ホーム > 特許ランキング > 雪印メグミルク株式会社
知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】特許公報(B2)
(11)【特許番号】
(24)【登録日】2024-11-29
(45)【発行日】2024-12-09
(54)【発明の名称】骨強化剤
(51)【国際特許分類】
A23L 33/135 20160101AFI20241202BHJP
A61K 35/744 20150101ALI20241202BHJP
A61K 35/745 20150101ALI20241202BHJP
A61K 35/747 20150101ALI20241202BHJP
A61P 19/08 20060101ALI20241202BHJP
A21D 2/08 20060101ALN20241202BHJP
A21D 13/45 20170101ALN20241202BHJP
A23L 29/256 20160101ALN20241202BHJP
A23L 9/00 20160101ALN20241202BHJP
A23L 9/20 20160101ALN20241202BHJP
A23D 7/00 20060101ALN20241202BHJP
A23C 19/09 20060101ALN20241202BHJP
A23L 2/52 20060101ALN20241202BHJP
A23L 2/38 20210101ALN20241202BHJP
A23C 9/123 20060101ALN20241202BHJP
A23C 9/152 20060101ALN20241202BHJP
【ＦＩ】
A23L33/135
A61K35/744
A61K35/745
A61K35/747
A61P19/08
A21D2/08
A21D13/45
A23L29/256
A23L9/00
A23L9/20
A23D7/00 500
A23C19/09
A23L2/00 F
A23L2/38 G
A23C9/123
A23L2/52
A23C9/152
【請求項の数】
12
(21)【出願番号】P 2021562636
(86)(22)【出願日】2020-11-30
(86)【国際出願番号】 JP2020044521
(87)【国際公開番号】W WO2021112041
(87)【国際公開日】2021-06-10
【審査請求日】2023-09-06
(31)【優先権主張番号】P 2019217705
(32)【優先日】2019-12-02
(33)【優先権主張国・地域又は機関】JP
【微生物の受託番号】NPMD NITE P-03073
【微生物の受託番号】NPMD NITE P-03074
【微生物の受託番号】NPMD NITE BP-01707
【微生物の受託番号】NPMD NITE BP-02644
【微生物の受託番号】NPMD NITE P-03077
【微生物の受託番号】NPMD NITE P-03076
【微生物の受託番号】NPMD NITE P-03075
【微生物の受託番号】NPMD NITE BP-02997
【微生物の受託番号】NPMD NITE BP-03078
【微生物の受託番号】NPMD NITE P-03081
【微生物の受託番号】NPMD NITE P-03003
【微生物の受託番号】NPMD NITE P-03079
【微生物の受託番号】NPMD NITE P-03080
【微生物の受託番号】NPMD NITE P-03071
【微生物の受託番号】NPMD NITE BP-03072
【微生物の受託番号】NPMD NITE P-03070
(73)【特許権者】
【識別番号】711002926
【氏名又は名称】雪印メグミルク株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】110000774
【氏名又は名称】弁理士法人 もえぎ特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】安枝 武彦
(72)【発明者】
【氏名】加茂 佳恵
(72)【発明者】
【氏名】瀬戸 泰幸
【審査官】▲高▼ 美葉子
(56)【参考文献】
【文献】国際公開第２００１／０１５７１５（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特開２００６－２５６９９３（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開平０９－１９４３８４（ＪＰ，Ａ）
【文献】特開２００４－３１５４７７（ＪＰ，Ａ）
【文献】国際公開第２０１３／０３１７４９（ＷＯ，Ａ１）
【文献】特表２０１５－５２６３８９（ＪＰ，Ａ）
【文献】Clinical Interventions in Aging，2018年，Vol.13，pp.1555-1564
【文献】Lacto Plus Kids + Vitamin D,ID 2829323，Mintel GNPD[online],2014年12月,[検索日2024.08.13]，https://www.portal.mintel.com
【文献】Yogurt with Strawberry Pure,ID 4963793，Mintel GNPD[online],2017年7月,[検索日2024.08.13]，https://www.portal.mintel.com
【文献】Probiotics Supplement,ID 3488223，Mintel GNPD[online],2015年9月,[検索日2024.08.13]，https://www.portal.mintel.com
【文献】Supplement for Stress and Fatigue,ID 6695677，Mintel GNPD[online],2019年7月,[検索日2024.08.13]，https://www.portal.mintel.com
(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)
Ａ２３Ｃ ９／００
Ａ２３Ｃ１９／００
Ａ２３Ｌ ９／００
Ａ２３Ｌ２９／００
Ａ２３Ｌ３３／００
Ａ２３Ｌ ２／００
Ａ２３Ｄ ７／００
Ａ２１Ｄ１３／４５
Ａ２１Ｄ ２／０８
Ｃ１２Ｎ １／２０
Ａ６１Ｋ３５／７４４
ＣＡＰＬＵＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＥＭＢＡＳＥ／ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩＤＳ／ＦＳＴＡ （ＳＴＮ）
ＪＳＴＰｌｕｓ／ＪＭＥＤＰｌｕｓ／ＪＳＴ７５８０（ＪＤｒｅａｍＩＩＩ）
Ｍｉｎｔｅｌ ＧＮＰＤ
(57)【特許請求の範囲】
【請求項1】
ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属又はビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌の菌体及び／又はその培養物を有効成分として含む骨芽細胞増殖促進用組成物であって、ラクトバチルス属又はビフィドバクテリウム属に属する菌が、ラクトバチルス・デルブルッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）から選択される１つ以上であることを特徴とする前記組成物。
【請求項2】
ラクトバチルス・デルブルッキーに属する菌が、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）に属する菌であることを特徴とする請求項１に記載の組成物 。
【請求項3】
ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス属又はビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌の菌体及び／又はその培養物を有効成分として含む骨芽細胞増殖促進用組成物であって、ラクトバチルス属、ラクトコッカス属又はビフィドバクテリウム属に属する菌が、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１１５株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７４）、ＳＢＴ００５６株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７３）、 ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５４株（ＮＩＴ Ｅ Ｐ－０３０７６）、ＳＢＴ１８４８株（ＮＩＴＥ ＢＰ－０３０７５）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）ＳＢＴ１００１０株（ＮＩＴＥ ＢＰ－０２９９７）、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス （Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株（ＮＩＴＥ ＢＰ－０３０７８）、ＳＢＴ２４８３株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０８１ ）、ＳＢＴ１２２３株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３００３）、ＳＢＴ１５５４株（ＮＩＴＥ Ｐ －０３０７９）、ＳＢＴ２３９７株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０８０）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）ＳＢＴ１０５３５株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７１）、ＳＢＴ１０５６１株（ＮＩＴＥ ＢＰ－０３０７２）から選択される１つ以上であることを特徴とする前記組成物。
【請求項4】
請求項１乃至３のいずれか一項に記載の骨芽細胞増殖促進用組成物を含むことを特徴とする骨芽細胞増殖促進用飲食品、骨芽細胞増殖促進用栄養組成物、骨芽細胞増殖促進用飼料又は骨芽細胞増殖促進用医薬品。
【請求項5】
新規乳酸菌ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス ＳＢＴ００５６株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７３）。
【請求項6】
新規乳酸菌ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ０６２５株 （ＮＩＴＥ ＢＰ－０３０７８）。
【請求項7】
新規乳酸菌ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ２４８３株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０８１）。
【請求項8】
新規乳酸菌ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ１２２３株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３００３）。
【請求項9】
新規乳酸菌ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ１５５４株 （ＮＩＴＥ Ｐ －０３０７９）。
【請求項10】
新規乳酸菌ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ２３９７株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０８０）。
【請求項11】
新規ビフィズス菌ビフィドバクテリウム・ブレーベ ＳＢＴ１０５３５株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７１）。
【請求項12】
新規ビフィズス菌ビフィドバクテリウム・ブレーベ ＳＢＴ１０５６１株（ＮＩＴＥ ＢＰ－０３０７２）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、骨を強化することができる骨強化剤に関する。本発明は、骨芽細胞の増殖を促進させる作用がある。また、本発明は、破骨細胞による骨吸収を抑制する作用がある。本発明により、骨粗鬆症、骨折治療、リウマチ、及び関節炎などの種々の骨疾患の予防又は治療に有用である、骨強化作用を有する素材を提供することができる。さらに、本発明は、該骨強化作用を有する素材を含有する、骨強化用飲食品、骨強化用栄養組成物、骨強化用飼料又は骨強化用医薬品に関する。
この出願は、２０１９年１２月２日に出願された日本出願特願２０１９－２１７７０５号を基礎とする優先権を主張し、その開示の全てをここに取り込む。
この出願は、２０１９年１２月２日に出願された日本出願特願２０１９－２１７７０５号を基礎とする優先権を主張し、その開示の全てをここに取り込む。
【背景技術】
【0002】
近年、世界的規模で、高齢化等に伴い、骨粗鬆症、骨折、あるいは腰痛などの種々の骨に関連する疾患が増加している。そして、これらが、大きな社会問題となっている。これは、カルシウムの摂取不足、カルシウム吸収能力の低下、及び閉経後のホルモンのアンバラスなどが原因であるとされている。骨粗鬆症、骨折、及び腰痛などの種々の骨疾患を予防するためには、若齢期から骨芽細胞による骨形成を促進して体内の骨量をできるだけ増加させることにより、最大骨量及び骨強度（骨密度＋骨質）を高めることが有効であるとされている。なお、骨質とは、骨の微細構造、代謝回転、微小骨折、及び石灰化を指すものである。また、骨粗鬆症、骨折、及び腰痛などの種々の骨疾患を予防する方法としては、破骨細胞による骨吸収を抑制することも考えられる。骨はバランスのとれた吸収と形成を絶えず繰り返している（リモデリング）。しかしながら、閉経後のホルモンのバランス変化等により、骨吸収が骨形成を上回ることがある。そして、これが骨粗鬆症、骨折、及び腰痛などの種々の骨疾患の原因となる。したがって、破骨細胞による骨吸収を抑制して骨強度を一定に保つことにより、結果的に骨を強化することが可能である。
【0003】
このような現状から、骨を強化する目的で、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、及び乳酸カルシウムなどのカルシウム塩、ならびに、乳清カルシウム、牛骨粉、及び卵殻などの天然カルシウム剤が、それぞれ単独で医薬品、飲食品、及び飼料などに添加され、摂取されている。あるいは、これらのカルシウム剤をカゼインホスホペプチド又はオリゴ糖などのカルシウム吸収促進効果を有する物質と共に、医薬品、飲食品、及び飼料などに添加して、摂取することが行われている。しかしながら、これらのカルシウム塩、又は天然カルシウム剤を飲食品に添加して摂取した場合、カルシウムの吸収率は５０％以下であり、半分以上のカルシウムが吸収されず体外に排出されてしまうといわれている。また、体内に吸収されたカルシウムは、その形態又は同時に摂取される他の栄養成分の種類によって骨への親和性が異なるので、必ずしも骨代謝の改善又は骨強化作用を示さないこともある。
【0004】
その他、骨粗鬆症治療又は骨強化のための医薬として、女性ホルモン製剤、活性型ビタミンＤ３製剤、ビタミンＫ２製剤、ビスフォスフォネート製剤、及びカルシトニン製剤などが知られている。抗ＲＡＮＫＬ抗体などの新薬の開発も進められている。しかし、これらの医薬品を用いた場合、耳鳴り、頭痛、及び食欲不振などの副作用を伴うことがある。また、服用期間に制限があるものもある。さらに、これらの物質は安全性及びコストなどの面から、現在のところ、飲食品に添加することができない状況にある。したがって、骨粗鬆症、骨折、及び腰痛などの種々の骨疾患の疾病の性質を鑑みて、長期的に副作用が無く摂取することができ、骨形成促進的及び／又は骨吸収抑制的に作用して骨強度を高め、その予防又は治療効果が期待できるような骨強化剤、並びに、このような骨強化剤を含有する飲食品及び飼料の開発が望まれている。
【0005】
こうしたなかで、プロピオニバクテリウム・フロイデンライヒの培養物が株化骨芽細胞の分化を促進すること、及び培養破骨細胞の分化を抑制することが知られている（特許文献１）。しかしながら、乳酸菌及び／又はビフィズス菌の菌体成分又はその培養物が、骨芽細胞の増殖を促進し、加えて、破骨細胞による骨吸収を抑制することは、これまで知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0006】
【文献】特許４７５０９９１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0007】
