特表 2023-536195 環境適合性洗剤の調製及び精製方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-08-23

(54)【発明の名称】環境適合性洗剤の調製及び精製方法

(51)【国際特許分類】

   C07C 41/36 20060101AFI20230816BHJP

   C07C 41/38 20060101ALI20230816BHJP

   C07C 41/09 20060101ALI20230816BHJP

   C07C 43/178 20060101ALI20230816BHJP

   C07C 41/16 20060101ALI20230816BHJP

【ＦＩ】

C07C41/36

C07C41/38

C07C41/09

C07C43/178 A

C07C41/16

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023507421

(86)(22)【出願日】2021-08-05

(85)【翻訳文提出日】2023-03-02

(86)【国際出願番号】 IB2021057190

(87)【国際公開番号】W WO2022029674

(87)【国際公開日】2022-02-10

(31)【優先権主張番号】63/061,335

(32)【優先日】2020-08-05

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＢＲＩＪ

２．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】000002934

【氏名又は名称】武田薬品工業株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ファルセ， ジャン－バティスト

(72)【発明者】

【氏名】コストナー， オットー

【テーマコード（参考）】

4H006

【Ｆターム（参考）】

4H006AA02

4H006AC43

4H006AD16

4H006AD17

4H006BB25

4H006BC10

4H006BC19

4H006GN03

4H006GN04

4H006GP01

4H006GP10

(57)【要約】

本発明は、環境適合性洗剤として使用できる化合物を調製し精製する方法、ならびにそのような方法によって得られる化合物を提供する。本発明者らは、Ｓ／Ｄ処理及び単一洗剤処理において脂質エンベロープウイルスを効率的に不活化する、環境適合性の非フェノール性ポリオキシエチレンエーテル洗剤を合成した。よって、本発明者らは、脂質エンベロープウイルスを不活化するために、環境適合性の非フェノール性ポリオキシエチレンエーテル洗剤を使用できることを見出した。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記一般式（ＸＩＸ）の化合物

【化1】

（式中、ｍ＝１であり、Ｒは炭素数２～１２の直鎖と前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表し、Ａはポリオキシエチレン残基を表す）の調製及び精製方法であって、
前記方法は、
（３）下記一般式（ＸＩＩ）の化合物

【化2】

（式中、ｍ及びＲは上記に定義された通りであり、Ｘはハロゲン原子またはヒドロキシル基を表す）を
一般式ＨＯ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨ（ｎはｎ≧２の整数）のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と反応させて、前記一般式（ＸＩＸ）の化合物と下記一般式（ＸＩＩＩ）の副生成物

【化3】

（式中、Ｒは上記に定義された通りであり、ｎはｎ≧２の整数である）とを生成することと、
（４）前記一般式（ＸＩＸ）の化合物を、そこから未反応のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と前記副生成物とを除去することによって精製することと、
のステップを含む、前記方法。

【請求項2】

前記ステップ（３）の前に、下記ステップ（２）をさらに含む、請求項１に記載の方法。
（２） 下記一般式（ＸＩＶ）の化合物

【化4】

（式中、ｍ及びＲは請求項１に定義された通りである）を、
下記一般式（ＸＩＩ）の化合物

【化5】

（式中、ｍ、Ｒ及びＸは請求項１に定義された通りである）に変換すること。

【請求項3】

前記ステップ（２）の前に、下記ステップ（１）をさらに含む、請求項２に記載の方法。
（１）下記一般式（ＸＩＶ）の化合物

【化6】

（式中、ｍ及びＲは請求項１に定義された通りである）を得るようにトルエンを反応させること。

【請求項4】

ステップ（３）において、前記ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が、反応物及び溶媒として兼用される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項5】

ステップ（１）において、トルエンをジイソブチレンまたは化合物Ｒ－Ｘ（Ｒは請求項１に定義された通りであり、Ｘはハロゲン原子を表す）と反応させる、請求項３または請求項４に記載の方法。

【請求項6】

ステップ（２）における前記変換することが、ラジカル開始剤としてＡＩＢＮ（アゾビス（イソブチロニトリル））を用いたラジカル反応である、請求項２～５のいずれかに記載の方法。

【請求項7】

Ｘが塩素、ヨウ素または臭素原子である、請求項１～６のいずれかに記載の方法。

【請求項8】

Ｘが臭素原子である、請求項１～７のいずれかに記載の方法。

【請求項9】

ステップ（２）における前記変換することが、ハロゲン化試薬としてＮ－ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）を使用する、請求項２～８のいずれかに記載の方法。

【請求項10】

前記ステップ（４）が、アルカン、エーテル及びエステルならびにそれらの混合液から選択された溶媒の中に前記一般式（ＸＩＸ）の前記化合物の入った溶液を、１回以上の水洗にかけて、前記一般式（ＸＩＸ）の前記化合物から前記未反応のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を除去することを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項11】

アルカン、エーテル及びエステルならびにそれらの混合液から選択される前記溶媒がエステルである、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

アルカン、エーテル及びエステルならびにそれらの混合液から選択される前記溶媒が酢酸エチルである、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

ステップ（４）における、前記一般式（ＸＩＸ）の前記化合物の、そこから前記副生成物を除去することによる前記精製することが、水及び水混和性有機溶媒を含む混合液の中に前記一般式（ＸＩＸ）の前記化合物の入った溶液を、非極性溶媒による１回以上の洗浄にかけることを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項14】

前記非極性溶媒がアルカンを含む、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

前記アルカンがヘキサン、シクロヘキサンまたはヘプタンである、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

前記アルカンがシクロヘキサンである、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

ステップ（３）が、前記ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）以外の溶媒または希釈剤を使用せずに実施される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項18】

ハロゲン化溶媒を使用しない、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項19】

ステップ（３）の後に分取クロマトグラフィ法を使用することを全く含まない、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項20】

分取クロマトグラフィ法を使用することを全く含まない、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項21】

ステップ（３）における前記反応させることが、少なくとも１０分間及び１時間以下の間行われる、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項22】

ステップ（３）における前記反応させることが、少なくとも２０分間及び４５分以下の間行われる、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項23】

ステップ（３）における前記反応させることが、３０分間行われる、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項24】

ステップ（３）における前記反応させることが、５５℃～６５℃の温度で行われる、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項25】

ステップ（３）における前記反応させることが、６０℃の温度で行われる、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項26】

ステップ（３）において、前記一般式（ＸＩＩ）の前記化合物の各モル当量（ｅｑ．）を、前記ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の少なくとも１．０、少なくとも２．０、少なくとも３．０または少なくとも４．０モル当量（ｅｑ．）と反応させる、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項27】

ステップ（３）において、前記一般式（ＸＩＩ）の前記化合物の各モル当量（ｅｑ．）を、前記ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の少なくとも４．５モル当量（ｅｑ．）と反応させる、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項28】

ステップ（３）において、前記一般式（ＸＩＩ）の前記化合物の各モル当量（ｅｑ．）を、前記ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の少なくとも５．０モル当量（ｅｑ．）と反応させる、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項29】

ステップ（３）で使用される前記ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が、前記ステップ（３）の反応温度で液体であることを特徴とする、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項30】

前記方法が、少なくとも１００ｇ、少なくとも１ｋｇ、少なくとも１０ｋｇ、少なくとも１００ｋｇ、または少なくとも１０００ｋｇの前記式（ＸＩＸ）の前記化合物が得られる規模で実施される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項31】

ステップ（２）で得られた前記式（ＸＩＩ）の化合物を溶媒から沈殿させる、請求項２～３０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項32】

前記溶媒がアルコール溶媒である、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

前記溶媒が、極性溶媒である、請求項３１～３２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項34】

前記アルコール溶媒が、イソプロピルアルコール、エタノール、メタノール及びブタノールまたはそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項３２～３３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項35】

前記アルコール溶媒が、第２級アルコールである、請求項３２～３４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項36】

前記アルコール溶媒が、イソプロピルアルコールである、請求項３２～３５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項37】

前記溶媒がアセトニトリルである、請求項３２～３３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項38】

前記式（ＸＩＩ）の化合物の少なくとも１回の再結晶が、ステップ（２）とステップ（３）との間に行われる、請求項２～３７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項39】

請求項３１～３７のいずれか１項に記載の溶媒が、ステップ２とステップ３との間の前記再結晶のための溶媒として使用される、請求項３８に記載の方法。

【請求項40】

ステップ３の後に、少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも３回、または少なくとも４回の水洗が行われる、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項41】

ステップ３の後に４～６回の水洗が行われる、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項42】

式（ＸＩＸ）の化合物

【化7】

（式中、ｍ＝１であり、Ｒは炭素数２～１２の直鎖と前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表し、Ａはポリオキシエチレン残基を表す）を含む組成物から、前記式（ＸＩＸ）の化合物を精製する方法であって、
アルカン、エーテル及びエステルならびにそれらの混合液から選択された溶媒の中に前記組成物の入った溶液を、１回以上の水洗にかけることを含む、前記方法。

【請求項43】

アルカン、エーテル及びエステルならびにそれらの混合液から選択される前記溶媒がエステルである、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

アルカン、エーテル及びエステルならびにそれらの混合液から選択される前記溶媒が酢酸エチルである、請求項４３に記載の方法。

【請求項45】

前記組成物が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む、請求項４２～４４のいずれかに記載の方法。

【請求項46】

前記式（ＸＩＸ）の化合物の前記精製することが、前記組成物から前記ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を除去することを含む、請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

前記ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の前記除去することが、前記溶液の前記１回以上の水洗への前記かけることを含む、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

前記組成物が、下記一般式（ＸＩＩＩ）の化合物

【化8】

をさらに含み、Ｒが請求項４２に定義した通りであり、ｎがｎ≧２の整数である、請求項４２～４７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項49】

前記式（ＸＩＸ）の化合物の前記精製することが、前記式（ＸＩＩＩ）の化合物を前記組成物から除去することを含む、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

前記式（ＸＩＩＩ）の化合物の前記除去することが、前記一般式（ＸＩＸ）の前記化合物を含む水溶液を調製することと、前記水溶液の、非極性溶媒による１回以上の洗浄によって、前記式（ＸＩＩＩ）の化合物を除去することとを含む、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

前記非極性溶媒がアルカンを含む、請求項５０に記載の方法。

【請求項52】

前記アルカンがヘキサン、シクロヘキサンまたはヘプタンである、請求項５１に記載の方法。

【請求項53】

前記アルカンがシクロヘキサンである、請求項５２に記載の方法。

【請求項54】

前記方法によって得られる前記式（ＸＩＸ）の化合物の純度が、２００ｎｍでのＵＶ検出を伴う高速液体クロマトグラフィで測定して、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％である、請求項１～５３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項55】

前記方法によって得られる前記式（ＸＩＸ）の化合物の純度が、蒸発光散乱検出器（ＥＬＳＤ）を用いた検出を伴う高速液体クロマトグラフィで測定して、少なくとも９９％である、請求項１～５４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項56】

下記一般式（ＸＩＩＩ）の化合物

【化9】

（式中、Ｒは炭素数２～１２の直鎖と前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表し、ｎはｎ≧２の整数である）を同定するステップをさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項57】

下記一般式（ＸＩＩＩ）の化合物

【化10】

（式中、Ｒは炭素数２～１２の直鎖と前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表し、ｎはｎ≧２の整数である）を定量化するステップをさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項58】

Ａが、４～１６個のオキシエチレン単位を含むポリオキシエチレン残基を表す、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項59】

Ａが、８～１０個のオキシエチレン単位を含むポリオキシエチレン残基を表す、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項60】

Ａが、９個または１０個のオキシエチレン単位を含むポリオキシエチレン残基を表す、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項61】

Ｒが、炭素数２～６の直鎖と、前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表す、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項62】

Ｒが、炭素数２～６の直鎖と、前記直鎖上の置換基としての２～４個のメチル基とを有する炭化水素基を表す、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項63】

Ｒが、炭素数４の直鎖と、前記直鎖上の置換基としての４個のメチル基とを有する炭化水素基を表す、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項64】

Ｒが、２，４，４－トリメチル－ペンタ－２－イル基を表す、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項65】

前記式（ＸＩＸ）の化合物が、下記化合物

【化11】

であり、ｍが１に等しく、ｚがｚ＝１～５から選択される整数である、
先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項66】

前記式（ＸＩＸ）の化合物が、下記化合物

【化12】

であり、ｎが４～１６の間の整数であり、好ましくはｎが８、９または１０に等しい、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。

【請求項67】

下記一般式（ＸＩＸ）の化合物

【化13】

であって、ｍ＝１であり、Ｒが炭素数２～１２の直鎖と前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表し、Ａがポリオキシエチレン残基を表し、
前記化合物が、先行請求項のいずれか１項に記載の方法によって得られる、前記化合物。

【請求項68】

２００ｎｍでのＵＶ検出を伴う高速液体クロマトグラフィで測定して、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％の純度を示す、請求項６７に記載の化合物。

【請求項69】

蒸発光散乱検出器（ＥＬＳＤ）を用いた検出を伴う高速液体クロマトグラフィで測定して、少なくとも９９％の純度を示す、請求項６７または請求項６８に記載の化合物。

【請求項70】

下記一般式（ＸＩＩＩ）の化合物

【化14】

（式中、Ｒは炭素数２～１２の直鎖と前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表し、ｎはｎ≧２の整数である）を、
前記式（ＸＩＩＩ）の化合物と式（ＸＩＸ）の化合物

【化15】

（式中、ｍ＝１であり、Ｒは炭素数２～１２の直鎖と前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表し、Ａはポリオキシエチレン残基を表す）とを含む組成物から、抽出し、除去するための非極性溶媒の使用。

【請求項71】

前記非極性溶媒が、請求項５１～５３のいずれか１項に定義された通りである、請求項７０に記載の使用。

【請求項72】

Ａが、請求項５８～６０のいずれか１項に定義された通りである、請求項７０または請求項７１に記載の使用。

【請求項73】

Ｒが、請求項６１～６４のいずれか１項に定義された通りである、請求項７０～７２のいずれか１項に記載の使用。

【請求項74】

前記式（ＸＩＸ）の化合物が、請求項６５～６６のいずれか１項に定義された通りである、請求項７０～７３のいずれか１項に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、環境適合性洗剤として使用できる化合物を調製し精製する方法、ならびにそのような方法によって得られる化合物を提供する。

【背景技術】

【0002】

生物薬剤学的薬物の使用は、個人の健康に影響を与える多くの疾患、障害、または病状を治療する方法として重要性を増し続けている。生物薬剤学的薬物は、通常、生体液からの精製によって、または哺乳類細胞株などの宿主細胞での組み換え産生を介して、得られる。しかし、このような生物薬剤学的製造プロセスでは、ウイルス汚染が深刻な問題をもたらす。生物薬剤学的製造プロセスでは、精製される生体液によって、または動物由来製品の使用を通じて、ウイルス汚染を生じさせる可能性がある。細菌汚染とは対照的に、ウイルス汚染は検出が困難である。しかし、ウイルス汚染が見過ごされ、感染性ウイルスが生物薬剤学的薬物の製剤に組み込まれると、それは患者に重大な健康上のリスクをもたらす。したがって、ウイルスの不活化は、生物薬剤学的製造において最も重要である。

【0003】

多くの生物薬剤学的製造プロセスでは、ウイルスの不活化に洗剤が使用されている。多くの場合、これらの洗剤は、いわゆる溶媒／洗剤（Ｓ／Ｄ）処理において溶媒と組み合わされる。洗剤トリトンＸ－１００（４－（１，１，３，３－テトラメチルブチル）フェノール、エトキシル化）は、市販製品のＳ／Ｄ処理に長年使用されている。

【0004】

しかし、最近の生態学的研究によれば、トリトンＸ－１００とその分解生成物とが水生生物の内分泌攪乱物質として潜在的に振る舞う可能性があり、環境への影響に関する懸念を高めることが示唆されている（２０１２年１２月１２日に採用された「ＥＣＨＡ Ｓｕｐｐｏｒｔ ｄｏｃｕｍｅｎｔ ｆｏｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ４－（１，１，３，３－ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｌ）ｐｈｅｎｏｌ， ｅｔｈｏｘｙｌａｔｅｄ ａｓ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ｏｆ ｖｅｒｙ ｈｉｇｈ ｃｏｎｃｅｒｎ ｂｅｃａｕｓｅ， ｄｕｅ ｔｏ ｔｈｅｉｒ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｔｏ ａ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｏｆ ｖｅｒｙ ｈｉｇｈ ｃｏｎｃｅｒｎ （４－（１，１，３，３－ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｌ）ｐｈｅｎｏｌ） ｗｉｔｈ ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｄｉｓｒｕｐｔｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ， ｔｈｅｙ ｃａｕｓｅ ｐｒｏｂａｂｌｅ ｓｅｒｉｏｕｓ ｅｆｆｅｃｔｓ ｔｏ ｔｈｅ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｗｈｉｃｈ ｇｉｖｅ ｒｉｓｅ ｔｏ ａｎ ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｃｏｎｃｅｒｎ ｔｏ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ＣＭＲｓ ａｎｄ ＰＢＴｓ／ｖＰｖＢｓ」を参照されたい）。その結果として、ウイルス不活化のための代替の環境適合性洗剤が必要である。ＷＯ２０１９／０８６４６３は、ウイルス不活化のためのそのような洗剤、及びその製造方法に関する。また一方、これらの化合物の調製及び精製のための改善された方法が必要であり、より高純度の化合物が望ましい。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【特許文献1】国際公開第２０１９／０８６４６３号

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0006】

本発明は、本発明の実施形態を提供することにより、当技術分野における、上記の必要性を満たし、上述の問題を解決する。
トリトン－Ｘ１００の毒性とされているものは、そのフェノール部分から生じると言われており、この部分は海洋生物の特定の内分泌受容体に結合する能力を有する。一貫して、内分泌攪乱物質活性のインシリコ予測に基づいて、本発明による非フェノール性ポリオキシエチレンエーテル洗剤のいずれについても、それらが内分泌攪乱物質として活性であるという予測は皆無であった。

【0007】

本発明者らは、Ｓ／Ｄ処理及び単一洗剤処理において脂質エンベロープウイルスを効率的に不活化する、環境適合性の非フェノール性ポリオキシエチレンエーテル洗剤を合成した。よって、本発明者らは、脂質エンベロープウイルスを不活化するために、環境適合性の非フェノール性ポリオキシエチレンエーテル洗剤を使用できることを見出した。

【0008】

さらに、本発明者らは、本発明の洗剤の改良された調製及び精製方法、ならびにそのような方法によって得られる改良された純度を有する洗剤を開発した。

【0009】

したがって、本発明は、以下に記載する好ましい実施形態を提供する。
１．下記一般式（ＸＩＸ）の化合物

【化1】

（式中、ｍ＝１であり、Ｒは炭素数２～１２の直鎖と前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表し、Ａはポリオキシエチレン残基を表す）の調製及び精製方法であって、
前記方法は、
（３）下記一般式（ＸＩＩ）の化合物

【化2】

（式中、ｍ及びＲは上記に定義された通りであり、Ｘはハロゲン原子またはヒドロキシル基を表す）を
一般式ＨＯ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨ（ｎはｎ≧２の整数）のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と反応させて、前記一般式（ＸＩＸ）の化合物と下記一般式（ＸＩＩＩ）の副生成物

