特許 7186976 歯周病治療薬

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2022-12-02

(45)【発行日】2022-12-12

(54)【発明の名称】歯周病治療薬

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/197 20060101AFI20221205BHJP

   A61K 41/00 20200101ALI20221205BHJP

   A61P 1/02 20060101ALI20221205BHJP

【ＦＩ】

A61K31/197 ZMD

A61K41/00

A61P1/02

【請求項の数】 3

(21)【出願番号】P 2020548356

(86)(22)【出願日】2019-09-10

(86)【国際出願番号】 JP2019035433

(87)【国際公開番号】W WO2020066577

(87)【国際公開日】2020-04-02

【審査請求日】2021-02-10

(31)【優先権主張番号】P 2018180475

(32)【優先日】2018-09-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】504176911

【氏名又は名称】国立大学法人大阪大学

(73)【特許権者】

【識別番号】508123858

【氏名又は名称】ＳＢＩファーマ株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100107984

【弁理士】

【氏名又は名称】廣田 雅紀

(74)【代理人】

【識別番号】100182305

【弁理士】

【氏名又は名称】廣田 鉄平

(74)【代理人】

【識別番号】100096482

【弁理士】

【氏名又は名称】東海 裕作

(74)【代理人】

【識別番号】100131093

【弁理士】

【氏名又は名称】堀内 真

(74)【代理人】

【識別番号】100150902

【弁理士】

【氏名又は名称】山内 正子

(74)【代理人】

【識別番号】100141391

【弁理士】

【氏名又は名称】園元 修一

(74)【代理人】

【識別番号】100221958

【弁理士】

【氏名又は名称】篠田 真希恵

(74)【代理人】

【識別番号】100192441

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 仁

(72)【発明者】

【氏名】粟津 邦男

(72)【発明者】

【氏名】関根 伸一

(72)【発明者】

【氏名】石塚 昌宏

【審査官】山村 祥子

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１３／００５３７９（ＷＯ，Ａ１）

【文献】韓国公開特許第１０－２０１２－００６５５３６（ＫＲ，Ａ）

【文献】米国特許出願公開第２０１１／００２７３８４（ＵＳ，Ａ１）

【文献】特開２０１７－００６４５４（ＪＰ，Ａ）

【文献】SIERON A et al.，Photodynamic destruction of Porphyromonas gingivalis induced by delta-aminolaevulinic acid，PROCEEDINGS OF SPIE，2004年，Vol.5610，p.218-223，218-219ページINTRODUCTION

【文献】歯薬療法，2015年，Vol.34, No.2，70ページ 一般演題２（う蝕／歯内療法）07

【文献】JJSLSM，2015年，Vol.35, No.4，p.403-407

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３１／００

Ａ６１Ｋ ４１／００

Ａ６１Ｐ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記式（I）
［化１］

（式中、Ｒ^１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ^２は、水素原子、アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す。）で表される化合物又は薬学的に許容されるその塩を含み、歯周病患部に式（I）で表される化合物又は薬学的に許容されるその塩を投与し、その後３９７±１３ｎｍの波長の光を照射する５－アミノレブリン酸－光線力学的療法（ＡＬＡ－ＰＤＴ）のための歯周病の治療薬。

【請求項2】

歯周病における歯周病原因菌が、エンテロコッカス・フェカリス（E.faecalis）である請求項１に記載の治療薬。

【請求項3】

３９７±１３ ｎｍの波長の光が、青色発光ダイオードである請求項１記載の治療薬。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、５－アミノレブリン酸（以下「ＡＬＡ」ということがある。）若しくはその誘導体又はそれらの塩を含有し、３６０ｎｍ～７００ｎｍの波長の光を照射するＡＬＡ－光線力学的療法（以下「ＡＬＡ－ＰＤＴ」ということがある。）において用いられる歯周病の治療剤に関する。

【背景技術】

【0002】

近年、光に反応する化合物を投与し、光を照射することにより標的箇所を治療する方法である光線動力学的療法（以下ＰＤＴという。）が開発されてきた。ＰＤＴは、治療が簡便で、生体侵襲性が小さく、臓器温存が可能であること等から、クオリティ・オブ・ライフ（Quality Of Life；ＱＯＬ）を考慮した新たながん治療法として注目されている。

【0003】

ＰＤＴに用いられる薬剤の一つであるＡＬＡは、動物や植物や菌類に広く存在する色素生合成経路の中間体として知られており、通常ＡＬＡシンセターゼにより、スクシニルＣｏＡとグリシンとから生合成される。ＡＬＡ自体には光感受性はないが、細胞内でヘム生合成経路の一連の酵素群によりプロトポルフィリンＩＸ（以下「ＰｐＩＸ」ともいう）に代謝活性化され、直接腫瘍組織や新生血管へ特異的に集積し、かかるＰｐＩＸ集積部位にレーザー光を照射すると、光の励起により生ずる一重項酸素及び／又はヒドロキシルラジカル、スーパーオキシド等に代表される活性酸素種によりがん細胞が変性・壊死することが知られている。

