ホーム > 特許ランキング > 国立大学法人北海道大学
▶ 国立大学法人北海道大学の特許一覧 ▶ ネオファーマジャパン株式会社の特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-06-03
(45)【発行日】2024-06-11
(54)【発明の名称】豚コレラの治療及び／又は予防剤
(51)【国際特許分類】
A61K 31/197 20060101AFI20240604BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20240604BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240604BHJP
A61K 33/26 20060101ALI20240604BHJP
A61K 33/34 20060101ALI20240604BHJP
A61K 33/30 20060101ALI20240604BHJP
A61K 33/24 20190101ALI20240604BHJP
A61K 33/14 20060101ALI20240604BHJP
【ＦＩ】
A61K31/197
A61P31/14
A61P43/00 121
A61K33/26
A61K33/34
A61K33/30
A61K33/24
A61K33/14
【請求項の数】
13
(21)【出願番号】P 2019239164
(22)【出願日】2019-12-27
(65)【公開番号】P2021107352
(43)【公開日】2021-07-29
【審査請求日】2022-12-21
(73)【特許権者】
【識別番号】504173471
【氏名又は名称】国立大学法人北海道大学
(73)【特許権者】
【識別番号】517198735
【氏名又は名称】ＫＩＹＡＮ ＰＨＡＲＭＡ株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100114188
【弁理士】
【氏名又は名称】小野 誠
(74)【代理人】
【識別番号】100183519
【弁理士】
【氏名又は名称】櫻田 芳恵
(74)【代理人】
【識別番号】100196483
【弁理士】
【氏名又は名称】川嵜 洋祐
(74)【代理人】
【識別番号】100127812
【弁理士】
【氏名又は名称】城山 康文
(72)【発明者】
【氏名】迫田 義博
(72)【発明者】
【氏名】河田 聡史
(72)【発明者】
【氏名】富岡 基康
(72)【発明者】
【氏名】吉本 圭一郎
(72)【発明者】
【氏名】和田 康史
【審査官】伊藤 幸司
(56)【参考文献】
【文献】特表２００４－５２７５６６（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２００９－５１１４５９（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１０－５２１４８９（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表平０９－５０９６８２（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２００６－５１７１９６（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２００９－５４２７９０（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２００１－３１６２５５（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１４／０１３６６４（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１６／１６３０８２（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２０００－５１０１２３（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２０１９－０８５３８２（ＪＰ，Ａ）
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ６１Ｋ
Ａ６１Ｐ
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記式（Ｉ）【化7】
で示される化合物又はその塩を含有する豚コレラの治療及び／又は予防剤。
【請求項2】
Ｒ１及びＲ２が水素原子であることを特徴とする、請求項１に記載の豚コレラの治療及び／又は予防剤。
【請求項3】
さらに、一種又は二種以上の金属含有化合物を含有することを特徴とする請求項１又は２記載の豚コレラの治療及び／又は予防剤。
【請求項4】
金属含有化合物が、鉄、マグネシウム、亜鉛、ニッケル、バナジウム、銅、クロム、モリブデン又はコバルトを含有する化合物であることを特徴とする請求項３記載の豚コレラの治療及び／又は予防剤。
【請求項5】
金属含有化合物が、鉄、マグネシウム又は亜鉛を含有する化合物であることを特徴とする請求項３記載の豚コレラの治療及び／又は予防剤。
【請求項6】
