特表 2023-521658 ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、組成物、及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-05-25

(54)【発明の名称】ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、組成物、及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/57 20060101AFI20230518BHJP

   A61K 38/48 20060101ALI20230518BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230518BHJP

   A61P 7/02 20060101ALI20230518BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20230518BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20230518BHJP

   A61P 7/06 20060101ALI20230518BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20230518BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20230518BHJP

   A61K 9/19 20060101ALI20230518BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20230518BHJP

   C12N 9/64 20060101ALI20230518BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20230518BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20230518BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20230518BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20230518BHJP

【ＦＩ】

C12N15/57

A61K38/48 ZNA

A61P43/00 121

A61P7/02

A61P9/10

A61P31/04

A61P7/06

A61P11/00

A61K9/08

A61K9/19

C12N15/63 Z

C12N9/64 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2022560179

(86)(22)【出願日】2021-04-02

(85)【翻訳文提出日】2022-11-29

(86)【国際出願番号】 IB2021000210

(87)【国際公開番号】W WO2021198781

(87)【国際公開日】2021-10-07

(31)【優先権主張番号】63/004,389

(32)【優先日】2020-04-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

２．プルロニック

３．ＢＲＩＪ

４．Ｌｉｎｕｘ

(71)【出願人】

【識別番号】000002934

【氏名又は名称】武田薬品工業株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100080791

【弁理士】

【氏名又は名称】高島 一

(74)【代理人】

【識別番号】100136629

【弁理士】

【氏名又は名称】鎌田 光宜

(74)【代理人】

【識別番号】100125070

【弁理士】

【氏名又は名称】土井 京子

(74)【代理人】

【識別番号】100121212

【弁理士】

【氏名又は名称】田村 弥栄子

(74)【代理人】

【識別番号】100174296

【弁理士】

【氏名又は名称】當麻 博文

(74)【代理人】

【識別番号】100137729

【弁理士】

【氏名又は名称】赤井 厚子

(74)【代理人】

【識別番号】100151301

【弁理士】

【氏名又は名称】戸崎 富哉

(74)【代理人】

【識別番号】100152308

【弁理士】

【氏名又は名称】中 正道

(74)【代理人】

【識別番号】100201558

【弁理士】

【氏名又は名称】亀井 恵二郎

(72)【発明者】

【氏名】バックマン、フリードムンド

(72)【発明者】

【氏名】セイフリッド、ビルギット

(72)【発明者】

【氏名】グラニンガー、ミヒャエル

(72)【発明者】

【氏名】メルガルド、ビョルン

【テーマコード（参考）】

4B050

4B065

4C076

4C084

【Ｆターム（参考）】

4B050CC04

4B050DD11

4B050LL01

4B065AA93X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA33

4B065CA44

4C076AA12

4C076BB11

4C076CC11

4C076CC14

4C076CC29

4C084AA02

4C084AA07

4C084BA01

4C084BA02

4C084BA08

4C084BA22

4C084BA44

4C084CA36

4C084CA53

4C084DC09

4C084MA02

4C084MA17

4C084MA44

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZA361

4C084ZA362

4C084ZA401

4C084ZA402

4C084ZA541

4C084ZA542

4C084ZA551

4C084ZA552

4C084ZA591

4C084ZA592

4C084ZB351

4C084ZB352

(57)【要約】

本発明は、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、並びにＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを投与してＡＤＡＭＴＳ１３及びＶＷＦの機能不全に関連する疾患又は病態の治療をする方法に関する。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。

【請求項2】

配列番号１に示されるアミノ酸Ｑ９７又はＡＤＡＭＴＳ１３における等価なアミノ酸位置に単一のアミノ酸置換が存在する、請求項１に記載の組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。

【請求項3】

ＱからＤ、Ｅ、Ｋ、Ｈ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、又はＲに単一のアミノ酸が変化している、請求項２に記載の組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。

【請求項4】

ＱからＲに単一のアミノ酸が変化している、請求項２に記載の組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。

【請求項5】

配列番号２のアミノ酸配列又はその少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。

【請求項6】

前記ＡＤＡＭＴＳ１３が、配列番号２のアミノ酸配列から本質的になる、請求項５に記載の組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。

【請求項7】

前記ＡＤＡＭＴＳ１３が、配列番号２のアミノ酸配列からなる、請求項５に記載の組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。

【請求項8】

前記ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、ヒトＡＤＡＭＴＳ１３である、請求項１に記載の組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。

【請求項9】

前記ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。

【請求項10】

前記単一のアミノ酸置換のうちの少なくとも１つが、前記ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と比較してＡＤＡＭＴＳ１３触媒ドメイン内にある、前記請求項のいずれかに記載の組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。

【請求項11】

前記単一のアミノ酸置換が、配列番号１に示されるＩ^７９Ｍ、Ｖ^８８Ｍ、Ｈ^９６Ｄ、Ｒ^１０２Ｃ、Ｓ^１１９Ｆ、Ｉ^１７８Ｔ、Ｒ^１９３Ｗ、Ｔ^１９６Ｉ、Ｓ^２０３Ｐ、Ｌ^２３２Ｑ、Ｈ^２３４Ｑ、Ｄ^２３５Ｈ、Ａ^２５０Ｖ、Ｓ^２６３Ｃ、及び／又はＲ^２６８Ｐでもなく、ＡＤＡＭＴＳ１３における等価なアミノ酸位置にもない、前記請求項のいずれかに記載の組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。

【請求項12】

請求項１～７のいずれか一項に記載の少なくとも１つのＡＤＡＭＴＳ１３バリアントと、薬学的に許容し得る担体又は賦形剤と、を含む医薬組成物。

【請求項13】

ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を更に含む、請求項１２に記載の医薬組成物。

【請求項14】

前記ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列又はその少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載の医薬組成物。

【請求項15】

前記ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列からなる、請求項１３に記載の医薬組成物。

【請求項16】

前記ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、組み換え的に生成される、請求項１３～１５のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項17】

前記ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、血漿由来である、請求項１３～１５のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項18】

ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質に対する比が、約１：１～約３：１、約１：１、又は約３：２である、請求項１３～１５のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項19】

前記ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントが、前記組成物中の全てのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質及びＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの総量の約５２％～約７２％又は約４７％～約８４％を構成する、請求項１３～１８のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項20】

前記比又は割合が、ペプチドマッピング法によって求められる、請求項１８又は１９に記載の医薬組成物。

【請求項21】

前記比又は割合が、液体クロマトグラフィーによって分離したトリプシンペプチドのＨＰＬＣ分析に続いて質量分析を行うことによって求められる、請求項１８又は１９に記載の医薬組成物。

【請求項22】

前記比又は割合が、抽出イオンクロマトグラムにおける強度に基づいて求められる、請求項１８～２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項23】

前記比又は割合が、前記組成物中の全てのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質及びＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのピーク面積の合計に対する、前記ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのトリプシンペプチドのピーク面積に基づいて求められる、請求項１８～２２のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項24】

測定される組成物中の全てのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質及びＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのトリプシンペプチドが、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントと前記組成物中の全ての他のＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質及びＡＤＡＭＴＳ１３バリアントとの間で比較したとき少なくとも１つのアミノ酸の差異に特異的である、請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項25】

前記ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントについて測定されるトリプシンペプチド（複数可）が、ＡＡＧＧＩＬＨＬＥＬＬＶＡＶＧＰＤＶＦＱＡＨＲ又はＡＡＧＧＩＬＨＬＥＬＬＶＡＶＧＰＤＶＦＱＡＨＲとＥＤＴＥＲとの組み合わせである、請求項２４に記載の医薬組成物。

【請求項26】

前記ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質について測定されるトリプシンペプチドが、ＡＡＧＧＩＬＨＬＥＬＬＶＡＶＧＰＤＶＦＱＡＨＱＥＤＴＥＲである、請求項２４又は２５に記載の医薬組成物。

【請求項27】

前記比又は割合が、前記組成物中の全てＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質及びＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの総和重量に対する、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの総重量に基づいて求められる、請求項１８又は１９に記載の医薬組成物。

【請求項28】

凝血障害に罹患しているか又は罹患するリスクのある対象における凝血障害の治療又は予防をする方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の請求項１～７のいずれか一項に記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は請求項１２～２７のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。

【請求項29】

前記凝血障害が、遺伝性ＴＴＰ、後天性ＴＴＰ、梗塞、脳梗塞、心筋梗塞、虚血／再灌流傷害、深部静脈血栓症、又は敗血症関連播種性血管内凝固である、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

出血障害に罹患しているか又は罹患するリスクのある対象における対象における出血エピソードの治療又は予防をする方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の請求項１～７のいずれか一項に記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は請求項１２～２７のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。

【請求項31】

前記出血エピソードが、遺伝性ＴＴＰ、後天性ＴＴＰ、梗塞、脳梗塞、心筋梗塞、虚血／再灌流傷害、深部静脈血栓症、又は敗血症関連播種性血管内凝固に関連する、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

鎌状赤血球症に罹患している対象における血管閉塞クリーゼの治療又は予防をする方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の請求項１～７のいずれか一項に記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は請求項１２～２７のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。

【請求項33】

急性肺傷害（ＡＬＩ）及び／又は急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）に罹患しているか又は罹患するリスクのある対象における肺傷害の治療又は予防をする方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の請求項１～７のいずれか一項に記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は請求項１２～２７のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。

【請求項34】

対象における閉塞した血管の再疎通をさせることによって、対象における脳梗塞の治療をする方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の請求項１～７のいずれか一項に記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は請求項１２～２７のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与し、それによって、前記閉塞した血管の再疎通をさせることを含む方法。

【請求項35】

対象における心血管疾患に関連する凝血障害の治療又は予防をする方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の請求項１～７のいずれか一項に記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は請求項１２～２７のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。

【請求項36】

前記心血管疾患に関連する凝血障害が、心筋梗塞、心筋虚血、深部静脈血栓症、末梢血管疾患、脳卒中、一過性虚血発作、又は医療機器関連血栓症に関連する、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

対象における血液疾患の治療又は予防をする方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の請求項１～７のいずれか一項に記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は請求項１２～２７のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。

【請求項38】

前記ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、組み換え的に生成される、請求項２８～３７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項39】

前記対象が、哺乳類である、請求項２８～３８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

前記対象が、ヒトである、請求項２８～３８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項41】

前記組成物が、凍結乾燥されている、請求項２８～４０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項42】

前記組成物が、投与前に、注射に好適な薬学的に許容し得るビヒクルで再構成される、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

前記組成物が、投与準備の整った安定な水溶液である、請求項２８～４０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項44】

請求項１～７のいずれか一項のいずれか一項に記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントをコードしている核酸分子。

【請求項45】

請求項４４に記載の核酸分子を含むベクター。

【請求項46】

前記ベクターが、前記ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントをコードしているポリヌクレオチド配列が宿主細胞における前記ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの発現を媒介することができるプロモーターに作動可能に連結されている発現ベクターである、請求項４５に記載のベクター。

【請求項47】

請求項４４に記載の核酸分子を含む宿主細胞。

【請求項48】

請求項４５又は４６に記載のベクターを含む、宿主細胞。

【請求項49】

請求項１～１２のいずれか一項に記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び少なくとも１つのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を発現するように改変された細胞を含む、宿主細胞株。

【請求項50】

前記ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントが、配列番号２のアミノ酸配列又はその少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４９に記載の宿主細胞株。

【請求項51】

前記ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質のアミノ酸配列が、配列番号１のアミノ酸配列又はその少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４９又は５０に記載の宿主細胞株。

【請求項52】

前記ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質のアミノ酸配列が、配列番号１のアミノ酸配列からなる、請求項４９～５１のいずれか一項に記載の宿主細胞株。

【請求項53】

前記ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び前記ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、前記宿主細胞株における異なる細胞で発現する、請求項４９～５３のいずれか一項に記載の宿主細胞株。

【請求項54】

前記ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び前記ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、同一細胞内で発現する、請求項４９～５３のいずれか一項に記載の宿主細胞株。

【請求項55】

前記細胞が、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ、ＳＫ－Ｈｅｐ、又はＨｅｐＧ２の細胞である、請求項４７～５４のいずれか一項に記載の宿主細胞又は宿主細胞株。

【請求項56】

前記ＣＨＯ細胞が、ＣＨＯ ＤＢＸ－１１又はＣＨＯＺＮの細胞株である、請求項５５に記載の宿主細胞又は宿主細胞株。

【請求項57】

前記ＣＨＯＺＮ細胞が、ＣＨＯ ＤＢＸ－１１細胞株である、請求項５６に記載の宿主細胞又は宿主細胞株。

【請求項58】

前記ＣＨＯＺＮ細胞が、ＣＨＯＺＮグルタミン合成酵素（ＧＳ）^－／－細胞株である、請求項５６に記載の宿主細胞又は宿主細胞株。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本願は、その開示全体が参照により本明細書に組み入れられる、２０２０年４月２日出願の米国仮出願第６３／００４，３８９号に対する優先権を主張する。

【背景技術】

【0002】

ＡＤＡＭＴＳ（Ａ Ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ－ｌｉｋｅ Ａｎｄ Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅａｓｅ ｗｉｔｈ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｔｙｐｅ Ｉ ｍｏｔｉｆｓ、トロンボスポンジンＩ型モチーフを有するディスインテグリン様及びメタロプロテアーゼ）タンパク質は、亜鉛依存性触媒ドメイン、システインリッチドメイン、ディスインテグリン様ドメイン、及び少なくとも１つ、ほとんどの場合複数のトロンボスポンジンＩ型リピートを含む多数の保存ドメインを含有するメタロプロテイナーゼのファミリーである（総説については、全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれるＮｉｃｈｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｅｖｏｌ Ｂｉｏｌ．２００５ Ｆｅｂ．４；５（１）：１１を参照）。進化的にはメタロプロテイナーゼのＡＤＡＭ及びＭＭＰのファミリーに関連している（全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれるＪｏｎｅｓ Ｇ Ｃ，Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００６ Ｆｅｂｒｕａｒｙ；７（１）：２５－３１）これらタンパク質は、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）（全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれるＭｏａｋｅ Ｊ Ｌ，Ｓｅｍｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ．２００４ Ｊａｎｕａｒｙ；４１（１）：４－１４）、結合組織障害、がん、炎症（Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．）、及び重症熱帯熱マラリア（全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれるＬａｒｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇ．２００９ Ｍａｒｃｈ；５（３）：ｅ１０００３４９）を含む多数の疾患及び病態に関連する分泌酵素である。これら関連性から、ＡＤＡＭＴＳ酵素は、多数の病理についての有望な治療標的であると認識されている（全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれるＪｏｎｅｓ Ｇ Ｃ，Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００６ Ｆｅｂｒｕａｒｙ；７（１）：２５－３１）。

【0003】

ＡＤＡＭＴＳファミリーメンバーの１つであるＡＤＡＭＴＳ１３は、成熟フォンビルブランド因子（ｖＷＦ）サブユニットの中央のＡ２ドメインにおけるＴｙｒ^８４２－Ｍｅｔ^８４３結合（すなわち、全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれるｖＷＦ ＵｎｉＰｒｏｔ Ｉｄ Ｐ０４２７５におけるＴｙｒ^１６０５－Ｍｅｔ^１６０６）でｖＷＦを切断し、活性には亜鉛又はカルシウムを必要とする（全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれるＤｅｎｔ Ｊ Ａ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．１９９０；８７：６３０６－６３１０）。巨核球及び内皮細胞で合成されたｖＷＦは、それぞれ血小板顆粒及びバイベル－パラーデ小体に超大型ｖＷＦ（ＵＬ－ｖＷＦ）として貯蔵される（それぞれが全ての目的のために全体が本明細書に組み込まれるＭｏａｋｅ Ｊ Ｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．１９８２；３０７：１４３２－１４３５；Ｗａｇｎｅｒ Ｄ Ｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１９８２；９５：３５５－３６０；Ｗａｇｎｅｒ Ｄ Ｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｍａｙｏ Ｃｌｉｎ Ｐｒｏｃ．１９９１；６６：６２１－６２７；Ｓｐｏｒｎ Ｌ Ａ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１９８７；６９：１５３１－１５３４；Ｔｓａｉ Ｈ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．１９８９；１５８：９８０－９８５；Ｔｓａｉ Ｈ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１９８９；７３：２０７４－２０７６）。内皮細胞から分泌されると、これらＵＬ－ｖＷＦ多量体は、循環中にＡＤＡＭＴＳ１３によってｖＷＦ分子内の特定の切断部位で一連のより小さな多量体に切断される（それぞれが全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれるＴｓａｉ Ｈ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．１９８９；１５８：９８０－９８５；Ｄｅｎｔ Ｊ Ａ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９１；８８：７７４－７８２；Ｆｕｒｌａｎ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．１９９３；９０：７５０３－７５０７）。

【0004】

ＡＤＡＭＴＳ１３活性の喪失又はｖＷＦレベルの上昇は、ＴＴＰ（Ｍｏａｋｅ Ｊ Ｌ，Ｓｅｍｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ．２００４ Ｊａｎｕａｒｙ；４１（１）：４－１４）、急性及び慢性の炎症（Ｃｈａｕｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２００８ Ｓｅｐ．１；２０５（９）：２０６５－７４）、重症熱帯熱マラリア（Ｌａｒｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇ．２００９ Ｍａｒｃｈ；５（３）：ｅ１０００３４９）、鎌状赤血球病（ＳＣＤ）に関連する急性血管閉塞性イベント、急性肺傷害、心血管疾患（Ｓｏｎｎｅｖｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ ２０１６ ＤＯＩ：１０．１１６１／ＡＴＶＢＡＨＡ．１１６．３０８２２５）、及び虚血性脳卒中（Ｓｏｎｎｅｖｅｌｄ ｅｔ ａｌ．２０１６、本段落における各刊行物は、全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる）等の多数の病態に関連している。

【0005】

ＡＤＡＭＴＳ１３プロテアーゼは、肝臓によって主に生成される１９０ｋＤａのグリコシル化タンパク質である（それぞれが全ての目的のために全体が本明細書に組み込まれるＬｅｖｙ Ｇ Ｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．２００１；４１３：４８８－４９４；Ｆｕｊｉｋａｗａ Ｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２００１；９８：１６６２－１６６６；Ｚｈｅｎｇ Ｘ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００１；２７６：４１０５９－４１０６３；Ｓｏｅｊｉｍａ Ｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ（Ｔｏｋｙｏ）．２００１；１３０：４７５－４８０；Ｇｅｒｒｉｔｓｅｎ Ｈ Ｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２００１；９８：１６５４－１６６１）。ＡＤＡＭＴＳ１３は、Ｎ末端にプロペプチドを有する前駆体として発現する。成熟ＡＤＡＭＴＳ１３は、図４に示すように、メタロプロテアーゼ（Ｍ）ドメイン、ディスインテグリン様（Ｄ）ドメイン、トロンボスポンジン１型（Ｔ）リピート、システインリッチ（Ｃ）ドメイン、及びスペーサー（Ｓ）ドメイン、続いて、７回連続ＴＳＰ１リピート（Ｔ２～Ｔ８）及び２つのＣＵＢドメインを含む。ヒトＡＤＡＭＴＳ１３ ＤＴＣＳ（残基２８７～６８５）の構造を含む、ＡＤＡＭＴＳファミリータンパク質における様々なドメインの構造情報が報告されている（全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれるＡｋｉｙａｍａ Ｍ．，Ｔａｋｅｄａ Ｓ．，Ｋｏｋａｍｅ Ｋ．，Ｔａｋａｇｉ Ｊ．，Ｍｉｙａｔａ Ｔ．２００９ Ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｎｏｎｃａｔａｌｙｔｉｃ ｄｏｍａｉｎｓ ｏｆ ＡＤＡＭＴＳ１３ ｒｅｖｅａｌ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｉｓｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｅｘｏｓｉｔｅｓ ｆｏｒ ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ ｆａｃｔｏｒ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １０６：１９２７４－１９２７９）。ＡＤＡＭＴＳファミリーのメンバーはＭＤＴＣＳドメインの配列保存及び構造の類似性を共有していることが、構造解析により示されている（それぞれが全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれるＡｋｉｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，２００９、上掲；Ｍｏｓｙａｋ Ｌ．，Ｇｅｏｒｇｉａｄｉｓ Ｋ．，Ｓｈａｎｅ Ｔ．，Ｓｖｅｎｓｏｎ Ｋ．ｅｔ ａｌ．２００８ Ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｗｏ ｍａｊｏｒ ａｇｇｒｅｃａｎ ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅｓ，ＡＤＡＭＴＳ４ ａｎｄ ＡＤＡＭＴＳ５，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ １７：１６－２１）。ＡＤＡＭＴＳ１３のＶＷＦタンパク質分解活性は二価カチオンに強く依存しており、これは、このＡＤＡＭＴＳファミリーにおける他のメタロプロテアーゼドメインでも観察されている（全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれるＺｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００１、上掲；Ｇａｒｄｎｅｒ Ｍ．Ｄ．，Ｃｈｉｏｎ Ｃ．Ｋ．，ｄｅ Ｇｒｏｏｔ Ｒ．，Ｓｈａｈ Ａ．，Ｃｒａｗｌｅｙ Ｊ．Ｔ．ｅｔ ａｌ．２００９ Ａ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｃａｌｃｉｕｍ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｉｎ ｔｈｅ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅａｓｅ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ＡＤＡＭＴＳ１３，Ｂｌｏｏｄ １１３：１１４９－１１５７）。更に、ＡＤＡＭＴＳ１３活性は、ＶＷＦに対する結合及びＮ末端のＭＤＴＣＳドメインとＣ末端のＣＵＢドメインとの間の相互作用によってアロステリックな調節を受ける（それぞれが全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれるＭｕｉａ Ｊ．，Ｚｈｕ Ｊ．，Ｇｕｐｔａ Ｇ．，Ｈａｂｅｒｉｃｈｔｅｒ Ｓ．Ｌ．，Ｆｒｉｅｄｍａｎ Ｋ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．２０１４ Ａｌｌｏｓｔｅｒｉｃ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＡＤＡＭＴＳ１３ ｂｙ ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ ｆａｃｔｏｒ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １１１：１８５８４－１８５８９；Ｓｏｕｔｈ Ｋ．，Ｌｕｋｅｎ Ｂ．Ｍ．，Ｃｒａｗｌｅｙ Ｊ．Ｔ．Ｂ．，Ｐｈｉｌｌｉｐｓ Ｒ．，Ｔｈｏｍａｓ Ｍ．，ｅｔ ａｌ．２０１４ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＡＤＡＭＴＳ１３，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １１１：１８５７８－１８５８３）。

【0006】

ＡＤＡＭＴＳ１３及びＶＷＦの機能不全に関連する疾患又は病態の治療をする組成物及び方法におけるＡＤＡＭＴＳ１３のバリアントの使用を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアントが本明細書に記載される。

【発明の概要】

【0007】

本開示は、ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアントを含む。本開示は、医薬組成物及び／又は医薬を調製するためのＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの使用も含む。本開示は、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを用いて、ＡＤＡＭＴＳ１３の欠損、高いｖＷＦレベル、及び／又は高いｖＷＦ抗原レベルに関連する疾患又は障害の治療をする、寛解をさせる、及び／又は予防をする方法も含む。他の関連する態様も、本開示に提供される。

【0008】

特定の実施形態では、本開示は、ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアントを提供する。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質のアミノ酸（例えば、配列番号１）と比較して（すなわち、に対して）少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、単一のアミノ酸置換が、ＡＤＡＭＴＳ１３の触媒ドメイン（例えば、配列番号１のアミノ酸８０～２８６）内にある。特定の実施形態では、単一のアミノ酸置換は、配列番号１に示されるＩ^７９Ｍ、Ｖ^８８Ｍ、Ｈ^９６Ｄ、Ｑ^９７Ｒ、Ｒ^１０２Ｃ、Ｓ^１１９Ｆ、Ｉ^１７８Ｔ、Ｒ^１９３Ｗ、Ｔ^１９６Ｉ、Ｓ^２０３Ｐ、Ｌ^２３２Ｑ、Ｈ^２３４Ｑ、Ｄ^２３５Ｈ、Ａ^２５０Ｖ、Ｓ^２６３Ｃ、及び／若しくはＲ^２６８Ｐのうちの少なくとも１つであるか、又はＡＤＡＭＴＳ１３における等価なアミノ酸位置にある。特定の実施形態では、単一のアミノ酸置換は、配列番号１に示されるＩ^７９Ｍ、Ｖ^８８Ｍ、Ｈ^９６Ｄ、Ｒ^１０２Ｃ、Ｓ^１１９Ｆ、Ｉ^１７８Ｔ、Ｒ^１９３Ｗ、Ｔ^１９６Ｉ、Ｓ^２０３Ｐ、Ｌ^２３２Ｑ、Ｈ^２３４Ｑ、Ｄ^２３５Ｈ、Ａ^２５０Ｖ、Ｓ^２６３Ｃ、及び／又はＲ^２６８Ｐでもなく、ＡＤＡＭＴＳ１３における等価なアミノ酸位置にもない。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、配列番号１に示されるＱ^９７又はＡＤＡＭＴＳ１３における等価なアミノ酸における単一のアミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、ＱからＤ、Ｅ、Ｋ、Ｈ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、又はＲにアミノ酸が変化している。特定の実施形態では、ＱからＲにアミノ酸が変化している。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、ＡＤＡＭＴＳ１３ Ｑ^９７Ｒ（配列番号２）又はその少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。

【0009】

特定の実施形態では、本開示は、少なくとも１つのＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む医薬組成物を提供する。特定の実施形態では、本開示は、少なくとも１つのＡＤＡＭＴＳ１３バリアントと、薬学的に許容し得る担体又は賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。特定の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１つのＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び少なくとも１つのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質（例えば、野生型）の組み合わせを含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１つのＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び少なくとも１つのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質（例えば、野生型）の組み合わせと、薬学的に許容し得る担体又は賦形剤とを含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの野生型ＡＤＡＭＴＳ１３（例えば、配列番号１）に対する比は、約４：１～約１：４である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３野生型に対する比は、約３：１である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３野生型に対する比は、約２：１である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３野生型に対する比は、約１：１である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３野生型に対する比は、約１：２である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３野生型に対する比は、約２：３である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３野生型に対する比は、約３：２である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、配列番号１に示されるＱ^９７又はＡＤＡＭＴＳ１３における等価なアミノ酸位置における単一のアミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、ＡＤＡＭＴＳ１３ Ｑ^９７Ｒ（配列番号２）又はその少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。特定の実施形態では、野生型ＡＤＡＭＴＳ１３は、ヒトＡＤＡＭＴＳ１３、又は全ての目的のために参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１１／０２２９４５５号に記載されているその生物学的に活性のある誘導体若しくは断片である。一実施形態では、ｈＡＤＡＭＴＳ１３のアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿６２０５９４のものである。特定の実施形態では、ｈＡＤＡＭＴＳ１３は、配列番号１である。

【0010】

特定の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１つのＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び少なくとも１つのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質（例えば、野生型）の組み合わせを含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１つのＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び少なくとも１つのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質（例えば、野生型）の組み合わせと、薬学的に許容し得る担体又は賦形剤とを含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、組成物中の全てのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質及びＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの総量の約５２％～約７２％又は約４７％～約８４％を構成する。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、配列番号１に示されるＱ^９７又はＡＤＡＭＴＳ１３における等価なアミノ酸位置における単一のアミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、ＡＤＡＭＴＳ１３ Ｑ^９７Ｒ（配列番号２）又はその少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。特定の実施形態では、野生型ＡＤＡＭＴＳ１３は、ヒトＡＤＡＭＴＳ１３、又は全ての目的のために参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１１／０２２９４５５号に記載されているその生物学的に活性のある誘導体若しくは断片である。一実施形態では、ｈＡＤＡＭＴＳ１３のアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿６２０５９４のものである。特定の実施形態では、ｈＡＤＡＭＴＳ１３は、配列番号１である。

【0011】

特定の実施形態では、相対的な存在量、割合、及び／又は比は、ペプチドマッピング法によって求められる。特定の実施形態では、相対的な存在量、割合、及び／又は比は、実施例３に記載のペプチドマッピング法によって求められる。特定の実施形態では、相対的な存在量、割合、及び／又は比は、液体クロマトグラフィーによって分離したトリプシンペプチドのＨＰＬＣ分析に続いて質量分析を行うことによって求められる。特定の実施形態では、相対的な存在量、割合、及び／又は比は、抽出イオンクロマトグラムにおける強度に基づく。特定の実施形態では、相対的な存在量、割合、及び／又は比は、組成物中の全てのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質及びＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（例えば、Ｑ^９７Ｒ ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及びＱ^９７ ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の総和）のピーク面積の合計に対するＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（例えば、Ｑ^９７Ｒ ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント）のトリプシンペプチドのピーク面積に基づいて求められる。特定の実施形態では、測定される組成物中の全てのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質及びＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのトリプシンペプチドは、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントと組成物中の全ての他のＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質及びＡＤＡＭＴＳ１３バリアントとの間で比較したときの少なくとも１つのアミノ酸の差異に特異的である。例えば、Ｑ^９７Ｒ ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントについて測定することができるトリプシンペプチド（複数可）は、ＡＡＧＧＩＬＨＬＥＬＬＶＡＶＧＰＤＶＦＱＡＨＲ又はＡＡＧＧＩＬＨＬＥＬＬＶＡＶＧＰＤＶＦＱＡＨＲとＥＤＴＥＲとの組み合わせであってよく、Ｑ^９７ ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質について測定されるトリプシンペプチドはＡＡＧＧＩＬＨＬＥＬＬＶＡＶＧＰＤＶＦＱＡＨＱＥＤＴＥＲであってよい。

【0012】

特定の実施形態では、相対的な存在量、割合、及び／又は比は、組成物中の全てのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質及びＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの総和重量に対するＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの総重量に基づいて求められる。

【0013】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び／又は野生型は、組み換え体である。特定の実施形態では、野生型ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び／又は野生型は、血漿由来である。

【0014】

一態様では、本開示は、対象における凝血障害の治療又は予防をする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を含むものを含む、その組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。

【0015】

本明細書に提供される方法の特定の実施形態では、凝固障害は、遺伝性ＴＴＰ（先天性ＴＴＰ、遺伝ＴＴＰ、家族性ＴＴＰ、及びアップショー－シュルマン症候群とも呼ばれる）、後天性ＴＴＰ（免疫介在性ＴＴＰとも呼ばれる）、梗塞、脳梗塞、心筋梗塞、虚血／再灌流傷害、深部静脈血栓症、及び敗血症関連播種性血管内凝固からなる群から選択される。本明細書に提供される方法の一実施態様では、凝固障害は、遺伝性ＴＴＰである。本明細書に提供される方法の一実施態様では、凝固障害は、後天性ＴＴＰである。

【0016】

一態様では、本開示は、対象における出血エピソードの治療をする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を含むものを含む、その組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。

【0017】

特定の実施形態では、出血エピソードは、遺伝性ＴＴＰ、後天性ＴＴＰ、梗塞、心筋梗塞、脳梗塞、及び／又は虚血再灌流傷害と関連している。

【0018】

一態様では、本開示は、鎌状赤血球症に罹患している対象における血管閉塞クリーゼの治療又は予防をする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を含む組成物を含む、その組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。

【0019】

一態様では、本開示は、急性肺傷害（ＡＬＩ）及び／又は急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）に罹患している対象における血管閉塞クリーゼの治療又は予防をする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を含む組成物を含む、その組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。

【0020】

一態様では、本開示は、脳梗塞を有する対象における閉塞した血管の再疎通をさせる方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を含む組成物を含む、その組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。

【0021】

一態様では、本開示は、脳梗塞を経験したことのある対象における感覚運動機能の回復の改善をする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を含む組成物を含む、その組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。

【0022】

一態様では、本開示は、対象における心血管疾患に関連する凝血障害の治療又は予防をする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を含む組成物を含む、その組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。

【0023】

一態様では、本開示は、対象における血液疾患の治療又は予防をする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を含む組成物を含む、その組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。

【0024】

本明細書に提供される方法の特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む組成物は、単回ボーラス注射で、毎月、２週間ごとに、毎週、週２回、毎日、１２時間毎に、８時間毎に、６時間毎に、４時間毎に、２時間毎に、又は毎時間投与される。

【0025】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む組成物は、静脈内又は皮下に投与される。

【0026】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質（例えば、野生型）は、組み換え体である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、ＨＥＫ２９３細胞によって組み換え的に生成される。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、ＣＨＯ細胞によって組み換え的に生成される。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、血漿由来である。

【0027】

特定の実施態様では、対象は、哺乳類である。特定の実施態様では、対象は、ヒトである。

【0028】

特定の実施形態では、組成物は、投与準備の整った安定な水溶液である。特定の実施形態では、組成物は、凍結乾燥される。特定の実施形態では、組成物は、投与前に、注射に好適な薬学的に許容し得るビヒクルで再構成される。

【0029】

一態様では、本開示は、本明細書に開示されるＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（例えば、配列番号４）をコードしている核酸分子を提供する。

【0030】

一態様では、本開示は、本明細書に開示されるＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（例えば、配列番号４）をコードしている核酸分子を含むベクターを提供する。特定の実施形態では、ベクターは、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントをコードしているポリヌクレオチド配列が、宿主細胞におけるＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの発現を媒介することができるプロモーターに作動可能に連結されている発現ベクターである。

【0031】

一態様では、本開示は、本明細書に開示されるＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（例えば、配列番号４）をコードしている核酸分子又は本明細書に開示されるベクターを含む宿主細胞を提供する。

【0032】

一態様では、本開示は、本明細書に開示されるＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（例えば、配列番号２）及び少なくとも１つのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質（例えば、配列番号１）を発現するように改変された細胞を含む宿主細胞株を提供する。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及びＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、宿主細胞株における異なる細胞で発現する。ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及びＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、宿主細胞株における同一細胞で発現する。

【0033】

特定の実施形態では、宿主細胞又は宿主細胞株は、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨＥＫ ２９３、ＢＨＫ、ＳＫ－Ｈｅｐ、又はＨｅｐＧ２の細胞又は細胞株である。特定の実施形態では、ＣＨＯ細胞は、ＣＨＯ ＤＢＸ－１１又はＣＨＯＺＮの細胞株である。特定の実施形態では、ＣＨＯＺＮ細胞は、ＣＨＯ ＤＢＸ－１１細胞株である。特定の実施形態では、ＣＨＯＺＮ細胞は、ＣＨＯＺＮグルタミン合成酵素（ＧＳ）^－／－細胞株である。

【図面の簡単な説明】

【0034】

優先権主張出願ファイルには、少なくとも１枚のカラーで作成された図面が含まれ、これには、米国特許商標庁の特許審査調査データセット（ＰＡＩＲ）を通じてアクセスすることができる。

【図1】野生型ＡＤＡＭＴＳ１３（配列番号１）とＡＤＡＭＴＳ１３ Ｑ^９７Ｒバリアント（配列番号２）との間のアライメントを示す。

【図2A-2C】野生型ＡＤＡＭＴＳ１３（配列番号１）と野生型ゴリラＡＤＡＭＴＳ１３（配列番号３）との間のアライメントを示す。

【図3】血漿由来ＡＤＡＭＴＳ１３（ｐｄＡＤＡＭＴＳ１３）、及び野生型とＱ^９７Ｒバリアント組み換えＡＤＡＭＴＳ１３（ｒＡＤＡＭＴＳ１３）との組み合わせの比活性（Ｕ／ｍｇ Ａｇ）の箱ひげ図である。ｐｄＡＤＡＭＴＳデータについては、異なるドナーから少なくとも８０サンプルを調べ、ｒＡＤＡＭＴＳ１３の組み合わせについては、３５の異なるバッチのｒＡＤＡＭＴＳ１３を調べ、バリアントの存在量は、５２～７２％である。

【図4】Ｍプロテアーゼドメイン上に露出しており、安定なヘリックス－ターン－ヘリックス構造における短い２残基のターンに位置するＱ^９７の位置を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３の３次元モデルを示す。

【図5】野生型ＡＤＡＭＴＳ１３とＱ^９７Ｒバリアントとの組み合わせを含む組成物のＵＶクロマトグラムである。インサートは、２つのバリアントを表すトリプシンペプチドが良好に分離されていることを示す。

【図6】組成物中のネイティブバリアント及びＱ^９７Ｒバリアントからのトリプシンペプチドのトータルイオンクロマトグラム及び抽出イオンクロマトグラムである。ネイティブバリアントのトリプシンペプチドは、Ｑ^９７Ｒバリアントの正しく切断されたトリプシンペプチドの前に溶出した。Ｑ^９７Ｒバリアントの切断に失敗したペプチドは、他の２つのペプチドの前に溶出した。ピークの面積は、それぞれペプチド及びバリアントの相対的な存在量を表す。

【図7】様々な比のＱ^９７Ｒ ｒＡＤＡＭＴＳ１３バリアント対野生型ｒＡＤＡＭＴＳ１３を含む、ｒＡＤＡＭＴＳ１３組成物の比活性（Ｕ／ｍｇ Ａｇ）の散布図である。合計３５種類のｒＡＤＡＭＴＳ１３組成物を試験した。

【図8】様々な比のＱ^９７Ｒ ｒＡＤＡＭＴＳ１３バリアント対野生型ｒＡＤＡＭＴＳ１３を含む、ｒＡＤＡＭＴＳ１３組成物のＶＷＦ切断の散布図である。合計３５種のｒＡＤＡＭＴＳ１３組成物を試験した。

【図9】Ｑ^９７Ｒ ｒＡＤＡＭＴＳ１３及びＱ^９７Ｒ ｒＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのフラミンゴ蛍光染色したＣＤＣゲルである。フラミンゴ蛍光染色は、総タンパク質量を表す。ゲル画像は、両方のＡＤＡＭＴＳ１３サンプルについて、以下のバンドパターンを示す：完全長分子を表す約１９０ｋＤａの１本の主なバンド、切断型を示す約１５０ｋＤａのより弱いバンド、及びタンパク質が部分的に分解されたことを示す１５０～７５ｋＤａの更に弱い２本のバンド。しかし、両サンプルのバンドパターンは存在及び強度が類似しており、このことは、総タンパク質組成が同等であることを示している。１：対照サンプル、２：Ｑ^９７ ｒＡＤＡＭＴＳ１３、及び３：Ｑ^９７Ｒ ｒＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。

【図10】Ｑ^９７Ｒ ｒＡＤＡＭＴＳ１３及びＱ^９７Ｒ ｒＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのウェスタンブロット解析である。ウェスタンブロット解析では、抗ＡＤＡＭＴＳ１３抗体を用いてＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の形態を可視化した。メンブレンの画像は、両サンプルについて同等のバンドパターンを示す：完全長タンパク質は約１９０ｋＤａにメインシグナルとして存在し、切断型は約１５０ｋＤａにより弱いバンドとして存在し、約１２５ｋＤａには非常に弱いバンドが見えた。１：対照サンプル、２：Ｑ^９７ ｒＡＤＡＭＴＳ１３、及び３：Ｑ^９７Ｒ ｒＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。

【図11】ＣＨＯＺＮ ＧＳ^－／－細胞株で生成された野生型ＡＤＡＭＴＳ１３及びＱ^９７Ｒ ｒＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのクロマトグラムのオーバーレイである。

【図12】ＣＨＯＺＮ ＧＳ^－／－細胞株で生成された野生型ＡＤＡＭＴＳ１３及びＱ^９７Ｒ ｒＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのクロマトグラムのオーバーレイを提示する、図１１の拡大バージョンである。

【図13】ＣＨＯ ＤＢＸ－１１細胞細胞株で生成された野生型ＡＤＡＭＴＳ１３及びＱ^９７Ｒ ｒＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのクロマトグラムのオーバーレイである。

【図14A-14B】ＡＤＡＭＴＳ１３（配列番号４）のアミノ酸配列を示す。

【発明を実施するための形態】

【0035】

Ｉ．序論
心臓発作及び脳卒中等の虚血性イベントは、世界中で死亡及び身体障害の主因である。フィブリンを分解し、血栓溶解を促進する組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）による血栓溶解療法を使用して虚血を治療することはできるが、ｔＰＡの使用は、虚血イベント後最初の数時間に限定されている。更に、ｔＰＡは、出血及び浮腫の形成の発生率及び重症度を高める恐れがある。このように、虚血の影響を最小限に抑えるための新規治療薬を特定することが明確に必要とされている。このような剤は、凝固に対する効果に加えて、血小板の粘着及び虚血イベント後の炎症過程も標的とすることができる。

【0036】

フォンビルブランド因子（ＶＷＦ）は、血漿中に存在する大きな多量体糖タンパク質であり、血液凝固において主な役割を果たす。ＶＷＦは、血小板α顆粒及び傷害又は炎症中にそれが放出される内皮細胞のバイベル－パラーデ小体に超大型（ＵＬ－ＶＷＦ、＞２０００万Ｄａ）で貯蔵される。血小板粘着のために直ちには消費されない場合、ＵＬ－ＶＷＦは、ＡＤＡＭＴＳ １３によって、血漿中を循環する粘着性の低いより小さな多量体に切断される。例えば血栓溶解後に生じる虚血はバイベル－パラーデ小体分泌の強力な誘導因子であるため、梗塞領域の血栓形成性が高くなる。

【0037】

基本のＶＷＦ単量体は、特定の機能を有する特定のドメインを多数含む２０５０アミノ酸のタンパク質である：（１）第ＶＩＩＩ因子に結合するＤ７Ｄ３ドメイン、（２）血小板ＧＰｌｂ受容体、ヘパリン、及び場合によってはコラーゲンに結合するＡｌドメイン、（３）コラーゲンに結合するＡ３ドメイン、（４）Ｒ－Ｇ－Ｄモチーフが、活性化されたときに血小板インテグリンαｌｌｂβ３に結合するＣｌドメイン、並びに（５）ＶＷＦが血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、トランスフォーミング成長因子－β（ＴＧＦβ）、及びβ－ヒト絨毛性ゴナドトロピン（βＨＣＧ）と共有している、Ｃ末端に位置する「システインノット」ドメイン。ＶＷＦの多量体は極めて大きく、２０，０００ｋＤａを超える分子量を有する８０を超える単量体からなることがある。これら大きなＶＷＦ多量体は、ほとんどが生物学的に機能的であり、血管傷害部位への血小板の粘着を媒介することができると共に、凝固促進タンパク質である第ＶＩＩＩ因子に結合し安定化させることができる。ＶＷＦの欠損又はＶＷＦの変化は、様々な出血障害の原因となることが知られている。

【0038】

ＶＷＦの生物学的分解は、主に肝臓によって生成される１９０ｋＤａのグリコシル化タンパク質であるＡＤＡＭＴＳ１３（Ａ Ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ－ｌｉｋｅ Ａｎｄ Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅａｓｅ ｗｉｔｈ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｔｙｐｅ Ｉ ｍｏｔｉｆ Ｎｏ．１３）と呼ばれるタンパク質によって大部分が媒介される。ＡＤＡＭＴＳ１３は、１６０５位のチロシンと１６０６位のメチオニンとの間でＶＷＦを切断して、ＶＷＦの多量体をより小さなユニットに分解する血漿メタロプロテアーゼであり、当該ユニットは他のペプチダーゼによって更に分解される。また、ＶＷＦは、血液の供給が不十分であるせいで組織が壊死するプロセスである梗塞において役割を果たすことも示されている。例えば、ＶＷＦレベルが抑制されると梗塞体積は減少するが、ＶＷＦレベルが上昇すると梗塞体積は大きくなる。

【0039】

低レベルのＡＤＡＭＴＳ１３は、遺伝性血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）（先天性ＴＴＰ、遺伝ＴＴＰ、家族性ＴＴＰ、及びアップショー－シュルマン症候群とも呼ばれる）、後天性ＴＴＰ（免疫介在性ＴＴＰとも呼ばれる）、脳梗塞、心筋梗塞、虚血／再灌流傷害、深部静脈血栓症、及び敗血症関連播種性血管内凝固（ＤＩＣ）等のＤＩＣ等の凝固異障害と関連している。ＡＤＡＭＴＳ１３の欠損は、遺伝性ＴＴＰ、後天性ＴＴＰ、脳梗塞、心筋梗塞、虚血／再灌流傷害、深部静脈血栓症、及び／又は敗血症関連播種性血管内凝固に関連するもの等の出血エピソードに加えて、鎌状赤血球症に罹患している対象における血管閉塞クリーゼ、並びに急性肺傷害（ＡＬＩ）及び／又は急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）に罹患しているか又は罹患するリスクのある対象における肺傷害にも関連している。また、ＡＤＡＭＴＳ１３の補給は、冠動脈閉塞（心筋梗塞）後の回復、及び脳梗塞を経験したことのある対象における血管の再疎通を通した感覚運動機能の回復を改善する可能性がある。