【0004】

１９８６年にカナダクイーンズ大ケネディー教授が、ＡＬＡを塗布し、光を照射することで皮膚がんの治療ができることを報告（例えば、非特許文献１参照）して以来、ＡＬＡを用いた様々な部位の病変部等の診断及び治療方法が報告されており、例えば、ＡＬＡを体内に投与すると、がんにＡＬＡから誘導されるＰｐＩＸが蓄積し、光照射で蛍光を発するという知見に基づいて開発された腫瘍診断剤等が提案されている（例えば、特許文献１及び２参照）。

【0005】

一方、歯周病治療の分野においても、広義の光療法（phototherapy）として、約２０年前より高出力レーザーをはじめとしたさまざまな光エネルギーを用いた治療が行われており、最近は、光と色素の併用による光化学反応を使用した抗菌的光線力学的療法（antimicrobial photodynamic therapy: ａ－ＰＤＴ）が、新しい手段として注目を集めている。

【0006】

歯周病の原因菌の一つであるエンテロコッカス・フェカリス（Ｅ．フェカリス）を滅菌した単根歯中において培養液AC Broth（アルドリッチ社製）を用いて４週間培養し、１００μｍｏｌのメチレンブルーの溶液で洗浄後、６６０ｎｍの光を照射したが、Ｅ．フェカリスは死滅しないことが知られている（特許文献３参照）。

【0007】

また、よりエネルギーの高い波長４０５ｎｍの半導体レーザーを、歯周病原因菌であるポルフィノモナス・ジンジバリス（Ｐ．ジンジバリス）、プレボテラ・インターメディア（Ｐ．インターメディア）、Ｅ．フェカリスに照射したところ、照射時間と照射光強度に比例して、Ｐ．ジンジバリス及びＰ．インターメディアは、菌体数が減少したが、Ｅ．フェカリスは、菌体数は減少しなかったことが知られている（非特許文献２）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0008】

【文献】特許第２７３１０３２号公報

【文献】特開２００６－１２４３７２号公報

【文献】特表２０１７－５３４４１２号公報

【非特許文献】

【0009】

【文献】J.C Kennedy, R.H Pottier and DC Pross, Photodynamic therapy with endogeneous protoprophyrin IX: basic principles and present clinical experience, J. Photochem., Photobiol. B: Biol., 6 (1990) 143-148

【文献】International Journal of Photoenergy, Volume 2014, Article ID 387215, 7 pages

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0010】

ＰＤＴは、非侵襲性で副作用や患者への肉体的苦痛はほとんど無く、安全且つ簡単な治療法であるにも関わらず、歯周病原因菌の中に従来の方法では効力を示さない菌がいるという問題に直面した。
本発明の課題は、従来のＰＤＴでは効力を示さない歯周病病原菌に対してもＰＤＴが可能となる治療薬、治療方法等を提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0011】

本発明者らは、Ｅ．フェカリスが光照射しても死滅しないのは、もともと菌体内で、ＰｐＩＸを生合成できないためであると考え、生体内でＰｐＩＸを生成できるように、ＡＬＡを添加した培地でＥ．フェカリスを培養し、光を照射したが、菌は死滅しなかった。そこで、培養条件を種々検討した結果、ＡＬＡの存在下、嫌気性条件下に培養を行い、その後光照射することでＥ．フェカリスを死滅させることができることを見いだし、本発明を完成するに至った。

【0012】

すなわち、本発明は以下の事項により特定される次のとおりのものである。
（１）下記式（I）

【化1】

（式中、Ｒ^１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ^２は、水素原子、アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す。）で表される化合物又は薬学的に許容されるそれらの塩（以下「ＡＬＡ類」ということがある。）を含み、歯周病患部に式（I）で表される化合物又は薬学的に許容されるそれらの塩を投与し、その後３６０ｎｍ～７００ｎｍの波長の光を照射する５－アミノレブリン酸－光線力学的療法のための歯周病の治療薬。
（２）歯周病における歯周病原因菌が、Ｅ．フェカリスである（１）に記載の治療薬。
（３）３６０ｎｍ～７００ｎｍの波長の光が、青色発光ダイオードである（１）に記載の治療薬。
また本発明の他の実施態様は以下のとおりである。
（４）上記式（I）で表される化合物又は薬学的に許容されるそれらの塩を歯周病患部に投与し、その後３６０ｎｍ～７００ｎｍの波長の光を照射する歯周病の治療方法。
（５）歯周病患部に投与し、その後３６０ｎｍ～７００ｎｍの波長の光を照射する歯周病の治療に用いるための上記式（I）で表される化合物又は薬学的に許容されるそれらの塩。
（６）歯周病患部に投与し、その後３６０ｎｍ～７００ｎｍの波長の光を照射する歯周病の治療薬の製造に用いるための上記式（I）で表される化合物又は薬学的に許容されるそれらの塩の利用。

