特許 7362184 カスパーゼ阻害剤プロドラッグの注射用組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-10-06

(45)【発行日】2023-10-17

(54)【発明の名称】カスパーゼ阻害剤プロドラッグの注射用組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/4725 20060101AFI20231010BHJP

   A61K 47/59 20170101ALI20231010BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20231010BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20231010BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20231010BHJP

   A61P 19/08 20060101ALI20231010BHJP

   A61P 25/04 20060101ALI20231010BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20231010BHJP

【ＦＩ】

A61K31/4725

A61K47/59

A61K47/02

A61P19/02

A61P29/00 101

A61P29/00

A61P19/08

A61P25/04

A61P43/00 111

A61P43/00 105

【請求項の数】 11

(21)【出願番号】P 2021570951

(86)(22)【出願日】2020-05-29

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-07-29

(86)【国際出願番号】 KR2020006954

(87)【国際公開番号】W WO2020242235

(87)【国際公開日】2020-12-03

【審査請求日】2022-02-07

(31)【優先権主張番号】10-2019-0064301

(32)【優先日】2019-05-31

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(73)【特許権者】

【識別番号】500239823

【氏名又は名称】エルジー・ケム・リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100110364

【弁理士】

【氏名又は名称】実広 信哉

(74)【代理人】

【識別番号】100122161

【弁理士】

【氏名又は名称】渡部 崇

(72)【発明者】

【氏名】スン・ウォン・キム

(72)【発明者】

【氏名】ボク・テ・キム

(72)【発明者】

【氏名】シ・ヒョン・チェ

(72)【発明者】

【氏名】ジェ・ウク・ベク

【審査官】鶴見 秀紀

(56)【参考文献】

【文献】特表２００８－５３１５５１（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ａ６１Ｋ ３１／００－３１／８０

Ａ６１Ｋ ４７／００－４７／６９

Ａ６１Ｐ ４３／００

Ａ６１Ｐ ２９／００

Ａ６１Ｐ １９／０２

Ａ６１Ｐ １９／０８

Ａ６１Ｐ ２５／０４

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

有効成分として、下記式（１）

【化1】

（式中、Ｒ₁はアルキル、シクロアルキル、アリール又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ₂を表し、ここで、Ｒ₂は、アルキル、シクロアルキル、アリール、アリールアルキル、又はＮ、Ｏ及びＳから選ばれる一つ以上のヘテロ原子を含むヘテロアリールを表し、前記アルキル、シクロアルキル、アリールアルキル及びヘテロアリールは、任意に置換され、置換基は、アルキル、シクロアルキル、ヒドロキシ、ハロ、ハロアルキル、アシル、アミノ、アルコキシ、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミノ、シアノ、ニトロ、チオール、アリールオキシ、スルホキシ及びグアニド基から選ばれる一つ以上である。）で示される化合物、又はその薬学的に許容される塩又は異性体；及び
生体適合性ポリマー；
を含む注射用医薬組成物であって、
前記生体適合性ポリマーが、ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）であることを特徴とする、注射用医薬組成物。

【請求項2】

Ｒ₁は、Ｃ₁－Ｃ₈アルキル又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ₂を表し、ここで、Ｒ₂は、Ｃ₁－Ｃ₂₀アルキル、Ｃ₆－Ｃ₁₀アリール又はＣ₆－Ｃ₁₀アリール－Ｃ₁－Ｃ₇アルキルであることを特徴とする請求項１に記載の注射用医薬組成物。

【請求項3】

Ｒ₁は、Ｃ₁－Ｃ₅アルキル又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ₂を表し、ここで、Ｒ₂は、Ｃ₁－Ｃ₁₅アルキル、Ｃ₆－Ｃ₁₀アリール又はＣ₆－Ｃ₁₀アリール－Ｃ₁－Ｃ₅アルキルを表し、置換基は、アルキル又はハロアルキルであることを特徴とする請求項１に記載の注射用医薬組成物。

【請求項4】

前記一般式（１）の化合物が以下の群からから選ばれることを特徴とする請求項１に記載の注射用医薬組成物：
（２Ｓ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イルアセテート；
（２Ｓ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イルプロピオネート；
（２Ｒ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イルイソブチレート；
（２Ｒ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イルピバレート；
（２Ｒ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イル３－メチルブタノエート；
（２Ｒ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イル３，３－ジメチルブタノエート；
（２Ｓ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イルパルミテート；
（２Ｓ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イルベンゾエート；
（２Ｓ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イル４－（トリフルオロメチル）ベンゾエート；
（２Ｓ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イル２－フェニルアセテート；
（５Ｒ）－Ｎ－（（３Ｓ）－２－エトキシ－２－（フルオロメチル）－５－オキソテトラヒドロフラン－３－イル）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド；及び
（５Ｒ）－Ｎ－（（３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－２－メトキシ－５－オキソテトラヒドロフラン－３－イル）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド

【請求項5】

前記ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）のラクチド対グリコリドのモル比が、９０：１０～１０：９０であることを特徴とする請求項４に記載の注射用医薬組成物。

【請求項6】

前記ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）のラクチド対グリコリドのモル比が、９０：１０～４０：６０であることを特徴とする請求項５に記載の注射用医薬組成物。

【請求項7】

前記ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）のラクチド対グリコリドのモル比が、８５：１５～５０：５０であることを特徴とする請求項６に記載の注射用医薬組成物。

