特表 2022-512748 大腸癌の治療のためのアビツズマブ

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2022-02-07

(54)【発明の名称】大腸癌の治療のためのアビツズマブ

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20220131BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20220131BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20220131BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20220131BHJP

   A61K 31/4745 20060101ALI20220131BHJP

   A61K 31/513 20060101ALI20220131BHJP

   A61K 31/519 20060101ALI20220131BHJP

   A61K 31/282 20060101ALI20220131BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20220131BHJP

   C07K 16/22 20060101ALN20220131BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 T

A61P35/00

A61P35/04

A61K39/395 U

A61K45/00

A61K31/4745

A61K31/513

A61K31/519

A61K31/282

C07K16/28 ZNA

C07K16/22

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2021521247

(86)(22)【出願日】2019-10-18

(85)【翻訳文提出日】2021-06-04

(86)【国際出願番号】 EP2019078327

(87)【国際公開番号】W WO2020079209

(87)【国際公開日】2020-04-23

(31)【優先権主張番号】62/748,114

(32)【優先日】2018-10-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】591032596

【氏名又は名称】メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング

【氏名又は名称原語表記】Ｍｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｍｉｔ ｂｅｓｃｈｒａｅｎｋｔｅｒ Ｈａｆｔｕｎｇ

【住所又は居所原語表記】Ｆｒａｎｋｆｕｒｔｅｒ Ｓｔｒ． ２５０，Ｄ－６４２９３ Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｆｅｄｅｒａｌ Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｇｅｒｍａｎｙ

(74)【代理人】

【識別番号】100094569

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 伸一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100103610

【弁理士】

【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦

(74)【代理人】

【識別番号】100109070

【弁理士】

【氏名又は名称】須田 洋之

(74)【代理人】

【識別番号】100119013

【弁理士】

【氏名又は名称】山崎 一夫

(74)【代理人】

【識別番号】100123777

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 さつき

(74)【代理人】

【識別番号】100111796

【弁理士】

【氏名又は名称】服部 博信

(74)【代理人】

【識別番号】100111501

【弁理士】

【氏名又は名称】滝澤 敏雄

(72)【発明者】

【氏名】マッスィミーニ ジョルジオ

(72)【発明者】

【氏名】チェリック イルハン

(72)【発明者】

【氏名】シュトラウブ ヨーゼフ

(72)【発明者】

【氏名】ブルンス ロルフ

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4C086

4C206

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA19

4C084MA66

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZB051

4C084ZB091

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZC751

4C084ZC752

4C085AA14

4C085BB01

4C085CC21

4C085DD62

4C085EE01

4C085EE03

4C085GG01

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC43

4C086CB09

4C086CB22

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA03

4C086MA04

4C086MA66

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZB05

4C086ZB09

4C086ZB26

4C086ZC75

4C206AA01

4C206AA02

4C206JB14

4C206JB15

4C206JB16

4C206MA01

4C206MA02

4C206MA03

4C206MA04

4C206MA86

4C206NA05

4C206NA14

4C206ZB05

4C206ZB09

4C206ZB26

4C206ZC75

4H045AA30

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

(57)【要約】

本発明は、大腸癌の治療方法に関するものであり、前記治療は抗α－ｖインテグリン（受容体）抗体アビツズマブの投与を含む。好ましくは、本発明は、それを必要とする患者への前記アビツズマブの投与を含む、大腸癌、ステージＩＩ～ＩＶの大腸癌、転移性大腸癌、左側大腸癌、及び／又は左側転移性大腸癌を治療する方法に関するものである。本発明は、大腸癌、好ましくは本明細書で定義された大腸癌を治療するための医薬品の製造のためのアビツズマブの使用、及び／又は成長因子又は成長因子受容体を標的とするモノクローナル抗体などの適切な標的療法の概念、及び／又は化学療法と組み合わせた大腸癌を治療するための医薬品の製造のためのアビツズマブの使用にも関する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトの大腸癌を治療する方法であって、ヒトにアビツズマブを投与することを含み、前記大腸癌はαｖβ６インテグリンが高発現していることを特徴とする、前記方法。

【請求項2】

ヒトの大腸癌を治療する方法であって、ヒトにアビツズマブを投与することを含み、前記大腸癌が左側大腸癌である、前記方法。

【請求項3】

左側大腸癌を治療する方法であって、ヒトにアビツズマブを投与することを含み、前記の左側大腸癌はαｖβ６インテグリンが高発現していることを特徴とする、前記方法。

【請求項4】

ヒトが少なくとも１つの成長因子又は成長因子受容体を標的とするモノクローナル抗体、及び／又は化学療法も受ける、請求項１、２、又は３に記載の方法。

【請求項5】

大腸癌がステージＩＩ、ステージＩＩＩ、又はステージＩＶの大腸癌である、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項6】

大腸癌が転移性大腸癌又は左側転移性大腸癌である、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

大腸癌が左側大腸癌又は左側転移性大腸癌であって、αｖβ６インテグリンが高発現していることを特徴とする、請求項１～６のいずれか1項に記載の方法。

【請求項8】

大腸癌がＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型大腸癌である、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項9】

大腸癌が、ＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側大腸癌又はＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側転移性大腸癌である、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

大腸癌が、ステージＩＩ、ステージＩＩＩ、又はステージＩＶのＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側大腸癌、又はＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側転移性大腸癌であり、αｖβ６インテグリンが高発現していることを特徴とする、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項11】

大腸癌がＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側転移性大腸癌であり、αｖβ６インテグリンが高発現していることを特徴とする、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項12】

左側大腸癌が、新たに診断された大腸癌である、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項13】

第一選択治療で適用される、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項14】

方法が併用療法で適用される、請求項４～１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項15】

アジュバント療法で適用される、請求項４～１４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項16】

ネオアジュバント療法で適用される、請求項４～１５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項17】

ヒトが、アビツズマブと同時に、少なくとも１つの成長因子又は成長因子受容体を標的とするモノクローナル抗体及び／又は前記化学療法を受ける、請求項４～１５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項18】

少なくとも１つの成長因子又は成長因子受容体を標的とするモノクローナル抗体が、セツキシマブ、ベバシズマブ及び／又はパニツムマブを含む、請求項４～１６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項19】

少なくとも１つの成長因子又は成長因子受容体を標的とするモノクローナル抗体が、セツキシマブ及びベバシズマブからなる群から選択される、請求項４～１８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項20】

化学療法が、イリノテカン、フルオロウラシル、テガフール／ウラシル（ＵＦＴ）、フォリン酸、オキサリプラチン、アフリベルセプト、レゴラフェニブ、カペシタビン、及びそれらのプロドラッグ、並びにそれらの塩及び溶媒和物からなる群から選択される１つ以上の化合物を含む、請求項５～１８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項21】

化学療法がＦＯＬＦＩＲＩプロトコルに従って実施される、請求項４～２０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項22】

化学療法がＦＯＬＦＯＸプロトコルに従って実施される、請求項４～２０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項23】

化学療法が、
ａ）イリノテカン、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、及びフォリン酸（ロイコボリン）から選択される１つ以上の化合物、並びにそれらのプロドラッグ、
又は
ｂ）オキサリプラチン、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、及びフォリン酸（ロイコボリン）、並びにそれらのプロドラッグから選択される１つ以上の化合物、
及び、その塩及び溶媒
を含む、請求項４～２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項24】

アビツズマブが、１週間あたり３７５ｍｇから７５０ｍｇの量で、隔週で７５０ｍｇから１５００ｍｇの量で、又は１ヶ月あたり１５００ｍｇから３０００ｍｇの量で、ヒトに投与される、請求項１～２３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項25】

アビツズマブが、１週間あたり約５００ｍｇの量で、隔週で約１０００ｍｇの量で、又は１ヶ月あたり２０００ｍｇの量で、ヒトに投与される、請求項１～２４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項26】

アビツズマブが少なくとも６サイクルにわたってヒトに投与され、各サイクルが約１週間、約２週間、約４週間、又は約１カ月の期間を有する、請求項１～２５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項27】

アビツズマブが少なくとも６サイクルにわたってヒトに投与され、各サイクルが約２週間の期間を有する、請求項１～２６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項28】

少なくとも１つの成長因子又は成長因子受容体を標的とするモノクローナル抗体が、１週間あたり７５ｍｇ～１０００ｍｇ、隔週で１５０ｍｇ～２０００ｍｇ、又は１ヶ月あたり３００ｍｇ～４０００ｍｇの量でヒトに投与される、請求項４～２７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項29】

セツキシマブが、１週間に約１５０ｍｇ／ｍ²～５５０ｍｇ／ｍ²、隔週で約３００ｍｇ／ｍ²～１１００ｍｇ／ｍ²、又は１ヶ月に約６００ｍｇ／ｍ²～２２００ｍｇ／ｍ²の量で、ヒトに投与される、請求項１８～２８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項30】

セツキシマブが少なくとも６サイクルにわたってヒトに投与され、各サイクルが約１週間、約２週間、約４週間、又は約１カ月の期間を有する、請求項１８～２９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項31】

セツキシマブが少なくとも６サイクルにわたってヒトに投与され、各サイクルが約２週間の期間を有し、前記セツキシマブが、ヒトに毎週又は隔週で投与される、請求項１８～３０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項32】

セツキシマブが少なくとも６サイクルにわたってヒトに投与され、各サイクルが約２週間の期間を有し、セツキシマブがヒトに、
ａ）各サイクル中、好ましくは各サイクルの開始時に、約５００ｍｇ／ｍ²の量、
又は
ｂ）各サイクルの第１週目の初めに約４００ｍｇ／ｍ²の量で、各サイクルの第２週目の初めに約２５０ｍｇ／ｍ²の量
のいずれかで投与される、請求項１８～３１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項33】

ベバシズマブは、１週間あたり約１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの量、隔週で３ｍｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇの量、又は１ヶ月あたり約６ｍｇ／ｋｇ～３０ｍｇ／ｋｇの量でヒトに投与される、請求項１８～２８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項34】

ベバシズマブが少なくとも６サイクルにわたってヒトに投与され、各サイクルが約１週間、約２週間、約４週間、又は約１カ月の期間を有する、請求項１８～２８及び３３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項35】

ベバシズマブが少なくとも６サイクルにわたってヒトに投与され、各サイクルが約２週間の期間を有し、ベバシズマブがヒトに毎週又は隔週で投与される、請求項１８～２８及び３３～３４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項36】

ベバシズマブが少なくとも６サイクルにわたってヒトに投与され、各サイクルが約２週間の持続時間を有し、ベバシズマブがヒトに
ａ）各サイクル中、好ましくは各サイクルの開始時に、３ｍｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇの量、又は５ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの量、
又は
ｂ）各サイクル中、好ましくは各サイクルの開始時に、約７．５ｍｇ／ｋｇの量
のいずれかで投与される、請求項１８～２８及び３３～３５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項37】

パニツムマブが、１週間あたり約１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの量、隔週で３ｍｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇの量、又は１ヶ月あたり約６ｍｇ／ｋｇ～３０ｍｇ／ｋｇの量でヒトに投与される、請求項１８～２８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項38】

パニツムマブが少なくとも６サイクルにわたってヒトに投与され、各サイクルが約１週間、約２週間、約４週間、又は約１カ月の期間を有する、請求項１８～２８及び３７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項39】

パニツムマブが少なくとも６サイクルにわたってヒトに投与され、各サイクルが約２週間の期間を有し、パニツムマブがヒトに毎週又は２週目ごとに投与されることを特徴とする、請求項１８～２８及び３７～３８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項40】

パニツムマブが少なくとも６サイクルにわたってヒトに投与され、各サイクルが約２週間の持続時間を有し、パニツムマブがヒトに
ａ）各サイクル中、好ましくは各サイクルの開始時に、３ｍｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇの量、又は４ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの量、
又は
ｂ）各サイクル中、好ましくは各サイクルの開始時に、約６ｍｇ／ｋｇの量
のいずれかで投与される、請求項１８～２８及び３７～３９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項41】

大腸癌がＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型大腸癌である、請求項２９～３２及び／又は請求項３７～４０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項42】

大腸癌が、ＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側大腸癌、又はＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側転移性大腸癌である、請求項２９～３２及び／又は請求項３７～４０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項43】

化学療法が少なくとも６サイクルにわたってヒトに施され、各サイクルが約２週間の期間を有し、
ａ）イリノテカン、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
ｂ）フォリン酸、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
及び／又は
ｃ）フルオロウラシル（５－ＦＵ）、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物が、
各サイクル中、好ましくは各サイクルの開始時及び／又は各サイクルの各週の開始時にヒトに投与される、請求項４～４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項44】

ヒトが化学療法も受け、前記化学療法が、
ａ）１週間に５０ｍｇ／ｍ²～１５０ｍｇ／ｍ²、隔週で１００ｍｇ／ｍ²～３００ｍｇ／ｍ²、又は１ヶ月に２００ｍｇ／ｍ²～６００ｍｇ／ｍ²の量の、イリノテカン、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
ｂ）１週間あたり１５０ｍｇ／ｍ²～２５０ｍｇ／ｍ²、隔週で３００ｍｇ／ｍ²～５００ｍｇ／ｍ²、又は１ヶ月あたり６００ｍｇ／ｍ²～１０００ｍｇ／ｍ²の量の、フォリン酸、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
及び／又は
ｃ）１週間あたり１５０ｍｇ／ｍ²～２５０ｍｇ／ｍ²、隔週で３００ｍｇ／ｍ²～５００ｍｇ／ｍ²、又は１ヶ月あたり６００ｍｇ／ｍ²～１０００ｍｇ／ｍ²の量の、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物
を含む、請求項４～４３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項45】

ヒトが化学療法も受け、前記化学療法が
ａ）１週間あたり５０ｍｇ／ｍ²～１５０ｍｇ／ｍ²、隔週で１００ｍｇ／ｍ²～３００ｍｇ／ｍ²、又は１ヶ月あたり２００ｍｇ／ｍ²～６００ｍｇ／ｍ²の量のイリノテカン、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
ｂ）１週間あたり１５０ｍｇ／ｍ²～２５０ｍｇ／ｍ²、隔週で３００ｍｇ／ｍ²～５００ｍｇ／ｍ²、又は１ヶ月あたり６００ｍｇ／ｍ²～１０００ｍｇ／ｍ²の量の、フォリン酸、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
及び／又は
ｃ）１週間あたり１０００ｍｇ／ｍ²～３０００ｍｇ／ｍ²、隔週で２０００ｍｇ／ｍ²～６０００ｍｇ／ｍ²、又は１ヶ月あたり４０００ｍｇ／ｍ²～１２０００ｍｇ／ｍ²の量、好ましくは隔週で２０００ｍｇ／ｍ²～３２００ｍｇ／ｍ²の量の、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物
を含む、請求項４～４４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項46】

化学療法が少なくとも６サイクルにわたってヒトに施され、各サイクルが約１週間、約２週間、約４週間、又は約１カ月の期間を有する、請求項４～４５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項47】

化学療法が少なくとも６サイクルにわたってヒトに施され、各サイクルが約２週間の期間を有し、
ａ）オキサリプラチン、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
ｂ）フォリン酸、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
及び／又は
ｃ）フルオロウラシル（５－ＦＵ）、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物が、
各サイクル中、好ましくは各サイクルの開始時にヒトに投与される、請求項４～４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項48】

ヒトが化学療法も受け、前記化学療法が、
ａ）１週間あたり２０ｍｇ／ｍ²～１２０ｍｇ／ｍ²、隔週で４０ｍｇ／ｍ²～２４０ｍｇ／ｍ²、又は１ヶ月あたり８０ｍｇ／ｍ²～４８０ｍｇ／ｍ²の量の、オキサリプラチン、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
ｂ）１週間あたり１５０ｍｇ／ｍ²～２５０ｍｇ／ｍ²、隔週で３００ｍｇ／ｍ²～５００ｍｇ／ｍ²、又は１ヶ月あたり６００ｍｇ／ｍ²～１０００ｍｇ／ｍ²の量の、フォリン酸、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
及び／又は
ｃ）１週間あたり１５０ｍｇ／ｍ²～２５０ｍｇ／ｍ²、隔週で３００ｍｇ／ｍ²～５００ｍｇ／ｍ²、又は１ヶ月あたり６００ｍｇ／ｍ²～１０００ｍｇ／ｍ²の量の、５－ＦＵ、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物
を含む、請求項４～４２及び４７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項49】

ヒトが化学療法も受け、前記化学療法が、
ａ）１週間あたり２０ｍｇ／ｍ²～１２０ｍｇ／ｍ²、隔週で４０ｍｇ／ｍ²～２４０ｍｇ／ｍ²、又は１ヶ月あたり８０ｍｇ／ｍ²～４８０ｍｇ／ｍ²の量の、オキサリプラチン、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
ｂ）１週間あたり１５０ｍｇ／ｍ²～２５０ｍｇ／ｍ²、隔週で３００ｍｇ／ｍ²～５００ｍｇ／ｍ²、又は１ヶ月あたり６００ｍｇ／ｍ²～１０００ｍｇ／ｍ²の量の、フォリン酸、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
及び／又は
ｃ）１週間あたり１０００ｍｇ／ｍ²～３０００ｍｇ／ｍ²、隔週で２０００ｍｇ／ｍ²～６０００ｍｇ／ｍ²、又は１ヶ月あたり４０００ｍｇ／ｍ²～１２０００ｍｇ／ｍ²の量、好ましくは隔週で２０００ｍｇ／ｍ²～３２００ｍｇ／ｍ²の量の、５－ＦＵ、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物
を含む、請求項４～４２及び４７～４８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項50】

化学療法が少なくとも６サイクルにわたってヒトに施され、各サイクルが約１週間、約２週間、約４週間、又は約１カ月の期間を有する、請求項４～４２及び４７～４９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項51】

化学療法が少なくとも６サイクルにわたってヒトに施され、各サイクルが約２週間の期間を有する、
ａ）オキサリプラチン、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
ｂ）フォリン酸、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
及び／又は
ｃ）５－ＦＵ、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物が、
各サイクル中、好ましくは各サイクルの開始時にヒトに投与される、請求項４～４２及び４７～５０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項52】

原発性腫瘍が結腸に位置する、請求項１～５１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項53】

原発性腫瘍が結腸の左側に位置する、請求項１～５２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項54】

セツキシマブ及び／又はＦＯＬＦＩＲＩと併用し、αｖβ６インテグリンが高発現している患者のＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側転移性大腸癌（ｍＣＲＣ）を治療するための医薬品の製造におけるアビツズマブの使用。

【請求項55】

セツキシマブ及びＦＯＬＦＩＲＩの併用し、αｖβ６インテグリンが高発現している患者のＲＡＳ野生型の左側転移性大腸癌（ｍＣＲＣ）を治療するための医薬品の製造におけるアビツズマブの使用。

【請求項56】

セツキシマブ及び／又はＦＯＬＦＩＲＩと併用し、αｖβ６インテグリンが高発現している患者のＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側転移性結腸癌を治療するための医薬品の製造におけるアビツズマブの使用。

【請求項57】

セツキシマブ及び／又はイリノテカンと併用し、αｖβ６インテグリンが高発現している患者のＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側転移性結腸癌又は転移性大腸癌を治療するための医薬品の製造におけるアビツズマブの使用。

【請求項58】

セツキシマブ及びイリノテカンと併用、好ましくはフォリン酸及び／又は５－ＦＵと併用し、αｖβ６インテグリンが高発現している患者のＲＡＳ野生型の左側転移性結腸癌又は転移性大腸癌を治療するための医薬品の製造におけるアビツズマブの使用。

【請求項59】

治療が第一選択治療である、請求項５４～５８のいずれか１項に記載のアビツズマブの使用。

【請求項60】

治療する前記転移性結腸癌及び／又は転移性大腸癌が、ステージＩＩＩ及び／又はステージＩＶの癌である、請求項５４～５９のいずれか１項に記載のアビツズマブの使用。

【請求項61】

医薬品が、投与されるアビツズマブの量が隔週で約１０００ｍｇ、又は１ヶ月あたり約２０００ｍｇとなるように患者に投与される、請求項５４～６０のいずれか１項に記載のアビツズマブの使用。

【請求項62】

αｖβ６インテグリンが高発現している患者が、７０より高いαｖβ６インテグリンのヒストスコアによって特徴付けられる、請求項５４～６１のいずれか１項に記載のアビツズマブの使用。

【請求項63】

治療が少なくとも６サイクル、少なくとも８サイクル、少なくとも１０サイクル、又は少なくとも１２サイクルにわたって投与され、各サイクルが２週間又は約２週間で構成される、請求項５４～６２のいずれか１項に記載のアビツズマブの使用。

【請求項64】

アビツズマブ、セツキシマブ、及び／又はＦＯＬＦＩＲＩを、隔週で、好ましくは２週間又は約２週間のサイクルで前記患者に投与する、請求項５４～６２のいずれか１項に記載のアビツズマブの使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１０月１９日に出願された仮出願第６２／７４８１１４号の利益を請求するものであり、その全体が参照により組み込まれている。

【0002】

本発明は、大腸癌の治療方法に関するものであり、前記治療は抗α－ｖインテグリン（受容体）抗体アビツズマブの投与を含む。好ましくは、本発明は、それを必要とする患者への前記アビツズマブの投与を含む、大腸癌、ステージＩＩ～ＩＶの大腸癌、転移性大腸癌、左側大腸癌、及び／又は左側転移性大腸癌を治療する方法に関するものである。より好ましくは、本発明は、大腸癌、好ましくは上記の種類又はステージの大腸癌を治療する方法であって、前記種類又はステージの大腸癌に対する既存の治療又は治療レジメンに追加して、抗α－ｖインテグリン（受容体）抗体アビツズマブの投与を含む方法に関する。従って、本発明は、大腸癌、好ましくは本明細書で定義された大腸癌を治療するための医薬品の製造のためのアビツズマブの使用、及び／又は成長因子又は成長因子受容体を標的とするモノクローナル抗体などの適切な標的療法の概念、及び／又は化学療法と組み合わせた大腸癌を治療するための医薬品の製造のためのアビツズマブの使用にも関する。

【背景技術】

【0003】

大腸癌（一般的には、結腸癌、直腸癌、及び／又は腸管癌とも呼ばれる）は、結腸又は直腸（大腸の一部）に癌が発生することである。一般的には体内の他の部位に侵入したり、転移したりする能力を持つ細胞が異常に増殖することによる。
現在、大腸癌の治療には、手術、放射線療法、化学療法、及び標的療法などが使用されている。大腸の壁の中にとどまっている癌は手術で治る可能性があるが、広範囲に広がっている癌は通常治らず、生活の質又は症状の改善に重点を置いた管理を伴う。米国における５年生存率は、約６５％である。しかし、これは癌の進行度、手術で全ての癌を取り除くことができるかどうか、そしてその人の全体の健康状態によって異なる。大腸癌は、世界的に見ても３番目に多い癌で、全ての癌患者の約１０％を占めている。２０１２年には１４０万人の新規患者が発生し、６９万４千人が死亡した。先進国でより多く、発症の６５％以上を占める。男性よりも女性の方が少ない。

【0004】

大腸癌及び直腸癌共に、場合によっては手術に加えて化学療法を使用することもある。直腸癌の場合、ネオアジュバント環境で化学療法を使用することもある。
癌がリンパ節に転移している場合、化学療法剤であるフルオロウラシル又はカペシタビンを追加することで、生命予後が向上する。リンパ節に癌がない場合、化学療法の効果については賛否両論ある。広範囲に転移した癌又は切除不能な癌の場合、これまでは緩和的な治療が中心だった。一般的に、このような状況では、いくつかの異なる化学療法薬が使用されることもある。この疾患に対する化学療法薬としては、カペシタビン、フルオロウラシル、イリノテカン、ロイコボリン、オキサリプラチン、及びＵＦＴが含まれてもよい。好ましくは、フルオロウラシルは、カペシタビン及び／又は５－フルオロシトシンなどのプロドラッグとして投与されてもよい。上皮細胞成長因子受容体阻害剤もまた使用されることもある。
放射線及び化学療法の併用は直腸癌には有効かもしれないが、大腸癌では腸が放射線に弱いため、通常は使用しない。化学療法と同様に、直腸癌の一部のステージでは、ネオアジュバント及びアジュバント環境で放射線治療を使用することができる。

【0005】

しかし、大腸癌（ＣＲＣ）という適応症は当業界では知られており、広く理解されている。好ましくは、大腸癌は、限定はしないが、発生場所、罹患した組織の種類、及び／又は発症した疾患の段階などの特徴によって区別できる異種混合を呈する疾患である。大腸癌の病期分類は、当業界では広く知られており、理解されている。好ましくは、発症の異なる段階を４つ又は５つのカテゴリー、好ましくは４つのカテゴリーに分類する。最も初期の大腸癌は「ステージ０」（超早期癌）に分類されるのが好ましく、その後、ステージＩ（１）からＩＶ（４）まで分類される。原則として、数値が低いほど、癌の発症、進行、及び／又は転移が少ないことを意味する。ステージＩＶのように数字が大きいほど、癌がより広がっていることを意味する。そして、１つのステージの中で、前の文字は好ましくは下のステージを意味する。癌の体験は人それぞれだが、同じようなステージの癌は、見通しも似ていて、ほぼ同じように治療されることが多い。
大腸癌の病期分類には、米国癌合同委員会（ＡＪＣＣ）のＴＮＭ分類がよく使用され、３つの基本情報に基づく。
・腫瘍（Ｔ）の範囲（大きさ）：癌が結腸又は直腸の壁にどの程度まで成長しているか。これらの層は、図１に示すように、内層から外層へと続き、以下が含まれる。
〇内側の層（粘膜）は、ほぼ全ての大腸癌が発生する層である。これには、薄い筋肉の層（粘膜筋層）が含まれる。
〇この筋層の下にある繊維組織（粘膜下層）
○厚い筋肉の層（固有筋層）
○直腸ではなく結腸の大部分を覆っている薄い結合組織の一番外側の層（漿膜下層及び漿膜）
・近くのリンパ節への転移（Ｎ）：癌が近くのリンパ節に転移しているか。
・遠くの部位への広がり（転移）（Ｍ）：癌が遠隔のリンパ節、又は肝臓若しくは肺などの遠隔臓器に転移しているか。

【0006】

以下に紹介するシステムは、２０１８年１月施行の最新のＡＪＣＣシステムである。手術中に摘出した組織を検査して決定する病理学的病期（外科的病期ともいう）を使用する。このシステムは外科的ステージングとも呼ばれている。健康診断、生検、及び画像検査の結果を考慮する臨床病期診断よりも正確である可能性が高く、手術前に実行するのが好ましい。
Ｔ、Ｎ、及びＭの後の数字又は文字は、それぞれの要素の詳細を表している。数字が大きいほど、癌が進行していることを意味する。Ｔ、Ｎ、及びＭの各カテゴリーが決定されると、これらの情報はステージグループ化と呼ばれる工程で統合され、全体のステージが割り当てられる。

【表1】

＊以下の追加カテゴリーは、上記の表１には記載されていない：
・ＴＸ：主な腫瘍は、情報不足のため評価できない。
・Ｔ０：原発性腫瘍の証拠はない。
・ＮＸ：広域リンパ節は、情報不足のため評価できない。

【0007】

大腸癌は、より一般的に４つのステージに分類される。ステージＩ、ステージＩＩ、ステージＩＩＩ、及びステージＩＶである。ステージが高いほど、大腸癌が進行していることを意味する。好ましくは、ステージＩとは、大腸の特定の場所に癌があると診断できるが、まだ実際には成長し始めていないことを意味する。ステージＩＩの大腸癌は、腫瘍が元々の大腸の場所で成長しているが、そこから先には広がっていないのに対し、ステージＩＩＩでは、癌が元々の大腸の場所の外に、例えば転移を介して広がっているが、最小限の範囲のみにとどまっている。多くの場合、ステージＩＩＩの大腸癌は、隣接する組織及び近くのリンパ節など、近くの組織にのみ転移している。最後に、ステージＩＶでは、癌が大腸領域の元の場所の外に、離れたリンパ節、骨、肝臓、肺、及び／又は脳などの他の組織に広がっている。例えば、Ｍａｔｉａｓ Ｒｉｉｈｉｍａｋｉ， Ａｋｓｅｌｉ Ｈｅｍｍｉｎｋｉ， Ｊａｎ Ｓｕｎｄｑｕｉｓｔ， Ｋａｒｉ Ｈｅｍｍｉｎｋｉ， Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ｜６：２９７６５｜ＤＯＩ：１０．１０３８／ｓｒｅｐ２９７６５を参照する。この開示内容は、好ましくは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0008】

１９９６年以降、ＣＲＣ及び／又はｍＣＲＣの治療法は、イリノテカン及びオキサリプラチンなどの化学療法、並びにセツキシマブ、パニツムマブ、アフリベルセプト、レゴラフェニブ、ベバシズマブなどの分子標的薬の登場により、選択肢が広がった。現在、大腸癌、特に進行性大腸癌に対しては、５－ＦＵ及びイリノテカンを含む複合化学療法レジメンによる治療が確立されている。これらにより、患者の予後は改善されたが、それでもほとんどの患者はこの疾患が原因で亡くなっている。
ＣＲＣの分子生物学的な理解が進み、側性が治療成績に影響を与えることが新たに分かってきたことから、腫瘍の成長及び進行に不可欠な因子を標的とした新しい併用療法が患者の治療成績の改善につながることが期待されている。基本的に、既存のｍＣＲＣの治療は、腫瘍細胞を破壊するための５つの異なる作用メカニズム、すなわち、チミジル酸合成酵素の阻害、ＤＮＡへのインターカレーション（白金化合物）、トポイソメラーゼＩの標的（イリノテカン）、限定はしないが、ＥＧＦ（上皮細胞成長因子）、ＥＧＦＲ（上皮細胞成長因子受容体）、ＶＥＧＦ（血管内皮細胞成長因子）、及び／又はＶＥＧＦＲ（血管内皮細胞成長因子受容体）などの成長因子又は成長因子受容体を標的とした治療法に基づいている。

【0009】

インテグリン阻害剤の使用は、インテグリンが内皮細胞だけでなく腫瘍細胞にも発現していることから、癌細胞の生存及び血管新生の両方に影響を与えると考えられている。腫瘍の成長に対する効果及び血管新生に対する効果を区別することは困難だが、標的とするインテグリンが腫瘍細胞及び内皮細胞の両方に発現している場合、これらの阻害剤の最大の反応が予測される。
骨は、ＣＲＣに限定はしないが、様々な癌の頻繁な転移部位の一つである。Ｂｉｓａｎｚら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ２００５； １２， ６３４－６４３）は、α－ｖインテグリンが、例えば骨内での前立腺腫瘍生存にプラスの役割を果たすことを示している。更に、研究（ＭｃＣａｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２００７； ２６， ６２３８－６２４３）によると、腫瘍細胞におけるαｖβ３インテグリンの活性化は、主要な骨特異的マトリックスタンパク質の認識に不可欠である。これらのデータは、αｖβ３インテグリンが遠隔転移における癌の成長を調節していることを示唆している。
インテグリンは、腫瘍細胞と骨微小環境の間の相互作用を媒介し、骨での成長を促進するという仮説が立てられているため、インテグリン阻害剤を使用することで、ＣＲＣ癌の骨病変を予防することが可能となる。これらの病変は、好ましくは骨芽細胞性及び／又は溶骨性であり、癌患者で頻繁に検出される。一部の癌の場合、剖検時に８０％以上の患者に骨転移が認められる。
更に、免疫組織化学的分析により、ヒトＣＲＣ癌組織の大部分にαｖインテグリンが存在することが示されている。
従って、大腸癌の治療のための新しい高活性の治療薬及び／又は高効率の治療法を提供する必要性が高くなっている。従って、本発明の好ましい目的は、ヒト、特に大腸癌（ＣＲＣ）及び／又はこれらの転移、特に転移性大腸癌（ｍＣＲＣ）に罹患しているヒト患者に対して、好ましくは転移の場所とは無関係に、より効果的で忍容性の高い治療レジメンを提供することであり、従って、好ましくは、全生存期間（ＯＳ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、生活の質（ＱＯＬ）、及び／又は生存期間の中央値の増加をもたらすことである。

【発明の概要】

【0010】

本発明によれば、大腸癌の治療のための新しい非常に強力な治療薬を提供する高い必要性は、抗α－ｖインテグリン（受容体）抗体アビツズマブを、インテグリンの発現が高く、特にαｖβ６インテグリンが高発現している腫瘍及び／又は転移を有する患者の大腸癌の治療方法に使用することによって満たされる。より好ましくは、大腸癌の治療のための新しい非常に強力な治療薬を提供する高い必要性は、抗α－ｖインテグリン（受容体）抗体アビツズマブの提供によって満たされ、好ましくは左側大腸癌、より好ましくは左側転移性大腸癌、特にインテグリンの発現が高く、特にαｖβ６インテグリンが高発現している腫瘍及び／又は転移を有する患者に適している。好ましくは、大腸癌の治療のための新しい高効率の治療法を提供する、これまでの満たされていない高い必要性も、本発明によって満たされる。
この点で、アビツズマブは大腸癌において、好ましくは直接的及び間接的な抗腫瘍作用を有することが分かっている。

