特許 7399399 癌治療後に予後良好群に属するかを判定する方法、及び若年性癌発症リスク群に属するかを判定する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2023-12-08

(45)【発行日】2023-12-18

(54)【発明の名称】癌治療後に予後良好群に属するかを判定する方法、及び若年性癌発症リスク群に属するかを判定する方法

(51)【国際特許分類】

   C12Q 1/6886 20180101AFI20231211BHJP

   C12Q 1/6869 20180101ALI20231211BHJP

   C12N 15/09 20060101ALN20231211BHJP

【ＦＩ】

C12Q1/6886 Z ZNA

C12Q1/6869 Z

C12N15/09 Z

【請求項の数】 5

(21)【出願番号】P 2020515588

(86)(22)【出願日】2019-04-25

(86)【国際出願番号】 JP2019017807

(87)【国際公開番号】W WO2019208739

(87)【国際公開日】2019-10-31

【審査請求日】2022-04-11

(31)【優先権主張番号】P 2018084491

(32)【優先日】2018-04-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】504136568

【氏名又は名称】国立大学法人広島大学

(73)【特許権者】

【識別番号】598170338

【氏名又は名称】日本ケフィア株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】110002332

【氏名又は名称】弁理士法人綾船国際特許事務所

(74)【代理人】

【識別番号】100127133

【弁理士】

【氏名又は名称】小板橋 浩之

(72)【発明者】

【氏名】岡本 哲治

(72)【発明者】

【氏名】谷 亮治

(72)【発明者】

【氏名】徳丸 浩一郎

【審査官】吉門 沙央里

(56)【参考文献】

【文献】米国特許出願公開第２０１５／０２１８６３５（ＵＳ，Ａ１）

【文献】国際公開第２００２／０５３０１８（ＷＯ，Ａ２）

【文献】D. Chen, et al.，Cancer Medicine，2014年，Vol.3, No.1，p.190-198

【文献】S. Tamaki, et al.，J Oral Pathol Med，2007年，Vol.36，p.351-356

【文献】A. Lazaryan, et al.，Blood，2009年，Vol.114, No.22，Abstract 1094

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｑ １／００ー３／００

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

被験者のＭＩＣＡ遺伝子のエキソン５内の遺伝子多型を同定することによって、被験者が、癌治療後に予後良好群に属するかを判定する方法であって、
癌がヒト口腔癌であり、
被験者のＭＩＣＡ遺伝子のエキソン５内の遺伝子多型として、Ａ５．１型をホモ接合体で有する場合に、予後良好群に属すると判定する、判定方法。

【請求項2】

予後良好群が、５年後生存率９５％以上の群である、請求項１に記載の判定方法。

【請求項3】

被験者が、癌患者、又は健常人である、請求項１～２のいずれかに記載の判定方法。

【請求項4】

被験者のＭＩＣＡ遺伝子のエキソン５内の遺伝子多型を同定することによって、被験者が、若年性癌発症リスク群に属するかを判定する方法であって、
癌がヒト口腔癌であり、
被験者のＭＩＣＡ遺伝子のエキソン５内の遺伝子多型として、Ａ５．１型のホモ接合体を有するか、又はＡ５．１型とＡ５型とのヘテロ接合体を有する場合に、若年性癌発症リスク群に属すると判定する、判定方法。

【請求項5】

若年性癌発症リスク群が、２０～３９歳での癌発症リスク群である、請求項４に記載の判定方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、癌治療後に予後良好群に属するかを判定する方法、及び被験者が若年性癌発症リスク群に属するかを判定する方法に関する。

【背景技術】

【0002】

癌治療の予後が良好か否かについて予測することができれば、癌治療後にどの程度の頻度で検査等を行うべきか等をより効果的に計画することができ、ＱＯＬの観点や医療資源の配分の観点から望ましい。

【0003】

また、癌発症のリスクがどの程度あるか、あるいはそれが生涯のどの時期になるかについて、予測することができれば、どの程度の頻度で検査等を行うべきか等をより効果的に計画することができ、ＱＯＬの観点や医療資源の配分の観点から望ましい。

