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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-10-16
(45)【発行日】2024-10-24
(54)【発明の名称】歯の再生治療のためのＵＳＡＧ－１を標的分子とした中和抗体
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20241017BHJP
A61P 1/02 20060101ALI20241017BHJP
C07K 16/18 20060101ALI20241017BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20241017BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20241017BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20241017BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 N
A61P1/02
C07K16/18 ZNA
C12P21/08
C07K16/46
C12N15/13
【請求項の数】
12
(21)【出願番号】P 2020119469
(22)【出願日】2020-07-10
(65)【公開番号】P2021176829
(43)【公開日】2021-11-11
【審査請求日】2023-06-05
(31)【優先権主張番号】P 2019130153
(32)【優先日】2019-07-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
(31)【優先権主張番号】P 2020080723
(32)【優先日】2020-04-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成３０年度、国立研究開発法人日本医療研究開発機構、難治性疾患実用化研究事業「希少疾患先天性無歯症治療薬の開発研究－Ｗｎｔシグナル＆ＢＭＰシグナルに関連する難治性疾患治療への展開－」 委託研究開発、産業技術力強化法第１７条の適用を受ける特許出願
(73)【特許権者】
【識別番号】504132272
【氏名又は名称】国立大学法人京都大学
(73)【特許権者】
【識別番号】504145320
【氏名又は名称】国立大学法人福井大学
(73)【特許権者】
【識別番号】000116622
【氏名又は名称】愛知県
(73)【特許権者】
【識別番号】504176911
【氏名又は名称】国立大学法人大阪大学
(74)【代理人】
【識別番号】100101454
【弁理士】
【氏名又は名称】山田 卓二
(74)【代理人】
【識別番号】100122301
【弁理士】
【氏名又は名称】冨田 憲史
(74)【代理人】
【識別番号】100170520
【弁理士】
【氏名又は名称】笹倉 真奈美
(72)【発明者】
【氏名】▲高▼橋 克
(72)【発明者】
【氏名】菅井 学
(72)【発明者】
【氏名】時田 義人
(72)【発明者】
【氏名】▲高▼木 淳一
(72)【発明者】
【氏名】三原 恵美子
【審査官】吉門 沙央里
(56)【参考文献】
【文献】特表２０１１－５０４５０１（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１１－５０２４７０（ＪＰ，Ａ）
【文献】特表２０１２－５３０５０２（ＪＰ，Ａ）
【文献】米国特許出願公開第２０１３／０１９５８５６（ＵＳ，Ａ１）
【文献】CHO, Sung-Won et al.，"Interactions between Shh, Sostdc1 and Wnt signaling and a new feedback loop for spatial patterning，Development，2011年，Vol.138，pp.1807-1816
【文献】ABITBOL, Marc Mordekhai et al.，"Sostdc1, a secreted dual BMP and WNT antagonist, is differentially expressed in RCS rdy+ and rdy- r，ARVO Annual Meeting Abstract，2017年，Vol.58, No.610
【文献】CHEN, Xiaoyan et al.，"Mesenchymal Wnt/beta-catenin signaling induces Wnt and BMP antagonists in dental epithelium"，Organogenesis，2019年，Vol.15，pp.55-67
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ｃ０７Ｋ １／００－１９／００
Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０
ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ）
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、歯の再生治療のための医薬組成物。
【請求項2】
前記抗体が、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合してＵＳＡＧ－１のＢＭＰシグナリング抑制活性を中和する抗体である、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項3】
前記抗体が、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合してＵＳＡＧ－１のＷＮＴシグナリング抑制活性を中和する抗体である、請求項１または２記載の医薬組成物。
【請求項4】
前記抗体が、
（ｌ）それぞれ配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、およびそれぞれ配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、
（ｍ）それぞれ配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、およびそれぞれ配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、
または、
（ｏ）それぞれ配列番号５２、配列番号５３、および配列番号５４で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、およびそれぞれ配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３
を含む、請求項１～３のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項5】
前記抗体が、
（ｑ）配列番号１３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｒ）配列番号２３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
または、
（ｔ）配列番号５０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号５１で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項４記載の医薬組成物。
【請求項6】
前記抗体が、ＵＳＡＧ－１への結合について、請求項４または５に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと競合する抗体である、請求項１～３のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項7】
前記抗体が、配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含むエピトープに結合する抗体である、請求項１～３のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項8】
前記抗体がヒト化抗体またはキメラ抗体である、請求項１～７のいずれか１項記載の医薬組成物。
【請求項9】
（ｌ）それぞれ配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、およびそれぞれ配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、
（ｍ）それぞれ配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、およびそれぞれ配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、
または、
（ｏ）それぞれ配列番号５２、配列番号５３、および配列番号５４で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、およびそれぞれ配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３
を含む、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項10】
（ｑ）配列番号１３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｒ）配列番号２３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
または、
（ｔ）配列番号５０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号５１で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項９記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項11】
ＵＳＡＧ－１への結合について、請求項９または１０記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項12】
抗体がヒト化抗体またはキメラ抗体である、請求項９～１１のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、無歯症の治療または歯の再生のためのＵＳＡＧ－１を標的とする中和抗体に関する。
【背景技術】
【0002】
無歯症（歯の欠損を有する患者）の原因の多くは、う蝕や歯周病等の後天的な原因によるが、先天性のものとしては、発症率が１％と高い先天性無歯症がある。現在、欠損歯の治療法としては歯科インプラントや義歯等の補綴治療のみであり、根本的な治療法は存在しない。組織工学的なアプローチを用いた歯の再生の研究は多数報告されている。細胞ソースとして幹細胞（非特許文献１）等、種々の細胞が用いられている。また、イン・ビトロで作製した歯を口腔内で機能させるために、コラーゲンのゲルの中で、器官のもととなる歯の器官原基を再生する細胞操作技術、「器官原基法」（非特許文献２）が報告されている。しかし、組織工学的なアプローチは、いずれも細胞ソースを確保するためのコストや安全性等の問題があり、臨床応用まで至っていない。
【0003】
一方、先天性無歯症の原因遺伝子は多数同定されており、多くのものがヒトとマウスで共通する。例えば、ＲＵＮＸ２、ＭＳＸ１、ＥＤＡ、ＷＮＴ１０Ａ、ＰＡＸ９、ＡＸＩＮ２等が知られている。なかでも、ＷＮＴ１０Ａを原因遺伝子とする先天性無歯症は、患者数が最も多い。また、ＥＤＡは、症候群性先天性無歯症の代表疾患である無汗性外胚葉異形成症の原因遺伝子である。先天性無歯症は、原因遺伝子の欠損、機能抑制により、歯の発生が途中で停止するために引き起こされる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0004】
【文献】Ｏｈａｚａｍａ， Ｊ Ｄｅｎｒ Ｒｅｓ， ２００４
【文献】Ｎａｋａｏ， Ｎａｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ， ２００７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
先天性無歯症の新たな視点からの治療では、上述のように歯の発生が途中で停止した状態から、分化誘導を促して完全な歯を形成させることが考えられる。そこで、本発明は、外科的な組織移植を利用するのではなく、歯の器官に内在する分化誘導を利用した歯の無歯症の治療方法に関する技術を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明者らは、鋭意研究の結果、ＵＳＡＧ－１を標的分子とした中和抗体の開発に成功した。さらに、該抗体の投与により、先天性無歯症モデルマウスの欠損歯を再生すること、および先天性無歯症モデルマウスまたは野生型マウスにおいて過剰歯を形成することができることを見出し、本発明を完成した。
【0007】
すなわち、本発明は、
［１］ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメント、
［２］ＵＳＡＧ－１に特異的に結合してＵＳＡＧ－１のＢＭＰシグナリング抑制活性を中和する、［１］記載の抗体またはその抗原フラグメント、
［３］ＵＳＡＧ－１に特異的に結合してＵＳＡＧ－１のＷＮＴシグナリング抑制活性を中和する、［１］または［２］記載の抗体またはその抗原フラグメント、
［４］（ａ）それぞれ配列番号５、配列番号６、および配列番号７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号８、配列番号９、および配列番号１０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域、
（ｂ）それぞれ配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域、
（ｃ）それぞれ配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域、
（ｄ）それぞれ配列番号４２、配列番号４３、および配列番号４４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域、あるいは、
（ｅ）それぞれ配列番号５２、配列番号５３、および配列番号５４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域
を含む、［１］～［３］のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、
［５］（ｆ）配列番号３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｇ）配列番号１３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号１４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｈ）配列番号２３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号２４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｉ）配列番号４０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号４１で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
あるいは、
（ｊ）配列番号５０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号５１で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、［１］～［４］のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、
［６］（ｋ）それぞれ配列番号５、配列番号６、および配列番号７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号８、配列番号９、および配列番号１０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域、
（ｌ）それぞれ配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域、
（ｍ）それぞれ配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域、
（ｎ）それぞれ配列番号４２、配列番号４３、および配列番号４４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域、または、
（ｏ）それぞれ配列番号５２、配列番号５３、および配列番号５４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域
を含む、［１］～［３］のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、
［７］（ｐ）配列番号３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｑ）配列番号１３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｒ）配列番号２３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｓ）配列番号４０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４１で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または、