本発明の課題は、骨を強化することができる骨強化作用を有する素材を提供することである。この素材は、安全性が高く、骨芽細胞の増殖を促進させる作用がある。また、この素材は、破骨細胞による骨吸収を抑制する作用がある。また、この素材は、骨粗鬆症、骨折、リウマチ、及び関節炎などの種々の骨疾患の予防又は治療に有用である。また、本発明の課題は、骨粗鬆症、骨折、リウマチ、及び関節炎などの種々の骨疾患の予防又は治療に有用である骨強化作用を有する素材を配合した骨強化剤、骨強化用飲食品、骨強化用栄養組成物、骨強化用飼料又は骨強化用医薬品を提供することである。これらは、骨芽細胞の増殖を促進させる作用がある。これらは、また、破骨細胞による骨吸収を抑制する作用があり、骨を強化することができる。
【課題を解決するための手段】
【0008】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討を進めた結果、いくつかの乳酸菌あるいはビフィズス菌が、骨強化作用を有することを見出した。本発明には、以下の構成が含まれる。
（１）ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、又はビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌の菌体及び／又はその培養物を有効成分として含む骨強化用組成物。
（２）ラクトバチルス属、ラクトコッカス属、又はビフィドバクテリウム属に属する菌がラクトバチルス・デルブルッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトコッカス・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）から選択されるひとつ以上であることを特徴とする（１）の骨強化用組成物。
（３）ラクトバチルス・デルブルッキー又はラクトコッカス・ラクチスに属する菌がラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）に属する菌であることを特徴とする（２）の骨強化用組成物。
（４）ラクトバチルス属、ラクトコッカス属、又はビフィドバクテリウム属に属する菌が、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１１５株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７４）、ＳＢＴ００５６株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７３）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１６１株（ＮＩＴＥ ＢＰ－０１７０７）、ＳＢＴ１１３８０株（ＮＩＴＥ ＢＰ－０２６４４）、ＳＢＴ２１９２Ａ株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７７）、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５４株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７６）、ＳＢＴ１８４８株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７５）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）ＳＢＴ１００１０株（ＮＩＴＥ ＢＰ－０２９９７）、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株（ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０３０７８）、ＳＢＴ２４８３株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０８１）、ＳＢＴ１２２３株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３００３）、ＳＢＴ１５５４株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７９）、ＳＢＴ２３９７株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０８０）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）ＳＢＴ１０５３５株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７１）、ＳＢＴ１０５６１株（ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０３０７２）、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）ＳＢＴ１０５４９株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７０）から選択されるひとつ以上であることを特徴とする（１）乃至（３）のいずれか一項に記載の骨強化用組成物。
（５）（１）乃至（４）のいずれか一項に記載の骨強化用組成物を含むことを特徴とする骨強化用飲食品、骨強化用栄養組成物、骨強化用飼料又は骨強化用医薬品。
（６）新規乳酸菌ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス ＳＢＴ００５６株。
（７）新規乳酸菌ラクトバチルス・ヘルベティカス ＳＢＴ２１９２Ａ株。
（８）新規乳酸菌ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ０６２５株。
（９）新規乳酸菌ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ２４８３株。
（１０）新規乳酸菌ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ１２２３株。
（１１）新規乳酸菌ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ１５５４株。
（１２）新規乳酸菌ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ２３９７株。
（１３）新規ビフィズス菌ビフィドバクテリウム・ブレーベ ＳＢＴ１０５３５株。
（１４）新規ビフィズス菌ビフィドバクテリウム・ブレーベ ＳＢＴ１０５６１株。
（１５）新規ビフィズス菌ビフィドバクテリウム・アドレセンティス ＳＢＴ１０５４９株。
（１６）骨強化用組成物の製造のための、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、又はビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌の菌体及び／又はその培養物の使用。
（１７）骨強化に使用するための、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、又はビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌の菌体及び／又はその培養物。
（１８）有効量のラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、又はビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌の菌体及び／又はその培養物を、それを必要としている対象に摂取させるか、又は投与することを含む、骨強化方法。
（１）ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、又はビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌の菌体及び／又はその培養物を有効成分として含む骨強化用組成物。
（２）ラクトバチルス属、ラクトコッカス属、又はビフィドバクテリウム属に属する菌がラクトバチルス・デルブルッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトコッカス・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）から選択されるひとつ以上であることを特徴とする（１）の骨強化用組成物。
（３）ラクトバチルス・デルブルッキー又はラクトコッカス・ラクチスに属する菌がラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）に属する菌であることを特徴とする（２）の骨強化用組成物。
（４）ラクトバチルス属、ラクトコッカス属、又はビフィドバクテリウム属に属する菌が、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１１５株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７４）、ＳＢＴ００５６株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７３）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１６１株（ＮＩＴＥ ＢＰ－０１７０７）、ＳＢＴ１１３８０株（ＮＩＴＥ ＢＰ－０２６４４）、ＳＢＴ２１９２Ａ株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７７）、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５４株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７６）、ＳＢＴ１８４８株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７５）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）ＳＢＴ１００１０株（ＮＩＴＥ ＢＰ－０２９９７）、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株（ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０３０７８）、ＳＢＴ２４８３株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０８１）、ＳＢＴ１２２３株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３００３）、ＳＢＴ１５５４株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７９）、ＳＢＴ２３９７株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０８０）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）ＳＢＴ１０５３５株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７１）、ＳＢＴ１０５６１株（ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０３０７２）、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）ＳＢＴ１０５４９株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７０）から選択されるひとつ以上であることを特徴とする（１）乃至（３）のいずれか一項に記載の骨強化用組成物。
（５）（１）乃至（４）のいずれか一項に記載の骨強化用組成物を含むことを特徴とする骨強化用飲食品、骨強化用栄養組成物、骨強化用飼料又は骨強化用医薬品。
（６）新規乳酸菌ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス ＳＢＴ００５６株。
（７）新規乳酸菌ラクトバチルス・ヘルベティカス ＳＢＴ２１９２Ａ株。
（８）新規乳酸菌ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ０６２５株。
（９）新規乳酸菌ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ２４８３株。
（１０）新規乳酸菌ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ１２２３株。
（１１）新規乳酸菌ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ１５５４株。
（１２）新規乳酸菌ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ２３９７株。
（１３）新規ビフィズス菌ビフィドバクテリウム・ブレーベ ＳＢＴ１０５３５株。
（１４）新規ビフィズス菌ビフィドバクテリウム・ブレーベ ＳＢＴ１０５６１株。
（１５）新規ビフィズス菌ビフィドバクテリウム・アドレセンティス ＳＢＴ１０５４９株。
（１６）骨強化用組成物の製造のための、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、又はビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌の菌体及び／又はその培養物の使用。
（１７）骨強化に使用するための、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、又はビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌の菌体及び／又はその培養物。
（１８）有効量のラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、又はビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌の菌体及び／又はその培養物を、それを必要としている対象に摂取させるか、又は投与することを含む、骨強化方法。
【発明の効果】
【0009】
本発明の骨強化用組成物は、安全性が高く、骨芽細胞の増殖を促進させることができる。加えて、本発明の骨強化用組成物は、破骨細胞の分化ならびに該細胞による骨吸収を、いずれも抑制する作用を介した骨強化作用が顕著である。該骨強化用組成物は、骨粗鬆症、骨折、リウマチ、及び関節炎などの種々の骨疾患の予防又は治療に有用である。また、本発明は、骨芽細胞の増殖を促進させることができる。また、本発明は、破骨細胞の分化ならびに該細胞による骨吸収を、いずれも抑制する作用があり、骨を強化することができる。したがって、本発明は、骨粗鬆症、骨折、リウマチ、及び関節炎などの種々の骨疾患の予防又は治療に有用である骨強化用組成物を配合した骨強化用飲食品、骨強化用栄養組成物、骨強化用飼料又は骨強化用医薬品を提供するものである。
【発明を実施するための形態】
【0010】
本発明において使用できる乳酸菌としては、骨強化作用を有する、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属に分類される乳酸菌であればどのようなものでも用いることができる。ビフィズス菌としては、骨強化作用を有する、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属するビフィズス菌であればどのようなものでも用いることができる。ラクトバチルス属に属する乳酸菌としては、ラクトバチルス・デルブルッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）等に属する乳酸菌を例示することができる。ラクトコッカス属に属する乳酸菌としては、ラクトコッカス・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）等に属する乳酸菌を例示することができる。ビフィドバクテリウム属に属するビフィズス菌としては、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）等に属するビフィズス菌を例示することができる。ラクトバチルス・デルブルッキーに属する乳酸菌としては、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）等の乳酸菌を例示することができる。ラクトコッカス・ラクチスに属する乳酸菌としては、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）等の乳酸菌を例示することができる。いずれの乳酸菌又はビフィズス菌についても、例示したものに限定されるものではない。