【0011】

アビツズマブは、ヒトのインテグリン受容体のα－βサブユニットに対する組換えヒト化モノクローナルＩｇＧ２抗体アンタゴニストである。アビツズマブは、αｖインテグリンに特異的な汎インテグリン阻害剤で、すべてのαｖヘテロ二量体（αｖβ１、β３、β５、β６、及びβ８）を阻害する。特に、アビツズマブは、転移性大腸癌において活性が高く、この疾患の負の予後因子として議論されているαｖβ６を阻害し（Ｂａｔｅｓ ＲＣ， Ｂｅｌｌｏｖｉｎ ＤＩ， Ｂｒｏｗｎ Ｃ， ｅｔ ａｌ．“Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｇｒｉｎ β６ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｄｅｆｉｎｅｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｉｎｄｉｃａｔｏｒ ｏｆ ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ ｃｏｌｏｎ ｃａｒｃｉｎｏｍａ”． Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ．２００５ １１５ （２）：３３９－３４７； Ｎｉｕ Ｚ， Ｗａｎｇ Ｊ， Ｍｕｈａｍｍａｄ Ｓ， ｅｔ ａｌ． “Ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅＩＦ４Ｅ ａｎｄ ｉｎｔｅｇｒｉｎ αｖβ６ ｉｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃａｎ ｐｒｅｄｉｃｔ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ， ｒｅｖｅａｌ ｔｈｅｉｒ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｐｌｙ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ” Ｃｅｌｌ ＆ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ．２０１４ ； Ｙａｎｇ ＧＹ， Ｇｕｏ Ｓ， Ｄｏｎｇ ＣＹ， ｅｔ ａｌ． “Ｉｎｔｅｇｒｉｎ αｖβ６ ｓｕｓｔａｉｎｓ ａｎｄ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｔｕｍｏｒ ｉｎｖａｓｉｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ”． Ｗｏｒｌｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２０１５； ２１（２４）：７４５７－７４６７）、これらの開示は、好ましくは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。インテグリンは細胞接着分子の一種であり、細胞と細胞外マトリックス（ＥＣＭ）及び細胞と細胞の幅広い相互作用に役割を果たし（Ａｒｎａｏｕｔ ＭＡ、Ｇｏｏｄｍａｎ ＳＬ、Ｘｉｏｎｇ ＪＰ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｃｓ ｏｆ ｉｎｔｅｇｒｉｎ－ｂａｓｅｄ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ． Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ． ２００７；１９（５）：４９５－５０７）、これらの開示は、好ましくは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。インテグリンは、アルファ（α）サブユニット及びベータ（β）サブユニットからなるＥＣＭタンパク質のヘテロ二量体膜貫通型受容体である。これらは、それぞれのＥＣＭリガンドに結合することで活性化される。この相互作用の後、インテグリンは細胞内のキナーゼカスケードを引き起こし、細胞の増殖や生存を調節したり、アクチン細胞骨格と結合して細胞の接着や運動を促したりする（Ｇｏｅｌ ＨＬ， Ｌａｎｇｕｉｎｏ ＬＲ． Ｉｎｔｅｇｒｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ． Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ Ｒｅｓ． ２００４； １１９：１５ ３１、これらの開示は、好ましくは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
α－ｖ－インテグリンは、血管新生、増殖中の腫瘍血管や、ある種の腫瘍細胞に多く発現している。αｖβ６インテグリンファミリーのメンバーは、腫瘍の進行、腫瘍の血管新生、及び転移に直接的な役割を果たしていることが実証されている（Ｎｅｍｅｔｈ ＪＡ， Ｎａｋａｄａ ＭＴ， Ｔｒｉｋｈａ Ｍ， ｅｔ ａｌ．α－ｖ ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ ａｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔｓ ｉｎ ｏｎｃｏｌｏｇｙ． Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｖｅｓｔ． ２００７；２５（７）：６３２－６４６、これらの開示は、好ましくは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。

【0012】

本発明によれば、インテグリンが高発現しているＣＲＣ患者、好ましくはαｖβ６インテグリンが高発現しているＣＲＣ患者において、αｖβ６を含むがこれに限定されないインテグリンをアビツズマブでターゲティングすることは、ＣＲＣ及び／又はｍＣＲＣの治療にとって驚くほど有利な新規アプローチであり、特にＣＲＣ及び／又はｍＣＲＣで有効性を示した他の標的治療薬及び／又は化学療法と組み合わせた場合に有効であると考えられる。
従って、本発明の好ましい対象は、以下の１つ以上を含む。
好ましくは、上記及び／又は下記に記載の方法で、ヒト（複数可）にアビツズマブを投与することを含み、前記大腸癌が高いαｖβ６インテグリン発現によって特徴づけられる、又は高いαｖβ６インテグリン発現を有することを特徴とする、ヒト又は複数のヒトの大腸癌を治療する前記方法。
好ましくは、上記及び／又は下記に記載のヒト又はヒト集団における大腸癌を治療する方法であって、ヒト（複数を含む）にアビツズマブを投与することを含み、前記大腸癌が左側大腸癌であることを特徴とする前記方法。
好ましくは、上記及び／又は下記に記載の左側大腸癌の治療方法であって、ヒト（複数を含む）にアビツズマブを投与することを含み、前記左側大腸癌が高いαｖβ６インテグリン発現によって特徴付けられる、又は高いαｖβ６インテグリン発現を有することを特徴とする前記方法。
大腸癌が転移性大腸癌である、上記及び／又は下記に記載の方法。
アビツズマブが、２週間ごとに約１０００ミリグラムの量で、又は１ヶ月あたり約２０００ミリグラムの量で、ヒト（複数可）に投与されることを特徴とする、上記及び／又は下記に記載の方法。
ヒト（複数可）が少なくとも１つの成長因子又は成長因子受容体を標的とするモノクローナル抗体、及び／又は化学療法も受ける、上記及び／又は下記に記載の方法。
ヒト（複数可）が、上記及び／又は下記に記載の大腸癌の治療における現在の標準治療（ＳｏＣ）の１つ以上の治療オプションも受ける、上記及び／又は下記に記載の方法。
上記及び／又は下記に記載の方法であって、以下
ａ）大腸癌が、ＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側大腸癌、又はＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側転移性大腸癌であり、
ｂ）ヒトが、好ましくはセツキシマブであり、少なくとも１つの成長因子又は成長因子受容体を標的とするモノクローナル抗体も与えられており、及び
ｃ）ヒトが、ＦＯＬＦＩＲＩ又はＦＯＬＦＯＸプロトコルによる化学療法を任意的に処置されていてもよく、好ましくはＦＯＬＦＩＲＩプロトコルによる化学療法を受けていてもよい、
前記方法。
本発明の更なる側面については、以下でより詳しく説明する。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1】ヒトの腸管組織及び大腸壁層の一般的な構造を示している。

【図2】セツキシマブ＋イリノテカン単独群におけるαｖβ６の発現量に基づくＯＳ曲線（ＰＯＳＥＩＤＯＮ）であり、２４カ月時点でαｖβ６＞中央値が下側の曲線、αｖβ６＜中央値が上側の曲線である。

【図3】右側と左側の両方に腫瘍がある患者にアビツズマブ＋セツキシマブ＋イリノテカンの治療及びセツキシマブ＋イリノテカン単独（ＳＯＣ）の治療を実施した場合のαｖβ６の高発現に基づくＯＳ曲線で（ＰＯＳＥＩＤＯＮ）、ＳｏＣは２４ヵ月後の最低曲線；アビツズマブ５００ミリグラムは２４ヵ月後の中央曲線；アビツズマブ１０００ミリグラムは２４ヵ月後の最高曲線である。

【図4】試験の第２相部分のＣＯＮＳＯＲＴ図である。

【図5A】ＩＴＴ集団におけるＰＦＳのカプランマイヤー曲線を示しており、ＳｏＣ、アビツズマブ５００ミリグラム、アビツズマブ１０００ミリグラムは、いずれも１６ヶ月で同一の曲線となっている。

【図5B】ＩＴＴ集団におけるＯＳのカプランマイヤー曲線を示しており、ＳｏＣは２４ヶ月目の曲線の中央値；アビツズマブ５００ミリグラムは２４ヶ月目の曲線の最低値；アビツズマブ１０００ミリグラムは２４ヶ月目の曲線の最高値を示している。

【図6】入手できた、腫瘍ブロックを有する全患者（ｎ＝１９７）のαｖβ６のヒストスコア、及びこの集団のヒストスコア中央値（７０）を示すヒストグラムである。各患者について、αｖβ６染色の強度及び頻度に関するデータを統合し、以下の数式を用いてヒストスコアを作成した。１×（弱く染色された細胞の割合［１＋］）＋２×（中程度に染色された細胞の割合［２＋］）＋３×（強く染色された細胞の割合［３＋］）［１２］。

【図7】セツキシマブ及びイリノテカン単独を受けたαｖβ６発現量が多い患者と少ない患者のＯＳ曲線（POSEIDON（ポセイドン）試験）で、αｖβ６＞中央値は２４カ月時点での下側の曲線；αｖβ６＜中央値は２４カ月時点での上側の曲線；ＣＩは信頼区間；ＨＲはハザード比を示す。

【図8】右側及び左側の両方に腫瘍がある患者において、αｖβ６が高発現している患者にアビツズマブ＋セツキシマブ＋イリノテカンで治療及びセツキシマブ＋イリノテカン単独（ＳＯＣ）で治療した場合のＯＳカーブ（POSEIDON試験）で、ＳｏＣは２４カ月時点で最も低い曲線となり；アビツズマブ５００ミリグラムは２４ヵ月後の曲線の中央値；アビツズマブ１０００ミリグラムは２４ヵ月後の曲線の最高値；ＣＩは信頼区間；ＨＲはハザード比；ＳｏＣは標準治療を示す。

【図9A】αｖβ６が高発現している左側患者におけるＯＳのレトロスペクティブな解析結果を示しており（POSEIDON試験）、ＳｏＣは２４カ月時点で最も低い曲線となり；アビツズマブ５００ミリグラムは２４カ月時点で曲線の中央値；アビツズマブ１０００ミリグラムは２４カ月時点で曲線の最高値となっている。

【図9B】αｖβ６が高発現している右側患者におけるＯＳのレトロスペクティブな解析結果を示しており（POSEIDON試験）、ＳｏＣは１８カ月時点で最も低い曲線となり；アビツズマブ５００ミリグラムは１８カ月時点で曲線の中央値；及びアビツズマブ１０００ミリグラムは１８カ月時点で曲線の最高値となっている。

【発明を実施するための形態】

【0014】

組織化学的なデータによると、ＣＲＣ及び／又はｍＣＲＣの腫瘍血管系及び腫瘍細胞には、αｖインテグリンの標的が発現している。特に、αｖβ６インテグリンの発現は、７００人以上のｍＣＲＣ患者で解析されており、ＣＲＣの予後因子としても注目され（Ｂａｔｅｓ ＲＣ， Ｂｅｌｌｏｖｉｎ ＤＩ， Ｂｒｏｗｎ Ｃ， ｅｔ ａｌ． “Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｇｒｉｎ β６ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｄｅｆｉｎｅｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｉｎｄｉｃａｔｏｒ ｏｆ ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ ｃｏｌｏｎ ｃａｒｃｉｎｏｍａ”． Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ． ２００５； １１５ （２）：３３９－３４７； Ｎｉｕ Ｚ， Ｗａｎｇ Ｊ， Ｍｕｈａｍｍａｄ Ｓ， ｅｔ ａｌ． “Ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅＩＦ４Ｅ ａｎｄ ｉｎｔｅｇｒｉｎ αｖβ６ ｉｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃａｎ ｐｒｅｄｉｃｔ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ， ｒｅｖｅａｌ ｔｈｅｉｒ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｐｌｙ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ” Ｃｅｌｌ ＆ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ． ２０１４； Ｙａｎｇ ＧＹ， Ｇｕｏ Ｓ， Ｄｏｎｇ ＣＹ， ｅｔ ａｌ． “Ｉｎｔｅｇｒｉｎ αｖβ６ ｓｕｓｔａｉｎｓ ａｎｄ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｔｕｍｏｒ ｉｎｖａｓｉｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ”． Ｗｏｒｌｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ． ２０１５； ２１（２４）：７４５７－７４６７）、これらの開示は、好ましくは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。このように、本発明によれば、結腸及び／又は直腸癌の腫瘍における高いαｖβ６の発現は、腫瘍の進行及びこれらの患者の生存率の低さの指標となると考えられる。

【0015】

POSEIDON試験で得られたデータを最近再評価し （Ｅｌｅｚ Ｅ， Ｋｏｃａｋｏｖａ Ｉ， Ｈｏｈｌｅｒ Ｔ， ｅｔ ａｌ． Ａｂｉｔｕｚｕｍａｂ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｃｅｔｕｘｉｍａｂ ｐｌｕｓ ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ ｖｅｒｓｕｓ ｃｅｔｕｘｉｍａｂ ｐｌｕｓ ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ ａｌｏｎｅ ｆｏｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＫＲＡＳ ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ： ｔｈｅ ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ ｐｈａｓｅ Ｉ／ＩＩ ＰＯＳＥＩＤＯＮ ｔｒｉａｌ． Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ． ２０１５；２６： １３２－１４０、これらの開示は、好ましくは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）、ＫＲＡＳ ＷＴ ｍＣＲＣのセカンドラインにおけるアビツズマブとセツキシマブ及びイリノテカンの併用の活性度を探ったところ、セツキシマブ＋イリノテカン単独群の解析では、αｖβ６の発現量が多いと予後が悪くなることが示され、好ましくはαｖβ６の高発現が、予後が悪くなる原因であること示された（図２）。更に、POSEIDON試験のデータを最近再評価したところ、αｖβ６が高発現している患者をアビツズマブで治療した場合、より高いＰＦＳが得られたことから、好ましくはαｖβ６の高発現がアビツズマブの奏効を予測する効果があることが示された。

【0016】

更に、アビツズマブの治療に関しては、ＣＲＣ、特にｍＣＲＣは遺伝的に不均一な疾患であり、結腸の異なる側（左と右）から発生した腫瘍は臨床的に異なる結果をもたらすという証拠が増えてきていることが分かった （Ｂｅｖｅｒ ＫＭ， Ｌｅ ＤＴ． Ａｎ Ｅｘｐａｎｄｉｎｇ Ｒｏｌｅ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｃａｎｃｅｒｓ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｎｅｔｗｏｒｋ． ２０１７；１５（３）：４０１－４１０； Ｌｅｅ ＭＳ， Ｍｅｎｔｅｒ ＤＧ， Ｋｏｐｅｔｓ Ｓ． Ｒｉｇｈｔ Ｖｅｒｓｕｓ Ｌｅｆｔ Ｃｏｌｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ： Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｕｂｔｙｐｅｓ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｎｅｔｗｏｒｋ． ２０１７；１５（３）：４１１－４１９， Ｌｅｅ Ｂ， ｅｔ ａｌ． Ｌｅｆｔ ｖｅｒｓｕｓ ｒｉｇｈｔ ｓｉｄｅｄ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ： Ｔｅａｓｉｎｇ ｏｕｔ ｄｒｉｖｅｒｓ ｏｆ ｄｉｓｐａｒｉｔｙ ｉｎ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｉｎ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ． ２０１７；３５：４＿ｓｕｐｐｌ， ６８２－６８２、これらの開示は、好ましくは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。ＫＲＡＳ野生型（ＷＴ）又はＲＡＳ野生型のｍＣＲＣ患者を対象に、異なるクラスの標的薬剤の活性の比較分析により、ｍＣＲＣにおいては、原発性腫瘍の位置（側）が予後及び予測両方を示す臨床結果を示唆する可能性がある。

【0017】

６つの無作為化試験（ＣＲＹＳＴＡＬ、ＦＩＲＥ－３、ＣＡＬＧＢ ８０４０５、ＰＲＩＭＥ、ＰＥＡＫ、２００５０１８１）に参加した切除不能なＲＡＳ ＷＴ及び／又はＫＲＡＳ ＷＴ ｍＣＲＣ患者を対象に、化学療法＋ＥＧＦＲ抗体療法（実験群）並びに化学療法又は化学療法＋ベバシズマブ（対照群）を比較し、原発性腫瘍の局在性が予後及び予測に及ぼす影響をレトロスペクティブ分析により検討した。左側腫瘍及び右側腫瘍の患者の全生存期間（ＯＳ）及び無増悪生存期間（ＰＦＳ）のハザード比（ＨＲ）並びに９５％信頼区間（ＣＩ）、及び客観的奏効率（ＯＲＲ）のオッズ比（ＯＲ）は、個々の研究のＨＲ／ＯＲをプールして推定した¹⁰。
治療効果と腫瘍側の相関関係をレトロスペクティブに評価し、予知性を評価した。その結果、６つの試験で無作為に割り付けられた５，７６０人の患者のうち、２，１５９人（３７．５％）の原発性腫瘍の位置及びＲＡＳ遺伝子変異の有無を調べたところ、プールされた対照群及び実験群の両方において、右側腫瘍の患者が左側の腫瘍の患者に比べて有意に予後が悪いことが分かった（ＯＳ（ＨＲ２．０３（９５％ＣＩ：１．６９～２．４２）及び１．３８（１．１７～１．６３））、ＰＦＳ（ＨＲ１．５９（１．３４～１．８８）及び１．２５（１．０６～１．４７））、並びにＯＲＲ（ＯＲ０．３８（０．２８～０．５０）及び０．５６（０．４３～０．７３））。
予測効果の観点から、化学療法＋ＥＧＦＲ抗体療法は、左側腫瘍の患者では、ＯＳ及びＰＦＳにおいて、それぞれ（ＨＲ０．７５（０．６７～０．８４）及び０．７８（０．７０～０．８７）の有意な効果が認められたのに対し、右側腫瘍の患者では、ＯＳ及びＰＦＳにおいて、それぞれ（ＨＲ１．１２（０．８７～１．４５）及び１．１２（０．８７～１．４４）の有意な効果が認められず、Ｐ値はそれぞれ＜０．００１及び０．００２であった。ＯＲＲについては、右側腫瘍の患者（ＨＲ １．４７（０．９４～２．２９））と比較して、左側腫瘍の患者（ＨＲ ２．１２（１．７７～２．５５））では、化学療法＋ＥＧＦＲ抗体療法の有益性が高いという傾向（Ｐ値０．０７）が見られた。
この解析では、ＲＡＳ ＷＴ及び／又はＫＲＡＳ ＷＴのｍＣＲＣ患者において、右側腫瘍の患者は左側腫瘍の患者に比べてＯＳ、ＰＦＳ、及びＯＲＲの予後がより悪く、腫瘍側の予測効果があり、化学療法とセツキシマブの併用は、化学療法又は化学療法及びベバシズマブの併用に比べて効果が大きく、その効果は左側腫瘍の患者で最も大きいことが示されているが、この結果はこれらの試験の患者のサブ集団に基づくものであり、解析はレトロスペクティブに実行されている。

【0018】

非臨床試験データ
αｖ－インテグリンは、多くの腫瘍の適応症にわたって原発性腫瘍及び転移性腫瘍の様々な腫瘍細胞、腫瘍浸潤脈管、及び腫瘍間質細胞に発現している。
好ましくは、アビツズマブは、血管新生を阻害することにより、間質を改変することにより、及び／又は腫瘍細胞を直接標的とすることにより、腫瘍の進行を阻害する力を有する。インビトロにおいて、アビツズマブは、内皮細胞のＥＭＣへの接着、フォーカルコンタクトの不安定化、内皮細胞の移動、血管新生成長因子シグナルの伝達、及び／又は内皮細胞の生存率など、腫瘍の血管新生に関わる複数の側面を好ましく阻害することが示されている。インビボにおいて、アビツズマブの血管新生阻害効果は、好ましくは様々な動物モデルで実証されている。
アビツズマブは、好ましくは、腫瘍細胞にも直接作用する。アビツズマブは、好ましくは、αｖインテグリンリガンドへの腫瘍細胞の接着を減少させる。アビツズマブは、好ましくは、αｖ－インテグリンヘテロダイマーの発現量が異なる、異なる適応症の複数の腫瘍異種移植モデルにおいて、腫瘍の成長を阻害する。アビツズマブは、単剤療法に加えて、様々なモデルにおいて、複数の化学療法剤及びセツキシマブの効果を高めることが示され得る。
カニクイザルを用いたアビツズマブの反復投与毒性試験における安全性薬理評価では、循環器系、呼吸器系などの主要な身体システム又は臨床行動に関連する所見は認められなかった。６ヵ月間の慢性静脈内投与による毒性試験では、心拍数、ＱＴｃ間隔を含む心電図パラメータに、治療に関連した障害は認められなかった。
要約すると、本明細書で提供される科学的証拠は、アビツズマブを脈管新生阻害活性及び直接抗腫瘍活性を有する薬剤として使用することを支持するものであり、この薬剤を単独で、又は標準治療（ＳｏＣ）治療オプションと組み合わせて、若しくは好ましくはセツキシマブを含むがこれに限定されない成長因子ターゲティングモノクローナル抗体又は成長因子受容体ターゲティングモノクローナル抗体及び／又は化学療法と組み合わせて投与すると、好ましくは本明細書に記載されているように、大腸癌、特に転移性大腸癌の治療に驚くほど有利な治療コンセプトを提供することができる。

【0019】

臨床試験データ
ＫＲＡＳ ＷＴ ｍＣＲＣ患者を対象としたフェーズＩ／ＩＩ試験
ＥＭＲ ６２２４２－００４「POSEIDON試験⁷」は、ＫＲＡＳ遺伝子変異を有するｍＣＲＣ患者の第二選択治療として、アビツズマブを２用量（５００ミリグラム及び１，０００ミリグラム静注）でセツキシマブ＋イリノテカンと併用する方法、及びセツキシマブ＋イリノテカン単独で投与する方法を調査する、非盲検、多施設共同の無作為化比較フェーズＩ／ＩＩ試験である。ＫＲＡＳ ＷＴ ｍＣＲＣ患者は、オキサリプラチンを含む治療レジメンによる一次化学療法に抵抗性又は進行性である場合、登録の対象となった。
本試験は、セツキシマブ＋イリノテカンとの併用において、異なる用量レベルのアビツズマブを繰り返し投与した際の安全性及び忍容性プロファイルを明らかにするためのフェーズＩ／ＩＩ試験の用量設定／安全性試験である。本試験では、２種類のアビツズマブの投与量の抗癌作用をＰＦＳの観点から評価することを主要な目的とした。
副次的な目的は、全生存期間（ＯＳ）、腫瘍進行までの期間（ＴＴＰ）、腫瘍反応（固形腫瘍における反応評価基準［ＲＥＣＩＳＴ］、第１．０版）、治療失敗までの期間（ＴＴＦ）に関して、アビツズマブの２つの投与量の有効性を評価することであった。
その他の目的としては、血中に循環している、及び／若しくは腫瘍に発現している候補タンパク質、及び有効性並びに安全性の評価項目との関係を調べることにより、調査中の治療に対する反応を予測するマーカーとなり得るものを同定することが挙げられる。
合計２３２名の患者が登録され、試験のフェーズＩ部分に１６名、無作為のフェーズＩＩ部分に２１６名が登録された。
フェーズＩＩ部分では、７３名の患者が、アビツズマブ５００ミリグラム静注とセツキシマブ＋イリノテカンの併用グループ、７１名がアビツズマブ１０００ミリグラム静注とセツキシマブ＋イリノテカンの併用グループ、７２名がセツキシマブ＋イリノテカン単独グループに無作為に割り当てられた。パープロトコール（ＰＰ）解析セットの患者数は、１９７名（アビツズマブ５００ミリグラムとセツキシマブ＋イリノテカンの併用グループ６６名、アビツズマブ１０００ミリグラムとセツキシマブ＋イリノテカンの併用グループ６５名、セツキシマブ＋イリノテカン単独グループ６６名）だった。プロトコルに重大な逸脱があった患者の発生率は低く、全ての治療グループでおおむね同程度であった。

【0020】

ＩＴＴ集団における有効性の結果
有効性の主要評価項目は、治験責任医師の評価に基づくＰＦＳとした。データカットオフ日の時点で、アビツズマブ５００ミリグラムとセツキシマブ＋イリノテカンの併用グループ及びアビツズマブ１０００ミリグラムとセツキシマブ＋イリノテカンの併用グループのセツキシマブ＋イリノテカン単独群に対するＣｏｘ比例ハザードモデルによる推定ＨＲは、それぞれ１．１３（９５％ＣＩ：０７８、１．６４）及び１．１１（９５％ＣＩ：０．７７、１．６１）であり、両グループ間に差はなかった。ＰＦＳ期間の中央値は、アビツズマブ５００ミリグラムをセツキシマブ＋イリノテカンの併用グループ、アビツズマブ１０００ミリグラムをセツキシマブ＋イリノテカンの併用グループ、セツキシマブ＋イリノテカン単独グループで同等であった（それぞれ５．４ヵ月［９５％ ＣＩ：４．１， ６．０］、５．６ヵ月［９５％ ＣＩ：４．１， ６．９］、５．６ヵ月［９５％ ＣＩ： ４．２， ６．９］）。
ＯＳ解析の結果から、アビツズマブが良好な所見を示す可能性が示された。イベント（あらゆる原因による死亡）が発生した患者の数と割合は、アビツズマブとセツキシマブ＋イリノテカンの併用グループがセツキシマブ＋イリノテカン単独グループよりも少なく、それぞれ、アビツズマブ５００ミリグラムとセツキシマブ＋イリノテカンの併用グループでは３９名（５３．４％）、アビツズマブ１０００ミリグラムとセツキシマブ＋イリノテカンの併用グループでは３５名（４９．３％）、セツキシマブ＋イリノテカン単独グループでは４５名（６２．５％）であった。アビツズマブ５００ミリグラム、１０００ミリグラムとセツキシマブ＋イリノテカン併用グループとセツキシマブ＋イリノテカン単独グループのＨＲは、それぞれ０．８３（９５％ＣＩ：０．５４、１．２８）、０．８０（９５％ＣＩ：０．５２、１．２５）であり、アビツズマブが有利であることがわかった。ＯＳの中央値は、それぞれアビツズマブ５００ミリグラムとセツキシマブ＋イリノテカンの併用では１５．０カ月（９５％ＣＩ：１０．９、１９．２）、アビツズマブ１０００ミリグラムとセツキシマブ＋イリノテカンの併用では１４．４カ月（９５％ＣＩ：９．８、１９．３）、セツキシマブ＋イリノテカンの単独では１１．６カ月（９５％ＣＩ：９．８、１５．７）であった。

【0021】

探索的バイオマーカーの結果
以下のハイレベルな概要は、主なバイオマーカーの知見をまとめたものである：
免疫組織化学に基づくターゲット（αｖβ３、αｖβ５，αｖβ６，αｖβ８、パンαｖβ）とターゲットリガンド（オステオポンチン、ビトロネクチン）の発現解析を実施した。
インテグリンαｖβ６の高発現は、負の予後（セツキシマブ＋イリノテカン単独グループでの短い生存期間を予測）として同定され、アビツズマブ治療によるＯＳの延長を予測する指標として同定された。αｖβ６バイオマーカーのサブセットは、POSEIDON試験の無作為化パートのＩＴＴ集団の９１％にあたる１９７名の患者から構成されている。
更に、インテグリンαｖβ３、αｖβ５、αｖβ８、パンαｖβ、オステオポンチンなどの候補マーカーの免疫組織化学検査を実施したが、テストしたいずれの追加のマーカーも予後又は予測に相関性を示さなかった。
αｖβ６のヒストスコアが高い患者のＯＳに対するＶＥＧＦを含む第一選択治療の影響を分析したところ、ＨＲに関しては２群間で差がなかった。

【0022】

免疫原性の結果
アビツズマブに対する中和抗体が陽性となった患者がいなかったことから、アビツズマブの免疫原性特性は有利に肯定的である。

【0023】

安全性の結果
本試験では、セツキシマブ＋イリノテカン単独グループの１名を除き、全ての患者に１つ以上の治療中ＡＥが発生した。３つの試験薬のうち少なくとも１つに関連していると考えられたＴＥＡＥが発生した患者の数と割合は、３群グループ間で同程度であり、アビツズマブに関連していると考えられたＴＥＡＥが発生した患者の数と割合は、アビツズマブ５００ミリグラムのグループで３５名（４８．６％）、１０００ミリグラムのグループで３９名（５６．５％）であった。
グレード３以上のＴＥＡＥは、アビツズマブ５００ミリグラム及び１０００ミリグラムのグループで、セツキシマブ＋イリノテカン単独グループと比較して、わずかに高い頻度で報告された（それぞれ、５２名［７２．２％］、５４名［７８．３％］、４９名［６７．１％］の患者）。アビツズマブの投与を中止するに至ったＴＥＡＥは、アビツズマブ５００ミリグラムのグループと１０００ミリグラムのグループで、それぞれ１６名（２２．２％）と１２名（１７．４％）の患者に報告され、投与量との明らかな関係はなかった。重篤なＴＥＡＥの発生率は、アビツズマブ１０００ミリグラム治療グループが他の治療グループに比べて最も高く、アビツズマブ５００ミリグループ、アビツズマブ１０００ミリグラムグループ、セツキシマブ＋イリノテカン単独グループでは、それぞれ２６名（３６．１％）、３４名（４９．３％）、２９名（３９．７％）の患者であった。致命的な結果をもたらしたＴＥＡＥは、それぞれ９名（１２．５％）、７名（１０．１％）、６名（８．２％）の患者に発生した。
結論として、POSEIDON試験におけるアビツズマブの２５０ミリグラムから１０００ミリグラムへの増量は、良好な忍容性を示し、安全性に関する重大な懸念は認められなかった。

【0024】

バイオマーカーの結果
POSEIDON試験では、免疫組織化学によるαｖβ６の発現を事前に検査することが計画されていた。αｖβ６の発現量が高い場合と低い場合は、これらの患者の生存率の予後を左右するマーカーになると考えられ、αｖβ６が高発現している患者はアビツズマブによる治療が有効であると考えられた（図３）。
アビツズマブの追加が最も効果的な患者集団を特定するために、更なる分析が実行された。αｖβ６の高発現は、腫瘍に発現すると生存率の負の予後因子となることが示唆されているため、セツキシマブ＋イリノテカン単独での治療効果は限定的とみられる。更に、αｖβ６の高発現がアビツズマブの奏効予測因子であることが判明していることから、αｖβ６インテグリン阻害剤としてのアビツズマブは、これらの患者のサブセットにおいてＰＦＳ及びＯＳの延長をもたらすと推測される。

【0025】

αｖβ６が高発現している左側集団における有効性の結果（POSEIDON）
POSEIDON試験のデータを再評価した結果、約７３％の患者において、腫瘍の位置は結腸の左側にあり、アビツズマブとセツキシマブ＋イリノテカン併用グループとセツキシマブ＋イリノテカン単独グループの間で均等に分布していることが判明した。国際ガイドライン（ＮＣＣＮ、ＥＳＭＯ２０１７）によるＲＡＳ ＷＴ及び／又はＫＲＡＳ ＷＴ ｍＣＲＣにおける左側腫瘍の推奨に基づき、POSEIDON試験データを用いて更に探索的な解析を実行し、αｖβ６が高発現している左側患者におけるアビツズマブによる治療効果を、右側ＣＲＣと比較して検討した。驚くべきことに、左側ＣＲＣ患者集団において非常に良好な治療効果が認められた。

【表2】

【0026】

左側大腸癌
左側大腸癌及び左側結腸癌という用語は、癌又は腫瘍のそれぞれの局在を含めて当業界では知られており、理解されており、「右側大腸癌」又は「右側結腸癌」と区別できる。本発明によれば、「左側大腸癌」及び「左側結腸癌」を治療する方法が好ましい。
更に詳しく言うと、結腸の近位部及び遠位部は、好ましくは発生学的に異なる起源を持っていると考えられる。盲腸から横行結腸の近位３分の２までの部分は、好ましくは中腸に由来すると考えられる。横行結腸の遠位３分の１から上部肛門管までを含む部分は、後腸に由来すると考えるのが好ましい。遠位横行結腸を右結腸と左結腸の境界と考えた場合、右結腸は盲腸、上行結腸、肝弯曲、及び横行結腸を含むのが好ましく、左結腸は脾弯曲、下行結腸、及びＳ状結腸を含むのが好ましい。これらの知見に基づき、大腸癌は、右結腸癌、左結腸癌、直腸癌の３つの異なる疾病に分けられることが示唆され、例えば、Ｍｉｃｈａｌ Ｍｉｋ， Ｍａｃｉｅｊ Ｂｅｒｕｔ， Ｌｕｋａｓｚ Ｄｚｉｋｉ， Ｒａｄｚｉｓｌａｗ Ｔｒｚｃｉｎｓｋｉ， Ａｄａｍ Ｄｚｉｋｉ； Ａｒｃｈ Ｍｅｄ Ｓｃｉ ２０１７； １３， １： １５７－１６２を参照し、これらの開示は、好ましくは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
より具体的には、本発明との関係において、「左側大腸癌」及び「左側結腸癌」は、好ましくは直腸を含み、より好ましくは直腸を除く、結腸の一部であり、結腸彎曲部である自然な解剖学的離線によって定義されるものである。
本発明との関係では、左側大腸癌又は左側結腸癌は、前記結腸彎曲部の左側の組織に位置する癌と定義される。従って、本発明との関係では、結腸彎曲部の右側に位置する癌、好ましくは横行部を含む癌を、「右側大腸癌」又は「右側結腸癌」とみなす。
癌又は腫瘍を実際に診断する方法、及び／又は左側として局所化する方法は、当技術分野で知られており、理解されている。好ましくは、解剖学的、光学的、又はセンサー的に、好ましくは光学的に、例えば、手術中に探索的に、又は大腸内視鏡を用いて、左側と判定する。しかし、ＣＴ、ＭＲＴ、ＭＲＩ、Ｘ線、超音波、及び医療用超音波などを含む（ただし、これらに限定されない）イメージング方法は、ヒト、ヒトの患者、又は患者が左側ＣＲＣ及び／又はｍＣＲＣを有しているかどうかを判断するのにも同様に適している。詳細は、米国癌協会の「大腸癌検診ガイドライン」も参照する。

