特許 7567475 フラボノイド配糖体の分解方法及びフラボノイドの製造方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2024-10-07

(45)【発行日】2024-10-16

(54)【発明の名称】フラボノイド配糖体の分解方法及びフラボノイドの製造方法

(51)【国際特許分類】

   C07D 311/30 20060101AFI20241008BHJP

【ＦＩ】

C07D311/30

【請求項の数】 10

(21)【出願番号】P 2020532518

(86)(22)【出願日】2019-07-26

(86)【国際出願番号】 JP2019029526

(87)【国際公開番号】W WO2020022508

(87)【国際公開日】2020-01-30

【審査請求日】2022-06-28

(31)【優先権主張番号】PCT/JP2018/028278

(32)【優先日】2018-07-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP

(73)【特許権者】

【識別番号】000004455

【氏名又は名称】株式会社レゾナック

(74)【代理人】

【識別番号】100088155

【弁理士】

【氏名又は名称】長谷川 芳樹

(74)【代理人】

【識別番号】100128381

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 義憲

(74)【代理人】

【識別番号】100169454

【弁理士】

【氏名又は名称】平野 裕之

(72)【発明者】

【氏名】有福 征宏

(72)【発明者】

【氏名】栗原 祥晃

(72)【発明者】

【氏名】金枝 雅人

【審査官】早乙女 智美

(56)【参考文献】

【文献】国際公開第２００８／１５５８９０（ＷＯ，Ａ１）

【文献】中国特許出願公開第１０７５０１２２４（ＣＮ，Ａ）

【文献】特開２００８－２０８０６４（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１３－０２１９５０（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２０１１－１５３０８４（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００９－１５３４４９（ＪＰ，Ａ）

【文献】RAVBER, M. et al.，Optimization of hydrolysis of rutin in subcritical water using response surface methodology，Journal of Supercritical Fluids，2015年，104，pp. 145-152

【文献】RUEN-NGAM, D. et al.，Hydrothermal Hydrolysis of Hesperidin Into More Valuable Compounds Under Supercritical Carbon Dioxid，Industrial & Engineering Chemistry Research，2012年，51(42)，pp. 13545-13551

【文献】我妻正祥ら，菜種外皮の水熱加水分解によるポリフェノール生成の速度論解析およびその生成機構に関する考察，化学工業論文集，2018年07月20日，44(3)，pp. 189-196

【文献】田崎弘之ら，テルペン配糖体の熱分解生成物の分析，第47回香料・テルペンおよび精油化学に関する討論会 講演要旨集，2003年，pp. 85-87

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ０７Ｄ３１１／３０－３１１／４０

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）

ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

ＪＳＴＣｈｉｎａ（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

フラボノイド配糖体を含む原料を水熱処理することで、前記フラボノイド配糖体をフラボノイドに分解する、フラボノイド配糖体の分解方法であって、
前記フラボノイド配糖体がスダチチン配糖体及び／又はデメトキシスダチチン配糖体を含み、
前記水熱処理は、温度１１０～１９０℃、０．５～１０時間の条件で行われる、分解方法。

【請求項2】

前記水熱処理は、前記原料を封入した密閉容器内で行われる、請求項１に記載の分解方法。

【請求項3】

前記水熱処理は、前記原料及び水を含む反応液を前記密閉容器内で加熱することで行われる、請求項２に記載の分解方法。

【請求項4】

前記反応液中の前記フラボノイド配糖体の含有量が、反応液全量を基準として０．０１～３質量％である、請求項３に記載の分解方法。

【請求項5】

前記反応液中の無機酸の含有量が、反応液全量を基準として１質量％以下である、請求項３又は４に記載の分解方法。

【請求項6】

前記水熱処理は、前記密閉容器内に外部から水蒸気を供給することで行われる、請求項２～５のいずれか一項に記載の分解方法。

【請求項7】

前記原料がフラボノイドを更に含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の分解方法。

【請求項8】

前記水熱処理は、温度１６０～１９０℃、０．５～１０時間の条件で行われる、請求項１～７のいずれか一項に記載の分解方法。

【請求項9】

前記原料が、柑橘類又は柑橘類の果皮から得られた乾燥粉末である、請求項１～８のいずれか一項に記載の分解方法。

【請求項10】

請求項１～９のいずれか一項に記載の方法によりフラボノイド配糖体を分解する分解工程と、
前記分解工程で得られた分解生成物からフラボノイドを抽出する抽出工程と、
を含む、フラボノイドの製造方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、フラボノイド配糖体の分解方法及びフラボノイドの製造方法に関する。