本発明に用いることができるラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス、ラクトバチルス・ヘルベティカス、ラクトバチルス・ガセリ、ラクトバチルス・ロイテリ、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、及びビフィドバクテリウム・アドレセンティスは、１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子配列解析等の一般的な分類方法により、分類することができる。
本発明では、特に、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＳＢＴ００５６株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７３）、ＳＢＴ２１１５株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７４）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１６１株（ＮＩＴＥ ＢＰ－０１７０７）、ＳＢＴ１１３８０株（ＮＩＴＥ ＢＰ－０２６４４）、２１９２Ａ株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７７）、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５４株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７６）、ＳＢＴ１８４８株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７５）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）ＳＢＴ１００１０株（ＮＩＴＥ ＢＰ－０２９９７）、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株（ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０３０７８）、ＳＢＴ２４８３株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０８１）、ＳＢＴ１２２３株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３００３）、ＳＢＴ１５５４株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７９）、ＳＢＴ２３９７株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０８０）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）ＳＢＴ１０５３５株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７１）、ＳＢＴ１０５６１株（ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０３０７２）、又はビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）ＳＢＴ１０５４９株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７０）を用いることが好ましいが、これらに限定されるものではない。
本発明の骨強化用組成物では、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、又はビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌の菌体、及びその培養物のうちの１つ以上を含むことができる。本発明の有効成分は、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、又はビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌の各々の菌体から成るものであってもよい。本発明の有効成分は、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、又はビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌の各々の培養物から成るものであってもよい。
本発明に用いることができるラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス、ラクトバチルス・ヘルベティカス、ラクトバチルス・ガセリ、ラクトバチルス・ロイテリ、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、及びビフィドバクテリウム・アドレセンティスは、１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子配列解析等の一般的な分類方法により、分類することができる。
本発明では、特に、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＳＢＴ００５６株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７３）、ＳＢＴ２１１５株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７４）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１６１株（ＮＩＴＥ ＢＰ－０１７０７）、ＳＢＴ１１３８０株（ＮＩＴＥ ＢＰ－０２６４４）、２１９２Ａ株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７７）、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５４株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７６）、ＳＢＴ１８４８株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７５）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）ＳＢＴ１００１０株（ＮＩＴＥ ＢＰ－０２９９７）、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株（ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０３０７８）、ＳＢＴ２４８３株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０８１）、ＳＢＴ１２２３株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３００３）、ＳＢＴ１５５４株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７９）、ＳＢＴ２３９７株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０８０）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）ＳＢＴ１０５３５株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７１）、ＳＢＴ１０５６１株（ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０３０７２）、又はビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）ＳＢＴ１０５４９株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７０）を用いることが好ましいが、これらに限定されるものではない。
本発明の骨強化用組成物では、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、又はビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌の菌体、及びその培養物のうちの１つ以上を含むことができる。本発明の有効成分は、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、又はビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌の各々の菌体から成るものであってもよい。本発明の有効成分は、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、又はビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌の各々の培養物から成るものであってもよい。
【0011】
（乳酸菌又はビフィズス菌の培養法）
本発明に用いられる乳酸菌又はビフィズス菌は、乳酸菌又はビフィズス菌の培養の常法に従って培養することができる。培養培地は、乳培地又は乳成分を含む培地、乳培地又は乳成分を含まない半合成培地など種々の培地を用いることができる。このような培地としては、還元脱脂乳培地などを例示することができる。得られた培養物から遠心分離などの集菌手段によって分離された菌体を、そのまま本発明の有効成分として用いることができる。濃縮、乾燥、又は凍結乾燥などした菌体を用いることもできる。菌体は、加熱乾燥などによる死菌体でもよい。菌体として純粋に分離されたものだけでなく、培養物、懸濁物、又はその他の菌体含有物、並びに菌体を酵素又は物理的手段を用いて処理した細胞質又は細胞壁画分も用いることができる。培養物などの形態としては、合成培地であるＭＲＳ培地（ＤＩＦＣＯ社製）、Ｍ１７培地（ＤＩＦＣＯ社製）、１％グルコース含有ＧＡＭ培地（日水製薬社製）、還元脱脂乳培地など一般的に乳酸菌の培養に用いられる培地を用いた培養物だけでなく、チーズ、発酵乳、及び乳酸菌飲料などの乳製品などを例示することができるが特に限定されるものではない。さらに、得られた培養物から遠心分離、濾過操作などの方法を用いて、乳タンパク質沈殿及び菌体成分を除去することによって調製した培養上清なども用いることができる。このような培養上清は、固形分が少ない上清であるため、飲食品などへの適用範囲が広くなる。例えば、還元脱脂乳培養物を５，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離することにより、培養上清を調製することができる。
本発明に用いられる乳酸菌又はビフィズス菌は、乳酸菌又はビフィズス菌の培養の常法に従って培養することができる。培養培地は、乳培地又は乳成分を含む培地、乳培地又は乳成分を含まない半合成培地など種々の培地を用いることができる。このような培地としては、還元脱脂乳培地などを例示することができる。得られた培養物から遠心分離などの集菌手段によって分離された菌体を、そのまま本発明の有効成分として用いることができる。濃縮、乾燥、又は凍結乾燥などした菌体を用いることもできる。菌体は、加熱乾燥などによる死菌体でもよい。菌体として純粋に分離されたものだけでなく、培養物、懸濁物、又はその他の菌体含有物、並びに菌体を酵素又は物理的手段を用いて処理した細胞質又は細胞壁画分も用いることができる。培養物などの形態としては、合成培地であるＭＲＳ培地（ＤＩＦＣＯ社製）、Ｍ１７培地（ＤＩＦＣＯ社製）、１％グルコース含有ＧＡＭ培地（日水製薬社製）、還元脱脂乳培地など一般的に乳酸菌の培養に用いられる培地を用いた培養物だけでなく、チーズ、発酵乳、及び乳酸菌飲料などの乳製品などを例示することができるが特に限定されるものではない。さらに、得られた培養物から遠心分離、濾過操作などの方法を用いて、乳タンパク質沈殿及び菌体成分を除去することによって調製した培養上清なども用いることができる。このような培養上清は、固形分が少ない上清であるため、飲食品などへの適用範囲が広くなる。例えば、還元脱脂乳培養物を５，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離することにより、培養上清を調製することができる。
【0012】
（新規乳酸菌株又は新規ビフィズス菌株）
本発明は、新規乳酸菌株又は新規ビフィズス菌株に関するものである。これらの新規乳酸菌株又は新規ビフィズス菌株とは、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス ＳＢＴ００５６株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７３）、ラクトバチルス・ヘルベティカス ＳＢＴ２１９２Ａ株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７７）、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ０６２５株（ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０３０７８）、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ２４８３株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０８１）、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ１２２３株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３００３）、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ１５５４株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７９）、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ２３９７株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０８０）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ ＳＢＴ１０５３５株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７１）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ ＳＢＴ１０５６１株（ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０３０７２）、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス ＳＢＴ１０５４９株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７０）である。以下、同乳酸菌株又はビフィズス菌株を「本発明の乳酸菌又はビフィズス菌」、「本発明の乳酸菌株又はビフィズス菌株」、又は単にＳＢＴ００５６株、ＳＢＴ２１９２Ａ株、ＳＢＴ０６２５株、ＳＢＴ２４８３株、ＳＢＴ１２２３株、ＳＢＴ１５５４株、ＳＢＴ２３９７株、ＳＢＴ１０５３５株、ＳＢＴ１０５６１株、ＳＢＴ１０５４９株と記載することがある。
これらの乳酸菌株のうち、ＳＢＴ１２２３株はＮＩＴＥ Ｐ－０３００３の受託番号で、２０１９年７月８日に、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（郵便番号２９２－０８１８ 千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室）に寄託されている。それ以外の菌株は、２０１９年１１月２５日に、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（郵便番号２９２－０８１８ 千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室）に、ＳＢＴ００５６株はＮＩＴＥ Ｐ－０３０７３、ＳＢＴ２１９２Ａ株はＮＩＴＥ Ｐ－０３０７７、ＳＢＴ０６２５株はＮＩＴＥ ＡＢＰ－０３０７８、ＳＢＴ２４８３株はＮＩＴＥ Ｐ－０３０８１、ＳＢＴ１５５４株はＮＩＴＥ Ｐ－０３０７９、ＳＢＴ２３９７株はＮＩＴＥ Ｐ－０３０８０、ＳＢＴ１０５３５株はＮＩＴＥ Ｐ－０３０７１、ＳＢＴ１０５６１株はＮＩＴＥ ＡＢＰ－０３０７２、ＳＢＴ１０５４９株はＮＩＴＥ Ｐ－０３０７０の受託番号で、それぞれ寄託されている。