（ｔ）配列番号５０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号５１で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、［１］～［３］および［６］のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、
［８］ＵＳＡＧ－１への結合について、［４］～［７］のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと競合する抗体またはその抗原結合フラグメント、
［９］抗体がヒト化抗体またはキメラ抗体である、［１］～［８］のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、および
［１０］［１］～［９］のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、歯の再生治療のための医薬組成物
を提供する。
［１］ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメント、
［２］ＵＳＡＧ－１に特異的に結合してＵＳＡＧ－１のＢＭＰシグナリング抑制活性を中和する、［１］記載の抗体またはその抗原フラグメント、
［３］ＵＳＡＧ－１に特異的に結合してＵＳＡＧ－１のＷＮＴシグナリング抑制活性を中和する、［１］または［２］記載の抗体またはその抗原フラグメント、
［４］（ａ）それぞれ配列番号５、配列番号６、および配列番号７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号８、配列番号９、および配列番号１０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域、
（ｂ）それぞれ配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域、
（ｃ）それぞれ配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域、
（ｄ）それぞれ配列番号４２、配列番号４３、および配列番号４４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域、あるいは、
（ｅ）それぞれ配列番号５２、配列番号５３、および配列番号５４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域
を含む、［１］～［３］のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、
［５］（ｆ）配列番号３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｇ）配列番号１３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号１４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｈ）配列番号２３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号２４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｉ）配列番号４０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号４１で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
あるいは、
（ｊ）配列番号５０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号５１で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、［１］～［４］のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、
［６］（ｋ）それぞれ配列番号５、配列番号６、および配列番号７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号８、配列番号９、および配列番号１０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域、
（ｌ）それぞれ配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域、
（ｍ）それぞれ配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域、
（ｎ）それぞれ配列番号４２、配列番号４３、および配列番号４４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域、または、
（ｏ）それぞれ配列番号５２、配列番号５３、および配列番号５４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域
を含む、［１］～［３］のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、
［７］（ｐ）配列番号３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｑ）配列番号１３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｒ）配列番号２３で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２４で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｓ）配列番号４０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４１で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または、
（ｔ）配列番号５０で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号５１で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、［１］～［３］および［６］のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、
［８］ＵＳＡＧ－１への結合について、［４］～［７］のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合フラグメントと競合する抗体またはその抗原結合フラグメント、
［９］抗体がヒト化抗体またはキメラ抗体である、［１］～［８］のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、および
［１０］［１］～［９］のいずれか１項記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、歯の再生治療のための医薬組成物
を提供する。
【発明の効果】
【0008】
本発明では、抗体製剤を用いることにより、イン・ビボで歯を再生することに成功した。本発明の抗体製剤による治療は、歯の再生医療として、従来の抜歯、歯科矯正、歯牙移植等の一般的な歯科口腔外科的アプローチにて臨床展開が十分可能である。
【図面の簡単な説明】
【0009】
【図1】実施例において抗原として用いた大腸菌由来組換えヒトＵＡＳＧ－１蛋白のＷｎｔ抑制活性を示す。
【図2】実施例において抗原として用いた大腸菌由来組換えヒトＵＡＳＧ－１蛋白のＢＭＰ抑制活性を示す。
【図3】ＣＲＩＳＰＥＲ－ＣＡＳ９を利用して新たに樹立したＵＳＡＧ－１ＫＯマウスを示す。
【図4-1】抗ＵＳＡＧ－１中和抗体の１次スクリーニングの結果を示す。
【図4-2】抗ＵＳＡＧ－１中和抗体の１次スクリーニングの結果を示す。
【図5】マウスＮ末ＰＡタグ付きＵＳＡＧ－１（ＷＩＳＥ）の精製・濃縮の結果を示す。
【図6】マウスＵＳＡＧ－１蛋白の用量依存性のＷＮＴシグナル抑制活性を示す。
【図7】マウスＵＳＡＧ－１蛋白の用量依存性のＢＭＰシグナルの抑制活性を示す。
【図8】用量依存性にマウスＵＳＡＧ－１によるＷＮＴシグナルの抑制活性を中和する抗体を示す。
【図9】用量依存性にマウスＵＳＡＧ－１によるＢＭＰシグナルの抑制活性を中和する抗体を示す。
【図10】抗ＵＳＡＧ－１中和抗体が無歯症モデルマウスに歯を生やすことを示す。
【図11】抗ＵＳＡＧ－１中和抗体がＵＳＡＧ－１ＫＯと同等の効果のあることを示す。
【図12】マウス抗ＵＳＡＧ－１抗体のマウス／ヒトＵＳＡＧ－１蛋白との結合実験の結果を示す。
【図13】ヒトＦＬＡＧタグＵＳＡＧ－１を一過性に強制発現させたＨＥＫ２９３細胞に対するマウス抗ＵＳＡＧ－１抗体を用いた免疫染色を示す。
【図14】抗体Ａおよび抗体Ｂの重鎖および軽鎖可変領域の配列を示す。
【図15】マウス抗ＵＳＡＧ－１抗体のマウス／ヒトＵＳＡＧ－１蛋白との結合実験の結果を示す。
【図16】得られた６種の抗体の競合結合データを示す。６種の試験抗体のそれぞれについて、６種の抗体で捕捉されたＵＳＡＧ－１センサーに反応させたときのセンサーグラムを重ねた図である。
【図17】マウスＵＳＡＧ－１によるＷＮＴシグナルの抑制活性およびＢＭＰシグナルの抑制活性に対する、本発明の抗体の中和活性を示す。
【図18】先天性無歯症イヌに対するＵＳＡＧ－１中和抗体投与の効果を示す、デンタルＸ線写真である。
【図19】フェレットにおける、ＵＳＡＧ－１中和抗体投与による下顎第３小臼歯部の第３生歯の誘導を示す、μＣＴ画像とその３次元再構築像である。
【図20】スンクスにおける、ＵＳＡＧ－１中和抗体投与による下顎第３小臼歯部の第３生歯の誘導を示す、μＣＴ画像とその３次元再構築像である。
【図21】抗体Ｃの重鎖および軽鎖可変領域の配列を示す。
【図22】抗体ＤおよびＥの重鎖および軽鎖可変領域の配列を示す。
【図23】フェレットにおける、ＵＳＡＧ－１中和抗体投与による上顎前歯部の第３生歯の誘導を示す、μＣＴスライス画像とその３次元再構築像である。
【図24】フェレットにおける、ＵＳＡＧ－１中和抗体投与による下顎小臼歯部の第３生歯の誘導を示す、μＣＴデータに基づき作成した３次元再構築像である。
【図25】マウスＵＳＡＧ－１によるＷＮＴシグナルの抑制活性およびＢＭＰシグナルの抑制活性に対する、本発明の抗体の中和活性を示す。
【図26】マウス抗ＵＳＡＧ－１抗体とマウスＵＳＡＧ－１蛋白との複合体と、ＬＲＰ６－Ｅ１Ｅ２ドメインの相互作用を示すプルダウンアッセイの結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【0010】
ＵＳＡＧ－１（Uterine Sensitization Associated Gene-1）は、Ｓｏｓｔｄｃ－１、Ｅｃｔｏｄｉｎ、またはＷｉｓｅとも呼ばれる、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）アンタゴニストおよびＷｎｔアンタゴニストである。ＵＳＡＧ－１欠損モデルマウスでは、ＢＭＰシグナリングの増加がみられ、過剰歯の形成が導かれることが知られている。発明者らは、先天性無歯症モデルマウスであるＲｕｎｘ２欠損マウスと過剰歯（正常な歯数以上に存在する歯）モデルマウスであるＵＳＡＧ－１の遺伝子欠損マウスを交配してダブルノックアウトマウスを作製し、解析したところ、歯の形成が回復することを見出した。したがって、ＵＳＡＧ－１の阻害により、無歯症を治療できることが示唆された。
【0011】
今回、発明者らは、Ｒｕｎｘ２以外の原因遺伝子Ｍｓｘ１、Ｅｄａ、およびＷｎｔ１０ａを欠損した先天性無歯症モデルマウスと、ＣＲＩＳＰＥＲ－ＣＡＳ９システムにて新たに作製した過剰歯モデルマウスであるＵＳＡＧ－１の遺伝子欠損マウスを交配してダブルノックアウトマウスを作製し、解析したところ、すべての無歯症モデルマウスにおいて歯の形成が回復することを見出した。したがって、ＵＳＡＧ－１の阻害による治療は、各種の遺伝子変異を原因とする先天性無歯症患者に適用可能であることが明らかになった。
【0012】
そこで、本発明では、活性の確認されたヒトＵＳＡＧ－１組み換え蛋白を抗原として用いて抗体を作製し、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合する抗体を得た。これらの抗体は、ＢＭＰシグナリングおよび／またはＷｎｔシグナリングを増加させることが確認された。
【0013】
したがって、本発明の一の態様は、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体およびその抗原結合フラグメント、すなわち、抗ＵＳＡＧ－１中和抗体およびその抗原結合フラグメントが提供される。本明細書において特記しない限り、ＵＳＡＧ－１は、哺乳動物のＵＳＡＧ－１を意味する。該哺乳動物としては、限定するものではないが、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ネズミ、フェレット、スンクス、ブタ、サル等が挙げられ、好ましくはヒトである。
【0014】
本明細書において、中和とは、ＵＳＡＧ－１の機能を阻害することをいう。ＵＳＡＧ－１の機能には、例えば、ＢＭＰシグナリング抑制活性（「ＢＭＰアンタゴニスト活性」ともいう）およびＷｎｔシグナリング抑制活性（「Ｗｎｔアンタゴニスト活性」ともいう）がある。本願の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＵＳＡＧ－１のＢＭＰシグナリング抑制活性および／またはＷｎｔシグナリング抑制活性を阻害する。したがって、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＵＳＡＧ－１のＢＭＰシグナリング抑制活性およびＵＳＡＧ－１のＷｎｔシグナリング抑制活性のいずれか、または両方を中和する。例えば、限定するものではないが、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合してＵＳＡＧ－１のＢＭＰシグナリング抑制活性を中和するが、ＵＳＡＧ－１のＷｎｔシグナリング抑制活性を中和しない抗体またはその抗原フラグメントや、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合してＵＳＡＧ－１のＷｎｔシグナリング抑制活性を中和するが、ＵＳＡＧ－１のＢＭＰシグナリング抑制活性を中和しない抗体またはその抗原フラグメントも、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントに包含される。なお、本明細書において「阻害」には、抑制および低減が包含される。
【0015】
抗体またはその抗原結合フラグメントの中和活性は常法により決定すればよい。ＵＳＡＧ－１のＢＭＰアンタゴニスト活性を中和する活性（「ＢＭＰアンタゴニスト中和活性」ともいう）は、例えば、ＡＬＰ（アルカリフォスファターゼ）アッセイまたはレポーターアッセイによってイン・ビトロで測定することができる。ＡＬＰアッセイは、例えば、骨芽前駆細胞等をＢＭＰの存在下、ＵＳＡＧ－１蛋白および抗体またはその抗原結合フラグメントを加えて培養し、骨芽細胞への分化が誘導される際に生じるＡＬＰを測定することによって行う。ＵＳＡＧ－１のＷｎｔアンタゴニスト活性を中和する活性（「Ｗｎｔアンタゴニスト中和活性」ともいう）は、例えば、レポーターアッセイによってイン・ビトロで測定することができる。レポーターアッセイは、例えば、ＢＭＰまたはＷｎｔに反応するプロモーター領域をルシフェラーゼ等のレポーター遺伝子に連結したベクターを細胞に導入し、該細胞をＢＭＰまたはＷｎｔの存在下、ＵＳＡＧ－１蛋白および抗体またはその抗原結合フラグメントを加えて培養し、発現するルシフェラーゼ活性を測定することによって行う。本願の抗ＵＳＡＧ－１抗体およびその抗原結合フラグメントによって中和されるＢＭＰアンタゴニスト活性は、いずれのＢＭＰファミリーに対するアンタゴニスト活性であってもよい。例えば、本願の抗ＵＳＡＧ－１抗体およびその抗原結合フラグメントは、限定するものではないが、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ６、ＢＭＰ７等に対するアンタゴニスト活性を中和し得る。また、本願の抗ＵＳＡＧ－１抗体およびその抗原結合フラグメントによって中和されるＷｎｔアンタゴニスト活性は、いずれのＷｎｔファミリーに対するアンタゴニスト活性であってもよい。例えば、本願の抗ＵＳＡＧ－１抗体およびその抗原結合フラグメントは、限定するものではないが、Ｗｎｔ－１、Ｗｎｔ－３等に対するアンタゴニスト活性を中和し得る。
【0016】
