特表 2023-514541 組換えＶＷＦの投与による重症のフォンヴィレブランド病患者における過多月経の治療

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-04-06

(54)【発明の名称】組換えＶＷＦの投与による重症のフォンヴィレブランド病患者における過多月経の治療

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/36 20060101AFI20230330BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20230330BHJP

   A61P 7/04 20060101ALI20230330BHJP

   C07K 14/745 20060101ALN20230330BHJP

   C07K 14/755 20060101ALN20230330BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20230330BHJP

【ＦＩ】

A61K38/36

A61P15/00 ZNA

A61P7/04

C07K14/745

C07K14/755

C12N15/12

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022547192

(86)(22)【出願日】2021-02-04

(85)【翻訳文提出日】2022-09-21

(86)【国際出願番号】 US2021016592

(87)【国際公開番号】W WO2021158777

(87)【国際公開日】2021-08-12

(31)【優先権主張番号】62/969,998

(32)【優先日】2020-02-04

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】000002934

【氏名又は名称】武田薬品工業株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100102118

【弁理士】

【氏名又は名称】春名 雅夫

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100188433

【弁理士】

【氏名又は名称】梅村 幸輔

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100214396

【弁理士】

【氏名又は名称】塩田 真紀

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(72)【発明者】

【氏名】プローダー ベッティーナ

(72)【発明者】

【氏名】トゥルオン－ベルトス フランソワーズ

【テーマコード（参考）】

4C084

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA01

4C084AA02

4C084BA01

4C084BA22

4C084CA53

4C084DC10

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA41

4H045BA53

4H045BA56

4H045BA70

4H045BA71

4H045CA40

4H045DA65

4H045DA66

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、フォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）を有する対象における過多月経の治療のための方法であって、治療量の組換えフォンヴィレブランド因子（ｒＶＷＦ）を対象に投与することを含む、方法に関する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

重症のフォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）を有する対象の過多月経出血エピソードを治療するための方法であって、
約３０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇの範囲の少なくとも１用量の組換えフォンヴィレブランド因子（ｒＶＷＦ）を前記対象に投与すること
を含む、前記方法。

【請求項2】

前記過多月経出血エピソードが、軽度の過多月経出血エピソード及び重度の過多月経出血エピソードからなる群から選択される、請求項１に記載の治療の方法。

【請求項3】

前記ＶＷＤが、１型ＶＷＤ、２型ＶＷＤ、及び３型ＶＷＤからなる群から選択される、請求項１または２に記載の治療の方法。

【請求項4】

３０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が前記対象に投与され、前記過多月経出血エピソードが軽度の過多月経出血エピソードである、請求項１～３のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項5】

３０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第２の用量を前記対象に投与することを更に含む、請求項４に記載の治療の方法。

【請求項6】

４０～５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が前記対象に投与され、前記過多月経出血エピソードが軽度の過多月経出血エピソードである、請求項１～３のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項7】

４０～５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第２の用量を前記対象に投与することを更に含む、請求項６に記載の治療の方法。

【請求項8】

前記ＶＷＤが、１型ＶＷＤである、請求項１～７のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項9】

前記ＶＷＤが、２Ａ型、２Ｂ型、２Ｎ型、２Ｍ型ＶＷＤ、及び３型ＶＷＤからなる群から選択される、請求項１～７のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項10】

４０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が前記対象に投与され、前記過多月経出血エピソードが重度の過多月経出血エピソードである、請求項１～３のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項11】

前記ＶＷＤが１型ＶＷＤである、請求項１０に記載の治療の方法。

【請求項12】

前記ＶＷＤが、２Ａ型ＶＷＤ、２Ｂ型ＶＷＤ、２Ｎ型ＶＷＤ、２Ｍ型ＶＷＤ、及び３型ＶＷＤからなる群から選択される、請求項１０に記載の治療の方法。

【請求項13】

複数の用量のｒＶＷＦを前記対象に投与することを更に含む、請求項１０～１２のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項14】

４０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの前記第１の用量と複数の第２の用量とを含む複数の用量を、前記対象に投与することを更に含み、
前記第２の用量のそれぞれが、約３日間、８～１２時間ごとに投与される、
請求項１０～１３のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項15】

４０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの前記第１の用量と複数の第２の用量とを含む複数の用量を、前記対象に投与することを更に含み、
前記第２の用量のそれぞれが、４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦであり、約３日間、８～１２時間ごとに投与される、
請求項１０～１３のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項16】

４０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの前記第１の用量と４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第２の用量とを含む複数の用量を、前記対象に投与することを更に含む、請求項１０～１３のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項17】

前記出血エピソードの残りの期間、３０～７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第３の用量を前記対象に毎日投与することを更に含む、請求項１０～１６のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項18】

前記方法の合計期間が約７日以内である、請求項１０～１７のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項19】

前記対象に投与されるｒＶＷＦの第１の用量が５０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦであり、前記過多月経出血エピソードが重度の過多月経出血エピソードである、請求項１～３のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項20】

前記ＶＷＤが１型ＶＷＤである、請求項１９に記載の治療の方法。

【請求項21】

複数の用量のｒＶＷＦを前記対象に投与することを更に含む、請求項１９または２０に記載の治療の方法。

【請求項22】

５０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの前記第１の用量と複数の第２の用量とを含む複数の用量を、前記対象に投与することを更に含み、
前記第２の用量のそれぞれが、約３日間、８～１２時間ごとに投与される、
請求項１９～２１のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項23】

５０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの前記第１の用量と複数の第２の用量とを含む複数の用量を、前記対象に投与することを更に含み、
前記第２の用量のそれぞれが、４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦであり、約３日間、８～１２時間ごとに投与される、
請求項１９～２１のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項24】

５０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量と４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第２の用量とを含む複数の用量を、前記対象に投与することを更に含む、請求項１９～２１のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項25】

前記出血エピソードの残りの期間、３０～７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第３の用量を前記対象に毎日投与することを更に含む、請求項１９～２４のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項26】

前記方法の合計期間が約７日以内である、請求項１９～２５のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項27】

前記対象に投与される前記ｒＶＷＦの第１の用量が、６０～８０ＩＵ／ｋｇであり、前記ＶＷＤが、２Ａ型ＶＷＤ、２Ｂ型ＶＷＤ、２Ｎ型ＶＷＤ、２Ｍ型ＶＷＤ、及び３型ＶＷＤからなる群から選択される、請求項１９に記載の治療の方法。

【請求項28】

複数の用量のｒＶＷＦを前記対象に投与することを更に含む、請求項１９または２７に記載の治療の方法。

【請求項29】

６０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの前記第１の用量と複数の第２の用量とを含む複数の用量を、前記対象に投与することを更に含み、
前記第２の用量のそれぞれが、約３日間、８～１２時間ごとに投与される、
請求項１９、２７及び２８のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項30】

６０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの前記第１の用量と複数の第２の用量とを含む複数の用量を、前記対象に投与することを更に含み、
前記第２の用量のそれぞれが、４０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦであり、約３日間、８～１２時間ごとに投与される、
請求項１９、２７及び２８のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項31】

６０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量と４０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第２の用量とを含む複数の用量を、前記対象に投与することを更に含む、請求項１９、２７及び２８のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項32】

前記出血エピソードの残りの期間、４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第３の用量を前記対象に毎日投与することを更に含む、請求項１９～３１のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項33】

前記方法の合計期間が約７日以内である、請求項１９～３２のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項34】

組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）を前記対象に投与することを更に含む、請求項１～３３のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項35】

前記ｒＦＶＩＩＩが、１以上の用量のｒＶＷＦと同時にまたは逐次的に投与される、請求項３４に記載の治療の方法。

【請求項36】

前記ｒＦＶＩＩＩが、前記第１の用量及び／または前記第２の用量のｒＶＷＦと同時にまたは逐次的に投与される、請求項３４または３５に記載の治療の方法。

【請求項37】

前記ｒＦＶＩＩＩが、各用量のｒＶＷＦと同時にまたは逐次的に投与される、請求項３４～３６のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項38】

前記ｒＦＶＩＩＩが、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５０ＩＵ／ｋｇの用量で前記対象に投与される、請求項１～３７のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項39】

前記ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩ比が、約１．５：０．８、約１．３：１、約１．１：０．８、約１．５：１、及び約１．１：１．２からなる群から選択されるように、前記ｒＦＶＩＩＩが前記対象に投与される、請求項１～３８のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項40】

重症の１型フォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）を有する対象の重度の過多月経出血エピソードを治療するための方法であって、
ａ）５０～７５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量を前記対象に投与することと、
ｂ）４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの複数の第２の用量を前記対象に投与することであって、前記用量のそれぞれが、ＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルが少なくとも０．３０ＩＵ／ｍＬに維持されるか、またはＶＷＦ：ＧＰＩｂＭもしくはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルが少なくとも０．３０ＩＵ／ｍＬのＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと同等に維持されるように、３日間、８～１２時間ごとに投与される、前記投与することと、
ｃ）前記出血エピソードの残りの期間、４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第３の用量を前記対象に１日１回投与することと
を含み、
ステップ（ａ）～（ｃ）の合計期間が、約７日以内である、前記方法。

【請求項41】

前記ＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルが少なくとも０．４０ＩＵ／ｍＬに維持されるか、または前記ＶＷＦ：ＧＰＩｂＭもしくはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルが少なくとも０．４０ＩＵ／ｍＬの前記ＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと同等に維持される、請求項４０に記載の治療の方法。

【請求項42】

前記ＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルが少なくとも０．５０ＩＵ／ｍＬに維持されるか、または前記ＶＷＦ：ＧＰＩｂＭもしくはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルが少なくとも０．５０ＩＵ／ｍＬの前記ＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと同等に維持される、請求項４０または４１に記載の治療の方法。

【請求項43】

ステップ（ａ）～（ｃ）の前記合計期間が６日以内である、請求項４０～４２のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項44】

ステップ（ａ）～（ｃ）の前記合計期間が５日以内である、請求項４０～４２のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項45】

ステップ（ａ）～（ｃ）の前記合計期間が４日以内である、請求項４０～４２のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項46】

重症の２型または３型フォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）を有する対象の重度の過多月経出血エピソードを治療するための方法であって、
ａ）６０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量を前記対象に投与することと、
ｂ）４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの複数の第２の用量を前記対象に投与することであって、前記用量のそれぞれが、ＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルが少なくとも０．３０ＩＵ／ｍＬに維持されるか、またはＶＷＦ：ＧＰＩｂＭもしくはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルが少なくとも０．３０ＩＵ／ｍＬのＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと同等に維持されるように、３日間、８～１２時間ごとに投与される、前記投与することと、
ｃ）前記出血エピソードの残りの期間、４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第３の用量を前記対象に１日１回投与することと
を含み、
ステップ（ａ）～（ｃ）の合計期間が、約７日以内である、前記方法。

【請求項47】

前記ＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルが少なくとも０．４０ＩＵ／ｍＬに維持されるか、または少なくとも０．４０ＩＵ／ｍＬの前記ＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと同等である前記ＶＷＦ：ＧＰＩｂＭもしくはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルが維持される、請求項４６に記載の治療の方法。

【請求項48】

前記ＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルが少なくとも０．５０ＩＵ／ｍＬに維持されるか、または前記ＶＷＦ：ＧＰＩｂＭもしくはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルが少なくとも０．５０ＩＵ／ｍＬの前記ＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと同等に維持される、請求項４６または４７に記載の治療の方法。

【請求項49】

ステップ（ａ）～（ｃ）の前記合計期間が６日以内である、請求項４６～４８のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項50】

ステップ（ａ）～（ｃ）の前記合計期間が５日以内である、請求項４６～４８のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項51】

ステップ（ａ）～（ｃ）の前記合計期間が４日以内である、請求項４６～４８のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項52】

組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）を前記対象に投与することを更に含む、請求項４６～５１のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項53】

前記ｒＦＶＩＩＩが、少なくとも１用量のｒＶＷＦと同時にまたは逐次的に投与される、請求項５２に記載の治療の方法。

【請求項54】

前記ｒＦＶＩＩＩが、前記第１の用量及び／または前記複数の第２の用量のｒＶＷＦと同時にまたは逐次的に投与される、請求項５２～５３のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項55】

前記ｒＦＶＩＩＩが、前記第１の用量及び前記複数の第２の用量の両方のｒＶＷＦと同時にまたは逐次的に投与される、請求項５２～５４のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項56】

前記対象に投与される前記ｒＦＶＩＩＩの用量が、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５０ＩＵ／ｋｇである、請求項５２～５５のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項57】

前記対象に投与される前記ｒＦＶＩＩＩが、約１．５：０．８、約１．３：１、約１．１：０．８、約１．５：１、及び約１．１：１．２からなる群から選択されるｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩ比である、請求項５２～５６のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項58】

前記ｒＶＷＦが、約２０ｍＵ／μｇ～約１５０ｍＵ／μｇの比活性を有する、請求項１～５７のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項59】

前記対象に投与される前記ｒＦＶＩＩＩ及びｒＶＷＦが、約３：１～約１：５のｒＦＶＩＩＩ凝血活性（ＩＵ ｒＦＶＩＩＩ：Ｃ）対ｒＶＷＦリストセチン補因子活性（ＩＵ ｒＶＷＦ：ＲＣｏ）比を有する、請求項１～５８のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項60】

重症のフォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）を有する対象の過多月経出血エピソードを治療するための方法であって、
約３０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇの範囲の少なくとも１用量の組換えフォンヴィレブランド因子（ｒＶＷＦ）を前記対象に投与すること
を含み、
前記対象が患う前記出血エピソードの期間及び／または重症度が、前記ｒＶＷＦが投与されていない場合において前記対象が患う前記出血エピソードの期間及び／または重症度と比較して低減される、前記方法。

【請求項61】

前記出血エピソードの期間中に、１用量のｒＶＷＦが投与される、請求項１～６０のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項62】

前記出血エピソードの期間中に、２用量のｒＶＷＦが投与される、請求項１～６１のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項63】

前記出血エピソードの期間中に、３用量のｒＶＷＦが投与される、請求項１～６２のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項64】

前記出血エピソードの期間中に、４用量のｒＶＷＦが投与される、請求項１～６３のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項65】

前記出血エピソードの期間中に、５用量以上のｒＶＷＦが投与される、請求項１～６４のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項66】

前記出血エピソードの期間中に前記対象に投与される前記ｒＶＷＦが、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの範囲である、請求項１～６５のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項67】

前記出血エピソードの期間中に前記対象に投与される前記ｒＶＷＦが、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの範囲である、請求項１～６６のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項68】

前記ｒＶＷＦが、配列番号３の配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項１～６７のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項69】

前記ｒＶＷＦが、ｒＶＷＦの断片であり、前記ｒＶＷＦが、配列番号３の配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項１～６８のいずれか１項に記載の治療の方法。

【請求項70】

前記ｒＶＷＦが、ユビキチン化、グリコシル化、治療用または診断用薬剤とのコンジュゲーション、標識化、共有結合による高分子化合物の結合、非加水分解性結合の導入、及び１つ以上のアミノ酸の化学合成による挿入または置換からなる群からの１つ以上の技術を使用して化学修飾されている、請求項１～６９のいずれか１項に記載の治療の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年２月４日に出願された米国仮特許出願第６２／９６９，９９８号の優先権を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に援用される。

【0002】

配列表への参照
本明細書とともに提出された配列表のテキストコピーは、２０２１年２月３日に作成され、００８０７３－５２１５－ＷＯ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔというタイトルで、サイズは５３，９６１バイトであり、その全体が参照により本明細書に援用される。

【背景技術】

【0003】

発明の背景
フォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）などの凝固系疾患は、一般に、凝固カスケード不全に起因する。フォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）は、フォンヴィレブランド因子の欠損によって引き起こされる疾患群を指す。フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）は、血小板同士を凝集させ、血管壁に粘着するのを助けるものであり、これは、正常な血液凝固に必要である。

【0004】

フォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）は、最も一般的な遺伝性出血性疾患であり、推定有病率は１％である（Ｖｅｙｒａｄｉｅｒ Ａ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ）．２０１６，９５（１１）：ｅ３０３８（非特許文献1））。しかしながら、より軽症の病型の疾患を除くと、実際に治療を必要とする患者は約１０，０００人に１人のみである。現在、これらの凝固異常の治療には、正常な凝固因子を含む医薬調製物を使用する補充療法が含まれる。

【0005】

ＶＷＦは、約５００～２０，０００ｋＤの範囲の大きさの一連のマルチマーとして血漿中を循環する糖タンパク質である。ＶＷＦの全長ｃＤＮＡがクローニングされており、そのプロポリペプチドは、全長プレプロＶＷＦのアミノ酸残基２３～７６４に相当する（Ｅｉｋｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ（１９９５）Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ １，７７ ９０（非特許文献2））。ＶＷＦのマルチマー形態は、ジスルフィド結合によって一緒に連結された２５０ｋＤのポリペプチドサブユニットで構成される。ＶＷＦは、損傷を受けた血管壁の内皮下への初期血小板粘着を媒介し、より大きなマルチマーは、高い止血活性を示す。マルチマー化したＶＷＦは、ＶＷＦのＡ１ドメインにおける相互作用を介して血小板表面糖タンパク質Ｇｐ１ｂαに結合し、血小板粘着を促進する。ＶＷＦ上の他の部位は、血管壁への結合を媒介する。このようにして、ＶＷＦは、血小板と血管壁との間に架橋を形成し、これは、高ずり応力の条件下での血小板粘着及び一次止血に不可欠である。通常、内皮細胞は、大きな高分子形態のＶＷＦを分泌し、分子量の小さい形態のＶＷＦは、タンパク質分解による切断から生じる。超巨大分子量のマルチマーは、内皮細胞のワイベルパラーデ小体内に貯蔵され、トロンビン及びヒスタミンなどのアゴニストによって刺激されると放出される。

【0006】

ＶＷＤの患者に対しては、特に大手術での長期間の止血が必要とされることから、ＶＷＦ補充による治療が推奨されている（Ｍａｎｎｕｃｃｉ ＰＭ ａｎｄ Ｆｒａｎｃｈｉｎｉ Ｍ．，Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ，２０１７，２３（２）：１８２－１８７（非特許文献3）；Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｈｅａｒｔ，Ｌｕｎｇ，ａｎｄ Ｂｌｏｏｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．Ｔｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．０８－５８３２；Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００７（非特許文献4））。血漿由来ＶＷＦ（ｐｄＶＷＦ）治療薬は、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）を含有し、反復投与によりＦＶＩＩＩが蓄積する可能性がある。組換えＶＷＦ（ｒＶＷＦ）濃縮製剤（ＶＯＮＶＥＮＤＩ（登録商標）、ＶＥＹＶＯＮＤＩ（登録商標）、ボニコグアルファとしても知られる（Ｔａｋｅｄａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｌｉｍｉｔｅｄ））は、血漿由来ＶＷＦ治療薬と比較して、臨床上の利益が改善されている（Ｔｕｒｅｃｅｋ ＰＬ，ｅｔ ａｌ．Ｈａｍｏｓｔａｓｅｏｌｏｇｉｅ．２００９；２９（ｓｕｐｐｌ １）：Ｓ３２－３８（非特許文献5）；Ｍａｎｎｕｃｃｉ ＰＭ，ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，２０１３；１２２（５）：６４８－６５７（非特許文献6）；Ｇｉｌｌ ＪＣ，ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，２０１５；１２６（１７）：２０３８－２０４６（非特許文献7））。

【0007】

ＶＷＤの女性に最も一般的な症状は、重度月経出血（ＨＭＢ）または過多月経であり、ＶＷＤの女性の最大８０％がこの症状を患い、中等症または重症ＶＷＤの女性の２０％が主にＨＭＢのために子宮摘出を必要とする。過多月経／ＨＭＢは、一般に、症候性鉄欠乏性貧血、心理的ストレス、及び生活の質の低下と関連する。仕事、学校、及び日常生活に悪影響を及ぼし、医療費の増加につながり得る。

【0008】

過多月経の診断及び効果的な治療がないことは、ＶＷＤの女性におけるアンメット・ヘルス・ニーズである。ｒＶＷＦは、重症ＶＷＤを有する成人患者における出血エピソード（ＢＥ）のオンデマンド治療に使用した場合、止血効果及び良好なベネフィット・リスクプロファイルを示した。しかしながら、特にｒＶＷＦを伴う過多月経の管理に関する情報は限られている。したがって、ｒＶＷＦを使用して重症ＶＷＤの女性を治療するための改善された方法が必要とされている。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0009】

【非特許文献1】Ｖｅｙｒａｄｉｅｒ Ａ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ）．２０１６，９５（１１）：ｅ３０３８

【非特許文献2】Ｅｉｋｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ（１９９５）Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ １，７７ ９０

【非特許文献3】Ｍａｎｎｕｃｃｉ ＰＭ ａｎｄ Ｆｒａｎｃｈｉｎｉ Ｍ．，Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ，２０１７，２３（２）：１８２－１８７

【非特許文献4】Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｈｅａｒｔ，Ｌｕｎｇ，ａｎｄ Ｂｌｏｏｄ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．Ｔｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．０８－５８３２；Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００７

【非特許文献5】Ｔｕｒｅｃｅｋ ＰＬ，ｅｔ ａｌ．Ｈａｍｏｓｔａｓｅｏｌｏｇｉｅ．２００９；２９（ｓｕｐｐｌ １）：Ｓ３２－３８

【非特許文献6】Ｍａｎｎｕｃｃｉ ＰＭ，ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，２０１３；１２２（５）：６４８－６５７

【非特許文献7】Ｇｉｌｌ ＪＣ，ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，２０１５；１２６（１７）：２０３８－２０４６

【発明の概要】

【0010】

本開示は、重症のフォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）を有する対象の過多月経出血エピソードを治療するための方法であって、約３０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇの範囲の少なくとも１用量の組換えフォンヴィレブランド因子（ｒＶＷＦ）を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0011】

いくつかの実施形態において、過多月経出血エピソードは、軽度の過多月経出血エピソード及び重度の過多月経出血エピソードからなる群から選択される。

【0012】

いくつかの実施形態において、ＶＷＤは、１型ＶＷＤ、２型ＶＷＤ、及び３型ＶＷＤからなる群から選択される。

【0013】

いくつかの実施形態において、３０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が対象に投与され、過多月経出血エピソードは軽度の過多月経出血エピソードである。いくつかの実施形態において、方法は、３０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第２の用量を対象に投与することを更に含む。

【0014】

いくつかの実施形態において、４０～５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が対象に投与され、過多月経出血エピソードは軽度の過多月経出血エピソードである。いくつかの実施形態において、方法は、４０～５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第２の用量を対象に投与することを更に含む。

【0015】

いくつかの実施形態において、ＶＷＤは、１型ＶＷＤである。いくつかの実施形態において、ＶＷＤは、２Ａ型、２Ｂ型、２Ｎ型、２Ｍ型ＶＷＤ、及び３型ＶＷＤからなる群から選択される。

【0016】

いくつかの実施形態において、４０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が対象に投与され、過多月経出血エピソードは重度の過多月経出血エピソードである。いくつかの実施形態において、ＶＷＤは、１型ＶＷＤである。いくつかの実施形態において、ＶＷＤは、２Ａ型ＶＷＤ、２Ｂ型ＶＷＤ、２Ｎ型ＶＷＤ、２Ｍ型ＶＷＤ、及び３型ＶＷＤからなる群から選択される。

【0017】

いくつかの実施形態において、４０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が対象に投与され、ＶＷＤは１型ＶＷＤである。いくつかの実施形態において、５０～９０ＩＵ／ｋｇのＶＷＦの第１の用量が対象に投与され、ＶＷＤは２Ａ型ＶＷＤ、２Ｂ型ＶＷＤ、２Ｎ型ＶＷＤ、２Ｍ型ＶＷＤ、及び３型ＶＷＤからなる群から選択される。

【0018】

いくつかの実施形態において、記載される方法は、４０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量を含む複数の用量を、対象に投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、各用量は、約３日間、８～１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態において、方法は、４０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量と複数の第２の用量とを含む複数の用量を、対象に投与することを更に含み、第２の用量のそれぞれは、約３日間、８～１２時間ごとに投与される。

【0019】

いくつかの実施形態において、方法は、４０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量と複数の第２の用量とを含む複数の用量を、対象に投与することを更に含み、第２の用量のそれぞれは、４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦであり、約３日間、８～１２時間ごとに投与される。

【0020】

いくつかの実施形態において、方法は、４０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量と４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第２の用量とを含む複数の用量を、対象に投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、方法は、出血エピソードの残りの期間、３０～７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第３の用量を対象に毎日投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、方法の合計期間は、約７日以内である。

【0021】

いくつかの実施形態において、対象に投与されるｒＶＷＦの第１の用量は、５０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦであり、過多月経出血エピソードは重度の過多月経出血エピソードである。

【0022】

いくつかの実施形態において、ＶＷＤは、１型ＶＷＤである。いくつかの実施形態において、方法は、複数の用量のｒＶＷＦを対象に投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、記載される方法は、５０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量と複数の第２の用量とを含む複数の用量を、対象に投与することを更に含み、第２の用量のそれぞれは、約３日間、８～１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態において、方法は、５０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量と複数の第２の用量とを含む複数の用量を、対象に投与することを更に含み、第２の用量のそれぞれは、４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦであり、約３日間、８～１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態において、方法は、出血エピソードの残りの期間、３０～７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第３の用量を対象に毎日投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、方法の合計期間は、約７日以内である。

【0023】

いくつかの実施形態において、対象に投与されるｒＶＷＦの第１の用量は、６０～８０ＩＵ／ｋｇであり、ＶＷＤは、２Ａ型ＶＷＤ、２Ｂ型ＶＷＤ、２Ｎ型ＶＷＤ、２Ｍ型ＶＷＤ、及び３型ＶＷＤからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、方法は、複数の用量のｒＶＷＦを対象に投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、方法は、６０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量と複数の第２の用量とを含む複数の用量を、対象に投与することを更に含み、第２の用量のそれぞれは、約３日間、８～１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態において、方法は、６０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量と複数の第２の用量とを含む複数の用量を、対象に投与することを更に含み、第２の用量のそれぞれは、４０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦであり、約３日間、８～１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態において、方法は、６０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量と４０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第２の用量とを含む複数の用量を、対象に投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、方法は、出血エピソードの残りの期間、４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第３の用量を対象に毎日投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、方法の合計期間は、約７日以内である。

【0024】

いくつかの実施形態において、方法は、組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）を対象に投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、ｒＦＶＩＩＩは、１以上の用量のｒＶＷＦと同時にまたは逐次的に投与される。

【0025】

いくつかの実施形態において、ｒＦＶＩＩＩは、第１の用量及び／または第２の用量のｒＶＷＦと同時にまたは逐次的に投与される。いくつかの実施形態において、ｒＦＶＩＩＩは、各用量のｒＶＷＦと同時にまたは逐次的に投与される。いくつかの実施形態において、ｒＦＶＩＩＩは、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５０ＩＵ／ｋｇの用量で対象に投与される。

【0026】

いくつかの実施形態において、ｒＦＶＩＩＩは、当該ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩ比が、約１．５：０．８、約１．３：１、約１．１：０．８、約１．５：１、及び約１．１：１．２からなる群から選択されるように、対象に投与される。

【0027】

一態様において、重症の１型フォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）を有する対象の重度の過多月経出血エピソードを治療するための方法であって、（ａ）５０～７５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量を対象に投与することと、（ｂ）４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの複数の第２の用量を対象に投与することであって、用量のそれぞれは、ＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルが少なくとも０．３０ＩＵ／ｍＬに維持されるか、またはＶＷＦ：ＧＰＩｂＭもしくはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルが少なくとも０．３０ＩＵ／ｍＬのＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと同等に維持されるように、３日間、８～１２時間ごとに投与される、投与することと、（ｃ）出血エピソードの残りの期間、４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第３の用量を対象に１日１回投与することとを含み、ステップ（ａ）～（ｃ）の合計期間は、約７日以内である、方法が提供される。

【0028】

いくつかの実施形態において、ＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルは、少なくとも０．４０ＩＵ／ｍＬに維持されるか、またはＶＷＦ：ＧＰＩｂＭもしくはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルは、少なくとも０．４０ＩＵ／ｍＬのＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと同等に維持される。

【0029】

いくつかの実施形態において、ＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルは、少なくとも０．５０ＩＵ／ｍＬに維持されるか、またはＶＷＦ：ＧＰＩｂＭもしくはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルは、少なくとも０．５０ＩＵ／ｍＬのＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと同等に維持される。

【0030】

いくつかの実施形態において、ステップ（ａ）～（ｃ）の合計期間は、６日以内である。いくつかの実施形態において、ステップ（ａ）～（ｃ）の合計期間は、５日以内である。いくつかの実施形態において、ステップ（ａ）～（ｃ）の合計期間は、４日以内である。

【0031】

いくつかの態様において、重症の２型または３型フォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）を有する対象の重度の過多月経出血エピソードを治療するための方法であって、（ａ）６０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量を対象に投与することと、（ｂ）４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの複数の第２の用量を対象に投与することであって、用量のそれぞれは、ＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルが少なくとも０．３０ＩＵ／ｍＬに維持されるか、またはＶＷＦ：ＧＰＩｂＭもしくはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルが少なくとも０．３０ＩＵ／ｍＬのＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと同等に維持されるように、３日間、８～１２時間ごとに投与される、投与することと、（ｃ）出血エピソードの残りの期間、４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第３の用量を対象に１日１回投与することとを含み、ステップ（ａ）～（ｃ）の合計期間は、約７日以内である、方法が提供される。

【0032】

いくつかの実施形態において、ＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルは、少なくとも０．４０ＩＵ／ｍＬに維持されるか、または少なくとも０．４０ＩＵ／ｍＬのＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと同等であるＶＷＦ：ＧＰＩｂＭもしくはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルが維持される。いくつかの実施形態において、ＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルは、少なくとも０．５０ＩＵ／ｍＬに維持されるか、またはＶＷＦ：ＧＰＩｂＭもしくはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルは、少なくとも０．５０ＩＵ／ｍＬのＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと同等に維持される。

【0033】

いくつかの実施形態において、ステップ（ａ）～（ｃ）の合計期間は、６日以内である。いくつかの実施形態において、ステップ（ａ）～（ｃ）の合計期間は、５日以内である。いくつかの実施形態において、ステップ（ａ）～（ｃ）の合計期間は、４日以内である。

【0034】

いくつかの実施形態において、方法は、組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）を対象に投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、ｒＦＶＩＩＩは、少なくとも１用量のｒＶＷＦと同時にまたは逐次的に投与される。いくつかの実施形態において、ｒＦＶＩＩＩは、第１の用量及び／または複数の第２の用量のｒＶＷＦと同時にまたは逐次的に投与される。いくつかの実施形態において、ｒＦＶＩＩＩは、第１の用量及び複数の第２の用量の両方のｒＶＷＦと同時にまたは逐次的に投与される。いくつかの実施形態において、対象に投与されるｒＦＶＩＩＩの用量は、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５０ＩＵ／ｋｇである。

【0035】

いくつかの実施形態において、ｒＦＶＩＩＩは、ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩ比が、約１．５：０．８、約１．３：１、約１．１：０．８、約１．５：１、及び約１．１：１．２からなる群から選択されるように、対象に投与される。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩ比は、約１．５：０．８である。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩ比は、約１．３：１である。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩ比は、約１．１：０．８である。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩ比は、約１．５：１である。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦ対ＦＶＩＩＩ比は約１．１：１．２である。

