特許 7511823 ｍｉＲＮＡの発現レベルをがんの確定診断の前のスクリーニングの指標として用いるがんの診断を補助する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-06-28

(45)【発行日】2024-07-08

(54)【発明の名称】ｍｉＲＮＡの発現レベルをがんの確定診断の前のスクリーニングの指標として用いるがんの診断を補助する方法

(51)【国際特許分類】

   C12Q 1/686 20180101AFI20240701BHJP

   C12Q 1/6851 20180101ALI20240701BHJP

   C12N 15/10 20060101ALI20240701BHJP

   C12Q 1/6883 20180101ALI20240701BHJP

【ＦＩ】

C12Q1/686 Z ZNA

C12Q1/6851 Z

C12N15/10 110Z

C12Q1/6883 Z

【請求項の数】 7

(21)【出願番号】P 2021572763

(86)(22)【出願日】2021-01-20

(86)【国際出願番号】 JP2021001836

(87)【国際公開番号】W WO2021149719

(87)【国際公開日】2021-07-29

【審査請求日】2022-06-24

(31)【優先権主張番号】P 2020009850

(32)【優先日】2020-01-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】523007203

【氏名又は名称】株式会社Ｔｈｅ ＩＴ Ｌａｂ

(73)【特許権者】

【識別番号】504136568

【氏名又は名称】国立大学法人広島大学

(73)【特許権者】

【識別番号】598133665

【氏名又は名称】学校法人国際医療福祉大学

(74)【代理人】

【識別番号】100107766

【弁理士】

【氏名又は名称】伊東 忠重

(74)【代理人】

【識別番号】100070150

【弁理士】

【氏名又は名称】伊東 忠彦

(72)【発明者】

【氏名】田口 好弘

(72)【発明者】

【氏名】黒川 洋

(72)【発明者】

【氏名】中山 早苗

(72)【発明者】

【氏名】小林 謙也

(72)【発明者】

【氏名】梅田 雅

(72)【発明者】

【氏名】堀 貫治

(72)【発明者】

【氏名】梅村 創

【審査官】斉藤 貴子

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１７－５２５３５０（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１８－１９１６３６（ＪＰ，Ａ）

【文献】SU, Z. et al.，MiR-451, a potential prognostic biomarker and tumor suppressor for gastric cancer，Int J Clin Exp Pathol，2015年，Vol.8, No.8，P.9154-9160

【文献】BAI, H. et al.，miR-451: A Novel Biomarker and Potential Therapeutic Target for Cancer，Onco Targets and Therapy，2019年，Vol. 12，P. 11069-11082，doi: 10.2147/OTT.S230963

【文献】MENG, L. et al.，MiR-122-5p suppresses the proliferation, migration, and invasion of gastric cancer cells by targeting LYN，Acta Biochimica et Biophysica Sinica，2019年12月11日，Vol.52, No.1，P.49-57，https：//doi.org/10.1093/abbs/gmz141

【文献】ASADI, M. et al.，Identification of miRNAs correlating with stage and progression of colorectal cancer，Colorectal Cancer，2019年，Volume 8, Issue 2，P. 1-10，https://www.futuremedicine.com/doi/epub/10.2217/crc-2018-0014

【文献】TAN, Q. et al.，HOTAIR: An Oncogenic Long Non-Coding RNA in Human Cancer，Cell Physiol Biochem，2018年，Vol. 47, No. 3，P. 893-913，DOI: 10.1159/000490131

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｑ

Ｃ１２Ｎ

Ｇ０１Ｎ

ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

ｍｉＲＮＡの発現レベルをがんの確定診断の前のスクリーニングの指標として用いるがんの診断を補助する方法であって、
被験者の体液から、ｍｉＲＮＡを抽出する工程と、
該抽出されたｍｉＲＮＡを使用して、前記被験者の体液中のｍｉＲＮＡの発現レベルを検出する工程を含み、
前記被験者の体液中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルが、健常者の体液中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルよりも減少していることを、ＨＯＴＡＩＲ（Ｈｏｘ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃ ＲＮＡ）を発現するがんの確定診断の前のスクリーニングの指標として用い、
前記ＨＯＴＡＩＲを発現するがんは、小腸がん、大腸がん、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、消化管カルチノイド、食道がん、肝臓がん、胆のう・胆道がん、膵がん、膵・消化管神経内分泌腫瘍、ランゲルハンス細胞組織球症、腎細胞がん、腎盂・尿管がん、副腎腫瘍、骨肉腫、軟部肉腫、悪性リンパ腫、膀胱がん、尿道がん、前立腺がん、精巣腫瘍、陰茎がん、子宮体がん、子宮頸がん、子宮腫瘍、卵巣腫瘍、女性器がん、肺がん、胸腺腫瘍、中皮腫、乳がん、造血器腫瘍、白血病、骨髄増殖性疾患、又は多発性骨髄腫であり、
前記体液は、血しょう又は血清である、ｍｉＲＮＡの発現レベルをがんの確定診断の前のスクリーニングの指標として用いるがんの診断を補助する方法。

【請求項2】

前記被験者は、がんに罹患していた被験者である、請求項１に記載のｍｉＲＮＡの発現レベルをがんの確定診断の前のスクリーニングの指標として用いるがんの診断を補助する方法。

【請求項3】

前記被験者の体液を高マンノース型糖鎖特異的レクチンが固定化されている基材と接触させる工程をさらに含み、
該高マンノース型糖鎖特異的レクチンにより選択的に捕捉された成分から、前記ｍｉＲＮＡを抽出する、請求項１又は２に記載のｍｉＲＮＡの発現レベルをがんの確定診断の前のスクリーニングの指標として用いるがんの診断を補助する方法。

【請求項4】

前記高マンノース型糖鎖特異的レクチンは、Ｏｓｃｉｌｌａｔｏｒｉａ ａｇａｒｄｈｉｉ由来レクチン（ＯＡＡ）である、請求項３に記載のｍｉＲＮＡの発現レベルをがんの確定診断の前のスクリーニングの指標として用いるがんの診断を補助する方法。

【請求項5】

前記被験者の体液中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルに加えて、前記被験者の体液中のｍｉＲ－４５１ａの発現レベルを検出し、
前記被験者の体液中のｍｉＲ－４５１ａの発現レベルが、前記健常者の体液中のｍｉＲ－４５１ａの発現レベルよりも減少していることを、進行がんの指標として用いる、請求項１～４のいずれか一項に記載のｍｉＲＮＡの発現レベルをがんの確定診断の前のスクリーニングの指標として用いるがんの診断を補助する方法。

【請求項6】

前記体液中のｍｉＲＮＡの発現レベルを検出する際に、前記体液中のｍｉＲ－１９２－５ｐ、ｍｉＲ－９３－５ｐ、ｍｉＲ－５０２－５ｐからなる群より選択される１種以上のｍｉＲＮＡのＣＴ（ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ ｃｙｃｌｅ）値により、前記体液中のｍｉＲＮＡのＣＴ値を補正する、請求項１～５のいずれか一項に記載のｍｉＲＮＡの発現レベルをがんの確定診断の前のスクリーニングの指標として用いるがんの診断を補助する方法。

【請求項7】

前記被験者の体液中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルに加えて、前記被験者の体液中のｍｉＲ－１２６－３ｐ、ｍｉＲ－１９２－５ｐ、ｍｉＲ－９３－５ｐ、ｍｉＲ－４２３－３ｐ、ｍｉＲ－２１－５ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐからなる群より選択される１種以上のｍｉＲＮＡの発現レベルを検出し、
前記被験者の体液中の前記１種以上のｍｉＲＮＡの発現レベルが、それぞれ前記健常者の体液中の前記１種以上のｍｉＲＮＡの発現レベルよりも上昇していることを、がんの指標として用いる、請求項１～６のいずれか一項に記載のｍｉＲＮＡの発現レベルをがんの確定診断の前のスクリーニングの指標として用いるがんの診断を補助する方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ｍｉＲＮＡの発現レベルをがんの指標として用いる方法に関する。

【背景技術】

【0002】

１９８１年以降、がんは、我が国における死亡原因の第一位であり、がんのリスクの低下や健康寿命の延伸に向けた対策は、重要な課題である。がんは、ステージが上がるにつれ、予後が不良となる。ステージ１の段階でがんを発見することができれば、ほとんど完治することが可能であるため、できるだけ早いステージで、がんを発見しうる技術が重要である。特に、血液、尿等の体液は、診断しやすいため、体液を用いて、がんを早期にスクリーニング診断するニーズが高い。また、手術や、その他のがん治療を行った後に、早い段階で、がんの再発や転移をサーベイランス診断するニーズも存在する。

【0003】

また、大腸がんの１次スクリーニングにおいて、便潜血が用いられている。

【0004】

しかしながら、擬陽性率が高いため、便潜血陽性者は、侵襲度が高く、受診に抵抗のある内視鏡検査で確定診断を受けなければならない。このため、便潜血陽性者のうち、内視鏡検査を受診する割合は、５０％程度と低く、問題となっている。

【0005】

また、前立腺がんの１次スクリーニングにおいて、ＰＳＡが用いられている。

【0006】

しかしながら、前立腺肥大でもＰＳＡの値が高くなるため、ＰＳＡ高値者は、侵襲性が非常に高いバイオプシーで確定診断を受けなければならない。

【0007】

こういった侵襲度が高い診断の前段階で、尿、血液等の体液を用いて、被験者が、がんに罹患していることを高い感度で予測することができれば、がんに罹患していない被験者にとって、不要な侵襲性の高い検査をする必要がなくなる。また、より多くの被験者が、尿、血液等の体液を用いる診断を経て、確定診断を受けるようになると考えられる。

【0008】

上記の観点から、従来より、各種がんマーカーが探索され、がんを早期に検出しようという努力がなされている。

【0009】

しかしながら、上記マーカーは、感度が圧倒的に不足しているため、早期のがんを診断することができず、がんをモニタリングする用途で使用されているに過ぎない。また、がんに対する特異性も十分ではなく、がん以外の疾患でもマーカーの濃度が上昇する。