【0027】

αｖβ６インテグリンの高発現
ＣＲＣ及び／又はｍＣＲＣの状況下で、αｖβ６インテグリンの高発現を判定する方法は、当技術分野で知られており、理解されている。既知の手順としては、免疫組織化学などの組織学的手法により、好ましくは腫瘍組織を用いてαｖβ６インテグリンの発現を測定することが挙げられる。それらの適切な方法は、当技術分野で知られており、例えば、Ｓｉｍｏｎ Ｌ． Ｇｏｏｄｍａｎ， Ｈａｎｓ Ｊｕｅｒｇｅｎ Ｇｒｏｔｅ ａｎｄ Ｃｌａｕｄｉａ Ｗｉｌｍ； Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｏｐｅｎ １， ３２９－３４０ （２０１２）に記載され、その開示内容は好ましくは参照により本文書に含まれる。
インテグリンαｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、αｖβ８、及びパンαｖの発現、特にαｖβ６インテグリンの発現は、好ましくは、ホルマリン固定パラフィン包埋腫瘍組織の免疫組織化学を用いて評価され、前記の通りＧｏｏｄｍａｎ ＳＬ， Ｇｒｏｔｅ ＨＪ， Ｗｉｌｍ Ｃ． “Ｍａｔｃｈｅｄ ｒａｂｂｉｔ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ αｖ－ｓｅｒｉｅｓ ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ ｒｅｖｅａｌ ａ ｎｏｖｅｌ αｖβ３－ＬＩＢＳ ｅｐｉｔｏｐｅ， ａｎｄ ｐｅｒｍｉｔ ｒｏｕｔｉｎｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｏｆ ａｒｃｈｉｖａｌ ｐａｒａｆｆｉｎ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒｓ”． Ｂｉｏｌ Ｏｐｅｎ ２０１２； １： ３２９－３４０に記載され、これらの開示は、好ましくは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
染色の強度及び頻度のデータを用いて、０～３００の連続スケールでヒストスコアを算出したが、前記の通りＰｉｒｋｅｒ Ｒ， Ｐｅｒｅｉｒａ ＪＲ， ｖｏｎ Ｐａｗｅｌ Ｊ ｅｔ ａｌ． “ＥＧＦＲ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｓ ａ ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ ｏｆ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｆｏｒ ｆｉｒｓｔ－ｌｉｎｅ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｐｌｕｓ ｃｅｔｕｘｉｍａｂ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ： ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｄａｔａ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｐｈａｓｅ ３ ＦＬＥＸ ｓｔｕｄｙ”． Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌ ２０１２； １３： ３３－４２に記載され、これらの開示は、好ましくは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
好ましくは、このようにして得られた免疫組織化学的に染色されたＦＦＰＥサンプルを病理学的に評価する。一般的に、病理医は優勢な染色強度を定量化し、染色パターンを特定し、陽性に染色された腫瘍組織の割合を推定する。好ましくは、免疫組織化学的に染色された腫瘍組織の半定量的評価であるＨスコア分類を適用し、好ましくは、上記で引用したＭｃＣａｒｔｙ ＫＳ Ｊｒらの１９８５年に記載された手順に従う。従って、陰性（０）、弱く染まった（１）、中程度に染まった（２）、強く染まった（３）部分は、腫瘍組織の割合として推定することが好ましい。その後、それぞれのヒストスコア（Ｈスコア）を以下のように算出することが好ましい。
Ｈスコア＝（弱）％＋（中）％×２＋（強）％×３
得られたヒストスコアは、好ましくは以下のように分類される。

【0028】

【表3】

【0029】

本発明との関係では、αｖβ６インテグリンの発現は、区分が少なくとも弱陽性であれば、好ましくは中程度の陽性であれば、更に特に強陽性であれば、高いと分類される。
また、中央値以上のαｖβ６インテグリンの発現は、好ましくはαｖβ６インテグリンの高発現とも言える。
より好ましくは、本発明による使用において、高いαｖβ６インテグリンの発現は、ヒストスコア、好ましくは本明細書及び／又はこの点で本明細書に引用された文献に記載されているように得られたヒストスコア、若しくは本明細書に記載及び／又は引用されている方法に類似して得られたヒストスコアが、６０よりも高く（＞６０）、好ましくは７０よりも高く（＞７０）、より好ましくは８０よりも高く（＞７０）、更に好ましくは９０よりも高く（＞９０）、特に１００よりも高い（＞１００）ことによって特徴付けられる。しかし、＞１１０、＞１２０、＞１３０、＞１４０、＞１５０、＞１６０、＞１７０、＞１８０、＞１９０、＞２００など、更に高いヒストスコアも同様に好ましい。
しかし、POSEIDON試験では、７０以上のヒストスコアが、アビツズマブ治療において「αｖβ６インテグリンの高発現」という基準を満たすための適切な閾値であることが明らかにされている。

【0030】

ＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の状態
大腸癌及び／又は転移性大腸癌におけるＲＡＳ検査の重要性、及びその決定のための方法、好ましくはＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の状態の決定のためのものを含むがこれに限定されないものは、当技術分野で知られており、理解されており、例えば、以下に記載されている。Ｊ Ｈａｎ ＪＭ Ｖａｎ Ｋｒｉｅｋｅｎ， Ｅｔｉｅｎｎｅ Ｒｏｕｌｅａｕ， Ｍａｒｊｏｌｉｊｎ Ｊ． Ｌ． Ｌｉｇｔｅｎｂｅｒｇ， Ｎｉｃｏｌａ Ｎｏｒｍａｎｎｏ，Ｓｃｏｔｔ Ｄ． Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ， Ａｎｄｒｅａｓ Ｊｕｎｇ， Ｖｉｒｃｈｏｗｓ Ａｒｃｈ （２０１６） ４６８：３８３－３９６。
ＣＲＣ及び／又はｍＣＲＣ患者のＲＡＳ ＷＴ、ＫＲＡＳ ＷＴ及び／又はＮＲＡＳ ＷＴの状態を判定するための適切な検査は、世界中で市販されており、世界中の病院で実施されており、好ましくはＥＭＡ及び／又はＦＤＡの承認を受けている。ＲＡＳ ＷＴ、ＫＲＡＳ ＷＴ及び／又はＮＲＡＳ ＷＴの状態を決定するための適切な試験及び試験手順は、本明細書の実験セクションに記載されている。
更に、Ｎ．Ｎｏｒｍａｎｎｏ、Ｒ．Ｅｓｐｏｓｉｔｏ Ａｂａｔｅ、Ｍ．Ｌａｍｂｉａｓｅ、Ｌ．Ｆｏｒｇｉｏｎｅ、Ｃ．Ｃａｒｄｏｎｅ、Ａ．Ｉａｎｎａｃｃｏｎｅ、Ａ．Ｓａｃｃｏ、Ａ．Ｍ．Ｒａｃｈｉｇｌｉｏ、Ｅ．Ｍａｒｔｉｎｅｌｌｉ、Ｄ．Ｒｉｚｚｉ、Ｓ．Ｐｉｓｃｏｎｔｉ、Ｍ． Ｂｉｇｌｉｅｔｔｏ、Ｒ．Ｂｏｒｄｏｎａｒｏ、Ｔ．Ｔｒｏｉａｎｉ、Ｔ．Ｐ．Ｌａｔｉａｎｏ、Ｆ．Ｇｉｕｌｉａｎｉ、Ｓ．Ｌｅｏ、Ａ．Ｒｉｎａｌｄｉ、Ｅ．Ｍａｉｅｌｌｏ、Ｆ．Ｃｉａｒｄｉｅｌｌｏ； Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２９： １１２－１１８， ２０１８， Ｊ．Ｖｉｄａｌ ｅｔ ａｌ， Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２８： １３２５－１３３２， ２０１７， Ｊ． Ｇｒａｓｓｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２８： １２９４－１３０１， ２０１７に記載され、これらの開示は、好ましくはその全体が参照により本明細書に組み込まれるものであり、ＲＡＳ ＷＴ、ＫＲＡＳ ＷＴ及び／又はＮＲＡＳ ＷＴの状態を決定するための好適な代替方法を記載している。

【0031】

本発明との関係では、ＲＡＳは好ましくはＫＲＡＳ及び／又はＮＲＡＳを含み、好ましくはＫＲＡＳ及びＮＲＡＳの両方を含む。特に好ましくは、セツキシマブを含む本発明による治療法の場合、ＲＡＳは好ましくはＫＲＡＳ及びＮＲＡＳからなる。それぞれの野生型の状態は、限定はしないが、セツキシマブ及びパニツムマブを含む、少なくとも幾つかの成長因子又は成長因子受容体を標的とするモノクローナル抗体の重要なバイオマーカーとなることがわかっている。しばらくの間、セツキシマブの効果は主にＫＲＡＳ野生型の状態と関連付けられていたが、現在はＲＡＳ野生型の状態とも関連していることが好ましいとされている。これとは対照的に、パニツムマブの有効性は主にＮＲＡＳの野生型の状態と関連している。しかし、パニツムマブの有効性は、好ましくは、ＲＡＳ及び／又は野生型試験によっても評価することができ、例えば、Ｒａｆａｅｌ Ｇ． Ａｍａｄｏ、Ｍｉｃｈａｅｌ Ｗｏｌｆ、Ｍａｒｃ Ｐｅｅｔｅｒｓ、Ｅｒｉｃ Ｖａｎ Ｃｕｔｓｅｍ、Ｓａｌｖａｔｏｒｅ Ｓｉｅｎａ、Ｄａｎｉｅｌ Ｊ． Ｆｒｅｅｍａｎ、Ｔｏｄｄ Ｊｕａｎ、Ｒｏｂｅｒｔ Ｓｉｋｏｒｓｋｉ、Ｓｉｄ Ｓｕｇｇｓ、Ｒｏｂｅｒｔ Ｒａｄｉｎｓｋｙ、Ｓｃｏｔｔ Ｄ． Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ、及びＤａｖｉｄ Ｄ． Ｃｈａｎｇ、Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２６：１６２６－１６３４ （２００８）を参照でき、この開示内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
また、主要なガイドラインでは、左辺ＲＡＳ ＷＴ ｍＣＲＣの第一選択治療にセツキシマブが推奨されている（ＮＣＣＮガイドライン第２版２０１７年更新の結腸癌；Ａｒｎｏｌｄ Ｄ， Ｃｕｔｓｅｍ Ｅ． Ｖ， Ｃｅｒｖａｎｔｅｓ Ａ， ｅｔ ａｌ． Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ Ｃａｎｃｅｒ： ＥＳＭＯ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ． Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ． ２０１４；２５ （ｓｕｐｐｌ ３）： ｉｉｉ１－ｉｉｉ９．）。

【0032】

本発明に従って好ましく使用されるＲＡＳ ＷＴ状態の判定は、好ましくは、例えばPOSEIDON試験の実施時に実行されたＫＲＡＳ ＷＴ状態の判定とは異なる（ＫＲＡＳエクソン２変異のみが除外され、エクソン４及びＮＲＡＳエクソン２～４の変異（＝ＲＡＳ変異）は除外されなかった）。従って、本発明による治療方法では、治療対象となる患者は、ＫＲＡＳ ＷＴ ＣＲＣ／ＭＣＲＣ患者ではなく、ＲＡＳ ＷＴ ＣＲＣ／ＭＣＲＣ患者であることが好ましい。前記ＲＡＳ検査の結果、ＫＲＡＳエクソン２～４及びＮＲＡＳエクソン２～４の両方の変異（＝ＲＡＳ変異）を有する患者は、本発明の方法に従って治療を受けるべき好ましい患者サブグループから好ましくは除外される。
従って、ＲＡＳ野生型の検査は、Ｋ好ましくはＲＡＳ変異型及びＮＲＡＳ変異型の両方の患者を除外する。
結果として、ＲＡＳ野生型の状態は、好ましくは、ＫＲＡＳ野生型の状態及びＮＲＡＳ野生型の状態を含み、より好ましくは、ＫＲＡＳ野生型の状態及びＮＲＡＳ野生型の状態を含む。
従って、本発明との関係において、ＲＡＳ ＷＴ検査は、好ましくは、ＫＲＡＳ ＷＴ検査及び／又はＮＲＡＳ ＷＴ検査を含み、好ましくは、ＫＲＡＳ ＷＴ検査及びＮＲＡＳ ＷＴ検査の両方を含む。特に好ましくは、セツキシマブを含む本発明による治療法の場合、ＲＡＳ ＷＴ検査は、好ましくはＫＲＡＳ ＷＴ検査及びＮＲＡＳ ＷＴ検査からなる。
従って、本発明の好ましい対象は、以下の通りである。

【0033】

［１］ヒトの大腸癌を治療する方法であって、それを必要とするヒトにアビツズマブを投与することを含み、前記大腸癌が高いαｖβ６インテグリン発現を有する、前記方法。
［２］ヒトの大腸癌を治療する方法であって、それを必要とするヒトにアビツズマブを投与することを含み、前記大腸癌が左側大腸癌である、前記方法。
［３］本明細書、好ましくは上記及び／又は下記に記載の左側大腸癌を治療する方法であって、それを必要とするヒトにアビツズマブを投与することを含み、前記左側大腸癌が高いαｖβ６インテグリン発現を有する、前記方法。
［４］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１］、［２］、又は［３］のセクションの１つ以上に記載の方法であって、それを必要とするヒトが、少なくとも１つの成長因子又は成長因子受容体を標的とするモノクローナル抗体、及び／又は化学療法も受ける、前記方法。
［５］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１］、［２］、［３］、及び／又は［４］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、前記大腸癌がステージＩＩ、ステージＩＩＩ、又はステージＩＶの大腸癌である、前記方法。
［６］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１］、［２］、［３］、［４］、及び／又は［５］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、前記大腸癌が、転移性大腸癌又は左側転移性大腸癌である、前記方法。
［７］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１］、［２］、［３］、［４］、［５］、及び／又は［６］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、前記大腸癌が、左側大腸癌又は左側転移性大腸癌であり、αｖβ６インテグリンが高発現している、前記方法。
［８］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１］～［７］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、前記大腸癌が、ＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の大腸癌である、前記方法。
［９］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１］～［８］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、前記大腸癌が、ＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側大腸癌、若しくはＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側転移性大腸癌である、前記方法。
［１０］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１］～［９］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、前記大腸癌が、ステージＩＩ、ステージＩＩＩ、又はステージＩＶのＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側大腸癌、若しくはＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側転移性大腸癌であり、αｖβ６インテグリンが高発現している、前記方法。

【0034】

［１１］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１］～［１０］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、前記大腸癌が、ＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側転移性大腸癌であり、αｖβ６インテグリンが高発現している、前記方法。
［１２］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１］～［１１］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、前記左側大腸癌が新たに診断された大腸癌である、前記方法。
［１３］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１］～［１２］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、第一選択治療において適用される、前記方法。
［１４］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［４］～［１３］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、併用療法の環境で適用される、前記方法。
［１５］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［４］～［１４］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、アジュバント療法の環境で適用される、前記方法。
［１６］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［４］～［１５］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、ネオアジュバント療法の環境で適用される、前記方法。
［１７］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［４］～［１５］のセクションの１つ以上に記載の方法であって、ヒトが、前記アビツズマブと同時に、前記少なくとも１つの成長因子又は成長因子受容体を標的とするモノクローナル抗体及び／又は前記任意の化学療法を受けることを特徴とする、前記方法。
［１８］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［４］～［１６］のセクションの１つ以上に記載の方法であって、少なくとも１つの成長因子又は成長因子受容体を標的とするモノクローナル抗体が、セツキシマブ、ベバシズマブ及び／又はパニツムマブを含む、前記方法。
［１９］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［４］～［１８］のセクションの１つ以上に記載の方法であって、少なくとも１つの成長因子又は成長因子受容体を標的とするモノクローナル抗体が、セツキシマブ及びベバシズマブからなる群から選択される、前記方法。
［２０］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号のセクションに記載、特に番号［５］～［１８］のセクションの１つ以上に記載の方法であって、化学療法が、イリノテカン、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、又はそのプロドラッグ、好ましくはカペシタビン及び／又は５－フルオロシトシン、テガフール／ウラシル（ＵＦＴ）、フォリン酸（ロイコボリン）、オキサリプラチン（エロキサチン）、アフリベルセプト、レゴラフェニブ、カペシタビン、及びそのプロドラッグ、並びにそれらの塩及び溶媒和物からなる群から選択される１つ以上の化合物を含む、前記方法。

【0035】

［２１］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［４］～［２０］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、化学療法がＦＯＬＦＩＲＩプロトコルに従って実施される、前記方法。
［２２］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［４］～［２０］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、化学療法がＦＯＬＦＯＸプロトコルに従って実施される、前記方法。
［２３］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［４］～［２２］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、化学療法が
ａ）イリノテカン、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、及びフォリン酸（ロイコボリン）から選択される１つ以上の化合物、並びにそのプロドラッグ、
又は
ｂ）オキサリプラチン（例、エロキサチン）、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、及びフォリン酸（例、ロイコボリン）、並びにそれらのプロドラッグから選択される１つ以上の化合物、
及びその塩及び溶媒を含む、前記方法。
［２４］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１］～［２３］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、アビツズマブが、１週間あたり３７５ミリグラム～７５０ミリグラムの量で、隔週で７５０ミリグラム～１５００ミリグラムの量で、又は１ヶ月あたり１５００ミリグラム～３０００ミリグラムの量で、ヒトに投与される、方法。
［２５］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１］～［２４］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、アビツズマブが、１週間あたり約５００ミリグラムの量で、隔週で約１０００ミリグラムの量で、又は１ヶ月あたり約２０００ミリグラムの量で、ヒトに投与されることを特徴とする。
［２６］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１］～［２５］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、アビツズマブが、少なくとも６サイクル、好ましくは少なくとも８サイクル、より好ましくは少なくとも１０サイクル、特に少なくとも１２サイクルヒトに投与され、各サイクルが約１週間、約２週間、約４週間、又は約１カ月の期間を有する、前記方法。
［２７］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１］～［２６］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、アビツズマブが、少なくとも６サイクル、好ましくは少なくとも８サイクル、より好ましくは少なくとも１０サイクル、特に少なくとも１２サイクルヒトに投与され、各サイクルが約２週間の期間を有する、前記方法。
［２８］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［４］～［２７］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、少なくとも１つの成長因子又は成長因子受容体を標的とするモノクローナル抗体が、１週間あたり７５ミリグラム～１０００ミリグラム、隔週で１５０ミリグラム～２０００ミリグラム、又は１ヶ月あたり３００ミリグラム～４０００ミリグラムの量でヒトに投与される、前記方法。
［２９］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１８］～［２８］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、セツキシマブは、１週間あたり約１５０ミリグラム／平方メートル～５５０ミリグラム／平方メートル、２週間に約３００ミリグラム／平方メートル～１１００ミリグラム／平方メートル、又は１ヶ月あたり約６００ミリグラム／平方メートル～２２００ミリグラム／平方メートルの量でヒトに投与される。
［３０］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１８］～［２９］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、セツキシマブが、少なくとも６サイクル、好ましくは少なくとも８サイクル、より好ましくは少なくとも１０サイクル、特に少なくとも１２サイクルにわたってヒトに投与され、各サイクルが約１週間、約２週間、約４週間、又は約１カ月の期間を有する、前記方法。

【0036】

［３１］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１８］～［３０］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、セツキシマブが、少なくとも６サイクル、好ましくは少なくとも８サイクル、より好ましくは少なくとも１０サイクル、特に少なくとも１２サイクルにわたってヒトに投与され、各サイクルが約２週間の期間を有し、前記セツキシマブが毎週又は隔週でヒトに投与される、前記方法。
［３２］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１８］～［３１］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、セツキシマブが、少なくとも６サイクル、好ましくは少なくとも８サイクル、より好ましくは少なくとも１０サイクル、特に好ましくは少なくとも１２サイクルにわたってヒトに投与され、各サイクルが約２週間の期間を有し、セツキシマブが
ａ）各サイクル中、好ましくは各サイクルの開始時に、約５００ミリグラム／平方メートルの量、
又は
ｂ）各サイクルの第１週目の初めに約４００ミリグラム／平方メートルの量で、各サイクルの第２週目の初めに約２５０ミリグラム／平方メートルの量
のいずれかで投与される、前記方法。
［３３］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１８］～［２８］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、ベバシズマブが、１週間あたり約１ミリグラム／キログラム～１０ミリグラム／キログラム、隔週で３ミリグラム／キログラム～１５ミリグラム／キログラム、又は１ヶ月あたり約６ミリグラム／キログラム～３０ミリグラム／キログラムの量で、ヒトに投与される、前記方法。
［３４］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１８］～［２８］、及び［３３］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、ベバシズマブが、少なくとも６サイクル、好ましくは少なくとも８サイクル、より好ましくは少なくとも１０サイクル、特に少なくとも１２サイクルにわたってヒトに投与され、各サイクルが約１週間、約２週間、約４週間、又は約１カ月の期間を有する、前記方法。
［３５］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１８］～［２８］、及び［３３］～［３４］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、ベバシズマブが、少なくとも６サイクル、好ましくは少なくとも８サイクル、より好ましくは少なくとも１０サイクル、特に少なくとも１２サイクルにわたってヒトに投与され、各サイクルが約２週間の期間を有し、前記ベバシズマブが毎週又は隔週でヒトに投与される、前記方法。
［３６］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１８］～［２８］、及び［３３］～［３５］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、ベバシズマブが、少なくとも６サイクル、好ましくは少なくとも８サイクル、より好ましくは少なくとも１０サイクル、特に好ましくは少なくとも１２サイクルにわたってヒトに投与され、各サイクルが約２週間の期間を有し、前記ベバシズマブが
ａ）各サイクル中、好ましくは各サイクルの開始時に、３ミリグラム／キログラム～１５ミリグラム／キログラムの量、又は５ミリグラム／キログラム～１０ミリグラム／キログラムの量、
又は
ｂ）各サイクル中、好ましくは各サイクルの開始時に、約７．５ミリグラム／キログラムの量
のいずれかで投与される、前記方法。
［３７］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１８］～［２８］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、パニツムマブが、１週間あたり約１ミリグラム／キログラム～１０ミリグラム／キログラム、隔週で３ミリグラム／キログラム～１５ミリグラム／キログラム、又は１ヶ月あたり約６ミリグラム／キログラム～３０ミリグラム／キログラムの量で、ヒトに投与される、前記方法。
［３８］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１８］～［２８］、及び［３７］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、パニツムマブが、少なくとも６サイクル、好ましくは少なくとも８サイクル、より好ましくは少なくとも１０サイクル、特に好ましくは少なくとも１２サイクルにわたってヒトに投与され、各サイクルが約１週間、約２週間、約４週間、又は約１カ月の期間を有する、前記方法。
［３９］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１８］～［２８］、及び［３７］～［３８］の２つ以上のセクションに記載の方法であって、パニツムマブが、少なくとも６サイクル、好ましくは少なくとも８サイクル、より好ましくは少なくとも１０サイクル、特に少なくとも１２サイクルにわたってヒトに投与され、各サイクルが約２週間の期間を有し、前記パニツムマブが毎週又は隔週でヒトに投与される、前記方法。
［４０］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１８］～［２８］、及び［３７］～［３９］の２つ以上のセクションに記載の方法であって、パニツムマブが、少なくとも６サイクル、好ましくは少なくとも８サイクル、より好ましくは少なくとも１０サイクル、特に少なくとも１２サイクルにわたってヒトに投与され、各サイクルが約２週間の期間を有し、前記パニツムマブが、
ａ）各サイクル中、好ましくは各サイクルの開始時に、３ミリグラム／キログラム～１５ミリグラム／キログラムの量、又は４ミリグラム／キログラム～１０ミリグラム／キログラムの量、
又は
ｂ）各サイクル中、好ましくは各サイクルの開始時に、約６ミリグラム／キログラムの量
のいずれかの方法で投与される、前記方法。

【0037】

［４１］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［２９］から［３２］までのセクション及び／又は番号［３７］から［４０］までのセクションの１つ以上のセクションに記載の方法であって、前記大腸癌が、ＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の大腸癌である、前記方法。
［４２］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［２９］～［３２］及び／又は番号［３７］～［４０］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、前記大腸癌が、ＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側大腸癌、若しくはＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側転移性大腸癌であることを特徴とする。
［４３］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［４］～［４２］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、前記化学療法が、少なくとも６サイクル、好ましくは少なくとも８サイクル、より好ましくは少なくとも１０サイクル、特に少なくとも１２サイクルにわたってヒトに施され、各サイクルが約２週間の期間を有し、
ａ）前記イリノテカン、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
ｂ）前記フォリン酸、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
及び／又は
ｃ）前記フルオロウラシル（５－ＦＵ）、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物が、
各サイクル中、好ましくは各サイクルの開始時及び／又は各サイクルの各週の開始時に、ヒトに投与される、前記方法。
［４４］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［４］～［４３］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、ヒトが化学療法も受けており、前記化学療法が、
ａ）１週間あたり５０ミリグラム／平方メートル～１５０ミリグラム／平方メートル、隔週で１００ミリグラム／平方メートル～３００ミリグラム／平方メートル、又は１ヶ月あたり２００ミリグラム／平方メートル～６００ミリグラム／平方メートルの量の、イリノテカン、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
ｂ）１週間あたり１５０ミリグラム／平方メートル～２５０ミリグラム／平方メートル、隔週で３００ミリグラム／平方メートル～５００ミリグラム／平方メートル、又は１ヶ月あたり６００ミリグラム／平方メートル～１０００ミリグラム／平方メートルの量の、フォリン酸（ラセミ体）、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
及び／又は
ｃ）１週間あたり１５０ミリグラム／平方メートル～２５０ミリグラム／平方メートル、隔週で３００ミリグラム／平方メートル～５００ミリグラム／平方メートル、又は１ヶ月あたり６００ミリグラム／平方メートル～１０００ミリグラム／平方メートルの量の、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物
を含む、前記方法。
［４５］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［４］～［４４］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、ヒトが化学療法も受けており、前記化学療法が、
ａ）１週間あたり５０ミリグラム／平方メートル～１５０ミリグラム／平方メートル、隔週で１００ミリグラム／平方メートル～３００ミリグラム／平方メートル、又は１ヶ月あたり２００ミリグラム／平方メートル～６００ミリグラム／平方メートルの量の、イリノテカン、並びにそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
ｂ）１週間あたり１５０ミリグラム／平方メートル～２５０ミリグラム／平方メートル、隔週で３００ミリグラム／平方メートル～５００ミリグラム／平方メートル、又は１ヶ月あたり６００ミリグラム／平方メートル～１０００ミリグラム／平方メートルの量の、フォリン酸（ラセミ体）、並びにそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
及び／又は
ｃ）１週間あたり１０００ミリグラム／平方メートル～３０００ミリグラム／平方メートル、隔週で２０００ミリグラム／平方メートル～６０００ミリグラム／平方メートル、又は１ヶ月あたり４０００ミリグラム／平方メートル～１２０００ミリグラム／平方メートルの量、好ましくは隔週で２０００ミリグラム／平方メートル～３２００ミリグラム／平方メートルの量の、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、並びにそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物
を含む、前記方法。
［４６］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［４］～［４５］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、前記化学療法が、少なくとも６サイクル、好ましくは少なくとも８サイクル、より好ましくは少なくとも１０サイクル、特に少なくとも１２サイクルにわたってヒトに施され、各サイクルが約１週間、約２週間、約４週間、又は約１カ月の期間を有する、前記方法。
［４７］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［４］～［４２］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、前記化学療法が、少なくとも６サイクル、好ましくは少なくとも８サイクル、より好ましくは少なくとも１０サイクル、特に少なくとも１２サイクルにわたってヒトに施され、各サイクルが約２週間の期間を有し、
ａ）前記オキサリプラチン、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
ｂ）前記フォリン酸、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
及び／又は
ｃ）前記フルオロウラシル（５－ＦＵ）、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物が、
各サイクル中、好ましくは各サイクルの開始時にヒトに投与される、方法。
［４８］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載の、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［４］～［４２］、及び［４７］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、ヒトが化学療法も受けており、前記化学療法が、
ａ）１週間あたり２０ミリグラム／平方メートル～１２０ミリグラム／平方メートル、隔週で４０ミリグラム／平方メートル～２４０ミリグラム／平方メートル、又は１ヶ月あたり８０ミリグラム／平方メートル～４８０ミリグラム／平方メートルの量の、オキサリプラチン、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
ｂ）１週間あたり１５０ミリグラム／平方メートル～２５０ミリグラム／平方メートル、隔週で３００ミリグラム／平方メートル～５００ミリグラム／平方メートル、又は１ヶ月あたり６００ミリグラム／平方メートル～１０００ミリグラム／平方メートルの量の、フォリン酸（ラセミ体）、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
及び／又は
ｃ）１週間あたり１５０ミリグラム／平方メートル～２５０ミリグラム／平方メートル、隔週で３００ミリグラム／平方メートル～５００ミリグラム／平方メートル、又は１ヶ月あたり６００ミリグラム／平方メートル～１０００ミリグラム／平方メートルの量の、５－ＦＵ、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物
を含む、前記方法。
［４９］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［４］～［４２］、及び［４７］～［４８］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、ヒトが化学療法も受けており、前記化学療法が、
ａ）１週間あたり２０ミリグラム／平方メートル～１２０ミリグラム／平方メートル、隔週で４０ミリグラム／平方メートル～２４０ミリグラム／平方メートル、又は１ヶ月あたり８０ミリグラム／平方メートル～４８０ミリグラム／平方メートルの量の、オキサリプラチン、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
ｂ）１週間あたり１５０ミリグラム／平方メートル～２５０ミリグラム／平方メートル、隔週で３００ミリグラム／平方メートル～５００ミリグラム／平方メートル、又は１ヶ月あたり６００ミリグラム／平方メートル～１０００ミリグラム／平方メートルの量の、フォリン酸（ラセミ体）、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
及び／又は
ｃ）１週間あたり１０００ミリグラム／平方メートル～３０００ミリグラム／平方メートル、隔週で２０００ミリグラム／平方メートル～６０００ミリグラム／平方メートル、又は１ヶ月あたり４０００ミリグラム／平方メートル～１２０００ミリグラム／平方メートルの量、好ましくは隔週で２０００ミリグラム／平方メートル～３２００ミリグラム／平方メートルの量の、５－ＦＵ、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物
を含む、前記方法。
［５０］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［４］～［４２］、及び［４７］～［４９］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、前記化学療法が、少なくとも６サイクル、好ましくは少なくとも８サイクル、より好ましくは少なくとも１０サイクル、特に少なくとも１２サイクルにわたってヒトに施され、各サイクルが約１週間、約２週間、約４週間、又は約１カ月の期間を有する、前記方法。

【0038】

［５１］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［４］～［４２］、及び［４７］～［５０］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、前記化学療法が、少なくとも６サイクル、好ましくは少なくとも８サイクル、より好ましくは少なくとも１０サイクル、特に少なくとも１２サイクルにわたってヒトに以下が投与され、各サイクルが約２週間の期間を有する、
ａ）オキサリプラチン、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、
ｂ）フォリン酸、並びに／若しくはそのプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物、及び／又は
ｃ）５－ＦＵ、並びにその／若しくはプロドラッグ、塩及び／又は溶媒和物が、
各サイクル中、好ましくは各サイクルの開始時にヒトに投与される、前記方法。
［５２］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１］～［５１］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、原発性腫瘍が結腸に位置している、方法。
［５３］本明細書に記載、好ましくは上記及び／又は下記に記載、より好ましくは上記及び／又は下記の番号の付いたセクションに記載、特に番号［１］～［５２］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、原発性腫瘍が結腸の左側に位置していることを特徴とする、前記方法。
［５４］αｖβ６インテグリンが高発現している患者におけるＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側転移性大腸癌（ｍＣＲＣ）の治療方法であって、前記患者にアビツズマブをセツキシマブ及び／又はＦＯＬＦＩＲＩと併用して投与することを含む、方法。
［５５］αｖβ６インテグリンが高発現している患者におけるＲＡＳ野生型の左側転移性大腸癌（ｍＣＲＣ）の治療方法であって、前記患者にアビツズマブをセツキシマブ及びＦＯＬＦＩＲＩと併用して投与することを含む、前記方法。
［５６］αｖβ６インテグリンが高発現している患者におけるＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側転移性結腸癌の治療方法であって、前記患者にアビツズマブをセツキシマブ及び／又はＦＯＬＦＩＲＩと併用して投与することを含む、方法。
［５７］αｖβ６インテグリンが高発現している患者におけるＲＡＳ野生型及び／又はＫＲＡＳ野生型の左側転移性結腸癌、又は転移性大腸癌の治療方法であって、前記患者にアビツズマブをセツキシマブ及び／又はイリノテカンと併用して投与することを含む、前記方法。
［５８］αｖβ６インテグリンが高発現している患者におけるＲＡＳ野生型の左側転移性結腸癌、又は転移性大腸癌の治療方法であって、前記患者にアビツズマブを、セツキシマブ及びイリノテカンと併用して、好ましくはフォリン酸及び／又は５－ＦＵと併用して投与することを含む、前記方法。
［５９］前記治療が第一選択治療である、セクション番号［５４］～［５８］の１つ以上に記載の方法。
［６０］治療する転移性大腸癌及び／又は転移性大腸直腸癌が、ステージＩＩＩ及び／又はステージＩＶの癌である、セクション番号［５４］～［５９］の１つ以上に記載の方法。