【背景技術】

【0002】

フラボノイドは、天然に存在する有機化合物群であり、柑橘類及び豆類をはじめとして、様々な植物の花、葉、根、茎、果実、種子等に含まれている。フラボノイドは、種類によって特徴及び作用が異なるが、その多くが強い抗酸化作用を有している。例えば、柑橘類に含まれるフラボノイドであるポリメトキシフラボンは、抗酸化作用、発ガン抑制作用、抗菌作用、抗ウイルス作用、抗アレルギー作用、メラニン生成抑制作用、血糖値抑制作用等を有することが知られており、医薬品、健康食品、化粧品等の様々な用途への応用が期待されている。

【0003】

柑橘類からフラボノイドを製造する方法としては、例えば、柑橘類の果皮等からエタノール水溶液でフラボノイドを抽出し、抽出されたフラボノイドを溶液中から回収する方法が知られている（例えば、特許文献１参照）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【文献】特開２００５－１４５８２４号公報

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

しかしながら、従来のフラボノイドの製造方法では、フラボノイドの収率が低いという問題がある。そのため、フラボノイドの収率を向上できる製造方法の開発が求められている。

【0006】

例えば柑橘類の果皮には、フラボノイドの他に、それよりも多量のフラボノイド配糖体が含まれているが、これをフラボノイドとして回収できれば、フラボノイドの収率を向上させることが可能である。フラボノイド配糖体をフラボノイドに分解する方法としては、フラボノイド配糖体を塩酸等の酸と反応させる方法が挙げられる。しかしながら、この方法では、使用した酸が残存して製品中に混入するおそれがあること、酸とフラボノイドとの副反応生成物が生じる恐れがあるという問題がある。酸及び副生成物等の不純物を除去する方法としては、分解生成物中のフラボノイドを液体クロマトグラフィーにより分離・精製する方法が挙げられるが、高コストであり且つ生産効率が悪いという問題がある。そのため、酸を用いない新たなフラボノイド配糖体の分解方法が求められている。

【0007】

本発明は、上記従来技術の有する課題に鑑みてなされたものであり、酸を用いなくてもフラボノイド配糖体を効率的にフラボノイドに分解できるフラボノイド配糖体の分解方法、及び、フラボノイドの収率を向上できるフラボノイドの製造方法を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0008】

上記目的を達成するために、本発明は、フラボノイド配糖体を含む原料を水熱処理することで、上記フラボノイド配糖体をフラボノイドに分解する、フラボノイド配糖体の分解方法を提供する。

【0009】

上記方法によれば、酸を用いることなく、水熱処理によりフラボノイド配糖体を効率的にフラボノイドに分解することができる。また、この方法を用いることで、フラボノイドを低コストで効率的に製造することが可能となる。

【0010】

上記方法において、上記フラボノイド配糖体はスダチチン配糖体及び／又はデメトキシスダチチン配糖体を含んでいてもよい。上記方法によれば、スダチチン配糖体及びデメトキシスダチチン配糖体を特に効率的に分解することができる。

【0011】

上記方法において、水熱処理温度は１１０～３００℃の範囲内であってもよい。上記範囲内の温度であると、フラボノイド配糖体の分解をより促進することができる。

【0012】

本発明はまた、上記本発明の方法によりフラボノイド配糖体を分解する分解工程と、上記分解工程で得られた分解生成物からフラボノイドを抽出する抽出工程と、を含む、フラボノイドの製造方法を提供する。かかる製造方法によれば、フラボノイドを高い収率で、低コスト且つ効率的に製造することができる。

【発明の効果】

【0013】

本発明によれば、酸を用いなくてもフラボノイド配糖体を効率的にフラボノイドに分解できるフラボノイド配糖体の分解方法、及び、フラボノイドの収率を向上できるフラボノイドの製造方法を提供することができる。

