特許 7667775 ヌクレオチド類似体を含有するオリゴヌクレオチド

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】特許公報(B2)

(11)【特許番号】

(24)【登録日】2025-04-15

(45)【発行日】2025-04-23

(54)【発明の名称】ヌクレオチド類似体を含有するオリゴヌクレオチド

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/113 20100101AFI20250416BHJP

   A61K 31/713 20060101ALI20250416BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20250416BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20250416BHJP

   A61K 31/711 20060101ALI20250416BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20250416BHJP

【ＦＩ】

C12N15/113 Z ZNA

A61K31/713

A61P43/00 111

A61K31/7105

A61K31/711

A61K48/00

A61P43/00 105

【請求項の数】 22

(21)【出願番号】P 2022514677

(86)(22)【出願日】2020-09-04

(65)【公表番号】

(43)【公表日】2022-11-16

(86)【国際出願番号】 EP2020074800

(87)【国際公開番号】W WO2021044004

(87)【国際公開日】2021-03-11

【審査請求日】2023-09-01

(31)【優先権主張番号】19195696.0

(32)【優先日】2019-09-05

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(73)【特許権者】

【識別番号】504456798

【氏名又は名称】サノフイ

【氏名又は名称原語表記】ＳＡＮＯＦＩ

(74)【代理人】

【識別番号】100127926

【弁理士】

【氏名又は名称】結田 純次

(74)【代理人】

【識別番号】100140132

【弁理士】

【氏名又は名称】竹林 則幸

(72)【発明者】

【氏名】ボードー・ブルナー

(72)【発明者】

【氏名】アルミン・ホフマイスター

(72)【発明者】

【氏名】ケルスティーン・ヤーン－ホフマン

【審査官】上村 直子

(56)【参考文献】

【文献】特表２０１８－５１８１４８（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０１０－５２８０４１（ＪＰ，Ａ）

【文献】特開２００６－１０９８４６（ＪＰ，Ａ）

【文献】米国特許出願公開第２０１５／０３１５５８２（ＵＳ，Ａ１）

【文献】特表２０２２－５４６０４０（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０２２－５１３１１１（ＪＰ，Ａ）

【文献】特表２０２１－５１７１２６（ＪＰ，Ａ）

(58)【調査した分野】(Int.Cl.，ＤＢ名)

Ｃ１２Ｎ １５／００－１５／９０

Ａ６１Ｋ

Ａ６１Ｐ

ＣＡｐｌｕｓ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ）

(57)【特許請求の範囲】

【請求項1】

センス鎖オリゴヌクレオチドおよびアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドを含む二本鎖オリゴヌクレオチドであって、該アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの５’－オーバーハング以外または３’－オーバーハング以外の位置にある、式（Ｉ－Ａ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体を含み、そして式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体は、以下に記載される通り：

【化1】

［式中、式（Ｉ－Ａ）の各化合物につき独立して：
－ Ｂは、複素環式の核酸塩基であり；
－ Ｌ１およびＬ２の一方は、式（Ｉ－Ａ）の化合物をヌクレオチド残基に連結するヌクレオシド間連結基であり、Ｌ１およびＬ２の他方は、Ｈ、保護基、リン部分または式（Ｉ－Ａ）の化合物をヌクレオチド残基に連結するヌクレオシド間連結基であり、
－ Ｙは、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ１またはＮ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１であり、Ｒ１は：
・場合により、ハロゲン原子、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３～Ｃ１４）複素環、（Ｃ６～Ｃ１４）アリール基、（Ｃ５～Ｃ１４）ヘテロアリール基、－Ｏ－Ｚ１、－Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、－Ｓ－Ｚ１、－ＣＮ、－Ｃ（＝Ｊ）－Ｏ－Ｚ１、－Ｏ－Ｃ（＝Ｊ）－Ｚ１、－Ｃ（＝Ｊ）－Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、－Ｎ（Ｚ１）－Ｃ（＝Ｊ）－Ｚ２から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基であって、
Ｊは、ＯまたはＳであり、
Ｚ１およびＺ２のそれぞれは、独立して、Ｈであるか、場合によりハロゲン原子および（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であるか、
・場合によりハロゲン原子および（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基であるか、
・基－［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ－Ｒ２－（Ｏ－ＣＨ₂－ＣＨ₂）ｐ－Ｒ３であって、
ｍは、０または１を意味する整数であり、
ｐは、０～１０の範囲の整数であり、
Ｒ２は、場合により（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、－Ｏ－Ｚ３、－Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、－Ｓ－Ｚ３、－ＣＮ、－Ｃ（＝Ｋ）－Ｏ－Ｚ３、－Ｏ－Ｃ（＝Ｋ）－Ｚ３、－Ｃ（＝Ｋ）－Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、および－Ｎ（Ｚ３）－Ｃ（＝Ｋ）－Ｚ４で置換されている（Ｃ１～Ｃ２０）アルキレン基であり、
Ｋは、ＯまたはＳであり、
Ｚ３およびＺ４のそれぞれは、独立して、Ｈであるか、場合によりハロゲン原子および（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、
Ｒ３は、水素原子、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ基、（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３～Ｃ１４）複素環、（Ｃ６～Ｃ１４）アリール基または（Ｃ５～Ｃ１４）ヘテロアリール基からなる群から選択され、
－ Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、水素原子、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、
－ Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄのそれぞれは、独立して、Ｈであるか、または（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基である］
、ならびにその任意の立体異性体またはその任意の医薬的に許容される塩である、前記二本鎖オリゴヌクレオチド。

【請求項2】

アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、前記式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体の１～１０個を含む、請求項１に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。

【請求項3】

アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、前記式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体の１～５個を含む、請求項１に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。

【請求項4】

アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、１５～３０ヌクレオチドの範囲のヌクレオチド長を有する、請求項１に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。

【請求項5】

アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、２０～２５ヌクレオチドの範囲のヌクレオチド長を有する、請求項４に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。

【請求項6】

アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、１７～２５ヌクレオチドの範囲のヌクレオチド長を有する、請求項５に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。

【請求項7】

アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドにおいて、そこに含まれる式（Ｉ－Ａ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体は、連続して、および／または連続しないで、前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの任意の場所に配置される、請求項１に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。

【請求項8】

アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、センス鎖オリゴヌクレオチドとハイブリダイズするハイブリダイジング領域を含み、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドにおいて、そこに含まれる式（Ｉ－Ａ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体は、前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドのヌクレオチド領域中、アンチセンス鎖の５’末端のヌクレオチ
ドから開始して前記ハイブリダイジング領域の２位におけるヌクレオチドから１５位におけるヌクレオチドまで、または２位から１０位におけるヌクレオチドまで、または２位から８位におけるヌクレオチドまでの範囲に配置される、請求項１に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。

【請求項9】

アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、以下の式（Ｉ－Ｂ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体

【化2】

［式中、式（Ｉ－Ｂ）の各化合物につき独立して：
－ Ｂは、複素環式の核酸塩基であり；
－ Ｌ１およびＬ２の一方は、式（Ｉ－Ｂ）の化合物をヌクレオチド残基に連結するヌクレオシド間連結基であり、Ｌ１およびＬ２の他方は、Ｈ、保護基、リン部分または式（Ｉ－Ｂ）の化合物をヌクレオチド残基に連結するヌクレオシド間連結基であり、
－ Ｙは、ＮＲ１またはＮ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１であり、Ｒ１は：
・基－［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ－Ｒ２－（Ｏ－ＣＨ₂－ＣＨ₂）ｐ－Ｒ３であって、
ｍは、０または１を意味する整数であり、
ｐは、０～１０の範囲の整数であり、
Ｒ２は、場合により（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、－Ｏ－Ｚ３、－Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、－Ｓ－Ｚ３、－ＣＮ、－Ｃ（＝Ｋ）－Ｏ－Ｚ３、－Ｏ－Ｃ（＝Ｋ）－Ｚ３、－Ｃ（＝Ｋ）－Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、および－Ｎ（Ｚ３）－Ｃ（＝Ｋ）－Ｚ４で置換されている（Ｃ１～Ｃ２０）アルキレン基であり、
Ｋは、ＯまたはＳであり、
Ｚ３およびＺ４のそれぞれは、独立して、Ｈであるか、場合によりハロゲン原子および（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、
Ｒ３は、細胞標的化部分であり、
－ Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、水素原子、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、
－ Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄのそれぞれは、独立して、Ｈであるか、または（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基である］
、ならびにその任意の立体異性体またはその任意の医薬的に許容される塩をさらに含む、請求項１に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。

【請求項10】

アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、式（Ｉ－Ｂ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体を含み、式（Ｉ－Ｂ）の少なくとも１つのヌクレオチドは、５’末端または３’末端のヌクレオチドからなる、請求項９に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。

【請求項11】

アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドに含まれる式（Ｉ－Ａ）および（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体において、
－ Ｙは、ＮＲ１であり、
－ Ｒ１は、非置換の（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基であるか、またはＲ１は、非置換の（Ｃ１～Ｃ１６）アルキル基であり、該アルキル基は、メチル、イソプロピル、ブチル、オクチル、ヘキサデシルを含む群から選択されるアルキル基を含むか、またはＲ１は、場合によりハロゲン原子および（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つもしくはそれ以上の基で置換された（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基であるか、またはＲ１は、シクロヘキシル基であるか、またはＲ１は、（Ｃ６～Ｃ１４）アリール基で置換された（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基であるか、またはＲ１は、フェニル基で置換されたメチル基であり、
－ Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、請求項１に記載の一般式（Ｉ－Ａ）について定義されたのと同じ意味を有し、またはその任意の医薬的に許容される塩である、請求項１または９に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。

【請求項12】

アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドに含まれる式（Ｉ－Ａ）および（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体において、
－ Ｙは、Ｎ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１であり、
－ Ｒ１は、場合により置換された（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基であるか、またはＲ１は、メチルおよびペンタデシルを含む群から選択され、
－ Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、請求項１で定義されたのと同じ意味を有し、またはその医薬的に許容される塩である、請求項１または９に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。

【請求項13】

アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドに含まれる式（Ｉ－Ａ）および（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体において、Ｂは、ピリミジン、置換されたピリミジン、プリンおよび置換されたプリンを含む群から選択され、またはその任意の医薬的に許容される塩である、請求項１または９に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。

【請求項14】

前記式（Ｉ－Ａ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体は、その（２Ｒ，６Ｒ）－立体異性体からなる、請求項１に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。

【請求項15】

センス鎖オリゴヌクレオチドは、請求項１で定義される式（Ｉ－Ａ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体を含む、請求項１に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。

【請求項16】

センス鎖オリゴヌクレオチドは、請求項９で定義される式（Ｉ－Ｂ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体を含む、請求項１５に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。

【請求項17】

センス鎖は、請求項９で定義される式（Ｉ－Ｂ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体を含み、式（Ｉ－Ｂ）の少なくとも１つのヌクレオチドは、５’末端または３’末端のヌクレオチドからなり、前記式（Ｉ－Ｂ）の１つまたはそれ以上の修飾されたヌクレオチドは連続している、請求項１６に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。

【請求項18】

センス鎖は、請求項９で定義される式（Ｉ－Ｂ）の１～３つのヌクレオチド類似体を含み、式（Ｉ－Ｂ）の修飾されたヌクレオチドは連続しており、センス鎖の５’末端または３’末端に配置されるオリゴヌクレオチドストレッチを形成する、請求項１６に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。

【請求項19】

短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、またはその医薬的に許容される塩からなる、請求項１に記載の二本鎖オリゴヌクレオチド。

【請求項20】

請求項１～１９のいずれか１項で定義される二本鎖オリゴヌクレオチドを含む組成物。

【請求項21】

請求項１～１９のいずれか１項に記載の二本鎖オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物。

【請求項22】

医薬としての、請求項１～１９のいずれか１項で定義される二本鎖オリゴヌクレオチド。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、本明細書に記載される修飾されたヌクレオチド類似体を含む一本鎖および二本鎖オリゴヌクレオチド、より詳細には短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）での標的化された遺伝子サイレンシングの分野に関する。

【背景技術】

【0002】

特異的な遺伝子の発現を制御するための合成オリゴヌクレオチドの使用の概念は１９７０年代後半まで遡り、そのとき最初に短い合成オリゴヌクレオチドを使用する標的化された遺伝子サイレンシングが実証された（非特許文献１）。Ｓｔｅｐｈｅｎｓｏｎの発見に続いて、遺伝子発現のモジュレーションのためのＲＮＡ干渉経路およびそのプロセスにおけるｓｉＲＮＡの役割の解明は、真核細胞における転写後の遺伝子発現制御の科学者の理解を大いに拡大した。

【0003】

合成オリゴヌクレオチドとしては、アンチセンスオリゴヌクレオチド（「ＡＳＯ」）、抗ｍｉＲおよびアンタゴｍｉＲなどの一本鎖オリゴヌクレオチド、ならびにｓｉＲＮＡなどの二本鎖オリゴヌクレオチドが挙げられる。ＡＳＯおよびｓｉＲＮＡはどちらもワトソン－クリック塩基対形成を介して標的ＲＮＡと結合することによって作用するが、それらの作用メカニズムは異なる。アンチセンス技術において、ＡＳＯは標的ＲＮＡとＤＮＡ－ＲＮＡ二重鎖を形成し、メカニズムをブロックすることによってｍＲＮＡ翻訳を阻害するか、または標的化されたＲＮＡのＲＮアーゼＨ依存性分解を引き起こす。ＲＮＡ干渉技術において、ｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体（「ＲＩＳＣ」）に結合し、そこで一方の鎖（「パッセンジャー鎖」または「センス鎖」）が置き換えられ、残りの鎖（「ガイド鎖」または「アンチセンス鎖」）はＲＩＳＣと協働して相補的なＲＮＡ（標的ＲＮＡ）と結合する；一旦結合すると、標的ＲＮＡは、ＲＩＳＣ中のＲＮＡエンドヌクレアーゼであるアルゴノート（ＡＧＯ）によって切断され、次いでＲＮＡエキソヌクレアーゼによって更に分解される。

【0004】

ｓｉＲＮＡ治療剤を含むオリゴヌクレオチド治療剤の開発に関する最も重大な障害としては、（ｉ）化合物の不良な安定性、（ｉｉ）標的細胞へのインビボ送達の低い効率、および（ｉｉｉ）「オフターゲット」遺伝子サイレンシングおよび予期せぬ免疫促進などの副作用が挙げられる。これらの障害の一部に取り組むために、様々なオリゴヌクレオチド化学修飾の調査が試みられた。これらの修飾は、３つのカテゴリー、すなわち（ｉ）糖修飾、（ｉｉ）ヌクレオチド間連結修飾、および（ｉｉｉ）核酸塩基修飾に分類することができる。

【0005】

糖基への化学修飾としては、リボース環の２’－炭素原子または２’－ヒドロキシ基における修飾が挙げられる。２’－ＯＭｅ（メトキシ）ヌクレオチド類似体は、最も広く使用される修飾の１つである。２’－Ｆ（フルオロ）ヌクレオチドおよび２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオチドも使用されてきた。糖の変更の大部分が２’位に集中しているが、他の位置、例えば４’位における修飾も報告されている（非特許文献２）。

【0006】

糖基の他の化学修飾としては、ヌクレオシドのリボース足場の２’－酸素と４’－炭素とを連結し、いわゆるロックド核酸（「ＬＮＡ」）を作り出すことが挙げられる。ＬＮＡはまた二環式核酸とも称され、増加したＲＮＡ結合親和性を有することが示され（非特許文献３；非特許文献４）、これは、得られた二本鎖オリゴヌクレオチドにおいて、その融解温度の著しい増加を引き起こす。しかしながら、完全にＬＮＡで修飾された、８個のヌクレオチドより長いオリゴマーは、集合化する傾向がある。ＬＮＡ修飾のリジッドな性質とは対照的に、高度にフレキシブルなアンロックド核酸（「ＵＮＡ」）修飾もオリゴヌクレオチド治療剤における適用のために開発された。ＵＮＡヌクレオシドは、リボース糖のＣ２’－Ｃ３’結合を有さない。ＵＮＡは、その開鎖構造のために立体配座的に制限されず、オリゴヌクレオチドのフレキシビリティーをモジュレートするのに使用されてきた（非特許文献５）。ＵＮＡの挿入は、二重鎖の融解温度（Ｔｍ）を、一部の場合において挿入当たり５℃～１０℃低下させることができる。ＵＮＡおよびＬＮＡを含有するｓｉＲＮＡは、非特許文献６によって報告されている。

【0007】

更に、拡大された糖環系も開発され、遺伝子サイレンシング技術に適用されている。このような系としては、ヌクレオシドのリボース部分がモルホリン環で置き換えられた６員環のモルホリノ環系が挙げられる。モルホリノベースのヌクレオシドは、モルホリンサブユニットの窒素原子を介してそれを含有するオリゴヌクレオチド内でヌクレオチド間連結を形成する。アンチセンス技術では、ホスホロジアミデートモルホリノベースのオリゴヌクレオチド（「ＰＭＯ」）が使用されてきた（非特許文献７；非特許文献８）。しかしながら、相補的なＲＮＡへの低い結合親和性のために、アンチセンスＰＭＯは相対的に長いことが必要であり、例えば２５塩基の長さである（非特許文献７、上記）。モルホリノサブユニットの例はまた、特許文献１；特許文献２；特許文献３；特許文献４；および特許文献５でも開示されている。

【0008】

ヌクレアーゼ分解に対する感受性を低減させるために、３’－５’ホスホジエステル連結をより安定な部分で置き換えることによってヌクレオチド間連結に化学修飾を実行してもよい。広く使用される修飾は、ホスホジエステル主鎖を、酸素原子の代わりに硫黄原子が使用されたホスホロチオエート結合で部分的または完全に置き換えることである。核酸に増加した生物学的な安定性を付与する代替の主鎖修飾は、ボラノリン酸結合である。ボラノリン酸オリゴヌクレオチドでは、架橋されていないホスホジエステルの酸素が、等電子のボラン（－ＢＨ_３）部分で置き換えられている。

【0009】

しかしながら、ホスホロチオエートなどの前述のホスホジエステル修飾のほとんどは、ヌクレオチド間連結中にキラルのリンを生じ、得られたオリゴヌクレオチドのジアステレオマー混合物をもたらす。それぞれ修飾されたホスホジエステル連結を有するジアステレオマーオリゴヌクレオチドの数が倍加する可能性があるため、得られたジアステレオマーの数は、修飾されたホスホジエステル連結数の増加に伴い指数関数的に増加する。個々のジアステレオマーは、異なる程度のヌクレアーゼ耐性および標的ｍＲＮＡへの異なるハイブリダイズ特性を呈示する可能性がある。加えて、ジアステレオマー混合物の精製および化学的分析論は複雑である。したがって、一部の場合、ホスホロチオエートなどのホスホジエステル修飾および得られたジアステレオマーオリゴヌクレオチド混合物の使用を回避することが望ましい場合がある。

【0010】

ＲＮＡ干渉技術における他の重要な問題は、ｓｉＲＮＡの標的化された送達および細胞内取り込みである。細胞膜は、負電荷を有するリン脂質の二分子層であり、同様に負電荷を有するｓｉＲＮＡにとって侵入の障壁である。一部のグループは、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）を使用して、それに付着したｓｉＲＮＡを肝細胞に標的化しており、肝細胞は、ＧａｌＮＡｃ結合アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）を発現し、エンドサイトーシスを介してＡＳＧＰＲ結合ｓｉＲＮＡ－ＧａｌＮＡｃコンジュゲートを内在化することができる（例えば、非特許文献９を参照）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0011】

【文献】米国特許第５，０３４，５０６号

【文献】米国特許第５，１６６，３１５号

【文献】米国特許第５，１８５，４４４号

【文献】米国特許第５，６９８，６８５号

【文献】米国特許公開第２０１６／０１８６１７４号

【非特許文献】

【0012】

【文献】Ｓｔｅｐｈｅｎｓｏｎら、１９７８、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、７５：２８５～２８８

【文献】Ｌｅｙｄｌｅｒら、１９９５、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓ Ｄｅｖ、５：１６１～１７４

【文献】Ｋｏｓｈｉｎら、１９９８、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、５４：３６０７～３６３０

【文献】Ｐｒａｋａｓｈら、２０１１、Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓ、８：１６１６～１６４１

【文献】Ｍａｎｇｏｓら、２００３、Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ、１２５：６５４～６６１

【文献】Ｂｒａｍｓｅｎら（２０１０、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、３８（１７）：５７６１～５７７３）

【文献】Ｃｏｒｅｙら、２００１、Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２（５）：ｒｅｖｉｅｗｓ １０１５．１～１０１５

【文献】Ｐａｒｔｒｉｄｇｅら、１９９６、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ、６：１６９～１７５

【文献】Ｎａｉｒら、２０１４、Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ、１３６：１６９５８～１６９６１

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0013】

ＲＮＡ干渉技術が進展し続ける一方で、安定性が改善され、オフターゲットプロファイルが低減されたｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチド、およびその標的細胞への送達に関する分野における必要が未だある。

【課題を解決するための手段】

【0014】

本開示は、センス鎖オリゴヌクレオチドおよびアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドを含む二本鎖オリゴヌクレオチドであって、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの５’－オーバーハングでも３’－オーバーハングでもない式（Ｉ－Ａ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体を含み、式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体は、本明細書にわたり記載される通りである、二本鎖オリゴヌクレオチドに関する。

【0015】

前記二本鎖オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、前記式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体の１～１０個、好ましくは前記式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体の１～５個を含む。

【0016】

前記二本鎖オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、１５～３０ヌクレオチド、好ましくは２０～２５ヌクレオチド、最も好ましくは１７～２５ヌクレオチドの範囲のヌクレオチド長を有する。

【0017】

前記二本鎖オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドにおいて、そこに含まれる式（Ｉ－Ａ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体は、連続して、および／または連続しないで、前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの任意の場所に配置される。

【0018】

前記二本鎖オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、センス鎖オリゴヌクレオチドとハイブリダイズするハイブリダイジング領域を含み、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドにおいて、そこに含まれる式（Ｉ－Ａ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体は、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオチド領域中、アンチセンス鎖の５’末端のヌクレオチドから開始して前記ハイブリダイジング領域の２位におけるヌクレオチドから１５位におけるヌクレオチドまでの範囲に配置される。

【0019】

前記二本鎖オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、センス鎖オリゴヌクレオチドとハイブリダイズするハイブリダイジング領域を含み、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドにおいて、そこに含まれる式（Ｉ－Ａ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体は、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオチド領域中、前記アンチセンス鎖の５’末端のヌクレオチドから開始して前記ハイブリダイジング領域の２位におけるヌクレオチドから８位におけるヌクレオチドまでのような、前記ハイブリダイジング領域の２位におけるヌクレオチドから１０位におけるヌクレオチドまでの範囲に配置される。

【0020】

前記二本鎖オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、本明細書に記載される式（Ｉ－Ｂ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体を更に含む。

【0021】

前記二本鎖オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドに含まれる式（Ｉ－Ａ）および（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体において、Ｂは、ピリミジン、置換されたピリミジン、プリンおよび置換されたプリンを含む群から選択され、またはその任意の医薬的に許容される塩である。

【0022】

前記二本鎖オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、前記式（Ｉ－Ａ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体は、その（２Ｒ，６Ｒ）－立体異性体からなる。

【0023】

前記二本鎖オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、センス鎖オリゴヌクレオチドは、本明細書に記載される式（Ｉ－Ａ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体を含む。

【0024】

前記二本鎖オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、センス鎖オリゴヌクレオチドは、本明細書に記載される式（Ｉ－Ｂ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体を含む。

【0025】

前記二本鎖オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、センス鎖は、請求項７で定義される式（Ｉ－Ｂ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体を含み、式（Ｉ－Ｂ）の少なくとも１つのヌクレオチドは、５’末端または３’末端のヌクレオチドからなり、前記式（Ｉ－Ｂ）の１つまたはそれ以上の修飾されたヌクレオチドは連続している。

【0026】

前記二本鎖オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、センス鎖は、１～３つの請求項７で定義される式（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体を含み、式（Ｉ－Ｂ）の修飾されたヌクレオチドは連続しており、センス鎖の５’末端または３’末端に配置されるオリゴヌクレオチドストレッチを形成する。

【0027】

一部の実施形態では、前記二本鎖オリゴヌクレオチドは、短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、またはそれらの医薬的に許容される塩からなる。

【0028】

本開示は更に、本明細書にわたり定義される標的ｍＲＮＡまたは標的（二本鎖）ＤＮＡに相補的な一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドに関する。

【0029】

本開示はまた、本明細書に記載される二本鎖オリゴヌクレオチドまたは一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物にも関する。

【0030】

本開示はまた、医薬としてのその使用のための、本明細書に記載される二本鎖オリゴヌクレオチドにも関する。

【図面の簡単な説明】

【0031】

【図1】ｓｉＲＮＡ２－０、１－８、３－３、３－８および３－１１のインビボノックダウンを示す図である。 縦座標：対照ｓｉＲＮＡと比べたＴＴＲ血清レベル。 横座標：ｓ．ｃ．投与後の日数。

【図2】ｓｉＲＮＡ２－０、１－８、３－８および３－１１のインビボノックダウンを示す図である。 縦座標：対照ｓｉＲＮＡと比べた肝臓におけるＴＴＲ ｍＲＮＡ発現レベル。 横座標：投与されるｓｉＲＮＡ２－０、１－８、３－８および３－１１のそれぞれのｍｇ／ｋｇでの用量。

【図3】ｓｉＲＮＡ２－０、１－８、３－８および３－１１のインビボノックダウンを示す図である。 縦座標：ｎｇ／ｍｌで示されるＴＴＲ血清レベル。 横座標：投与されるｓｉＲＮＡ２－０、１－８、３－８および３－１１のそれぞれのｍｇ／ｋｇでの用量。

【図4】ｓｉＲＮＡ２－０、５－１、５－４、５－５、５－６、５－８、５－１０および５－１１のインビボノックダウンを示す図である。 縦座標：対照ｓｉＲＮＡと比べたＴＴＲ血清レベル。 横座標：ｓ．ｃ．ｓｉＲＮＡ投与後の日数。

【図5】ｓｉＲＮＡ２－０、５－１、５－４、５－５、５－６、５－８、５－１０および５－１１のインビボノックダウンを示す図である。 縦座標：対照ｓｉＲＮＡと比べたＴＴＲ血清レベル。 横座標：ｓ．ｃ．ｓｉＲＮＡ投与後の日数。

【図6】ｓｉＲＮＡ２－０、５－１、５－１１および５－１３のインビボノックダウンを示す図である。 縦座標：対照ｓｉＲＮＡと比べた肝臓におけるＴＴＲ ｍＲＮＡ発現レベル。 横座標：投与されるｓｉＲＮＡ２－０、５－１、５－１１および５－１３のそれぞれのｍｇ／ｋｇでの用量。

【図7】ｓｉＲＮＡ２－０、５－１、５－１１および５－１３のインビボノックダウンを示す図である。 縦座標：ｎｇ／ｍｌで示されるＴＴＲ血清レベル。 横座標：投与されるｓｉＲＮＡ２－０、５－１、５－１１および５－１３のそれぞれのｍｇ／ｋｇでの用量。

【発明を実施するための形態】

【0032】

本開示は、１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体を含む新規の二本鎖および一本鎖オリゴヌクレオチドを提供する。これらの類似体を含有するオリゴヌクレオチドは、優れた生物学的活性、例えば、改善されたインビトロ安定性、オフターゲットプロファイルおよびインビボ作用持続時間を有する。改善されたオリゴヌクレオチドは、標的遺伝子の発現をサイレンシングする（例えば低減させるまたは根絶する）のに有用である。特定の実施形態では、本開示は、目的の標的遺伝子の発現を低減させるかまたはブロックするように目的のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）にハイブリダイズすることができる、特異的なヌクレオチド類似体を含む二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡｓ）、特に、特異的なヌクレオチド類似体を含むｓｉＲＮＡを包含する。

【0033】

最も好ましい実施形態によれば、前記特異的なヌクレオチド類似体は、６員環の複素環で置き換えられたリボース糖環を有する。本開示において更に詳細に記載される通り、前記特異的なヌクレオチド類似体の６員環の複素環式基は、ジオキサンまたはモルホリノ環であり得る。複素環式基がモルホリノ環である場合、窒素原子は、置換された、または非置換のいずれかである。一部の実施形態では、６員環の複素環式基は、直鎖もしくは環式基および／または標的化部分で置換される。

【0034】

定義
本明細書において使用される用語は、一般的に当業界におけるそれらの通常の意味を有する。本開示の主題の生成物および方法を説明することにおける追加の指針を提供するために、特定の用語を本開示の以下または他所で論じる。

【0035】

以下の定義が本開示の文脈において適用される。

【0036】

本明細書および添付の特許請求の範囲で使用されるように、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、内容が明らかにそうではないことを指示していない限り、複数の指示対象を含む。

【0037】

用語「約」は、本明細書で使用される場合、この技術分野の当業者には容易に認識されるそれぞれの値に対する通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」の値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーターそれ自体を対象とする実施形態を含む（更にそれを記載する）。一部の実施形態では、用語「約」は、所与の値の±１０％を指す。しかしながら、問題の値が、ヌクレオチドなどの分割できないもの、または一度分割されたらその同一性を喪失すると予想される他のものを指す場合は必ず、「約」は、分割できないものの±１を指す。

【0038】

本明細書に記載される本開示の態様および実施形態は、態様および実施形態を「有する」、それを「含む」、それ「からなる」、およびそれ「から本質的になる」ことを含むことが理解される。言葉「有する（ｈａｖｅ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、または「有する（ｈａｓ）」、「有すること」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、もしくは「含むこと」などの変化形は、述べられた要素（例えば物質の組成物または方法工程）の包含を示すが、他のいかなる要素も排除されないことが理解されるであろう。用語「からなる」は、述べられた要素の包含を意味し、追加の要素はまったく含まれない。用語「から本質的になる」は、述べられた要素の包含と、場合によっては、他の要素が発明の基礎となる新規の特徴に著しい影響を与えない場合、他の要素の包含を示す。

【0039】

「アルキル」は、別段の規定がない限り、鎖中に１～２０（例えば、１～５、１～１０、または１～１５）個の炭素原子を有する直鎖状または分枝状であってもよい脂肪族炭化水素基を意味する。「分枝状」は、直鎖状アルキル鎖に、１つまたはそれ以上のアルキル基、例えばメチル、エチルまたはプロピル基が付着していることを意味する。例示的な直鎖状または分枝状のアルキル基としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、ｎ－ブチル、ｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、３－ペンチル、オクチル、ノニル、およびデシルが挙げられる。

【0040】

「シクロアルキル」は、環状の飽和した、上記で定義した通りのアルキル基を意味する。その例は、これらに限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルである。

【0041】

「アルコキシ」は、－ＯＲ基と定義され、式中、Ｒは、シクロアルキル基を含む上記で定義した通りのアルキル基である。その例は、これらに限定されないが、メトキシ、エトキシ、１－プロポキシ、２－プロポキシ、ブトキシ、およびペントキシである。

【0042】

「ハロゲン原子」は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素原子を指す。一部の実施形態では、フッ素または塩素原子が好ましい場合がある。

【0043】

「アリール」は、別段の規定がない限り、６～１４個の炭素原子、例えば６～１０個の炭素原子の芳香族の単環式または多環式の炭化水素環系を意味する。例示的なアリール基としては、フェニルおよびナフチル基が挙げられる。

【0044】

「複素環」または「複素環式」は、酸素、窒素、セレニウム、リン、および硫黄の群から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含有する、飽和した、部分的に不飽和の、または不飽和の炭素環式基を指す。窒素、セレニウム、リンまたは硫黄は、場合により酸化されていてもよく、窒素は、場合により四級化されていてもよい。例えば、複素環は、少なくとも１つの環員がヘテロ原子である安定な環であってもよい。一部の実施形態では、複素環は、３～１４、例えば、５～７、または５～１０個の環員を有していてもよく、１個の、２個の、または複数の環（すなわち、単環、二環または多環式の環）を有していてもよい。特定の実施形態では、ヘテロ原子は、酸素、窒素および硫黄である。ヘテロ原子の数は様々であってもよく、例えば、１個から３個である。好適な複素環はまた、Ｔｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ、第７６版、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、１９９５～１９９６、ｐｐｐｐ．２－２５～２－２６にも開示されており、その開示は、参照により本明細書に組み入れられる。一部の実施形態では、複素環は、非芳香族の複素環であり、その例としては、これらに限定されないが、ピロリジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、オキシラニル、テトラヒドロフラニル、ジオキソラニル、テトラヒドロ－ピラニル、ジオキサニル、ジオキソラニル、ピペリジル、ピペラジニル、モルホリニル、ピラニル、イミダゾリニル、ピロリニル、ピラゾリニル、チアゾリジニル、テトラヒドロチオピラニル、ジチアニル、チオモルホリニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロ－ピリジル、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリジニル、ジヒドロチオピラニル、およびアゼパニル、加えて、フェニル基との縮合の結果生じる融合した系が挙げられる。

【0045】

「ヘテロアリール」は、５～１４（例えば、５～７、または５～１０）個の環員を有する芳香族の複素環を指し、単環、二環または多環式の環であり得る。ヘテロ原子の数は、典型的には、例えばＮおよびＯから選択される１個から３個のヘテロ原子まで様々であってもよい。ヘテロアリール基の例としては、ピロリル、ピリジル、ピラゾリル、チエニル、ピリミジニル、ピラジニル、テトラゾリル、インドリル、キノリニル、プリニル、イミダゾリル、チエニル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、フラニル、ベンゾフラニル、１，２，４－チアジアゾリル、オキサジアゾール、イソチアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、イソキノリル、ベンゾチエニル、イソベンゾフリル、ピラゾリル、カルバゾリル、ベンゾイミダゾリル、イソオキサゾリル、およびピリジル－Ｎ－酸化物、加えて、フェニル基との縮合の結果生じる融合した系が挙げられる。特定の実施形態では、ヘテロアリールは、１個またはそれ以上のヘテロ原子、例えば、ＮおよびＯから選択される１個から３個のヘテロ原子を含む５または６員環のヘテロアリールである。「アルキル」、「シクロアルキル」、「アルケニル」、「アルキニル」、「アリール」、「ヘテロアリール」、および「ヘテロシクリル」はまた、２個の水素原子の除去によって形成される対応する「アルキレン」、「シクロアルキレン」、「アルケニレン」、「アルキニレン」、「アリーレン」、「ヘテロアリーレン」、および「ヘテロシクレン」も指す。

【0046】

用語「複素環式の核酸塩基」は、核酸塩基がポリマー性の構造に取り込まれたときに相補的な核酸塩基または核酸塩基類似体（すなわち核酸塩基の誘導体）との対合においてワトソン－クリック型の水素結合およびスタッキング相互作用を形成することが可能な任意の窒素含有複素環式部分を意味する。

【0047】

別段の規定がない限り、用語「複素環式の核酸塩基」は、本明細書では、本開示により、場合により置換されるジオキサン環または場合により置換されるモルホリノ環に付着することができる、場合により置換される窒素含有複素環式基を指す。一部の実施形態では、複素環式の核酸塩基は、場合により置換されるプリン塩基または場合により置換されるピリミジン塩基から選択することができる。用語「プリン塩基」は、本明細書において、当業者によって理解される通りのその通常の意味で使用され、その互変異性体を含む。同様に、用語「ピリミジン塩基」は、本明細書において、当業者によって理解される通りのその通常の意味で使用され、その互変異性体を含む。場合により置換されるプリン塩基の非限定的な列挙としては、プリン、アデニン、グアニン、ヒポキサンチン、キサンチン、アロキサンチン、７－アルキルグアニン（例えば、７－メチルグアニン）、テオブロミン、カフェイン、尿酸およびイソグアニンが挙げられる。ピリミジン塩基の例としては、これらに限定されないが、シトシン、チミン、ウラシル、５，６－ジヒドロウラシルおよび５－アルキルシトシン（例えば、５－メチルシトシン）が挙げられる。複素環式の核酸塩基の他の非限定的な例としては、ジアミノプリン、８－オキソ－Ｎ_６アルキルアデニン（例えば、８－オキソ－Ｎ_６メチルアデニン）、７－デアザキサンチン、７－デアザグアニン、７－デアザアデニン、Ｎ_４，Ｎ_４－エタノシトシン、Ｎ_６，Ｎ_６－エタノ－２，６－ジアミノプリン、５－ハロウラシル（例えば、５－フルオロウラシルおよび５－ブロモウラシル）、プソイドイソシトシン、イソシトシン、イソグアニン、１，２，４－トリアゾール－３－カルボキサミド、ならびに参照により本明細書に組み入れられる追加の複素環塩基を開示する米国特許第５，４３２，２７２号および７，１２５，８５５号に記載される他の複素環式の核酸塩基が挙げられる。一部の実施形態では、複素環式の核酸塩基は、アミンまたはエノール保護基で場合により置換される。

【0048】

用語「保護基（ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）」および「保護基（ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐｓ）」は、本明細書で使用される場合、分子中の既存の基が不要な化学反応を受けないようにするために分子に付加される任意の原子または原子の基を指す。「保護基」は、化学合成中の望ましくない、または時期尚早な反応から反応性基を保護することが当業界において公知の不安定性の化学成分であってもよく、例えばヒドロキシル、アミノ、チオール、カルボン酸またはリン酸基であり得る。保護基は、典型的には、反応中に他の反応性部位における部位を保護するために選択的に、および／またはオルソゴナルに使用され、次いで除去して、保護されていない基をそのままにすることもできるし、または更なる反応に利用できるようにすることもできる。

【0049】

保護基部分の例は、Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９９、およびＪ．Ｆ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、１９７３に記載されており、これらはどちらも、好適な保護基を開示する限定的な目的のために参照により本明細書に組み入れられる。保護基部分は、それらが特定の反応条件に対して安定であり、当業界公知の手法を使用して都合の良い段階で容易に除去されるような方法で選択することができる。

【0050】

保護基の非限定的な列挙としては、ベンジル；置換されたベンジル；アルキルカルボニルおよびアルコキシカルボニル（例えば、ｔ－ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、アセチル、またはイソブチリル）；アリールアルキルカルボニルおよびアリールアルコキシカルボニル（例えば、ベンジルオキシカルボニル）；置換されたメチルエーテル（例えばメトキシメチルエーテル）；置換されたエチルエーテル；置換されたベンジルエーテル；テトラヒドロピラニルエーテル；シリルエーテル（例えば、トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリル、ｔ－ブチルジメチルシリル、トリイソプロピルシリルオキシメチル、［２－（トリメチルシリル）エトキシ］メチルまたはｔ－ブチルジフェニルシリル）；エステル（例えば安息香酸エステル、２－シアノエチルリン酸エステル）；カーボネート（例えばメトキシメチルカーボネート）；スルホネート（例えばトシレートまたはメシレート）；非環式ケタール（例えばジメチルアセタール）；環式ケタール（例えば、１，３－ジオキサン、１，３－ジオキソラン、および本明細書に記載されるもの）；非環式アセタール；環式アセタール（例えば、本明細書に記載されるもの）；非環式ヘミアセタール；環式ヘミアセタール；環式ジチオケタール（例えば、１，３－ジチアンまたは１，３－ジチオラン）；オルトエステル（例えば、本明細書に記載されるもの）およびトリアリールメチル基（例えば、トリチル；モノメトキシトリチル（ＭＭＴ）；４，４’－ジメトキシトリチル（ＤＭＴ）；４，４’，４”－トリメトキシトリチル（ＴＭＴ）；および本明細書に記載されるもの）が挙げられる。

【0051】

好ましい保護基は、アセチル（Ａｃ）、ベンゾイル（Ｂｚｌ）、イソブチリル（ｉＢｕ）、フェニルアセチル、ジメトキシトリチル（ＤＭＴ）、メトキシトリチル（ＭＭＴ）、トリフェニルメチル（Ｔｒｔ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミジンおよび２－シアノエチル（ＣＥ）を含む群から選択される。

【0052】

別段の指定がない限り、いずれの保護基、アミノ酸および他の化合物に対する略語は、それらの一般的な使用、認められた略語、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１：９４２～９４４（１９７２）を参照）に従う。

【0053】

用語「固体支持体」（樹脂とも呼ばれる）は、本明細書で使用される場合、合成中にオリゴヌクレオチドが結合する不溶性粒子、典型的には直径５０～２００μｍの不溶性粒子を意味する。多くのタイプの固体支持体が使用されているが、制御多孔質ガラス（ＣＰＧ）およびポリスチレン（高度に架橋されたポリスチレンビーズ）が特に有用であることが証明されている。制御多孔質ガラスは、硬質であり、非膨張性であり、オリゴヌクレオチド合成が起こる深い孔（孔径５００～１０００Å）を有する。従来のオリゴヌクレオチド合成のための固体支持体は商業的に入手可能であり、典型的には、ＣＰＧ固体支持体の場合、樹脂１グラム当たり２０～４０μｍｏｌのヌクレオシドの負荷量で製造される。ポリスチレンベースの固体支持体は、樹脂１グラム当たり最大３００μｍｏｌのより高い負荷量を示す。標準的なヌクレオチドがすでに付着された固体支持体材料は商業的に入手可能であり、アミノ官能化ＣＰＧおよびポリスチレン材料が、後で本明細書に記載される構成単位に関して示されるような非商業的な構成単位の合成に使用される。第１のヌクレオチド構成単位がすでに付着された固体支持体の代替として、後で本開示で記載されるような商業的に入手可能なユニバーサルな固体支持体材料を使用することができる。

【0054】

用語「リボヌクレオチド」または「ヌクレオチド」は、本明細書で使用される場合、以下で更に詳述されるような、天然に存在する、もしくは修飾されたヌクレオチド、または代用の置き換え部分を含む。修飾されたヌクレオチドは、天然に存在しないヌクレオチドであり、本明細書では「ヌクレオチド類似体」とも称される。当業者であれば、ヌクレオチド中のグアニン、シトシン、アデニン、ウラシルまたはチミンは、このような置き換え部分が結合しているヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの塩基対合特性を実質的に変更することなく、他の部分で置き換えが可能であることを理解していると予想される。例えば、その塩基としてイノシンを含むヌクレオチドは、これらに限定されないが、アデニン、シトシン、またはウラシルを含有するヌクレオチドと塩基対合することができる。したがって、ウラシル、グアニン、またはアデニンを含有するヌクレオチドは、本開示のヌクレオチド配列中で、例えばイノシンを含有するヌクレオチドによって置き換えることができる。このような置き換え部分を含む配列は、本開示の実施形態として含まれる。

【0055】

「細胞標的化部分」は、本明細書で使用される場合、確実にｓｉＲＮＡの送達を増加させる分子基を意味し、このような増加は、（ｉ）選択された標的受容体（例えば、標的タンパク質）に結合するｓｉＲＮＡの特異性の増加、例えば選択された標的受容体を発現する細胞に結合するｓｉＲＮＡの特異性の増加など；（ｉｉ）標的細胞によるｓｉＲＮＡの取り込みの増加；および／または（ｉｉｉ）標的細胞に入ったら、適切にプロセシングされるｓｉＲＮＡの能力の増加、例えば、ｓｉＲＮＡの細胞内放出を、例えば輸送小胞から細胞質へのｓｉＲＮＡの転移を容易にすることによって増加させることを包含する。したがって、細胞標的化部分は、オリゴヌクレオチドを、特定の細胞、組織、臓器などに方向付け、および／または送達するのに使用される。ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体またはオリゴヌクレオチドに含まれる細胞標的化部分は、前記ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体またはオリゴヌクレオチドが、標的化された細胞型によって、標的化されていない細胞型に対して優先的に認識される、結合される、内在化される、プロセシングされる、活性化などされるように、前記ヌクレオチドにヌクレオチド類似体またはオリゴヌクレオチドの特徴を付与する。例えば、内皮細胞は、ペプチド細胞標的化部分Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＲＧＤ）への高親和性を有する；がんおよび腎臓細胞は、葉酸部分を有する化合物と優先的に相互作用する；免疫細胞は、マンノースへの親和性を有する；および心筋細胞は、ペプチドＷＬＳＥＡＧＰＶＶＴＶＲＡＬＲＧＴＧＳＷ（配列番号１）への親和性を有する（例えば、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ＺＶ－８０８１－８０８７、２０１０を参照）。他の細胞標的化／送達部分は、当業界において公知である。したがって、細胞標的化部分を含む化合物は、優先的に標的化された細胞型と相互作用し、それに取り込まれる。

【0056】

細胞標的化部分は、細胞標的化ペプチド基および細胞標的化非ペプチド基を包含する。

【0057】

「標的細胞」または「標的化された細胞」は、本明細書で使用される場合、目的の細胞を指す。このような細胞は、インビトロ、インビボ、インサイチュまたは生物の組織もしくは臓器で見出すことができる。生物は、動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒト、最も好ましくはヒト患者であり得る。

【0058】

用語「ＴＴＲ」は、本明細書で使用される場合、トランスチレチン遺伝子またはタンパク質を指す。用語「ＴＴＲ」は、本明細書で使用される場合、ヒトＴＴＲを含み、そのアミノ酸およびヌクレオチド配列は、例えばＥＭＢＬデータベースにおいて受託番号ＣＲ４５６９０８で見出すことができ；マウスＴＴＲを含み、そのアミノ酸およびヌクレオチド配列は、例えばＧｅｎＢａｎｋデータベースにおいて受託番号ＡＡＨ２４７０２で見出すことができる。ＴＴＲ ｍＲＮＡ配列の更なる例は、例えばＧｅｎＢａｎｋで容易に入手可能である。

【0059】

「標的配列」は、本明細書で使用される場合、一次転写生成物のＲＮＡプロセシング生成物であるｍＲＮＡを含む標的遺伝子のＲＮＡ転写物またはその部分に見出される連続するヌクレオチド配列を指す。

【0060】

本明細書で使用される場合、更に別段の指定がない限り、用語「相補的」は、第２のヌクレオチド配列（例えば、オリゴヌクレオチド）に対して第１のヌクレオチド配列（例えば、オリゴヌクレオチド）を記載するのに使用される場合、当業者によって理解される通り、特定の条件下で第２のヌクレオチド配列とハイブリダイズし、二重鎖構造を形成する第１のヌクレオチド配列の能力を指す。この例としては、第１または第２のヌクレオチド配列の全長にわたる第１のヌクレオチド配列の第２のヌクレオチド配列への塩基対合が挙げられる。このような配列は、本明細書において互いに「完全に相補的」と称することができる。本明細書において第１の配列が第２の配列に対して「実質的に相補的」と称される場合、２つの配列は、完全に相補的であってもよいし、またはその最終的な標的に最適な条件下でハイブリダイズする能力を保持しながら７０％またはそれより高いヌクレオチド同一性を有していてもよい。しかしながら、２つのオリゴヌクレオチドが、ハイブリダイゼーションのときに１つまたはそれ以上の一本鎖オーバーハングを形成するように設計される場合、このようなオーバーハングは、相補性の決定に関するミスマッチとみなされないものとする。例えば、２１ヌクレオチドの長さの第１のオリゴヌクレオチドと、２３ヌクレオチドの長さの第２のオリゴヌクレオチドとを含む二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）であって、第２のオリゴヌクレオチドが第１のオリゴヌクレオチドに完全に相補的な２１ヌクレオチドの配列を含むものは、本開示の目的に関して「完全に相補的」とも称される。「相補」配列はまた、そのハイブリダイズする能力に関する上記の必要条件が満たされる限り、非ワトソン－クリック塩基対および／または非天然の修飾されたヌクレオチドから形成された塩基対を含んでいてもよいし、またはそれから全体的に形成されたものでもよい。用語「相補的な」、「完全に相補的な」、および「実質的に相補的な」は、その使用の状況から理解されるように、ｄｓＲＮＡのセンス鎖とアンチセンス鎖との間、またはｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖と標的配列との間での塩基の一致に関して使用することができる。ｍＲＮＡの「少なくとも一部に実質的に相補的な」ポリヌクレオチドは、本明細書で使用される場合、目的のｍＲＮＡの連続する部分に実質的に相補的なポリヌクレオチドを指す。用語「二本鎖ＲＮＡ」または「ｄｓＲＮＡ」は、本明細書で使用される場合、上記で定義した通り２つの逆平行の実質的に相補的な核酸鎖を含む二重鎖構造を有するリボ核酸分子の複合体を指す。二重鎖構造を形成する２つの鎖は、一方の大きい方のＲＮＡ分子の異なる部分であってもよいし、またはそれらは、別個のＲＮＡ分子であってもよい。別個のＲＮＡ分子の場合、このようなｄｓＲＮＡは、文献では短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）と称される場合もある。２つの鎖が一方の大きい方の分子の一部であり、それゆえに第１の鎖の３’末端と第２の鎖の５’末端との間がヌクレオチドの中断のない鎖によって接続されて二重鎖構造を形成する場合、接続するＲＮＡ鎖は、「ヘアピンループ」、「短鎖ヘアピンＲＮＡ」、または「ｓｈＲＮＡ」と称される。２つの鎖が、ヌクレオチドの中断のない鎖以外の手段によって、第１の鎖の３’末端と第２の鎖の５’末端との間で共有結合により接続されて、二重鎖構造を形成する場合、接続する構造は、「リンカー」と称される。ＲＮＡ鎖は、同じまたは異なる数のヌクレオチドを有していてもよい。塩基対の最大数は、二重鎖中に存在する全てのオーバーハングを引いたｄｓＲＮＡの最も短い鎖におけるオリゴヌクレオチドの数である。二重鎖構造に加えて、ｄｓＲＮＡは、１つまたはそれ以上のヌクレオチドオーバーハングを含んでいてもよい。加えて、用語「ｄｓＲＮＡ」は、本明細書で使用される場合、複数のヌクレオチドにおける実質的な修飾、更に、本明細書で開示された、または当業界において公知の全てのタイプの修飾などのリボヌクレオチドへの化学修飾を含み得る。任意のこのような修飾は、ｓｉＲＮＡ型の分子で使用される場合、本開示の目的に関して「ｄｓＲＮＡ」に包含される。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡにおけるヌクレオチド間連結は、修飾されたものでもよく、例えば本明細書に記載されるように修飾されたものでもよい。

【0061】

本開示の範囲内で、核酸の２つの配列間の「パーセンテージ同一性」は、最適なアライメント後に得られた、比較される２つの配列間の同一なヌクレオチド残基のパーセンテージを意味し、このパーセンテージは純粋に統計であり、２つの配列間の差はそれらの長さに沿ってランダムに分布する。２つの核酸配列の比較は従来、それらを最適にアライメントした後に配列を比較することによって行われ、前記比較は、セグメントによって、または「アライメントウィンドウ」を使用することによって実行することができる。比較のための配列の最適なアライメントは、手動での比較に加えて、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１）のローカルホモロジーアルゴリズムを用いて、ＮｅｄｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（１９７０）のローカルホモロジーアルゴリズムを用いて、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（１９８８））の類似性サーチ方法を用いて、またはこれらのアルゴリズム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ、または比較ソフトウェアであるＢＬＡＳＴ ＮＲまたはＢＬＡＳＴ Ｐによる）を使用するコンピューターソフトウェアを用いて行うことができる。

【0062】

２つの核酸配列間のパーセンテージ同一性は、２つの最適にアライメントされた配列を比較することによって決定され、この場合、２つの配列間で最適なアライメントのために、比較される核酸配列が、参照配列と比較して付加または欠失を有していてもよい。パーセンテージ同一性は、２つの配列間で、好ましくは２つの完全配列間でヌクレオチド残基が同一な位置の数を決定すること、アライメントウィンドウで同一な位置の数を位置の総数により割ること、および結果に１００を掛けて２つの配列間のパーセンテージ同一性を得ることによって計算される。

【0063】

本明細書において意図される通り、参照配列と少なくとも７０％のヌクレオチド同一性を有するヌクレオチド配列は、前記参照配列と、少なくとも７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％および９９％のヌクレオチド同一性を有するものを包含する。

【0064】

一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、デオキシリボヌクレオシドを含む修飾されたリボヌクレオシドを含み、例えば、デオキシリボヌクレオシドオーバーハング、ｄｓＲＮＡの二本鎖部分内に１つまたはそれ以上のデオキシリボヌクレオシドを含むものなどが挙げられる。しかしながら、いかなる場合でも、二本鎖ＤＮＡ分子は、用語「ｄｓＲＮＡ」に包含されないことは自明である。

【0065】

用語「ヌクレオチドオーバーハング」は、本明細書で使用される場合、ｄｓＲＮＡの第１の鎖の３’末端が第２の鎖の５’末端を超えて伸長している場合、またはその逆の場合に、ｄｓＲＮＡの二重鎖構造から突き出ている対になっていない１つまたは複数のヌクレオチドを指す。「平滑」または「平滑末端」は、ｄｓＲＮＡの末端に対になっていないヌクレオチドがない、すなわちヌクレオチドオーバーハングがないことを意味する。「平滑末端化された」ｄｓＲＮＡは、その全長にわたり二本鎖であるｄｓＲＮＡ、すなわち分子のどちらの末端にもヌクレオチドオーバーハングがないｄｓＲＮＡである。明確にするために、ｄｓＲＮＡの鎖の３’末端および／または５’末端にコンジュゲートした化学的キャップまたはヌクレオチドではない化学成分は、ｄｓＲＮＡがオーバーハングを有するかまたは平滑末端化されているかを決定することにおいて考慮されない。

【0066】

用語「連続するヌクレオチド」は、本明細書で使用される場合、ヌクレオチド間連結を介して互いに連結されている天然ヌクレオチドまたは修飾されたヌクレオチドのいずれかであるヌクレオチドを指す。したがって、２つの連続するヌクレオチドは、ヌクレオチド間連結を介して互いに連結されている。また３つの連続するヌクレオチドも、３つのヌクレオチドのストレッチを意味し、この場合、第１のヌクレオチドは、ヌクレオチド間連結を介して第２のヌクレオチドに連結され、第２のヌクレオチドも同様に、ヌクレオチド間連結を介して第３のヌクレオチドに連結される。オリゴヌクレオチド中で連続的に配置される前記３つのヌクレオチドのストレッチ内で、前記３つのヌクレオチドは、「連続するヌクレオチド」と呼ばれる。例証として、１０個の連続するヌクレオチド類似体を含むオリゴヌクレオチドは、その配列中に、ヌクレオチド間連結を介して互いに連結されている１０個のヌクレオチド類似体の中断のないストレッチを含むオリゴヌクレオチドからなる。

【0067】

ｄｓＲＮＡにおける用語「アンチセンス鎖」または「アンチセンス鎖オリゴヌクレオチド」は、本明細書で使用される場合、標的ヌクレオチド配列に実質的に相補的な配列を含有するｄｓＲＮＡの鎖を指す。ｄｓＲＮＡの他方の鎖は「センス鎖」であり、これは「センス鎖オリゴヌクレオチド」と呼ばれることもある。ｄｓＲＮＡ中に含まれる二本鎖オリゴヌクレオチドにおいて、アンチセンス鎖は、本明細書において「ハイブリダイジング領域」と呼ばれるヌクレオチド領域を含み、これは、センス鎖の領域（これは、センス鎖のハイブリダイジング領域である）と対合する。アンチセンス鎖は、センス鎖と対合しない５’末端および／または３’末端に配置される領域を更に含んでいてもよい。ｄｓＲＮＡがｓｉＲＮＡからなるｄｓＲＮＡの実施形態では、この対合していない領域は、慣習的に、「ヌクレオチドオーバーハング」または「オーバーハング」、すなわち「５’－ヌクレオチドオーバーハング」または「３’－ヌクレオチドオーバーハング」と呼ばれる。通常、ヌクレオチドオーバーハングは、１～８ヌクレオチドの長さを有し、これは、１、２、３、４、５、６、７および８ヌクレオチドの長さを包含する。ほとんどの実施形態において、ヌクレオチドオーバーハングは、２～３ヌクレオチドの長さを有する。対称的に、二本鎖オリゴヌクレオチドのセンス鎖、例えばｄｓＲＮＡのセンス鎖などは、アンチセンス鎖のハイブリダイジング領域とハイブリダイズするハイブリダイジング領域を含む。またセンス鎖は、５’－ヌクレオチドオーバーハングおよび／または３’－ヌクレオチドオーバーハングを更に含んでいてもよい。二本鎖オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖のハイブリダイジング領域は、それはセンス鎖の領域と対合していても、一部の実施形態では、センス鎖の前記領域に完全に相補的でなくてもよく、これは、ハイブリダイズしたとき、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドのハイブリダイジング領域と、センス鎖オリゴヌクレオチドの前記対合している領域との間に、一部のミスマッチ（すなわち一部の対合していないヌクレオチド）が存在してもよいことを意味する。典型的には、これらの実施形態の一部では、１～３つのミスマッチが、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドのハイブリダイジング領域と、センス鎖オリゴヌクレオチドの対合している領域との間に存在していてもよい。

【0068】

用語「細胞に導入する」は、本明細書で使用される場合、当業者によって理解されている通り、細胞への取り込みまたは吸収を容易にすることを意味する。ｄｓＲＮＡの吸収または取り込みは、助けのない拡散性の、もしくは能動的な細胞プロセスを介して、または補助剤もしくはデバイスによって起こる場合がある。この用語の意味は、インビトロにおける細胞に限定されないこととする；ｄｓＲＮＡはまた「細胞に導入」されていてもよく、この場合、細胞は、生物の一部である。このような例において、細胞への導入は、生物への送達を含むことになる。例えば、インビボ送達の場合、ｄｓＲＮＡは、組織部位に注射してもよいし、または全身投与してもよい。インビボ送達はまた、ベータグルカン送達系によっても媒介される（例えば、Ｔｅｓｚ，Ｇ．Ｊ．ら、２０１１、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．４３６（２）：３５１～６２を参照）。インビトロでの細胞への導入としては、エレクトロポレーションおよびリポフェクションなどの当業界において公知の方法が挙げられる。更なるアプローチは、本明細書の以下に記載されるか、または当業界において公知である。

【0069】

用語「～の発現を阻害する」または「～の発現を阻害すること」は、本明細書で使用される場合、それらが標的遺伝子に対して言及される限り、標的遺伝子から転写されたｍＲＮＡの量の低減によって証明されるような標的遺伝子の発現の少なくとも部分的な抑制を指す。用語「阻害すること」は、本明細書で使用される場合、「低減させる」、「サイレンシングする」、「下方調節する」、「抑制する」、「ノックダウンする」および他の類似の用語と同義的に使用され、任意のレベルの阻害を含む。阻害の程度は、通常、（（（対照細胞におけるｍＲＮＡ）－（処置された細胞におけるｍＲＮＡ））／（対照細胞におけるｍＲＮＡ））×１００％で表される。代替として、阻害の程度は、標的遺伝子の転写に機能的に関連するパラメーターの低減、例えば、細胞によって分泌される標的遺伝子によってコードされたタンパク質の量、または特定の表現型、例えばアポトーシスを提示する細胞の数の低減で示すことができる。原則的に、標的遺伝子サイレンシングは、構成的に、またはゲノム操作によってのいずれかで、および任意の適切なアッセイによって、標的を発現する任意の細胞において決定することができる。しかしながら、所与のｄｓＲＮＡが標的遺伝子の発現を特定の程度阻害するかどうかを決定するために参照が必要であり、それゆえに本開示に包含される場合、以下の例で提供されるアッセイは、そのような参照として役立つと予想される。

【0070】

本明細書で使用される場合、標的遺伝子発現の文脈において、用語「処置する」、「処置」などは、標的遺伝子の発現によって媒介される病理学的プロセスの緩和または軽減を指す。本開示の文脈において、用語「処置する」、「処置」などは、それが本明細書の以下で列挙される他の状態（標的発現によって媒介される病理学的プロセス以外の）のいずれかに関する限り、このような状態に関連する１つまたはそれ以上の症状を緩和または軽減することを指す。

【0071】

本明細書で使用される場合、疾患または障害に関する用語「防止する」または「その進行を遅延させる」（およびそれらの文法上の変化形）は、例えば疾患を有する疑いのある、または疾患を発生させるリスクがある個体における、疾患の予防的処置に関する。防止としては、これらに限定されないが、疾患の発症または進行を防止するかもしくは遅延させること、および／または疾患の１つまたはそれ以上の症状を望ましい、または病的な状態未満のレベルを維持することを挙げることができる。

【0072】

用語「治療有効量」および「予防有効量」は、本明細書で使用される場合、標的遺伝子発現によって媒介される病理学的プロセス、または標的遺伝子の発現によって媒介される病理学的プロセスの明らかな症状の処置、防止、または管理における治療的な利益を提供する量を指す。治療上有効な具体的な量は、通常の医療技術者によって容易に決定することができ、標的遺伝子発現によって媒介される病理学的プロセスのタイプおよび段階、患者の病歴および年齢、ならびに標的遺伝子によって媒介される生物学的プロセスを阻害する他の治療剤の投与などの要因に応じて変更することができる。

【0073】

用語「個体」または「対象」は、本明細書で使用される場合、哺乳動物である。哺乳動物としては、これらに限定されないが、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、およびウマ）、霊長類（例えば、ヒトおよび非ヒト霊長類、例えばサル）、ウサギ、およびげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）が挙げられる。一部の実施形態では、個体または対象は、ヒトである。

【0074】

用語「ヌクレオシド間連結」、「ヌクレオシド間連結基」、「ヌクレオチド間連結」、または「ヌクレオチド間連結基」は、本明細書において同義的に使用され、２つのヌクレオシド（すなわち、複素環の塩基部分および糖部分）単位間の任意のリンカーまたは結合を指し、その例としては、当業界において公知のように、これらに限定されないが、リン酸エステル、リン酸エステルの類似体（すなわち、ホスホジエステルまたはホスホトリエステル部分）、ホスホロチオエート、リン酸エステル、グアニジウム、ヒドロキシルアミン、ヒドロキシルヒドラジニル、アミド、カルバミン酸エステル、アルキル、および置換されたアルキル連結などが挙げられる。「ヌクレオシド間の連結基」は、２つのヌクレオシド間、２つのヌクレオシド類似体間、またはヌクレオシドとヌクレオシド類似体との間の連結に関与し得る。

【0075】

ヌクレオシド間連結は、核酸分子の主鎖を構成する。ヌクレオシド間連結基は、核酸分子に含まれる２つの隣接するヌクレオシド残基を連結する化学基を指し、（ｉ）２つの隣接するヌクレオシド残基を連結する化学基、（ｉｉ）ヌクレオシド残基を隣接するヌクレオシド類似体残基と連結する化学基、および（ｉｉｉ）第１のヌクレオシド類似体残基を第２のヌクレオシド類似体残基と連結する化学基であって、ヌクレオシド類似体残基は同一でもよいし、または別個でもよい、化学基を包含する。ヌクレオシド類似体残基は、本明細書で開示される式（Ｉ）の化合物を包含する。一態様では、本発明のｓｉＮＡ分子のヌクレオチドは、第１のヌクレオチドの糖部分の３’－炭素と、第２のヌクレオチドの糖部分の５’－炭素との連結（本明細書では、３’ヌクレオシド間連結と称される）を介して、隣接するヌクレオチドに連結される。３’－５’ヌクレオシド間連結は、本明細書で使用される場合、２つの隣接するヌクレオシド単位を連結するヌクレオシド間連結を指し、この場合、連結は、第１のヌクレオシドの糖部分の３’－炭素と、第２のヌクレオシドの糖部分の５’－炭素との間である。別の態様では、本発明のｓｉＮＡ分子のヌクレオチド（ヌクレオチド類似体を含む）は、第１のヌクレオチドの糖部分の２’－炭素と、第２のヌクレオチドの糖部分の５’－炭素との連結（本明細書では、２’ヌクレオシド間連結と称される）を介して、隣接するヌクレオチド（ヌクレオチド類似体を含む）に連結される。２’－５’ヌクレオシド間連結は、本明細書で使用される場合、２つの隣接するヌクレオシド単位を連結するヌクレオシド間連結を指し、この場合、連結は、第１のヌクレオシドの糖部分の２’－炭素と、第２のヌクレオシドの糖部分の５’－炭素との間である。

【0076】

用語「ヌクレオシド間連結基」は、本明細書で使用される場合、リンおよび非リンを含有するヌクレオシド間連結基を包含する。

【0077】

一部の実施形態では、リンを含有するヌクレオシド間連結基は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチルおよび他のアルキルのホスホン酸エステル、例えばなど３’－アルキレンホスホン酸エステル、５’－アルキレンホスホン酸エステルおよびキラルホスホン酸エステル、ホスフィン酸エステル、３’－アミノホスホロアミデートおよびアミノアルキルホスホロアミデートなどのホスホロアミデート、チオノホスホロアミデート、チオノアルキルリン酸エステル、チオノアルキルホスホトリエステル、ノルマル３’－５’連結を有するセレノリン酸エステルおよびボラノリン酸エステル、および２’－５’連結されたそれらの類似体を包含する。

【0078】

上記のリンを含有するヌクレオシド間連結の調製を教示する代表的な米国特許としては、米国特許第３，６８７，８０８号；４，４６９，８６３号；４，４７６，３０１号；５，０２３，２４３号；５，１７７，１９６号；５，１８８，８９７号；５，２６４，４２３号；５，２７６，０１９号；５，２７８，３０２号；５，２８６，７１７号；５，３２１，１３１号；５，３９９，６７６号；５，４０５，９３９号；５，４５３，４９６号；５，４５５，２３３号；５，４６６，６７７号；５，４７６，９２５号；５，５１９，１２６号；５，５３６，８２１号；５，５４１，３０６号；５，５５０，１１１号；５，５６３，２５３号；５，５７１，７９９号；５，５８７，３６１号；５，１９４，５９９号；５，５６５，５５５号；５，５２７，８９９号；５，７２１，２１８号；５，６７２，６９７号および５，６２５，０５０号が挙げられ、これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み入れられる。

【0079】

一実施形態では、非ホスホジエステル主鎖連結は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、アルキル－ホスホネートおよびホスホロアミデート主鎖連結基からなる群から選択される。

【0080】

一実施形態では、リンを含有するヌクレオシド間連結基は、ホスホジエステル、ホスホトリエステルおよびホスホロチオエートを包含する。

【0081】

一部の実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドは、リン原子を含有しない１つまたはそれ以上のヌクレオシド間連結基を含む。このようなオリゴヌクレオチドとしては、これらに限定されないが、短鎖アルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド間連結基、混成のヘテロ原子およびアルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド間連結基、または１つもしくはそれ以上の短鎖ヘテロ原子もしくは複素環式のヌクレオシド間連結基によって形成されるものが挙げられる。これらの例としては、シロキサン主鎖；硫化物、スルホキシドおよびスルホン主鎖；ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル主鎖；メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル主鎖；リボアセチル主鎖；アルケンを含有する主鎖；スルファミン酸主鎖；メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ主鎖；スルホン酸およびスルホンアミド主鎖；アミド主鎖を有するもの；ならびに混成のＮ、Ｏ、ＳおよびＣＨ２構成要素部分を有する他のものが挙げられる。上記の非リンを含有するヌクレオシド間連結基の調製を教示する代表的な米国特許としては、これらに限定されないが、米国特許第５，０３４，５０６号；５，１６６，３１５号；５，１８５，４４４号；５，２１４，１３４号；５，２１６，１４１号；５，２３５，０３３号；５，２６４，５６２号；５，２６４，５６４号；５，４０５，９３８号；５，４３４，２５７号；５，４６６，６７７号；５，４７０，９６７号；５，４８９，６７７号；５，５４１，３０７号；５，５６１，２２５号；５，５９６，０８６号；５，６０２，２４０号；５，６１０，２８９号；５，６０２，２４０号；５，６０８，０４６号；５，６１０，２８９号；５，６１８，７０４号；５，６２３，０７０号；５，６６３，３１２号；５，６３３，３６０号；５，６７７，４３７号；５，７９２，６０８号；５，６４６，２６９号および５，６７７，４３９号が挙げられ、これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み入れられる。

【0082】

一実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドは、非イオン性である１つまたはそれ以上の中性ヌクレオシド間連結基を含む。中性ヌクレオシド間連結基は、シロキサン（ジアルキルシロキサン）、カルボキシレートエステル、カルボキサミド、硫化物、スルホン酸エステルおよびアミドを含む非イオン性連結基を包含する（例えば：Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ；Ｙ．Ｓ．ＳａｎｇｈｖｉおよびＰ．Ｄ．Ｃｏｏｋ編、ＡＣＳ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ ５８０；第３章および４、（４０～６５頁）を参照）。更なる中性ヌクレオシド間連結基は、混成のＮ、Ｏ、ＳおよびＣＨ２構成要素部分を含む非イオン性連結を包含する。

【0083】

二本鎖オリゴヌクレオチド、例えば二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）
これまでに本明細書で特定したように、ｄｓＲＮＡを包含する本開示による二本鎖オリゴヌクレオチドは、センス鎖オリゴヌクレオチドおよびアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、そこに含まれるハイブリダイジング領域を介してセンス鎖オリゴヌクレオチドとハイブリダイズする。対称的に、センス鎖オリゴヌクレオチドはまた、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドに含まれるハイブリダイジング領域とハイブリダイズするハイブリダイジング領域も含む。一部の実施形態では、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、その５’末端に、その３’末端に、またはその５’末端とその３’末端の両方に、センス鎖オリゴヌクレオチドとハイブリダイズしないヌクレオチド領域を更に含み、このハイブリダイズしない領域は、本明細書において「ヌクレオチドオーバーハング」または代替として「オーバーハング」と呼ばれる。またセンス鎖オリゴヌクレオチドは、その５’末端に、その３’末端に、またはその５’末端とその３’末端の両方に、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドとハイブリダイズしないヌクレオチド領域を更に含んでいてもよく、このハイブリダイズしない領域は、本明細書において「ヌクレオチドオーバーハング」または代替として「オーバーハング」と呼ばれる。

【0084】

本開示による二本鎖オリゴヌクレオチドの好ましい実施形態では、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドに含まれるハイブリダイジング領域は、センス鎖オリゴヌクレオチドに含まれるハイブリダイジング領域と完全に相補的である。

【0085】

アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、その５’末端に、その３’末端に、または５’末端とその３’末端の両方に配置される、センス鎖と対合しない領域を更に含んでいてもよい。ｄｓＲＮＡがｓｉＲＮＡからなるｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの実施形態では、センス鎖オリゴヌクレオチドと対合しない前記３’末端または５’末端領域は、慣習的に、「ヌクレオチドオーバーハング」または「オーバーハング」、すなわち「５’－ヌクレオチドオーバーハング」または「３’－ヌクレオチドオーバーハング」と呼ばれる。本開示による二本鎖オリゴヌクレオチドの好ましい実施形態では、ヌクレオチドオーバーハングは、センス鎖オリゴヌクレオチドまたはアンチセンス鎖オリゴヌクレオチド中に存在する場合、１～８ヌクレオチドの長さを有し、これは、１、２、３、４、５、６、７および８ヌクレオチドの長さを包含する。ほとんどの実施形態において、ヌクレオチドオーバーハングは、２～３ヌクレオチドの長さを有する。

【0086】

本発明者らは、センス鎖オリゴヌクレオチドおよびアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドを含む二本鎖オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドに含まれるハイブリダイジング領域において、特に、ｓｉＲＮＡとして有用な二本鎖オリゴヌクレオチドにおいて、本開示に記載される特定の式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体の存在は、インビボにおける作用の長い持続時間をもたらす前記二本鎖オリゴヌクレオチドの高い安定性を可能にすることを見出した。更に、前記二本鎖オリゴヌクレオチドがｓｉＲＮＡである実施形態では、５’－オーバーハングまたは３’－オーバーハング以外の配置におけるアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドのハイブリダイジング領域における本明細書に記載される１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体の存在は、前記ｓｉＲＮＡに、標的遺伝子の発現を阻害する改善された特性、その遺伝子発現阻害特性の改善された持続時間、および、特にアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの標的化された配列への改善された特異性を付与することが本明細書において示される。本明細書に記載の例で示されるように、改善された特異性は、オフターゲット事象の数を低減させながら、標的オリゴヌクレオチドとハイブリダイズするアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの改善された特性を包含する。

【0087】

本明細書に記載の例は、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドおよびセンス鎖オリゴヌクレオチドを含み、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドのハイブリダイジング領域中に、その３’－オーバーハングまたは５’－オーバーハングとは異なる配置に１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体を取り込んだ二本鎖オリゴヌクレオチドが、標的遺伝子の効率的な阻害を確実にするのに必要な安定性および特異性を有するｓｉＲＮＡ二重鎖構造を生成することを可能にすることを示す。本明細書では、標的遺伝子の効率的な阻害は、オフターゲット事象の数の低減を伴うことも示される。

【0088】

意外なことに、本発明者らは、本開示の１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）または（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体を含むｓｉＲＮＡ二重鎖の高い代謝的安定性は、式（Ｉ－Ａ）または（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体が、一方が他方と、または一方がリボースを含有するヌクレオチドと、従来のホスホジエステル結合を介して連結される場合に得られることを示した。意外なことに、式（Ｉ－Ａ）または（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体が、オリゴヌクレオチド内で従来のホスホジエステル結合を介して連結されてｓｉＲＮＡの鎖を形成する場合、得られたｓｉＲＮＡ二重鎖は、ヌクレアーゼ分解に対してより高い安定性を有し、それにより、式（Ｉ－Ａ）または（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体の代わりにホスホロチオエート連結されたデオキシリボヌクレオチドを有する同じｓｉＲＮＡより長いインビボにおける作用の持続時間がもたらされることが示された。

【0089】

式（Ｉ－Ａ）または（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体のインビボにおける作用の持続時間におけるこの高い増加は、ホスホジエステル結合を介して連結される場合、ホスホロチオエートなどのリン基を連結する修飾されたヌクレオチド間を介した安定化を回避することができるため、明確な技術的利点である。この場合、このような非従来型のホスホロチオエートは、キラル中心を導入し、それにより生じるｓｉＲＮＡの望ましくないジアステレオマー混合物が生じることを連想させる。後者は、ｓｉＲＮＡ結合特性を変更する可能性があり、もしかするとオフターゲット事象の増加を引き起こす可能性がある。本明細書では、式（Ｉ－Ａ）または（Ｉ－Ｂ）の１つまたはそれ以上の化合物を有するｓｉＲＮＡは、いずれのトランスフェクション試薬も存在しない条件下でｓｉＲＮＡが標的細胞によって内在化される場合でさえも、インビトロおよびインビボにおいて優れた標的遺伝子サイレンシング活性を有することも示される。

【0090】

文献に記載されている通り、二重鎖を不安定化する修飾されたヌクレオチドの、二本鎖オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖への取り込みは、オフターゲットプロファイルの改善をもたらし、それゆえに、対応するｓｉＲＮＡの副作用をより少なくする（例えばＮｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０１０、３８（１７）、５７６１～５７７３を参照）。

【0091】

それゆえに、より驚くべきことに、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチド中の特異的な位置における、すなわちアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドのハイブリダイジング領域における、更に、前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの５’－オーバーハングまたは３’－オーバーハング以外の配置における本明細書に記載される式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体の取り込みは、一連の（２Ｓ，６Ｒ）－ジアステレオマーにおいて高度に二重鎖を不安定化する特性を示し、更に、類似体（２Ｒ，６Ｒ）－ジアステレオマーの場合、それほどはっきりしない二重鎖不安定化を示した。予想とは対照的に、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドのハイブリダイジング領域中に式（Ｉ－Ａ）の（２Ｒ，６Ｒ）－ジアステレオ異性体類似体を含むｓｉＲＮＡは、インビトロのシステムにおけるオフターゲット結合の有意な低減を示し、それと同時に、インビボにおけるその高度に有力な標的を阻害する特性を維持する。

【0092】

重要なことに、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドのハイブリダイジング領域中に１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体を取り込んだｓｉＲＮＡは、インビボにおいて、これらのｓｉＲＮＡが標的遺伝子サイレンシング作用を発揮することが示される用量範囲で副作用がない。

【0093】

いかなる特定の理論にも縛られることは望まないが、本明細書に記載される式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体は、例で示される、１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体を含むオリゴヌクレオチドに付与された特異的な物理化学特性、安定性の改善、結合特性およびオフターゲットプロファイルを授けられていると本発明者らは考える。これらの特性は特に、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドのハイブリダイジング領域が、式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体のようにその（２Ｒ，６Ｒ）ジアステレオ異性体を含む二本鎖オリゴヌクレオチドで改善される。

【0094】

本開示に記載される式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体はまた、本明細書において式（Ｉ－Ａ）の「標的化されていない」ヌクレオチド類似体と呼ぶこともある。

【0095】

二本鎖オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖の実施形態
本開示の重要な態様は、センス鎖オリゴヌクレオチドおよびアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドを含む二本鎖オリゴヌクレオチドの提供であり、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、本明細書に記載される１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体を含み、このヌクレオチド類似体は、前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの５’－オーバーハングヌクレオチドでもないし、３’－オーバーハングヌクレオチドでもない。一部の実施形態では、前記二本鎖オリゴヌクレオチドは、選択された標的ｍＲＮＡにハイブリダイズするｓｉＲＮＡからなる。

【0096】

本明細書で使用される場合、本明細書に記載される二本鎖オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドに含まれ、存在する場合、５’－オーバーハングに含まれず、存在する場合、３’－オーバーハングにも含まれないヌクレオチドは、本明細書では「ハイブリダイジングヌクレオチド」と呼ぶこともあり、または代替として、「内部ヌクレオチド」と呼ぶこともある。

【0097】

したがって、本明細書に記載される二本鎖オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドに含まれ、存在する場合、５’－オーバーハングに含まれず、存在する場合、３’－オーバーハングにも含まれない式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体は、本明細書に記載の式（Ｉ－Ａ）の「ハイブリダイジングヌクレオチド」、または代替として本明細書に記載の式（Ｉ－Ａ）の「内部ヌクレオチド」と呼ぶこともある。

【0098】

同様に、本明細書に記載される二本鎖オリゴヌクレオチドのセンス鎖オリゴヌクレオチドに含まれ、存在する場合、５’－オーバーハングに含まれず、存在する場合、３’－オーバーハングにも含まれないヌクレオチドはまた、本明細書に記載の「ハイブリダイジングヌクレオチド」と呼ぶこともあり、または代替として「内部ヌクレオチド」と呼ぶこともある。

【0099】

更に、存在する場合、本開示による二本鎖オリゴヌクレオチドの前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの、５’－オーバーハング内または３’－オーバーハング内に配置されるヌクレオチドは、本明細書において「オーバーハング」ヌクレオチドと呼ぶこともある。