【0040】

本発明は、ＡＤＡＭＴＳ１３ Ｑ^９７Ｒ（配列番号２）等のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントが、ＡＤＡＭＴＳ１３（例えば、配列番号１）と同じ疾患及び障害の治療に有用であるという知見に一部基づくものである。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）は、本明細書に記載の方法において他のＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質（例えば、野生型）と組み合わせて使用することができる。
配列番号１：

【0041】

【化1】

【0042】

配列番号１は、シグナルペプチド（太字かつ下線）及びプロペプチド（太字）を含む。Ｒ９７タンパク質バリアントは、９７位に「Ｑ」から「Ｒ」へのアミノ酸交換を有する（太字かつイタリック体）。

【0043】

ＩＩ．定義
本明細書で使用するとき、「ＡＤＡＭＴＳ１３」又は「Ａ１３」は、残基Ｔｙｒ１６０５とＭｅｔ１６０６との間でフォンビルブランド因子（ｖＷＦ）を切断するＡＤＡＭＴＳ（ａ ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｎｄ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｗｉｔｈ ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ ｔｙｐｅ Ｉ ｍｏｔｉｆｓ）ファミリーのメタロプロテアーゼを指す。本発明の文脈において、「ＡＤＡＭＴＳ１３」は、任意のＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質、例えば、霊長類、ヒト（ＮＰ６２０５９４）、サル、ウサギ、ブタ、ウシ（ＸＰ６１０７８４）、げっ歯類、マウス（ＮＰ００１００１３２２）、ラット（ＸＰ３４２３９６）、ハムスター、スナネズミ、イヌ、ネコ、カエル（ＮＰ００１０８３３１）、トリ（ＸＰ４１５４３５）等の哺乳類由来のＡＤＡＭＴＳ１３及びその断片を包含する。本明細書で使用するとき、「ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質」は、組み換え的に生成された血漿由来のＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を指す。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、全ての目的のために参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１２／０２２９４５５号に記載されている野生型ヒトＡＤＡＭＴＳ１３（ｈＡＤＡＭＴＳ１３）又はその断片である。特定の実施形態では、ｈＡＤＡＭＴＳ１３のアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿６２０５９４のものである。特定の実施形態では、ｈＡＤＡＭＴＳ１３のアミノ酸配列は、配列番号１である。

【0044】

「ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント」という用語は、野生型分子（例えば、配列番号１）と構造が実質的に類似しており、同じ生物学的活性を有するが、特定の場合には程度が異なるポリペプチドを指す。（ｉ）（上記のような断片を含む）ポリペプチドの１つ以上の末端及び／若しくは野生型ポリペプチド配列の１つ以上の内部領域における１つ以上のアミノ酸残基の欠失、（ｉｉ）ポリペプチドの１つ以上の末端（典型的には、「付加」バリアント）及び／若しくは野生型ポリペプチド配列の１つ以上の内部領域（典型的には、「挿入」バリアント）における１つ以上のアミノ酸の挿入若しくは付加、又は（ｉｉｉ）野生型ポリペプチド配列における１つ以上のアミノ酸による他のアミノ酸の置換を含む１つ以上の変異に基づいて、バリアントは、そのバリアントが由来する野生型ポリペプチドと比較してアミノ酸配列の組成が異なる。置換は、置換されるアミノ酸とそれに置き換わるアミノ酸との物理化学的又は機能的な関連性に基づいて、保存的又は非保存的である。バリアントは、ペプチド配列における１つ以上のアミノ酸の、類似若しくは相同なアミノ酸（複数可）又は類似していないアミノ酸（複数可）による置換を含む。アミノ酸の類似性又は相同性をランク付けすることができる尺度が数多く存在する。（Ｇｕｎｎａｒ ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｐ．１２３－３９（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．１９８７、全ての目的のために参照により本明細書に組み込まれる）。

【0045】

ヒトＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質としては、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ ６２０５９４のアミノ酸配列を含むポリペプチド、又はそのプロセシングされたポリペプチド、例えば、シグナルペプチド（アミノ酸１～２９）及び／又はプロペプチド（アミノ酸３０～７４）が除去されたポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。ヒトＡＤＡＭＴＳ１３の多くの天然バリアントは当技術分野において公知であり、本発明の組成物に包含され、そのうちの幾つかは、Ｒ^７Ｗ、Ｖ^８８Ｍ、Ｈ^９６Ｄ、Ｒ^１０２Ｃ、Ｒ^１９３Ｗ、Ｔ^１９６Ｉ、Ｈ^２３４Ｑ、Ａ^２５０Ｖ、Ｒ^２６８Ｐ、Ｗ^３９０Ｃ、Ｒ^３９８Ｈ、Ｑ^４４８Ｅ、Ｑ^４５６Ｈ、Ｐ^４５７Ｌ、Ｐ^４７５Ｓ、Ｃ^５０８Ｙ、Ｒ^５２８Ｇ、Ｐ^６１８Ａ、Ｒ^６２５Ｈ、Ｉ^６７３Ｆ、Ｒ^６９２Ｃ、Ａ^７３２Ｖ、Ｅ^７４０Ｋ、Ａ^９００Ｖ、Ｓ^９０３Ｌ、Ｃ^９０８Ｙ、Ｃ^９５１Ｇ、Ｇ^９８２Ｒ、Ｃ^１０２４Ｇ、Ａ^１０３３Ｔ、Ｒ^１０９５Ｗ、Ｒ^１０９５Ｗ、Ｒ^１１２３Ｃ、Ｃ^１２１３Ｙ、Ｔ^１２２６１、Ｇ^１２３９Ｖ、及びＲ^１３３６Ｗから選択される変異を含む。好ましくは、ＡＤＡＭＴＳ１３の酵素活性に必須のアミノ酸は、変異させない。これらには、例えば、残基８３、１７３、２２４、２２８、２３４、２８１、及び２８４等の金属結合に必須であることが知られているか推定されている残基、並びに残基２２５等の酵素の活性部位にみられる残基が含まれる。同様に、本発明の文脈において、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、別のアイソフォーム、例えば、完全長ヒトタンパク質のアミノ酸２７５～３０５及び／又は１１３５～１１９０を欠くアイソフォームを含む。

【0046】

「保存的に改変されたバリアント」は、アミノ酸配列及び核酸配列の両方に適用される。特定の核酸配列に関して、保存的に改変された核酸とは、同一若しくは本質的に同一のアミノ酸配列をコードしている核酸、又は核酸がアミノ酸配列をコードしていない場合には、本質的に同一の配列を指す。遺伝コードの縮重により、多数の機能的に同一の核酸が任意の所与のタンパク質をコードしている。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ、及びＧＣＵは、全てアミノ酸のアラニンをコードしている。従って、コドンによってアラニンが指定されている全ての位置で、コードされているポリペプチドを変更することなく、コドンを記述された対応するコドンのいずれかに変更することができる。このような核酸バリエーションは、保存的に改変されたバリアントの１種である「サイレントバリエーション」である。ポリペプチドをコードしている本明細書における全ての核酸配列は、その核酸の全ての可能なサイレントバリエーションについても記載する。当業者であれば、核酸における各コドン（通常メチオニンに対する唯一のコドンであるＡＵＧ及び通常トリプトファンに対する唯一のコドンであるＴＧＧを除く）を、機能的に同一の分子を得るために改変できることを認識するであろう。従って、ポリペプチドをコードしている核酸の各サイレントバリエーションは、記載された各核酸に潜在する。

【0047】

本明細書で使用するとき、「等価な位置」（例えば、「等価なアミノ酸位置」又は「等価な残基位置」）は、アラインメントアルゴリズム（例えば、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム、Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ）を使用して、参照アミノ酸配列（例えば、配列番号１）の対応位置にアラインするアミノ酸配列の位置（例えば、アミノ酸位置又は残基位置）であると本明細書では定義される。アミノ酸配列の等価なアミノ酸位置は、参照アミノ酸配列の対応する位置と同じ数の位置番号を有する必要はない。一例として、図２は、ゴリラ野生型ＡＤＡＭＴＳ１３（配列番号３）とアラインメントしたヒト野生型ＡＤＡＭＴＳ１３（配列番号１）の配列を示す。この例では、配列番号１のアミノ酸番号９７は配列番号３のアミノ酸番号１０１とアラインするので、配列番号１のアミノ酸位置番号９７は、配列番号３のアミノ酸位置番号１０１と等価なアミノ酸位置である（すなわち、「等価である」）とみなされる。すなわち、配列番号１のアミノ酸位置９７は、配列番号３のアミノ酸位置１０１に対応する。

【0048】

本明細書で使用するとき、２つ以上のポリヌクレオチド又はアミノ酸の配列について記載する文脈において、「同一である」又は「同一性」パーセントという用語は、以下の配列比較アルゴリズムのうちの１つを使用して又は手動でアライメントし、目視検査することによって測定したときに比較ウィンドウ又は指定の領域にわたって一致が最大になるように比較し、アライメントした場合に、同じであるか又は指定の割合の同じアミノ酸残基若しくはヌクレオチドを有する（例えば、参照配列、例えば配列番号１と少なくとも８０％同一である、好ましくは８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である）２つ以上の配列又は部分配列を指す。このような配列は、「実質的に同一である」と言われる。ポリヌクレオチド配列に関しては、この定義は、試験配列の相補体も指す。好ましくは、同一性は、少なくとも約５０アミノ酸又はヌクレオチド長の領域にわたって存在するか、又はより好ましくは７５～１００アミノ酸又はヌクレオチド長の領域にわたって存在する。

【0049】

本明細書で使用するとき、組成物における「ＡＤＡＭＴＳ１３の総量」又は「総ＡＤＡＭＴＳ１３」という表現は、組成物における全てのＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質（例えば、野生型の配列番号１）の総和を含む。例えば、組成物がＱ^９７ ＡＤＡＭＴＳ１３及びＱ^９７Ｒ ＡＤＡＭＴＳ１３を含む場合、「ＡＤＡＭＴＳ１３の総量」又は「総ＡＤＡＭＴＳ１３」は、組成物におけるＱ^９７ ＡＤＡＭＴＳ１３及びＱ^９７Ｒ ＡＤＡＭＴＳ１３の総和となる。同様に、組成物がＱ^９７Ｒ ＡＤＡＭＴＳ１３のみを含む場合、ＡＤＡＭＴＳ１３の総量又は総ＡＤＡＭＴＳ１３は、組成物におけるＱ^９７Ｒ ＡＤＡＭＴＳ１３の総和となる。

【0050】

アミノ酸配列に関しては、当業者であれば、コードされている配列における単一のアミノ酸又はわずかな割合のアミノ酸を変更する、付加する、又は欠失させる核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質の配列に対する個々の置換、挿入、欠失、付加、又は切断が、その変更の結果、アミノ酸が化学的に類似のアミノ酸で置換される「保存的に改変されたバリアント」であることを認識するであろう。機能的に類似するアミノ酸を提供する保存的な置換の表は、当技術分野において周知である。このような保存的に改変されたバリアントは、本開示の多型バリアント、種間ホモログ、及びアレルに追加され、そして、それらを除外するものではない。

【0051】

以下の８つの群は、それぞれ、互いに保存的置換となるアミノ酸を含む：
１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；
２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；
３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；
４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；
５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；
６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；
７）セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）；及び
８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９８４）を参照）。

【0052】

本明細書で使用するとき、ポリペプチドの「断片」とは、完全長のポリペプチド又はタンパク質の発現産物よりも小さなポリペプチドの任意の部分を指す。断片は、典型的には、完全長ポリペプチドのアミノ末端及び／又はカルボキシ末端から１つ以上のアミノ酸残基が除去されている、完全長ポリペプチドの欠失アナログである。従って、「断片」は、後述する欠失アナログのサブセットである。

【0053】

「組み換え」又は「組み換え発現系」という用語は、例えば細胞に関連して使用する場合、その細胞が異種の核酸若しくはタンパク質の導入又はネイティブの核酸若しくはタンパク質の改変によって改変されていること、あるいはその細胞がそのように改変された細胞に由来することを示す。従って、例えば、組み換え細胞は、ネイティブ（非組み換え）型の細胞にはみられない遺伝子を発現するか、又は組み換えされていなければ異常に発現するか、低発現するか、若しくは全く発現しないネイティブな遺伝子を発現する。また、この用語は、組み換え遺伝エレメント、又は遺伝子発現において調節的な役割を有するエレメント、例えば、プロモーター又はエンハンサーが安定的に組み込まれている宿主細胞も意味する。本明細書で定義される組み換え発現系は、発現する内因性ＤＮＡセグメント又は遺伝子に連結された調節エレメントが誘導された際に、細胞に対して内因性のポリペプチド又はタンパク質を発現する。細胞は、原核生物であっても真核生物であってもよい。

【0054】

ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質及びＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、例えば、翻訳後修飾（例えば、ヒト残基１４２、１４６、５５２、５７９、６１４、６６７、７０７、８２８、１２３５、１３５４、又は任意の他の天然若しくは操作された改変部位から選択される１つ以上のアミノ酸におけるグリコシル化）、又はグリコシル化、水溶性ポリマーによる修飾（例えば、ＰＥＧ化、シアリル化、ＨＥＳ化等）、タグ付けを含むがこれらに限定されないエクスビボにおける化学的若しくは酵素的な修飾等によって更に改変されてもよい。例えば、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質又はＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、精製、検出、又はその両方を容易にするタグを含んでいてもよい。本明細書に記載のＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、治療部分又はインビトロ若しくはインビボにおけるイメージングに好適な部分で更に改変されてもよい。

【0055】

本明細書で使用するとき、「グリコシル化された」又は「ＡＤＡＭＴＳ１３のグリコシル化型」という用語は、炭水化物又はグリカン残基の付加によって翻訳後修飾されたＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を指す。１つを超えるグリコシル化部位を有するＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、各グリコシル化部位に同じグリカン残基が結合していてもよく、異なるグリコシル化部位に異なるグリカン残基が結合していてもよい。このように、グリカンの結合パターンが異なると、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質のグリコフォームも異なるものになる。グリコシル化されたＡＤＡＭＴＳ１３でみられる主な糖は、グルコース（Ｇｌｕ）、ガラクトース（Ｇａｌ）、マンノース（Ｍａｎ）、フコース（Ｆｕｃ）、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｕＮＡｃ）、及びシアル酸（例えば、Ｎ－アセチルノイラミン酸（ＮｅｕＡｃ又はＮＡＮＡ））である。ヘキソース（ヘキソース）及びＨｅｘＮＡｃは、それぞれ、Ｍａｎ、Ｇｌｃ、及びＧａｌの残基、並びにＧｌｃＮＡｃ及びＧａｌＮＡｃの残基等の単糖のクラスを表す総称である。

【0056】

「グリコシル化」という用語は、タンパク質のアスパラギン（Ａｓｎ）残基（すなわち、Ｎ－結合）、又はセリン（Ｓｅｒ）若しくはスレオニン（Ｔｈｒ）残基（すなわち、Ｏ－結合）、又はトリプトファン（Ｔｒｐ）残基（すなわち、Ｃ－結合及び／又はＣ－マンノシル化）の側鎖のいずれかにグリカン残基が結合しているＡＤＡＭＴＳ１３糖タンパク質の形成を含む。

【0057】

「Ｎ－グリコシル化部位」という用語は、窒素原子、例えば、アスパラギン残基のアミド窒素を有するアミノ酸残基を含む任意のアミノ酸配列を指す。糖タンパク質に結合するＮグリカンは、共通のコア五糖：「トリマンノース」（Ｍａｎ_３）成分及び「キトビオース」（ＧｌｃＮＡｃ_２）成分を含有するＭａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２に付加される周辺の糖（例えば、ＧｌｃＮＡｃ、Ｇａｌ、Ｆｕｃ、及びＮｅｕＡｃ）を含む分枝（アンテナ）の数が異なる。Ｎ－グリカンは、一般に、その分岐構成要素に応じて分類される（例えば、高マンノース、ハイブリッド、又は複合）。「高マンノース」型Ｎ－グリカンは、非置換の末端マンノース糖を含有する。これらグリカンは、典型的には、キトビオースコアに結合している５～９個のマンノース残基を含有する。「ハイブリッド」型Ｎ－グリカンは、非置換の末端マンノース残基及びＧｌｃＮＡｃ結合を有する置換されたマンノース残基の両方を含有し得る。「複合」型Ｎ－グリカンは、典型的には、トリマンノースコアのα１，３マンノースアームに結合している少なくとも１つのＧｌｃＮＡｃ及びα１，６マンノースアームに結合している少なくとも１つのＧｌｃＮＡｃを有する。複合Ｎ－グリカンは、任意でＮｅｕＡｃ残基で修飾されるＧａｌ又はＧａｌＮＡｃの糖残基を有する場合もある。複合Ｎ－グリカンは、「二分岐」ＧｌｃＮＡｃ及びコアＦｕｃ残基を含む鎖内置換を有する場合もある。また、複合Ｎ－グリカンは、トリマンノースコアに複数のアンテナを有する場合もあり、これは、多くの場合「マルチアンテナグリカン」と呼ばれる。

【0058】

「Ｏ－結合グリコシル化」とは、ヒドロキシルアミノ酸、例えば、セリン又はスレオニンに炭水化物残基（例えば、ＧａｌＮＡｃ、Ｇａｌ）が付加されるグリコシル化の形態を指す。Ｏ－結合グリカンは、一般に、二糖であるＦｕｃ－Ｇｌｃ又はＨｅｘＮＡｃ－Ｈｅｘ－ＮｅｕＡｃ_０－２を含有するムチン型構造を有するＯ－フコシル化を含む。「Ｏ－グリコシル化部位」という用語は、ヒドロキシル基を有するアミノ酸残基（例えば、セリン、スレオニン、又はチロシンの側鎖）を有するアミノ酸を含む任意のアミノ酸配列を指す。

【0059】

「Ｃ－結合グリコシル化」とは、炭水化物残基（例えば、Ｍａｎ）がトリプトファン側鎖における炭素に付加されるグリコシル化の形態を指す。「Ｃ－グリコシル化部位」又は「Ｃ－マンノシル化部位」という用語は、炭素原子、例えば、トリプトファン側鎖における炭素原子を有するアミノ酸残基を含む任意のアミノ酸配列を指す。

【0060】

本明細書で使用するとき、「糖類似性指数」又は「グリカン指数」又は「Ｎ－グリカン指数」という用語は、所与の標的プロファイルと比較した参照グリコシル化プロファイルの一致度を指す。

【0061】

本明細書で使用するとき、「凝血障害」とは、機能不全性好中球動員に加えて、機能不全性血小板動員を含む障害として定義される。「凝血障害」の非限定的な例としては、遺伝性血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、後天性ＴＴＰ、脳梗塞、心筋梗塞、虚血／再灌流障害、深部静脈血栓症、及び敗血症関連播種性血管内凝固（ＤＩＣ）等のＤＩＣが挙げられる。

【0062】

本明細書で使用するとき、「ＡＤＡＭＴＳ１３活性」は、完全長ＶＷＦ、ＶＷＦ断片、又はＶＷＦ基質（例えば、ＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３基質（Ｋｏｋａｍｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ．２００５ Ａｐｒｉｌ；１２９（１）：９３－１００））の切断を含む。「ＡＤＡＭＴＳ１３活性」は、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質（例えば、野生型）、又はそれらの組み合わせの活性を指す場合もある。特定の実施形態では、組成物がＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３（例えば、野生型）の混合物である場合、「ＡＤＡＭＴＳ１３活性」は、組成物における総ＡＤＡＭＴＳ１３の活性を指す。

【0063】

本明細書で使用するとき、「１単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性」は、使用するアッセイにかかわらず、プールした正常ヒト血漿１ｍＬにおける活性の量と定義される。例えば、１単位のＡＤＡＭＴＳ１３ ＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性は、プールした正常ヒト血漿１ｍＬによって切断したときと同量のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３基質を切断するのに必要な活性の量である（全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれるＫｏｋａｍｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ．２００５ Ａｐｒｉｌ；１２９（１）：９３－１００）。追加の活性アッセイを使用して、１単位のＡＤＡＭＴＳ１３の活性を求めることもできる。例えば、直接ＡＤＡＭＴＳ１３活性アッセイを行って、ＳＤＳアガロースゲル電気泳動を用いて完全長ＶＷＦ分子又はＶＷＦ断片のいずれかの切断を検出することができ、コラーゲン結合アッセイを用いてＡＤＡＭＴＳ１３活性を間接的に検出することができる。「１単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性」という用語は、「活性単位」、「Ｕ」、「国際単位」、「ＩＵ」、又は「ＵＦＶ７３」と互換的に使用することができる。特定の実施形態では、国際単位は、ＶＷＦ ＦＲＥＴＳアッセイを使用して血漿に対して較正されたＷＨＯ標準の使用に基づく（すなわち、「ＵＦＶ７３」又は「ＩＵ」）。

【0064】

本明細書で使用するとき、「血栓」という用語は、血餅、特に血小板を含む血餅、微小血栓、及び／又は塞栓を指す。当該血栓は、動脈血管又は静脈血管に付着している場合も付着していない場合もあり、動脈血管又は静脈血管における血流を部分的に又は完全に閉塞又は遮断させ得る。

【0065】

本明細書で使用するとき、「鎌状赤血球症（ＳＣＤ）」という用語は、複数の形態で存在する遺伝性赤血球障害の群を表す。ＳＣＤの幾つかの形態は、ヘモグロビンＳＳ、ヘモグロビンＳＣ、ヘモグロビンＳβ^０サラセミア、ヘモグロビンＳβ^＋サラセミア、ヘモグロビンＳＤ、及びヘモグロビンＳＥである。ヘモグロビンＳＣ症及びヘモグロビンＳβサラセミアがＳＣＤの２つの一般的な形態であるが、本開示は、ＳＣＤの全ての形態に関するものであり、それを含む。

【0066】

本明細書で使用するとき、「血管閉塞クリーゼ（ＶＯＣ）」という用語は、突然の激痛の発作であり、前触れなく発生することがある。ＶＯＣは、疼痛発作又は鎌状赤血球クリーゼとしても知られており、青年及び成人におけるＳＣＤの一般的な有痛性合併症である。ＶＯＣは、鎌状赤血球、内皮細胞、及び血漿成分間の相互作用によって発生し、持続する。血管閉塞は、疼痛症候群、脳卒中、下腿潰瘍、自然流産、及び／又は腎不全を含む、ＳＣＤの広範囲に渡る臨床的合併症の原因となる。

【0067】

「急性肺損傷」（ＡＬＩ）及び「急性呼吸促迫症候群」（ＡＲＤＳ）という用語は、かなりの罹患率及び死亡率を伴う急性呼吸不全の臨床症候群を説明する（Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｅｒｏｓｏｌ Ｍｅｄ．Ｐｕｌｍｏｎ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．２３：２４３－５２，２０１０）。ＡＬＩ及びより重症であるＡＲＤＳはいずれも、両側性炎症性肺浸潤及び酸素化障害又は低酸素血症を含む無数の局所的又は全身的な侵襲が続発する炎症性肺水腫の突然の発症を特徴とする様々な肺疾患を表す（Ｗａｌｋｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ４：１５９－６９，２０１２）。ＡＬＩ及びＡＲＤＳは肺傷害又は疾患の２つの臨床症候群であるが、本開示は、ＡＬＩ及びＡＲＤＳだけでなく、全ての形態の肺傷害及び肺疾患、特に酸素化障害に関連する肺疾患の治療、予防、又は寛解におけるＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の使用に関し、それを含む。

【0068】

「再疎通」という用語は、内腔の回復による又は１つ以上の新たなチャネルを形成することによる、閉塞後の血管の内腔の回復を指す。「再疎通させる」という用語は、内腔の回復によって又は１つ以上の新たなチャネルを形成することによって、閉塞後の血管の内腔を回復させることを意味する。本明細書に記載される特定の実施形態では、再疎通は、梗塞（例えば、脳梗塞）に関連する閉塞した血管に関する。再疎通は、当技術分野で公知の任意の好適な方法を用いて判定することができる。再疎通が閉塞した脳血管の再疎通である幾つかの実施形態では、再疎通は、局所脳血流（ｒＣＢＦ）の回復によって判定される。

【0069】

「局所脳血流」及び「ｒＣＢＦ」とは、所与の時間内に脳の特定部位に流れる血液の量を指す。局所脳血流は、例えば、本明細書に記載のレーザードップラー血流モニタリング技術を使用することを含む当技術分野で公知の任意の好適な技術を使用して測定することができる。

【0070】

「出血エピソード」という用語は、ＡＤＡＭＴＳ１３欠損に関連する内出血を指す。小血管及び他の箇所で生じるもの等の凝固活性の亢進は、利用可能な血小板及び凝固因子を過度に消費するので、血小板及び凝固因子の利用可能な供給源が枯渇することによって重篤な内出血及び外出血の確率が高くなる。この出血は、毛細血管及び他の微小血管でみられ、臓器の損傷及び／又は虚血を引き起こす恐れがある。

【0071】

「重症度を低下させる」という用語は、症状に言及する場合、症状の発現が遅れること、重症度が低下すること、頻度が低下すること、対象に与える損傷が少なくなることを意味する。一般に、症状の重症度は、対照、例えば、活性のある予防若しくは治療組成物が投与されていない対象と比較するか、又は治療薬の投与前の症状の重症度と比較する。例えば、組成物は、症状の対照レベルと比較して、症状が約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又は約１００％低減された（すなわち、本質的に消失した）場合、本明細書に列挙する適応症のいずれかの症状の重症度を低下させるということができる。特定の態様では、組成物は、症状の対照レベルと比較して、症状が約１０％～約１００％、約２０％～約９０％、約３０％～約８０％、約４０％～約７０％、又は約５０％～約６０％低減された場合、症状の重症度を低下させるということができる。特定の態様では、組成物は、症状の対照レベルと比較して、症状が約１０％～約３０％、約２０％～約４０％、約３０％～約５０％、約４０％～約６０％、約５０％～約７０％、約６０％～約８０％、約７０％～約９０％、又は約８０％～約１００％低減された場合、症状の重症度を低下させるということができる。

【0072】

本発明の目的のための「患者」又は「対象」は、ヒト及び他の動物、特に哺乳類の両方を含む。従って、組成物／製剤及び方法は、ヒトの治療及び獣医学的用途の両方に適用可能である。特定の実施形態では、患者は哺乳類であり、一実施形態では、ヒトである。ＡＤＡＭＴＳ１３又はＶＷＦの機能不全に関連する病態に対する他の既知の治療及び療法を、本発明によって提供される組成物及び方法と組み合わせて使用することができる。

【0073】

本明細書で使用するとき、「ビタミンＢ３」、「ニコチンアミド」、「ナイアシンアミド」、「ナイアシン」、及び「ニコチン酸」という用語は、ビタミンのＢ３ファミリーの任意のメンバーを指すために互換的に使用され得る。

【0074】

本明細書で使用するとき、「治療的に有効な量又は用量」又は「十分な量又は用量」は、それを投与する目的である効果をもたらす用量を指す。正確な用量は、治療の目的に依存し、当業者であれば公知の技術を用いて確認できるであろう（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ（ｖｏｌｓ．１－３，１９９２）；Ｌｌｏｙｄ，Ｔｈｅ Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ（１９９９）；Ｐｉｃｋａｒ，Ｄｏｓａｇｅ Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（１９９９）；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００３，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓを参照）。

【0075】

本明細書で使用するとき、塩の「生理学的濃度」は、薬学的に許容し得る塩の約１００ｍＭ～約２００ｍＭの塩濃度を指す。薬学的に許容し得る塩の非限定的な例としては、塩化ナトリウム及びカリウム、酢酸ナトリウム及びカリウム、クエン酸ナトリウム及びカリウム、リン酸ナトリウム及びカリウムが挙げられるが、これらに限定されない。

【0076】

本明細書で使用するとき、塩の「準生理学的濃度」は、薬学的に許容し得る塩の約１００ｍＭ未満の塩濃度を指す。特定の実施形態では、塩の準生理学的濃度は、薬学的塩の約８０ｍＭ未満である。特定の実施形態では、塩の準生理学的濃度は、薬学的塩の約６０ｍＭ未満である。

【0077】

本明細書で使用するとき、「既知組成培地」という用語は、全ての成分の同一性及び濃度が既知である合成成長培地を指す。既知組成培地は、細菌、酵母、動物、又は植物の抽出物を含有しないが、個々の植物又は動物由来の成分（例えば、タンパク質、ポリペプチド等）は含んでいてもいなくてもよい。市販の既知組成培地の非限定的な例としては、各種ＥＸ－ＣＥＬＬ（登録商標）培地（ＳＡＦＣ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ）、各種ダルベッコ変法イーグル（ＤＭＥ）培地（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ；ＳＡＦＣ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ）、ハム栄養素ミックス（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ；ＳＡＦＣ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ）等が挙げられる。既知組成培養培地を調製する方法は、当技術分野において、例えば、米国特許第６，１７１，８２５号及び同第６，９３６，４４１号、国際公開第２００７／０７７２１７号、並びに米国特許出願公開第２００８／０００９０４０号及び同第２００７／０２１２７７０号において公知であり、それらの開示は、全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0078】

本明細書で使用するとき、「オリゴペプチド不含培養培地」という用語は、例えば、タンパク質加水分解物に由来するオリゴペプチド等のオリゴペプチドを含まないタンパク質不含培地を指す。一実施形態では、培地は、２０個以上のアミノ酸を有するオリゴペプチドを含まない。本発明の一実施形態では、培地は、１５個以上のアミノ酸を有するオリゴペプチドを含まない。本発明の別の実施形態では、培地は、１０個以上のアミノ酸を有するオリゴペプチドを含まない。一実施形態では、培地は、７個以上のアミノ酸を有するオリゴペプチドを含まない。別の実施形態では、培地は、５個以上のアミノ酸を有するオリゴペプチドを含まない。更に別の実施形態では、培地は、３個以上のアミノ酸を有するオリゴペプチドを含まない。本発明の更なる実施形態によれば、培地は、２個以上のアミノ酸を有するオリゴペプチドを含まない。オリゴペプチド不含培養培地を調製する方法は、当技術分野において、例えば、米国特許第６，１７１，８２５号及び同第６，９３６，４４１号、国際公開第２００７／０７７２１７号、並びに米国特許出願公開第２００８／０００９０４０号及び同第２００７／０２１２７７０号において公知であり、それらの開示は、全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0079】

本明細書で使用するとき、「無血清培養培地」という用語は、動物血清を補給しない培養培地を指す。無血清培地は既知組成培地であることが多いが、無血清培地に動物又は植物のタンパク質又はタンパク質画分を別個に補給してもよい。無血清培養培地を調製する方法は、当技術分野において、例えば、米国特許第６，１７１，８２５号及び同第６，９３６，４４１号、国際公開第２００７／０７７２１７号、並びに米国特許出願公開第２００８／０００９０４０号及び同第２００７／０２１２７７０号において公知であり、それらの開示は、全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書で使用するとき、「動物タンパク質不含培養培地」という用語は、動物の血清も、タンパク質も、タンパク質画分も補給しない培養培地を指す。動物タンパク質不含培養培地は既知組成培地であることが多いが、動物タンパク質不含培養培地は、植物又は酵母の加水分解物を含有していてもよい。動物タンパク質不含培養培地を調製する方法は、当技術分野において、例えば、米国特許第６，１７１，８２５号及び同第６，９３６，４４１号、国際公開第２００７／０７７２１７号、並びに米国特許出願公開第２００８／０００９０４０号及び同第２００７／０２１２７７０号において公知であり、それらの開示は、全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、任意の動物又は植物由来のタンパク質もタンパク質画分も含まない既知組成培地が使用される。

【0080】

「発現ベクター」とは、宿主細胞において特定の核酸の転写を可能にする一連の指定の核酸エレメントを有する、組み換え的又は合成的に生成された核酸コンストラクトである。発現ベクターは、プラスミド、ウイルス、又は核酸断片の一部であってよい。典型的には、発現ベクターは、プロモーターに作動可能に連結されている、転写される核酸を含む。

【0081】

核酸の一部に関連して使用するとき、「異種」という用語は、その核酸が、自然界では互いに対して同じ関係でみられることのない２つ以上の部分配列を含むことを示す。例えば、新たな機能的核酸、例えば、ある起源由来のプロモーター及び別の起源由来のコード領域を作製するために配置された無関係な遺伝子由来の２つ以上の配列を有する核酸は、典型的には、組み換え的に生成される。同様に、異種タンパク質とは、タンパク質が、自然界では互いに対して同じ関係でみられることのない２つ以上の部分配列を含むことを示す（例えば、融合タンパク質）。

【0082】

「プロモーター」とは、核酸の転写を指示する核酸制御配列のアレイと定義される。本明細書で使用するとき、プロモーターは、転写開始部位近傍の必要な核酸配列、例えば、ポリメラーゼＩＩ型プロモーターの場合にはＴＡＴＡエレメント等を含む。プロモーターは、任意で、遠位のエンハンサー又はリプレッサーエレメントも含み、それらは転写開始部位から数千塩基対も離れて位置する場合もある。「構成的」プロモーターとは、ほとんどの環境及び発生条件下で活性を有するプロモーターである。「誘導性」プロモーターとは、環境又は発生の調節下で活性を有するプロモーターである。「作動可能に連結された」という用語は、核酸発現制御配列（プロモーター、又は転写因子結合部位のアレイ等）と第２の核酸配列との間の機能的連結を指し、当該発現制御配列は、第２の配列に対応する核酸の転写を指示する。

【0083】

本明細書で使用するとき、「約」という用語は、指定の値からおよそプラスマイナス１０％の範囲を示す。例えば、「約２０％」という表現は、１８～２２％の範囲を包含する。本明細書で使用するとき、約とは正確な量も含む。従って、「約２０％」は、「約２０％」及び「２０％」も意味する。

【0084】

本開示の態様が、ある特徴を「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」又はその変形（例えば、ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）と記載されている場合、実施形態はまた、その特徴「からなる」又は「から本質的になる」ことも企図される。

【0085】

また、具体的には、本明細書に列挙される任意の数値はより低い値からより高い値までの全ての値を含むこと、すなわち、列記された最低値と最高値との間の数値の全ての可能な組み合わせが本願に明示的に記述されているとみなされることが理解される。例えば、濃度範囲が約１％～５０％と記述されている場合、本明細書では２％～４０％、１０％～３０％、１％～３％等の値が明示的に列記されていることを意図する。上記の数値は、あくまで具体的に意図されるものの一例である。

【0086】

ＩＩＩ．ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント組成物
一態様では、本発明は、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを提供する。ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、天然／野生型ＡＤＡＭＴＳ１３のアミノ酸配列（例えば、配列番号１）と比較して、１つ以上のアミノ酸の置換、欠失、挿入、及び／又はフレームシフトを含み得る。例えば、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、野生型ＡＤＡＭＴＳ１３と比較して（すなわち、に対して）、少なくとも１つの単一のアミノ酸置換を含み得る。アミノ酸置換（複数可）は、触媒ドメイン、ディスインテグリンドメイン、及び／又は第１のトロンボスポンジ１型ドメイン（Ｃ１及びＣ２）内にあってよい。

【0087】

例えば、アミノ酸置換は、配列番号１に示されるＩ^７９Ｍ、Ｖ^８８Ｍ、Ｈ^９６Ｄ、Ｑ^９７Ｒ、Ｒ^１０２Ｃ、Ｓ^１１９Ｆ、Ｉ^１７８Ｔ、Ｒ^１９３Ｗ、Ｔ^１９６Ｉ、Ｓ^２０３Ｐ、Ｌ^２３２Ｑ、Ｈ^２３４Ｑ、Ｄ^２３５Ｈ、Ａ^２５０Ｖ、Ｓ^２６３Ｃ、及び／若しくはＲ^２６８Ｐのうちの少なくとも１つであってもよく、又はＡＤＡＭＴＳ１３における等価なアミノ酸位置にあってもよい（言い換えれば、配列番号１は、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質における、変更される特定されたアミノ酸残基（例えば、Ｍ^７９、Ｍ^８８、Ｄ^９６、Ｒ^９７、Ｃ^１０２、Ｆ^１１９、Ｔ^１７８、Ｗ^１９３、Ｉ^１９６、Ｐ^２０３、Ｑ^２３２、Ｑ^２３４、Ｈ^２３５、Ｖ^２５０、Ｃ^２６３、及び／又はＰ^２６８）が位置する位置に関する状況を提供するための参照配列として使用される）。特定の実施形態では、単一のアミノ酸置換は、配列番号１に示されるＩ^７９Ｍ、Ｖ^８８Ｍ、Ｈ^９６Ｄ、Ｒ^１０２Ｃ、Ｓ^１１９Ｆ、Ｉ^１７８Ｔ、Ｒ^１９３Ｗ、Ｔ^１９６Ｉ、Ｓ^２０３Ｐ、Ｌ^２３２Ｑ、Ｈ^２３４Ｑ、Ｄ^２３５Ｈ、Ａ^２５０Ｖ、Ｓ^２６３Ｃ、及び／又はＲ^２６８Ｐでもなく、ＡＤＡＭＴＳ１３における等価なアミノ酸位置にもない。

【0088】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、配列番号１に示されるＱ^９７又はＡＤＡＭＴＳ１３における等価なアミノ酸位置における単一のアミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、ＱからＤ、Ｅ、Ｋ、Ｈ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、又はＲにアミノ酸が変化する。特定の実施形態では、ＱからＲにアミノ酸が変化する。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、ＡＤＡＭＴＳ１３ Ｑ^９７Ｒ（配列番号２、又はＲ^９７を依然として維持しながらその少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列）である。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、配列番号２に記載のアミノ酸配列、又はＲ^９７を依然として維持しながら配列番号２と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそのバリアントを含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントをコードしているヌクレオチド配列は、配列番号２のアミノ酸配列、又はＲ^９７を依然として維持しながら配列番号２と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそのバリアントをコードしているヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、配列番号２に記載のアミノ酸配列から本質的になる。

【0089】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、Ｒ^７Ｗ、Ｑ^４４Ｘ、Ｔ^１６７Ｍ、Ｙ^３０４Ｃ、Ｃ^３１１Ｙ、Ｔ^３３９Ｒ、Ｐ^３４１Ｌ、Ｃ^３４７Ｓ、Ｒ^３４９Ｃ、Ｐ^３５３Ｌ、Ｗ^３９０Ｘ、Ｗ^３９０Ｃ、Ｒ^３９８Ｈ、Ｑ^４４８Ｅ、Ｑ^４４９Ｘ、Ｑ^４５６Ｈ、Ｐ^４５７Ｌ、Ｐ^４７５Ｓ、Ｒ^５０７Ｑ、Ｃ^５０８Ｙ、Ｇ^５２５Ｄ、Ｒ^５２８Ｇ、Ａ^５９６Ｖ、Ａ^６０６Ｐ、Ｐ^６１８Ａ、Ｒ^６２５Ｈ、Ｐ^６７１Ｌ、Ｉ^６７３Ｆ、Ｒ^６９２Ｃ、Ｑ^７２３Ｋ、Ａ^７３２Ｖ、Ｅ^７４０Ｋ、Ｃ^７５８Ｒ、Ｖ^８３２Ｍ、Ａ^９００Ｖ、Ｓ^９０３Ｌ、Ｃ^９０８Ｓ、Ｃ^９０８Ｙ、Ｒ^９１０Ｘ、Ｑ^９２９Ｘ、Ｃ^９５１Ｇ、Ｇ^９８２Ｒ、Ａ^１０３３Ｔ、Ｗ^１０１６Ｘ、Ｃ^１０２４Ｇ、Ａ^１０３３Ｔ、Ｒ^１０３４Ｘ、Ｓ^１０３６Ｘ、Ｒ^１０６０Ｗ、Ｒ^１１２３Ｃ、Ｒ^１１４９Ｗ、Ｒ^１２０６Ｘ、Ｃ^１２１３Ｙ、Ｉ^１２１７Ｔ、Ｒ^１２１９Ｗ、Ｔ^１２２６Ｉ、Ｇ^１２３９Ｖ、Ｗ^１２４５Ｘ、Ｑ^１３０２Ｘ、Ｓ^１３１４Ｌ、及び／又はＲ^１３３６Ｗである。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、配列番号１に示されるＲ^７Ｗ、Ｑ^４４Ｘ、Ｔ^１６７Ｍ、Ｙ^３０４Ｃ、Ｃ^３１１Ｙ、Ｔ^３３９Ｒ、Ｐ^３４１Ｌ、Ｃ^３４７Ｓ、Ｒ^３４９Ｃ、Ｐ^３５３Ｌ、Ｗ^３９０Ｘ、Ｗ^３９０Ｃ、Ｒ^３９８Ｈ、Ｑ^４４８Ｅ、Ｑ^４４９Ｘ、Ｑ^４５６Ｈ、Ｐ^４５７Ｌ、Ｐ^４７５Ｓ、Ｒ^５０７Ｑ、Ｃ^５０８Ｙ、Ｇ^５２５Ｄ、Ｒ^５２８Ｇ、Ａ^５９６Ｖ、Ａ^６０６Ｐ、Ｐ^６１８Ａ、Ｒ^６２５Ｈ、Ｐ^６７１Ｌ、Ｉ^６７３Ｆ、Ｒ^６９２Ｃ、Ｑ^７２３Ｋ、Ａ^７３２Ｖ、Ｅ^７４０Ｋ、Ｃ^７５８Ｒ、Ｖ^８３２Ｍ、Ａ^９００Ｖ、Ｓ^９０３Ｌ、Ｃ^９０８Ｓ、Ｃ^９０８Ｙ、Ｒ^９１０Ｘ、Ｑ^９２９Ｘ、Ｃ^９５１Ｇ、Ｇ^９８２Ｒ、Ａ^１０３３Ｔ、Ｗ^１０１６Ｘ、Ｃ^１０２４Ｇ、Ａ^１０３３Ｔ、Ｒ^１０３４Ｘ、Ｓ^１０３６Ｘ、Ｒ^１０６０Ｗ、Ｒ^１１２３Ｃ、Ｒ^１１４９Ｗ、Ｒ^１２０６Ｘ、Ｃ^１２１３Ｙ、Ｉ^１２１７Ｔ、Ｒ^１２１９Ｗ、Ｔ^１２２６Ｉ、Ｇ^１２３９Ｖ、Ｗ^１２４５Ｘ、Ｑ^１３０２Ｘ、Ｓ^１３１４Ｌ、及び／又はＲ^１３３６Ｗでもなく、ＡＤＡＭＴＳ１３における等価なアミノ酸位置にもない。

【0090】

特定の実施形態では、本明細書に提供されるＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、著しいＡＤＡＭＴＳ１３活性を保持している。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、野生型ＡＤＡＭＴＳ１３と等しいＡＤＡＭＴＳ１３活性を提供した。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、そのままで野生型ＡＤＡＭＴＳ１３よりも高いＡＤＡＭＴＳ１３活性を提供した。

【0091】

特定の実施形態では、本発明は、それぞれが全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１１／０２２９４５５号及び／又は米国特許出願公開第２０１４／０２７１６１１号に記載の構成要素を含む組成物等の、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）の組成物を提供する。他の態様では、本発明は、血漿由来のＡＤＡＭＴＳ１３及び／又は野生型組み換えＡＤＡＭＴＳ１３（ｒＡＤＡＭＴＳ１３）タンパク質と組み合わせたＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）の組成物を提供する。一実施形態では、ｈＡＤＡＭＴＳ１３のアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿６２０５９４のものである。別の実施形態では、ｈＡＤＡＭＴＳ１３のアミノ酸配列は、ＮＰ＿６２０５９４のアミノ酸７５～１４２７、その天然の若しくは保存的バリアント、又はその生物学的に活性のある断片を含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、ＡＤＡＭＴＳ１３ Ｑ^９７Ｒ（配列番号２）、又はＲ^９７を依然として維持しながらその少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列である。

【0092】

特定の実施形態では、組成物は、液体の又は凍結乾燥された組成物である。他の実施形態では、凍結乾燥組成物は、それぞれが全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１１／０２２９４５５号及び／又は米国特許出願公開第２０１４／０２７１６１１号に記載の通り液体組成物から凍結乾燥される。

