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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-09-11
(45)【発行日】2024-09-20
(54)【発明の名称】細胞培養器具および細胞の処理方法
(51)【国際特許分類】
C12M 3/00 20060101AFI20240912BHJP
C12M 1/28 20060101ALI20240912BHJP
C12N 5/071 20100101ALI20240912BHJP
C08F 120/60 20060101ALI20240912BHJP
C08F 120/36 20060101ALI20240912BHJP
【ＦＩ】
C12M3/00 Z
C12M3/00 A
C12M1/28
C12N5/071
C08F120/60
C08F120/36
【請求項の数】
10
(21)【出願番号】P 2020559334
(86)(22)【出願日】2019-12-13
(86)【国際出願番号】 JP2019048865
(87)【国際公開番号】W WO2020122225
(87)【国際公開日】2020-06-18
【審査請求日】2022-09-27
(31)【優先権主張番号】P 2018233382
(32)【優先日】2018-12-13
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
【前置審査】
(73)【特許権者】
【識別番号】301021533
【氏名又は名称】国立研究開発法人産業技術総合研究所
(73)【特許権者】
【識別番号】598072179
【氏名又は名称】株式会社片岡製作所
(74)【代理人】
【識別番号】110003557
【氏名又は名称】弁理士法人レクシード・テック
(72)【発明者】
【氏名】須丸 公雄
(72)【発明者】
【氏名】高木 俊之
(72)【発明者】
【氏名】金森 敏幸
(72)【発明者】
【氏名】森下 加奈
(72)【発明者】
【氏名】松本 潤一
【審査官】斉藤 貴子
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２０１１／１２５６１５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】国際公開第２０１６／１９４４５４（ＷＯ，Ａ１）
【文献】須丸 公雄 ほか，PAGポリマー薄膜担持基材を用いた培養細胞単層の光マニピュレーション，膜，2015年，Vol. 40, No. 3，P. 130-136
【文献】SUMARU, K. et al.，Photoresponsive Aqueous Dissolution of Poly(N-Isopropylacrylamide) Functionalized with o-Nitrobenzal，Biomacromolecules，2018年04月11日，Vol. 19，P. 2913-2922
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ１２Ｍ
Ｃ１２Ｎ
Ｃ０８Ｆ
ＣＡｐｌｕｓ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
基板と、光溶解性および光熱変換性を有する光反応層とを備え、前記光反応層は、前記基板に積層され、
前記光反応層は、光溶解性および光熱変換性を有するポリマーを含み、
前記光溶解性および光熱変換性を有するポリマーは、下記式（６）で表される、細胞培養器具：
【化6】
ＡおよびＢは、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、単結合または官能基であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９およびＲ１０は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素またはアルキル基であり、
Ｒ６およびＲ７は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、または芳香環であり、
Ｄは、３５０ｎｍ以上の波長において、所定の吸光度を有する色素団であり、
ｖ、ｘ、ｙ、およびｚは、モル百分率を示し、０＜ｖ＜１００、０≦ｘ＜１００、０≦ｙ＜１００、０≦ｚ＜１００（ただし、ｘ＝ｙ＝０を除く）である。
【請求項2】
基板と、光溶解性および光熱変換性を有する光反応層とを備え、前記光反応層は、前記基板に積層され、
前記光反応層は、光溶解性および光熱変換性を有するポリマーを含み、
前記光溶解性および光熱変換性を有するポリマーは、下記式（７）で表される、細胞培養器具：
【化7】
Ａ、ＢおよびＥは、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、単結合または官能基であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９およびＲ１１は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素またはアルキル基であり、
Ｒ６およびＲ７は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、または芳香環であり、
Ｄは、３５０ｎｍ以上の波長において、所定の吸光度を有する色素団であり、
ｕ、ｘ、ｙ、およびｚは、モル百分率を示し、０＜ｕ＜１００、０≦ｘ＜１００、０≦ｙ＜１００、０≦ｚ＜１００（ただし、ｘ＝ｙ＝０を除く）である。
【請求項3】
基板と、光溶解性および光熱変換性を有する光反応層とを備え、前記光反応層は、前記基板に積層され、前記光反応層は、光溶解性および光熱変換性を有するポリマーを含み、
前記光反応層は、光溶解性を有する光溶解層と、光熱変換性を有する光熱変換層とを有し、
前記光溶解層は、光溶解性ポリマーを含み、
前記光熱変換層は、光熱変換性ポリマーを含み、
前記基板、前記光熱変換層、および前記光溶解層は、この順序で積層され、
前記光熱変換性ポリマーは、主鎖と側鎖とを含み、
前記主鎖は、アクリル系ポリマーであり、
前記側鎖は、アゾベンゼン骨格を含む色素団を有し、
前記光溶解性ポリマーは、下記式（２）で表されるポリマーを含む、細胞培養器具：
【化2】
Ａは、単結合または官能基であり、
Ｒ１は、アルデヒド基または下記式（１）で表される官能基であり、
Ｒ１およびＮＯ２は、隣り合った炭素原子にそれぞれ結合しており、
Ｒ２は、水素原子、アルキル基、下記式（３）で表される官能基、および下記式（４）で表される官能基の中から選ばれる少なくとも１つであり、
Ｒ３およびＲ４は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子またはアルキル基であり、
Ｇは、ベンゼン環の水素と置換されてもよいアルキル基であり、前記アルキル基は、３個以下であり、
ｗおよびｚは、モル百分率を示し、０＜ｗ≦１００、０≦ｚ＜１００であり、
【化1】
【化3】
【化4】
Ｒ６およびＲ７は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、または芳香環であり、
前記式（４）において、
Ｒ８は、アルキル基である。
【請求項4】
前記光溶解性ポリマーは、下記式（５）で表されるポリマーを含む、請求項３記載の細胞培養器具：【化5】
ＡおよびＢは、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、単結合または官能基であり、
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ９は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素またはアルキル基であり、
Ｒ６およびＲ７は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、または芳香環であり、
ｘ、ｙ、およびｚは、モル百分率を示し、０≦ｘ＜１００、０≦ｙ＜１００、０≦ｚ＜１００（ただし、ｘ＝ｙ＝０を除く）である。
【請求項5】
前記光反応層と前記基板とを接続する接続層を備え、前記接続層は、前記基板に積層され、
前記光反応層は、前記接続層に積層される、請求項１から４のいずれか一項に記載の細胞培養器具。
【請求項6】
前記光反応層上で、細胞を培養可能である、請求項１から５のいずれか一項に記載の細胞培養器具。
【請求項7】
請求項１から６のいずれか一項に記載の細胞培養器具において、細胞を培養する培養工程と、前記光反応層に、光溶解が生じる第１の光を照射する第１の照射工程と、
前記光反応層に、光熱変換が生じる第２の光を照射する第２の照射工程とを含む、細胞の処理方法。
【請求項8】
前記第１の照射工程において、前記細胞のうち、処理対象の細胞と対応する光反応層に、前記第１の光を照射し、前記第２の照射工程において、前記細胞のうち、前記処理対象の細胞と、処理対象でない細胞との境界と対応する光反応層に、前記第２の光を照射する、請求項７記載の細胞の処理方法。
【請求項9】
前記第２の照射工程において、前記第２の光を照射された光反応層と対応する細胞を致死させる、請求項７または８記載の細胞の処理方法。
【請求項10】
前記第２の光の光照射量は、前記第１の光の光照射量より多い、請求項７から９のいずれか一項に記載の細胞の処理方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、細胞培養器具および細胞の処理方法に関する。
【背景技術】
【0002】
ディッシュ等の細胞培養器具上で培養されている付着性の細胞を回収する場合、トリプシン等のプロテアーゼおよびＥＤＴＡ等のキレート剤との共存下で、細胞と培養器具との接着とを切断し、遊離した細胞を剥離および回収する（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0003】
【文献】国際公開第２０１７／０１０１００号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
しかしながら、プロテアーゼを用いる方法では、培養器具全面の細胞を回収可能であるが、プロテアーゼの作用位置を限定することはできないため、所望の位置の細胞を剥離および回収することはできない。
【0005】
また、細胞を培養器具上で培養すると、細胞同士が接着し、シート状等の細胞塊を形成する。この場合においても、プロテアーゼを用いる方法では、培養器具全面の細胞を回収可能であるが、プロテアーゼの作用位置を限定することはできないため、所望の位置の細胞を回収することはできない。
【0006】
そこで、本発明は、所望の位置の細胞を剥離可能な細胞培養器具およびそれを用いた細胞の処理方法の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0007】
前記目的を達成するために、本発明の細胞培養器具（以下、「培養器具」ともいう）は、基板と、光溶解性および光熱変換性を有する光反応層とを備え、
前記光反応層は、前記基板に積層され、
前記光反応層は、光溶解性および光熱変換性を有するポリマーを含む。
前記光反応層は、前記基板に積層され、
前記光反応層は、光溶解性および光熱変換性を有するポリマーを含む。
【0008】
本発明の細胞の処理方法（以下、「処理方法」ともいう）は、前記本発明の細胞培養器具において、細胞を培養する培養工程と、
前記光反応層に、光溶解が生じる第１の光を照射する第１の照射工程と、
前記光反応層に、光熱変換が生じる第２の光を照射する第２の照射工程とを含む。
前記光反応層に、光溶解が生じる第１の光を照射する第１の照射工程と、
前記光反応層に、光熱変換が生じる第２の光を照射する第２の照射工程とを含む。
【発明の効果】
【0009】
本発明によれば、所望の位置の細胞を剥離可能とすることができる。
【図面の簡単な説明】
【0010】
【図1】図１は、実施形態１の培養器具の構成の一例を示す模式図であり、（Ａ）は、実施形態１の培養器具の模式斜視図であり、（Ｂ）は、（Ａ）におけるＩ－Ｉ方向からみた実施形態１の培養器具の模式断面図であり、（Ｃ）は、培養器具１００で細胞を培養している状態において、（Ａ）におけるＩ－Ｉ方向からみた培養器具１００の模式断面図である。