【化3】

（式中、Ｒは上記に定義された通りであり、ｎはｎ≧２の整数である）とを生成することと、
（４）前記一般式（ＸＩＸ）の化合物を、そこから未反応のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と前記副生成物とを除去することによって精製することと、
のステップを含む、前記方法。

【0010】

２．前記ステップ（３）の前に、下記ステップ（２）をさらに含む、条項１に記載の方法。
（２）下記一般式（ＸＩＶ）の化合物

【化4】

（式中、ｍ及びＲは条項１に定義された通りである）を、
下記一般式（ＸＩＩ）の化合物

【化5】

（式中、ｍ、Ｒ及びＸは条項１に定義された通りである）に変換すること。

【0011】

３．前記ステップ（２）の前に、下記ステップ（１）をさらに含む、条項２に記載の方法。
（１）下記一般式（ＸＩＶ）の化合物

【化6】

（式中、ｍ及びＲは条項１に定義された通りである）を得るようにトルエンを反応させること。

【0012】

４．ステップ（３）において、前記ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が、反応物及び溶媒として兼用される、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0013】

５．ステップ（１）において、トルエンをジイソブチレンまたは化合物Ｒ－Ｘ（Ｒは条項１に定義された通りであり、Ｘはハロゲン原子を表す）と反応させる、条項３または条項４に記載の方法。

【0014】

６．ステップ（２）における前記変換することが、ラジカル開始剤としてＡＩＢＮ（アゾビス（イソブチロニトリル））を用いたラジカル反応である、条項２～５のいずれかに記載の方法。

【0015】

７．Ｘが塩素、ヨウ素または臭素原子である、条項１～６のいずれかに記載の方法。

【0016】

８．Ｘが臭素原子である、条項１～７のいずれかに記載の方法。

【0017】

９．ステップ（２）における前記変換することが、ハロゲン化試薬としてＮ－ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）を使用する、条項２～８のいずれかに記載の方法。

【0018】

１０．前記ステップ（４）が、アルカン、エーテル及びエステルならびにそれらの混合液から選択された溶媒の中に前記一般式（ＸＩＸ）の前記化合物の入った溶液を、１回以上の水洗にかけて、前記一般式（ＸＩＸ）の前記化合物から前記未反応のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を除去することを含む、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0019】

１１．アルカン、エーテル及びエステルならびにそれらの混合液から選択される前記溶媒がエステルである、条項１０に記載の方法。

【0020】

１２．アルカン、エーテル及びエステルならびにそれらの混合液から選択される前記溶媒が酢酸エチルである、条項１１に記載の方法。

【0021】

１３．ステップ（４）における、前記一般式（ＸＩＸ）の前記化合物の、そこから前記副生成物を除去することによる前記精製することが、水及び水混和性有機溶媒を含む混合液の中に前記一般式（ＸＩＸ）の前記化合物の入った溶液を、非極性溶媒による１回以上の洗浄にかけることを含む、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0022】

１４．前記非極性溶媒がアルカンを含む、条項１３に記載の方法。

【0023】

１５．前記アルカンがヘキサン、シクロヘキサンまたはヘプタンである、条項１４に記載の方法。

【0024】

１６．前記アルカンがシクロヘキサンである、条項１５に記載の方法。

【0025】

１７．ステップ（３）が、前記ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）以外の溶媒または希釈剤を使用せずに実施される、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0026】

１８．ハロゲン化溶媒を使用しない、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0027】

１９．ステップ（３）の後に分取クロマトグラフィ法を使用することを全く含まない、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0028】

２０．分取クロマトグラフィ法を使用することを全く含まない、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0029】

２１．ステップ（３）における前記反応させることが、少なくとも１０分間及び１時間以下の間行われる、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0030】

２２．ステップ（３）における前記反応させることが、少なくとも２０分間及び４５分以下の間行われる、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0031】

２３．ステップ（３）における前記反応させることが、３０分間行われる、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0032】

２４．ステップ（３）における前記反応させることが、５５℃～６５℃の温度で行われる、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0033】

２５．ステップ（３）における前記反応させることが、６０℃の温度で行われる、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0034】

２６．ステップ（３）において、前記一般式（ＸＩＩ）の前記化合物の各モル当量（ｅｑ．）を、前記ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の少なくとも１．０、少なくとも２．０、少なくとも３．０または少なくとも４．０モル当量（ｅｑ．）と反応させる、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0035】

２７．ステップ（３）において、前記一般式（ＸＩＩ）の前記化合物の各モル当量（ｅｑ．）を、前記ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の少なくとも４．５モル当量（ｅｑ．）と反応させる、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0036】

２８．ステップ（３）において、前記一般式（ＸＩＩ）の前記化合物の各モル当量（ｅｑ．）を、前記ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の少なくとも５．０モル当量（ｅｑ．）と反応させる、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0037】

２９．ステップ（３）で使用される前記ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が、前記ステップ（３）の反応温度で液体であることを特徴とする、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0038】

３０．前記方法が、少なくとも１００ｇ、少なくとも１ｋｇ、少なくとも１０ｋｇ、少なくとも１００ｋｇ、または少なくとも１０００ｋｇの前記式（ＸＩＸ）の前記化合物が得られる規模で実施される、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0039】

３１．ステップ（２）で得られた前記式（ＸＩＩ）の化合物を溶媒から沈殿させる、条項２～３０のいずれか１項に記載の方法。

【0040】

３２．前記溶媒がアルコール溶媒である、条項３１に記載の方法。

【0041】

３３．前記溶媒が、極性溶媒である、条項３１～３２のいずれか１項に記載の方法。

【0042】

３４．前記アルコール溶媒が、イソプロピルアルコール、エタノール、メタノール及びブタノールまたはそれらの組み合わせからなる群から選択される、条項３２～３３のいずれか１項に記載の方法。

【0043】

３５．前記アルコール溶媒が、第２級アルコールである、条項３２～３４のいずれか１項に記載の方法。

【0044】

３６．前記アルコール溶媒が、イソプロピルアルコールである、条項３２～３５のいずれか１項に記載の方法。

【0045】

３７．前記溶媒がアセトニトリルである、条項３２～３３のいずれか１項に記載の方法。

【0046】

３８．前記式（ＸＩＩ）の化合物の少なくとも１回の再結晶が、ステップ（２）とステップ（３）との間に行われる、条項２～３７のいずれか１項に記載の方法。

【0047】

３９．条項３１～３７のいずれか１項に記載の溶媒が、ステップ２とステップ３との間の前記再結晶のための溶媒として使用される、条項３８に記載の方法。

【0048】

４０．ステップ３の後に、少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも３回、または少なくとも４回の水洗が行われる、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0049】

４１．ステップ３の後に４～６回の水洗が行われる、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0050】

４２．式（ＸＩＸ）の化合物

【化7】

（式中、ｍ＝１であり、Ｒは炭素数２～１２の直鎖と前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表し、Ａはポリオキシエチレン残基を表す）を含む組成物から、前記式（ＸＩＸ）の化合物を精製する方法であって、
アルカン、エーテル及びエステルならびにそれらの混合液から選択された溶媒の中に前記組成物の入った溶液を、１回以上の水洗にかけることを含む、前記方法。

【0051】

４３．アルカン、エーテル及びエステルならびにそれらの混合液から選択される前記溶媒がエステルである、条項４２に記載の方法。

【0052】

４４．アルカン、エーテル及びエステルならびにそれらの混合液から選択される前記溶媒が酢酸エチルである、条項４３に記載の方法。

【0053】

４５．前記組成物が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む、条項４２～４４のいずれかに記載の方法。

【0054】

４６．前記式（ＸＩＸ）の化合物の前記精製することが、前記組成物から前記ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を除去することを含む、条項４５に記載の方法。

【0055】

４７．前記ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の前記除去することが、前記溶液の前記１回以上の水洗への前記かけることを含む、条項４６に記載の方法。

【0056】

４８．前記組成物が、下記一般式（ＸＩＩＩ）の化合物

【化8】

をさらに含み、Ｒが条項４２に定義した通りであり、ｎがｎ≧２の整数である、条項４２～４７のいずれか１項に記載の方法。

【0057】

４９．前記式（ＸＩＸ）の化合物の前記精製することが、前記式（ＸＩＩＩ）の化合物を前記組成物から除去することを含む、条項４８に記載の方法。

【0058】

５０．前記式（ＸＩＩＩ）の化合物の前記除去することが、前記一般式（ＸＩＸ）の前記化合物を含む水溶液を調製することと、前記水溶液の、非極性溶媒による１回以上の洗浄によって、前記式（ＸＩＩＩ）の化合物を除去することとを含む、条項４９に記載の方法。

【0059】

５１．前記非極性溶媒がアルカンを含む、条項５０に記載の方法。

【0060】

５２．前記アルカンがヘキサン、シクロヘキサンまたはヘプタンである、条項５１に記載の方法。

【0061】

５３．前記アルカンがシクロヘキサンである、条項５２に記載の方法。

【0062】

５４．前記方法によって得られる前記式（ＸＩＸ）の化合物の純度が、２００ｎｍでのＵＶ検出を伴う高速液体クロマトグラフィで測定して、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％である、条項１～５３のいずれか１項に記載の方法。

【0063】

５５．前記方法によって得られる前記式（ＸＩＸ）の化合物の純度が、蒸発光散乱検出器（ＥＬＳＤ）を用いた検出を伴う高速液体クロマトグラフィで測定して、少なくとも９９％である、条項１～５４のいずれか１項に記載の方法。

【0064】

５６．下記一般式（ＸＩＩＩ）の化合物

【化9】

（式中、Ｒは炭素数２～１２の直鎖と前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表し、ｎはｎ≧２の整数である）を同定するステップをさらに含む、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0065】

５７．下記一般式（ＸＩＩＩ）の化合物

【化10】

（式中、Ｒは炭素数２～１２の直鎖と前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表し、ｎはｎ≧２の整数である）を定量化するステップをさらに含む、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0066】

５８．Ａが、４～１６個のオキシエチレン単位を含むポリオキシエチレン残基を表す、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0067】

５９．Ａが、８～１０個のオキシエチレン単位を含むポリオキシエチレン残基を表す、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0068】

６０．Ａが、９個または１０個のオキシエチレン単位を含むポリオキシエチレン残基を表す、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0069】

６１．Ｒが、炭素数２～６の直鎖と、前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表す、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0070】

６２．Ｒが、炭素数２～６の直鎖と、前記直鎖上の置換基としての２～４個のメチル基とを有する炭化水素基を表す、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0071】

６３．Ｒが、炭素数４の直鎖と、前記直鎖上の置換基としての４個のメチル基とを有する炭化水素基を表す、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0072】

６４．Ｒが、２，４，４－トリメチル－ペンタ－２－イル基を表す、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0073】

６５．前記式（ＸＩＸ）の化合物が、下記化合物

【化11】

であり、ｍが１に等しく、ｚがｚ＝１～５から選択される整数である、
先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0074】

６６．前記式（ＸＩＸ）の化合物が、下記化合物

【化12】

であり、ｎが４～１６の間の整数であり、好ましくはｎが８、９または１０に等しい、先行条項のいずれか１項に記載の方法。

【0075】

６７．下記一般式（ＸＩＸ）の化合物

【化13】

であって、ｍ＝１であり、Ｒが炭素数２～１２の直鎖と前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表し、Ａがポリオキシエチレン残基を表し、
前記化合物が、先行条項のいずれか１項に記載の方法によって得られる、前記化合物。

【0076】

６８．２００ｎｍでのＵＶ検出を伴う高速液体クロマトグラフィで測定して、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％の純度を示す、条項６７に記載の化合物。

【0077】

６９．蒸発光散乱検出器（ＥＬＳＤ）を用いた検出を伴う高速液体クロマトグラフィで測定して、少なくとも９９％の純度を示す、条項６７または条項６８に記載の化合物。

【0078】

７０．下記一般式（ＸＩＩＩ）の化合物

【化14】

（式中、Ｒは炭素数２～１２の直鎖と前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表し、ｎはｎ≧２の整数である）を、
前記式（ＸＩＩＩ）の化合物と式（ＸＩＸ）の化合物

【化15】

（式中、ｍ＝１であり、Ｒは炭素数２～１２の直鎖と前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表し、Ａはポリオキシエチレン残基を表す）とを含む組成物から、抽出し、除去するための非極性溶媒の使用。

【0079】

７１．前記非極性溶媒が、条項５１～５３のいずれか１項に定義された通りである、条項７０に記載の使用。

【0080】

７２．Ａが、条項５８～６０のいずれか１項に定義された通りである、条項７０または条項７１に記載の使用。

【0081】

７３．Ｒが、条項６１～６４のいずれか１項に定義された通りである、条項７０～７２のいずれか１項に記載の使用。

【0082】

７４．前記式（ＸＩＸ）の化合物が、条項６５～６６のいずれか１項に定義された通りである、条項７０～７３のいずれか１項に記載の使用。

【図面の簡単な説明】

【0083】

【図1】１７℃±１℃でのＩＶＩＧ含有液のＳ／Ｄ処理における低濃度４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートのウイルス不活化効率を示す。３成分混合液を最終的な濃度が０．０４％～０．０６％の４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、０．０１％～０．０２％のポリソルベート８０、０．０１％～０．０２％のＴｎＢＰとなるように用いた（同じ濃度のトリトンＸ－１００と対照比較した）。時間の経過に伴うウイルスの不活化を、ＰＲＶを用いた２回の実験（それぞれＡ及びＢ）のウイルスリダクション指数（ＲＦ）によって示す。４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートを使用したＳ／Ｄ処理のウイルス不活化を、トリトンＸ－１００（４－ｔｅｒｔ－オクチルフェノールポリエトキシレート、「ＴＸ－１００」）を使用したＳ／Ｄ処理のウイルス不活化と比較した。（Ａ）では、両方の洗剤が同一の不活化速度を示すことに留意されたい。塗りつぶされた記号は感染力が残っている値を示し、塗りつぶされていない記号は検出限界未満のリダクション指数を示す。

【図2】１℃±１℃でのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）含有液のＳ／Ｄ処理における低濃度４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートのウイルス不活化効率を示す。３成分混合液を最終的な濃度が０．０８％～０．１％の４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、０．０２％～０．０３％のポリソルベート８０、０．０２％～０．０３％のＴｎＢＰとなるように用いた（同じ濃度のトリトンＸ－１００と対照比較した）。時間の経過に伴うウイルスの不活化を、Ｘ－ＭｕＬＶを用いた２回の実験（それぞれＡ及びＢ）のウイルスリダクション指数（ＲＦ）によって示す。４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートを使用したＳ／Ｄ処理のウイルス不活化を、トリトンＸ－１００（「ＴＸ－１００」）を使用したＳ／Ｄ処理のウイルス不活化と比較した。塗りつぶされた記号は感染力が残っている値を示し、塗りつぶされていない記号は検出限界未満のリダクション指数を示す。

【図3】１９℃±１℃でのＨＳＡ含有液のＳ／Ｄ処理における低濃度４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートのウイルス不活化効率を示す。３成分混合液を最終的な濃度が０．０８％～０．１％の４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、０．０２％～０．０３％のポリソルベート８０、０．０２％～０．０３％のＴｎＢＰとなるように用いた（同じ濃度のトリトンＸ－１００と対照比較した）。時間の経過に伴うウイルスの不活化を、Ｘ－ＭｕＬＶを用いた２回の実験（それぞれＡ及びＢ）のウイルスリダクション指数（ＲＦ）によって示す。４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートを使用したＳ／Ｄ処理のウイルス不活化を、トリトンＸ－１００（「ＴＸ－１００」）を使用したＳ／Ｄ処理のウイルス不活化と比較した。塗りつぶされた記号は感染力が残っている値を示し、塗りつぶされていない記号は検出限界未満のリダクション指数を示す。

【図4】Ａは、１４℃±１℃でのＨＳＡを含む緩衝液の洗剤処理における低濃度の４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、または還元型トリトンＸ－１００（すなわち、４－ｔｅｒｔ－オクチルシクロヘキシルアルコールポリエトキシレート）、またはＢｒｉｊ Ｃ１０（すなわち、ｎ－ヘキサデシルアルコールポリエトキシレート）のウイルス不活化効率を示す。単一洗剤処理を最終的な濃度が０．０９％～０．１１％の４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、または還元型トリトンＸ－１００、またはＢｒｉｊ Ｃ１０となるように用いた（同じ濃度のトリトンＸ－１００と対照比較した）。時間の経過に伴うウイルスの不活化を、ＢＶＤＶを用いた２回の実験の平均ウイルスリダクション指数（ＲＦ）によって示す。４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、または還元型トリトンＸ－１００（「還元型ＴＸ－１００」）、またはＢｒｉｊ Ｃ１０を使用した単一洗剤処理のウイルス不活化を、トリトンＸ－１００（「ＴＸ－１００」）を使用した単一洗剤処理のウイルス不活化と比較した。４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート及び還元型トリトンＸ－１００は、トリトンＸ－１００と同じ不活化速度を有することに留意されたい。塗りつぶされた記号は感染力が残っている値を示し、塗りつぶされていない記号は検出限界未満のリダクション指数を示す。Ｂは、１４℃±１℃でのＨＳＡを含む緩衝液の洗剤処理における低濃度の４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、または還元型トリトンＸ－１００のウイルス不活化効率を示す。単一洗剤処理を最終的な濃度が０．０２％～０．０４％の４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、または還元型トリトンＸ－１００となるように用いた（同じ濃度のトリトンＸ－１００と対照比較した）。時間の経過に伴うウイルスの不活化を、ＢＶＤＶを用いた２回の実験の平均ウイルスリダクション指数（ＲＦ）によって示す。４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、または還元型トリトンＸ－１００（「還元型ＴＸ－１００」）を使用した単一洗剤処理のウイルス不活化を、トリトンＸ－１００（「ＴＸ－１００」）を使用した単一洗剤処理のウイルス不活化と比較した。塗りつぶされた記号は感染力が残っている値を示し、塗りつぶされていない記号は検出限界未満のリダクション指数を示す。

【図5】Ａは、１７℃±１℃でのＩＶＩＧ含有液の洗剤処理における低濃度の４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、または還元型トリトンＸ－１００のウイルス不活化効率を示す。単一洗剤処理を最終的な濃度が０．０９％～０．１１％の４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、または還元型トリトンＸ－１００となるように用いた（同じ濃度のトリトンＸ－１００と対照比較した）。時間の経過に伴うウイルスの不活化を、ＢＶＤＶを用いた２回の実験の平均ウイルスリダクション指数（ＲＦ）によって示す。４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、または還元型トリトンＸ－１００（「還元型ＴＸ－１００」）を使用した単一洗剤処理のウイルス不活化を、トリトンＸ－１００（「ＴＸ－１００」）を使用した単一洗剤処理のウイルス不活化と比較した。塗りつぶされた記号は感染力が残っている値を示し、塗りつぶされていない記号は検出限界未満のリダクション指数を示す。Ｂは、１７℃±１℃でのＩＶＩＧ含有液の洗剤処理における低濃度の４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、または還元型トリトンＸ－１００のウイルス不活化効率を示す。単一洗剤処理を最終的な濃度が０．０２％～０．０４％の４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、または還元型トリトンＸ－１００となるように用いた（同じ濃度のトリトンＸ－１００と対照比較した）。時間の経過に伴うウイルスの不活化を、ＢＶＤＶを用いた２回の実験の平均ウイルスリダクション指数（ＲＦ）によって示す。４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、または還元型トリトンＸ－１００（「還元型ＴＸ－１００」）を使用した単一洗剤処理のウイルス不活化を、トリトンＸ－１００（「ＴＸ－１００」）を使用した単一洗剤処理のウイルス不活化と比較した。塗りつぶされた記号は感染力が残っている値を示し、塗りつぶされていない記号は検出限界未満のリダクション指数を示す。