さらに、本発明では、得られた抗体のうち５つ、抗体Ａ、抗体Ｂ、抗体Ｃ、抗体Ｄおよび抗体Ｅの配列を決定および解析し、各抗体の可変領域および相補性決定領域も決定した。すなわち、抗体Ａは、配列番号１で示されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、上記重鎖は、配列番号５、配列番号６、および配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域を含む重鎖可変領域（配列番号３）を含み、上記軽鎖は、配列番号８、配列番号９、および配列番号１０で示される軽鎖相補性決定領域を含む軽鎖可変領域（配列番号４）を含む。抗体Ｂは、配列番号１１で示されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１２で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、上記重鎖は、配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７で示される重鎖相補性決定領域を含む重鎖可変領域（配列番号１３）を含み、上記軽鎖は、配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０で示される軽鎖相補性決定領域を含む軽鎖可変領域（配列番号１４）を含む。抗体Ｃは、配列番号２１で示されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号２２で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、上記重鎖は、配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７で示される重鎖相補性決定領域を含む重鎖可変領域（配列番号２３）を含み、上記軽鎖は、配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０で示される軽鎖相補性決定領域を含む軽鎖可変領域（配列番号２４）を含む。抗体Ｄは、配列番号３８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号３９で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、上記重鎖は、配列番号４２、配列番号４３、および配列番号４４で示される重鎖相補性決定領域を含む重鎖可変領域（配列番号４０）を含み、上記軽鎖は、配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７で示される軽鎖相補性決定領域を含む軽鎖可変領域（配列番号４１）を含む。抗体Ｅは、配列番号４８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号４９で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、上記重鎖は、配列番号５２、配列番号５３、および配列番号５４で示される重鎖相補性決定領域を含む重鎖可変領域（配列番号５０）を含み、上記軽鎖は、配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７で示される軽鎖相補性決定領域を含む軽鎖可変領域（配列番号５１）を含む。抗体Ａおよび抗体Ｂおよび抗体Ｃは、特にＢＭＰアンタゴニスト中和活性を有する。抗体Ｃは、特にＢＭＰアンタゴニスト中和活性およびＷｎｔアンタゴニスト中和活性の両方を有する。抗体Ｄおよび抗体Ｅは、特にＷｎｔアンタゴニスト中和活性を有する。
【0017】
したがって、本発明の一態様において、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントとして、抗体Ａ、抗体Ｂ、抗体Ｃ、抗体Ｄ、および抗体Ｅならびにそれらの変異体が提供される。抗体Ａまたはその変異体の一例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５、配列番号６、および配列番号７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号８、配列番号９、および配列番号１０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５、配列番号６、および配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号８、配列番号９、および配列番号１０で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。さらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５、配列番号６、および配列番号７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号８、配列番号９、および配列番号１０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。またさらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５、配列番号６、および配列番号７で示されるアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号８、配列番号９、および配列番号１０で示されるアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0018】
抗体Ａまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５、配列番号６、および配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号８、配列番号９、および配列番号１０で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５、配列番号６、および配列番号７で示されるアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号８、配列番号９、および配列番号１０で示されるアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0019】
抗体Ａまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号３で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。さらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号３で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、または、配列番号４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。またさらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号３で示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、または、配列番号４で示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0020】
抗体Ａまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、上記アミノ酸配列において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号３で示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、または、配列番号４で示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含み、上記アミノ酸配列において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0021】
抗体Ａまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５、配列番号６、および配列番号７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号８、配列番号９、および配列番号１０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５、配列番号６、および配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号８、配列番号９、および配列番号１０で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。さらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５、配列番号６、および配列番号７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号８、配列番号９、および配列番号１０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。またさらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５、配列番号６、および配列番号７で示されるアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号８、配列番号９、および配列番号１０で示されるアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0022】
抗体Ａまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５、配列番号６、および配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号８、配列番号９、および配列番号１０で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５、配列番号６、および配列番号７で示されるアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号８、配列番号９、および配列番号１０で示されるアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0023】
抗体Ａまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号３で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。さらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号３で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、および配列番号４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。またさらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号３で示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、および配列番号４で示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0024】
抗体Ａまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号３で示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、および配列番号４で示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0025】
抗体Ｂまたはその変異体の一例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。さらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。またさらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７で示されるアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０で示されるアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0026】
抗体Ｂまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７で示されるアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０で示されるアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0027】
抗体Ｂまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号１３で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号１４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号１３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号１４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。さらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号１３で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、または、配列番号１４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。またさらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号１３で示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、または配列番号１４で示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0028】
抗体Ｂまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号１３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号１４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、上記アミノ酸配列において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号１３で示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、または、配列番号１４で示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含み、上記アミノ酸配列において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0029】
抗体Ｂまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。さらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。またさらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７で示されるアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０で示されるアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0030】
抗体Ｂまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号１５、配列番号１６、および配列番号１７で示されるアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号１８、配列番号１９、および配列番号２０で示されるアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0031】
抗体Ｂまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号１３で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号１３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。さらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号１３で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、および配列番号１４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。またさらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号１３で示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、および配列番号１４で示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0032】
抗体Ｂまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号１３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号１３で示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、および配列番号１４で示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0033】
抗体Ｃまたはその変異体の一例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。さらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。またさらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７で示されるアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０で示されるアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0034】
