特許 7237945 ＦＧＦ－１８部分を含む融合タンパク質

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-03-03

(45)【発行日】2023-03-13

(54)【発明の名称】ＦＧＦ－１８部分を含む融合タンパク質

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20230306BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20230306BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20230306BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20230306BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20230306BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20230306BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20230306BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20230306BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230306BHJP

   C12P 21/02 20060101ALI20230306BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20230306BHJP

   A61K 38/18 20060101ALI20230306BHJP

   A61K 38/17 20060101ALI20230306BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20230306BHJP

   A61P 19/00 20060101ALI20230306BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20230306BHJP

   C07K 16/22 20060101ALN20230306BHJP

   C07K 14/50 20060101ALN20230306BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z ZNA

C07K19/00

C12N15/13

C12N15/12

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/02 H

C12P21/08

A61K38/18

A61K38/17 100

A61K39/395 N

A61P19/00

A61P19/02

C07K16/22

C07K14/50

【請求項の数】 9

(21)【出願番号】P 2020516660

(86)(22)【出願日】2018-09-20

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2020-12-17

(86)【国際出願番号】 EP2018075432

(87)【国際公開番号】W WO2019057805

(87)【国際公開日】2019-03-28

【審査請求日】2021-09-17

(31)【優先権主張番号】17192467.3

(32)【優先日】2017-09-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】18182696.7

(32)【優先日】2018-07-10

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】591032596

【氏名又は名称】メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング

【氏名又は名称原語表記】Ｍｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｍｉｔ ｂｅｓｃｈｒａｅｎｋｔｅｒ Ｈａｆｔｕｎｇ

【住所又は居所原語表記】Ｆｒａｎｋｆｕｒｔｅｒ Ｓｔｒ． ２５０，Ｄ－６４２９３ Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｆｅｄｅｒａｌ Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｇｅｒｍａｎｙ

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100150810

【弁理士】

【氏名又は名称】武居 良太郎

(74)【代理人】

【識別番号】100196977

【弁理士】

【氏名又は名称】上原 路子

(72)【発明者】

【氏名】アンヌ ギゴー

(72)【発明者】

【氏名】クリスティアン ブレンナイズ

(72)【発明者】

【氏名】トーマス ライシオック

(72)【発明者】

【氏名】シュテファン ジェロンカ

【審査官】中野 あい

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２０１７／０２５６１１（ＷＯ，Ａ１）

【文献】特表２０１３－５４２７１６（ＪＰ，Ａ）

【文献】米国特許出願公開第２００３／０１５２５６８（ＵＳ，Ａ１）

【文献】国際公開第２０１６／０８７６５０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】Drug Discov Today, 2016 Dec, vol. 21, no. 12, pp. 1932-1937

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０

Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／ＧｅｎｅＳｅｑ／ＵｎｉＰｒｏｔ

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

抗ＮＧＦ部分に融合されたＦＧＦ－１８部分を含む融合タンパク質であって、配列番号５５、５６および１１のアミノ酸配列を含むＳＥＥＤボディである、融合タンパク質。

【請求項2】

請求項１に記載の融合タンパク質をコードする配列を有する核酸。

【請求項3】

請求項２に記載の核酸配列を含む発現ベクター。

【請求項4】

請求項３に記載の発現ベクターを用いて形質転換された宿主細胞。

【請求項5】

請求項１に記載の融合タンパク質を製造する方法であって、
ａ．請求項４に記載の宿主細胞を培養するステップ、および
ｂ．前記宿主細胞により産生された前記抗体を単離するステップ
を含む、方法。

【請求項6】

請求項１に記載の融合タンパク質および少なくとも１つの賦形剤を含む、医薬組成物。

【請求項7】

軟骨障害の治療において使用するための、請求項６に記載の医薬組成物。

【請求項8】

前記軟骨障害が変形性関節症である、請求項７に記載の医薬組成物。

【請求項9】

前記軟骨障害が軟骨傷害である、請求項７に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、抗ＮＧＦ部分に融合されたＦＧＦ－１８部分を含む新たな融合タンパク質に関する。前記融合タンパク質は、変形性関節症または軟骨傷害などの軟骨障害の治療のために使用され得る。

【背景技術】

【0002】

軟骨は、マトリックス（堅い、ゲル様の基質）中に分散された軟骨細胞（間葉細胞に由来する細胞）から構成される。軟骨マトリックスは、これらの細胞により産生され、主にＩＩ型コラーゲン線維（Ｉ型コラーゲン線維も含有する線維軟骨を除く）、プロテオグリカン、およびエラスチン線維を含む。軟骨は、特に、関節、胸郭、および耳、鼻、喉、気管および椎間板（ｉｎｔｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｌ ｄｉｓｋｓ）中に見出される。軟骨には、３つの主な種類：硝子、弾性および線維軟骨があり、それらの組織学的形態にしたがって異なる機能的特性を提供する。例えば、関節軟骨は硝子軟骨であり、粘弾特性を有し、骨の関節表面を覆う。関節軟骨の主な目的は、関節骨のほぼ摩擦のない運動を確実にするために滑らかな表面を提供することである。

【0003】

軟骨障害とは、概して、軟骨の変性／崩壊ならびに影響された身体部分の炎症、疼痛、硬直および運動の制限により現れる結合組織における異常により特徴付けられる疾患をいう。これらの障害は、病理に起因することがあり、または外傷もしくは傷害の結果であり得る。成熟した軟骨は、非常に限られた自己修復能力を有し、その理由は特に、成熟軟骨細胞は、軟骨における血管の非存在に起因して栄養分の供給が限られているため、増殖の潜在能力をほとんど有しないからである。傷害または疾患のいずれかにより引き起こされる損傷した軟骨、特に関節軟骨の置換は、医師にとって大きな挑戦であり、利用可能な外科的治療手順は予測不可能であり、変形性関節症性の変化を伴わない若年患者における限られた時間にとってのみ効果的であると考えられる。したがって、ほとんどの患者は治療を求めないか、または可能な限り治療を延期するように助言されるかのいずれかである。治療が必要な場合、標準的な手順は年齢依存的であり、全もしくは部分関節置換、軟骨小片もしくは軟骨細胞の移植または髄刺激技術（マイクロフラクチャーなど）の間で変化する。マイクロフラクチャーは安価かつよく行われる手順であり、骨髄由来幹細胞による軟骨沈着を刺激するために軟骨下骨の穿通を伴う。しかしながら、この技術は軟骨欠陥を充分に修復せず、形成される新たな軟骨は主に線維軟骨であり、短命な修復組織を結果としてもたらすことが示されている。実際、線維軟骨は硝子関節軟骨と同じ生物機械特性を有さず、多くの場合に周囲軟骨への適切な側方統合（ｌａｔｅｒａｌ ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ）を欠いている。この理由から、新たに合成された線維軟骨はより容易に壊れることがある（予測される時間枠：５～１０年）。

【0004】

変形性関節症（ＯＡ）を有する患者にとって、すべてのこれらの軟骨修復技術は失敗する。残りの非外科的治療は、特に、理学療法、生活様式の変更（例えば、体重低減）、補助器具、経口薬物（例えば、非ステロイド性抗炎症性薬物）および薬物（例えば、ヒアルロン酸およびコルチコイド）の注射、ならびに栄養補助食品摂取からなる。すべてのこれらの治療は、ＯＡ疾患の進行を停止させることができない。疼痛療法もまた失敗した場合、膝関節の関節置換または高脛骨骨切り術などの手術が患者にとって残りの選択肢である。脛骨または大腿骨骨切り術（関節摩耗をリバランスするための骨の切断）は、症状を低減させ、活動的な生活様式の維持を助け、かつ全関節置換の必要性を遅延させることがある。全関節置換は、進行した変形性関節症の症状の軽減を提供できるが、患者の生活様式および／または活動レベルにおける大きな変化を概して必要とする。

【0005】

現行の利用可能な薬物治療は、疼痛からの解放を主に対象とする。現在、軟骨損傷を回復させる市販の治療はない（Lotz, 2010を参照）。

【0006】

抗ＮＧＦ化合物は、ＯＡに関連する疼痛の文脈において記載されている分子のカテゴリーである。現在、タネズマブ、ファシヌマブまたはさらにフルラヌマブが、ＯＡ患者における疼痛の治療のために開発されており、いずれも現在、第Ｉ～ＩＩＩ相臨床試験における有望な結果に基づいて、関節炎および／または慢性疼痛について第ＩＩ／ＩＩＩ相臨床試験が為されている（Sanga et al., 2013; Tiseo et al., 2014; Brown et al. 2012）。

【0007】

線維芽細胞増殖因子１８（ＦＧＦ－１８）は、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）ファミリーのタンパク質のメンバーである。ＦＧＦ－１８は、軟骨細胞および骨芽細胞にとって増殖性因子であることが示されている（Ellsworth et al., 2002; Shimoaka et al., 2002）。ＦＧＦ－１８は、単独（国際公開第２００８０２３０６３号パンフレット）またはヒアルロン酸（国際公開第２００４０３２８４９号パンフレット）との組合せのいずれかで変形性関節症および軟骨傷害などの軟骨障害の治療について提案されている。ＦＧＦ－１８は、現在、ＯＡの治療について臨床試験において調べられている。

【0008】

ＦＧＦ１８は関節軟骨修復において良好な結果を提供するが、疼痛の減少／機能の改善ができると共に、軟骨障害の治療の有効性を維持するさらなる分子の必要性が存在する。実際、疼痛は、非常に多くの場合に軟骨障害に付随するだけでなく、これらの障害の臨床的検出のための主要な症状を表す。

【発明の概要】

【0009】

発明の概要
本発明の目的は抗ＮＧＦ部分（すなわち、ＮＧＦの阻害剤）に融合されたＦＧＦ－１８部分を含む新たな融合タンパク質を提供することである。融合タンパク質は、軟骨障害の治療において使用され得る。前記軟骨障害は、例えば、変形性関節症または軟骨傷害である。

【0010】

本発明はさらに、前記融合タンパク質の好ましいアミノ酸配列を提供する。

【0011】

本発明の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列、前記ポリヌクレオチド配列を含むベクターおよび細胞株もまた包含される。

【0012】

本発明による融合タンパク質を製造する方法もまた記載される。

【0013】

本発明の別の態様は、本発明による融合タンパク質を少なくとも１つの賦形剤と共に含む医薬組成物である。

【0014】

さらなる態様では、本発明による融合タンパク質は、変形性関節症または軟骨傷害などの軟骨障害の治療において使用するためのものである。

【0015】

定義
－ 「ＦＧＦ－１８部分」、「ＦＧＦ１８部分」、「ＦＧＦ－１８」または「ＦＧＦ１８」という用語は、本明細書において使用される場合、ヒトＦＧＦ－１８タンパク質（すなわち、線維芽細胞増殖因子１８）の少なくとも１つの生物学的活性を維持するタンパク質であることが意図される。ＦＧＦ－１８は、天然、その成熟型、組換え型または切断型（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ ｆｏｒｍ）であってもよい。ヒトＦＧＦ－１８タンパク質の生物学的活性は特に、軟骨細胞もしくは骨芽細胞増殖（国際公開第９８１６６４４号パンフレットを参照）または軟骨形成（国際公開第２００８０２３０６３号パンフレットを参照）の増加を含む。天然、または野生型の、ヒトＦＧＦ－１８は、ほとんどが骨格発生の間に産生されるタンパク質であり、骨および軟骨形成に関与する（Haque et al., 2007を参照）。ヒトＦＧＦ－１８はｚＦＧＦ－５と最初に称され、国際公開第９８１６６４４号パンフレットに充分に記載されている。配列番号１は天然ヒトＦＧＦ－１８のアミノ酸配列に対応し、アミノ酸残基１（Ｍｅｔ）～２７（Ａｌａ）からなるシグナルペプチドを有する。ヒトＦＧＦ－１８の成熟型は、配列番号１の残基２８（Ｇｌｕ）～残基２０７（Ａｌａ）のアミノ酸配列（１８０アミノ酸）に対応する。本発明によるＦＧＦ－１８部分はまた、以下に限定されないが、配列番号１の残基２８（Ｇｌｕ）～１９６（Ｌｙｓ）を含むまたはからなる切断バージョン（前記切断型は配列番号２として再現される）、またはＦＧＦ－１８の変異体（ｍｕｔａｎｔｓ）（例えば、配列番号１とまたは配列番号２の成熟型と少なくとも８０％の配列同一性を有する変異体）などの、ＦＧＦ－１８の活性断片を含む。ＦＧＦ－１８部分がＦＧＦ－１８の活性断片（またはＦＧＦ－１８の切断型）である場合、前記ＦＧＦ－１８断片（またはＦＧＦ－１８の前記切断型）は、好ましくは、少なくとも１５０アミノ酸残基を含む。配列番号２を含むＦＧＦ－１８部分は成熟ヒトＦＧＦ－１８と類似の活性を示し、例えば、軟骨細胞増殖および軟骨沈着を増加させて、様々な軟骨組織の修復および再構築をもたらすことが既に示されている（国際公開第２００８０２３０６３号パンフレットを参照）。

【0016】

「ＦＧＦ－８部分」、「ＦＧＦ８部分」、「ＦＧＦ－８」または「ＦＧＦ８」という用語は、本明細書において使用される場合、ヒトＦＧＦ－８タンパク質（すなわち、線維芽細胞増殖因子８）の少なくとも１つの生物学的活性を維持するタンパク質であることが意図される。ＦＧＦ－８は、天然、その成熟型、組換え型、切断型または変異体型であってもよい。天然型は配列番号１２１に表される。

【0017】

「ＦＧＦ－９部分」、「ＦＧＦ９部分」、「ＦＧＦ－９」または「ＦＧＦ９」という用語は、本明細書において使用される場合、ヒトＦＧＦ－９タンパク質（すなわち、線維芽細胞増殖因子９）の少なくとも１つの生物学的活性を維持するタンパク質であることが意図される。ＦＧＦ－９は、天然、その成熟型、組換え型、切断型または変異体型であってもよい。天然型は配列番号１２２に表される。ＦＧＦ９は、ＤＭＭマウスモデルにおいて軟骨分解を減弱させ、ＯＡ軟骨においてＭＭＰ１３発現を低減させかつＩＩ型コラーゲン発現を促進することが示された（Zhou et al., 2016）。