【0039】

［６１］前記医薬品が、投与されるアビツズマブの量が隔週で約１０００ミリグラム、又は１ヶ月あたり約２０００ミリグラムとなるように患者に投与される、セクション番号［５４］～［６０］の１つ以上に記載の方法。
［６２］高いαｖβ６インテグリン発現を有する前記患者が、７０より高い、好ましくは８０より高い、より好ましくは９０より高い、及び特に１００より高い、１２０より高い、又は１５０より高いαｖβ６インテグリンのヒストスコアを有する、セクション番号［５４］～［６１］の１つ以上に記載の方法。
［６３］前記治療が少なくとも６サイクル、少なくとも８サイクル、少なくとも１０サイクル、又は少なくとも１２サイクルにわたって投与され、各サイクルが２週間又は約２週間で構成される、セクション番号［５４］～［６２］の１つ以上に記載の方法。
［６４］前記アビツズマブ、前記セツキシマブ、及び／又は前記ＦＯＬＦＩＲＩを、隔週で、好ましくは２週間又は約２週間のサイクルで前記患者に投与する、セクション番号［５４］～［６３］の１つ以上に記載の方法。
［６５］セクション番号［５４］～［６４］の１つ以上のセクションに記載された方法で、前記方法が更にセクション番号［１］～［５３］の１つ以上のセクション記載のように定義される方法。
［６５］セクション番号［１］～［６４］の１つ以上のセクションに記載の方法であって、アビツズマブで治療されるヒト（複数可）又は患者（複数可）が、高いαｖβ６インテグリン発現を有しており、好ましくは７０より高い、好ましくは８０より高い、より好ましくは９０より高い、及び特に１００より高い、１２０より高い、又は１５０より高いαｖβ６インテグリンのヒストスコアによって定量化され、前記ヒストスコアがＳｉｍｏｎ Ｌ． Ｇｏｏｄｍａｎ， Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｏｐｅｎ １， ３２９－３４０ （２０１２）， ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｓｃｏｒｅ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ＭｃＣａｒｔｙ Ｊｒ ＫＳ， Ａｒｃｈ Ｐａｔｈｏｌ Ｌａｂ Ｍｅｄ １０９： ７１６－７２１ （１９８５）に基づいて実施される免疫組織化学によって決定される、前記方法。

【0040】

従って、本発明の好ましい対象は、大腸癌、好ましくはαｖβ６が高発現している左側ＣＲＣ及び／又はｍＣＲＣ患者の大腸癌、好ましくは第一選択治療を受けている患者の治療におけるアビツズマブの使用である。特に好ましいのは、ＲＡＳ野生型（ＷＴ）及び／又はＫＲＡＳ野生型のＣＲＣ及び／又はｍＣＲＣ患者において、少なくとも１つの成長因子又は成長因子受容体を標的とするモノクローナル抗体、好ましくはセツキシマブ及びパニツムマブからなる群から選択されるモノクローナル抗体と併用して、大腸癌の治療にアビツズマブを使用することである。

【0041】

また、特に好ましいのは、好ましくは上記及び／又は下記のようなアビツズマブを、大腸癌の推奨される標準治療（ＳＯＣ）と組み合わせて使用することであり、特に推奨される標準治療（ＳＯＣ）の治療レジメン、好ましくは推奨される標準治療（ＳＯＣ）の治療レジメン、
ｉ）ＲＡＳ ＷＴ ＣＲＣ及び／又はｍＣＲＣの治療のためのＳＯＣ治療レジメン、
ｉｉ）ＫＲＡＳ ＷＴ ＣＲＣ及び／又はｍＣＲＣの治療のためのＳＯＣ治療レジメン、
ｉｉｉ）左側ＲＡＳ ＷＴ ＣＲＣ及び／又はｍＣＲＣの治療のためのＳＯＣ治療レジメン、
ｉｖ）左側ＫＲＡＳ ＷＴ ＣＲＣ及び／又はｍＣＲＣの治療のためのＳＯＣ治療レジメン、
ｖ）左側ＲＡＳ ＷＴ ＣＲＣ及び／又はｍＣＲＣの第一選択治療のためのＳＯＣ治療レジメン、
ｖｉ）左側ＫＲＡＳ ＷＴ ＣＲＣ及び／又はｍＣＲＣの第一選択治療のためのＳＯＣ治療レジメン、
からなる群から選択されるＳＯＣ治療レジメン、好ましくはセツキシマブ又はパニツムマブ、より好ましくはセツキシマブを含み、任意にＦＯＬＦＩＲＩ又はＦＯＬＦＯＸと併用し、好ましくはＦＯＬＦＩＲＩと併用するＳＯＣ治療レジメン。これらの治療法は十分に確立されており、特に第一選択のＲＡＳ ＷＴ及び／又はＫＲＡＳ ＷＴのＣＲＣ及び／又はｍＣＲＣにおいて、好ましくは第一選択ＲＡＳ ＷＴ及び／又はＫＲＡＳ ＷＴのｍＣＲＣにおいて、並びに最新の分析によれば、左側ＣＲＣ及び／又はｍＣＲＣにおいて特に好ましく、更に好ましくは左側ＣＲＣ及び／又はｍＣＲＣにおいて確立されている。
更に、主要なガイドラインでは、第一選択左側ＲＡＳ ＷＴ及び／又はＫＲＡＳ ＷＴ ｍＣＲＣにおける本治療法を推奨している（参考：ＮＣＣＮガイドライン１１、ＥＳＭＯガイドライン１２）。

【0042】

上記及び／又は下記に記載したアビツズマブの使用、並びに本発明による治療方法は、確認されたＲＡＳ ＷＴ状態を有するヒト、複数のヒト、又はヒトの患者に関して特に好ましい。この患者群は、好ましくは、ＫＲＡＳエクソン２のみを除外し、エクソン４は除外せず及びＮＲＡＳエクソン２～４の変異（＝ＲＡＳ変異）を除外したという点でＫＲＡＳ ＷＴ状態が確認されたヒト又はヒト患者、例えばPOSEIDON試験で治療を受けたヒト又はヒト患者とは異なる。従って、ＲＡＳ ＷＴ ＣＲＣ患者は、ＫＲＡＳ ＷＴ ＣＲＣ患者よりも本発明に従って治療することがより好ましい。従って、ＫＲＡＳエクソン２～４及びＮＲＡＳエクソン２～４変異（＝ＲＡＳ変異）を有する患者は、本発明に従って治療されるべきヒト又はヒト患者の最も好ましい集団の一部ではない。更に、ＣＲＣでＢＲＡＦ遺伝子変異を示すヒト又はヒト患者は、好ましくは異なる治療法を必要とする予後不良のＣＲＣ患者のサブセットとみなせる。しかし、ＢＲＡＦの変異は、右側ＣＲＣで発生すると考えられている。
従って、本発明による方法の相乗効果は、特にアビツズマブ＋セツキシマブ＋イリノテカンを含む本発明による方法に関して、特にαｖβ６インテグリンが高発現しているヒト、複数のヒト、又はヒト患者において、好ましくは確立されていると考えられる。

【0043】

従って、本発明によれば特に好ましいのは、ＣＲＣ及び／又はｍＣＲＣ、好ましくはｍＣＲＣを治療する方法であり、好ましくは本明細書に記載されているように、バックボーン治療の選択がイリノテカンベースの化学療法、好ましくはＦＯＬＦＩＲＩであり、特に第一選択治療のためのものである。更に、セツキシマブ＋ＦＯＬＦＩＲＩは、ＣＲＣ及び／又はｍＣＲＣの国際ガイドラインでＳＯＣとして推奨されており、特に左側ＲＡＳ ＷＴ ｍＣＲＣの治療にＳＯＣとして推奨されている。好ましくは、バックボーン治療の選択は、特にこれらの第一選択治療の患者では、腫瘍生物学に基づいて実施される。本発明によれば、特に好ましいのは、治療レジメンに５－ＦＵを加えることを含む、本明細書に記載のＣＲＣ及び／又はｍＣＲＣ、好ましくはｍＣＲＣの治療方法である。従って、本発明との関係において特に好ましいのは、アビツズマブをセツキシマブ及びＦＯＬＦＩＲＩ（好ましくは５－ＦＵを含む）に追加することを含む治療レジメンである。
また、セツキシマブ及び／又はＦＯＬＦＯＸを含むバックボーン治療、若しくはベバシズマブを含むバックボーン治療（任意でＦＯＬＦＩＲＩ又はＦＯＬＦＯＸとの併用）も好ましい。

【0044】

本明細書に記載の治療方法又は治療における使用において、アビツズマブは、好ましくは、１週あたり少なくとも２５０ミリグラムの量で、隔週で少なくとも５００ミリグラムの量で、又は１ヶ月あたり少なくとも１０００ミリグラムの量で、ヒト（複数可）、ヒト患者、又は患者に投与される。アビツズマブは、好ましくは、ヒト（複数可）、ヒト患者、又は患者に対して、１週間あたり最大１０００ミリグラム以下、隔週で最大２０００ミリグラム以下、又は１ヶ月あたり最大４０００ミリグラム以下の量で投与される。好ましくは、アビツズマブは、いわゆる「フラットドージング」方式で投与され、全てのヒト、ヒトの患者、又は単なる患者が、体重又は体表面などとは無関係に、定義された量又は用量のアビツズマブを受け取ることを意味する。
他に明確に定義されていない場合、アビツズマブの投与は、好ましくは、ヒト／複数のヒト、ヒトの患者、又は単なる患者へのアビツズマブの投与を意味し、それに関して与えられる量は、好ましくは、ヒトあたり、ヒトの患者あたり、又は単なる患者あたりの量である。同じことが、好ましくは、本明細書に記載された本発明による治療方法、医療用途及び／又は治療レジメンとの関係における全ての活性成分、活性原理、又は医薬品に適用される。
より好ましくは、アビツズマブが、１週間あたり３７５ミリグラム～７５０ミリグラムの量で、隔週で７５０ミリグラム～１５００ミリグラムの量で、又は１ヶ月あたり１５００ミリグラム～３０００ミリグラムの量で投与される。
更に好ましくは、アビツズマブが、１週間あたり４５０ミリグラム～５５０ミリグラムの量で、隔週で９００ミリグラム～１１００ミリグラムの量で、又は１ヶ月あたり１８００ミリグラム～２２００ミリグラムの量で投与される。

【0045】

典型的には、腫瘍治療は定義された時間間隔で繰り返され、その間隔は好ましくは「サイクル」と呼ばれる。「サイクル」という言葉は、当業界では知られており、理解されている。一般的に、１サイクルは、１週間以上、好ましくは１週間、２週間、３週間、又は４週間の間隔で、その後、特定のヒト、ヒトの患者、又は単なる患者に関して、基本的に同じ治療を繰り返すことである。本発明によれば、１サイクルは、特にアビツズマブの投与に関して、好ましくは２週間又は約２週間の期間を有する。
更に好ましくは、アビツズマブを１サイクルあたり９００ミリグラム～１１００ミリグラムの量で投与し、各サイクルは好ましくは２週間又は約２週間で構成される。
好ましくは、前記アビツズマブを各サイクルの初めに、好ましくは各サイクルの１日目又は２日目に、より好ましくは各サイクルの１日目に投与する。
特に好ましくは、アビツズマブを１サイクルあたり約１０００ミリグラムの量で投与し、各サイクルは好ましくは２週間又は約２週間で構成される。好ましくは、前記アビツズマブを各サイクルの初めに、好ましくは各サイクルの１日目又は２日目に、より好ましくは各サイクルの１日目に投与する。
特に好ましくは、アビツズマブを１サイクルあたり約１０００ミリグラムの量（フラットドーズ）で患者に投与し、各サイクルは好ましくは２週間又は約２週間で構成される。好ましくは、前記アビツズマブを各サイクルの初めに、好ましくは各サイクルの１日目又は２日目に、より好ましくは各サイクルの１日目に投与する。

【0046】

好ましくは、アビツズマブは、少なくとも１つの成長因子又は成長因子受容体を標的とするモノクローナル抗体、及び／又は化学療法と組み合わせて投与される。成長因子又は成長因子受容体を標的とするモノクローナル抗体は、当技術分野で知られている。好ましい成長因子又は成長因子受容体ターゲティングモノクローナル抗体は、セツキシマブ、ベバシズマブ、及び／又はパニツムマブからなり、好ましくは、前記成長因子又は成長因子受容体ターゲティングモノクローナル抗体は、セツキシマブ、ベバシズマブ、及び／又はパニツムマブの群から選択され、その中でもセツキシマブが特に好ましい。
セツキシマブ自体、及びセツキシマブを投与するための適切な投与法は、当技術分野で知られている。好ましくは、セツキシマブが、１週間に１５０ミリグラム／平方メートル～５５０ミリグラム／平方メートル、２週間に３００ミリグラム／平方メートル～１１００ミリグラム／平方メートル、１ヶ月に６００ミリグラム／平方メートル～２２００ミリグラム／平方メートル程度の量で投与される。
更に好ましくは、セツキシマブが、１週間に２００ミリグラム／平方メートル～３５０ミリグラム／平方メートル、２週間に４００ミリグラム／平方メートル～７００ミリグラム／平方メートル、１ヶ月に８００ミリグラム／平方メートル～１４００ミリグラム／平方メートル程度の量で投与される。
更に好ましくは、セツキシマブを１サイクルあたり４５０ミリグラム～７５０ミリグラムの量で投与し、各サイクルは好ましくは２週間又は約２週間で構成される。
好ましくは、前記セツキシマブを２週間の各サイクルの最初に、好ましくは各サイクルの１日目又は２日目に、より好ましくは各サイクル（２週間又は約２週間からなる）の１日目に投与する、若しくは代わりに、投与するセツキシマブの量を２つに分け、１つの部分を各サイクルの１週目の最初に投与し、２つ目の部分を各サイクルの２週目の最初に投与することである。好ましくは、約１：１の比率、又は２：１～４：１の間の比率で分割され、特に好ましくは約３：２の比率で分割される。特に好ましくは、前記セツキシマブを１サイクル（２週間又は約２週間で構成）あたり約５００ミリグラム／平方メートルの量で、好ましくは各サイクルの１日目又は２日目、より好ましくは各サイクルの１日目に投与する、若しくは１サイクルあたり約６５０ミリグラム／平方メートルの量で、最初の約４００ミリグラム／平方メートルを各サイクルの第１週目の初めに投与し、残りの約２５０ミリグラム／平方メートルを各サイクルの第２週目（及び最終週）の初めに投与する。

【0047】

好ましくは、前記アビツズマブをＦＯＬＦＩＲＩと併用して投与する。更に好ましくは、前記アビツズマブは、前記セツキシマブ及びＦＯＬＦＩＲＩと併用して投与される。ＦＯＬＦＩＲＩは、フォリン酸（ロイコボリン）、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、及びイリノテカン、並びに／若しくはそれらのプロドラッグ、塩、及び／又は溶媒和物を含み、より好ましくはフォリン酸（ロイコボリン）、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、及びイリノテカン、並びに／若しくはそれらのプロドラッグ、塩、及び／又は溶媒和物から構成されている。
ＦＯＬＦＩＲＩ自体、およびその投与方法は当業界では知られており、理解されている。好ましくは、ＦＯＬＦＩＲＩは、ＦＯＬＦＩＲＩプロトコルに従って投与される。更に好ましくは、下記のようにＦＯＬＦＩＲＩを投与する。

【0048】

フォリン酸（好ましくはラセミ体のフォリン酸）、及び／又はそのプロドラッグ、塩、及び／又は溶媒和物は、それ自体、及びそのための適切な投与量がレジメンとして、当技術分野で知られている。好ましくは、１週間あたり１５０ミリグラム／平方メートル～２５０ミリグラム／平方メートルの量で、隔週で３００ミリグラム／平方メートル～５００ミリグラム／平方メートルの量で、又は１ヶ月あたり６００ミリグラム／平方メートル～１０００ミリグラム／平方メートルの量で投与される。より好ましくは、１サイクルあたり３００ミリグラム／平方メートル～５００ミリグラム／平方メートルの量で投与し、各サイクルは好ましくは２週間又は約２週間で構成される。更に好ましくは、１サイクルあたり約４００ミリグラム／平方メートルの量で投与し、各サイクルは好ましくは２週間又は約２週間で構成される。好ましくは、各サイクルの初めに、好ましくは各サイクルの１日目又は２日目に、より好ましくは各サイクルの１日目に投与され、前記サイクルは２週間又は約２週間で構成される。
フルオロウラシル（５－ＦＵ）、及び／又はそのプロドラッグ、塩、及び溶媒和物、それ自体、及びそのための適切な投与量がレジメンとして、当技術分野で知られている。好ましくは、１週間あたり１０００ミリグラム／平方メートル～３０００ミリグラム／平方メートル、隔週で２０００ミリグラム／平方メートル～６０００ミリグラム／平方メートル、又は１ヶ月あたり４０００ミリグラム／平方メートル～１２０００ミリグラム／平方メートルの量、より好ましくは隔週で２０００ミリグラム／平方メートル～３２００ミリグラム／平方メートルの量で投与される。更に好ましくは、１週間あたり１２００ミリグラム／平方メートル～１５００ミリグラム／平方メートル、隔週で２４００ミリグラム／平方メートル～３０００ミリグラム／平方メートル、又は１ヶ月あたり４８００ミリグラム／平方メートル～６０００ミリグラム／平方メートルの量、より好ましくは隔週で２０００ミリグラム／平方メートル又は３０００ミリグラム／平方メートルの量で投与される。更に好ましくは、１サイクルあたり、２０００ミリグラム／平方メートル又は２８００ミリグラム／平方メートルの量で投与し、各サイクルは好ましくは２週間又は約２週間で構成される。好ましくは、２週間の各サイクルの最初に、好ましくは各サイクルの１日目及び／又は２日目に投与される。より好ましくは、１日目に約４００ミリグラム／平方メートルを静脈内ボーラス投与し、１日目及び／又は２日目に１回以上、合計約２４００ミリグラム／平方メートルを静脈内に追加投与する、或いは１日目及び２日目に２４００ミリグラム／平方メートルを持続的に投与する。
イリノテカン、及び／又はプロドラッグ、塩、及び溶媒和物、それ自体、並びにその投与のための適切な用量レジメンは、当技術分野で知られている。好ましくは、１週間あたり５０ミリグラム／平方メートル～１５０ミリグラム／平方メートル、隔週で１００ミリグラム／平方メートル～３００ミリグラム／平方メートル、又は１ヶ月あたり２００ミリグラム／平方メートル～６００ミリグラム／平方メートルの量、より好ましくは１週間あたり８０ミリグラム／平方メートル～１００ミリグラム／平方メートルの量、隔週で１６０ミリグラム／平方メートル～２００ミリグラム／平方メートルの量、又は１ヶ月あたり３２０ミリグラム／平方メートル～４００ミリグラム／平方メートルの量で投与される。更に好ましくは、１サイクルあたり１６０ミリグラム／平方メートル～２００ミリグラム／平方メートルの量で投与し、各サイクルは好ましくは２週間又は約２週間で構成される。好ましくは、各サイクルの初めに、好ましくは各サイクルの１日目又は２日目に、より好ましくは各サイクルの１日目に投与され、前記サイクルは２週間又は約２週間で構成される。

【0049】

１０００ミリグラムのアビツズマブ投与により、試験を受けた最も多数の患者で、毒性の著しい増加を伴わない有効性が新たに確認されたことから、好ましくは２週間の投与間隔で、やはり好ましくは２週間又は約２週間のサイクルとして言及されたように、１０００ミリグラムの投与が最も好ましいものとなった。また、前記１０００ミリグラムの定常状態での投与では、２週間の投与間隔でアビツズマブの血清トラフ濃度が非線形クリアランス経路のＩＣ９９を常に上回っている。
好ましくは、前記１０００ミリグラムのアビツズマブ投与量、好ましくは静脈内投与を、同じく好ましくは静脈内投与を行うセツキシマブ＋ＦＯＬＦＩＲＩと組み合わせて、αｖβ６インテグリンが高発現しているＲＡＳ ＷＴ、左側、ｍＣＲＣ患者、より好ましくは、αｖβ６インテグリンが高発現しているＲＡＳ ＷＴ、左側、ｍＣＲＣの新規診断患者、特に第一選択治療の対象となる患者に投与する。

【0050】

セツキシマブの投与にあたっては、現地の検査機関でＲＡＳ ＷＴ又はＫＲＡＳ ＷＴのｍＣＲＣであることを確認してから投与することが強く推奨される。中央検査室によるαｖβ６インテグリンの高発現の判定は特に好ましく、スクリーニング時に実施することが好ましい。
好ましくは、αｖβ６インテグリンの高発現が確認され、ＲＡＳ ＷＴ又はＫＲＡＳ ＷＴの状態にある患者を、この点に関して標準治療のプロトコルに基づいて、アビツズマブ１０００ミリグラム（２週目ごと＝１サイクル）に加えて、セツキシマブ＋ＦＯＬＦＩＲＩで治療する。
好ましくは、治療は少なくとも６サイクル、より好ましくは少なくとも８サイクル、特に少なくとも１０サイクル継続される。典型的には、６サイクル又は８サイクル以上が投与される。典型的には、最大で約２０サイクル、好ましくは約１８サイクル、約１６サイクル、約１４サイクル、又は約１２サイクルを実施する。しかし、各患者への投与サイクル数は、担当の腫瘍医が独自に決定する。
好ましくは、ＳｏＣに加えられた、より好ましくはセツキシマブ＋ＦＯＬＦＩＲＩに加えられた本発明によるアビツズマブ治療は、無増悪生存期間（ＰＦＳ）に関して、好ましくは治験責任医師による無増悪生存期間（ＰＦＳ）に関して、ＳｏＣに比べて優れており、より好ましくはセツキシマブ＋ＦＯＬＦＩＲＩ単独に比べて優れている。

【0051】

好ましくは、本発明による治療方法は、以下の基準からなる群から選択される１つ以上の基準に関して、先行技術による治療レジメンよりも優れている。治験責任医師による全生存率（ＯＳ）、客観的奏効率（ＯＲＲ）、奏効深度（ＤＰＲ）、及び早期腫瘍縮小（ＥＴＳ）。
より好ましくは、本発明による治療方法は、安全性及び忍容性に関して先行技術による治療レジメンと同等であり、好ましくはより高い有効性を考慮しても同等である。
従って、本発明による方法治療は、好ましくは、以下の与えられた特性の１つ以上において好ましい結果を示す。
・高い全生存率（ＯＳ）、
・高い客観的奏効率（ＯＲＲ）、
・高い奏効深度（ＤＰＲ）、及び
・早期腫瘍縮小（ＥＴＳ）。
・治癒効果を意図した二次切除率が高くなる可能性。
・好ましい総合的な安全性プロファイル、例えば、以下の１つ以上において少なくとも妥当な結果が得られること：ＡＥ（重篤な結果を伴うＡＥを含む）の頻度、重症度及び重さ、中止に至ったＡＥの頻度及び性質、臨床的に有意な臨床検査項目及びバイタルサインの異常の頻度及び性質、抗薬剤抗体（結合及び／又は中和）の頻度。

【0052】

本発明による治療、特に本発明による好ましい治療の利益を得るためには、ヒト、ヒトの患者、又は患者は、好ましくは以下の基準の１つ以上、好ましくは２つ以上、特に３つ以上を満たさなければならない。
・転移性大腸癌、好ましくはステージＩＶの転移性大腸癌、より好ましくは新たに診断された転移性大腸癌、又は新たに診断されたステージＩＶの転移性大腸癌の証拠；
・結腸の左側（左脾彎曲部を含む）又は直腸に原発性腫瘍がある、若しくは好ましくは結腸の左側（左脾彎曲部を含む）に原発性腫瘍があることであって、直腸を除く；
・局所評価により、腫瘍（原発性腫瘍又は転移性腫瘍）に野生型ＲＡＳ遺伝子変異状態が明らかにされていること；若しくは、好ましくは局所評価により、腫瘍（原発性腫瘍又は転移性腫瘍）に野生型ＫＲＡＳ遺伝子変異状態が明らかにされていること；
・腫瘍組織標本が、中央検査室での評価により、高いαｖβ６インテグリン発現を示していること；若しくは、好ましくは、腫瘍組織標本（ホルマリン固定、パラフィン包埋ブロック）が、好ましくは一次切除の腫瘍組織標本及び／又は転移部位からの外科的サンプルが入手可能な場合の、腫瘍組織標本であること。
本発明による治療、特に本発明による好ましい治療の利益を得るためには、ヒト、ヒトの患者、又は患者は、好ましくはＲＡＳ又はＢＲＡＦの変異を持たず、特に実証されたＲＡＳ又はＢＲＡＦの変異を持たないものとする。

【0053】

本発明による特に好ましい投与レジメンは、以下に直接記載されており、以下を含む、又は好ましくは以下で構成されている。
治療は２週間のサイクルで静脈内投与され、各サイクル（２週間）は以下の内容で構成される。
セツキシマブ：
４００ミリグラム／平方メートル（好ましくは１２０分かけて静脈内注入）、続いて
週に２５０ミリグラム／平方メートル（好ましくは６０分かけて静脈内注入）
又は
５００ミリグラム／平方メートルを２週間ごとに投与（好ましくは点滴で、最初は１２０分かけて投与し、その後６０～９０分で投与する）
＋（セツキシマブの注入完了後６０分［±５分］）
アビツズマブ：
１０００ミリグラム：２週間ごと（好ましくは６０分かけて静脈内注入）
＋（アビツズマブの注入完了後６０分［±５分］）
ＦＯＬＦＩＲＩ：
２週間ごと
イリノテカン１８０ミリグラム／平方メートルを１日目に３０～９０分かけて静脈内投与
フォリン酸（好ましくはラセミ体）４００ミリグラム／平方メートルを１日目に１２０分かけて静脈内投与
５－ＦＵ４００ミリグラム／平方メートルをボーラスで１日目に投与
５－ＦＵ２４００ミリグラム／平方メートルを好ましくは１～２日目の４６時間かけて静脈内投与。

【0054】

しかし、セツキシマブ及びＦＯＬＦＩＲＩは、地域の標準に沿って、及び国際的なガイドライン（ＮＣＣＮ、ＥＳＭＯなど）の推奨に沿って投与されることが好ましい。セツキシマブ及びＦＯＬＦＩＲＩの投与量の調整は、好ましくは添付文書又は地域で受け入れられている方法に従って、治験責任医師の裁量で実行される。
典型的には、セツキシマブを投与した後、アビツズマブ（若しくは他の成長因子又は成長因子受容体を標的とするモノクローナル抗体）及びＦＯＬＦＩＲＩ（若しくは他の化学療法、好ましくはＦＯＬＦＯＸ）をそれぞれ投与するスケジュールとなる。
好ましくは、セツキシマブ（若しくは他の成長因子又は成長因子受容体を標的としたモノクローナル抗体）の注入終了からアビツズマブの注入開始まで、常に１時間空ける必要がある。好ましくは、アビツズマブの注入終了とＦＯＬＦＩＲＩ（若しくは他の化学療法、好ましくはＦＯＬＦＯＸ）の注入開始の間に、それぞれ薬に関連する副作用の評価を可能にするために、常に１時間空けるべきである。
本発明による治療レジメンは、好ましくは最低６サイクル、より好ましくは最低８サイクル、特に最低１０サイクル適用されるべきである。本発明による治療レジメンは、許容できない毒性が現れない限り、疾患が退縮又は疾患が進行するまで継続することが好ましい。

【0055】

アビツズマブ（ＥＭＤ ５２５７９７）（ｍＡｂ ＤＩ １７Ｅ６）は、好ましくは現在、静脈内注入用の滅菌溶液として入手可能である。アビツズマブは、安定剤及び等張化剤としての塩化ナトリウムを含む緩衝生理食塩水に、２５ミリグラム／ミリリットルの溶液として製剤化するのが好ましい。
典型的には、アビツズマブ１０００ミリグラムを１時間（±５分）かけて点滴静注する。一定の注入速度を得るために、マイクロプロセッサ制御の注入ポンプを使用するのが好ましい。
典型的には、アビツズマブの投与は、第１日目（好ましくはセツキシマブ（若しくは他の成長因子又は成長因子受容体を標的とするモノクローナル抗体）の注入完了後６０分［±５分］）、その後は２週間ごとに、すなわち好ましくは２週間又は約２週間の各サイクルの第１日目に実施される。

【0056】

治療やスクリーニングを実行する前に、現地の検査機関でＲＡＳ ＷＴ ｍＣＲＣの確認をすることが望まれる。αｖβ６インテグリンが高発現しているかどうかは、治療前及び／又はスクリーニングの段階で中央検査機関が判定することが好ましい。
スクリーニングは、以下の項目の１つ以上からなることが好ましい。

【表4】

【0057】

本発明による治療方法で取り組むべき好ましい目的には、好ましくは、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、全生存期間（ＯＳ）、客観的奏効率（ＯＲＲ）、奏効深度（ＤＰＲ）、早期腫瘍収縮（ＥＴＳ）、及び／又は潜在的に治癒的な意図を持つ二次切除率が含まれる。
奏効深度（ＤＰＲ）は、治療中の腫瘍収縮率の最大値として決定するのが好ましい。
早期腫瘍縮小（ＥＴＳ）は、最長の腫瘍径の合計がベースラインから２０％以上減少した患者の割合として決定するのが好ましい。
治癒の可能性のある二次切除率は、好ましくは以下のように決定される。
試験治療中に転移性腫瘍の切除可能性が明らかになった患者は、転移性腫瘍の外科的切除を実行するべきである。
本臨床試験プロトコルの範囲内で、治癒目的で転移性腫瘍の二次的切除を実行する場合は、客観的寛解（ＣＲ又はＰＲ）が事前に明らかにされる必要がある。

【0058】

登録及び推奨されている国際的な一般名（ＩＮＮ）「アビツズマブ」を持つ既知のモノクローナル抗αｖ抗体は、ＤＩ－１７Ｅ６、ＤＩ１７Ｅ６、ＥＭＲ６２２４２、又はＥＭＤ ５２５７９７とも呼ばれることがある。
アビツズマブは、α－ｖインテグリン（受容体）に対する、特別に適合するように調整されたＩｇＧ２ハイブリッドモノクローナル抗体である。本抗体の詳細は国際公開第２００９／０１０２９０号に記載され、これらの開示は、好ましくは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0059】

アビツズマブの超可変領域（ＣＤＲ）は、マウスｍＡｂ １７Ｅ６（ＥＭＤ ７３０３４）に由来する。この親マウスＩｇＧ１抗体は、例えば、Ｍｉｔｊａｎｓら（１９９５； Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ． １０８， ２８２５）、及び米国特許第５９８５２７８号並びに欧州特許第７１９８５９号に記載されている。マウスｍＡｂ １７Ｅ６は、ハイブリドーマ細胞株２７２－１７Ｅ６によって産生され、アクセッション番号ＤＳＭ ＡＣＣ２１６０で寄託されている。
アビツズマブの軽鎖ドメインは、ヒト化モノクローナル抗ＥＧＦＲ抗体４２５（マツズマブ）に由来する。本抗体は、例えば、欧州特許第０５３１４７２Ｂ１号に詳細に記載され、マウスの対応する４２５（マウスＭＡｂ４２５、ＡＴＣＣ ＨＢ９６２９）に由来している。本抗体は、ヒトのＡ４３１癌細胞株に対して発現され、ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）の外部ドメイン上のポリペプチドエピトープに結合することが分かった。マツズマブは、臨床試験で高い有効性を示している。

【0060】

一般的に、本発明に基づいて使用される抗αｖインテグリン抗体アビツズマブ／ＤＩ１７Ｅ６には、以下が含まれる。
（ｉ）マウスモノクローナル抗αｖインテグリン抗体１７Ｅ６に由来するＣＤＲ軽鎖領域及び重鎖領域
（ｉｉ）ヒト化モノクローナル抗ＥＧＦＲ抗体４２５から採取した軽鎖フレームワーク領域、
（ｉｉｉ）マウスモノクローナル抗αｖインテグリン抗体１７Ｅ６に由来する重鎖フレームワーク領域であって、任意に特定の位置のアミノ酸の１つ以上の変異を含む重鎖フレームワーク領域、及び
（ｉｖ）ヒトＩｇＧ２に由来する重鎖定常領域、及びヒトカッパ軽鎖定常領域を有し、前記ＩｇＧ２ドメインにおいて、ＩｇＧ２ヒンジ領域がヒトＩｇＧ１ヒンジドメインに置換されている、並びに；
ここで、任意にＩｇＧ２内の１つ以上の変異が実施されている。

