特許 7181954 高いＡｈＲ活性化能を有する乳酸菌

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-11-22

(45)【発行日】2022-12-01

(54)【発明の名称】高いＡｈＲ活性化能を有する乳酸菌

(51)【国際特許分類】

   C12N 1/20 20060101AFI20221124BHJP

   A61K 35/747 20150101ALI20221124BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20221124BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20221124BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20221124BHJP

   A23L 33/135 20160101ALN20221124BHJP

【ＦＩ】

C12N1/20 E

A61K35/747

A61P37/06

A61P37/08

A61P43/00 107

A23L33/135

【請求項の数】 2

(21)【出願番号】P 2021037225

(22)【出願日】2021-03-09

(62)【分割の表示】P 2016201382の分割

【原出願日】2016-10-13

(65)【公開番号】P2021101711

(43)【公開日】2021-07-15

【審査請求日】2021-03-09

【微生物の受託番号】NPMD  NITE BP-02003

【前置審査】

(73)【特許権者】

【識別番号】000006138

【氏名又は名称】株式会社明治

(74)【代理人】

【識別番号】110001047

【氏名又は名称】弁理士法人セントクレスト国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】栗原 俊祐

(72)【発明者】

【氏名】逸見 隼

(72)【発明者】

【氏名】狩野 宏

【審査官】鈴木 崇之

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１６／１３６９４２（ＷＯ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１２／０３３１５１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】Semin. Immunopathol.，2013年，Vol. 35，pp. 671-675

【文献】Immunol. Cell Biol.，2010年，Vol. 88，pp. 685-689

【文献】Immunity，2013年，Vol. 39，pp. 372-385

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １／００－７／０８

Ａ２３Ｌ ５／４０－５／４９

Ａ２３Ｌ ３１／００－３３／２９

Ａ６１Ｋ ３５／７４７

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＰｕｂＭｅｄ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＨｅＸＳ３４細胞に３７℃、２４時間の菌体処理（凍結乾燥菌体の重量濃度が５０ｍｇ／ｍＬ）を加えることで、ＰＢＳ群と比較して１４倍以上のＳＥＡＰ活性を有するＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉを含有する、芳香族炭化水素レセプター（ＡｈＲ）活性化により自己免疫疾患またはアレルギーを抑制するための経口摂取用組成物であり、
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉとして、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＪＣＭ２０１２ＴまたはＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＯＬＬ２０３５６５（受託番号：ＮＩＴＥ ＢＰ－０２００３）を含有する、経口摂取用組成物。

【請求項2】

Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉとして、その培養物、分泌物、死菌体、またはその破砕物を含有する、請求項１に記載の経口摂取用組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、芳香族炭化水素レセプター（ＡｈＲ）を活性化することで、腸内において炎症の抑制作用を発揮する乳酸菌に関する。

【背景技術】

【0002】

芳香族炭化水素レセプター（Ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ＡｈＲ）は、ほとんどの細胞、組織に発現が見られる、ｂＨＬＨ－ＰＡＳファミリーに属する転写因子であり、リガンドの結合によって様々な遺伝子の転写活性化を引き起こすことが知られている。ＡｈＲのリガンドとしては、ダイオキシンやポリ塩化ビフェニルなどの化合物が知られている。

【0003】

免疫学的な知見として、ＡｈＲの活性化は、制御性Ｔ細胞の誘導やＴｈ１７細胞の分化の抑制を通して、Ｉ型糖尿病、自己免疫性ブドウ膜炎、多発性硬化症といった自己免疫性疾患の改善や、ピーナッツアレルギー等の食物アレルギーの改善に寄与することが知られている。このことから、ＡｈＲの活性化能が高い物質や素材等は、自己免疫疾患やアレルギー等の過剰な免疫応答を抑制できる有用な物質である可能性が考えられる。

