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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-05-31
(45)【発行日】2024-06-10
(54)【発明の名称】ＦＧＦ２１変異体
(51)【国際特許分類】
C07K 14/50 20060101AFI20240603BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20240603BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20240603BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20240603BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20240603BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240603BHJP
C12P 21/02 20060101ALI20240603BHJP
A61K 38/18 20060101ALI20240603BHJP
A61K 38/26 20060101ALI20240603BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240603BHJP
A61K 47/36 20060101ALI20240603BHJP
A61K 47/42 20170101ALI20240603BHJP
A61K 47/60 20170101ALI20240603BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20240603BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20240603BHJP
A61P 3/00 20060101ALI20240603BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20240603BHJP
A61P 3/06 20060101ALI20240603BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20240603BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20240603BHJP
C12N 15/63 20060101ALN20240603BHJP
【ＦＩ】
C07K14/50 ZNA
C12N15/12
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/02 C
A61K38/18
A61K38/26
A61K45/00
A61K47/36
A61K47/42
A61K47/60
A61K47/68
A61P1/16
A61P3/00
A61P3/04
A61P3/06
A61P3/10
A61P9/10
C12N15/63 Z
【請求項の数】
24
【外国語出願】
(21)【出願番号】P 2022021706
(22)【出願日】2022-02-16
(62)【分割の表示】P 2018528657の分割
【原出願日】2016-12-02
(65)【公開番号】P2022068275
(43)【公開日】2022-05-09
【審査請求日】2022-03-17
(31)【優先権主張番号】15306913.3
(32)【優先日】2015-12-02
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(73)【特許権者】
【識別番号】504456798
【氏名又は名称】サノフイ
【氏名又は名称原語表記】ＳＡＮＯＦＩ
(74)【代理人】
【識別番号】100127926
【弁理士】
【氏名又は名称】結田 純次
(74)【代理人】
【識別番号】100140132
【弁理士】
【氏名又は名称】竹林 則幸
(72)【発明者】
【氏名】マルク・ゾンマーフェルト
(72)【発明者】
【氏名】トーマス・ランガー
(72)【発明者】
【氏名】オリヴァー・ボッシャイネン
(72)【発明者】
【氏名】マティーアス・ドライヤー
(72)【発明者】
【氏名】ヴェルナー・ディートリッヒ
(72)【発明者】
【氏名】パウル・ハーバーマン
【審査官】鈴木 崇之
(56)【参考文献】
【文献】米国特許出願公開第２０１５／０１６６６２２（ＵＳ，Ａ１）
【文献】特表２０１１－５２３５６１（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１３－５３３２２７（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１４－５３０２２０（ＪＰ，Ａ）
【文献】Bioconjugate Chemistry，2013年，Vol. 24, No. 6，pp. 915-925
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００
Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０
Ｃ１２Ｐ １／００－４１／００
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／ＧｅｎｅＳｅｑ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
配列番号４６、４７、２１５または２１６のアミノ酸配列を含むヒト線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）の変異体。
【請求項2】
そのＮ末端に少なくとも１つの追加のアミノ酸をさらに含む、請求項１に記載の変異体。
【請求項3】
少なくとも１つの追加のアミノ酸は、Ｇ、Ａ、Ｎ、およびＣからなる群から選択される、請求項２に記載の変異体。
【請求項4】
成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）と比べて、ヒトおよび／またはマウスの血漿中での増加したタンパク分解安定性を有する、請求項１～３のいずれか１項に記載の変異体。
【請求項5】
成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）と比べて、増加した熱安定性を有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の変異体。
【請求項6】
マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）ＥＲＫ１／２のリン酸化を誘導する、請求項１～５のいずれか１項に記載の変異体。
【請求項7】
Ｉｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ（ＩＣＷ）アッセイで決定される場合、１００ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または９０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または８０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または７０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または６０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または４０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または３０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または２０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または１５ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または１２ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または１１ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または１０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または９ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または８ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または７ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または６ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または５ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または４ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または３ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または２ｎｍｏｌ／Ｌ以下のＥＣ５０で、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）ＥＲＫ１／２のリン酸化を誘導する、請求項６に記載の変異体。
【請求項8】
変異体の検出および／または単離を可能にする、少なくとも１つの標識またはタグをさらに含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の変異体。
【請求項9】
半減期延長モジュールに融合またはコンジュゲートされている、請求項１～８のいずれか１項に記載の変異体。
【請求項10】
半減期延長モジュールは、ポリマー、非構造化（ポリ）ペプチド鎖、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、血清タンパク質、血清タンパク質結合分子、抗体、免疫グロブリン、免疫グロブリンのＦｃ領域／ドメイン、および免疫グロブリン結合ドメインからなる群から選択される、請求項９に記載の変異体。
【請求項11】
請求項１～１０のいずれか１項に記載のヒトＦＧＦ２１の変異体と、他の少なくとも１種の医薬品有効成分とを含む、融合分子。
【請求項12】
請求項１～１０のいずれか１項に記載のヒトＦＧＦ２１の変異体または請求項１１に記載の融合分子をコードする、核酸分子。
【請求項13】
ベクターに含まれているか、またはゲノムに統合されている、請求項１２に記載の核酸分子。
【請求項14】
請求項１２または１３に記載の核酸分子を含有する、宿主細胞。
【請求項15】
請求項１～１０のいずれか１項に記載のヒトＦＧＦ２１の変異体または請求項１１に記載の融合分子を製造する方法であって、請求項１４に記載の宿主細胞を培養することと、培養培地から該変異体または融合分子を単離することとを含む、前記方法。
【請求項16】
請求項１～１０のいずれか１項に記載のヒトＦＧＦ２１の変異体または請求項１１に記載の融合分子または請求項１２もしくは１３に記載の核酸分子または請求項１４に記載の宿主細胞を、薬学的に許容される担体および／または賦形剤と一緒に含む、医薬組成物。
【請求項17】
少なくとも１種の他の医薬品有効成分をさらに含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項18】
少なくとも１種の他の医薬品有効成分は、インスリンおよびインシュリン誘導体、ＧＬＰ－１，ＧＬＰ１類似体、およびＧＬＰ－１受容体アゴニスト、ポリマー結合ＧＬＰ－１およびＧＬＰ－１類似体、二重ＧＬＰ－１／ＧＩＰアゴニスト、二重ＧＬＰ－１／グルカゴン受容体アゴニスト、ＰＹＹ３－３６またはその類似体、膵臓ポリペプチドまたはその類似体、グルカゴン受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、ＧＩＰ受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、グレリンアンタゴニストまたはインバースアゴニスト、キセニンおよびその類似体、ＤＤＰ－ＩＶ阻害剤、ＳＧＬＴ－２阻害剤、二重ＳＧＬＴ－２／ＳＧＬＴ－１阻害剤、ビグアニド、チアゾリジンジオン、ＰＰＡＲアゴニスト、ＰＰＡＲモジュレーター、スルホニルウレア、メグリチニド、アルファ－グルコシダーゼ阻害剤、アミリンおよびアミリン類似体、ＧＰＲ１１９アゴニスト、ＧＰＲ４０アゴニスト、ＧＰＲ１２０アゴニスト、ＧＰＲ１４２アゴニスト、ＴＧＲ５アゴニスト、ＡＭＰＫ興奮薬、ＡＭＰＫ活性剤、１１－ベータ－ＨＳＤの阻害剤、グルコキナーゼの活性剤、ＤＧＡＴの阻害剤、プロテインチロシンホスファターゼ１の阻害剤、グルコース－６－ホスファターゼの阻害剤、フルクトース－１，６－ビスホスファターゼの阻害剤、グリコーゲンホスホリラーゼの阻害剤、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼの阻害剤、グリコーゲンシンターゼキナーゼの阻害剤、ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼの阻害剤、ＣＣＲ－２アンタゴニスト、グルコーストランスポーター－４のモジュレーター、ソマトスタチン受容体３アゴニスト、ＨＭＧ－ＣｏＡ－レダクターゼ阻害剤、フィブレート、ニコチン酸およびその誘導体、ニコチン酸受容体１アゴニスト、ＡＣＡＴ阻害剤、コレステロール吸収阻害剤、胆汁酸結合物質、ＩＢＡＴ阻害剤、ＭＴＰ阻害剤、ＰＣＳＫ９のモジュレーター、ＬＤＬ受容体アップレギュレーター（肝臓選択的甲状腺ホルモン受容体ベータアゴニスト）、ＨＤＬ上昇化合物、脂質代謝モジュレーター、ＰＬＡ２阻害剤、ＡｐｏＡ－Ｉエンハンサー、コレステロール合成阻害剤、オメガ－３脂肪酸およびその誘導体、肥満の治療のための活性物質、ＣＢ１受容体アンタゴニスト、ＭＣＨ－１アンタゴニスト、ＭＣ４受容体アゴニストおよび部分的アゴニスト、ＮＰＹ５またはＮＰＹ２アンタゴニスト、ＮＰＹ４アゴニスト、ベータ－３アドレナリン受容体アゴニスト、レプチンまたはレプチン模倣物、５ＨＴ２ｃ受容体アゴニスト、リパーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、Ｈ３アンタゴニスト、ＡｇＲＰ阻害剤、三重モノアミン取り込み阻害剤、ＭｅｔＡＰ２阻害剤、線維芽細胞増殖因子受容体４またはプロヒビチン標的化ペプチド－１の産生に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド、高血圧、慢性心不全、またはアテローム性動脈硬化症に影響を及ぼす薬物、アンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト、二重アンジオテンシン受容体遮断薬（ＡＲＢ）、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ－２）活性剤、レニン阻害剤、プロレニン阻害剤、エンドセリン変換酵素（ＥＣＥ）阻害剤、エンドセリン受容体遮断薬、エンドセリンアンタゴニスト、利尿薬、アルドステロンアンタゴニスト、アルドステロンシンターゼ阻害剤、アルファ－遮断薬、アルファ－２アドレナリン受容体のアンタゴニスト、ベータ－遮断薬、混合アルファ－／ベータ－遮断薬、カルシウムアンタゴニスト／カルシウムチャネル遮断薬（ＣＢＢ）、二重ミネラルコルチコイド／ＣＣＢ、中枢作用性抗高血圧症薬、中性エンドペプチダーゼの阻害剤、アミノペプチダーゼＡ阻害剤、バソペプチド阻害剤、二重バソペプチド阻害剤、ネプリリシン－ＡＣＥ阻害剤、ネプリリシン－ＥＣＥ阻害剤、二重作用性アンジオテンシン（ＡＴ）受容体－ネプリリシン阻害剤、二重ＡＴ１／エンドセリン－１（ＥＴＡ）アンタゴニスト、進行糖化終末産物ブレーカー、遺伝子組換えレナラーゼ、血圧ワクチン、抗ＲＡＡＳワクチン、ＡＴ１－またはＡＴ２－ワクチン、抗高血圧応答を伴う遺伝的多型のモジュレーター、ならびに栓球凝集抑制因子からなる群から選択される、請求項１１に記載の融合分子または請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項19】
請求項１～１０のいずれか１項に記載のヒトＦＧＦ２１の変異体または請求項１１もしくは１８に記載の融合分子または請求項１２もしくは１３に記載の核酸分子または請求項１４に記載の宿主細胞または請求項１６～１８のいずれか１項に記載の医薬組成物を含む、キット。
【請求項20】
医薬としての使用のための、請求項１～１０のいずれか１項に記載のヒトＦＧＦ２１の変異体または請求項１１もしくは１８に記載の融合分子または請求項１２もしくは１３に記載の核酸分子または請求項１４に記載の宿主細胞または請求項１６～１８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項21】
肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、高血糖症、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される疾患または障害の治療での使用のための、請求項１～１０のいずれか１項に記載のヒトＦＧＦ２１の変異体または請求項１１もしくは１８に記載の融合分子または請求項１２もしくは１３に記載の核酸分子または請求項１４に記載の宿主細胞または請求項１６～１８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項22】
肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、高血糖症、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される疾患または障害の治療のための医薬の製造における、請求項１～１０のいずれか１項に記載のヒトＦＧＦ２１の変異体または請求項１１もしくは１８に記載の融合分子または請求項１２もしくは１３に記載の核酸分子または請求項１４に記載の宿主細胞または請求項１６～１８のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用。
【請求項23】
疾患または障害は糖尿病である、請求項２１に記載の使用のための変異体または融合分子または核酸分子または宿主細胞または医薬組成物。
【請求項24】
疾患または障害は糖尿病である、請求項２２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ヒト線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）のポリペプチド変異体およびその融合分子、ならびにそれをコードする核酸分子に関する。本発明はさらに、特に、肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、高血糖症、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、および／またはアテローム性動脈硬化症の治療のための医薬としてのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【0002】
線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）は、発生中の組織および成体組織において広く発現するポリペプチドである。現在、ＦＧＦファミリーは、ＦＧＦ１からＦＧＦ２３の２２のメンバーからなる（それらの１つは、ＦＧＦ１５／１９と呼ばれる）。ＦＧＦファミリーのメンバーは、脊椎動物種の間において遺伝子構造およびアミノ酸配列の両方において高度に保存される。１８の哺乳動物線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ１～ＦＧＦ１０およびＦＧＦ１６～ＦＧＦ２３）が存在し、これらは、配列相同性および系統発生における違いに基づいて６つのサブファミリーにグループ分けされる。番号付けされているがサブファミリーに割り当てられていない「ＦＧＦ」、すなわちＦＧＦ相同因子（以前に、ＦＧＦ１１～ＦＧＦ１４として知られる）は、ＦＧＦファミリーとの高い配列同一性を有するが、ＦＧＦ受容体（ＦＧＦＲ）を活性化せず、したがって、一般的に、ＦＧＦファミリーのメンバーと見なされない。ほとんどのＦＧＦが、細胞の増殖および分化の局所的レギュレーターとして機能するが、最近の研究では、ＦＧＦ１５／１９、ＦＧＦ２１、およびＦＧＦ２３を含むＦＧＦ１９サブファミリーのメンバーが、内分泌的に、重要な代謝効果を発揮することが示された。ＦＧＦ１９サブファミリーのメンバーは、古典的ＦＧＦによって影響を受けない様々な生理的プロセスを調整する。これらの内分泌因子の多種多様な代謝活性としては、胆汁酸、炭水化物、および脂質代謝の調整ならびにホスフェート、カルシウム、およびビタミンＤのホメオスタシスが挙げられる。
【0003】
ＦＧＦ２１は、元々、マウス胚から単離された。ＦＧＦ２１ ｍＲＮＡは、肝臓で最も豊富に発現され、それより低い程度であるが胸腺でも発現されていた。ヒトＦＧＦ２１は、マウスＦＧＦ２１に高度に類似する（およそ８１％のアミノ酸同一性）。ヒトＦＧＦファミリーのメンバーの中で、ＦＧＦ２１は、ＦＧＦ１９に最も類似する（およそ３０％のアミノ酸同一性）。ＦＧＦ２１は、ＦＧＦファミリーのメンバーの大部分にとって典型的である増殖性および発癌性の効果を呈示しない。
【0004】
ＦＧＦ２１は、主に肝臓によって産生される代謝調節因子であり、肥満および２型糖尿病の動物モデルにおいて強力な抗糖尿病効果および脂質低下効果を発揮する。このホルモンは、体重調節に貢献し、マウスにおける栄養不足およびケトジェニック状態に対する応答に関与する。ＦＧＦ２１の代謝作用の主要部位は、脂肪組織、肝臓、および膵臓である。実験研究では、糖尿病のマウスおよび霊長類におけるＦＧＦ２１投与後の糖尿病合併症および異常脂血症における改善が示されている。ＦＧＦ２１は、インスリンの存在下および不在下においてマウス３Ｔ３－Ｌ１脂肪細胞におけるグルコース摂取を刺激し、ならびに、ｏｂ／ｏｂおよびｄｂ／ｄｂマウスおよび８週齢ＺＤＦラットにおいて、用量依存的に、給餌時および空腹時の血中グルコース、トリグリセリド、およびグルカゴンレベルを低下させ、結果として糖尿病および肥満を治療するための療法としてのＦＧＦ２１の使用のための基礎を提供することが分かっている。
【0005】
肥満のレプチン欠損ｏｂ／ｏｂマウスおよびレプチン受容体欠損ｄｂ／ｄｂマウスならびに肥満のＺＤＦラットへのＦＧＦ２１の投与は、血中グルコースおよびトリグリセリド
を著しく低下させ、空腹時インスリンレベルを減少させ、経口グルコース負荷試験の際のグルコースクリアランスを向上させた。ＦＧＦ２１は、２週間にわたる投与において、食物摂取または体重／糖尿病もしくは痩せたマウスおよびラットの構成に影響を及ぼさなかった。重要なことに、ＦＧＦ２１は、糖尿病の動物または健康な動物において、あるいは過剰発現させる場合には遺伝子導入マウスにおいて、試験した全ての用量においてマイトジェン活性、低血糖、または体重増加を引き起こさなかった。ＦＧＦ２１過剰発現性遺伝子導入マウスは、食餌性肥満に対して抵抗性であった。
を著しく低下させ、空腹時インスリンレベルを減少させ、経口グルコース負荷試験の際のグルコースクリアランスを向上させた。ＦＧＦ２１は、２週間にわたる投与において、食物摂取または体重／糖尿病もしくは痩せたマウスおよびラットの構成に影響を及ぼさなかった。重要なことに、ＦＧＦ２１は、糖尿病の動物または健康な動物において、あるいは過剰発現させる場合には遺伝子導入マウスにおいて、試験した全ての用量においてマイトジェン活性、低血糖、または体重増加を引き起こさなかった。ＦＧＦ２１過剰発現性遺伝子導入マウスは、食餌性肥満に対して抵抗性であった。
【0006】
６週間にわたる糖尿病の赤毛ザルへのＦＧＦ２１の投与は、空腹時の血漿中グルコース、フルクトサミン、トリグリセリド、インスリン、およびグルカゴンレベルを低減させた。重要なことに、著しいグルコース低下効果にもかかわらず、研究の間、低血糖は観察されなかった。ＦＧＦ２１の投与はさらに、ＬＤＬ－コレステロールを著しく低下させ、ＨＤＬ－コレステロールを増加させ、ならびにマウスとは対照的に、体重をわずかだが有意に減少させた。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
糖尿病、肥満、メタボリック症候群、および他の兆候の治療のための治療法としてのヒト野生型ＦＧＦ２１の使用に関連する問題は、インビボでのその限られた半減期である。マウスにおいて、ＦＧＦ２１は、１時間未満の半減期を有し、マカクザル（カニクイザル（ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｕｌａｒｉｓ））では、約２～４時間のみである。したがって、治療法としての使用のためのＦＧＦ２１タンパク質の開発において、ヒト野生型ＦＧＦ２１に勝る向上した薬学的特性、特に、プロテアーゼおよび／または誘起熱分解に対する増加した安定性および／または増加した効力／効能、を有する変異体が必要とされている。この目標を達成するために、増強した安定性を有するＦＧＦ２１ポリペプチドが同定されるように、ＦＧＦ２１変異体を設計した。
【課題を解決するための手段】
【0008】
第１の態様において、本発明は、配列番号１７１のアミノ酸配列を含むヒト線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）の変異体に関し、
－ Ｘａａ５５は、Ｇまたは別のアミノ酸、例えば、ＧまたはＣなどであり；
－ Ｘａａ１４７は、ＰもしくはＣであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１４８は、ＧもしくはＣであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１４９は、ＮもしくはＣであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１５０は、ＫまたはＨのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１５１は、Ｓであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１５２は、ＰまたはＡもしくはＬのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１５３は、ＨまたはＱ、ＹもしくはＫのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１５４は、ＲまたはＱもしくはＫのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１５５は、ＤまたはＬ、Ｋ、Ｙ、Ｐ、Ｅ、ＮもしくはＣのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１５６は、ＰまたはＡもしくはＫのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１５７は、ＡまたはＶ、ＧもしくはＳのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１５８は、ＰまたはＨのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており
；
－ Ｘａａ１５９は、ＲまたはＨ、ＫもしくはＱのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１６０は、Ｇであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１６１は、ＰもしくはＣであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１６２は、ＡまたはＣもしくはＹのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１６３は、ＲまたはＨのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１８４は、Ｑであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１８５は、Ｐであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１８６は、Ｐであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１８７は、Ｄであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１８８は、Ｖであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１８９は、Ｇであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９０は、Ｓであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９１は、Ｓであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９２は、Ｄであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９３は、Ｐであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９４は、Ｌであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９５は、ＳまたはＣであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９６は、ＭまたはＰ、Ｖ、もしくはＣのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９７は、ＶまたはＥ、Ｄ、ＧもしくはＭのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９８は、ＧまたはＥ、Ｄ、Ｒ、Ｋ、Ｙ、ＰもしくはＶのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９９は、ＰまたはＳ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｌ、ＤもしくはＭのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２００は、ＳまたはＱ、Ｍ、Ｃ、Ｐ、ＮもしくはＨのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２０１は、ＱまたはＰもしくはＳのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２０２は、ＧまたはＴのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２０３は、ＲまたはＥ、ＨもしくはＣのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２０４は、Ｓであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２０５は、Ｐであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２０６は、Ｓであるか、または欠失しており；、
－ Ｘａａ２０７は、Ｙであるか、または欠失しており；
場合により、配列番号１７１は、Ｃによる以下のアミノ酸：Ｒ４７、Ｌ４９、Ｔ５１、Ａ５４、Ｑ５６、Ａ５９、Ｈ６０、Ｅ６２、Ｉ６３、Ｇ６７、Ｖ６９、Ｇ７１、Ａ７２、Ａ７３、Ｓ７６、Ｐ７７、Ｅ７８、Ｓ７９、Ｌ８０、Ｌ８１、Ｑ８２、Ｌ８３、Ｉ９１、Ｌ９４、Ｇ９５、Ｖ９６、Ｋ９７、Ｔ９８、Ｒ１００、Ｌ１０２、Ｑ１０４、Ｄ１０７、Ｇ１０８、Ｌ１１０、Ｇ１１２、Ｌ１１４、Ａ１２０、Ｒ１２４、Ｄ１３０、Ｙ１３２、Ｑ１３６、Ｓ１３７、Ａ１３９、Ｈ１４０、Ｌ１４２、Ｐ１４３、Ｈ１４５、Ｌ１４６、Ｌ１６５、Ｌ１６７、Ｌ１７０、Ｐ１７４のうちの少なくとも１つの置換を含み：
ただし、配列番号１７１は、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）ではなく、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）と比較して、０、２、４、６、または８個の追加のシ
ステインを含み、
場合により、配列番号１７１は、変異Ｇ１４１Ｓおよび／または変異Ｐ１７４Ｌをさらに含む。