金属含有化合物が、鉄を含有する化合物であることを特徴とする請求項３記載の豚コレラの治療及び／又は予防剤。
【請求項7】
下記式（Ｉ）【化8】
で示される化合物又はその塩を含有する豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制剤。
【請求項8】
Ｒ１及びＲ２が水素原子であることを特徴とする、請求項７に記載の豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制剤。
【請求項9】
さらに、一種又は二種以上の金属含有化合物を含有することを特徴とする請求項７又は８記載の豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制剤。
【請求項10】
金属含有化合物が、鉄、マグネシウム、亜鉛、ニッケル、バナジウム、銅、クロム、モリブデン又はコバルトを含有する化合物であることを特徴とする請求項９記載の豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制剤。
【請求項11】
金属含有化合物が、鉄、マグネシウム又は亜鉛を含有する化合物であることを特徴とする請求項９記載の豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制剤。
【請求項12】
金属含有化合物が、鉄を含有する化合物であることを特徴とする請求項９記載の豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制剤。
【請求項13】
前記豚コレラウイルスのタンパク質が、エンベロープタンパク質である、請求項７～１２のいずれか１項に記載の豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、豚コレラ（Ｃｌａｓｓｉｃａｌ Ｓｗｉｎｅ Ｆｅｖｅｒ）の治療及び／又は予防剤に関し、さらに詳しくは、５－アミノレブリン酸（５－ＡＬＡ）若しくはその誘導体又はそれらの塩を含む豚コレラの治療及び／又は予防剤およびこれを用いた豚コレラの治療及び／又は予防に関する。
【背景技術】
【0002】
豚コレラ（Ｃｌａｓｓｉｃａｌ Ｓｗｉｎｅ Ｆｅｖｅｒ）は一本鎖ＲＮＡフラビウイルス科ペスチウイルス属のウイルスの感染によって引き起こされるブタおよびイノシシに特有の疾患であり、その感染経路は不明である。豚コレラを発症した動物は、発熱、食欲減退、急性結膜炎といった症状を示し、初期に便秘になった後に下痢に移行する傾向がある。その他症状として、全身リンパ節や各臓器の充出血、点状出血などが認められる。養豚場等で発症動物が発見された場合は、たとえ発症した動物が１頭であっても養豚場全体で殺処分が行われるなど、産業上大きな問題となっている。
【0003】
したがって、豚コレラの治療または予防のために有効な治療薬の開発が必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0004】
非特許文献１：世界保健機関（ＷＨＯ）ホームページ：「Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏ
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
本発明の課題は、新たな豚コレラの治療及び／又は予防剤を提供することである。より詳細には、５－ＡＬＡ若しくはその誘導体又はそれらの塩を含む豚コレラの治療及び／又は予防剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明者等は、上記課題解決に向けて鋭意研究を重ねた結果、全く意外にも５－ＡＬＡが豚コレラウイルスの増殖および／またはウイルスタンパク質発現を抑制し、豚コレラウイルスを治療または予防することを見いだして本発明を完成した。
【0007】
５－ＡＬＡは、細胞内のミトコンドリア内で産生されるヘム系化合物の共通前駆体である。５－ＡＬＡは特定の炎症性疾患に対して抗炎症作用を示すことなどが知られていたが、５－ＡＬＡおよびその誘導体が豚コレラウイルスの増殖および／またはウイルスタンパク質発現を抑制し、豚コレラを治療または予防し得ることは知られていなかった。本発明は新たに、豚コレラを治療または予防するための、５－ＡＬＡおよびその誘導体を含有する医薬およびその使用を提供するものである。
【0008】
さらに、本発明者等は、５－ＡＬＡとクエン酸第一鉄ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ Ｆｅｒｒｏｕｓ Ｃｉｔｒａｔｅ、ＳＦＣ）などの金属含有化合物を組み合わせて用いることにより、極めて優れた豚コレラの治療または予防効果が得られることも見出した。
【0009】
すなわち、本発明は以下を提供する。
[項目１]
下記式（Ｉ）
（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す。）
で示される化合物又はその塩を含有する豚コレラの治療及び／又は予防剤。
[項目２]
Ｒ１及びＲ２が水素原子であることを特徴とする、項目１に記載の豚コレラの治療及び／又は予防剤。
[項目３]
さらに、一種又は二種以上の金属含有化合物を含有することを特徴とする項目１又は２記載の豚コレラの治療及び／又は予防剤。