【発明を実施するための形態】

【0014】

以下、本発明をその好適な実施形態に即して詳細に説明する。但し、本発明は以下の実施形態に限定されるものではない。

【0015】

本明細書において、「～」を用いて示された数値範囲は、「～」の前後に記載される数値をそれぞれ最小値及び最大値として含む範囲を示す。本明細書に段階的に記載されている数値範囲において、ある段階の数値範囲の上限値又は下限値は、他の段階の数値範囲の上限値又は下限値と任意に組み合わせることができる。本明細書に記載されている数値範囲において、その数値範囲の上限値又は下限値は、実施例に示されている値に置き換えてもよい。「Ａ又はＢ」とは、Ａ及びＢのどちらか一方を含んでいればよく、両方とも含んでいてもよい。本明細書に例示する材料は、特に断らない限り、１種を単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。

【0016】

（フラボノイド配糖体の分解方法）
本実施形態に係るフラボノイド配糖体の分解方法は、フラボノイド配糖体を含む原料を水熱処理することで、フラボノイド配糖体をフラボノイドに分解する方法である。

【0017】

フラボノイド配糖体は、フラボノイドと糖とがグリコシド結合により結合した構造を有する親水性の化合物である。フラボノイド配糖体の元となるフラボノイド（アグリコン）は、フェニルクロマン骨格を基本構造とする芳香族化合物であり、フラボン類、フラボノール類、フラバノン類、フラバノノール類、イソフラボン類、アントシアニン類、フラバノール類、カルコン類、オーロン類等が挙げられる。これらの中でも、フラボノイドは、フラボン類であるポリメトキシフラボンであってもよい。

【0018】

ポリメトキシフラボンとしては、スダチチン、デメトキシスダチチン、ノビレチン、タンゲレチン、ペンタメトキシフラボン、テトラメトキシフラボン、ヘプタメトキシフラボン等が挙げられる。これらの中でも、ポリメトキシフラボンは、スダチチン、又は、デメトキシスダチチンであってもよい。

【0019】

また、フラボノイドは、ケルセチン、ヘスペレチン、又は、アントシアニジンを含んでいてもよい。

【0020】

フラボノイド配糖体の元となる糖としては特に限定されず、上述したフラボノイドとグリコシド結合により結合して配糖体を形成することができる公知の糖が挙げられる。

【0021】

水熱処理に供する原料は、フラボノイド配糖体以外の他の成分を含んでいてもよい。他の成分としては、例えば、フラボノイド、水溶性食物繊維、難溶性食物繊維、糖類等が挙げられる。原料におけるフラボノイド配糖体の含有量は、原料の固形分全量を基準として、０．１質量％以上であることが好ましく、０．２５～３０質量％であることがより好ましく、０．３～１５質量％であることが更に好ましく、０．５～５質量％であることが特に好ましい。原料がフラボノイドを更に含む場合、フラボノイド配糖体の含有量は、フラボノイドの含有量１質量部に対して、０．２５質量部以上であることが好ましく、０．５～１００質量部であることがより好ましく、５～５０質量部であることが更に好ましい。

【0022】

原料として具体的には、植物及び海草の花、葉、根、茎、果実、種子等を用いることができる。特に果皮はポリメトキシフラボン、及びそれらの配糖体を多く含有するため、柑橘果実の搾汁残渣を好適に用いることができる。また、原料は、柑橘類から得られた乾燥粉末であってもよく、柑橘類の果皮から得られた乾燥粉末であってもよい。柑橘類としては、スダチ、温州みかん、ポンカン、シークワサー等が挙げられる。柑橘類は、スダチチン及びデメトキシスダチチン等のポリメトキシフラボン、及びそれらの配糖体を多く含有するスダチであってもよい。

【0023】

水熱処理は、原料を水と共に耐圧性の密閉容器内に封入し、密閉したまま１００℃を超える温度で加熱することで行うことができる。上記原料及び水を含む反応液が密閉容器内で加熱されることで、密閉容器内が加熱及び加圧環境となり、水熱処理（水熱合成）が行われる。