【発明を実施するための形態】
【0011】
本発明において、「細胞」は、例えば、単離された細胞、細胞から構成される細胞塊、組織、または臓器を意味する。前記細胞は、例えば、培養細胞でもよいし、生体から単離した細胞でもよい。また、前記細胞塊、組織または臓器は、例えば、前記細胞から作製した細胞塊、細胞シート、組織または臓器でもよいし、生体から単離した細胞塊、組織または臓器でもよい。
【0012】
本発明において、「細胞の処理」は、例えば、細胞の剥離、細胞の回収、不要な細胞の除去、および必要な細胞の保持または維持のいずれの意味で用いてもよい。
【0013】
以下、本発明の細胞培養器具および細胞の処理方法について、図面を参照して詳細に説明する。ただし、本発明は、以下の説明に限定されない。なお、以下の図１～図９において、同一部分には、同一符号を付し、その説明を省略する場合がある。また、図面においては、説明の便宜上、各部の構造は適宜簡略化して示す場合があり、各部の寸法比等は、実際とは異なり、模式的に示す場合がある。また、各実施形態は、特に言及しない限り、互いにその説明を援用できる。
【0014】
（実施形態１）
本実施形態は、細胞培養器具および細胞の処理方法の一例である。図１は、実施形態１の培養器具１００の構成を示す模式図であり、（Ａ）は、培養器具１００の模式斜視図であり、（Ｂ）は、（Ａ）におけるＩ－Ｉ方向からみた培養器具１００の模式断面図であり、（Ｃ）は、培養器具１００で細胞を培養している状態において、（Ａ）におけるＩ－Ｉ方向からみた培養器具１００の模式断面図である。図１（Ａ）および（Ｂ）に示すように、培養器具１００は、容器１１および光反応層１２を有する。容器１１は、円状の基板１１ａおよび基板１１ａの外周を囲う側壁１１ｂを有する。光反応層１２は、光溶解性および光熱変換性を有するポリマー（以下、「光反応性ポリマー」ともいう）を含む。光反応層１２は、基板１１ａ上に積層されている。また、図１（Ｃ）に示すように、培養器具１００において、細胞Ｃは、光反応層１２上で培養される、すなわち、光反応層１２および側壁１１ｂに囲われた領域で培養される。図１（Ｃ）に示すように、細胞Ｃは、光反応層１２と接触してもよいし、他の層等を介して光反応層１２と接触してもよい。なお、図１（Ｃ）において、培地は省略している（以下、同様）。
本実施形態は、細胞培養器具および細胞の処理方法の一例である。図１は、実施形態１の培養器具１００の構成を示す模式図であり、（Ａ）は、培養器具１００の模式斜視図であり、（Ｂ）は、（Ａ）におけるＩ－Ｉ方向からみた培養器具１００の模式断面図であり、（Ｃ）は、培養器具１００で細胞を培養している状態において、（Ａ）におけるＩ－Ｉ方向からみた培養器具１００の模式断面図である。図１（Ａ）および（Ｂ）に示すように、培養器具１００は、容器１１および光反応層１２を有する。容器１１は、円状の基板１１ａおよび基板１１ａの外周を囲う側壁１１ｂを有する。光反応層１２は、光溶解性および光熱変換性を有するポリマー（以下、「光反応性ポリマー」ともいう）を含む。光反応層１２は、基板１１ａ上に積層されている。また、図１（Ｃ）に示すように、培養器具１００において、細胞Ｃは、光反応層１２上で培養される、すなわち、光反応層１２および側壁１１ｂに囲われた領域で培養される。図１（Ｃ）に示すように、細胞Ｃは、光反応層１２と接触してもよいし、他の層等を介して光反応層１２と接触してもよい。なお、図１（Ｃ）において、培地は省略している（以下、同様）。
【0015】
容器１１は、前記細胞を培養可能である。容器１１において、基板１１ａと、側壁１１ｂとで囲まれた空間が、前記細胞を培養可能な領域（細胞培養領域）である。容器１１は、細胞培養容器があげられ、具体例として、ディッシュ、プレート、フラスコ（細胞培養フラスコ）等があげられる。容器１１の大きさ、形状、容積、材質、接着処理の有無等は、培養器具１００で培養する細胞の種類および量に応じて適宜決定できる。培養器具１００において、容器１１は、側壁１１ｂを有するが、側壁１１ｂは任意の構成であり、あってもよいし、なくてもよい。側壁１１ｂがない容器１１としては、例えば、前述のプレート、プレパラート等があげられる。基板１１ａは、平面状でもよいし、凹凸を有してもよい。
【0016】
容器１１ならびにそれを構成する基板１１ａおよび側壁１１ｂの材料（材質）は、同じでもよいし、異なってもよい。前記材料は、例えば、細胞培養容器に用いられる材料が使用可能であり、透光性を有する材料であることが好ましい。前記材料は、例えば、ポリスチレン、ポリメチルペンテン、ポリカーボネート、シクロオレフィンポリマー等のプラスチック；ガラス；石英；シリコーン樹脂；セルロース系材料；等があげられる。
【0017】
容器１１は、前記細胞培養領域を１つ有するが、複数有してもよい。後者の場合、容器１１は、例えば、複数のウェルを有するということもできる。また、後者の場合、複数の細胞培養領域のうち、いずれか１つに光反応層１２が形成されてもよいし、複数に光反応層１２が形成されてもよいし、全てに光反応層１２が形成されてもよい。すなわち、容器１１の複数のウェルのうち、いずれか１ウェル、２ウェル以上または全てのウェルに光反応層１２が形成されてもよい。
【0018】
本実施形態において、光反応層１２は、基板１１ａ上の全面に積層されているが、一部に積層させてもよい。光反応層１２を基板１１ａの一部に積層する場合、その大きさおよび形状は、所望の大きさおよび形状に設定できる。光反応層１２は、例えば、剥離したい細胞の大きさおよび形状と対応するように形成してもよい。
【0019】
本実施形態において、容器１１は、蓋を含んでもよい。前記蓋は、例えば、容器１１の上面を着脱可能に覆うことができる。前記蓋は、例えば、基板１１ａと対向するように配置される。前記蓋は、例えば、前記細胞培養容器の蓋、キャップ等があげられる。
【0020】
光反応層１２は、前述のように、前記光反応性ポリマーを含む。前記光反応性ポリマーは、光反応層１２の一部または全体に分散しているが、全体に分散していることが好ましい。光反応層１２は、例えば、光熱変換性を有するポリマーと、光溶解性ポリマーとを、光溶解性および光熱変換性を有するポリマーとして含んでもよいし、光溶解性および光熱変換性の両特性を有するポリマーを含んでもよい。以下、各ポリマーについて説明する。
【0021】
（１）光溶解性ポリマー
前記光溶解性ポリマーは、例えば、光照射によって溶媒溶解性が変化するポリマーであり、例えば、光照射によって水性溶媒（例えば、水、培地等）に対する溶解性が大きく変化するポリマーである。このため、光反応層１２が前記光溶解性ポリマーを含むと、図１（Ｃ）に示すように、光反応層１２上で細胞Ｃを培養している際に、光照射によって光反応層１２を溶媒に溶解させることで、細胞Ｃの基板１１ａに対する間接的な固定（接着）を解除することができる。
前記光溶解性ポリマーは、例えば、光照射によって溶媒溶解性が変化するポリマーであり、例えば、光照射によって水性溶媒（例えば、水、培地等）に対する溶解性が大きく変化するポリマーである。このため、光反応層１２が前記光溶解性ポリマーを含むと、図１（Ｃ）に示すように、光反応層１２上で細胞Ｃを培養している際に、光照射によって光反応層１２を溶媒に溶解させることで、細胞Ｃの基板１１ａに対する間接的な固定（接着）を解除することができる。
【0022】
前記光溶解性ポリマーは、例えば、主鎖と側鎖とを有し、前記側鎖は、芳香環を含み、前記芳香環は、ニトロ基で置換された第１炭素原子と、アルデヒド基または下記式（１）で表される官能基で置換された第２炭素原子とを含み、前記第１炭素原子と、前記第２炭素原子とは、同じベンゼン環内で隣接しているポリマーがあげられる。このようなポリマーを用いることにより、前記光照射によって、水性溶媒に対する溶解性を大きく変化させることができ、好適に光溶解性を発現することができる。
【化1】
【0023】
前記主鎖は、例えば、ポリマーを構成する骨格ということもできる。前記ポリマーを構成する骨格は、例えば、アクリルアミド系ポリマー等のアクリル系ポリマー、ポリスチレン系ポリマー、ポリオレフィン系ポリマー、ポリ酢酸ビニルやポリ塩化ビニル、ポリオレフィン系ポリマー、ポリカーボネート系ポリマー、エポキシ系ポリマー等があげられる。
【0024】
本発明において、前記芳香環は、例えば、芳香族炭化水素でもよいし、複素芳香族化合物でもよい。前記芳香環は、例えば、ベンゼン環、ナフタレン環、アントラセン環、ナフタセン環等があげられる。前記芳香環は、例えば、前記主鎖に直接または間接的に結合している（後述のＡ）。前記直接的な結合では、前記芳香環は、前記主鎖と単結合で直接的に結合している。前記間接的な結合は、例えば、エステル結合、エーテル結合、アミド結合、チオエーテル結合、チオエステル結合、ウレタン結合、またはアルキレン基等を介した結合でもよいし、エステル結合、エーテル結合、アミド結合、チオエーテル結合、チオエステル結合、ウレタン結合、またはアルキレン基を備える他の官能基等を介した結合でもよい。
【0025】
前記光溶解性ポリマーは、好ましくは、下記式（２）で表されるポリマーを含む。
【化2】
【0026】
前記式（２）において、Ａは、単結合または官能基であり、Ｒ１は、アルデヒド基または前記式（１）で表される官能基であり、Ｒ１およびＮＯ２は、隣り合った炭素原子にそれぞれ結合しており、Ｒ２は、水素原子、アルキル基、下記式（３）で表される官能基、および下記式（４）で表される官能基の中から選ばれる少なくとも１つであり、Ｒ３およびＲ４は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子またはアルキル基であり、Ｇは、ベンゼン環の水素と置換されてもよい３個以下のアルキル基であり、ｗおよびｚは、モル百分率を示し、０＜ｗ≦１００、０≦ｚ＜１００である。
【化3】
【化4】
【0027】
また、前記式（３）において、Ｒ６およびＲ７は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、または芳香環である。前記式（４）において、Ｒ８は、アルキル基である。
【0028】
本発明において、前記アルキル基は、例えば、炭素原子１～６個を含む、直鎖、分枝、または環状のアルキル基であり、具体例として、メチル基、エチル基、プロピル基、iso-プロピル基、ブチル基、tert-ブチル基、sec-ブチル基、iso-ブチル基、ペンチル基、ネオペンチル基、イソペンチル機、sec-ペンチル基、tert-ペンチル基、シクロペンチル基、またはヘキシル基である。
【0029】
前記主鎖とベンゼン環とを連結するＡの構造は、制限されず、例えば、単結合、またはエステル結合、エーテル結合、アミド結合、チオエーテル結合、チオエステル結合、ウレタン結合、もしくはアルキレン基を備える官能基等があげられる。すなわち、前記主鎖とベンゼン環とは、単結合で直接結合されていてもよいし、エステル結合、エーテル結合、アミド結合、チオエーテル結合、チオエステル結合、ウレタン結合、またはアルキレン基を介して結合されていてもよいし、エステル結合、エーテル結合、アミド結合、チオエーテル結合、チオエステル結合、ウレタン結合、またはアルキレン基を備える他の官能基を介して結合されていてもよい。
【0030】
前記光溶解性ポリマーは、より好ましくは、下記式（５）で表されるポリマーを含む。下記式（５）において、各モノマーは、ランダムに重合してもよいし、規則性をもって重合してもよい。
【化5】
【0031】
前記式（５）において、ＡおよびＢは、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、単結合または官能基であり、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ９は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子またはアルキル基であり、Ｒ６およびＲ７は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、または芳香環であり、ｘ、ｙ、およびｚは、モル百分率を示し、０≦ｘ＜１００、０≦ｙ＜１００、０≦ｚ＜１００（ただし、ｘ＝ｙ＝０を除く）である。
【0032】