【0004】

ＭＩＣＡ遺伝子（ＭＨＣ ｃｌａｓｓ Ｉ ｃｈａｉｎ－ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅ Ａ）産物は、ＮＫ細胞やγδＴ細胞などの活性化ＮＫ細胞レセプターＮＫＧ２Ｄのリガンドであり、同受容体を介した活性化シグナルはウイルスに対する感染免疫や自己免疫疾患などの多彩な免疫応答に寄与しているとされる。このため、ＭＩＣＡ遺伝子あるいはその遺伝子産物は、治療薬の作用の対象として、種々の治療薬の開発がなされている（例えば、特許文献１）。

【0005】

ＭＩＣＡ遺伝子は、遺伝子多型の存在が知られており、膜貫通領域をコードするｅｘｏｎ５内に５種類の遺伝子多型が存在することが報告されている（非特許文献１）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【文献】特表２０１６－５１２２２３号公報

【非特許文献】

【0007】

【文献】“Triplet repeat polymorphism in the transmembrane region of the MICA gene: a strong association of six GCT repetitions with Behcet disease.”, Proc Natl Acad Sci U S A. 1997 Feb 18;94(4):1298-303.

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

したがって、本発明の目的は、癌治療後に予後良好群に属するかを判定する新規な方法を提供すること、被験者が若年性癌発症リスク群に属するかを判定する新規な方法を提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0009】

本発明者は、癌治療の臨床に携わり、その治療成績について長年の間、鋭意研究してきたところ、ＭＩＣＡ遺伝子多型としてＡ５．１型を有するヒトが、口腔癌発症年齢が若年となること、及び口腔癌の治療の予後が良好であることを見いだして、本発明に到達した。

【0010】

したがって、本発明は次の（１）以下を含む。
（１）
被験者のＭＩＣＡ遺伝子のエキソン５内の遺伝子多型を同定することによって、被験者が、癌治療後に予後良好群に属するかを判定する方法。
（２）
被験者のＭＩＣＡ遺伝子のエキソン５内の遺伝子多型として、Ａ５．１型をホモ接合体で有する場合に、予後良好群に属すると判定する、（１）に記載の判定方法。
（３）
予後良好群が、５年後生存率９５％以上の群である、（１）～（２）のいずれかに記載の判定方法。
（４）
被験者が、癌患者、又は健常人である、（１）～（３）のいずれかに記載の判定方法。
（５）
癌がヒト口腔癌である、（１）～（４）のいずれかに記載の判定方法。
（６）
被験者のＭＩＣＡ遺伝子のエキソン５内の遺伝子多型を同定することによって、被験者が、若年性癌発症リスク群に属するかを判定する方法。
（７）
被験者のＭＩＣＡ遺伝子のエキソン５内の遺伝子多型として、Ａ５．１型を有する場合に、若年性癌発症リスク群に属すると判定する、（６）に記載の判定方法。
（８）
被験者のＭＩＣＡ遺伝子のエキソン５内の遺伝子多型として、Ａ５．１型のホモ接合体を有するか、又はＡ５．１型とＡ５型とのヘテロ接合体を有する場合に、若年性癌発症リスク群に属すると判定する、（６）に記載の判定方法。
（９）
若年性癌発症リスク群が、２０～３９歳での癌発症リスク群である、（６）～（８）のいずれかに記載の判定方法。
（１０）
癌がヒト口腔癌である、（６）～（９）のいずれかに記載の判定方法。

【0011】

好適な実施の態様において、上記の判定方法を含み、この判定方法からなる予測方法、推定方法、評価方法、検出方法、決定方法、分析方法、検査方法、診断方法、分類方法、分別方法、選別方法、識別方法、及び判別方法を含む。

【0012】

好適な実施の態様において、被験者のＭＩＣＡ遺伝子のエキソン５内の遺伝子多型を同定する工程を、被験者から採取した試料を用いて行うことができ、該工程に先立って、被験者から遺伝子を含む試料を採取する工程を行うことができる。