【0018】

「ＦＧＦ－１７部分」、「ＦＧＦ１７部分」、「ＦＧＦ－１７」または「ＦＧＦ１７」という用語は、本明細書において使用される場合、ヒトＦＧＦ－１７タンパク質（すなわち、線維芽細胞増殖因子１７）の少なくとも１つの生物学的活性を維持するタンパク質であることが意図される。ＦＧＦ－１７は、天然、その成熟型、組換え型、切断型または変異体型であってもよい。天然型は配列番号１２３に表される。

【0019】

本明細書において使用される「ＮＧＦの阻害剤」または「抗ＮＧＦ部分」という用語は、ＮＧＦ（すなわち、神経成長因子）に結合して、前記ＮＧＦの活性を部分的または完全のいずれかで阻害することができる化合物をいう。本発明による好ましい「ＮＧＦの阻害剤」は、抗ＮＧＦ抗体、またはその活性断片もしくは活性多様体（ａｃｔｉｖｅ ｖａｒｉａｎｔｓ）の他に、ナノボディである。そのような化合物は、例えば、タネズマブ（配列番号９～１１を参照）またはその活性断片もしくは活性多様体、ファシヌマブ（配列番号１２～１３を参照）またはその活性断片もしくは活性多様体、フルラヌマブ（配列番号１４～１５を参照）またはその活性断片もしくは活性多様体であるがこれらに限定されない。ＡＮＡ－０２、ＡＢＴ－１１０、ＡＬＤ－９０６またはＭＥＤＩ－５７８は、公知のＮＧＦ受容体阻害剤の他の例である。

【0020】

「抗体」（ａｎｔｉｂｏｄｙ）という用語、およびその複数形「抗体」（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）は、本明細書において使用される場合、特に、ポリクローナル抗体、親和性精製ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、および抗原結合断片、例えば、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ断片、単鎖可変領域断片（ｓｃＦｖまたはサメＶＮＡＲ）、および単一ドメイン抗体（ラクダ科動物ＶＨＨなど）を含む。それは、１アーム（一価；一対の免疫グロブリン鎖）または２アーム（二価；二対の免疫グロブリン鎖）の抗体の両方をいう。この用語はまた、ノブ－イントゥー－ホール（ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ）ベースの抗体（Ridgway et al, 1996）およびＳＥＥＤボディ（ＳＥＥＤｂｏｄｉｅｓ；Davis et al. 2010または米国特許第８，８７１，９１２号明細書）と呼ばれる多様体を含む。遺伝子操作されたインタクトな抗体または活性断片、例えば、キメラ抗体、ｓｃＦｖおよびＦａｂ断片の他に、合成の抗原結合ペプチドおよびポリペプチドもまた含まれる。抗体の基本構造単位は四量体であり、免疫グロブリン鎖の２つの同一のペアからなり、各ペアは１つの軽鎖および１つの重鎖を有する。軽鎖は２つの部分：可変ドメイン（ＶＬ）および定常ドメイン（ＣＬ）を有し、ＣＬは軽鎖の文脈において定常領域とも呼ばれ得る。重鎖もまた２つの部分：可変ドメイン（ＶＨ）および定常領域（ＣＨ）を有する。各ペアにおいて、軽鎖および重鎖可変ドメインは一緒になって抗原への結合に関与し、定常領域は抗体エフェクター機能に関与する。全長免疫グロブリン「軽鎖」（通常約２５ｋＤａ）は、Ｎ末端における可変ドメイン遺伝子（通常約１１０アミノ酸）およびＣ末端におけるカッパまたはラムダ定常ドメイン（それぞれＣ_KおよびＣ_λ）遺伝子によりコードされる。全長免疫グロブリン「重鎖」（通常約５０ｋＤａ）は、同様に、可変ドメイン遺伝子（通常約１１６アミノ酸）および以下に記載される他の定常領域遺伝子（通常約３３０アミノ酸）の１つによりコードされる。ギリシャ文字：［アルファ］、［デルタ］、［イプシロン］、［ガンマ］、および［ミュー］により表される５種類の哺乳動物重鎖がある。重鎖の種類は、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭとして定義する。定常領域は同じアイソタイプのすべての抗体において同一であるが、異なるアイソタイプの抗体において異なる。重鎖［ガンマ］、［アルファ］および［デルタ］は、３つのＩｇ定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）から構成される定常領域、および柔軟性を加えるためのヒンジ領域を有し、重鎖［ミュー］および［イプシロン］は、４つのＩｇ定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４）から構成される定常領域およびヒンジ領域を有する。

【0021】

軽鎖または重鎖可変ドメインは、抗原結合に関与する３つの超可変領域により遮られた「フレームワーク」領域からなる。超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」のアミノ酸残基（Kabat et al. 1991）および／または「超可変ループ」の残基（Chothia and Lesk 1987）を含む。「フレームワーク領域」または「ＦＲ」残基は、本明細書において定義されるような超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。異なる軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は、種内で比較的保存されている。したがって、「ヒトフレームワーク領域」は、天然に存在するヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域と実質的に同一（約８５％またはより高い、通常９０～９５％またはより高い）のフレームワーク領域である。抗体のフレームワーク領域は、構成要素となる軽鎖および重鎖の合わさったフレームワーク領域であり、ＣＤＲを配置および位置合わせするように働く。ＣＤＲは主に、抗原のエピトープへの結合に関与する。前記抗体（または免疫グロブリン）は、キメラ、ヒト化、および完全ヒト抗体であり得る。それらはほとんどの場合に組換え（すなわち、組換え抗体）である。

【0022】

「組換え抗体」という用語は、アミノ酸配列が天然抗体のアミノ酸配列から変更されている抗体を意味する。抗体の生成における組換えＤＮＡ技術の妥当性のため、天然抗体中に見出されるアミノ酸の配列に制限される必要はなく、抗体は、所望の特徴を得るために再設計され得る。可能なバリエーションは多く、例えば、可変ドメインまたは定常領域の１個または数個のアミノ酸の変更から完全な再設計までに及ぶ。定常領域における変更は、概しては、補体結合（例えば、補体依存性細胞傷害性、ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体との相互作用、および他のエフェクター機能（例えば、抗体依存性細胞傷害性、ＡＤＣＣ）、薬物動態特性（例えば、新生児Ｆｃ受容体；ＦｃＲｎへの結合）などの特徴を向上、低減または変化させるために為される。可変ドメインにおける変更は、抗原結合特徴を向上させるために為される。抗体に加えて、免疫グロブリンは、様々な他の形態において存在することができ、この形態としては、例えば、単鎖またはＦｖ、Ｆａｂ、および（Ｆａｂ’）２の他に、ダイアボディ、直鎖状抗体、多価または多重特異的ハイブリッド抗体が挙げられる。

【0023】

本明細書において使用される場合、「断片」という用語は、インタクトなまたは全長の鎖の抗体（本明細書において抗ＮＧＦ抗体）の活性断片をいい、通常、結合または可変領域である。前記部分、または断片は、インタクトな鎖／抗体の少なくとも１つの活性を維持するべきであり、すなわち、それらは、「機能的部分」または「機能的断片」または「活性断片」である。それらが少なくとも１つの活性を維持する場合、それらは、好ましくは、標的結合特性を維持する。抗体部分（または抗体断片）の例としては、単鎖Ｆｖ、Ｆａｂ、単鎖抗体、ＦｖまたはｓｃＦｖ、ＶＨＨまたはｖＮＡＲが挙げられるがこれらに限定されない。これらの用語は、すべて単一のポリペプチド鎖内の、重鎖および軽鎖の両方からの可変ドメインを含むが定常領域を欠いた抗体断片をいう。概しては、単鎖抗体は、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含み、このポリペプチドリンカーは、抗原結合を可能とする所望の構造の形成を可能とする。特定の態様では、単鎖抗体はまた、二重特異的なおよび／またはヒト化されたものであり得る。

【0024】

「断片」という用語はまた、１つの軽鎖ならびに１つの重鎖の可変およびＣＨ１ドメインを含む「Ｆａｂ断片」をいう。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。１つの軽鎖および１つの重鎖を含有し、かつ２つの重鎖の間に鎖間ジスルフィド結合が形成され得るようにＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間に定常領域より多くを含有する「Ｆａｂ’断片」は、Ｆ（ａｂ’）２分子と呼ばれる。「Ｆ（ａｂ’）２」は、２つの軽鎖および２つの重鎖を含有し、２つの重鎖は、２つの重鎖の間に鎖間ジスルフィド結合が形成されるようにＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとの間に定常領域の部分を含有する。

【0025】

「ＳＥＥＤボディ」（ＳＥＥＤはＳｔｒａｎｄ－Ｅｘｃｈａｎｇｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｄｏｍａｉｎ）という用語は、ヒトＩｇＧおよびＩｇＡ ＣＨ３配列の交互のセグメントから構成される相補的なヒトＳＥＥＤ ＣＨ３ヘテロ二量体（図１に示されるように、結果として生じるヘテロ二量体はＡＧ部分およびＧＡ部分と呼ばれる）を作製する、ヒトＩｇＧおよびＩｇＡ ＣＨ３ドメインの誘導体を含む特定の種類の抗体をいう。それらは非対称の融合タンパク質である。ＳＥＥＤボディおよびＳＥＥＤ技術は、Davis et al. 2010または米国特許第８，８７１，９１２号明細書（これらのすべての内容を本明細書中に取り込む）に記載されている。それらは一価または二価であり得る。

【0026】

「ノブ－イントゥー－ホール」ベースの抗体という用語は、Carterおよび共同研究者らにより１９９６年に開発されたような重鎖ヘテロ二量体化技術に関する（Ridgway et al., 1996）。このアプローチでは、ＣＨ３ドメインの「ノブ」多様体と称される多様体は、より大きいアミノ酸による小さいアミノ酸の置換（Ｔ３６６Ｙ）を含有する。対照的に、ヘテロ二量体化のために設計された「ホール」多様体と称される対向するＣＨ３ドメインは、Ｙ４０７Ｔ変異、すなわち、より小さい残基での大きい残基の置換を含有する。

【0027】

本発明の文脈における「治療」という用語は、疾患の進行に対する任意の有益な効果をいい、この効果としては、疾患の発症後の病理発生の減弱、低減および減少または縮小が挙げられる。

【0028】

「薬学的に許容される」という用語は、活性成分の生物学的活性の有効性に干渉せず、かつそれが投与される宿主にとって毒性ではない任意の担体を包含することが意図される。例えば、関節内投与のために、活性タンパク質（複数可）は、注射用の単位剤形において、以下に限定されないが、生理食塩水、デキストロース溶液、血清アルブミンおよびリンガー溶液などのビヒクル（ｖｅｈｉｃｌｅｓ）中に配合されてもよい。

【0029】

「軟骨障害」という用語は、本明細書において使用される場合、外傷などの傷害に起因する損傷、軟骨疾患または関節炎の結果としてもたらされる障害を包含する。本明細書に記載される融合タンパク質の投与により治療され得る軟骨障害の例としては、変形性関節症などの関節炎、および軟骨傷害が挙げられるがこれらに限定されない。軟骨石灰化症、多発軟骨炎、再発性多発軟骨炎、強直性脊椎炎または肋軟骨炎などの軟骨または関節の変性疾患／障害もまた、この表現により包含される。The International Cartilage Repair Societyは、軟骨欠陥の重篤度を評価するための関節鏡グレーディングシステムを提案している：グレード０：（正常な）健常軟骨、グレード１：軟骨は軟質の斑点または水疱を有する、グレード２：軟骨中に小さな裂け目が見られる、グレード３：病変は深い（軟骨層の５０％より多く）割れ目を有する、およびグレード４：軟骨の裂け目は裏打ちする（軟骨下の）骨を露出している。（ICRS publication：http://www.cartilage.org/_files/contentmanagement/ICRS_evaluation.pdf, page 13を参照）。

【0030】

本明細書において使用される「関節炎」という用語は、変形性関節症、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、感染性関節炎、乾癬性関節炎、スチル病（若年性関節リウマチの発症）または離断性骨軟骨炎などの障害を包含する。それは、好ましくは、１つの軟骨が損傷した疾患または障害を含む。

【0031】

「変形性関節症」という用語は、関節炎の最もよく見られる形態を意図するために使用される。「変形性関節症」という用語は、原発性変形性関節症および二次性変形性関節症の両方を包含する（例えば、The Merck Manual, 17^th edition, page 449を参照）。変形性関節症は、軟骨の破壊により引き起こされ得る。軟骨の小片は、断裂して、骨の間の関節において疼痛および腫脹を引き起こすことがある。時間と共に、軟骨は完全にすり減ることがあり、骨がこすれるようになる。変形性関節症は、任意の関節に影響し得るが、通常、手、肩ならびに体重負荷のかかる関節、例えば、腰（ｈｉｐｓ）、膝、足、および脊椎に関する。好ましい例では、変形性関節症は膝変形性関節症または股関節変形性関節症（ｈｉｐ ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ）であってもよい。この表現は、特に、ＯＡＲＳＩ分類システムにしたがってステージ１～ステージ４またはグレード１～グレード６として分類される変形性関節症の形態を包含する。当業者は、当該技術分野、特に前記ＯＡＲＳＩ評価システム（ＯＯＣＨＡＳとも称される；例えば、Custers et al., 2007を参照）において使用される変形性関節症の分類を充分に認識している。変形性関節症は、本発明による融合タンパク質を投与することにより治療され得る好ましい軟骨障害の１つである。

【0032】

本明細書において使用される「軟骨傷害」という用語は、特に外傷の結果としてもたらされる軟骨障害または軟骨損傷である。軟骨傷害は、特に外傷性の機械的破壊の後、特にさらには事故または手術（例えば、マイクロフラクチャー手術）の後に起こり得る。この用語「軟骨傷害」はまた、軟骨または骨軟骨骨折および半月板への損傷を含む。関節の組織のスポーツ関連傷害またはスポーツ関連摩耗もまたこの定義に入ると考えられる。この用語はまた、微細損傷または鈍的外傷、軟骨骨折、骨軟骨骨折または半月板への損傷を含む。

【0033】

「対象」、または「患者」という用語は、ヒト、イヌ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、マウス、ウサギ、またはラットなどの哺乳動物を含む（但し、それに限定されない）ことが意図される。より好ましくは、対象（または患者）はヒトである。

