす目的で、アレルギー性疾患、アレルギー性疾患の症状またはアレルギー性疾患に対する素因を有する対象に１種以上の活性剤を含む組成物を施用または投与することを指す。「予防的治療（preventive treatment）」としても知られている「予防的治療（prophylactic treatment）」は、人を保護すること、または既に曝露されているか今後曝され得る疾患のリスクを減らすことを目指す治療を指す。
【0051】
対象において疾患を「予防する」という用語は、当該疾患の少なくとも１つの症状が予防されるように当該対象に薬物治療を行うこと（例えば薬物を投与すること）、すなわち宿主が望ましくない病気を発症するのを保護するように、望ましくない病気（例えば、宿主動物の疾患または他の望ましくない状態）の臨床的発現前に投与を行うことを指す。また、疾患を「予防する」ことを「予防法」または「予防的治療」と呼んでもよい。
【0052】
「予防的有効量」とは、所望の予防的結果を達成するのに必要な投与量および期間での有効量を指す。典型的には、対象において疾患の前または初期段階で予防的用量が使用されるため、予防的有効量は治療的有効量よりも少なくなる。
【0053】
血漿カリクレインに特異的な抗体
本明細書に記載されている方法で使用される血漿カリクレイン結合抗体は、完全長（例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤおよびＩｇＥ）であってもよく、あるいは、抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２またはｓｃＦｖ断片のみを含んでいてもよい。当該結合抗体は、２本の免疫グロブリン重鎖および２本の免疫グロブリン軽鎖を含んでいても一本鎖抗体であってもよい。血漿カリクレイン結合抗体は、ヒト化抗体、ＣＤＲ移植抗体、キメラ抗体、脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄ）抗体または生体外で産生された抗体などの組換えタンパク質であってもよく、かつ任意でヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の定常領域を含んでいてもよい。一実施形態では、血漿カリクレイン結合抗体はモノクローナル抗体である。
本明細書に記載されている方法で使用される血漿カリクレイン結合抗体は、完全長（例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤおよびＩｇＥ）であってもよく、あるいは、抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２またはｓｃＦｖ断片のみを含んでいてもよい。当該結合抗体は、２本の免疫グロブリン重鎖および２本の免疫グロブリン軽鎖を含んでいても一本鎖抗体であってもよい。血漿カリクレイン結合抗体は、ヒト化抗体、ＣＤＲ移植抗体、キメラ抗体、脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄ）抗体または生体外で産生された抗体などの組換えタンパク質であってもよく、かつ任意でヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の定常領域を含んでいてもよい。一実施形態では、血漿カリクレイン結合抗体はモノクローナル抗体である。
【0054】
一態様では、本開示は、血漿カリクレイン（例えば、ヒト血漿カリクレインおよび／またはマウスカリクレイン）に結合し、かつ少なくとも１つの免疫グロブリン可変領域を含む抗体（例えば、単離された抗体）を特徴とする。例えば、当該抗体は、重鎖（ＨＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列および／または軽鎖（ＬＣ）免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む。一実施形態では、当該抗体は、血漿カリクレイン、例えばヒト血漿カリクレインおよび／またはマウスカリクレインに結合して阻害する。
【0055】
当該抗体は、以下の特性：（ａ）ヒトＣＤＲまたはヒトフレームワーク領域、（ｂ）本明細書に記載されているＨＣ可変領域のＣＤＲと少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％同一の１つ以上（例えば、１、２または３つの）ＣＤＲを含むＨＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列、（ｃ）本明細書に記載されているＬＣ可変ドメインのＣＤＲと少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％同一の１つ以上（例えば、１、２または３つの）ＣＤＲを含むＬＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列、（ｄ）本明細書に記載されているＬＣ可変ドメインと少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％同一である（例えば、全体あるいはフレームワーク領域またはＣＤＲにおいて）ＬＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列、（ｅ）本明細書に記載されているＨＣ可変ドメインと少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％同一である（例えば、全体あるいはフレームワーク領域またはＣＤＲにおいて）ＨＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列、（ｆ）本明細書に記載されている抗体によって結合されるエピトープに結合するか本明細書に記載されている抗体と結合のために競合する抗体、（ｇ）霊長類ＣＤＲまたは霊長類フレームワーク領域、（ｈ）本明細書に記載されているＨＣ可変ドメインのＣＤＲ１とは少なくとも１つのアミノ酸であって、多くても２または３つ以下のアミノ酸だけ異なるＣＤＲ１を含むＨＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列、（ｉ）本明細書に記載されているＨＣ可変ドメインのＣＤＲ２とは少なくとも１つのアミノ酸であって、多くても２、３、４、５、６、７または８つのアミノ酸だけ異なるＣＤＲ２を含むＨＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列、（ｊ）本明細書に記載されているＨＣ可変ドメインのＣＤＲ３とは少なくとも１つのアミノ酸であって、多くても２、３、４、５または６つのアミノ酸だけ異なるＣＤＲ３を含むＨＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列、（ｋ）本明細書に記載されているＬＣ可変ドメインのＣＤＲ１とは少なくとも１つのアミノ酸であって、多くても２、３、４または５つのアミノ酸だけ異なるＣＤＲ１を含むＬＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列、（ｌ）本明細書に記載されているＬＣ可変ドメインのＣＤＲ２とは少なくとも１つのアミノ酸であって、多くても２、３または４つのアミノ酸だけ異なるＣＤＲ２を含むＬＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列、（ｍ）本明細書に記載されているＬＣ可変領域のＣＤＲ３とは少なくとも１つのアミノ酸であって、多くても２、３、４または５つのアミノ酸だけ異なるＣＤＲ３を含むＬＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列、（ｎ）本明細書に記載されているＬＣ可変ドメインとは少なくとも１つのアミノ酸であって、多くても２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸だけ異なる（例えば、全体あるいはフレームワーク領域またはＣＤＲにおいて）ＬＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列、および（ｏ）本明細書に記載されているＨＣ可変領域とは少なくとも１つのアミノ酸であって、多くても２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸だけ異なる（例えば、全体あるいはフレームワーク領域またはＣＤＲにおいて）ＨＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列のうちの１つ以上を含むことができる。
【0056】
当該血漿カリクレイン結合タンパク質は単離された（例えば、他のタンパク質を少なくとも７０、８０、９０、９５または９９％含まない）抗体であってもよい。いくつかの実施形態では、当該血漿カリクレイン結合抗体またはその組成物は、当該血漿カリクレイン結合抗体と比較して不活性または部分的に活性な（例えば、５０００ｎＭ以上のＫｉ，ａｐｐで血漿カリクレインに結合する）抗体切断断片（例えばＤＸ－２９３０）から単離されている。例えば、当該血漿カリクレイン結合抗体はそのような抗体切断断片を少なくとも７０％含まず、他の実施形態では当該結合抗体は不活性または部分的に活性な抗体切断断片を少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％またはさらには１００％含まない。
【0057】
当該血漿カリクレイン結合抗体は、血漿カリクレイン（例えばヒト血漿カリクレイン）をさらに阻害してもよい。
【0058】
いくつかの実施形態では、当該血漿カリクレイン結合抗体は、プレカリクレイン（例えば、ヒトプレカリクレインおよび／またはマウスプレカリクレイン）に結合しないが、血漿カリクレイン（例えば、ヒト血漿カリクレインおよび／またはマウスカリクレイン）の活性型に結合する。
【0059】
特定の実施形態では、当該抗体は、血漿カリクレインまたはその断片の触媒ドメインの活性部位またはその近くで結合するか、血漿カリクレインの活性部位と重複するエピトープに結合する。
【0060】
いくつかの態様では、当該抗体は同じエピトープに結合するか、本明細書に記載されている抗体と結合のために競合する。
【0061】
当該抗体は少なくとも１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０および１０１１Ｍ－１の結合親和性で血漿カリクレイン（例えばヒト血漿カリクレイン）に結合することができる。一実施形態では、当該抗体は１×１０－３、５×１０－４ｓ－１または１×１０－４ｓ－１よりも遅いＫｏｆｆでヒト血漿カリクレインに結合する。一実施形態では、当該抗体は１×１０２、１×１０３または５×１０３Ｍ－１ｓ－１よりも速いＫｏｎでヒト血漿カリクレインに結合する。一実施形態では、当該抗体は血漿カリクレインに結合するが、組織カリクレインおよび／または血漿プレカリクレインには結合しない（例えば、当該抗体は血漿カリクレインに結合するほど有効には組織カリクレインおよび／または血漿プレカリクレインに結合しない（例えば、陰性対照と比較した場合、例えば５、１０、５０、１００または１０００倍少なく結合するか全く結合しない））。
【0062】
一実施形態では、当該抗体は、例えば１０－５、１０－６、１０－７、１０－８、１０－９および１０－１０Ｍ未満のＫｉでヒト血漿カリクレインの活性を阻害する。当該抗体は、例えば１００ｎＭ、１０ｎＭ、１、０．５または０．２ｎＭ未満のＩＣ５０を有することができる。例えば、当該抗体は、血漿カリクレインの活性ならびに（例えば第ＸＩＩ因子からの）第ＸＩＩａ因子および／または（例えば高分子量キニノーゲン（ＨＭＷＫ）からの）ブラジキニンの産生を調節してもよい。当該抗体は、血漿カリクレインの活性および／または（例えば第ＸＩＩ因子からの）第ＸＩＩａ因子および／または（例えば高分子量キニノーゲン（ＨＭＷＫ）からの）ブラジキニンの産生を阻害してもよい。当該抗体のヒト血漿カリクレインとの親和性は、１００ｎｍ未満、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満のＫＤによって特徴づけることができる。一実施形態では、当該抗体は血漿カリクレインを阻害するが組織カリクレインを阻害しない（例えば、当該抗体は血漿カリクレインを阻害するほど有効には組織カリクレインを阻害しない（例えば陰性対照と比較した場合、例えば５、１０、５０、１００または１０００倍少なく阻害するか全く阻害しない））。
【0063】
いくつかの実施形態では、当該抗体は、１０００、５００、１００、５、１、０．５または０．２ｎＭ未満の見かけの阻害定数（Ｋｉ，ａｐｐ）を有する。
【0064】
血漿カリクレイン結合抗体は、単一のポリペプチド（例えばｓｃＦｖ）に含まれるか異なるポリペプチド（例えばＩｇＧまたはＦａｂ）上にそれらのＨＣおよびＬＣ可変ドメイン配列を有していてもよい。
【0065】
一実施形態では、ＨＣおよびＬＣ可変領域ドメイン配列は同じポリペプチド鎖の構成要素である。別の実施形態では、ＨＣおよびＬＣ可変領域ドメイン配列は異なるポリペプチド鎖の構成要素である。例えば、当該抗体はＩｇＧ、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４である。当該抗体は可溶性Ｆａｂであってもよい。他の実施形態では、当該抗体は、Ｆａｂ２’、ｓｃＦｖ、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、ｓｃＦｖ：：Ｆｃ融合体、Ｆａｂ：：ＨＳＡ融合体、ＨＳＡ：：Ｆａｂ融合体、Ｆａｂ：：ＨＳＡ：：Ｆａｂ融合体または本明細書中の結合タンパク質の１種の抗原結合部位を含む他の分子を含む。これらのＦａｂのＶＨおよびＶＬ領域は、ＩｇＧ、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆａｂ２’、ｓｃＦｖ、ペグ化Ｆａｂ、ペグ化ｓｃＦｖ、ペグ化Ｆａｂ２、ＶＨ：：ＣＨ１：：ＨＳＡ＋ＬＣ、ＨＳＡ：：ＶＨ：：ＣＨ１＋ＬＣ、ＬＣ：：ＨＳＡ＋ＶＨ：：ＣＨ１、ＨＳＡ：：ＬＣ＋ＶＨ：：ＣＨ１または他の適当な構築物として提供することができる。
【0066】
一実施形態では、当該抗体はヒトまたはヒト化抗体であるか、ヒトにおいて非免疫原性である。例えば、当該抗体は１つ以上のヒト抗体フレームワーク領域、例えば全てのヒトフレームワーク領域またはヒトフレームワーク領域と少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％同一のフレームワーク領域を含む。一実施形態では、当該抗体はヒトＦｃドメインまたはヒトＦｃドメインと少なくとも９５、９６、９７、９８または９９％同一のＦｃドメインを含む。
【0067】
一実施形態では、当該抗体は霊長類または霊長類化抗体であるか、ヒトにおいて非免疫原性である。例えば、当該抗体は１つ以上の霊長類抗体のフレームワーク領域、例えば全ての霊長類フレームワーク領域または霊長類フレームワーク領域と少なくとも８５、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％同一のフレームワーク領域を含む。一実施形態では、当該抗体は霊長類Ｆｃドメインまたは霊長類Ｆｃドメインと少なくとも９５、９６、９７、９８または９９％同一のＦｃドメインを含む。「霊長類」としては、ヒト（学名：Homo sapiens）、チンパンジー（学名：Pan troglodytesおよびボノボ（学名：Pan paniscus)）、ゴリラ（学名：Gorilla gorilla)、テナガザル、サル、キツネザル、アイアイ（学名：Daubentonia madagascariensis）およびメガネザルが挙げられる。
【0068】
いくつかの実施形態では、霊長類抗体のヒト血漿カリクレインとの親和性は、１０００、５００、１００、１０、５、１、０．５ｎＭ未満、例えば１０ｎＭ未満、１ｎＭ未満または０．５ｎＭ未満のＫＤによって特徴づけられる。
【0069】
特定の実施形態では、当該抗体は、マウスまたはウサギ由来の配列を含んでいない（例えばマウスまたはウサギ抗体ではない）。