【0013】

好適な実施の態様において、被験者のＭＩＣＡ遺伝子のエキソン５内の遺伝子多型を同定する工程を、公知の多型同定手段によって行うことができ、例えば、ＰＣＲ法を使用した多型同定手段によって行うことができ、例えば、被験者のＭＩＣＡ遺伝子のエキソン５内の遺伝子をエキソン５を含む適切な位置のプライマーを用いてＰＣＲ増幅した後にＰＣＲ産物を用いて塩基数の相違によって多型の同定を行う工程によって、実施することができる。

【発明の効果】

【0014】

本発明によれば、癌治療後に予後良好群に属するかを判定することができる。また、本発明によれば、被験者が若年性癌発症リスク群に属するかを判定することができる。これによって、どの程度の頻度で検査等を行うべきか等をより効果的に計画することができ、ＱＯＬの観点や医療資源の配分の観点から個人と社会に大きな利益をもたらす。

【図面の簡単な説明】

【0015】

【図1】図１は、ＭＩＣＡ遺伝子産物についての説明図である。

【図2】図２は、ＭＩＣＡ遺伝子の膜貫通領域をコードするｅｘｏｎ５内に存在する５種類の遺伝子多型を示す説明図である。

【図3】図３は、塩基数の違いに基づき、キャピラリーカラムで各ＰＣＲ産物を分離した多型解析のクロマトグラムの説明図である。

【図4】図４は、Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ法による口腔癌患者の生存曲線を、Ａ５．１／５．１のホモ接合体とそれ以外の全てのＧｅｎｏｔｙｐｅ多型（ｎｏｎ－Ａ５．１／５．１）とを対比して示したグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0016】

具体的な実施の形態をあげて、以下に本発明を詳細に説明する。本発明は、以下にあげる具体的な実施の形態に限定されるものではない。

【0017】

［癌治療後に予後良好群に属するかを判定する方法］
本発明によれば、被験者のＭＩＣＡ遺伝子のエキソン５内の遺伝子多型を同定することによって、被験者が、癌治療後に予後良好群に属するかを判定することができる。

【0018】

好適な実施の態様において、被験者のＭＩＣＡ遺伝子のエキソン５内の遺伝子多型として、Ａ５．１型をホモ接合体で有する場合に、予後良好群に属すると判定することができる。

【0019】

好適な実施の態様において、癌としては、特に制約はないが、好ましくはヒト口腔癌について好適に判定することができる。ヒト口腔癌として、例えば、舌癌、歯肉癌、口底癌、頬粘膜癌、上顎洞癌、口峡咽頭癌、唾液腺癌をあげることができる。ヒト口腔癌に隣接する臓器の癌として、例えば、上咽頭癌、中咽頭癌、下咽頭癌、食道癌をあげることができる。

【0020】

［予後良好群］
好適な実施の態様において、予後良好群は、生存率を指標として予後が良好である群を言い、例えば５年生存率、１０年生存率、２０年生存率によって表現することができる。好適な実施の態様において、例えば５年生存率が、９０％以上、９５％以上、９９％以上である群をあげることができ、例えば１０年生存率が、９０％以上、９５％以上、９９％以上である群をあげることができ、例えば２０年生存率が、９０％以上、９５％以上、９９％以上である群をあげることができる。本発明の実施例で示すように、特に好適な場合に、２０年生存率が１００％であった。

【0021】

好適な実施の態様において、癌治療後に予後良好群に属するかを判定する被験者としては、癌患者であってもよく、健常人であってもよい。癌患者であれば、癌治療後の予後を判定することができ、健常人であれば、癌を発症した場合における癌治療後の予後を判定することができる。

【0022】

［若年性癌発症リスク群に属するかを判定する方法］
本発明によれば、被験者のＭＩＣＡ遺伝子のエキソン５内の遺伝子多型を同定することによって、被験者が、若年性癌発症リスク群に属するかを判定することができる。

【0023】

好適な実施の態様において、被験者のＭＩＣＡ遺伝子のエキソン５内の遺伝子多型として、Ａ５．１型を有する場合に、若年性癌発症リスク群に属すると判定することができる。

【0024】

好適な実施の態様において、被験者のＭＩＣＡ遺伝子のエキソン５内の遺伝子多型として、Ａ５．１型のホモ接合体を有するか、又はＡ５．１型とＡ５型とのヘテロ接合体を有する場合に、若年性癌発症リスク群に属すると判定することができる。