【発明を実施するための形態】

【0034】

発明の詳細な説明
驚くべきことに、本発明による融合タンパク質（すなわち、ＦＧＦ－１８部分および抗ＮＧＦ部分の両方を有する）は、軟骨に対するＦＧＦ－１８の活性および疼痛に対するＮＧＦ阻害剤の活性の両方を維持することが本発明者らにより発見された。実際、全体として、１）ＦＧＦ－１８部分の効果はＮＧＦの阻害剤への融合により保存されること、および２）ＦＧＦ－１８部分は抗ＮＧＦ部分の中和効果に影響しないことがｉｎ ｖｉｔｒｏで発見された。融合タンパク質の各部分が高分子量であること、および、融合タンパク質は、例えば異なるリフォールディングに起因して、予測される活性を呈さない場合があることが周知なことから、この発見は予測されないものであった。これもまた驚くべきことに、前記活性は、各化合物について低い投与量であっても維持される。疾患の状況において、本発明の利点は、疼痛を減少させ／機能を改善させると共に、軟骨構造に対するＦＧＦ－１８部分の有効性を維持することである。

【0035】

第１の態様では、本発明は、抗ＮＧＦ部分（すなわち、ＮＧＦの阻害剤、好ましくは抗ＮＧＦ抗体またはその断片）に融合されたＦＧＦ－１８部分を含む新たな融合タンパク質を提供する。任意で、融合タンパク質は、２つの部分の間にリンカーを含む。

【0036】

本発明によるＦＧＦ－１８部分は、全体として、配列番号１に示されるようなＦＧＦ－１８の天然型、またはその成熟型（配列番号１のアミノ酸残基２８～残基２０７に対応する）であり得る。あるいは、それは、切断型、好ましくは、少なくとも１５０アミノ酸残基を含む切断型、例えば、配列番号２に示される切断型（配列番号２は、いかなるリーダー配列も有しない切断されたＦＧＦ－１８の成熟型である）であり得る。前記切断型は、そのＮ末端部分における追加のメチオニン残基と共に発現された場合、スプリフェルミンとして公知である。他の切断型、好ましくは、少なくとも１５０アミノ酸残基を含む他の切断型もまた使用することができ、他の切断型は、例えば、配列番号２のアミノ酸１（Ｇｌｕ）～１６７（Ｔｈｒ）を含むもしくはからなる形態、配列番号２のアミノ酸１（Ｇｌｕ）～１６１（Ｐｒｏ）を含むもしくはからなる形態（配列番号３に表される）、または例えば、配列番号２と比較してＮ末端および／もしくはＣ末端部分において１～１５個のアミノ酸残基の欠失を有するかつ／もしくは何らかの変異（例えば、プロテアーゼ活性を減少させるための変異）を有する任意の形態である。そのような切断および／または変異型は、天然のＦＧＦ－１８またはスプリフェルミンの全体的な生物学的活性を保つ限り、使用され得る。そのような他の切断および／または変異型の例は、例えば、配列番号４～８もしくは８７または配列番号１～８もしくは８７のいずれか１つの少なくとも１５０個の連続するアミノ酸残基を含むポリペプチドからなる（但し、これらに限定されない）群から選択されるアミノ酸配列である。別の選択肢では、ＦＧＦ１８部分は、配列番号１のアミノ酸残基２８～残基２０７または配列番号２と少なくとも８０％の配列同一性を有する活性多様体であり得る。好ましくは、前記ＦＧＦ１８多様体は、配列番号１のアミノ酸残基２８～残基２０７または配列番号２と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する。前記（活性）多様体は、ＦＧＦ１８部分の点変異（ｐｕｎｃｔｕａｌ ｍｕｔａｔｉｏｎ）（複数可）またはＦＧＦ８、ＦＧＦ９もしくはＦＧＦ１９部分などからの別のＦＧＦ部分に由来する部分配列との融合の結果であってもよい。そのような多様体の例は配列番号８３～８６に示される。

【0037】

本発明の抗ＮＧＦ部分は、ＮＧＦに結合してＮＧＦを中和する必要がある。好ましくは、前記抗ＮＧＦ部分は抗ＮＧＦ抗体に基づき、好ましくは、その活性断片または活性多様体である。本発明にしたがって使用され得る抗ＮＧＦ抗体は、例えば、タネズマブ、ファシヌマブまたはフルラヌマブであるが、これらの抗体に限定されない。好ましくは、これらの抗ＮＧＦ部分は、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ活性断片、ＶＨＨもしくはｖＮＡＲなどの抗ＮＧＦ抗体の活性断片であるか、またはＳＥＥＤボディもしくはノブ－イントゥー－ホールベースの抗体などの前記抗ＮＧＦ抗体の活性多様体であるかのいずれかである。例として、抗ＮＧＦ抗体の（活性）断片は、アミノ酸配列：配列番号２２（タネズマブのｓｃＦｖ）、配列番号２３（ファシヌマブのｓｃＦｖ）、配列番号２４（フルラヌマブのｓｃＦｖ）、配列番号１６（タネズマブのＶＨ－Ｆａｂ）、配列番号１８（ファシヌマブのＶＨ－Ｆａｂ）、配列番号２０（フルラヌマブのＶＨ－Ｆａｂ）、配列番号１７（タネズマブのＶＬ－Ｆａｂ）、配列番号１９（ファシヌマブのＶＬ－Ｆａｂ）および配列番号２１（フルラヌマブのＶＬ－Ｆａｂ）からなる群から選択され得る。

【0038】

あるいは、本発明による抗ＮＧＦ抗体、またはＮＧＦに結合するその部分は、ＨＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２およびＨ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン、ならびにＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２およびＬ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含み、１）Ｈ－ＣＤＲ１は、配列番号１３５からなるアミノ酸配列を含むまたはからなり、２）Ｈ－ＣＤＲ２は、配列番号１３６からなるアミノ酸配列を含むまたはからなり、３）Ｈ－ＣＤＲ３は、配列番号１３７からなるアミノ酸配列を含むまたはからなり、４）Ｌ－ＣＤＲ１は、配列番号１３８からなるアミノ酸配列を含むまたはからなり、５）Ｌ－ＣＤＲ２は、配列番号１３９からなるアミノ酸配列を含むまたはからなり、かつ６）Ｌ－ＣＤＲ３は、配列番号１４０からなるアミノ酸配列を含むまたはからなる。

【0039】

本発明のＦＧＦ－１８部分は、直接的にまたはリンカーを介して、そのＮ末端またはそのＣ末端を介して、抗ＮＧＦ部分に連結され得る（図１を参照）。任意の構築物において無差別に使用され得るリンカーの例は、配列番号１１８～１２０または１２７～１３１に表される。当業者は、本発明による融合タンパク質のための任意の配列番号において、選択した任意の他のリンカーによりリンカーを変更することができることを理解する。

【0040】

本発明による融合タンパク質が、ｓｃＦｖ部分に融合されたＦＧＦ－１８部分である場合、この連結は、抗ＮＧＦ ｓｃＦｖ部分の遊離ＶＨ末端または遊離ＶＬ末端を介して為され得る。そのような融合タンパク質の例は、例えば、１）ＦＧＦ－１８部分として配列番号１～８のいずれか１つを含むまたはからなる群から選択されるアミノ酸配列、および２）抗ＮＧＦ部分として配列番号２２～２４のいずれか１つを含むまたはからなる群から選択されるアミノ酸配列、および任意で３）ＦＧＦ－１８部分と抗ＮＧＦ部分との間のリンカーを含む。特定の融合タンパク質の例は、例えば、配列番号２５～２７のアミノ酸配列からなる（但し、これらに限定されない）群から選択される。

【0041】

本発明による構築物（または融合タンパク質）が抗ＮＧＦ部分としてのＦａｂに基づく場合、それは、ＶＨ－ＦａｂドメインおよびＶＬ－Ｆａｂドメインの両方を含み、ＦＧＦ－１８は、前記Ｆａｂ部分のＣ末端および／またはＮ末端を介して、ＶＨ－Ｆａｂドメインおよび／またはＶＬ－Ｆａｂドメインのいずれか１つに融合されている。そのような融合タンパク質の例は、例えば、１）ＦＧＦ－１８部分として配列番号１～８または８３～８７のいずれか１つを含むまたはからなる群から選択されるアミノ酸配列、および２）抗ＮＧＦ部分として配列番号１６～２１のいずれか１つを含むまたはからなる群から選択されるアミノ酸配列、および任意で３）ＦＧＦ－１８部分と抗ＮＧＦ部分との間の、配列番号１１８～１２０または１２７～１３１のいずれか１つを含むまたはからなる群から選択され得るリンカーを含む。特定の融合タンパク質の例は、例えば、配列番号２８～５３のアミノ酸配列からなる（但し、これらに限定されない）群から選択される。ＦＧＦ－１８部分がＶＨ－Ｆａｂに連結されている場合、融合タンパク質はまた、通常のＶＬ－Ｆａｂを含む。そのような分子の例は、例えば、配列番号３７と配列番号１７、配列番号４０と配列番号１７または配列番号４６と配列番号１７の組合せであるがこれらに限定されない。ＦＧＦ－１８部分がＶＬ－Ｆａｂに連結されている場合、融合タンパク質はまた、通常のＶＨ－Ｆａｂを含む。Ｆａｂ分子はＶＨ－ＦａｂドメインおよびＶＬ－Ｆａｂドメインの両方を含むので、前記分子は以下を含み得る：ｉ）ＶＨ－Ｆａｂドメインは、配列番号１６、１８もしくは２０のいずれか１つを含むもしくはからなる群から選択されるアミノ酸配列に融合された配列番号１～８もしくは８３～８７のいずれか１つを含むもしくはからなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、任意で２つのアミノ酸配列部分の間のリンカーを有し；かつＶＬ－Ｆａｂドメインは、配列番号１７、１９もしくは２１のいずれか１つを含むもしくはからなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ｉｉ）ＶＬ－Ｆａｂドメインは、配列番号１７、１９もしくは２１のいずれか１つを含むもしくはからなる群から選択されるアミノ酸配列に融合された配列番号１～８もしくは８３～８７のいずれか１つを含むもしくはからなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、任意で２つのアミノ酸配列部分の間のリンカーを有し；かつＶＨ－Ｆａｂドメインは、配列番号１６、１８もしくは２１のいずれか１つを含むもしくはからなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ｉｉｉ）ＶＨ－Ｆａｂドメインは、配列番号３４～３９、４５～４９、５１もしくは５３のいずれか１つを含むもしくはからなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；かつＶＬ－Ｆａｂドメインは、配列番号１７、１９もしくは２１のいずれか１つを含むもしくはからなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、またはｉｖ）ＶＬ－Ｆａｂドメインは、配列番号２８～３３、４０～４４、５０もしくは５２のいずれか１つを含むもしくはからなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；かつＶＨ－Ｆａｂドメインは、配列番号１６、１８もしくは２１のいずれか１つを含むもしくはからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。そのような分子の例は、例えば、１）配列番号２８と配列番号１６、２）配列番号３１と配列番号１６、３）配列番号４０と配列番号１６、４）配列番号４１と配列番号１６または４）配列番号４２と配列番号１６（ＨＯＦ３）の組合せであるがこれらに限定されない。

【0042】

あるいは、本発明による融合タンパク質が、抗ＮＧＦ抗体のＳＥＥＤボディ型に融合されたＦＧＦ－１８部分である場合、ＳＥＥＤボディの一価型が好ましくは使用される（すなわち、それらは通常、２つの完全重鎖および２つの軽鎖を含むホモ二量体を形成しない）。（単量体としての）ＳＥＥＤボディは、可変ドメインおよび定常ドメインの両方を含む１つの完全軽鎖（配列番号１１、１３または１５として開示されるものなど）、可変ドメインおよび定常ドメインの両方を含む１つの完全重鎖（配列番号５６、５８、６０、６５、７１または９６として開示されるものなど）の他に、ＳＥＥＤボディの定常ドメインＣＨ２およびＣＨ３のみを含む１つの部分重鎖（配列番号５４のアミノ酸残基１８５～４１４、配列番号５５のアミノ酸残基１８０～４０９、配列番号５７のアミノ酸残基１８０～４０９またはさらには配列番号５９のアミノ酸残基１８０～４０９、配列番号１０２もしくは配列番号１０７として開示されるものなど）からなる。部分重鎖は、完全重鎖上のその対応物に対して非対称である（例えば、完全重鎖がＧＡ型である場合、部分重鎖はＡＧ型であり、その逆も同様である）。ＦＧＦ－１８部分は、部分重鎖（図１Ｂまたは図１Ｄを参照））、その完全重鎖または軽鎖（図１Ｃを参照）を介して、Ｃ末端またはＮ末端のいずれかにおいて、ＳＥＥＤボディに連結される。ＡＧ型に融合されたそのようなＦＧＦ－１８部分の非限定的な例は、例えば、配列番号５４、５５、５７、５９、６２、６６～７０、７７～８２、９１～９５、１０１または１０３～１０６のアミノ酸配列からなる群から選択される。ＧＡ型に融合されたそのようなＦＧＦ－１８部分の非限定的な例は、例えば、配列番号７２～７６、９０、９７～１００または１０８のアミノ酸配列からなる群から選択される。そのようなＦＧＦ－１８－ＳＥＥＤボディの非限定的な例は、例えば、アミノ酸配列（各ＳＥＥＤボディは３つの配列、ここではそれぞれ、ＦＧＦ－１８部分重鎖；完全重鎖および軽鎖により形成される）：１）配列番号５４、５６および１１（ＭＢＥ６２６）、２）配列番号５５、５６および１１、３）配列番号５７、５８および１３、４）配列番号５９、６０および１５、５）配列番号９０、７１および１１（ＨＯ１２４）、６）配列番号９７、９６および１１（ＨＯ１１０）、または７）配列番号１００、９６および１１（ＨＯ１１３）からなる群から選択される。軽鎖に融合されたＦＧＦ－１８部分の例は、例えば、アミノ酸配列：４０～４４または１２４～１２６からなる群から選択される。そのようなＦＧＦ－１８－ＳＥＥＤボディの非限定的な例は、例えば、アミノ酸配列（各ＳＥＥＤボディは３つの配列、ここではそれぞれ、完全重鎖；部分重鎖およびＦＧＦ－１８軽鎖により形成される）：１）配列番号７１、１０２および１２６（ＨＯ１１４）、２）配列番号９６、１０２および４０～４４もしくは１２４～１２６のいずれか１つ、３）５６、１０７および４０もしくは１２４、４）５８、１０７および４０もしくは１２４、または５）６０、１０７および４０もしくは１２４からなる群から選択される。