【請求項8】

溶媒をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の注射用医薬組成物。

【請求項9】

前記溶媒が、水、生理食塩水又はリン酸緩衝食塩水であることを特徴とする請求項８に記載の注射用医薬組成物。

【請求項10】

アポトーシス関連疾患、炎症疾患、骨関節炎、リウマチ性関節炎、変性性関節炎及び破壊性骨障害から選ばれる疾患の予防又は治療のためであることを特徴とする請求項１に記載の注射用医薬組成物であって、アポトーシス関連疾患が、骨関節炎、リウマチ性関節炎、変性性関節炎、破壊性骨障害、肝炎ウィルスによる肝疾患、急性肝炎、肝硬変、肝炎ウィルスによる脳損傷、ヒト劇症肝不全、敗血症、臓器移植拒絶、虚血性心臓疾患、認知症、脳卒中、ＡＩＤＳによる脳損傷、糖尿、及び胃潰瘍から選択される、注射用医薬組成物。

【請求項11】

骨関節炎の予防、治療又は疼痛緩和のためであることを特徴とする請求項１０に記載の注射用医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、カスパーゼ阻害剤プロドラッグの注射用医薬組成物に関し、より詳細には、有効成分として、カスパーゼ阻害剤のプロドラッグ、又はその薬学的に許容される塩又は異性体、及び生体適合性ポリマーを含む注射用医薬組成物に関するものである。

【背景技術】

【0002】

カスパーゼは酵素の一種であり、α２β２四量体として存在するシステインプロテアーゼである。カスパーゼ阻害剤は、これらのカスパーゼの活性を妨害し、それによってカスパーゼの作用により誘発される炎症又はアポトーシスを調節できる化合物である。これらの化合物の投与により症状を解消又は緩和できる疾患には、骨関節炎、リウマチ性関節炎、変性性関節炎、破壊性骨障害、肝炎ウィルスによる肝疾患、急性肝炎、肝硬変、肝炎ウィルスによる脳損傷、ヒト劇症肝不全、敗血症、臓器移植拒絶、虚血性心臓疾患、認知症、脳卒中、ＡＩＤＳによる脳損傷、糖尿、胃潰瘍などがある。

【0003】

カスパーゼ阻害剤として知られた様残な構造を有する化合物の中で、イソオキサゾリン誘導体が特許文献１、２及び３として出願された。さらに、イソオキサゾリン誘導体に基づいたカスパーゼ阻害剤のプロドラッグが、特許文献４に開示された。

【0004】

一方、下記式（２）のニボカサン（（Ｒ）－Ｎ－（（２Ｓ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－２－ヒドロキシ－５－オキソテトラヒドロフラン－３－イル）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）は、有効なカスパーゼ阻害剤として注目されている。

【化1】

【0005】

しかし、ニボカサンが徐放性製剤中の高分子ミクロスフェア製剤として調製される場合、物理化学的特性により、調製過程で多量の薬物が失われるため、カプセル化効率が低くなり、インビトロでの薬物放出期間に限界がある。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【文献】韓国 特許出願第１０－２００４－００６６７２６号

【文献】韓国 特許出願第１０－２００６－００１３１０７号

【文献】韓国 特許出願第１０－２００８－００２５１２３号

【文献】国際公開番号 ＷＯ２００７／０１５９３１号（出願人：Vertex Pharmaceuticals Incorporated, USA）

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

そこで、本発明は、カスパーゼ阻害剤の徐放性放出製剤を調製するときに、カプセル化効率が大幅に改善され、薬物の放出期間が大幅に増加する注射用組成物を提供することをその技術的課題とする。

【課題を解決するための手段】

【0008】

前記課題を解決するために、本発明は、有効成分として、下記式（１）

【化2】

（式中、Ｒ₁はアルキル、シクロアルキル、アリール又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ₂を表し、ここで、Ｒ₂は、アルキル、シクロアルキル、アリール、アリールアルキル、又はＮ、Ｏ及びＳから選ばれる一つ以上のヘテロ原子を含むヘテロアリールを表し、前記アルキル、シクロアルキル、アリールアルキル及びヘテロアリールは、任意に置換され、置換基は、アルキル、シクロアルキル、ヒドロキシ、ハロ、ハロアルキル、アシル、アミノ、アルコキシ、カルボアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミノ、シアノ、ニトロ、チオール、アリールオキシ、スルホキシ及びグアニド基から選ばれる一つ以上である。）で示される化合物、又はその薬学的に許容される塩又は異性体；及び生体適合性ポリマー；を含む注射用医薬組成物を提供する。

【0009】

本発明による式（１）の化合物は、薬学的に許容される塩を形成してもよい。薬学的に許容される塩には、薬学的に許容されるアニオンを含有する無毒性酸付加塩を形成する酸、例えば、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸などの無機酸；酒石酸、ギ酸、クエン酸、酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、グルコン酸、安息香酸、乳酸、フマル酸、マレイン酸、サリチル酸などの有機酸；メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸などのスルホン酸などによって形成された酸付加塩を含んでいてもよい。また、薬学的に許容されるカルボン酸塩には、例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどによって形成されたアルカリ金属又はアルカリ土類金属塩；リシン、アルギニン、グアニジンなどのアミノ酸塩；ジシクロヘキシルアミン、Ｎ－メチル－Ｄ－グルカミン、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン、ジエタノールアミン、コリン、トリエチルアミンなどの有機塩などが含まれる。本発明による式（１）の化合物は通常の方法によってそれらの塩に転換することができる。