【図6】２３℃±１℃での第ＶＩＩＩ因子含有液の洗剤処理における低濃度の４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、または還元型トリトンＸ－１００のウイルス不活化効率を示す。単一洗剤処理を最終的な濃度が０．０９％～０．１１％の４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、または還元型トリトンＸ－１００となるように用いた（同じ濃度のトリトンＸ－１００と対照比較した）。時間の経過に伴うウイルスの不活化を、ＢＶＤＶを用いた２回の実験の平均ウイルスリダクション指数（ＲＦ）によって示す。４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、または還元型トリトンＸ－１００（「還元型ＴＸ－１００」）を使用した単一洗剤処理のウイルス不活化を、トリトンＸ－１００（「ＴＸ－１００」）を使用した単一洗剤処理のウイルス不活化と比較した。塗りつぶされた記号は感染力が残っている値を示し、塗りつぶされていない記号は検出限界未満のリダクション指数を示す。

【図7-1】実施例３に記載のＨＰＬＣ法１を使用した生成物のスペクトルを示す。

【図7-2】実施例３に記載のＨＰＬＣ法１を使用した生成物のスペクトルを示す。

【図8】実施例３に記載のＨＰＬＣ法２を使用した生成物のスペクトルを示す。

【図9】実施例３に記載のＨＰＬＣ法３を使用した生成物のスペクトルを示す。

【発明を実施するための形態】

【0084】

以下に特に定義しない限り、本発明で使用される用語は、当業者に知られているその一般的な意味に従って理解されるものとする。

【0085】

本明細書で引用されている全ての出版物、特許及び特許出願は、あらゆる目的において、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0086】

定義
「脂質エンベロープを有するウイルス」、「脂質エンベロープウイルス」及び「エンベロープウイルス」という用語は、本明細書では区別なく使用され、当業者に知られている意味を有する。例えば、脂質エンベロープウイルスは、仮性狂犬病ウイルス（ＰＲＶ）、単純ヘルペスウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルスもしくはエプスタイン－バーウイルスなどのヘルペスウイルス科；Ｂ型肝炎ウイルスなどのヘパドナウイルス科；シンドビスウイルス、風疹ウイルスもしくはアルファウイルスなどのトガウイルス科；リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルスなどのアレナウイルス科；ウエストナイルウイルス、ウシウイルス性下痢症ウイルス（ＢＶＤＶ）、デングウイルス、Ｃ型肝炎ウイルスもしくは黄熱病ウイルスなどのフラビウイルス科；インフルエンザウイルスＡ、インフルエンザウイルスＢ、インフルエンザウイルスＣ、イサウイルスもしくはソゴトウイルスなどのオルソミクソウイルス科；センダイウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、牛疫ウイルスもしくはイヌジステンパーウイルスなどのパラミクソウイルス科；カリフォルニア脳炎ウイルスもしくはハンタウイルスなどのブニヤウイルス科；水疱性口内炎ウイルスもしくは狂犬病ウイルスなどのラブドウイルス科；エボラウイルスもしくはマールブルグウイルスなどのフィロウイルス科；コロナウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルスもしくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２などのコロナウイルス科；ボルナ病ウイルスなどのボルナウイルス科；またはアルテリウイルスもしくはウマ動脈炎ウイルスなどのアルテリウイルス科；ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトＴリンパ好性ウイルス１（ＨＴＬＶ－１）もしくは異種指向性マウス白血病ウイルス（Ｘ－ＭｕＬＶ）などのレトロウイルス科；ワクシニアウイルスもしくはＯｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ ｖａｒｉｏｌａｅ（痘瘡ウイルス）などのポックスウイルス科であり得る。

【0087】

本明細書で使用される「脂質エンベロープを有するウイルスの不活化」という用語は、脂質エンベロープウイルスが細胞に感染する能力を攪乱することを指す。当業者に理解されるように、脂質エンベロープウイルスが細胞に感染する能力、すなわち脂質エンベロープウイルスの感染力は、典型的には、液体中の感染性ウイルス粒子の数を求めることによって評価される。したがって、本明細書で使用される「脂質エンベロープを有するウイルスの不活化」または「脂質エンベロープウイルスの不活化」という用語は、溶液中の感染性ウイルス粒子の数を減らすことを指す。

【0088】

本明細書において、「Ｌｏｇ１０減少値」または「ＬＲＶ」という用語は、「ウイルスリダクション指数」、「リダクション指数」、「ＲＦ」または「Ｒ」という用語と区別なく使用される。一実施形態では、「Ｌｏｇ１０減少値」または「ＬＲＶ」は、液体中の感染性ウイルス粒子の減少の尺度として使用することができる。本明細書で使用される場合、「Ｌｏｇ１０減少値」または「ＬＲＶ」は、ウイルス不活化後の感染性ウイルス粒子に対するウイルス不活化前の感染性ウイルス粒子の比の対数（底１０）として定義される。ＬＲＶ値は、与えられたウイルスの種類に固有である。ゼロを超える任意のＬｏｇ１０減少値（ＬＲＶ）が、生物薬剤学的製造の方法及びプロセスなどの方法及びプロセスの安全性を改善するために有益であることは、当業者には明らかである。本発明による方法によって達成されるＬｏｇ１０減少値（ＬＲＶ）は、当業者に知られているようにして求められる。例えば、本発明によるウイルス不活化の方法を液体に施す前後で液体中の感染性ウイルス粒子の数を測定することにより、ＬＲＶを求めることができる。

【0089】

当業者は、液体中の感染性ウイルス粒子を測定するための多数の方法を認識しているであろう。例えば、限定するものではないが、液体中の感染性ウイルス粒子濃度は、好ましくはプラークアッセイまたはＴＣＩＤ_５０アッセイによって、より好ましくはＴＣＩＤ_５０アッセイによって測定することができる。本明細書で使用される「ＴＣＩＤ_５０アッセイ」は、組織培養感染用量アッセイを指す。ＴＣＩＤ_５０アッセイはエンドポイント希釈試験であり、ＴＣＩＤ_５０値は、植え付けた細胞培養の５０％に細胞死または病理学的変化を誘発するのに必要なウイルス濃度を表す。

【0090】

本明細書で使用される「界面活性剤」という用語は、２種の液体間または液体と固体との間の表面張力を低下させる化合物を指す。界面活性剤は、洗剤、湿潤剤、乳化剤、発泡剤、及び分散剤として機能し得る。

【0091】

本発明に関連して、最初及び２番目に言及した溶媒、洗剤及び／または液体に関連する「～への添加」、「～に添加する」または「～に添加された」などの用語は、最初に言及した溶媒、洗剤及び／または液体が、２番目に言及した溶媒、洗剤及び／または液体に添加される状況を包含する。しかしながら、これらの用語はまた、２番目に言及した溶媒、洗剤及び／または液体が、最初に言及した溶媒、洗剤及び／または液体に添加される状況を包含するように意図されている。したがって、「～への添加」、「～に添加する」または「～に添加された」などの用語は、最初に言及した溶媒、洗剤及び／または液体が、２番目に言及した溶媒、洗剤及び／または液体に添加されるか、それともその逆に添加されるかを特定するように意図されていない。

【0092】

当業者に知られるように、「洗剤」という用語は、当技術分野で公知であるその一般的な意味に従って使用され、特に脂質膜を透過化できる界面活性剤を含む。例えば、洗剤トリトンＸ－１００及びデオキシコレートは、タンパク質の疎水性セグメントに結合することにより、両親媒性膜タンパク質を可溶化することが示唆されている（Ｓｉｍｏｎｓ ｅｔ ａｌ．， １９７３を参照）。洗剤は、その電荷に応じて、大きく３つのグループに分類される。陰イオン洗剤は、陰イオン、すなわち負に帯電した親水性基を含む。例示的な陰イオン洗剤は、臭化テトラデシルトリメチルアンモニウム、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、ラウレス硫酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、セトリミド及び臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウムである。陽イオン洗剤は、陽イオン、すなわち正に帯電した親水性基を含む。例示的な陽イオン洗剤は、塩化ベンザルコニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ）、塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）及び塩化ベンゼトニウム（ＢＺＴ）である。本明細書で使用される「非イオン洗剤」という用語は、正または負の電荷を持たない洗剤を指す。例示的な非イオン洗剤は、ソルビタンエステル（ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタントリステアレート、ソルビタンモノオレエート、ソルビタントリオレエート）、ポリソルベート（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート（ポリソルベート２０）、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタントリステアレート、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタントリオレエート、ポリオキシエチレン（２０）－ソルビタン－モノオレエート（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０／ポリソルベート８０））、ポロクサマー（ポロクサマー４０７、ポロクサマー１８８）及びクレモホールである。本発明による洗剤は、好ましい実施形態に明記されている通りである。

【0093】

本明細書で使用される「非フェノール性」という用語は、「フェノールを含まない」という用語と区別なく用いられている。本発明による非フェノール性洗剤は、フェノール官能基を全く含まない洗剤を指す。

【0094】

「芳香族」という用語は、当業者に知られている意味を有する。非芳香族洗剤とは、芳香環を全く含まない洗剤を指す。

【0095】

本明細書で使用される「環境適合性」という用語は、当業者に知られている意味を有する。本発明の好ましい実施形態では、洗剤に関して、「環境適合性」という用語は、洗剤が内分泌攪乱物質として振る舞わないことを示す。内分泌攪乱物質は、内分泌系の機能（複数可）を変化させ、その結果、無傷の生物もしくはその子孫、または（亜）個体群に健康への悪影響を引き起こす外因性物質である。当業者は、内分泌攪乱物質を同定する様々な方法を知っている。内分泌攪乱物質及びその評価に関するさらに詳しい情報を、例えば、２０１２年１２月１２日に採用されたＥＣＨＡの「Ｓｕｐｐｏｒｔ ｄｏｃｕｍｅｎｔ ｆｏｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ４－（１，１，３，３－ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｌ）ｐｈｅｎｏｌ， ｅｔｈｏｘｙｌａｔｅｄ ａｓ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ｏｆ ｖｅｒｙ ｈｉｇｈ ｃｏｎｃｅｒｎ ｂｅｃａｕｓｅ， ｄｕｅ ｔｏ ｔｈｅｉｒ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｔｏ ａ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｏｆ ｖｅｒｙ ｈｉｇｈ ｃｏｎｃｅｒｎ （４－（１，１，３，３－ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｌ）ｐｈｅｎｏｌ） ｗｉｔｈ ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｄｉｓｒｕｐｔｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ， ｔｈｅｙ ｃａｕｓｅ ｐｒｏｂａｂｌｅ ｓｅｒｉｏｕｓ ｅｆｆｅｃｔｓ ｔｏ ｔｈｅ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｗｈｉｃｈ ｇｉｖｅ ｒｉｓｅ ｔｏ ａｎ ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｃｏｎｃｅｒｎ ｔｏ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ＣＭＲｓ ａｎｄ ＰＢＴｓ／ｖＰｖＢｓ」（この文書はその全体があらゆる目的で本明細書に組み込まれる）、または世界保健機関の国際化学物質安全性計画によって発行されたパンフレット「Ｇｌｏｂａｌ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｔａｔｅ－ｏｆ－ｔｈｅ－Ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｄｉｓｒｕｐｔｏｒｓ」（ＷＨＯ／ＰＣＳ／ＥＤＣ／０２．２）（この文書はその全体があらゆる目的で本明細書に組み込まれる）で得ることができる。

【0096】

本明細書で使用される「生物学的医薬品」という用語は、当技術分野で公知であり、その活性物質が生物学的物質、例えば哺乳動物細胞または微生物によって産生される生物学的物質である生成物を指す。本明細書で使用するとき、本発明の方法で使用される生物学的医薬品は、最終的に製造された生成物に限定されず、好ましくは、製造プロセスの任意の段階における中間生成物も含む。

【0097】

本明細書で使用される「生物薬剤学的薬物」という用語は、当業者に知られている意味を有する。生物薬剤学的薬物には、組み換え型生物薬剤学的薬物と、ヒト血漿などの他の供給源から得られる生物薬剤学的薬物との両方が含まれる。

【0098】

本明細書で使用される用語「デプスフィルタ」は、当技術分野で公知である意味を有する。具体的には、そのようなフィルタ（例えば、密度勾配型デプスフィルタ）は、フィルタ材料の深さ内での濾過を実現する。そのようなフィルタの一般的なクラスは、複雑で曲がりくねった流路の迷路を形成するように結合された（または他の方法で固定された）繊維のランダムマトリックスを含むクラスである。これらのフィルタでの粒子の分離は、一般に、繊維マトリックスによる捕捉、または繊維マトリックスへの吸着によって生じる。デプスフィルタは、濾過助剤または「マトリックス」、例えば、紙、プラスチック、金属、ガラス、ガラス繊維、ナイロン、ポリオレフィン、炭素、セラミック、珪藻土、セルロースまたは珪藻岩（海面上に持ち上がった海成堆積物に見られる微細藻類（珪藻）の骨格残骸）と共に、セルロースまたはポリプロピレンの繊維、繊維マット、織布または不織布の繊維層、あるいはナイロンまたはレーヨンなどの合成織物、例えば、Ｍｉｒａｃｌｏｔｈ（登録商標）（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ， Ｌａ Ｊｏｌｌａ， Ｃａｌｉｆ．）を含むがこれらに限定されない多数の材料で構成され得る。

【0099】

本明細書で使用される用語「生物薬剤学的薬物の精製」は、当業者に知られている意味を有し、本発明の混合液に含まれ得る他の物質から生物薬剤学的薬物を分離することを指す。本発明の好ましい実施形態において、用語「生物薬剤学的薬物の精製」は、生物薬剤学的薬物を本発明の洗剤から分離することを指す。

【0100】

「クロマトグラフィ」という用語は、当技術分野で公知である意味に従って使用される。これには、混合液中に存在する他の分子から目的の分析物（例えば、生物薬剤学的薬物などの標的分子）を分離する任意のクロマトグラフィ技法が含まれる。通常、目的の分析物は、混合液の個々の分子が移動相の影響下で静止媒体中を移動する速度、または結合及び溶出プロセスの差異の結果として、他の分子から分離される。

【0101】

「クロマトグラフィ樹脂」及び「クロマトグラフィ媒体」という用語は、本明細書では区別なく使用され、混合液中に存在する他の分子から目的の分析物（例えば、生物薬剤学的薬物などの標的分子）を分離する任意の種類の相（例えば、固相）を指す。通常、目的の分析物は、混合液の個々の分子が移動相の影響下で固定固相中を移動する速度、または結合及び溶出プロセスの相違の結果として、他の分子から分離される。様々なタイプのクロマトグラフィ媒体の例には、例えば、陽イオン交換樹脂、陽イオン交換膜、親和性樹脂、陰イオン交換樹脂、陰イオン交換膜、疎水性相互作用樹脂、及びイオン交換モノリスが含まれる。

【0102】

本明細書で使用される「医薬製剤」という用語は、当業者に知られている意味を有し、患者への投与に適した任意の製剤を指す。医薬製剤は、当技術分野で公知である方法に従って調製することができる。例えば、製剤中に存在する任意の生物薬剤学的薬物に対して、当業者は、緩衝剤、安定剤、界面活性剤、酸化防止剤、キレート剤及び／または防腐剤などを含む好ましい追加の成分を選択し添加することができよう。

【0103】

本明細書で使用される「溶媒／洗剤混合液」という用語は、当業者に知られている意味を有する。好ましい実施形態では、本発明に従って使用される溶媒／洗剤混合液は、水以外の少なくとも１つの溶媒と少なくとも１つの洗剤とを含有する。本発明に従って使用される溶媒は、好ましくは有機溶媒であり、最も好ましくはリン酸トリ－ｎ－ブチルである。混合液に含まれる異なる溶媒及び／または洗剤の数は、特に限定されない。例えば、溶媒／洗剤混合液は、リン酸トリ－ｎ－ブチル、ポリソルベート８０、及び本発明によるポリオキシエチレンエーテル洗剤から構成され得る。

【0104】

本発明において数値範囲を示すために使用される場合、「～の間」という用語は、それぞれの範囲の示されている下限及び上限を含むことを理解されたい。例えば、温度が０℃～１０℃の間であると示されている場合、これには０℃及び１０℃の温度が含まれる。同様に、変数ｘが、例えば４～１６の間の整数であると示されている場合、これには整数４及び１６が含まれる。

【0105】

本明細書で使用される場合、「～を含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」または「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」などの出現用語のそれぞれを、任意選択で「～からなっている（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」または「～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ）」に置き換えてもよい。

【0106】

実施形態
本発明は、ポリオキシエチレンエーテル洗剤及びポリオキシプロピレンエーテル洗剤、ならびにそれらの調製及び精製のための方法と、ウイルス不活化のためのこれらの洗剤の方法及び使用とに関する。

【0107】

トリトン－Ｘ１００の毒性作用は、そのフェノール部分から生じ、この部分は海洋生物の特定の内分泌受容体に結合する能力を有する。芳香環とＰＥＧ鎖との間にメチレン基を挿入することにより、新しい式ＸＩＸの構造にはトリトン－Ｘ１００のフェノール官能基がもはや存在しなくなる。さらに、ＰＥＧ鎖が環境中に放出された後に分解されると、曝露されたベンジルアルコールが容易に酸化して、対応する安息香酸になる。この代謝産物は、フェノール誘導体とは完全に異なる極性と幾何学的構造とを有し、それによって内分泌受容体への結合を減少させるようになる。

【0108】

上記の考察に基づいて、本発明者らは、非フェノール性ポリオキシエチレンエーテルを合成し、それらの抗ウイルス活性を試験した（実施例１～９を参照）。

【0109】

したがって、一態様では、本発明は、以下の一般式（ＸＩＸ）の非フェノール性ポリオキシエチレンエーテルを提供する。

【化16】

式中、ｍ＝１であり、Ｒは炭素数２～１２の直鎖と前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表し、Ａはポリオキシエチレン残基を表す。

【0110】

本発明はまた、以下の一般式（ＸＩＸ）の非フェノール性ポリオキシエチレンエーテルを提供する。

【化17】

式中、ｍ＝１であり、Ｒは炭素原子数２～１２の直鎖と前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表し、Ａはポリオキシエチレン残基を表し、任意選択で、以下の構造式を有する２９－［４－（１，１，３，３－テトラメチルブチル）フェニル］－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７－ノナオキサノナコサン－１－オールが除外されることを条件とする。