Ｒ６およびＲ７がアルキル基の場合、Ｒ６およびＲ７は、iso-プロピル基またはtert-ブチル基が好ましい。
【0033】
ｘおよびｙは、例えば、より効率よく細胞を処理できることから、ｘ＞ｙを満たすことが好ましい。また、ｘ、ｙおよびｚは、ｘ／（ｘ＋ｙ＋ｚ）が、０．０４以上であることが好ましい。
【0034】
前記式（２）または（５）で表されるポリマーとしては、例えば、後述の式（１１）または（１２）のポリマーがあげられる。
【0035】
前記主鎖とベンゼン環とを連結するＡおよびＢの構造は、前記主鎖とベンゼン環とを連結するＡの構造の説明を援用できる。Ａで連結されている側鎖は、例えば、Ｂで連結されている側鎖のアセタール基を加水分解することで生成できる。このため、前記主鎖とベンゼン環とを連結するＡおよびＢの構造は、同じであることが好ましい。
【0036】
前記光溶解性ポリマーの製造方法は、例えば、国際公開第２０１７／０１３２２６号の説明を参照でき、本明細書の一部として援用できる。
【0037】
（２）光熱変換性ポリマー
前記光熱変換性ポリマーは、光照射によって熱を生じるポリマーである。このため、光反応層１２が前記光熱変換性ポリマーを含むと、図１（Ｃ）に示すように、光反応層１２上で細胞Ｃを培養している際に、光照射によって光反応層１２で熱が発生し、これにより、光照射されている光反応層１２と隣接する細胞Ｃ、すなわち、光照射部の直上に存在する細胞Ｃが致死する。これにより、致死した細胞Ｃを介して間接的に接着していた細胞Ｃ間の固定（接着）を解除することができる。
前記光熱変換性ポリマーは、光照射によって熱を生じるポリマーである。このため、光反応層１２が前記光熱変換性ポリマーを含むと、図１（Ｃ）に示すように、光反応層１２上で細胞Ｃを培養している際に、光照射によって光反応層１２で熱が発生し、これにより、光照射されている光反応層１２と隣接する細胞Ｃ、すなわち、光照射部の直上に存在する細胞Ｃが致死する。これにより、致死した細胞Ｃを介して間接的に接着していた細胞Ｃ間の固定（接着）を解除することができる。
【0038】
前記光熱変換性ポリマーは、例えば、照射する光の波長を吸収する色素団を含むポリマーである。前記光熱変換性ポリマーは、例えば、主鎖と側鎖とを含み、前記側鎖は、前記色素団を有する。前記色素団は、例えば、アゾベンゼン骨格を有する化合物またはその誘導体、ジアリールエテン、スピロピラン、スピロオキサジン、フルギド、ロイコ色素、インジゴ、カロチノイド（カロテン等）、フラボノイド（アントシアニン等）、キノイド（アントラキノン等）等の有機化合物の誘導体を含む。
【0039】
前記主鎖は、例えば、ポリマーを構成する骨格ということもできる。前記ポリマーを構成する骨格は、例えば、アクリルアミド系ポリマー等のアクリル系ポリマー、ポリスチレン系ポリマー、ポリオレフィン系ポリマー、ポリ酢酸ビニルやポリ塩化ビニル、ポリオレフィン系ポリマー、ポリカーボネート系ポリマー、エポキシ系ポリマー等があげられる。
【0040】
前記側鎖は、３５０ｎｍ以上の波長において、所定の吸光度を有する色素団を有することが好ましい。前記所定の吸光度は、例えば、吸光度が、０．０１以上、好ましくは、０．１以上である。前記側鎖は、例えば、３５０ｎｍ以上、１３００ｎｍ以下の範囲において、吸光度が、０．０１以上、好ましくは、０．１以上であることが好ましい。前記吸光度は、吸光光度計を用いて測定できる。前記所定の吸光度を有する色素団は、アゾ系（例えば、アゾベンゼン骨格を有する色素）、フルオレセイン系、ロイコ色素、フェノール色素、多環芳香族系、インジゴイド等のタール色素類；カロチノイド、フラボノイド、ポリフィリン系、アントシアニン系、アリザニン系、フィコビリン系、キノン系の天然色素類似骨格を持つ色素類；等があげられる。具体例として、前記所定の吸光度を有する色素団は、例えば、ジスパースイエロー７、ジスパースオレンジ３、４－（４－ニトロフェニルアゾ）フェノール等があげられる。
【0041】
前記色素団は、例えば、前記主鎖に直接または間接的に結合している。前記直接的な結合では、前記芳香環は、前記主鎖と単結合で直接的に結合している。前記間接的な結合は、例えば、エステル結合、エーテル結合、アミド結合、チオエーテル結合、チオエステル結合、ウレタン結合、またはアルキレン基等を介した結合でもよいし、エステル結合、エーテル結合、アミド結合、チオエーテル結合、チオエステル結合、ウレタン結合、またはアルキレン基を備える他の官能基等を介した結合でもよい。
【0042】
具体例として、前記光熱変換性ポリマーは、例えば、下記式（８）～（１０）で表されるポリマーがあげられる。
【化8】
【化9】
【化10】
【0043】
前記式（８）～（１０）において、ｍおよびｎは、モル百分率を示し、０＜ｍ≦１００、０≦ｎ＜１００である。前記式（８）～（１０）において、ポリマーにおけるアゾベンゼンの構造は、無置換のアゾベンゼンの他、ニトロ基、アミノ基、メチル基等で修飾した様々なバリエーションの構造を採用してもよい。
【0044】
前記光熱変換性ポリマーは、例えば、光熱変換性ポリマーを構成する主鎖の官能基と、前記色素団の官能基とを反応させることにより製造してもよい。また、前記光熱変換性ポリマーは、例えば、前記主鎖のモノマーの官能基と、前記色素団の官能基とを反応させることで得られた色素団を有するモノマーを、前記主鎖のモノマーと重合させることにより製造してもよい。
【0045】
（３）光溶解性および光熱変換性ポリマー
前記光溶解性および光熱変換性ポリマーは、前述の光溶解性ポリマーおよび光熱変換性ポリマーの両者の特性を有するポリマーである。前記光溶解性および光熱変換性ポリマーにおいて、光溶解性を担う原子団と、光熱変換性を担う原子団とは、例えば、異なる特性を有する光によりその特性を発現する。具体的には、前記光溶解性を担う原子団と、前記光熱変換性を担う原子団とは、例えば、異なるエネルギー（光照射量）の光によりその特性を発現し、前記光熱変換性を担う原子団は、好ましくは、前記光溶解性を担う原子団と比較して、エネルギーの高い光によりその特性を発揮する。このため、各原子団が特性を発揮する光を光反応層１２に照射することにより、光反応層１２における光溶解性および光熱変換性ポリマーの溶解による細胞Ｃと基板１１ａとの間接的な固定の解除、および細胞Ｃの致死による、致死した細胞Ｃを介して間接的に接着していた細胞Ｃ間の固定の解除を実施できる。
前記光溶解性および光熱変換性ポリマーは、前述の光溶解性ポリマーおよび光熱変換性ポリマーの両者の特性を有するポリマーである。前記光溶解性および光熱変換性ポリマーにおいて、光溶解性を担う原子団と、光熱変換性を担う原子団とは、例えば、異なる特性を有する光によりその特性を発現する。具体的には、前記光溶解性を担う原子団と、前記光熱変換性を担う原子団とは、例えば、異なるエネルギー（光照射量）の光によりその特性を発現し、前記光熱変換性を担う原子団は、好ましくは、前記光溶解性を担う原子団と比較して、エネルギーの高い光によりその特性を発揮する。このため、各原子団が特性を発揮する光を光反応層１２に照射することにより、光反応層１２における光溶解性および光熱変換性ポリマーの溶解による細胞Ｃと基板１１ａとの間接的な固定の解除、および細胞Ｃの致死による、致死した細胞Ｃを介して間接的に接着していた細胞Ｃ間の固定の解除を実施できる。
【0046】
前記光溶解性および光熱変換性ポリマーは、例えば、主鎖と側鎖とを含み、前記側鎖は、第１の側鎖と第２の側鎖とを含み、前記第１の側鎖は、前述の光溶解性ポリマーの側鎖であり、前記第２の側鎖は、前述の光熱変換性ポリマーの側鎖である。前記光溶解性ポリマーの側鎖および前記光熱変換性ポリマーの側鎖の説明は、前述の説明を援用できる。
【0047】
前記光溶解性および光熱変換性ポリマーは、好ましくは、下記式（６）で表されるポリマーを含む。下記式（６）において、各モノマーは、ランダムに重合してもよいし、規則性をもって重合してもよい。
【化6】
【0048】
前記式（６）において、ＡおよびＢは、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、単結合または官能基であり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９およびＲ１０は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子またはアルキル基であり、Ｒ６およびＲ７は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、または芳香環であり、Ｄは、３５０ｎｍ以上の波長において、所定の吸光度を有する色素団であり、ｖ、ｘ、ｙ、およびｚは、モル百分率を示し、０＜ｖ＜１００、０≦ｘ＜１００、０≦ｙ＜１００、０≦ｚ＜１００（ただし、ｘ＝ｙ＝０を除く）である。
【0049】
前記式（６）で表されるポリマーとしては、例えば、後述の式（１３）のポリマーがあげられる。
【0050】
前記光溶解性および光熱変換性ポリマーは、好ましくは、下記式（７）で表されるポリマーを含む。下記式（７）において、各モノマーは、ランダムに重合してもよいし、規則性をもって重合してもよい。
【化7】
【0051】
前記式（７）において、Ａ、ＢおよびＥは、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、単結合または官能基であり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９およびＲ１１は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子またはアルキル基であり、Ｒ６およびＲ７は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、または芳香環であり、Ｄは、３５０ｎｍ以上の波長において、所定の吸光度を有する色素団であり、ｕ、ｘ、ｙ、およびｚは、モル百分率を示し、０＜ｕ＜１００、０≦ｘ＜１００、０≦ｙ＜１００、０≦ｚ＜１００（ただし、ｘ＝ｙ＝０を除く）である。
【0052】
前記式（６）および（７）におけるＡ、Ｂおよび各置換基の説明は、前記「（１）光溶解性ポリマー」および「（２）光熱変換性ポリマー」における対応する説明を援用できる。
【0053】
前記主鎖と所定の吸光度を有する色素団とを連結するＥの構造は、特に制限されず、例えば、単結合、またはエステル結合、エーテル結合、アミド結合、チオエーテル結合、チオエステル結合、ウレタン結合、もしくはアルキレン基を備える官能基等があげられる。すなわち、前記主鎖とベンゼン環とは、単結合で直接結合されていてもよいし、エステル結合、エーテル結合、アミド結合、チオエーテル結合、チオエステル結合、ウレタン結合、またはアルキレン基を介して結合されていてもよいし、エステル結合、エーテル結合、アミド結合、チオエーテル結合、チオエステル結合、ウレタン結合、またはアルキレン基を備える他の官能基を介して結合されていてもよい。
【0054】
前記光溶解性および光熱変換性ポリマーは、例えば、前記光熱溶解性ポリマーのアルデヒド基と、前記色素団の官能基とを反応させることにより製造してもよいし、前記光溶解性ポリマーの各モノマーと、前記色素団が導入された主鎖のモノマーと、前記主鎖のモノマーとを重合させることにより製造してもよい。
【0055】
光反応層１２は、前記光反応性ポリマー以外に、他の成分を含んでもよい。前記他の成分は、例えば、光融解性材料があげられる。前記光融解性材料は、例えば、異なる波長の光により、固化および液化を誘導できる光応答性材料を意味する。
【0056】
本実施形態の培養器具１００の製造方法は、例えば、基板１１ａ上に光反応層１２を形成する光反応層形成工程を含む。光反応層１２は、例えば、公知の膜形成方法により形成でき、具体例として、塗布法、印刷法（スクリーン法）、蒸着法、スパッタリング法、キャスト法、スピンコート法等により実施できる。光反応層１２における光反応性ポリマーが、前記光溶解性ポリマーおよび前記光熱変換性ポリマーを含む場合、前記光溶解性ポリマーおよび前記光熱変換性ポリマーを混合し、得られた混合物を使用することにより、光反応層１２を形成できる。前記光溶解性ポリマーおよび前記光熱変換性ポリマーが溶媒に分散されている場合、基板１１ａ上に光反応層１２を形成後、前記溶媒を除去する工程を有することが好ましい。このようにして、本実施形態の培養器具１００を製造できる。