【0036】

いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦは、約２０ｍＵ／μｇ～約１５０ｍＵ／μｇの比活性を有する。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦは、約２０ＩＵ／ｍｇタンパク質～約１５０ＩＵ／ｍｇタンパク質の比活性を有する。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦは、約２０ＩＵ ｒＶＷＦ：ＲＣｏ／ｍｇタンパク質～約１５０ＩＵ ｒＶＷＦ：ＲＣｏ／ｍｇタンパク質、または別のＶＷＦ活性測定を使用して決定した場合のそれと同等の値の比活性を有する。

【0037】

いくつかの実施形態において、ｒＦＶＩＩＩ及びｒＶＷＦは、ｒＦＶＩＩＩ凝血活性（ＩＵ ｒＦＶＩＩＩ：Ｃ）対ｒＶＷＦリストセチン補因子活性（ＩＵ ｒＶＷＦ：ＲＣｏ）が約３：１～約１：５の比になるように、対象に投与される。

【0038】

また、重症のフォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）を有する対象の過多月経出血エピソードを治療するための方法であって、約３０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇの範囲の少なくとも１用量の組換えフォンヴィレブランド因子（ｒＶＷＦ）を対象に投与することを含み、対象が患う出血エピソードの期間及び／または重症度が、ｒＶＷＦが投与されていない場合において対象が患う出血エピソードの期間及び／または重症度と比較して低減される、方法が提供される。

【0039】

記載される方法のいずれかのいくつかの実施形態において、出血エピソードの期間中に、１用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、出血エピソードの期間中に、２用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、出血エピソードの期間中に、３用量のｒＶＷＦが投与される。多くの実施形態において、出血エピソードの期間中に、４用量のｒＶＷＦが投与される。他の実施形態において、出血エピソードの期間中に、５以上用量のｒＶＷＦが投与される。

【0040】

いくつかの実施形態において、出血エピソードの期間中に、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇの範囲のｒＶＷＦが対象に投与される。多くの実施形態において、出血エピソードの期間中に、約４０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇの範囲のｒＶＷＦが対象に投与される。いくつかの実施形態において、出血エピソードの期間中に、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇの範囲のｒＦＶＩＩＩが対象に投与される。

【0041】

多くの実施形態において、本明細書で概説されるｒＶＷＦは、配列番号３の配列に対して、少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦは、配列番号３の配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。多くの実施形態において、ｒＶＷＦは、配列番号３の配列に対して、少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、アミノ酸配列は、配列番号１に対して、少なくとも８０％の配列同一性を有する核酸配列またはその断片によってコードされる。

【0042】

多くの実施形態において、記載されるｒＶＷＦは、ｒＶＷＦの断片であり、ｒＶＷＦは、配列番号３の配列に対して、少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦは、ｒＶＷＦの断片であり、ｒＶＷＦは、配列番号３の配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。

【0043】

いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦは、ユビキチン化、グリコシル化、治療用または診断用薬剤とのコンジュゲーション、標識化、共有結合による高分子化合物の結合、非加水分解性結合の導入、及び１つ以上のアミノ酸の化学合成による挿入または置換からなる群からの１つ以上の技法を使用して化学修飾される。

【図面の簡単な説明】

【0044】

【図1】重症ＶＷＤ患者におけるｒＶＷＦの第３相オープンラベル試験のプロセス全体を示す。

【図2】ｒＶＷＦの第３相オープンラベル試験における出血イベント（ＢＥ）の治療のためのｒＶＷＦ推奨用量を示す。ｒＶＷＦ投与量は、ＩＵ ＶＷＦ：ＲＣｏ／ｋｇ体重として測定した。

【図3】ＢＥに対するｒＶＷＦ治療の臨床効果を評価する際に試験責任医師らが使用した総合的な基準を示す。

【図4】本試験においてｒＶＷＦで治療された過多月経を有する患者の人口統計学的特徴を示す。

【図5】ｒＶＷＦのみ（例えば、血漿由来ＶＷＦではない）で治療した合計４５件の過多月経エピソードのうち、軽症、中等症または重症であった過多月経エピソードの割合をパーセントで示す。

【図6】４５件の過多月経エピソードに対するｒＶＷＦ治療の概要を示す。

【図7】試験責任医師らによって決定されたｒＶＷＦ治療の臨床効果の評価を示す。評価は、ｒＶＷＦのみ（すなわち、血漿由来ＶＷＦではない）で治療した合計４５件の過多月経エピソードに基づく。

【図8】過多月経患者の試験においてｒＶＷＦと併用した薬の下で報告された有害事象（ＡＥ）を示す。各ＡＥは、１名の患者で報告された。

【図9A】プレプロＶＷＦの核酸配列を示す。

【図9B】プレプロＶＷＦの核酸配列を示す。

【図9C】プレプロＶＷＦの核酸配列を示す。

【図10A】プレプロＶＷＦのアミノ酸配列を示す。

【図10B】プレプロＶＷＦのアミノ酸配列を示す。

【図10C】プレプロＶＷＦのアミノ酸配列を示す。

【図10D】プレプロＶＷＦのアミノ酸配列を示す。

【図10E】プレプロＶＷＦのアミノ酸配列を示す。

【図10F】プレプロＶＷＦのアミノ酸配列を示す。

【図10G】プレプロＶＷＦのアミノ酸配列を示す。

【図10H】プレプロＶＷＦのアミノ酸配列を示す。

【図10I】プレプロＶＷＦのアミノ酸配列を示す。

【図10J】プレプロＶＷＦのアミノ酸配列を示す。

【図11A】成熟ＶＷＦのアミノ酸配列を示す（全長プレプロＶＷＦのアミノ酸残基７６４～２８１３に相当する）。

【図11B】成熟ＶＷＦのアミノ酸配列を示す（全長プレプロＶＷＦのアミノ酸残基７６４～２８１３に相当する）。

【図11C】成熟ＶＷＦのアミノ酸配列を示す（全長プレプロＶＷＦのアミノ酸残基７６４～２８１３に相当する）。

【図11D】成熟ＶＷＦのアミノ酸配列を示す（全長プレプロＶＷＦのアミノ酸残基７６４～２８１３に相当する）。

【図11E】成熟ＶＷＦのアミノ酸配列を示す（全長プレプロＶＷＦのアミノ酸残基７６４～２８１３に相当する）。

【図11F】成熟ＶＷＦのアミノ酸配列を示す（全長プレプロＶＷＦのアミノ酸残基７６４～２８１３に相当する）。

【図11G】成熟ＶＷＦのアミノ酸配列を示す（全長プレプロＶＷＦのアミノ酸残基７６４～２８１３に相当する）。

【発明を実施するための形態】

【0045】

発明の詳細な説明
序文
本発明は、フォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）を有する女性における過多月経の治療のための方法を提供する。そのような治療は、組換えフォンヴィレブランド因子（ｒＶＷＦ）の投与を含む。本発明によるｒＶＷＦの投与及び重症ＶＷＤを有する成人患者における出血エピソード（ＢＥ）のオンデマンド治療のためのｒＶＷＦの投与は、止血効果及び良好なベネフィット・リスクプロファイルを患者に提供する。

【0046】

定義
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈上、別途明記されない限り、複数の指示物を含む。したがって、例えば、「抗体」への言及は、複数のそのような抗体を含み、「宿主細胞」への言及は、１つ以上の宿主細胞及び当業者に知られているその同等物への言及を含むなどとなる。更に、特許請求の範囲は、何らかの任意選択の要素を除外するように作成される場合があることにも留意されたい。したがって、本記述は、請求項の要素の詳述に関連する「だけ」、「のみ」などの排他的用語の使用、または「否定的な」限定の使用に対する先行的な根拠として働くことが意図される。

【0047】

本発明を更に説明する前に、本発明が、記載される特定の実施形態に限定されず、当然のことながら、それ自体多様であり得ることを理解されたい。また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的にしており、本発明の範囲が添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、限定を意図するものではないことも理解されたい。

【0048】

本明細書で使用される場合、「ｒＶＷＦ」は、組換えＶＷＦを指す。

【0049】

本明細書で使用される場合、「ｒＦＶＩＩＩ」は、組換えＦＶＩＩＩを指す。

【0050】

「組換え」という用語は、例えば、細胞、または核酸、タンパク質、またはベクターを参照して使用される場合、その細胞、核酸、タンパク質またはベクターが、異種の核酸もしくはタンパク質の導入によってまたは天然の核酸もしくはタンパク質の変更によって改変されていること、あるいは、その細胞が、そのように改変された細胞に由来することを示す。したがって、例えば、組換え細胞は、天然（非組換え）型の細胞内ではみられない遺伝子を発現するか、あるいは、異常発現されるか、過少発現されるか、または全く発現されない天然遺伝子を発現する。

【0051】

本明細書で使用される場合、「組換えＶＷＦ」は、組換えＤＮＡ技術を介して得られるＶＷＦを含む。ある特定の実施形態において、本発明のＶＷＦタンパク質は、コンストラクト、例えば、ＷＯ１９８６／０６０９６及びＵＳ８，５９７，９１０におけるように調製されるものを含み得、それらの内容は、組換えＶＷＦを作製する方法に関して、参照により本明細書に援用される。本開示のＶＷＦは、モノマー形態及びマルチマー形態を含む、全ての可能な形態を含み得る。また、本発明は、組み合わせて使用される様々な形態のＶＷＦも包含することも理解されたい。例えば、本開示のＶＷＦは、異なるマルチマー、異なる誘導体、ならびに生物学的に活性な誘導体及び生物学的に活性でない誘導体の両方を含み得る。

【0052】

本開示の文脈において、組換えＶＷＦは、例えば、霊長類、ヒト、サル、ウサギ、ブタ、齧歯類、マウス、ラット、ハムスター、アレチネズミ、イヌ科動物、ネコ科動物などの哺乳動物に由来するＶＷＦファミリーの任意のメンバー、及び生物学的に活性なその誘導体を含む。また、活性を有する変異体及びバリアントのＶＷＦタンパク質も包含され、ＶＷＦタンパク質の機能性断片及び融合タンパク質も同様である。更に、本発明のＶＷＦは、精製、検出、またはその両方を容易にするタグを更に含み得る。本明細書に記載されるＶＷＦは、治療部分またはｉｎ ｖｉｔｒｏもしくはｉｎ ｖｉｖｏでのイメージングに好適な部分により更に修飾されてもよい。

【0053】

本明細書で使用される場合、「血漿由来ＶＷＦ（ｐｄＶＷＦ）」は、血液中でみられる当該タンパク質の全ての形態を含み、少なくとも１つのＦＶＩＩＩ分子をｉｎ ｖｉｖｏで安定化させる特性、例えば、結合特性を有する、哺乳動物から得られる成熟ＶＷＦを含む。

【0054】

「高マルチマーＶＷＦ」または「高分子量ＶＷＦ」という用語は、少なくとも１０サブユニット、または１２、１４、もしくは１６サブユニット～約２０、２２、２４、もしくは２６以上のサブユニットを含むＶＷＦを指す。「サブユニット」という用語は、ＶＷＦのモノマーを指す。当該技術分野で知られているように、重合してより高次のマルチマーを形成するのは、一般にＶＷＦのダイマーである（Ｔｕｒｅｃｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈｅｍｏｓｔ．２０１０，３６（５）：５１０－５２１を参照されたく、あらゆる目的のため、特にＶＷＦのマルチマー分析に関するあらゆる教示のために、その全体が参照により本明細書に援用される）。

【0055】

本明細書で使用される場合、「第ＶＩＩＩ因子」または「ＦＶＩＩＩ」という用語は、患者にとって内因性であるか、血漿に由来するか、または組換えＤＮＡ技術の使用により作製されるかにかかわらず、血液凝固第ＶＩＩＩ因子の典型的な特徴を有する任意の形態の第ＶＩＩＩ因子分子を指し、第ＶＩＩＩ因子の全ての修飾形態を含む。第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）は、単一遺伝子産物から生じる不均一な分布のポリペプチドとして、天然において及び治療用調製物中に存在する（例えば、Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８３：２９７９－２９８３（１９８６）参照）。第ＶＩＩＩ因子を含有する市販の治療用調製物の例としては、ＨＥＭＯＦＩＬ Ｍ（登録商標）、ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）、及びＲＥＣＯＭＢＩＮＡＴＥ（登録商標）（Ｔａｋｅｄａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｌｉｍｉｔｅｄ，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）の商標名で販売されているものが挙げられる。

【0056】

本明細書で使用される場合、「血漿ＦＶＩＩＩ活性」及び「ｉｎ ｖｉｖｏ ＦＶＩＩＩ活性」は、区別なく使用される。標準的なアッセイを使用して測定されるｉｎ ｖｉｖｏ ＦＶＩＩＩ活性は、内因性ＦＶＩＩＩ活性、治療投与されたＦＶＩＩＩ（組換えまたは血漿由来）の活性、または内因性ＦＶＩＩＩ活性及び投与されたＦＶＩＩＩ活性の両方であり得る。同様に、「血漿ＦＶＩＩＩ」は、内因性ＦＶＩＩＩ、または投与された組換えもしくは血漿由来ＦＶＩＩＩを指す。

【0057】

本明細書で使用される場合、「フォンヴィレブランド病」は、フォンヴィレブランド因子の欠損によって引き起こされる疾患群を指す。フォンヴィレブランド因子は、血小板同士を凝集させ、血管壁に粘着するのを助けるものであり、これは、正常な血液凝固に必要である。本明細書で更に詳しく記載されるように、フォンヴィレブランド病には、１型、２Ａ型、２Ｂ型、２Ｍ型、２Ｎ型、及び３型を含む、いくつかの病型がある。

【0058】

「単離された」、「精製された」、または「生物学的に純粋な」という用語は、その天然状態において見出される場合に通常は付随している成分が実質的または本質的に含まれていない物質を指す。純度及び均一性は、典型的に、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーなどの分析化学技術を使用して決定される。ＶＷＦは、調製物中に存在する主な種であり、実質的に精製されている。「精製された」という用語は、いくつかの実施形態において、核酸またはタンパク質が電気泳動ゲルに本質的に１本のバンドで現れることを示す。他の実施形態において、核酸またはタンパク質は、少なくとも５０％純粋、より好ましくは、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上純粋であることを意味する。他の実施形態において、「精製する」または「精製」とは、少なくとも１つの夾雑物を、精製される組成物から除去することを意味する。この意味では、精製は、精製された化合物が均質である必要はなく、例えば、１００％純粋である必要はない。

【0059】

本明細書で使用される場合、「投与すること」（及び文法上の全ての同等表現）には、対象に対する、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、経口投与、坐剤としての投与、局所接触、腹腔内投与、病巣内投与、もしくは鼻腔内投与、または徐放性デバイス、例えば、小型浸透圧ポンプの埋め込みが含まれる。投与は、非経口、及び経粘膜（例えば、経口、経鼻、膣、直腸、または経皮）を含む、任意の経路による。非経口投与には、例えば、静脈内、筋肉内、細動脈内、皮内、皮下、腹腔内、脳室内、及び頭蓋内が含まれる。他の送達様式には、リポソーム製剤、静脈内注入、経皮パッチの使用などが挙げられるが、これらに限定されない。

【0060】

「治療上有効な量または用量」または「治療上十分な量または用量」または「有効または十分な量または用量」という用語は、投与される目的に対して治療効果をもたらす用量を指す。例えば、血友病の治療に有用な薬物の治療上有効な量は、血友病に伴う１つ以上の症状を予防または緩和することが可能な量であり得る。正確な用量は、治療の目的によって異なり、当業者であれば、既知の技法を使用して見極めることができる（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ（ｖｏｌｓ．１－３，１９９２）；Ｌｌｏｙｄ，Ｔｈｅ Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ（１９９９）；Ｐｉｃｋａｒ，Ｄｏｓａｇｅ Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（１９９９）；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００３，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ参照）。

【0061】

本明細書で使用される場合、「患者」及び「対象」という用語は、区別なく使用され、疾患を有するか、または疾患に罹患する可能性を有する哺乳動物（好ましくは、ヒト）を指す。

【0062】

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、指定した値からプラスマイナス１０％のおよその範囲を示す。例えば、「約２０％」という文言は、１８～２２％の範囲を包含する。

【0063】

本明細書で使用される場合、「半減期」という用語は、崩壊を受けている物質の量（または試料もしくは患者からのクリアランス）が半減するのに要する期間を指す。

【0064】

本明細書で使用される場合、「トラフレベル」という用語は、次の用量の直前の、血漿中の薬物濃度、または２用量間の最小薬物濃度を指す。例えば、１２時間ごとに実施されるレジメンの場合、トラフレベルは、通常、最終用量から１２時間後に生じる。トラフレベルは、臨床転帰と相関し得ることが示されており、例えば、トラフレベルが低いと、治療レジメンの有効性に悪影響を及ぼし得る耐性が生じる場合があるため、トラフレベルは、重要である。例えば、トラフレベルは、血漿レベルの≧３０％に維持することができ、例えば、低トラフレベルは、＜３０％のレベルで示される。例えば、トラフレベルは、血漿レベルの≧３５％に維持することができ、例えば、低トラフレベルは、＜３５％のレベルで示される。例えば、トラフレベルは、血漿レベルの≧４０％に維持することができ、例えば、低トラフレベルは、＜４０％のレベルで示される。例えば、トラフレベルは、血漿レベルの≧４５％に維持することができ、例えば、低トラフレベルは、＜４５％のレベルで示される。例えば、トラフレベルは、血漿レベルの≧５０％に維持することができ、例えば、低トラフレベルは、＜５０％のレベルで示される。いくつかの場合において、推奨される目標トラフ血漿レベル及び最小治療期間には、≧３０ＩＵ／ｄＬ（軽度）及び＞５０ＩＵ／ｄＬ（重度）の、ＶＷＦ：ＲＣｏ目標トラフ血漿レベルが含まれる。いくつかの場合において、推奨される目標トラフ血漿レベル及び最小治療期間には、≧３５ＩＵ／ｄＬ（軽度）及び＞５５ＩＵ／ｄＬ（重度）の、ＶＷＦ：ＲＣｏ目標トラフ血漿レベルが含まれる。いくつかの場合において、推奨される目標トラフ血漿レベル及び最小治療期間には、≧４０ＩＵ／ｄＬ（軽度）及び＞６５ＩＵ／ｄＬ（重度）の、ＶＷＦ：ＲＣｏ目標トラフ血漿レベルが含まれる。いくつかの場合において、推奨される目標トラフ血漿レベル及び最小治療期間には、≧４５ＩＵ／ｄＬ（軽度）及び＞７０ＩＵ／ｄＬ（重度）の、ＶＷＦ：ＲＣｏ目標トラフ血漿レベルが含まれる。

【0065】

「過多月経」という用語は、本明細書で使用される場合、月経出血量が１周期あたり約８０ｍＬ以上である月経出血エピソード（周期的な子宮出血イベント）を指す。いくつかの場合、過多月経は、７日間を超えて続く重度の月経出血を含む。

【0066】

Ｉ．重症ＶＷＤ患者における過多月経を治療する方法のためのｒＶＷＦの投与
本明細書で提供されるのは、重症ＶＷＤを有する対象における過多月経（すなわち、異常な子宮出血）を治療する方法である。そのような対象にｒＶＷＦを投与することの利点の１つは、ｒＶＷＦの比活性がｐｄＶＷＦと比較して高いことにより、投与されるｒＶＷＦの量及び対象に再投与される回数に柔軟性が出ることである。理解されるように、また本明細書で更に考察されるように、同時投与されるＦＶＩＩＩは、組換えであっても血漿由来であってもよい。

【0067】

いくつかの態様において、ｒＶＷＦは、３０～１００ＩＵ／ｋｇの範囲、例えば、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、１００、３０～６０、３０～７０、４０～１００、４０～８０、５０～８０、６０～８０、７０～８０、４０～５０、４０～６０、４０～７０、４０～５０、５０～６０、５０～７５、６０～７０、７０～８０、４０～９０、５０～９０、６０～９０、７０～９０、８０～９０、または９０～１００ＩＵ／ｋｇで対象に投与される。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦは、過多月経出血エピソード中に少なくとも１回投与される。他の実施形態において、ｒＶＷＦは、出血エピソード中に２回以上、例えば、２、３、４、５回またはそれ以上投与される。いくつかの場合において、対象は、１回以上のｒＶＷＦの注入投与を受ける。各注入は、約３０～９０ＩＵ／ｋｇの範囲のｒＶＷＦ、例えば、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、３０～６０、３０～７０、６０～７０、４０～５０、４０～６０、４０～７０、４０～７５、５０～７５、６０～７５、４０～８０、５０～７５、５０～８０、６０～８０、７０～８０、４０～８５、５０～８５、６０～８５、７０～８５、４５～５０、４５～６０、４５～７０、５０～６０、４０～９０、５０～９０、６０～９０、７０～９０、または８０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦを含み得る。いくつかの実施形態において、各注入は、ｒＶＷＦの量が実質的に等しくあり得る。例えば、第１の注入及び第２の注入（すなわち、第１の用量及び第２の用量）は、ｒＶＷＦの量が実質的に等しくあり得る。いくつかの実施形態において、第２の注入及び第３の注入（すなわち、第２の用量及び第３の用量）は、ｒＶＷＦの量が実質的に等しくあり得る。いくつかの実施形態において、出血エピソードあたりに対象に投与されるｒＶＷＦの総用量は、約３０～１５０ＩＵ／ｋｇ、例えば、４０～５０、４０～９０、４０～１５０、４０～１２５、４０～１００、４０～９０、４０～７５、５０～１５０、５０～１００、７５～１５０、または１００～１５０ＩＵ／ｋｇである。

【0068】

いくつかの実施形態において、軽度及び中程度の過多月経の出血イベントの場合、出血エピソードを管理するには、推定よりも更に１～２回の注入のみが必要であり、追加のＶＷＦ含有製品は必要とされなかった。いくつかの実施形態において、重度の出血イベントの場合、出血エピソードを管理するには、推定よりも更に１．５回未満の注入が必要であり、追加のＶＷＦ含有製品は必要とされなかった。いくつかの実施形態において、軽度、中程度、及び重度の出血イベントでの実際の注入回数は、出血イベントを治療するのに必要な推定回数以下であり、追加のＶＷＦ含有製品は必要とされなかった。

【0069】

いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦは、少なくとも１日１回、少なくとも１日２回、８～１２時間ごとなどに投与される。いくつかの場合において、ｒＶＷＦは、合計１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日などの間、投与される。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦは、８時間ごと、９時間ごと、１０時間ごと、１１時間ごと、または１２時間ごとに投与される。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦは、約３日間～約７日間、８～１２時間ごとに投与される。

【0070】

いくつかの実施形態において、重症ＶＷＤを有する対象は、１型ＶＷＤを有する。いくつかの実施形態において、重症ＶＷＤを有する対象は、２型ＶＷＤを有する。いくつかの更なる実施形態において、重症ＶＷＤを有する対象は、２Ａ型ＶＷＤを有する。いくつかの更なる実施形態において、重症ＶＷＤを有する対象は、２Ｂ型ＶＷＤを有する。いくつかの更なる実施形態において、重症ＶＷＤを有する対象は、２Ｍ型ＶＷＤを有する。いくつかの更なる実施形態において、重症ＶＷＤを有する対象は、２Ｎ型ＶＷＤを有する。他の実施形態において、重症ＶＷＤを有する対象は、３型ＶＷＤを有する。他の実施形態において、重症ＶＷＤを有する対象は、重症の非３型ＶＷＤを有する。

【0071】

いくつかの実施形態において、対象は、３型ＶＷＤと診断される。いくつかの実施形態において、対象は、３型ＶＷＤと診断され、≦３ＩＵ／ｄＬのベースラインＶＷＦ抗原レベルを有する。いくつかの実施形態において、対象は、３ＩＵ／ｄＬ以下の範囲のベースラインＶＷＦ抗原レベルを有する。いくつかの実施形態において、対象は、重症の非３型ＶＷＤと診断される。いくつかの実施形態において、対象は、１型または２Ａ型ＶＷＤと診断される。いくつかの実施形態において、対象は、＜２０ＩＵ／ｄＬまたは２０％のベースラインＶＷＦリストセチン補因子活性（ＶＷＦ：ＲＣｏ）を有する。いくつかの実施形態において、対象は、＜２０ＩＵ／ｄＬまたはそれ以下（すなわち、＜０．２ＩＵ／ｍＬもしくは２０％またはそれ以下）の範囲のベースラインＶＷＦ：ＲＣｏを有する。いくつかの実施形態において、対象は、＜２０ＩＵ／ｄＬまたはそれ以下（すなわち、＜０．２ＩＵ／ｍＬもしくは２０％またはそれ以下）の範囲のベースラインＶＷＦ：ＲＣｏと同一または同等であるベースラインＶＷＦ：ＧＰＩｂＭまたはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲを有する。いくつかの実施形態において、対象は、２Ｂ型ＶＷＤと診断される。いくつかの実施形態において、対象は、遺伝子タイピングによって診断された２Ｂ型ＶＷＤを有する。いくつかの実施形態において、対象は、２Ｎ型ＶＷＤと診断される。いくつかの実施形態において、対象は、＜１０％または１０％以下の範囲のベースラインＦＶＩＩＩ活性（ＦＶＩＩＩ：Ｃ）を有する。いくつかの実施形態において、対象は、２Ｎ型ＶＷＤと診断され、＜１０％のベースラインＦＶＩＩＩ活性（ＦＶＩＩＩ：Ｃ）を有する。いくつかの実施形態において、対象は、２Ｍ型ＶＷＤと診断される。

【0072】

いくつかの実施形態において、対象は、ＡＳＨ ＩＳＴＨ ＮＨＦ ＷＦＨ ２０２１ガイドライン（Ｊａｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ Ａｄｖａｎｃｅｓ，２０２１，５（１）：２８０－３００）に従ってＶＷＤと診断されており、当該文献の内容は、図及び表を含め、参照により本明細書に援用される。いくつかの実施形態において、対象は、ＶＷＦ抗原活性（ＶＷＦ：Ａｇ）、血小板依存性ＶＷＦ活性（例えば、ＶＷＦ：ＧＰＩｂＭ及びＶＷＦ：ＧＰＩｂＲ）、及び／またはＦＶＩＩＩ凝固活性（ＦＶＩＩｌＩ：Ｃ）によって診断され、ＶＷＦレベルが＜３０（＜０．３０ＩＵ／ｍＬのＶＷＦレベルを指す）であり、血小板依存性ＶＷＦ活性／ＶＷＦ：Ａｇ比が＞０．７である、１型ＶＷＤを有する。いくつかの場合において、１型ＶＷＤを有する対象は、臨床医によって決定されるように、出血プロファイルに関係なく、＜０．３０ＩＵ／ｍＬのＶＷＦレベルを有する。いくつかの場合において、１型ＶＷＤを有する対象は、臨床医によって決定されるように、＜０．６０ＩＵ／ｍＬのＶＷＦレベル及び異常な出血プロファイルを有する。いくつかの実施形態において、ＶＷＦレベルは、ＶＷＦ：Ａｇを指す。いくつかの実施形態において、ＶＷＦレベルは、血小板依存性ＶＷＦ活性（例えば、ＶＷＦ：ＧＰＩｂＭまたはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲ）を指す。いくつかの実施形態において、ＶＷＦレベルは、ＶＷＦ：Ａｇ及び／または血小板依存性ＶＷＦ活性（例えば、ＶＷＦ：ＧＰＩｂＭまたはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲ）を指す。いくつかの実施形態において、対象は、ＶＷＦ抗原活性（ＶＷＦ：Ａｇ）、血小板依存性ＶＷＦ活性（例えば、ＶＷＦ糖タンパク質ＩｂＭ（ＶＷＦ：ＧＰＩｂＭ）及びＶＷＦ糖タンパク質ＩｂＲ（ＶＷＦ：ＧＰＩｂＲ））、ＦＶＩＩＩ凝固活性（ＦＶＩＩｌＩ：Ｃ）、及び／またはデスモプレシン（ＤＤＡＶＰ）試験によって診断され、ＶＷＦレベルが＜３０（＜０．３０ＩＵ／ｍＬのＶＷＦレベルを指す）であり、血小板依存性ＶＷＦ活性／ＶＷＦ：Ａｇ比が＞０．７である、１Ｃ型ＶＷＤを有する。いくつかの実施形態において、ＤＤＡＶＰ試験は、１Ｃ型の対象におけるＶＷＦクリアランス増強を確認するために、注入後１時間及び４時間の血液検査を含む。いくつかの実施形態において、対象は、ＶＷＦ：Ａｇ、血小板依存性ＶＷＦ活性、及びＦＶＩＩＩ：Ｃ評価によって診断され、ＶＷＦレベルが＜３０、＜０．３０ＩＵ／ｍＬのＶＷＦレベルであり、血小板依存性ＶＷＦ活性／ＶＷＦ：Ａｇ比が＜０．７である、２型ＶＷＤを有する。いくつかの実施形態において、対象は、ＶＷＦ：Ａｇ活性、血小板依存性ＶＷＦ活性、ＦＶＩＩＩ：Ｃ活性、ＶＷＦコラーゲン結合と抗原の比（ＶＷＦ：ＣＢ／Ａｇ）アッセイ、ＶＷＦマルチマー分析、及び／または遺伝子タイピングによって診断され、ＶＷＦレベルが＜３０、＜０．３０ＩＵ／ｍＬのＶＷＦレベルであり、血小板依存性ＶＷＦ活性／ＶＷＦ：Ａｇ比が＜０．７であり、異常なＶＷＦマルチマープロファイルを有する、２Ａ型または２Ｂ型ＶＷＤを有する。いくつかの場合において、対象は、遺伝子検査で更に確認された２Ｂ型を有する。いくつかの実施形態において、対象は、ＶＷＦ：Ａｇ活性、血小板依存性ＶＷＦ活性、ＦＶＩＩＩ：Ｃ活性、ＶＷＦコラーゲン結合と抗原の比（ＶＷＦ：ＣＢ／Ａｇ）アッセイ、ＶＷＦマルチマー分析、及び／または遺伝子タイピングによって診断され、ＶＷＦレベルが＜３０（＜０．３０ＩＵ／ｍＬのＶＷＦレベル）であり、血小板依存性ＶＷＦ活性／ＶＷＦ：Ａｇ比が＜０．７であり、正常なＶＷＦマルチマープロファイルを有する、２Ｍ型ＶＷＤを有する。いくつかの実施形態において、対象は、ＶＷＦ ＦＶＩＩＩの結合（ＶＷＦ：ＦＶＩＩＩＢ）及び／または遺伝子検査によって診断された２Ｎ型ＶＷＤを有する。いくつかの場合において、対象は、２Ｎ型ＶＷＤを有し、ＦＶＩＩＩ＜ＶＷＦレベルまたは異常なレベルに基づいても診断される。いくつかの場合、遺伝子検査は、１つ以上の２Ｎ型ＶＷＤ遺伝子バリアントの存在を検出する。ＶＷＦ糖タンパク質ＩＢ結合、ＶＷＦコラーゲン結合、ＶＷＦマルチマー、ＤＤＡＶＰ負荷試験のアッセイを含む、ＶＷＦアッセイを評価するための方法は、当業者に知られており、例えば、Ｐａｔｚｋｅ ａｎｄ Ｆａｖａｌｏｒｏ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２０１７，１６４６：４５３－４６０；Ｈｉｇｇｉｎｓ ａｎｄ Ｇｏｏｄｗｉｎ，Ａｍ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ，２０１９，９４：４９６－５０３；Ｓｔｕｆａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ，２０２０，２６（２）：２９８－３０５；Ｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｈｅｍａｔｏｌ，２０１３，３５（２）：１７０－１７６；Ｍｉｃｈｉｅｌｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ／Ｈｅｍｏｓｔａｔｉｓ，２０１７，２３（６）：５１８－５３１；Ｍｏｈａｍｍｅｄ ａｎｄ Ｆａｖａｌｏｒｏ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２０１７，１６４６：４６１－４７２に記載されている。