－ Ｘａａ５５は、Ｇまたは別のアミノ酸、例えば、ＧまたはＣなどであり；
－ Ｘａａ１４７は、ＰもしくはＣであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１４８は、ＧもしくはＣであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１４９は、ＮもしくはＣであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１５０は、ＫまたはＨのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１５１は、Ｓであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１５２は、ＰまたはＡもしくはＬのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１５３は、ＨまたはＱ、ＹもしくはＫのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１５４は、ＲまたはＱもしくはＫのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１５５は、ＤまたはＬ、Ｋ、Ｙ、Ｐ、Ｅ、ＮもしくはＣのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１５６は、ＰまたはＡもしくはＫのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１５７は、ＡまたはＶ、ＧもしくはＳのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１５８は、ＰまたはＨのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており
；
－ Ｘａａ１５９は、ＲまたはＨ、ＫもしくはＱのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１６０は、Ｇであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１６１は、ＰもしくはＣであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１６２は、ＡまたはＣもしくはＹのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１６３は、ＲまたはＨのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１８４は、Ｑであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１８５は、Ｐであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１８６は、Ｐであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１８７は、Ｄであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１８８は、Ｖであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１８９は、Ｇであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９０は、Ｓであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９１は、Ｓであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９２は、Ｄであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９３は、Ｐであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９４は、Ｌであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９５は、ＳまたはＣであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９６は、ＭまたはＰ、Ｖ、もしくはＣのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９７は、ＶまたはＥ、Ｄ、ＧもしくはＭのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９８は、ＧまたはＥ、Ｄ、Ｒ、Ｋ、Ｙ、ＰもしくはＶのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９９は、ＰまたはＳ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｌ、ＤもしくはＭのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２００は、ＳまたはＱ、Ｍ、Ｃ、Ｐ、ＮもしくはＨのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２０１は、ＱまたはＰもしくはＳのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２０２は、ＧまたはＴのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２０３は、ＲまたはＥ、ＨもしくはＣのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２０４は、Ｓであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２０５は、Ｐであるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２０６は、Ｓであるか、または欠失しており；、
－ Ｘａａ２０７は、Ｙであるか、または欠失しており；
場合により、配列番号１７１は、Ｃによる以下のアミノ酸：Ｒ４７、Ｌ４９、Ｔ５１、Ａ５４、Ｑ５６、Ａ５９、Ｈ６０、Ｅ６２、Ｉ６３、Ｇ６７、Ｖ６９、Ｇ７１、Ａ７２、Ａ７３、Ｓ７６、Ｐ７７、Ｅ７８、Ｓ７９、Ｌ８０、Ｌ８１、Ｑ８２、Ｌ８３、Ｉ９１、Ｌ９４、Ｇ９５、Ｖ９６、Ｋ９７、Ｔ９８、Ｒ１００、Ｌ１０２、Ｑ１０４、Ｄ１０７、Ｇ１０８、Ｌ１１０、Ｇ１１２、Ｌ１１４、Ａ１２０、Ｒ１２４、Ｄ１３０、Ｙ１３２、Ｑ１３６、Ｓ１３７、Ａ１３９、Ｈ１４０、Ｌ１４２、Ｐ１４３、Ｈ１４５、Ｌ１４６、Ｌ１６５、Ｌ１６７、Ｌ１７０、Ｐ１７４のうちの少なくとも１つの置換を含み：
ただし、配列番号１７１は、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）ではなく、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）と比較して、０、２、４、６、または８個の追加のシ
ステインを含み、
場合により、配列番号１７１は、変異Ｇ１４１Ｓおよび／または変異Ｐ１７４Ｌをさらに含む。
【0009】
一実施形態において、
－ Ｘａａ１４７からＸａａ１５９は、欠失し、プロテアーゼ耐性ペプチドリンカー、例えば、配列番号１６１または配列番号１６２のペプチドリンカーなどによって置き換えられており；
－ Ｘａａ１４９からＸａａ１５５は、欠失しており、プロテアーゼ耐性ペプチドリンカー、例えば、配列番号１６１、配列番号１６３、または配列番号１６４のペプチドリンカーなどによって置き換えられており；
－ Ｘａａ１４９からＸａａ１５９は、欠失しており、プロテアーゼ耐性ペプチドリンカー、例えば、配列番号１６１または配列番号１６２のペプチドリンカーなどによって置き換えられており；
－ Ｘａａ１４９からＸａａ１６２は、欠失しており、プロテアーゼ耐性ペプチドリンカー、例えば、配列番号１６３または配列番号１６５のペプチドリンカーなどによって置き換えられており；
－ Ｘａａ１４９からＸａａ１６３は、欠失しており、プロテアーゼ耐性ペプチドリンカー、例えば、配列番号１６１のペプチドリンカーなどによって置き換えられており；
－ Ｘａａ１５９からＸａａ１６３は、欠失しており、プロテアーゼ耐性ペプチドリンカー、例えば、ＧＡ、ＧＹ、ＨＨ、ＧＥ、またはＨＥなどによって置き換えられており；
－ Ｘａａ１９７からＸａａ２０３は、欠失しており、プロテアーゼ耐性ペプチドリンカー、例えば、配列番号１６６または配列番号１６７のペプチドリンカーなどによって置き換えられており；
－ プロテアーゼ耐性ペプチドリンカー、例えば、配列番号１６８のペプチドリンカーなど、が、Ｘａａ１９８とＸａａ１９９との間に挿入され；および／または、
－ 配列番号１６９もしくは配列番号１７０のアミノ酸配列が、配列番号１７１のＳ２０９の後に付加される。
－ Ｘａａ１４７からＸａａ１５９は、欠失し、プロテアーゼ耐性ペプチドリンカー、例えば、配列番号１６１または配列番号１６２のペプチドリンカーなどによって置き換えられており；
－ Ｘａａ１４９からＸａａ１５５は、欠失しており、プロテアーゼ耐性ペプチドリンカー、例えば、配列番号１６１、配列番号１６３、または配列番号１６４のペプチドリンカーなどによって置き換えられており；
－ Ｘａａ１４９からＸａａ１５９は、欠失しており、プロテアーゼ耐性ペプチドリンカー、例えば、配列番号１６１または配列番号１６２のペプチドリンカーなどによって置き換えられており；
－ Ｘａａ１４９からＸａａ１６２は、欠失しており、プロテアーゼ耐性ペプチドリンカー、例えば、配列番号１６３または配列番号１６５のペプチドリンカーなどによって置き換えられており；
－ Ｘａａ１４９からＸａａ１６３は、欠失しており、プロテアーゼ耐性ペプチドリンカー、例えば、配列番号１６１のペプチドリンカーなどによって置き換えられており；
－ Ｘａａ１５９からＸａａ１６３は、欠失しており、プロテアーゼ耐性ペプチドリンカー、例えば、ＧＡ、ＧＹ、ＨＨ、ＧＥ、またはＨＥなどによって置き換えられており；
－ Ｘａａ１９７からＸａａ２０３は、欠失しており、プロテアーゼ耐性ペプチドリンカー、例えば、配列番号１６６または配列番号１６７のペプチドリンカーなどによって置き換えられており；
－ プロテアーゼ耐性ペプチドリンカー、例えば、配列番号１６８のペプチドリンカーなど、が、Ｘａａ１９８とＸａａ１９９との間に挿入され；および／または、
－ 配列番号１６９もしくは配列番号１７０のアミノ酸配列が、配列番号１７１のＳ２０９の後に付加される。
【0010】
一実施形態において、配列番号１７１は、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）に対して少なくとも９０％、または少なくとも９１％、または少なくとも９２％、または少なくとも９３％、または少なくとも９４％、または少なくとも９５％、または少なくとも９６％、または少なくとも９７％、または少なくとも９８％の配列同一性を有する。
【0011】
一実施形態において、
－ Ｘａａ５５は、ＱまたはＣであり；
－ Ｘａａ１４７は、ＰまたはＣであり；
－ Ｘａａ１４８は、ＧまたはＣであり；
－ Ｘａａ１４９は、ＮまたはＣであり；
－ Ｘａａ１５０は、Ｋであり；
－ Ｘａａ１５１は、Ｓであり；
－ Ｘａａ１５２は、Ｐであり；
－ Ｘａａ１５３は、Ｈであり；
－ Ｘａａ１５４は、Ｒであり；
－ Ｘａａ１５５は、ＤまたはＣであり；
－ Ｘａａ１５６は、Ｐであり；
－ Ｘａａ１５７は、Ａであり；
－ Ｘａａ１５８は、Ｐであり；
－ Ｘａａ１５９は、Ｒであり；
－ Ｘａａ１６０は、Ｇであり；
－ Ｘａａ１６１は、ＰまたはＣであり；
－ Ｘａａ１６２は、ＡまたはＣであり；
－ Ｘａａ１６３は、Ｒであり；
－ Ｘａａ１８４は、Ｑであり；
－ Ｘａａ１８５は、Ｐであり；
－ Ｘａａ１８６は、Ｐであり；
－ Ｘａａ１８７は、Ｄであり；
－ Ｘａａ１８８は、Ｖであり；
－ Ｘａａ１８９は、Ｇであり；
－ Ｘａａ１９０は、Ｓであり；
－ Ｘａａ１９１は、Ｓであり；
－ Ｘａａ１９２は、Ｄであり；
－ Ｘａａ１９３は、Ｐであり；
－ Ｘａａ１９４は、Ｌであり；
－ Ｘａａ１９５は、ＳまたはＣであり；
－ Ｘａａ１９６は、ＭまたはＰ、Ｖ、もしくはＣのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９７は、ＶまたはＥ、Ｄ、ＧもしくはＭのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９８は、ＧまたはＥ、Ｄ、Ｒ、Ｋ、Ｙ、ＰもしくはＶのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９９は、ＰまたはＳ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｌ、ＤもしくはＭのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２００は、ＳまたはＱ、Ｍ、Ｃ、Ｐ、ＮもしくはＨのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２０１は、ＱまたはＰもしくはＳのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２０２は、ＧまたはＴのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２０３は、ＲまたはＥ、Ｈ、もしくはＣのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２０４は、Ｓであり；
－ Ｘａａ２０５は、Ｐであり；
－ Ｘａａ２０６は、Ｓであり；
－ Ｘａａ２０７は、Ｙであり；
場合により、配列番号１７１は、Ｃによる以下のアミノ酸：Ｒ４７、Ｌ４９、Ｔ５１、Ａ５４、Ｑ５６、Ａ５９、Ｈ６０、Ｅ６２、Ｉ６３、Ｇ６７、Ｖ６９、Ｇ７１、Ａ７２、Ａ７３、Ｓ７６、Ｐ７７、Ｅ７８、Ｓ７９、Ｌ８０、Ｌ８１、Ｑ８２、Ｌ８３、Ｉ９１、Ｌ９４、Ｇ９５、Ｖ９６、Ｋ９７、Ｔ９８、Ｒ１００、Ｌ１０２、Ｑ１０４、Ｄ１０７、Ｇ１０８、Ｌ１１０、Ｇ１１２、Ｌ１１４、Ａ１２０、Ｒ１２４、Ｄ１３０、Ｙ１３２、Ｑ１３６、Ｓ１３７、Ａ１３９、Ｈ１４０、Ｌ１４２、Ｐ１４３、Ｈ１４５、Ｌ１４６、Ｌ１６５、Ｌ１６７、Ｌ１７０、Ｐ１７４のうちの少なくとも１つの置換を含む。
－ Ｘａａ５５は、ＱまたはＣであり；
－ Ｘａａ１４７は、ＰまたはＣであり；
－ Ｘａａ１４８は、ＧまたはＣであり；
－ Ｘａａ１４９は、ＮまたはＣであり；
－ Ｘａａ１５０は、Ｋであり；
－ Ｘａａ１５１は、Ｓであり；
－ Ｘａａ１５２は、Ｐであり；
－ Ｘａａ１５３は、Ｈであり；
－ Ｘａａ１５４は、Ｒであり；
－ Ｘａａ１５５は、ＤまたはＣであり；
－ Ｘａａ１５６は、Ｐであり；
－ Ｘａａ１５７は、Ａであり；
－ Ｘａａ１５８は、Ｐであり；
－ Ｘａａ１５９は、Ｒであり；
－ Ｘａａ１６０は、Ｇであり；
－ Ｘａａ１６１は、ＰまたはＣであり；
－ Ｘａａ１６２は、ＡまたはＣであり；
－ Ｘａａ１６３は、Ｒであり；
－ Ｘａａ１８４は、Ｑであり；
－ Ｘａａ１８５は、Ｐであり；
－ Ｘａａ１８６は、Ｐであり；
－ Ｘａａ１８７は、Ｄであり；
－ Ｘａａ１８８は、Ｖであり；
－ Ｘａａ１８９は、Ｇであり；
－ Ｘａａ１９０は、Ｓであり；
－ Ｘａａ１９１は、Ｓであり；
－ Ｘａａ１９２は、Ｄであり；
－ Ｘａａ１９３は、Ｐであり；
－ Ｘａａ１９４は、Ｌであり；
－ Ｘａａ１９５は、ＳまたはＣであり；
－ Ｘａａ１９６は、ＭまたはＰ、Ｖ、もしくはＣのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９７は、ＶまたはＥ、Ｄ、ＧもしくはＭのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９８は、ＧまたはＥ、Ｄ、Ｒ、Ｋ、Ｙ、ＰもしくはＶのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９９は、ＰまたはＳ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｌ、ＤもしくはＭのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２００は、ＳまたはＱ、Ｍ、Ｃ、Ｐ、ＮもしくはＨのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２０１は、ＱまたはＰもしくはＳのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２０２は、ＧまたはＴのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２０３は、ＲまたはＥ、Ｈ、もしくはＣのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２０４は、Ｓであり；
－ Ｘａａ２０５は、Ｐであり；
－ Ｘａａ２０６は、Ｓであり；
－ Ｘａａ２０７は、Ｙであり；
場合により、配列番号１７１は、Ｃによる以下のアミノ酸：Ｒ４７、Ｌ４９、Ｔ５１、Ａ５４、Ｑ５６、Ａ５９、Ｈ６０、Ｅ６２、Ｉ６３、Ｇ６７、Ｖ６９、Ｇ７１、Ａ７２、Ａ７３、Ｓ７６、Ｐ７７、Ｅ７８、Ｓ７９、Ｌ８０、Ｌ８１、Ｑ８２、Ｌ８３、Ｉ９１、Ｌ９４、Ｇ９５、Ｖ９６、Ｋ９７、Ｔ９８、Ｒ１００、Ｌ１０２、Ｑ１０４、Ｄ１０７、Ｇ１０８、Ｌ１１０、Ｇ１１２、Ｌ１１４、Ａ１２０、Ｒ１２４、Ｄ１３０、Ｙ１３２、Ｑ１３６、Ｓ１３７、Ａ１３９、Ｈ１４０、Ｌ１４２、Ｐ１４３、Ｈ１４５、Ｌ１４６、Ｌ１６５、Ｌ１６７、Ｌ１７０、Ｐ１７４のうちの少なくとも１つの置換を含む。
【0012】
一実施形態において、変異体は、配列番号１７５のアミノ酸配列を含み（変数は本明細書において定義される通りである）、
場合により、配列番号１７５は、Ｃによる以下のアミノ酸：Ｒ４７、Ｌ４９、Ｔ５１、Ａ５４、Ｑ５６、Ａ５９、Ｈ６０、Ｅ６２、Ｉ６３、Ｇ６７、Ｖ６９、Ｇ７１、Ａ７２、Ａ７３、Ｓ７６、Ｐ７７、Ｅ７８、Ｓ７９、Ｌ８０、Ｌ８１、Ｑ８２、Ｌ８３、Ｉ９１、Ｌ９４、Ｇ９５、Ｖ９６、Ｋ９７、Ｔ９８、Ｒ１００、Ｌ１０２、Ｑ１０４、Ｄ１０７、Ｇ１０８、Ｌ１１０、Ｇ１１２、Ｌ１１４、Ａ１２０、Ｒ１２４、Ｄ１３０、Ｙ１３２、
Ｑ１３６、Ｓ１３７、Ａ１３９、Ｈ１４０、Ｌ１４２、Ｐ１４３、Ｈ１４５、Ｌ１４６、Ｌ１６５、Ｌ１６７、Ｌ１７０、Ｐ１７４のうちの少なくとも１つの置換を含み；
ただし、配列番号１７５は、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）ではなく、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）と比較して、０、２、４、６または８個の追加のシステインを含み、
場合により、配列番号１７５は、変異Ｇ１４１Ｓおよび／または変異Ｐ１７４Ｌをさらに含む。
場合により、配列番号１７５は、Ｃによる以下のアミノ酸：Ｒ４７、Ｌ４９、Ｔ５１、Ａ５４、Ｑ５６、Ａ５９、Ｈ６０、Ｅ６２、Ｉ６３、Ｇ６７、Ｖ６９、Ｇ７１、Ａ７２、Ａ７３、Ｓ７６、Ｐ７７、Ｅ７８、Ｓ７９、Ｌ８０、Ｌ８１、Ｑ８２、Ｌ８３、Ｉ９１、Ｌ９４、Ｇ９５、Ｖ９６、Ｋ９７、Ｔ９８、Ｒ１００、Ｌ１０２、Ｑ１０４、Ｄ１０７、Ｇ１０８、Ｌ１１０、Ｇ１１２、Ｌ１１４、Ａ１２０、Ｒ１２４、Ｄ１３０、Ｙ１３２、
Ｑ１３６、Ｓ１３７、Ａ１３９、Ｈ１４０、Ｌ１４２、Ｐ１４３、Ｈ１４５、Ｌ１４６、Ｌ１６５、Ｌ１６７、Ｌ１７０、Ｐ１７４のうちの少なくとも１つの置換を含み；
ただし、配列番号１７５は、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）ではなく、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）と比較して、０、２、４、６または８個の追加のシステインを含み、
場合により、配列番号１７５は、変異Ｇ１４１Ｓおよび／または変異Ｐ１７４Ｌをさらに含む。
【0013】
一実施形態において、
－ Ｘａａ５５は、ＱまたはＣであり；
－ Ｘａａ１４７は、ＰまたはＣであり；
－ Ｘａａ１４８は、Ｇであり；
－ Ｘａａ１４９は、ＮまたはＣであり；
－ Ｘａａ１５５は、ＤまたはＣであり；
－ Ｘａａ１６１は、Ｐであり；
－ Ｘａａ１６２は、Ａであり；
－ Ｘａａ１９５は、Ｓであり；
－ Ｘａａ１９６は、Ｍであり；
－ Ｘａａ１９７は、Ｖであり；
－ Ｘａａ１９８は、ＧまたはＥ、Ｄ、Ｒ、Ｋ、Ｙ、ＰもしくはＶのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９９は、ＰまたはＳ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｌ、ＤもしくはＭのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２００は、Ｓであり；
－ Ｘａａ２０１は、Ｑであり；
－ Ｘａａ２０２は、Ｇであり；
－ Ｘａａ２０３は、Ｒであり；
場合により、配列番号１７１は、Ｃによる以下のアミノ酸：Ｒ４７、Ａ５９、Ｈ６０、Ｇ７１、Ｓ７６、Ｓ７９、Ｄ１０７、Ｇ１０８、Ｌ１４２、Ｐ１７４のうちの少なくとも１つの置換を含む。
－ Ｘａａ５５は、ＱまたはＣであり；
－ Ｘａａ１４７は、ＰまたはＣであり；
－ Ｘａａ１４８は、Ｇであり；
－ Ｘａａ１４９は、ＮまたはＣであり；
－ Ｘａａ１５５は、ＤまたはＣであり；
－ Ｘａａ１６１は、Ｐであり；
－ Ｘａａ１６２は、Ａであり；
－ Ｘａａ１９５は、Ｓであり；
－ Ｘａａ１９６は、Ｍであり；
－ Ｘａａ１９７は、Ｖであり；
－ Ｘａａ１９８は、ＧまたはＥ、Ｄ、Ｒ、Ｋ、Ｙ、ＰもしくはＶのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ１９９は、ＰまたはＳ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｇ、Ｆ、Ｌ、ＤもしくはＭのような別のアミノ酸であるか、または欠失しており；
－ Ｘａａ２００は、Ｓであり；
－ Ｘａａ２０１は、Ｑであり；
－ Ｘａａ２０２は、Ｇであり；
－ Ｘａａ２０３は、Ｒであり；
場合により、配列番号１７１は、Ｃによる以下のアミノ酸：Ｒ４７、Ａ５９、Ｈ６０、Ｇ７１、Ｓ７６、Ｓ７９、Ｄ１０７、Ｇ１０８、Ｌ１４２、Ｐ１７４のうちの少なくとも１つの置換を含む。
【0014】
一実施形態において、変異体は、配列番号１７６のアミノ酸配列を含み（変数は本明細書において定義される通りである）、
場合により、配列番号１７６は、Ｃによる以下のアミノ酸：Ｒ４７、Ａ５９、Ｈ６０、Ｇ７１、Ｓ７６、Ｓ７９、Ｄ１０７、Ｇ１０８、Ｌ１４２、Ｐ１７４のうちの少なくとも１つの置換を含み：
ただし、配列番号１７６は、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）ではなく、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）と比較して、０、２、４、６または８個の追加のシステインを含み、
場合により、配列番号１７６は、変異Ｇ１４１Ｓおよび／または変異Ｐ１７４Ｌをさらに含む。
場合により、配列番号１７６は、Ｃによる以下のアミノ酸：Ｒ４７、Ａ５９、Ｈ６０、Ｇ７１、Ｓ７６、Ｓ７９、Ｄ１０７、Ｇ１０８、Ｌ１４２、Ｐ１７４のうちの少なくとも１つの置換を含み：
ただし、配列番号１７６は、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）ではなく、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）と比較して、０、２、４、６または８個の追加のシステインを含み、
場合により、配列番号１７６は、変異Ｇ１４１Ｓおよび／または変異Ｐ１７４Ｌをさらに含む。
【0015】
一実施形態において、Ｘａａ１９８は、Ｇ、Ｒ、ＫまたはＹである。
【0016】
一実施形態において、Ｘａａ１９９は、Ｐであるか、または欠失している。
【0017】
一実施形態において、配列番号１７１、１７５、または１７６は、Ｃによる以下のアミノ酸：
－ Ｒ４７およびＰ１７４；
－ Ｘａａ５５およびＸａａ１４７；
－ Ｘａａ５５およびＸａａ１４９；
－ Ａ５９およびＧ７１；
－ Ｈ６０およびＳ７９；
－ Ｓ７６およびＳ７９；
－ Ｄ１０７およびＸａａ１５５；ならびに／または
－ Ｇ１０８およびＬ１４２
の置換を含む。
－ Ｒ４７およびＰ１７４；
－ Ｘａａ５５およびＸａａ１４７；
－ Ｘａａ５５およびＸａａ１４９；
－ Ａ５９およびＧ７１；
－ Ｈ６０およびＳ７９；
－ Ｓ７６およびＳ７９；
－ Ｄ１０７およびＸａａ１５５；ならびに／または
－ Ｇ１０８およびＬ１４２
の置換を含む。
【0018】
一実施形態において、配列番号１７１、１７５、または１７６は、Ｃによる以下のアミノ酸：
－ Ｘａａ５５およびＸａａ１４７；
－ Ｘａａ５５およびＸａａ１４９；
－ Ａ５９およびＧ７１；
－ Ｓ７６およびＳ７９；
－ Ｄ１０７およびＸａａ１５５；または
－ Ｇ１０８およびＬ１４２
の置換を含む。
－ Ｘａａ５５およびＸａａ１４７；
－ Ｘａａ５５およびＸａａ１４９；
－ Ａ５９およびＧ７１；
－ Ｓ７６およびＳ７９；
－ Ｄ１０７およびＸａａ１５５；または
－ Ｇ１０８およびＬ１４２
の置換を含む。
【0019】
一実施形態において、配列番号１７１、１７５、または１７６は、ＣによるＸａａ５５およびＸａａ１４７の置換を含む。別の実施形態において、配列番号１７１、１７５、または１７６は、ＣによるＸａａ５５およびＸａａ１４９の置換を含む。
【0020】
一実施形態において、
－ Ｘａａ５５はＣであり、Ｘａａ１４７はＣであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＧであり、Ｘａａ１９９は欠失しており；
－ Ｘａａ５５はＣであり、Ｘａａ１４７はＣであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＹであり、Ｘａａ１９９はＰであり；
－ Ｘａａ５５はＣであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＣであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＧであり、Ｘａａ１９９は欠失しており；
－ Ｘａａ５５はＣであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＣであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＹであり、Ｘａａ１９９はＰであり；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＧであり、Ｘａａ１９９は欠失しており；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＲであり、Ｘａａ１９９はＰであり；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＫであり、Ｘａａ１９９はＰであり；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＹであり、Ｘａａ１９９はＰであり；
－ Ｘａａ５５はＣであり、Ｘａａ１４７はＣであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＧであり、Ｘａａ１９９はＰであり；
－ Ｘａａ５５はＣであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＣであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＧであり、Ｘａａ１９９はＰであり；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＧであり、Ｘａａ１９９は欠失しており、配列番号１７１、１７５、または１７６は、ＣによるＡ５９およびＧ７１の置換を含み；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＹであり、Ｘａａ１９９はＰであり、配列番号１７１、１７５、または１７６は、ＣによるＡ５９およびＧ７１の置換を含み；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａ
ａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＧであり、Ｘａａ１９９は欠失しており、配列番号１７１、１７５、または１７６は、ＣによるＳ７６およびＳ７９の置換を含み；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＹであり、ならびにＸａａ１９９はＰであり、配列番号１７１、１７５、または１７６は、ＣによるＳ７６およびＳ７９の置換を含み；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＧであり、Ｘａａ１９９は欠失しており、配列番号１７１、１７５、または１７６は、ＣによるＧ１０８およびＬ１４２の置換を含み；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＹであり、Ｘａａ１９９はＰであり、配列番号１７１、１７５、または１７６は、ＣによるＧ１０８およびＬ１４２の置換を含み；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＣであり、Ｘａａ１９８はＧであり、Ｘａａ１９９は欠失しており、この場合、配列番号１７１、１７５、または１７６は、ＣによるＤ１０７の置換を含み；または
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＣであり、Ｘａａ１９８はＹであり、Ｘａａ１９９はＰであり、配列番号１７１、１７５、または１７６は、ＣによるＤ１０７の置換を含む。
－ Ｘａａ５５はＣであり、Ｘａａ１４７はＣであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＧであり、Ｘａａ１９９は欠失しており；
－ Ｘａａ５５はＣであり、Ｘａａ１４７はＣであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＹであり、Ｘａａ１９９はＰであり；
－ Ｘａａ５５はＣであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＣであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＧであり、Ｘａａ１９９は欠失しており；
－ Ｘａａ５５はＣであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＣであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＹであり、Ｘａａ１９９はＰであり；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＧであり、Ｘａａ１９９は欠失しており；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＲであり、Ｘａａ１９９はＰであり；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＫであり、Ｘａａ１９９はＰであり；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＹであり、Ｘａａ１９９はＰであり；
－ Ｘａａ５５はＣであり、Ｘａａ１４７はＣであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＧであり、Ｘａａ１９９はＰであり；
－ Ｘａａ５５はＣであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＣであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＧであり、Ｘａａ１９９はＰであり；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＧであり、Ｘａａ１９９は欠失しており、配列番号１７１、１７５、または１７６は、ＣによるＡ５９およびＧ７１の置換を含み；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＹであり、Ｘａａ１９９はＰであり、配列番号１７１、１７５、または１７６は、ＣによるＡ５９およびＧ７１の置換を含み；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａ
ａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＧであり、Ｘａａ１９９は欠失しており、配列番号１７１、１７５、または１７６は、ＣによるＳ７６およびＳ７９の置換を含み；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＹであり、ならびにＸａａ１９９はＰであり、配列番号１７１、１７５、または１７６は、ＣによるＳ７６およびＳ７９の置換を含み；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＧであり、Ｘａａ１９９は欠失しており、配列番号１７１、１７５、または１７６は、ＣによるＧ１０８およびＬ１４２の置換を含み；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＤであり、Ｘａａ１９８はＹであり、Ｘａａ１９９はＰであり、配列番号１７１、１７５、または１７６は、ＣによるＧ１０８およびＬ１４２の置換を含み；
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＣであり、Ｘａａ１９８はＧであり、Ｘａａ１９９は欠失しており、この場合、配列番号１７１、１７５、または１７６は、ＣによるＤ１０７の置換を含み；または
－ Ｘａａ５５はＱであり、Ｘａａ１４７はＰであり、Ｘａａ１４９はＮであり、Ｘａａ１５５はＣであり、Ｘａａ１９８はＹであり、Ｘａａ１９９はＰであり、配列番号１７１、１７５、または１７６は、ＣによるＤ１０７の置換を含む。
【0021】
一実施形態において、変異体は、そのＮ末端に少なくとも１つの追加のアミノ酸をさらに含む。
【0022】
一実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸は、Ｇ、Ａ、ＮおよびＣからなる群から選択される。
【0023】
第２の態様において、本発明は、配列番号１から３、１７２、１７３、および１７４のうちの１つによるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ヒトＦＧＦ２１の変異体に関し、
アミノ酸配列は、以下の変異のうちの少なくとも１つを含む：
Ｑ５５Ｇ、Ｋ１５０Ｈ、Ｐ１５２Ａ、Ｐ１５２Ｌ、Ｐ１５２の欠失、Ｈ１５３Ｑ、Ｈ１５３Ｙ、Ｈ１５３Ｋ、Ｈ１５３の欠失、Ｒ１５４Ｑ、Ｒ１５４Ｋ、Ｄ１５５Ｌ、Ｄ１５５Ｋ、Ｄ１５５Ｙ、Ｄ１５５Ｐ、Ｄ１５５Ｅ、Ｄ１５５Ｎ、Ｐ１５６Ａ、Ｐ１５６Ｋ、Ａ１５７Ｖ、Ａ１５７Ｇ、Ａ１５７Ｓ、Ｐ１５８Ｈ、Ｒ１５９Ｈ、Ｒ１５９Ｋ、Ｒ１５９Ｑ、Ａ１６２Ｙ、Ｒ１６３Ｈ、Ｑ１８４の欠失、Ｐ１８５の欠失、Ｐ１８６の欠失、Ｄ１８７の欠失、Ｖ１８８の欠失、Ｇ１８９の欠失、Ｓ１９０の欠失、Ｓ１９１の欠失、Ｄ１９２の欠失、Ｐ１９３の欠失、Ｌ１９４の欠失、Ｓ１９５の欠失、Ｍ１９６の欠失、Ｍ１９６Ｐ、Ｍ１９６Ｖ、Ｖ１９７Ｅ、Ｖ１９７Ｄ、Ｖ１９７の欠失、Ｖ１９７Ｇ、Ｖ１９７Ｍ、Ｇ１９８Ｅ、Ｇ１９８Ｄ、Ｇ１９８Ｒ、Ｇ１９８Ｋ、Ｇ１９８Ｙ、Ｇ１９８Ｐ、Ｇ１９８Ｖ、Ｇ１９８の欠失、Ｐ１９９Ｓ、Ｐ１９９Ｑ、Ｐ１９９の欠失、Ｐ１９９Ｒ、Ｐ１９９Ｔ、Ｐ１９９Ｇ、Ｐ１９９Ｆ、Ｐ１９９Ｌ、Ｐ１９９Ｄ、Ｐ１９９Ｍ、Ｓ２００Ｑ、Ｓ２００Ｍ、Ｓ２００Ｐ、Ｓ２００Ｎ、Ｓ２００Ｈ、Ｓ２００の欠失、Ｑ２０１Ｐ、Ｑ２０１Ｓ、Ｑ２０１の欠失、Ｇ２０２Ｔ、Ｇ２０２の欠失、Ｒ２０３Ｅ、Ｒ２０３Ｈ、Ｒ２０３の欠失、Ｓ２０４の欠失、Ｐ２０５の欠失、Ｓ２０６の欠失、Ｙ２０７の欠失、ＧＳＧＳ（配列番号１６１）によって置き換えられたＰ１４７～Ｒ１５９、ＧＧＳＧＧＳ（配列番号１６２）によって置き換えられたＰ１４７～Ｒ１５９、ＧＳＧＳ（配列番号１６１）によって置き換えられたＮ１４９～Ｄ１５５、ＧＳＨＳＧ（配列番号１６３）によって置き換えられたＮ１４９～Ｄ１５５、ＡＴＴＳ（配列番号１６４）によって置き換えられたＮ１４９～Ｄ１５５、ＧＳＧＳ（配列番号１６１）によって置き換えられたＮ１４９～Ｒ１５９、ＧＧＳＧＧＳ（配列番号１６２）によって置き換えられたＮ１４９～Ｒ１５９、ＧＳＨＳＧ（配列番号１６３）によって置き換えられたＮ１４９～Ａ１６２、ＧＳＨＳＧＳ（配列番号１６５）によって置き換えられたＰ１４９～Ｒ１６２、ＧＳＧＳ（配列番号１６
１）によって置き換えられたＮ１４９～Ｒ１６３、ＧＡ、ＧＹ、ＨＨ、ＧＥまたはＨＥによって置き換えられたＰ１５９～Ｒ１６３、ＧＨＲＳＨＬＱＴＶＦ（配列番号１６６）によって置き換えられたＰ１９７～Ｒ２０３、ＧＬＮＳＭＶ（配列番号１６７）によって置き換えられたＶ１９７～Ｒ２０３、Ｇ１９８とＰ１９９との間に挿入されたＧＧＧＧＳ（配列番号１６８）、Ｓ２０９の後に追加されたＰＬＳＭＶＧＰＳＱＧＲＳＰＳＹＡＳ（配列番号１６９）またはＰＬＳＭＶＧＳＱＧＲＳＰＳＹＡＳ（配列番号１７０）；
および／または
アミノ酸配列は、Ｃによる、２つ、４つ、６つ、もしくは８つの以下のアミノ酸の置換を含む：
Ｒ４７、Ｌ４９、Ｔ５１、Ａ５４、Ｑ５５、Ｑ５６、Ａ５９、Ｈ６０、Ｅ６２、Ｉ６３、Ｇ６７、Ｖ６９、Ｇ７１、Ａ７２、Ａ７３、Ｓ７６、Ｐ７７、Ｅ７８、Ｓ７９、Ｌ８０、Ｌ８１、Ｑ８２、Ｌ８３、Ｉ９１、Ｌ９４、Ｇ９５、Ｖ９６、Ｋ９７、Ｔ９８、Ｒ１００、Ｌ１０２、Ｑ１０４、Ｄ１０７、Ｇ１０８、Ｌ１１０、Ｇ１１２、Ｌ１１４、Ａ１２０、Ｒ１２４、Ｄ１３０、Ｙ１３２、Ｑ１３６、Ｓ１３７、Ａ１３９、Ｈ１４０、Ｌ１４２、Ｐ１４３、Ｈ１４５、Ｌ１４６、Ｐ１４７、Ｇ１４８、Ｎ１４９、Ｄ１５５、Ｐ１６１、Ａ１６２、Ｌ１６５、Ｌ１６７、Ｌ１７０、Ｐ１７４、Ｓ１９５、Ｍ１９６、Ｓ２００、Ｒ２０３；
ここで、アミノ酸の番号付けは、配列番号１に従う。
アミノ酸配列は、以下の変異のうちの少なくとも１つを含む：
Ｑ５５Ｇ、Ｋ１５０Ｈ、Ｐ１５２Ａ、Ｐ１５２Ｌ、Ｐ１５２の欠失、Ｈ１５３Ｑ、Ｈ１５３Ｙ、Ｈ１５３Ｋ、Ｈ１５３の欠失、Ｒ１５４Ｑ、Ｒ１５４Ｋ、Ｄ１５５Ｌ、Ｄ１５５Ｋ、Ｄ１５５Ｙ、Ｄ１５５Ｐ、Ｄ１５５Ｅ、Ｄ１５５Ｎ、Ｐ１５６Ａ、Ｐ１５６Ｋ、Ａ１５７Ｖ、Ａ１５７Ｇ、Ａ１５７Ｓ、Ｐ１５８Ｈ、Ｒ１５９Ｈ、Ｒ１５９Ｋ、Ｒ１５９Ｑ、Ａ１６２Ｙ、Ｒ１６３Ｈ、Ｑ１８４の欠失、Ｐ１８５の欠失、Ｐ１８６の欠失、Ｄ１８７の欠失、Ｖ１８８の欠失、Ｇ１８９の欠失、Ｓ１９０の欠失、Ｓ１９１の欠失、Ｄ１９２の欠失、Ｐ１９３の欠失、Ｌ１９４の欠失、Ｓ１９５の欠失、Ｍ１９６の欠失、Ｍ１９６Ｐ、Ｍ１９６Ｖ、Ｖ１９７Ｅ、Ｖ１９７Ｄ、Ｖ１９７の欠失、Ｖ１９７Ｇ、Ｖ１９７Ｍ、Ｇ１９８Ｅ、Ｇ１９８Ｄ、Ｇ１９８Ｒ、Ｇ１９８Ｋ、Ｇ１９８Ｙ、Ｇ１９８Ｐ、Ｇ１９８Ｖ、Ｇ１９８の欠失、Ｐ１９９Ｓ、Ｐ１９９Ｑ、Ｐ１９９の欠失、Ｐ１９９Ｒ、Ｐ１９９Ｔ、Ｐ１９９Ｇ、Ｐ１９９Ｆ、Ｐ１９９Ｌ、Ｐ１９９Ｄ、Ｐ１９９Ｍ、Ｓ２００Ｑ、Ｓ２００Ｍ、Ｓ２００Ｐ、Ｓ２００Ｎ、Ｓ２００Ｈ、Ｓ２００の欠失、Ｑ２０１Ｐ、Ｑ２０１Ｓ、Ｑ２０１の欠失、Ｇ２０２Ｔ、Ｇ２０２の欠失、Ｒ２０３Ｅ、Ｒ２０３Ｈ、Ｒ２０３の欠失、Ｓ２０４の欠失、Ｐ２０５の欠失、Ｓ２０６の欠失、Ｙ２０７の欠失、ＧＳＧＳ（配列番号１６１）によって置き換えられたＰ１４７～Ｒ１５９、ＧＧＳＧＧＳ（配列番号１６２）によって置き換えられたＰ１４７～Ｒ１５９、ＧＳＧＳ（配列番号１６１）によって置き換えられたＮ１４９～Ｄ１５５、ＧＳＨＳＧ（配列番号１６３）によって置き換えられたＮ１４９～Ｄ１５５、ＡＴＴＳ（配列番号１６４）によって置き換えられたＮ１４９～Ｄ１５５、ＧＳＧＳ（配列番号１６１）によって置き換えられたＮ１４９～Ｒ１５９、ＧＧＳＧＧＳ（配列番号１６２）によって置き換えられたＮ１４９～Ｒ１５９、ＧＳＨＳＧ（配列番号１６３）によって置き換えられたＮ１４９～Ａ１６２、ＧＳＨＳＧＳ（配列番号１６５）によって置き換えられたＰ１４９～Ｒ１６２、ＧＳＧＳ（配列番号１６
１）によって置き換えられたＮ１４９～Ｒ１６３、ＧＡ、ＧＹ、ＨＨ、ＧＥまたはＨＥによって置き換えられたＰ１５９～Ｒ１６３、ＧＨＲＳＨＬＱＴＶＦ（配列番号１６６）によって置き換えられたＰ１９７～Ｒ２０３、ＧＬＮＳＭＶ（配列番号１６７）によって置き換えられたＶ１９７～Ｒ２０３、Ｇ１９８とＰ１９９との間に挿入されたＧＧＧＧＳ（配列番号１６８）、Ｓ２０９の後に追加されたＰＬＳＭＶＧＰＳＱＧＲＳＰＳＹＡＳ（配列番号１６９）またはＰＬＳＭＶＧＳＱＧＲＳＰＳＹＡＳ（配列番号１７０）；
および／または
アミノ酸配列は、Ｃによる、２つ、４つ、６つ、もしくは８つの以下のアミノ酸の置換を含む：
Ｒ４７、Ｌ４９、Ｔ５１、Ａ５４、Ｑ５５、Ｑ５６、Ａ５９、Ｈ６０、Ｅ６２、Ｉ６３、Ｇ６７、Ｖ６９、Ｇ７１、Ａ７２、Ａ７３、Ｓ７６、Ｐ７７、Ｅ７８、Ｓ７９、Ｌ８０、Ｌ８１、Ｑ８２、Ｌ８３、Ｉ９１、Ｌ９４、Ｇ９５、Ｖ９６、Ｋ９７、Ｔ９８、Ｒ１００、Ｌ１０２、Ｑ１０４、Ｄ１０７、Ｇ１０８、Ｌ１１０、Ｇ１１２、Ｌ１１４、Ａ１２０、Ｒ１２４、Ｄ１３０、Ｙ１３２、Ｑ１３６、Ｓ１３７、Ａ１３９、Ｈ１４０、Ｌ１４２、Ｐ１４３、Ｈ１４５、Ｌ１４６、Ｐ１４７、Ｇ１４８、Ｎ１４９、Ｄ１５５、Ｐ１６１、Ａ１６２、Ｌ１６５、Ｌ１６７、Ｌ１７０、Ｐ１７４、Ｓ１９５、Ｍ１９６、Ｓ２００、Ｒ２０３；
ここで、アミノ酸の番号付けは、配列番号１に従う。
【0024】
一実施形態において、アミノ酸配列は、以下の変異：
Ｋ１５０Ｈ、Ｐ１５２Ａ、Ｐ１５２Ｌ、Ｐ１５２の欠失、Ｈ１５３Ｑ、Ｈ１５３Ｙ、Ｈ１５３Ｋ、Ｈ１５３の欠失、Ｒ１５４Ｑ、Ｒ１５４Ｋ、Ｄ１５５Ｌ、Ｄ１５５Ｋ、Ｄ１５５Ｙ、Ｄ１５５Ｐ、Ｄ１５５Ｅ、Ｄ１５５Ｎ、Ｐ１５６Ａ、Ｐ１５６Ｋ、Ａ１５７Ｖ、Ａ１５７Ｇ、Ａ１５７Ｓ、Ｐ１５８Ｈ、Ｒ１５９Ｈ、Ｒ１５９Ｋ、Ｒ１５９Ｑ、Ａ１６２Ｙ、Ｒ１６３Ｈ、Ｍ１９６の欠失、Ｍ１９６Ｐ、Ｍ１９６Ｖ、Ｖ１９７Ｅ、Ｖ１９７Ｄ、Ｖ１９７の欠失、Ｖ１９７Ｇ、Ｖ１９７Ｍ、Ｇ１９８Ｅ、Ｇ１９８Ｄ、Ｇ１９８Ｒ、Ｇ１９８Ｋ、Ｇ１９８Ｙ、Ｇ１９８Ｐ、Ｇ１９８Ｖ、Ｇ１９８の欠失、Ｐ１９９Ｓ、Ｐ１９９Ｑ、Ｐ１９９の欠失、Ｐ１９９Ｒ、Ｐ１９９Ｔ、Ｐ１９９Ｇ、Ｐ１９９Ｆ、Ｐ１９９Ｌ、Ｐ１９９Ｄ、Ｐ１９９Ｍ、Ｓ２００Ｑ、Ｓ２００Ｍ、Ｓ２００Ｐ、Ｓ２００Ｎ、Ｓ２００Ｈ、Ｓ２００の欠失、Ｑ２０１Ｐ、Ｑ２０１Ｓ、Ｑ２０１の欠失、Ｇ２０２Ｔ、Ｇ２０２の欠失、Ｒ２０３Ｅ、Ｒ２０３Ｈ、Ｒ２０３の欠失；のうちの少なくとも１つを含む
および／または
アミノ酸配列は、Ｃによる２つ、４つ、６つまたは８つの以下のアミノ酸の置換を含む：Ｒ４７、Ｌ４９、Ｔ５１、Ａ５４、Ｑ５５、Ｑ５６、Ａ５９、Ｈ６０、Ｅ６２、Ｉ６３、Ｇ６７、Ｖ６９、Ｇ７１、Ａ７２、Ａ７３、Ｓ７６、Ｐ７７、Ｅ７８、Ｓ７９、Ｌ８０、Ｌ８１、Ｑ８２、Ｌ８３、Ｉ９１、Ｌ９４、Ｇ９５、Ｖ９６、Ｋ９７、Ｔ９８、Ｒ１００、Ｌ１０２、Ｑ１０４、Ｄ１０７、Ｇ１０８、Ｌ１１０、Ｇ１１２、Ｌ１１４、Ａ１２０、Ｒ１２４、Ｄ１３０、Ｙ１３２、Ｑ１３６、Ｓ１３７、Ａ１３９、Ｈ１４０、Ｌ１４２、Ｐ１４３、Ｈ１４５、Ｌ１４６、Ｐ１４７、Ｇ１４８、Ｎ１４９、Ｄ１５５、Ｐ１６１、Ａ１６２、Ｌ１６５、Ｌ１６７、Ｌ１７０、Ｐ１７４、Ｓ１９５、Ｍ１９６、Ｓ２００、Ｒ２０３。
Ｋ１５０Ｈ、Ｐ１５２Ａ、Ｐ１５２Ｌ、Ｐ１５２の欠失、Ｈ１５３Ｑ、Ｈ１５３Ｙ、Ｈ１５３Ｋ、Ｈ１５３の欠失、Ｒ１５４Ｑ、Ｒ１５４Ｋ、Ｄ１５５Ｌ、Ｄ１５５Ｋ、Ｄ１５５Ｙ、Ｄ１５５Ｐ、Ｄ１５５Ｅ、Ｄ１５５Ｎ、Ｐ１５６Ａ、Ｐ１５６Ｋ、Ａ１５７Ｖ、Ａ１５７Ｇ、Ａ１５７Ｓ、Ｐ１５８Ｈ、Ｒ１５９Ｈ、Ｒ１５９Ｋ、Ｒ１５９Ｑ、Ａ１６２Ｙ、Ｒ１６３Ｈ、Ｍ１９６の欠失、Ｍ１９６Ｐ、Ｍ１９６Ｖ、Ｖ１９７Ｅ、Ｖ１９７Ｄ、Ｖ１９７の欠失、Ｖ１９７Ｇ、Ｖ１９７Ｍ、Ｇ１９８Ｅ、Ｇ１９８Ｄ、Ｇ１９８Ｒ、Ｇ１９８Ｋ、Ｇ１９８Ｙ、Ｇ１９８Ｐ、Ｇ１９８Ｖ、Ｇ１９８の欠失、Ｐ１９９Ｓ、Ｐ１９９Ｑ、Ｐ１９９の欠失、Ｐ１９９Ｒ、Ｐ１９９Ｔ、Ｐ１９９Ｇ、Ｐ１９９Ｆ、Ｐ１９９Ｌ、Ｐ１９９Ｄ、Ｐ１９９Ｍ、Ｓ２００Ｑ、Ｓ２００Ｍ、Ｓ２００Ｐ、Ｓ２００Ｎ、Ｓ２００Ｈ、Ｓ２００の欠失、Ｑ２０１Ｐ、Ｑ２０１Ｓ、Ｑ２０１の欠失、Ｇ２０２Ｔ、Ｇ２０２の欠失、Ｒ２０３Ｅ、Ｒ２０３Ｈ、Ｒ２０３の欠失；のうちの少なくとも１つを含む
および／または
アミノ酸配列は、Ｃによる２つ、４つ、６つまたは８つの以下のアミノ酸の置換を含む：Ｒ４７、Ｌ４９、Ｔ５１、Ａ５４、Ｑ５５、Ｑ５６、Ａ５９、Ｈ６０、Ｅ６２、Ｉ６３、Ｇ６７、Ｖ６９、Ｇ７１、Ａ７２、Ａ７３、Ｓ７６、Ｐ７７、Ｅ７８、Ｓ７９、Ｌ８０、Ｌ８１、Ｑ８２、Ｌ８３、Ｉ９１、Ｌ９４、Ｇ９５、Ｖ９６、Ｋ９７、Ｔ９８、Ｒ１００、Ｌ１０２、Ｑ１０４、Ｄ１０７、Ｇ１０８、Ｌ１１０、Ｇ１１２、Ｌ１１４、Ａ１２０、Ｒ１２４、Ｄ１３０、Ｙ１３２、Ｑ１３６、Ｓ１３７、Ａ１３９、Ｈ１４０、Ｌ１４２、Ｐ１４３、Ｈ１４５、Ｌ１４６、Ｐ１４７、Ｇ１４８、Ｎ１４９、Ｄ１５５、Ｐ１６１、Ａ１６２、Ｌ１６５、Ｌ１６７、Ｌ１７０、Ｐ１７４、Ｓ１９５、Ｍ１９６、Ｓ２００、Ｒ２０３。
【0025】
一実施形態において、アミノ酸配列は、以下の変異：Ｍ１９６の欠失、Ｍ１９６Ｐ、Ｍ１９６Ｖ、Ｖ１９７Ｅ、Ｖ１９７Ｄ、Ｖ１９７の欠失、Ｖ１９７Ｇ、Ｖ１９７Ｍ、Ｇ１９８Ｅ、Ｇ１９８Ｄ、Ｇ１９８Ｒ、Ｇ１９８Ｋ、Ｇ１９８Ｙ、Ｇ１９８Ｐ、Ｇ１９８Ｖ、Ｇ１９８の欠失、Ｐ１９９Ｓ、Ｐ１９９Ｑ、Ｐ１９９の欠失、Ｐ１９９Ｒ、Ｐ１９９Ｔ、Ｐ１９９Ｇ、Ｐ１９９Ｆ、Ｐ１９９Ｌ、Ｐ１９９Ｄ、Ｐ１９９Ｍ、Ｓ２００Ｑ、Ｓ２００Ｍ、Ｓ２００Ｐ、Ｓ２００Ｎ、Ｓ２００Ｈ、Ｓ２００の欠失、Ｑ２０１Ｐ、Ｑ２０１Ｓ、Ｑ２０１の欠失、Ｇ２０２Ｔ、Ｇ２０２の欠失、Ｒ２０３Ｅ、Ｒ２０３Ｈ、Ｒ２０３の欠失；のうちの少なくとも１つを含む
および／または
アミノ酸配列は、Ｃによる２つ、４つ、６つまたは８つの以下のアミノ酸の置換を含む：Ｒ４７、Ｌ４９、Ｔ５１、Ａ５４、Ｑ５５、Ｑ５６、Ａ５９、Ｈ６０、Ｅ６２、Ｉ６３、Ｇ６７、Ｖ６９、Ｇ７１、Ａ７２、Ａ７３、Ｓ７６、Ｐ７７、Ｅ７８、Ｓ７９、Ｌ８０、Ｌ８１、Ｑ８２、Ｌ８３、Ｉ９１、Ｌ９４、Ｇ９５、Ｖ９６、Ｋ９７、Ｔ９８、Ｒ１００、Ｌ１０２、Ｑ１０４、Ｄ１０７、Ｇ１０８、Ｌ１１０、Ｇ１１２、Ｌ１１４、Ａ１２０、Ｒ１２４、Ｄ１３０、Ｙ１３２、Ｑ１３６、Ｓ１３７、Ａ１３９、Ｈ１４０、Ｌ１４２、Ｐ１４３、Ｈ１４５、Ｌ１４６、Ｐ１４７、Ｇ１４８、Ｎ１４９、Ｄ１５５、Ｐ１６１、Ａ１６２、Ｌ１６５、Ｌ１６７、Ｌ１７０、Ｐ１７４。
および／または
アミノ酸配列は、Ｃによる２つ、４つ、６つまたは８つの以下のアミノ酸の置換を含む：Ｒ４７、Ｌ４９、Ｔ５１、Ａ５４、Ｑ５５、Ｑ５６、Ａ５９、Ｈ６０、Ｅ６２、Ｉ６３、Ｇ６７、Ｖ６９、Ｇ７１、Ａ７２、Ａ７３、Ｓ７６、Ｐ７７、Ｅ７８、Ｓ７９、Ｌ８０、Ｌ８１、Ｑ８２、Ｌ８３、Ｉ９１、Ｌ９４、Ｇ９５、Ｖ９６、Ｋ９７、Ｔ９８、Ｒ１００、Ｌ１０２、Ｑ１０４、Ｄ１０７、Ｇ１０８、Ｌ１１０、Ｇ１１２、Ｌ１１４、Ａ１２０、Ｒ１２４、Ｄ１３０、Ｙ１３２、Ｑ１３６、Ｓ１３７、Ａ１３９、Ｈ１４０、Ｌ１４２、Ｐ１４３、Ｈ１４５、Ｌ１４６、Ｐ１４７、Ｇ１４８、Ｎ１４９、Ｄ１５５、Ｐ１６１、Ａ１６２、Ｌ１６５、Ｌ１６７、Ｌ１７０、Ｐ１７４。
【0026】
一実施形態において、アミノ酸配列は、Ｃによる以下のアミノ酸の置換を含む：
－ Ｒ４７およびＰ１７４；
－ Ｑ５５およびＰ１４７；
－ Ｑ５５およびＮ１４９；
－ Ａ５９およびＧ７１；
－ Ｈ６０およびＳ７９；
－ Ｓ７６およびＳ７９；
－ Ｄ１０７およびＤ１５５；ならびに／または
－ Ｇ１０８およびＬ１４２。
－ Ｒ４７およびＰ１７４；
－ Ｑ５５およびＰ１４７；
－ Ｑ５５およびＮ１４９；
－ Ａ５９およびＧ７１；
－ Ｈ６０およびＳ７９；
－ Ｓ７６およびＳ７９；
－ Ｄ１０７およびＤ１５５；ならびに／または
－ Ｇ１０８およびＬ１４２。
【0027】
一実施形態において、アミノ酸配列は、Ｇ１９８Ｒ、Ｇ１９８Ｋ、Ｇ１９８Ｙ、およびＰ１９９の欠失からなる群から選択される変異を含む；
および／または
アミノ酸配列は、Ｃによる以下のアミノ酸の置換を含む：
－ Ｑ５５およびＰ１４７；
－ Ｑ５５およびＮ１４９；
－ Ａ５９およびＧ７１；
－ Ｓ７６およびＳ７９；
－ Ｄ１０７およびＤ１５５；または
－ Ｇ１０８およびＬ１４２。
および／または
アミノ酸配列は、Ｃによる以下のアミノ酸の置換を含む：
－ Ｑ５５およびＰ１４７；
－ Ｑ５５およびＮ１４９；
－ Ａ５９およびＧ７１；
－ Ｓ７６およびＳ７９；
－ Ｄ１０７およびＤ１５５；または
－ Ｇ１０８およびＬ１４２。
【0028】
一実施形態において、アミノ酸配列は、ＣによるＱ５５およびＰ１４７の置換を含む。
【0029】
別の実施形態において、アミノ酸配列は、ＣによるＱ５５およびＮ１４９の置換を含む。
【0030】
一実施形態において、アミノ酸配列は、配列番号１から３、１７２、１７３、および１７４のうちの１つの別の部位に、少なくとも１つのさらなる変異（例えば、１つ、２つ、３つ、４つまたは５つのさらなる変異）を含む。
【0031】
一実施形態において、アミノ酸配列は、配列番号１から３、１７２、１７３、および１７４のうちの１つに対して少なくとも９０％、または少なくとも９１％、または少なくとも９２％、または少なくとも９３％、または少なくとも９４％、または少なくとも９５％、または少なくとも９６％、または少なくとも９７％、または少なくとも９８％の配列同一性を有する。
【0032】
第３の態様において、本発明は、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５
５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、および３２８のうちの１つによるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ヒトＦＧＦ２１の変異体であって、場合により、変異Ｇ１４１Ｓおよび／または変異Ｐ１７４Ｌをさらに含み、アミノ酸の番号付けは、配列番号１に従う、変異体に関する。
５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、および３２８のうちの１つによるアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、ヒトＦＧＦ２１の変異体であって、場合により、変異Ｇ１４１Ｓおよび／または変異Ｐ１７４Ｌをさらに含み、アミノ酸の番号付けは、配列番号１に従う、変異体に関する。
【0033】
一実施形態において、第１、第２、および第３の態様による変異体は、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）と比べて、ヒトおよび／またはマウスの血漿中における、増加したタンパク分解安定性を有する。
【0034】
一実施形態において、変異体は、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）と比べて、増加した熱安定性を有する。
【0035】
一実施形態において、変異体は、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）ＥＲＫ１／２のリン酸化を誘導する。
【0036】
一実施形態において、変異体は、例えば、哺乳動物細胞の培養などにおいて、Ｉｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ（ＩＣＷ）アッセイによって決定される場合、１００ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または９０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または８０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または７０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または６０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または４０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または３０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または２０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または１５ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または１２ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または１１ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または１０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または９ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または８ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または７ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または６ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または５ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または４ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または３ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または２ｎｍｏｌ／Ｌ以下のＥＣ５０で、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）ＥＲＫ１／２のリン酸化を誘導する。
【0037】
一実施形態において、変異体は、変異体の検出および／または単離を可能にする、少なくとも１つの標識またはタグをさらに含む。
【0038】
一実施形態において、変異体は、半減期延長モジュールに融合またはコンジュゲートされている。
【0039】
一実施形態において、半減期延長モジュールは、ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、ヒアルロン酸、ポリシアル酸）、非構造化（ポリ）ペプチド鎖（例えば、ＰＡＳ、ＸＴＥＮ）、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、血清タンパク質（例えば、アルブミン）、血清タンパク質結合分子（例えば、アルブミン結合ドメイン（ＡＢＤ）、アルブミン結合脂肪酸）、抗体、免疫グロブリン、免疫グロブリンのＦｃ領域／ドメイン、および免疫グロブリン結合ドメインからなる群から選択される。
【0040】
別の態様において、本発明は、上記において定義されるヒトＦＧＦ２１の変異体と、少なくとも１種の他の医薬品有効成分とを含む融合分子に関する。
【0041】
別の態様において、本発明は、上記において定義されるヒトＦＧＦ２１の変異体または上記において定義される融合分子をコードする核酸分子に関する。
【0042】
一実施形態において、核酸分子は、ベクターに含まれているか、またはゲノムに統合されている。
【0043】
別の態様において、本発明は、上記において定義される核酸分子を含有する宿主細胞に関する。
【0044】
別の態様において、本発明は、上記において定義されるヒトＦＧＦ２１の変異体または上記において定義される融合分子を生産する方法であって、上記において定義される宿主細胞を培養すること、および培養培地から変異体または融合分子を単離することを含む、方法に関する。
【0045】
別の態様において、本発明は、上記において定義されるヒトＦＧＦ２１の変異体または上記において定義される融合分子または上記において定義される核酸分子または上記において定義される宿主細胞を、薬学的に許容される担体および／または賦形剤と一緒に含む、医薬組成物に関する。
【0046】
一実施形態において、医薬組成物は、少なくとも１種の他の医薬品有効成分をさらに含む。
【0047】
別の態様において、本発明は、上記において定義されるヒトＦＧＦ２１の変異体と、少なくとも１種の他の医薬品有効成分との組合せに関する。
【0048】
一実施形態において、上記において定義される、融合分子または医薬組成物または組合せに含まれる少なくとも１種の他の医薬品有効成分は、インスリンおよびインシュリン誘導体、ＧＬＰ－１、ＧＬＰ１類似体、およびＧＬＰ－１受容体アゴニスト、ポリマー結合ＧＬＰ－１およびＧＬＰ－１類似体、二重ＧＬＰ－１／ＧＩＰアゴニスト、二重ＧＬＰ－１／グルカゴン受容体アゴニスト、ＰＹＹ３－３６またはその類似体、膵臓ポリペプチドまたはその類似体、グルカゴン受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、ＧＩＰ受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、グレリンアンタゴニストまたはインバースアゴニスト、
キセニンおよびその類似体、（詳細には）前述の受容体（例えば、ＧＬＰ－１受容体、ＧＩＰ受容体、グルカゴン受容体）のうちの１つに結合したペプチド、ＤＤＰ－ＩＶ阻害剤、ＳＧＬＴ－２阻害剤、二重ＳＧＬＴ－２／ＳＧＬＴ－１阻害剤、ビグアニド、チアゾリジンジオン、ＰＰＡＲアゴニスト、ＰＰＡＲモジュレーター、スルホニルウレア、メグリチニド、アルファ－グルコシダーゼ阻害剤、アミリンおよびアミリン類似体、ＧＰＲ１１９アゴニスト、ＧＰＲ４０アゴニスト、ＧＰＲ１２０アゴニスト、ＧＰＲ１４２アゴニスト、ＴＧＲ５アゴニスト、ＡＭＰＫ刺激剤、ＡＭＰＫ活性剤、１１－ベータ－ＨＳＤの阻害剤、グルコキナーゼの活性剤、ＤＧＡＴの阻害剤、プロテインチロシンホスファターゼ１の阻害剤、グルコース－６－ホスファターゼの阻害剤、フルクトース－１，６－ビスホスファターゼの阻害剤、グリコーゲンホスホリラーゼの阻害剤、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼの阻害剤、グリコーゲンシンターゼキナーゼの阻害剤、ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼの阻害剤、ＣＣＲ－２アンタゴニスト、グルコーストランスポーター－４のモジュレーター、ソマトスタチン受容体３アゴニスト、ＨＭＧ－ＣｏＡ－レダクターゼ阻害剤、フィブレート、ニコチン酸およびその誘導体、ニコチン酸受容体１アゴニスト、ＡＣＡＴ阻害剤、コレステロール吸収阻害剤、胆汁酸結合物質、ＩＢＡＴ阻害剤、ＭＴＰ阻害剤、ＰＣＳＫ９のモジュレーター、ＬＤＬ受容体アップレギュレーター（肝臓選択的甲状腺ホルモン受容体ベータアゴニスト）、ＨＤＬ上昇化合物、脂質代謝モジュレーター、ＰＬＡ２阻害剤、ＡｐｏＡ－Ｉエンハンサー、コレステロール合成阻害剤、オメガ－３脂肪酸およびその誘導体、肥満の治療のための活性物質、ＣＢ１受容体アンタゴニスト、ＭＣＨ－１アンタゴニスト、ＭＣ４受容体アゴニストおよび部分的アゴニスト、ＮＰＹ５またはＮＰＹ２アンタゴニスト、ＮＰＹ４アゴニスト、ベータ－３アドレナリン受容体アゴニスト、レプチンまたはレプチン模倣物、５ＨＴ２ｃ受容体アゴニスト、リパーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、Ｈ３アンタゴニスト、ＡｇＲＰ阻害剤、三重モノアミン取り込み阻害剤、ＭｅｔＡＰ２阻害剤、線維芽細胞増殖因子受容体４またはプロヒビチン標的化ペプチド－１の産生に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド、高血圧、慢性心不全、またはアテローム性動脈硬化症に影響を及ぼす薬物、アンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト、二重アンジオテンシン受容体遮断薬（ＡＲＢ）、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ－２）活性剤、レニン阻害剤、プロレニン阻害剤、エンドセリン変換酵素（ＥＣＥ）阻害剤、エンドセリン受容体遮断薬、エンドセリンアンタゴニスト、利尿薬、アルドステロンアンタゴニスト、アルドステロンシンターゼ阻害剤、アルファ－遮断薬、アルファ－２アドレナリン受容体のアンタゴニスト、ベータ－遮断薬、混合アルファ－／ベータ－遮断薬、カルシウムアンタゴニスト／カルシウムチャネル遮断薬（ＣＢＢ）、二重ミネラルコルチコイド／ＣＣＢ、中枢作用性抗高血圧症薬、中性エンドペプチダーゼの阻害剤、アミノペプチダーゼＡ阻害剤、バソペプチド阻害剤、二重バソペプチド阻害剤、ネプリリシン－ＡＣＥ阻害剤、ネプリリシン－ＥＣＥ阻害剤、二重作用性アンジオテンシン（ＡＴ）受容体－ネプリリシン阻害剤、二重ＡＴ１／エンドセリン－１（ＥＴＡ）アンタゴニスト、進行糖化終末産物ブレーカー、遺伝子組換えレナラーゼ、血圧ワクチン、抗ＲＡＡＳワクチン、ＡＴ１－またはＡＴ２－ワクチン、抗高血圧応答を伴う遺伝的多型のモジュレーター、ならびに栓球凝集抑制因子からなる群から選択される。
キセニンおよびその類似体、（詳細には）前述の受容体（例えば、ＧＬＰ－１受容体、ＧＩＰ受容体、グルカゴン受容体）のうちの１つに結合したペプチド、ＤＤＰ－ＩＶ阻害剤、ＳＧＬＴ－２阻害剤、二重ＳＧＬＴ－２／ＳＧＬＴ－１阻害剤、ビグアニド、チアゾリジンジオン、ＰＰＡＲアゴニスト、ＰＰＡＲモジュレーター、スルホニルウレア、メグリチニド、アルファ－グルコシダーゼ阻害剤、アミリンおよびアミリン類似体、ＧＰＲ１１９アゴニスト、ＧＰＲ４０アゴニスト、ＧＰＲ１２０アゴニスト、ＧＰＲ１４２アゴニスト、ＴＧＲ５アゴニスト、ＡＭＰＫ刺激剤、ＡＭＰＫ活性剤、１１－ベータ－ＨＳＤの阻害剤、グルコキナーゼの活性剤、ＤＧＡＴの阻害剤、プロテインチロシンホスファターゼ１の阻害剤、グルコース－６－ホスファターゼの阻害剤、フルクトース－１，６－ビスホスファターゼの阻害剤、グリコーゲンホスホリラーゼの阻害剤、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼの阻害剤、グリコーゲンシンターゼキナーゼの阻害剤、ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼの阻害剤、ＣＣＲ－２アンタゴニスト、グルコーストランスポーター－４のモジュレーター、ソマトスタチン受容体３アゴニスト、ＨＭＧ－ＣｏＡ－レダクターゼ阻害剤、フィブレート、ニコチン酸およびその誘導体、ニコチン酸受容体１アゴニスト、ＡＣＡＴ阻害剤、コレステロール吸収阻害剤、胆汁酸結合物質、ＩＢＡＴ阻害剤、ＭＴＰ阻害剤、ＰＣＳＫ９のモジュレーター、ＬＤＬ受容体アップレギュレーター（肝臓選択的甲状腺ホルモン受容体ベータアゴニスト）、ＨＤＬ上昇化合物、脂質代謝モジュレーター、ＰＬＡ２阻害剤、ＡｐｏＡ－Ｉエンハンサー、コレステロール合成阻害剤、オメガ－３脂肪酸およびその誘導体、肥満の治療のための活性物質、ＣＢ１受容体アンタゴニスト、ＭＣＨ－１アンタゴニスト、ＭＣ４受容体アゴニストおよび部分的アゴニスト、ＮＰＹ５またはＮＰＹ２アンタゴニスト、ＮＰＹ４アゴニスト、ベータ－３アドレナリン受容体アゴニスト、レプチンまたはレプチン模倣物、５ＨＴ２ｃ受容体アゴニスト、リパーゼ阻害剤、血管新生阻害剤、Ｈ３アンタゴニスト、ＡｇＲＰ阻害剤、三重モノアミン取り込み阻害剤、ＭｅｔＡＰ２阻害剤、線維芽細胞増殖因子受容体４またはプロヒビチン標的化ペプチド－１の産生に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド、高血圧、慢性心不全、またはアテローム性動脈硬化症に影響を及ぼす薬物、アンジオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト、二重アンジオテンシン受容体遮断薬（ＡＲＢ）、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ－２）活性剤、レニン阻害剤、プロレニン阻害剤、エンドセリン変換酵素（ＥＣＥ）阻害剤、エンドセリン受容体遮断薬、エンドセリンアンタゴニスト、利尿薬、アルドステロンアンタゴニスト、アルドステロンシンターゼ阻害剤、アルファ－遮断薬、アルファ－２アドレナリン受容体のアンタゴニスト、ベータ－遮断薬、混合アルファ－／ベータ－遮断薬、カルシウムアンタゴニスト／カルシウムチャネル遮断薬（ＣＢＢ）、二重ミネラルコルチコイド／ＣＣＢ、中枢作用性抗高血圧症薬、中性エンドペプチダーゼの阻害剤、アミノペプチダーゼＡ阻害剤、バソペプチド阻害剤、二重バソペプチド阻害剤、ネプリリシン－ＡＣＥ阻害剤、ネプリリシン－ＥＣＥ阻害剤、二重作用性アンジオテンシン（ＡＴ）受容体－ネプリリシン阻害剤、二重ＡＴ１／エンドセリン－１（ＥＴＡ）アンタゴニスト、進行糖化終末産物ブレーカー、遺伝子組換えレナラーゼ、血圧ワクチン、抗ＲＡＡＳワクチン、ＡＴ１－またはＡＴ２－ワクチン、抗高血圧応答を伴う遺伝的多型のモジュレーター、ならびに栓球凝集抑制因子からなる群から選択される。
【0049】
一実施形態において、少なくとも１種の他の医薬品有効成分は、グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）受容体アゴニストである。
【0050】
別の態様において、本発明は、上記において定義されるヒトＦＧＦ２１の変異体または上記において定義される融合分子または上記において定義される核酸分子または上記において定義される宿主細胞または上記において定義される医薬組成物を含むキットに関する。
【0051】
別の態様において、本発明は、医薬としての使用のための、上記において定義されるヒ