【化18】

式（ＸＩＸ）中、Ｒは、炭素数２～１２、好ましくは２～８、より好ましくは２～６、最も好ましくは４の直鎖と、前記直鎖上の置換基（複数可）としての１つ以上、好ましくは２～６、最も好ましくは４個のメチル基（複数可）とを有する炭化水素基を表す。

【0111】

好ましくは、Ｒは、炭素数２～１２、好ましくは２～８、より好ましくは２～６、最も好ましくは４の直鎖と、前記直鎖上の置換基（複数可）としての２個のメチル基（複数可）とを有する炭化水素基、炭素数２～１２、好ましくは２～８、より好ましくは２～６、最も好ましくは４の直鎖と、前記直鎖上の置換基（複数可）としての４個のメチル基（複数可）とを有する炭化水素基、または炭素数２～１２、好ましくは２～８、より好ましくは２～６、最も好ましくは４の直鎖と、前記直鎖上の置換基（複数可）としての６個のメチル基（複数可）とを有する炭化水素基を表す。

【0112】

最も好ましくは、Ｒは、２，４，４－トリメチル－ペンタ－２－イル基を表す。

【0113】

式（ＸＩＸ）中、Ａは、ポリオキシエチレン残基、好ましくはオキシエチレン単位を２～２０個含むポリオキシエチレン残基、より好ましくはオキシエチレン単位を４～１６個含むポリオキシエチレン残基、さらにいっそう好ましくはオキシエチレン単位を８～１２個含むポリオキシエチレン残基、最も好ましくはオキシエチレン単位を９個または１０個含むポリオキシエチレン残基を表す。

【0114】

一般式（ＸＩＸ）の化合物の好ましい態様は、Ｒが炭素数２～６の直鎖と前記直鎖上の置換基としての２～４個のメチル基とを有する炭化水素基であり、ｍ＝１であり、Ａが８～１２個のオキシエチレン単位を含むポリオキシエチレン残基である、化合物である。

【0115】

一般式（ＸＩＸ）の化合物の具体的な好ましい実施形態は、以下の化合物である。

【化19】

式中、ｍは１に等しく、ｚはｚ＝１～５から選択される整数である。

【0116】

一般式（ＸＩＸ）の化合物の別の具体的な好ましい実施形態は、以下の化合物である。

【化20】

式中、ｎは４～１６の間の整数であり、好ましくはｎは８、９または１０に等しい。

【0117】

ポリオキシエチレンエーテルは、当業者に知られており、式Ａによる以下の構造を有する。

【化21】

式中、ｎは１以上である。

【0118】

当業者には明らかであるように、ポリオキシプロピレンエーテルは、本発明によるポリオキシエチレンエーテルと非常に類似した特性を有し得、対応する方法で調製し精製することができる。したがって、本発明の他の全ての実施形態によれば、例えば本発明の全ての方法においては、ポリオキシエチレンエーテルをポリオキシプロピレンエーテルで置き換えてもよい。

【0119】

ポリオキシプロピレンエーテルもまた、当業者に知られており、式Ｂによる以下の構造を有する。

【化22】

式中、ｎは、ｎ≧２の整数である。

【0120】

したがって、さらなる態様では、本発明は、以下の一般式（ＸＩＸ）の非フェノール性ポリオキシプロピレンエーテルを提供する。

【化23】

式中、ｍ＝１であり、Ｒは炭素数２～１２の直鎖と前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表し、Ａはポリオキシプロピレン残基を表す。

【0121】

式（ＸＩＸ）中、Ｒは、炭素数２～１２、好ましくは２～８、より好ましくは２～６、最も好ましくは４の直鎖と、前記直鎖上の置換基（複数可）としての１つ以上、好ましくは２～６、最も好ましくは４個のメチル基（複数可）とを有する炭化水素基を表す。

【0122】

好ましくは、Ｒは、炭素数２～１２、好ましくは２～８、より好ましくは２～６、最も好ましくは４の直鎖と、前記直鎖上の置換基（複数可）としての２個のメチル基（複数可）とを有する炭化水素基、炭素数２～１２、好ましくは２～８、より好ましくは２～６、最も好ましくは４の直鎖と、前記直鎖上の置換基（複数可）としての４個のメチル基（複数可）とを有する炭化水素基、または炭素数２～１２、好ましくは２～８、より好ましくは２～６、最も好ましくは４の直鎖と、前記直鎖上の置換基（複数可）としての６個のメチル基（複数可）とを有する炭化水素基を表す。

【0123】

最も好ましくは、Ｒは、２，４，４－トリメチル－ペンタ－２－イル基を表す。

【0124】

本発明のこのさらなる態様の式（ＸＩＸ）中、Ａは、ポリオキシプロピレン残基、好ましくはオキシプロピレン単位を２～２０個含むポリオキシプロピレン残基、より好ましくはオキシプロピレン単位を４～１６個含むポリオキシプロピレン残基、さらにいっそう好ましくはオキシプロピレン単位を８～１２個含むポリオキシプロピレン残基、最も好ましくはオキシプロピレン単位を９個または１０個含むポリオキシプロピレン残基を表す。

【0125】

一般式（ＸＩＸ）の化合物の好ましい態様は、Ｒが炭素数２～６の直鎖と前記直鎖上の置換基としての２～４個のメチル基とを有する炭化水素基を表し、ｍ＝１であり、Ａが８～１２個のオキシプロピレン単位を含むポリオキシプロピレン残基を表す、化合物である。

【0126】

本明細書で言及される場合、本発明による「ポリオキシエチレンエーテル」は、好ましくは、当技術分野におけるその一般的な意味によるポリオキシエチレンエーテルである。あるいは、本発明によるポリオキシエチレンエーテルは、ポリオキシエーテル分子の総数の一部、好ましくは大部分がポリオキシエチレンエーテル分子であるが、ポリオキシエーテル分子の総数の別の一部、好ましくは少数が、オキシエチレン及びオキシプロピレン単位を含む混合ポリマー、及び／またはオキシプロピレン単位を含むポリマーである、ポリオキシエーテルであってもよい。ここで、「ポリオキシエーテル分子の総数の大部分がポリオキシエチレンエーテル分子である」ということは、ポリオキシエーテル分子の総数の少なくとも５０％がポリオキシエチレンエーテル分子であることを意味する。好ましくは、ポリオキシエーテル分子の総数の少なくとも６０％がポリオキシエチレンエーテル分子である。より好ましくは、ポリオキシエーテル分子の総数の少なくとも７０％がポリオキシエチレンエーテル分子である。さらにより好ましくは、ポリオキシエーテル分子の総数の少なくとも８０％がポリオキシエチレンエーテル分子である。さらにより好ましくは、ポリオキシエーテル分子の総数の少なくとも９０％がポリオキシエチレンエーテル分子である。最も好ましくは、ポリオキシエーテル分子の総数の少なくとも９５％がポリオキシエチレンエーテル分子である。さらに代替形態として、本発明によるポリオキシエチレンエーテルは、大部分（例えば、少なくとも６０％、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％、さらにより好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％）のオキシエチレン単位と、少数のオキシプロピレン単位とを含む混合ポリオキシエーテルであってもよい。

【0127】

本発明による洗剤は非フェノール性である。

【0128】

本発明によれば、式（ＸＩＸ）の化合物は、好ましい実施形態で示されているように、調製し精製してもよい。

【0129】

したがって、本発明は、下記一般式（ＸＩＸ）の化合物

【化24】

（式中、ｍ＝１であり、Ｒは炭素数２～１２の直鎖と前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表し、Ａはポリオキシエチレン残基を表す）の調製及び精製方法であって、
本方法は、
（３）下記一般式（ＸＩＩ）の化合物

【化25】

（式中、ｍ及びＲは上記に定義された通りであり、Ｘはハロゲン原子またはヒドロキシル基を表す）を
一般式ＨＯ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨ（ｎはｎ≧２の整数）のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と反応させて、前記一般式（ＸＩＸ）の化合物と下記一般式（ＸＩＩＩ）の副生成物

【化26】

（式中、Ｒは上記に定義された通りであり、ｎはｎ≧２の整数である）とを生成することと、
（４）前記一般式（ＸＩＸ）の化合物を、そこから未反応のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と前記副生成物とを除去することによって精製することと、のステップを含む、方法を包含する。

【0130】

この方法は、前記ステップ（３）の前に、下記ステップ（２）、すなわち
（２） 下記一般式（ＸＩＶ）の化合物

【化27】

（式中、ｍ及びＲは請求項１に定義された通りである）を、
下記一般式（ＸＩＩ）の化合物

【化28】

（式中、ｍ、Ｒ及びＸは請求項１に定義された通りである）に変換すること、をさらに含んでもよい。

【0131】

さらに、この方法は、前記ステップ（２）の前に、下記ステップ（１）、すなわち
（１）下記一般式（ＸＩＶ）の化合物

【化29】

（式中、ｍ及びＲは請求項１に定義された通りである）を得るようにトルエンを反応させること、をさらに含んでもよい。

【0132】

本発明のこの好ましい方法は、以下に示すスキーム２の修正形態である。本発明の前記方法は、合成に、クロマトグラフィによる精製を必要とすることなく、３ステップしか必要とせず、それによって必要な溶媒の量を減らし、高額化学薬品（例えば、Ｔｆ_２Ｏ、Ｐｄ触媒）、有毒化学薬品（例えば、オクチルフェノール、Ｚｎ（ＣＮ）_２、ＤＭＦ、ＭｓＣｌ）及び有害化学薬品（例えばＬｉＡｌＨ_４）の使用を避け、大規模な実施に適しているという利点を提供する。

【0133】

ステップ（１）における反応の触媒として、硫酸などのフリーデルクラフトアルキル化で一般的に使用される酸を使用してもよい。触媒は、好ましくはパーフルオロアルキルスルホン酸、より好ましくはヘプタフルオロ－１－プロアンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸（トリフル酸）またはノナフルオロ－１－ブタンスルホン酸である。

【0134】

ステップ（２）の変換に使用できるハロゲン化試薬は、当技術分野で公知であるハロゲン化試薬から選択してもよい。好ましい試薬としては、
－ Ｎ－ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）などのＮ－ハロスクシンイミド、
－ 臭素
－ 臭素－１，４－ジオキサン錯体などの適切な臭素錯体試薬、
－ テトラブチルアンモニウムトリブロミド、トリメチルフェニルアンモニウムトリブロミド、ベンジルトリメチルアンモニウムトリブロミド、ピリジニウムブロミドペルブロミド、４－ジメチルアミノピリジニウムブロミドペルブロミド、１－ブチル－３－メチルイミダゾリウムトリブロミド及び１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］－７－ウンデセン水素トリブロミドなどの適切なトリブロミド錯体試薬、
－ ジブロモイソシアヌル酸、
－ トリブロモイソシアヌル酸、
－ １，２－ジブロモ－１，１，２，２－テトラクロロエタン、
－ Ｎ－ブロモフタルイミド、及び
－ 次亜臭素酸塩がある。

【0135】

最も好ましいハロゲン化試薬は、Ｎ－ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）である。

【0136】

ステップ（２）の変換に使用できるラジカル開始剤は、当技術分野で公知である物理的及び化学的ラジカル開始剤から適切に選択してもよい。それらには、例えば、光、ＡＩＢＮ（アゾビス（イソブチロニトリル）、ベンゾイルペルオキシド、ジ－ｔｅｒｔ－ブチルペルオキシド、メチルエチルケトンペルオキシド、アセトンペルオキシド、ペルオキシ二硫酸塩またはそれらの誘導体の１つが含まれる。最も好ましいのはＡＩＢＮ（アゾビス（イソブチロニトリル））である。

【0137】

ステップ（２）の変換に使用できる好ましい溶媒は、シクロヘキサン及びアセトニトリルである。ヘプタン、酢酸エチル、ＣＣｌ_４及びベンゼンもまた、ステップ（２）の変換用の溶媒として使用できる。

【0138】

本発明の好ましい実施形態では、ステップ（２）で得られた式（ＸＩＩ）の化合物を溶媒から沈殿させる。好ましくは、溶媒は極性溶媒である。好ましい実施形態では、溶媒は、好ましくはイソプロピルアルコール、エタノール、メタノール及びブタノールまたはそれらの組み合わせからなる群から選択されるアルコール溶媒である。より好ましくは、アルコール溶媒は、イソプロピルアルコールなどの第２級アルコールである。別の好ましい実施形態では、溶媒は、アセトニトリルである。水は溶媒の極性を高める。したがって、本発明に従って使用される極性溶媒は、水を含んでもよい。よって、本発明に従って使用される極性溶媒は、例えば、（ｉ）水と、（ｉｉ）上記アルコール及び／またはアセトニトリルとを含む溶媒混合液であってもよい。

【0139】

アルコール溶媒は、式（ＸＩＩ）によるハロゲン化中間体と反応して、エーテル副生成物を形成し得る。第１級アルコールは、この反応を起こす傾向があるが、イソプロパノールなどの第２級アルコールは、この副生成物を形成する傾向が少ないため有利である。アセトニトリルなどの非アルコール溶媒もまた、このようなエーテル副生成物を回避するために使用することができるため、やはり有利である。

【0140】

極性溶媒は、当技術分野で公知である。誘電率が１５．０を超える溶媒は、一般に極性があると見なされる。そのような極性溶媒の例には、イソプロピルアルコール、エタノール、メタノール及びブタノール、ならびにアセトニトリルがある。本明細書で使用される場合、本明細書で言及される誘電率の値は、２０℃の基準温度で測定された誘電率を指す。

【0141】

ステップ（３）で使用することができるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、当業者によって適切に選択され得ることが理解される。このようなポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、特に限定されない。好ましくは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、前記ステップ（３）の反応温度で液体であることを特徴とする。ステップ（３）で使用できる好ましいポリエチレングリコール（ＰＥＧ）としては、平均分子量１５０～１０００ダルトンのＰＥＧが挙げられる。より好ましくは、ステップ（３）で使用できるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、ＰＥＧ２００、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ６００、ＰＥＧ８００及びＰＥＧ１０００からなる群から選択される。最も好ましくは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、ＰＥＧ４００である。

【0142】

一般式（ＸＩＩＩ）の化合物は、ステップ（３）のＰＥＧ化反応における副生成物として得られる。ステップ（４）において、一般式（ＸＩＸ）の化合物は、そこから前記式（ＸＩＩＩ）の副生成物を除去することによって精製される。本発明によって提供される式（ＸＩＸ）及び式（ＸＩＩＩ）の化合物の知識に基づいて、かつこれら２つの化合物の違いに基づいて、当業者は、一般式（ＸＩＩＩ）の副生成物を適切な方法ステップによって除去できるようになることが理解される。例えば、一般式（ＸＩＩＩ）の副生成物は、二官能性であるため、一般式（ＸＩＸ）の化合物よりも大きく、極性が低い。したがって、ステップ（４）において、一般式（ＸＩＸ）の化合物は、サイズ及び／または極性に基づいた精製法を使用して、そこから前記副生成物を除去することによって、精製することができる。好ましい実施形態では、ステップ（４）における、前記一般式（ＸＩＸ）の前記化合物を、そこから前記副生成物を除去することによって精製することは、水及び水混和性有機溶媒を含む混合液の中に前記一般式（ＸＩＸ）の前記化合物の入った溶液を、非極性溶媒を用いた１回以上の洗浄にかけることにより、前記一般式（ＸＩＸ）の化合物から前記副生成物を除去することを含む。

【0143】

本明細書で使用される水混和性有機溶媒は、当技術分野で公知であり、とりわけ以下の溶媒、すなわち、アセトアルデヒド、酢酸、アセトン、アセトニトリル、１，２－ブタンジオール、１，３－ブタンジオール、１，４－ブタンジオール、２－ブトキシエタノール、酪酸、ジエタノールアミン、ジエチレントリアミン、ジメチルホルムアミド、ジメトキシエタン、ジメチルスルホキシド、１，４－ジオキサン、エタノール、エチルアミン、エチレングリコール、ギ酸、フルフリルアルコール、グリセロール、メタノール、メチルジエタノールアミン、メチルイソシアニド、Ｎ－メチル－２－ピロリドン、１－プロパノール、１，３－プロパンジオール、１，５－ペンタンジオール、２－プロパノール（イソプロパノール）、プロパン酸、プロピレングリコール、ピリジン、テトラヒドロフラン、及びトリエチレングリコールを含む。

【0144】

好ましくは、水及び水混和性有機溶媒を含む混合液の中に前記一般式（ＸＩＸ）の前記化合物の入った前記溶液は、アルコール及び水の混合液の中に前記一般式（ＸＩＸ）の前記化合物の入った溶液である。より好ましくは、前記一般式（ＸＩＸ）の前記化合物の前記溶液は、エタノールと水との混合液の中に前記一般式（ＸＩＸ）の前記化合物の入った溶液である。このような混合液の適切な混合比は、当業者が容易に求め得ることが理解される。エタノールと水との混合液の典型的な混合比は、５０：１（ｖ／ｖ）～１０：１（ｖ／ｖ）の間、好ましくは２０：１（ｖ／ｖ）である。

【0145】

非極性溶媒は、当技術分野で公知である。誘電率が１５．０未満の溶媒は、一般に非極性であると見なされる。好ましくは、前記洗浄に使用される非極性溶媒は、５．０未満、より好ましくは２．５未満の誘電率を有する。そのようなより好ましい溶媒の例は、ヘキサン、シクロヘキサン及びヘプタンである。本明細書で使用される場合、本明細書で言及される誘電率の値は、２０℃の基準温度で測定された誘電率を指す。

【0146】

本発明はまた、式（ＸＩＸ）の化合物

【化30】

（式中、ｍ＝１であり、Ｒは炭素数２～１２の直鎖と前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表し、Ａはポリオキシエチレン残基を表す）を含む組成物から、前記式（ＸＩＸ）の化合物を精製する方法であって、
アルカン、エーテル及びエステルならびにそれらの混合液から選択された溶媒の中に前記組成物の入った溶液を、１回以上の水洗にかけることを含む方法を提供する。

【0147】

好ましくは、この組成物は、下記一般式（ＸＩＩＩ）の化合物をさらに含む。

【化31】

ここで、Ｒは請求項３７で定義した通りであり、ｎはｎ≧２の整数である。好ましくは、式（ＸＩＸ）の化合物の精製は、式（ＸＩＩＩ）の化合物を上記の組成物から除去することを含む。より好ましくは、式（ＸＩＩＩ）の化合物を除去することが、前記一般式（ＸＩＸ）の前記化合物を含む水溶液を調製することと、前記水溶液の、非極性溶媒による１回以上の洗浄によって、前記式（ＸＩＩＩ）の化合物を除去することとを含む。非極性溶媒は上記で定義した通りであり、本発明に従って使用できる水溶液は、水を含み、好ましくは、水と水混和性有機溶媒とを含む混合液の中に前記一般式（ＸＩＸ）の前記化合物の入った溶液である。水及び水混和性有機溶媒を含む混合液の中に前記一般式（ＸＩＸ）の前記化合物の入った好ましい溶液は、上記で定義した通りである。