【0043】

別の選択肢では、本発明による融合タンパク質が、抗ＮＧＦ抗体の活性ＩｇＧ多様体型に融合されたＦＧＦ－１８部分である場合、ＦＧＦ－１８部分は、その重鎖またはその軽鎖を介して、Ｃ末端またはＮ末端のいずれかにおいて、活性ＩｇＧ多様体に連結される。そのようなＦＧＦ－１８－ＩｇＧ融合物の例は、例えば、アミノ酸配列（各融合タンパク質は２つの配列、すなわち、１つの重鎖および１つの軽鎖により形成される）：１）配列番号９もしくは１０および６１、２）配列番号６２および１１、３）配列番号６３および９もしくは１０、４）配列番号６４および１１、５）配列番号８８もしくは８９および１１、６）配列番号９もしくは１０および１２４、または７）５）配列番号９もしくは１０および１２５からなる群から選択される。

【0044】

本発明による融合タンパク質は、全体として、Ｎ末端における分子リーダーと共に発現され得る。さらに、本明細書に開示される重鎖可変領域配列または全体もしくは部分重鎖アミノ酸配列に対して少なくとも８０％もしくはより高い、少なくとも８５％もしくはより高い、少なくとも９０％もしくはより高い、少なくとも９５％もしくはより高い、または少なくとも９９％もしくはより高い配列同一性を有するアミノ酸配列もまた提供される。同様に、本明細書に開示される軽鎖可変領域配列に対して少なくとも８５％もしくはより高い、少なくとも９０％もしくはより高い、少なくとも９５％もしくはより高い、または少なくとも９９％もしくはより高い配列同一性を有するアミノ酸配列もまた提供される。

【0045】

本発明の別の態様は、本明細書に記載される融合タンパク質のいずれかをコードする単離された核酸分子、もしくはポリヌクレオチド、またはその相補鎖もしくは縮重配列である。これに関して、「核酸分子」、または交換可能に「ポリヌクレオチド」という用語は、すべての異なる種類の核酸を包含し、この核酸としては、デオキシリボ核酸（例えば、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｇＤＮＡ、合成ＤＮＡなど）、リボ核酸（例えば、ＲＮＡ）およびペプチド核酸（ＰＮＡ）が挙げられるがこれらに限定されない。好ましい態様では、核酸分子は、二本鎖ＤＮＡ分子またはｃＤＮＡ分子などのＤＮＡ分子である。「単離された」という用語は、天然の供給源において通常会合している少なくとも１つの汚染物核酸分子から分離されている、同定された核酸分子を意味する。単離された核酸分子は、それが天然に見出される形態または状況以外にある。単離された核酸分子は、したがって、それが天然の細胞中に存在する場合の特定の核酸分子から区別される。縮重配列は、参照ヌクレオチド配列と同じアミノ酸配列をコードするが、遺伝コードの縮重の結果として別個のヌクレオチド配列を含む任意のヌクレオチド配列を指す。

【0046】

特定の態様では、本発明による融合タンパク質が、活性抗ＮＧＦ部分の活性ｓｃＦｖ断片に連結されたＦＧＦ－１８部分である場合、前記融合タンパク質は単一の分子としてコードされ、すなわち、ヌクレオチド配列は、コードされる２つの部分のために全体として必要とされるヌクレオチドを含む。

【0047】

あるいは、本発明による融合タンパク質が、Ｆａｂ部分または活性ＩｇＧ多様体に連結されたＦＧＦ－１８部分である場合、１つのポリヌクレオチドは本発明の融合タンパク質のいずれか１つの重鎖をコードし、別のポリヌクレオチドは本発明の融合タンパク質のいずれか１つの軽鎖をコードする。ＦＧＦ－１８部分がＦａｂに連結される方法に応じて、そのコーディング配列は、そのＮ末端またはそのＣ末端において、重鎖または軽鎖のいずれかのコーディング配列に取り付けられる。あるいは、本発明による融合タンパク質が、ＳＥＥＤボディに連結されたＦＧＦ－１８部分である場合、１つのポリヌクレオチドは本発明の融合タンパク質のいずれか１つの完全重鎖をコードし、別のポリヌクレオチドは、本発明の融合タンパク質のいずれか１つのＦＧＦ－１８部分に融合された部分重鎖をコードし、かつ別の１つは本発明の融合タンパク質のいずれか１つの軽鎖をコードする。前記タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列には、通常、リーダー配列が先行する。本発明にしたがって使用され得るポリヌクレオチド配列の非限定的な例は、例えば、配列番号１０９～１１７および１３２のポリヌクレオチド配列である。

【0048】

遺伝コードの縮重に起因して、本発明による融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは最適化され得ることが理解されるべきである。したがって、上記に列記される好ましいポリヌクレオチド配列などの、本明細書に開示される重鎖可変領域配列をコードするポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％もしくはより高い、少なくとも９５％もしくはより高い、または少なくとも９９％もしくはより高い配列同一性を有するポリヌクレオチド配列もまた提供される。同様に、上記に列記される好ましいポリヌクレオチド配列などの、本明細書に開示される軽鎖可変領域配列をコードするポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％もしくはより高い、少なくとも９５％もしくはより高い、または少なくとも９９％もしくはより高い配列同一性を有するポリヌクレオチド配列もまた提供される。

【0049】

本発明のさらなる態様は、本明細書に記載される融合タンパク質のいずれかをコードするＤＮＡを含むベクターである。ベクターは、任意の原核または真核細胞において機能的な、組込み型または自律複製型の、任意のクローニングまたは発現ベクターであってもよい。特に、ベクターは、プラスミド、コスミド、ウイルス、ファージ、エピソーム、人工染色体、および同種のものであってもよい。ベクターは、重鎖および軽鎖の両方のコーディング配列の全体もしくは部分、または軽鎖および重鎖コーディング配列のいずれか、またはその任意の部分を含んでもよい。ベクターが重鎖および軽鎖の両方のコーディング配列を含む場合（Ｆａｂ融合タンパク質またはＳＥＥＤボディ融合タンパク質の場合など）、これらのコーディング配列はそれぞれ、プロモーターに作用可能に連結されていてもよい。プロモーターは、重鎖および軽鎖コーディング配列について同じまたは異なっていてもよい。重鎖および軽鎖コーディング配列はまた、１つの単一プロモーターに作用可能に連結されていてもよく、この場合、重鎖および軽鎖のコーディング配列は、好ましくは、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）によりまたはウイルス２Ａペプチドを介して分離されていてもよい。真核遺伝子発現用の好適なプロモーターは、例えば、マウスもしくはヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）などのウイルス遺伝子に由来するプロモーター、マウス二方向性ＣＭＶプロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーターまたはヒト伸長因子－１アルファ（ＥＦ－１α）プロモーターであり、これらは当業者に周知である。ベクターは、プロモーター、ターミネーター、エンハンサー、選択マーカー、複製起点、インシュレーターなどの調節エレメントを含んでもよい。適切な核酸配列は、様々な手順によりベクターに挿入されてもよい。概しては、ＤＮＡは、当該技術分野において公知の技術を使用して適切な制限エンドヌクレアーゼ部位（複数可）に挿入される。これらの成分の１つまたは複数を含有する好適なベクターの構築には、当業者に公知の標準的なライゲーション技術が用いられる。

【0050】

本発明のさらなる態様は、組換え宿主細胞であって、前記細胞が、上記に定義されるような１つもしくは複数の核酸分子／ポリヌクレオチドまたは１つもしくは複数のベクターを含む、組換え宿主細胞である。宿主細胞は、原核細胞または真核細胞であってもよい。原核細胞の例としては、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌が挙げられる。真核細胞の例は、酵母細胞、植物細胞、哺乳動物細胞および昆虫細胞であり、これらには、任意の初代細胞培養物または確立された細胞株（例えば、３Ｔ３、Ｖｅｒｏ、ＨＥＫ２９３、ＴＮ５など）が含まれる。グリコシル化タンパク質の発現用の好適な宿主細胞は、多細胞生物に由来する。好ましい有用な哺乳動物宿主細胞株の例としては、ＣＨＯ（例えば、ＣＨＯ－Ｓ、ExpiCHO（商標）、ＣＨＯ－ｋ１またはＣＨＯ－ＬＦ）、ＨＥＫ２９３（例えば、２９３、２９３－６ＥまたはExpi293（商標））、ＮＳ０、ＳＰ２／０およびＣＯＳ細胞が挙げられる。本発明の融合タンパク質は、組換え技術、化学合成、クローニング、ライゲーション、またはこれらの組合せなどの当該技術分野において公知の任意の技術により製造されてもよい。多くの書籍および総説は、ベクターおよび原核または真核宿主細胞を使用して組換えタンパク質をクローニングおよび製造する方法に関する教示を提供している。より低いグリコシル化レベルを有する融合タンパク質または非グリコシル化融合タンパク質を得ることが必要な場合、酵母発現系または操作された／糖操作型のＣＨＯ細胞株が有利に使用され得る。同様に、より低いフコシル化レベルを有する融合タンパク質または非フコシル化融合タンパク質を得ることが必要な場合、操作された／糖操作型の酵母発現系または操作された／糖操作型のＣＨＯ細胞株が有利に使用され得る。

【0051】

本発明の別の態様は、したがって、本発明の融合タンパク質を製造する方法であって、本明細書に記載される融合タンパク質のいずれかまたはその部分をコードする核酸分子（複数可）の発現を可能とする条件下で本発明の組換え宿主細胞を培養すること、および産生された融合タンパク質（複数可）を回収／単離することを含む、方法である。産生される融合タンパク質（複数可）は、グリコシル化されていてもされていなくてもよく、フコシル化されていてもされていなくてもよく、または使用される宿主細胞種に応じて他の翻訳後修飾を含有してもよい。本発明の融合タンパク質を製造する方法は、融合タンパク質を精製するステップ、および／または前記融合タンパク質を医薬組成物に配合するステップをさらに含んでもよい。

【0052】

本明細書に記載される融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド（ＤＮＡおよびＲＮＡが挙げられる）を調製する他の方法は当該技術分野において周知である。トータルＲＮＡは、グアニジニウムイソチオシアネート抽出およびその後のＣｓＣＩ勾配中での遠心分離による単離を使用して調製され得る（Chirgwin et al. 1979）。ポリ（Ａ）＋ＲＮＡは、AvivおよびLeder（Aviv and Leder 1972）の方法を使用してトータルＲＮＡから調製される。相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）は、公知の方法を使用してポリ（Ａ）＋ＲＮＡから調製される。あるいは、ゲノムＤＮＡは単離され得る。融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは次に、例えば、ハイブリダイゼーションまたはＰＣＲにより同定および単離される。

【0053】

全体としての本発明の文脈において、融合タンパク質は医薬配合物の部分である。本発明の融合タンパク質は、医薬組成物として、すなわち、少なくとも１つの薬学的に許容される担体、賦形剤（複数可）または同種のものと共に配合されてもよい。「薬学的に許容される」の定義は、活性成分の生物学的活性の有効性に干渉せず、かつそれが投与される患者にとって毒性ではない任意の担体、賦形剤または同種のものを包含することが意図される。少なくとも１つの賦形剤は、例えば、緩衝剤、界面活性剤、塩、酸化防止剤、等張化剤、充填剤、安定化剤または任意のこれらの組合せからなる群から選択される。例えば、非経口投与のために、融合タンパク質（複数可）は、注射用の単位剤形において、生理食塩水、デキストロース溶液、血清アルブミンおよびリンガー溶液または任意の種類の公知の緩衝液などのビヒクル中に配合されてもよい。関節内適用用の配合物は、他の注射用配合物にも適用される要件のほとんどに合致し、すなわち、それらは、無菌であり、かつ適用部位（例えば、膝関節、滑液）における生理的条件と適合性である必要がある。関節内注射のために使用される賦形剤はまた、他の注射用配合物、例えば、静脈内または皮下適用用の他の注射用配合物中に存在してもよい。少なくとも１つのさらなる薬学的に許容される担体、賦形剤または同種のものを含む融合タンパク質のそのような配合物もまた、本発明の文脈において有用である。

【0054】

全体としての本発明の文脈において、融合タンパク質は、変形性関節症または軟骨傷害などの軟骨障害を治療するために使用される。特に、それらは、例えば表在性のフィブリル化（初期変形性関節症）に起因する滑膜関節における関節軟骨欠陥、変形性関節症に起因する軟骨変性、および傷害または疾患に起因する軟骨または骨軟骨欠陥を治療するために使用され得る。融合タンパク質はまた、離断性骨軟骨炎および関節変性疾患により引き起こされる関節疾患を治療するために使用されてもよい。再建外科および形成外科の分野において、融合タンパク質は、自己または同種軟骨拡張および大規模な組織欠陥の再構築用の移動のために有用である。本発明による融合タンパク質は、関節の洗浄、骨髄の刺激、摩耗関節形成術（ａｂｒａｓｉｏｎ ａｒｔｈｒｏｐｌａｓｔｙ）、軟骨下ドリリング、または軟骨下骨のマイクロフラクチャーと組み合わせて軟骨損傷を修復するために使用され得る。

【0055】

好ましい態様では、本発明にしたがって治療される軟骨障害は、膝変形性関節症または股関節変形性関節症などの変形性関節症である。治療される変形性関節症は、例えば、原発性変形性関節症または二次性変形性関節症の他に、ＯＡＲＳＩ分類システムにしたがってステージ１～ステージ４またはグレード１～グレード６として分類される変形性関節症であり得るがこれらに限定されない。

【0056】

別の好ましい態様では、本発明にしたがって治療される軟骨障害は、マイクロフラクチャーとしての外科的介入ありまたはなしの軟骨傷害である。さらに、本発明による融合タンパク質の投与に起因する軟骨の成長後、新たに形成された軟骨表面の輪郭を好適に作るために外科的治療が必要なことがある。