【発明の効果】

【0013】

本発明の歯周病の治療剤を用いて歯周病の治療を行うと、非侵襲性で副作用や患者への肉体的苦痛はほとんど無く、安全且つ簡単に、従来の方法では効力が及ばなかった歯周病原因菌が原因となる歯周病をも治療することができる。

【図面の簡単な説明】

【0014】

【図1】図１は、Ｅ．フェカリスを、様々な濃度になるようにＡＬＡを添加して嫌気性条件下で培養したのち、光照射して得られた培養溶液中の菌体数を測定するための希釈平板法による測定結果を示す。

【図2】図２は、Ｅ．フェカリスを、様々な濃度になるようにＡＬＡ及びＡＬＡ＋ＥＤＴＡを添加して好気性性条件下で培養したのち、光照射して得られた培養溶液中の菌体数を測定するための希釈平板法による測定結果を示す。

【発明を実施するための形態】

【0015】

本発明の歯周病の治療剤としては、ＡＬＡ類を含有し、３６０ｎｍ～７００ｎｍの波長の光を照射するＡＬＡ－ＰＤＴにおいて用いられるＡＬＡ－ＰＤＴのための治療剤であれば特に制限されず、３６０ｎｍ～７００ｎｍの波長の光を照射するＡＬＡ－ＰＤＴの前に、３６０ｎｍ～４２０ｎｍの波長の励起光を照射して、ＰｐＩＸ蓄積部位を検出する５－アミノレブリン酸－光線力学的診断（ＡＬＡ－ＰＤＤ）を行うこともできるが、かかるＡＬＡ－ＰＤＤを行うことを必要としない治療剤を特に好適に例示することができる。また、本発明の歯周病の治療剤が適用される治療システムとしては、ＡＬＡ－ＰＤＴデバイスを具備したシステムであればよく、ＡＬＡ類の投与デバイスやＡＬＡ－ＰＤＤを備えたものであってよい。

【0016】

式（I）で示される化合物中、Ｒ^１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ^２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す。

【0017】

Ｒ^１におけるアシル基としては、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、イソバレリル基、ピバロイル基、ヘキサノイル基、オクタノイル基、ベンジルカルボニル基等の直鎖又は分岐状の炭素数１～８のアルカノイル基や、ベンゾイル基、１－ナフトイル基、２－ナフトイル基等の炭素数７～１４のアロイル基を挙げることができる。なお、本発明において、アシル基に、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ｎ－プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基等のアルコキシカルボニル基を便宜上含むものとする。

【0018】

Ｒ^２におけるアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基等の直鎖又は分岐状の炭素数１～８のアルキル基を挙げることができる。

【0019】

Ｒ^２におけるシクロアルキル基としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロドデシル基、１－シクロヘキセニル基等の飽和又は一部不飽和結合が存在する炭素数３～８のシクロアルキル基を挙げることができる。

【0020】

Ｒ^２におけるアリール基としては、フェニル基、ナフチル基、アントリル基、フェナントリル基等の炭素数６～１４のアリール基を挙げることができる。

【0021】

Ｒ^２におけるアラルキル基としては、アリール部分は上記アリール基と同じ例示ができ、アルキル部分は上記アルキル基と同じ例示ができ、具体的には、ベンジル基、フェネチル基、フェニルプロピル基、フェニルブチル基、ベンズヒドリル基、トリチル基、ナフチルメチル基、ナフチルエチル基等の炭素数７～２０のアラルキル基を挙げることができる。

【0022】

上記Ｒ^１及びＲ^２は、必要に応じて化学的に許容される範囲で置換基を有していてもよく、そのような置換基として、例えば、ハロゲン原子、アルキル基、ハロアルキル基、アルコキシ基、ニトロ基、アリール基等が挙げられる。

【0023】

式（I）で表される化合物として、生体内において、ＰｐＩＸを形成することができるＡＬＡの任意のＡＬＡ誘導体として作用するのが好ましく、例えば、生体内でＡＬＡを形成し得るＡＬＡプロドラッグ又は中間体としてＡＬＡを形成せずにポルフィリンに変換（例えば、酵素的に）されるＡＬＡプロドラッグが挙げられ、中でも、ＡＬＡエステルが好ましく挙げられる。