【0004】

これまで、ＡｈＲの活性化能の高い物質や素材等について、様々な探索検討がされている。例えば、特許５９１９１９３号公報（特許文献１）では、ＡｈＲの活性化能を有する乳酸菌として、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｃｒｅｍｏｒｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓが記載されている。特開２０１１－１６２４８２号公報（特許文献２）には、芳香族炭化水素レセプターを活性化する物質を有効成分として含有する腸がん抑制剤が記載されており、具体的な有効成分として、インドール誘導体やフラボノイド類が記載されている。しかし、更にＡｈＲの活性化能が高く、かつ、摂取しやすい形態であり、安全で副作用のない物質や素材等が求められている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【文献】特許５９１９１９３号公報

【文献】特開２０１１－１６２４８２号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

このような背景から、本発明では、摂取しやすい形態であり、安全で副作用のない素材として乳酸菌に着目した。本発明では、これまでにない高いＡｈＲの活性化能を有する乳酸菌を提供することを課題とする。

【課題を解決するための手段】

【0007】

上記課題を解決するために、本発明者らは、身近で手軽に摂取できる素材として所定の乳酸菌に着目し、ＡｈＲの活性化能について詳細に検討した。そして、その結果として、乳酸菌の中でも、一定の条件を満たすＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉやＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓが顕著なＡｈＲの活性化能を有することを見出し、本発明を完成させた。

【0008】

すなわち、本発明は、次の通りとなる。
［１］Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉを含有する、芳香族炭化水素レセプター（ＡｈＲ）活性化のための経口摂取用組成物。
［２］ＨｅＸＳ３４細胞に３７℃、２４時間の菌体処理（凍結乾燥菌体の重量濃度が５０ｍｇ／ｍＬ）を加えることで、ＰＢＳ群と比較して１４倍以上のＳＥＡＰ活性を有するＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉを含有する、［１］に記載の経口摂取用組成物。
［３］Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉとして、その培養物、分泌物、死菌体、またはその破砕物を含有する、［１］または［２］に記載の経口摂取用組成物。

【発明の効果】

【0009】

本発明によれば、これまでにない高いＡｈＲの活性化能を有する乳酸菌を提供できる。本発明の乳酸菌や、例えばそれを用いて調製した発酵乳を摂取することで、ＡｈＲの活性化による抗炎症作用を得ることができる。特に、乳酸菌は食経験が豊富な食品であり、身近で手軽かつ安全に摂取できるので、自己免疫疾患やアレルギー等の過剰な免疫応答の抑制に大きく寄与できる。

【図面の簡単な説明】

【0010】

【図1】実施例において、表１に示した菌株のＳＥＡＰ活性を比較した結果を示すグラフである。横棒は、各菌体の測定値の標準偏差を示している。

【発明を実施するための形態】

【0011】

本発明は、芳香族炭化水素レセプター（ＡｈＲ）活性化能を有するＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓやＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉに関する。本発明において、「ＡｈＲ活性化能」とは、ＡｈＲ活性化によって開始されるシグナル伝達経路を活性化することができる能力のことをいい、活性化するメカニズムは何であってもよい。したがって、必ずしも菌体そのものがＡｈＲのリガンドである必要はなく、例えば菌が産生する分泌物質がＡｈＲ活性化能を有していてもよいし、死菌体またはその破砕物などによってＡｈＲが活性化されてもよい。したがって、本発明において特定の菌について言及する場合、生菌そのものだけでなく、死菌体またはその破砕物、該菌の培養物または分泌物も含まれる。

【0012】

本発明では、ＡｈＲ活性化能の評価方法は特に限定されず、公知の方法で測定して評価できる。ＡｈＲ活性化能の評価方法として、例えば、分泌型アルカリフォスファターゼ（ＳＥＡＰ）活性を指標にする方法や、所定のヒト細胞を用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＣＹＰ１Ａ１の発現量を測定する方法などが挙げられるが、簡便さの観点から、ＳＥＡＰ活性を測定し評価する方法が好ましい。