【0070】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている方法で使用される抗体は、本明細書に記載されているＤＸ－２９３０またはその機能的変異体、あるいはＤＸ－２９３０と同じエピトープに結合するか活性血漿カリクレインへの結合のためにＤＸ－２９３０と競合する抗体であってもよい。
【0071】
一例では、ＤＸ－２９３０の機能的変異体は、同じ方法で決定した場合にＤＸ－２９３０と同じ相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。別の例では、ＤＸ－２９３０の機能的変異体は、ＤＸ－２９３０のＶＨおよびＶＬにおけるＦＲと比較した場合に、ＶＨまたはＶＬのいずれかのＦＲにおいて１つ以上の突然変異（例えば保存的置換）を含んでいてもよい。日常的な技術によって決定することができるそのような突然変異は、１つ以上のＣＤＲと相互作用すると予測される残基では生じないことが好ましい。他の実施形態では、本明細書に記載されている機能的変異体は、ＤＸ－２９３０の１つ以上のＣＤＲ領域に１つ以上（例えば、１、２または３つ）の突然変異を含む。そのような機能的変異体は、その親抗体と同じ抗原結合に関与する領域／残基を保持していることが好ましい。さらに他の実施形態では、ＤＸ－２９３０の機能的変異体は、ＤＸ－２９３０のＶＨと少なくとも８５％（例えば、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％）同一のアミノ酸配列を含むＶＨ鎖および／またはＤＸ－２９３０のＶＬと少なくとも８５％（例えば、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％）同一のアミノ酸配列を有するＶＬ鎖を含んでいてもよい。これらの変異体は血漿カリクレインの活性型に結合することができ、好ましくはプレカリクレインに結合しない。
【0072】
２つのアミノ酸配列の「同一性の割合（％）」は、Karlin and Altschul Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-77, 1993において修正されているKarlin and Altschul Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-68, 1990のアルゴリズムを用いて決定する。そのようなアルゴリズムは、Altschul,ら J. Mol. Biol. 215:403-10, 1990のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。ＸＢＬＡＳＴプログラム（スコア＝５０、ワード長さ＝３）を用いてＢＬＡＳＴタンパク質検索を行って、目的のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を得ることができる。２つの配列間にギャップが存在する場合、Altschulら, Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402, 1997に記載されているようにGapped BLASTを利用することができる。ＢＬＡＳＴおよびGapped BLASTプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメーターを使用することができる。
【0073】
いくつかの実施形態では、本方法で使用される抗体および本明細書に記載されている組成物はＤＸ－２９３０抗体であってもよい。シグナル配列をイタリック体にしたＤＸ－２９３０の重鎖および軽鎖の完全および可変配列を以下に示す。ＣＤＲは太字であり、下線が引かれている（カバットの番号付けスキームに基づく）。
ＤＸ－２９３０の重鎖アミノ酸配列（４５１個のアミノ酸、４９４３９．０２Ｄａ）
ＤＸ－２９３０の軽鎖アミノ酸配列（２１３個のアミノ酸、２３４１９．０８Ｄａ）
ＤＸ－２９３０の重鎖可変ドメインアミノ酸配列
ＤＸ－２９３０の軽鎖可変ドメインアミノ酸配列
ＤＸ－２９３０の重鎖アミノ酸配列（４５１個のアミノ酸、４９４３９．０２Ｄａ）
【化1】
【化2】
【化3】
【化4】
【表1】
【0074】
抗体の調製
本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）は、当該技術分野で知られている任意の方法によって調製することができる。例えば、Harlow and Lane, (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York and Greenfield, (2013) Antibodies: A Laboratory Manual, Second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Pressを参照されたい。
本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）は、当該技術分野で知られている任意の方法によって調製することができる。例えば、Harlow and Lane, (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York and Greenfield, (2013) Antibodies: A Laboratory Manual, Second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Pressを参照されたい。
【0075】
目的の抗体、例えばＤＸ－２９３０をコードする配列を宿主細胞内にベクターに入れて維持してもよく、次いでこの宿主細胞を後で使用するために増殖させて凍結することができる。代替法として、遺伝子操作のためにこのポリヌクレオチド配列を使用して当該抗体を「ヒト化する」か、当該抗体の親和性（親和性成熟）または他の特性を改善してもよい。例えば、その定常領域をヒトの定常領域により酷似するように操作して、当該抗体をヒトにおける臨床試験および治療において使用する際に免疫応答を回避してもよい。標的抗原に対するより高い親和性およびＰＫａｌの活性を阻害する際により高い有効性を得るように、当該抗体配列を遺伝子操作することが望ましい場合がある。当該抗体に対して１つ以上のポリヌクレオチドの変化を行ってもなお標的抗原に対するその結合特異性を維持できることは当業者には明らかであろう。
【0076】
他の実施形態では、特異的なヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するように操作された市販のマウスを用いて完全ヒト抗体を得ることができる。ヒト化抗体またはヒト抗体の産生のために、より望ましい（例えば完全ヒト抗体）またはより強い免疫応答を生じるように設計されたトランスジェニック動物を使用してもよい。そのような技術の例は、Ａｍｇｅｎ社（カリフォルニア州フリーモント）のＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（登録商標）およびＭｅｄａｒｅｘ社のＨｕＭＡｂ－Ｍｏｕｓｅ（登録商標）およびTC Mouse（商標）（ニュージャージー州プリンストン）である。別の代替法では、ファージディスプレイ法または酵母法による組換えにより抗体を調製してもよい。例えば、米国特許第５，５６５，３３２号、第５，５８０，７１７号、第５，７３３，７４３号および第６，２６５，１５０号ならびにWinterら, (1994) Annu. Rev. Immunol. 12:433-455を参照されたい。あるいは、ファージディスプレイ法(McCaffertyら, (1990) Nature 348:552-553)を使用して、未免疫のドナーから得た免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーからヒト抗体および抗体断片を生体外で産生させることができる。
【0077】
日常的な方法によりインタクトな抗体（完全長抗体）の抗原結合断片を調製することができる。例えば、抗体分子のペプシン消化によりＦ（ａｂ’）２断片を生成することができ、かつＦ（ａｂ’）２断片のジスルフィド架橋を還元することによりＦａｂ断片を生成することができる。
【0078】
例えば従来の組換え技術により、ヒト化抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体および二重特異性抗体などの遺伝子操作された抗体を産生させることができる。一例では、標的抗原に特異的なモノクローナル抗体をコードするＤＮＡを容易に単離したり合成したりすることができる。このＤＮＡを１つ以上の発現ベクターの中に入れて、次いで、これを大腸菌細胞、サルのＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞または骨髄腫細胞などの宿主細胞に形質移入し（そうしなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない）、組換え宿主細胞においてモノクローナル抗体の合成を得てもよい。例えば、ＰＣＴ公報の国際公開第８７／０４４６２号を参照されたい。次いで、例えば相同なマウスの配列の代わりにヒト重鎖および軽鎖定常ドメインのコード配列に置き換えることにより（Morrisonら, (1984) Proc. Nat. Acad. Sci. 81:6851）、あるいは非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全てまたは一部を免疫グロブリンコード配列に共有結合的に結合させることにより、このＤＮＡを修飾することができる。このようにして、標的抗原の結合特異性を有する「キメラ」抗体または「ハイブリッド」抗体などの遺伝子操作された抗体を調製することができる。
【0079】
「キメラ抗体」の産生のために開発された技術が当該技術分野でよく知られている。例えば、Morrisonら (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81, 6851; Neubergerら (1984) Nature 312, 604およびTakedaら (1984) Nature 314:452を参照されたい。
【0080】
ヒト化抗体を構築するための方法も当該技術分野でよく知られている。例えば、Queenら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86:10029-10033 (1989)を参照されたい。一例では、親の非ヒト抗体のＶＨおよびＶＬの可変領域を当該技術分野で知られている方法に従って３次元分子モデリング解析に供する。次に、正確なＣＤＲ構造の形成にとって重要であると予測されるフレームワークアミノ酸残基を同じ分子モデリング解析を用いて同定する。並行して、親のＶＨおよびＶＬ配列を検索クエリとして用いて、親の非ヒト抗体のアミノ酸配列と相同なアミノ酸配列を有するヒトのＶＨおよびＶＬ鎖を任意の抗体遺伝子データベースから同定する。次いで、ヒトのＶＨおよびＶＬアクセプター遺伝子を選択する。
【0081】
選択されたヒトのアクセプター遺伝子内のＣＤＲ領域を親の非ヒト抗体またはその機能的変異体からのＣＤＲ領域で置き換えることができる。必要に応じて、ＣＤＲ領域と相互作用する際に重要であると予測される親の鎖のフレームワーク領域内の残基（上の記載を参照）を使用して、ヒトのアクセプター遺伝子内の対応する残基を置き換えることができる。
【0082】
一本鎖抗体は、重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列と軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列とを連結する組換え技術により調製することができる。柔軟なリンカーを２つの可変領域の間に組み込むことが好ましい。あるいは、一本鎖抗体の作製について記載されている技術（米国特許第４，９４６，７７８号および第４，７０４，６９２号）を改変してファージまたは酵母ｓｃＦｖライブラリーを構築することができ、日常的な手順に従い、そのライブラリーからＰＫａｌに特異的なｓｃＦｖクローンを同定することができる。陽性のクローンをさらにスクリーニングしてＰＫａｌ活性を阻害するものを同定することができる。
【0083】
いくつかの抗体（例えばＦａｂ）は細菌細胞、例えば大腸菌細胞において産生させることができる（例えば、Nadkarni, A.ら, 2007 Protein Expr Purif 52(1):219-29を参照）。例えば、Ｆａｂがディスプレイ実体とバクテリオファージタンパク質（またはその断片）との間に抑制可能な終止コドンを含むファージディスプレイベクターに入れた配列によってコードされる場合、終止コドンを抑制できない細菌細胞内にベクター核酸を移動させることができる。この場合、Ｆａｂは遺伝子ＩＩＩタンパク質に融合されず、周辺質および／または培地の中に分泌される。
【0084】
抗体は真核性細胞において産生させることもできる。一実施形態では、当該抗体（例えば、ｓｃＦｖ）をピキア属（例えば、Powersら, 2001, J. Immunol. Methods. 251:123-35; Schoonooghe S.ら, 2009 BMC Biotechnol. 9:70; Abdel-Salam, HA.ら, 2001 Appl Microbiol Biotechnol 56(1-2):157-64; Takahashi K.ら, 2000 Biosci Biotechnol Biochem 64(10):2138-44; Edqvist, J.ら, 1991 J Biotechnol 20(3):291-300を参照）、ハンゼヌラ属またはサッカロミセス属などの酵母細胞において発現させる。当業者は、例えば、酸素条件（例えば、Baumann K.ら 2010 BMC Syst. Biol. 4:141を参照）、モル浸透圧濃度（例えば、Dragosits, M.ら, 2010 BMC Genomics 11:207）、温度（例えば、Dragosits, M.ら, 2009 J Proteome Res. 8(3):1380-92を参照）、発酵条件（例えば、Ning, D.ら 2005 J. Biochem. and Mol. Biol. 38(3): 294-299を参照）、酵母菌株（例えば、Kozyr, AVら 2004 Mol Biol (Mosk) 38(6):1067-75; Horwitz, AH.ら, 1988 Proc Natl Acad Sci U S A 85(22):8678-82; Bowdish, K.ら 1991 J Biol Chem 266(18):11901-8を参照）、抗体産生を高めるためのタンパク質の過剰発現（例えば、Gasser, B.ら, 2006 Biotechol. Bioeng. 94(2):353-61を参照）、培養物の酸性レベル（例えば、Kobayashi H.ら, 1997 FEMS Microbiol Lett 152(2):235-42を参照）、基質および／またはイオンの濃度（例えば、Ko JH.ら, 2996 Appl Biochem Biotechnol 60(1):41-8を参照）を最適化することにより酵母における抗体産生を最適化することができる。また、酵母系を使用して長い半減期を有する抗体を産生させることができる（例えば、Smith, BJ.ら 2001 Bioconjug Chem 12(5):750-756を参照）。
【0085】
好ましい一実施形態では、抗体を哺乳類の細胞で産生させる。クローン抗体またはその抗原結合断片を発現させるための好ましい哺乳類宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えばKaufman and Sharp, 1982, Mol. Biol. 159:601 621に記載されているＤＨＦＲ選択可能なマーカーと共に使用される、Urlaub and Chasin, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220に記載されているｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞を含む）、リンパ球細胞株、例えばＮＳ０骨髄腫細胞およびＳＰ２細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（J. Immunol. Methods (2004) 289(1-2):65-80）、およびトランスジェニック動物（例えばトランスジェニック哺乳類）からの細胞が挙げられる。例えば当該細胞は乳房上皮細胞である。