【0024】

ＡＬＡエステルとして、例えば、ＡＬＡ メチルエステル、ＡＬＡ エチルエステル、ＡＬＡ ｎ－プロピルエステル、ＡＬＡ ｎ－ブチルエステル、ＡＬＡ ｎ－ペンチルエステル、ＡＬＡ ｎ－ヘキシルエステル、ＡＬＡ ｎ－オクチルエステル、ＡＬＡ ２－メトキシエチルエステル、ＡＬＡ ２－メチル－ｎ－ペンチルエステル、ＡＬＡ ４－メチル－ｎ－ペンチルエステル、ＡＬＡ １－エチル－ｎ－ブチルエステル、ＡＬＡ ３，３－ジメチル－ｎ－ブチルエステル、ＡＬＡ ベンジルエステル、ＡＬＡ ４－イソプロピルベンジルエステル、ＡＬＡ ４－メチルベンジルエステル、ＡＬＡ ２－メチルベンジルエステル、ＡＬＡ ３－メチルベンジルエステル、ＡＬＡ ４－（ｔ－ブチル）ベンジルエステル、ＡＬＡ ４－（トリフルオロメチル）ベンジルエステル、ＡＬＡ ４－メトキシベンジルエステル、ＡＬＡ ３，４－（ジクロロ）ベンジルエステル、ＡＬＡ ４－クロロベンジルエステル、ＡＬＡ ４－フルオロベンジルエステル、ＡＬＡ ２－フルオロベンジルエステル、ＡＬＡ ３－フルオロベンジルエステル、ＡＬＡ ２，３，４，５，６－ペンタフルオロベンジルエステル、ＡＬＡ ３－ニトロベンジルエステル、ＡＬＡ ４－ニトロベンジルエステル、ＡＬＡ ２－フェニルエチルエステル、ＡＬＡ ４－フェニルブチルエステル、ＡＬＡ ３－ピリジル－メチルエステル、ＡＬＡ ４－フェニルベンジルエステル、Ｎ－[（１－アセチルオキシ）エトキシカルボニル]ＡＬＡ ベンジルエステル、Ｎ－ホルミル－ＡＬＡ メチルエステル、Ｎ－アセチル－ＡＬＡ エチルエステル、Ｎ－プロピオニル－ＡＬＡ メチルエステル、Ｎ－ブチリル－ＡＬＡ メチルエステル、Ｎ－ホルミル－ＡＬＡ エチルエステル、Ｎ－アセチル－ＡＬＡ エチルエステル、Ｎ－プロピオニル－ＡＬＡ エチルエステル、Ｎ－ブチリル－ＡＬＡ エチルエステルが挙げられる。

【0025】

式（I）で表される化合物は、投与する形態に応じて、溶解性を上げるための各種の塩として投与することができる。式（I）で表される化合物の塩として、例えば、薬理学的に許容される酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩等が挙げられる。酸付加塩として、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、リン酸塩、硝酸塩、硫酸塩等の各無機酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、トルエンスルホン酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、グリコール酸塩、メタンスルホン酸塩、酪酸塩、吉草酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩等の各有機酸付加塩等を例示することができる。金属塩としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等の各アルカリ金属塩、マグネシウム、カルシウム塩等の各アルカリ土類金属塩、アルミニウム、亜鉛等の各金属塩を例示することができる。アンモニウム塩としては、アンモニウム塩、テトラメチルアンモニウム塩等のアルキルアンモニウム塩等を例示することができる。有機アミン塩としては、トリエチルアミン塩、ピペリジン塩、モルホリン塩、トルイジン塩等の各塩を例示することができる。なお、これらの塩は使用時において溶液としても用いることができる。

【0026】

ＡＬＡ誘導体として、ＡＬＡ又はＡＬＡ メチルエステル、ＡＬＡ エチルエステル、ＡＬＡ プロピルエステル、ＡＬＡ ブチルエステル、ＡＬＡ ペンチルエステル等の各種エステル類、及びにこれらの塩酸塩、リン酸塩、硫酸塩が好ましく挙げられ、ＡＬＡ塩酸塩やＡＬＡリン酸塩が特に好ましく挙げられる。

【0027】

ＡＬＡ誘導体は、化学合成、微生物による生産、酵素による生産のいずれの公知の方法によって製造することができる。また、上記ＡＬＡ誘導体は、水和物又は溶媒和物を形成していてもよく、またいずれかを単独で又は２種以上を適宜組み合わせて用いることができる。