トＦＧＦ２１の変異体または上記において定義される融合分子または上記において定義される核酸分子または上記において定義される宿主細胞または上記において定義される医薬組成物に関する。
トＦＧＦ２１の変異体または上記において定義される融合分子または上記において定義される核酸分子または上記において定義される宿主細胞または上記において定義される医薬組成物に関する。
【0052】
別の態様において、本発明は、肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、高血糖症、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される疾患または障害の治療での使用のための、上記において定義されるヒトＦＧＦ２１の変異体または上記において定義される融合分子または上記において定義される核酸分子または上記において定義される宿主細胞または上記において定義される医薬組成物に関する。
【0053】
別の態様において、本発明は、肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、高血糖症、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される疾患または障害の治療のための医薬の製造における、上記において定義されるヒトＦＧＦ２１の変異体または上記において定義される融合分子または上記において定義される核酸分子または上記において定義される宿主細胞または上記において定義される医薬組成物の使用に関する。
【0054】
別の態様において、本発明は、肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、高血糖症、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される疾患または障害を治療する方法であって、上記において定義されるヒトＦＧＦ２１の変異体または上記において定義される融合分子または上記において定義される核酸分子または上記において定義される宿主細胞または上記において定義される医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、上記方法に関する。
【0055】
一実施形態において、疾患または障害は、糖尿病である。
【図面の簡単な説明】
【0056】
【図1-1】配列番号３のＦＧＦ２１およびその代謝物質の質量スペクトルおよびデコンボリューションのデータを示す。（Ａ）配列番号３のアミノ酸の配列［１～１８２］の質量分析スペクトルおよびデコンボリューション；（Ｂ）ヒト血漿中の（ラットおよびマウス血漿中においても見出される）、配列番号３のアミノ酸の配列［１～１７２］の質量分析スペクトルおよびデコンボリューション；室温；３３．６分；Ｃで標識された多荷電質量が１８，４２９Ｄａにデコンボリューションされた；（Ｃ）ヒト血漿中の（ラット血漿中においても見出される）、配列番号３のアミノ酸の配列［１３２～１８２］の質量分析スペクトルおよびデコンボリューション；室温；３０．４分；Ｆで標識された多荷電質量が５，１１３．６７Ｄａにデコンボリューションされた；（Ｄ）ヒト血漿中の、配列番号３における提案されたアミノ酸の配列［１２９～１８２］、［１２５～１７７］、［１２６～１７８］、または［１２４～１７６］の質量分析スペクトルおよびデコンボリューション；室温；３０．８分；Ｅで標識された多荷電質量が５，３７９Ｄａにデコンボリューションされた；（Ｅ）ヒト血漿中の、配列番号３における提案されたアミノ酸の配列［１３６～１８２］の質量分析スペクトルおよびデコンボリューション；室温；３１．３分；Ｂで標識された多荷電質量が４，７３２．４１Ｄａにデコンボリューションされた；（Ｆ）ヒト血漿中の配列番号３における提案されたアミノ酸の配列［５３～１２９］または［２１～９８］の質量分析スペクトルおよびデコンボリューション；室温；３２．５；Ａで標識された多荷電質量が８，５６４．６７Ｄａにデコンボリューションされた。
【図2】ヒト血漿中における成熟ヒトＦＧＦ２１（配列番号２）およびＦＧＦ２１変異体の安定性の分析を示す。タンパク質を３７℃で２４時間、血漿中でインキュベートし、残りのＦＧＦ２１の量を、完全な成熟ＦＧＦ２１を認識するＥＬＩＳＡを使用して測定した。インキュベーションの開始時の量を１００％として設定した。データは、平均＋ＳＤである。対応する配列番号を表３に示す。
【図3-1】Ｉｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎによって測定した、成熟ヒトＦＧＦ２１（配列番号２）または様々なＦＧＦ２１変異体による刺激後の、ヒトＦＧＦＲ１ｃおよびベータ－ｋｌｏｔｈｏを過剰発現するＣＨＯ細胞におけるＥＲＫ１／２－リン酸化の用量－応答曲線を示す（ＡからＷ）。対応する配列番号を表４に示す。
【図4】Ｉｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎによって測定した、成熟ヒトＦＧＦ２１（配列番号２）または様々なＦＧＦ２１変異体による刺激後の、初代ヒト皮下脂肪細胞におけるＥＲＫ１／２－リン酸化の用量－応答曲線を示す（ＡおよびＢ）。対応する配列番号を表５に示す。
【図5】示差走査蛍光分析法（ＤＳＦ）によって分析したヒトＦＧＦ２１（配列番号３）およびＦＧＦ２１変異体の熱安定性の分析を示す。ヒトＦＧＦ２１（配列番号３）および選択したＦＧＦ２１変異体のＴｈｅｒｍｏＦｌｕｏｒ（商標）実験からの例示的な融解曲線を示している。２５℃において正規化した相対蛍光単位（ｒｅｌａｔｉｖｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｕｎｉｔ）が温度（℃）に対してプロットされている。対応する配列番号を表６に示す。
【図6】ヒトＦＧＦ２１のコンピュータおよび実験モデルの構造の詳細を示す。（Ａ）ＦＧＦ１９およびＦＧＦ２３における異なる実験的相同構造に基づく骨格構造として表されたコンピュータモデルの重ね合わせ、白：ＦＧＦ１９の構造に基づきＢｉｏＬｕｍｉｎａｔｅによって作製したモデル（ＰＤＢコード２Ｐ２３）；薄灰色：ＦＧＦ１９の構造に基づきＳｗｉｓｓ－Ｍｏｄｅｌサーバーを使用して作製したモデル（ＰＤＢコード１ＰＷＡ）；暗灰色：ＦＧＦ１９の構造に基づきＳｗｉｓｓ－Ｍｏｄｅｌサーバーを使用して作製したモデル（ＰＤＢコード２Ｐ２３）；黒：ＦＧＦ２３の構造に基づきＳｗｉｓｓ－Ｍｏｄｅｌサーバーを使用して作製したモデル（ＰＤＢコード２Ｐ３９）。特に、残基１５０～１５８の周りのループ領域（囲まれた部分）は、元になった実験データの構造的違いにより、これらのモデルにおいて著しく異なっている。（Ｂ）ＦＧＦ２１ Ｑ５５Ｃ、Ｎ１４９Ｃ（配列番号１５８）のＸ線結晶構造に存在する分子Ａ（淡灰色）および分子Ｂ（暗灰色）の模式図として示された重ね合わせ。コンフォメーションを安定化させ、それにより熱安定性を増加させる、システイン１４９とシステイン５５との間における設計されたジスルフィド結合が強調されている。（Ｃ）分子Ｂにおける設計されたＣ５５～Ｃ１４９ジスルフィド結合の周りの２ｍＦｏ－ｄＦｃ電子密度。輪郭レベルは１σである。Ｃ１４９とＰ１５６との間において、電子密度は不連続であり、これは、重要な障害を示している。
【発明を実施するための形態】
【0057】
本発明を以下において詳細に説明するが、本明細書において説明される特定の方法、プロトコール、および試薬は変わることがあるため、本発明はそれらに限定されるものではないことは理解されるべきである。本明細書において使用する専門用語は、特定の実施形態を説明する目的のみのためのものであり、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定することを意図するものではないということも理解されるべきである。特に明記されない限り、本明細書において使用される全ての技術的および科学的用語は、当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。
【0058】
以下において、本発明のある特定の要素について説明する。これらの要素は、特定の実施形態により列挙されるが、それらは、追加の実施形態を創出するためにあらゆる様式およびあらゆる数において組み合わせることができるということは理解されるべきである。様々に説明される実施例および実施形態は、明確に説明された実施形態のみに本発明を限定すると解釈すべきではない。この説明は、明確に説明される実施形態をいくつもの開示された要素と組み合わせる実施形態も、支持および包含すると理解されるべきである。さらに、本出願における全ての説明された要素のあらゆる順序および組合せは、文脈において明記されない限り、本出願の説明によって開示されるものと解釈すべきである。
【0059】
本明細書において使用される用語は、一般的に、「Ａ ｍｕｌｔｉｌｉｎｇｕａｌ ｇｌｏｓｓａｒｙ ｏｆ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｅｒｍｓ：（ＩＵＰＡＣ
Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ）」，Ｈ．Ｇ．Ｗ．Ｌｅｕｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｂ．Ｎａｇｅｌ，ａｎｄ Ｈ．Ｋｏｌｂｌ編，Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，ＣＨ－４０１０ Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，（１９９５）に記載される通りに定義される。
Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ）」，Ｈ．Ｇ．Ｗ．Ｌｅｕｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｂ．Ｎａｇｅｌ，ａｎｄ Ｈ．Ｋｏｌｂｌ編，Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，ＣＨ－４０１０ Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，（１９９５）に記載される通りに定義される。
【0060】
本発明の実施は、そうでないと明記されない限り、当技術分野における文献において説明される、化学、生化学、細胞生理学、免疫学、遺伝子組換えＤＮＡ技術における従来の方法を用いるであろう（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ）。
【0061】
以下の本明細書および特許請求の範囲全体を通して、文脈上必要とされない限り、言葉「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」およびその変形、例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などは、言明されたメンバー、整数、または工程の包含だけでなく、任意の他のメンバー、整数、もしくは工程、または、メンバー、整数、または工程の群の包含を含意するが、いくつかの実施形態では、そのような他のメンバー、整数、または工程、または、メンバー、整数、もしくは工程の群が除外される場合もある、すなわち、主題が、言明されたメンバー、整数、もしくは工程、またはメンバー、整数、または工程の群の包含からなることも理解されるべきである。本発明を説明する文脈において使用される用語「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」ならびに同様の指示語は（特に特許請求の範囲の文脈において）、本明細書において別段の指示がないか、または文脈において明確に否定されない限り、単数および複数の両方を網羅すると解釈されるできである。本明細書における値の範囲の列挙は、単にその範囲内に属する別々の各値を個別に言及するための簡単な方法として機能する。本明細書において別段の指示がない限り、個々の各値は、それらが本明細書において個別に列挙されるかのように、本明細書に組み入れられる。本明細書において説明される全ての方法は、そうでないことが本明細書において示されていない限り、または文脈によって明確に否定されない限り、任意の適切な順序において実行することができる。本明細書
において提供されるありとあらゆる実施例または例示言語（例えば、「例えば、～など（ｓｕｃｈ ａｓ）」）の使用は、単に本発明をよりよく解説することを意図するものであり、そうでないことが主張されない限り、発明の範囲に制限を課すものではない。明細書におけるいかなる言語も、非請求要素を発明の実施に不可欠なものと指摘していると解釈すべきではない。
において提供されるありとあらゆる実施例または例示言語（例えば、「例えば、～など（ｓｕｃｈ ａｓ）」）の使用は、単に本発明をよりよく解説することを意図するものであり、そうでないことが主張されない限り、発明の範囲に制限を課すものではない。明細書におけるいかなる言語も、非請求要素を発明の実施に不可欠なものと指摘していると解釈すべきではない。
【0062】
いくつかの文献が、本明細書の本文全体を通して引用されている。本明細書において引用された各文献（全ての特許、特許出願、科学的刊行物、製造業者の仕様書、取扱説明書などを含む）は、上記および下記に関わらず、それらを参照することによりその全体を本明細書に組み入れる。本明細書のいかなる記載も、先行発明によるそのような開示に先行する権利がないことの承認として、解釈されるべきではない。
【0063】
用語「ヒト線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）」は、本明細書において使用される場合、配列番号１のアミノ酸配列を有するヒト野生型ＦＧＦ２１（「全長ヒト野生型ＦＧＦ２１」とも呼ばれる）または天然に存在するその変異体を指す。用語「成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１」は、本来のシグナル配列（シグナルペプチドとも呼ばれる）、すなわち、配列番号１のアミノ酸１から２８（Ｍ１からＡ２８）、を欠くヒト野生型ＦＧＦ２１を指し、配列番号２によって表される。別段の指示がない限り、本明細書において開示されるＦＧＦ２１（ポリ）ペプチドにおける特定のアミノ酸残基の番号付けは、配列番号１に従う。
【0064】
用語「天然に存在する」は、生体物質、例えば、核酸分子、（ポリ）ペプチド、宿主細胞などと関連して使用される場合、天然において見出され、人によって操作されていない材料を意味する。
【0065】
Ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ（ＵｎｉＰｒｏｔ、ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇにおいて利用可能なオンラインデータベース）のように一般に公開されているデータベースには、いくつかの天然に存在するヒトＦＧＦ２１の変異体が記載されている。ＵｎｉＰｒｏｔＫＢの受託番号Ｑ９ＮＳＡ１の下、２つのヒトＦＧＦ２１変異体がリストされている：ＦＧＦ２１ Ｇ１４１→Ｓ（ＶＡＲ＿０５５３７５、配列番号１７２）およびＦＧＦ２１ Ｌ１７４→Ｐ（ＶＡＲ＿０４９０６４）。１７４位におけるプロリンの出現は、ＥｘＡＣブラウザ（Ｐ＝７３％対Ｌ＝２７％；Ｔｈｅ Ｅｘｏｍｅ
Ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ；ｅｘａｃ．ｂｒｏａｄｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｏｒｇ／ｖａｒｉａｎｔ／１９－４９２６１３６８－Ｔ－Ｃにおいてオンライン利用可能）およびＡＭＰ（Ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｎｇ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ Ｐａｒｔｎｅｒｓｈｉｐ；ｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓｇｅｎｅｔｉｃｓ．ｏｒｇ／ｖａｒｉａｎｔＩｎｆｏ／ｖａｒｉａｎｔＩｎｆｏ／ｒｓ７３９３２０においてオンライン利用可能）のようなデータベースによれば、ロイシンより一般的である。したがって、Ｐ１７４を有するヒトＦＧＦ２１は、本明細書において、ヒト野生型ＦＧＦ２１と呼ばれ（配列番号１を参照のこと）、その一方で、Ｌ１７４を有するヒトＦＧＦ２１は、天然に存在する変異体（配列番号１７３を参照のこと）として本明細書に含まれる。１７４位における変異は、ＡＭＰによる２型糖尿病の発症に影響を及ぼさない。さらに、Ｌ１７４からＰへの変異は、Ｉｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎによって評価した場合、ＦＧＦ２１のインビトロ活性に影響を及ぼさない（実施例３において説明される）。１７４位にロイシンを有するＧ－ＦＧＦ２１（配列番号１７４）の０．２１ｎｍｏｌ／Ｌに対して、１７４位にプロリンを有するＧ－ＦＧＦ２１（配列番号３）のＥ５０は０．２４ｎｍｏｌ／Ｌである。ＦＧＦ２１変異体Ｇ１４１→Ｓ（ＶＡＲ＿０５５３７５、配列番号１７２）は、０．１％未満の対立遺伝子頻度と非常にまれであり（ｅｘａｃ．ｂｒｏａｄｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｏｒｇ／ｖａｒｉａｎｔ／１９－４９２６１２６８－Ｇ－Ａにおいて利用可能なオンライン）、さらにインビトロにおいて特徴付けられていなかった。
Ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ；ｅｘａｃ．ｂｒｏａｄｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｏｒｇ／ｖａｒｉａｎｔ／１９－４９２６１３６８－Ｔ－Ｃにおいてオンライン利用可能）およびＡＭＰ（Ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｎｇ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ Ｐａｒｔｎｅｒｓｈｉｐ；ｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓｇｅｎｅｔｉｃｓ．ｏｒｇ／ｖａｒｉａｎｔＩｎｆｏ／ｖａｒｉａｎｔＩｎｆｏ／ｒｓ７３９３２０においてオンライン利用可能）のようなデータベースによれば、ロイシンより一般的である。したがって、Ｐ１７４を有するヒトＦＧＦ２１は、本明細書において、ヒト野生型ＦＧＦ２１と呼ばれ（配列番号１を参照のこと）、その一方で、Ｌ１７４を有するヒトＦＧＦ２１は、天然に存在する変異体（配列番号１７３を参照のこと）として本明細書に含まれる。１７４位における変異は、ＡＭＰによる２型糖尿病の発症に影響を及ぼさない。さらに、Ｌ１７４からＰへの変異は、Ｉｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎによって評価した場合、ＦＧＦ２１のインビトロ活性に影響を及ぼさない（実施例３において説明される）。１７４位にロイシンを有するＧ－ＦＧＦ２１（配列番号１７４）の０．２１ｎｍｏｌ／Ｌに対して、１７４位にプロリンを有するＧ－ＦＧＦ２１（配列番号３）のＥ５０は０．２４ｎｍｏｌ／Ｌである。ＦＧＦ２１変異体Ｇ１４１→Ｓ（ＶＡＲ＿０５５３７５、配列番号１７２）は、０．１％未満の対立遺伝子頻度と非常にまれであり（ｅｘａｃ．ｂｒｏａｄｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｏｒｇ／ｖａｒｉａｎｔ／１９－４９２６１２６８－Ｇ－Ａにおいて利用可能なオンライン）、さらにインビトロにおいて特徴付けられていなかった。
【0066】
本発明による「ヒト線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）の変異体」（「ＦＧＦ２１変異体」または「ＦＧＦ２１類似体」とも呼ばれる）は、天然に存在するＦＧＦ２１における（例えば、配列番号１または２の）少なくとも１つのアミノ酸残基を欠失および／または置換することによって、および／または少なくとも１つのアミノ酸残基を追加することによって、ヒト野生型ＦＧＦ２１またはその天然に存在する変異体の構造に形式的に由来する分子構造を有するポリペプチドである。
【0067】
一実施形態において、ヒトＦＧＦ２１の変異体は、ヒトＦＧＦ２１の生物学的に活性な変異体である。用語「ヒトＦＧＦ２１の生物学的に活性な変異体」は、ヒト野生型ＦＧＦ２１ポリペプチドの活性、例えば、血中グルコース、インスリン、トリグリセリド、またはコレステロールを低下させる能力、体重を低減させる能力、および／またはグルコース耐性、エネルギー消費、またはインスリン感度を向上させる能力などを有する任意の変異体を指す。それでもなお、ヒト野生型ＦＧＦ２１ポリペプチドに対していくらか減少したレベルのＦＧＦ２１活性を有する変異体も、ヒトＦＧＦ２１の生物学的に活性な変異体と見なすことができる。
【0068】
いくつかの実施形態において、ヒト野生型ＦＧＦ２１アミノ酸配列（配列番号１または２のそれ）の特定のアミノ酸は、別のアミノ酸で置換される。用語「別のアミノ酸」は、本明細書において使用される場合、典型的には、ヒト野生型ＦＧＦ２１（例えば、配列番号１または２）と比較した場合に、変異体の安定性、例えば、タンパク質分解安定性および／または熱安定性などの増加に貢献するアミノ酸に関する。これは、例えば、置換されたアミノ酸においてかまたはその近くでのプロテアーゼ切断の防止によって、または１つまたはそれ以上の追加のジスルフィド架橋の形成によって達成される。
【0069】
用語「アミノ酸」または「アミノ酸残基」は、本明細書において使用される場合、天然に存在するアミノ酸、非天然アミノ酸、アミノ酸類似体、および天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能するアミノ酸模倣物、それらの構造がそのような立体異性形態を許容する場合にはそれらのＤおよびＬ立体異性体の全てを指す。アミノ酸は、本明細書において、それらの名前もしくは一般的に知られるそれらの３文字記号のどちらかにおいて、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ生化学命名法委員会（ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ）によって推奨される１文字記号によって呼ばれる。
【0070】
アミノ酸に関連して使用される場合、用語「天然に存在する」は、慣習的な２０のアミノ酸（すなわち、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、フェニルアラニン（Ｆ）、グリシン（Ｇ）、ヒスチジン（Ｈ）、イソロイシン（Ｉ）、リジン（Ｋ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、アスパラギン（Ｎ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）、およびチロシン（Ｙ））、ならびにセレノシステイン、ピロリシン（ＰＹＬ）、およびピロリン－カルボキシリシン（ＰＣＬ）を意味する。
【0071】
用語「非天然アミノ酸」は、本明細書において使用される場合、自然にはコードされないかまたはどの有機体の遺伝子コードにも見出されないアミノ酸を意味することを指す。それらは、例えば、純粋に合成された化合物である場合がある。非天然アミノ酸の例としては、これらに限定されるわけではないが、ヒドロキシプロリン、ガンマ－カルボキシグルタメート、Ｏ－ホスホセリン、アゼチジンカルボン酸、２－アミノアジピン酸、３－アミノアジピン酸、ベータ－アラニン、アミノプロピオン酸、２－アミノ酪酸、４－アミノ酪酸、６－アミノカプロン酸、２－アミノヘプタン酸、２－アミノイソ酪酸、３－アミノ
イソ酪酸、２－アミノピメリン酸、第三級ブチルグリシン、２，４－ジアミノイソ酪酸、デスモシン、２，２’－ジアミノピメリン酸、２，３－ジアミノプロピオン酸、Ｎ－エチルグリシン、Ｎ－メチルグリシン、Ｎ－エチルアスパラギン、ホモプロリン、ヒドロキシリシン、アロ－ヒドロキシリシン、３－ヒドロキシプロリン、４－ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロ－イソロイシン、Ｎ－メチルアラニン、Ｎ－メチルグリシン、Ｎ－メチルイソロイシン、Ｎ－メチルペンチルグリシン、Ｎ－メチルバリン、ナフトアラニン、ノルバリン、ノルロイシン、オルニチン、Ｄ－オルニチン、Ｄ－アルギニン、ｐ－アミノフェニルアラニン、ペンチルグリシン、ピペコリン酸、およびチオプロリンが挙げられる。
イソ酪酸、２－アミノピメリン酸、第三級ブチルグリシン、２，４－ジアミノイソ酪酸、デスモシン、２，２’－ジアミノピメリン酸、２，３－ジアミノプロピオン酸、Ｎ－エチルグリシン、Ｎ－メチルグリシン、Ｎ－エチルアスパラギン、ホモプロリン、ヒドロキシリシン、アロ－ヒドロキシリシン、３－ヒドロキシプロリン、４－ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロ－イソロイシン、Ｎ－メチルアラニン、Ｎ－メチルグリシン、Ｎ－メチルイソロイシン、Ｎ－メチルペンチルグリシン、Ｎ－メチルバリン、ナフトアラニン、ノルバリン、ノルロイシン、オルニチン、Ｄ－オルニチン、Ｄ－アルギニン、ｐ－アミノフェニルアラニン、ペンチルグリシン、ピペコリン酸、およびチオプロリンが挙げられる。
【0072】
用語「アミノ酸類似体」は、本明細書において使用される場合、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的化学構造を有する化合物を指す。アミノ酸類似体は、可逆的もしくは非可逆的に化学的に遮断されるか、またはそれらのＣ末端カルボキシ基、それらのＮ末端アミノ基、および／またはそれらの側鎖の官能基が化学的に修飾された、天然および非天然アミノ酸を含む。そのような類似体としては、これらに限定されるわけではないが、メチオニンスルホキシド、メチオニンスルホン、Ｓ－（カルボキシメチル）－システイン、Ｓ－（カルボキシメチル）－システインスルホキシド、Ｓ－（カルボキシメチル）－システインスルホン、アスパラギン酸－（ベータメチルエステル）、Ｎ－エチルグリシン、アラニンカルボキサミド、ホモセリン、ノルロイシン、およびメチオニンメチルスルホニウムが挙げられる。
【0073】
用語「アミノ酸模倣物」は、本明細書において使用される場合、アミノ酸の一般的化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能する化学化合物を指す。
【0074】
用語「ペプチド」は、本明細書において使用される場合、ペプチド結合によって供給結合的に連結された、例えば、２以上、または３以上、または４以上、または６以上、または８以上、または９以上、または１０以上、または１３以上、または１６以上、または２１以上のアミノ酸を含む、任意の長さのアミノ酸のポリマー形態を指す。用語「ポリペプチド」は、大きなペプチド、例えば、１００を超えるアミノ酸残基を有するペプチドを指す。用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、本明細書において、互換的に使用される。
【0075】
いくつかの実施形態において、変異体は、そのＮ末端に、少なくとも１つの追加のアミノ酸を含む。一実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸は、プロリンを除く天然に存在するアミノ酸、非天然アミノ酸、アミノ酸類似体、およびアミノ酸模倣物から選択される。一実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸は、Ｇ、Ａ、Ｎ、およびＣからなる群から選択される。特定の実施形態において、少なくとも１つの追加のアミノ酸は、Ｇである。
【0076】
いくつかの実施形態において、本発明による変異体のアミノ酸配列は、配列番号１から３、１７２、１７３、および１７４のうちの１つ、例えば、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）、に対して少なくとも９０％、または少なくとも９１％、または少なくとも９２％、または少なくとも９３％、または少なくとも９４％、または少なくとも９５％、または少なくとも９６％、または少なくとも９７％、または少なくとも９８％の配列同一性を有する。
【0077】
２つのアミノ酸配列間の「配列同一性」は、配列間において同一であるアミノ酸の割合を示す。比較のための配列の最適化アラインメントは、手作業以外に、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ、１９８１、Ａｄｓ Ａｐｐ．Ｍａｔｈ．２、４８２の局所的相同性ア
ルゴリズムによって、ＮｅｄｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ、１９７０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８、４４３の局所的相同性アルゴリズムによって、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５、２４４４の類似検索方法によって、またはこれらのアルゴリズムを使用するコンピュータプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．におけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、およびＴＦＡＳＴＡ）によって、生成され得る。
ルゴリズムによって、ＮｅｄｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ、１９７０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８、４４３の局所的相同性アルゴリズムによって、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５、２４４４の類似検索方法によって、またはこれらのアルゴリズムを使用するコンピュータプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．におけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、およびＴＦＡＳＴＡ）によって、生成され得る。
【0078】
本発明において取り上げたＦＧＦ２１変異体は、典型的には、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）と比べた場合、ヒトおよび／またはマウスの血漿中での増加したタンパク分解安定性を有する。
【0079】
用語「タンパク質分解安定性」は、プロテアーゼによって触媒されるタンパク質分解に耐える、（ポリ）ペプチドの能力を指す。そのようなプロテアーゼの例は、セリンプロテアーゼ、トレオニンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、アスパラギン酸プロテアーゼ、および／またはグルタミン酸プロテアーゼである。セリンプロテアーゼの例は、トリプシン、キモトリプシン、プラスミン、トロンビン、グランザイム、および／またはカリクレインである。システインプロテアーゼの例は、カテプシンＫ、カスパーゼおよび／またはカルパインである。ＥＣ番号付けに従って、そのようなプロテアーゼは、例えば、酵素活性により、セリンカールボキシペプチダーゼ（ＥＣ３．４．１６）、セリンエンドペプチダーゼ（ＥＣ３．４．２１）、トレオニンエンドペプチダーゼ（ＥＣ３．４．２５）、システインカルボキシペプチダーゼ（ＥＣ３．４．１８）、システインエンドペプチダーゼ（ＥＣ３．４．２２）、またはアスパラギン酸エンドペプチダーゼ（ＥＣ３．４．２３）として分類される。用語「タンパク質分解安定性」は、インビトロまたはインビボでのタンパク質分解安定性を指す。所定の（ポリ）ペプチドのタンパク質分解安定性を測定するための手段および方法は、当業者に公知である。一実施形態において、タンパク質分解安定性は、例えば、本質的に実施例２において説明されるように、サンドイッチイムノアッセイによって測定される。
【0080】
用語「プロテアーゼ耐性ペプチドリンカー」は、本明細書において使用される場合、プロテアーゼ、例えば、上記において説明されるようなプロテアーゼなど、によって触媒されるタンパク質分解に対して低感度を有するかまたは耐性を有するペプチドリンカーを指す。そのようなリンカーは、１から２０、または１から１５、または１から１２、または１から１０の長さのアミノ酸を有する。いくつかの実施形態において、リンカーは、最小２つのアミノ酸（例えば、ＧＡ、ＧＹ、ＨＨ、ＧＥ、またはＨＥ）からなる。特定の実施形態において、プロテアーゼ耐性ペプチドリンカーは、配列番号１６１、配列番号１６２、配列番号１６３、配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、または配列番号１６８のペプチドリンカーである。