【0100】

アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドが５’－オーバーハングおよび／または３’－オーバーハングを含む二本鎖オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、その５’－オーバーハングに、もしくはその３’－オーバーハングに、またはその５’－オーバーハングとその３’－オーバーハングの両方に、いかなる式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体も含まない。次いで、前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドに含まれる式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体は、本明細書における「ハイブリダイジングヌクレオチド」のこれまでに特定された定義を参照すれば、全て式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体である。

【0101】

アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドが５’－オーバーハングおよび／または３’－オーバーハングを含む二本鎖オリゴヌクレオチドの一部の他の実施形態では、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、その５’－オーバーハングに、もしくはその３’－オーバーハングに、またはその５’－オーバーハングとその３’－オーバーハングの両方に、１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体を更に含んでいてもよい。

【0102】

本明細書において、用語「ハイブリダイズ」ヌクレオチドまたは「オーバーハング」ヌクレオチドは、本開示で定義された通り、様々な開示された実施形態の構成の言語の簡易化および明確さの改善の理由で使用することができる。

【0103】

二本鎖オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドに含まれる式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体の数は、様々であり得る。

【0104】

一部の実施形態では、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、１～１０個の式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体を含む。１～１０個の式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体は、本明細書で使用される場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体を包含する。

【0105】

一部の実施形態では、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、１～５個の式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体を含む。

【0106】

一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体を含む前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、９～３６ヌクレオチドの長さの範囲であり、これは、１５～３０ヌクレオチドの長さを包含する。一部の実施形態では、前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、２０～２５ヌクレオチドの長さの範囲であり、これは、１７～２５ヌクレオチドの長さを包含する。

【0107】

一部の実施形態では、本明細書に記載される式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体の（２Ｒ，６Ｒ）立体異性体が好ましい。

【0108】

式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体の配置は、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチド内である。

【0109】

１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体は、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドのハイブリダイズ配列内の様々なヌクレオチド位置に配置される。

【0110】

更に、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドが２個またはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体を含む実施形態において、前記２個またはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体は、前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドのハイブリダイジング領域の任意の場所に、したがって一方または両方のオーバーハングが存在する場合、その５’－オーバーハングまたは３’－オーバーハングを除いて、連続して、および／または連続しないで配置される。

【0111】

前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、そこに含まれる各式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体は、式（Ｉ－Ａ）の修飾されたヌクレオチドとは異なるヌクレオチドに連結される。これらの実施形態によれば、２個またはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体は離れており、すなわち、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドのハイブリダイズ配列内に別々に分布している。

【0112】

前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの一部の他の実施形態では、そこに含まれる全ての式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体は、それらがアンチセンス鎖オリゴヌクレオチド内で連続的に配置されるように、一緒に連結されている。これらの実施形態では、この一連の前記ハイブリダイジングヌクレオチド類似体の５’末端に配置された式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体は、式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体とは異なるヌクレオチドに連結され、この一連の前記ハイブリダイジングヌクレオチド類似体の３’末端に配置された式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体は、式（Ｉ－Ａ）の修飾されたヌクレオチドとは異なるヌクレオチドに連結される。これらの実施形態によれば、連続した２個またはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体は、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチド内で連続していると呼ばれる。

【0113】

前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの更に他の実施形態では、式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体は、離れた単一の式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体、および連続した式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体の１つまたはそれ以上のストレッチの両方として配置される。容易に理解されるように、一緒に連結された連続した式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体は、前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドに含まれる連続する式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体である。

【0114】

例証として、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドが２３ヌクレオチドの長さを有し、全てのヌクレオチドがセンス鎖オリゴヌクレオチドと対合する二本鎖オリゴヌクレオチドの実施形態では、前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの５’末端から開始するヌクレオチド位置の番号付けで、ヌクレオチド位置１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２または２３からなる群から選択されるヌクレオチド位置に式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体を含んでいてもよい。

【0115】

更なる例証として、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドが２３ヌクレオチドの長さを有し、（ｉ）２１ヌクレオチドの長さのハイブリダイジング領域、および（ｉｉ）２ヌクレオチドの長さの３’－オーバーハングを含む二本鎖オリゴヌクレオチドの実施形態では、前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの５’末端から開始するヌクレオチド位置の番号付けで、ヌクレオチド位置１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、または２１からなる群から選択されるヌクレオチド位置に式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体を含んでいてもよい。それらの一部の実施形態では、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、その３’－オーバーハングに、式（Ｉ－Ａ）の２つのオーバーハングヌクレオチド類似体を更に含む。

【0116】

アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドが２３ヌクレオチドの長さを有する二本鎖オリゴヌクレオチドの他の例示的な実施形態では、前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの５’末端から開始するヌクレオチド位置の番号付けで、ヌクレオチド位置２、３、４、５、６、７または８からなる群から選択されるヌクレオチド位置に式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体を含んでいてもよい。

【0117】

標的化されたヌクレオチドを含むアンチセンス鎖の実施形態
本開示による二本鎖オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、１つまたはそれ以上の標的化されたヌクレオチド類似体を更に含む。

【0118】

これらの実施形態の一部では、そこに含まれる１つまたはそれ以上の標的化されたヌクレオチド類似体の少なくとも１つは、本明細書の他所で記載される通りの式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体からなる。

【0119】

したがって、本開示による二本鎖オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、本明細書の他所で記載される通りの１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体を含む。

【0120】

式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、本開示による二本鎖オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖オリゴヌクレオチド内の様々な配置に存在していてもよい。

【0121】

一部の実施形態では、式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、アンチセンスオリゴヌクレオチド鎖の３’－オーバーハングまたは５’－オーバーハングに、例えば、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの３’－オーバーハングまたは５’－オーバーハングに配置される。

【0122】

一部の好ましい実施形態では、式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、ｄｓＲＮＡの、例えばｓｉＲＮＡのオーバーハングに配置される。例えば、式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドのオーバーハングに、例えば３’－オーバーハングに配置される。

【0123】

一部の実施形態では、２～１０（例えば、２～５）個の式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、本開示による二本鎖オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖オリゴヌクレオチド中に存在する。２～１０個の式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、本明細書で使用される場合、２、３、４、５、６、７、８、９および１０個の式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体を包含する。

【0124】

二本鎖オリゴヌクレオチドのセンス鎖の実施形態
一部の実施形態では、本開示による二本鎖オリゴヌクレオチドのセンス鎖オリゴヌクレオチドは、いかなる式（Ｉ－Ａ）の修飾されたヌクレオチドも含まない。これらの実施形態の一部では、本明細書に記載される二本鎖オリゴヌクレオチドのセンス鎖オリゴヌクレオチドは、式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体とは異なる１つまたはそれ以上の修飾されたヌクレオチド、例えばメトキシまたはフルオロで修飾されたヌクレオチドを含んでいてもよい。

【0125】

他の実施形態では、本開示による二本鎖オリゴヌクレオチドのセンス鎖オリゴヌクレオチドは、１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体を含む。一部の実施形態では、本開示による二本鎖オリゴヌクレオチドのセンス鎖オリゴヌクレオチドは、式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体の１つまたはそれ以上を含み、この式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体は、その５’－オーバーハングに、その３’－オーバーハングに、そのハイブリダイジング領域に、またはセンス鎖オリゴヌクレオチド内のこれらの場所の２つまたはそれ以上に配置されてもよい。

【0126】

本明細書に記載される二本鎖オリゴヌクレオチドのセンス鎖オリゴヌクレオチドの特定の実施形態では、式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体は、前記センス鎖オリゴヌクレオチドの３’－オーバーハングに、５’－オーバーハングに、または３’－オーバーハングおよび５’－オーバーハングの両方に配置される。これらの特定の実施形態の一部では、式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体は、ｄｓＲＮＡのセンス鎖オリゴヌクレオチドの３’－オーバーハングに独占的に配置され、例えばｓｉＲＮＡの核酸鎖の３’－オーバーハングに独占的に配置される。

【0127】

これらの特定の実施形態の一部では、式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体は、（ｉ）ｓｉＲＮＡのセンス鎖オリゴヌクレオチドの３’－オーバーハングおよび５’－オーバーハングの両方に配置される。

【0128】

一部の実施形態では、２～１０（例えば、２～５）個の式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体は、本開示による二本鎖オリゴヌクレオチドのセンス鎖オリゴヌクレオチド中に存在する。２～１０個の式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体は、本明細書で使用される場合、２、３、４、５、６、７、８、９および１０個の式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体を包含し、この式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体は、その５’－オーバーハングに、その３’－オーバーハングに、そのハイブリダイジング領域に、またはセンス鎖オリゴヌクレオチド内のこれらの場所の２つまたはそれ以上に配置されてもよい。

【0129】

標的化されたヌクレオチドを含むセンス鎖の実施形態
本開示による二本鎖オリゴヌクレオチドのセンス鎖オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、前記センス鎖オリゴヌクレオチドは、１つまたはそれ以上の標的化されたヌクレオチド類似体を更に含む。

【0130】

これらの実施形態の一部では、そこに含まれる１つまたはそれ以上の標的化されたヌクレオチド類似体の少なくとも１つは、本明細書の他所で記載される通りの式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体からなる。

【0131】

したがって、本開示による二本鎖オリゴヌクレオチドのセンス鎖オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、前記センス鎖オリゴヌクレオチドは、本明細書の他所で記載される通りの１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体を含む。

【0132】

本明細書に記載の例で例示されるように、式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、本開示による二本鎖オリゴヌクレオチドのセンス鎖オリゴヌクレオチド内の様々な配置に存在していてもよい。

【0133】

一部の実施形態では、式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、センスオリゴヌクレオチド鎖の３’－オーバーハングまたは５’－オーバーハングに、例えばｓｉＲＮＡのセンス鎖オリゴヌクレオチドの３’－オーバーハングまたは５’－オーバーハングに配置される。

【0134】

一部の好ましい実施形態では、式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、ｄｓＲＮＡの、例えばｓｉＲＮＡのオーバーハングに配置される。例えば、式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、ｓｉＲＮＡのセンス鎖オリゴヌクレオチドのオーバーハング、例えば５’－オーバーハングに配置される。

【0135】

一部の実施形態では、２～１０（例えば、２～５）個の式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、本開示による二本鎖オリゴヌクレオチドのセンス鎖オリゴヌクレオチド中に存在する。２～１０個の式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、本明細書で使用される場合、２、３、４、５、６、７、８、９および１０個の式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体を包含する。

【0136】

一部の実施形態では、センス鎖オリゴヌクレオチドは、（ｉ）１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体、および（ｉｉ）式（Ｉ－Ｂ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体を含む。これらの実施形態の一部では、センス鎖オリゴヌクレオチドに含まれる１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体は、式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体からなり、すなわち、５’－オーバーハング、３’－オーバーハング、または５’－オーバーハングおよび３’－オーバーハングの両方が存在する実施形態では、センス鎖オリゴヌクレオチドの５’－オーバーハングにも、または３’－オーバーハングにも配置されていない式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体からなる。これらの実施形態の一部では、センス鎖オリゴヌクレオチドはまた、５’－オーバーハングに、３’－オーバーハングに、または５’－オーバーハングおよび３’－オーバーハングの両方に、１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体を含む。

【0137】

二本鎖オリゴヌクレオチドの他の構成
１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体を含む二本鎖オリゴヌクレオチドは、（ｉ）そこに含まれるヌクレオチド単量体単位のほとんどに含有されるリボース糖部分、および（ｉｉ）そこに含まれる核酸塩基の種類を考慮して、「リボ核酸」または「ＲＮＡ」、と呼ぶこともある。したがって、本開示の特定の態様は、目的のｍＲＮＡを標的化する二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）分子に関する。本発明のｄｓＲＮＡは、式（Ｉ－Ａ）の１つまたはそれ以上の化合物を含む修飾されたオリゴヌクレオチドを含んでいてもよい。

【0138】

一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、２つの鎖、すなわち第１の配列を含むセンス鎖および第２の配列を含むアンチセンス鎖を含み、第１の鎖および第２の鎖は、二重鎖構造を形成するのに十分に相補的である。一部の実施形態では、センス鎖は、アンチセンス鎖中の第２の配列に実質的に相補的であるか、またはそれに完全に相補的である第１の配列を含む。一部の実施形態では、アンチセンス鎖中の第２の配列は、標的配列、例えば、標的遺伝子から転写されたｍＲＮＡの配列に実質的に相補的であるか、またはそれに完全に相補的である。

【0139】

一部の実施形態では、センスおよびアンチセンス鎖のそれぞれは、９～３６ヌクレオチドの長さの範囲であり得る。例えば、各鎖は、１２～３０ヌクレオチドの長さ、１４～３０ヌクレオチドの長さ、１５～３０ヌクレオチドの長さ、２５～３０ヌクレオチドの長さ、２７～３０ヌクレオチドの長さ、１５～２６ヌクレオチドの長さ、１５～２３ヌクレオチドの長さ、１５～２２ヌクレオチドの長さ、１５～２１ヌクレオチドの長さ、１５～２０ヌクレオチドの長さ、１５～１９ヌクレオチドの長さ、１５～１８ヌクレオチドの長さ、１５～１７ヌクレオチドの長さ、１７～３０ヌクレオチドの長さ、１７～２３ヌクレオチドの長さ、１７～２１ヌクレオチドの長さ、１７～１９ヌクレオチドの長さ、１８～３０ヌクレオチドの長さ、１８～２６ヌクレオチドの長さ、１８～２５ヌクレオチドの長さ、１８～２３ヌクレオチドの長さ、１８～２２ヌクレオチドの長さ、１８～２１ヌクレオチドの長さ、１８～２０ヌクレオチドの長さ、１９～３０ヌクレオチドの長さ、１９～２５ヌクレオチドの長さ、１９～２４ヌクレオチドの長さ、１９～２３ヌクレオチドの長さ、１９～２２ヌクレオチドの長さ、１９～２１ヌクレオチドの長さ、１９～２０ヌクレオチドの長さ、２０～３０ヌクレオチドの長さ、２０～２６ヌクレオチドの長さ、２０～２５ヌクレオチドの長さ、２０～２４ヌクレオチドの長さ、２０～２３ヌクレオチドの長さ、２０～２２ヌクレオチドの長さ、２０～２１ヌクレオチドの長さ、２１～３０ヌクレオチドの長さ、２１～２６ヌクレオチドの長さ、２１～２５ヌクレオチドの長さ、２１～２４ヌクレオチドの長さ、２１～２３ヌクレオチドの長さ、または２１～２２ヌクレオチドの長さであり得る。一部の実施形態では、各鎖は、長さが９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、または３５ヌクレオチドより大きいかまたはそれに等しい。一部の実施形態では、各鎖は、長さが１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、または３６ヌクレオチド未満であるかまたはそれに等しい。すなわち、各鎖は、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、または３６の上限と、独立して選択される９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、または３５の下限とを有するヌクレオチド長の範囲のいずれかであってもよく、下限は、上限未満である。一部の実施形態では、各鎖は、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、または３６ヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、同じ数のヌクレオチドの長さである。一部の実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、異なる数のヌクレオチドの長さである。

【0140】

オーバーハング
一部の実施形態では、本開示のｄｓＲＮＡは、センスおよびアンチセンス鎖の一方または両方の３’末端、５’末端、または両方の末端に、１つまたはそれ以上のオーバーハングを含む。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のオーバーハングは、オーバーハング中、より少ない数のホスホロチオエート基で安定性を改善する。

【0141】

一部の実施形態では、オーバーハングは、１個もしくはそれ以上の、２個もしくはそれ以上の、３個もしくはそれ以上の、４個もしくはそれ以上の、５個もしくはそれ以上の、または６個もしくはそれ以上のヌクレオチドを含む。例えば、オーバーハングは、１～８ヌクレオチド、２～８ヌクレオチド、３～８ヌクレオチド、４～８ヌクレオチド、５～８ヌクレオチド、１～５ヌクレオチド、２～５ヌクレオチド、３～５ヌクレオチド、４～５ヌクレオチド、１～４ヌクレオチド、２～４ヌクレオチド、３～４ヌクレオチド、１～３ヌクレオチド、２～３ヌクレオチド、または１～２ヌクレオチドを含んでいてもよい。一部の実施形態では、オーバーハングは、１、２、３、４、５、または６ヌクレオチドの長さである。

【0142】

一部の実施形態では、本開示のオーバーハングは、１つまたはそれ以上のリボヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、本開示のオーバーハングは、１つまたはそれ以上のデオキシリボヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、オーバーハングは、１つまたはそれ以上のチミンを含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の３’末端に配置されるオーバーハングを含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の５’末端に平滑末端を含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の３’末端に配置されるオーバーハング、およびアンチセンス鎖の５’末端に配置される平滑末端を含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、センス鎖の３’末端に配置されるオーバーハングを含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、センス鎖の５’末端に平滑末端を含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、センス鎖の３’末端に配置されるオーバーハング、およびセンス鎖の５’末端に配置される平滑末端を含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、ｄｓＲＮＡのセンスおよびアンチセンス鎖の３’末端の両方に配置されるオーバーハングを含む。

【0143】

一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の５’末端に配置されるオーバーハングを含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の３’末端に平滑末端を含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、アンチセンス鎖の５’末端に配置されるオーバーハング、およびアンチセンス鎖の３’末端に配置される平滑末端を含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、センス鎖の５’末端に配置されるオーバーハングを含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、センス鎖の３’末端に平滑末端を含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、センス鎖の５’末端に配置されるオーバーハング、およびセンス鎖の３’末端に配置される平滑末端を含む。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、ｄｓＲＮＡの両方の鎖に配置されるオーバーハングを含む。

【0144】

一部の実施形態では、オーバーハングは、センス鎖がアンチセンス鎖より長いことの結果である。一部の実施形態では、オーバーハングは、アンチセンス鎖がセンス鎖より長いことの結果である。一部の実施形態では、オーバーハングは、同じ長さのセンスおよびアンチセンス鎖が互い違いになっている結果である。一部の実施形態では、オーバーハングは、標的ｍＲＮＡとミスマッチを形成する。一部の実施形態では、オーバーハングは、標的ｍＲＮＡに相補的である。

【0145】

一部の実施形態では、本開示のｄｓＲＮＡは、第１の配列を含むセンス鎖および第２の配列を含むアンチセンス鎖を含み、第１および第２の配列は、実質的に相補的であるか、または相補的である。一部の実施形態では、第１および第２の配列は、実質的に相補的であるか、または相補的であり、ｄｓＲＮＡの二重鎖領域を形成する。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡの二重鎖領域は、９～３６ヌクレオチド対の長さである。例えば、二重鎖領域は、１２～３０ヌクレオチド対の長さ、１４～３０ヌクレオチド対の長さ、１５～３０ヌクレオチド対の長さ、１５～２６ヌクレオチド対の長さ、１５～２３ヌクレオチド対の長さ、１５～２２ヌクレオチド対の長さ、１５～２１ヌクレオチド対の長さ、１５～２０ヌクレオチド対の長さ、１５～１９ヌクレオチド対の長さ、１５～１８ヌクレオチド対の長さ、１５～１７ヌクレオチド対の長さ、１７～３０ヌクレオチド対の長さ、２７～３０ヌクレオチド対の長さ、１７～２３ヌクレオチド対の長さ、１７～２１ヌクレオチド対の長さ、１７～１９ヌクレオチド対の長さ、１８～３０ヌクレオチド対の長さ、１８～２６ヌクレオチド対の長さ、１８～２５ヌクレオチド対の長さ、１８～２４ヌクレオチド対の長さ、１８～２３ヌクレオチド対の長さ、１８～２２ヌクレオチド対の長さ、１８～２１ヌクレオチド対の長さ、１８～２０ヌクレオチド対の長さ、１９～３０ヌクレオチド対の長さ、１９～２５ヌクレオチド対の長さ、１９～２４ヌクレオチド対の長さ、１９～２３ヌクレオチド対の長さ、１９～２２ヌクレオチド対の長さ、１９～２１ヌクレオチド対の長さ、１９～２０ヌクレオチド対の長さ、２０～３０ヌクレオチド対の長さ、２０～２６ヌクレオチド対の長さ、２０～２５ヌクレオチド対の長さ、２０～２４ヌクレオチド対の長さ、２０～２３ヌクレオチド対の長さ、２０～２２ヌクレオチド対の長さ、２０～２１ヌクレオチド対の長さ、２１～３０ヌクレオチド対の長さ、２１～２６ヌクレオチド対の長さ、２１～２５ヌクレオチド対の長さ、２１～２４ヌクレオチド対の長さ、２１～２３ヌクレオチド対の長さ、または２１～２２ヌクレオチド対の長さであり得る。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡの二重鎖領域は、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、または３５ヌクレオチド対の長さより大きいかまたはそれに等しい。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡの二重鎖領域は、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、または３６ヌクレオチド対の長さ未満であるかまたはそれに等しい。すなわち、ｄｓＲＮＡの二重鎖領域は、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、または３６の上限と、独立して選択される９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、または３５の下限とを有するヌクレオチド対の長さの範囲のいずれかであってもよく、下限は、上限未満である。一部の実施形態では、二重鎖領域は、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、または３６ヌクレオチド対の長さである。１つより多くのｄｓＲＮＡが使用される場合、各ｄｓＲＮＡの二重鎖領域は、１つまたはそれ以上の追加のｄｓＲＮＡと同一かまたはそれと異なる長さであってもよい。

【0146】

標的化された二本鎖オリゴヌクレオチドの実施形態
本開示で上述したように、二本鎖オリゴヌクレオチドにおいて、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチド、センス鎖オリゴヌクレオチドまたはアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドおよびセンス鎖オリゴヌクレオチドの両方は、１つまたはそれ以上の標的化されたヌクレオチドを含んでいてもよい。一部の実施形態では、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチド、センス鎖オリゴヌクレオチドまたはアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドおよびセンス鎖オリゴヌクレオチドの両方は、１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体を含んでいてもよい。

【0147】

したがって、本開示による一部の実施形態では、標的化された二本鎖オリゴヌクレオチドは、１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体を含む。

【0148】

一部の他の実施形態では、本開示による標的化された二本鎖オリゴヌクレオチドに含まれる標的化されたヌクレオチドは、当業界において公知の標的化されたヌクレオチドから選択される。

【0149】

したがって、一部の実施形態では、本開示による標的化された二本鎖オリゴヌクレオチドは、１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）の標的化されていないヌクレオチド類似体、および式（Ｉ－Ｂ）と異なる構造を有する１つまたはそれ以上の標的化されたヌクレオチドを含む。

【0150】

これらの実施形態の一部によれば、標的化された二本鎖オリゴヌクレオチドは、（ｉ）１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体を包含する、１つまたはそれ以上の標的化されたヌクレオチドを含むセンス鎖オリゴヌクレオチド、および（ｉｉ）標的化されていないアンチセンス鎖オリゴヌクレオチド、すなわち標的化されたヌクレオチドを含まないアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドを含んでいてもよい。これらの実施形態の他の一部によれば、標的化された二本鎖オリゴヌクレオチドは、（ｉ）標的化されたヌクレオチドを含まない標的化されていないセンス鎖オリゴヌクレオチド、および（ｉｉ）１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体を包含する、１つまたはそれ以上の標的化されたヌクレオチドを含む標的化されたアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドを含んでいてもよい。それでもなお他の実施形態によれば、標的化された二本鎖オリゴヌクレオチドは、（ｉ）１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体を包含する、１つまたはそれ以上の標的化されたヌクレオチドを含むセンス鎖オリゴヌクレオチド、および１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体を包含する、１つまたはそれ以上の標的化されたヌクレオチドを含む標的化されたアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドを含んでいてもよい。

【0151】

一部の実施形態では、本開示による標的化された二本鎖オリゴヌクレオチドは：
－ （ｉ）１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体、および（ｉｉ）式（Ｉ－Ｂ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体を含むセンス鎖オリゴヌクレオチド、ならびに
－ アンチセンス鎖オリゴヌクレオチド中に一方または両方のオーバーハングが存在する場合、５’－オーバーハングにも３’－オーバーハングにも配置されていない、１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体、すなわち１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体を含むアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、前記アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドは、これらのオーバーハングの一方または両方が存在する実施形態において、その５’－オーバーハングまたは３’－オーバーハングに１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体を更に含む。

【0152】

本開示の他所で開示されたように、式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、細胞標的化部分として基Ｒ３を有する。細胞標的化部分は本開示の他所で開示されている。

【0153】

特定の実施形態では、前記１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、オリゴヌクレオチド鎖の選択された末端においてこれらの標的化されたヌクレオチド類似体の連続的な鎖を形成するように互いに連結されており、すなわち前記式（Ｉ－Ｂ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体は、選択されたアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドまたは選択されたセンス鎖オリゴヌクレオチドにおいて連続している。

【0154】

二本鎖オリゴヌクレオチドの更なる実施形態
例証の目的のために、本開示を限定せずに、二本鎖オリゴヌクレオチドはまた、修飾されているセンスおよび／またはアンチセンス鎖に１つまたはそれ以上の更なるヌクレオチドを含んでいてもよい。

【0155】

修飾は、核酸または塩基の類似体での置換または挿入、および塩基、糖またはリン酸部分の化学修飾から選択することができる。選択された修飾は、３’末端デオキシ－チミン、２’－Ｏ－メチル、２’－デオキシ修飾、２’－デスオキシ－フルオロ、２’－アミノ修飾、２’－アルキル修飾、ホスホロチオエート修飾、ホスホロアミデート修飾、５’－ホスホロチオエート基修飾、５’－リン酸もしくは５’－リン酸擬似体修飾、およびコレステリル誘導体またはドデカン酸ビスデシルアミド基修飾からそれぞれ個々に選択してもよいし、および／または修飾されたヌクレオチドは、ロックドヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチドまたは非天然塩基を含むヌクレオチドのいずれか１つであってもよい。好ましい実施形態の１つは、少なくとも１つの修飾が２’－Ｏ－メチルであり、および／または少なくとも１つの修飾が２’－デスオキシ－フルオロであるものであり得る。

【0156】

修飾されたオリゴヌクレオチドの他の例は、本明細書で使用される場合、以下：修飾、例えば、連結していないリン酸と酸素の一方または両方および／または連結しているリン酸と酸素の１つまたはそれ以上の置き換え；リン酸部分の置き換え；天然に存在する塩基の修飾もしくは置き換え；リボース－リン酸主鎖の置き換えもしくは修飾；ＲＮＡの３’末端もしくは５’末端の修飾、例えば、末端リン酸基の除去、修飾もしくは置き換え、またはＲＮＡの３’もしくは５’末端のいずれかへの部分、例えば蛍光標識した部分のコンジュゲーションのうち１つまたはそれ以上を含み得る。

【0157】

標的化されたオリゴヌクレオチド－細胞標的化部分の更なる実施形態
本明細書における標的化されたヌクレオチドは、特異的な細胞または組織を標的化する１つまたはそれ以上のリガンドに連結することができる。このようなリガンドは、「細胞標的化部分」とも呼ばれる。リガンドは、例えば、特異的な細胞の標的化の改善、オリゴヌクレオチドの細胞内在化の改善、および／または細胞内ｍＲＮＡ標的化の改善によって、ｓｉＲＮＡなどの得られたオリゴヌクレオチドの細胞への送達効率を増加させる任意の分子基を包含する。リガンドは、受容体特異的なペプチド、受容体特異的なタンパク質（例えば、モノクローナル抗体または融合タンパク質）、および受容体特異的な小分子リガンド（例えば、ＧａｌＮＡｃ基などの炭水化物）を含む群から選択することができる。

【0158】

リガンドは、天然に存在するものでもよいし、または組換えもしくは合成であってもよい。例えば、リガンドは、タンパク質、炭水化物、リポ多糖、脂質、合成ポリマー、ポリアミン、アルファヘリカルペプチド、レクチン、ビタミン、または補因子であり得る。一部の実施形態では、リガンドは、１つまたはそれ以上の色素、架橋剤、多環式芳香族炭化水素、ペプチドコンジュゲート（例えば、ＲＧＤペプチド、アンテナペディアペプチド、Ｔａｔペプチド）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、酵素、ハプテン、輸送／吸収促進因子、合成リボヌクレアーゼ（例えば、イミダゾール、ビスイミダゾール、ヒスタミン、またはイミダゾールクラスター）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、またはＬＤＬである。

【0159】

一例として、リガンドは、共リガンドへの特異的な親和性を有する１つまたはそれ以上のタンパク質、糖タンパク質、ペプチド、または分子であり得る。このようなリガンドとしては、チロトロピン、メラノトロピン、糖タンパク質、サーファクタントタンパク質Ａ、ムチン炭水化物、ラクトース（例えば、多価ラクトース）、ガラクトース（例えば、多価ガラクトース）、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン（例えば、多価Ｎ－アセチル－ガラクトサミン）、Ｎ－アセチル－グルコサミン（例えば、多価Ｎ－アセチル－グルコサミン）、マンノース（例えば、多価マンノース）、フコース（例えば、多価フコース）、グリコシル化ポリアミノ酸、トランスフェリン、ビスホスホネート、ポリグルタメート、ポリアスパルテート、脂質、コレステロール、ステロイド、胆汁酸、葉酸塩、ビタミンＢ１２、およびビオチンを挙げることができる。

【0160】

一部の実施形態では、細胞標的化部分は、１つまたはそれ以上の色素、架橋剤、多環式芳香族炭化水素、ペプチドコンジュゲート（例えば、アンテナペディアペプチド、Ｔａｔペプチド）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、酵素、ハプテン、輸送／吸収促進因子、合成リボヌクレアーゼ（例えば、イミダゾール、ビスイミダゾール、ヒスタミン、またはイミダゾールクラスター）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、またはＬＤＬである。

【0161】

一部の実施形態では、リガンドは、１つまたはそれ以上のコレステロール誘導体または親油性部分であり得る。任意の親油性化合物としては、これらに限定されないが、コレステロールまたはコレステロール誘導体；コール酸；ビタミン（例えば葉酸塩、ビタミンＡ、ビタミンＥ（トコフェロール）、ビオチン、ピリドキサール；飽和および不飽和の両方を含む胆汁または脂肪酸コンジュゲート（例えばラウロイル（Ｃ１２）、ミリストイル（Ｃ１４）およびパルミトイル（Ｃ１６）、ステアロイル（Ｃ１８）およびドコサニル（Ｃ２２）、リトコール酸および／またはリトコール酸オレイルアミンコンジュゲート（リトコール酸－オレイル、Ｃ４３）；ポリマー性の主鎖または足場（例えばＰＥＧ、トリエチレングリコール（ＴＥＧ）、ヘキサエチレングリコール（ＨＥＧ）、ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）（ＰＬＧ）、流体力学的なポリマー；ステロイド（例えばジハイドロテストステロン）；テルペン（例えばトリテルペン）；カチオン脂質またはペプチド；および／または脂質または脂質ベースの分子を挙げることができる。このような脂質または脂質ベースの分子は、血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）と結合することができる。脂質ベースのリガンドは、コンジュゲートの標的組織への結合をモジュレート（例えば、制御）するのに使用することができる。例えば、より強くＨＳＡに結合する脂質または脂質ベースのリガンドは、腎臓に標的化される可能性が低いと予想され、それゆえに体から排除される可能性が低い。標的組織は、肝臓、例えば肝臓実質細胞などであり得る。

【0162】

ポリアミノ酸、トランスフェリン、細胞標的化リガンドまたは部分もまた、特異的な細胞型、例えば肝細胞における受容体に結合する抗体であり得る。例示的な細胞受容体特異的なモノクローナル抗体は、Ｘｉａら（２００９、Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍ、６３（３）：７４７～７５１）；Ｃｕｅｌｌａｒら（２０１５、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、４３（２）：１１８９～１２０３）；Ｂａｕｍｅｒら（２０１６、Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ、１１（１）：２２～３６）；Ｉｂｔｅｊａｈら（２０１７、Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１７６：１２２～１３０）；およびＳｕｇｏら（２０１６、Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ、２３７：１～１３）によって開示されたものである。

【0163】

細胞標的化リガンドまたは部分はまた、１価または多価の（例えば、３価の）ＧａｌＮＡｃ基、例えばＰｒａｋａｓｈら（２０１５、Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ、２５（１９）：４１２７～４１３０）；Ｚｕら（２０１６、Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ－Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ、ｅ３１７、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｍｎｔａ．２０１６．２６）；Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎら（２０１７、Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ、２５（１）：７１～７８）；Ｓｈｅｍｅｓｈら（２０１６、Ｔｈｅｒ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ、５：ｅ３１９－ｄｏｉ：１０．１０３８／ｍｎｔａ．２０１６．３１）；Ｈｕａｎｇら（２０１６、Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ－Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ、６：１１６～１３２）；Ｒｏｚｅｍａら（２００７、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、１０４（３２）：１２９８２～１２９８７）；Ｒａｊｅｅｖら（２０１５、Ｃｈｅｍｂｉｏｃｈｅｍ、１６（６）：９０３～９０８）；およびＮａｉｒら（２０１４、Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ、１３６（４９）：１６９５８～１６９６１）によって開示されたものも包含する。

【0164】

修飾されたｄｓＲＮＡの調製
本開示のｄｓＲＮＡは、１つまたはそれ以上のリガンド、部分またはコンジュゲートに化学的／物理的に連結されてもよい。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、リンカーを介して１つまたはそれ以上のリガンドにコンジュゲート／付着されている。例えば多価の分枝状リンカーなどの当業界において公知の任意のリンカーを使用することができる。リガンドをｄｓＲＮＡにコンジュゲートすることは、その分布を変更したり、その細胞吸収および／もしくは特定の組織への標的化および／もしくは１つまたはそれ以上の特異的な細胞型（例えば、肝臓細胞）による取り込みを強化したり、および／またはｄｓＲＮＡ剤の寿命を強化したりすることができる。一部の実施形態では、疎水性リガンドは、細胞膜を通過する直接の透過および／または細胞（例えば、肝臓細胞）による取り込みを容易にするために、ｄｓＲＮＡにコンジュゲートされる。

【0165】

ｄｓＲＮＡコンジュゲートの一部の実施形態では、１つまたはそれ以上のヌクレオチドは、標的化部分が結合している基を含んでいてもよく、例えば、１つまたはそれ以上のヌクレオチドは、標的化部分が結合している基を含み、この場合、標的化部分が、場合によっては連結基を介してヌクレオチド主鎖に共有結合で連結されている。これらの実施形態によれば、ｄｓＲＮＡの１つまたはそれ以上のヌクレオチドは、標的化部分を含む標的化部分が結合している基にコンジュゲートされており、この場合、標的化部分は、組成物の細胞内送達を強化するリガンド（例えば、細胞透過性部分または薬剤）であり得る。

【0166】

本開示の、リガンドがコンジュゲートしたｄｓＲＮＡおよびリガンド分子が結合している配列特異的な連結されたヌクレオシドおよびヌクレオチドは、当業界において公知の任意の方法によってアセンブルすることができ、例えば、標準的なヌクレオチド前駆体、またはすでに連結部分を有するヌクレオチドもしくはヌクレオシドコンジュゲート前駆体、リガンド－ヌクレオチド、またはすでにリガンド分子を有するヌクレオシドにコンジュゲートした前駆体、またはヌクレオシドとリガンドが結合していない構成単位を利用する好適なＤＮＡシンセサイザーでのアセンブリなどによってアセンブルすることができる。

【0167】

本開示のリガンドがコンジュゲートしたｄｓＲＮＡは、当業界において公知の任意の方法によって合成でき、例えば、ペンダント反応性官能性が結合しているｄｓＲＮＡ、例えばｄｓＲＮＡ上の連結分子の付着によって得られたものの使用などによって合成できる。一部の実施形態では、この反応性オリゴヌクレオチドは、商業的に入手可能なリガンド、様々な保護基のいずれかが結合している合成されたリガンド、または連結部分を付着させたリガンドと直接的に反応することができる。一部の実施形態では、本方法は、リガンドと適切にコンジュゲートされ、更に固体支持体材料に付着されていてもよいヌクレオシド単量体の使用によって、リガンドがコンジュゲートしたｄｓＲＮＡの合成を容易にする。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡの３’末端に付着されたアラルキルリガンドが結合しているｄｓＲＮＡは、まずアミノアルキル基を介して制御多孔質ガラス支持体に単量体構成単位を共有結合で付着させることによって調製され；次いで、ヌクレオチドは、固体支持体に結合した単量体構成単位に標準的な固相合成技術を介して結合する。単量体構成単位は、ヌクレオシドまたは固相合成に適合する他の有機化合物であり得る。

【0168】

式（Ｉ－Ａ）および（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体の前駆体
式（Ｉ－Ａ）および（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体は、前駆体化合物から開始することによって合成することができ、このような化合物は、本明細書においてヌクレオチド類似体前駆体と呼ぶこともある。

【0169】

式（Ｉ－Ａ）および（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体の両方は、以下の式（ＩＩ）のそれらの対応する前駆体化合物から合成することができる。

【0170】

容易に理解されると予想されるように、式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体は、以下の式（ＩＩ－Ａ）のヌクレオチド類似体前駆体（式中、基Ｒ３は、細胞標的化部分からなっていない）から開始することによって調製することができる。更に、式（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体は、以下の式（ＩＩ－Ｂ）のヌクレオチド類似体前駆体（式中、基Ｒ３は、細胞標的化部分からなる）から開始することによって調製することができる。

【0171】

本開示はまた、一般式（ＩＩ）のヌクレオチド類似体前駆体も記載する。

【化1】

式中：
－ Ｂは、複素環式の核酸塩基であり；
－ Ｐ１およびＰ２は、それぞれ独立して、Ｈ、反応性リン基または保護基であり；
－ Ｙは、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ１またはＮ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１であり、Ｒ１は：
・場合により非置換の、またはハロゲン原子、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３～Ｃ１４）複素環、（Ｃ６～Ｃ１４）アリール基、（Ｃ５～Ｃ１４）ヘテロアリール基、－Ｏ－Ｚ１、－Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、－Ｓ－Ｚ１、－ＣＮ、－Ｃ（＝Ｊ）－Ｏ－Ｚ１、－Ｏ－Ｃ（＝Ｊ）－Ｚ１、－Ｃ（＝Ｊ）－Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、および－Ｎ（Ｚ１）－Ｃ（＝Ｊ）－Ｚ２から選択される１つまたはそれ以上の基によって置換された（Ｃ_１～Ｃ_２０）アルキル基（式中、
Ｊは、ＯまたはＳであり、
Ｚ１およびＺ２のそれぞれは、独立して、Ｈであるか、場合によりハロゲン原子および（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている）であるか、
・場合によりハロゲン原子および（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つもしくはそれ以上の基で置換されている（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基であるか、または
・基－［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ－Ｒ２－（Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２）ｐ－Ｒ３（式中、
ｍは、０または１を意味する整数であり、
ｐは、０～１０の範囲の整数であり、
Ｒ２は、場合により（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、－Ｏ－Ｚ３、－Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、－Ｓ－Ｚ３、－ＣＮ、－Ｃ（＝Ｋ）－Ｏ－Ｚ３、－Ｏ－Ｃ（＝Ｋ）－Ｚ３、－Ｃ（＝Ｋ）－Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、－Ｎ（Ｚ３）－Ｃ（＝Ｋ）－Ｚ４で置換されている（Ｃ１～Ｃ２０）アルキレン基であり、
Ｋは、ＯまたはＳであり、
Ｚ３およびＺ４のそれぞれは、独立して、Ｈであるか、場合によりハロゲン原子および（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、
Ｒ３は、水素原子、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ基、（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３～Ｃ１４）複素環、（Ｃ６～Ｃ１４）アリール基または（Ｃ５～Ｃ１４）ヘテロアリール基からなる群から選択されるか、
または
Ｒ３は、細胞標的化部分である）であり、
－ Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、水素原子、－（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、
－ Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄのそれぞれは、独立して、Ｈであるか、または（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基である。

【0172】

本開示の目的のために、式（ＩＩ）の化合物は、用語「ヌクレオチド前駆体」に包含される。本開示の目的のために、基Ｒ３が存在し、細胞標的化部分を意味する式（ＩＩ）の化合物は、用語「標的化されたヌクレオチド前駆体」に包含される。

【0173】

本明細書で開示される式（Ｉ）、例えば（Ｉ－Ａ）、および（Ｉ－Ｂ）、ならびに（ＩＩ）の化合物は、それらの異性体、例えば立体異性体を包含し、その例としては、式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物の位置の番号付けおよびキラル中心を特定した以下の式で具体的に記載されるように、それらの（２Ｓ，６Ｒ）立体異性体およびそれらの（２Ｒ，６Ｒ）立体異性体が挙げられ、以下に、式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物に関して例示する：

【化2】

【0174】

本明細書に記載の例で示されることになるが、オリゴヌクレオチド中に取り込まれる場合、式（Ｉ）の化合物の（２Ｓ，６Ｒ）立体異性体および式（Ｉ）の化合物の（２Ｒ，６Ｒ）立体異性体は、標的ｍＲＮＡの優れた阻害を可能にするｓｉＲＮＡを生成する能力を授けられている。

【0175】

しかしながら、ｓｉＲＮＡなどの本開示の二本鎖オリゴヌクレオチドの一部の実施形態では、立体配置（２Ｒ，６Ｒ）を有する式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体の立体異性体が好ましい。

【0176】

本明細書において一部の例で示されるように、二本鎖オリゴヌクレオチドにおける、その（２Ｒ，６Ｒ）立体異性体からなる式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体の使用は、ヌクレオチド類似体（Ｉ－Ａ）が、本明細書で特定されるハイブリダイジングヌクレオチド類似体として取り込まれる場合、例えば、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドのハイブリダイジング領域中に取り込まれる場合、一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡのセンス鎖オリゴヌクレオチドのハイブリダイジング領域中に取り込まれる場合、対応する（２Ｓ，６Ｒ）立体異性体と比較してより優れたインビボにおける前記二本鎖オリゴヌクレオチド、例えばｓｉＲＮＡの効力をもたらす。

【0177】

本明細書では「ジオキサン類似体」と呼ぶこともある式（ＩＩ）の化合物の一部の実施形態では、Ｙは、Ｏである。本開示におけるこのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、プレｌＢ１（式中、Ｂは式（ＩＩ）で定義された通りである）と呼ばれ、例えば、Ｂがチミジニル（ｔｈｙｍｉｄｉｎｙｌ）基からなる場合、プレｌＴ１と呼ばれる。

【0178】

本明細書では「モルホリノ類似体」と呼ぶこともある式（ＩＩ）の化合物の他の実施形態では、Ｙは、ＮＨ、ＮＲ１またはＮ－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１である。

【0179】

式（ＩＩ）のモルホリノ類似体において、窒素原子は、得られたモルホリノ類似体を含有するオリゴヌクレオチド、および特に得られたモルホリノ類似体を含有するｓｉＲＮＡの特性を改善するように好ましくは官能化されている。

【0180】

式（ＩＩ）の化合物の一部の実施形態では、化合物は、細胞標的化部分を含まない本開示のモルホリノ類似体である。これらの実施形態によれば、基Ｒ３は、存在する場合、細胞標的化部分を表さない。

【0181】

したがって、式（ＩＩ）のモルホリノ類似体の一部の好ましい実施形態では、Ｙは、ＮＨ、ＮＲ１またはＮ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１であり、Ｒ１は、一般式（ＩＩ）に関して定義された通りである。

【0182】

ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１が：
・場合により、ハロゲン原子、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３～Ｃ１４）複素環、（Ｃ６～Ｃ１４）アリール基、（Ｃ５～Ｃ１４）ヘテロアリール基、－Ｏ－Ｚ１、－Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、－Ｓ－Ｚ１、－ＣＮ、－Ｃ（＝Ｊ）－Ｏ－Ｚ１、－Ｏ－Ｃ（＝Ｊ）－Ｚ１、－Ｃ（＝Ｊ）－Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、および－Ｎ（Ｚ１）－Ｃ（＝Ｊ）－Ｚ２から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基（式中、
Ｊは、ＯまたはＳであり、
Ｚ１およびＺ２のそれぞれは、独立して、Ｈであるか、場合によりハロゲン原子および（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている）であるか、または
・場合によりハロゲン原子および（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基であるか、
・基－［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ－Ｒ２－（Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２）ｐ－Ｒ３（式中、
ｍは、０または１を意味する整数であり、
ｐは、０～１０の範囲の整数であり、
Ｒ２は、場合により（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、－Ｏ－Ｚ３、－Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、－Ｓ－Ｚ３、－ＣＮ、－Ｃ（＝Ｋ）－Ｏ－Ｚ３、－Ｏ－Ｃ（＝Ｋ）－Ｚ３、－Ｃ（＝Ｋ）－Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、－Ｎ（Ｚ３）－Ｃ（＝Ｋ）－Ｚ４で置換されている（Ｃ１～Ｃ２０）アルキレン基であり、
Ｋは、ＯまたはＳであり、
Ｚ３およびＺ４のそれぞれは、独立して、Ｈであるか、場合によりハロゲン原子および（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、
Ｒ３は、水素原子、（Ｃ１～Ｃ６）－アルキル、（Ｃ１～Ｃ６）－アルコキシ、（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３～Ｃ１４）複素環、（Ｃ６～Ｃ１４）アリール基または（Ｃ５～Ｃ１４）ヘテロアリール基からなる群から選択される）であり、
Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、水素原子、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄのそれぞれは、独立して、Ｈであるか、または（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基である。

【0183】

本明細書において意図される通り、（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基は、非置換のアルキル基または置換されたアルキル基のいずれであってもよく、その例としては、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６、Ｃ１７、Ｃ１８、Ｃ１９およびＣ２０アルキル基が挙げられる。

【0184】

本明細書において意図される通り、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基は、非置換のアルキル基または置換されたアルキル基のいずれであってもよく、その例としては、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５およびＣ６アルキル基が挙げられる。

【0185】

本明細書において意図される通り、（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基は、非置換のシクロアルキル基または置換されたシクロアルキル基のいずれであってもよく、その例としては、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７およびＣ８シクロアルキル基が挙げられる。

【0186】

本明細書において意図される通り、（Ｃ３～Ｃ１４）複素環は、非置換の、または置換された複素環のいずれであってもよく、その例としては、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３およびＣ１４複素環が挙げられる。

【0187】

本明細書において意図される通り、（Ｃ６～Ｃ１４）アリール基は、非置換のアリール基または置換されたアリール基のいずれであってもよく、その例としては、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３およびＣ１４アリール基が挙げられる。

【0188】

本明細書において意図される通り、（Ｃ５～Ｃ１４）ヘテロアリール基は、非置換のヘテロアリール基または置換されたヘテロアリール基のいずれであってもよく、その例としては、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３およびＣ１４ヘテロアリール基が挙げられる。

【0189】

ＹがＮＲ１である式（ＩＩ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ１は、場合により置換された（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（ＩＩ）に関して定義された通りである。

【0190】

ＹがＮＲ１であるこれらの実施形態の一部において、Ｒ１は、非置換の（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基である。

【0191】

ＹがＮＲ１である実施形態の一部では、Ｒ１は、非置換の（Ｃ１～Ｃ１６）アルキル基であり、その例としては、メチル、イソプロピル、ブチル、オクチル、ヘキサデシルを含む群から選択されるアルキル基が挙げられ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（ＩＩ）について定義されたのと同じ意味を有する。

【0192】

ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、メチル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、水素原子であり、Ｐ１およびＰ２は、一般式（ＩＩ）に関して定義された通りである。本開示におけるこのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、プレｌＢ２と呼ばれ、Ｂは、一般式（ＩＩ）での意味と同じ意味を有し；例えば、本開示におけるこのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、Ｂがチミジニル基からなる場合、プレｌＴ２と呼ばれる。

【0193】

ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、イソプロピル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、水素原子であり、Ｐ１およびＰ２は、一般式（ＩＩ）に関して定義された通りである。本開示におけるこのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、プレｌＢ３と呼ばれ、Ｂは、一般式（ＩＩ）での意味と同じ意味を有し；例えば、本開示におけるこのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、プレｌＴ３（式中、Ｂは、チミジニル基からなる）、プレｌＵ３（式中、Ｂは、ウラシル基からなる）、プレｌＧ３（式中、Ｂは、グアニル基からなる）、プレｌＣ３（式中、Ｂは、シトシル基からなる）、およびプレｌＡ３（式中、Ｂは、アデニル基からなる）と呼ばれる。

【0194】

ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、ブチル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、水素原子であり、Ｐ１およびＰ２は、一般式（ＩＩ）に関して定義された通りである。本開示におけるこのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、プレｌＢ６と呼ばれ、Ｂは、一般式（ＩＩ）での意味と同じ意味を有し；例えば、本開示におけるこのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、プレｌＴ６と呼ばれ、式中、Ｂは、チミジニル基からなる。

【0195】

ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、オクチル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、水素原子であり、Ｐ１およびＰ２は、一般式（ＩＩ）に関して定義された通りである。本開示におけるこのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、プレｌＢ７と呼ばれ、Ｂは、一般式（ＩＩ）での意味と同じ意味を有し；例えば、本開示におけるこのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、プレｌＴ７と呼ばれ、式中、Ｂは、チミジニル基からなる。

【0196】

ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、直鎖状Ｃ１６－アルキル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、水素原子であり、Ｐ１およびＰ２は、一般式（ＩＩ）に関して定義された通りである。本開示におけるこのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、プレｌＢ８と呼ばれ、Ｂは、一般式（ＩＩ）での意味と同じ意味を有し；例えば、本開示におけるこのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、プレｌＴ８と呼ばれ、式中、Ｂは、チミジニル基からなる。

【0197】

ＹがＮＲ１である式（ＩＩ）の化合物の更なる実施形態では、Ｒ１は、一般式（ＩＩ）で定義された通りに置換された（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基であり、その例としては、一般式（ＩＩ）で定義された通りに置換された、Ｃ１、Ｃ２またはＣ３アルキル基が挙げられる。

【0198】

これらの更なる実施形態の一部では、Ｒ１は、ハロゲン原子、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３～Ｃ１４）複素環、（Ｃ６～Ｃ１４）アリール基および（Ｃ５～Ｃ１４）ヘテロアリール基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換された（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（ＩＩ）について定義されたのと同じ意味を有する。

【0199】

これらの更なる実施形態の一部では、Ｒ１は、（Ｃ６～Ｃ１４）アリール基で置換された（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（ＩＩ）について定義されたのと同じ意味を有する。

【0200】

ＹがＮＲ１である式（ＩＩ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ１は、（Ｃ６～Ｃ１４）アリール基で置換された（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基である。これらの実施形態は、ＹがＮＲ１であり、Ｒ１がアリール基で置換されたメチレン基である式（ＩＩ）の化合物を包含する。これらの実施形態はまた、ＹがＮＲ１である式（ＩＩ）の化合物も包含し、Ｒ１は、フェニル基で置換された（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基である。

【0201】

ＹがＮＲ１である式（ＩＩ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ１は、非置換のフェニル基で置換されたメチル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、それぞれ水素原子であり、Ｐ１およびＰ２は、一般式（ＩＩ）で定義された通りである。本開示におけるこのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、プレｌＢ５と呼ばれ、Ｂは、一般式（ＩＩ）での意味と同じ意味を有し；例えば、本開示におけるこのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、プレｌＴ５と呼ばれ、式中、Ｂは、チミジニル基からなる。

【0202】

ＹがＮＲ１である式（ＩＩ）の化合物の更なる実施形態では、Ｒ１は、場合によりハロゲン原子および（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基であり、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（ＩＩ）について定義されたのと同じ意味を有する。

【0203】

ＹがＮＲ１である式（ＩＩ）の化合物のこれらの更なる実施形態の一部では、Ｒ１は、シクロヘキシルである。

【0204】

ＹがＮＲ１である式（ＩＩ）の化合物のこれらの更なる実施形態の一部では、Ｒ１は、非置換のシクロヘキシルであり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、それぞれ水素原子であり、Ｐ１およびＰ２は、一般式（ＩＩ）に関して定義された通りである。

【0205】

本開示におけるこのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、プレｌＢ４と呼ばれ、Ｂは、一般式（ＩＩ）での意味と同じ意味を有し；例えば、本開示におけるこのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、プレｌＴ４と呼ばれ、式中、Ｂは、チミジニル基からなる。

【0206】

式（ＩＩ）のモルホリノ類似体の一部の他の実施形態では、Ｙは、Ｎ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１であり、Ｒ１は、場合により、ハロゲン原子、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３～Ｃ１４）複素環、（Ｃ６～Ｃ１４）アリール基、（Ｃ５～Ｃ１４）ヘテロアリール基－Ｏ－Ｚ１、－Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、－Ｓ－Ｚ１、－ＣＮ、－Ｃ（＝Ｊ）－Ｏ－Ｚ１、－Ｏ－Ｃ（＝Ｊ）－Ｚ１、－Ｃ（＝Ｊ）－Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、－Ｎ（Ｚ１）－Ｃ（＝Ｊ）－Ｚ２から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基であり、
Ｊは、ＯまたはＳであり、
Ｚ１およびＺ２のそれぞれは、独立して、Ｈであるか、場合によりハロゲン原子および（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、
Ｒ１は、場合により、ハロゲン原子または（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基であり、
Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（ＩＩ）について定義されたのと同じ意味を有する。

【0207】

ＹがＮ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１である実施形態の一部では、Ｒ１は、場合により置換された（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基であり、その例としては、場合により置換された（Ｃ１～Ｃ１５）アルキル基が挙げられ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（ＩＩ）について定義されたのと同じ意味を有する。

【0208】

ＹがＮ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１であるこれらの実施形態の一部によれば、Ｒ１は、メチルおよびペンタデシル基を含む群から選択され、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（ＩＩ）について定義されたのと同じ意味を有する。

【0209】

これらの実施形態は、ＹがＮ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１であり、Ｒ１がメチル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２がそれぞれ水素原子を表し、Ｂ、Ｐ１およびＰ２は、一般式（ＩＩ）で定義された通りである式（ＩＩ）の化合物を包含する。

【0210】

本開示におけるこのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、プレｌＢ９と呼ばれ、Ｂは、一般式（ＩＩ）での意味と同じ意味を有し；例えば、本開示におけるこのようなヌクレオチド類似体の実施形態は、プレｌＴ９と呼ばれ、式中、Ｂは、チミジニル基からなる。これらの実施形態はまた、ＹがＮ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１であり、Ｒ１がペンタデシル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２がそれぞれ水素原子を表し、Ｂ、Ｐ１およびＰ２は、一般式（ＩＩ）で定義された通りである式（ＩＩ）の化合物も包含する。本開示におけるこのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、プレｌＢ１０と呼ばれ、Ｂは、一般式（ＩＩ）での意味と同じ意味を有し；例えば、本開示におけるこのようなヌクレオチド前駆体の実施形態は、プレｌＴ１０と呼ばれ、式中、Ｂは、チミジニル基からなる。

【0211】

式（ＩＩ）の化合物において、Ｂは、複素環式の核酸塩基部分である。用語「複素環式の核酸塩基」は、本明細書で使用される場合、場合により置換された、ジオキサン環またはモルホリノ環に共有結合で連結された窒素含有複素環を指す。一部の実施形態では、複素環式の核酸塩基は、場合により置換されたプリン塩基および場合により置換されたピリミジン塩基から選択することができる。用語「プリン塩基」は、本明細書において、当業者によって理解される通りのその通常の意味で使用され、その互変異性体を含む。同様に、用語「ピリミジン塩基」は、本明細書において、当業者によって理解される通りのその通常の意味で使用され、その互変異性体を含む。場合により置換されたプリン塩基の非限定的な列挙としては、プリン、アデニン、グアニン、ヒポキサンチン、キサンチン、アロキサンチン、７－アルキルグアニン（例えば７－メチルグアニン）、テオブロミン、カフェイン、尿酸およびイソグアニンが挙げられる。ピリミジン塩基の例としては、これらに限定されないが、シトシン、チミン、ウラシル、５，６－ジヒドロウラシルおよび５－アルキルシトシン（例えば、５－メチルシトシン）が挙げられる。複素環塩基の他の非限定的な例としては、ジアミノプリン、８－オキソ－Ｎ^６アルキルアデニン（例えば、８－オキソ－Ｎ^６メチルアデニン）、７－デアザキサンチン、７－デアザグアニン、７－デアザアデニン、Ｎ^４Ｎ^４エタノシトシン、Ｎ^＜６＞，Ｎ^＜６＞－エタノ－２，６－ジアミノプリン、５－ハロウラシル（例えば、５－フルオロウラシルおよび５－ブロモウラシル）、プソイドイソシトシン、イソシトシン、イソグアニン、１，２，４－トリアゾール－３－カルボキサミド、ならびに追加の複素環塩基を開示する限定的な目的のために参照により本明細書に組み入れられる米国特許第５，４３２，２７２号および７，１２５，８５５号に記載される他の複素環塩基が挙げられる。一部の実施形態では、複素環塩基は、アミンまたはエノール保護基で場合により置換される。一部の実施形態では、Ｂは、ピリミジン、置換されたピリミジン、プリンおよび置換されたプリンを含む群から選択され、それらのアミノ基は、存在する場合、場合により保護基によって保護されている。

【0212】

好ましい実施形態では、Ｂは、アデニン、チミン、ウラシル、グアニンおよびシトシン（すなわちアデニル、チミニル、ウラシル、グアニルおよびシトシル基）を含む群から選択される。アデニン、グアニンおよびシトシンは、場合によりアミン保護基によって保護されている。アミン保護基は、例えばベンゾイル、フェニルアセチルおよびイソブチリル－保護基のようなアシル基、または例えばＮ，Ｎ－ジメチル－ホルムアミジンのようなホルムアミジン保護基を包含する。

【0213】

すでに述べたように、式（ＩＩ）の化合物において、基Ｐ１およびＰ２は、それぞれ独立して、水素原子、反応性リン基または保護基である。

【0214】

「反応性リン基」は、本明細書で使用される場合、ヌクレオチド単位またはヌクレオチド類似体単位に含まれるリンを含有する基であって、求核性攻撃反応を介して、別の分子に含まれる、特に別のヌクレオチド単位または別のヌクレオチド類似体に含まれるヒドロキシル基またはアミン基と反応することができる基を指す。一般的に、このような反応は、前記第１のヌクレオチド単位または前記第１のヌクレオチド類似体単位を前記第２のヌクレオチド単位または前記第２のヌクレオチド類似体単位に連結するエステル型のヌクレオシド間連結を生成する。

【0215】

一部の実施形態では、反応性リン基は、ホスホロアミダイト、Ｈ－リン酸エステル、アルキルリン酸エステル、リン酸エステルまたはリン酸エステル擬似体からなる群から選択することができ、その例としては、これらに限定されないが：天然リン酸エステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ボラノリン酸エステル、ボラノチオリン酸エステル、リン酸エステル、ハロゲンで置換されたホスホン酸エステルおよびリン酸エステル、ホスホロアミデート、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、チオホスホジエステル、チオホスホトリエステル、二リン酸エステルおよび三リン酸エステルが挙げられる。保護基は、ヒドロキシル、アミンおよびホスホロアミダイト保護基を包含し、これは、アセチル（Ａｃ）、ベンゾイル（Ｂｚｌ）、ベンジル（Ｂｎ）、イソブチリル（ｉＢｕ）、フェニルアセチル、ベンジルオキシメチルアセタール（ＢＯＭ）、ベータ－メトキシエトキシメチルエーテル（ＭＥＭ）、メトキシメチルエーテル（ＭＯＭ）、ｐ－メトキシベンジルエーテル（ＰＭＢ）、メチルチオメチルエーテル、ピバロイル（Ｐｉｖ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、トリフェニルメチル（Ｔｒｔ）、メトキシトリチル［（４－メトキシフェニル）ジフェニルメチル］（ＭＭＴ）、ジメトキシトリチル、［ビス－（４－メトキシフェニル）フェニルメチル（ＤＭＴ）、トリメチルシリルエーテル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルエーテル（ＴＢＤＭＳ）、トリイソプロピルシリルオキシメチルエーテル（ＴＯＭ）、トリ－イソプロピルシリルエーテル（ＴＩＰＳ）、メチルエーテル、エトキシエチルエーテル（ＥＥ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミジンおよび２－シアノエチル（ｃｙｎａｏｎｅｔｈｙｌ）（ＣＥ）を含む群から選択することができる。

【0216】

式（ＩＩ）の化合物（式中、Ｙ、Ｂ、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、一般式（ＩＩ）に関して定義された通りである）の一部の実施形態では、Ｐ１またはＰ２の一方は、Ｏ－４，４’－ジメトキシトリチル基（ＤＭＴ）であり、Ｐ１およびＰ２の他方は、Ｈ、反応性リン基または保護基である。

【0217】

式（ＩＩ）の化合物（式中、Ｙ、Ｂ、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、一般式（ＩＩ）に関して定義された通りである）の一部の実施形態では、Ｐ１およびＰ２の一方は、２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルホスホロアミダイト基であり、Ｐ１およびＰ２の他方は、保護基である。

【0218】

式（ＩＩ）の化合物（式中、Ｙ、Ｂ、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、一般式（ＩＩ）に関して定義された通りである）の一部の実施形態では、Ｐ１およびＰ２の一方は、２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルホスホロアミダイト基であり、Ｐ１およびＰ２の他方は、Ｏ－４，４’－ジメトキシトリチル基である。

【0219】

更に、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄのそれぞれは、独立して、Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、好ましくはＨまたは非置換の（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキル基である。

【0220】

（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基は、本明細書で使用される場合、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５およびＣ６アルキル基を含む群から選択されるアルキル基を包含する。

【0221】

最も好ましい実施形態において、Ｘ１およびＸ２の両方は、水素原子を表す。

【0222】

最も好ましい実施形態において、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは全て、水素原子を表す。

【0223】

標的化されたヌクレオチド類似体を含む式（ＩＩ）の化合物の実施形態
本明細書でこれまでに特定されたように、本開示は、式（ＩＩ）の化合物［式中：
－ Ｂは、複素環式の核酸塩基であり；
－ Ｐ１およびＰ２は、それぞれ独立して、Ｈ、反応性リン基または保護基であり；
－ Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、基－［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ－Ｒ２－（Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２）ｐ－Ｒ３（式中、
ｍは、０または１を意味する整数であり、
ｐは、０～１０の範囲の整数であり、
Ｒ２は、場合により（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、－Ｏ－Ｚ３、－Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、－Ｓ－Ｚ３、－ＣＮ、－Ｃ（＝Ｋ）－Ｏ－Ｚ３、－Ｏ－Ｃ（＝Ｋ）－Ｚ３、－Ｃ（＝Ｋ）－Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、－Ｎ（Ｚ３）－Ｃ（＝Ｋ）－Ｚ４で置換されている（Ｃ１～Ｃ２０）アルキレン基であり、
Ｋは、ＯまたはＳであり、
Ｚ３およびＺ４のそれぞれは、独立して、Ｈであるか、場合によりハロゲン原子および（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、
Ｒ３は、細胞標的化部分である）であり、
－ Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、水素原子、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、
－ Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄのそれぞれは、独立して、Ｈであるか、または（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基である］
を包含する。

【0224】

これらの式（ＩＩ）の化合物は、本開示において「標的化されたヌクレオチド前駆体」と呼ぶこともある、より一般的な化合物のファミリーに包含される。本開示において、基Ｒ３が存在し、細胞標的化部分を表す式（ＩＩ）の化合物は、「式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド前駆体」または「標的化されたヌクレオチド前駆体（ＩＩ）」と呼ぶこともある。

【0225】

細胞標的化部分を表す基Ｒ３を含まない式（ＩＩ）の化合物は、標的化されたヌクレオチド前駆体ではなく、本開示において、「式（ＩＩ）の標的化されていないヌクレオチド前駆体」または「標的化されていないヌクレオチド前駆体（ＩＩ）」と呼ばれる。

【0226】

式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド前駆体の一部の実施形態では、Ｒ１は、基－［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ－Ｒ２－（Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２）ｐ－Ｒ３であり、ｍは、０であり、ｐは、０であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、およびＲ２は、式（ＩＩ）の化合物の一般的な定義に記載の通りである。一部の実施形態では、Ｒ２は、エチレン基であり、Ｘ１およびＸ２は、両方とも水素原子である。これらの実施形態の他の一部では、Ｒ２は、ペンチレン基であり、Ｘ１およびＸ２は、両方とも水素原子である。一部の実施形態では、Ｒ２は、（Ｃ１２）アルキレンであり、Ｘ１およびＸ２は、両方とも水素原子である。

【0227】

式（ＩＩ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ１は、基－［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ－Ｒ２－（Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２）ｐ－Ｒ３であり、ｍは、０であり、ｐは、１、２、３および４からなる群から選択される整数であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＲ２は、式（ＩＩ）の化合物の一般的な定義に記載の通りである。一部の実施形態では、Ｒ２は、エチレン基であり、ｐは、１であり、Ｘ１およびＸ２は、両方とも水素原子である。一部の実施形態では、Ｒ２は、エチレン基であり、ｐは、２であり、Ｘ１およびＸ２は、両方とも水素原子である。一部の実施形態では、Ｒ２は、エチレン基であり、ｐは、３であり、Ｘ１およびＸ２は、両方とも水素原子である。一部の実施形態では、Ｒ２は、エチレン基であり、ｐは、４であり、Ｘ１およびＸ２は、両方とも水素原子である。

【0228】

式（ＩＩ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ１は、基－［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ－Ｒ２－（Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２）ｐ－Ｒ３であり、ｍは、１であり、ｐは、０であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｒ２、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、式（ＩＩ）の化合物の一般的な定義に記載の通りである。これらの実施形態の一部では、Ｒ２は、ブチレンであり、Ｘ１およびＸ２はそれぞれ水素原子を表し、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、一般式（ＩＩ）に関して定義された通りである。これらの実施形態の更なる一部では、Ｒ２は、（Ｃ１１）アルキレンであり、Ｘ１およびＸ２の両方は、水素原子を表し、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、一般式（ＩＩ）に関して定義された通りである）。一部の更なる一層のこれらの実施形態では、Ｒ２は、メチレンであり、Ｘ１およびＸ２の両方は、水素原子を表し、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、一般式（ＩＩ）に関して定義された通りである。

【0229】

Ｒ１が基－［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ－Ｒ２－（Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２）ｐ－Ｒ３である式（ＩＩ）の化合物の一部の実施形態では、ｍが１であり、ｐが１および２からなる整数の群から選択され、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｒ２、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、式（ＩＩ）の化合物の一般的な定義に記載の通りである。これらの実施形態の一部では、Ｒ２は、メチレン基であり、ｐは、２であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、一般式（ＩＩ）に関して定義された通りである。これらの実施形態の他の一部では、Ｒ２は、メチレン基であり、ｐは、１であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、一般式（ＩＩ）に関して定義された通りである。

【0230】

式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、水素原子である。

【0231】

一般的に、基Ｒ３は、本開示で特定された任意の細胞標的化部分を含む当業界において公知の任意の細胞標的化部分を包含し、その例としては、本開示において標的化されたオリゴヌクレオチドの説明のために特定されている細胞標的化部分が挙げられる。

【0232】

式（ＩＩ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ３は、式（ＩＩＩ）

【化3】

（式中、
Ａ１、Ａ２およびＡ３は、ＯＨまたはＯ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ４であり、Ｒ４は、（Ｃ１～Ｃ６）－アルキルまたは（Ｃ６～Ｃ１０）－アリール基である）
を有する。

【0233】

Ａ４は、ＯＨ、Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ４、ＮＨＣ（＝Ｏ）－Ｒ５であり、Ｒ４は、上記で定義された通りであり、Ｒ５は、場合によりハロゲン原子で置換されている（Ｃ１～Ｃ６）－アルキル基である。

【0234】

一部の好ましい実施形態では、Ａ１、Ａ２およびＡ３は、Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ４であり、Ｒ４は、（Ｃ１～Ｃ６）－アルキルまたは（Ｃ６～Ｃ１０）－アリール基である。

【0235】

一部の好ましい実施形態では、Ａ１、Ａ２およびＡ３は、Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ４であり、Ｒ４は、メチルまたはフェニル基である。

【0236】

一部の好ましい実施形態では、Ａ１、Ａ２およびＡ３は、Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ４であり、Ｒ４は、メチルである。

【0237】

一部の好ましい実施形態では、Ａ４は、Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ４またはＮＨＣ（＝Ｏ）－Ｒ５であり、Ｒ４は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ６～Ｃ１０）－アリール基であり、Ｒ５は、場合によりハロゲン原子で置換されている（Ｃ１～Ｃ６）－アルキル基である。

【0238】

一部の好ましい実施形態では、Ａ１、Ａ２およびＡ３は、Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ４であり、Ｒ４は、メチルであり、Ａ４は、Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ４またはＮＨＣ（＝Ｏ）－Ｒ５であり、Ｒ４およびＲ５のそれぞれは、メチルである。

【0239】

一部の好ましい実施形態では、Ｒ３は、式（ＩＩＩ－Ａ）の３，４，６－トリ－Ｏ－アセチル－Ｄ－Ｎ－アセチルガラクトシルアミンである：

【化4】

【0240】

本開示はまた、本明細書において特定された式（ＩＩ）の化合物であるヌクレオチド類似体前駆体を使用することによってオリゴヌクレオチド中に導入された１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体を含むオリゴヌクレオチドにも関する。

【0241】

本開示は、本明細書の他所で、式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体が、存在する場合、そのアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの５’－オーバーハングにも３’－オーバーハングにもないと詳細に説明される通りの、１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体を含む、一本鎖オリゴヌクレオチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチドに関し、特にｓｉＲＮＡに関し、場合によっては式（Ｉ－Ｂ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体にも関する。

【0242】

本開示は、アンチセンス鎖オリゴヌクレオチドのハイブリダイジング領域中に１つまたはそれ以上の式（Ｉ－Ａ）のハイブリダイジングヌクレオチド類似体を含む、場合によってはセンス鎖オリゴヌクレオチド中に１つまたはそれ以上のハイブリダイジングヌクレオチド類似体（Ｉ－Ａ）を含む、一本鎖オリゴヌクレオチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチド、特にｓｉＲＮＡに関する。更に、二本鎖オリゴヌクレオチド、特にｓｉＲＮＡは、存在する場合、センスおよびアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの５’－オーバーハングに、３’－オーバーハングに、または５’－オーバーハングと３’－オーバーハングの両方に１つまたはそれ以上の非標的化ヌクレオチド類似体を含んでいてもよいし、場合によっては、センスおよびアンチセンス鎖オリゴヌクレオチドの５’－オーバーハングに、３’－オーバーハングに、または５’－オーバーハングと３’－オーバーハングの両方に１つまたはそれ以上の標的化されたヌクレオチド類似体（Ｉ－Ｂ）を含んでいてもよい。

【0243】

式（Ｉ－Ａ）および（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体を以下で更に詳述する。

【0244】

式（Ｉ－Ａ）および（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体
本明細書で開示される式（ＩＩ）の化合物は、オリゴマー化合物の単量体単位として、特にオリゴヌクレオチドの単量体単位として、例えば、二本鎖ＲＮＡ（「ｄｓＲＮＡ」）オリゴマーの単量体単位として、特にｓｉＲＮＡの単量体単位などとして含まれるように考え出されたヌクレオチド類似体構成単位であり、これは、「ヌクレオチド類似体前駆体」とも呼ばれる。本明細書において式（ＩＩ）の化合物で記載されるヌクレオチド類似体前駆体のオリゴヌクレオチドへの取り込みは、前記オリゴヌクレオチドにおいて、式（Ｉ）の化合物として本明細書に記載される対応する単量体単位の存在をもたらし、この式（Ｉ）の化合物は、（ｉ）式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体または（ｉｉ）式（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体のいずれかからなる。

【0245】

更に後述されるように、式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体は、式（Ｉ）の化合物（式中、基Ｒ３は、細胞標的化部分からなっていない）からなる。また式（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体も、式（Ｉ）の化合物（式中、基Ｒ３は、細胞標的化部分からなる）からなる。

【0246】

本開示はまた、式（Ｉ）：

【化5】

［式中、
－ Ｂは、複素環式の核酸塩基であり；
－ Ｌ１およびＬ２の一方は、式（Ｉ）の化合物をヌクレオチド残基に連結するヌクレオシド間連結基であり、Ｌ１およびＬ２の他方は、Ｈ、保護基、リン部分または式（Ｉ）の化合物をヌクレオチドに連結するヌクレオシド間連結基であり、
－ Ｙは、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ１またはＮ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１であり、Ｒ１は：
・場合により、ハロゲン原子、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３～Ｃ１４）複素環、（Ｃ６～Ｃ１４）アリール基、（Ｃ５～Ｃ１４）ヘテロアリール基、－Ｏ－Ｚ１、－Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、－Ｓ－Ｚ１、－ＣＮ、－Ｃ（＝Ｊ）－Ｏ－Ｚ１、－Ｏ－Ｃ（＝Ｊ）－Ｚ１、－Ｃ（＝Ｊ）－Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、－Ｎ（Ｚ１）－Ｃ（＝Ｊ）－Ｚ２から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基（式中、
Ｊは、ＯまたはＳであり、
Ｚ１およびＺ２のそれぞれは、独立して、Ｈであるか、場合によりハロゲン原子および（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている）であるか、
・場合によりハロゲン原子および（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基であるか、
・基－［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ－Ｒ２－（Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２）ｐ－Ｒ３（式中、
ｍは、０または１を意味する整数であり、
ｐは、０～１０の範囲の整数であり、
Ｒ２は、場合により（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、－Ｏ－Ｚ３、－Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、－Ｓ－Ｚ３、－ＣＮ、－Ｃ（＝Ｋ）－Ｏ－Ｚ３、－Ｏ－Ｃ（＝Ｋ）－Ｚ３、－Ｃ（＝Ｋ）－Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、および－Ｎ（Ｚ３）－Ｃ（＝Ｋ）－Ｚ４で置換されている（Ｃ１～Ｃ２０）アルキレン基であり、
Ｋは、ＯまたはＳであり、
Ｚ３およびＺ４のそれぞれは、独立して、Ｈであるか、場合によりハロゲン原子および（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、
Ｒ３は、水素原子、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ基、（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３～Ｃ１４）複素環、（Ｃ６～Ｃ１４）アリール基または（Ｃ５～Ｃ１４）ヘテロアリール基からなる群から選択されるか、
または
Ｒ３は、細胞標的化部分である）であり、
－ Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、水素原子、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、
－ Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄのそれぞれは、独立して、Ｈであるか、または（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基である］
のヌクレオチド類似体、ならびにその任意の異性体、例えば立体異性体、またはその医薬的に許容される塩にも関する。

【0247】

本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドの一部の好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物において、Ｙは、Ｏである。

【0248】

本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドの一部の他の好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物において、Ｙは、ＮＲ１またはＮ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１であり、Ｒ１は、一般式（Ｉ）に関して定義された通りである。

【0249】

ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、場合により、ハロゲン原子、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３～Ｃ１４）複素環、（Ｃ６～Ｃ１４）アリール基、（Ｃ５～Ｃ１４）ヘテロアリール基、－Ｏ－Ｚ１、－Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、－Ｓ－Ｚ１、－ＣＮ、－Ｃ（＝Ｊ）－Ｏ－Ｚ１、－Ｏ－Ｃ（＝Ｊ）－Ｚ１、－Ｃ（＝Ｊ）－Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、－Ｎ（Ｚ１）－Ｃ（＝Ｊ）－Ｚ２から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基であり、
Ｊは、ＯまたはＳであり、
Ｚ１およびＺ２のそれぞれは、独立して、Ｈであるか、場合によりハロゲン原子および（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、塩基の形態で、または酸との付加塩の形態である。

【0250】

ＹがＮＲ１であるこれらの実施形態の一部において、Ｒ１は、非置換の（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基であり、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有し、またはその医薬的に許容される塩である。

【0251】

ＹがＮＲ１である実施形態の一部では、Ｒ１は、非置換の（Ｃ１～Ｃ１６）アルキル基であり、その例としては、メチル、イソプロピル、ブチル、オクチル、ヘキサデシルを含む群から選択されるアルキル基が挙げられ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）に関して定義されたのと同じ意味を有する。

【0252】

ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、メチル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、水素原子であり、Ｌ１およびＬ２は、一般式（Ｉ）に関して定義された通りである。

【0253】

ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、イソプロピル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、水素原子であり、Ｌ１およびＬ２は、一般式（Ｉ）に関して定義された通りである。

【0254】

ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、フェニル基で置換されたメチル基であり、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有し、またはその医薬的に許容される塩である。

【0255】

ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、ブチル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、水素原子であり、Ｌ１およびＬ２は、一般式（Ｉ）に関して定義された通りである。

【0256】

ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、オクチル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、水素原子であり、Ｌ１およびＬ２は、一般式（Ｉ）に関して定義された通りである。

【0257】

ＹがＮＲ１である一部の実施形態では、Ｒ１は、直鎖状Ｃ１６アルキル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１およびＸ２は、水素原子であり、Ｌ１およびＬ２は、一般式（Ｉ）に関して定義された通りである。

【0258】

ＹがＮＲ１である式（Ｉ）の化合物の更なる実施形態では、Ｒ１は、一般式（Ｉ）で定義した通り置換された（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基であり、その例としては、一般式（Ｉ）で定義した通り置換されたＣ１、Ｃ２またはＣ３アルキル基が挙げられる。

【0259】

これらの更なる実施形態の一部では、Ｒ１は、ハロゲン原子、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３～Ｃ１４）複素環、（Ｃ６～Ｃ１４）アリール基および（Ｃ５～Ｃ１４）ヘテロアリール基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換された（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基である。

【0260】

これらの更なる実施形態の一部では、Ｒ１は、（Ｃ６～Ｃ１４）アリール基で置換された（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基であり、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する。

【0261】

ＹがＮＲ１である式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ１は、（Ｃ６～Ｃ１４）アリール基で置換された（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基である。これらの実施形態は、ＹがＮＲ１であり、Ｒ１がアリール基で置換されたメチレン基である式（Ｉ）の化合物を包含する。これらの実施形態はまた、ＹがＮＲ１であり、Ｒ１が、フェニル基で置換された（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基である式（Ｉ）の化合物も包含する。

【0262】

ＹがＮＲ１である式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ１は、非置換のフェニル基で置換されたメチル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄは、それぞれ水素原子であり、Ｌ１およびＬ２は、一般式（Ｉ）で定義した通りである。

【0263】

ＹがＮＲ１である式（Ｉ）の化合物の更なる実施形態では、Ｒ１は、場合によりハロゲン原子および（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基であり、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有する。

【0264】

ＹがＮＲ１である式（Ｉ）の化合物のこれらの更なる実施形態の一部では、Ｒ１は、シクロヘキシル基であり、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有し、またはその医薬的に許容される塩である。

【0265】

ＹがＮＲ１である式（Ｉ）の化合物のこれらの更なる実施形態の一部では、Ｒ１は、非置換のシクロヘキシルであり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、それぞれ水素原子であり、Ｌ１およびＬ２は、一般式（Ｉ）に関して定義された通りである。

【0266】

式（Ｉ）のオリゴヌクレオチドの一部の他の実施形態では、Ｙは、Ｎ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１であり、Ｒ１は、（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基であり、Ｒ１は、メチルおよびペンタデシルを含む群から選択され、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３およびＢは、一般式（Ｉ）について定義されたのと同じ意味を有し、またはその医薬的に許容される塩である。