【0073】

いくつかの実施形態において、対象は、過去１２ヶ月間に１以上の出血エピソードを治療するために、血漿由来ＶＷＦ（ｐｄＶＷＦ）の投与を受けたことがある。いくつかの実施形態において、対象は、過去１２ヶ月にｐｄＶＷＦの投与を受けたことがある。いくつかの実施形態において、対象は、過去１２ヶ月間に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２またはそれ以上の出血エピソードを治療するために、ｐｄＶＷＦの投与を受けたことがある。いくつかの実施形態において、対象は、ｒＶＷＦの初回投与前の過去１２ヶ月間にｐｄＶＷＦの投与を受けたことがある。言い換えれば、対象は、過多月経出血エピソードを治療するためにｒＶＷＦの投与を受ける前の過去１２ヶ月以内にｐｄＶＷＦの投与を受けている。

【0074】

いくつかの実施形態において、対象は、対象のＶＷＦ：ＲＣｏ活性が、投与後、０．６ＩＵ／ｍＬ（すなわち、６０ＩＵ／ｄＬ）以上の範囲となるように、ｒＶＷＦの用量が投与される。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの用量は、対象のＶＷＦ：ＲＣｏ活性が、投与後、０．６ＩＵ／ｍＬ（すなわち、６０ＩＵ／ｄＬ）より大きくなるように投与される。いくつかの実施形態において、対象は、投与後、対象のＶＷＦ：ＧＰＩｂＭまたはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲ活性が、０．６ＩＵ／ｍＬ（すなわち、６０ＩＵ／ｄＬ）以上の範囲のＶＷＦ：ＲＣｏ活性と同一または同等となるように、ｒＶＷＦの用量が投与される。

【0075】

いくつかの実施形態において、対象は、対象のＦＶＩＩＩ：Ｃ活性が、投与後、０．４ＩＵ／ｍＬ（すなわち、４０ＩＵ／ｄＬ）以上の範囲となるように、ｒＶＷＦの用量が投与される。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの用量は、対象のＦＶＩＩＩ：Ｃ活性が、投与後、０．４ＩＵ／ｍＬ（すなわち、４０ＩＵ／ｄＬ）より大きくなるように投与される。

【0076】

いくつかの実施形態において、対象は、投与後、対象のＶＷＦ：ＲＣｏ活性が、０．６ＩＵ／ｍＬ（すなわち、６０ＩＵ／ｄＬまたは６０％または正常レベル）以上の範囲となるように（または対象のＶＷＦ：ＧＰＩｂＭもしくはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲ活性が０．６ＩＵ／ｍＬ（すなわち、６０ＩＵ／ｄＬ）以上の範囲のＶＷＦ：ＲＣｏ活性と同一もしくは同等となるように）、また、ＦＶＩＩＩ：Ｃ活性が、０．４ＩＵ／ｍＬ（すなわち、４０ＩＵ／ｄＬまたは正常レベルの４０％）以上の範囲となるように、ｒＶＷＦの用量が投与される。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの用量は、投与後、対象のＶＷＦ：ＲＣｏ活性が０．６ＩＵ／ｍＬ（すなわち、６０ＩＵ／ｄＬまたは正常レベルの６０％）以上に大きくなるように（または対象のＶＷＦ：ＧＰＩｂＭもしくはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲ活性が０．６ＩＵ／ｍＬ（すなわち、６０ＩＵ／ｄＬまたは正常レベルの６０％）以上の範囲のＶＷＦ：ＲＣｏ活性と同一もしくは同等となるように）、また、ＦＶＩＩＩ：Ｃ活性が０．４ＩＵ／ｍＬ（すなわち、正常レベルの４０％）よりも大きくなるように、投与される。

【0077】

当業者であれば、本明細書に包含されるＶＷＦのトラフレベルは、ＶＷＦ：ＲＣｏだけでなく、ＶＷＦ：ＧＰＩｂＭ、ＶＷＦ：ＧＰＩｂＲ、及び他の既知の方法に従って測定することができることを認識している。したがって、ＶＷＦトラフレベルがＶＷＦ：ＲＣｏを基準にして記載されていても、本明細書の実施形態のいずれも、ＶＷＦ：ＲＣｏによって測定された記載のトラフレベルと同等であるＶＷＦ：ＧＰＩｂＭまたはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲによって測定されたＶＷＦのトラフレベルを包含することを理解すべきである。いくつかの実施形態において、対象は、対象のＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルが少なくとも３０％（すなわち、３０ＩＵ／ｄＬまたは０．３ＩＵ／ｍＬ）となるように、ｒＶＷＦの用量が投与される。いくつかの実施形態において、対象は、対象のＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルが少なくとも３５％（すなわち、３５ＩＵ／ｄＬまたは０．３５ＩＵ／ｍＬ）となるように、ｒＶＷＦの用量が投与される。いくつかの実施形態において、対象は、対象のＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルが少なくとも４０％（すなわち、４０ＩＵ／ｄＬまたは０．４ＩＵ／ｍＬ）となるように、ｒＶＷＦの用量が投与される。いくつかの実施形態において、対象は、対象のＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルが少なくとも４５％（すなわち、４５ＩＵ／ｄＬまたは０．４５ＩＵ／ｍＬ）となるように、ｒＶＷＦの用量が投与される。いくつかの実施形態において、対象は、対象のＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルが少なくとも５０％（すなわち、５０ＩＵ／ｄＬまたは０．５ＩＵ／ｍＬ）となるように、ｒＶＷＦの用量が投与される。いくつかの実施形態において、対象は、対象のＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルが少なくとも５５％（すなわち、５５ＩＵ／ｄＬまたは０．５５ＩＵ／ｍＬ）となるように、ｒＶＷＦの用量が投与される。いくつかの実施形態において、対象は、対象のＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルが少なくとも６０％（すなわち、６０ＩＵ／ｄＬまたは０．６ＩＵ／ｍＬ）となるように、ｒＶＷＦの用量が投与される。いくつかの実施形態において、対象は、対象のＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルが少なくとも６５％（すなわち、６５ＩＵ／ｄＬまたは０．６５ＩＵ／ｍＬ）となるように、ｒＶＷＦの用量が投与される。いくつかの実施形態において、対象は、対象のＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルが少なくとも７０％（すなわち、７０ＩＵ／ｄＬまたは０．７０ＩＵ／ｍＬ）となるように、ｒＶＷＦの用量が投与される。いくつかの実施形態において、対象は、対象のＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルが少なくとも７５％（すなわち、７５ＩＵ／ｄＬまたは０．７５ＩＵ／ｍＬ）となるように、ｒＶＷＦの用量が投与される。

【0078】

いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの投与は、０．６ＩＵ／ｍＬまたは６０ＩＵ／ｄＬより大きいＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルを維持する。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの投与は、０．６ＩＵ／ｍＬまたは６０ＩＵ／ｄＬより大きいＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと実質的に同等であるＶＷＦ：ＧＰＩｂＭまたはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルを維持する。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの投与は、０．５ＩＵ／ｍＬまたは５０ＩＵ／ｄＬより大きいＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルを維持する。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの投与は、０．５ＩＵ／ｍＬまたは５０ＩＵ／ｄＬより大きいＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと実質的に同等であるＶＷＦ：ＧＰＩｂＭまたはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルを維持する。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの投与は、０．４ＩＵ／ｍＬまたは４０ＩＵ／ｄＬより大きいＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルを維持する。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの投与は、０．４ＩＵ／ｍＬまたは４０ＩＵ／ｄＬより大きいＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと実質的に同等であるＶＷＦ：ＧＰＩｂＭまたはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルを維持する。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの投与は、０．３ＩＵ／ｍＬまたは３０ＩＵ／ｄＬより大きいＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルを維持する。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの投与は、０．３ＩＵ／ｍＬまたは３０ＩＵ／ｄＬより大きいＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと実質的に同等であるＶＷＦ：ＧＰＩｂＭまたはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルを維持する。

【0079】

いくつかの実施形態において、対象が重症の過多月経エピソードを経験する場合、約１～７日間またはそれ以上の間、０．５ＩＵ／ｍＬより大きいＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルを維持するように、１以上の用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、０．５ＩＵ／ｍＬより大きいＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルは、約１～２日間、約１～３日間、約２～５日間、約１～５日間、約１～７日間、約２～７日間、約３～７日間、約４～７日間、約５～７日間、約６～７日間またはそれ以上の間維持される。いくつかの実施形態において、０．５ＩＵ／ｍＬより大きいＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルは、１週間、２週間、３週間またはそれ以上の間、出血エピソードが解決するまで。いくつかの実施形態において、対象が重症の過多月経エピソードを経験する場合、約１～７日間またはそれ以上の間、０．５ＩＵ／ｍＬより大きいＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと実質的に同等であるＶＷＦ：ＧＰＩｂＭまたはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルを維持するように、１以上の用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、０．５ＩＵ／ｍＬより大きいＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと実質的に同等であるＶＷＦ：ＧＰＩｂＭまたはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルは、約１～２日間、約１～３日間、約２～５日間、約１～５日間、約１～７日間、約２～７日間、約３～７日間、約４～７日間、約５～７日間、約６～７日間またはそれ以上の間維持される。いくつかの実施形態において、０．５ＩＵ／ｍＬより大きいＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと実質的に同等であるＶＷＦ：ＧＰＩｂＭまたはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルは、１週間、２週間、３週間またはそれ以上の間、出血エピソードが解決するまで、維持される。

【0080】

いくつかの実施形態において、対象が軽症から中等症の過多月経エピソードを経験する場合、約１～７日間またはそれ以上の間、０．３ＩＵ／ｍＬより大きいＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルを維持するように、１以上の用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、０．３ＩＵ／ｍＬより大きいＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルは、約１～２日間、約１～３日間、約２～５日間、約１～５日間、約１～７日間、約２～７日間、約３～７日間、約４～７日間、約５～７日間、約６～７日間またはそれ以上の間維持される。いくつかの実施形態において、０．５ＩＵ／ｍＬより大きいＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルは、１週間、２週間、３週間またはそれ以上の間、出血エピソードが解決するまで、維持される。いくつかの実施形態において、対象が軽症から中等症の過多月経エピソードを経験する場合、約１～７日間またはそれ以上の間、０．３ＩＵ／ｍＬより大きいＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと実質的に同等であるＶＷＦ：ＧＰＩｂＭまたはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルを維持するように、１以上の用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、０．３ＩＵ／ｍＬより大きいＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと実質的に同等であるＶＷＦ：ＧＰＩｂＭまたはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルは、約１～２日間、約１～３日間、約２～５日間、約１～５日間、約１～７日間、約２～７日間、約３～７日間、約４～７日間、約５～７日間、約６～７日間またはそれ以上の間維持される。いくつかの実施形態において、０．５ＩＵ／ｍＬより大きいＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルと実質的に同等であるＶＷＦ：ＧＰＩｂＭまたはＶＷＦ：ＧＰＩｂＲのトラフレベルは、１週間、２週間、３週間またはそれ以上の間、出血エピソードが解決するまで、維持される。

【0081】

いくつかの実施形態において、組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）はまた、過多月経出血エピソードを治療するために、重症ＶＷＤを有する対象に投与される。いくつかの場合において、投与される治療薬は、ｒＶＷＦ及びｒＦＶＩＩＩを含む。他の場合において、投与される治療薬は、ｒＦＶＩＩＩを含まない。いくつかの実施形態において、ｒＦＶＩＩＩは、約１０～７０ＩＵ／ｋｇの範囲、例えば、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、１０～７０、１０～６０、１０～５０、１０～４０、１０～３０、１０～２０、２０～３０、３０～４０、４０～５０、５０～６０、または６０～７０ＩＵ／ｋｇで対象に投与される。いくつかの場合において、ｒＦＶＩＩＩは、初回（第１）用量または初回（第１）注入で投与される。いくつかの場合において、ｒＦＶＩＩＩは、第２の用量または第２の注入の一部として投与されない。いくつかの実施形態において、過多月経出血エピソードを経験するＶＷＤの対象は、ｒＶＷＦ及びｒＦＶＩＩＩの単回注入を受ける。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの第２の投与は、ｒＦＶＩＩＩと一緒に行われない。

【0082】

方法のいくつかの実施形態において、ｒＶＷＦ及びＦＶＩＩＩが一緒に投与される場合、ｒＶＷＦとＦＶＩＩＩの比は、約１．５：０．８である。方法のいくつかの実施形態において、ｒＶＷＦ及びＦＶＩＩＩが一緒に投与される場合、ｒＶＷＦとＦＶＩＩＩの比は、約１．３：１である。方法のいくつかの実施形態において、ｒＶＷＦ及びＦＶＩＩＩが一緒に投与される場合、ｒＶＷＦとＦＶＩＩＩの比は、約１．１：０．８である。方法のいくつかの実施形態において、ｒＶＷＦ及びＦＶＩＩＩが一緒に投与される場合、ｒＶＷＦとＦＶＩＩＩの比は、約１．５：１である。方法のいくつかの実施形態において、ｒＶＷＦ及びＦＶＩＩＩが一緒に投与される場合、ｒＶＷＦとＦＶＩＩＩの比は、約１．１：１．２である。

【0083】

いくつかの実施形態において、過多月経が軽度または中程度の過多月経である場合、４０～５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、過多月経が軽度または中程度の過多月経である場合、約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、過多月経が軽度または中程度の過多月経である場合、約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、過多月経が軽度または中程度の過多月経である場合、約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、過多月経が軽度または中程度の過多月経である場合、１または２用量の４０～５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、過多月経が軽度または中程度の過多月経である場合、１または２用量の約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、過多月経が軽度または中程度の過多月経である場合、１または２用量の約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、過多月経が軽度または中程度の過多月経である場合、１または２用量の約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、過多月経が軽度または中程度の過多月経である場合及び対象が重症１型または２型ＶＷＤである場合、１または２用量の４０～５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、過多月経が軽度または中程度の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、１または２用量の約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、過多月経が軽度または中程度の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、１または２用量の約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、過多月経が軽度または中程度の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、１または２用量の約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、過多月経が軽度または中程度の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型ＶＷＤである場合、１または２用量の約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、過多月経が軽度または中程度の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型ＶＷＤである場合、１または２用量の約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、過多月経が軽度または中程度の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型ＶＷＤである場合、１または２用量の約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。

【0084】

いくつかの実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経である場合、約４０～９０ＩＵ／ｋｇまたは約５０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与される。いくつかの実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約４０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量。いくつかの実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約５０～７５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量。いくつかの更なる実施形態において、約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量及び過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合。いくつかの更なる実施形態において、約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量及び過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合。いくつかの更なる実施形態において、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量及び過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合。いくつかの更なる実施形態において、約６５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量及び過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合。いくつかの更なる実施形態において、約７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量及び過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合。更なる実施形態において、約７５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量及び過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合。いくつかの実施形態において、約８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量及び過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合。更なる実施形態において、約８５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量及び過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合。いくつかの実施形態において、約９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量及び過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経である場合、ｒＶＷＦの第１の用量が投与された後、４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経である場合、約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経である場合、約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経である場合、約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経である場合、約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経である場合、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。

【0085】

いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約６５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約６５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約６５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約６５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約６５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約７５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約７５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約７５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約７５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが１型ＶＷＤである場合、約７５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。

【0086】

いくつかの実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経である場合、約５０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦまたは約６０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約６０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量。いくつかの更なる実施形態において、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量及び過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合。いくつかの更なる実施形態において、約６５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量及び過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合。いくつかの更なる実施形態において、約７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量及び過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合。いくつかの更なる実施形態において、約７５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量及び過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合。いくつかの更なる実施形態において、約８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量及び過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経である場合、ｒＶＷＦの第１の用量が投与された後、４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経である場合、約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経である場合、約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経である場合、約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経である場合、約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経である場合、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。

【0087】

いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの初回用量（第１の用量とも呼ばれる）が投与され、次いで、約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約６５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約６５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約６５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約６５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約６５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約７５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約７５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約７５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約７５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約７５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経であり、重症ＶＷＤが２型または３型ＶＷＤである場合、約８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与される。

【0088】

いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経である場合、約５０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦまたは約６０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与され、次いで、治療合計期間が７日間になるまで４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが更に投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経である場合、５０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、約４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与され、次いで、治療合計期間が７日間になるまで約４０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが更に投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経である場合、５０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与され、次いで、治療合計期間が７日間になるまで約４５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが更に投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経である場合、５０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与され、次いで、治療合計期間が７日間になるまで約５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが更に投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経である場合、５０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与され、次いで、治療合計期間が７日間になるまで約５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが更に投与される。いくつかの更なる実施形態において、過多月経が重度または重症の過多月経である場合、５０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与され、次いで、４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが８～１２時間ごとに約３日間投与され、次いで、治療合計期間が７日間になるまで約６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが更に投与される。

【0089】

一般に、１型ＶＷＤは、＜３０ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：ＲＣｏまたはＶＷＦの血小板結合活性（すなわち、ＶＷＦ：ＧＰＩｂＭ及びＶＷＦ：ＧＰＩｂＲ）によって決定した場合のそれと同等の値、＜３０ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：Ａｇ、低いまたは正常なＦＶＩＩＩ、及び＞０．５～０．７ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ：Ａｇ比またはＶＷＦ／ＶＷＦ：Ａｇ比の血小板結合活性に基づいたそれと同等の値によって示される。２Ａ型ＶＷＤは、＜３０ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：ＲＣｏまたはＶＷＦの血小板結合活性（すなわち、ＶＷＦ：ＧＰＩｂＭ及びＶＷＦ：ＧＰＩｂＲ）によって決定した場合のそれと同等の値、＜３０～２００ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：Ａｇ、低いまたは正常なＦＶＩＩＩ、及び＜０．５～０．７ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ：Ａｇ比またはＶＷＦ／ＶＷＦ：Ａｇ比の血小板結合活性に基づいたそれと同等の値によって示される。２Ｂ型ＶＷＤは、＜３０～２００ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：ＲＣｏまたはＶＷＦの血小板結合活性（すなわち、ＶＷＦ：ＧＰＩｂＭ及びＶＷＦ：ＧＰＩｂＲ）によって決定した場合のそれと同等の値、＜３０ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：Ａｇ、低いまたは正常なＦＶＩＩＩ、及び通常＜０．５～０．７ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ：Ａｇ比またはＶＷＦ／ＶＷＦ：Ａｇ比の血小板結合活性に基づいたそれと同等の値によって示される。２Ｍ型ＶＷＤは、＜３０ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：ＲＣｏまたはＶＷＦの血小板結合活性（すなわち、ＶＷＦ：ＧＰＩｂＭ及びＶＷＦ：ＧＰＩｂＲ）によって決定した場合のそれと同等の値、＜３０～２００ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：Ａｇ、低いまたは正常なＦＶＩＩＩ、及び＜０．５～０．７ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ：Ａｇ比またはＶＷＦ／ＶＷＦ：Ａｇ比の血小板結合活性に基づいたそれと同等の値によって示される。２Ｎ型ＶＷＤは、３０～２０００ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：ＲＣｏまたはＶＷＦの血小板結合活性（すなわち、ＶＷＦ：ＧＰＩｂＭ及びＶＷＦ：ＧＰＩｂＲ）によって決定した場合のそれと同等の値、３０～２００ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：Ａｇ、非常に低いＦＶＩＩＩ、及び＞０．５～０．７ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ：Ａｇ比またはＶＷＦ／ＶＷＦ：Ａｇ比の血小板結合活性に基づいたそれと同等の値によって示される。３型ＶＷＤは、＜３ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：ＲＣｏまたはＶＷＦの血小板結合活性（すなわち、ＶＷＦ：ＧＰＩｂＭ及びＶＷＦ：ＧＰＩｂＲ）によって決定した場合のそれと同等の値、＜３ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：Ａｇ、極めて低い（＜１０ＩＵ／ｄＬ）ＦＶＩＩＩによって示され、ＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ：Ａｇ比は適用されない。正常は、５０～２００ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：ＲＣｏまたはＶＷＦの血小板結合活性（すなわち、ＶＷＦ：ＧＰＩｂＭ及びＶＷＦ：ＧＰＩｂＲ）によって決定した場合のそれと同等の値、５０～２００ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：Ａｇ、正常なＦＶＩＩＩ、及び＞０．５～０．７ＩＵ／ｄＬのＶＷＦ：ＲＣｏ／ＶＷＦ：Ａｇ比またはＶＷＦ／ＶＷＦ：Ａｇ比の血小板結合活性に基づいたそれと同等の値によって示される。いくつかの実施形態において、対象は、３型ＶＷＤを有する。いくつかの実施形態において、対象は、重症の１型ＶＷＤを有する。いくつかの実施形態において、対象は、重症の２型ＶＷＤを有する。

【0090】

いくつかの実施形態において、対象は、過去１２ヶ月以内に少なくとも１回の出血イベントに対して治療を受けている。いくつかの実施形態において、対象は、過去１２ヶ月以内に１回を超える出血イベントに対して治療を受けている。

【0091】

一態様において、ＶＷＤを有する対象は、過多月経の治療のために約３０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇの範囲の少なくとも１用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、ＶＷＤを有する対象は、軽度の過多月経の治療のために約３０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇの範囲の少なくとも１用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、ＶＷＤを有する対象は、中程度の過多月経の治療のために約３０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇの範囲の少なくとも１用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、ＶＷＤを有する対象は、重度の過多月経の治療のために約３０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇの範囲の少なくとも１用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、１型ＶＷＤを有する対象は、軽度、中程度、または重度の過多月経エピソードを含む過多月経の治療のために約３０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇの範囲の少なくとも１用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、２型ＶＷＤを有する対象は、軽度、中程度、または重度の過多月経エピソードを含む過多月経の治療のために約３０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇの範囲の少なくとも１用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、２Ａ型ＶＷＤを有する対象は、軽度、中程度、または重度の過多月経エピソードを含む過多月経の治療のために約３０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇの範囲の少なくとも１用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、２Ｂ型ＶＷＤを有する対象は、軽度、中程度、または重度の過多月経エピソードを含む過多月経の治療のために約３０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇの範囲の少なくとも１用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、２Ｍ型ＶＷＤを有する対象は、軽度、中程度、または重度の過多月経エピソードを含む過多月経の治療のために約３０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇの範囲の少なくとも１用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、２Ｎ型ＶＷＤを有する対象は、軽度、中程度、または重度の過多月経エピソードを含む過多月経の治療のために約３０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇの範囲の少なくとも１用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、３型ＶＷＤを有する対象は、軽度、中程度、または重度の過多月経エピソードを含む過多月経の治療のために約３０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇの範囲の少なくとも１用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、重症３型ＶＷＤを有する対象は、軽度、中程度、または重度の過多月経エピソードを含む過多月経の治療のために約３０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇの範囲の少なくとも１用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、非重症３型ＶＷＤを有する対象は、軽度、中程度、または重度の過多月経エピソードを含む過多月経の治療のために約３０ＩＵ／ｋｇ～約９０ＩＵ／ｋｇの範囲の少なくとも１用量のｒＶＷＦが投与される。

【0092】

いくつかの実施形態において、軽度の過多月経を有するＶＷＤの対象は、３０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与される。いくつかの実施形態において、軽度の過多月経を有するＶＷＤの対象は、３０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量、及び３０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第２の用量が投与される。いくつかの実施形態において、軽度の過多月経を有する１型ＶＷＤの対象は、３０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与される。いくつかの実施形態において、軽度の過多月経を有するＶＷＤの対象は、３０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量、及び３０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第２の用量が投与される。いくつかの実施形態において、軽度の過多月経を有する２型ＶＷＤの対象は、３０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与される。いくつかの実施形態において、軽度の過多月経を有するＶＷＤの対象は、３０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量、及び３０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第２の用量が投与される。いくつかの実施形態において、軽度の過多月経を有する３型ＶＷＤの対象は、３０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与される。いくつかの実施形態において、軽度の過多月経を有するＶＷＤの対象は、３０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量、及び３０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第２の用量が投与される。

【0093】

いくつかの実施形態において、重度の過多月経を有するＶＷＤの対象は、４０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与される。いくつかの実施形態において、重度の過多月経を有するＶＷＤの対象は、４０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量及び８～１２時間ごとの約３日間の３０～７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの後続用量が投与される。いくつかの実施形態において、重度の過多月経を有するＶＷＤの対象は、４０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量、８～１２時間ごとの約３日間の３０～７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの追加用量、及び１日１回の３０～７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの後続用量が投与され、ｒＶＷＦ治療合計期間は、７日間以内である。特定の実施形態において、ｒＶＷＦの用量の少なくとも１つは、組換え第ＶＩＩＩ因子とともに投与される。

【0094】

特定の実施形態において、ｒＶＷＦの各用量は、組換え第ＶＩＩＩ因子とともに投与される。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの第１の用量は、組換え第ＶＩＩＩ因子とともに投与される。いくつかの実施形態において、８～１２時間ごとに投与されるｒＶＷＦの用量の少なくとも１つは、組換え第ＶＩＩＩ因子とともに投与される。いくつかの実施形態において、毎日に投与されるｒＶＷＦの用量の少なくとも１つは、組換え第ＶＩＩＩ因子とともに投与される。いくつかの場合において、ｒＶＷＦ及びｒＦＶＩＩＩは、対象に同時にまたは逐次的に投与される。いくつかの実施形態において、ｒＦＶＩＩＩは、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５０ＩＵ／ｋｇの用量で対象に投与される。

【0095】

いくつかの実施形態において、重度の過多月経を有する１型ＶＷＤの対象は、４０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与される。いくつかの実施形態において、重度の過多月経を有する１型ＶＷＤの対象は、４０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量及び８～１２時間ごとの約３日間の３０～７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの後続用量が投与される。いくつかの実施形態において、重度の過多月経を有する１型ＶＷＤの対象は、４０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量、８～１２時間ごとの約３日間の３０～７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの追加用量、及び１日１回の３０～７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの後続用量が投与され、ｒＶＷＦ治療合計期間は、７日間以内である。特定の実施形態において、ｒＶＷＦの用量の少なくとも１つは、組換え第ＶＩＩＩ因子とともに投与される。特定の実施形態において、ｒＶＷＦの各用量は、組換え第ＶＩＩＩ因子とともに投与される。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの第１の用量は、組換え第ＶＩＩＩ因子とともに投与される。いくつかの実施形態において、８～１２時間ごとに投与されるｒＶＷＦの用量の少なくとも１つは、組換え第ＶＩＩＩ因子とともに投与される。いくつかの実施形態において、毎日に投与されるｒＶＷＦの用量の少なくとも１つは、組換え第ＶＩＩＩ因子とともに投与される。いくつかの場合において、ｒＶＷＦ及びｒＦＶＩＩＩは、対象に同時にまたは逐次的に投与される。いくつかの実施形態において、ｒＦＶＩＩＩは、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５０ＩＵ／ｋｇの用量で対象に投与される。

【0096】

いくつかの実施形態において、重度の過多月経を有する２型ＶＷＤの対象は、５０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与される。いくつかの実施形態において、重度の過多月経を有する２型ＶＷＤの対象は、５０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量及び８～１２時間ごとの約３日間の３０～７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの後続用量が投与される。いくつかの実施形態において、重度の過多月経を有する２型ＶＷＤの対象は、５０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量、８～１２時間ごとの約３日間の３０～７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの追加用量、及び１日１回の３０～７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの後続用量が投与され、ｒＶＷＦ治療合計期間は、７日間以内である。特定の実施形態において、ｒＶＷＦの用量の少なくとも１つは、組換え第ＶＩＩＩ因子とともに投与される。特定の実施形態において、ｒＶＷＦの各用量は、組換え第ＶＩＩＩ因子とともに投与される。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの第１の用量は、組換え第ＶＩＩＩ因子とともに投与される。いくつかの実施形態において、８～１２時間ごとに投与されるｒＶＷＦの用量の少なくとも１つは、組換え第ＶＩＩＩ因子とともに投与される。いくつかの実施形態において、毎日に投与されるｒＶＷＦの用量の少なくとも１つは、組換え第ＶＩＩＩ因子とともに投与される。いくつかの場合において、ｒＶＷＦ及びｒＦＶＩＩＩは、対象に同時にまたは逐次的に投与される。いくつかの実施形態において、ｒＦＶＩＩＩは、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５０ＩＵ／ｋｇの用量で対象に投与される。

【0097】

いくつかの実施形態において、重度の過多月経を有する３型ＶＷＤの対象は、５０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量が投与される。いくつかの実施形態において、重度の過多月経を有する３型ＶＷＤの対象は、５０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量及び８～１２時間ごとの約３日間の３０～７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの後続用量が投与される。いくつかの実施形態において、重度の過多月経を有する３型ＶＷＤの対象は、５０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量、８～１２時間ごとの約３日間の３０～７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの追加用量、及び１日１回の３０～７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの後続用量が投与され、ｒＶＷＦ治療合計期間は、７日間以内である。特定の実施形態において、ｒＶＷＦの用量の少なくとも１つは、組換え第ＶＩＩＩ因子とともに投与される。特定の実施形態において、ｒＶＷＦの各用量は、組換え第ＶＩＩＩ因子とともに投与される。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの第１の用量は、組換え第ＶＩＩＩ因子とともに投与される。いくつかの実施形態において、８～１２時間ごとに投与されるｒＶＷＦの用量の少なくとも１つは、組換え第ＶＩＩＩ因子とともに投与される。いくつかの実施形態において、毎日に投与されるｒＶＷＦの用量の少なくとも１つは、組換え第ＶＩＩＩ因子とともに投与される。いくつかの場合において、ｒＶＷＦ及びｒＦＶＩＩＩは、対象に同時にまたは逐次的に投与される。いくつかの実施形態において、ｒＦＶＩＩＩは、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５０ＩＵ／ｋｇの用量で対象に投与される。

【0098】

いくつかの実施形態において、重症１型ＶＷＤを有し、重度の過多月経エピソードを体験している対象は、７日間以内の合計期間に、（ａ）５０～７５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量；（ｂ）対象のＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルが少なくとも５０％となるような８～１２時間ごとの３日間の４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第２セットの用量；及び（ｃ）１日１回の４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第３セットの用量が対象に投与される。

【0099】

いくつかの実施形態において、重症２型ＶＷＤを有し、重度の過多月経エピソードを体験している対象は、７日間以内の合計期間に、（ａ）６０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第１の用量；（ｂ）対象のＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルが少なくとも５０％となるような８～１２時間ごとの３日間の４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第２セットの用量；及び（ｃ）１日１回の４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦの第３セットの用量が対象に投与される。