抗体Ｃまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７で示されるアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０で示されるアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0035】
抗体Ｃまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号２３で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号２４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号２３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号２４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。さらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号２３で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、または、配列番号２４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。またさらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号２３で示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、または配列番号２４で示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0036】
抗体Ｃまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号２３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号２４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、上記アミノ酸配列において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号２３で示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、または、配列番号２４で示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含み、上記アミノ酸配列において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0037】
抗体Ｃまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。さらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。またさらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７で示されるアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０で示されるアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0038】
抗体Ｃまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７で示されるアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号２８、配列番号２９、および配列番号３０で示されるアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0039】
抗体Ｃまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号２３で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号２３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。さらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号２３で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、および配列番号２４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。またさらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号２３で示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、および配列番号２４で示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0040】
抗体Ｃまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号２３で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号２４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号２３で示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、および配列番号２４で示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0041】
抗体Ｄまたはその変異体の一例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号４２、配列番号４３、および配列番号４４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号４２、配列番号４３、および配列番号４４で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。さらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号４２、配列番号４３、および配列番号４４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。またさらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号４２、配列番号４３、および配列番号４４で示されるアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７で示されるアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0042】
抗体Ｄまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号４２、配列番号４３、および配列番号４４で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号４２、配列番号４３、および配列番号４４で示されるアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７で示されるアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0043】
抗体Ｄまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号４０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号４１で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号４０で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号４１で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。さらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号４０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、または、配列番号４１で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。またさらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号４０で示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、または配列番号４１で示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0044】
抗体Ｄまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号４０で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号４１で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号４０で示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、または、配列番号４１で示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0045】
抗体Ｄまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号４２、配列番号４３、および配列番号４４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号４２、配列番号４３、および配列番号４４で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。さらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号４２、配列番号４３、および配列番号４４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。またさらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号４２、配列番号４３、および配列番号４４で示されるアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７で示されるアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0046】
抗体Ｄまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号４２、配列番号４３、および配列番号４４で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号４２、配列番号４３、および配列番号４４で示されるアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７で示されるアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0047】
抗体Ｄまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号４０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４１で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号４０で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４１で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。さらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号４０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、および配列番号４１で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。またさらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号４０で示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、および配列番号４１で示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0048】
抗体Ｄまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号４０で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号４１で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号４０で示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、および配列番号４１で示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0049】
抗体Ｅまたはその変異体の一例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５２、配列番号５３、および配列番号５４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５２、配列番号５３、および配列番号５４で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。さらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５２、配列番号５３、および配列番号５４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。またさらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５２、配列番号５３、および配列番号５４で示されるアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７で示されるアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0050】
抗体Ｅまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５２、配列番号５３、および配列番号５４で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５２、配列番号５３、および配列番号５４で示されるアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、または、それぞれ配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７で示されるアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0051】
抗体Ｅまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号５０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号５１で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号５０で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号５１で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。さらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号５０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、または、配列番号５１で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。またさらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号５０で示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、または配列番号５１で示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0052】