[項目４]
金属含有化合物が、鉄、マグネシウム、亜鉛、ニッケル、バナジウム、銅、クロム、モリブデン又はコバルトを含有する化合物であることを特徴とする項目３記載の豚コレラの治療及び／又は予防剤。
[項目５]
金属含有化合物が、鉄、マグネシウム又は亜鉛を含有する化合物であることを特徴とする項目３記載の豚コレラの治療及び／又は予防剤。
[項目６]
金属含有化合物が、鉄を含有する化合物であることを特徴とする項目３記載の豚コレラの治療及び／又は予防剤。
[項目７]
（１）下記式（Ｉ）
（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す。）
で示される化合物又はその塩を含有する豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制剤。
[項目８]
Ｒ１及びＲ２が水素原子であることを特徴とする、項目１に記載の豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制剤。
[項目９]
さらに、一種又は二種以上の金属含有化合物を含有することを特徴とする項目１又は２記載の豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制剤。
[項目１０]
金属含有化合物が、鉄、マグネシウム、亜鉛、ニッケル、バナジウム、銅、クロム、モリブデン又はコバルトを含有する化合物であることを特徴とする項目９記載の豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制剤。
[項目１１]
金属含有化合物が、鉄、マグネシウム又は亜鉛を含有する化合物であることを特徴とする項目９記載の豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制剤。
[項目１２]
金属含有化合物が、鉄を含有する化合物であることを特徴とする項目９記載の豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制剤。
[項目１３]
前記豚コレラウイルスのタンパク質が、エンベロープタンパク質である、項目７～１２のいずれか１項に記載の豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制剤。
[項目１４]
下記式（Ｉ）
（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す。）
で示される化合物又はその塩を、薬学的許容される賦形剤と共に投与することを含む、豚コレラの治療及び／又は予防方法。
[項目１５]
下記式（Ｉ）
（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す。）
で示される化合物又はその塩の、豚コレラの治療及び／又は予防における使用。
[項目１６]
下記式（Ｉ）
（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す。）
で示される化合物又はその塩を、薬学的許容される賦形剤と共に投与することを含む、豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制方法。
[項目１７]
下記式（Ｉ）
（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す。）
で示される化合物又はその塩の、豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制における使用。
[項目１]
下記式（Ｉ）
【化1】
で示される化合物又はその塩を含有する豚コレラの治療及び／又は予防剤。
[項目２]
Ｒ１及びＲ２が水素原子であることを特徴とする、項目１に記載の豚コレラの治療及び／又は予防剤。
[項目３]
さらに、一種又は二種以上の金属含有化合物を含有することを特徴とする項目１又は２記載の豚コレラの治療及び／又は予防剤。
[項目４]
金属含有化合物が、鉄、マグネシウム、亜鉛、ニッケル、バナジウム、銅、クロム、モリブデン又はコバルトを含有する化合物であることを特徴とする項目３記載の豚コレラの治療及び／又は予防剤。
[項目５]
金属含有化合物が、鉄、マグネシウム又は亜鉛を含有する化合物であることを特徴とする項目３記載の豚コレラの治療及び／又は予防剤。
[項目６]
金属含有化合物が、鉄を含有する化合物であることを特徴とする項目３記載の豚コレラの治療及び／又は予防剤。
[項目７]
（１）下記式（Ｉ）
【化2】
で示される化合物又はその塩を含有する豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制剤。
[項目８]
Ｒ１及びＲ２が水素原子であることを特徴とする、項目１に記載の豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制剤。
[項目９]
さらに、一種又は二種以上の金属含有化合物を含有することを特徴とする項目１又は２記載の豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制剤。