【0028】

上記ＡＬＡ誘導体を水溶液として調製する場合には、ＡＬＡ誘導体の分解を防ぐため、水溶液がアルカリ性とならないように留意する必要がある。アルカリ性となってしまう場合は、酸素を除去することによって分解を防ぐことができる。

【0029】

前記ＡＬＡ類に加えて、必要に応じて以下に示す光増感剤を混合して使用することも同時投与することもできる。
ヘマトポルフィリン誘導体（ＨｐＤ）；フォトフリン［Photofrin］（登録商標）（クアドラ ロジック テクノロジーズ社，バンクーバー，カナダ）、ヘマトポルフィリンＩＸ（ＨｐＩＸ）等のヘマトポルフィリン；フォトサン［Photosan］ＩＩＩ（シーホフ ラボラトリアム社，シーホフ，ヴェッセルブレーネルコーフ，ドイツ）；テトラ（ｍ－ヒドロキシフェニル）クロリン（ｍ－ＴＨＰＣ）、バクテリオクロリン（スコティア製薬会社，サリー州，イギリス）、モノ－Ｌ－アスパラチルクロリンｅ６（ＮＰｅ６）（日本石油化学会社，カリフォルニア州，アメリカ）、クロリンｅ６（ポルフィリン プロダクト社）、ベンゾポルフィリン（クアドラ ロジック テクノロジーズ社，バンクーバー，カナダ）（例えば、benzoporphyrin derivative monoacid ring A、ＢＰＤ－ＭＡ）、プルプリン［purpurine］（ＰＤＴ製薬会社，カリフォルニア州，アメリカ）（例えば、スズ－エチルエチオプルプリン［tin-ethyl etiopurpurin］、ＳｎＥＴ２）等のクロリン；フタロシアニン（例えば、亜鉛－（クアドラロジックテクノロジーズ社，バンクーバー，カナダ）、いくらかのアルミニウム－又はシリコンフタロシアニン，これらはスルホン酸化されていてもよく、特にアルミニウムフタロシアニンジスルホン酸（ＡｌＰｃＳ_2a）、アルミニウムフタロシアニンテトラスルホン酸（ＡｌＰｃＳ₄）等のスルホン酸化フタロシアニン）；ポルフィセン；ヒポクレリリン［hypocrellin］；プロトポルフィリンＩＸ（ＰｐＩＸ）；ヘマトポルフィリンジ－エステル；ウロポルフィリン；コプロポルフィリン；ジュウテロポルフィリン；ポリヘマトポルフィリン（ＰＨＰ）、及びそれらの前駆体、誘導体；テトラサイクリン（例えば、トピサイクリン［Topicycline］（登録商標）、シャイアー社［Shire］）。
これらは、１種単独で、又は２種以上を混合して用いることができる。

【0030】

さらに、ＡＬＡ類は、光感作効果を上げ、よってＰＤＴを促進することができる他の活性を有する化合物とともに投与することができる。そのような化合物として、例えば、キレート剤が挙げられ、より具体的には、アミノポリカルボン酸、金属解毒に関する文献又は磁気共鳴映像法に用いる造影剤中の常磁性金属イオンのキレート化に関する文献に記載されているキレート剤等が挙げられ、さらに具体的には、エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＤＴＡ）、１，２－ジアミノシクロヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＣＤＴＡ）、ジエチレントリアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’－五酢酸（ＤＴＰＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトラ酢酸（ＤＯＴＡ）、デスフェリオキサミン又は周知のそれらの誘導体／類似体が挙げられ、これらは、１種単独で、又は２種以上を混合して用いることができる。
キレート剤を有する場合、該キレート剤は、標準的には０．０５～２０％（w/v）の濃度で、例えば、０．１～１０％（w/v）の濃度で用いられる。

【0031】

本発明においてＡＬＡ類を歯周病患部に投与するとは、歯周病患部又はその周辺へ局所投与することをいい、特に局所塗布が好ましい。歯周ポケット内への局所投与は、当該分野において公知の技術、例えば、注射器、カテーテル又は他の好適な薬物送達システムを使用することによって行うことができる。

【0032】

本発明の治療薬の剤型として、例えば、ゲル、クリーム、軟膏、スプレー、ローション、エアロゾル、外用液剤等が挙げられる。

【0033】

本発明の治療薬において、含まれるＡＬＡ類の濃度は、化合物の化学的性質、化学組成、投与方法及び治療されるべき疾患の程度を含むさまざまな要因に応じて変化するが、２０％（w/v）未満の濃度範囲が好ましく、０．０５～１６％(w/v)がさらに好ましく、０．５～１４％(w/v)が特に好ましく、例えば、１．５～１２．０％(w/v)又は２～１０％(w/v)の範囲を好適に例示することができる。