【0010】

一方、最近になって、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）の分析によるがんのスクリーニング診断や、がんの再発及び／又は転移のサーベイランス診断が試みられるようになってきた。

【0011】

例えば、特許文献１には、被験者の胃がんを検出または診断する方法、あるいは、被験者が胃がんを発症する尤度を決定する方法として、被験者から得られる非細胞性生体液サンプル中の少なくとも一つのｍｉＲＮＡの発現レベルを測定する工程を含み、胃がんの無い被験者と比較する場合のｍｉＲＮＡ発現の差次的発現が、胃がんを有する被験者の指標となる方法が開示されている。ここで、ｍｉＲＮＡの差次的発現が、ｈｓａ－ｍｉＲ－１４２－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｃ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－９３－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１４０－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１４８ａ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１８３－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｂ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－４２４－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１０１－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１０６ｂ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２８、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２８０、ｈｓａ－ｍｉＲ－１４０－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１５ｂ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１８６－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１８ｂ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１９７－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１９ａ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１９ｂ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２０ｂ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２１－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２３ａ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２５－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２７ａ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ａ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｂ－２－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２９ｃ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３３８－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－４２５－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－４３０６、ｈｓａ－ｍｉＲ－４５０ａ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－４８６－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５００ａ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５０１－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５３２－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５５０ａ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５７９、ｈｓａ－ｍｉＲ－５８９－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５９０－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５９８、ｈｓａ－ｍｉＲ－６１６－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－６２７、ｈｓａ－ｍｉＲ－６２９－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－６２９－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－９３－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１９５－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１８ａ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３６３－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１８１ａ－２－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１６－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－５０１－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３３９－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１５ａ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３２０ｂ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３７４ｂ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－６５０、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２９０、ｈｓａ－ｍｉＲ－２２－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３２０ｃ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３２０ｅ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３７８ａ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－９－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２００ｂ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１４１－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１９１－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－６２８－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－４８４、ｈｓａ－ｍｉＲ－４２５－５ｐからなる群より選択される「アップレギュレートされた」ｍｉＲＮＡの発現であるか；または、ｈｓａ－ｍｉＲ－１０３ａ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ａ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１８１ａ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１０７、ｈｓａ－ｍｉＲ－２６ａ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２６－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－９９ｂ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３３９－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１３６－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１３９－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１５４－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１９３ｂ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２３ｃ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｂ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３３７－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３８２－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－４０９－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－４１１－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－４８５－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－４８７ｂ、ｈｓａ－ｍｉＲ－４９５、ｈｓａ－ｍｉＲ－８８５－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－９９ａ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３６２－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－６７１－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－４５４－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３２８、ｈｓａ－ｍｉＲ－３２０ａ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１２６－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－２７ａ－３ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－３０ｄ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１０ａ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１０ｂ－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－４９７－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－１３４、およびｈｓａ－ｍｉＲ－１５０－５ｐからなる群より選択される「ダウンレギュレートされた」ｍｉＲＮＡの発現のいずれかである。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0012】

【文献】特表２０１７－５２５３５０号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0013】

しかしながら、多数のｍｉＲＮＡの発現レベルを胃がんの指標として用いるという問題がある。

【0014】

本発明は、少数のｍｉＲＮＡの発現レベルを多数のがんの指標として用いることが可能な、ｍｉＲＮＡの発現レベルをがんの指標として用いる方法を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0015】

本発明の一態様は、ｍｉＲＮＡの発現レベルをがんの指標として用いる方法において、被験者の体液から、ｍｉＲＮＡを抽出する工程と、該抽出されたｍｉＲＮＡを使用して、前記被験者の体液中のｍｉＲＮＡの発現レベルを検出する工程を含み、前記被験者の体液中のｍｉＲＮＡであるｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルが、健常者の体液中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルよりも減少していることを、ＨＯＴＡＩＲ（Ｈｏｘ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃ ＲＮＡ）を発現するがんの指標として用い、前記体液は、血しょう又は血清である。

【発明の効果】

【0016】

本発明によれば、少数のｍｉＲＮＡの発現レベルを多数のがんの指標として用いることが可能な、ｍｉＲＮＡの発現レベルをがんの指標として用いる方法を提供することができる。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1A】大腸がん（ステージ２～４）患者の血しょう１０検体を等量混合したプール検体１～３と、健常者の血しょう３０検体の血しょう画分のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現量の相対値（２－ΔΔＣＴ）の散布図である。

【図1B】大腸がん（ステージ２～４）患者の血しょう１０検体を等量混合したプール検体と、健常者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現量の相対値（２－ΔΔＣＴ）の散布図である。

【図2A】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体の血しょう画分のｍｉＲ－１２２－５ｐのΔΔＣＴ値の箱ひげ図と、ＲＯＣ曲線を示す図である。

【図2B】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分のｍｉＲ－１２２－５ｐのΔΔＣＴ値の箱ひげ図と、ＲＯＣ曲線を示す図である。

【図3】８種類のがん患者の血しょうのレクチンカラム溶出画分のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現量の相対値（２－ΔΔＣＴ）の散布図である。

【図4A】大腸がん（ステージ１～４）患者の血しょう４０検体と、健常者の血しょう３０検体の血しょう画分のｍｉＲ－４５１ａの発現量の相対値（２－ΔΔＣＴ）の散布図である。

【図4B】大腸がん（ステージ１～４）患者の血しょう４０検体と、健常者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分のｍｉＲ－４５１ａの発現量の相対値（２－ΔΔＣＴ）の散布図である。

【図5】表４Ａ、Ｂ、Ｃで得られた重回帰式及びロジスティック回帰式に、健常者の血しょう３０検体と、大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分の各値を代入したときのｙハット値の散布図である。

【図6】表４Ｂ、Ｃで得られたΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値と、ΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値のロジスティック回帰式に、７種類のがん患者の血しょうのレクチンカラム溶出画分の各値を代入して得られたｙハット値の散布図である。

【図7A】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分の１２種類のｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値の決定木学習（Ｃ５．０）により得られた決定木と、ＲＯＣ曲線を示す図である。

【図7B】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図７Ａと同様にして得られた決定木（その１）である。

【図7C】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図７Ａと同様にして得られた決定木（その２）である。

【図7D】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図７Ａと同様にして得られた決定木（その３）である。

【図7E】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図７Ａと同様にして得られた決定木（その４）である。

【図7F】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図７Ａと同様にして得られた決定木（その５）である。

【図7G】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図７Ａと同様にして得られた決定木（その６）である。

【図7H】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図７Ａと同様にして得られた決定木（その７）である。

【図7I】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図７Ａと同様にして得られた決定木（その８）である。

【図7J】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図７Ａと同様にして得られた決定木（その９）である。

【図7K】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図７Ａと同様にして得られた決定木（その１０）である。

【図7L】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図７Ａと同様にして得られた決定木（その１１）である。

【図7M】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図７Ａと同様にして得られた決定木（その１２）である。

【図7N】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図７Ａと同様にして得られた決定木（その１３）である。

【図7O】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図７Ａと同様にして得られた決定木（その１４）である。

【図7P】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図７Ａと同様にして得られた決定木（その１５）である。

【図7Q】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図７Ａと同様にして得られた決定木（その１６）である。

【図7R】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図７Ａと同様にして得られた決定木（その１７）である。

【図7S】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図７Ａと同様にして得られた決定木（その１８）である。

【図8A】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分の１２種類のｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値の決定木学習（Ｃ５．０）により得られた決定木と、ＲＯＣ曲線を示す図である。

【図8B】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図８Ａと同様にして得られた決定木（その１）である。

【図8C】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図８Ａと同様にして得られた決定木（その２）である。

【図8D】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図８Ａと同様にして得られた決定木（その３）である。

【図8E】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図８Ａと同様にして得られた決定木（その４）である。

【図8F】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図８Ａと同様にして得られた決定木（その５）である。

【図8G】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図８Ａと同様にして得られた決定木（その６）である。

【図8H】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図８Ａと同様にして得られた決定木（その７）である。

【図8I】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図８Ａと同様にして得られた決定木（その８）である。

【図8J】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図８Ａと同様にして得られた決定木（その９）である。

【図8K】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図８Ａと同様にして得られた決定木（その１０）である。

【図8L】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図８Ａと同様にして得られた決定木（その１１）である。

【図8M】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図８Ａと同様にして得られた決定木（その１２）である。

【図8N】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図８Ａと同様にして得られた決定木（その１３）である。

【図8O】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図８Ａと同様にして得られた決定木（その１４）である。

【図9A】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分の１２種類のｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値の決定木学習（Ｃ５．０）により得られた決定木と、ＲＯＣ曲線を示す図である。

【図9B】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図９Ａと同様にして得られた決定木（その１）である。

【図9C】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図９Ａと同様にして得られた決定木（その２）である。

【図9D】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図９Ａと同様にして得られた決定木（その３）である。

【図9E】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図９Ａと同様にして得られた決定木（その４）である。

【図9F】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図９Ａと同様にして得られた決定木（その５）である。

【図9G】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図９Ａと同様にして得られた決定木（その６）である。

【図9H】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図９Ａと同様にして得られた決定木（その７）である。

【図9I】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図９Ａと同様にして得られた決定木（その８）である。

【図9J】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図９Ａと同様にして得られた決定木（その９）である。

【図9K】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図９Ａと同様にして得られた決定木（その１０）である。

【図9L】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図９Ａと同様にして得られた決定木（その１１）である。

【図9M】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図９Ａと同様にして得られた決定木（その１２）である。

【図9N】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図９Ａと同様にして得られた決定木（その１３）である。

【図9O】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図９Ａと同様にして得られた決定木（その１４）である。

【図10A】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分の１２種類のｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値の決定木学習（Ｃ５．０）により得られた決定木と、ＲＯＣ曲線を示す図である。