【0057】
本実施形態の培養器具１００は、例えば、光反応層１２と基板１１ａとを接続する接続層を備えてもよい。この場合、前記接続層は、基板１１ａに積層され、光反応層１２は、前記接続層に積層される、すなわち、前記接続層は、基板１１ａと光反応層１２との間に配置される。培養器具１００は、前記接続層を有することで、例えば、長期の細胞培養を行なった際にも、光反応層１２の応答性を維持できるため、長期培養後も良好に細胞Ｃを剥離できる。
【0058】
前記接続層は、例えば、水和性が高く水酸基に富むポリマーを含む。具体例として、前記接続層は、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシブチルセルロース等のセルロース誘導体、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）およびそのコポリマーの架橋物を含む。前記セルロース誘導体の架橋物は、例えば、ヒドロキシプロピルセルロースをポリ（エチレングリコール）ビス（カルボキシメチル）エーテルで架橋した物があげられる。
【0059】
培養器具１００が前記接続層を有する場合、本実施形態の培養器具１００の製造方法は、前記光反応層形成工程に先立ち、基板１１ａ上に接続層を形成する工程を含み、前記光反応層形成工程では、前記接続層上に、光反応層１２を形成することが好ましい。前記接続層の形成は、例えば、光反応層１２の形成と同様にして実施できる。
【0060】
本実施形態の培養器具１００は、例えば、光反応層１２上に、細胞培養基材層を有してもよい。すなわち、光反応層１２に、前記細胞培養基材層が積層されてもよい。これにより、培養器具１００は、例えば、細胞Ｃの基板１１ａへの間接的な固定を良好に実施できる。前記細胞培養基材は、例えば、細胞外基質（細胞外マトリックス）または細胞の足場としての機能を有する物質があげられる。前記細胞外基質は、例えば、エラスチン；エンタクチン；I型コラーゲン、II型コラーゲン、III型コラーゲン、IV型コラーゲン、Ｖ型コラーゲン、VII型コラーゲン等のコラーゲン；テネイシン；フィブリリン；フィブロネクチン；ラミニン；ビトロネクチン（Vitronectin）；コンドロイチン硫酸、ヘパラン硫酸、ケラタン硫酸、デルマタン硫酸等の硫酸化グルコサミノグリカンと、コアタンパク質とから構成されるプロテオグリカン；コンドロイチン硫酸、ヘパラン硫酸、ケラタン硫酸、デルマタン硫酸、ヒアルロン酸等のグルコサミノグリカン；Synthemax（登録商標、ビトロネクチン誘導体）、Matrigel（登録商標、ラミニン、IV型コラーゲン、ヘパリン硫酸プロテオグリカン、エンタクチン／ニドゲン等の混合物）等があげられ、好ましくは、ラミニンである。前記細胞培養基材は、前記タンパク質のペプチド断片または前記糖鎖の断片を含んでもよい。具体例として、前記タンパク質のペプチド断片は、例えば、ラミニンの断片があげられる。前記ラミニンの断片（フラグメント）は、例えば、ラミニン211-E8、ラミニン311-E8、ラミニン411-E8、ラミニン511-E8があげられる。前記ラミニン211-E8は、ラミニンのα２鎖、β１鎖、およびγ１鎖の断片から構成される。前記ラミニン311-E8は、ラミニンのα３鎖、β１鎖、およびγ１鎖の断片から構成される。前記ラミニン411-E8は、ラミニンのα４鎖、β１鎖、およびγ１鎖の断片から構成される。前記ラミニン511-E8は、例えば、ラミニンのα５鎖、β１鎖、およびγ１鎖の断片から構成される。
【0061】
培養器具１００が前記細胞培養基材層を有する場合、本実施形態の培養器具１００の製造方法は、前記光反応層形成工程後、光反応層１２上に細胞培養基材層を形成する工程を含むことが好ましい。前記細胞培養基材層の形成は、例えば、光反応層１２の形成と同様にして実施できる。
【0062】
つぎに、本実施形態の培養器具１００を用いた細胞の処理方法について、図２に基づき説明する。図２は、培養器具１００を用いた細胞の処理方法の一例を示す模式図である。図２に示すように、本実施形態の処理方法では、培養された細胞Ｃが存在する培養器具１００に対して、第１の光（Ｌ１）および第２の光（Ｌ２）を照射することにより、所望の細胞を剥離可能にする。
【0063】
まず、本実施形態の処理方法では、図２（Ａ）および（Ｂ）に示すように、培養器具１００において、細胞を培養する（培養工程）。培養対象の細胞は、例えば、細胞懸濁液を培養器具１００内に導入することにより、導入できる。前記培養工程における培養条件（培養温度、培養湿度、ガス分圧、培養時間等）は、例えば、前記細胞の種類に応じて適宜決定でき、具体例として、５％ＣＯ２、２５～４０℃の湿潤環境下があげられる。
【0064】
つぎに、光反応層１２に、光溶解が生じる第１の光（Ｌ１）を照射する（第１の照射工程）。より具体的には、前記第１の照射工程では、細胞Ｃのうち、処理（剥離）対象の細胞Ｃ１と対応する光反応層１２、すなわち、処理対象の細胞Ｃ１の直下の光反応層１２にＬ１を照射する。これにより、図２（Ｃ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１の直下の光反応層１２が溶解し、細胞Ｃ１の基板１１ａに対する間接的な固定（接着）が解除される。Ｌ１の波長は、前記光反応性ポリマーにおいて、光溶解性を担う原子団が光溶解性を発揮する波長である。具体例として、Ｌ１の波長は、例えば、３１０～４１０ｎｍであり、好ましくは、３５０～４１０ｎｍ、３６０～３７０ｎｍである。また、Ｌ１の光照射量（Ｊ／ｃｍ２）は、例えば、照射する波長およびそのエネルギー量に応じて適宜設定できる。具体例として、Ｌ１の波長が３６５ｎｍの場合、前記光照射量は、例えば、０．０５～１Ｊ／ｃｍ２であり、好ましくは、０．１～０．５Ｊ／ｃｍ２である。また、Ｌ１の波長が４０５ｎｍの場合、前記光照射量は、例えば、０．５～１０Ｊ／ｃｍ２であり、好ましくは、１～５Ｊ／ｃｍ２である。本実施形態において、Ｌ１は、レーザ光、すなわち、点状の光としているが、Ｌ１はこれに限定されず、面状の光であってもよい。
【0065】
つぎに、光反応層１２に、光熱変換が生じる第２の光（Ｌ２）を照射する（第２の照射工程）。具体的には、前記第２の照射工程では、細胞Ｃのうち、処理（剥離）対象の細胞Ｃ１と、処理（剥離）対象でない細胞Ｃ２との境界と対応する光反応層１２、すなわち、処理対象でない細胞Ｃ２において処理対象の細胞Ｃ１と隣接する細胞Ｃ２の直下の光反応層１２にＬ２を照射する。前記境界は、例えば、Ｌ１を照射した領域の外周に隣接する領域ということもできる。これにより、図２（Ｄ）に示すように、Ｌ２が照射された光反応層１２と隣接する細胞Ｃ２が致死し、処理対象の細胞Ｃ１と処理対象でない細胞Ｃ２との固定が解除される。このため、図２（Ｅ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１は、剥離可能となる。前記致死は、Ｌ２の照射時に誘導されてもよいし、Ｌ２の照射後に誘導されてもよい。Ｌ２の波長は、前記光反応性ポリマーにおいて、光熱変換性を担う原子団（色素団）が光熱変換性を発揮する波長である。具体例として、Ｌ２の波長は、例えば、３００ｎｍ以上であり、好ましくは、３００～１３００ｎｍ、３５０～１３００ｎｍである。Ｌ２の波長は、例えば、Ｌ１の波長と同じでもよいし、異なってもよい。また、Ｌ２の光照射条件は、例えば、Ｌ２の照射部に隣接する細胞Ｃが致死する光照射量であり、照射するＬ２の出力、Ｌ２の照射サイズ（スポット径）およびＬ２の照射波長における光反応層の吸光度に応じて適宜設定できる。具体例として、レーザ光の出力が０．６Ｗ、直径（スポット径）が５０μｍであり、照射光波長（レーザ光の波長）における光反応層１２の吸光度が０．２５である場合、前記レーザ光の走査速度は、１０～５００ｍｍ／秒であり、好ましくは、５０～２００ｍｍ／秒に設定できる。前記Ｌ２の光照射条件は、この光照射条件に基づき、適宜変更してもよい。具体例として、前記レーザ光の出力を２倍とし、かつレーザ光の直径および光反応層１２の吸光度が同じの場合、前記レーザ光の走査速度は、例えば、約２倍程度、すなわち、２０～１０００ｍｍ／秒に設定できる。前記第２の照射工程では、Ｌ２の照射部が、一時的または継続的に約１００℃（例えば、８０～１２０℃）まで温度上昇するように、Ｌ２を照射することが好ましい。このような光照射条件とすることにより、本実施形態の処理方法は、例えば、第２の照射工程において、効果的に細胞を致死させることができる。本実施形態において、Ｌ２は、レーザ光、すなわち、点状の光としているが、Ｌ２はこれに限定されず、面状の光であってもよい。
【0066】
このようにして、本実施形態の処理方法は、処理対象の細胞Ｃ１を剥離できる。
【0067】
なお、本実施形態では、前記第１の照射工程後に、前記第２の照射工程を実施しているため、細胞Ｃ１と隣接する細胞Ｃ２の直下の光反応層１２にＬ２を照射しているが、Ｌ２の照射対象はこれに限定されない。すなわち、本実施形態の処理方法は、前記第２照射工程後に、前記第１の照射工程を実施してもよいし、これらを併行して実施してもよい。具体例として、Ｌ２の照射後にＬ１を照射する場合、前記第２の照射工程では、例えば、処理対象の細胞Ｃ１と隣接する細胞Ｃ２の直下の光反応層１２、または処理対象でない細胞Ｃ２と隣接する細胞Ｃ１の直下の光反応層１２にＬ２を照射する。そして、前記第１の照射工程では、細胞Ｃ１の直下の光反応層１２にＬ１を照射してもよい。
【0068】
また、本実施形態の処理方法では、境界に存在する１つの細胞Ｃを致死させたが、境界に隣接する複数の細胞Ｃを致死させてもよい。これにより、本実施形態の処理方法は、例えば、処理対象の細胞Ｃ１が、処理対象でない細胞Ｃ２に残存すること、および処理対象でない細胞Ｃ２が、処理対象の細胞Ｃ１と併せて剥離することを効果的に防止できる。
【0069】
（実施形態２）
本実施形態は、細胞培養器具および細胞の処理方法の他の例である。図３は、実施形態２の培養器具２００の構成を示す模式図であり、（Ａ）は、培養器具２００の模式斜視図であり、（Ｂ）は、（Ａ）におけるII－II方向からみた培養器具２００の模式断面図であり、（Ｃ）は、培養器具２００で細胞を培養している状態において、（Ａ）におけるII－II方向からみた培養器具２００の模式断面図である。図３に示すように、培養器具２００は、実施形態１の培養器具１００の構成における光反応層１２が、２層から構成されている。すなわち、光反応層１２は、光熱変換層１２ａおよび光溶解層１２ｂを有する。また、光熱変換層１２ａは、基板１１ａに積層され、光溶解層１２ｂは、光熱変換層１２ａに積層されている。図３（Ｃ）に示すように、細胞Ｃは、光溶解層１２ｂと接触してもよいし、他の層等を介して光溶解層１２ｂと接触してもよい。この点を除き、実施形態２の培養器具２００の構成は、実施形態１の培養器具１００の構成と同様であり、その説明を援用できる。
本実施形態は、細胞培養器具および細胞の処理方法の他の例である。図３は、実施形態２の培養器具２００の構成を示す模式図であり、（Ａ）は、培養器具２００の模式斜視図であり、（Ｂ）は、（Ａ）におけるII－II方向からみた培養器具２００の模式断面図であり、（Ｃ）は、培養器具２００で細胞を培養している状態において、（Ａ）におけるII－II方向からみた培養器具２００の模式断面図である。図３に示すように、培養器具２００は、実施形態１の培養器具１００の構成における光反応層１２が、２層から構成されている。すなわち、光反応層１２は、光熱変換層１２ａおよび光溶解層１２ｂを有する。また、光熱変換層１２ａは、基板１１ａに積層され、光溶解層１２ｂは、光熱変換層１２ａに積層されている。図３（Ｃ）に示すように、細胞Ｃは、光溶解層１２ｂと接触してもよいし、他の層等を介して光溶解層１２ｂと接触してもよい。この点を除き、実施形態２の培養器具２００の構成は、実施形態１の培養器具１００の構成と同様であり、その説明を援用できる。
【0070】
光熱変換層１２ａは、光熱変換性を有する層である。すなわち、光熱変換層１２ａは、光の照射により、熱を生じる層である。光熱変換層１２ａは、前述の光熱変換性ポリマーを含む。前記光熱変換性ポリマーは、前記実施形態１における「（２）光熱変換性ポリマー」の説明を援用できる。光熱変換層１２ａは、例えば、基板１１ａ上の一部または全面に形成される。
【0071】