[項目１０]
金属含有化合物が、鉄、マグネシウム、亜鉛、ニッケル、バナジウム、銅、クロム、モリブデン又はコバルトを含有する化合物であることを特徴とする項目９記載の豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制剤。
[項目１１]
金属含有化合物が、鉄、マグネシウム又は亜鉛を含有する化合物であることを特徴とする項目９記載の豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制剤。
[項目１２]
金属含有化合物が、鉄を含有する化合物であることを特徴とする項目９記載の豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制剤。
[項目１３]
前記豚コレラウイルスのタンパク質が、エンベロープタンパク質である、項目７～１２のいずれか１項に記載の豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制剤。
[項目１４]
下記式（Ｉ）
【化3】
で示される化合物又はその塩を、薬学的許容される賦形剤と共に投与することを含む、豚コレラの治療及び／又は予防方法。
[項目１５]
下記式（Ｉ）
【化4】
で示される化合物又はその塩の、豚コレラの治療及び／又は予防における使用。
[項目１６]
下記式（Ｉ）
【化5】
で示される化合物又はその塩を、薬学的許容される賦形剤と共に投与することを含む、豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制方法。
[項目１７]
下記式（Ｉ）
【化6】
で示される化合物又はその塩の、豚コレラウイルスのタンパク質発現抑制における使用。
【発明の効果】
【0010】
本発明の豚コレラの治療及び／又は予防剤、並びにウイルスタンパク質発現抑制剤は、特にウイルスエンベロープタンパク質の発現を強力に抑制することにより、感染細胞の増加を抑制し、優れた豚コレラ治療及び／または予防効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【発明を実施するための形態】
【0012】
（定義）
本明細書において、複数の数値の範囲が示された場合、それら複数の範囲の任意の下限値および上限値の組み合わせからなる範囲も同様に意味する。
本明細書において、複数の数値の範囲が示された場合、それら複数の範囲の任意の下限値および上限値の組み合わせからなる範囲も同様に意味する。
【0013】
（本発明の豚コレラの治療及び／又は予防剤、並びにウイルスタンパク質発現抑制剤の有効成分）
本発明の豚コレラの治療及び／又は予防剤、並びにウイルスタンパク質発現抑制剤の有効成分として用いられる化合物は、式（Ｉ）で示される化合物又はその塩（以下、これらを総称して「ＡＬＡ類」ということもある）として例示することができる。δ－アミノレブリン酸とも呼ばれる５－ＡＬＡは、式（Ｉ）のＲ１及びＲ２が共に水素原子の場合であり、アミノ酸の１種である。５－ＡＬＡ誘導体としては、式（Ｉ）のＲ１が水素原子又はアシル基であり、式（Ｉ）のＲ２が水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基である、５－ＡＬＡ以外の化合物を挙げることができる。
本発明の豚コレラの治療及び／又は予防剤、並びにウイルスタンパク質発現抑制剤の有効成分として用いられる化合物は、式（Ｉ）で示される化合物又はその塩（以下、これらを総称して「ＡＬＡ類」ということもある）として例示することができる。δ－アミノレブリン酸とも呼ばれる５－ＡＬＡは、式（Ｉ）のＲ１及びＲ２が共に水素原子の場合であり、アミノ酸の１種である。５－ＡＬＡ誘導体としては、式（Ｉ）のＲ１が水素原子又はアシル基であり、式（Ｉ）のＲ２が水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基である、５－ＡＬＡ以外の化合物を挙げることができる。
【0014】
式（Ｉ）におけるアシル基としては、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、イソバレリル、ピバロイル、ヘキサノイル、オクタノイル、ベンジルカルボニル基等の直鎖又は分岐状の炭素数１～８のアルカノイル基や、ベンゾイル、１－ナフトイル、２－ナフトイル基等の炭素数７～１４のアロイル基を挙げることができる。
【0015】
式（Ｉ）におけるアルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル基等の直鎖又は分岐状の炭素数１～８のアルキル基を挙げることができる。
【0016】
式（Ｉ）におけるシクロアルキル基としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロドデシル、１－シクロヘキセニル基等の飽和、又は一部不飽和結合が存在してもよい、炭素数３～８のシクロアルキル基を挙げることができる。
【0017】
式（Ｉ）におけるアリール基としては、フェニル、ナフチル、アントリル、フェナントリル基等の炭素数６～１４のアリール基を挙げることができる。
【0018】