【0081】
本発明において取り上げたＦＧＦ２１変異体は、典型的には、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）と比べた場合、増加した熱安定性を有する。
【0082】
用語「熱安定性」は、高温、例えば、４０℃超、でのその化学的または物理的構造における不可逆的変化に抵抗する、（ポリ）ペプチドの能力を指す。特定の実施形態において、増加した熱安定性は、変異体における増加した溶融温度（ＴＭ）を指す。所定の（ポリ）ペプチドの熱安定性を測定するための手段および方法は、当業者に公知である。一実施形態において、熱安定性（例えば、ＴＭ）は、生理的緩衝液中、例えば、ＰＢＳなどにおいて測定される。一実施形態において、熱安定性（例えば、ＴＭ）は、例えば、本質的に実施例５において説明されるように、サーマルシフトアッセイによって測定される。
【0083】
一実施形態において、変異体の溶融温度（ＴＭ）は、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）と比べた場合、少なくとも２℃、少なくとも４℃、少なくとも６℃、少なくとも８℃、少なくとも１０℃、少なくとも１２℃、少なくとも１４℃、少なくとも１６℃、少なくとも１８℃、または少なくとも２０℃高められる。一実施形態において、ＴＭは、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）と比べた場合、少なくとも１８℃、例えば、１８℃から３０℃の間、または１８℃から２５℃の間など、高められる。
【0084】
ＦＧＦ２１変異体の生物学的機能または活性は、通常、当業者に一般的に公知であるＦＧＦ２１活性アッセイにおいて、測定および／またはヒト野生型ＦＧＦ２１、例えば、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）などと比較される。ＦＧＦ２１活性アッセイは、例えば、Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖ Ａ．ら（２００５）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ
１１５：１６２７～１６３５頁に記載されるような「グルコース取り込みアッセイ（ｇｌｕｃｏｓｅ ｕｐｔａｋｅ ａｓｓａｙ）」である。あるいは、細胞アッセイ、例えば、Ｉｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ（ＩＣＷ）アッセイのような自己リン酸化アッセイを使用して、ＦＧＦ受容体：ＫＬＢ複合体のＦＧＦ２１受容体を活性化するための、または下流細胞内シグナル伝達を刺激するための、ＦＧＦ２１変異体の効能を測定することができる。
１１５：１６２７～１６３５頁に記載されるような「グルコース取り込みアッセイ（ｇｌｕｃｏｓｅ ｕｐｔａｋｅ ａｓｓａｙ）」である。あるいは、細胞アッセイ、例えば、Ｉｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ（ＩＣＷ）アッセイのような自己リン酸化アッセイを使用して、ＦＧＦ受容体：ＫＬＢ複合体のＦＧＦ２１受容体を活性化するための、または下流細胞内シグナル伝達を刺激するための、ＦＧＦ２１変異体の効能を測定することができる。
【0085】
用語「Ｉｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ（ＩＣＷ）アッセイ」は、本明細書において使用される場合、免疫細胞化学的アッセイ、より詳しくは、通常はマイクロプレート（例えば、９６ウェル形式または３８４ウェル形式）において実施される、定量的免疫蛍光アッセイを指す。それは、ウェスタンブロットの特異性を、ＥＬＩＳＡの再現性および処理能力と組み合わせるものである（例えば、Ａｇｕｉｌａｒ Ｈ．Ｎ．ら（２０１０）ＰＬｏＳ ＯＮＥ ５（４）：ｅ９９６５を参照されたい）。適切なＩＣＷアッセイシステムは市販されている（例えば、ＬＩ－ＣＯＲ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、米国）。一実施形態において、ＩＣＷアッセイは、本質的に実施例３または４において説明されるように実施される。
【0086】
典型的には、ＦＧＦ２１変異体は、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）ＥＲＫ１／２のリン酸化を誘導する。一実施形態において、変異体は、例えばＩｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ（ＩＣＷ）アッセイにおいて決定した場合、１００ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または９０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または８０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または７０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または６０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または５０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または４０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または３０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または２０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または１５ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または１２ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または１１ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または１０ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または９ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または８ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または７ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または６ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または５ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または４ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または３ｎｍｏｌ／Ｌ以下、または２ｎｍｏｌ／Ｌ以下のＥＣ５０での、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）ＥＲＫ１／２のリン酸化を誘導する。
【0087】
「変異体の検出および／または単離を可能にする標識またはタグ」は、これらの目的のために、当技術分野において公知の任意の標識／タグを含むことを意味する。例示的タグとしては、アフィニティータグ、例えば、キチン結合タンパク質（ＣＢＰ）、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、およびＨｉｓタグ、例えば、ヒスチジンリッチな配列（例えば、配列番号５または６）またはポリ（Ｈｉｓ）（例えば、Ｈｉｓ６）など；可溶化タグ、例えば、チオレドキシン（ＴＲＸ）およびポリ（ＮＡＮＰ）など；クロマトグラフィータグ、例えば、ＦＬＡＧタグなど；エピトープタグ、例えば、Ｖ５タグ、ｍｙｃタグ、およびＨＡタグなど；ならびに蛍光ま
たは発光標識またはタグ、例えば、蛍光タンパク質（例えば、ＧＦＰ、ＹＦＰ、ＲＦＰなど）、蛍光染料、およびルシフェラーゼなどが挙げられる。
たは発光標識またはタグ、例えば、蛍光タンパク質（例えば、ＧＦＰ、ＹＦＰ、ＲＦＰなど）、蛍光染料、およびルシフェラーゼなどが挙げられる。
【0088】
（ポリ）ペプチド標識またはタグのアミノ酸配列は、変異体のアミノ酸配列内の任意の位置に導入してもよく、例えば、コードされたタンパク質構造内においてループ形状を取ってもよく、または、Ｎ末端またはＣ末端に融合させることもできる。一実施形態において、標識またはタグは、Ｎ末端に融合される。標識またはタグには、さらに、変異体からの標識またはタグの除去を可能にする切断部位（例えば、ＴＥＶプロテアーゼ切断部位）を含有することもできる。同様に、非ペプチド標識またはタグ、例えば、蛍光染料などを、任意の好適な部位において変異体にコンジュゲートさせることもできる。
【0089】
本明細書において取り上げたＦＧＦ２１変異体はまた、Ｎ末端分泌シグナルなど、分子の分泌を促進するアミノ酸配列も含ませることができる。いくつかの実施形態において、分泌シグナルは、十分な分泌経路の通過および／または細胞外環境への分泌を可能にするシグナル配列である。いくつかの実施形態において、分泌シグナル配列は、切断可能であり、変異体から取り除かれる。一実施形態において、シグナル配列は、ヒトＦＧＦ２１の天然のシグナル配列とは異なる。分泌シグナル配列は、変異体を産生する細胞または有機体での使用に対して好適である。一実施形態において、分泌シグナル配列は、配列番号４のアミノ酸配列を含むかまたはそのようなアミノ酸配列からなる。
【0090】
本発明において取り上げたＦＧＦ２１変異体には、例えば、特異的な細胞タイプまたは組織に対する選択性を強化するのに役立つ結合ドメインをさらに含むことができる。これは、例えば、前記の細胞タイプまたは組織の表面において発現する特異的抗原に結合する結合ドメインを提供することなどによって達成することができる。
【0091】
ＦＧＦ２１変異体はさらに、半減期延長モジュールに融合またはコンジュゲートされていてもよい。「半減期」は、例えば、インビボにおいて、分子の活性、量、または数の半分を排除するのに必要な期間に関する。そのようなモジュールは、当業者に公知であり、そのようなモジュールとしては、例えば、ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、ヒアルロン酸、ポリシアル酸）、非構造化（ポリ）ペプチド鎖、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、血清タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＡＳ）のようなアルブミン）、血清タンパク質結合分子（例えば、アルブミン結合ドメイン（ＡＢＤ）、アルブミン結合脂肪酸）、抗体、免疫グロブリン、免疫グロブリンのＦｃ領域／ドメイン、および免疫グロブリン結合ドメインが挙げられる。
【0092】
用語「非構造化（ポリ）ペプチド鎖」は、本明細書において使用される場合、固定された、または秩序立った三次元構造を持たない、典型的には親水性である（ポリ）ペプチド鎖を指す。融合したペプチドおよびタンパク質の（インビボでの）半減期を延長する非構造化（ポリ）ペプチド鎖は、当業者に公知であり、例えば、ＸＴＥＮ（Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒ Ｖ．ら（２００９）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２７（１２）：１１８６～９０頁）およびＰＡＳ配列 （Ｓｃｈｌａｐｓｃｈｙ Ｍ．ら（２０１３）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２６（８）：４８９～５０１頁）が挙げられる。
【0093】
用語「融合した」は、本明細書において使用される場合、特に、例えば、遺伝子組換えＤＮＡ技術などによる、遺伝子融合を指す。（ポリ）ペプチド半減期延長モジュールのアミノ酸配列は、変異体のアミノ酸配列内の任意の位置に導入することができ、例えば、コードされたタンパク質構造内においてループ形状を取ってもよく、または、Ｎ末端もしくはＣ末端に融合させることもできる。
【0094】
用語「にコンジュゲートさせる」は、本明細書において使用される場合、特に、結果として（ポリ）ペプチドと別の分子との間、例えば、変異体および半減期延長モジュールなどとの間において安定な共有結合を生じる、化学的および／または酵素的コンジュゲーションを指す。そのようなコンジュゲーションは、（ポリ）ペプチドのＮ末端もしくはＣ末端または特定の側鎖において、例えば、リジン、システイン、チロシン、または非天然アミノ酸残基において、生じてもよい。
【0095】
用語「融合分子」は、一般的に、２つ以上の異なる分子（例えば、タンパク質および／またはペプチド）を連結、特に共有結合させ、結果として元の各分子に由来する機能特性を有する単一の分子を生じさせることよって作り出された分子を指す。タンパク質および／またはペプチドの場合、融合分子は、「融合タンパク質」と呼ばれる。融合分子は、遺伝子融合によって（例えば、遺伝子組換えＤＮＡ技術によって）、または化学的および／または酵素的コンジュゲーションによって生じさせることができる。２つ以上の異なる分子は、好適なリンカー分子、例えば、ペプチドリンカーまたは非ペプチドポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などによって連結させてもよい。ペプチドリンカーは、特異的プロテアーゼ切断部位をさらに含み得る。
【0096】
本発明によれば、融合分子は、ＦＧＦ２１変異体に加えて、少なくとも１つの他の医薬品有効成分を含む。
【0097】
用語「医薬品有効成分」（ＡＰＩ）は、本明細書において使用される場合、いくつらかの薬理効果を提供し、例えば、本明細書において定義される疾患または障害などの状態を治療または予防するために使用される、任意の薬学的に活性な化学的または生物学的化合物ならびにそれらの任意の薬学的に許容される塩およびそれらの任意の混合物を含む。例示的な薬学的に許容される塩としては、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、臭化水素酸、マレイン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、クエン酸、酒石酸、パモン酸、ラウリン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸、ミリスチン酸、ラウリル硫酸、ナフタリンスルホン酸、リノール酸、リノレン酸などが挙げられる。本明細書において使用される場合、用語「医薬品有効成分」、「活性剤」、「有効成分」、「活性物質」、「治療的に活性な化合物」、および「薬物」は、同義語であることが意図され、すなわち、同一の意味を有する。
【0098】
本発明により、医薬品有効成分は、場合により、以下から選択される：
－ Ｒｏｔｅ Ｌｉｓｔｅ ２０１４において言及される全ての薬物、例えば、Ｒｏｔｅ Ｌｉｓｔｅ ２０１４、ｃｈａｐｔｅｒ １２において言及される全ての抗糖尿病薬、Ｒｏｔｅ Ｌｉｓｔｅ ２０１４、ｃｈａｐｔｅｒ ０６において言及される全ての体重減量剤または食欲抑制剤、Ｒｏｔｅ Ｌｉｓｔｅ ２０１４、ｃｈａｐｔｅｒ ５８において言及される全ての脂質低下剤、Ｒｏｔｅ Ｌｉｓｔｅ ２０１４ ｃｈａｐｔｅｒ
１７において言及される全ての抗高血圧症薬、Ｒｏｔｅ Ｌｉｓｔｅにおいて言及される全ての腎臓保護薬（ｎｅｐｈｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）、またはＲｏｔｅ Ｌｉｓｔｅ ２０１４ｃｈａｐｔｅｒ ３６において言及される全ての利尿薬など；
－ インスリンおよびインスリン誘導体、例えば：インスリングラルギン（例えば、Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））、１００Ｕ／ｍＬ超に濃縮されたインスリングラルギン、例えば、２７０～３３０Ｕ／ｍＬのインスリングラルギンまたは３００Ｕ／ｍＬのインスリングラルギン（ＥＰ２３８７９８９において開示される）、インスリングルリシン（例えば、Ａｐｉｄｒａ（登録商標））、インスリンデテミル（例えば、Ｌｅｖｅｍｉｒ（登録商標））、インスリンリスプロ（例えば、Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）、Ｌｉｐｒｏｌｏｇ（登録商標））、インスリンデグルデク（例えば、ＤｅｇｌｕｄｅｃＰｌｕｓ（登録商標）、ＩｄｅｇＬｉｒａ（ＮＮ９０６８））、インスリンアスパルトおよびアスパルト製剤（例えば、ＮｏｖｏＬｏｇ（登録商標））、基礎インスリンおよび類似体（例えば、ＬＹ２６０５５４１、ＬＹ２９６３０１６、ＮＮ１４３６）、ペグ化インスリンリスプロ（例
えば、ＬＹ－２７５５８５）、長時間作用型インスリン（例えば、ＮＮ１４３６、Ｉｎｓｕｍｅｒａ（ＰＥ０１３９）、ＡＢ－１０１、ＡＢ－１０２、Ｓｅｎｓｕｌｉｎ ＬＬＣ）、中間時間作用型インスリン（例えば、Ｈｕｍｕｌｉｎ（登録商標）Ｎ、Ｎｏｖｏｌｉｎ（登録商標）Ｎ）、速効性および短時間作用型インスリン（例えば、Ｈｕｍｕｌｉｎ（登録商標）Ｒ、Ｎｏｖｏｌｉｎ（登録商標）Ｒ、Ｌｉｎｊｅｔａ（登録商標）（ＶＩＡｊｅｃｔ（登録商標））、ＰＨ２０インスリン、ＮＮ１２１８、ＨｉｎｓＢｅｔ（登録商標））、予備混合インスリン、ＳｕｌｉＸｅｎ（登録商標）、ＮＮ１０４５、インスリン＋Ｓｙｍｌｉｎ（登録商標）、ＰＥ－０１３９、ＡＣＰ－００２ヒドロゲルインスリン、および経口、吸入可能、経皮、および口腔、または舌下インスリン（例えば、Ｅｘｕｂｅｒａ（登録商標）、Ｎａｓｕｌｉｎ（登録商標）、Ａｆｒｅｚｚａ（登録商標）、インスリントレゴピル（ｔｒｅｇｏｐｉｌ）、ＴＰＭ－０２インスリン、Ｃａｐｓｕｌｉｎ（登録商標）、Ｏｒａｌ－ｌｙｎ（登録商標）、Ｃｏｂａｌａｍｉｎ（登録商標）、経口インスリン、ＯＲＭＤ－０８０１、Ｏｓｈａｄｉ経口インスリン、ＮＮ１９５３、ＮＮ１９５４、ＮＮ１９５６、ＶＩＡｔａｂ（登録商標））。二官能性リンカーによってアルブミンまたは他のタンパク質に結合したこれらのインスリンの誘導体も好適である；
－ グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）、ＧＬＰ－１類似体、およびＧＬＰ－１受容体アゴニスト、例えば：ＧＬＰ－１（７～３７）、ＧＬＰ－１（７～３６）アミド、リキシセナチド（例えば、Ｌｙｘｕｍｉａ（登録商標））、エキセナチド（例えば、エキセンディン－４、ｒエキセンディン－４、Ｂｙｅｔｔａ（登録商標）、Ｂｙｄｕｒｅｏｎ（登録商標）、エキセナチドＮｅｘＰ）、エキセナチド－ＬＡＲ、リラグルチド（例えば、Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））、セマグルチド、タスポグルチド、アルビグルチド、デュラグルチド、アルブゴン、オキシントモジュリン、ゲニプロシド、ＡＣＰ－００３、ＣＪＣ－１１３１、ＣＪＣ－１１３４－ＰＣ、ＧＳＫ－２３７４６９７、ＰＢ－１０２３、ＴＴＰ－０５４、ラングレナチド（ＨＭ－１１２６０Ｃ）、ＣＭ－３、ＧＬＰ－１Ｅｌｉｇｅｎ、ＡＢ－２０１、ＯＲＭＤ－０９０１、ＮＮ９９２４、ＮＮ９９２６、ＮＮ９９２７、Ｎｏｄｅｘｅｎ、Ｖｉａｄｏｒ－ＧＬＰ－１、ＣＶＸ－０９６、ＺＹＯＧ－１、ＺＹＤ－１、ＺＰ－３０２２、ＣＡＭ－２０３６、ＤＡ－３０９１、ＤＡ－１５８６４、ＡＲＩ－２６５１、ＡＲＩ－２２５５、エキセナチド－ＸＴＥＮ（ＶＲＳ－８５９）、エキセナチド－ＸＴＥＮ＋グルカゴン－ＸＴＥＮ（ＶＲＳ－８５９＋ＡＭＸ－８０８）、およびポリマー結合ＧＬＰ－１およびＧＬＰ－１類似体；
－ 二重ＧＬＰ－１／ＧＩＰアゴニスト（例えば、ＲＧ－７６９７（ＭＡＲ－７０１）、ＭＡＲ－７０９、ＢＨＭ０８１、ＢＨＭ０８９、ＢＨＭ０９８）；二重ＧＬＰ－１／グルカゴン受容体アゴニスト（例えばＢＨＭ－０３４、ＯＡＰ－１８９（ＰＦ－０５２１２３８９、ＴＫＳ－１２２５）、ＴＴ－４０１／４０２、ＺＰ２９２９、ＬＡＰＳ－ＨＭＯＸＭ２５、ＭＯＤ－６０３０）；
－ 二重ＧＬＰ－１／ガストリンアゴニスト（例えば、ＺＰ－３０２２）；
－ 胃腸ペプチド、例えば、ペプチドＹＹ３－３６（ＰＹＹ３－３６）またはその類似体および膵臓ポリペプチド（ＰＰ）またはその類似体；
－ グルカゴン受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、グルコース依存性インスリン分泌性ポリペプチド（ＧＩＰ）受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、グレリンアンタゴニストまたはインバースアゴニスト、キセニンおよびその類似体；
－ ジペプチジルペプチダーゼ－ＩＶ（ＤＰＰ－４）阻害剤、例えば：アログリプチン（例えば、Ｎｅｓｉｎａ（登録商標）、Ｋａｚａｎｏ（登録商標））、リナグリプチン（例えば、Ｏｎｄｅｒｏ（登録商標）、Ｔｒａｊｅｎｔａ（登録商標）、Ｔｒａｄｊｅｎｔａ（登録商標）、Ｔｒａｙｅｎｔａ（登録商標））、サキサグリプチン（例えば、Ｏｎｇｌｙｚａ（登録商標）、Ｋｏｍｂｏｇｌｙｚｅ ＸＲ（登録商標））、シタグリプチン（例えば、Ｊａｎｕｖｉａ（登録商標）、Ｘｅｌｅｖｉａ（登録商標）、Ｔｅｓａｖｅｌ（登録商標）、Ｊａｎｕｍｅｔ（登録商標）、Ｖｅｌｍｅｔｉａ（登録商標）、Ｊｕｖｉｓｙｎｃ（登録商標）、Ｊａｎｕｍｅｔ ＸＲ（登録商標））、アナグリプチン、テネリグリプチン（例えば、Ｔｅｎｅｌｉａ（登録商標））、トレラグリプチン、ビルダグリプチ
ン（例えば、Ｇａｌｖｕｓ（登録商標）、Ｇａｌｖｕｍｅｔ（登録商標））、ゲミグリプチン、オマリグリプチン、エボグリプチン、デュトグリプチン、ＤＡ－１２２９、ＭＫ－３１０２、ＫＭ－２２３、ＫＲＰ－１０４、ＰＢＬ－１４２７、ピノキサシンヒドロクロリド、およびＡｒｉ－２２４３；
－ ナトリウム依存性グルコーストランスポーター２（ＳＧＬＴ－２）阻害剤、例えば：カナグリフロジン、ダパグリフロジン、レモグリフロジン、エタボン酸レモグリフロジン、セルグリフロジン、エンパグリフロジン、イプラグリフロジン、トホグリフロジン、ルセオグリフロジン、エルツグリフロジン、ＥＧＴ－０００１４４２、ＬＩＫ－０６６、ＳＢＭ－ＴＦＣ－０３９、およびＫＧＡ－３２３５（ＤＳＰ－３２３５）；
－ ＳＧＬＴ－２およびＳＧＬＴ－１の二重阻害剤（例えば、ＬＸ－４２１１、ＬＩＫ０６６）。
－ 肥満防止薬、例えば、回腸型胆汁酸トランスポーター（ＩＢＡＴ）阻害剤（例えば、ＧＳＫ－１６１４２３５＋ＧＳＫ－２３３０６７２）と組み合わせたＳＧＬＴ－１阻害剤（例えばＬＸ－２７６１、ＫＧＡ－３２３５）またはＳＧＬＴ－１阻害剤；
－ ビグアニド（例えば、メトホルミン、ブホルミン、フェンホルミン）；
－ チアゾリジンジオン（例えば、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン）、グリタゾン類似体（例えば、ロベグリタゾン）；
－ ペルオキシソーム増殖活性化受容体（ＰＰＡＲ－）（アルファ、ガンマ、またはアルファ／ガンマ）アゴニストまたはモジュレーター（例えば、サログリタザル（例えば、Ｌｉｐａｇｌｙｎ（登録商標））、ＧＦＴ－５０５）、またはＰＰＡＲガンマ部分アゴニスト（例えば、Ｉｎｔ－１３１）；
－ スルホニル尿素（例えば、トルブタミド、グリベンクラミド、グリメピリド、Ａｍａｒｙｌ（登録商標）、グリピザイド）およびメグリチニド（例えば、ナテグリニド、レパグリニド、ミチグリニド）；
－ アルファ－グルコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボース、ミグリトール、ボグリボース）；
－ アミリンおよびアミリン類似体（例えば、プラムリンチド、Ｓｙｍｌｉｎ（登録商標））；
－ Ｇタンパク質結合受容体１１９（ＧＰＲ１１９）アゴニスト（例えば、ＧＳＫ－１２９２２６３、ＰＳＮ－８２１、ＭＢＸ－２９８２、ＡＰＤ－５９７、ＡＲＲＹ－９８１、ＺＹＧ－１９、ＤＳ－８５００、ＨＭ－４７０００、ＹＨ－Ｃｈｅｍ１）；
－ ＧＰＲ４０アゴニスト（例えば、ＴＵＧ－４２４、Ｐ－１７３６、Ｐ－１１１８７、ＪＴＴ－８５１、ＧＷ９５０８、ＣＮＸ－０１１－６７、ＡＭ－１６３８、ＡＭ－５２６２）；
－ ＧＰＲ１２０アゴニストおよびＧＰＲ１４２アゴニスト；
－ 全身性または低吸収性ＴＧＲ５（ＧＰＢＡＲ１＝Ｇタンパク質結合胆汁酸受容体１）アゴニスト（例えば、ＩＮＴ－７７７、ＸＬ－４７５、ＳＢ７５６０５０）；
－ 糖尿病免疫療法、例えば：経口Ｃ－Ｃケモカインレセプタータイプ２（ＣＣＲ－２）アンタゴニスト（例えば、ＣＣＸ－１４０、ＪＮＪ－４１４４３５３２）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ－１β）アンタゴニスト（例えばＡＣ－２０１）、または経口モノクローナル抗体（ＭｏＡ）（例えば、メタゾラミド、ＶＶＰ８０８、ＰＡＺ－３２０、Ｐ－１７３６、ＰＦ－０５１７５１５７、ＰＦ－０４９３７３１９）；
－ メタボリック症候群および糖尿病の治療のための抗炎症剤、例えば：核内因子カッパＢ阻害剤（例えば、Ｔｒｉｏｌｅｘ（登録商標））；
－ アデノシンモンリン酸－活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）刺激剤、例えば：Ｉｍｅｇｌｉｍｉｎ（ＰＸＬ－００８）、Ｄｅｂｉｏ－０９３０（ＭＴ－６３－７８）、Ｒ－１１８；
－ １１－ベータ－ヒドロキシステロイド脱水素酵素１（１１－ベータ－ＨＳＤ－１）の阻害剤（例えば、ＬＹ２５２３１９９、ＢＭＳ７７０７６７、ＲＧ－４９２９、ＢＭＳ８１６３３６、ＡＺＤ－８３２９、ＨＳＤ－０１６、ＢＩ－１３５５８５）；
－ グルコキナーゼの活性剤（例えば、ＰＦ－０４９９１５３２、ＴＴＰ－３９９（ＧＫ１－３９９）、ＧＫＭ－００１（ＡＤＶ－１００２４０１）、ＡＲＲＹ－４０３（ＡＭＧ－１５１）、ＴＡＫ－３２９、ＴＭＧ－１２３、ＺＹＧＫ１）；
－ ジアシルグリセロールＯ－アシルトランスフェラーゼ（ＤＧＡＴ）の阻害剤（例えば、プラジガスタット（ＬＣＱ－９０８））、プロテインチロシンホスファターゼ１の阻害剤（例えば、トロズスクエミン）、グルコース－６－ホスファターゼの阻害剤、フルクトース－１，６－ビスホスファターゼの阻害剤、グリコーゲンホスホリラーゼの阻害剤、ホスホエノールピルベートカルボキシキナーゼの阻害剤、グリコーゲンシンターゼキナーゼの阻害剤、ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼの阻害剤；
－ グルコーストランスポーター－４のモジュレーター、ソマトスタチン受容体３アゴニスト（例えば、ＭＫ－４２５６）；
－ １種またはそれ以上の脂質低下剤も組合せパートナーとして好適であり、例えば：３－ヒドロキシ－３－メチルグルタリル－コエンザイム－Ａ－レダクターゼ（ＨＭＧ－ＣｏＡ－レダクターゼ）阻害剤、例えば、シンバスタチン（例えば、Ｚｏｃｏｒ（登録商標）、Ｉｎｅｇｙ（登録商標）、Ｓｉｍｃｏｒ（登録商標））、アトルバスタチン（例えば、Ｓｏｒｔｉｓ（登録商標）、Ｃａｄｕｅｔ（登録商標））、ロスバスタチン（例えば、Ｃｒｅｓｔｏｒ（登録商標））、プラバスタチン（例えば、Ｌｉｐｏｓｔａｔ（登録商標）、Ｓｅｌｉｐｒａｎ（登録商標））、フルバスタチン（例えば、Ｌｅｓｃｏｌ（登録商標））、ピタバスタチン（例えば、Ｌｉｖａｚｏ（登録商標）、Ｌｉｖａｌｏ（登録商標））、ロバスタチン（例えば、Ｍｅｖａｃｏｒ（登録商標）、Ａｄｖｉｃｏｒ（登録商標））、メバスタチン（例えば、Ｃｏｍｐａｃｔｉｎ（登録商標））、リバスタチン、セリバスタチン（Ｌｉｐｏｂａｙ（登録商標））、フィブレート、例えば、ベザフィブレート（例えば、Ｃｅｄｕｒ（登録商標）ｒｅｔａｒｄ）、シプロフィブレート（例えば、Ｈｙｐｅｒｌｉｐｅｎ（登録商標））、フェノフィブレート（例えば、Ａｎｔａｒａ（登録商標）、Ｌｉｐｏｆｅｎ（登録商標）、Ｌｉｐａｎｔｈｙｌ（登録商標））、ゲンフィブロジル（例えば、Ｌｏｐｉｄ（登録商標）、Ｇｅｖｉｌｏｎ（登録商標））、エトフィブレート、シンフィブレート、ロニフィブレート、クリノフィブレート、クロフィブリド、ニコチン酸およびその誘導体（例えば、ナイアシン、例えば、ナイアシンの徐放性製剤など）、ニコチン酸受容体１アゴニスト（例えば、ＧＳＫ－２５６０７３）、ＰＰＡＲ－デルタアゴニスト、アセチル－ＣｏＡ－アセチルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤（例えば、アバシミベ）、コレステロール吸収阻害剤（例えば、エゼチミブ、Ｅｚｅｔｒｏｌ（登録商標）、Ｚｅｔｉａ（登録商標）、Ｌｉｐｔｒｕｚｅｔ（登録商標）、Ｖｙｔｏｒｉｎ（登録商標）、Ｓ－５５６９７１）、胆汁酸結合物質（例えば、コレスチラミン、コレセベラム）、回腸胆汁酸トランスポート（ＩＢＡＴ）阻害剤（例えば、ＧＳＫ－２３３０６７２、ＬＵＭ－００２）、ミクロソーマールトリグリセリド移転タンパク質（ＭＴＰ）阻害剤（例えば、ロミタピド（ＡＥＧＲ－７３３）、ＳＬｘ－４０９０、グラノタピド）、前駆タンパク質転換酵素ズブチリシン／ケキシンタイプ９（ＰＣＳＫ９）のモジュレーター（例えば、アリロクマブ（ＲＥＧＮ７２７／ＳＡＲ２３６５５３）、ＡＭＧ－１４５、ＬＧＴ－２０９、ＰＦ－０４９５０６１５、ＭＰＳＫ３１６９Ａ、ＬＹ３０１５０１４、ＡＬＤ－３０６、ＡＬＮ－ＰＣＳ、ＢＭＳ－９６２４７６、ＳＰＣ５００１、ＩＳＩＳ－３９４８１４、１Ｂ２０、ＬＧＴ－２１０、１Ｄ０５、ＢＭＳ－ＰＣＳＫ９Ｒｘ－２、ＳＸ－ＰＣＫ９、ＲＧ７６５２）、ＬＤＬ受容体アップレギュレーター、例えば、肝臓選択性甲状腺ホルモン受容体ベータアゴニス（例えば、エプロチローム（ＫＢ－２１１５）、ＭＢ０７８１１、ソベチロム（ＱＲＸ－４３１）、ＶＩＡ－３１９６、ＺＹＴ１）、ＨＤＬ－上昇化合物（ＨＤＬ－ｒａｉｓｉｎｇ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）、例えば：コレステリルエステル輸送タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害剤（例えば、アナセトラピブ（ＭＫ０８５９）、ダルセトラピブ、エバセトラピブ、ＪＴＴ－３０２、ＤＲＬ－１７８２２、ＴＡ－８９９５、Ｒ－１６５８、ＬＹ－２４８４５９５、ＤＳ－１４４２）、または二重ＣＥＴＰ／ＰＣＳＫ９阻害剤（例えばＫ－３１２）、ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ１）レギュレーター、脂質代謝モジュレーター（例えば、ＢＭＳ－８２３７７８、ＴＡＰ－３０１、Ｄ
ＲＬ－２１９９４、ＤＲＬ－２１９９５）、ホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）阻害剤（例えば、ダラプラディブ、Ｔｙｒｉｓａ（登録商標）、バレスプラジブ、リラプラジブ）、ＡｐｏＡ－Ｉエンハンサー（例えば、ＲＶＸ－２０８、ＣＥＲ－００１、ＭＤＣＯ－２１６、ＣＳＬ－１１２）、コレステロール合成阻害剤（例えば、ＥＴＣ－１００２）、脂質代謝モジュレーター（例えば、ＢＭＳ－８２３７７８、ＴＡＰ－３０１、ＤＲＬ－２１９９４、ＤＲＬ－２１９９５）、およびオメガ－３脂肪酸およびその誘導体（例えば、イコサペント酸エチル（ＡＭＲ１０１）、Ｅｐａｎｏｖａ（登録商標）、ＡＫＲ－０６３、ＮＫＰＬ－６６、ＰＲＣ－４０１６、ＣＡＴ－２００３）；
－ ブロモクリプチン（例えば、Ｃｙｃｌｏｓｅｔ（登録商標）、Ｐａｒｌｏｄｅｌ（登録商標））、フェンテルミンおよびフェンテルミン処方物または組合せ（例えば、Ａｄｉｐｅｘ－Ｐ、Ｉｏｎａｍｉｎ、Ｑｓｙｍｉａ（登録商標））、ベンズフェタミン（例えば、Ｄｉｄｒｅｘ（登録商標））、ジエチルプロピオン（例えば、Ｔｅｎｕａｔｅ（登録商標））、フェンジメトラジン（例えば、Ａｄｉｐｏｓｔ（登録商標）、Ｂｏｎｔｒｉｌ（登録商標））、ブプロピオンおよび組合せ（例えば、Ｚｙｂａｎ（登録商標）、Ｗｅｌｌｂｕｔｒｉｎ ＸＬ（登録商標）、Ｃｏｎｔｒａｖｅ（登録商標）、Ｅｍｐａｔｉｃ（登録商標））、シブトラミン（例えば、Ｒｅｄｕｃｔｉｌ（登録商標）、Ｍｅｒｉｄｉａ（登録商標））、トピラマート（例えば、Ｔｏｐａｍａｘ（登録商標））、ゾニサミド（例えば、Ｚｏｎｅｇｒａｎ（登録商標））、テソフェンシン、オピオイドアンタゴニスト、例えば、ナルトレキソン（例えば、Ｎａｌｔｒｅｘｉｎ（登録商標）、ナルトレキソン＋ブプロピオン）、カンナビノイド受容体１（ＣＢ１）アンタゴニスト（例えば、ＴＭ－３８８３７）、メラニン凝集ホルモン（ＭＣＨ－１）アンタゴニスト（例えば、ＢＭＳ－８３０２１６、ＡＬＢ－１２７１５８（ａ））、ＭＣ４受容体アゴニストおよび部分的アゴニスト（例えば、ＡＺＤ－２８２０、ＲＭ－４９３）、ニューロペプチドＹ５（ＮＰＹ５）またはＮＰＹ２アンタゴニスト（例えば、ベルネペリト、Ｓ－２３４４６２）、ＮＰＹ４アゴニスト（例えば、ＰＰ－１４２０）、ベータ－３－アドレナリン受容体アゴニスト、レプチンまたはレプチン模倣物、５－ヒドロキシトリプタミン２ｃ（５ＨＴ２ｃ）受容体のアゴニスト（例えば、ロルカセリン、Ｂｅｌｖｉｑ（登録商標））、プラムリンチド／メトレレプチン、リパーゼ阻害剤、例えば、セチリスタット（例えば、Ｃａｍｅｔｏｒ（登録商標））、オルリスタット（例えば、Ｘｅｎｉｃａｌ（登録商標）、Ｃａｌｏｂａｌｉｎ（登録商標））、血管新生阻害剤（例えば、ＡＬＳ－Ｌ１０２３）、ベータヒスチジンおよびヒスタミンＨ３アンタゴニスト（例えば、ＨＰＰ－４０４）、ＡｇＲＰ（アグーチ関連タンパク質）阻害剤（例えば、ＴＴＰ－４３５）、セロトニン再取り込み阻害剤、例えば、フルオキセチン（例えば、Ｆｌｕｃｔｉｎｅ（登録商標））、ジュロキセチン（例えば、Ｃｙｍｂａｌｔａ（登録商標））、二重または三重モノアミン取り込み阻害剤（ドーパミン、ノルエピネフリン、およびセロトニン再取り込み）、例えば、セルトラリン（例えば、Ｚｏｌｏｆｔ（登録商標））、テソフェンシン、メチオニンアミノペプチダーゼ－２（ＭｅｔＡＰ２）阻害剤（例えば、ベロラニブ）、および線維芽細胞増殖因子受容体４（ＦＧＦＲ４）の産生に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＩＳＩＳ－ＦＧＦＲ４Ｒｘ）またはプロヒビチン標的指向性ペプチド－１（例えば、Ａｄｉｐｏｔｉｄｅ（登録商標））；