光溶解層１２ｂは、光溶解性を有する層である。すなわち、光溶解層１２ｂは、光の照射により、溶媒溶解性が変化する層である。光溶解層１２ｂは、前述の光溶解性ポリマーを含む。前記光溶解性ポリマーは、前記実施形態１における「（１）光溶解性ポリマー」の説明を援用できる。
【0072】
培養器具２００において、光溶解層１２ｂは、光熱変換層１２ａ上に積層されているが、培養器具２００における光熱変換層１２ａおよび光熱溶解層１２ｂの積層順序は、これに限定されず、光熱変換層１２ａは、光溶解層１２ｂ上に積層されていてもよい。培養器具２００は、例えば、光溶解層１２ｂを光熱変換層１２ａ上に積層することにより、後述の第１の照射工程および第２の照射工程後に、簡易に処理対象の細胞を剥離できる。
【0073】
培養器具２００は、例えば、前述の接続層および細胞培養基材層の少なくとも一方を含んでもよい。培養器具２００が前記接続層を有する場合、基板１１ａ上に前記接続層が積層され、前記接続層上に、光熱変換層１２ａが積層される。また、培養器具２００が前記細胞培養基材層を有する場合、光溶解層１２ｂ上に前記細胞培養基材層が積層される。
【0074】
本実施形態の培養器具２００の製造方法は、例えば、基板１１ａ上に光熱変換層１２ａを形成する光熱変換層形成工程と、光熱変換層１２ａ上に光溶解層１２ｂを形成する光溶解層形成工程とを含む。光熱変換層１２ａおよび光溶解層１２ｂは、例えば、公知の膜形成方法により形成でき、前記実施形態１における光反応層１２の形成方法の説明を援用できる。このようにして、本実施形態の培養器具２００を製造できる。
【0075】
つぎに、本実施形態の培養器具２００を用いた細胞の処理方法について、図４に基づき説明する。図４は、培養器具２００を用いた細胞の処理方法の一例を示す模式図である。図４に示すように、本実施形態の処理方法では、培養された細胞Ｃが存在する培養器具１００に対して、第１の光（Ｌ１）および第２の光（Ｌ２）を照射することにより、所望の細胞を剥離可能にする。
【0076】
まず、本実施形態の処理方法では、図４（Ａ）および（Ｂ）に示すように、培養器具２００において、細胞を培養する（培養工程）。培養対象の細胞は、例えば、細胞懸濁液を培養器具２００内に導入することにより、導入できる。前記培養工程における培養条件（培養温度、培養湿度、ガス分圧、培養時間等）は、例えば、前記細胞の種類に応じて適宜決定でき、具体例として、５％ＣＯ２、２５～４０℃の湿潤環境下があげられる。
【0077】
つぎに、光溶解層１２ｂに、光溶解が生じる第１の光（Ｌ１）を照射する（第１の照射工程）。より具体的には、前記第１の照射工程では、細胞Ｃのうち、処理（剥離）対象の細胞Ｃ１と対応する光溶解層１２ｂ、すなわち、処理対象の細胞Ｃ１の直下の光溶解層１２ｂにＬ１を照射する。これにより、図４（Ｃ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１の直下の光溶解層１２ｂが溶解し、細胞Ｃ１の基板１１ａに対する間接的な固定（接着）が解除される。Ｌ１の波長は、前記光反応性ポリマーにおいて、光溶解性を担う原子団が光溶解性を発揮する波長である。具体例として、Ｌ１の波長および光照射量は、例えば、前記実施形態１の説明を援用できる。本実施形態において、Ｌ１は、レーザ光、すなわち、点状の光としているが、Ｌ１はこれに限定されず、面状の光であってもよい。
【0078】
つぎに、光熱変換層１２ａに、光熱変換が生じる第２の光（Ｌ２）を照射する（第２の照射工程）。具体的には、前記第２の照射工程では、細胞Ｃのうち、処理（剥離）対象の細胞Ｃ１と、処理（剥離）対象でない細胞Ｃ２との境界と対応する光熱変換層１２ａ、すなわち、処理対象でない細胞Ｃ２において処理対象の細胞Ｃ１と隣接する細胞Ｃ２の直下の光熱変換層１２ａにＬ２を照射する。これにより、図４（Ｄ）に示すように、Ｌ２が照射された光熱変換層１２ａと隣接する細胞Ｃ２が致死し、処理対象の細胞Ｃ１と処理対象でない細胞Ｃ２との固定が解除される。このため、図４（Ｅ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１は、剥離可能となる。Ｌ２の波長は、前記光反応性ポリマーにおいて、光熱変換性を担う原子団（色素団）が光熱変換性を発揮する波長である。具体例として、Ｌ２の波長および光照射量は、前記実施形態１の説明を援用できる。Ｌ２の光照射量は、例えば、Ｌ１の光照射量と同じでもよいし、異なってもよいが、異なる方が好ましい。また、Ｌ２の光照射量は、Ｌ１光照射量より多いことが好ましい。このような光照射量とすることにより、本実施形態の処理方法は、例えば、第２の照射工程において、効果的に細胞を致死させることができる。本実施形態において、Ｌ２は、レーザ光、すなわち、点状の光としているが、Ｌ２はこれに限定されず、面状の光であってもよい。
【0079】
このようにして、本実施形態の処理方法は、処理対象の細胞Ｃ１を剥離できる。
【0080】
なお、本実施形態では、前記第１の照射工程後に、前記第２の照射工程を実施しているため、細胞Ｃ１と隣接する細胞Ｃ２の直下の光熱変換層１２ａにＬ２を照射しているが、Ｌ２の照射対象はこれに限定されない。すなわち、本実施形態の処理方法は、前記第２照射工程後に、前記第１の照射工程を実施してもよいし、これらを併行して実施してもよい。具体例として、Ｌ２の照射後にＬ１を照射する場合、前記第２の照射工程では、例えば、処理対象の細胞Ｃ１と隣接する細胞Ｃ２の直下の光熱変換層１２ａ、または処理対象でない細胞Ｃ２と隣接する細胞Ｃ１の直下の光熱変換層１２ａにＬ２を照射する。そして、前記第１の照射工程では、細胞Ｃ１の直下の光溶解層１２ｂにＬ１を照射してもよい。
【0081】
また、本実施形態の処理方法では、境界に存在する１つの細胞Ｃを致死させたが、境界に隣接する複数の細胞Ｃを致死させてもよい。これにより、本実施形態の処理方法は、例えば、処理対象の細胞Ｃ１が、処理対象でない細胞Ｃ２に残存すること、および処理対象でない細胞Ｃ２が、処理対象の細胞Ｃ１と併せて剥離することを効果的に防止できる。
【実施例】
【0082】
次に、本発明の実施例について説明する。ただし、本発明は、下記実施例により制限されない。市販の試薬は、特に示さない限り、それらのプロトコルに基づいて使用した。
【0083】
［実施例１］
本発明の培養器具を製造し、本発明の処理方法により、所望の位置の細胞を剥離可能にできることを確認した。
本発明の培養器具を製造し、本発明の処理方法により、所望の位置の細胞を剥離可能にできることを確認した。
【0084】
（１）培養器具の製造
実施形態１の培養器具１００を調製した。まず、前記光溶解性ポリマーとして、下記式（１１）で表されるポリマーを合成した。下記式（１１）のポリマーは、国際公開第２０１７／０１３２２６号の化合物１２と同様の手順で合成した。なお、側鎖（２－ニトロベンズアルデヒド）の導入率は、１０ｍｏl％であった。また、前記光熱変換性ポリマーとして、前記式（８）のポリマーを合成した。
実施形態１の培養器具１００を調製した。まず、前記光溶解性ポリマーとして、下記式（１１）で表されるポリマーを合成した。下記式（１１）のポリマーは、国際公開第２０１７／０１３２２６号の化合物１２と同様の手順で合成した。なお、側鎖（２－ニトロベンズアルデヒド）の導入率は、１０ｍｏl％であった。また、前記光熱変換性ポリマーとして、前記式（８）のポリマーを合成した。
【化11】
【0085】
つぎに、１．０％（w/w）光溶解性ポリマーおよび０．０８５％（w/w）光熱変換性ポリマーを含む２，２，２－トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）溶液を調製し、得られた溶液をポリスチレン製の基板１１ａの表面にスピンコートすることで、光反応層１２を形成した。これにより、培養器具１００（実施例１）を製造した。
【0086】
（２）細胞の処理
ＭＤＣＫ細胞（理研バイオリソースセンターから入手）を培地に分散して、実施例１の培養器具１００に播種し、半日培養した。ＭＤＣＫ細胞の培地は、１０％ウシ胎児血清（FBS）含有ＭＥＭ培地を用いた。また、培養条件は、５％ＣＯ２、３７℃および湿潤条件下とした。前記培養後、基板１１ａ表面全体で細胞が接着および伸展していることを確認した。そして、基板１１ａの底面側（図１における下側）から、光反応層１２上の細胞Ｃに向かって、レーザを照射可能な細胞処理装置（株式会社片岡製作所社製）を用いて、Ｌ１およびＬ２を照射した。具体的には、図５（Ａ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１の直下の光反応層１２に対してＬ１を照射した。Ｌ１は、波長４０５ｎｍ、直径２５μｍ、エネルギー強度０．２Ｗのレーザ光とし、速度１０００ｍｍ／ｓ、２０μｍピッチで幅０．６ｍｍの範囲で走査することで、光反応層１２の溶解を誘導した。つぎに、図５（Ａ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１および処理対象でない細胞Ｃ２において、細胞Ｃ１と隣接する細胞Ｃ２の直下の光反応層１２に対してＬ２を照射した。Ｌ２は、波長４０５ｎｍ、直径２５μｍ、エネルギー強度０．８Ｗのレーザ光とし、速度３００ｍｍ／ｓで走査した。Ｌ２の照射は、４回繰り返し、細胞単層の致死を誘導した。培養器具１００を約９０°回転してから同様にＬ１およびＬ２の照射を実施した。前記照射後、しばらくインキュベータに保管後、表面に培地を軽く吹き付けると、図５（Ｂ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１が剥離した。これらの結果から、本発明の培養器具および処理方法により、所望の位置の細胞を剥離可能にできることがわかった。
ＭＤＣＫ細胞（理研バイオリソースセンターから入手）を培地に分散して、実施例１の培養器具１００に播種し、半日培養した。ＭＤＣＫ細胞の培地は、１０％ウシ胎児血清（FBS）含有ＭＥＭ培地を用いた。また、培養条件は、５％ＣＯ２、３７℃および湿潤条件下とした。前記培養後、基板１１ａ表面全体で細胞が接着および伸展していることを確認した。そして、基板１１ａの底面側（図１における下側）から、光反応層１２上の細胞Ｃに向かって、レーザを照射可能な細胞処理装置（株式会社片岡製作所社製）を用いて、Ｌ１およびＬ２を照射した。具体的には、図５（Ａ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１の直下の光反応層１２に対してＬ１を照射した。Ｌ１は、波長４０５ｎｍ、直径２５μｍ、エネルギー強度０．２Ｗのレーザ光とし、速度１０００ｍｍ／ｓ、２０μｍピッチで幅０．６ｍｍの範囲で走査することで、光反応層１２の溶解を誘導した。つぎに、図５（Ａ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１および処理対象でない細胞Ｃ２において、細胞Ｃ１と隣接する細胞Ｃ２の直下の光反応層１２に対してＬ２を照射した。Ｌ２は、波長４０５ｎｍ、直径２５μｍ、エネルギー強度０．８Ｗのレーザ光とし、速度３００ｍｍ／ｓで走査した。Ｌ２の照射は、４回繰り返し、細胞単層の致死を誘導した。培養器具１００を約９０°回転してから同様にＬ１およびＬ２の照射を実施した。前記照射後、しばらくインキュベータに保管後、表面に培地を軽く吹き付けると、図５（Ｂ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１が剥離した。これらの結果から、本発明の培養器具および処理方法により、所望の位置の細胞を剥離可能にできることがわかった。
【0087】
［実施例２］
本発明の培養器具を製造し、本発明の処理方法により、所望の位置の細胞を剥離可能にできることを確認した。
本発明の培養器具を製造し、本発明の処理方法により、所望の位置の細胞を剥離可能にできることを確認した。
【0088】
（１）培養器具の製造
実施形態１の培養器具１００において、光反応層１２と基板１１ａとの間に接続層を設け、光反応層１２上に細胞培養基材層を積層した培養器具を調製した。まず、前記光溶解性ポリマーとして、前記実施例１（１）で合成した式（１１）のポリマーを使用した。また、前記光熱変換性ポリマーとして、前記式（９）のポリマーを合成した。