【図10B】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図１０Ａと同様にして得られた決定木（その１）である。

【図10C】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図１０Ａと同様にして得られた決定木（その２）である。

【図10D】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図１０Ａと同様にして得られた決定木（その３）である。

【図10E】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図１０Ａと同様にして得られた決定木（その４）である。

【図10F】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図１０Ａと同様にして得られた決定木（その５）である。

【図10G】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図１０Ａと同様にして得られた決定木（その６）である。

【図10H】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図１０Ａと同様にして得られた決定木（その７）である。

【図10I】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図１０Ａと同様にして得られた決定木（その８）である。

【図10J】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図１０Ａと同様にして得られた決定木（その９）である。

【図10K】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図１０Ａと同様にして得られた決定木（その１０）である。

【図10L】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図１０Ａと同様にして得られた決定木（その１１）である。

【図10M】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図１０Ａと同様にして得られた決定木（その１２）である。

【図10N】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図１０Ａと同様にして得られた決定木（その１３）である。

【図10O】大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出した以外は、図１０Ａと同様にして得られた決定木（その１４）である。

【発明を実施するための形態】

【0018】

次に、本発明を実施するための形態を説明する。

【0019】

［ｍｉＲＮＡをがんの指標として用いる方法］
本実施形態のｍｉＲＮＡをがんの指標として用いる方法は、被験者の体液から、ｍｉＲＮＡを抽出する工程と、抽出されたｍｉＲＮＡを使用して、被験者の体液中のｍｉＲＮＡの発現レベルを検出する工程を含む。

【0020】

本実施形態においては、被験者の体液中のｍｉＲ－１２２－５ｐ（ＵＧＧＡＧＵＧＵＧＡＣＡＡＵＧＧＵＧＵＵＵＧ；配列番号１）の発現レベルが、健常者の体液中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルよりも減少していることを、ＨＯＴＡＩＲ（Ｈｏｘ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃ ＲＮＡ）を発現するがんの指標として用いる。

【0021】

ここで、体液としては、全血、血漿、血清等を含む血液、髄液、リンパ液、涙、尿、汗、母乳、精液、唾液、鼻粘膜、痰、羊水、関節液、腹水、便、細胞培養上清、組織塊由来物、及び動物等由来の体液、等をあげることができる。細胞には、多細胞生物、及び微細藻類等の単細胞性微生物が含まれる。これらはそれ自体を試料として用いてもよいし、例えばＭＥＭ培地や生理食塩水等に添加されて調製された液体として用いることもできる。好ましい体液は、血しょう又は血清である。

【0022】

また、被験者は、いかなる種の動物であり、家畜、畜産動物、霊長類、及びヒト、マウス、ラット、ネコ、イヌ、ヒツジ、ウサギ、ウマ、ウシ、ヤギ、ブタ、モルモット、ハムスター、ニワトリ、七面鳥、または非ヒト霊長類（例えば、マーモセット、マカク）等を含むが、これらに限定されない。であり、健常者は、これらの被験者のうち、がんに罹患していないものをいうである。

【0023】

マイクロＲＮＡ(miRNA)とは、約２１～２２塩基の一本鎖ＲＮＡであるノンコーディングRNAをいい、標的mRNAを分解して、又はその翻訳を阻害することにより、転写後レベルで標的遺伝子の発現を制御する。本発明の一実施形態であるマイクロＲＮＡには、これと同等物も含まれる。

【0024】

「発現レベル」とは、miRNAの発現、活性及びそれらの量のレベルをいう。「発現レベルの減少」とは、被験体の体液に存在するmiRNAの発現レベルが、対照被検体の体液よりも低いレベルで見出されることをいう。対照被検体には、健常者が含まれる。

【0025】

健常者の体液中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルとしては、例えば、対照被験体である１又は複数の健常者の体液中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルの平均値、中央値閾値、値の標準範囲等が挙げられる。当業者であれば、特定のがんである（又はでない）被験者集団の体液における、特定のｍｉＲＮAの活性、発現又は量の評価、及びこの評価に基づいて、適当な平均値、中央値、閾値、値の「標準範囲」等を決定することができる。

【0026】

ＨＯＴＡＩＲは、長鎖非翻訳ＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）の一種である。

【0027】

ＨＯＴＡＩＲを発現するがんとしては、例えば、、小腸がん、大腸がん、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、消化管カルチノイド、胃がん、食道がん、肝臓がん、胆のう・胆道がん、膵がん、膵・消化管神経内分泌腫瘍、ランゲルハンス細胞組織球症、腎細胞がん、腎盂・尿管がん、副腎腫瘍、骨肉腫、軟部肉腫、悪性リンパ腫、膀胱がん、尿道がん、前立腺がん、精巣腫瘍、陰茎がん、子宮体がん、子宮頸がん、子宮腫瘍、卵巣腫瘍、女性器がん、肺がん、胸腺腫瘍、中皮腫、乳がん、造血器腫瘍、白血病、骨髄増殖性疾患および多発性骨髄腫等のがんが挙げられる。

【0028】

本実施形態のｍｉＲＮＡの発現レベルをがんの指標として用いる方法によれば、例えば、ｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルを、ＨＯＴＡＩＲを発現するがんの指標として用いることができるため、がんのスクリーニング診断や、がんの再発及び／又は転移のサーベイランス診断を補助することができる。即ち、被験者の体液中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルが、健常者の体液中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルよりも減少していると、被験者がＨＯＴＡＩＲを発現するがんに罹患している（過去にがんに罹患しており、回復後の被験者にＨＯＴＡＩＲを発現するがんが再発及び／又は転移している）可能性が高い。

【0029】

本実施形態のｍｉＲＮＡの発現レベルをがんの指標として用いる方法を用いても、がんの種類を特定することができない場合がある。このため、本実施形態のｍｉＲＮＡの発現レベルをがんの指標として用いる方法を、がんの１次スクリーニング、大腸がん検診における便潜血陽性者の２次スクリーニング、前立腺がん検診におけるＰＳＡ高値者の２次スクリーニング等に適用することが好ましい。

【0030】

先述したように、大腸がん検診における便潜血陽性者が、確定診断である内視鏡診断を受診する割合は、５０％程度の場合があるが、本実施形態のｍｉＲＮＡの発現レベルをがんの指標として用いる方法により、ＨＯＴＡＩＲを発現するがんに罹患している可能性が高いと診断された便潜血陽性者が、内視鏡診断を受診する割合は、格段に改善することができる。また、前立腺検診におけるＰＳＡ高値者も、本実施形態のｍｉＲＮＡの発現レベルをがんの指標として用いる方法により、ＨＯＴＡＩＲを発現するがんに罹患している可能性が高いと診断された後に、前立腺のバイオプシーをすることで、ＨＯＴＡＩＲを発現するがんに罹患している可能性が低いＰＳＡ高値者が前立腺のバイオプシーを回避することが可能となる。

【0031】

なお、ＮＭＲ－ＣＴ、ＰＥＴ、超音波診断等の物理的診断、血中循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）、ｍｉＲＮＡ等をターゲットとした次世代シーケンサーによる診断等を実施することにより、がんの種類を特定することができる。

【0032】

また、がんの再発及び／又は転移のサーベイランス診断を補助する場合は、がんが再発及び／又は転移する場所を容易に推定することができるので、本実施形態のｍｉＲＮＡの発現レベルをがんの指標として用いる方法を、ＨＯＴＡＩＲを発現する全てのがんに対して、適用することができる。

【0033】

被験者の体液中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルが、健常者の体液中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルよりも減少していることを、ＨＯＴＡＩＲを発現するがんの指標として用いることができる理由は、以下のように考えられている。

【0034】

ＨＯＴＡＩＲを発現するがんから、血中に放出される細胞外小胞（ＥＶｓ）等にＨＯＴＡＩＲが搭載された後、血流に乗って肝臓に輸送される。肝臓に輸送されたＨＯＴＡＩＲは、肝細胞に特異的なｍｉＲ－１２２－５ｐの発現を抑制するため、肝細胞から血中に放出されるＥＶｓ、超低比重リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）に搭載されるｍｉＲ－１２２－５ｐが減少する。その結果、ＨＯＴＡＩＲを発現するがんに罹患している被験者の体液中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルが、健常者の体液中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルよりも減少する。

【0035】

ここで、肝細胞由来のＥＶｓは、高マンノース型糖鎖を有するトランスフェリンレセプター（ＴｆＲ）が表面に存在するため、高マンノース型糖鎖特異的レクチンにより特異的に結合する。また、ＶＬＤＬ、ＬＤＬは、高マンノース型糖鎖を有するアポリポプロテインＢ－１００が存在するため、高マンノース型糖鎖特異的レクチンにより特異的に結合する。このため、被験者の体液を高マンノース型糖鎖特異的レクチンが固定化されている基材と接触させると、肝細胞由来のＥＶｓ、ＶＬＤＬ、ＬＤＬを含む成分が選択的に捕捉される。その結果、選択的に捕捉された成分から、ｍｉＲＮＡを抽出すると、がん陽性に対する判別能が向上する。

【0036】

ｍｉＲ－１２２－５ｐ等の肝細胞由来のｍｉＲＮＡを特異的に捕捉する方法として、基材に固定化したデキストラン硫酸、抗Ａｐｏ－Ｂ抗体を用いて、ＶＬＤＬ、ＬＤＬを選択的に捕捉する方法も使用することが可能である。このとき、ＢＰＬ－１７等の高マンノース型糖鎖特異的で、単糖結合性のあるレクチンを固定化したデバイスで、糖鎖特異的に、ＥＶｓ、ＶＬＤＬ、ＬＤＬを捕捉した後、マンノース等の単糖で溶出し、溶出物を基材に固定化したデキストラン硫酸で精製してもよい。これにより、より純度の高いＶＬＤＬ、ＬＤＬが得られ、肝臓から分泌されるｍｉＲＮＡの精度が向上する。