－ 硝酸オキシド供与体、ＡＴ１アンタゴニストまたはアンジオテンシンＩＩ（ＡＴ２）受容体アンタゴニスト、例えば、テルミサルタン（例えば、Ｋｉｎｚａｌ（登録商標）、Ｍｉｃａｒｄｉｓ（登録商標））、カンデサルタン（例えば、Ａｔａｃａｎｄ（登録商標）、Ｂｌｏｐｒｅｓｓ（登録商標））、バルサルタ（例えば、Ｄｉｏｖａｎ（登録商標）、Ｃｏ－Ｄｉｏｖａｎ（登録商標））、ロサルタン（例えば、Ｃｏｓａａｒ（登録商標））、エプロサルタン（例えば、Ｔｅｖｅｔｅｎ（登録商標））、イルベサルタン（例えば、Ａｐｒｏｖｅｌ（登録商標）、ＣｏＡｐｒｏｖｅｌ（登録商標））、オルメサルタン（例えば、Ｖｏｔｕｍ（登録商標）、Ｏｌｍｅｔｅｃ（登録商標））、タソサルタン、アジルサルタン（例えば、Ｅｄａｒｂｉ（登録商標））、二重アンジオテンシン受容体遮断薬（二重ＡＲＢ）、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、ＡＣＥ－２活性剤、レ
ニン阻害剤、プロレニン阻害剤、エンドセリン変換酵素（ＥＣＥ）阻害剤、エンドセリン受容体（ＥＴ１／ＥＴＡ）遮断薬、エンドセリンアンタゴニスト、利尿薬、アルドステロンアンタゴニスト、アルドステロンシンターゼ阻害剤、アルファ遮断薬、アルファ－２アドレナリン受容体のアンタゴニスト、ベータ遮断薬、混合アルファ／ベータ遮断薬、カルシウムアンタゴニスト、カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）、カルシウムチャネル遮断薬ジルチアゼムの経鼻剤（例えば、ＣＰ－４０４）、二重ミネラルコルチコイド／ＣＣＢ、中枢作用性抗高血圧症薬、中性エンドペプチダーゼの阻害剤、アミノペプチダーゼＡ阻害剤、バソペプチド阻害剤、二重バソペプチド阻害剤、例えば、ネプリリシンＡＣＥ阻害剤またはネプリリシン－ＥＣＥ阻害剤、二重作用性ＡＴ受容体－ネプリリシン阻害剤、二重ＡＴ１／ＥＴＡアンタゴニスト、終末糖化産物（ＡＧＥ）分解剤、遺伝子組換えレナラーゼ、血圧ワクチン、例えば、抗ＲＡＡＳ（レニン－アンジオテンシン－アルドステロン－システム）ワクチン、ＡＴ１－またはＡＴ２－ワクチンなど、高血圧症ファーマコゲノミクスに基づく薬物、例えば、抗高血圧応答を有する遺伝的多型のモジュレーター、栓球凝集抑制因子、および他のものまたはそれらの組合せが好適である。
－ Ｒｏｔｅ Ｌｉｓｔｅ ２０１４において言及される全ての薬物、例えば、Ｒｏｔｅ Ｌｉｓｔｅ ２０１４、ｃｈａｐｔｅｒ １２において言及される全ての抗糖尿病薬、Ｒｏｔｅ Ｌｉｓｔｅ ２０１４、ｃｈａｐｔｅｒ ０６において言及される全ての体重減量剤または食欲抑制剤、Ｒｏｔｅ Ｌｉｓｔｅ ２０１４、ｃｈａｐｔｅｒ ５８において言及される全ての脂質低下剤、Ｒｏｔｅ Ｌｉｓｔｅ ２０１４ ｃｈａｐｔｅｒ
１７において言及される全ての抗高血圧症薬、Ｒｏｔｅ Ｌｉｓｔｅにおいて言及される全ての腎臓保護薬（ｎｅｐｈｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）、またはＲｏｔｅ Ｌｉｓｔｅ ２０１４ｃｈａｐｔｅｒ ３６において言及される全ての利尿薬など；
－ インスリンおよびインスリン誘導体、例えば：インスリングラルギン（例えば、Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））、１００Ｕ／ｍＬ超に濃縮されたインスリングラルギン、例えば、２７０～３３０Ｕ／ｍＬのインスリングラルギンまたは３００Ｕ／ｍＬのインスリングラルギン（ＥＰ２３８７９８９において開示される）、インスリングルリシン（例えば、Ａｐｉｄｒａ（登録商標））、インスリンデテミル（例えば、Ｌｅｖｅｍｉｒ（登録商標））、インスリンリスプロ（例えば、Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）、Ｌｉｐｒｏｌｏｇ（登録商標））、インスリンデグルデク（例えば、ＤｅｇｌｕｄｅｃＰｌｕｓ（登録商標）、ＩｄｅｇＬｉｒａ（ＮＮ９０６８））、インスリンアスパルトおよびアスパルト製剤（例えば、ＮｏｖｏＬｏｇ（登録商標））、基礎インスリンおよび類似体（例えば、ＬＹ２６０５５４１、ＬＹ２９６３０１６、ＮＮ１４３６）、ペグ化インスリンリスプロ（例
えば、ＬＹ－２７５５８５）、長時間作用型インスリン（例えば、ＮＮ１４３６、Ｉｎｓｕｍｅｒａ（ＰＥ０１３９）、ＡＢ－１０１、ＡＢ－１０２、Ｓｅｎｓｕｌｉｎ ＬＬＣ）、中間時間作用型インスリン（例えば、Ｈｕｍｕｌｉｎ（登録商標）Ｎ、Ｎｏｖｏｌｉｎ（登録商標）Ｎ）、速効性および短時間作用型インスリン（例えば、Ｈｕｍｕｌｉｎ（登録商標）Ｒ、Ｎｏｖｏｌｉｎ（登録商標）Ｒ、Ｌｉｎｊｅｔａ（登録商標）（ＶＩＡｊｅｃｔ（登録商標））、ＰＨ２０インスリン、ＮＮ１２１８、ＨｉｎｓＢｅｔ（登録商標））、予備混合インスリン、ＳｕｌｉＸｅｎ（登録商標）、ＮＮ１０４５、インスリン＋Ｓｙｍｌｉｎ（登録商標）、ＰＥ－０１３９、ＡＣＰ－００２ヒドロゲルインスリン、および経口、吸入可能、経皮、および口腔、または舌下インスリン（例えば、Ｅｘｕｂｅｒａ（登録商標）、Ｎａｓｕｌｉｎ（登録商標）、Ａｆｒｅｚｚａ（登録商標）、インスリントレゴピル（ｔｒｅｇｏｐｉｌ）、ＴＰＭ－０２インスリン、Ｃａｐｓｕｌｉｎ（登録商標）、Ｏｒａｌ－ｌｙｎ（登録商標）、Ｃｏｂａｌａｍｉｎ（登録商標）、経口インスリン、ＯＲＭＤ－０８０１、Ｏｓｈａｄｉ経口インスリン、ＮＮ１９５３、ＮＮ１９５４、ＮＮ１９５６、ＶＩＡｔａｂ（登録商標））。二官能性リンカーによってアルブミンまたは他のタンパク質に結合したこれらのインスリンの誘導体も好適である；
－ グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）、ＧＬＰ－１類似体、およびＧＬＰ－１受容体アゴニスト、例えば：ＧＬＰ－１（７～３７）、ＧＬＰ－１（７～３６）アミド、リキシセナチド（例えば、Ｌｙｘｕｍｉａ（登録商標））、エキセナチド（例えば、エキセンディン－４、ｒエキセンディン－４、Ｂｙｅｔｔａ（登録商標）、Ｂｙｄｕｒｅｏｎ（登録商標）、エキセナチドＮｅｘＰ）、エキセナチド－ＬＡＲ、リラグルチド（例えば、Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））、セマグルチド、タスポグルチド、アルビグルチド、デュラグルチド、アルブゴン、オキシントモジュリン、ゲニプロシド、ＡＣＰ－００３、ＣＪＣ－１１３１、ＣＪＣ－１１３４－ＰＣ、ＧＳＫ－２３７４６９７、ＰＢ－１０２３、ＴＴＰ－０５４、ラングレナチド（ＨＭ－１１２６０Ｃ）、ＣＭ－３、ＧＬＰ－１Ｅｌｉｇｅｎ、ＡＢ－２０１、ＯＲＭＤ－０９０１、ＮＮ９９２４、ＮＮ９９２６、ＮＮ９９２７、Ｎｏｄｅｘｅｎ、Ｖｉａｄｏｒ－ＧＬＰ－１、ＣＶＸ－０９６、ＺＹＯＧ－１、ＺＹＤ－１、ＺＰ－３０２２、ＣＡＭ－２０３６、ＤＡ－３０９１、ＤＡ－１５８６４、ＡＲＩ－２６５１、ＡＲＩ－２２５５、エキセナチド－ＸＴＥＮ（ＶＲＳ－８５９）、エキセナチド－ＸＴＥＮ＋グルカゴン－ＸＴＥＮ（ＶＲＳ－８５９＋ＡＭＸ－８０８）、およびポリマー結合ＧＬＰ－１およびＧＬＰ－１類似体；
－ 二重ＧＬＰ－１／ＧＩＰアゴニスト（例えば、ＲＧ－７６９７（ＭＡＲ－７０１）、ＭＡＲ－７０９、ＢＨＭ０８１、ＢＨＭ０８９、ＢＨＭ０９８）；二重ＧＬＰ－１／グルカゴン受容体アゴニスト（例えばＢＨＭ－０３４、ＯＡＰ－１８９（ＰＦ－０５２１２３８９、ＴＫＳ－１２２５）、ＴＴ－４０１／４０２、ＺＰ２９２９、ＬＡＰＳ－ＨＭＯＸＭ２５、ＭＯＤ－６０３０）；
－ 二重ＧＬＰ－１／ガストリンアゴニスト（例えば、ＺＰ－３０２２）；
－ 胃腸ペプチド、例えば、ペプチドＹＹ３－３６（ＰＹＹ３－３６）またはその類似体および膵臓ポリペプチド（ＰＰ）またはその類似体；
－ グルカゴン受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、グルコース依存性インスリン分泌性ポリペプチド（ＧＩＰ）受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、グレリンアンタゴニストまたはインバースアゴニスト、キセニンおよびその類似体；
－ ジペプチジルペプチダーゼ－ＩＶ（ＤＰＰ－４）阻害剤、例えば：アログリプチン（例えば、Ｎｅｓｉｎａ（登録商標）、Ｋａｚａｎｏ（登録商標））、リナグリプチン（例えば、Ｏｎｄｅｒｏ（登録商標）、Ｔｒａｊｅｎｔａ（登録商標）、Ｔｒａｄｊｅｎｔａ（登録商標）、Ｔｒａｙｅｎｔａ（登録商標））、サキサグリプチン（例えば、Ｏｎｇｌｙｚａ（登録商標）、Ｋｏｍｂｏｇｌｙｚｅ ＸＲ（登録商標））、シタグリプチン（例えば、Ｊａｎｕｖｉａ（登録商標）、Ｘｅｌｅｖｉａ（登録商標）、Ｔｅｓａｖｅｌ（登録商標）、Ｊａｎｕｍｅｔ（登録商標）、Ｖｅｌｍｅｔｉａ（登録商標）、Ｊｕｖｉｓｙｎｃ（登録商標）、Ｊａｎｕｍｅｔ ＸＲ（登録商標））、アナグリプチン、テネリグリプチン（例えば、Ｔｅｎｅｌｉａ（登録商標））、トレラグリプチン、ビルダグリプチ
ン（例えば、Ｇａｌｖｕｓ（登録商標）、Ｇａｌｖｕｍｅｔ（登録商標））、ゲミグリプチン、オマリグリプチン、エボグリプチン、デュトグリプチン、ＤＡ－１２２９、ＭＫ－３１０２、ＫＭ－２２３、ＫＲＰ－１０４、ＰＢＬ－１４２７、ピノキサシンヒドロクロリド、およびＡｒｉ－２２４３；
－ ナトリウム依存性グルコーストランスポーター２（ＳＧＬＴ－２）阻害剤、例えば：カナグリフロジン、ダパグリフロジン、レモグリフロジン、エタボン酸レモグリフロジン、セルグリフロジン、エンパグリフロジン、イプラグリフロジン、トホグリフロジン、ルセオグリフロジン、エルツグリフロジン、ＥＧＴ－０００１４４２、ＬＩＫ－０６６、ＳＢＭ－ＴＦＣ－０３９、およびＫＧＡ－３２３５（ＤＳＰ－３２３５）；
－ ＳＧＬＴ－２およびＳＧＬＴ－１の二重阻害剤（例えば、ＬＸ－４２１１、ＬＩＫ０６６）。
－ 肥満防止薬、例えば、回腸型胆汁酸トランスポーター（ＩＢＡＴ）阻害剤（例えば、ＧＳＫ－１６１４２３５＋ＧＳＫ－２３３０６７２）と組み合わせたＳＧＬＴ－１阻害剤（例えばＬＸ－２７６１、ＫＧＡ－３２３５）またはＳＧＬＴ－１阻害剤；
－ ビグアニド（例えば、メトホルミン、ブホルミン、フェンホルミン）；
－ チアゾリジンジオン（例えば、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン）、グリタゾン類似体（例えば、ロベグリタゾン）；
－ ペルオキシソーム増殖活性化受容体（ＰＰＡＲ－）（アルファ、ガンマ、またはアルファ／ガンマ）アゴニストまたはモジュレーター（例えば、サログリタザル（例えば、Ｌｉｐａｇｌｙｎ（登録商標））、ＧＦＴ－５０５）、またはＰＰＡＲガンマ部分アゴニスト（例えば、Ｉｎｔ－１３１）；
－ スルホニル尿素（例えば、トルブタミド、グリベンクラミド、グリメピリド、Ａｍａｒｙｌ（登録商標）、グリピザイド）およびメグリチニド（例えば、ナテグリニド、レパグリニド、ミチグリニド）；
－ アルファ－グルコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボース、ミグリトール、ボグリボース）；
－ アミリンおよびアミリン類似体（例えば、プラムリンチド、Ｓｙｍｌｉｎ（登録商標））；
－ Ｇタンパク質結合受容体１１９（ＧＰＲ１１９）アゴニスト（例えば、ＧＳＫ－１２９２２６３、ＰＳＮ－８２１、ＭＢＸ－２９８２、ＡＰＤ－５９７、ＡＲＲＹ－９８１、ＺＹＧ－１９、ＤＳ－８５００、ＨＭ－４７０００、ＹＨ－Ｃｈｅｍ１）；
－ ＧＰＲ４０アゴニスト（例えば、ＴＵＧ－４２４、Ｐ－１７３６、Ｐ－１１１８７、ＪＴＴ－８５１、ＧＷ９５０８、ＣＮＸ－０１１－６７、ＡＭ－１６３８、ＡＭ－５２６２）；
－ ＧＰＲ１２０アゴニストおよびＧＰＲ１４２アゴニスト；
－ 全身性または低吸収性ＴＧＲ５（ＧＰＢＡＲ１＝Ｇタンパク質結合胆汁酸受容体１）アゴニスト（例えば、ＩＮＴ－７７７、ＸＬ－４７５、ＳＢ７５６０５０）；
－ 糖尿病免疫療法、例えば：経口Ｃ－Ｃケモカインレセプタータイプ２（ＣＣＲ－２）アンタゴニスト（例えば、ＣＣＸ－１４０、ＪＮＪ－４１４４３５３２）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ－１β）アンタゴニスト（例えばＡＣ－２０１）、または経口モノクローナル抗体（ＭｏＡ）（例えば、メタゾラミド、ＶＶＰ８０８、ＰＡＺ－３２０、Ｐ－１７３６、ＰＦ－０５１７５１５７、ＰＦ－０４９３７３１９）；
－ メタボリック症候群および糖尿病の治療のための抗炎症剤、例えば：核内因子カッパＢ阻害剤（例えば、Ｔｒｉｏｌｅｘ（登録商標））；
－ アデノシンモンリン酸－活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）刺激剤、例えば：Ｉｍｅｇｌｉｍｉｎ（ＰＸＬ－００８）、Ｄｅｂｉｏ－０９３０（ＭＴ－６３－７８）、Ｒ－１１８；
－ １１－ベータ－ヒドロキシステロイド脱水素酵素１（１１－ベータ－ＨＳＤ－１）の阻害剤（例えば、ＬＹ２５２３１９９、ＢＭＳ７７０７６７、ＲＧ－４９２９、ＢＭＳ８１６３３６、ＡＺＤ－８３２９、ＨＳＤ－０１６、ＢＩ－１３５５８５）；
－ グルコキナーゼの活性剤（例えば、ＰＦ－０４９９１５３２、ＴＴＰ－３９９（ＧＫ１－３９９）、ＧＫＭ－００１（ＡＤＶ－１００２４０１）、ＡＲＲＹ－４０３（ＡＭＧ－１５１）、ＴＡＫ－３２９、ＴＭＧ－１２３、ＺＹＧＫ１）；
－ ジアシルグリセロールＯ－アシルトランスフェラーゼ（ＤＧＡＴ）の阻害剤（例えば、プラジガスタット（ＬＣＱ－９０８））、プロテインチロシンホスファターゼ１の阻害剤（例えば、トロズスクエミン）、グルコース－６－ホスファターゼの阻害剤、フルクトース－１，６－ビスホスファターゼの阻害剤、グリコーゲンホスホリラーゼの阻害剤、ホスホエノールピルベートカルボキシキナーゼの阻害剤、グリコーゲンシンターゼキナーゼの阻害剤、ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼの阻害剤；
－ グルコーストランスポーター－４のモジュレーター、ソマトスタチン受容体３アゴニスト（例えば、ＭＫ－４２５６）；
－ １種またはそれ以上の脂質低下剤も組合せパートナーとして好適であり、例えば：３－ヒドロキシ－３－メチルグルタリル－コエンザイム－Ａ－レダクターゼ（ＨＭＧ－ＣｏＡ－レダクターゼ）阻害剤、例えば、シンバスタチン（例えば、Ｚｏｃｏｒ（登録商標）、Ｉｎｅｇｙ（登録商標）、Ｓｉｍｃｏｒ（登録商標））、アトルバスタチン（例えば、Ｓｏｒｔｉｓ（登録商標）、Ｃａｄｕｅｔ（登録商標））、ロスバスタチン（例えば、Ｃｒｅｓｔｏｒ（登録商標））、プラバスタチン（例えば、Ｌｉｐｏｓｔａｔ（登録商標）、Ｓｅｌｉｐｒａｎ（登録商標））、フルバスタチン（例えば、Ｌｅｓｃｏｌ（登録商標））、ピタバスタチン（例えば、Ｌｉｖａｚｏ（登録商標）、Ｌｉｖａｌｏ（登録商標））、ロバスタチン（例えば、Ｍｅｖａｃｏｒ（登録商標）、Ａｄｖｉｃｏｒ（登録商標））、メバスタチン（例えば、Ｃｏｍｐａｃｔｉｎ（登録商標））、リバスタチン、セリバスタチン（Ｌｉｐｏｂａｙ（登録商標））、フィブレート、例えば、ベザフィブレート（例えば、Ｃｅｄｕｒ（登録商標）ｒｅｔａｒｄ）、シプロフィブレート（例えば、Ｈｙｐｅｒｌｉｐｅｎ（登録商標））、フェノフィブレート（例えば、Ａｎｔａｒａ（登録商標）、Ｌｉｐｏｆｅｎ（登録商標）、Ｌｉｐａｎｔｈｙｌ（登録商標））、ゲンフィブロジル（例えば、Ｌｏｐｉｄ（登録商標）、Ｇｅｖｉｌｏｎ（登録商標））、エトフィブレート、シンフィブレート、ロニフィブレート、クリノフィブレート、クロフィブリド、ニコチン酸およびその誘導体（例えば、ナイアシン、例えば、ナイアシンの徐放性製剤など）、ニコチン酸受容体１アゴニスト（例えば、ＧＳＫ－２５６０７３）、ＰＰＡＲ－デルタアゴニスト、アセチル－ＣｏＡ－アセチルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）阻害剤（例えば、アバシミベ）、コレステロール吸収阻害剤（例えば、エゼチミブ、Ｅｚｅｔｒｏｌ（登録商標）、Ｚｅｔｉａ（登録商標）、Ｌｉｐｔｒｕｚｅｔ（登録商標）、Ｖｙｔｏｒｉｎ（登録商標）、Ｓ－５５６９７１）、胆汁酸結合物質（例えば、コレスチラミン、コレセベラム）、回腸胆汁酸トランスポート（ＩＢＡＴ）阻害剤（例えば、ＧＳＫ－２３３０６７２、ＬＵＭ－００２）、ミクロソーマールトリグリセリド移転タンパク質（ＭＴＰ）阻害剤（例えば、ロミタピド（ＡＥＧＲ－７３３）、ＳＬｘ－４０９０、グラノタピド）、前駆タンパク質転換酵素ズブチリシン／ケキシンタイプ９（ＰＣＳＫ９）のモジュレーター（例えば、アリロクマブ（ＲＥＧＮ７２７／ＳＡＲ２３６５５３）、ＡＭＧ－１４５、ＬＧＴ－２０９、ＰＦ－０４９５０６１５、ＭＰＳＫ３１６９Ａ、ＬＹ３０１５０１４、ＡＬＤ－３０６、ＡＬＮ－ＰＣＳ、ＢＭＳ－９６２４７６、ＳＰＣ５００１、ＩＳＩＳ－３９４８１４、１Ｂ２０、ＬＧＴ－２１０、１Ｄ０５、ＢＭＳ－ＰＣＳＫ９Ｒｘ－２、ＳＸ－ＰＣＫ９、ＲＧ７６５２）、ＬＤＬ受容体アップレギュレーター、例えば、肝臓選択性甲状腺ホルモン受容体ベータアゴニス（例えば、エプロチローム（ＫＢ－２１１５）、ＭＢ０７８１１、ソベチロム（ＱＲＸ－４３１）、ＶＩＡ－３１９６、ＺＹＴ１）、ＨＤＬ－上昇化合物（ＨＤＬ－ｒａｉｓｉｎｇ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）、例えば：コレステリルエステル輸送タンパク質（ＣＥＴＰ）阻害剤（例えば、アナセトラピブ（ＭＫ０８５９）、ダルセトラピブ、エバセトラピブ、ＪＴＴ－３０２、ＤＲＬ－１７８２２、ＴＡ－８９９５、Ｒ－１６５８、ＬＹ－２４８４５９５、ＤＳ－１４４２）、または二重ＣＥＴＰ／ＰＣＳＫ９阻害剤（例えばＫ－３１２）、ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ１）レギュレーター、脂質代謝モジュレーター（例えば、ＢＭＳ－８２３７７８、ＴＡＰ－３０１、Ｄ
ＲＬ－２１９９４、ＤＲＬ－２１９９５）、ホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）阻害剤（例えば、ダラプラディブ、Ｔｙｒｉｓａ（登録商標）、バレスプラジブ、リラプラジブ）、ＡｐｏＡ－Ｉエンハンサー（例えば、ＲＶＸ－２０８、ＣＥＲ－００１、ＭＤＣＯ－２１６、ＣＳＬ－１１２）、コレステロール合成阻害剤（例えば、ＥＴＣ－１００２）、脂質代謝モジュレーター（例えば、ＢＭＳ－８２３７７８、ＴＡＰ－３０１、ＤＲＬ－２１９９４、ＤＲＬ－２１９９５）、およびオメガ－３脂肪酸およびその誘導体（例えば、イコサペント酸エチル（ＡＭＲ１０１）、Ｅｐａｎｏｖａ（登録商標）、ＡＫＲ－０６３、ＮＫＰＬ－６６、ＰＲＣ－４０１６、ＣＡＴ－２００３）；
－ ブロモクリプチン（例えば、Ｃｙｃｌｏｓｅｔ（登録商標）、Ｐａｒｌｏｄｅｌ（登録商標））、フェンテルミンおよびフェンテルミン処方物または組合せ（例えば、Ａｄｉｐｅｘ－Ｐ、Ｉｏｎａｍｉｎ、Ｑｓｙｍｉａ（登録商標））、ベンズフェタミン（例えば、Ｄｉｄｒｅｘ（登録商標））、ジエチルプロピオン（例えば、Ｔｅｎｕａｔｅ（登録商標））、フェンジメトラジン（例えば、Ａｄｉｐｏｓｔ（登録商標）、Ｂｏｎｔｒｉｌ（登録商標））、ブプロピオンおよび組合せ（例えば、Ｚｙｂａｎ（登録商標）、Ｗｅｌｌｂｕｔｒｉｎ ＸＬ（登録商標）、Ｃｏｎｔｒａｖｅ（登録商標）、Ｅｍｐａｔｉｃ（登録商標））、シブトラミン（例えば、Ｒｅｄｕｃｔｉｌ（登録商標）、Ｍｅｒｉｄｉａ（登録商標））、トピラマート（例えば、Ｔｏｐａｍａｘ（登録商標））、ゾニサミド（例えば、Ｚｏｎｅｇｒａｎ（登録商標））、テソフェンシン、オピオイドアンタゴニスト、例えば、ナルトレキソン（例えば、Ｎａｌｔｒｅｘｉｎ（登録商標）、ナルトレキソン＋ブプロピオン）、カンナビノイド受容体１（ＣＢ１）アンタゴニスト（例えば、ＴＭ－３８８３７）、メラニン凝集ホルモン（ＭＣＨ－１）アンタゴニスト（例えば、ＢＭＳ－８３０２１６、ＡＬＢ－１２７１５８（ａ））、ＭＣ４受容体アゴニストおよび部分的アゴニスト（例えば、ＡＺＤ－２８２０、ＲＭ－４９３）、ニューロペプチドＹ５（ＮＰＹ５）またはＮＰＹ２アンタゴニスト（例えば、ベルネペリト、Ｓ－２３４４６２）、ＮＰＹ４アゴニスト（例えば、ＰＰ－１４２０）、ベータ－３－アドレナリン受容体アゴニスト、レプチンまたはレプチン模倣物、５－ヒドロキシトリプタミン２ｃ（５ＨＴ２ｃ）受容体のアゴニスト（例えば、ロルカセリン、Ｂｅｌｖｉｑ（登録商標））、プラムリンチド／メトレレプチン、リパーゼ阻害剤、例えば、セチリスタット（例えば、Ｃａｍｅｔｏｒ（登録商標））、オルリスタット（例えば、Ｘｅｎｉｃａｌ（登録商標）、Ｃａｌｏｂａｌｉｎ（登録商標））、血管新生阻害剤（例えば、ＡＬＳ－Ｌ１０２３）、ベータヒスチジンおよびヒスタミンＨ３アンタゴニスト（例えば、ＨＰＰ－４０４）、ＡｇＲＰ（アグーチ関連タンパク質）阻害剤（例えば、ＴＴＰ－４３５）、セロトニン再取り込み阻害剤、例えば、フルオキセチン（例えば、Ｆｌｕｃｔｉｎｅ（登録商標））、ジュロキセチン（例えば、Ｃｙｍｂａｌｔａ（登録商標））、二重または三重モノアミン取り込み阻害剤（ドーパミン、ノルエピネフリン、およびセロトニン再取り込み）、例えば、セルトラリン（例えば、Ｚｏｌｏｆｔ（登録商標））、テソフェンシン、メチオニンアミノペプチダーゼ－２（ＭｅｔＡＰ２）阻害剤（例えば、ベロラニブ）、および線維芽細胞増殖因子受容体４（ＦＧＦＲ４）の産生に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＩＳＩＳ－ＦＧＦＲ４Ｒｘ）またはプロヒビチン標的指向性ペプチド－１（例えば、Ａｄｉｐｏｔｉｄｅ（登録商標））；
－ 硝酸オキシド供与体、ＡＴ１アンタゴニストまたはアンジオテンシンＩＩ（ＡＴ２）受容体アンタゴニスト、例えば、テルミサルタン（例えば、Ｋｉｎｚａｌ（登録商標）、Ｍｉｃａｒｄｉｓ（登録商標））、カンデサルタン（例えば、Ａｔａｃａｎｄ（登録商標）、Ｂｌｏｐｒｅｓｓ（登録商標））、バルサルタ（例えば、Ｄｉｏｖａｎ（登録商標）、Ｃｏ－Ｄｉｏｖａｎ（登録商標））、ロサルタン（例えば、Ｃｏｓａａｒ（登録商標））、エプロサルタン（例えば、Ｔｅｖｅｔｅｎ（登録商標））、イルベサルタン（例えば、Ａｐｒｏｖｅｌ（登録商標）、ＣｏＡｐｒｏｖｅｌ（登録商標））、オルメサルタン（例えば、Ｖｏｔｕｍ（登録商標）、Ｏｌｍｅｔｅｃ（登録商標））、タソサルタン、アジルサルタン（例えば、Ｅｄａｒｂｉ（登録商標））、二重アンジオテンシン受容体遮断薬（二重ＡＲＢ）、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、ＡＣＥ－２活性剤、レ
ニン阻害剤、プロレニン阻害剤、エンドセリン変換酵素（ＥＣＥ）阻害剤、エンドセリン受容体（ＥＴ１／ＥＴＡ）遮断薬、エンドセリンアンタゴニスト、利尿薬、アルドステロンアンタゴニスト、アルドステロンシンターゼ阻害剤、アルファ遮断薬、アルファ－２アドレナリン受容体のアンタゴニスト、ベータ遮断薬、混合アルファ／ベータ遮断薬、カルシウムアンタゴニスト、カルシウムチャネル遮断薬（ＣＣＢ）、カルシウムチャネル遮断薬ジルチアゼムの経鼻剤（例えば、ＣＰ－４０４）、二重ミネラルコルチコイド／ＣＣＢ、中枢作用性抗高血圧症薬、中性エンドペプチダーゼの阻害剤、アミノペプチダーゼＡ阻害剤、バソペプチド阻害剤、二重バソペプチド阻害剤、例えば、ネプリリシンＡＣＥ阻害剤またはネプリリシン－ＥＣＥ阻害剤、二重作用性ＡＴ受容体－ネプリリシン阻害剤、二重ＡＴ１／ＥＴＡアンタゴニスト、終末糖化産物（ＡＧＥ）分解剤、遺伝子組換えレナラーゼ、血圧ワクチン、例えば、抗ＲＡＡＳ（レニン－アンジオテンシン－アルドステロン－システム）ワクチン、ＡＴ１－またはＡＴ２－ワクチンなど、高血圧症ファーマコゲノミクスに基づく薬物、例えば、抗高血圧応答を有する遺伝的多型のモジュレーター、栓球凝集抑制因子、および他のものまたはそれらの組合せが好適である。
【0099】
「核酸分子」は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）である。核酸分子は、一本鎖または二本鎖の、直鎖状であるかまたは共有結合により閉じて環を形成する分子の形態である。
【0100】
用語「ＤＮＡ」は、デオキシリボヌクレオチド残基を含む分子、典型的には、完全にまたは実質的にデオキシリボヌクレオチド残基で構成される分子に関する。「デオキシリボヌクレオチド」は、ベータ－Ｄ－リボフラノシル基の２’位においてヒドロキシル基を欠くヌクレオチドに関する。用語「ＤＮＡ」は、単離ＤＮＡ、例えば、部分的または完全に精製されたＤＮＡ、本質的に純粋なＤＮＡ、合成ＤＮＡ、および遺伝子組換えにより生じたＤＮＡを含み、１つまたはそれ以上のヌクレオチドの追加、欠失、置換、および／または改変によって天然に存在するＤＮＡとは異なる修飾ＤＮＡも含む。そのような改変は、ＤＮＡの末端または内部などへの、例えば、ＤＮＡの１つまたはそれ以上のヌクレオチドへの、非ヌクレオチド材料の追加を含み得る。ＤＮＡ分子におけるヌクレオチドは、非標準的ヌクレオチド、例えば、天然に存在しないヌクレオチドまたは化学的に合成されたヌクレオチドなども含むことができる。これらの改変ＤＮＡは、類似体または天然に存在するＤＮＡの類似体と呼ぶことができる。用語「天然に存在する」は、ヌクレオチドと組み合わせて使用される場合、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、およびウラシル（Ｕ）の塩基を指す。
【0101】
用語「ＲＮＡ」は、リボヌクレオチド残基を含む分子、典型的には、完全にまたは実質的に、リボヌクレオチド残基で構成された分子に関する。「リボヌクレオチ」は、ベータ－Ｄ－リボフラノシル基の２’位にヒドロキシル基を有するヌクレオチドに関する。用語「ＲＮＡ」は、単離ＲＮＡ、例えば、部分的または完全に精製されたＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、および遺伝子組換えにより生じたＲＮＡを含み、１つまたはそれ以上のヌクレオチドの追加、欠失、置換、および／または改変によって、天然に存在するＲＮＡとは異なる修飾ＲＮＡを含む。そのような改変は、ＲＮＡの末端または内部などへの、例えば、ＲＮＡの１つまたはそれ以上のヌクレオチドでの、非ヌクレオチド材料の追加を含み得る。ＲＮＡ分子におけるヌクレオチドは、非標準的ヌクレオチド、例えば、天然に存在しないヌクレオチドもしくは化学的に合成されたヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドなども含むことができる。これらの改変ＲＮＡは、類似体または天然に存在するＲＮＡの類似体と呼ぶことができる。本発明によれば、「ＲＮＡ」は、一本鎖ＲＮＡまたは二本鎖ＲＮＡを指す。一実施形態において、ＲＮＡは、ｍＲＮＡ、例えば、インビトロにおいて転写されたＲＮＡ（ＩＶＴ ＲＮＡ）または合成ＲＮＡである。ＲＮＡは、例えば、ＲＮＡの安定性（例えば、半減期）を増加させる１つまたはそれ以上の修飾によって、修飾することができる。そのような変更は、当業者に公知であり、そのようなもの
として、例えば、５’－キャップまたは５’キャップ類似体が挙げられる。
として、例えば、５’－キャップまたは５’キャップ類似体が挙げられる。
【0102】
本発明による核酸分子は、ベクターに含有させる／含ませることができる。用語「ベクター」は、本明細書において使用される場合、プラスミドベクター、コスミドベクター、ファージベクター、例えば、ラムダファージなど、ウイルスベクター、例えば、アデノウイルスもしくはバキュロウイルスベクターなど、または人工染色体ベクター、例えば、バクテリア人工染色体（ＢＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、もしくはＰ１人工染色体（ＰＡＣ）などを含む、当業者に公知の全てのベクターを含む。前記ベクターは、発現ベクターおよびクローニングベクターを含む。発現ベクターは、プラスミドおよびウイルスベクターを含み、一般的に、特定の宿主生物（例えば、細菌、酵母、植物、昆虫、または哺乳動物）における、またはインビトロ発現系における、所望のコード配列と、作動可能に連結されたコード配列の発現のために必要な適切なＤＮＡ配列とを含有する。クローニングベクターは、一般的に、ある特定の所望のＤＮＡ断片を設計および増幅するために使用され、所望のＤＮＡ断片の発現に必要な機能的配列を欠き得る。
【0103】
あるいは、本発明による核酸分子は、ゲノム、例えば、宿主細胞のゲノム、に統合させてもよい。特定の核酸分子をゲノムに統合するための手段および方法は、当業者に公知である。
【0104】
用語「細胞」または「宿主細胞」は、典型的には、完全細胞、すなわち、その正常な細胞内成分、例えば、酵素、細胞小器官、または遺伝物質などを放出していない、完全膜を有する細胞に関する。完全細胞は、典型的には、生存細胞、すなわち、その正常な代謝機能を行うことができる生きた細胞である。この用語は、典型的には、外因性の核酸をトランスフェクトまたは形質転換することができる任意の細胞に関する。外因性の核酸をトランスフェクトまたは形質導入させ、レシピエントに移した細胞は、典型的には、レシピエントにおいてその核酸を発現することができる。用語「細胞」は、原核細胞、例えば、細菌細胞など、および真核生物細胞、例えば、酵母細胞、真菌細胞、または哺乳動物細胞などを含む。好適な細菌細胞としては、グラム陰性細菌株、例えば、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、およびシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）の細菌株など、およびグラム陽性細菌株、例えば、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、ブドウ球菌属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、およびラクトコッカス属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）などに由来する細胞が挙げられる。好適な真菌細胞としては、トリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）、ニューロスポーラ属（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒ）、およびアスペルギルス属 （Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）の種に由来する細胞が挙げられる。好適な酵母細胞としては、サッカロマイセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）の種（例えば、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））、シゾサッカロマイセス属（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）の種（例えば、シゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ））、ピキア属（Ｐｉｃｈｉａ）の種（例えば、ピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）およびピチア・メタノリカ（Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ））、およびハンゼヌラ属（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）の種に由来する細胞が挙げられる。好適な哺乳動物細胞としては、例えば、ＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ２９３などが挙げられる。一実施形態において、ＨＥＫ２９３細胞が使用される。しかしながら、両生類細胞、昆虫細胞、植物細胞、および異種タンパク質の発現のために当技術分野において使用される任意の他の細胞も、使用することができる。哺乳動物細胞、例えば、哺乳動物脂肪細胞などは、養子移入にとって特に有用であり、ヒト、マウス、ハムスター、ブタ、ヤギ、および霊長類に由来する細胞が挙げられる。これらの細胞は、多くの組織型から誘導することができ、初代細胞および細胞株、例えば、免疫系の細胞など、特に抗原提示細胞、例えば、樹枝状細胞およびＴ細胞など、幹細胞、例えば、造血幹細胞およ