本発明の乳酸菌又はビフィズス菌は、上記寄託乳酸菌株又はビフィズス菌株に制限されず、これらの寄託乳酸菌株又はビフィズス菌株と実質的に同等の乳酸菌株又はビフィズス菌株であってもよい。実質的に同等の乳酸菌株又はビフィズス菌株とは、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス、ラクトバチルス・ヘルベティカス、ラクトバチルス・ガセリ、ラクトバチルス・ロイテリ、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・アドレセンティスに属する乳酸菌株又はビフィズス菌株であって、寄託乳酸菌株又はビフィズス菌株と同程度の高い骨強化作用を有する乳酸菌株又はビフィズス菌株を言う。「寄託乳酸菌株又はビフィズス菌株と同程度の高い骨強化作用を有する乳酸菌株又はビフィズス菌株」とは、例えば、以下の手順１）～３）により測定した骨芽細胞増殖促進効果又は、手順４）～６）により測定した骨吸収抑制効果が、各々の寄託乳酸菌株又はビフィズス菌株における骨芽細胞増殖促進効果又は骨吸収抑制効果と有意差がない乳酸菌株又はビフィズス菌株を意味する。
（骨芽細胞増殖促進効果の評価方法）
１）株化骨芽細胞（ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１）を９６穴の平板細胞培養プレートに４，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになるように播種し、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清を含むα－ＭＥＭ培地で２４時間培養する。
２）培地を全て除いた後、ウシ胎児血清を含まないα－ＭＥＭ培地に交換し、各種乳酸菌体又はビフィズス菌体を５μｇ／ｍｌの最終濃度となるよう培地に添加して、さらに２４時間培養する。
３）Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｋｉｔ（ＧＥヘルスケア社製）付属のブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）を添加し２時間培養する。その後、ペルオキシダーゼ標識抗ＢｒｄＵ抗体と反応させる。そして、基質である３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジンを添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定する。
（骨吸収抑制効果の評価方法）
４）５日齢のウサギの脛骨及び大腿骨を摘出し、軟組織を除去する。その後、５％（ｖ／ｖ）ＦＢＳを含むα－ＭＥＭ培地中で機械的に細切した破骨細胞を含む全骨髄細胞を５００，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになるように結晶性リン酸カルシウムプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製）のウェル上に撒き込み、培養する。
５）培養２時間後に、新しい培地へと交換する。その後、各種乳酸菌体又はビフィズス菌体を１００μｇ／ｍｌの最終濃度となるよう培地に添加して７２時間培養する。
６）培地を全て除き、５％次亜塩素酸ナトリウム溶液を添加することで細胞を取り除く。その後、リン酸カルシウムプレートのウェル上にできた骨吸収窩（ピット）を実体顕微鏡下で撮影する。画像解析によってその面積を測定することにより破骨細胞による骨吸収を抑制する効果を調べる（瀬野悍二ら，研究テーマ別動物培養細胞マニュアル、ｐｐ．１９９－２００、１９９３）。
本発明において、「骨強化」とは、骨芽細胞の増殖を促進することにより、及び／又は、破骨細胞の分化を抑制する又は破骨細胞による骨吸収を抑制することにより、骨量、骨密度、及び骨質のうちの少なくとも１つを増加させることを意味する。「骨強化」は、インビトロにおける効果であってもよく、インビボにおける効果であってもよい。インビボにおける効果である場合、「骨強化」は、骨芽細胞の増殖を促進すること、及び／又は、骨吸収を抑制することを意味することができる。
本発明の乳酸菌又はビフィズス菌は、前記手順１）～３）により、骨芽細胞増殖促進効果の評価を行った場合に、好ましくは、測定した細胞増殖促進効果が、乳酸菌株又はビフィズス菌株を添加していないコントロールにおける骨芽細胞増殖促進効果よりも１．５倍以上、さらに好ましくは２倍以上大きいものである。なお、前記「測定した細胞増殖促進効果」とは、前記手順１）～３）の後に測定した吸光度の値の大きさを意味する。
また、本発明の乳酸菌又はビフィズス菌は、前記手順４）～６）により、骨吸収抑制効果の評価を行った場合に、好ましくは、測定した骨吸収抑制効果が、乳酸菌株又はビフィズス菌株を添加していないコントロールにおける骨吸収抑制効果よりも２倍以上、さらに好ましくは４倍以上、より好ましくは６倍以上大きいものである。なお、前記「測定した骨吸収抑制効果」とは、前記手順４）～６）の後に測定したピットの面積を意味する。ピットの面積が小さいほど、骨吸収抑制効果が大きい。例えば後述の試験例２において、ＰＢＳに懸濁したラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ０６２５株を添加した場合、対照（ＰＢＳのみ）と比較して、リン酸カルシウムプレートのウェル上にできたピットの面積が１０分の１以下である。
なお、上記の評価方法に限定されず、当業者に公知である骨芽細胞増殖促進効果の評価方法又は骨吸収抑制効果の評価方法を採用して、骨芽細胞増殖促進効果又は骨吸収抑制効果を評価可能であることは言うまでもない。
また、実質的に同等の乳酸菌株又はビフィズス菌株は、さらに、その１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列が、上記寄託乳酸菌株又はビフィズス菌株の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列と９８％以上、好ましくは９９％以上、より好ましくは１００％の相同性を有し、且つ、好ましくは上記寄託乳酸菌株又はビフィズス菌株と同一の菌学的性質を有する。さらに、本発明の乳酸菌又はビフィズス菌は、本発明の効果が損なわれない限り、寄託乳酸菌株もしくはビフィズス菌株、又はそれと実質的に同等の乳酸菌株もしくはビフィズス菌株から、変異処理、遺伝子組み換え、又は自然変異株の選択等によって育種された乳酸菌株又はビフィズス菌株であってもよい。
本発明は、新規乳酸菌株又は新規ビフィズス菌株に関するものである。これらの新規乳酸菌株又は新規ビフィズス菌株とは、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス ＳＢＴ００５６株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７３）、ラクトバチルス・ヘルベティカス ＳＢＴ２１９２Ａ株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７７）、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ０６２５株（ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０３０７８）、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ２４８３株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０８１）、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ１２２３株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３００３）、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ１５５４株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７９）、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ２３９７株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０８０）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ ＳＢＴ１０５３５株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７１）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ ＳＢＴ１０５６１株（ＮＩＴＥ ＡＢＰ－０３０７２）、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス ＳＢＴ１０５４９株（ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７０）である。以下、同乳酸菌株又はビフィズス菌株を「本発明の乳酸菌又はビフィズス菌」、「本発明の乳酸菌株又はビフィズス菌株」、又は単にＳＢＴ００５６株、ＳＢＴ２１９２Ａ株、ＳＢＴ０６２５株、ＳＢＴ２４８３株、ＳＢＴ１２２３株、ＳＢＴ１５５４株、ＳＢＴ２３９７株、ＳＢＴ１０５３５株、ＳＢＴ１０５６１株、ＳＢＴ１０５４９株と記載することがある。
これらの乳酸菌株のうち、ＳＢＴ１２２３株はＮＩＴＥ Ｐ－０３００３の受託番号で、２０１９年７月８日に、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（郵便番号２９２－０８１８ 千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室）に寄託されている。それ以外の菌株は、２０１９年１１月２５日に、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（郵便番号２９２－０８１８ 千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室）に、ＳＢＴ００５６株はＮＩＴＥ Ｐ－０３０７３、ＳＢＴ２１９２Ａ株はＮＩＴＥ Ｐ－０３０７７、ＳＢＴ０６２５株はＮＩＴＥ ＡＢＰ－０３０７８、ＳＢＴ２４８３株はＮＩＴＥ Ｐ－０３０８１、ＳＢＴ１５５４株はＮＩＴＥ Ｐ－０３０７９、ＳＢＴ２３９７株はＮＩＴＥ Ｐ－０３０８０、ＳＢＴ１０５３５株はＮＩＴＥ Ｐ－０３０７１、ＳＢＴ１０５６１株はＮＩＴＥ ＡＢＰ－０３０７２、ＳＢＴ１０５４９株はＮＩＴＥ Ｐ－０３０７０の受託番号で、それぞれ寄託されている。
本発明の乳酸菌又はビフィズス菌は、上記寄託乳酸菌株又はビフィズス菌株に制限されず、これらの寄託乳酸菌株又はビフィズス菌株と実質的に同等の乳酸菌株又はビフィズス菌株であってもよい。実質的に同等の乳酸菌株又はビフィズス菌株とは、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス、ラクトバチルス・ヘルベティカス、ラクトバチルス・ガセリ、ラクトバチルス・ロイテリ、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・アドレセンティスに属する乳酸菌株又はビフィズス菌株であって、寄託乳酸菌株又はビフィズス菌株と同程度の高い骨強化作用を有する乳酸菌株又はビフィズス菌株を言う。「寄託乳酸菌株又はビフィズス菌株と同程度の高い骨強化作用を有する乳酸菌株又はビフィズス菌株」とは、例えば、以下の手順１）～３）により測定した骨芽細胞増殖促進効果又は、手順４）～６）により測定した骨吸収抑制効果が、各々の寄託乳酸菌株又はビフィズス菌株における骨芽細胞増殖促進効果又は骨吸収抑制効果と有意差がない乳酸菌株又はビフィズス菌株を意味する。
（骨芽細胞増殖促進効果の評価方法）
１）株化骨芽細胞（ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１）を９６穴の平板細胞培養プレートに４，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになるように播種し、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清を含むα－ＭＥＭ培地で２４時間培養する。
２）培地を全て除いた後、ウシ胎児血清を含まないα－ＭＥＭ培地に交換し、各種乳酸菌体又はビフィズス菌体を５μｇ／ｍｌの最終濃度となるよう培地に添加して、さらに２４時間培養する。
３）Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｋｉｔ（ＧＥヘルスケア社製）付属のブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）を添加し２時間培養する。その後、ペルオキシダーゼ標識抗ＢｒｄＵ抗体と反応させる。そして、基質である３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジンを添加し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定する。
（骨吸収抑制効果の評価方法）
４）５日齢のウサギの脛骨及び大腿骨を摘出し、軟組織を除去する。その後、５％（ｖ／ｖ）ＦＢＳを含むα－ＭＥＭ培地中で機械的に細切した破骨細胞を含む全骨髄細胞を５００，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになるように結晶性リン酸カルシウムプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製）のウェル上に撒き込み、培養する。
５）培養２時間後に、新しい培地へと交換する。その後、各種乳酸菌体又はビフィズス菌体を１００μｇ／ｍｌの最終濃度となるよう培地に添加して７２時間培養する。
６）培地を全て除き、５％次亜塩素酸ナトリウム溶液を添加することで細胞を取り除く。その後、リン酸カルシウムプレートのウェル上にできた骨吸収窩（ピット）を実体顕微鏡下で撮影する。画像解析によってその面積を測定することにより破骨細胞による骨吸収を抑制する効果を調べる（瀬野悍二ら，研究テーマ別動物培養細胞マニュアル、ｐｐ．１９９－２００、１９９３）。
本発明において、「骨強化」とは、骨芽細胞の増殖を促進することにより、及び／又は、破骨細胞の分化を抑制する又は破骨細胞による骨吸収を抑制することにより、骨量、骨密度、及び骨質のうちの少なくとも１つを増加させることを意味する。「骨強化」は、インビトロにおける効果であってもよく、インビボにおける効果であってもよい。インビボにおける効果である場合、「骨強化」は、骨芽細胞の増殖を促進すること、及び／又は、骨吸収を抑制することを意味することができる。
本発明の乳酸菌又はビフィズス菌は、前記手順１）～３）により、骨芽細胞増殖促進効果の評価を行った場合に、好ましくは、測定した細胞増殖促進効果が、乳酸菌株又はビフィズス菌株を添加していないコントロールにおける骨芽細胞増殖促進効果よりも１．５倍以上、さらに好ましくは２倍以上大きいものである。なお、前記「測定した細胞増殖促進効果」とは、前記手順１）～３）の後に測定した吸光度の値の大きさを意味する。
また、本発明の乳酸菌又はビフィズス菌は、前記手順４）～６）により、骨吸収抑制効果の評価を行った場合に、好ましくは、測定した骨吸収抑制効果が、乳酸菌株又はビフィズス菌株を添加していないコントロールにおける骨吸収抑制効果よりも２倍以上、さらに好ましくは４倍以上、より好ましくは６倍以上大きいものである。なお、前記「測定した骨吸収抑制効果」とは、前記手順４）～６）の後に測定したピットの面積を意味する。ピットの面積が小さいほど、骨吸収抑制効果が大きい。例えば後述の試験例２において、ＰＢＳに懸濁したラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス ＳＢＴ０６２５株を添加した場合、対照（ＰＢＳのみ）と比較して、リン酸カルシウムプレートのウェル上にできたピットの面積が１０分の１以下である。
なお、上記の評価方法に限定されず、当業者に公知である骨芽細胞増殖促進効果の評価方法又は骨吸収抑制効果の評価方法を採用して、骨芽細胞増殖促進効果又は骨吸収抑制効果を評価可能であることは言うまでもない。
また、実質的に同等の乳酸菌株又はビフィズス菌株は、さらに、その１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列が、上記寄託乳酸菌株又はビフィズス菌株の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列と９８％以上、好ましくは９９％以上、より好ましくは１００％の相同性を有し、且つ、好ましくは上記寄託乳酸菌株又はビフィズス菌株と同一の菌学的性質を有する。さらに、本発明の乳酸菌又はビフィズス菌は、本発明の効果が損なわれない限り、寄託乳酸菌株もしくはビフィズス菌株、又はそれと実質的に同等の乳酸菌株もしくはビフィズス菌株から、変異処理、遺伝子組み換え、又は自然変異株の選択等によって育種された乳酸菌株又はビフィズス菌株であってもよい。