【0148】

本発明の方法の好ましい実施形態では、これらの方法は、下記一般式（ＸＩＩＩ）の化合物

【化32】

（式中、Ｒは炭素数２～１２の直鎖と前記直鎖上の置換基としての１つ以上のメチル基とを有する炭化水素基を表し、ｎはｎ≧２の整数である）を同定するステップ及び／または定量化するステップを含む。そのような同定は、例えば、^１Ｈ－ＮＭＲ測定法を含む、当技術分野で公知である、化学化合物の構造同定のための任意の適切な方法によって行ってもよい。同定には、^１３Ｃ－ＮＭＲ法または２次元ＮＭＲ法などの他のＮＭＲ測定を使用することもできる。さらに、ＨＲＭＳ（高分解能質量分析）を同定に使用してもよい。前記式（ＸＩＩＩ）の化合物の定量化は、例えば、ＵＶ検出を伴う高速液体クロマトグラフィ、及び蒸発光散乱検出器（ＥＬＳＤ）を用いた検出を伴う高速液体クロマトグラフィを含む、当技術分野で公知の、化学化合物を定量化するための任意の適切な方法によって行うことができる。

【0149】

一般に、本発明によれば、ＵＶ検出を伴う高速液体クロマトグラフィは、好ましくは、２００ｎｍでのＵＶ検出を使用して実施される。より好ましくは、本発明によれば、ＵＶ検出を伴う高速液体クロマトグラフィは、好ましくは、実施例３のＨＰＬＣ法１及び２に示される方法設定を使用して実施され、より好ましくは、実施例３のＨＰＬＣ法２に示される方法設定を使用して実施される。

【0150】

好ましくは、本発明によれば、蒸発光散乱検出器（ＥＬＳＤ）を用いた検出を伴う高速液体クロマトグラフィは、実施例３のＨＰＬＣ法２に示された方法設定を用いて実施される。

【0151】

実施例３のＨＰＬＣ方法２に使用される設定は以下の通りである。
ＨＰＬＣ：アジレント１２６０
カラム：Ｚｏｒｂａｘ ３００ＳＢ－Ｃ３、５μｍ、２．１×１５０ｍｍ（Ｖ＝０．５２０ｍＬ）
溶離液：水（Ａ）、アセトニトリル（Ｂ）
勾配溶離（Ｇｒａｄｉｅｎｔ ｅｌｕｔｉｏｎ）：勾配溶離（ｇｒａｄｉｅｎｔ ｅｌｕｔｉｏｎ）：３５％Ｂ（０分）－－＞３５％Ｂ（４分）－－＞９７％Ｂ（２０分）－－＞９７％Ｂ（２５分）
ポストタイム：８分
流量：０．５ｍＬ／分
カラム温度：２５℃
注入量：５μＬ
検出：波長２００ｎｍのＵＶ、またはＥＬＳＤ

【0152】

本発明の洗剤の調製及び精製のための本発明の好ましい方法は、とりわけ、以下の利点を提供する。
・クロマトグラフィによる精製が不要なため、有機溶媒の全体の使用量が大幅に削減される。
・ジクロロメタンなどの有害な溶媒は必要ない。
・さらに、精製手順は短時間で実行できる。つまり、全体の合成コストが最小限に抑えられる。
・第３のステップでは溶媒が不要である。手順は実行しやすく、ワークアップ中に存在するさまざまな溶媒の数を最小限に抑えることができる。
・全収率は他の方法に匹敵するが、プロセスは、実行コストが安く、より迅速に実行することができ、無駄が少なくなるという意味では、そのような他の方法よりも効率的である。
・二官能性副生成物の量は、いくつかの手段、例えば、ヘキサンまたはシクロヘキサンなどの非極性溶媒による生成物の抽出によって、及び／またはステップ（３）中に高い（例えば、少なくとも４、少なくとも４．５または少なくとも５）モル当量のＰＥＧを使用することによって、効果的に減少させることができる。
・上記の理由により、本発明の好ましい方法は、工業規模で容易に実施することができ、それにより、標準的な装置を使用してキログラム量の純粋な生成物を製造することが可能になる。

【0153】

あるいは、本発明によるポリオキシエチレンエーテル洗剤は、例えば、エトキシル化反応によって合成することができる。エトキシル化は、アルコールエトキシレート（別名ポリオキシエチレンエーテル）を生成するためにアルコールに対して実行される工業プロセスである。この反応は、高温（例えば、約１８０℃）及び高圧下（例えば、１～２バールの圧力下）で、エチレンオキシドをアルコールに通過させ、塩基（水酸化カリウム、ＫＯＨなど）が触媒として作用することによって進行する。このプロセスは、大きな発熱を伴う。

【化33】

この反応により、繰り返し単位長の広い多分散性を持つ生成物が形成される（上記の式のｎの値は平均ポリマー長である）。

【0154】

本発明の化合物はポリオキシエチレンエーテル（＝エチレンオキシドガスを用いてエトキシル化反応が行われる）であり得るが、プロピレンオキシドを用いて工業規模で同様の反応（＝プロポキシル化）を行うことも可能である。唯一の違いは、ＰＥＧ鎖のメチル基置換である。

【化34】

エトキシル化及びプロポキシル化は、同じプロセスで組み合わせることもでき、オキシエチレン単位及びオキシプロピレン単位を含む混合ポリマーポリオキシエーテルなどの混合生成物をもたらすことができる。

【0155】

実験室規模では、ポリオキシエチレンエーテル洗剤は、最初にアルコールのヒドロキシル基から好適な脱離基（Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＭｓまたはＯＴｆなど）を形成し、次にこの基質をモノ脱プロトン化ポリエチレングリコールと反応させることによって製造することができる。あるいは、好適な脱離基（Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＭｓまたはＯＴｆなど）を、ポリエチレングリコール鎖に導入し、それを第２のステップで脱プロトン化アルコールと反応させてもよい。

【化35】

ポリオキシエチレンエーテルを合成するための例示的な方法は、例えば、それらの全体があらゆる目的で参照によって本明細書に組み込まれる、米国特許第１，９７０，５７８号及びＤｉ Ｓｅｒｉｏ ｅｔ ａｌ．（２００５）に詳説されている。

【0156】

式（ＸＩＸ）の化合物は、Ｖｏｇｅｌ‘ｓ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ （５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， １９８９， Ａ．Ｉ． Ｖｏｇｅｌ， Ａ．Ｒ． Ｔａｔｃｈｅｌｌ， Ｂ．Ｓ． Ｆｕｒｎｉｓ， Ａ．Ｊ． Ｈａｎｎａｆｏｒｄ， Ｐ．Ｗ．Ｇ． Ｓｍｉｔｈ）に記載されている方法など、周知の合成法によって合成することもできる。例えば、４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートは、一般式（ＸＩＸ）の基Ｒに対応する置換基を含むフェノールを、対応する安息香酸またはホモ安息香酸に変換すること、酸基をアルコール基に還元すること、及びアルコールを反応させてポリエチレングリコールエーテル（別名ポリオキシエチレンエーテル；ＰＯＥエーテル）を形成することによって調製することができる。本明細書では、エチレンオキシドまたは適切なポリエチレングリコールは、ポリエチレングリコールエーテル官能基を導入するための基礎として機能し得る（スキーム１；個々の転化を実行するのに効果的な実験手順の代表的な例は、例えば、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， １６（９）， ４８８３－４９０７， ２００８；Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ４８（１０）， ３５８６－３６０４， ２００５；Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｂ， １０７（３１）， ７８９６－７９０２；２００３；Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， １５（１１）， ２０２５／１－２０２５／１２， １２ ｐｐ．， ２０１３；及びＰＣＴ国際出願第２００５０１６２４０号， ２４ Ｆｅｂ ２００５に見出すことができる）。

【化36】

【0157】

あるいは、一般式（ＸＩＸ）の化合物は、トルエンのアルキル化と、その後に続くベンジルメチル基の官能基化、及びポリエチレングリコールエーテルを形成するためのさらなる反応によって入手することができる（スキーム２；個々の転化を実行するのに効果的な実験手順の代表的な例は、例えば、Ｒｕｓｓｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ８２（６）， １０２９－１０３２， ２００９；Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ７９（１）， ２２３－２２９， ２０１４；及びＣｈｅｍｉｓｔｒｙ － Ａ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ， ２３（６０）， １５１３３－１５１４２， ２０１７に見出すことができる）。ポリエチレングリコールエーテル官能基を導入するのに適した中間体を得るために、ベンジルアルコールを直接アルキル化することも想定される（スキーム３；対応する転化のための実験手順の代表的な例は、例えば、Ｒｕｓｓｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ５１（１１）， １５４５－１５５０， ２０１５に見出すことができる）。

【化37】

【化38】

【0158】

式（ＸＩＸ）による構造を有する上記のポリオキシエチレンエーテルを、本発明による、脂質エンベロープを有するウイルスを不活化するための方法に使用することができる。

【0159】

上記のように、当業者には明らかであるように、ポリオキシエチレンエーテルの合成は、通常、ポリオキシエチレン繰り返し単位長の広い多分散性を有する生成物をもたらす。したがって、本発明のポリオキシエチレンエーテルについてポリオキシエチレン繰り返し単位の数が示される場合、この数は、最も近い整数に丸められた平均ポリオキシエチレン繰り返し単位長を指す。平均ポリオキシエチレン繰り返し単位長は、サンプルの全ポリオキシエチレンエーテル分子のポリオキシエチレン繰り返し単位の、最も近い整数に丸められた平均数を指す。同じことがポリオキシプロピレンエーテルにも当てはまる。例えば、本発明に従って使用される式において、ポリオキシエチレンまたはポリオキシプロピレンの繰り返し単位数がｎ＝１０である場合、このことは、全てのポリオキシエチレンエーテル分子またはポリオキシプロピレンエーテル分子のポリオキシエチレンまたはポリオキシプロピレンの繰り返し単位の平均数が、最も近い整数に丸められて、１０であることを意味する。

【0160】

本発明による、脂質エンベロープを有するウイルスを不活化する方法で使用されるポリオキシエチレンエーテル洗剤またはポリオキシプロピレンエーテル洗剤は、２～１００、２～５０、２～２０、または４～１６、あるいは９または１０のポリオキシエチレンまたはポリオキシプロピレンの繰り返し単位の平均数を有する。好ましくは、ポリオキシエチレンまたはポリオキシプロピレンの繰り返し単位の平均数は、４～１６、より好ましくは９または１０、最も好ましくは１０である。

【0161】

当業者には明らかであるように、本発明によるポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンエーテル洗剤において、メチル基は、ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレン部分の末端ヒドロキシル基に結合し得る（すなわち、末端ヒドロキシル基が遮蔽され得る）。末端ヒドロキシル基のそのような遮蔽は、合成を容易にし得る。このことは、上記のスキーム１またはスキーム２に従って作成された化合物など、エトキシル化またはプロポキシル化によって作成されていない化合物に特に有用である。メチル遮蔽されたポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレン部分を有する構造は、通常、以下の例示的な構造によって示されるように、ｍＰＥＧ誘導体と呼ばれる。

【化39】

当業者には明らかであるように、ポリオキシプロピレンエーテルの合成もまた、通常、ポリオキシプロピレン繰り返し単位長の広い多分散性を有する生成物をもたらす。したがって、本発明によるポリオキシプロピレンエーテルについてポリオキシプロピレン繰り返し単位の数が示される場合、この数は平均ポリオキシプロピレン繰り返し単位長を指す。上記のポリオキシエチレンエーテルについて説明したように、平均ポリオキシプロピレン繰り返し単位長は、サンプルの全ポリオキシプロピレンエーテル分子のポリオキシプロピレン繰り返し単位の平均数を指す。

【0162】

本発明に従って使用されるポリオキシプロピレンエーテル洗剤は、２～１００、２～５０、２～２０、または５～１５、あるいは９または１０のポリオキシプロピレン繰り返し単位の平均数を有する。好ましくは、ポリオキシプロピレンの繰り返し単位の平均数は、５～１５、より好ましくは９または１０、最も好ましくは１０である。

【0163】

本発明による、脂質エンベロープを有するウイルスを不活化する方法は、本発明の洗剤を液体に添加して、前記洗剤と前記液体との混合液を調製するステップ、及び前記混合液をインキュベートして、前記ウイルスを不活化するステップを含む。上記のように、本明細書で使用される用語「脂質エンベロープを有するウイルスを不活化する」は、溶液中の感染性ウイルス粒子の濃度を低下させることをいう。本発明による脂質エンベロープを有するウイルスを不活化する方法において、本方法は、少なくとも１つのウイルスについて少なくとも１の１Ｌｏｇ１０減少値（ＬＲＶ）、または少なくとも１つのウイルスについて、少なくとも２、または少なくとも３、または少なくとも４、または少なくとも５、または少なくとも６、または少なくとも７、または少なくとも８の１Ｌｏｇ１０減少値（ＬＲＶ）、及び最も好ましくは少なくとも４のＬｏｇ１０減少値（ＬＲＶ）を達成することが好ましい。当然のことながら、少なくとも１つのウイルスについていかなるＬｏｇ１０減少値（ＬＲＶ）も有益であることは、例えば生物薬剤学的製造プロセスの安全性を向上させるという理由で、当業者にとっては明らかである。本発明に従って言及されるＬＲＶは、エンベロープウイルスのＬＲＶである。

【0164】

本発明の方法は一般に脂質エンベロープウイルスを不活化するためのものであるが、本発明による洗剤は、例えば、非エンベロープウイルスがその複製サイクル中のある段階で脂質エンベロープを獲得する場合には、そのような非エンベロープウイルスも不活化し得ることを理解されたい。したがって、用語「脂質エンベロープを有するウイルスを不活化する」は、本発明の方法では、脂質エンベロープを有するウイルスに加えて非エンベロープウイルスをも不活化できるという可能性を排除することを意図していない。

【0165】

本発明による、脂質エンベロープを有するウイルスを不活化する方法では、本発明の洗剤を液体に添加して前記洗剤と前記液体との混合液を調製し、前記混合液をインキュベートして前記ウイルスを不活化する。本発明の方法の前記液体は、溶液、懸濁液、またはいくつかの懸濁液及び／または溶液の混合液を含む、任意の種類の液体またはいくつかの液体の混合液であり得ることが理解されるべきである。例えば、これに限定されないが、本発明による前記液体は、血液であってもよく、または血液もしくは血液分画を含んでいてもよく、血漿であってもよく、または血漿もしくは血漿分画を含んでいてもよく、血清であってもよく、または血清もしくは血清分画を含んでいてもよく、細胞培地であってもよく、または細胞培地を含んでいてもよく、緩衝液であってもよく、または緩衝液を含んでいてもよい。液体はまた、プロセス中間体、例えば生物薬剤学的薬物の調製におけるプロセス中間体であってもよい。

【0166】

本発明による液体は、脂質エンベロープを有するウイルスを含む場合があり、または脂質エンベロープを有するウイルスを含む疑いがある場合がある（例えば、その液体が血液である、または血液もしくは血液分画を含む、血漿である、または血漿もしくは血漿分画を含む、血清である、または血清もしくは血清分画を含む場合、あるいは細胞培養で生成された生物薬剤学的薬物を含む場合）。本発明の他の全ての実施形態による本発明の好ましい実施形態では、本発明による前記液体は、脂質エンベロープを有するウイルスを含む。本発明による前記液体中の脂質エンベロープを有する前記ウイルスの起源は、特に限定されない。例えば、ウイルスは、本発明に従って液体を調製するために使用され得るヒト血液、ヒト血漿もしくはヒト血清に由来し得るか、または本発明に従って液体を調製するために使用され得る細胞培地に由来し得る。特に、ウイルスが、本発明に従って液体を調製するために使用される細胞培地に由来する場合、ウイルスは、ウシ血清アルブミンなどの前記細胞培地の動物由来成分に由来する場合がある。

【0167】

本発明による、脂質エンベロープを有するウイルスを不活化する方法では、液体に洗剤を添加して、前記洗剤と前記液体との混合液を調製する。前記洗剤は、本発明のポリオキシエチレンエーテルまたはポリオキシプロピレンエーテルである。

【0168】

本発明による、脂質エンベロープを有するウイルスを不活化する方法では、液体に洗剤を添加して、前記洗剤と前記液体との混合液を調製する。本発明の一実施形態では、ポリオキシエチレンエーテル洗剤またはポリオキシプロピレンエーテル洗剤を、液体中のポリオキシエチレンエーテル洗剤またはポリオキシプロピレンエーテル洗剤の最終的な濃度が約０．０３％（ｗ／ｗ）～１０％（ｗ／ｗ）、好ましくは約０．０５％（ｗ／ｗ）～１０％（ｗ／ｗ）、より好ましくは０．１％（ｗ／ｗ）～１０％（ｗ／ｗ）、さらにより好ましくは約０．５％（ｗ／ｗ）～５％（ｗ／ｗ）、最も好ましくは約０．５％（ｗ／ｗ）～２％（ｗ／ｗ）となるように、液体に添加する。

【0169】

本発明の脂質エンベロープを有するウイルスを不活化する方法の好ましい実施形態では、本方法で使用されるポリオキシエチレンエーテルまたはポリオキシプロピレンエーテルは、脂質エンベロープを有する前記ウイルスの不活化に適している。本明細書で使用される不活化とは、脂質エンベロープウイルスが細胞に感染する能力を阻害することをいう。当業者には明らかであるように、脂質エンベロープウイルスが細胞に感染する能力、すなわち脂質エンベロープウイルスの感染力は、典型的には、溶液中の感染性ウイルス粒子の数を求めることによって評価される。本明細書には、溶液中の感染性ウイルス粒子の数を求めるための例示的な方法が記載されている。

【0170】

一実施形態では、本発明の脂質エンベロープを有するウイルスを不活化する方法において、本発明の非フェノール性洗剤を含む洗剤と溶媒とを液体に添加するステップは、前記ウイルスを不活化するための溶媒／洗剤混合液が調製されるようにして実施される。好ましくは、前記溶媒は有機溶媒であり、さらにより好ましくは、前記溶媒はトリ－ｎ－ブチルホスフェートである。洗剤の濃度と溶媒の種類及び濃度とは、例えば、液体中に存在する可能性のあるウイルス、所望のＬＲＶ、液体中に存在し得る生物薬剤学的薬物の特性、及び液体中に存在し得る生物薬剤学的薬物の製造プロセスの特性（例えば、不活化が行われるようになる温度）を考慮して、当業者が適切に選択できることが理解される。典型的には、本発明によるインキュベーション中の有機溶媒及び単一洗剤の最終濃度は、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）の有機溶媒及び約０．０５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）の洗剤、好ましくは約０．１％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）の有機溶媒及び約０．１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）の洗剤、より好ましくは約０．１％（ｗ／ｗ）～約１％（ｗ／ｗ）の有機溶媒及び約０．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）の洗剤、最も好ましくは約０．１％（ｗ／ｗ）～約０．５％（ｗ／ｗ）の有機溶媒及び約０．５％（ｗ／ｗ）～約２％（ｗ／ｗ）の洗剤である。