【0037】

また、ＨＯＴＡＩＲを発現するがんのがん細胞由来のＥＶｓ、一部の免疫系細胞（例えば、Ｔｒｅｇ等）由来のＥＶｓ、網状赤血球由来のＥＶｓも、高マンノース型糖鎖を有するトランスフェリンレセプターが表面に存在するため、高マンノース型糖鎖特異的レクチンに特異的に結合する。このため、これらのＥＶｓに搭載されたｍｉＲＮＡも、ｍｉＲ－１２２－５ｐ以外の補助的なｍｉＲＮＡとして、本実施形態のｍｉＲＮＡの発現レベルをがんの指標として用いる方法に使用される。

【0038】

高マンノース型糖鎖特異的レクチンとしては、例えば、紅藻Ｓｏｌｉｅｒｉａ ｒｏｂｕｓｔａ由来レクチン（ＳｏｌｎｉｎＡ、ＳｏｌｎｉｎＢ、ＳｏｌｎｉｎＣ）、紅藻Ｅｕｃｈｅｕｍａ ｓｅｒｒａ由来レクチン（ＥＳＡ－１、ＥＳＡ－２）、紅藻Ｅ．ａｍａｋｕｓａｅｎｓｉｓ由来レクチン（ＥＡＡ－１、ＥＡＡ－２、ＥＡＡ－３）、紅藻Ｅ．ｄｅｎｔｉｃｕｌａｔｕｍ由来レクチン（ＥＤＡ－１、ＥＤＡ－２、ＥＤＡ－３）、紅藻Ｋａｐｐａｐｈｙｃｕｓ ａｌｖａｒｅｚｉｉ由来レクチン（ＥＣＡ－１（ＫＡＡ－１）、ＥＣＡ－２（ＫＡＡ－２））、ＫＡＡ－３）、紅藻Ｋ．ｓｔｒｉａｔｕｍ由来レクチン（ＫＳＡ－１、ＫＳＡ－２）、紅藻Ｍｅｒｉｓｔｏｔｈｅｃａ ｐａｐｕｌｏｓａ由来レクチン（ＭＰＡ－１、ＭＰＡ－２）、紅藻Ｇｒａｃｉａｌｒｉａｂｕｒｓａ－ｐａｓｔｏｒｉｓ由来レクチン（Ｇｒａｎｉｎ－ＢＰ）、紅藻Ａｇａｒｄｈｉｅｌｌａ ｓｕｂｕｌａｔａ由来レクチン（ＡＳＬ－１、ＡＳＬ－２）、Ｏｓｃｉｌｌａｔｏｒｉａ ａｇａｒｄｈｉｉ由来レクチン（ＯＡＡ）、緑藻Ｂｏｏｄｌｅａ ｃｏａｃｔａ由来レクチン（ＢＣＡ）、緑藻Ｂｒｙｏｐｓｉｓ ｐｌｕｍｏｓａ由来レクチン（ＢＰＬ１７）、緑藻Ｂ．ｍａｘｉｍａ由来レクチン（ＢＭＬ１７）、緑藻Ｂ．ｃｏｒｔｉｃｕｌａｎｓ由来レクチン（ＢＣＬ１７）、紅藻Ｍｅｒｉｓｔｏｔｈｅｃａｐａｐｕｌｏｓａ由来レクチン（ＭＰＬ－１）等が挙げられ、二種以上を併用してもよい。これらの中でも、がん陽性に対する判別能の点で、ＯＡＡが好ましい。

【0039】

高マンノース型糖鎖特異的レクチンが固定化されている基材としては、例えば、高マンノース型糖鎖特異的レクチンを固定化する担体として、シリカモノリスが内包されている、スピンカラム、ピペットチップ、マイクロ流路プレート（例えば、特開２０１８－１９１６３６号公報参照）等が挙げられる。

【0040】

シリカモノリスの市販品としては、例えば、Ｍｏｎｏ Ｂｉｓシリーズ（京都モノテック製）等が挙げられる。

【0041】

高マンノース型糖鎖特異的レクチンを基材に固定化する方法としては、公知の方法を用いることができる（例えば、特開２０１８－１９１６３６号公報参照）。

【0042】

上記以外の高マンノース型糖鎖特異的レクチンが固定化されている基材として、例えば、高マンノース型糖鎖特異的レクチンを固定化する担体として、充填材が充填されているカラム等を用いてもよい。

【0043】

被験者の体液（を高マンノース型糖鎖特異的レクチンが固定化されている基材と接触させることにより選択的に捕捉された成分）から、ｍｉＲＮＡを抽出する方法としては、公知の方法を用いることができる。

【0044】

ｍｉＲＮＡの抽出に用いられる試薬の市販品としては、例えば、ＱＩＡｚｏｌ Ｌｙｓｉｓ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＱＩＡＧＥＮ製）等が挙げられる。

【0045】

被験者の体液（を高マンノース型糖鎖特異的レクチンが固定化されている基材と接触させることにより選択的に捕捉された成分）から、ｍｉＲＮＡを抽出した後、公知の方法を用いて、精製してもよい。

【0046】

ｍｉＲＮＡの精製に用いられる試薬の市販品としては、例えば、ＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎ（登録商標） ｍｉＲＮＡ Ｐｌａｓｍａ（ＭＡＣＨＥＲＥＹ－ＮＡＧＥＬ製）等が挙げられる。

【0047】

体液中のｍｉＲＮＡの発現レベルを検出する方法としては、例えば、リボ核酸ハイブリダイゼーションを利用する通常の分析フォーマットとして、核ランオンアッセイ、リアルタイムＰＣＲ、ＬＡＭＰ（Ｌｏｏｐ－Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）法、ＲＮａｓｅ保護アッセイ（Melton et al., Nuc. Acids Res. 12:7035）、ノーザンブロット法及びＩｎＳｉｔｕハイブリダイゼーション、マイクロアレイ分析等が挙げられる。

【0048】

本実施形態においては、被験者の体液中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルに加えて、被験者の体液中のｍｉＲ－４５１ａ（ＡＡＡＣＣＧＵＵＡＣＣＡＵＵＡＣＵＧＡＧＵＵ；配列番号１３）の発現レベルを検出することが好ましい。このとき、被験者の体液中のｍｉＲ－４５１ａの発現レベルが、健常者の体液中のｍｉＲ－４５１ａの発現レベルよりも減少していることを、進行がんの指標として用いる。即ち、被験者の体液中のｍｉＲ－４５１ａの発現レベルが、健常者の体液中のｍｉＲ－４５１ａの発現レベルよりも減少していると、被験者が進行がんに罹患している（がんに罹患していた被験者に進行がんが再発及び／又は転移している）可能性が高い。

【0049】

被験者の体液中のｍｉＲ－４５１ａの発現レベルが、健常者の体液中のｍｉＲ－４５１ａの発現レベルよりも減少していることを、進行がんの指標として用いることができる理由は、以下のように考えられている。

【0050】

進行がんは、長鎖非翻訳ＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）の一種であるＣＲＮＤＥ（Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｎｅｏｐｌａｓｉａ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ）を発現する。このため、がん細胞から血中に放出されるＥＶｓにＣＲＮＤＥが搭載された後、骨髄に輸送される。骨髄に輸送されたＣＲＮＤＥは、赤血球前駆細胞に作用し、ｍｉＲ－４５１ａの発現を抑制するため、血中のｍｉＲ－４５１ａが減少する。その結果、進行がんに罹患している被験者の体液中のｍｉＲ－４５１ａの発現レベルが、健常者の体液中のｍｉＲ－４５１ａの発現レベルよりも減少する。

【0051】

本実施形態において、体液中のｍｉＲＮＡの発現レベルは、体液中のｍｉＲＮＡの、ＰＣＲ産物が一定量になるＰＣＲのサイクル数であるＣＴ（ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ ｃｙｃｌｅ）値を測定し、当該ＣＴ値を公知の方法により、補正することにより得ることが好ましい。

【0052】

体液中のｍｉＲＮＡの発現レベルとしては、例えば、規定量の公知のｍｉＲＮＡであるｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ（ＵＣＡＣＣＧＧＧＵＧＵＡＡＡＵＣＡＧＣＵＵＧ；配列番号１４）が添加された体液中のｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐのＣＴ値との差である体液中のｍｉＲＮＡのΔＣＴ値、健常者の体液のプール検体中のｍｉＲＮＡのΔＣＴ値との差である体液中のｍｉＲＮＡのΔΔＣＴ値、体液中のｍｉＲＮＡの発現量の相対値（２－ΔΔＣＴ）等が挙げられる。

【0053】

しかしながら、体液中のｍｉＲＮＡの発現レベルを検出する度に、規定量のｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐを体液に添加することは、手間がかかり、簡単な操作とはいえない。

【0054】

そこで、体液中のｍｉＲＮＡの発現レベルを検出する際に、体液中のｍｉＲ－１９２－５ｐ（ＣＵＧＡＣＣＵＡＵＧＡＡＵＵＧＡＣＡＧＣＣ；配列番号９）、ｍｉＲ－９３－５ｐ（ＣＡＡＡＧＵＧＣＵＧＵＵＣＧＵＧＣＡＧＧＵＡＧ；配列番号５）、ｍｉＲ－５０２－５ｐ（ＡＵＣＣＵＵＧＣＵＡＵＣＵＧＧＧＵＧＣＵＡ；配列番号１２）からなる群より選択される１種以上のｍｉＲＮＡのＣＴ値により、体液中のｍｉＲＮＡのＣＴ値を補正することが好ましい。これにより、がん陽性に対する判別能が向上することに加え、ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐを体液に添加する必要がなくなり、操作も簡単になる。