【0013】
（有効成分の摂取量）
本発明の乳酸菌あるいはビフィズス菌の菌体又は培養物の摂取量は、骨芽細胞の増殖を促進させる作用、あるいは、破骨細胞の分化ならびに該細胞による骨吸収を抑制する作用を介した骨強化作用を示す有効量であれば特に制限はない。したがって、製造の容易性及び好ましい１日摂取量にあわせて、摂取量を適宜調節すればよい。本発明の投与対象は特に限定されず、ヒトに対して投与することができるが、投与対象はヒト以外の動物（例えば、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ又はウサギ等）であってもよい。投与対象がヒトである場合は、２０歳未満の未成年、成人、男女、又は６５歳以上の高齢者などに投与することができる。本発明の乳酸菌又はビフィズス菌の菌体又は培養物の摂取量は、投与対象者の症状、年齢、及び性別などを考慮してそれぞれ個別に決定されるが、通常成人の場合、乳酸菌あるいはビフィズス菌の培養物などを１０～２００ｇ、あるいはその菌体を０．１～５，０００ｍｇ摂取できるように配合量などを調整すればよい。本発明の乳酸菌又はビフィズス菌の菌体又は培養物は、そのまま経口摂取してもよいが、飲食品、栄養組成物、飼料及び経口用医薬等へ配合する場合は、上記した摂取量となるように配合量を調整すればよい。このようにして摂取することにより、所望の効果を発揮することができる。
投与対象は、骨粗鬆症、骨折、リウマチ、及び関節炎などの種々の骨疾患を罹患する患者でもよく、又は罹患する恐れの高い対象でもよく、未だ罹患していないが、将来罹患する恐れのある健康な対象であってもよい。
本発明の乳酸菌あるいはビフィズス菌の菌体又は培養物の摂取量は、骨芽細胞の増殖を促進させる作用、あるいは、破骨細胞の分化ならびに該細胞による骨吸収を抑制する作用を介した骨強化作用を示す有効量であれば特に制限はない。したがって、製造の容易性及び好ましい１日摂取量にあわせて、摂取量を適宜調節すればよい。本発明の投与対象は特に限定されず、ヒトに対して投与することができるが、投与対象はヒト以外の動物（例えば、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ又はウサギ等）であってもよい。投与対象がヒトである場合は、２０歳未満の未成年、成人、男女、又は６５歳以上の高齢者などに投与することができる。本発明の乳酸菌又はビフィズス菌の菌体又は培養物の摂取量は、投与対象者の症状、年齢、及び性別などを考慮してそれぞれ個別に決定されるが、通常成人の場合、乳酸菌あるいはビフィズス菌の培養物などを１０～２００ｇ、あるいはその菌体を０．１～５，０００ｍｇ摂取できるように配合量などを調整すればよい。本発明の乳酸菌又はビフィズス菌の菌体又は培養物は、そのまま経口摂取してもよいが、飲食品、栄養組成物、飼料及び経口用医薬等へ配合する場合は、上記した摂取量となるように配合量を調整すればよい。このようにして摂取することにより、所望の効果を発揮することができる。
投与対象は、骨粗鬆症、骨折、リウマチ、及び関節炎などの種々の骨疾患を罹患する患者でもよく、又は罹患する恐れの高い対象でもよく、未だ罹患していないが、将来罹患する恐れのある健康な対象であってもよい。
【0014】
（本発明の乳酸菌あるいはビフィズス菌の飲食品及び医薬品への使用方法について）
本発明の乳酸菌あるいはビフィズス菌の菌体又は培養物は、それぞれを単独もしくは、任意の組み合わせでそのまま骨強化用組成物として使用してもよい。それに加えて、骨芽細胞の増殖を促進させる作用、あるいは、破骨細胞の分化及び該細胞による骨吸収を抑制する作用を介した骨強化作用を失わない範囲で必要に応じて常法に従い、粉末剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、又はドリンク剤等に製剤化して用いることもできる。また、そのまま又は製剤化した後に、栄養剤や粉乳、乳飲料、乳酸菌飲料、発酵乳、清涼飲料水、チーズ、マーガリン、クリーム、プリン、ゼリー、又はウエハース等の飲食品、栄養組成物、飼料及び医薬品に配合することも可能である。
本発明の乳酸菌又はビフィズス菌の菌体又は培養物は、他の飲食品、飼料及び医薬に通常含まれる安定剤や糖類、脂質、フレーバー、ビタミン、ミネラル、フラボノイド、ポリフェノール等の原材料とともに使用することができる。
本発明の乳酸菌あるいはビフィズス菌の菌体又は培養物は、それぞれを単独もしくは、任意の組み合わせでそのまま骨強化用組成物として使用してもよい。それに加えて、骨芽細胞の増殖を促進させる作用、あるいは、破骨細胞の分化及び該細胞による骨吸収を抑制する作用を介した骨強化作用を失わない範囲で必要に応じて常法に従い、粉末剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、又はドリンク剤等に製剤化して用いることもできる。また、そのまま又は製剤化した後に、栄養剤や粉乳、乳飲料、乳酸菌飲料、発酵乳、清涼飲料水、チーズ、マーガリン、クリーム、プリン、ゼリー、又はウエハース等の飲食品、栄養組成物、飼料及び医薬品に配合することも可能である。
本発明の乳酸菌又はビフィズス菌の菌体又は培養物は、他の飲食品、飼料及び医薬に通常含まれる安定剤や糖類、脂質、フレーバー、ビタミン、ミネラル、フラボノイド、ポリフェノール等の原材料とともに使用することができる。
【0015】
製剤化に際しては、通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、及び滑沢剤等の希釈剤又は賦形剤を用いることができる。賦形剤としては、例えばショ糖、乳糖、デンプン、結晶性セルロース、マンニット、軽質無水珪酸、アルミン酸マグネシウム、合成珪酸アルミニウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸水素カルシウム、及びカルボキシルメチルセルロースカルシウム等の１種又は２種以上を組み合わせて加えることができる。
また、本発明の飲食品は、機能性表示食品、特定保健用食品、栄養機能食品、又は美容用食品として使用することも可能である。
また、本発明の飲食品は、機能性表示食品、特定保健用食品、栄養機能食品、又は美容用食品として使用することも可能である。
【0016】
以下に実施例、試験例を示し、本発明について詳細に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。なお、本明細書において、特に説明のない限り、％は質量％を示す。
【実施例】
【0017】
（実施例１）
ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＳＢＴ００５６株、ＳＢＴ２１１５株、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１６１株、ＳＢＴ１１３８０株、２１９２Ａ株、又はラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５４株、ＳＢＴ１８４８株、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）ＳＢＴ１００１０株を、滅菌したＭＲＳ ｂｒｏｔｈ（ＤＩＦＣＯ社製）にて、それぞれの菌株毎に、３７℃、１６時間の培養を３代以上行って賦活させた。その培養物を同培地にそれぞれ３％（ｖ／ｖ）接種し、３７℃で１６時間培養した。その後、遠心分離によりそれぞれの菌体を分離した。菌体は滅菌生理食塩水で２回、超純水で１回洗浄した後、凍結乾燥した。上記の操作により、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＳＢＴ００５６株、ＳＢＴ２１１５株、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１６１株、ＳＢＴ１１３８０株、２１９２Ａ株、又はラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５４株、ＳＢＴ１８４８株、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）ＳＢＴ１００１０株の菌体を得た（実施例品１）。このようにして得られたラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＳＢＴ００５６株、ＳＢＴ２１１５株、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１６１株、ＳＢＴ１１３８０株、２１９２Ａ株、又はラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５４株、及びＳＢＴ１８４８株、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）ＳＢＴ１００１０株の菌体は、そのまま本発明の骨強化作用を有する乳酸菌として使用できる。
ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＳＢＴ００５６株、ＳＢＴ２１１５株、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１６１株、ＳＢＴ１１３８０株、２１９２Ａ株、又はラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５４株、ＳＢＴ１８４８株、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）ＳＢＴ１００１０株を、滅菌したＭＲＳ ｂｒｏｔｈ（ＤＩＦＣＯ社製）にて、それぞれの菌株毎に、３７℃、１６時間の培養を３代以上行って賦活させた。その培養物を同培地にそれぞれ３％（ｖ／ｖ）接種し、３７℃で１６時間培養した。その後、遠心分離によりそれぞれの菌体を分離した。菌体は滅菌生理食塩水で２回、超純水で１回洗浄した後、凍結乾燥した。上記の操作により、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＳＢＴ００５６株、ＳＢＴ２１１５株、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１６１株、ＳＢＴ１１３８０株、２１９２Ａ株、又はラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５４株、ＳＢＴ１８４８株、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）ＳＢＴ１００１０株の菌体を得た（実施例品１）。このようにして得られたラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＳＢＴ００５６株、ＳＢＴ２１１５株、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１６１株、ＳＢＴ１１３８０株、２１９２Ａ株、又はラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５４株、及びＳＢＴ１８４８株、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）ＳＢＴ１００１０株の菌体は、そのまま本発明の骨強化作用を有する乳酸菌として使用できる。
【0018】
（実施例２）
ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株、ＳＢＴ２４８３株、ＳＢＴ１２２３株、ＳＢＴ１５５４株、ＳＢＴ２３９７株を、滅菌した０．５％ラクトース含有Ｍ１７培地（ＤＩＦＣＯ社製）にて、それぞれの菌株毎に、３０℃、１６時間の培養を３代以上行って賦活させた。その培養物を同培地にそれぞれ３％（ｖ／ｖ）接種し、３０℃で１６時間培養した。その後、遠心分離によりそれぞれの菌体を分離した。菌体は滅菌生理食塩水で２回、超純水で１回洗浄した後、凍結乾燥した。上記の操作により、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株、ＳＢＴ２４８３株、ＳＢＴ１２２３株、ＳＢＴ１５５４株、ＳＢＴ２３９７株の菌体を得た（実施例品２）。このようにして得られたラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株、ＳＢＴ２４８３株、ＳＢＴ１２２３株、ＳＢＴ１５５４株、ＳＢＴ２３９７株の菌体は、そのまま本発明の骨強化作用を有する乳酸菌として使用できる。
ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株、ＳＢＴ２４８３株、ＳＢＴ１２２３株、ＳＢＴ１５５４株、ＳＢＴ２３９７株を、滅菌した０．５％ラクトース含有Ｍ１７培地（ＤＩＦＣＯ社製）にて、それぞれの菌株毎に、３０℃、１６時間の培養を３代以上行って賦活させた。その培養物を同培地にそれぞれ３％（ｖ／ｖ）接種し、３０℃で１６時間培養した。その後、遠心分離によりそれぞれの菌体を分離した。菌体は滅菌生理食塩水で２回、超純水で１回洗浄した後、凍結乾燥した。上記の操作により、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株、ＳＢＴ２４８３株、ＳＢＴ１２２３株、ＳＢＴ１５５４株、ＳＢＴ２３９７株の菌体を得た（実施例品２）。このようにして得られたラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株、ＳＢＴ２４８３株、ＳＢＴ１２２３株、ＳＢＴ１５５４株、ＳＢＴ２３９７株の菌体は、そのまま本発明の骨強化作用を有する乳酸菌として使用できる。
【0019】
（実施例３）
ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）ＳＢＴ１０５３５株、ＳＢＴ１０５６１株、又はビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）ＳＢＴ１０５４９株を、滅菌した１％グルコース含有ＧＡＭ培地（日水製薬社製）にて、それぞれの菌株毎に、３０℃、１６時間の培養を３代以上行って賦活させた。その培養物を同培地にそれぞれ３％（ｖ／ｖ）接種し、３７℃で１６時間培養した。その後、遠心分離によりそれぞれの菌体を分離した。菌体は滅菌生理食塩水で２回、超純水で１回洗浄した後、凍結乾燥した。上記の操作により、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）ＳＢＴ１０５３５株、ＳＢＴ１０５６１株、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）ＳＢＴ１０５４９株の菌体を得た（実施例品３）。このようにして得られたビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）ＳＢＴ１０５３５株、ＳＢＴ１０５６１株、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）ＳＢＴ１０５４９株の菌体は、そのまま本発明の骨強化作用を有するビフィズス菌として使用できる。
ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）ＳＢＴ１０５３５株、ＳＢＴ１０５６１株、又はビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）ＳＢＴ１０５４９株を、滅菌した１％グルコース含有ＧＡＭ培地（日水製薬社製）にて、それぞれの菌株毎に、３０℃、１６時間の培養を３代以上行って賦活させた。その培養物を同培地にそれぞれ３％（ｖ／ｖ）接種し、３７℃で１６時間培養した。その後、遠心分離によりそれぞれの菌体を分離した。菌体は滅菌生理食塩水で２回、超純水で１回洗浄した後、凍結乾燥した。上記の操作により、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）ＳＢＴ１０５３５株、ＳＢＴ１０５６１株、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）ＳＢＴ１０５４９株の菌体を得た（実施例品３）。このようにして得られたビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）ＳＢＴ１０５３５株、ＳＢＴ１０５６１株、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）ＳＢＴ１０５４９株の菌体は、そのまま本発明の骨強化作用を有するビフィズス菌として使用できる。
【0020】
（比較例１）