【0093】

特定の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１つのＡＤＡＭＴＳ１３バリアントとＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質（例えば、野生型）との組み合わせを含む。特定の実施形態では、組成物におけるＡＤＡＭＴＳ１３の総量（すなわち、全てのＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び野生型を含む）中に存在するＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの相対的存在量（例えば、割合）は、約５％～約９５％、約１０％～約９０％、約１５％～約８５％、約２０％～約８０％、約２５％～約７５％、約３０％～約７０％、約３５％～約６５％、約４０％～約６０％、約４５％～約５５％である。特定の実施形態では、組成物におけるＡＤＡＭＴＳ１３の総量中に存在するＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの割合は、約４０％～約９０％、約４０％～約８０％、約４５％～約７５％、約５０％～約８０％、約５０％～約７０％、又は約５５％～約６５％である。特定の実施形態では、組成物におけるＡＤＡＭＴＳ１３の総量中に存在するＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの割合は、約５０％～約７５％、約５２％～約７２％、約５５％～約７０％、約５９％～約７２％である。特定の実施形態では、組成物におけるＡＤＡＭＴＳ１３の総量中に存在するＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの割合は、約４５％～約８５％又は約４７％～約８４％である。特定の実施形態では、組成物におけるＡＤＡＭＴＳ１３の総量中に存在するＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの割合は、約４７％～約８４％である。特定の実施形態では、組成物におけるＡＤＡＭＴＳ１３の総量中に存在するＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの割合は、約４０％、約４１％、約４２％、約４３％、約４４％、約４５％、約４６％、約４７％、約４８％、約４９％、約５０％、約５１％、約５２％、約５３％、約５４％、約５５％、約５６％、約５７％、約５８％、約５９％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６１％。約６５％、約６６％、約６７％、約６８％、約６９％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％。約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％である。特定の実施形態では、組成物におけるＡＤＡＭＴＳ１３の総量中に存在するＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの割合は、約５２％、約６０％、約６１％、約６２％、約６３％、約６４％、約６５％、約６６％、又は約７２％である。

【0094】

特定の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１つのＡＤＡＭＴＳ１３バリアントと、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質との組み合わせを含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質に対する比は、約４：１～約１：４、約３：１～約１：３、約２：１～約１：２である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質に対する比は、約３：１～約１：３、約２：１～約１：２、又は約２：１～約１：３、又は約１：１～約１：３、又は約１：１．１～約１：２．９、又は約１：１．２～約１：２．８、又は約１：１．３～約１：２．７、又は約１：１．４～約１：２．６、又は約１：１．５～約１：２．５、又は約１：１．６～約１：２．４、又は約１：１．７～約１：２．３、又は１：１．８～約１：２．２、又は約１：１．９～約１：２．１である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質に対する比は、約１．１：１～約２．９：１、又は約１．２：１～約２．８：１、又は約１．３：１～約２．７：１、又は約１．４：１～約２．６：１、又は約１．５：１～約２．５：１、又は約１．６：１～約２．４：１、又は約１．７：１～約２．３：１、又は約１．８：１～約２．２：１、又は約１．９：１～約２．１：１である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３野生型に対する比は、約１：１～約１：３である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３野生型に対する比は、約３：１～約１：１である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３野生型に対する比は、約１：１．１～約１：２．５である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３野生型に対する比は、約４：１、約４：１．５、約４：２、約４：２．５、約４：３、約４：３．５、約３：１、約３：１．５、約３：２、約３：２．５、約２：１、又は約２：１．５である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３野生型に対する比は、約１：１．５、約１：２、約１：２．５、約１：３、約１：３．５、約１：４、約２：２．５、約２：３、約２：３．５、約２：４、約３：３．５、又は約３：４である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３野生型に対する比は、約１：３である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３野生型に対する比は、約３：１である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３野生型に対する比は、約２：１である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３野生型に対する比は、約１：２である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３野生型に対する比は、約１：１である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３野生型に対する比は、約３：２である。

【0095】

特定の実施形態では、相対的な存在量、割合、及び／又は比は、ペプチドマッピング法によって求められる。特定の実施形態では、相対的な存在量、割合、及び／又は比は、実施例３に記載のペプチドマッピング法によって求められる。特定の実施形態では、相対的な存在量、割合、及び／又は比は、液体クロマトグラフィーによって分離したトリプシンペプチドのＨＰＬＣ分析に続いて質量分析を行うことによって求められる。特定の実施形態では、相対的な存在量、割合、及び／又は比は、抽出イオンクロマトグラムにおける強度に基づく。特定の実施形態では、相対的な存在量、割合、及び／又は比は、組成物中の全てのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質及びＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（例えば、Ｑ^９７Ｒ ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及びＱ^９７ ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の総和）のピーク面積の合計に対するＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（例えば、Ｑ^９７Ｒ ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント）のトリプシンペプチドのピーク面積に基づいて求められる。特定の実施形態では、測定される組成物中の全てのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質及びＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのトリプシンペプチドは、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントと組成物中の全ての他のＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質及びＡＤＡＭＴＳ１３バリアントとの間で比較したときの少なくとも１つのアミノ酸の差異に特異的である。例えば、Ｑ^９７Ｒ ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントについて測定することができるトリプシンペプチド（複数可）は、ＡＡＧＧＩＬＨＬＥＬＬＶＡＶＧＰＤＶＦＱＡＨＲ又はＡＡＧＧＩＬＨＬＥＬＬＶＡＶＧＰＤＶＦＱＡＨＲとＥＤＴＥＲとの組み合わせであってよく、Ｑ^９７ ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質について測定されるトリプシンペプチドはＡＡＧＧＩＬＨＬＥＬＬＶＡＶＧＰＤＶＦＱＡＨＱＥＤＴＥＲであってよい。

【0096】

特定の実施形態では、相対的な存在量、割合、及び／又は比は、組成物中の全てのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質及びＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの総和重量に対するＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの総重量に基づいて求められる。

【0097】

本開示の組成物は、様々な態様では、経口的に、局所的に、経皮的に、非経口的に、吸入スプレーにより、膣内に、直腸内に、又は頭蓋内注射によって投与される。本明細書で使用するとき、非経口という用語は、皮下注射、静脈内、筋肉内、槽内注射、又は点滴技術を含む。幾つかの実施態様では、投与は皮下である。静脈内、皮内、筋肉内、乳房内、腹腔内、髄腔内、球後、肺内への注射による投与、及び／又は特定の部位への外科的移植も同様に企図される。幾つかの実施態様では、投与は静脈内である。一般に、組成物は、パイロジェン、及びレシピエントにとって有害であり得る他の不純物を本質的に含まない。

【0098】

特定の実施形態では、皮下組成物は、皮下注射によって投与される。具体的な実施形態では、皮下組成物は、繰り返し又は連続注射の場合、患者の同じ部位に皮下注射される（例えば、上腕、大腿の前面、下腹部、又は背中の上部に投与される）。他の実施形態では、皮下組成物は、患者の異なる部位に、すなわち、交代で皮下注射される。

【0099】

特定の実施形態では、皮下組成物は、皮下埋め込みデバイスによって投与される。特定の実施形態では、埋め込みデバイスは、組成物を持続的に放出させる。特定の実施形態では、埋め込みデバイスは、組成物を連続的に放出させる。

【0100】

組成物又は医薬組成物の製剤は、選択された投与経路に応じて変化する（例えば、液剤又は乳剤）。投与される組成物を含む適切な組成物は、生理学的に許容し得るビヒクル又は担体中で調製される。液剤又は乳剤の場合、好適な担体としては、例えば、生理食塩水及び緩衝培地を含む、水溶液若しくはアルコール／水溶液、エマルション、又は懸濁液が挙げられる。非経口ビヒクルとしては、特定の実施形態では、塩化ナトリウム溶液、ブドウ糖加リンゲル液、デキストロース及び塩化ナトリウム、乳酸加リンゲル、又は固定油が挙げられる。静脈内ビヒクルは、特定の態様では、種々の添加剤、保存剤、又は流体、栄養素又は電解質の補給剤を含む。

【0101】

活性成分として少なくとも１つのＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含有する本開示の化合物及び方法において有用な組成物又は医薬組成物は、様々な態様では、投与経路に応じて薬学的に許容し得る担体又は添加剤を含有する。このような担体又は添加剤の例としては、水、薬学的に許容し得る有機溶媒、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、デンプングリコール酸ナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、エチルセルロース、キサンタンガム、アラビアガム、カゼイン、ゼラチン、寒天、ジグリセリン、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ワセリン、パラフィン、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、薬学的に許容し得る界面活性剤等が挙げられる。使用される添加剤は、剤形に応じて、上記又はその組み合わせから適宜選択されるが、これらに限定されるものではない。

【0102】

様々な水性担体、例えば、水、緩衝水、０．４％生理食塩水、０．３％グリシン、又は水性懸濁液は、様々な態様では、水性懸濁液の製造に好適な賦形剤との混合物中に活性化合物を含有する。このような賦形剤は、懸濁剤、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム、及びアカシアガムであり；分散又は湿潤剤は、幾つかの場合には、天然に存在するホスファチド、例えばレシチン、又はアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物、例えばポリオキシエチレンステアレート、又はエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、例えばヘプタデカエチル－エネオキセタノール、又はエチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトールに由来する部分エステルとの縮合生成物、例えばポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、又はエチレンオキシドと脂肪酸及び無水ヘキシトールに由来する部分エステルとの縮合生成物、例えばポリエチレンソルビタンモノオレエートである。水性懸濁液は、特定の実施形態では、１つ以上の保存料、例えば、エチル、又はｎ－プロピル、ｐ－ヒドロキシベンゾエートを含有する。

【0103】

幾つかの特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）、又は他のＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を含む組成物を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント組成物は、保管のために凍結乾燥され、使用前に好適な担体中で再構成される。当技術分野において公知の任意の好適な凍結乾燥及び再構成の技術が使用される。当業者であれば、凍結乾燥及び再構成によって様々な程度タンパク質活性が喪失すること、及び多くの場合代償するために使用レベルが調整されることを理解する。

【0104】

水を添加することによって水性懸濁液を調製するのに好適な分散性の粉末及び顆粒は、分散又は湿潤剤、懸濁剤、及び１つ以上の保存剤との混合物中に活性化合物を提供する。好適な分散又は湿潤剤及び懸濁剤としては、既に上述したものが例示される。

【0105】

特定の実施形態では、本明細書に提供される、ＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント組成物は、それぞれが全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１１０２２９４５５号及び／又は米国特許出願公開第２０１４／０２７１６１１号に記載の１つ以上の薬学的に許容し得る賦形剤、担体、及び／又は希釈剤を更に含んでいてもよい。

【0106】

特定の実施形態では、本明細書に提供される、他のＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を含む組成物を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント組成物は、それぞれが全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１１／０２２９４５５号及び／又は米国特許出願公開第２０１４／０２７１６１１号に記載の範囲の浸透圧を有する。

【0107】

一実施形態では、本発明は、治療的に有効な量若しくは用量の少なくとも１つのＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は治療的に有効な量の総ＡＤＡＭＴＳ１３、準生理学的～生理学的濃度の薬学的に許容し得る塩、安定化濃度の１つ以上の糖及び／又は糖アルコール、非イオン性界面活性剤、組成物のｐＨを中性にする緩衝剤、並びに任意でカルシウム及び／又は亜鉛の塩を含む、他のＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を含む組成物を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）の組成物を提供する。一般に、本明細書に提供される安定化組成物は、医薬を投与するのに好適である。

【0108】

特定の実施形態では、組成物は、液体組成物である。他の実施形態では、組成物は、米国特許出願公開第２０１１／０２２９４５５号に記載の通り、液体組成物から凍結乾燥された凍結乾燥組成物である。

【0109】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬの治療的に有効な用量で提供される。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬの治療的に有効な用量で提供される。他の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。更に他の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。更に他の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、約０．０３ｍｇ／ｍＬ～約０．４ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。別の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。更に他の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、約０．０１ｍｇ／ｍＬ、又は約０．０２ｍｇ／ｍＬ、０．０３ｍｇ／ｍＬ、０．０４ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ、０．０６ｍｇ／ｍＬ、０．０７ｍｇ／ｍＬ、０．０８ｍｇ／ｍＬ、０．０９ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．２ｍｇ／ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬ、０．４ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ、０．６ｍｇ／ｍＬ、０．７ｍｇ／ｍＬ、０．８ｍｇ／ｍＬ、０．９ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、１．１ｍｇ／ｍＬ、１．２ｍｇ／ｍＬ、１．３ｍｇ／ｍＬ、１．４ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬ、１．６ｍｇ／ｍＬ、１．７ｍｇ／ｍＬ、１．８ｍｇ／ｍＬ、１．９ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ、３．０ｍｇ／ｍＬ、３．５ｍｇ／ｍＬ、４．０ｍｇ／ｍＬ、４．５ｍｇ／ｍＬ、５．０ｍｇ／ｍＬ、５．５ｍｇ／ｍＬ、６．０ｍｇ／ｍＬ、６．５ｍｇ／ｍＬ、７．０ｍｇ／ｍＬ、７．５ｍｇ／ｍＬ、８．０ｍｇ／ｍＬ、８．５ｍｇ／ｍＬ、９．０ｍｇ／ｍＬ、９．５ｍｇ／ｍＬ、１０．０ｍｇ／ｍＬ、又はそれ以上の濃度で存在し得る。一実施形態では、比較的純粋なＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの濃度は、分光法（すなわち、Ａ２８０で測定した総タンパク質）又は他のバルク判定（例えば、ブラッドフォードアッセイ、クーマシー染色又は銀染色のような様々な染色方法と組み合わせたＳＤＳ－ＰＡＧＥ、凍結乾燥粉末の重量等）によって求めることができる。他の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの濃度は、ＡＤＡＭＴＳ１３ ＥＬＩＳＡアッセイ（例えば、ｍｇ／ｍＬ抗原）によって求めることもできる。

【0110】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）は、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質（例えば、野生型ＡＤＡＭＴＳ１３）と共に、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬの総ＡＤＡＭＴＳ１３（すなわち、両方を合わせた総量）の治療的に有効な用量で提供される。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）は、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と共に、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬの総ＡＤＡＭＴＳ１３（すなわち、両方を合わせた総量）の治療的に有効な用量で提供される。他の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と共に、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。更に他の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と共に、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。他の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と共に、約０．０３ｍｇ／ｍＬ～約０．４ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。別の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と共に、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。更に他の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と共に、約０．０１ｍｇ／ｍＬ、又は約０．０２ｍｇ／ｍＬ、０．０３ｍｇ／ｍＬ、０．０４ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ、０．０６ｍｇ／ｍＬ、０．０７ｍｇ／ｍＬ、０．０８ｍｇ／ｍＬ、０．０９ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ、０．２ｍｇ／ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬ、０．４ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ、０．６ｍｇ／ｍＬ、０．７ｍｇ／ｍＬ、０．８ｍｇ／ｍＬ、０．９ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、１．１ｍｇ／ｍＬ、１．２ｍｇ／ｍＬ、１．３ｍｇ／ｍＬ、１．４ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬ、１．６ｍｇ／ｍＬ、１．７ｍｇ／ｍＬ、１．８ｍｇ／ｍＬ、１．９ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ、３．０ｍｇ／ｍＬ、３．５ｍｇ／ｍＬ、４．０ｍｇ／ｍＬ、４．５ｍｇ／ｍＬ、５．０ｍｇ／ｍＬ、５．５ｍｇ／ｍＬ、６．０ｍｇ／ｍＬ、６．５ｍｇ／ｍＬ、７．０ｍｇ／ｍＬ、７．５ｍｇ／ｍＬ、８．０ｍｇ／ｍＬ、８．５ｍｇ／ｍＬ、９．０ｍｇ／ｍＬ、９．５ｍｇ／ｍＬ、１０．０ｍｇ／ｍＬ、又はそれ以上の濃度で存在し得る。一実施形態では、比較的純粋なＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及びＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の濃度は、分光法（すなわち、Ａ２８０で測定した総タンパク質）又は他のバルク判定（例えば、ブラッドフォードアッセイ、銀染色、凍結乾燥粉末の重量等）によって求めることができる。他の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及びＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の濃度は、ＡＤＡＭＴＳ１３ ＥＬＩＳＡアッセイ（例えば、ｍｇ／ｍＬ抗原）によって求めることもできる。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及びＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、別々に検出される（すなわち、互いに識別可能である）。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及びＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、一緒に検出される（すなわち、互いに識別不可能である）。

【0111】

更に別の実施形態では、本発明によって提供される組成物中のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の濃度は、酵素活性のレベルとして表すこともできる。例えば、一実施形態では、製剤は、約０．０１単位のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性～約１０，０００単位のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性、又は他の好適なＡＤＡＭＴＳ１３酵素単位（ＩＵ）を含有し得る。別の実施形態では、製剤は、約０．１単位のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性～約１０，０００単位のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性、又は他の好適なＡＤＡＭＴＳ１３酵素単位（ＩＵ）を含有し得る。別の実施形態では、製剤は、約１単位のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性～約１０，０００単位のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性、又は他の好適なＡＤＡＭＴＳ１３酵素単位（ＩＵ）を含有し得る。別の実施形態では、製剤は、約１０単位のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性～約１０，０００単位のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性、又は他の好適なＡＤＡＭＴＳ１３酵素単位（ＩＵ）を含有し得る。他の実施形態では、製剤は、約１単位のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３（Ｕ_ＦＶ７３）活性～約８，０００単位のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性、又は約３０Ｕ_ＦＶ７３～約６，０００Ｕ_ＦＶ７３、又は約４０Ｕ_ＦＶ７３～約４，０００Ｕ_ＦＶ７３、又は約５０Ｕ_ＦＶ７３～約３，０００Ｕ_ＦＶ７３、又は約７５Ｕ_ＦＶ７３～約２，５００Ｕ_ＦＶ７３、又は約１００Ｕ_ＦＶ７３～約２，０００Ｕ_ＦＶ７３、又は約２００Ｕ_ＦＶ７３～約１、５００Ｕ_ＦＶ７３、又はおよそこれらの中の他の範囲を含有し得る。特定の実施形態では、本明細書に提供される製剤は、約２０～約１０，０００Ｕ_ＦＶ７３を含有する。特定の実施形態では、製剤は、約０．０１単位のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性、又は約０．０２単位、０．０３単位、０．０４単位、０．０５単位、０．０６単位、０．０７単位、０．０８単位、０．０９単位、０．１単位、０．２単位、０．３単位、０．４単位、０．５単位、０．６単位、０．７単位、０．８単位、０．９単位、１単位、２単位、３単位、４単位、５単位、６単位、７単位、８単位、９単位、１０単位、２０単位、３０単位、４０単位、５０単位、６０単位、７０単位、８０単位、９０単位、１００単位、１５０単位、２００単位、２５０単位、３００単位、３５０単位、４００単位、４５０単位、５００単位、６００単位、７００単位、８００単位、９００単位、１，０００単位、１，１００単位、１，２００単位、１，３００単位、１，４００単位、１，５００単位、１，６００単位、１，７００単位、１，８００単位、１，９００単位、２，０００単位、２，１００単位、２，２００単位、２，３００単位、２，４００単位、２，５００単位、２，６００単位、２，７００単位、２，８００単位、２，９００単位、３，０００単位、３，１００単位、３，２００単位、３，３００単位、３，４００単位、３，５００単位、３，６００単位、３，７００単位、３，８００単位、３，９００単位、４，０００単位、４，１００単位、４，２００単位、４，３００単位、４，４００単位、４，５００単位、４，６００単位、４，７００単位、４，８００単位、４，９００単位、５，０００単位、５，１００単位、５，２００単位、５，３００単位、５，４００単位、５，５００単位、５，６００単位、５，７００単位、５，８００単位、５，９００単位、６，０００単位、６，１００単位、６，２００単位、６，３００単位、６，４００単位、６，５００単位、６，６００単位、６，７００単位、６，８００単位、６，９００単位、７，０００単位、７，１００単位、７，２００単位、７，３００単位、７，４００単位、７，５００単位、７，６００単位、７，７００単位、７，８００単位、７，９００単位、８，０００単位、８，１００単位、８，２００単位、８，３００単位、８，４００単位、８，５００単位、８，６００単位、８，７００単位、８，８００単位、８，９００単位、９，０００単位、９，１００単位、９，２００単位、９，３００単位、９，４００単位、９，５００単位、９，６００単位、９，７００単位、９，８００単位、９，９００単位、１０，０００単位、若しくはそれ以上のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性を含有する。

【0112】

同様に、特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の濃度は、単位体積あたりの酵素活性、例えば、１ｍＬあたりのＡＤＡＭＴＳ１３酵素単位（ＩＵ／ｍＬ）として表すこともできる。例えば、一実施形態では、製剤は、約０．０１ＩＵ／ｍＬ～約１０，０００ＩＵ／ｍＬを含有し得る。別の実施形態では、製剤は、約０．１ＩＵ／ｍＬ～約１０，０００ＩＵ／ｍＬを含有し得る。別の実施形態では、製剤は、約１ＩＵ／ｍＬ～約１０，０００ＩＵ／ｍＬを含有し得る。別の実施形態では、製剤は、約１０ＩＵ／ｍＬ～約１０，０００ＩＵ／ｍＬを含有し得る。他の実施形態では、製剤は、約１ＩＵ／ｍＬ～約１０，０００ＩＵ／ｍＬ、又は約２０ＩＵ／ｍＬ～約８，０００ＩＵ／ｍＬ、又は約３０ＩＵ／ｍＬ～約６，０００ＩＵ／ｍＬ、又は約４０ＩＵ／ｍＬ～約４，０００ＩＵ／ｍＬ、又は約５０ＩＵ／ｍＬ～約３，０００ＩＵ／ｍＬ、又は約７５ＩＵ／ｍＬ～約２，５００ＩＵ／ｍＬ、又は約１００ＩＵ／ｍＬ～約２，０００ＩＵ／ｍＬ、又は約２００ＩＵ／ｍＬ～約１，５００ＩＵ／ｍＬ、又はおよそこれらの中の他の範囲を含有し得る。特定の実施形態では、本明細書に提供される製剤は、約１５０ＩＵ／ｍＬ～約６００ＩＵ／ｍＬを含有し得る。特定の実施形態では、本明細書に提供される製剤は、約１００ＩＵ／ｍＬ～約１，０００ＩＵ／ｍＬを含有し得る。特定の実施形態では、製剤は、約０．０１ＩＵ／ｍＬ、又は約０．０２ＩＵ／ｍＬ、０．０３ＩＵ／ｍＬ、０．０４ＩＵ／ｍＬ、０．０５ＩＵ／ｍＬ、０．０６ＩＵ／ｍＬ、０．０７ＩＵ／ｍＬ、０．０８ＩＵ／ｍＬ、０．０９ＩＵ／ｍＬ、０．１ＩＵ／ｍＬ、０．２ＩＵ／ｍＬ、０．３ＩＵ／ｍＬ、０．４ＩＵ／ｍＬ、０．５ＩＵ／ｍＬ、０．６ＩＵ／ｍＬ、０．７ＩＵ／ｍＬ、０．８ＩＵ／ｍＬ、０．９ＩＵ／ｍＬ、１ＩＵ／ｍＬ、２ＩＵ／ｍＬ、３ＩＵ／ｍＬ、４ＩＵ／ｍＬ、５ＩＵ／ｍＬ、６ＩＵ／ｍＬ、７ＩＵ／ｍＬ、８ＩＵ／ｍＬ、９ＩＵ／ｍＬ、１０ＩＵ／ｍＬ、２０ＩＵ／ｍＬ、３０ＩＵ／ｍＬ、４０ＩＵ／ｍＬ、５０ＩＵ／ｍＬ、６０ＩＵ／ｍＬ、７０ＩＵ／ｍＬ、８０ＩＵ／ｍＬ、９０ＩＵ／ｍＬ、１００ＩＵ／ｍＬ、１５０ＩＵ／ｍＬ、２００ＩＵ／ｍＬ、２５０ＩＵ／ｍＬ、３００ＩＵ／ｍＬ、３５０ＩＵ／ｍＬ、４００ＩＵ／ｍＬ、４５０ＩＵ／ｍＬ、５００ＩＵ／ｍＬ、６００ＩＵ／ｍＬ、７００ＩＵ／ｍＬ、８００ＩＵ／ｍＬ、９００ＩＵ／ｍＬ、１，０００ＩＵ／ｍＬ、１，１００ＩＵ／ｍＬ、１，２００ＩＵ／ｍＬ、１，３００ＩＵ／ｍＬ、１，４００ＩＵ／ｍＬ、１，５００ＩＵ／ｍＬ、１，６００ＩＵ／ｍＬ、１，７００ＩＵ／ｍＬ、１，８００ＩＵ／ｍＬ、１，９００ＩＵ／ｍＬ、２，０００ＩＵ／ｍＬ、２，１００ＩＵ／ｍＬ、２，２００ＩＵ／ｍＬ、２，３００ＩＵ／ｍＬ、２，４００ＩＵ／ｍＬ、２，５００ＩＵ／ｍＬ、２，６００ＩＵ／ｍＬ、２，７００ＩＵ／ｍＬ、２，８００ＩＵ／ｍＬ、２，９００ＩＵ／ｍＬ、３，０００ＩＵ／ｍＬ、３，１００ＩＵ／ｍＬ、３，２００ＩＵ／ｍＬ、３，３００ＩＵ／ｍＬ、３，４００ＩＵ／ｍＬ、３，５００ＩＵ／ｍＬ、３，６００ＩＵ／ｍＬ、３，７００ＩＵ／ｍＬ、３，８００ＩＵ／ｍＬ、３，９００ＩＵ／ｍＬ、４，０００ＩＵ／ｍＬ、４，１００ＩＵ／ｍＬ、４，２００ＩＵ／ｍＬ、４，３００ＩＵ／ｍＬ、４，４００ＩＵ／ｍＬ、４，５００ＩＵ／ｍＬ、４，６００ＩＵ／ｍＬ、４，７００ＩＵ／ｍＬ、４，８００ＩＵ／ｍＬ、４，９００ＩＵ／ｍＬ、５，０００ＩＵ／ｍＬ、５，１００ＩＵ／ｍＬ、５，２００ＩＵ／ｍＬ、５，３００ＩＵ／ｍＬ、５，４００ＩＵ／ｍＬ、５，５００ＩＵ／ｍＬ、５，６００ＩＵ／ｍＬ、５，７００ＩＵ／ｍＬ、５，８００ＩＵ／ｍＬ、５，９００ＩＵ／ｍＬ、６，０００ＩＵ／ｍＬ、６，１００ＩＵ／ｍＬ、６，２００ＩＵ／ｍＬ、６，３００ＩＵ／ｍＬ、６，４００ＩＵ／ｍＬ、６，５００ＩＵ／ｍＬ、６，６００ＩＵ／ｍＬ、６，７００ＩＵ／ｍＬ、６，８００ＩＵ／ｍＬ、６，９００ＩＵ／ｍＬ、７，０００ＩＵ／ｍＬ、７，１００ＩＵ／ｍＬ、７，２００ＩＵ／ｍＬ、７，３００ＩＵ／ｍＬ、７，４００ＩＵ／ｍＬ、７，５００ＩＵ／ｍＬ、７，６００ＩＵ／ｍＬ、７，７００ＩＵ／ｍＬ、７，８００ＩＵ／ｍＬ、７，９００ＩＵ／ｍＬ、８，０００ＩＵ／ｍＬ、８，１００ＩＵ／ｍＬ、８，２００ＩＵ／ｍＬ、８，３００ＩＵ／ｍＬ、８，４００ＩＵ／ｍＬ、８，５００ＩＵ／ｍＬ、８，６００ＩＵ／ｍＬ、８，７００ＩＵ／ｍＬ、８，８００ＩＵ／ｍＬ、８，９００ＩＵ／ｍＬ、９，０００ＩＵ／ｍＬ、９，１００ＩＵ／ｍＬ、９，２００ＩＵ／ｍＬ、９，３００ＩＵ／ｍＬ、９，４００ＩＵ／ｍＬ、９，５００ＩＵ／ｍＬ、９，６００ＩＵ／ｍＬ、９，７００ＩＵ／ｍＬ、９，８００ＩＵ／ｍＬ、９，９００ＩＵ／ｍＬ、１０，０００ＩＵ／ｍＬ、若しくはそれ以上を含有する。

【0113】

特定の実施形態では、本開示は、米国特許出願公開第２０１１／０２２９４５５号の第ＩＩＩ章（「ＡＤＡＭＴＳ１３組成物及び製剤」）に記載の例示的組成物を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの組成物を提供する。全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１１／０２２９４５５号及び／又は米国特許出願公開第２０１４／０２７１６１１号に記載のＡＤＡＭＴＳ１３の生成方法及びその組成物。更に、実際の非経口投与可能な組成物を調製する方法及び組成物は公知であるか、又は当業者には明らかであり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１５ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９８０）により詳細に記載されている。

【0114】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの組成物が生成され、それは添加剤を含む。全ての目的のために参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１１／０２２９４５５号の第ＩＶ章及び第Ｖ章に記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の生成方法及びその組成物。

【0115】

様々な態様では、医薬組成物は、無菌注射用の水性、油性の懸濁液、分散液、又は無菌注射用の溶液若しくは分散液を即時調製するための無菌粉末の形態である。懸濁液は、特定の実施形態では、上述の好適な分散又は湿潤剤及び懸濁剤を用いて公知の技術に従って製剤化される。無菌注射用製剤は、特定の態様では、例えば１，３－ブタンジオール溶液等の非毒性の非経口的に許容し得る希釈剤又は溶媒中の無菌注射用の溶液又は懸濁液である。幾つかの実施形態では、担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール等）、これらの好適な混合物、植物油、リンゲル液、及び等張塩化ナトリウム溶液を含有する溶媒又は分散媒である。更に、無菌固定油が、慣習的に溶媒又は懸濁媒として使用される。この目的のために、様々な態様では、合成モノ－又はジグリセリドを含む任意のブランドの固定油が使用される。更に、オレイン酸等の脂肪酸が、注射可能物質の調製において利用される。

【0116】

全ての場合において、該形態は滅菌されていなければならず、そして、容易に注射針を通過可能である程度に流体でなければならない。例えば、レシチン等のコーティングを使用することによって、分散液の場合は必要な粒径を維持することによって、及び界面活性剤を使用することによって、適切な流動性が維持される。該形態は、製造及び保管条件下で安定でなければならず、そして、細菌及び真菌等の微生物の汚染作用から保護されなければならない。微生物の作用は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール等の様々な抗菌及び抗真菌剤によって阻止される。多くの場合、等張剤、例えば、糖又は塩化ナトリウムを含めることが望ましい。特定の態様では、注射可能な組成物は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチン等の吸収を遅延させる剤を該組成物中で使用することによって持続的に吸収される。

【0117】

投与に有用な組成物は、特定の態様では、その有効性を高めるために取り込み又は吸収促進剤と共に製剤化される。このような促進剤としては、例えば、サリチレート、グリココレート／リノレート、グリコレート、アプロチニン、バシトラシン、ＳＤＳ、カプレート等が挙げられる。例えば、それぞれが全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれるＦｉｘ（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，８５：１２８２－１２８５，１９９６）及びＯｌｉｙａｉ ｅｔ ａｌ．（Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．，３２：５２１－５４４，１９９３）を参照。

【0118】

更に、本開示の組成物及び方法で使用される組成物の親水性及び疎水性の特性は、うまくバランスが取れており、それによって、インビトロ及び特にインビボの両方での使用に対する有用性が向上するが、そのようなバランスを欠く他の組成物は、実質的に有用性が低い。具体的には、本開示における組成物は、体内での吸収及びバイオアベイラビリティを可能にする水性媒体への適切な溶解度を有する一方、化合物が細胞膜を通過して推定作用部位に到達することを可能にする脂質への溶解度も有している。

【0119】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、薬学的ビヒクル、賦形剤、又は媒体として機能する薬学的に許容し得る（すなわち、無菌かつ非毒性の）液体、半固体、又は固体の希釈剤中で提供される。当技術分野において公知の任意の希釈剤が使用される。例示的な希釈剤としては、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ステアリン酸マグネシウム、メチル－及びプロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、アルギネート、デンプン、ラクトース、スクロース、デキストロース、ソルビトール、マンニトール、アカシアガム、リン酸カルシウム、鉱油、カカオバター、及びカカオ脂が挙げられるが、これらに限定されない。

【0120】

組成物は、送達に便利な形態で包装される。組成物は、カプセル、カプレット、サシェ、カシェ、ゼラチン、紙、又は他の容器内に封入される。これら送達形態は、レシピエント生物への組成物の送達に適合する場合、特に、組成物が単位用量形態で送達される場合に好ましい。投薬単位は、例えば、バイアル、錠剤、カプセル、坐剤、又はカシェに包装される。

【0121】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、準生理学的～生理学的塩濃度、例えば、０ｍＭ～約２００ｍＭの薬学的に許容し得る塩を含有し得る。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、生理学的濃度の塩、例えば、約１００ｍＭ～約２００ｍＭの薬学的に許容し得る塩を含有する。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、生理学的濃度の塩、例えば、約０ｍＭ～約６０ｍＭの薬学的に許容し得る塩を含有する。他の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、約０ｍＭ、又は約５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、１１０ｍＭ、１２０ｍＭ、１３０ｍＭ、１４０ｍＭ、１５０ｍＭ、１６０ｍＭ、１７０ｍＭ、１８０ｍＭ、１９０ｍＭ、２００ｍＭ、又はそれ以上の薬学的に許容し得る塩を含有する。特定の実施形態では、塩化物塩は、塩化ナトリウム又は塩化カリウムである。

【0122】

有利なことに、準生理学的濃度の薬学的に許容し得る塩を含有するＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、滑らかな表面を有するコンパクトなライオケーキを形成することが見出されている。更に、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質タンパク質の低塩凍結乾燥製剤は、生理学的濃度の塩を用いて調製した製剤と比較してタンパク質の凝集を低減することが見出されている。従って、特定の実施形態では、本発明は、準生理学的濃度の薬学的に許容し得る塩、例えば、約１００ｍＭ未満の薬学的に許容し得る塩を含有するＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の低塩製剤を提供する。一実施形態では、本明細書に提供される低塩ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、約１００ｍＭ未満の薬学的塩を含有する。特定の実施形態では、本明細書に提供される低塩ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、約８０ｍＭ未満の薬学的塩を含有する。特定の実施形態では、本明細書に提供される低塩のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又は野生型ＡＤＡＭＴＳ１３の製剤は、約６０ｍＭ未満の薬学的塩（すなわち、約０ｍＭ～約６０ｍＭの塩）を含有する。特定の実施形態では、低塩ＡＤＡＭＴＳ１３製剤は、約３０ｍＭ～約６０ｍＭの薬学的に許容し得る塩を含有する。更に他の実施形態では、低塩のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又は野生型ＡＤＡＭＴＳ１３の製剤は、約０ｍＭ、又は約５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、又は１００ｍＭの薬学的に許容し得る塩を含有する。特定の実施形態では、低塩ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、凍結乾燥製剤である。特定の実施形態では、塩は、塩化ナトリウム又は塩化カリウムである。

【0123】

また、適度なレベル（すなわち、約２％～約６％）の１つ以上の糖及び／又は糖アルコールを含めることは、滑らかな表面を有するコンパクトなライオケーキの調製を支援し、凍結乾燥時にＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又は野生型ＡＤＡＭＴＳ１３を安定化するのに役立つことも見出されている。従って、一実施形態では、本発明は、約２％～約６％の１つ以上の糖及び／又は糖アルコールを含有するＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤を提供する。単糖、二糖、若しくは多糖等の糖類等の任意の糖、又は例えば、フルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、ラクトース、スクロース、デキストラン、トレハロース、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、及びカルボキシメチルセルロースを含む水溶性グルカンを使用してよい。特定の実施形態では、スクロース又はトレハロースが糖添加剤として使用される。糖アルコールは、約４～約８個の炭素原子及びヒドロキシル基を有する炭化水素として定義される。本明細書に提供されるＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤において使用され得る糖アルコールの非限定的な例としては、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、ガラクチトール、ダルシトール、キシリトール、及びアラビトールが挙げられる。一実施形態では、マンニトールが糖アルコール添加剤として使用される。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、糖及び糖アルコールの添加剤の両方を含む。

【0124】

糖及び糖アルコールは、個々に使用してもよく、併用してもよい。幾つかの実施形態では、糖、糖アルコール、又はそれらの組み合わせは、約０．５％～約７％の濃度で製剤中に存在する。一実施形態では、製剤の糖及び／又は糖アルコールの含量は、約０．５％～約５％である。特定の実施形態では、糖、糖アルコール、又はそれらの組み合わせは、約１％～約５％の濃度で存在する。特定の実施形態では、糖、糖アルコール、又はそれらの組み合わせは、約２％～約６％の濃度で存在する。特定の実施形態では、糖、糖アルコール、又はそれらの組み合わせは、約３％～約５％の濃度で存在する。特定の実施形態では、最終濃度は、約０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％、５％、５．５％、６．０％、６．５％、又は７．０％の糖、糖アルコール、又はその組み合わせであってよい。特定の実施形態では、本明細書に提供される製剤は、約０．５％～約５．０％の濃度の糖と、約０．５％～約５．０％の濃度の糖アルコールとを含んでいてよい。糖及び糖アルコールの濃度の任意の組み合わせを使用することができ、例えば、糖は、約０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％、５％、５．５％、６．０％、６．５％、又は７．０％の濃度で存在し、糖アルコールは、約０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％、５％、５．５％、６．０％、６．５％、又は７．０％の濃度で存在する。

【0125】

有利なことに、非イオン性界面活性剤を含めることにより、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤の凝集が実質的に減少することも見出された。従って、一実施形態では、安定化濃度の非イオン性洗剤を含有するＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤が提供される。本発明の製剤で使用することができる薬学的に許容し得る非イオン性界面活性剤は、薬学分野において公知であり、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ ２０）、並びに様々なポロキサマー又はプルロニックＦ－６８を含むプルロニック、及びＢＲＩＪ ３５、又はこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、本医薬製剤において使用される非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート８０である。特定の実施形態では、界面活性剤は、本明細書に提供される製剤において約０．００１％～約０．２％の濃度で使用してよい。特定の実施形態では、界面活性剤は、約０．０１％～約０．１％の濃度で使用される。特定の実施形態では、界面活性剤は、約０．０５％の濃度で使用される。例えば、特定の実施形態では、製剤は、約０．００１％、０．００５％、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、０．１％、０．１２５％、０．１５％、０．１７５％、０．２％等の濃度の非イオン性界面活性剤を含んでいてよい。

【0126】

更に、約６．５～約７．５の中性ｐＨで製剤化したとき、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤が安定化することが見出された。従って、特定の実施形態では、製剤を中性ｐＨで維持するのに好適な緩衝剤を含有するＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤が提供される。薬学的に許容し得る緩衝剤は当技術分野で周知であり、リン酸バッファ、ヒスチジン、クエン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳ、トリス、ビシン、グリシン、Ｎ－グリシルグリシン、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、グリシルグリシン、リジン、アルギニン、リン酸ナトリウム、及びそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、バッファは、ヒスチジン、リン酸バッファ、ＨＥＰＥＳ、及びクエン酸ナトリウムから選択される。特定の実施形態では、バッファは、ヒスチジン又はＨＥＰＥＳである。具体的な実施形態では、バッファは、ヒスチジンである。別の具体的な実施形態では、バッファは、ＨＥＰＥＳである。一実施形態では、本明細書に提供される製剤のｐＨは、約６．５～約９．０である。特定の実施形態では、製剤のｐＨは、約６．５、又は約６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、又は９．０である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤のｐＨは、約６．０～約８．０である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤のｐＨは、約６．５～約７．５である。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤のｐＨは、約７．０である。別の特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤のｐＨは、７．０±０．２である。

【0127】

カルシウムを含めることによって、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３の製剤が更に安定化することも本明細書において実証される。従って、特定の実施形態では、約０．５ｍＭ～約２０ｍＭのカルシウム（例えば、塩化カルシウム）を含有する、安定化ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤が提供される。本明細書に提供される製剤では、任意の薬学的に許容し得るカルシウム塩を使用することができる。使用することができるカルシウム塩の非限定的な例としては、例えば、ＣａＣｌ_２、ＣａＣＯ_３、Ｃａ（Ｃ_６Ｈ_１１Ｏ_７）_２、Ｃａ_３（ＰＯ_４）_２、Ｃａ（Ｃ_１８Ｈ_３５Ｏ_２）_２等が挙げられる。一実施形態では、カルシウムは、約０．５ｍＭ～約１０ｍＭの濃度で、本発明のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤中に存在する。別の実施形態では、カルシウムは、約２ｍＭ～約５ｍＭの濃度でＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤中に存在する。特定の実施形態では、カルシウムは、約２ｍＭ～約４ｍＭの濃度でＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤中に存在する。特定の実施形態では、カルシウムの濃度は、約０．５ｍＭ、又は約１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭ、１５ｍＭ、１６ｍＭ、１７ｍＭ、１８ｍＭ、１９ｍＭ、又は２０ｍＭである。特定の実施形態では、カルシウムの濃度は、約２ｍＭである。別の実施形態では、カルシウムの濃度は、約３ｍＭである。更に別の実施形態では、カルシウムの濃度は、約４ｍＭである。

【0128】

同様に、特定の条件下では、亜鉛を含めることによって、本明細書に提供されるＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤が更に安定化することが見出されている。例えば、図３４は、約２μＭ～約１０μＭの亜鉛を含めることによって、カルシウムを含有するＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤が更に安定化したことを示す。本明細書に提供される製剤では、任意の薬学的に許容し得る亜鉛塩を使用することができる。使用することができる亜鉛塩の非限定的な例としては、例えば、ＺｎＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ、ＺｎＳＯ_３・２Ｈ_２Ｏ、Ｚｎ_３（ＰＯ_４）_２、及び（Ｃ_６Ｈ_５Ｏ_７）_２Ｚｎ_３・２Ｈ_２Ｏ等が挙げられる。一実施形態では、ＺｎＳＯ_４が、本明細書に提供されるＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤において使用される。幾つかの実施形態では、亜鉛は、約０．５μＭ～約２０．０μＭの濃度で本発明のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤中に存在する。特定の実施形態では、亜鉛は、約０．５μＭ～約１０．０μＭの濃度でＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤中に含まれる。特定の実施形態では、亜鉛の濃度は、約０．５μＭ、又は約１μＭ、２μＭ、３μＭ、４μＭ、５μＭ、６μＭ、７μＭ、８μＭ、９μＭ、又は１０μＭである。

【0129】

一実施形態では、本明細書に提供されるＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、約２００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ～約４００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌの範囲、又は約２５０～約３５０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌの範囲の浸透圧を有する。特定の実施形態では、本明細書に提供されるＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、例えば、約２００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、又は約２１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、２２０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、２３０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、２４０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ，２５０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、２６０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、２７０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、２８０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、２９０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、３２０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、３３０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、３４０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、３５０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、３６０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、３７０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、３８０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、３９０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、若しくは４００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌの浸透圧を有する。

【0130】

本明細書に提供される製剤で使用することができる等張化剤の例としては、塩化ナトリウム、デキストロース、スクロース、キシリトール、フルクトース、グリセロール、ソルビトール、マンニトール、トレハロース、塩化カリウム、マンノース、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、他の無機塩、他の糖、他の糖アルコール、及びそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、少なくとも１つの等張化剤、又は少なくとも２つ、３つ、４つ、５つ、若しくはそれ以上の等張化剤を含んでいてよい。

【0131】

本明細書に提供されるＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、例えば、ボーラスとしての又は一定期間にわたる持続注入による静脈内投与、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液包内、くも膜下腔内、経口、局所、又は吸入の経路による投与等の公知の方法を介して投与するために製剤化することができる。特定の実施形態では、本明細書に提供されるＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、全身又は局所のいずれに投与してもよい。全身投与としては、経口、皮下、腹腔内、皮下、経鼻、舌下、又は直腸の投与経路が挙げられるが、これらに限定されない。局所投与としては、局所、皮下、筋肉内、及び腹腔内の投与経路が挙げられるが、これらに限定されない。