式（Ｉ）におけるアラルキル基としては、アリール部分は上記アリール基と同じ例示ができ、アルキル部分は上記アルキル基と同じ例示ができ、具体的には、ベンジル、フェネチル、フェニルプロピル、フェニルブチル、ベンズヒドリル、トリチル、ナフチルメチル、ナフチルエチル基等の炭素数７～１５のアラルキル基を挙げることができる。
【0019】
上記５－ＡＬＡ誘導体としては、Ｒ１が、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル基等である化合物や、上記Ｒ２が、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル基等である化合物が好ましく、上記Ｒ１とＲ２の組合せが、ホルミルとメチル、アセチルとメチル、プロピオニルとメチル、ブチリルとメチル、ホルミルとエチル、アセチルとエチル、プロピオニルとエチル、ブチリルとエチルの組合せである化合物などを好ましく挙げることができる。
【0020】
５－ＡＬＡ類は、生体内で式（Ｉ）の５－ＡＬＡ又はその誘導体の状態で有効成分として作用すればよく、投与する形態に応じて、溶解性を上げるための各種の塩、エステル、または生体内の酵素で分解されるプロドラッグ（前駆体）として投与すればよい。例えば、５－ＡＬＡ及びその誘導体の塩としては、薬理学的に許容される酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩等を挙げることができる。酸付加塩としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、リン酸塩、硝酸塩、硫酸塩等の各無機酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、トルエンスルホン酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、グリコール酸塩、メタンスルホン酸塩、酪酸塩、吉草酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩等の各有機酸付加塩を例示することができる。金属塩としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等の各アルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等の各アルカリ土類金属塩、アルミニウム、亜鉛等の各金属塩を例示することができる。アンモニウム塩としては、アンモニウム塩、テトラメチルアンモニウム塩等のアルキルアンモニウム塩等を例示することができる。有機アミン塩としては、トリエチルアミン塩、ピペリジン塩、モルホリン塩、トルイジン塩等の各塩を例示することができる。なお、これらの塩は使用時において溶液としても用いることができる。
【0021】
以上のＡＬＡ類のうち、望ましいものは、５－ＡＬＡ、及び５－ＡＬＡメチルエステル、５－ＡＬＡエチルエステル、５－ＡＬＡプロピルエステル、５－ＡＬＡブチルエステル、５－ＡＬＡペンチルエステル等の各種エステル類、並びに、これらの塩酸塩、リン酸塩、硫酸塩であり、ＡＬＡ塩酸塩、５－ＡＬＡリン酸塩を特に好適に例示することができる。
【0022】
上記ＡＬＡ類は、化学合成、微生物による生産、酵素による生産のいずれの公知の方法によって製造することができる。また、上記ＡＬＡ類は、水和物又は溶媒和物を形成していてもよく、またいずれかを単独で又は２種以上を適宜組み合わせて用いることができる。
【0023】
本発明の豚コレラの治療及び／又は予防剤、並びにウイルスタンパク質発現抑制剤は、過剰症を生じない範囲で、さらに金属含有化合物を含有するものが好ましく、かかる金属含有化合物の金属部分としては、鉄、マグネシウム、亜鉛、ニッケル、バナジウム、コバルト、銅、クロム、モリブデンを挙げることができるが、鉄、マグネシウム、亜鉛が好ましく、中でも鉄を好適に例示することができる。
【0024】
上記ＡＬＡ類と金属含有化合物を併用することで、より低濃度のＡＬＡ類の使用でも、ウイルスタンパク質発現抑制効果、並びに優れた豚コレラの治療及び／又は予防効果を得ることができる。
【0025】
上記鉄化合物としては、有機塩でも無機塩でもよく、無機塩としては、塩化第二鉄、三二酸化鉄、硫酸鉄、ピロリン酸第一鉄を挙げることができ、有機塩としては、カルボン酸塩、例えばヒドロキシカルボン酸塩である、クエン酸第一鉄、クエン酸鉄ナトリウム、クエン酸第一鉄ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ Ｆｅｒｒｏｕｓ Ｃｉｔｒａｔｅ、ＳＦＣ）、クエン酸鉄アンモニウム等のクエン酸塩や、ピロリン酸第二鉄、ヘム鉄、デキストラン鉄、乳酸鉄、グルコン酸第一鉄、ジエチレントリアミン五酢酸鉄ナトリウム、ジエチレントリアミン五酢酸鉄アンモニウム、エチレンジアミン四酢酸鉄ナトリウム、エチレンジアミン五酢酸鉄アンモニウム、ジカルボキシメチルグルタミン酸鉄ナトリウム、ジカルボキシメチルグルタミン酸鉄アンモニウム、フマル酸第一鉄、酢酸鉄、シュウ酸鉄、コハク酸第一鉄、コハク酸クエン酸鉄ナトリウム等の有機酸塩や、トリエチレンテトラアミン鉄、ラクトフェリン鉄、トランスフェリン鉄、鉄クロロフィリンナトリウム、フェリチン鉄、含糖酸化鉄、グリシン第一鉄硫酸塩を挙げることができる。