【0013】

本発明のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓやＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉはＡｈＲ活性化能を有し、抗炎症性の効果を発揮することができる。したがって、本発明のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓやＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉを抗炎症剤の有効成分として用いることができる。本発明のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓやＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉを抗炎症剤の有効成分として用いる場合、生菌、死菌、培養物やその加工物を用いることが可能である。前記培養物とは、本発明のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓやＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉの培養終了後の培養上清や培地成分をそのまま用いるものであり、前記加工物は、培養物に由来すればとくに限定されないが、例えば、培養物の濃縮、ペースト化、噴霧乾燥、凍結乾燥、真空乾燥、ドラム乾燥、液状化、希釈、破砕などの加工により得られる物が挙げられる。これらの加工には、公知の方法を適宜用いることができる。前記培養物中または前記加工物中において、本発明のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓやＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉは、生菌であっても死菌であってもよい。摂取によって腸内有害菌の増殖を抑制して腸内環境を改善する、という観点から、好ましくは生菌として組成物中に含まれる。

【0014】

また本発明のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓやＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、その培養物、またはその加工物には、適宜、例えば、培地成分、経口経管摂取に適した添加物および水などの溶媒、糖質、タンパク質、脂質、ビタミン類、生体必須微量金属、香料、薬学的に許容し得る担体、食品添加物などの任意成分を添加し、医薬組成物や食品組成物などの経口摂取用組成物とすることができる。

【0015】

本明細書において、「経口摂取用組成物」とは、経口摂取可能な全ての組成物を意味する。したがって、経口摂取用組成物には、これに限定するものではないが、例えば飲料品組成物、食品組成物、飼料組成物、医薬組成物、などが含まれる。

【0016】

本発明の飲料品組成物は、典型的には、ＡｈＲ活性化能を有するＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓやＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、その培養物およびその加工品から選択される１または２以上を含む。本発明の飲料品組成物にはさらに、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓやＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉの生育を妨げない限り、糖質、タンパク質、脂質、ビタミン類、生体必須微量金属（硫酸マンガン、硫酸亜鉛、塩化マグネシウム、炭酸カリウムなど）、香料やその他の配合物を含むことができる。かかる飲料品組成物は、摂取個体の腸内環境を改善し、炎症性疾患の改善および／または予防効果を奏する。

【0017】

本発明の食品組成物は、典型的には、ＡｈＲ活性化能を有するＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓやＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、その培養物およびその加工品から選択される１または２以上を含む。本発明の食品組成物にはさらに、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓやＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉの生育を妨げない限り、糖質、タンパク質、脂質、ビタミン類、生体必須微量金属（硫酸マンガン、硫酸亜鉛、塩化マグネシウム、炭酸カリウムなど）、香料やその他の配合物を含むことができる。かかる食品組成物は、摂取個体の腸内環境を改善し、炎症性疾患の改善および／または予防効果を奏する。

【0018】

糖質としては、糖類、加工澱粉（デキストリンのほか、可溶性澱粉、酸化澱粉、澱粉エステル、澱粉エーテルなど）、食物繊維などが挙げられる。タンパク質としては、例えば全脂粉乳、脱脂粉乳、部分脱脂粉乳、カゼイン、ホエイ粉、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物、ホエイタンパク質分離物、α－カゼイン、β－カゼイン、κ－カゼイン、β－ラクトグロブリン、α－ラクトアルブミン、ラクトフェリン、大豆タンパク質、鶏卵タンパク質、肉タンパク質などの動植物性タンパク質、これら加水分解物；バター、乳性ミネラル、クリーム、ホエイ、非タンパク態窒素、シアル酸、リン脂質、乳糖などの各種乳由来成分などが挙げられる。