【0024】

水熱処理は、上記密閉容器内に外部から水蒸気（スチーム）を供給することで行われてもよい。水蒸気を外部から供給することで、密閉容器内を短時間で昇温昇圧することができ、水熱処理環境を容易に形成及び維持することができる。水蒸気の供給は、例えば、ボイラーを用いて行うことができる。水蒸気の供給は、上記原料及び水を含む反応液を密閉容器内で加熱する方法と組み合わせて行ってもよい。水蒸気の供給量は、密閉容器内が所定の温度及び圧力となるように適宜調整される。

【0025】

水熱処理は、反応液を撹拌しながら行ってもよい。耐圧性の密閉容器としては、水熱処理に使用可能な公知の容器を特に制限なく用いることができる。耐圧性の密閉容器としては、例えば、オートクレーブを用いることができる。

【0026】

水の量は、水熱処理を行うのに十分な量であればよく、特に限定されないが、水１００質量部に対して原料の固形分が１質量部以上、２質量部以上、４質量部以上、又は、５質量以上であってもよく、１００質量部以下、３３質量部以下、２５質量部以下、１８質量部以下、又は、１１質量部以下であってもよい。また、反応液中の原料の固形分の含有量（原料濃度）としては、反応液全量を基準として１．０質量％以上、２．０質量％以上、３．８質量％以上、又は、４．８質量％以上であってもよく、５０質量％以下、２５質量％以下、２０質量％以下、１５質量％以下、又は、１０質量％以下であってもよい。水の量又は原料濃度が上記範囲内であると、フラボノイド配糖体の分解を効率的に行うことができる。また、水に対する原料の固形分の割合又は原料濃度が上記上限値以下であると、本実施形態の分解方法で得られた分解生成物からフラボノイドを抽出した際に、フラボノイドの収率が向上する傾向がある。

【0027】

原料及び水を含む反応液は、水以外の溶媒を含んでいてもよく、水のみを溶媒として含んでいてもよい。溶媒中の水の含有量は、溶媒全量を基準として５０～１００質量％、７０～１００質量％、９０～１００質量％、又は、９５～１００質量部であってもよい。溶媒中の水の含有量が上記下限値以上であることで、溶媒へのフラボノイド配糖体の溶解性を高めることができるため、フラボノイド配糖体の分解をより促進することができる。

【0028】

反応液は、酸を含まないことが好ましい。特に、反応液は、塩酸、硫酸、硝酸等の無機酸を含まないことが好ましい。反応液が無機酸を含む場合、密閉容器内での水熱処理により、毒性の高い有機塩素系化合物、有機窒素系化合物、有機硫黄系化合物が生成し易いため、好ましくない。また、反応液が無機酸を含む場合、製品中に残存するおそれがあると共に、製品中への残存を防ぐために無機酸を十分に除去する工程が必要となるため高コストになるという問題がある。反応液中の無機酸の含有量は、反応液全量を基準として１質量％以下、０．１質量％以下、又は、０．０１質量％以下であることが好ましい。なお、クエン酸、酢酸、アスパラギン酸、アミノ酸、核酸等の生体由来の有機酸の含有は特に制限されない。本明細書中、反応液全量とは、水熱処理を行う前（密閉容器内で加熱加圧を行う前）の状態における反応液の全量を意味する。

【0029】

反応液中のフラボノイド配糖体の含有量は、反応液全量を基準として０．００５質量％以上、０．０１質量％以上、０．０２質量％以上、又は、０．０３質量％以上であってもよく、１０質量％以下、５質量％以下、３質量％以下、１質量％以下、０．９質量％以下、０．５質量％以下、０．３質量％以下、又は、０．１質量％以下であってもよい。上記含有量が上記下限値以上であると、フラボノイドの製造効率が向上する傾向がある。一方、上記含有量が上記上限値以下であると、本実施形態の分解方法で得られた分解生成物からフラボノイドを抽出した際に、フラボノイドの収率が向上する傾向がある。これは、反応液中のフラボノイド配糖体の濃度が高いと、フラボノイド配糖体から分離した糖同士の重合（カラメル化反応）、及び、反応液中にアミノ酸が存在した場合には、糖とアミノ酸との重合（メイラード反応）が生じ易くなるためであると考えられる。糖の重合物（カラメル化反応生成物及びメイラード反応生成物）は、水にもアルコールにも溶解し難い。そして、糖の重合物が、分解したフラボノイドを取り込むことでフラボノイドの抽出を妨げ、フラボノイドの収率を低下させる要因となるものと推察される。