【0267】

式（Ｉ）のオリゴヌクレオチドの一部の他の実施形態では、Ｙは、Ｎ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１であり、Ｒ１は、場合により、ハロゲン原子、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル基、（Ｃ３～Ｃ１４）複素環、（Ｃ６～Ｃ１４）アリール基、（Ｃ５～Ｃ１４）ヘテロアリール基、－Ｏ－Ｚ１、－Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、－Ｓ－Ｚ１、－ＣＮ、－Ｃ（＝Ｊ）－Ｏ－Ｚ１、－Ｏ－Ｃ（＝Ｊ）－Ｚ１、－Ｃ（＝Ｊ）－Ｎ（Ｚ１）（Ｚ２）、および－Ｎ（Ｚ１）－Ｃ（＝Ｊ）－Ｚ２から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基であり、
Ｊは、ＯまたはＳであり、
Ｚ１およびＺ２のそれぞれは、独立して、Ｈであるか、場合によりハロゲン原子および（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、
Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（ＩＩ）に関して定義されたのと同じ意味を有する。

【0268】

ＹがＮ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１である実施形態の一部では、Ｒ１は、場合により置換された（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基であり、これは、場合により置換された（Ｃ１～Ｃ１５）アルキル基を含み、Ｌ１、Ｌ２、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）に関して定義されたのと同じ意味を有する。

【0269】

ＹがＮ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１である実施形態の一部では、Ｒ１は、非置換の（Ｃ１～Ｃ２０）アルキル基であり、これは、非置換の（Ｃ１～Ｃ１５）アルキル基を含み、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＢは、一般式（Ｉ）に関して定義されたのと同じ意味を有する。

【0270】

ＹがＮ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１であるこれらの実施形態の一部によれば、Ｒ１は、メチルおよびペンタデシルを含む群から選択され、Ｌ１およびＬ２およびＢは、一般式（Ｉ）に関して定義されたのと同じ意味を有する。これらの実施形態は、Ｙが、Ｎ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１であり、Ｒ１は、メチル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２はそれぞれ水素原子を表し、Ｂ、Ｌ１およびＬ２は、一般式（Ｉ）で定義した通りである、式（ＩＩ）の化合物を包含する。これらの実施形態はまた、Ｙが、Ｎ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｒ１であり、Ｒ１は、ペンタデシル基であり、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２はそれぞれ水素原子を表し、Ｂ、Ｌ１およびＬ２は、一般式（Ｉ）で定義した通りである、式（Ｉ）の化合物も包含する。

【0271】

式（Ｉ）のヌクレオチド類似体は、式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体または式（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体のいずれかからなり、遊離塩基の形態で、または酸との付加塩の形態で存在することができる。式（Ｉ）のヌクレオチド類似体は、式（Ｉ－Ａ）のヌクレオチド類似体または式（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体のいずれかからなり、それらの医薬的に許容される塩の形態で存在することもでき、これもまた本開示の範囲内である。

【0272】

標的化されたヌクレオチド類似体とも呼ばれる式（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体の実施形態
本明細書でこれまでに特定されたように、本開示はまた、塩基の形態で、または酸との付加塩の形態での、式（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体［式中、
－ Ｂは、複素環式の核酸塩基であり；
－ Ｌ１およびＬ２の一方は、式（Ｉ）の化合物をヌクレオチド残基に連結するヌクレオシド間連結基であり、Ｌ１およびＬ２の他方は、Ｈ、保護基、リン部分または式（Ｉ）の化合物をヌクレオチド残基に連結するヌクレオシド間連結基であり；
－ Ｙは、ＮＲ１であり、Ｒ１は、基－［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ－Ｒ２－（Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２）ｐ－Ｒ３（式中、
ｍは、０または１を意味する整数であり、
ｐは、０～１０の範囲の整数であり、
Ｒ２は、場合により（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、－Ｏ－Ｚ３、－Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、－Ｓ－Ｚ３、－ＣＮ、－Ｃ（＝Ｋ）－Ｏ－Ｚ３、－Ｏ－Ｃ（＝Ｋ）－Ｚ３、－Ｃ（＝Ｋ）－Ｎ（Ｚ３）（Ｚ４）、－Ｎ（Ｚ３）－Ｃ（＝Ｋ）－Ｚ４で置換されている（Ｃ１～Ｃ２０）アルキレン基であり、
Ｋは、ＯまたはＳであり、
Ｚ３およびＺ４のそれぞれは、独立して、Ｈであるか、場合によりハロゲン原子および（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基から選択される１つまたはそれ以上の基で置換されている（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、
Ｒ３は、細胞標的化部分である）であり、
－ Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、水素原子、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、
－ Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄのそれぞれは、独立して、Ｈであるか、または（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基である］
、ならびにそれらの任意の異性体、例えばそれらの立体異性体、または医薬的に許容される塩も包含する。

【0273】

これらの式（Ｉ－Ｂ）の化合物は、本開示において「標的化されたヌクレオチド類似体」と呼ぶこともある、より一般的な化合物のファミリーに包含される。

【0274】

Ｒ１が基－［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ－Ｒ２－（Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２）ｐ－Ｒ３である式（Ｉ－Ｂ）の標的化されたヌクレオチド類似体の一部の実施形態では、ｍが０であり、ｐが０であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、およびＲ２は、式（Ｉ－Ｂ）の化合物の一般的な定義に記載の通りである。

【0275】

一部の実施形態では、Ｒ２は、エチレン基であり、Ｘ１およびＸ２は、両方とも水素原子であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄは、式（Ｉ－ＢＩ）の化合物の一般的な定義に記載の通りである。

【0276】

これらの実施形態の他の一部では、Ｒ２は、ペンチレン基であり、Ｘ１およびＸ２は、両方とも水素原子であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄは、式（Ｉ－Ｂ）の化合物の一般的な定義に記載の通りである。

【0277】

これらの実施形態の他の一部では、Ｒ２は、（Ｃ１２）アルキレン基であり、Ｘ１およびＸ２は、両方とも水素原子であり、Ｂ、Ｐ１、Ｐ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄは、式（Ｉ－Ｂ）の化合物の一般的な定義に記載の通りである。

【0278】

Ｒ１が基－［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ－Ｒ２－（Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２）ｐ－Ｒ３である式（Ｉ－Ｂ）の化合物の一部の実施形態では、ｍが０であり、ｐが１、２、３および４からなる整数の群から選択され、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２およびＲ２は、式（ＩＩ）の化合物の一般的な定義に記載の通りである。これらの実施形態の一部では、Ｒ２は、エチレン基であり、ｐは、１であり、Ｘ１およびＸ２は、両方とも水素原子である。更なる一層のこれらの実施形態では、Ｒ２は、エチレン基であり、ｐは、２であり、Ｘ１およびＸ２は、両方とも水素原子である。より更なるこれらの実施形態では、Ｒ２は、エチレン基であり、ｐは、３であり、Ｘ１およびＸ２は、両方とも水素原子である。それでもなお他のこれらの実施形態では、Ｒ２は、エチレン基であり、ｐは、４であり、Ｘ１およびＸ２は、両方とも水素原子である。

【0279】

Ｒ１が基－［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ－Ｒ２－（Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２）ｐ－Ｒ３である式（Ｉ－Ｂ）の化合物の一部の実施形態では、ｍが１であり、ｐが０であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｒ２、Ｂ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、式（Ｉ－Ｂ）の化合物の一般的な定義に記載の通りである。

【0280】

これらの実施形態の一部では、Ｒ２は、ブチレンであり、Ｘ１およびＸ２の両方は、水素原子を表し、Ｂ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、一般式（Ｉ－Ｂ）に関して定義された通りである。

【0281】

これらの実施形態の更なる一部では、Ｒ２は、（Ｃ１１）アルキレンであり、Ｘ１およびＸ２の両方は、水素原子を表し、Ｂ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、一般式（Ｉ－Ｂ）に関して定義された通りである。

【0282】

それでもなお一部の更なるこれらの実施形態では、Ｒ２は、メチレンであり、Ｘ１およびＸ２の両方は、水素原子を表し、Ｂ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、一般式（Ｉ－Ｂ）に関して定義された通りである。

【0283】

Ｒ１が基－［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ－Ｒ２－（Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２）ｐ－Ｒ３である式（ＩＩ）の化合物の一部の実施形態では、ｍが１であり、ｐが１および２からなる整数の群から選択され、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｒ２、Ｂ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、は、式（Ｉ－Ｂ）の化合物の一般的な定義に記載の通りである。

【0284】

これらの実施形態の一部では、Ｒ２は、メチレン基であり、ｐは、２であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２、は、一般式（Ｉ－Ｂ）に関して定義された通りである。

【0285】

これらの実施形態の他の一部では、Ｒ２は、メチレン基であり、ｐは、１であり、Ｒ３は、細胞標的化部分であり、Ｂ、Ｌ１、Ｌ２、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｘ１、Ｘ２は、一般式（Ｉ－Ｂ）に関して定義された通りである。

【0286】

一般的に、基Ｒ３は、本開示で特定された任意の細胞標的化部分を含む当業界において公知の任意の細胞標的化部分を包含し、その例としては、本開示において標的化されたオリゴヌクレオチドの説明のために特定されている細胞標的化部分が挙げられる。

【0287】

式（Ｉ－Ｂ）の化合物の一部の実施形態では、Ｒ３は、式（ＩＩＩ）：

【化6】

（式中、Ａ１、Ａ２およびＡ３は、ＯＨであり、
Ａ４は、ＯＨまたはＮＨＣ（＝Ｏ）－Ｒ５であり、Ｒ５は、場合によりハロゲン原子で置換されている（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基である）
を有する。

【0288】

一部の実施形態では、Ｒ３は、式（ＩＩＩ－Ｂ）のＮ－アセチル－ガラクトサミンである：

【化7】

【0289】

本開示によれば、「ＧａｌＮＡｃ」または「Ｎ－アセチルガラクトサミン」への言及は、β形態：２－（アセチルアミノ）－２－デオキシ－β－Ｄ－ガラクトピラノースおよびα形態：２－（アセチルアミノ）－２－デオキシ－α－Ｄ－ガラクトピラノースの両方を含む。特定の実施形態では、β－形態：２－（アセチルアミノ）－２－デオキシ－β－Ｄ－ガラクトピラノースおよびα形態；２－（アセチルアミノ）－２－デオキシ－α－Ｄ－ガラクトピラノースはどちらも同義的に使用することができる。

【0290】

式（Ｉ－Ｂ）のオリゴヌクレオチドにおいて、Ｂは、複素環式の核酸塩基部分である。用語「複素環式の核酸塩基」は、本明細書で使用される場合、場合により置換された、ジオキサン環またはモルホリノ環に共有結合で連結された窒素含有複素環を指す。一部の実施形態では、複素環式の核酸塩基は、場合により置換されたプリン塩基、場合により置換されたピリミジン塩基から選択することができる。用語「プリン塩基」は、本明細書において、当業者によって理解される通りのその通常の意味で使用され、その互変異性体を含む。同様に、用語「ピリミジン塩基」は、本明細書において、当業者によって理解される通りのその通常の意味で使用され、その互変異性体を含む。場合により置換されるプリン塩基の非限定的な列挙としては、プリン、アデニン、グアニン、ヒポキサンチン、キサンチン、アロキサンチン、７－アルキルグアニン（例えば７－メチルグアニン）、テオブロミン、カフェイン、尿酸およびイソグアニンが挙げられる。ピリミジン塩基の例としては、これらに限定されないが、シトシン、チミン、ウラシル、５，６－ジヒドロウラシルおよび５－アルキルシトシン（例えば、５－メチルシトシン）が挙げられる。複素環塩基の他の非限定的な例としては、ジアミノプリン、８－オキソ－Ｎ^６アルキルアデニン（例えば、８－オキソ－Ｎ^６メチルアデニン）、７－デアザキサンチン、７－デアザグアニン、７－デアザアデニン、Ｎ^４Ｎ^４エタノシトシン、Ｎ^＜６＞，Ｎ^＜６＞－エタノ－２，６－ジアミノプリン、５－ハロウラシル（例えば、５－フルオロウラシルおよび５－ブロモウラシル）、プソイドイソシトシン、イソシトシン、イソグアニン、１，２，４－トリアゾール－３－カルボキサミド、ならびに追加の複素環塩基を開示するために参照により本明細書に組み入れられる米国特許第５，４３２，２７２号および７，１２５，８５５号に記載される他の複素環塩基が挙げられる。

【0291】

一部の実施形態では、Ｂは、ピリミジン、置換されたピリミジン、プリンおよび置換されたプリンを含む群から選択される。

【0292】

好ましい実施形態では、Ｂは、アデニン、チミン、ウラシル、グアニンおよびシトシン（すなわち、アデニル、チミニル、ウラシル、グアニルおよびシトシル基を含む群から選択される）。

【0293】

すでに述べたように、式（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体を含むオリゴヌクレオチドにおいて、基Ｌ１およびＬ２のうち一方の基は、式（Ｉ）の化合物を、ヌクレオチド残基に、すなわち隣接するヌクレオチド残基に連結するヌクレオシド間連結基であり、Ｌ１およびＬ２基のうち他方の基は、Ｈ、保護基、または式（Ｉ－Ｂ）の化合物を、ヌクレオチド残基に、すなわち隣接するヌクレオチド残基に連結するヌクレオシド間連結基である。

【0294】

加えて、モルホリン－窒素（ＧａｌＮＡｃ残基）に付着された標的化部分を有する式（Ｉ）の１つまたはそれ以上の化合物を取り込んだ二本鎖オリゴヌクレオチドの本明細書に記載される例は、肝臓へのロバストな送達を示し、標的ｍＲＮＡおよび対応するタンパク質レベルのインビボノックダウンをもたらす。

【0295】

意外なことに、１つの二本鎖オリゴヌクレオチド内で式（Ｉ）の標的化された化合物と式（Ｉ）の標的化されていない化合物とを組み合わせると、インビボにおいて二本鎖オリゴヌクレオチドの挙動（特にインビボにおける作用の持続時間）が著しく改善されることが実証され；これはまた、センス鎖がまったくホスホロチオエート基を含有しない場合に示すことができる。

【0296】

センス鎖に、アンチセンス鎖に、またはセンス鎖とアンチセンス鎖の両方に、特にセンス鎖に式（Ｉ）の１つまたはそれ以上の化合物を取り込んだｓｉＲＮＡもインビボで効率的な標的遺伝子サイレンシング活性を発揮する。標的遺伝子サイレンシング活性は、（ｉ）本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物の実施形態、（ｉｉ）本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物の数、および（ｉｉｉ）ｓｉＲＮＡのセンス鎖またはアンチセンス鎖内の式（Ｉ）の化合物の配置によって制御することができる。

【0297】

重要なことには、式（Ｉ）の１つまたはそれ以上の化合物を取り込んだｓｉＲＮＡは、インビボにおいて、これらのｓｉＲＮＡが標的遺伝子サイレンシング作用を発揮することが示される用量範囲で副作用がない。

【0298】

例証の目的のために、本開示を限定せずに、二本鎖オリゴヌクレオチドはまた、修飾されているセンスおよび／またはアンチセンス鎖に１つまたはそれ以上のヌクレオチドを含んでいてもよい。

【0299】

修飾は、核酸または塩基の類似体での置換または挿入、および塩基、糖またはリン酸部分の化学修飾から選択することができる。選択された修飾は、３’末端デオキシ－チミン、２’－Ｏ－メチル、２’－デオキシ修飾、２’－デスオキシ－フルオロ、２’－アミノ修飾、２’－アルキル修飾、ホスホロチオエート修飾、ホスホロアミデート修飾、５’－ホスホロチオエート基修飾、５’－リン酸もしくは５’－リン酸擬似体修飾、およびコレステリル誘導体またはドデカン酸ビスデシルアミド基修飾からそれぞれ個々に選択してもよいし、ならびに／または修飾されたヌクレオチドは、ロックドヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチドまたは非天然塩基を含むヌクレオチドのいずれか１つであってもよい。好ましい実施形態の１つは、少なくとも１つの修飾が２’－Ｏ－メチルであり、および／または少なくとも１つの修飾が２’－デスオキシ－フルオロであるものであり得る。

【0300】

修飾されたオリゴヌクレオチドの他の例は、本明細書で使用される場合、以下：修飾、例えば、連結していないリン酸と酸素の一方または両方および／または連結しているリン酸と酸素の１つまたはそれ以上の置き換え；リン酸部分の置き換え；天然に存在する塩基の修飾もしくは置き換え；リボース－リン酸主鎖の置き換えもしくは修飾；ＲＮＡの３’末端もしくは５’末端の修飾、例えば、末端リン酸基の除去、修飾もしくは置き換え、またはＲＮＡの３’もしくは５’末端のいずれかへの部分、例えば蛍光標識した部分のコンジュゲーションのうち１つまたはそれ以上を含み得る。

【0301】

式（ＩＩ）のヌクレオチド類似体前駆体の合成のための方法
式（ＩＩ）のヌクレオチド類似体前駆体は、本明細書に記載の開示で例示された詳細な方法に従って調製してもよい。

【0302】

本開示は、式（ＩＩ－１）の化合物を調製するための方法であって、以下：
ａ）式（Ｘ）

【化8】

（式中、Ｂは、複素環式の核酸塩基であり、Ｐ１およびＰ２はそれぞれ、独立して、本明細書に記載の一般式（ＩＩ）で定義された保護基を表す）
の化合物を、式（Ｘ）の化合物を酸化試薬、例えば過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ_４）と反応させることによって酸化し、それにより以下の式（ＸＩ）：

【化9】

の化合物を得る工程、および

【0303】

ｂ）式（ＸＩ）の化合物を、式（ＸＩＩ）の化合物
Ｒ１－ＮＨ_２ （ＸＩＩ）
（式中、Ｒ１は、本明細書に記載の一般式（Ｉ）で定義した通りである）
の存在下で、還元的アミノ化の工程に供し、式（ＩＩ－１）：

【化10】

（式中、Ｂは、複素環式の核酸塩基であり、Ｐ１およびＰ２はそれぞれ、独立して、一般式（ＩＩ）で定義された保護基を表す）
の化合物を得る工程
を含む、方法に関する。

【0304】

本開示はまた、式（ＩＩ－２）の化合物を調製するための方法であって、以下：
ａ）式（Ｘ）

【化11】

（式中、Ｂは、複素環式の核酸塩基であり、Ｐ１およびＰ２はそれぞれ、独立して、本明細書に記載の一般式（ＩＩ）で定義された保護基を表す）
の化合物を、式（Ｘ）の化合物を酸化試薬、例えば過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ_４）と反応させることによって酸化し、それにより以下の式（ＸＩ）：

【化12】

の化合物を得る工程、および

【0305】

ｂ）式（ＸＩ）の化合物を、例えばアンモニアまたは二ホウ酸アンモニウムのようなアミンの存在下で、還元的アミノ化の工程に供し、式（ＸＩＩＩ）

【化13】

の化合物を得る工程、

【0306】

ｃ）式（ＸＩＩＩ）の化合物を、式（ＸＩＶ）
Ｒ１－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＨ （ＸＩＶ）
（式中、Ｒ１は、本明細書に記載の一般式（ＩＩ）で定義した通りである）
の化合物の存在下で、アミドカップリングの工程に供し、式（ＩＩ－２）の化合物

【化14】

（式中、Ｂは、複素環式の核酸塩基であり、Ｐ１およびＰ２はそれぞれ、独立して、一般式（ＩＩ）で定義された保護基を表し、Ｒ１は、一般式（ＩＩ）で定義した通りである）
を得る工程、

【0307】

ｄ）式（ＸＩＩＩ）の化合物を、アルデヒドまたはケトンの存在下で、還元的アミノ化の工程に供し、式（ＩＩ－１）

【化15】

の化合物を得る工程
を含む、方法にも関する。

【0308】

本開示はまた、式（ＩＩ－３）

【化16】

の化合物を調製するための方法であって、式（ＸＶ）

【化17】

（式中、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は、本明細書に記載の式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩ－Ａ）で定義した通りであり、－Ｙ－ＣＨＯは、還元的アミノ化反応によって、Ｘに等しい－Ｙ－ＣＨ２－に変換され、Ｘは、式－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｐ－Ｒ２－の基であり、式中、ｐおよびＲ２は、一般式（Ｉ）で定義した通りである）
の化合物を、式（ＸＩＩＩ）

【化18】

（式中、Ｂは、複素環式の核酸塩基であり、Ｐ１およびＰ２はそれぞれ、独立して、一般式（ＩＩ）で定義された保護基を表す）
の化合物と還元的アミノ化によって反応させ、式（ＩＩ－３）

【化19】

の化合物を得る工程
を含む、方法にも関する。

【0309】

上記の方法は、本開示ではスキーム２で例示される。

【0310】

本開示はまた、式（ＩＩ－４）

【化20】

の化合物を得るための方法であって、以下：

【0311】

ａ）式（ＸＶＩ）

【化21】

（式中、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は、本明細書に記載の式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩ－Ａ）で定義した通りであり、Ｘは、式－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｐ－Ｒ２－の基であり、ｐおよびＲ２は、一般式（Ｉ）で定義した通りである）
の化合物を、式（ＸＩＩＩ）

【化22】

（式中、Ｂは、複素環式の核酸塩基であり、Ｐ１およびＰ２はそれぞれ、独立して、一般式（ＩＩ）で定義された保護基を表す）
の化合物と、ペプチドカップリング条件下で反応させ、式（ＩＩ－４）の化合物を得る工程
を含む、方法にも関する。

【0312】

上記の方法は、本開示ではスキーム２で例示される。

【0313】

本開示は更に、式（ＩＩ－５）の化合物を調製するための方法であって、以下：
ａ）式（ＸＩ）

【化23】

（式中、Ｂは、複素環式の核酸塩基であり、Ｐ１およびＰ２はそれぞれ、独立して、一般式（ＩＩ）で定義された保護基を表す）
の化合物を還元し、式（ＸＶＩＩ）

【化24】

の化合物を得る工程、

【0314】

ｂ）式（ＸＶＩＩ）の化合物を、スルホニル化剤（例えばｐ－トルエンスルホニルクロリドＴｓ－Ｃｌ、メタンスルホニルクロリドＭｓ－Ｃｌ）の存在下で変換して、式（ＸＶＩＩＩ）

【化25】

（式中、Ｔｓは、トシル基を表す）
の化合物を得る工程、

【0315】

ｃ）式（ＸＶＩＩＩ）の化合物を塩基性条件に供し、式（ＩＩ－５）

【化26】

の化合物を得る工程
を含む、方法に関する。

【0316】

上記の方法は、本開示ではスキーム３で例示される。

【0317】

本開示はまた、式（ＩＩ－５）の化合物を調製するための代替方法であって、以下：
ａ）式（ＸＶＩＩ）

【化27】

の化合物を、過量のスルホニル化剤（例えばｐ－トルエンスルホニルクロリドＴｓ－Ｃｌ、メタンスルホニルクロリドＭｓ－Ｃｌ）の存在下で変換して、式（ＸＩＸ）

【化28】

（式中、Ｔｓは、トシル基を表す）
の化合物を得る工程、

【0318】

ｂ）式（ＸＩＸ）の化合物を、基Ｐ１の除去によって脱保護し、式（ＸＸ）

【化29】

の化合物を得る工程、

【0319】

ｃ）式（ＸＸ）の化合物を、塩基性条件に供し、式（ＸＸＩ）

【化30】

の化合物を得る工程、および

【0320】

ｄ）トシル基を保護基Ｐ１で置き換え、式（ＩＩ－５）

【化31】

の化合物を得る工程
を含む、方法にも関する。

【0321】

上記の方法は、本開示ではスキーム３で例示される。

【0322】

式（ＩＩ）、（ＩＩ－１）、（ＩＩ－２）、（ＩＩ－３）、（ＩＩ－４）および（ＩＩ－５）の化合物は、本明細書で開示される以下のスキーム１～８で例示される詳細な方法に従って調製してもよい。

【0323】

商業的に入手可能なリボース誘導体Ｇ１から開始して、２つの第一級ＯＨ－基は、標準的な文献プロトコールに従って選択的なベンジル化によって区別することができる。得られたベンジルエーテルＧ２の標準的な保護基修飾によって、完全に保護されたリボース類似体Ｇ３が生じ、これを核酸塩基Ｂ（例えば：Ｔ、Ｕ、Ｃ^Ｂｚｌ、Ｉ、Ｇ^ｉＢｕ、Ａ^Ｂｚｌ）の存在下でグリコシルドナーとして使用して、ヌクレオシド誘導体Ｇ４を得ることができる（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、１９９８、５４、３６０７～３６３０）。

【0324】

【化32】

【0325】

スキーム１：ＹがＮＨ、ＮＲ１およびＮＣ（＝Ｏ）Ｒ１である式（ＩＩ）の化合物の合成
ヌクレオシド類似体Ｇ４から開始して、標準的手順により保護基パターンを修飾することにより、リボース足場のＣ２’およびＣ３’における２つの第一級アルコールおよび保護されていないＯＨ基に一般式（ＩＩ）で定義されたオルソゴナルな保護基Ｐ１およびＰ２を有する中間体Ｇ５が生じる。Ｇ５化合物におけるジヒドロキシ官能基のｃｉｓ方向は、酸化剤としてＮａＩＯ_４を使用するＣ２’とＣ３’との間のＣ－Ｃ結合の酸化による切断を可能にする。得られたジアルデヒドは、一水和物Ｇ６として単離することができ、これは、還元剤、例えばＮａＣＮＢＨ_３との還元的アミノ化反応によって所望のモルホリン足場に変換される。アンモニアまたは二ホウ酸アンモニウムなどのアミン基質を使用することにより、モルホリン足場中に遊離のＮＨ基を有するモルホリン中間体Ｇ７が生じる。例えばＮａＣＮＢＨ_３の存在下で対応するアルデヒドまたはケトンとの第２の還元的アミノ化反応によりアルキル化モルホリンＧ８（Ｒ１は、一般式（ＩＩ）で定義された通りである）が得られる。代替として、中間体Ｇ６は、適切なアミンＲ１－ＮＨ_２（式中、Ｒ１は一般式（ＩＩ）で定義された通りである）の存在下で還元的アミノ化反応を受けてもよく、それにより直接的にアルキル化モルホリンＧ８が得られる。類似体アシル化モルホリンは、遊離のモルホリン構成単位Ｇ７と対応するカルボン酸Ｒ１－ＣＯＯＨとの標準的なペプチドカップリング反応により得られ、結果としてアミド中間体Ｇ９が生じる。

【0326】

化合物Ｇ７、Ｇ８およびＧ９は、本開示に記載される式（ＩＩ）の化合物の実施形態からなる。

【0327】

一般式（ＩＩ）の化合物の形成のためのスキーム１に記載された合成と同様に、本明細書に記載される一般式（ＩＩ）の標的化された化合物は、中間体Ｇ７をアミン試薬として使用した還元的アミノ化またはペプチドカップリング反応によって調製することができる。

【0328】

以下のスキーム２に、保護された細胞標的化部分として過アセチル化Ｎ－アセチルガラクトサミンＧ１１を使用した一般式（ＩＩ）の化合物の合成を記載する。

【0329】

【化33】

【0330】

スキーム２：アミド（Ｇ１４）およびアミン（Ｇ１５）の付着、細胞標的化部分として保護されたＧａｌＮＡｃおよび異なるＸリンカー基を用いた一般式（ＩＩ）の化合物の合成であって、この場合、Ｇ１５合成において、Ｘは、（Ｇ１３）におけるリンカー断片－Ｙ－ＣＨＯから作り出され、還元的アミノ化の後に－Ｙ－ＣＨ_２－に変換される。

【0331】

以下において、Ｘは、一般式（ＩＩ）の化合物で定義した通り、基－［Ｃ（＝Ｏ）］ｍ－Ｒ２－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｐ－Ｒ３に含まれる基－Ｒ２（ＯＣＨ２－ＣＨ２）ｐ－と定義される。

【0332】

標準的なグリコシル化条件下においてω－ヒドロキシカルボン酸エステル（ＨＯ－Ｘ－ＣＯＯＢｎ）で過アセチル化ＧａｌＮＡｃ－誘導体Ｇ１１を処理することにより、エステル切断後にカルボン酸Ｇ１２が得られ、これは、ペプチドカップリング条件下で、モルホリン誘導体Ｇ７の存在下において所望のアミドＧ１４を形成する。代替として、ω－ヒドロキシ－ベンジルエーテル（ＨＯ－Ｘ－ＯＢｎ）でＧ１１をグリコシル化することで、ベンジルエーテル切断および対応するアルコールの酸化の後にアルデヒド中間体Ｇ１３が提供される。アミン成分としてモルホリンＧ７を用いた還元的アミノ化は、アルキル化モルホリンＧ１５の形成をもたらす。化合物Ｇ１４およびＧ１５は、本開示に記載される式（ＩＩ）の化合物である。

【0333】

スキーム３に、一連のジオキサンでのＹがＯである一般式（ＩＩ）の化合物への合成経路を示す。

【0334】

【化34】

【0335】

スキーム３：ＹがＯである一般式（ＩＩ）の化合物への合成経路
すでに記載されたｃｉｓ－ジオール中間体Ｇ５およびその酸化による構成単位Ｇ６への切断（スキーム１を参照）から開始して、水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤での処理により、２’－および３’－Ｃに２個の第一級ＯＨ基を有するジオール中間体Ｇ１６が得られる。塩基性条件下における化学量論量のｐ－トルエンスルホニルクロリドなどのスルホニル化剤の存在下で、２’－ＯＨ官能基を選択的にトシル化して、モノトシレートＧ１７を形成することができる。塩基性条件下、例えばＮａＯＨ水溶液またはＭｅＯＨ中のＮａＯＭｅを使用して、Ｇ１７は、３’－Ｃにおいて遊離のＯＨ基による第一級トシレートの求核置換を受け、これは、所望のジオキサン足場Ｇ１８の形成をもたらす。

【0336】

化合物Ｇ１８は、本開示に記載される一般式（ＩＩ）の化合物からなる。

【0337】

代替として、ジオール中間体Ｇ１６は、例えば過量のｐ－トルエンスルホニルクロリドおよび増加させた反応時間によりビススルホニル化でき、それによりビストシレートＧ１９が得られる。オルソゴナルな保護基Ｐ１またはＰ２の一方の脱保護後、得られた第一級アルコールＧ２０は、所望のジオキサン足場Ｇ２１の求核置換および形成下でＧ１７と同様に反応する（スキーム３を参照）。残存するトシレートを安息香酸ナトリウムで置き換えて、第一級ヒドロキシル基にオルソゴナルな保護基Ｐ１およびＰ２を有する完全に保護されたジオキサン足場Ｇ１８を再び得ることができる。

【0338】

【化35】

【0339】

スキーム４：ＹがＯである式（ＩＩ）の化合物の代替の合成
オルソゴナルな保護基Ｐ１およびＰ２を有する一般式（ＩＩ）の記載された構成単位（Ｇ８、Ｇ９、Ｇ１４、Ｇ１５およびＧ１８）は、最終的に対応するＤＭＴ保護ホスホロアミダイトに変換され、自動オリゴヌクレオチド合成におけるヌクレオチド前駆体としてのそれらの使用を可能にする。

【0340】

この目的のために、完全に保護された一般式（ＩＩ）の化合物（Ｇ８、Ｇ９、Ｇ１４、Ｇ１５およびＧ１８）は、標準的な保護基修飾によって単一ＤＭＴ保護中間体Ｇ２２に変換される。標準的なプロトコールによるＧ２２－構成単位における遊離のＯＨ基のホスフィチル化は、自動オリゴヌクレオチド合成のためのヌクレオチド前駆体として最終的なＤＭＴ保護ホスホロアミダイトＧ２３をもたらす。

【0341】

【化36】

【0342】

スキーム５：自動オリゴヌクレオチド合成のための一般式（ＩＩ）の化合物の最終的なホスホロアミダイト構成単位の合成
化合物Ｇ２３は、基Ｐ１がＤＭＴ保護基であり、基Ｐ２がホスホロアミダイト基からなる反応性リン基である式（ＩＩ）の化合物である。

【0343】

中間体Ｇ２２をもたらす保護基修飾に応じて、一般的な構造（ＩＩ）の化合物の（２Ｓ，６Ｒ）－および（２Ｒ，６Ｒ）－ジアステレオマーを合成することができる。

【0344】

【化37】

【0345】

スキーム６：一般式（ＩＩ）の化合物Ｇ２３のジアステレオマー構造
オリゴヌクレオチド一本鎖の３’末端における開始のヌクレオチドは、自動合成における第１のヌクレオチド足場としての対応するホスホロアミダイトＧ２３と反応させるユニバーサルな固体支持体材料を用いた標準的手順によって調製することができる（実験の部、オリゴヌクレオチドの合成を参照）。

【0346】

式（Ｉ－Ａ）および場合によっては（Ｉ－Ｂ）のヌクレオチド類似体を含む、オリゴヌクレオチドの調製
本開示に従って使用するためのオリゴヌクレオチドは、本明細書では「修飾されたオリゴヌクレオチド」と呼ぶこともあり、これは、本明細書に記載される方法を含む任意の有用な技術に従って、最終的なオリゴヌクレオチドの成長する鎖の選択された位置に取り込もうとする開始の構成単位の一部として、式（ＩＩ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体前駆体を使用することによって調製してもよく、そのようにして式（Ｉ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体を含むオリゴヌクレオチドが生成し、式（Ｉ）の１つまたはそれ以上の化合物は、最終的なオリゴヌクレオチドの選択された位置に配置される。

【0347】

式（ＩＩ）のヌクレオチド類似体前駆体は、本開示に記載した通りに合成することができる。

【0348】

本開示の修飾されたオリゴヌクレオチドは、オーバーハングを有する、または有さない二本鎖であってもよいし、または少なくとも二本鎖部分を含んでいてもよい。二本鎖の修飾されたオリゴヌクレオチドは、第１のヌクレオチド配列（例えば、センスヌクレオチド配列）と、第１のヌクレオチド配列に相補的でありそれにハイブリダイズする第２のヌクレオチド配列（例えば、アンチセンスヌクレオチド配列）とをそこに含む単一のオリゴヌクレオチド鎖から形成することができ、第２のヌクレオチド配列は、その阻害が求められる標的ＲＮＡ配列にも相補的である。これらの実施形態によれば、第１のヌクレオチド配列および第２のヌクレオチド配列は、修飾されたオリゴヌクレオチド内の別々の鎖に存在していてもよいし；または同じ鎖に、ただしスペーサー、または第１のヌクレオチド配列が第２のヌクレオチド配列にハイブリダイズしたらヘアピンループを形成するような適切な長さの追加のヌクレオチド配列によって分離されて存在していてもよい。

【0349】

一部の実施形態では、本発明の修飾されたオリゴヌクレオチドは、一本鎖であり、ｓｉＲＮＡなどの二本鎖ＲＮＡのセンスまたはアンチセンス鎖のどちらを含んでいてもよい。

【0350】

本発明のオリゴヌクレオチド、例えば式（Ｉ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体を含むものは、当業界において公知のプロトコールを使用して化学的に合成することができる。例えば、Ｃａｒｕｔｈｅｒｓら、１９９２、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、２１１：３～１９；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、国際ＰＣＴ公開ＷＯ９９／５４４５９号；Ｗｉｎｃｏｔｔら、１９９５、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２３：２６７７～２６８４；Ｗｉｎｃｏｔｔら、１９９７、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．、７４：５９；Ｂｒｅｎｎａｎら、１９９８、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ．、６１：３３～４５；およびＢｒｅｎｎａｎ、米国特許第６，００１，３１１号を参照されたい。オリゴヌクレオチドの合成は、共通の核酸保護およびカップリング基、例えば５’末端におけるジメトキシトリチル、および３’末端におけるホスホロアミダイトを利用する。特定の実施形態では、式（Ｉ）のヌクレオチド類似体を含むオリゴヌクレオチドは、米国特許第６，９９５，２５９号；６，６８６，４６３号；６，６７３，９１８号；６，６４９，７５１号；６，９８９，４４２号；および７，２０５，３９９号に記載される方法に従って、合成、脱保護、および分析される。非限定的な合成例において、スモールスケール合成は、３９４ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ， Ｉｎｃ．／Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．のシンセサイザーで実行される。

【0351】

代替として、式（Ｉ）の１つまたはそれ以上のヌクレオチド類似体を含むオリゴヌクレオチドは、別々に合成し、合成後に、例えば、ライゲーションによって（Ｍｏｏｒｅら、１９９２、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：９９２３；Ｄｒａｐｅｒら、国際ＰＣＴ公開ＷＯ９３／２３５６９号；Ｓｈａｂａｒｏｖａら、１９９１、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９：４２４７；Ｂｅｌｌｏｎら、１９９７、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、１６：９５１；Ｂｅｌｌｏｎら、１９９７、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．、８：２０４）、または合成および／または脱保護後のハイブリダイゼーションによって一体化してもよい。本開示による様々な修飾されたオリゴヌクレオチドはまた、Ｓｃａｒｉｎｇｅら、米国特許第５，８８９，１３６号；６，００８，４００号；および６，１１１，０８６号の教示を使用して合成することができる。

【0352】

組成物
本開示の特定の態様は、本明細書に記載されるｄｓＲＮＡを含む組成物（例えば、医薬組成物）に関する。一部の実施形態では、組成物（例えば、医薬組成物）は、医薬的に許容される担体を更に含む。一部の実施形態では、組成物（例えば、医薬組成物）は、標的化された遺伝子の発現または活性に関連する疾患または障害を処置するのに有用である。

【0353】

本開示の組成物（例えば、医薬組成物）は、送達様式に基づいて製剤化され、例えば、非経口送達を介した肝臓への送達のために製剤化された組成物などが挙げられる。

【0354】

本開示の組成物（例えば、医薬組成物）は、標的化された遺伝子の発現を阻害するのに十分な投薬量で投与することができる。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡの好適な用量は、レシピエントの体重当たり０．０１ｍｇ／ｋｇ～４００ｍｇ／ｋｇの範囲内である。

【0355】

当業者は、これらに限定されないが、疾患もしくは障害の重症度、以前の処置、対象の全身の健康状態および／または年齢、ならびに１つもしくはそれ以上の他の存在する疾患などの特定の要因が、対象を効果的に処置するのに必要な投薬量およびタイミングに影響を与える可能性があることを理解しているであろう。更に、治療有効量の医薬組成物での対象の処置は、単回の処置または一連の処置を含んでいてもよい。本明細書で開示されるｄｓＲＮＡの有効な投薬量およびインビボにおける半減期の概算は、従来の方法論を使用して、または適切な動物モデルを使用したインビボでの試験に基づき行うことができる。

【0356】

本開示のｄｓＲＮＡ分子は、医薬的に許容される担体または希釈剤中に製剤化することができる。医薬的に許容される担体は、液体または固体であってもよく、所望の嵩、粘度、および他の関連する輸送および化学特性がもたらされるよう考慮して計画された投与方式と共に選択することができる。任意の公知の医薬的に許容される担体または希釈剤を使用することができ、その例としては、例えば、水、生理食塩水、結合剤（例えば、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、充填剤（例えば、ラクトースおよび他の糖、ゼラチン、または硫酸カルシウム）、潤滑剤（例えば、デンプン、ポリエチレングリコール、または酢酸ナトリウム）、崩壊剤（例えば、デンプンまたはデンプングリコール酸ナトリウム）、カルシウム塩（例えば、硫酸カルシウム、塩化カルシウム、リン酸カルシウム、など）および湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）が挙げられる。

【0357】

本開示のｄｓＲＮＡ分子は、他の分子、分子構造、または核酸の混合物と混合された、それとカプセル化された、それとコンジュゲートした、またはそれ以外の方法でそれと会合したｄｓＲＮＡを含有する組成物（例えば、医薬組成物）に製剤化することができる。例えば、本明細書に記載される１つまたはそれ以上のｄｓＲＮＡを含む組成物は、他の治療剤、例えば他の脂質低下剤（例えば、スタチン）を含有していてもよい。一部の実施形態では、組成物（例えば、医薬組成物）は、送達媒体（本明細書に記載されるような）を更に含む。

【0358】

ベクターおよびｄｓＲＮＡ送達
本開示のｄｓＲＮＡは、直接的または間接的に送達することができる。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、ｄｓＲＮＡを含む組成物（例えば、医薬組成物）を対象に投与することによって直接的に送達される。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、本明細書に記載される１つまたはそれ以上のベクターを投与することによって間接的に送達される。

【0359】

送達
本開示のｄｓＲＮＡは、当業界において公知の任意の方法によって、例えば、ｄｓＲＮＡとの使用のために核酸分子を送達する方法を適合させることによって（例えば、Ａｋｈｔａｒ，Ｓ．ら（１９９２）Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２（５）：１３９～１４４；ＷＯ９４／０２５９５を参照）、または当業界において公知の追加の方法を介して（例えば、Ｋａｎａｓｔｙ，Ｒ．ら（２０１３）Ｎａｔｕｒｅ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ １２：９６７～９７７；Ｗｉｔｔｒｕｐ，Ａ．およびＬｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｊ．（２０１５）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １６：５４３～５５２；Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ，Ｋ．ら（２００９）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ８：１２９～１３８；Ｇａｒｙ，Ｄ．ら（２００７）１２１（１～２）：６４～７３；Ｗａｎｇ．Ｊ．ら（２０１０）ＡＡＰＳ Ｊ．１２（４）：４９２～５０３；Ｄｒａｚ，Ｍ．ら（２０１４）Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ ４（９）：８７２～８９２；Ｗａｎ，Ｃ．ら（２０１３）Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．およびＴｒａｎｓｌ．Ｒｅｓ．４（１）：７４～８３；Ｅｒｄｍａｎｎ，Ｖ．Ａ．およびＢａｒｃｉｓｚｅｗｓｋｉ，Ｊ．（編）（２０１０）「ＲＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ Ｂｅｒｌｉｎ Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，ＤＯＩ １０．１００７／９７８－３－６４２－１２１６８－５；Ｘｕ，Ｃ．およびＷａｎｇ，Ｊ．（２０１５）Ａｓｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １０（１）：１～１２を参照）送達することができる。

【0360】

一部の実施形態では、本開示のｄｓＲＮＡは、ｄｓＲＮＡを含む送達媒体によって送達される。一部の実施形態では、送達媒体は、リポソーム、リポプレックス、複合体、またはナノ粒子である。

【0361】

リポソーム配合物
リポソームは、親油性物質と水性の内部から形成される膜を有する単層または多層小胞である。一部の実施形態では、リポソームは、球状の二分子層または二重層に整列した両親媒性脂質で構成される小胞である。水性部分は、送達されることになる組成物を含有する。カチオン性リポソームは、細胞壁に融合させることができるという利点を有する。リポソームの利点としては、例えば、天然リン脂質から得られたリポソームは、生体適合性および生分解性であること；リポソームは、多様な水溶性および脂溶性薬物を取り込むことができること；リポソームは、その内部区画中にカプセル化された薬物を代謝や分解から保護できることが挙げられる（Ｒｏｓｏｆｆ，ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ、ＲｉｅｇｅｒおよびＢａｎｋｅｒ（編）、１９８８、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、第１巻、２４５頁）。リポソーム配合物の調製における重要な考察は、脂質表面電荷、小胞のサイズおよびリポソームの水性体積である。例えば、操作されたカチオン性リポソームおよび空間配置的に安定化されたリポソームは、ｄｓＲＮＡを送達するのに使用することができる。例えば、Ｐｏｄｅｓｔａら（２００９）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．４６４、３４３～５４；米国特許第５，６６５，７１０号を参照されたい。

【0362】

核酸－脂質粒子
一部の実施形態では、本開示のｄｓＲＮＡは、脂質配合物中に完全にカプセル化されて、例えば、核酸－脂質粒子、例えば、ＳＰＬＰ、ｐＳＰＬＰ、またはＳＮＡＬＰを形成する。用語「ＳＮＡＬＰ」は、本明細書で使用される場合、ＳＰＬＰを含む安定な核酸－脂質粒子を指す。用語「ＳＰＬＰ」は、本明細書で使用される場合、脂質小胞内にカプセル化されたプラスミドＤＮＡを含む核酸－脂質粒子を指す。核酸－脂質粒子、例えばＳＮＡＬＰは、典型的には、粒子の凝集を防止し循環時間を増加させる、カチオン脂質、非カチオン脂質、コレステロール、および脂質（例えば、ＰＥＧ－脂質コンジュゲート）を含有する。ＳＮＡＬＰおよびＳＰＬＰは、静脈内（ｉ．ｖ．）注射後に長い循環寿命を示し、遠位部位（例えば、物理的に投与部位から離れた部位）で蓄積するため、全身適用に有用である。ＳＰＬＰとしては、「ｐＳＰＬＰ」が挙げられ、その例としては、ＰＣＴ公開ＷＯ００／０３６８３号に記載のようなカプセル化された縮合剤－核酸複合体が挙げられる。

【0363】

一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、核酸－脂質粒子中に存在する場合、水溶液中でヌクレアーゼでの分解に対して耐性である。核酸－脂質粒子およびその調製方法は、例えば、米国特許第５，９７６，５６７号；５，９８１，５０１号；６，５３４，４８４号；６，５８６，４１０号；および６，８１５，４３２号；ならびにＰＣＴ公開ＷＯ９６／４０９６４号に開示されている。

【0364】

一部の実施形態では、核酸－脂質粒子は、カチオン脂質を含む。当業界において公知の任意のカチオン脂質またはそれらの混合物を使用することができる。一部の実施形態では、核酸－脂質粒子は、非カチオン脂質を含む。当業界において公知の任意の非カチオン脂質またはそれらの混合物を使用することができる。一部の実施形態では、核酸－脂質粒子は、コンジュゲートした脂質を含む（例えば、凝集を防止するために）。当業界において公知の任意のコンジュゲートした脂質を使用することができる。

【0365】

追加の配合物
インビボでｄｓＲＮＡ分子をうまく送達するために考慮することが重要な要因としては、（１）送達された分子の生物学的な安定性、（２）非特異的な作用の防止、および（３）標的組織における送達された分子の蓄積が挙げられる。ｄｓＲＮＡの非特異的な作用は、局所投与によって、例えば組織への直接注射もしくは埋め込みによって、または調製物を局所的に投与することによって最小化することができる。疾患の処置のためにｄｓＲＮＡを全身投与するために、ｄｓＲＮＡは、修飾してもよいし、または代替として薬物送達系を使用して送達してもよい；どちらの方法も、インビボにおけるエンドおよびエキソヌクレアーゼによるｄｓＲＮＡの迅速な分解を防止するように作用する。ＲＮＡの修飾または製剤用担体もまた、標的組織へのｄｓＲＮＡ組成物の標的化を許容し、望ましくないオフターゲット作用を回避することができる。上述したように、ｄｓＲＮＡ分子は、細胞内取り込みを強化し、分解を防止するために、コレステロールなどの親油性基への化学的コンジュゲーションによって修飾することができる。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、ナノ粒子、デンドリマー、ポリマー、リポソーム、またはカチオン性送達系などの薬物送達系を使用して送達される。正電荷を有するカチオン性送達系は、ｄｓＲＮＡ分子（負電荷を有する）の結合を容易にし、細胞によるｄｓＲＮＡの効率的な取り込みを許容するために負電荷を有する細胞膜での相互作用も強化する。カチオン脂質、デンドリマー、またはポリマーは、ｄｓＲＮＡに結合するか、またはｄｓＲＮＡを包み込む小胞またはミセルを形成するように誘導されるかのいずれかでもよい（例えば、Ｋｉｍ Ｓ．Ｈ．ら（２００８）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ １２９（２）：１０７～１１６を参照）。小胞またはミセルの形成は更に、全身投与されるとｄｓＲＮＡの分解を防止する。カチオン性ｄｓＲＮＡ複合体を作製および投与するための方法は、当業界において公知である。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡは、全身投与のためのシクロデキストリンとの複合体を形成する。

【0366】

ｄｓＲＮＡを使用する方法
本開示の特定の態様は、哺乳動物における標的化遺された伝子の発現を阻害するための方法であって、有効量の１つまたはそれ以上の本開示のｄｓＲＮＡ、１つまたはそれ以上の本開示のベクター、または１つまたはそれ以上の本開示のｄｓＲＮＡを含む本開示の組成物（例えば、医薬組成物）を投与することを含む、方法に関する。本開示の特定の態様は、１つまたはそれ以上の標的遺伝子が媒介する疾患または障害を処置および／または防止する方法であって、１つまたはそれ以上の本開示のｄｓＲＮＡ、および／または１つまたはそれ以上の本開示のベクター、および／または１つまたはそれ以上の本開示のｄｓＲＮＡを含む組成物（例えば、医薬組成物）を投与することを含む、方法に関する。一部の実施形態では、対象において標的遺伝子発現を下方調節することは、対象における標的化された遺伝子が媒介する疾患または障害の１つまたはそれ以上の症状を軽減する。

【0367】

一部の実施形態では、対象における標的遺伝子の発現は、処置の後に、前処置レベルと比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または約１００％阻害される。一部の実施形態では、標的遺伝子の発現は、処置の後に、前処置レベルと比較して、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約５．５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約６．５倍、少なくとも約７倍、少なくとも約７．５倍、少なくとも約８倍、少なくとも約８．５倍、少なくとも約９倍、少なくとも約９．５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約７５倍、または少なくとも約１００倍阻害される。一部の実施形態では、標的遺伝子は、対象の肝臓において阻害される。

【0368】

一部の実施形態では、対象は、ヒトである。一部の実施形態では、対象は、標的遺伝子が媒介する障害もしくは疾患を有するかまたは有すると診断されている。一部の実施形態では、対象は、標的遺伝子が媒介する障害または疾患を有する疑いがある。一部の実施形態では、対象は、標的遺伝子が媒介する障害または疾患を発症させるリスクがある。

【0369】

本開示の内容から理解される通り、本明細書に記載されるｄｓＲＮＡは、式（ＩＩ）のヌクレオチド類似体は、その「糖のような」基の特異的な構造的機能を有する、そこに含まれる１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）のヌクレオチド類似体の存在に基づくその主要な特徴を有する。本明細書に記載されるｄｓＲＮＡは、一般的に、目的の標的核酸に含まれる選択された核酸配列を標的化するために考え出されたものである。特に、本明細書に記載されるｓｉＲＮＡからなるｄｓＲＮＡの実施形態は、目的の標的核酸に含まれる核酸配列と特異的にハイブリダイズするアンチセンス鎖を含む。本明細書に記載されるｄｓＲＮＡまたは組成物（例えば、医薬組成物）は、標的遺伝子が媒介する障害または疾患の処置での使用のためであり得る。特には、本明細書に記載されるｄｓＲＮＡまたは組成物（例えば、医薬組成物）、特に、１つまたはそれ以上の標的化されたヌクレオチド類似体を含むｄｓＲＮＡ、および特に、１つまたはそれ以上の式（ＩＩ）の標的化されたヌクレオチド類似体は、肝臓の標的化が求められる標的遺伝子が媒介する障害または疾患の処置での使用のためであり得る。

【0370】

本開示の特定の態様はまた、肝細胞を本明細書に記載されるｄｓＲＮＡと接触させることを含む、肝細胞への核酸の送達方法にも関する。

【0371】

本明細書に記載されるｄｓＲＮＡまたは組成物（例えば、医薬組成物）は、当業界において公知の任意の手段によって投与することができ、このような手段としては、これらに限定されないが、静脈内、筋肉内、皮下、肺、経皮、および気道（エアロゾル）投与などの経口または非経口経路が挙げられる。典型的には、高脂血症を有する哺乳動物を処置する場合、ｄｓＲＮＡ分子は、非経口手段を介して全身投与される。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡおよび／または組成物は、皮下投与によって投与される。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡおよび／または組成物は、静脈内投与によって投与される。一部の実施形態では、ｄｓＲＮＡおよび／または組成物は、肺投与によって投与される。

【0372】

ｄｓＲＮＡの処置または防止的な作用は、疾患のステータスの１つまたはそれ以上のパラメーターにおいて統計学的に有意な改善がある場合、または普通なら症状の悪化や発症が予期される場合に症状を悪化または発症させなかったことによって明白である。例えば、疾患の測定可能なパラメーターにおける、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％の、またはそれより大きい好都合な変化が、有効な処置を示し得る。所与のｄｓＲＮＡまたはｄｓＲＮＡを含む組成物に関する効能はまた、当業界において公知の所与の疾患または障害のための実験動物モデルを使用しても判断できる。実験動物モデルを使用する場合、処置の効能は、マーカーまたは症状における統計学的に有意な低減が観察される場合、証明される。

【0373】

キットおよび製品
本開示の特定の態様は、上述したような標的遺伝子が媒介する障害または疾患の処置および／または防止に有用なｄｓＲＮＡ、ベクター、または組成物（例えば、本明細書に記載される医薬組成物の１つまたはそれ以上を含む製品またはキットに関する。製品またはキットは、容器、および容器上の、またはそれに付随するラベルまたは添付文書を更に含んでいてもよい。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から成形することができる。容器は、単独の、または疾患を処置または防止するのに有効な別の組成物と組み合わせた組成物を保持し、滅菌アクセスポート（例えば容器は、皮下注射針で突き刺し可能なストッパーを有する静脈注射液バッグまたはバイアルであり得る）を有していてもよい。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本明細書に記載されるｄｓＲＮＡである。ラベルまたは添付文書は、標的が媒介する障害または疾患を処置するために組成物が使用されることを示す。更に、製品またはキットは、（ａ）本明細書に記載されるｄｓＲＮＡを含む組成物を含有する第１の容器；および（ｂ）第２の治療剤を含む組成物を含有する第２の容器を含んでいてもよい。この実施形態における本開示の製品またはキットは、組成物が特定の疾患を処置するのに使用できることを示す添付文書を更に含んでいてもよい。代替として、または加えて、製品またはキットは、医薬的に許容される緩衝液、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液およびデキストロース溶液を含む第２の（または第３の）容器を更に含んでいてもよい。これは更に、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジなどの商業的な、および使用者の観点から望ましい他の材料を含んでいてもよい。

【0374】

核酸配列は、本明細書に、特に、参考として役立つ本明細書に記載の実施例に開示される。同じ配列はまた、特許事項の目的のために標準的な必要条件に従ってフォーマットされた配列表にも提示される。標準的な配列表と何らかの配列の不一致がある場合、本明細書に記載される配列が参照されるものとする。

【0375】

本開示を限定することはないが、例証の目的のために本開示のいくつかの実施形態を後述する。

【実施例】

【0376】

命名法は、ＩＵＰＡＣ規則に従って規定されている。
別段の指示がない限り、以下のＬＣ－ＭＳ方法が使用されている：
Ａ：
カラム： Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ
溶出液： （Ｈ_２Ｏ＋０．０５％ＦＡ）／（ＡＣＮ＋０．０３５％ＦＡ）９５：５（０分）から５：９５（２分）から５：９５（２．６分）から９５：５（２．７分）から９５：５（３．０分）、０．９ｍｌ／分５５℃。
Ｂ－１：
カラム： Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８、３．０μｍ、２．０×１０ｍｍ
溶出液： （Ｈ_２Ｏ＋０．０５％ＴＦＡ）／ＡＣＮ９３：７（０分）から５：９５（１．２０分）から５：９５ＡＣＮ（１．４０分）から９３：７（１．５０分）；１．１ｍｌ／分、室温。
Ｂ－２：
カラム： Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８、３．０μｍ、２．０×１０ｍｍ
溶出液： （Ｈ_２Ｏ＋０．０５％ＴＦＡ）／ＡＣＮ９３：７（０分）から５：９５（１．００分）から５：９５ＡＣＮ（１．４５分）から９３：７（１．５０分）；１．１ｍｌ／分、室温。
Ｂ－３：
カラム： Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８、３．０μｍ、２．０×１０ｍｍ
溶出液： （Ｈ_２Ｏ＋０．０５％ＴＦＡ）／ＡＣＮ２０：８０（０分）から５：９５（０．６０分）から５：９５ＡＣＮ（１．４５分）から８０：２０（１．５０分）；１．１ｍｌ／分、室温。
Ｃ：
カラム： Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８、１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ
溶出液： （Ｈ_２Ｏ＋０．０５％ＦＡ）／（ＡＣＮ＋０．０３５％ＦＡ）９８：２（０分）から９８：２（０．２分）から２：９８（３．８分）から２：９８（４．３分）から９８：２（４．５分）、１．０ｍｌ／分、５５℃。
Ｄ：
カラム： Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ＠Ｆｌａｓｈ ＲＰ－１８Ｅ ２×２５ｍｍ
溶出液： （Ｈ_２Ｏ＋０．０３７５％ＴＦＡ）／（ＡＣＮ＋０．０１８７５％ＴＦＡ）９５：５（０分）から５：９５（０．８０分）から５：９５（１．２０分）から９５：５（１．２１分）から９５：５（１．５５分）、１．５ｍｌ／分、５０℃。
Ｅ：
カラム： Ｋｉｎｅｔｅｘ ＥＶＯ Ｃ１８Ｅ ２．１×３０ｍｍ、５μｍ
溶出液： （Ｈ_２Ｏ＋０．０３７５％ＴＦＡ）／（ＡＣＮ＋０．０１８７５％ＴＦＡ）９５：５（０分）から５：９５（０．８０分）から５：９５（１．２０分）から９５：５（１．２１分）から９５：５（１．５５分）、１．５ｍｌ／分、５０℃。

【0377】

使用した略語：
－ＡｃＯＨ：酢酸
－ＦＡ：ギ酸
－ＡＣＮ：アセトニトリル
－ＤＣＭ：ジクロロメタン
－ＤＭＡ：ジメチルアセトアミド
－ＤＣＥ：ジクロロエタン
－ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
－ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
－ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
－ＥｔＯＨ：エタノール
－Ｅｔ_２Ｏ：ジエチルエーテル
－ｉＰｒＯＨ：イソプロパノール
－ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
－ＭｅＯＨ：メタノール
－ＮＭＰ：Ｎ－メチル－２－ピロリドン
－ＰＥ：石油エーテル
－Ｐｙｒ：ピリジン
－ｉＰｒ：イソプロピル
－ｉＢｕ：イソブチリル
－ｃＨｅｘ：シクロヘキシル
－ＭＴＢ：メチル－ｔｅｒｔ－ブチル
－ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
－ＤＭＡＰ：４－（ジメチルアミノ）－ピリジン
－ＤＢＵ：１．８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン
－ＨＢＴＵ：（２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウム－ヘキサフルオロホスフェート）
－ＴＢＴＵ：Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート
－ＤＤＴＴ：３－（（Ｎ，Ｎ－ジメチル－アミノメチリデン）アミノ）－３Ｈ－１，２，４－ジチアゾール－５－チオン
－ＮＥｔ_３：トリエチルアミン
－ＮＥＭ：Ｎ－エチル－モルホリン
－ＢＳＡ：Ｎ，Ｏ－ビス－トリメチルシリルアセトアミド
－ＴＭＳＯＴｆ：トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート
－Ｔｓ：ｐ－トルエンスルホニル
－Ｔｆ：トリフルオロメタンスルホニル
－トリフルオロメタンスルホネート
－ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
－ＤＣＡＡ：ジクロロ酢酸
－ＴＥＡ：トリエチルアンモニウム
－ＴＩＰＳ：トリイソプロピルシリル
－ＴＢＤＭＳ：ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル
－ＤＭＴ：４，４’－ジメトキシトリチル
－Ｂｚｌ：ベンゾイル
－Ｂｎ：ベンジル
－ＢＯＭ：ベンジルオキシメチル
－Ａｃ：アセチル
－ｉＢｕ：イソブチリル
－Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル
－Ｆｍｏｃ：フルオレニルメチルオキシカルボニル
－Ｆｍｏｃ－ＯＳｕ：Ｎ－（９－フルオレニルメトキシカルボニルオキシ）スクシンイミド
－ＣＥ：シアノエチル
－ＣＰＧ：制御細孔ガラス
－Ｔ：チミン
－Ｕ：ウラシル
－Ｃ：シトシン
－Ａ：アデニン
－Ｇ：グアニン
－Ｉ：ヒポキサンチン
－Ｔ^ＢＯＭ：Ｎ－ベンジルオキシメチル－チミン
－Ｕ^ＢＯＭ：Ｎ－ベンジルオキシメチル－ウラシル
－Ｕ^Ｂｚｌ：Ｎ－ベンゾイル－ウラシル
－Ｃ^Ｂｚｌ：Ｎ－ベンゾイル－シトシン
－Ａ^Ｂｚｌ：Ｎ－ベンゾイル－アデニン
－Ｇ^ｉＢｕ：Ｎ－イソブチリル－グアニン
－ＧａｌＮＡｃ：Ｄ－Ｎ－アセチルガラクトサミン
－ＦＲ：流速
－ＨＰＬＣ：高圧液体クロマトグラフィー
－ＭＳ－ＴＯＦ：飛行時間型質量分析
－ＬＣ－ＭＳ：高圧液体クロマトグラフィー－質量分析
－Ｒｔ：保持時間
－ＲＴ：室温
－Ｈａｌ：ハロゲン
－ＥＬＳＤ：蒸発光散乱検出器
－ｑｕａｎｔ．：定量的
－ｓａｔ．：飽和
－ｉ．ｖａｃ．：真空中
－ｎ．ｄ．：決定せず
－ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
－ｈ：時間
－ｍｉｎ：分
－Ｔｍ：融解温度
－ｒ：リボヌクレオチド
－ｄ：デスオキシ－リボヌクレオチド
－ｍ：２’－ＯＭｅ－ヌクレオチド
－ｆ：２’－デスオキシ－フルオロ－ヌクレオチド
－ｓｓ：センス鎖
－ａｓ：アンチセンス鎖
－ｄｓ：二本鎖
－ｃｈｏｌ：コレステロール
－ＰＯ：ホスホジエステル結合
－^＊またはＰＳ：ホスホロチオエート結合
－ｍｐｋ：ｍｇ／ｋｇ
－Ｍ：モル濃度
－＃：番号、ｎ°
－ＦＢＳ：ウシ胎児血清
－ＡＴＰ：アデノシン－三リン酸
－ｐｒｅ－ｌＢ：前駆体ヌクレオチド
－ｐｒｅ－ｌｇＢ：標的化された前駆体ヌクレオチド
－ｌＢ：ヌクレオチド類似体
－ｌｇＢ：標的化されたヌクレオチド類似体

【0378】

Ａ：ＸがＮＨ、ＮＲ１、ＮＣ（＝Ｏ）Ｒ１である式（Ｉ）のヌクレオチド類似体の合成

【0379】

【化38】

【0380】

１ａ：［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－４－アセトキシ－３－ベンジルオキシ－２－（ベンジルオキシメチル）－５－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）テトラヒドロフラン－２－イル］メチルアセテート
出発物質Ｇ３（４２．５ｇ、８７．４ｍｍｏｌ）およびチミン２２．３ｇ（１７４．７ｍｍｏｌ）をＡｒ雰囲気下乾燥ＡＣＮ（５００ｍｌ）に溶解した。ＢＳＡ（１０６．６ｇ、１２８．２ｍｌ、５２４．１ｍｍｏｌ）を加えた後、溶液を８０℃で１時間撹拌した。溶液を５０℃に冷却した後、ＴＭＳＯＴｆ（３１．８ｇ、２５．９ｍｌ、１４１．５ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で１時間加熱を続けた。溶媒を真空で蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液、Ｈ_２Ｏおよび飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、有機層を蒸発させ、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中１０から１００％酢酸エチル）により精製して、所望のチミジン誘導体１ａを無色泡状物として得た（４０．９ｇ、８４．７％）。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,82
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 551,3
1H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ[ppm]: 8.55 (s, 1 H) 7.51-7.17 (m, 12 H), 6.23 (d, J=5.27 Hz, 1 H), 5.44 (t, J=5.65 Hz, 1 H), 4.72-4.35 (m, 6 H), 4.19 (d, J=12.17 Hz, 1 H), 3.79 (d, J=10.16 Hz, 1 H), 3.53 (d, J=10.16 Hz, 1 H) 2.17-2.06 (m, 6 H), 1.55 (d, J=0.75 Hz, 3 H).

【0381】

１ｂ：［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－４－アセトキシ－３－ベンジルオキシ－２－（ベンジルオキシメチル）－５－（２，４－ジオキソピリミジン－１－イル）－テトラヒドロフラン－２－イル］メチルアセテート
Ｇ３（１０．０ｇ、２０．５５ｍｍｏｌ）およびウラシル３．４９ｇ（３０．８ｍｍｏｌ）を乾燥ＡＣＮ（２００ｍｌ）に溶解した。ＢＳＡ（２０．０９ｇ、３０．１５ｍｌ、１２３．３ｍｍｏｌ）を加えた後、溶液を８１℃で１時間撹拌した。溶液を０℃に冷却した後、ＴＭＳＯＴｆ（７．４８ｇ、６．１０ｍｌ、３３．３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を６５℃に加熱した。撹拌をこの温度で１時間続け、この時点で完全に転化していた。室温で、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液５００ｍｌを加え、混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、Ｈ_２Ｏおよび飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、粗生成物をシリカゲル（ｎ－ヘプタン中２０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、保護されたヌクレオシド類似体１ｂを収率８２．３％（９．１１ｇ）で無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,82
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 539,1
1H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ[ppm]: 8.97 (s, 1 H), 7.66 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 7.38-7.35 (m, 10 H), 6.19 (d, J=4.0 Hz, 1 H), 5.38-5.30 (m, 2 H), 4.63 (d, J=12.0 Hz, 1 H), 4.46-4.41 (m, 5 H), 4.19 (d, J=12.0 Hz, 1 H), 3.79 (d, J=12.0 Hz, 1 H), 3.51 (d, J=12.0 Hz, 1 H), 2.12 (s, 3 H), 2.07 (s, 3 H).

【0382】

１ｃ：［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－４－アセトキシ－３－ベンジルオキシ－２－（ベンジルオキシメチル）－５－［２－（２－メチルプロパノイル－アミノ）－６－オキソ－１Ｈ－プリン－９－イル］テトラヒドロフラン－２－イル］メチルアセテート
化合物Ｇ３（１４８．５ｇ、０．３０ｍｏｌ）のＤＣＥ（６．６８ｌ）中溶液に、Ｎ_２雰囲気下１５℃でＮ－イソブチリル－グアニン（１３５ｇ、０．６１ｍｏｌ）およびＢＳＡ（３１１．８５ｍｌ、１．２ｍｏｌ）を加えた。混合物を８５℃で３時間撹拌した。次いでＴＭＳＯＴｆ（１８３．４ｇ、０．９０ｍｏｌ）を８５℃で加え、撹拌を３時間続け、この時点でＴＬＣは完全に転化していることを示した。混合物を室温に冷却し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液６．５ｌ中に注ぎ入れた。有機層を分離し、水性相をＤＣＭ（５ｌ）で２回抽出した。有機層を合わせ、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮した。得られた粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ／ＡＣＮ）により精製して、化合物１ｃ（１２８ｇ、６４％）を白色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.09 (s,1 H), 11.62 (s, 1 H), 8.14 (s, 1 H), 7.41-7.30 (m, 10 H), 6.12 (d, J=6.4 Hz, 1 H), 5.90 (t, J₁=J₂ =5.6 Hz, 1 H), 4.71 (d, J=5.2 Hz, 1 H), 4.63-4.55 (m, 4 H), 4.34 (d, J=5.6 Hz, 1 H), 4.23 (d, J=5.6 Hz, 1 H), 3.71-3.66 (m, 2 H), 3.18 (d, J=4.8 Hz, 1 H), 2.76-2.51 (m, 1 H), 2.05 (s, 3 H), 1.99 (s, 3 H), 1.20-1.12 (s, 6 H).

【0383】

１ｄ：［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－４－アセトキシ－３－ベンジルオキシ－２－（ベンジルオキシメチル）－５－（６－オキソ－１Ｈ－プリン－９－イル）－テトラヒドロフラン－２－イル］メチルアセテート
Ｇ３（１０．０ｇ、２０．５５ｍｍｏｌ）および核酸塩基としてヒポキサンチン３．３２ｇ（２３．６６ｍｍｏｌ）を出発物とし、１ｃにて記載したプルトコルに従って、表題化合物を合成した。シリカゲル精製（ｎ－ヘプタン中１０から１００％ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（９：１））後、表題化合物１ｄを無色泡状物として単離した（９．５３ｇ、８１．１％）。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,73
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 563,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.42 (s, 1 H), 8.22 (s, 1 H), 8.01 (s, 1 H), 7.25 - 7.39 (m, 10 H), 6.21 (d, J=4.89 Hz, 1 H), 5.90 - 5.97 (m, 1 H), 4.78 (d, J=5.75 Hz, 1 H), 4.45 - 4.61 (m, 4 H), 4.32 - 4.41 (m, 1 H), 4.17 - 4.25 (m, 1 H), 3.59 - 3.74 (m, 2 H), 2.04 (m, 3 H), 1.98 (m, 3 H).

【0384】

１ｅ：［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－４－アセトキシ－５－（６－ベンズアミドプリン－９－イル）－３－ベンジルオキシ－２－（ベンジルオキシメチル）－テトラヒドロフラン－２－イル］メチルアセテート
化合物Ｇ３（１６４ｇ、０．３３７ｍｏｌ）およびＮ－ベンゾイルアデニン（１２１ｇ、０．５０６ｍｏｌ）のＤＣＥ（６．５６ｌ）中混合物に、室温でＢＳＡ（２７４ｇ、１．３４８ｍｏｌ）を滴下添加し、混合物を９０℃で１．５時間撹拌した。４０～５０℃でＴＭＳＯＴｆ（２２５ｇ、１．０１１ｍｏｌ）を滴下添加した後、混合物を９０℃で１時間撹拌した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液１５ｌでクエンチし、層を分離した。水性層をＥｔＯＡｃ（３ｌ）で２回抽出し、合わせた有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１：２）により精製して、化合物１ｅをアノマー混合物（２２４．４ｇ）として黄色油状物として得た。混合物を２回の逆フラッシュクロマトグラフィー（中性）により精製して、純粋な化合物１ｅ（７５．５ｇ、３３．７％）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.25 (s, 1 H), 8.72 (s, 1 H), 8.62 (s, 1 H), 8.05 (d, J=7.40 Hz, 2 H), 7.71-7.62 (m, 1 H), 7.60-7.50 (m, 2 H), 7.43-7.21 (m, 10 H), 6.38 (d, J=4.77 Hz, 1 H), 6.12 (t, J=5.33 Hz, 1 H), 4.88 (d, J=5.77 Hz, 1 H), 4.63 (s, 2 H), 4.56-4.45 (m, 2 H), 4.41 (d, J=11.92 Hz, 1 H), 4.25 (d, J=11.80 Hz, 1 H), 3.75-3.59 (m, 2 H), 2.06 (s, 3 H), 2.00 (s, 3 H).

【0385】

２ａ：１－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－４－ベンジルオキシ－５－（ベンジルオキシメチル）－３－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－テトラヒドロフラン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
１ａ（４０．９ｇ、７４．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／ＥｔＯＨ（４：１）５００ｍｌ中溶液に、０℃でＮａＯＨ水溶液（２Ｍ）２２１．９ｍｌ（４４３．８ｍｍｏｌ）を加えた。氷浴を除去した後、混合物を２時間撹拌して、完全に転化させた。０℃で２Ｎ ＨＣｌ溶液を加えることにより、溶液を中性ｐＨにした。溶媒を真空で濃縮し、残った水性相をＤＣＭ（２５０ｍｌ）で２回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させて、脱保護生成物２ａ（３４．８ｇ、定量的）を得、これを更には精製せずに引き続くステップに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,64
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 469,2
1H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ[ppm]: 9.24-8.77 (m, 1 H), 7.45 (br s, 1 H), 7.41-7.30 (m, 8 H), 7.27 (br d, J=7.78 Hz, 2 H), 6.04 (br d, J=4.02 Hz, 1 H), 4.86 (br d, J=11.67 Hz, 1 H), 4.63-4.51 (m, 3 H), 4.45-4.31 (m, 2 H), 4.31-3.96 (m, 1 H), 3.84 (br d, J=11.29 Hz, 1 H), 3.76-3.64 (m, 2 H), 3.58 (d, J=10.42 Hz, 1 H), 2.96-2.62 (m, 1 H), 1.63-1.51 (m, 3 H).

【0386】

２ｂ：１－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－４－ベンジルオキシ－５－（ベンジルオキシメチル）－３－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－テトラヒドロフラン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
１ｂ（９．１０ｇ、１６．９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ／ＥｔＯＨ（３：１）２４０ｍｌに溶解した。０℃で、１Ｍ ＮａＯＨ溶液８．４９ｍｌ（８４．５ｍｍｏｌ）を加え、溶液を撹拌し、室温にした。１時間後、ｐＨが７に達するまでクエン酸を加え、溶媒を蒸発させた。水性残留物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶媒を除去して、粗生成物７．６６ｇ（９９．７％）を無色泡状物として得、これを更には精製せずに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,63
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 455,1
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.29 (s, 1 H), 7.69 (d, J=8.2 Hz, 1 H), 7.27 - 7.41 (m, 10 H), 5.88 (d, J=5.7 Hz, 1 H), 5.57 (d, J=7.2 Hz, 1 H), 5.37 (d, J=8.1 Hz, 1 H), 4.98 (t, J=5.4 Hz, 1 H), 4.80 (d, J=11.7 Hz, 1 H), 4.46 - 4.58 (m, 3 H), 4.27 - 4.37 (m, 1 H), 4.00 - 4.14 (m, 1 H), 3.50 - 3.69 (m, 4 H).

【0387】

２ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－４－ベンジルオキシ－５－（ベンジルオキシメチル）－３－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－テトラヒドロフラン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
化合物１ｃ（７２ｇ、０．１１ｍｏｌ）のＴＨＦ／ＥｔＯＨ（４：１）１．７ｌ中溶液に、０℃で１Ｍ ＮａＯＨ溶液（４４３ｍＬ）を滴下添加した。溶液を０℃で１時間撹拌して、完全に転化させた。１Ｎ ＨＣｌを加えることによりｐＨを７に調節し、溶媒を除去した。残留物をＨ_２Ｏ（５００ｍＬ）に溶解し、ＤＣＭ（３×５００ｍｌ）で抽出した。有機層を合わせ、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濃縮して、化合物２ｃ（１１３ｇ、定量的）を無色固体として得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.07(s,1 H), 11.66 (s, 1 H), 8.10 (s, 1 H), 7.42-7.30 (m, 10 H), 5.92 (d, J=6.8Hz, 1 H) , 4.99 (s, 1 H) , 4.87-4.84 (m, 2 H), 4.63 (d, J=15.6 Hz, 1 H), 4.56 (s, 2 H), 4.24 (d, J=4.8 Hz, 1 H), 3.69-3.62 (m, 4 H), 2.76-2.73 (m, 1 H), 1.13-1.04 (m, 7 H).

【0388】

２ｄ：９－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－４－ベンジルオキシ－５－（ベンジルオキシメチル）－３－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－テトラヒドロフラン－２－イル］－１Ｈ－プリン－６－オン
２ｂにて記載した手順に従い、１ｄ（９．３４ｇ、１６．６５ｍｍｏｌ）を脱保護して、表題化合物２ｄ（７．７６ｇ、９７．４％）を粗生成物として得、これを追加の精製をせずに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,53
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 479,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 8.16 (s, 1 H), 7.97 - 8.04 (m, 1 H), 7.27 - 7.41 (m, 10 H), 5.97 (d, J=5.75 Hz, 1 H), 5.75 (s, 1 H), 5.03 (br s, 1 H), 4.79 - 4.92 (m, 2 H), 4.47 - 4.62 (m, 3 H), 4.24 - 4.34 (m, 1 H), 3.55 - 3.70 (m, 4 H).

【0389】

２ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－４－ベンジルオキシ－５－（ベンジルオキシメチル）－３－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－テトラヒドロフラン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
２ｂにて記載した手順に従い、１ｅ（１４４ｇ、２１６ｍｍｏｌ）を脱保護して、表題化合物２ｅ（１２６ｇ、定量的、粗製物）を無色泡状物として得、これを追加の精製をせずに使用した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.23 (s, 1 H), 8.73 (s, 1 H), 8.59 (s, 1 H), 8.05 (br d, J=7.46 Hz, 2 H), 7.71-7.63 (m, 1 H), 7.61-7.52 (m, 2 H), 7.49-7.23 (m, 10 H), 6.16 (d, J=5.75 Hz, 1 H), 5.85 (d, J=7.46 Hz, 1 H), 5.14-4.99 (m, 2 H), 4.86 (d, J=11.86 Hz, 1 H), 4.63 (d, J=11.74 Hz, 1 H), 4.53 (s, 2 H), 4.38 (d, J=5.14 Hz, 1 H), 3.79-3.57 (m, 4 H).

【0390】

３ａ：１－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－４－ベンジルオキシ－５－（ベンジルオキシメチル）－３－ヒドロキシ－５－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
出発化合物２ａ（３４．７ｇ、７４．２ｍｍｏｌ）およびイミダゾール１６．８ｇ（２４４．７ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（３００ｍｌ）に溶解した。室温で、ＴＩＰＳ－クロリド１６．２ｇ（１８．０ｍｌ、８１．６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２００ｍｌ）中溶液を加え、反応物を１９時間撹拌した。ＥｔＯＨでクエンチした後、溶媒を蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。有機溶液をＨ_２Ｏ、１Ｍ ＨＣｌ、Ｈ_２Ｏおよび飽和ＮａＨＣＯ_３溶液、続いて飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶媒を除去し、粗生成物（４７．１ｇ）をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中１０から１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望のＴＩＰＳ保護生成物３ａを無色泡状物として得た（３７．５ｇ、８０．９％）。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,22
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 625,3
1H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ[ppm]: 8.52 (s, 1 H), 7.35-7.13 (m, 11 H), 5.88 (d, J=3.89 Hz, 1 H), 4.72-4.63 (m, 1 H), 4.60-4.51 (m, 1 H), 4.46 (s, 2 H), 4.34-4.26 (m, 1 H), 4.22 (d, J=6.27 Hz, 1 H), 3.90 (d, J=10.92 Hz, 1 H), 3.77 (d, J=1.00 Hz, 2 H), 3.63-3.51 (m, 2 H), 1.52 (d, J=0.88 Hz, 3 H), 1.12-0.90 (m, 21 H).