実施形態１の培養器具１００において、光反応層１２と基板１１ａとの間に接続層を設け、光反応層１２上に細胞培養基材層を積層した培養器具を調製した。まず、前記光溶解性ポリマーとして、前記実施例１（１）で合成した式（１１）のポリマーを使用した。また、前記光熱変換性ポリマーとして、前記式（９）のポリマーを合成した。
【0089】
まず、０．４９％（w/w）ヒドロキシプロピルセルロース（ＭＷ＝１０万）、０．０４７％（w/w）ポリ（エチレングリコール）ビス（カルボキシメチル）エーテル（ＭＷ＝６００）、および０．４９ｍｏｌ／ｋｇ硫酸を含むメタノール溶液を調製し、得られた溶液をポリスチレン製の基板１１ａの表面にスピンコートした。つぎに、得られた培養器具を、８５℃で１８時間加熱後、エタノールで洗浄し、さらに乾燥させた。
【0090】
前記乾燥後、１．９％（w/w）光溶解性ポリマーおよび０．０８８％（w/w）光熱変換性ポリマーを含むＴＦＥ溶液を調製し、得られた溶液をポリスチレン製の基板１１ａの表面にスピンコートした。前記スピンコート後、波長３６５ｎｍ、エネルギー密度０．９ｍＷ／ｃｍ２の紫外光を１５秒間照射することで光反応層１２を形成した。
【0091】
つぎに、光反応層１２を有する培養器具に対して、９．６μＬのｉＭａｔｒｉｘ５１１（株式会社ニッピ社製）を、２ｍＬのＰＢＳに希釈した希釈液を用い、添付のプロトコルにしたがって、細胞培養基材層を形成した。これにより、培養器具（実施例２）を製造した。
【0092】
（２）細胞の処理
培地に懸濁したヒトｉＰＳ細胞（２０１Ｂ７株、理研バイオリソースセンターから入手）を、前記実施例２の培養器具に播種し、５日間培養した。ｉＰＳ細胞の培地は、StemFitAK02N（味の素株式会社）を用いた。また、培養条件は、５％ＣＯ２、３７℃および湿潤条件下とした。前記培養後、基板１１ａ表面全体で細胞が接着および伸展していることを確認した。そして、基板１１ａの底面側（図１における下側）から、光反応層１２上の細胞Ｃに向かって、前記細胞処理装置を用いて、Ｌ１およびＬ２を照射した。具体的には、図６（Ａ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１の直下の光反応層１２に対してＬ１を照射した。Ｌ１は、波長４０５ｎｍ、直径２５μｍ、エネルギー強度０．２Ｗまたは０．３Ｗのレーザ光とし、速度１０００ｍｍ／ｓ、１０μｍピッチで幅０．６ｍｍの範囲で１回（０．３Ｗの場合）または２回走査（０．２Ｗの場合）することで、光反応層１２の溶解を誘導した。つぎに、図６（Ａ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１および処理対象でない細胞Ｃ２において、細胞Ｃ１と隣接する細胞Ｃ２の直下の光反応層１２に対してＬ２を照射した。Ｌ２は、波長４０５ｎｍ、直径２５μｍ、エネルギー強度０．８Ｗのレーザ光とし、速度２００ｍｍ／ｓで走査し、細胞単層の致死を誘導した。前記照射後、しばらくインキュベータに保管後、表面に培地を軽く吹き付けると、図６（Ｂ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１が剥離した。なお、図６（Ｂ）は、Ｌ１が０．２Ｗの際の写真であるが、Ｌ１が０．３Ｗの場合も同様に処理対象の細胞Ｃ１の剥離が観察された。これらの結果から、本発明の培養器具および処理方法により、所望の位置の細胞を剥離可能にできることがわかった。
培地に懸濁したヒトｉＰＳ細胞（２０１Ｂ７株、理研バイオリソースセンターから入手）を、前記実施例２の培養器具に播種し、５日間培養した。ｉＰＳ細胞の培地は、StemFitAK02N（味の素株式会社）を用いた。また、培養条件は、５％ＣＯ２、３７℃および湿潤条件下とした。前記培養後、基板１１ａ表面全体で細胞が接着および伸展していることを確認した。そして、基板１１ａの底面側（図１における下側）から、光反応層１２上の細胞Ｃに向かって、前記細胞処理装置を用いて、Ｌ１およびＬ２を照射した。具体的には、図６（Ａ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１の直下の光反応層１２に対してＬ１を照射した。Ｌ１は、波長４０５ｎｍ、直径２５μｍ、エネルギー強度０．２Ｗまたは０．３Ｗのレーザ光とし、速度１０００ｍｍ／ｓ、１０μｍピッチで幅０．６ｍｍの範囲で１回（０．３Ｗの場合）または２回走査（０．２Ｗの場合）することで、光反応層１２の溶解を誘導した。つぎに、図６（Ａ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１および処理対象でない細胞Ｃ２において、細胞Ｃ１と隣接する細胞Ｃ２の直下の光反応層１２に対してＬ２を照射した。Ｌ２は、波長４０５ｎｍ、直径２５μｍ、エネルギー強度０．８Ｗのレーザ光とし、速度２００ｍｍ／ｓで走査し、細胞単層の致死を誘導した。前記照射後、しばらくインキュベータに保管後、表面に培地を軽く吹き付けると、図６（Ｂ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１が剥離した。なお、図６（Ｂ）は、Ｌ１が０．２Ｗの際の写真であるが、Ｌ１が０．３Ｗの場合も同様に処理対象の細胞Ｃ１の剥離が観察された。これらの結果から、本発明の培養器具および処理方法により、所望の位置の細胞を剥離可能にできることがわかった。
【0093】
［実施例３］
本発明の培養器具を製造し、本発明の処理方法により、所望の位置の細胞を剥離可能にできることを確認した。
本発明の培養器具を製造し、本発明の処理方法により、所望の位置の細胞を剥離可能にできることを確認した。
【0094】
（１）培養器具の製造
実施形態１の培養器具１００を調製した。まず、前記光溶解性ポリマーとして、下記式（１２）で表されるポリマーを合成した。さらに、下記式（１２）のポリマーを用いて、前記光反応性ポリマー（光溶解性および光熱変換性を有するポリマー）として、下記式（１３）のポリマーを合成した。下記式（１２）のポリマーは、国際公開第２０１７／０１３２２６号の化合物１２の合成手順において、Ｎ－イソプロピルアクリルアミドに代えて、Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルアクリルアミドを用いた以外は同様の手順で合成した。なお、側鎖（２－ニトロベンズアルデヒド）の導入率は、１９ｍｏl％であった。つぎに、１．８％（w/w）下記式（１２）のポリマーを含むＴＦＥ溶液に、ジスパースオレンジ３を０．０１６（w/w）％となるように添加後、撹拌した。これにより、下記式（１２）のポリマーのアルデヒド基とジスパースオレンジ３のアミノ基とが反応し、溶液の色が、橙色から紅色に変色し、下記式（１３）のポリマーを合成した。
実施形態１の培養器具１００を調製した。まず、前記光溶解性ポリマーとして、下記式（１２）で表されるポリマーを合成した。さらに、下記式（１２）のポリマーを用いて、前記光反応性ポリマー（光溶解性および光熱変換性を有するポリマー）として、下記式（１３）のポリマーを合成した。下記式（１２）のポリマーは、国際公開第２０１７／０１３２２６号の化合物１２の合成手順において、Ｎ－イソプロピルアクリルアミドに代えて、Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルアクリルアミドを用いた以外は同様の手順で合成した。なお、側鎖（２－ニトロベンズアルデヒド）の導入率は、１９ｍｏl％であった。つぎに、１．８％（w/w）下記式（１２）のポリマーを含むＴＦＥ溶液に、ジスパースオレンジ３を０．０１６（w/w）％となるように添加後、撹拌した。これにより、下記式（１２）のポリマーのアルデヒド基とジスパースオレンジ３のアミノ基とが反応し、溶液の色が、橙色から紅色に変色し、下記式（１３）のポリマーを合成した。
【化12】
【化13】
【0095】
つぎに、得られた溶液をポリスチレン製の基板１１ａの表面にスピンコートすることで、光反応層１２を形成した。これにより、培養器具１００（実施例３－１）を製造した。
【0096】
さらに、実施例３－１の培養器具１００に対して、０．２μＬのｉＭａｔｒｉｘ５１１（株式会社ニッピ社製）を、１．５ｍＬのＰＢＳに希釈した希釈液を用い、添付のプロトコルにしたがって、細胞培養基材層を形成した。これにより、培養器具（実施例３－２）を製造した。
【0097】
（２）細胞の処理１
ＨｅＬａ細胞（理研バイオリソースセンターから入手）を培地に分散して、前記実施例３－１の培養器具１００に播種し、半日培養した。ＨｅＬａ細胞の培地は、１０％ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地を用いた。また、培養条件は、５％ＣＯ２、３７℃および湿潤条件下とした。前記培養後、基板１１ａ表面全体で細胞が接着および伸展していることを確認した。そして、基板１１ａの底面側（図１における下側）から、光反応層１２上の細胞Ｃに向かって、前記細胞処理装置を用いて、Ｌ１およびＬ２を照射した。具体的には、図７（Ａ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１の直下の光反応層１２に対してＬ１を照射した。Ｌ１は、波長４０５ｎｍ、直径２５μｍ、エネルギー強度０．２Ｗまたは０．３Ｗのレーザ光とし、速度１０００ｍｍ／ｓ、１０μｍピッチで幅０．６ｍｍの範囲で走査することで、光反応層１２の溶解を誘導した。つぎに、図７（Ａ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１および処理対象でない細胞Ｃ２において、細胞Ｃ１と隣接する細胞Ｃ２の直下の光反応層１２に対してＬ２を照射した。Ｌ２は、波長４０５ｎｍ、直径２５μｍ、エネルギー強度０．８Ｗのレーザ光とし、速度２００ｍｍ／ｓで走査し、細胞単層の致死を誘導した。前記照射後、しばらくインキュベータに保管後、表面に培地を軽く吹き付けると、図７（Ｂ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１が剥離した。なお、図７（Ｂ）は、Ｌ１が０．２Ｗの際の写真であるが、Ｌ１が０．３Ｗの場合も同様に処理対象の細胞Ｃ１の剥離が観察された。
ＨｅＬａ細胞（理研バイオリソースセンターから入手）を培地に分散して、前記実施例３－１の培養器具１００に播種し、半日培養した。ＨｅＬａ細胞の培地は、１０％ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地を用いた。また、培養条件は、５％ＣＯ２、３７℃および湿潤条件下とした。前記培養後、基板１１ａ表面全体で細胞が接着および伸展していることを確認した。そして、基板１１ａの底面側（図１における下側）から、光反応層１２上の細胞Ｃに向かって、前記細胞処理装置を用いて、Ｌ１およびＬ２を照射した。具体的には、図７（Ａ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１の直下の光反応層１２に対してＬ１を照射した。Ｌ１は、波長４０５ｎｍ、直径２５μｍ、エネルギー強度０．２Ｗまたは０．３Ｗのレーザ光とし、速度１０００ｍｍ／ｓ、１０μｍピッチで幅０．６ｍｍの範囲で走査することで、光反応層１２の溶解を誘導した。つぎに、図７（Ａ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１および処理対象でない細胞Ｃ２において、細胞Ｃ１と隣接する細胞Ｃ２の直下の光反応層１２に対してＬ２を照射した。Ｌ２は、波長４０５ｎｍ、直径２５μｍ、エネルギー強度０．８Ｗのレーザ光とし、速度２００ｍｍ／ｓで走査し、細胞単層の致死を誘導した。前記照射後、しばらくインキュベータに保管後、表面に培地を軽く吹き付けると、図７（Ｂ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１が剥離した。なお、図７（Ｂ）は、Ｌ１が０．２Ｗの際の写真であるが、Ｌ１が０．３Ｗの場合も同様に処理対象の細胞Ｃ１の剥離が観察された。
【0098】
（３）細胞の処理２