【0055】

なお、体液中のｍｉＲＮＡのＣＴ値は、リアルタイムＰＣＲにより、検出することができる。

【0056】

本実施形態においては、被験者の体液中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルに加えて、被験者の体液中のｍｉＲ－１２６－３ｐ（ＵＣＧＵＡＣＣＧＵＧＡＧＵＡＡＵＡＡＵＧＣＧ；配列番号６）、ｍｉＲ－１９２－５ｐ、ｍｉＲ－９３－５ｐ、ｍｉＲ－４２３－３ｐ（ＡＧＣＵＣＧＧＵＣＵＧＡＧＧＣＣＣＣＵＣＡＧＵ；配列番号１１）、ｍｉＲ－２１－５ｐ（ＵＡＧＣＵＵＡＵＣＡＧＡＣＵＧＡＵＧＵＵＧＡ；配列番号３）、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐ（ＣＡＧＵＧＣＡＡＵＧＵＵＡＡＡＡＧＧＧＣＡＵ；配列番号７）、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ（ＡＵＣＡＣＡＵＵＧＣＣＡＧＧＧＡＵＵＵＣＣ；配列番号４）、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐ（ＵＧＡＧＡＡＣＵＧＡＡＵＵＣＣＡＵＧＧＧＵＵ；配列番号８）、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐ（ＡＣＡＧＵＡＧＵＣＵＧＣＡＣＡＵＵＧＧＵＵＡ；配列番号１０）、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐ（ＵＡＧＣＡＧＣＡＣＡＵＣＡＵＧＧＵＵＵＡＣＡ；配列番号２）からなる群より選択される１種以上のｍｉＲＮＡの発現レベルを検出することが好ましい。このとき、被験者の体液中の上記１種以上のｍｉＲＮＡの発現レベルが、それぞれ健常者の体液中の上記１種以上のｍｉＲＮＡの発現レベルよりも上昇していることを、がんの指標として用いる。即ち、被験者の体液中の上記１種以上のｍｉＲＮＡの発現レベルが、それぞれ健常者の体液中の上記１種以上のｍｉＲＮＡの発現レベルよりも上昇していると、被験者ががんに罹患している（過去にがんに罹患しており、回復後の被験者にがんが再発及び／又は転移している）可能性が高い。

【0057】

この場合、Ｃ５．０のアルゴリズムを用いた決定木学習により、上記１種以上のｍｉＲＮＡを選択することが好ましい。これにより、がん陽性に対する判別能が向上する。

【0058】

具体的には、被験者の体液中の上記１種以上のｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値を検出する場合、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐが選択される。

【0059】

このとき、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値の閾値が－２．２～０．１であり、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値の閾値が－２．５～－１．５であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値の閾値が－６．７～－３．０である。

【0060】

また、被験者の体液中の上記１種以上のｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値を検出する場合、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐが選択される。

【0061】

このとき、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値の閾値が１．０～４．０であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値の閾値が０．１～５．７であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値の閾値が－０．５～１．８である。

【0062】

また、被験者の体液中の上記１種以上のｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値を検出する場合、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐが選択される。

【0063】

このとき、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値の閾値が－７．１～－２．６であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値の閾値が－２．５～－０．４であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値の閾値が－６．４～－３．８である。

【0064】

また、被験者の体液中の上記１種以上のｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値を検出する場合、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２６－３ｐ、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐが選択される。

【0065】

このとき、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値の閾値が－０．８～１．８であり、ｍｉＲ－１２６－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値の閾値が－４．６～－３．４であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値の閾値が－４．９～－２．０である。

【0066】

なお、各ｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値は、各ｍｉＲＮＡのＣＴ値から、ｍｉＲ－９３－５ｐ、ｍｉＲ－１９２－５ｐ及びｍｉＲ－５０２－５ｐの平均ＣＴ値を引いた値である。

【実施例】

【0067】

以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、実施例に限定されるものではない。

【0068】

［血しょう又は血清］
本実施例において、以下の血しょう又は血清を使用した。

【0069】

大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体
大腸がん（ステージ２～４）患者の血しょう１０検体
肝がん患者の血しょう３検体
乳がん患者の血しょう３検体
前立腺がん患者の血しょう２検体
肺がん患者の血しょう２検体
胃がん患者の血しょう２検体
食道がん患者の血しょう２検体
すい臓がん患者の血清２検体
健常者（非がん患者）の血しょう３０検体
がん患者の血しょうは、株式会社ケー・エー・シー又は国際バイオ株式会社から購入した。

【0070】

すい臓がん患者の血清は、福島県立医科大学から入手した。

【0071】

健常者の血しょうは、ボランティアから入手した。

【0072】

血しょう又は血清は、遠心分離（１０，０００ｘＧ，５分間，４℃）により得られた上清を、０．４５μｍフィルターでろ過したものを試料として使用した。

【0073】

［レクチンカラム溶出画分の採取］
レクチンカラムを廃液用チューブにセットし、遠心処理（１，５００ｘＧ，２分間，４℃）して保存液を捨てた。３００μＬのＰＢＳ溶液を加えて、遠心処理（１，５００ｘＧ，２分間，４℃）し、レクチンカラムを洗浄した。各試料１５０μＬをカラムに加えて、室温で５分間静置した後、遠心処理（１，５００ｘＧ，２分間，４℃）して、フロースルー液を捨てた。３００μＬの１０倍濃度のＰＢＳ液を加えて、遠心処理（１，５００ｘＧ，２分間，４℃）してレクチンカラムを洗浄した。上記と同一のレクチンカラムを洗浄する操作を３回繰り返した。３回目の洗浄液を捨てた後、遠心処理（３，０００ｘＧ，１分間，４℃）して、レクチンカラムの液を完全に取り除いた。レクチンカラムを溶出液回収用チューブにセットし、１００μＬのＱＩＡｚｏｌ Ｌｙｓｉｓ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＱＩＡＧＥＮ製）を加えて、室温で５分間静置した後、遠心処理（４００ｘＧ，２分間，４℃）して溶出液を回収し、レクチンカラム溶出画分とした。

【0074】

ここで、レクチンカラムとしては、スピンカラムに充填されたシリカモノリスに、高マンノース型糖鎖特異的レクチンとして、ＯＡＡを固定化することによって得られた、ＡＩＳＴ－ＯＡＡ固定スピンカラム（直径４ｍｍ、厚さ２ｍｍ、容量２７μＬ、ＯＡＡの固定化量４２μｇ）（京都モノテック製）を用いた。

【0075】

［レクチンカラム溶出画分からのｍｉＲＮＡの抽出及び精製］
レクチンカラム溶出画分に４００μＬのＱＩＡｚｏｌ Ｌｙｓｉｓ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＱＩＡＧＥＮ製）を加え、メーカーの処方により、ｍｉＲＮＡの抽出液を得た後、２５０μＬのイソプロピルアルコール（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ含有）を加えた。ここで、ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐは、ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９） Ｓｐｉｋｅ－Ｉｎ Ｋｉｔ（ＮＯＲＧＥＮ ＢＩＯＴＥＫ製）をイソプロピルアルコールで１０００倍に希釈して使用した。ｍｉＲＮＡの精製は、ＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎ（登録商標） ｍｉＲＮＡ Ｐｌａｓｍａ（ＭＡＣＨＥＲＥＹ－ＮＡＧＥＬ製）を、メーカーの処方により、使用して行った。

【0076】

［血しょう画分からのｍｉＲＮＡの抽出及び精製］
各試料１００μＬに５００μＬのＱＩＡｚｏｌ Ｌｙｓｉｓ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＱＩＡＧＥＮ製）を加え、メーカーの処方により、ｍｉＲＮＡの抽出液を得た後、２５０μＬのイソプロピルアルコール（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ含有）を加えた。ｍｉＲＮＡの精製は、ＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎ（登録商標） ｍｉＲＮＡ Ｐｌａｓｍａ（ＭＡＣＨＥＲＥＹ－ＮＡＧＥＬ製）を、メーカーの処方により、使用して行った。

【0077】

［ｍｉＲＮＡアッセイ］
ｍｉＲＮＡアッセイは、ＴａｑＭａｎ（登録商標） ＭｉｃｒｏＲＮＡ Ａｓｓａｙｓ（サーモフィッシャーサイエンティフィック製）を、メーカーの処方により、使用して行った。リアルタイムＰＣＲは、７５００ ＦａｓｔリアルタイムＰＣＲシステム（サーモフィッシャーサイエンティフィック製）を、メーカーの処方により、使用して行った。

【0078】

表１に、ｍｉＲＮＡアッセイに使用した１４種類のｍｉＲＮＡを示す。

【0079】

【表1】

【0080】

ここで、ｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値、ΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値、ΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値、ΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値、ΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値を各統計計算に用いた。全データは、各３回とり、その平均値を使用した。

【0081】

表２Ａに、健常者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分のｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値を示す。

【0082】

【表2A】

【0083】

なお、各ｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値は、各ｍｉＲＮＡのＣＴ値から、ｍｉＲ－９３－５ｐのＣＴ値を引いた値である。

【0084】

表２Ｂに、大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分のｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値を示す。

【0085】

【表2B】

【0086】

表２Ｃに、健常者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分のΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値を示す。

【0087】

【表2C】

【0088】

なお、各ｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値は、各ｍｉＲＮＡのＣＴ値から、ｍｉＲ－１９２－５ｐのＣＴ値を引いた値である。

【0089】

表２Ｄに、大腸がん（ステージ１）患者の試料のレクチンカラム溶出画分のｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値を示す。

【0090】

【表2D】

【0091】

表２Ｅに、健常者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分のｍｉＲＮＡのΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値を示す。

【0092】

【表2E】

【0093】

なお、各ｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値は、各ｍｉＲＮＡのＣＴ値から、ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐのＣＴ値を引いた値である。

【0094】

また、各ｍｉＲＮＡのΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９）値は、各ｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値から、健常者の血しょう３０検体を等量混合したプール検体の各ｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値を引いた値である。

【0095】

表２Ｆに、大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分のｍｉＲＮＡのΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値を示す。

【0096】

【表2F】

【0097】

表２Ｇに、健常者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分のΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値を示す。