【0019】

脂質としては、例えば、ラード、魚油など、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油などの動物性油脂；パーム油、サフラワー油、コーン油、ナタネ油、ヤシ油、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油などの植物性油脂などが挙げられる。ビタミン類としては、例えば、ビタミンＡ、カロチン類、ビタミンＢ群、ビタミンＣ、ビタミンＤ群、ビタミンＥ、ビタミンＫ群、ビタミンＰ、ビタミンＱ、ナイアシン、ニコチン酸、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、コリン、葉酸などが挙げられ、ミネラル類としては、例えば、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ナトリウム、銅、鉄、マンガン、亜鉛、セレンなどが挙げられる。

【0020】

本発明の飲料品組成物および食品組成物のカテゴリーや種類に制限はなく、機能性食品、特定保健用食品、特定用途食品、栄養機能食品、健康食品、介護用食品でもよく、また、菓子、乳酸菌飲料、チーズやヨーグルトなどの乳製品、調味料などであってもよい。飲食品の形状についても制限はなく、固形、液状、流動食状、ゼリー状、タブレット状、顆粒状、カプセル状など、通常流通し得るあらゆる飲食品形状をとることができ、各種食品（牛乳、清涼飲料、発酵乳、ヨーグルト、チーズ、パン、ビスケット、クラッカー、ピッツァクラスト、調製粉乳、流動食、病者用食品、栄養食品、冷凍食品、加工食品その他の市販食品など）に添加してもよい。上記飲食品の製造は、当業者の常法によって行うことができる。

【0021】

本発明のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓやＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、その培養物、またはその加工物は、上記のとおり、乳製品・発酵乳を含む一般飲食品に加工できる他、ヨーグルトやチーズなどの乳製品・発酵乳の製造用スターターとして利用することも可能である。スターターとする場合は、本発明のプロバイオティクスの生存および増殖に支障がない限り、また、乳製品製造に支障がない限り、他の微生物が混合されていてもよい。例えば、ヨーグルト用乳酸菌として主要な菌種であるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓなどと混合してもよく、その他、一般にヨーグルト用やチーズ用として用いられる菌種と混合してスターターとすることができる。上記スターターによる乳製品、発酵乳の製造は、常法に従って行うことができる。例えば、加温・混合・均質化・殺菌処理後に冷却した乳または乳製品に、上記スターターを混合し、発酵・冷却することにより、プレーンヨーグルトを製造することができる。

【0022】

本発明の飼料組成物は、典型的には、ＡｈＲ活性化能を有するＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓやＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、その培養物およびその加工品から選択される１または２以上を含む。本発明の飼料組成物にはさらに、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓやＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉの生育を妨げない限り、糖質、タンパク質、脂質、ビタミン類、生体必須微量金属（硫酸マンガン、硫酸亜鉛、塩化マグネシウム、炭酸カリウムなど）、香料やその他の配合物を含むことができる。かかる飼料組成物は、摂取個体の腸内環境を改善し、炎症性疾患の改善および／または予防効果を奏する。

【0023】

本発明の医薬組成物は、典型的には、ＡｈＲ活性化能を有するＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓやＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、その培養物およびその加工物から選択される１種または２種以上を含む。かかる医薬組成物は、摂取個体の腸内環境を改善し、炎症性疾患に対して治療、改善および／または予防効果を奏する。また、かかる医薬組成物は、投与経路はとくに限定されないが、経口的または非経口的に投与することが含まれ、例えば、経口投与、経管投与、経腸投与を例示できる。簡便かつ安全性の観点から、経口投与が好ましい。また剤型は、とくに限定されないが、投与経路に応じて適宜選択することができ、例えば、エアゾール剤、液剤、エキス剤、エリキシル剤、カプセル剤、顆粒剤、丸剤、眼軟膏剤、経皮吸収型製剤、懸濁剤、乳剤、坐剤、散剤、酒精剤、錠剤、シロップ剤、浸剤、煎剤、注射剤、貼付剤、チンキ剤、点眼剤、トローチ剤、軟膏剤、パップ剤、芳香水剤、リニメント剤、リモナーデ剤、流エキス剤、ローション剤が挙げられる。