【0030】

水熱処理の反応条件は特に限定されないが、例えば、１１０～３００℃で０．５～２０時間とすることができる。反応温度は、１２０～１９０℃であることが好ましく、１４０～１８５℃であることがより好ましい。反応温度が１１０℃以上であると、水熱反応がより良好に発生しやすい傾向があり、３００℃以下であると、原料及びフラボノイドの炭化が進行しにくく、収率がより向上する傾向がある。反応時間は、０．５～２０時間であることが好ましく、１～１０時間であることがより好ましい。反応時間が０．５時間以上であると、反応がより進みやすくなる傾向があり、２０時間以下であると、反応の進行とコストとのバランスがとりやすくなる傾向がある。

【0031】

水熱処理は、低温（例えば２００℃未満）且つ長時間（例えば１時間以上）の条件で行うことが、フラボノイドの収率を向上させる観点から好ましい。反応温度が高温であると、反応後の冷却時に反応液の突沸が生じ易く、突沸が生じると反応液が該反応液を収容した容器の外に飛散するため、収率が低下する傾向がある。また、上述した突沸が生じないように冷却する場合、冷却時間が長時間必要となるため、作業効率が低下することとなる。この冷却時間が長くなる問題は、特にフラボノイドを量産化する際のデメリットとなる。このような問題を改善する観点から、水熱処理は低温で長時間の条件で行うことが好ましい。水熱処理を低温で行った場合でも、反応時間を長くすることでフラボノイド配糖体を十分にフラボノイドに分解することができる。また、水熱処理を低温且つ長時間の条件で行った方が、水熱処理を高温且つ短時間の条件で行った場合よりも、水熱処理後の冷却時間を含めた全体の工程時間を短縮することができる。

【0032】

水熱処理時の容器内の圧力は、上記反応温度に対応する飽和蒸気圧又はそれ以上であればよいが、装置の耐圧性の観点から、飽和蒸気圧であることが好ましい。密閉容器内に水蒸気を供給する場合、上述した反応温度の飽和水蒸気を供給することが好ましい。水熱処理時の密閉容器内の圧力は、例えば、０．２～１．６ＭＰａとすることができる。

【0033】

上記条件で水熱処理を行うことで、フラボノイド配糖体をフラボノイドに（より具体的にはフラボノイドと糖に）、効率的に分解することができる。

【0034】

（フラボノイドの製造方法）
本実施形態に係るフラボノイドの製造方法は、フラボノイド配糖体を分解する分解工程と、分解工程で得られた分解生成物からフラボノイドを抽出する抽出工程と、を含む。分解工程は、上述した本実施形態に係るフラボノイド配糖体の分解方法によりフラボノイド配糖体を分解する工程である。

【0035】

抽出工程では、分解工程で得られた分解生成物からフラボノイドを抽出する。分解生成物には、フラボノイドの他に、糖、分解させずに残ったフラボノイド配糖体、水溶性及び難溶性セルロース並びにその分解物等が含まれている。ここで、フラボノイドは疎水性であるのに対し、糖、フラボノイド配糖体、水溶性セルロース及びその分解物は親水性である。そのため、水熱処理後の水溶液に不溶な成分にはフラボノイドが高濃度で含まれており、水熱処理後に水溶液と不溶分とを分離することで、フラボノイドを濃縮することができる。また、さらに水不溶分を、フラボノイドを溶解する溶媒、例えばエタノール、酢酸エチル、ヘキサン、トルエン等、及び、それらの混合溶媒に溶解し、不溶物をろ過等により除去することで、フラボノイドをさらに抽出・精製することができる。その後、ろ液を乾燥させることにより、高濃度フラボノイドを得ることができる。

【0036】

上記方法により、フラボノイドを高い収率で効率的に製造することができる。本実施形態の製造方法で製造されるフラボノイドは、ポリメトキシフラボンであってもよく、スダチチン及び／又はデメトキシスダチチンであってもよい。本実施形態の製造方法は、ポリメトキシフラボン、特にスダチチン及びデメトキシスダチチンの製造に好適であり、その収率を大きく向上させることができる。