【0026】
上記マグネシウム化合物としては、クエン酸マグネシウム、安息香酸マグネシウム、酢酸マグネシウム、酸化マグネシウム、塩化マグネシウム、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、ケイ酸マグネシウム、硝酸マグネシウム、ジエチレントリアミン五酢酸マグネシウムジアンモニウム、エチレンジアミン四酢酸マグネシウムジナトリウム、マグネシウムプロトポルフィリンを挙げることができる。
【0027】
上記亜鉛化合物としては、塩化亜鉛、酸化亜鉛、硝酸亜鉛、炭酸亜鉛、硫酸亜鉛、ジエチレントリアミン五酢酸亜鉛ジアンモニウム、エチレンジアミン四酢酸亜鉛ジナトリウム、亜鉛プロトポルフィリン、亜鉛含有酵母を挙げることができる。
【0028】
上記金属含有化合物は、それぞれ１種類又は２種類以上を用いることができ、金属含有化合物の投与量としては、５－ＡＬＡの投与量に対してモル比で０～１００倍であればよく、０．０１倍～１０倍が望ましく、０．１倍～８倍がより望ましい。
【0029】
本発明の豚コレラの治療及び／又は予防剤、並びにウイルスタンパク質発現抑制剤は、過剰症を生じない範囲で、さらに他の抗ウイルス剤や、他の疾患治療薬と併用することができる。これら他の薬剤の投与量、および５－ＡＬＡの投与量との比率は、当業者が適宜調整することができる。
【0030】
（本発明の治療及び／又は予防剤並びにウイルスタンパク質発現抑制剤の投与方法）
本発明の豚コレラの治療及び／又は予防剤に含有されるＡＬＡ類と金属含有化合物または他の薬剤は、これらのうちのいずれか２つ以上を含む組成物としても、あるいは、それぞれを単独で含む組成物としても投与することできる。ＡＬＡ類と金属含有化合物または他の薬剤とを、それぞれ単独で含む組成物を用いる場合、これらを同時に投与してもよく、また、別々に投与してもよい。好ましくは、ＡＬＡ類と金属含有化合物または他の薬剤との投与が相加的効果、好ましくは相乗的効果を奏することができるように組み合わせて投与することができる。ＡＬＡ類と金属含有化合物または他の薬剤をそれぞれ単独で含む組成物を別々に投与する場合、それらの投与間隔は、５分、１０分、１５分、２０分、３０分、４５分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間等に設定できるが、これらに限定されない。
本発明の豚コレラの治療及び／又は予防剤に含有されるＡＬＡ類と金属含有化合物または他の薬剤は、これらのうちのいずれか２つ以上を含む組成物としても、あるいは、それぞれを単独で含む組成物としても投与することできる。ＡＬＡ類と金属含有化合物または他の薬剤とを、それぞれ単独で含む組成物を用いる場合、これらを同時に投与してもよく、また、別々に投与してもよい。好ましくは、ＡＬＡ類と金属含有化合物または他の薬剤との投与が相加的効果、好ましくは相乗的効果を奏することができるように組み合わせて投与することができる。ＡＬＡ類と金属含有化合物または他の薬剤をそれぞれ単独で含む組成物を別々に投与する場合、それらの投与間隔は、５分、１０分、１５分、２０分、３０分、４５分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間等に設定できるが、これらに限定されない。
【0031】
本発明の豚コレラの治療及び／又は予防剤並びにウイルスタンパク質発現抑制剤の投与経路としては特に限定されないが、経口投与、吸入投与、注射、点滴等による静脈内投与、経皮投与、座薬、又は経鼻胃管、経鼻腸管、胃ろうチューブ若しくは腸ろうチューブを用いる強制的経腸栄養法による投与等の非経口投与などを使用することができる。
【0032】
（本発明の治療及び／又は予防剤並びにウイルスタンパク質発現抑制剤の剤型）
本発明の豚コレラの治療及び／又は予防剤並びにウイルスタンパク質発現抑制剤の剤型としては、上記投与経路に応じて適宜決定することができるが、注射剤、点滴剤、錠剤、カプセル剤、細粒剤、散剤、液剤、シロップ等に溶解した水剤、パップ剤、座薬剤等を挙げることができる。
本発明の豚コレラの治療及び／又は予防剤並びにウイルスタンパク質発現抑制剤の剤型としては、上記投与経路に応じて適宜決定することができるが、注射剤、点滴剤、錠剤、カプセル剤、細粒剤、散剤、液剤、シロップ等に溶解した水剤、パップ剤、座薬剤等を挙げることができる。
【0033】
本発明の豚コレラの治療及び／又は予防剤並びにウイルスタンパク質発現抑制剤を調製するために、必要に応じて、薬理学的に許容し得る担体、賦形剤、希釈剤、添加剤、崩壊剤、結合剤、被覆剤、潤滑剤、滑走剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、可溶化剤、溶剤、ゲル化剤、栄養剤等を添加することができ、当業者は各具体的な成分を目的に応じて選択することができる。
【0034】
（本発明の治療及び／又は予防剤並びにウイルスタンパク質発現抑制剤の投与量）