【0034】

本発明の歯周病の治療方法は、光に反応する化合物を歯周病原因菌に投与し、光を照射することにより歯周病を治療するＰＤＴを行う際に、それ自身は光増感作用を有さないＡＬＡ類を歯周病患部に投与し、色素生合成経路を経て誘導されたＰｐＩＸが歯周病原因菌における細胞内に集積し、歯周病原因菌細胞内に蓄積したＰｐＩＸを、光を照射して励起させることで、周囲の酸素分子を光励起し、その結果生成する光の励起により生ずる一重項酸素及び／又はヒドロキシルラジカル、スーパーオキシド等に代表される活性酸素種が、その強い酸化力による殺細胞効果を有することを利用する歯周病の治療方法である。

【0035】

本発明の治療薬は、歯周病の患部及びその周辺、特に歯周ポケット内に投与され、望ましい光感作効果を得るため治療されるべき部位が露光される前に、特定の時間が経過していることが好ましい。露光前に、余剰の治療薬は除去されることが好ましい。

【0036】

投与した後、露光が行われるまでの時間は、ＡＬＡ類の種類、治療すべき条件及び投与の形態によって決まる。その時間は、例えば、約３～６時間が挙げられ、０～９０分間、５～９０分間、３０～９０分間が好ましく挙げられ、１０～５０分間が特に好ましく挙げられる。

【0037】

本発明の治療薬が歯周ポケット等の歯周病患部に投与された後、歯周ポケット内等の歯周病患部が嫌気性条件下におかれる必要がある。本発明において歯周病患部を嫌気性条件下におくとは、歯周病患部が嫌気性条件下におかれていない場合には、歯周病患部を嫌気性条件下にすること、歯周病患部がすでに嫌気性条件下におかれている場合には、その状態を保つこと、歯周病患部がすでに嫌気性条件下におかれている場合であっても本発明の治療薬を投与するときに嫌気性条件下でなくなった場合には、元の状態に復帰させる又は嫌気性条件下にすることを意味する。歯周ポケット等の歯周病患部を嫌気性条件下におくには、例えば、歯周病患部周辺を酸素が遮断できる材質のもので覆う方法等が考えられる。また、歯周病患部はもともと歯根に近い部分であり、歯周病原因菌が繁殖している環境は、嫌気性であるので、歯周病原因菌が繁殖している部位まで本発明の治療薬が浸透できるように物理的又は化学的な手法を用いることも考えられる。

【0038】

本発明の治療薬を投与後、光活性化は、当該分野において公知である光源を用いて行うことができ、例えば青色ＬＥＤ、赤色ＬＥＤ等の発光ダイオード、青色半導体レーザー、赤色半導体レーザー等の半導体レーザー、強い青色又は赤色発光スペクトルをもつ放電ランプ等を挙げることができるが、装置がコンパクトになり、コスト面や可搬性において有利であることから、青色ＬＥＤ又は赤色ＬＥＤを好適に例示することができる。照射に使用する光の波長は、より効率的な光感作効果を得るために選択することができ、３６０～７００ｎｍの範囲の光が挙げられる。また、エネルギー密度は、１０～２００Ｊ／ｃｍ²の範囲が好ましく、１０～１００Ｊ／ｃｍ²の範囲がさらに好ましく、２０～６０Ｊ／ｃｍ²の範囲が特に好ましい。

【0039】

また、用いる光源のパワー密度は、本発明の効果を奏する範囲であれば特に制限を受けず、例えば、１５～４００ｍＷ／ｃｍ^２の範囲が好ましく、１５～５０ｍＷ／ｃｍ²、５～４０ｍＷ／ｃｍ²、１０～３５ｍＷ／ｃｍ²の範囲がさらに好ましく、１５～３５ｍＷ／ｃｍ²の範囲が特に好ましい。

【0040】

また、照射光は、連続光であってもよく、パルス光であってもよいが、パルス光を利用することにより、正常な皮膚表面への損傷を小さくできる点で、パルス光がより好ましい。

【0041】

光照射時間は、エネルギー密度及びパワー密度にもよるが、５～３０分間、好ましくは１５分間行うことが望ましい。照射は１回だけであってもよく、あるいは、例えば照射の間隔を１～１０分間とし、光照射量をいくつかに分割した光照射として用いてもよい。