【0100】

いくつかの実施形態において、対象が軽度から中程度の過多月経エピソードを経験している場合、１以上の用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、軽度から中程度の出血エピソードの場合、対象は、１用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、軽度から中程度の出血エピソードの場合、対象は、２用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、重度の過多月経出血エピソードの場合、対象は、１用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、重度の出血エピソードの場合、対象は、２用量のｒＶＷＦが投与される。

【0101】

いくつかの実施形態において、過多月経エピソードを有する対象は、約３０～９０ＩＵ／ｋｇ、約４０～８０ＩＵ／ｋｇ、約５０～７５ＩＵ／ｋｇ、約５０～９０ＩＵ／ｋｇ、約５０～８０ＩＵ／ｋｇ、約７０～９０ＩＵ／ｋｇ、または約４０～６０ＩＵ／ｋｇの範囲のｒＶＷＦの用量が投与される。いくつかの実施形態において、重度の過多月経エピソードを有する対象は、約３０～９０ＩＵ／ｋｇ、約４０～８０ＩＵ／ｋｇ、約５０～７５ＩＵ／ｋｇ、約５０～９０ＩＵ／ｋｇ、約５０～８０ＩＵ／ｋｇ、約７０～９０ＩＵ／ｋｇ、または約４０～６０ＩＵ／ｋｇの範囲のｒＶＷＦの用量が投与される。いくつかの実施形態において、中程度の過多月経エピソードを有する対象は、約３０～９０ＩＵ／ｋｇ、約４０～８０ＩＵ／ｋｇ、約５０～７５ＩＵ／ｋｇ、約５０～９０ＩＵ／ｋｇ、約５０～８０ＩＵ／ｋｇ、約７０～９０ＩＵ／ｋｇ、または４０～６０ＩＵ／ｋｇの範囲のｒＶＷＦの用量が投与される。いくつかの実施形態において、軽度の過多月経エピソードを有する対象は、約３０～９０ＩＵ／ｋｇ、約４０～８０ＩＵ／ｋｇ、約５０～７５ＩＵ／ｋｇ、約５０～９０ＩＵ／ｋｇ、約５０～８０ＩＵ／ｋｇ、約７０～９０ＩＵ／ｋｇ、または約４０～６０ＩＵ／ｋｇの範囲のｒＶＷＦの用量が投与される。いくつかの実施形態において、対象は、１、２またはそれ以上の用量のｒＶＷＦが投与される。

【0102】

いくつかの実施形態において、過多月経エピソードを有する対象は、約３０～９０ＩＵ／ｋｇ、約３０～６０ＩＵ／ｋｇ、約４０～８０ＩＵ／ｋｇ、約５０～７５ＩＵ／ｋｇ、約５０～９０ＩＵ／ｋｇ、約５０～８０ＩＵ／ｋｇ、約７０～９０ＩＵ／ｋｇ、または約４０～６０ＩＵ／ｋｇの範囲のｒＶＷＦの第１の用量が投与される。ある特定の実施形態において、対象は、約３０～９０ＩＵ／ｋｇ、約３０～６０ＩＵ／ｋｇ、約４０～８０ＩＵ／ｋｇ、約５０～７５ＩＵ／ｋｇ、約５０～９０ＩＵ／ｋｇ、約５０～８０ＩＵ／ｋｇ、約７０～９０ＩＵ／ｋｇ、または約４０～６０ＩＵ／ｋｇの範囲のｒＶＷＦの第２の用量が投与される。

【0103】

いくつかの実施形態において、重度の過多月経エピソードを有する対象は、約３０～９０ＩＵ／ｋｇ、約３０～６０ＩＵ／ｋｇ、約４０～８０ＩＵ／ｋｇ、約５０～７５ＩＵ／ｋｇ、約５０～９０ＩＵ／ｋｇ、約５０～８０ＩＵ／ｋｇ、約７０～９０ＩＵ／ｋｇ、または約４０～６０ＩＵ／ｋｇの範囲のｒＶＷＦの第１の用量が投与される。ある特定の実施形態において、対象は、約３０～９０ＩＵ／ｋｇ、約３０～６０ＩＵ／ｋｇ、約４０～８０ＩＵ／ｋｇ、約５０～７５ＩＵ／ｋｇ、約５０～９０ＩＵ／ｋｇ、約５０～８０ＩＵ／ｋｇ、約７０～９０ＩＵ／ｋｇ、または約４０～６０ＩＵ／ｋｇの範囲のｒＶＷＦの第２の用量が投与される。

【0104】

いくつかの実施形態において、中程度の過多月経エピソードを有する対象は、約３０～９０ＩＵ／ｋｇ、約３０～６０ＩＵ／ｋｇ、約４０～８０ＩＵ／ｋｇ、約５０～７５ＩＵ／ｋｇ、約５０～９０ＩＵ／ｋｇ、約５０～８０ＩＵ／ｋｇ、約７０～９０ＩＵ／ｋｇ、または約４０～６０ＩＵ／ｋｇの範囲のｒＶＷＦの第１の用量が投与される。ある特定の実施形態において、対象は、約３０～９０ＩＵ／ｋｇ、約３０～６０ＩＵ／ｋｇ、約４０～８０ＩＵ／ｋｇ、約５０～７５ＩＵ／ｋｇ、約５０～９０ＩＵ／ｋｇ、約５０～８０ＩＵ／ｋｇ、約７０～９０ＩＵ／ｋｇ、または約４０～６０ＩＵ／ｋｇの範囲のｒＶＷＦの第２の用量が投与される。

【0105】

いくつかの実施形態において、軽症の過多月経エピソードを有する対象は、約３０～９０ＩＵ／ｋｇ、約３０～６０ＩＵ／ｋｇ、約４０～８０ＩＵ／ｋｇ、約５０～７５ＩＵ／ｋｇ、約５０～９０ＩＵ／ｋｇ、約５０～８０ＩＵ／ｋｇ、約７０～９０ＩＵ／ｋｇ、または約４０～６０ＩＵ／ｋｇの範囲のｒＶＷＦの第１の用量が投与される。ある特定の実施形態において、対象は、約３０～９０ＩＵ／ｋｇ、約３０～６０ＩＵ／ｋｇ、約４０～８０ＩＵ／ｋｇ、約５０～７５ＩＵ／ｋｇ、約５０～９０ＩＵ／ｋｇ、約５０～８０ＩＵ／ｋｇ、約７０～９０ＩＵ／ｋｇ、または約４０～６０ＩＵ／ｋｇの範囲のｒＶＷＦの第２の用量が投与される。

【0106】

いくつかの実施形態において、過多月経エピソードを有する対象は、約３０～９０ＩＵ／ｋｇ、約３０～６０ＩＵ／ｋｇ、約４０～８０ＩＵ／ｋｇ、約５０～７５ＩＵ／ｋｇ、約５０～９０ＩＵ／ｋｇ、約５０～８０ＩＵ／ｋｇ、約７０～９０ＩＵ／ｋｇ、または約４０～６０ＩＵ／ｋｇの範囲の第１の用量が投与される。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの後続用量は、４～１２時間ごとに、約３０～９０ＩＵ／ｋｇ、約３０～６０ＩＵ／ｋｇ、約４０～８０ＩＵ／ｋｇ、約５０～７５ＩＵ／ｋｇ、約５０～９０ＩＵ／ｋｇ、約５０～８０ＩＵ／ｋｇ、約７０～９０ＩＵ／ｋｇ、または約４０～６０ＩＵ／ｋｇの範囲である。

【0107】

いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの後続用量は、４～１２時間、６～１２時間、８～１２時間、１０～１２時間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、及び１２時間ごとに、約３０～７０ＩＵ／ｋｇまたは約４０～６０ＩＵ／ｋｇの範囲である。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの後続用量は、出血エピソードの期間にわたって投与される。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの後続用量は、出血エピソードが解決するまで投与される。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの後続用量は、約１～２日間、約１～３日間、約２～５日間、約１～５日間、約１～７日間、約２～７日間、約３～７日間、約４～７日間、約５～７日間、約６～７日間またはそれ以上投与される。いくつかの実施形態において、第１の用量の後、ｒＶＷＦは、約３０～７０ＩＵ／ｋｇまたは約４０～６０ＩＵ／ｋｇの範囲の用量で、８～１２時間ごとに約３日間投与される。

【0108】

いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの第１の用量は、治療の初日に投与され、後続用量は、最大７日の治療合計期間で投与される。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦの第１の用量は、１日目に投与され、次の用量は、２日間、３日間、４日間、５日間またはそれ以上投与される。ある特定の実施形態において、ｒＶＷＦの投与は、０．５ＩＵ／ｍＬ以上のＶＷＦ：ＲＣｏまたは同等のＶＷＦ活性アッセイ、限定するものではないが、ＶＷＦ：ＧＰＩｂＭアッセイ及びＶＷＦ：ＧＰＩｂＲアッセイなどによって決定した場合のそれと同等の値のトラフレベルを維持する。

【0109】

いくつかの実施形態において、軽度または中程度の過多月経エピソードを有する対象は、４０～５０ＩＵ／ｋｇを１用量または２用量（すなわち、１または２回の注入）で投与される。いくつかの実施形態において、対象は、重症１型ＶＷＤと診断される。いくつかの実施形態において、対象は、重症１型ＶＷＤと診断され、２０％のベースラインＶＷＦ：ＲＣｏ活性または同等のＶＷＦ活性アッセイ、限定するものではないが、ＶＷＦ：ＧＰＩｂＭアッセイ及びＶＷＦ：ＧＰＩｂＲアッセイなどによって決定した場合のそれと同等の値である。

【0110】

いくつかの実施形態において、重度または重症の過多月経エピソードを有する対象は、約５０～７５ＩＵ／ｋｇの初回用量（すなわち、第１の用量または第１セットの用量）、８～１２時間ごとの３日間の約４０～６０ＩＵ／ｋｇの第２の用量または第２セットの用量、及び毎日の約４０～６０ＩＵ／ｋｇの第３の用量または第３セットの用量が最大７日の治療合計期間で投与される。いくつかの実施形態において、重度または重症の過多月経エピソードを有する対象は、約６０～８０ＩＵ／ｋｇの第１の用量及び８～１２時間ごとの３日間の約４０～６０ＩＵ／ｋｇの追加の後続用量が投与される。いくつかの実施形態において、重度または重症の過多月経エピソードを有する対象は、約６０～８０ＩＵ／ｋｇの第１の用量及び毎日の約４０～６０ＩＵ／ｋｇの追加後続用量が最大７日の治療合計期間で投与される。いくつかの場合において、第１の用量後の追加用量により、０．５ＩＵ／ｍＬ以上のＶＷＦ：ＲＣｏまたは同等のＶＷＦ活性アッセイによって決定した場合のそれと同等の値のトラフレベルが維持される。いくつかの実施形態において、対象は、重症１型ＶＷＤと診断される。いくつかの実施形態において、対象は、重症１型ＶＷＤと診断され、２０％のベースラインＶＷＦ：ＲＣｏ活性または同等のＶＷＦアッセイ、限定するものではないが、ＶＷＦ：ＧＰＩｂＭアッセイ及びＶＷＦ：ＧＰＩｂＲアッセイなどによって決定した場合のそれと同等の値である。

【0111】

いくつかの実施形態において、軽度または中程度の過多月経エピソードを有する対象は、４０～５０ＩＵ／ｋｇを１用量または２用量（すなわち、１または２回の注入）で投与される。いくつかの実施形態において、対象は、２Ａ型、２Ｂ型、２Ｎ型または２Ｍ型を含むがこれらに限定されない２型ＶＷＤと診断される。いくつかの実施形態において、対象は、３型ＶＷＤと診断される。

【0112】

いくつかの実施形態において、重度または重症の過多月経エピソードを有する対象は、約６０～８０ＩＵ／ｋｇの第１の用量（すなわち、第１の用量または第１セットの用量）、８～１２時間ごとの３日間の約４０～６０ＩＵ／ｋｇの第２の用量または第２セットの用量、及び毎日の約４０～６０ＩＵ／ｋｇの第３の用量または第３セットの用量が最大７日の治療合計期間で投与される。いくつかの実施形態において、重度または重症の過多月経エピソードを有する対象は、約６０～８０ＩＵ／ｋｇの第１の用量及び８～１２時間ごとの３日間の約４０～６０ＩＵ／ｋｇの追加の後続用量が投与される。いくつかの実施形態において、重度または重症の過多月経エピソードを有する対象は、約６０～８０ＩＵ／ｋｇの第１の用量及び毎日の約４０～６０ＩＵ／ｋｇの追加後続用量が最大７日の治療合計期間で投与される。いくつかの場合において、第１の用量後の用量により、０．５ＩＵ／ｍＬ以上のＶＷＦ：ＲＣｏまたは同等のＶＷＦ活性アッセイによって決定した場合のそれと同等の値のトラフレベルが維持される。いくつかの実施形態において、対象は、２Ａ型、２Ｂ型、２Ｎ型または２Ｍ型ＶＷＤを含むがこれらに限定されない２型ＶＷＤと診断される。いくつかの実施形態において、対象は、３型ＶＷＤ、すなわち、重症または非重症３型ＶＷＤと診断される。

【0113】

いくつかの実施形態において、過多月経エピソードを有する対象は、出血エピソードの期間中（すなわち、継続期間中）、約４０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ（例えば、約４０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１９５ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１９０ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１８５ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１８０ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１７５ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１７０ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１６５ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１５５ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１５０ＩＵ／ｋｇ、約４１ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約４２ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約４３ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約４４ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約４５ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約４６ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約４７ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約４８ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約４９ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約５２ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約５５ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約５８ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約６２ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約６４ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約６６ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約６８ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約６９ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約７０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約７２ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約７４ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約７５ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約７７ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約７９ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１５９ＩＵ／ｋｇ、約４４ＩＵ／ｋｇ～約１８５ＩＵ／ｋｇなど）の範囲のｒＶＷＦが投与される。

【0114】

いくつかの実施形態において、過多月経エピソードを有する対象は、出血エピソードの期間中、約１５ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ（例えば、約１５ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約１７ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約１８ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約１９ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約２１ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約２２ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約２３ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約２４ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約２６ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約２７ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約２８ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約２９ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約３１ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約３２ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約３３ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約３４ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ，約３６ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約３７ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約３８ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約３９ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約４１ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約４２ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約４３ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約４４ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約４５ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約４６ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約４７ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約４８ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約４９ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇ、約１５ＩＵ／ｋｇ～約７５ＩＵ／ｋｇ、約２０ＩＵ／ｋｇ～約７５ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ～約７５ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ～約７５ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ～約４５ＩＵ／ｋｇ、約２８ＩＵ／ｋｇ～約４０ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ～約７４ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ～約７４ＩＵ／ｋｇ、約３１ＩＵ／ｋｇ～約７４ＩＵ／ｋｇなど）の範囲のｒＦＶＩＩＩが投与される。

【0115】

いくつかの実施形態において、過多月経エピソードを治療するためにｒＶＷＦを投与される対象は、以前の過多月経エピソードを治療するためにホルモン療法を以前に受けたことがある。多くの実施形態において、以前の過多月経エピソードは、混合型避妊薬またはレボノルゲストレル放出子宮内システムを使用して治療された。いくつかの実施形態において、以前の過多月経エピソードは、トランセキサム酸を使用して治療された。他の実施形態において、以前の過多月経エピソードは、デスモプレシンを使用して治療された。ＶＷＤを有する対象における過多月経エピソードを治療するための他の方法の説明は、例えば、Ｃｏｎｎｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０２１，５（１）：３０１－３２５；Ｒｉｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ，２０１３，１９（６）：９３３－９３８；Ａｄｅｙｅｍｉ－Ｆｏｗｏｄｅ ｅｔ ａｌ．，；Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ Ａｄｏｌｅｓｃ Ｇｙｎｅｃｏｌ，２０１７，３０（４）：４７９－４８３；Ｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｎｔｒａｃｅｐｔｉｏｎ，２０１１，８３（３）：２４２－２４７；Ｋｏｕｉｄｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ，２００９，１４５（２）：２１２－２２０；Ｋｉｎｇｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ＢＪＯＧ，２００４，１１１（１２）：１４２５－１４２８；Ａｍｅｓｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ Ｈｅｍａｌｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ，２００５，２７（７）：３５７－３６３；及びＬｕｋｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｔｅｒｉｌ，２００８，９０（３）：６７３－６７７に見出すことができ、その内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。

【0116】

いくつかの実施形態において、対象は、ｒＶＷＦのみで治療される。いくつかの実施形態において、対象は、血漿由来ＶＷＦで治療されない。いくつかの実施形態において、対象は、組換えＦＶＩＩＩが投与される。いくつかの実施形態において、対象は、過多月経エピソードを治療するために、組換えＦＶＩＩＩの投与を受けない。

【0117】

いくつかの実施形態において、対象は、過多月経エピソードのために、１用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、対象は、過多月経エピソードのために、少なくとも１用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、対象は、過多月経エピソードのために、２～６用量、例えば、２用量、３用量、４用量、５用量または６用量のｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、対象は、過多月経エピソードのために、２～６回の注入、例えば、２回の注入、３回の注入、４回の注入、５回の注入または６回の注入のｒＶＷＦが投与される。

【0118】

過多月経、または重度月経出血（ＨＭＢ）は、ＶＷＤなどの出血性疾患を有する女性が経験する一般的な症状である。出血性疾患のない女性の場合、平均的な月経出血量は、２５～８０ｍｌで、大きな血塊はない。いくつかの場合、対象は、対象の平均的な月経出血量ではなく、対象が自己申告した症状及びそのような症状が生活の質に与える影響に基づいて、過多月経を経験しているとみなされる。したがって、過多月経を有する対象は、過多月経出血エピソード１回につき８０ｍｌ未満の平均出血量を有し得る。過多月経の分類及び管理の指針は、例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｃａｒｅ Ｅｘｃｅｌｌｅｎｃｅ（ＮＩＣＥ）Ｈｅａｖｙ ｍｅｎｓｔｒｕａｌ ｂｌｅｅｄｉｎｇ：ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ．ＮＩＣＥ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ，２０１８；Ｑｕｉｎｎ ａｎｄ Ｈｉｇｈａｍ，Ｗｏｍｅｎ’ｓ Ｈｅａｌｔｈ（Ｌｏｎｄ．），２０１６，１２２（１）：２１－２６；及びＭａｇｎａｙ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｗｏｍｅｎ’ｓ Ｈｅａｌｔｈ，２０２０，２０：２４に見出すことができる。いくつかの場合において、過多月経は、ＰＡＬＭ－ＣＯＥＩＮシステムに従って分類される（Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｃｕｔｅ ａｂｎｏｒｍａｌ ｕｔｅｒｉｎｅ ｂｌｅｅｄｉｎｇ ｉｎ ｎｏｎｐｒｅｇｎａｎｔ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ－ａｇｅｄ ｗｏｍｅｎ．Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｎｏ．５５７．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｉａｎｓ ａｎｄ Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｓｔｓ．Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ ２０１３；１２１：８９１－６）。

【0119】

過多月経出血エピソードは、当業者によって認識される測定及び評価によって評価することができる。評価の非限定的な例としては、Ｒｕｔａ Ｍｅｎｏｒｒｈａｇｉａ Ｓｃｏｒｅ、ＦＩＧＯ ＡＵＢ Ｓｙｓｔｅｍ １、ＦＩＧＯ ＡＵＢ Ｓｙｓｔｅｍ ２、絵図式出血量評価チャート（ＰＢＡＣ）、周期重症度スコア（ＣＳＲ）、周期長（ＣＬ）、質問票、健康調査、及びこれらの任意の組み合わせが挙げられる。

【0120】

いくつかの実施形態において、軽度の過多月経は、対象のヘモグロビンレベルが１２ｇ／ｄＬを超える月経出血エピソードを指す。いくつかの実施形態において、中程度の過多月経は、対象のヘモグロビンレベルが約９～１２ｇ／ｄＬである月経出血エピソードを指す。いくつかの実施形態において、重度または重症の過多月経は、対象のヘモグロビンレベルが約９ｇ／ｄＬ未満となる月経出血エピソードを指す。いくつかの場合において、過多月経は、次の因子のうちの１つ以上に基づく（ａ）対象自身の経験に基づく月経出血量、（ｂ）過多月経の発生率、（ｃ）月経頻度、（ｄ）月経の期間、及び（ｅ）月間出血量の体積。

【0121】

いくつかの実施形態において、軽度の過多月経は、重度の過多月経と比較して出血の重症度が低いことを特徴とする月経出血エピソードを含む。いくつかの実施形態において、重度または重症の過多月経は、軽度の過多月経と比較して出血の重症度が大きいことを特徴とする月経出血エピソードを含む。いくつかの場合において、軽度、中程度、または重度の過多月経出血エピソードは、対象の身体的、社会的、感情的及び／または物質的な生活の質に対する出血エピソードの影響を評価／査定することで、対象によって決定される。

【0122】

一般に、軽度の出血は、多量出血、大出血及び／または臨床的に関係のある非大出血（ＣＲＮＭ出血）（Ａｒｉｓｔｏｔｌｅ臨床定義）の基準を満たさない急性または亜急性の臨床的に明らかな出血を特徴とする。一般に、大出血は、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｎ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ（ＩＳＴＨ）の基準によって特徴付けられ、生命を脅かす及び／または致死的なあらゆる出血ならびに重要な領域または臓器への症状性出血を含む。大出血イベントは、ヘモグロビンの少なくとも２０ｇ／Ｌの低下または＞２単位の全血輸血があるものを含み得る（生命を脅かす出血の定義で言及されているのは濃縮赤血球；生命を脅かす出血のＲＥ－ＬＹ定義：以下の基準のうちの１つ以上：少なくとも５．０ｇ／Ｌのヘモグロビンレベルの低下；少なくとも４Ｕの血液もしくは濃縮赤血球の輸血；静脈内強心薬の使用を必要とする低血圧を伴うもの；ヘモグロビンの＞２ｇ／ｄＬの低下もしくは＞２単位の全血／赤血球の輸血（ＩＳＴＨまたはＲｏｃｋｅｔ－ＡＦ臨床定義）；及び／または手術もしくは≧２Ｕの輸血を必要とする出血もしくは≧２．０ｇ／Ｌのヘモグロビン低下エピソードを伴う出血。例えば、Ｒｏｄｅｇｈｉｅｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ，２０１０，８：２０６３－２０６５ ａｎｄ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ＩＳＴＨ Ｂｌｏｏｄ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｔｏｏｌ；“Ｔｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ，”ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．０８－５８３２，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２００７；及びＣｏｎｎｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ Ａｄｖａｎｃｅｓ，２０２１，５（１）：３０１－３２５を参照されたい。

【0123】

ＩＩ．重症ＶＷＤ患者における過多月経を治療するためのｒＶＷＦの投与の治療効果
いくつかの実施形態において、本発明は、重症フォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）を有する対象の過多月経エピソードを治療することを提供する。いくつかの実施形態において、治療は、過多月経エピソードを管理するために、組換えフォンヴィレブランド因子（ｒＶＷＦ）を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態において、過多月経エピソードを管理することは、出血の重症度、出血期間、出血頻度、及び過多月経エピソードの解決までの時間を減らすことが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、過多月経エピソードを管理することは、治療効果を示すものである。

【0124】

いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦ投与の治療効果は、ｒＶＷＦによる治療前のレベルと比較して、ｒＶＷＦによる治療後のＦＶＩＩＩ、ＦＶＩＩＩ：Ｃ、ＶＷＦ：ＲＣｏ、ＶＷＦ：ＧＰＩｂＭ、ＶＷＦ：ＧＰＩｂＲ、血小板依存性ＶＷＦ活性／ＶＷＦ：Ａｇ比、ＶＷＦコラーゲン結合と抗原の比（ＶＷＦ：ＣＢ／ＶＷＦ：Ａｇ比）及び／またはＶＷＦ：Ａｇ活性レベルの改善によって示される。いくつかの実施形態において、ＦＶＩＩＩ、ＦＶＩＩＩ：Ｃ、ＶＷＦ：ＲＣｏ、ＶＷＦ：ＧＰＩｂＭ、ＶＷＦ：ＧＰＩｂＲ、血小板依存性ＶＷＦ活性／ＶＷＦ：Ａｇ比、ＶＷＦコラーゲン結合と抗原の比（ＶＷＦ：ＣＢ／ＶＷＦ：Ａｇ比）及び／またはＶＷＦ：Ａｇ活性レベルの改善は、活性レベルが正常レベル、すなわち、ＶＷＤを有しない対象におけるレベルに近付くような活性レベルの変化を含む。

【0125】

いくつかの実施形態において、治療効果は、臨床評価スケールに従って決定される。いくつかの実施形態において、臨床評価スケールは、３、４、または５つの分類または基準を含む。いくつかの実施形態において、臨床評価スケールは、「優良」、「良好」、「中程度」及び「なし」の評価を含む。

【0126】

いくつかの実施形態において、重度または重症の過多月経エピソードを経験する患者に本明細書で提供される方法に従ってｒＶＷＦを投与することは、「優良」または「良好」に分類される治療上の効果をもたらす。いくつかの場合において、ｒＶＷＦ投与の治療上の効果は、「中程度」と定義される。いくつかの実施形態において、軽度及び／または中程度の過多月経エピソードを経験する患者に本明細書で提供される方法に従ってｒＶＷＦを投与することは、「優良」または「良好」に分類される治療上の効果をもたらす。いくつかの場合において、ｒＶＷＦ投与の治療上の効果は、「中程度」と定義される。

【0127】

いくつかの実施形態において、軽度及び／または中程度の過多月経エピソードの治療に対する「優良」という治療上の効果の評価は、注入回数が、１型、２Ａ型、２Ｂ型、２Ｍ型、２Ｎ型、または３型ＶＷＤを有しない対象における同等のエピソードを治療するのに必要な推定注入回数と同等またはそれ以下であり、過多月経エピソードを解決するために追加のＶＷＦ含有凝固因子療法が必要でない場合に示される。いくつかの実施形態において、軽度及び中程度の過多月経エピソードの治療に対する「良好」という治療効果の評価は、１型、２Ａ型、２Ｂ型、２Ｍ型、２Ｎ型、または３型ＶＷＤを有しない対象における同等のエピソードを治療するのに必要な回数と比較して、更に１～２回の追加注入がエピソードを解決するために必要であり、過多月経エピソードを解決するために追加のＶＷＦ含有凝固因子療法が必要でない場合に示される。いくつかの実施形態において、軽度及び中程度の過多月経エピソードの治療に対する「中程度」という治療効果の評価は、１型、２Ａ型、２Ｂ型、２Ｍ型、２Ｎ型、または３型ＶＷＤを有しない対象における同等のエピソードを治療するのに必要な回数と比較して、３回以上の追加注入がエピソードを解決するために必要であり、過多月経エピソードを解決するために追加のＶＷＦ含有凝固因子療法が必要でない場合に示される。いくつかの実施形態において、軽度及び中程度の過多月経エピソードの治療に対する「なし」という治療効果の評価は、重症及びコントロール不良の出血がｒＶＷＦ治療によって変化せず、追加のＶＷＦ含有凝固因子療法が必要である場合に示される。

【0128】

いくつかの実施形態において、重度または重症の過多月経エピソードの治療に対する「優良」という治療効果の評価は、注入回数が、１型、２Ａ型、２Ｂ型、２Ｍ型、２Ｎ型、または３型ＶＷＤを有しない対象における同等のエピソードを治療するのに必要な推定注入回数と同等またはそれ以下であり、過多月経エピソードを解決するために追加のＶＷＦ含有凝固因子療法が必要でない場合に示される。いくつかの実施形態において、重度または重症の過多月経エピソードの治療に対する「良好」という治療効果の評価は、１型、２Ａ型、２Ｂ型、２Ｍ型、２Ｎ型、または３型ＶＷＤを有しない対象における同等のエピソードを治療するのに必要な回数と比較して、更に１．５倍未満の注入がエピソードを解決するために必要であり、過多月経エピソードを解決するために追加のＶＷＦ含有凝固因子療法が必要でない場合に示される。いくつかの実施形態において、重度または重症の過多月経エピソードの治療に対する「中程度」という治療効果の評価は、１型、２Ａ型、２Ｂ型、２Ｍ型、２Ｎ型、または３型ＶＷＤを有しない対象における同等のエピソードを治療するのに必要な回数と比較して、更に少なくとも１．５倍（例えば、≧１．５倍）の注入がエピソードを解決するために必要であり、過多月経エピソードを解決するために追加のＶＷＦ含有凝固因子療法が必要でない場合に示される。

【0129】

いくつかの実施形態において、重度または重症の過多月経エピソードの治療に対する「なし」という治療効果の評価は、重症及びコントロール不良の出血または出血の強度がｒＶＷＦ治療によって変化せず、追加のＶＷＦ含有凝固因子療法が必要である場合に示される。

【0130】

治療効果はまた、過多月経を評価するのに有用な以下の尺度のうちの１つ以上を使用して評価することができる：ＰＢＡＣによる月経出血、周期重症度、周期期間、及び健康関連の生活の質（ＨＲＱｏＬ）質問票、例えば、Ｒａｎｄ Ｓｈｏｒｔ Ｆｏｒｍ ３６－Ｑｕｅｓｔｉｏｎ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｕｒｖｅｙ（ＳＦ－３６）、Ｒｕｔａ Ｍｅｎｏｒｒｈａｇｉａ Ｓｅｖｅｒｉｔｙ Ｓｃａｌｅ、Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｈｅａｌｔｈ－Ｒｅｌａｔｅｄ Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ－１４ Ｑｕｅｓｔｉｏｎ Ｆｏｒｍ（ＣＤＣ－ＨＲＱｏＬ１４）、及びＣｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃ Ｓｔｕｄｉｅｓ Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｃａｌｅ（ＣＥＳ－Ｄ）。

【0131】

ＩＩＩ．組換えフォンヴィレブランド因子（ｒＶＷＦ）
本発明は、過多月経出血エピソードを経験したことがあるまたは経験している重症ＶＷＤを有する対象を治療するための、ｒＶＷＦを含む組成物を利用する。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦを含む組成物は、重症ＶＷＤを有する対象における過多月経出血エピソードの発症を予防するためのものである。

【0132】

ある特定の実施形態において、本発明のＶＷＦタンパク質は、組換えＶＷＦを作製するためのＷＯ１９８６／０６０９６及びＵＳ８，５９７，９１０に記載されているものなどのコンストラクトを含み得る。提供される有用なＶＷＦは、モノマー形態及びマルチマー形態を含む、全ての可能な形態を含み得る。ＶＷＦの特に有用な形態の１つは、少なくとも２つのＶＷＦのホモマルチマーである。ＶＷＦタンパク質は、生物学的に活性な誘導体であってもよいし、ＦＶＩＩＩの安定剤としてのみ使用される場合には、ＶＷＦは、生物学的に活性でない形態であってもよい。また、本発明は、組み合わせて使用される様々な形態のＶＷＦも包含することも理解されたい。例えば、本発明に有用な組成物は、異なるマルチマー、異なる誘導体、ならびに生物学的に活性な誘導体及び生物学的に活性でない誘導体の両方を含み得る。