【0061】

具体的には、治療、好ましくは本明細書に記載及び／又は請求されている治療、好ましくは上記及び下記の臨床試験で使用されるアビツズマブ／ＤＩ１７Ｅ６（「ＤＩ１７Ｅ６γ２ｈ（Ｎ２９７Ｑ）」又は「ＥＭＤ５２５７９７」とも呼ばれる）は、以下のアミノ酸配列を有する。

【化1】

【0062】

ここで、下線部の配列は、ＣＤＲを持つ可変領域（太字は親マウス抗体と同一）を表している。変更されたＩｇＧ１ヒンジ領域は、ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３）で表され、ＡＱはＩｇＧ２ドメイン内の置換である。

【0063】

しかし、国際公開第２００９／０１０２９０に示されているように、本発明の考え方によれば、ＤＩ１７Ｅ６の変種も使用することができる。従って、以下の重鎖のフレームワーク領域に１つ以上の改変を含むＤＩ１７Ｅ６の変種は

【化2】

【0064】

太字及び下線の位置の１つ以上が変異しており、記載されているように、前立腺癌患者の治療に使用できる。より詳細には、以下の位置の重鎖フレームワーク領域が、１つ、複数、又は全てで変異している。Ａ９、Ｅ１３、Ｍ２０、Ｋ３８、Ｒ４０、Ａ７２、Ｓ７６、Ｑ８２、Ｇ８５、Ｔ８７、Ｓ９１、及びＳ１１３。これらの変種は、上記の配列で定義されたＤＩ１７Ｅ６と比較して、同一又は非常に類似した生物学的活性と有効性を示す。

【0065】

一般的に、記載されている本発明には、未改変のＤＩ１７Ｅ６と機能的及び／又は薬学的に同一又は類似のＤＩ１７Ｅ６抗体の改変体及び変種も含まれ、ＣＤＲ領域並びに重鎖及び軽鎖可変領域は、ＤＩ１７Ｅ６のそれぞれの可変領域と比較して、そのアミノ酸配列において少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一である。更に、本発明は、好ましくは、未改変のＤＩ１７Ｅ６と機能的及び／又は薬学的に同一又は類似のＤＩ１７Ｅ６抗体の改変体及び変種も含まれ、定常領域は、ＤＩ１７Ｅ６のそれぞれの定常領域と比較して、そのアミノ酸配列において少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一である。抗体のＩｇＧ鎖の定常領域を変更することで、免疫原性又はＡＤＣＣなどの特定の特性を向上させてもよい。
好ましくは、記載されている本発明には、（未改変の）ＤＩ１７Ｅ６又はアビツズマブと機能的及び／又は薬学的に同一又は類似のＤＩ１７Ｅ６抗体の改変体及び変種も含まれ、重鎖及び軽鎖可変領域は、ＤＩ１７Ｅ６のそれぞれの重鎖及び軽鎖可変領域と比較して、そのアミノ酸配列において、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％又は少なくとも９９．９％同一である。更に、本発明は、未改変のＤＩ１７Ｅ６と機能的及び／又は薬学的に同一又は類似のＤＩ１７Ｅ６抗体の改変体及び変種も含まれ、好ましくは、上述したように、定常領域は、ＤＩ１７Ｅ６のそれぞれの定常領域と比較して、そのアミノ酸配列において少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、又は少なくとも９９．９％同一である。抗体のＩｇＧ鎖の定常領域を変更することで、免疫原性又はＡＤＣＣなどの特定の特性を向上させてもよい。

【0066】

更に好ましくは、記載されている本発明には、（未改変の）ＤＩ１７Ｅ６又はアビツズマブと機能的及び／又は薬学的に同一又は類似のＤＩ１７Ｅ６抗体の改変体及び変種も含まれ、重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域上のＣＤＲ領域が、ＤＩ１７Ｅ６の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域上のそれぞれのＣＤＲ領域と比較して、そのアミノ酸配列において、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一である。更に、本発明は、未改変のＤＩ１７Ｅ６と機能的及び／又は薬学的に同一又は類似のＤＩ１７Ｅ６抗体の改変体及び変種も含まれ、好ましくは、上述したように、定常領域は、ＤＩ１７Ｅ６のそれぞれの定常領域と比較して、そのアミノ酸配列において少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、又は少なくとも９９．９％同一である。
特に好ましくは、記載されている本発明には、（未改変の）ＤＩ１７Ｅ６又はアビツズマブと機能的及び／又は薬学的に同一又は類似のＤＩ１７Ｅ６抗体の改変体及び変種も含まれ、重鎖及び軽鎖ＣＤＲ領域は、（未改変の）ＤＩ１７Ｅ６又はアビツズマブと１００％同一であるが、前記ＣＤＲ領域以外の重鎖及び軽鎖可変領域が、ＤＩ１７Ｅ６のそれぞれの重鎖及び軽鎖可変領域と比較して、そのアミノ酸配列が少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％同一である。更に、本発明は、好ましくは、未改変のＤＩ１７Ｅ６と機能的及び／又は薬学的に同一又は類似のＤＩ１７Ｅ６抗体の改変体及び変種も含まれ、好ましくは、上述したように、定常領域は、ＤＩ１７Ｅ６のそれぞれの定常領域と比較して、そのアミノ酸配列において少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、又は少なくとも９９．９％同一である。
特に好ましくは、記載されている本発明には、（未改変の）ＤＩ１７Ｅ６又はアビツズマブと機能的及び／又は薬学的に同一又は類似のＤＩ１７Ｅ６抗体の改変体及び変種も含まれ、重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域上のＣＤＲ領域が、ＤＩ１７Ｅ６の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域上のそれぞれのＣＤＲ領域と比較して、そのアミノ酸配列において少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、又は少なくとも９８％同一であり、前記ＣＤＲ領域以外の重鎖及び軽鎖可変領域が、ＤＩ１７Ｅ６のそれぞれの重鎖及び軽鎖可変領域と比較して、そのアミノ酸配列において少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％同一である。更に、本発明は、好ましくは、未改変のＤＩ１７Ｅ６と機能的及び／又は薬学的に同一又は類似のＤＩ１７Ｅ６抗体の改変体及び変種も含まれ、好ましくは、上述したように、定常領域は、ＤＩ１７Ｅ６のそれぞれの定常領域と比較して、そのアミノ酸配列において少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％、又は少なくとも９９．９％同一である。

【0067】

更に、本明細書に記載の使用に特に好ましいのは、ＤＩ１７Ｅ６抗体の改変体又は変種であり、好ましくは（未改変の）ＤＩ１７Ｅ６又はアビツズマブと機能的及び／又は薬学的に同一又は類似であり、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１に従う配列及び／又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２に従う配列を含み、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１の配列及び／又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２の配列の１～１０個のアミノ酸、好ましくは１～５個のアミノ酸、特に１～３個のアミノ酸が、異なるアミノ酸、好ましくは異なる天然由来のアミノ酸で置換されているものである。従って、更に、本明細書に記載の使用に特に好ましいのは、ＤＩ１７Ｅ６抗体の改変体又は変種であり、好ましくは（未改変の）ＤＩ１７Ｅ６又はアビツズマブと機能的及び／又は薬学的に同一又は類似であり、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１に従う配列及び／又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２に従う配列からなり、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１の配列及び／又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２の配列の１～１０個のアミノ酸、好ましくは１～５個のアミノ酸、特に１～３個のアミノ酸が、異なるアミノ酸、好ましくは異なる天然由来のアミノ酸で置換されているものである。従って、本明細書に記載されている使用に更に特に好ましいのは、ＤＩ１７Ｅ６抗体の改変体又は変種であり、好ましくは（未改変の）ＤＩ１７Ｅ６又はアビツズマブと機能的及び／又は薬学的に同一又は類似しており、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１及び／又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２の配列と少なくとも９８％、好ましくは少なくとも９９％、特に少なくとも９９．９％の同一性を有する配列を含んでいる。従って、本明細書に記載されている使用に更に特に好ましいのは、ＤＩ１７Ｅ６抗体の改変体又は変種であり、好ましくは（未改変の）ＤＩ１７Ｅ６又はアビツズマブと機能的及び／又は薬学的に同一又は類似しており、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１及び／又はＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２の配列と少なくとも９８％、好ましくは少なくとも９９％、特に少なくとも９９．９％の同一性を有する配列からなる。

【0068】

特に好ましくは、ＤＩ１７Ｅ６抗体又はアビツズマブは、ヒトαｖ－インテグリンへのリガンド結合を標的として阻害する、上記及び下記のＩｇＧ２サブクラスの組換え脱免疫モノクローナル抗体である。特に好ましくは、前記ＤＩ１７Ｅ６抗体又はアビツズマブのＦｃ領域に通常存在する糖鎖構造を、通常の結合点となるアミノ酸残基を遺伝子的に変化させることで除去し、分子をアグリコシル化したものである。特に好ましくは、４４７個のアミノ酸からなる同一の重鎖２本及び２１４個のアミノ酸からなる同一の軽鎖２本の計４本のポリペプチド鎖からなる抗体である。一般的に、４本の鎖は共有結合（ジスルフィド）と非共有結合の組み合わせで結合している。大体の分子量は、１４５ｋＤａである。
しかし、全ての方法、用途、及び治療において最も好まれるのは、登録された国際的な一般名（ＩＮＮ）であるアビツズマブの名を持つ抗体である。
アビツズマブの単回及び複数回投与後のＰＫ評価では、膜結合型受容体を標的とする他の抗体で説明されているように、受容体を介したクリアランスモデルに基づいて挙動することが好ましいとされている。健康なボランティアを対象とした先行研究の結果と同様に、ｍＣＲＰＣ患者におけるアビツズマブのＰＫは用量依存性であり、クリアランスは主に未結合の受容体の利用可能性によって決定される。好んで使用されるアビツズマブの用量において、１０００ミリグラム以上の用量では、好ましくはほぼすべての受容体が飽和状態となり、好ましくは薬物のクリアランスに寄与しない、又はわずかに寄与するだけであることが想定され得る。

【0069】

本明細書で使用されている「化学療法」という用語は、当技術分野で理解されている。好ましくは、化学療法レジメンの一部として１つ以上の抗癌剤（化学療法剤）を使用する癌治療の種類として理解される。
「化学療法剤」又は「化学療法剤」又は「抗新生物剤」という用語は、本発明の理解によれば、好ましくは、「細胞毒性剤」及び／又は「細胞静菌剤」のクラスのメンバーとみなされ、抗新生物効果、すなわち新生物細胞の発生、成熟、又は拡散を防ぐ効果を、生物学的反応改変などのメカニズムを介した間接的なものではなく、腫瘍細胞に直接及ぼす化学剤を含むものである。本発明による適切な化学療法剤は、好ましくは天然又は合成の化学化合物であるが、タンパク質、ポリペプチド等以外の生物学的分子は、好ましくは明示的に除外されない。化学療法又は薬剤の例としては、好ましくは、例えば、ナイトロスマスタード、エチレンイミン化合物、アルキルスルホン酸塩などのアルキル化剤及びニトロソウレア、シスプラチン、及びダカルバジンなどのアルキル化作用を有する化合物；例えば、葉酸、プリン、又はピリミジン拮抗剤などの代謝拮抗剤；例えば、ビンカアルカロイド、及びポドフィロトキシンの誘導体などの分裂阻害剤；細胞毒性抗生物質及びカンプトテシン誘導体などが挙げられる。

【0070】

好ましい化学療法剤又は化学療法としては、アミフォスチン（エチオール）、カバジタキセル、シスプラチン、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、ダクチノマイシン、ドセタキセル、メクロレタミン、ストレプトゾシン、シクロホスファミド、カルナスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、ドキソルビシンリポ（ドキシル）、ゲムシタビン（ゲムザール）、ダウノルビシン、ダウノルビシンリポ（ダウノソーム）、プロカルバジン、ケトコナゾール、マイトマイシン、シタラビン、エトポシド、メトトレキサート、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ブレオマイシン、パクリタキセル（タキソール）、ドセタキセル（タキソテール）、アルデスロイキン、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、クラドリビン、カンプトテシン、ＣＰＴ－１１、１０－ヒドロキシ－７－エチル－カンプトテシン（ＳＮ３８）、ダカルバジン、フロクスリジン、フルダラビン、ヒドロキシウレア、イホスファミド、イダルビシン、メスナ、インターフェロンα、インターフェロンβ、イリノテカン、ミトキサントロン、トポテカン、リュープロリド、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、プリカマイシン、ミトタン、ペガスパルガーゼ、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、ウラシルマスタード、ビノレルビン、クロラムブシル、及びそれらの組み合わせである。
アビツズマブとの併用でより好ましい本発明による化学療法剤は、カバジタキセル、シスプラチン、ドセタキセル、ゲムシタビン、ドキソルビシン、パクリタキセル（タキソール）、イリノテカン、及びブレオマイシンである。
アビツズマブと併用するための本発明による更に好ましい化学療法剤は、好ましくは、イリノテカン、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、テガフール／ウラシル（ＵＦＴ）、フォリン酸（ロイコボリン）、オキサリプラチン（エロキサチン）、アフリベルセプト、レゴラフェニブ、カペシタビン、及びそれらのプロドラッグ、並びにそれらの塩及び溶媒和物からなる群から選択される。
アビツズマブと併用するための最も好ましい本発明による化学療法剤は、好ましくは、
イリノテカン、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、及びフォリン酸（ロイコボリン）、並びにそれらのプロドラッグからなる群から選択されるいずれか、
若しくは、オキサリプラチン、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、及びフォリン酸（ロイコボリン）、並びにそれらのプロドラッグからなる群から選択されるいずれか、
並びにそれらの塩及び溶媒和物、
である。

【0071】

アビツズマブは、典型的には静脈内注射で投与されるが、抗体／タンパク質医薬の分野では便利な他の投与方法が適用できる。リポソーム製剤を含む、国際公開第２００５／０７７４１４号及び国際公開第２００３／０５３４６５号に記載されているような、全ての標準的な輸液及び製剤が適用できる。更に、ＤＩ１７Ｅ６及び任意に（細胞毒性を高めるために）化学療法剤を担持したヒト血清アルブミンナノ粒子を提供することは好ましいことである（Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ２０１０， ８， ２３８８－９８； Ｗａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．）。
他に明確に定義されていない場合、有効成分、活性原理（ＡＰＩ）、医薬品、又はその国際的な一般名（ＩＮＮ）の命名には、好ましくはその全てのプロドラッグ、塩、及び溶媒和物、特に機能的に同等のもの、及び／又は臨床的観点から適切な代替品とみなされるものが含まれる。
他に明確に定義されていない場合、本明細書では、ヒト、人間、ヒト患者、又は患者という用語は、互換性があるものとして、又は同義語として使用されることが好ましい。
他に明確に定義されていない場合、本明細書では、ヒト、ヒト患者、又は（単なる）患者という用語は、互換性があるものとして、又は同義語として使用されることが好ましい。
他に明示的に定義されていない場合、又はある用語が使用される文脈に不利な場合、単数形での用語の使用は、好ましくは、複数形でのその用語そのものを含むことを意味し、複数形での用語の使用は、好ましくは、単数形でのその用語そのものを含むことを意味する。

【0072】

本発明によれば特に好ましいのは、２つ以上の好ましい、より好ましい、及び／又は特に好ましい実施形態、態様、及び／又は対象の特性が１つの実施形態、態様、及び／又は対象に組み合わされている、本明細書に記載の対象である。好ましくは、本発明によれば、好ましい対象又は実施形態は、他の好ましい対象又は実施形態と組み合わせることができ、より好ましい対象又は実施形態は、他のより好ましくない対象又は更に好ましい対象又は実施形態と組み合わせることができ、特に好ましい対象又は実施形態は、他のちょうど好ましい対象又はちょうど更に好ましい対象又は実施形態と組み合わせることができるなどである。

【0073】

本明細書で、数字、数値、範囲、及び／又は量に関して使用されている「約」という用語は、好ましくは「約」及び／又は「およそ」を意味する。これらの用語の意味は、当業界ではよく知られており、好ましくは、それぞれの数字、数値、範囲、及び量の分散、偏差、及び／又は変動がプラス／マイナス１５％、特にプラス／マイナス１０％であることを含む。
いずれにしても、本明細書で、数字、数値、範囲、及び／又は量に関して使用されている「約」という用語は、好ましくは「約」及び／又は「およそ」を意味する。これらの用語の意味は、当業界ではよく知られており、好ましくは、それぞれの数値、数字、範囲、及び量の分散、偏差、及び／又は変動が少なくともプラス／マイナス５％であることを含む。

【0074】

本明細書で使用されている「障害」及び「疾患」という用語は、当業界ではよく知られており、理解されている。本発明との関係では、それらは好ましくは同義語として使用されるため、それらが本明細書で使用されている文脈が他を強く示唆していない場合、好ましくは交換可能である。従って、本明細書で使用されている「繊維性障害」及び「繊維性疾患」という用語も、当業界ではよく知られており、理解されている。本発明との関係では、それらは好ましくは同義語として使用されるため、それらが本明細書で使用されている文脈が、それ以外を強く示唆していない場合、好ましくは交換可能である。

【0075】

治療レジメン、投与スケジュール、及び臨床試験デザインなど（これらに限定しない）の医療関連では、患者、医療スタッフ、及び／又は医師の利便性及び／又は使いやすさ、結果の信頼性及び／又は再現性などを考慮して、「週」／「１週間」、「月」／「１ヶ月」、「年」／「１年」という用語を、グレゴリオ暦の定義から若干逸脱した形で使用することができる。例えば、前記医療関連の文脈では、１ヶ月を２８日、１年を４８週と呼ぶことが多い。
従って、本発明との関係では、「週」又は「１週間」という用語は、好ましくは約５日、約６日、又は約７日、より好ましくは約７日の期間を意味する。
医療関連の文脈では、「月」又は「１ヶ月」という用語は、好ましくは約２８日、約２９日、約３０日、又は約３１日の期間を指し、より好ましくは約２８日、約３０日、又は約３１日の期間を指す。
医療関連の文脈では、「年」又は「１年」という用語は、好ましくは約１２ヶ月の期間、又は約４８週、約５０週、若しくは約５２週の期間を指し、より好ましくは１２ヶ月、又は約４８週、又は約５２週の期間を指す。

【0076】

以下、実施例を用いて本発明をより詳細に説明する。本発明は、好ましくは、請求された範囲全体で実施することができ、ここで与えられた実施例に限定されるものではない。
更に、当業者が例示によって本発明をよりよく理解するのを助けるために、以下の実施例が挙げられている。実施例は、特許請求の範囲によって与えられる保護の範囲を制限することを意図したものではない。実施例で定義された工程、化合物、組成物、及び／又は使用について例示された特徴、特性、及び利点は、実施例で具体的に説明、及び／又は定義されていないが、特許請求の範囲で定義されている範囲内にある他の工程、化合物、組成物、及び／又は使用に割り当てることができる。
従って、以下の実施例では、本発明をより詳細に説明しているが、本発明及び請求項に記載された範囲を限定するものではない。
以下の実施例では、本発明をより詳細に説明しているが、本発明及び請求項に記載された範囲を限定するものではない。

【実施例1】

【0077】

ＫＲＡＳ野生型の転移性大腸癌患者に対するアビツズマブとセツキシマブ＋イリノテカンの併用療法、及びセツキシマブ＋イリノテカン単独療法の比較：無作為化されたフェーズＩ／ＩＩのPOSEIDON試験
次も参照： Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２６： １３２－１４０， ２０１５
背景：インテグリンは、腫瘍の進行又は転移に関与しており、大腸癌（ＣＲＣ）細胞では異なる発現をしている。インテグリンαｖヘテロダイマーを標的としたヒト化モノクローナル抗体であるアビツズマブ（ＥＭＤ ５２５７９７）は、前臨床試験で活性を示した。本試験は、転移性ＣＲＣ（ｍＣＲＣ）患者を対象に、アビツズマブの異なる用量をセツキシマブ及びイリノテカンと併用した場合の忍容性を評価し（フェーズＩ部分）、セツキシマブ及びイリノテカンとの併用に対する有効性及び忍容性を評価し、セツキシマブ及びイリノテカンに対する有効性及び忍容性を検討するために設計された（フェーズＩＩ部分）。
手法：対象となるのは、ＫＲＡＳ（エクソン２）野生型のｍＣＲＣで、オキサリプラチンを含む治療を受けたことのある患者である。本試験は、アビツズマブ１０００ミリグラムまでを標準治療（ＳｏＣ：セツキシマブ＋イリノテカン）と併用して安全性を確認する初期ランイン試験と、アビツズマブ５００ミリグラム（Ａ治療群）又は１０００ミリグラム（Ｂ治療群）を２週間ごとにＳｏＣと併用するグループ、又はＳｏＣのみを投与するグループ（Ｃ治療群）に１：１：１で割り当てられたフェーズ２試験で構成されている。主要評価項目は、治験責任医師が評価した無増悪生存期間（ＰＦＳ）だった。副次評価項目には、全生存期間（ＯＳ）、奏功率（ＲＲ）、及び忍容性が含まれる。また、腫瘍のインテグリン発現と転帰の関連も評価した。
結果：フェーズＩ試験では、ＳｏＣとの併用により、１０００ミリグラムまでのアビツズマブの用量が良好な忍容性を示した。７３名（Ａ治療群）、７１名（Ｂ治療群）、７２名（Ｃ治療群）の患者が、フェーズＩＩ試験に無作為に割り当てられた。ベースラインの特徴はバランスが取れていた。ＰＦＳは、Ａ治療群対ＳｏＣ治療群ではハザード比（ＨＲ）１．１３［９５％信頼区間（ＣＩ）０．７８～１．６４）；Ｂ治療群対ＳｏＣ治療群ではＨＲ１．１１（９５％ＣＩ ０．７７～１．６１）と、３つのグループで同様の結果が得られた。ＲＲも同様であった。ＯＳの改善傾向が見られた：Ａ治療群対ＳｏＣ治療群でＨＲ ０．８３（９５％ＣＩ ０．５４～１．２８）；Ｂ治療群対ＳｏＣ治療群でＨＲ ０．８０（９５％ＣＩ ０．５２～１．２５）であった。グレード３以上の治療上の有害事象は、７２％、７８％、及び６７％の患者に認められた。腫瘍インテグリンαｖβ６の高発現は、Ａ治療群［ＨＲ ０．５５（０．３０～１．００）］及びＢ治療群［ＨＲ ０．４１（０．２１～０．８１）］において、Ｃ治療群よりもＯＳの延長と関連していた。
結論：主要評価項目であるＰＦＳは達成されなかったが、事前に定義した探索的バイオマーカー解析により、アビツズマブの効果が期待できる患者のサブグループが特定された。アビツズマブとセツキシマブ及びイリノテカンとの併用療法の忍容性は、許容範囲内であった。更なる研究が望まれる。
ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖの識別子：ＮＣＴ０１００８４７５
キーワード：アビツズマブ、大腸癌、インテグリン、バイオマーカー、モノクローナル抗体、フェーズＩ／ＩＩ

【0078】

導入
過去２０年間、転移性大腸癌の治療法は、イリノテカン及びオキサリプラチンなどの化学療法、並びにセツキシマブ、パニツムマブ、アフリベルセプト、レゴラフェニブ、ベバシズマブなどの標的薬の登場により、選択肢が広がった［１： Ｖａｎ Ｃｕｔｓｅｍ Ｅ， Ｃｅｒｖａｎｔｅｓ Ａ， Ｎｏｒｄｌｉｎｇｅｒ Ｂ ｅｔ ａｌ． Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ： ＥＳＭＯ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ， ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｆｏｌｌｏｗ－ｕｐ． Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ ２０１４； ２５（ｓｕｐｐｌ ３）： ｉｉｉ１－ｉｉｉ９］。これにより、患者の予後は改善されたが、ほとんどの患者は疾患が原因で亡くなっている。ＣＲＣの分子生物学的解明が進む中、腫瘍の成長及び進行に不可欠な因子を標的とした新しい治療法は、患者の予後を改善するための最大の希望となっている［２： Ｃｉｏｍｂｏｒ ＫＫ， Ｂｅｒｌｉｎ Ｊ． Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ－ｐｒｅｓｅｎｔ ａｎｄ ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｐｔｉｏｎｓ． Ｐｈａｒｍｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｐｅｒｓ Ｍｅｄ ２０１４； ７： １３７－１４４］。インテグリンは、膜貫通型のヘテロ二量体糖タンパク質（αサブユニットとβサブユニットを含む）のファミリーであり、正常細胞及び腫瘍細胞の両方において、様々な細胞間及び細胞と細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の相互作用を媒介する ［３： Ｇｏｏｄｍａｎ ＳＬ， Ｐｉｃａｒｄ Ｍ． Ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ ａｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔｓ． Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｓｃｉ ２０１２； ３３： ４０５－４１２］。インテグリンは腫瘍細胞の生存、転移、及び血管新生を促進する［４： Ｎｅｍｅｔｈ ＪＡ， Ｎａｋａｄａ ＭＴ， Ｔｒｉｋｈａ Ｍ ｅｔ ａｌ． Ａｌｐｈａ－ｖ ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ ａｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔｓ ｉｎ ｏｎｃｏｌｏｇｙ． Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｖｅｓｔ ２００７； ２５： ６３２－６４６］。ＣＲＣ細胞にはインテグリンαｖβ５及びαｖβ６が、腫瘍関連の血管にはインテグリンαｖβ３及びαｖβ５が発現しているという研究結果がある［５， ６： Ｇｏｏｄｍａｎ ＳＬ， Ｇｒｏｔｅ ＨＪ， Ｗｉｌｍ Ｃ． Ｍａｔｃｈｅｄ ｒａｂｂｉｔ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ αｖ－ｓｅｒｉｅｓ ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ ｒｅｖｅａｌ ａ ｎｏｖｅｌ αｖβ３－ＬＩＢＳ ｅｐｉｔｏｐｅ， ａｎｄ ｐｅｒｍｉｔ ｒｏｕｔｉｎｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｏｆ ａｒｃｈｉｖａｌ ｐａｒａｆｆｉｎ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒｓ． Ｂｉｏｌ Ｏｐｅｎ ２０１２； １： ３２９－３４０； Ａｇｒｅｚ ＭＶ， Ｂａｔｅｓ ＲＣ， Ｍｉｔｃｈｅｌｌ Ｄ ｅｔ ａｌ． Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ ｏｆ ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ－ｂｉｎｄｉｎｇ ａｌｐｈａ Ｖ ｉｎｔｅｇｒｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ． Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １９９６； ７３： ８８７－８９２］。インテグリンαｖβ６の過剰発現は、早期のｍＣＲＣ患者の全生存期間（ＯＳ）中央値の有意な低下と関連する［７： Ｂａｔｅｓ ＲＣ， Ｂｅｌｌｏｖｉｎ ＤＩ， Ｂｒｏｗｎ Ｃ ｅｔ ａｌ． Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｇｒｉｎ β６ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｄｅｆｉｎｅｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｉｎｄｉｃａｔｏｒ ｏｆ ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ ｃｏｌｏｎ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ ２００５； １１５： ３３９－３４７］。従って、αｖインテグリン、特にαｖβ６は、ｍＣＲＣの治療のための合理的なターゲットとなる。ヒト化モノクローナルＩｇＧ２抗体アビツズマブ（ＥＭＤ ５２５７９７）は、αｖインテグリンサブユニットに特異的に結合し、ＥＣＭ内のリガンドとの相互作用を阻害する。これにより、細胞の付着や運動を妨げ、アポトーシスを誘導する可能性がある［３， ８： Ｇｏｏｄｍａｎ ＳＬ， Ｐｉｃａｒｄ Ｍ． Ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ ａｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔｓ． Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｓｃｉ ２０１２； ３３： ４０５-４１２； Ｍｉｔｊａｎｓ Ｆ， Ｓａｎｄｅｒ Ｄ， Ａｄａｎ Ｊ ｅｔ ａｌ． Ａｎ ａｎｔｉ－ａｌｐｈａ ｖ－ｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｈａｔ ｂｌｏｃｋｓ ｉｎｔｅｇｒｉｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｈｕｍａｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ｉｎ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ． Ｊ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ １９９５； １０８（Ｐｔ ８）： ２８２５－２８３８］。前臨床試験では、ヒトの腫瘍の異種移植モデルにおいて、アビツズマブの抗腫瘍活性が確認されており、アビツズマブとセツキシマブ又はイリノテカンを併用した場合には、いずれかの薬剤単独よりも高い活性が確認された［Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ、社内資料］。更に、アビツズマブ単剤療法の臨床試験では、その忍容性が証明されている［９， １０： Ｕｈｌ Ｗ， Ｚｕｈｌｓｄｏｒｆ Ｍ， Ｋｏｅｒｎｉｃｋｅ Ｔ ｅｔ ａｌ． Ｓａｆｅｔｙ， ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ， ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｎｏｖｅｌ ａｌｐｈａｖ－ｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ＥＭＤ ５２５７９７ （ＤＩ１７Ｅ６） ｉｎ ｈｅａｌｔｈｙ ｓｕｂｊｅｃｔｓ ａｆｔｅｒ ａｓｃｅｎｄｉｎｇ ｓｉｎｇｌｅ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｄｏｓｅｓ． Ｉｎｖｅｓｔ Ｎｅｗ Ｄｒｕｇｓ ２０１４； ３２： ３４７-３５４； Ｗｉｒｔｈ Ｍ， Ｈｅｉｄｅｎｒｅｉｃｈ Ａ， Ｇｓｃｈｗｅｎｄ ＪＥ ｅｔ ａｌ． Ａ ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ ｐｈａｓｅ １ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ＥＭＤ ５２５７９７ （ＤＩ１７Ｅ６）， ａ ｎｏｖｅｌ ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ａｌｐｈａｖ ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ， ｉｎ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｗｉｔｈ ｂｏｎｅ ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ ａｆｔｅｒ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ． Ｅｕｒ Ｕｒｏｌ ２０１４； ６５： ８９７－９０４］。我々は、オキサリプラチンを含む前治療歴のあるＫＲＡＳエクソン２野生型ｍＣＲＣ患者を対象に、ｍＣＲＣの標準治療（ＳｏＣ）であるイリノテカン及びセツキシマブとアビツズマブの異なる用量を併用した場合の忍容性を評価するフェーズＩ／ＩＩ試験を実施した。フェーズＩＩ試験では、これらの患者を対象に、アビツズマブとイリノテカン、セツキシマブの併用療法とイリノテカン、セツキシマブの併用療法の有効性を比較した。

【0079】

患者及び手法
試験設計及び治療
本非盲検の多施設共同のフェーズＩ／ＩＩ試験（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ識別子：ＮＣＴ０１００８４７５）は、各施設の施設内審査委員会の承認を得た。全患者は、登録前にインフォームド・コンセントを得た。本研究は、ヘルシンキ宣言の原則に基づいて実施された。フェーズＩの用量漸増試験では、古典的な「３＋３」デザインが採用され、対象となる患者は、ＳｏＣと併用してアビツズマブ２５０、５００、７５０、又は１０００ミリグラムを２週間ごとに静脈投与された。アビツズマブの投与量は、標的の飽和度を参考に、潜在的に有効な投与量範囲の薬物動態（ＰＫ）モデルに基づいて選択された。第１サイクルの第１日目にセツキシマブ４００ミリグラム／平方メートルを投与し、その後は毎週２５０ミリグラム／平方メートルを投与した。アビツズマブは、セツキシマブの注入終了後６０分以上経過してから投与し、イリノテカン１８０ミリグラム／平方メートル（最大体表面積２．０平方メートル）はアビツズマブの注入終了後６０分以上経過してから投与し、注入関連の副作用の評価を実施した。治療は疾患が進行する、又は許容できない毒性が出るまで続けられた。用量制限毒性（ＤＬＴ）は、治療開始後２週間以内の治療関連死亡；又は試験治療に関連したグレード３／４の非血液学的毒性又はグレード４の血液学的毒性と定義した。セツキシマブ及びイリノテカンで予想される毒性（発熱を伴わないグレード４の好中球減少又は白血球減少が５日以下の持続する、十分な支持療法を実施しないグレード３／４の下痢など）はＤＬＴに含めなかった［１１： Ｅｌｅｚ Ｅ， Ｋｏｃａｋｏｖａ Ｉ， Ｈｏｈｌｅｒ Ｔ ｅｔ ａｌ． Ｐｈａｓｅ Ｉ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ＥＭＤ ５２５７９７ （ＤＩ１７Ｅ６）， ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ αｖβ ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ， ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃｅｔｕｘｉｍａｂ ａｎｄ ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ， ａｓ ａ ｓｅｃｏｎｄ－ｌｉｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｋ－ｒａｓ ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２０１２； ３０（ｓｕｐｐｌ）： ａｂｓｔｒａｃｔ ３５３９］。無作為化されたフェーズＩＩ試験では、患者はアビツズマブ５００ミリグラム又はアビツズマブ１０００ミリグラムを２週間ごとに投与してＳｏＣを併用する治療法、又はＳｏＣ（セツキシマブを毎週、イリノテカンを２週間ごとに投与）を併用する治療法に１：１：１で中央無作為に割り当てられた（図は、Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙオンライン版で入手可能、図４を参照）。フェーズＩＩ試験で２種類のアビツズマブの用量を選択したのは、フェーズ１試験のデータが不十分であったため、１種類の用量を選択し、主に異なるレベルの標的飽和度を達成するためにＰＫガイドを実行し：アビツズマブ５００ミリグラムを２週間に１回投与することで、前臨床試験で活性が確認された血清濃度が得られる可能性があり；アビツズマブ１０００ミリグラムを２週間に１回投与することで、投与間の非線形クリアランス経路のＩＣ９９を常に上回る定常血清トラフ濃度が得られるように選択した。患者は、抗血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）療法の既往の有無によって層別された。治療は、治験責任医師によりレントゲン写真で評価された疾患の進行、許容できない毒性、治癒的切除の適格性（治験責任医師による評価）、又は同意の撤回があるまで続けられた。