【0132】

本発明の一態様では、単量体ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質タンパク質の組成物が提供される。特定の実施形態では、単量体ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質タンパク質の組成物は、凝集体ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／若しくはＡＤＡＭＴＳ１３、二量体ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／若しくはＡＤＡＭＴＳ１３、又は凝集体及び二量体の両方のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／若しくはＡＤＡＭＴＳ１３を実質的に含まない。幾つかの実施形態では、単量体組成物は、凝集体及び／又は二量体のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を含有する類似の組成物よりも高い比活性を有する。特定の実施形態では、単量体ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の組成物は、ゲル濾過又はサイズ排除クロマトグラフィーを含む方法によって生成される。特定の一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、ヒトＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／若しくはＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質、又は組み換えヒトＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／若しくはＡＤＡＭＴＳ１３、又はその生物学的に活性のある誘導体若しくは断片である。

【0133】

特定の実施形態では、本発明は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１０．０ｍｇ／ｍＬの総ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質、約０ｍＭ～約２００ｍＭの薬学的に許容し得る塩、糖及び／又は糖アルコール、非イオン界面活性剤、並びに緩衝剤を含むＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤を提供する。特定の実施形態では、製剤は、カルシウム及び／又は亜鉛を更に含んでいてもよい。他の実施形態では、製剤は、約６．５～９．０のｐＨで緩衝され得る。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、医薬投与に好適である。

【0134】

特定の実施形態では、本発明は、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３の安定化製剤であって、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０．０ｍｇ／ｍＬの総ＡＤＡＭＴＳ１３；０ｍＭ～２００ｍＭの薬学的に許容し得る塩；０．５ｍＭ～２０ｍＭのカルシウム；糖及び／又は糖アルコール；非イオン性界面活性剤；並びに約６．５～約７．５のｐＨを維持するための緩衝剤を含む製剤を提供する。特定の実施形態では、薬学的に許容し得る塩は、塩化ナトリウム又は塩化カリウムである。

【0135】

一実施形態では、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０．０ｍｇ／ｍＬの総ＡＤＡＭＴＳ１３；０ｍＭ～２００ｍＭの薬学的に許容し得る塩；０．５ｍＭ～２０ｍＭのカルシウム；糖及び／又は糖アルコール；非イオン性界面活性剤；並びに約６．５～約７．５のｐＨを維持するための緩衝剤を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤が提供され、約５０単位／ｍＬ～約１０００単位／ｍＬのＡＤＡＭＴＳ１３活性を含有する。特定の実施形態では、薬学的に許容し得る塩は、塩化ナトリウム又は塩化カリウムである。

【0136】

別の実施形態では、本発明は、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０．０ｍｇ／ｍＬの総ＡＤＡＭＴＳ１３；０ｍＭ～２００ｍＭの薬学的に許容し得る塩；１ｍＭ～１０ｍＭのカルシウム；糖及び／又は糖アルコール；非イオン性界面活性剤；並びに約６．５～約７．５のｐＨを維持するための緩衝剤を含む、安定化ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤を提供する。特定の実施形態では、製剤は、約２ｍＭ～約４ｍＭのカルシウムを含有する。特定の実施形態では、薬学的に許容し得る塩は、塩化ナトリウム又は塩化カリウムである。

【0137】

別の実施形態では、本発明は、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０．０ｍｇ／ｍＬの総ＡＤＡＭＴＳ１３；０ｍＭ～２００ｍＭの薬学的に許容し得る塩；０．５ｍＭ～２０ｍＭのカルシウム；約２％～約６％の糖及び／又は糖アルコール；非イオン性界面活性剤；並びに約６．５～約７．５のｐＨを維持するための緩衝剤を含む、安定化ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤を提供する。特定の実施形態では、糖及び／又は糖アルコールは、スクロース、トレハロース、マンニトール、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。特定の実施形態では、糖及び／又は糖アルコールは、スクロースとマンニトールとの混合物である。特定の実施形態では、スクロースとマンニトールとの混合物は、約１％のスクロース及び約３％のマンニトールからなる。特定の実施形態では、製剤は、約１ｍＭ～約１０ｍＭのカルシウム又は約２ｍＭ～約４ｍＭのカルシウムを含む。特定の実施形態では、薬学的に許容し得る塩は、塩化ナトリウム又は塩化カリウムである。

【0138】

別の実施形態では、本発明は、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０．０ｍｇ／ｍＬの総ＡＤＡＭＴＳ１３；０ｍＭ～２００ｍＭの薬学的に許容し得る塩；０．５ｍＭ～２０ｍＭのカルシウム；糖及び／又は糖アルコール；約０．０１％～０．１％の非イオン性界面活性剤；並びに約６．５～約７．５のｐＨを維持するための緩衝剤を含む、安定化ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤を提供する。特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、プルロニックＦ－６８、ＢＲＩＪ３５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。特定の実施形態では、糖及び／又は糖アルコールは、スクロースとマンニトールとの混合物である。特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート８０である。特定の実施形態では、製剤は、約１ｍＭ～約１０ｍＭのカルシウム又は約２ｍＭ～約４ｍＭのカルシウムを含む。特定の実施形態では、薬学的に許容し得る塩は、塩化ナトリウム又は塩化カリウムである。

【0139】

別の実施形態では、本発明は、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０．０ｍｇ／ｍＬの総ＡＤＡＭＴＳ１３；０ｍＭ～２００ｍＭの薬学的に許容し得る塩；０．５ｍＭ～２０ｍＭのカルシウム；糖及び／又は糖アルコール；非イオン性界面活性剤；並びに約６．５～約７．５のｐＨを維持するための緩衝剤を含み、当該緩衝剤がヒスチジン又はＨＥＰＥＳである、安定化ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤を提供する。特定の実施形態では、緩衝剤は、約５ｍＭ～約１００ｍＭ又は約１０ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で存在する。別の実施形態では、製剤のｐＨは、７．０±０．２である。特定の実施形態では、製剤は、約１ｍＭ～約１０ｍＭのカルシウム又は約２ｍＭ～約４ｍＭのカルシウムを含む。特定の実施形態では、薬学的に許容し得る塩は、塩化ナトリウム又は塩化カリウムである。

【0140】

別の実施形態では、本発明は、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０．０ｍｇ／ｍＬの総ＡＤＡＭＴＳ１３；０ｍＭ～２００ｍＭの薬学的に許容し得る塩；０．５ｍＭ～２０ｍＭのカルシウム；糖及び／又は糖アルコール；非イオン性界面活性剤；並びに約６．５～約７．５のｐＨを維持するための緩衝剤を含む、安定化ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤を提供する。特定の実施形態では、製剤は、約０．５μＭ～約２０μＭの亜鉛を更に含む。特定の実施形態では、製剤は、約１ｍＭ～約１０ｍＭのカルシウム又は約２ｍＭ～約４ｍＭのカルシウムを含む。特定の実施形態では、薬学的に許容し得る塩は、塩化ナトリウム又は塩化カリウムである。

【0141】

特定の実施形態では、本発明は、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０．０ｍｇ／ｍＬの総ＡＤＡＭＴＳ１３；０～６０ｍＭのＮａＣｌ；２ｍＭ～４ｍＭのカルシウム；２％～４％のマンニトール；０．５％～２％のスクロース；０．０２５～０．１％のポリソルベート８０；及び１０ｍＭ～５０ｍＭのヒスチジン（ｐＨ７．０±０．２）を含む、安定化ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤を提供する。一実施形態では、製剤は、約０．５μＭ～約２０μＭの亜鉛を更に含む。

【0142】

別の実施形態では、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０．０ｍｇ／ｍＬの総ＡＤＡＭＴＳ１３；約１００ｍＭ未満の薬学的に許容し得る塩；０．５ｍＭ～２０ｍＭのカルシウム；糖及び／又は糖アルコール；非イオン性界面活性剤；並びにおよそ６．５～７．５のｐＨを維持するための緩衝剤を含む、安定化低塩ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤が提供される。特定の実施形態では、薬学的に許容し得る塩は、塩化ナトリウム又は塩化カリウムである。特定の実施形態では、低塩ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、凍結乾燥製剤である。

【0143】

一実施形態では、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０．０ｍｇ／ｍＬの総ＡＤＡＭＴＳ１３；約１００ｍＭ未満の薬学的に許容し得る塩；０．５ｍＭ～２０ｍＭのカルシウム；糖及び／又は糖アルコール；非イオン性界面活性剤；並びに約６．５～約７．５のｐＨを維持するための緩衝剤を含む、安定化低塩ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤が提供され、約５０単位／ｍＬ～約１０００単位／ｍＬのＡＤＡＭＴＳ１３活性を含有する。特定の実施形態では、薬学的に許容し得る塩は、塩化ナトリウム又は塩化カリウムである。特定の実施形態では、低塩ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、凍結乾燥製剤である。

【0144】

別の実施形態では、本発明は、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０．０ｍｇ／ｍＬの総ＡＤＡＭＴＳ１３；約１００ｍＭ未満の薬学的に許容し得る塩；１ｍＭ～１０ｍＭのカルシウム；糖及び／又は糖アルコール；非イオン性界面活性剤；並びに約６．５～約７．５のｐＨを維持するための緩衝剤を含む、安定化低塩ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤を提供する。特定の実施形態では、製剤は、約２ｍＭ～約４ｍＭのカルシウムを含む。特定の実施形態では、薬学的に許容し得る塩は、塩化ナトリウム又は塩化カリウムである。特定の実施形態では、低塩ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、凍結乾燥製剤である。

【0145】

別の実施形態では、本発明は、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０．０ｍｇ／ｍＬの総ＡＤＡＭＴＳ１３；約１００ｍＭ未満の薬学的に許容し得る塩；０．５ｍＭ～２０ｍＭのカルシウム；約２％～約６％の糖及び／又は糖アルコール；非イオン性界面活性剤；並びに約６．５～約７．５のｐＨを維持するための緩衝剤を含む、安定化低塩ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤を提供する。特定の実施形態では、糖及び／又は糖アルコールは、スクロース、トレハロース、マンニトール、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。特定の実施形態では、糖及び／又は糖アルコールは、スクロースとマンニトールとの混合物である。特定の実施形態では、スクロースとマンニトールとの混合物は、約１％のスクロース及び約３％のマンニトールからなる。特定の実施形態では、製剤は、約１ｍＭ～約１０ｍＭのカルシウム又は約２ｍＭ～約４ｍＭのカルシウムを含む。特定の実施形態では、薬学的に許容し得る塩は、塩化ナトリウム又は塩化カリウムである。特定の実施形態では、低塩ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、凍結乾燥製剤である。

【0146】

別の実施形態では、本発明は、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０．０ｍｇ／ｍＬの総ＡＤＡＭＴＳ１３；約１００ｍＭ未満の薬学的に許容し得る塩；０．５ｍＭ～２０ｍＭのカルシウム；糖及び／又は糖アルコール；約０．０１％～０．１％の非イオン性界面活性剤；並びに約６．５～約７．５のｐＨを維持するための緩衝剤を含む、安定化低塩ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤を提供する。特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、プルロニックＦ－６８、ＢＲＩＪ３５、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。特定の実施形態では、糖及び／又は糖アルコールは、スクロースとマンニトールとの混合物である。特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート８０である。特定の実施形態では、製剤は、約１ｍＭ～約１０ｍＭのカルシウム又は約２ｍＭ～約４ｍＭのカルシウムを含む。特定の実施形態では、薬学的に許容し得る塩は、塩化ナトリウム又は塩化カリウムである。特定の実施形態では、低塩ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、凍結乾燥製剤である。

【0147】

別の実施形態では、本発明は、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０．０ｍｇ／ｍＬの総ＡＤＡＭＴＳ１３；約１００ｍＭ未満の薬学的に許容し得る塩；０．５ｍＭ～２０ｍＭのカルシウム；糖及び／又は糖アルコール；非イオン性界面活性剤；並びに約６．５～約７．５のｐＨを維持するための緩衝剤を含み、当該緩衝剤がヒスチジン又はＨＥＰＥＳである、安定化低塩ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤を提供する。特定の実施形態では、緩衝剤は、約５ｍＭ～約１００ｍＭ又は約１０ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で存在する。別の実施形態では、製剤のｐＨは、７．０±０．２である。特定の実施形態では、製剤は、約１ｍＭ～約１０ｍＭのカルシウム又は約２ｍＭ～約４ｍＭのカルシウムを含む。特定の実施形態では、薬学的に許容し得る塩は、塩化ナトリウム又は塩化カリウムである。特定の実施形態では、低塩ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、凍結乾燥製剤である。

【0148】

別の実施形態では、本発明は、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０．０ｍｇ／ｍＬの総ＡＤＡＭＴＳ１３；約１００ｍＭ未満の薬学的に許容し得る塩；０．５ｍＭ～２０ｍＭのカルシウム；糖及び／又は糖アルコール；非イオン性界面活性剤；並びに約６．５～約７．５のｐＨを維持するための緩衝剤を含む、安定化低塩ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤を提供する。特定の実施形態では、製剤は、約０．５μＭ～約２０μＭの亜鉛を更に含む。特定の実施形態では、製剤は、約１ｍＭ～約１０ｍＭのカルシウム又は約２ｍＭ～約４ｍＭのカルシウムを含む。特定の実施形態では、薬学的に許容し得る塩は、塩化ナトリウム又は塩化カリウムである。特定の実施形態では、低塩ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、凍結乾燥製剤である。

【0149】

特定の実施形態では、本発明は、０．０１ｍｇ／ｍＬ～１０．０ｍｇ／ｍＬの総ＡＤＡＭＴＳ１３；約１００ｍＭ未満のＮａＣｌ；２ｍＭ～４ｍＭのカルシウム；２％～４％のマンニトール；０．５％～２％のスクロース；０．０２５～０．１％のポリソルベート８０；及び１０ｍＭ～５０ｍＭのヒスチジン（ｐＨ７．０±０．２）を含む、安定化低塩ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤を提供する。一実施形態では、製剤は、約０．５μＭ～約２０μＭの亜鉛を更に含む。特定の実施形態では、低塩ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤は、凍結乾燥製剤である。

【0150】

一実施形態では、本発明は、（ａ）ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又はＡＤＡＭＴＳ１３バリアントとＡＤＡＭＴＳ１３との組み合わせ（すなわち、総ＡＤＡＭＴＳ１３）１ｍｇあたり少なくとも０．０１単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性（すなわち、ＦＲＥＴＳ－ｖＷＦ７３活性）；（ｂ）０ｍＭ～２００ｍＭの薬学的に許容し得る塩；（ｃ）０．５ｍＭ～２０ｍＭのカルシウム；（ｄ）糖及び／又は糖アルコール；（ｅ）非イオン性界面活性剤；並びに（ｆ）６．０～８．０のｐＨを維持するための緩衝剤を含む製剤を提供する。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の安定化製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも１０単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の安定化製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも１００単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。一実施形態では、製剤は、ＤＡＭＴＳ１３バリアント又はＡＤＡＭＴＳ１３バリアントとＡＤＡＭＴＳ１３との組み合わせ（すなわち、総ＡＤＡＭＴＳ１３）１ｍｇあたり少なくとも２００単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。別の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の安定化製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも４００単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の安定化製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも６００単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。更なる実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の安定化製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも８００単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。更に別の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の安定化製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも１０００単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の安定化製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり約１００単位～約２０００単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。特定の実施形態では、製剤は、凍結乾燥され、本明細書に記載の液体製剤から凍結乾燥される。

【0151】

安定化ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤の一実施形態では、製剤は、約１．０ｍＭ～約１０．０ｍＭのカルシウムを含む。特定の実施形態では、製剤は、約２．０～約４．０ｍＭのカルシウムを含有する。

【0152】

安定化ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤の別の実施形態では、製剤は、約２％～約６％の糖及び／又は糖アルコールを含む。特定の実施形態では、製剤は、約３％～約５％の糖及び／又は糖アルコールを含む。具体的な実施形態では、製剤は、約４％の糖及び／又は糖アルコールを含む。一実施形態では、糖及び／又は糖アルコールは、スクロース、トレハロース、マンニトール、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。特定の実施形態では、糖及び／又は糖アルコールは、スクロースとマンニトールとの混合物である。

【0153】

安定化ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤の一実施形態では、製剤は、約０．０１％～約０．１％の非イオン性界面活性剤を含む。特定の実施形態では、製剤は、約０．０５％の非イオン性界面活性剤を含む。一実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、プルロニックＦ－６８、及びＢＲＩＪ３５からなる群から選択される。特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート８０である。

【0154】

安定化ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤の一実施形態では、製剤は、約５ｍＭ～約１００ｍＭの緩衝剤を含む。特定の実施形態では、製剤は、約１０ｍＭ～約５０ｍＭの緩衝剤を含む。別の実施形態では、緩衝剤は、ヒスチジン又はＨＥＰＥＳである。特定の実施形態では、緩衝剤は、ヒスチジンである。一実施形態では、製剤のｐＨは、約６．５～７．５である。特定の実施形態では、製剤のｐＨは、７．０±０．２である。

【0155】

安定化ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤の一実施形態では、製剤は、約０．５μＭ～２０μＭの亜鉛を更に含む。

【0156】

特定の実施形態では、本発明は、（ａ）総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも０．０１単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性；（ｂ）０～２００ｍＭのＮａＣｌ；（ｃ）２ｍＭ～４ｍＭのカルシウム；（ｄ）２％～４％のマンニトール；（ｅ）０．５％～２％のスクロース；（ｆ）０．０２５～０．１％のポリソルベート８０；及び（ｇ）１０ｍＭ～５０ｍのヒスチジン（ｐＨ７．０±０．２）を含む、安定化ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤を提供する。

【0157】

一実施形態では、本発明は、（ａ）ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又はＡＤＡＭＴＳ１３バリアントとＡＤＡＭＴＳ１３との組み合わせ（すなわち、総ＡＤＡＭＴＳ１３）１ｍｇあたり少なくとも０．０１単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性（すなわち、ＦＲＥＴＳ－ｖＷＦ７３活性）；（ｂ）０ｍＭ～１００ｍＭの薬学的に許容し得る塩；（ｃ）０．５ｍＭ～２０ｍＭのカルシウム；（ｄ）糖及び／又は糖アルコール；（ｅ）非イオン性界面活性剤；並びに（ｆ）６．０～８．０のｐＨを維持するための緩衝剤を含む製剤を提供する。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の安定化製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも１０単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の安定化製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも１００単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。一実施形態では、製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも２００単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。別の実施形態では、製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも４００単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。別の実施形態では、製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも６００単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。別の実施形態では、製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも８００単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。更に別の実施形態では、製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも１０００単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。一実施形態では、製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３あたり約１００単位～約２０００単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。特定の実施形態では、製剤は、凍結乾燥され、本明細書に記載の液体製剤から凍結乾燥される。

【0158】

一実施形態では、製剤は、約１．０ｍＭ～約１０．０ｍＭのカルシウムを含む。別の実施形態では、製剤は、約２．０～約４．０ｍＭのカルシウムを含有する。

【0159】

別の実施形態では、製剤は、約２％～約６％の糖及び／又は糖アルコールを含む。別の実施形態では、製剤は、約３％～約５％の糖及び／又は糖アルコールを含む。特定の実施形態では、製剤は、約４％の糖及び／又は糖アルコールを含む。特定の実施形態では、糖及び／又は糖アルコールは、スクロース、トレハロース、マンニトール、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。別の実施形態では、糖及び／又は糖アルコールは、スクロースとマンニトールとの混合物である。

【0160】

別の実施形態では、製剤は、約０．０１％～約０．１％の非イオン性界面活性剤を含む。別の実施形態では、製剤は、約０．０５％の非イオン性界面活性剤を含む。特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、プルロニックＦ－６８、及びＢＲＩＪ３５からなる群から選択される。他の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート８０である。

【0161】

別の実施形態では、製剤は、約５ｍＭ～約１００ｍＭの緩衝剤を含む。別の実施形態では、製剤は、約１０ｍＭ～約５０ｍＭの緩衝剤を含む。特定の実施形態では、緩衝剤は、ヒスチジン又はＨＥＰＥＳである。別の実施形態では、緩衝剤は、ヒスチジンである。更に別の一実施形態では、製剤のｐＨは、約６．５～７．５である。他の実施形態では、製剤のｐＨは、７．０±０．２である。

【0162】

別の実施形態では、製剤は、約０．５μＭ～２０μＭの亜鉛を更に含む。

【0163】

特定の実施形態では、本発明は、（ａ）ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又はＡＤＡＭＴＳ１３バリアントとＡＤＡＭＴＳ１３との組み合わせ（すなわち、総ＡＤＡＭＴＳ１３）１ｍｇあたり少なくとも０．０１単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性；ｂ）０～２００ｍＭのＮａＣｌ；（ｃ）２ｍＭ～４ｍＭのカルシウム；（ｄ）２％～４％のマンニトール；（ｅ）０．５％～２％のスクロース；（ｆ）０．０２５～０．１％のポリソルベート８０；及び（ｇ）１０ｍＭ～５０ｍＭのヒスチジン（ｐＨ７．０±０．２）を含むＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又は野生型ＡＤＡＭＴＳ１３の製剤を提供する。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の安定化製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも１０単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の安定化製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも１００単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。

【0164】

特定の実施形態では、本発明は、（ａ）ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも０．０１単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性；（ｂ）０～１００ｍＭのＮａＣｌ；（ｃ）２ｍＭ～４ｍＭのカルシウム；（ｄ）２％～４％のマンニトール；（ｅ）０．５％～２％のスクロース；（ｆ）０．０２５～０．１％のポリソルベート８０；及び（ｇ）１０ｍＭ～５０ｍのヒスチジン（ｐＨ７．０±０．２）を含むＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤を提供する。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の安定化製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも１０単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の安定化製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも１００単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。

【0165】

別の実施形態では、本発明は、（ａ）ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも０．０１単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性；（ｂ）０～６０ｍＭのＮａＣｌ；（ｃ）２ｍＭ～４ｍＭのカルシウム；（ｄ）２％～４％のマンニトール；（ｅ）０．５％～２％のスクロース；（ｆ）０．０２５～０．１％のポリソルベート８０；及び（ｇ）１０ｍＭ～５０ｍのヒスチジン（ｐＨ７．０±０．２）を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の製剤を提供する。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の安定化製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも１０単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の安定化製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも１００単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。

【0166】

別の実施形態では、本発明は、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の凍結乾燥製剤であって、（ａ）ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも０．０１単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性；（ｂ）０～２００ｍＭのＮａＣｌ；（ｃ）２ｍＭ～４ｍＭのカルシウム；（ｄ）２％～４％のマンニトール；（ｅ）０．５％～２％のスクロース；（ｆ）０．０２５～０．１％のポリソルベート８０；及び（ｇ）１０ｍＭ～５０ｍのヒスチジン（ｐＨ７．０±０．２）を含む、液体製剤から凍結乾燥された製剤を提供する。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の安定化製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも１０単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の安定化製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも１００単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。

【0167】

別の実施形態では、本発明は、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の凍結乾燥製剤であって、（ａ）ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも０．０１単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性；（ｂ）０～１００ｍＭのＮａＣｌ；（ｃ）２ｍＭ～４ｍＭのカルシウム；（ｄ）２％～４％のマンニトール；（ｅ）０．５％～２％のスクロース；（ｆ）０．０２５～０．１％のポリソルベート８０；及び（ｇ）１０ｍＭ～５０ｍのヒスチジン（ｐＨ７．０±０．２）を含む、液体製剤から凍結乾燥された製剤を提供する。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の安定化製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも１０単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の安定化製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも１００単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。

【0168】

更に別の実施形態では、本発明は、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の低塩凍結乾燥製剤であって、（ａ）ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも０．０１単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性；（ｂ）０～６０ｍＭのＮａＣｌ；（ｃ）２ｍＭ～４ｍＭのカルシウム；（ｄ）２％～４％のマンニトール；（ｅ）０．５％～２％のスクロース；（ｆ）０．０２５～０．１％のポリソルベート８０；及び（ｇ）１０ｍＭ～５０ｍのヒスチジン（ｐＨ７．０±０．２）を含む、液体製剤から凍結乾燥された製剤を提供する。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の安定化製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも１０単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の安定化製剤は、総ＡＤＡＭＴＳ１３ １ｍｇあたり少なくとも１００単位のＡＤＡＭＴＳ１３活性を含む。

【0169】

ＩＶ．処置の方法
本明細書に記載の組成物は、治療的又は予防的な処置のために投与することができる。一般に、治療的用途の場合、組成物は、ＡＤＡＭＴＳ１３若しくはＶＷＦの機能不全に関連する疾患若しくは病態を有する対象、又は他の理由でそれを必要とする対象に、「治療的に有効な用量」で投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の組成物は、血栓性の疾患及び病態の治療及び予防のために使用される。特定の実施形態では、本明細書に記載の組成物は、梗塞の治療及び予防のために使用される。これら使用に有効な組成及び量は、疾患又は病態の重症度及び患者の全身健康状態に依存する。組成物の単回投与又は複数回投与は、患者が必要とし、そして、耐容する投薬量及び頻度に依存して投与してよい。

【0170】

一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、単独で又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と共に（すなわち、総ＡＤＡＭＴＳ１３）、０．０１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）（すなわち、ＩＵ／ｋｇ（体重））～１００００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）（すなわち、ＩＵ／ｋｇ（体重））の総ＡＤＡＭＴＳ１３の用量で投与される。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、単独で又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と共に、０．１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１００００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）の用量で投与される。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、単独で又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と共に、０．１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～６０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～５０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～４０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～３０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１６０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～８０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、又は０．１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）の用量で投与される。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、単独で又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と共に、１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１００００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～６０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～５０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～４０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～３０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１６０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～８０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、又は１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）の用量で投与される。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、単独で又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と共に、５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１００００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～６０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～５０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～４０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～３０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１６０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、又は５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～８０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、又は５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）の用量で投与される。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、単独で又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と共に、１０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１００００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～６０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～５０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～４０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～３０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１６０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～８０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、又は１０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）の用量で投与される。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、単独で又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と共に、２０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１００００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～６０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～５０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～４０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～３０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１６０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～８０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、又は２０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）の用量で投与される。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、単独で又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と共に、２５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１００００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～６０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～５０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～４０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～３０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～４００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１６０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～８０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、又は２５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）の用量で投与される。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、単独で又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と共に、４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１００００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～６０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～５０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～４０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～３０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１６０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、又は４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～８０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）の用量で投与される。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、単独で又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と共に、５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１００００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～６０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～５０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～４０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～３０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１６０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、又は５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）の用量で投与される。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、単独で又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と共に、１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１００００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～６０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～５０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～４０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～３０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、又は１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～１６０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）の用量で投与される。

【0171】

同様に、特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、約０．０１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）（すなわち、ＩＵ／ｋｇ（体重））～約１０，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）の総ＡＤＡＭＴＳ１３の用量で投与される。他の実施形態では、用量は、約１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～約１０，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、又は約２０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～約８，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、又は約３０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～約６，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、又は約４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～約４，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、又は約５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～約３，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、又は約７５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～約２，５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、又は約１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～約２，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、又は約２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～約１，５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、又はおよそこれらの中の他の範囲の総ＡＤＡＭＴＳ１３であってよい。特定の実施形態では、用量は、約１５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～約６００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）であってよい。特定の実施形態では、用量は、約１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）～約１，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）の総ＡＤＡＭＴＳ１３であってよい。特定の実施形態では、用量は、約０．０１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、又は約０．０２ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．０３ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．０４ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．０５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．０６ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．０７ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．０８ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．０９ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．２ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．３ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．４ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．６ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．７ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．８ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．９ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、６ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、７ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、８ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、９ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、６０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、７０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、８０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、９０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１６０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、６００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、７００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、８００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、９００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１，１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１，２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１，３００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１，４００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１，５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１，６００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１，７００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１，８００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１，９００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２，１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２，２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２，３００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２，４００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２，５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２，６００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２，７００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２，８００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２，９００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３，１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３，２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３，３００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３，４００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３，５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３，６００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３，７００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３，８００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３，９００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４，１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４，２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４，３００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４，４００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４，５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４，６００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４，７００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４，８００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４，９００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５，１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５，２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５，３００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５，４００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５，５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５，６００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５，７００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５，８００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５，９００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、６，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、６，１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、６，２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、６，３００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、６，４００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、６，５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、６，６００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、６，７００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、６，８００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、６，９００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、７，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、７，１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、７，２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、７，３００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、７，４００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、７，５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、７，６００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、７，７００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、７，８００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、７，９００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、８，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、８，１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、８，２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、８，３００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、８，４００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、８，５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、８，６００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、８，７００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、８，８００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、８，９００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、９，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、９，１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、９，２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、９，３００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、９，４００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、９，５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、９，６００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、９，７００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、９，８００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、９，９００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１０，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、若しくはそれ以上であってよい。

【0172】

他の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、単独で又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と共に（すなわち、総ＡＤＡＭＴＳ１３）、約０．１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．２ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．３ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．４ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．６ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．７ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．８ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、０．９ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、６ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、７ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、８ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、９ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、６０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、７０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、８０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、９０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４５０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、６００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、７００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、８００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、９００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１，１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１，２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１，３００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１，４００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１，５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１，６００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１，７００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１，８００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、１，９００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２，１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２，２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２，３００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２，４００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２，５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２，６００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２，７００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２，８００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２，９００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３，１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３，２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３，３００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３，４００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３，５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３，６００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３，７００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３，８００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、３，９００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４，１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４，２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４，３００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４，４００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４，５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４，６００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４，７００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４，８００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４，９００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５，１００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５，２００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５，３００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５，４００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５，５００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５，６００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５，７００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５，８００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、５，９００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、若しくは６，０００ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、又はその中間の濃度若しくは濃度範囲で投与される。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、単独で又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と共に（すなわち、総ＡＤＡＭＴＳ１３）、約１０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、２０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、４０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、８０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）、又は１６０ＵＦＶ７３／ｋｇ（体重）で投与される。

【0173】

特定の実施形態では、本開示は、疾患又は病態の治療又は予防をする方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に提供される組成物のいずれか１つに係る組成物を投与することを含む方法を提供する。

【0174】

幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、配列番号２に記載のアミノ酸配列、又はＲ^９７を依然として維持しながら配列番号２と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそのバリアントを含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントをコードしているヌクレオチド配列は、配列番号２のアミノ酸配列、又はＲ^９７を依然として維持しながら配列番号２と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそのバリアントをコードしているヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、配列番号２に記載のアミノ酸配列から本質的になる。

【0175】

幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、配列番号１に記載のアミノ酸配列、又は配列番号１と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質をコードしているヌクレオチド配列は、配列番号１のアミノ酸配列、又は配列番号２と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列をコードしているヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、配列番号１に記載のアミノ酸配列から本質的になる。

【0176】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、その組成物は、疾患又は病態の治療又は予防をするために対象に投与される。例えば、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、疾患又は病態の治療又は予防をするのに有効な総ＡＤＡＭＴＳ１３の循環レベルを維持するために、単回ボーラス注射又は複数回投与で投与される。このような態様では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物、又はＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、その組成物は、毎月、２週間ごとに、毎週、週２回、隔日、毎日、１２時間毎に、８時間毎に、６時間毎に、４時間毎に、２時間毎に、又は毎時間投与される。特定の態様では、注射は、皮下投与される。他の態様では、注射は、静脈内投与される。

【0177】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、その組成物は、疾患又は病態の発見時に直ちに、例えば、５分間以内、１０分間以内、１５分間以内、２０分間以内、２５分間以内、３０分間以内、３５分間以内、４０分間以内、４５分間以内、５０分間以内、５５分間以内、６０分間以内、９０分間以内、１１０分間以内、１２０分間以内、３時間以内、４時間以内、５時間以内、６時間以内、７時間以内、８時間以内、９時間以内、１０時間以内、１１時間以内、１２時間以内、１３時間以内、１４時間以内、１５時間以内、１６時間以内、１７時間以内、１８時間以内、１９時間以内、２０時間以内、２１時間以内、２２時間以内、２３時間以内、２４時間以内、２５時間以内、若しくはそれ以上の時間以内、又はそれらの任意の組み合わせで投与される。

【0178】

特定の実施形態では、皮下投与後のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質のバイオアベイラビリティは、同じ用量で正規化した静脈内投与と比較して少なくとも約４０％、又は少なくとも約４５％、又は少なくとも約５０％、又は少なくとも約５１％、又は少なくとも約５２％、又は少なくとも約５３％、又は少なくとも約５４％、又は少なくとも約５５％、又は少なくとも約５６％、又は少なくとも約５７％、又は少なくとも約５８％、又は少なくとも約５９％、又は少なくとも約６０％、又は少なくとも約６１％、又は少なくとも約６２％、又は少なくとも約６３％、又は少なくとも約６４％、又は少なくとも約６５％、又は少なくとも約６６％、又は少なくとも約６７％、又は少なくとも約６８％、又は少なくとも約６９％、又は少なくとも約７０％、又は少なくとも約７１％、又は少なくとも約７２％、又は少なくとも約７３％、又は少なくとも約７４％、又は少なくとも約７５％、又は少なくとも約７６％、又は少なくとも約７７％、又は少なくとも約７８％、又は少なくとも約７９％、又は少なくとも約８０％、又は少なくとも約８１％、又は少なくとも約８２％、又は少なくとも約８３％、又は少なくとも約８４％、又は少なくとも約８５％である。

【0179】

特定の実施形態では、皮下投与後のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質のバイオアベイラビリティは、同じ用量で正規化した静脈内投与と比較して約３０％と約９０％又は約８０％又は約５０％との間である。特定の実施形態では、皮下投与後のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質のバイオアベイラビリティは、同じ用量で正規化した静脈内投与と比較して約６０％～約８０％である。特定の実施形態では、皮下投与後のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質のバイオアベイラビリティは、同じ用量で正規化した静脈内投与と比較して約５０％～約７０％である。特定の実施形態では、皮下投与後のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質のバイオアベイラビリティは、同じ用量で正規化した静脈内投与と比較して約５５％～約７０％である。特定の実施形態では、皮下投与後のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質のバイオアベイラビリティは、同じ用量で正規化した静脈内投与と比較して約５５％～約６５％である。特定の実施形態では、皮下投与後のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質のバイオアベイラビリティは、同じ用量で正規化した静脈内投与と比較して約６５％である。

【0180】

特定の実施形態では、皮下投与後のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質のバイオアベイラビリティは、同じ用量で正規化した静脈内投与と比較して約６５％である。従って、特定の実施形態では、治療的に有効な量の総ＡＤＡＭＴＳ１３が静脈内投与を介して少なくとも２０～１６０国際単位／キログラム（ＩＵ／ｋｇ）（体重）を含み、バイオアベイラビリティが６５％である場合、±１５％のばらつきを適用すると、バイオアベイラビリティは４０～８０％となり、皮下投与されるとき２５～４００国際単位の範囲になる。

【0181】

特定の実施形態では、本開示は、血栓の形成及び／又は存在を伴う疾患又は病態の治療又は予防をする方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に提供される組成物のいずれか１つに係る組成物を投与することを含む方法を提供する。

【0182】

特定の実施形態では、本開示は、これらに限定されるものではないが例として、対象における凝血障害（例えば、遺伝性ＴＴＰ、後天性ＴＴＰ、梗塞、脳梗塞、心筋梗塞、虚血／再灌流傷害、深部静脈血栓症（ＤＶＴ）、敗血症関連播種性血管内凝固（ＤＩＣ））、出血エピソード（例えば、遺伝性ＴＴＰ、後天性ＴＴＰ、梗塞、心筋梗塞、脳梗塞、虚血再灌流傷害に関連に関連）、心筋梗塞、脳梗塞、深部静脈血栓症、虚血／再灌流障害、ＤＩＣ、鎌状赤血球症、血管閉塞クリーゼ、急性肺傷害、急性呼吸促迫症候群、肝疾患（例えば、肝不全、門脈血栓、及びバッド・キアリ症候群）、腎疾患（例えば、溶血性尿毒症症候群、及び腎静脈血栓）、臓器移植拒絶の治療又は予防をする方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、その組成物を投与することを含む方法を提供する。

【0183】

特定の実施形態では、本開示は、対象における凝血障害の治療又は予防をする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、その組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。本明細書に提供される方法の特定の実施形態では、凝血障害としては、遺伝性ＴＴＰ、後天性ＴＴＰ、梗塞、脳梗塞、心筋梗塞、虚血／再灌流障害、深部静脈血栓（ＤＶＴ）、及び敗血症関連播種性血管内凝固（ＤＩＣ）が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に提供される方法の一実施態様では、凝固障害は、遺伝性ＴＴＰである。本明細書に提供される方法の一実施態様では、凝固障害は、後天性ＴＴＰである。

【0184】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、その組成物は、凝血障害を治療又は予防するために対象に投与される。例えば、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、凝血障害を治療又は予防するのに有効な総ＡＤＡＭＴＳ１３の循環レベルを維持するために、単回ボーラス注射又は複数回投与で投与される。このような態様では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物、又はＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、その組成物は、毎月、２週間ごとに、毎週、週２回、隔日、毎日、１２時間毎に、８時間毎に、６時間毎に、４時間毎に、２時間毎に、又は毎時間投与される。特定の態様では、注射は、皮下投与される。他の態様では、注射は、静脈内投与される。

【0185】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、その組成物は、凝血障害の発見時に直ちに、例えば、５分間以内、１０分間以内、１５分間以内、２０分間以内、２５分間以内、３０分間以内、３５分間以内、４０分間以内、４５分間以内、５０分間以内、５５分間以内、６０分間以内、９０分間以内、１１０分間以内、１２０分間以内、３時間以内、４時間以内、５時間以内、６時間以内、７時間以内、８時間以内、９時間以内、１０時間以内、１１時間以内、１２時間以内、１３時間以内、１４時間以内、１５時間以内、１６時間以内、１７時間以内、１８時間以内、１９時間以内、２０時間以内、２１時間以内、２２時間以内、２３時間以内、２４時間以内、２５時間以内、若しくはそれ以上の時間以内、又はそれらの任意の組み合わせで投与される。

【0186】

一態様では、本開示は、対象における出血エピソードの治療をする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、その組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。特定の実施形態では、出血エピソードは、遺伝性ＴＴＰ、後天性ＴＴＰ、梗塞、心筋梗塞、脳梗塞、及び／又は虚血再灌流傷害と関連している。

【0187】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、その組成物は、出血エピソードを治療又は予防するために対象に投与される。例えば、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、出血エピソードを治療又は予防するのに有効な総ＡＤＡＭＴＳ１３の循環レベルを維持するために、単回ボーラス注射又は複数回投与で投与される。このような態様では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物、又はＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、その組成物は、毎月、２週間ごとに、毎週、週２回、隔日、毎日、１２時間毎に、８時間毎に、６時間毎に、４時間毎に、２時間毎に、又は毎時間投与される。特定の態様では、注射は、皮下投与される。他の態様では、注射は、静脈内投与される。

【0188】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、その組成物は、出血エピソードの発見時に直ちに、例えば、５分間以内、１０分間以内、１５分間以内、２０分間以内、２５分間以内、３０分間以内、３５分間以内、４０分間以内、４５分間以内、５０分間以内、５５分間以内、６０分間以内、９０分間以内、１１０分間以内、１２０分間以内、３時間以内、４時間以内、５時間以内、６時間以内、７時間以内、８時間以内、９時間以内、１０時間以内、１１時間以内、１２時間以内、１３時間以内、１４時間以内、１５時間以内、１６時間以内、１７時間以内、１８時間以内、１９時間以内、２０時間以内、２１時間以内、２２時間以内、２３時間以内、２４時間以内、２５時間以内、若しくはそれ以上の時間以内、又はそれらの任意の組み合わせで投与される。

【0189】

特定の実施形態では、本開示は、遺伝性ＴＴＰの治療又は予防をする方法を提供する。遺伝性ＴＴＰは、ＡＤＡＭＴＳ１３遺伝子の遺伝子変異が原因である。遺伝性ＴＴＰは、神経学的徴候（例えば、精神状態、脳卒中、発作、片麻痺、知覚異常、視覚障害、及び失語症）、疲労、及び重度の出血を引き起こす場合がある。後天性ＴＴＰは、治療せずに放置すると、死亡の原因となったり、持続的な生理学的損傷を引き起こしたりする場合がある。更に、遺伝性ＴＴＰは遺伝子変異が原因であるので、生涯にわたって治療が必要であり、患者の服薬遵守の必要がある。

【0190】

一実施形態では、本開示は、遺伝性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約１～約４０００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0191】

一実施形態では、本開示は、遺伝性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約５～約４０００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0192】

一実施形態では、本開示は、遺伝性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約２０～約４０００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、２０ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0193】

一実施形態では、本開示は、遺伝性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約２０～約２０００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0194】

一実施形態では、本開示は、遺伝性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約２０～約１０００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、２０ＩＵ／ｋｇ～約１０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0195】

一実施形態では、本開示は、遺伝性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約５～約５００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、５ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0196】

一実施形態では、本開示は、遺伝性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約１０～約１５００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約１，５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約１，５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約１，５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約１，５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約１，５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約１，５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約１，５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0197】

一実施形態では、本開示は、遺伝性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約２０～約５００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0198】

一実施形態では、本開示は、遺伝性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約２０～約２００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、２０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0199】

一実施形態では、本開示は、遺伝性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約２０～約１００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、２０ＩＵ／ｋｇ～約１００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0200】

一実施形態では、本開示は、遺伝性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約４０～約２００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、４０ＩＵ／ｋｇ～約２００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0201】

一実施形態では、本開示は、遺伝性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約１０～約１６０単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0202】

一実施形態では、本開示は、遺伝性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約２０～約１６０単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約２０～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約２０～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、総ＡＤＡＭＴＳ１３は、約２０ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ、約７０ＩＵ／ｋｇ、約７５ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ、約９０ＩＵ／ｋｇ、約１００ＩＵ／ｋｇ、約１００ＩＵ／ｋｇ、約１２０ＩＵ／ｋｇ、約１２５ＩＵ／ｋｇ、約１３０ＩＵ／ｋｇ、約１４０ＩＵ／ｋｇ、約１５０ＩＵ／ｋｇ、約１６０ＩＵ／ｋｇである。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0203】

一実施形態では、本開示は、遺伝性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約２０～約４０単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約２０～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約２０～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約２０～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約２０～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、総ＡＤＡＭＴＳ１３は、約２０ＩＵ／ｋｇ、約２１ＩＵ／ｋｇ、約２２ＩＵ／ｋｇ、約２３ＩＵ／ｋｇ、約２４ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ、約２６ＩＵ／ｋｇ、約２７ＩＵ／ｋｇ、約２８ＩＵ／ｋｇ、約２９ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ、約３１ＩＵ／ｋｇ、約３２ＩＵ／ｋｇ、約３３ＩＵ／ｋｇ、約３４ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ、約３６ＩＵ／ｋｇ、約３７ＩＵ／ｋｇ、約３８ＩＵ／ｋｇ、約３９ＩＵ／ｋｇ、又は約４０ＩＵ／ｋｇである。特定の実施形態では、総ＡＤＡＭＴＳ１３は、約２０ＩＵ／ｋｇ又は約４０ＩＵ／ｋｇである。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0204】

特定の実施形態では、本開示は、遺伝性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約４０単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。特定の実施形態では、処置レジメンは、遺伝性ＴＴＰの治療的又は予防的な処置のためのものである。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0205】