【0086】
いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合抗体を植物または無細胞系で産生させる（例えば、Galeffi, P.ら, 2006 J Transl Med 4:39を参照)。
【0087】
多様な免疫グロブリンドメインをコードする核酸配列に加えて、組換え発現ベクターは、宿主細胞においてベクターの複製を制御する配列（例えば複製起点）および選択可能なマーカー遺伝子などのさらなる配列を運搬してもよい。選択可能なマーカー遺伝子により、その中にベクターが導入されている宿主細胞の選択が容易になる（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、第４，６３４，６６５号および第５，１７９，０１７号を参照）。例えば、典型的には選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞に対してＧ４１８、ハイグロマイシンまたはメトトレキサートなどの薬物に対する耐性を与える。好ましい選択可能なマーカー遺伝子としては、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキサートによる選択／増幅を用いてｄｈｆｒ－宿主細胞で使用するため）およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）が挙げられる。
【0088】
抗体またはその抗原結合部分の組換え発現のための例示的な系では、リン酸カルシウム法による形質移入により、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターをｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞に導入する。組換え発現ベクターの中では、この抗体重鎖および軽鎖遺伝子はそれぞれ、遺伝子の高レベルの転写を活性化するためのエンハンサー／プロモーター調節エレメント（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウイルスなどに由来する、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントまたはＳＶ４０エンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントなど）に機能的に連結されている。組換え発現ベクターはＤＨＦＲ遺伝子も運搬し、これによりメトトレキサートによる選択／増幅を用いてベクターで形質転換されているＣＨＯ細胞の選択が可能になる。選択された形質転換体宿主細胞を培養して抗体の重鎖および軽鎖の発現を可能にし、インタクトな抗体をこの培地から回収する。標準的な分子生物学技術を使用して組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞を形質転換させ、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養して、この培地から抗体を回収する。例えば、一部の抗体は、タンパク質Ａまたはタンパク質Ｇ結合マトリックスを用いる親和性クロマトグラフィーによって単離することができる。
【0089】
Ｆｃドメインを含む抗体では、抗体産生系によりＦｃ領域がグリコシル化された抗体を産生させてもよい。例えばＩｇＧ分子のＦｃドメインは、ＣＨ２ドメインのアスパラギン２９７においてグリコシル化されている。このアスパラギンは二分岐オリゴ糖による修飾のための部位である。このグリコシル化はＦｃｇ受容体および補体Ｃ１ｑによって媒介されるエフェクター機能のために必要であることが実証されている(Burton and Woof, 1992, Adv. Immunol. 51:1-84; Jefferisら, 1998, Immunol. Rev. 163:59-76)。一実施形態では、Ｆｃドメインは、アスパラギン２９７に対応する残基を適当にグリコシル化する哺乳類の発現系において産生される。Ｆｃドメインは他の真核生物翻訳後修飾も含むことができる。
【0090】
トランスジェニック動物によって抗体を産生させることもできる。例えば、米国特許第５，８４９，９９２号は、トランスジェニック哺乳類の乳腺において抗体を発現させる方法について記載している。乳汁特異的プロモーターおよび目的の抗体をコードする核酸および分泌のためのシグナル配列を含む導入遺伝子を構築する。そのようなトランスジェニック哺乳類の雌によって生成される乳汁は、その中で分泌される目的の抗体を含む。この抗体を乳汁から精製したり、いくつかの用途では直接使用したりすることができる。
【0091】
医薬組成物
本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）は組成物、例えば薬学的に許容される組成物または医薬組成物中に存在していてもよい。本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）を薬学的に許容される担体と共に製剤化することができる。いくつかの実施形態では、３０ｍｇ～４００ｍｇのＤＸ－２９３０抗体は任意で薬学的に許容される担体と共に組成物、例えば薬学的に許容される組成物または医薬組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、３０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇまたは４００ｍｇのＤＸ－２９３０抗体は任意で薬学的に許容される担体と共に組成物、例えば薬学的に許容される組成物または医薬組成物中に存在する。
本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）は組成物、例えば薬学的に許容される組成物または医薬組成物中に存在していてもよい。本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）を薬学的に許容される担体と共に製剤化することができる。いくつかの実施形態では、３０ｍｇ～４００ｍｇのＤＸ－２９３０抗体は任意で薬学的に許容される担体と共に組成物、例えば薬学的に許容される組成物または医薬組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、３０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇまたは４００ｍｇのＤＸ－２９３０抗体は任意で薬学的に許容される担体と共に組成物、例えば薬学的に許容される組成物または医薬組成物中に存在する。
【0092】
薬学的に許容される担体としては、生理学的に適合可能なありとあらゆる溶媒、分散媒、被覆剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられる。担体は皮下、静脈内、筋肉内、非経口、脊髄または表皮投与（例えば、注射または注入による）に適していることが好ましいが、吸入および鼻腔内投与に適した担体も想定される。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体は、リン酸ナトリウム、クエン酸、ヒスチジン、塩化ナトリウムおよびＴｗｅｅｎ８０のうちの１種以上である。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される担体はリン酸ナトリウム、クエン酸、ヒスチジン、塩化ナトリウムおよびＴｗｅｅｎ８０である。いくつかの実施形態では、ＤＸ－２９３０などの抗体を３０ｍＭのリン酸ナトリウム、８．６ｍＭのクエン酸、５０ｍＭのヒスチジン、９０ｍＭの塩化ナトリウム、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０（ｐＨ６．０）中で製剤化する。いくつかの実施形態では、当該組成物は、３０ｍＭのリン酸ナトリウム、８．６ｍＭのクエン酸、５０ｍＭのヒスチジン、９０ｍＭの塩化ナトリウム、０．０１％のＴｗｅｅｎ８０の溶液１ｍＬ当たり１００ｍｇのＤＸ－２９３０を含むかそれからなる。
【0093】
薬学的に許容される塩は、当該化合物の所望の生物活性を保持し、かつどんな望ましくない毒性作用も与えない塩である（例えば、Berge, S.M.ら, 1977, J. Pharm. Sci. 66:1-19を参照）。そのような塩の例としては酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素、ヨウ化水素、亜リン酸などの非毒性の無機酸、ならびに脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸などの非毒性の有機酸から得られるものが挙げられる。塩基付加塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどのアルカリ土類金属ならびにＮ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ－メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどの非毒性の有機アミンから得られるものが挙げられる。
【0094】
当該組成物は様々な形態であってもよい。そのような形態としては、例えば、液体溶液（例えば、注射可能および注入可能な溶液）、分散液または懸濁液、錠剤、丸剤、粉末、リポソームおよび坐剤などの、液体、半固体および固体の剤形が挙げられる。これらの剤形は、意図される投与様式および治療用途によって決まってもよい。多くの組成物は、ヒトに抗体を投与するために使用されるものと同様の組成物などの、注射可能または注入可能な溶液の形態である。例示的な投与様式は非経口（例えば、静脈内、皮下、腹膜内、筋肉内）である。一実施形態では、当該血漿カリクレイン結合タンパク質を静脈内注入または注射によって投与する。別の好ましい実施形態では、当該血漿カリクレイン結合タンパク質を筋肉内または皮下注射によって投与する。別の好ましい実施形態では、当該血漿カリクレイン結合タンパク質を腹膜内注射によって投与する。
【0095】
本明細書で使用される「非経口投与」および「非経口で投与される」という語句は、腸内および局所投与以外の通常は注射による投与様式を意味し、限定されるものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、クモ膜下腔内、関節内、眼窩内、心臓内、皮内、腹膜内、気管内、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊椎内、硬膜外および胸骨内注射および注入が挙げられる。
【0096】
当該組成物を溶液、マイクロエマルション、分散液、リポソームまたは、高い薬物濃度に適した他の規則構造体として製剤化することができる。上に列挙した１種の成分または成分の組み合わせを含む適当な溶媒に当該結合タンパク質を必要な量で組み込み、かつ必要に応じてその後に濾過滅菌することにより、無菌注射溶液を調製することができる。一般に、基礎分散媒および上に列挙したもののうち必要な他の成分を含む無菌媒体に活性化合物を組み込むことにより分散液を調製する。無菌注射溶液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は真空乾燥および凍結乾燥であり、それにより以前に無菌濾過したその溶液から活性成分の粉末＋あらゆるさらなる所望の成分を得る。溶液の適切な流動性は、例えばレシチンなどの被覆剤の使用により、分散液の場合には必要な粒径の維持により、そして界面活性剤の使用により維持することができる。当該組成物中に吸収を遅らせる薬剤、例えばモノステアリン酸塩およびゼラチンを含めることにより、注射可能な組成物の長期吸収をもたらすことができる。
【0097】
本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）は、静脈内注射または注入などの様々な方法によって投与することができる。例えば、いくつかの治療用途では、当該抗体を静脈内注入により３０、２０、１０、５または１ｍｇ／分未満の速度で、約１～１００ｍｇ／ｍ２または７～２５ｍｇ／ｍ２の用量に達するように投与することができる。投与の経路および／または様式は所望の結果に応じて異なる。特定の実施形態では、埋込物およびマイクロカプセル化送達システムなどの制御放出製剤のように、当該活性化合物を当該化合物の急速放出を防ぐ担体と共に調製してもよい。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物（ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅ）、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸などの生分解性の生体適合性ポリマーを使用することができる。そのような製剤の多くの調製方法が利用可能である。例えば、Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., 1978, Marcel Dekker, Inc., New Yorkを参照されたい。
【0098】
医薬組成物は医療装置を用いて投与することができる。例えば、一実施形態では、本明細書に開示されている医薬組成物を装置、例えば無針皮下注射装置、ポンプまたは埋込物を用いて投与することができる。
【0099】
特定の実施形態では、本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）を生体内で適切に分布させることができるように製剤化することができる。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は多くの高親水性化合物を透過させない。本明細書に開示されている治療用化合物がＢＢＢを透過する（所望であれば）ことができるように、それらを例えばリポソームに入れて製剤化することができる。リポソームの製造方法については、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号、第５，３７４，５４８号および第５，３９９，３３１号を参照されたい。リポソームは特異的な細胞または臓器の中に選択的に輸送される１つ以上の部分を含んでもよく、このようにして標的とされる薬物送達を高めてもよい（例えば、V.V. Ranade, 1989, J. Clin. Pharmacol. 29:685を参照）。
【0100】
最適な所望の応答（例えば治療応答）を得るように投与レジメンを調整する。例えば、単回ボーラスを投与してもよく、ゆっくり時間をかけていくつかの分割用量を投与してもよく、あるいは治療の状況の緊急性によって必要が示される場合には用量を比例的に増減させてもよい。投与の容易性および投与量の均等性のために、非経口組成物を単位剤形で製剤化すると特に有利である。本明細書で使用される単位剤形とは、治療される対象のための単位投与量として適した物理的に分離した単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と組み合わせた、所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含む。単位剤形の詳細は、（ａ）当該活性化合物の固有の特性および達成される特定の治療効果、ならびに（ｂ）個体における感受性に対処するためのそのような活性化合物の配合の分野における固有の限界によって決まり、かつそれらに直接依存する。
【0101】