【0133】

提供されるｒＶＷＦ組成物のｐｄＶＷＦに対する利点は、ｒＶＷＦがｐｄＶＷＦよりも高い比活性を示すことである。ｐｄＶＷＦの比活性は、約４０ｍＵ／μｇ～約７０ｍＵ／μｇ（すなわち、約４０ＩＵ ＶＷＦ：ＲＣｏ／ｍｇタンパク質～約７０ＩＵ ＶＷＦ：ＲＣｏ／ｍｇタンパク質）の範囲であり得る。いくつかの実施形態において、本発明のｒＶＷＦは、少なくとも約２０、２２．５、２５、２７．５、３０、３２．５、３５、３７．５、４０、４２．５、４５、４７．５、５０、５２．５、５５、５７．５、６０、６２．５、６５、６７．５、７０、７２．５、７５、７７．５、８０、８２．５、８５、８７．５、９０、９２．５、９５、９７．５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０ｍＵ／μｇまたはそれ以上の比活性を有する。いくつかの実施形態において、本発明のｒＶＷＦは、約２０～約３０ｍＵ／μｇの比活性を有する。いくつかの実施形態において、本発明のｒＶＷＦは、約３０～約４０ｍＵ／μｇの比活性を有する。いくつかの実施形態において、本発明のｒＶＷＦは、約４０～約５０ｍＵ／μｇの比活性を有する。いくつかの実施形態において、本発明のｒＶＷＦは、約５０～約６０ｍＵ／μｇの比活性を有する。いくつかの実施形態において、本発明のｒＶＷＦは、約６０～約７０ｍＵ／μｇの比活性を有する。いくつかの実施形態において、本発明のｒＶＷＦは、約７０～約８０ｍＵ／μｇの比活性を有する。いくつかの実施形態において、本発明のｒＶＷＦは、約８０～約９０ｍＵ／μｇの比活性を有する。いくつかの実施形態において、本発明のｒＶＷＦは、約９０～約１００ｍＵ／μｇの比活性を有する。いくつかの実施形態において、本発明のｒＶＷＦは、約１００～約１１０ｍＵ／μｇの比活性を有する。いくつかの実施形態において、本発明のｒＶＷＦは、約１１０～約１２０ｍＵ／μｇの比活性を有する。いくつかの実施形態において、本発明のｒＶＷＦは、約１２０～約１３０ｍＵ／μｇの比活性を有する。いくつかの実施形態において、本発明のｒＶＷＦは、約１３０～約１４０ｍＵ／μｇの比活性を有する。いくつかの実施形態において、本発明のｒＶＷＦは、約１４０～約１５０ｍＵ／μｇの比活性を有する。いくつかの実施形態において、本発明のｒＶＷＦは、約１５０ｍＵ／μｇを超える比活性を有する。

【0134】

いくつかの実施形態において、本明細書で概説される方法に従って精製されたｒＶＷＦは、少なくとも約２０、２２．５、２５、２７、５、３０、３２．５、３５、３７．５、４０、４２．５、４５、４７．５、５０、５２．５、５５、５７．５、６０、６２．５、６５、６７．５、７０、７２．５、７５、７７．５、８０、８２．５、８５、８７．５、９０、９２．５、９５、９７．５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０ｍＵ／μｇまたはそれ以上の比活性を有する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される方法において使用されるｒＶＷＦは、２０ｍＵ／μｇ～１５０ｍＵ／μｇの比活性を有する。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦは、３０ｍＵ／μｇ～１２０ｍＵ／μｇの比活性を有する。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦは、４０ｍＵ／μｇ～９０ｍＵ／μｇの比活性を有する。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦは、ＷＯ２０１２／１７１０３１の表１の再掲である以下の表１に見出される変形形態１～１３３から選択される比活性を有する。

【0135】

（表１）本明細書で提供される組成物中に存在する及び本明細書で提供される方法において使用されるｒＶＷＦの比活性の例示的な実施形態

Ｖａｒ．＝変形形態

【0136】

本明細書で概説されるｒＶＷＦ組成物は、約１０～約４０サブユニットを含む高マルチマーである。いくつかの実施形態において、以下に概説される方法を使用して作製されるマルチマーｒＶＷＦは、約１０～３０、１２～２８、１４～２６、１６～２４、１８～２２、２０～２１サブユニットを含む。更なる実施形態において、ｒＶＷＦは、ダイマーから４０サブユニットを超えるマルチマー（１００万ダルトン超）までの様々な大きさのマルチマーで存在する。最も大型のマルチマーは、血小板受容体及び内皮下マトリックスの損傷部位の両方と相互作用することができる複数の結合部位を提供し、ＶＷＦのうち最も止血活性の高い形態である。超大型ｒＶＷＦマルチマーはＡＤＡＭＴＳ１３の適用により経時的に切断されるが、産生中（一般に細胞培養での発現による）、本発明のｒＶＷＦ組成物は一般にＡＤＡＭＴＳ１３に曝露されることはなく、高マルチマー構造を保持する。ＶＷＦマルチマーに関する更なる詳細は、以下のセクションに見出される。

【0137】

特定の態様において、ｒＶＷＦは、任意のコンジュゲーション、翻訳後または共有結合による修飾によって修飾されない。特定の実施形態において、本発明のｒＶＷＦは、限定するものではないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、ポリシアル酸、ヒドロキシルエチルデンプン、ポリ炭水化物部分などを含む、水溶性ポリマーで修飾されない。

【0138】

他の態様において、ｒＶＷＦは、コンジュゲーション、翻訳後修飾、または共有結合による修飾により修飾され、これらには、Ｎ末端またはＣ末端残基の修飾、ならびに選択された側鎖、例えば、遊離スルフヒドリル基、第一級アミン、及びヒドロキシル基における修飾が含まれる。一実施形態において、水溶性ポリマーは、リシン基または他の第一級アミンによってタンパク質に（直接またはリンカーを介して）連結される。一実施形態において、本発明のｒＶＷＦタンパク質は、限定するものではないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、ポリシアル酸、ヒドロキシルエチルデンプン、ポリ炭水化物部分などを含む、水溶性ポリマーのコンジュゲーションによって修飾され得る。

【0139】

ｒＶＷＦ及び／またはＦＶＩＩＩの修飾に使用され得る水溶性ポリマーは、線状及び分枝状の構造を含む。コンジュゲートされるポリマーは、本発明の凝固タンパク質に直接結合されてもよいし、あるいは、連結部分を介して結合されてもよい。水溶性ポリマーとのタンパク質コンジュゲーションの非限定的な例としては、米国特許第４，６４０，８３５号；同第４，４９６，６８９号；同第４，３０１，１４４号；同第４，６７０，４１７号；同第４，７９１，１９２号、及び同第４，１７９，３３７号、ならびにＡｂｕｃｈｏｗｓｋｉ ａｎｄ Ｄａｖｉｓ “Ｅｎｚｙｍｅｓ ａｓ Ｄｒｕｇｓ，” Ｈｏｌｃｅｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｅｄｓ．，ｐｐ．３６７ ３８３，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８１）、及びＨｅｒｍａｎｓｏｎ Ｇ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２ｎｄ Ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．２００８に見出すことができる。

【0140】

ＩＶ．組換えＶＷＦの産生
本発明の遊離成熟組換えフォンヴィレブランド因子（ｒＶＷＦ）は、組換え的に産生することができる。当業者であれば、組換えタンパク質を宿主細胞中で発現させる有用な方法を認識している。いくつかの場合において、方法は、ｒＶＷＦをコードする核酸配列をＣＨＯ細胞などの宿主細胞中で発現させ、得られた宿主細胞をある特定の条件下で培養して、ｒＶＷＦ、プレプロＶＷＦ、プロＶＷＦなどを産生させることを含む。

【0141】

ある特定の実施形態において、ＶＷＦをコードする配列を含む核酸配列は、発現ベクターであり得る。ベクターは、ウイルスにより送達され得るか、またはプラスミドであり得る。タンパク質をコードする核酸配列は、特定の遺伝子またはその生物学的に機能性である部分であり得る。一実施形態において、タンパク質は、少なくともＶＷＦの生物学的に活性な部分である。核酸配列は、プロモーター配列、エンハンサー、ＴＡＴＡボックス、転写開始部位、ポリリンカー、制限部位、ポリＡ配列、タンパク質プロセシング配列、選択マーカー、及び当業者に一般に知られている同様のものなどのタンパク質の発現制御に好適な他の配列を更に含むことができる。

【0142】

ＶＷＦの発現には、多種多様なベクターを使用することができ、真核細胞発現ベクターから選択することができる。真核細胞発現用ベクターの例としては、（ｉ）酵母での発現の場合、ＡＯＸ１、ＧＡＰ、ＧＡＬ１、ＡＵＧ１などのプロモーターを使用する、ｐＡＯ、ｐＰＩＣ、ｐＹＥＳ、ｐＭＥＴなどのベクター；（ｉｉ）昆虫細胞での発現の場合、ＰＨ、ｐ１０、ＭＴ、Ａｃ５、ＯｐＩＥ２、ｇｐ６４、ｐｏｌｈなどのプロモーターを使用する、ｐＭＴ、ｐＡｃ５、ｐＩＢ、ｐＭＩＢ、ｐＢＡＣなどのベクター、ならびに（ｉｉｉ）哺乳動物細胞での発現の場合、ＣＭＶ、ＳＶ４０、ＥＦ－１、ＵｂＣ、ＲＳＶ、ＡＤＶ、ＢＰＶ、及びβ－アクチンなどのプロモーターを使用する、ｐＳＶＬ、ｐＣＭＶ、ｐＲｃ／ＲＳＶ、ｐｃＤＮＡ３、ｐＢＰＶなどのベクター、及びワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、レトロウイルスなどのウイルス系由来のベクターが挙げられる。

【0143】

いくつかの実施形態において、本発明の方法で使用されるｒＶＷＦは、当該技術分野において既知の方法を使用して、哺乳動物細胞の培養物における発現によって産生される。特定の実施形態において、哺乳動物の培養物は、ＣＨＯ細胞を含む。更なる実施形態において、ｒＶＷＦは、同じ培養物中で、組換え第ＶＩＩＩ因子（ｒＦＶＩＩＩ）と共発現される。このような実施形態において、ｒＶＷＦ及びｒＦＶＩＩＩは、当該技術分野において既知の方法を使用して、一緒に精製（同時精製）されるか、または別個に精製される。他の実施形態において、ｒＶＷＦは、ｒＦＶＩＩＩを含有しない培養物中で発現される。

【0144】

いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦは、好適な真核生物宿主系から発現及び単離される。真核細胞の例としては、限定するものではないが、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨＥＫ ２９３、ＢＨＫ、ＳＫ－Ｈｅｐ、及びＨｅｐＧ２などの哺乳動物細胞；昆虫細胞、例えば、ＳＦ９細胞、ＳＦ２１細胞、Ｓ２細胞、及びＨｉｇｈ Ｆｉｖｅ細胞；ならびに酵母細胞、例えば、サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）細胞またはシゾサッカロマイセス（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）細胞が挙げられる。一実施形態において、ＶＷＦは、酵母細胞、昆虫細胞、鳥類細胞、哺乳動物細胞などおいて発現させることができる。例えば、ヒト細胞株、ハムスター細胞株、またはマウス細胞株においてである。特定の一実施形態において、細胞株は、ＣＨＯ細胞株、ＢＨＫ細胞株、またはＨＥＫ細胞株である。典型的に、哺乳動物細胞、例えば、連続継代性細胞株由来のＣＨＯ細胞を使用して、本発明のＶＷＦを発現させることができる。ある特定の場合、ＶＷＦタンパク質は、ＣＨＯ細胞発現系から発現及び単離される。

【0145】

ＶＷＦは、細胞培養系において、または当業者により認識されている任意の細胞培養方法に従って産生させることができる。いくつかの実施形態において、細胞培養は、高い細胞密度及びタンパク質発現を達成するような高い体積比培養表面積を得るのに好適な条件下で、大型バイオリアクターで実施することができる。そのような成長条件を得るための手段の一つは、攪拌槽型バイオリアクターで細胞培養用マイクロキャリアを使用することである。マイクロキャリアでの細胞成長の概念は、ｖａｎ Ｗｅｚｅｌによって最初に記載されており（ｖａｎ Ｗｅｚｅｌ，Ａ．Ｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９６７，２１６：６４－５）、これは、成長培地中に懸濁した小さな固体粒子の表面に細胞が付着するのを可能にするものである。これらの方法により、高い表面積対体積比が得られるため、効率的な栄養利用が可能となる。更に、真核細胞株で分泌タンパク質を発現させる場合、表面積対体積比の増大により、分泌レベルがより高くなることから、培養物の上清中のタンパク質収量が高くなる。最終的に、これらの方法により、真核細胞発現培養のスケールアップが容易になる。

【0146】

ＶＷＦを発現する細胞は、細胞培養の成長中に、球状または多孔質のマイクロキャリアに結合し得る。マイクロキャリアは、デキストラン、コラーゲン、プラスチック、ゼラチン及びセルロースをベースにしたマイクロキャリア、ならびにＢｕｔｌｅｒに記載されるような他のマイクロキャリアの群から選択されるマイクロキャリアであり得る（１９８８．Ｉｎ：Ｓｐｉｅｒ ＆ Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３：２８３－３０３）。また、細胞を球状マイクロキャリア上である生物量まで成長させ、細胞が発酵槽の最終生物量に達したときに細胞を継代培養してから、多孔質マイクロキャリア上で発現タンパク質を産生させることも可能であり、またはその逆も可能である。好適な球状マイクロキャリアには、Ｃｙｔｏｄｅｘ（商標）１、Ｃｙｔｏｄｅｘ（商標）２、及びＣｙｔｏｄｅｘ（商標）３（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）などの表面が滑らかなマイクロキャリア、ならびにＣｙｔｏｐｏｒｅ（商標）１、Ｃｙｔｏｐｏｒｅ（商標）２、Ｃｙｔｏｌｉｎｅ（商標）１、及びＣｙｔｏｌｉｎｅ（商標）２（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）などのマクロ孔質マイクロキャリアが含まれ得る。

【0147】

更なる実施形態において、ＶＷＦプロペプチドは、プロＶＷＦのフューリンへの曝露を介して、ｉｎ ｖｉｔｒｏで非成熟ＶＷＦから切断される。いくつかの実施形態において、ペプチド切断に使用されるフューリンは、組換えフューリンである。

【0148】

ある特定の実施形態において、ｒＶＷＦは、高分子量ｒＶＷＦを産生する細胞培地中で培養された細胞で発現される。「細胞培養液」、「細胞培地（複数可）」、及び「細胞培養上清」という用語は、当該技術分野において一般によく知られている細胞培養プロセスの側面を指す。本発明の文脈において、細胞培養液は、細胞培地及び細胞培養上清を含み得る。細胞培地は、細胞培養液に、任意選択により添加物とともに、外部から加えられ、ＶＷＦを発現する細胞を培養するための栄養素及び他の成分を供給する。細胞培養上清は、細胞培地からの栄養素及び他の成分ならびに培養中に細胞から放出、代謝、及び／または排泄された産物を含む細胞培養液を指す。更なる実施形態において、培地は、動物性タンパク質を含まず、化学的に成分が明らかであり得る。動物性タンパク質を含まず、化学的に成分が明らかな培地を調製する方法は、当該技術分野、例えば、ＵＳ２００６／００９４１０４、ＵＳ２００７／０２１２７７０、及びＵＳ２００８／０００９０４０において知られており、あらゆる目的のため、特に細胞培地に関するあらゆる教示のために、いずれも本明細書に援用される。「タンパク質を含まない」及び関連用語は、成長中にタンパク質を自然に放出する培養中の細胞に対して外来であるかまたはそれらの細胞以外の供給源に由来するタンパク質を指す。別の実施形態において、培地は、ポリペプチドを含まない。別の実施形態において、培地は、血清を含まない。別の実施形態において、培地は、動物性タンパク質を含まない。別の実施形態において、培地は、動物性成分を含まない。別の実施形態において、培地は、タンパク質、例えば、ウシ胎児血清などの血清由来の動物性タンパク質を含有する。別の実施形態において、培養物は、外因的に加えられた組換えタンパク質を有する。別の実施形態において、タンパク質は、認定されている病原体を含まない動物に由来する。本明細書で使用される「化学的に成分が明らかな」という用語は、培地が、成分が明らかでない添加物、例えば、動物性成分、器官、腺、植物、または酵母の抽出物などをいかなるものも含まないことを意味するものとする。したがって、化学的に成分が明らかな培地の各成分は、正確に定義される。好ましい実施形態において、培地は、動物性成分もタンパク質も含まない。

【0149】

ある特定の実施形態において、ＶＷＦを発現する細胞の培養は、少なくとも約７日間、または少なくとも約１４日間、２１日間、２８日間、または少なくとも約５週間、６週間、７週間、または少なくとも約２ヶ月、または３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８ヶ月またはそれ以上の間、維持することができる。組換えＶＷＦタンパク質の産生のために細胞培養が維持される細胞密度は、タンパク質発現に使用される培養条件及び培地によって異なる。当業者であれば、ＶＷＦを産生する細胞培養に最適な細胞密度を容易に決定することができるであろう。一実施形態において、培養は、約０．５×１０^６～４×１０^７細胞／ｍｌの細胞密度で長期間維持される。他の実施形態において、細胞密度は、約１．０×１０^６～約１．０×１０^７細胞／ｍｌの濃度で長期間維持される。他の実施形態において、細胞密度は、約１．０×１０^６～約４．０×１０^６細胞／ｍｌの濃度で長期間維持される。他の実施形態において、細胞密度は、約１．０×１０^６～約４．０×１０^６細胞／ｍｌの濃度で長期間維持される。更に他の実施形態において、細胞密度は、約２．０×１０^６～約４．０×１０^６、または約１．０×１０^６～約２．５×１０^６、または約１．５×１０^６～約３．５×１０^６、または他の任意の同様な範囲の濃度で長期間維持され得る。細胞培養において適切な時間の後、ｒＶＷＦは、当該技術分野において既知の方法を使用して、発現系から単離することができる。

【0150】

具体的な一実施形態において、ｒＶＷＦの産生のための連続細胞培養の細胞密度は、２．５×１０^６細胞／ｍＬ以下の濃度で長期間維持される。具体的な他の一実施形態において、細胞密度は、２．０×１０^６細胞／ｍＬ以下、１．５×１０^６細胞／ｍＬ以下、１．０×１０^６細胞／ｍＬ以下、０．５×１０^６細胞／ｍＬ以下に維持される。一実施形態において、細胞密度は、１．５×１０^６細胞／ｍＬ～２．５×１０^６細胞／ｍＬに維持される。

【0151】

上記の細胞培養の一実施形態において、細胞培養液は、銅を含む培地添加物を含む。そのような細胞培養液は、例えば、米国特許第８，８５２，８８８号及び米国特許第９，４０９，９７１号に記載されており、あらゆる目的のため、特に組換えＶＷＦを産生するための細胞培養方法及び組成物に関するあらゆる教示のために、その全体が参照により本明細書に援用される。

【0152】

プレプロＶＷＦのポリヌクレオチド配列及びアミノ酸配列は、配列番号１及び配列番号２にそれぞれ記載され、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿０００５５２（ホモサピエンスフォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ）ｍＲＮＡ）及びＮＰ＿０００５４３でそれぞれ入手可能である。成熟ＶＷＦタンパク質に相当するアミノ酸配列は、配列番号３に示される（全長プレプロＶＷＦアミノ酸配列のアミノ酸７６４～２８１３に相当する）。いくつかの実施形態において、ＶＷＦは、配列番号３の配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％の同一性を示す。いくつかの実施形態において、本発明のｒＶＷＦは、配列番号３の配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または少なくとも１００％の同一性を示す。例えば、米国特許第８，５９７，９１０号、米国特許公開第２０１６／０１２９０９０号、及び図６を参照されたい。

【0153】

有用なｒＶＷＦの一形態は、少なくとも１つの第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）分子をｉｎ ｖｉｖｏで安定化させる特性、すなわち、結合特性を少なくとも有し、任意選択により、薬理学的に許容されるグリコシル化パターンを有する。その具体例としては、Ａ２ドメインを含まないことからタンパク質分解に耐性であるＶＷＦ（Ｌａｎｋｈｏｆ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．７７：１００８－１０１３，１９９７）、ならびに糖タンパク質ｌｂ結合ドメインと、コラーゲン及びヘパリンに対する結合部位とを含むＶａｌ４４９～Ａｓｎ７３０のＶＷＦ断片（Ｐｉｅｔｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１６４：１３３９－１３４７，１９８９）が挙げられる。少なくとも１つのＦＶＩＩＩ分子を安定化させるＶＷＦの能力の決定は、一態様において、当該技術分野において知られている方法に従って、ＶＷＦ欠損哺乳動物で実施される。

【0154】

本発明のｒＶＷＦは、当該技術分野において知られている任意の方法によって産生することができる。したがって、（ｉ）遺伝子操作、例えば、ＲＮＡの逆転写及び／またはＤＮＡの増幅による組換えＤＮＡの生成、（ｉｉ）トランスフェクション、例えば、エレクトロポレーションまたはマイクロインジェクションによる組換えＤＮＡの原核細胞または真核細胞への導入、（ｉｉｉ）形質転換細胞の培養、例えば、連続式またはバッチ式での培養、（ｉｖ）ＶＷＦの発現、例えば、構成的発現または誘導時の発現、及び（ｖ）ＶＷＦの単離、例えば、培地からの単離または形質転換細胞を回収することによる単離、その結果として、（ｖｉ）精製されたｒＶＷＦの取得、例えば、アニオン交換クロマトグラフィーまたはアフィニティークロマトグラフィーによる取得のための方法が当該技術分野において知られている。組換えＶＷＦは、一態様において、当該技術分野においてよく知られている組換えＤＮＡ技術を使用して、形質転換した宿主細胞において作製される。例えば、ポリペプチドをコードする配列は、好適な制限酵素を使用して、ＤＮＡから切り出され得る。別の方法としては、ＤＮＡ分子は、別の態様において、ホスホロアミデート法どの化学合成技法を使用して合成される。また、更に別の態様において、これらの技法の組み合わせが使用される。

【0155】

本発明はまた、適切な宿主において、本発明のポリペプチドをコードするベクターを提供する。ベクターは、適切な発現制御配列に作動可能に連結されたポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。ポリヌクレオチドがベクターに挿入される前または後のいずれかに、この作動可能な連結を行う方法は、よく知られている。発現制御配列としては、プロモーター、アクチベーター、エンハンサー、オペレーター、リボソーム結合部位、開始シグナル、終止シグナル、キャップシグナル、ポリアデニル化シグナル、及び転写または翻訳の制御に関与する他のシグナルが含まれる。得られたベクターは、その中にポリヌクレオチドを有し、適切な宿主を形質転換するために使用される。この形質転換は、当該技術分野においてよく知られている方法を使用して実施され得る。

【0156】

本発明の実施には、よく知られている利用可能な多数の宿主細胞のうちのいずれかが使用される。特定の宿主の選択は、当該技術分野で認識されているいくつかの要因によって決定され、これらには、例えば、選択した発現ベクターとの適合性、ＤＮＡ分子によりコードされるペプチドの毒性、形質転換率、ペプチドの回収容易性、発現特性、バイオセーフティ及び費用が含まれる。これらの要因のバランスは、全ての宿主細胞が特定のＤＮＡ配列の発現に等しく有効であるわけではないという理解の下で達成する必要がある。これらの一般的なガイドライン内で、有用な微生物宿主細胞としては、限定するものではないが、細菌、酵母及び他の真菌、昆虫、植物、哺乳動物（ヒトを含む）の培養細胞、または当該技術分野において知られている他の宿主が挙げられる。

【0157】

形質転換された宿主細胞は、所望の化合物が発現されるように、従来の発酵条件下で培養される。そのような発酵条件は、当該技術分野においてよく知られている。最後に、ポリペプチドは、当該技術分野においてよく知られている方法によって、培地または宿主細胞自体から精製される。

【0158】

本発明の化合物を発現させるために利用される宿主細胞に応じて、炭水化物（オリゴ糖）基が、任意選択により、タンパク質中のグリコシル化部位として知られている部位に結合される。一般に、Ｏ結合型オリゴ糖は、セリン（Ｓｅｒ）またはトレオニン（Ｔｈｒ）残基に結合され、Ｎ結合型オリゴ糖は、アスパラギン（Ａｓｎ）残基に結合され、この場合、これらは、配列Ａｓｎ－Ｘ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒの一部であり、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸であり得る。Ｘは、好ましくは、プロリンを除く１９個の天然アミノ酸のうちの１つである。Ｎ結合型及びＯ結合型オリゴ糖の構造と各タイプにみられる糖残基の構造は異なる。Ｎ結合型及びＯ結合型の両オリゴ糖で一般にみられる糖の１種は、Ｎ－アセチルノイラミン酸（シアル酸と呼ばれる）である。シアル酸は、通常、Ｎ結合型及びＯ結合型の両オリゴ糖の末端残基であり、その負の電荷のため、一態様において、グリコシル化化合物に酸性特性を付与する。そのような部位（複数可）は、本発明の化合物のリンカーに組み込まれてもよく、好ましくは、ポリペプチド化合物の組換え産生中に細胞によって（例えば、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＣＯＳなどの哺乳動物細胞において）グリコシル化される。他の態様において、そのような部位は、当該技術分野で知られている合成法または半合成法によってグリコシル化される。

【0159】

いくつかの実施形態において、シアル化（シアリル化とも呼ばれる）は、本明細書に記載される精製手順（アニオン交換、カチオン交換、サイズ排除、及び／またはイムノアフィニティー法を含む）の一環として、カラム上で実施することができる。いくつかの実施形態において、シアリル化により、ｒＶＷＦの安定性が、シアリル化を受けていないｒＶＷＦと比較して増加する。いくつかの実施形態において、シアリル化により、血液循環中のｒＶＷＦの安定性が、シアリル化を受けていないｒＶＷＦと比較して増加する（例えば、対象への投与後）。いくつかの実施形態において、シアリル化されたｒＶＷＦの安定性の増加は、シアリル化を受けていないｒＶＷＦと比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上の増加をもたらす。いくつかの実施形態において、シアリル化により、ｒＶＷＦの半減期が、シアリル化を受けていないｒＶＷＦと比較して増加する。いくつかの実施形態において、シアリル化により、血液循環中のｒＶＷＦの半減期が、シアリル化を受けていないｒＶＷＦと比較して増加する（例えば、対象への投与後）。いくつかの実施形態において、シアリル化されたｒＶＷＦの半減期の増加は、シアリル化を受けていないｒＶＷＦと比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上の増加をもたらす。いくつかの実施形態において、シアリル化されたｒＶＷＦの半減期の増加は、シアリル化を受けていないｒＶＷＦと比較して、１時間、２時間、３時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間以上、血液循環中で安定であるｒＶＷＦをもたらす（例えば、対象への投与後）。いくつかの実施形態において、シアリル化により、２，３シアリル化及び／または２，６シアリル化の数が増加する。いくつかの実施形態において、シアリル化は、追加の緩衝ステップとして、２，３シアリルトランスフェラーゼ及び／または２，６シアリルトランスフェラーゼならびにＣＭＰ－ＮＡＮＡ（シチジン－５’－モノホスホ－Ｎ－アセチルノイラミン酸ナトリウム塩）を添加することによって増加される。いくつかの実施形態において、シアリル化は、追加の緩衝ステップとして、２，３シアリルトランスフェラーゼ及びＣＭＰ－ＮＡＮＡ（シチジン－５’－モノホスホ－Ｎ－アセチルノイラミン酸ナトリウム塩）を添加することによって増加される。いくつかの実施形態において、２，３シアリル化は、追加の緩衝ステップとして、２，３シアリルトランスフェラーゼ及びＣＭＰ－ＮＡＮＡ（シチジン－５’－モノホスホ－Ｎ－アセチルノイラミン酸ナトリウム塩）を添加することによって増加される。

【0160】

いくつかの実施形態において、２，６シアリル化は、追加の緩衝ステップとして、２，６シアリルトランスフェラーゼ及びＣＭＰ－ＮＡＮＡ（シチジン－５’－モノホスホ－Ｎ－アセチルノイラミン酸ナトリウム塩）を添加することによって増加される。いくつかの実施形態において、２，３シアリル化及び／または２，６シアリル化は、追加の緩衝ステップとして、２，３シアリルトランスフェラーゼ及び／または２，６シアリルトランスフェラーゼならびにＣＭＰ－ＮＡＮＡ（シチジン－５’－モノホスホ－Ｎ－アセチルノイラミン酸ナトリウム塩）を添加することによって増加される。いくつかの実施形態において、ＣＭＰ－ＮＡＮＡは、修飾されたシアル酸が電位フリーな位置に移動するように、化学的または酵素的に修飾される。いくつかの実施形態において、シアリル化は、ｒＶＷＦを樹脂上にロードし、本明細書に記載される１つ以上の緩衝液で洗浄して望ましくない不純物を除去し、シアリルトランスフェラーゼ及びＣＭＰ－ＮＡＮＡを含有する１つ以上の緩衝液を追加のシアリル化が可能となる条件下で適用し、１つ以上の緩衝液で洗浄して過剰なシアリル化試薬を除去し、増強されたｒＶＷＦ（例えば、シアリル化が増加したｒＶＷＦ）を１つ以上の緩衝液で溶出することによって実施される。いくつかの実施形態において、シアリル化プロセスは、本明細書に記載されるように、カチオン交換法、アニオン交換法、サイズ排除法、またはイムノアフィニティー精製法の一環として実施される。

【0161】

別の方法としては、化合物は、例えば、固相合成法を使用する合成方法によって作製される。好適な技法は、当該技術分野においてよく知られており、これには、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９７３），Ｃｈｅｍ．Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ，ｐｐ．３３５－６１（Ｋａｔｓｏｙａｎｎｉｓ ａｎｄ Ｐａｎａｙｏｔｉｓ ｅｄｓ．）；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９６３），Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９；Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．（１９８５），Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．１０：３９４－４１４；Ｓｔｅｗａｒｔ ａｎｄ Ｙｏｕｎｇ（１９６９），Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；ＵＳ３，９４１，７６３；Ｆｉｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９７６），Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（３ｒｄ ｅｄ．）２：１０５－２５３；及びＥｒｉｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９７６），Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（３ｒｄ ｅｄ．）２：２５７－５２７に記載されるものが含まれる。固相合成は、費用対効果が最も高い小ペプチド作製法であることから、個々のペプチドを作製するのに好ましい技法である。

【0162】

ＶＷＦの断片、バリアント及び類似体は、当該技術分野においてよく知られている方法に従って産生することができる。ポリペプチドの断片は、限定するものではないが、酵素切断（例えば、トリプシンまたはキモトリプシンによる切断）を使用して調製することができ、また、組換え手段を使用して特定のアミノ酸配列を有するポリペプチド断片を生成することで調製することもできる。マルチマー化ドメインまたは当該技術分野において知られている任意の他の同定可能なＶＷＦドメインなどの特定の活性を有するタンパク質の領域を含むポリペプチド断片が作製されてもよい。

【0163】

ポリペプチド類似体を作製する方法もよく知られている。ポリペプチドのアミノ酸配列類似体は、置換、挿入、付加または欠失の類似体であり得る。ポリペプチドの断片を含め、欠失類似体は、機能または免疫原性活性にとって必須ではない天然タンパク質の１つ以上の残基が欠如している。挿入類似体は、ポリペプチドの非末端点における付加、例えば、アミノ酸（複数可）の付加を伴う。この類似体は、例えば、限定するものではないが、免疫反応性エピトープまたは単に単一残基の挿入を含み得る。ポリペプチドの断片を含め、付加類似体は、タンパク質のいずれかの末端または両末端における１つ以上のアミノ酸の付加を含み、例えば、融合タンパク質を含む。前述の類似体の組み合わせもまた企図される。