【実施例】

【0037】

以下、実施例及び比較例に基づいて本発明をより具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

【0038】

（実施例１）
スダチチン含有量１０００質量ｐｐｍ、デメトキシスダチチン含有量１５００質量ｐｐｍ、配糖体由来スダチチン含有量８０００質量ｐｐｍ、配糖体由来デメトキシスダチチン含有量３０００質量ｐｐｍであるスダチ果皮エキス粉（池田薬草株式会社製）２ｇを超純水５０ｇに溶解／分散させ、容量１００ｍｌのテフロン（登録商標）容器に封入し、更にそのテフロン（登録商標）容器をステンレス製耐圧容器に収め、耐圧容器を密閉した。密閉した耐圧容器内で、テフロン（登録商標）容器内の溶液をマグネティックスターラーを用いて回転数６００ｒｐｍで撹拌しながら、溶液の温度が１８０℃となるようにヒーターで加熱した。１８０℃到達後、撹拌を続けながら１８０℃で６０分間水熱処理を行った。その後、加熱及び撹拌を止めて常温（２５℃）まで自然冷却した。なお、水熱処理中の最高到達温度は１８１℃であった。冷却後、テフロン（登録商標）容器内の溶液及び固形分をビーカーに取り出し、６０℃加温下でダイアフラムポンプを用いて真空乾燥し、粉末状の配糖体分解サンプル１を１．８５ｇ得た。

【0039】

次いで、再度、同様の処理を行い、水熱処理後に自然冷却した後、テフロン（登録商標）容器内の溶液と固形分を目開き０．２μｍの親水化ＰＴＦＥ製メンブレンフィルター（メルク－ミリポア社製、商品名：Ｏｍｎｉｐｏｒｅ ０．２μｍ ＪＧ）を用いて、ダイアフラムポンプを用いて減圧濾過した。分離された溶液には分解された配糖体由来の糖が溶解しており、固形物には分解したフラボノイド（スダチチン及びデメトキシスダチチン）が高濃度で含まれているため、得られた固形物を２００ｃｃのガラス製ビーカーに入れて、オーブンで１２０℃にて５時間乾燥し、粉末状の配糖体分解物を得た。次いで、配糖体分解物をエタノールに分散させて５質量％分散液になるよう調整し、還流下６０℃で１時間処理して、エタノールにフラボノイドを抽出した。その後、分散液を、目開き０．２μｍの親水化ＰＴＦＥ製メンブレンフィルター（メルク－ミリポア社製、商品名：Ｏｍｎｉｐｏｒｅ ０．２μｍ ＪＧ）を用いて、ダイアフラムポンプを用いて減圧濾過し、フラボノイド溶解液を得た。フラボノイド溶解液を６０℃加温下でダイアフラムポンプを用いて真空乾燥し、粉末状のフラボノイド濃縮粉末１を０．１５ｇ得た。

【0040】

（実施例２～４）
水熱処理中の溶液の温度を１６０℃（実施例２）、１４０℃（実施例３）、１２０℃（実施例４）としたこと以外は実施例１と同様にして、粉末状の配糖体分解サンプル２（１．９ｇ）、３（１．８１ｇ）、４（１．７９ｇ）及びフラボノイド濃縮粉末２（０．１５ｇ）、３（０．０８ｇ）、４（０．０５ｇ）を得た。

【0041】

（実施例５～８）
水熱処理の反応時間を６００分（１０時間）とし、処理中の温度を１８０℃（実施例５）、１６０℃（実施例６）、１４０℃（実施例７）、１２０℃（実施例８）としたこと以外は実施例１と同様にして、粉末状の配糖体分解サンプル５（１．８３ｇ）、６（１．８２ｇ）、７（１．７５ｇ）、８（１．９２ｇ）及びフラボノイド濃縮粉末５（０．１６ｇ）、６（０．１６ｇ）、７（０．１３ｇ）、８（０．０８ｇ）を得た。