本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）の治療的または予防的有効量の例示的な非限定的範囲は、３０ｍｇ～４００ｍｇまたはそれらの間の任意の整数、例えば、１００～４００ｍｇ、１００～３００ｍｇまたは３００～４００ｍｇである。いくつかの実施形態では、治療的または予防的有効量は３０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇまたは４００ｍｇである。
【0102】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）の治療的または予防的有効量は３０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇまたは４００ｍｇである。いくつかの実施形態では、治療的または予防的有効量は１５０ｍｇである。いくつかの実施形態では、治療的または予防的有効量は３００ｍｇである。いくつかの実施形態では、治療的または予防的有効量は４００ｍｇである。
【0103】
いくつかの実施形態では、治療的または予防的有効量を少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも６回、少なくとも７回、少なくとも８回、少なくとも９回、少なくとも１０回またはそれ以上で投与する。いくつかの実施形態では、治療的または予防的有効量を隔週で（すなわち２週間ごとに）投与する。いくつかの実施形態では、治療的または予防的有効量は３００ｍｇまたは４００ｍｇであり、その量を２週間ごとに投与する。いくつかの実施形態では、治療的または予防的有効量は３００ｍｇであり、この量の抗体を２週間ごとに投与する。いくつかの実施形態では、治療的または予防的有効量は４００ｍｇであり、この量の抗体を２週間ごとに投与する。
【0104】
いくつかの実施形態では、ＤＸ－２９３０などの抗ｐＫａｌ抗体のいずれかの治療は、少なくとも負荷投与期間および維持期間を含む治療レジメンを含む。いくつかの実施形態では、負荷投与期間の当該抗体の治療的または予防的有効量は各投与当たり１００～３００ｍｇ（例えば１５０ｍｇまたは３００ｍｇ）である。この期間中に、当該抗体を毎週（例えば、１、２または３週間にわたって毎週）投与してもよい。一例では、負荷投与期間は２週間であり、当該抗体を０日目、７日目および１４日目に投与する。
【0105】
代わりまたは追加として、維持期間のための治療的または予防的有効量は、各投与当たり約１００～３００ｍｇ（例えば１５０ｍｇまたは３００ｍｇ）である。この期間中に、当該抗体を隔週（すなわち２週間ごと）、３週間ごと、または４週間ごとに投与することができる（例えば、１０週間にわたって２週間ごとに投与し、全部で５回の用量の送達が得られる）。一例では、維持期間は１０週間続いてもよく、当該抗体を２８日目、４２日目、５６日目、７０日目および８４日目に投与する。
【0106】
いくつかの実施形態では、ＤＸ－２９３０などの抗ｐＫａｌ抗体を１５０ｍｇまたは３００ｍｇで投与し、その量を最初に好適な期間にわたって毎週（例えば、１、２または３週間にわたって毎週）投与し、その後に好適な期間にわたって２～４週間ごと（例えば、２、３または４週間ごと）に投与する。
【0107】
本明細書に記載されている方法のいずれかにおいて、当該治療レジメンは維持期間後に経過観察期間をさらに含んでもよい。経過観察期間では、ＤＸ－２９３０などの抗体を２～４週間ごとに１００～３００ｍｇ、例えば３００ｍｇで投与してもよい。場合によっては、負荷投与期間、維持期間および経過観察期間のうちの１つ以上で投与量を４００ｍｇまで増加させてもよい。
【0108】
本明細書に開示されている医薬組成物は、「治療的有効量」または「予防的有効量」の本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）を含んでもよい。
【0109】
キット
本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）をキットに入れて、例えばキットの構成要素として提供することができる。例えば、当該キットは、（ａ）ＤＸ－２９３０抗体、例えば当該抗体を含む組成物（例えば医薬組成物）と、任意で（ｂ）情報資料とを含む。情報資料は記述的資料、説明資料、マーケティング資料または、本明細書に記載されている方法および／または例えば本明細書に記載されている方法のための本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）の使用に関する他の資料であってもよい。いくつかの実施形態では、当該キットは１回以上の用量のＤＸ－２９３０を含む。いくつかの実施形態では、１回以上の用量は３０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇまたは４００ｍｇである。
本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）をキットに入れて、例えばキットの構成要素として提供することができる。例えば、当該キットは、（ａ）ＤＸ－２９３０抗体、例えば当該抗体を含む組成物（例えば医薬組成物）と、任意で（ｂ）情報資料とを含む。情報資料は記述的資料、説明資料、マーケティング資料または、本明細書に記載されている方法および／または例えば本明細書に記載されている方法のための本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）の使用に関する他の資料であってもよい。いくつかの実施形態では、当該キットは１回以上の用量のＤＸ－２９３０を含む。いくつかの実施形態では、１回以上の用量は３０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇまたは４００ｍｇである。
【0110】
当該キットの情報資料はその形態に限定されない。一実施形態では、情報資料は、当該化合物の生成、当該化合物の分子量、濃度、使用期限、バッチまたは製造場所情報などに関する情報を含むことができる。一実施形態では、情報資料は、疾患および病気（例えば血漿カリクレインに関連する疾患または病気）を治療、予防または診断するための当該抗体の使用に関する。
【0111】
一実施形態では、情報資料は本明細書に記載されている方法を実施するのに好適な方法で、例えば好適な用量、剤形、投与様式または投薬スケジュール（例えば、本明細書に記載されている用量、剤形、投薬スケジュールまたは投与様式）で本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）を投与するための説明書を含むことができる。別の実施形態では、情報資料は好適な対象、例えばヒト（例えば、疾患または病気に関連する血漿カリクレインを有するかそのリスクのあるヒト）に本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）を投与するための説明書を含むことができる。例えば、当該資料は、例えば本明細書に記載されている投薬スケジュールに従い、本明細書に記載されている疾患または病気（例えば血漿カリクレイン関連疾患）を有する患者に本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）を投与するための説明書を含むことができる。当該キットの情報資料はその形態に限定されない。多くの場合、情報資料（例えば説明書）は印刷物として提供されるが、コンピュータ可読媒体などの他の形式であってもよい。
【0112】
本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）をあらゆる形態、例えば、液体、乾燥または凍結乾燥した形態で提供することができる。抗体は実質的に純粋かつ／または無菌であることが好ましい。抗体を液体溶液として提供する場合、その液体溶液は好ましくは水溶液であり、無菌水溶液が好ましい。抗体を乾燥した形態で提供する場合、再構成は一般に好適な溶媒の添加によるものである。その溶媒（例えば滅菌水または緩衝液）は任意で当該キットに入れて提供することができる。
【0113】
当該キットは、本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）を含む組成物のための１つ以上の容器を含むことができる。いくつかの実施形態では、当該キットは、当該組成物および情報資料のための別個の容器、仕切りまたは区画を含む。例えば、当該組成物を瓶、バイアルまたは注射器に収容することができ、情報資料をその容器に付随して含めることができる。他の実施形態では、当該キットの別個の要素を仕切りのない単一の容器に収容する。例えば、ラベルの形態の情報資料が貼り付けられた瓶、バイアルまたは注射器に当該組成物を収容する。いくつかの実施形態では、当該キットは、それぞれが本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）の１つ以上の単位剤形（例えば、本明細書に記載されている剤形）を含む複数の個々の容器（例えばパック）を含む。例えば、当該キットは、それぞれが本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）の単回の単位用量を含む複数の注射器、アンプル、ホイルパケットまたはブリスターパックを含む。当該キットの容器は、気密性、防水性（例えば、湿気の変化または蒸発に対して不透水性）および／または遮光性であってもよい。
【0114】
当該キットは任意で当該組成物の投与に適した装置、例えば注射器またはあらゆるそのような送達装置を含む。一実施形態では、当該装置は定量された抗体を投与する埋込装置である。本開示は、例えば本明細書に記載されている構成要素を１つにまとめてキットを提供する方法も特徴とする。
【0115】
治療
いくつかの態様では、本開示はＨＡＥを治療する際の本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）の使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示はＨＡＥを治療する際の本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）の使用を提供する。
【0116】
遺伝性血管浮腫
遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）は「クインケ浮腫」、Ｃ１エステラーゼインヒビター欠損、Ｃ１インヒビター欠損および遺伝性血管神経性浮腫（ＨＡＮＥ）としても知られている。ＨＡＥは、例えば、肢、顔、性器、消化管および気道を冒し得る重度の腫れ（血管浮腫）の再発性の症状発現を特徴とする。ＨＡＥの症状としては、例えば、腕、脚、唇、眼、舌および／または喉の腫れ、喉の腫れや突然の嗄声を伴うことがある気道閉塞、明らかな原因が不明の腹部痙攣の反復性症状発現および／または腸の腫れなどが挙げられ、それらは重症になることがあり、腹部痙攣、嘔吐、脱水、下痢、疼痛および／またはショックを引き起こすことがある。このようなＨＡＥを有する個体の約３分の１が発作中に有縁性紅斑と呼ばれる痒みのない発疹を生じる。
遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）は「クインケ浮腫」、Ｃ１エステラーゼインヒビター欠損、Ｃ１インヒビター欠損および遺伝性血管神経性浮腫（ＨＡＮＥ）としても知られている。ＨＡＥは、例えば、肢、顔、性器、消化管および気道を冒し得る重度の腫れ（血管浮腫）の再発性の症状発現を特徴とする。ＨＡＥの症状としては、例えば、腕、脚、唇、眼、舌および／または喉の腫れ、喉の腫れや突然の嗄声を伴うことがある気道閉塞、明らかな原因が不明の腹部痙攣の反復性症状発現および／または腸の腫れなどが挙げられ、それらは重症になることがあり、腹部痙攣、嘔吐、脱水、下痢、疼痛および／またはショックを引き起こすことがある。このようなＨＡＥを有する個体の約３分の１が発作中に有縁性紅斑と呼ばれる痒みのない発疹を生じる。
【0117】
気道の腫れは生命を脅かす可能性があり、患者の中には死亡するものもいる。死亡率は１５～３３％と推定されている。ＨＡＥが原因で１年間に約１５，０００～３０，０００人が救急に来院する。
【0118】
外傷またはストレス、例えば、歯科治療、病気（例えば、風邪やインフルエンザなどのウイルス性疾患）、月経および外科手術が血管浮腫の発作の誘因となることがある。ＨＡＥの急性発作を防ぐために、患者は以前に発作を引き起こしたことのある特定の刺激を回避することを試みることができる。しかし、発作は公知の誘因以外で生じることが多い。典型的には、ＨＡＥ症状は最初に幼児期に現れ、思春期の間に悪化する。平均すると、未治療の個体は１～２週間ごとに発作を有し、大部分の症状発現は約３～４日間続く（ｇｈｒ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ／ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ－ａｎｇｉｏｅｄｅｍａ）。発作の頻度および持続期間は遺伝性血管浮腫を有する人々の中で大きく異なり、同じ家族の人々の間でさえも大きく異なる。
【0119】
Ｉ型、ＩＩ型およびＩＩＩ型として知られている３つの型のＨＡＥがあり、それら全てを本明細書に記載されている方法によって治療することができる。ＨＡＥは５０，０００人に１人を冒し、Ｉ型は症例の約８５％を占め、ＩＩ型は症例の約１５％を占め、ＩＩＩ型は非常に稀であると推定されている。Ｉ型またはＩＩ型ＨＡＥを有する患者は典型的にＣ１－ＩＮＨが欠損している。そのような患者は、欠陥のあるＣ１－ＩＮＨ遺伝子を有するため、Ｃ１－ＩＮＨを産生しないか通常でないＣ１－ＩＮＨタンパク質を産生する。ＩＩＩ型は最も新しく登場した形態であり、当初は女性のみに生じると考えられていたが、罹患した男性がいる家族が確認されている。ＩＩＩ型ＨＡＥはＣ１－ＩＮＨとは関連がないと考えられている。ＩＩＩ型ＨＡＥを有する患者は正常なＣ１－ＩＮＨタンパク質を有していることがある。
【0120】
ＨＡＥは、罹患した人が１人の罹患した親から突然変異を受け継いだ可能性があるような常染色体優性遺伝形式で受け継がれる。遺伝子における新しい突然変異も生じる可能性があり、従って、ＨＡＥは自身の家族の中にその疾患の既往歴がない人々においても生じる可能性がある。症例の２０～２５％は新しい自然発生的な突然変異に起因するものであると推定されている。
【0121】
ＳＥＲＰＩＮＧ１遺伝子の突然変異が、Ｉ型およびＩＩ型遺伝性血管浮腫を引き起こす。ＳＥＲＰＩＮＧ１遺伝子は炎症を制御するのに重要なＣ１インヒビタータンパク質を産生するための命令を与える。Ｃ１インヒビターは炎症を促進する特定のタンパク質の活性を阻止する。Ｉ型遺伝性血管浮腫を引き起こす突然変異により血中のＣ１インヒビターレベルが減少する。対照的に、ＩＩ型を引き起こす突然変異により、異常に機能するＣ１インヒビターが産生される。適切なレベルの機能的Ｃ１インヒビターが存在しないと、過剰な量のブラジキニンが産生される。ブラジキニンは、血管壁から体組織内への流体の漏れを増加させることにより炎症を促進する。体組織内の流体の過剰な蓄積は、Ｉ型およびＩＩ型遺伝性血管浮腫を有する個体に見られる腫れの症状発現を引き起こす。
【0122】
Ｆ１２遺伝子の突然変異は、ＩＩＩ型遺伝性血管浮腫のいくつかの症例に関連している。Ｆ１２遺伝子は第ＸＩＩ凝固因子を産生するための命令を与える。第ＸＩＩ因子は血液凝固（凝血）において重要な役割を担うだけでなく、炎症の重要な刺激物質でもあり、ブラジキニンの産生に関与する。Ｆ１２遺伝子の特定の突然変異により、高い活性を有する第ＸＩＩ因子が産生される。その結果、より多くのブラジキニンが産生され、血管壁はより漏れやすくなり、これにより腫れの症状発現が生じる。ＩＩＩ型遺伝性血管浮腫の他の症例の原因は未知なままである。１種以上の未だに同定されていない遺伝子の突然変異がこれらの症例における疾患に関与しているかもしれない。
【0123】