【0098】

【表2G】

【0099】

なお、各ｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値は、各ｍｉＲＮＡのＣＴ値から、ｍｉＲ－５０２－５ｐのＣＴ値を引いた値である。

【0100】

表２Ｈに、大腸がん（ステージ１）患者の試料のレクチンカラム溶出画分のｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値を示す。

【0101】

【表2H】

【0102】

表２Ｉに、健常者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分のΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値を示す。

【0103】

【表2I】

【0104】

なお、各ｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値は、各ｍｉＲＮＡのＣＴ値から、ｍｉＲ－９３－５ｐ、ｍｉＲ－１９２－５ｐ及びｍｉＲ－５０２－５ｐの平均ＣＴ値を引いた値である。

【0105】

表２Ｊに、大腸がん（ステージ１）患者の試料のレクチンカラム溶出画分のｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値を示す。

【0106】

【表2J】

【0107】

表２Ｋに、健常者と大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体の血しょう画分のｍｉＲ－４５１ａとｍｉＲ－１２２－５ｐのΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値を示す。

【0108】

【表2K】

【0109】

表２Ｌに、大腸がん（ステージ２～４）患者１０名の血しょうを、それぞれ等量混合したプール検体１～３のｍｉＲ－１２２－５ｐのΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値を示す。

【0110】

【表2L】

【0111】

表２Ｍに、大腸がん（ステージ２～４）患者の血しょう９検体のｍｉＲ－４５１ａのΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値を示す。

【0112】

【表2M】

【0113】

表２Ｎに、７種類のがん患者の血しょう１６検体のレクチンカラム溶出画分のｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値を示す。

【0114】

【表2N】

【0115】

表２Ｏに、８種類のがん患者の血しょう１６検体と血清２検体のレクチンカラム溶出画分のｍｉＲＮＡのΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値を示す。

【0116】

【表2O】

【0117】

表３に、大腸がん（ステージ１）患者と健常者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分のｍｉＲＮＡのΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値のｔ検定結果を示す。

【0118】

【表3】

【0119】

［統計処理］
本実施例に使用した重回帰分析、ロジスティック回帰分析、決定木学習（Ｃ５．０）は、統計処理ソフトＲを用いて実施した。重回帰分析とロジスティック回帰分析によるｍｉＲＮＡの選択は、ＡＩＣを用いたステップワイズ法によって行った。

【0120】

［実施例１：ｍｉＲ－１２２－５ｐの発現量の相対値（２－ΔΔＣＴ）による大腸がん（ステージ２～４）の判定］
（統計）
図１Ａ、Ｂに、大腸がん（ステージ２～４）患者の血しょう１０検体を等量混合したプール検体１～３と、健常者の血しょう３０検体の（Ａ）血しょう画分と、（Ｂ）レクチンカラム溶出画分のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現量の相対値（２－ΔΔＣＴ）の散布図を示す。図１Ａ、Ｂ中、棒は、平均値である。

【0121】

なお、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔΔＣＴ値は、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値から、健常者の血しょう３０検体を等量混合したプール検体のｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値を引いた値である。

【0122】

（結果）
大腸がん（ステージ２～４）患者の血しょうのプール検体１～３の（Ａ）血しょう画分と、（Ｂ）レクチンカラム溶出画分は、健常者の血しょう３０検体の平均値に比べて、ｍｉＲ－１２２－５ｐの発現量の相対値（２－ΔΔＣＴ）が、それぞれ０．４倍、０．０８倍となり、明らかに減少している。また、大腸がん（ステージ２～４）患者のプール検体１～３は、（Ａ）血しょう画分よりも、（Ｂ）レクチンカラム溶出画分の方が、ｍｉＲ－１２２－５ｐの発現量の相対値（２－ΔΔＣＴ）の減少がより明らかである。

【0123】

以上のことから、被験者の血しょう中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルが、健常者の血しょう中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルよりも減少していることが、大腸がん（ステージ２～４）の指標となることがわかる。

【0124】

［実施例２：ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔΔＣＴ値による大腸がん（ステージ１）の判定］
（統計）
図２Ａ、Ｂに、大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体の（Ａ）血しょう画分と、（Ｂ）レクチンカラム溶出画分のｍｉＲ－１２２－５ｐのΔΔＣＴ値の箱ひげ図と、ＲＯＣ曲線を示す。

【0125】

ここで、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔΔＣＴ値は、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値から、健常者の血しょう３０検体を等量混合したプール検体のｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値を引いた値である。

【0126】

（結果）
大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体の（Ａ）血しょう画分と、（Ｂ）レクチンカラム溶出画分のｍｉＲ－１２２－５ｐのΔΔＣＴ値のｔ検定におけるＰ値は、それぞれ０．００２６６４、０．０００１４４であった。このため、大腸がん（ステージ１）患者の血しょうのｍｉＲ－１２２－５ｐのΔΔＣＴ値は、（Ａ）血しょう画分と、（Ｂ）レクチンカラム溶出画分のいずれにおいても、健常者の血しょうのｍｉＲ－１２２－５ｐのΔΔＣＴ値と有意的な差があることがわかる。

【0127】

また、図２Ａ、ＢのＲＯＣ曲線からＡＵＣを求めると、それぞれ０．２６９、０．７８３となったため、血しょうの（Ｂ）レクチンカラム溶出画分のｍｉＲ－１２２－５ｐのΔΔＣＴ値は、がん陽性に対する中程度の判別能を有することがわかる。

【0128】

以上のことから、被験者の血しょう中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルが、健常者の血しょう中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルよりも減少していることが、大腸がん（ステージ１）の指標となることがわかる。

【0129】

［実施例３：ｍｉＲ－１２２－５ｐの発現量の相対値（２－ΔΔＣＴ）による８種類のがんの判定］
（統計）
図３に、８種類のがん患者の血しょうのレクチンカラム溶出画分のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現量の相対値（２－ΔΔＣＴ）の散布図を示す。ここで、比較対照として、健常者の血しょう３０検体の中央値を示した。

【0130】

ここで、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔΔＣＴ値は、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値から、健常者の血しょう３０検体を等量混合したプール検体のｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値を引いた値である。

【0131】

（結果）
血しょうのレクチンカラム溶出画分のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現量の相対値（２－ΔΔＣＴ）が、健常者の血しょう３０検体の中央値に対して、減少しているのは、肝臓がん（ステージ３Ａ）、乳がん（ステージ１Ａ、３Ａ、４）、前立腺がん（ステージ３）、肺がん（ステージ１Ａ、２Ａ）、胃がん（１Ａ、３Ａ）、食道がん（ステージ３Ｂ）、腎臓がん（ステージ３）、すい臓がん（ステージ３、ＩＰＭＣ：Ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ ｐａｐｉｌｌａｒｙ－ｍｕｃｉｎｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ（膵管内乳頭粘液性腺がん））の患者であった。

【0132】

以上のことから、被験者の血しょう又は血清中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルが、健常者の血しょう又は血清中のｍｉＲ－１２２－５ｐの発現レベルよりも減少していることが、被験者が、肝臓がん（ステージ３Ａ）、乳がん（ステージ１Ａ、３Ａ、４）、前立腺がん（ステージ３）、肺がん（ステージ１Ａ、２Ａ）、胃がん（１Ａ、３Ａ）、食道がん（ステージ３Ｂ）、腎臓がん（ステージ３）、すい臓がん（ステージ３、ＩＰＭＣ）の指標となることがわかる。

【0133】

［実施例４：ｍｉＲ－４５１ａの発現量の相対値（２－ΔΔＣＴ）による大腸がん（ステージ２～４）の判定］
（統計）
図４Ａ、Ｂに、大腸がん（ステージ１～４）患者の血しょう４０検体と、健常者の血しょう３０検体の（Ａ）血しょう画分と、（Ｂ）レクチンカラム溶出画分のｍｉＲ－４５１ａの発現量の相対値（２－ΔΔＣＴ）の散布図を示す。ここで、リファレンスは、健常者の血しょう３０検体を等量混合したプール検体である。

【0134】

なお、ｍｉＲ－４５１ａのΔΔＣＴ値は、ｍｉＲ－４５１ａのΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値から、健常者の血しょう３０検体を等量混合したプール検体のｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値を引いた値である。

【0135】

（結果）
大腸がん（ステージ１）患者は、（Ａ）血しょう画分と、（Ｂ）レクチンカラム溶出画分のいずれにおいても、血しょうのｍｉＲ－４５１ａの発現量の相対値（２－ΔΔＣＴ）が、健常者と略同一である。

【0136】

これに対して、大腸がん（ステージ２～４）患者は、（Ａ）血しょう画分と、（Ｂ）レクチンカラム溶出画分のいずれにおいても、血しょうのｍｉＲ－４５１ａの発現量の相対値（２－ΔΔＣＴ）が、健常者に対して、大幅に減少している。

【0137】

以上のことから、被験者の血しょう中のｍｉＲ－４５１ａの発現レベルが、健常者の血しょう中のｍｉＲ－４５１ａの発現レベルよりも減少していることが、ステージ２～４のがんの指標となることがわかる。

【0138】

［実施例５：重回帰分析及びロジスティック回帰分析による大腸がん（ステージ１）患者を判定するｍｉＲＮＡの選択］
（統計）
表４Ａ～Ｅに、大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分の１２種類のｍｉＲＮＡの（Ａ）ΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値、（Ｂ）ΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値、（Ｃ）ΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値、（Ｄ）ΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値、（Ｅ）ΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値による重回帰分析とロジスティック回帰分析の結果を示す。

【0139】

【表4A】

【0140】

【表4B】

【0141】

【表4C】

【0142】

【表4D】

【0143】

【表4E】

【0144】

（結果）
大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分のｍｉＲＮＡアッセイにおける重回帰分析及びロジスティック回帰分析の結果、（Ａ）ΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値、（Ｂ）ΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値、（Ｃ）ΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値、（Ｄ）ΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値、（Ｅ）ΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値のいずれにおいても、ＡＵＣが０．９１以上、感度が０．８３以上、特異度が０．８以上であった。