【0010】

一方、本発明による化合物は、不斉炭素中心及び不斉軸又は不斉平面を有し得るので、それらは、Ｅ又はＺ異性体、Ｒ又はＳ異性体、ラセミ混合物、ジアステレオマー混合物及び個々のジアステレオマーとして存在することができ、これらはすべて本発明の範囲内である。

【0011】

本明細書において、特に明記しない限り、用語「式（１）の化合物」とは、式（１）の化合物、その薬学的に許容される塩及び異性体をすべて含む意味として使用される。

【0012】

本明細書において、置換基を定義する以下の概念を使用して、式（１）の化合物を定義する。

【0013】

用語「ハロゲン」又は「ハロ」は、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、臭素（Ｂｒ）又はヨード（Ｉ）を意味する。

【0014】

用語「アルキル」は、直鎖状又は分枝状炭化水素を意味し、単結合、二重結合又は三重結合を含むことができ、好ましくはＣ₁－Ｃ₁₀アルキルである。例えば、前記アルキルの例には、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、ｎ－ブチル、ｉ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、アセチレン、ビニル、トリフルオロメチルなどが含まれるが、これらに限定されない。

【0015】

用語「シクロアルキル」は、部分的又は完全に飽和された単環又は縮合環炭化水素を意味し、好ましくはＣ₃－Ｃ₁₀－シクロアルキルである。シクロアルキルの例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘキセニルなどが含まれるが、これらに限定されない。

【0016】

用語「アルコキシ」は、別段の定義がない限り、１～１０個の炭素原子を有するアルキルオキシを意味する。

【0017】

用語「アリール」は、芳香族炭化水素、好ましくはＣ₅－Ｃ₁₂アリール、より好ましくはＣ₆－Ｃ₁₀アリールを意味する。前記アリールの例には、フェニル、ナフチルなどが含まれるが、それらに限定さない。

【0018】

用語「ヘテロアリール」は、Ｎ、Ｏ及びＳから選ばれた一つ以上のヘテロ原子を還元子として含み、ベンゾ又はＣ₃－Ｃ₈シクロアルキルと融合し得る単環又は縮合環を形成する３～１２員、より好ましくは５～１０員の芳香族炭化水素を意味する。例えば、前記ヘテロアリールは、ピリジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル、オキサジアゾリル、イソオキサジアゾリル、テトラゾリル、トリアゾリル、インドリル、インダゾリル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、フラニル、ベンゾフラニル、イミダゾリル、チオフェニル、ベンズチアゾール、ベンズイミダゾール、キノリニル、インドリニル、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリル、３，４－ジヒドロイソキノリニル、チアゾロピリジル、２，３－ジヒドロベンゾフラン、２，３－ジヒドロチオフェン、２，３－ジヒドロインドール、ベンゾ［１，３］ダイオキシン、クロマン、チオクロマン、１，２，３，４－テトラヒドロキノリン、４Ｈ－ベンゾ［１，３］ダイオキシン、２，３－ジヒドロベンゾ［１，４］ダイオキシン、６，７－ジヒドロ－５Ｈ－シクロペンタ［ｄ］ピリミジンなどが含まれるが、これらに限定されない。

【0019】

アリールアルキル、アルキルアリール及びヘテロアリールアルキルは、前記のアリールとアルキル又、はヘテロアリールとアルキルの結合によって形成された基を意味する。例えば、ベンジル、チオフェンメチル、ピリミジンメチルなどが含まれるが、これらに限定されない。

【0020】

本発明の一実施形態によれば、前記一般式（１）において、Ｒ₁はＣ_1－8アルキル又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ₂を表し、ここで、Ｒ₂は、Ｃ_1－20アルキル、Ｃ₆－Ｃ₁₀アリール又はＣ₆－Ｃ₁₀アリール－Ｃ₁－Ｃ₇アルキルである。

【0021】

本発明の別の実施形態によれば、前記一般式（１）において、Ｒ₁は、Ｃ_1－5アルキル又は－Ｃ（Ｏ）Ｒ₂を表し、ここで、Ｒ₂は、Ｃ_1－15アルキル、Ｃ₆－Ｃ₁₀アリール又はＣ₆－Ｃ₁₀アリール－Ｃ₁－Ｃ₅アルキルを表し、置換基は、アルキル又はハロアルキルである。

【0022】

本発明による前記式（１）の代表的な化合物は、下記化合物が含まれるが、これらに限定されない：
（２Ｓ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イルアセテート；
（２Ｓ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イルプロピオネート；
（２Ｒ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イルイソブチレート；
（２Ｒ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イルピバレート；
（２Ｒ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イル３－メチルブタノエート；
（２Ｒ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イル３，３－ジメチルブタノエート；
（２Ｓ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イルパルミテート；
（２Ｓ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イルベンゾエート；
（２Ｓ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イル４－（トリフルオロメチル）ベンゾエート；
（２Ｓ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イル２－フェニルアセテート；
（５Ｒ）－Ｎ－（（３Ｓ）－２－エトキシ－２－（フルオロメチル）－５－オキソテトラヒドロフラン－３－イル）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド；及び
（５Ｒ）－Ｎ－（（３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－２－メトキシ－５－オキソテトラヒドロフラン－３－イル）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド

【0023】

本明細書で使用されている用語及び略語は、特に明記されない限り、元の意味を有る。

【0024】

本発明の一実施形態において、前記生体適合性ポリマーは、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリグリコリド（ＰＧＡ）、ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル及びポリホスファジンからなる群から選ばれる一つ以上であってもよいが、これに限定されるものではない。

【0025】

本発明の一実施形態において、前記生体適合性ポリマーは、ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）である。ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）は、触媒の存在下で開環重合によってラクチド及びグリコリドから重合することができる。

【0026】

本発明の一実施形態において、ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）のラクチド対グリコリドのモル比は、好ましくは９０：１０～１０：９０、より好ましくは９０：１０～４０：６０、さらに好ましくは８５：１５～５０：５０である。

【0027】

体内物質である乳酸及びグリコール酸を重合して得られたポリマーであるポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）は、生体適合性及び生分解性を有しており、薬物の制御放出により医療及び製薬分野で広く使用されている。ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）中のグリコリドの比率が高いほど、親水性が高くなり、水分がよく吸収されて加水分解が促進されるため、体内での分解速度が速くなる。逆に、ラクチドの比率が高くなると、疎水性が高くなり、水分が十分に吸収されないため、加水分解に対する耐性が高まり、体内での分解速度が遅くなる。また、ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）の平均分子量が大きいほど、ポリマーの鎖長が長くなり、分解時間が長くなる。さらに、ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）の分解速度は、末端基の種類、分子構造、結晶性などによって影響を受けることがある。本発明の一実施形態では、注射用医薬組成物は、溶媒をさらに含むことができる。溶媒の例には、水、生理食塩水又はリン酸緩衝食塩水が含まれるが、これらに限定されない。

【0028】

本発明の注射用医薬組成物は、必要に応じて、分散剤、湿潤剤又は懸濁剤などとの他の成分をさらに含むことができる。

【0029】

本発明による注射用医薬組成物によって予防又は治療することができる疾患は、アポトーシス関連疾患、炎症疾患、骨関節炎、リウマチ性関節炎、変性性関節炎及び破壊性骨障害から選ばれるものが含まれるが、これらに限定されない。

【0030】

本発明の一実施形態において、本発明による注射用医薬組成物は、骨関節炎の予防、治療又は疼痛緩和のために使用することができる。

【発明の効果】

【0031】

本発明において、カスパーゼ阻害剤のプロドラッグである一般式（１）の化合物を使用する注射用医薬組成物を提供することにより、ポリマーミクロスフェアを調製する際のカプセル化効率を大幅に改善することができ、薬物の放出期間が著しく増加する可能性がある。

【図面の簡単な説明】

【0032】

【図1】実施例１、４及び５で調製されたミクロスフェアを走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）で撮影した写真である。

【図2】比較例で調製されたミクロスフェアを走査電子顕微鏡で撮影した写真である。

【図3】実験例２におけるインビトロ溶出試験の結果を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0033】

以下、本発明について、製造例及び実施例を通じて本発明をより詳細に説明する。しかし、これらの例は例示に過ぎなく、本発明の範囲がそれに限定されない。

【0034】

製造例１：（２Ｓ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イルアセテート

【化3】

【0035】

ニボカサン（（Ｒ）－Ｎ－（（２Ｓ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－２－ヒドロキシ－５－オキソテトラヒドロフラン－３－イル）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド；５．０ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶媒に溶解し、塩化アセチル（０．９４ｍＬ、１３．２ｍｍｏｌ、１．１当量）、トリエチルアミン（２．５２ｍＬ、１８．０ｍｍｏｌ、１．５当量）及び４－ジメチルアミノピリジン（０．１５ｇ、１．２ｍｍｏｌ、０．１当量）を５℃以下を維持しながら加えた。反応混合物を２５℃で約２時間撹拌し、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液（２５ｍＬ）を加えて反応を終結させた。水（２５ｍＬ）を加え、撹拌した後、有機層を分離し、減圧下で蒸留した。得られた混合物を酢酸エチルとヘキサンの１：５混合物（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：５）を用いてカラム分離して、表題化合物を３．０ｇ（収率：５４％）得た。

【0036】

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.12 (d, 1H), 8.55 (d, 1H), 7.88 (d, 1H), 7.74-7.69 (m, 3H), 7.09 (d, 1H), 5.25 (m, 1H), 4.69 (d, 2H), 4.03 (d, 1H), 3.83 (d, 1H), 2.95 (m, 2H), 2.63 (m, 1H), 2.38 (m, 1H), 1.26 (dd, 6H), 1.05 (dd, 6H)

【0037】

製造例２：（２Ｓ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イルプロピオネート

【化4】

【0038】

ニボカサン（１．０ｇ、２．４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）溶媒に溶解し、塩化プロピオニル（０．２３ｍＬ、２．６５ｍｍｏｌ、１．１当量）、トリエチルアミン（０．５ｍＬ、３．６１ｍｍｏｌ、１．５当量）及び４－ジメチルアミノピリジン（０．０３ｇ、０．２４ｍｍｏｌ、０．１当量）を５℃以下に維持しながら加えた。反応混合物を２５℃で約２時間撹拌し、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加えて反応を終結させた。水（１０ｍＬ）を加え、撹拌した後、有機層を分離し、減圧下で蒸留した。得られた混合物を酢酸エチルとヘキサンの１：２混合物（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：２）を用いてカラム分離して表題化合物を０．２５ｇ（収率：２３％）得た。