ＨＡＥは、アレルギーまたは他の医学的状態から生じる他の形態の血管浮腫と同じように現れる場合があるが、原因および治療において顕著に異なる。遺伝性血管浮腫がアレルギーと誤診された場合、最も一般的には、通常ＨＡＥには効果がない抗ヒスタミン薬、ステロイドおよび／またはエピネフリンで治療されるが、エピネフリンは生命を脅かす反応に対して使用することができる。誤診により腹部の腫れを有する患者に対して不必要な診査手術も行われ、ＨＡＥ患者の中には腹痛が心因性のものとして誤診されるものもいる。
【0124】
Ｃ１インヒビター療法ならびにＨＡＥのための他の治療法については、Kaplan, A.P., J Allergy Clin Immunol, 2010, 126(5):918-925に記載されている。
【0125】
早急に浮腫の進行を食い止めるためにＨＡＥ発作の急性治療が行われる。静脈内に投与されるドナー血液から得られたＣ１インヒビター濃縮物は急性治療の１つであるが、この治療は多くの国々で利用可能ではない。Ｃ１インヒビター濃縮物が利用可能ではない緊急事態では、新鮮な凍結させた血漿（ＦＦＰ）もＣ１インヒビターを含むため、代わりとして使用することができる。
【0126】
欧州では１９７９年からヒトの血液由来の精製されたＣ１インヒビターが使用されている。米国ではいくつかのＣ１インヒビター治療が現在利用可能であり、カナダでは２種類のＣ１インヒビター製品が現在利用可能である。殺菌されているBerinert P（CS LBehring社）が急性発作のために２００９年にＦ．Ｄ．Ａ．によって認可された。ナノ濾過されているＣｉｎｒｙｚｅ（ＶｉｒｏＰｈａｒｍａ社）が予防のために２００８年にＦ．Ｄ．Ａ．によって認可された。Ｒｈｕｃｉｎ（Ｐｈａｒｍｉｎｇ社）は、ヒト血液由来の病原体による感染症伝播のリスクのない開発中の組換えＣ１インヒビターである。
【0127】
急性ＨＡＥ発作の治療は、鎮痛および／または点滴のための薬物療法も含むことができる。
【0128】
他の治療法は、Ｃ１インヒビターの合成を刺激するかＣ１インヒビターの消費を減少させることができる。ダナゾールなどのアンドロゲン薬物療法は、Ｃ１インヒビターの産生を刺激することにより発作の頻度および重症度を低下させることができる。
【0129】
ヘリコバクター・ピロリ（ピロリ菌）は腹部の発作の誘因になり得る。ピロリ菌を治療するための抗生物質は腹部の発作を減少させる。
【0130】
より新しい治療は接触カスケードを攻撃する。エカランチド（ＫＡＬＢＩＴＯＲ（登録商標）、ＤＸ－８８、Ｄｙａｘ社）は血漿カリクレインを阻害するものであり、米国で認可されている。イカチバント（ＦＩＲＡＺＹＲ（登録商標）、Ｓｈｉｒｅ社）は、ブラジキニンＢ２受容体を阻害するものであり、欧州および米国で認可されている。
【0131】
ＨＡＥの診断は、例えば家族歴および／または血液検査に依存することができる。Ｉ型、ＩＩ型およびＩＩＩ型ＨＡＥに関連する検査所見については、例えばKaplan, A.P., J Allergy Clin Immunol, 2010, 126(5):918-925に記載されている。Ｉ型ＨＡＥでは、Ｃ４レベルと同じようにＣ１インヒビターレベルは低下するが、Ｃ１ｑレベルは正常である。ＩＩ型ＨＡＥでは、Ｃ１インヒビターレベルは正常であるか上昇するが、Ｃ１インヒビター機能は異常である。Ｃ４レベルは低下し、Ｃ１ｑレベルは正常である。ＩＩＩ型では、Ｃ１インヒビター、Ｃ４およびＣ１ｑのレベルは全て正常である可能性がある。
【0132】
ＨＡＥの症状は、例えば質問表（例えば患者、臨床医または家族の一員が記入する質問表）を用いて評価することができる。そのような質問表は当該技術分野で知られており、例えば視覚的アナログスケールが挙げられる。例えば、McMillan, C.V.ら Patient. 2012;5(2):113-26を参照されたい。
【0133】
抗ＰＫａｌ抗体によるＨＡＥの治療
本開示は、例えば本明細書に記載されている投薬スケジュールに従い、本明細書に記載されている抗体（例えば、治療的有効量の本明細書に記載されている抗体）を、ＨＡＥを有するかその疑いのある対象に投与することにより遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）を治療する（例えば、１つ以上の症状を寛解、安定化または除去する）方法を提供する。さらに、例えば本明細書に記載されている投薬スケジュールに従うか、第２の治療法（例えば、本明細書に記載されている例えば１種の他の薬剤）と組み合わせて、本明細書に記載されている抗体（例えば、治療的有効量の本明細書に記載されている抗体）を投与することによりＨＡＥを治療する方法を提供する。本開示は、例えば本明細書に記載されている投薬スケジュールに従い、本明細書に記載されている抗体（例えば、予防的有効量の本明細書に記載されている抗体）を、ＨＡＥを発症するリスクのある対象（例えば、ＨＡＥまたはそれに対する遺伝的素因を有する家族の一員がいる対象）に投与することによりＨＡＥまたはその症状を予防する方法も提供する。いくつかの例では、当該対象は治療の時点でＨＡＥの症状を有していないヒトの患者であってもよい。
本開示は、例えば本明細書に記載されている投薬スケジュールに従い、本明細書に記載されている抗体（例えば、治療的有効量の本明細書に記載されている抗体）を、ＨＡＥを有するかその疑いのある対象に投与することにより遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）を治療する（例えば、１つ以上の症状を寛解、安定化または除去する）方法を提供する。さらに、例えば本明細書に記載されている投薬スケジュールに従うか、第２の治療法（例えば、本明細書に記載されている例えば１種の他の薬剤）と組み合わせて、本明細書に記載されている抗体（例えば、治療的有効量の本明細書に記載されている抗体）を投与することによりＨＡＥを治療する方法を提供する。本開示は、例えば本明細書に記載されている投薬スケジュールに従い、本明細書に記載されている抗体（例えば、予防的有効量の本明細書に記載されている抗体）を、ＨＡＥを発症するリスクのある対象（例えば、ＨＡＥまたはそれに対する遺伝的素因を有する家族の一員がいる対象）に投与することによりＨＡＥまたはその症状を予防する方法も提供する。いくつかの例では、当該対象は治療の時点でＨＡＥの症状を有していないヒトの患者であってもよい。
【0134】
治療は当該疾患、当該疾患の症状または当該疾患に対する素因を軽減させる、緩和させる、変化させる、修復する、寛解させる、改善するかそれに影響を及ぼすのに有効な量の投与を含む。当該治療により、疾患または病気の発症を遅らせもよく、例えばその発症を予防するかその悪化を防止してもよい。
【0135】
ＤＸ－２９３０抗体の投与方法については「医薬組成物」の箇所にも記載されている。使用される抗体の好適な投与量は、当該対象の年齢および体重ならびに使用される特定の薬物によって決まってもよい。当該抗体は、例えば血漿カリクレインとその基質（例えば、第ＸＩＩ因子またはＨＭＷＫ）との間での望ましくない相互作用を阻害するか減少させるための競合薬として使用することができる。当該抗体の用量は、患者の特に疾患部位における血漿カリクレインの活性の９０％、９５％、９９％または９９．９％を阻止するのに十分な量であればよい。これには、例えば２週間ごとに投与される３０ｍｇ、１００ｍｇ、３００ｍｇまたは４００ｍｇが必要となることがある。
【0136】
一実施形態では、当該抗体を使用して例えば生体内での血漿カリクレインの活性を阻害する（例えば、血漿カリクレインの少なくとも１つの活性を阻害する、例えば第ＸＩＩａ因子および／またはブラジキニン産生を減少させる）。当該結合タンパク質は単独で、あるいは薬剤（例えば、細胞毒性薬、細胞毒素、酵素または放射性同位体）に結合させて使用することができる。
【0137】
当該抗体を直接生体内で使用して、天然の補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）により抗原発現細胞を除去することができる。本明細書に記載されている抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ３のＦｃ部分あるいは補体に結合するＩｇＭの対応する部分などの補体結合エフェクタードメインを含むことができる。一実施形態では、標的細胞集団を本明細書に記載されている抗体および適当なエフェクター細胞により生体外で処理する。この処理は補体または補体を含む血清の添加により補うことができる。さらに、本明細書に記載されている抗体で被覆された標的細胞の食作用を、補体タンパク質の結合によって高めることができる。別の実施形態では、補体結合エフェクタードメインを含む抗体で被覆された標的細胞を補体により溶解する。
【0138】
ＤＸ－２９３０抗体の投与方法は「医薬組成物」の箇所に記載されている。使用される分子の好適な投与量は対象の年齢および体重ならびに使用される特定の薬物によって決まってもよい。当該抗体は、例えば自然物質または病的物質と血漿カリクレインとの間での望ましくない相互作用を阻害するか減少させるための競合薬として使用することができる。
【0139】
治療的有効量の本明細書に記載されている抗体を、ＨＡＥを有するかその疑いまたはリスクのある対象に投与し、それにより当該疾患を治療する（例えば、疾患の症状または特徴を寛解または改善させ、疾患の進行を遅らせ、安定化させ、かつ／または食い止める）ことができる。
【0140】
本明細書に記載されている抗体を治療的有効量で投与することができる。抗体の治療的有効量は、そのような治療の非存在下で期待される程度を超える程度まで対象を治療する、例えば対象における疾患の少なくとも１つの症状を治癒、軽減、緩和または改善させる際に対象に単回または複数回用量を投与すると有効な量である。
【0141】
最適な所望の応答（例えば治療応答）を得るように投与レジメンを調整することができる。例えば、単回ボーラスを投与してもよく、ゆっくり時間をかけていくつかの分割用量を投与してもよく、あるいは治療の状況の緊急性によって必要が示される場合には用量を比例的に増減させてもよい。投与の容易性および投与量の均等性のために、非経口組成物を単位剤形で製剤化すると特に有利である。本明細書で使用される単位剤形とは、治療される対象のための単位投与量として適した物理的に分離した単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と組み合わせた、所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含む。
【0142】
いくつかの実施形態では、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、４週間ごとに１回、６週間ごとに１回、８週間ごとに１回またはそれによりも少ない頻度などの複数回用量によりＤＸ－２９３０抗体を投与する。複数回用量はそれぞれ、３０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇまたは４００ｍｇであってもよい。場合によっては、複数回用量を患者に好適な期間にわたって２週間ごとに１回与えてもよい。いくつかの実施形態では、ＤＸ－２９３０を２週間ごとに３００ｍｇまたは４００ｍｇで投与してもよい。他の実施形態では、ＤＸ－２９３０を４週間ごとに３００ｍｇまたは４００ｍｇで投与してもよい。さらに他の実施形態では、ＤＸ－２９３０を４週間ごとに１５０ｍｇで投与してもよい。本明細書に記載されている方法のいずれかにおいて、本明細書に記載されている複数回用量のＤＸ－２９３０で治療される対象を、維持治療により経過観察してもよい。
【0143】
本明細書に記載されている方法のいずれかにおいて、対象を負荷投与期間において複数回用量のＤＸ－２９３０で治療し、次いで維持期間により経過観察してもよい。負荷投与期間では、当該対象を好適な期間にわたって２～４週間ごと（例えば、２週間、３週間または４週間ごと）に１回の約１００ｍｇ～約４００ｍｇ（例えば、１００～３００ｍｇまたは１５０～３００ｍｇ、例えば、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇまたは４００ｍｇ）のＤＸ－２９３０で治療してもよい。負荷投与期間では、当該対象を好適な期間にわたって２～４週間ごと（例えば、２週間、３週間または４週間ごと）に１回の約１００ｍｇ～約３００ｍｇ（例えば、１００～３００ｍｇまたは１５０～３００ｍｇ、例えば、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇまたは３００ｍｇ）のＤＸ－２９３０で治療してもよい。
【0144】
いくつかの実施形態では、治療の前もしくは後または治療中に、副作用（例えば、クレアチンホスファターゼレベルの上昇）および／または当該抗体によるｐＫａｌの阻害レベル（例えば、当該抗体の血清もしくは血漿中濃度またはｐＫａｌ活性レベル）について患者を監視してもよい。有害作用を観察する場合、当該抗体の用量を減少させてもよく、あるいは当該治療を終了してもよい。阻害レベルが最小治療レベル未満であれば、当該抗体のさらなる用量を当該患者に投与してもよい。
【0145】
いくつかの実施形態では、治療の有効性を評価するために、当該抗体（例えばＤＸ－２９３０）の血漿もしくは血清中濃度を治療中（例えば初回投与後）に測定してもよい。当該抗体の血漿もしくは血清中濃度が約８０ｎＭよりも低ければ、経過観察投与を必要としてもよく、その量は初回投与量と同じかそれ以上であってもよい。当該対象から得られた血漿もしくは血清試料中の当該抗体のタンパク質レベルを例えば免疫測定法またはＭＳアッセイによって測定することで、当該抗体の血漿もしくは血清中濃度を測定してもよい。また、当該抗体で治療した対象から得られた血漿もしくは血清試料中のｐＫａｌの阻害レベルを測定することで、当該抗体の血漿もしくは血清中濃度を測定してもよい。そのようなアッセイとしては、本明細書に記載されている切断されたキニノーゲンを測定するための合成基質アッセイ（synthetic substrate assay）またはウェスタンブロットアッセイを挙げることができる。
【0146】
代わりまたは追加として、治療中にクレアチンキナーゼの血漿もしくは血清レベルを監視してもよい。クレアチンキナーゼの血漿もしくは血清レベルが治療中に上昇することが分かった場合、当該抗体の投与量を減少させてもよく、あるいは治療を終了してもよい。
【0147】
いくつかの実施形態では、当該抗体（例えばＤＸ－２９３０）の最適な投与量（例えば、最適な予防的投与量または最適な治療的投与量）を以下のように決定してもよい。当該抗体を初回用量で治療を必要とする対象に与える。当該対象における当該抗体の血漿中濃度を測定する。その血漿中濃度が８０ｎＭよりも低ければ、その後の投与において当該抗体の用量を増加させる。当該抗体の血漿中濃度を約８０ｎＭ超に維持する当該抗体の投与量を当該対象にとって最適な投与量として選択することができる。治療中に当該対象のクレアチンホスホキナーゼレベルを監視してもよく、クレアチンホスホキナーゼレベルに基づき対象にとって最適な投与量をさらに調節することができ、例えば、治療中にクレアチンホスホキナーゼの上昇が観察された場合、当該抗体の投与量を減少させてもよい。いくつかの実施形態では、ＤＸ－２９３０などの抗体を投与して切断されたキニノーゲンのレベルを健康な対象に匹敵するレベルまで減少させる。
【0148】
いくつかの実施形態では、ＤＸ－２９３０などの本明細書に開示されている抗体のいずれかおよびその機能的変異体を使用して、ＨＡＥ発作の病歴を有するヒトの患者においてＨＡＥ発作を予防するかＨＡＥ発作率を低下させてもよい。いくつかの例では、当該ヒトの患者は、１年間に少なくとも２回および任意で当該治療前の６ヶ月以内に少なくとも１回のＨＡＥ発作を経験したものである。他の例では、当該ヒトの患者は当該治療前の３ヶ月以内に少なくとも２回のＨＡＥ発作を経験したものである。他の例では、当該ヒトの患者は、当該治療前の３ヶ月以内に少なくとも９回のＨＡＥ発作、および任意で当該治療前の１２ヶ月以内に少なくとも２５回の発作（例えば３６回の発作）を有したものである。
【0149】
併用療法