び間充織幹細胞など、ならびに他の細胞型を含む。抗原提示細胞は、その表面上の主要組織適合遺伝子複合体との関連において抗原を示す細胞である。Ｔ細胞は、それらのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を使用して、この複合体を認識することができる。「細胞」または「宿主細胞」は、単離してもよく、または組織または有機体、特に「非人体」、の一部であってもよい。
び間充織幹細胞など、ならびに他の細胞型を含む。抗原提示細胞は、その表面上の主要組織適合遺伝子複合体との関連において抗原を示す細胞である。Ｔ細胞は、それらのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を使用して、この複合体を認識することができる。「細胞」または「宿主細胞」は、単離してもよく、または組織または有機体、特に「非人体」、の一部であってもよい。
【0105】
用語「非人体」は、本明細書において使用される場合、非ヒト霊長類または他の動物、特に哺乳動物、例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、ウサギ、もしくはげっ歯類、例えば、マウス、ラット、モルモット、およびハムスターなどを含むことを意味する。
【0106】
本発明において取り上げた医薬組成物は、典型的には、所望の反応または所望の効果を生じさせるために、場合により、本明細書において説明されるような、融合分子、核酸分子、または宿主細胞の一部として（本明細書において、「薬剤」とも呼ばれる）、治療有効量のヒトＦＧＦ２１の変異体を含有する。
【0107】
本発明による医薬組成物は、少なくとも１種の他の医薬品有効生物、例えば、上記において定義されるような少なくとも１種の他の医薬品有効成分をさらに含んでもよい。
【0108】
本発明による医薬組成物は、典型的には、滅菌組成物である。医薬組成物は、通常、一様な剤形において提供され、それ自体公知の様式において製造される。医薬組成物は、例えば、溶液剤または懸濁剤の形態であってもよい。
【0109】
医薬組成物はさらに、１種もしくはそれ以上の担体および／または賦形剤を含んでもよく、それら全ては、薬学的に許容されるものである。用語「薬学的に許容される」は、本明細書において使用される場合、該医薬組成物の活性剤の作用と相互作用しない材料の非毒性を意味する。
【0110】
用語「担体」は、適用を促進、増強、または可能にするために有効成分と組み合わされる、天然または合成の有機または無機成分を指す。本発明によれば、用語「担体」は、対象への投与にとって好適な、１種またはそれ以上の適合性の固体または液体の充填剤、希釈剤、または封入物質も含む。
【0111】
非経口投与のための可能な担体物質は、例えば、滅菌水、リンゲル液、乳酸リンゲル液、生理食塩水、静菌性生理食塩水（例えば、０．９％ベンジルアルコールを含有する生理食塩水）、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、ハンクス液、ポリアルキレングリコール、水素化ナフタレン、および、特に、生体適合性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマー、またはポリオキシエチレン／ポリオキシ－プロピレンコポリマーである。
【0112】
用語「賦形剤」は、本明細書において使用される場合、有効成分ではないが医薬組成物中に存在していてもよい全ての物質、例えば、塩、結合剤（例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、トレハロース、ソルビトール、マンニトール）、潤滑剤、増粘剤、表面活性剤、防腐剤、乳化剤、緩衝剤物質、香味剤、または着色剤などを含むことが意図される。
【0113】
薬学的に許容される塩を製造するために、薬学的に許容されない塩を使用してもよく、それらは本発明に含まれる。この種類の薬学的に許容される塩は、非限定的に以下の酸：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、クエン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸などから製造されるものを含む。薬学的に許容される塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、またはカル
シウム塩などとして製造することもできる。塩は、イオン強度または張度を調節するために加えることができる。
シウム塩などとして製造することもできる。塩は、イオン強度または張度を調節するために加えることができる。
【0114】
医薬組成物での使用のための好適な防腐剤としては、酸化防止剤、クエン酸、クエン酸ナトリウム、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、システイン、メチオニン、パラベン、およびチメロサールが挙げられる。
【0115】
医薬組成物での使用のための好適な緩衝物質としては、塩での酢酸、塩でのクエン酸、塩でのホウ酸、および塩でのリン酸が挙げられる。
【0116】
医薬組成物は、適切な希釈剤によって再構成される、安定な凍結乾燥された製品として製剤化することもでき、場合により、上記において定義されるような１種またはそれ以上の賦形剤を含む。
【0117】
本明細書において使用される場合、用語「部品のキット（簡潔に：キット）」は、１つまたはそれ以上の容器と、場合によりデータ媒体とを含む製品を指す。前記１つまたはそれ以上の容器は、上記において言及した薬剤（試薬）の１つまたはそれ以上で満たされる。キットには、例えば、希釈剤、緩衝剤、およびさらなる試薬を収容する追加の容器を含ませてもよい。前記データ媒体は、非電子的データ媒体、例えば、グラフィックデータ媒体、例えば、情報リーフレット、情報シート、バーコードもしくはアクセスコード、または電子的データ媒体、例えば、コンパクトディスク（ＣＤ）、デジタル多用途ディスク（ＤＶＤ）、マイクロチップ、もしくは別の半導体ベースの電子的データ媒体である。アクセスコードは、データベース、例えば、インターネットデータベース、集中データベース、分散データベースなどへのアクセスの可能にする。前記データ媒体は、本発明において取り上げたＦＧＦ２１変異体の使用のための取扱説明書を含んでいてもよい。
【0118】
本明細書において説明される薬剤および組成物は、任意の従来の経路、例えば、経口、経肺、吸入によって、または注射もしくは注入による非経口において投与することができる。一実施形態において、非経口投与は、静脈内、動脈内、皮下、皮内、または筋肉内において使用される。本明細書において説明される薬剤および組成物は、徐放性投与によって投与することもできる。
【0119】
非経口投与にとって好適な医薬組成物は、通常、活性物質の滅菌水性または非水性調製物を含み、これらは、通常、レシピエントの血液に対して等張である。適合性の担体／溶媒／希釈剤の例は、滅菌水、リンゲル液、乳酸リンゲル液、生理食塩水、静菌性生理食塩水（例えば、０．９％ベンジルアルコールを含有する生理食塩水）、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、およびハンクス液である。さらに、通常、滅菌の不揮発性油も、溶液または懸濁液媒体として使用することができる。
【0120】
本明細書において説明される薬剤および組成物は、通常、治療有効量において投与される。「治療有効量」は、典型的には、許容できない副作用を引き起こすことなく、単独でまたはさらなる用量と一緒に、所望の治療反応または所望の治療効果を達成する量を指す。特定の疾患または特定の状態の治療の場合、所望の反応は、典型的には、疾患の経過の阻害に関する。これは、疾患の進行を減速させること、および、特に疾患の進行を中断または逆転させることを含む。疾患または状態の治療における所望の反応は、前記疾患または状態の発生の遅延または発生の予防であってもよい。本明細書において説明される薬剤および組成物の有効量は、治療される状態、疾患の重篤度、対象の個々のパラメータ、例えば、年齢、生理的条件、サイズ、および体重など、治療の持続期間、付随する療法のタイプ（存在する場合）、投与の特定の経路、ならびに同様の因子に依存するであろう。したがって、本明細書において説明される薬剤の投与される用量は、様々なそのようなパラ
メータに依存する。対象における反応が、初回用量において十分でない場合、より多い用量（または、別のより局所的経路の投与によって効果的に達成される、より多い用量）を使用することもできる。
メータに依存する。対象における反応が、初回用量において十分でない場合、より多い用量（または、別のより局所的経路の投与によって効果的に達成される、より多い用量）を使用することもできる。
【0121】
本発明はさらに、本発明のヒトＦＧＦ２１の変異体と、少なくとも１種の他の医薬品有効成分との組合せも提供する。
【0122】
一実施形態において、本発明のヒトＦＧＦ２１の変異体と、少なくとも１種の他の医薬品有効成分との組合せは、患者への医薬品有効成分の別々の投与によって、または、複数の医薬品有効成分が１つの医薬組成物中に存在する併用製品の形態において、適用することができる。別々に投与される場合、投与は、同時にまたは逐次に、任意の順序において行うことができる。ＦＧＦ２１変異体および他の医薬品有効成分の量ならびに関連する投与のタイミングは、所望の組合せ療法効果を達成するように選択される。組合せ物の投与は、同時に、（１）全ての医薬品有効成分を含む単一の医薬組成物において；または（２）医薬品有効成分の少なくとも１つをそれぞれが含む別々の医薬組成物においてであってもよい。あるいは、組合せ物は、ある治療薬剤が最初に投与され、二番目に他の薬剤が投与されるか、またはその逆において、連続して別々に投与してもよい。そのような連続投与は、時間的に近くであっても、または時間的に離れていてもよい。
【0123】
本発明により、用語「疾患または障害」は、任意の病理学的状態または不健康な状態、特に、肥満、太り過ぎ、メタボリック症候群、糖尿病、高血糖、異常脂血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、および／またはアテローム性動脈硬化症を指す。
【0124】
用語「肥満」は、健康に負の影響を有し得る程度にまで過剰な体脂肪が蓄積された医学的状態を指す。ヒト（成人）対象に関して、肥満は、３０ｋｇ／ｍ２以上の肥満度指数（ＢＭＩ）（ＢＭＩ≧３０ｋｇ／ｍ２）として定義することができる。
【0125】
用語「太り過ぎ」は、体脂肪の量が、最適に健康である量を超えている医学的状態を指す。ヒト（成人）対象に関して、肥満は、２５ｋｇ／ｍ２以上の肥満度指数（ＢＭＩ）（例えば、２５ｋｇ／ｍ２≦ＢＭＩ＜３０ｋｇ／ｍ２）として定義することができる。
【0126】
ＢＭＩは、成人において太り過ぎおよび肥満を分類するために一般的に使用される身長体重比の単純な指標である。それは、キログラムで表した人の体重をメートルで表したその人の身長の二乗で割ったものとして定義される（ｋｇ／ｍ２）。
【0127】
「メタボリック症候群」は、以下の医学的状態のうちの少なくとも３つのクラスタリングとして定義することができる：腹部（中心性）肥満（例えば、コーカソイドの男性の場合には胴回り≧９４ｃｍおよびコーカソイドの女性の場合は≧８０ｃｍ、他の群に関しては民族的特有の値を有すると定義）、高い血圧（例えば、１３０／８５ｍｍＨｇ以上）、高い空腹時血漿グルコース（例えば、少なくとも１００ｍｇ／ｄＬ）、高い血清トリグリセリド（少なくとも１５０ｍｇ／ｄＬＥ）、および低い高比重リポタンパク質（ＨＤＬ）レベル（例えば、男性の場合には４０ｍｇ／ｄＬ未満および女の場合は５０ｍｇ／ｄＬ未満）。
【0128】
「糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ）」（単に「糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ）」とも呼ばれる）は、インスリン産生、インスリン作用、またはその両方における欠陥から結果として生じる血中グルコースの高濃度によって特徴付けられる代謝病の群を指す。一実施形態において、糖尿病は、１型糖尿病、２型糖尿病、妊娠性糖尿病、緩徐発症成人自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）、若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）、ならびに特定の遺伝的条件、薬物、栄養不良、感染症、および他の病気からの結果として生じる他のタ
イプの糖尿病からなる群から選択される。
イプの糖尿病からなる群から選択される。
【0129】
糖尿病の現在のＷＨＯ診断基準は以下の通りである：空腹時血漿グルコース≧７．０ｍｍｏｌ／ｌ（１２６ｍｇ／ｄＬ）または２時間血漿グルコース≧１１．１ｍｍｏｌ／ｌ（２００ｍｇ／ｄＬ）。
【0130】
「１型糖尿病」（「インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）」または「若年性糖尿病」としても知られる）は、インスリンの完全な欠乏によって引き起こされる高い血中グルコース濃度によって特徴付けられる状態である。これは、体の免疫システムが、膵臓におけるインスリンを産生するベータ細胞を攻撃し、それらを破壊する場合に生じる。膵臓は、インスリンを少ししか、または全く産生しない。膵臓除去または膵疾患も、インスリンを産生するベータ細胞の欠乏を生じ得る。１型糖尿病は、糖尿病の症例の５％から１０％の間を占める。
【0131】
「２型糖尿病」（「インスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）」または「成人発症型糖尿病」としても知られる）は、インスリンの可用性にかかわらない過剰なグルコース産生と、不十分なグルコースクリアランス（インスリン作用）の結果として過度に高いレベルのままにグルコースレベルが循環することによって特徴付けられる状態である。２型糖尿病は、糖尿病の全ての診断症例の約９０から９５％を占める。
【0132】
「妊娠性糖尿病」は、それ以前に糖尿病と診断されていない女性が、妊娠中（特に妊娠第三期）に高い血中グルコースレベルを示す状態である。妊娠性糖尿病は、調査された集団に応じて、妊娠の３～１０％に影響する。
【0133】
「緩徐発症成人自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）」（「遅発性１型糖尿病」とも呼ばれる）は、成人において生じる、多くの場合において発症の経過がより遅い、１型糖尿病の形態である。
【0134】
「若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）」は、インスリン産生を妨害する常染色体優性遺伝子における変異によって引き起こされる、糖尿病の遺伝子型を指す。
【0135】
用語「高血糖」は、血液中の過剰な糖（グルコース）を指す。
【0136】
用語「異常脂血症」は、リポタンパク質の過剰産生（高脂肪血症）または欠乏（低脂血症）を含む、リポタンパク質代謝の障害を指す。異常脂血症は、血中の総コレステロール、低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロールおよび／もしくはトリグリセリド濃度の上昇、ならびに／または高比重リポタンパク質（ＨＤＬ）コレステロール濃度の減少によって明らかにされる。
【0137】
非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）は、肝細胞の炎症および変性を伴う、脂肪の蓄積（脂肪滴）によって特徴付けられる肝臓疾患である。一度罹患すると、この疾患は、肝臓機能が変化して肝不全へと進行し得る状態である、肝硬変の高リスクを伴う。その後、ＮＡＳＨは、多くの場合、肝臓がんへと進行する。
【0138】
「アテローム性動脈硬化症」は、動脈内腔の狭窄を引き起こして線維症および石灰化へと進行し得る、大動脈および中動脈の血管内膜におけるプラークと呼ばれる不規則に分布する脂質沈着によって特徴付けられる血管疾患である。病巣は、通常、限局性であり、ゆっくりと断続的に進行する。時折、血流障害を生じ、その結果として、閉塞に対して末梢側の組織死を引き起こす、プラークの破裂を生じる。血流の制限は、ほとんどの臨床徴候の主要因であり、これは、閉塞の分布および重篤度によって変わる。
【0139】
用語「医薬」は、本明細書において使用される場合、治療法において、すなわち、疾患および障害の治療において使用される、物質／組成物を指す。
【0140】
「治療」は、疾患または障害を予防または除去するため；対象の疾患および障害を停止または鈍化させるため；対象における新たな疾患または障害の発生を阻害または鈍化させるため；現在または以前に疾患または障害を有している対象における症状の頻度もしくは重篤度および／または再発を減少させるため；および／または、対象の寿命を延長、すなわち増加させるために、化合物もしくは組成物または化合物もしくは組成物の組合せを対象に投与することを意味する。
【0141】
特に、用語「疾患または障害を治療すること／治療」は、治癒、期間の短縮、改善、予防、進行または悪化の鈍化または阻害、または疾患もしくは障害もしくはそれらの症状の発症を予防または遅延させることを包含する。
【0142】
用語「対象」は、本明細書において、治療のための対象、特に罹患した対象（「患者」とも呼ばれる）、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、または他の動物、特に哺乳動物、例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、ウサギ、またはげっ歯類、例えば、マウス、ラット、モルモット、およびハムスターなどを意味する。一実施形態において、対象／患者は、ヒトである。
【0143】
さらなる参考文献
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ＷＯ２００６／０２８５９５Ａ２およびＵＳ２００８／０１０３０９６Ａ１；
ＷＯ２００６／０２８７１４Ａ１およびＵＳ２００７／０２９９００７Ａ１；
ＷＯ２００６／０６５５８２Ａ２およびＵＳ２００７／０２９３４３０Ａ１；
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ＷＯ２００３／０１１２１３Ａ２およびＵＳ２００４／０２５９７８０Ａ１；
ＷＯ２００５／０６１７１２Ａ１およびＵＳ２００７／０１４２２７８Ａ１；
ＷＯ２００６／０２８５９５Ａ２およびＵＳ２００８／０１０３０９６Ａ１；
ＷＯ２００６／０２８７１４Ａ１およびＵＳ２００７／０２９９００７Ａ１；
ＷＯ２００６／０６５５８２Ａ２およびＵＳ２００７／０２９３４３０Ａ１；
ＷＯ２００８／１２１５６３Ａ２およびＵＳ２００８／０２５５０４５Ａ１
【実施例】
【0144】
〔実施例１〕
ＨＥＫ２９３細胞または大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）におけるＦＧＦ２１変異体の発現
ＦＧＦ２１変異体は、ＨＥＫ２９３細胞または大腸菌における一過性トランスフェクトによって作製した。
ＨＥＫ２９３細胞または大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）におけるＦＧＦ２１変異体の発現
ＦＧＦ２１変異体は、ＨＥＫ２９３細胞または大腸菌における一過性トランスフェクトによって作製した。
【0145】
（ａ）ＨＥＫ２９３細胞におけるＦＧＦ２１変異体の発現
ＦＧＦ２１変異体のＤＮＡ配列を、Ｎ末端においてＩＬ２シグナル配列（配列番号４）に融合させ、続いて、ヒスチジンリッチな配列（Ｈｉｓタグ）およびＴＥＶプロテアーゼ切断部位（配列番号５または６）に融合させた。シグナル配列は、培養培地への所望のタンパク質の分泌に必要であった。固定化金属イオン親和性クロマトグラフィ（ＩＭＡＣ）（ｃＯｍｐｌｅｔｅ Ｈｉｓ－Ｔａｇ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｃｏｌｕｍｎ、Ｒｏｃｈｅ）を使用して、培養上清から所望のタンパク質を精製した。ＩＭＡＣカラムからの溶出後、場合により、Ｎ末端ＨｉｓタグをＴＥＶプロテアーゼの添加によって切断した。Ｈｉｓタグ切断後、切断反応溶液をＩｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ－Ｍｅｔａｌ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｃｏｌｕｍｎ（ＩＭＡＣカラム）（ｃＯｍｐｌｅｔｅ Ｈｉｓ－Ｔａｇ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｃｏｌｕｍｎ、Ｒｏｃｈｅ）に２回通過させ、（Ｈｉｓタグを有さない）フロースルー分画を収集した。これらのタンパク質をさらに、泳動用緩衝液としてリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、Ｇｉｂｃｏ）を用いたゲルろ過カラムを使用して精製した。所望のタンパク質を含有する分画を収集し、プールし、濃縮して、さらなる使用まで－８０℃で貯蔵した。
ＦＧＦ２１変異体のＤＮＡ配列を、Ｎ末端においてＩＬ２シグナル配列（配列番号４）に融合させ、続いて、ヒスチジンリッチな配列（Ｈｉｓタグ）およびＴＥＶプロテアーゼ切断部位（配列番号５または６）に融合させた。シグナル配列は、培養培地への所望のタンパク質の分泌に必要であった。固定化金属イオン親和性クロマトグラフィ（ＩＭＡＣ）（ｃＯｍｐｌｅｔｅ Ｈｉｓ－Ｔａｇ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｃｏｌｕｍｎ、Ｒｏｃｈｅ）を使用して、培養上清から所望のタンパク質を精製した。ＩＭＡＣカラムからの溶出後、場合により、Ｎ末端ＨｉｓタグをＴＥＶプロテアーゼの添加によって切断した。Ｈｉｓタグ切断後、切断反応溶液をＩｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ－Ｍｅｔａｌ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｃｏｌｕｍｎ（ＩＭＡＣカラム）（ｃＯｍｐｌｅｔｅ Ｈｉｓ－Ｔａｇ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｃｏｌｕｍｎ、Ｒｏｃｈｅ）に２回通過させ、（Ｈｉｓタグを有さない）フロースルー分画を収集した。これらのタンパク質をさらに、泳動用緩衝液としてリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、Ｇｉｂｃｏ）を用いたゲルろ過カラムを使用して精製した。所望のタンパク質を含有する分画を収集し、プールし、濃縮して、さらなる使用まで－８０℃で貯蔵した。
【0146】
（ｂ）大腸菌におけるＦＧＦ２１変異体の発現
配列番号２のＦＧＦ２１タンパク質（成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１、すなわち、シグナル配列を有さない；ＦＧＦ２１ Ｈ２９～Ｓ２０９とも呼ばれる）および配列番号３のＦＧＦ２１タンパク質（Ｎ末端にＧを追加した成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１；Ｇ＋ＦＧＦ２１ Ｈ２９～Ｓ２０９またはＧ－ＦＧＦ２１ Ｈ２９～Ｓ２０９または単にＧ－ＦＧＦ２１とも呼ばれる）のＦＧＦ２１タンパク質、ならびに配列番号１２４から配列番号１５７のタンパク質を大腸菌において発現させた。ＦＧＦ２１タンパク質のＤＮＡ配列を、Ｎ末端においてヒスチジンリッチな配列（Ｈｉｓタグ）およびＴＥＶまたはＳＵＭＯプロテアーゼ切断部位（配列番号６または７）に融合させた。所望のタンパク質を、固定化金属イオン親和性クロマトグラフィ（ＩＭＡＣ）（Ｈｉｓ Ｔｒａｐ ＨＰ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して精製し、続いて、ＴＥＶまたはＳＵＭＯプロテアーゼを添加することによってＮ末端Ｈｉｓタグを切断した。Ｈｉｓタグ切断後、切断反応溶液を、イオン交換カラムを使用して精製し、続いて、泳動用緩衝液としてリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、Ｇｉｂｃｏ）を使用してゲルろ過工程を行った。所望のタンパク質を含有する分画を収集し、プールし、濃縮して、さらなる使用まで－８０℃で貯蔵した。
配列番号２のＦＧＦ２１タンパク質（成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１、すなわち、シグナル配列を有さない；ＦＧＦ２１ Ｈ２９～Ｓ２０９とも呼ばれる）および配列番号３のＦＧＦ２１タンパク質（Ｎ末端にＧを追加した成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１；Ｇ＋ＦＧＦ２１ Ｈ２９～Ｓ２０９またはＧ－ＦＧＦ２１ Ｈ２９～Ｓ２０９または単にＧ－ＦＧＦ２１とも呼ばれる）のＦＧＦ２１タンパク質、ならびに配列番号１２４から配列番号１５７のタンパク質を大腸菌において発現させた。ＦＧＦ２１タンパク質のＤＮＡ配列を、Ｎ末端においてヒスチジンリッチな配列（Ｈｉｓタグ）およびＴＥＶまたはＳＵＭＯプロテアーゼ切断部位（配列番号６または７）に融合させた。所望のタンパク質を、固定化金属イオン親和性クロマトグラフィ（ＩＭＡＣ）（Ｈｉｓ Ｔｒａｐ ＨＰ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して精製し、続いて、ＴＥＶまたはＳＵＭＯプロテアーゼを添加することによってＮ末端Ｈｉｓタグを切断した。Ｈｉｓタグ切断後、切断反応溶液を、イオン交換カラムを使用して精製し、続いて、泳動用緩衝液としてリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、Ｇｉｂｃｏ）を使用してゲルろ過工程を行った。所望のタンパク質を含有する分画を収集し、プールし、濃縮して、さらなる使用まで－８０℃で貯蔵した。
【0147】
〔実施例２〕
ヒトおよびマウス血漿中でのＦＧＦ２１変異体の安定性測定
マウスおよびラットにおける成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１のインビボ薬物動態（ＰＫ）分析から、腎臓による急速なクリアランスによる、１時間未満の半減期が明らかとなった（Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖ Ａ．ら（２００７）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １４８（２）：７７４～７８１頁；Ｓｔｅｉｎ Ｓ．ら（２００９）Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ ３２（１）：１２６～８頁；Ｌｉｎ Ｚ．ら（２０１１）ＰＬｏＳ ＯＮＥ ６（４）：ｅ１８３９８）。さらに、ＦＧＦ２１がインビボでのタンパク質分解を受けやすいことも見出された。この分解は、ＦＧＦ２１の治療有効性に対して著しい負の影響を及ぼす（表１）（Ｈｅｃｈｔ Ｒ．ら（２０１２）ＰＬｏＳ ＯＮＥ ７（１１）：ｅ４９３４
５；Ｍｉｃａｎｏｖｉｃ Ｒ．ら（２００９）Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２１９（２）：２２７～３４頁；Ｙｉｅ Ｊ．ら（２０１２）Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．７９（４）：３９８～４１０頁）。
ヒトおよびマウス血漿中でのＦＧＦ２１変異体の安定性測定
マウスおよびラットにおける成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１のインビボ薬物動態（ＰＫ）分析から、腎臓による急速なクリアランスによる、１時間未満の半減期が明らかとなった（Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖ Ａ．ら（２００７）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １４８（２）：７７４～７８１頁；Ｓｔｅｉｎ Ｓ．ら（２００９）Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ ３２（１）：１２６～８頁；Ｌｉｎ Ｚ．ら（２０１１）ＰＬｏＳ ＯＮＥ ６（４）：ｅ１８３９８）。さらに、ＦＧＦ２１がインビボでのタンパク質分解を受けやすいことも見出された。この分解は、ＦＧＦ２１の治療有効性に対して著しい負の影響を及ぼす（表１）（Ｈｅｃｈｔ Ｒ．ら（２０１２）ＰＬｏＳ ＯＮＥ ７（１１）：ｅ４９３４
５；Ｍｉｃａｎｏｖｉｃ Ｒ．ら（２００９）Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２１９（２）：２２７～３４頁；Ｙｉｅ Ｊ．ら（２０１２）Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．７９（４）：３９８～４１０頁）。
【0148】
【表1】
【0149】
ヒトＦＧＦ２１の代謝安定性についてさらに学ぶため、さらに血中でのタンパク質分解によって形成された代謝物質を特定するために、タンパク質を以下に説明されるように分析した。詳細には、１５μｍｏｌ／Ｌのヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号３）を、ヒト、マウス、およびラットのリチウムヘパリン血漿中において、３７℃で６０分間、インビトロでインキュベートした。インキュベーションの終了時に、試料を、製造元によって説明される手順に従って、Ｎｏｒｇｅｎ Ｓｅｒｕｍ Ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｎｏｒｇｅｎ Ｂｉｏｔｅｋ、ソロルド、オンタリオ、カナダ、１７３００番）によって後処理した。アルブミン、アルファ－アンチトリプシン、トランスフェリン、およびハプトグロビンを含む主要な血清タンパク質を、血漿試料から枯渇させた。４℃において、５００μＬの血漿試料を活性化スピンカラムに適用し、ベンチトップ微量遠心機において、６，７００×ｇで１分間遠心分離し、フロースルーを捨てた。カラムを、５００μＬの洗浄緩衝液を加えて２回洗浄し、１分間の遠心分離を行った。カラムに１００μＬの溶離緩衝液を加えて１分間の遠心分離を２回繰り返すことによって、結合したタンパク質を溶出させた。
【0150】
代謝物質を、精密な質量計測（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ ＬＴＱ－Ｏｒｂｉｔｒａｐ、ＮａｎｏＬＣ １Ｄ Ｕｌｔｒａ、ＡＳ２ Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒ）による陽イオン化モードでのｍ／ｚ６５０からｍ／ｚ１７００の質量範囲内におけるイオントラップ質量分析計による液体クロマトグラフィ－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）実験によって同定した。代謝物質同定に使用したＨＰＬＣ条件は以下の通りであった：カラム、Ｖｙｄａｃ ＭＳ
Ｃ４ ３００ Ａ、１５０ｍｍ×７５μｍ（Ｇｒａｃｅ、ローケレン、ベルギー）；移動相：溶離液Ａ、２％（ｖ／ｖ）のアセトニトリルを含む０．１％ギ酸溶液、および溶離液Ｂ、アセトニトリル＋０．１％のギ酸；ランタイム、７５分；流量：２８０ｎＬ／分。多荷電質量を、Ｍａｇｔｒａｎソフトウェア（Ｚｈｏｎｇｑｉ Ｚｈａｎｇ）によってデコンボリューションし、形成された代謝物質のタンパク質配列を、ＧＰＭＡＷプログラム（Ｌｉｇｈｔｈｏｕｓｅ Ｄａｔａ、オデンセ、デンマーク）によって解明した。
Ｃ４ ３００ Ａ、１５０ｍｍ×７５μｍ（Ｇｒａｃｅ、ローケレン、ベルギー）；移動相：溶離液Ａ、２％（ｖ／ｖ）のアセトニトリルを含む０．１％ギ酸溶液、および溶離液Ｂ、アセトニトリル＋０．１％のギ酸；ランタイム、７５分；流量：２８０ｎＬ／分。多荷電質量を、Ｍａｇｔｒａｎソフトウェア（Ｚｈｏｎｇｑｉ Ｚｈａｎｇ）によってデコンボリューションし、形成された代謝物質のタンパク質配列を、ＧＰＭＡＷプログラム（Ｌｉｇｈｔｈｏｕｓｅ Ｄａｔａ、オデンセ、デンマーク）によって解明した。
【0151】