【0391】

３ｂ：１－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－４－ベンジルオキシ－５－（ベンジルオキシメチル）－３－ヒドロキシ－５－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
２ｂ（７．６６ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）を出発物とし、３ａのためのプロトコールに記載した通りに表題化合物を製造し、シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中２０から８０％ＥｔＯＡｃ）後に、所望のシリル化生成物３ｂ（８．６９ｇ、８４．５％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,23
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 611,2
1H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ[ppm]: 9.04 (s, 1 H), 7.63 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 7.37-7.34 (m, 8 H), 7.26-7.24 (m, 2 H), 5.96 (d, J=4.0 Hz, 1 H), 5.37 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 4.77 (d, J=12.0 Hz, 1 H), 4.62 (d, J=12.0 Hz, 1 H), 4.49 (s, 2 H), 4.26 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 3.83 (dd, J=8.0, 10.0 Hz, 2 H), 3.63 (dd, J=8.0, 10.0 Hz, 2 H), 1.15-1.04 (m, 21 H).

【0392】

３ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－４－ベンジルオキシ－５－（ベンジルオキシメチル）－３－ヒドロキシ－５－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
化合物２ｃ（７５ｇ、１３３ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（１５６８ｍｌ）中溶液に、Ｎ_２雰囲気下０℃でイミダゾール（３８ｇ、５５９ｍｍｏｌ）およびＴＩＰＳＣｌ（３５．９ｇ、１８６ｍｍｏｌ）を加えた。１０から１５℃で１２時間撹拌した後、溶液を氷水（２ｌ）中に注ぎ入れ、ＤＣＭ（３×１．５ｌ）で抽出した。有機層を合わせ、ブライン（１ｌ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ２：１からＥｔＯＡｃ）により精製して、表題化合物３ｃ（６５ｇ、６８％）を白色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.07 (s,1 H), 11.61 (s, 1 H), 8.14 (s, 1 H), 7.37-7.22 (m, 10 H), 5.89 (d, J=6.8 Hz, 1 H), 5.72 (d, J=5.6 Hz, 1 H) , 4.94-4.93 (m, 2 H) , 4.90-4.53 (m, 3 H), 4.19 (d, J=4.4 Hz, 1 H), 3.92-3.88 (m, 2 H), 3.85-3.71 (m, 2 H), 2.78-2.71 (m, 1 H), 1.13-1.05 (m, 6 H), 1.00-0.94 (m, 21 H).

【0393】

３ｄ：９－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－４－ベンジルオキシ－５－（ベンジルオキシメチル）－３－ヒドロキシ－５－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン－２－イル］－１Ｈ－プリン－６－オン
２ｄ（７．７５ｇ、１６．２ｍｍｏｌ）を出発物とし、３ａのためのプロトコールに記載した通りに表題化合物を製造し、シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（９：１））後に、所望のシリル化生成物３ｄ（８．６０ｇ、８３．６％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,19
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 635,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.38 (br s, 1 H), 8,22 (s, 1 H), 8,03 (s, 1 H), 7.26 - 7.39 (m, 10 H), 5.94 (d, J=6.85 Hz, 1 H), 5.67 (d, J=6.48 Hz, 1 H), 4.98 - 4.74 (m, 2 H), 4.61 - 4.48 (m, 3 H), 4.24 (d, J=4.89 Hz, 1 H), 3.97 - 3.82 (m, 2 H), 3.69 (s, 2 H), 0.80 - 1.18 (m, 21 H).

【0394】

３ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－４－ベンジルオキシ－５－（ベンジルオキシメチル）－３－ヒドロキシ－５－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
化合物２ｅ（１３５ｇ、０．２３２ｍｏｌ）およびイミダゾール（４７．４ｇ、０．６９６ｍｏｌ）のＤＣＭ（１．３５ｌ）中混合物に、室温でＴＩＰＳＣｌ（８０．６ｇ、０．４１８ｍｏｌ）のＤＣＭ（１．３５ｌ）中溶液を加えた。混合物を２４時間撹拌した。ＥｔＯＨ（４００ｍｌ）でクエンチした後、混合物を水１．５ｌで洗浄した。水性層をＥｔＯＡｃ（１ｌ）で２回抽出し、合わせた有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ２：１）により精製して、シリルエーテル３ｅ（１４５ｇ、８４．８％）を白色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.23 (s, 1 H), 8.74 (s, 1 H), 8.63 (s, 1 H), 8.06 (d, J=7.28 Hz, 2 H), 7.71-7.62 (m, 1 H), 7.60-7.51 (m, 2 H), 7.44-7.23 (m, 10 H), 6.13 (d, J=6.78 Hz, 1 H), 5.77 (d, J=6.40 Hz, 1 H), 5.21-5.10 (m, 1 H), 4.94 (d, J=11.92 Hz, 1 H), 4.66-4.50 (m, 3 H), 4.30 (d, J=4.77 Hz, 1 H), 4.00-3.86 (m, 2 H), 3.74 (s, 2 H), 1.11-0.89 (m, 21 H).

【0395】

４ａ：１－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３，４－ジヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－５－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－テトラヒドロフラン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
オートクレーブ中、ビス－ベンジルエーテル３ａ（１３．４ｇ、２１．４ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１００ｍｌ）中溶液を脱気し、アルゴンでパージした。触媒量のＰｄ（ＯＨ）_２（炭素担持２０％）を加えた後、溶液を４ｂａｒのＨ_２雰囲気下１時間セットした。Ｐｄ触媒を濾別し、濾液を蒸発させ、所望の脱ベンジル化生成物９．７４ｇ（定量的）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,84
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 445,3
1H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ[ppm]: 8.85 (s, 1 H), 7.25 (d, J=1.00 Hz, 1 H), 5.58 (d, J=6.15 Hz, 1 H), 4.71-4.61 (m, 1 H), 4.51-4.44 (m, 1 H), 4.02-3.95 (m, 1 H), 3.94-3.89 (m, 1 H), 3.88-3.77 (m, 3 H), 3.76-3.67 (m, 1 H), 3.22 (br dd, J=6.71, 3.83 Hz, 1 H), 1.93 (d, J=1.00 Hz, 3 H), 1.00 - 1.24 (m, 21 H).

【0396】

４ｂ：１－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３，４－ジヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－５－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－テトラヒドロフラン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
３ｂ（８．６９ｇ、１４．２ｍｍｏｌ）を出発物とし、４ａのためのプロトコールに記載した通りに表題化合物を製造して、所望の生成物４ｂ（６．２１ｇ、定量的、粗製物）を得、これを精製せずに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,78
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 431,1
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.29 (s, 1 H), 7.91 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 5.87 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 5.69 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 5.28 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 5.12 (t, J=4.0 Hz, 1 H), 5.00 (d, J=4.0 Hz, 1 H), 4.19 (dd, J=8.0, 12.0 Hz, 1 H), 4.05 (t, J=4.0 Hz, 2 H), 3.81 (dd, J=8.0, 12.0 Hz, 2 H), 3.62 (d, J=4.0 Hz, 2 H), 1.05-1.00 (m, 21 H).

【0397】

４ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３，４－ジヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－５－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－テトラヒドロフラン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
化合物３ｃ（９５ｇ、０．１３２ｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（３００ｍＬ）中溶液に、Ｎ_２雰囲気下－７０℃でＢＣｌ_３（９２１ｍＬ）を加えた。反応溶液を－７５と－６０℃の間で２時間撹拌し、この時点で完全に転化していることがＴＬＣにより検出された。混合物に、ＮＨ_３のＭｅＯＨ中飽和溶液約２００ｍｌを加えた。ｐＨを１０～１１に調節し、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ２０：１から４：１）により精製して、脱ベンジル化生成物４ｃ（５１ｇ、収率７１．６％）を黄色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.86 (s, 2 H), 8.27 (s, 1 H), 5.83 (d, J=7.2 Hz, 1 H), 5.42 (s, 1 H), 5.06 (s, 2 H), 4.64 (s, 1 H) , 4.17 (d, J=4.0Hz, 1 H), 3.89 (d, J=10.8 Hz, 1 H), 3.79 (d, J=10.4 Hz, 1 H), 3.67 (s, 2 H), 2.80-2.73 (m, 1 H),1.17-1.08 (m, 6 H), 1.02-0.92 (m, 21 H).

【0398】

４ｄ：９－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３，４－ジヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－５－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－テトラヒドロフラン－２－イル］－１Ｈ－プリン－６－オン
出発化合物３ｄ（８．５９ｇ、１３．５３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２００ｍｌ）に溶解した。－７０から－５０℃に冷却した後、ＢＣｌ_３のトルエン中１Ｍ溶液７４．４ｍｌ（７４．４ｍｍｏｌ）を１５分間かけて加えた。－７０℃で追加の１５分間撹拌した後、冷却浴を除去し、撹拌を室温で更に３０分間続けた。次いで反応溶液をＮＨ_３のＭｅＯＨ中７Ｍ溶液１８０ｍｌ中に滴下添加した。２０分間撹拌した後、混合物を蒸発させ、残留物をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ（４：１）１００ｍｌに溶解した。飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で洗浄した後、層を分離し、水性層をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ（４：１）で３回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０から１０％ＭｅＯＨ）により精製して、表題化合物４ｄ（４．１４ｇ、６７．３％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,74
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 453,4
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.38 (m, 1 H), 8.33 (s, 1 H), 8.07 (s, 1 H), 5.87 (d, J=7.34 Hz, 1 H), 5.37 (d, J=6.97 Hz, 1 H), 5.01 - 5.14 (m, 2 H), 4.64 - 4.76 (m, 1 H), 4.15 - 4.20 (m, 1 H), 3.81 - 3.93 (m, 2 H), 3.65 (d, J=5.14 Hz, 2 H), 0.94 - 1.14 (m, 21 H).

【0399】

４ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３，４－ジヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－５－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－テトラヒドロフラン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
化合物３ｅ（３１ｇ、４２．０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（６２０ｍｌ）中溶液に、－７０℃でＢＣｌ_３（２５２ｍＬ、０．２５２ｍｏｌ）を滴下添加した。混合物をＮ_２下－７０℃で３０分間撹拌し、１５℃に加温した。この温度で更に３０分間撹拌した後、温度を－２０℃未満に維持しながら、反応混合物をＭｅＯＨ中７Ｍ ＮＨ_３（６００ｍｌ）中に注意深く注ぎ入れた。蒸発させた後、残留物をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ（４：１）３ｌに溶解し、水１ｌおよび飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で洗浄した。合わせた水性層をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ（４：１）２×１ｌで抽出し、合わせた有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１：４）により精製して、化合物４ｅ（１６．９ｇ、収率７２．２％）を白色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.23 (s, 1 H), 8.77 (s, 1 H), 8.72 (s, 1 H), 8.06 (d, J=7.28 Hz, 2 H), 7.70-7.61 (m, 1 H), 7.60-7.51 (m, 2 H), 6.06 (d, J=7.53 Hz, 1 H), 5.48 (d, J=6.90 Hz, 1 H), 5.22-5.11(m, 2 H), 4.93-4.83 (m, 1 H), 4.24 (t, J=4.77 Hz, 1 H), 3.92 (q, J=10.67 Hz, 2 H), 3.78-3.62 (m, 2 H), 1.14-1.01 (m, 21 H).

【0400】

５ａ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－３，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
出発物質４ａ（２．９３ｇ、６．６ｍｍｏｌ）をアセトン／Ｈ_２Ｏ（４：１）１２０ｍｌに溶解した。ＮａＩＯ_４（１．６９ｇ、７．９ｍｍｏｌ）のＨ_２Ｏ（５０ｍｌ）中溶液を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。沈殿物を濾別し、濾液を真空で濃縮した。残った水溶液をＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）で抽出した。有機層をＨ_２Ｏおよび飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した後、これをＭｇＳＯ_４で乾燥し、溶媒を減圧下で除去して、所望の生成物２．８６ｇ（９４．１％）を無色固体として得、これを更には精製せずに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ｂ－１：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝１．０４
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ－Ｈ_２Ｏ］^＋＝４４３．２

【0401】

５ｂ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－３，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
４ｂ（６．２１ｇ、１４．４ｍｍｏｌ）を出発物とし、４ａに記載したプロトコールに従い、表題化合物を製造して、所望の生成物５ｂ（６．３８ｇ、９９％）を粗生成物として得、これを追加の精製をせずに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ｂ－１：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝１．００
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ－Ｈ_２Ｏ］^＋＝４２９．５

【0402】

５ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－３，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
化合物４ｃ（２５ｇ、４６ｍｍｏｌ）のアセトン（４８５ｍｌ）と水（１４５ｍｌ）との混合溶媒中溶液に、２５℃でＮａＩＯ_４（１３．９ｇ、６５ｍｍｏｌ）の水（１５０ｍｌ）中溶液を加え、混合物を１２時間撹拌した。溶媒を真空で蒸発させた後、残留物をＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（５００ｍｌ）およびブライン（５００ｍｌ）で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮して、粗製物５ｃ（２５．７ｇ、定量的）を白色固体として得、これを更には精製せずに使用した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.05 (br s, 1 H), 11.79 (s, 1 H), 8.17 (s, 1 H), 7.52 (d, J=5.62 Hz, 1 H), 6.23 (s, 1 H), 5.34 (d, J=5.62 Hz, 1 H), 5.23 (s, 1 H), 4.46 (d, J=9.54 Hz, 1 H), 4.15-4.04 (m, 1 H), 3.93 (d, J=9.78 Hz, 1 H), 3.85 (d, J=10.03 Hz, 1 H), 3.71 (d, J=10.03 Hz, 1 H), 2.85-2.66 (m, 1 H), 1.12 (d, J=6.85 Hz, 6 H), 1.07-0.95 (m, 21 H).

【0403】

５ｄ：９－［（２Ｒ，６Ｓ）－３，５－ジヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－１Ｈ－プリン－６－オン
出発物質４ｄ（４．１４ｇ、９．１ｍｍｏｌ）をアセトン／Ｈ_２Ｏ（４：１）１２０ｍｌに溶解した。ＮａＩＯ_４（２．６３ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）のＨ_２Ｏ（５０ｍｌ）中溶液を加え、混合物を室温で１８時間撹拌した。沈殿物を濾別し、濾液を真空で濃縮した。残った水溶液に、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液１００ｍｌを加え、水性層をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ（４：１）１００ｍｌで２回抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、溶媒を減圧下で除去して、所望の生成物５ｄ（４．２７ｇ、９９．７％）を無色泡状物として得、これを更には精製せずに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝１．８２
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ－Ｈ_２Ｏ］^＋＝４５３．３

【0404】

６ａ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
化合物５ａ（３１ｇ、６７ｍｍｏｌ）の無水ＭｅＯＨ（５２７ｍｌ）中溶液に、Ｎ_２雰囲気下室温で（ＮＨ_４）_２Ｂ_２Ｏ_７・４Ｈ_２Ｏ（１９．５ｇ、７４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２時間撹拌し、続いてＡｃＯＨ（８．０８ｇ、１３４ｍｍｏｌ）、４Åモレキュラーシーブ（６２ｇ）およびＮａＢＨ_３ＣＮ（８．４４ｇ、１３４ｍｍｏｌ）を加えた。ＴＬＣにより出発物質が完全に消費されていることが示されるまで、混合物をＮ_２雰囲気下室温で１２時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、残留物を水（２００ｍｌ）に溶解し、ＤＣＭ（３×２００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空で濃縮した。残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ５０：１から１０：１）により精製して、化合物６ａ（１９．５ｇ、６７％）を無色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.27 (br s, 1 H), 7.71-7.52 (m, 1 H), 5.90-5.68 (m, 1 H), 4.68-4.46 (m, 1 H), 4.05-3.83 (m, 2 H), 3.40 (br d, J=5.38 Hz, 2 H), 2.83 (br d, J=9.78 Hz, 1 H), 2.79-2.72 (m, 1 H), 2.66 (br d, J=12.96 Hz, 2 H),1.79 (s, 3 H), 1.22-0.83 (m, 23 H).

【0405】

６ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
化合物５ｃ（２５．７ｇ、４６．４ｍｍｏｌ）を出発物とし、６ａにて記載したプルトコルに従い、表題化合物を合成して、所望のモルホリン６ｃを無色固体として得た（７．５ｇ、３０．６％）。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.56 (br s, 1 H), 8.13 - 8.25 (m, 1 H), 5.67 - 5.81 (m, 2 H), 4.56 (br s, 1 H), 4.08 (br d, J=9.54 Hz, 1 H), 3.83 (br d, J=9.29 Hz, 1 H), 3.39 - 3.48 (m, 2 H), 3.10 (br d, J=9.54 Hz, 1 H), 2.65 - 2.93 (m, 4 H), 1.12 (br d, J=6.60 Hz, 7 H), 0.96 - 1.07 (m, 21 H).

【0406】

７ａ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン（６ａから）
化合物６ａ（１９．５ｇ、４５．７ｍｍｏｌ）の無水ＭｅＯＨ（３９０ｍｌ）中溶液に、Ｎ_２雰囲気下室温で４Åモレキュラーシーブ（３９ｇ）、アセトン（１３．２５ｇ、２２８ｍｍｏｌ）およびＮａＢＨ_３ＣＮ（１４．４ｇ、２２８ｍｍｏｌ）を加えた。２時間撹拌した後、混合物をＡｃＯＨ（約２．０ｍｌ）でｐＨ＝５から６に調節し、撹拌を１２時間続け、この時点で出発物質が完全に消費していることがＴＬＣにより検出された。溶媒を真空で除去し、残留物を水（５００ｍｌ）に溶解した。ＤＣＭ（３×５００ｍｌ）で抽出した後、有機層を合わせ、Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、真空で濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ５０：１から１０：１）により精製した後、表題化合物７ａを無色固体（１７ｇ、８１％）として得た。

【0407】

７ａ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン（５ａから）
出発化合物５ａ（２．８５ｇ、６．２ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ_３（１．２６ｇ、１．７４ｍｌ、１２．４ｍｍｏｌ）、ＡｃＯＨ（３．７３ｇ、３．５６ｍｌ、６１．９ｍｍｏｌ）およびイソプロピルアミン９２４ｍｇ（１．３４ｍｌ、１５．５ｍｍｏｌ）を乾燥ＭｅＯＨ（６０ｍｌ）に溶解した。室温で、シアノ水素化ホウ素ナトリウム１．６４ｇ（２４．８ｍｍｏｌ）を加え、溶液を６０℃で２時間撹拌した。室温に冷却した後、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液１００ｍｌ中に注ぎ入れ、溶媒を減圧下で濃縮した。残った水性相をＥｔＯＡｃで抽出し、これを飽和ＮａＨＣＯ_３溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶媒を蒸発させ、粗生成物（３．０ｇ）をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中１０から８０％酢酸エチル）により精製して、所望のモルホリン７ａ（１．７６ｇ、６０．７％）を無色固体として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,80
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 470,2
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.30 (s, 1 H), 7.63 (s, 1 H), 5.77 (dd, J=10.42, 2.89 Hz, 1 H), 4.61 (t, J=5.90 Hz, 1 H), 4.00 (d, J=9.29 Hz, 1 H), 3.74 (d, J=9.03 Hz, 1 H), 3.53-3.41 (m, 2 H), 2.83-2.63 (m, 3 H), 2.26 (br d, J=11.29 Hz, 1 H), 2.21-2.07 (m, 1 H), 1.80 (s, 3 H), 1.14-1.00 (m, 21 H), 0.97 (d, J=6.53 Hz, 6 H).

【0408】

７ｂ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－ピリミジン－２，４－ジオン（５ｂから）
５ｂ（６．３８ｇ、１４．３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１５０ｍｌ）中溶液に、室温でＡｃＯＨ（８．６２ｇ、８．２３ｍｌ、１４２．８ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ_３（２．９０ｇ、３．９８ｍｌ、２８．６ｍｍｏｌ）およびイソプロピルアミン２．１３ｇ（３．０９ｍｌ、３５．７ｍｍｏｌ）を加えた。１時間後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム３．７８ｇ（５７．１ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を室温で１時間、続いて６５℃で追加の１時間続けた。混合物を室温に冷却し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液１５０ｍｌを加え、ＭｅＯＨを真空で蒸発させた。水溶液をＥｔＯＡｃ（３５０ｍｌ）で抽出し、有機層を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）により精製して、表題化合物７ｂ（３．１８ｇ、４８．９％）を無色固体として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,76
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 456,4
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.32 (b s, 1 H), 7.77 (d, J=8.07 Hz, 1 H), 5.75 (dd, J=9.90, 2.81 Hz, 1 H), 5.61 (d, J=8.07 Hz, 1 H), 4.62 (t, J=5.93 Hz, 1 H), 3.99 (d, J=9.29 Hz, 1 H), 3.74 (d, J=9.17 Hz, 1 H), 3.45 (dd, J=10.33, 6.05 Hz, 2 H), 2.82 (br d, J=10.27 Hz, 1 H), 2.64 - 2.77 (m, 2 H), 2.24 (d, J=11.37 Hz, 1 H), 2.03 - 2.13 (m, 1 H), 1.00 - 1.10 (m, 21 H), 0.96 (m, 6 H).

【0409】

７ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド（６ｃから）
６ｃ（７．５ｇ、１４．０ｍｍｏｌ）を出発物とし、７ａ（６ａから）にて記載したプルトコルに従って、表題化合物を合成した。シリカゲル（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ４：１から１：１）上で最後に精製した後、７ｃを無色固体として単離した（５．１３ｇ、６３％）。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.09 (s, 1 H), 11.56 (s, 1 H), 8.22 (s, 1 H), 5.80 (dd, J=9.79, 2.76 Hz, 1 H), 4.60 (t, J=6.27 Hz, 1 H), 4.09 (d, J=8.78 Hz, 1 H), 3.71 (d, J=8.78 Hz, 1 H), 3.48 (d, J=6.27 Hz, 2 H), 2.98 (br d, J=10.04 Hz, 1 H), 2.89-2.65 (m, 3 H), 2.43 (t, J = 10.42 Hz, 1 H), 2.34 (d, J=11.29 Hz, 1 H), 1.13 (d, J=6.78 Hz, 6 H), 1.08-1.01 (m, 21 H), 0.99 (d, J=6.27 Hz, 6 H).

【0410】

７ｄ：９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－１Ｈ－プリン－６－オン（５ｄから）
出発化合物５ｄ（４．２７ｇ、９．１ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１００ｍｌ）に溶解した。ＮＥｔ_３（１．８４ｇ、２．５３ｍｌ、１８．１ｍｍｏｌ）、ＡｃＯＨ（５．４４ｇ、５．１９ｍｌ、９０．６ｍｍｏｌ）およびイソプロピルアミン８０８ｍｇ（１．１７ｍｌ、１３．６ｍｍｏｌ）を加えた後、溶液を室温で１時間撹拌した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム１．８０ｇ（２７．２ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で３０分間および６０℃で更に３０分間撹拌し、この時点で完全に転化していることが検出された。反応混合物に飽和ＮａＨＣＯ_３溶液１００ｍｌを加え、ＭｅＯＨを蒸発させた。残った水性相をＥｔＯＡｃ（２５０ｍｌ）で抽出した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）により精製して、表題化合物７ｄを無色固体として得た（２．６８ｇ、６１．７％）。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,80
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 480,4
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.35 (br s, 1 H), 8.31 (s, 1 H), 8.06 (s, 1 H), 5.91 (dd, J=9.90, 2.81 Hz, 1 H), 4.57 (t, J=6.05 Hz, 1 H), 4.11 (d, J=9.05 Hz, 1 H), 3.77 (d, J=9.05 Hz, 1 H), 3.40 - 3.50 (m, 2 H), 2.94 - 3.02 (m, 1 H), 2.67 - 2.87 (m, 2 H), 2.54 - 2.63 (m, 1 H), 2.33 (d, J=11.37 Hz, 1 H), 0.97 - 1.11 (m, 27 H).

【0411】

【化39】

【0412】

１ｇ：［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－４－アセトキシ－３－ベンジルオキシ－２－（ベンジルオキシメチル）－５－（６－クロロプリン－９－イル）テトラヒドロフラン－２－イル］メチルアセテート
炭水化物構成単位Ｇ３（１２．６０ｇ、２５．９ｍｍｏｌ）および６－クロロ－プリン６．１９ｇ（３８．９ｍｍｏｌ）を乾燥ＡＣＮ（１７５ｍｌ）に溶解した。Ａｒ雰囲気下、ＤＢＵ（１２．０７ｇ、１１．８４ｍｌ、７７．７ｍｍｏｌ）およびＴＭＳＯＴｆ（２３．２６ｇ、１８．９９ｍｌ、１０３．６ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。氷浴を除去し、反応物を室温で１時間および８０℃で更に１時間撹拌し、この時点で完全に転化していることが検出された。溶液を室温に冷却し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液５００ｍｌ中に注ぎ入れた。１時間激しく撹拌した後、水溶液をＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液／Ｈ_２Ｏ（１：１）および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物（１５．７８ｇ）をシリカゲル（ｎ－ヘプタン中１０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、表題化合物１ｇ（１２．３１ｇ、８１．８％）を薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,57
イオン化方法： ES^-: [M-H+FA]^-= 625,1
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 8.80 (s, 1 H), 8.75 (s, 1 H), 7.16 - 7.39 (m, 10 H), 6.38 (d, J=4.2 Hz, 1 H), 6.10 (dd, J=5.6, 4.3 Hz, 1 H), 4.86 (d, J=5.7 Hz, 1 H), 4.54 - 4.68 (m, 2 H), 4.37 - 4.47 (m, 3 H), 4.24 (d, J=12.0 Hz, 1 H), 3.69 (d, J=10.1 Hz, 1 H), 3.60 (d, J=10.1 Hz, 1 H), 2.05 (s, 3 H), 1.99 (s, 3 H).

【0413】

２ｈ：（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－２－（６－アミノプリン－９－イル）－４－ベンジルオキシ－５－（ベンジルオキシメチル）－５－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン－３－オール
クロロプリンリボシド１ｇ（１２．３０ｇ、２１．２ｍｍｏｌ）をＡＣＮ（４０ｍｌ）に溶解した。アンモニア水（３５％）６８．０ｇ（７７．２ｍｌ、１．４０ｍｏｌ）を加えた後、反応溶液をオートクレーブ中に移し、７０℃で１８時間加熱した。反応混合物を蒸発させ、水性残留物をＤＣＭ／イソプロパノール（４：１）１５０ｍｌで３回抽出した。有機層を合わせ、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させて粗生成物９．３７ｇを得、これをＡＣＮ（４００ｍｌ）から再結晶化して、アデノシン類似体２ｈ（６．９２ｇ、６８．５％）を無色固体として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,69
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 477,9
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 8.22 (s, 1 H), 8.12 (s, 1 H), 7.24 - 7.42 (m, 12 H), 6.01 (d, J=5.7 Hz, 1 H), 5.72 (d, J=7.3 Hz, 1 H), 5.01 (br t, J=5.1 Hz, 1 H), 4.91 - 4.98 (m, 1 H), 4.84 (d, J=11.9 Hz, 1 H), 4.60 (d, J=11.7 Hz, 1 H), 4.51 (s, 2 H), 4.34 (d, J=5.3 Hz, 1 H), 3.57 - 3.72 (m, 4 H).

【0414】

２ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）－４－ベンジルオキシ－５－（ベンジルオキシメチル）－３－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－テトラヒドロフラン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
２ｈ（６．９１ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）をＡｒ雰囲気下ピリジン１００ｍｌに溶解した。室温で、塩化ベンゾイル１０．１７ｇ（８．４１ｍｌ、７２．４ｍｍｏｌ）を加え、反応物を１時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、残留物をＨ_２Ｏに溶解し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、１Ｎ ＨＣｌ（２×２５０ｍｌ）、Ｈ_２Ｏ（１×２００ｍｌ）、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（２×２００ｍｌ）および飽和ＮａＣｌ溶液（１×２００ｍｌ）で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶媒を除去し、粗生成物（１４．６６ｇ、黄色泡状物）をピリジン／ＥｔＯＨ（１：１）１４０ｍｌに溶解した。室温で、２Ｎ ＮａＯＨ（１０８．５ｍｌ、２１７．１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を３０分間撹拌した。ＡｃＯＨ（１１ｍｌ）を加えた後、反応溶液を真空で濃縮した。残留物をＨ_２Ｏ（２００ｍｌ）で処理し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）で抽出した。有機層を１Ｎ ＨＣｌ（２×２００ｍｌ）、Ｈ_２Ｏ（１×２００ｍｌ）および飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（１×２００ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物（９．０ｇ）をシリカ（ｎ－ヘプタン中２０から１００％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（９：１））上で精製して、表題化合物２ｅ（７．２５ｇ、８６．１％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,12
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 582,4
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.19 (s, 1 H), 8.72 (s, 1 H), 8.58 (s, 1 H), 8.05 (br d, J=7.3 Hz, 2 H), 7.64 (br t, J=7.3 Hz, 1 H), 7.52 - 7.60 (br t, 2 H), 7.25 - 7.44 (m, 10 H), 6.15 (d, J=5.6 Hz, 1 H), 5.82 (d, J=7.5 Hz, 1 H), 4.99 - 5.08 (m, 2 H), 4.86 (d, J=11.9 Hz, 1 H), 4.62 (d, J=11.9 Hz, 1 H), 4.52 (s, 2 H), 4.38 (d, J=5.1 Hz, 1 H), 3.59 - 3.74 (m, 4 H).

【0415】

【化40】

【0416】

８：［（２Ｓ，６Ｒ）－６－（２，４－ジオキソピリミジン－１－イル）－４－イソプロピル－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
出発物質７ｂ（６．００ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）を乾燥ピリジン８０ｍｌに溶解した。室温で塩化ベンゾイル２．８０ｇ（２．３２ｍｌ、１９．７５ｍｍｏｌ）を加え、反応物を２０時間撹拌して、完全に転化させた。溶媒を蒸発させた後、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、１０％クエン酸溶液２×１００ｍｌ、Ｈ_２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させて、表題化合物７．９９ｇ（定量的）を無色泡状物として得、これを更には精製せずに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．２３
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５６０．５

【0417】

９：［（２Ｓ，６Ｒ）－６－（４－アミノ－２－オキソ－ピリミジン－１－イル）－４－イソプロピル－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
出発化合物８（粗製物７．９９ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）を乾燥ＡＣＮ（２００ｍｌ）に溶解した。ＮＥｔ_３（２２．８８ｇ、３１．４ｍｌ、２２３．８ｍｍｏｌ）および１Ｈ－１，２，４－トリアゾール１１．１３ｇ（１５８．０ｍｍｏｌ）を加えた後、溶液を０℃に冷却し、ＰＯＣｌ_３（６．０６ｇ、３．６８ｍｌ、３９．５ｍｍｏｌ）の乾燥ＡＣＮ（５０ｍｌ）中溶液を、激しく撹拌しながら加えた。氷浴を除去し、溶液を２時間撹拌した。減圧下、溶媒約２００ｍｌを蒸発させ、残った溶液を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液／Ｈ_２Ｏ（１：１）５００ｍｌ中に注ぎ入れた。水性混合物をＤＣＭ（１５０ｍｌ）で３回抽出し、合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ_４で乾燥した。溶媒を蒸発させた後、粗製の中間体（９．１ｇ、黄色泡状物）をＡＣＮ（２００ｍｌ）に溶解し、アンモニア水溶液（３２％）１００ｍｌを加えた。反応溶液を室温で１８時間撹拌し、この時点で完全に転化していた。溶媒を減圧下で除去し、Ｈ_２Ｏ（１００ｍｌ）を残留物に加えた。ＤＣＭ（２×２００ｍｌ）で抽出し、有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、溶媒を蒸発させて、粗製の化合物９（７．６５ｇ、定量的）を得、これを追加の精製をせずに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．０２
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ］^－＝５５７．４

【0418】

１０：［（２Ｓ，６Ｒ）－６－（４－ベンズアミド－２－オキソ－ピリミジン－１－イル）－４－イソプロピル－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
出発化合物９（７．６４ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）を乾燥ピリジン１３０ｍｌに溶解した。室温で、塩化ベンゾイル２．９０ｇ（２．４０ｍｌ、２０．５ｍｍｏｌ）を加え、溶液を２０時間撹拌し、この時点で完全に転化していた。溶媒を蒸発させた後、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、１０％クエン酸溶液２×１００ｍｌ、Ｈ_２Ｏ、飽和ＮａＨＯＣ_３溶液およびＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させて、粗生成物８．８８ｇを得、これをシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、表題化合物１０（６．６９ｇ、７６．７％）を薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．２９
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ］^－＝６６１．５

【0419】

７ｆ：Ｎ－［１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－２－オキソ－ピリミジン－４－イル］ベンズアミド
化合物１０（３．６３ｇ、５．４８ｍｍｏｌ）をピリジン／ＥｔＯＨ（２：１）４５ｍｌに溶解した。０℃で、１Ｍ ＮａＯＨ溶液２７．４ｍｌ（２７．４ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を０℃で３０分および室温で更に３時間撹拌して、完全に転化させた。クエン酸一水和物（約２．０ｇ）を加えることによりｐＨを約６に調節した。有機溶媒を３５℃で除去し、水溶液をＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を１０％クエン酸溶液１５０ｍｌ、Ｈ_２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびＮａＣｌ溶液で３回洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶媒を蒸発させた。得られた粗生成物（２．７３ｇ、黄色泡状物）をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中１０から７０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、表題化合物７ｆ（２．２５ｇ、７３．４％）を薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,89
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 559,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.23 (s, 1 H), 8.31 (d, J=7.5 Hz, 1 H), 8.01 (d, J=7.3 Hz, 2 H), 7.63 (t, J=7.5 Hz, 1 H), 7.52 (m, 2 H), 7.37 (d, J=7.5 Hz, 1 H), 5.86 (dd, J=9.5, 2.6 Hz, 1 H), 4.67 (t, J=5.9 Hz, 1 H), 4.06 (d, J=9.4 Hz, 1 H), 3.76 (d, J=9.3 Hz, 1 H), 3.51 (m, 2 H), 2.98 (br d, J=10.5 Hz, 1 H), 2.64 - 2.83 (m, 2 H), 2.31 (m, 1 H), 2.00 (m, 1 H), 0.93 - 1.14 (m, 27 H).

【0420】

【化41】

【0421】

１１：［（２Ｓ，６Ｒ）－４－イソプロピル－６－（６－オキソ－１Ｈ－プリン－９－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
出発物質７ｄ（２．６８ｇ、５．５９ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（２．５３ｇ、３．４２ｍｌ、１９．５５ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．３４ｇ、２．７９ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（５０ｍｌ）に溶解した。室温で、塩化ベンゾイル１．１８ｇ（０．９７ｍｌ、８．３８ｍｍｏｌ）を加え、反応物を１８時間撹拌して、完全に転化させた。ＭｅＯＨ（２０ｍｌ）を加えた後、溶媒を蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、１０％クエン酸溶液２×１００ｍｌ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させて、表題化合物１１（３．４７ｇ、定量的、粗製物）を無色泡状物として得、これを更には精製せずに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．１８
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５８４．４

【0422】

１２：［（２Ｓ，６Ｒ）－６－（６－クロロプリン－９－イル）－４－イソプロピル－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
出発化合物１１（粗製物２．８６ｇ、４．９０ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルアニリン（１．２８ｇ、１．３４ｍｌ、１０．５３ｍｍｏｌ）およびテトラエチルアンモニウムクロリド（１．２４ｇ、７．３５ｍｍｏｌ）を乾燥ＡＣＮ（３０ｍｌ）に溶解した。撹拌しながら、ＰＯＣｌ_３（１．７０ｇ、１．０３ｍｌ、１１．０７ｍｍｏｌ）を室温で加え、溶液を３時間還流した。室温に冷却した後、混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液１５０ｍｌ中に注ぎ入れ、固体のＮａＨＣＯ_３（３．０ｇ）を追加で加えた。反応物を３０分間撹拌し、ＤＣＭ（１００ｍｌ）で抽出した。層を分離し、水性相をＤＣＭ（５０ｍｌ）で２回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲル（ｎ－ヘプタン中０から５０％ＥｔＯＡｃ）上で精製した後、表題化合物１２（１．５２ｇ、５１．４％）を薄黄色泡状物として単離した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．３３
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝６０２．４

【0423】

１３：［（２Ｓ，６Ｒ）－６－（６－ベンズアミドプリン－９－イル）－４－イソプロピル－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
クロロプリン１２（１．５４ｇ、２．５６ｍｍｏｌ）、ベンズアミド（６４６ｍｇ、３．８４ｍｍｏｌ）およびＣｓ_２ＣＯ_３（１．２５ｇ、３．８４ｍｍｏｌ）をジオキサン３０ｍｌに溶解した。Ｐｄ（ＯＡｃ）_２（４３ｍｇ、１９１．８μｍｏｌ）およびｘａｎｔｐｈｏｓ（１１１ｍｇ、１９１．８μｍｏｌ）を加えた後、反応溶液をアルゴン下１００℃で１時間撹拌して、完全に転化させた。反応物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で希釈した。溶液を濾過し、濾液を真空で蒸発させた。粗生成物（２．４８ｇ）をシリカゲル（ｎ－ヘプタン中１０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、所望の化合物１３（１．２９ｇ、７３．４％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．２６
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝６８７．６

【0424】

７ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
７ｆにて記載したプルトコルに従って、ベンゾエート１３（１．００ｇ、１．４６ｍｍｏｌ）を鹸化した。クロマトグラフィー精製をせずに、表題化合物７ｅ（７３１ｍｇ、８６．２％、粗製物）を薄黄色泡状物として単離することができた。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,97
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 583,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.17 (s, 1 H), 8.75 (s, 1 H), 8.71 (s, 1 H), 8.04 (d, J=7.2 Hz, 2 H), 7.65 (t, J=7.3 Hz, 1 H), 7.55 (m, 2 H), 6.11 (dd, J=9.9, 2.7 Hz, 1 H), 4.61 (t, J=5.9 Hz, 1 H), 4.15 (d, J=9.1 Hz, 1 H), 3.85 (d, J=9.2 Hz, 1 H), 3.46 (br d, J=6.7 Hz, 2 H), 3.08 (br d, J=10.4 Hz, 1 H), 2.71 - 2.89 (m, 3 H), 2.37 (d, J=11.5 Hz, 1 H), 0.95 - 1.19 (m, 27 H).

【0425】

【化42】

【0426】

１４ａ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－イソプロピル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
第一級アルコール７ａ（８１０ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ_３（８７３ｍｇ、１．２０ｍｌ、８．６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３０ｍｌ）に溶解した。室温で、ＤＭＴ－Ｃｌ（７１６ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で２時間撹拌した。更に０．６当量のＤＭＴ－Ｃｌを加え、終夜撹拌した後、反応は完全に転化していることを示した。粗生成物の溶液をシリカカラムに直接移し、ｎ－ヘプタン中０から６５％ＥｔＯＡｃを用いて精製して、所望の生成物１４ａ（１．１９ｇ、８９．０％）を薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．３８
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝７７２．５

【0427】

１４ｂ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－イソプロピル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
７ｂ（１．００ｇ、２．２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１．４２ｇ、１．９２ｍｌ、１１．０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３０ｍｌ）に溶解した。ＤＭＴ－クロリド９４８ｍｇ（２．７ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で終夜撹拌して、完全に転化させた。Ｉｓｏｌｕｔｅ－ｓｏｒｂｅｎｔを加えた後、有機溶媒を除去し、固体物質をシリカ（ｎ－ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中０から７５％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、ＤＭＴ保護生成物１４ｂ（１．６１ｇ、９６．８％）を薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．３４
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝７５８．３

【0428】

１４ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－イソプロピル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
１４ａにて記載したプロトコールに従って、出発化合物７ｃ（１．００ｇ、１．７７ｍｍｏｌ）を保護した。シリカゲル（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）上で精製した後、所望の生成物１４ｃを黄色泡状物として単離した（１．４６ｇ、９４．８％）。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝３．６６
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝８６７．６

【0429】

１４ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－イソプロピル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
出発物質７ｅ（９５０ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ／ピリジン（１：１）１０ｍｌに溶解した。ＤＭＴ－Ｃｌ（７３３ｍｇ、２．１２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍｌ）中溶液を加えた後、反応物を１．５時間撹拌して、完全に転化させた。溶媒を蒸発させた後、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、Ｈ_２Ｏ、１０％クエン酸溶液で２回および飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶媒を除去し、粗生成物をシリカ（ｎ－ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ_３で予め処理した；ｎ－ヘプタン中０から５０％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、ＤＭＴ－エーテル１４ｅ（１．２０ｇ、８３．２％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．３８
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ］^－＝８８３．５

【0430】

１４ｆ：Ｎ－［１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－イソプロピル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－２－オキソ－ピリミジン－４－イル］ベンズアミド
１４ｅのためのプロトコールに従って、出発物質７ｆ（２．２５ｇ、４．０２ｍｍｏｌ）を、乾燥ピリジン中で保護した。シリカ（ｎ－ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ_３で予め処理した；ｎ－ヘプタン中０から８０％ＥｔＯＡｃ）上で最後のクロマトグラフィー後に、表題化合物１４ｆ（３．３５ｇ、９６．９％）を黄色泡状物として単離した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．４０
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝８６１．６

【0431】

１５ａ：１－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
ＴＩＰＳ保護モルホリン１４ａ（１．１８ｇ、１．５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン６．７４ｇ（９．２６ｍｌ、６６．０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３０ｍｌ）に溶解した。室温で、ＮＥｔ_３・３ＨＦ（１２．２３ｇ、１２．４ｍｌ、７３．６ｍｍｏｌ）を加え、反応物を６５℃で１時間撹拌した。室温で終夜静置した後、ＮＭＰ（１０ｍｌ）を加え、反応物を６５℃で追加の１４時間撹拌して、完全に転化させた。溶媒を真空で濃縮し、残ったＮＭＰ溶液をＨ_２Ｏ／飽和ＮａＨＣＯ_３溶液混合物（１：２）に加えた。水溶液をＥｔＯＡｃで抽出し、有機層をＨ_２Ｏおよび飽和ＮａＣｌ溶液で３回洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中１％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中１０から１００％酢酸エチル）により精製して、脱シリル化生成物１５ａ（６４５ｍｇ、６８．８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,67
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 616,4
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (s, 1 H), 7.53 - 7.58 (m, 1 H), 7.41 (d, J=7.34 Hz, 2 H), 7.20 - 7.31 (m, 7 H), 6.87 (d, J=8.80 Hz, 4 H), 5.82 (dd, J=9.66, 2.93 Hz, 1 H), 4.61 (br s, 1 H), 3.67 - 3.79 (m, 8 H), 3.07 (s, 1 H), 2.97 - 3.10 (m, 1 H), 2.80 (br d, J=9.78 Hz, 1 H), 2.63 - 2.76 (m, 2 H), 2.17 - 2.31 (m, 2 H), 1.69 (s, 3 H), 0.95 (d, J=6.60 Hz, 6 H).

【0432】

１５ｂ：１－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
１４ｂ（１．６０ｇ、２．１ｍｍｏｌ）をＮＭＰ（２０ｍｌ）に溶解した。ＮＥｔ_３（４．７３ｇ、６．５０ｍｌ、４６．３ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ_３・３ＨＦ（８．４１ｇ、８．５０ｍｌ、５０．６ｍｍｏｌ）を加えた後、混合物を室温で１５時間、続いて６５℃で５時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、続いて飽和ＮａＨＣＯ_３溶液２５０ｍｌおよびＨ_２Ｏ（２５０ｍｌ）を加えた。ＥｔＯＡｃ（２５０ｍｌ）で抽出した後、有機層をＨ_２Ｏ（２×）および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、シリカ（ｎ－ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、所望のアルコール１５ｂを無色泡状物として得た（１．１６ｇ、９１．１％）。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,63
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 602,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (br s, 1 H), 7.63 (d, J=8.07 Hz, 1 H), 7.40 (br d, J=7.82 Hz, 2 H), 7.20 - 7.33 (m, 7 H), 6.88 (d, J=8.56 Hz, 4 H), 5.81 (br d, J=7.34 Hz, 1 H), 5.62 (d, J=8.07 Hz, 1 H), 4.62 (br s, 1 H), 3.78 - 3.95 (m, 1 H), 3.68 - 3.76 (m, 7 H), 3.11 (d, J=9.05 Hz, 1 H), 2.96 (br d, J=9.05 Hz, 1 H), 2.82 (br d, J=10.27 Hz, 1 H), 2.60 - 2.76 (m, 2 H), 2.10 - 2.22 (m, 2 H), 0.94 (d, J=6.36 Hz, 6 H).

【0433】

１５ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
ＴＩＰＳ保護アルコール１４ｃ（１．４４ｇ、１．６６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１７ｍｌ）に溶解した。６５％ピリジン・ＨＦ溶液１．２７ｇ（１．１５ｍｌ、８．３０ｍｍｏｌ）を加えた後、反応混合物を室温で１時間撹拌した。激しく撹拌しながら、ＮａＨＣＯ_３（０．９ｇ）およびＨ_２Ｏ（１０ｍｌ）を加え、撹拌を２時間続けた。ＴＨＦを除去し、水溶液をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ（４：１）で１０回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させて、１５ｃ（０．８３ｇ、７０．１％、粗製物）を得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,11
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 709,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.09 (s, 1 H), 11.67 (s, 1 H), 8.05 (s, 1 H), 7.38 (d, J=7.34 Hz, 2 H), 7.18 - 7.30 (m, 7 H), 6.85 (d, J=8.80 Hz, 4 H), 5.92 (dd, J=8.99, 3.00 Hz, 1 H), 4.64 (t, J=5.14 Hz, 1 H), 3.71 - 3.84 (m, 8 H), 2.90 - 3.08 (m, 3 H), 2.55 - 2.83 (m, 4 H), 2.31 - 2.47 (m, 1 H), 1.12 (dd, J=6.79, 3.36 Hz, 6 H), 0.96 (d, J=6.48 Hz, 6 H).

【0434】

１５ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
出発化合物１４ｅ（１．２０ｇ、１．３５ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ_３（１．９１ｇ、２．６３ｍｌ、１８．９０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２０ｍｌ）に溶解した。ＮＥｔ_３・３ＨＦ（３．５９ｇ、３．６３ｍｌ、２１．６０ｍｍｏｌ）を加えた後、溶液を６５℃で加熱し、続いて更にＮＥｔ_３（０．９５ｇ、１．３２ｍｌ、９．４５ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ_３・３ＨＦ（１．８０ｇ、１．８２ｍｌ、１０．８ｍｍｏｌ）を加えた。完全に転化するまで（約１０時間）、反応混合物を６５℃で撹拌した。室温に冷却した後、混合物をＨ_２Ｏ／飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（１：１）１５０ｍｌに注ぎ入れ、３０分間撹拌した。水溶液を５０ＤＣＭで３回抽出し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中１０から１００％ＥｔＯＡｃ）後に、脱保護生成物１５ｅ（８３５ｍｇ、８４．９％）を無色泡状物として単離した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,74
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 729,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.21 (br s, 1 H), 8.74 (s, 1 H), 8.54 (s, 1 H), 8.04 (d, J=7.62 Hz, 2 H), 7.62 - 7.67 (m, 1 H), 7.52 - 7.58 (m, 2 H), 7.37 (d, J=7.34 Hz, 2 H), 7.15 - 7.29 (m, 7 H), 6.82 (d, J=7.95 Hz, 4 H), 6.16 (dd, J=9.17, 2.93 Hz, 1 H), 4.67 (t, J=5.20 Hz, 1 H), 3.86 - 3.96 (m, 1 H), 3.79 (dd, J=11.00, 5.87 Hz, 1 H), 3.69 - 3.73 (m, 6 H), 3.01 - 3.15 (m, 2 H), 2.90 - 2.99 (m, 2 H), 2.68 - 2.84 (m, 2 H), 2.40 (m, 1 H), 1.00 (d, J=6.60 Hz, 6 H).

【0435】

１５ｆ：Ｎ－［１－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］－２－オキソ－ピリミジン－４－イル］ベンズアミド
１５ｅにて記載した通りに、出発化合物１４ｆ（３．３５ｇ、３．８８ｍｍｏｌ）をＮＥｔ_３・３ＨＦで処理した。７０℃で反応時間２０時間後、完全に転化した。１５ｅと同様に後処理し、最後に精製して、表題化合物１５ｆ（２．５７ｇ、９３．７％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,79
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 705,4
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.28 (br s, 1 H), 8.10 (br d, J=7.58 Hz, 1 H), 8.00 (d, J=7.69 Hz, 2 H), 7.58 - 7.67 (m, 1 H), 7.51 (t, J=7.64 Hz, 2 H), 7.21 - 7.43 (m, 10 H), 6.89 (d, J=8.80 Hz, 4 H), 5.93 (dd, J=9.41, 2.69 Hz, 1 H), 4.66 (t, J=5.26 Hz, 1 H), 3.91 (dd, J=10.94, 4.22 Hz, 1 H), 3.71 - 3.77 (m, 7 H), 3.19 (d, J=9.05 Hz, 1 H), 2.92 - 3.06 (m, 2 H), 2.65 - 2.79 (m, 2 H), 2.18 (d, J=11.49 Hz, 1 H), 2.07 (t, J=10.21 Hz, 1 H), 0.95 (d, J=6.36 Hz, 6 H).

【0436】

１６ａ：３－［［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－イソプロピル－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－２－イル］メトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル
１５ａ（６２４ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン４０１．０ｍｇ（５１３μｌ、３．０ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（１５ｍｌ）中溶液に、２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルクロロホスホロアミダイト３７０．９ｍｇ（３４９．６μｌ、１．５ｍｍｏｌ）をＡｒ雰囲気下室温で加えた。１時間撹拌した後、反応物をｎ－ブタノール２００μｌを加えることによりクエンチし、撹拌を１０分間続けた。反応溶液をＨ_２Ｏで洗浄し、水性相をＤＣＭで１回抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中０．５％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中１０から１００％メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル）により精製して、所望のホスホロアミダイト（ジアステレオマーの混合物）１６ａ（６６８ｍｇ、８０．８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｂ－２：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 0,82
イオン化方法： ES⁺: [M]⁺ = 733,1 (M-ⁱPr₂N+OH+H⁺)
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.37,11.36 (2 x s, 1 H), 7.60, 7.56 (2 x s, 1 H), 7.41 (m, 2 H), 7.20 - 7.32 (m, 7 H), 6.83 - 6.90 (m, 4 H), 5.88 (m, 1 H), 3.84 - 4.05 (m, 2 H), 3.74 (s, 6 H), 3.54 - 3.73 (m, 2 H), 3.40 - 3.54 (m, 2 H), 3.14 (m, 1 H), 2.95 - 3.05 (m, 1 H), 2.57 - 2.84 (m, 5 H), 2.15 - 2.37 (m, 2 H), 1.76, 1.73 (2 x s, 3 H), 0.93 - 1.14 (m, 18 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,1, 147,6.

【0437】

１６ｂ：３－［［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（２，４－ジオキソピリミジン－１－イル）－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］メトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル
１６ａにて記載したプロトコールに従って、表題化合物を製造した。第一級アルコール１５ｂ（１．９５ｇ、３．２ｍｍｏｌ）を出発物とし、シリカゲル（ｎ－ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中０から８０％ＥｔＯＡｃ）上で精製した後、所望のホスホロアミダイト１６ｂ（１．７０ｇ、６５．７％）を無色泡状物として単離した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,85
イオン化方法： ES⁺: [M]⁺ = 719,2 (M-ⁱPr₂N+OH+H⁺)
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (br s, 1 H), 7.67, 7.63 (2 x d, J=8.19 Hz, 1 H), 7.35 - 7.44 (m, 2 H), 7.20 - 7.32 (m, 7 H), 6.84 - 6.89 (m, 4 H), 5.81 - 5.89 (m, 1 H), 5.67, 5.63 (2 x d, J=8.13 Hz, 1 H), 3.89 - 4.08 (m, 2 H), 3.73 (s, 6 H), 3.54 - 3.72 (m, 2 H), 3.41 - 3.54 (m, 2 H), 3.16 (d, J=9.05 Hz, 1 H), 2.96 (t, J=9.05 Hz, 1 H), 2.84 (br d, J=10.15 Hz, 1 H), 2.55 - 2.76 (m, 4 H), 2.10 - 2.33 (m, 2 H), 0.89 - 1.12 (m, 18 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,3, 147,6.

【0438】

１６ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
アルコール１５ｃ（１００ｍｇ、１４１μｍｏｌ）、モレキュラーシーブ（４Å）０．２ｇおよびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド１２．７ｍｇ（７０μｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（２．５ｍｌ）に溶解した。Ａｒ雰囲気下、２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトライソプロピルホスホロジアミダイト４２．８ｍｇ（４５μｌ、１３８μｍｏｌ）を加え、溶液を室温で２時間撹拌して、完全に転化させた。飽和ＮａＨＣＯ_３溶液を加えた後、有機相を分離し、水性相をＤＣＭで抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をシリカ（ＤＣＭ＋０．５％ＮＥｔ_３で予め調整した、ＤＣＭ中０から１０％ＭｅＯＨ）上で精製して、表題化合物１６ｃ（８７ｍｇ、６７．９％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,50, 2,52
イオン化方法： ES⁺: [M-ⁱPr₂N+OH+H]⁺= 828,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.08 (br s, 1 H), 11.62 (br s, 1 H), 8.09, 8.04 (2 x s, 1 H), 7.33 - 7.40 (m, 2 H), 7.18 - 7.29 (m, 7 H), 6.81 - 6.87 (m, 4 H), 5.91 (m, 1 H), 3.93 - 4.07 (m, 2 H), 3.73 (s, 6 H), 3.54 - 3.72 (m, 2 H), 3.39 - 3.50 (m, 2 H), 3.11 (m, 1 H), 2.92 - 3.07 (m, 2 H), 2.54 - 2.81 (m, 6 H), 2.26 - 2.38 (m, 1 H), 0.94 - 1.16 (m, 18 H), 0.83 - 0.91 (m, 6 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,5, 146,7.

【0439】

１６ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
１５ｅ（８２０ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド５８４ｍｇ（３．３８ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（２０ｍｌ）に溶解した。Ａｒ雰囲気下、２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトライソプロピルホスホロジアミダイト５２４ｍｇ（１．６９ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温で撹拌した。終夜撹拌した後、Ｈ_２Ｏ（５０ｍｌ）を加え、層を分離した。水性層をＤＣＭ（３０ｍｌ）で１回抽出し、合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中０から１００％ＭＴＢ－エーテル／ＤＣＭ（１：１））により精製して、表題化合物１６ｅ（９１３ｍｇ、８７．３％）を無色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.19 (s, 1 H), 8.76, 8.74 (2 x s, 1 H), 8.61, 8.59 (2 x s, 1 H), 8.04 (d, J=8.09 Hz, 2 H), 7.64 (t, J=7.37 Hz, 1 H), 7.51 - 7.60 (m, 2 H), 7.37 (m, 2 H), 7.16 - 7.28 (m, 7 H), 6.77 - 6.84 (m, 4 H), 6.19 (m, 1 H), 3.98 - 4.15 (m, 2 H), 3.71 (2 x s, 6 H), 3.56 - 3.69 (m, 2 H), 3.41 - 3.56 (m, 2 H), 3.03 - 3.17 (m, 2 H), 2.89 - 3.01 (m, 2 H), 2.74 - 2.88 (m, 2 H), 2.70 (t, J=6.15 Hz, 1 H), 2.59 (m, 1 H), 2.36 (m, 1 H), 0.92 - 1.18 (m, 18 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,0, 146,7.

【0440】

１６ｆ：Ｎ－［１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］－２－オキソ－ピリミジン－４－イル］ベンズアミド
１６ｅにて記載したプロトコールに従って、第一級アルコール１５ｆ（５５０ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）をホスフィチル化した。シリカゲル（ｎ－ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中０から１００％ＭＴＢ－エーテル／ＤＣＭ（１：１））上でクロマトグラフィー精製した後、１６ｆ（５６０ｍｇ、７９．３％）を無色泡状物として単離した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.29 (br s, 1 H), 8.12 (2 x d, J=7.50 Hz, 1 H), 7.98 - 8.04 (m, 2 H), 7.63 (t, J=7.40 Hz, 1 H), 7.48 - 7.55 (m, 2 H), 7.36 - 7.45 (m, 3 H), 7.21 - 7.35 (m, 7 H), 6.88 (2 x d, J=8.89, 4 H), 5.95, 6.01 (2 x m, 1 H), 3.89 - 4.14 (m, 2 H), 3.74, 3.75 (2 x s, 6 H), 3.55 - 3.72 (m, 2 H), 3.39 - 3.55 (m, 2 H), 3.24 (d, J=8.85 Hz, 1 H), 2.93 - 3.05 (m, 2 H), 2.68 - 2.87 (m, 3 H), 2.55 - 2.64 (m, 1 H), 2.10 - 2.23 (m, 2 H), 0.90 - 1.22 (m, 18 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,4, 146,7.

【0441】

【化43】

【0442】

１７ａ：［（２Ｓ，６Ｒ）－４－イソプロピル－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
遊離アルコール７ａ（８１０ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍｌ）に溶解した。ＤＩＰＥＡ（１．１４ｇ、１．４５ｍｌ、８．６ｍｍｏｌ）および塩化ベンゾイル２９４ｍｇ（２４３μｌ、２．１ｍｍｏｌ）を加えた後、溶液を室温で２時間撹拌した。完全に転化させるため、更に０．２当量の塩化ベンゾイルを加え、撹拌を１８時間続けた。反応溶液を、ｎ－ヘプタン中０から６５％ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルカラムに直接移した。ベンゾイル化生成物１７ａ（７２６ｍｇ、７３．３％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．２９
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５７４．３

【0443】

１７ｂ：［（２Ｓ，６Ｒ）－６－（３－ベンゾイル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－４－イソプロピル－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
１７ａに記載した通りに、第一級アルコール７ｂ（１．４５ｇ、３．１８ｍｍｏｌ）を塩化ベンゾイルで処理して、モノおよびジベンジル化生成物の混合物を得た。それゆえ、反応混合物を蒸発させ、粗生成物をピリジン３０ｍｌに溶解した。塩化ベンゾイル５６５ｍｇ（３．９８ｍｍｏｌ）および触媒量のＤＭＡＰを加えた後、反応溶液を室温で４時間撹拌した。溶媒を蒸発させた後、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、１０％クエン酸溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、溶媒を除去した。シリカ（ｎ－ヘプタン中０から３５％ＥｔＯＡｃ）上で最後にクロマトグラフィーを行って、ジベンゾイル化生成物１７ｂ（１．６４ｇ、７７．８％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝３．６７
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝６６４．４

【0444】

１７ｃ：［（２Ｓ，６Ｒ）－４－イソプロピル－６－［２－（２－メチルプロパノイルアミノ）－６－オキソ－１Ｈ－プリン－９－イル］－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
出発化合物７ｃ（０．８９ｇ、１．５８ｍｍｏｌ）をピリジン３０ｍｌに溶解した。塩化ベンゾイル２４６ｍｇ（２０３μｌ、１．７３ｍｍｏｌ）を加えた後、反応溶液を室温で終夜撹拌し、この時点で完全に転化していることが検出された。溶媒を真空で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。Ｈ_２Ｏで洗浄した後、有機相を分離し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。シリカ（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）上で最後に精製して、表題化合物１７ｃを無色泡状物として得た（１．０１ｇ、９５．４％）。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝３．２８
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝６６９．２

【0445】

１８ａ：［（２Ｒ，６Ｒ）－２－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
１７ａ（７２０ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍｌ）中溶液を、ピリジン－フッ化水素１．３４ｇ（１．２２ｍｌ、８．８ｍｍｏｌ）で処理した。室温で１時間撹拌した後、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で処理して、ｐＨを７．５にした。溶媒を減圧下で濃縮し、水溶液をＤＣＭで２回抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、溶媒を除去した。粗生成物をトルエン５０ｍｌで２回共蒸留し、残った残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望の生成物１８ａ（５０２ｍｇ、９５．８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝１．３０
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝４１８．２

【0446】

１８ｂ：［（２Ｒ，６Ｒ）－６－（３－ベンゾイル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
１８ａにて記載したプルトコルに従い、シリルエーテル１７ｂ（１．６４ｇ、２．４７ｍｍｏｌ）を脱シリル化して、所望の生成物１８ｂ（１．３３ｇ）を粗生成物として得、これをクロマトグラフィー精製せずに次のステップに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝１．８１
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５０８．２

【0447】

１８ｃ：［（２Ｒ，６Ｒ）－２－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－６－［２－（２－メチルプロパノイルアミノ）－６－オキソ－１Ｈ－プリン－９－イル］モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
１７ｃ（１．０ｇ、１．４９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍｌ）に溶解した。ＮＥｔ_３（１．５３ｇ、２．１０ｍｌ、１５．０ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ_３・３ＨＦ（１．４８ｇ、１．４９ｍｌ、９．０ｍｍｏｌ）を加えた後、反応溶液を９０℃で２時間撹拌した。混合物を室温に冷却した後、ＮａＨＣＯ_３（２．５ｇ）およびＨ_２Ｏ（１０ｍｌ）を加え、反応混合物を２時間撹拌した。溶媒を真空で蒸発させ、残留物をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ（２５ｍｌ）に溶解し、Ｈ_２Ｏで洗浄した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をシリカ（ＤＣＭ中０から１０％ＭｅＯＨ）上で精製して、脱シリル化生成物１８ｃ（２４５ｍｇ、３２．０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝１．４５
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５１３．１

【0448】

１８ｅ：［（２Ｒ，６Ｒ）－６－（６－ベンズアミドプリン－９－イル）－２－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］－メチルベンゾエート
１８ａにて記載したプルトコルに従って、シリルエーテル１３（１．２３ｇ、１．７９ｍｍｏｌ）を脱保護し、シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）後に、表題化合物１８ｅ（９３９ｍｇ、９８．８％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝１．６０
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ］^－＝５２９．３

【0449】

１８ｆ：［（２Ｒ，６Ｒ）－６－（４－ベンズアミド－２－オキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
１８ａにて記載したプルトコルに従って、シリルエーテル１０（３．６３ｇ、５．４８ｍｍｏｌ）を脱保護し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中５％ＭｅＯＨ）後に、表題化合物１８ｆ（２．４５ｇ、８８．４％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝１．５３
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５０７．３

【0450】

１９ａ：［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－イソプロピル－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
出発化合物１８ａ（４９７ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１５ｍｌ）に溶解した。ＤＩＰＥＡ（５０２ｍｇ、６４３μｌ、３．８ｍｍｏｌ）およびＤＭＴ－Ｃｌ（６５９ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ）を加えた後、反応溶液を室温で２時間撹拌した。反応混合物を真空で蒸発させ、粗生成物をシリカゲル（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製した。ＤＭＴ保護生成物１９ａを無色泡状物として単離した（７７９ｍｇ、９０．９％）。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．１４
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝７２０．４

【0451】

１９ｂ：［（２Ｒ，６Ｒ）－６－（３－ベンゾイル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
第一級アルコール１８ｂ（１．３０ｇ、２．４１ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ_３（４９２ｍｇ、６７６μｌ、４．８２ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍｌ）に溶解した。ＤＭＴ－Ｃｌ（９２５ｍｇ、２．６５ｍｍｏｌ）を加えた後、反応物を室温で６時間撹拌し、続いて更にＤＭＴ－Ｃｌ（９２５ｍｇ、２．６５ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を７２時間撹拌した。ｎ－プロパノール２．０ｍｌを加えた後、溶液を１０分間撹拌した。混合物をＨ_２Ｏで洗浄し、有機層を分離した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶媒を真空で除去した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中０から２５％ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望のＤＭＴ－エーテル１９ｂ（１．７４ｇ、８９．２％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝３．２５
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝８１０．３

【0452】

１９ｃ：［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－イソプロピル－６－［２－（２－メチルプロパノイルアミノ）－６－オキソ－１Ｈ－プリン－９－イル］モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
出発アルコール１８ｃ（２４０ｍｇ、４６８μｍｏｌ）をＤＣＭ（５．０ｍｌ）に溶解した。ＮＥｔ_３（９５．７ｍｇ、１３１．５μｌ、９３６μｍｏｌ）およびＤＭＴ－Ｃｌ（１８０ｍｇ、５１５μｍｏｌ）を加えた後、反応物を室温で３日間撹拌して、完全に転化させた。ｎ－プロパノール２．０ｍｌを加えた後、溶液を１０分間撹拌した。混合物をＨ_２Ｏで洗浄し、有機層を分離した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶媒を真空で除去した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中０から２５％ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望のＤＭＴ－エーテル１９ｃ（３０３ｍｇ、７９．４％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．９３
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ］^－＝８１３．２

【0453】

１９ｅ：［（２Ｒ，６Ｒ）－６－（６－ベンズアミドプリン－９－イル）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
出発物質１８ｅ（９３４ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ）をＤＭＣ／ピリジン（１：１）２０ｍｌに溶解した。ＤＭＴ－Ｃｌ（９７４ｍｇ、２．８２ｍｍｏｌ）を加えた後、反応溶液を室温で１７時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、Ｈ_２Ｏ、２×１０％クエン酸溶液、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。得られた粗生成物（１．７７ｇ）をＥｔＯＡｃ／ジエチルエーテル（１：２）２０ｍｌに溶解した。ｎ－ペンタン４０ｍｌを加えた後、沈殿物を遠心分離し、上澄み液を廃棄した。沈殿手順を更に２回繰り返して、所望のＤＭＴ－エーテル１９ｅを無色固体として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝３．０７
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ］^－＝８３１．５

【0454】

１９ｆ：［（２Ｒ，６Ｒ）－６－（４－ベンズアミド－２－オキソ－ピリミジン－１－イル）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
１８ｆ（２．４５ｇ、４．８４ｍｍｏｌ）をピリジン４０ｍｌに溶解した。ＤＭＴ－Ｃｌ（２．５１ｇ、７．２６ｍｍｏｌ）を加えた後、反応混合物を室温で４日間撹拌した。溶媒を真空で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、Ｈ_２Ｏ、２×１０％クエン酸溶液、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲル（ｎ－ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、表題化合物１９ｆ（３．６９ｇ、９４．３％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．１４
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ］^－＝８０７．４

【0455】

２０ａ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
ベンゾイルエステル１９ａ（７７５ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ－メタノール（４：１）２０ｍｌに溶解した。室温で、２Ｎ ＮａＯＨ水溶液４．３１ｍｌ（８．６ｍｍｏｌ）を加え、反応物を９０分間撹拌した。クエン酸一水和物を加えることにより、ｐＨを７と８との間で調節し、次いで溶媒を減圧下で除去した。残留物をＤＣＭおよびＨ_２Ｏに溶解した。有機層を分離し、水性相をＤＣＭで抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中５から１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望の生成物２０ａ（６６３ｍｇ、定量的）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,73
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 616,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.29 (s, 1 H), 7.60 (d, J=1.10 Hz, 1 H), 7.39 (d, J=6.93 Hz, 2 H), 7.19 - 7.33 (m, 7 H), 6.88 (d, J=8.68 Hz, 4 H), 5.60 (dd, J=9.96, 2.87 Hz, 1 H), 4.64 (t, J=5.93 Hz, 1 H), 3.74 (m, 6 H), 3.53 - 3.60 (m, 1 H), 3.44 - 3.52 (m, 1 H), 3.32 - 3.37 (m, 1 H), 3.09 (d, J=8.56 Hz, 1 H), 2.76 (br d, J=11.62 Hz, 1 H), 2.61 - 2.72 (m, 2 H), 2.37 (d, J=11.49 Hz, 1 H), 2.10 (t, J=10.45 Hz, 1 H), 1.78 (s, 3 H), 0.84 - 0.96 (m, 6 H).

【0456】

２０ｂ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
出発化合物１９ｂ（１．４０ｇ、１．７３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（８０ｍｌ）に溶解した。室温で、ＮａＯＭｅのＭｅＯＨ中０．５Ｍ溶液１３．８３ｍｌ（６．９１ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を２時間撹拌して、完全に転化させた。クエン酸０．９２ｇを加えた後、溶媒を除去した。残留物をＨ_２Ｏに溶解し、水性混合物をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ（４：１）で３回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させて、所望の化合物２０ｂ（０．８５ｇ、８１．２％、粗製物）を得、これを更には精製せずに引き続くステップに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,04
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 602,2
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.31 (s, 1 H), 7.75 (d, J=8.07 Hz, 1 H), 7.39 (d, J=7.34 Hz, 2 H), 7.10 - 7.33 (m, 8 H), 6.88 (d, J=8.31 Hz, 4 H), 5.55 - 5.64 (m, 2 H), 4.66 (t, J=5.93 Hz, 1 H), 3.74 (s, 6 H), 3.57 (dd, J=11.31, 6.79 Hz, 1 H), 3.46 (br dd, J=11.25, 5.14 Hz, 1 H), 3.08 (d, J=8.56 Hz, 1 H), 2.54 - 2.79 (m, 3 H), 2.32 - 2.39 (m, 1 H), 1.95 - 2.13 (m, 1 H), 0.86 - 0.98 (m, 6 H).

【0457】

２０ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
出発物質１９ｃ（２６０ｍｇ、３１９μｍｏｌ）をＥｔＯＨ（１０ｍｌ）に溶解した。１Ｍ ＮａＯＨ溶液１．０ｍｌ（１．０ｍｍｏｌ）を加えた後、溶液を室温で４時間撹拌して、完全に転化させた。溶液を１Ｍ ＨＣｌで中和し、溶媒を真空で除去した。残留物をＨ_２Ｏに溶解し、ＤＣＭで抽出した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。シリカ（ＤＣＭ中０から１０％ＭｅＯＨ）上で最後に精製して、所望のアルコール２０ｃ（１１４ｍｇ、５０．３％）を黄色固体として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,36
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 709,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.08 (s, 1 H), 11.52 (s, 1 H), 8.20 (s, 1 H), 7.35 - 7.43 (m, 2 H), 7.20 - 7.33 (m, 7 H), 6.83 - 6.92 (m, 4 H), 5.56 (dd, J=9.60, 2.75 Hz, 1 H), 4.59 - 4.66 (m, 1 H), 3.73 (2 x s, 6 H), 3.51 - 3.62 (m, 2 H), 3.43 - 3.50 (m, 1 H), 2.88 - 3.02 (m, 3 H), 2.70 - 2.82 (m, 2 H), 2.30 - 2.39 (m, 1 H), 1.11 (m, 6 H), 1.01 (d, J=6.48 Hz, 3 H), 0.97 (d, J=6.48 Hz, 3 H).

【0458】

２０ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
出発化合物１９ｅ（１．２７ｇ、１．５２ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ／ピリジン（１：１）１４ｍｌに溶解した。０℃で、１Ｍ ＮａＯＨ溶液７．５９ｍｌ（１５．１９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。クエン酸一水和物（９５８ｍｇ）を加えることによりｐＨを７に調節した後、Ｈ_２Ｏ（７０ｍｌ）およびＥｔＯＡｃを加えた。有機層を分離し、１０％クエン酸溶液（３×）、Ｈ_２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、有機相を蒸発させて、粗生成物１．０８ｇを無色泡状物として得、これをＥｔＯＡｃ／ジエチルエーテル（１：１）２０ｍｌに溶解した。ｎ－ペンタン４０ｍｌを加えた後、沈殿物を遠心分離し、上澄み液を廃棄した。沈殿手順を更に２回繰り返して、表題化合物２０ｅ（９６４ｍｇ、８７．１％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,42
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 727,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.18 (s, 1 H), 8.71 (s, 1 H), 8.69 (s, 1 H), 8.05 (d, J=7.34 Hz, 2 H), 7.61 - 7.68 (m, 1 H), 7.56 (t, J=7.58 Hz, 2 H), 7.45 (d, J=7.46 Hz, 2 H), 7.28 - 7.36 (m, 6 H), 7.20 - 7.28 (m, 1 H), 6.90 (dd, J=8.99, 2.26 Hz, 4 H), 5.89 (dd, J=9.84, 2.63 Hz, 1 H), 4.69 (t, J=5.99 Hz, 1 H), 3.75 (s, 6 H), 3.45 - 3.61 (m, 3 H), 3.24 - 3.30 (m, 1 H), 3.00 (br d, J=10.15 Hz, 1 H), 2.85 (br d, J=11.62 Hz, 1 H), 2.60 - 2.78 (m, 2 H), 2.45 - 2.55 (m, 1 H), 0.98 (br d, J=6.48 Hz, 3 H), 0.95 (br d, J=6.48 Hz, 3 H).

【0459】

２０ｆ：Ｎ－［１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］－２－オキソ－ピリミジン－４－イル］ベンズアミド
２０ｅにて記載した手順に従って、１９ｆ（３．６８ｇ、４．５５ｍｍｏｌ）を鹸化した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中２０から１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、２０ｆ（１．７２ｇ、５３．５％）を薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,81
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 703,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.24 (s, 1 H), 8.29 (d, J=7.46 Hz, 1 H), 8.01 (d, J=7.46 Hz, 2 H), 7.62 (t, J=7.40 Hz, 1 H), 7.51 (t, J=7.70 Hz, 2 H), 7.20 - 7.41 (m, 10 H), 6.88 (dd, J=8.99, 2.38 Hz, 4 H), 5.68 (dd, J=9.35, 2.38 Hz, 1 H), 4.71 (t, J=6.11 Hz, 1 H), 3.74 (s, 6 H), 3.58 - 3.69 (m, 1 H), 3.48 - 3.58 (m, 1 H), 3.35 - 3.43 (m, 1 H), 3.11 (d, J=8.56 Hz, 1 H), 2.79 - 2.95 (m, 2 H), 2.66 - 2.76 (m, 1 H), 2.39 - 2.47 (m, 1 H), 1.91 - 2.00 (m, 1 H), 0.96 (d, J=6.54 Hz, 3 H), 0.94 (d, J=6.54 Hz, 3 H).

【0460】

２１ａ：３－［［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－イソプロピル－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－２－イル］メトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］－オキシプロパンニトリル
１６ａ（スキーム５）のためのプロトコールに従って、出発物質２０ａ（７６４ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を所望のホスホロアミダイト２１ａに変換した。８４２ｍｇ（８３．２％、ジアステレオマーの混合物）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.34, 11.32 (2 x s, 1 H), 7.59, 7.54 (2 x d, J=1.10 Hz, 1 H), 7.36 - 7.43 (m, 2 H), 7.20 - 7.34 (m, 7 H), 6.89 (m, 4 H), 5.59 - 5.75 (m, 1 H), 3.44 - 3.95 (m, 6 H), 3.74 (s, 6 H), 3.36 (m, 1 H), 3.22 (m, 1 H), 2.60 - 2.85 (m, 5 H), 2.36 (m, 1 H), 2.18 (m, 1 H), 1.78 (2 x d, J=8.69 Hz, 3 H), 0.83 - 1.17 (m, 18 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,6, 148,3.

【0461】

２１ｂ：３－［［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（２，４－ジオキソピリミジン－１－イル）－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］メトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル
１６ｂ（スキーム５）のためのプロトコールに従って、対応するアルコール２０ｂ（１．３６ｇ、２．２６ｍｍｏｌ）を出発物として、表題化合物２１ｂを合成した。表題化合物１．０９ｇ（６０．１％）を無色泡状物として単離した。
ＬＣＭＳ－方法Ｂ－１：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 0,80
イオン化方法： ES⁺: [M-NⁱPr₂+OH+H]⁺= 718,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.32 (br s, 1 H), 7.71, 7.66 (2 x s, J= 8.13 Hz, 1 H), 7.35 - 7.42 (m, 2 H), 7.20 - 7.33 (m, 7 H), 6.83 - 6.92 (m, 4 H), 5.60 - 5.70 (m, 2 H), 3.73 (s, 6 H), 3.43 - 3.95 (m, 6 H), 3.29 - 3.39 (m, 1 H), 3.22 (m, 1 H), 2.59 - 2.83 (m, 5 H), 2.33 (m, 1 H), 2.13 (m, 1 H), 0.84 - 1.21 (m, 18 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,5, 148,3.

【0462】

２１ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
１６ｃの合成（スキーム５）にて記載したプロトコールに従って、出発化合物２０ｃ（４０ｍｇ、５６μｍｏｌ）から、シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中０から１００％メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル、ｎ－ヘプタン＋１％ＮＥｔ_３で予め調整したカラム）後に、所望のホスホロアミダイト２１ｃ（２３ｍｇ、４４．９％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,57
イオン化方法： ES⁺: [M-NⁱPr₂+OH+H]⁺= 828,2
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.70 - 12.30 (b s, 1 H), 11.53 (b s, 1 H), 8.05 (s, 1 H), 7.35 - 7.45 (m, 2 H), 7.20 - 7.33 (m, 7 H), 6.82 - 6.91 (m, 4 H), 5.54 - 5.68 (m, 1 H), 3.80 - 3.93 (m, 0.5 H), 3.73, 3.72 (2 x s, 6 H), 3.68 - 3.76 (m, 1.5 H), 3.60 - 3.67 (m, 2 H), 3.35 - 3.60 (m, 4 H), 3.12 (m, 1 H), 2.57 - 2.98 (m, 7 H), 0.92 - 1.13 (m, 24 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147.6, 147.4.

【0463】

２１ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
２０ｅ（９５０ｍｇ、１．３０ｍｍｏｌ）を出発物とし、１６ｅ（スキーム５）にて記載したプルトコルに従って、表題化合物を製造して、２１ｅ（１．１０ｇ、９１．０％）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.19 (br s, 1 H), 8.73, 8.71 (2 x s, 1 H), 8.63, 8.59 (2 x s, 1 H), 8.04 (d, J=7.65 Hz, 2 H), 7.64 (t, J=7.34 Hz, 1 H), 7.55 (t, J=7.43 Hz, 2 H), 7.44 (d, J=7.78 Hz, 2 H), 7.21 - 7.35 (m, 7 H), 6.86 - 6.93 (m, 4 H), 5.89 - 5.99 (m, 1 H), 3.80 - 4.15 (m, 1 H), 3.74 (s, 6 H), 3.63 - 3.72 (m, 2 H), 3.31 - 3.60 (m, 5 H), 3.01 (br d, J=10.79 Hz, 1 H), 2.66 - 2.90 (m, 4 H), 2.59 - 2.64 (m, 1 H), 2.42 - 2.47 (m, 1 H), 0.91 - 1.12 (m, 18 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,6, 147,5.

【0464】

２１ｆ：Ｎ－［１－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－４－イソプロピル－モルホリン－２－イル］－２－オキソ－ピリミジン－４－イル］ベンズアミド
２０ｆ（６２０ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）を出発物とし、１６ｅ（スキーム５）にて記載したプルトコルに従って、表題化合物を製造して、２１ｆ（６８１ｍｇ、８５．５％）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.28 (br s, 1 H), 8.12 - 8.23 (2 x d, J= 7.47 Hz, 1 H), 8.01 (d, J=7.65 Hz, 2 H), 7.58 - 7.67 (m, 1 H), 7.51 (t, J=7.58 Hz, 2 H), 7.35 - 7.42 (m, 3 H), 7.20 - 7.35 (m, 7 H), 6.83 - 6.93 (m, 4 H), 5.71 - 5.80 (2 x dd, J=9.49, 2.54 Hz, 1 H), 3.44 - 4.00 (m, 6 H), 3.74 (s, 6 H), 3.38 (m, 1 H), 3.24 - 3.33 (m, 1 H), 2.60 - 2.94 (m, 5 H), 2.33 - 2.48 (m, 1 H), 2.01 - 2.09 (m, 1 H), 1.02 - 1.23 (m, 12 H), 0.83 - 1.00 (m, 6 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,5, 147,4.