【0080】

患者
１８歳以上の成人で、組織学的にＫＲＡＳエクソン２野生型のｍＣＲＣであることが確認され、遠隔転移が確認され、以前に放射線を照射していない部位に少なくとも１つのＸ線写真で測定可能な病変が確認された人を対象とした。全患者は、オキサリプラチン／フルオロピリミジン含有レジメンの前治療に失敗した者でなければならず、その定義は、最終投与から６カ月以内に疾患が進行した場合、又は不耐症の場合とする。患者は、米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）のパフォーマンスステータスが０若しくは１、又はカルノフスキーのパフォーマンスステータスが８０％以上であり、許容可能な検査項目（絶対好中球数が１．５×１０９／リットル以上、血小板数が１００×１０９／リットル以上、ヘモグロビンが９グラム／デシリットル以上、ビリルビンが１．５×正常上限値以上など）を有していた。主な除外基準は、上皮成長因子受容体阻害剤による治療歴、既知の脳転移、臨床的に関連のある冠動脈疾患、コントロールされていない高血圧、過去１２ヶ月以内の心筋梗塞の既往などだった。

【0081】

評価
全患者は、スクリーニング時にＫＲＡＳ遺伝子変異の解析及びインテグリン発現の評価のために腫瘍塊を提供する必要があった。インテグリンαｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、αｖβ８、及びパンαｖの発現は、ホルマリン固定パラフィン包埋腫瘍組織の免疫組織化学を用いて評価された［５： Ｇｏｏｄｍａｎ ＳＬ， Ｇｒｏｔｅ ＨＪ， Ｗｉｌｍ Ｃ． ”Ｍａｔｃｈｅｄ ｒａｂｂｉｔ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ αｖ－ｓｅｒｉｅｓ ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ ｒｅｖｅａｌ ａ ｎｏｖｅｌ αｖβ３－ＬＩＢＳ ｅｐｉｔｏｐｅ， ａｎｄ ｐｅｒｍｉｔ ｒｏｕｔｉｎｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｏｆ ａｒｃｈｉｖａｌ ｐａｒａｆｆｉｎ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒｓ． Ｂｉｏｌ Ｏｐｅｎ ２０１２； １： ３２９－３４０］。染色の強度及び頻度のデータを用いて、０～３００の連続スケールでヒストスコアを算出した［Ｐｉｒｋｅｒ Ｒ， Ｐｅｒｅｉｒａ ＪＲ， ｖｏｎ Ｐａｗｅｌ Ｊ ｅｔ ａｌ．ＥＧＦＲ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｓ ａ ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ ｏｆ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｆｏｒ ｆｉｒｓｔ－ｌｉｎｅ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｐｌｕｓ ｃｅｔｕｘｉｍａｂ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ： ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｄａｔａ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｐｈａｓｅ ３ ＦＬＥＸ ｓｔｕｄｙ． Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌ ２０１２； １３： ３３－４］。患者は、試験開始時から試験薬の最終投与後３１日目まで、治療中発生した有害事象（ＴＥＡＥ）をモニターされた。試験薬とＴＥＡＥの因果関係は、治験責任医師が評価した。腫瘍は、ベースライン時と、無作為化された日から疾患の進行又は死亡までの６週間ごとに、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）又は磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャンを用いた画像で評価された。奏功を客観的に評価するために、ＲＥＣＩＳＴを使用した［１３： Ｔｈｅｒａｓｓｅ Ｐ， Ａｒｂｕｃｋ ＳＧ， Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ＥＡ ｅｔ ａｌ． Ｎｅｗ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｎ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ． Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃａｎａｄａ． Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ ２０００； ９２： ２０５－２１６］。完全奏功及び部分奏功（ＣＲ又はＰＲ）は、初回スキャンから６週間以上経過した後のスキャンで確認される必要があった。無作為化されたフェーズＩＩ試験では、全てのスキャン画像が独立審査委員会によって審査された。最初のスクリーニングの後、腫瘍の評価を受けずに死亡以外の理由で試験から離脱した全患者は、ＣＴ又はＭＲＩスキャンを含む最終的な治療評価を受けた。

【0082】

統計学的考察
フェーズＩの主要評価項目であるプロトコル定義のＤＬＴ及び各用量レベルの他のデータを要約するために、記述統計学が用いられた。無作為化されたフェーズＩＩ試験の主要評価項目は無増悪生存期間（ＰＦＳ）で、無作為化されてから最後の腫瘍評価後１２週間以内に疾患が進行する、又は何らかの原因で死亡するまでの期間と定義された。ＳｏＣに対するハザード比（ＨＲ）が０．６７、ＰＦＳの中央値がＳｏＣの４．０ヵ月からアビツズマブベースの治療で６．０ヵ月に増加、有意水準（α）が２５％（両側）と仮定して、薬物活性なしの帰無仮説を棄却するのに必要な１７３件のＰＦＳイベントを、８５％の検出力で観察するために、２１３名のサンプルサイズの患者群（各グループ７１名）を計画した。フェーズＩＩ部分の副次的評価項目は、ＯＳ、進行までの期間、治療失敗までの期間、奏効率、及び病勢コントロール率、安全性などである。事前に設定した探索的評価項目には、腫瘍のインテグリン発現と有効性の関連性が含まれていた。有効性の主要解析では、無作為化された全患者を含む包括解析（ＩＴＴ）集団を用いた。安全性解析対象者は、いずれかの試験薬を少なくとも１回投与された全ての患者であった。データは、記述統計学を用いて要約された。イベントまでの時間を表す評価項目の解析には、抗癌剤治療歴（抗ＶＥＧＦの有無）で層別化したログランク検定を用いた。治療法及び抗癌剤治療歴（抗ＶＥＧＦの有無）を共変量としたＣｏｘ比例ハザードモデルを用いて、ＨＲを推定した。統計解析は、ＳＡＳ（登録商標）システム（バージョン８．２以降）を用いて実行した。腫瘍のインテグリン発現と患者の転帰の関連性という探索的評価項目の評価では、当初、高発現と低発現の間のカットオフとしてヒストスコアの中央値が用いられた。その後、カットオフ値を中央値付近で変化させ、中央値が試験対象の患者集団に許容可能かどうかを評価した。

【0083】

結果
フェーズＩの用量漸増試験
２００９年１０月～２０１０年１０月にかけて、１６名の患者がフェーズＩの用量漸増試験に登録された。いずれの投与量においてもＤＬＴは認められなかった（Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙオンライン版に掲載されている補遺、表Ｓ１、下記の表５参照）。しかし、ＤＬＴ観察期間終了後、最初の３名の患者のうち１名がアビツズマブとは無関係の原因で死亡したため、７５０ミリグラムの用量で更に３名の患者が登録された。４人目の追加患者は、１人の患者が予定されていた７５０ミリグラムの用量ではなく、２５０ミリグラムのアビツズマブを投与されたために登録された。アビツズマブに関連するＴＥＡＥは稀で、グレード３の低カリウム血症（２５０ミリグラム投与時に１名）及びグレード３の頻脈性不整脈（１０００ミリグラム投与時に１名）が含まれていた（Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ誌オンライン版に掲載されている補遺、表Ｓ１、下記表５参照）。また、グレード４の好中球減少、グレード３／４の血小板減少、グレード３／４のヘモグロビン減少は認められず、腎機能、肝機能、肺機能、心拍出量の悪化もなかった。アビツズマブの投与期間は、一般的に用量の増加と共に長くなり、相対用量強度の中央値は全ての用量レベルで９６％より高かった。セツキシマブとイリノテカンの相対的な用量強度は維持された。全ての用量で抗腫瘍効果が確認され、ＣＲが１例、ＰＲが４例、病勢が安定した患者が７例いた（Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙオンライン版に掲載されている補足表Ｓ１、下記表５参照）。これらのデータを総合すると、アビツズマブとセツキシマブ、イリノテカンの併用療法を、更に評価することが正当化される。

【0084】

【表5】

^*全患者が、ＭＣＣＣに対して、オキサリプラチン／フルオロピリミジンを含む第一選択治療を受けた。
^†２人の患者は評価不能であった。
^‡４２日以上のＣＲ、ＰＲ、又はＳＤと定義された。
ＣＲ、完全奏功；ＥＣＯＧ、米国東海岸癌臨床試験グループ；ＰＲ、部分奏功；ＳＤ、安定期；ＴＥＡＥ、治療に起因する有害事象

【0085】

無作為化フェーズＩＩ試験
患者
２０１１年４月～２０１３年１０月にかけて、合計２１６名の患者が登録され、無作為化された。コンソート図を、図４に示す。
試験期間の中央値（範囲）は、アビツズマブ５００ミリグラム治療群、アビツズマブ１０００ミリグラム治療群、ＳｏＣ治療群で、それぞれ１３．６（０．１－２６．２）ヵ月、１２．３（０．５－２７．３＋）ヵ月、１１．６（０．６－２８．８＋）ヵ月であった。アビツズマブの全投与期間の中央値は４．１カ月、相対用量強度の中央値は９８％だった。３つの治療群の患者のベースライン特性は、概ねバランスが取れていた（表６）。安全性。アビツズマブ治療群では全例、ＳｏＣ治療群では１例（９９％）を除く全例でＴＥＡＥが発生し（表５）、グレード３以上のＴＥＡＥは、アビツズマブ５００ミリグラム治療群、アビツズマブ１０００ミリグラム治療群、ＳｏＣ治療群のそれぞれ７２％、７８％、６７％の患者に認められた。これらのデータは、アビツズマブがセツキシマブ及びイリノテカンとの併用において許容できる安全性プロファイルを有することを示している。しかし、アビツズマブ５００ミリグラム及び１０００ミリグラム治療群の１７％及び２９％の患者に発生したグレード３以上のＴＥＡＥを含む、アビツズマブ群のＴＥＡＥの約５０％は、治験責任医師の評価に基づき、アビツズマブとの関連性が疑われた；アビツズマブに関連する重篤なＴＥＡＥは、アビツズマブ５００ミリグラム治療群では、発熱性好中球減少症、大腸炎、直腸膿瘍、末梢神経障害、及び急性腎不全；アビツズマブ１０００ミリグラム治療群では好中球減少症、消化管感染症、及び深部静脈血栓症が、それぞれ１名の患者に発生した。データカットオフ時点で、アビツズマブ５００ミリグラム治療群、アビツズマブ１０００ミリグラム治療群、ＳｏＣ治療群で、それぞれ３９名（５４％）、３５名（５１％）、４５名（６２％）の患者が死亡した。アビツズマブ１０００ミリグラム治療群１名及びＳｏＣ治療群１名の死亡者２名は、いずれも敗血症で、イリノテカンに関連していると考えられ、３２／３９名、３０／３５名、３８／４５名の死亡者は、疾患の進行に起因するものであった。有効性。ＩＴＴ集団の有効性データを表７及び図５Ａ－Ｂに示す。これらのデータによると、ＰＦＳ及び奏効率（ＲＲ）は治療群間で差がなかった。ＯＳの中央値は、アビツズマブ５００ミリグラム［ＨＲ ０．８３（９５％ＣＩ ０．５４－１．２８）対ＳｏＣ］で１５．０カ月［９５％信頼区間（ＣＩ）１０．９－１９．２］、アビツズマブ１０００ミリグラム［ＨＲ ０．８０（９５％ＣＩ ０．５２－１．２５）対ＳｏＣ］で１４．４カ月（９５％ＣＩ ９．８－１９．３）、ＳｏＣで１１．６カ月［９５％ＣＩ ９．８－１５．７］だった（図５Ｂ）。

【0086】

【表6】

【0087】

【表7】

【0088】

バイオマーカー分析
αｖインテグリンの発現と転帰の関係をより深く理解するために実施した、事前に計画された探索的バイオマーカー分析では、インテグリンαｖβ６の高発現［調査対象集団（ｎ＝１９７）の中央値以上、ヒストスコア中央値＝７０］が示唆され（Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙオンライン版に掲載されている図、図６参照）ＳｏＣ治療群におけるＯＳの負の予後を左右し、アビツズマブ治療によるＯＳの延長を予測する可能性が示唆された（図７及び８、表７）。また、インテグリンαｖβ６が高発現している腫瘍の患者では、ＲＲが改善される可能性が示唆された。対照的に、インテグリンαｖβ６の発現が低い（中央値以下）腫瘍の患者は、アビツズマブ治療の恩恵を受けないようだった（表７）。腫瘍インテグリンαｖβ６のヒストスコアが０であった患者（ｎ＝２４）の数が少なすぎたため、この集団の分析はできなかった。パンαｖインテグリンレベル（ヒストスコア中央値＝２３０）の予測及び予後判定は、インテグリンαｖβ６と同様のようであったが、インテグリンαｖβ５のレベルは予測及び予後判定にはならず、インテグリンαｖβ３及びαｖβ８は発現していなかった（データは示さず）。

【0089】

考察
ＣＲＣ患者を対象としたインテグリン阻害剤の臨床試験としては、初めての報告である。セツキシマブとイリノテカンの併用療法にアビツズマブを追加した場合も、オキサリプラチンの前治療を受けた非選択的なｍＣＲＣ集団では、その効果は限定的だったが、事前に設定した探索的バイオマーカー解析では、インテグリンαｖβ６が高発現している腫瘍を持つ患者では、アビツズマブがＯＳを向上させる可能性が示唆された。ＯＳは、癌の臨床試験におけるゴールドスタンダードの評価項目で［１４， １５： 欧州医薬品庁 Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ ｏｎ ｔｈｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｉｎ ｍａｎ． Ｉｎ 欧州医薬品委員会（ｅｄ）， Ｌｏｎｄｏｎ， ＵＫ： Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ Ａｇｅｎｃｙ ２０１３； Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ． Ｇｕｉｄａｎｃｅ ｆｏｒ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ： ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ ｅｎｄｐｏｉｎｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｐｐｒｏｖａｌ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇｓ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ． Ｉｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ ＵＳＤｏＨａＨ （ｅｄ）， Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， ＭＤ， ＵＳＡ： Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ２００７］、本試験ではＯＳは副次的な評価項目であったが、探索的なバイオマーカーのデータは、腫瘍αｖβ６が高発現している患者集団を対象に、ＯＳを主要評価項目とした更なる試験が必要であることを示唆している。適切な患者集団を選択するためのコンパニオン診断テストの開発は、更なる試験のために非常に重要である。その結果、インテグリンαｖβ６が高発現している患者は低い患者に比べてＯＳの中央値が約４ヶ月短く［ＨＲ １．９５ （９５％ ＣＩ １．０４－３．６７）］、早期のｍＣＲＣ患者でインテグリンαｖβ６の発現量が高いとＯＳが有意に低下するという過去の研究結果と一致していた。［７： Ｂａｔｅｓ ＲＣ， Ｂｅｌｌｏｖｉｎ ＤＩ， Ｂｒｏｗｎ Ｃ ｅｔ ａｌ． Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｇｒｉｎ β６ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｄｅｆｉｎｅｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｉｎｄｉｃａｔｏｒ ｏｆ ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ ｃｏｌｏｎ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ ２００５； １１５： ３３９－３４７］。しかし、アビツズマブ治療により、腫瘍インテグリンαｖβ６が高発現している患者の死亡リスクは、対照群に比べて最大５９％減少する可能性がこの解析により示唆された。また、予後不良のバイオマーカーで選別された本集団では、アビツズマブ治療によりＰＦＳ及びＲＲが増加したようである。一方、インテグリンαｖβ５レベルと臨床転帰との関連性は示されず、これまでの研究では、ＣＲＣにおけるインテグリンαｖβ５の予後又は予測に関わる役割は報告されていない。

【0090】

早期癌の研究では、インテグリンαｖβ６が上皮間葉転換（ＥＭＴ）に関与し、ＣＲＣなどの上皮性腫瘍の浸潤挙動を亢進することが示唆されている［１６： Ｂａｔｅｓ ＲＣ． Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ： ｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｌｐｈａｖｂｅｔａ６ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ （ＥＭＴ）． Ｃｅｌｌ Ｃｙｃｌｅ ２００５； ４： １３５０－１３５２］。ＥＭＴ工程は転移にも関与している可能性があり、肝転移又はリンパ節転移で見られる高レベルのインテグリンαｖβ６の存在は、ｍＣＲＣの攻撃性にインテグリンαｖβ６が関与していることを示唆している［７， １６： Ｂａｔｅｓ ＲＣ， Ｂｅｌｌｏｖｉｎ ＤＩ， Ｂｒｏｗｎ Ｃ ｅｔ ａｌ． Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｇｒｉｎ β６ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｄｅｆｉｎｅｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｉｎｄｉｃａｔｏｒ ｏｆ ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ ｃｏｌｏｎ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ ２００５； １１５： ３３９－３４７； Ｂａｔｅｓ ＲＣ． Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ： ｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｌｐｈａｖｂｅｔａ６ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ （ＥＭＴ）． Ｃｅｌｌ Ｃｙｃｌｅ ２００５； ４： １３５０－１３５２］。

【0091】

更に、インテグリンαｖβ６は、結腸癌の進行過程で腫瘍の成長及び浸潤を促す潜在的なトランスフォーミング成長因子－β（ＴＧＦ－β）の活性化因子であることが知られている［１６： Ｂａｔｅｓ ＲＣ． Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ： ｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｌｐｈａｖｂｅｔａ６ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ （ＥＭＴ）． Ｃｅｌｌ Ｃｙｃｌｅ ２００５； ４： １３５０－１３５２］。従って、インテグリンαｖβ６を阻害する治療法は、浸潤及び転移する腫瘍細胞を標的とする可能性があり、本試験でαｖβ６が高発現している腫瘍患者においてアビツズマブによるＯＳ及びＰＦＳの改善が認められた理由と考えられる。ＴＧＦ－βは免疫機能の制御にも重要な役割を果たしており、インテグリンは本工程に不可欠である［１７： Ｔｒａｖｉｓ ＭＡ， Ｓｈｅｐｐａｒｄ Ｄ． ＴＧＦ－ｂｅｔａ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｉｍｍｕｎｉｔｙ． Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１４； ３２： ５１－８２］。アビツズマブによる腫瘍インテグリンαｖβ６の阻害が抗腫瘍免疫応答に対するＴＧＦ－βの阻害作用を低下させるという可能性は、ＰＦＳ及びＲＲよりもＯＳに対するアビツズマブの効果を説明できるかもしれない。本研究には、データを解釈する際に考慮する必要がある複数の限界が存在する。鍵となるのは、本試験がフェーズＩＩ試験であること、並びにバイオマーカーのデータは、仮説が立てられているとはいえ、事前に計画された探索的分析に基づくことである。アビツズマブの治療を受けたｍＣＲＣ患者におけるαｖインテグリンの予後及び予測値を確認するために、更なる試験を実施する必要がある。結論として、今回のデータは、インテグリンを標的とした治療が、特定のｍＣＲＣ患者の治療に役立つ可能性を示している。探索的解析では、インテグリンαｖβ６が高発現している腫瘍を有する患者において、（使用しない場合に）予後が悪いであろう患者にアビツズマブを用いた治療が有効である可能性が示された。ｍＣＲＣにおけるアビツズマブの有効性を更に評価するために、本集団を対象とした更なる試験、及びコンパニオン診断試験の開発が必要となる。

【0092】

参考文献

【実施例2】

【0093】

転移性大腸癌患者（ｍＣＲＣ）におけるアビツズマブによるインテグリン標的のための患者選択。無作為化されたフェーズＩ／ＩＩのPOSEIDON試験のレトロスペクティブ分析。

【0094】

導入
インテグリン、特にαｖβ６を標的とすることは、ｍＣＲＣの治療に対する新しいアプローチである。組織化学的なデータによると、アビツズマブ（αｖインテグリン）の標的はＣＲＣの腫瘍脈管系及び腫瘍細胞に発現している。
特にαｖβ６インテグリンの発現は、７００人以上のｍＣＲＣ患者で解析されているので、ＣＲＣの予後因子としても提案されている^1-4 （Ｂａｔｅｓ ＲＣ， ｅｔ ａｌ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ． ２００５；１１５（２）：３３９－３４７； Ｎｉｕ Ｚ， ｅｔ ａｌ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｓｃｉ； ２０１４；４：２３； Ｙａｎｇ ＧＹ， ｅｔ ａｌ． Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ． ２０１５；２１（２４）：７４５７－７４６７； Ｅｌｅｚ Ｅ， ｅｔ ａｌ． Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ． ２０１５；２６：１３２－１４０）。結腸癌におけるαｖβ６の高発現は、腫瘍の進行及び患者の生存率の低さの指標であった。
ｍＣＲＣは遺伝的に不均一な疾患であり、結腸の異なる側（左対右）から発生した腫瘍は異なる臨床転帰をもたらすという証拠が増えてきている⁵（Ａｒｎｏｌｄ Ｄ， ｅｔ ａｌ． Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ． ２０１７；２８：１７１３-１７２９）。ｋ－ＲＡＳ野生型（ＷＴ）又はＲＡＳ野生型のｍＣＲＣ患者を対象に、異なるクラスの標的薬剤の活性を比較した従来の分析から、原発性腫瘍の位置（サイド）が予後を左右する可能性が示唆された。
αｖβ６のレトロスペクティブな本データ解析では、POSEIDON試験の探索的データに基づき、右側と左側のｋ－ＲＡＳ ＷＴ ＣＲＣの違いを調査し、アビツズマブを投与した場合に、右側ｍＣＲＣと左側ｍＣＲＣの患者とで転帰に違いがあるかどうかを検討している。

【0095】

背景
第二選択ｋ－ＲＡＳ ＷＴ ｍＣＲＣにおけるアビツズマブとセツキシマブ及びイリノテカンとの併用療法の活性を探るPOSEIDON試験（ＮＣＴ０１００８４７５）⁴（Ｅｌｅｚ Ｅ， ｅｔ ａｌ． Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ． ２０１５；２６：１３２－１４０）では、セツキシマブ＋イリノテカン単独群の解析でも、αｖβ６の高発現が予後不良と関連することが示され、αｖβ６の高発現が負の予後因子であることが示唆されている（図７）。
主要評価項目である包括解析集団における無増悪生存期間（ＰＦＳ）は、前回のPOSEIDON試験で第二選択ｋ－ＲＡＳ ＷＴ（ｋ－ＲＡＳ ＷＴ ｅｘｏｎ－２）ｍＣＲＣにおけるフェーズＩ／ＩＩ試験において、統計的に有意な恩恵を示すことができなかった⁴ （Ｅｌｅｚ Ｅ， ｅｔ ａｌ． Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ． ２０１５；２６：１３２－１４０）。
事前に計画された探索的バイオマーカー解析により、インテグリンαｖβ６の高発現は、対照群では全生存期間（ＯＳ）の負の予後因子となり、アビツズマブ治療下ではＯＳの延長を予測する可能性が示唆された⁴ （Ｅｌｅｚ Ｅ， ｅｔ ａｌ． Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ． ２０１５；２６：１３２－１４０）。
前回のPOSEIDON試験の探索的データ解析では、αｖβ６が高発現している（ヒストスコア ＞ ７０）患者にアビツズマブを投与すると、ＰＦＳ、ＯＳ、及び客観的奏効率（ＯＲＲ）が高くなることが示されて、αｖβ６の高発現（ヒストスコア ＞ ７０）がアビツズマブの奏効を予測することが示唆された（図８）。

【0096】

方法
レトロスペクティブ分析のPOSEIDON試験
ホルマリン固定パラフィン包埋腫瘍組織におけるインテグリンαｖβ６の発現を解析することは、POSEIDON試験の一部であり、事前に計画された患者資料のレトロスペクティブ解析が実行された（αｖβ６の発現が高かったｎ＝９８人、低かったｎ＝９９人）。
POSEIDON試験データのレトロスペクティブ解析を実行し、腫瘍部位（左ｎ＝１５２対右ｎ＝４４、１名は左右両方の大腸癌）とインテグリンαｖβ６の発現量（低値対高値）の影響を相関させ、イリノテカン＋セツキシマブにアビツズマブを追加した場合のＯＳ、ＰＦＳ、及びＯＲＲを解析した（表８、図９Ａ、９Ｂ）。

【0097】

【表8】

ＣＲＣ、大腸癌；ＯＲＲ、客観的奏効率；ＯＳ、全生存期間；ＰＦＳ、無増悪生存期間

【表9】

ＨＲ、ハザード比；ＯＳ、全生存率

【0098】

結論
サンプルサイズは小さいが、左側ｋ－ＲＡＳ ＷＴ ｍＣＲＣで、腫瘍にαｖβ６インテグリンが高発現している患者は、イリノテカン＋セツキシマブにアビツズマブを追加することで、イリノテカン＋セツキシマブ単独と比較して、最も効果がある。
ヒストスコアが低い患者には、効果が見られなかった。
POSEIDON試験では、イリノテカン＋セツキシマブとの併用において、１０００ミリグラムまでのアビツズマブの用量は良好な忍容性を示した⁵ （Ａｒｎｏｌｄ Ｄ， ｅｔ ａｌ． Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ． ２０１７；２８：１７１３-１７２９）。
セカンドラインのPOSEIDON試験の本レトロスペクティブなデータ解析は、第一選択の転移性疾患に対してセツキシマブ又はパニツムマブなどのＥＧＦＲ阻害剤の投与を受けた患者のｋ－ＲＡＳ ＷＴ ｍＣＲＣにおいて、左側と右側で治療効果に差があるという観察結果を裏付けるものである⁵（Ａｒｎｏｌｄ Ｄ， ｅｔ ａｌ． Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ． ２０１７；２８：１７１３-１７２９）。
単独で、αｖβ６インテグリンの発現は、ｍＣＲＣの新たなバイオマーカーとなる可能性がある。

【0099】

参考文献
1. Bates RC, et al. J Clin Invest. 2005;115(2):339-347.2. Niu Z, et al. Cell Biosci; 2014;4:23.
3. Yang GY, et al. World J Gastroenterol. 2015;21(24):7457-7467
4. Elez E, et al. Ann Oncol. 2015; 26:132-140.
5. Arnold D, et al. Ann Oncol. 2017; 28:1713-1729

【実施例3】

【0100】

ＲＡＳ野生型、ＫＲＡＳ野生型、及び／又はＮＲＡＳ野生型の検査方法 Ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＫＲＡＳ ＲＧＱ ＰＣＲキット及び手法
Ｉ．一般情報
デバイスの一般名：リアルタイムＰＣＲ検査
デバイスの商品名： ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＫＲＡＳ ＲＧＱ ＰＣＲキット
デバイスのプロコード： ＯＷＤ
申請者の名前及び住所： ＱＩＡＧＥＮ Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ Ｌｔｄ． Ｓｋｅｌｔｏｎ Ｈｏｕｓｅ， Ｌｌｏｙｄ Ｓｔｒｅｅｔ Ｎｏｒｔｈ Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ， ＵＫ Ｍ１５ ６ＳＨ
諮問建議の日付：なし
市販前承認申請（ＰＭＡ）番号：Ｐ１１００２７
ＦＤＡの承認通知の日付：２０１４年５月２３日
優先性：適用なし
Ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標） ＫＲＡＳ ＲＧＱ ＰＣＲキットの最初のＰＭＡ（Ｐ１１００３０）は２０１２年７月６日に承認され、ＫＲＡＳ遺伝子変異が検出されないという検査結果に基づいて、Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）（セツキシマブ）による治療を受けるＣＲＣ患者の特定を支援することを目的としている。適応を裏付けるＳＳＥＤは、ＣＤＲＨのウェブサイトから入手可能であり、ここに参照として組み込まれている。今回のＰＭＡ（Ｐ１１００２７）は、Ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＫＲＡＳ ＲＧＱ ＰＣＲキットの適応拡大のために提出された。

【0101】

ＩＩ． 使用の適応
Ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＫＲＡＳ ＲＧＱ ＰＣＲキットは、Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ Ｑ ＭＤｘ装置で使用されるリアルタイム定性ＰＣＲ分析で、大腸癌（ＣＲＣ）のホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織から抽出したＤＮＡを用いて、ヒトＫＲＡＳ癌遺伝子の７つの体細胞変異を検出する。Ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＫＲＡＳ ＲＧＱ ＰＣＲキットは、ＫＲＡＳの変異が検出されないという検査結果に基づいてＥｒｂｉｔｕｘ（登録商標）（セツキシマブ）及びＶｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標）（パニツムマブ）による治療を受けるＣＲＣ患者の特定を支援することを目的としている。
ＩＩＩ．禁忌
なし。
ＩＶ．警告及び注意事項
警告及び注意事項は、Ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＫＲＡＳ ＲＧＱ ＰＣＲキットのラベルに記載されている。
Ｖ．デバイスの説明
デバイス全体を構成する要素は、以下の通りである。
・ＱＩＡＧＥＮ ＱＩＡａｍｐ（登録商標）ＤＳＰ ＤＮＡ ＦＦＰＥ Ｔｉｓｓｕｅキット
・ＱＩＡＧＥＮ ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＫＲＡＳ ＲＧＱ ＰＣＲキット
・ＱＩＡＧＥＮ Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ Ｑ ＭＤｘ、ソフトウェアバージョン２．１．０、及びＫＲＡＳアッセイパッケージ

【0102】

検体の調製
ホルマリン固定、パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）ブロックを、スライドガラス上に切片化する。染色したスライドを用いて、腫瘍の含有量が組織の２０％を超え、最小で４平方ミリメートルの腫瘍面積があることを確認する。ＤＮＡを抽出するために、スライドから非染色の組織切片を１枚削り取る。腫瘍の含有量が２０％以下の切片は、マクロダイセクションを実行する。ＱＩＡＧＥＮ ＱＩＡａｍｐ（登録商標）ＤＳＰ ＤＮＡ ＦＦＰＥ Ｔｉｓｓｕｅ Ｋｉｔ及び改変したプロトコルを用いて、大腸癌患者から採取したＦＦＰＥ組織の５マイクロメートルのガラスマウントされた切片から、手作業でＤＮＡを抽出及び精製する。腫瘍組織をキシレンで脱パラフィンし、キシレンをエタノールで抽出する。サンプルは、プロテイナーゼＫを用いた変性条件で１時間かけて溶解される。サンプルを９０℃で加熱し、ゲノムＤＮＡのホルマリン架橋を逆転させる。サンプルをシリカベースの膜に通すことで、ゲノムＤＮＡが膜に結合し、夾雑物が除去される。精製されたゲノムＤＮＡは、膜から２００マイクロリットルの溶出バッファーに溶出される。抽出されたＤＮＡは、－２０℃で保存される。

【0103】

ＰＣＲ増幅及び検出
ＱＩＡＧＥＮ ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＫＲＡＳ ＲＧＱ ＰＣＲ Ｋｉｔには、ＫＲＡＳ癌遺伝子のエクソン２のコドン１２及び１３の変異を増幅して検出する７つの変異特異的反応、並びにＫＲＡＳ癌遺伝子のエクソン４の領域を増幅して検出する１つのコントロール反応の計８つの個別反応用の試薬が含まれている。ＫＲＡＳ ＲＧＱキットの各反応では、ＡＲＭＳ（登録商標）（Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ）対立遺伝子特異的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて、変異していないゲノムＤＮＡ（変異陰性、野生型）をバックグラウンドとして、変異したゲノムＤＮＡテンプレート（変異陽性）を選択的に増幅し、蛍光標識されたスコーピオン（Ｓｃｏｒｐｉｏｎ（登録商標））プライマーと組み合わせて、得られた増幅産物を検出する。ＡＲＭＳ技術は、ＰＣＲプライマーの３’末端のマッチとミスマッチを区別するＴａｑポリメラーゼの能力を利用している。スコーピオンは、ＰＣＲプライマーとプローブを共有結合させた２つの機能を持つ分子である。プローブには、フルオロフォアであるカルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ（登録商標））と、フルオロフォアの蛍光を消させるクエンチャーの両方が組み込まれている。ＰＣＲの際、プローブがＡＲＭＳアンプリコンに結合すると、フルオロフォア及びクエンチャーが分離し、検出可能な蛍光の増加が見られる。
変異特異的試験反応で検査する前に、各ＤＮＡサンプルをコントロール反応で検査して、ＤＮＡの質及び量が分析のワーキングレンジに対して十分かつ適切であるかどうかを判断する必要がある。コントロール反応のＣｔ値は、サンプル中の増幅可能なＤＮＡの総量を評価するために使用され、各サンプルにあらかじめ指定された範囲内でなければならない。
コントロール反応で得られた結果の解釈は、以下の通りである。