【0171】

別の実施形態では、本発明の脂質エンベロープを有するウイルスを不活化する方法において、本発明の非フェノール性洗剤を含む洗剤（及び任意選択で溶媒も）を液体に添加するステップは、さらなる洗剤が液体に添加されるようにして実施される。好ましくは、前記さらなる洗剤は、ポリオキシエチレン（８０）ソルビタンモノオレエート（例えば、ポリソルベート８０またはＴＷＥＥＮ（登録商標） ８０としても知られる）である。好ましくは、前記溶媒は有機溶媒であり、さらにより好ましくは、前記溶媒はトリ－ｎ－ブチルホスフェートである。本発明による洗剤の濃度、さらなる洗剤の種類及び濃度、ならびに溶媒の種類及び濃度は、例えば、液体中に存在する可能性のあるウイルス、所望のＬＲＶ、液体中に存在し得る生物薬剤学的薬物の特性、及び液体中に存在し得る生物薬剤学的薬物の製造プロセスの特性（例えば、不活化が行われるようになる温度）を考慮して、当業者が適切に選択できることが理解される。典型的には、有機溶媒の最終濃度は約０．０１％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）であり、本発明による洗剤の最終濃度は約０．０５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）であり、さらなる洗剤の最終濃度は約０．０１％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）である。好ましくは、有機溶媒の最終濃度は約０．１％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）であり、本発明による洗剤の最終濃度は約０．１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）であり、さらなる洗剤の最終濃度は約０．１％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）である。より好ましくは、有機溶媒の最終濃度は約０．１％（ｗ／ｗ）～約１％（ｗ／ｗ）であり、本発明による洗剤の最終濃度は約０．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）であり、さらなる洗剤の最終濃度は約０．１％（ｗ／ｗ）～約１％（ｗ／ｗ）である。最も好ましくは、有機溶媒の最終濃度は約０．１％（ｗ／ｗ）～約０．５％（ｗ／ｗ）であり、本発明による洗剤の最終濃度は約０．５％（ｗ／ｗ）～約２％（ｗ／ｗ）であり、さらなる洗剤の最終濃度は約０．１％（ｗ／ｗ）～約０．５％（ｗ／ｗ）である。

【0172】

本発明による別の実施形態では、１つのみの洗剤が使用される。例えば、本発明の方法の一実施形態では、ステップａ）において、本発明の洗剤以外のさらなる洗剤は添加されない。本発明の方法の別の実施形態では、本方法において、本発明の洗剤以外のさらなる洗剤は添加されない。本発明による別の実施形態では、脂質エンベロープを有するウイルスの不活化方法における本発明の洗剤の使用において、本発明の洗剤以外のさらなる洗剤は使用されない。これらの実施形態の１つの利点は、後続の（方法）ステップで単一の洗剤をより容易に除去できることである。例えば、単一の洗剤は、標準的な溶媒／洗剤（Ｓ／Ｄ）処理で使用される、典型的には２つの洗剤と１つの溶媒、具体的には有機溶媒とを含む、３成分のものと比較して、より容易に除去することができる。したがって、本発明による別の実施形態では、本発明の洗剤を含む組成物は、前記洗剤以外のさらなる洗剤を全く含まない。

【0173】

ウイルスを不活化する方法による別の実施形態では、有機溶媒は使用されない。例えば、本発明のウイルス不活化方法の一実施形態では、ステップａ）において有機溶媒は添加されない。本発明による別の実施形態では、脂質エンベロープを有するウイルスの不活化のための方法における本発明の洗剤の使用において、有機溶媒は使用されない。本発明による別の実施形態では、本発明の洗剤を含む組成物は、有機溶媒を全く含まない。

【0174】

上記の概略のように、本発明による脂質エンベロープを有するウイルスを不活化する方法は、患者の安全を保証するために、最終生成物に活性な（つまり、感染性の）ウイルスが存在しないことが徹底されなければならない生物薬剤学的製造プロセスにおいては特に有用である。したがって、一実施形態では、本発明による脂質エンベロープを有するウイルスを不活化する方法において、本発明の洗剤は、生物学的医薬品または生物薬剤学的薬物を含む液体、好ましくは生物薬剤学的薬物を含む液体に添加される。本発明の好ましい実施形態では、前記生物薬剤学的薬物はウイルスワクチンではない。本発明による生物薬剤学的薬物は特に限定されない。それらには、組み換え型生物薬剤学的薬物と、ヒト血漿から得られる生物薬剤学的薬物などの他の供給源からの生物薬剤学的薬物との両方が含まれる。本発明による生物薬剤学的薬物には、限定されることなく、血液因子、免疫グロブリン、置換酵素、ワクチン、遺伝子治療ベクター、成長因子及びそれらの受容体が含まれる。好ましい実施形態では、生物薬剤学的薬物は治療用タンパク質である。好ましい血液因子には、第Ｉ因子（フィブリノゲン）、第ＩＩ因子（プロトロンビン）、組織因子、第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子及び第ＶＩＩａ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、第ＸＩＩＩ因子、フォン・ヴィレブランド因子（ＶＷＦ）、プレカリクレイン、高分子量キニノゲン（ＨＭＷＫ）、フィブロネクチン、抗トロンビンＩＩＩ、ヘパリン副因子ＩＩ、タンパク質Ｃ、タンパク質Ｓ、タンパク質Ｚ、プラスミノーゲン、アルファ２－抗プラスミン、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）、ウロキナーゼ、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤－１（ＰＡＩ１）、ならびにプラスミノーゲン活性化因子阻害剤－２（ＰＡＩ２）が含まれる。第ＶＩＩＩ因子は、特に好ましい血液因子であり、組み換え第ＶＩＩＩ因子はさらにより好ましい。本発明に従って使用され得る血液因子は、機能的ポリペプチド変異体と、血液因子をコードするポリヌクレオチド、またはそのような機能的変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドとを含むように意図されている。好ましい免疫グロブリンには、ヒト血漿由来の免疫グロブリン、モノクローナル抗体及び組み換え抗体が含まれる。本発明による生物薬剤学的薬物は、好ましくは、それぞれのヒトタンパク質もしくは組み換えヒトタンパク質またはその機能的変異体である。

【0175】

上記のように、本発明による生物薬剤学的薬物は、ウイルス遺伝子治療ベクターを含む遺伝子治療ベクターであってもよい。当業者には明らかであるように、本発明の脂質エンベロープを有するウイルスを不活化する方法は、一般に、非エンベロープウイルスを不活化しない。したがって、好ましい実施形態では、本発明による生物薬剤学的薬物がウイルス遺伝子治療ベクターである場合、そのようなウイルス遺伝子治療ベクターは非エンベロープウイルスに基づく。好ましい実施形態では、そのようなウイルス遺伝子治療ベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に基づく。

【0176】

本発明の他の全ての実施形態によれば、本発明の脂質エンベロープを有するウイルスを不活化する方法は、前記混合液をインキュベートして前記ウイルスを不活化するステップの後に、前記生物薬剤学的薬物を精製するステップを含み得る。好ましくは、前記精製することは、前記生物薬剤学的薬物を前記洗剤（複数可）から分離することを含む。当業者は、生物薬剤学的薬物を洗剤（複数可）から分離するための様々な方法を認識されているであろう。このような方法は、当業者が、生物薬剤学的薬物の特性、生物薬剤学的薬物が（例えば、組み換えにより、またはヒト血漿などの他の供給源から）得られる供給源、及び所望の生物薬剤学的薬物用途（例えば、皮下に投与されるか静脈内に投与されるかなど）を考慮することによって選択され得る。例えば、生物薬剤学的薬物を洗剤（複数可）から、陰イオン交換クロマトグラフィまたは陽イオン交換クロマトグラフィなどのクロマトグラフィを使用して分離してもよい。一実施形態では、前記洗剤（複数可）からの前記精製することは、１回を超えるクロマトグラフィ精製を含む。

【0177】

本発明の他の全ての実施形態によれば、本発明の脂質エンベロープを有するウイルスを不活化する方法は、好ましくはデプスフィルタを用いて前記混合液を濾過するステップを含み得る。この濾過するステップは、洗剤を液体に添加して前記洗剤と前記液体との混合液を調製するステップの前に実施することができる。あるいは、この濾過するステップは、洗剤を液体に添加して前記洗剤と前記液体との混合液を調製するステップと、前記混合液をインキュベートして前記ウイルスを不活化するステップとの間に実施することができる。

【0178】

本発明の他の全ての実施形態による別の実施形態では、脂質エンベロープを有するウイルスを不活化する方法において、前記混合液をインキュベートして前記ウイルスを不活化するステップは、前記混合液を、少なくとも１０分間、少なくとも３０分間、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも４時間、少なくとも１２時間、または少なくとも２４時間、インキュベートするようにして実施することができる。

【0179】

本発明の他の全ての実施形態による別の実施形態では、前記混合液をインキュベートして前記ウイルスを不活化するステップにおいて、前記混合液は、０℃～１５℃の間、０℃～１０℃の間、０℃～８℃の間、０℃～６℃の間、０℃～４℃の間、または０℃～２℃の間、及び好ましくは０℃～１０℃の間の温度などの低温でインキュベートされる。本発明の他の全ての実施形態による代替実施形態では、前記混合液をインキュベートして前記ウイルスを不活化するステップにおいて、前記混合液は、１６℃～２５℃の間、１８℃～２４℃の間、または２０℃～２３℃の間などの室温または室温に近い温度でインキュベートされる。

【0180】

本発明の方法のステップを実施する方法は、特に限定されないことを理解されたい。特に、本方法のステップは、バッチ方式で実施してもよい。あるいは、本方法のステップは、半連続的または連続的な方式で実行してもよい。

【0181】

上記の概略のように、本発明による脂質エンベロープを有するウイルスを不活化する方法は、生物薬剤学的製造プロセスにおいて特に有用である。したがって、本発明はまた、生物薬剤学的薬物の調製方法であって、本発明及びその任意の実施形態による、脂質エンベロープを有するウイルスを不活化する方法の方法ステップを含む前記調製方法に関する。好ましくは、本発明による生物薬剤学的薬物の調製方法は、前記生物薬剤学的薬物を含む医薬製剤を調製するステップを含み、このステップは、本発明による脂質エンベロープを有するウイルスを不活化する方法のステップの後に行われる。このような医薬製剤は、医薬製剤の調製に関する既知の標準に従って調製することができる。例えば、製剤は、例えば、担体、賦形剤または安定剤などの薬学的に許容される成分を使用することにより、適切に保存し投与することができるように調製することができる。そのような薬学的に許容される成分は、医薬製剤を患者に投与するときに使用される量では毒性がない。

【0182】

本発明者らは、驚くべきことに、本発明による洗剤が、脂質エンベロープを有するウイルスを不活化するのに特に有用であることを見出した。したがって、本発明はまた、脂質エンベロープを有するウイルスの不活化のための任意の方法における、本発明による開示されたポリオキシエチレンエーテル洗剤またはポリオキシプロピレンエーテル洗剤の使用に関する。好ましくは、前記ウイルスの前記不活化のための前記方法は、溶媒／洗剤処理を使用する方法であり、前記溶媒／洗剤処理が、本発明の前記洗剤の使用を含む。別の実施形態では、前記ウイルスの不活化とは、生物薬剤学的薬物を含む液体中のウイルスを不活化することである。

【0183】

本発明者らが、本発明による非フェノール性洗剤が脂質エンベロープを有するウイルスを不活化するのに特に有用であることを意外にも見出したということから、本発明はまた、本発明によるポリオキシエチレンエーテル洗剤またはポリオキシプロピレンエーテル洗剤、及び本発明によるポリオキシエチレンエーテル洗剤またはポリオキシプロピレンエーテル洗剤を含む組成物に関する。別の実施形態では、本発明によるポリオキシエチレンエーテル洗剤またはポリオキシプロピレンエーテル洗剤を含む組成物は、生物薬剤学的薬物及び／または有機溶媒及び／またはさらなる洗剤をさらに含む。

【0184】

本発明は、非フェノール性ポリオキシエチレンエーテルまたは非フェノール性ポリオキシプロピレンエーテルを提供する。上記のように、これらのポリオキシエチレンエーテルまたはポリオキシプロピレンエーテルは、本発明による脂質エンベロープを有するウイルスを不活化する方法に使用することができる。しかしながら、これらの非フェノール性ポリオキシエチレンエーテルまたは非フェノール性ポリオキシプロピレンエーテル、ならびに本発明による他の全ての非フェノール性ポリオキシエチレンエーテルまたは非フェノール性ポリオキシプロピレンエーテルは、他の様々な用途、例えばトリトンＸ－１００が通常使用される用途に使用することもできる。例えば、本発明による非フェノール性ポリオキシエチレンエーテルまたは非フェノール性ポリオキシプロピレンエーテルは、実験室において用いられ得る。実験室では、本発明による非フェノール性ポリオキシエチレンエーテルまたは非フェノール性ポリオキシプロピレンエーテルは、例えば、細胞を溶解してタンパク質もしくは細胞小器官を抽出すること、または生細胞の膜を透過処理することのために使用すること、固定されていない（または軽く固定された）真核細胞膜を透過処理するために使用すること、ＣＨＡＰＳなどの両性イオン洗剤と併用して膜タンパク質をそれらの天然状態で可溶化するために使用すること、ＤＮＡ抽出の際に溶解緩衝液の一部として（通常、アルカリ溶解緩衝液に５％の溶液で）使用すること、（通常、ＴＢＳまたはＰＢＳ緩衝液に０．１～０．５％の濃度で）免疫染色中に水溶液の表面張力を低減するために使用すること、微生物学においてアスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｄｕｌａｎｓ）のコロニー増殖を制限するために使用すること、動物由来の組織を脱細胞化するために使用すること、あるいはＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルからＳＤＳを除去した後に、ゲル内でタンパク質を再生させるために使用することが可能である。別の実施形態では、本発明による非フェノール性ポリオキシエチレンエーテルまたは非フェノール性ポリオキシプロピレンエーテルは、電子産業において、例えば、いくつかの手順及び操作を改善し迅速化するためのスラットの湿潤剤として使用することができる。別の実施形態では、本発明による非フェノール性ポリオキシエチレンエーテルまたは非フェノール性ポリオキシプロピレンエーテルは、医学的用途を有することができ、例えば、殺精子剤ノノキシノール９の代替物として、または医薬品賦形剤として、またはインフルエンザワクチン（Ｆｌｕｚｏｎｅ）の成分として使用することができる。さらなる実施形態では、本発明による非フェノール性ポリオキシエチレンエーテルまたは非フェノール性ポリオキシプロピレンエーテルは、強力な工業製品から低刺激の洗剤に及ぶいくつかのタイプの洗浄化合物に使用することができる。それらは、蒸留水及びイソプロピルアルコールと共に自家製ビニールレコード洗浄液の成分として使用することができる。それらは、ダイヤモンド刃のクリーニング中に使用することができる。それらは、エマルションの重合のための配合物に使用することができる。それらは、タイヤに使用することができる。それらは、洗浄剤及び清浄剤に使用することができる。それらは、ポリマーまたは接着剤の製造のための開始化学物質として産業で使用することができる。それらは、家庭用または工業用洗浄剤、塗料またはコーティング、パルプまたは紙、油田、繊維、農薬、金属加工液に使用することができる。それらは、軟質複合材料用の炭素材料の分散に使用することができる。あるいは、それらは、金属のめっきに使用することができる。

【0185】

以下に、本発明を実施例によって説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

【実施例】

【0186】

上記の概略のように、最近の生態学的研究は、生物薬剤学的製造プロセスでのトリトンＸ－１００の使用に関する環境への懸念を提起している。本発明者らは、構造的考察に基づいて、環境への悪影響と関連していない、トリトンＸ－１００に代わる有用な代替物としての候補洗剤を同定した。具体的には、本発明者らは、驚いたことに、生物薬剤学的製造中に溶媒／洗剤（Ｓ／Ｄ）処理によって脂質エンベロープウイルスを不活化するためのトリトンＸ－１００に代わる適切な代替物として、非フェノール性ポリオキシエチレンエーテルを同定した。以下の実験では、４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートを合成し、４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートなどのポリオキシエチレンエーテルのＳ／Ｄ処理及び単一洗剤処理への適合性を、さまざまなテスト項目でテストした。

【0187】

実施例１：４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートＩの合成（方法１）

【0188】

【化40】

【0189】

中間体ＩＩＩの合成：
フェノールＩＩ（１７０．３ｇ、８００ｍｍｏｌ）を、内部温度計及び攪拌棒を備えた２Ｌの三つ口フラスコに入れた。無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（１０００ｍＬ）をフラスコに加えて、撹拌を開始した。出発物質の溶解後、溶液を０℃に冷却した。完全に溶解した後、ＮＥｔ_３（２２５ｍＬ、１．６ｍｏｌ）を１０分以内に添加した。ＣＨ_２Ｃｌ_２（１８０ｍＬ）中のＴｆ_２Ｏ（２５６ｇ、９０７ｍｍｏｌ）溶液を、０℃で１２０分かけて反応混合液に添加し、反応物を室温で一晩攪拌した。飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（４００ｍＬ）を添加し、反応混合液を抽出した。有機相を水（２×４００ｍＬ）及びブライン（５００ｍＬ）で繰り返し洗浄した。次いで有機相を真空中で濃縮した。トルエン（３００ｍＬ）を残留物に添加し、粗生成物を濃縮して、３１４ｇの粗黒色液体を得た。この残留物をＳｉＯ_２プラグの上部に充填し、石油エーテル／ＥｔＯＡｃ（０～２％）で溶離した。純粋な留分を濃縮することで、透明な無色の油２６９．５ｇ（収率：９９．６％）を得た。Ｒ_ｆ＝０．７４（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ５％）．
中間体ＩＶの合成：
トリフラートＩＩＩ（２６９ｇ、７９５ｍｍｏｌ）を無水の脱気ＤＭＦ（１．３Ｌ）に溶解させ、Ｚｎ（ＣＮ）_２（９５．３ｇ、７９５ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ_３）_４（２５ｇ、２１．５ｍｍｏｌ）を順次添加した。反応混合液を８０℃に３時間加温し、続いて真空下でＤＭＦを除去した。トルエン（３００ｍＬ）を残留物に添加し、粗生成物を濃縮して、４３２ｇの黒色残留物を得た。この粗生成物をＳｉＯ_２プラグの上部に充填し、石油エーテル／ＥｔＯＡｃ（０～１０％）で溶離した。純粋な留分を濃縮することで、透明な無色の油１２８．１ｇ（収率：７４．８％）を得た。Ｒ_ｆ＝０．２３（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ２％）．

【0190】

中間体Ｖの合成：
ニトリルＩＶ（１２７．６ｇ、５９２．５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５００ｍＬ）に溶解させ、ＮａＯＨ水溶液４Ｍ（７５０ｍＬ）を添加し、混合液を還流させ、この温度（８０℃）で一晩維持した。追加のＮａＯＨ水溶液１０Ｍ（１５０ｍＬ）を、加温した混合液に添加し、その溶液をさらに２０時間加熱した。周囲温度まで冷却した後、反応容器の内容物を大型ビーカーに移し、氷浴で冷却した。ＨＣｌ水溶液４Ｍ（１．１Ｌ）を３０分以内に添加し、この時点でｐＨ試験紙が示すｐＨは酸性であり、白色固体が沈殿していた。沈殿物を濾過し、水（５００ｍＬ）ですすいだ。ウェットケーキを２Ｌのフラスコに移し、真空下で３日間乾燥させて、１２７．５ｇ（収率：９１．９％）の白色粉末を得た。Ｒ_ｆ＝０．４２（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ２：１）．