【0164】

置換類似体は、典型的に、タンパク質内の１つ以上の部位において、野生型の１つのアミノ酸が別のアミノ酸と交換され、ポリペプチドの１つ以上の特性を、他の機能または特性を完全に喪失させることなく調節するよう設計され得る。一態様において、置換は、保存的置換である。「保存的アミノ酸置換」は、あるアミノ酸を、側鎖または同様の化学的特性を有するアミノ酸で置換することである。保存的置換を行うための類似アミノ酸には、酸性側鎖（グルタミン酸、アスパラギン酸）、塩基性側鎖（アルギニン、リシン、ヒスチジン）、極性アミド側鎖（グルタミン、アスパラギン）、疎水性脂肪族側鎖（ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、グリシン）、芳香族側鎖（フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン）、小さな側鎖（グリシン、アラニン、セリン、トレオニン、メチオニン）、または脂肪族ヒドロキシル側鎖（セリン、トレオニン）を有するものが含まれる。

【0165】

一態様において、類似体は、その由来となる組換えＶＷＦと実質的に相同であるかまたは実質的に同一である。類似体には、野生型ポリペプチドの生物学的活性の少なくとも一部、例えば、血液凝固活性を保持するものが含まれる。

【0166】

企図されるポリペプチドバリアントには、限定するものではないが、ユビキチン化、ポリシアル化（またはポリシアリル化）を含むグリコシル化、治療用または診断用薬剤とのコンジュゲーション、標識化、ペグ化（ポリエチレングリコールによる誘導体化）などの共有結合による高分子化合物の結合、非加水分解性結合の導入、及びオルニチンなどのアミノ酸の化学合成による挿入または置換などの技術によって化学修飾された、ヒトタンパク質では通常生じないポリペプチドが含まれる。バリアントは、本発明の非修飾分子の結合特性と同じかまたは本質的に同じ結合特性を保持する。そのような化学修飾には、薬剤のＶＷＦポリペプチドへの直接的または間接的（例えば、リンカーを介する）結合が含まれ得る。間接的結合の場合、リンカーは、加水分解性であっても非加水分解性であってもよいことが企図される。

【0167】

ペグ化ポリペプチド類似体の調製は、一態様において、（ａ）結合コンストラクトポリペプチドが１つ以上のＰＥＧ基に結合した状態になる条件下でポリエチレングリコール（ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体など）とポリペプチドを反応させるステップ、及び（ｂ）反応生成物（複数可）を得るステップを含む。一般に、アシル化反応のための至適反応条件は、既知のパラメーター及び所望の結果に基づいて決定される。例えば、ＰＥＧ：タンパク質の比が大きいほど、ポリペグ化生成物の割合は大きくなる。いくつかの実施形態において、結合コンストラクトは、Ｎ末端に単一のＰＥＧ部分を有する。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、例えば、より長いｉｎ ｖｉｖｏ半減期を得るために、血液凝固因子に結合させてもよい。ＰＥＧ基は、任意の簡便な分子量のものであってよく、線状または分枝状である。ＰＥＧの平均分子量は、約２キロダルトン（「ｋＤ」）～約１００ｋＤａ、約５ｋＤａ～約５０ｋＤａ、または約５ｋＤａ～約１０ｋＤａの範囲である。ある特定の態様において、ＰＥＧ基は、ＰＥＧ部分上の天然もしくは操作された反応性基（例えば、アルデヒド、アミノ、チオール、またはエステル基）と、血液凝固因子上の反応性基（例えば、アルデヒド、アミノ、またはエステル基）によるアシル化もしくは還元アルキル化を介して、または当該技術分野において知られている任意の他の技法によって、血液凝固因子に結合される。

【0168】

ポリシアリル化ポリペプチドを調製するための方法は、ＵＳ ２００６／１６０９４８、Ｆｅｒｎａｎｄｅｓ ｅｔ Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ；Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １３４１：２６－３４，１９９７、及びＳａｅｎｋｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ １２：４２－５１，２００６に記載されている。簡潔に述べると、０．１Ｍ ＮａＩＯ_４を含有するコロミン酸（ＣＡ）の溶液を室温の暗所で攪拌して、ＣＡを酸化させる。活性化されたＣＡ溶液を、例えば、ｐＨ７．２の０．０５Ｍリン酸ナトリウム緩衝液に対して暗所で透析し、この溶液をｒＶＷＦ溶液に加え、穏やかな振盪下、室温の暗所で１８時間インキュベートする。遊離試薬を、任意選択により、例えば、限外濾過／ダイアフィルトレーションによって、ｒＶＷＦポリシアル酸コンジュゲートから分離する。ｒＶＷＦとポリシアル酸とのコンジュゲーションは、グルタルアルデヒドを架橋試薬として使用することで達成される（Ｍｉｇｎｅａｕｌｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ３７：７９０－７９６，２００４）。

【0169】

また、別の態様において、プレプロＶＷＦ及びプロＶＷＦポリペプチドは、本発明の製剤に治療上の利益をもたらすことも企図される。例えば、米国特許第７，００５，５０２号は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでトロンビン生成を誘導する相当量のプロＶＷＦを含む医薬調製物を記載している。天然に存在する成熟ＶＷＦの組換えによる生物学的に活性な断片、バリアント、または他の類似体に加えて、本発明は、本明細書に記載される製剤におけるプレプロＶＷＦ（配列番号２に記載）またはプロＶＷＦポリペプチド（配列番号２のアミノ酸残基２３～７６４）の組換えによる生物学的に活性な断片、バリアント、または類似体の使用を企図する。

【0170】

断片、バリアント及び類似体をコードするポリヌクレオチドは、天然に存在する分子と同じかまたは類似した生物学的活性を有する、天然に存在する分子の生物学的に活性な断片、バリアント、または類似体をコードするように、当業者によって容易に生成され得る。様々な態様において、これらのポリヌクレオチドは、ＰＣＲ法、分子をコードするＤＮＡの消化／ライゲーションなどを使用して調製される。したがって、当業者であれば、限定するものではないが、部位特異的変異誘発を含む、当該技術分野において知られている任意の方法を使用して、ＤＮＡ鎖の単一塩基の変更を生じさせ、改変コドン及びミスセンス変異をもたらすことができる。本明細書で使用される場合、「中程度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」という文言は、例えば、５０％ホルムアミド中４２℃でハイブリダイゼーションし、０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中６０℃で洗浄することを意味する。これらの条件は、ハイブリダイズされる配列の長さ及びＧＣヌクレオチド塩基含量に基づいて変更されることが当業者には理解されるであろう。正確なハイブリダイゼーション条件の決定には、当該技術分野で標準的な処方が適切である。Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，９．４７－９．５１ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８９）を参照されたい。

【0171】

Ａ．ＶＷＦマルチマー
一実施形態において、本明細書に記載される方法において使用されるｒＶＷＦ組成物は、オリゴマーの９５％が６サブユニット～２０サブユニットを有することを特徴とするｒＶＷＦオリゴマー分布を有する。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦオリゴマー分布は、オリゴマーの９５％が６サブユニット～１０サブユニットを有することを特徴とする。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦオリゴマー分布は、オリゴマーの９５％が１０サブユニット～１５サブユニットを有することを特徴とする。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦオリゴマー分布は、オリゴマーの９５％が１５サブユニット～２０サブユニットを有することを特徴とする。他の実施形態において、ｒＶＷＦ組成物は、オリゴマーの９５％が、ＷＯ２０１２／１７１０３１の表２の再掲である以下の表２に見出される変形形態４５８～６４１から選択されるサブユニットの範囲を有することを特徴とするｒＶＷＦオリゴマー分布を有する。

【0172】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載される精製方法によって調製されるｒＶＷＦ組成物は、オリゴマーの９５％が６サブユニット～２０サブユニットを有することを特徴とするｒＶＷＦオリゴマー分布を有する。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦ組成物は、オリゴマーの９５％が、ＷＯ２０１２／１７１０３１の表２の再掲である以下の表２に見出される変形形態４５８～６４１から選択されるサブユニットの範囲を有することを特徴とするｒＶＷＦオリゴマー分布を有する。

【0173】

（表２）本明細書で提供される組成物中に存在する及び本明細書で提供される方法において使用されるｒＶＷＦオリゴマーの分布の例示的実施形態

Ｖａｒ．＝変形形態

【0174】

いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦオリゴマー分布は、オリゴマーの９５％が４６０サブユニット～５００サブユニットを有することを特徴とする。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦオリゴマー分布は、オリゴマーの９５％が５００サブユニット～５５０サブユニットを有することを特徴とする。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦオリゴマー分布は、オリゴマーの９５％が５５０サブユニット～６００サブユニットを有することを特徴とする。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦオリゴマー分布は、オリゴマーの９５％が６００サブユニット～６４０サブユニットを有することを特徴とする。

【0175】

一実施形態において、ｒＶＷＦ組成物は、特定のより高次のｒＶＷＦマルチマーまたはより大型のマルチマーで存在するｒＶＷＦ分子の割合に従って特徴付けることができる。例えば、一実施形態において、本明細書に記載される方法において使用されるｒＶＷＦ組成物中のｒＶＷＦ分子の少なくとも２０％は、少なくとも１０サブユニットのオリゴマー複合体で存在する。別の実施形態において、本明細書に記載される方法において使用されるｒＶＷＦ組成物中のｒＶＷＦ分子の少なくとも２０％は、少なくとも１２サブユニットのオリゴマー複合体で存在する。更に他の実施形態において、本明細書で提供される方法において使用されるｒＶＷＦ組成物は、ＷＯ２０１２／１７１０３１の表３～表５の再掲である以下の表３～５に見出される変形形態１３４～４５７のいずれか１つに従った、特定のより高次のｒＶＷＦマルチマーまたはより大型のマルチマー（例えば、少なくともＹサブユニットのマルチマー）で存在するｒＶＷＦ分子の最小割合（例えば、少なくともＸ％）を有する。

【0176】

いくつかの実施形態において、本明細書で提供される方法によって調製されるｒＶＷＦ組成物は、特定のより高次のｒＶＷＦマルチマーまたはより大型のマルチマーで存在するｒＶＷＦ分子の割合に従って特徴付けることができる。例えば、一実施形態において、本明細書に記載される方法において使用されるｒＶＷＦ組成物中のｒＶＷＦ分子の少なくとも２０％は、少なくとも１０サブユニットのオリゴマー複合体で存在する。別の実施形態において、本明細書に記載される方法において使用されるｒＶＷＦ組成物中のｒＶＷＦ分子の少なくとも２０％は、少なくとも１２サブユニットのオリゴマー複合体で存在する。更に他の実施形態において、本明細書で提供される方法において使用されるｒＶＷＦ組成物は、ＷＯ２０１２／１７１０３１の表３～表５の再掲である以下の表３～５に見出される変形形態１３４～４５７のいずれか１つに従った、特定のより高次のｒＶＷＦマルチマーまたはより大型のマルチマー（例えば、少なくともＹサブユニットのマルチマー）で存在するｒＶＷＦ分子の最小割合（例えば、少なくともＸ％）を有する。

【0177】

（表３）本明細書で提供される組成物中に存在する及び本明細書で提供される方法において使用される特定のより高次のｒＶＷＦマルチマーまたはより大型のマルチマーで存在するｒＶＷＦ分子の割合の例示的実施形態

Ｖａｒ．＝変形形態

【0178】

（表４）本明細書で提供される組成物中に存在する及び本明細書で提供される方法において使用される特定のより高次のｒＶＷＦマルチマーまたはより大型のマルチマーで存在するｒＶＷＦ分子の割合の例示的実施形態

Ｖａｒ．＝変形形態

【0179】

（表５）本明細書で提供される組成物中に存在する及び本明細書で提供される方法において使用される特定のより高次のｒＶＷＦマルチマーまたはより大型のマルチマーで存在するｒＶＷＦ分子の割合の例示的実施形態

Ｖａｒ．＝変形形態

【0180】

上記に従って、対象に投与されるｒＶＷＦ組成物（ＦＶＩＩＩありまたはなし）は、一般に、かなりの割合の高分子量（ＨＭＷ）ｒＶＷＦマルチマーを含む。更なる実施形態において、ＨＭＷ ｒＶＷＦマルチマー組成物は、少なくとも１０％～８０％のｒＶＷＦデカマーまたはそれより高次のマルチマーを含む。更なる実施形態において、組成物は、約１０～９５％、２０～９０％、３０～８５％、４０～８０％、５０～７５％、６０～７０％のデカマーまたはそれより高次のマルチマーを含む。更なる実施形態において、ＨＭＷ ｒＶＷＦマルチマー組成物は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のデカマーまたはそれより高次のマルチマーを含む。

【0181】

更なる実施形態において、本発明のより高次のｒＶＷＦマルチマーは、投与後、約１～約９０時間安定である。更に別の実施形態において、より高次のｒＶＷＦマルチマーは、投与後、約５～８０、１０～７０、１５～６０、２０～５０、２５～４０、３０～３５時間安定である。更に別の実施形態において、より高次のｒＶＷＦマルチマーは、投与後、少なくとも３、６、１２、１８、２４、３６、４８、７２時間安定である。ある特定の実施形態において、ｒＶＷＦマルチマーの安定性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで評価される。

【0182】

ｒＶＷＦは、約１０～約４０サブユニットを含む高マルチマーである。更なる実施形態において、本発明の方法を使用して産生されるマルチマーｒＶＷＦは、約１０～３０、１２～２８、１４～２６、１６～２４、１８～２２、２０～２１サブユニットを含む。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦは、ダイマーから４０サブユニットを超えるマルチマー（１００万ダルトン超）までの様々な大きさのマルチマーで存在する。最も大型のマルチマーは、血小板受容体及び内皮下マトリックスの損傷部位の両方と相互作用することができる複数の結合部位を提供し、ＶＷＦのうち最も止血活性の高い形態である。いくつかの実施形態において、本発明のｒＶＷＦは、超大型マルチマー（ＵＬＭ）を含む。一般に、高マルチマー及び超大型マルチマーは、止血効果が最も高いと考えられる（例えば、Ｔｕｒｅｃｅｋ，Ｐ．，Ｈａｍｏｓｔａｓｅｏｌｏｇｉｅ，（Ｖｏｌ．３７）：Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ １，ｐａｇｅｓ Ｓ１５－Ｓ２５（２０１７）参照）。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦは、５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態において、任意の所望のマルチマーパターンは、記載される方法を使用して得ることができる。いくつかの実施形態において、アニオン交換法及び／またはカチオン交換法が採用される場合、１つ以上の洗浄ステップ（複数可）の緩衝液またはグラジエント緩衝液のｐＨ、伝導率、及び／または対イオン濃度は、所望のマルチマーパターンを得るために操作することができる。いくつかの実施形態において、次いで、サイズ排除クロマトグラフィー法が採用され、所望のマルチマーパターンを得るための回収基準が採用され得る。いくつかの実施形態において、記載されるマルチマーパターンは、超大型マルチマーを含む。いくつかの実施形態において、超大型マルチマーは、少なくとも１０，０００ｋＤａ、少なくとも１１，０００ｋＤａ、少なくとも１２，０００ｋＤａ、少なくとも１３，０００ｋＤａ、少なくとも１４，０００ｋＤａ、少なくとも１５，０００ｋＤａ、少なくとも１６，０００ｋＤａ、少なくとも１７，０００ｋＤａ、少なくとも１８，０００ｋＤａ、少なくとも１９，０００ｋＤａ、少なくとも２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態において、超大型マルチマーは、約１０，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態において、超大型マルチマーは、約１１，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態において、超大型マルチマーは、約１２，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態において、超大型マルチマーは、約１３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態において、超大型マルチマーは、約１４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態において、超大型マルチマーは、約１５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態において、超大型マルチマーは、約１６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態において、超大型マルチマーは、約１７，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態において、超大型マルチマーは、約１８，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態において、超大型マルチマーは、約１９，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａである。いくつかの実施形態において、本方法を使用して得られるｒＶＷＦは、ｒＶＷＦのローディング試料中に存在する任意のマルチマーパターンを含む。いくつかの実施形態において、本方法を使用して得られるｒＶＷＦは、生理学的に生じるマルチマーパターン及び超大型ＶＷＦマルチマーパターンを含む。

【0183】

上記に従って、ｒＶＷＦは、かなりの割合の高分子量（ＨＭＷ）ｒＶＷＦマルチマーを含む。更なる実施形態において、ＨＭＷ ｒＶＷＦマルチマー組成物は、少なくとも１０％～８０％のｒＶＷＦデカマーまたはそれより高次のマルチマーを含む。更なる実施形態において、組成物は、約１０～９５％、２０～９０％、３０～８５％、４０～８０％、５０～７５％、６０～７０％のデカマーまたはそれより高次のマルチマーを含む。更なる実施形態において、ＨＭＷ ｒＶＷＦマルチマー組成物は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％のデカマーまたはそれより高次のマルチマーを含む。

【0184】

更なる実施形態において、本発明のより高次のｒＶＷＦマルチマーは、投与後、約１～約９０時間安定である。更に別の実施形態において、より高次のｒＶＷＦマルチマーは、投与後、約５～８０、１０～７０、１５～６０、２０～５０、２５～４０、３０～３５時間安定である。更に別の実施形態において、より高次のｒＶＷＦマルチマーは、投与後、少なくとも３、６、１２、１８、２４、３６、４８、７２時間安定である。ある特定の実施形態において、ｒＶＷＦマルチマーの安定性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで評価される。

【0185】

一実施形態において、本明細書で提供される組成物及び方法において使用されるより高次のｒＶＷＦマルチマーは、投与後、少なくとも１２時間の半減期を有する。別の実施形態において、より高次のｒＶＷＦマルチマーは、投与後、少なくとも２４時間の半減期を有する。更に他の実施形態において、より高次のｒＶＷＦマルチマーは、ＷＯ２０１２／１７１０３１の表６の写しである以下の表６に見出される変形形態６４２～１０４５から選択される半減期を有する。

【0186】

（表６）本明細書で提供される方法によって調製された組成物中に存在する高次ｒＶＷＦマルチマーの半減期についての例示的実施形態

Ｖａｒ．＝変形形態

【0187】

ｒＶＷＦマルチマーの数及び割合の評価は、限定するものではないが、例えば、Ｃｕｍｍｉｎｇらによって考察されているように（Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ．，１９９３ Ｍａｙ；４６（５）：４７０－４７３；あらゆる目的のため、特にＶＷＦマルチマーの評価に関するあらゆる教示のために、その全体が参照により本明細書に援用される）、ＶＷＦマルチマーをサイズによって分離する電気泳動及びサイズ排除クロマトグラフィー法を使用する方法を含む、当該技術分野で知られている方法を使用して実施することができる。そのような技術には、ＶＷＦに対する放射標識抗体でゲルを免疫ブロットし、続いて、化学発光を検出する免疫ブロット法（ウェスタンブロットなど）が更に含まれ得る（例えば、Ｗｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎａｌ．，１９９３，７：３１７－３２３を参照されたく、あらゆる目的のため、特にＶＷＦマルチマーの評価に関するあらゆる教示のために、その全体が参照により本明細書に援用される）。いくつかの実施形態において、本方法を使用して得られるｒＶＷＦは、ｒＶＷＦのローディング試料中に存在する任意のマルチマーパターンを含む。いくつかの実施形態において、本方法を使用して得られるｒＶＷＦは、生理学的に生じるマルチマーパターン及び超大型ＶＷＦマルチマーパターンを含む。

【0188】

ｂ．ＶＷＦアッセイ
一次止血において、ＶＷＦは、血小板とコラーゲンなどの細胞外マトリックスの特定成分との間の架け橋として働く。このプロセスにおけるＶＷＦの生物学的活性は、様々なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイによって測定することができる（Ｔｕｒｅｃｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈｅｍｏｓｔ．２８：１４９－１６０，２００２）。リストセチン補因子アッセイは、ＶＷＦの存在下で、抗生物質リストセチンによって誘導される、新鮮なまたはホルマリン固定された血小板の凝集に基づく。血小板凝集の程度は、ＶＷＦ濃度に依存し、比濁法により、例えば、血小板凝集計の使用によって測定することができる（Ｗｅｉｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．５２：２７０８－２７１６，１９７３；Ｍａｃｆａｒｌａｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂ．Ｄｉａｔｈ．Ｈａｅｍｏｒｒｈ．３４：３０６－３０８，１９７５）。本明細書で提供されるように、本発明のＶＷＦの具体的なリストセチン補因子活性（ＶＷＦ：ＲＣｏ）は、一般に、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを使用して測定した場合のＶＷＦのｍＵ／μｇまたはＶＷＦタンパク質のＩＵ／ｍｇ単位で記載される。

【0189】

２つ目の方法は、ＥＬＩＳＡ法に基づくＶＷＦコラーゲン結合（ＶＷＦ：ＣＢ）アッセイである（Ｂｒｏｗｎ ｅｔ Ｂｏｓａｋ，Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．４３：３０３－３１１，１９８６；Ｆａｖａｌｏｒｏ，Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．８３：１２７－１３５，２０００）。マイクロタイタープレートにＩ型またはＩＩＩ型コラーゲンをコーティングする。次いで、ＶＷＦをコラーゲン表面に結合させ、その後、酵素標識ポリクローナル抗体で検出する。最終ステップは基質反応であり、この反応をＥＬＩＳＡリーダーで光度測定的にモニターすることができる。いくつかの実施形態において、ＶＷＦコラーゲン結合（ＶＷＦ：ＣＢ）／ＶＷＦ：Ａｇは、ＶＷＦコラーゲン結合と抗原の比とも呼ばれ、ＶＷＦ及び／またはＶＷＤの診断を評価するために使用される。

【0190】

ＶＷＦの更なるアッセイには、ＶＷＦ：抗原（ＶＷＦ：Ａｇ）、ＶＷＦ：リストセチン補因子（ＶＷＦ：ＲＣｏ）、及びＶＷＦ：コラーゲン結合活性アッセイ（ＶＷＦ：ＣＢ）が含まれ、フォンヴィレブランド病の診断及び分類に使用されることが多い。ＶＷＦ糖タンパク質ＩＢ結合、ＶＷＦコラーゲン結合、ＶＷＦマルチマー、ＤＤＡＶＰ負荷試験のアッセイを含む、ＶＷＦアッセイを評価するために有用な追加の方法は、当業者に知られており、例えば、Ｐａｔｚｋｅ ａｎｄ Ｆａｖａｌｏｒｏ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２０１７，１６４６：４５３－４６０；Ｈｉｇｇｉｎｓ ａｎｄ Ｇｏｏｄｗｉｎ，Ａｍ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ，２０１９，９４：４９６－５０３；Ｓｔｕｆａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ，２０２０，２６（２）：２９８－３０５；Ｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｈｅｍａｔｏｌ，２０１３，３５（２）：１７０－１７６；Ｍｉｃｈｉｅｌｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｔｈｒｏｍｂｏ Ｄｉｓ，２０１９，６：２９９；Ｍｉｃｈｉｅｌｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ／Ｈｅｍｏｓｔａｔｉｓ，２０１７，２３（６）：５１８－５３１；Ｍｏｈａｍｍｅｄ ａｎｄ Ｆａｖａｌｏｒｏ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２０１７，１６４６：４６１－４７２；Ｆａｖａｌｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９９７，２９（４）：３４１－４５６に記載されており、ＶＷＦのアッセイに関するあらゆる教示を含め、その全体が参照により本明細書に援用される。

【0191】

いくつかの実施形態において、ＶＷＦコラーゲン結合（ＶＷＦ：ＣＢ）／ＶＷＦ：Ａｇは、ＶＷＦコラーゲン結合と抗原の比とも呼ばれ、ＶＷＦ及び／またはＶＷＤの診断を評価するために使用される。

【0192】

いくつかの実施形態において、本発明の方法に従って調製されるｒＶＷＦのｒＦＶＩＩＩ凝血活性（ＩＵ ｒＦＶＩＩＩ：Ｃ）とｒＶＷＦリストセチン補因子活性（ＩＵ ｒＶＷＦ：ＲＣｏ）の比は、３：１～１：５である。更なる実施形態において、比は、２：１～１：４である。更に別の実施形態において、比は、５：２～１：４である。更なる実施形態において、比は、３：２～１：３である。更に別の実施形態において、比は、約１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、２：１、２：３、２：４、２：５、３：１、３：２、３：４、または３：５である。更なる実施形態において、比は、１：１～１：２である。更に別の実施形態において、比は、１．１：１、１．２：１、１．３：１、１．４：１、１．５：１、１．６：１、１．７：１、１．８：１、１．９：１、または２：１である。ある特定の実施形態において、本明細書に記載される方法に有用な組成物におけるｒＦＶＩＩＩ凝血活性（ＩＵ ｒＦＶＩＩＩ：Ｃ）のｒＶＷＦリストセチン補因子活性（ＩＵ ｒＶＷＦ：ＲＣｏ）比は、ＷＯ２０１２／１７１０３１の表７の写しである以下の表７に見出される変形形態１９８８～２１４０から選択される。

【0193】

（表７）本明細書で提供される方法で使用される組成物におけるｒＦＶＩＩＩ凝血活性（ＩＵ ｒＦＶＩＩＩ：Ｃ）とｒＶＷＦリストセチン補因子活性（ＩＵ ｒＶＷＦ：ＲＣｏ）の比についての例示的実施形態

Ｖａｒ．＝変形形態

【0194】

いくつかの実施形態において、本発明に従って精製されたプロＶＷＦ及び／または精製ｒＶＷＦは、いかなるコンジュゲーション、翻訳後または共有結合による修飾によっても修飾されない。特定の実施形態において、本発明のプロＶＷＦ及び／または精製ｒＶＷＦは、限定するものではないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、ポリシアル酸、ヒドロキシルエチルデンプン、ポリ炭水化物部分などを含む、水溶性ポリマーで修飾されない。

【0195】

いくつかの実施形態において、本発明に従って精製されたプロＶＷＦ及び／または精製ｒＶＷＦは、コンジュゲーション、翻訳後修飾、または共有結合による修飾により修飾され、これらには、Ｎ末端またはＣ末端残基の修飾、ならびに選択された側鎖、例えば、遊離スルフヒドリル基、第一級アミン、及びヒドロキシル基における修飾が含まれる。一実施形態において、水溶性ポリマーは、リシン基または他の第一級アミンによってタンパク質に（直接またはリンカーを介して）連結される。いくつかの実施形態において、本発明のプロＶＷＦ及び／または精製ｒＶＷＦは、限定するものではないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、ポリシアル酸、ヒドロキシルエチルデンプン、ポリ炭水化物部分などを含む、水溶性ポリマーのコンジュゲーションによって修飾され得る。

【0196】

プロＶＷＦ及び／または精製ｒＶＷＦの修飾に使用され得る水溶性ポリマーは、線状及び分枝状の構造を含む。コンジュゲートされるポリマーは、本発明の凝固タンパク質に直接結合されてもよいし、あるいは、連結部分を介して結合されてもよい。水溶性ポリマーとのタンパク質コンジュゲーションの非限定的な例としては、米国特許第４，６４０，８３５号；同第４，４９６，６８９号；同第４，３０１，１４４号；同第４，６７０，４１７号；同第４，７９１，１９２号、及び同第４，１７９，３３７号、ならびにＡｂｕｃｈｏｗｓｋｉ ａｎｄ Ｄａｖｉｓ “Ｅｎｚｙｍｅｓ ａｓ Ｄｒｕｇｓ，” Ｈｏｌｃｅｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｅｄｓ．，ｐｐ．３６７ ３８３，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８１）、及びＨｅｒｍａｎｓｏｎ Ｇ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２ｎｄ Ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．２００８に見出すことができる。

【0197】

タンパク質コンジュゲーションは、当該技術分野においてよく知られているいくつかの技法によって実施され得、例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ Ｇ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２ｎｄ Ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．２００８を参照されたい。例としては、凝固タンパク質もしくは水溶性ポリマー部分のいずれか一方上のカルボキシル基と他方のアミン基との間のペプチド結合、または一方のカルボキシル基と他方のヒドロキシル基との間のエステル結合を介した連結が挙げられる。本発明の凝固タンパク質を水溶性ポリマー化合物にコンジュゲートできる別の連結は、シッフ塩基を介したものであり、ポリマー部分上の遊離アミノ基と、過ヨウ素酸酸化によってポリマーの非還元末端に形成されるアルデヒド基とを反応させるものである（Ｊｅｎｎｉｎｇｓ ａｎｄ Ｌｕｇｏｗｓｋｉ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８１；１２７：１０１１－８；Ｆｅｍａｎｄｅｓ ａｎｄ Ｇｒｅｇｏｎｒａｄｉｓ，Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ．１９９７；１３４１；２６－３４）。生成されたシッフ塩基は、ＮａＣＮＢＨ_３との特異的還元により第二級アミンを形成させることで安定化させることができる。代替的なアプローチは、事前酸化後にＮＨ_４Ｃｌとの還元的アミノ化によってポリマー上に末端遊離アミノ基を生成することである。２つのアミノ基または２つのヒドロキシル基を連結させるには、二官能性試薬を使用することができる。例えば、アミノ基を含有するポリマーは、ＢＳ３（ビス（スルホスクシンイミジル）基質／Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．）のような試薬を用いて、凝固タンパク質のアミノ基にカップリングすることができる。加えて、例えば、アミン基とチオール基を連結させるには、スルホ－ＥＭＣＳ（Ｎ－ε－マレイミドカプロイルオキシ）スルホスクシンイミドエステル／Ｐｉｅｒｃｅ）などのヘテロ二官能性架橋試薬を使用することができる。他の実施形態において、アルデヒド反応性基、例えば、ＰＥＧアルコキシド＋ブロモアセトアルデヒドのジエチルアセタール；ＰＥＧ＋ＤＭＳＯ及び無水酢酸、ならびにＰＥＧクロリド＋４－ヒドロキシベンズアルデヒドのフェノキシド、スクシンイミジル活性エステル、活性化ジチオカルボナートＰＥＧ、２，４，５－トリクロロフェニルクロロギ酸及びＰ－ニトロフェニルクロロギ酸活性化ＰＥＧが凝固タンパク質のコンジュゲーションに使用され得る。

【0198】

ＶＷＦの生物学的活性を測定するための別の方法は、コラーゲン結合アッセイであり、これは、ＥＬＩＳＡ法に基づくものである（Ｂｒｏｗｎ ａｎｄ Ｂｏｓａｋ，Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．，１９８６，４３：３０３－３１１；Ｆａｖａｌｏｒｏ，Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．，２０００，８３ １２７－１３５）。マイクロタイタープレートにＩ型またはＩＩＩ型コラーゲンをコーティングする。次いで、ＶＷＦをコラーゲン表面に結合させ、その後、酵素標識ポリクローナル抗体で検出する。最終ステップは基質反応であり、この反応をＥＬＩＳＡリーダーで光度測定的にモニターすることができる。