特定の実施形態では、本開示は、遺伝性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約２０～約４０単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、処置レジメンは、急性遺伝性ＴＴＰを治療するためのものである。特定の実施形態では、処置は、１日目に約２０ＩＵ／ｋｇ、約２１ＩＵ／ｋｇ、約２２ＩＵ／ｋｇ、約２３ＩＵ／ｋｇ、約２４ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ、約２６ＩＵ／ｋｇ、約２７ＩＵ／ｋｇ、約２８ＩＵ／ｋｇ、約２９ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ、約３１ＩＵ／ｋｇ、約３２ＩＵ／ｋｇ、約３３ＩＵ／ｋｇ、約３４ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ、約３６ＩＵ／ｋｇ、約３７ＩＵ／ｋｇ、約３８ＩＵ／ｋｇ、約３９ＩＵ／ｋｇ、又は約４０ＩＵ／ｋｇの初回負荷量で始める。特定の実施形態では、初回負荷量に続いて、イベントが回復するまで又はイベントの回復の１日若しくは２日後まで毎日約２０ＩＵ／ｋｇ、約２１ＩＵ／ｋｇ、約２２ＩＵ／ｋｇ、約２３ＩＵ／ｋｇ、約２４ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ、約２６ＩＵ／ｋｇ、約２７ＩＵ／ｋｇ、約２８ＩＵ／ｋｇ、約２９ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ、約３１ＩＵ／ｋｇ、約３２ＩＵ／ｋｇ、約３３ＩＵ／ｋｇ、約３４ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ、約３６ＩＵ／ｋｇ、約３７ＩＵ／ｋｇ、約３８ＩＵ／ｋｇ、約３９ＩＵ／ｋｇ、又は約４０ＩＵ／ｋｇの用量を投与する。特定の実施形態では、初回負荷量に続いて、イベントが回復するまで又はイベントの回復の１日若しくは２日後まで毎日約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０ＩＵ／ｋｇを投与する。特定の実施形態では、初回負荷量は、１日目に約２０ＩＵ／ｋｇ又は約４０ＩＵ／ｋｇであり、続いて、イベントが回復するまで又はイベントの回復の１日若しくは２日後まで毎日約２０ＩＵ／ｋｇ、約２１ＩＵ／ｋｇ、約２２ＩＵ／ｋｇ、約２３ＩＵ／ｋｇ、約２４ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ、約２６ＩＵ／ｋｇ、約２７ＩＵ／ｋｇ、約２８ＩＵ／ｋｇ、約２９ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ、約３１ＩＵ／ｋｇ、約３２ＩＵ／ｋｇ、約３３ＩＵ／ｋｇ、約３４ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ、約３６ＩＵ／ｋｇ、約３７ＩＵ／ｋｇ、約３８ＩＵ／ｋｇ、約３９ＩＵ／ｋｇ、又は約４０ＩＵ／ｋｇの用量を投与する。特定の実施形態では、急性遺伝性ＴＴＰの処置は、１日目の約４０ＩＵ／ｋｇの初回負荷量で始めて、続いて、イベントが回復するまで又はイベントの回復の１日若しくは２日後まで毎日約２０ＩＵ／ｋｇ、約２１ＩＵ／ｋｇ、約２２ＩＵ／ｋｇ、約２３ＩＵ／ｋｇ、約２４ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ、約２６ＩＵ／ｋｇ、約２７ＩＵ／ｋｇ、約２８ＩＵ／ｋｇ、約２９ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ、約３１ＩＵ／ｋｇ、約３２ＩＵ／ｋｇ、約３３ＩＵ／ｋｇ、約３４ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ、約３６ＩＵ／ｋｇ、約３７ＩＵ／ｋｇ、約３８ＩＵ／ｋｇ、約３９ＩＵ／ｋｇ、又は約４０ＩＵ／ｋｇの用量を投与する。特定の実施形態では、急性遺伝性ＴＴＰの処置は、１日目に約４０ＩＵ／ｋｇの初回負荷量で始めて、続いて、イベントが回復するまで毎日約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０ＩＵ／ｋｇの用量を投与する。特定の実施形態では、急性遺伝性ＴＴＰの処置は、１日目に約４０ＩＵ／ｋｇの初回負荷量で始めて、続いて、イベントの回復の１日後まで毎日約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０ＩＵ／ｋｇの用量を投与する。特定の実施形態では、急性遺伝性ＴＴＰの処置は、１日目に約４０ＩＵ／ｋｇの初回負荷量で始めて、続いて、イベントの回復の２日後まで毎日約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０ＩＵ／ｋｇの用量を投与する。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。特定の実施形態では、本開示は、後天性ＴＴＰの治療又は予防をする方法を提供する。後天性ＴＴＰでは、ＡＤＡＭＴＳ１３に対する自己免疫抗体の発現により、患者は低いＡＤＡＭＴＳ１３活性を有する。免疫複合体化されたＡＤＡＭＴＳ１３は、不活化される、中和される、並びに／又は血流及び患者血漿から排除される。ＡＤＡＭＴＳ１３の活性が低下すると、血小板に自然に粘着することができる大きな未切断のＶＷＦ多量体が蓄積し、微小循環における血小板－ＶＷＦリッチな血栓が引き起こされる。遺伝性ＴＴＰと同様に、後天性ＴＴＰは、神経学的徴候（例えば、精神状態、脳卒中、発作、片麻痺、知覚異常、視覚障害、及び失語症）、疲労、及び重度の出血を引き起こす場合もある。後天性ＴＴＰは、治療せずに放置すると、死亡の原因となったり、持続的な生理学的損傷を引き起こしたりする場合がある。

【0206】

一実施形態では、本開示は、後天性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約１～約４０００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0207】

一実施形態では、本開示は、後天性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約５～約４０００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0208】

一実施形態では、本開示は、後天性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約１０～約１５００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約１，５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約１，５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約１，５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約１，５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約１，５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約１，５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約１，５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0209】

一実施形態では、本開示は、後天性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約２０～約１６０単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約２０～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約２０～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、総ＡＤＡＭＴＳ１３は、約２０ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ、約７０ＩＵ／ｋｇ、約７５ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ、約９０ＩＵ／ｋｇ、約１００ＩＵ／ｋｇ、約１００ＩＵ／ｋｇ、約１２０ＩＵ／ｋｇ、約１２５ＩＵ／ｋｇ、約１３０ＩＵ／ｋｇ、約１４０ＩＵ／ｋｇ、約１５０ＩＵ／ｋｇ、約１６０ＩＵ／ｋｇである。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0210】

一実施形態では、本開示は、後天性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約２０～約８０単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約８０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約２０～約８０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約８０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約８０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約２０～約８０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０～約８０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０～約８０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、総ＡＤＡＭＴＳ１３は、約２０ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ、約７０ＩＵ／ｋｇ、約７５ＩＵ／ｋｇ、又は約８０ＩＵ／ｋｇである。特定の実施形態では、用量は、同日に２回投与される分割用量である。例えば、用量が８０ＩＵ／ｋｇである場合、４０ＩＵ／ｋｇを同日に２回投与することになる。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0211】

一実施形態では、本開示は、後天性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約２０～約４０単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約２０～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約２０～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約２０～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約２０～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、総ＡＤＡＭＴＳ１３は、約２０ＩＵ／ｋｇ、約２１ＩＵ／ｋｇ、約２２ＩＵ／ｋｇ、約２３ＩＵ／ｋｇ、約２４ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ、約２６ＩＵ／ｋｇ、約２７ＩＵ／ｋｇ、約２８ＩＵ／ｋｇ、約２９ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ、約３１ＩＵ／ｋｇ、約３２ＩＵ／ｋｇ、約３３ＩＵ／ｋｇ、約３４ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ、約３６ＩＵ／ｋｇ、約３７ＩＵ／ｋｇ、約３８ＩＵ／ｋｇ、約３９ＩＵ／ｋｇ、又は約４０ＩＵ／ｋｇである。特定の実施形態では、総ＡＤＡＭＴＳ１３は、約２０ＩＵ／ｋｇ又は約４０ＩＵ／ｋｇである。特定の実施形態では、総ＡＤＡＭＴＳ１３は、約２０ＩＵ／ｋｇである。特定の実施形態では、総ＡＤＡＭＴＳ１３は、約４０ＩＵ／ｋｇである。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0212】

特定の実施形態では、本開示は、後天性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約２０～約４０単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、処置レジメンは、後天性ＴＴＰを治療するためのものである。特定の実施形態では、処置は、約２０ＩＵ／ｋｇ、約２１ＩＵ／ｋｇ、約２２ＩＵ／ｋｇ、約２３ＩＵ／ｋｇ、約２４ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ、約２６ＩＵ／ｋｇ、約２７ＩＵ／ｋｇ、約２８ＩＵ／ｋｇ、約２９ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ、約３１ＩＵ／ｋｇ、約３２ＩＵ／ｋｇ、約３３ＩＵ／ｋｇ、約３４ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ、約３６ＩＵ／ｋｇ、約３７ＩＵ／ｋｇ、約３８ＩＵ／ｋｇ、約３９ＩＵ／ｋｇ、又は約４０ＩＵ／ｋｇの初回負荷量で始める。特定の実施形態では、初回負荷量に続いて、毎日約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０ＩＵ／ｋｇ、あるいはイベントが回復するまで又はイベントの回復の１日若しくは２日後まで毎日又はＢＩＤで、約２０ＩＵ／ｋｇ～約８０ＩＵ／ｋｇを投与する。特定の実施形態では、初回負荷量は、１日目に約２０ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ、又は約８０ＩＵ／ｋｇであり、続いて、イベントが回復するまで又はイベントの回復の１日若しくは２日後まで毎日又はＢＩＤで、約２０ＩＵ／ｋｇ、約２１ＩＵ／ｋｇ、約２２ＩＵ／ｋｇ、約２３ＩＵ／ｋｇ、約２４ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ、約２６ＩＵ／ｋｇ、約２７ＩＵ／ｋｇ、約２８ＩＵ／ｋｇ、約２９ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ、約３１ＩＵ／ｋｇ、約３２ＩＵ／ｋｇ、約３３ＩＵ／ｋｇ、約３４ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ、約３６ＩＵ／ｋｇ、約３７ＩＵ／ｋｇ、約３８ＩＵ／ｋｇ、約３９ＩＵ／ｋｇ、又は約４０ＩＵ／ｋｇの用量を投与する。特定の実施形態では、後天性ＴＴＰの処置は、１日目の約４０ＩＵ／ｋｇの初回負荷量で始めて、続いて、イベントが回復するまで又はイベントの回復の１日若しくは２日後まで毎日又はＢＩＤで、約２０ＩＵ／ｋｇ、約２１ＩＵ／ｋｇ、約２２ＩＵ／ｋｇ、約２３ＩＵ／ｋｇ、約２４ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ、約２６ＩＵ／ｋｇ、約２７ＩＵ／ｋｇ、約２８ＩＵ／ｋｇ、約２９ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ、約３１ＩＵ／ｋｇ、約３２ＩＵ／ｋｇ、約３３ＩＵ／ｋｇ、約３４ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ、約３６ＩＵ／ｋｇ、約３７ＩＵ／ｋｇ、約３８ＩＵ／ｋｇ、約３９ＩＵ／ｋｇ、又は約４０ＩＵ／ｋｇの用量を投与する。特定の実施形態では、後天性ＴＴＰの処置は、１日目に約４０ＩＵ／ｋｇの初回負荷量で始めて、続いて、イベントが回復するまで毎日又はＢＩＤで、約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０ＩＵ／ｋｇの用量を投与する。特定の実施形態では、後天性ＴＴＰの処置は、１日目に約４０ＩＵ／ｋｇの初回負荷量で始めて、続いて、イベントの回復の１日後まで毎日又はＢＩＤで、約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０ＩＵ／ｋｇの用量を投与する。特定の実施形態では、後天性ＴＴＰの処置は、１日目に約４０ＩＵ／ｋｇの初回負荷量で始めて、続いて、イベントの回復の２日後まで毎日又はＢＩＤで、約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０ＩＵ／ｋｇの用量を投与する。特定の実施形態では、後天性ＴＴＰの処置は、１日目に約４０ＩＵ／ｋｇの初回負荷量で始めて、続いて、イベントが回復するまで毎日又はＢＩＤで、約４０ＩＵ／ｋｇを投与する。特定の実施形態では、後天性ＴＴＰの処置は、１日目に約４０ＩＵ／ｋｇの初回負荷量で始めて、続いて、イベントの回復の１日後まで毎日又はＢＩＤで、約４０ＩＵ／ｋｇを投与する。特定の実施形態では、後天性ＴＴＰの処置は、１日目に約４０ＩＵ／ｋｇの初回負荷量で始めて、続いて、イベントの回復の２日後まで毎日又はＢＩＤで、約４０ＩＵ／ｋｇを投与する。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0213】

一実施形態では、本開示は、後天性ＴＴＰの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、緩解したら、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約２０～約４０単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約２０～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約２０～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約２０～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約２０～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約２０～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０～約４０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、総ＡＤＡＭＴＳ１３は、約２０ＩＵ／ｋｇ、約２１ＩＵ／ｋｇ、約２２ＩＵ／ｋｇ、約２３ＩＵ／ｋｇ、約２４ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ、約２６ＩＵ／ｋｇ、約２７ＩＵ／ｋｇ、約２８ＩＵ／ｋｇ、約２９ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ、約３１ＩＵ／ｋｇ、約３２ＩＵ／ｋｇ、約３３ＩＵ／ｋｇ、約３４ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ、約３６ＩＵ／ｋｇ、約３７ＩＵ／ｋｇ、約３８ＩＵ／ｋｇ、約３９ＩＵ／ｋｇ、又は約４０ＩＵ／ｋｇである。特定の実施形態では、総ＡＤＡＭＴＳ１３は、約２０ＩＵ／ｋｇ又は約４０ＩＵ／ｋｇである。特定の実施形態では、総ＡＤＡＭＴＳ１３は、約２０ＩＵ／ｋｇである。特定の実施形態では、総ＡＤＡＭＴＳ１３は、約４０ＩＵ／ｋｇである。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0214】

特定の実施形態では、本開示は、心筋梗塞の治療又は予防をする方法を提供する。特定の実施形態では、本明細書に記載されるＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、その組成物は、虚血／再灌流傷害の治療及び予防のために使用される。再灌流とは、血液供給の低下により虚血状態にある組織への血液供給を回復させることである。再灌流とは、生存可能な虚血組織を回復させて、更なる壊死を制限することによって、梗塞（例えば、心筋梗塞及び脳梗塞）又は他の虚血を治療するための手技である。しかし、再灌流自体が虚血組織に更なる損傷を与え、再灌流傷害を引き起こすことがある。例えば、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）は、冠動脈の血栓性閉塞によって引き起こされる。血流が欠乏したときに起こる直接的な傷害に加えて、虚血／再灌流傷害は、再灌流から血流が回復した後に起こる組織傷害も含む。

【0215】

更に、ＡＤＡＭＴＳ１３が、虚血再灌流時の二次傷害を予防又は減少させる抗炎症効果を有することも報告されている。Ｄｅ Ｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．（“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＡＤＡＭＴＳ１３ ｏｎ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ ｍｉｃｅ，”Ｂｌｏｏｄ，２０１２，１２０（２６）：５２１７－５２２３、全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる）。Ｄｅ Ｍｅｙｅｒらによって記載されているように、ＶＷＦ及びＡＤＡＭＴＳ１３は、血小板粘着及び血栓形成に関与しているが、その理由は、ＡＤＡＭＴＳ１３がほとんどの血栓形成性ＶＷＦ多量体を切断して、より小さく、止血活性の低いＶＷＦ断片にするためである。Ｄｅ Ｍｅｙｅｒらは、炎症応答のダウンレギュレーションにおけるＡＤＡＭＴＳの役割についても述べている。また、ＡＤＡＭＴＳ１３は血栓症及び炎症（例えば、アテローム性動脈硬化症）を低減できることも示されている。Ｃｈａｕｈａｎ ｅｔ ａｌ．（“ＡＤＡＭＴＳ１３：ａ ｎｅｗ ｌｉｎｋ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，”Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．，２００８，２０５：２０６５－２０７４）；Ｃｈａｕｈａｎ ｅｔ ａｌ．（“Ｓｙｓｔｅｍｉｃ ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＡＤＡＭＴＳ１３，”Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．，２００６，２０３：７６７－７７６；Ｇａｎｄｈｉ ｅｔ ａｌ．（“ＡＤＡＭＴＳ１３ ｒｅｄｕｃｅｓ ｖａｓｃｕｌａｒ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｅａｒｌｙ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ｉｎ ｍｉｃｅ，”Ｂｌｏｏｄ，２０１２，１１９（１０）：２３８５－２３９１）、これらはそれぞれ、全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0216】

Ｄｅ Ｍｅｙｅｒらは、ＡＤＡＭＴＳ１３が、ＶＷＦを切断することにより、虚血心筋におけるＶＷＦを介した血小板及び白血球の過剰な動員を防ぐことを示唆している。この仮説に基づき、Ｄｅ Ｍｅｙｅｒらは、動物をＡＤＡＭＴＳ１３で処理した場合、心筋梗塞が誘発された動物の心筋における好中球浸潤が９倍少なくなることを示している。従って、Ｄｅ Ｍｅｙｅｒらは、ＡＤＡＭＴＳ１３が虚血心筋における炎症応答を低減することを示している。この炎症の軽減は、白血球の浸潤及び損傷を防ぐことにより、再灌流障害も軽減する。従って、本明細書に開示されるＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、及びＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、その組成物を使用して、梗塞（例えば、心筋梗塞及び脳梗塞）及び再灌流中に組織を損傷させる炎症応答を軽減し、炎症を回避することができる。

【0217】

特定の実施形態では、本開示は、脳梗塞の治療又は予防をする方法を提供する。脳梗塞は、一般に脳卒中と呼ばれ、脳の一部への血流が妨げられたときに発症する。脳梗塞は、例えば、脳に血液を供給する血管が血餅によって封鎖されたときに発症し得る。脳梗塞は、鈍器による外傷及び機械的傷害の結果である場合もある。これは、脳の動脈における血餅によって（血栓性脳卒中）又は身体の別の部分から脳に移動する血餅によって（塞栓性脳卒中）引き起こされ得る。従って、幾つかの実施形態では、本発明は、脳梗塞後の患者における感覚及び／又は運動の機能の回復を改善する（又は損傷を低減する）方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、その組成物を含む医薬組成物を個体に投与し、それによって、脳梗塞後の個体における感覚及び／又は運動の機能の回復を改善（又は損傷を低減）する工程を含む方法を提供する。

【0218】

特定の実施形態では、本開示は、深部静脈血栓症（ＤＶＴ）の治療又は予防をする方法を提供する。ＤＶＴは、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、その組成物を用いて、身体の深部の静脈に形成される血餅である。ほとんどの深部静脈血餅は下腿又は大腿に発生するが、全身に発生することもある。ＤＶＴは、血餅が破れ、血流に乗って（塞栓）、例えば心臓、肺、又は脳に移動する場合があるので、特に危険な疾患である。このような塞栓症は、臓器に損傷を与える場合もあり、死に至らしめることもある。従って、上記のように、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、及びＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、その組成物を使用して、ＤＶＴ及びその結果生じる塞栓症を治療することができる。

【0219】

特定の実施形態では、本開示は、播種性血管内凝固（ＤＩＣ）、具体的には、敗血症関連ＤＩＣの治療又は予防をする方法を提供する。ＤＩＣは、身体の微小血管の至る所に血餅が形成される病態である。これら血餅は、全身の血流を低減又は遮断し得るので、組織及び臓器に損傷を与える場合がある。凝固活性の増大の結果、微小血管に血餅が生じる。この活性の増大によって、利用可能な血小板及び凝固因子が過度に使用されて、血小板及び凝固因子の利用可能な供給源が枯渇することによって重篤な内出血及び外出血の確率が高くなる。従って、ＤＩＣの患者は、血餅及び重症の出血障害に罹患することが多い。

【0220】

敗血症、手術／外傷、がん、出産／妊娠の合併症、毒蛇咬傷（ガラガラヘビ及びクサリヘビ）、凍傷、及び熱傷等特定の疾患では、凝固因子の活性が過剰になる場合があり、ＤＩＣが引き起こされる場合がある。また、ＤＩＣは、急性（数時間又は数日にわたって急速に発症する）である場合も、慢性（数週間又は数ヶ月にわたって発症する）である場合もある。いずれのタイプのＤＩＣにも医学的処置が必要であるが、急速に重度の出血を引き起こす微小血管における過剰の凝血を防ぐために、急性ＤＩＣは迅速に治療しなければならない。

【0221】

一実施形態では、本開示は、凝血障害（例えば、心筋梗塞、脳梗塞、虚血再灌流傷害、ＤＶＴ、又はＤＩＣ等であるが、これらに限定されない）の治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約１～約４０００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、用量は、治療及び／又は予防のために投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0222】

一実施形態では、本開示は、凝血障害（例えば、心筋梗塞、脳梗塞、虚血再灌流傷害、ＤＶＴ、又はＤＩＣ等であるが、これらに限定されない）の治療及び／又は炎症イベント／応答の低減を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約５～約４０００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、用量は、治療及び／又は予防のために投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0223】

一実施形態では、本開示は、凝血障害（例えば、心筋梗塞、脳梗塞、虚血再灌流傷害、ＤＶＴ、又はＤＩＣ等であるが、これらに限定されない）の治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約１０～約２０００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約２，０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約２，０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約２，０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約２，０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約２，０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約２，０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約１０ＩＵ／ｋｇ～約２，０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、用量は、治療及び／又は予防のために投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0224】

一実施形態では、本開示は、凝血障害（例えば、心筋梗塞、脳梗塞、虚血再灌流傷害、ＤＶＴ、又はＤＩＣ等であるが、これらに限定されない）の治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約２０～約１５００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１，５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１，５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１，５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１，５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１，５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１，５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１，５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、総ＡＤＡＭＴＳ１３は、約２０ＩＵ／ｋｇ、約２１ＩＵ／ｋｇ、約２２ＩＵ／ｋｇ、約２３ＩＵ／ｋｇ、約２４ＩＵ／ｋｇ、約２５ＩＵ／ｋｇ、約２６ＩＵ／ｋｇ、約２７ＩＵ／ｋｇ、約２８ＩＵ／ｋｇ、約２９ＩＵ／ｋｇ、約３０ＩＵ／ｋｇ、約３１ＩＵ／ｋｇ、約３２ＩＵ／ｋｇ、約３３ＩＵ／ｋｇ、約３４ＩＵ／ｋｇ、約３５ＩＵ／ｋｇ、約３６ＩＵ／ｋｇ、約３７ＩＵ／ｋｇ、約３８ＩＵ／ｋｇ、約３９ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ、約４５ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ、約ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ、約７０ＩＵ／ｋｇ、約７５ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ、約９０ＩＵ／ｋｇ、約１００ＩＵ／ｋｇ、約１１０ＩＵ／ｋｇ、約１２０ＩＵ／ｋｇ、約１２５ＩＵ／ｋｇ、約１３０ＩＵ／ｋｇ、約１４０ＩＵ／ｋｇ、約１５０ＩＵ／ｋｇ、約１６０ＩＵ／ｋｇ、約１７０ＩＵ／ｋｇ、約１７５ＩＵ／ｋｇ、約１８０ＩＵ／ｋｇ、約１９０ＩＵ／ｋｇ、約２００ＩＵ／ｋｇ、約２２５ＩＵ／ｋｇ、約２５０ＩＵ／ｋｇ、約２７５ＩＵ／ｋｇ、約３００ＩＵ／ｋｇ、約３５０ＩＵ／ｋｇ、約４００ＩＵ／ｋｇ、約４５０ＩＵ／ｋｇ、約５００ＩＵ／ｋｇ、約５５０ＩＵ／ｋｇ、約６００ＩＵ／ｋｇ、約６５０ＩＵ／ｋｇ、約７００ＩＵ／ｋｇ、約７５０ＩＵ／ｋｇ、約８００ＩＵ／ｋｇ、約８５０ＩＵ／ｋｇ、約９００ＩＵ／ｋｇ、約９５０ＩＵ／ｋｇ、約１０００ＩＵ／ｋｇ、約１１５０ＩＵ／ｋｇ、約１２００ＩＵ／ｋｇ、約１２５０ＩＵ／ｋｇ、約１３００ＩＵ／ｋｇ、約１３５０ＩＵ／ｋｇ、約１４００ＩＵ／ｋｇ、約１４５０ＩＵ／ｋｇ、又は約１５００ＩＵ／ｋｇである。特定の実施形態では、用量は、治療及び／又は予防のために投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0225】

特定の実施形態では、本開示は、全ての目的のために全体が本明細書に組み込まれる国際公開第２０１８０２７１６９号に記載されているように、鎌状赤血球病（ＳＣＤ）における血管閉塞クリーゼ（ＶＯＣ）の治療又は予防をする方法を提供する。ＳＣＤは、病的なＨｂＳの合成及び低酸素条件における異常なＨｂＳの重合を引き起こすβグロビン遺伝子における点変異によって引き起こされる、世界中に広がる遺伝性赤血球障害である。ＳＣＤの２つの主な臨床徴候は、慢性溶血性貧血及び急性ＶＯＣであり、これらはＳＣＤ患者の入院の主な原因である。最近の研究によって、鎌状赤血球に関連する急性イベント及び慢性臓器合併症の発生における鎌状血管症の中心的な役割が理解された（それぞれが全ての目的のために参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｐａｒｋｅｎｂａｕｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１６２：３－１４，２０１３；Ｄｅ Ｆｒａｎｃｅｓｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｍｉｎ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈｅｍｏｓｔ．２２６－３６，２０１１；及びＨｅｂｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｄｉｓｏｒｄ．Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ，９：２７１－９２，２００９）。これら合併症の病態生理は、ＶＯＣ、血流障害、血管炎症、及び／又は虚血性細胞損傷を伴う血栓症を引き起こす、毛細血管及び微小血管における血管内鎌状赤血球化に基づいている。

【0226】

ＳＣＤの最も一般的な臨床徴候は、ＶＯＣである。ＶＯＣは、鎌状赤血球によって微小循環が閉塞したときに発症し、供給される臓器に対する虚血傷害を引き起こし、その結果疼痛が生じる。疼痛クリーゼは、ＳＣＤの最も際立った臨床的特徴を構成し、ＳＣＤに罹患している対象又は患者における救急外来受診及び入院の主な原因である。

【0227】

ホモ接合型ＨｂＳ疾患を有するＳＣＤの対象又は患者の約半数がＶＯＣを経験する。クリーゼの頻度は極めて可変的である。一部のＳＣＤの対象又は患者は、年間６回以上もエピソードを有するが、長い間隔でしかエピソードを有しない対象又は患者や、全くエピソードを有しない対象又は患者もいる。各対象又は患者には、典型的には、クリーゼの頻度に関して一貫したパターンを有する。

【0228】

本開示は、ＶＯＣに関連する虚血及び疼痛（例えば、指炎、持続勃起症、腹部、胸部、及び関節）、黄疸、骨梗塞、呼吸異常（例えば、頻呼吸及び息切れ）、低酸素、アシドーシス、低血圧、及び／又は頻脈を含むがこれらに限定されないＶＯＣの少なくとも１つの症状を低減する方法を含む。特定の態様では、ＶＯＣは、これら症状のうちの１つ以上を含む状態として定義することができる。疼痛クリーゼは突然始まる。クリーゼは数時間から数日続き、始まった時と同様に突然終わることもある。疼痛は身体の任意の部分にも影響を及ぼし得、腹部、付属器、胸部、背部、骨、関節、及び軟部組織等を侵すことが多く、指炎（小児における両手及び／又は両足の疼痛及び腫脹）、急性関節壊死若しくは乏血壊死、又は急性腹症等として現れ得る。脾臓でエピソードが繰り返し生じると、生命を脅かす感染症の素因となる梗塞及び自己脾臓摘出が通常である。また、肝臓も梗塞を起こし、経時的に不全に進行することがある。乳頭壊死は、ＶＯＣの一般的な腎徴候であり、等張尿症（すなわち、尿を濃縮することができない）を引き起こす。

【0229】

重度の深部痛は、長骨を含む四肢に存在する。腹痛は、急性腹症に似て重度になり得、他の部位からの関連痛又は腹腔内の固形臓器若しくは軟部組織の梗塞に起因することがある。反応性イレウスは、腸の膨満及び疼痛を引き起こす。また、顔面が侵されることもある。疼痛は、発熱、倦怠感、呼吸困難、勃起痛、黄疸、及び白血球増多を伴うこともある。骨痛は、多くの場合、骨髄梗塞が原因である。疼痛は骨髄の活動性が最も高い骨で生じる傾向があり、骨髄の活動性は年齢と共に変化するので、特定のパターンが予測可能である。生後１８ヶ月の間に、中足骨及び中手骨が侵され、指炎又は手足症候群を呈する場合がある。上記のパターンは、一般的に遭遇する症状について説明しているが、血液供給及び感覚神経のある対象の身体のいずれの部位もＶＯＣに罹患する可能性がある。

【0230】

多くの場合、何がＶＯＣを引き起こすのかについて増悪原因を同定することはできない。しかし、脱酸素化したＨｂＳは半固形化するので、ＶＯＣの最も可能性の高い生理学的トリガーは低酸素血症である。これは、急性胸部症候群に起因したり、呼吸合併症を伴ったりする場合がある。また、アシドーシスにより酸素解離曲線がシフトし（ボーア効果）、ヘモグロビンがより容易に脱飽和するようになるので、脱水も疼痛を増悪させる可能性がある。また、血液濃縮も一般的な機序である。また、発熱による上昇であろうと環境温度の変化による低下であろうと、体温の変化はＶＯＣの別の一般的なトリガーである。体温の低下は、末梢血管収縮の結果、クリーゼを引き起こす可能性が高い。

【0231】

特定の実施形態では、ＶＯＣは、対照と比較して末梢好中球が増加していることと定義することができる。特定の実施形態では、ＶＯＣは、対照と比較したときの肺血管漏出（例えば、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）中の白血球数及び／又はタンパク質含有量（ＢＡＬタンパク質（ｍｇ／ｍＬ））の増加として定義することができる。

【0232】

特定の実施形態では、対照と比較したときの臓器における血管活性化のレベルの上昇（例えば、ＶＣＡＭ－１及び／又はＩＣＡＭ－１の発現、レベル、及び／又は活性の増加によって測定）が、ＶＯＣのマーカーである。特定の実施形態では、対照と比較したときの臓器における炎症性血管障害のレベルの上昇が、ＶＯＣのマーカーである。特定の実施形態では、対照と比較したときの組織における血管活性化及び炎症性血管障害のレベルの上昇が、ＶＯＣのマーカーである。特定の実施形態では、臓器は、肺及び／又は腎臓である。特定の実施形態では、臓器は、腎臓である。

【0233】

特定の実施形態では、ＶＯＣは、対照と比較したときのＮＦ－ｋＢ（ＮＦ－ｋＢの活性化は、Ｐ－ＮＦ－ｋＢ又はＰ－ＮＦ－ｋＢ／ＮＦ－ｋＢの比によって測定される）、ＶＣＡＭ－１、及びＩＣＡＭ－１のうちの少なくとも１つの発現、レベル、及び／又は活性化の増加として定義することができる。特定の実施形態では、ＶＯＣは、対照と比較したときのエンドセリン－１（ＥＴ－１）、トロンボキサン合成酵素（ＴＸＡＳ）、及びヘムオキシゲナーゼ－１（ＨＯ－１）のうちの少なくとも１つの発現又はレベルの増加として定義することができる。特定の実施形態では、これら増加は、肺組織でみられる。特定の実施形態では、これら増加は、腎臓組織でみられる。特定の実施形態では、腎臓組織におけるＴＸＡＳ、ＥＴ－１、及びＶＣＡＭ－１の発現及び／又はレベル、並びにＮＦ－ｋＢの活性化の増加が、ＶＯＣのマーカーである。

【0234】

特定の実施形態では、ＶＯＣは、血液学的パラメータによって定義することができる。特定の実施形態では、ＶＯＣは、対照と比較したときのＨｃｔ、Ｈｂ、ＭＣＶ、及びＭＣＨのうちの少なくとも１つのレベルの低下として定義することができる。特定の実施形態では、ＶＯＣは、対照と比較したときのＨｃｔ、Ｈｂ、ＭＣＶ、及びＭＣＨのうちの少なくとも２つのレベルの低下として定義することができる。特定の実施形態では、ＶＯＣは、対照と比較したときのＨｃｔ、Ｈｂ、ＭＣＶ、及びＭＣＨのうちの少なくとも３つのレベルの低下として定義することができる。特定の実施形態では、ＶＯＣは、対照と比較したときのＣＨＣＭ、ＨＤＷ、好中球数、及びＬＤＨのうちの少なくとも１つのレベルの上昇として定義することができる。特定の実施形態では、ＶＯＣは、対照と比較したときのＣＨＣＭ、ＨＤＷ、好中球数、及びＬＤＨのうちの少なくとも２つのレベルの上昇として定義することができる。特定の実施形態では、ＶＯＣは、対照と比較したときのＣＨＣＭ、ＨＤＷ、好中球数、及びＬＤＨのうちの少なくとも３つのレベルの上昇として定義することができる。特定の実施形態では、ＶＯＣは、対照と比較したときのＨｃｔレベルの低下として定義することができる。特定の実施形態では、ＶＯＣは、対照と比較したときのＨｂレベルの低下として定義することができる。特定の実施形態では、ＶＯＣは、対照と比較したときのＭＣＶの減少として定義することができる。特定の実施形態では、ＶＯＣは、対照と比較したときのＭＣＨの減少として定義することができる。特定の実施形態では、ＶＯＣは、対照と比較したときのＣＨＣＭの増加として定義することができる。特定の実施形態では、ＶＯＣは、対照と比較したときのＨＤＷの増加として定義することができる。特定の実施形態では、ＶＯＣは、対照と比較したときの好中球数の増加として定義することができる。特定の実施形態では、ＶＯＣは、対照と比較したときのＬＤＨの増加として定義することができる。特定の実施形態では、ＶＯＣは、対照と比較したときのＨｃｔ、Ｈｂ、ＭＣＶ、及びＭＣＨのうちの少なくとも１つのレベルの低下、並びに／又は対照と比較したときのＣＨＣＭ、ＨＤＷ、好中球数、及びＬＤＨのうちの少なくとも１つのレベルの上昇として定義することができる。特定の実施形態では、ＶＯＣは、対照と比較したときのＨｃｔ、Ｈｂ、ＭＣＶ、及びＭＣＨのレベルの低下、並びに／又は対照と比較したときのＣＨＣＭ、ＨＤＷ、好中球数、及びＬＤＨのレベルの上昇として定義することができる。

【0235】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物は、ＶＯＣ発症後約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、２５時間、２６時間、２７時間、２８時間、２９時間、３０時間、３１時間、３２時間、３３時間、３４時間、３５時間、３６時間、３７時間、３８時間、３９時間、４０時間、４１時間、４２時間、４３時間、４４時間、４５時間、４６時間、４７時間、４８時間、６０時間、７２時間、８４時間、９６時間、１０８時間、又は１２０時間以内に対象に投与される。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物は、ＶＯＣの発症後約１～２時間、約１～５時間、約１～１０時間、約１～１２時間、約１～２４時間、約１～３６時間、約１～４８時間、約１～６０時間、約１～７２時間、約１～８４時間、約１～９６時間、約１～１０８時間、又は約１～１２０時間以内に対象に投与される。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物は、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、ＶＯＣの発症後約２～５時間、約５～１０時間、約１０～２０時間、約２０～４０時間、約３０～６０時間、約４０～８０時間、約５０～１００時間、又は約６０～１２０時間以内に対象に投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、ＶＯＣの１週間以内に投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、ＶＯＣ後に毎日投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、ＶＯＣ後に毎週投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、毎日投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、隔日投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、２日毎に投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、週２回投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、臨床徴候が消失するまで投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、臨床徴候が消失した１日後まで投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、臨床徴候が消失した後少なくとも２日間投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、臨床徴候が消失した後少なくとも３日間投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、臨床徴候が消失した後少なくとも１週間投与される。

【0236】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物は、ＶＯＣの発症を予防するために対象に投与される。このような予防的処置では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、ＶＯＣの発症を予防するのに有効な総ＡＤＡＭＴＳ１３の循環レベルを維持するために、単回ボーラス注射又は複数回投与で投与される。このような態様では、ＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物は、毎月、２週間ごとに、毎週、週２回、隔日、毎日、１２時間毎に、８時間毎に、６時間毎に、４時間毎に、２時間毎に、又は毎時間投与される。特定の態様では、注射は、皮下投与される。他の態様では、注射は、静脈内投与される。

【0237】

一実施形態では、本開示は、ＳＣＤにおけるＶＯＣの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約１～約４０００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、用量は、治療及び／又は予防のために投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0238】

一実施形態では、本開示は、ＳＣＤにおけるＶＯＣの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約５～約４０００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、用量は、治療及び／又は予防のために投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0239】

一実施形態では、本開示は、ＳＣＤにおけるＶＯＣの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約２０～約２０００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、用量は、治療及び／又は予防のために投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0240】

一実施形態では、本開示は、ＳＣＤにおけるＶＯＣの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約２０～約５００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、用量は、治療及び／又は予防のために投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0241】

一実施形態では、本開示は、ＳＣＤにおけるＶＯＣの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約２０～約１６０単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、用量は、治療及び／又は予防のために投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0242】

一実施形態では、本開示は、ＳＣＤにおけるＶＯＣの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約４０～約１６０単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、総ＡＤＡＭＴＳ１３の用量は、約２０ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ、約７０ＩＵ／ｋｇ、約７５ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ、約９０ＩＵ／ｋｇ、約１００ＩＵ／ｋｇ、約１００ＩＵ／ｋｇ、約１２０ＩＵ／ｋｇ、約１２５ＩＵ／ｋｇ、約１３０ＩＵ／ｋｇ、約１４０ＩＵ／ｋｇ、約１５０ＩＵ／ｋｇ、又は約１６０ＩＵ／ｋｇである。特定の実施形態では、総ＡＤＡＭＴＳ１３の用量は、約４０ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ、又は約１６０ＩＵ／ｋｇである。特定の実施形態では、用量は、治療及び／又は予防のために投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0243】

特定の実施形態では、本開示は、結果として生じる人工呼吸器関連肺傷害を含む、急性肺傷害（ＡＬＩ）及び急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）の治療及び／又は予防をする方法を提供する。ＡＬＩ／ＡＲＤＳの病態形成は、血管内皮及び肺胞上皮の両方に対する傷害によって説明される。ＮＨＬＢＩ ＡＲＤＳ Ｎｅｔｗｏｒｋによる第ＩＩＩ相臨床試験では、肺保護換気ストラテジー及び流体保存プロトコルにより生存期間が改善されかつ機械的換気期間が短縮されている。しかしながら、ＡＬＩ／ＡＲＤＳに対する既存の特異的な薬物療法が存在しないため、更なる治療に対する強いアンメットメディカルニーズが存在する。従って、ＡＬＩ／ＡＲＤＳの治療におけるＡＤＡＭＴＳ１３の使用は、ＡＬＩ／ＡＲＤＳの治療におけるブレークスルーとなる。

【0244】

ＡＬＩは、特定の実施形態では、肺の内皮及び上皮の関門を破壊する急性炎症の障害である。ＡＬＩの細胞特徴としては、肺胞－毛細血管膜の完全性の喪失、過剰な経上皮好中球遊走、及び炎症促進性、細胞毒性メディエーターの放出が挙げられる。幾つかの研究では、内皮傷害後のＶＷＦの放出の増加及び細胞内接着分子－１（ＩＣＡＭ－１）のアップレギュレーションが報告されている（Ｊｏｈｎｓｏｎ、上掲）。好中球は炎症の主な原因であるため、経上皮好中球遊走はＡＬＩの重要な特徴である。好中球の長時間にわたる活性化は、基底膜の破壊及び肺胞－毛細血管関門の透過性の上昇に寄与する。（Ｊｏｈｎｓｏｎ、上掲）。

【0245】

ＡＲＤＳは、特定の実施形態では、成人における高い早期死亡率を特徴とする、急性発症の頻呼吸、低酸素血症、びまん性肺浸潤、及び肺コンプライアンスの喪失を含む（Ｗａｌｋｅｙ、上掲）。ＡＲＤＳの治療ストラテジーは、根底にある病因を治療し、肺傷害の進行を抑える支持療法を提供することに重点を置いている。ＡＲＤＳ患者の大半は、機械的換気のサポートが必要になるほど重症の呼吸不全を発症する。機械的換気は、過膨満及び周期的動員の複合的な機械的力によって、人工呼吸器関連肺傷害（ＶＡＬＩ）と呼ばれる肺への更なる傷害を引き起こす可能性がある。ＶＡＬＩは、炎症性サイトカインの全身放出から「バイオトラウマ」を生じさせる。現在、ＡＲＤＳの管理の主要目的はＶＡＬＩの減少である。（Ｗａｌｋｅｙ、上掲）。

【0246】

ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、その組成物は、両側性の炎症性肺浸潤及び酸素化障害又は低酸素血症を含む無数の局所又は全身の侵襲に続発する肺水腫（炎症性肺水腫を含む）の突然の発症を特徴とする急性肺傷害に起因する肺損傷の治療又は寛解に使用することができる。

【0247】

特定の実施形態では、ＡＬＩ及び／又はＡＲＤＳは、ＡＬＩ／ＡＲＤＳに関連する虚血、異常呼吸（例えば、頻呼吸及び息切れ）、非心原性肺水腫、肺浸潤、酸素化低下、及び換気低下等のうちの１つ以上（これらに限定されない）によって定義することができる。本開示は、ＡＬＩ／ＡＲＤＳに関連する虚血、異常呼吸（例えば、頻呼吸及び息切れ）、非心原性肺水腫、肺浸潤、酸素化低下、換気低下、及びそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つを含むがこれらに限定されないＡＬＩ／ＡＲＤＳの症状を低減する方法を含む。

【0248】

特定の実施形態では、ＡＬＩ及び／又はＡＲＤＳは、対照と比較して末梢好中球が増加していることと定義することができる。特定の実施形態では、ＡＬＩ及び／又はＡＲＤＳは、対照と比較したときの肺血管漏出（例えば、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）中の白血球数及び／又はタンパク質含有量（ＢＡＬタンパク質（ｍｇ／ｍＬ））の増加として定義することができる。

【0249】

特定の実施形態では、対照と比較したときの臓器における血管活性化のレベルの上昇が、ＡＬＩ及び／又はＡＲＤＳのマーカーである。特定の実施形態では、対照と比較したときの臓器における炎症性血管障害のレベルの上昇が、ＡＬＩ及び／又はＡＲＤＳのマーカーである。特定の実施形態では、対照と比較したときの組織における血管活性化及び炎症性血管障害のレベルの上昇が、ＡＬＩ及び／又はＡＲＤＳのマーカーである。特定の実施形態では、臓器は、肺及び／又は腎臓である。

【0250】

特定の実施形態では、ＡＬＩ及び／又はＡＲＤＳは、対照と比較したときのＮＦ－ｋＢ（ＮＦ－ｋＢの活性化は、Ｐ－ＮＦ－ｋＢ又はＰ－ＮＦ－ｋＢ／ＮＦ－ｋＢの比によって測定される）、ＶＣＡＭ－１、及び／又はＩＣＡＭ－１の発現、レベル及び／又は活性化の増加として定義することができる。特定の実施形態では、ＡＬＩ及び／又はＡＲＤＳは、対照と比較したときのエンドセリン－１（ＥＴ－１）、トロンボキサン合成酵素（ＴＸＡＳ）、及びヘムオキシゲナーゼ－１（ＨＯ－１）のうちの少なくとも１つの発現又はレベルの増加として定義することができる。特定の実施形態では、これら増加は、肺組織でみられる。特定の実施形態では、これら増加は、腎臓組織でみられる。特定の実施形態では、腎臓組織におけるＴＸＡＳ及びＥＴ－１の発現及び／又はレベル、並びにＮＦ－ｋＢの活性化の増加が、ＡＬＩ及び／又はＡＲＤＳのマーカーである。

【0251】

特定の実施形態では、ＡＬＩ及び／又はＡＲＤＳは、血液学的パラメータによって定義することができる。特定の実施形態では、ＡＬＩ及び／又はＡＲＤＳは、対照と比較したときの好中球数の増加として定義することができる。特定の実施形態では、ＡＬＩ及び／又はＡＲＤＳは、対照と比較したときの好中球の増加として定義することができる。

【0252】

幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物は、ＡＬＩ又はＡＲＤＳ発症後１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、２５時間、２６時間、２７時間、２８時間、２９時間、３０時間、３１時間、３２時間、３３時間、３４時間、３５時間、３６時間、３７時間、３８時間、３９時間、４０時間、４１時間、４２時間、４３時間、４４時間、４５時間、４６時間、４７時間、４８時間、６０時間、７２時間、８４時間、９６時間、１０８時間、又は１２０時間以内に対象に投与される。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物は、ＡＬＩ又はＡＲＤＳの発症後約１～２時間、約１～５時間、約１～１０時間、約１～１２時間、約１～２４時間、約１～３６時間、約１～４８時間、約１～６０時間、約１～７２時間、約１～８４時間、約１～９６時間、約１～１０８時間又は約１～１２０時間以内に対象に投与される。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物は、ＡＬＩ又はＡＲＤＳの発症後約２～５時間、約５～１０時間、約１０～２０時間、約２０～４０時間、約３０～６０時間、約４０～８０時間、約５０～１００時間、又は約６０～１２０時間以内に対象に投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、ＡＬＩ又はＡＲＤＳの発症又は診断後４時間以内、８時間以内、１２時間以内、１日間以内、２日間以内、３日間以内、４日間以内、５日間以内、６日間以内に投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、ＡＬＩ又はＡＲＤＳの発症又は診断後１週間以内に投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、ＡＬＩ又はＡＲＤＳの発症又は診断後、毎日投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、ＡＬＩ又はＡＲＤＳの発症又は診断後、毎週投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、毎日投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、隔日投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、２日毎に投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、週２回投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、臨床徴候が消失するまで投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、臨床徴候が消失した１日後まで投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、臨床徴候が消失した後少なくとも２日間投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、臨床徴候が消失した後少なくとも３日間投与される。幾つかの実施形態では、組成物は、臨床徴候が消失した後少なくとも１週間投与される。