【0465】

【化44】

【0466】

２２ａ：１－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－５－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－３，４－ジヒドロキシ－５－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
出発化合物４ａ（２３．７ｇ、５３．４ｍｍｏｌ）の無水ピリジン２４０ｍｌ中溶液に、Ｎ_２雰囲気下室温でＤＭＴ－Ｃｌ（２３．１３ｇ、８０ｍｍｏｌ）を加えた。１２時間撹拌した後、溶媒を真空で除去し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１０：１から１：１）により精製して、所望のＤＭＴ保護生成物２２ａ（１６．３ｇ、４１％）を無色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.34 (s, 1 H), 7.50 (d, J=0.75 Hz, 1 H), 7.42-7.37 (m, 2 H), 7.32 (t, J=7.53 Hz, 2 H), 7.29-7.22 (m, 6 H), 6.90 (dd, J=8.91, 2.13 Hz, 4 H), 5.89 (d, J=7.28 Hz, 1 H), 5.45 (d, J=6.53 Hz, 1 H), 5.15 (d, J=5.02 Hz, 1 H), 4.48-4.39 (m, 1 H), 4.31 (t, J=5.14 Hz, 1 H), 3.86-3.80 (m, 1 H), 3.74 (s, 6 H), 1.28 (s, 3 H), 0.98-0.83 (m, 22 H).

【0467】

２２ｂ：１－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－５－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－３，４－ジヒドロキシ－５－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
化合物４ｂ（７５ｇ、１７４ｍｍｏｌ）の無水ピリジン７５０ｍｌ中溶液に、Ｎ_２雰囲気下室温でＤＭＴ－Ｃｌ（７０．８ｇ、２０９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１２時間撹拌して、完全に転化させた。溶媒を真空で除去し、残留物を水５００ｍｌで希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×５００ｍｌ）で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１：１からＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ２０：１）により精製して、２２ｂ（８０ｇ、６２．６％）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.35 (s, 1 H), 7.61 (d, J=8.28 Hz, 1 H), 7.42-7.36 (m, 2 H), 7.32 (t, J=7.65 Hz, 2 H), 7.28-7.19 (m, 5 H), 6.90 (d, J=8.03 Hz, 4 H), 5.83 (d, J=6.53 Hz, 1 H), 5.48 (d, J=6.02 Hz, 1 H), 5.27 (d, J=8.03 Hz, 1 H), 5.21 (d, J=5.27 Hz, 1 H), 4.33-4.26 (m, 1 H), 4.22 (q, J=6.02 Hz, 1 H), 3.89-3.79 (m, 2 H), 3.74 (s, 6 H), 3.24 (d, J=10.04 Hz, 1 H), 1.01-0.84 (m, 21 H).

【0468】

２２ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－５－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－３，４－ジヒドロキシ－５－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
２２ｂにて記載したプロトコールに従って、４ｃ（５５．８ｇ、１０３ｍｍｏｌ）をピリジン中ＤＭＴ－Ｃｌで保護して、２２ｃ（５０．０ｇ、５７．４％）を無色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.12 (br s, 1 H), 11.67 (br s, 1 H), 7.99-7.83 (m, 1 H), 7.38 (br d, J=7.28 Hz, 2 H), 7.32-7.13 (m, 8 H), 6.84 (dd, J=8.78, 2.26 Hz, 4 H), 5.86 (d, J=7.03 Hz, 1 H), 5.70-5.45 (m, 1 H), 5.18 (br s, 1 H), 4.73-4.62 (m, 1 H), 4.25 (br d, J=4.77 Hz, 1 H), 3.97 (br d, J=10.29 Hz, 1 H), 3.84 (br d, J=10.29 Hz, 1 H), 3.73 (s, 6 H), 3.20 (br d, J=10.04 Hz, 1 H), 2.76 (dt, J=13.61, 6.87 Hz, 1 H), 1.12 (d, J=6.78 Hz, 6 H), 1.01-0.87 (m, 21 H).

【0469】

２２ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－５－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－３，４－ジヒドロキシ－５－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
２２ｂにて記載したプロトコールに従って、４ｅ（５７．０ｇ、１０２ｍｍｏｌ）をピリジン中ＤＭＴ－Ｃｌで保護して、２２ｅを無色固体として得た（７０．０％）。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.22 (s, 1 H), 8.68-8.58 (m, 1 H), 8.49 (s, 1 H), 8.05 (d, J=7.28 Hz, 2 H), 7.70-7.60 (m, 1 H), 7.59-7.50 (m, 2 H), 7.43 (d, J=7.28 Hz, 2 H), 7.33-7.17 (m, 7 H), 6.86 (dd, J=8.91, 1.38 Hz, 4 H), 6.00 (d, J=7.28 Hz, 1 H), 5.53 (d, J=6.78 Hz, 1 H), 5.32 (d, J=4.89 Hz, 1 H), 5.00-4.87 (m, 1 H), 4.34 (t, J=4.89 Hz, 1 H), 4.08-4.04 (m, 1 H), 3.98 (d, J=10.79 Hz, 1 H), 3.73 (s, 6 H), 3.40 (d, J=9.54 Hz, 1 H), 3.30 (br d, J=9.54 Hz, 1 H), 1.12-0.93 (m, 21 H).

【0470】

２３ａ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－３，５－ジヒドロキシ－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
出発物質２２ａ（１２．６ｇ、１６．９ｍｍｏｌ）のアセトン／Ｈ_２Ｏ（３：１）２５０ｍｌ中溶液に、室温でＮａＩＯ_４（５．０５ｇ、２３．６ｍｍｏｌ）のＨ_２Ｏ（６０ｍｌ）中水溶液を滴下添加した。混合物を１２時間撹拌して完全に転化させ、氷水５００ｍｌ中に注ぎ入れた。混合物をＤＣＭ（５００ｍｌ）で３回抽出した。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、所望の生成物２３ａ（１１．２０ｇ、８７％）を白色泡状物として得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.62-11.33 (m, 1 H), 7.80-7.65 (m, 1 H), 7.57-7.38 (m, 3 H), 7.33-7.13 (m, 9 H), 6.88-6.73 (m, 5 H), 6.08-5.86 (m, 1 H), 5.71-5.51 (m, 1 H), 5.24-5.06 (m, 1 H), 5.01-4.94 (m, 1 H), 4.29-4.16 (m, 1 H), 3.75-3.70 (m, 7 H), 3.34-3.24 (m, 1 H), 3.06-2.81 (m, 1 H), 2.02-1.59 (m, 2 H), 1.03 (m, 1 H), 1.09-0.74 (m, 21 H).

【0471】

２３ｂ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－３，５－ジヒドロキシ－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
２３ａにて記載したプロトコールに従って、ジオール２２ｂ（７７．０ｇ、１０５ｍｍｏｌ）から、表題化合物２３ｂ（８０ｇ、定量的、粗生成物）を黄色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.67-11.36 (m, 1 H), 7.87-7.77 (m, 1 H), 7.76-7.67 (m, 1 H), 7.55-7.41 (m, 2 H), 7.39-7.20 (m, 8 H), 6.94-6.81 (m, 4 H), 5.94-5.87 (m, 1 H), 5.78-5.63 (m, 1 H), 5.59-5.51 (m, 1 H), 5.25-5.08 (m, 1 H), 5.07-4.99 (m, 1 H), 4.32-4.20 (m, 1 H), 3.82-3.70 (m, 6 H), 3.34-3.26 (m, 1 H), 3.15-3.04 (m, 1 H), 2.95-2.86 (m, 1 H), 1.14-0.81 (m, 22 H).

【0472】

２３ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－３，５－ジヒドロキシ－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
２３ａにて記載したプロトコールに従って、ジオール２２ｃ（５０．０ｇ、５９ｍｍｏｌ）から、表題化合物２３ｃ（４７ｇ、９６．１％、粗生成物）を黄色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.25-12.06 (m, 1 H), 11.78-11.55 (m, 1 H), 8.19 (d, J=8.78 Hz, 1 H), 7.44 (br d, J=7.28 Hz, 1 H), 7.38 (br d, J=6.53 Hz, 1 H), 7.34-7.14 (m, 10 H), 6.99 (d, J=6.78 Hz, 1 H), 6.90-6.71 (m, 5 H), 6.05-5.98 (m, 1 H), 5.74 (d, J=7.78 Hz, 1 H), 5.61-5.53 (m, 1 H), 5.48 (q, J=6.78 Hz, 1 H), 5.24-5.17 (m, 1 H), 5.06 (d, J=6.53 Hz, 1 H), 4.35-4.22 (m, 1 H), 3.83 (br d, J=11.54 Hz, 1 H), 3.72 (d, J=3.26 Hz, 7 H), 3.27 (br d, J=9.29 Hz, 1 H), 3.29-3.23 (m, 1 H), 3.12-3.04 (m, 1 H), 2.91-2.75 (m, 1 H), 1.22-0.76 (m, 29 H).

【0473】

２３ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－３，５－ジヒドロキシ－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
２３ａにて記載したプロトコールに従って、ジオール２２ｅ（７８．０ｇ、９０．６ｍｍｏｌ）から、表題化合物２３ｅ（７５．２ｇ、９４．６％、粗生成物）を白色固体として得た。
ＭＳ（ｍ／ｚ）＝８７６．２［Ｍ＋Ｈ］^＋

【0474】

２４ａ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
出発化合物２３ａ（２．６ｇ、３．４ｍｍｏｌ）の無水ＭｅＯＨ（４４ｍｌ）中溶液に、Ｎ_２雰囲気下室温で（ＮＨ_４）_２Ｂ_４Ｏ_７・４Ｈ_２Ｏ（０．９８ｇ、３．７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２時間撹拌し、続いてＡｃＯＨ（０．４５ｇ、６．８ｍｍｏｌ）、４Åモレキュラーシーブ５．０ｇおよびＮａＢＨ_３ＣＮ（０．４７ｇ、６．８ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１２時間撹拌した後、ＴＬＣは、出発物質が完全に消費されていることを示した。溶媒を真空で除去し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ４：１から１：１）により精製して、所望のモルホリン２４ａ（１．５９ｇ、６４％）を白色泡状物として得た。
MS (m/z) = 752,5 [M+Na]⁺
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.39 (s, 1 H), 7.62 (s, 1 H), 7.43 (br d, J=7.28 Hz, 2 H), 7.33-7.23 (m, 8 H), 6.84 (d, J=8.78 Hz, 5 H), 5.86 (br dd, J=9.91, 2.64 Hz, 1 H), 5.89-5.81 (m, 1 H), 4.13 (br d, J=9.54 Hz, 1 H), 3.96 (br d, J=9.54 Hz, 1 H), 3.72 (d, J=0.75 Hz, 6 H), 3.06 (br d, J=9.29 Hz, 1 H), 2.97 (br d, J=9.03 Hz, 1 H), 2.93-2.78 (m, 2 H), 2.76-2.57 (m, 3 H), 1.76 (s, 3 H), 0.98-0.87 (m, 22 H).

【0475】

２４ｂ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
化合物２３ｂ（５．０ｇ、６．７ｍｍｏｌ）の無水ＭｅＯＨ（８５ｍｌ）中溶液に、Ｎ_２雰囲気下２５℃で（ＮＨ_４）_２Ｂ_４Ｏ_７・４Ｈ_２Ｏ（１．９３ｇ、７．６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２時間撹拌し、続いてＡｃＯＨ（０．８０ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）、４Åモレキュラーシーブ１０ｇおよびＮａＢＨ_３ＣＮ（０．８４ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）を加えた。１２時間撹拌した後、混合物を濾過し、濾液を真空で濃縮した。残留物を氷水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）で３回抽出した。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮した。粗生成物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１０：１から１：１）により精製して、表題化合物２４ｂを白色泡状物として得た（９４％）。
MS (m/z) = 738,5 [M+H]⁺
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.44 (br s, 1 H), 7.75 (d, J=8.07 Hz, 1 H), 7.45 (br d, J=7.34 Hz, 2 H), 7.37-7.20 (m, 7 H), 6.89 (d, J=8.80 Hz, 4 H), 5.88 (br dd, J=10.03, 2.45 Hz, 1 H), 5.73 (d, J=8.07 Hz, 1 H), 4.17 (br d, J=9.78 Hz, 1 H), 4.11-4.02 (m, 2 H), 3.77 (d, J=0.73 Hz, 6 H), 3.12 (br d, J=9.05 Hz, 1 H), 3.02-2.83 (m, 3 H), 2.70-2.58 (m, 2 H), 1.06-0.90 (m, 21 H).

【0476】

２４ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
２４ｂにて記載したプロトコールに従って、出発物質２３ｃ（７．０ｇ、８．２ｍｍｏｌ）をモルホリン化合物２４ｃに変換し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ５：１から１：１）後に、これを無色泡状物として単離した（７３．２％）。
MS (m/z) = 825,2 [M+H]⁺
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.12 (br s, 1 H), 11.59 (s, 1 H), 8.15 (s, 1 H), 7.40 (br d, J=7.03 Hz, 2 H), 7.30-7.12 (m, 7 H), 6.81 (br d, J=7.78 Hz, 4 H), 5.83 (dd, J=9.66, 3.14 Hz, 1 H), 4.23 (br d, J=9.03 Hz, 1 H), 3.92 (br d, J=9.03 Hz, 1 H), 3.72 (d, J=2.76 Hz, 6 H), 2.97 - 3.18 (m, 3 H), 2.96-2.86 (m, 2 H), 2.80 (dt, J=13.55, 6.78 Hz, 1 H), 2.67 (br d, J=12.05 Hz, 1 H), 1.13 (t, J=6.15 Hz, 6 H), 1.03-0.82 (m, 22 H).

【0477】

２４ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
２４ｂにて記載したプロトコールに従って、出発物質２３ｅ（５．０ｇ、５．７ｍｍｏｌ）をモルホリン化合物２４ｅに変換し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１：４）後に、これを無色泡状物として単離した（７３．４％）。
MS (m/z) = 843,1 [M+H]⁺
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.22 (br s, 1 H), 8.75 (s, 1 H), 8.66 (s, 1 H), 8.05 (d, J=7.34 Hz, 2 H), 7.70-7.62 (m, 1 H), 7.60-7.51 (m, 2 H), 7.38 (br d, J=6.97 Hz, 2 H), 7.26-7.16 (m, 7 H), 6.78 (d, J=8.93 Hz, 4 H), 6.16 (dd, J=10.03, 2.81 Hz, 1 H), 4.26 (d, J=9.66 Hz, 1 H), 4.10-3.98 (m, 1 H), 3.71 (d, J=0.73 Hz, 6 H), 3.28 (br d, J=10.64 Hz, 1 H), 3.16 (br d, J=9.17 Hz, 1 H), 3.06 (br d, J=9.17 Hz, 1 H), 2.98-2.90 (m, 2 H), 2.79 (br d, J=12.47 Hz, 1 H), 1.10-0.82 (m, 21 H).

【0478】

【化45】

【0479】

２５：ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－４－カルボキシレート
モルホリン２４ｂ（５０ｇ、６９．８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１８ｇ、１３９．７ｍｏｌ）のＤＣＭ（５００ｍｌ）中混合物に、室温でＢｏｃ_２Ｏ（２２．９ｇ、１０４．８ｍｏｌ）を滴下添加した。２４時間撹拌した後、溶媒を真空で除去し、残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１：１）により精製して、化合物２５（６０ｇ、収率９３％）を白色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.58 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 7.45 (d, J=7.2 Hz, 2 H), 7.33-7.26 (m, 7 H), 6.85-6.81 (m, 4 H), 6.02-5.98 (dd, J=10.0 3.6 Hz, 1 H), 5.77 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 4.24-4.11 (m, 2 H), 3.99 (d, J=9.6 Hz, 1 H), 3.80 (s, 1 H), 3.75 (m, 1 H), 3.28-3.20 (m, 2 H), 3.08 (d, J=12.8 Hz, 1 H), 2.69 (t, J=11.4 Hz, 1 H), 1.48 (m, 9 H), 1.03-0.95 (m, 21 H).

【0480】

２６：ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－［２－オキソ－４－（１，２，４－トリアゾール－１－イル）ピリミジン－１－イル］－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－４－カルボキシレート
１Ｈ－１，２，４－トリアゾール（６５ｇ、０．９４ｍｏｌ）のＡＣＮ（６５０ｍｌ）中混合物に、３０℃でＰＯＣｌ_３（４９．７９ｇ、０．３１ｍｏｌ）を滴下添加した。０℃に冷却した後、ＤＩＰＥＡ（１９８ｇ、１．５３ｍｏｌ）を滴下添加し、撹拌を０℃で３０分間続けた。同一温度で、出発物質２５（３２ｇ、３９．２１ｍｍｏｌ）を混合物に一度で加え、氷浴を除去し、反応物を３０℃で３時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ／水（１：２）の混合溶媒３ｌ中に注ぎ入れた。分離した後、有機層を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液５００ｍｌおよびブラインで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、粗製の化合物２６（４０ｇ）を黄色油状物として得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。
ＭＳ（ｍ／ｚ）＝８６７．５［Ｍ＋Ｈ］^＋

【0481】

２７：ｔｅｒｔ－ブチル－（２Ｓ，６Ｒ）－６－（４－ベンズアミド－２－オキソ－ピリミジン－１－イル）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－４－カルボキシレート
ベンズアミド（３８ｇ、０．３１ｍｏｌ）のジオキサン３８０ｍｌ中混合物に、０℃でＮａＨ（１２．８ｇ、０．３１ｍｏｌ）を一部ずつ加えた。３０℃で３０分間撹拌した後、トリアゾール２６（４０ｇ、３９．２１ｍｍｏｌ、粗製物）を一度に加え、混合物を３０℃で１時間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液２４ｌでクエンチし、ＥｔＯＡｃ（３ｌ）で抽出した。有機層を水２ｌおよびブラインで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、粗製の化合物５４ｇを黄色油状物として得た。最後にシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ２：１）にかけて、２７（２０．４ｇ、５６．６％）を黄色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.31 (br s, 1 H), 8.20 (br d, J=7.21 Hz, 1 H), 8.01 (br d, J=7.46 Hz, 2 H), 7.70-7.59 (m, 1 H), 7.58-7.48 (m, 2 H), 7.47-7.36 (m, 3 H), 7.34-7.16 (m, 7 H), 6.87 (br d, J=7.70 Hz, 4 H), 5.96 (br dd, J=10.09, 2.63 Hz, 1 H), 4.12 (br d, J=11.25 Hz, 1 H), 4.00-3.83 (m, 3 H), 3.74 (s, 6 H), 3.28-3.16 (m, 2 H), 3.06 (br d, J=9.17 Hz, 2 H), 1.55-1.32 (m, 9 H), 1.11-0.80 (m, 21 H).

【0482】

２８：Ｎ－［１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－２－オキソ－ピリミジン－４－イル］ベンズアミド
２７（１３．５ｇ、１４．７０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（９３ｍｌ）中溶液に、０℃でＴＦＡ（３１ｍｌ）を滴下添加した。反応物を３０℃で１６時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ_３溶液でｐＨ＝７～８に中和した後、有機層を分離し、水性相をＤＣＭ（１００ｍｌ）で２回抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ＝３０：１）により精製して、２８（２．７ｇ、収率３５．６％）を黄色泡状物として、および対応するトリフルオロ酢酸エステル（４．７８ｇ、５３．１％）を副生成物として得、これをＴＨＦ（１８６ｍｌ）とＥｔＯＨ（６２ｍｌ）との混合溶媒に溶解した。０℃で１Ｍ ＮａＯＨ水溶液７５．８ｍｌを加えた。２分間撹拌した後、溶液を飽和クエン酸溶液で中和し、Ｈ_２Ｏ（３００ｍｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ３０：１）により精製して、２８（５．２ｇ、６８．５％）を白色固体として得た。
MS (m/z) = 517,4 [M+H⁺]⁺
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.26 (br s, 1 H), 8.28 (d, J=7.53 Hz, 1 H), 8.01 (d, J=7.28 Hz, 2 H), 7.67-7.58 (m, 1 H), 7.57-7.47 (m, 2 H), 7.34 (d, J=7.40 Hz, 1 H), 5.86 (dd, J=9.66, 2.64 Hz, 1 H), 4.64 (br s, 1 H), 4.01-3.90 (m, 2 H), 3.46 (br s, 2 H), 3.05 (dd, J=11.98, 2.57 Hz, 1 H), 3.11-3.00 (m, 1 H), 2.87-2.75 (m, 1 H), 2.74-2.63 (m, 1 H), 2.40-2.27 (m, 1 H), 1.15-0.99 (m, 21 H).

【0483】

２９：９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル（２Ｓ，６Ｒ）－６－（４－ベンズアミド－２－オキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（ヒドロキシメチル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－４－カルボキシレート
モルホリン２８（７．０ｇ、１３．５５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（７０ｍｌ）中溶液に、０℃でＦｍｏｃ－Ｎ－ヒドロキシ－スクシンイミドエステル５．５ｇ（１６．２６ｍｍｏｌ）を一部ずつ加えた。１６時間撹拌した後、溶液を水１００ｍｌ中に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ）で３回抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮した。シリカ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１：２）上で最後に精製して、化合物２９（１０．０ｇ、定量的）を黄色固体として得た。
MS (m/z) = 739,4 [M+H]⁺
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.26 (br s, 1 H), 8.33 (br s, 1 H), 8.02 (br d, J=7.46 Hz, 2 H), 7.90 (d, J=7.58 Hz, 2 H), 7.64 (br t, J=7.40 Hz, 3 H), 7.57-7.49 (m, 2 H), 7.48-7.40 (m, 3 H), 7.39-7.30 (m, 2 H), 6.11-5.79 (m, 1 H), 4.98 (t, J=6.05 Hz, 1 H), 4.52-4.12 (m, 4 H), 3.89-3.69 (m, 2 H), 3.54 (br s, 3 H), 3.21-3.07 (m, 1 H), 3.04-2.77 (m, 1 H), 1.11-0.89 (m, 21 H).

【0484】

３０：９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル－（２Ｓ，６Ｒ）－６－（４－ベンズアミド－２－オキソ－ピリミジン－１－イル）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－４－カルボキシレート
化合物２９（１３．９ｇ、１８．８３ｍｍｏｌ）のピリジン１４０ｍｌ中溶液に、２５℃でＤＭＴ－Ｃｌ（１２．７５ｇ、３７．６２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５℃で１６時間撹拌して、完全に転化させた。溶媒を蒸発させた後、残留物をＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）に溶解し、水１００ｍｌおよびブラインで洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１：１）により精製して、化合物３０（１７．３ｇ、８８．１％）を黄色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.32 (br s, 1 H), 8.21 (br s, 1 H), 8.02 (br d, J=7.58 Hz, 2 H), 7.88 (br s, 2 H), 7.76-7.60 (m, 3 H), 7.59-7.50 (m, 2 H), 7.42 (br d, J=7.21 Hz, 5 H), 7.38-7.19 (m, 9 H), 6.89 (br d, J=8.44 Hz, 4 H), 6.19-5.85 (m, 1 H), 4.28 (br s, 4 H), 3.91 (br d, J=8.80 Hz, 2 H), 3.75 (s, 6 H), 3.23 (br s, 1 H), 3.10 (br d, J=9.05 Hz, 3 H), 1.06-0.78 (m, 21 H).

【0485】

２４ｆ：Ｎ－［１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－２－オキソ－ピリミジン－４－イル］ベンズアミド
３０（８．４ｇ、８．０７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（８５ｍｌ）中溶液に、室温でピペリジン１７ｍｌを加えた。完全に転化した（約２０分）後、反応溶液を飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液で洗浄した。水性相をＤＣＭで抽出し、合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１：４）により精製して、表題化合物２４ｆ（４．７ｇ、７１．２％）を白色泡状物として得た。
MS (m/z) = 819,4 [M+H]⁺
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.31 (br s, 1 H), 8.18 (d, J=7.58 Hz, 1 H), 8.01 (br d, J=7.34 Hz, 2 H), 7.67-7.58 (m, 1 H), 7.57-7.47 (m, 2 H), 7.42 (br d, J=7.46 Hz, 3 H), 7.34-7.15 (m, 7 H), 6.86 (br d, J=8.56 Hz, 4 H), 6.04-5.89 (m, 1 H), 4.18 (br d, J=9.54 Hz, 1 H), 4.07 (br d, J=9.54 Hz, 1 H), 3.73 (d, J=1.34 Hz, 6 H), 3.15 (br d, J=9.17 Hz, 1 H), 3.05 (br d, J=10.15 Hz, 1 H), 2.97 (br d, J=9.17 Hz, 1 H), 2.88 (br d, J=12.47 Hz, 1 H), 2.62 (br d, J=12.47 Hz, 1 H), 2.46 (br s, 1 H), 1.08-0.83 (m, 21 H).

【0486】

【化46】

【0487】

化合物３１ａ～３１ｆを製造する還元的アミノ化反応のための一般的手順Ａ
モルホリン２４ａ（１．０ｇ、１．４ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２５ｍｌ）に溶解し、続いてモレキュラーシーブ（４Å）２．０ｇ、ＮＥｔ_３（５６０ｍｇ、７６９μｌ、５．５ｍｍｏｌ）、ＡｃＯＨ（８２７ｍｇ、７８９μｌ、１３．７ｍｍｏｌ）および１．０から３．０当量の対応するアルデヒドまたはケトンを加えた。１５分間撹拌した後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム３４４ｍｇ（５．５ｍｍｏｌ）を３０分毎に４回に分けて加え、反応物を室温で６時間撹拌した。終夜静置した後、混合物を濾過し、濾液を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液２５ｍｌで希釈した。ＭｅＯＨを蒸発させ、水性相をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ（５：１）５０ｍｌで抽出した。更に濾過した後、有機相を分離し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。得られた粗生成物を更には精製せずに次のステップに使用した。

【0488】

３１ａ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－メチル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
一般的手順Ａに従って、３．０当量のホルムアルデヒド（３７％水溶液）を使用し、表題化合物３１ａ（１．０ｇ）を粗生成物として単離し、更には精製せずに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．２９
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝７４４．３

【0489】

３１ｂ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－ブチル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
一般的手順Ａに従って、２．０当量のブチルアルデヒドを使用し、表題化合物３１ｂ（１．１９ｇ）を粗生成物として単離し、更には精製せずに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．４１
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝７８６．７

【0490】

３１ｃ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－オクチル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
一般的手順Ａに従って、２．０当量のオクタナールを使用し、表題化合物３１ｃ（１．３５ｇ）を粗生成物として単離し、更には精製せずに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．６６
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝８４２．７

【0491】

３１ｄ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－ヘキサデシル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
一般的手順Ａに従って、１．０当量のヘキサデカナールを使用し、表題化合物３１ｄ（１．５８ｇ）を粗生成物として単離し、更には精製せずに使用した。

【0492】

３１ｅ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
一般的手順Ａに従って、１．２５当量のシクロヘキサノンを使用し、表題化合物３１ｅ（１．１４ｇ）を粗生成物として単離し、更には精製せずに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．４５
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝８１２．５

【0493】

３１ｆ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－４－ベンジル－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
一般的手順Ａに従って、１．２５当量のベンズアルデヒドを使用し、表題化合物３１ｆ（１．１２ｇ）を粗生成物として単離し、更には精製せずに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．３７
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝８２１．４

【0494】

３１ｇ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－４－アセチル－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
出発化合物２４ａ（１．０ｇ、１．４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２５ｍｌ）に溶解した。ＡｃＯＨ（１０３ｍｇ、９９μｌ、１．７ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（７７９ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）およびジイソプロピル－エチルアミン９０３ｍｇ（１．１９ｍｌ、６．９ｍｍｏｌ）を加えた後、反応混合物を室温で４時間撹拌して、完全に転化させた。反応溶液をＨ_２Ｏ（２５ｍｌ）で洗浄し、有機層を分離した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶媒を蒸発させ、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）により精製して、表題化合物３１ｇ（１．０６ｇ、定量的）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．２０
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ］^－＝７７０．２

【0495】

３１ｈ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－ヘキサデカノイル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
３１ｇのためのプロトコールに従って、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０から２０％ＭｅＯＨ）後に、出発化合物２４ａ（１．０ｇ、１．４ｍｍｏｌ）およびパルミチン酸を表題化合物３１ｈ（１．１４ｇ、８６％）に変換した。

【0496】

化合物３２ａ～３２ｈを製造する脱シリル化反応のための一般的手順Ｂ
粗生成物３１ａ～３１ｈをＮＭＰ（１２ｍｌ）に溶解した。ＮＥｔ_３（２．１ｇ、２．９ｍｌ、２０．６ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ_３・３ＨＦ（１．１４ｇ、１．１５ｍｌ、６．９ｍｍｏｌ）を加えた後、反応混合物を９０℃で２時間撹拌した。室温に冷却した後、溶液を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液中に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。残留物をアセトニトリル／Ｈ_２Ｏに溶解し、凍結乾燥した。得られた粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、所望の化合物３２ａ～３２ｈを得た。

【0497】

３２ａ：１－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－４－メチル－モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
粗生成物３１ａを出発物とし一般手順Ｂに従って、最終のシリカゲル精製（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）により、表題化合物３２ａ（５４３ｍｇ、６６．０％、２ステップ）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,59
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 588,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.37 (s, 1 H), 7.52 (s, 1 H), 7.40 (d, J=7.46 Hz, 2 H), 7.19 - 7.32 (m, 7 H), 6.87 (d, J=8.80 Hz, 4 H), 5.85 (dd, J=9.78, 2.93 Hz, 1 H), 4.63 (t, J=5.32 Hz, 1 H), 3.70 - 3.78 (m, 7 H), 3.65 (m, 1 H), 2.96 - 3.06 (m, 2 H), 2.81 (br d, J=9.29 Hz, 1 H), 2.63 - 2.74 (m, 1 H), 2.21 (s, 3 H), 2.06 - 2.16 (m, 1 H), 1.97 - 2.04 (m, 1 H), 1.67 (s, 3 H).

【0498】

３２ｂ：１－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－ブチル－６－（ヒドロキシメチル）モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
粗生成物３１ｂを出発物とし一般手順Ｂに従って、最終のシリカゲル精製（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）により、表題化合物３２ｂ（７５３ｍｇ、８５．５％、２ステップ）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,75
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 630,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (s, 1 H), 7.54 (s, 1 H), 7.40 (d, J=7.46 Hz, 2 H), 7.20 - 7.34 (m, 7 H), 6.87 (d, J=8.68 Hz, 4 H), 5.85 (dd, J=9.66, 2.93 Hz, 1 H), 4.62 (t, J=5.14 Hz, 1 H), 3.70 - 3.78 (m, 7 H), 3.65 (m, 1 H), 2.96 - 3.09 (m, 2 H), 2.86 (br d, J=9.05 Hz, 1 H), 2.71 - 2.80 (m, 1 H), 2.31 (br t, J=7.15 Hz, 2 H), 1.99 - 2.22 (m, 2 H), 1.67 (s, 3 H), 1.20 - 1.45 (m, 4 H), 0.88 (m, 3 H).

【0499】

３２ｃ：１－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－４－オクチル－モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
粗生成物３１ｃを出発物とし一般手順Ｂに従って、最終のシリカゲル精製（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）により、表題化合物３２ｃ（７５１ｍｇ、７８．２％、２ステップ）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,99
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 686,4
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (b s, 1 H), 7.54 (s, 1 H), 7.40 (d, J=7.34 Hz, 2 H), 7.19 - 7.34 (m, 7 H), 6.87 (d, J=8.68 Hz, 4 H), 5.84 (dd, J=9.72, 2.87 Hz, 1 H), 4.61 (t, J=5.14 Hz, 1 H), 3.69 - 3.82 (m, 7 H), 3.64 (m, 1 H), 2.97 - 3.14 (m, 2 H), 2.82 - 2.91 (m, 1 H), 2.70 - 2.76 (m, 1 H), 2.30 (br t, J=7.09 Hz, 2 H), 1.98 - 2.21 (m, 2 H), 1.67 (s, 3 H), 1.33 - 1.46 (m, 2 H), 1.26 (m, 10 H), 0.81 - 0.92 (m, 3 H).

【0500】

３２ｄ：１－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－ヘキサデシル－６－（ヒドロキシメチル）モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
粗生成物３１ｄを出発物とし一般手順Ｂに従って、最終のシリカゲル精製（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）により、表題化合物３２ｄ（６７７ｍｇ、６０．６％、２ステップ）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,44
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 798,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (s, 1 H), 7.54 (s, 1 H), 7.40 (d, J=7.46 Hz, 2 H), 7.18 - 7.34 (m, 7 H), 6.86 (m, 4 H), 5.84 (m, 1 H), 4.61 (m, 1 H), 3.69 - 3.80 (m, 7 H), 3.64 (m, 1 H), 2.97 - 3.07 (m, 2 H), 2.85 (br d, J=8.80 Hz, 1 H), 2.68 - 2.77 (m, 1 H), 2.24 - 2.35 (m, 2 H), 1.99 - 2.20 (m, 2 H), 1.67 (s, 3 H), 1.35 - 1.46 (m, 2 H), 1.23 (s, 26 H), 0.82 - 0.88 (m, 3 H).

【0501】

３２ｅ：１－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（ヒドロキシメチル）モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
粗生成物３１ｅを出発物とし一般手順Ｂに従って、最終のシリカゲル精製（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）により、表題化合物３２ｅ（７０１ｍｇ、７６．４％、２ステップ）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,75
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 656,4
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.35 (s, 1 H), 7.55 (s, 1 H), 7.40 (d, J=7.46 Hz, 2 H), 7.18 - 7.33 (m, 7 H), 6.87 (d, J=8.93 Hz, 4 H), 5.81 (m, 1 H), 4.59 (t, J=5.20 Hz, 1 H), 3.72 - 3.78 (m, 7 H), 3.66 (m, 1 H), 3.03 (m, 2 H), 2.84 (br d, J=9.41 Hz, 1 H), 2.66 - 2.73 (m, 1 H), 2.23 - 2.39 (m, 3 H), 1.64 - 1.78 (m, 4 H), 1.68 (s, 3 H), 0.99 - 1.27 (m, 6 H).

【0502】

３２ｆ：１－［（２Ｒ，６Ｒ）－４－ベンジル－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
粗生成物３１ｆを出発物とし一般手順Ｂに従って、最終のシリカゲル精製（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）により、表題化合物３２ｆ（５９１ｍｇ、６３．６％、２ステップ）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,94
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 664,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.33 (s, 1 H), 7.52 (s, 1 H), 7.18 - 7.39 (m, 14 H), 6.86 (d, J=8.80 Hz, 4 H), 5.86 (dd, J=9.66, 2.93 Hz, 1 H), 4.62 (t, J=5.20 Hz, 1 H), 3.83 (dd, J=10.94, 4.46 Hz, 1 H), 3.73 (s, 6 H), 3.66 (dd, J=11.00, 5.99 Hz, 1 H), 3.47 - 3.61 (m, 2 H), 3.01 (s, 2 H), 2.72 - 2.84 (m, 2 H), 2.22 - 2.31 (m, 1 H), 2.14 - 2.21 (m, 1 H), 1.66 (s, 3 H).

【0503】

３２ｇ：１－［（２Ｒ，６Ｒ）－４－アセチル－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
粗生成物３１ｇを出発物とし一般手順Ｂに従って、最終のシリカゲル精製（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）により、表題化合物３２ｇ（６００ｍｇ、６９．６％、２ステップ）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,77
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 614,2
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.43 (s, 1 H), 7.64 (s, 0.65 H), 7.58 (s, 0.35 H), 7.36 - 7.47 (m, 2 H), 7.20 - 7.33 (m, 7 H), 6.84 - 6.91 (m, 4 H), 5.88 (dd, J=10.58, 2.75 Hz, 0.35 H), 5.74 - 5.80 (m, 0.65 H), 5.00 (t, J=4.40 Hz, 0.65 H), 4.63 (t, J=4.83 Hz, 0.35 H), 4.39 (br d, J=10.88 Hz, 0.65 H), 4.22 (br d, J=13.33 Hz, 0.35 H), 3.89 (m, 0.35 H), 3.74 (s, 6.65 H), 3.42 - 3.65 (m, 2 H), 3.35 - 3.41 (m, 1 H), 3.00 - 3.12 (m, 2 H), 2.83 - 2.98 (m, 1 H), 2.03 (m, 3 H), 1.73 (s, 3 H).

【0504】

３２ｈ：１－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－ヘキサデカノイル－６－（ヒドロキシメチル）モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
粗生成物３１ｈを出発物とし一般手順Ｂに従って、最終のシリカゲル精製（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）により、表題化合物３２ｈ（８７４ｍｇ、７６．９％、２ステップ）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,33
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 304,3 (DMT⁺)
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.42 (br s, 1 H), 7.61, 7.57 (2 x s, 1 H), 7.41 (m, 2 H), 7.20 - 7.34 (m, 7 H), 6.87 (m, 4 H), 5.84 (m, 0.5 H),, 5.77 (m, 0.5 H), 4.95 (m, 0.5 H), 4.64 (m, 0.5 H), 4.40 (m, 0.5 H), 4.24 (m, 0.5 H), 3.95 (m, 0.5 H), 3.69 -3.84 (m, 0.5 H), 3.74 (s, 6 H), 3.41 - 3.62 (m, 2 H), 3.00 - 3.15 (m, 2 H), 2.22 - 2.40 (m, 2 H), 1.72 (s, 3 H), 1.47 (br s, 2 H), 1.23 (br s, 26 H), , 0.82 - 0.90 (m, 3 H).

【0505】

ホスホロアミダイト３３ａ～３３ｈの製造のための一般的手順Ｃ
出発物質３２ａ～３２ｈ（１．０ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（３．０ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（２５ｍｌ）に溶解した。２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトライソプロピルホスホロジアミダイト（１．５ｍｍｏｌ）を加えた後、溶液をＡｒ雰囲気下室温で撹拌した。１．５時間後、反応溶液をＨ_２Ｏ（５０ｍｌ）で洗浄した。層を分離し、水性相をＤＣＭで抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中０から１００％メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル、ｎ－ヘプタン＋１％ＮＥｔ_３で予め調整したカラム）により精製して、最後にホスホロアミダイト３３ａ～３３ｈを得た。

【0506】

３３ａ：３－［［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－メチル－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－２－イル］メトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル
一般的手順Ｃに従って、３２ａ（５４０ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）を表題化合物３３ａに変換し、これを無色泡状物として単離した（５６８ｍｇ、７８．５％）。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.35 (br s, 1 H), 7.54, 7.52 (2 x s, 1 H), 7.35 - 7.44 (m, 2 H), 7.20 - 7.32 (m, 7 H), 6.86 (d, J=8.85 Hz, 4 H), 5.90 (m, 1 H), 4.02 (m, 1 H), 3.79 - 3.92 (m, 1 H), 3.73 (s, 6 H), 3.39 - 3.64 (m, 4 H), 2.98 - 3.12 (m, 2 H), 2.66 - 2.84 (m, 3 H), 2.53 - 2.64 (m, 1 H), 2.23, 2.21 (2 x s, 3 H), 1.99 - 2.18 (m, 2 H), 1.72, 1.69 (2 x s, 3 H), 0.91 - 1.12 (m, 12 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,9, 147,7.

【0507】

３３ｂ：３－［［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－ブチル－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－２－イル］メトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル
一般的手順Ｃに従って、３２ｂ（７５０ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）を表題化合物３３ｂに変換し、これを無色泡状物として単離した（５６９ｍｇ、７０．２％）。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (br s, 1 H), 7.57, 7.54 (2 x s, 1 H), 7.35 - 7.44 (m, 2 H), 7.20 - 7.32 (m, 7 H), 6.86 (d, J=8.78 Hz, 4 H), 5.90 (m, 1 H), 3.83 - 4.01 (m, 2 H), 3.73 (s, 6 H), 3.53 - 3.64 (m, 2 H), 3.39 - 3.52 (m, 2 H), 3.06 - 3.15 (m, 1 H), 2.96 - 3.05 (m, 1 H), 2.73 - 2.90 (m, 2 H), 2.63 - 2.70 (m, 1 H), 2.59 (m, 1 H), 2.24 - 2.48 (m, 2 H), 1.99 - 2.19 (m, 2 H), 1.73, 1.70 (2 x s, 3 H), 1.27 - 1.42 (m, 4 H), 0.95 - 1.18 (m, 12 H), 0.87 (m, 3 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,4, 147,0.

【0508】

３３ｃ：３－［［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－４－オクチル－モルホリン－２－イル］メトキシジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル
一般的手順Ｃに従って、３２ｃ（７４５ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を表題化合物３３ｃに変換し、これを無色泡状物として単離した（５３７ｍｇ、６０．６％）。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.37, 11.36 (2 x s, 1 H), 7.56, 7.53 (2 x s, 1 H), 7.40 (m, 2 H), 7.20 - 7.31 (m, 7 H), 6.86 (d, J=8.72 Hz, 4 H), 5.89 (m, 1 H), 3.75 - 4.02 (m, 2 H), 3.73 (s, 6 H), 3.53 - 3.63 (m, 2 H), 3.41 - 3.52 (m, 2 H), 3.10 (m, 1 H), 2.95 - 3.05 (m, 1 H), 2.73 - 2.89 (m, 2 H), 2.52 - 2.69 (m, 2 H), 2.23 - 2.41 (m, 2 H), 1.98 - 2.18 (m, 2 H), 1.73, 1.70 (2 x s, 3 H), 1.14 - 1.49 (m, 12 H), 0.96 - 1.11 (m, 12 H), 0.85 (m, 3 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,3, 147,1.

【0509】

３３ｄ：３－［［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－ヘキサデシル－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－２－イル］メトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］－オキシプロパンニトリル
一般的手順Ｃに従って、３２ｄ（６７５ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を表題化合物３３ｄに変換し、これを無色泡状物として単離した（６０８ｍｇ、７９．１％）。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (br s, 1 H), 7.56, 7.53 (2 x s, 1 H), 7.37 - 7.42 (m, 2 H), 7.19 - 7.31 (m, 7 H), 6.86 (d, J=8.85 Hz, 4 H), 5.89 (m, 1 H), 3.82 - 4.02 (m, 2 H), 3.73 (s, 6 H), 3.53 - 3.63 (m, 2 H), 3.39 - 3.52 (m, 2 H), 3.07 - 3.13 (m, 1 H), 2.95 - 3.05 (m, 1 H), 2.71 - 2.90 (m, 2 H), 2.62 - 2.68 (m, 1 H), 2.58 (m, 1 H), 2.23 - 2.39 (m, 2 H), 1.96 - 2.18 (m, 2 H), 1.73, 1.70 (2 x s, 3 H), 1.13 - 1.45 (m, 28 H), 0.96 - 1.13 (m, 12 H), 0.82 - 0.88 (m, 3 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,3, 147,1.

【0510】

３３ｅ：３－［［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－２－イル］メトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］－オキシプロパンニトリル
一般的手順Ｃに従って、３２ｅ（６９５ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）を表題化合物３３ｅに変換し、これを無色泡状物として単離した（５６０ｍｇ、７６．２％）。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36, 11.35 (2 x br s, 1 H), 7.57, 7.54 (2 x s, 1 H), 7.37 - 7.43 (m, 2 H), 7.21 - 7.31 (m, 7 H), 6.86 (d, J=8.85 Hz, 4 H), 5.86 (m, 1 H), 3.87 - 4.02 (m, 2 H), 3.73 (s, 6 H), 3.53 - 3.65 (m, 2 H), 3.40 - 3.52 (m, 2 H), 3.12 (m, 1 H), 3.00 (m, 1 H), 2.79 - 2.88 (m, 1 H), 2.64 - 2.77 (m, 2 H), 2.54 - 2.63 (m, 1 H), 2.23 - 2.41 (m, 3 H), 1.64 - 1.73 (s, 7 H), 0.91 - 1.25 (m, 18 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,2, 146,7.

【0511】

３３ｆ：３－［［（２Ｓ，６Ｒ）－４－ベンジル－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－２－イル］メトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル
一般的手順Ｃに従って、３２ｆ（５８９ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）を表題化合物３３ｆに変換し、これを無色泡状物として単離した（６６８ｍｇ、９９．０％）。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.34 (s, 1 H), 7.54, 7.53 (2 x s, 1 H), 7.19 - 7.39 (m, 14 H), 6.80 - 6.89 (m, 4 H), 5.92 (m, 1 H), 4.10 (dd, J=9.94, 7.56 Hz, 0.5 H), 4.01 (m, 0.5 H), 3.93 (m, 0.5 H), 3.85 (m, 0.5 H), 3.73 (s, 6 H), 3.35 - 3.64 (m, 6 H), 3.03 - 3.12 (m, 2 H), 2.98 (d, J=9.10 Hz, 1 H), 2.72 - 2.91 (m, 2 H), 2.62 - 2.69 (m, 1 H), 2.12 - 2.26 (m, 2 H), 1.71, 1.70 (2 x s, 3 H), 0.97 - 1.10 (m, 9 H), 0.91 (d, J=6.71 Hz, 3 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,2.

【0512】

３３ｇ：３－［［（２Ｓ，６Ｒ）－４－アセチル－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－２－イル］メトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル
一般的手順Ｃに従って、３２ｇ（５９８ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）を表題化合物３３ｇに変換し、これを無色泡状物として単離した（７２８ｍｇ、定量的）。ｔｅｒｔ－ブチル－メチルエーテル１０ｍｌに溶解し、ｎ－ペンタン４０ｍｌを加えることにより、粗生成物の精製を行った。沈殿物を遠心分離し、上澄み液を廃棄した。この洗浄手順を更に２回繰り返した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.41 (br s, 1 H), 7.56 - 7.71 (m, 1 H), 7.35 - 7.46 (m, 2 H), 7.20 - 7.33 (m, 7 H), 6.82 - 6.91 (m, 4 H), 5.79 - 5.97 (m, 1 H), 4.27 - 4.45 (m, 1 H), 3.53 - 3.97 (m, 4 H), 3.73 (s, 6 H), 3.32 - 3.50 (m, 4 H), 3.02 - 3.19 (m, 2 H), 2.80 - 3.00 (m, 1 H), 2.55 - 2.74 (m, 2 H), 1.99 - 2.09 (m, 3 H), 1.69 - 1.81 (m, 3 H), 1.04 - 1.13 (m, 9 H), 0.97 - 1.03 (m, 3 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,9, 146,9, 146,8, 146,5.

【0513】

３３ｈ：３－［［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－ヘキサデカノイル－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－２－イル］メトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル
一般的手順Ｃに従って、３２ｈ（８７２ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を表題化合物３３ｈに変換し、これを無色泡状物として単離した（９１５ｍｇ、８７．７％）。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.42, 11.40 (2 x s, 1 H), 7.55 - 7.71 (m, 1 H), 7.40 (m, 2 H), 7.18 - 7.34 (m, 7 H), 6.82 - 6.91 (m, 4 H), 5.73 - 5.99 (m, 1 H), 4.27 - 4.50 (m, 1 H), 3.98 (m, 0.5 H), 3.75 - 3.85 (m, 1.5 H), 3.73 (s, 6 H), 3.53 - 3.65 (m, 2 H), 3.37 - 3.52 (m, 2 H), 3.02 - 3.25 (m, 2 H), 2.82 - 3.00 (m, 1 H), 2.67 (m, 1 H), 2.58 (m, 1 H), 2.21 - 2.48 (m, 2 H), 1.69 - 1.80 (m, 3 H), 1.49 (br s, 2 H), 1.18 - 1.31 (m, 26 H), 1.04 - 1.12 (m, 6 H), 0.92 - 1.03 (m, 6 H), 0.82 - 0.89 (m, 3 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]:147,7, 147,3, 147,2, 146,7.

【0514】

【化47】

【0515】

３４ｂ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
２４ｂ（２５ｇ、３３ｍｍｏｌ）、シクロヘキサノン（１６．１ｇ、１６５ｍｍｏｌ）および４Åモレキュラーシーブ（３０ｇ）のＭｅＯＨ（４５０ｍｌ）中混合物に、２５℃でＡｃＯＨを加えてｐＨを５と６との間に調節した。４０℃で１時間撹拌した後、ＮａＢＨ_３ＣＮ（１０．３ｇ、１６５ｍｍｏｌ）を４０℃で少しずつ加えた。撹拌を１２時間続けて、完全に転化させた。混合物を濾過し、濾液を真空で濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（１５００ｍｌ）で希釈し、Ｈ_２Ｏ（２×５００ｍｌ）および飽和ＮａＣｌ溶液（５００ｍｌ）で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ２：１）により精製して、３４ｂ（２８ｇ、８２％）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.42 (br s, 1 H), 7.71 (d, J=8.1 Hz, 1 H), 7.41 (br d, J=7.5 Hz, 2 H), 7.31 - 7.19 (m, 7 H), 6.85 (d, J=8.8 Hz, 4 H), 5.82 (br dd, J=2.6, 9.8 Hz, 1 H), 5.73 (d, J=8.1 Hz, 1 H), 4.14 (br d, J=8.9 Hz, 1 H), 3.93 (br d, J=8.8 Hz, 1 H), 3.74 (d, J=2.0 Hz, 6 H), 3.13 (br d, J=9.4 Hz, 1 H), 2.99 - 2.83 (m, 2 H), 2.72 (br d, J=10.8 Hz, 1 H), 2.31 - 2.17 (m, 3 H), 1.78 - 1.48 (m, 5 H), 1.32 - 1.09 (m, 6 H), 1.01 - 0.83 (m, 21 H).

【0516】

３４ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
３４ｂの合成にて記載したプロトコールに従って、出発物質２４ｃ（３５ｇ、４２．４ｍｍｏｌ）から、シリカゲル精製（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１：１）後に、所望の生成物３４ｃ（３２ｇ、６４．７％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｄ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝１．１８
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝９０７．５

【0517】

３４ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
３４ｂの合成にて記載したプロトコールに従って、出発物質２４ｅ（５８ｇ、６８．８ｍｍｏｌ）から、シリカゲル精製（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ２：１）後に、所望の生成物３４ｅ（４９ｇ、７７％）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.21 (br s, 1 H), 8.77 (s, 1 H), 8.66 (s, 1 H), 8.06 (br d, J=7.2 Hz, 2 H), 7.68 - 7.61 (m, 1 H), 7.60 - 7.52 (m, 2 H), 7.38 (dd, J=1.6, 7.8 Hz, 2 H), 7.26 - 7.15 (m, 7 H), 6.76 (dd, J=3.1, 9.0 Hz, 4 H), 6.16 (dd, J=3.1, 9.7 Hz, 1 H), 4.29 (d, J=9.0 Hz, 1 H), 3.95 (d, J=8.8 Hz, 1 H), 3.70 (d, J=1.0 Hz, 6 H), 3.17 - 3.02 (m, 3 H), 2.94 (d, J=9.3 Hz, 1 H), 2.83 (br d, J=11.1 Hz, 1 H), 2.36 - 2.30 (m, 1 H), 1.82 - 1.70 (m, 4 H), 1.55 (br d, J=11.2 Hz, 1 H), 1.34 - 1.15 (m, 8 H), 1.04 - 0.91 (m, 23 H).

【0518】

３５ｂ：１－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（ヒドロキシメチル）モルホリン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
化合物３４ｂ（２８ｇ、３５．１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２８０ｍｌ）中溶液に、室温でＮＥｔ_３（３５ｇ、３５１ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ_３・３ＨＦ（５６．３ｇ、３５１ｍｍｏｌ）を加えた。Ｎ_２雰囲気下７０℃で１６時間撹拌した後、完全に脱保護されていることがＴＬＣにより検出された。混合物を真空で濃縮し、残留物をＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）で希釈した。有機溶液を水（２×２００ｍｌ）および飽和ＮａＣｌ溶液（２００ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１：２）により精製して、表題化合物３５ｂ（２０ｇ、８８．８％）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.41 (br s, 1 H), 7.66 (d, J=8.1 Hz, 1 H), 7.47 - 7.40 (m, 2 H), 7.36 - 7.21 (m, 7 H), 6.92 (br d, J=8.7 Hz, 4 H), 5.84 (br dd, J=2.3, 9.4 Hz, 1 H), 5.65 (br d, J=7.9 Hz, 1 H), 4.67 (br s, 1 H), 3.88 (br d, J=10.9 Hz, 1 H), 3.78 (s, 6 H), 3.72 (br d, J=10.5 Hz, 1 H), 3.15 (br d, J=9.0 Hz, 1 H), 3.10 - 2.96 (m, 2 H), 2.91 (br d, J=9.8 Hz, 1 H), 2.73 (br d, J=11.5 Hz, 1 H), 2.35 - 2.18 (m, 3 H), 1.73 (br s, 4 H), 1.32 - 1.10 (m, 9 H).

【0519】

３５ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（ヒドロキシメチル）モルホリン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
３５ｂの合成にて記載したプロトコールに従って、出発物質３４ｃ（３２ｇ、３５．３ｍｍｏｌ）から、シリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１：２）後に、所望の生成物３５ｃ（２１ｇ、７９％）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.10 (s, 1 H), 11.68 (s, 1 H), 8.04 (s, 1 H), 7.38 (d, J=7.3 Hz, 2 H), 7.31 - 7.20 (m, 7 H), 6.85 (d, J=8.7 Hz, 4 H), 5.91 (dd, J=3.1, 8.8 Hz, 1 H), 4.63 (t, J=5.2 Hz, 1 H), 3.87 - 3.78 (m, 1 H), 3.74 (s, 7 H), 3.06 - 2.94 (m, 3 H), 2.84 - 2.65 (m, 3 H), 2.43 (d, J=11.6 Hz, 1 H), 2.37 - 2.28 (m, 1 H), 2.37 - 2.28 (m, 1 H), 1.72 (br s, 4 H), 1.56 (br d, J=10.8 Hz, 1 H), 1.27 - 1.02 (m, 13 H).

【0520】

３５ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（ヒドロキシメチル）モルホリン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
３５ｂの合成にて記載したプロトコールに従って、出発物質３４ｅ（４９ｇ、５３．０ｍｍｏｌ）から、１２時間の反応時間およびシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１：２）後に、所望の生成物３５ｅ（３８ｇ、８８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｄ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝０．９４
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝７６９．４

【0521】

３６ｂ：３－［［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（２，４－ジオキソピリミジン－１－イル）モルホリン－２－イル］メトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］－オキシプロパンニトリル
３５ｂ（１４ｇ、２２．４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１５０ｍｌ）中溶液に、Ａｒ雰囲気下ＤＩＰＥＡ（１１．５ｇ、８９．８ｍｍｏｌ）および３－［クロロ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル（６．９ｇ、２９．２ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を１３℃で０．５時間撹拌して、完全に転化させた。反応混合物を真空で濃縮して容量を約５０ｍｌにし、シリカ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ２：１）上で精製して、３６ｂ（１２．０ｇ、６５．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,60
イオン化方法： ES⁺: [M+H-ⁱPr₂N+OH]⁺= 759,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.34 (br s, 1 H), 7.59 - 7.69 (2 x d, J= 8.0 Hz, 1 H), 7.35 - 7.44 (m, 2 H), 7.20 - 7.32 (m, 7 H), 6.87 (m, 4 H), 5.84 (m, 1 H), 5.59 - 5.68 (2 x d, J=8.1 Hz, 1 H), 3.99 - 4.09 (m, 1 H), 3.93 (m, 1 H), 3.73 (s, 6 H), 3.54 - 3.68 (m, 2 H), 3.40 - 3.53 (m, 2 H), 3.16 (br d, J=8.9 Hz, 1 H), 2.96 (t, J=9.5 Hz, 1 H), 2.88 (m, 1 H), 2.66 - 2.80 (m, 2 H), 2.60 (m, 1 H), 2.15 - 2.35 (m, 3 H), 1.69 (m, 4 H), 1.53 (m, 1 H), 0.95 - 1.21 (m, 17 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,4, 146,7.

【0522】

３６ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－４－シクロヘキシル－モルホリン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
３６ｂの合成にて記載したプロトコールに従って、出発物質３５ｃ（２０ｇ、２６．６ｍｍｏｌ）から、室温で反応時間１５分およびシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１：１）後に、所望の生成物３６ｃ（２０ｇ、７９％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,70, 2,73
イオン化方法： ES⁺: [M+H-ⁱPr₂N+OH]⁺= 868,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.08 (br s, 1 H), 11.63 (br s, 1 H), 8.07, 8.03 (2 x s, 1 H), 7.37 (d, J=8.2 Hz, 2 H), 7.18 - 7.29 (m, 7 H), 6.79 - 6.87 (m, 4 H), 5.89 (m, 1 H), 3.92 - 4.11 (m, 2 H), 3.72 - 3.74 (m, 6 H), 3.55 - 3.72 (m, 2 H), 3.38 - 3.51 (m, 2 H), 3.10 (m, 1 H), 2.96 - 3.05 (m, 2 H), 2.66 - 2.93 (m, 4 H), 2.55 - 2.62 (m, 1 H), 2.27 - 2.45 (m, 2 H), 1.71 (m, 4 H), 1.55 (m, 1 H), 0.83 - 1.29 (m, 23 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,5, 146,7.

【0523】

３６ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－４－シクロヘキシル－モルホリン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
３６ｂの合成にて記載したプロトコールに従って、出発物質３５ｅ（２２ｇ、３１．２ｍｍｏｌ）から、室温で反応時間１５分およびシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１：１）後に、所望の生成物３６ｅ（２２．３ｇ、８０．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,78
イオン化方法： ES⁺: [M+H-ⁱPr₂N+OH]⁺= 886,6
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.18 (s, 1 H), 8.75, 8.73 (2 x s, 1 H), 8.59, 8.57 (2 x s, 1 H), 8.04 (d, J=7.8 Hz, 2 H), 7.64 (t, J=7.3 Hz, 1 H), 7.55 (t, J=7.6 Hz, 2 H), 7.37 (m, 2 H), 7.17 - 7.27 (m, 7 H), 6.77 - 6.84 (m, 4 H), 6.18 (m, 1 H), 3.97 - 4.17 (m, 2 H), 3.71 (m, 6 H), 3.56 - 3.71 (m, 2 H), 3.43 - 3.56 (m, 2 H), 2.92 - 3.15 (m, 4 H), 2.78 - 2.91 (m, 1 H), 2.70 (t, J=6.0 Hz, 1 H), 2.55 - 2.62 (m, 1 H), 2.31 - 2.47 (m, 2 H), 1.74 (m, 4 H), 1.55 (m, 1 H), 0.90 - 1.29 (m, 17 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,0, 146,7.

【0524】

【化48】

【0525】

３７：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－４－（１，２，４－トリアゾール－１－イル）ピリミジン－２－オン
１，２，４－トリアゾール（４１．５ｇ、０．６０１ｍｏｌ）のＡＣＮ（４１５ｍｌ）中混合物に、２０℃でＰＯＣｌ_３（３０．５８ｇ、０．２０ｍｏｌ）を滴下添加した。０℃で、ＤＩＰＥＡ（１２６ｇ、０．９７７ｍｏｌ）を注意深く加え、撹拌を０℃で５時間続け、続いて出発物質３４ｂ（２０ｇ、２５．０ｍｍｏｌ）を一度で加えた。溶液を２０℃で３時間撹拌して、完全に転化させた。反応混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）および水（１ｌ）中に注ぎ入れた。有機層を分離し、水性相をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（５００ｍｌ）および飽和ＮａＣｌ溶液（５００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、表題化合物３７（２９ｇ、粗製物）を黄色泡状物として得、これを更には精製せずに使用した。

【0526】

３４ｆ：Ｎ－［１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］－２－オキソ－ピリミジン－４－イル］ベンズアミド
ベンズアミド（３０．３ｇ、０．２５１ｍｏｌ）のジオキサン（３１０ｍｌ）中溶液に、０℃でＮａＨ（１０ｇ、２５１ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。２０℃で３０分間撹拌した後、トリアゾール３７（２９ｇ、粗生成物２５．０ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を２時間続けて、完全に転化させた。反応混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）および飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液（８ｌ）中に注ぎ入れた。水性層を分離し、ＥｔＯＡｃ（２×５００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相を水（２×５００ｍｌ）および飽和ＮａＣｌ溶液（５００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、真空で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ５：１）により精製して、３４ｆ（１６ｇ、７０．８％）を黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｅ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝１．１６
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝９０１．６

【0527】

３５ｆ：Ｎ－［１－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（ヒドロキシメチル）モルホリン－２－イル］－２－オキソ－ピリミジン－４－イル］ベンズアミド
３５ｂの合成にて記載したプロトコールに従って、出発物質３４ｆ（４０ｇ、４４．４ｍｍｏｌ）から、反応時間１６時間およびシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１：１）後に、所望の生成物３５ｆ（２４ｇ、７２．７％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｅ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝０．９２
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝７４５．３

【0528】

３６ｆ：Ｎ－［１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－４－シクロヘキシル－モルホリン－２－イル］－２－オキソ－ピリミジン－４－イル］ベンズアミド
３６ｂの合成にて記載したプロトコールに従って、出発物質３５ｆ（１６ｇ、２２．８ｍｍｏｌ）から、室温で反応時間１５分およびシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１：１）後に、所望の生成物３６ｆ（１７ｇ、６５．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,92
イオン化方法： ES⁺: [M+H-ⁱPr₂N+OH]⁺= 862,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.29, 11.26 (2 x br s, 1 H), 8.14, 8.09 (2 x br d, J=7.6 Hz, 1 H), 8.01 (br d, J=7.8 Hz, 2 H), 7.63 (m, 1 H), 7.51 (t, J=7.3 Hz, 2 H), 7.35 - 7.45 (m, 3 H), 7.21 - 7.34 (m, 7 H), 6.88 (m, 4 H), 5.96 (m, 1 H), 3.94 - 4.15 (m, 2 H), 3.74 (s, 6 H), 3.55 - 3.69 (m, 2 H), 3.41 - 3.53 (m, 2 H), 3.19 - 3.28 (m, 1 H), 2.95 - 3.08 (m, 2 H), 2.66 - 2.92 (m, 2 H), 2.52 - 2.64 (m, 1 H), 2.32 (m, 1 H), 2.13 - 2.28 (m, 2 H), 1.70 (m, 4 H), 1.54 (m, 1 H), 0.91 - 1.27 (m, 17 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,5, 146,7.

【0529】

【化49】

【0530】

３８ａ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－４－シクロヘキシル－６－（ヒドロキシメチル）－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
ＤＭＴ－エーテル３４ａ（５．０９ｇ、６．２６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１２０ｍｌ）に溶解した。ＤＣＡＡ（８．１５ｇ、６２．６ｍｍｏｌ、５．２３ｍｌ）を加えた後、反応物を室温で５分間撹拌して、完全に脱保護した。飽和ＮａＨＣＯ_３溶液１２０ｍｌを加え、混合物を１時間激しく撹拌した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ_４で乾燥した。シリカ（ＤＣＭ中０から１０％ＭｅＯＨ）上でクロマトグラフィー精製した後、所望の生成物３８ａを無色泡状物として単離した（３．０７ｇ、９６．０％）。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,47
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 510,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.29 (s, 1 H), 7.61 (s, 1 H), 5.75 (dd, J=9.9, 2.7 Hz, 1 H), 4.60 (t, J=6.0 Hz, 1 H), 3.97 (d, J=9.3 Hz, 1 H), 3.77 (d, J=9.3 Hz, 1 H), 3.38 - 3.53 (m, 2 H), 2.78 (m, 2 H), 2.15 - 2.38 (m, 3 H), 1.78 (s, 3 H), 1.65 - 1.76 (m, 4 H), 1.50 - 1.59 (m, 1 H), 1.13 - 1.27 (m, 5 H), 0.99 - 1.13 (m, 21 H).

【0531】

３８ｂ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－４－シクロヘキシル－６－（ヒドロキシメチル）－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
ＤＭＴ－エーテル３４ｂ（１．９６ｇ、２．４５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５０ｍｌ）に溶解した。ＤＣＡＡ（４．１５ｇ、２．６６ｍｌ、３１．９ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温で５分撹拌して、完全に転化させた。飽和ＮａＨＣＯ_３溶液１００ｍｌを加えた後、混合物を１時間撹拌し、層を分離した。水性層をＤＣＭ（１００ｍｌ）で２回抽出し、合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物をシリカ（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、脱保護生成物３８ｂ（１．０６ｇ、８６．９％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,51
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 496,4
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.31 (s, 1 H), 7.76 (d, J=8.2 Hz, 1 H), 5.74 (dd, J=9.8, 2.7 Hz, 1 H), 5.61 (d, J=8.1 Hz, 1 H), 4.61 (t, J=5.9 Hz, 1 H), 3.97 (d, J=9.4 Hz, 1 H), 3.78 (d, J=9.3 Hz, 1 H), 3.36 - 3.51 (m, 2 H), 2.86 (br d, J=10.4 Hz, 1 H), 2.76 (br d, J=11.5 Hz, 1 H), 2.22 - 2.36 (m, 2 H), 2.15 (m, 1 H), 1.71 (br d, J=8.4 Hz, 4 H), 1.55 (m, 1 H), 0.92 - 1.29 (m, 26 H).

【0532】

３８ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－４－シクロヘキシル－６－（ヒドロキシメチル）－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－モルホリン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
３８ｂにて記載したプロトコールに従って、ＤＭＴ－エーテル３４ｃ（２．５８ｇ、２．８４ｍｍｏｌ）を脱保護した。シリカゲル（ｎ－ヘプタン中０から７０％ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（９：１））上でクロマトグラフィー精製した後、表題化合物３８ｃ（１．４１ｇ、８２．１％）を薄黄色泡状物として単離した。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,92
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 605,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]:
12.09 (s, 1 H), 11.54 (s, 1 H), 8.21 (s, 1 H), 5.78 (dd, J=9.7, 2.7 Hz, 1 H), 4.59 (t, J=6.1 Hz, 1 H), 4.08 (d, J=8.9 Hz, 1 H), 3.73 (d, J=8.8 Hz, 1 H), 3.46 (br d, J=6.1 Hz, 2 H), 3.01 (br d, J=10.1 Hz, 1 H), 2.72 - 2.93 (m, 2 H), 2.37 - 2.56 (m, 2 H), 2.30 (m, 1 H), 1.63 - 1.83 (m, 4 H), 1.56 (m, 1 H), 0.94 - 1.31 (m, 32 H).

【0533】

３８ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－４－シクロヘキシル－６－（ヒドロキシメチル）－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
類似体３８ａの合成にて記載したプロトコールに従って、ＤＭＴ－エーテル３４ｅ（２．１８ｇ、２．３６ｍｍｏｌ）をジクロロ酢酸で脱保護した。シリカ（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上でクロマトグラフィー精製した後、所望の生成物３８ｅを無色泡状物として単離した（１．１４ｇ、７７．５％）。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,94
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 623,7
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.17 (s, 1 H), 8.74 (s, 1 H), 8.70 (s, 1 H), 8.04 (br d, J=7.3 Hz, 2 H), 7.65 (m, 1 H), 7.55 (t, J=7.1 Hz, 2 H), 6.10 (m, 1 H), 4.60 (m, 1 H), 4.14 (m, 1 H), 3.88 (m, 1 H), 3.45 (br d, J=6.2 Hz, 2 H), 3.12 (m, 1 H), 2.77 - 2.93 (m, 2 H), 2.45 (m, 1 H), 2.35 (m, 1 H), 1.76 (m, 4 H), 1.56 (br d, J=11.5 Hz, 1 H), 1.16 - 1.33 (m, 4 H), 0.99 - 1.15 (m, 22 H).

【0534】

３８ｆ：Ｎ－［１－［（２Ｒ，６Ｓ）－４－シクロヘキシル－６－（ヒドロキシメチル）－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－モルホリン－２－イル］－２－オキソ－ピリミジン－４－イル］ベンズアミド
３８ｂにて記載したプロトコールに従って、ＤＭＴ－エーテル３４ｆ（１．９４ｇ、２．１５ｍｍｏｌ）を脱保護した。シリカゲル（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上でクロマトグラフィー精製した後、表題化合物３８ｆ（１．１８ｇ、９１．７％）を薄黄色泡状物として単離した。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,77
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 599,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.23 (s, 1 H), 8.29 (br d, J=7.3 Hz, 1 H), 8.01 (br d, J=7.3 Hz, 2 H), 7.62 (t, J=7.5 Hz, 1 H), 7.52 (m, 2 H), 7.37 (br d, J=7.3 Hz, 1 H), 5.85 (br dd, J=9.3, 2.2 Hz, 1 H), 4.65 (t, J=6.2 Hz, 1 H), 4.03 (d, J=9.3 Hz, 1 H), 3.79 (d, J=9.3 Hz, 1 H), 3.50 (m, 2 H), 3.03 (br d, J=10.6 Hz, 1 H), 2.82 (br d, J=11.4 Hz, 1 H), 2.37 (d, J=11.5 Hz, 1 H), 2.30 (m, 1 H), 2.06 (t, J=10.2 Hz, 1 H), 1.65 - 1.81 (m, 4 H), 1.55 (m, 1 H), 0.91 - 1.33 (m, 26 H).

【0535】

３９ａ：［（２Ｓ，６Ｒ）－４－シクロヘキシル－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
出発物質３８ａ（３．０５ｇ、６．０ｍｍｏｌ）を乾燥ピリジン６０ｍｌに溶解した。室温で、塩化ベンゾイル１．０６ｇ（８７７．６μｌ、７．５ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（７４５．９ｍｇ、６．０ｍｍｏｌ）を加え、溶液を４時間撹拌した。追加の塩化ベンゾイル２１２．０ｍｇ（１７５．５μｌ、１．５ｍｍｏｌ）を加えた後、溶液を終夜撹拌し、この時点で完全に転化していることが検出された。溶媒を真空で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。溶液を５％クエン酸溶液、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。シリカ（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）上で精製して、ベンゾエート３９ａ（３．０５ｇ、８３．０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 3,57
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 614,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.32 (s, 1 H), 7.97 - 8.02 (m, 2 H), 7.68 (s, 1 H), 7.52 - 7.58 (m, 2 H), 7.47 - 7.49 (m, 1 H), 5.80 (dd, J=9.9, 2.9 Hz, 1 H), 4.40 (d, J=11.3 Hz, 1 H), 4.31 (d, J=11.4 Hz, 1 H), 4.17 (d, J=9.4 Hz, 1 H), 3.95 (d, J=9.4 Hz, 1 H), 2.95 (br d, J=11.5 Hz, 1 H), 2.87 (br d, J=10.0 Hz, 1 H), 2.44 (br d, J=11.4 Hz, 1 H), 2.33 (m, 2 H), 1.69 - 1.80 (m, 4 H), 1.66 (s, 3 H), 1.52 - 1.60 (m, 1 H), 1.13 - 1.31 (m, 5 H), 0.96 - 1.12 (m, 21 H).

【0536】

３９ｂ：［（２Ｓ，６Ｒ）－４－シクロヘキシル－６－（２，４－ジオキソピリミジン－１－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
３８ｂ（１．０３ｇ、２．０８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ／ピリジン（５：１）３０ｍｌ中溶液に、塩化ベンゾイル３９８．３ｍｇ（３２８．９μｌ、２．８０ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２５．６ｍｇ、２０８μｍｏｌ）を加えた。室温で３時間撹拌した後、反応混合物を、ｎ－プロパノール１ｍｌを加えることによりクエンチした。溶媒を真空で除去し、残留物をＨ_２ＯおよびＥｔＯＡｃで処理した。有機層を分離し、１０％クエン酸溶液（２×）、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、ベンゾイルエステル３９ｂ（１．１４ｇ、９２．０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 3,56
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 600,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.35 (s, 1 H), 7.97 (m, 2 H), 7.68 (m, 2 H), 7.54 (m, 2 H), 5.79 (dd, J=9.8, 2.8 Hz, 1 H), 5.58 (d, J=8.2 Hz, 1 H), 4.33 (s, 2 H), 4.17 (d, J=9.4 Hz, 1 H), 3.95 (d, J=9.4 Hz, 1 H), 2.93 (m, 2 H), 2.40 (br d, J=11.5 Hz, 1 H), 2.25 - 2.36 (m, 2 H), 1.67 - 1.80 (m, 4 H), 1.56 (m, 1 H), 0.92 - 1.31 (m, 26 H).

【0537】

３９ｃ：［（２Ｓ，６Ｒ）－４－シクロヘキシル－６－［２－（２－メチルプロパノイルアミノ）－６－オキソ－１Ｈ－プリン－９－イル］－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
３９ｂの合成にて記載したプロトコールに従い、シリカゲル（ｎ－ヘプタン中０から６５％ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（９：１））上で精製して、第一級アルコール３８ｃ（１．３９ｇ、２．３０ｍｍｏｌ）から、表題化合物３９ｃ（１．５６ｇ、９５．６％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 3,53
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 709,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.84 (s, 1 H), 11.60 (s, 1 H), 8.09 (s, 1 H), 7.80 (m, 2 H), 7.59 (m, 1 H), 7.44 (t, J=7.8 Hz, 2 H), 5.84 (dd, J=5.8, 3.9 Hz, 1 H), 4.28 (d, J=11.6 Hz, 1 H), 4.23 (d, J=11.6 Hz, 1 H), 3.98 (d, J=9.1 Hz, 1 H), 3.85 (d, J=9.1 Hz, 1 H), 2.93 - 3.11 (m, 2 H), 2.74 - 2.90 (m, 2 H), 2.68 (d, J=11.6 Hz, 1 H), 2.45 (m, 1 H), 1.70 - 1.88 (m, 4 H), 1.59 (m, 1 H), 0.90 - 1.35 (m, 32 H).

【0538】

３９ｅ：［（２Ｓ，６Ｒ）－６－（６－ベンズアミドプリン－９－イル）－４－シクロヘキシル－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
出発物質３８ｅ（１．１３ｇ、１．８ｍｍｏｌ）を乾燥ピリジン２０ｍｌに溶解した。室温で、塩化ベンゾイル３３４．９ｍｇ（２７６．５μｌ、２．４ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２２３．９ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）を加え、溶液を３時間撹拌した。追加の塩化ベンゾイル１０３．０ｍｇ（８５．１μｌ、０．７ｍｍｏｌ）を加えた後、完全に転化するまで溶液を撹拌した。溶媒を真空で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。溶液をＨ_２Ｏ、２×１０％クエン酸溶液、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。シリカ（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、ベンゾエート３９ｅ（８７７ｍｇ、６６．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 3,65
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 727,8
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]:11.15 (m, 1 H), 8.71 (s, 1 H), 8.61 (s, 1 H), 8.02 (d, J=7.3 Hz, 2 H), 7.92 (d, J=7.4 Hz, 2 H), 7.59 - 7.69 (m, 2 H), 7.48 - 7.58 (m, 4 H), 6.15 (m, 1 H), 4.24 - 4.40 (m, 3 H), 3.99 (m, 1 H), 3.17 (m, 1 H), 2.98 - 3.10 (m, 2 H), 2.60 (m, 1 H), 2.42 (m, 1 H), 1.70 - 1.90 (m, 4 H), 1.57 (br d, J=12.1 Hz, 1 H), 1.16 - 1.32 (m, 4 H), 0.99 - 1.14 (m, 22 H).

【0539】

３９ｆ：［（２Ｓ，６Ｒ）－６－（４－ベンズアミド－２－オキソ－ピリミジン－１－イル）－４－シクロヘキシル－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
３９ｂの合成にて記載したプロトコールに従い、シリカゲル（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、第一級アルコール３８ｆ（１．１６ｇ、１．９４ｍｍｏｌ）から、表題化合物３９ｆ（１．２５ｇ、９１．９％）を淡黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 3,74
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 703,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]:11.25 (s, 1 H), 8.16 (br d, J=7.5 Hz, 1 H), 7.96 - 8.03 (m, 4 H), 7.48 - 7.69 (m, 6 H), 7.34 (br d, J=7.3 Hz, 1 H), 5.92 (dd, J=9.4, 2.4 Hz, 1 H), 4.39 (m, 2 H), 4.25 (d, J=9.4 Hz, 1 H), 3.97 (d, J=9.4 Hz, 1 H), 3.09 (br d, J=10.5 Hz, 1 H), 3.01 (d, J=11.6 Hz, 1 H), 2.44 (d, J=11.5 Hz, 1 H), 2.36 (m, 1 H), 2.20 (m, 1 H), 1.68 - 1.81 (m, 4 H), 1.56 (m, 1 H), 0.89 - 1.34 (m, 26 H).

【0540】

４０ａ：［（２Ｒ，６Ｒ）－４－シクロヘキシル－２－（ヒドロキシメチル）－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
シリルエーテル３９ａ（３．０ｇ、４．８９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１５ｍｌ）に溶解した。ＮＥｔ_３（７．４９ｇ、７３．３ｍｍｏｌ、１０．２９ｍｌ）およびＮＥｔ_３・３ＨＦ（６．０３ｇ、３６．７ｍｍｏｌ、６．１０ｍｌ）を加えた後、溶液を７５℃で２時間撹拌して、完全に転化させた。反応物を室温に冷却し、５％ＮａＨＣＯ_３溶液１００ｍｌで洗浄した。濾過した後、水溶液をＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０から１０％ＭｅＯＨ）により精製し、所望の脱保護生成物４０ａ（１．２３ｇ、５５．０％）を得、これは異性体不純物約２０％を含んでおり、これは遊離ＯＨ基へのベンゾイルエステル転移に起因していた。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝１．６３
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝４５８．４

【0541】

４０ｂ：［（２Ｒ，６Ｒ）－４－シクロヘキシル－６－（２，４－ジオキソピリミジン－１－イル）－２－（ヒドロキシメチル）モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
シリルエーテル３９ｂ（１．１２ｇ、１．８７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１８ｍｌ）に溶解した。ピリジン・ＨＦ（２．８５ｇ、２．５９ｍｌ、１８．６７ｍｍｏｌ）を加えた後、溶液を室温で１時間撹拌して、完全に転化させた。飽和ＮａＨＣＯ_３溶液１２０ｍｌを加え、混合物を１時間激しく撹拌し、続いてＤＣＭ（４０ｍｌ）を加えた。有機層を分離し、水性相をＤＣＭで２回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をＡＣＮと共蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、表題化合物４０ｂ（７０９ｍｇ、８５．６％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,57
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 444,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.33 (s, 1 H), 7.99 (m, 2 H), 7.68 (t, J=7.5 Hz, 1 H), 7.64 (d, J=8.1 Hz, 1 H), 7.56 (t, J=7.8 Hz, 2 H), 5.80 (dd, J=9.5, 2.9 Hz, 1 H), 5.55 (d, J=8.1 Hz, 1 H), 4.92 (t, J=5.6 Hz, 1 H), 4.29 (m, 2 H), 3.82 (dd, J=11,3 5.0 Hz, 1 H), 3.74 (dd, J=11,3, 6.2 Hz, 1 H), 2.87 (m, 2 H), 2.41 (d, J=11.5 Hz, 1 H), 2.22 - 2.38 (m, 2 H), 1.73 (m, 4 H), 1.55 (m, 1 H), 1.01 - 1.29 (m, 5 H).