抗体Ｅまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号５０で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、または、配列番号５１で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、上記アミノ酸配列において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号５０で示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、または、配列番号５１で示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含み、上記アミノ酸配列において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0053】
抗体Ｅまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５２、配列番号５３、および配列番号５４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５２、配列番号５３、および配列番号５４で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。さらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５２、配列番号５３、および配列番号５４で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。またさらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５２、配列番号５３、および配列番号５４で示されるアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７で示されるアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0054】
抗体Ｅまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５２、配列番号５３、および配列番号５４で示されるアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７で示されるアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、それぞれ配列番号５２、配列番号５３、および配列番号５４で示されるアミノ酸配列からなる３つの重鎖相補性決定領域、およびそれぞれ配列番号５５、配列番号５６、および配列番号５７で示されるアミノ酸配列からなる３つの軽鎖相補性決定領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0055】
抗体Ｅまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号５０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号５１で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号５０で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号５１で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。さらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号５０で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、および配列番号５１で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。またさらに好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号５０で示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、および配列番号５１で示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0056】
抗体Ｅまたはその変異体のさらなる例として、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号５０で示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号５１で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。好ましくは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合して中和する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、配列番号５０で示されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、および配列番号５１で示されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含み、上記アミノ酸配列の１以上において１～数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されている、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0057】
本明細書において「数個」とは、２～１０個程度をいい、アミノ酸配列の長さにもよるが、好ましくは２～７個程度、例えば３個、４個、５個、または６個をいう。また、本明細書において、「置換」は、保存的置換または非保存的置換であってもよく、好ましくは保存的置換であってもよい。保存的置換は、当業者に既知であり、得られる分子の生物学的活性を変えることのない置換を指す。保存的アミノ酸置換の例は、アラニンからグリシンまたはセリンへの置換、アルギニンからリジンまたはヒスチジンへの置換、アスパラギンからグルタミンまたはヒスチジンへの置換、アスパラギン酸からグルタミン酸またはアスパラギンへの置換、システインからセリンまたはアラニンへの置換、グルタミンからアスパラギンへの置換、グルタミン酸からアスパラギン酸またはグルタミンへの置換、グリシンからアラニンへの置換、ヒスチジンからアスパラギンまたはグルタミンへの置換、イソロイシンからロイシンまたはバリンへの置換、ロイシンからイソロイシンまたはバリンへの置換、リジンからアルギニンまたはヒスチジンへの置換、メチオニンからロイシン、イソロイシンまたはチロシンへの置換、フェニルアラニンからチロシン、メチオニンまたはロイシンへの置換、プロリンからアラニンへの置換、セリンからスレオニンへの置換、スレオニンからセリンへの置換、トリプトファンからチロシンまたはフェニルアラニンへの置換、チロシンからトリプトファンまたはフェニルアラニンへの置換、およびバリンからイソロイシンまたはロイシンへの置換が挙げられる。
【0058】
本明細書において、配列同一性は、２つの配列を最適にアラインメントして常法にしたがって決定すればよい。例えばＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ等の当該分野で既知のアルゴリズムを用いて決定してもよい。本願の抗体またはその抗原結合フラグメントは、上記の配列同一性の範囲内でアミノ酸残基が置換、欠失、挿入または付加されていてもよい。
【0059】
さらに、本発明の別の態様では、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントとして、上記で示された抗体Ａ、抗体Ｂ、抗体Ｃ、抗体Ｄ、または抗体Ｅ、またはその変異体またはその抗原結合フラグメントが結合するＵＳＡＧ－１上のエピトープと同一のエピトープの全部または一部に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。またさらに、本発明では、ＵＳＡＧ－１への結合について、あるいはＵＳＡＧ－１上のエピトープの全部または一部への結合について、上記で示された抗体Ａ、抗体Ｂ、抗体Ｃ、抗体Ｄ、または抗体Ｅ、またはその変異体またはその抗原結合フラグメントと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。
【0060】
さらに、本発明では、抗体Ａが、ヒトＵＳＡＧ－１上のVNDKTRTQRI（配列番号３１）（ヒトＵＳＡＧ－１蛋白の１３４番目～１４３番目のアミノ酸配列に対応）を含むポリペプチド（エピトープ）を特異的に認識し、結合することを見出した。したがって、配列番号３１で示されるアミノ酸配列を含むＵＳＡＧ－１ポリペプチドに結合する抗体またはその抗原結合フラグメントも、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントの一態様である。さらに、配列番号３１で示されるアミノ酸配列を含むＵＳＡＧ－１ポリペプチドへの結合について、上記で示された抗体Ａまたはその変異体またはその抗原結合フラグメントと競合する抗体またはその抗原結合フラグメントも、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントの一態様である。例えば、上記ＵＳＡＧ－１ポリペプチドは、配列番号３１で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドであってもよい。また、上記配列番号３１で示されるアミノ酸配列を含むＵＳＡＧ－１ポリペプチドは、該ポリペプチドに実質的に同一のポリペプチドであってもよい。該実質的に同一のポリペプチドとしては、例えば、ヒト以外の動物のＵＳＡＧ－１蛋白上の対応する位置にあるポリペプチドが挙げられる。
【0061】
本明細書において、「競合」とは、抗体またはその抗原結合フラグメントが、ＵＳＡＧ－１蛋白またはポリペプチドを使用する結合アッセイにおいて、参照抗体（例えば、抗体Ａ、抗体Ｂ、抗体Ｃ、抗体Ｄ、抗体Ｅ、またはその変異体またはその抗原結合フラグメント）と競合することを意味する。例えば、試験抗体またはその抗原結合フラグメントが結合アッセイにおいて、ＵＳＡＧ－１蛋白またはポリペプチドへの参照抗体の結合を低減させる場合、該試験抗体は、参照抗体と「競合する」。参照抗体に競合する抗体は、例えば、参照抗体の抗原蛋白またはポリペプチドへの結合を、少なくとも約４０％、好ましくは少なくとも約５０％、より好ましくは少なくとも約６０％、さらに好ましくは少なくとも約８０％、さらに好ましくは少なくとも９０％低減させる。競合結合アッセイは、当該分野で既知の方法によって行うことができ、限定するものではないが、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、ＳＰＲ（surface plasmon resonance)法、ＢＬＩ（Bio-Layer Interferometry）法等が例示される。
【0062】
例えばＳＰＲ法やＢＬＩ法を用いて、２以上の抗体をそのエピトープに基づき分類する技術がエピトープビニングである。エピトープビニングでは、例えば、参照抗体を固定したバイオセンサーに、抗原蛋白（標的）を加えて、参照抗体と標的とを結合させ、次いで、該参照抗体と標的との複合体を保持したバイオセンサーを試験抗体と反応させ、該試験抗体の該バイオセンサーへの結合（すなわち、バイオセンサー上に固定された参照抗体に捕捉された標的への結合）および解離を解析する。試験抗体が参照抗体と同じエピトープを共有する場合、標的上のエピトープは既に参照抗体との結合により占有されているため、該試験抗体は該バイオセンサーに結合することができない。逆に、試験抗体が参照抗体と異なるエピトープを認識する場合、該試験抗体は該バイオセンサーに結合することができる。さらに、試験抗体が参照抗体のエピトープに立体構造上で近い領域を認識する場合、該参照抗体と標的との結合により該試験抗体のエピトープへの結合が妨害されるため、該試験抗体は該バイオセンサーに結合することができない。かくして、エピトープビニングを用いれば、２以上の抗体クローンが標的タンパク質への結合について競合するか否かを判定することができる。
【0063】
本願の抗体またはその抗原結合フラグメントは、例えば１μＭ以下、好ましくは１００ｎＭ以下、より好ましくは５０ｎＭ以下、さらに好ましくは３０ｎＭ以下、さらに好ましくは１０ｎＭ以下、さらに好ましくは８ｎＭ以下、さらに好ましくは５ｎＭ以下のＫＤ値で、ＵＳＡＧ－１あるいはＵＳＡＧ－１上のエピトープの全部または一部に結合する。
【0064】
本発明において、抗体は、好ましくは単離された抗体である。また、本発明において、抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のいずれであってもよい。また、本発明において、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、または多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）であってもよい。ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性および結合能を有するヒト以外の種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基によって置換されているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を包含する。場合により、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置換されていてもよい。さらにヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体に見いだされない残基を含んでいてもよい。一般にヒト化抗体は、全てまたは実質的に全てのＣＤＲが非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲに置換され、かつＦＲ領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものである、少なくとも１つ、典型的には２つの可変領域を含む。キメラ抗体は、ドナー抗体由来の可変領域をレシピエント抗体の定常領域に連結した、遺伝子組み換え技術によって作製された抗体を包含する。上記抗体の作製は、当該分野で既知の方法で行うことができる。
【0065】
本発明において、抗原結合フラグメントとしては、例えば、限定するものではないが、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｒＩｇＧ、Ｆｄ、直鎖抗体、ＳｃＦｖ、Ｆｖ－ｃｌａｓｐ、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、単一ドメイン抗体（ナノボディ）、抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体等が挙げられる。上記抗体フラグメントの作製は、当該分野で既知の方法で行うことができる。
【0066】
本願の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする単離された核酸も本発明に含まれる。
【0067】
本願の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＵＳＡＧ－１に特異的に結合してＵＳＡＧ－１の機能を阻害し、歯の形成を誘導する。したがって、本発明の別の態様は、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、歯の再生治療のための医薬組成物を提供する。ここで、歯の再生には、例えば、欠損した歯の再生（欠損歯の回復）および第３生歯などの新しい歯の形成が含まれる。
【0068】
本願の医薬組成物は、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントの他に、医薬上許容される担体、安定化剤、賦形剤等の添加剤を含有していてもよい。医薬上許容される担体としては、例えば、限定するものではないが、生理食塩水、バッファー、グリコール、グリセロール、ゼラチン、ゼラチンハイドロゲル、ポリ乳酸、コラーゲンスポンジ、アガロース、ポリビニルアルコール、アルギン酸、フィブリンゲル、エチレンー酢酸ビニル共重合体、乳酸―グリコール酸共重合体等が挙げられる。添加剤としては、例えば、限定するものではないが、グルコース、スクロースまたはデキストラン等の炭水化物、アスコルビン酸またはグルタチオン等の抗酸化剤、キレート剤、低分子量タンパク質等が挙げられる。当業者は、医薬組成物の投与形態または投与経路等に基づいて、上記担体および添加剤を適宜選択することができる。また、本願の医薬組成物は、上記抗体またはその抗原結合フラグメントと、適宜上記添加剤を用いて常法によって製剤化することによって製造することができる。
【0069】
本願の医薬組成物の形態としては、例えば、錠剤、散剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ剤、徐放錠、徐放性カプセル、腸溶剤、挿入剤、注入剤、注射剤等が挙げられ、好ましくは注射剤である。本願の医薬組成物は、全身投与または局所投与によって投与される。投与経路は、当業者が適宜選択すればよく、限定するものではないが、例えば、経口、経鼻、皮下、静脈内、筋肉内、骨内投与が挙げられる。本願の医薬組成物は、例えば、歯の形成部位に局所投与してもよい。
【0070】
本発明において、歯の再生治療には、先天性無歯症の治療、および後天的な歯の欠損の治療が包含される。本願の医薬組成物で治療可能な先天性無歯症は、特に限定されず、いずれの原因遺伝子による先天性無歯症であってもよい。本願の医薬組成物で治療可能な先天性無歯症の例としては、限定するものではないが、ＲＵＮＸ２、ＭＳＸ１、ＥＤＡ、ＷＮＴ１０Ａ、ＰＡＸ９、またはＡＸＩＮ２が原因遺伝子である先天性無歯症が挙げられ、好ましくは、ＲＵＮＸ２、ＭＳＸ１、ＥＤＡ、またはＷＮＴ１０Ａが原因遺伝子である先天性無歯症が挙げられる。また、本願の抗体は、野生型マウスにおいての過剰歯の形成を誘導した。したがって、本願の医薬組成物は、無歯症の原因遺伝子が欠損していない正常個体および後天的に歯が欠損した個体においても歯の形成を誘導することができる。