雪印メグミルク株式会社保有のロイコノストック・メセンテロイデス・サブスピーシーズ・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｕｂｓｐ． ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）Ｎｏ．１株を、滅菌したＭＲＳ ｂｒｏｔｈ（ＤＩＦＣＯ社製）にて、３７℃、１６時間の培養を３代以上行って賦活させた。これを同培地にそれぞれ３％（ｖ／ｖ）接種し、３７℃で１６時間培養した。その後、遠心分離によりそれぞれの菌体を分離した。菌体は滅菌生理食塩水で２回、超純水で１回洗浄した後、凍結乾燥した。上記の操作により、ロイコノストック・メセンテロイデス・サブスピーシーズ・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｕｂｓｐ． ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）Ｎｏ．１株の菌体を得た（比較例品１）。
雪印メグミルク株式会社保有のロイコノストック・メセンテロイデス・サブスピーシーズ・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｕｂｓｐ． ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）Ｎｏ．１株を、滅菌したＭＲＳ ｂｒｏｔｈ（ＤＩＦＣＯ社製）にて、３７℃、１６時間の培養を３代以上行って賦活させた。これを同培地にそれぞれ３％（ｖ／ｖ）接種し、３７℃で１６時間培養した。その後、遠心分離によりそれぞれの菌体を分離した。菌体は滅菌生理食塩水で２回、超純水で１回洗浄した後、凍結乾燥した。上記の操作により、ロイコノストック・メセンテロイデス・サブスピーシーズ・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｕｂｓｐ． ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）Ｎｏ．１株の菌体を得た（比較例品１）。
【0021】
（比較例２）
雪印メグミルク株式会社保有のストレプトコッカス・ミティス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｉｔｉｓ）Ｎｏ．１株を、滅菌した０．５％ラクトース含有Ｍ１７培地（ＤＩＦＣＯ社製）にて、３０℃、１６時間の培養を３代以上行って賦活させた。これを同培地にそれぞれ３％（ｖ／ｖ）接種し、３７℃で１６時間培養した。その後、遠心分離によりそれぞれの菌体を分離した。菌体は滅菌生理食塩水で２回、超純水で１回洗浄した後、凍結乾燥した。上記の操作により、ストレプトコッカス・ミティス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｉｔｉｓ）Ｎｏ．１株の菌体を得た（比較例品２）。
雪印メグミルク株式会社保有のストレプトコッカス・ミティス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｉｔｉｓ）Ｎｏ．１株を、滅菌した０．５％ラクトース含有Ｍ１７培地（ＤＩＦＣＯ社製）にて、３０℃、１６時間の培養を３代以上行って賦活させた。これを同培地にそれぞれ３％（ｖ／ｖ）接種し、３７℃で１６時間培養した。その後、遠心分離によりそれぞれの菌体を分離した。菌体は滅菌生理食塩水で２回、超純水で１回洗浄した後、凍結乾燥した。上記の操作により、ストレプトコッカス・ミティス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｉｔｉｓ）Ｎｏ．１株の菌体を得た（比較例品２）。
【0022】
（試験例１）
実施例品１の、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＳＢＴ００５６株、ＳＢＴ２１１５株、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１６１株、ＳＢＴ１１３８０株、２１９２Ａ株、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５４株、ＳＢＴ１８４８株、実施例品２の、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株、実施例品３の、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）ＳＢＴ１０５３５株、ＳＢＴ１０５６１株の菌体の骨芽細胞増殖促進効果を調べた。また、比較のために、比較例品１のロイコノストック・メセンテロイデス・サブスピーシーズ・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｕｂｓｐ． ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）Ｎｏ．１株、比較例品２のストレプトコッカス・ミティス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｉｔｉｓ）Ｎｏ．１株の菌体の骨芽細胞増殖促進効果を調べた。株化骨芽細胞（ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１）を９６穴の平板細胞培養プレートに４，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになるように播種し、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清を含むα－ＭＥＭ培地で２４時間培養した。培地を全て除いた後、ウシ胎児血清を含まないα－ＭＥＭ培地に交換した。その後、本発明の菌体を５μｇ／ｍｌの最終濃度となるよう培地に添加して、さらに２４時間培養した。Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｋｉｔ（ＧＥヘルスケア社製）付属のブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）を添加し２時間培養した。その後、ペルオキシダーゼ標識抗ＢｒｄＵ抗体と反応させ、基質である３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジンを添加した。その後、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。上記操作を行うことで、細胞内に取り込まれたＢｒｄＵ量を測定することにより骨芽細胞増殖促進効果を求めた。その結果を表１に示す。
実施例品１の、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＳＢＴ００５６株、ＳＢＴ２１１５株、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１６１株、ＳＢＴ１１３８０株、２１９２Ａ株、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５４株、ＳＢＴ１８４８株、実施例品２の、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株、実施例品３の、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）ＳＢＴ１０５３５株、ＳＢＴ１０５６１株の菌体の骨芽細胞増殖促進効果を調べた。また、比較のために、比較例品１のロイコノストック・メセンテロイデス・サブスピーシーズ・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｕｂｓｐ． ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）Ｎｏ．１株、比較例品２のストレプトコッカス・ミティス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｉｔｉｓ）Ｎｏ．１株の菌体の骨芽細胞増殖促進効果を調べた。株化骨芽細胞（ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１）を９６穴の平板細胞培養プレートに４，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになるように播種し、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清を含むα－ＭＥＭ培地で２４時間培養した。培地を全て除いた後、ウシ胎児血清を含まないα－ＭＥＭ培地に交換した。その後、本発明の菌体を５μｇ／ｍｌの最終濃度となるよう培地に添加して、さらに２４時間培養した。Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｋｉｔ（ＧＥヘルスケア社製）付属のブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）を添加し２時間培養した。その後、ペルオキシダーゼ標識抗ＢｒｄＵ抗体と反応させ、基質である３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジンを添加した。その後、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。上記操作を行うことで、細胞内に取り込まれたＢｒｄＵ量を測定することにより骨芽細胞増殖促進効果を求めた。その結果を表１に示す。
【0023】
【表1】
【0024】
この結果、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＳＢＴ００５６株、ＳＢＴ２１１５株、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１６１株、ＳＢＴ１１３８０株、２１９２Ａ株、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５４株、ＳＢＴ１８４８株、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）ＳＢＴ１０５３５株、ＳＢＴ１０５６１株の菌体を添加した場合は、いずれも対照（ＰＢＳ）に比べ、有意に骨芽細胞の増殖が促進した。この結果から、本発明のラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＳＢＴ００５６株、ＳＢＴ２１１５株、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１６１株、ＳＢＴ１１３８０株、２１９２Ａ株、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５４株、ＳＢＴ１８４８株、実施例品２の、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株、実施例品３の、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）ＳＢＴ１０５３５株、ＳＢＴ１０５６１株の菌体には骨芽細胞の増殖促進作用があることがわかった。一方、比較例品１のロイコノストック・メセンテロイデス・サブスピーシーズ・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｕｂｓｐ． ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）Ｎｏ．１株、比較例品２のストレプトコッカス・ミティス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｉｔｉｓ）Ｎｏ．１株の菌体は、骨芽細胞の増殖促進作用を示さなかった。
【0025】
（試験例２）
実施例品１の、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）ＳＢＴ１００１０株、実施例品２の、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株、ＳＢＴ２４８３株、ＳＢＴ１２２３株、ＳＢＴ１５５４株、ＳＢＴ２３９７株、実施例品３の、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）ＳＢＴ１０５４９株の菌体の骨吸収抑制効果を調べた。また、比較のために、比較例品１のロイコノストック・メセンテロイデス・サブスピーシーズ・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｕｂｓｐ． ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）Ｎｏ．１株、比較例品２のストレプトコッカス・ミティス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｉｔｉｓ）Ｎｏ．１株の菌体の骨吸収の抑制効果を調べた。５日齢のウサギの脛骨及び大腿骨を摘出し、軟組織を除去した。その後、５％（ｖ／ｖ）ＦＢＳを含むα－ＭＥＭ培地中で機械的に細切した破骨細胞を含む全骨髄細胞を、５００，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになるように結晶性リン酸カルシウムプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製）のウェル上に撒き込み、培養した。培養２時間後に、新しい培地へと交換した後、本発明の菌体を１００μｇ／ｍｌの最終濃度となるよう培地に添加して７２時間培養した。そして、５％次亜塩素酸ナトリウム溶液を添加することで細胞を取り除いた後、リン酸カルシウムプレートのウェル上にできた骨吸収窩（ピット）を実体顕微鏡下で撮影した。画像解析によってその面積を測定することにより破骨細胞による骨吸収を抑制する効果を調べた（瀬野悍二ら，研究テーマ別動物培養細胞マニュアル、ｐｐ．１９９－２００、１９９３）。その結果を表２に示す。
実施例品１の、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）ＳＢＴ１００１０株、実施例品２の、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株、ＳＢＴ２４８３株、ＳＢＴ１２２３株、ＳＢＴ１５５４株、ＳＢＴ２３９７株、実施例品３の、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）ＳＢＴ１０５４９株の菌体の骨吸収抑制効果を調べた。また、比較のために、比較例品１のロイコノストック・メセンテロイデス・サブスピーシーズ・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｕｂｓｐ． ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）Ｎｏ．１株、比較例品２のストレプトコッカス・ミティス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｉｔｉｓ）Ｎｏ．１株の菌体の骨吸収の抑制効果を調べた。５日齢のウサギの脛骨及び大腿骨を摘出し、軟組織を除去した。その後、５％（ｖ／ｖ）ＦＢＳを含むα－ＭＥＭ培地中で機械的に細切した破骨細胞を含む全骨髄細胞を、５００，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになるように結晶性リン酸カルシウムプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製）のウェル上に撒き込み、培養した。培養２時間後に、新しい培地へと交換した後、本発明の菌体を１００μｇ／ｍｌの最終濃度となるよう培地に添加して７２時間培養した。そして、５％次亜塩素酸ナトリウム溶液を添加することで細胞を取り除いた後、リン酸カルシウムプレートのウェル上にできた骨吸収窩（ピット）を実体顕微鏡下で撮影した。画像解析によってその面積を測定することにより破骨細胞による骨吸収を抑制する効果を調べた（瀬野悍二ら，研究テーマ別動物培養細胞マニュアル、ｐｐ．１９９－２００、１９９３）。その結果を表２に示す。
【0026】
【表2】
【0027】
この結果、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）ＳＢＴ１００１０株、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株、ＳＢＴ２４８３株、ＳＢＴ１２２３株、ＳＢＴ１５５４株、ＳＢＴ２３９７株、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）ＳＢＴ１０５４９株の菌体を添加した場合は、いずれも対照（ＰＢＳ）に比べ、ピットの面積が有意に減少した。この結果から、本発明のラクトバチルス・ロイテリ（