【0542】

４０ｃ：［（２Ｒ，６Ｒ）－４－シクロヘキシル－２－（ヒドロキシメチル）－６－［２－（２－メチルプロパノイルアミノ）－６－オキソ－１Ｈ－プリン－９－イル］モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
４０ｂの合成にて記載したプロトコールに従って、シリルエーテル３９ｃ（１．５４ｇ、２．１７ｍｍｏｌ）を脱保護し、シリカゲル（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（９：１））上で精製した後、表題化合物４０ｃ（９９５ｍｇ、８３．２％）を淡黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,79
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 553,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.82 (s, 1 H), 11.68 (s, 1 H), 8.08 (s, 1 H), 7.82 (d, J=7.1 Hz, 2 H), 7.60 (t, J=7.3 Hz, 1 H), 7.45 (t, J=7.8 Hz, 2 H), 5.88 (t, J=4.7 Hz, 1 H), 4.95 (t, J=5.8 Hz, 1 H), 4.24 (d, J=11.5 Hz, 1 H), 4.17 (d, J=11.5 Hz, 1 H), 3.70 (dd, J=11.0, 5.6 Hz, 1 H), 3.57 (dd, J=10.9, 5.9 Hz, 1 H), 3.01 (m, 2 H), 2,65 - 2.84 (m, 3 H), 2.46 (m, 1 H), 1.71 - 1.87 (m, 4 H), 1.59 (m, 1 H), 1.04 - 1.34 (m, 11 H).

【0543】

４０ｅ：［（２Ｒ，６Ｒ）－６－（６－ベンズアミドプリン－９－イル）－４－シクロヘキシル－２－（ヒドロキシメチル）モルホリン－２－イル］－メチルベンゾエート
シリルエーテル３９ｅ（８７０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）をＮＭＰ（１５ｍｌ）に溶解した。ＮＥｔ_３（１．７０ｇ、１６．８ｍｍｏｌ、２．３４ｍｌ）およびＮＥｔ_３・ＨＦ（３．１８ｇ、１９．２ｍｍｏｌ、３．２２ｍｌ）を加えた後、溶液を室温で１７時間、続いて６５℃で３時間撹拌し、この時点で完全に転化していることが検出された。室温に冷却した後、飽和ＮａＨＯＣ_３溶液１５０ｍｌおよびＥＥ（５０ｍｌ）を加え、混合物を３０分間激しく撹拌した。有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液および１０％ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で脱水した後、溶媒を真空で蒸発させた。クロマトグラフィー精製（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）後に、４０ｅを無色泡状物として単離した（６１６ｍｇ、９０．２％）。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,90
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 571,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]:11.13 (s, 1 H), 8.70 (s, 1 H), 8.56 (s, 1 H), 8.02 (br d, J=7.3 Hz, 2 H), 7.93 (m, 2 H), 7.65 (m, 2 H), 7.48 - 7.59 (m, 4 H), 6.16 (dd, J=8.7, 3.0 Hz, 1 H), 4.97 (br s, 1 H), 4.21 - 4.38 (m, 2 H), 3.89 (br d, J=10.5 Hz, 1 H), 3.80 (br d, J=10.2 Hz, 1 H), 3.15 (m, 1 H), 3.05 (m, 1 H), 2.93 (br d, J=11.6 Hz, 1 H), 2.63 (m, 1 H), 2.37 - 2.44 (m, 1 H), 1.65 - 1.82 (m, 4 H), 1.57 (br d, J=11.7 Hz, 1 H), 1.13 - 1.32 (m, 4 H), 1.01 - 1.13 (m, 1 H).

【0544】

４０ｆ：［（２Ｒ，６Ｒ）－６－（４－ベンズアミド－２－オキソ－ピリミジン－１－イル）－４－シクロヘキシル－２－（ヒドロキシメチル）－モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
４０ｂの合成にて記載したプロトコールに従って、シリルエーテル３９ｆ（１．２３ｇ、１．７４ｍｍｏｌ）を脱保護し、シリカゲル（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（９：１））上で精製した後、表題化合物４０ｆ（８８８ｍｇ、９３．２％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,05
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 547,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.25 (s, 1 H), 8.12 (br d, J=7.6 Hz, 1 H), 8.01 (m, 4 H), 7.47 - 7.73 (m, 6 H), 7.33 (br d, J=7.5 Hz, 1 H), 5.92 (dd, J=9.4, 2.6 Hz, 1 H), 4.95 (t, J=6.0 Hz, 1 H), 4.31 - 4.40 (2 x d, J=11.4 Hz, 2 H), 3.92 (dd, J=11.4, 5.0 Hz, 1 H), 3.75 (dd, J=11.5, 6.6 Hz, 1 H), 3.09 (br d, J=10.3 Hz, 1 H), 2.93 (d, J=11.5 Hz, 1 H), 2.45 (d, J=11.6 Hz, 1 H), 2.36 (m, 1 H), 2.16 (m, 1 H), 1.74 (m, 4 H), 1.56 (m, 1 H), 1.00 - 1.32 (m, 5 H).

【0545】

４１ａ：［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
出発物質４０ａ（２．０５ｇ、４．４８ｍｍｏｌ）を乾燥ピリジン４０ｍｌに溶解した。室温で、ＤＭＴ－Ｃｌ（１．６４ｇ、４．７０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍｌ）中溶液を滴下添加し、反応溶液を終夜撹拌した。ｉＰｒＯＨ（５ｍｌ）を加えた後、反応溶液を蒸発させ、残留物をＤＣＭに溶解した。有機溶液をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。得られた粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０から１０％ＭｅＯＨ）により精製し、続いてＨＰＬＣ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＺ－Ｈ／１４０、２５０×４．６ｍｍ、１．０ｍｌ／分、３０℃；溶出液：ＭｅＯＨ／ＥｔＯＨ１：１）により２回目の精製をして、表題化合物４１ａ（１．０５ｇ、３０．８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 3,17
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 758,6
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.31 (s, 1 H), 7.73 - 7.79 (m, 2 H), 7.63 - 7.71 (m, 1 H), 7.46 - 7.54 (m, 3 H), 7.35 (d, J=7.1 Hz, 2 H), 7.16 - 7.28 (m, 7 H), 6.79 (dd, J=8.9, 3.6 Hz, 4 H), 5.65 (dd, J=9.9, 2.9 Hz, 1 H), 4.50 (d, J=11.3 Hz, 1 H), 4.40 (d, J=11.1 Hz, 1 H), 3.69 (d, J=1.59 Hz, 6 H), 3.55 (d, J=8.6 Hz, 1 H), 3.01 (d, J=11.4 Hz, 1 H), 2.81 (d, J=9.9 Hz, 1 H), 2.66 - 2.69 (m, 1 H), 2.23 - 2.39 (m, 2 H), 1.61 - 1.78 (m, 4 H), 1.68 (s, 3 H), 1.51 - 1.60 (m, 1 H), 0.98 - 1.30 (m, 5 H).

【0546】

４１ｂ：［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（２，４－ジオキソピリミジン－１－イル）モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
４０ｂ（６９０ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ／ピリジン（４：１）３０ｍｌ中溶液に、室温でＤＭＴ－Ｃｌ（６９９ｍｇ、２．０２ｍｍｏｌ）を加えた。１６時間撹拌した後、溶媒を真空で除去し、残留物をＡＣＮ（２５ｍｌ）と３回共蒸留させた。Ｈ_２Ｏを加えた後、混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を分離し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥し、溶媒を蒸発させた後、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ、ｎ－ヘプタン＋１％ＮＥｔ_３で予め調整したカラム）により精製して、ＤＭＴ－エーテル４１ｂ（１．０６ｇ、９１．３％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 3,16
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 744,7
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.34 (s, 1 H), 7.64 - 7.76 (m, 4 H), 7.49 (m, 2 H), 7.35 (m, 2 H), 7.16 - 7.26 (m, 7 H), 6.74 - 6.81 (m, 4 H), 5.63 (dd, J=9.8, 2.8 Hz, 1 H), 5.58 (d, J=8.2 Hz, 1 H), 4.44 (s, 2 H), 3.69 (s, 3 H), 3.68 (s, 3 H), 3.57 (d, J=8.6 Hz, 1 H), 3.02 (d, J=11.6 Hz, 1 H), 2.85 (br d, J=10.2 Hz, 1 H), 2.34 (m, 1 H), 2.24 (t, J=8.6 Hz, 1 H), 1.61 - 1.79 (m, 4 H), 1.56 (m, 1 H), 0.98 - 1.31 (m, 5 H).

【0547】

４１ｃ：［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－［２－（２－メチルプロパノイルアミノ）－６－オキソ－１Ｈ－プリン－９－イル］モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
４１ｂの合成にて記載したプロトコールに従って、出発物質４０ｃ（８８０ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）から、表題化合物４１ｃ（１．３０ｇ、９５．６％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 3,16
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 853,4
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.86 (br s, 1 H), 11.55 (br s, 1 H), 8.07 (s, 1 H), 7.53 - 7.61 (m, 3 H), 7.30 - 7.42 (m, 4 H), 7.16 - 7.27 (m, 7 H), 6.72 - 6.85 (m, 4 H), 5.66 (dd, J=6.6, 3.4 Hz, 1 H), 4.41 (d, J=11.5 Hz, 1 H), 4.34 (d, J=11.5 Hz, 1 H), 3.67 (s, 3 H), 3.64 (s, 3 H), 3.51 (d, J=8.1 Hz, 1 H), 3.14 (d, J=8.1 Hz, 1 H), 2.96 - 3.05 (m, 2 H), 2.81 - 2.93 (m, 2 H), 2.75 (m, 1 H), 1.79 (m, 4 H), 1.61 (br d, J=11.7 Hz, 1 H), 1.03 - 1.39 (m, 11 H).

【0548】

４１ｅ：［（２Ｒ，６Ｒ）－６－（６－ベンズアミドプリン－９－イル）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
出発物質４０ｅ（６１０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を乾燥ピリジン３０ｍｌに溶解し、蒸発させた。この手順を３回繰り返した。次いで化合物を乾燥ピリジン３０ｍｌに溶解し、続いてＮＥｔ_３（１６２．７ｍｇ、２２３．６μｌ、１．６ｍｍｏｌ）およびＤＭＴ－Ｃｌ（５５４．４ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液を室温で終夜撹拌し、この時点で完全に転化していた。溶媒を真空で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。Ｈ_２Ｏ、１０％クエン酸溶液（２×）、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した後、有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥した。溶媒を蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、ＤＭＴ－エーテル４１ｅ（８０７ｍｇ、８６．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 3,26
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 873,8
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.17 (br s, 1 H), 8.69 (s, 1 H), 8.60 (s, 1 H), 8.02 (m, 2 H), 7.73 (m, 2 H), 7.64 (m, 2 H), 7.54 (m, 2 H), 7.47 (m, 2 H), 7.39 (m, 2 H), 7.18 - 7.28 (m, 7 H), 6.75 - 6.84 (m, 4 H), 5.95 (dd, J=9.4, 2.9 Hz, 1 H), 4.44 (m, 2 H), 3.65 - 3.72 (m, 7 H), 3.44 (m, 1 H), 3.02 - 3.14 (m, 2 H), 2.94 (br t, J=10.3 Hz, 1 H), 2.67 (m, 1 H), 2.41 (br d, J=7.7 Hz, 1 H), 1.66 - 1.83 (m, 4 H), 1.57 (br d, J=11.62 Hz, 1 H), 1.13 - 1.29 (m, 4 H), 1.01 - 1.12 (m, 1 H).

【0549】

４１ｆ：［（２Ｒ，６Ｒ）－６－（４－ベンズアミド－２－オキソ－ピリミジン－１－イル）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－モルホリン－２－イル］メチルベンゾエート
４１ｂの合成にて記載したプロトコールに従って、出発物質４０ｆ（８７０ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）から、表題化合物４１ｆ（１．２１ｇ、８９．４％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 3,37
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 847,4
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.27 (br s, 1 H), 8.16 (d, J=7.6 Hz, 1 H), 7.99 (m, 2 H), 7.74 (m, 2 H), 7.59 - 7.70 (m, 2 H), 7.44 - 7.55 (m, 4 H), 7.28 - 7.42 (m, 3 H), 7.18 - 7.28 (m, 7 H), 6.74 - 6.84 (m, 4 H), 5.74 (dd, J=9.5, 2.6 Hz, 1 H), 4.51 (m, 2 H), 3.70 (s, 3 H), 3.69 (s, 3 H), 3.65 (d, J=8.4 Hz, 1 H), 3.10 (d, J=11.4 Hz, 1 H), 3.00 (m, 1 H), 2.54 (d, J=11.9 Hz, 1 H), 2.37 (m, 1 H), 2.15 (t, J=10.5 Hz, 1 H), 1.62 - 1.80 (m, 4 H), 1.56 (m, 1 H), 0.98 - 1.32 (m, 5 H).

【0550】

４２ａ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（ヒドロキシメチル）モルホリン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
ベンゾイルエステル４１ａ（１．０ｇ、１．３２ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ／ピリジン（５：１）１２ｍｌに溶解した。０℃で２Ｍ ＮａＯＨ溶液６．５８ｍｌ（１３．１６ｍｍｏｌ）を加えた。冷却浴を除去した後、反応溶液を室温で１時間撹拌して、完全に転化させた。溶液をＨ_２Ｏ（５０ｍｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、１０％クエン酸溶液、５％ＮａＨＣＯ_３溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥し、溶媒を蒸発させた後、粗生成物をシリカ（ｎ－ヘプタン中０から５０％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、表題化合物４２ａ（３２５ｍｇ、３７．７％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,33
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 656,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]:11.28 (s, 1 H), 7.58 (d, J=1.0 Hz, 1 H), 7.39 (d, J=7.5 Hz, 2 H), 7.19 - 7.32 (m, 7 H), 6.87 (d, J=8.8 Hz, 4 H), 5.56 (dd, J=9.9, 2.7 Hz, 1 H), 4.65 (t, J=6.0 Hz, 1 H), 3.73 (s, 6 H), 3.58 (dd, J=11.4, 6.9 Hz, 1 H), 3.50 (dd, J=11.3, 5.0 Hz, 1 H), 3.35 (d, J=8.7 Hz, 1 H), 3.10 (d, J=8.6 Hz, 1 H), 2.68 - 2.83 (m, 2 H), 2.42 (d, J=11.6 Hz, 1 H), 2.22 (m, 1 H), 2.14 (t, J=10.4 Hz, 1 H), 1.78 (s, 3 H), 1.58 - 1.71 (m, 4 H), 1.53 (br d, J=12.2 Hz, 1 H), 1.00 - 1.32 (m, 5 H).

【0551】

４２ｂ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（ヒドロキシメチル）モルホリン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
出発化合物４１ｂ（１．０４ｇ、１．３９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ／ＥｔＯＨ（４：１）２５ｍｌに溶解した。溶液を０℃に冷却し、２Ｍ ＮａＯＨ溶液６．９７ｍｌ（１３．９４ｍｍｏｌ）を加えた。氷浴を除去し、反応物を１時間撹拌した。更に２Ｍ ＮａＯＨ溶液６．９７ｍｌ（１３．９４ｍｍｏｌ）を加えた後、撹拌を室温で３時間および４５℃で更に６０分間続けて、完全に転化させた。Ｈ_２Ｏ（１００ｍｌ）およびクエン酸一水和物１．７ｇを加えた後、混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を分離し、Ｈ_２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶液を蒸発させ、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中２０から１００ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望の生成物４２ｂ（８２３ｍｇ、９２．０％）を無色固体として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,36
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 642,4
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.30 (s, 1 H), 7.74 (d, J=8.1 Hz, 1 H), 7.39 (m, 2 H), 7.19 - 7.32 (m, 7 H), 6.87 (d, J=8.7 Hz, 4 H), 5.60 (d, J=8.1 Hz, 1 H), 5.54 (dd, J=9.7, 2.5 Hz, 1 H), 4.66 (t, J=5.9 Hz, 1 H), 3.73 (s, 6 H), 3.58 (dd, J=11.3, 6.7 Hz, 1 H), 3.48 (dd, J=11.3, 5.0 Hz, 1 H), 3.35 (d, J=8.8 Hz, 1 H), 3.10 (d, J=8.6 Hz, 1 H), 2.78 (br d, J=11.4 Hz, 2 H), 2.41 (br d, J=11.9 Hz, 1 H), 2.23 (m, 1 H), 2.08 (m, 1 H), 1.57 - 1.73 (m, 4 H), 1.55 (m, 1 H), 0.97 - 1.27 (m, 5 H).

【0552】

４２ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（ヒドロキシメチル）モルホリン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
ベンゾイルエステル４１ｃ（１．２８ｇ、１．５０ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ／ピリジン（２：１）３６ｍｌに溶解した。２Ｍ ＮａＯＨ溶液７．４９ｍｌ（１４．９７ｍｍｏｌ）を０℃で加え、溶液を氷冷下２０分間撹拌した。氷浴を除去し、撹拌を１．５時間続けた。反応溶液を０℃に再度冷却し、続いてＨ_２Ｏ（３０ｍｌ）およびクエン酸一水和物９８０ｍｇを加えた。反応溶液をＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）で抽出し、有機相を分離した。１０％クエン酸溶液（２×）、Ｈ_２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した後、有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。得られた粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（９：１））により精製して、表題化合物４２ｃ（７２１ｍｇ、６４．１％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,68
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 749,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.08 (br s, 1 H), 11.52 (br s, 1 H), 8.18 (s, 1 H), 7.39 (m, 2 H), 7.20 - 7.33 (m, 7 H), 6.86 - 6.93 (m, 4 H), 5.53 (dd, J=9.7, 2.7 Hz, 1 H), 4.62 (t, J=6.2 Hz, 1 H), 3.73 (s, 3 H), 3.72 (s, 3 H), 3.45 - 3.63 (m, 3 H), 2.92 - 3.04 (m, 3 H), 2.75 (m, 1 H), 2.59 (br d, J=11.7 Hz, 1 H), 2.41 (t, J=10.6 Hz, 1 H), 2.33 (m, 1 H), 1.63 - 1.82 (m, 4 H), 1.57 (m, 1 H), 0.98 - 1.31 (m, 11 H).

【0553】

４２ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（ヒドロキシメチル）モルホリン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
出発化合物４１ｅ（８００ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ／ピリジン（３：１）３２ｍｌに溶解した。０℃で、２Ｍ ＮａＯＨ溶液４．５８ｍｌ（９．１６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１時間撹拌した。クエン酸一水和物（６４１ｍｇ）を加えることによりｐＨを７に調節した後、Ｈ_２Ｏ（１００ｍｌ）およびＥｔＯＡｃを加えた。有機層を分離し、１０％クエン酸溶液（２×）、Ｈ_２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、有機相を蒸発させて、粗生成物７４１ｍｇを無色泡状物として得た。シリカ上でのクロマトグラフィー精製（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）を行って、所望の化合物４２ｅ（６３４ｍｇ、９０．０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,69
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 767,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]:11.18 (br s, 1 H), 8.69 (s, 1 H), 8.66 (s, 1 H), 8.04 (d, J=7.7 Hz, 2 H), 7.64 (m, 1 H), 7.55 (t, J=7.6 Hz, 2 H), 7.44 (d, J=7.5 Hz, 2 H), 7.27 - 7.34 (m, 6 H), 7.22 (m, 1 H), 6.89 (dd, J=9.1, 2.6 Hz, 4 H), 5.84 (dd, J=9.9, 2.7 Hz, 1 H), 4.68 (br t, J=5.8 Hz, 1 H), 3.74, 3.73 (2 x s, 6 H), 3.47 - 3.63 (m, 3 H), 3.28 (m, 1 H), 3.03 (br d, J=9.9 Hz, 1 H), 2.86 (br d, J=11.6 Hz, 1 H), 2.72 (t, J=10.5 Hz, 1 H), 2.53 (m, 1 H), 2.24 - 2.34 (m, 1 H), 1.61 - 1.73 (m, 4 H), 1.54 (br d, J=11.4 Hz, 1 H), 1.00 - 1.30 (m, 5 H).

【0554】

４２ｆ：Ｎ－［１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（ヒドロキシメチル）モルホリン－２－イル］－２－オキソ－ピリミジン－４－イル］ベンズアミド
４２ｃの合成にて記載したプロトコールに従って、ベンゾエート４１ｆ（１．１９ｇ、１．４０ｍｍｏｌ）を鹸化し、シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）後に、表題化合物４２ｆ（７９５ｍｇ、７６．５％）を無色固体として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,59
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 743,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.25 (br s, 1 H), 8.27 (br d, J=7.5 Hz, 1 H), 8.00 (m, 2 H), 7.62 (t, J=7.5 Hz, 1 H), 7.51 (m, 2 H), 7.17 - 7.44 (m, 10 H), 6.85 -6.92 (m, 4 H), 5.64 (dd, J=9.4, 2.6 Hz, 1 H), 4.71 (t, J=6.1 Hz, 1 H), 3.74 (m, 6 H), 3.63 (dd, J=11.6, 7.1 Hz, 1 H), 3.55 (dd, J=11.5, 5.3 Hz, 1 H), 3.41 (d, J=8.7 Hz, 1 H), 3.13 (d, J=8.6 Hz, 1 H), 2.95 (br d, J=10.1 Hz, 1 H), 2.85 (d, J=11.9 Hz, 1 H), 2.48 (m, 1 H), 2.26 (m, 1 H), 2.00 (t, J=10.3 Hz, 1 H), 1.59 - 1.78 (m, 4 H), 1.53 (m, 1 H), 0.98 - 1.30 (m, 5 H).

【0555】

４３ａ：３－［［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－２－イル］メトキシ－（ジイソプロピルアミノ）－ホスファニル］－オキシプロパンニトリル
出発物質４２ａ（３２０ｍｇ、４８８μｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（６ｍｌ）に溶解した。Ａｒ雰囲気下、^ｉＰｒ_２ＮＨ－テトラゾール４４ｍｇ（２４４μｍｏｌ）および２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトライソプロピルホスホロジアミダイト１９０ｍｇ（６０１μｍｏｌ）を加え、溶液を室温で終夜撹拌した。Ｈ_２Ｏ（５０ｍｌ）およびＤＣＭを加えた後、有機層を分離し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン＋１％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望のホスホロアミダイト４３ａ（３２２ｍｇ、７８．６％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｂ－２：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 0,83
イオン化方法： ES⁺: [M+H-ⁱPr₂N+OH]⁺= 773,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]:11.32, 11.30 (2 x br s, 1 H), 7.57, 7.52 (2 x d, J=1.0 Hz, 1 H), 7.38 (m, 2 H), 7.19 - 7.32 (m, 7 H), 6.84 - 6.91 (m, 4 H), 5.68, 5,59 (2 x m, 1 H), 3.89 (m, 0.5 H), 3.59 - 3.78 (m, 3.5 H), 3.73 (s, 6 H), 3.46 - 3.57 (m, 2 H), 3.35 (m, 1 H), 3.22 (m, 1 H), 2.66 - 2.84 (m, 4 H), 2.40 (m, 1 H), 2.17 - 2.28 (m, 2 H), 1.78, 1.76 (2 x s, 3 H), 1.56 - 1.72 (m, 4 H), 1.47 - 1.56 (m, 1 H), 1.00 - 1.31 (m, 17 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147.6, 147.5.

【0556】

４３ｂ：３－［［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－４－シクロヘキシル－６－（２，４－ジオキソピリミジン－１－イル）モルホリン－２－イル］メトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル
出発物質４２ｂ（７９７ｍｇ、１．２４ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（２７ｍｌ）に溶解した。Ａｒ雰囲気下、^ｉＰｒ_２ＮＨ－テトラゾール６４４ｍｇ（３．７３ｍｍｏｌ）および２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトライソプロピルホスホロジアミダイト５７９ｍｇ（６１０μｌ、１．８６ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温で終夜撹拌した。Ｈ_２Ｏ（５０ｍｌ）およびＤＣＭを加えた後、有機層を分離し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物（１．２５ｇ）をＥｔＯＡｃ／ジエチルエーテル（１：１）１０ｍｌに溶解し、ｎ－ペンタン４０ｍｌを加えた。沈殿物を遠心分離により集め、溶媒を廃棄した。沈殿手順を３回繰り返し、Ｓｐｅｅｄｖａｃ上で乾燥した後、所望の生成物４３ｂ（８６５ｍｇ、８２．７％）を無色固体として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｂ－２：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 0,89
イオン化方法： ES⁺: [DMT]⁺ = 303,1
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]:11.34, 11.32 (2 x br s, 1 H), 7.69, 7,65 (2 x d, J=8.1 Hz, 1 H), 7.38 (m, 2 H), 7.19 - 7.32 (m, 7 H), 6.84 - 6.91 (m, 4 H), 5.56 - 5.66 (m, 2 H), 3.89 (m, 0.5 H), 3.44 - 3.79 (m, 5.5 H), 3.74 (s, 6 H), 3.35 (m, 1 H), 3.23 (m, 1 H), 2.70 - 2.86 (m, 3 H), 2.67 (m, 1 H), 2.38 (m, 1 H), 2.11 - 2.29 (m, 2 H), 1.46 - 1.74 (m, 5 H), 0.98 - 1.24 (m, 17 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147.5.

【0557】

４３ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－４－シクロヘキシル－モルホリン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
４３ｂの合成にて記載したプロトコールに従って、出発化合物４２ｃ（６９５ｍｇ、９２３μｍｏｌ）から、表題化合物４３ｃ（６８７ｍｇ、７８．０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｂ－２：
ＵＶ波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝０．９６
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ－^ｉＰｒ_２Ｎ＋ＯＨ］^＋＝８６８．３
ＬＣＭＳ－方法Ｂ－２：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 0,89
イオン化方法： ES⁺: [DMT]⁺ = 303,1
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]:12.06 (br s, 1 H), 11.53 (br s, 1 H), 8.05, 8.04 (2 x s, 1 H), 7.34 - 7.42 (m, 2 H), 7.20 - 7.33 (m, 7 H), 6.83 - 6.91 (m, 4 H), 5.54 - 5.61 (m, 1 H), 3.87 (m, 0.5 H), 3.73, 3.72 (2 x s, 6 H), 3.35 - 3.67 (m, 5.5 H), 3.21, 3.14 (2 x d, J=8.4 Hz, 1 H), 2.65 - 3.03 (m, 5 H), 2.53 - 2.64 (m, 3 H), 2.28 - 2.41 (m, 1 H), 1.62 - 1.81 (m, 4 H), 1.57 (m, 1 H), 0.88 - 1.33 (m, 23 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147.6, 147.5.

【0558】

４３ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－４－シクロヘキシル－モルホリン－２－イル］プリン－６－イル］－ベンズアミド
出発物質４２ｅ（６２５ｍｇ、８１３μｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（１５ｍｌ）に溶解した。Ａｒ雰囲気下、^ｉＰｒ_２ＮＨ－テトラゾール４２２ｍｇ（２．４４ｍｍｏｌ）および２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトライソプロピルホスホロジアミダイト３７９ｍｇ（１．２２ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温で終夜撹拌した。Ｈ_２Ｏ（５０ｍｌ）およびＤＣＭを加えた後、有機層を分離し、水性層をＤＣＭで抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させて、粗生成物８３５ｍｇを無色泡状物として得た。粗生成物をＭＴＢ－エーテル１０ｍｌに溶解し、ｎ－ペンタン４０ｍｌを加えた。沈殿物を遠心分離により集め、溶媒を廃棄した。沈殿手順を３回繰り返し、Ｓｐｅｅｄｖａｃ上で乾燥した後、所望の生成物４３ｅ（７１０ｍｇ、９０．１％）を無色固体として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｂ－３：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 0,63
イオン化方法： ES⁺: [M+H-ⁱPr₂N+OH-A^Bzl]⁺= 647,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]:11.16 (br s, 1 H), 8.72, 8.70 (2 x s, 1 H), 8.60, 8.57 (2 x s, 1 H), 8.04 (d, J=8.1 Hz, 2 H), 7.63 (m, 1 H), 7.55 (m, 2 H), 7.44 (m, 2 H), 7.20 - 7.36 (m, 7 H), 6.85 - 6.94 (m, 4 H), 5.83 - 5.95 (m, 1 H), 3.83 - 3.95 (m, 1 H), 3.74 (s, 6 H), 3.34 - 3.73 (m, 7 H), 3.00 - 3.11 (m, 2 H), 2.76 - 2.92 (m, 2 H), 2.71, 2.62 (2 x m, 2 H), 2.23 - 2.39 (m, 1 H), 1.59 - 1.77 (m, 4 H), 1.47 - 1.58 (m, 1 H), 0.99 - 1.30 (m, 14 H), 0.90 - 0.97 (m, 3 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147.5, 147.3.

【0559】

４３ｆ：Ｎ－［１－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－４－シクロヘキシル－モルホリン－２－イル］－２－オキソ－ピリミジン－４－イル］ベンズアミド
４３ｂの合成にて記載したプロトコールに従って、出発化合物４２ｆ（７６９ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）から、表題化合物４３ｆ（６９８ｍｇ、７１．５％）を無色泡状物として得た。記載した沈殿手順において、ＥｔＯＡｃ／ジエチルエーテル（１：１）溶媒混合物の代わりにジエチルエーテル１０ｍｌに粗生成物を溶解した。
ＬＣＭＳ－方法Ｂ－２：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 0,96
イオン化方法： ES⁺: [M+H-ⁱPr₂N+OH-DMT]⁺= 560,2
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]:11.27 (br s, 1 H), 8.16 (m, 1 H), 8.01 (d, J=7.4 Hz, 2 H), 7.63 (t, J=7.4 Hz, 1 H), 7.51 (m, 2 H), 7.16 - 7.45 (m, 10 H), 6.85 - 6.91 (m, 4 H), 5.73, 5.69 (2 x dd, J=9.7, 2.7 Hz, 1 H), 3.89 - 4.01 (m, 0.5 H), 3.46 - 3.88 (m, 5.5 H), 3.74 (s. 6 H), 3.36 - 3.44 (m, 1 H), 3.24 - 3.34 (m, 1 H), 2.92 - 3.02 (m, 1 H), 2.79 - 2.92 (m, 1 H), 2.75 (t, J=5.9 Hz, 1 H), 2.68 (m, 1 H), 2.44 (m, 1 H), 2.27 (m, 1 H), 2.03 - 2.15 (m, 1 H), 1.57 - 1.73 (m, 4 H), 1.53 (m, 1 H), 0.98 - 1.29 (m, 17 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147.6, 147.5.

【0560】

Ｂ：ＸがＯである式（Ｉ）のヌクレオチド類似体の合成

【0561】

【化50】

【0562】

４４ａ：３－（ベンジルオキシメチル）－１－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３，４－ジヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－５－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
化合物４ａ（７２．７５ｇ、０．１６４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（７２８ｍｌ）中混合物に、－３０℃でＢＯＭ－Ｃｌ（４４．６ｇ、０．２８５ｍｏｌ）およびＤＢＵ（５０ｇ、０．３２７ｍｏｌ）を加えた。混合物を－１５℃から－３０℃で３時間撹拌して、完全に転化させた。混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（２ｌ）中に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃ（３×１ｌ）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ２０：１）により精製して、ＢＯＭ保護生成物４４ａ（６２．７ｇ、６７．７％）を黄色油状物として得た。
1H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ[ppm]: 8.67-8.55 (m, 4 H), 7.70 (tt, J=7.64, 1.77 Hz, 2 H), 7.52-7.20 (m, 10 H), 5.69-5.62 (m, 1 H), 5.52-5.44 (m, 1 H), 4.74-4.54 (m, 2 H), 4.51-4.42 (m, 1 H), 4.11-3.63 (m, 6 H), 2.01-1.84 (m, 4 H), 1.30-0.85 (m, 21 H).

【0563】

４４ｂ：３－（ベンジルオキシメチル）－１－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－３，４－ジヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）－５－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
４４ａにて記載したプロトコールに従って、出発化合物４ｂ（２４ｇ、０．０５６ｍｏｌ）から、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ２０：１から１０：１）後に、４４ｂ（２２．０ｇ、７１．７％）を無色固体として得た。
1H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ[ppm]: 8.02 (d, J=8.0Hz, 1H), 7.34-7.31 (m, 5H), 5.95 (d, J=8.0Hz, 1H), 5.85 (d, J=8.0Hz, 1H), 5.35-5.32 (m, 3H), 5.08 (d, J=4.0Hz, 1H), 4.59 (s, 2H), 4.50 (d, J=4.0Hz, 1H), 4.24-4.19 (m, 2H), 4.09 (t, J=4.0Hz, 1H), 3.83 (s, 2H), 3.65 (t, J=4.0Hz, 2H), 1.03-1.02 (m, 21H).

【0564】

４５ａ：３－（ベンジルオキシメチル）－１－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－５－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］－メチル］－３，４－ジヒドロキシ－５－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
出発物質４４ａ（７．４２ｇ、１３．１ｍｍｏｌ）をピリジン４０ｍｌと共に２回共蒸留し、ＤＣＭ／ピリジン（４：１）１５０ｍｌに溶解した。ＤＭＴ－Ｃｌ（４．７７ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）を加えた後、溶液を室温で６５時間撹拌した。溶液をクエン酸水溶液（１０％）、続いてＨ_２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびＮａＣｌ溶液で２回洗浄した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望の生成物４５ａ（８．５０ｇ、７４．７％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,34
イオン化方法： ES⁺: [M+Na]⁺= 889,5
1H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ[ppm]: 7.46-7.40 (m, 1 H), 7.35-7.12 (m, 14 H), 6.75 (d, J=7.91 Hz, 4 H), 6.04 (d, J=5.52 Hz, 1 H), 5.53-5.37 (m, 2 H), 4.67-4.54 (m, 2 H), 4.46-4.37 (m, 2 H), 3.89 (d, J=10.29 Hz, 1 H), 3.76-3.68 (m, 7 H), 3.62 (d, J=10.16 Hz, 1 H), 3.52 (br d, J=8.41 Hz, 1 H), 3.40-3.33 (m, 1 H), 3.17 (d, J=10.16 Hz, 1 H), 1.44 (s, 3 H), 1.05-0.85 (m, 21 H).

【0565】

４５ｂ：３－（ベンジルオキシメチル）－１－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）－５－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］－メチル］－３，４－ジヒドロキシ－５－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）テトラヒドロフラン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
化合物４４ｂ（２１．０ｇ、３８ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（２３０ｍｌ）中溶液に、室温でＤＩＰＥＡ（９．８ｇ、７６ｍｍｏｌ）およびＤＭＴ－Ｃｌ（１５．４ｇ、４５．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液をＮ_２雰囲気下４時間撹拌した。ＥｔＯＨ（３０ｍｌ）を加えた後、溶媒を減圧下で除去し、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１０：１から１：１）により精製して、４５ｂ（１９．０ｇ、５８．５％）を黄色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.72 (d, J=8.0Hz, 1H), 6.90 (d, J=8.0Hz, 4H), 7.39-7.24 (m, 14H), 5.89 (d, J=8.0Hz, 1H), 3.51 (d, J=8.0Hz, 1H), 5.37-5.24 (m, 4H), 4.58 (s, 2H), 4.34 (t, J=4.0Hz, 1H), 4.24 (dd, J=12.0, 8.0Hz, 1H), 3.73 (s, 6H), 3.40 (d, J=12.0Hz, 1H), 3.29 (d, J=12.0Hz, 1H), 1.19-0.86 (m, 21H).

【0566】

４６ａ：３－（ベンジルオキシメチル）－１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－３，５－ジヒドロキシ－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
４５ａ（２０ｇ、２３．０７ｍｍｏｌ）のアセトン／水（３：１）４００ｍｌ中溶液に、室温でＮａＩＯ_４（６．９ｇ、３２．２９ｍｍｏｌ）の水１００ｍｌ中溶液を加えた。１６時間撹拌した後、溶媒を真空で除去し、残留物をＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ_３（２００ｍｌ）およびブライン（２００ｍｌ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、４６ａを黄色泡状物として得、これを更には精製せずに次のステップに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．３０、２．３２（２種の異性体）
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝９０５．５

【0567】

４６ｂ：３－（ベンジルオキシメチル）－１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－３，５－ジヒドロキシ－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
４６ａに記載したプロトコールに従って、４５ｂ（２０ｇ、２３．５ｍｍｏｌ）を表題化合物４６ｂに変換した（１８．６ｇ、粗製物）。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．２３、２．２５（２種の異性体）
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝８９１．４

【0568】

４７ａ：３－（ベンジルオキシメチル）－１－［（１Ｒ）－１－［（１Ｓ）－１－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－１－（ヒドロキシメチル）－２－トリイソプロピルシリルオキシ－エトキシ］－２－ヒドロキシ－エチル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
化合物４６ａ（粗生成物、２３．０７ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（３２０ｍｌ）中溶液に、室温でＮａＢＨ_４（１．０５ｇ、２７．６８ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。混合物を終夜撹拌し、溶媒を真空で除去した。残留物をＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（５００ｍｌ）およびブライン（５００ｍｌ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ２０：１）後に、４７ａ（１２．０ｇ、４８％）を黄色泡状物として単離した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,31
イオン化方法： ES⁺: [M+Na]⁺= 891,5
1H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ[ppm]: 7.52-7.06 (m, 20 H), 6.80-6.65 (m, 5 H), 6.08 (dd, J=7.03, 3.76 Hz, 1 H), 5.44-5.25 (m, 1 H), 4.64-4.46 (m, 2 H), 3.85-3.63 (m, 12 H), 3.60-3.40 (m, 2 H), 3.35.3.22 (m, 2 H), 2.95-2.66 (m, 2 H), 1.80 (s, 3 H), 1.51 (s, 3 H), 1.03-0.81 (m, 23 H).

【0569】

４７ｂ：３－（ベンジルオキシメチル）－１－［（１Ｒ）－１－［（１Ｓ）－１－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］－メチル］－１－（ヒドロキシメチル）－２－トリイソプロピルシリルオキシ－エトキシ］－２－ヒドロキシ－エチル］ピリミジン－２，４－ジオン
４６ｂ（１５．３５ｇ、１７．７ｍｍｏｌ、粗製物）のＥｔＯＨ（２５０ｍｌ）中溶液に、室温でＮａＢＨ_４（８１８ｍｇ、２１．２ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を１６時間撹拌し、この時点で完全に転化していることが検出された。溶媒を真空で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。有機溶液をＨ_２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した後、有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させて、４７ｂ（１４．８５ｇ、９８．３％）を無色泡状物として得、これを更には精製せずに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．２３
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ］^＋＝３０３．２（ＤＭＴ^＋）

【0570】

４７ｃ：Ｎ－［９－［（１Ｒ）－１－［（１Ｓ）－１－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－１－（ヒドロキシメチル）－２－トリイソプロピルシリルオキシ－エトキシ］－２－ヒドロキシ－エチル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
２３ｃ（３０ｇ、３５ｍｍｏｌ）の無水ＥｔＯＨ（４００ｍｌ）中溶液に、１５～２０℃でＮａＢＨ_４（１．６ｇ、４２ｍｍｏｌ）を加えた。４時間撹拌した後、１０％クエン酸溶液（約２５ｍｌ）を使用することによりｐＨを７に調節した。溶媒を真空で濃縮し、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ２０：１から１０：１）により精製して、４７ｃ（２２．０ｇ、７４．５％）を黄色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.06 (s,1H), 11.71 (s,1H), 8.04 (s, 1H), 7.37-7.28 (m, 3H), 7.26-7.19 (m, 11H), 6.87-6.83 (m, 4H), 6.09 (d, J₁ =5.6Hz, J₂ =5.6Hz, 1H), 5.22 (d, J=5.6Hz, 1H), 4.75 (d, J₁ =4.8Hz, J₂ =4.8Hz, 1H), 3.85-3.84 (m, 2H), 3.74-3.70 (m, 9H), 3.68-3.49 (m, 2H), 3.14 (m, 1H), 2.99-2.81 (m, 1H), 1.15-1.12 (m, 6H), 0.80-0.79 (m, 21H).

【0571】

４７ｅ：Ｎ－［９－［（１Ｒ）－１－［（１Ｓ）－１－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－１－（ヒドロキシメチル）－２－トリイソプロピルシリルオキシ－エトキシ］－２－ヒドロキシ－エチル］プリン－６－イル］ベンズアミド
出発物質２３ｅ（３．５５ｇ、４．１ｍｍｏｌ）をエタノール６０ｍｌに溶解した。Ａｒ雰囲気下、水素化ホウ素ナトリウム２８５．５ｍｇ（７．４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を０℃に冷却した後、クエン酸５０ｍｌを加え、続いて飽和ＮａＨＣＯ_３溶液を加えてｐＨを７にした。溶媒を真空で除去し、水性残留物をＨ_２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶媒を除去し、粗生成物をシリカ（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）上で精製して、所望のジオール４７ｅ（２．１５ｇ）を薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 3,21
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 862,7
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.14 (s, 1 H), 8.66 (s, 1 H), 8.47 (s, 1 H), 8.05 (br d, J=7.3 Hz, 2 H), 7.61 - 7.67 (m, 1 H), 7.51 - 7.60 (m, 2 H), 7.36 (d, J=7.3 Hz, 2 H), 7.27 (br t, J=7.6 Hz, 2 H), 7.17 - 7.23 (m, 5 H), 6.83 (dd, J=9.0, 3.0 Hz, 4 H), 6.43 (t, J=5.7 Hz, 1 H), 5.17 (t, J=5.7 Hz, 1 H), 4.63 (t, J=4.7 Hz, 1 H), 3.76 - 3.99 (m, 2 H), 3.55 - 3.76 (m, 10 H), 3.17 - 3.26 (m, 1 H), 3.05 (d, J=9.7 Hz, 1 H), 0.78 - 1.02 (m, 21).

【0572】

４８ａ：［（２Ｒ）－２－［３－（ベンジルオキシメチル）－５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル］－２－［（１Ｓ）－１－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－１－（ヒドロキシメチル）－２－トリイソプロピルシリルオキシ－エトキシ］エチル］４－メチルベンゼンスルホネート
４７ａ（１０．８ｇ、１２．４３ｍｍｏｌ）、ＮＥｔ_３（３．１４ｇ、３１．０７ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１．５２ｇ、１２．４３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０８ｍｌ）中溶液に、１５℃でＴｓ－Ｃｌ（１．９ｇ、９．９４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５４ｍｌ）中溶液を加えた。混合物を２時間撹拌し、続いて更にＴｓ－Ｃｌ（５００ｍｇ）を加え、ＤＣＭ（５ｍｌ）に溶解した。１５℃で更に１時間撹拌した後、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（２００ｍｌ）およびブライン（２００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ２：１）により精製して、４８ａ（１０ｇ、７８．７％）を黄色油状物として得た。
1H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ[ppm]: 7.74-7.43 (m, 2 H), 7.34-7.00 (m, 18 H) 6.84-6.64 (m, 4 H), 6.42-6.24 (m, 1 H), 5.43-5.15 (m, 2 H), 5.00-4.72 (m, 1 H), 4.63-4.47 (m, 2 H), 4.21-3.90 (m, 2 H), 3.83-3.56 (m, 10 H), 3.29-3.11 (m, 1 H), 2.44-2.19 (m, 4 H), 1.89-1.64 (m, 3 H), 1.07-0.71 (m, 21 H).

【0573】

４８ｂ：［（２Ｒ）－２－［３－（ベンジルオキシメチル）－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル］－２－［（１Ｓ）－１－［［ビス（４－メトキシ－フェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－１－（ヒドロキシメチル）－２－トリイソプロピルシリルオキシ－エトキシ］エチル］４－メチルベンゼンスルホネート
４８ａについてのプロトコールに従い、１．２当量のＴｓ－Ｃｌを使用することにより、４７ｂ（３．０ｇ、３．５ｍｍｏｌ）を４８ｂに変換した。シリカゲル（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１０：１から２：１）上で最後に精製した後、表題化合物４８ｂ（２．０ｇ、５７％）を無色泡状物として単離した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.65-7.56 (m, 3H), 7.35-7.18 (m, 16H), 6.84-6.80 (m, 4H), 6.37-6.36 (m, 1H), 5.74 (s, 2H), 5.64 (d, J=12.0Hz, 1H), 5.23-5.18 (m, 2H), 4.93-4.91 (m, 1H), 4.52 (s, 2H), 4.18-4.09 (m, 2H), 3.71 (s, 6H), 3.23-3.01 (m, 4H), 2.34 (s, 3H), 0.96-0.79 (m, 21H).

【0574】

４８ｃ：［（２Ｒ）－２－［（１Ｓ）－１－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－１－（ヒドロキシメチル）－２－トリイソプロピルシリルオキシ－エトキシ］－２－［２－（２－メチルプロパノイルアミノ）－６－オキソ－１Ｈ－プリン－９－イル］エチル］４－メチルベンゼンスルホネート
４７ｃ（３１．５ｇ、４０．８ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（５３７ｍｌ）中溶液に、Ｎ_２雰囲気下０℃でＮＥｔ_３（１０．３ｇ、１０２ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（４．９８ｇ、４０．８ｍｍｏｌ）を加えた。１０分後、Ｔｓ－Ｃｌ（９．３ｇ、４９ｍｍｏｌ）を０℃で混合物に加え、撹拌を１５～２０℃で６時間続けた。溶媒を蒸発させ、残留物をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ２０：１から１０：１）により精製して、４８ｃ（３０ｇ、７３．７％）を黄色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.03 (s,1H), 11.59 (s,1 H), 8.11 (s, 2 H), 7.09 (s, 1 H), 7.50-7.49 (m, 2 H), 7.31-7.16 (m, 12 H), 6.87-6.86 (m, 4 H), 6.59-6.58 (m, 2 H), 6.31 (s, 1 H), 4.96 (s, 1 H), 4.62 (s, 1 H), 4.37 (s, 1 H), 4.04 (s, 2 H), 3.66-3.61 (m, 4 H), 3.59-3.51 (m, 1 H), 3.12-3.03 (m, 2 H), 2.95 (s, 6 H), 2.79-2.61 (m, 1 H), 2.33 (s, 3 H), 1.20-1.11 (m, 7 H),0.86-0.79 (m, 21 H).

【0575】

４８ｅ：［（２Ｒ）－２－（６－ベンズアミドプリン－９－イル）－２－［（１Ｓ）－１－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］－メチル］－１－（ヒドロキシメチル）－２－トリイソプロピルシリルオキシ－エトキシ］エチル］４－メチル－ベンゼンスルホネート
ジオール４７ｅ（２．１５ｇ、２．５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（６０ｍｌ）に溶解した。室温で、ＮＥｔ_３（８９１．４ｍｇ、１．２２ｍｌ、８．７ｍｍｏｌ）、Ｔｓ－Ｃｌ（５０３．８ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（３０．８ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を加え、溶液を０．５時間撹拌した。２および４時間後に追加のｐ－トルエンスルホニルクロリド１６７．９ｍｇ（０．９ｍｍｏｌ）を加えた後、溶液を更に１５時間撹拌して、完全に転化させた。Ｈ_２Ｏ（１５０ｍｌ）を加えた後、有機層を分離し、ＭｇＳＯ_４で乾燥した。溶媒を除去し、得られた粗生成物４８ｅ（２．５６ｇ）を更には精製せずに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 3,46
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 1014,8
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.20 (br s, 1 H), 8.53 (s, 1 H), 8.43 (s, 1 H), 8.04 - 8.10 (m, 2 H), 7.62 - 7.70 (m, 1 H), 7.54 - 7.60 (m, 2 H), 7.43 - 7.48 (m, 2 H), 7.12 - 7.35 (m, 11 H), 6.77 - 6.86 (m, 4 H), 6.58 (m, 1 H), 4.80 (m, 1 H), 4.59 (m, 1 H), 4.35 (m, 1 H), 3.73 (s, 3 H), 3.72 (s, 3 H), 3.50 - 3.67 (m, 4 H), 3.21 (m, 1 H), 3.09 (m, 1 H), 2.35 (s, 3 H), 0.82 (br s, 21 H).

【0576】

４９ａ：３－（ベンジルオキシメチル）－１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
化合物４８ａ（１０．５ｇ、１０．２６ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（３４３ｍｌ）およびＭｅＯＨ（３４３ｍｌ）中混合物に、１５℃で２Ｍ ＮａＯＨの溶液（７４ｍＬ、１４７．４７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を６５℃で３時間撹拌し、この時点で完全に転化していることが検出された。混合物をクエン酸水溶液（１０％）で中和し、真空で濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（７００ｍｌ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（７００ｍｌ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ５：１）により精製して、表題化合物４９ａ（４．９ｇ、４９．１％）を黄色油状物として得た。
MS (m/z) = 873,4 (M+Na)
1H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ[ppm]: 7.62-7.18 (m, 19 H), 6.82 (br d, J=8.66 Hz, 4 H), 6.10 (dd, J=10.04, 3.39 Hz, 1 H), 5.53 (s, 1 H), 4.74 (s, 1 H), 4.26-4.15 (m, 1 H), 4.04-3.88 (m, 2 H), 3.81 (d, J=1.00 Hz, 7 H), 3.72-3.59 (m, 1 H), 3.31-3.12 (m, 3 H), 1.94-1.80 (m, 3 H), 1.17-0.78 (m, 23 H).

【0577】

４９ｂ：３－（ベンジルオキシメチル）－１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
化合物４８ｂ（１．０ｇ、１．０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２５０ｍｌ）中溶液に、ＮａＯＭｅ（２．５ｇ、４５．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ_２雰囲気下５０℃で３時間加熱し、この時点でＴＬＣは完全に転化していることを示した。溶媒を減圧下で除去し、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１０：１から３：１）により精製して、４９ｂ（０．２７ｇ、３３％）を白色泡状物として得た。
1H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ[ppm]: 7.54 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 7.39-7.37 (m, 2 H), 7.35-7.30 (m, 6 H), 7.28-7.26 (m, 3 H), 7.24-7.22 (m, 1 H), 6.85 (d, J=8.0 Hz, 4 H), 6.05 (dd, J=12.0, 4.0 Hz, 1 H), 5.79 (d, J=12.0 Hz, 1 H), 5.49 (s, 2 H), 4.72 (s, 2 H), 4.20 (d, J=8.0 Hz, 1H), 4.0 (dd, J=12.0, 4.0 Hz, 1 H), 3.94 (d, J=12.0 Hz, 1 H), 3.86 (d, J=12.0 Hz, 1 H), 3.79 (s, 6 H), 3.56 (d, J=12.0 Hz, 1 H), 3.22-3.12 (m, 3 H), 1.10-0.95 (m, 21 H).

【0578】

４９ｃ：２－アミノ－９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－１Ｈ－プリン－６－オン
化合物４８ｃ（２８ｇ、２８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６１６ｍｌ）中溶液に、１５から２０℃で５Ｍ ＮａＯＨ（１５１ｍｌ、７５８ｍｍｏｌ）を滴下添加した。混合物を６０と７０℃との間で３０分間撹拌して、完全に転化させた。混合物を０℃に冷却し、１０％クエン酸溶液（約２００ｍｌ）を使用してｐＨを７に調節した。溶媒を３０℃で濃縮し、残った水性相をＤＣＭ（３×５００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（５００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ２０：１から１０：１）により精製して、４９ｃ（１８ｇ、７９％）を黄色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 10.71 (m,1 H), 7.91 (m,1 H), 7.41-7.40 (m, 2 H), 7.27-7.20 (m, 12 H), 6.82-6.50 (m, 6 H), 6.50 (s, 1 H), 5.88-5.85 (m, 1 H), 4.17-4.14 (m, 1 H), 3.96-3.89 (m, 1 H), 3.80 (m, 2 H), 3.74-3.72 (m, 10 H), 3.69-3.61 (m, 1 H), 3.10-3.08 (m, 1 H), 2.41-2.58 (m, 1 H), 0.94-0.91 (m, 21 H).

【0579】

４９ｅ：９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］プリン－６－アミン
トシレート４８ｅ（２．４５ｇ、２．４ｍｍｏｌ）のジオキサン５０ｍｌ中溶液に、２Ｍ ＮａＯＨ（３６．１６ｍｌ、７２．３ｍｍｏｌ）を加えた。８０℃で２時間撹拌した後、反応混合物を室温に冷却し、有機溶媒を蒸発させた。水性残留物に、Ｈ_２Ｏ（２５０ｍｌ）およびＤＣＭ（１５０ｍｌ）、続いて酢酸４．５ｍｌを加えた。有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶媒を除去し、粗生成物をシリカ（ＤＣＭ中０から５０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（１：１））上で精製して、ジオキサン４９ｅ（１．２２ｇ、６８．６％）を薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 3,41
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 740,6
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 8.33 (s, 1 H), 8.16 (s, 1 H), 7.11 - 7.45 (m, 11 H), 6.72 - 6.79 (m, 4 H), 6.13 (m, 1 H), 4.13 - 4.26 (m, 2 H), 4.04 (m, 1 H), 3.93 (m, 1 H), 3.5 (m, 1 H), 3.71 (s, 3 H), 3.70 (s, 3 H), 3.66 (br d, J=11.6 Hz, 1 H), 3.06 (d, J=9.5 Hz, 1 H), 2.92 (d, J=9.5 Hz, 1 H), 0.88 - 0.95 (m, 21 H).

【0580】

５０ａ：１－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－（ヒドロキシメチル）－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
化合物４９ａ（３．７ｇ、４．３５ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（５５．５ｍｌ）中溶液に、Ｐｄ（ＯＨ）_２／Ｃ（２ｇ、炭素担持２０％および水中５０％）およびトリクロロ酢酸（１．４２ｇ、８．７０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をＨ_２（１５ｐｓｉ）下１５℃で１時間撹拌して、完全に転化させた。混合物を濾過し、濾液を真空で濃縮して、粗製の脱ベンジル化および脱トリチル化中間体を黄色油状物として得、これをＭｅＯＨ（９０ｍｌ）に溶解した。１５℃でＮＥｔ_３（１．１４ｇ、１１．２８ｍｍｏｌ）を加えた後、溶液を終夜撹拌し、この時点で完全に転化していることが検出された。溶媒を真空で除去し、残留物をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ５０：１）により精製して、表題化合物５０ａ（９５０ｍｇ、５１．０％）を白色泡状物として得た。
MS (m/z) = 451,2 (M+Na)
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 8.22 (s, 1 H), 7.26-7.17 (m, 1 H), 6.06-5.93 (m, 1 H), 5.52 (d, J=8.16 Hz, 1 H), 4.39-4.25 (m, 1 H), 4.08 (d, J=11.92 Hz, 1 H), 4.01-3.90 (m, 1 H), 3.85 (d, J=9.29 Hz, 1 H), 3.74 (s, 2 H), 3.56-3.49 (m, 1 H), 3.31 (dd, J=11.29, 10.29 Hz, 1 H), 2.32-2.10 (m, 1 H), 2.02-1.89 (m, 3 H), 1.32-0.96 (m, 17 H).

【0581】

５０ｂ：１－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－（ヒドロキシメチル）－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
４９ｂ（９．５ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）を出発物とし、５０ａにて記載したプルトコルに従って、表題化合物５０ｂを合成した。シリカゲル（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１０：１から１：１）上で精製した後、５０ｂ（４．０ｇ、８６％）を白色泡状物として単離した。
MS (m/z) = 415,0 (M+H)
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 8.74 (br. s., 1 H), 7.47 (d, J=8.03 Hz, 1 H), 6.02-5.97 (m, 1 H), 5.85-5.78 (m, 1 H), 5.50 (br. s., 1 H), 4.32-4.26 (m, 1 H), 4.08 (d, J=12.05 Hz, 1 H), 4.03-3.96 (m, 1 H), 3.85 (d, J=9.29 Hz, 1 H), 3.73 (s, 2 H), 3.51 (d, J=12.05 Hz, 1 H), 3.27 (t, J=10.67 Hz, 1 H), 1.19-1.09 (m, 21 H).

【0582】

５１ａ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
出発化合物５０ａ（６８３ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（３０ｍｌ）に溶解した。室温で、ＮＥｔ_３（７５３ｍｇ、１．０３ｍｌ、７．４ｍｍｏｌ）およびＤＭＴ－Ｃｌ（６１６ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）を加え、反応物を１６時間撹拌し、この時点で出発物質の転化が完結していた。反応溶液を蒸発させ、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、ＤＭＴ保護生成物５１ａ（９９０ｍｇ、９１．０％）を薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．３１
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝７５３．４

【0583】

５２ａ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
出発物質５１ａ（９８５ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４０ｍｌ）に溶解した。ＮＥｔ_３（５．９５ｇ、８．１８ｍｌ、５８．２５ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ_３・３ＨＦ（１０．８０ｇ、１０．９２ｍｌ、６５．０ｍｍｏｌ）を加えた後、完全に転化していることが検出されるまで（約１６時間）、反応物を６５℃で撹拌した。溶媒を除去し、残留物をＨ_２Ｏ／飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（１：２）４００ｍｌ中に注ぎ入れた。水性混合物をＤＣＭ（２×５０ｍｌ）で２回抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させて粗生成物９５６ｍｇを得、これをシリカ（ｎ－ヘプタン中１％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中１０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製した。所望のアルコール５２ａ（７６０ｍｇ、９８．２％）を無色泡状物として単離した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,86
イオン化方法： ES⁺: [M]⁺ = 303,1 (DMT⁺)
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.41 (s, 1 H), 7.56 - 7.61 (m, 1 H), 7.40 (d, J=7.34 Hz, 2 H), 7.20 - 7.32 (m, 7 H), 6.87 (d, J=8.56 Hz, 4 H), 5.90 (dd, J=10.09, 3.36 Hz, 1 H), 4.79 (t, J=5.20 Hz, 1 H), 3.70 - 3.85 (m, 10 H), 3.62 (d, J=11.74 Hz, 1 H), 3.49 (t, J=10.76 Hz, 1 H), 2.97 - 3.12 (m, 2 H), 1.70 (s, 3 H).

【0584】

５３ａ：３－［［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－１，４－ジオキサン－２－イル］メトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル
出発物質５２ａ（６６９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（４１５ｍｇ、５３０μｌ、３．１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍｌ）に溶解した。Ａｒ雰囲気下、２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルクロロホスホロアミダイト３８４ｍｇ（３６１μｌ、１．６ｍｍｏｌ）を０℃で加え、溶液を１時間撹拌して、室温にした。完全に転化させるため、追加の０．５当量のＤＩＰＥＡおよび２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルクロロホスホロアミダイトを加え、反応物を更に２時間撹拌した。ｎ－ブタノール２００μｌを加えた後、反応物を１０分間撹拌した。溶液をＨ_２Ｏ（５０ｍｌ）で洗浄した。水性層を分離し、ＤＣＭ（５０ｍｌ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。残留物をジエチルエーテル３０ｍｌに溶解し、－３０℃でｎ－ペンタン１００ｍｌに滴下添加した。沈殿物を濾過し、真空乾固して、所望の生成物５３ａ（７２３ｍｇ、８０．１％）を無色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.40 (s, 1 H), 7.63, 7.60 (2 x s, 1 H), 7.36 - 7.45 (m, 2 H), 7.21 - 7.34 (m, 7 H), 6.84 - 6.90 (m, 4 H), 5.93 - 6.03 (m, 1 H), 3.76 - 4.04 (m, 4 H), 3.74 (s, 6 H), 3.42 - 3.71 (m, 6 H), 2.98 - 3.12 (m, 2 H), 2.58 - 2.74 (m, 2 H), 1.75, 1.72 (2 x s, 3 H), 0.95 - 1.14 (m, 12 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,8, 148,7.

【0585】

５１ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
４９ｃ（１４．１８ｇ、１８．８ｍｍｏｌ）の無水ピリジン１５０ｍｌ中溶液に、Ｎ_２雰囲気下０℃でＴＭＳＣｌ（１５．２２ｇ、１４１ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２時間撹拌した後、２－メチルプロパノイルクロリド（２．１８ｇ、２０．６ｍｍｏｌ）を０℃で加え、撹拌を室温で２時間続けて、完全に転化させた。ＥｔＯＨ（２０ｍｌ）を加えた後、混合物を追加の１０分間撹拌した。溶液を氷水（５００ｍｌ）中に注ぎ入れ、ＤＣＭ（３×５００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を１０％クエン酸水溶液（２×５００ｍｌ）、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（３００ｍｌ）およびブライン（２００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＦＡ／ＡＣＮ）により精製して、５１ｃ（９．５ｇ、６１．２％）を白色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 8.08 (s, 2 H), 7.39-7.26 (m, 2 H), 7.25-7.19 (m, 8 H), 6.80 (d, J=8.0 Hz, 4 H), 5.79 (d, J=1.6 Hz, 1 H), 4.18-4.12 (m, 1 H), 3.99-3.81 (m, 4 H), 3.72 (s, 7 H), 3.69 (d, J=10 Hz, 1 H), 3.11 (d, J=11.2 Hz, 1 H), 2.93 (d, J=10.4 Hz, 1 H), 2.72 (s, 1 H), 1.11-1.08 (m, 7 H), 1.01-0.91 (m, 21 H).

【0586】

５１ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
ジオキサン４９ｅ（１．８４ｇ、２．５ｍｍｏｌ）をＡｒ雰囲気下乾燥ピリジン３０ｍｌに溶解した。室温で、塩化ベンゾイル１．０５ｇ（８６７μｌ、７．５ｍｍｏｌ）を加え、反応物を３時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、残留物をＨ_２Ｏに溶解し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、クエン酸溶液（１０％）（２×１００ｍｌ）、Ｈ_２Ｏ（１×１００ｍｌ）および飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（１×１００ｍｌ）で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶媒を除去し、粗生成物（２．６１ｇ、黄色泡状物）をピリジン／ＥｔＯＨ（１：１）４０ｍｌに溶解した。０℃で、２Ｎ ＮａＯＨ（７．４６ｍｌ、１４．９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を３０分間撹拌した。ＡｃＯＨ（８６４μｌ）を加えた後、反応溶液を真空で濃縮した。残留物をＨ_２Ｏ（１００ｍｌ）で処理し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、クエン酸溶液（１０％）（２×１００ｍｌ）、Ｈ_２Ｏ（１×１００ｍｌ）、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（１×１００ｍｌ）および飽和ＮａＣｌ溶液（１×１００ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物（２．１９ｇ）をシリカ（ｎ－ヘプタン中０から７０％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、表題化合物５１ｅ（１．７２ｇ、８２．０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 3,56
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 842,8
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.26 (br s, 1 H), 8.77 (s, 1 H), 8.68 (s, 1 H), 8.05 (m, 2 H), 7.64 (br t, J=7.3 Hz, 1 H), 7.56 (m, 2 H), 7.37 (dd, J=7.8, 1.5 Hz, 2 H), 7.13 - 7.28 (m, 7 H), 6.76 (dd, J=8.9, 1.7 Hz, 4 H), 6.28 (dd, J=10.1, 3.4 Hz, 1 H), 4.20 - 4.36 (m, 2 H), 4.12 (m, 1 H), 3.84 - 3.99 (m, 2 H), 3.64 - 3.75 (m, 7 H), 3.06 (m, 1 H), 2.96 (m, 1 H), 0.88 - 1.06 (m, 21 H).

【0587】

５２ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
５１ｃ（１．３３ｇ、１．６１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１６ｍｌ）に溶解した。ＮＥｔ_３（１．６５ｇ、２．２６ｍｌ、１６．１ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ_３・３ＨＦ（１．３２ｇ、１．３４ｍｌ、８．０５ｍｍｏｌ）を加えた後、溶液を９０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、続いてＮａＨＣＯ_３（２．５ｇ）およびＨ_２Ｏ（１０ｍｌ）を加えた。２時間撹拌した後、混合物を蒸発させ、残留物をＤＣＭ／ｉＰｒＯＨ（４：１）２５ｍｌに溶解し、シリカ（ＤＣＭ中０から１０％ＭｅＯＨ）上で精製して、表題化合物５２ｃ（０．８３ｇ、７６．５％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,33
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 670,2
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.11 (br s, 1 H), 11.66 (s, 1 H), 8.11 (s, 1 H), 7.37 (d, J=7.46 Hz, 2 H), 7.18 - 7.29 (m, 7 H), 6.84 (dd, J=8.93, 2.69 Hz, 4 H), 5.98 (dd, J=8.31, 4.40 Hz, 1 H), 4.81 (t, J=5.26 Hz, 1 H), 3.90 - 4.02 (m, 2 H), 3.67 - 3.86 (m, 4 H), 3.72 (s, 6 H), 3.04 (d, J=9.54 Hz, 1 H), 2.96 (m, 1 H), 2.75 - 2.81 (m, 1 H), 1.11 (t, J=6.66 Hz, 6 H).

【0588】

５２ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
シリルエーテル５１ｅ（１．１０ｇ、１．３ｍｍｏｌ）をＮＭＰ（２０ｍｌ）に溶解した。ＮＥｔ_３・ＨＦ（３．４７ｇ、３．５０ｍｌ、２０．９ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ_３（１．８５ｇ、２．５４ｍｌ、１８．２ｍｍｏｌ）を加えた後、反応溶液を６５℃で１８時間撹拌した。室温に冷却した後、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液２５０ｍｌおよびＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）を加え、混合物を３０分間撹拌した。有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液でおよび飽和ＮａＣｌ溶液で２回洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶媒を除去し、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（０．５％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、５２ｅ（８５２ｍｇ、９５．１％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,43
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 688,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.22 (br s, 1 H), 8.75 (s, 1 H), 8.59 (s, 1 H), 8.04 (d, J=7.6 Hz, 2 H), 7.64 (t, J=7.1 Hz, 1 H), 7.55 (t, J=7.6 Hz, 2 H), 7.38 (d, J=7.6 Hz, 2 H), 7.14 - 7.32 (m, 7 H), 6.80 (m, 4 H), 6.26 (dd, J=9.8, 3.3 Hz, 1 H), 4.85 (t, J=5.4 Hz, 1 H), 4.29 (t, J=10.6 Hz, 1 H), 4.09 (dd, J=11.1, 3.2 Hz, 1 H), 3.73 - 3.90 (m, 4 H), 3.72 (s, 3 H), 3.71 (s, 3 H), 3.03 (m, 1 H), 2.95 (m, 1 H).

【0589】

５３ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－１，４－ジオキサン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
アルコール５２ｃ（１００ｍｇ、１４９μｍｏｌ）、モレキュラーシーブ（４Å）０．２ｇおよびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド１３．５ｍｇ（７５μｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（２．５ｍｌ）に溶解した。Ａｒ雰囲気下、２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトライソプロピルホスホロジアミダイト４５．５ｍｇ（４８μｌ、１４６μｍｏｌ）を加え、溶液を室温で２時間撹拌して、完全に転化させた。飽和ＮａＨＣＯ_３溶液を加えた後、有機相を分離し、水性相をＤＣＭで１回洗浄した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をシリカ（ＤＣＭ＋０．５％ＮＥｔ_３で予め調整した、ＤＣＭ中０から１０％ＭｅＯＨ）上で精製して、表題化合物５３ｃ（９５ｍｇ、７３．１％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,34, 2,36
イオン化方法： ES⁺: [M]⁺ = 787,2 (M-ⁱPr₂N+OH+H⁺)
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.09 (br s, 1 H), 11.61, 11.58 (2 x s, 1 H), 8.13, 8.08 (2 x s, 1 H), 7.35 (m, 2 H), 7.18 - 7.28 (m, 7 H), 6.80 - 6.85 (m, 4 H), 5.97 (m, 1 H), 3.95 - 4.07 (m, 4 H), 3.56 - 3.94 (m, 4 H), 3.72 (s, 6 H), 3.36 - 3.54 (m, 2 H), 2.96 - 3.11 (m, 2 H), 2.68 - 2.82 (m, 2 H), 2.59 (m, 1 H), 0.96 - 1.15 (m, 12 H), 0.83 - 0.90 (m, 6 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]:148,1, 147,9.

【0590】

５３ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－１，４－ジオキサン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
出発物質５２ｅ（８４８ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド６４０ｍｇ（３．７ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（２５ｍｌ）に溶解した。Ａｒ雰囲気下、２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトライソプロピルホスホロジアミダイト５７４．７ｍｇ（１．９ｍｍｏｌ）を室温で加えた。１６時間後、Ｈ_２Ｏ（５０ｍｌ）を加えた。有機層を分離し、水性相をＤＣＭで抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、溶媒を３５℃で真空除去した。粗生成物をＥｔＯＡｃ／ジエチルエーテル（１：１）１０ｍｌに溶解し、ｎ－ペンタン４０ｍｌを加えた。沈殿物を遠心分離により集め、溶媒を廃棄した。沈殿手順を３回繰り返し、Ｓｐｅｅｄｖａｃ上で乾燥した後、所望の生成物５３ｅ（９９１ｍｇ、９０．５％）を無色固体として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｂ－３：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 0,61
イオン化方法： ES⁺: [M+H-ⁱPr₂N+OH]⁺= 805,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm] 11.21 (br s, 1 H), 8.76, 8.74 (2 x s, 1 H), 8.63, 8.61 (2 x s, 1 H), 8.04 (d, J=7.3 Hz, 2 H), 7.65 (t, J=7.3 Hz, 1 H), 7.55 (m, 2 H), 7.37 (br d, J=8.3 Hz, 2 H), 7.14 - 7.30 (m, 7 H), 6.75 - 6.86 (m, 4 H), 6.30 (m, 1 H), 4.27 (m, 1 H), 3.85 - 4.17 (m, 4 H), 3.61 - 3.80 (m, 9 H), 3.49 (m, 2 H), 3.08 (m, 1 H), 2.98 (dd, J=9.1, 7.1 Hz, 1 H), 2.72 (m, 1 H), 2.62 (m, 1 H), 1.04 - 1.14 (m, 6 H), 1.02 (m, 3 H), 0.93 (d, J=6.8 Hz, 3 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,7, 147,6.

【0591】

【化51】

【0592】

５４：［（２Ｒ）－２－［３－（ベンジルオキシメチル）－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル］－２－［（１Ｓ）－１－［［ビス（４－メトキシ－フェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－１－（ｐ－トリルスルホニルオキシメチル）－２－トリイソプロピルシリルオキシ－エトキシ］エチル］４－メチルベンゼンスルホネート
出発物質４７ｂ（１４．８０ｇ、１７．３１ｍｍｏｌ）を乾燥ピリジン１２０ｍｌに溶解した。室温で、Ｔｓ－Ｃｌ（１３．３３ｇ、６９．２３ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で撹拌した。２３時間後、ＤＭＡＰ（１．０ｇ、８．２ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を更に２４時間続けた。追加のＴｓ－Ｃｌ（６．６７ｇ、３４．６２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を４８時間撹拌して、完全に転化させた。溶媒を除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。有機溶液をＨ_２Ｏ、クエン酸水溶液（１０％）、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびブラインで洗浄した。ＭｇＳＯ_４で脱水し、溶媒を蒸発させて粗生成物を得、これをシリカ（ｎ－ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中２０から５０％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、５４（１２．０ｇ、５９．６％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．３３
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１１８５．５

【0593】

５５：［（２Ｒ）－２－［３－（ベンジルオキシメチル）－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル］－２－［（１Ｓ）－１－（ヒドロキシメチル）－１－（ｐ－トリルスルホニルオキシメチル）－２－トリイソプロピルシリルオキシ－エトキシ］エチル］４－メチルベンゼンスルホネート
５４（１２．０ｇ、１０．３１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２４０ｍｌ）中溶液をＤＣＡ（２６．８７ｇ、１７．２２ｍｌ、２０６．２８ｍｍｏｌ）で処理した。溶液を室温で３０分間撹拌して、完全に転化させた。有機溶液を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で洗浄し、層を分離した。水性相をＤＣＭで２回洗浄し、合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物をシリカ（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、表題化合物５５（７．８４ｇ、８８．３％）をオレンジ色油状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．１９
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝８６１．３

【0594】

５６：［（２Ｓ，６Ｒ）－６－［３－（ベンジルオキシメチル）－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル］－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］メチル４－メチルベンゼンスルホネート
５５（７．８３ｇ、９．０９ｍｍｏｌ）を乾燥ＭｅＯＨ（２５０ｍｌ）に溶解した。ナトリウムメトキシド２２．１１ｇ（４０９．１８ｍｍｏｌ）を加えた後、溶液を５０℃で撹拌した。２．５時間後、溶媒を除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。有機溶液をＨ_２Ｏおよびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をシリカ（ｎ－ヘプタン中２０から１００％エチル）上で精製して、所望のジオキサン５６を無色泡状物として得た（３．８４ｇ、６１．３％）。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．２０
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝６８９．３

【0595】

５７：［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［３－（ベンジルオキシメチル）－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル］－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］メチルベンゾエート
出発化合物５６（３．８４ｇ、５．５７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２００ｍｌ）に溶解した。安息香酸ナトリウム２．０３ｇ（１３．９４ｍｍｏｌ）を加えた後、溶液を１５０℃で２４時間撹拌して、完全に転化させた。反応混合物を室温に冷却し、溶媒を真空で除去した。残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、Ｈ_２Ｏおよびブラインで２回洗浄した。ＭｇＳＯ_４で脱水し、溶媒を蒸発させた後、粗生成物をシリカ（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、５７（２．６３ｇ、７３．８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．２４
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝６３９．３

【0596】

５８：［（２Ｒ，６Ｒ）－６－（２，４－ジオキソピリミジン－１－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］メチルベンゾエート
５７（２．６２ｇ、４．１０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６５ｍｌ）中溶液に、Ａｒ雰囲気下Ｐｄ（ＯＨ）_２（炭素担持２０％）１４４ｍｇ（０．２１ｍｍｏｌ）を加えた。溶液をＨ_２でパージした後、反応混合物を４ｂａｒでのＨ_２の雰囲気下室温で撹拌した。１時間後、触媒を濾過し、濾液を減圧下で蒸発させた。粗生成物（２．１１ｇ）をＭｅＯＨ（４０ｍｌ）に溶解し、ＮＥｔ_３（３．６３ｇ、５．０ｍｌ、３５．８７ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を室温で３０分間撹拌して、完全に転化させた。クエン酸水溶液（１０％）を使用してｐＨを７に調節した後、溶媒を除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。クエン酸水溶液（１０％）および飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で洗浄した後、有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させて、５８（１．９７ｇ、９９．３％、粗製物）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．１２
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５１９．３

【0597】

５９：［（２Ｒ，６Ｒ）－６－（２，４－ジオキソピリミジン－１－イル）－２－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］メチルベンゾエート
５８（９８０ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（３５ｍｌ）に溶解した。室温で、ピリジン－ＨＦ（６５％）７．２０ｇ（６．５５ｍｌ、４７．２４ｍｍｏｌ）を加え、溶液を１．５時間撹拌した。更にピリジン－ＨＦ（６５％）７．２０ｇを加えた後、撹拌を５時間続け、この時点で完全な転化が検出された。固体のＮａＨＣＯ_３（約２４ｇ）を加えた後、反応物を１．５時間撹拌した。無機塩を濾別し、濾液を蒸発させた。粗生成物をシリカ（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）上で精製して、表題化合物５９（４９４ｍｇ、７２．２％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝１．２２
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝３６３．１

【0598】

６０：［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（２，４－ジオキソピリミジン－１－イル）－１，４－ジオキサン－２－イル］メチルベンゾエート
５９（４９０ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍｌ）中溶液に、室温でＤＩＰＥＡ（８７４ｍｇ、１．１８ｍｌ、６．７６ｍｍｏｌ）およびＤＭＴ－Ｃｌ（５８４ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）を加えた。１６時間撹拌した後、溶液を蒸発させ、粗生成物をシリカ（ｎ－ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、所望のＤＭＴ－エーテル６０（８９４ｍｇ、９９．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝１．９６
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝６８７．２

【0599】

５２ｂ：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
６０（８８８ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２０ｍｌ）およびＭｅＯＨ（５ｍｌ）に溶解した。０℃で、２Ｍ ＮａＯＨ溶液６．６８ｍｌ（１３．３６ｍｍｏｌ）を加え、溶液を１時間撹拌して、室温にした。０℃に冷却した後、クエン酸水溶液（１０％）１２ｍｌを加え、混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶媒を除去した。粗生成物をシリカ（ｎ－ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中０から１００％（ＥｔＯＡｃ＋５％ＭｅＯＨ））上で精製して、５２ｂ（７３０ｍｇ、９７．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,78
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 559,4
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.42 (br s, 1 H), 7.67 (d, J=8.07 Hz, 1 H), 7.39 (d, J=6.95 Hz, 2 H), 7.19 - 7.33 (m, 7 H), 6.85 - 6.90 (m, 4 H), 5.89 (dd, J=10.03, 3.18 Hz, 1 H), 5.66 (d, J=8.07 Hz, 1 H), 4.80 (t, J=5.26 Hz, 1 H), 3.70 - 3.83 (m, 10 H), 3.55 (d, J=11.62 Hz, 1 H), 3.44 (m, 1 H), 3.08 (d, J=9.41 Hz, 1 H), 2.97 (d, J=9.41 Hz, 1 H).

【0600】

５３ｂ：３－［［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（２，４－ジオキソピリミジン－１－イル）－１，４－ジオキサン－２－イル］メトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル
出発化合物５２ｂ（７２５ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド１２２ｍｇ（０．７１ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（２０ｍｌ）に溶解した。Ａｒ雰囲気下、２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトライソプロピルホスホロジアミダイト４２９ｍｇ（４５２μｌ、１．４３ｍｍｏｌ）を室温で加え、溶液を１６時間撹拌した。更にジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド１２２ｍｇ（０．７１ｍｍｏｌ）および２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトライソプロピルホスホロジアミダイト４２９ｍｇ（４５２μｌ、１．４３ｍｍｏｌ）を加えた後、撹拌を２時間続けて、完全に転化させた。溶媒を除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、Ｈ_２Ｏおよび飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶媒を蒸発させ、粗生成物をジエチルエーテル２５ｍｌに溶解した。撹拌しながら、有機溶液をｎ－ペンタン１５０ｍｌ中に滴下した。沈殿物を濾過し、４０℃で真空乾固して、表題化合物５３ｂ（７５１ｍｇ、７６．３％）を無色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.39 (br s, 1 H), 7.65 - 7.73 (m, 1 H), 7.34 - 7.43 (m, 2 H), 7.19 - 7.34 (m, 7 H), 6.84 - 6.90 (m, 4 H), 5.95 (m, 1 H), 5.66 (m, 1 H), 3.92 - 4.10 (m, 2 H), 3.78 - 3.91 (m, 2 H), 3.73 (s, 6 H), 3.41 - 3.68 (m, 6 H), 3.11 (m, 1 H), 2.98 (m, 1 H), 2.70 (m, 1 H), 2.61 (m, 1 H), 0.94 - 1.14 (m, 12 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,9, 148,7.