【0025】

好適な実施の態様において、癌としては、特に制約はないが、好ましくはヒト口腔癌について好適に判定することができる。ヒト口腔癌として、例えば、舌癌、歯肉癌、口底癌、頬粘膜癌、上顎洞癌、口峡咽頭癌、唾液腺癌をあげることができる。ヒト口腔癌に隣接する臓器の癌として、例えば、上咽頭癌、中咽頭癌、下咽頭癌、食道癌をあげることができる。

【0026】

［若年性癌発症リスク群］
好適な実施の態様において、若年性癌発症リスク群は、若年における癌発症のリスクが大きい群を言い、具体的には２０～３９歳での癌発症リスクが大きな群を言う。この２０～３９歳は、厚生労働省の提唱するＡＹＡ（Ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｓ ａｎｄ Ｙｏｕｎｇ Ａｄｕｌｔ）（思春期・若年成人）世代（１５歳以上４０歳未満）とほぼ重なっている。この年代で癌を発症した患者は、癌治療の後に社会に復帰することが特に大きく期待されているから、この年代での癌発症を予測して、適切な治療を早期に始めることは、社会的な意義が特に大きい。２０～３９歳での癌発症リスクが大きいとは、２０～３９歳での癌発症の割合が、他の年代、例えば４０～５９歳、６０～７９歳、８０～１００歳の患者群と比較して有意に多いことを言う。

【0027】

［ＭＩＣＡ遺伝子多型］
後述する実施例のなかでも説明しているように、ＭＩＣＡ遺伝子には、膜貫通領域をコードするｅｘｏｎ５内に５種類の遺伝子多型が存在することが報告されている。上述のように、これらの多型のなかで、本発明ではＡ５．１型を有することを同定することによって、判定を行っている。ＭＩＣＡ遺伝子の多型の同定には、公知の技術を使用することができ、例えば、実施例に開示した手段を使用することができる。典型的な手法として、例えば、細胞から得たゲノムＤＮＡを、エキソン５を含む適切な位置のプライマーを用いてＰＣＲ増幅して、得られたＰＣＲ産物をＣＥＱ８０００にてキャピラリーカラムにかけて、塩基数の違いによって多型の同定を行って、被験者のＧｅｎｏｔｙｐｅを特定することができる。

【実施例】

【0028】

以下に実施例をあげて、本発明を詳細に説明する。本発明は、以下に例示する実施例に限定されるものではない。

【0029】

［臨床研究］
広島大学病院の顎・口腔外科を受診した口腔扁平上皮癌（ＯＳＣＣ）患者３８６名より、同意のもと、腫瘍組織または血液を採取した。対照として１０３名の健常人ボランティアの血液も同様に同意を得て採取した。本研究は広島大学ヒトゲノム・遺伝子解析研究倫理審査委員会の承認済み（許可番号：第ヒー５７号）である。

【0030】

［ＭＩＣＡ遺伝子多型］
ＭＨＣ ｃｌａｓｓ Ｉ ｃｈａｉｎ－ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅ Ａ（ＭＩＣＡ）は、ＮＫ細胞やγδＴ細胞などの活性化ＮＫ細胞レセプターＮＫＧ２Ｄのリガンドであり、同受容体を介した活性化シグナルはウイルスに対する感染免疫や腫瘍免疫、自己免疫疾患などの多彩な免疫応答に寄与しているとされる。このＭＩＣＡ遺伝子産物についての説明図を図１に示す。
ＭＩＣＡ遺伝子には、膜貫通領域をコードするｅｘｏｎ５内に５種類の遺伝子多型が存在することが報告されている。この５種類の遺伝子多型の説明図を図２に示す。図２に示されるように、Ａ４、Ａ５、Ａ６、Ａ９の多型では、エキソン５中において塩基配列が［ＧＣＴ］［ＧＣＴ］と続いてこの最後のＴ（エキソン５の９５１番塩基）の次に、さらに塩基配列が［ＧＣＴ］［ＧＣＴ］と続いている。一方、Ａ５．１の多型では、エキソン５中において塩基配列が［ＧＣＴ］［ＧＣＴ］と続いてこの最後のＴ（エキソン５の９５１番塩基）の次に、Ｇが挿入されて、その後に塩基配列が［ＧＣＴ］［ＧＣＴ］と続いている。この結果、Ａ５．１多型では、コドンのフレームがシフトして、コードされるアミノ酸配列が他の多型とは異なったものとなっている。