【0071】
本願の医薬組成物の投与対象は、哺乳動物、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ネズミ、フェレット、スンクス、ブタ、サル等が挙げられ、好ましくはヒトである。
【0072】
本願の医薬組成物の投与量は特に限定されない。当該医薬組成物中の本願の抗体またはその抗原結合フラグメントの含有量、投与対象の体重等に基づき、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントの所望の投与量が投与されるように当業者が適宜決定することができる。例えば、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントは、非投与時と比べて、ＢＭＰシグナルを少なくとも３０％、好ましくは少なくとも６０％増加させる中和活性および／またはＷｎｔシグナルを少なくとも３０％、好ましくは少なくとも６０％増加させる中和活性を示す量で投与される。上記中和活性は、例えばＡＬＰアッセイやレポーターアッセイ等でイン・ビトロで測定した活性に基づき決定してもよい。
【0073】
本発明のさらなる態様は、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントを治療の必要な対象に投与することを含む、歯の再生治療法を提供する。本願の抗体またはその抗原結合フラグメントとして、上記の医薬組成物を用いることができる。治療の必要な対象は、歯が欠損した対象であり、例えば、上記の哺乳動物が挙げられる。本願の抗体またはその抗原結合フラグメントの投与経路および投与量、ならびに歯の再生治療については、上記の本願の医薬組成物について記載したとおりである。
【0074】
以下、実施例を用いて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は実施例に限定されるものではない。
【実施例1】
【0075】
抗体の作製１
マウスＵＳＡＧ－１中和抗体作製のために、大腸菌発現系由来ヒトＵＳＡＧ－１蛋白（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ社）を抗原として用いた。ＨＥＫ２９３細胞を用いたＷｎｔレポーターアッセイにおいて、大腸菌発現系由来ヒトＵＳＡＧ－１蛋白のＷｎｔ抑制活性を確認した（図１）。Ｃ２Ｃ１２細胞を用いたＢＭＰ７添加ＡＬＰアッセイにおいて、大腸菌発現系由来ヒトＵＳＡＧ－１蛋白のＢＭＰ抑制活性を確認した（図２）。マウスＵＳＡＧ－１中和抗体作製のために、ＣＲＩＳＰＥＲ－ＣＡＳ９を利用して、ＵＳＡＧ－１ＫＯマウス（＃１１６，＃１１８，＃１３８）の３系統の過剰歯モデルマウスを新たに樹立した（図３）。ＩＴＭ社においてＵＳＡＧ－１ ＫＯ（＃１１６）マウスを用いて腸骨リンパ節法にて中和抗体を作製した。
マウスＵＳＡＧ－１中和抗体作製のために、大腸菌発現系由来ヒトＵＳＡＧ－１蛋白（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ社）を抗原として用いた。ＨＥＫ２９３細胞を用いたＷｎｔレポーターアッセイにおいて、大腸菌発現系由来ヒトＵＳＡＧ－１蛋白のＷｎｔ抑制活性を確認した（図１）。Ｃ２Ｃ１２細胞を用いたＢＭＰ７添加ＡＬＰアッセイにおいて、大腸菌発現系由来ヒトＵＳＡＧ－１蛋白のＢＭＰ抑制活性を確認した（図２）。マウスＵＳＡＧ－１中和抗体作製のために、ＣＲＩＳＰＥＲ－ＣＡＳ９を利用して、ＵＳＡＧ－１ＫＯマウス（＃１１６，＃１１８，＃１３８）の３系統の過剰歯モデルマウスを新たに樹立した（図３）。ＩＴＭ社においてＵＳＡＧ－１ ＫＯ（＃１１６）マウスを用いて腸骨リンパ節法にて中和抗体を作製した。
【0076】
免疫した抗原を用いたＥＬＩＳＡにて２８４ウェルの一次スクリーニングを行ったところ、数多くの陽性ウェルが認められた（図４－１および図４－２）。カットオフ値を０．７と設定し、７９クローンを選択した。拡大培養を行い、免疫した抗原およびシスメックス社で作製したＣＨＯ細胞発現系由来のマウスＵＳＡＧ－１蛋白を使用し、ＥＬＩＳＡを行ったところ、吸光度のカットオフ値を０．０２５以上に設定すると半数ほどに陽性ウェルを認めた（図４－１および図４－２）。抗体のサブクラスを測定したところ、ＩｇＧ１、２ａ、２ｂ、および２ｃであった（図４－１および図４－２）。
【0077】
各抗体の中和活性を、抗原蛋白と同様に、Ｃ２Ｃ１２細胞にＢＭＰ７（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ社製）３００ｎｇ／ｍｌを添加にて上昇したＡＬＰ活性を、哺乳類細胞発現系由来ラットＵＳＡＧ－１蛋白３００ｎｇ／ｍｌ（ＭｙＢｉｏｓｏｕｒｃｅ社）を添加し、抑制させる実験系に、各種抗体を添加してＡＬＰ活性抑制の中和を確認した。軽度の中和活性を認めたもの（＊：６０－１００％の中和活性）、中等度の中和活性を認めたもの（＊＊：１００－１４０％の中和活性）、高度の中和活性を認めたもの（＊＊＊：１４０％以上の中和活性）に分類した。ＢＭＰレポーターアッセイは、ＢＲＥ－Ｌｕｃが組み込まれている市販の細胞株ＢＭＰ Ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅ（Ｂｒｉｔｅｒ ｃｅｌｌ）（Ｋｅｒａｆａｓｔ社製）を用いた。ＢＭＰ７を３００ｎｇ／ｍｌ添加し、発現したルシフェラーゼ活性を哺乳類細胞発現系由来ラットＵＳＡＧ－１蛋白３００ｎｇ／ｍｌを添加し抑制させる実験系に、各種抗体を添加してルシフェラーゼ活性抑制の中和を確認した。軽度の中和活性を認めたもの（＊：４０－６０％の中和活性）、中等度の中和活性を認めたもの（＊＊：６０％以上の中和活性）に分類した。ＷＮＴレポーターアッセイには、ＷＮＴシグナルの下流で活性化する転写因子ＴＣＦに結合するＤＮＡ配列をもつＴＯＰ－Ｆｌａｓｈレポーター遺伝子、ＷＮＴ１遺伝子、さらに内部標準値を得るためにＨＳＶ－チミジンキナーゼプロモーターで制御されるレポーター遺伝子を発現させる発現プラスミドを導入したＨＥＫ２９３細胞に、Ｗｎｔシグナルの最大抑制効果の５０％を抑制する濃度（ＥＣ５０）で哺乳類細胞発現系由来マウスＵＳＡＧ－１蛋白を添加し培養する系を用いた。ＵＳＡＧ－１蛋白の添加量は予め決定した。抗体産生ハイブリドーマの培養上清がスクリーニング系の培地のそれぞれ２５％、２０％、１０％になるように添加し、３回の実験を行い評価した。２５％添加時は、軽度の中和活性を認めたもの（＊：発光値の補正値が１．５－２．０）、中等度の中和活性を認めたもの（＊＊：発光値の補正値が２．０以上）、２０％添加時は、軽度の中和活性を認めたもの（＊：発光値の補正値が１－１．１）、中等度の中和活性を認めたもの（＊＊：発光値の補正値が１．１以上）、１０％添加時は、軽度の中和活性を認めたもの（＊：発光値の補正値が１－１．１）、中等度の中和活性を認めたもの（＊＊：発光値の補正値が１．１以上）に分類した。なお、中和活性の％は、ＵＳＡＧ－１蛋白無添加条件下での活性（１００％）に基づいて算出した。また、発光値に基づく中和活性は、抗体無添加時の活性を１として算出した。
【0078】
ＷＮＴおよびＢＭＰレポーターアッセイ、ＢＭＰ７ ＡＬＰアッセイで測定したところ、ＢＭＰおよびＷＮＴシグナリングのいずれかを活性化する抗体、ならびにＢＭＰおよびＷＮＴシグナリングの両者を同時に活性化する抗体の３種類の中和抗体が存在していた。中和活性の測定結果に基づき、６個の抗体を選択した（図４－１および図４－２）。拡大培養、精製の過程で１クローンの活性が消失した。最終的に５種のマウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体（Ｅ１２、Ｅ１６、Ｅ３７、Ｅ４８、Ｅ５７）を確保した。
【0079】
このうちＥ３７（本明細書において、抗体Ａと称される）およびＥ５７（本明細書において、抗体Ｂと称される）の配列を決定した。抗体Ａのシグナル配列を含む重鎖全長配列を配列番号１に、シグナル配列を含む軽鎖全長配列を配列番号２に示す。抗体Ｂのシグナル配列を含む重鎖全長配列を配列番号１１に、シグナル配列を含む軽鎖全長配列を配列番号１２に示す。さらに、抗体ＡおよびＢの可変領域を図１４に示す。
【実施例2】
【0080】
抗体のイン・ビトロ試験１
Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞においてＮ末にＰＡタグを付加したマウスＵＳＡＧ－１（ＷＩＳＥ）組み換え蛋白の一過性の発現を確認した後、安定発現株を樹立した。ＰＡタグシステムを用いてアフィニティー精製を行い、１５０ｍＬの培養上清から０．２ｍｇのＰＡ－ｍＵＳＡＧ－１（ＷＩＳＥ）を得た（図５）。精製したＰＡ－ｍＵＳＡＧ－１（ＷＩＳＥ）蛋白質は還元下（Ｒ）および非還元下（ＮＲ）の電気泳動で、理論値（２４ｋＤａ）に近い、約２８ｋＤａの分子量を示した。哺乳類細胞Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞発現系由来マウスのＮ末ＰＡタグＵＳＡＧ－１（ＷＩＳＥ）蛋白は、ＷＮＴレポーターアッセイにおいて、用量依存性にＷＮＴシグナルの抑制活性（図６）、ＢＭＰ ＡＬＰアッセイにおいて、用量依存性にＢＭＰシグナルの抑制活性を示した（図７）。この活性の確認されたマウスＵＳＡＧ－１蛋白を用いて、５個のマウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体（Ｅ１２、Ｅ１６、Ｅ３７、Ｅ４８、Ｅ５７）の中和活性を確認した。ＷＮＴレポーターアッセイにおいて、プロモーターをルシフェラーゼ遺伝子に連結したベクター、およびＷｎｔ１発現ベクターを導入した細胞を、マウスＵＳＡＧ－１組換え蛋白１．７μｇ、各種抗体を培地に対し１／１０００、１／３００、または１／１００の割合となるように添加して培養し、ルシフェラーゼ活性を測定した。ＢＭＰ ＡＬＰアッセイにおいて、Ｃ２Ｃ１２細胞をＢＭＰ７ ３０ｎｇ／ｍｌの存在下、マウスＵＳＡＧ－１組換え蛋白３０ｎｇ／ｍｌ、各種抗体を１倍量（３０ｎｇ／ｍｌ）、１０倍量（３００ｎｇ／ｍｌ）、１００倍量（３μｇ／ｍｌ）添加し、ともに培養し、ＡＬＰ活性を測定した。
Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞においてＮ末にＰＡタグを付加したマウスＵＳＡＧ－１（ＷＩＳＥ）組み換え蛋白の一過性の発現を確認した後、安定発現株を樹立した。ＰＡタグシステムを用いてアフィニティー精製を行い、１５０ｍＬの培養上清から０．２ｍｇのＰＡ－ｍＵＳＡＧ－１（ＷＩＳＥ）を得た（図５）。精製したＰＡ－ｍＵＳＡＧ－１（ＷＩＳＥ）蛋白質は還元下（Ｒ）および非還元下（ＮＲ）の電気泳動で、理論値（２４ｋＤａ）に近い、約２８ｋＤａの分子量を示した。哺乳類細胞Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞発現系由来マウスのＮ末ＰＡタグＵＳＡＧ－１（ＷＩＳＥ）蛋白は、ＷＮＴレポーターアッセイにおいて、用量依存性にＷＮＴシグナルの抑制活性（図６）、ＢＭＰ ＡＬＰアッセイにおいて、用量依存性にＢＭＰシグナルの抑制活性を示した（図７）。この活性の確認されたマウスＵＳＡＧ－１蛋白を用いて、５個のマウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体（Ｅ１２、Ｅ１６、Ｅ３７、Ｅ４８、Ｅ５７）の中和活性を確認した。ＷＮＴレポーターアッセイにおいて、プロモーターをルシフェラーゼ遺伝子に連結したベクター、およびＷｎｔ１発現ベクターを導入した細胞を、マウスＵＳＡＧ－１組換え蛋白１．７μｇ、各種抗体を培地に対し１／１０００、１／３００、または１／１００の割合となるように添加して培養し、ルシフェラーゼ活性を測定した。ＢＭＰ ＡＬＰアッセイにおいて、Ｃ２Ｃ１２細胞をＢＭＰ７ ３０ｎｇ／ｍｌの存在下、マウスＵＳＡＧ－１組換え蛋白３０ｎｇ／ｍｌ、各種抗体を１倍量（３０ｎｇ／ｍｌ）、１０倍量（３００ｎｇ／ｍｌ）、１００倍量（３μｇ／ｍｌ）添加し、ともに培養し、ＡＬＰ活性を測定した。
【0081】
その結果、ＷＮＴレポーターアッセイにおいて、用量依存性にマウスＵＳＡＧ－１によるＷＮＴシグナルの抑制活性を中和する抗体が存在することが確認された（図８）。ＢＭＰ ＡＬＰアッセイにおいて、用量依存性にマウスＵＳＡＧ－１によるＢＭＰシグナルの抑制活性を中和する抗体が存在することが確認された（図９）。
【実施例3】
【0082】
抗体のイン・ビボ投与試験１
先天性無歯症モデルマウスＥＤＡ欠損ホモマウスは、下顎の第３臼歯（Ｍ３）の欠損が高率（約９０％）に認められる。先天性無歯症モデルマウスＥＤＡ欠損マウスを妊娠した母親マウスに、マウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体Ａ（＃３７）を腹腔内に単回投与した。その結果、生まれたＥＤＡ欠損マウス８例中７例において下顎の第３臼歯（Ｍ３）の欠損が回復した（図１０）。マウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体Ａを投与した先天性無歯症モデルマウスＥＤＡ欠損マウスにおいては、過剰歯は認められなかった。したがって、抗体Ａは欠損歯を回復できることが分かった。なお、ここで「回復」とは、生まれたＥＤＡ欠損マウスにおいて、ＥＤＡ欠損マウスにおいて通常欠損している部位（Ｍ３）に歯が生えていること（Ｍ３が欠損していないこと）を言う。
先天性無歯症モデルマウスＥＤＡ欠損ホモマウスは、下顎の第３臼歯（Ｍ３）の欠損が高率（約９０％）に認められる。先天性無歯症モデルマウスＥＤＡ欠損マウスを妊娠した母親マウスに、マウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体Ａ（＃３７）を腹腔内に単回投与した。その結果、生まれたＥＤＡ欠損マウス８例中７例において下顎の第３臼歯（Ｍ３）の欠損が回復した（図１０）。マウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体Ａを投与した先天性無歯症モデルマウスＥＤＡ欠損マウスにおいては、過剰歯は認められなかった。したがって、抗体Ａは欠損歯を回復できることが分かった。なお、ここで「回復」とは、生まれたＥＤＡ欠損マウスにおいて、ＥＤＡ欠損マウスにおいて通常欠損している部位（Ｍ３）に歯が生えていること（Ｍ３が欠損していないこと）を言う。
【実施例4】
【0083】
抗体のイン・ビボ投与試験２
先天性無歯症モデルマウスＥＤＡ欠損マウスを妊娠した母親マウスに、マウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体Ｂ（Ｅ５７）を腹腔内に単回投与した。その結果、生まれたＥＤＡ欠損ホモマウス３例中２例において前歯部の過剰歯または、上顎臼歯部の癒合歯の形成が誘導された（図１０）。生まれたＥＤＡ欠損ヘテロマウスにおいては、前歯部の過剰歯または臼歯部の癒合歯が５例中５例に認められた。さらに、マウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体Ｂ（Ｅ５７）を野生型マウスを妊娠した母親マウスに腹腔内に単回投与することにより、１２例中１１例において前歯部の過剰歯または臼歯部の癒合歯が認められた（図１１）。したがって、抗体Ｂは、ＥＤＡ欠損ホモマウス、ＥＤＡ欠損ヘテロマウスおよび野生型マウスの全てにおいて、歯の数を増やすことができることが分かった。
先天性無歯症モデルマウスＥＤＡ欠損マウスを妊娠した母親マウスに、マウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体Ｂ（Ｅ５７）を腹腔内に単回投与した。その結果、生まれたＥＤＡ欠損ホモマウス３例中２例において前歯部の過剰歯または、上顎臼歯部の癒合歯の形成が誘導された（図１０）。生まれたＥＤＡ欠損ヘテロマウスにおいては、前歯部の過剰歯または臼歯部の癒合歯が５例中５例に認められた。さらに、マウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体Ｂ（Ｅ５７）を野生型マウスを妊娠した母親マウスに腹腔内に単回投与することにより、１２例中１１例において前歯部の過剰歯または臼歯部の癒合歯が認められた（図１１）。したがって、抗体Ｂは、ＥＤＡ欠損ホモマウス、ＥＤＡ欠損ヘテロマウスおよび野生型マウスの全てにおいて、歯の数を増やすことができることが分かった。
【実施例5】
【0084】
抗体のイン・ビボ投与試験３
無歯症モデルマウスの一つであるＷｎｔ１０ａ欠損マウスを妊娠した母親マウスに、中和抗体ＡおよびＢを含む実施例１で得られた５種類の抗ＵＳＡＧ－１中和抗体の混合物を腹腔内に単回投与した。その結果、上顎前歯部に過剰歯が形成された（図１０）。
無歯症モデルマウスの一つであるＷｎｔ１０ａ欠損マウスを妊娠した母親マウスに、中和抗体ＡおよびＢを含む実施例１で得られた５種類の抗ＵＳＡＧ－１中和抗体の混合物を腹腔内に単回投与した。その結果、上顎前歯部に過剰歯が形成された（図１０）。
【実施例6】
【0085】
抗体のヒトＵＳＡＧ－１認識のデータ
実施例１で大腸菌発現系由来ヒトＵＳＡＧ－１蛋白を抗原として用いて得られた５種のマウス抗ＵＳＡＧ－１（ＷＩＳＥ）中和抗体（Ｅ１２、Ｅ１６、Ｅ３７、Ｅ４８、Ｅ５７）が、ヒトＵＳＡＧ－１蛋白を認識することができるか確認した。マウス／ヒトＮ末ＰＡタグＵＳＡＧ－１蛋白を用いて、結合アッセイを行った。プロテインＡセファロース（３０μｌ）にそれぞれ実施例１で得られた５種のマウス抗ＵＳＡＧ－１（ＷＩＳＥ）中和抗体（Ｅ１２、Ｅ１６、Ｅ３７、Ｅ４８、Ｅ５７）（１ｍｌ ＰＢＳ中５μｇ）をキャプチャーさせた（室温、２．５時間）。そこにＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞においてＮ末端にＰＡタグを付加したヒトまたはマウスＵＳＡＧ－１（ＷＩＳＥ）組み換え蛋白を一過性に発現させた培養上清（１ｍＬ）およびＮＺ１セファロース（３０μｌ）を加えてインキュベートした（室温、２．５時間）。ＰＢＳバッファーで３回洗浄し、結合していない蛋白を除いた。セファロースに結合した蛋白質をすべて溶出し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動によりバンドを確認した。その結果、これら５つの抗体はすべて、マウスＵＳＡＧ－１のみならずヒトＵＳＡＧ－１蛋白にも結合した（図１２）。