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）ＳＢＴ１００１０株、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株、ＳＢＴ２４８３株、ＳＢＴ１２２３株、ＳＢＴ１５５４株、ＳＢＴ２３９７株、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）ＳＢＴ１０５４９株の菌体には破骨細胞による骨吸収を抑制する作用があることがわかった。一方、比較例品１のロイコノストック・メセンテロイデス・サブスピーシーズ・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｕｂｓｐ． ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）Ｎｏ．１株、比較例品２のストレプトコッカス・ミティス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｉｔｉｓ）Ｎｏ．１株の菌体は、破骨細胞による骨吸収の抑制作用を示さなかった。
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）ＳＢＴ１００１０株、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株、ＳＢＴ２４８３株、ＳＢＴ１２２３株、ＳＢＴ１５５４株、ＳＢＴ２３９７株、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）ＳＢＴ１０５４９株の菌体には破骨細胞による骨吸収を抑制する作用があることがわかった。一方、比較例品１のロイコノストック・メセンテロイデス・サブスピーシーズ・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｕｂｓｐ． ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）Ｎｏ．１株、比較例品２のストレプトコッカス・ミティス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｉｔｉｓ）Ｎｏ．１株の菌体は、破骨細胞による骨吸収の抑制作用を示さなかった。
【0028】
（実施例４）
（骨強化用カプセル剤の調製）
表３に示す配合で原材料を混合後、常法により造粒し、カプセルに充填して、本発明の骨強化用カプセル剤を製造した。
（骨強化用カプセル剤の調製）
表３に示す配合で原材料を混合後、常法により造粒し、カプセルに充填して、本発明の骨強化用カプセル剤を製造した。
【0029】
【表3】
【0030】
(実施例５）
（骨強化用錠剤の調製）
表４に示す配合で原材料を混合後、常法により１ｇに成型、打錠して本発明の骨強化用錠剤を製造した。
（骨強化用錠剤の調製）
表４に示す配合で原材料を混合後、常法により１ｇに成型、打錠して本発明の骨強化用錠剤を製造した。
【0031】
【表4】
【0032】
(実施例６）
（骨強化用液状栄養組成物の調製）
ＳＢＴ１０５６１株の菌体（実施例品３）２５ｇを４９７５ｇの脱イオン水に溶解し、４０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合して２５ｇ／５ｋｇのＳＢＴ１０５６１株の菌体溶液を得た。このＳＢＴ１０５６１株溶液５．０ｋｇに、カゼイン５．０ｋｇ、大豆タンパク質５．０ｋｇ、魚油１．０ｋｇ、シソ油３．０ｋｇ、デキストリン１７．０ｋｇ、ミネラル混合物６．０ｋｇ、ビタミン混合物１．９５ｋｇ、乳化剤２．０ｋｇ、安定剤４．０ｋｇ、香料０．０５ｋｇを配合し、２００ｍｌのレトルトパウチに充填し、レトルト殺菌機(第１種圧力容器、ＴＹＰＥ: ＲＣＳ－４ＣＲＴＧＮ、日阪製作所製)で１２１℃、２０分間殺菌して、本発明の骨強化用液状栄養組成物５０ｋｇを製造した。なお、本発明の骨強化用液状栄養組成物２００ｇには、ＳＢＴ１０５６１株の菌体が１００ｍｇ含まれていた。
（骨強化用液状栄養組成物の調製）
ＳＢＴ１０５６１株の菌体（実施例品３）２５ｇを４９７５ｇの脱イオン水に溶解し、４０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合して２５ｇ／５ｋｇのＳＢＴ１０５６１株の菌体溶液を得た。このＳＢＴ１０５６１株溶液５．０ｋｇに、カゼイン５．０ｋｇ、大豆タンパク質５．０ｋｇ、魚油１．０ｋｇ、シソ油３．０ｋｇ、デキストリン１７．０ｋｇ、ミネラル混合物６．０ｋｇ、ビタミン混合物１．９５ｋｇ、乳化剤２．０ｋｇ、安定剤４．０ｋｇ、香料０．０５ｋｇを配合し、２００ｍｌのレトルトパウチに充填し、レトルト殺菌機(第１種圧力容器、ＴＹＰＥ: ＲＣＳ－４ＣＲＴＧＮ、日阪製作所製)で１２１℃、２０分間殺菌して、本発明の骨強化用液状栄養組成物５０ｋｇを製造した。なお、本発明の骨強化用液状栄養組成物２００ｇには、ＳＢＴ１０５６１株の菌体が１００ｍｇ含まれていた。
【0033】
（実施例７）
（骨強化用飲料の調製）
実施例品１のＳＢＴ２１６１株の菌体０．５ｇを６９９．５ｇの脱イオン水に溶解した後、４０℃まで加熱後、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ－ＴＵＲＲＡＸ Ｔ－２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、９，５００ｒｐｍで２０分間撹拌混合した。マルチトール１００ｇ、酸味料２ｇ、還元水２０ｇ、香料２ｇ、脱イオン水１７６ｇを添加した後、１００ｍｌのガラス瓶に充填し、９５℃、１５秒間殺菌後、密栓し、本発明の骨強化用飲料１０本（１００ｍｌ入り）を調製した。なお、本発明の骨強化用飲料１００ｇには、ＳＢＴ２１６１株の菌体が５０ｍｇ含まれていた。
（骨強化用飲料の調製）
実施例品１のＳＢＴ２１６１株の菌体０．５ｇを６９９．５ｇの脱イオン水に溶解した後、４０℃まで加熱後、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ－ＴＵＲＲＡＸ Ｔ－２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、９，５００ｒｐｍで２０分間撹拌混合した。マルチトール１００ｇ、酸味料２ｇ、還元水２０ｇ、香料２ｇ、脱イオン水１７６ｇを添加した後、１００ｍｌのガラス瓶に充填し、９５℃、１５秒間殺菌後、密栓し、本発明の骨強化用飲料１０本（１００ｍｌ入り）を調製した。なお、本発明の骨強化用飲料１００ｇには、ＳＢＴ２１６１株の菌体が５０ｍｇ含まれていた。
【0034】
（実施例８）
（イヌ用骨強化用飼料の調製）
実施例品３のＳＢＴ１０５４９株の菌体２ｇを３，９９８ｇの脱イオン水に溶解し、４０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＭＡＲＫ ＩＩ １６０型；特殊機化工業社製）にて、３，６００ｒｐｍで２０分間撹拌混合して２ｇ／４ｋｇのＳＢＴ１０５４９株の菌体溶液を得た。このＳＢＴ１０５４９株の菌体溶液２ｋｇに大豆粕１ｋｇ、脱脂粉乳１ｋｇ、大豆油０．４ｋｇ、コーン油０．２ｋｇ、パーム油２.３ｋｇ、トウモロコシ澱粉１ｋｇ、小麦粉０．９ｋｇ、ふすま０．２ｋｇ、ビタミン混合物０．５ｋｇ、セルロース０．３ｋｇ、ミネラル混合物０．２ｋｇを配合し、１２０℃、４分間加熱殺菌して、本発明の骨強化用飼料１０ｋｇを製造した。なお、本発明の骨強化用飼料１００ｇには、ＳＢＴ１０５４９株の菌体が１０ｍｇ含まれていた。
（イヌ用骨強化用飼料の調製）
実施例品３のＳＢＴ１０５４９株の菌体２ｇを３，９９８ｇの脱イオン水に溶解し、４０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＭＡＲＫ ＩＩ １６０型；特殊機化工業社製）にて、３，６００ｒｐｍで２０分間撹拌混合して２ｇ／４ｋｇのＳＢＴ１０５４９株の菌体溶液を得た。このＳＢＴ１０５４９株の菌体溶液２ｋｇに大豆粕１ｋｇ、脱脂粉乳１ｋｇ、大豆油０．４ｋｇ、コーン油０．２ｋｇ、パーム油２.３ｋｇ、トウモロコシ澱粉１ｋｇ、小麦粉０．９ｋｇ、ふすま０．２ｋｇ、ビタミン混合物０．５ｋｇ、セルロース０．３ｋｇ、ミネラル混合物０．２ｋｇを配合し、１２０℃、４分間加熱殺菌して、本発明の骨強化用飼料１０ｋｇを製造した。なお、本発明の骨強化用飼料１００ｇには、ＳＢＴ１０５４９株の菌体が１０ｍｇ含まれていた。
【0035】
（実施例９）
(骨強化用粉乳の調製)
実施例品１のＳＢＴ００５６株の菌体２ｇ、脱脂粉乳９．９９８ｋｇ、脱イオン水９０ｋｇを混合し、４０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合した。この溶液を噴霧乾燥して本発明の骨強化用粉乳１０ｋｇを製造した。なお、本発明の骨強化粉乳１０ｇにはＳＢＴ００５６株の菌体が２ｍｇ含まれていた。
(骨強化用粉乳の調製)
実施例品１のＳＢＴ００５６株の菌体２ｇ、脱脂粉乳９．９９８ｋｇ、脱イオン水９０ｋｇを混合し、４０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合した。この溶液を噴霧乾燥して本発明の骨強化用粉乳１０ｋｇを製造した。なお、本発明の骨強化粉乳１０ｇにはＳＢＴ００５６株の菌体が２ｍｇ含まれていた。
【0036】
（実施例１０）
（骨強化用乳飲料の調製）
実施例品２のＳＢＴ１２２３株の菌体１ｇ、牛乳９．９９９ｋｇを混合し、４０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合した。１３０℃で２秒間、加熱殺菌した後、１０℃以下まで冷却して本発明の骨強化用乳飲料１０ｋｇを製造した。なお、本発明の骨強化用乳飲料２００ｇにはＳＢＴ１２２３株の菌体が２０ｍｇ含まれていた。
（骨強化用乳飲料の調製）
実施例品２のＳＢＴ１２２３株の菌体１ｇ、牛乳９．９９９ｋｇを混合し、４０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合した。１３０℃で２秒間、加熱殺菌した後、１０℃以下まで冷却して本発明の骨強化用乳飲料１０ｋｇを製造した。なお、本発明の骨強化用乳飲料２００ｇにはＳＢＴ１２２３株の菌体が２０ｍｇ含まれていた。
【0037】
（実施例１１）
（骨強化用発酵乳の調製）
実施例品２のＳＢＴ０６２５株の菌体０．１ｇ、脱脂粉乳１７００ｇ、グルコース３００ｇ、脱イオン水７６９９．９ｇを混合し、９５℃で２時間保持することで加熱殺菌した。これを３７℃まで冷却し、乳酸菌スターター（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）を３００ｇ植菌し、攪拌混合後、３７℃に保持したインキュベーター内でｐＨ４．０まで発酵させた。ｐＨ４．０到達後１０℃以下まで冷却し、本発明の骨強化用発酵乳１０ｋｇを製造した。なお、本発明の骨強化用発酵乳２００ｇには、ＳＢＴ０６２５株の菌体が２ｍｇ含まれていた。
（骨強化用発酵乳の調製）
実施例品２のＳＢＴ０６２５株の菌体０．１ｇ、脱脂粉乳１７００ｇ、グルコース３００ｇ、脱イオン水７６９９．９ｇを混合し、９５℃で２時間保持することで加熱殺菌した。これを３７℃まで冷却し、乳酸菌スターター（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）を３００ｇ植菌し、攪拌混合後、３７℃に保持したインキュベーター内でｐＨ４．０まで発酵させた。ｐＨ４．０到達後１０℃以下まで冷却し、本発明の骨強化用発酵乳１０ｋｇを製造した。なお、本発明の骨強化用発酵乳２００ｇには、ＳＢＴ０６２５株の菌体が２ｍｇ含まれていた。
【0038】
（実施例１２）
（骨強化用乳酸菌飲料の調製）
脱脂粉乳１７００ｇ、グルコース３００ｇ、脱イオン水７７００ｇを混合し、９５℃で２時間保持することで加熱殺菌した。これを３７℃まで冷却し、乳酸菌スターター（Ｌｂ．ｃａｓｅｉ）を３００ｇ植菌し、攪拌混合後、３７℃に保持したインキュベーター内でｐＨ４．０まで発酵させた。ｐＨ４．０到達後、攪拌しながら１０℃以下まで冷却し、発酵ベースを得た。また、実施例品１のＳＢＴ１００１０株の菌体４ｇ、上白糖１８００ｇ、酸味料２０ｇ、香料１０ｇ、脱イオン水８１６６ｇを混合し、９０℃で１０分間殺菌後１０℃以下まで冷却し、糖液を得た。前述の発酵ベース２０００ｇと糖液８０００ｇを混和し、均質機で組織を滑らかにし、２００ｍｌ入り紙容器５０本に分注後、アルミ蓋で密封し、本発明の骨強化用乳酸菌飲料１０ｋｇを製造した。なお、本発明の骨強化用乳酸菌飲料２００ｍｌには、ＳＢＴ１００１０株の菌体が６４ｍｇ含まれていた。
（骨強化用乳酸菌飲料の調製）
脱脂粉乳１７００ｇ、グルコース３００ｇ、脱イオン水７７００ｇを混合し、９５℃で２時間保持することで加熱殺菌した。これを３７℃まで冷却し、乳酸菌スターター（Ｌｂ．ｃａｓｅｉ）を３００ｇ植菌し、攪拌混合後、３７℃に保持したインキュベーター内でｐＨ４．０まで発酵させた。ｐＨ４．０到達後、攪拌しながら１０℃以下まで冷却し、発酵ベースを得た。また、実施例品１のＳＢＴ１００１０株の菌体４ｇ、上白糖１８００ｇ、酸味料２０ｇ、香料１０ｇ、脱イオン水８１６６ｇを混合し、９０℃で１０分間殺菌後１０℃以下まで冷却し、糖液を得た。前述の発酵ベース２０００ｇと糖液８０００ｇを混和し、均質機で組織を滑らかにし、２００ｍｌ入り紙容器５０本に分注後、アルミ蓋で密封し、本発明の骨強化用乳酸菌飲料１０ｋｇを製造した。なお、本発明の骨強化用乳酸菌飲料２００ｍｌには、ＳＢＴ１００１０株の菌体が６４ｍｇ含まれていた。
【0039】
（実施例１３）
（骨強化用清涼飲料水の調製）
実施例品１のＳＢＴ２０５４株の菌体３ｇ、５０％乳酸０．７５ｋｇ、エリスリトール５．７ｋｇ、香料１ｋｇ、脱イオン水４２．５４７ｋｇを混合し、４０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合した。この溶液を９０℃で１０分間殺菌後１０℃以下まで冷却することで、本発明の骨強化用清涼飲料水５０ｋｇを製造した。なお、本発明の骨強化用清涼飲料水２００ｍｌには、ＳＢＴ２０５４株の菌体が１２ｍｇ含まれていた。
（骨強化用清涼飲料水の調製）
実施例品１のＳＢＴ２０５４株の菌体３ｇ、５０％乳酸０．７５ｋｇ、エリスリトール５．７ｋｇ、香料１ｋｇ、脱イオン水４２．５４７ｋｇを混合し、４０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合した。この溶液を９０℃で１０分間殺菌後１０℃以下まで冷却することで、本発明の骨強化用清涼飲料水５０ｋｇを製造した。なお、本発明の骨強化用清涼飲料水２００ｍｌには、ＳＢＴ２０５４株の菌体が１２ｍｇ含まれていた。
【0040】
（実施例１４）
（骨強化用チーズの調製）
ゴーダチーズ９．５ｋｇ、チェダーチーズ９．５ｋｇ、実施例品１のＳＢＴ１０５６１株の菌体４ｇ、クエン酸ナトリウム２００ｇ、脱イオン水７９６ｇを混合し、８５℃で乳化した。乳化後にチーズをカルトンに充填して２昼夜、５℃で冷却して、本発明の骨強化用チーズ２０ｋｇを製造した。なお、本発明の骨強化用チーズ１００ｇには、ＳＢＴ１０５６１株の菌体が２０ｍｇ含まれていた。
（骨強化用チーズの調製）
ゴーダチーズ９．５ｋｇ、チェダーチーズ９．５ｋｇ、実施例品１のＳＢＴ１０５６１株の菌体４ｇ、クエン酸ナトリウム２００ｇ、脱イオン水７９６ｇを混合し、８５℃で乳化した。乳化後にチーズをカルトンに充填して２昼夜、５℃で冷却して、本発明の骨強化用チーズ２０ｋｇを製造した。なお、本発明の骨強化用チーズ１００ｇには、ＳＢＴ１０５６１株の菌体が２０ｍｇ含まれていた。
【0041】
（実施例１５）
（骨強化用マーガリンの調製）
大豆硬化油２ｋｇ、大豆白絞油４ｋｇ、パーム油２．５ｋｇ、グリセリン脂肪酸エステル５０ｇを混合して油層を調製した。次に、実施例品１のＳＢＴ１１３８０株の菌体２０ｇ、乳酸１０ｇ、脱イオン水１４２０ｇを混合し、油層へ添加して油中水型乳化物を得た、この乳化物をマーガリン製造機で冷却、固化及び練圧して、本発明の骨強化用マーガリン１０ｋｇを製造した。なお本発明の骨強化マーガリン１０ｇには、ＳＢＴ１１３８０株の菌体が２０ｍｇ含まれていた。
（骨強化用マーガリンの調製）
大豆硬化油２ｋｇ、大豆白絞油４ｋｇ、パーム油２．５ｋｇ、グリセリン脂肪酸エステル５０ｇを混合して油層を調製した。次に、実施例品１のＳＢＴ１１３８０株の菌体２０ｇ、乳酸１０ｇ、脱イオン水１４２０ｇを混合し、油層へ添加して油中水型乳化物を得た、この乳化物をマーガリン製造機で冷却、固化及び練圧して、本発明の骨強化用マーガリン１０ｋｇを製造した。なお本発明の骨強化マーガリン１０ｇには、ＳＢＴ１１３８０株の菌体が２０ｍｇ含まれていた。
【0042】
（実施例１６）
（骨強化用クリームの調製）
ナタネ硬化油４．５ｋｇ、レシチン４０ｇ、モノグリセリン脂肪酸エステル１０ｇ、ソルビタン脂肪酸エステル１０ｇを混合し、油相を調製した。次に、実施例品１のＳＢＴ２１１５株の菌体４０ｇ、脱脂粉乳４００ｇ、カゼインナトリウム１０ｇ、シュガーエステル２０ｇ、リン酸塩１０ｇ、キサンタンガム５ｇ、脱イオン水４．９５５ｋｇを混合して、水相を調製した。水相を６５℃に加温し、７０℃に加温した油相を少量ずつ攪拌しながら添加し、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合した。これを均質機で均質処理して本発明の骨強化クリーム１０ｋｇを製造した。なお、本発明の骨強化クリーム１０ｇには、ＳＢＴ２１１５株の菌体が４０ｍｇ含まれていた。