【0031】

［ゲノムＤＮＡの抽出］
血液からのゲノムＤＮＡの抽出は、ＱＩＡ ａｍｐ（登録商標） ＤＮＡ Ｂｌｏｏｄ ｍｉｄｉ ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を用いて行った。また、ＯＳＣＣ組織片からのゲノムＤＮＡの抽出は、ＱＩＡ ａｍｐ（登録商標） ＤＮＡ ｍｉｎｉ ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を用いて行った。

【0032】

ＱＩＡ ａｍｐ（登録商標） ＤＮＡ Ｂｌｏｏｄ ｍｉｄｉ ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を用いたゲノムＤＮＡ抽出法は添付プロトコールに準じて行った。抽出したＤＮＡはＮａｎｏ Ｄｒｏｐ（Ｎａｎｏ Ｄｒｏｐ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）を用いて定量した。

【0033】

また、ＯＳＣＣ組織片からのゲノムＤＮＡの抽出は、ＱＩＡ ａｍｐ（登録商標） ＤＮＡ ｍｉｎｉ ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を用い添付プロトコールに準じて行った。抽出したＤＮＡはＮａｎｏ Ｄｒｏｐ（Ｎａｎｏ Ｄｒｏｐ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）を用いて定量した。

【0034】

［ポリメラーゼ連鎖反応（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ； ＰＣＲ）］
ＭＩＣＡ遺伝子の膜貫通領域（エキソン５）を含む染色体ＤＮＡ断片を増幅するプライマーを、以下のように設計した。
プライマー：
ＭＩＣＡ５Ｆ：５’－ＣＣＴＴＴＴＴＴＴＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＧＣ－３’
ＭＩＣＡ５Ｒ：５’－ＣＣＴＴＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＡＡＣＴＧＣ－３’

【0035】

抽出したゲノムＤＮＡに、上記のプライマー対と、ＫＯＤ ＦＸ Ｎｅｏ（Ｔｏｙｏｂｏ，Ｏｓａｋａ，Ｊａｐａｎ）を用いて、サーマルサイクラー（ＰＴＣ－０２２０ ＤＮＡ Ｅｎｇｉｎｅ Ｄｙａｄ（登録商標）： ＭＪ Ｊａｐａｎ，Ｔｏｋｙｏ）を使用し、変性反応は９８℃；１０秒間、アニーリングは５８℃；３０秒間、伸長反応は６８℃；３０秒間の条件で行い、これを１サイクルとして３５サイクル行い、ＰＣＲ産物を得た。このＰＣＲ産物を１．５％アガロースゲルにて電気泳動後、ＳＹＢＲ Ｓａｆｅ ＤＮＡ ｇｅｌ ｓｔａｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にて可視化しＭＩＣＡ遺伝子エキソン５領域のＰＣＲ増幅物の有無を確認した。

【0036】

ＭＩＣＡ遺伝子の各アレルによってＰＣＲ産物の大きさが異なるため、ＭＩＣＡ遺伝子多型の解析は、塩基数によっても判別が可能となる。図３に、塩基数の違いに基づき、ＣＥＱ８０００にてキャピラリーカラムで各ＰＣＲ産物を分離した多型解析のクロマトグラムを、説明図として示す。

【0037】

［塩基配列の決定(ダイレクトシークエンス)］
得られたＰＣＲ産物を用い、ＱｌＡｑｕｉｃｋ（登録商標） ＰＣＲ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、ＰＣＲ産物の精製を行った。得られた産物を、サンガーシーケンス法にてＭＩＣＡ遺伝子のエキソン５領域の塩基配列を決定した。詳細は下記のとおりである。