実施例１で大腸菌発現系由来ヒトＵＳＡＧ－１蛋白を抗原として用いて得られた５種のマウス抗ＵＳＡＧ－１（ＷＩＳＥ）中和抗体（Ｅ１２、Ｅ１６、Ｅ３７、Ｅ４８、Ｅ５７）が、ヒトＵＳＡＧ－１蛋白を認識することができるか確認した。マウス／ヒトＮ末ＰＡタグＵＳＡＧ－１蛋白を用いて、結合アッセイを行った。プロテインＡセファロース（３０μｌ）にそれぞれ実施例１で得られた５種のマウス抗ＵＳＡＧ－１（ＷＩＳＥ）中和抗体（Ｅ１２、Ｅ１６、Ｅ３７、Ｅ４８、Ｅ５７）（１ｍｌ ＰＢＳ中５μｇ）をキャプチャーさせた（室温、２．５時間）。そこにＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞においてＮ末端にＰＡタグを付加したヒトまたはマウスＵＳＡＧ－１（ＷＩＳＥ）組み換え蛋白を一過性に発現させた培養上清（１ｍＬ）およびＮＺ１セファロース（３０μｌ）を加えてインキュベートした（室温、２．５時間）。ＰＢＳバッファーで３回洗浄し、結合していない蛋白を除いた。セファロースに結合した蛋白質をすべて溶出し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動によりバンドを確認した。その結果、これら５つの抗体はすべて、マウスＵＳＡＧ－１のみならずヒトＵＳＡＧ－１蛋白にも結合した（図１２）。
【0086】
さらに、ヒトＦＬＡＧタグＵＳＡＧ－１ｃＤＮＡをＨＥＫ２９３細胞に一過性に強制発現させ、５種のマウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体（Ｅ１２、Ｅ１６、Ｅ３７、Ｅ４８、Ｅ５７）を用いて免疫染色を行った。その結果、中和抗体（Ｅ１２、Ｅ３７、Ｅ５７）を用いた場合に明らかな陽性反応が認められた。したがって、イン・ビボで有効性の確認されたマウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体Ａ（Ｅ３７）およびマウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体Ｂ（Ｅ５７）は、ともにヒトＵＳＡＧ－１蛋白を認識できることが確認された（図１３）。
【実施例7】
【0087】
抗体の作製２
マウスＵＳＡＧ－１中和抗体作製のために、バキュロウイルス発現系由来ラットＵＳＡＧ－１蛋白を抗原として用いた。ＵＳＡＧ－１ ＫＯ（＃１１６）マウスを用いて腸骨リンパ節法にて中和抗体を作製した。該バキュロウイルス発現系由来ラットＵＳＡＧ－１蛋白は、実施例１の記載と同様の方法によって、ＢＭＰ抑制活性およびＷｎｔ抑制活性を有することを確認した。免疫した抗原（バキュロウイルス発現系由来ラットＵＳＡＧ－１蛋白）、および大腸菌発現系由来ヒトＵＳＡＧ－１蛋白を用いたＥＬＩＳＡにて、得られた抗体クローンの一次スクリーニングを行ったところ、数多くの陽性ウェルが認められた。カットオフ値を１．０と設定し、１１１クローンを選択した。拡大培養し、免疫した抗原を使用し、サンドイッチＥＬＩＳＡを行ったところ、吸光度のカットオフ値を０．５以上（Ｈｉｓタグ）および１．４以上（Ｍｙｃタグ）に設定すると半数ほどに陽性ウェルを認めた。抗体のサブクラスを測定したところ、ＩｇＧ１、２ａ、２ｂ、およびＧ３であった。さらに、得られた各抗体の中和活性を実施例１の記載と同様の方法によって測定し、最終的に４種のマウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体（Ｂ１４、Ｂ４８、Ｂ１０３、Ｂ１０８）を確保した。
マウスＵＳＡＧ－１中和抗体作製のために、バキュロウイルス発現系由来ラットＵＳＡＧ－１蛋白を抗原として用いた。ＵＳＡＧ－１ ＫＯ（＃１１６）マウスを用いて腸骨リンパ節法にて中和抗体を作製した。該バキュロウイルス発現系由来ラットＵＳＡＧ－１蛋白は、実施例１の記載と同様の方法によって、ＢＭＰ抑制活性およびＷｎｔ抑制活性を有することを確認した。免疫した抗原（バキュロウイルス発現系由来ラットＵＳＡＧ－１蛋白）、および大腸菌発現系由来ヒトＵＳＡＧ－１蛋白を用いたＥＬＩＳＡにて、得られた抗体クローンの一次スクリーニングを行ったところ、数多くの陽性ウェルが認められた。カットオフ値を１．０と設定し、１１１クローンを選択した。拡大培養し、免疫した抗原を使用し、サンドイッチＥＬＩＳＡを行ったところ、吸光度のカットオフ値を０．５以上（Ｈｉｓタグ）および１．４以上（Ｍｙｃタグ）に設定すると半数ほどに陽性ウェルを認めた。抗体のサブクラスを測定したところ、ＩｇＧ１、２ａ、２ｂ、およびＧ３であった。さらに、得られた各抗体の中和活性を実施例１の記載と同様の方法によって測定し、最終的に４種のマウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体（Ｂ１４、Ｂ４８、Ｂ１０３、Ｂ１０８）を確保した。
【0088】
さらに、実施例６と同様に、得られたマウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体（Ｂ１４、Ｂ４８、Ｂ１０３、Ｂ１０８）がヒトＵＳＡＧ－１蛋白を認識することができるか確認するため、マウス／ヒトＮ末ＰＡタグＵＳＡＧ－１蛋白を用いる結合アッセイを行った。プロテインＡセファロース（３０μｌ）にそれぞれ、各マウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体（２５０μｌ プロテインＡ／Ｇ ＩｇＧ結合バッファー（ＰｉｅｒｃｅＴＭ）＋２５０μｌ ＰＢＳ中５μｇ）をキャプチャーさせた（室温、１．５時間）。そこに、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞においてＮ末端にＰＡタグを付加したヒトまたはマウスＵＳＡＧ－１（ＷＩＳＥ）組み換え蛋白を一過性に発現させた培養上清（０．７５ｍＬ）を加えてインキュベートした（室温、２時間）。ＴＢＳバッファーで３回洗浄して、結合していない蛋白を除いた。セファロースについた蛋白質をすべて溶出し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動およびＣＢＢ（クマシーブリリアントブルー）染色によりバンドを確認した。その結果、Ｂ１０３およびＢ１０８の結合はＢ１４およびＢ４８と比べて弱いものの、試験したマウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体はすべて、マウスＵＳＡＧ－１およびヒトＵＳＡＧ－１蛋白の両方に結合した（図１５）。
【0089】
このうちＢ１４（本明細書において、抗体Ｃと称される）の配列を決定した。抗体Ｃのシグナル配列を含む重鎖全長配列を配列番号２１に、シグナル配列を含む軽鎖全長配列を配列番号２２に示す。さらに、抗体Ｃの可変領域を図２１に示す。さらに、Ｂ４８（本明細書において、抗体Ｄと称される）およびＢ１０３（本明細書において、抗体Ｅと称される）の配列を決定した。抗体ＤおよびＥのシグナル配列を含む重鎖全長配列をそれぞれ、配列番号３８および配列番号４８に、シグナル配列を含む軽鎖全長配列をそれぞれ、配列番号３９および配列番号４９に示す。さらに、抗体ＤおよびＥの可変領域を図２２に示す。
【実施例8】
【0090】
エピトープビニング
実施例１で選択した５種のマウスＵＳＡＧ－１中和抗体（Ｅ１２、Ｅ１６、Ｅ３７、Ｅ４８、Ｅ５７）および実施例７で作製した中和抗体（Ｂ１４、Ｂ４８、Ｂ１０３、Ｂ１０８）をエピトープビニングに供した。得られた競合結合データのうち６種の抗体について比較したものを図１６に示す。エピトープビニングは、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ（Pall ForteBio社製）を用いて行った。簡単に言うと、９種の各抗体を捕捉抗体としてバイオセンサー上に固定し、精製した組換えマウスＵＳＡＧ－１全長を含む標的を添加して結合させた後に試験抗体と反応させて結合シグナルを検出するというサイクルを、捕捉に使ったものと同じ抗体を含む９種の試験抗体について連続でおこなった。バイオセンサー上に固定した捕捉抗体と認識部位が競合しない抗体は、捕捉されたＵＳＡＧ－１蛋白に結合することが出来てシグナルが上昇するが、競合する抗体は結合が減弱するためにこの上昇が無いか、あるいは低く抑えられる。得られたシグナルデータに基づき、９種の抗体をそのエピトープに関してグループ分けした。すなわち、ある試験抗体を９種の捕捉抗体のセンサーに反応させたときに、捕捉抗体と同じ抗体を添加したときのシグナル（図１６では太字下線で示す）と同等かそれよりも弱いシグナルを与える抗体は捕捉抗体と同じグループであると見なした。すると、Ｅ１２抗体に対してはＥ３７とＥ４８が、Ｅ１６抗体に対してはＥ４８、Ｅ５７、Ｂ１４が、Ｅ３７抗体に対してはＥ１２が、Ｅ４８抗体に対してはＥ１６、Ｅ５７、Ｂ１４が、Ｅ５７抗体に対してはＥ１６、Ｅ４８、Ｂ１４が、Ｂ１４抗体に対してはＥ１６、Ｅ４８、Ｅ５７が、Ｂ１０３に対してはＢ１０８が、それぞれ競合し、この結果を踏まえて９種の抗体が４つのグループに分類された。表１に示す。但し、抗体Ｅ４８は基本的にはグループ２に分類されるが、Ｅ１２とも競合することからグループ１とも近かった。
実施例１で選択した５種のマウスＵＳＡＧ－１中和抗体（Ｅ１２、Ｅ１６、Ｅ３７、Ｅ４８、Ｅ５７）および実施例７で作製した中和抗体（Ｂ１４、Ｂ４８、Ｂ１０３、Ｂ１０８）をエピトープビニングに供した。得られた競合結合データのうち６種の抗体について比較したものを図１６に示す。エピトープビニングは、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ（Pall ForteBio社製）を用いて行った。簡単に言うと、９種の各抗体を捕捉抗体としてバイオセンサー上に固定し、精製した組換えマウスＵＳＡＧ－１全長を含む標的を添加して結合させた後に試験抗体と反応させて結合シグナルを検出するというサイクルを、捕捉に使ったものと同じ抗体を含む９種の試験抗体について連続でおこなった。バイオセンサー上に固定した捕捉抗体と認識部位が競合しない抗体は、捕捉されたＵＳＡＧ－１蛋白に結合することが出来てシグナルが上昇するが、競合する抗体は結合が減弱するためにこの上昇が無いか、あるいは低く抑えられる。得られたシグナルデータに基づき、９種の抗体をそのエピトープに関してグループ分けした。すなわち、ある試験抗体を９種の捕捉抗体のセンサーに反応させたときに、捕捉抗体と同じ抗体を添加したときのシグナル（図１６では太字下線で示す）と同等かそれよりも弱いシグナルを与える抗体は捕捉抗体と同じグループであると見なした。すると、Ｅ１２抗体に対してはＥ３７とＥ４８が、Ｅ１６抗体に対してはＥ４８、Ｅ５７、Ｂ１４が、Ｅ３７抗体に対してはＥ１２が、Ｅ４８抗体に対してはＥ１６、Ｅ５７、Ｂ１４が、Ｅ５７抗体に対してはＥ１６、Ｅ４８、Ｂ１４が、Ｂ１４抗体に対してはＥ１６、Ｅ４８、Ｅ５７が、Ｂ１０３に対してはＢ１０８が、それぞれ競合し、この結果を踏まえて９種の抗体が４つのグループに分類された。表１に示す。但し、抗体Ｅ４８は基本的にはグループ２に分類されるが、Ｅ１２とも競合することからグループ１とも近かった。
【0091】
【表1】
【実施例9】
【0092】
エピトープマッピング
グループ１の抗体Ｅ３７（中和抗体Ａ)のエピトープマッピングを行った。簡単に言うと、シグナルペプチドを除いたヒトＵＳＡＧ－１蛋白配列（１８３アミノ酸長）を基に、先頭から１アミノ酸ずつずらして、重複する１６９種の１５アミノ酸ペプチドのペプチドライブラリーを合成した。該１６９種ペプチドをセルロース膜上に結合させ、ペプチドアレイを作成した。１次抗体として抗体Ｅ３７（０．３ｇ／ｍｌ）を添加し、インキュベートした。洗浄後、ＨＲＰ結合抗マウス抗体（１／２５０００希釈）を２次抗体として添加し、ＥＣＬ溶液を用いて発色させた。
グループ１の抗体Ｅ３７（中和抗体Ａ)のエピトープマッピングを行った。簡単に言うと、シグナルペプチドを除いたヒトＵＳＡＧ－１蛋白配列（１８３アミノ酸長）を基に、先頭から１アミノ酸ずつずらして、重複する１６９種の１５アミノ酸ペプチドのペプチドライブラリーを合成した。該１６９種ペプチドをセルロース膜上に結合させ、ペプチドアレイを作成した。１次抗体として抗体Ｅ３７（０．３ｇ／ｍｌ）を添加し、インキュベートした。洗浄後、ＨＲＰ結合抗マウス抗体（１／２５０００希釈）を２次抗体として添加し、ＥＣＬ溶液を用いて発色させた。
【0093】
その結果、抗体Ｅ３７が６種のペプチド：QEWRCVNDKTRTQRI（配列番号３２）、EWRCVNDKTRTQRIQ（配列番号３３）、WRCVNDKTRTQRIQL（配列番号３４）、RCVNDKTRTQRIQLQ（配列番号３５）、CVNDKTRTQRIQLQC（配列番号３６）、およびVNDKTRTQRIQLQCQ（配列番号３７）に特異的に結合することが分かった。したがって、アミノ酸配列：VNDKTRTQRI（配列番号３１）（シグナルペプチドを含めた全長ＵＳＡＧ－１アミノ酸配列の１３４位～１４３位に相当する）がエピトープとして同定された。
【実施例10】
【0094】
抗体のイン・ビトロ試験２
実施例８でグループ分けした９種の抗体のうち８種について、実施例８と同様なＯｃｔｅｔによるＢＬＩ法を用いて親和性（ＫＤ値）を求めた。具体的には、それぞれの抗体をバイオセンサーに固定した後、精製した組換えマウスＵＳＡＧ－１蛋白を３種類の異なる濃度（１０ｎＭ、３０ｎＭ、１００ｎＭ）で添加し、それぞれの結合と解離の曲線を得て、それらをＯｃｔｅｔ装置附属の解析プログラムによりグローバルフィッティングすることにより算出した。結果を表２に示す。
実施例８でグループ分けした９種の抗体のうち８種について、実施例８と同様なＯｃｔｅｔによるＢＬＩ法を用いて親和性（ＫＤ値）を求めた。具体的には、それぞれの抗体をバイオセンサーに固定した後、精製した組換えマウスＵＳＡＧ－１蛋白を３種類の異なる濃度（１０ｎＭ、３０ｎＭ、１００ｎＭ）で添加し、それぞれの結合と解離の曲線を得て、それらをＯｃｔｅｔ装置附属の解析プログラムによりグローバルフィッティングすることにより算出した。結果を表２に示す。
【0095】
【表2】
【実施例11】
【0096】
抗体のイン・ビトロ試験３
実施例８でグループ２に分類された抗体Ｂ１４について、ＢＭＰおよびＷｎｔシグナリング抑制中和活性を測定した。実験は、実施例２に記載の方法と同様の方法を用いて行った。すなわち、ＷＮＴレポーターアッセイにおいて、プロモーターをルシフェラーゼ遺伝子に連結したベクター、およびＷｎｔ１発現ベクター（１μｇ）を導入した細胞を、マウスＵＳＡＧ－１組換え蛋白１μｇ、抗体を培地に対し１．０、３．０、４．０、６．０、８．０、１０．０、１２．０、１５．０、または３０．０μｇ／ｍｌとなるように添加して培養し、ルシフェラーゼ活性を測定した。ＢＭＰ ＡＬＰアッセイにおいて、Ｃ２Ｃ１２細胞をＢＭＰ７ ３０ｎｇ／ｍｌの存在下、マウスＵＳＡＧ－１組換え蛋白３０ｎｇ／ｍｌ、各種抗体を３０ｎｇ／ｍｌ、１５０ｎｇ／ｍｌ、３００ｎｇ／ｍｌ、または１５００ｎｇ／ｍｌ添加し、ともに培養し、ＡＬＰ活性を測定した。結果を図１７に示す。ＷＮＴレポーターアッセイにおいて、抗体Ｂ１４がＵＳＡＧ－１によるＷＮＴシグナルの抑制活性を中和することが確認された（最大で４２％の中和活性）。ＢＭＰ ＡＬＰアッセイにおいて、抗体Ｂ１４がＵＳＡＧ－１によるＢＭＰシグナルの抑制活性を中和することが確認された。
実施例８でグループ２に分類された抗体Ｂ１４について、ＢＭＰおよびＷｎｔシグナリング抑制中和活性を測定した。実験は、実施例２に記載の方法と同様の方法を用いて行った。すなわち、ＷＮＴレポーターアッセイにおいて、プロモーターをルシフェラーゼ遺伝子に連結したベクター、およびＷｎｔ１発現ベクター（１μｇ）を導入した細胞を、マウスＵＳＡＧ－１組換え蛋白１μｇ、抗体を培地に対し１．０、３．０、４．０、６．０、８．０、１０．０、１２．０、１５．０、または３０．０μｇ／ｍｌとなるように添加して培養し、ルシフェラーゼ活性を測定した。ＢＭＰ ＡＬＰアッセイにおいて、Ｃ２Ｃ１２細胞をＢＭＰ７ ３０ｎｇ／ｍｌの存在下、マウスＵＳＡＧ－１組換え蛋白３０ｎｇ／ｍｌ、各種抗体を３０ｎｇ／ｍｌ、１５０ｎｇ／ｍｌ、３００ｎｇ／ｍｌ、または１５００ｎｇ／ｍｌ添加し、ともに培養し、ＡＬＰ活性を測定した。結果を図１７に示す。ＷＮＴレポーターアッセイにおいて、抗体Ｂ１４がＵＳＡＧ－１によるＷＮＴシグナルの抑制活性を中和することが確認された（最大で４２％の中和活性）。ＢＭＰ ＡＬＰアッセイにおいて、抗体Ｂ１４がＵＳＡＧ－１によるＢＭＰシグナルの抑制活性を中和することが確認された。
【0097】
さらに、ＵＳＡＧ－１によるＢＭＰおよびＷｎｔシグナリング抑制に対する抗体Ｂ１４のＥＣ５０値として、抗体無添加時を０として最大中和活性時を１００％として、５０％抑制時の濃度を算出した。その結果、ＢＭＰおよびＷｎｔシグナリング抑制に対して、それぞれ、２９８ｎｇ／ｍｌおよび４．７３μｇ／ｍｌであった。
【実施例12】
【0098】
抗体のイン・ビボ投与試験４（マウス）
実施例８でグループ１および２に分類された６種の抗体を、先天性無歯症モデルマウスＥＤＡホモ欠損マウス、先天性無歯症モデルマウスＥＤＡヘテロ欠損マウス、または野生型マウスを妊娠した母親マウスの腹腔内に単回投与した。結果を表３に示す。６種の抗体はいずれも、ＥＤＡ欠損マウスにおいて、過剰歯／癒合歯の形成を誘導し、ＥＤＡ欠損マウスの歯数を増やすことができることが分かった。特に、グループ１の抗体は、ＥＤＡ欠損マウスにおいて欠損歯を回復させた。グループ１の抗体では、野生型マウスにおいて過剰歯および癒合歯の形成は見られなかったが、グループ２の抗体のうち抗体Ｅ５７およびＢ１４は、野生型マウスにおいて過剰歯および癒合歯の形成を誘導した。抗体Ｂ１４（抗体Ｃ）は、抗体Ｅ５７（抗体Ｂ）と同様に、ＥＤＡ欠損ホモマウス、ＥＤＡ欠損ヘテロマウスおよび野生型マウスの全てにおいて、歯の数を増やすことができることが分かった。なお、ここで「回復」とは、生まれたＥＤＡ欠損マウスにおいて、ＥＤＡ欠損マウスにおいて通常欠損している部位（Ｍ３）に歯が生えていること（Ｍ３が欠損していないこと）を言う。