【0039】

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.12 (d, 1H), 8.55 (d, 1H), 7.87 (d, 1H), 7.74-7.69 (m, 3H), 7.08 (d, 1H), 5.22 (m, 1H), 4.69 (d, 2H), 4.03 (d, 1H), 3.83 (d, 1H), 2.98 (m, 2H), 2.45 (m, 2H), 2.37 (m, 1H), 1.20 (t, 3H), 1.05 (dd, 6H)

【0040】

製造例３：（２Ｒ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イルイソブチレート

【化5】

【0041】

ニボカサン（１．０ｇ、２．４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）溶媒に溶解し、塩化イソブチル（０．７３ｇ、２．６５ｍｍｏｌ、１．１当量）、トリエチルアミン（０．５ｍＬ、３．６１ｍｍｏｌ、１．５当量）及び４－ジメチルアミノピリジン（０．０３ｇ、０．２４ｍｍｏｌ、０．１当量）を５℃以下に維持しながら加えた。反応混合物を２５℃で約２時間撹拌し、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加えて反応を終結させた。水（１０ｍＬ）を加え、撹拌した後、有機層を分離し、減圧下で蒸留した。得られた混合物を酢酸エチルとヘキサンの１：２混合物（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：２）を用いてカラム分離して、表題化合物を０．０６ｇ（収率：５％）得た。

【0042】

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.12 (d, 1H), 8.55 (d, 1H), 7.88 (d, 1H), 7.74-7.69 (m, 3H), 7.09 (d, 1H), 5.25 (m, 1H), 4.69 (d, 2H), 4.03 (d, 1H), 3.83 (d, 1H), 2.95 (m, 2H), 2.63 (m, 1H), 2.38 (m, 1H), 1.26 (dd, 6H), 1.05 (dd, 6H)

【0043】

製造例４：（２Ｒ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イルピバレート

【化6】

【0044】

ニボカサン（０．５ｇ、１．２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）溶媒に溶解し、塩化ピバロイル（０．１７ｇ、１．４ｍｍｏｌ、１．１当量）及び４－ジメチルアミノピリジン（０．２９ｇ、２．４ｍｍｏｌ、２．０当量）を５℃以下に維持しながら加えた。反応混合物を２５℃で約２時間撹拌し、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加えて反応を終結させた。水（１０ｍＬ）を加え、撹拌した後、有機層を分離し、減圧下で蒸留した。得られた混合物を酢酸エチルとヘキサンの１：５混合物（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：５）で再結晶して、表題化合物を０．１ｇ（収率：１７％）得た。

【0045】

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.11 (d, 1H), 8.55 (d, 1H), 7.88 (d, 1H), 7.71 (m, 3H), 7.11 (d, 1H), 5.26 (m, 1H), 4.68 (d, 2H), 4.02 (d, 1H), 3.83 (d, 1H), 2.95 (m, 2H), 2.39 (m, 1H), 2.27 (s, 2H), 1.28 (s, 9H), 1.05 (dd, 6H)

【0046】

製造例５：（２Ｒ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イル３－メチルブタノエート

【化7】

【0047】

ニボカサン（０．５ｇ、１．２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）溶媒に溶解し、塩化ソバレリル（０．１７ｇ、１．４ｍｍｏｌ、１．１当量）、トリエチルアミン（０．１８ｇ、１．８ｍｍｏｌ、１．５当量）及び４－ジメチルアミノピリジン（０．０１５ｇ、０．１２ｍｍｏｌ、０．１当量）を５℃以下に維持しながら加えた。反応混合物を２５℃で約２時間撹拌し、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加えて反応を終結させた。水（１０ｍＬ）を加え、撹拌した後、有機層を分離し、減圧下で蒸留した。得られた混合物を酢酸エチル及びヘキサンの１：５混合物（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：５）で再結晶して、表題化合物を０．１３ｇ（収率：１７％）得た。

【0048】

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.11 (d, 1H), 8.52 (d, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.71 (m, 3H), 7.11 (d, 1H), 5.23 (m, 1H), 4.71 (d, 2H), 4.04 (d, 1H), 3.83 (d, 1H), 2.95 (m, 2H), 2.35 (m, 1H), 2.28 (d, 2H), 2.15 (m, 1H), 1.05 (dd, 12H)

【0049】

製造例６：（２Ｒ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イル３，３－ジメチルブタノエート

【化8】

【0050】

ニボカサン（０．５ｇ、１．２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）溶媒に溶解し、塩化ｔ－ブチルアセチル（０．１９ｇ、１．４ｍｍｏｌ、１．１当量）、トリエチルアミン（０．１８ｇ、１．８ｍｍｏｌ、１．５当量）及び４－ジメチルアミノピリジン（０．０１５ｇ、０．１２ｍｍｏｌ、０．１当量）を５℃以下に維持しながら加えた。反応混合物を２５℃で約２時間撹拌し、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加えて反応を終結させた。水（１０ｍＬ）を加え、撹拌した後、有機層を分離して、減圧蒸留した。得られた混合物を酢酸エチルとヘキサンの１：５混合物（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：５）で再結晶して、表題化合物を０．１４ｇ（収率：２３％）得た。