【0253】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物は、ＡＬＩ又はＡＲＤＳの発症を予防するために対象に投与される。このような予防的処置では、ＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含むＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、ＡＬＩ又はＡＲＤＳの発症を予防するのに有効なＡＤＡＭＴＳ１３の循環レベルを維持するために、単回ボーラス注射又は複数回投与で投与される。このような態様では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物は、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、毎月、２週間ごとに、毎週、週２回、隔日、毎日、１２時間毎に、８時間毎に、６時間毎に、４時間毎に、２時間毎に、又は毎時間投与される。特定の態様では、注射は、皮下投与される。他の態様では、注射は、静脈内投与される。

【0254】

幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物は、ＡＬＩ又はＡＲＤＳを予防するためにＡＬＩ又はＡＲＤＳの発症前に対象に投与される。本開示のそのような態様では、組成物は、対象又は対象の血液中で有効レベルのＡＤＡＭＴＳ１３活性を維持するのに十分な治療的に有効な量又は用量で投与される。

【0255】

一実施形態では、本開示は、ＡＬＩ及び／又はＡＲＤＳの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約１～約４０００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約１ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、用量は、治療及び／又は予防のために投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0256】

一実施形態では、本開示は、ＡＬＩ及び／又はＡＲＤＳの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約５～約４０００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約５ＩＵ／ｋｇ～約４０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、用量は、治療及び／又は予防のために投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0257】

一実施形態では、本開示は、ＡＬＩ及び／又はＡＲＤＳの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約２０～約２０００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約２０００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、用量は、治療及び／又は予防のために投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0258】

一実施形態では、本開示は、ＡＬＩ及び／又はＡＲＤＳの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約２０～約５００単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約５００ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、用量は、治療及び／又は予防のために投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0259】

一実施形態では、本開示は、ＡＬＩ及び／又はＡＲＤＳの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約２０～約１６０単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約２０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、用量は、治療及び／又は予防のために投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0260】

一実施形態では、本開示は、ＡＬＩ及び／又はＡＲＤＳの治療を、それを必要とする哺乳類においてする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む組成物を、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、当該哺乳類に投与することを含み、総ＡＤＡＭＴＳ１３の当該治療的に有効な量が、当該哺乳類の体重１キログラムあたり約４０～約１６０単位（ＩＵ／ｋｇ）のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性である方法を提供する。特定の実施形態では、哺乳類は、ヒトである。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月１回程度投与される。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、月２回程度投与される。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週１回程度投与される。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週２回程度投与される。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、週３回程度投与される。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、４８時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、２４時間毎に１回程度投与される。一実施形態では、約４０ＩＵ／ｋｇ～約１６０ＩＵ／ｋｇの総ＡＤＡＭＴＳ１３が、１２時間毎に１回程度投与される。特定の実施形態では、総ＡＤＡＭＴＳ１３の用量は、約２０ＩＵ／ｋｇ、約４０ＩＵ／ｋｇ、約５０ＩＵ／ｋｇ、約６０ＩＵ／ｋｇ、約７０ＩＵ／ｋｇ、約７５ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ、約９０ＩＵ／ｋｇ、約１００ＩＵ／ｋｇ、約１００ＩＵ／ｋｇ、約１２０ＩＵ／ｋｇ、約１２５ＩＵ／ｋｇ、約１３０ＩＵ／ｋｇ、約１４０ＩＵ／ｋｇ、約１５０ＩＵ／ｋｇ、又は約１６０ＩＵ／ｋｇである。特定の実施形態では、総ＡＤＡＭＴＳ１３の用量は、約４０ＩＵ／ｋｇ、約８０ＩＵ／ｋｇ、又は約１６０ＩＵ／ｋｇである。特定の実施形態では、用量は、治療及び／又は予防のために投与される。特定の態様では、注射は、静脈内投与される。他の態様では、注射は、皮下投与される。

【0261】

特定の態様では、本開示は、対象における心血管疾患に関連する凝血障害の治療又は予防をする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、その組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。本明細書に提供される方法の特定の実施形態では、凝血障害としては、心筋梗塞、心筋虚血、深部静脈血栓症、末梢血管疾患、脳卒中、一過性虚血発作、及び医療機器関連血栓症が挙げられるが、これらに限定されない。

【0262】

特定の態様では、本開示は、対象における血液疾患の治療又は予防をする方法であって、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、又はＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、その組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。本明細書に提供される方法の特定の実施形態では、血液疾患は、ＴＴＰ（遺伝性及び後天性）、血栓性微小血管症、及び鎌状赤血球症を含むが、これらに限定されない。

【0263】

特定の実施形態では、本開示は、全ての目的のために全体が本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／１９１５６５号に記載されているように、梗塞（例えば、脳梗塞）を有する対象における閉塞した血管の再疎通をさせる方法を提供する。ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント、及びＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、その組成物は、有利なことに、用量依存的にその効果を発揮し、これら効果は、血管閉塞後に長期間にわたって観察される。

【0264】

対象となる方法は、治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の有り無しで、梗塞の検出後に特定の投薬量及び時間範囲で対象に投与する工程を含む。

【0265】

対象となる方法は、血管閉塞によって引き起こされる任意の梗塞の治療に好適である。このような梗塞としては、心筋梗塞、脳梗塞、肺梗塞、脾臓梗塞、四肢梗塞、骨梗塞、精巣梗塞、及び眼球梗塞が挙げられるが、これらに限定されない。

【0266】

例示的な実施形態では、対象となる方法は、脳梗塞を有する対象における閉塞した血管の再疎通をさせるためのものである。「脳梗塞」とは、脳に血液を供給する血管が封鎖されることに起因する虚血性脳卒中の一種であり、その結果、脳組織が死滅する。脳梗塞の症状は、脳の患部によって決定される。例えば、一次運動野における梗塞は対側性半身不随を引き起こし得る。脳幹梗塞は、ワレンベルグ症候群、ウェーバー症候群、ミヤール－ギュブレル症候群、及びベネディクト症候群を含む脳幹症候群を引き起こす。

【0267】

閉塞した血管の再疎通は、任意の好適な技術を用いて測定することができる。例えば、再疎通は、対照のベースライン値（例えば、閉塞した血管も梗塞も有しない対照個体の血流）と比較した血流の割合として測定することができる。血流は、例えば、フレーム間解析を伴うビデオキャピラリー顕微鏡検査又はレーザードップラー流速計技術を使用して測定することができる。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＳｔｕｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２（２）：１８８－１９２（１９９６）を参照。幾つかの実施形態では、対象となる方法は、対照のベースライン値（例えば、閉塞した血管も梗塞も有しない対照個体の血流）と比較して、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％血流を増加させる。

【0268】

何らかの特定の動作理論に縛られるものではないが、開示された組成物を介して閉塞した血管を再疎通させると、梗塞体積が減少すると考えられる。幾つかの実施形態では、本明細書に開示される組成物を投与すると、単独で又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と共にＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを投与しなかった対照対象の梗塞体積の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、対象における梗塞体積が減少する。

【0269】

一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３を含む組成物を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント組成物は、凝固障害（例えば、梗塞）によって引き起こされる炎症を軽減し、それによって、組織損傷（例えば、脳損傷に対する損傷）を予防若しくは低減するため並びに／又は白血球の浸潤及び損傷を予防することによって再灌流傷害を低減するために投与される。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３を含むものを含むＡＤＡＭＴＳ１３組成物は、再灌流によって引き起こされる梗塞組織（例えば、脳組織及び心筋組織）への二次傷害から保護するために投与される。特定の態様では、注射は、皮下投与される。他の態様では、注射は、静脈内投与される。

【0270】

Ｖ．ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの発現
特定の実施形態では、本明細書に提供される組成物で使用されるＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、例えば、全て全体が参照により全ての目的のために本明細書に組み込まれる米国特許第６，９２６，８９４号、同第８，３１３，９２６号、米国特許出願公開第２００５／２２６６５２８号、同第２００７／００１５７０３号、同第２００９／０３１７３７５号、及び国際公開第２００２／４２４４１号で既に開示されている方法に従って発現、生成、又は精製され得る。

【0271】

Ａ．宿主細胞及びベクター
組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、任意の好適な原核生物又は真核生物の宿主系において発現させることによって生成することができる。真核細胞の例としては、哺乳類細胞、例えば、ＣＨＯ（例えば、ＣＨＯ ＤＢＸ－１１、ＣＨＯＺＮ（Ｓｉｇｍａ））、ＣＯＳ、ＨＥＫ ２９３、ＢＨＫ、ＳＫ－Ｈｅｐ、及びＨｅｐＧ２；昆虫細胞、例えば、ＳＦ９細胞、ＳＦ２１細胞、Ｓ２細胞、及びＨｉｇｈ Ｆｉｖｅ細胞；並びに酵母細胞、例えば、サッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）又はシゾサッカロミセス属（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）の細胞等が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、鳥類細胞、哺乳類細胞等で発現させることができる。例えば、ヒト細胞株、ハムスター細胞株、又はマウス細胞株等である。特定の一実施形態では、細胞株は、ＣＨＯ、ＢＨＫ、又はＨＥＫの細胞株である。特定の実施形態では、細胞株は、ＣＨＯ細胞株である。

【0272】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の切断を防ぐために、セリンプロテアーゼ阻害剤（例えば、アプロチニン、アンチパイン、キモスタチン、エラスタチナール、フェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）、ＡＰＭＳＦ、ＴＬＣＫ、ＴＰＣＫ、ロイペプチン、及びダイズトリプシン阻害剤）を上流（例えば、培養及び収集中）及び下流（例えば、精製中）の製造において添加してもよい。特定の実施形態では、セリンプロテアーゼ阻害剤は、アプロチニンである。

【0273】

一実施形態では、細胞は、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質等の所望のＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を生成するために製造プロセス（すなわち、少なくとも１リットル）で培養することができる任意の哺乳類細胞であってよい。例としては、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胚腎臓株（２９３又は浮遊培養で成長させるためにサブクローニングした２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．，３６：５９（１９７７））；ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；ＤＵＫＸ－Ｂ１１サブクローン等のチャイニーズハムスター卵巣細胞／ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｉａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６（１９８０））；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ，２３．２４３－２５１（１９８０））；サル腎細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）；ヒト子宮頸がん細胞（ＨｅＬａ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．、Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，３８３：４４－６８（１９８２））；ＭＲＣ ５細胞；ＦＳ４細胞；及びヒトヘパトーマ株（Ｈｅｐ Ｇ２）が挙げられる。特定の実施形態では、細胞株は、げっ歯類細胞株、特にＣＨＯ又はＢＨＫ等のハムスター細胞株である。

【0274】

多種多様なベクターを、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（例えば、配列番号２）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質（例えば、配列番号１）の発現に使用することができ、真核生物及び原核生物の発現ベクターから選択することができる。特定の実施形態では、プラスミドベクターをＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の発現において使用することが企図される。一般に、レプリコン及び宿主細胞と適合性のある種に由来する制御配列を含有するプラスミドベクターが、これら宿主に関連して使用される。ベクターは、複製部位、及び形質転換細胞において表現型選抜を提供することができるマーキング配列を保有し得る。プラスミドは、１つ以上の制御配列、例えばプロモーターに作動可能に連結しているＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質をコードしているヌクレオチド配列を含む。

【0275】

組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を発現する安定なＣＨＯ細胞クローンを調製する方法を伴う一実施形態は、以下の通りである。本質的に米国特許第５，２５０，４２１号（Ｋａｕｆｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｉｎｃ．）に記載の通り、ＤＨＦＲ欠損ＣＨＯ細胞株ＤＵＫＸ－Ｂ１１にＤＨＦＲ発現ベクターをトランスフェクトして、関連する組み換えタンパク質を発現させる。ヒポキサンチン／チミジン（ＨＴ）不含培地で成長させることによって選抜を行い、漸増濃度のメトトレキサート中で細胞を増殖させることによって、組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質並びにＤＨＦＲ遺伝子の発現をコードしている関連領域を増幅させる。適切な場合、ＣＨＯ細胞株は、本質的に米国特許第６，１００，０６１号（Ｒｅｉｔｅｒ ｅｔ ａｌ．ｌｍｍｕｎｏ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ）に記載の通り、無血清及び／又はタンパク質不含培地での成長に適合させることができる。

【0276】

特定の実施形態では、組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質タンパク質は、グルタミン合成酵素（ＧＳ）を発現しないように遺伝子操作されたＣＨＯ細胞株において発現させることによって生成することができ、任意でグルタミン及び／又はヒポキサンチン／チミジンを含まない、既知組成及び／又は動物成分不含培地で培養して成長させることができる。特定の実施形態では、ＣＨＯ細胞株は、グルタミン合成酵素（ＧＳ）を発現しないように遺伝子操作され、任意でグルタミン及び／又はヒポキサンチン／チミジンを含まない、既知組成及び／又は動物成分不含培地で培養して成長させた、遺伝子操作されたＣＨＯ Ｋ１細胞株である。特定の実施形態では、細胞株を維持するためのグルタミンの供給源は、組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質タンパク質の発現に連結された外因性グルタミンの発現に由来する。特定の実施形態では、細胞株は、それぞれ全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，５３４，２６１号、同第６，６０７，８８２号、同第６，７４６，８３８号、同第６，７９４，１３６号、同第６，８２４，９７８号、同第６，８６６，９９７号、同第６，９３３，１１３号、同第６，９７９，５３９号、同第７，０１３，２１９号、同第７，０３０，２１５号、同第７，２２０，７１９号、同第７，２４１，５７３号、同第７，２４１，５７４号、同第７，５８５，８４９号、同第７，５９５，３７６号、同第６，９０３，１８５号、同第６，４７９，６２６号、米国特許出願公開第２００３０２３２４１０号、及び／又は同第２００９０２０３１４０号に記載の細胞株であってよい。特定の実施形態では、既知組成培地は、ＥＸ－Ｃｅｌｌ培地（例えば、ＥＸ－Ｃｅｌｌ ＣＤ ＣＨＯ融合培地、ＥＸ－Ｃｅｌｌ Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣＨＯ流加培地）又はＣｅｌｌｖｅｎｔｏ ４Ｆｅｅｄ）であってよいが、これらに限定されない。特定の実施形態では、細胞株は、ＣＨＯＺＮ ＧＳ^－／－細胞株（Ｓｉｇｍａ）であってよいが、これに限定されない。特定の実施形態では、細胞株は、ＣＨＯＺＮ ＧＳ^－／－細胞株である。特定の実施形態では、細胞株は、ＥＸ－Ｃｅｌｌ Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣＨＯ流加培地において培養される。

【0277】

特定の実施形態では、組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質タンパク質は、ＥＸ－Ｃｅｌｌ Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣＨＯ流加培地で生成されたＣＨＯＺＮ ＧＳ^－／－細胞株において発現させることによって生成することができる。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の切断を防ぐために、セリンプロテアーゼ阻害剤（例えば、アプロチニン、アンチパイン、キモスタチン、エラスタチナール、フェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）、ＡＰＭＳＦ、ＴＬＣＫ、ＴＰＣＫ、ロイペプチン、及びダイズトリプシン阻害剤）を上流（例えば、培養及び収集中）及び下流（例えば、精製中）の製造において添加してもよい。特定の実施形態では、セリンプロテアーゼ阻害剤は、アプロチニンである。

【0278】

特定の実施形態では、安定なＨＥＫ２９３細胞は、ハイグロマイシン選択性マーカーを含有するコンストラクトでトランスフェクトし、抗生物質耐性によって形質転換体を選抜することによって調製される。

【0279】

幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、１つ以上のグリコシル化部位でグリコシル化される。グリコシル化は、例えば、配列番号１に記載のアミノ酸配列のセリン残基Ｓ３９９、Ｓ６９８、Ｓ７５７、Ｓ９０７、Ｓ９６５、Ｓ１０２７、又はＳ１０８７を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質のＯ－グリコシル化部位で生じ得る。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、二糖（例えば、Ｆｕｃ－Ｇｌｃ二糖）又はムチン型Ｏ－グリカン（例えば、構造ＨｅｘＮＡｃ－Ｈｅｘ－ＮｅｕＡｃ_０－２を有する）でＯ－グリコシル化することができる。

【0280】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、Ｎ－グリコシル化部位でグリコシル化される。グリコシル化は、例えば、配列番号１に記載のアミノ酸配列のアスパラギン残基Ｎ１４２、Ｎ１４６、Ｎ５５２、Ｎ５７９、Ｎ６１４、Ｎ６６７、Ｎ７０７、Ｎ８２８、Ｎ１２３５、又はＮ１３５４を含むＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の１つ以上のＮグリコシル化部位で生じ得る。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、高マンノース型Ｎ－グリカンでグリコシル化される。他の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３は、ハイブリッド型Ｎ－グリカンでグリコシル化される。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、例えば、コア－フコース残基及び／又は１つ以上のシアル酸残基を含んでいてもよい複合型Ｎ－グリカンでグリコシル化される。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、モノシアリル化、ジシアリル化、トリシアリル化、又はテトラシアリル化されたＮ－グリカンで修飾される。特定の実施形態では、シアリル化は、α２，６－結合又はα２，３－結合を介する。

【0281】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、例えば、配列番号１に記載のＡＤＡＭＴＳ１３のアミノ酸配列のＷ３８７又はＷ３９０等の１つ以上のＣ－マンノシル化部位におけるトリプトファン残基でグリコシル化される。

【0282】

幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、合わせて少なくとも約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、又は約８６％の中性のモノ及びジシアリル化されたＮ－グリカンを有するＮ－グリカンシグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、合わせて少なくとも約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、又は約１５％のトリ及びテトラシアリル化グリカンを有するＮ－グリカンシグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約１０％～約３５％、約１１％～約３４％、約１２％～約３３％、約１３％～約３２％、約１４％～約３１％、約１５％～約３０％、約１６％～約２９％、約１７％～約２８％、約１８％～約２７％、約１９％～約２６％、約２０％～約２５％、約２１％～約２４％、約２２％～約２４％、又は２３％～約２４％の中性Ｎ－グリカンを有するＮ－グリカンシグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約２０％～約５０％、約２１％～約４９％、約２２％～約４８％、約２３％～約４７％、約２４％～約４６％、約２５％～約４５％、約２６％～約４４％、約２７％～約４３％、約２８％～約４２％、約２９％～約４１％、約３０％～約４０％、約３１％～約３９％、約３２％～約３８％、約３３％～約３７％、約３４％～約３６％、又は約３５％のモノシアリル化Ｎ－グリカンを有するＮ－グリカンシグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約１０％～約４０％、約１１％～約３９％、約１２％～約３８％、約１３％～約３７％、約１４％～約３６％、約１５％～約３５％、約１６％～約３４％、約１７％～約３３％、約１８％～約３２％、約１９％～約３１％、約２０％～約３０％、約２２％～約３０％、約２４％～約３０％、約２５％～約２９％、約２６％～約２９％、約２７％、又は約２８％のジシアリル化Ｎ－グリカンを有するＮ－グリカンシグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約１％～約２５％、約２％～約２４％、約３％～約２３％、約４％～約２２％、約５％～約２０％、約６％～約１９％、約７％～約１８％、約８％～約１７％、約９％～約１６％、約１０％～約１５％、約１１％～約１４％、又は約１１％～約１２％トリシアリル化Ｎ－グリカンを有するＮ－グリカンシグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約０．１％～約１０％、約０．５％～約８％、約１％～約７％、約１％～約５％、約１％～約４％、約２％～約６％、約２％～約４％、又は約３％のテトラシアリル化Ｎ－グリカンを有するＮ－グリカンシグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約１１０～約１６０、約１１１～約１５９、約１１２～約１５８、約１１３～約１５７、約１１４～約１５６、約１１５～約１５５、約１１６～約１５４、約１１７～約１５３、約１１８～約１５２、約１１９～約１５１、約１２０～約１５０、約１２１～約１４９、約１２２～約１４８、約１２３～約１４７、約１２４～約１４６、約１２５～約１４５、約１２６～約１４４、約１２７～約１４３、約１２８～約１４２、約１２９～約１４１、約１３０～約１４０、約１３３～約１３９、約１３４、約１３５、約１３６、約１３７、又は約１３８のおよそのＮ－グリカン指数を有するＮ－グリカンシグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨＥＫ ２９３、ＢＨＫ、ＳＫ－Ｈｅｐ、又はＨｅｐＧ２の細胞株で生成される。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、ＣＨＯ ＤＢＸ－１１又はＣＨＯＺＮの細胞株で生成される。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、ＣＨＯＺＮグルタミン合成酵素（ＧＳ）^－／－細胞株で生成される。

【0283】

幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約１％～約１５％、約２％～約１２％、約２％～約１０％、約３％～約９％、約３％～約８％、約３％～約６％、若しくは約４％～約５％、又は約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、若しくは約１５％の、ＮＡＮＡに対するＮＧＮＡ％の比を有するシアル酸シグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨＥＫ ２９３、ＢＨＫ、ＳＫ－Ｈｅｐ、又はＨｅｐＧ２の細胞株で生成される。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、ＣＨＯ ＤＢＸ－１１又はＣＨＯＺＮの細胞株で生成される。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、ＣＨＯＺＮグルタミン合成酵素（ＧＳ）－／－細胞株で生成される。

【0284】

幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、合わせて少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、又は約８６％の中性のモノ及びジシアリル化されたＮ－グリカンを有するＮ－グリカンシグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、合わせて少なくとも約１６％、約１７％、約１８％、又は約１９％のトリ及びテトラシアリル化グリカンを有するＮ－グリカンシグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、合わせて少なくとも約１６％、約１７％、約１８％、又は約１９％のトリ及びテトラシアリル化グリカンを有するＮ－グリカンシグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約５％～約３０％、約６％～約２８％、約７％～約２６％、約８％～約２５％、約９％～約２２％、約１０％～約２０％、約１１％～約１８％、約１２％～約１７％、又は約１３％～約１６％の中性Ｎ－グリカンを有するＮ－グリカンシグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約１０％～約４５％、約１１％～約４４％、約１２％～約４３％、約１３％～約４２％、約１４％～約４１％、約１５％～約４０％、約１６％～約３９％、約１７％～約３８％、約１８％～約３７％、約１９％～約３６％、約２０％～約３５％、約２２％～約３４％、約２４％～約３４％、約２６％～約３３％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、又は約３２％のモノシアリル化Ｎ－グリカンを有するＮ－グリカンシグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約２０％～約５５％、約２１％～約５４％、約２２％～約５３％、約２３％～約５２％、約２４％～約５１％、約２５％～約５０％、約２６％～約４９％、約２７％～約４８％、約２８％～約４７％、約２９％～約４６％、約３０％～約４５％、約３５％～約４４％、約３６％～約４４％、約３７％～約４３％、約３８％、約３９％、約４０％、約４１％、又は約４２％のジシアリル化Ｎ－グリカンを有するＮ－グリカンシグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約１％～約３０％、約２％～約２９％、約３％～約２８％、約４％～約２７％、約５％～約２５％、約６％～約２４％、約７％～約２３％、約８％～約２２％、約９％～約２１％、約１０％～約２０％、約１１％～約１８％、約１２％～約１５％、約１３％、又は約１４％のトリシアリル化Ｎ－グリカンを有するＮ－グリカンシグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約０．１％～約１５％、０．５％～約１２％、約１％～約１０％、１％～約９％、約２％～約８％、２％～約７％、約３％～約６％、又は約４％、又は約５％のテトラシアリル化Ｎ－グリカンを有するＮ－グリカンシグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約１３０～約１９０、約１３２～約１８９、約１３４～約１８８、約１３６～約１８６、約１４０～約１８５、約１４１～約１８３、約１４２～約１８１、約１４３～約１７９、約１４４～約１７７、約１４５～約１７５、約１４７～約１７４、約１４９～約１７３、約１５１～約１７２、約１５２～約１７１、約１５３～約１７０、約１５４、約１５５、約１５６、約１５７、約１５８、約１５９、約１６０、約１６１、約１６３、約１６３、約１６４、約１６５、約１６６、約１６７、約１６８、又は約１６９のＮ－グリカン指数を有するＮ－グリカンシグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨＥＫ ２９３、ＢＨＫ、ＳＫ－Ｈｅｐ、又はＨｅｐＧ２の細胞株で生成される。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、ＣＨＯ ＤＢＸ－１１又はＣＨＯＺＮの細胞株で生成される。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、ＣＨＯ ＤＢＸ－１１細胞株で生成される。

【0285】

幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約１０％～約４０％、約１１％～約３９％、約１２％～約３８％、約１３％～約３７％、約１４％～約３６％、約１５％～約３５％、約１６％～約３４％、約１７％～約３３％、約１８％～約３２％、約１９％～約３１％、約２０％～約３０％、約２１％～約３０％、約２３％～約３０％、約２５％～約２９％、約２６％～約２９％、約２７％～約２９％、又は約２８％のＧｌｃＮＡｃを有する単糖シグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約０．１％～約１０％、約１％～約８％、約５％～約６％、又は約６％のＧａｌＮＡｃを有する単糖シグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約１０％～約３５％、約１１％～約３４％、約１２％～約３３％、約１３％～約３２％、約１４％～約３１％、約１５％～約３０％、約１６％～約２９％、約１７％～約２８％、約１８％～約２７％、約１９％～約２６％、約２０％～約２５％、約２１％～約２５％、約２２％～約２４％、又は約２３％～約２４％のＧａｌを有する単糖シグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約１０％～約３５％、約１１％～約３４％、約１２％～約３３％、約１３％～約３２％、約１４％～約３１％、約１５％～約３０％、約１６％～約２９％、約１８％～約２８％、約２０％～約２８％、約２１％～約２７％、約２２％～約２６％、約２３％～約２５％、約２３％、約２４％、又は約２５％のＭａｎを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約０．１％～約２０％、約０．５％～約１８％、約１％～約１５％、約２％～約１４％、約３％～約１３％、約４％～約１２％、約５％～約１０％、約５％～約８％、約６％～約７％、約６％、又は約７％のＧｌｃを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約５％～約２０％、約６％～約１９％、約７％～約１８％、約８％～約１７％、約９％～約１６％、約１０％～約１５％、約１０％～約１４％、約１１％～約１３％、約１１％～約１２％、約１０％、約１１％、又は約１２％のＦｕｃを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨＥＫ ２９３、ＢＨＫ、ＳＫ－Ｈｅｐ、又はＨｅｐＧ２の細胞株で生成される。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、ＣＨＯ ＤＢＸ－１１又はＣＨＯＺＮの細胞株で生成される。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、ＣＨＯ ＤＢＸ－１１細胞株で生成される。

【0286】

幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約１００ｎｍｏｌ～約２００ｎｍｏｌ、約１０５ｎｍｏｌ～約１９０ｎｍｏｌ、約１１０ｎｍｏｌ～約１８０ｎｍｏｌ、約１１８ｎｍｏｌ～約１７５ｎｍｏｌ、約１２０ｎｍｏｌ～約１７２、約１２５ｎｍｏｌ～約１７０ｎｍｏｌ、約１３０ｎｍｏｌ～約１６９ｎｍｏｌ、約１３５ｎｍｏｌ、約１４０ｎｍｏｌ、約１４５ｎｍｏｌ、約１５０ｎｍｏｌ、約１５５ｎｍｏｌ、約１６０ｎｍｏｌ、又は約１６５ｎｍｏｌのＮＡＮＡ／ｍｇを有する単糖シグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約０．０１ｎｍｏｌ～約１ｎｍｏｌ、約０．０２ｎｍｏｌ～約０．７５ｎｍｏｌ、約０．０４ｎｍｏｌ～約０．６０ｎｍｏｌ、約０．０５ｎｍｏｌ～約０．５０ｎｍｏｌ、約０．０６ｎｍｏｌ～約０．４０ｎｍｏｌ、約０．０７ｎｍｏｌ～約０．３５ｎｍｏｌ、約０．０８ｎｍｏｌ～約０．３０ｎｍｏｌ、約０．１ｎｍｏｌ～約０．３ｎｍｏｌ、約０．１ｎｍｏｌ、約０．２ｎｍｏｌ、又は約０．３ｎｍｏｌのＮＡＮＡ／ｍｇを有する単糖シグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、約０．０１％～約１％、約０．０２％～約０．７５％、約０．０４％～約０．６％、約０．０５％～約０．５％、約０．０６％～約０．４％、約０．０６％～約０．２％、約０．０８％～約０．２％、約０．１％～約０．２％、約０．１％、約０．２％、又は約０．１５％の、ＮＡＮＡに対するＮＧＮＡの％の比を有する単糖シグネチャーを含む。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨＥＫ ２９３、ＢＨＫ、ＳＫ－Ｈｅｐ、又はＨｅｐＧ２の細胞株で生成される。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、ＣＨＯ ＤＢＸ－１１又はＣＨＯＺＮの細胞株で生成される。幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアントは、ＣＨＯ ＤＢＸ－１１細胞株で生成される。

【0287】

細胞に感染し、受容体が媒介するエンドサイトーシスを介して細胞に侵入し、宿主細胞のゲノムに組み込まれ、ウイルス遺伝子を安定的かつ効率的に発現する特定のウイルスの能力により、当該ウイルスは、細胞（例えば、哺乳類細胞）に外来核酸を導入するための魅力的な候補となる。従って、特定の実施形態では、ウイルスベクターは、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質をコードしているヌクレオチド配列を、発現のために宿主細胞へ導入するために使用される。ウイルスベクターは、１つ以上の制御配列、例えばプロモーターに作動可能に連結しているＡＤＡＭＴＳバリアント及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３をコードしているヌクレオチド配列を含む。あるいは、ウイルスベクターは制御配列を含有していなくてもよく、その代わり、宿主細胞内の制御配列に依存して、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の発現を駆動する。核酸を送達するために使用され得るウイルスベクターの非限定的な例としては、アデノウイルスベクター、ＡＡＶベクター、及びレトロウイルスベクターが挙げられる。

【0288】

一実施形態では、アデノウイルス発現ベクターは、コンストラクトのパッケージングを支援し、そこにクローニングされたＡＤＡＭＴＳコンストラクトを最終的に発現させるのに十分なアデノウイルス配列を含有するコンストラクトを含む。アデノウイルスベクターは、７ｋｂ以下の外来配列の導入を可能にする（Ｇｒｕｎｈａｕｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｍｉｎａｒ ｉｎ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２００（２）：５３５－５４６，１９９２））。

【0289】

別の実施形態では、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を使用して、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質（例えば、ＡＤＡＭＴＳ１３）をコードしているヌクレオチド配列を発現のために宿主細胞に導入することができる。ＡＡＶ系については、既に記載されており、一般に、当技術分野において周知である（Ｋｅｌｌｅｈｅｒ ａｎｄ Ｖｏｓ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１７（６）：１１１０－７，１９９４；Ｃｏｔｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，８９（１３）：６０９４－６０９８，１９９２；Ｃｕｒｉｅｌ，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎ，１３（２－３）：１４１－６４，１９９４；Ｍｕｚｙｃｚｋａ，Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５８：９７－１２９，１９９２）。ｒＡＡＶベクターの生成及び使用に関する詳細は、例えば、それぞれが全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，１３９，９４１号及び同第４，７９７，３６８号に記載されている。

【0290】

一実施形態では、レトロウイルス発現ベクターを使用して、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質をコードしているヌクレオチド配列を、発現のために宿主細胞に導入することができる。これら系については既に記載されており、一般に、当技術分野において周知である（Ｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，３３：１５３－１５９，１９８３；Ｎｉｃｏｌａｓ ａｎｄ Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎ，Ｉｎ：Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｕｓｅｓ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ ａｎｄ Ｄｅｎｈａｒｄｔ，ｅｄｓ．，Ｓｔｏｎｅｈａｍ：Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ，ｐｐ．４９４－５１３，１９８８；Ｔｅｍｉｎ，Ｉｎ：Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ，Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ（ｅｄ．），Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．１４９－１８８，１９８６）。具体的な実施形態では、レトロウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである（例えば、Ｎａｌｄｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７２（５２５９）：２６３－２６７，１９９６；Ｚｕｆｆｅｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，１５（９）：８７１－８７５，１９９７；Ｂｌｏｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．，７１（９）：６６４１－６６４９，１９９７；米国特許第６，０１３，５１６号及び同第５，９９４，１３６号を参照）。

【0291】

原核生物発現用ベクターの非限定的な例としては、ｐＲＳＥＴ、ｐＥＴ、ｐＢＡＤ等のプラスミドが挙げられ、原核生物発現用ベクターで用いられるプロモーターとしては、ｌａｃ、ｔｒｃ、ｔｒｐ、ｒｅｃＡ、ａｒａＢＡＤ等が挙げられる。真核生物発現用ベクターの例としては、（ｉ）酵母における発現については、ＡＯＸ１、ＧＡＰ、ＧＡＬ１、ＡＵＧ１等のプロモーターを用いるｐＡＯ、ｐＰＩＣ、ｐＹＥＳ、ｐＭＥＴ等のベクター、（ｉｉ）昆虫細胞における発現については、ＰＨ、ｐ１０、ＭＴ、Ａｃ５、ＯｐＩＥ２、ｇｐ６４、ｐｏｌｈ等のプロモーターを用いるｐＭＴ、ｐＡｃ５、ｐＩＢ、ｐＭＩＢ、ｐＢＡＣ等のベクター、そして、（ｉｉｉ）哺乳類細胞における発現については、ｐＳＶＬ、ｐＣＭＶ、ｐＲｃ／ＲＳＶ、ｐｃＤＮＡ３、ｐＢＰＶ等のベクター、並びにＣＭＶ、ＳＶ４０、ＥＦ－１、ＵｂＣ、ＲＳＶ、ＡＤＶ、ＢＰＶ、及びβ－アクチン等のプロモーターを用いるワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、レトロウイルス等のウイルス系由来のベクターが挙げられる。

【0292】

特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の細胞培養発現は、マイクロキャリアの使用を含んでいてもよい。本発明は、特に、大規模なＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の発現方法を提供する。幾つかの実施形態では、実施形態の細胞培養は、高い細胞密度及びタンパク質発現を達成するために高い体積－比培養表面積を提供するのに好適な条件下で、大型バイオリアクターにおいて実施することができる。このような成長条件を提供する１つの手段は、撹拌槽型バイオリアクターにおける細胞培養用のマイクロキャリアを使用することである。別の実施形態では、これら成長要件は、浮遊細胞培養の使用によって満たされる。

【0293】

Ｂ．培養方法
特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の発現は、回分又は連続作動モード下で作動する細胞培養システムの使用を含み得る。例えば、回分細胞培養を利用する場合、シングルバッチ、流加、又は反復回分モード下で作動し得る。同様に、連続式細胞培養は、例えば、灌流、タービドスタット、又はケモスタットモード下で作動し得る。回分及び連続の細胞培養は、浮遊状態又は接着状態のいずれでも行うことができる。浮遊状態で作動する場合、細胞は培養培地内で自由に浮遊し、混合される。あるいは、接着条件下では、細胞は、固相、例えば、マイクロキャリア、多孔質マイクロキャリア、ディスクキャリア、セラミックカートリッジ、中空繊維、フラットシート、ゲルマトリックス等に結合する。

【0294】

回分培養は、典型的には、細胞接種材料をタンク又は発酵槽で最高密度まで培養し、シングルバッチとして収集及び加工する大規模な細胞培養である。流加培養は、典型的には、新鮮な栄養素（例えば、成長を制限する基質）又は添加剤（例えば、生成物の前駆体）のいずれかが供給される回分培養である。バイオリアクターの希釈を避けるために、供給溶液は、通常、高度に濃縮されている。反復回分培養では、細胞を培養培地に入れ、所望の細胞密度まで成長させる。衰退期の開始及び細胞死を避けるために、次いで、細胞が最高濃度に達する前に完全成長培地で培養物を希釈する。希釈の量及び頻度は多岐にわたり、細胞株の成長特性及び培養プロセスの利便性に依存する。このプロセスは、必要に応じて多数回繰り返すことができ、継代培養時に細胞及び培地を廃棄しない限り、希釈を行う度に培養物の体積が段階的に増加する。体積の増加には、容器内で希釈を行うのに十分なサイズの反応器を有するか又は希釈した培養物を幾つかの容器に分割することによって対処することができる。このタイプの培養の原理は、細胞を指数関数的に成長する状態で維持することである。連続継代培養は、培養物の体積が常に段階的に増加すること、複数回の収集が可能であること、細胞が成長し続けること、及び希望する限りプロセスを継続できることを特徴とする。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、回分培養の上清を収集した後に回収され得る。

【0295】

連続培養とは、新鮮培地の流入によって栄養素を連続的に供給する浮遊培養であってよく、通常、使用済み培地を同時に除去することにより培養物の体積が一定に保たれる。ケモスタット法及びタービドスタット法では、抽出された培地が細胞を含有する。従って、細胞培養容器内に残った細胞は、定常状態を維持するために成長しなければならない。ケモスタット法では、典型的には、希釈速度、すなわち、新鮮培地を添加する速度を制御することによって成長速度を制御する。培養中の細胞の成長速度は、希釈速度を変更することにより、例えば、最大成長速度以下で制御することができる。対照的に、タービドスタット法では、ｐＨ及び温度等の所与の作動条件下で細胞が達成できる最高成長速度が得られるように希釈速度を設定する。

【0296】

灌流培養では、抽出した培地には細胞が枯渇しており、細胞は、例えば、濾過又は細胞を再び培養物に導入する遠心分離法によって、培養容器内に保持される。しかし、典型的には、濾過に使用される膜は細胞を１００％保持するわけではないので、培地を抽出する際に一部は除去される。細胞の大部分は培養容器内に保持されるので、非常に高い成長速度で灌流培養を行うことは重要ではない場合がある。

【0297】

浮遊又は接着のモード下で作動する回分及び連続の細胞培養には、攪拌槽型反応器システムを使用することができる。一般に、攪拌槽型反応器システムは、ラシュトン、ハイドロフォイル、ピッチドブレード、マリン等の任意の種類の攪拌器を備えた任意の従来の攪拌槽型反応器として作動することができる。Ｃ．培養培地

【0298】

ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、外添されたタンパク質を含まない培養培地中で発現させることができる。「タンパク不含培養培地」及び関連する用語は、成長中に自然にタンパク質を排出する培養中の細胞に対して外因性の又は当該細胞以外の供給源由来のタンパク質を含まない培養培地を指す。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、外添されたタンパク質を含まず（すなわち、タンパク質不含）、亜鉛、カルシウム、及び／又はニコチンアミド（ビタミンＢ３）を補給した培地で発現させることができる。特定の実施形態では、タンパク質不含培養培地は、ポリアミンを含有する。例えば、少なくとも２ｍｇ／Ｌ、又は２ｍｇ／Ｌ～３０ｍｇ／Ｌ若しくは約２ｍｇ／Ｌ～３０ｍｇ／Ｌ、又は２ｍｇ／Ｌ～８ｍｇ／Ｌ若しくは２ｍｇ／Ｌ～８ｍｇ／Ｌの濃度で。具体的な実施形態では、ポリアミンは、プトレシンである。例示的なタンパク質不含培養培地は、米国特許第６，１７１，８２５号、同第６，９３６，４４１号、同第８，３１３，９２６号、国際公開第２００７／０７７２１７号、並びに米国特許出願公開第２００８／０００９０４０号及び同第２００７／０２１２７７０号に教示されており、それらの開示は、全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0299】

動物タンパク質不含かつ既知組成の培養培地を調製する方法は、当技術分野において、例えば、米国特許第６，１７１，８２５号及び同第６，９３６，４４１号、国際公開第２００７／０７７２１７号、並びに米国特許出願公開第２００８／０００９０４０号及び同第２００７／０２１２７７０号において公知であり、それらの開示は、全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を発現させるために使用される培養培地は、動物タンパク質不含又はオリゴペプチド不含の培地である。特定の実施形態では、培養培地は、既知組成であってよい。特定の実施形態では、培養培地は、約０．５ｍｇ／Ｌ～約１０ｍｇ／Ｌの濃度で少なくとも１つのポリアミンを含有し得る。

【0300】

ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、外添されたオリゴペプチドを含まない培養培地中で発現させることもできる。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を、外添されたオリゴペプチドを含まず（すなわち、ポリペプチド不含）、亜鉛、カルシウム、及び／又はニコチンアミド（ビタミンＢ３）が補給された培養培地で発現させる。特定の実施形態では、オリゴペプチド不含培養培地は、ポリアミンを含有する。例えば、少なくとも２ｍｇ／Ｌ、又は２ｍｇ／Ｌ～３０ｍｇ／Ｌ若しくは約２ｍｇ／Ｌ～３０ｍｇ／Ｌ、又は２ｍｇ／Ｌ～８ｍｇ／Ｌ若しくは２ｍｇ／Ｌ～８ｍｇ／Ｌの濃度で。具体的な実施形態では、ポリアミンは、プトレシンである。例示的なオリゴペプチド不含培養培地は、米国特許第６，１７１，８２５号、同第６，９３６，４４１号、同第８，３１３，９２６号、国際公開第２００７／０７７２１７号、並びに米国特許出願公開第２００８／０００９０４０号及び同第２００７／０２１２７７０号に教示されており、それらの開示は、全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0301】

ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、血清を含まない培養培地中で発現させることもできる。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を、外添された血清を含まず（すなわち、無血清）、亜鉛、カルシウム、及び／又はニコチンアミド（ビタミンＢ３）が補給された培養培地で発現させる。特定の実施形態では、無血清培養培地は、ポリアミンを含有する。例えば、少なくとも２ｍｇ／Ｌ、又は２ｍｇ／Ｌ～３０ｍｇ／Ｌ若しくは約２ｍｇ／Ｌ～３０ｍｇ／Ｌ、又は２ｍｇ／Ｌ～８ｍｇ／Ｌ若しくは２ｍｇ／Ｌ～８ｍｇ／Ｌの濃度で。具体的な実施形態では、ポリアミンは、プトレシンである。例示的な無血清培養培地は、米国特許第６，１７１，８２５号、同第６，９３６，４４１号、同第８，３１３，９２６号、国際公開第２００７／０７７２１７号、並びに米国特許出願公開第２００８／０００９０４０号及び同第２００７／０２１２７７０号に教示されており、それらの開示は、全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0302】

ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、動物タンパク質を含まない培養培地中で発現させることもできる。一実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、外添された動物タンパク質もポリペプチドも含まず（すなわち、動物タンパク質不含）、亜鉛、カルシウム及び／又はニコチンアミド（ビタミンＢ３）が補給された培養培地で発現させる。特定の実施形態では、動物タンパク質不含培養培地は、ポリアミンを含有する。例えば、少なくとも２ｍｇ／Ｌ、又は２ｍｇ／Ｌ～３０ｍｇ／Ｌ若しくは約２ｍｇ／Ｌ～３０ｍｇ／Ｌ、又は２ｍｇ／Ｌ～８ｍｇ／Ｌ若しくは２ｍｇ／Ｌ～８ｍｇ／Ｌの濃度で。具体的な実施形態では、ポリアミンは、プトレシンである。例示的な動物タンパク質不含培養培地は、米国特許第６，１７１，８２５号、同第６，９３６，４４１号、同第８，３１３，９２６号、国際公開第２００７／０７７２１７号、並びに米国特許出願公開第２００８／０００９０４０号及び同第２００７／０２１２７７０号に教示されており、それらの開示は、全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0303】

ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、その開示全体が全ての目的のために参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，３１３，９２６号に記載されているように、追加のカルシウム、亜鉛及び／又はビタミンＢ３が補給された培養培地で発現させることもできる。特定の実施形態では、培地は、動物タンパク質不含、オリゴペプチド不含、又は既知組成の培地であってよい。特定の実施形態では、その開示全体が全ての目的のために参照により本明細書に組み込まれ、いずれも全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許番号６，１７１，８２５号及び同第６，９３６，４４１号、国際公開第２００７／０７７２１７号、並びに米国特許出願公開第２００８／０００９０４０号及び同第２００７／０２１２７７０号に教示されている通り、動物タンパク質不含又はオリゴペプチド不含の培地を調製し、追加のカルシウム、亜鉛、及び／又はビタミンＢ３を補給する。具体的な実施形態では、既知組成培養培地は、培地中で培養された細胞で発現するＡＤＡＭＴＳバリアント及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３の比活性を高めるために、追加のカルシウム、亜鉛、及び／又はビタミンＢ３を補給したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）と同様であってよい。更に他の実施形態では、培養培地は、動物成分不含である。別の実施形態では、培養培地は、タンパク質、例えば、ウシ胎児血清等の血清由来の動物タンパク質を含有する。別の実施形態では、培養物は、外添された組み換えタンパク質を有する。別の実施形態では、タンパク質は、認定された病原体除去動物に由来する。