【0601】

【化52】

【0602】

６１：［（２Ｓ，６Ｒ）－６－（２，４－ジオキソピリミジン－１－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－メチルベンゾエート
５０ｂ（２．６６ｇ、６．４２ｍｍｏｌ）を乾燥ピリジン３５ｍｌに溶解した。室温で、塩化ベンゾイル１．３７ｇ（１．１３ｍｌ、９．６２ｍｍｏｌ）を滴下添加し、溶液を１６時間撹拌して、完全に転化させた。溶媒を真空で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。１０％クエン酸水溶液（２×）、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびＮａＣｌ溶液で洗浄した後、有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をシリカ（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、６１（２．０ｇ、６０．０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝３．０２
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５１９．４

【0603】

６２：［（２Ｓ，６Ｒ）－６－（４－アミノ－２－オキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］メチルベンゾエート
６１（１．９９ｇ、３．６１ｍｍｏｌ）の乾燥ＡＣＮ中溶液に、ＮＥｔ_３（６．２８ｇ、８．６３ｍｌ、６１．４３ｍｍｏｌ）および１Ｈ－１，２，４－トリアゾール３．０６ｇ（４３．３６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃に冷却し、ＰＯＣｌ_３（１．６６ｇ、１．０１ｍｌ、１０．８４ｍｍｏｌ）の乾燥ＡＣＮ（１５ｍｌ）中溶液を激しく撹拌しながら滴下添加した。１時間後、溶媒を真空で除去し、残留物に飽和ＮａＨＣＯ_３／Ｈ_２Ｏ混合物（１：１）１５０ｍｌを加えた。水性混合物をＤＣＭで３回抽出し、合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物を乾燥ＡＣＮ（５０ｍｌ）に溶解し、続いてＮＨ_３水溶液（３２％）５０ｍｌを加えた。終夜（１７時間）撹拌した後、溶液を濃縮し、残った水性混合物をＤＣＭ（２×１００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥した。溶媒を蒸発させて、６２（１．９３ｇ、定量的、粗生成物）を薄黄色泡状物として得、これを更には精製せずに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．５９
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５１８．４

【0604】

６３ｆ：［（２Ｓ，６Ｒ）－６－（４－ベンズアミド－２－オキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］メチルベンゾエート
６２（１．９３ｇ、３．７２ｍｍｏｌ）を乾燥ピリジン３０ｍｌに溶解した。室温で、塩化ベンゾイル０．７９ｇ（０．６６ｍｌ、５．５９ｍｍｏｌ）を滴下添加し、溶液を１８時間撹拌して、完全に転化させた。溶媒を真空で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。１０％クエン酸水溶液（２×）、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびＮａＣｌ溶液で洗浄した後、有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をシリカ（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、６３ｆ（１．９１ｇ、８２．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝３．２７
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝６２２．５

【0605】

５０ｆ：Ｎ－［１－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－（ヒドロキシメチル）－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－２－オキソ－ピリミジン－４－イル］ベンズアミド
６３ｆ（９５２ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ／ピリジン（１：１）２０ｍｌに溶解した。０℃で、１Ｍ ＮａＯＨ溶液９．１９ｍｌ（９．１９ｍｍｏｌ）を加え、溶液を０℃で３時間撹拌し、この時点で完全に転化していることが検出された。クエン酸一水和物（約６５０ｍｇ、Ｈ_２Ｏ（１５ｍｌ）に溶解）を使用してｐＨを６にした。有機溶媒を蒸発させた後、水性層をＥｔＯＡｃで抽出した。有機相をクエン酸水溶液（１０％）、Ｈ_２Ｏおよび飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で脱水し、蒸発させた後、粗生成物をシリカ（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、表題化合物５０ｆ（６７８ｍｇ、８５．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．７２
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５１８．２

【0606】

５１ｆ：Ｎ－［１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－２－オキソ－ピリミジン－４－イル］ベンズアミド
５０ｆ（６７３ｍｇ、１．３０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ／ピリジン（１：１）２０ｍｌに溶解した。室温でＤＭＴ－Ｃｌ（７１９ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）を加えた後、溶液を２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。クエン酸水溶液（１０％）で２回および飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で洗浄した後、有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空で濃縮した。粗生成物をシリカ（ｎ－ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中０から７０％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、ＤＭＴ－エーテル５１ｆ（９７５ｍｇ、９１．５％）を薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝３．６１
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ］^－＝８１８．４

【0607】

５２ｆ：Ｎ－［１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－２－オキソ－ピリミジン－４－イル］ベンズアミド
５１ｆ（９７０ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ_３（１．６８ｇ、２．３１ｍｌ、１６．５６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２０ｍｌ）に溶解した。ＮＥｔ_３・３ＨＦ（３．１５ｇ、３．１８ｍｌ、１８．９３ｍｍｏｌ）を加えた後、反応物を６５℃で４８時間撹拌して、完全に転化させた。室温に冷却した後、混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液２００ｍｌ中に注ぎ入れ、１．５時間撹拌した。ＤＣＭ（２×１００ｍｌ）で抽出した後、合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。シリカ（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で最後に精製して、５２ｆ（７４５ｍｇ、９４．９％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,61
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 664,3
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ[ppm]: 11.31 (br s, 1 H), 8.13 (br d, J=7.15 Hz, 1 H), 8.00 (d, J=7.66 Hz, 2 H), 7.63 (t, J=7.38 Hz, 1 H), 7.51 (t, J=7.79 Hz, 2 H), 7.36 - 7.42 (m, 3 H), 7.22 - 7.33 (m, 7 H), 6.87 - 6.91 (m, 4 H), 6.03 (dd, J=9.72, 3.12 Hz, 1 H), 4.84 (t, J=5.50 Hz, 1 H), 3.94 (dd, J=11.19, 3.12 Hz, 1 H), 3.84 - 3.89 (m, 1 H), 3.72 - 3.81 (m, 8 H), 3.56 (d, J=11.92 Hz, 1 H), 3.33 - 3.38 (m, 1 H), 3.16 (d, J=9.35 Hz, 1 H), 3.02 (d, J=9.17 Hz, 1 H).

【0608】

５３ｆ：Ｎ－［１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－１，４－ジオキサン－２－イル］－２－オキソ－ピリミジン－４－イル］ベンズアミド
出発化合物５２ｆ（７１５ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド５５９ｍｇ（３．２３ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（２０ｍｌ）に溶解した。Ａｒ雰囲気下、２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトライソプロピルホスホロジアミダイト５０２ｍｇ（５２９μｌ、１．６２ｍｍｏｌ）を室温で加え、溶液を１６時間撹拌して、完全に転化させた。Ｈ_２Ｏ（４０ｍｌ）を加えた後、有機層を分離し、水性相をＤＣＭで抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をシリカ（ｎ－ヘプタン＋１．０％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中０から１００％ＭＴＢ－エーテル／ＤＣＭ（１：１））上で精製して、表題化合物５３ｆ（８８７ｍｇ）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.30 (br s, 1 H), 8.15 (2 x d, J=7.53 Hz, 1 H), 8.00 (m, 2 H), 7.63 (m, 1 H), 7.51 (m, 2 H), 7.20 - 7.44 (m, 10 H), 6.89 (br d, J=8.72 Hz, 4 H), 6.03 - 6.13 (m, 1 H), 3.78 - 4.17 (m, 4 H), 3.74 (s, 6 H), 3.35 - 3.71 (m, 6 H), 3.20 (m, 1 H), 3.03 (m, 1 H), 2.89 (m, 1 H), 2.72 (m, 1 H), 0.89 - 1.22 (m, 12 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 148,2, 147,7.

【0609】

【化53】

【0610】

５０ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－（ヒドロキシメチル）－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
ＤＭＴ－エーテル５１ｃ（９．５ｇ、１１．５ｍｍｏｌ；合成スキーム１２参照）の無水ＤＣＭ（１９０ｍｌ）中溶液に、Ｎ_２雰囲気下０℃でＤＣＡＡ（２９．７ｇ、２３０ｍｍｏｌ）を滴下添加した。室温で３０分間撹拌した後、ＴＬＣは完全に転化していることを示した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（１００ｍｌ）で中和し、ＤＣＭ（３×２００ｍｌ）で抽出した。有機層を合わせ、飽和ＮａＣｌ溶液（２００ｍｌ）で洗浄した。無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥した後、有機溶液を蒸発させ、粗生成物を分取ＨＰＬＣ（ＡＣＮ、０．１％ＦＡ）により精製して、所望の生成物５０ｃ（９．５ｇ、６１．２％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,68
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 524,4
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.10 (br s, 1 H), 11.53 (br s, 1 H), 8.21 (s, 1 H), 5.88 (dd, J=9.8, 3.3 Hz, 1 H), 4.75 (t, J=6.0 Hz, 1 H), 4.06 (d, J=9.5 Hz, 1 H), 3.98 (dd, J=11.4, 3.3 Hz, 1 H), 3.86 (d, J=11.7 Hz, 1 H), 3.74 - 3.83 (m, 2 H), 3.61 (d, J=11.7 Hz, 1 H), 3.46 (d, J=6.1 Hz, 2 H), 2.79 (m, 1 H), 1.00 - 1.16 (m, 27 H).

【0611】

５０ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－（ヒドロキシメチル）－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
ＤＭＴ－エーテル５１ｅ（６１５ｍｇ、７２９μｍｏｌ）をＤＣＭ（２５ｍｌ）に溶解した。ジクロロ酢酸９４９ｍｇ（６０８μｌ、７．３ｍｍｏｌ）を加えた後、反応混合物を１分間撹拌して、完全に転化させた。反応溶液を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液１００ｍｌで洗浄した。有機層を分離し、水性相をＤＣＭ（３５ｍｌ）で２回抽出した。合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望の生成物５０ｅ（３０２ｍｇ、７６．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,70
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 542,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.20 (s, 1 H), 8.75 (s, 1 H), 8.69 (s, 1 H), 8.04 (d, J=7.5 Hz, 2 H), 7.65 (m, 1 H), 7.55 (m, 2 H), 6.23 (m, 1 H), 4.75 (t, J=6.1 Hz, 1 H), 4.01 - 4.12 (m, 3 H), 3.94 (d, J=9.9 Hz, 1 H), 3.86 (d, J=11.9 Hz, 1 H), 3.65 (d, J=11.7 Hz, 1 H), 3.44 (m, 2 H), 1.10 - 1.17 (m, 3 H), 1.04 - 1.09 (m, 18 H).

【0612】

６３ａ：［（２Ｓ，６Ｒ）－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］メチルベンゾエート
化合物６１（スキーム１５）にて記載したプロトコールに従って、５０ａ（１．０ｇ、２．３３ｍｍｏｌ）から、シリカ（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製した後、ベンゾイル化生成物６３ａ（１．２４ｇ、８６．４％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝３．１０
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ］^－＝５３１．６

【0613】

６３ｃ：［（２Ｓ，６Ｒ）－６－［２－（２－メチルプロパノイルアミノ）－６－オキソ－１Ｈ－プリン－９－イル］－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］メチルベンゾエート
出発物質５０ｃ（２．８０ｇ、５．３５ｍｍｏｌ）を乾燥ピリジン２０ｍｌに溶解した。塩化ベンゾイル９４９ｍｇ（７８４μｌ、６．６８ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（６６７ｍｇ、５．３５ｍｍｏｌ）を加えた後、反応溶液を室温で４時間撹拌した。更に塩化ベンゾイル１８９ｍｇ（１５７μｌ、１．３７ｍｍｏｌ）を加え、反応物を終夜撹拌して、完全に転化させた。溶媒を真空で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、５％クエン酸水溶液、５％ＮａＨＣＯ_３水溶液および飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、有機層を蒸発させ、粗生成物をシリカゲル（ＤＣＭ中０から１０％ＭｅＯＨ）上で精製して、ベンゾイルエステル６３ｃ（３．３３ｇ、９９．２％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 3,06
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 628,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.84 (s, 1 H), 11.58 (s, 1 H), 8.09 (s, 1 H), 7.79 - 7.86 (m, 2 H), 7.56 - 7.64 (m, 1 H), 7.41 - 7.49 (m, 2 H), 5.89 (dd, J=5.9 Hz, 3.4 Hz, 1 H), 4.18 - 4.32 (m, 3 H), 4.07 (m, 1 H), 3.77 - 4.02 (m, 4 H), 2.79 (m, 1 H), 0.93 - 1.21 (m, 27 H).

【0614】

６３ｅ：［（２Ｓ，６Ｒ）－６－［６－（ジベンゾイルアミノ）プリン－９－イル］－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］メチルベンゾエート
遊離アルコール５０ｅ（２９９ｍｇ、５５２μｍｏｌ）の乾燥ピリジン１０ｍｌ中溶液に、室温で塩化ベンゾイル９４．０ｍｇ（７７．７μｌ、６６２．３μｍｏｌ）を加えた。１８時間後、溶媒を容量５ｍｌに濃縮し、更に塩化ベンゾイル９４．０ｍｇを加えた。室温で更に６０分後、追加の塩化ベンゾイル２８２ｍｇを加え、溶液を終夜撹拌した。溶媒を除去し、残留物をＨ_２ＯおよびＥｔＯＡｃで処理した。有機層を分離し、クエン酸溶液（１０％）、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で２回洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶媒を除去し、粗生成物をシリカ（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、６３ｅ（４０５ｍｇ、９７．８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 3,49
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 750,7
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 8.74 (s, 1 H), 8.62 (s, 1 H), 7.92 - 7.97 (m, 2 H), 7.74 - 7.79 (m, 4 H), 7.42 - 7.67 (m, 9 H), 6.28 (dd, J=9.4, 3.4 Hz, 1 H), 4.22 - 4.35 (m, 4 H), 4.16 (m, 1 H), 4.01 (m, 2 H), 3.78 (m, 1 H), 1.06 - 1.14 (m, 3 H), 0.97 - 1.05 (m, 18 H).

【0615】

６４ａ：［（２Ｓ，６Ｒ）－２－（ヒドロキシメチル）－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－メチルベンゾエート
６３ａ（１．０７ｇ、２．０１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２０ｍｌ）に溶解した。室温で、ピリジン・ＨＦ（６５％）１．５３ｇ（１．３９ｍｌ、１０．０３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１８時間撹拌した。更にピリジン・ＨＦ（６５％）３．０６ｇ（２．７８ｍｌ、２０．０６ｍｍｏｌ）を加えた後、溶液を６５℃で５時間撹拌し、この時点で完全に転化していることが検出された。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液２５０ｍｌ中に注ぎ入れた。１時間撹拌した後、混合物をＤＣＭ（３×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をシリカ（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、６４ａ（６８０ｍｇ、９０．０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝１．４６
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ］^－＝３７５．３

【0616】

６４ｃ：［（２Ｓ，６Ｒ）－２－（ヒドロキシメチル）－６－［２－（２－メチルプロパノイルアミノ）－６－オキソ－１Ｈ－プリン－９－イル］－１，４－ジオキサン－２－イル］メチルベンゾエート
シリルエーテル６３ｃ（３．３０ｇ、５．２６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３３ｍｌ）に溶解した。ＮＥｔ_３（８．０６ｇ、７８．９ｍｍｏｌ、１１．１ｍｌ）およびＮＥｔ_３・３ＨＦ（６．４９ｇ、３９．４ｍｍｏｌ、６．５６ｍｌ）を加えた後、溶液を７５℃で２時間撹拌して、完全に転化させた。反応物を室温に冷却し、５％ＮａＨＣＯ_３溶液１００ｍｌで洗浄した。濾過した後、水溶液をＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をＨＰＬＣ（カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ－Ｈ／７４、２５０×４．６ｍｍ、１．０ｍｌ／分、３０℃；溶出液：ヘプタン／ＥｔＯＨ５：２）により精製して、所望の生成物６４ｃ（１．２０ｇ、４８．４％）を無色固体として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,40
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 472,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.89 (s, 1 H), 11.67 (s, 1 H), 8.08 (s, 1 H), 7.87 (d, J=7.7 Hz, 2 H), 7.62 (t, J=7.2 Hz, 1 H), 7.47 (t, J=7.6 Hz, 2 H), 5.92 (dd, J=6.6, 3.3 Hz, 1 H), 5.11 (t, J=5.7 Hz, 1 H), 4.14 - 4.26 (m, 3 H), 4.03 (dd, J=12.0, 3.4 Hz, 1 H), 3.90 (d, J=12.0 Hz, 1 H), 3.79 (d, J=12.0 Hz, 1 H), 3.70 (m, 2 H), 2.79 (spt, J=6.8 Hz, 1 H), 1.15 (d, J=6.9 Hz, 3 H), 1.11 (d, J=6.7 Hz, 3 H).

【0617】

６４ｅ：［（２Ｓ，６Ｒ）－６－［６－（ジベンゾイルアミノ）プリン－９－イル］－２－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］メチルベンゾエート
５２ｅ（スキーム１３）にて記載したプロトコールを使用して、シリルエーテル６３ｅ（４０２ｍｇ、５３６μｍｏｌ）を脱保護した。シリカ（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上でのクロマトグラフィー精製後に、所望の生成物６４ｅ（１９４ｍｇ、６１．０％）を無色泡状物として単離した。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,22
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 594,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 8.71 (s, 1 H), 8.59 (s, 1 H), 7.97 (m, 2 H), 7.77 (m, 4 H), 7.43 - 7.67 (m, 9 H), 6.27 (m, 1 H), 5.14 (m, 1 H), 4.20 - 4.36 (m, 3 H), 4.12 (m, 1 H), 3.95 (m, 1 H), 3.75 - 3.91 (m, 3 H).

【0618】

６４ｆ：［（２Ｓ，６Ｒ）－６－（４－ベンズアミド－２－オキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－メチルベンゾエート
化合物６４ａにて記載したプロトコールに従い、１０．０当量のピリジン－ＨＦを使用し、６３ｆ（９５２ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）から、６４ｆ（４７１ｍｇ、６６．１％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝１．８９
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝４６６．１

【0619】

６５ａ：［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－１，４－ジオキサン－２－イル］メチルベンゾエート
６４ａ（６７５ｍｇ、１．７９ｍｍｏｌ）をＤＣＭ／ピリジン（１：１）１０ｍｌに溶解した。ＤＭＴ－Ｃｌ（８０６ｍｇ、２．３３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１５ｍｌ）中溶液を加えた後、反応溶液を室温で５．５時間撹拌し、続いて更にＤＭＴ－Ｃｌ（４０３ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）を加えた。撹拌を１８時間続け、この時点で完全に転化していることが検出された。溶媒を蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。クエン酸水溶液（１０％）および飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で２回洗浄した後、有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空で濃縮した。粗生成物をシリカ（ｎ－ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、ＤＭＴ－エーテル６５ａ（１．１５ｇ、９４．１％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．７６
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ］^－＝６７７．３

【0620】

６５ｃ：［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－［２－（２－メチルプロパノイル－アミノ）－６－オキソ－１Ｈ－プリン－９－イル］－１，４－ジオキサン－２－イル］メチルベンゾエート
第一級アルコール６４ｃ（１．２０ｇ、２．５５ｍｍｏｌ）を乾燥ピリジン２５ｍｌに溶解した。ＮＥｔ_３（６４７ｍｇ、６．３６ｍｍｏｌ、８９１μｌ）およびＤＭＴ－Ｃｌ（１．７８ｇ、５．０９ｍｍｏｌ）を加え、溶液を室温で１時間、続いて８０℃で４時間撹拌した。室温に冷却した後、ＭｅＯＨ（１ｍｌ）を加え、溶液をＥｔＯＡｃで希釈した。有機溶液を１０％クエン酸水溶液および飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶媒を蒸発させ、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）により精製して、所望のＤＭＴ－エーテル６５ｃ（１．９７ｇ、定量的）を薄黄色固体として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,75
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 774,4
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.78 (s, 1 H), 11.53 (s, 1 H), 8.06 (s, 1 H), 7.50 - 7.55 (m, 2 H), 7.31 - 7.41 (m, 5 H), 7.14 - 7.29 (m, 7 H), 6.81 (br d, J=8.9 Hz, 2 H), 6.77 (d, J=8.9 Hz, 2 H), 5.72 (m, 1 H), 4.19 - 4.35 (m, 3 H), 4.01 - 4.11 (m, 3 H), 3.66 (s, 3 H), 3.63 (s, 3 H), 3.34 (d, J=8.8 Hz, 1 H), 3.16 (d, J=8.7 Hz, 1 H), 2.75 (m, 1 H), 1.13 (d, J=6.9 Hz, 3 H), 1.08 (d, J=6.7 Hz, 3 H).

【0621】

６５ｅ：［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－［６－（ジベンゾイルアミノ）－プリン－９－イル］－１，４－ジオキサン－２－イル］メチルベンゾエート
出発物質６４ｅ（１９０ｍｇ、３２０μｍｏｌ）を乾燥ピリジン１０ｍｌに溶解し、蒸発させた。この手順を３回繰り返した。次いで化合物を乾燥ピリジン１０ｍｌに溶解し、続いてＮＥｔ_３（４８．７ｍｇ、６６．９μｌ、４８０μｍｏｌ）およびＤＭＴ－Ｃｌ（１６６ｍｇ、４８０μｍｏｌ）を加えた。室温で終夜撹拌した後、更にＮＥｔ_３（９７．４ｍｇ）およびＤＭＴ－Ｃｌ（３３２ｍｇ）を加え、溶液を追加の１８時間撹拌して、完全に転化させた。溶媒を真空で除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解した。Ｈ_２Ｏ、クエン酸溶液（２×）、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した後、有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥した。溶媒を蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、ＤＭＴ－エーテル６５ｅ（２１６ｍｇ、７５．３％）を薄黄色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 3,17
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 896,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 8.75 (s, 1 H), 8.61 (s, 1 H), 7.73 - 7.80 (m, 7 H), 7.65 (m, 1 H), 7.58 (m, 2 H), 7.42 - 7.50 (m, 6 H), 7.36 - 7.41 (m, 2 H), 7.22 - 7.29 (m, 6 H), 6.78 - 6.84 (m, 4 H), 6.07 (m, 1 H), 4.36 (m, 2 H), 4.22 (m, 1 H), 3.99 - 4.14 (m, 2 H), 3.84 (d, J=11.9 Hz, 1 H), 3.68 (s, 6 H), 3.44 - 3.57 (m, 2 H).

【0622】

６５ｆ：［（２Ｒ，６Ｒ）－６－（４－ベンズアミド－２－オキソ－ピリミジン－１－イル）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－１，４－ジオキサン－２－イル］メチルベンゾエート
６５ａにて記載したプロトコールに従って、出発化合物６４ｆ（４６７ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）をＤＭＴ保護して、６５ｆ（６７７ｍｇ、８７．９％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．９５
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ］^－＝７６６．４

【0623】

６６ａ：１－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－５－メチル－ピリミジン－２，４－ジオン
出発化合物６５ａ（５８０ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ／ＭｅＯＨ（４：１）２５ｍｌに溶解した。室温で、２Ｍ ＮａＯＨ溶液（４．２７ｍｌ、８．５５ｍｍｏｌ）を加え、反応物を３０分間撹拌した。固体のクエン酸一水和物および飽和ＮａＨＣＯ_３溶液を使用してｐＨを７にした。有機溶媒を真空で除去し、水性相をＤＣＭ（２×３０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥した。蒸発させた後、表題化合物６６ａ（４８１ｍｇ、９８．０％、粗製物）を無色固体として得、これを更には精製せずに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,82
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 573,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.35 (s, 1 H), 7.63 (s, 1 H), 7.39 (d, J=7.34 Hz, 2 H), 7.20 - 7.33 (m, 7 H), 6.89 (d, J=8.31 Hz, 4 H), 5.75 (m, 1 H), 4.83 (t, J=5.81 Hz, 1 H), 3.74 (s, 6 H), 3.57 - 3.72 (m, 4 H), 3.51 - 3.56 (m, 2 H), 3.20 - 3.29 (m, 2 H), 1.79 (d, J=0.86 Hz, 3 H).

【0624】

６６ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
ベンゾイルエステル６５ｃ（１．９７ｇ、２．５５ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ／ピリジン（３：１）４０ｍｌに溶解した。２Ｍ ＮａＯＨ溶液１２．９ｍｌ（２５．８ｍｍｏｌ）を加えた後、混合物を室温で３０分間撹拌して、完全に転化させた。クエン酸（固体）で中和した後、ＥｔＯＨを真空で除去し、残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）およびＨ_２Ｏ（２５ｍｌ）で希釈した。沈殿物を濾過により除去し、濾液から有機層を分離し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶媒を除去し、粗生成物をシリカ（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）上で精製して、表題化合物６６ｃ（０．９９ｇ、５８．０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,46
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 670,4
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 12.10 (s, 1 H), 11.52 (s, 1 H), 8.19 (s, 1 H), 7.20 - 7.42 (m, 9 H), 6.85 - 6.93 (m, 4 H), 5.62 (dd, J=9.7, 3.3 Hz, 1 H), 4.81 (br t, 1 H), 3.91 - 3.99 (m, 2 H), 3.74 (s, 3 H), 3.73 (s, 3 H), 3.65 - 3.76 (m, 1 H), 3.41 - 3.59 (m, 4 H), 3.15 (d, J=9.1 Hz, 1 H), 2.77 (m, 1 H), 1.13 (m, 6 H).

【0625】

６６ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
出発物質６５ｅ（２１３ｍｇ、２３８μｍｏｌ）をＥｔＯＨ／ピリジン（３：１）８ｍｌに溶解した。０℃で２Ｍ ＮａＯＨ（１．１９ｍｌ、２．４ｍｍｏｌ）を加えた後、溶液を０℃で１０分間および室温で６０分間撹拌して、完全に転化させた。クエン酸一水和物１６６ｍｇを加え、続いてＨ_２Ｏ（５０ｍｌ）およびＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）を加えた。有機層を分離し、１０％クエン酸溶液（２×）、Ｈ_２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、粗生成物をシリカ（ＤＣＭ中０から１００％アセトン）上で精製して、６６ｅ（１３４ｍｇ、８２．０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,44
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 688,4
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.21 (br s, 1 H), 8.72 (s, 1 H), 8.67 (s, 1 H), 8.04 (m, 2 H), 7.65 (m, 1 H), 7.55 (m, 2 H), 7.45 (m, 2 H), 7.29 - 7.37 (m, 6 H), 7.23 (m, 1 H), 6.91 (dd, J=9.0, 2.0 Hz, 4 H), 6.01 (m, 1 H), 4.84 (t, J=5.9 Hz, 1 H), 3.94 - 4.02 (m, 2 H), 3.83 (m, 1 H), 3.74 (s, 6 H), 3.68 - 3.73 (m, 1 H), 3.49 - 3.55 (m, 2 H), 3.38 (m, 2 H).

【0626】

６６ｆ：Ｎ－［１－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］－２－オキソ－ピリミジン－４－イル］ベンズアミド
６５ｆ（６７２ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ／ピリジン（１：１）２０ｍｌに溶解した。０℃で、１Ｍ ＮａＯＨ溶液（５．２５ｍｌ、５．２５ｍｍｏｌ）を加え、反応物を１時間撹拌した。クエン酸水溶液を使用してｐＨを７にした。ＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）およびＨ_２Ｏを加えた後、有機相を分離し、クエン酸水溶液（１０％）、Ｈ_２ＯおよびＮａＣｌ溶液で２回洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥し、溶媒を蒸発させた後、粗生成物をシリカ（ｎ－ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、表題化合物６６ｆ（５５５ｍｇ、９５．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,49
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 662,3
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ[ppm]: 11.28 (br s, 1 H), 8.31 (br d, J=6.79 Hz, 1 H), 8.00 (d, J=7.66 Hz, 2 H), 7.63 (t, J=7.43 Hz, 1 H), 7.52 (t, J=7.79 Hz, 2 H), 7.39 (m, 3 H), 7.21 - 7.33 (m, 7 H), 6.87 - 6.91 (m, 4 H), 5.80 (dd, J=9.81, 3.21 Hz, 1 H), 4.89 (t, J=5.96 Hz, 1 H), 3.85 (dd, J=11.19, 3.12 Hz, 1 H), 3.79 (m, 1 H), 3.74 (s, 6 H), 3.64 (d, J=11.92 Hz, 1 H), 3.59 (m, 2 H), 3.26 - 3.30 (m, 2 H), 3.20 (t, J=10.55 Hz, 1 H).

【0627】

６７ａ：３－［［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－１，４－ジオキサン－２－イル］メトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル
５３ａ（スキーム１３）にて記載したプロトコールに従って、出発化合物６６ａ（３８０ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）をホスホロアミダイト６７ａに転換した。ジエチルエーテル／ｎ－ペンタンから沈殿させた後、表題化合物６７ａ（３４２ｍｇ、６６．７％）を無色固体として単離した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.40, 11.39 (2 x s, 1 H), 7.63, 7.61 (2 x s, 1 H), 7.40 (m, 2 H), 7.21 - 7.35 (m, 7 H), 6.83 - 6.96 (m, 4 H), 5.77 - 5.87 (m, 1 H), 3.36 - 3.90 (m, 17 H), 3.12 - 3.28 (m, 1 H), 2.66 - 2.77 (m, 2 H), 1.81 - 1.79 (2 x s, 3 H), 1.02 - 1.17 (m, 12 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,5, 148,1.

【0628】

６７ｃ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－１，４－ジオキサン－２－イル］－６－オキソ－１Ｈ－プリン－２－イル］－２－メチル－プロパンアミド
出発物質６６ｃ（９８５ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（３０ｍｌ）に溶解した。Ａｒ雰囲気下、^ｉＰｒ_２ＮＨ－テトラゾール１３３ｍｇ（７３５μｍｏｌ）および２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトライソプロピルホスホロジアミダイト５７１ｍｇ（１．８４ｍｍｏｌ、６０２μｌ）を加え、溶液を室温で終夜撹拌した。Ｈ_２Ｏ（５０ｍｌ）およびＤＣＭを加えた後、有機層を分離し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン＋１％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望のホスホロアミダイト６７ｃ（１．０７ｇ、８３．８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,42
イオン化方法： ES⁺: [M+H-ⁱPr₂N+OH]⁺= 787,4
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]:12.08 (br s, 1 H), 11.55 (br s, 1 H), 8.06, 8.05 (2 x s, 1 H), 7.18 - 7.44 (m, 9 H), 6.82 - 6.94 (m, 4 H), 5.65 (m, 1 H), 3.66 - 4.01 (m, 3 H), 3.73 (s, 3 H), 3.72 (s, 3 H), 3.35 - 3.65 (m, 6 H), 3.21 - 3.29 (m, 1 H), 2.72 - 2.83 (m, 1 H), 2.59 - 2.72 (m, 2 H), 0.90 - 1.22 (m, 20 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,7, 147,3.

【0629】

６７ｅ：Ｎ－［９－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－１，４－ジオキサン－２－イル］プリン－６－イル］ベンズアミド
この立体異性体５３ｅ（スキーム１３）にて記載したプルトコルに従い、出発化合物６６ｅ（１３１ｍｇ、１９０μｍｏｌ）をホスフィチル化して、所望のホスホロアミダイト６７ｅを定量的収率で得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｂ－３：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 0,61
イオン化方法： ES⁺: [M+H-ⁱPr₂N+OH]⁺= 805,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm] 11.20 (br s, 1 H), 8.74, 8.73 (2 x s, 1 H), 8.62, 8.60 (2 x s, 1 H), 8.05 (d, J=7.4 Hz, 2 H), 7.65 (m, 1 H), 7.55 (m, 2 H), 7.45 (d, J=7.3 Hz, 2 H), 7.29 - 7.36 (m, 6 H), 7.24 (m, 1 H), 6.91 (m, 4 H), 6.06 (m, 1 H), 3.99 - 4.14 (m, 2 H), 3.62 - 3.90 (m, 11 H), 3.37 - 3.62 (m, 5 H), 2.71 (m, 1 H), 2.64 (m, 1 H), 1.06 - 1.13 (m, 6 H), 1.03 (d, J=6.7 Hz, 3 H), 0.97 (m, 3 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,7, 147,6.

【0630】

６７ｆ：Ｎ－［１－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－１，４－ジオキサン－２－イル］－２－オキソ－ピリミジン－４－イル］ベンズアミド
５３ｆ（スキーム１５）にて記載したプロトコールに従って、出発物質６６ｆ（５２５ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ）をホスホロアミダイト６７ｆに転換した。シリカ（ｎ－ヘプタン＋１．０％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中０から１００％ＭＴＢ－エーテル／ＤＣＭ（１：１））上でクロマトグラフィー精製した後、表題化合物６７ｆ（６２０ｍｇ、９０．７％）を無色泡状物として単離した。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.31 (br s, 1 H), 8.22 (m, 1 H), 8.01 (d, J=7.59 Hz, 2 H), 7.57 - 7.69 (m, 1 H), 7.52 (m, 2 H), 7.39 (m, 3 H), 7.20 - 7.34 (m, 7 H), 6.86 - 6.92 (m, 4 H), 5.88 (m, 1 H), 3.39 - 3.95 (m, 11 H), 3.74 (s, 6 H), 3.26 - 3.34 (m, 0.5 H), 3.17 - 3.24 (m, 0.5 H), 2.71 - 2.77 (m, 1 H), 2.64 - 2.69 (m, 1 H), 1.03 - 1.24 (m, 12 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,5, 147,3.

【0631】

【化54】

【0632】

６８：１－［（２Ｒ，６Ｓ）－６－（ヒドロキシメチル）－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
出発物質５８（９８０ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ／ＭｅＯＨ（４：１）４０ｍｌに溶解した。０℃で、２Ｍ ＮａＯＨ溶液９．４５ｍｌ（１８．９０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を０℃で１時間撹拌した。溶液を固体のクエン酸（約１．３３ｇ）を加えることによりｐＨ７にした。有機溶媒を真空で除去し、水性残留物をＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物をシリカ（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）上で精製して、６８（６０３ｍｇ、７７．０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝１．９０
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝４１５．３

【0633】

６９：１－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
６８（５９７ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（９３１ｍｇ、１．２６ｍｌ、７．２０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍｌ）に溶解した。ＤＭＴ－Ｃｌ（６２２ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ）を加えた後、溶液を室温で２２時間撹拌して、完全に転化させた。溶媒を真空で除去し、粗生成物をシリカ（ｎ－ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、ＤＭＴ－エーテル６９（８６０ｍｇ、８３．３％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．２５
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝７３９．４

【0634】

６６ｂ：１－［（２Ｒ，６Ｒ）－６－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（ヒドロキシメチル）－１，４－ジオキサン－２－イル］ピリミジン－２，４－ジオン
６９（８５４ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）を、ＮＥｔ_３（５．２６ｇ、７．２３ｍｌ、５１．４９ｍｍｏｌ）およびＮＥｔ_３・３ＨＦ（９．５５ｇ、９．６６ｍｌ、５７．４６ｍｍｏｌ）のＮＭＰ（１７ｍｌ）中溶液に加えた。６５℃で２時間撹拌した後、反応物を室温で終夜置いた。反応溶液をＨ_２Ｏ／飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（１：１）４５０ｍｌ中に注ぎ入れ、溶液をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層をＨ_２Ｏおよび飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、粗生成物をシリカ（ｎ－ヘプタン＋０．５％ＮＥｔ_３で予め調整した、ｎ－ヘプタン中１０から１００％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、表題化合物６６ｂ（６６６ｍｇ、９９．７％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,76
イオン化方法： ES⁺: [M+Na]⁺= 583,3
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.37 (s, 1 H), 7.79 (d, J=8.07 Hz, 1 H), 7.35 - 7.45 (m, 2 H), 7.20 - 7.33 (m, 7 H), 6.89 (2 x d, J=8.93, 4 H), 5.72 (dd, J=10.09, 3.24 Hz, 1 H), 5.62 - 5.68 (m, 1 H), 4.84 (t, J=5.75 Hz, 1 H), 3.74 (s, 6 H), 3.71 (m, 2 H), 3.47 - 3.63 (m, 3 H), 3.14 - 3.30 (m, 3 H).

【0635】

６７ｂ：３－［［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（２，４－ジオキソピリミジン－１－イル）－１，４－ジオキサン－２－イル］メトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシプロパンニトリル
出発化合物６６ｂ（６５０ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド１１０ｍｇ（０．６４ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（１６ｍｌ）に溶解した。Ａｒ雰囲気下、２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトライソプロピルホスホロジアミダイト３９６ｍｇ（４１８μｌ、１．２８ｍｍｏｌ）を室温で加え、溶液を１６時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、Ｈ_２Ｏおよび飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で洗浄した。ＭｇＳＯ_４で乾燥した後、溶媒を蒸発させ、粗生成物をメチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル１５ｍｌに溶解した。撹拌しながら、有機溶液をｎ－ペンタン１２０ｍｌ中に滴下した。沈殿物を濾過し、４０℃で真空乾固して、表題化合物６７ｂ（８２７ｍｇ、９３．７％）を無色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.39 (br s, 1 H), 7.74 (m, 1 H), 7.35 - 7.44 (m, 2 H), 7.18 - 7.35 (m, 7 H), 6.84 - 6.92 (m, 4 H), 5.73 - 5.86 (m, 1 H), 5.67 (m, 1 H), 3.54 - 3.89 (m, 7 H), 3.74 (s, 6 H), 3.35 - 3.53 (m, 4 H), 3.12 - 3.28 (m, 1 H), 2.62 - 2.76 (m, 2 H), 1.02 - 1.16 (m, 12 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,5, 148,1.

【0636】

Ｃ：式Ｉの標的化されたヌクレオチド類似体の合成

【0637】

【化55】

【0638】

７１：［（３ａＲ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ，７ａＲ）－６，７－ジアセトキシ－２－メチル－５，６，７，７ａ－テトラヒドロ－３ａＨ－ピラノ［３，２－ｄ］オキサゾール－５－イル］メチルアセテート
Ｄ－ガラクトサミンペンタアセテート（７０）２０．０ｇ（５１．４ｍｍｏｌ）のＤＣＥ（２００ｍｌ）中溶液に、３０℃でＴＭＳＯＴｆ（１７．１ｇ、７７．１ｍｍｏｌ）を滴下添加した。混合物を５０℃に２時間加熱した。室温で終夜静置した後、完全に転化していることが検出された。混合物をＮａＨＣＯ_３（８．６３ｇ、１０２．８ｍｍｏｌ）の水１ｌ中溶液によりクエンチし、ＤＣＭ（２×５００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、表題化合物７１（１９．０ｇ、粗製物）を得、これを更には精製せずに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＥＬＳＤ：Ｒ_ｔ［分］＝０．９０
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝３３０．１

【0639】

７２ｇ：１２－ベンジルオキシドデカン－１－オール
１，１２－ドデカンジオール１４．０５ｇ（６８．７６ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（１５０ｍｌ）に溶解した。０℃で、ＮａＨ（６０％）２．７５ｇ（６８．７６ｍｍｏｌ）を３０分間かけ４回に分けて加えた。氷浴を除去し、溶液を室温で３時間撹拌し、続いて０℃でベンジルブロミド１０．０ｇ（６．９９ｍｌ、５７．３３ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（５０ｍｌ）中溶液を加えた。反応物を室温で終夜撹拌した。更にＮａＨ（６０％）１．９９ｇ（４９．８ｍｍｏｌ）を加えた後、撹拌を４時間続けた。反応混合物を氷水５００ｍｌ中に注ぎ入れ、ジエチルエーテルおよびＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、蒸発させた。粗生成物をシリカ（ｎ－ヘプタン中０から６０％ＥｔＯＡｃ）上で精製して、表題化合物７２ｇ（６．９１ｇ、４１．２％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．０９
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝２９３．３

【0640】

化合物７３ａから７３ｇの製造のための一般的手順Ｄ
オキサゾリン７１（１．０当量）の乾燥ＤＣＥ（２００ｍｌ／５０．０ｍｍｏｌ）中溶液およびアルコール７２ａ～７２ｇ（１．１０当量）に、モレキュラーシーブ４Å（２０．０ｇ）を加えた。室温で、ＴＭＳＯＴｆ（０．５当量）を滴下添加し、完全に転化するまで溶液を撹拌した。反応物をＮａＨＣＯ_３（２．０当量）のＨ_２Ｏ（４００ｍｌ）中溶液を加えることによりクエンチした。有機相を分離し、水性層をＤＣＭ（２×１００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、真空で濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、グリコシド７３ａから７３ｇを得た。

【0641】

７３ａ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－（２－ベンジルオキシエトキシ）テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｄに従って、７１（１７．０ｇ、５１．３７ｍｍｏｌ）および７２ａ（８．６ｇ、５６．５６ｍｍｏｌ）から、シリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ１：２）後に、表題化合物７３ａ（１８．８７ｇ、７６．４％）を黄色油状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.83 (d, J=9.29 Hz, 1 H), 7.41-7.20 (m, 5 H), 5.22 (d, J=3.30 Hz, 1 H), 4.98 (dd, J=11.25, 3.42 Hz, 1 H), 4.58 (d, J=8.44 Hz, 1 H), 4.52-4.43(m, 2 H), 4.03 (s, 2 H), 3.96-3.80 (m, 2 H), 3.69-3.49 (m, 3 H), 2.12-2.08 (m, 3 H), 1.99 (s, 3 H), 1.89 (s, 3 H), 1.74 (s, 3 H).

【0642】

７３ｂ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－（２－ベンジルオキシエトキシ）エトキシ］－テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｄに従って、７１（１４．０ｇ、４２．５ｍｍｏｌ）および７２ｂ（７．５ｇ、３８．２ｍｍｏｌ）から、シリカゲルクロマトグラフィー後に、表題化合物７３ｂ（１０．６ｇ、４８％）を黄色油状物として得た。
ＭＳ：イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５２６．３

【0643】

７３ｃ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－（２－ベンジルオキシエトキシ）エトキシ］－エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｄに従って、７１（１６．０ｇ、４８．６ｍｍｏｌ）および７２ｃ（１４．０ｇ、５８．３ｍｍｏｌ）から、シリカゲルクロマトグラフィー後に、表題化合物７３ｃ（１５．６ｇ、５７％）を無色油状物として得た。
ＭＳ：イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５７０．１

【0644】

７３ｄ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［２－（２－ベンジルオキシエトキシ）－エトキシ］－エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｄに従って、７１（１９．０ｇ、５１．４ｍｍｏｌ）および７２ｄ（１７．５ｇ、６１．７ｍｍｏｌ）から、シリカゲルクロマトグラフィー後に、表題化合物７３ｄ（１０．０ｇ、３２％）を無色油状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.79 (d, J=9.3 Hz, 1 H), 7.40-7.25 (m, 5 H), 5.27-5.20 (m, 1 H), 5.22 (d, J=3.3 Hz, 1 H), 4.98 (dd, J=3.4, 11.2 Hz, 1 H), 4.49 (s, 2 H), 4.08-3.99 (m, 3 H), 3.94-3.75 (m, 2 H), 3.62-3.43 (m, 16 H), 2.15-2.07 (m, 3 H), 2.00 (s, 3 H), 1.90 (s, 3 H), 1.78 (s, 3 H).

【0645】

７３ｅ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［２－［２－（２－ベンジルオキシエトキシ）－エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｄに従って、７１（３５．０ｇ、６４．２ｍｍｏｌ、純度６０％）および７２ｅ（２３．２ｇ、７０．６ｍｍｏｌ）から、シリカゲルクロマトグラフィー後に、表題化合物７３ｅ（１３．４ｇ、３２％）を黄色油状物として得た。
1H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ[ppm]: 7.44-7.29 (m, 5 H), 6.63 (d, J=9.29 Hz, 1 H), 5.33 (d, J=2.76 Hz, 1 H), 5.01 (dd, J=11.17, 3.39 Hz, 1 H), 4.80 (d, J=8.66 Hz, 1 H), 4.58 (s, 2 H), 4.33-4.01 (m, 4 H), 3.98-3.80 (m, 3 H), 3.77-3.54 (m, 20 H), 2.18-2.16 (m, 3 H) 1.99 (s, 6 H) 1.87 (s, 3 H).

【0646】

７３ｆ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－（５－ベンジルオキシペントキシ）テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｄに従って、７１（１．６９ｇ、５．１３ｍｍｏｌ）および７２ｆ（１．１０ｇ、１．０９ｍｌ、５．３９ｍｍｏｌ）から、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０から１０％ＭｅＯＨ）後に、表題化合物７３ｆ（２．６０ｇ、９６．７％）を無色油状物として得た。
1H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ[ppm]: 7.36-7.28 (m, 6 H), 5.24 (d, J = 12.0 Hz, 1 H), 5.37 (d, J = 2.4 Hz, 1 H), 5.34-5.31 (m, 1 H), 4.71 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 4.51 (s, 2 H), 4.17-4.14 (m, 2 H), 3.93-3.90 (m, 3 H), 3.50-3.47 (m, 3 H), 2.15 (s, 3 H), 2.06 (s, 3 H), 1.92 (s, 3 H), 1.68 (s, 3 H), 1.66-1.61 (m, 4 H) , 1.48-1.44 (m, 2 H).

【0647】

７３ｇ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－（１２－ベンジルオキシドデコキシ）テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｄに従って、７１（４．１６ｇ、１２．６２ｍｍｏｌ）および７２ｇ（４．４３ｇ、１５．１４ｍｍｏｌ）から、シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ中１０から１００％ＤＣＭ）後に、表題化合物７３ｇ（５．６９ｇ、７２．６％）を薄黄色油状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．０７
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝６２２．４

【0648】

化合物７４ａから７４ｇの製造のための一般的手順Ｅ
ベンジルエーテル７３ａ～ｇをＴＨＦ（３７０ｍｌ中４０ｍｍｏｌ）に溶解した。Ｐｄ／Ｃ（１０％、５０％Ｈ_２Ｏ含有）５ｇを加えた後、完全に脱ベンジル化するまで、混合物をＨ_２（１５ｐｓｉ）雰囲気下室温で撹拌した。混合物を濾過し、濾液を真空で蒸発させた。シリカ上で最後に精製して、所望の表題化合物７４ａ～ｇを得た。

【0649】

７４ａ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－（２－ヒドロキシエトキシ）テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｅに従って、７３ａ（１８．８７ｇ、３９．１９ｍｍｏｌ）から、シリカ（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ１０：１）上で精製した後、７４ａ（１１．６ｇ、７５．８％）を無色固体として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.81 (br d, J=9.03 Hz, 1 H), 5.22 (br d, J=2.38 Hz, 1 H), 4.98 (br dd, J=10.98, 2.57 Hz, 1 H), 4.66-4.44 (m, 2 H), 4.04 (s, 3 H), 3.94-3.79 (m, 1 H), 3.68 (br d, J=4.64 Hz, 1 H), 3.49 (br s, 3 H), 2.11 (s, 3 H), 2.01 (s, 3 H), 1.90 (s, 3 H), 1.78 (s, 3 H).

【0650】

７４ｂ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ］－テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｅに従って、７３ｂ（１０．６ｇ、２０．１ｍｍｏｌ）から、追加の精製をせずに、７４ｂ（８．０ｇ、９２．０％）を無色油状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.80 (d, J=9.2 Hz, 1 H), 5.22 (d, J=3.3 Hz, 1 H), 4.98 (dd, J=3.4, 11.3 Hz, 1 H), 4.64-4.53 (m, 2 H), 4.11-4.00 (m, 3 H), 3.94-3.83 (m, 1 H), 3.82-3.73 (m, 1 H), 3.61 (dt, J=3.2, 7.1 Hz, 1 H), 3.56-3.46 (m, 4 H), 3.44-3.38 (m, 2 H), 2.11 (s, 3 H), 2.01 (s, 3 H), 1.90 (s, 3 H), 1.78 (s, 3 H).

【0651】

７４ｃ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ］－エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｅに従って、７３ｃ（１５．６ｇ、２７．４ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ／ＴＨＦ（１：１）の混合溶媒２００ｍｌ中で水素化して、７４ｃ（１１．０ｇ、８４．６％）を追加の精製をせずに無色油状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.80 (d, J=9.2 Hz, 1 H), 5.22 (d, J=3.3 Hz, 1 H), 4.98 (dd, J=3.4, 11.2 Hz, 1 H), 4.62-4.52 (m, 2 H), 4.09-4.00 (m, 4 H), 3.89 (td, J=8.9, 11.0 Hz, 1 H), 3.82-3.74 (m, 1 H), 3.63-3.56 (m, 1 H), 3.55-3.46 (m, 8 H), 3.45-3.39 (m, 2 H), 2.11 (s, 3 H), 2.01 (s, 3 H), 1.91-1.88 (m, 3 H), 1.78 (s, 3 H), 1.18 (t, J=7.1 Hz, 1 H).

【0652】

７４ｄ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ］－エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｅに従って、７３ｄ（１０．０ｇ、１６．３ｍｍｏｌ）を１００ＥｔＯＡｃ中で水素化して、７４ｄ（８．７ｇ、９３．０％）を追加の精製をせずに無色油状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.80 (d, J=9.2 Hz, 1 H), 5.22 (d, J=3.3 Hz, 1 H), 4.97 (dd, J=3.4, 11.2 Hz, 1 H), 4.62-4.53 (m, 2 H), 4.09-3.98 (m, 4 H), 3.89 (td, J=9.0, 10.9 Hz, 1 H), 3.82-3.75 (m, 1 H), 3.63-3.56 (m, 1 H), 3.55-3.46 (m, 12 H), 3.42 (d, J=5.0 Hz, 2 H), 2.11 (s, 3 H), 2.00 (s, 3 H), 1.92-1.87 (m, 3 H), 1.78 (s, 3 H).

【0653】

７４ｅ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［２－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ］－エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｅに従って、７３ｅ（１２．４ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）を２５０ＥｔＯＡｃ中で水素化して、シリカ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ１５：１）上での最後の精製後に、７４ｅ（９．７ｇ、８３．９％）を黄色油状物として得た。
1H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ[ppm]: 6.96 (br d, J=9.29 Hz, 1 H), 5.35-5.32 (m, 1 H), 5.05 (dd, J=11.17, 3.39 Hz, 1 H), 5.09-5.02 (m, 1 H), 4.74 (d, J=8.66 Hz, 1 H), 4.27 (dt, J=11.04, 8.97 Hz, 1 H), 4.20-4.11 (m, 2 H), 4.01-3.91 (m, 3 H), 3.84-3.59 (m, 21 H), 2.95 (br s, 2 H), 2.17-2.15 (m, 3 H), 2.05 (s, 3 H), 2.01-1.98 (m, 6 H).

【0654】

７４ｆ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－（５－ヒドロキシペントキシ）テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
７３ｆ（２．５０ｇ、４．７７ｍｍｏｌ）を、完全に転化するまで、４ｂａｒのＨ_２雰囲気下Ｐｄ（ＯＨ）_２／Ｃ（２０％）１６８ｍｇ（２３９μｍｏｌ）の存在下でＴＨＦ（１３ｍｌ）中室温にて水素化した。反応混合物を濾過し、濾液を蒸発させて、表題化合物７４ｆ（２．０８ｇ、定量的、粗製物）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＥＬＳＤ：Ｒ_ｔ［分］＝１．１５
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ＋ギ酸］^－＝４７８．２

【0655】

７４ｇ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－（１２－ヒドロキシドデコキシ）テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
７４ｆにて記載したプロトコールに従い、ベンジルエーテル７３ｇ（５．６９ｇ、９．１４ｍｍｏｌ）を水素化して、表題化合物７４ｇ（４．７９ｇ、９８．５％）を無色油状物として得、これは結晶化して白色針状物になった。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＥＬＳＤ：Ｒ_ｔ［分］＝１．７２
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ－Ｈ^＋］^＋＝５３２．３

【0656】

７５ａ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－（２－オキソエトキシ）テトラヒドロピラン－２－イル］－メチルアセテート
出発物質７４ａ（０．７５ｇ、１．９２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍｌ）中溶液に、１，１，１－トリアセトキシ－１，１－ジヒドロ－１，２－ベンゾヨードキソール－３（１Ｈ）－オン（デス－マーチンペルヨージナン）６．７７ｇ（４．９７ｍｌ、２．４０ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を室温で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物をシリカ（ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ１：１からＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ／ＭｅＯＨ５：５：２）上で精製して、表題化合物７５ａ（５９１ｍｇ、７９．２％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＥＬＳＤ Ｒ_ｔ［分］＝０．８６
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝３９０．２

【0657】

７５ｂ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－（２－オキソエトキシ）エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
７５ａにて記載したプロトコールに従って、７４ｂ（１．０ｇ、２．３０ｍｍｏｌ）を、１，１，１－トリアセトキシ－１，１－ジヒドロ－１，２－ベンゾヨードキソール－３（１Ｈ）－オン（デス－マーチンペルヨージナン）８．１２ｇ（５．９６ｍｌ、２．８７ｍｍｏｌ）を用いて酸化した。シリカ（ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ１：１からＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ／ＭｅＯＨ５：５：２）上で最後に精製して、表題化合物７５ｂ（１．０ｇ、定量的）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｂ２：
ＭＳ ＴＩＣ Ｒ_ｔ［分］＝０．３５
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝４３４．１

【0658】

７５ｃ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－（２－オキソエトキシ）エトキシ］エトキシ］－テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
ＤＭＳＯ（５９６ｍｇ、５４２μｌ、７．５９ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（１１ｍｌ）に溶解した。－６０℃に冷却した後、塩化オキサリルの乾燥ＤＣＭ中２Ｍ溶液１．７５ｍｌ（３．５０ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を１０分間続け、続いてアルコール７４ｃ（１．４０ｇ、２．９２ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（１１ｍｌ）中溶液を加えた。混合物を－６０℃で更に１０分間撹拌し、ＮＥｔ_３（２．９７ｇ、４．０８ｍｌ、２９．２ｍｍｏｌ）を加えた。冷却浴を除去し、反応混合物を室温にした。転化が完結した後、溶液をＤＣＭ（２５ｍｌ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で洗浄した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、溶媒を除去して、所望のアルデヒド７５ｃ（１．２７ｇ、９１．１％、粗製物）を無色油状物として得、これを更には精製せずに使用した。
ＬＣＭＳ－方法Ｂ２：
ＥＬＳＤ Ｒ_ｔ［分］＝１．６６
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝４７８．２

【0659】

７５ｄ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［２－（２－オキソエトキシ）エトキシ］エトキシ］－エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
７５ｃにて記載したプロトコールに従って、アルコール７４ｄ（１．１０ｇ、２．１０ｍｍｏｌ）を酸化して、アルデヒド７５ｄ（０．９９ｇ、９０．３％、粗製物）を無色油状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＥＬＳＤ Ｒ_ｔ［分］＝１．６９
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５２２．２

【0660】

７５ｅ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［２－［２－（２－オキソエトキシ）エトキシ］－エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
７５ｃにて記載したプロトコールに従って、アルコール７４ｅ（１．１０ｇ、１．９４ｍｍｏｌ）を酸化して、アルデヒド７５ｅ（１．１０ｇ、定量的、粗製物）を無色油状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＥＬＳＤ Ｒ_ｔ［分］＝１．５０
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５６６．４

【0661】

７５ｆ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－（５－オキソペントキシ）テトラヒドロピラン－２－イル］－メチルアセテート
７５ｃにて記載したプロトコールに従って、アルコール７４ｆ（２．０５ｇ、４．７３ｍｍｏｌ）を酸化して、アルデヒド７５ｆ（２．０５ｇ、定量的、粗製物）を無色油状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＥＬＳＤ Ｒ_ｔ［分］＝１．１９
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ＋ギ酸］^－＝４７６．２

【0662】

７５ｇ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－（１２－オキソドデコキシ）テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
７５ｃにて記載したプロトコールに従って、アルコール７４ｇ（２．２０ｇ、４．１４ｍｍｏｌ）を酸化して、アルデヒド７５ｇ（２．１９ｇ、９９．９％、粗製物）を無色油状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＥＬＳＤ Ｒ_ｔ［分］＝１．７９
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ＋ギ酸］^－＝５７４．３

【0663】

化合物７６ａから７６ｇの合成のための一般的手順Ｆ
１．０当量の出発アルデヒド７５ａから７５ｇをＭｅＯＨ（２０ｍｌ／１．０ｍｍｏｌ）に溶解した。室温で、モレキュラーシーブ（４Å）５ｇ、４．０当量のＮＥｔ_３および１０．０当量のＡｃＯＨを加え、続いて１．０当量のモルホリン２４ａを加えた。反応溶液を１５分間撹拌し、４．０当量のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを２時間（４分割）かけて加えた。反応物を室温で終夜撹拌して、完全に転化させた。混合物を濾過し、濾液を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液５０ｍｌ中に注ぎ入れた。ＭｅＯＨを蒸発させ、水性混合物をＤＣＭで２回抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、溶媒を真空で除去し、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物７６ａから７６ｇを得た。

【0664】

７６ａ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－４－イル］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｆに従い、シリカ（ＤＣＭ中０から１０％ＭｅＯＨ）上で最後に精製して、出発アルデヒド７５ａ（５８０ｍｇ、７４５μｍｏｌ）から、表題化合物７６ａ（５１０ｍｇ、６２．１％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝３．３０
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１１０４．０

【0665】

７６ｂ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシ－フェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－４－イル］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｆに従い、シリカ（ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ１：１からＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ／ＭｅＯＨ５：５：１）上で最後に精製して、出発アルデヒド７５ｂ（５００ｍｇ、５７７μｍｏｌ）から、表題化合物７６ｂ（３５２ｍｇ、５３．２％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝３．２７
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１１４８．０

【0666】

７６ｃ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［２－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシ－フェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－４－イル］エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｆに従い、シリカ（ＤＣＭ中０から１０％ＭｅＯＨ）上で最後に精製して、出発アルデヒド７５ｃ（９００ｍｇ、１．８８ｍｍｏｌ）から、表題化合物７６ｃ（１．３４ｇ、５９．５％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝３．２９
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ］^－＝１１８９．９

【0667】

７６ｄ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［２－［２－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－４－イル］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｆに従い、シリカ（ＤＣＭ中０から１０％ＭｅＯＨ）上で最後に精製して、出発アルデヒド７５ｄ（８４０ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）から、表題化合物７６ｄ（８３５ｍｇ、４２．０％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝３．３０
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１２３５．８

【0668】

７４ｅ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［２－［２－［２－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－４－イル］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｆに従い、シリカ（ＤＣＭ中０から１０％ＭｅＯＨ）上で最後に精製して、出発アルデヒド７５ｅ（１．０９ｇ、１．５４ｍｍｏｌ、純度８０％）から、表題化合物７６ｅ（１．１２ｇ、５６．８％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．２０
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１２７９．９

【0669】

７６ｆ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［５－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－４－イル］ペントキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｆに従い、シリカ（ＤＣＭ中０から１０％ＭｅＯＨ）上で最後に精製して、出発アルデヒド７５ｆ（１．０ｇ、２．３２ｍｍｏｌ）から、表題化合物７６ｆ（２．１８ｇ、８２．１％）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.44 (s, 1 H), 7.84-7.77 (m, 1 H), 7.62 (s, 1 H), 7.42 (d, J = 7.6 Hz, 2 H), 7.33-7.18 (m, 8 H), 6.84 (d, J = 8.8 Hz, 4 H), 5.88 (dd, J = 2.4, 10.0 Hz, 1 H), 5.22 (d, J = 3.6 Hz, 1 H), 4.98 (dd, J = 3.2, 11.2 Hz, 1 H), 4.52-4.47 (m, 1 H), 4.11 (d, J = 9.6 Hz, 1 H), 4.07-3.97 (m, 4 H), 3.93-3.83 (m, 2 H), 3.80-3.65 (m, 8 H), 3.47-3.38 (m, 1 H), 3.11 (d, J = 9.2 Hz, 1 H), 2.97 (d, J = 9.2 Hz, 1 H), 2.90 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 2.79 (d, J = 11.2 Hz, 1 H), 2.29 (t, J = 7.2 Hz, 2 H), 2.14-2.04 (m, 5 H), 2.02-1.95 (m, 3 H), 1.90 (s, 3 H), 1.82-1.73 (m, 6 H), 1.57-1.22 (m, 6 H), 1.01-0.83 (m, 21 H).

【0670】

７６ｇ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［１２－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシ－フェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－４－イル］ドデコキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｆに従い、シリカ（ｎ－ヘプタン中０から１００％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（９：１））上で最後に精製して、出発アルデヒド７５ｇ（２．１９ｇ、４．１３ｍｍｏｌ）から、表題化合物７６ｇ（４．８４ｇ、９４．３％）を無色泡状物として得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｂ－２：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝１．１４
イオン化方法：ＥＳ^＋：［（Ｍ＋２Ｈ）／２］^＋＝６２２．５

【0671】

化合物７７ａ～ｇおよび８３ａ～ｅの合成のための一般的手順Ｇ
１．０当量のＴＩＰＳ保護出発化合物７６ａ～ｅ（８２ａ～ｅ、スキーム２０参照）をＮＭＰ（１４ｍｌ／１．０ｍｍｏｌ）に溶解した。１５．０当量のトリエチルアミンおよび６．０当量のＮＥｔ_３・３ＨＦを加えた後、完全に転化するまで反応混合物を９０℃で撹拌した。溶液を室温に冷却した後、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液を加え、混合物をＥｔＯＡｃで３回抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物をシリカ上で精製して、脱保護生成物７７ａ～ｇ（８３ａ～ｅ、スキーム２０参照）を得た。

【0672】

７７ａ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－（ヒドロキシメチル）－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｇに従い、ＴＩＰＳ－エーテル７６ａ（８５０ｍｇ、７７０μｍｏｌ）を脱保護して、シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ１：１からＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ／ＭｅＯＨ５：５：１）後に、表題化合物７７（４０１ｍｇ、５５．０％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,16
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 947,8
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ[ppm]: 11.37 (s, 1 H), 7.78 (d, J=9.17 Hz, 1 H), 7.53 (s, 1 H), 7.40 (d, J=7.52 Hz, 2 H), 7.18 - 7.32 (m, 7 H), 6.87 (d, J=8.99 Hz, 4 H), 5.85 (dd, J=9.90, 3.12 Hz, 1 H), 5.20 (d, J=3.48 Hz, 1 H), 4.96 (dd, J=11.19, 3.48 Hz, 1 H), 4.57 (t, J=5.32 Hz, 1 H), 4.52 (d, J=8.44 Hz, 1 H), 3.99 - 4.06 (m, 3 H), 3.79 - 3.91 (m, 2 H), 3.72 - 3.76 (m, 7 H), 3.66 (dd, J=11.10, 5.78 Hz, 1 H), 3.59 (dt, J=11.51, 5.52 Hz, 1 H), 3.00 (s, 2 H), 2.90 (br d, J=9.35 Hz, 1 H), 2.76 (br d, J=11.55 Hz, 1 H), 2.51 - 2.60 (m, 2 H), 2.25 (d, J=11.37 Hz, 1 H), 2.17 (t, J=10.64 Hz, 1 H), 2.04 (m, 3 H), 1.97 (m, 3 H), 1.88 (s, 3 H), 1.70 (s, 3 H), 1.69 (s, 3 H).

【0673】

７７ｂ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシ－フェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－（ヒドロキシメチル）－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｇに従い、ＴＩＰＳ－エーテル７６ｂ（７２０ｍｇ、６３５μｍｏｌ）を脱保護して、シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ１：１からＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ／ＭｅＯＨ５：５：１）後に、表題化合物７７ｂ（５２７ｍｇ、８３．７％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,12
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 991,9
1H-NMR DMSO-d6, 600 MHz) δ[ppm]: 11.36 (s, 1 H), 7.79 (d, J=9.17 Hz, 1 H), 7.55 (s, 1 H), 7.40 (d, J=7.70 Hz, 2 H), 7.21 - 7.31 (m, 7 H), 6.87 (d, J=8.80 Hz, 4 H), 5.85 (br d, J=7.34 Hz, 1 H), 5.21 (d, J=3.30 Hz, 1 H), 4.98 (dd, J=11.19, 3.30 Hz, 1 H), 4.61 (br s, 1 H), 4.54 (d, J=8.62 Hz, 1 H), 3.99 - 4.04 (m, 3 H), 3.83 - 3.90 (m, 1 H), 3.72 - 3.79 (m, 8 H), 3.55 - 3.67 (m, 2 H), 3.48 - 3.55 (m, 4 H), 3.01 (s, 2 H), 2.90 (br d, J=10.09 Hz, 1 H), 2.80 (br d, J=12.10 Hz, 1 H), 2.51 - 2.55 (m, 2 H), 2.27 (br d, J=11.74 Hz, 1 H), 2.15 - 2.21 (m, 1 H), 2.09 (s, 3 H), 1.98 (s, 3 H), 1.89 (s, 3 H), 1.76 (s, 3 H), 1.67 (s, 3 H).

【0674】

７７ｃ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［２－［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシ－フェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－（ヒドロキシメチル）－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｇに従い、ＴＩＰＳ－エーテル７６ｃ（１．２５ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を脱保護して、シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ１：１からＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ／ＭｅＯＨ５：５：１）後に、表題化合物７７ｃ（６３０ｍｇ、５８．０％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,11
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 1035,6
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ[ppm]: 11.36 (s, 1 H), 7.77 (d, J=9.17 Hz, 1 H), 7.55 (s, 1 H), 7.40 (d, J=7.34 Hz, 2 H), 7.20 - 7.31 (m, 7 H), 6.87 (d, J=8.62 Hz, 4 H), 5.85 (dd, J=9.72, 3.12 Hz, 1 H), 5.21 (d, J=3.48 Hz, 1 H), 4.97 (dd, J=11.19, 3.30 Hz, 1 H), 4.60 (t, J=5.41 Hz, 1 H), 4.54 (d, J=8.62 Hz, 1 H), 4.00 - 4.06 (m, 3 H), 3.84 - 3.91 (m, 1 H), 3.71 - 3.77 (m, 8 H), 3.59 - 3.67 (m, 1 H), 3.42 - 3.57 (m, 9 H), 3.01 (s, 2 H), 2.92 (br d, J=9.54 Hz, 1 H), 2.80 (br d, J=11.55 Hz, 1 H), 2.51 - 2.56 (m, 2 H), 2.27 (d, J=11.55 Hz, 1 H), 2.17 (t, J=10.45 Hz, 1 H), 2.10 (s, 3 H), 1.99 (s, 3 H), 1.89 (s, 3 H), 1.76 (m, 3 H), 1.67 (m, 3 H).

【0675】

７７ｄ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，６Ｒ）－２－（ヒドロキシメチル）－２－［［（４－ヒドロキシフェニル）－（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｇに従い、ＴＩＰＳ－エーテル７６ｄ（７８０ｍｇ、６３１μｍｏｌ）を脱保護し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ１：１からＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ／ＭｅＯＨ５：５：１）後に、表題化合物７７ｄ（４５０ｍｇ、６６．１％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,12
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 1079,7
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ[ppm]: 11.36 (s, 1 H), 7.77 (d, J=9.17 Hz, 1 H), 7.55 (s, 1 H), 7.40 (d, J=7.34 Hz, 2 H), 7.20 - 7.31 (m, 7 H), 6.87 (d, J=8.80 Hz, 4 H), 5.84 (dd, J=9.72, 3.12 Hz, 1 H), 5.21 (d, J=3.48 Hz, 1 H), 4.97 (dd, J=11.28, 3.39 Hz, 1 H), 4.60 (t, J=5.32 Hz, 1 H), 4.55 (d, J=8.44 Hz, 1 H), 4.00 - 4.06 (m, 3 H), 3.85 - 3.91 (m, 1 H), 3.72 - 3.78 (m, 8 H), 3.61 - 3.66 (m, 1 H), 3.55 - 3.60 (m, 1 H), 3.43 - 3.54 (m, 12 H), 3.00 (s, 2 H), 2.92 (br d, J=8.99 Hz, 1 H), 2.81 (br d, J=11.19 Hz, 1 H), 2.51 - 2.56 (m, 2 H), 2.28 (d, J=11.74 Hz, 1 H), 2.15 - 2.21 (m, 1 H), 2.10 (s, 3 H), 1.99 (s, 3 H), 1.89 (m, 3 H), 1.77 (s, 3 H), 1.67 (s, 3 H).

【0676】

７７ｅ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［２－［２－［２－［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－（ヒドロキシメチル）－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｇに従い、ＴＩＰＳ－エーテル７６ｅ（１．１０ｇ、８６０μｍｏｌ）を脱保護し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）後に、表題化合物７７ｅ（４３７ｍｇ、４５．３％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,72
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 1121,6
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (s, 1 H), 7.77 (d, J=9.17 Hz, 1 H), 7.53 - 7.56 (m, 1 H), 7.40 (d, J=7.34 Hz, 2 H), 7.19 - 7.31 (m, 7 H), 6.87 (d, J=8.93 Hz, 4 H), 5.85 (dd, J=9.66, 2.93 Hz, 1 H), 5.21 (d, J=3.42 Hz, 1 H), 4.97 (dd, J=11.25, 3.42 Hz, 1 H), 4.53 - 4.62 (m, 2 H), 4.03 (s, 3 H), 3.83 - 3.93 (m, 1 H), 3.72 - 3.82 (m, 8 H), 3.44 - 3.66 (m, 18 H), 2.98 - 3.04 (m, 2 H), 2.92 (br d, J=8.80 Hz, 1 H), 2.77 - 2.86 (m, 1 H), 2.52 - 2.57 (m, 2 H), 2.25 - 2.32 (m, 1 H), 2.18 (br t, J=10.51 Hz, 1 H), 2.10 (m, 3 H), 1.99 (m, 3 H), 1.89 (s, 3 H), 1.77 (s, 3 H), 1.67 (s, 3 H).

【0677】

７７ｆ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［５－［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－（ヒドロキシメチル）－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］ペントキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｇに従い、ＴＩＰＳ－エーテル７６ｆ（２．１５ｇ、１．８８ｍｍｏｌ）を脱保護して、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）後に、表題化合物７７ｆ（１．２１ｇ、６５．０％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,69
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 989,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (s, 1 H), 7.79 (d, J=9.29 Hz, 1 H), 7.51 - 7.58 (m, 1 H), 7.40 (d, J=7.34 Hz, 2 H), 7.19 - 7.32 (m, 7 H), 6.87 (d, J=8.44 Hz, 4 H), 5.84 (dd, J=9.90, 2.93 Hz, 1 H), 5.21 (d, J=3.42 Hz, 1 H), 4.96 (dd, J=11.25, 3.42 Hz, 1 H), 4.58 - 4.65 (m, 1 H), 4.48 (d, J=8.44 Hz, 1 H), 3.98 - 4.06 (m, 3 H), 3.80 - 3.94 (m, 1 H), 3.63 - 3.78 (m, 9 H), 3.34 - 3.45 (m, 1 H), 2.97 - 3.08 (m, 2 H), 2.87 (br d, J=9.05 Hz, 1 H), 2.74 (br d, J=11.49 Hz, 1 H), 2.24 - 2.33 (m, 2 H), 2.01 - 2.17 (m, 5 H), 1.98 (s, 3 H), 1.89 (s, 3 H), 1.76 (s, 3 H), 1.67 (s, 3 H), 1.35 - 1.54 (m, 4 H), 1.23 - 1.35 (m, 2 H).

【0678】

７７ｇ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［１２－［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシ－フェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－（ヒドロキシメチル）－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］ドデコキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｇに従い、ＴＩＰＳ－エーテル７６ｇ（４．８３ｇ、３．８８ｍｍｏｌ）を脱保護して、表題化合物７７ｇ（３．０３ｇ、７１．７％）を得、これは追加の精製をしなかった。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,89
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 1085,5
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (s, 1 H), 7.79 (d, J=9.29 Hz, 1 H), 7.54 (s, 1 H), 7.40 (d, J=7.46 Hz, 2 H), 7.19 - 7.32 (m, 7 H), 6.87 (d, J=8.80 Hz, 4 H), 5.84 (dd, J=9.72, 2.87 Hz, 1 H), 5.21 (d, J=3.30 Hz, 1 H), 4.96 (dd, J=11.25, 3.30 Hz, 1 H), 4.61 (t, J=5.14 Hz, 1 H), 4.48 (d, J=8.44 Hz, 1 H), 3.98 - 4.07 (m, 3 H), 3.82 - 3.91 (m, 1 H), 3.61 - 3.78 (m, 9 H), 3.35 - 3.44 (m, 1 H), 2.96 - 3.08 (m, 2 H), 2.86 (br d, J=9.17 Hz, 1 H), 2.66 - 2.77 (m, 1 H), 2.30 (br t, J=7.09 Hz, 2 H), 2.01 - 2.16 (m, 5 H), 1.99 (s, 3 H), 1.89 (m, 3 H), 1.76 (m, 3 H), 1.67 (m, 3 H), 1.36 - 1.48 (m, 4 H), 1.20 - 1.31 (br s, 16 H).

【0679】

化合物７８ａ～ｇおよび８４ａ～ｅの合成のための一般的手順Ｈ
１．０当量の出発アルコール７７ａ～ｇ（８３ａ～ｅ、スキーム２０参照）および６．０当量のジイソプロピルアンモニウムテトラゾリドを乾燥ＤＣＭ（３３ｍｌ／１．０ｍｍｏｌ）に溶解した。Ａｒ雰囲気下、３．０当量の２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトライソプロピルホスホロジアミダイトを室温で滴下添加し、完全に転化するまで溶液を撹拌した。反応物をＨ_２Ｏ（２５ｍｌ）でクエンチし、有機層を分離した。水性相をＤＣＭで抽出し、合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ_４で乾燥した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物を酢酸エチル／ジエチルエーテル（１：１）約１０ｍｌに溶解し、ｎ－ペンタン４０ｍｌを加えた。沈殿物を遠心分離（２分、１０℃、４４００ｕｐｍ）し、液層をデカントした。沈殿物の精製を３回繰り返した。Ｓｐｅｅｄｖａｃ上で乾燥した後、表題化合物７８ａ～ｇ（８４ａ～ｅ、スキーム２２参照）を無色固体として単離した。

【0680】

７８ａ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｈに従って、出発アルコール７７ａ（４０１ｍｇ、４２３μｍｏｌ）をホスフィチル化して、表題化合物７８ａ（４３０ｍｇ、８８．５％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.35 (br s, 1 H), 7.78 (d, J=9.03 Hz, 1 H), 7.52, 7.55 (2 x s, 1 H), 7.35 - 7.44 (m, 2 H), 7.19 - 7.32 (m, 7 H), 6.81 - 6.90 (m, 4 H), 5.86 - 5.92 (m, 1 H), 5.20 (m, 1 H), 4.95 (2 x t, 3.12 Hz, 1 H), 4.50 (m, 1 H), 3.96 - 4.08 (m, 4 H), 3.77 - 3.93 (m, 3 H), 3.73 (s, 6 H), 3.38 - 3.67 (m, 5 H), 2.87 - 3.11 (m, 3 H), 2.72 - 2.83 (m, 1 H), 2.52 - 2.70 (m, 4 H), 2.13 - 2.36 (m, 2 H), 1.93 - 2.04 (m, 6 H), 1.85 - 1.91 (m, 3 H), 1.67 - 1.76 (m, 6 H), 0.94 - 1.13 (m, 12 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,7, 147,5.

【0681】

７８ｂ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシ－フェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシ－メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｈに従って、出発アルコール７７ｂ（５２７ｍｇ、５３２μｍｏｌ）をホスフィチル化して、表題化合物７８ｂ（５２８ｍｇ、８３．４％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.35 (br s, 1 H), 7.79 (d, J=9.16, 1 H), 7.55 (2 x s, 1 H), 7.35 - 7.43 (m, 2 H), 7.19 - 7.32 (m, 7 H), 6.82 - 6.90 (m, 4 H), 5.84 - 5.93 (m, 1 H), 5.21 (m, 1 H), 4.98 (m, 1 H), 4.54 (m, 1 H), 3.95 - 4.09 (m, 5 H), 3.71 - 3.92 (m, 3 H), 3.73 (s, 6 H), 3.39 - 3.64 (m, 9 H), 2.96 - 3.12 (m, 2 H), 2.77 - 2.96 (m, 2 H), 2.63 - 2.73 (m, 1 H), 2.52 - 2.63 (m, 2 H), 2.16 - 2.35 (m, 2 H), 2.09 (s, 3 H), 1.98, 1.99 (2 x s, 3 H), 1.89 (s, 3 H), 1.76 (s, 3 H) 1.72, 1.69 (2 x s, 3 H), 0.91 - 1.14 (m, 12 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,6, 147,4.

【0682】

７８ｃ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［２－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシ－フェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）－ホスファニル］オキシメチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］エトキシ］－エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｈに従って、出発アルコール７７ｃ（６３０ｍｇ、６０９μｍｏｌ）をホスフィチル化して、表題化合物７８ｃ（６９８ｍｇ、９２．８％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.35 (br s, 1 H), 7.76 (m, 1 H), 7.56, 7.53 (2 x s, 1 H), 7.39 (m, 2 H), 7.19 - 7.33 (m, 7 H), 6.82 - 6.91 (m, 4 H), 5.84 - 5.93 (m, 1 H), 5.21 (m, 1 H), 4.97 (m, 1 H), 4.55 (m, 1 H), 3.96 - 4.09 (m, 4 H), 3.70 - 3.91 (m, 4 H), 3.73 (s, 6 H), 3.40 - 3.63 (m, 13 H), 2.98 - 3.08 (m, 2 H), 2.79 - 2.96 (m, 2 H), 2.64 - 2.73 (m, 1 H), 2.52 - 2.62 (m, 2 H), 2.17 - 2.34 (m, 2 H), 2.10 (s, 3 H), 1.99 (m, 3 H), 1.89 (m, 3 H), 1.78 (m, 3 H), 1.72, 1.70 (2 x s, 3 H), 0.91 - 1.25 (m, 12 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,6, 147,4.

【0683】

７８ｄ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［２－［２－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）－ホスファニル］－オキシメチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］エトキシ］－エトキシ］エトキシ］－エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｈに従って、出発アルコール７７ｄ（４５０ｍｇ、４１７μｍｏｌ）をホスフィチル化して、表題化合物７８ｄ（４６０ｍｇ、８６．２％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: (br s, 1 H), 7.77 (d, J=9.22 Hz, 1 H), 7.56, 7.53 (2 x s, 1 H), 7.35 - 7.43 (m, 2 H), 7.19 - 7.33 (m, 7 H), 6.82 - 6.90 (m, 4 H), 5.84 - 5.93 (m, 1 H), 5.22 (m, 1 H), 4.97 (m, 1 H), 4.56 (m, 1 H), 3.97 - 4.09 (m, 4 H), 3.68 - 3.96 (m, 4 H), 3.73 (s, 6 H), 3.37 - 3.66 (m, 17 H), 2.79 - 3.08 (m, 4 H), 2.64 - 2.71 (m, 1 H), 2.52 - 2.62 (m, 2 H), 2.17 - 2.35 (m, 2 H), 2.10 (s, 3 H), 1.99 (s, 3 H), 1.89 (s, 3 H), 1.77 (s, 3 H), 1.72, 1.69 (2 x s, 3 H), 0.89 - 1.22 (m, 12 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,6, 147,4.