【0051】

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.12 (d, 1H), 8.55 (d, 1H), 7.88 (d, 1H), 7.71 (m, 3H), 7.13 (d, 1H), 5.23 (m, 1H), 4.71 (d, 2H), 4.04 (d, 1H), 3.83 (d, 1H), 2.95 (m, 2H), 2.35 (m, 1H), 2.27 (s, 2H), 1.05 (dd, 15H)

【0052】

製造例７：（２Ｓ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イルパルミテート

【化9】

【0053】

ニボカサン（１．０ｇ、２．４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）溶媒に溶解し、塩化パルミトイル（０．７３ｇ、２．６５ｍｍｏｌ、１．１当量）、トリエチルアミン（０．５ｍＬ、３．６１ｍｍｏｌ、１．５当量）及び４－ジメチルアミノピリジン（０．０３ｇ、０．２４ｍｍｏｌ、０．１当量）を５℃以下に維持しながら加えた。反応混合物を２５℃で約２時間撹拌し、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加えて反応を終結させた。水（１０ｍＬ）を加え、撹拌した後、有機層を分離し、減圧下で蒸留した。得られた混合物を酢酸エチルとヘキサンの１：２混合物（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：２）を用いてカラム分離して、表題化合物を０．１１ｇ（収率：７％）得た。

【0054】

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.12 (d, 1H), 8.55 (d, 1H), 7.88 (d, 1H), 7.74-7.69 (m, 3H), 7.09 (d, 1H), 5.23 (m, 1H), 4.69 (d, 2H), 4.03 (d, 1H), 3.83 (d, 1H), 2.95 (m, 2H), 2.41 (m, 2H), 2.38 (m, 1H), 1.68 (m, 2H), 1.35-1.24 (m, 24H), 1.05 (dd, 6H), 0.88 (t, 3H)

【0055】

製造例８：（２Ｓ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イルベンゾエート

【化10】

【0056】

ニボカサン（０．５ｇ、１．２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）溶媒に溶解し、塩化ベンゾイル（０．１７ｇ、１．４ｍｍｏｌ、１．１当量）、トリエチルアミン（０．１８ｇ、１．８ｍｍｏｌ、１．５当量）及び４－ジメチルアミノピリジン（０．１５ｇ、１．２ｍｍｏｌ、１．０当量）を５℃以下に維持しながら加えた。反応混合物を２５℃で約２時間撹拌し、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加えて反応を終結させた。水（１０ｍＬ）を加え、撹拌した後、有機層を分離し、減圧下で蒸留した。得られた混合物を酢酸エチルとヘキサンの１：５混合物（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：５）で再結晶して、表題化合物を０．１４ｇ（収率：２２％）得た。

【0057】

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.13 (d, 1H), 8.55 (d, 1H), 8.03 (d, 2H), 7.85 (d, 1H), 7.70 (m, 3H), 7.63 (t, 1H), 7.48 (m, 2H), 7.09 (d, 1H), 5.23 (m, 1H), 4.81 (d, 2H), 4.03 (d, 1H), 3.74 (d, 1H), 3.08 (m, 2H), 2.20 (m, 1H), 0.97 (dd, 6H)

【0058】

製造例９：（２Ｓ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イル４－（トリフルオロメチル）ベンゾエート

【化11】

【0059】

ニボカサン（０．５ｇ、１．２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）溶媒に溶解し、４－トリフルオロメチルベンゾイルクロリド（０．３０ｇ、１．４ｍｍｏｌ、１．１当量）と４－ジメチルアミノピリジン（０．２９ｇ、２．４ｍｍｏｌ、２．０当量）を５℃以下に維持しながら加えた。反応混合物を２５℃で約２時間撹拌し、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加えて反応を終結させた。水（１０ｍＬ）を加え、撹拌した後、有機層を分離し、減圧下で蒸留した。得られた混合物を酢酸エチルとヘキサンの１：５混合物（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：５）で再結晶して、表題化合物を０．１ｇ（収率：１３％）得た。

【0060】

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.12 (d, 1H), 8.55 (d, 1H), 8.14 (d, 2H), 7.88 (d, 1H), 7.74 (m, 3H), 7.85 (m, 2H), 7.09 (d, 1H), 5.26 (m, 1H), 4.82 (d, 2H), 4.03 (d, 1H), 3.83 (d, 1H), 3.08 (m, 2H), 2.19 (m, 1H), 0.82 (dd, 6H)

【0061】

製造例１０：（２Ｓ，３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－５－オキソテトラヒドロフラン－２－イル２－フェニルアセテート

【化12】

【0062】

ニボカサン（０．５ｇ、１．２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）溶媒に溶解し、フェニルアセチルクロリド（０．２２ｇ、１．４ｍｍｏｌ、１．１当量）、トリエチルアミン（０．１８ｇ、１．８ｍｍｏｌ、１．５当量）及び４－ジメチルアミノピリジン（０．０１５ｇ、０．１２ｍｍｏｌ、０．１当量）を５℃以下に維持しながら加えた。反応混合物を２５℃で約２時間撹拌し、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加えて反応を終結させた。水（１０ｍＬ）を加え、撹拌した後、有機層を分離し、減圧下で蒸留した。得られた混合物を酢酸エチル及びヘキサンの１：５混合物（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：５）で再結晶して、表題化合物を０．３ｇ（収率：５１％）得た。