【0057】

好ましい態様では、治療は、本発明による融合タンパク質の滑膜周囲投与、滑膜内投与、関節周囲投与または関節内投与を含む。前記融合タンパク質は、単独またはタンパク質（例えば、持続放出配合物）の持続放出もしくは制限された局所放出用の好適な担体との複合体化のいずれかで、関節の滑液へのまたは直接的に欠陥への直接注射により適用され得る。関節内投与は、腰、膝、肘、手首、足首、脊椎、足、指、足指、手、肩、肋骨、肩甲骨、大腿、脛、踵の関節、および脊椎の骨ばった点に沿った関節から選択される関節において為される。さらに別の好ましい態様では、関節内投与は、腰または膝の関節において為される。

【図面の簡単な説明】

【0058】

【図1A】図１Ａは、ＳｃＦｖ部分の遊離ＶＬ部分を介して前記ｓｃＦｖ部分に連結されたＦＧＦ－１８部分の構造。

【図1B】図１Ｂは、ＳＥＥＤボディの部分重鎖（本明細書においてＡＧ部分）のＮ末端を介して前記ＳＥＥＤボディ部分に連結されたＦＧＦ－１８部分の構造。

【図1C】図１Ｃは、ＳＥＥＤボディの軽鎖のＣ末端を介して前記ＳＥＥＤボディ部分に連結されたＦＧＦ－１８部分の構造。

【図1D】図１Ｄは、ＳＥＥＤボディの部分重鎖（本明細書においてＡＧ部分）のＣ末端を介して前記ＳＥＥＤボディ部分に連結されたＦＧＦ－１８部分の構造。

【図1E】図１Ｅは、軽鎖融合物のＮ末端を介してＦａｂ部分に連結されたＦＧＦ－１８部分の構造。

【図1F】図１Ｆは、Ｎ末端重鎖融合物を介してＦａｂ部分に連結されたＦＧＦ－１８部分の構造。

【図1G】図１Ｇは、Ｃ末端軽鎖融合物を介してＦａｂ部分に連結されたＦＧＦ－１８部分の構造。

【図1H】図１Ｈは、Ｃ末端重鎖融合物を介してＦａｂ部分に連結されたＦＧＦ－１８部分の構造。

【図1I】図１Ｉは、Ｎ末端軽鎖融合物を介してＩｇＧ部分に連結されたＦＧＦ－１８部分の構造。

【図1J】図１Ｊは、Ｎ末端重鎖融合物を介してＩｇＧ部分に連結されたＦＧＦ－１８部分の構造。

【図1K】図１Ｋは、Ｃ末端軽鎖融合物を介してＩｇＧ部分に連結されたＦＧＦ－１８部分の構造。

【図1L】図１Ｌは、Ｃ末端重鎖融合物を介してＩｇＧ部分に連結されたＦＧＦ－１８部分の構造。

【図2A】図２Ａは、ｒｈＦＧＦ１８、構築物ＦＧＦ１８ ｓｃＦｖタネズマブまたはＭＢＥ６２６と７日培養された単層中のブタ軟骨細胞における細胞増殖およびＩ型コラーゲン発現。

【図2B】図２Ｂは、５０．０４ｎＭのｒｈＦＧＦ１８、構築物ＦＧＦ１８ ｓｃＦｖタネズマブまたはＭＢＥ６２６と５日培養された単層中のブタ軟骨細胞の細胞形態（アクチン染色）。

【図3A】図３Ａは、ＭＩＡラットモデルにおける歩行障害を解析するためのｉｎ ｖｉｖｏ研究の設計。３ｍｇ／関節のＭＩＡにより変形性関節症疼痛の誘導後１日目に関節内注射を行った。タネズマブを同時にｉ．ｖ．で注射した。歩行障害をキャットウォーク解析により解析した。

【図3B】図３Ｂは、ＭＩＡ誘導性の変形性関節症疼痛の間のＦＧＦ１８－ｓｃＦｖ－タネズマブによる用量依存性の対症利益（ｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ ｂｅｎｅｆｉｔ）。７～８ラット／群の対側後足跡の％の平均±ＳＥＭ±ＳＥＭの時間経過を示す。

【図4A】図４Ａは、慢性変形性関節症のＡＣＬＴ ｔＭｘラットモデルにおける歩行障害を解析するためのｉｎ ｖｉｖｏ研究の設計。

【図4B】図４Ｂは、経時的な歩行障害。１００％の歩行クオリティは、両方の後足における等体重負荷に対応する。

【図4C】図４Ｃは、曲線上面積（ＡＡＣ；１００％＝ベースライン）として表される注射後３週の間の歩行障害。９～１０匹の動物の平均±ＳＥＭを示す。有意性は、ダネットの事後検定を用いる二元配置分散分析により決定した。

【図5A】図５Ａは、構造的および対症利益に関するＭＢＥ６２６を用いた慢性研究用の介入スキーム。

【図5B】図５Ｂは、慢性変形性関節症の間の経時的な歩行成績に対するＭＢＥ６２６の治療効果。パラメーター跡長さ（ｐｒｉｎｔ ｌｅｎｇｔｈ）についての対側の％を示す。１００％は等体重負荷を示す。減少した値は、膝疼痛に起因する影響された後肢に対する低減された体重負荷を指し示した。データは、ｎ＝１０～１８動物／群の平均±ＳＥＭを表す。

【図6】図６は、プラセボに対する利益の％：曲線下面積を１３日目から９８日目（終了）まで決定した。次に、健常＋ビヒクル群についてのＡＵＣの平均を１００％の利益に設定し、ＡＣＬＴ ｐＭｘ＋ビヒクル群の平均を０％の利益に設定した。この正規化に基づいて、ビヒクル（プラセボ）に対する利益の％を各動物について算出し、平均±ＳＥＭを示す（ｎ＝１０～１８動物／群）。

【図7】図７は、組織学スコアリングにより決定された軟骨構造。１８動物／群の平均±ＳＥＭを示す。

【0059】

［配列表］
アミノ酸配列のリストと表記
配列番号1: 天然型ヒトFGF-18のアミノ酸配列
MYSAPSACTCLCLHFLLLCFQVQVLVAEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKRSRRIRPTHPA

【0060】

配列番号2: 組み換え切断型FGF-18 (trFGF-18)のアミノ酸配列
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTK

【0061】

配列番号3: FGF18_delta8のアミノ酸配列
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKP

【0062】

配列番号4: FGF18_TFのアミノ酸配列
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPGGGGSGGGGS

【0063】

配列番号5: FGF18_QNQSのアミノ酸配列
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQQNFQSTTVTK

【0064】

配列番号6: FGF18_Y191Pのアミノ酸配列
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKPTTVTK

【0065】

配列番号7: FGF18_3Alaのアミノ酸配列
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQAAFAYTTVTK

【0066】

配列番号8: FGF18_VSのアミノ酸配列
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFVSTTVTK

【0067】

配列番号9: タネズマブの完全重鎖アミノ酸配列
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

【0068】

配列番号10: 点変異を有するタネズマブの完全重鎖アミノ酸配列
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

【0069】

配列番号11: タネズマブの完全軽鎖のアミノ酸配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

【0070】

配列番号12: ファシヌマブの完全重鎖のアミノ酸配列
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGFTLTELSIHWVRQAPGKGLEWMGGFDPEDGETIYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELTSLRSEDTAVYYCSTIFGVVTNFDNWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

【0071】

配列番号13: ファシヌマブの完全軽鎖のアミノ酸配列
DIQMTQSPSSLSASAGDRVTITCRASQAIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAAFNLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDLASYYCQQYNRYPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

【0072】

配列番号14: フルラヌマブの重鎖のアミノ酸配列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLRSYSMNWVRQAPGKGLEWVSYISRSSHTIFYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMDSLRDEDTAMYYCARVYSSGWHVSDYFDYWGQGILVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

【0073】

配列番号15: フルラヌマブの軽鎖のアミノ酸配列
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

【0074】

配列番号16: タネズマブの重鎖Fab断片のアミノ酸配列
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC

【0075】

配列番号17: タネズマブの軽鎖Fab断片のアミノ酸配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

【0076】

配列番号18: ファシヌマブの重鎖Fab断片のアミノ酸配列
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGFTLTELSIHWVRQAPGKGLEWMGGFDPEDGETIYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELTSLRSEDTAVYYCSTIFGVVTNFDNWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC

【0077】

配列番号19: ファシヌマブの軽鎖Fab断片のアミノ酸配列
DIQMTQSPSSLSASAGDRVTITCRASQAIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAAFNLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDLASYYCQQYNRYPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

【0078】

配列番号20: フルラヌマブの重鎖Fab断片のアミノ酸配列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLRSYSMNWVRQAPGKGLEWVSYISRSSHTIFYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMDSLRDEDTAMYYCARVYSSGWHVSDYFDYWGQGILVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC

【0079】

配列番号21: フルラヌマブの軽鎖Fab断片のアミノ酸配列
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

【0080】

配列番号22: タネズマブのscFvのアミノ酸配列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSS

【0081】

配列番号23: ファシヌマブのscFvのアミノ酸配列
DIQMTQSPSSLSASAGDRVTITCRASQAIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAAFNLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDLASYYCQQYNRYPWTFGQGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGFTLTELSIHWVRQAPGKGLEWMGGFDPEDGETIYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELTSLRSEDTAVYYCSTIFGVVTNFDNWGQGTLVTVSS

【0082】

配列番号24: フルラヌマブのscFvのアミノ酸配列
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPLTFGGGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLRSYSMNWVRQAPGKGLEWVSYISRSSHTIFYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMDSLRDEDTAMYYCARVYSSGWHVSDYFDYWGQGILVTVSS

【0083】

配列番号25: FGF-18-scFv-タネズマブ, 軽ドメインのＮ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-169 = FGF-18部分; 170-184 = リンカー; 185-427 = 抗ＮＧＦ阻害剤部分としてのscFvタネズマブ)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSS

【0084】

配列番号26: FGF-18-scFv-ファシヌマブ, 軽ドメインのＮ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-169 = FGF-18部分; 170-184 = リンカー; 185-425 = 抗ＮＧＦ阻害剤部分としてのscFvファシヌマブ)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASAGDRVTITCRASQAIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAAFNLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDLASYYCQQYNRYPWTFGQGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGFTLTELSIHWVRQAPGKGLEWMGGFDPEDGETIYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELTSLRSEDTAVYYCSTIFGVVTNFDNWGQGTLVTVSS

【0085】

配列番号27: FGF-18-scFv-フルラヌマブ, 軽ドメインのＮ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-169 = FGF-18部分; 170-184 = リンカー; 185-429 = 抗ＮＧＦ阻害剤部分としてのscFvフルラヌマブ)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKGGGGSGGGGSGGGGSAIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPLTFGGGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLRSYSMNWVRQAPGKGLEWVSYISRSSHTIFYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMDSLRDEDTAMYYCARVYSSGWHVSDYFDYWGQGILVTVSS

【0086】

配列番号28: FGF-18-抗ＮＧＦのFab, 軽鎖のＮ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-169 = FGF-18部分; 170-184 = リンカー; 185-398 = Fab部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

【0087】

配列番号29: FGF18TF-抗ＮＧＦのFab, 軽鎖のＮ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-161 = FGF-18部分; 162-186 = リンカー; 187-400 = Fab部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPGGGGSGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

【0088】

配列番号30: FGF18QNQS -抗ＮＧＦのFab, 軽鎖のＮ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-169 = FGF-18部分; 1170-184 = リンカー; 185-398 = Fab部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQQNFQSTTVTKEPKSSDKTHTGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

【0089】

配列番号31: FGF18Y191P -抗ＮＧＦのFab, 軽鎖のＮ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-169 = FGF-18部分; 170-184 = リンカー; 185-398 = Fab部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKPTTVTKEPKSSDKTHTGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

【0090】

配列番号32: FGF18_3Ala -抗ＮＧＦのFab, 軽鎖のＮ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-169 = FGF-18部分; 170-184 = リンカー; 185-398 = Fab部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQAAFAYTTVTKEPKSSDKTHTGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

【0091】

配列番号33: FGF18VS -抗ＮＧＦのFab, 軽鎖のＮ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-169 = FGF-18部分; 170-184 = リンカー; 185-398 = Fab部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFVSTTVTKEPKSSDKTHTGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

【0092】

配列番号34: FGF18-抗ＮＧＦのFab, 重鎖のＮ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-169 = FGF-18部分; 170-179 = リンカー; 180-403 = Fab部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKGGGGSGGGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC

【0093】

配列番号35: FGF18TF-抗ＮＧＦのFab, 重鎖のＮ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-161 = FGF-18部分; 162-186 = リンカー; 187-410 = Fab部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPGGGGSGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC

【0094】

配列番号36: FGF18QNQS -抗ＮＧＦのFab, 重鎖のＮ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-169 = FGF-18部分; 170-184 = リンカー; 185-408 = Fab部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQQNFQSTTVTKEPKSSDKTHTGGGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC

【0095】

配列番号37: FGF18Y191P -抗ＮＧＦのFab, 重鎖のＮ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-169 = FGF-18部分; 170-184 = リンカー; 185-408 = Fab部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKPTTVTKEPKSSDKTHTGGGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC

【0096】

配列番号38: FGF18_3Ala -抗ＮＧＦのFab, 重鎖のＮ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-169 = FGF-18部分; 170-184 = リンカー; 185-408 = Fab部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQAAFAYTTVTKEPKSSDKTHTGGGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC

【0097】

配列番号39: FGF18VS -抗ＮＧＦのFab, 重鎖のＮ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-169 = FGF-18部分; 170-184 = リンカー; 185-408 = Fab部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFVSTTVTKEPKSSDKTHTGGGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC

【0098】

配列番号40: 抗ＮＧＦのFab- FGF18_delta8, 軽鎖のＣ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-214 = Fab部分; 215-234 = リンカー;235-395 = FGF-18部分)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKP

【0099】

配列番号41: 抗ＮＧＦのFab- FGF18QNQS -, 軽鎖のＣ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-214 = Fab部分; 215-234 = リンカー;235-403 = FGF-18部分)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQQNFQSTTVTK

【0100】

配列番号42: 抗ＮＧＦのFab- FGF18Y191P, 軽鎖のＣ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-214 = Fab部分; 215-234 = リンカー;235-403 = FGF-18部分)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKPTTVTK

【0101】

配列番号43: 抗ＮＧＦのFab- FGF18_3Ala, 軽鎖のＣ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-214 = Fab部分; 215-234 = リンカー;235-403 = FGF-18部分)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQAAFAYTTVTK

【0102】

配列番号44: 抗ＮＧＦのFab-FGF18VS, 軽鎖のＣ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-214 = Fab部分; 215-234 = リンカー;235-403 = FGF-18部分)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFVSTTVTK

【0103】

配列番号45: 抗ＮＧＦのFab- FGF18TF, 重鎖のＣ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-224 = Fab部分; 225-244 = リンカー;245-405 = FGF-18部分)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKP

【0104】

配列番号46: 抗ＮＧＦのFab- FGF18QNQS, 重鎖のＣ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-224 = Fab部分; 225-244 = リンカー;245-413 = FGF-18部分)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQQNFQSTTVTK

【0105】

配列番号47: 抗ＮＧＦのFab- FGF18Y191P, 重鎖のＣ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-224 = Fab部分; 225-244 = リンカー;245-413 = FGF-18部分)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKPTTVTK

【0106】

配列番号48: 抗ＮＧＦのFab- FGF18_3Ala, 重鎖のＣ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-224 = Fab部分; 225-244 = リンカー;245-413 = FGF-18部分)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQAAFAYTTVTK

【0107】

配列番号49: 抗ＮＧＦのFab- FGF18VS, 重鎖のＣ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-224 = Fab部分; 225-244 = リンカー;245-413 = FGF-18部分)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFVSTTVTK

【0108】

配列番号50: FGF-18-抗ＮＧＦのFab, ファシヌマブの軽鎖のＮ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-169 = FGF-18部分; 170-179 = リンカー; 180-393 = Fab部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASAGDRVTITCRASQAIRNDLGWYQQKPGKAPKRLIYAAFNLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDLASYYCQQYNRYPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

【0109】

配列番号51: FGF-18-抗ＮＧＦのFab, ファシヌマブの重鎖のＮ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-169 = FGF-18部分; 170-179 = リンカー; 180-401 = Fab部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGFTLTELSIHWVRQAPGKGLEWMGGFDPEDGETIYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELTSLRSEDTAVYYCSTIFGVVTNFDNWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC

【0110】

配列番号52: FGF-18-抗ＮＧＦのFab, フルラヌマブの軽鎖のＮ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-169 = FGF-18部分; 170-179 = リンカー; 180-393 = Fab部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKGGGGSGGGGSAIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

【0111】

配列番号53: FGF-18-抗ＮＧＦのFab, フルラヌマブの重鎖のＮ末端を介した融合のアミノ酸配列(残基1-169 = FGF-18部分; 170-179 = リンカー; 180-405 = Fab部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLRSYSMNWVRQAPGKGLEWVSYISRSSHTIFYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMDSLRDEDTAMYYCARVYSSGWHVSDYFDYWGQGILVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC

【0112】

配列番号54: FGF18-SEED, AG鎖のアミノ酸配列(FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される; 残基1-169 = FGF-18部分; 170-184 = リンカー; 185-414 = AG鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKGGSGGSGSGSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0113】

配列番号55: FGF18-SEED, AG鎖のアミノ酸配列(FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される; 残基1-169 = FGF-18部分; 170-179 = リンカー; 180-409 = AG鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0114】

配列番号56:抗ＮＧＦ GA鎖 のアミノ酸配列
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVLDSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNRFTQKSLDRSPGK

【0115】

配列番号57: FGF18-SEED, AG鎖のアミノ酸配列(FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される; 残基1-169 = FGF-18部分; 170-179 = リンカー; 180-409 = AG鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0116】

配列番号58:抗ＮＧＦ GA鎖 のアミノ酸配列
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGFTLTELSIHWVRQAPGKGLEWMGGFDPEDGETIYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELTSLRSEDTAVYYCSTIFGVVTNFDNWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVLDSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNRFTQKSLDRSPGK

【0117】

配列番号59: FGF18-SEED, AG鎖のアミノ酸配列(FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される; 残基1-169 = FGF-18部分; 170-179 = リンカー; 180-409 = AG鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0118】

配列番号60:抗ＮＧＦ GA鎖 のアミノ酸配列
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLRSYSMNWVRQAPGKGLEWVSYISRSSHTIFYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMDSLRDEDTAMYYCARVYSSGWHVSDYFDYWGQGILVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVLDSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNRFTQKSLDRSPGK

【0119】

配列番号61: FGF18_3Ala_IgG-軽鎖, 配列のＮ末端を介した融合のアミノ酸配列; 残基1-169 = FGF-18部分; 170-184 = リンカー; 185-398 = 軽鎖部分
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQAAFAYTTVTKEPKSSDKTHTGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

【0120】

配列番号62: FGF18_3Ala_IgG-重鎖, 配列のＮ末端を介した融合のアミノ酸配列; 残基1-169 = FGF-18部分; 170-184 = リンカー; 185-635 = AG鎖部分
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQAAFAYTTVTKEPKSSDKTHTGGGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

【0121】

配列番号63: IgG-軽鎖 - FGF18_3Ala, 配列のＣ末端を介した融合のアミノ酸配列; 残基1-214 = 軽鎖部分; 215-234 = リンカー; 235-403 = FGF-18部分
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQAAFAYTTVTK

【0122】

配列番号64: IgG-重鎖 - FGF18_3Ala, 配列のＣ末端を介した融合のアミノ酸配列; 残基1-451 = 重鎖部分; 452- 471 = リンカー; 472-640 = FGF-18部分
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQAAFAYTTVTK

【0123】

配列番号65: 点変異を有する抗ＮＧＦ GA鎖のアミノ酸配列
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVLDSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNRFTQKSLDRSPGK

【0124】

配列番号66: FGF18TF_SEED, AG鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの部分重鎖として) (FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される; 残基1-162 = FGF-18部分; 163-176 = リンカー; 177- 406= AG鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPGGGGSGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0125】

配列番号67: FGF18QNQS_SEED, AG鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの部分重鎖として) (FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される; 残基1-169 = FGF-18部分; 170-174 = リンカー; 175- 404= AG鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQQNFQSTTVTKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0126】

配列番号68: FGF18Y191P_SEED, AG鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの部分重鎖として) (FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される; 残基1-169 = FGF-18部分; 170-174 = リンカー; 175- 404= AG鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKPTTVTKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0127】

配列番号69: FGF18_3Ala_SEED, AG鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの部分重鎖として) (FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される; 残基1-169 = FGF-18部分; 170-174 = リンカー; 175- 404= AG鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQAAFAYTTVTKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0128】

配列番号70: FGF18VS_SEED, AG鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの部分重鎖として)(FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される; 残基1-169 = FGF-18部分; 170-174 = リンカー; 175- 404= AG鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFVSTTVTKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0129】

配列番号71:抗ＮＧＦ AG鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの完全重鎖として)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0130】

配列番号72: SEED_FGF18TF, GA鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの部分重鎖として) (FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される; 残基1-161 = FGF-18部分; 162-176 = リンカー; 177- 406= GA鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPGGGGSGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVLDSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNRFTQKSLDRSPGK

【0131】

配列番号73: SEED_FGF18QNQS, GA鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの部分重鎖として) (FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される; 残基1-169 = FGF-18部分; 170-174 = リンカー; 175- 404= GA鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQQNFQSTTVTKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVLDSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNRFTQKSLDRSPGK

【0132】

配列番号74: SEED_FGF18Y191P, GA鎖のアミノ酸配列(FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される) (SEEDボディの部分重鎖として; 残基1-169 = FGF-18部分; 170-174 = リンカー; 175- 404= GA鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKPTTVTKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVLDSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNRFTQKSLDRSPGK

【0133】

配列番号75: SEED_FGF18_3Ala, GA鎖のアミノ酸配列(FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される) (SEEDボディの部分重鎖として; 残基1-169 = FGF-18部分; 170-174 = リンカー; 175- 404= GA鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQAAFAYTTVTKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVLDSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNRFTQKSLDRSPGK

【0134】

配列番号76: SEED_FGF18VS, GA鎖のアミノ酸配列(FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される) (SEEDボディの部分重鎖として; 残基1-169 = FGF-18部分; 170-174 = リンカー; 175- 404= GA鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFVSTTVTKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVLDSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNRFTQKSLDRSPGK

【0135】

配列番号77: FGF18_SEED_GS, AG鎖のアミノ酸配列(FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される) (SEEDボディの部分重鎖として; 残基1-169 = FGF-18部分; 170-179 = リンカー; 180- 409= AG鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKGGSGGSGSGSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0136】

配列番号78: FGF18_SEED_CH2, AG鎖のアミノ酸配列(FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される) (SEEDボディの部分重鎖として; 残基1-169 = FGF-18部分; 170-177 = リンカー; 178- 407= AG鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKPAPEAAGGDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0137】

配列番号79: FGF18_SEED_YOL, AG鎖のアミノ酸配列(FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される) (SEEDボディの部分重鎖として; 残基1-169 = FGF-18部分; 170-178 = リンカー; 179- 408= AG鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKEEGEFSEARDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0138】

配列番号80: FGF18_SEED_Hinge, AG鎖のアミノ酸配列(FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される) (SEEDボディの部分重鎖として; 残基1-169 = FGF-18部分; 170-174 = リンカー; 175- 404= AG鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0139】

配列番号81: FGF18_SEED_shin, AG鎖のアミノ酸配列(FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される) (SEEDボディの部分重鎖として; 残基1-169 = FGF-18部分; 170- 399= AG鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0140】

配列番号82: FGF18_SEED_ 3Ala, AG鎖のアミノ酸配列(FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される) (SEEDボディの部分重鎖として; 残基1-169 = FGF-18部分; 170-172 = リンカー; 173- 402= AG鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKAAADKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0141】

配列番号83: FGF18CFGF8のアミノ酸配列(残基1-155 = FGF18部分; 156 -188 = FGF8部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQHTTEQSLRFEFLNYPPFTRSLRGSQRTWAPEPR

【0142】

配列番号84: FGF18CFGF8Tのアミノ酸配列(残基1-155 = FGF18部分; 156 -173 = FGF8T部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQHTTEQSLRFEFLNYPPFT

【0143】

配列番号85: FGF18CFGF17Tのアミノ酸配列(残基1-155 = FGF18部分; 156 -177 = FGF17T部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQLPFPNHAEKQKQFEFVGSAPTR

【0144】

配列番号86: FGF18CFGF9のアミノ酸配列(残基1-147 = FGF18部分; 148 -168 = FGF9部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFLPRPVDPDKVPELYKDILSQS

【0145】

配列番号87: FGF18Y191Fのアミノ酸配列
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKFTTVTK

【0146】

配列番号88: IgG-重鎖 - 野生型FGF18, 配列のＣ末端を介した融合のアミノ酸配列; 残基1-451 = 重鎖部分; 452-471= リンカー; 472-651= FGF-18部分
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKRSRRIRPTHPA

【0147】

配列番号89: IgG-重鎖 - スプリフェルミン, 配列のＣ末端を介した融合のアミノ酸配列; 残基1-451 = 重鎖部分; 452-471= リンカー; 472-640= FGF-18部分
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTK

【0148】

配列番号90: SEED_スプリフェルミン, GA鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの部分重鎖として) (FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される; 残基1-169 = FGF-18部分; 170 -184= リンカー; 185-414= GA鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKGGSGGSGSGSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVLDSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNRFTQKSLDRSPGK

【0149】

配列番号91: SEED_野生型FGF18, GA鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの部分重鎖として) (FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される; 残基1-180= FGF-18部分; 181-185= リンカー; 186-415= GA鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKRSRRIRPTHPAEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0150】

配列番号92: SEED_ FGF18CFGF8, AG鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの部分重鎖として) (FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される; 残基1-188 = FGF-18部分; 189-193 = リンカー; 194-423= AG鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQHTTEQSLRFEFLNYPPFTRSLRGSQRTWAPEPREPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0151】

配列番号93: SEED_ FGF18CFGF8T, AG鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの部分重鎖として) (FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される; 残基1-173= FGF-18部分; 174-178= リンカー; 179-408= AG鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQHTTEQSLRFEFLNYPPFTEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0152】

配列番号94: SEED_ FGF18CFGF17, AG鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの部分重鎖として) (FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される; 残基1-177= FGF-18部分; 178-182= リンカー; 183-412= AG鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQLPFPNHAEKQKQFEFVGSAPTREPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0153】

配列番号95: SEED_ FGF18CFGF9, AG鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの部分重鎖として) (FGF-18部分は配列のＮ末端に連結される; 残基1-168= FGF-18部分; 169-173= リンカー; 174-403= AG鎖部分)
EENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFLPRPVDPDKVPELYKDILSQSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0154】

配列番号96:変異AG鎖のアミノ酸配列
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVLDSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNRFTQKSLDRSPGK

【0155】

配列番号97: SEED_ スプリフェルミン, GA鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの部分重鎖として) (FGF-18部分は配列のＣ末端に連結される; 残基1-235= GA鎖部分; 236-245= リンカー; 246-414= FGF-18部分)
EPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVLDSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNRFTQKSLDRSPGKEPKSSDKTHTEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTK

【0156】

配列番号98: SEED_ スプリフェルミン, GA鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの部分重鎖として) (FGF-18部分は配列のＣ末端に連結される; 残基1-235= GA鎖部分; 236-255= リンカー; 256-424= FGF-18部分)
EPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVLDSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNRFTQKSLDRSPGKGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTK

【0157】

配列番号99: SEED_ スプリフェルミン, GA鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの部分重鎖として) (FGF-18部分は配列のＣ末端に連結される; 残基1-235= GA鎖部分; 236-250= リンカー; 251-419= FGF-18部分)
EPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVLDSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNRFTQKSLDRSPGKGGGGSGGGGSGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTK

【0158】

配列番号100: SEED_ 野生型FGF18, GA鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの部分重鎖として) (FGF-18部分は配列のＣ末端に連結される; 残基1-235= GA鎖部分; 236-255= リンカー; 256-435= FGF-18部分)
EPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVLDSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNRFTQKSLDRSPGKGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKRSRRIRPTHPA

【0159】

配列番号101: SEED_ スプリフェルミン, AG鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの部分重鎖として) (FGF-18部分は配列のＣ末端に連結される; 残基1-235= AG鎖部分; 236-255= リンカー; 256-424= FGF-18部分)
EPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGKGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTK

【0160】

配列番号102: GA鎖のCH2-CH3ドメインのアミノ酸配列 (すなわち、部分GA鎖)
EPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVLDSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNRFTQKSLDRSPGK

【0161】

配列番号103: SEED_ スプリフェルミン, AG鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの完全重鎖として) (FGF-18部分は配列のＣ末端に連結される; 残基1-454= AG鎖部分; 455-474= リンカー; 475-643= FGF-18部分)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGKGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTK

【0162】

配列番号104: SEED_ FGF18Y191P, AG鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの完全重鎖として) (FGF-18部分は配列のＣ末端に連結される; 残基1-454= AG鎖部分; 455-474= リンカー; 475-643= FGF-18部分)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGKGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKPTTVTK

【0163】

配列番号105: SEED_ FGF18Y191F, AG鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの完全重鎖として) (FGF-18部分は配列のＣ末端に連結される; 残基1-454= AG鎖部分; 455-474= リンカー; 475-643= FGF-18部分)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGKGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKFTTVTK

【0164】

配列番号106: SEED_ FGF18VS, AG鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの完全重鎖として) (FGF-18部分は配列のＣ末端に連結される; 残基1-454= AG鎖部分; 455-474= リンカー; 475-643= FGF-18部分)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGKGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFVSTTVTK

【0165】

配列番号107: AG鎖のCH2-CH3ドメインのアミノ酸配列(部分AG鎖)
EPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPFRPEVHLLPPSREEMTKNQVSLTCLARGFYPKDIAVEWESNGQPENNYKTTPSRQEPSQGTTTFAVTSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKTISLSPGK

【0166】

配列番号108: SEED_ FGF18VS, GA鎖のアミノ酸配列(SEEDボディの完全重鎖として) (FGF-18部分は配列のＣ末端に連結される; 残基1-454= GA鎖部分; 455-474= リンカー; 475-643= FGF-18部分)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPPSEELALNELVTLTCLVKGFYPSDIAVEWLQGSQELPREKYLTWAPVLDSDGSFFLYSILRVAAEDWKKGDTFSCSVMHEALHNRFTQKSLDRSPGKGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTK

【0167】

配列番号118: リンカーのアミノ酸配列
GGGGSEPKSSDKTHTGGGGS

【0168】

配列番号119 リンカーのアミノ酸配列
GGGGSGGGGSGGGGS

【0169】

配列番号120: リンカーのアミノ酸配列
EPKSSDKTHT

【0170】

配列番号121:ヒトFGF8前駆体のアミノ酸配列(GenBank Ref.: AAC50785.1)
MGSPRSALSCLLLHLLVLCLQAQVTVQSSPNFTQHVREQSLVTDQLSRRLIRTYQLYSRTSGKHVQVLANKRINAMAEDGDPFAKLIVETDTFGSRVRVRGAETGLYICMNKKGKLIAKSNGKGKDCVFTEIVLENNYTALQNAKYEGWYMAFTRKGRPRKGSKTRQHQREVHFMKRLPRGHHTTEQSLRFEFLNYPPFTRSLRGSQRTWAPEPR

【0171】

配列番号122:ヒトFGF9前駆体のアミノ酸配列(GenBank Ref.: NP_002001.1)
MAPLGEVGNYFGVQDAVPFGNVPVLPVDSPVLLSDHLGQSEAGGLPRGPAVTDLDHLKGILRRRQLYCRTGFHLEIFPNGTIQGTRKDHSRFGILEFISIAVGLVSIRGVDSGLYLGMNEKGELYGSEKLTQECVFREQFEENWYNTYSSNLYKHVDTGRRYYVALNKDGTPREGTRTKRHQKFTHFLPRPVDPDKVPELYKDILSQS

【0172】

配列番号123:ヒトFGF17のアミノ酸配列(GenBank Ref.: AAI43790.1)
MGAARLLPNLTLCLQLLILCCQTQYVRDQGAMTDQLSRRQIREYQLYSRTSGKHVQVTGRRISATAEDGNKFAKLIVETDTFGSRVRIKGAESEKYICMNKRGKLIGKPSGKSKDCVFTEIVLENNYTAFQNARHEGWFMAFTRQGRPRQASRSRQNQREAHFIKRLYQGQLPFPNHAEKQKQFEFVGSAPTRRTKRTRRPQPLT

【0173】

配列番号124: C末端にスプリフェルミンを有する軽鎖のアミノ酸配列 (残基1-214 = 軽鎖; 215-234 = リンカー;235-403 = スプリフェルミン部分)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTK

【0174】

配列番号125:野生型FGF18末端を有する軽鎖のアミノ酸配列(残基1-214 = 軽鎖; 215-234 = リンカー;235-414 = FGF18部分)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTKRSRRIRPTHPA

【0175】

配列番号126: C末端にFGF18を有する軽鎖のアミノ酸配列(残基1-214 = 軽鎖; 215-234 = リンカー;235-414 = FGF18部分)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEPKSSDKTHTGGGGSEENVDFRIHVENQTRARDDVSRKQLRLYQLYSRTSGKHIQVLGRRISARGEDGDKYAQLLVETDTFGSQVRIKGKETEFYLCMNRKGKLVGKPDGTSKECVFIEKVLENNYTALMSAKYSGWYVGFTKKGRPRKGPKTRENQQDVHFMKRYPKGQPELQKPFKYTTVTK

【0176】

配列番号127: リンカーのアミノ酸配列
GGSGGSGSGSEPKSS

【0177】

配列番号128: リンカーのアミノ酸配列
GGGGSGGGGS

【0178】

配列番号129: リンカーのアミノ酸配列
EPKSS

【0179】

配列番号130: リンカーのアミノ酸配列
GGGGSGGGGSEPKSSDKTHTGGGGS

【0180】

配列番号131: リンカーのアミノ酸配列
EPKSSDKTHT

【0181】

配列番号135: 抗ＮＧＦ 多様体CDR-H1 のアミノ酸配列
TVSGFSLIGYDLN

【0182】

配列番号136:抗ＮＧＦ 多様体CDR-H2のアミノ酸配列, X1 = D又はE; X2 = N又はH; X3 = S, P, H,又はQ; X4 = A又はS; X5 is V又はL
IIWGX1GTTDYX2X3X4X5KS

【0183】

配列番号137:抗ＮＧＦ 多様体CDR-H3 のアミノ酸配列
ARGGYWYATSYYFDY

【0184】

配列番号138:抗ＮＧＦ 多様体CDR-L1のアミノ酸配列, X1 = N又はQ; X2 = N又はH
RASQSISX1X2LN

【0185】

配列番号139:抗ＮＧＦ 多様体CDR-L2 のアミノ酸配列
YYTSRFHS

【0186】

配列番号140:抗ＮＧＦ 多様体CDR-L3 のアミノ酸配列
QQEHTLPYT

【実施例】

【0187】

材料
対照として使用したＦＧＦ１８部分はスプリフェルミンであった。それは、Ｎ末端における追加のＭｅｔ残基（Ｅ．ｃｏｌｉにおいて発現されるため）と共に配列番号２によるアミノ酸配列を有するポリペプチドに対応する。対照として使用した抗ＮＧＦ部分はタネズマブであった。

【0188】

実施例１－構築物
１リットルスケールで、ExpiFectamine（商標） ReagentによるExpiCHO（商標）細胞の一過性トランスフェクションを使用してタンパク質を発現させた。ExpiCHO（商標）細胞をExpiCHO（商標）発現培地中での３．０×１０⁶ｖｃ／ｍｌでのトランスフェクションの２０±２ｈ前に播種した（ｖｃ＝生存数）。細胞数はトランスフェクションの日に７．０×１０⁶ｖｃ／ｍｌ～１０．０×１０⁶ｖｃ／ｍｌであり、生存は９５％より高かった。培養物を７５０ｍｌ中６×１０⁶ｖｃ／ｍｌに希釈した。ExpiCHO（商標） Expression mediumをトランスフェクション培地として使用した。２．４ｍｌのExpiFectamine（商標）を２８ｍｌのOptiPro（商標）で希釈し、穏やかに混合した。目的のタンパク質（複数可）をコードする（配列番号１～８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するタンパク質のいずれか１つをコードする）ＤＮＡ分子を３０ｍｌのOptiPro（商標）に加え、穏やかに混合した。ExpiFectamine（商標）およびＤＮＡ溶液を混合し、複合体を直ちに細胞に加えた。複合体形成時間は必要なかった。細胞を３６．５℃および５％のＣＯ₂でインキュベートした。トランスフェクションの２０時間後に培養物に４．５μｌのエンハンサーおよび１８０ｍｌのフィードを添加した。トランスフェクションの６日後に細胞を回収し、４℃での４３００×ｇで２０分間の遠心分離により細胞を上清から分離した。目的のタンパク質を含む上清を精製のための下流の処理に移した。標準的な処理を目的のタンパク質を精製するために使用した。

【0189】

実施例２－融合タンパク質の生物活性
ＢａＦ３／ＦＧＦＲ３細胞アッセイ：ＦＧＦＲ３を発現し、ＦＧＦＲ３活性化の下でのみ増殖するＢａＦ３細胞。（ATP liteを用いて）ＡＴＰを介して代謝活性を測定し、代謝活性は細胞数に比例する。２ｍＭのＬ－グルタミン、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、１Ｘのペニシリン／ストレプトマイシン、０．６ｍｇ／ｍＬのＧ－４１８、５０ｎＭのベータ－メルカプトエタノールおよび５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ３を含むＲＰＭＩ １６４０培地中でＢａＦ３／ＦＧＦＲ３細胞を培養および継代した。アッセイのために、細胞を最初にアッセイ培地（ＩＬ３を含まないが、代わりに１μｇ／ｍＬのヘパリンを含む同じ培地）中で２４ｈ培養した後、増加濃度の試験化合物を含む１００μＬのアッセイ培地中に白色９６ウェルプレート中のウェル当たり２００００細胞で接種した。細胞を３７℃で４８ｈさらに培養した。ＡＴＰ含有量（細胞含有量に比例する）を次に製造業者の推奨にしたがってATPlite kit（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、カタログ番号６０１６７３１）を用いて評価した。ｒｈＦＧＦ１８を０．００１、０．０１、０．１、１、１０、１００および１０００ｎｇ／ｍＬ（５．０４×１０^-5～５０．４ｎＭに対応する）において対照として試験した。ＦＧＦ１８＿抗ＮＧＦ構築物を同じ等モル濃度で試験した。結果として得られたＥＣ５０をPadPrism Software v7.0を用いて算出した。

【0190】

Ｕ２ＯＳ ＴｒｋＡ－Ｐ７５アッセイ：ＴｒｋＡおよびｐ７５（ＮＧＦ受容体）を発現するＵ２ＯＳ細胞を使用した。ＮＧＦの存在下で受容体は二量体化し、発光する。Ｕ２ＯＳ ＴｒｋＡ－ｐ７５細胞（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｘ、カタログ番号９３－０５２９Ｃ３）を、０．２ｍｇ／ｍｌのジェネティシン、０．１ｍｇ／ｍＬのハイグロマイシンおよび１０％のＦＣＳを含むMcCoy培地中で培養した。アッセイのために、ウェル当たり５００００個の細胞を白色９６ウェルプレート中で９０μＬのアッセイ培地（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．５Ｘのペニシリン／ストレプトマイシン、２％のＦＣＳを含むＭＥＭα）に接種し、３７℃で終夜培養した。６００ｎｇ／ｍＬのＮＧＦを次に増加濃度の試験化合物（ウェル中の最終の所望の濃度の２０Ｘ）と１：１のｖ／ｖで混合し、室温で１ｈインキュベートした。１０μＬのＮＧＦ／試験化合物混合物を次に室温で３ｈ細胞に加えた。受容体活性化を製造業者の推奨にしたがってPathhunter Bioassay detection kit（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｘ、カタログ番号９３－０９３３Ｅ）を用いて測定した。タネズマブを０．４５７、１．３７、４．１２、１２．３６、３７、１１１．１、３３３．３、および１０００ｎｇ／ｍＬ（０．００３～６．８６ｎＭに対応する）において対照として試験した。ＦＧＦ１８＿抗ＮＧＦ構築物を同じ等モル濃度で試験した。結果として得られたＩＣ５０をPadPrism Software v7.0を用いて算出した。

【0191】

結果：すべての試験した構築物は、ＢａＦ３／ＦＧＦＲ３細胞アッセイおよびＵ２ＯＳ Ｔｒｋａ＿ｐ７５細胞アッセイの両方において活性であり、すべての構築物について両方の部分（ＦＧＦ１８および抗ＮＧＦ）は生物活性であることを指し示した（表１を参照）。

【0192】

【表1】

表１：それぞれＢａＦ３／ＦＧＦＲ３アッセイ（ＦＧＦＲ３活性化をモニターするため）およびＵ２ＯＳ ＴｒｋＡ＿ｐ７５アッセイ（ＮＧＦ阻害をモニターするため）において各構築物について得られたＥＣ₅₀およびＩＣ₅₀。

【0193】

実施例３－初代軟骨細胞に対する融合タンパク質の活性
初代軟骨細胞の単離：ブタ軟骨細胞をブタ腰の大腿骨頭の軟骨から単離した。細胞を最初に２００００細胞／ｃｍ²で接種し、１０％のＦＣＳ、５０μｇ／ｍＬのアスコルベート－２－ホスフェートおよび０．４ｍＭのＬ－プロリンを含むＤＭＥＭＨＧ中で１週間培養した。