血漿中での上記において説明したような１時間の配列番号３のＦＧＦ２１のインキュベートにより、急速な切断が生じ、表２に一覧したようないくつかの代謝物質を検出することができた。ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号１）の２９位から１９９位までのアミノ酸配列に対応する切断生成物が、調査した全ての種の血漿中において形成された。この代謝物質は、１８４２８．５６Ｄａの分子量を有するヒト－ＦＧＦ２１－デス－デカペプチドとして説明することができる。配列番号３のヒトＦＧＦ２１およびその切断生成物の質量スペクトルおよびデコンボリューションを図１に提示する。
【0152】
【表2】
【0153】
タンパク質をヒトまたはマウスの血漿中において最大２４時間まで３７℃でインキュベートし、サンドイッチイムノアッセイを使用した、残りの完全な全長ＦＧＦ２１タンパク質の分析によって、成熟ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号２）および様々なＦＧＦ２１変異体のインビトロ安定性を分析した。詳細には、成熟ヒトＦＧＦ２１（配列番号２）または変異体を、血液試料（Ｋ２ＥＤＴＡ血漿、数人の健康なヒトドナーの混合物）に１００ｎｇ／ｍＬの濃度で加え、３７℃で最大２４時間までインキュベートした。０、１、８、および／または２４時間後に、試料を採取し、２倍に濃縮したプロテアーゼ阻害剤（Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｃｏｃｋｔａｉｌ Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｒｏｃｈｅ）を加えることによってインキュベーションを止めた。次いで、試料を、さらなる処理まで、－８０℃に移した。続いて、残りの完全な全長ＦＧＦ２１タンパク質の量を、Ｈｕｍａｎ Ｉｎｔａｃｔ ＦＧＦ２１ ＥＬＩＳＡ（Ｆ２１３１－Ｋ０１、Ｅａｇｌｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ナッシュア、ニューハンプシャー、米国）を使用して評価した。アッセイは、ベンダーによって説明される通りに、全長ヒト野生型ＦＧＦ２１（配列番号１）のアミノ酸ａａ２９～３５およびａａ２０３～２０９に対応する、成熟ヒトＦＧＦ２１のＮ末端（ａａ１－７）およびＣ末端（ａａ１７５～１８１）に特異的に結合する２種の選択された抗体によるサンドイッチ技術を利用した。インキュベート開始時の個々の試料それぞれの濃度を内部基準として使用し、後の時点で測定された濃度に関連付けた。
【0154】
ヒトおよびマウスの血漿中での安定性について試験した組換えＦＧＦ２１変異体の結果を表３にまとめ、代表的な結果を図２に示す。
【0155】
【表3】
【0156】
〔実施例３〕
ＣＨＯ細胞におけるヒトＦＧＦ２１受容体の有効性についてのインビトロ細胞アッセイ（Ｉｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ）
成熟ヒトＦＧＦ２１（配列番号２）またはＦＧＦ２１変異体の細胞インビトロ有効性を、特異的な高感度のＩｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ（ＩＣＷ）アッセイを使用して測定した。ＩＣＷアッセイは、通常、マイクロプレート形式において実施される、免疫細胞化学的アッセイである。Ｉｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ（Ａｇｕｉｌａｒ Ｈ．Ｎ．ら（２０１０）ＰＬｏＳ ＯＮＥ ５（４）：ｅ９９６５頁）を使用するＦＧＦ２１受容体自己リン酸化アッセイのために、ヒトベータ－Ｋｌｏｔｈｏ（ＫＬＢ）と共にヒトＦＧＦＲ１ｃを安定して発現するＣＨＯ Ｆｌｐ－Ｉｎ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ダルムシュタット、ドイツ）を使用した。ＭＰＡキナーゼＥＲＫ１／２の受容体自己リン酸化レベルまたは下流活性を決定するために、２×１０４細胞／ウェルを、９６ウェルプレートに播種し、４８時間培養した。細胞を、ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｇｉｂｃｏ、ダルムシュタット、ドイツ）を伴う無血清培地ハムＦ－１２ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｍｉｘによって３～４時間、血清飢餓させた。続いて、細胞を、増加した濃度の、成熟ヒトＦＧＦ２１（配列番号２）、示されたＦＧＦ２１変異体、または他のペプチドのいずれかによって、３７℃で５時間処理した。インキュベーション後、培地を捨て、細胞を、３．７％の新たに調製したパラ－ホルムアルデヒドにおいて２０分間固定させた。２０分間、ＰＢＳ中で細胞に０．１％Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ－１００を浸透させた。Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキングバッファー（ＬＩＣＯＲ、バートホンブルク、ドイツ）により、室温で２時間、ブロッキングを実施した。一次抗体として、抗ｐＦＧＦＲ Ｔｙｒ６５３／６５４（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、フランクフルト、ドイツ）または抗ｐＥＲＫホスホ－ｐ４４／４２ ＭＡ
ＰキナーゼＴｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を加えて、４℃で一晩インキュベートした。一次抗体のインキュベーション後、細胞をＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で洗浄した。二次抗マウス８００ＣＷ抗体（ＬＩＣＯＲ、バートホンブルク、ドイツ）を、室温で１時間インキュベートした。続いて、細胞をＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で再び洗浄し、Ｏｄｙｓｓｅｙ画像表示装置（ＬＩＣＯＲ、バートホンブルク、ドイツ）により、赤外色素シグナルを定量した。結果を、ＴＯ－ＰＲＯ３染料（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスルーエ、ドイツ）によるＤＮＡの定量化によって正規化した。任意単位（ＡＵ）としてデータを得て、用量－応答曲線からＥＣ５０値を得て、それらを表４にまとめる。図３は、ヒトＦＧＦＲ１ｃ＋ＫＬＢを過剰発現するＣＨＯ細胞によるＩＣＷの結果を示している。
ＣＨＯ細胞におけるヒトＦＧＦ２１受容体の有効性についてのインビトロ細胞アッセイ（Ｉｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ）
成熟ヒトＦＧＦ２１（配列番号２）またはＦＧＦ２１変異体の細胞インビトロ有効性を、特異的な高感度のＩｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ（ＩＣＷ）アッセイを使用して測定した。ＩＣＷアッセイは、通常、マイクロプレート形式において実施される、免疫細胞化学的アッセイである。Ｉｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ（Ａｇｕｉｌａｒ Ｈ．Ｎ．ら（２０１０）ＰＬｏＳ ＯＮＥ ５（４）：ｅ９９６５頁）を使用するＦＧＦ２１受容体自己リン酸化アッセイのために、ヒトベータ－Ｋｌｏｔｈｏ（ＫＬＢ）と共にヒトＦＧＦＲ１ｃを安定して発現するＣＨＯ Ｆｌｐ－Ｉｎ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ダルムシュタット、ドイツ）を使用した。ＭＰＡキナーゼＥＲＫ１／２の受容体自己リン酸化レベルまたは下流活性を決定するために、２×１０４細胞／ウェルを、９６ウェルプレートに播種し、４８時間培養した。細胞を、ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｇｉｂｃｏ、ダルムシュタット、ドイツ）を伴う無血清培地ハムＦ－１２ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｍｉｘによって３～４時間、血清飢餓させた。続いて、細胞を、増加した濃度の、成熟ヒトＦＧＦ２１（配列番号２）、示されたＦＧＦ２１変異体、または他のペプチドのいずれかによって、３７℃で５時間処理した。インキュベーション後、培地を捨て、細胞を、３．７％の新たに調製したパラ－ホルムアルデヒドにおいて２０分間固定させた。２０分間、ＰＢＳ中で細胞に０．１％Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ－１００を浸透させた。Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキングバッファー（ＬＩＣＯＲ、バートホンブルク、ドイツ）により、室温で２時間、ブロッキングを実施した。一次抗体として、抗ｐＦＧＦＲ Ｔｙｒ６５３／６５４（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、フランクフルト、ドイツ）または抗ｐＥＲＫホスホ－ｐ４４／４２ ＭＡ
ＰキナーゼＴｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を加えて、４℃で一晩インキュベートした。一次抗体のインキュベーション後、細胞をＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で洗浄した。二次抗マウス８００ＣＷ抗体（ＬＩＣＯＲ、バートホンブルク、ドイツ）を、室温で１時間インキュベートした。続いて、細胞をＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で再び洗浄し、Ｏｄｙｓｓｅｙ画像表示装置（ＬＩＣＯＲ、バートホンブルク、ドイツ）により、赤外色素シグナルを定量した。結果を、ＴＯ－ＰＲＯ３染料（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスルーエ、ドイツ）によるＤＮＡの定量化によって正規化した。任意単位（ＡＵ）としてデータを得て、用量－応答曲線からＥＣ５０値を得て、それらを表４にまとめる。図３は、ヒトＦＧＦＲ１ｃ＋ＫＬＢを過剰発現するＣＨＯ細胞によるＩＣＷの結果を示している。
【0157】
【表4】
【0158】
【表5】
【0159】
【表6】
【0160】
【表7】
【0161】
〔実施例４〕
初代ヒト脂肪細胞によるＦＧＦ２１変異体のインビトロ活性測定
Ｉｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ（ＩＣＷ）アッセイ（Ａｇｕｉｌａｒ Ｈ．Ｎ．ら（２０１０）ＰＬｏＳ ＯＮＥ ５（４）：ｅ９９６５頁）を使用して、ヒト初代皮下脂肪
細胞により、ヒトＦＧＦ２１（配列番号２）またはＦＧＦ２１変異体の細胞インビトロ有効性も測定した。簡潔には、２．８×１０４のヒト前脂肪細胞（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ、ハイデルベルグ、ドイツ）を、９６ウェルプレートの各ウェルに播種し、成熟脂肪細胞へと分化させた（Ｈｅｍｍｒｉｃｈ Ｋ．ら（２００５）Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ７３（１）：２８～３５頁；Ｌｅｅ Ｍ．Ｊ．（２０１４）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．５３８：４９～６５頁）。ＭＡＰキナーゼＥＲＫ１／２活性化の刺激の前に、細胞を、無血清培地（１ｇ／ｌのＤＭＥＭ／ハムＦ－１０培地（１：１、ｖ／ｖ）（ＰＡＮ－Ｂｉｏｔｅｃｈ、アイデンバッハ、ドイツ）、１５ｍｍｏｌ／ＬのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、３３μｍｏｌ／Ｌのビオチン、１７μｍｏｌ／Ｌのパントテン酸）によって３～４時間、血清飢餓させた。続いて、細胞を、増加した濃度の、成熟ヒトＦＧＦ２１（配列番号２）、示されたＦＧＦ２１変異体、または他のペプチドのいずれかによって、３７℃で５分間処理した。インキュベーション後、培地を捨て、細胞を、３．７％の新たに調製したパラ－ホルムアルデヒドにおいて２０分間固定させた。２０分間、ＰＢＳ中において細胞に０．１％Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ－１００を浸透させた。Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキングバッファー（ＬＩＣＯＲ、バートホンブルク、ドイツ）により、室温で２時間、ブロッキングを実施した。一次抗体として、抗ｐＥＲＫ ホスホ－ｐ４４／４２ ＭＡＰキナーゼＴｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を加えて、４℃で一晩インキュベートした。一次抗体のインキュベーション後、細胞をＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で洗浄した。二次抗マウス８００ＣＷ抗体（ＬＩＣＯＲ、バートホンブルク、ドイツ）を、室温で１時間インキュベートした。続いて、細胞をＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で再び洗浄し、Ｏｄｙｓｓｅｙ画像表示装置（ＬＩＣＯＲ、バートホンブルク、ドイツ）により、赤外色素シグナルを定量した。結果を、ＴＯ－ＰＲＯ３染料（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスルーエ、ドイツ）によるＤＮＡの定量化によって正規化した。任意単位（ＡＵ）としてデータを得て、表４ＡおよびＢに示すように、用量－応答曲線からＥＣ５０値を得た。ＥＣ５０値を表５にまとめる。
初代ヒト脂肪細胞によるＦＧＦ２１変異体のインビトロ活性測定
Ｉｎ－Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎ（ＩＣＷ）アッセイ（Ａｇｕｉｌａｒ Ｈ．Ｎ．ら（２０１０）ＰＬｏＳ ＯＮＥ ５（４）：ｅ９９６５頁）を使用して、ヒト初代皮下脂肪
細胞により、ヒトＦＧＦ２１（配列番号２）またはＦＧＦ２１変異体の細胞インビトロ有効性も測定した。簡潔には、２．８×１０４のヒト前脂肪細胞（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ、ハイデルベルグ、ドイツ）を、９６ウェルプレートの各ウェルに播種し、成熟脂肪細胞へと分化させた（Ｈｅｍｍｒｉｃｈ Ｋ．ら（２００５）Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ７３（１）：２８～３５頁；Ｌｅｅ Ｍ．Ｊ．（２０１４）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．５３８：４９～６５頁）。ＭＡＰキナーゼＥＲＫ１／２活性化の刺激の前に、細胞を、無血清培地（１ｇ／ｌのＤＭＥＭ／ハムＦ－１０培地（１：１、ｖ／ｖ）（ＰＡＮ－Ｂｉｏｔｅｃｈ、アイデンバッハ、ドイツ）、１５ｍｍｏｌ／ＬのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、３３μｍｏｌ／Ｌのビオチン、１７μｍｏｌ／Ｌのパントテン酸）によって３～４時間、血清飢餓させた。続いて、細胞を、増加した濃度の、成熟ヒトＦＧＦ２１（配列番号２）、示されたＦＧＦ２１変異体、または他のペプチドのいずれかによって、３７℃で５分間処理した。インキュベーション後、培地を捨て、細胞を、３．７％の新たに調製したパラ－ホルムアルデヒドにおいて２０分間固定させた。２０分間、ＰＢＳ中において細胞に０．１％Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ－１００を浸透させた。Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキングバッファー（ＬＩＣＯＲ、バートホンブルク、ドイツ）により、室温で２時間、ブロッキングを実施した。一次抗体として、抗ｐＥＲＫ ホスホ－ｐ４４／４２ ＭＡＰキナーゼＴｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を加えて、４℃で一晩インキュベートした。一次抗体のインキュベーション後、細胞をＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で洗浄した。二次抗マウス８００ＣＷ抗体（ＬＩＣＯＲ、バートホンブルク、ドイツ）を、室温で１時間インキュベートした。続いて、細胞をＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で再び洗浄し、Ｏｄｙｓｓｅｙ画像表示装置（ＬＩＣＯＲ、バートホンブルク、ドイツ）により、赤外色素シグナルを定量した。結果を、ＴＯ－ＰＲＯ３染料（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスルーエ、ドイツ）によるＤＮＡの定量化によって正規化した。任意単位（ＡＵ）としてデータを得て、表４ＡおよびＢに示すように、用量－応答曲線からＥＣ５０値を得た。ＥＣ５０値を表５にまとめる。
【0162】
【表8】
【0163】
〔実施例５〕
ヒトＦＧＦ２１およびＦＧＦ２１変異体の熱安定性の分析
熱安定性に対するＦＧＦ２１における変異の影響を分析するために、リガンドの安定化の探求に使用した示差走査型蛍光定量法（ＤＳＦまたはＴｈｅｒｍｏＦｌｕｏｒ（商標））アッセイをまねて、サーマルシフトアッセイを適用した（Ａｈｍａｄ Ｓ．ら（２０１２）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１：４３３～４４６頁；Ｐａｎｔｏｌｉａｎｏら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｃｒｅｅｎ ６：４２９～４４０頁；Ｎｉｅｓｅｎ
ら（２００７）Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．２：２２１２～２１頁）。このアッセイは、疎水性蛍光染料、例えば、Ｓｙｐｒｏ（商標）Ｏｒａｎｇｅ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号Ｓ６６５１）など、の観察に基づいており、これらは、タンパク質上の疎水性パッチに結合したときにその蛍光を増加させる。タンパク質が加熱時にアンフォールドする場合、そのような疎水性パッチをタンパク質に曝露することにより、蛍光の増加を、アンフォールディングの程度の指標として、したがって、タンパク質の熱安定性のための指標として、使用することができる。
ヒトＦＧＦ２１およびＦＧＦ２１変異体の熱安定性の分析
熱安定性に対するＦＧＦ２１における変異の影響を分析するために、リガンドの安定化の探求に使用した示差走査型蛍光定量法（ＤＳＦまたはＴｈｅｒｍｏＦｌｕｏｒ（商標））アッセイをまねて、サーマルシフトアッセイを適用した（Ａｈｍａｄ Ｓ．ら（２０１２）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１：４３３～４４６頁；Ｐａｎｔｏｌｉａｎｏら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｃｒｅｅｎ ６：４２９～４４０頁；Ｎｉｅｓｅｎ
ら（２００７）Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．２：２２１２～２１頁）。このアッセイは、疎水性蛍光染料、例えば、Ｓｙｐｒｏ（商標）Ｏｒａｎｇｅ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号Ｓ６６５１）など、の観察に基づいており、これらは、タンパク質上の疎水性パッチに結合したときにその蛍光を増加させる。タンパク質が加熱時にアンフォールドする場合、そのような疎水性パッチをタンパク質に曝露することにより、蛍光の増加を、アンフォールディングの程度の指標として、したがって、タンパク質の熱安定性のための指標として、使用することができる。
【0164】
ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）中のタンパク質の溶液を、Ｓｙｐｒｏ（商標）Ｏｒａｎｇｅの１６０倍溶液（供給元によって提供される５０００倍のＤＭＳＯストックから水中で希釈した）と混合することによって、ＦＧＦ２１変異体を試験した。試料体積を、ＰＢＳによって２０μｌに調節した。典型的な条件では、最終混合物中に０．８ｍｇ／ｍｌのＦＧＦ２１変異体タンパク質および８倍のＳｙｐｒｏ（商標）Ｏｒａｎｇｅが含有されたが、タンパク質濃度は、０．４ｍｇ／ｍｌから１．２ｍｇ／ｍｌの間で変えることができた。試料を、９６ウェルＰＣＲプレート（ＢｉｏＲａｄ Ｓｅｍｉ－Ｓｋｉｒｔ ９６ ｗｈｉｔｅ）に分配し、気泡を除去するために簡潔に遠心分離した。プレートを、ＢｉｏＲａｄ ｉＱ５リアルタイムＰＣＲ装置に挿入し、１℃／分の昇温速度において１０℃から９０℃の熱勾配をかけた。蛍光の励起および量子化のために、４８５ｎｍおよび５７５ｎｍの波長のフィルタを選択した。データ処理のために、Ｂｉｏｒａｄ ｉＱ５スタンダードエディションソフトウェア（ｖ．２．０．１４８．６０６２３）を使用した。温度に対する蛍光強度の曲線において、溶融温度（ＴＭ）のための指標として、変曲点を選択した。レファレンスとしてヒトＦＧＦ２１（配列番号３）を各プレートに含ませた。図５は、選択されたＦＧＦ２１変異体の代表的な溶融曲線を示しており、表６に、ヒトＦＧＦ２１（配列番号３）に関するＴＭ値の違いを一覧する。
【0165】
【表9】
【0166】
【表10】
【0167】
〔実施例６〕
熱安定性変異体の設計およびＦＧＦ２１ Ｑ５５Ｃ、Ｎ１４９Ｃ（配列番号１５８）のＸ線結晶構造。
ＲＣＳＢ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ（ＰＤＢ）のような公開データベース
には、ＦＧＦ２１の構造は蓄積されていないため、ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ相同モデリングサーバー（Ｋｉｅｆｅｒら（２００９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３７：Ｄ３８７～Ｄ３９２）またはソフトウェアプログラムＢｉｏＬｕｍｉｎａｔｅ（ＢｉｏＬｕｍｉｎａｔｅ、バージョン１．０、Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ、 ＬＬＣ、ニューヨーク、ＮＹ、２０１２）を使用して、ヒトＦＧＦ２１（配列番号２）の様々な相同モデルを作り出した。これらのモデルは、公開されているＦＧＦ１９（Ｇｏｅｔｚら（２００７）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２７：３４１７～３４２８頁；ＰＤＢコード２Ｐ２３；Ｈａｒｍｅｒ （２００４）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４３：６２９～６４０頁；ＰＤＢコード１ＰＷＡ）およびＦＧＦ２３（Ｇｏｅｔｚら（２００７）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２７：３４１７～３４２８頁；ＰＤＢコード２Ｐ３９）の結晶構造に基づいている（図６）。ジスルフィド架橋を導入するため、可能性のある部位の一覧を作製するために、ＢｉｏＬｕｍｉｎａｔｅを使用して、様々なモデルをさらなる分析にかけた。発現および実験的試験のための候補の最終選択のために、ソフトウェアプログラムＰＹＭＯＬ（Ｔｈｅ ＰｙＭＯＬ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒａｐｈｉｃｓ Ｓｙｓｔｅｍ、バージョン１．７ Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ，ＬＬＣ）を使用して、可能性のある配置をモデル構造において目視により調べた。
熱安定性変異体の設計およびＦＧＦ２１ Ｑ５５Ｃ、Ｎ１４９Ｃ（配列番号１５８）のＸ線結晶構造。
ＲＣＳＢ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ（ＰＤＢ）のような公開データベース
には、ＦＧＦ２１の構造は蓄積されていないため、ＳＷＩＳＳ－ＭＯＤＥＬ相同モデリングサーバー（Ｋｉｅｆｅｒら（２００９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３７：Ｄ３８７～Ｄ３９２）またはソフトウェアプログラムＢｉｏＬｕｍｉｎａｔｅ（ＢｉｏＬｕｍｉｎａｔｅ、バージョン１．０、Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ、 ＬＬＣ、ニューヨーク、ＮＹ、２０１２）を使用して、ヒトＦＧＦ２１（配列番号２）の様々な相同モデルを作り出した。これらのモデルは、公開されているＦＧＦ１９（Ｇｏｅｔｚら（２００７）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２７：３４１７～３４２８頁；ＰＤＢコード２Ｐ２３；Ｈａｒｍｅｒ （２００４）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４３：６２９～６４０頁；ＰＤＢコード１ＰＷＡ）およびＦＧＦ２３（Ｇｏｅｔｚら（２００７）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２７：３４１７～３４２８頁；ＰＤＢコード２Ｐ３９）の結晶構造に基づいている（図６）。ジスルフィド架橋を導入するため、可能性のある部位の一覧を作製するために、ＢｉｏＬｕｍｉｎａｔｅを使用して、様々なモデルをさらなる分析にかけた。発現および実験的試験のための候補の最終選択のために、ソフトウェアプログラムＰＹＭＯＬ（Ｔｈｅ ＰｙＭＯＬ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒａｐｈｉｃｓ Ｓｙｓｔｅｍ、バージョン１．７ Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ，ＬＬＣ）を使用して、可能性のある配置をモデル構造において目視により調べた。
【0168】
ヒトＦＧＦ２１を結晶化させるため、改変およびトランケートした変異体（ヒトＦＧＦ２１ Ｓ３４～Ｅ１７６、Ｑ５５Ｃ、Ｎ１４９Ｃ；配列番号１５８）を発現させ、上記において説明されるように精製した（実施例１）。結晶は、ハンギングドロップ蒸気拡散法によって成長させた。タンパク質を、５０ｍｍｏｌ／Ｌのトリス、ｐＨ８．０、０．５ｍｏｌ／ＬのＮａＣｌ中において１２ｍｇ／ｍＬまで濃縮した。リザーバ溶液は、１００ｍｍｏｌ／のトリス、ｐＨ８．５中に２ｍｏｌ／ＬのＮＨ４ＳＯ４を含んでいた。１００ｎＬのタンパク質溶液を１００ｎＬのリザーバ溶液と混合し、２０℃で平衡させた。２週間以内に結晶が現れた。２０％から２５％（体積／体積）のエチレングリコールを補ったリザーバ溶液に結晶を浸してから、液体窒素中において急速冷凍することによって、凍結保護を達成した。
【0169】
フィリゲン、スイスにおけるＳｗｉｓｓ Ｌｉｇｈｔ Ｓｏｕｒｃｅ（ＳＬＳ）のビームラインＰＸ－ＩＩＩにおいてＸ線回折データを収集し、ＸＤＳ（Ｋａｂｓｃｈ Ｗ．（２０１０）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ６６：１２５～１３２頁）によって処理し、ａｕｔｏＰｒｏｃ（Ｖｏｎｒｈｅｉｎ Ｃ．ら（２０１１）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ６７：２９３～３０２頁）において実践されるようにＡｉｍｌｅｓｓ（Ｅｖａｎｓ Ｐ．Ｒ．（２００６）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ６２：７２～８２頁）によりスケーリングした。結晶は、空間群Ｐ４１３２のものであり、非対称単位に２つのＦＧＦ２１ Ｑ５５Ｃ、Ｎ１４９Ｃ分子を含有していた。この結晶の単位格子寸法は、以下の通りであった：ａ＝ｂ＝ｃ＝１３６．７Å。結晶は、２．９７Åの解像度に回折され、Ｒｍａｒｇｅは１０．５％であった。
【0170】
構造は、プログラムＰｈａｓｅｒを使用して分子置換によって決定した（ＭｃＣｏｙ Ａ．Ｊ．ら（２００７）Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．４０：６５８～６７４頁）。ＦＧＦ１９（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋコード１ｐｗａ）、ＦＧＦ２３（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋコード２ｐ３９）、およびＦＧＦ９（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋコード２Ｐ３９）の結晶構造を重ね合わせ、約５Å超異なる全てのループを除去した。得られたアンサンブルを、サーチモデルとして使用し、結果として、明確な解を生じた。Ｐｈａｓｅｒは、３つのＦＧＦアンサンブルを位置した。しかしながら、三番目のアンサンブルの電子密度は非常に弱かったため、このアンサンブルは削除した。モデル構築は、Ｃｏｏｔによって行い（Ｅｍｓｌｅｙ Ｐ．ら（２０１０）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ６６：４８６～５０１頁）、洗練は、Ｂｕｓｔｅｒ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ．ら（２０１１）Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄ
ｏｍ：Ｇｌｏｂａｌ Ｐｈａｓｉｎｇ Ｌｔｄ．）およびＲｅｆｍａｃ５（Ｍｕｒｓｈｕｄｏｖ Ｇ．Ｎ．ら（２０１１）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ６７：３５５～３６７頁）によって行った。最終的なＲｆａｃｔｏｒは２５．５％であり、自由Ｒｆａｃｔｏｒは２８．６％であった。これらのＲｆａｃｔｏｒは比較的高く、結晶におけるある特定の量の無秩序性を示し得る。
ｏｍ：Ｇｌｏｂａｌ Ｐｈａｓｉｎｇ Ｌｔｄ．）およびＲｅｆｍａｃ５（Ｍｕｒｓｈｕｄｏｖ Ｇ．Ｎ．ら（２０１１）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ６７：３５５～３６７頁）によって行った。最終的なＲｆａｃｔｏｒは２５．５％であり、自由Ｒｆａｃｔｏｒは２８．６％であった。これらのＲｆａｃｔｏｒは比較的高く、結晶におけるある特定の量の無秩序性を示し得る。
【0171】
ＦＧＦ２１ Ｑ５５Ｃ、Ｎ１４９Ｃ（配列番号１５８）の最終モデルにおいて、分子Ａは、残基Ｇ４２～Ｋ１５０およびＰ１５８～Ｇ１６９を含有しており；分子Ｂは、残基Ｐ３６～Ｈ１５４およびＰ１５６～Ｌ１７０を含有していた。両分子において、Ｐ１５０とＲ１５９との間のループは、著しく無秩序であり、これは、この領域の高い柔軟性を示している。
【0172】
そのような高い柔軟性のループは、タンパク質の熱的アンフォールディングの出発点を表していると仮定することができる。したがって、ジスルフィド結合によるこの領域の安定化は、ＦＧＦ２１変異体Ｈ２９～Ｓ２０９ Ｑ５５Ｃ、Ｎ１４９Ｃ（配列番号１００）または隣接する変異体Ｈ２９～Ｓ２０９ Ｑ５５Ｃ、Ｐ１４７Ｃ（配列番号９９）に対して評価した場合の約２０℃の熱安定性の著しい増加を説明することができる。
【0173】
【表11】
【0174】
【表12】
【0175】
【表13】
【0176】
【表14】
【0177】
【表15】
【0178】
【表16】
【0179】
【表17】
【0180】
【表18】
【0181】
【表19】
【0182】
【表20】
【0183】
【表21】
【0184】
【表22】
【0185】
【表23】
【0186】
【表24】
【0187】
【表25】
【0188】
【表26】
【0189】
【表27】
【0190】
【表28】
【0191】
【表29】
【0192】
【表30】
【0193】
【表31】
【0194】
【表32】
【0195】
【表33】
【0196】
【表34】
【0197】
【表35】
【0198】
【表36】
【0199】
【表37】
【0200】
【表38】
【0201】
【表39】
【0202】
【表40】
【0203】
【表41】
【図1-1】
【図1-2】
【図1-3】
【図1-4】
【図1-5】
【図1-6】
【図1-7】
【図1-8】
【図1-9】
【図1-10】
【図1-11】
【図1-12】
【図2】
【図3-1】
【図3-2】
【図3-3】
【図3-4】
【図3-5】
【図3-6】
【図3-7】
【図3-8】
【図4】
【図5】
【図6】
【配列表】