本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）を、血漿カリクレインの活性に関連する疾患または病気、例えば本明細書に記載されている疾患または病気を治療するための１種以上の他の治療法と組み合わせて投与することができる。例えば、本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）を外科手術、別の抗血漿カリクレインＦａｂまたはＩｇＧ（例えば、本明細書に記載されている別のＦａｂまたはＩｇＧ）、別の血漿カリクレイン阻害剤、ペプチド阻害剤または小分子阻害剤と共に、治療的または予防的に使用することができる。本明細書に記載されている血漿カリクレイン結合抗体との併用療法で使用することができる血漿カリクレイン阻害剤の例としては、例えば国際公開第９５／２１６０１号または国際公開第２００３／１０３４７５号に記載されている血漿カリクレイン阻害剤が挙げられる。
本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）を、血漿カリクレインの活性に関連する疾患または病気、例えば本明細書に記載されている疾患または病気を治療するための１種以上の他の治療法と組み合わせて投与することができる。例えば、本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）を外科手術、別の抗血漿カリクレインＦａｂまたはＩｇＧ（例えば、本明細書に記載されている別のＦａｂまたはＩｇＧ）、別の血漿カリクレイン阻害剤、ペプチド阻害剤または小分子阻害剤と共に、治療的または予防的に使用することができる。本明細書に記載されている血漿カリクレイン結合抗体との併用療法で使用することができる血漿カリクレイン阻害剤の例としては、例えば国際公開第９５／２１６０１号または国際公開第２００３／１０３４７５号に記載されている血漿カリクレイン阻害剤が挙げられる。
【0150】
１種以上の血漿カリクレイン阻害剤を本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）と組み合わせて使用することができる。例えば、その組み合わせにより、必要とされる阻害剤の用量を低下させることができ、その結果として副作用が減少する。
【0151】
本明細書に記載されている抗体（例えばＤＸ－２９３０）を、ＨＡＥを治療するための１種以上の現在の治療法と組み合わせて投与することができる。例えば、ＤＸ－２９３０抗体をエカランチド、Ｃ１エステラーゼインヒビター（例えば、ＣＩＮＲＹＺＥ（商標））、アプロチニン（トラジロール（ＴＲＡＳＹＬＯＬ）（登録商標））および／またはブラジキニンＢ２受容体阻害剤（例えば、イカチバント（ＦＩＲＡＺＹＲ）（登録商標））などの第２の抗ＨＡＥ治療薬と同時に使用することができる。
【0152】
「組み合わせ」という用語は、その使用または作用が時間と共に重なり合う、同じ患者を治療するための２種以上の薬剤または治療法の使用を指す。当該薬剤または治療法を同時に（例えば、患者に投与される単一製剤または同時に投与される２種類の別個の製剤として）または任意の順序で連続的に与えることができる。連続投与は異なる時間で行われる投与である。一方の薬剤の投与と他方の薬剤の投与との時間は分、時間、日または週単位であってもよい。本明細書に記載されている血漿カリクレイン結合抗体は、別の治療法の投与量を減少させるために、例えば投与されている別の薬剤に付随する副作用を減少させるために使用することもできる。従って、組み合わせは、当該血漿カリクレイン結合抗体の非存在下で使用される場合よりも少なくとも１０、２０、３０または５０％少ない投与量での第２の薬剤の投与を含むことができる。
【0153】
併用療法は、他の治療法の副作用を減少させる薬剤の投与を含むことができる。当該薬剤は血漿カリクレイン関連疾患の治療の副作用を減少させる薬剤であってもよい。
【0154】
さらなる詳細がなくとも、当業者であれば上記説明に基づき本発明を最大限に利用することができると考えられる。従って、以下の具体的な実施形態は単なる例示として解釈されるべきであり、いかなる場合であっても決して本開示の残りの部分を限定するものではない。本明細書で引用されている全ての刊行物は、本明細書で言及されている目的または主題のために参照により組み込まれる。
【実施例】
【0155】
実施例１：遺伝性血管浮腫対象におけるＤＸ－２９３０の安全性、耐容性および薬物動態を評価するための第１ｂ相、二重盲検、複数回漸増用量試験
遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）対象において異なる用量レベルのＤＸ－２９３０の複数回皮下投与の安全性および耐容性を評価するために、第１ｂ相試験を行った。本試験に含まれるＨＡＥ患者には、以下の全てに基づきＨＡＥ（Ｉ型またはＩＩ型）の文書化された診断を有する患者が含まれていた：ＨＡＥ（蕁麻疹を伴わない皮下または粘膜の非そう痒性の腫れの症状発現）に一致する文書化された病歴を有すること、正常なレベルの４０％未満のＣ１インヒビター（Ｃ１－ＩＮＨ）抗原または機能的レベル（正常範囲未満のＣ４レベルおよびＩ型またはＩＩ型ＨＡＥに一致する家族歴も有していれば、正常なレベルの４０～５０％の抗原または機能的Ｃ１－ＩＮＨレベルを有する対象も試験に参加した）を有すること、最初の血管浮腫症状の発症を報告した年齢が３０歳以下であるかＩ型またはＩＩ型ＨＡＥに一致する家族歴を有すること、および１年間に２回以上のＨＡＥ発作を経験しており、その少なくとも１回の発作が最近６ヶ月間に当該対象によって報告されていること。試験に参加したＨＡＥ患者を２：１の活性薬物：プラセボの比で無作為化し、３０ｍｇ（ｎ＝４）、１００ｍｇ（ｎ＝４）、３００ｍｇ（ｎ＝５）および４００ｍｇ（ｎ＝１１）のＤＸ－２９３０またはプラセボ（ｎ＝１３）の皮下用量を１４日間隔で２回の用量として投与した。４００ｍｇ群中の１人の患者は用量を１回しか摂取せず、その上２回目の用量も摂取できずに交替させられた。代わりの患者も本試験に無関係であるという理由で本試験を完了することができず、その結果、全部で１０人の患者が４００ｍｇの用量を完了し、評価に含められた。最長５０日目にデータが利用可能である４００ｍｇの用量を摂取した群を除いて、投与から最長１２０日目（１５週）の時点で血漿を採取した。分析には安全性、薬物動態、薬力学（バイオマーカー）および有効性が含められた。当該薬物群およびプラセボ群は、年齢、人種、民族性およびＢＭＩに関して群にまとめたが、プラセボ（５４％）群に対してＤＸ－２９３０群（６７％）には僅かに多くの女性が含まれていた。
遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）対象において異なる用量レベルのＤＸ－２９３０の複数回皮下投与の安全性および耐容性を評価するために、第１ｂ相試験を行った。本試験に含まれるＨＡＥ患者には、以下の全てに基づきＨＡＥ（Ｉ型またはＩＩ型）の文書化された診断を有する患者が含まれていた：ＨＡＥ（蕁麻疹を伴わない皮下または粘膜の非そう痒性の腫れの症状発現）に一致する文書化された病歴を有すること、正常なレベルの４０％未満のＣ１インヒビター（Ｃ１－ＩＮＨ）抗原または機能的レベル（正常範囲未満のＣ４レベルおよびＩ型またはＩＩ型ＨＡＥに一致する家族歴も有していれば、正常なレベルの４０～５０％の抗原または機能的Ｃ１－ＩＮＨレベルを有する対象も試験に参加した）を有すること、最初の血管浮腫症状の発症を報告した年齢が３０歳以下であるかＩ型またはＩＩ型ＨＡＥに一致する家族歴を有すること、および１年間に２回以上のＨＡＥ発作を経験しており、その少なくとも１回の発作が最近６ヶ月間に当該対象によって報告されていること。試験に参加したＨＡＥ患者を２：１の活性薬物：プラセボの比で無作為化し、３０ｍｇ（ｎ＝４）、１００ｍｇ（ｎ＝４）、３００ｍｇ（ｎ＝５）および４００ｍｇ（ｎ＝１１）のＤＸ－２９３０またはプラセボ（ｎ＝１３）の皮下用量を１４日間隔で２回の用量として投与した。４００ｍｇ群中の１人の患者は用量を１回しか摂取せず、その上２回目の用量も摂取できずに交替させられた。代わりの患者も本試験に無関係であるという理由で本試験を完了することができず、その結果、全部で１０人の患者が４００ｍｇの用量を完了し、評価に含められた。最長５０日目にデータが利用可能である４００ｍｇの用量を摂取した群を除いて、投与から最長１２０日目（１５週）の時点で血漿を採取した。分析には安全性、薬物動態、薬力学（バイオマーカー）および有効性が含められた。当該薬物群およびプラセボ群は、年齢、人種、民族性およびＢＭＩに関して群にまとめたが、プラセボ（５４％）群に対してＤＸ－２９３０群（６７％）には僅かに多くの女性が含まれていた。
【0156】
ＤＸ－２９３０の薬物動態
ＤＸ－２９３０（Ｍ２９３－Ｄ０２）に対する抗イディオタイプ抗体を使用する有効な免疫学的検定によってＤＸ－２９３０薬物濃度を血漿中で測定した。ＤＸ－２９３０投与後の日数に対する各用量群の平均血漿中薬物濃度のプロットから、薬物濃度が用量依存的であり、かつヒトモノクローナル抗体に典型的な長期半減期を示すことは明らかであった。重要な薬物動態観察が表２および図１に要約する。最初に、Ｃｍａｘ薬物濃度は予想通りに用量の増加に伴い増加した。また、２回目の投与後のＴｍａｘは約２０日であり、半減期は約１４日であった。これらのパラメーターは健康志願者における第１ａ相試験で得られた値と一致しており、１ヶ月に１回または２回の投薬のどちらも支持するものであった。
ＤＸ－２９３０（Ｍ２９３－Ｄ０２）に対する抗イディオタイプ抗体を使用する有効な免疫学的検定によってＤＸ－２９３０薬物濃度を血漿中で測定した。ＤＸ－２９３０投与後の日数に対する各用量群の平均血漿中薬物濃度のプロットから、薬物濃度が用量依存的であり、かつヒトモノクローナル抗体に典型的な長期半減期を示すことは明らかであった。重要な薬物動態観察が表２および図１に要約する。最初に、Ｃｍａｘ薬物濃度は予想通りに用量の増加に伴い増加した。また、２回目の投与後のＴｍａｘは約２０日であり、半減期は約１４日であった。これらのパラメーターは健康志願者における第１ａ相試験で得られた値と一致しており、１ヶ月に１回または２回の投薬のどちらも支持するものであった。
【表2】
【0157】
ＤＸ－２９３０の薬力学的活性：蛍光発生活性アッセイ
２種類の異なるバイオマーカーアッセイを使用してＨＡＥ患者の血漿中のＤＸ－２９３０の薬力学的（ＰＤ）活性を調べた。第１のＰＤアッセイを蛍光発生活性アッセイと呼び、これは、ＤＸ－２９３０の薬物動態学的特性を決定するために使用される投薬後の同じ時点で治療した患者から得られたクエン酸添加血漿中のＤＸ－２９３０の生理活性の尺度を提供する。このアッセイにより、接触経路の活性化後に希釈血漿中で産生される活性血漿カリクレインの量を測定した。具体的には、希釈血漿に接触経路の酵素カスケードを伝播させる活性な第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）を添加し、２分後にＦＸＩＩａ阻害剤であるコーントリプシン阻害剤を添加して反応を停止させ、試料中に存在する活性血漿カリクレインの量をプロ蛍光性（ｐｒｏ－ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ）合成ペプチド基質を加水分解するその能力によって測定した。治療した健康志願者（第１ａ相試験）またはＨＡＥ患者（第１ｂ相試験）の血漿中の高レベルのＤＸ－２９３０の存在は、観察される血漿カリクレイン酵素反応速度（enzymatic rate）における用量依存的減少に関連していた（図２）。各時点で観察される阻害率（％）を各患者の投与前の試料中の血漿カリクレインの活性量に対して計算した。図２の観察された生理活性は、図１のＤＸ－２９３０の薬物動態学的特性と十分に相関していた。投薬後に３００ｍｇおよび４００ｍｇの用量において顕著な阻害が観察された。１００ｍｇの用量において中間の阻害が観察され、３０ｍｇの用量において見かけの阻害は明らかでなかった。
２種類の異なるバイオマーカーアッセイを使用してＨＡＥ患者の血漿中のＤＸ－２９３０の薬力学的（ＰＤ）活性を調べた。第１のＰＤアッセイを蛍光発生活性アッセイと呼び、これは、ＤＸ－２９３０の薬物動態学的特性を決定するために使用される投薬後の同じ時点で治療した患者から得られたクエン酸添加血漿中のＤＸ－２９３０の生理活性の尺度を提供する。このアッセイにより、接触経路の活性化後に希釈血漿中で産生される活性血漿カリクレインの量を測定した。具体的には、希釈血漿に接触経路の酵素カスケードを伝播させる活性な第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）を添加し、２分後にＦＸＩＩａ阻害剤であるコーントリプシン阻害剤を添加して反応を停止させ、試料中に存在する活性血漿カリクレインの量をプロ蛍光性（ｐｒｏ－ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ）合成ペプチド基質を加水分解するその能力によって測定した。治療した健康志願者（第１ａ相試験）またはＨＡＥ患者（第１ｂ相試験）の血漿中の高レベルのＤＸ－２９３０の存在は、観察される血漿カリクレイン酵素反応速度（enzymatic rate）における用量依存的減少に関連していた（図２）。各時点で観察される阻害率（％）を各患者の投与前の試料中の血漿カリクレインの活性量に対して計算した。図２の観察された生理活性は、図１のＤＸ－２９３０の薬物動態学的特性と十分に相関していた。投薬後に３００ｍｇおよび４００ｍｇの用量において顕著な阻害が観察された。１００ｍｇの用量において中間の阻害が観察され、３０ｍｇの用量において見かけの阻害は明らかでなかった。
【0158】
ＤＸ－２９３０の薬力学的活性：ウェスタンブロットアッセイ
ＨＡＥ患者は、血漿カリクレインの内因性インヒビターであるＣ１インヒビターが欠損している。その結果、これらの患者は、その１本鎖高分子量キニノーゲン基質を２本鎖に変換させる活性血漿カリクレイン、およびＨＡＥにおける疼痛および浮腫の重要なメディエーターであるブラジキニンを上昇させた。ＤＸ－２９３０は、２本鎖およびブラジキニン産生を阻止する活性血漿カリクレインの非常に強力な阻害剤である。
ＨＡＥ患者は、血漿カリクレインの内因性インヒビターであるＣ１インヒビターが欠損している。その結果、これらの患者は、その１本鎖高分子量キニノーゲン基質を２本鎖に変換させる活性血漿カリクレイン、およびＨＡＥにおける疼痛および浮腫の重要なメディエーターであるブラジキニンを上昇させた。ＤＸ－２９３０は、２本鎖およびブラジキニン産生を阻止する活性血漿カリクレインの非常に強力な阻害剤である。
【0159】
異なる血漿抗凝固因子および治療条件における血漿中の１本鎖および２本鎖高分子量キニノーゲンの相対量を測定するために、ウェスタンブロットアッセイを開発した。図３は、プロテアーゼ阻害剤の存在下で採取したＨＡＥ患者血漿（ＳＣＡＴ１６９血漿）中で観察された２本鎖の割合（％）を示す。ＳＣＡＴ１６９血漿の存在は、接触系の活性化および血液採取および血漿処理中に生じ得るその後の２本鎖の産生を防止した。従って、この２本鎖のレベルは、第１ｂ相試験におけるＨＡＥ患者（２７％）および健康志願者（１２％）の内因性レベルの割合に極めて一致することが予想された。ＤＸ－２９３０で治療したＨＡＥ患者は、投薬後８日または２２日目のいずれかに採取した試料中で測定した際に、より低い２本鎖レベルを示した。
【0160】
図４によれば、第１ｂ相試験中にＨＡＥ患者から得られた投与前のクエン酸添加血漿は約５２％の２本鎖を含んでいた。対照的に、第１ａ相試験中に得られた健康志願者からのクエン酸添加血漿試料は約８％の２本鎖を含んでいた。８日目および２２日目に採取した第１ｂ相対象の血漿中の平均２本鎖レベルも調べ、図４に示す。投与前のレベルに対する３００ｍｇおよび４００ｍｇの用量群における２本鎖レベルの統計的に有意な減少により、ＤＸ－２９３０の薬力学的活性が実証された。
【0161】
図５から、ＤＸ－２９３０を投与したＨＡＥ患者から得られたクエン酸添加血漿が第ＸＩＩａ凝固因子（ＦＸＩＩａ）により生体外で活性化された後により少ない２本鎖を示したことが分かる。３００ｍｇおよび４００ｍｇの用量群は、２本鎖の量を健康志願者で観察される量よりも少ないレベルまで減少させた。この生体外での活性化を重度のＨＡＥ発作の生体外モデルとみなしてもよい。
【0162】