【0304】

ＶＩ．ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントキット
別の態様では、ＡＤＡＭＴＳ１３又はＶＷＦの機能不全に関連する疾患又は病態を治療するためのキットが提供される。一実施形態では、キットは、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の組成物を含む。幾つかの実施形態では、本明細書に提供されるキットは、１以上の用量の本明細書に提供される液体又は凍結乾燥組成物を含み得る。キットが凍結乾燥されたＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の組成物を含む場合、一般に、キットは、液体組成物の再構成に好適な液体、例えば、滅菌水又は薬学的に許容し得るバッファも含む。幾つかの実施形態では、キットは、医療従事者による皮下投与用に又は家庭で使用するために注射器に予めパッケージされたＡＤＡＭＴＳ１３組成物を含む組成物を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント組成物を含む。

【0305】

幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、配列番号２に記載のアミノ酸配列、又はＲ^９７を依然として維持しながら配列番号２と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそのバリアントを含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントをコードしているヌクレオチド配列は、配列番号２のアミノ酸配列、又はＲ^９７を依然として維持しながら配列番号２と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそのバリアントをコードしているヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントは、配列番号２に記載のアミノ酸配列から本質的になる。

【0306】

幾つかの実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、配列番号１に記載のアミノ酸配列、又は配列番号１と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質をコードしているヌクレオチド配列は、配列番号１のアミノ酸配列、又は配列番号２と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列をコードしているヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、配列番号１に記載のアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、配列番号１に記載のアミノ酸配列から本質的になる。

【0307】

一実施形態では、約１単位のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性～約１０，０００単位のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性を含むキットが提供される。他の実施形態では、キットは、例えば、約２０単位のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３（Ｕ_ＦＶ７３）活性～約８，０００単位のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性、又は約３０Ｕ_ＦＶ７３～約６，０００Ｕ_ＦＶ７３、又は約４０Ｕ_ＦＶ７３～約４，０００Ｕ_ＦＶ７３、又は約５０Ｕ_ＦＶ７３～約３，０００Ｕ_ＦＶ７３、又は約７５Ｕ_ＦＶ７３～約２，５００Ｕ_ＦＶ７３、又は約１００Ｕ_ＦＶ７３～約２，０００Ｕ_ＦＶ７３、又は約２００Ｕ_ＦＶ７３～約１、５００Ｕ_ＦＶ７３、又はおよそこれらの中の他の範囲を提供し得る。特定の実施形態では、キットは、約１０単位のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性、又は約１単位、５単位、１０単位、１５単位、２０単位、３０単位、４０単位、５０単位、６０単位、７０単位、８０単位、９０単位、１００単位、１５０単位、２００単位、２５０単位、３００単位、３５０単位、４００単位、４５０単位、５００単位、６００単位、７００単位、８００単位、９００単位、１，０００単位、１，１００単位、１，２００単位、１，３００単位、１，４００単位、１，５００単位、１，６００単位、１，７００単位、１，８００単位、１，９００単位、２，０００単位、２，１００単位、２，２００単位、２，３００単位、２，４００単位、２，５００単位、２，６００単位、２，７００単位、２，８００単位、２，９００単位、３，０００単位、３，１００単位、３，２００単位、３，３００単位、３，４００単位、３，５００単位、３，６００単位、３，７００単位、３，８００単位、３，９００単位、４，０００単位、４，１００単位、４，２００単位、４，３００単位、４，４００単位、４，５００単位、４，６００単位、４，７００単位、４，８００単位、４，９００単位、５，０００単位、５，１００単位、５，２００単位、５，３００単位、５，４００単位、５，５００単位、５，６００単位、５，７００単位、５，８００単位、５，９００単位、６，０００単位、６，１００単位、６，２００単位、６，３００単位、６，４００単位、６，５００単位、６，６００単位、６，７００単位、６，８００単位、６，９００単位、７，０００単位、７，１００単位、７，２００単位、７，３００単位、７，４００単位、７，５００単位、７，６００単位、７，７００単位、７，８００単位、７，９００単位、８，０００単位、８，１００単位、８，２００単位、８，３００単位、８，４００単位、８，５００単位、８，６００単位、８，７００単位、８，８００単位、８，９００単位、９，０００単位、９，１００単位、９，２００単位、９，３００単位、９，４００単位、９，５００単位、９，６００単位、９，７００単位、９，８００単位、９，９００単位、１０，０００単位、１１，０００単位、１２，０００単位、１３，０００単位、１４，０００単位、１５，０００単位、１６，０００単位、１７，０００単位、１８，０００単位、１９，０００単位、２０，０００単位、若しくはそれ以上のＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性を提供し得る。

【0308】

特定の実施形態では、キットは、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の単回投与又は単一用量のためのものである。他の実施形態では、キットは、投与のための複数用量のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を含んでいてもよい。一実施形態では、キットは、医療従事者による投与用に又は家庭で使用するために注射器に予めパッケージされたＡＤＡＭＴＳ１３バリアント（複数可）及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の組成物を含んでいてもよい。

【0309】

ＶＩＩ．実施形態
本願は、以下の非限定的な実施形態を提供する。
１． ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。
２． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、ヒトＡＤＡＭＴＳ１３である、実施形態１に記載の組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。
３． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、実施形態１に記載の組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。
４． 単一のアミノ酸置換のうちの少なくとも１つが、当該ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質と比較してＡＤＡＭＴＳ１３触媒ドメイン内にある、前記実施形態のいずれかに記載の組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。
５． 当該単一のアミノ酸置換が、配列番号１に示されるＩ^７９Ｍ、Ｖ^８８Ｍ、Ｈ^９６Ｄ、Ｒ^１０２Ｃ、Ｓ^１１９Ｆ、Ｉ^１７８Ｔ、Ｒ^１９３Ｗ、Ｔ^１９６Ｉ、Ｓ^２０３Ｐ、Ｌ^２３２Ｑ、Ｈ^２３４Ｑ、Ｄ^２３５Ｈ、Ａ^２５０Ｖ、Ｓ^２６３Ｃ、及び／又はＲ^２６８Ｐでもなく、ＡＤＡＭＴＳ１３における等価なアミノ酸位置にもない、実施形態１～３のいずれか１つに記載の組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。
６． 当該単一のアミノ酸置換が、配列番号１に示されるアミノ酸Ｑ^９７又はＡＤＡＭＴＳ１３における等価なアミノ酸位置に存在する、実施形態１～３のいずれか１つに記載の組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。
７． ＱからＤ、Ｅ、Ｋ、Ｈ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、又はＲに単一のアミノ酸が変化している、実施形態６に記載の組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。
８． ＱからＲに単一のアミノ酸が変化している、実施形態６に記載の組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。
９． 配列番号２のアミノ酸配列又はその少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態８に記載の組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。
１０． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３が、配列番号２のアミノ酸配列から本質的になる、実施形態８に記載の組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。
１１． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３が、配列番号２のアミノ酸配列からなる、実施形態８に記載の組み換えＡＤＡＭＴＳ１３バリアント。
１２． 実施形態１～１１のいずれか１つに記載の少なくとも１つのＡＤＡＭＴＳ１３バリアントと、薬学的に許容し得る担体又は賦形剤と、を含む医薬組成物。
１３． ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を更に含む、実施形態１２に記載の医薬組成物。
１４． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列又はその少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１３に記載の医薬組成物。
１５． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列からなる、実施形態１３に記載の医薬組成物。
１６． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、組み換え的に生成される、実施形態１３～１５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１７． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、血漿由来である、実施形態１３～１５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１８． ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質に対する比が、約１：１～約３：１、約１：１、又は約３：２である、実施形態１３～１５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
１９． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントが、当該組成物中の全てのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質及びＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの総量の約５２％～約７２％又は約４７％～約８４％を構成する、実施形態１３～１８のいずれか１つに記載の医薬組成物。
２０． 当該比又は割合が、ペプチドマッピング法によって求められる、実施形態１８又は実施形態１９に記載の医薬組成物。
２１． 当該比又は割合が、液体クロマトグラフィーによって分離したトリプシンペプチドのＨＰＬＣ分析に続いて質量分析を行うことによって求められる、実施形態１８又は実施形態１９に記載の医薬組成物。
２２． 当該比又は割合が、抽出イオンクロマトグラムにおける強度に基づいて求められる、実施形態１８～２１のいずれか１つに記載の医薬組成物。
２３． 当該比又は割合が、当該組成物中の全てのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質及びＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのピーク面積の合計に対する、当該ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのトリプシンペプチドのピーク面積に基づいて求められる、実施形態１８～２２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
２４． 測定される当該組成物中の全てのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質及びＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのトリプシンペプチドが、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントと当該組成物中の全ての他のＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質及びＡＤＡＭＴＳ１３バリアントとの間で比較したときの少なくとも１つのアミノ酸の差異に特異的である、実施形態２３に記載の医薬組成物。
２５． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントについて測定されるトリプシンペプチド（複数可）が、ＡＡＧＧＩＬＨＬＥＬＬＶＡＶＧＰＤＶＦＱＡＨＲ又はＡＡＧＧＩＬＨＬＥＬＬＶＡＶＧＰＤＶＦＱＡＨＲとＥＤＴＥＲとの組み合わせである、実施形態２４に記載の医薬組成物。
２６． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質について測定されるトリプシンペプチドが、ＡＡＧＧＩＬＨＬＥＬＬＶＡＶＧＰＤＶＦＱＡＨＱＥＤＴＥＲである、実施形態２４又は実施形態２５に記載の医薬組成物。
２７． 当該比又は割合が、当該組成物中の全てＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質及びＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの総和重量に対する、ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの総重量に基づいて求められる、実施形態１８又は実施形態１９に記載の医薬組成物。
２８． 凝血障害に罹患しているか又は罹患するリスクのある対象における凝血障害の治療又は予防をする方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は実施形態１２～２７のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
２９． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約１ＩＵ／ｋｇ（体重）～約４，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態２８に記載の方法。
３０． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約５ＩＵ／ｋｇ（体重）～約４，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態２８に記載の方法。
３１． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約１０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約２，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態２８に記載の方法。
３２． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約２０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約２００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態２８に記載の方法。
３３． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約１０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約２００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態２８に記載の方法。
３４． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、持続注入を介して約０．１～約４，０００ＩＵ／ｋｇ／日である、実施形態２８に記載の方法。
３５． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、持続注入を介して約１ＩＵ／ｋｇ／日～約２００ＩＵ／ｋｇ／日である、実施形態２８に記載の方法。
３６． 当該凝血障害が、遺伝性ＴＴＰ、後天性ＴＴＰ、梗塞、脳梗塞、心筋梗塞、虚血／再灌流傷害、深部静脈血栓症、又は敗血症関連播種性血管内凝固である、実施形態２８～３５のいずれか１つに記載の方法。
３７． 当該凝血障害が、遺伝性ＴＴＰである、実施形態２８～３６のいずれか１つに記載の方法。
３８． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、少なくとも約１ＩＵ／ｋｇ（体重）～約４，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）を含む、実施形態３７に記載の方法。
３９． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、少なくとも約５ＩＵ／ｋｇ（体重）～約４，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）を含む、実施形態３７に記載の方法。
４０． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、少なくとも約５ＩＵ／ｋｇ（体重）～約５００ＩＵ／ｋｇ（体重）を含む、実施形態３７に記載の方法。
４１． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、少なくとも約１０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約１，５００ＩＵ／ｋｇ（体重）を含む、実施形態３７に記載の方法。
４２． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、少なくとも約１０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約１６０ＩＵ／ｋｇ（体重）を含む、実施形態３７に記載の方法。
４３． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、少なくとも約１０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約４０ＩＵ／ｋｇ（体重）を含む、実施形態３７に記載の方法。
４４． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、少なくとも約２０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約４０ＩＵ／ｋｇ（体重）を含む、実施形態３７に記載の方法。
４５． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、少なくとも約２０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約１６０ＩＵ／ｋｇ（体重）を含む、実施形態３７に記載の方法。
４６． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約２０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約１６０ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態３７に記載の方法。
４７． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約２０ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態３７に記載の方法。
４８． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約４０ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態３７に記載の方法。
４９． 当該凝血障害が、後天性ＴＴＰである、実施形態２８～３６のいずれか１つに記載の方法。
５０． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約１ＩＵ／ｋｇ（体重）～約４，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態４９に記載の方法。
５１． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約５ＩＵ／ｋｇ（体重）～約４，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態４９に記載の方法。
５２． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約１０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約１，５００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態４９に記載の方法。
５３． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約１０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約８０ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態４９に記載の方法。
５４． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約２０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約８０ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態４９に記載の方法。
５５． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約２０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約４０ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態４９に記載の方法。
５６． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約４０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約２，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態４９に記載の方法。
５７． 当該凝血障害が、脳梗塞及び／又は虚血再灌流傷害である、実施形態２８～３６のいずれか１つに記載の方法。
５８． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約１ＩＵ／ｋｇ（体重）～約４，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態５７に記載の方法。
５９． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約５ＩＵ／ｋｇ（体重）～約４，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態５７に記載の方法。
６０． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約１０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約２，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態５７に記載の方法。
６１． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約１０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約１，５００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態５７に記載の方法。
６２． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約４０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約４，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態５７に記載の方法。
６３． 当該凝血障害が、心筋梗塞及び／又は虚血再灌流傷害である、実施形態２８～３６のいずれか１つに記載。
６４． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約１ＩＵ／ｋｇ（体重）～約４，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態６３に記載の方法。
６５． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約５ＩＵ／ｋｇ（体重）～約４，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態６３に記載の方法。
６６． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約１０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約２，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態６３に記載の方法。
６７． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約１０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約１，５００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態６３に記載の方法。
６８． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約４０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約２，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態６３に記載の方法。
６９． 出血障害に罹患しているか又は罹患するリスクのある対象における対象における出血エピソードの治療又は予防をする方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は実施形態１２～２７のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
７０． 当該出血エピソードが、遺伝性ＴＴＰ、後天性ＴＴＰ、梗塞、脳梗塞、心筋梗塞、虚血／再灌流傷害、深部静脈血栓症、又は敗血症関連播種性血管内凝固に関連する、実施形態６９に記載の方法。
７１． 鎌状赤血球症に罹患している対象における血管閉塞クリーゼの治療又は予防をする方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は実施形態１２～２７のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
７２． 血管閉塞クリーゼの症状を呈した後に、当該対象に当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物を投与する、実施形態７１に記載の方法。
７３． 血管閉塞クリーゼの症状を呈する前に、当該対象に当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物を投与する、実施形態７１に記載の方法。
７４． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物を投与することにより、対照又は処置なしと比較して、炎症、血管収縮、血小板凝集、又はそれらのいずれかの組み合わせのうちの少なくとも１つが減少する、実施形態７１～７３のいずれか１つに記載の方法。
７５． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物を投与することにより、対照又は処置なしと比較して、生存期間の改善、肺機能の改善、臓器損傷の低減、肺血管漏出の低減、又はそれらのいずれかの組み合わせのうちの少なくとも１つがもたらされる、実施形態７１～７４のいずれか１つに記載の方法。
７６． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物を投与することにより、対照又は処置なしと比較して、血流障害、血液凝固、血管炎症、血栓症、虚血性細胞損傷、若しくは臓器損傷、又はそれらのいずれかの組み合わせのうちの少なくとも１つが低減及び／又は予防される、実施形態７１～７５のいずれか１つに記載の方法。
７７． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物を投与することにより、対照又は処置なしと比較して、疼痛又は当該疼痛の重症度が低減及び／又は予防される、実施形態７１～７６のいずれか１つに記載の方法。
７８． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物を投与することにより、対照又は処置なしと比較して、ＶＯＣの発生頻度及び／又はＶＯＣエピソードの持続時間が低減される、実施形態７１～７７のいずれか１つに記載の方法。
７９． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約１ＩＵ／ｋｇ（体重）～約４，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態７１～７８のいずれか１つに記載の方法。
８０． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約５ＩＵ／ｋｇ（体重）～約４，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態７１～７８のいずれか１つに記載の方法。
８１． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約２０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約２，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態７１～７８のいずれか１つに記載の方法。
８２． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約２０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約５００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態７１～７８のいずれか１つに記載の方法。
８３． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約２０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約８０ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態７１～７８のいずれか１つに記載の方法。
８４． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約４０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約１６０ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態７１～７８のいずれか１つに記載の方法。
８５． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約４０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約８０ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態７１～７８のいずれか１つに記載の方法。
８６． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約４０ＩＵ／ｋｇ（体重）、約８０ＩＵ／ｋｇ（体重）、又は約１６０ＩＵ／ｋｇ（体重）～である、実施形態７１～７８のいずれか１つに記載の方法。
８７． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約１０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約６，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態７１～７８のいずれか１つに記載の方法。
８８． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約２０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約４，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態７１～７８のいずれか１つに記載の方法。
８９． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約５０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約５００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態７１～７８のいずれか１つに記載の方法。
９０． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約１００ＩＵ／ｋｇ（体重）～約３，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態７１～７８のいずれか１つに記載の方法。
９１． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物が、当該血管閉塞クリーゼの発症後４８時間以内に当該対象に投与される、実施形態７１、７２、又は７４～９０のいずれか１つに記載の方法。
９２． 当該血管閉塞クリーゼを予防するための当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物が、当該対象において有効レベルのＡＤＡＭＴＳ１３活性を維持するのに十分である、実施形態７１～９１のいずれか１つに記載の方法。
９３． 急性肺傷害（ＡＬＩ）及び／又は急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）に罹患しているか又は罹患するリスクのある対象における肺傷害の治療又は予防をする方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は実施形態１２～２７のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
９４． 当該対象が、炎症性肺水腫、炎症性肺浸潤、酸素化障害、及び低酸素血症からなる群から選択される病態又は病態の組み合わせに罹患している、実施形態９３に記載の方法。
９５． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物を投与することにより、対照又は処置なしと比較して、生存期間の改善、肺機能の改善、臓器損傷の低減、肺血管漏出の低減、又はそれらのいずれかの組み合わせのうちの少なくとも１つがもたらされる、実施形態９３又は実施形態９４に記載の方法。
９６． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物を投与することにより、対照又は処置なしと比較して、炎症、血管収縮、血小板凝集、又はそれらのいずれかの組み合わせのうちの少なくとも１つが減少する、実施形態９３～９５のいずれか１つに記載の方法。
９７． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物を投与することにより、対照又は処置なしと比較して、血流障害、血液凝固、血管炎症、血栓症、虚血性細胞損傷、臓器損傷、又はそれらのいずれかの組み合わせのうちの少なくとも１つが低減及び／又は予防される、実施形態９３～９６のいずれか１つに記載の方法。
９８． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物を投与することにより、対照又は処置なしと比較して、疼痛又は当該疼痛の重症度が低減及び／又は予防される、実施形態９３～９７のいずれか１つに記載の方法。
９９． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物を投与することにより、対照又は処置なしと比較して、ＡＬＩ及び／若しくはＡＲＤＳの発生頻度並びに／又はＡＬＩ及び／若しくはＡＲＤＳエピソードの持続時間が低減される、実施形態９３～９８のいずれか１つに記載の方法。
１００． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約１ＩＵ／ｋｇ（体重）～約４，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態９３～９９のいずれか１つに記載の方法。
１０１． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約５ＩＵ／ｋｇ（体重）～約４，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態９３～９９のいずれか１つに記載の方法。
１０２． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約２０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約２，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態９３～９９のいずれか１つに記載の方法。
１０３． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約４０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約１６０ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態９３～９９のいずれか１つに記載の方法。
１０４． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約４０ＩＵ／ｋｇ（体重）、約８０ＩＵ／ｋｇ（体重）、又は約１６０ＩＵ／ｋｇ（体重）～である、実施形態９３～９９のいずれか１つに記載の方法。
１０５． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約１０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約６，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態９３～９９のいずれか１つに記載の方法。
１０６． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約２０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約４，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態９３～９９のいずれか１つに記載の方法。
１０７． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約５０ＩＵ／ｋｇ（体重）～約５００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態９３～９９のいずれか１つに記載の方法。
１０８． 総ＡＤＡＭＴＳ１３の治療的に有効な量が、約１００ＩＵ／ｋｇ（体重）～約３，０００ＩＵ／ｋｇ（体重）である、実施形態９３～９９のいずれか１つに記載の方法。
１０９． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物が、炎症性肺水腫、炎症性肺浸潤、酸素化障害、又は低酸素血症の検出後４８時間以内に当該対象に投与される、実施形態９３～１０８のいずれか１つに記載の方法。
１１０． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物が、当該対象において有効レベルのＡＤＡＭＴＳ１３活性を維持するのに十分である、実施形態９３～１０９のいずれか１つに記載の方法。
１１１． 脳梗塞を有する対象における閉塞した血管の再疎通をさせる方法であって、それを必要とする当該対象に、治療的に有効な量の実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は実施形態１２～２７のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与し、それによって、当該閉塞した血管の再疎通をさせることを含む方法。
１１２． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物が、約４０ＩＵ／ｋｇ、５０ＩＵ／ｋｇ、６０ＩＵ／ｋｇ、７０ＩＵ／ｋｇ、８０ＩＵ／ｋｇ、９０ＩＵ／ｋｇ、１００ＩＵ／ｋｇ、１５０ＩＵ／ｋｇ、２００ＩＵ／ｋｇ、２５０ＩＵ／ｋｇ、３００ＩＵ／ｋｇ、３５０ＩＵ／ｋｇ、４００ＩＵ／ｋｇ、４５０ＩＵ／ｋｇ、５００ＩＵ／ｋｇ、５５０ＩＵ／ｋｇ、６００ＩＵ／ｋｇ、６５０ＩＵ／ｋｇ、７００ＩＵ／ｋｇ、７５０ＩＵ／ｋｇ、８００ＩＵ／ｋｇ、８５０ＩＵ／ｋｇ、９００ＩＵ／ｋｇ、９５０ＩＵ／ｋｇ、１，０００ＩＵ／ｋｇ、１，２５０ＩＵ／ｋｇ、１，５００ＩＵ／ｋｇ、１，７５０ＩＵ／ｋｇ、若しくは２，０００ＩＵ／ｋｇの用量で、及び／又は当該梗塞の検出の１５分間、３０分間、６０分間、９０分間、１２０分間、１８０分間、２１０分間、２４０分間、２７０分間、若しくは３００分間以内に当該対象に投与される、実施形態１１１に記載の方法。
１１３． 対象における閉塞した血管の再疎通をさせることによって、対象における脳梗塞の治療をする方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は実施形態１２～２７のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与し、それによって、当該閉塞した血管の再疎通をさせることを含む方法。
１１４． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物が、約４０ＩＵ／ｋｇ、５０ＩＵ／ｋｇ、６０ＩＵ／ｋｇ、７０ＩＵ／ｋｇ、８０ＩＵ／ｋｇ、９０ＩＵ／ｋｇ、１００ＩＵ／ｋｇ、１５０ＩＵ／ｋｇ、２００ＩＵ／ｋｇ、２５０ＩＵ／ｋｇ、３００ＩＵ／ｋｇ、３５０ＩＵ／ｋｇ、４００ＩＵ／ｋｇ、４５０ＩＵ／ｋｇ、５００ＩＵ／ｋｇ、５５０ＩＵ／ｋｇ、６００ＩＵ／ｋｇ、６５０ＩＵ／ｋｇ、７００ＩＵ／ｋｇ、７５０ＩＵ／ｋｇ、８００ＩＵ／ｋｇ、８５０ＩＵ／ｋｇ、９００ＩＵ／ｋｇ、９５０ＩＵ／ｋｇ、１，０００ＩＵ／ｋｇ、１，２５０ＩＵ／ｋｇ、１，５００ＩＵ／ｋｇ、１，７５０ＩＵ／ｋｇ、若しくは２，０００ＩＵ／ｋｇの用量で、及び／又は当該梗塞の検出１５分間、３０分間、６０分間、９０分間、１２０分間、１８０分間、２１０分間、２４０分間、２７０分間、若しくは３００分間以内に当該対象に投与される、実施形態１１３に記載の方法。
１１５． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物が、約４０ＩＵ／ｋｇ、５０ＩＵ／ｋｇ、６０ＩＵ／ｋｇ、７０ＩＵ／ｋｇ、８０ＩＵ／ｋｇ、９０ＩＵ／ｋｇ、１００ＩＵ／ｋｇ、１５０ＩＵ／ｋｇ、２００ＩＵ／ｋｇ、２５０ＩＵ／ｋｇ、３００ＩＵ／ｋｇ、３５０ＩＵ／ｋｇ、４００ＩＵ／ｋｇ、４５０ＩＵ／ｋｇ、５００ＩＵ／ｋｇ、５５０ＩＵ／ｋｇ、６００ＩＵ／ｋｇ、６５０ＩＵ／ｋｇ、７００ＩＵ／ｋｇ、７５０ＩＵ／ｋｇ、８００ＩＵ／ｋｇ、８５０ＩＵ／ｋｇ、９００ＩＵ／ｋｇ、９５０ＩＵ／ｋｇ、１，０００ＩＵ／ｋｇ、１，２５０ＩＵ／ｋｇ、１，５００ＩＵ／ｋｇ、１，７５０ＩＵ／ｋｇ、又は２，０００ＩＵ／ｋｇの用量で、かつ当該梗塞の検出の１５分間、３０分間、６０分間、９０分間、１２０分間、１８０分間、２１０分間、２４０分間、２７０分間、又は３００分間以内に当該対象に投与される、実施形態１１１～１１４のいずれか１つに記載の方法。
１１６． 脳梗塞を有する対象における閉塞した血管の再疎通をさせる方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は実施形態１２～２７のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与し、それによって当該閉塞した血管の再疎通をさせることを含む、対象に医薬組成物を投与する工程を含み、当該医薬組成物が、投与前の当該対象における総ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質のレベルよりも１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、又は２０倍多く当該対象における総ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質のレベルを増加させる量で当該対象に投与される方法。
１１７． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物が、当該梗塞の検出の１５分間、３０分間、６０分間、９０分間、１２０分間、１８０分間、２１０分間、２４０分間、２７０分間、又は３００分間以内に当該対象に投与される、実施形態１１６に記載の方法。
１１８． 当該対象における局所脳血流が、脳梗塞を有しない対照対象と比較して少なくとも２５％改善される、実施形態１１１～１１７のいずれか１つに記載の方法。
１１９． 当該局所脳血流が、対照対象における局所脳血流と比較して少なくとも５０％改善される、実施形態１１１～１１８のいずれか１つに記載の方法。
１２０． 当該局所脳血流が、対照対象における局所脳血流と比較して少なくとも７５％改善される、実施形態１１１～１１８のいずれか１つに記載の方法。
１２１． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物が、複数回又は持続注入によって投与される、実施形態１１１～１２０のいずれか１つに記載の方法。
１２２． 当該投与によって、当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物が投与されていない対象における出血のレベルと比較して出血のレベルが増加しない、実施形態１１１～１２１のいずれか１つに記載の方法。
１２３． 当該投与によって梗塞体積が減少する、実施形態１１１～１２２のいずれか１つに記載の方法。
１２４． 当該梗塞体積が、脳梗塞を有しない対照対象における梗塞体積と比較して少なくとも５０％減少する、実施態様１２３に記載の方法。
１２５． 脳梗塞を経験したことのある対象における感覚運動機能の回復の改善をする方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は実施形態１２～２７のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与し、それによって、感覚運動機能の回復の改善をすることを含み、当該対象における局所脳血流が、脳梗塞を有しない対照対象における局所脳血流と比較して少なくとも２５％改善される方法。
１２６． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物が、単回ボーラス注射で、毎月、２週間ごとに、毎週、週２回、毎日、１２時間毎に、８時間毎に、６時間毎に、４時間毎に、２時間毎に、又は毎時間投与される、実施形態２５～１２５のいずれか１つに記載の方法。
１２７． 対象における心血管疾患に関連する凝血障害の治療又は予防をする方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は実施形態１２～２７のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
１２８． 当該心血管疾患に関連する凝血障害が、心筋梗塞、心筋虚血、深部静脈血栓症、末梢血管疾患、脳卒中、一過性虚血発作、又は医療機器関連血栓症に関連する、実施形態１２７に記載の方法。
１２９． 対象における血液疾患の治療又は予防をする方法であって、それを必要とする対象に、治療的に有効な量の実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は実施形態１２～２７のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
１３０． 当該血液疾患が、遺伝性ＴＴＰ、後天性ＴＴＰ、血栓性微小血管症、又は鎌状赤血球症である、実施形態１２９に記載の方法。
１３１． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物が、静脈内又は皮下に投与される、実施形態２８～１３０のいずれか１つに記載の方法。
１３２． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又はその組成物が、静脈内投与される、実施形態１３１に記載の方法。
１３３． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物が、皮下投与される、実施形態１３２に記載の方法。
１３４． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又はその組成物が皮下投与され、当該治療的に有効な量が静脈内使用のための治療量であり、皮下投与する場合は調整しなければならない、実施形態１３３に記載の方法。
１３５． 皮下投与後の当該ＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物のバイオアベイラビリティが、同じ用量で正規化した静脈内投与と比較して５０～８０％である、実施形態１３４に記載の方法。
１３６． 当該治療的に有効な量のＡＤＡＭＴＳ１３のバリアント又は組成物が、１キログラムあたりの活性単位で測定したとき、特定の適応症についての静脈内用量の少なくとも１２０～３００％の量を含む、実施形態１３４に記載の方法。
１３７． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、組み換え的に生成される、実施形態２８～１３６のいずれか１つに記載の方法。
１３８． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、ＨＥＫ２９３細胞によって組み換え的に生成される、実施形態２８～１３７のいずれか１つに記載の方法。
１３９． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、ＣＨＯ細胞によって組み換え的に生成される、実施形態２８～１３７のいずれか１つに記載の方法。
１４０． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び／又はＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、グリコシル化される、実施形態２８～１３９のいずれか１つに記載の方法。
１４１． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントが、１時間を超える血漿半減期を有する、実施形態２８～１４０のいずれか１つに記載の方法。
１４２． 当該対象が、哺乳類である、実施形態２８～１４１のいずれか１つに記載の方法。
１４３． 当該対象が、ヒトである、実施形態２８～１４２のいずれか１つに記載の方法。
１４４． 当該組成物が、凍結乾燥される、実施形態２８～１４３のいずれか１つに記載の方法。
１４５． 当該組成物が、投与前に、注射に好適な薬学的に許容し得るビヒクルで再構成される、実施形態１４４に記載の方法。
１４６． 当該組成物が、投与準備の整った安定な水溶液である、実施形態２８～１４３のいずれか１つに記載の方法。
１４７． 対象における凝血障害を治療又は予防するための、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は実施形態１２～２７のいずれか１つに記載の医薬組成物を含む組成物の使用。
１４８． 対象における凝血障害を治療又は予防するための医薬として使用するための、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は実施形態１２～２７のいずれか１つに記載の医薬組成物を含む組成物。
１４９． 当該凝血障害が、遺伝性ＴＴＰ、後天性ＴＴＰ、脳梗塞、心筋梗塞、虚血／再灌流傷害、深部静脈血栓症、又は敗血症関連播種性血管内凝固である、実施形態１４７に記載の使用又は実施形態１４８に記載の組成物。
１５０． 対象における出血エピソードを治療又は予防するための、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は実施形態１２～２７のいずれか１つに記載の医薬組成物を含む組成物の使用。
１５１． 対象における出血エピソードを治療又は予防するための医薬として使用するための、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は実施形態１２～２７のいずれか１つに記載の医薬組成物を含む組成物。
１５２． 当該出血エピソードが、遺伝性ＴＴＰ、後天性ＴＴＰ、脳梗塞、心筋梗塞、虚血／再灌流傷害、深部静脈血栓症、又は敗血症関連播種性血管内凝固に関連する、実施形態１５０に記載の使用又は実施形態１５１に記載の組成物。
１５３． 鎌状赤血球病に罹患している対象における血管閉塞性クリーゼを治療又は予防するための、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は実施形態１２～２７のいずれか１つに記載の医薬組成物を含む組成物の使用。
１５４． 鎌状赤血球病に罹患している対象における血管閉塞性クリーゼを治療又は予防するための医薬として使用するための、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は実施形態１２～２７のいずれか１つに記載の医薬組成物を含む組成物。
１５５． 急性肺傷害（ＡＬＩ）及び／又は急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）に罹患しているか又は罹患するリスクのある対象における肺傷害を治療する、寛解させる、又は予防するための、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は実施形態１２～２７のいずれか１つに記載の医薬組成物を含む組成物の使用。
１５６． 急性肺傷害（ＡＬＩ）及び／又は急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）に罹患しているか又は罹患するリスクのある対象における肺傷害を治療する、寛解させる、又は予防するための医薬として使用するための、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は実施形態１２～２７のいずれか１つに記載の医薬組成物を含む組成物。
１５７． 脳梗塞を経験したことのある対象における感覚運動機能の回復を改善するための、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は実施形態１２～２７のいずれか１つに記載の医薬組成物を含む組成物の使用であって、当該対象における局所脳血流が、脳梗塞を有しない対照対象における局所脳血流と比較して少なくとも２５％改善される使用。
１５８． 脳梗塞を経験したことのある対象における感覚運動機能の回復を改善するための医薬として使用するための、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント又は実施形態１２～２７のいずれか１つに記載の医薬組成物を含む組成物であって、当該対象における局所脳血流が、脳梗塞を有しない対照対象における局所脳血流と比較して少なくとも２５％改善される組成物。
１５９． 実施形態１～１１のいずれか１つのいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントをコードしている核酸分子。
１６０． 実施形態１５９に記載の核酸分子を含むベクター。
１６１． 当該ベクターが、当該ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントをコードしているポリヌクレオチド配列が宿主細胞における当該ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの発現を媒介することができるプロモーターに作動可能に連結されている発現ベクターである、実施形態１６０に記載のベクター。
１６２． 実施形態１５９に記載の核酸分子を含む宿主細胞。
１６３． 実施形態１６０又は実施形態１６１に記載のベクターを含む、宿主細胞。
１６４． 実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び少なくとも１つのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を発現するように改変された細胞を含む宿主細胞株。
１６５． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントが、配列番号２のアミノ酸配列又はその少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１６４に記載の宿主細胞株。
１６６． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質のアミノ酸配列が、配列番号１のアミノ酸配列又はその少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１６４又は１６５に記載の宿主細胞株。
１６７． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質のアミノ酸配列が、配列番号１のアミノ酸配列からなる、実施形態１６４～１６６のいずれか１つに記載の宿主細胞株。
１６８． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び当該ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、当該宿主細胞株における異なる細胞で発現する、実施形態１６４～１６８のいずれか１つに記載の宿主細胞株。
１６９． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３バリアント及び当該ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、同一細胞内で発現する、実施形態１６４～１６９のいずれか１つに記載の宿主細胞株。
１７０． 当該細胞が、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ、ＳＫ－Ｈｅｐ、又はＨｅｐＧ２の細胞である、実施形態１６２～１６９のいずれか１つに記載の宿主細胞又は宿主細胞株。
１７１． 当該ＣＨＯ細胞が、ＣＨＯ ＤＢＸ－１１又はＣＨＯＺＮの細胞株である、実施形態１７０に記載の宿主細胞又は宿主細胞株。
１７２． 当該ＣＨＯＺＮ細胞が、ＣＨＯ ＤＢＸ－１１細胞株である、実施形態１７１に記載の宿主細胞又は宿主細胞株。
１７３． 当該ＣＨＯＺＮ細胞が、ＣＨＯＺＮグルタミン合成酵素（ＧＳ）^－／－細胞株である、実施形態１７１に記載の宿主細胞又は宿主細胞株。
１７４． １つ以上のグリコシル化部位を含む、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質又はそのバリアント。
１７５． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントが、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを含む、実施形態１７４に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１７６． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列又はその少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１７４に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１７７． Ｏ－グリコシル化部位でグリコシル化される、実施形態１７４～１７６のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１７８． １つ以上のＯ－グリコシル化部位Ｓ３９９、Ｓ６９８、Ｓ７５７、Ｓ９０７、Ｓ９６５、Ｓ１０２７、又はＳ１０８７におけるセリン残基でグリコシル化される、実施形態１７７に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１７９． 二糖Ｆｕｃ－Ｇｌｃでグリコシル化される、実施形態１７７に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１８０． ムチン型Ｏ－グリカンでグリコシル化される、実施形態１７７に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１８１． 当該ムチン型Ｏ－グリカンが、構造ＨｅｘＮＡｃ－Ｈｅｘ－ＮｅｕＡｃ_０－２を有する、実施形態１８０に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１８２． Ｎ－グリコシル化部位でグリコシル化される、実施形態１７４～１８１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１８３． １つ以上のＮ－グリコシル化部位Ｎ１４２、Ｎ１４６、Ｎ５５２、Ｎ５７９、Ｎ６１４、Ｎ６６７、Ｎ７０７、Ｎ８２８、Ｎ１２３５、又はＮ１３５４におけるアスパラギン残基でグリコシル化される、実施形態１８２に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１８４． 高マンノース型Ｎ－グリカンでグリコシル化される、実施形態１８２に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１８５． ハイブリッド型Ｎ－グリカンでグリコシル化される、実施形態１８２に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１８６． 複合型Ｎ－グリカンでグリコシル化される、実施形態１８２に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１８７． 複合型Ｎ－結合型グリカンが、コア－フコース残基を含む、実施形態１８６に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１８８． 複合型Ｎ－結合型グリカンが、１つ以上のシアル酸残基を含む、実施形態１８６に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１８９． 複合型Ｎ－結合型グリカンが、１つのシアル酸残基を含む、実施形態１８６に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１９０． 複合型Ｎ－結合型グリカンが、２つのシアル酸残基を含む、実施形態１８６に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１９１． 複合型Ｎ－結合型グリカンが、３つのシアル酸残基を含む、実施形態１８６に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１９２． 複合型Ｎ－結合型グリカンが、４つのシアル酸残基を含む、実施形態１８６に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１９３． 当該シアル酸残基が、α２，６－結合を介して結合される、実施形態１８８に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１９４． 当該シアル酸残基が、α２，３－結合を介して結合される、実施形態１８８に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１９５． １つ以上のＣ－マンノシル化部位におけるトリプトファン残基でグリコシル化される、実施形態１７４～１８１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１９６． １つ以上のＣ－マンノシル化部位Ｗ３８７又はＷ３９０におけるトリプトファン残基でグリコシル化される、実施形態１８７に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１９７． マンノシル残基でグリコシル化される、実施形態１８７に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１９８． 当該ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントのＮ－グリカン指数が、当該ＡＤＡＭＴＳ１３のＮ－グリカン指数と実質的に類似している、実施形態１７４～１８１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
１９９． 当該Ｎ－グリカン指数が、約１２０～約１９０である、実施形態１７４～１８１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
２００． 当該Ｎ－グリカン指数が、１４０未満である、実施形態１７４～１８１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
２０１． 当該シアル酸残基の量が、ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質１ｍｇあたりシアル酸約１３０～約１６９ｎｍｏｌである、実施形態１７４～１８１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
２０２． 以下のパラメータのうちの１つ以上に一致するＮ－グリカンシグネチャー（すなわち、総和１００％）を含む、実施形態１７４～１７６のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント：
ａ．合わせて少なくとも約７５％の中性のモノ及びジシアル化Ｎ－グリカンを有する；
ｂ．合わせて少なくとも約５％のトリ及びテトラシアリル化グリカンを有する；
ｃ．約１０％～約３５％の中性Ｎ－グリカンを有する；
ｄ．約２０％～約５０％のモノシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｅ．約１０％～約４０％のジシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｆ．約１％～約２５％のトリシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｇ．約０．１％～約１０％のテトラシアリル化Ｎ－グリカンを有する；及び／又は
ｈ．約１１０～約１６０のＮ－グリカン指数を有する。
２０３． 以下のパラメータのうちの１つ以上に一致するＮ－グリカンシグネチャーを含む、実施形態２０２に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント：
ａ．合わせて少なくとも約８０％の中性のモノ及びジシアル化Ｎ－グリカンを有する；
ｂ．合わせて少なくとも約１０％のトリ及びテトラシアリル化グリカンを有する；
ｃ．約１５％～約３０％の中性Ｎ－グリカンを有する；
ｄ．約２５％～約４５％のモノシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｅ．約１５％～約３５％のジシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｆ．約５％～約２０％のトリシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｇ．約１％～約５％のテトラシアリル化Ｎ－グリカンを有する；及び／又は
ｈ．約１２０～約１５０のＮ－グリカン指数を有する。
２０４． 以下のパラメータのうちの１つ以上に一致するＮ－グリカンシグネチャーを含む、実施形態２０２に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント：
ａ．合わせて少なくとも約８５％の中性のモノ及びジシアル化Ｎ－グリカンを有する；
ｂ．合わせて少なくとも約１４％のトリ及びテトラシアリル化グリカンを有する；
ｃ．約２０％～約２５％の中性Ｎ－グリカンを有する；
ｄ．約３０％～約４０％のモノシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｅ．約２０％～約３０％のジシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｆ．約１０％～約１５％のトリシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｇ．約２％～約４％のテトラシアリル化Ｎ－グリカンを有する；及び／又は
ｈ．約１３０～約１４０のＮ－グリカン指数を有する。
２０５． 以下のパラメータのうちの１つ以上に一致するＮ－グリカンシグネチャーを含む、実施形態２０２に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント：
ａ．合わせて少なくとも約８６％の中性のモノ及びジシアル化Ｎ－グリカンを有する；
ｂ．合わせて少なくとも約１５％のトリ及びテトラシアリル化グリカンを有する；
ｃ．約２３％～約２４％の中性Ｎ－グリカンを有する；
ｄ．約３４％～約３６％のモノシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｅ．約２６％～約２９％のジシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｆ．約１１％～約１２％のトリシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｇ．約３％のテトラシアリル化Ｎ－グリカンを有する；及び／又は
ｈ．約１３３～約１３９のＮ－グリカン指数を有する。
２０６． 約１％～約１５％のＮＡＮＡに対するＮＧＮＡの％の比を含むシアル酸シグネチャーを含む、実施形態１７４～１７６のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
２０７． 約２％～約１０％のＮＡＮＡに対するＮＧＮＡの％の比を含むシアル酸シグネチャーを含む、実施形態２０６に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
２０８． 約３％～約８％のＮＡＮＡに対するＮＧＮＡの％の比を含むシアル酸シグネチャーを含む、実施形態２０６に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
２０９． 約４％～約５％のＮＡＮＡに対するＮＧＮＡの％の比を含むシアル酸シグネチャーを含む、実施形態２０６に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
２１０． 以下のパラメータのうちの１つ以上に一致するＮ－グリカンシグネチャー（すなわち、総和１００％）を含む、実施形態１７４～１７６のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント：
ａ．合わせて少なくとも約８０％の中性のモノ及びジシアル化Ｎ－グリカンを有する；
ｂ．合わせて少なくとも約１６％のトリ及びテトラシアリル化グリカンを有する；
ｃ．約５％～約３０％の中性Ｎ－グリカンを有する；
ｄ．約１０％～約４５％のモノシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｅ．約２０％～約５５％のジシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｆ．約１％～約３０％のトリシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｇ．約０．１％～約１５％のテトラシアリル化Ｎ－グリカンを有する；及び／又は
ｈ．約１３０～約１９０のＮ－グリカン指数を有する。
２１１． 以下のパラメータのうちの１つ以上に一致するＮ－グリカンシグネチャーを含む、実施形態２１０に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント：
ａ．合わせて少なくとも約８３％の中性のモノ及びジシアル化Ｎ－グリカンを有する；
ｂ．合わせて少なくとも約１７％のトリ及びテトラシアリル化グリカンを有する；
ｃ．約８％～約２５％の中性Ｎ－グリカンを有する；
ｄ．約１５％～約４０％のモノシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｅ．約２５％～約５０％のジシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｆ．約５％～約２５％のトリシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｇ．約１％～約１０％のテトラシアリル化Ｎ－グリカンを有する；及び／又は
ｈ．約１４０～約１８５のＮ－グリカン指数を有する。
２１２． 以下のパラメータのうちの１つ以上に一致するＮ－グリカンシグネチャーを含む、実施形態２１０に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント：
ａ．合わせて少なくとも約８５％の中性のモノ及びジシアル化Ｎ－グリカンを有する；
ｂ．合わせて少なくとも約１８％のトリ及びテトラシアリル化グリカンを有する；
ｃ．約１０％～約２０％の中性Ｎ－グリカンを有する；
ｄ．約２０％～約３５％のモノシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｅ．約３０％～約４５％のジシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｆ．約１０％～約２０％のトリシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｇ．約２％～約８％のテトラシアリル化Ｎ－グリカンを有する；及び／又は
ｈ．約１４５～約１７５のＮ－グリカン指数を有する。
２１３． 以下のパラメータのうちの１つ以上に一致するＮ－グリカンシグネチャーを含む、実施形態２１０に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント：
ａ．合わせて少なくとも約８６％の中性のモノ及びジシアル化Ｎ－グリカンを有する；
ｂ．合わせて少なくとも約１９％のトリ及びテトラシアリル化グリカンを有する；
ｃ．約１３％～約１６％の中性Ｎ－グリカンを有する；
ｄ．約２６％～約３３％のモノシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｅ．約３７％～約４３％のジシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｆ．約１２％～約１５％のトリシアリル化Ｎ－グリカンを有する；
ｇ．約３％～約６％のテトラシアリル化Ｎ－グリカンを有する；及び／又は
ｈ．約１５３～約１７０のＮ－グリカン指数を有する。
２１４． 以下のパラメータのうちの１つ以上に一致する単糖シグネチャー（すなわち、総和１００％）を含む、実施形態１７４～１７６のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント：
ａ．約１０％～約４０％のＧｌｃＮＡｃを有する；
ｂ．約０．１％～約１０％のＧａｌＮＡｃを有する；
ｃ．約１０％～約３５％のＧａｌを有する；
ｄ．約１０％～約３５％のＭａｎを有する；
ｅ．約０．１％～約２０％のＧｌｃを有する；及び／又は
ｆ．約５％～約２０％のＦｕｃを有する。
２１５． 以下のパラメータのうちの１つ以上に一致する単糖シグネチャーを含む、実施形態２１４に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント：
ａ．約１５％～約３５％のＧｌｃＮＡｃを有する；
ｂ．約１％～約８％のＧａｌＮＡｃを有する；
ｃ．約１５％～約３０％のＧａｌを有する；
ｄ．約１５％～約３０％のＭａｎを有する；
ｅ．約１％～約１５％のＧｌｃを有する；及び／又は
ｆ．約１０％～約１５％のＦｕｃを有する。
２１６． 以下のパラメータのうちの１つ以上に一致する単糖シグネチャーを含む、実施形態２１４に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント：
ａ．約２０％～約３０％のＧｌｃＮＡｃを有する；
ｂ．約５％～約６％のＧａｌＮＡｃを有する；
ｃ．約２０％～約２５％のＧａｌを有する；
ｄ．約２０％～約２８％のＭａｎを有する；
ｅ．約５％～約１０％のＧｌｃを有する；及び／又は
ｆ．約１１％～約１２％のＦｕｃを有する。
２１７． 以下のパラメータのうちの１つ以上に一致する単糖シグネチャーを含む、実施形態２１４に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント：
ａ．約２７％～約２９％のＧｌｃＮＡｃを有する；
ｂ．約６％のＧａｌＮＡｃを有する；
ｃ．約２３％～約２４％のＧａｌを有する；
ｄ．約２３％～約２５％のＭａｎを有する；
ｅ．約６％～約７％のＧｌｃを有する；及び／又は
ｆ．約１２％のＦｕｃを有する。
２１８． 以下のパラメータのうちの１つ以上に一致するシアル酸シグネチャーを含む、実施形態１７４～１７６のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント：
ａ．約１００ｎｍｏｌ ＮＡＮＡ／ｍｇ～約２００ｎｍｏｌ ＮＡＮＡ／ｍｇを有する；
ｂ．約０．０１ｎｍｏｌ ＮＧＮＡ／ｍｇ～約１ｎｍｏｌ ＮＧＮＡ／ｍｇを有する；及び／又は
ｃ．約０．０１％～約１％のＮＡＮＡに対するＮＧＮＡの％の比を有する。
２１９． 以下のパラメータのうちの１つ以上に一致するシアル酸シグネチャーを含む、実施形態２１８に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント：
ａ．約１１０ｎｍｏｌ ＮＡＮＡ／ｍｇ～約１８０ｎｍｏｌ ＮＡＮＡ／ｍｇを有する；
ｂ．約０．０５ｎｍｏｌ ＮＧＮＡ／ｍｇ～約０．５０ｎｍｏｌ ＮＧＮＡ／ｍｇを有する；及び／又は
ｃ．約０．０５％～約０．５％のＮＡＮＡに対するＮＧＮＡの％の比を有する。
２２０． 以下のパラメータのうちの１つ以上に一致するシアル酸シグネチャーを含む、実施形態２１８に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント：
ａ．約１２５ｎｍｏｌ ＮＡＮＡ／ｍｇ～約１７０ｎｍｏｌ ＮＡＮＡ／ｍｇを有する；
ｂ．約０．０８ｎｍｏｌ ＮＧＮＡ／ｍｇ～約０．３０ｎｍｏｌ ＮＧＮＡ／ｍｇを有する；及び／又は
ｃ．約０．０６％～約０．２％のＮＡＮＡに対するＮＧＮＡの％の比を有する。
２２１． 以下のパラメータのうちの１つ以上に一致するシアル酸シグネチャーを含む、実施形態２１８に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント：
ａ．約１３０ｎｍｏｌ ＮＡＮＡ／ｍｇ～約１６９ｎｍｏｌ ＮＡＮＡ／ｍｇを有する；
ｂ．約０．１ｎｍｏｌ ＮＧＮＡ／ｍｇ～約０．３ｎｍｏｌ ＮＧＮＡ／ｍｇを有する；及び／又は
ｃ．約０．１％～約０．２％のＮＡＮＡに対するＮＧＮＡの％の比を有する。
２２２． ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ、ＳＫ－Ｈｅｐ、又はＨｅｐＧ２の細胞株で生成される、実施形態１７４～２２１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
２２３． 当該ＣＨＯ細胞が、ＣＨＯ ＤＢＸ－１１又はＣＨＯＺＮの細胞株である、実施形態２２２に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
２２４． 当該ＣＨＯＺＮ細胞が、ＣＨＯＺＮグルタミン合成酵素（ＧＳ）^－／－細胞株である、実施形態２２３に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
２２５． ＣＨＯ細胞株で生成される、実施形態１７４～２０１又は２１０～２２１のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
２２６． 当該ＣＨＯＺＮ細胞が、ＣＨＯＺＮグルタミン合成酵素（ＧＳ）^－／－細胞株である、実施形態２２５に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
２２７． ＣＨＯ細胞株で生成される、実施形態１７４～２０９のいずれか１つに記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。
２２８． 当該ＣＨＯＺＮ細胞が、ＣＨＯ ＤＢＸ－１１である、実施形態２２７に記載のＡＤＡＭＴＳ１３又はそのバリアント。