本発明の豚コレラの治療及び／又は予防剤並びにウイルスタンパク質発現抑制剤の投与の量・頻度・期間としては、豚コレラを治療又は予防しようとする動物の種類、年齢、体重、症状等により異なるが、例えば豚に投与する場合、ＡＬＡ類の投与量としては、５－ＡＬＡモル換算で、動物１頭当たり、０．０１－２００ｍｇ／体重ｋｇ／日、好ましくは０．５－１００ｍｇ／体重ｋｇ／日、より好ましくは１－５０ｍｇ／体重ｋｇ／日、さらに好ましくは５－３０ｍｇ／体重ｋｇ／日を挙げることができ、特に予防剤として用いる場合は、低容量を継続して摂取することが望ましい。例えば予防剤サプリメントとして投与する場合には、０．１－１０ｍｇ／体重ｋｇ／日、好ましくは０．５～１ｍｇ／体重ｋｇ／日などの投与量で投与することができる。投与頻度としては、一日一回～複数回の投与又は点滴等による連続的投与を例示することができる。治療剤または予防剤としての投与期間は、獣医等当該技術分野の専門家が既知の方法により決定することができる。
本発明の豚コレラの治療及び／又は予防剤並びにウイルスタンパク質発現抑制剤の投与の量・頻度・期間としては、豚コレラを治療又は予防しようとする動物の種類、年齢、体重、症状等により異なるが、例えば豚に投与する場合、ＡＬＡ類の投与量としては、５－ＡＬＡモル換算で、動物１頭当たり、０．０１－２００ｍｇ／体重ｋｇ／日、好ましくは０．５－１００ｍｇ／体重ｋｇ／日、より好ましくは１－５０ｍｇ／体重ｋｇ／日、さらに好ましくは５－３０ｍｇ／体重ｋｇ／日を挙げることができ、特に予防剤として用いる場合は、低容量を継続して摂取することが望ましい。例えば予防剤サプリメントとして投与する場合には、０．１－１０ｍｇ／体重ｋｇ／日、好ましくは０．５～１ｍｇ／体重ｋｇ／日などの投与量で投与することができる。投与頻度としては、一日一回～複数回の投与又は点滴等による連続的投与を例示することができる。治療剤または予防剤としての投与期間は、獣医等当該技術分野の専門家が既知の方法により決定することができる。
【0035】
（本発明の治療及び／又は予防剤並びにウイルスタンパク質発現抑制剤の適用症状）
本発明の豚コレラの治療及び／又は予防剤並びにウイルスタンパク質発現抑制剤は、豚コレラの感染および／または発症を原因として生じる様々な症状の治療および予防に適用することができる。そのような症状として、発熱、食欲減退、急性結膜炎、便秘、下痢、全身リンパ節や各臓器の充出血、点状出血を例示することができるが、これらに限定されない。
本発明の豚コレラの治療及び／又は予防剤並びにウイルスタンパク質発現抑制剤は、豚コレラの感染および／または発症を原因として生じる様々な症状の治療および予防に適用することができる。そのような症状として、発熱、食欲減退、急性結膜炎、便秘、下痢、全身リンパ節や各臓器の充出血、点状出血を例示することができるが、これらに限定されない。
【0036】
（本発明の治療及び／又は予防剤並びにウイルスタンパク質発現抑制剤の適用動物）
本発明の豚コレラの治療及び／又は予防剤並びにウイルスタンパク質発現抑制剤は、豚、イノシシおよびこれらの近縁動物に投与することができる。
本発明の豚コレラの治療及び／又は予防剤並びにウイルスタンパク質発現抑制剤は、豚、イノシシおよびこれらの近縁動物に投与することができる。
【0037】
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。
【実施例1】
【0038】
以下に示すように、既知の報告（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２０１９，Ｖｏｌ．９３，ｎｏ．２２，ｅ０１１９１－１９）に基づいて、ＨｉＢｉｔペプチドタグをコードする核酸を、ウイルスエンベロープタンパク質Ｅｒｎｓをコードする核酸の５‘側に挿入・融合させた組み換え豚コレラウイルスを用いて、ウイルス増殖およびウイルスタンパク質発現に対する、５－ＡＬＡ、または５－ＡＬＡ＋ＳＦＣの効果を評価した。
【0039】
１．細胞：
豚腎尿細管上皮細胞由来の株化細胞（ＳＫ－Ｌ細胞、Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌ Ｄｅｖ Ｂｉｏｌ Ａｎｉｍ． １９９８ Ｊａｎ；３４（１）：５３－７、農林水産省家畜衛生試験場より入手）を用いた。
豚腎尿細管上皮細胞由来の株化細胞（ＳＫ－Ｌ細胞、Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌ Ｄｅｖ Ｂｉｏｌ Ａｎｉｍ． １９９８ Ｊａｎ；３４（１）：５３－７、農林水産省家畜衛生試験場より入手）を用いた。
【0040】
２．豚コレラウイルス
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， ２０１９， Ｖｏｌ． ９３， ｎｏ． ２２， ｅ０１１９１－１９に基づいて、ＨｉＢｉｔペプチドタグをコードする核酸を、ウイルスエンベロープタンパク質Ｅｒｎｓをコードする核酸の５‘側に挿入・融合させた豚コレラウイルスＧＰＥ－株（１０８．３ＴＣＩＤ５０／ｍｌ）を作成し、これを試験に用いた。
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， ２０１９， Ｖｏｌ． ９３， ｎｏ． ２２， ｅ０１１９１－１９に基づいて、ＨｉＢｉｔペプチドタグをコードする核酸を、ウイルスエンベロープタンパク質Ｅｒｎｓをコードする核酸の５‘側に挿入・融合させた豚コレラウイルスＧＰＥ－株（１０８．３ＴＣＩＤ５０／ｍｌ）を作成し、これを試験に用いた。