【0038】

Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ（ＰＴＣ－０２２０ ＤＮＡ Ｅｎｇｉｎｅ Ｄｙａｄ：ＭＪ Ｊａｐａｎ）を使用し、ＤＴＣＳ Ｑｕｉｃｋ Ｓｔａｒｔ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ Ｋｉｔ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を用いて、変性反応は９６℃；２０秒間、アニーリングは５０℃；２０秒間、伸長反応は６０℃；２分間の条件でシークエンス反応を行い、これを１サイクルとして４０サイクル行い、ＰＣＲ産物を得た。ＰＣＲ反応終了後は、エタノール沈殿を行った後、ＳＬＳ容液（Ｓａｍｐｌｅ Ｌｏａｄｉｎｇ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）にて溶解し、遺伝子解析システムＣＥＱ８０００ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ （Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，ＵＳＡ）にて解析を行った。

【0039】

［ＭＩＣＡ遺伝子アレルの解析法（フラグメント解析）］
フラグメント解析は ＣＥＱ８０００ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ， ＵＳＡ）を用いて行った。上記と同じ配列のＭＩＣＡ５Ｒプライマーに ＣＥＱ８０００専用のＢｅｃｋｍａｎ Ｄｙｅ４（登録商標）で標識した蛍光 ＥｃｏＲＩ－セレクティブプライマーを作製し、上述した方法に準じてＰＣＲ反応を行った。Ｄｙｅ４で標識したプライマーは蛍光強度が強いため、ＰＣＲ産物をＳＬＳで１０倍希釈し、希釈ＰＣＲ産物２μｌと、ＳＬＳおよび分子量マーカーとなるｓｔａｎｄａｒｄ４００を混合したベース液３０μｌを、サンプルプレートの各ウェルに加え、ＣＥＱ８０００にてキャピラリーカラムで各ＰＣＲ産物を塩基数の差を利用して分離することで解析し、付属のフラグメント解析ソフトを用いて、ＭＩＣＡ遺伝子多型を決定した。

【0040】

［統計学的解析］
ＯＳＣＣ患者および対照とした健常人ボランティアにおける、ＭＩＣＡ遺伝子のエキソン５内の遺伝子多型について、表現形質（Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）別、各アレル（Ａｌｌｅｌｅ）別、Ｇｅｎｏｔｙｐｅ別に集計し、統計学的解析（カイ２乗検定）を行った。さらに、口腔癌患者の初診時年齢を４群（２０～３９歳、４０～５９歳、６０～７９歳、８０～１００歳）に区分し、各年齢群における、表現形質（Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）別、各アレル（Ａｌｌｅｌｅ）別、Ｇｅｎｏｔｙｐｅ別にＭＩＣＡ遺伝子多型を集計し、対照群と統計学的解析（カイ２乗検定）を行った。
さらに、ＭＩＣＡ多型別の治療内容の内訳を検討するとともに、ＭＩＣＡ遺伝子多型別（５．１／５．１ホモ接合体とそれ以外の遺伝子多型群）の口腔癌患者の生存曲線の算出をＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ法で行い、生存率の有意差はｌｏｇ－ｒａｎｋ検定で行なった。

【0041】

表１－１に健常人と各年代別口腔癌患者のＭＩＣＡ多型比較（Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ別）の結果をまとめて示す。表１－２に、表１－１に対応するカイ２乗検定（Ｐ値）の結果を示す。Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ別の比較においては、該当する多型を有している場合には、それぞれＡ４、Ａ５、Ａ５．１、Ａ６、Ａ９のいずれかに分類して計数した。ヘテロ接合体は１人が２回計数されている。ホモ接合体ではＰｈｅｎｏｔｙｐｅは１つであるとして１人が１回だけ計数されている。表１－２において有意差のあるものには＊（アスタリスク）を付した。健常人と口腔癌患者の比較において、特にＡ５．１型の２０～３９歳の群について有意差があった。