【0191】

中間体ＶＩの合成：
カルボン酸Ｖ（１２７ｇ、５４２ｍｍｏｌ）を乾燥ｍＴＨＦ（１．２Ｌ）中に懸濁させ、－１０℃に冷却した。ＬｉＡｌＨ_４のＴＨＦ溶液（１Ｍ、５７５ｍＬ、５７５ｍｍｏｌ）を６０分かけて添加し、次いで反応物を周囲温度までゆっくり温め、さらに一晩撹拌した。反応容器の内容物を大型ビーカーに移し、過剰の水素化物を氷（１５ｇ）で注意深くクエンチした。ＨＣｌ水溶液３Ｍ（５００ｍＬ）を２０分以内に添加し、この時点でｐＨ試験紙が示すｐＨは酸性であった。ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）を粗混合液に添加し、２相を激しく攪拌した。水相を、ＥｔＯＡｃで２回（３００ｍＬ及び５００ｍＬ）、逆抽出した。混ぜ合わさった有機相を、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（３００ｍＬ）、水（３００ｍＬ）及びブライン（５００ｍＬ）で連続的に洗浄した。次いで有機相を真空中で濃縮した。トルエン（３００ｍＬ）を残留物に添加し、粗生成物を濃縮して、１２３．３ｇの透明な黄色がかった油を得た。この残留物をＳｉＯ_２プラグの上部に充填し、石油エーテル／ＥｔＯＡｃ（０～１５％）で溶離した。純粋な留分を濃縮することで、８５．３ｇ（収率：７１．４％）の非晶質白色固体を得た。Ｒ_ｆ＝０．３７（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ４：１）．

【0192】

中間体ＶＩＩの合成：
ベンジルアルコールＶＩ（８４．８ｇ、３８５ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（１Ｌ）に溶解させ、氷浴／水浴で冷却した。ＮＥｔ_３（１１０ｍＬ、７７０ｍｍｏｌ）を添加し、続いてＭｓＣｌ（４５ｍＬ、５７７ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（２５ｍＬ）溶液を６０分かけてゆっくりと添加した。反応物を、周囲温度までゆっくり温め、さらに一晩撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（４２０ｍＬ）を添加し、反応混合液を激しく攪拌した。有機相を水（２×５００ｍＬ）及びブライン（３００ｍＬ）で繰り返し洗浄した。次いで有機相を真空中で濃縮した。トルエン（２００ｍＬ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１００ｍＬ）を残留物に添加し、粗生成物を濃縮して、９０ｇ（収率：７８．４％）のオレンジ色の半固体を得た。Ｒ_ｆ＝０．７１（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ４：１）．

【0193】

Ｉの合成：
ＰＥＧ４００（３６０ｇ、９００ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１Ｌ）に溶解させ、ｔＢｕＯＫ（９０ｇ、８０２ｍｍｏｌ）を周囲温度で１５分かけて少しずつ添加し、混合液を周囲温度で６０分間攪拌し、氷浴で冷却した。その間に、メシラートＶＩＩ（８９．５ｇ、３００ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３００ｍＬ）に懸濁させ、乳濁したオレンジ色の溶液を、冷却した脱プロトン化ＰＥＧ４００溶液に２０分かけて添加した。反応物を周囲温度までゆっくり温め、さらに一晩撹拌した。氷（５００ｇ）とＨＣｌ水溶液１Ｍ（８２０ｍＬ）とを添加した。ＴＨＦを真空下で除去し、ＥｔＯＡｃ（１Ｌ）を添加した。相を攪拌し、有機相を水（２×５００ｍＬ）で連続的に洗浄した。各水相をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で逆抽出した。混ぜ合わさった有機層を、水（５００ｍｌ）で洗浄し、真空中で濃縮した。トルエン（２５０ｍＬ）を残留物に添加し、粗生成物を濃縮して、１２５．２ｇの透明な黄色がかった油を得た。この残留物をＳｉＯ_２プラグの上部に充填し、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ（０～８％）で溶離した。純粋な留分を濃縮することで、１０７．５ｇ（収率：５９．５％）の薄茶色の透明な油を得た。Ｒ_ｆ＝０．３７－０．２２（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ２０：１）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５７３．５，６１７．５（１００％），６６１．６；［Ｍ＋Ａｃ］^－＝６３１．４，６７５．４（１００％），７１９．５．^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．３３（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），４．５２（ｓ，２Ｈ），３．７２－３．５８（ｍ，３３Ｈ），２．５４（ｂｒｓ，１Ｈ），１．７２（ｓ，２Ｈ），１．３４（ｓ，６Ｈ），０．７０（ｓ，９Ｈ）．^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１４９．７，１３５．１，１２７．４（２Ｃ），１２６．２（２Ｃ），７３．２，７２．６，７０．７（ｍ），７０．５，６９．４，６１．９，５７．０，３８．６，３２．５，３１．９（３Ｃ），３１．６（２Ｃ）．

【0194】

実施例２ａ：４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートＩの合成（方法２）

【0195】

【化41】

【0196】

トルエン（３５ｍＬ、３２８ｍｍｏｌ）及び濃縮Ｈ_２ＳＯ_４（１０ｍＬ）を丸底フラスコ中で０℃に冷却した。トルエン（２７ｍＬ、２５６ｍｍｏｌ）とジイソブチレン（２，４，４－トリメチル－１－ペンテン＋２，４，４－トリメチル－２－ペンテンの３：１混合液、１０ｍＬ、６４ｍｍｏｌ）との混合液を、反応混合液に２時間かけてゆっくりと添加した。反応物を０℃でさらに２時間撹拌した。水（１００ｍＬ）を添加した。相分離後、有機相を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、濃縮して１４ｇの無色透明油を得た。油を、１００ｍＬの丸底フラスコに入れ、短行程蒸留装置（１・１０^－１ｍｂａｒ）によって蒸留した。６２～７０℃で留出する留分（８．１ｇ、収率６１．９％）を収集した。Ｒ_ｆ＝０．６５（ガソリンエーテル４０－６０１００％）．

【0197】

ｐ－置換トルエンＸ（５００ｍｇ、２．４５ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（ＡＣＮ）（５ｍＬ）に溶解させた。Ｎ－ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）（４６０ｍｇ、２．５７ｍｍｏｌ）を添加し、溶解後、デュラン２５ｍＬ丸底フラスコをハロゲンランプ（３００Ｗ）から１５ｃｍ離して配置した。６０分間の照射（反応温度＝４５℃）後、溶媒を除去した。ガソリンエーテル４０－６０（２５ｍＬ）を添加すると、固体が沈殿した。液相を水（２×２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、濃縮して、５４０ｍｇ（収率：７７．９％）の黄色がかった粗油を得た。Ｒ_ｆ＝０．４３（ガソリンエーテル４０－６０１００％）．

【0198】

ＰＥＧ４００（２．２５ｇ、５．６１ｍｍｏｌ）を、周囲温度で無水ＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解させた。ｔＢｕＯＫ（４２０ｍｇ、３．７４ｍｍｏｌ）を、１分かけて少しずつ添加し、混合液を９０分間撹拌し、次に氷浴／水浴で０℃に冷却した。その間に、臭化ベンジル中間体ＸＩ（５３０ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）に懸濁させ、その溶液を、冷却した脱プロトン化ＰＥＧ４００溶液に添加した。反応物を周囲温度にゆっくり加温し、さらに一晩撹拌した。ＨＣｌ（１Ｍ、２０ｍＬ）、ならびにＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）を、反応混合液に添加した。その溶液を、分液漏斗に移し、勢いよく抽出した。相分離後、有機相を水（５×１５ｍＬ）で連続的に洗浄し、最後にＭｇＳＯ_４上で乾燥させて、０．８ｇの粗油性残留物を得た。この残留物をＳｉＯ_２カラムの上部に充填し、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ（０～８％）で溶離した。純粋な留分を濃縮することで、５８８ｍｇ（収率：５２．２％）の透明な黄色がかった油を得た。Ｒ_ｆ＝０．３７－０．２２（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ２０：１）．

【0199】

実施例２ｂ：４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートＩの合成（方法２の変形法）

【0200】

【化42】

【0201】

ステップ１：
このステップを次のように実行した。
トルエン（７５０ｍＬ、７．０４ｍｏｌ）及び濃縮Ｈ_２ＳＯ_４（２０ｍＬ、０．３７５ｍｏｌ）を、丸底フラスコ中で０℃に冷却した。トルエン（２５０ｍＬ、２．３５ｍｏｌ）とジイソブチレン（２，４，４－トリメチル－１－ペンテン＋２，４，４－トリメチル－２－ペンテンの３：１混合液、２００ｍＬ、１．２８ｍｏｌ）との混合液を、反応混合液に９０分かけてゆっくりと添加した。反応物を０℃でさらに撹拌し、周囲温度まで一晩加温した。氷（４００ｇ）を加え、混合液を分液漏斗に移した。相分離後、有機相を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（３００ｍＬ）及び水（２×２５０ｍＬ）で連続的に洗浄した。有機相を濃縮して、１９９．１ｇの無色透明油を得た。油を、５００ｍＬの丸底フラスコに入れ、短行程蒸留装置（２０ｍｂａｒ）によって蒸留した。１３８℃～１６１℃の間で蒸留された留分を収集した（１３４．１ｇ、収率５１．４％）。Ｒ_ｆ＝０．６５（ガソリンエーテル４０－６０１００％）．^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．２８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ），１．７５（ｓ，２Ｈ），１．３８（ｓ，６Ｈ），０．７５（ｓ，９Ｈ）．^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１４７．３，１３４．７，１２８．６（２Ｃ），１２６．１（２Ｃ），５７．１，３８．４，３２．５，３１．９（３Ｃ），３１．７（２Ｃ），２１．０．

【0202】

あるいは、このステップを次のように実行した。
トルエン（４００ｍＬ、３．８３ｍｏｌ）及びノナフルオロ－１－ブタンスルホン酸（４ｍＬ、２４ｍｍｏｌ）を、丸底フラスコ中において周囲温度で撹拌した。トルエン（２００ｍＬ、１．９２ｍｏｌ）とジイソブチレン（２，４，４－トリメチル－１－ペンテン＋２，４，４－トリメチル－２－ペンテンの３：１混合液、１００ｍＬ、０．６４ｍｏｌ）との混合液を、反応混合液に６０分かけてゆっくりと添加した。反応物を周囲温度でさらに一晩撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（２００ｍＬ）を添加し、混合液を２０分間撹拌した。混合液を分液漏斗に移し、水相を廃棄した。有機相を水（３×３００ｍＬ）で連続的に洗浄した。有機相を濃縮して、１３２．５ｇの無色透明油を得た。油を、５００ｍＬの丸底フラスコに入れ、短行程蒸留装置（２６～１６ｍｂａｒ）によって蒸留した。１１５℃～１３５℃の間で蒸留された留分を収集した（８０．５ｇ、収率６２％）。Ｒ_ｆ＝０．６５（ガソリンエーテル４０－６０１００％）．^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．２８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ），１．７５（ｓ，２Ｈ），１．３８（ｓ，６Ｈ），０．７５（ｓ，９Ｈ）．^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１４７．３，１３４．７，１２８．６（２Ｃ），１２６．１（２Ｃ），５７．１，３８．４，３２．５，３１．９（３Ｃ），３１．７（２Ｃ），２１．０．

【0203】

ステップ２：
このステップを次のように実行した。
ｐ－置換トルエンＸ（６３．６ｇ、３１１ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（ＡＣＮ）（６５０ｍＬ）に溶解させた。Ｎ－ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）（５８．２ｇ、３２７ｍｍｏｌ）を添加し、溶解後、デュラン２Ｌ丸底フラスコをハロゲンランプ（３００Ｗ）から５～２５ｃｍ離して配置し、その間に攪拌（３５０ｒｐｍ）した。６時間の照射後（反応温度＝４６℃まで）、溶媒を真空下で除去した。ガソリンエーテル４０－６０（４５０ｍＬ）を添加すると、暗色の固体が沈殿した。液相を濃縮して、暗褐色の残留物（７５ｇ）を得た。この残留物をＳｉＯ_２プラグの上部に充填し、ガソリンエーテル４０－６０（１００％）で溶離した。純粋な留分を濃縮することで、４３．８ｇ（収率：４９．７％）のオレンジ色の透明な油を得た。Ｒ_ｆ＝０．４３（ガソリンエーテル４０－６０１００％）．^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．３４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），４．５０（ｓ，２Ｈ），１．７４（ｓ，２Ｈ），１．３６（ｓ，６Ｈ），０．７２（ｓ，９Ｈ）．^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１５０．９，１３４．８，１２８．６（２Ｃ），１２６．７（２Ｃ），５７．０，３８．７，３３．９，３２．５，３１．９（３Ｃ），３１．６（２Ｃ）．

【0204】

あるいは、このステップを次のように実行した。
ｐ－置換トルエンＸ（８５．２ｇ、４１７ｍｍｏｌ）を、トリフルオロトルエン（８３０ｍＬ）に溶解させた。エステルまたはアルカン（ＥｔＯＡｃ及びヘキサン）などの他の溶媒も効果的である。Ｎ－ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）（７４．２ｇ、４１７ｍｍｏｌ）及びＡＩＢＮ（アゾビス（イソブチロニトリル））（３．４ｇ、２１ｍｍｏｌ）を、撹拌しながら（４５０ｒｐｍ）、添加した。混合液を８０℃に５時間加熱した。溶媒を真空下で除去した。ガソリンエーテル４０－６０（３５０ｍＬ）を添加すると、白色の固体が沈殿した。液相を濃縮して、透明なオレンジ色の残留物（１０８ｇ）を得た。この残留物をＳｉＯ_２プラグの上部に充填し、ガソリンエーテル４０－６０（１００％）で溶離した。純粋な留分を濃縮することで、６４．１ｇ（収率：５４．３％）の透明なほぼ無色の油が得られ、これは結晶化して無色の針状結晶を形成し、高純度の生成物を示した。Ｒ_ｆ＝０．４３（ガソリンエーテル４０－６０１００％）．^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．３４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），４．５０（ｓ，２Ｈ），１．７４（ｓ，２Ｈ），１．３６（ｓ，６Ｈ），０．７２（ｓ，９Ｈ）．^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１５０．９，１３４．８，１２８．６（２Ｃ），１２６．７（２Ｃ），５７．０，３８．７，３３．９，３２．５，３１．９（３Ｃ），３１．６（２Ｃ）．ラジカル開始剤としてのＡＩＢＮ（アゾビス（イソブチロニトリル））の使用は、この反応ステップで得られる生成物の高純度に寄与することが期待される。

【0205】

ステップ３：
このステップを次のように実行した。
ＰＥＧ４００（１８４．１ｇ、４６０ｍｍｏｌ）を、周囲温度で無水ＴＨＦ（５５０ｍＬ）に溶解させた。ｔＢｕＯＫ（２７．２ｇ、２４５ｍｍｏｌ）を、１５分かけて少しずつ添加し、混合液を９０分間撹拌した。その間に、臭化ベンジル中間体ＸＩ（４３．５ｇ、１５３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３００ｍＬ）に懸濁させ、その溶液を、冷却した脱プロトン化ＰＥＧ４００溶液に添加した。反応物を周囲温度で一晩撹拌した。ＨＣｌ（１Ｍ、２７０ｍＬ）を反応混合液に添加した。揮発物を除去し、ＥｔＯＡｃ（６００ｍＬ）を添加した。その溶液を、分液漏斗に移し、勢いよく抽出した。相を分離した後に、水相を、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）でさらに抽出した。混ぜ合わさった有機相を、水／ブライン（１：１、３×３００ｍＬ）で連続的に洗浄し、最後に濃縮してオレンジ色の粗油性残留物９０．４ｇを得た。この残留物をＳｉＯ_２カラムの上部に充填し、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ（０～８％）で溶離した。純粋な留分を濃縮することで、８２．２ｇ（収率：８９．０％）の透明な薄茶色の油を得た。Ｒ_ｆ＝０．３７－０．２２（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ２０：１）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５７３．５，６１７．５（１００％），６６１．６；［Ｍ＋Ａｃ］^－＝６３１．４，６７５．４（１００％），７１９．５．^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．３３（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），４．５２（ｓ，２Ｈ），３．７２－３．５８（ｍ，３３Ｈ），２．５４（ｂｒｓ，１Ｈ），１．７２（ｓ，２Ｈ），１．３４（ｓ，６Ｈ），０．７０（ｓ，９Ｈ）．^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１４９．７，１３５．１，１２７．４（２Ｃ），１２６．２（２Ｃ），７３．２，７２．６，７０．７（ｍ），７０．５，６９．４，６１．９，５７．０，３８．６，３２．５，３１．９（３Ｃ），３１．６（２Ｃ）．

【0206】

あるいは、このステップを次のように実行した。
ＰＥＧ４００（４７５ｇ、１．１９ｍｏｌ）を、ＴＢＭＥ（メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル）（１．０Ｌ）に周囲温度で溶解させた。ｔＢｕＯＫ（４３．２ｇ、３８５ｍｍｏｌ）を、２０分かけて少しずつ添加し、混合液を９０分間撹拌した。その間に、臭化ベンジル中間体ＸＩ（８４ｇ、２９７ｍｍｏｌ）を、ＴＢＭＥ（２５０ｍＬ）に懸濁させ、その溶液を脱プロトン化ＰＥＧ４００溶液に周囲温度で添加した。反応物を周囲温度で３時間撹拌した。氷（２００ｇ）及びＨＣｌ（１Ｍ、４００ｍＬ）を、反応混合液に添加した。溶液を分液漏斗に移し、ＥｔＯＡｃ（１Ｌ）及び水（５００ｍＬ）を添加し、勢いよく抽出した。相分離後、有機相を、水／ブライン（１：１、３×５００ｍＬ）で連続的に洗浄し、最後に濃縮して１６５ｇのオレンジ色の粗油性残留物を得た。この残留物をＳｉＯ_２カラムの上部に充填し、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ（０～１０％）で溶離した。純粋な留分を濃縮することで、透明な薄茶色の油１５１．７ｇ（収率：８４．９％）を得た。Ｒ_ｆ＝０．３７－０．２２（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ２０：１）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５７３．５，６１７．５（１００％），６６１．６；［Ｍ＋Ａｃ］^－＝６３１．４，６７５．４（１００％），７１９．５．^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．３３（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），４．５２（ｓ，２Ｈ），３．７２－３．５８（ｍ，３３Ｈ），２．５４（ｂｒｓ，１Ｈ），１．７２（ｓ，２Ｈ），１．３４（ｓ，６Ｈ），０．７０（ｓ，９Ｈ）．^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１４９．７，１３５．１，１２７．４（２Ｃ），１２６．２（２Ｃ），７３．２，７２．６，７０．７（ｍ），７０．５，６９．４，６１．９，５７．０，３８．６，３２．５，３１．９（３Ｃ），３１．６（２Ｃ）．溶媒としてＴＢＭＥ（メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテル）を使用すること、３時間という適度な反応時間（反応副生成物を最小限に抑えることが期待される）、より大きな製造規模、及び出発物質（すなわち、臭化ベンジル中間体ＸＩ）の純度は全て、この反応ステップで観察される高収率に寄与することが期待される。