培地に懸濁した前記ヒトｉＰＳ細胞を、前記実施例３－２の培養器具１００に播種し、前記実施例２と同様の条件で５日間培養した。前記培養後、基板１１ａ表面全体で細胞が接着および伸展していることを確認した。そして、基板１１ａの底面側（図１における下側）から、光反応層１２上の細胞Ｃに向かって、前記細胞処理装置を用いて、Ｌ１およびＬ２を照射した。具体的には、図８（Ａ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１の直下の光反応層１２に対してＬ１を照射した。Ｌ１は、波長４０５ｎｍ、直径２５μｍ、エネルギー強度０．２Ｗまたは０．３Ｗのレーザ光とし、速度１０００ｍｍ／ｓ、１０μｍピッチで幅０．６ｍｍの範囲で走査することで、光反応層１２の溶解を誘導した。つぎに、図８（Ａ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１および処理対象でない細胞Ｃ２において、細胞Ｃ１と隣接する細胞Ｃ２の直下の光反応層１２に対してＬ２を照射した。Ｌ２は、波長４０５ｎｍ、直径２５μｍ、エネルギー強度０．８Ｗのレーザ光とし、速度２００ｍｍ／ｓで走査し、細胞単層の致死を誘導した。前記照射後、しばらくインキュベータに保管後、表面に培地を軽く吹き付けると、図８（Ｂ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１が剥離した。なお、図８（Ｂ）は、Ｌ１が０．２Ｗの際の写真であるが、Ｌ１が０．３Ｗの場合も同様に処理対象の細胞Ｃ１の剥離が観察された。これらの結果から、本発明の培養器具および処理方法により、所望の位置の細胞を剥離可能にできることがわかった。
培地に懸濁した前記ヒトｉＰＳ細胞を、前記実施例３－２の培養器具１００に播種し、前記実施例２と同様の条件で５日間培養した。前記培養後、基板１１ａ表面全体で細胞が接着および伸展していることを確認した。そして、基板１１ａの底面側（図１における下側）から、光反応層１２上の細胞Ｃに向かって、前記細胞処理装置を用いて、Ｌ１およびＬ２を照射した。具体的には、図８（Ａ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１の直下の光反応層１２に対してＬ１を照射した。Ｌ１は、波長４０５ｎｍ、直径２５μｍ、エネルギー強度０．２Ｗまたは０．３Ｗのレーザ光とし、速度１０００ｍｍ／ｓ、１０μｍピッチで幅０．６ｍｍの範囲で走査することで、光反応層１２の溶解を誘導した。つぎに、図８（Ａ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１および処理対象でない細胞Ｃ２において、細胞Ｃ１と隣接する細胞Ｃ２の直下の光反応層１２に対してＬ２を照射した。Ｌ２は、波長４０５ｎｍ、直径２５μｍ、エネルギー強度０．８Ｗのレーザ光とし、速度２００ｍｍ／ｓで走査し、細胞単層の致死を誘導した。前記照射後、しばらくインキュベータに保管後、表面に培地を軽く吹き付けると、図８（Ｂ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１が剥離した。なお、図８（Ｂ）は、Ｌ１が０．２Ｗの際の写真であるが、Ｌ１が０．３Ｗの場合も同様に処理対象の細胞Ｃ１の剥離が観察された。これらの結果から、本発明の培養器具および処理方法により、所望の位置の細胞を剥離可能にできることがわかった。
【0099】
これらの結果から、本発明の培養器具および処理方法により、所望の位置の細胞を剥離可能にできることがわかった。
【0100】
［実施例４］
本発明の培養器具を製造し、本発明の処理方法により、所望の位置の細胞を剥離可能にできることを確認した。
本発明の培養器具を製造し、本発明の処理方法により、所望の位置の細胞を剥離可能にできることを確認した。
【0101】
（１）培養器具の製造
実施形態２の培養器具２００を調製した。まず、光熱変換性ポリマーとして、前記式（１０）のポリマーを合成した。具体的には、０．００３５ｇ ４－（４－ニトロフェニルアゾ）フェノールおよび０．００８ｇ ポリ（メタクリル酸グリシジル）を、０．４５７ｇのアセトンに溶解した。得られた溶液に対して、２.８％（w/w）ジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）を含む１，２－ジクロロエタン溶液を０．００８６ｇ添加後、撹拌し、６０℃で５日間反応させると、橙色から濃赤色に変化した。これにより、ポリ（メタクリル酸グリシジル）のグリシジル基に、４－（４－ニトロフェニルアゾ）フェノールが導入され、前記式（１０）のポリマーが合成されたことを確認した。光溶解性ポリマーは、前記実施例３（１）で合成した式（１２）のポリマーを使用した。
実施形態２の培養器具２００を調製した。まず、光熱変換性ポリマーとして、前記式（１０）のポリマーを合成した。具体的には、０．００３５ｇ ４－（４－ニトロフェニルアゾ）フェノールおよび０．００８ｇ ポリ（メタクリル酸グリシジル）を、０．４５７ｇのアセトンに溶解した。得られた溶液に対して、２.８％（w/w）ジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）を含む１，２－ジクロロエタン溶液を０．００８６ｇ添加後、撹拌し、６０℃で５日間反応させると、橙色から濃赤色に変化した。これにより、ポリ（メタクリル酸グリシジル）のグリシジル基に、４－（４－ニトロフェニルアゾ）フェノールが導入され、前記式（１０）のポリマーが合成されたことを確認した。光溶解性ポリマーは、前記実施例３（１）で合成した式（１２）のポリマーを使用した。
【0102】
前記式（１０）のポリマー溶液から０．１６４ｇの溶液を分取し、窒素吹き付けでアセトンを除去後、ＴＦＥ０．０４７８ｇに再溶解した。さらに、得られた溶液に、０．０５％（w/w）１，１２－ジアミノドデカンを含むＴＦＥ溶液を０．００４１ｇ添加し、撹拌した。つぎに、得られた溶液をポリスチレン製の基板１１ａの表面にスピンコート後、８５℃で４時間加熱し、さらに、エタノールで洗浄し、再乾燥させることで、光熱変換層１２ａを形成した。つぎに、１．８％（w/w）前記式（１２）のポリマーを含むＴＦＥ溶液を光熱変換層１２ａの表面にスピンコート後、波長３６５ｎｍ、エネルギー強度１．５ｍＷ／ｃｍ２の紫外光を４秒間照射することで、培養器具２００を製造した。
【0103】
（２）細胞の処理
ＨｅＬａ細胞を培地に分散して、実施例４の培養器具２００に播種し、半日培養した。ＨｅＬａ細胞の培地は、１０％ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地を用いた。また、培養条件は、５％ＣＯ２、３７℃および湿潤条件下とした。前記培養後、基板１１ａ表面全体で細胞が接着および伸展していることを確認した。そして、基板１１ａの底面側（図３における下側）から、光反応層１２上の細胞Ｃに向かって、前記細胞処理装置を用いて、Ｌ１およびＬ２を照射した。具体的には、図９（Ａ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１の直下の光反応層１２に対してＬ１を照射した。Ｌ１は、波長４０５ｎｍ、直径２５μｍ、エネルギー強度０．２Ｗまたは０．３Ｗのレーザ光とし、速度１０００ｍｍ／ｓ、１０μｍピッチで幅０．６ｍｍの範囲で走査することで、光反応層１２の溶解を誘導した。つぎに、図９（Ａ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１および処理対象でない細胞Ｃ２において、細胞Ｃ１と隣接する細胞Ｃ２の直下の光反応層１２に対してＬ２を照射した。Ｌ２は、波長４０５ｎｍ、直径２５μｍ、エネルギー強度０．８Ｗのレーザ光とし、速度７５０ｍｍ／ｓで２回走査し、細胞単層の致死を誘導した。前記照射後、しばらくインキュベータに保管後、表面に培地を軽く吹き付けると、図９（Ｂ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１が剥離した。なお、図９（Ｂ）は、Ｌ１が０．２Ｗの際の写真であるが、Ｌ１が０．３Ｗの場合も同様に処理対象の細胞Ｃ１の剥離が観察された。これらの結果から、本発明の培養器具および処理方法により、所望の位置の細胞を剥離可能にできることがわかった。
ＨｅＬａ細胞を培地に分散して、実施例４の培養器具２００に播種し、半日培養した。ＨｅＬａ細胞の培地は、１０％ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地を用いた。また、培養条件は、５％ＣＯ２、３７℃および湿潤条件下とした。前記培養後、基板１１ａ表面全体で細胞が接着および伸展していることを確認した。そして、基板１１ａの底面側（図３における下側）から、光反応層１２上の細胞Ｃに向かって、前記細胞処理装置を用いて、Ｌ１およびＬ２を照射した。具体的には、図９（Ａ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１の直下の光反応層１２に対してＬ１を照射した。Ｌ１は、波長４０５ｎｍ、直径２５μｍ、エネルギー強度０．２Ｗまたは０．３Ｗのレーザ光とし、速度１０００ｍｍ／ｓ、１０μｍピッチで幅０．６ｍｍの範囲で走査することで、光反応層１２の溶解を誘導した。つぎに、図９（Ａ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１および処理対象でない細胞Ｃ２において、細胞Ｃ１と隣接する細胞Ｃ２の直下の光反応層１２に対してＬ２を照射した。Ｌ２は、波長４０５ｎｍ、直径２５μｍ、エネルギー強度０．８Ｗのレーザ光とし、速度７５０ｍｍ／ｓで２回走査し、細胞単層の致死を誘導した。前記照射後、しばらくインキュベータに保管後、表面に培地を軽く吹き付けると、図９（Ｂ）に示すように、処理対象の細胞Ｃ１が剥離した。なお、図９（Ｂ）は、Ｌ１が０．２Ｗの際の写真であるが、Ｌ１が０．３Ｗの場合も同様に処理対象の細胞Ｃ１の剥離が観察された。これらの結果から、本発明の培養器具および処理方法により、所望の位置の細胞を剥離可能にできることがわかった。
【0104】
以上、実施形態を参照して本発明を説明したが、本発明は、上記実施形態に限定されるものではない。本発明の構成や詳細には、本発明のスコープ内で当業者が理解しうる様々な変更をすることができる。
【0105】
この出願は、２０１８年１２月１３日に出願された日本出願特願２０１８－２３３３８２を基礎とする優先権を主張し、その開示のすべてをここに取り込む。
【0106】
＜付記＞
上記の実施形態および実施例の一部または全部は、以下の付記のように記載されうるが、以下には限られない。
（付記１）
基板と、光溶解性および光熱変換性を有する光反応層とを備え、
前記光反応層は、前記基板に積層され、
前記光反応層は、光溶解性および光熱変換性を有するポリマーを含む、細胞培養器具。
（付記２）
前記光反応層は、光溶解性を有する光溶解層と、光熱変換性を有する光熱変換層とを有し、
前記光溶解層は、光溶解性ポリマーを含み、
前記光熱変換層は、光熱変換性ポリマーを含む、付記１記載の細胞培養器具。
（付記３）
前記光溶解性ポリマーは、主鎖と側鎖とを有し、
前記側鎖は、芳香環を含み、
前記芳香環は、ニトロ基で置換された第１炭素原子と、アルデヒド基または下記式（１）で表される官能基で置換された第２炭素原子とを含み、
前記第１炭素原子と、前記第２炭素原子とは、同じベンゼン環内で隣接している、付記２記載の細胞培養器具。
（付記４）
前記光溶解性ポリマーは、下記式（２）で表されるポリマーを含む、付記３記載の細胞培養器具：
前記式（２）において、
Ａは、単結合または官能基であり、
Ｒ１は、アルデヒド基または前記式（１）で表される官能基であり、
Ｒ１およびＮＯ２は、隣り合った炭素原子にそれぞれ結合しており、
Ｒ２は、水素原子、アルキル基、下記式（３）で表される官能基、および下記式（４）で表される官能基の中から選ばれる少なくとも１つであり、
Ｒ３およびＲ４は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子またはアルキル基であり、
Ｇは、ベンゼン環の水素と置換されてもよい３個以下のアルキル基であり、
ｗおよびｚは、モル百分率を示し、０＜ｗ≦１００、０≦ｚ＜１００であり、
前記式（３）において、
Ｒ６およびＲ７は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、または芳香環であり、
前記式（４）において、
Ｒ８は、アルキル基である。
（付記５）
前記光溶解性ポリマーは、下記式（５）で表されるポリマーを含む、付記３または４記載の細胞培養器具：
前記式（５）において、