【0042】

【表1-1】

【0043】

【表1-2】

【0044】

表２－１に健常人と各年代別口腔癌患者のＭＩＣＡ多型比較（アレル別）の結果をまとめて示す。表２－２に、表２－１に対応するカイ２乗検定（Ｐ値）の結果を示す。アレル別の比較においては、Ｇｅｎｏｔｙｐｅのいずれかのアレルとして該当する多型を有している場合には、それぞれＡ４、Ａ５、Ａ５．１、Ａ６、Ａ９のいずれかに分類して計数した。すなわち、ホモ接合体とヘテロ接合体のいずれにおいても１人がアレルごとに２回計数されている。表２－２において有意差のあるものには＊（アスタリスク）を付した。

【0045】

【表2-1】

【0046】

【表2-2】

【0047】

表３に健常人と各年代別口腔癌患者のＭＩＣＡ多型比較（Ｇｅｎｏｔｙｐｅ別）の結果をまとめて示す。表３にさらにカイ２乗検定（Ｐ値）の結果を示す。表３において有意差のあるものには＊（アスタリスク）を付した。健常人と口腔癌患者の比較において、特にＡ５．１／５．１のＧｅｎｏｔｙｐｅの２０～３９歳の群について有意差があった。また、健常人と口腔癌患者の比較において、特にＡ５．１／５のＧｅｎｏｔｙｐｅの２０～３９歳の群について有意差があった。すなわち、Ａ５．１／５．１及びＡ５．１／５のいずれのＧｅｎｏｔｙｐｅも若年性癌発症リスク群であることがわかった。また、健常人と口腔癌患者の比較において、特にＡ４／６のＧｅｎｏｔｙｐｅの４０～５９歳の群について有意差があった。

【0048】

【表3】

【0049】

表４に各年代別口腔癌患者のＭＩＣＡ多型比較（Ｇｅｎｏｔｙｐｅ別）の結果をまとめて示す。表４にさらにカイ２乗検定（Ｐ値）の結果を示す。表４において有意差のあるものには＊（アスタリスク）を付した。２０～３９歳と他の各年代別の口腔癌患者との比較において、Ａ５．１／５．１のＧｅｎｏｔｙｐｅの群とＡ５．１／５のＧｅｎｏｔｙｐｅの群について有意差があった。すなわち、２０－３９歳代のＡ５．１／５．１のＧｅｎｏｔｙｐｅは他の年代の癌患者群と比較して発症リスクが高いことがわかった。

【0050】

【表4】

【0051】

表５に全てのＭＩＣＡ多型別の治療内容内訳の結果をまとめて示す。略号はそれぞれ、ＣＲＴ：化学療法＋放射線療法、Ｃ：化学療法、ＲＴ：放射線療法を示す。表５において、カイ２乗検定（Ｐｅａｒｓｏｎ）ｐ＝０．７５を行ったが、各ＭＩＣＡ多型別において実施された治療方法に有意差はなかった。

【0052】

【表5】

【0053】

表６にＡ５．１／５．１のホモ接合体と、それ以外の全てのＧｅｎｏｔｙｐｅ多型（ｎｏｎ－Ａ５．１／５．１）についての治療内容内訳の結果をまとめて示す。略号はそれぞれ、ＣＲＴ：化学療法＋放射線療法、Ｃ：化学療法、ＲＴ：放射線療法を示す。表６において、カイ２乗検定（Ｐｅａｒｓｏｎ）ｐ＝０．９１を行ったが、Ａ５．１／５．１の患者群と非Ａ５．１／５．１の患者群において実施された治療方法に有意差はなかった。

【0054】

【表6】

【0055】

Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ法による口腔癌患者の生存曲線を、Ａ５．１／５．１のホモ接合体と、それ以外の全てのＧｅｎｏｔｙｐｅ多型（ｎｏｎ－Ａ５．１／５．１）とを対比して、図４に示す。Ａ５．１／５．１ホモ接合体個体群の予後は、それ以外の多型のＭＩＣＡ多型個体群より有意に良好であった（ｌｏｇ－ｒａｎｋ検定 ｐ＝０．０１８５）。

【産業上の利用可能性】

【0056】

本発明は、癌治療後に予後良好群に属するかの判定方法、及び被験者が若年性癌発症リスク群に属するかの判定方法を提供する。本発明は、産業上有用な発明である。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【配列表】

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