【0199】

フォンヴィレブランド因子（ＶＷＦ：Ａｇ）の免疫学的アッセイは、血漿中のＶＷＦタンパク質濃度を測定するイムノアッセイである。これらでは、ＶＷＦ機能に関する情報は何ら示されない。ＶＷＦ：Ａｇを測定する方法は多数存在し、これらには、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）または自動化ラテックスイムノアッセイ（ＬＩＡ）の両方が含まれる。多くの研究室が全自動ラテックスイムノアッセイを使用している。歴史的には、Ｌａｕｒｅｌｌ電気イムノアッセイ「Ｌａｕｒｅｌｌ Ｒｏｃｋｅｔｓ」を含む多様な技法が研究室で使用されていたが、今日では、ほとんどの研究室で使われていない。

【0200】

Ｖ．キット
追加の態様として、本発明は、対象への投与に使用し易いような様式でパッケージされた１つ以上の凍結乾燥組成物を含むキットを含む。一実施形態において、そのようなキットは、密封された瓶または器などの容器の中にパッケージされた本明細書に記載される医薬製剤（例えば、治療用タンパク質またはペプチドを含む組成物）を含み、本方法の実施における化合物または組成物の使用について説明するラベルが容器に貼付されているか、またはパッケージに含まれている。一実施形態において、医薬製剤は、容器のヘッドスペースの量（例えば、液体製剤と容器の上部との間の空気量）が極めて小さくなるように、容器にパッケージされる。好ましくは、ヘッドスペースの量は、ごくわずかである（例えば、ほとんどない）。一実施形態において、キットには、治療用タンパク質またはペプチド組成物を含む第１の容器と、生理学的に許容される組成物の再構成溶液を含む第２の容器が収容されている。一態様において、医薬製剤は、単位剤形にパッケージされる。キットは、特定の投与経路に従って医薬製剤を投与するのに好適なデバイスを更に含んでもよい。好ましくは、キットには、医薬製剤の使用について説明するラベルが収容されている。

【0201】

ある特定の実施形態において、提供される組成物は、シリンジまたは他の保存容器の使用による投与のための液体製剤である。更なる実施形態において、これらの液体製剤は、水溶液として再構成される本明細書に記載される凍結乾燥物質から生成される。

【0202】

ＶＩ．重症ＶＷＤ患者における過多月経を治療する方法のためのｒＶＷＦ
重症ＶＷＤの対象にｒＶＷＦを投与することの利点の１つは、ｒＶＷＦの比活性がｐｄＶＷＦと比較して高いことにより、投与されるｒＶＷＦの量及び対象に再投与される回数に柔軟性が出ることである。理解されるように、また本明細書で更に考察されるように、同時投与されるＦＶＩＩＩは、組換えであっても血漿由来であってもよい。

【0203】

ｒＶＷＦの単回投与または複数回投与は、担当医師によって選択される用量レベル及びパターンで実施される。疾患の予防または治療の場合、適切な投与量は、治療される疾患の種類（例えば、フォンヴィレブランド病）、疾患の重症度と経過、薬物の投与が予防または治療目的であるか、治療歴、患者の臨床歴と薬物に対する反応、及び主治医の判断によって決定される。

【0204】

いくつかの態様において、ｒＶＷＦは、２０～９０ＩＵ／ｋｇの範囲、例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、２０～９０、３０～６０、３０～７０、３５～７０、２０～４０、３５～６０、４０～５０、４０～６０、４０～８５、４５～６０、４５～５５、４５～５０、５０～５５、５０～６０、５０～７５、５０～９０、５５～６０、または６０～８０ＩＵ／ｋｇで対象に投与される。

【0205】

いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦは、～９０ＩＵ／ｋｇ、例えば、５～９０、５～５０、１０～９０、１５～９０、２０～９０、３０～６０、３０～７０、３０～９０、４０～５０、４０～６０、４０～８５、４０～９０、５０～７５、５０～９０、６０～８０、６０～９０、７０～９０、８０～９０、５～８０、１０～７０、２０～６０、３０～５０、３５～６０、５～５０、５～４０、５～３０、５～２０、１０～９０、１０～５０、または２０～４０ＩＵ／ｋｇの範囲で対象に投与される。他の実施形態において、ｒＶＷＦは、７０～２００ＩＵ／ｋｇ、例えば、７０～２００、８０～２００、９０～２００、１００～２００、１１０～２００、１２０～２００、１３０～２００、１３０～２００、１４０～２００、１５０～２００、１６０～２００、１７０～２００、１８０～２００、１９０～２００、７０～１７０、８０～１８０、６０～１６０、５０～１５０、４０～１４０、３０、１３０、２０～１２０、１０～１１０、７０～１００、または７０～９０ＩＵ／ｋｇの用量で対象に投与される。

【0206】

いくつかの実施形態において、対象は、３０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、対象は、４０～５０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。

【0207】

いくつかの実施形態において、対象は、４０～８５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、対象は、５０～７５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。他の実施形態において、対象は、５５～７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。

【0208】

いくつかの実施形態において、対象は、３０～７０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、対象は、４０～６０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。他の実施形態において、対象は、４５～５５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。

【0209】

いくつかの実施形態において、対象は、５０～９０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。いくつかの実施形態において、対象は、６０～８０ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。他の実施形態において、対象は、６５～８５ＩＵ／ｋｇのｒＶＷＦが投与される。

【0210】

ｒＶＷＦの組成物は、本明細書に記載されるように、医薬製剤中に含有させることができる。そのような製剤は、経口、局所、経皮、非経口、吸入用スプレー、経膣、経直腸、または頭蓋内注射により投与することができる。本明細書で使用される非経口という用語は、皮下注射、静脈内注射、筋肉内注射、槽内注射、または注入法を含む。静脈内、皮内、筋肉内、乳房内、腹腔内、髄腔内、球後、肺内への注射及び／または特定の部位への外科的植え込みによる投与も同様に企図される。一般に、組成物は、パイロジェン、及びレシピエントにとって有害となり得る他の不純物を本質的に含まない。

【0211】

一態様において、本発明の製剤は、医薬品の循環血中治療濃度を維持するために、最初のボーラス投与に続いて、持続注入される。別の例として、本発明の化合物は１回用量として投与される。当業者であれば、適正な医療行為及び個々の患者の臨床状態によって決定される有効な投与量及び投与レジメンを容易に最適化するであろう。投与経路は、静脈内、腹腔内、皮下、または筋肉内の投与であり得るが、これらに限定されない。投与頻度は、薬剤の薬物動態パラメーター及び投与経路によって異なる。最適な医薬製剤は、投与経路及び所望の投与量に応じて当業者により決定される。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄ．，１９９０，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．１８０４２ ｐａｇｅｓ １４３５－１７１２を参照されたく、その開示は、あらゆる目的のため、特に医薬品のための製剤、投与経路及び投与量に関するあらゆる教示のために、その全体が参照により本明細書に援用される。そのような製剤は、投与される薬剤の物理的状態、安定性、ｉｎ ｖｉｖｏ放出速度、及びｉｎ ｖｉｖｏクリアランス速度に影響を与え得る。好適な用量は、投与経路に応じて、体重、体表面積または臓器の大きさに従って算出される。適切な投与量は、適切な用量反応データと併せて、血中投与濃度を決定するために確立されたアッセイの使用により確定され得る。最終投与レジメンは、薬物の作用を変更する様々な因子、例えば、薬物の比活性、患者の損傷の重症度と反応性、患者の年齢、状態、体重、性別と食事、感染症があればその重症度、投与時間及び他の臨床的因子を考慮して、主治医によって決定される。例として、本発明の組換えＶＷＦの典型的な用量は、およそ５０ＩＵ／ｋｇであり、５００μｇ／ｋｇに相当する。研究が進むにつれて、様々な疾患及び状態に対して適切な投与量及び治療期間に関する更なる情報が明らかになるであろう。

【0212】

ａ．凍結乾燥ＶＷＦ製剤
本発明の方法はまた、本明細書で提供される治療方法において使用するためのｒＶＷＦの製剤を提供する。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦ組成物は、医薬組成物の製造に使用される。いくつかの実施形態において、ｒＶＷＦは、凍結乾燥製剤に製剤化することができる。

【0213】

いくつかの実施形態において、本発明のＶＷＦポリペプチドを含む製剤は、精製後、対象への投与前に凍結乾燥される。凍結乾燥は、当該技術分野において一般的な技法を使用して実施され、開発される組成物用に最適化される必要がある（Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．２１：１９１－２００，（２００４）及びＣｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．１３：２４３－９（１９９６））。

【0214】

凍結乾燥サイクルは、一態様において、凍結、一次乾燥、及び二次乾燥という３つのステップで構成される（Ａ．Ｐ．Ｍａｃｋｅｎｚｉｅ，Ｐｈｉｌ Ｔｒａｎｓ Ｒ Ｓｏｃ Ｌｏｎｄｏｎ，Ｓｅｒ Ｂ，Ｂｉｏｌ ２７８：１６７（１９７７））。凍結ステップでは、溶液を、氷の形成が開始するまで冷却する。更に、このステップは、増量剤の結晶化を誘導する。氷は、一次乾燥段階で昇華し、これは、真空を利用してチャンバーの圧力を氷の蒸気圧を下回るまで減圧し、熱を導入して昇華を促進することによって行われる。最後に、二次乾燥段階で、チャンバーの圧力を減圧し、棚温度を上げることで、吸着または結合した水を除去する。このプロセスにより、凍結乾燥ケーキとして知られる物質が生成される。その後、ケーキは、注射用の滅菌水または好適な希釈剤のいずれかで再構成することができる。

【0215】

凍結乾燥サイクルは、賦形剤の最終的な物理的状態を決定するだけでなく、再構成時間、外観、安定性及び最終含水量などの他のパラメーターにも影響する。凍結状態の組成物の構造は、特定の温度で起こるいくつかの転移（例えば、ガラス転移、湿潤、及び結晶化）を経て進行し、その構造を使用して、凍結乾燥プロセスを理解し、最適化することができる。ガラス転移温度（Ｔｇ及び／またはＴｇ’）により、溶質の物理的状態についての情報を得ることができ、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって決定することができる。Ｔｇ及びＴｇ’は、凍結乾燥サイクルを設計するときに考慮しなければならない重要なパラメーターである。例えば、Ｔｇ’は、一次乾燥にとって重要である。更に、乾燥状態でのガラス転移温度から、最終生成物の保存温度に関する情報が得られる。

【0216】

ｂ．医薬製剤及び賦形剤全般
賦形剤は、医薬品（例えば、タンパク質）の安定性及び送達性を付与または増大させる添加剤である。賦形剤は、それを含める理由にかかわらず、製剤の不可欠な成分であるため、患者にとって安全であり、忍容性が良好である必要がある。タンパク質薬物の場合、賦形剤の選択は、薬物の有効性と免疫原性の両方に影響を与え得るため、特に重要である。したがって、タンパク質製剤は、好適な安定性、安全性、及び市場性を与える賦形剤を適切に選択して開発する必要がある。

【0217】

凍結乾燥製剤は、一態様において、少なくとも緩衝液、増量剤、及び安定剤のうちの１つ以上で構成される。この態様において、凍結乾燥ステップ中または再構成中に凝集が問題となる場合には、界面活性剤の有用性が評価され、選択される。凍結乾燥中に製剤を安定なｐＨ域に維持するために、適切な緩衝剤が含まれる。液体タンパク質製剤及び凍結乾燥タンパク質製剤について企図される賦形剤成分の比較が表８に記載される。

【0218】

（表８）凍結乾燥タンパク質製剤の賦形剤成分

【0219】

タンパク質の製剤開発における主な課題は、製造、輸送及び保存のストレスに対して製品を安定化させることである。製剤用賦形剤の役割は、これらのストレスに対する安定化を提供することである。賦形剤はまた、高濃度タンパク質製剤の粘度を下げて、製剤の送達を可能にし、患者の利便性を向上させるためにも利用される。一般に、賦形剤は、様々な化学的及び物理的ストレスに対してタンパク質を安定化させるメカニズムに基づいて分類することができる。いくつかの賦形剤は、特定のストレスの影響を軽減するため、または特定のタンパク質の個々の感受性を調節するために使用される。他の賦形剤は、タンパク質の物理的及び共有結合による安定性に、より全般的な効果がある。本明細書に記載される賦形剤は、その化学的種類または製剤における機能的役割のいずれかで体系化されている。安定化の様式についての簡単な説明は、各種賦形剤を考察する際に提供される。

【0220】

本明細書で提供される教示及び指針を考慮すれば、当業者は、バイオ医薬製剤（例えば、タンパク質）の安定性の保持を促進する本発明のバイオ医薬製剤を達成するために、どの程度の量または範囲の賦形剤を任意の特定の製剤中に含めることができるかがわかるであろう。例えば、本発明のバイオ医薬製剤に含める塩の量及び種類は、最終溶液の所望のオスモル濃度（例えば、等張、低張または高張）ならびに製剤中に含める他の成分の量及びオスモル濃度に基づいて選択される。

【0221】

例として、約５％のソルビトールを含めることで等張性を達成することができるが、等張性を達成するには約９％のスクロース賦形剤が必要である。本発明のバイオ医薬製剤内に含めることができる１つ以上の賦形剤の量または濃度範囲の選択は、塩、ポリオール及び糖への言及により上記で例示されている。しかしながら、当業者は、本明細書に記載され、具体的な賦形剤への言及により更に例示される考慮事項が、例えば、塩、アミノ酸、他の等張化剤、界面活性剤、安定剤、増量剤、凍結保護剤、凍結乾燥保護剤、抗酸化剤、金属イオン、キレート剤及び／または保存剤を含む、賦形剤の全ての種類及び組み合わせに同様に適用可能であることを理解するであろう。

【0222】

更に、特定の賦形剤がモル濃度で報告される場合、当業者は、それと同等のパーセント（％）ｗ／ｖ（例えば、（試料溶液中の物質のグラム数／溶液のｍＬ）×１００％）の溶液もまた企図されることを認識するであろう。

【0223】

当然のことながら、当業者であれば、本明細書に記載される賦形剤の濃度は、特定の製剤内で相互依存性を持つことを認識するであろう。例として、増量剤の濃度は、例えば、タンパク質濃度が高い場合、または、例えば、安定化剤濃度が高い場合、低減され得る。加えて、当業者であれば、増量剤のない特定の製剤の等張性を維持するために、安定化剤の濃度が適宜調整されることを認識するであろう（例えば、「等張」量の安定剤が使用される）。一般的な賦形剤は、当該技術分野において知られており、Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｉｒ Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ（１９９８），ＰＤＡ Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，５２：２３８－３１１に見出すことができる。

【0224】

ｃ．医薬用緩衝液及び緩衝剤
薬理学的に活性なタンパク質製剤の安定性は、通常、狭いｐＨ範囲で最大になることが観察されている。安定性が最適なこのｐＨ範囲は、プレフォーミュレーション研究において早期に特定する必要がある。この取り組みにおいて、加速安定性試験及び熱量測定スクリーニング試験などのいくつかのアプローチが有用である（Ｒｅｍｍｅｌｅ Ｒ．Ｌ．Ｊｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３８（１６）：５２４１－７（１９９９））。製剤が最終的に決定したら、タンパク質は、製造され、その有効期間を通じて維持されなければならない。したがって、緩衝剤は、製剤のｐＨを調整するためにほぼ必ず使用される。

【0225】

緩衝種の緩衝能は、ｐＫａと等しいｐＨで最大となり、ｐＨがこの値から増減していくにつれ低下する。緩衝能の９０パーセントは、そのｐＫａの１ｐＨ単位内に存在する。緩衝能はまた、緩衝液濃度の増大に比例して増大する。

【0226】

緩衝液を選択する際には、いくつかの要因を考慮する必要がある。最初に最も重要なことは、緩衝種及びその濃度がそのｐＫａ及び所望の製剤ｐＨに基づいて定義されることが必要である。同様に重要なのは、緩衝液がタンパク質及び他の製剤用賦形剤と適合性があり、いかなる分解反応も触媒しないことを確保することである。第３に考慮すべき重要な側面は、投与時に緩衝剤が誘発し得る刺すような痛み及び刺激である。例えば、クエン酸塩は、注射時に刺すような痛みを引き起こすことが知られている（Ｌａｕｒｓｅｎ Ｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｂａｓｉｃ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ．，９８（２）：２１８－２１（２００６））。刺すような痛み及び刺激の可能性は、皮下（ＳＣ）または筋肉内（ＩＭ）経路を介して投与される薬物でより高く、これは、投与時に製剤が急速に血液中に希釈されるＩＶ経路で投与される場合よりも、薬液が比較的長い時間その部位に留まるからである。直接ＩＶ注入によって投与される製剤の場合、緩衝剤（及び任意の他の製剤成分）の総量はモニターする必要がある。特に、患者に心血管系作用を誘発し得る、リン酸カリウム緩衝液の形態で投与されるカリウムイオンについては注意が必要である（Ｈｏｌｌａｎｄｅｒ－Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ ＪＣ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｆａｍ．Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ．，７３（２）：２８３－９０（２００６））。

【0227】

凍結乾燥製剤用の緩衝液は、更なる考慮が必要である。リン酸ナトリウムなどの一部の緩衝液は、凍結中にタンパク質非晶相から結晶化し、ｐＨのシフトが生じ得る。酢酸塩及びイミダゾールなどの他の一般的な緩衝液は、凍結乾燥プロセス中に昇華または蒸発することにより、凍結乾燥中または再構成後に製剤のｐＨがシフトし得る。

【0228】

組成物中に存在する緩衝系は、生理学的に適合するように、また、医薬製剤の所望のｐＨを維持するように選択される。一実施形態において、溶液のｐＨは、ｐＨ２．０～ｐＨ１２．０である。例えば、溶液のｐＨは、２．０、２．３、２．５、２．７、３．０、３．３、３．５、３．７、４．０、４．３、４．５、４．７、５．０、５．３、５．５、５．７、６．０、６．３、６．５、６．７、７．０、７．３、７．５、７．７、８．０、８．３、８．５、８．７、９．０、９．３、９．５、９．７、１０．０、１０．３、１０．５、１０．７、１１．０、１１．３、１１．５、１１．７、または１２．０であり得る。

【0229】

ｐＨ緩衝化合物は、製剤のｐＨを所定のレベルに維持するのに好適な任意の量で存在し得る。一実施形態において、ｐＨ緩衝濃度は、０．１ｍＭ～５００ｍＭである。例えば、ｐＨ緩衝剤は、少なくとも０．１、０．５、０．７、０．８ ０．９、１．０、１．２、１．５、１．７、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、または５００ｍＭであることが企図される。

【0230】

本明細書に記載される製剤を緩衝するために使用される例示的なｐＨ緩衝剤としては、有機酸、グリシン、ヒスチジン、グルタミン酸塩、コハク酸塩、リン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、Ｔｒｉｓ、ＨＥＰＥＳ、ならびにアミノ酸またはアミノ酸の混合物、例えば、限定するものではないが、アスパラギン酸、ヒスチジン、及びグリシンが挙げられるがこれらに限定されない。本発明の一実施形態において、緩衝剤は、クエン酸塩である。

【0231】

ｄ．医薬用安定剤及び増量剤
本発明の医薬製剤の一態様において、安定剤（または安定剤の組み合わせ）は、保存により誘発される凝集及び化学分解を防止または低減するために添加される。再構成時の溶液の霞みまたは混濁は、タンパク質の沈殿または少なくとも凝集を示す。「安定剤」という用語は、水性状態での凝集または化学分解（例えば、自己分解、脱アミド、酸化など）を含む物理的分解を防ぐことが可能な賦形剤を意味する。企図される安定剤としては、スクロース、トレハロース、マンノース、マルトース、ラクトース、グルコース、ラフィノース、セロビオース、ゲンチオビオース、イソマルトース、アラビノース、グルコサミン、フルクトース、マンニトール、ソルビトール、グリシン、アルギニンＨＣＬ、ポリヒドロキシ化合物、例えば、デキストラン、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、シクロデキストリン、Ｎ－メチルピロリデン、セルロース及びヒアルロン酸などの多糖、塩化ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ ７４：２２５，（１９９１））。本発明の製剤において、安定剤は、約０．１、０．５、０．７、０．８ ０．９、１．０、１．２、１．５、１．７、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、５００、７００、９００、または１０００ｍＭの濃度で組み込まれる。本発明の一実施形態において、マンニトール及びトレハロースが安定化剤として使用される。

【0232】

所望される場合、製剤はまた、適量の増量剤及びオスモル濃度調節剤を含み得る。増量剤としては、例えば、限定するものではないが、マンニトール、グリシン、スクロース、高分子化合物、例えば、デキストラン、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、ラクトース、ソルビトール、トレハロース、またはキシリトールが挙げられる。一実施形態において、増量剤は、マンニトールである。増量剤は、約０．１、０．５、０．７、０．８ ０．９、１．０、１．２、１．５、１．７、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、５００、７００、９００、または１０００ｍＭの濃度で組み込まれる。

【0233】

ｅ．医薬用界面活性剤
タンパク質は、表面と相互作用する性質が強いため、気－液、バイアル－液体、及び液－液（シリコーンオイル）界面で吸着及び変性を受け易い。この分解経路は、タンパク質濃度に反比例することが観察されており、可溶性及び不溶性タンパク質凝集体の形成または表面への吸着による溶液からのタンパク質の消失のいずれかをもたらす。容器表面の吸着に加えて、表面により誘起される分解は、製品の輸送や取り扱い時に受ける物理的な攪拌によって悪化する。

【0234】

界面活性剤は、一般に、表面により誘起される分解を防止するためにタンパク質製剤に使用される。界面活性剤は、両親媒性分子であり、界面位置でタンパク質に競り勝つ能力がある。界面活性剤分子の疎水性部分が界面位置（例えば、気／液）を占め、当該分子の親水性部分はバルク溶媒の方向に配向された状態を保つ。十分な濃度（典型的には、洗浄剤の臨界ミセル濃度程度）であれば、界面活性剤分子の表面層がタンパク質分子の界面での吸着を防ぐように作用する。それにより、表面により誘起される分解が最小限に抑えられる。本明細書で企図される界面活性剤には、限定するものではないが、ソルビタンポリエトキシラートの脂肪酸エステル、例えば、ポリソルベート２０及びポリソルベート８０が挙げられる。この２つは、分子に疎水特性を付与する脂肪族鎖の長さが異なるだけであり、それぞれＣ－１２及びＣ－１８である。したがって、ポリソルベート８０は、ポリソルベート２０よりも表面活性が高く、臨界ミセル濃度が低い。

【0235】

洗浄剤はまた、タンパク質の熱力学的配座安定性にも影響し得る。ここでも同様に、所与の洗浄賦形剤の作用は、タンパク質特異的である。例えば、ポリソルベートは、一部のタンパク質の安定性を低下させ、他のタンパク質の安定性を増大させることがわかっている。洗浄剤によるタンパク質の不安定化は、洗浄剤分子の疎水性尾部が部分的または完全にアンフォールドな状態のタンパク質と特異的に結合することに関与し得ることから合理的に説明することができる。このようなタイプの相互作用は、より展開したタンパク質状態に向かう配座平衡のシフトを生じ得る（例えば、結合するポリソルベートと相補的にタンパク質分子の疎水性部分の露出が増加する）。あるいは、タンパク質の天然状態がある程度の疎水性表面を示す場合、洗浄剤が天然状態に結合することで、その立体配座が安定化し得る。

【0236】

ポリソルベートの別の側面として、本質的に酸化分解を受け易いことがある。多くの場合、ポリソルベートは、原材料として、タンパク質の残基側鎖、特にメチオニンの酸化を引き起こすのに十分な量の過酸化物を含有する。安定剤の添加により酸化劣化が生じる可能性があることから、賦形剤は、製剤中に最低有効濃度で使用されるべきである点が強調される。界面活性剤の場合、所与のタンパク質の有効濃度は、安定化のメカニズムによって異なる。

【0237】

界面活性剤もまた、凍結及び乾燥中の表面関連凝集現象を防ぐために適切な量で加えられる（Ｃｈａｎｇ，Ｂ，Ｊ．，Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，８５：１３２５，（１９９６））。したがって、例示的な界面活性剤としては、限定するものではないが、天然アミノ酸に由来する界面活性剤を含む、アニオン性、カチオン系、非イオン性、双極性イオン、及び両性界面活性剤が挙げられる。アニオン性界面活性剤としては、ラウリル硫酸ナトリウム、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム及びジオクチルスルホン酸ナトリウム、ケノデオキシコール酸、Ｎ－ラウロイルサルコシンナトリウム塩、ドデシル硫酸リチウム、１－オクタンスルホン酸ナトリウム塩、コール酸ナトリウム水和物、デオキシコール酸ナトリウム、ならびにグリコデオキシコール酸ナトリウム塩が挙げられるが、これらに限定されない。カチオン界面活性剤としては、塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウム一水和物、及び臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウムが挙げられるが、これらに限定されない。双極性界面活性剤としては、ＣＨＡＰＳ、ＣＨＡＰＳＯ、ＳＢ３－１０、及びＳＢ３－１２が挙げられるが、これらに限定されない。非イオン性界面活性剤としては、ジギトニン、ＴｒｉｔｏｎＸ－１００、ＴｒｉｔｏｎＸ－１１４、ＴＷＥＥＮ－２０、及びＴＷＥＥＮ－８０が挙げられるが、これらに限定されない。界面活性剤としてはまた、ラウロマクロゴール４００、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油１０、４０、５０及び６０、モノステアリン酸グリセロール、ポリソルベート４０、６０、６５及び８０、大豆レシチンならびにジオレイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、及び（ジオレイルホスファチジルグリセロール）ＤＯＰＧなどの他のリン脂質；スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロース及びカルボキシメチルセルロースが挙げられるが、これらに限定されない。したがって、これらの界面活性剤を個別にまたは異なる比率の組み合わせとして含む組成物が更に提供される。本発明の一実施形態において、界面活性剤は、ＴＷＥＥＮ－８０である。本発明の製剤において、界面活性剤は、約０．０１～約０．５ｇ／Ｌの濃度で組み込まれる。提供される製剤において、界面活性剤濃度は、０．００５、０．０１、０．０２、０．０３、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９または１．０ｇ／Ｌである。

【0238】

ｆ．医薬用塩
塩は、多くの場合、製剤のイオン強度を上げるために添加され、タンパク質の溶解性、物理的安定性、及び等張性に重要であり得る。塩は、様々な様式でタンパク質の物理的安定性に影響し得る。イオンは、タンパク質表面の荷電残基に結合することによってタンパク質の天然状態を安定化させることができる。あるいは、塩は、タンパク質骨格（－ＣＯＮＨ－）に沿ったペプチド基に結合することによって変性状態を安定化させることができる。塩はまた、タンパク質分子内の残基同士の反発性静電相互作用を遮蔽することによってタンパク質の天然立体配座を安定化させることができる。タンパク質製剤中の塩はまた、タンパク質の凝集及び不溶性をもたらし得る、タンパク質分子同士の誘引性静電相互作用を遮蔽することができる。提供される製剤において、塩の濃度は、０．１、１、１０、２０、３０、４０、５０、８０、１００、１２０、１５０、２００、３００から５００ｍＭの間である。

【0239】

ｇ．他の一般的な賦形剤成分：医薬用アミノ酸
アミノ酸は、緩衝剤、増量剤、安定剤及び抗酸化剤として、タンパク質製剤に多目的に利用されている。したがって、一態様において、タンパク質製剤をそれぞれ５．５～６．５及び４．０～５．５のｐＨ範囲に緩衝するために、ヒスチジン及びグルタミン酸が採用される。ヒスチジンのイミダゾール基はｐＫａ＝６．０であり、グルタミン酸側鎖のカルボキシル基は４．３のｐＫａであることから、これらのアミノ酸はそれぞれのｐＨ範囲での緩衝に好適である。グルタミン酸は、そのような場合に特に有用である。ヒスチジンは、一般に市販されているタンパク質製剤にみられ、このアミノ酸は、注射時の刺すような痛みで知られるクエン酸緩衝液の代替となる。興味深いことに、ヒスチジンはまた、液体及び凍結乾燥の両方の形態で高濃度で使用した場合、凝集に関して、安定化作用を有することが報告されている（Ｃｈｅｎ Ｂ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．，２０（１２）：１９５２－６０（２００３））。ヒスチジンはまた、高タンパク質濃度製剤の粘度を下げることが他者によって観察された。しかしながら、同じ研究において、著者らは、ステンレス鋼製容器中の抗体の凍結融解試験中に、ヒスチジン含有製剤における凝集増加及び変色を観察した。ヒスチジンに関して注意すべき別の点は、ヒスチジンが金属イオン存在下では光酸化を受けることである（Ｔｏｍｉｔａ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，８（１２）：５１４９－６０（１９６９））。メチオニンの製剤の抗酸化剤としての使用は、有望であると考えられ、いくつかの酸化ストレスに対して有効であることが観察されている（Ｌａｍ ＸＭ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ，８６（１１）：１２５０－５（１９９７））。

【0240】

様々な態様において、選択的排除のメカニズムによってタンパク質を安定化させることがわかっているアミノ酸のグリシン、プロリン、セリン、アルギニン及びアラニンのうちの１つ以上を含む製剤が提供される。グリシンはまた、凍結乾燥製剤に一般的に使用される増量剤である。アルギニンは、凝集阻害において有効な薬剤であることが示されており、液体製剤及び凍結乾燥製剤の両方で使用されている。提供される製剤において、アミノ酸濃度は、０．１、１、１０、２０、３０、４０、５０、８０、１００、１２０、１５０、２００、３００から５００ｍＭの間である。本発明の一実施形態において、アミノ酸は、グリシンである。

【0241】

ｈ．他の一般的な賦形剤成分：医薬用抗酸化剤
タンパク質残基の酸化は、いくつかの異なる原因から生じる。タンパク質の酸化劣化を防ぐには、特定の抗酸化剤の添加だけでなく、大気中酸素、温度、光曝露、及び化学汚染など、製造プロセス及び製品の保存全体に関する様々な要因を注意深く管理することを必要とする。したがって、本発明は、限定するものではないが、還元剤、酸素／フリーラジカルスカベンジャー、またはキレート剤を含む医薬用抗酸化剤の使用を企図する。治療用タンパク質製剤の抗酸化剤は、一態様において、水溶性であり、製品の有効期間全体にわたって活性を維持する。還元剤及び酸素／フリーラジカルスカベンジャーは、溶液中の活性酸素種を消失させることで作用する。ＥＤＴＡなどのキレート剤は、フリーラジカル形成を促進する微量の金属汚染物質と結合することによって効果を示す。例えば、酸性線維芽細胞増殖因子の液体製剤では、金属イオンによるシステイン残基の触媒酸化を阻害するためにＥＤＴＡが利用された。