【0684】

７８ｅ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［２－［２－［２－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）－ホスファニル］オキシメチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｈに従って、出発アルコール７７ｅ（４９５ｍｇ、４４１μｍｏｌ）をホスフィチル化して、表題化合物７８ｅ（５８９ｍｇ、定量的）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.35 (br s, 1 H), 7.77 (d, J=9.16 Hz, 1 H), 7.56, 7.53 (2 x s, 1 H), 7.35 - 7.43 (m, 2 H), 7.18 - 7.33 (m, 7 H), 6.86 (br d, J=8.78 Hz, 4 H), 5.84 - 5.93 (m, 1 H), 5.22 (dm, 1 H), 4.97 (m, 1 H), 4.56 (m, 1 H), 3.96 - 4.10 (m, 4 H), 3.72 - 3.95 (m, 4 H), 3.73 (s, 6 H), 3.41 - 3.63 (m, 21 H), 2.79 - 3.08 (m, 4 H), 2.64 - 2.72 (m, 1 H), 2.53 - 2.61 (m, 2 H), 2.14 - 2.33 (m, 2 H), 2.10 (s, 3 H), 1.99 (s, 3 H), 1.89 (s, 3 H), 1.77 (s, 3 H), 1.72, 1.69 (2 x s, 3 H), 0.93 - 1.12 (m, 12 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,6, 147,4.

【0685】

７８ｆ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［５－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］ペントキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｈに従って、出発アルコール７７ｆ（１．１７ｇ、１．１８ｍｍｏｌ）をホスフィチル化して、表題化合物７８ｆ（１．３２ｇ、９４．１％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.36 (br s, 1 H), 7.78 (2 x d, J=9.19, 1 H), 7.57, 7.54 (2 x s, 1 H), 7.36 - 7.44 (m, 2 H), 7.19 - 7.32 (m, 7 H), 6.86 (br d, J=8.78 Hz, 4 H), 5.89 (m, 1 H), 5.21 (m, 1 H), 4.96 (m, 1 H), 4.48 (m, 1 H), 3.94 - 4.09 (m, 4 H), 3.81 - 3.93 (m, 2 H), 3.66 - 3.75 (m, 1 H), 3.73 (s, 6 H), 3.53 - 3.66 (m, 2 H), 3.37 - 3.51 (m, 3 H), 3.07 - 3.13 (m, 1 H), 2.95 - 3.05 (m, 1 H), 2.84 - 2.92 (m, 1 H), 2.77 (m, 1 H), 2.63 - 2.71 (m, 1 H), 2.52 - 2.62 (m, 1 H), 2.23 - 2.39 (m, 2 H), 2.02 - 2.16 (m, 2 H), 2.10 (s, 3 H), 1.99, 1.98 (2 x s, 3 H), 1.89 (s, 3 H), 1.76 (s, 3 H), 1.73, 1.70 (2 x s, 3 H), 1.35 - 1.56 (m, 4 H), 1.22 - 1.33 (m, 2 H), 0.93 - 1.13 (m, 12 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,4, 147,1.

【0686】

７８ｇ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［１２－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシ－フェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシ－メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］ドデコキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｈに従って、出発アルコール７７ｇ（１．５２ｇ、１．４０ｍｍｏｌ）をホスフィチル化して、表題化合物７８ｇ（１．５５ｇ、８６．３％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.37 (br s, 1 H), 7.80 (d, J=9.22 Hz, 1 H), 7.57, 7.54 (2 x s, 1 H), 7.36 - 7.45 (m, 2 H), 7.20 - 7.32 (m, 7 H), 6.86 (d, J=8.85 Hz, 4 H), 5.86 - 5.93 (m, 1 H), 5.22 (m, 1 H), 4.97 (m, 1 H), 4.49 (m, 1 H), 3.82 - 4.09 (m, 6 H), 3.74 (s, 6 H), 3.65 - 3.72 (m, 1 H), 3.54 - 3.64 (m, 2 H), 3.36 - 3.52 (m, 3 H), 3.06 - 3.14 (m, 1 H), 2.96 - 3.06 (m, 1 H), 2.73 - 2.91 (m, 2 H), 2.64 - 2.71 (m, 1 H), 2.53 - 2.61 (m, 1 H), 2.20 - 2.39 (m, 2 H), 2.03 - 2.16 (m, 2 H), 2.11 (s, 3 H), 1.99 (s, 3 H), 1.90 (s, 3 H),1.77 (s, 3 H), 1.73, 1.71 (2 x s, 3 H), 1.35 - 1.52 (m, 4 H), 1.17 - 1.32 (m, 16 H), 0.97 - 1.14 (m, 12 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,3, 147,1.

【0687】

合成スキーム１９
１９ａ

【化56】

【0688】

１９ｂ

【化57】

【0689】

１９ｃ

【化58】

【0690】

８０ａ：ベンジル２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロピラン－２－イル］オキシアセテート
出発化合物７０（１６ｇ、４１．１ｍｍｏｌ）およびベンジル２－ヒドロキシ－アセテート７９ａ（１３．６ｇ、８２．２ｍｍｏｌ）のＤＣＥ（１６０ｍｌ）中混合物に、Ｓｃ（ＯＴｆ）_３（１．４１ｇ、２．８８ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を９０℃で１６時間撹拌して、完全に転化させた。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３（２００ｍｌ）中に注ぎ入れ、ＤＣＭ（３×１００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、濾液を真空で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ１：１）次いで逆フラッシュクロマトグラフィー（中性）により精製して、表題化合物８０ａ（１２．０ｇ、６０％）を黄色油状物として得た。
ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］^＋（ｍ／ｚ）＝４９６．０

【0691】

８１ａ：２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロピラン－２－イル］オキシ酢酸
化合物８０ａ（１２ｇ、２４．２ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（１５０ｍｌ）中混合物に、２５℃でＰｄ／Ｃ（３ｇ、炭素担持１０％および水含有率５０％）を加えた。完全に転化するまで、混合物をＨ_２雰囲気（１５ｐｓｉ）下室温で１２時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を真空で濃縮して、８１ａ（９．２ｇ、９３％）を無色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.93 (br d, J=8.7 Hz, 1 H), 5.22 (d, J=3.4 Hz, 1 H), 5.01 (dd, J=3.3, 11.1 Hz, 1 H), 4.63 (d, J=8.5 Hz, 1 H), 4.10 (br d, J=4.9 Hz, 2 H), 4.05-3.99 (m, 3 H), 3.94 - 3.85 (m, 2 H), 2.14-2.10 (m, 3 H), 2.02-1.99 (m, 3 H), 1.89 (s, 3 H), 1.79 (s, 3 H).

【0692】

８０ｃ：ベンジル２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］アセテート
化合物８０ａにて記載したプロトコールに従って、７０（１４．６ｇ、３７．６ｍｍｏｌ）およびベンジル２－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ］アセテート７９ｃ（１９．１ｇ、７５．２ｍｍｏｌ）から、表題化合物８０ｃ（１２．０ｇ、５４．８％）を薄黄色油状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.75 (d, J=9.17 Hz, 1 H), 7.50-7.27 (m, 5 H), 5.21 (d, J=3.30 Hz, 1 H,) 5.15 (s, 2 H), 4.97 (dd, J=11.19, 3.36 Hz, 1 H), 4.57 (d, J=8.44 Hz, 1 H), 4.19 (s, 2 H), 4.04-4.00 (m, 3 H), 3.88 (dt, J=10.97, 8.94 Hz, 1 H), 3.81-3.71 (m, 1 H), 3.63-3.48 (m, 7 H), 2.10 (s, 3 H), 1.99 (s, 3 H), 1.89 (s, 3 H), 1.77 (s, 3 H).

【0693】

８１ｃ：２－［２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］エトキシ］酢酸
ベンジルエステル８０ｃ（１２．０ｇ、２０．６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（４００ｍｌ）中溶液に、Ｐｄ／Ｃ（２ｇ、炭素担持１０％および水含有率５０％）を加えた。混合物をＨ_２雰囲気（１５ｐｓｉ）下室温で１２時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を真空で濃縮して、８１ｃ（８．５ｇ、８３．７％）を無色油状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.78 (d, J=9.17 Hz, 1 H), 5.22 (d, J=3.42 Hz, 1 H), 4.98 (dd, J=11.13, 3.42 Hz, 1 H), 4.59 (d, J=8.44 Hz, 1 H), 4.10-3.98 (m, 5 H), 3.89 (dt, J=11.00, 8.93 Hz, 1 H), 3.78 (dt, J=11.16, 4.63 Hz, 1 H), 3.65-3.46 (m, 7 H), 2.11 (s, 3 H), 2.01 (s, 3 H), 1.90 (s, 3 H), 1.78 (s, 3 H).

【0694】

８０ｂ：ベンジル２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］アセテート
化合物７９ｂ（７．０ｇ、２１．２ｍｍｏｌ）およびオキサゾリン７１（６．７ｇ、３１．９ｍｍｏｌ）のＤＣＥ（１００ｍｌ）中混合物に、２５℃で４Åシーブ（１０ｇ）を加えた。混合物を１．５時間撹拌し、続いてＴＭＳＯＴｆ（２．３ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１２時間撹拌した後、反応溶液を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液２００ｍｌ中に注ぎ入れ、ＤＣＭ（３×１００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮した。残留物を逆フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、化合物８０ｂ（４．０ｇ、３６％）を黄色油状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.68 (d, J=9.2 Hz, 1 H), 7.29-7.16 (m, 5 H), 5.12 - 5.05 (m, 1 H), 5.02 (s, 2 H), 4.89-4.79 (m, 1 H), 4.43 (d, J=8.4 Hz, 1 H), 4.06 (d, J=1.6 Hz, 2 H), 3.92-3.85 (m, 3 H), 3.81-3.64 (m, 2 H), 3.55-3.41 (m, 3 H), 1.97 (s, 3 H), 1.87-1.84 (m, 3 H), 1.78-1.74 (m, 3 H), 1.65-1.57 (m, 3 H).

【0695】

８１ｂ：２－［２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロピラン－２－イル］オキシエトキシ］酢酸
化合物８０ｂ（６．０ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）中混合物に、室温でＰｄ／Ｃ（０．６ｇ、炭素担持１０％および水含有率５０％）を加えた。混合物をＨ_２（１５ｐｓｉ）下１２時間撹拌して、完全に転化させた。反応混合物を濾過し、濾液を真空で濃縮して、表題化合物８１ｂ（５．０ｇ、９６％）を白色泡状物として得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 7.83 (d, J=9.3 Hz, 1 H), 5.22 (d, J=3.4 Hz, 1 H), 4.97 (dd, J=3.4, 11.2 Hz, 1 H), 4.57 (d, J=8.6 Hz, 1 H), 4.06-4.02 (m, 3 H), 4.01 (s, 2 H), 3.89 (td, J=8.9, 11.1 Hz, 1 H), 3.83-3.77 (m, 1 H), 3.66-3.52 (m, 3 H), 2.13-2.07 (m, 3 H), 2.02-1.98 (m, 3 H), 1.89 (s, 3 H), 1.78 (s, 3 H).

【0696】

８０ｄ：ベンジル５－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロピラン－２－イル］オキシペンタノエート
（Ｄ）－２－デスオキシ－２－アミノ－ガラクトシル－ペンタアセテート７０（３８７ｇ、０．９６８ｍｏｌ）のＤＣＥ（４ｌ）中溶液に、１５℃でＴＭＳＯＴｆ（３２２ｇ、１．４５２ｍｏｌ）を滴下添加した。混合物を５０℃で１．５時間加熱し、次いで３０℃で終夜撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液４ｌ中に注ぎ入れ、ＤＣＭ（１ｌ）で２回抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮した。残留物をＤＣＥ（４ｌ）に溶解し、ベンジル－５－ヒドロキシペンタノエート７９ｄ（３０２ｇ、１．４５２ｍｏｌ）および粉状のモレキュラーシーブ（４Å）３００ｇを１５℃で加えた。１時間撹拌した後、ＴＭＳＯＴｆ（１０７．４ｇ、０．４８４ｍｏｌ）を１５℃で滴下添加した。懸濁液を１５℃で終夜撹拌して、完全に転化させた。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液４ｌ中に注ぎ入れ、濾過し、ＤＣＭ（１ｌ）で２回抽出した。合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ３：１）により精製して、所望の生成物８０ｄ（２４０ｇ、４６％）を無色油状物として得た。
1H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ[ppm]: 7.47-7.30 (m, 5 H), 5.74 (br d, J=8.5 Hz, 1 H), 5.36 (d, J=2.8 Hz, 1 H), 5.30-5.23 (m, 1 H), 5.17-5.07 (m, 2 H), 4.65 (d, J=8.4 Hz, 1 H), 4.20-4.08 (m, 3 H), 4.02-3.94 (m, 1 H), 3.94-3.85 (m, 2 H), 3.50 (td, J=6.1, 9.9 Hz, 1 H), 2.49-2.32 (m, 2 H), 2.15 (s, 3 H), 2.05 (s, 3 H), 2.01 (s, 3 H), 1.92 (s, 3 H), 1.78-1.56 (m, 4 H).

【0697】

８１ｄ：５－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロピラン－２－イル］オキシペンタン酸
ベンジルエステル８０ｄ（２４０ｇ、０．４４７ｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２．５ｌ）中溶液に、Ｐｄ／Ｃ（２４ｇ、炭素担持１０％、水含有率５０％）を加えた。混合物をＨ_２（１５ｐｓｉ）下１５℃で終夜撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を真空で濃縮して、８１ｄ（１９６ｇ、９７％）を白色固体を得た。
1H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ[ppm]: 6.19 (d, J=8.8 Hz, 1 H), 5.37 (d, J=3.1 Hz, 1 H), 5.30 (dd, J=3.4, 11.2 Hz, 1 H), 4.69 (d, J=8.3 Hz, 1 H), 4.16 (m, 1 H), 3.98-3.92 (m, 2 H), 3.57-3.48 (m, 2 H), 2.40-2.30 (m, 2 H), 2.18-2.15 (s, 3 H), 2.06 (s, 3 H), 2.02 (s, 3 H), 1.99-1.94 (s, 3 H), 1.76-1.59 (m, 4 H).

【0698】

７９ｅ：ベンジル１２－ヒドロキシドデカノエート
１２－ヒドロキシドデカン酸５．０ｇ（２２．４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１００ｍｌ）に溶解した。ベンジルブロミド４．５ｇ（３．１５ｍｌ、２５．８ｍｍｏｌ）および重炭酸カリウム３．３７ｇ（３３．６ｍｍｏｌ）を加えた後、混合物を２０時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、残留物をジエチルエーテルに溶解した。Ｈ_２Ｏで洗浄した後、水性相を分離し、ジエチルエーテルで抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ－ヘプタン中０から３０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、所望のベンジルエステル７９ｅ（５．７０ｇ、８２．９％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．０４
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝３０７．２

【0699】

８０ｅ：ベンジル１２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロピラン－２－イル］オキシドデカノエート
７０（２．２０ｇ、５．７ｍｍｏｌ）を出発物とし、８０ｄにて記載したプロトコールに従って、表題化合物８０ｅ（２．０ｇ、５５．９％）を合成した。７０℃で４時間および室温で追加の１６時間撹拌した後、７９ｅとのグリコシル化が完結した。ｎ－ヘプタン中０から１００％ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ（１：１）で溶出するシリカゲル上で最後の精製を行った。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝１．９９
イオン化方法：ＥＳ^＋：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝６３６．５

【0700】

８１ｅ：１２－［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－３－アセトアミド－４，５－ジアセトキシ－６－（アセトキシメチル）テトラヒドロピラン－２－イル］オキシドデカン酸
ベンジルエステル８０ｅ（２．０ｇ、３．２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２０ｍｌ）に溶解した。Ｐｄ（炭素担持１０％）１６７ｍｇ（１５７μｍｏｌ）を加えた後、反応混合物をＨ_２でパージし、Ｈ_２圧４ｂａｒで水素化した。４時間後、Ｐｄ触媒を濾別し、濾液を真空で蒸発させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０から２０％ＭｅＯＨ、１０％ＡｃＯＨ）により精製して、カルボン酸８１ｅ（１．６７ｇ、９７．３％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ELSD: R_t[分] = 1,68
イオン化方法： ES⁺: [M+H]⁺ = 546,4
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.79 (br s, 1 H), 7.67 (d, J=9.17 Hz, 1 H), 5.08 (d, J=3.42 Hz, 1 H), 4.83 (dd, J=11.25, 3.42 Hz, 1 H), 4.35 (d, J=8.44 Hz, 1 H), 3.84 - 3.95 (m, 3 H), 3.73 (m, 1 H), 3.56 (m, 1 H), 3.44 - 3.51 (m, 1 H), 3.28 (m, 1 H), 1.97 (s, 3 H), 1.87 (s, 3 H), 1.76 (s, 3 H), 1.63 (s, 3 H), 1.28 - 1.39 (m, 4 H), 1.11 (s, 14 H).

【0701】

【化59】

【0702】

化合物８２ａから８２ｅの合成のための一般的手順Ｊ
カルボン酸（８１ａ～ｅ、１．０から１．２当量）およびモルホリン化合物２４ａ（１．０当量）をＤＣＭ（２０ｍｌ、１．０ｍｍｏｌ）に溶解した。１．５当量のＨＢＴＵおよび３．０当量のＤＩＰＥＡを加えた後、反応物を室温で１８時間撹拌して、完全に転化させた。反応溶液を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥し、溶媒を蒸発させた。粗生成物をシリカ上で精製して、所望のアミドを無色固体として得た。

【0703】

８２ａ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－４－イル］－２－オキソ－エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｊに従って、カルボン酸８１ａ（４００ｍｇ、９８６μｍｏｌ、１．２当量）から、シリカ（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ１：１中０から１０％ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ１０：１０：１）上で精製した後、表題化合物８２ａ（５３０ｍｇ、５７．７％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝３．１５
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ］^－＝１１１５．９

【0704】

８２ｂ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシ－フェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－４－イル］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｊに従って、カルボン酸８１ｂ（４０６ｍｇ、９０４μｍｏｌ、１．１当量）から、シリカ（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ１：１中０から１０％ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ１０：１０：１）上で精製した後、表題化合物８２ｂ（５９０ｍｇ、６１．８％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝３．１６
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ］^－＝１１６０．０

【0705】

８２ｃ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［２－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシ－フェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－４－イル］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｊに従って、カルボン酸８１ｃ（４０６ｍｇ、８２２μｍｏｌ、１．２当量）から、シリカ（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ１：１中０から１０％ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ１０：１０：１）上で精製した後、表題化合物８２ｃ（４１３ｍｇ、５０．０％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝３．１７
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ］^－＝１２０４．０

【0706】

８２ｄ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［５－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシ－フェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－４－イル］－５－オキソ－ペントキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｊに従って、カルボン酸８１ｄ（７５０ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ、１．０当量）から、シリカ（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）上で精製した後、表題化合物８２ｄ（１．７６ｇ、９０．６％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．１６
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ］^－＝１１５７．５

【0707】

８２ｅ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［１２－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシ－フェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－２－（トリイソプロピルシリルオキシメチル）モルホリン－４－イル］－１２－オキソ－ドデコキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｊに従って、カルボン酸８１ｅ（８９７ｍｇ、１．６４ｍｍｏｌ、１．２当量）から、シリカ（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）上で精製した後、表題化合物８２ｅ（１．４６ｇ、８４．５％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
ＵＶ－波長［ｎｍ］＝２２０：Ｒ_ｔ［分］＝２．２５
イオン化方法：ＥＳ^－：［Ｍ－Ｈ］^－＝１２５５．６

【0708】

８３ａ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－（ヒドロキシメチル）－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］－２－オキソ－エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｇ（スキーム１８参照）に従い、ＴＩＰＳ－エーテル８２ａ（５３０ｍｇ、４７４μｍｏｌ）を脱保護し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ１：１中０から１０％ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ５：５：１）後に、表題化合物８３ａ（３８０ｍｇ、８３．４％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,29
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 959,9
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ[ppm]: 11.44 (br s, 1 H), 7.83 - 7.88 (m, 0.4 H), 7.78 (br d, J=9.17 Hz, 0.6 H), 7.64 (s, 1 H), 7.39 - 7.44 (m, 2 H), 7.21 - 7.32 (m, 7 H), 6.85 - 6.90 (m, 4 H), 5.88 - 5.93 (m, 0.4 H), 5.83 (m, 0.6 H), 5.19 - 5.23 (m, 1 H), 4.90 - 5.02 (m, 1.6 H), 4.53 - 4.62 (m, 1.4 H), 21 4.42 (br d, J=14.12 Hz, 0.6 H), 4.32 - 4.39 (m, 1 H), 4.20 - 4.31 (m, 1.4 H), 3.81 - 4.07 (m, 6 H), 3.72 - 3.79 (m, 7 H), 3.47 - 3.65 (m, 2 H), 2.99 - 3.11 (m, 2 H), 2.88 - 2.97 (m, 1 H), 2.10, 2.04 (2 x s, 3 H), 1.99, 1.97 (2 x s, 3 H), 1.88 (s, 3 H), 1.73, 1.72 (m, 6 H).

【0709】

８３ｂ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシ－フェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－（ヒドロキシメチル）－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｇ（スキーム１８参照）に従い、ＴＩＰＳ－エーテル８２ｂ（６７０ｍｇ、５７７μｍｏｌ）を脱保護し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ１：１中０から１０％ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ５：５：１）後に、表題化合物８３ｂ（５０４ｍｇ、８６．９％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,30
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 1003,9
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ[ppm]: 11.42 (br s, 1 H), 7.80 (d, J=9.35 Hz, 1 H), 7.64, 7.60 (2 x s, 1 H), 7.39 - 7.44 (m, 2 H), 7.19 - 7.35 (m, 7 H), 6.85 - 6.90 (m, 4 H), 5.87 - 5.93 (m, 0.4 H), 5.82 (br d, J=8.07 Hz, 0.6 H), 5.21 (br s, 1 H), 4.94 - 5.00 (m, 1.6 H), 4.64 - 4.70 (m, 0.4 H), 4.54 - 4.58 (m, 1 H), 4.33 - 4.39 (m, 0.6 H), 4.11 - 4.26 (m, 2.4 H), 4.00 - 4.05 (m, 3.4 H), 3.78 - 3.94 (m, 2.6 H), 3.74 (m, 6 H), 3.42 - 3.70 (m, 6 H), 3.07 - 3.11 (m, 1 H), 2.89 - 3.05 (m, 2 H), 2.04 - 2.12 (m, 3 H), 1.97 - 2.01 (m, 3 H), 1.89 (s, 3 H), 1.71 - 1.78 (m, 6 H).

【0710】

８３ｃ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［２－［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシ－フェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－（ヒドロキシメチル）－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－モルホリン－４－イル］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｇ（スキーム１８参照）に従い、ＴＩＰＳ－エーテル８２ｃ（４１０ｍｇ、３４０μｍｏｌ）を脱保護し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ１：１中０から１０％ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ５：５：１）後に、表題化合物８３ｃ（２８５ｍｇ、７９．９％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ｃ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 2,31
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 1047,9
1H-NMR (DMSO-d6, 600 MHz) δ[ppm]: 11.43 (br s, 1 H), 7.76 (m, 1 H), 7.57 - 7.65 (m, 1 H), 7.42 (m, 2 H), 7.21 - 7.32 (m, 7 H), 6.85 - 6.90 (m, 4 H), 5.88 - 5.94 (m, 0.4 H), 5.82 (m, 0.6 H), 5.21 (m, 1 H), 4.94 - 4.99 (m, 1.6 H), 4.63 - 4.69 (m, 0.4 H), 4.57 (m, 1 H), 4.36 (m, 0.6 H), 4.16 - 4.26 (m, 2 H), 4.09 - 4.15 (m, 0.4 H), 3.99 - 4.05 (m, 3 H), 3.85 - 3.92 (m, 2 H), 3.69 - 3.79 (m, 8 H), 3.45 - 3.62 (m, 9 H), 3.06 - 3.10 (m, 1 H), 2.88 - 3.06 (m, 2 H), 2.10 (s, 3 H), 1.99 (s, 3 H), 1.88 (s, 3 H), 1.76 (br s, 3 H), 1.73 (s, 3 H).

【0711】

８３ｄ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［５－［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－（ヒドロキシメチル）－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］－５－オキソ－ペントキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｇ（スキーム１８参照）に従い、ＴＩＰＳ－エーテル８２ｄ（１．７５ｇ、１．５１ｍｍｏｌ）を脱保護し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０から１０％ＭｅＯＨ）後に、表題化合物８３ｄ（１．１７ｇ、７７．３％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,80
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 1001,4
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.43 (s, 1 H), 7.78 (m, 1 H), 7.64, 7.58 (2 x b s, 1 H), 7.41 (m, 2 H), 7.20 - 7.33 (m, 7 H), 6.88 (m, 4 H), 5.85 (m, 0.4 H), 5.77 (m, 0.6 H), 5.21 (m, 1 H), 4.92 - 5.01 (m, 1.6 H), 4.61 - 4.67 (m, 0.4 H), 4.45 - 4.52 (m, 1 H), 4.37 - 4.45 (m, 0.6 H), 4.21 - 4.29 (m, 0.4 H), 3.67 - 4.07 (m, 12 H), 3.32 - 3.64 (m, 4 H), 2.81 - 3.14 (m, 3 H), 2.27 - 2.38 (m, 2 H), 2.06 - 2.12 (m, 3 H), 1.96 - 2.01 (m, 3 H), 1.89 (m, 3 H), 1.76 (m, 3 H), 1.72 (m, 3 H), 1.49 (br s, 4 H).

【0712】

８３ｅ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［１２－［（２Ｒ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシ－フェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－（ヒドロキシメチル）－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）－モルホリン－４－イル］－１２－オキソ－ドデコキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｇ（スキーム１８参照）に従い、ＴＩＰＳ－エーテル８２ｅ（１．４５ｇ、１．１５ｍｍｏｌ）を脱保護し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０から５％ＭｅＯＨ）後に、表題化合物８３ｅ（１．１０ｇ、８６．６％）を得た。
ＬＣＭＳ－方法Ａ：
UV-波長 [nm] = 220: R_t[分] = 1,96
イオン化方法： ES^-: [M-H]^- = 1099,6
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.42 (br s, 1 H), 7.79 (d, J=9.29 Hz, 1 H), 7.63, 7.57 (2 x s, 1 H), 7.41 (m, 2 H), 7.20 - 7.34 (m, 7 H), 6.87 (m, 4 H), 5.84 (m, 0.4 H), 5. 77 (m, 0.6 H), 5.21 (m, 1 H), 4.91 - 5.01 (m, 1.6 H), 4.61 - 4.68 (m, 0.4 H), 4.48 (m, 1 H), 4.39 (m, 0.6 H), 4.24 (m, 0.4 H), 3.98 - 4.06 (m, 3 H), 3.66 - 3.90 (m, 3 H), 3.74 (s, 6 H), 3.56 (m, 1 H), 3.36 - 3.50 (m, 2 H), 2.77 - 3.16 (m, 2 H), 2.22 - 2.39 (m, 2 H), 2.10 (m, 3 H), 1.99 (m, 3 H), 1.89 (m, 3 H), 1.76 (m, 3 H), 1.72 (m, 3 H), 1.39 - 1.56 (m, 4 H), 1.18 - 1.32 (br s, 16 H).

【0713】

８４ａ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］－２－オキソ－エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｈ（スキーム１８参照）に従って、出発アルコール８３ａ（３８０ｍｇ、３９５μｍｏｌ）から、表題化合物８４ａ（４３４ｍｇ、９４．４％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.41 (b s, 1 H), 7.72 - 7.90 (m, 1 H), 7.60 - 7.71 (m, 1 H), 7.35 - 7.48 (m, 2 H), 7.17 - 7.33 (m, 7 H), 6.82 - 6.95 (m, 4 H), 5.78 - 6.05 (m, 1 H), 5.16 - 5.26 (m, 1 H), 4.91 - 5.03 (m, 1 H), 4.55 - 4.64 (m, 1 H), 4.10 - 4.54 (m, 3 H), 3.52 - 4.08 (m, 16 H), 3.36 - 3.50 (m, 2 H), 2.85 - 3.18 (m, 3 H), 2.57 - 2.72 (m, 2 H), 2.07 (m, 3 H), 1.98 (m, 3 H), 1.88 (m, 3 H), 1.68 - 1.78 (m, 6 H), 0.89 - 1.22 (m, 12 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,2, 147,1, 146,8, 146,3.

【0714】

８４ｂ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシ－フェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシ－メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｈ（スキーム１８参照）に従って、出発アルコール８３ｂ（５００ｍｇ、４９７μｍｏｌ）から、表題化合物８４ｂ（５７５ｍｇ、９５．９％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.40 (br s, 1 H), 7.79 (br d, J=9.22 Hz, 1 H), 7.63 (m, 1 H), 7.40 (br s, 2 H), 7.20 - 7.34 (m, 7 H), 6.83 - 6.91 (m, 4 H), 5.80 - 6.03 (m, 1 H), 5.22 (m, 1 H), 4.96 (m, 1 H), 4.56 (m, 1 H), 4.08 - 4.43 (m, 4 H), 4.03 (s, 3 H), 3.52 - 3.91 (m, 16 H), 3.38 - 3.50 (m, 2 H), 2.86 - 3.18 (m, 3 H), 2.52 - 2.75 (m, 2 H), 2.07 (m, 3 H), 1.99 (m, 3 H), 1.90 (m, 3 H), 1.68 - 1.81 (m, 6 H), 0.89 - 1.22 (m, 12 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,2, 147,2, 147,13, 147,06.

【0715】

８４ｃ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［２－［２－［２－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシ－フェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシ－メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］－エトキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｈ（スキーム１８参照）に従って、出発アルコール８３ｃ（２８５ｍｇ、２７２μｍｏｌ）から、表題化合物８４ｃ（３１７ｍｇ、９３．５％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.40 (br s, 1 H), 7.77 (m, 1 H), 7.60 - 7.71 (m, 1 H), 7.40 (m, 2 H), 7.21 - 7.33 (m, 7 H), 6.87 (m, 4 H), 5.82 - 5.99 (m, 1 H), 5.21 (m, 1 H), 4.97 (m, 1 H), 4.57 (m, 1 H), 4.09 - 4.39 (m, 3 H), 3.97 - 4.08 (m, 3 H), 3.34 - 3.95 (m, 20 H), 2.90 - 3.18 (m, 3 H), 2.56 - 2.73 (m, 2 H), 2.10 (m, 3 H), 2.07 (m, 3 H), 1.99 (m, 3 H), 1.89 (m, 3 H), 1.71 - 1.80 (m, 6 H), 0.89 - 1.22 (m, 12 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 148,1, 147,3, 147,2, 147,0.

【0716】

８４ｄ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［５－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシフェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシメチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］－５－オキソ－ペントキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｈ（スキーム１８参照）に従って、出発アルコール８３ｄ（１．０ｇ、９９７μｍｏｌ）から、表題化合物８４ｄ（１．１９ｇ、９９．２％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.41 (br s, 1 H), 7.74 - 7.81 (m, 1 H), 7.58 - 7.70 (m, 1 H), 7.40 (m, 2 H), 7.20 - 7.33 (m, 7 H), 6.87 (m, 4 H), 5.79 - 5.93 (m, 1 H), 5.21 (br s, 1 H), 4.96 (m, 1 H), 4.31 - 4.52 (m, 2 H), 3.96 - 4.08 (m, 4 H), 3.53 - 3.94 (m, 6 H), 3.73 (s, 6 H), 3.34 - 3.50 (m, 4 H), 3.02 - 3.19 (m, 1 H), 2.83 - 3.01 (m, 1 H), 2.56 - 2.74 (m, 2 H), 2.52 - 2.54 (m, 1 H), 2.26 - 2.43 (m, 2 H), 2.10, 2.08 (2 x s, 3 H), 1.99 (s, 3 H), 1.89 (m, 3 H), 1.71 - 1.79 (m, 6 H), 1.41 - 1.69 (m, 4 H), 0.89 - 1.12 (m, 12 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,9, 147,1, 147,0, 146,7.

【0717】

８４ｅ：［（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）－５－アセトアミド－３，４－ジアセトキシ－６－［１２－［（２Ｓ，６Ｒ）－２－［［ビス（４－メトキシ－フェニル）－フェニル－メトキシ］メチル］－２－［［２－シアノエトキシ－（ジイソプロピルアミノ）ホスファニル］オキシ－メチル］－６－（５－メチル－２，４－ジオキソ－ピリミジン－１－イル）モルホリン－４－イル］－１２－オキソ－ドデコキシ］テトラヒドロピラン－２－イル］メチルアセテート
一般的手順Ｈ（スキーム１８参照）に従って、出発アルコール８３ｅ（５５７ｍｇ、５０６μｍｏｌ）から、表題化合物８４ｅ（３９６ｍｇ、６０．２％）を得た。
1H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ[ppm]: 11.35 - 11.48 (m, 1 H), 7.76 - 7.84 (m, 1 H), 7.56 - 7.70 (m, 1 H), 7.33 - 7.45 (m, 2 H), 7.21 - 7.33 (m, 7 H), 6.87 (m, 4 H), 5.77 - 5.96 (m, 1 H), 5.21 (m, 1 H), 4.93 - 5.01 (m, 1 H), 4.31 - 4.51 (m, 2 H), 3.94 - 4.11 (m, 4 H), 3.53 - 3.92 (m, 4 H), 3.73 (m, 6 H), 3.33 - 3.49 (m, 3 H), 3.03 - 3.21 (m, 2 H), 2.83 - 2.99 (m, 1 H), 2.62 - 2.72 (m, 1 H), 2.21 - 2.48 (m, 2 H), 2.10 (m, 3 H), 1.99 (m, 3 H), 1.89 (m, 3 H), 1.71 - 1.82 (m, 6 H), 1.45 (br s, 4 H), 1.14 - 1.30 (m, 18 H), 0.83 - 1.13 (m, 12 H).
31P-NMR (DMSO-d6, 162 MHz) δ[ppm]: 147,7, 147,3, 147,2, 146,7.

【0718】

本明細書に従う化合物のいくつかの例の化学構造を以下の表に例示する；本明細書およびスキームへの対応ならびに立体化学を示す。表ＡおよびＢは、オリゴヌクレオチド合成のためのモルホリノシリーズおよびジオキサンシリーズからの非標的化ホスホルアミダイトヌクレオチド類似体のいくつかの例を示し；表Ｃは、オリゴヌクレオチド合成のための標的化ヌクレオチド類似体のいくつかの例を示す。

【0719】

ヌクレオチド前駆体としてのホスホルアミダイトは「ｐｒｅ－ｌ」と略記され、ヌクレオチド類似体は「ｌ」と略記され、これに核酸塩基および数字が続き、これは式（Ｉ）および（ＩＩ）におけるＹ基を指定する（表ＡおよびＢ参照）。両方の立体化学を区別するために、（２Ｓ，６Ｒ）－ジアステレオ異性体は追加の「ａ」で示され、類似体（２Ｒ，６Ｒ）－ジアステレオ異性体は追加の「ｂ」で示される。標的化されたヌクレオチド前駆体および標的化されたヌクレオチド類似体（表Ｃ）は、上記の通りに略記されるが、「ｌ」の代わりに「ｌｇ」が用いられる。標的化された類似体に関し、立体異性体の間に追加の区別はない。

【0720】

化合物表

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【表1-4】

【表1-5】

【表1-6】

【0721】

【表2-1】

【表2-2】

【0722】

【表3-1】

【表3-2】

【表3-3】

【0723】

ヌクレオチド類似体ならびに標的化されたヌクレオチドおよび類似体を含むｓｉＲＮＡの合成
オリゴヌクレオチド合成およびｓｉＲＮＡ製造
全てのオリゴヌクレオチドは、ＡＢＩ３９４合成装置で合成した。５’－Ｏ－ジメトキシトリチル－チミジン－３’－Ｏ－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル－２－シアノエチル）－ホスホルアミダイト、５’－Ｏ－ジメトキシトリチル－２’－Ｏ－ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル－ウラシル－３’－Ｏ－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル－２－シアノエチル）－ホスホルアミダイト、５’－Ｏ－ジメトキシトリチル－２’－Ｏ－ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル－Ｎ４－シチジン－３’－Ｏ－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル－２－シアノエチル）－ホスホルアミダイト、５’－Ｏ－ジメトキシトリチル－２’－Ｏ－ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル－Ｎ６－ベンゾイル－アデノシン－３’－Ｏ－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル－２－シアノエチル）－ホスホルアミダイト、５’－Ｏ－ジメトキシトリチル－２’－Ｏ－ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル－Ｎ２－イソブチリル－グアノシン－３’－Ｏ－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル－２－シアノエチル）－ホスホルアミダイト、５’－Ｏ－ジメトキシトリチル－２’－Ｏ－メチル－ウラシル－３’－Ｏ－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル－２－シアノエチル）－ホスホルアミダイト、５’－Ｏ－ジメトキシトリチル－２’－Ｏ－メチル－Ｎ４－シチジン－３’－Ｏ－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル－２－シアノエチル）－ホスホルアミダイト、５’－Ｏ－ジメトキシトリチル－２’－Ｏ－メチル－Ｎ６－ベンゾイル－アデノシン－３’－Ｏ－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル－２－シアノエチル）－ホスホルアミダイト、５’－Ｏ－ジメトキシトリチル－２’－Ｏ－メチル－Ｎ２－イソブチリル－グアノシン－３’－Ｏ－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル－２－シアノエチル）－ホスホルアミダイト、５’－Ｏ－ジメトキシトリチル－２’－デスオキシ－フルオロ－ウラシル－３’－Ｏ－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル－２－シアノエチル）－ホスホルアミダイト、５’－Ｏ－ジメトキシトリチル－２’－デスオキシ－フルオロ－Ｎ４－シチジン－３’－Ｏ－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル－２－シアノエチル）－ホスホルアミダイト、５’－Ｏ－ジメトキシトリチル－２’－デスオキシ－フルオロ－Ｎ６－ベンゾイル－アデノシン－３’－Ｏ－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル－２－シアノエチル）－ホスホルアミダイトおよび５’－Ｏ－ジメトキシトリチル－２’－デスオキシ－フルオロ－Ｎ２－イソブチリル－グアノシン－３’－Ｏ－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル－２－シアノエチル）－ホスホルアミダイト等の標準的な保護基を有する市販（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）のＤＮＡ－、ＲＮＡ－、２’－ＯＭｅ－ＲＮＡおよび２’－デスオキシ－Ｆ－ＲＮＡ－ホスホルアミダイト、ならびに対応する固体支持体物質（ＣＰＧ－５００Å、４０μｍｏｌ／ｇ装填、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ）を、自動オリゴヌクレオチド合成に使用した。３’末端コレステロールコンジュゲートには、固体支持体３’－コレステロールＳｙｎＢａｓｅ（商標）ＣＰＧ１０００（ｌｉｎｋ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）３２μｍｏｌ／ｇを使用した。

【0724】

ホスホルアミダイト構成単位をアセトニトリル中０．１Ｍ溶液として使用し、５－（ビス－３，５－トリフルオロメチルフェニル）－１Ｈ－テトラゾール（アクティベーター４２、アセトニトリル中０．２５Ｍ、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）で活性化した。２００秒の反応時間を標準的なホスホルアミダイトカップリングに使用した。表Ａ、ＢおよびＣに列挙した本明細書に記載のホスホルアミダイトの場合、３００秒のカップリング時間を適用した。キャッピング試薬として、ＴＨＦ中無水酢酸（ＡＢＩ用ｃａｐＡ、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）およびＴＨＦ中Ｎ－メチルイミダゾール（ＡＢＩ用ｃａｐＢ、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用した。酸化試薬として、ＴＨＦ／ピリジン／水中ヨウ素（０．０２Ｍ；ＡＢＩ用酸化剤、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用した。代替として、ＰＳ酸化を、３－（（Ｎ，Ｎ－ジメチル－アミノメチリデン）アミノ）－３Ｈ－１，２，４－ジチアゾール－５－チオン（ＤＤＴＴ）のピリジン／アセトニトリル（１：１）中０．０５Ｍ溶液を用いて達成した。ＤＭＴ保護基の脱保護を、ＤＣＭ中ジクロロ酢酸（ＤＣＡ ｄｅｂｌｏｃｋ、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して行った。固体支持体からの最終切断および脱保護（アシルおよびシアノエチル保護基）を、ＮＨ_３（３２％水溶液／エタノール、３：１容量／容量）を用いて達成した。ＮＭＰ／ＮＥｔ_３／ＮＥｔ_３・３ＨＦ（３：１．５：２）による処理を、ＴＢＤＭＳ脱保護に適用した。

【0725】

３’末端に本明細書に記載のモルホリノまたはジオキサン構成単位を有するオリゴヌクレオチドを、ユニバーサルリンカー固体支持体（ＣＰＧ－５００Å、３９μｍｏｌ／ｇ装填、ＡＭ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ ＬＬＣ）および表Ａ、ＢおよびＣに示した対応するホスホルアミダイト上で合成した。

【0726】

粗生成物をＨＰＬＣにより分析し、一本鎖の精製をイオン交換または分取ＨＰＬＣ方法により実行した。
イオン交換：ＡＫＴＡ精製装置（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＤＮＡＰａｃ ＰＡ２００半分取イオン交換カラム、８μｍ粒子、幅２２ｍｍ×長さ２５０ｍｍ）。
緩衝液Ａ：Ｈ_２Ｏ １．５０ｌ、ＮａＣｌＯ_４ ２．１０７ｇ、ＥＤＴＡ ４３８ｍｇ、ＴＲＩＳ １．８１８ｇ、尿素５４０．５４ｇ、ｐＨ７．４。
緩衝液Ｂ：Ｈ_２Ｏ １．５０ｌ、ＮａＣｌＯ_４ １０５．３４ｇ、ＥＤＴＡ ４３８ｍｇ、ＴＲＩＳ １．８１８ｇ、尿素５４０．５４ｇ、ｐＨ７．４。
オリゴヌクレオチドの単離を、４容量のエタノールの添加および－２０℃での貯蔵により誘発される沈殿により達成した。
分取ＨＰＬＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００シリーズ分取ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ（登録商標）ＢＥＨ Ｃ１８ ＯＢＤ（商標）分取カラム１３０Å、５μｍ、１０ｍｍ×１００ｍｍ）。溶出液：アセトニトリル／水中トリエチルアンモニウムアセテート（０．１Ｍ）。凍結乾燥した後、生成物を２．５Ｍ ＮａＣｌ溶液１．０ｍｌおよびＨ_２Ｏ（４．０ｍｌ）に溶解した。エタノール２０ｍｌを加えて－２０℃で１８時間貯蔵することにより沈殿させた後に、対応するＮａ^＋塩を単離した。

【0727】

一本鎖の最終分析をＬＣ／ＭＳ－ＴＯＦ法により行った。結果を表Ｄ１およびＤ２に示す。

【0728】

二本鎖形成のために、等モル量のセンス鎖およびアンチセンス鎖を、１×ＰＢＳ緩衝液中で混合し、８５℃に１０分間加熱し、室温にゆっくり冷却した。ｓｉＲＮＡ二本鎖の最終分析をＬＣ／ＭＳ－ＴＯＦ法により行った。結果を表Ｅ１およびＥ２に示す。

【0729】

一本鎖および二本鎖のオリゴヌクレオチドの分析データ
一本鎖のオリゴヌクレオチドからの分析データを、以下の表Ｄ１およびＤ２に示す。

【0730】

【表4-1】

【表4-2】

【0731】

【表5-1】

【表5-2】

【表5-3】

【表5-4】

【0732】

二本鎖のオリゴヌクレオチドからの分析データを、以下の表Ｅ１およびＥ２に示す。

【0733】

【表6-1】

【表6-2】

【表6-3】

【表6-4】

【表6-5】

【表6-6】

【0734】

【表7】

【0735】

インビトロ生物学的アッセイの物質および方法
Ｔ_ｍ－決定
ｓｉＲＮＡのＰＢＳ緩衝液（１×ＰＢＳ）中１．０μＭ溶液を、１℃／分の加熱速度で２０から９０℃にて分光光度計（Ｊａｓｃｏ Ｖ－６５０）中で加熱した。吸光度を２６０ｎｍで測定し、対応する温度に対してプロットした。９０℃に到達した後、溶液を１℃／分と同じ速度で２０℃にまで冷却し、加熱冷却サイクルを繰り返した。融解温度を、２つの加熱曲線の変曲点の平均値として計算した。

【0736】

細胞および組織培養
Ｓｅｇｌｅｎ、Ｐ．Ｏ．（１９７６）：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｓｏｌａｔｅｄ Ｒａｔ Ｌｉｖｅｒ Ｃｅｌｌｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ、１３：２９～８３頁から適合させたプロトコールに基づいて、実験前に雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウスからの初代肝細胞を新たに単離した。単離した肝細胞のプレーティングを、２ｍＭグルタミン（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号２５０３０）、ペニシリン－ストレプトマイシン（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号１５１４０）１００Ｕ／ｍｌ、デキサメタゾン（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｄ１７５６）１μｇ／ｍｌ、１×ＩＴＳ溶液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号４１４００）および５％ＦＢＳを補充したＷｉｌｌｉａｍｓ’Ｅ培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号２２５５１）中、３７℃、５％ＣＯ_２および９５％ＲＨで３～５時間行った。プレーティングの後、培地を、１％ＦＢＳの補充以外はプレーティング培地と同一である培養培地に交換した。４８または７２時間のインキュベーション期間中に、更なる培地交換は行わなかった。

【0737】

製造業者の指示書に従ってヘパリンナトリウム（ＢＤ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、ドイツ）で被覆したＶａｃｕｔａｉｎｅｒチューブに収集した３人の健常ドナー由来の血液およそ１６ｍＬから、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離した。

【0738】

ヒトＨｅｐ３Ｂ細胞を３７℃、５％ＣＯ_２および９５％ＲＨで増殖させ、１０％ＦＢＳを補充したＥＭＥＭ培地（ＡＴＣＣ、カタログ番号３０－２００３）中で培養した。

【0739】

ｓｉＲＮＡトランスフェクション
ヒトＰＢＭＣのトランスフェクションのために、無血清ＲＰＭＩ培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号１１８７５）の総体積１５０μＬ中、９６ウェル（Ｎ＝２）当たりリポフェクタミン２０００ ０．３μＬを用いて、１００ｎＭのｓｉＲＮＡを、ＰＢＭＣ １×１０^５個に２４時間リバーストランスフェクトした。

【0740】

初代マウス肝細胞を用いるノックダウン実験のために、コラーゲンＩ被覆９６ウェルプレート中の４０，０００細胞／ウェルを、更には培地交換をせずに、濃度１０、１および０．１ｎＭでＴＴＲ ｓｉＲＮＡを用いる遊離取り込み条件下で７２時間インキュベートした。ＴＴＲ ｍＲＮＡ発現分析を以下に記載した通りに行った（「ｍＲＮＡ発現分析」参照）

【0741】

ＩＣ_５０測定
初代の新たなマウス肝細胞におけるＩＣ_５０測定のために、コラーゲンＩ被覆９６ウェルプレート中の細胞３０，０００個を、１０倍希釈ステップを使用する１μＭから１ｐＭの範囲の濃度でｓｉＲＮＡを用いる遊離取り込み条件下、４８時間インキュベートした。各ｓｉＲＮＡについての半最大阻害濃度（ＩＣ_５０）を、Ｂｉｏｓｔａｔ－Ｓｐｅｅｄ統計計算ツールを適用することにより計算した。結果は、ＲａｔｋｏｖｓｋｙおよびＲｅｅｄｙ（１９８６、Ｂｉｏｍｅｔｒｉｃｓ、４２巻：５７５～５８２頁）に従う４パラメーターロジスティックモデルを使用して得た。調整は、ＳＡＳ ｖ９．１．３ソフトウェアにおいてＬｅｖｅｎｂｅｒｇ－Ｍａｒｑｕａｒｄｔアルゴリズムを使用する非線形回帰により得た。

【0742】

ｍＲＮＡ発現分析
ｓｉＲＮＡトランスフェクションまたは遊離ｓｉＲＮＡ取り込みの４８時間後、手順中のＤＮａｓｅ工程を含む製造業者のプロトコールに従ったＰｒｏｍｅｇａのＳＶ９６全ＲＮＡ単離システム（カタログ番号Ｚ３５００）を使用することにより、細胞ＲＮＡを回収した。

【0743】

ｃＤＮＡ合成のために、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ製の逆転写酵素キット（カタログ番号Ｎ８０８０２３４）を使用した。ＲＮＡ３０ｎｇからのｃＤＮＡ合成を、総体積１２μｌ中、１０×ＲＴ緩衝液１．２μｌ、ＭｇＣｌ_２（２５ｍＭ）２．６４μｌ、ｄＮＴＰｓ（１０ｍＭ）２．４μｌ、ランダムヘキサマー（５０μＭ）０．６μｌ、オリゴ（ｄＴ）１６（５０μＭ）０．６μｌ、ＲＮａｓｅ阻害剤（２０Ｕ／μｌ）０．２４μｌおよびＭｕｌｔｉｓｃｒｉｂｅ（５０Ｕ／μｌ）０．３μｌを使用して実行した。サンプルを２５℃で１０分間および４２℃で６０分間インキュベートした。９５℃に５分間加熱することにより、反応を停止させた。

【0744】

マウスＴＴＲ ｍＲＮＡレベルを、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ＴａｑＭａｎユニバーサルＰＣＲマスターミックス（カタログ番号４３０５７１９）およびＴａｑＭａｎ遺伝子発現アッセイＭｍ００４４３２６７＿ｍ１を使用して、ｑＰＣＲにより定量した。ＰＣＲを、以下のＰＣＲ条件下、ＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ７９００を用いて技術的に二重に実行した：５０℃で２分間、９５℃で１０分間、９５℃１５秒と６０℃１分とを４０サイクル。ＰＣＲは、１回の反応で標的遺伝子を検出し、第２の反応で正規化のためのハウスキーピング遺伝子（マウスＲＰＬ３７Ａ）を検出する、単純ＰＣＲとしてセットアップした。ＰＣＲ反応のための最終体積を１×ＰＣＲマスターミックスで１２．５μｌとし、ＲＰＬ３７Ａプライマーを最終濃度５０ｎＭおよびプローブ２００ｎＭで使用した。ΔΔＣｔ法を適用して、標的転写物の相対的発現レベルを計算した。標的遺伝子発現の百分率を、ＬＶ２非サイレンシングｓｉＲＮＡ対照配列のレベルに基づく正規化により計算した。

【0745】

ＩＦＮα決定
ＩＦＮαタンパク質濃度を、ヒトＰＢＭＣの上清において以下の通り定量した：細胞培養上清２５μＬを、ＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙの技術に基づく自己確立電気化学発光アッセイを適用し、ｐａｎ ＩＦＮαモノクローナル捕捉抗体（ＭＴ１／３／５、Ｍａｂｔｅｃｈ）を使用する、ＩＦＮα濃度の測定に使用した。代替として、ヒトＩＦＮα２ａアイソフォーム特異的アッセイ（カタログ番号Ｋ１５１ＶＨＫ）を、ＭｅｓｏＳｃａｌｅのＵ－ＰＬＥＸプラットフォームに基づき、および供給業者のプロトコールに従って適用した。

【0746】

細胞毒性
マウスＴＴＲ ｓｉＲＮＡの細胞毒性は、各サンプルにおける細胞生存性／毒性の比率を決定することにより、遊離取り込み条件下での初代の新たなマウス肝細胞３０，０００個とのインキュベーションの７２時間後に測定した。細胞生存性は、製造業者のプロトコールに従ってＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｇ７５７０）を使用する細胞内ＡＴＰ含量を決定することにより測定した。細胞毒性は、製造業者のプロトコールに従ってＬＤＨアッセイ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号１１６４４７９３００１）を使用して上清において測定した。

【0747】

ｐｍｉｒＧＬＯ二重のルシフェラーゼレポーターアッセイ
ｓｉＲＮＡシード領域媒介オフターゲットを定量化するために、修飾した部分的な３’ＵＴＲマウスＴＴＲ配列（ＮＭ＿０１３６９７）を、市販されている二重のルシフェラーゼレポーターベースのｐｍｉｒＧＬＯスクリーニングプラスミド（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｅ１３３０）の多重のクローニング部位中にサブクローニングした。４つの連続したマウスＴＴＲ ｓｉＲＮＡシード配列構成成分を、野生のマウスＴＴＲ３’ＵＴＲ配列の上流および下流のヌクレオチドそれぞれ約６０により隣接させた：

【化60】

【0748】

ＴＧＡ＝ＮＭ＿０１３６９７の停止コドン、

【化61】

【0749】

ｐｍｉｒＧＬＯ－ＴＴＲプラスミド１０μｇを、ＦｕＧｅｎｅ ＨＤトランスフェクション試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｅ２３１１）を使用して２つのＴ２５フラスコ（Ｇｒｅｉｎｅｒ、カタログ番号６９０１７５）中で４百万のＨｅｐ３Ｂ細胞中に１８時間早送りセットアップに過渡的にトランスフェクトした。リポフェクタミンＲＮＡｉＭＡＸを使用して３８４ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ、カタログ番号７８１０９８）中で、ウェル毎に５０００のプラスミドで予めトランスフェクトしたＨｅｐ３Ｂ細胞の１００，１０，１および０．１ｎＭでのｓｉＲＮＡトランスフェクションを、リバースセットアップで翌日に行い、細胞を７２時間インキュベートした。相対的発光シグナルを、Ｄｕａｌ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｅ２９４０）を使用して、やはりｐｍｉｒＧＬＯプラスミドによってコードされる、恒常的に発現したＲｅｎｉｌｌａルシフェラーゼのレベルに正規化したＦｉｒｅｆｌｙルシフェラーゼレベルを測定することにより決定した。ＴＴＲ遺伝子ノックダウンの百分率を、ＬＶ２非サイレンシングｓｉＲＮＡ対照配列の相対的発光シグナルに基づく正規化により計算した。

【実施例1】

【0750】

本開示に従う修飾ｓｉＲＮＡによる標的遺伝子発現のインビボ阻害

【0751】

【表8】

【0752】

【表9】

【0753】

【表10】

【0754】

インビトロ結果
化合物ｓｉＲＮＡ１－１からｓｉＲＮＡ１－４の初代マウス肝細胞におけるインビトロノックダウン結果を表１ｄに要約する。

【0755】

【表11】

【0756】

ｌｇＴ構成単位を有する全ての試験されたｓｉＲＮＡは、遊離取り込み下ピコモル濃度範囲において高いインビトロ効力を示す。ｌｇＴ３およびｌｇＴ７を含有する標的化されたヌクレオチド類似体の間の比較は、３’または５’末端置換（ｓｉＲＮＡ１－２対ｓｉＲＮＡ１－３）の間に有意差がないｌｇＴ７類似体（ｓｉＲＮＡ１－１対ｓｉＲＮＡ１－２およびｓｉＲＮＡ１－３）について有益なＩＣ_５０値を示す。ｓｉＲＮＡ１－１とｓｉＲＮＡ１－４との比較は、追加のｌＴ４ａ－オーバーハングが何ら追加のホスホチオエート基も有しないセンス鎖の３’末端に結合している場合、インビトロ効力に有意差がないことを示し、このことはセンス鎖においてまったくホスホチオエート安定化していない結果となる。

【0757】

ｌｇＴ－またはｌｇＴ－およびｌＴ－オーバーハングを有する全てのｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ１－０からｓｉＲＮＡ１－４）を、ＩＦＮα中アッセイおよび細胞毒性アッセイで試験したが、これらは免疫刺激または細胞生存性に対して何らの影響も示さなかった。

【0758】

インビボ実施例１．１：
ＧａｌＮＡｃ－ｓｉＲＮＡコンジュゲートのインビボ活性の実証、およびＲＮＡ干渉活性に対する追加のｌＴ４ａ－オーバーハングを有するおよび有しない異なるＧａｌＮＡｃ構成単位の影響の比較

【0759】

方法
Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス（雌性２０～２２ｇ；Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ、ドイツ）を、ｎ＝６の群にてＰＥＧ－ＧａｌＮＡｃ－ｓｉＲＮＡまたはＰＢＳ（模擬対照）５ｍｇ／ｋｇの単回用量で皮下処置した。投与された化合物の配列および化学組成を、表１ａから表１ｃに列挙する。図１に示すように、投与前後に血液サンプルを採取した。ｓｉＲＮＡ標的ＴＴＲを、市販のＥＬＩＳＡアッセイ（Ａｌｐｃｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、カタログ番号：４１－ＰＡＬＭＳ－Ｅ０１）により血清から定量した。

【0760】

結果（図１参照）
図１に見ることができるように、センス鎖の５’末端で３種のｌｇＴ７構成単位を結合させることは、ｌｇＴ３構成単位を有する類似の化合物と比較して、作用持続時間が有意に改善される（ｓｉＲＮＡ１－３対ｓｉＲＮＡ１－１）。同じ標的化ヌクレオチド（ｌｇＴ７）を使用して、５’末端で３種の構成単位を結合させることは、センス鎖の３’末端で同じ標的化部分を有する類似体ＳｉＲＮＡを超える明らかな利益を示した（ｓｉＲＮＡ１－３対ｓｉＲＮＡ１－２）。驚くべきことに、センス鎖の５’末端での標的化ヌクレオチド（ｌｇＴ７）と３’末端で非標的化ヌクレオチド類似体（ｌＴ４ａ）との組合せは、追加のｌＴ４ａ構成単位を有しない類似のホスホチオエート安定化ｓｉＲＮＡと比較して、インビボ作用持続時間が明らかに改善されることを示した（ｓｉＲＮＡ１－４対ｓｉＲＮＡ１－１）。

【0761】

これらの結果は、モルホリンベースのヌクレオチド類似体が、肝臓ｓｉＲＮＡ標的化のためのＧａｌＮＡｃ置換ヌクレオチド類似体（ｌｇＴ）として使用される場合、インビボで有益な特性を示すことを明らかに示している。

【0762】

インビボ実施例１．２：
インビボ実施例１．１から選択された化合物の用量依存的インビボ活性および急性毒性評価。

【0763】

方法
動物研究
Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス（雌性２０～２２ｇ；Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ、ドイツ）を、ｎ＝６（０．５および２．５ｍｇ／ｋｇについて）またはｎ＝５（２５ｍｇ／ｋｇについて）の群にて、ｓｉＲＮＡまたはＰＢＳ（模擬対照）０．５、２．５または２５ｍｇ／ｋｇの単回用量で皮下処置した。投与された化合物の配列および化学組成は、表１ａから表１ｃで参照される。動物を、処置の４８時間後に屠殺し、血液を血液学的分析、臨床化学のために採取し、臓器を回収し、秤量した。血液学的血球計数をｓｃｉｌ Ｖｅｔ動物用血球計数装置で実行し、臨床化学分析をＲｏｃｈｅ Ｃｏｂａｓシステムで実行した。

【0764】

ｓｉＲＮＡ標的ＴＴＲを、市販のＥＬＩＳＡアッセイ（Ａｌｐｃｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、カタログ番号：４１－ＰＡＬＭＳ－Ｅ０１）により血清から定量化した。

【0765】

肝臓組織を、ＤＮａｓｅ消化を含む全ＲＮＡ抽出（ＲＮＡｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ）により、ＲＴ－ｑＰＣＲ分析のために処理した。ＴＴＲ（ＴａｑＭａｎアッセイＩＤ Ｍｍ００４４３２６７＿ｍ１）および参照ｍＲＮＡ（Ａｃｔｂ（ＴａｑＭａｎアッセイＩＤ４３５２３４１Ｅ）、Ｇａｐｄｈ（ＴａｑＭａｎアッセイＩＤ４３０８３１３））を、ＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ７９００システム上でｑＰＣＲにより定量化し、続いてオリゴ－ｄＴおよびランダムヘキサマープライミングｃＤＮＡ合成を行った。ΔΔＣｔ法を適用して、標的転写物の相対的発現レベルを計算した。

【0766】

２５ｍｇ／ｋｇ処置群（＋ＰＢＳ）の右上の肝葉、脾臓および腎臓をホルマリン固定し、標準的なＨ＆Ｅ染色に続いて異常について病理学的に評価した。

【0767】

結果（図２および３参照）：
タンパク質およびｍＲＮＡレベルの両方が、投与の４８時間後に用量依存的方法で、全ての試験された活性ｓｉＲＮＡにより低減した。ｍＲＮＡおよびタンパク質低減は、平行して起こった。試験された活性物質の中では、いかなる用量でも、タンパク質またはｍＲＮＡレベルのいずれにおいても有意差は観察されなかった。

【0768】

処置用量依存的影響は、標準的な血液学および肝臓／腎臓臨床化学アッセイにおいて観察されなかった。また、有意の処置依存的な、血清サイトカインの変質、および臓器または体重への影響も、屠殺において観察されなかった。全ての偏差が正常な生理学的範囲または正常な動物間変動性内であった。肝臓および脾臓の組織病理学的評価には所見がなかった。

【実施例2】

【0769】

本開示に従う修飾ｓｉＲＮＡによる標的遺伝子発現のインビボ阻害

【0770】

【表12】

【0771】

【表13-1】

【表13-2】

【0772】

【表14】

【0773】

化合物ｓｉＲＮＡ２－１からｓｉＲＮＡ２－１７の初代マウス肝細胞におけるインビトロノックダウン結果を表２ｄに要約する：

【0774】

【表15】

【0775】

１０ｎＭの濃度で、ほぼ全ての化合物は、極めて高いインビトロ効力でｍＲＮＡのほぼ定量的減少を示す。アンチセンス鎖の２位でモルホリノ類似体ｌＡ４ａを有するｓｉＲＮＡ２－２およびｓｉＲＮＡ２－３のみが、５７．１および６０．９％のｍＲＮＡが残る、極めて低いインビトロ効力を示す。１０ｎＭ濃度と対照的に、全てのｓｉＲＮＡｓは０．１ｎＭの最少濃度ではｍＲＮＡが減少しなかった。最も差異を生じさせる濃度は１ｎＭであり、この場合ｓｉＲＮＡ２－２およびｓｉＲＮＡ２－３は最も弱い阻害値を再度示した。４位でｌＴ４ａ構成単位を組み入れることが、インビトロ効力の低下につながる（ｓｉＲＮＡ２－５）。５、６および７位にて、式Ｉの構成単位を正しい核酸塩基（ｓｉＲＮＡ２－６、ｓｉＲＮＡ２－８、ｓｉＲＮＡ２－１０、ｓｉＲＮＡ２－１１、ｓｉＲＮＡ２－１２およびｓｉＲＮＡ２－１３）で組み入れることが、高いインビトロ効力につながるが、７位でミスマッチな核酸塩基を有する対応する二本鎖（ｓｉＲＮＡ２－１４）は、インビトロノックダウンを低下させることを再度示す。驚くべきことに、モルホリノまたはジオキサン構成単位（それぞれｌＡ４ｂおよびｌＡ１ｂ）で（２Ｒ，６Ｒ）立体化学を有するｓｉＲＮＡ２－１１およびｓｉＲＮＡ２－１３は、最も強力な化合物の内である。８位にて、両方のｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ２－１６およびｓｉＲＮＡ２－１７）は、陽性対照ｓｉＲＮＡ２－１として同様の効力を示す。

【0776】

記載した式Ｉの配列－内部構成単位を有するｓｉＲＮＡについて、対応するＴ_ｍ値を決定し、これを表２ｅに要約する。

【0777】

【表16】

【0778】

対照ｓｉＲＮＡ２－１（Ｔ_ｍ＝８６．８℃）と比較して、修飾ｓｉＲＮＡは、アンチセンス鎖中に修飾ヌクレオチド類似体を組み込む位置に依存して、これらの融解温度の低下が示される。期待される通り、２，３および４位での修飾（ｓｉＲＮＡ２－２からｓｉＲＮＡ２－５）のみがＴ_ｍを若干低下させることを示すが、より高い位置での修飾がより顕著なＴ_ｍ低下をもたらし、８位で極めて高い低下（ｓｉＲＮＡ２－１６およびｓｉＲＮＡ２－１７）であって、マッチしたｓｉＲＮＡ２－１６では１３．３℃およびミスマッチした類似体ｓｉＲＮＡ２－１７では１５．６℃のＴ_ｍ低下をもたらした。

【0779】

驚くべきことに、７位でモルホリノまたはジオキサン構成単位を有するｓｉＲＮＡに関して、組み込まれた足場のキラリティに依存してＴ_ｍ値は有意差がある。モルホリノ化合物の場合、ｌＡ４ａ－ヌクレオチドの組み込みによりＴ_ｍ値が７７．５℃になり、これは９．３℃の低下である（ｓｉＲＮＡ２－１０）が、Ｃ－２にて反対の立体化学で類似体モルホリノ化合物ｌＡ４ｂを組み込むとＴ_ｍ値は８４．７になり、これは対照ｓｉＲＮＡ２－１と比較して２．１℃の小さな低下のみである（ｓｉＲＮＡ２－１１）。類似体ジオキサン対に同様に観察された。７位でのｌＡ１ａ－ヌクレオチド類似体の組み込みは、対照ｓｉＲＮＡ２－１より７．４℃低い７９．４℃への有意なＴｍ低下につながる（ｓｉＲＮＡ２－１２）。反対の立体化学を有する類似体修飾（ｌＡ１ｂ）によりＴ_ｍ値は８５．３℃になり、これは再度１．５℃の僅かな低下のみである（ｓｉＲＮＡ２－１３）。７位で式Ｉの化合物を含むオリゴヌクレオチド二本鎖の二重鎖安定性は、組み込まれたヌクレオチド類似体のＣ－２での立体化学により有意に影響されると見られる。（２Ｓ，６Ｒ）－立体化学を有する式Ｉのヌクレオチド類似体を含むＳｉＲＮＡはより高い二重鎖不安定化を示し、それゆえこれらの（２Ｒ，６Ｒ）類似体よりＴｍ値は低い。

【0780】

【表17】

【0781】

二重のルシフェラーゼレポーターアッセイの所定のセットアップを用いて、親陽性対照ｓｉＲＮＡ２－１は、ｓｉＲＮＡ濃度１０および１００ｎＭにてＴＴＲ－ｓｉＲＮＡ配列に最も顕著に結合していることを示した。驚くべきことに、この潜在的なオフターゲット結合は、アンチセンス鎖の２から７位でモルホリノおよびジオキサン構成単位を有する化合物ｓｉＲＮＡ２－２からｓｉＲＮＡ２－１５を用いて切断された（表２ａおよび２ｃ参照）。ｓｉＲＮＡ２－１６およびｓｉＲＮＡ２－１７について８位での修飾のみが、濃度１０および１００ｎＭにていくつかの効果を再度示し、これは潜在的なオフターゲット効果を示すが、陽性対照ｓｉＲＮＡ２－１と同様に顕著ではない。

【0782】

アンチセンス鎖中で少なくとも２から７位で式Ｉのモルホリノまたはジオキサン構成単位の使用は、場合によってｓｉＲＮＡ分子の特定プロファイルを更に高める可能性を有することを、データは示唆している。

【0783】

インビボ結果
説明：
インビボ実施例２．１：
表２ｃに列挙されたｓｉＲＮＡコンジュゲートのインビボ活性の実証およびこれらのＲＮＡｉ活性の比較

【0784】

方法
Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス（雌性２０～２２ｇ；Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ、ドイツ）を、ｎ＝６の群にて、ｓｉＲＮＡまたはＰＢＳ（模擬対照）１ｍｇ／ｋｇの単回用量で皮下処置した。投与された化合物の配列および化学組成を、表２ａ～表２ｃに列挙する。図４および５に示すように、投与前後に血液サンプルを採取した。ｓｉＲＮＡ標的ＴＴＲを、市販のＥＬＩＳＡアッセイ（Ａｌｐｃｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、カタログ番号：４１－ＰＡＬＭＳ－Ｅ０１）により血清から定量化した。

【0785】

結果（図４および５参照）
図４および５から推察できるように、３、４、５、６および８位で式Ｉの化合物の（２Ｓ，６Ｒ）－モルホリノ類似体を有するｓｉＲＮＡは、陽性対照ｓｉＲＮＡ２－１と比較して、インビボ効力が有意に低下することを示した。同様の結果は、アンチセンス鎖の７位で（２Ｓ，６Ｒ）－モルホリノ足場および（２Ｓ，６Ｒ）－ジオキサン足場を有するｓｉＲＮＡ２－１０およびｓｉＲＮＡ２－１２にて得られ、これらのミスマッチ類似体ｓｉＲＮＡ２－１４およびｓｉＲＮＡ２－１５も同様であった。驚くべきことに、ｓｉＲＮＡ２－１１およびｓｉＲＮＡ２－１３は、陽性対照化合物ｓｉＲＮＡ２－１と相当するインビボ効力を示した。７位で（２Ｓ，６Ｒ）体の構成単位（それぞれｌＡ４ａおよびｌＡ１ａ）を有する有意に強力ではない対応物（ｓｉＲＮＡ２－１０およびｓｉＲＮＡ２－１２）と対照的に、これら２種のｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ２－１１およびｓｉＲＮＡ２－１３）のみが、モルホリノまたはジオキサン構成単位（それぞれｌＡ４ｂおよびｌＡ１ｂ）のＣ－２原子にて立体化学が異なる。キラリティを（２Ｒ，６Ｒ）シリーズに変換すると、モルホリノ－およびジオキサン－シリーズの両方においてインビボ効力が有意に増加した。

【0786】

インビボ実施例２．２：
インビボ実施例２．１から選択された化合物の用量依存的インビボ活性および急性毒性評価

【0787】

方法
動物研究
Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス（雌性２０～２２ｇ；Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ、ドイツ）を、ｎ＝６（０．５および２．５ｍｇ／ｋｇについて）またはｎ＝５（２５ｍｇ／ｋｇについて）の群にて、ｓｉＲＮＡまたはＰＢＳ（模擬対照）０．５、２．５または２５ｍｇ／ｋｇの単回用量で皮下処置した。投与された化合物の配列および化学組成は、表２ａから表２ｃで参照される。動物を、処置の４８時間後に屠殺し、血液を血液学的分析、臨床化学のために採取し、臓器を回収し、秤量した。血液学的血球計数をｓｃｉｌ Ｖｅｔ動物用血球計数装置で実行し、臨床化学分析をＲｏｃｈｅ Ｃｏｂａｓシステムで実行した。

【0788】

ｓｉＲＮＡ標的ＴＴＲを、市販のＥＬＩＳＡアッセイ（Ａｌｐｃｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、カタログ番号：４１－ＰＡＬＭＳ－Ｅ０１）により血清から定量化した。

【0789】

肝臓組織を、ＤＮａｓｅ消化を含む全ＲＮＡ抽出（ＲＮＡｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ、Ｑｉａｇｅｎ）により、ＲＴ－ｑＰＣＲ分析のために処理した。ＴＴＲ（ＴａｑＭａｎアッセイＩＤ Ｍｍ００４４３２６７＿ｍ１）および参照ｍＲＮＡ（Ａｃｔｂ（ＴａｑＭａｎアッセイＩＤ４３５２３４１Ｅ）、Ｇａｐｄｈ（ＴａｑＭａｎアッセイＩＤ４３０８３１３））を、ＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ７９００システム上でｑＰＣＲにより定量化し、続いてオリゴ－ｄＴおよびランダムヘキサマープライミングｃＤＮＡ合成を行った。ΔΔＣｔ法を適用して、標的転写物の相対的発現レベルを計算した。

【0790】

２５ｍｇ／ｋｇ処置群（＋ＰＢＳ）の右上の肝葉、脾臓および腎臓をホルマリン固定し、標準的なＨ＆Ｅ染色に続いて異常について病理学的に評価した。

【0791】

結果（図６および７参照）：
タンパク質およびｍＲＮＡレベルの両方が、投与の４８時間後に用量依存的方法で、全ての試験された活性ｓｉＲＮＡにより低減した。ｍＲＮＡおよびタンパク質低減は、平行して起こった。試験された活性物質の中では、いかなる用量でも、タンパク質またはｍＲＮＡレベルのいずれにおいても有意差は観察されなかった。

【0792】

処置用量依存的影響は、標準的な血液学および肝臓／腎臓臨床化学アッセイにおいて観察されなかった。また、有意の処置依存的な、血清サイトカインの変質、および臓器または体重への影響も、屠殺において観察されなかった。全ての偏差が正常な生理学的範囲または正常な動物間変動性内であった。肝臓および脾臓の組織病理学的評価には所見がなかった。

【実施例3】

【0793】

本開示に従う修飾ｓｉＲＮＡによる標的遺伝子発現のインビトロ阻害
実施例１および２にすでに使用した、ＴＴＲ－ｍＲＮＡを標的とするｓｉＲＮＡ配列において、両鎖をセンス鎖およびアンチセンス鎖中モルホリノおよびジオキサンベースのヌクレオチドで修飾した。次いで得られた配列、全てが少なくとも１つのアンチセンス鎖中モルホリノまたはジオキサン構成単位を示す配列を、上記した物質および方法の「ｓｉＲＮＡトランスフェクション」および「ｍＲＮＡ発現分析」項にて記載した通りに、初代マウス肝細胞中のこれらのｍＲＮＡノックダウンをインビトロで試験した。センス鎖およびアンチセンス鎖ならびに対応するｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドの配列を表３ａ、３ｂおよび３ｃに列挙する。

【0794】

化合物ｓｉＲＮＡ３－１からｓｉＲＮＡ３－１２０の初代マウス肝細胞におけるインビトロノックダウン結果を表３ｄに要約する。

【0795】

【表18-1】

【表18-2】

【表18-3】

【0796】

【表19-1】

【表19-2】

【表19-3】

【表19-4】

【表19-5】

【0797】

【表20-1】

【表20-2】

【表20-3】

【0798】

【表21-1】

【表21-2】

【表21-3】

【表21-4】

【0799】

インビトロ結果
適用した０．１、１．０および１０．０ｎＭの濃度で、陽性対照化合物ｓｉＲＮＡ２－１は、それぞれ９１．９５、５２．４０および３．２０％の残留発現を示すが、センス鎖のＰＳ安定化３’末端を有する第２の陽性対照ｓｉＲＮＡ３－１（＝ｓｉＲＮＡ１－３，実施例１）は、残留ＴＴＲ ｍＲＮＡが６０．４７、２０．７８および０．８８％である、より高いインビトロ効力を示す。ｓｉＲＮＡ２－１およびｓｉＲＮＡ３－１の両方の化合物は、高いインビボ効力を示した（実施例１および２参照）。それゆえ、２つの陽性対照化合物の範囲内でのインビトロノックダウンは、有望なインビトロ結果に十分な効力があると考えられる。

【0800】

本明細書に記載したｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ３－２からｓｉＲＮＡ３－１２０）は、満足するノックダウン結果、陽性対照配列の範囲内である高い数を示す。

【0801】

アンチセンス鎖中に１つのモルホリンまたはジオキサン構成単位を有する化合物シリーズｓｉＲＮＡ３－２からｓｉＲＮＡ３－２２およびｓｉＲＮＡ３－６０からｓｉＲＮＡ３－８０は、本明細書に記載した新規なヌクレオチドがアンチセンス鎖の５’末端に配置されている場合、効力を適正化するために良好であることを示す。モルホリン修飾シリーズ（ｓｉＲＮＡ３－２、３－３、３－４および３－５）中の１、２、３および４位での、ならびにジオキサン類似体（ｓｉＲＮＡ３－６０および３－６１）内の１および２位での修飾により、効力を適正化する。有利に、これら２つのシリーズ内の全ての他の配列は、陽性対照（例えば、ｓｉＲＮＡ３－８、ｓｉＲＮＡ３－９、ｓｉＲＮＡ３－１７、ｓｉＲＮＡ３－７０、ｓｉＲＮＡ３－７１またはｓｉＲＮＡ３－７７）の範囲内のいくつかにおいても、良好なインビトロノックダウンを示す。

【0802】

７位に加えてアンチセンス鎖中の第２の修飾ヌクレオチド類似体を有するｓｉＲＮＡ、モルホリン誘導化ヌクレオチドを有するｓｉＲＮＡ３－２３からｓｉＲＮＡ３－４１ならびに対応するジオキサンを有するｓｉＲＮＡ３－８１およびｓｉＲＮＡ３－１００も、インビトロノックダウンを適正化するために良好であることを示す。このシリーズからの最高の実施化合物は、ｓｉＲＮＡ３－２９、ｓｉＲＮＡ３－３０、ｓｉＲＮＡ３－３２、ｓｉＲＮＡ３－３６、ｓｉＲＮＡ３－３８、ｓｉＲＮＡ３－３９、ｓｉＲＮＡ３－４０およびｓｉＲＮＡ３－４１であり、これは陽性対照化合物と同等である高い効力を示す。修飾７位に加えてアンチセンス鎖の３’末端での修飾は、反対の５’末端修飾以上に好ましいと思われる。極めて興味深いことに、類似体ジオキサンシリーズ（ｓｉＲＮＡ３－８１およびｓｉＲＮＡ３－１００）において、アンチセンス鎖中の２つのジオキサン構成単位を有するほぼ全ての配列は、高い効力を示す。モルホリンシリーズと同様に、７位に加えて５’末端での修飾（ｓｉＲＮＡ３－８１、ｓｉＲＮＡ３－８２およびｓｉＲＮＡ３－８４）のみが、適正ではあるが、満足するノックダウン効力に導く。

【0803】

最高の効力は、センス鎖中およびアンチセンス鎖中の７位で修飾した第３の修飾シリーズにおいて達成された。モルホリン誘導化ヌクレオチド（ｓｉＲＮＡ３－４２からｓｉＲＮＡ３－５９）および対応するジオキサン構成単位（ｓｉＲＮＡ３－１０１からｓｉＲＮＡ３－１２０）も有する全てのｓｉＲＮＡは、２つの陽性対照配列の範囲で高いインビトロ効力を示した。

【0804】

要約すると、表３ｄに列挙した結果は、ｓｉＲＮＡ配列のハイブリダイジング部分内へのモルホリンおよびジオキサンシリーズの（２Ｒ，６Ｒ）体の新規なヌクレオチド構成単位の組み込みは、オリゴヌクレオチド二本鎖の多数の位置で十分に許容され、高いインビトロノックダウン効力に導くことを示す。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【配列表】

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