【0194】

遺伝子発現用の細胞培養および細胞数：軟骨細胞を２４ウェルプレート中に、そのままのまたは異なる濃度のｒｈＦＧＦ１８もしくはＦＧＦ１８＿抗ＮＧＦ構築物（ｒｈＦＧＦ１８と等モル）を添加した１ｍＬの同じ培地中に１５０００細胞／ウェルで接種した。細胞を７日間培養した。培養の終わりに、細胞をViCell（商標） Cell analyzer（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を用いて計数するか、またはＲＮＡ単離および遺伝子発現のために溶解させるかのいずれかに付した。ＲＮＡを製造業者の推奨にしたがってRNeasy minikit（Ｑｉａｇｅｎ、カタログ番号７４１０４）を用いて単離した。ｍＲＮＡの濃度および品質を次にAgilent RNA 6000 Nano Chip（Ａｇｉｌｅｎｔ、カタログ番号Ｇ２９３８－８００２３）を用いてAgilent Bioanalyserにより分析した。逆転写は、SuperScript III First-Strand Synthesis SuperMixを用いて実現した。ｃＤＮＡを次に、ＲＮＡを消化するためのリボヌクレアーゼＨにより消化し、各２００ｎＭのＩ型コラーゲン用のリバースおよびフォワードプライマーの存在下でSYBRGreen Jumpstart Taq Ready Mixを用いるｑＰＣＲにより分析した（フォワード（配列番号１３３）：５’－ＡＡＡＧＧＡＴＣＴＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣ－３’およびリバース（配列番号１３４）：５’－ＣＣＴＧＡＧＴＧＧＡＡＧＡＧＴＧＧＡＧＡ－３’）。反応は、Ａｇｉｌｅｎｔ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙのサーモサイクラーMx3000Pにおいて行った。

【0195】

細胞形状解析用の細胞培養：軟骨細胞を９６ウェルプレート中に、そのままのまたは異なる濃度のｒｈＦＧＦ１８（１０、１００および１０００ｎｇ／ｍＬ）もしくはＦＧＦ１８＿抗ＮＧＦ構築物（ｒｈＦＧＦ１８と等モル）を添加した２００μＬの同じ培地中に１０００細胞／ウェルで接種した。細胞を５日間培養した。その後、細胞をＰＢＳ中の４％（ｗ／ｖ）のパラホルムアルデヒドで１５分固定し、ＰＢＳ中で３回洗浄した後、ＰＢＳ中の０．２％（ｖ／ｖ）のTriton X100を用いて室温で５分の透過処理を行った。固定および透過処理した細胞をＰＢＳで３回洗浄し、ＰＢＳ中のHoechst 33342（１／４００、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｈ１３９９）およびPhalloidin-Alex 488（１／４０、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ａ１２３７９）を用いて室温で１ｈ染色した。そして、細胞をＰＢＳで３回洗浄した。緑色および青色蛍光用のフィルターセットを使用して倒立顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ、Axio Observer）を用いて画像を取得した。

【0196】

ＦＧＦ１８ ｓｃＦｖタネズマブについての結果：ｒｈＦＧＦ１８およびＦＧＦ１８ｓｃＦｖ－タネズマブを０．０１５、０．０５、０．１５、０．５、１．５、５、１５および５０ｎＭにおいて試験した。構築物ＦＧＦ１８ ｓｃＦｖタネズマブの効果は、ｒｈＦＧＦ１８の効果より著明でなかった。しかしながら、両方の分子は、細胞増殖を用量依存的に増加させ、Ｉ型コラーゲン発現を減少させた（図２Ａ）。ｒｈＦＧＦ１８は軟骨細胞形態に対する効果を有し、細胞が丸くなるのに有利に働き、構築物ＦＧＦ１８ ｓｃＦｖタネズマブは類似の効果を有し、（すべてではないが）一部の細胞は丸い形態を示すこともまた観察された（図２Ｂ）。これらの結果は、構築物ＦＧＦ１８ ｓｃＦｖタネズマブはｒｈＦＧＦ１８と類似の効果を発揮することを示す。

【0197】

ＭＢＥ６２６についての結果：ｒｈＦＧＦ１８およびＭＢＥ６２６を０．５０４、５．０４および５０．４ｎＭにおいて試験した。軟骨細胞増殖に対するＭＢＥ６２６の効果は、ｒｈＦＧＦ１８の効果より著明でなかったが、５０．０４ｎＭにおいてｒｈＦＧＦ１８の効果の６５％に達した。Ｉ型コラーゲン発現の阻害に関して、両方の分子は同様に機能した。加えて、ＭＢＥ６２６は、ｒｈＦＧＦ１８のように細胞の丸まりを誘導した（図２Ｂ）。これらの結果は、構築物ＭＢＥ６２６はｒｈＦＧＦ１８と類似の効果を発揮することを示す。

【0198】

実施例４－ｉｎ ｖｉｖｏモデル（ＭＩＡモデル）での強いＯＡ疼痛における融合タンパク質の活性
この研究の目的は、ｉ．ｖ．注射されたタネズマブと比較して、モノヨード酢酸（ＭＩＡ）誘導性の歩行障害（疼痛様挙動）に対する関節内（ｉ．ａｒｔ．）ＦＧＦ１８－ｓｃＦｖ（ＮＧＦに対する抗体の単鎖断片に融合されたヒト組換えＦＧＦ１８）の用量応答（力価）を決定することであった。

【0199】

実験：Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒの雄Ｌｉｓｔｅｒ Ｈｏｏｄｅｄラット（２５０～３５０グラム）を４つの階の（４ ｓｔｏｒｉｅｄ）コロニーケージ中で４８個体の接続されたコロニーにおいて飼育した。このケージ中、自然な身体活動を可能とするために、ラットは、階の間のジャンプおよび階段を通る歩行の機会を有した。その後の炎症を伴う軟骨分解を誘導するために、０．９％のＮａＣｌ中に溶解した３０μｌの１００μｇ／μｌのＭＩＡ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、商品番号Ｉ９１４８、ロットＬＢＢ０９６８Ｖ）をイソフルラン麻酔されたラットの右膝関節にｉ．ａｒｔ．注射した。疼痛に対する潜在的な効果を評価するために、縦断的歩行解析をNoldus catwalk XT 10.0 system（Ｎｏｌｄｕｓ、Ｗａｇｅｎｉｎｇｅｎ、Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して行った。このシステムは、照明されるガラス底トンネルを使用し、このトンネルでは、ガラス上の足接触領域が明るく照明され、ビデオカメラにより下から記録される。ラットの昼夜を逆転させ、暗い活動期の間に解析する。トンネル（取得領域）を通る歩行は完全に自発的かつ１０秒の時間枠内でなければならない。各動物について３つの独立した実行を取得した。ビデオ取得の間に動物が停止または立ち上がった場合、その実行のデータを消去する。ラットが５分以内にキャットウォークを行わない場合、いかなるデータも得ることなく次の動物を試験する。Noldus Catwalk XT 10.0 softwareにより次に足跡をある特定の位置（例えば、左前足）に割り当てる。歩行成績／障害の記述のために、パラメーター跡長さを対側の％として算出する。対側値の％を各実行について平均して単一の動物値を得る。薬物効果を評価するために、異なる用量のＦＧＦ１８－ｓｃＦｖ－タネズマブ（０．０３～１００μｇ／関節）またはＰＢＳをＭＩＡ注射後１日目に疾患右膝関節に関節内注射した。タネズマブを同時に（１ｍｇ／ｋｇの高用量で）ｉ．ｖ．注射した。ビヒクル群には関節内に３０μｇ／関節のＰＢＳを与えた。各群は７匹の動物からなるものであった。図３Ａは研究の原理を示す。

【0200】

結果：ＦＧＦ１８－ｓｃＦｖタネズマブの関節内注射は、歩行障害の改善に関して、高用量で静脈内（ｉ．ｖ．）投与された臨床的に証明されたタネズマブと同じ有効性を達成した（図３Ｂ）。完全な効果は、３μｇ／関節のＦＧＦ１８－ｓｃＦｖタネズマブで既に達成された。

【0201】

結論：３μｇ／関節のＦＧＦ－１８－ｓｃＦｖおよびより高用量のｉ．ａｒｔ．注射は、陽性対照タネズマブのｉ．ｖ．と同じ有効性を結果としてもたらした。この結果は、抗ＮＧＦ部分がＦＧＦ１８に融合された新たな二機能性分子を用いて有意義な対症利益を達成できることを示した。ｉｎ ｖｉｖｏのラットにおいてＦＧＦ１８もまた１μｇ／関節（およびより高い）において活性であるので、この実験の結果は、新規の二機能性（＞３μｇ／関節）分子を用いて、ＦＧＦ１８部分からの構造的利益も誘導される用量において疼痛に対する効果が潜在的に起こり得ることを指し示す。

【0202】

実施例５－慢性ＯＡモデル（ＡＣＬＴ ｔＭｘモデル）における１回のｉ．ａｒｔ．注射後の融合タンパク質による対症利益の継続時間
この研究の目的は、手術誘導性の慢性変形性関節症後の歩行障害に対する、１つの高用量において試験した新規の二機能性分子の利益を決定することであった。
実験：動物、飼育条件および歩行解析は、実施例４に記載したものと同じであった。ＯＡの発症を前十字靭帯切離および部分的半月板切除（ＡＣＬＴ＋ｐＭｘ）手術により誘導した（すなわち、慢性変形性関節症を誘導するための手術誘導性の関節不安定性モデル）。ラットをイソフルランで麻酔し、右膝関節の周囲を剃毛した。内側関節上の膝蓋骨の側方の長手方向皮膚切開を外科用メスを用いて行った。次に、内側四頭筋腱の区画を長手方向に切断し、膝蓋骨を前に動かし、関節包を開いた。膝屈曲部において、前十字靭帯を小さなフックを用いて破壊した。次に、前半月脛骨腱を外科用メスを用いて解剖し、その内側部分上の内側半月板を切離し、１つの半分を関節から除去した。そして、関節包、付随する筋肉および結合組織を層状に縫合した。変形性関節症は、関節機構の障害により運動から発症した。これは、コロニーケージにおける高レベルの自発的な活動により加速された。薬物効果を試験するために、３０μｇ／関節（ＰＢＳ中、１μｇ／μｌで３０μｌ）のＦＧＦ１８－ＳＥＥＤ（ＭＢＥ６２６）またはＦＧＦ１８－ｓｃＦｖ－タネズマブをＡＣＬＴ ｐＭｘ後１６日目の疾患右膝関節に関節内注射した。ビヒクル群には関節内に３０μｇ／関節のＰＢＳを与えた。陽性参照として、タネズマブを同時にｉ．ｖ．注射した。動物の各群は９～１０匹の動物を含んだ。図４Ａは研究の原理を示す。

【0203】

結果：ＭＢＥ６２６およびＦＧＦ１８－ｓｃＦｖ－タネズマブの両方は、ＡＣＬＴ ｔＭｘ後１６日目におけるそのｉ．ａｒｔ．注射後に歩行障害に対する即時の利益を引き起こした。前記利益は、ＦＧＦ１８－ＳＥＥＤについて≧３週およびＦＧＦ１８－ｓｃＦｖ－タネズマブについて≧１週にわたり安定であった（図４）。ｉ．ａｒｔ．注射自体が疼痛を誘導し、これはｉ．ｖ．群には適用されないことが周知であるので、疼痛に対するｉ．ｖ．のタネズマブの効果は、ｉ．ａｒｔ．でのビヒクルの効果と直接的に比較できないことが留意される。

【0204】

結論：ＡＣＬＴ ｐＭｘ誘導性の慢性変形性関節症が確立された場合に、ＭＢＥ６２６またはＦＧＦ１８－ｓｃＦｖ－タネズマブの１回のｉ．ａｒｔ．注射を用いて、疼痛様症状の有意な改善を達成することができた。利益は即時（４ｈ後）であり、最低３週にわたり続いた。この期間中、対症利益は高用量のｉ．ｖ．のタネズマブ後のものと同等であり、ｉ．ａｒｔ．経路を介して適用される二機能性タンパク質は、疼痛症状に対して有意義かつ持続的な利益を生じさせることができることを指し示す。ＦＧＦ１８を単独で用いて、構造的利益が月毎のレジメンで達成され得るので、３週にわたり続く対症利益は、治療期間の３／４を潜在的にカバーすることができる。

【0205】

実施例６－慢性ＯＡモデル（ＡＣＬＴ ｐＭｘモデル）における月毎の間隔での３回のｉ．ａｒｔ．注射後の融合タンパク質ＭＢＥ６２６による用量依存性の対症および構造的利益
この研究の目的は、同じ実験において構造および症状に対する慢性の繰返し適用後の新規の二機能性分子の利益を決定することであった。

【0206】

実験：動物、飼育条件 手術および歩行解析は、実施例４に記載したものと同じであった。軟骨構造をトルイジンブルーおよびサフラン染色を用いた組織学により調べた。アナボリック効果を、表面の構造、マトリックス染色、基準点（ｔｉｄｅｍａｒｋ）、基底部の統合、骨異常および軟骨骨増殖体を考慮する内側脛骨区画のスコアにより調べた。薬物効果を試験するために、２．７μｇ／関節、７μｇ／関節、２７μｇ／関節または９０μｇ／関節のＭＢＥ６２６をＡＣＬＴ ｐＭｘ後１５日目、４３日目および７１日目に疾患右膝関節に関節内注射した（すべてｎ＝１８）。ビヒクル群には関節内に３０μｇ／関節のＰＢＳを与えた（ｎ＝１８）。疾患ウインドウを定義するために、健常動物にビヒクルＰＢＳを与えた（ｎ＝１４）。疼痛治療の陽性参照として、タネズマブ（０．３ｍｇ／ｋｇ）を同じ時点においてｉ．ｖ．注射した（ｎ＝１０）。図５Ａは研究の原理を示す。

【0207】

結果：ＭＢＥ６２６は、すべての試験された用量で歩行障害に対して即時かつ長期持続性の利益を引き起こした（図５Ｂ）。最初の注射後、２７μｇ／関節がいくつかの時点においていくぶんより効果的でなかったことを除いて、この効果は用量依存的であった。最も強い利益は最大用量（９０μｇ／関節）で見られ、プラセボに対して４０％の利益に達した（図６）。これと比較して、陽性参照タネズマブ（ｉ．ｖ．）はプラセボに対して８７％の利益を示した。終点（９８日目）において、組織学的調査により、より高用量のＭＢＥ６２６での同化促進スコアの増加の傾向が明らかになった（図７）。

【0208】

結論：結果は、新規の二機能性タンパク質ＭＢＥ６２６を用いる慢性治療は、軟骨構造および疼痛症状の両方において並行して長期利益を引き起こすことを示唆する。

【0209】

参考文献

【図1-1】

【図1-2】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【配列表】

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