【0042】

（実施例９～１２）
スダチ果皮エキス粉（池田薬草株式会社製）５ｇを超純水４５ｇに溶解／分散（実施例９）、スダチ果皮エキス粉（池田薬草株式会社製）７．５ｇを超純水４２．５ｇに溶解／分散（実施例１０）、スダチ果皮エキス粉（池田薬草株式会社製）１０ｇを超純水４０ｇに溶解／分散（実施例１１）、スダチ果皮エキス粉（池田薬草株式会社製）１２．５ｇを超純水３７．５ｇに溶解／分散（実施例１２）させたこと以外は実施例１と同様にして、粉末状の配糖体分解サンプル９（４．８ｇ）、１０（７．３ｇ）、１１（９．８ｇ）、１２（１２．２ｇ）及びフラボノイド濃縮粉末９（０．３９ｇ）、１０（０．４９ｇ）、１１（０．４１ｇ）、１２（０．２９ｇ）得た。実施例９～１２で用いたスダチ果皮エキス粉は、実施例１で用いたものと同じものである。

【0043】

（実施例１３）
超純水（和光純薬工業株式会社製）とエタノール（特級、和光純薬工業株式会社製）とを質量比（超純水／エタノール）で６／４で混合した抽出溶媒１３３０ｇを３Ｌ三ツ口フラスコに投入し、スリーワンモータ（攪拌機）に装着したテフロン（登録商標）製攪拌羽で３２０ｒｐｍで攪拌しながら、温浴で６０℃に温調し、リービッヒ冷却管にて還流した状態で、乾燥玉ねぎ皮粉末（株式会社自然健康社製）７０ｇを投入した。３時間攪拌を行い、玉ねぎ皮中に含まれるケルセチンとケルセチン配糖体を抽出した。

【0044】

その後、１００ｃｃプラスチック容器に６０ｃｃの上記抽出液を入れ、遠心分離機にて１００００ｒｐｍの条件で１０分間遠心分離し、上澄みをスポイトで取り出した。次いで、水／エタノール（質量比６：４）混合溶液を上記プラスチック容器に６０ｃｃ入れ、再度、同条件で遠心分離を行い、上澄みをスポイトで取り出した。上記作業を抽出液全てに対して行い、ケルセチン及びケルセチン配糖体抽出液Ａを２５４０ｇ得た。得られた抽出液Ａをエバポレータで減圧乾燥し、固形分Ａを１１．３８ｇ得た。固形分Ａ中のケルセチン濃度をＨＰＬＣにて分析した結果、７．９質量％であった。

【0045】

固形分Ａを原料とし、スダチ果皮エキス粉２ｇに代えて固形分Ａを２ｇ用いたこと以外は実施例１と同様の処理を行い、配糖体分解サンプル１３を１．９１ｇとフラボノイド濃縮粉末１３を０．５８ｇ得た。

【0046】

（実施例１４）
固形分Ａの量を１ｇに変更したこと以外は実施例１３と同様にして、配糖体分解サンプル１４を０．８１ｇとフラボノイド濃縮粉末１４を０．３２ｇ得た。

【0047】

（実施例１５）
フラボノイドの一種であるヘスペレチンの配糖体であるヘスペリジン（和光純薬工業株式会社製、濃度９５％以上）０．５ｇを原料とし、これを超純水４９．５ｇに溶解／分散させたものを反応液として用いたこと以外は実施例１と同様にして配糖体分解サンプル１５を０．３９ｇとフラボノイド濃縮粉末１５を０．３１ｇ得た。

【0048】

（比較例１）
実施例１で用いたものと同じスダチ果皮エキス粉（池田薬草株式会社製）２ｇを比較例１のサンプルとした。

【0049】

（参考例１）
実施例１で用いたものと同じスダチ果皮エキス粉（池田薬草株式会社製）２ｇを１Ｎ塩酸５０ｇに溶解／分散させ、マグネティックスターラーを用いて回転数６００ｒｐｍで撹拌しながら８０℃で１時間加熱した後、加熱及び撹拌を止めて常温（２５℃）まで自然冷却した。冷却後の反応液を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で中和し、６０℃加温下でダイアフラムポンプを用いて真空乾燥して、粉末状の配糖体塩酸分解サンプル１を１．７４ｇ得た。