【0042】

励起光照射デバイスとしては、光源用細径光ファイバーを挙げることができ、蓄積されたＰｐＩＸを励起させるＡＬＡ－ＰＤＴステップにおいて照射する励起光の光源としては、微小な歯周病原因菌の繁殖部位についてもＰｐＩＸの励起を行うことを可能とするために放射照度が強く、正確な自動識別を可能とするために照射面積が狭い半導体レーザー又はＬＥＤ光源が好ましく、励起光を導光して一端から外部へ出射する励起光導光部を有することが好ましく、励起光導光部としては、具体的には細径光ファイバーが挙げられる。

【0043】

前記のように、本発明の治療剤を用いる治療方法においては、ＡＬＡ－ＰＤＤを行うこともできる。ＡＬＡ－ＰＤＤは、本発明のＡＬＡ－ＰＤＴの前に、歯周病原因菌細胞内に蓄積したＰｐＩＸに紫色の光を照射すると赤色の蛍光を発することを利用して、歯周病原因菌の付着部位を特定する判定方法である。かかるＡＬＡ－ＰＤＤステップにおいて用いられるＡＬＡ－ＰＤＤデバイスとしては、ＰｐＩＸの励起光照射デバイスと、励起状態のＰｐＩＸ特有の赤色蛍光検出デバイス、あるいは、これらが一体化されたデバイスを例示することができる。ＰｐＩＸの励起光照射デバイスから照射する光としては、ＰｐＩＸを励起させることで、ＰｐＩＸ特有の赤色蛍光が観察できる波長の光が好ましく、いわゆるソーレー帯に属するＰｐＩＸの吸収ピークに属する紫外光に近い紫色の波長の光であって、少なくとも３６０ｎｍ～４２０ｎｍの範囲内の波長の光であればよく、例えば、３６０～４２０ｎｍ、４０３～４１０ｎｍ等を挙げることができるが、中でも４０８ｎｍが好ましい。

【0044】

上記ＡＬＡ－ＰＤＤステップにおける励起光を照射する光源としては、公知のものを使用することができ、例えば紫色ＬＥＤ、好ましくはフラッシュライト型紫色ＬＥＤや、半導体レーザー等の光源を挙げることができるが、装置がコンパクトになり、コスト面や可搬性において有利である紫色ＬＥＤ、中でもフラッシュライト型紫色ＬＥＤや、紫色半導体ダイオードを好適に例示することができる。また、ＰｐＩＸ蓄積部位を検出し、照射すべき歯周病病原菌の繁殖範囲を判断するための、赤色の蛍光、具体的には６１０ｎｍ～７５０ｎｍ、好ましくは６２５～６３８ｎｍの波長の蛍光を検出するための赤色蛍光検出デバイスとしては、肉眼による検出デバイスやＣＣＤカメラによる検出デバイスを挙げることができる。

【0045】

励起光照射デバイスと赤色蛍光検出デバイスとが一体化されたＡＬＡ－ＰＤＤデバイスとしては、光源・計測用細径光ファイバーを挙げることができ、蓄積されたＰｐＩＸを励起させるＡＬＡ－ＰＤＤステップにおいて照射する励起光の光源としては、微小な歯周病原因菌の繁殖部位についてもＰｐＩＸの検出を行うことを可能とするために放射照度が強く、正確な自動識別を可能とするために照射面積が狭い半導体レーザー光源が好ましく、励起光を導光して一端から外部へ出射する励起光導光部を有することが好ましく、励起光導光部としては、具体的には細径光ファイバーを挙げることができる。光源に用いられる素子としては、ＩｎＧａＮ等の半導体混晶を用いることができ、ＩｎＧａＮの配合比を変えることで、紫色光を発振することができる。具体的には直径５．６ｍｍ程度のコンパクトなレーザーダイオードを好適に例示することができる。レーザーダイオードから４レーザーアウトプットのポートと、スペクトル測定用のポートはビルトイン高感度スペクトロスコープで連結されたデスクトップＰＣほどのサイズである装置を例示することができる。また、前記励起光によって励起されたＰｐＩＸが発する蛍光を受光する受光工程においては計測用細径光ファイバーが用いられ、該計測用細径光ファイバーは前記光源用細径光ファイバーと一体化され、受光した蛍光を検出器に導光してＰｐＩＸ蓄積部位の判定を行う。

【0046】

以下に、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明の技術的範囲は、これら実施例により限定されるものではない。