【0242】

タンパク質の酸化を防ぐ様々な賦形剤の有効性に加えて、抗酸化剤自体が他の共有結合または物理的な変化をタンパク質に誘導する可能性が懸念される。例えば、還元剤は、分子内ジスルフィド連結の破壊を引き起こす場合があり、ジスルフィドシャッフリングをもたらし得る。遷移金属イオンの存在下において、アスコルビン酸及びＥＤＴＡは、いくつかのタンパク質及びペプチドにおいてメチオニン酸化を促進することがわかっている（Ａｋｅｒｓ ＭＪ，ａｎｄ Ｄｅｆｅｌｉｐｐｉｓ ＭＲ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｓ Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ．Ｉｎ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｓｖｅｎ Ｆｒｏｋｊａｅｒ，Ｌａｒｓ Ｈｏｖｇａａｒｄ，ｅｄｉｔｏｒｓ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ．Ｔａｙｌｏｒ ａｎｄ Ｆｒａｎｃｉｓ，ＵＫ（１９９９））；Ｆｒａｎｓｓｏｎ Ｊ．Ｒ．，／．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８６（９）：４０４６－１０５０（１９９７）；Ｙｉｎ Ｊ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．，２１（１２）：２３７７－８３（２００４））。チオ硫酸ナトリウムは、ｒｈｕＭａｂ ＨＥＲ２における光及び温度誘導メチオニン酸化レベルを減少させることが報告されているが、この研究では、チオ硫酸－タンパク質付加物の形成も報告された（Ｌａｍ ＸＭ，Ｙａｎｇ ＪＹ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ．８６（１１）：１２５０－５（１９９７））。適切な抗酸化剤の選択は、タンパク質の特定のストレス及び感受性に従って行われる。ある特定の態様で企図される抗酸化剤には、限定するものではないが、還元剤及び酸素／フリーラジカルスカベンジャー、ＥＤＴＡ、ならびにチオ硫酸ナトリウムが含まれる。

【0243】

ｉ．他の一般的な賦形剤成分：医薬用金属イオン
一般に、遷移金属イオンは、タンパク質の物理的及び化学的分解反応を触媒し得るので、タンパク質製剤に望ましくない。ただし、金属イオンがタンパク質の補因子である製剤、及び配位錯体を形成するタンパク質懸濁製剤（例えば、インスリンの亜鉛懸濁液）には、特定の金属イオンが含まれる。最近では、アスパラギン酸のイソアスパラギン酸への異性化を阻害するために、マグネシウムイオン（１０～１２０ｍＭ）の使用が提案されている（ＷＯ２００４０３９３３７）。

【0244】

金属イオンがタンパク質の安定性または活性の増加を付与する２つの例は、ヒトデオキシリボヌクレアーゼ（ｒｈＤＮａｓｅ、Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ（登録商標））、及び第ＶＩＩＩ因子である。ｒｈＤＮａｓｅの場合、Ｃａ^＋２イオン（最大１００ｍＭ）により、特異的結合部位を介して酵素の安定性が増加した（Ｃｈｅｎ Ｂ，ｅｔ ａｌ．，／Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ．，８８（４）：４７７－８２（１９９９））。実際に、ＥＧＴＡで溶液からカルシウムイオンを除去すると、脱アミド及び凝集が増加した。しかしながら、この作用は、Ｃａ^＋２イオンでのみ観察され、他の二価カチオンＭｇ^＋２、Ｍｎ^＋２及びＺｎ^＋２は、ｒｈＤＮａｓｅを不安定化させることが観察された。第ＶＩＩＩ因子でも同様の作用が観察された。Ｃａ^＋２及びＳｒ^＋２イオンは、タンパク質を安定化させたが、Ｍｇ^＋２、Ｍｎ^＋２及びＺｎ^＋２、Ｃｕ^＋２及びＦｅ^＋２などの他ものは、酵素を不安定化させた（Ｆａｔｏｕｒｏｓ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．，１５５，１２１－１３１（１９９７）。第ＶＩＩＩ因子を用いた別の研究では、Ａｌ^＋３イオンの存在下で凝集率の大幅な増加が観察された（Ｄｅｒｒｉｃｋ ＴＳ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，９３（１０）：２５４９－５７（２００４））。著者らは、緩衝塩などの他の賦形剤が多くの場合Ａｌ^＋３イオンで汚染されていることを指摘しており、製剤製品には、適切な品質の賦形剤を使用する必要性を説明している。

【0245】

ｊ．他の一般的な賦形剤成分：医薬用保存剤
同一容器から２回以上の抽出を伴うマルチユース非経口製剤を開発する場合には、保存剤が必要である。それらの主な機能は、微生物の成長を阻害すること、及び医薬品の有効期間または使用期間全体にわたる製品の無菌性を確保することである。一般的に使用される保存剤としては、限定するものではないが、ベンジルアルコール、フェノール及びｍ－クレゾールが挙げられる。保存剤は、長い間使用されているが、保存剤を含むタンパク質製剤の開発は困難であり得る。保存剤は、ほぼ必ずタンパク質に対して不安定化作用（凝集）があり、このことが複数回用量のタンパク質製剤における使用を制限する主な要因になっている（Ｒｏｙ Ｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ，９４（２）：３８２－９６（２００５））。

【0246】

現在まで、ほとんどのタンパク質薬物は、単回使用のみを目的に製剤化されている。しかしながら、複数回用量の製剤が可能であれば、患者の利便性、及び市場性の増大を可能にする追加の利点がある。良い例は、保存製剤の開発により、より簡便なマルチユース注射ペン形態の商品化に至ったヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）である。現在、ｈＧＨの保存製剤を含有するそのようなペンデバイスは、少なくとも４つ市販されている。Ｎｏｒｄｉｔｒｏｐｉｎ（登録商標）（液体、Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、Ｎｕｔｒｏｐｉｎ ＡＱ（登録商標）（液体、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）＆Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎ（凍結乾燥－デュアルチャンバーカートリッジ、Ｐｈａｒｍａｃｉａ＆Ｕｐｊｏｈｎ）は、フェノールを含有し、Ｓｏｍａｔｒｏｐｅ（登録商標）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）は、ｍ－クレゾールを用いて製剤化されている。

【0247】

保存剤形の製剤開発では、いくつかの側面を考慮する必要がある。医薬品中の保存剤の有効濃度は、最適化する必要がある。これには、タンパク質の安定性を損なうことなく抗菌有効性を付与する濃度範囲で、剤形中の所与の保存剤を試験することが必要である。例えば、インターロイキン－１受容体（Ｉ型）の液体製剤の開発では、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を使用した、３つの保存剤のスクリーニングが成功した。保存剤は、市販製品で一般的に使用されている濃度で安定性に与える影響に基づいてランク付けされた（Ｒｅｍｍｅｌｅ ＲＬ Ｊｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．，１５（２）：２００－８（１９９８））。

【0248】

保存剤を含有する液体製剤の開発は、凍結乾燥製剤よりも困難である。フリーズドライ製品は、保存剤を用いることなく凍結乾燥させ、使用時に希釈剤を含有する保存剤で再構成することができる。これにより、保存剤がタンパク質と接触する時間が短くなり、関連する安定性リスクがかなり最小化される。液体製剤の場合、保存剤の有効性及び安定性は、製品の有効期間全体（約１８～２４ヶ月）にわたって維持される必要がある。留意すべき重要な点は、活性薬物及び賦形剤の全成分を含有する最終製剤で保存剤の有効性が実証されなければならないことである。

【0249】

いくつかの保存剤は、注射部位反応を引き起こす可能性があり、これは、保存剤を選択する際に考慮が必要な別の要素である。ノルディトロピンにおける保存剤及び緩衝液の評価に焦点を当てた臨床試験では、ｍ－クレゾールを含有する製剤と比較して、フェノール及びベンジルアルコールを含有する製剤では、疼痛知覚が低いことが観察された（Ｋａｐｐｅｌｇａａｒｄ Ａ．Ｍ．，Ｈｏｒｍ Ｒｅｓ．６２ Ｓｕｐｐｌ ３：９８－１０３（２００４））。興味深いことに、一般的に使用される保存剤のうち、ベンジルアルコールは、麻酔特性を有する（Ｍｉｎｏｇｕｅ ＳＣ，ａｎｄ Ｓｕｎ ＤＡ．，ＡｎｅｓｔｈＡｎａｌｇ．，１００（３）：６８３－６（２００５））。様々な態様において、保存剤の使用は、いかなる副作用も上回る利益をもたらす。

【0250】

ｋ．医薬製剤の調製方法
本発明は、医薬製剤の調製方法を更に企図する。

【0251】

本発明の方法は、次のステップのうちの１つ以上を更に含む：本明細書に記載される安定化剤を凍結乾燥前の混合物に加えること、それぞれ本明細書に記載される増量剤、オスモル濃度調節剤、及び界面活性剤から選択される少なくとも１つの剤を凍結乾燥前の混合物に加えること。

【0252】

凍結乾燥物質の標準的な再構成法は、ある体積の純水または注射用滅菌水（ＷＦＩ）（典型的に凍結乾燥中に除去された体積と等量）を加えて戻すことであるが、非経口投与用医薬品の調製には抗菌剤の希釈液が使用されることもある（Ｃｈｅｎ，Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ，１８：１３１１－１３５４（１９９２））。したがって、本発明の凍結乾燥ｒＶＷＦ組成物に希釈剤を加えるステップを含む、再構成されたｒＶＷＦ組成物の調製のための方法が提供される。

【0253】

凍結乾燥物質は、水溶液として再構成され得る。様々な水性担体、例えば、注射用滅菌水、複数回用量の使用のための保存剤を含む水、または適量の界面活性剤を含む水（例えば、水性懸濁液の製造に好適な賦形剤と混合された活性化合物を含有する水性懸濁液）。様々な態様において、そのような賦形剤は、懸濁化剤、例えば、限定するものではないが、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム及びアラビアガムであり、分散剤または湿潤剤は、天然リン脂質、例えば、限定するものではないが、レシチン、またはアルキレンオキシドと脂肪酸の縮合生成物、例えば、限定するものではないが、ステアリン酸ポリオキシエチレン、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、例えば、限定するものではないが、ヘプタデカエチレンオキシセタノール、またはエチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトールから誘導された部分エステルとの縮合生成物、例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール、またはエチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトール無水物から誘導された部分エステルとの縮合生成物、例えば、限定するものではないが、モノオレイン酸ポリエチレンソルビタンである。様々な態様において、水性懸濁液はまた、１つ以上の保存剤、例えば、限定するものではないが、ｐ－ヒドロキシ安息香酸エチル、またはｐ－ヒドロキシ安息香酸ｎ－プロピルを含有する。

【0254】

ｌ．投与のための例示的なｒＶＷＦ製剤
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、治療の体積を小さくするために（１００ＩＵ／ｍｌ～１００００ＩＵ／ｍｌ）、高い効力（高濃度のｒＶＷＦ及び増強された長期安定性）を有する最終製品を可能にする増強された製剤を提供する。いくつかの実施形態において、投与用製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約１００ＩＵ／ｍｌ～１００００ＩＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態において、投与用製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約５００ＩＵ／ｍｌ～１００００ＩＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態において、投与用製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約１０００ＩＵ／ｍｌ～１００００ＩＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態において、投与用製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約２０００ＩＵ／ｍｌ～１００００ＩＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態において、投与用製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約３０００ＩＵ／ｍｌ～１００００ＩＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態において、投与用製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約４０００ＩＵ／ｍｌ～１００００ＩＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態において、投与用製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約５０００ＩＵ／ｍｌ～１００００ＩＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態において、投与用製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約６０００ＩＵ／ｍｌ～１００００ＩＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態において、投与用製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約７０００ＩＵ／ｍｌ～１００００ＩＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態において、投与用製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約８０００ＩＵ／ｍｌ～１００００ＩＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態において、投与用製剤中のｒＶＷＦ濃度は、約９０００ＩＵ／ｍｌ～１００００ＩＵ／ｍｌである。

【0255】

いくつかの実施形態において、投与用製剤は、例えば、ヒスチジン、グリシン、アルギニンなどのアミノ酸を含む、１つ以上の双極性イオン化合物を含む。いくつかの実施形態において、投与用製剤は、例えば、ポリソルベート８０、オクチルピラノシド、ジペプチド、及び／または両親媒性ペプチドを含む、最低でも１つの疎水性基及び１つの親水性基を有する両親媒性の特徴を有する成分を含む。いくつかの実施形態において、投与用製剤は、例えば、ソルビトール、マンニトール、スクロース、またはトレハロースを含む、非還元糖または糖アルコールまたは二糖を含む。いくつかの実施形態において、投与用製剤は、例えば、塩化ナトリウムを含む、生理学的オスモル濃度をもたらす無毒性水溶性塩を含む。いくつかの実施形態において、投与用製剤は、ｐＨが６．０～８．０の範囲である。いくつかの実施形態において、投与用製剤は、ｐＨが約６．０、約６．５、約７、約７．５または約８．０である。いくつかの実施形態において、投与用製剤は、例えば、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、Ｚｎ２＋、Ｍｎ２＋及び／またはそれらの組み合わせを含む、ｒＶＷＦを安定化させる１つ以上の二価カチオンを含む。いくつかの実施形態において、投与用製剤は、約１ｍＭ～約５０ｍＭのグリシン、約１ｍＭ～約５０ｍＭのヒスチジン、約０～約３００ｍＭの塩化ナトリウム（例えば、３００ｍＭ未満のナトリウム）、約０．０１％～約０．０５％ポリソルベート２０（またはポリソルベート８０）、及び約０．５％～約２０％（ｗ／ｗ）スクロースを含み、投与の時点でｐＨが約７．０であり、生理学的浸透圧モル濃度を有する。

【0256】

特定の態様において、ｒＶＷＦは、緩衝液、糖及び／または糖アルコール（限定するものではないが、トレハロース及びマンニトールを含む）、安定剤（グリシンなど）、及び界面活性剤（ポリソルベート８０など）を含有する製剤中に含有される。更なる実施形態において、ｒＦＶＩＩＩを含有する製剤の場合、製剤は、ナトリウム、ヒスチジン、カルシウム、及びグルタチオンを更に含み得る。

【0257】

いくつかの実施形態において、投与用製剤は、フリーズドライにすることができる。いくつかの実施形態において、投与用製剤は、安定であり、液体状態で約２℃～約８℃、及び約１８℃～約２５℃で保存することができる。いくつかの実施形態において、投与用製剤は、安定であり、液体状態で約２℃～約８℃で保存することができる。いくつかの実施形態において、投与用製剤は、安定であり、液体状態で約１８℃～約２５℃で保存することができる。

【0258】

ＶＷＦ組成物をヒトまたは試験動物に投与するために、一態様において、組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体を含む。「薬学的に」または「薬理学的に」許容されるという文言は、安定であり、凝集及び切断による産物などのタンパク質分解を阻害し、なおかつ、以下に記載されるように、当該技術分野においてよく知られている経路を使用して投与した場合に、アレルギー反応または他の有害反応をもたらすことのない分子実体及び組成物を指す。「薬学的に許容される担体」には、上記で開示される薬剤を含む、臨床的に有用なあらゆる溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌及び抗真菌剤、等張剤ならびに吸収遅延剤などが含まれる。

【0259】

医薬製剤は、経口、局所、経皮、非経口、吸入用スプレー、経膣、経直腸、または頭蓋内注射により投与される。本明細書で使用される非経口という用語は、皮下注射、静脈内注射、筋肉内注射、槽内注射、または注入法を含む。特定の部位での静脈内、皮内、筋肉内、乳房内、腹腔内、髄腔内、球後、及び／または肺内への注射による投与も同様に企図される。一般に、組成物は、パイロジェン、及びレシピエントにとって有害となり得る他の不純物を本質的に含まない。

【0260】

ｒＶＷＦの単回投与または複数回投与は、担当医師によって選択される用量レベル及びパターンで実施される。疾患の予防または治療の場合、適切な投与量は、治療される疾患の種類（例えば、フォンヴィレブランド病）、疾患の重症度と経過、薬物の投与が予防または治療目的であるか、治療歴、患者の臨床歴と薬物に対する反応、及び主治医の判断によって決定される。

【0261】

一態様において、製剤は、医薬品の循環血中治療濃度を維持するために、最初のボーラス投与に続いて、持続注入される。別の例として、本発明の化合物は１回用量として投与される。当業者であれば、適正な医療行為及び個々の患者の臨床状態によって決定される有効な投与量及び投与レジメンを容易に最適化するであろう。投与経路は、静脈内、腹腔内、皮下、または筋肉内の投与であり得るが、これらに限定されない。投与頻度は、薬剤の薬物動態パラメーター及び投与経路によって異なる。最適な医薬製剤は、投与経路及び所望の投与量に応じて当業者により決定される。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄ．，１９９０，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．１８０４２ ｐａｇｅｓ １４３５－１７１２を参照されたく、その開示は、あらゆる目的のため、特に医薬品のための製剤、投与経路及び投与量に関するあらゆる教示のために、その全体が参照により本明細書に援用される。そのような製剤は、投与される薬剤の物理的状態、安定性、ｉｎ ｖｉｖｏ放出速度、及びｉｎ ｖｉｖｏクリアランス速度に影響を与え得る。好適な用量は、投与経路に応じて、体重、体表面積または臓器の大きさに従って算出される。適切な投与量は、適切な用量反応データと併せて、血中投与濃度を決定するために確立されたアッセイの使用により確定され得る。最終投与レジメンは、薬物の作用を変更する様々な因子、例えば、薬物の比活性、患者の損傷の重症度と反応性、患者の年齢、状態、体重、性別と食事、感染症があればその重症度、投与時間及び他の臨床的因子を考慮して、主治医によって決定される。

【0262】

本発明の実施は、特に指定のない限り、従来の技術ならびに有機化学、高分子技術、分子生物学（組換え技術を含む）、細胞生物学、生化学、及び免疫学の記載を採用することができ、これらは、当業者の技術範囲内である。そのような従来技術は、ポリマーアレイ合成、ハイブリダイゼーション、ライゲーション、及び標識を使用したハイブリダイゼーションの検出を含む。好適な技術の具体的な例示は、本明細書中、以下の実施例を参照することにより得ることができる。ただし、当然のことながら、同等の従来手順もまた使用することができる。そのような従来の技術及び説明は、Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｓｅｒｉｅｓ（Ｖｏｌｓ．Ｉ－ＩＶ）、Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ＰＣＲ Ｐｒｉｍｅｒ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（いずれもＣｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）、Ｓｔｒｙｅｒ，Ｌ．（１９９５）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（４ｔｈ Ｅｄ．）Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｈｉｇｈｌｙ ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ Ｙｏｒｋ，Ｇａｉｔ，“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ” １９８４，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ、Ｎｅｌｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｘ（２０００），Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３ｒｄ Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ Ｐｕｂ．，Ｈｉｇｈｌｙ ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．ならびにＢｅｒｇ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ Ｐｕｂ．，Ｈｉｇｈｌｙ ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．などの標準的な実験マニュアルに見出すことができ、それらは全て、あらゆる目的のために、その全体が参照により本明細書に援用される。

【0263】

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈上、別途明記されない限り、複数の指示物を含むことに留意されたい。したがって、例えば、「ポリメラーゼ」への言及は、１つの薬剤またはそのような薬剤の混合物を指し、「方法」への言及は、当業者に知られている同等のステップ及び方法への言及を含むなどとなる。

【0264】

別途の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されている意味と同一の意味を有する。本明細書で言及される全ての公開物は、その公開物に記載されている及び本明細書に記載される発明との関連で使用され得るデバイス、組成物、製剤及び方法論を記載及び開示する目的で、参照により本明細書に援用される。

【0265】

値の範囲が記載される場合、その範囲の上限値と下限値との間にある、別途明確な記載がない限りはその下限値の単位の１０分の１までの各値、及びその指定範囲内の任意の他の指定値または間にある値は、本発明内に包含されることが理解される。これらのより狭い範囲の上限値及び下限値は、独立してより狭い範囲に含まれ得、指定範囲内で特に除外される任意の制限値を除き、本発明内に包含される。指定範囲が限界値の一方または両方を含む場合、当該含まれる限界値の一方または両方を除いた範囲もまた本明細書に含まれる。

【0266】

上記の説明において、本発明をより深く理解するために、多数の具体的な詳細が記載されている。しかしながら、本発明がこれらの具体的な詳細のうちの１つ以上がなくても実施され得ることは当業者には明らかであろう。他の場合には、発明が曖昧になるのを回避するために、よく知られた特徴及び当業者によく知られた手順は記載されていない。

【0267】

本発明は、主に具体的な実施形態を参照しながら説明されているが、本開示を読むことで、他の実施形態が当業者に明らかとなることもまた想定され、そのような実施形態も本発明の方法内に含まれることが意図される。

【実施例】

【0268】

実施例１－重症フォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）患者における組換えフォンヴィレブランド因子（ＲＶＷＦ）の第３相オープンラベル試験での過多月経の管理：事後解析
序文
フォンヴィレブランド病（ＶＷＤ）の女性に最も一般的な症状は、重度月経出血（ＨＭＢ）または過多月経であり、ＶＷＤの女性の最大８０％がこの症状を患い、中等症または重症ＶＷＤの女性の２０％が主にＨＭＢのために子宮摘出を必要とする。^１，２

【0269】

過多月経／ＨＭＢは、一般に、症候性鉄欠乏性貧血、心理的ストレス、及び生活の質の低下と関連する。仕事、学校、及び日常生活に悪影響を及ぼし、医療費の増加につながり得る。^３，４

【0270】

過多月経の診断及び効果的な治療がないことは、ＶＷＤの女性におけるアンメット・ヘルス・ニーズである。^３

【0271】

組換えフォンヴィレブランド因子（ｒＶＷＦ、ボニコグアルファ、ＶＥＹＶＯＮＤＩ（商標）；Ｂａｘａｌｔａ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ ＧｍｂＨ、Ｔａｋｅｄａの子会社，Ｖｉｅｎｎａ，Ａｕｓｔｒｉａ）は、重症ＶＷＤを有する成人患者における出血エピソード（ＢＥ）のオンデマンド治療に使用した場合、止血効果及び良好なベネフィット・リスクプロファイルを示した。^５，６しかしながら、特にｒＶＷＦを伴う過多月経の管理に関する情報は限られている。

【0272】

目的
本試験の目的は、重症ＶＷＤ患者の過多月経エピソードに対するオンデマンドｒＶＷＦ治療の有効性及び安全性を決定することであった。

【0273】

方法
重症ＶＷＤの成人のＢＥの治療におけるｒＶＷＦの薬物動態、安全性、及び止血効果を評価するために、第３相多施設一部無作為化試験（ＮＣＴ０１４１０２２７；ＥｕｄｒａＣＴ２０１０－０２４１０８－８４）を実施した。^６

【0274】

試験の組み入れ基準には、以下の要因を含めた：
男性または女性；１８～６５歳；いずれかの３型ＶＷＤの診断（ＶＷＦ抗原量≦３ＩＵ／ｄＬ）；または以下のタイプの重症非３型ＶＷＤ：
・１型もしくは２Ａ型（ＶＷＦリストセチン補因子活性［ＶＷＦ：ＲＣｏ］＜２０ＩＵ／ｄＬ）；
・２Ｂ型（遺伝子型によって診断）；
・２Ｎ型（第ＶＩＩＩ因子［ＦＶＩＩＩ］活性［ＦＶＩＩＩ：Ｃ］＜１０％及び過去に確認されている遺伝的性質）；
・２Ｍ型；
及び過去１２ヶ月に≧１のＢＥを治療するためにＶＷＦ濃縮製剤を受けたことがある。

【0275】

除外基準には、ｒＶＷＦもしくはｒＦＶＩＩＩの任意の成分に対する過敏症の既往歴；ＶＷＦもしくはＦＶＩＩＩ阻害薬の使用歴；免疫障害；または血栓塞栓症イベントを含めた。

【0276】

試験デザイン
患者を４つの治療コホートのうちの１つに登録し、薬物動態評価及び／またはＢＥの治療のために、ｒＶＷＦを組換えＦＶＩＩＩ（ｒＦＶＩＩＩ；抗血友病因子［組換え］［ＡＤＶＡＴＥ（登録商標）；Ｂａｘａｌｔａ ＵＳ Ｉｎｃ．，Ｔａｋｅｄａの子会社，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ］）とともにまたはそれなしで投与した（図１）。^６

【0277】

治療
一般に、初回用量（第１の用量とも呼ばれる）は、ＶＷＦの完全補充を目標とし、ＶＷＦ：ＲＣｏ＞０．６ＩＵ／ｍＬ（６０％）及びＦＶＩＩＩ：Ｃ＞０．４ＩＵ／ｍＬ（４０％）のレベルとした。

【0278】

重度のＢＥでは、後続用量は、ＶＷＦ：ＲＣｏのトラフレベルを＞５０％に３日間維持することを目標とし、次いで、その後の数日間は、試験責任医師が必要と判断する場合とした（図２）。

【0279】

中程度のＢＥでは、試験責任医師が必要と判断する期間、ＶＷＦ：ＲＣｏトラフレベル＞３０％を目標とした。軽度ＢＥの治療は、ほとんどの場合、１用量または２用量のみとした（図２）。

【0280】

過多月経エピソードの事後データ解析
１２ヶ月の試験期間中に１回以上の過多月経エピソードを報告したｒＶＷＦで治療した女性患者のサブセットについて、事後データ解析を実施した。ｒＶＷＦのみで治療された過多月経エピソードをこの解析に含めた。

【0281】

試験責任医師による過多月経のＢＥ評価には以下を含めた：
・ＢＥの回数及び重症度（軽度、中程度、または重症）
・ｒＶＷＦの総用量及びＢＥあたりの注入回数
・各ＢＥが解決するまでの時間は、最初の注入開始日時及びＢＥが解決した日時から得、これらの日時が利用可能なＢＥのみ解析に含めた。

【0282】

ＢＥの解決後、試験責任医師が客観的な評価スケールに基づいて総合的な臨床効果を決定した（図３）。

【0283】

以下の情報が、患者、患者の医療提供者（主要試験施設から離れた場所での治療の場合）、患者の法的代理人（在宅治療の場合）、または参加施設の権限を与えられた資格要件を満たす者（病院での治療の場合）よって記録された：
・ＢＥの部位（例えば、関節、軟組織、筋肉）；ＢＥのタイプ（例えば、自然発生的、外傷性、不明）；及びＢＥの重症度（例えば、軽度、中程度、重度）
・ＢＥの開始日時及び解決日時
・ＢＥの治療に使用されたｒＶＷＦ－ｒＦＶＩＩＩまたはｒＶＷＦの各注入日時
・止血効果の主観的評価日時
・必要とした鎮痛薬の種類及び数

【0284】

ＢＥは、最初の注入後８時間以内に患者によって主観的に評価され、注入後８時間以内のうち最後に入手可能な評価を解析に使用した。複数回の注入で治療されたＢＥの場合、最初の注入の止血効果評価を解析に使用した。

【0285】

過多月経及び過多月経関連貧血に対して試験中に服用された併用薬を記録した。

【0286】

安全性評価には、有害事象（ＡＥ）の数、種類、重篤度、及び重症度、ならびにＡＥと試験治療との間の因果関係が含まれた。

【0287】

カテゴリー変数はｎ（％）で報告し、連続変数は中央値（範囲）で報告した。

【0288】

結果
患者
ｒＶＷＦで治療した６名の患者が４６件の過多月経エピソード（患者あたり２～１５件のＢＥ）を有し（図４）、そのうちの４５件はｒＶＷＦのみ（例えば、血漿由来ＶＷＦではない）で治療されたので、これらの解析に含めた。

【0289】

１名の患者が２件の過多月経エピソードを有したが、そのうちの１件は、血漿由来ＶＷＦとｒＶＷＦの両方で治療されたことから、解析から除外した。

【0290】

過多月経エピソードの大部分は、医師または患者（自宅治療）によって軽症と評価された（図５）。

【0291】

過多月経の因子消費及び治療転帰
過多月経エピソードを管理するのに必要なｒＶＷＦ用量は、出血の重症度とともに増加し、ＶＷＤ３型のほうが２Ａ型よりも多かった（図６）。

【0292】

各過多月経エピソードの治療に使用されたｒＶＷＦの注入回数は、一般に、出血の重症度とともに増加し（図６）、４５件の過多月経エピソードのうち３０件は１回のみの注入を要した。

【0293】

１回を超える注入を要した過多月経エピソードの場合、ｒＦＶＩＩＩが同時投与され、１回目の注入では１５件中１２件（８０％）、２回目の注入では１５件中４件（２６．７％）、３回目の注入では６件中１件（１６．７％）、及び４回目の注入では１件中０件であった。

【0294】

最初の注入開始から過多月経エピソードの解決までの時間の中央値（範囲）は、２４．３（０．３～２０２．７）時間であった（ｎ＝４３）。過多月経エピソードの治療のためのｒＶＷＦの止血効果は、試験責任医師によってほとんどが「優良」と評価された（図７）。患者は、ｒＶＷＦの止血効果を、３９件（９０．７％）の過多月経エピソードで「優良」、３件（７．０％）のエピソードで「良好」、及び１件（２．３％）のエピソードで「中程度」と評価した。

【0295】

併用薬及び試験治療の安全性
過多月経の併用治療として、３名の患者がトラネキサム酸を使用し、３名の患者が経口避妊薬を使用した。

【0296】

過多月経に起因する貧血を治療するために、６名の患者全員が鉄補充療法を受けた。

【0297】

６名のうち４名の患者で合計１５件のＡＥが報告された（図８）。
・全ＡＥは、試験責任医師によって試験治療と無関係であるとみなされた。
・１件の子宮ポリープのＡＥは、重篤かつ重症とみなされた。
・１件の自然流産のＡＥは、重篤だが、軽度の重症度とみなされた。
・１３件のＡＥが非重篤とされ、１２件が軽症、１件が中等症の重症度であった。

【0298】

注意事項
この第３相一部無作為化ｒＶＷＦ試験からのデータ事後解析は、１２ヶ月の試験において過多月経／ＨＭＢエピソードに対して治療された少数の重症ＶＷＤ患者を対象とした。

【0299】

結論
ＨＭＢ（重度月経出血または過多月経）エピソード１回あたり中央値で１回の注入が必要であり、患者及び試験責任医師は、大部分のＨＭＢエピソードを管理するためのｒＶＷＦによる治療の臨床効果を「優良」と評価した。

【0300】

この解析は、重症ＶＷＤの女性におけるＨＭＢエピソードの管理のためのオンデマンドによるｒＶＷＦの有効性及び安全性を示す証拠を提供する。

【0301】

重症ＶＷＤを有する女性のこの消耗性の状態をｒＶＷＦ治療レジメンが継続して管理するのに役立ち得るかどうか確認するために、更なる試験が実施される。

【0302】

参考文献
１．Ｎｉｃｈｏｌｓ ＷＬ，ｅｔ ａｌ．Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ ２００８；１４：１７１－２３２．

【0303】

２．Ｄｅ Ｗｅｅ ＥＭ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ ２０１１；１０６：８８５－９２．

【0304】

３．Ｒａｇｎｉ ＭＶ，ｅｔ ａｌ．Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ ２０１６Ｐ２：３９７－４０２．

【0305】

４．Ｋａｄｉｒ ＲＡ，ｅｔ ａｌ．Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ ２０１０；１６：８３２－９．

【0306】

５．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ Ａｇｅｎｃｙ．ＶＥＹＶＯＮＤＩ．Ｓｕｍｍａｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ．ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｅｍａ．ｅｕｒｏｐａ．ｅｕ／ｅｎ／ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ／ｐｒｏｄｕｃｔ－ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ／ｖｅｙｖｏｎｄｉ－ｅｐａｒ－ｐｒｏｄｕｃｔ－ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ＿ｅｎ．ｐｄｆ．Ａｃｃｅｓｓｅｄ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ １８，２０１９．

【0307】

６．Ｇｉｌｌ ＪＣ，ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ ２０１５；１２６：２０３８－４６．

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図10D】

【図10E】

【図10F】

【図10G】

【図10H】

【図10I】

【図10J】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図11D】

【図11E】

【図11F】

【図11G】

【配列表】

2023514541000001.app

【国際調査報告】