【0145】

ＡＩＣを用いたステップワイズ法によって、以下に示すｍｉＲＮＡが選択された。

【0146】

ΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値では、重回帰分析と、ロジスティック回帰分析において、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐが選択された。

【0147】

ΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値では、重回帰分析において、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４５１ａが選択され、ロジスティック回帰分析において、ｍｉＲ－１５ｂ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４５１ａが選択された。

【0148】

ΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値では、重回帰分析において、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４２３－３ｐが選択され、ロジスティック回帰分析において、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐ、ｍｉＲ－４２３－３ｐが選択された。

【0149】

ΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値と、ΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値では、重回帰分析と、ロジスティック回帰分析において、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２６－３ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐが選択された。

【0150】

以上のことから、ΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値と、ΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値と、ΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値と、ΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値と、ΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値の重回帰分析と、ロジスティック回帰分析において、ｍｉＲ－１２２－５ｐが選択されていることがわかる。

【0151】

表４Ａ、Ｂ、Ｃの係数値と切片値から、次の６つの回帰式が得られた。

【0152】

ΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）の重回帰式
ｙ＝０．９８１７７＋（－０．１７８５６）＊（ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値）＋（－０．１６９０８）＊（ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値）＋０．３２５５７＊（ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値）
ΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）のロジスティック回帰式
ｙ＝３．９６７７＋（－０．９１７９）＊（ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値）＋（－０．６１９）＊（ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値）＋１．４７９３＊（ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値）
ΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）の重回帰式
ｙ＝－０．９５５３９＋（－０．１５７３４）＊（ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値）＋（－０．１８５４５）＊（ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値）＋０．３５８１２＊（ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値）＋（－０．１４６７）＊（ｍｉＲ－４５１ａのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値）
ΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）のロジスティック回帰式
ｙ＝－８．８２８１＋（－２．０５７）＊（ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値）＋（－１．１９６２）＊（ｍｉＲ－２３ａ―３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値）＋（－０．８６０９）＊（ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値）＋２．７８９２＊（ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値）＋１．２３７５＊（ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値）＋（－１．２５６９）＊（ｍｉＲ－４５１ａのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値）
ΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）の重回帰式
ｙ＝１．３５３７１＋（－０．２５８６１）＊（ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値）＋（－０．２０６２４）＊（ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値）＋０．１４３２９＊（ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐのΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値）＋０．２８７２５＊（ｍｉＲ－４２３－３ｐのΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値）
ΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）のロジスティック回帰式
ｙ＝４．０３３＋（－１．２９０５）＊（ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値）＋（－０．６７８３）＊（ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値）＋０．８５＊（ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値）＋０．９５７４＊（ｍｉＲ－４２３－３ｐのΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値）

【0153】

（統計）
図５に、表４Ａ、Ｂ、Ｃで得られた重回帰式及びロジスティック回帰式に、健常者の血しょう３０検体と、大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分の各値を代入したときのｙハット値の散布図を示す。ここで、カットオフ値を０とし、ｙ＞０である場合に、がん陰性であると判定され、ｙ＜０である場合に、がん陽性であると判定される。

【0154】

（結果）
健常者の血しょう３０検体のうち、健常者＃１６、＃２２の血しょう２検体は、いずれの回帰式においても、偽陽性となった。また、大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体のうち、大腸がん（ステージ１）患者＃２１、＃２６の血しょう２検体は、いずれの回帰式においても、偽陰性となった。

【0155】

なお、健常者＃１６、＃２２は、大腸がん（ステージ１）に罹患している可能性がある。

【0156】

［実施例６：実施例５で得られたロジスティック回帰式による７種類のがんの判定］
（統計）
図６に、表４Ｂ、Ｃで得られたΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値と、ΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値のロジスティック回帰式に、７種類のがん患者の血しょうのレクチンカラム溶出画分の各値を代入して得られたｙハット値の散布図を示す。ここで、カットオフ値を０とし、ｙ＞０である場合に、がん陰性であると判定され、ｙ＜０である場合に、がん陽性であると判定される。

【0157】

（結果）
ΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値のロジスティック回帰式と、ΔΔＣＴ（ｃｅｌ－ｍｉＲ－３９－３ｐ）値のロジスティック回帰式のいずれにおいても、がん陽性と判定された患者は、肝がん（ステージ３Ａ、４Ａ）、乳がん（ステージ１Ａ、３Ａ、４）、前立腺がん（ステージ３）、肺がん（ステージ１Ａ、２Ａ）、胃がん（ステージ３Ａ）、食道がん（ステージ３Ｂ）、腎臓がん（ステージ１、３）の患者であった。ΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値のロジスティック回帰式においてのみ、がん陽性と判定されたのは、胃がん（ステージ１Ａ）の患者であった。

【0158】

［実施例７：決定木学習（Ｃ５．０）による大腸がん（ステージ１）患者を判定するｍｉＲＮＡの選択］
（統計）
図７Ａに、大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分の１２種類のｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値の決定木学習（Ｃ５．０）により得られた決定木と、ＲＯＣ曲線を示す。

【0159】

図８Ａに、大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分の１２種類のｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値の決定木学習（Ｃ５．０）により得られた決定木と、ＲＯＣ曲線を示す。

【0160】

図９Ａに、大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分の１２種類のｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値の決定木学習（Ｃ５．０）により得られた決定木と、ＲＯＣ曲線を示す。

【0161】

図１０Ａに、大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分の１２種類のｍｉＲＮＡのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値の決定木学習（Ｃ５．０）により得られた決定木と、ＲＯＣ曲線を示す。

【0162】

（結果）
大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体のレクチンカラム溶出画分の１２種類のｍｉＲＮＡの決定木学習（Ｃ５．０）によって、以下に示すｍｉＲＮＡが選択された。

【0163】

ΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値を用いる場合は、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１９９ａ－５ｐが選択された。

【0164】

ΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値を用いる場合は、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐが選択された。

【0165】

ΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値を用いる場合は、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐが選択された。

【0166】

ΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値を用いる場合は、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１２６－３ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐが選択された。

【0167】

図７Ａ、図８Ａ、図９Ａ、図１０ＡのＲＯＣ曲線からＡＵＣ（感度、特異度）を求めると、それぞれＡＵＣ：０．９９８９（感度：０．９６７、特異度：０．９６７）、ＡＵＣ：０．９８５６（感度：１．０、特異度０．８６７）、ＡＵＣ：０．９５３（感度：０．９６７、特異度：０．７６７）、ＡＵＣ：０．９７４（感度：０．９００、特異度：０．９００）となった。

【0168】

図７Ａでは、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞１．１２５であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞３．９１７であり、ｍｉＲ－１９９ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞１．１１５である場合、あるいは、（ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞１．１２５であり、）ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦３．９１７であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦－０．１２８であり、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞１．３５６である場合に、がん陽性であると判定される。

【0169】

図８Ａでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞－０．３９である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－０．３９であり、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－１．５４８であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞－６．６２６である場合に、がん陽性であると判定される。

【0170】

図９Ａでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－３．８２８であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞－１．４１３である場合、あるいは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－３．８２８であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－１．４１３であり、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞－６．２３４である場合に、がん陽性であると判定される。

【0171】

図１０Ａでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－２．０６６であり、ｍｉＲ－１２６－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞－４．４５８である場合、あるいは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－２．０６６であり、ｍｉＲ－１２６－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－４．４５８であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞１．７５６である場合に、がん陽性であると判定される。

【0172】

（統計）
図７Ｂ－Ｓに、大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出する以外は、図７Ａと同様にして得られた決定木（１８通り）を示す。

【0173】

表５に、図７Ａ－Ｓの決定木の感度、特異度、閾値を示す。

【0174】

【表5】

【0175】

図８Ｂ－Ｏに、大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出する以外は、図８Ａと同様にして得られた決定木（１４通り）を示す。

【0176】

表６に、図８Ａ－Ｏの決定木の感度、特異度、閾値を示す。

【0177】

【表6】

【0178】

図９Ｂ－Ｏに、大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出する以外は、図９Ａと同様にして得られた決定木（１４通り）を示す。

【0179】

表７に、図９Ａ－Ｏの決定木の感度、特異度、閾値を示す。

【0180】

【表7】

【0181】

図１０Ｂ－Ｏに、大腸がん（ステージ１）患者の血しょう３０検体と、健常者の血しょう３０検体から、それぞれ２０検体を抽出する以外は、図１０Ａと同様にして得られた決定木（１４通り）を示す。

【0182】

表８に、図１０Ａ－Ｏの決定木の感度、特異度、閾値を示す。

【0183】

【表8】

【0184】

（結果）
ΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値を用いる場合は、図７Ａで選択されたｍｉＲＮＡが使用されている、図７Ｂ－Ｓのうち、図７Ｂ－Ｄ、Ｆ－Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｓの決定木の感度が０．９５以上であった。

【0185】

図７Ｂでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞４．５６９であり、ｍｉＲ－１９９ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞１．１７９である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦４．５６９であり、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦１．７０７であり、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞１．５３４である場合に、がん陽性であると判定される。

【0186】

図７Ｃでは、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦４．２８であり、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞１．１５３である場合に、がん陽性であると判定される。

【0187】

図７Ｄでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞３．９１７である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦３．９１７であり、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦１．８９７である場合に、がん陽性であると判定される。

【0188】

図７Ｅでは、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞４．６４７であり、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞１．２８８である場合に、がん陽性であると判定される。

【0189】

図７Ｆでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞３．９７１であり、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞１．１７９である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦３．９１７であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦－０．２１であり、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞１．２８８である場合に、がん陽性であると判定される。

【0190】

図７Ｇでは、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦４．２８であり、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞１．３８７である場合、あるいは、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦４．２８であり、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦１．３８７であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞４．６１８であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦－０．４１３である場合に、がん陽性であると判定される。

【0191】

図７Ｈでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞４．６４７であり、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞１．２８８である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞４．６４７であり、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦１．２８８であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦－０．３９２である場に、がん陽性であると判定される。