【0041】
３．培地
イーグルＭＥＭ培地に０．２９５％トリプトースフォスフェイトブロス、１０ｍＭ Ｎ， Ｎ－ｂｉｓ （２－ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）－２－ａｍｉｎｏｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ （ＢＥＳ）、０．２９２ｍｇ／ｍｌ Ｌ－グルタミン、１０％ウマ血清を添加して培養液とした。
イーグルＭＥＭ培地に０．２９５％トリプトースフォスフェイトブロス、１０ｍＭ Ｎ， Ｎ－ｂｉｓ （２－ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）－２－ａｍｉｎｏｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ （ＢＥＳ）、０．２９２ｍｇ／ｍｌ Ｌ－グルタミン、１０％ウマ血清を添加して培養液とした。
【0042】
４．培養：
ＳＫ－Ｌ細胞を２セットの６穴プレートに、１穴（ウェル）あたり８．８ｘ１０５個／ｍｌの濃度で２ｍＬ分注した。細胞が９０％のコンフルエンスに達した時点を試験開始点（０日目）として試験を開始した。
ＳＫ－Ｌ細胞を２セットの６穴プレートに、１穴（ウェル）あたり８．８ｘ１０５個／ｍｌの濃度で２ｍＬ分注した。細胞が９０％のコンフルエンスに達した時点を試験開始点（０日目）として試験を開始した。
【0043】
５．試験：
試験開始時点でプレートの２ｍＬの培地を含むウェルあたり、ｍｏｉ（Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）＝０．１となるように希釈したウイルス含有溶液を２００μＬずつ接種し、１５分毎に軽く揺らした後、接種１時間後にウイルスを含む培地を除去し、新たに培地を２ｍＬずつ加えた。
各ウェルから培地４００μＬを回収し、そのうち５０μＬをルシフェラーゼ測定に供し、代わりに下記の溶液を培地に加えた。
５－ＡＬＡとして、５－ＡＬＡ塩酸塩を用いた。
培養開始２４時間後（第１日目）、各ウェルから培地４００μＬを回収し、そのうち５０μＬをルシフェラーゼ測定に供し、代わりに下記の溶液を培地に加えた。
２日目から５日目まで、上記１日目と同様の方法で培地を交換して培養した。
なお、豚コレラウイルスについてはｍｏｉ＝０．１接種で３日目が増殖のピークであることが判明しており（北海道大学、博士（獣医学）乙第５５０８号）、実験５日目の時点で試験を終了した。
試験開始時点でプレートの２ｍＬの培地を含むウェルあたり、ｍｏｉ（Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）＝０．１となるように希釈したウイルス含有溶液を２００μＬずつ接種し、１５分毎に軽く揺らした後、接種１時間後にウイルスを含む培地を除去し、新たに培地を２ｍＬずつ加えた。
各ウェルから培地４００μＬを回収し、そのうち５０μＬをルシフェラーゼ測定に供し、代わりに下記の溶液を培地に加えた。
培養開始２４時間後（第１日目）、各ウェルから培地４００μＬを回収し、そのうち５０μＬをルシフェラーゼ測定に供し、代わりに下記の溶液を培地に加えた。
なお、豚コレラウイルスについてはｍｏｉ＝０．１接種で３日目が増殖のピークであることが判明しており（北海道大学、博士（獣医学）乙第５５０８号）、実験５日目の時点で試験を終了した。
【0044】
６．結果
試験開始後第０～５日目から得られた培養液について、ルシフェラーゼアッセイを行ったところ、図１に示すとおり、５－ＡＬＡを添加した培地で培養した場合、ルシフェラーゼ活性が抑制されることが分かった。５－ＡＬＡに加えてＳＦＣを添加した培地で培養した場合、更に強力なルシフェラーゼ活性抑制が得られ、５日目においてその抑制効果は、豚コレラウイルス免疫豚血清を添加した培地で培養した場合よりもさらに強力であった。
なお、細胞変性を目視によって観察したところ、第１群～第６群の間で、細胞変性の程度に差異はなく、いずれの薬剤も細胞障害性を有しないことが確認できた。
当該試験により、５－ＡＬＡおよび５－ＡＬＡ＋ＳＦＣにより、ウイルスの増殖およびタンパク質発現が抑制されることが判明した。
試験開始後第０～５日目から得られた培養液について、ルシフェラーゼアッセイを行ったところ、図１に示すとおり、５－ＡＬＡを添加した培地で培養した場合、ルシフェラーゼ活性が抑制されることが分かった。５－ＡＬＡに加えてＳＦＣを添加した培地で培養した場合、更に強力なルシフェラーゼ活性抑制が得られ、５日目においてその抑制効果は、豚コレラウイルス免疫豚血清を添加した培地で培養した場合よりもさらに強力であった。
なお、細胞変性を目視によって観察したところ、第１群～第６群の間で、細胞変性の程度に差異はなく、いずれの薬剤も細胞障害性を有しないことが確認できた。
当該試験により、５－ＡＬＡおよび５－ＡＬＡ＋ＳＦＣにより、ウイルスの増殖およびタンパク質発現が抑制されることが判明した。
【0045】
以上示した通り、本発明の５－アミノレブリン酸（ＡＬＡ）若しくはその誘導体又はそれらの塩を含む組成物により、豚コレラウイルスの増殖およびウイルスタンパク質の発現を抑制し、豚コレラを治療及び／又は予防することができる。
【図1】