実施例８でグループ１および２に分類された６種の抗体を、先天性無歯症モデルマウスＥＤＡホモ欠損マウス、先天性無歯症モデルマウスＥＤＡヘテロ欠損マウス、または野生型マウスを妊娠した母親マウスの腹腔内に単回投与した。結果を表３に示す。６種の抗体はいずれも、ＥＤＡ欠損マウスにおいて、過剰歯／癒合歯の形成を誘導し、ＥＤＡ欠損マウスの歯数を増やすことができることが分かった。特に、グループ１の抗体は、ＥＤＡ欠損マウスにおいて欠損歯を回復させた。グループ１の抗体では、野生型マウスにおいて過剰歯および癒合歯の形成は見られなかったが、グループ２の抗体のうち抗体Ｅ５７およびＢ１４は、野生型マウスにおいて過剰歯および癒合歯の形成を誘導した。抗体Ｂ１４（抗体Ｃ）は、抗体Ｅ５７（抗体Ｂ）と同様に、ＥＤＡ欠損ホモマウス、ＥＤＡ欠損ヘテロマウスおよび野生型マウスの全てにおいて、歯の数を増やすことができることが分かった。なお、ここで「回復」とは、生まれたＥＤＡ欠損マウスにおいて、ＥＤＡ欠損マウスにおいて通常欠損している部位（Ｍ３）に歯が生えていること（Ｍ３が欠損していないこと）を言う。
【0099】
【表3】
【実施例13】
【0100】
抗体のイン・ビボ投与試験５（イヌ）
抗マウスＵＳＡＧ－１中和抗体Ｂ１４（５０μｇ／ｇ体重）を生まれた直後の先天性無歯症モデルイヌの腹腔内に単回投与した。先天性無歯症モデルイヌは、先天性無歯症を発症しているＴＯＹＯビーグル系統であり、北山ラベス本郷ファームより入手した。該先天性無歯症モデルイヌには、上顎第３小臼歯を欠損する個体、および下顎第４小臼歯を欠損する個体がある。投与の１０週後にデンタルＸ線写真にて歯胚の石灰化を評価したところ、欠損歯の回復を確認した（図１８）。結果を表４に示す。また、抗体投与の３日後、１、３、５、および７週間後に、各個体における投与抗体の血中濃度を測定した。その結果、個体差はあるが、半減期は１週で投与後７週まで維持されていた。
抗マウスＵＳＡＧ－１中和抗体Ｂ１４（５０μｇ／ｇ体重）を生まれた直後の先天性無歯症モデルイヌの腹腔内に単回投与した。先天性無歯症モデルイヌは、先天性無歯症を発症しているＴＯＹＯビーグル系統であり、北山ラベス本郷ファームより入手した。該先天性無歯症モデルイヌには、上顎第３小臼歯を欠損する個体、および下顎第４小臼歯を欠損する個体がある。投与の１０週後にデンタルＸ線写真にて歯胚の石灰化を評価したところ、欠損歯の回復を確認した（図１８）。結果を表４に示す。また、抗体投与の３日後、１、３、５、および７週間後に、各個体における投与抗体の血中濃度を測定した。その結果、個体差はあるが、半減期は１週で投与後７週まで維持されていた。
【0101】
【表4】
【0102】
表４から明らかなように、先天性小臼歯欠損はＵＳＡＧ－１中和抗体Ｂ１４の単回全身投与により回復した。下顎の小臼歯欠損は回復率が低いのは、原因遺伝子が異なる可能性が示唆される。
【実施例14】
【0103】
抗体のイン・ビボ投与試験６（フェレット）
フェレットは、ヒトと同様に２生歯性であり、切歯３本、犬歯１本、小臼歯３本、大臼歯２本という哺乳類の基本歯式に類似した歯数を持つ。３９匹のフェレットの生後１および３週間後に、実施例１および７で作製した抗体を含む３９種類のＵＳＡＧ－１中和抗体（１６μｇ／ｇ体重）を腹腔内投与した（各抗体につき１匹）。生後１４週間にて、３８匹が生存した。実施例８で同定したグループ１～４の抗体を含む４種の抗体を投与した４匹の個体を生後３０週まで長期経過観察した。その結果、複数のフェレットにおいて、上下顎前歯および小臼歯にサイズの大きい歯が多数認められた。さらに、抗体Ｂ１４を投与したフェレットにおいて、生後１４週目に、下顎舌側の第３小臼歯部の第３生歯の誘導が認められた（図１９）。抗体Ｂ１０３を投与したフェレットにおいて、生後３０週目に、上顎舌（口蓋）側に前歯が１本多く発生し、上顎前歯部の第３生歯の誘導が認められた（図２３）。該前歯は、永久歯よりも後に発生し、先行永久歯と形態が類似していた。該前歯は、短小な歯根を有していた。さらに、抗体Ｂ１０３を投与したフェレットにおいて、生後３０週目に、下顎の左右の小臼歯部に第３生歯の誘導が認められた（図２４）。
フェレットは、ヒトと同様に２生歯性であり、切歯３本、犬歯１本、小臼歯３本、大臼歯２本という哺乳類の基本歯式に類似した歯数を持つ。３９匹のフェレットの生後１および３週間後に、実施例１および７で作製した抗体を含む３９種類のＵＳＡＧ－１中和抗体（１６μｇ／ｇ体重）を腹腔内投与した（各抗体につき１匹）。生後１４週間にて、３８匹が生存した。実施例８で同定したグループ１～４の抗体を含む４種の抗体を投与した４匹の個体を生後３０週まで長期経過観察した。その結果、複数のフェレットにおいて、上下顎前歯および小臼歯にサイズの大きい歯が多数認められた。さらに、抗体Ｂ１４を投与したフェレットにおいて、生後１４週目に、下顎舌側の第３小臼歯部の第３生歯の誘導が認められた（図１９）。抗体Ｂ１０３を投与したフェレットにおいて、生後３０週目に、上顎舌（口蓋）側に前歯が１本多く発生し、上顎前歯部の第３生歯の誘導が認められた（図２３）。該前歯は、永久歯よりも後に発生し、先行永久歯と形態が類似していた。該前歯は、短小な歯根を有していた。さらに、抗体Ｂ１０３を投与したフェレットにおいて、生後３０週目に、下顎の左右の小臼歯部に第３生歯の誘導が認められた（図２４）。
【実施例15】
【0104】
抗体のイン・ビボ投与試験７（スンクス）
妊娠したスンクスを入手し、妊娠１７日に、実施例１で作製した各種ＵＳＡＧ－１中和抗体（１６μｇ／ｇ体重）を腹腔内投与した。生後７週目にμＣＴ画像にて評価した。ＵＳＡＧ－１中和抗体を投与したスンクスは出産しなかったが、抗体Ｂ（Ｅ５７）および抗体Ｃ（Ｂ１４）を投与した生後４～８か月齢の親スンクスの歯根周囲に、エナメル上皮幹細胞が局所で上皮間葉誘導を起こし形成された新しい歯の形成が観察された。抗体Ｂを投与したスンクスにおいて、下顎頬側の第１小臼歯と第２小臼歯の間に第３生歯の誘導が認められた（図２０）。したがって、本願発明のＵＳＡＧ－１中和抗体は第３生歯の形成を誘導することが示された。
妊娠したスンクスを入手し、妊娠１７日に、実施例１で作製した各種ＵＳＡＧ－１中和抗体（１６μｇ／ｇ体重）を腹腔内投与した。生後７週目にμＣＴ画像にて評価した。ＵＳＡＧ－１中和抗体を投与したスンクスは出産しなかったが、抗体Ｂ（Ｅ５７）および抗体Ｃ（Ｂ１４）を投与した生後４～８か月齢の親スンクスの歯根周囲に、エナメル上皮幹細胞が局所で上皮間葉誘導を起こし形成された新しい歯の形成が観察された。抗体Ｂを投与したスンクスにおいて、下顎頬側の第１小臼歯と第２小臼歯の間に第３生歯の誘導が認められた（図２０）。したがって、本願発明のＵＳＡＧ－１中和抗体は第３生歯の形成を誘導することが示された。
【実施例16】
【0105】
抗体のイン・ビトロ試験４
実施例８でグループ３に分類された抗体Ｂ４８について、ＢＭＰおよびＷｎｔシグナリング抑制中和活性を測定した。実験は、実施例２に記載の方法と同様の方法を用いて行った。すなわち、ＷＮＴレポーターアッセイにおいて、プロモーターをルシフェラーゼ遺伝子に連結したベクター、およびＷｎｔ１発現ベクター（１μｇ）を導入した細胞を、マウスＵＳＡＧ－１組換え蛋白１μｇ、抗体を培地に対し１、３、６、１０、または３０μｇ／ｍｌとなるように添加して培養し、ルシフェラーゼ活性を測定した。ＢＭＰ ＡＬＰアッセイにおいて、Ｃ２Ｃ１２細胞をＢＭＰ７ ３０ｎｇ／ｍｌの存在下、マウスＵＳＡＧ－１組換え蛋白３０ｎｇ／ｍｌ、抗体を０．１倍量（３ｎｇ／ｍｌ）、１０倍量（３００ｎｇ／ｍｌ）または１００倍量（３μｇ／ｍｌ）添加し、ともに培養し、ＡＬＰ活性を測定した。結果を図２５に示す。ＷＮＴレポーターアッセイにおいて、抗体Ｂ４８がＵＳＡＧ－１によるＷＮＴシグナルの抑制活性をほぼ１００％中和することが確認された。
実施例８でグループ３に分類された抗体Ｂ４８について、ＢＭＰおよびＷｎｔシグナリング抑制中和活性を測定した。実験は、実施例２に記載の方法と同様の方法を用いて行った。すなわち、ＷＮＴレポーターアッセイにおいて、プロモーターをルシフェラーゼ遺伝子に連結したベクター、およびＷｎｔ１発現ベクター（１μｇ）を導入した細胞を、マウスＵＳＡＧ－１組換え蛋白１μｇ、抗体を培地に対し１、３、６、１０、または３０μｇ／ｍｌとなるように添加して培養し、ルシフェラーゼ活性を測定した。ＢＭＰ ＡＬＰアッセイにおいて、Ｃ２Ｃ１２細胞をＢＭＰ７ ３０ｎｇ／ｍｌの存在下、マウスＵＳＡＧ－１組換え蛋白３０ｎｇ／ｍｌ、抗体を０．１倍量（３ｎｇ／ｍｌ）、１０倍量（３００ｎｇ／ｍｌ）または１００倍量（３μｇ／ｍｌ）添加し、ともに培養し、ＡＬＰ活性を測定した。結果を図２５に示す。ＷＮＴレポーターアッセイにおいて、抗体Ｂ４８がＵＳＡＧ－１によるＷＮＴシグナルの抑制活性をほぼ１００％中和することが確認された。
【実施例17】
【0106】
抗体のイン・ビトロ試験５（ＰＡタグ付加ＵＳＡＧ－１およびＥ１Ｅ２を用いるプロテインＡセファロースによるプルダウンアッセイ）
Ｗｎｔは、Ｆｒｉｚｚｌｅｄと共役受容体であるＬＲＰ（low-density lipoprotein receptor-related protein；低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質）５／６受容体に結合して細胞内にシグナルを伝達する。ＬＲＰ６には４つの細胞外ドメイン（Ｅ１～Ｅ４）があり、このうちＥ１Ｅ２がＵＳＡＧ－１の結合に関与することが知られている。すなわち、ＵＳＡＧ－１は、ＬＲＰ６のＥ１Ｅ２領域に結合してＷｎｔのシグナル伝達を抑制する。そこで、実施例８でグループ分けされた９種のマウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体（Ｅ１２、Ｅ１６、Ｅ３７、Ｅ４８、Ｅ５７、Ｂ１４、Ｂ４８、Ｂ１０３、Ｂ１０８）について、ＵＳＡＧ－１のＬＲＰ６－Ｅ１Ｅ２への結合を阻害するか否かを調べた。
Ｗｎｔは、Ｆｒｉｚｚｌｅｄと共役受容体であるＬＲＰ（low-density lipoprotein receptor-related protein；低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質）５／６受容体に結合して細胞内にシグナルを伝達する。ＬＲＰ６には４つの細胞外ドメイン（Ｅ１～Ｅ４）があり、このうちＥ１Ｅ２がＵＳＡＧ－１の結合に関与することが知られている。すなわち、ＵＳＡＧ－１は、ＬＲＰ６のＥ１Ｅ２領域に結合してＷｎｔのシグナル伝達を抑制する。そこで、実施例８でグループ分けされた９種のマウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体（Ｅ１２、Ｅ１６、Ｅ３７、Ｅ４８、Ｅ５７、Ｂ１４、Ｂ４８、Ｂ１０３、Ｂ１０８）について、ＵＳＡＧ－１のＬＲＰ６－Ｅ１Ｅ２への結合を阻害するか否かを調べた。
【0107】
プロテインＡセファロース（３０μｌ）にそれぞれ、各マウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体（１ｍｌ ＰＢＳ中５μｇ）をキャプチャーさせた（室温、１．５時間）。そこにＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞においてＮ末端にＰＡタグを付加したマウスＵＳＡＧ－１組み換え蛋白を一過性に発現させた培養上清（１ｍＬ）を加えてインキュベートした（室温、２時間）。そこにＬＲＰ６－Ｅ１Ｅ２（ヒトＬＲＰ６のアミノ酸番号１～６２９までの領域にＨｉｓタグを融合したもの）を発現させた培養上清（１ｍＬ）を加えてインキュベートした（室温、２．５時間）。ＰＢＳバッファー（１ｍＬ）で３回洗浄して、結合していない蛋白を除いた。セファロースに結合した蛋白質をすべて溶出し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動およびＯｒｉｏｌｅゲル蛍光染色によりバンドを確認した。結果を図２６に示す。図２６において、陰性コントロールとして、マウス抗ＵＳＡＧ－１中和抗体をキャプチャーさせないで同じ操作をした試料（ｎｏ ｍＡｂ）、陽性コントロールとしてマウスＵＳＡＧ－１組み換え蛋白とＬＲＰ６－Ｅ１Ｅ２の複合体をＰＡタグ抗体ＮＺ－１で免疫沈降したもの（ＷＩＳＥ＋Ｅ１Ｅ２ Ｂｙ ＮＺ１）、そしてＬＲＰ６－Ｅ１Ｅ２のみの発現量をＨｉｓタグを吸着するＮｉ－ＮＴＡレジンで沈降したもの（Ｅ１Ｅ２ Ｂｙ ＮｉＮＴＡ）をそれぞれ右側のパネルに示した。
【0108】
その結果、いくつかの抗体（特に、グループ３および４の抗体Ｂ４８、Ｂ１０３、Ｂ１０８）とＵＳＡＧ－１との複合体には、ＬＲＰ６－Ｅ１Ｅ２が結合しないことが分かった（図２６）。したがって、これらの抗体のエピトープは、ＵＳＡＧ－１のＬＲＰ６結合部位と重複するかまたは立体構造上近い領域にあり、該抗体がＵＳＡＧ－１に結合することによってＵＳＡＧ－１のＬＲＰ６への結合を阻害し、それにより、ＵＳＡＧ－１のＷｎｔシグナリング抑制が中和されることが分かった。
【実施例18】
【0109】
抗体のイン・ビボ投与試験８（マウス）
実施例８でグループ３および４に分類された３種の抗体を、先天性無歯症モデルマウスＥＤＡホモ欠損マウス、先天性無歯症モデルマウスＥＤＡヘテロ欠損マウス、または野生型マウスを妊娠した母親マウスの腹腔内に単回投与した（１６μｇ／ｇ体重）。生まれた仔マウスにおいて、過剰歯および癒合歯の存在ならびに欠損歯の回復の有無を調べた。結果を表５に示す。３種の抗体は特に、ＥＤＡ欠損マウスにおいて欠損歯を回復させた。なお、ここで「回復」とは、生まれたＥＤＡ欠損マウスにおいて、ＥＤＡ欠損マウスにおいて通常欠損している部位（Ｍ３）に歯が生えていること（Ｍ３が欠損していないこと）を言う。
実施例８でグループ３および４に分類された３種の抗体を、先天性無歯症モデルマウスＥＤＡホモ欠損マウス、先天性無歯症モデルマウスＥＤＡヘテロ欠損マウス、または野生型マウスを妊娠した母親マウスの腹腔内に単回投与した（１６μｇ／ｇ体重）。生まれた仔マウスにおいて、過剰歯および癒合歯の存在ならびに欠損歯の回復の有無を調べた。結果を表５に示す。３種の抗体は特に、ＥＤＡ欠損マウスにおいて欠損歯を回復させた。なお、ここで「回復」とは、生まれたＥＤＡ欠損マウスにおいて、ＥＤＡ欠損マウスにおいて通常欠損している部位（Ｍ３）に歯が生えていること（Ｍ３が欠損していないこと）を言う。
【0110】
【表5】
【実施例19】
【0111】
抗体のイン・ビボ投与試験９（マウス）
５種の抗体（Ｅ５７、Ｂ１４、Ｂ４８、Ｂ１０３、Ｂ１０８）を、先天性無歯症モデルマウスＷｎｔ１０ａホモ欠損マウス、先天性無歯症モデルマウスＷｎｔ１０ａヘテロ欠損マウス、または野生型マウスを妊娠した母親マウスの腹腔内に単回投与した（Ｂ１０３は２μｇ／ｇ体重、その他の抗体は１６μｇ／ｇ体重）。生まれた仔マウスにおいて、過剰歯および癒合歯の存在ならびに欠損歯の回復の有無を調べた。結果を表６に示す。グループ３および４の抗体のうちＢ４８およびＢ１０３は、ホモ欠損マウスにおいて過剰歯および癒合歯の形成を誘導した。
５種の抗体（Ｅ５７、Ｂ１４、Ｂ４８、Ｂ１０３、Ｂ１０８）を、先天性無歯症モデルマウスＷｎｔ１０ａホモ欠損マウス、先天性無歯症モデルマウスＷｎｔ１０ａヘテロ欠損マウス、または野生型マウスを妊娠した母親マウスの腹腔内に単回投与した（Ｂ１０３は２μｇ／ｇ体重、その他の抗体は１６μｇ／ｇ体重）。生まれた仔マウスにおいて、過剰歯および癒合歯の存在ならびに欠損歯の回復の有無を調べた。結果を表６に示す。グループ３および４の抗体のうちＢ４８およびＢ１０３は、ホモ欠損マウスにおいて過剰歯および癒合歯の形成を誘導した。
【0112】
【表6】
【産業上の利用可能性】
【0113】
本願の抗体またはその抗原結合フラグメントは、先天性無歯症や後天的な歯の欠損の治療に利用することができる。また、本願の抗体またはその抗原結合フラグメントは、第３生歯形成に対して有効であると考えられ、医薬品分野における歯の再生のための分子標的薬の開発、および第３生歯を形成させることにより歯を再生する治療法の確立につながる。
【配列表フリーテキスト】
【0114】
SEQ ID NO:32; 15 amino acid peptide for epitope mapping
SEQ ID NO:33; 15 amino acid peptide for epitope mapping
SEQ ID NO:34; 15 amino acid peptide for epitope mapping
SEQ ID NO:35; 15 amino acid peptide for epitope mapping
SEQ ID NO:36; 15 amino acid peptide for epitope mapping
SEQ ID NO:37; 15 amino acid peptide for epitope mapping
SEQ ID NO:33; 15 amino acid peptide for epitope mapping
SEQ ID NO:34; 15 amino acid peptide for epitope mapping
SEQ ID NO:35; 15 amino acid peptide for epitope mapping
SEQ ID NO:36; 15 amino acid peptide for epitope mapping
SEQ ID NO:37; 15 amino acid peptide for epitope mapping
【図1】
【図2】
【図3】
【図4-1】
【図4-2】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【配列表】