【0050】

次いで、再度、同様の処理を行い、自然冷却後の反応液を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で中和した後、溶液と固形分を目開き０．２μｍの親水化ＰＴＦＥ製メンブレンフィルター（メルク－ミリポア社製、商品名：Ｏｍｎｉｐｏｒｅ ０．２μｍ ＪＧ）を用いて、ダイアフラムポンプを用いて減圧濾過した。分離された溶液には分解された配糖体由来の糖が溶解しており、固形物には分解したフラボノイド（スダチチン及びデメトキシスダチチン）が高濃度で含まれているため、得られた固形物を２００ｃｃのガラス製ビーカーに入れて、オーブンで１２０℃にて５時間乾燥し、粉末状の配糖体分解物を得た。次いで、配糖体分解物をエタノールに分散させて５質量％分散液になるよう調整し、還流下６０℃で１時間処理して、エタノールにフラボノイドを抽出した。その後、分散液を、目開き０．２μｍの親水化ＰＴＦＥ製メンブレンフィルター（メルク－ミリポア社製、商品名：Ｏｍｎｉｐｏｒｅ ０．２μｍ ＪＧ）を用いて、ダイアフラムポンプを用いて減圧濾過し、フラボノイド溶解液を得た。フラボノイド溶解液を６０℃加温下でダイアフラムポンプを用いて真空乾燥し、粉末状の塩酸分解フラボノイド濃縮粉末１を０．１５ｇ得た。

【0051】

（参考例２）
スダチ果皮エキス粉２ｇに代えて、実施例１３で得られた固形分Ａを２ｇ用いたこと以外は参考例１と同様の処理を行い、粉末状の配糖体塩酸分解サンプル２を１．６８ｇと、塩酸分解フラボノイド濃縮粉末２を０．６５ｇ得た。

【0052】

＜評価方法＞
（サンプル中のフラボノイド濃度の測定）
各実施例、比較例及び参考例で得られたサンプルのフラボノイド濃度は、以下の方法で測定した。まず、サンプル０．１ｇを希釈倍率５００となるように、エタノールに溶解／分散させ、孔径０．１μｍのＰＴＦＥフィルターでろ過して、エタノール溶液を得た。このエタノール溶液について、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により成分分析を行った。標準物質に市販のスダチチン標準精製試料、市販のデメトキシスダチチン標準精製試料、ケルセチン標準精製試料及びヘスペレチン標準精製試料を用いてそれぞれ検量線を作成し、それを用いてサンプル中のスダチチン濃度、デメトキシスダチチン濃度、ケルセチン濃度及びヘスペレチン濃度を概算した。ＨＰＬＣ装置には、日立ハイテク製「クロムマスター」を用いた。結果は表１及び表２にまとめて示した。

【0053】

（フラボノイドの収率の算出）
各実施例及び参考例で使用した原料粉に含まれるフラボノイドの質量に対する、得られたフラボノイド濃縮粉末に含まれるフラボノイドの質量の比率をフラボノイド収率として求めた。結果を表１及び表２に示す。

【0054】

【表1】

【0055】

【表2】

【0056】

表１に示すとおり、実施例１～１２は全て、比較例１と比較してスダチチン濃度及びデメトキシスダチチン濃度が上昇しており、スダチチン配糖体及びデメトキシスダチチン配糖体の分解によってスダチチン及びデメトキシスダチチンが新たに生成し、スダチチン及びデメトキシスダチチンの収率を向上させることができることが分かった。また、実施例１～１２では、参考例１のように塩酸を用いることなくスダチチン濃度及びデメトキシスダチチン濃度を向上させることができ、条件によっては塩酸を用いた場合と同程度にスダチチン濃度及びデメトキシスダチチン濃度を向上させることができることが分かった。また、実施例９～１２に示される通り、反応液の原料濃度を高くした場合、配糖体分解サンプルにおけるスダチチン濃度及びデメトキシスダチチン濃度に大きな変化はなかったが、原料濃度が高いほど、エタノール抽出及び濃縮後のフラボノイドの収率は低下することが確認された。なお、原料濃度を３０質量％以上とした場合は、原料の溶け残りが生じることが確認された。更に、表２に示した結果から明らかなように、ケルセチン配糖体及びヘスペリジンについても十分に分解できることが確認された。