（骨強化用クリームの調製）
ナタネ硬化油４．５ｋｇ、レシチン４０ｇ、モノグリセリン脂肪酸エステル１０ｇ、ソルビタン脂肪酸エステル１０ｇを混合し、油相を調製した。次に、実施例品１のＳＢＴ２１１５株の菌体４０ｇ、脱脂粉乳４００ｇ、カゼインナトリウム１０ｇ、シュガーエステル２０ｇ、リン酸塩１０ｇ、キサンタンガム５ｇ、脱イオン水４．９５５ｋｇを混合して、水相を調製した。水相を６５℃に加温し、７０℃に加温した油相を少量ずつ攪拌しながら添加し、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合した。これを均質機で均質処理して本発明の骨強化クリーム１０ｋｇを製造した。なお、本発明の骨強化クリーム１０ｇには、ＳＢＴ２１１５株の菌体が４０ｍｇ含まれていた。
【0043】
（実施例１７）
（骨強化用プリンの調製）
はちみつ２０００ｇ、実施例品１のＳＢＴ１８４８株の菌体４ｇ、脱脂粉乳８００ｇ、マスカルポーネ３００ｇ、液状水７００ｇ、グラニュー糖５００ｇ、生クリーム２５０ｇ、バター２００ｇ、加糖卵黄４００ｇ、ゼラチン４０ｇ、寒天１５ｇ、ローカストビーンガム１２０ｇ、脱イオン水４６７１ｇを混合して、プリンミックスとした。このプリンミックスをＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合し、６０℃に加熱して溶解した後、１００ｇずつ容器へ充填して冷却することで、本発明の骨強化用プリン１００個を製造した。なお、本発明の骨強化プリン１００ｇには、ＳＢＴ１８４８株の菌体が４０ｍｇ含まれていた。
（骨強化用プリンの調製）
はちみつ２０００ｇ、実施例品１のＳＢＴ１８４８株の菌体４ｇ、脱脂粉乳８００ｇ、マスカルポーネ３００ｇ、液状水７００ｇ、グラニュー糖５００ｇ、生クリーム２５０ｇ、バター２００ｇ、加糖卵黄４００ｇ、ゼラチン４０ｇ、寒天１５ｇ、ローカストビーンガム１２０ｇ、脱イオン水４６７１ｇを混合して、プリンミックスとした。このプリンミックスをＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合し、６０℃に加熱して溶解した後、１００ｇずつ容器へ充填して冷却することで、本発明の骨強化用プリン１００個を製造した。なお、本発明の骨強化プリン１００ｇには、ＳＢＴ１８４８株の菌体が４０ｍｇ含まれていた。
【0044】
（実施例１８）
（骨強化用ゼリーの調製）
実施例品２のＳＢＴ２４８３株の菌体４．４ｇ、果糖２０００ｇ、グラニュー糖１５００ｇ、水５００ｇ、寒天１００ｇ、香料１０ｇ、脱イオン水５８８５．６ｇを混合し、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合し、５０℃に加熱して溶解した後、１００ｇずつ容器へ充填して冷却することで、本発明の骨強化用ゼリー１００個を製造した。なお、本発明の骨強化用ゼリー１００ｇには、ＳＢＴ２４８３株の菌体が４４ｍｇ含まれていた。
（骨強化用ゼリーの調製）
実施例品２のＳＢＴ２４８３株の菌体４．４ｇ、果糖２０００ｇ、グラニュー糖１５００ｇ、水５００ｇ、寒天１００ｇ、香料１０ｇ、脱イオン水５８８５．６ｇを混合し、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合し、５０℃に加熱して溶解した後、１００ｇずつ容器へ充填して冷却することで、本発明の骨強化用ゼリー１００個を製造した。なお、本発明の骨強化用ゼリー１００ｇには、ＳＢＴ２４８３株の菌体が４４ｍｇ含まれていた。
【0045】
（実施例１９）
（骨強化用ウエハースの調製）
実施例品３のＳＢＴ１０５３５株の菌体９．２ｇ、小麦粉８．５ｋｇ、コーンスターチ１．２１ｋｇ、パーム油０．２２ｋｇ、膨張剤０．０５ｋｇを混合した後、脱イオン水を適量加えてバッターを調製した後、ウエハース焼成機で焼成して、本発明の骨強化用ウエハース１０ｋｇを製造した。なお、本発明の骨強化用ウエハース５０ｇには、ＳＢＴ１０５３５株の菌体が４６ｍｇ含まれていた。
（骨強化用ウエハースの調製）
実施例品３のＳＢＴ１０５３５株の菌体９．２ｇ、小麦粉８．５ｋｇ、コーンスターチ１．２１ｋｇ、パーム油０．２２ｋｇ、膨張剤０．０５ｋｇを混合した後、脱イオン水を適量加えてバッターを調製した後、ウエハース焼成機で焼成して、本発明の骨強化用ウエハース１０ｋｇを製造した。なお、本発明の骨強化用ウエハース５０ｇには、ＳＢＴ１０５３５株の菌体が４６ｍｇ含まれていた。
【産業上の利用可能性】
【0046】
本発明によれば長期摂取が可能で、安全性が高く、骨芽細胞の増殖を促進させる作用があり、また、破骨細胞の分化ならびに該細胞による骨吸収を抑制する作用を介した骨強化作用が顕著な骨強化用組成物を提供することが可能である。したがって、本発明の摂取により骨粗鬆症や骨折、リウマチ、関節炎などの種々の骨疾患の予防又は治療が可能である。
【受託番号】
【0047】
[寄託生物材料への言及]
（１）ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＳＢＴ００５６株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７３
（２）ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１１５株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７４
（３）ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１６１株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１３年９月１８日（原寄託日）
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ ＢＰ－０１７０７
（４）ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）ＳＢＴ１１３８０株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１８年２月２１日（原寄託日）
令和１年５月２７日（原寄託よりブタペスト条約に基づく寄託への移管日）
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ ＢＰ－０２６４４
（５）ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）２１９２Ａ株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７７
（６）ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５４株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７６
（７）ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ１８４８株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７５
（８）ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）ＳＢＴ１００１０株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年６月２６日（原寄託日）
令和２年７月１３日（原寄託よりブタペスト条約に基づく寄託への移管日）
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ ＢＰ－０２９９７
（９）ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
（なお、原寄託日後、原寄託に基づくブタペスト条約に基づく寄託への移管申請をし、生存確認試験の完了後に、受領・受託番号を通知する書面を受領した。受領・受託番号は、ＡＢＰ－０３０７８である。）
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７８
（１０）ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ２４８３株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０８１
（１１）ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ１２２３株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年７月８日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３００３
（１２）ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ１５５４株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７９
（１３）ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ２３９７株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０８０
（１４）ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）ＳＢＴ１０５３５株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７１
（１５）ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）ＳＢＴ１０５６１株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
（なお、原寄託日後、原寄託に基づくブタペスト条約に基づく寄託への移管申請をし、生存確認試験の完了後に、受領・受託番号を通知する書面を受領した。受領・受託番号は、ＡＢＰ－０３０７２である。）
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７２
（１６）ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）ＳＢＴ１０５４９株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７０
（１）ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＳＢＴ００５６株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７３
（２）ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐ． ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１１５株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７４
（３）ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）ＳＢＴ２１６１株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１３年９月１８日（原寄託日）
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ ＢＰ－０１７０７
（４）ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）ＳＢＴ１１３８０株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１８年２月２１日（原寄託日）
令和１年５月２７日（原寄託よりブタペスト条約に基づく寄託への移管日）
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ ＢＰ－０２６４４
（５）ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）２１９２Ａ株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７７
（６）ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ２０５４株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７６
（７）ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）ＳＢＴ１８４８株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７５
（８）ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）ＳＢＴ１００１０株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年６月２６日（原寄託日）
令和２年７月１３日（原寄託よりブタペスト条約に基づく寄託への移管日）
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ ＢＰ－０２９９７
（９）ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ０６２５株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
（なお、原寄託日後、原寄託に基づくブタペスト条約に基づく寄託への移管申請をし、生存確認試験の完了後に、受領・受託番号を通知する書面を受領した。受領・受託番号は、ＡＢＰ－０３０７８である。）
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７８
（１０）ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ２４８３株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０８１
（１１）ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ１２２３株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年７月８日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３００３
（１２）ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ１５５４株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７９
（１３）ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｌａｃｔｉｓ）ＳＢＴ２３９７株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０８０
（１４）ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）ＳＢＴ１０５３５株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７１
（１５）ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）ＳＢＴ１０５６１株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
（なお、原寄託日後、原寄託に基づくブタペスト条約に基づく寄託への移管申請をし、生存確認試験の完了後に、受領・受託番号を通知する書面を受領した。受領・受託番号は、ＡＢＰ－０３０７２である。）
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７２
（１６）ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）ＳＢＴ１０５４９株
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター
日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８ １２２号室（郵便番号２９２－０８１８）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
２０１９年１１月２５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＮＩＴＥ Ｐ－０３０７０