これらのＰＤバイオマーカーアッセイの両方が、３００ｍｇおよび４００ｍｇの用量群で得られる薬物濃度を達成する用量選択を支持した。
【0163】
安全性
有害事象の要約を以下の表３に示す。ＤＸ－２９３０の安全性懸念を示す治療中に発生した有害事象（ＴＥＡＥ）に平衡失調は存在しなかった。最も一般的なＡＥはＨＡＥ発作、注射部位疼痛および頭痛であった。３つの深刻なＴＥＡＥ（１分間持続する注射部位疼痛、１分間持続する悪化する頭痛および寝汗）が存在した。ベースラインからの臨床検査（バイタルサインまたは身体検査）異常または変化あるいは心電図（ＥＣＧ）における異常または変化について安全性シグナルは確認されなかった。これらの結果は、ＤＸ－２９３０が最大４００ｍｇの用量でＨＡＥ患者において十分に耐容性があるように見えることを示唆している。
有害事象の要約を以下の表３に示す。ＤＸ－２９３０の安全性懸念を示す治療中に発生した有害事象（ＴＥＡＥ）に平衡失調は存在しなかった。最も一般的なＡＥはＨＡＥ発作、注射部位疼痛および頭痛であった。３つの深刻なＴＥＡＥ（１分間持続する注射部位疼痛、１分間持続する悪化する頭痛および寝汗）が存在した。ベースラインからの臨床検査（バイタルサインまたは身体検査）異常または変化あるいは心電図（ＥＣＧ）における異常または変化について安全性シグナルは確認されなかった。これらの結果は、ＤＸ－２９３０が最大４００ｍｇの用量でＨＡＥ患者において十分に耐容性があるように見えることを示唆している。
【表3】
【0164】
免疫原性
５人の患者は抗薬物抗体が陽性であった（５人中２人が断続的に変動する結果であった）。但し、陽性試料は中和しておらず、過敏症の臨床的証拠は認められず、かつ薬物動態またはバイオマーカーに対する明らかな影響も認められなかった。
５人の患者は抗薬物抗体が陽性であった（５人中２人が断続的に変動する結果であった）。但し、陽性試料は中和しておらず、過敏症の臨床的証拠は認められず、かつ薬物動態またはバイオマーカーに対する明らかな影響も認められなかった。
【0165】
有効性の評価
個々および組み合わせの３００ｍｇおよび４００ｍｇの用量のＤＸ－２９３０に焦点を当てて、プラセボと比較する後向き主要有効性解析を行った。第１ａ相から得られたＰＫモデリングが６週間の主要評価期間（８日目から５０日目）中に顕著な薬物曝露を示唆したため、この期間を使用した（図６Ａおよび図６Ｂ）。主要解析は、最近３ヶ月間に少なくとも２回の発作の最小のベースライン病歴を有する対象に焦点を当てた。当該対象の大部分が最近３ヶ月間に少なくとも２回の発作の最小要件のベースライン病歴を満たしていた。１３人のプラセボ対象のうち１１人がこの要件を満たしていた。３００ｍｇまたは４００ｍｇのＤＸ－２９３０で治療した１６人の対象のうち１５人がこの要件を満たしていた。プラセボ、３００ｍｇおよび４００ｍｇ群におけるベースラインＨＡＥ発作率はそれぞれ１週間に０．３９回、０．３３回および０．５５回の発作であった。３００ｍｇおよび４００ｍｇの組み合わせ群におけるベースライン率は１週間に０．４９回の発作であった。
個々および組み合わせの３００ｍｇおよび４００ｍｇの用量のＤＸ－２９３０に焦点を当てて、プラセボと比較する後向き主要有効性解析を行った。第１ａ相から得られたＰＫモデリングが６週間の主要評価期間（８日目から５０日目）中に顕著な薬物曝露を示唆したため、この期間を使用した（図６Ａおよび図６Ｂ）。主要解析は、最近３ヶ月間に少なくとも２回の発作の最小のベースライン病歴を有する対象に焦点を当てた。当該対象の大部分が最近３ヶ月間に少なくとも２回の発作の最小要件のベースライン病歴を満たしていた。１３人のプラセボ対象のうち１１人がこの要件を満たしていた。３００ｍｇまたは４００ｍｇのＤＸ－２９３０で治療した１６人の対象のうち１５人がこの要件を満たしていた。プラセボ、３００ｍｇおよび４００ｍｇ群におけるベースラインＨＡＥ発作率はそれぞれ１週間に０．３９回、０．３３回および０．５５回の発作であった。３００ｍｇおよび４００ｍｇの組み合わせ群におけるベースライン率は１週間に０．４９回の発作であった。
【0166】
主要手法は包括解析（ＩＴＴ）であった。ベースライン発作率を共変量として用いる分散分析（ＡＮＯＶＡ）による反復測定モデルを使用した。読み出しはプラセボ発作率と比較したＤＸ－２９３０によるＨＡＥ発作の低下率として表し、ｐ値を計算した。
【0167】
有効性評価の結果を表４および表５ならびに図７に示す。どちらもプラセボと比較して個々および組み合わせの３００ｍｇおよび４００ｍｇの用量のＤＸ－２９３０によるＨＡＥ発作率の低下を示している。特に、３００ｍｇまたは４００ｍｇで治療した１５人のＤＸ－２９３０対象中１３人が本試験の持続期間にわたって発作を生じなかったが、プラセボ群では発作を生じなかったのは１１人の対象中たった３人であった。
【表4】
【表5】
【0168】
プラセボ対象では、一次有効性評価期間中に全部で２４回の発作を生じた。これらの２４回の発作のうち、それらの主要発作位置は１３人において腹部であり、１人において喉頭であった。その発作のうち１０回は重度であり、６回は中等度であった。２４回の発作のうち２２回で発作の急性治療を行った。
【0169】
３００ｍｇまたは４００ｍｇのＤＸ－２９３０で治療した対象のうち、４００ｍｇで治療した１人の対象が１回のＨＡＥ発作を生じた。この発作は末梢における軽度なものであり８時間持続したが、急性治療は全く必要ではなかった。発作を経験した４００ｍｇのＤＸ－２９３０で治療したそれ以外の対象は２回の末梢での発作を有した。一方の発作は中等度であり、他方は重度であり、どちらの発作も急性治療法で治療した。ＨＡＥ発作の特性の要約を表６に示す。
【表6】
【0170】
次に、修正された包括（ｍＩＴＴ）事後解析を行った。２人の対象（２回の投与を受けなかった１人の対象とＩ型またはＩＩ型ＨＡＥを有していなかった１人の対象）を除外したこと以外は、ＩＴＴ集団を使用した。修正された解析の結果を表７に示す。８日目から５０日目におけるこの修正された包括解析では、プラセボと比較して、３００ｍｇのＤＸ－２９３０群では０．０００１未満のｐ値で発作において１００％の低下率が認められた。４００ｍｇのＤＸ－２９３０群では０．００２２のｐ値で発作において９５％の低下率が認められた。３００ｍｇおよび４００ｍｇの組み合わせＤＸ－２９３０群では０．０００７のｐ値でＨＡＥ発作において９７％の低下率が認められた。
【表7】
【0171】
経時的な薬物曝露に関連するＨＡＥ発作の発生率も評価した。理論によって縛られたくはないが、仮説では、より高い薬物濃度はＨＡＥ発作の予防に相関するはずであると考えられており、これは（ａ）投薬前ならびに投薬後の数日間は発作が観察されるはずであり、（ｂ）薬物濃度が蓄積するにつれて、発作は稀になるか無くなることさえあるはずであり、かつ（ｃ）薬物濃度が低下するにつれて、発作は再び現れるはずであることを意味している。この評価の結果を図８～図１３に示す。
【0172】
プラセボ群では、高い発作発生率が明らかであった（図８）。これらの事象はどんな特定のパターンもなく本試験の持続期間全体にわたって分散されていた。
【0173】
３０ｍｇおよび１００ｍｇのＤＸ－２９３０群では、８日目から５０日目に発作は生じなかった（図９および図１０）。しかし、これらの群のベースライン発作率は比較的低く、３０ｍｇ群の薬力学的効果は、目に見える程にはプラセボの効果と異なってはいなかった。３００ｍｇのＤＸ－２９３０群では、投薬前に生じた発作があった。薬物濃度が上昇するにつれて当該対象は発作を生じなくなり、薬物濃度が低下するにつれて発作が再び現れた（図１１）。同様のパターンが４００ｍｇのＤＸ－２９３０群でも観察された（図１２）。発作の発生率は顕著な薬物曝露の期間中、特に８日目から５０日目までの期間内で実質的に低下した。この期間は、薬物の蓄積前または薬物濃度の低下に伴うより低い薬物曝露の期間中に生じる発作に挟まれていた。これらの結果は、ＤＸ－２９３０薬物曝露とＨＡＥ発作の予防との間に明らかな関連性があることを示している。
【0174】
ＤＸ－２９３０の有効性をさらに評価するために、高いベースライン発作率を有するＨＡＥ患者でも観察されたＤＸ－２９３０の治療効果を調べた。投薬前の最近３ヶ月間に少なくとも９回の発作を有した対象を特定して評価した。プラセボで治療した１人、３００ｍｇのＤＸ－２９３０で治療した１人および４００ｍｇのＤＸ－２９３０で治療した４人のそのような６人の対象が存在した。
【0175】
【0176】
４００ｍｇのＤＸ－２９３０で治療した高いベースライン発作率を有する４人の対象では、８日目から５０日目までの期間中に、これらの対象のうち４人全員が発作を生じなかった（図１３、パネルＣ～Ｆ）。ここには最近３ヶ月間に３６回の発作という非常に高いベースライン率を有する１人の対象が含まれていた。これらのＤＸ－２９３０で治療した対象における発作のパターンは全体として３００ｍｇおよび４００ｍｇ群に見られたパターンと一致していた。これらの個体は薬物濃度が高い場合はどんな発作も経験しなかった。有意義な薬物蓄積の前または薬物濃度の低下後のいずれかにおいて、薬物濃度が低い場合にのみ発作が生じた。
【0177】
これらのデータから、ＤＸ－２９３０の治療効果が高いベースライン発作率を有するＨＡＥ患者のおいて明らかであることも観察された。
【0178】
要約すると、本試験は、（ａ）ＤＸ－２９３０について明らかな安全性シグナルは存在しなかったこと、（ｂ）ＰＫプロファイルが全体としてモノクローナル抗体と一致し、かつ２週間ごとに１回またはさらにそれよりも少ない頻繁での投薬レジメンを支持したこと、（ｃ）薬力学的データがＤＸ－２９３０により少なくともキニノーゲンバイオマーカーアッセイの関連においてＨＡＥ血漿の異常な不安定性が正常化されたことを実証したこと、および（ｄ）ＤＸ－２９３０によるＨＡＥ発作予防の極めて統計的に有意な所見が観察されたことを示している。具体的には、プラセボと比較して、３００ｍｇおよび４００ｍｇのＤＸ－２９３０治療群によりそれぞれ発作において１００％および８８％の低下が認められた。この臨床的効果は経時的な薬物曝露と論理的に関連しており、高いベースライン発作率を有する患者のサブセットでも観察された。
【0179】
これらのデータは、ＨＡＥ発作に対する長期間の予防におけるＤＸ－２９３０の概念実証を示している。
【0180】
実施例２：遺伝性血管浮腫患者における血漿カリクレインに対するＤＸ－２９３０の薬力学的効果
遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）の発作は、高分子量キニノーゲン（ＨＭＷＫ）を切断して２本鎖ＨＭＷＫを生じる血漿カリクレイン（ｐＫａｌ）および浮腫誘導性ペプチドであるブラジキニンの急増を生じさせる制御されない接触系の活性化に起因している。ＤＸ－２９３０は、ＨＡＥ発作の予防のために開発中のｐＫａｌのヒトモノクローナル抗体阻害剤である。ＨＡＥを有する対象においてＤＸ－２９３０の薬力学的生理活性を評価した。
遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）の発作は、高分子量キニノーゲン（ＨＭＷＫ）を切断して２本鎖ＨＭＷＫを生じる血漿カリクレイン（ｐＫａｌ）および浮腫誘導性ペプチドであるブラジキニンの急増を生じさせる制御されない接触系の活性化に起因している。ＤＸ－２９３０は、ＨＡＥ発作の予防のために開発中のｐＫａｌのヒトモノクローナル抗体阻害剤である。ＨＡＥを有する対象においてＤＸ－２９３０の薬力学的生理活性を評価した。
【0181】
上記実施例１に記載したように、第１ｂ相多施設二重盲検試験では、Ｉ型またはＩＩ型ＨＡＥを有する対象を無作為化して３０ｍｇ、１００ｍｇ、３００ｍｇまたは４００ｍｇ（ｎ＝４、４、５、１１）用量群あるいはプラセボ（ｎ＝１３）群として２回のＤＸ－２９３０皮下投与を行った。試験薬の投与前および投与後（１、８、２２、６４、９２、１２０日目）に血液試料を得た。２本鎖ＨＭＷＫのためにウェスタンブロットを用いて、ベースおよびＦＸＩＩＡで活性化されたクエン酸添加血漿中でｐＫａｌを阻害するＤＸ－２９３０の能力を評価した。
【0182】
本試験から得られた結果から、プラセボで治療した対象と比較した場合、平均２本鎖ＨＭＷＫレベルが有意に減少し、かつ８および２２日目にならびに８、２２および５０日目に３００ｍｇおよび４００ｍｇの用量群のそれぞれにおいて本質的に正常化されることが分かった。３００ｍｇまたは４００ｍｇのＤＸ－２９３０による治療により、２本鎖産生の急上昇もＦＸＩＩＡで活性化された試料において健康な個体で観察されるレベルまたはそれよりも低いレベルまで弱まった。低い薬物曝露の期間に対応するＤＸ－２９３０の投与後６４、９２または１２０日目に採取された活性化試料または非活性化試料のいずれにおいても、２本鎖ＨＭＷＫのレベルは投与前の血漿試料と異ならなかった。
【0183】
要約すると、本試験は、ＤＸ－２９３０がＨＡＥ患者において用量および時間依存的にｐＫａｌを阻害することを示している。
【0184】
実施例３：薬物曝露と遺伝性血管浮腫を有する対象におけるＤＸ－２９３０の第１ｂ相試験で観察される臨床的応答との関係
ＤＸ－２９３０は、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）発作の予防のために開発中の血漿カリクレインのヒトモノクローナル抗体阻害剤である。上記実施例１に記載されているＨＡＥ対象におけるＤＸ－２９３０の第１ｂ相試験で得られたデータを解析して、薬物曝露と臨床的応答との関係を特徴づけた。
ＤＸ－２９３０は、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）発作の予防のために開発中の血漿カリクレインのヒトモノクローナル抗体阻害剤である。上記実施例１に記載されているＨＡＥ対象におけるＤＸ－２９３０の第１ｂ相試験で得られたデータを解析して、薬物曝露と臨床的応答との関係を特徴づけた。
【0185】
この第１ｂ相多施設二重盲検試験では、Ｉ型またはＩＩ型ＨＡＥを有する対象を無作為化して３０ｍｇ、１００ｍｇ、３００ｍｇまたは４００ｍｇ（ｎ＝４、４、５、１１）用量群あるいはプラセボ（ｎ＝１３）群として２回のＤＸ－２９３０皮下投与を行った。この事後解析では、ＨＡＥ発作の発生率を経時的な薬物曝露との関連で評価した。また、ＤＸ－２９３０の最大用量レジメンを摂取する対象との関連で臨床的効果を評価するために、事後の修正された包括有効性解析（ｍＩＴＴ）を行った。
【0186】
プラセボで治療した対象は本試験中にＨＡＥ発作を報告した（９人の対象、６５回のＨＡＥ発作）。３００ｍｇおよび４００ｍｇの用量群では、初回投薬前または直後にＨＡＥ発作が報告された。薬物濃度が高いとき（８～５０日目）には、１人の対象を除く全ての対象が発作を生じなかった。薬物濃度が低くなるにつれて発作は再び現れた。ｍＩＴＴ有効性解析では、８～５０日目にプラセボと比較して、３００ｍｇおよび４００ｍｇのＤＸ－２９３０群ではそれぞれ発作において１００％（Ｐ＜０．０００１）および９５％（Ｐ＝０．００２２）の減少が認められた。
【0187】
従って、本試験は、顕著な薬物曝露の期間中にＨＡＥ発作が実質的に減少したか皆無になったことを示しており、これは、より高い薬物濃度がＨＡＥ発作予防と相関しているはずであるという示唆に一致している。
【0188】
実施例４：遺伝性血管浮腫の長期間の予防のためのＤＸ－２９３０投薬レジメン候補を特定するためのモデリングおよび解析
ＤＸ－２９３０は遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）発作の予防のために開発中の血漿カリクレインのヒトモノクローナル抗体阻害剤である。上記実施例１に記載されているＤＸ－２９３０の第１相試験から得られたデータをモデル化および解析して投薬レジメン候補を特定した。
ＤＸ－２９３０は遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）発作の予防のために開発中の血漿カリクレインのヒトモノクローナル抗体阻害剤である。上記実施例１に記載されているＤＸ－２９３０の第１相試験から得られたデータをモデル化および解析して投薬レジメン候補を特定した。
【0189】
第１相臨床試験から得られた薬物動態、薬力学および有効性データを調べた。血漿薬物濃度に対するＨＡＥ発作の発生率を評価して、発作を予防するために必要な薬物濃度を通して定常状態を推定した。