【0063】

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.12 (d, 1H), 8.55 (d, 1H), 7.88 (d, 1H), 7.74-7.69 (m, 3H), 7.37 (m, 2H), 7.30(m, 3H), 7.09 (d, 1H), 5.23 (m, 1H), 4.69 (d, 2H), 4.03 (d, 1H), 3.83 (d, 1H), 3.74 (s, 2H), 2.95 (m, 2H), 2.38 (m, 1H), 1.05 (dd, 6H)

【0064】

製造例１１－１：（Ｓ）－４，４－ジエトキシ－５－フルオロ－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）ペンタン酸

【化13】

【0065】

（工程Ａ）エチル（Ｓ）－５－フルオロ－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－４－オキソペンタノエート

【化14】

【0066】

ニボカサン（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）をｐ－トシル酸（１１４ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、トリエトキシメタン（２０ｍＬ、１２０ｍｍｏｌ）及びエタノール（２０ｍＬ）と還流下で６日間反応させた。反応混合物を室温に冷却し、飽和塩化アンモニウム溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、ＭＰＬＣを使用して精製して、表題化合物（２３０ｍｇ、３７％）を得た。

【0067】

¹H-NMR (CDCl₃) δ 9.15 (d, 1H), 8.54 (d, 1H), 7.84 (d, 1H), 7.75 - 7.64 (m, 3H), 4.75 - 4.86 (m, 1H) 4.53 (dd, 1H), 4.42 (dd, 1H), 4.02 (d, 1H) 3.97 - 3.67 (m, 5H), 3.57 ~ 3.50 (m, 3H), 2.71 (dd, 1H), 2.52 - 2.36 (m, 2H), 1.18 - 0.97 (m, 15H)

【0068】

（工程Ｂ）（Ｓ）－４，４－ジエトキシ－５－フルオロ－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）ペンタン酸

【化15】

【0069】

エチル（Ｓ）－５－フルオロ－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－４－オキソペンタノエート（２３０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）と水酸化リチウム（３１．９ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）に、水（１．１２ｍＬ）とテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、０．２８ｍＬ）を加え、４０℃で３時間反応させた。反応物を室温に冷却し、減圧濃縮し、１Ｎ水酸化ナトリウムを加え、水層をトルエンで洗浄した。次に、６Ｎ塩酸を加えてｐＨを３に調整した後、ジクロロメタンを使用して抽出した。抽出された有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濾過して、表題化合物を得た。得られた表題化合物はさらに精製することなく次の反応に使用した。

【0070】

製造例１１－２：（５Ｒ）－Ｎ－（（３Ｓ）－２－エトキシ－２－（フルオロメチル）－５－オキソテトラヒドロフラン－３－イル）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド

【化16】

【0071】

（Ｓ）－４，４－ジエトキシ－５－フルオロ－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）ペンタン酸（２００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）に、トリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）とジクロロメタン（５ｍＬ）を０℃で加え、室温で２時間撹拌した。２時間撹拌後、反応混合物を減圧下で濃縮し、ＭＰＬＣにより表題化合物（９２ｍｇ、５４％）を得た。

【0072】

¹H-NMR (CDCl₃) δ 9.11 (d, 1H), 8.56 (d, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.75 - 7.64 (m, 3H), 7.38 (d, 1H) 4.94 (q, 1H) 4.66 (s, 1H), 4.54 (s, 1H), 4.09 (d, 1H), 4.02 (d, 1H) 3.90 - 3.67 (m, 3H), 2.92 (dd, 1H), 2.59 (dd, 1H), 2.36 (p, 1H), 1.29 - 1.19 (m, 4H), 1.06 (t, 6H)

【0073】

製造例１２－１：（Ｓ）－５－フルオロ－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－４，４－ジメトキシペンタン酸

【化17】

【0074】

（工程Ａ）メチル（Ｓ）－５－フルオロ－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－４，４－ジメトキシペンタノエート

【化18】

【0075】

ニボカサン（１ｇ、２．４ｍｍｏｌ）を、ｐ－トシル酸（２２９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、トリメトキシメタン（１０ｍＬ、９０ｍｍｏｌ）及びメタノール（２０ｍＬ）と還流下で４日間反応させた。反応混合物を室温に冷却し、飽和塩化アンモニウム溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、ＭＰＬＣを使用して精製して、表題化合物（５６１ｍｇ、４９％）を得た。

【0076】

（工程Ｂ）（Ｓ）－５－フルオロ－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－４，４－ジメトキシペンタン酸

【化19】

【0077】

メチル（Ｓ）－５－フルオロ－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－４，４－ジメトキシペンタノエート（５６１ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）と水酸化リチウム（１３４ｍｇ、５．５９ｍｍｏｌ）に、水（３．４２ｍＬ）とＴＨＦ（０．８５ｍＬ）を加え、４０℃で４時間反応させた。反応物を室温に冷却し、減圧濃縮した後、１Ｎ水酸化ナトリウムを加え、水層をトルエンで洗浄した。６Ｎ塩酸を加えてｐＨを３に調整し、ジクロロメタンを使用して抽出した。抽出された有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濾過して、表題化合物を得た。得られた表題化合物はさらに精製することなく次の反応に使用した。