【実施例】

【0310】

ＶＩＩＩ．実施例
実施例１：野生型ｒＡＤＡＭＴＳ１３とＱ^９７Ｒ ｒＡＤＡＭＴＳ１３バリアントとの組み合わせを含むｒＡＤＡＭＴＳ１３組成物に対する血漿由来ＡＤＡＭＴＳ１３（ｐｄＡＤＡＭＴＳ１３）のＶＷＦ切断の評価
比活性は、タンパク質の品質及び力価に関する情報を提供し、活性が低いほどタンパク質の品質及び力価が低いことを示す。従って、野生型ｒＡＤＡＭＴＳ１３及びＱ^９７Ｒバリアントの混合物で構成されるｒＡＤＡＭＴＳ１３ ５０バッチの比活性データ（ＦＲＥＴＳ Ｕ／抗原Ｕ）を、８０人の健常ドナーの血漿由来（ｐｄＡＤＡＭＴＳ１３）の比活性データ（ＦＲＥＴＳ Ｕ／抗原Ｕ）と比較した。ｒＡＤＡＭＴＳ１３ ｃＤＮＡ（ｍＲＮＡ）のコード配列の２９０位においてアデニンからグアニンへ単一のコードヌクレオチドを交換することにより、Ｑ^９７Ｒ ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントが得られる。

【0311】

比活性は、紫外吸収分光光度法によって求めた総タンパク質１ｍｇあたりのＡＤＡＭＴＳ１３活性（ＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３）を算出することによって求めた。サンプルに含有されているＶＷＦ（＝リストセチンコファクター）は、リストセチンの存在下で安定化血小板を凝集させ、これらはいずれも「フォンビルブランド試薬」（Ｂｅｈｒｉｎｇ Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ，ＢＣＳ，Ｓｉｅｍｅｎｓ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に含有されている。凝集により試薬製剤の濁度が低下するので、光学濃度の変化を凝集システムアナライザー（Ｂｅｈｒｉｎｇ Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ，ＢＣＳ，Ｓｉｅｍｅｎｓ，Ｇｅｒｍａｎｙ）によって測定する。ＷＨＯ標準に対して較正した参照血漿の様々な希釈物によって構築された参照曲線から、ＶＷＦ：ＲＣｏ活性を算出した。

【0312】

個々の健常ドナー由来の血漿サンプルは、分析した組み換え野生型及びＱ^９７Ｒバリアント混合バッチと比較して、ＡＤＡＭＴＳ１３の比活性において大きなばらつきを示す（図３）。しかし、混合ｒＡＤＡＭＴＳ１３バッチの平均比活性はｐｄＡＤＡＭＴＳ１３の比活性と同等であり、このことは、混合ｒＡＤＡＭＴＳ１３バッチの力価も同様にｐｄＡＤＡＭＴＳ１３の力価と同等であることを示す。

【0313】

完全長ＶＷＦは、Ｔｙｒ１６０５とＭｅｔ１６０６との間のＡ２ドメイン内の単一のペプチド結合においてヒトＡＤＡＭＴＳ１３によって切断され、それによって、Ｎ末端の１４０ｋＤａの断片及びＣ末端の１７６ｋＤａの断片が生成される。従って、ＶＷＦの切断は、ＡＤＡＭＴＳ１３の力価の別の指標となる。分解速度実験のデータは、混合ｒＡＤＡＭＴＳ１３バッチ及びｐｄＡＤＡＭＴＳ１３が類似の切断速度を有することを示し、このことは、混合ｒＡＤＡＭＴＳ１３バッチ及びｐｄＡＤＡＭＴＳ１３の活性が同等であることを示す（表１参照）。

【0314】

【表1】

【0315】

このように、ｐｄＡＤＡＭＴＳ１３及び混合ｒＡＤＡＭＴＳ１３バッチの比活性及びＶＷＦ切断には差がない。

【0316】

実施例２：Ｑ^９７Ｒ ｒＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの構造機能関係
Ｑ^９７Ｒ ｒＡＤＡＭＴＳ１３バリアントがｒＡＤＡＭＴＳ１３の構造／機能に影響を与えるかどうかを予測するために、Ｑ^９７Ｒ ｒＡＤＡＭＴＳ１３バリアントをモデル化した（図４）。この研究では、ＡＤＡＭＴＳ１３のＮ末端ＭＤＴＣＳドメインの３次元構造をモデル化し、Ｃ末端ドメインがＭドメインのＡＤＡＭＴＳ１３活性を調節するという公開データを再検討した。ＭドメインのＱ^９７は溶媒に露出しており、ＶＷＦ切断部位及び金属イオン結合部位から離れた場所に位置することが判明し、これらの結合ドメインの調節における役割は否定された。しかし、この研究は、Ｑ^９７がＣ末端のＣＵＢ１－２相互作用に関与しているかも知れない可能性を否定するものではなかった。

【0317】

インシリコツールを用いてＡＤＡＭＴＳ１３の計算モデルを作成し、モデル上にＱ^９７をマッピングするために、本研究を設計した。その意図は、Ｑ^９７Ｒがタンパク質のフォールディング、安定性、又はプロテアーゼの活性化を変化させ得るどうかを、当該計算モデル及び刊行物からの知見に基づいて示すことにあった。ＡＤＡＭＴＳ１３のＤＴＣＳドメインの結晶構造をＭＤドメインのモデルにつなぎ合わせることによって、ヒトＡＤＡＭＴＳ１３のＭＤＴＣＳドメインのモデルを構築した。

【0318】

ヒトＡＤＡＭＴＳ１３（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｑ７６ＬＸ８）のＭＤドメインを網羅する残基８０～３８３を用いて、計算モデルを作成した。プログラムＭＯＥバージョン２０１６．０８０２のホモログモデリングツールを備えるＤｅｌｌ Ｌｉｎｕｘワークステーション（システムデスクトップ管理情報：４４４５４Ｃ４Ｃ－４３００－１０３８－８０４Ｂ－Ｂ６Ｃ０４Ｆ５８４７３２）でモデリングを実施した。モデリングテンプレートとして、ＡＤＡＭＴＳ４のＭＤドメイン（ＰＤＢコード２ＪＲＰ［２］）の結晶構造を入力した。

【0319】

プログラムＣｏｏｔバージョン０．８．６のＳＳＭアライメントを用いてＤドメインとアラインすることによって、出力されたＡＤＡＭＴＳ１３のＭＤドメインのモデルをヒトＡＤＡＭＴＳ１３のＤＣＴＳドメイン（ＰＤＢコード３ＪＨＮ［１］）と重ね合わせた。次いで、ＭドメインのＡｓｐ２９８をＤドメインのＡｌａ２９９に手動で接続することによって、モデル化したＭドメインをＤＴＣＳドメインにつなぎ合わせて、完全なＭＤＴＣＳドメインのモデルを作成した。

【0320】

次いで、可視化、Ｑ^９７のマッピング、及び図面の作成のためにＭＤＴＣＳモデルをプログラムＰｙｍｏｌバージョン１．８．２．２にロードした。

【0321】

Ｑ^９７は、Ｍプロテアーゼドメイン上に露出しており、安定なヘリックス－ターン－ヘリックス構造の短い２残基のターンに位置している。Ｑ^９７に隣接するヘリックスは、Ｍドメイン内でフォールディングされるか、又はＭＤドメイン界面の相互作用を媒介することによって安定化される。Ｑ^９７及びＥ９８は、Ｍドメインにおけるフォールディングも金属イオンの結合も媒介せず、Ｑ^９７は、提案されたＶＷＦ結合部位から離れている。現在の知見では、Ｑ^９７がＣＵＢドメインの調節に関与している可能性を否定することはできない。最近の２つの刊行物は、小角Ｘ線散乱及び電子顕微鏡法によって、ＣＵＢ１－２ドメインがＮ末端のＭＤＴＣＳドメインに折り返され、ＡＤＡＭＴＳ１３活性を調節することを示している（それぞれ全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｕｉａら、上掲；Ｓｏｕｔｈら、上掲）。インサイツモデリングにより、Ｑ^９７Ｒ変異はＡＤＡＭＴＳ１３の機能に影響を与えないという証拠が得られた。

【0322】

Ｑ^９７はＭドメインの表面に位置し、タンパク質のフォールディングを媒介しないことが判明した。また、この残基は、ＶＷＦの結合及び切断の部位、亜鉛及びカルシウムの結合部位、ＭとＤＴＣＳとの間のドメイン界面を含む、提案された機能部位からも離れている。ＭＤＴＣＳドメインの計算モデルは、Ｑ^９７がＡＤＡＭＴＳ１３のＮ－末端ドメインの構造も機能も媒介しないことを示唆している。しかし、公表されたデータにより、Ｃ末端のＣＵＢ１－２ドメインがＭＤＴＣＳドメインと相互作用してＶＷＦ結合前にプロテアーゼを低活性状態に保つ、ＡＤＡＭＴＳ１３のアロステリックな活性化が示されている。Ｑ^９７がＣＵＢ１－２とＭＤＴＣＳとの間のドメイン相互作用に関与している可能性があるかどうかは未だ不明である。

【0323】

実施例３：様々な比のＱ^９７Ｒ ｒＡＤＡＭＴＳ１３バリアント対野生型ｒＡＤＡＭＴＳ１３を含むｒＡＤＡＭＴＳ１３組成物の評価
この実施例では、合計３５バッチを調べた。評価のため、サンプルをトリプシン消化に基づくペプチドマッピングに供した。特に、精製したｒＡＤＡＭＴＳ１３ ＢＤＳのサンプルをジチオスレイトール（ＤＴＴ）で還元し、遊離スルフヒドリル基をヨードアセトアミドでブロッキングした。サンプルを脱塩し、次いで、シーケンシング等級のトリプシンと共に１８時間インキュベートした。得られたペプチド混合物を逆相クロマトグラフィーによって分離し、溶出したペプチドを２１４ｎｍにおけるオンラインＵＶ検出及びオンラインエレクトロスプレーイオン化質量分析計によって検出した。Ｑ^９７Ｒバリアントの存在量を求めるために、変異したアミノ酸を保有するペプチドを分析した。

【0324】

ネイティブタンパク質のＮ末端トリプシンペプチドは２８個のアミノ酸を含有する：
７５～１０２位：

【0325】

【化2】

【0326】

「Ｑ」から「Ｒ」にアミノ酸が変化することにより、Ｑ^９７Ｒバリアントの配列に追加のトリプシン切断部位が導入される。従って、対応するペプチドから、２つのトリプシンペプチドが生じる：
７５～９７位：

【0327】

【化3】

【0328】

９８～１０２位：ＥＤＴＥＲ
Ｑ^９７Ｒバリアントの切断に失敗した形態も同様に考慮しなければならない：
７５～１０２位：

【0329】

【化4】

【0330】

Ｑ^９７Ｒバリアントでは、対象となるペプチドは、７５～１０２位の切断に失敗した形態でも検出された。切断に失敗した形態は正しく切断されたペプチドよりも存在量が少なかったが、そのレベルは方法のばらつきにより変動した。このばらつきには、分析者が制御することができないトリプシンの酵素活性のばらつきも含まれる。そこで、Ｑ^９７Ｒの量を正確に求めるために、正しく切断されたトリプシンペプチド（７５～９７）及び切断に失敗した形態（９８～１０２）のピーク面積を合計した。

【0331】

ＨＰＬＣデータは、バリアントのトリプシンペプチドを液体クロマトグラフィーによって分離できることを示す。以下の質量分析により、ネイティブバリアントのトリプシンペプチドがＱ^９７Ｒバリアントのトリプシンペプチドの前に溶出することが確認された（図５）。Ｑ^９７Ｒバリアントの切断に失敗したトリプシンペプチドは、ネイティブバリアントのペプチドよりも前に溶出する。単一組成物におけるこれらペプチドの存在量は同等であり、抽出イオンクロマトグラムにおける強度に基づいて求められ（図６）、このことは、製造キャンペーン全体で両バリアントの存在量が同等であることを示す。ネイティブ及びＱ^９７Ｒのバリアントの抽出イオンクロマトグラムを作成し、積分し、相対ピーク面積を算出した（表２）。

【0332】

Ｑ^９７ペプチド及びＱ^９７Ｒバリアントの両方のピーク面積の合計に関して算出されたトリプシンペプチドのピーク面積に基づいて、Ｑ^９７Ｒバリアントの相対的存在量を求めた。Ｑ^９７ペプチド及びＱ^９７Ｒバリアント（正しく切断されたもの及び切断に失敗したもの）の抽出イオンクロマトグラムを作成し、積分し、相対ピーク面積を算出した。

【0333】

【表2】

【0334】

Ｑ^９７Ｒバリアントの機能性を評価するために、回帰分析を用いてＱ^９７Ｒの相対的存在量に対する比活性（ＦＲＥＴＳ Ｕ／ｍｇ ＵＶタンパク質）を設定した（図７）。図７に示されているように、バリアント比（すなわち、Ｑ^９７Ｒ ｒＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの野生型ＡＤＡＭＴＳ１３に対する比）と比活性との間には相関がなく、このことは、Ｑ^９７Ｒ ｒＡＤＡＭＴＳ１３バリアントが野生型ＡＤＡＭＴＳ１３と類似の活性を有することを示唆している。

【0335】

完全長ＶＷＦは、Ｔｙｒ１６０５とＭｅｔ１６０６との間のＡ２ドメイン内の単一のペプチド結合においてヒトＡＤＡＭＴＳ１３によって切断され、それによって、Ｎ末端の１４０ｋＤａの断片及びＣ末端の１７６ｋＤａの断片が生成される。多量体ＶＷＦの存在量の減少は、アガロースゲル電気泳動を用いて検出される。従って、ＶＷＦの切断は、ＡＤＡＭＴＳ１３の力価の別の指標となる。

【0336】

また、完全長ＶＷＦ切断アッセイを用いて、機能性に対する影響も評価した。そこで、ＶＷＦ切断のデータをＱ^９７Ｒバリアントの存在量に対してプロットした（図８）。解析の結果、ｐ値は０．８３２となり、Ｑ^９７Ｒバリアントの存在量とＶＷＦ切断活性との間には相関がないことが示された。

【0337】

実施例４：Ｑ^９７Ｒバリアントの相対量の決定
合計１２バッチにおいて、Ｑ^９７Ｒタンパク質バリアントの相対的な比率について分析した。これら１２バッチには、生成プロセスの性質に起因する潜在的なばらつきを考慮するために、トリプシン消化法による生化学的特性評価中に得られたデータの再評価により明らかになった、Ｑ^９７Ｒが比較的少ない部分及び多い部分が含まれている。

【0338】

Ｑ^９７Ｒバリアントの相対量を求めるために、トロンビンタンパク質消化とその後の蛍光検出器と組み合わせた逆相高性能液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ－ＦＬＤ）による分析に基づく方法を用いてサンプルを試験した。サンプル調製は、アセトン沈殿、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）による還元、ヨードアセトアミド（ＩＡＡ）によるアルキル化、及びＮ－結合型オリゴ糖を切断するためのＰＮＧａｓｅＦとの一晩のインキュベーションを含んでいた。最後に、トロンビンを用いてタンパク質を６０分間消化したところ、アミノ酸交換部位を含有する両タンパク質バリアントから等しく切断された断片が生成された。サンプル２０μＬを、０．４ｍＬ／分、カラム温度７０℃で実施したＡｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ ３００ＳＢ－Ｃ８カラム（１．８μｍ；２．１×１００ｍｍ）を用いるＲＰ－ＨＰＬＣで分析した。５．８分間で１２％Ｂ→４４％Ｂの勾配溶出を行い、続いて、励起波長２８０ｎｍ及び発光波長３４０ｎｍで蛍光検出を行った。データ解析のため、Ｑ^９７及びＱ^９７Ｒバリアントに対応するピークを積分し、相対ピーク面積（％）を表３に報告する。

【0339】

【表3】

【0340】

信頼区間９５％及び母集団確率９９．７３％で、Ｑ^９７Ｒバリアントの相対比率は４６．５％～８４．３％の範囲であり、これは平均±４．８×標準偏差に相当する。Ｑ^９７Ｒの平均量は６５．４％であった。

【0341】

実施例５：Ｑ^９７ ＡＤＡＭＴＳ１３及びＱ^９７Ｒ ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントの発現及び特性評価
全体的なストラテジーは、構造及び機能の特性評価を行うためにＱ^９７ ＡＤＡＭＴＳ１３及びＱ^９７Ｒ ＡＤＡＭＴＳ１３バリアントを個別に発現させることであった。２つの個々のタンパク質（Ｑ^９７及びＲ^９７）の分析的特性評価を行った。機能、一次構造、及び高次構造に着目して特性評価を行った。特性評価の結果を表５及び表８にまとめる。

【0342】

２つの細胞株を、ＳＡＦＣ ＣＨＯＺＮ ＧＳ^－／－宿主細胞系に基づくクローンプールで生成し、ＥＸ－Ｃｅｌｌ Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣＨＯ流加培地で維持した。２つのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質の切断を防ぐために、上流及び下流のプロセスでアプロチニンを使用した。

【0343】

２つの個々のＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質は、２つの異なる細胞系で生成したので、タンパク質濃度が異なっていた。タンパク質の濃度が異なると、予測通り、活性及び抗原レベルも異なる。サンプルのタンパク質濃度は表４の通りであり、これを用いて活性と相互に関係付けた。関連するパラメータは、タンパク質濃度に依存しない比活性値であり、これら結果は２つの個々のバリアントで高度に同等であった。

【0344】

【表4】

【0345】

【表5】

【0346】

ＡＤＡＭＴＳ１３形態のオリゴマー構造を決定するために、サイズ排除高性能液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）法を使用した。両サンプルとも大部分は単量体形態で存在する。単量体のピークは小さなショルダーを示し、これはタンパク質の切断型であることを示す。しかし、ショルダーは両タンパク質バリアントサンプルに存在していた。また、二量体形態及び凝集体形態のタンパク質も少量存在していた（表６）。２つのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質のオリゴマー構造は同等であった。

【0347】

【表6】

【0348】

両ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質について、拡張特性評価プログラムを実施した。後述の通り特性評価試験パネルを実施し、列挙する基準に基づいて同等性を評価した。アッセイのばらつきの影響を軽減するために、拡張特性評価プログラムでは両タンパク質を並べて試験した。

【0349】

一次構造解析では、ペプチドマッピングアプローチを用いてｒＡＤＡＭＴＳ１３の一次構造を調べた。精製したｒＡＤＡＭＴＳ１３のサンプルをジチオスレイトールで還元し、遊離スルフヒドリル基をヨードアセトアミドでブロッキングした。Ｚｅｂａスピンカラムを用いて試薬を除去し、質量分析等級のトリプシンを加え、＋３７℃で１８時間反応させた。得られたペプチド混合物をＲＰ－ＨＰＬＣによって分離し、溶出ペプチドを２１４ｎｍでオンラインＵＶ検出によって検出し、質量分析検出を用いて同定した。ペプチドマッピングのデータは、２つのＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質がその純粋形態で存在することを示し、他の形態の夾雑は検出されなかった。

【0350】

タンパク質組成分析では、ｒＡＤＡＭＴＳ１３ ＢＤＳバッチを還元条件下で３～８％トリス－酢酸ゲルを使用するＳＤＳ ＰＡＧＥによって分析した。ゲルをフラミンゴ蛍光ゲル染色で染色して、分析したバッチのタンパク質組成を評価した（図９）。ウェスタンブロッティングでは、抗ＡＤＡＭＴＳ１３抗体で染色した後、タンパク質をニトロセルロースメンブレンに転写した。染色したゲル／メンブレンの目視比較によって同等性を評価した（図１０）。ｒＡＤＡＭＴＳ１３の平均分子量を求めるために、サンプルをマトリックス分子としてのシナピン酸と混合した。サンプル／マトリックス混合物をターゲット上にスポットし、ＨＭ－１高質量検出器（ＣｏｖａｌＸ）を備えたモデル４８００ ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ／ＴＯＦ機器（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）によるマトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析（ＭＡＬＤＩ ＭＳ）を用いて線形ポジティブイオンモードで分子質量を測定した。

【0351】

翻訳後修飾分析では、ＰＮＧａｓｅＦでＮ－結合型糖を遊離させ、遊離したオリゴ糖の還元末端を２－ＡＢ（２－アミノベンズアミド）で標識することによって、ｒＡＤＡＭＴＳ１３のタンパク質に結合したオリゴ糖を測定した。標識されたオリゴ糖の分離及び相対的定量を、順相ＨＰＬＣ及び蛍光検出によって実施した。そこで、サンプルを変性させ、ＰＮＧａｓｅＦを用いて酵素的脱グリコシル化を行った。遊離したＮ－グリカンを洗浄及び凍結乾燥した後、還元的アミノ化により２－アミノベンズアミドで標識した。水／アセトニトリル／２５０ｍＭ酢酸アンモニウム（ｐＨ４．５）勾配を用いてＬｕｎａ Ａｍｉｎｏ ３μカラムでオリゴ糖を分離し、蛍光検出を用いて検出した。Ｎ－グリカンを、シアル酸の数に関連する電荷に基づいて５つの電荷クラスター（中性、モノシアリル化、ジシアリル化、トリシアリル化、テトラシアリル化Ｎ－グリカン）に分類する。クロマトグラフィープロファイルの比較に加えて、各電荷状態クラスターの相対的存在量及びＮ－グリカン指数を算出した。Ｎ－グリカン指数は、異なる電荷状態クラスターの相対面積（％）から、以下の式によって算出した。Ｎ－グリカン指数＝中性×０＋モノシアロ×１＋ジシアロ×２＋トリシアロ×３＋テトラシアロ×４。タンパク質に結合したシアル酸を緩酸加水分解によってｒＡＤＡＭＴＳ１３から遊離させ、ＤＭＢ（１，２－ジアミノ－４，５－メチレンオキシベンゼン）を用いて標識し、次いで、ＦＬＤを用いたＲＰ－ＨＰＬＣによって定量した。簡単に説明すると、ｒＡＤＡＭＴＳ１３ ＢＤＳサンプルをアセトン沈殿により脱塩した。脱塩したサンプルをＭｉｌｌｉＱ水で再構成し、最終濃度が２Ｍ酢酸になるように調整し、＋８０℃で２．５時間インキュベートした。遊離したシアル酸をＤＭＢで標識し、アセトニトリル／メタノール／水の勾配を用いてＪｕｐｉｔｅｒ ５μ Ｃ１８カラムでＲＰ－ＨＰＬＣによって分離した。較正は、Ｎ－アセチルノイラミン酸（ＮＡＮＡ）及びＮ－グリコリルノイラミン酸（ＮＧＮＡ）の標準製剤を用いて行った。

【0352】

ＰＮＧａｓｅＦでＮ－結合型糖を遊離させ、その後、遊離したオリゴ糖を標識することによって、ｒＡＤＡＭＴＳ１３のタンパク質に結合したオリゴ糖を測定した。クロマトグラムのオーバーレイを図１１及び図１２に示す。更に、Ｎ－グリカンマッピングのデータをそのサブグループに従って解析し、これを表７にまとめる。このデータは、Ｎ－グリカン指数と同様に、個々のサブグループについて２つのサンプル間で良好な同等性を示す。具体的には、２つのサンプルのＮ－グリカン指数は、実質的に類似しており、Ｎ－グリカンの許容範囲である１４０～１８５を下回っていた。

【0353】

【表7】

【0354】

高次構造解析では、近紫外線波長域（２５０～３５０ｎｍ）におけるＣＤ分析により、タンパク質分子の三次構造を評価することができる。これら波長では、芳香族アミノ酸及びジスルフィド結合が光学的に活性であり、それらの複合シグナルが所与のタンパク質の三次構造に特有のスペクトルの特徴を生み出す。タンパク質の二次構造は、遠紫外線波長域（１９０～２５０ｎｍ）におけるＣＤスペクトル測定によって決定することができる。この領域では、ペプチド結合（アミド結合）によって、秩序正しい（ｗｅｌｌ－ｏｒｄｅｒｅｄ）二次構造（例えば、ヘリックス及びシート）に特徴的なＣＤシグナルが生じた。ＳＶ ＡＵＣは、溶液中のサンプルから直接タンパク質のサイズ及び立体構造を決定する。タンパク質サイズバリアント、例えば、単量体及び二量体が、その沈降係数の差に基づいて分離された。タンパク質の沈降係数は、種の分子量及び形状の両方の関数である。タンパク質の沈降は、高い角速度（典型的には、４０，０００～６０，０００ｒｐｍ）で遠心分離を通して行った。各タンパク質サイズバリアントの濃度は、吸光光学を用いて、時間及び半径方向位置の関数として測定した。その後、濃度プロファイルを解析し、ｃ（ｓ）分布としてプロットされたタンパク質サイズの分布に関する情報を得た。ｃ（ｓ）分布における各ピークは積分することができ、その面積（合計面積に対する割合として）は、その種の相対濃度を表す。ＤＳＣは、タンパク質のアンフォールディングを温度の関数として定量的にモニタリングすることにより、タンパク質の熱及び立体構造の安定性に関する情報を提供する。サンプルセル及び参照セル（同一マトリックスであるが、タンパク質を含まない）を、６０℃／ｈのスキャン速度で２０℃から１００℃まで同時に加熱した。温度の上昇と共に、両セルを加熱するのに必要な電力を連続的に測定し、セル間の電力の差を用いてサンプルの熱容量を求めた。タンパク質の熱容量を温度の関数としてプロットした。サーモグラムと呼ばれるこのプロファイルを解析すると、各アンフォールディングイベントについてのアンフォールディングのエンタルピー及び転移（すなわち融解）温度（Ｔｍ）を含む、サンプルに関する熱力学的な情報が得られる。

【0355】

機能性解析では、完全長ＶＷＦ基質を用いて静的条件下で機能特性評価アッセイを測定した。このような設定には、ＶＷＦ基質をアンフォールドし、ＡＤＡＭＴＳ１３の切断を受けやすくするための変性剤（尿素）を添加することが必要であった。全てのｒＡＤＡＭＴＳ１３サンプルを、割り当てられたＦＲＥＴＳ－ＶＷＦ７３活性に従って３０ｍＩＵ／ｍＬに希釈した。希釈したサンプルを、５ｍＭトリス及び１．５Ｍ尿素（ｐＨ８．０）の存在下、３７℃で３０分間、ＢａＣｌ_２で活性化させた。活性化したＡＤＡＭＴＳ１３を１ＶＷＦ：Ａｇ ＩＵ／ｍＬの組み換えＶＷＦと混合し、３７℃で２時間更にインキュベートした。Ｎａ_２ＳＯ_４（最終濃度８．２５ｍＭ）を添加することによって、反応を停止させた。対照として、ｒＡＤＡＭＴＳ１３の代わりにバッファで処理したｒＶＷＦを実験設定に含め、ｒＡＤＡＭＴＳ１３を用いた場合と同様の手順に従った。サンプルを２５００×ｇで５分間遠心分離し、上清を更なる分析に使用した。ｒＡＤＡＭＴＳ１３と共にインキュベートした後のｒＶＷＦの多量体構造の変化を、低分解能条件下でＳＤＳアガロースゲル水平電気泳動によって分析して、ＶＷＦのサイズ分布を分析した。ポリクローナルウサギ抗ヒトＶＷＦ抗体を用いた免疫染色により、分離ゲルにおいてＶＷＦ多量体を可視化した。ｒＡＤＡＭＴＳ１３のアミノ酸配列は２３個のメチオニン残基を含有しており、これらは潜在的な酸化部位となり、結果としてメチオニンがメチオニン－スルホキシドに修飾される。トリプシンペプチドによって、ｒＡＤＡＭＴＳ１３の酸化バリアントを測定した。非酸化ペプチド及び酸化ペプチドのそれぞれについて、再構成したイオンクロマトグラムを作成し、積分し、相対面積を算出した。過去の強制分解データに基づいて、定量的なデータ評価のために６つのメチオニンを選択した。

【0356】

【表8】

【0357】

個々のバリアントの結果は、高度に同等であり、このことは、両タンパク質バリアントの一次構造、二次構造、及び高次構造、並びに機能性が類似していることを示す。本実施例でまとめた結果に基づいて、Ｑ^９７ ＡＤＡＭＴＳ１３及びＱ^９７Ｒ ＡＤＡＭＴＳ１３は同じ物理化学的、生物物理学的、及び生物学的特性を有しており、同じ細胞で生成しようと同じバックグラウンドの異なる細胞で生成しようとそのようになると結論付けることができる。

【0358】

実施例６：Ｑ^９７ ＡＤＡＭＴＳ１３及びＱ^９７Ｒ ＡＤＡＭＴＳ１３のグリコシル化分析
この実施例では、幾つかの分析方法を用いて、グリコシル化の程度及びＡＤＡＭＴＳ１３のグリコシル化パターンの原理の性質を決定する。

【0359】

Ｑ^９７ ＡＤＡＭＴＳ１３及びＱ^９７Ｒ ＡＤＡＭＴＳ１３の両方をＣＨＯ ＤＢＸ－１１宿主細胞株で一緒に発現させた（すなわち、１つの細胞株が両ＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質を一緒に生成する）。

【0360】

トリプシンペプチドマッピングでは、精製したＡＤＡＭＴＳ１３のサンプルをジチオスレイトール（ＤＴＴ）で還元し、遊離スルフヒドリル基をヨードアセトアミドでブロッキングした。透析により試薬を除去し、ｒＡＤＡＭＴＳ１３を回収し、凍結乾燥した。シーケンシング等級のトリプシン又はＬｙｓＣを添加し、２時間反応させた後、第２の酵素を追加し、１８時間インキュベートした。更に、より完全な配列カバレッジを得るために、ＰＮＧａｓｅＦでＮ－グリカンを除去した。得られたペプチド混合物を逆相クロマトグラフィーによって分離した。溶出ペプチドを２１４ｎｍでオンラインＵＶ検出によって検出し、更に、トリプシンペプチド混合物についてのみオンライン質量分析によって検出した。ＡＤＡＭＴＳ１３のアミノ酸配列をカバーするペプチドを表９に列挙する。

【0361】

【表9-1】

【0362】

【表9-2】

【0363】

【表9-3】

【0364】

【表9-4】

【0365】

【表9-5】

【0366】

【表9-6】

【0367】

【表9-7】

【0368】

【表9-8】

【0369】

【表9-9】

【0370】

【表9-10】

【0371】

【表9-11】

【0372】

ピークパターンに大きな違いがみられなかったので、幾つかのサンプルのトリプシンペプチドマップのオーバーレイからサンプルの同等性が高いことが明らかになった。このように、サンプル間で類似の翻訳後修飾が生じていた。

【0373】

組み換えＡＤＡＭＴＳ１３は、配列ＷＸＸＷを含有するトロンボスポンジン１型（ＴＳＰ－１）モチーフに典型的なＣ－マンノシル化を示す。この修飾は、検出することができ、約３０％が修飾され、７０％が非修飾であることが見出された。

【0374】

ペプチドマッピングによって見出された主なＮ－グリカンバリアントは、二分岐モノシアリル化フコシル化グリカン及び二分岐ジシアリル化フコシル化グリカンであった。

【0375】

ＴＳＰ－１モチーフにおける７つのＯ－フコシル化は、全て二糖のＦｕｃ－Ｇｌｃによって完全に占められていることが見出された。更に、構造ＨｅｘＮＡｃ－Ｈｅｘ－ＮｅｕＡｃ_０－２を有するムチン型Ｏ－グリカンも幾つか同定することができた。表１０に、これらＯ－グリコシル化をそのおよその占有率と共にまとめる。ペプチドＴ０７１は、ＨｅｘＮＡｃ－Ｈｅｘ－ＮｅｕＡｃ_２で完全に修飾されていることが見出された。ペプチドＴ１００についても、大部分（８８％）がこの構造で修飾されており、修飾されていないのはごく微量である。ペプチドＴ０７２については、６０％が未修飾の形態で検出され、約４０％がＯ－グリカンＨｅｘＮａｃ－Ｈｅｘ－ＮｅｕＡｃ_２で修飾されていることが見出された。トリプシンペプチドＴ０９８－０９９は、シアル酸のレベルが異なる同じタイプの最大４つのＯ－グリカンが検出され（３０％）、約７０％は３つのＯ－グリカンを有することが見出され、未修飾ペプチドは検出することができなかった。

【0376】

【表10】

【0377】

遊離した加水分解ｒＡＤＡＭＴＳ１３グリカンの単糖分析によって、ＡＤＡＭＴＳ１３のグリコシル化についても評価した。手順は、酸加水分解、２－ＡＡを用いた標識、及び蛍光検出に連結された逆相ＨＰＬＣによる分離／検出／定量を含んでいた。ｒＡＤＡＭＴＳ１３サンプルをアセトン沈殿により脱塩した。脱塩したサンプルを６．７５Ｍトリフルオロ酢酸に再懸濁させ、１００℃で１．５時間インキュベートした。遊離した単糖を還元的アミノ化によって２－ＡＡ（アントラニル酸）で標識し、修飾剤としてリン酸及びブチルアミンを含むアセトニトリル勾配を用いてＪｕｐｉｔｅｒ ５μＣ１８カラムで逆相ＨＰＬＣによって分離した。較正は、標準単糖の適切な混合物を用いて行った。表１１に、分析した全サンプルのデータをまとめる。

【0378】

【表11】

【0379】

ＡＤＡＭＴＳ１３のグリコシル化を、ＰＮＧａｓｅＦによるＮ－結合型オリゴ糖のグリカン遊離及び２－ＡＢ（２－アミノベンズアミド）による還元末端の標識を含む２－ＡＢグリカンプロファイリングでも評価した。標識されたオリゴ糖の分離及び相対的定量は、順相ＨＰＬＣ及び蛍光検出によって実施した。簡単に説明すると、サンプルを尿素で変性させ、ＡｓｓａｙＭａｐカートリッジに結合させた。ＰＮＧａｓｅＦを用いて酵素的脱グリコシル化を行い、遊離したＮ－グリカンをカートリッジから洗い流し、凍結乾燥した後、還元的アミノ化によって２－アミノベンズアミドで標識した。水／アセトニトリル／２５０ｍＭ酢酸アンモニウム（ｐＨ４．５）勾配を用いてＬｕｎａ Ａｍｉｎｏ ３μカラムでオリゴ糖を分離し、蛍光検出を用いて検出した。Ｎ結合型グリカンを、シアル酸の数に関連する電荷に基づいて５つの電荷クラスター（中性、モノシアリル化、ジシアリル化、トリシアリル化、及びテトラシアリル化Ｎ－グリカン）に分類する。クロマトグラフィープロファイルの比較に加えて、各電荷状態クラスターの相対的存在量及びＮ－グリカン指数を算出する。Ｎ－グリカン指数は、異なる電荷状態クラスターの相対面積（％）から、以下の式によって算出する。Ｎ－グリカン指数＝中性×０＋モノシアロ×１＋ジシアロ×２＋トリシアロ×３＋テトラシアロ×４。

【0380】

ペプチドマッピングを介して見出された主なＮ－グリカンバリアントは、二分岐モノシアリル化フコシル化グリカン及び二分岐ジシアリル化フコシル化グリカンであり、これは、Ｎ型グリカンマッピングのデータと一致している（図１３）。表１２に、分析した全サンプルのＮ－グリカンマッピングデータをまとめる。ＡＤＡＭＴＳ１３でみられる主なＮ－グリカン構造は、１つ又は２つのシアル酸を有する二分岐コアフコシル化複合型オリゴ糖である。

【0381】

【表12】

【0382】

タンパク質に結合したシアル酸を緩酸加水分解によってｒＡＤＡＭＴＳ１３から遊離させ、ＤＭＢを用いて標識し、次いで、蛍光検出を備える逆相ＨＰＬＣによって定量した。ＡＤＡＭＴＳ１３サンプルをアセトン沈殿により脱塩し、ＭｉｌｌｉＱ水で最終濃度が２Ｍ酢酸になるように再構成し、８０℃で２．５時間インキュベートした。遊離したシアル酸を１，２－ジアミノ－４，５－メチレンジオキシベンゼン（ＤＭＢ）で標識し、アセトニトリル／メタノール／水勾配を用いてＪｕｐｉｔｅｒ ５μＣ１８カラムで逆相ＨＰＬＣによって分離した。較正は、Ｎ－アセチルノイラミン酸（ＮＡＮＡ）及びＮ－グリコリルノイラミン酸（ＮＧＮＡ）の標準製剤を用いて行った。表１３に、分析した全サンプルのデータをまとめる。

【0383】

【表13】

【0384】

サンプル中のＮＡＮＡの検出量は、高度に同等であり、ｒＡＤＡＭＴＳ１３タンパク質１ｍｇあたり約１３０～１６９ｎｍｏｌ ＮＡＮＡの範囲であった。

【0385】

本発明は、本明細書に記載された特定の実施形態によってその範囲が限定されるものではない。実際、本発明の様々な変形例は、本明細書に記載されたものに加えて、前述の説明から当業者には明らかになるであろう。このような変形例は、添付の特許の範囲の範囲内であることが意図される。

【0386】

本明細書で引用した全ての特許、出願、刊行物、試験方法、文献、及びその他の資料は、本明細書中に物理的に存在するかのように、全ての目的のために全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14A】

【図14B】

【手続補正書】

【提出日】2022-12-28

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】配列表

【補正方法】追加

【補正の内容】

【配列表】

2023521658000001.app

【国際調査報告】