【0190】
極めて重要な有効性研究のために、２週間ごと（ｑ２）または４週間ごと（ｑ４）に３００ｍｇおよび４週間ごとに１５０ｍｇのＤＸ－２９３０からなる投薬レジメンを検討する。薬物動態学的モデリングにより２７，０００、９，５００および４，７５０ｎｇ／ｍＬの血漿中濃度のそれぞれを通して定常状態を予測する。第１ｂ相試験では、２７，０００ｎｇ／ｍＬ（３００ｍｇのＤＸ－２９３０の２２日目におけるおおよその薬物濃度に対応する）において、２本鎖高分子量キニノーゲンが健康な対象で観察されるレベルに近いレベルまで抑制された。従って、３００ｍｇ（ｑ２）は定常状態においてＨＡＥ血漿の不安定性を正常化させるものと予測される。ＨＡＥ予防の成功にはそのような高レベルの薬力学的効果を必要としない場合があるため、血漿薬物濃度に関連する臨床的効果の解析も行った。ＤＸ－２９３０治療後の第１ｂ相試験では、２４／２５回の発作（９６％）、２１／２５回の発作（８４％）および１８／２５回の発作（７２％）がそれぞれ、２７，０００、９，５００および４，７５０ｎｇ／ｍＬ未満の血漿中濃度において生じ、これは臨床的応答の有意義な範囲はこの薬物曝露の範囲と関連していることを示唆している。
【0191】
この解析では、極めて重要な有効性研究におけるさらなる臨床試験のためにＤＸ－２９３０の投薬レジメン候補を特定した。
【0192】
実施例５：Health Analytics社レセプト情報データベースの解析において遺伝性血管浮腫は神経因性疼痛、全身性エリテマトーデスおよび全身性肥満細胞症に関連している
血漿カリクレインキニン系（ＫＫＳ）は、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）の重要なメディエーターであるだけでなく様々な疾患に関連づけられている。本研究では、ＨＡＥ患者がそのようなＫＫＳ関連疾患、すなわち腹部の大動脈瘤、アナフィラキシー、心血管麻痺症候群（cardiac vasoplegia syndrome）、クローン病、糖尿病性黄斑浮腫、特発性アナフィラキシー、神経因性疼痛、乾癬、乾癬性関節炎、網膜症、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、全身性肥満細胞症、全身性脈管炎、血栓性脳血管障害（thrombotic cerebrovascular accident）および潰瘍性大腸炎を発症する傾向があるか否かを調査した。
血漿カリクレインキニン系（ＫＫＳ）は、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）の重要なメディエーターであるだけでなく様々な疾患に関連づけられている。本研究では、ＨＡＥ患者がそのようなＫＫＳ関連疾患、すなわち腹部の大動脈瘤、アナフィラキシー、心血管麻痺症候群（cardiac vasoplegia syndrome）、クローン病、糖尿病性黄斑浮腫、特発性アナフィラキシー、神経因性疼痛、乾癬、乾癬性関節炎、網膜症、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、全身性肥満細胞症、全身性脈管炎、血栓性脳血管障害（thrombotic cerebrovascular accident）および潰瘍性大腸炎を発症する傾向があるか否かを調査した。
【0193】
本研究では、２０１０年から１月から２０１４年７月までの米国の８０００万人の生命のための医療費支払人の個々のレベルのレセプト情報データおよびメディケア追加計画を含むTruven MarketScanデータベースを利用した。このデータセット内では、ＨＡＥ集団（ｎ＝１０６３）および２つの対照集団、すなわちＨＡＥ患者を除く血管浮腫集団（ｎ＝１３８，８５１）および一般集団（ｎ＝７９，９７１，０９８）がＩＣＤ－９と処方薬物コードとの組み合わせを用いて定められていた。併存疾患のためのレセプト情報を特定して、計算したオッズ比および９５％信頼区間（ＣＩ）を用いて当該集団全体を比較した。
【0194】
以下の表８に示すように、ＨＡＥ集団では、血管浮腫対照集団よりも２．３倍（ＯＲ：２．３０、９５％ＣＩ：１．４７～３．５９）も多い頻度でＳＬＥが観察された。血管浮腫対照集団よりも１．４５倍（ＯＲ：１．４５、９５％ＣＩ：１．０１～２．０９）多い頻度で神経因性疼痛が観察され、４．７９倍（ＯＲ：４．７９、９５％ＣＩ：１．５１～１５．１８）も多い頻度で全身性肥満細胞症が観察された。
【表8】
【0195】
要約すると、大型の長期レセプト情報データベースの解析により、ＳＬＥ、神経因性疼痛および全身性肥満細胞症の併存疾患が他の型の血管浮腫よりもＨＡＥ患者において大きな割合を占めていることが明らかとなり、これはＫＫＳの活性がこれらの疾患の発現に寄与している可能性があることを示唆している。従って、ＨＡＥを有するかそのリスクのある患者は、神経因性疼痛、全身性エリテマトーデスおよび全身性肥満細胞症などのＫＫＳ関連疾患に罹患しやすい傾向があり得る。従って、ＤＸ－２９３０などのｐＫａｌ阻害剤による治療により、そのようなＫＫＳ関連疾患の発生リスクを低下させることができる。
【0196】
実施例６：負荷投与期間および維持期間を含む二重盲検試験
無作為化、二重盲検、プラセボ対照、並行群間比較試験を行う。４週間の間に少なくとも１回の発作を有するＩ型またはＩＩ型ＨＡＥ患者を含むように患者を選択する。導入期間を使用してベースラインＨＡＥ発作率を評価する。患者を１：１：１で無作為化して３種類の異なる治療群（３００ｍｇのＤＸ－２９３０、１５０ｍｇのＤＸ－２９３０またはプラセボ）に分けて、皮下注射により投与する。本試験を負荷投与期間および維持期間を含めて設計する（図１４）。負荷投与期間中の０、７および１４日目に対象を治療し、その後は維持期間中に２週間ごとに投薬を行う（２８、４２、５６、７０および８４日目）。
無作為化、二重盲検、プラセボ対照、並行群間比較試験を行う。４週間の間に少なくとも１回の発作を有するＩ型またはＩＩ型ＨＡＥ患者を含むように患者を選択する。導入期間を使用してベースラインＨＡＥ発作率を評価する。患者を１：１：１で無作為化して３種類の異なる治療群（３００ｍｇのＤＸ－２９３０、１５０ｍｇのＤＸ－２９３０またはプラセボ）に分けて、皮下注射により投与する。本試験を負荷投与期間および維持期間を含めて設計する（図１４）。負荷投与期間中の０、７および１４日目に対象を治療し、その後は維持期間中に２週間ごとに投薬を行う（２８、４２、５６、７０および８４日目）。
【0197】
他の実施形態
本明細書に開示されている全ての特徴をあらゆる組み合わせで組み合わせてもよい。本明細書に開示されている各特徴を同じ、同等または同様の目的を果たす他の特徴で置き換えてもよい。従って、明示的に別段の定めがない限り、開示されている各特徴は一般的な一連の同等または同様の特徴の単なる例である。
本明細書に開示されている全ての特徴をあらゆる組み合わせで組み合わせてもよい。本明細書に開示されている各特徴を同じ、同等または同様の目的を果たす他の特徴で置き換えてもよい。従って、明示的に別段の定めがない限り、開示されている各特徴は一般的な一連の同等または同様の特徴の単なる例である。
【0198】
当業者であれば、上記説明から本発明の必須の特性を容易に確認することができ、その趣旨および範囲から逸脱することなく本発明の各種変形および修正を行い、それを各種用法および条件に適合させることができる。従って、他の実施形態も特許請求の範囲に含まれる。
【0199】
均等物
本発明のいくつかの実施形態について本明細書に説明および図示してきたが、当業者であれば、当該機能を実施し、かつ／または本明細書に記載されている結果および／または１つ以上の利点を得るための様々な他の手段および／または構造を容易に思い付き、そのような変形および／または修正のそれぞれが本明細書に記載されている本発明の実施形態の範囲内であるとみなされる。より一般には、当業者であれば、本明細書に記載されている全てのパラメーター、寸法、材料および構成が例示的なものであり、実際のパラメーター、寸法、材料および／または構成は本発明の教示が使用される具体的な用途によって決まることを容易に理解するであろう。当業者であれば、本明細書に記載されている本発明の具体的な実施形態の多くの均等物を認識しているか、日常的な実験法のみを用いて確かめることができる。従って、当然のことながら、上記実施形態は例としてのみ提供されており、添付の特許請求の範囲およびその均等物の範囲内で、具体的に記載および特許請求されているもの以外の方法で本発明の実施形態を実施することができる。本開示の本発明の実施形態は、本明細書に記載されている各個々の特徴、システム、物品、材料、キットおよび／または方法に関する。また、２つ以上のそのような特徴、システム、物品、材料、キットおよび／または方法のあらゆる組み合わせは、そのような特徴、システム、物品、材料、キットおよび／または方法が互いに相反しない限り、本開示の本発明の範囲に含まれる。
本発明のいくつかの実施形態について本明細書に説明および図示してきたが、当業者であれば、当該機能を実施し、かつ／または本明細書に記載されている結果および／または１つ以上の利点を得るための様々な他の手段および／または構造を容易に思い付き、そのような変形および／または修正のそれぞれが本明細書に記載されている本発明の実施形態の範囲内であるとみなされる。より一般には、当業者であれば、本明細書に記載されている全てのパラメーター、寸法、材料および構成が例示的なものであり、実際のパラメーター、寸法、材料および／または構成は本発明の教示が使用される具体的な用途によって決まることを容易に理解するであろう。当業者であれば、本明細書に記載されている本発明の具体的な実施形態の多くの均等物を認識しているか、日常的な実験法のみを用いて確かめることができる。従って、当然のことながら、上記実施形態は例としてのみ提供されており、添付の特許請求の範囲およびその均等物の範囲内で、具体的に記載および特許請求されているもの以外の方法で本発明の実施形態を実施することができる。本開示の本発明の実施形態は、本明細書に記載されている各個々の特徴、システム、物品、材料、キットおよび／または方法に関する。また、２つ以上のそのような特徴、システム、物品、材料、キットおよび／または方法のあらゆる組み合わせは、そのような特徴、システム、物品、材料、キットおよび／または方法が互いに相反しない限り、本開示の本発明の範囲に含まれる。
【0200】
本明細書で定義および使用されている全ての定義は、辞書の定義、参照により組み込まれる文献内での定義および／または定義されている用語の通常の意味よりも優先されるものと理解されるべきである。
【0201】
本明細書および特許請求の範囲において本明細書で使用される不定冠詞の「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」は、特に明らかな矛盾がない限り、「少なくとも１つ」を意味するものとして解釈されるべきである。
【0202】
本明細書および特許請求の範囲において本明細書で使用される「および／または」という語句は、そのように結合された要素、すなわち場合によっては合接的に存在し、かつそれ以外の場合には離接的に存在する要素の「いずれか一方または両方」を意味するものとして解釈されるべきである。「および／または」と共に列挙されている複数の要素は同様に、すなわち、そのように結合された要素の「１つ以上」と解釈されるべきである。具体的に特定されているそれらの要素に関連しているか否かに関わらず、「および／または」の句によって具体的に特定されている要素以外の他の要素が任意で存在してもよい。従って、非限定的な例として、「Ａおよび／またはＢ」という言及は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの非限定的な言語と共に使用されている場合、例えば、一実施形態ではＡのみ（任意でＢ以外の要素を含む）を指すことができ、別の実施形態ではＢのみ（任意でＡ以外の要素を含む）を指すことができ、さらに別の実施形態ではＡおよびＢの両方（任意で他の要素を含む）を指すことができる。
【0203】
本明細書および特許請求の範囲において本明細書で使用される「または（ｏｒ）」は、上に定義した「および／または」と同じ意味を有するものとして理解されるべきできある。例えば列挙されている項目を区切る場合の「または」あるいは「および／または」は包括的なもの、すなわち少なくとも１つを包含するが複数または列挙されている要素の２つ以上も含み、かつ任意でさらなる列挙されていない項目も含むものとして解釈されるべきである。「～のうちのたった１つ」または「～のうちの厳密に１つ」などの明らかに矛盾していることを示す用語のみ、あるいは特許請求の範囲において使用されている場合の「～からなる（consisting of）」は、複数または列挙されている要素の厳密に１つの要素の包含を指す。一般に、本明細書で使用される「または（ｏｒ）」という用語は、「～のうちのいずれか」、「～のうちの１つ」、「～のうちの１つのみ」または「～のうちの厳密に１つ」などの排他性の用語が付随している場合に、排他的な二者択一（すなわち「一方または他方であるが両方ではない」）を示すものとしてのみ解釈されるべきである。「本質的に～からなる（consisting essentially of）」は、特許請求の範囲で使用される場合、特許法の分野で使用されるその通常の意味を有するものとする。
【0204】
本明細書および特許請求の範囲において本明細書で使用される「少なくとも１つ」という語句は、列挙されている１つ以上の要素について言及する場合、その列挙されている要素の中の任意の１つ以上の要素から選択される少なくとも１つの要素を意味するものとして解釈されるべきであるが、必ずしもその列挙されている要素の中のありとあらゆる具体的に列挙されている要素の少なくとも１つを含むものではなく、その列挙されている要素の中の要素のどんな組み合わせも排除するものではない。この定義は、具体的に特定されているそれらの要素に関連しているか否かに関わらず、「少なくとも１つ」という語句が指すその列挙されている要素の中の具体的に特定されている要素以外の要素が任意で存在してもよいことも認める。従って、非限定的な例として、「ＡおよびＢのうちの少なくとも１つ」（または、同等に「ＡまたはＢのうちの少なくとも１つ」、あるいは同等に「Ａおよび／またはＢのうちの少なくとも１つ」）は、例えば、一実施形態ではＢが存在しない少なくとも１つの（任意で２つ以上を含む）Ａ（および任意でＢ以外の要素を含む）を指すことができ、別の実施形態では、Ａが存在しない少なくとも１つの（任意で２つ以上を含む）Ｂ（および任意でＡ以外の要素を含む）を指すことができ、さらに別の実施形態では、少なくとも１つの（任意で２つ以上を含む）Ａおよび少なくとも１つの（任意で２つ以上を含む）Ｂ（および任意で他の要素を含む）を指すことができる。
【0205】
また当然のことながら、特に明らかな矛盾がない限り、２つ以上の工程または行為を含む本明細書において特許請求されているあらゆる方法において、当該方法の工程または行為の順序は必ずしも当該方法の工程または行為が列挙されている順序に限定されない。
【0206】
特許請求の範囲ならびに上記本明細書において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「保有する（ｃａｒｒｙｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ）」、「保持する（ｈｏｌｄｉｎｇ）」、「～からなる（composed of）」などの全ての移行語は、非限定的なもの、すなわち「～を含むがそれに限定されない」を意味するように理解されるべきである。「～からなる（consisting of）」および「本質的に～からなる（consisting essentially of）」という移行語だけは、特許審査手順の米国特許庁マニュアルのセクション２１１１．０３に記載されているようにそれぞれ限定的または半限定的な移行語とする。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13A】
【図13B】
【図13C】
【図13D】
【図13E】
【図13F】
【図14】
【配列表】