【0104】

表１０．コントロール反応で得られた結果の解釈

【表10】

【0105】

コントロール反応ミックスを用いたＤＮＡサンプルの評価に使用した実行パラメータは、変異反応ミックスを用いた変異解析の実行パラメータと同じである。実行パラメータは、以下の通りである：（１）９５℃で１５分間保持し、Ｔａｑポリメラーゼを活性化する。（２）９５℃で３０秒間変性させ、６０℃で１分間アニーリング／伸長させる、という４０サイクルのＰＣＲを実行する。特定の反応からの蛍光が、あらかじめ定義された閾値と交差するＰＣＲサイクルをＣｔ値と定義する。Ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＫＲＡＳ ＲＧＱ Ｋｉｔで検出されるＫＲＡＳ癌遺伝子のコドン１２及び１３における７つの変異を以下に示す。

【0106】

表１１：Ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標） ＫＲＡＳ ＲＧＱ Ｋｉｔで検出されるKRAS癌遺伝子のコドン１２及び１３における７つの変異

【表11】

【0107】

試験コントロール
各テストランには、インターナルコントロール、ポジティブコントロール、及びネガティブコントロールが含まれている必要がある。ネガティブコントロールがテストランが夾雑物を含むことを示す場合（ＦＡＭチャンネルのＣｔ値が設定値を超える場合）、又はポジティブコントロールのＣｔ値が設定範囲外の場合（ＦＡＭ及びＨＥＸチャンネルの両方）、テストランは無効とみなされる。

【0108】

【表12】

【0109】

インターナルコントロール
全ての８つの反応には、インターナルコントロールとして使用される合成された非ＫＲＡＳ関連オリゴヌクレオチドテンプレートの増幅及び検出のために、追加のＡＲＭＳのプライマー及びＨＥＸ標識されたスコーピオンプライマーが含まれている。スコーピオンプライマーは、ＨＥＸで標識されており、コントロール反応及び突然変異反応におけるＦＡＭ標識のスコーピオンと区別することができる。それぞれの反応において、インターナルコントロールの反応は、２つの反応のうち弱い方になるように設計されている。これは、非常に低濃度のインターナルコントロールテンプレートを使用することで実現している。インターナルコントロール反応は、変異特異的な増幅とは独立して働くように設計されているが、強い増幅がある場合、ＦＡＭ反応に「対抗」されて失敗することがある。７つの変異反応のうち１つでもインターナルコントロール反応が失敗した変異陰性の結果は、無効な結果として報告される。インターナルコントロールは、阻害要因又はグロス反応の失敗を検出するために使用される。
ポジティブコントロール
ポジティブコントロールは、Ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＫＲＡＳ ＲＧＱ Ｋｉｔで検出される各変異を表す合成オリゴヌクレオチドの混合物で構成されている。ポジティブコントロールの検出により、キット内の各反応ミックスが正しく機能していることが確認できる。
ネガティブコントロール
Ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＫＲＡＳ ＲＧＱ Ｋｉｔには、ノーテンプレートコントロール（ＮＴＣ）反応として使用するための核酸フリーの水が含まれている。ＮＴＣはネガティブコントロールとしての役割を果たし、分析のセットアップ中に潜在的なコンタミネーションを評価する。

【0110】

機器及びソフトウェア
Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ Ｑ （ＲＧＱ） ＭＤｘ機器は、増幅されたＤＮＡの熱サイクル及びリアルタイム検出のために設計されたリアルタイムＰＣＲ分析装置である。ＲＧＱ ＭＤｘ機器は、ＰＣＲ反応を制御及び監視し、ＰＣＲ結果に基づいて変異状態を判定するソフトウェアを搭載している。ＰＣＲ反応時の熱サイクル用の遠心式ローターデザインを採用しており、各チューブが空気の流れるチャンバー内で回転する。サンプルは、ソフトウェアが決定したＰＣＲサイクルの異なるフェーズを開始するサイクルにしたがって、低質量空気オーブンで加熱及び冷却され、各ＰＣＲランで合計４０サイクルが実行される。ＲＧＱ ＭＤｘ機器において、発光ダイオードによってチャンバーの底部からサンプルが励起される。エネルギーは、チューブの底部にある薄い壁を介して伝達される。放射された蛍光は、チャンバー側面の放射光フィルターを通過し、光電子増倍管で検出される。検出は、各チューブが検出光学系に整列する際に実施され、チューブは１５０ミリ秒ごとに励起／検出光学系を通過して回転する。蛍光シグナルは、ＰＣＲ反応の進行をモニターする。本装置は最大６つの光学チャンネル（６つの励起光源及び６つの検出フィルター）に対応しているが、Ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＫＲＡＳ ＲＧＱ Ｋｉｔではこれらのうち２つのチャンネル（ＦＡＭチャンネル及びＨＥＸチャンネル）のみを使用している。
Ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＫＲＡＳ Ａｓｓａｙ Ｐａｃｋａｇｅは、「Ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＫＲＡＳ ＱＣ Ｌｏｃｋｅｄ Ｔｅｍｐｌａｔｅ」（ＤＮＡサンプル評価用）及び「Ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＫＲＡＳ Ｌｏｃｋｅｄ Ｔｅｍｐｌａｔｅ」（ＫＲＡＳ変異の検出用）の２つのテンプレートで構成されている。これらのテンプレートには、ＰＣＲの実行パラメータが含まれており、結果を算出する。コントロール反応ミックスを用いたＤＮＡサンプルの評価と、変異反応ミックスを用いたＫＲＡＳ変異の検出の両方に、同じ実行パラメータが使用される。
ＲＧＱ ＭＤｘ機器のソフトウェアは、リアルタイムの分析手順をサポートしている。本ソフトウェアは、Ｃｔ値を決定し、ΔＣｔ値を計算し、これらを上述のようにソフトウェアに組み込まれた変異特異的カットオフ値と比較する。フラグ／警告システムがソフトウェアに組み込まれており、分析における潜在的な問題をユーザーに通知し、無効なテストラン又は有効なテストラン内の無効なサンプル（不適切なレベルのＤＮＡ又はインターナルコントロールの失敗）を示す。無効なラン又は有効なサンプルの結果は、報告されない。ＫＲＡＳ ＲＧＱキットのユーザーは、Ｃｔ値又はΔＣｔ値を見ることができず、ソフトウェアが報告する変異状態のコールを見るだけなので、変異状態を本質的に判断することはできない。

【0111】

結果の解釈
コントロール反応のＣｔはサンプル内の増幅可能なＫＲＡＳテンプレートの総量を反映し、対立遺伝子特異的反応のＣｔはサンプル内のＫＲＡＳ変異の量を反映する。コントロール反応と対立遺伝子特異的反応のＣｔ値の差（ΔＣｔ）は、サンプル内の変異の割合を示している。ΔＣｔ値は、サンプル中の変異体ＤＮＡの割合が増えると０に近づく。ΔＣｔ値は、サンプル中の変異体ＤＮＡの割合が減少すると増加する（ポジティブコールvs.ネガティブコールの閾値に近づく）。ΔＣｔ測定値が変異反応のΔＣｔカットオフ値を超えると、分析は「変異は検出されなかった」と報告する（例えば、７つの変異に対して陰性）。
各サンプルについて、ＲＧＱ ＭＤｘ機器ソフトウェアにより計算が実施され、７つの変異特異的反応のそれぞれについてΔＣｔ値（ＦＡＭチャンネル）が決定される。
［変異反応Ｃｔ値］－［コントロール反応Ｃｔ値］＝ΔＣｔ
Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ Ｑソフトウェアは、あらかじめ設定された分析用Ｃｔ及びΔＣｔ値に基づいて、ＤＮＡサンプルの変異状態を定性的に判断し、どのサンプルにどのような変異が含まれているかを報告する。各サンプルには、７つの可能なΔＣｔ値が存在する（変異ごとに１つ）。これらの値は、ＲＧＱ ＭＤｘ機器のソフトウェアに組み込まれた事前に設定された仕様（カットオフ値）と比較され、サンプルが変異陽性又は陰性か、若しくは変異がある場合にはどの変異が存在するかが判断される。変異反応のΔＣｔ値が、その反応のカットオフ値以下の場合、そのサンプルはＫＲＡＳ変異陽性である。分析結果は、「変異陽性」、「変異は検出されなかった」、「無効」、又はランコントロールが失敗した場合は「ランコントロール失敗」と表示される。変異陽性のサンプルについては、特定の変異が報告されている。

【0112】

【表13】

【0113】

ＶＩ．代替手段及び手順
大腸癌の治療には、手術、高周波焼灼療法、凍結手術、化学療法、放射線療法、及び標的療法などのいくつかの他の代替手段がある。それぞれの選択肢には、長所及び短所がある。患者は、これらの代替手段について医師と十分に話し合い、希望及びライフスタイルに合った方法を選択する必要がある。
ベクティビックス（パニツムマブ）による標的療法の効果が期待できる患者を選択するために、大腸癌組織のＫＲＡ癌遺伝子の変異を検出する検査には、他にＦＤＡ（米国食品医薬品局）で認可又は承認された代替手段はない。

【0114】

ｃｏｂａｓ（登録商標）ＫＲＡＳ変異検査
Ｉ．一般情報
デバイスの一般名：リアルタイムＰＣＲ検査
デバイスの商品名：ｃｏｂａｓ（登録商標）ＫＲＡＳ変異検査
デバイスのプロコード：ＯＷＤ
申請者の名前及び住所： Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｉｎｃ． （ＲＭＳ） ４３００ Ｈａｃｉｅｎｄａ Ｄｒｉｖｅ Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ， ＣＡ ９４５８８－２７２２
諮問建議の日付：なし
市販前承認申請（ＰＭＡ）番号：Ｐ１４００２３
承認通知の日付：２０１５年５月７日
優先性：適用なし
ＩＩ．使用の適応
ｃｏｂａｓ（登録商標）４８００システムで使用するｃｏｂａｓ（登録商標）ＫＲＡＳ変異検査は、ホルマリン固定パラフィン包埋のヒト大腸癌（ＣＲＣ）腫瘍組織由来のＤＮＡに含まれるＫＲＡＳ遺伝子のコドン１２及び１３における７つの体細胞変異を検出するためのリアルタイムＰＣＲ検査である。本検査は、変異が検出されないという結果に基づいてＥｒｂｉｔｕｘ（登録商標）（セツキシマブ）又はＶｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標）（パニツムマブ）による治療が適応となるＣＲＣ患者を特定するための補助として使用することを目的としている。検体の処理には、手動でのサンプル調製にはｃｏｂａｓ（登録商標）ＤＮＡサンプル調製キットを、自動での増幅及び検出にはｃｏｂａｓ ｚ ４８０アナライザーを使用する。
ＩＩＩ．禁忌
本検査の使用に関する既知の禁忌は存在しない。
ＩＶ．警告及び注意事項
警告及び注意事項は、ｃｏｂａｓ（登録商標）ＫＲＡＳ変異検査の製品ラベルに記載されている。
Ｖ．デバイスの説明
ｃｏｂａｓ（登録商標）ＫＲＡＳ遺伝子変異検査は、２つの試薬キット及びシステムプラットフォームで構成されている。ｃｏｂａｓ（登録商標）４８００システムのプラットフォームの詳細は、後述の「機器及びソフトウェア」に記載されている。試薬キットは、検査の２つの主要工程を実施するために必要な試薬を提供する。
１．ｃｏｂａｓ（登録商標）ＤＮＡサンプル調製キットは、ホルマリン固定、パラフィン包埋組織（ＦＦＰＥＴ）からゲノムＤＮＡを得るための手作業による検体調製用の試薬を提供する。
２．ｃｏｂａｓ（登録商標）ＫＲＡＳ変異検査キットは、ＫＲＡＳ変異の自動リアルタイムＰＣＲ増幅及び検出用の試薬を提供する。

【0115】

検体の調製
ＦＦＰＥＴの検体は、ガラス繊維への核酸の結合に基づいた手動の検体前処理であるｃｏｂａｓ（登録商標）ＤＮＡサンプル調製キットを用いて処理され、ゲノムＤＮＡが分離される。ＦＦＰＥＴ検体の脱パラフィン処理された５マイクロメートルの切片を、プロテアーゼ及びカオトロピックを含む溶解／結合バッファーを用いて高温でインキュベートすることにより、核酸を放出し、放出されたゲノムＤＮＡをＤＮａｓｅから保護しながら溶解する。その後、イソプロパノールを溶解混合物に加え、ガラス繊維のフィルターインサート付きのカラムで遠心分離する。遠心分離の際、ゲノムＤＮＡはグラスファイバーフィルターの表面に結合する。塩分、タンパク質、及び他の細胞の不純物など、結合していない物質は、遠心分離によって取り除かれる。
吸着した核酸を洗浄した後、水溶液で溶出する。ゲノムＤＮＡの量を分光光度計で測定し、２ナノグラム／マイクロリットルの固定濃度に調整する。５０ナノグラムのゲノムＤＮＡを含む溶出液２５マイクロリットルを、ｃｏｂａｓ（登録商標）ＫＲＡＳ変異検査キットの各活性化マスターミックス試薬２５マイクロリットルと合わせて９６ウェルプレートに入れる。コントロール及びサンプルを９６ウェルプレートに加えた後、プレートをｃｏｂａｓ ｚ ４８０アナライザーに移し、自動増幅及び検出を実施する。

【0116】

ＰＣＲ増幅
ターゲット選択及び増幅
ｃｏｂａｓ（登録商標）ＫＲＡＳ変異検査キットは、ヒトゲノムＤＮＡのＫＲＡＳコドン１２及び１３を含むエクソン２の８５塩基対の配列を定義するプライマーを使用している。プライマー間のＫＲＡＳ遺伝子の領域でのみ増幅され、ＫＲＡＳ遺伝子全体は増幅されない。以下の表１４に、意図した標的変異を示す。

【0117】

【表14】

【0118】

ターゲットの増幅には、サーマス種 Ｚ０５ ＤＮＡ ポリメラーゼの誘導体を使用している。まず、ＰＣＲ反応混合物を加熱してゲノムＤＮＡを変性させ、プライマーの標的配列を露出させる。混合物が冷えると、上流側及び下流側のプライマーがターゲットのＤＮＡ配列にアニーリングする。Ｚ０５ ＤＮＡポリメラーゼは、２価の金属イオン及び過剰なｄＮＴＰの存在下で、アニーリングした各プライマーを伸長し、２本目のＤＮＡ鎖を合成する。これでＰＣＲの第１サイクルが完了し、ＫＲＡＳ遺伝子の標的となる８５塩基対の領域を含む二本鎖ＤＮＡが得られる。本工程を数サイクル繰り返し、各サイクルでアンプリコンＤＮＡの量を効果的に２倍にする。
ｃｏｂａｓ（登録商標）ＫＲＡＳ変異検査では、ＡｍｐＥｒａｓｅ（ウラシル－Ｎ－グリコシラーゼ）酵素及びデオキシウリジン三リン酸（ｄＵＴＰ）を使用することで、検体からの標的核酸の選択的な増幅が実施される。ＡｍｐＥｒａｓｅ酵素は、デオキシウリジンを含むＤＮＡ鎖の破壊を触媒するが、チミジンを含むＤＮＡは破壊しない。デオキシウリジンは天然のＤＮＡには存在しないが、反応ミックス試薬のヌクレオチド三リン酸の１つとしてチミジン三リン酸の代わりにｄＵＴＰを使用しているため、アンプリコンには常に存在する。従って、アンプリコンのみデオキシウリジンを含む。デオキシウリジンは、ターゲットＤＮＡを増幅する前に、汚染されたアンプリコンをＡｍｐＥｒａｓｅ酵素で破壊しやすくする。ＡｍｐＥｒａｓｅ酵素は、５５℃以上の温度では不活性であるため、サーマルサイクリングのステップを通して、ターゲットアンプリコンを破壊することはない。

【0119】

自動化されたリアルタイム変異検出
ｃｏｂａｓ ｚ ４８０アナライザーでは、特定のＰＣＲ産物から発生する蛍光の量をリアルタイムで測定する。増幅後、ｃｏｂａｓ（登録商標）ＫＲＡＳ変異検査を使用して生成された各アンプリコンは、４０℃～９５℃まで温度を変化させる融解プログラム（ＴａｑＭｅｌｔ）の対象となる。野生型の特異的プローブは、低温下では野生型及び変異型の両方のアンプリコンに結合する。結合状態では、プローブの５’末端のフルオレセインレポーター色素が３’末端のクエンチャー色素から十分に離れているため、蛍光色素が特定の波長の光を発することができる。温度が上昇すると、プローブがアンプリコンから解離し、クエンチャー色素が蛍光色素に近づき、測定可能な蛍光の量が減少する。プローブと完全に一致したアンプリコン（ワイルドタイプ）は、１つ以上のミスマッチを持つアンプリコン（ミュータント）よりも高い温度で溶解する。各温度増分における蛍光量を測定し、融解温度を算出する。コドン１２及び１３の変異ＫＲＡＳ配列の存在は、融解温度が特定の範囲内にある場合に検出できる。コドン１２及びコドン１３のサイレント・ミューテーション（アミノ酸の変化がない）の検出を避けるために、改変された塩基がユニバーサル塩基として機能し、野生型の範囲内の融解温度が得られる。

【0120】

計測機器及びソフトウェア
ｃｏｂａｓ（登録商標）４８００システムは、コア・ソフトウェア・エンジン及びユーザー・インターフェースを提供するｃｏｂａｓ（登録商標）４８００システムＳＲ２．１ソフトウェアによって制御されている。本コアシステムのソフトウェアは、分析対象物に特化した分析パッケージソフトウェア（ＡＳＡＰ）を使用して、システム上で複数の分析を実行できるように設計されている。試験システムのコンポーネントであるｃｏｂａｓ ｚ ４８０アナライザーにも、コア・ソフトウェアによって駆動される独自の機器制御ソフトウェアが内蔵されている。これらのソフトウェアコンポーネントは全て、設計管理工程及び関連するソフトウェア標準に基づいて開発された。
専用の制御装置コンピュータは、ｃｏｂａｓ（登録商標）４８００ ＳＲ２．１システムソフトウェアを実行し、ｃｏｂａｓ ｚ ４８０及び検査室情報システム（ＬＩＳ）へのインターフェースを提供する。また、コンピュータは、ＡＳＡＰで蛍光信号を処理し、検査結果を管理されたデータベースに保存する。本システムでは、ユーザーは各検体の試験作業指示書を手動で作成できる。ｃｏｂａｓ ｚ ４８０のメンテナンス、検査項目の選択、検体ＩＤの入力、試薬並びにマイクロウェルプレートのバーコード入力、マイクロウェルプレートのセット、及び検査の開始など、検査に必要な手順をソフトウェアのウィザードが案内する。
ｃｏｂａｓ（登録商標）４８００システムは、処理中及びｃｏｂａｓ ｚ ４８０分析装置における分析中に各検体を追跡する。熱実行が完了すると、ＡＳＡＰはデータ解析アルゴリズムを使用して蛍光データを処理し、コントロールの有効性を評価し、アッセイ固有の結果解釈ロジックを使用して結果を判定する。本ソフトウェアは、印刷可能なＰＤＦ形式の結果レポート、グラフィカル・ユーザー・インターフェース（ＧＵＩ）ベースの結果ビューア、及びＬＩＳへの結果エクスポートの３つの形式でユーザーに結果を提供する。ｃｏｂａｓ（登録商標）４８００システムのソフトウェアには、有効なＫＲＡＳデータ解析アルゴリズムが含まれており、サンプルの結果及びランの有効性を判断できる。

【0121】

結果の解釈
融解温度（Ｔｍ）及び融解曲線のピークの高さ（ＰＨ）は解析ソフトウェアによって計算され、実行が有効であるかどうかを判断するために、全ての変異コントロール、ネガティブコントロール、及びキャリブレーターの反応からの値が使用される。ランが有効であれば、解析ソフトはＴｍ及びＰＨを許容範囲と比較して評価することで、検体の有効性及び変異状態を判断する。
変異Ｔｍが観察された検体は「変異検出」と報告され、変異反応が報告される（表１５）。可能な変異の数及び融解技術の性質上、コドン内の特定の変異は指定されていない。
変異Ｔｍが観察されない検体は「変異は検出されなかった」と報告される（表１５）。コドン１２／１３反応のウェルが無効な検体は、「無効」と報告される。範囲外のＴｍが観察された検体（野生型の範囲でも変異型の範囲でもない）は「無効」と報告される。有効な検体には、少なくとも１つのメルトピーク（変異型、野生型、又はその両方）が存在する。メルトピークがない検体は、無効である。

【0122】

【表15】

【0123】

試験コントロール及びキャリブレーター
外部ランコントロールとして、ＫＲＡＳ変異コントロール（ＭＣ）及びＫＲＡＳネガティブコントロールが１つずつ用意されている。プローブによる野生型コドン１２及び１３の検出は、内部の完全なプロセスコントロールとして機能する。
１．ＫＲＡＳ変異コントロール：変異コントロールは、二重変異線状化ＤＮＡプラスミドと野生型細胞株のゲノムＤＮＡの混合である。このプラスミドには、ＫＲＡＳのコドン１２（Ａｓｐ， ＧＡＴ）及びＫＲＡＳのコドン６１（Ｈｉｓ， ＣＡＣ）の変異配列が含まれている。
変異コントロールは全ての実行操作に含まれており、サンプルの調製を除く全てのステップのプロセスコントロールとして機能する。変異コントロール反応は、実行が有効とみなされるために、ＫＲＡＳ野生型及びＫＲＡＳコドン１２／１３変異体の融解温度がそれぞれの許容範囲内にある必要がある。
２．ＫＲＡＳネガティブコントロール：ネガティブコントロールは完全なプロセスコントロールであり、ｃｏｂａｓ（登録商標）ＤＮＡサンプル調製キット及びｃｏｂａｓ（登録商標）ＫＲＡＳ変異キットの試薬又は工程のコンタミネーションの可能性を確認するためのものである。ランが有効とみなされるために、融解ピークの高さの値が、あらかじめ設定されたカットオフ値以下でなければならない。ネガティブコントロール用の試薬は、提供されていない。ネガティブコントロールとして、ＤＮＡ検体希釈物（ＤＮＡ ＳＤ）を使用する。
３．ＫＲＡＳキャリブレーター：ＫＲＡＳキャリブレーターは、野生型のゲノムＤＮＡで構成されており、各実行間及び装置間の温度変動を補正するための融解温度（Ｔｍ）のキャリブレーターとして機能する。野生型のピークＴｍは、解析ソフトウェアによって、変異状態の解析に先立って、変異体コントロール及び全ての検体のＴｍ値を調整するために使用される。

【0124】

ＶＩ．代替手段及び手順
現在、セツキシマブ（アービタックス）又はパニツムマブ（ベクティビックス）による治療に適格性のある患者を選択する際に、ホルマリン固定、パラフィン包埋ＣＲＣ組織のＫＲＡＳ遺伝子変異状態を検査するためのＦＤＡ承認の代替手段が１つある。すなわち、ＱＩＡＧＥＮ ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ ＫＲＡＳ ＲＧＱ ＰＣＲキットがＰＭＡ Ｐ１１００３０及びＰ１１００２７として承認されている。

【0125】

ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ ＣＤｘ（登録商標）
Ｉ．一般情報
デバイスの一般名：次世代シーケンサーによるオンコロジーパネル、体細胞、又は生殖細胞系列のバリアント検出システム
デバイスの商品名：ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ ＣＤｘ（登録商標）
デバイスのプロコード：ＰＱＰ
申請者の名前及び住所：Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， Ｉｎｃ． １５０ Ｓｅｃｏｎｄ Ｓｔｒｅｅｔ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ， ＭＡ ０２１４１
諮問建議の日付：なし
市販前承認申請（ＰＭＡ）番号：Ｐ１７００１９
ＦＤＡの承認通知の日付：２０１７年１１月３０日
ブレークスルーデバイス：２０１６年６月１５日時点の承認ブレークスルーデバイスステータス［従前の迅速アクセスプログラムExpedited Access Pathway（ＥＡＰ）］であると認められた理由は、（１）生命を脅かす、若しくは不可逆的に衰弱させる疾患又は状態を診断することを目的としていること、（２）既存の合法的に販売されている技術に対して臨床的に意味のある優位性を提供する画期的な技術を表していること、及び（３）その装置の入手が患者の最善の利益になることである。

【0126】

ＩＩ．使用の適応
ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ ＣＤｘ（登録商標）（Ｆ１ＣＤｘ）は、ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）腫瘍組織標本から分離したＤＮＡを用いて、３２４遺伝子の置換、挿入、及び欠失変化（インデル）並びにコピー数変化（ＣＮＡ）、及び特定の遺伝子の再配列、マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）並びに腫瘍遺伝子変異量（ＴＭＢ）などのゲノムシグネチャーを検出する、次世代シーケンシングに基づく体外診断装置である。本検査は、承認された治療薬の添付文書に基づき、表１６に記載された標的治療薬による治療が有効である可能性のある患者を特定するためのコンパニオン診断を目的としている。また、Ｆ１ＣＤｘは、固形悪性新生物の癌患者に対して、腫瘍学の専門的なガイドラインに沿って、資格を有する医療従事者が使用する腫瘍変異プロファイリングを提供することを目的としている。Ｆ１ＣＤｘ試験は、ファウンデーション・メディシン社で実施される単一サイト分析である。

【0127】

【表16】

【0128】

ＩＩＩ．禁忌
既知の禁忌は存在しない。
ＩＶ．警告／注意事項及び制限事項
警告／注意事項及び制限事項は、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ ＣＤｘ分析のラベルに記載されている。
Ｖ．デバイスの説明
ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ ＣＤｘ（Ｆ１ＣＤｘ）は、ファウンデーション・メディシン社で実施される単一サイト分析である。本分析には、ホルマリン固定、パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）腫瘍標本から抽出したＤＮＡを検査するための試薬、ソフトウェア、機器、及び手順が含まれる。本分析では、通常のＦＦＰＥバイオプシー又は外科的切除標本からの単一ＤＮＡ抽出法を採用し、５０～１０００ナノグラムのＤＮＡは、全ゲノムショットガンライブラリの構築及びハイブリダイゼーションに基づく３０９の癌関連遺伝子の全コーディングエクソン、１つのプロモーター領域、１つのノンコーディングＲＮＡ（ｎｃＲＮＡ）、及び３４の一般的に再配列された遺伝子の選択されたイントロン領域（そのうち２１はコーディングエクソンも含む）の捕捉に供される（Ｆ１ＣＤｘに含まれる遺伝子の全リストは、下記の表１７及び表１８を参照）。従って、本分析では合計３２４の遺伝子の変化が検出される。Ｉｌｌｕｍｉｎａ（登録商標）Ｈｉ Ｓｅｑ ４０００プラットフォームを用いて、ハイブリッドキャプチャーで選択されたライブラリを高い均一な深さでシーケンスする（中央値で５００倍以上のカバレッジ、エクソンの９９％以上のカバレッジで１００倍以上を目標としている）。配列データは、塩基置換、インデル、コピー数の変化（増幅及びホモ接合の欠失）、特定のゲノム再配列（遺伝子融合など）を含む、全てのクラスのゲノム変化を検出するように設計された、カスタマイズされた解析パイプライン（Analysis Pipeline）を用いて処理される。更に、マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）及び腫瘍遺伝子変異量（ＴＭＢ）などのゲノムシグネチャーも報告される。

【0129】

置換、挿入欠失（インデル）、及びコピー数変化（ＣＮＡ）を検出するために、Ｆ１ＣＤに含まれる完全長エクソンコード領域を有する遺伝子

【表17-1】

【表17-2】

【0130】

【表18】

【0131】

試験結果
試験の結果には、以下が含まれる。
カテゴリー１：使用目的の表１６に記載されたＣＤｘクレーム
カテゴリー２：臨床的意義が確認された癌変異
カテゴリー３：臨床的意義が期待される癌変異
使用目的の説明の表１６に記載されているもの以外のゲノム所見（すなわちカテゴリー２及び３）は、特定の治療製品のラベル使用を規定するものでもなければ、決定的なものでもない。
試験キットの内容
本検査には、サンプル送付キットが含まれており、注文した検査機関に送られる。送付キットには、以下の構成物品が含まれる。
・検体の調製手順
・送付方法
・返送用ラベル
機器
Ｆ１ＣＤｘ分析は、下記の表１９に示されているように、シリアル番号で管理された機器で実施することを意図している。全ての機器は、ファウンデーション・メディシン社（ＦＭＩ）がＦＭｌ社の品質システムに基づいて認定している。

【0132】

【表19】

【0133】

試験工程
Ｆ１ＣＤｘの分析工程に含まれる全ての分析試薬は、ＦＭＩによって認定され、医療機器の品質システム規制（ＱＳＲ）に準拠している。
Ａ．検体の収集及び調製
ホルマリン固定、パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）された腫瘍標本は、標準的な病理学的手法に基づいて収集及び調製される。ＦＦＰＥ検体は、染色していないスライドとして、又はＦＦＰＥブロックとして受け取ることができる。
分析開始前に、ヘマトキシリン・エオジン（Ｈ＆Ｅ）染色したスライドを用意し、有資格病理医による検査を受け、疾患のオントロジーを確認すると共に、分析の実施に十分な組織（０．６立方メートル）、腫瘍の含有量（２０％以上の腫瘍）、十分な有核細胞が存在することを確認する。
Ｂ．ＤＮＡ抽出
病理検査に合格した検体は、ＤＮＡ抽出のために待ち行列に入れられ、ＦＦＰＥ組織からプロテイナーゼＫバッファーで消化して細胞を溶解した後、９６ウェルのＫｉｎｇＦｉｓｈｅｒ（商標）ＦＬＥＸ磁性粒子プロセッサーを使って自動精製を実施する。
ＤＮＡ抽出終了後、ライブラリ構築（ＬＣ）に先立ち、付属のラムダＤＮＡスタンダード（インビトロジェン社）を用いてＱｕａｎｔ－ｉＴ（商標）ＰｉｃｏＧｒｅｅｎ（登録商標）蛍光測定法により二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）を定量する。品質管理（ＱＣ）のために十分なＤＮＡを確保し、ＬＣを進めるためには、サンプルから最低５５ナノグラムのゲノムＤＮＡが得られる必要がある。
Ｃ．ライブラリ構築
ライブラリ構築（ＬＣ）は、ＤＮＡを５０～１０００ナノグラムに正規化することから始まる。正規化されたＤＮＡサンプルは、Ｃｏｖａｒｉｓ ＬＥ２２０を用いた適応型集束音響ソニケーションにより、ランダムに約２００塩基対までせん断（断片化）された後、１．８倍量のＡＭＰｕｒｅ（登録商標）ＸＰ Ｂｅａｄｓ（Ａｇｅｎｃｏｕｒｔ（登録商標））を用いて精製される。固相可逆的固定化（ＳＰＲＩ）精製と、それに続くＮＥＢＮｅｘｔ（登録商標）試薬（ＮＥＢ社のカスタム充填キット）を用いた末端修復、ｄＡ添加、及びライゲーション用ミックスを含むライブラリ構築は、９６ウェルプレート（エッペンドルフ）を用いて、再現性及びライブラリ収量を最大化するために、Ｂｒａｖｏ Ｂｅｎｃｈｂｏｔ（アジレント）で「ビーズあり」のプロトコルで実行する。インデックス付き（６塩基対バーコード）シーケンスライブラリは、ＨｉＦｉ（商標）（Ｋａｐａ社）で１０サイクルのＰＣＲ増幅を実行し、その後１．８倍のＳＰＲＩ精製を実行する。ＱＣ用の精製及び希釈を実行する。
ＬＣに続いて、モレキュラーデバイス社のＭｕｌｔｉｍｏｄｅ Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ Ｍ２プレートリーダーでＱｕａｎｔ－ｉＴ（商標）ＯｌｉＧｒｅｅｎ（登録商標）ｓｓＤＮＡ分析キット（ライフテクノロジーズ社）を用いて、精製したライブラリの一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）を定量することにより、ＱＣ手順を実施する。不十分なシーケンスライブラリが得られたライブラリは、失敗となる。