【実施例1】

【0047】

Ｅ．フェカリスＪＣＭ５８０３をブレインハートインフュージョン培地（ＢＨＩ）（Difco Laboratories, Detroit, Mich, USA）にて、３７℃で８時間培養し、０．８×１０^９CFU/mlに調整した。その後、３７℃で嫌気性条件下（Ｎ_２８０％，ＣＯ_２１０％，Ｈ_２１０％）に６時間静置した後、１．０×１０^９CFU/mlに調整し菌体サンプルとした。ＡＬＡはＰＢＳ（ｎａｃａｌａｉ ｔｅｓｑｕｅ、東京）１．２ｍｌに溶解し、さらに１０Ｎ ＮａＯＨ溶液０．３ｍｌを加えて、ｐＨ５．０のＡＬＡ溶液を調整した。２４穴プレートに上記調整したＥ．フェカリス菌体と上記調整したＡＬＡ溶液を加え、ＡＬＡの最終濃度を０％（w/v）、０．０５％（w/v）、０．５％（w/v）、５％（w/v）、１０％（w/v）に調整した。３７℃で嫌気条件下に暗所で静置し、２時間後に青色ＬＥＤ（波長３９７±１３ｎｍ、出力３５ｍＷ、照射径１５．５ｍｍ、平均パワー密度１９ｍＷ／ｃｍ^２、G-Light Prima-II Plus, GC,東京）を光学ステージ上で１分間照射した。希釈平板法に基づき、光照射して得られた培養液を、ＢＨＩを用いてＯＤ＝０．１となるように希釈し、希釈した各培養液を寒天培地上で１日間培養した。その結果を図１に示す。なお、ＡＬＡの最終濃度０％（w/v）に調整したものに関しては前記青色ＬＥＤによる光照射を行わない群も設けた。
なお、図１の各寒天培地上のコロニーは、各行ごとに上からＡＬＡの濃度が、０％（w/v）、０．０５％（w/v）、０．５％(w/v)、５％（w/v）、１０％（w/v）、０％（w/v）＋光非照射の培養液から形成されたコロニー（図１中の１～６）を表す。

【0048】

図１から明らかなように、ＡＬＡの最終濃度が５％（w/v）及び１０％（w/v）の場合には、光照射することにより、Ｅ．フェカリスの生菌数が著しく減少し、本発明の治療剤を用いて人体を侵襲することなく歯周病を治療することができることが示唆された。

【0049】

［参考例１］
Ｅ．フェカリスＪＣＭ５８０３をブレインハートインフュージョン培地（ＢＨＩ）（Difco Laboratories, Detroit, Mich, USA）にて、３７℃で８時間培養し、０．８×１０^９CFU/mlに調整した。ＡＬＡはＰＢＳ（ｎａｃａｌａｉ ｔｅｓｑｕｅ，東京）に１．２ｍｌに溶解し、１０Ｎ ＮａＯＨ溶液０．３ｍｌを加えて、ｐＨ５．０のＡＬＡ溶液を調整した。上記調整したＡＬＡ溶液にＥＤＴＡを０．０５％（w/v）となるように添加してＡＬＡ－ＥＤＴＡ溶液を調製した。２４穴プレートに上記調整したＥ．フェカリス菌体と上記調整したＡＬＡ溶液又はＡＬＡ＋ＥＤＴＡ溶液を加え、それぞれＡＬＡの最終濃度０％（w/v）、０．０５％（w/v）、０．５％（w/v）に調整した。３７℃で好気性条件下に暗所で静置し、２時間及び４時間後に青色ＬＥＤ（波長３９７±１３ｎｍ、出力３５ｍＷ、照射径１５．５ｍｍ、平均パワー密度１９ｍＷ／ｃｍ^２、G-Light Prima-II Plus、ＧＣ、東京）を光学ステージ上で１分間照射した。希釈平板法に基づき、光照射して得られた培養液を、ＢＨＩを用いて１倍、１０倍、１００倍、１０００倍希釈し、希釈した各培養液を寒天培地上で１日間培養した。その結果を図２に示す。
なお、図２の左から培養液を１倍希釈、１０倍希釈、１００倍希釈、１０００倍希釈した結果を表し、各寒天培地上のコロニーは、各行ごとに上からＡＬＡ溶液を添加した培養液中のＡＬＡ濃度が、０％（w/v）、０．０５％（w/v）、０．５％(w/v)、の培養液から形成されたコロニー（図２中の１～３）、ＡＬＡ＋ＥＤＴＡ溶液を添加した培養液中のＡＬＡ濃度が、０％（w/v）、０．０５％（w/v）、０．５％(w/v)、の培養液から形成されたコロニー（図２中の４～６）を表す。

【0050】

図２から明らかなように、好気性条件下で培養を行って光照射した場合には、Ｅ．フェカリスの生菌数は、ＡＬＡを添加した場合でもブランクの場合と全く変わらず、ＡＬＡを添加した効果は見られなかった。

【産業上の利用可能性】

【0051】

本発明の治療薬及び治療方法は、従来の方法では、効力がなかった歯周病原因菌に対しても効力を有することから、歯周病を治療する分野で有用である。

【図1】

【図2】