【0192】

図７Ｉでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞２．６２である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦２．６２であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦－０．１５４である場合に、がん陽性であると判定される。

【0193】

図７Ｊでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞３．９１７である場合に、がん陽性であると判定される。

【0194】

図７Ｋでは、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞１．２８８であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦０．９３８であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞０．１３１である場合に、がん陽性であると判定される。

【0195】

図７Ｌでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞４．５６９である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦４．５６９であり、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦１．７０７である場合に、がん陽性であると判定される。

【0196】

図７Ｍでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞５．６１８である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦５．６１８であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦－０．１５４であり、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞１．２９８である場合に、がん陽性であると判定される。

【0197】

図７Ｎでは、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞１．１２５であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞３．０３１である場合、あるいは、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞１．１２５であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦３．０３１であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦－０．１２８である場合に、がん陽性であると判定される。

【0198】

図７Ｏでは、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦４．２８であり、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞１．２８８である場合に、がん陽性であると判定される。

【0199】

図７Ｐでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞３．９１７である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦３．９１７であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦－０．１５４である場合に、がん陽性であると判定される。

【0200】

図７Ｑでは、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦２．００９であり、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞１．２８８である場合に、がん陽性であると判定される。

【0201】

図７Ｒでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞４．５６９であり、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞１．０９２である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦４．５６９であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦－０．１５４である場合に、がん陽性であると判定される。

【0202】

図７Ｓでは、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦４．２８であり、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞１．５３４である場合、あるいは、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦４．２８であり、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が≦１．５３４であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ）値が＞５．６１８である場合に、がん陽性であると判定される。

【0203】

ΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値を用いる場合は、図８Ａで選択されたｍｉＲＮＡが使用されている、図８Ｂ－Ｏの全ての決定木の感度が０．９５以上であった。

【0204】

図８Ｂでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞－０．５０８である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－０．５０８であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－４．１９１であり、且つ、＞－６．６２６である場合に、がん陽性であると判定される。

【0205】

図８Ｃでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞－０．３９である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－０．３９であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－４．４１１であり、且つ、＞－６．６３８である場合に、がん陽性であると判定される。

【0206】

図８Ｄでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞－０．５０８である場合に、がん陽性であると判定される。

【0207】

図８Ｅでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞－２．１９８である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－２．１９８であり、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－１．５４８であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞－６．６２６である場合に、がん陽性であると判定される。

【0208】

図８Ｆでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞－１．５６である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－１．５６であり、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－２．３３３であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞－６．２８２である場合に、がん陽性であると判定される。

【0209】

図８Ｇでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞－０．３９である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－０．３９であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－４．１９１であり、且つ、＞－６．６２６である場合に、がん陽性であると判定される。

【0210】

図８Ｈでは、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－１．５４８である場合、あるいは、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞－１．５４８であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞０．００１である場合に、がん陽性であると判定される。

【0211】

図８Ｉでは、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－２．４３であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞－０．５０８である場合、あるいは、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－２．４３であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－０．５０８であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞－６．６２６である場合に、がん陽性であると判定される。

【0212】

図８Ｊでは、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－２．０４８である場合に、がん陽性であると判定される。

【0213】

図８Ｋでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞－０．５０８である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－０．５０８であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≧－３．０２１であり、且つ、＞－６．６２６である場合に、がん陽性であると判定される。

【0214】

図８Ｌでは、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－１．５４８である場合、あるいは、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞－１．５４８であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞０．００１である場合に、がん陽性であると判定される。

【0215】

図８Ｍでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞－０．３９である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－０．３９であり、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－２．３６８であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞－６．６２６である場合に、がん陽性であると判定される。

【0216】

図８Ｎでは、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－１．５４８であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞－１．４６９である場合、あるいは、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－１．５４８であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－１．４６９であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞－６．６２６である場合に、がん陽性であると判定される。

【0217】

図８Ｏでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が＞－０．５０８である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－０．５０８であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－１９２－５ｐ）値が≦－３．０２１であり、且つ、＞－５．６２５である場合に、がん陽性であると判定される。

【0218】

ΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値を用いる場合は、図９Ａで選択されたｍｉＲＮＡが使用されている、図９Ｂ－Ｏのうち、図９Ｂ－Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｋ－Ｏの決定木の感度が０．９５以上であった。

【0219】

図９Ｂでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－３．８２８である場合に、がん陽性であると判定される。

【0220】

図９Ｃでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－３．８２８であり、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞－５．９７７である場合に、がん陽性であると判定される。

【0221】

図９Ｄでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－３．８２８である場合に、がん陽性であると判定される。

【0222】

図９Ｅでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－６．３０１である場合に、がん陽性であると判定される。

【0223】

図９Ｆでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－５．２９１である場合に、がん陽性であると判定される。

【0224】

図９Ｇでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－３．８２８であり、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞－５．３５４である場合に、がん陽性であると判定される。

【0225】

図９Ｈでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－３．９９７である場合に、がん陽性であると判定される。

【0226】

図９Ｉでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－３．８２８であり、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞－４．７７８である場合、あるいは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－３．８２８であり、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－４．７７８であり、且つ、＞－７．０２５である場合に、がん陽性であると判定される。

【0227】

図９Ｊでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－３．９９７であり、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞－５．９７７である場合に、がん陽性であると判定される。

【0228】

図９Ｋでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－３．８２８である場合に、がん陽性であると判定される。

【0229】

図９Ｌでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－３．８２８である場合に、がん陽性であると判定される。

【0230】

図９Ｍでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－６．２９である場合に、がん陽性であると判定される。

【0231】

図９Ｎでは、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－２．６５８である場合に、がん陽性であると判定される。

【0232】

図９Ｏでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－３．８２８である場合に、がん陽性であると判定される。

【0233】

ΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値を用いる場合は、図１０Ａで選択されたｍｉＲＮＡが使用されている、図１０Ｂ－Ｏのうち、図１０Ｂ、Ｄ、Ｈ、Ｌの決定木の感度が０．９５以上であった。

【0234】

図１０Ｂでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－２．０６６であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞１．７５６である場合、あるいは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞≦－２．０６６であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦１．７５６であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞－４．８２９である場合に、がん陽性であると判定される。

【0235】

図１０Ｃでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－２．０６６であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞０．４９６である場合、あるいは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－２．０６６であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦０．４９６であり、ｍｉＲ－１２６－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞－４．３７６である場合に、がん陽性であると判定される。

【0236】

図１０Ｄでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－２．０６６である場合に、がん陽性であると判定される。

【0237】

図１０Ｅでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞０．９７である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦０．９７であり、ｍｉＲ－１２６－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－３．４４５であり、且つ、＞－４．４５８である場合に、がん陽性であると判定される。

【0238】

図１０Ｆでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－３．０３３であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞０．９７である場合、あるいは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－３．０３３であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦０．９７であり、ｍｉＲ－１２６－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞－４．４５８である場合に、がん陽性であると判定される。

【0239】

図１０Ｇでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－２．０６６であり、ｍｉＲ－１２６－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞－４．４５８である場合、あるいは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－２．０６６であり、ｍｉＲ－１２６－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－４．４５８であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞１．７５６である場合に、がん陽性であると判定される。

【0240】

図１０Ｈでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－２．０６６である場合に、がん陽性であると判定される。

【0241】

図１０Ｉでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞０．４９６である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦０．４９６であり、ｍｉＲ－１２６－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－３．４４５であり、且つ、＞－４．３７６である場合に、がん陽性であると判定される。

【0242】

図１０Ｊでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－２．１９であり、ｍｉＲ－１２６－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞－４．４５８である場合、あるいは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－２．１９であり、ｍｉＲ－１２６－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－４．４５８であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞１．４１５である場合に、がん陽性であると判定される。

【0243】

図１０Ｋでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－２．０６６であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞１．７５６である場合、あるいは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－２．０６６であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦１．７５６であり、ｍｉＲ－１２６－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞－４．５３である場合に、がん陽性であると判定される。

【0244】

図１０Ｌでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞０．４９６である場合に、がん陽性であると判定される。

【0245】

図１０Ｍでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞－０．７３４である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－０．７３４であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－２．０６６であり、ｍｉＲ－１２６－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞－４．０４６である場合に、がん陽性であると判定される。

【0246】

図１０Ｎでは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞０．３５３である場合、あるいは、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦０．３５３であり、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－２．５６９であり、ｍｉＲ－１２６－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞－４．０４６である場合に、がん陽性であると判定される。

【0247】

図１０Ｏでは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－２．０６６であり、ｍｉＲ－１２６－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞－４．４５８である場合、あるいは、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－２．０６６であり、ｍｉＲ－１２６－３ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が≦－４．４５８であり、ｍｉＲ－１２２－５ｐのΔＣＴ（ｍｉＲ－９３－５ｐ，ｍｉＲ－１９２－５ｐ，ｍｉＲ－５０２－５ｐ）値が＞１．７５６である場合に、がん陽性であると判定される。

【0248】

本出願は、２０２０年１月２４日に出願された日本国特許出願２０２０－００９８５０号に基づく優先権を主張するものであり、その全内容をここに援用する。

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図7E】

【図7F】

【図7G】

【図7H】

【図7I】

【図7J】

【図7K】

【図7L】

【図7M】

【図7N】

【図7O】

【図7P】

【図7Q】

【図7R】

【図7S】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図8D】

【図8E】

【図8F】

【図8G】

【図8H】

【図8I】

【図8J】

【図8K】

【図8L】

【図8M】

【図8N】

【図8O】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図9D】

【図9E】

【図9F】

【図9G】

【図9H】

【図9I】

【図9J】

【図9K】

【図9L】

【図9M】

【図9N】

【図9O】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図10D】

【図10E】

【図10F】

【図10G】

【図10H】

【図10I】

【図10J】

【図10K】

【図10L】

【図10M】

【図10N】

【図10O】

【配列表】

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