【0024】

本発明の医薬組成物に用い得る担体としては、界面活性剤、賦形剤、着色料、着香料、保存料、安定剤、緩衝剤、懸濁剤、等張化剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤などが医薬上許容される担体として挙げられるが、その他常用の担体を適宜使用することができる。具体的には、軽質無水ケイ酸、乳糖、結晶セルロース、マンニトール、デンプン、カルメロースカルシウム、カルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、中鎖脂肪酸トリグリセライド、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０、白糖、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩類などを挙げることができる。

【実施例】

【0025】

以下、実施例に基づいて、本発明をより具体的に説明する。なお、この実施例は、本発明を限定するものではない。また、実施例で使用した微生物について、株名にＪＣＭと記載された菌株は、独立行政法人理化学研究所バイオリソースセンター微生物材料開発室から入手した基準株である。株名にＮＣＩＭＢと記載された菌株は、英国ＮＣＩＭＢ研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ａｎｄ Ｍａｒｉｎｅ Ｂａｃｔｅｒｉａ）から入手した基準株である。株名にＭＥＰと記載された菌株は、株式会社明治の保有菌株である。

【0026】

また、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＯＬＬ２０３５６５は、２０１５年２月３日付で、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室）に、受託番号がＮＩＴＥ ＢＰ－０２００３として寄託されている菌株である。
［実施例］
ＨｅＸＳ３４細胞の調製は、既報（Ｋａｓａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｔｏｘｉｃｏｌ Ａｐｐｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００６；２１１（１）：１１－１９）に従って行った。簡潔には、２コピーのＸＲＥコンセンサス配列（ｔｃｔｃａｃｇｃａａｃｔｃｃｇ）の下流にＳＥＡＰ遺伝子を導入したｐＸＲＥ－ＳＥＡＰを、Ｈｅｐａ－１ｃ１ｃ７細胞（ネズミヘパトーマ細胞株、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ （Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ， ＵＳＡ））に安定的に形質転換することにより、ＨｅＸＳ３４細胞を調製した。

【0027】

そのＨｅＸＳ３４細胞を、ＭＥＭα培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）に１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加した培地で維持し、その後、９６ウェルプレートに、ウェル毎に１×１０^４個／１００μＬで播種し、１８時間培養した。次に、その細胞に、５０ｍｇ／ｍＬに調製した加熱殺菌済みの、表１に示した各乳酸菌体を１０％添加した（終濃度；５ｍｇ／ｍＬ）。ネガティブコントロールには、菌体の代わりにＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）を添加した。菌体添加後、３７℃で２４時間培養し、ＡｈＲ活性化能の指標として培地上清中の分泌型アルカリフォスファターゼ（ＳＥＡＰ）活性を測定した。ＳＥＡＰ活性は、Ｇｒｅａｔ ＥｓｃＡＰｅ ＳＥＡＰ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社製）を用いて各検体につき３回測定し、得られた発光強度（ＬＵ）の平均値を評価に用いた。

【0028】

【表1】

【0029】

実施例の各菌株のＳＥＡＰ活性の測定結果を図１に示した。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓやＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉでは、いずれの菌株においても、５０００以上の発光強度が観察され、高いＡｈＲ活性化能を持つことが示唆された。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓやＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉの中で、もっともＳＥＡＰ活性が低かったＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ ＭＥＰ２０１６０２においても、ネガティブコントロールの１４．５倍ものＳＥＡＰ活性を示した。

【産業上の利用可能性】

【0030】

本発明によれば、これまでにない高いＡｈＲの活性化能を有する乳酸菌を提供でき、その乳酸菌や、それを含む組成物を摂取することで、ＡｈＲの活性化による抗炎症作用を得ることができる。特に、乳酸菌は食経験が豊富な食品であり、身近で手軽かつ安全に摂取できるので、自己免疫疾患やアレルギー等の過剰な免疫応答の抑制に大きく寄与できる。

【図1】