【0078】

製造例１２－２：（５Ｒ）－Ｎ－（（３Ｓ）－２－（フルオロメチル）－２－メトキシ－５－オキソテトラヒドロフラン－３－イル）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド

【化20】

【0079】

（Ｓ）－５－フルオロ－３－（（Ｒ）－５－イソプロピル－３－（イソキノリン－１－イル）－４，５－ジヒドロイソオキサゾール－５－カルボキサミド）－４，４－ジメトキシペンタン酸（４４１ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）に、トリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）とジクロロメタン（５ｍＬ）を０℃で加え、室温で２時間撹拌させた。２時間撹拌後、混合物を減圧下で濃縮し、ＭＰＬＣにより表題化合物（１９６ｍｇ、５１％）を得た。

【0080】

¹H-NMR (CDCl₃) δ 9.12 (d, 1H), 8.56 (d, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.75 - 7.64 (m, 3H), 7.40 (d, 1H) 4.91 (q, 1H) 4.66 (dd, 1H), 4.54 (dd, 1H), 4.08 (d, 1H), 4.80 (d, 1H), 3.35 (s, 3H), 2.90 (dd, 1H), 2.56 (dd, 1H), 2.36 (p, 1H), 1.06 (t, 6H)

【0081】

実施例１～６：プロドラッグをカプセル化するミクロスフェアの調製
下記表１の組成に従ってカスパーゼ阻害剤プロドラッグがカプセル化されたミクロスフェアを調製した。

【0082】

カスパーゼ阻害剤プロドラッグとＰＬＧＡ（Ｌ／Ｇ比＝５０：５０,７５：２５又は８５：１５、Ｍ．Ｗ．３８，０００～２４０，０００）を１：５の重量比で秤量し、有機溶媒であるジクロロメタンをＰＬＧＡ重量又はプロドラッグとＰＬＧＡの重量の１０倍の量で加え、撹拌して分散相を調製した。

【0083】

連続相には、１％又は２％ポリビニルアルコール（Ｍ．Ｗ．３１，０００～５０，０００、加水分解度８７～８９％）１５０ｍＬ又は４，８００ｍＬを使用し、膜乳化法でエマルジョンを調製した。

【0084】

調製されたエマルジョンは、室温で一晩撹拌して溶媒を除去し、滅菌精製水で洗浄した後、凍結乾燥してミクロスフェアを調製した。

【0085】

【表1】

【0086】

比較例：ニボカサンをカプセル化するミクロスフェアの調製
下記表２の組成に従ってニボカサンがカプセル化されたミクロスフェアを調製した。

【0087】

ニボカサンとＰＬＧＡ（Ｌ／Ｇ比＝５０：５０、Ｍ．Ｗ．３８，０００～５４，０００）を１：５の重量比で秤量し、有機溶媒であるジクロロメタンをＰＬＧＡ重量の１０倍の量で加え、撹拌して分散相を調製した。

【0088】

連続相には、２％ポリビニルアルコール（Ｍ．Ｗ．３１，０００～５０，０００、加水分解度８７～８９％）１５０ｍＬを使用し、膜乳化法でエマルジョンを調製した。

【0089】

調製されたエマルジョンは、室温で一晩撹拌して溶媒を除去し、滅菌精製水で洗浄した後、凍結乾燥してミクロスフェアを調製した。

【表2】

【0090】

実験例１：ミクロスフェア特性及び薬物カプセル化率分析
実施例及び比較例で調製されたミクロスフェアの特性は、調製中の薬物の析出、凍結乾燥ミクロスフェアの性状、及び再分散時の水相における浮遊よって確認した。

【0091】

調製時に薬物の析出を光学顕微鏡で確認し、凍結乾燥ミクロスフェアの性状は走査電子顕微鏡で確認した。凍結乾燥ミクロスフェアを水に再分散させることにより、ミクロスフェアが水相に浮いているかどうかを確認した。

【0092】

ミクロスフェアにカプセル化された薬物の量は、３０ｍｇのミクロスフェアを５０ｍＬのアセトニトリルに溶解し、超遠心分離によって得られた上清をＨＰＬＣによって分析した。薬物のカプセル化率を測定してカプセル化効率を計算した。
－カプセル化率＝（測定された薬物の重量）／（測定されたミクロスフェア（ＭＳ）の重量）×１００（％）
－カプセル化効率＝（測定された薬物の重量）／（添加した薬物の重量）×１００（％）
測定された結果をまとめて下記表３に示した。

【0093】

【表3】

【0094】

前記表３からわかるように、プロドラッグをカプセル化した実施例のミクロスフェアは、薬物の析出がほとんどなく、優れた薬物カプセル化効率を示したが、ニボカサンがカプセル化された比較例のミクロスフェアでは、薬物が調製過程中に大量析出しており、薬物のカプセル化効率も実施例と比較してわずか半分であった。

【0095】

実験例２：ミクロスフェアのインビトロ溶出試験
実施例４及び５で調製されたミクロスフェアのインビトロ溶出試験を行った。ミクロスフェアをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、３７℃）で振とうし、特定の時間に溶出液を収集及びろ過した後、放出された薬物の量をＨＰＬＣで分析した。プロドラッグは水溶液中での加水分解により親薬物であるカスパーゼ阻害剤に変換されるため、ＨＰＬＣで測定されるカスパーゼ阻害剤の量から放出された薬物の量を確認した。

【図1】

【図2】

【図3】