ＡおよびＢは、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、単結合または官能基であり、
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ９は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子またはアルキル基であり、
Ｒ６およびＲ７は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、または芳香環であり、
ｘ、ｙ、およびｚは、モル百分率を示し、０≦ｘ＜１００、０≦ｙ＜１００、０≦ｚ＜１００（ただし、ｘ＝ｙ＝０を除く）である。
（付記６）
前記光熱変換性ポリマーは、主鎖と側鎖とを含み、
前記側鎖は、３５０ｎｍ以上の波長において、所定の吸光度を有する色素団を有する、付記２から５のいずれかに記載の細胞培養器具。
（付記７）
前記色素団は、アゾベンゼン骨格を含む、付記６記載の細胞培養器具。
（付記８）
前記光溶解性および光熱変換性を有するポリマーは、主鎖と側鎖とを有し、
前記側鎖は、第１の側鎖と第２の側鎖とを有し、
前記第１の側鎖は、芳香環を含み、
前記芳香環は、ニトロ基で置換された第１炭素原子と、アルデヒド基または前記式（１）で表される官能基で置換された第２炭素原子とを含み、
前記第１炭素原子と、前記第２炭素原子とは、同じベンゼン環内で隣接しており、
前記第２の側鎖は、３５０ｎｍ以上の波長において、所定の吸光度を有する色素団を有する、付記１記載の細胞培養器具。
（付記９）
前記光溶解性および光熱変換性を有するポリマーは、下記式（６）で表される、付記１または８記載の細胞培養器具：
前記式（６）において、
ＡおよびＢは、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、単結合または官能基であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９およびＲ１０は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子またはアルキル基であり、
Ｒ６およびＲ７は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、または芳香環であり、
Ｄは、３５０ｎｍ以上の波長において、所定の吸光度を有する色素団であり、
ｖ、ｘ、ｙ、およびｚは、モル百分率を示し、０＜ｖ＜１００、０≦ｘ＜１００、０≦ｙ＜１００、０≦ｚ＜１００（ただし、ｘ＝ｙ＝０を除く）である。
（付記１０）
前記光溶解性および光熱変換性を有するポリマーは、下記式（７）で表される、付記１記載の細胞培養器具：
前記式（７）において、
Ａ、ＢおよびＥは、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、単結合または官能基であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９およびＲ１１は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子またはアルキル基であり、
Ｒ６およびＲ７は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、または芳香環であり、
Ｄは、３５０ｎｍ以上の波長において、所定の吸光度を有する色素団であり、
ｕ、ｘ、ｙ、およびｚは、モル百分率を示し、０＜ｕ＜１００、０≦ｘ＜１００、０≦ｙ＜１００、０≦ｚ＜１００（ただし、ｘ＝ｙ＝０を除く）である。
（付記１１）
前記光反応層と前記基板とを接続する接続層を備え、
前記接続層は、前記基板に積層され、
前記光反応層は、前記接続層に積層される、付記１から１０のいずれかに記載の細胞培養器具。
（付記１２）
前記光反応層上で、細胞を培養可能である、付記１から１１のいずれかに記載の細胞培養器具。
（付記１３）
付記１から１２のいずれかに記載の細胞培養器具において、細胞を培養する培養工程と、
前記光反応層に、光溶解が生じる第１の光を照射する第１の照射工程と、
前記光反応層に、光熱変換が生じる第２の光を照射する第２の照射工程とを含む、細胞の処理方法。
（付記１４）
前記第１の照射工程において、前記細胞のうち、処理対象の細胞と対応する光反応層に、前記第１の光を照射し、
前記第２の照射工程において、前記細胞のうち、前記処理対象の細胞と、処理対象でない細胞との境界と対応する光反応層に、前記第２の光を照射する、付記１３記載の細胞の処理方法。
（付記１５）
前記第２の照射工程において、前記第２の光を照射された光反応層と対応する細胞を致死させる、付記１３または１４記載の細胞の処理方法。
（付記１６）
前記第２の光の光照射量は、前記第１の光の光照射量より多い、付記１３から１５のいずれかに記載の細胞の処理方法。
上記の実施形態および実施例の一部または全部は、以下の付記のように記載されうるが、以下には限られない。
（付記１）
基板と、光溶解性および光熱変換性を有する光反応層とを備え、
前記光反応層は、前記基板に積層され、
前記光反応層は、光溶解性および光熱変換性を有するポリマーを含む、細胞培養器具。
（付記２）
前記光反応層は、光溶解性を有する光溶解層と、光熱変換性を有する光熱変換層とを有し、
前記光溶解層は、光溶解性ポリマーを含み、
前記光熱変換層は、光熱変換性ポリマーを含む、付記１記載の細胞培養器具。
（付記３）
前記光溶解性ポリマーは、主鎖と側鎖とを有し、
前記側鎖は、芳香環を含み、
前記芳香環は、ニトロ基で置換された第１炭素原子と、アルデヒド基または下記式（１）で表される官能基で置換された第２炭素原子とを含み、
前記第１炭素原子と、前記第２炭素原子とは、同じベンゼン環内で隣接している、付記２記載の細胞培養器具。
【化1】
前記光溶解性ポリマーは、下記式（２）で表されるポリマーを含む、付記３記載の細胞培養器具：
【化2】
Ａは、単結合または官能基であり、
Ｒ１は、アルデヒド基または前記式（１）で表される官能基であり、
Ｒ１およびＮＯ２は、隣り合った炭素原子にそれぞれ結合しており、
Ｒ２は、水素原子、アルキル基、下記式（３）で表される官能基、および下記式（４）で表される官能基の中から選ばれる少なくとも１つであり、
Ｒ３およびＲ４は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子またはアルキル基であり、
Ｇは、ベンゼン環の水素と置換されてもよい３個以下のアルキル基であり、
ｗおよびｚは、モル百分率を示し、０＜ｗ≦１００、０≦ｚ＜１００であり、
【化3】
【化4】
Ｒ６およびＲ７は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、または芳香環であり、
前記式（４）において、
Ｒ８は、アルキル基である。
（付記５）
前記光溶解性ポリマーは、下記式（５）で表されるポリマーを含む、付記３または４記載の細胞培養器具：
【化5】
ＡおよびＢは、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、単結合または官能基であり、
Ｒ３、Ｒ４、およびＲ９は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子またはアルキル基であり、
Ｒ６およびＲ７は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、または芳香環であり、
ｘ、ｙ、およびｚは、モル百分率を示し、０≦ｘ＜１００、０≦ｙ＜１００、０≦ｚ＜１００（ただし、ｘ＝ｙ＝０を除く）である。
（付記６）
前記光熱変換性ポリマーは、主鎖と側鎖とを含み、
前記側鎖は、３５０ｎｍ以上の波長において、所定の吸光度を有する色素団を有する、付記２から５のいずれかに記載の細胞培養器具。
（付記７）
前記色素団は、アゾベンゼン骨格を含む、付記６記載の細胞培養器具。
（付記８）
前記光溶解性および光熱変換性を有するポリマーは、主鎖と側鎖とを有し、
前記側鎖は、第１の側鎖と第２の側鎖とを有し、
前記第１の側鎖は、芳香環を含み、
前記芳香環は、ニトロ基で置換された第１炭素原子と、アルデヒド基または前記式（１）で表される官能基で置換された第２炭素原子とを含み、
前記第１炭素原子と、前記第２炭素原子とは、同じベンゼン環内で隣接しており、
前記第２の側鎖は、３５０ｎｍ以上の波長において、所定の吸光度を有する色素団を有する、付記１記載の細胞培養器具。
（付記９）
前記光溶解性および光熱変換性を有するポリマーは、下記式（６）で表される、付記１または８記載の細胞培養器具：
【化6】
ＡおよびＢは、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、単結合または官能基であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９およびＲ１０は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子またはアルキル基であり、
Ｒ６およびＲ７は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、または芳香環であり、
Ｄは、３５０ｎｍ以上の波長において、所定の吸光度を有する色素団であり、
ｖ、ｘ、ｙ、およびｚは、モル百分率を示し、０＜ｖ＜１００、０≦ｘ＜１００、０≦ｙ＜１００、０≦ｚ＜１００（ただし、ｘ＝ｙ＝０を除く）である。
（付記１０）
前記光溶解性および光熱変換性を有するポリマーは、下記式（７）で表される、付記１記載の細胞培養器具：
【化7】
Ａ、ＢおよびＥは、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、単結合または官能基であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９およびＲ１１は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子またはアルキル基であり、
Ｒ６およびＲ７は、同じでも異なってもよく、それぞれ独立して、水素原子、アルキル基、または芳香環であり、
Ｄは、３５０ｎｍ以上の波長において、所定の吸光度を有する色素団であり、
ｕ、ｘ、ｙ、およびｚは、モル百分率を示し、０＜ｕ＜１００、０≦ｘ＜１００、０≦ｙ＜１００、０≦ｚ＜１００（ただし、ｘ＝ｙ＝０を除く）である。
（付記１１）
前記光反応層と前記基板とを接続する接続層を備え、
前記接続層は、前記基板に積層され、
前記光反応層は、前記接続層に積層される、付記１から１０のいずれかに記載の細胞培養器具。
（付記１２）
前記光反応層上で、細胞を培養可能である、付記１から１１のいずれかに記載の細胞培養器具。
（付記１３）
付記１から１２のいずれかに記載の細胞培養器具において、細胞を培養する培養工程と、
前記光反応層に、光溶解が生じる第１の光を照射する第１の照射工程と、
前記光反応層に、光熱変換が生じる第２の光を照射する第２の照射工程とを含む、細胞の処理方法。
（付記１４）
前記第１の照射工程において、前記細胞のうち、処理対象の細胞と対応する光反応層に、前記第１の光を照射し、
前記第２の照射工程において、前記細胞のうち、前記処理対象の細胞と、処理対象でない細胞との境界と対応する光反応層に、前記第２の光を照射する、付記１３記載の細胞の処理方法。
（付記１５）
前記第２の照射工程において、前記第２の光を照射された光反応層と対応する細胞を致死させる、付記１３または１４記載の細胞の処理方法。
（付記１６）
前記第２の光の光照射量は、前記第１の光の光照射量より多い、付記１３から１５のいずれかに記載の細胞の処理方法。
【産業上の利用可能性】
【0107】
本発明によれば、所望の位置の細胞を剥離可能とすることができる。このため、本発明は、細胞、組織等の加工を行なう生命科学分野、医療分野等において、極めて有用である。
【符号の説明】
【0108】
１００、２００ 培養器具
１１ 容器
１１ａ 基板
１１ｂ 側壁
１２ 光反応層
１２ａ 光熱変換層
１２ｂ 光溶解層
１１ 容器
１１ａ 基板
１１ｂ 側壁
１２ 光反応層
１２ａ 光熱変換層
１２ｂ 光溶解層
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