【0134】

Ｄ．ハイブリッドキャプチャー
ハイブリッドキャプチャー（ＨＣ）は、各ライブラリを５００～２０００ナノグラムに正規化することから始まる。その後、正規化されたサンプルは、個別に合成された５'ビオチン化ＤＮＡ １２０塩基対オリゴヌクレオチドのプールを５０倍以上のモル比で使用して、溶液ハイブリダイゼーションを実施する。本ベイトは、ヒトゲノムの約１．８メガベースを対象としており、癌関連遺伝子３０９個の全コードエクソン、３５個の遺伝子のイントロン、又は非コード領域、及びゲノム全体に存在する３，５００を越える一塩基多型（ＳＮＰ）を含む。ベイトは、ターゲットのエクソン（６０塩基対オーバーラップ）及びイントロン（２０塩基対オーバーラップ）をカバーする１２０塩基対のＤＮＡ配列間隔を重ね合わせて設計されており、ターゲットごとに最低３つのベイトが割り当てられている。イントロニックベイトは、ＵＣＳＣゲノムのＲｅｐｅａｔＭａｓｋｅｒトラックで定義された繰り返し要素をフィルタリングしている。
ハイブリダイゼーション後、ライブラリ－ベイト二重鎖は常磁性ＭｙＯｎｅ（商標）ストレプトアビジンビーズ（インビトロジェン）に捕捉され、２５℃の１Ｘ ＳＳＣで１回、５５℃の０．２５Ｘ ＳＳＣで４回の洗浄により標的でない物質が除去される。ＰＣＲマスターミックスを加え、洗浄したビーズから捕捉したライブラリを直接増幅（１２サイクル）する。３ １２サイクルの増幅後、サンプルは１．８Ｘ ＳＰＲＩ精製される。ＱＣ用の精製及び希釈を実行する。
ハイブリッドキャプチャーの品質管理は、モレキュラーデバイス社のＭｕｌｔｉｍｏｄｅ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ２プレートリーダーでＱｕａｎｔ－ｉＴ（商標）ＰｉｃｏＧｒｅｅｎ（登録商標）ｄｓＤＮＡ分析キット（ライフテクノロジーズ社）を使用してｄｓＤＮＡ収量を測定することで実施する。１４０ナノグラム未満のシーケンスライブラリしか得られなかった場合は、失敗となる。
Ｅ．シークエンシング
シークエンシングは、パターン化されたフローセル技術を採用したＩｌｌｕｍｉｎａ ｃＢｏｔでオフボードクラスタリングを用いて実行し、単一のＤＮＡテンプレートからモノクローナルクラスターを生成した後、Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＨｉＳｅｑ ４０００で逐次合成によるシーケンス反応（ＳＢＳ）ケミストリーを用いてシークエンシングを実施する。蛍光標識された３’ブロックｄＮＴＰ及びポリメラーゼがフローセルに取り込まれ、成長するヌクレオチド鎖が生成され、レーザーで励起される。組み込まれた塩基の放射光色をカメラで捉え、それを切断する。その後、ターミネーターを除去すると、ヌクレオチドが自然な形に戻り、ポリメラーゼが成長中の鎖に別の塩基を加えることができるようになる。新しいシーケンスサイクルごとに、蛍光標識された３’ブロックｄＮＴＰｓの新しいプールが追加される。新しいサイクルでは、成長する鎖に新しい塩基が追加されるたびに色が変わる。本方法では、幾百万ものクローンコピーの個別のクラスターのＤＮＡを並行して配列できる。

【0135】

Ｆ．シーケンス分析
シーケンスデータの分析には、ＦＭＩ社が開発した独自のソフトウェアを使用する。配列データは、バローズ・ウィーラーアライナ（ＢＷＡ） ｖ０．５．９を用いて、ヒトゲノム（ｈｇ１９）にマッピングされている。ＰＣＲの重複リードの除去及びシーケンスメトリックの収集は、Ｐｉｃａｒｄ １．４７ （ｈｔｔｐ：／／ｐｉｃａｒｄ．ｓｏｕｒｃｅｆｏｒｇｅ．ｎｅｔ）及びＳＡＭｔｏｏｌｓ ０．１．１２ａを用いて実施している。ローカルアライメントの最適化は、ゲノム分析ツールキット（ＧＡＴＫ） １．０．４７０５を用いて実施している。バリアントコーリングは、試験の対象となるゲノム領域でのみ実施される。
塩基置換の検出はベイジアン手法を用いて行われ、組織固有の事前期待値を組み込むことで、低い変異対立遺伝子頻度（ＭＡＦ）で新規の体細胞変化を検出し、ホットスポット部位の変化に対する感度を高めることができる。マッピングの質が低い（マッピングの質＜２５）、又はベースコールの質が低い（ベースコールの質≦２）リードは破棄される。最終的にはＭＡＦ≧５％（ホットスポットではＭＡＦ≧１％）で判定される。
インデルを検出するために、ド・ブラウン法を用いて、各ターゲットエクソンのデノボ・ローカルアセンブリを実施する。主要なステップは、以下の通りである。
・少なくとも１つのリードがターゲット領域にマッピングされている、全リードペアを収集する。
・各リードを、構成するｋ－ｍｅｒに分解し、存在する全ての非参照ハプロタイプ候補の列挙可能なグラフ表現（ド・ブラウン）を構築する。
・生のリードデータについて各代替ハプロタイプのサポートを評価し、変異候補を生成する。全てのリードは、ギャップ無しアライメントによって各ハプロタイプ候補と比較され、各リードについて最も一致する候補にリード「票」が割り当てられる。候補間のつながりは、それぞれのハプロタイプを既にサポートしているリードの数で重み付けしてリード票を分割することで明らかにされる。本工程は、「勝者」ハプロタイプが選ばれるまで繰り返し実施される。
・候補を参照ゲノムとアラインメントし、変異コールを報告する。
インデル候補のフィルタリングは、塩基置換と同様に、ＧＡ ＴＫに実装されているように、リピート部分の対立遺伝子頻度の閾値を経験的に上げ、隣接する配列の品質メトリクスを用いて実施される。隣り合う塩基のミスマッチの割合＜２５％、隣り合う塩基の平均品質＞２５、サポートリードのミスマッチの平均数≦２。最終的にはＭＡＦ≧５％（ホットスポットではＭＡＦ≧３％）で判定される。
コピー数変化（ＣＮＡ）は、比較ゲノムハイブリダイゼーション（ＣＧＨ）に類似した方法で検出される。まず、全てのエクソン及びゲノム全体のＳＮＰ（約３，５００個）にて得られた配列カバレッジを、工程を適合させた正常対照に対して正規化することで、サンプルの対数比プロファイルを取得する。本プロファイルをセグメント化し、配列決定したＳＮＰの対立遺伝子頻度を用いて解釈することで、各セグメントにおける腫瘍の純度及びコピー数を推定する。腫瘍の純度が２０％以上のサンプルでは、６コピー以上（３倍体の場合は７コピー以上、４倍体の場合は８コピー以上）のセグメントで増幅が、０コピーでホモ接合性の欠失が確認される。ＥＲＢＢ２の増幅は、２倍体の腫瘍では５コピー以上のセグメントで陽性と呼ばれる。
ゲノムの再配列は、キメラのリードペアを解析することで特定される。キメラリードペアとは、リードが別々の染色体にマッピングされているか、又は１０メガベース（Ｍｂ）超の距離があるリードペアと定義される。ペアは、ペアのゲノム座標によってクラスター化され、少なくとも５つのキメラペア［既知の融合の場合は３つ］を含むクラスターが再配列候補として同定される。候補のフィルタリングは、マッピング品質（クラスター内の平均リードマッピング品質は３０以上でなければならない）及びアライメント位置の分布によって実施される。再配列には、予測される機能（融合遺伝子の生成など）がアノテーションされる。

【0136】

マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）の状態を判定するために、Ｆ１ＣＤｘ分析で十分なカバー率を持つ９５のイントロンホモポリマーのリピート遺伝子座（ヒト参照ゲノムでは１０～２０塩基対の長さ）の長さの変動を分析し、主成分分析によってＭＳＩの総合スコアにまとめた。９５の遺伝子座を用いて、各サンプルについて、遺伝子座にまたがる各リードの繰り返し長さを計算する。繰り返しの長さの平均及び分散を記録する。主成分分析（ＰＣＡ）を用いて、１９０次元のデータを、データの分離度を最大化する１次元（第１主成分）に投影し、ＭＳＩスコアを算出する。各サンプルには、ＭＳＩ－高（ＭＳＩ－Ｈ）又はＭＳＩ－安定（ＭＳＳ）の質的ステータスが割り当てられ、ＭＳＩスコアの範囲は、手動の教師なしクラスタリングによってＭＳＩ－Ｈ又はＭＳＳに割り当てられる。カバー率が低い（中央値２５０倍未満）サンプルには、ＭＳＩ－未知というステータスが割り当てられる。
腫瘍遺伝子変異量（ＴＭＢ）は、５％以上の対立遺伝子頻度で存在する全ての同義及び非同義バリアントをカウントし、一塩基多型データベース（ｄｂＳＮＰ）又はエクソーム集約コンソーシアム（Exome Aggretation Consortium：ＥｘＡＣ）などの既知の生殖細胞系列多型の公開データベースに基づいて、潜在的な生殖細胞系列多型をフィルタリングして測定する。データベースへの問い合わせ後にも依然として存在するさらなる生殖細胞系列の変化は、潜在的な生殖細胞系列状態について評価し、体細胞－生殖細胞／接合性（ＳＧＺ）アルゴリズムを用いてフィルタリングされる。更に、データセットの偏りをなくすために、既知のドライバーとなりそうな変異はフィルターで除外される。その後、得られた変異数を、カウントされた総変異数に対応するコーディング領域、すなわち７９３キロベースで割る。結果の数値は、メガベース単位あたりの変異数（変異数／メガベース）として伝えられる。
解析パイプラインの完了後、バリアントデータはＦＭＩ社が独自に開発したＣＡＴｉソフトウェアアプリケーションに配列品質管理指標とともに表示される。Ｆ１ＣＤｘアッセイは、各サンプルのデータ解析ＱＣの一環として、ＳＮＰプロファイル・アルゴリズムを用いてクロスコンタミネーションを評価し、予期せぬコンタミネーションの結果として起こりうる偽陽性コールのリスクを低減する。配列データは、バイオインフォマティクスのトレーニングを受けた担当者がレビューする。ＱＣ基準を満たさないサンプルは、自動的にホールドされ、リリースされない。

【0137】

Ｇ．レポート作成
承認された結果は、自動化されたソフトウェアによってＣＤｘに関連する情報が注釈され、実験室管理者又は指定された者による承認及びリリースの前に、患者の人口統計情報及びＦＭＩが専門サービスとして提供する追加情報と統合される。
Ｈ．システムに関連するインターナルプロセスコントロール
ポジティブコントロール
各分析の実行には、コントロールサンプルの二重実行が含まれている。コントロールサンプルは、１０種類のＨａｐＭａｐセルラインのプールを含み、ポジティブ変異検出コントロールとして使用される。解析パイプラインが検出するためには、対象領域全体に存在する１００種類の生殖細胞系ＳＮＰが必要である。ＳＮＰが期待通りに検出されなかった場合は、処理エラーの可能性があるため、ＱＣは失敗となる。
感度コントロール
ポジティブコントロールとして使用されるＨａｐＭａｐコントロールプールは、各ランで期待される感度を確保するために、解析パイプラインで検出する必要がある５％～１０％のＭＡＦのバリアントを含むように用意されている。
ネガティブコントロール
サンプルは、ＬＣの段階で分子的にバーコード化されている。完璧な分子バーコード配列を持つリードのみが解析に組み込まれる。分析パイプラインには、各検体のＳＮＰプロファイルを分析して、分子バーコード化の前に発生した可能性のあるコンタミネーションを特定するアルゴリズムが含まれており、１％より低いコンタミネーションを検出することができる。

【0138】

ＶＩ．代替手段及び手順
ＦＦＰＥ腫瘍標本を用いた遺伝子変化の検出については、Ｆ１ＣＤｘ使用目的の説明の表１６に記載されているように、ＦＤＡが承認したコンパニオン診断（ＣＤｘ）の代替手段が存在する。承認されたＣＤｘ試験は、以下の表２０に記載され、詳細は認可又は承認されたコンパニオン診断機器のＦＤＡリスト（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ＭｅｄｉｃａｌＤｅｖｉｃｅｓ／ＰｒｏｄｕｃｔｓａｎｄＭｅｄｉｃａｌＰｒｏｃｅｄｕｒｅｓ／ＩｎＶｉｔｒｏＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ／ｕｃｍ３０１４３１．ｈｔｍ？ｓｏｕｒｃｅ＝ｇｏｖｄｅｌｉｖｅｒｙ）を参照する。

【0139】

【表20】

【0140】

ＶＩＩ．マーケティングの歴史
ファウンデーション・メディシン社は、最初にＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ（登録商標）実験室開発試験（Ｆ１ ＬＤＴ）を設計及び開発し、２０１２年に最初の商用サンプルが試験された。Ｆ１ ＬＤＴは、ＦＦＰＥの腫瘍組織標本におけるゲノム変化の存在を検出するために使用されている。Ｆ１ ＬＤＴは、ＦＤＡの認可又は承認を得ていない。
Ｆ１ＣＤｘ分析は、米国及び他の国では販売されていない。

【0141】

ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＫＲＡＳ ＲＧＱ ＰＣＲキット（２０１２）
Ｉ． 一般情報
デバイスの一般名：リアルタイムＰＣＲ検査
デバイスの商品名： ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＫＲＡＳ ＲＧＱ ＰＣＲキット
デバイスのプロコード：ＯＷＤ
申請者の名前及び住所： ＱＩＡＧＥＮ Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ Ｌｔｄ Ｓｋｅｌｔｏｎ Ｈｏｕｓｅ， Ｌｌｏｙｄ Ｓｔｒｅｅｔ Ｎｏｒｔｈ Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ， ＵＫ Ｍ１５ ６ＳＨ
諮問建議の日付：なし
市販前承認申請（ＰＭＡ）番号：Ｐ１１００３０
ＦＤＡの承認通知の日付：２０１２年７月６日
優先性：適用なし
ＩＩ．使用の適応
ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ ＫＲＡＳ ＲＧＱ ＰＣＲキットは、Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ Ｑ ＭＤｘ装置で使用されるリアルタイム定性ＰＣＲ分析で、大腸癌（ＣＲＣ）のホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織から抽出したＤＮＡを用いて、ヒトＫＲＡＳ癌遺伝子の７つの体細胞変異を検出する。ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ ＫＲＡＳ ＲＧＱ ＰＣＲキットは、ＫＲＡＳの変異が検出されないという検査結果に基づいて、Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）（セツキシマブ）による治療を受けるＣＲＣ患者の特定を支援することを目的としている。
ＩＩＩ．禁忌
なし。
ＩＶ．警告及び注意事項
警告及び注意事項は、Ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＫＲＡＳ ＲＧＱ ＰＣＲキットのラベルに記載されている。
Ｖ．デバイスの説明
デバイス全体を構成する要素は、以下の通りである。
・ＱＩＡＧＥＮ ＱＩＡａｍｐ（登録商標）ＤＳＰ ＤＮＡ ＦＦＰＥ Ｔｉｓｓｕｅキット
・ＱＩＡＧＥＮ ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＫＲＡＳ ＲＧＱ ＰＣＲキット
・ＱＩＡＧＥＮ Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ Ｑ ＭＤｘ、ソフトウェアバージョン２．１．０、及びＫＲＡＳアッセイパッケージ

【0142】

検体の調製
ホルマリン固定、パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）ブロックを、スライドガラスに切片化する。染色したスライドを用いて、腫瘍の含有量が組織の２０％を超え、最小で４平方ミリメートルの腫瘍面積があることを確認する。ＤＮＡを抽出するために、スライドから非染色の組織切片を１枚削り取る。腫瘍の含有量が２０％以下の切片は、マクロダイセクションを実行する。ＱＩＡＧＥＮ ＱＩＡａｍｐ（登録商標）ＤＳＰ ＤＮＡ ＦＦＰＥ Ｔｉｓｓｕｅキット及び改変したプロトコルを用いて、大腸癌患者から採取したＦＦＰＥ組織の５マイクロメートルのガラスマウントされた切片から、手作業でＤＮＡを抽出及び精製する。腫瘍組織をキシレンで脱パラフィンし、キシレンをエタノールで抽出する。サンプルは、プロテイナーゼＫを用いた変性条件で１時間かけて溶解される。サンプルを９０℃で加熱し、ゲノムＤＮＡのホルマリン架橋を逆にする。サンプルをシリカベースの膜に通すことで、ゲノムＤＮＡが膜に結合し、汚染物質が除去される。精製されたゲノムＤＮＡは、膜から２００マイクロリットルの溶出バッファーに溶出される。抽出されたＤＮＡは、－２０℃で保存される。

【0143】

ＰＣＲ増幅及び検出
ＱＩＡＧＥＮ ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＫＲＡＳ ＲＧＱ ＰＣＲキットには、Ｋ－Ｒａｓ癌遺伝子のエクソン２のコドン１２及び１３の変異を増幅して検出する７つの変異特異的反応、並びにＫ－Ｒａｓ癌遺伝子のエクソン４の領域を増幅して検出する１つのコントロール反応の計８つの個別反応用の試薬が含まれている。ＫＲＡＳ ＲＧＱキットの各反応では、ＡＲＭＳ（登録商標）（Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ）対立遺伝子特異的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて、変異していないゲノムＤＮＡ（変異陰性、野生型）をバックグラウンドとして、変異したゲノムＤＮＡテンプレート（変異陽性）を選択的に増幅し、蛍光標識されたＳｃｏｒｐｉｏｎ（登録商標）プライマーと組み合わせて、得られた増幅産物を検出する。ＡＲＭＳ技術は、ＰＣＲプライマーの３’末端のマッチとミスマッチを区別するＴａｑポリメラーゼの能力を利用している。スコーピオンは、ＰＣＲプライマーとプローブを共有結合させた２つの機能を持つ分子である。プローブには、フルオロフォアであるカルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ（商標））と、フルオロフォアの蛍光を消させるクエンチャーの両方が組み込まれている。ＰＣＲの際、プローブがＡＲＭＳアンプリコンに結合すると、フルオロフォア及びクエンチャーが分離し、検出可能な蛍光の増加が見られる。
変異特異的試験反応で検査する前に、各ＤＮＡサンプルをコントロール反応で検査して、ＤＮＡの質及び量が分析のワーキングレンジに対して十分かつ適切であるかどうかを判断する必要がある。コントロール反応のＣｔ値は、サンプル中の増幅可能なＤＮＡの総量を評価するために使用され、各サンプルにあらかじめ指定された範囲内でなければならない。
コントロール反応で得られた結果の解釈は、以下の通りである。

【0144】

表２１．コントロール反応で得られた結果の解釈

【表21】

【0145】

コントロール反応ミックスを用いたＤＮＡサンプルの評価に使用した実行パラメータは、変異反応ミックスを用いた変異解析の実行パラメータと同じである。実行パラメータは、以下の通りである。（１）９５℃で１５分間保持し、Ｔａｑポリメラーゼを活性化する。（２）９５℃で３０秒間変性させ、６０℃で１分間アニーリング／伸長させる４０サイクルのＰＣＲを実行する。特定の反応からの蛍光が、あらかじめ定義された閾値を越えるＰＣＲサイクルをＣｔ値と定義する。
本キットで検出されたＫ－ＲＡＳ癌遺伝子のコドン１２及び１３における７つの変異を以下に示す。

【0146】

表２２．キットで検出されたＫ－ＲＡＳ癌遺伝子のコドン１２および１３における７つの変異

【表22】

【0147】

試験コントロール
各テストランには、インターナルコントロール、ポジティブコントロール、及びネガティブコントロールが含まれている必要がある。ネガティブコントロールが汚染されていることを示す場合（ＦＡＭチャンネルのＣｔ値が設定値を超える場合）、又はポジティブコントロールのＣｔ値が設定範囲外の場合（ＦＡＭ及びＨＥＸチャンネルの両方）、テストランは無効とみなされる。

【0148】

【表23】

【0149】

インターナルコントロール：
８つの反応には、インターナルコントロールとして使用される合成された非Ｋ－Ｒａｓ関連オリゴヌクレオチドテンプレートの増幅及び検出のために、追加のＡＲＭＳプライマー及びＨＥＸ標識されたスコーピオンプライマーが含まれている。スコーピオンプライマーは、ＨＥＸで標識されており、コントロール反応及び突然変異反応におけるＦＡＭ標識のスコーピオンと区別することができる。それぞれの反応において、インターナルコントロールの反応は、２つの反応のうち弱い方になるように設計されている。これは、非常に低濃度のインターナルコントロールテンプレートを使用することで実現している。インターナルコントロール反応は、変異特異的な増幅とは独立して働くように設計されているが、強い増幅がある場合、ＦＡＭ反応に「対抗」されて失敗することがある。７つの変異反応のうち１つでもインターナルコントロール反応が失敗した変異陰性の結果は、無効な結果として報告される。インターナルコントロールは、阻害要因又はグロス反応の失敗を検出するために使用される。
ポジティブコントロール：
ポジティブコントロールは、ＫＲＡＳ Ｋｉｔで検出される各変異を表す合成オリゴヌクレオチドの混合物で構成されている。ポジティブコントロールの検出により、キット内の各反応ミックスが正しく機能していることが確認できる。
ネガティブコントロール：
ＫＲＡＳ ＲＧＱキットには、ノーテンプレートコントロール（ＮＴＣ）反応として使用するための核酸フリーの水が含まれている。ＮＴＣはネガティブコントロールとしての役割を果たし、分析のセットアップ中に潜在的な汚染を評価する。

【0150】

機器及びソフトウェア
Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ Ｑ （ＲＧＱ） ＭＤｘ機器は、増幅されたＤＮＡの熱サイクル及びリアルタイム検出のために設計されたリアルタイムＰＣＲ分析装置である。ＲＧＱ ＭＤｘ機器は、ＰＣＲ反応を制御及び監視し、ＰＣＲ結果に基づいて変異状態を判定するソフトウェアを搭載している。ＰＣＲ反応時の熱サイクル用の遠心式ローターデザインを採用しており、各チューブが空気の流れるチャンバー内で回転する。サンプルは、ソフトウェアが決定したＰＣＲサイクルの異なるフェーズを開始するサイクルにしたがって、低質量空気オーブンで加熱及び冷却され、各ＰＣＲランで合計４０サイクルが実行される。ＲＧＱ ＭＤｘ機器において、発光ダイオードによってチャンバーの底部からサンプルが励起される。エネルギーは、チューブの底部にある薄い壁を介して伝達される。放射された蛍光は、チャンバー側面の放射光フィルターを通過し、光電子増倍管で検出される。検出は、各チューブが検出光学系に整列する際に実施され、チューブは１５０ミリ秒ごとに励起／検出光学系を通過して回転する。蛍光シグナルは、ＰＣＲ反応の進行をモニターする。本装置は最大６つの光学チャンネル（６つの励起光源及び６つの検出フィルター）に対応しているが、ＫＲＡＳキットではこれらのうち２つのチャンネル（ＦＡＭチャンネル及びＨＥＸチャンネル）のみを使用している。
ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ ＫＲＡＳ 分析パッケージは、「ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ ＫＲＡＳ ＱＣ Ｌｏｃｋｅｄ Ｔｅｍｐｌａｔｅ」（ＤＮＡサンプル評価用）及び「ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ ＫＲＡＳ Ｌｏｃｋｅｄ Ｔｅｍｐｌａｔｅ」（ＫＲＡＳ変異の検出用）の２つのテンプレートで構成されている。これらのテンプレートには、ＰＣＲの実行パラメータが含まれており、結果を算出する。コントロール反応ミックスを用いたＤＮＡサンプルの評価と、変異反応ミックスを用いたＫＲＡＳ変異の検出の両方に、同じ実行パラメータが使用される。
ＲＧＱ ＭＤｘ機器のソフトウェアは、リアルタイムの分析手順をサポートしている。本ソフトウェアは、Ｃｔ値を決定し、ΔＣｔ値を計算し、これらを上述のようにソフトウェアに組み込まれた変異特異的カットオフ値と比較する。フラグ／警告システムがソフトウェアに組み込まれており、分析における潜在的な問題をユーザーに通知し、無効なテストラン又は有効なテストラン内の無効なサンプル（不適切なレベルのＤＮＡ又はインターナルコントロールの失敗）を示す。無効なラン又は有効なサンプルの結果は、報告されない。ＫＲＡＳ ＲＧＱキットのユーザーは、Ｃｔ値又はΔＣｔ値を見ることができず、ソフトウェアが報告する変異状態のコールを見るだけなので、変異状態を主観的に判断することはできない。

【0151】

結果の解釈
コントロール反応のＣｔはサンプル内の増幅可能なＫ－Ｒａｓテンプレートの総量を反映し、対立遺伝子特異的反応のＣｔはサンプル内のＫ－Ｒａｓ変異の量を反映する。コントロール反応と対立遺伝子特異的反応のＣｔ値の差（ΔＣｔ）は、サンプル内の変異の割合を示している。ΔＣｔ値は、サンプル中の変異体ＤＮＡの割合が増えると０に近づく。ΔＣｔ値は、サンプル中の変異体ＤＮＡの割合が減少すると増加する（ポジティブコールとネガティブコールの閾値に近づく）。ΔＣｔ測定値が変異反応のΔＣｔカットオフ値を超えると、分析は「変異は検出されなかった」と報告する（例えば、７つの変異に対して陰性）。
各サンプルについて、ＲＧＱ ＭＤｘ機器ソフトウェアにより計算が実施され、７つの変異特異的反応のそれぞれについてΔＣｔ値（ＦＡＭチャンネル）が決定される。
［変異反応Ｃｔ値］－［コントロール反応Ｃｔ値］＝ΔＣｔ
Ｒｏｔｏｒ－Ｇｅｎｅ Ｑソフトウェアは、あらかじめ設定された分析用Ｃｔ及びΔＣｔ値に基づいて、ＤＮＡサンプルの変異状態を定性的に判断し、どのサンプルにどのような変異が含まれているかを報告する。各サンプルには、７つの可能なΔＣｔ値が存在する（変異ごとに１つ）。これらの値は、ＲＧＱ ＭＤｘ機器のソフトウェアに組み込まれた事前に設定された仕様（カットオフ値）と比較され、サンプルが変異陽性又は陰性か、若しくは変異がある場合にはどの変異が存在するかが判断される。変異反応のΔＣｔ値が、その反応のカットオフ値以下の場合、そのサンプルはＫ－Ｒａｓ変異陽性である。分析結果は、「変異陽性」、「変異は検出されなかった」、「無効」、又はランコントロールが失敗した場合は「ランコントロール失敗」と表示される。変異陽性のサンプルについては、特定の変異が報告されている。

【0152】

【表24】

【0153】

ＶＩ．代替手段及び手順
Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）（セツキシマブ）療法が有効な患者を選択するために、大腸癌組織のＫ－Ｒａｓ癌遺伝子の変異を検出する検査には、他にＦＤＡで認可又は承認された代替法は存在しない。

【実施例4】

【0154】

αｖβ６インテグリンの高発現状態の判定
４．方法
４．１免疫組織化学
ＦＦＰＥ組織の免疫組織化学は、インテグリンαｖβ５、αｖβ３、 αｖ、αｖβ６、αｖβ８、及びβ３、並びにビトロネクチン、オステオポンチン、Ｋｉ６７、及びＣＤ３１に対する抗体を用いて実施した。全ての抗インテグリン抗体及び関連する染色プロトコルは、メルクセローノ社から提供された。本プロトコルは、Ｉｎｄｉｖｕｍｅｄ社の実験室にある染色装置に合わせて更に調整された。ビトロネクチン、オステオポンチン、Ｋｉ６７、及びＣＤ３１を検出するための免疫組織化学のプロトコルは、Ｉｎｄｉｖｕｍｅｄ社で事前に確立され、メルクセローノ社の承認を得ている。品質管理として、各ランで細胞株及び組織のＩＨＣを実施した（ランコントロール）。更に、全てのランコントロールにアイソタイプコントロールを用意した。
ＩＨＣ染色には、メルクセローノ社／コーヴァンス社からＦＦＰＥ組織が提供された。ランコントロール及びアイソタイプコントロールとして使用したＦＦＰＥポジティブコントロールサンプル（細胞株又は組織）は、３マイクロメートルの切片にスライスし、正電荷を帯びたＳｕｐｅｒ Ｆｒｏｓｔ（登録商標）Ｕｌｔｒａ Ｐｌｕｓスライドガラス（ロート、カルルスルーエ）にマウントした。ＩＨＣは、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（登録商標）ＸＴ染色装置（ロシュ社／バリアンメディカルシステムズ社）で実施した。ＦＦＰＥスライドを染色装置内で脱パラフィンし、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（登録商標））ＸＴでＣｈｒｏｍｏＭａｐ検出キット（ロシュ・ダイアグノスティックス Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨ）を用いて免疫染色を実施した。詳細な染色方法は、例えば、以下に記載されている。Ｇｏｏｄｍａｎ ＳＬ， Ｇｒｏｔｅ ＨＪ， Ｗｉｌｍ Ｃ． Ｍａｔｃｈｅｄ ｒａｂｂｉｔ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ αｖ－ｓｅｒｉｅｓ ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ ｒｅｖｅａｌ ａ ｎｏｖｅｌ αｖβ３－ＬＩＢＳ ｅｐｉｔｏｐｅ， ａｎｄ ｐｅｒｍｉｔ ｒｏｕｔｉｎｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｏｆ ａｒｃｈｉｖａｌ ｐａｒａｆｆｉｎ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒｓ． Ｂｉｏｌ Ｏｐｅｎ ２０１２； １： ３２９-３４０。その後、界面活性剤を加えたお湯でスライドを手動で洗浄し、最後に水道水のみ及びdH₂Oで洗浄した。脱水のために、スライドを昇順のエタノールシリーズ（２×８０％、２×９６％、２×ａｂｓ． ＥｔＯＨ）に移し、それぞれ１～３分間インキュベートした。脱水後、スライドをキシレン（３×２分）に移し、最後にパーテックスで自動包埋した。

【0155】

４．１．１抗インテグリンαｖβ６
４．１．１．１抗インテグリンαｖβ６抗体及びイソタイプコントロール

【表25】

【0156】

４．２．自動手順／プロトコル
プログラムステップ（ＤｉｓｃｏｖｅｒｙＸＴ）：
手順：Ｒｅｓ ＩＨＣ Ｏｍｎｉ－ＵｌｔｒａＭａｐ ＨＲＰ ＸＴ（プロトコル概要）
ディスカバリーＸＴ染色モジュール
Ｉｎｄｉｖｕｍｅｄ， Ｆａｌｋｅｎｒｉｅｄ ８８， ２０２５１ Ｈａｍｂｕｒｇ
プロトコル番号３０７
プロトコル名：Ａ－ａｖｂ６（１０７）
作成日：２０１３年１０月５日
１ 組織サンプル［選択］
２ パラフィン［選択］
３ デパラフィン化 ［選択］
４ 酵素 ［選択］
５ ＰＲＯＴＥＡＳＥ２（酵素）を１滴滴下し、カバースリップを装着し、１２分間インキュベート
６ 抗体［選択］
７ 抗体オートディスペンス［選択］
８ 標準Ａｂインキュベーション（選択）
９ 抗体２３（抗体）を１滴滴下し、３２分間インキュベート
１０ ＯＭａｐ ａｎｔｉ－Ｒｂ ＨＲＰ（Ｍｕｌｔｉｍｅｒ ＨＲＰ）を１滴滴下し、カバースリップを装着し、１６分間インキュベート
１１ カウンターステイン［選択］
１２ 標準［選択］
１３ ＨＥＭＡＴＯＸＹＬＩＮ ＩＩ（カウンターステイン）を１滴滴下し、カバースリップを装着し、８分間インキュベート
１４ ポスト・カウンターステイン［選択］
１５ BLUING試薬（ポスト・カウンターステイン）を１滴滴下し、カバースリップを装着し、４分間インキュベート
１６ スライド洗浄［選択］

【0157】

４．２．病理組織学的評価
免疫組織化学的に染色されたＦＦＰＥサンプルは、Ｉｎｄｉｖｕｍｅｄ社の病理学者によって評価された。一般的に、病理医は優勢な染色強度を定量化し、染色パターンを特定し、陽性に染色された腫瘍組織の割合を推定する。Ｈ＆Ｅで染色した切片を用いて、腫瘍の量並びに組織の種類を確認した。半定量的な評価用のスコアリングシステムは、以下の通りである。更に、免疫組織化学的に染色された細胞内のコンパートメントを定義した。従って、病理医は、膜（ｍ）、核（ｎ）、及び細胞質（ｃ）を区別していた。必要に応じて、染色パターンのより詳細な説明をコメントに記載した。腫瘍組織の増殖率を解析するために、抗－Ｋｉ６７ ＩＨＣを実施した。病理医は、１００個の腫瘍細胞の評価により、Ｋｉ６７陽性の腫瘍細胞の割合を決定した。

【0158】

４．２．１ヒストスコア（Ｈ－スコア）：腫瘍細胞の評価
免疫組織化学的に染色された腫瘍組織を半定量的に評価するために、Ｈ－スコア分類を適用した。ＭｃＣａｒｔｙ Ｊｒ ＫＳ， Ｍｉｌｌｅｒ ＬＳ， Ｃｏｘ ＥＢ， Ｋｏｎｒａｔｈ Ｊ， ＭｃＣａｒｔｙ Ｓｒ ＫＳ “Ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎａｌｙｓｅｓ： Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ ｕｓｉｎｇ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”．Ａｒｃｈ Ｐａｔｈｏｌ Ｌａｂ Ｍｅｄ １０９： ７１６－７２１ （１９８５）、これらの開示は、好ましくは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。従って、陰性（０）、弱く染まった（１）、中程度に染まった（２）、強く染まった（３）部分は、腫瘍組織の割合として推定する。その後、Ｈスコアを以下のように算出する。
Ｈスコア＝（弱）％＋（中）％×２＋（強）％×３

【表26】

このようにして得られた７０超のヒストスコアが、好ましくは、アビツズマブ治療において「αｖβ６インテグリンの高発現」という基準を満たすための適切な閾値であることが証明されている。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9A】

【図9B】

【配列表】

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【国際調査報告】