【0207】

実施例３
４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートＩの改善された合成及び改善された精製

【0208】

【化43】

【0209】

１ 材料
全ての合成は、市販の試薬と溶媒（Ｍｅｒｃｋ、ＫａｒｌＲｏｔｈ、ＴＣＩ、ＷＶＲ）とをさらに精製することなく使用して実行した。

【0210】

２ 合成及び分析方法：
^１Ｈ及び^１３Ｃ－ＮＭＲスペクトルを、標準パルスプログラムを使用して室温にてＢｒｕｋｅｒ ＡＶ６００分光計で記録した。化学シフト（δ）を百万分の１（ｐｐｍ）で表し、適切な残留溶媒シグナルを基準とする。結合定数（Ｊ）は、０．１Ｈｚ単位で報告する。ＬＣ－質量スペクトル（ｍ／ｚ）はＳｈｉｍａｄｚｕ ＬＣ－ＭＳ ２０２０で実行し、ＨＲＭＳ（高分解能質量）分析はＷａｔｅｒｓのＭｉｃｒｏＭａｓｓ ＴＯＦ分光計（ＥＳＩ＋）で実行した。フラッシュクロマトグラフィを、シリカゲル（Ｍｅｒｃｋ Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ ６０、０．０４０～０．０６３ｍｍ）上で実行した。ＴＬＣ Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ ６０Ｆ２４（Ｍｅｒｃｋ製のアルミニウムシート）を使用して、薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）を行った。分析用ＨＰＬＣクロマトグラムは、ＤＡＤ及び／またはＥＬＳＤ検出器を備えたアジレントシステムで実行した。融点を、ＤＳＣ機器（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ製のＤＳＣ２０００）または顕微鏡Ｒｅｉｃｈｅｒｔ Ｔｈｅｒｍｏｖａｒで測定した。ＦＴ－ＩＲ（ＡＴＲ）は、ＡＴＲ ＢｉｏＡＴＲセルＩＩを装備したＢｒｕｋｅｒ ｔｅｎｓｏｒ ２７分光計で、純粋なサンプル（液体及び油性化合物の場合）を使用して、または揮発性物質を完全に蒸発させた後に測定されるジクロロメタン溶解溶液サンプル（固体サンプルの場合）を使用して、測定した。分子長の計算は、ソフトウェアＣｈｅｍ３Ｄ Ｖ１５．１を使用して実行した。

【0211】

３ 合成手順
３．１ １－メチル－４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）ベンゼン（ＸＶ）の合成（ステップ（１））

【化44】

周囲温度で撹拌しながら、反応容器にトルエン（Ｖ＝６００ｍＬ、４容量）を入れ、ノナフルオロ－１－ブタンスルホン酸（Ｖ＝４．８ｍＬ）を一度に加えた。溶液を０℃に冷却し、トルエン（Ｖ＝３００ｍＬ）中に予め混合したジイソブチレン（Ｖ＝１５０ｍＬ）の混合液を、反応混合液を氷／水浴で冷却しながら、滴下漏斗を使用して反応混合液に４０～１００分かけてゆっくりと添加した。次いで、反応混合液を周囲温度で１２０分間攪拌した後、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（Ｖ＝３００ｍＬ）を一度に加えて反応をクエンチした。反応混合液を６０分間撹拌し、フラスコの内容物を分液漏斗に移した。相分離後に水相を除去し、有機相を水（２×Ｖ＝５００ｍＬ）で洗浄した。有機相を真空で完全に濃縮して、粗生成物を薄茶色の油状残留物として得た（１９５．５ｇ、定量的収率）。Ｒ_ｆ＝０．６５（ガソリンエーテル４０－６０１００％）．^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．２８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ），１．７５（ｓ，２Ｈ），１．３８（ｓ，６Ｈ），０．７５（ｓ，９Ｈ）．^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１４７．３，１３４．７，１２８．６（２Ｃ），１２６．１（２Ｃ），５７．１，３８．４，３２．５，３１．９（３Ｃ），３１．７（２Ｃ），２１．０．ＩＲ（ｃｍ^－１）：２９５３，２９０６，２８６７，１５１３，１４６９，１３６４，１２５１，１０２０，８１５，６４９，４８９．

【0212】

さらに、ノナフルオロ－１－ブタンスルホン酸よりも安価で扱いやすい（粘性が低く、溶解しやすい）トリフリック酸が、ノナフルオロ－１－ブタンスルホン酸の代わりに有利に使用できることが分かった。

【0213】

３．２ １－（ブロモメチル）－４－（２，４，４－トリメチルペンタン－２－イル）ベンゼン（ＸＶＩ）の合成（ステップ（２））

【化45】

パラ置換トルエンＸＶ（１９５ｇ、９５４ｍｍｏｌ）をシクロヘキサン（１５６０ｍＬ、８容量）に溶解させ、ＮＢＳ（１７０ｇ、９５４ｍｍｏｌ）及びＡＩＢＮ（０．８ｇ、４．８ｍｍｏｌ）を撹拌しながら添加する。混合液を完了するまで７０℃に加熱し、周囲温度に冷却した。固体を濾別し、ケーキをｃＨｅｘ（１００ｍＬ）ですすいだ。濾液を分液漏斗に移し、有機相を水（２×５００ｍＬ）で洗浄した。有機相を真空中で濃縮して、粗残留物を褐色透明油状物として得た。粗生成物にＩＰＡ（残留物２ｍＬ／ｇ）を添加し、溶液を－２０℃に冷却した。－２０℃で１時間後、数個の種結晶（１０～５０ｍｇ）を添加した。フラスコを－２０℃で一晩放置した。固体を濾別し、冷ＩＰＡ（５０ｍＬ）ですすいで、オフホワイトの固体及び対応する母液を得た。この固体をＩＰＡ（２ｍＬ／ｇ固体）及び水（０．２ｍＬ／ｇ固体）に、Ｒｏｔａｖａｐｏｒの水浴を使用して（４５℃、５分）再溶解させた。溶液を＋２～８℃に冷却した。＋２～８℃で１時間後、数個の種結晶（１０～５０ｍｇ）を添加し、フラスコを＋２～８℃で一晩放置し、さらに－２０℃に４時間冷却した。必要に応じて結晶化を繰り返す。沈殿物を濾別し、冷ＩＰＡ（５０ｍＬ）ですすいで無色の針状物を得た。固体を真空オーブン（３０℃、＜１５ｍｂａｒ、２４時間、続いて２０℃、＜１５ｍｂａｒ、２４時間）で乾燥させて、５０～８０ｇ（２ステップにわたって収率２０～３０％）を得た。Ｒ_ｆ＝０．４３（ガソリンエーテル４０－６０１００％）．ｍ．ｐ．（ＤＳＣ）＝５３℃．^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．３４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），４．５０（ｓ，２Ｈ），１．７３（ｓ，２Ｈ），１．３６（ｓ，６Ｈ），０．７２（ｓ，９Ｈ）．^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１５０．９，１３４．８，１２８．７（２Ｃ），１２６．７（２Ｃ），５７．０，３８．７，３３．９，３２．５，３１．９（３Ｃ），３１．６（２Ｃ）．ＩＲ（ｃｍ^－１）：２９５３，２８９９，２８６８，１５１１，１４７０，１３６６，１２５２，１２３０，１２０４，１０９５，８３０，６４８，６２８，６０６，５７３，４５４．

【0214】

また、本ステップの溶媒として、シクロヘキサンの代わりにアセトニトリルを使用することが一般的に可能であることも分かった。アセトニトリルは、合成のための溶媒としても結晶化のための溶媒としても有利に使用することができる。さらに、アセトニトリルを使用すると、次のセクションで説明するジブロム化副生成物の形成を減らすことが可能になる。

【0215】

３．３ 比較のための副生成物ＸＶＩＩの合成

【化46】

パラ置換臭化ベンジルＸＶＩ（５０２ｍｇ、１．７７ｍｍｏｌ）を、シクロヘキサン（６ｍＬ）に溶解させた。ＮＢＳ（４７４ｍｇ、４１７ｍｍｏｌ）及びＡＩＢＮ（１６ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を、撹拌（４００ｒｐｍ）しながら添加した。混合液を８０℃に４時間加熱した。反応混合液を周囲温度に冷却し、２０ｍＬのシクロヘキサンを添加した。フラスコの内容物を分液漏斗に移し、有機相を、水（２×５ｍＬ）、続いてブライン（５ｍＬ）で洗浄した。溶媒を真空下で除去して、黄色がかった残留物（７２０ｍｇ）を得た。この残留物をＳｉＯ_２カラムの上部に充填し、ヘキサン（１００％）で溶離した。純粋な留分を濃縮することで、３５８ｍｇ（収率：５６％）の透明な無色の粘性油を得た。Ｒ_ｆ＝０．４７（ヘキサン）．^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．４７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．６５（ｓ，１Ｈ），１．７４（ｓ，２Ｈ），１．３６（ｓ，６Ｈ），０．７２（ｓ，９Ｈ）．^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１５２．６，１３９．１，１２６．５（２Ｃ），１２６．１（２Ｃ），５７．０，４１．３，３８．９，３２．５，３１．９（３Ｃ），３１．５（２Ｃ）．ＩＲ（ｃｍ^－１）：２９５５，２８９８，２８７１，１６０７，１４６９，１４１１，１３６５，１２５１，１１４３，１０９５，１０１７，８３６，７４６，６６７．

【0216】

３．４ ＸＶＩからの４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートの合成（ステップ（３））

【化47】

反応フラスコをＰＥＧ４００（７００ｇ、１．７７ｍｏｌ）で満たし、６０℃に加熱した後に、ｔＢｕＯＫ（４７．５ｇ、４２３ｍｍｏｌ）を攪拌しながら少しずつ添加した。添加後、反応混合液を６０℃で３０分間加熱した。固体結晶臭化ベンジル中間体ＸＶＩ（１００ｇ）を、脱プロトン化ＰＥＧへ、一度に添加した。３０分後、反応混合液を周囲温度まで冷却し、水（１．５Ｌ）を添加した。ＨＣｌ水溶液１Ｍを使用することで、ｐＨを６～７に設定した。任意選択で、最終生成物をほとんど無色にする必要がある場合、次亜塩素酸ナトリウム（５％活性Ｃｌ溶液、１０～１５ｍＬ）を反応容器に滴下した。容器の内容物を分液漏斗に移した。水（０．５Ｌ）及びＥｔＯＡｃ（２Ｌ）を漏斗に加え、相を激しく振とうさせた。相分離後、水相を除去した。水／ブライン（２０：１）（１Ｌ）を添加し、相を激しく振とうし、相分離後、水相を除去した。２回繰り返す。次いで、ＥｔＯＡｃ相を減圧下で濃縮して、約２００ｇの黄色がかった透明な生成物を得た。残留物をＥｔＯＨ（２Ｌ）に取り、分液漏斗に移した。ｃＨｅｘ（３Ｌ）と水（１００ｍＬ）とを加えた。相を激しく振とうし、ｃＨｅｘ相を除去した。新鮮なｃＨｅｘ（１Ｌ）を加え、相を激しく振とうし、ｃＨｅｘ相を除去した。ＥｔＯＨ相を減圧下で濃縮し、生成物をさらに一晩乾燥させて、約１６０～１７０ｇ（収率７５～８０％）の淡黄色がかった透明な生成物を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５７３．５，６１７．５（１００％），６６１．６；［Ｍ＋Ａｃ］^－＝６３１．４，６７５．４（１００％），７１９．５．^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．３３（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），４．５２（ｓ，２Ｈ），３．７２－３．５８（ｍ，３３Ｈ），２．５４（ｂｒｓ，１Ｈ），１．７２（ｓ，２Ｈ），１．３４（ｓ，６Ｈ），０．７０（ｓ，９Ｈ）．^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１４９．７，１３５．１，１２７．４（２Ｃ），１２６．２（２Ｃ），７３．２，７２．６，７０．７（ｍ），７０．５，６９．４，６１．９，５７．０，３８．６，３２．５，３１．９（３Ｃ），３１．６（２Ｃ）．ＩＲ（ｃｍ^－１）：２９５７，２８６５，１４６５，１３５０，１２４９，１０９７，９４８，８１６，６７０，６３２．ＩＲ（ｃｍ－^１）：２９５７，２８６５，１４６５，１３５０，１２４９，１０９７，９４８，８１６，６７０，６３２．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ^＋）（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］^＋Ｃ_３３Ｈ_６１Ｏ_１０（ｎ＝９）に対する計算値：６１７．４２６５；実測値：６１７．４２６９．

【0217】

３．５ 比較のための二官能性副生成物ＸＶＩＩＩの合成

【化48】

ＰＥＧ４００（５．０１ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）を周囲温度でＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶解させた。ｔＢｕＯＫ（３．２５ｇ、２８．８ｍｍｏｌ）を一度に添加し、混合液を３０分間撹拌した。臭化ベンジルＸＶＩを脱プロトン化ＰＥＧ４００溶液に周囲温度で一度に添加し、反応物を周囲温度で一晩撹拌した。水（１２０ｇ）及びＨＣｌ（１Ｍ、１０ｍＬ）を反応混合液に添加した。溶液を分液漏斗に移し、ＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）を添加し、勢いよく抽出した。相分離後、有機相を水（２×１００ｍＬ）で連続的に洗浄し、最後にＭｇＳＯ_４上で乾燥させた後に濃縮して、１０．８ｇの黄色がかった粗油性残留物を得た。この残留物をＳｉＯ_２カラムの上部に充填し、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ（０～１５％）で溶離した。純粋な留分を濃縮することで、９．１３ｇ（収率：９１％）の透明な淡黄色がかった油を得た。Ｒ_ｆ＝０．２１－０．７８（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ２０：１）．^１Ｈ－ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝７．３３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，４Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，４Ｈ），４．５３（ｓ，４Ｈ），３．８０－３．４９（ｍ，３６Ｈ），１．７３（ｓ，４Ｈ），１．３５（ｓ，１２Ｈ），０．７１（ｓ，１８Ｈ）．^１３Ｃ－ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ＝１４９．８（２Ｃ），１３５．２（２Ｃ），１２７．５（４Ｃ），１２６．３（４Ｃ），７３．２，７０．８，７０．８（ｍ），６９．４，５７．１（２Ｃ），３８．６（２Ｃ），３２．５（２Ｃ），３１．９（６Ｃ），３１．７（４Ｃ）．ＩＲ（ｃｍ^－１）：２９５１，２８６１，１４６５，１３６３，１２４９，１０９９，８１７，６７０，６３３．ＨＲＭＳ（ＥＳＩ^＋）（ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｎａ］^＋Ｃ_４８Ｈ_８２ＮａＯ_１０（ｎ＝９）に対する計算値：８４１．５８０６；実測値：８４１．５７９７．

【0218】

最終生成物の純度を分析するための分析方法：
ＨＰＬＣ法１：
この方法では、次の設定を使用した。
ＨＰＬＣ：アジレント１２６０
カラム：Ｚｏｒｂａｘ Ｒｘ－Ｃ８、５μｍ、４．６×２５０ｍｍ（Ｖ＝４．１５５ｍＬ）
溶離液：水（Ａ）、アセトニトリル（Ｂ）
勾配溶離：７０％Ｂ（０分）－－＞７０％Ｂ（４分）－－＞９７％Ｂ（２０分）－－＞９７％Ｂ（４０分）
ポストタイム：１２分
流量：１．０ｍＬ／分
カラム温度：２５℃
注入量：５μＬ
波長：２００ｎｍ
２００ｎｍでの粗生成物のスペクトルと、２００ｎｍでの最終生成物のスペクトルとを、図７に示す。

【0219】

ＨＰＬＣ法２：
この方法では、次の設定を使用した。
ＨＰＬＣ：アジレント１２６０
カラム：Ｚｏｒｂａｘ ３００ＳＢ－Ｃ３、５μｍ、２．１×１５０ｍｍ（Ｖ＝０．５２０ｍＬ）
溶離液：水（Ａ）、アセトニトリル（Ｂ）
勾配溶離（Ｇｒａｄｉｅｎｔ ｅｌｕｔｉｏｎ）：勾配溶離（ｇｒａｄｉｅｎｔ ｅｌｕｔｉｏｎ）：３５％Ｂ（０分）－－＞３５％Ｂ（４分）－－＞９７％Ｂ（２０分）－－＞９７％Ｂ（２５分）
ポストタイム：８分
流量：０．５ｍＬ／分
カラム温度：２５℃
注入量：５μＬ
波長：２００ｎｍ及びＥＬＳＤ
最終生成物のスペクトルを図８に示す。
ＥＬＳＤによる純度＞９９％
２００ｎｍによる純度＝９５％

【0220】

ＨＰＬＣ法３：
この方法では、次の設定を使用した。
ＨＰＬＣ：アジレント１２６０
カラム：Ａｃｃｌａｉｍ Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｐｌｕｓ、４．６×１５０ｍｍ、３μｍ、１７５Å、Ｖ＝２．４９３ｍＬ
溶離液：水（Ａ）、アセトニトリル（Ｂ）
勾配溶離：２０％Ｂ（０分）－－＞２０％Ｂ（７分）－－＞９０％Ｂ（２７分）－－＞９０％Ｂ（４０分）－－＞２０％Ｂ（４０．１分）－－＞２０％Ｂ（５０分）
ポストタイム：０分
流量：０．５ｍＬ／分
カラム温度：３０℃
注入量：５μＬ
波長：２２５ｎｍ
ＥＬＳＤ検出
最終生成物のスペクトルを図９に示す。

【0221】

結論：
このルートでは、少数の溶媒（例えば、トルエン、ｃＨｅｘ、ＩＰＡ、ＥｔＯＡｃ及びＥｔＯＨ）を利用し、それらは全て無害であり、濃縮後に回収可能であることが留意されてもよい。この方法で使用される、より高い当量（ｅｑ．）数のＰＥＧ、例えば５モル当量（ｅｑ．）のＰＥＧは、二官能性副産物ＸＶＩＩＩの量を減らすことによって生成物の純度を高めるので、より低い量のＰＥＧと比較して有利である。次亜塩素酸ナトリウムの添加を省略した場合、最終生成物はオレンジ色になるが、分析結果は同じである。

【0222】

上記の３ステップの、クロマトグラフィを使用しない合成プロセスでは、安価な出発物質を使用し、堅牢でシンプルなワークアップが可能であり、標準的な有機実験室での生産が、９９％を超える純度で数百グラムのバッチを提供することを可能にする。このプロセスを、本発明の洗剤の調製及び精製のために工業規模で使用することができる。

【0223】

実施例４：静脈内免疫グロブリンを含む液体中での４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートを使用したＰＲＶの不活化
材料及び方法
実験を、ＷＯ２０１９／０８６４６３の実施例１に記載されているように実施した。しかしながら、Ｓ／Ｄ処理については、実施例２ａで生成した４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートを含むＳ／Ｄ混合液を試験し、トリトンＸ－１００を含むＳ／Ｄ混合液と比較した。トリトンＸ－１００を含むＳ／Ｄ混合液の組成物は、ＷＯ２０１９／０８６４６３の実施例１に記載されているように調製した。４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートを含むＳ／Ｄ混合液の組成物を、次のように調製した。

【0224】

Ｓ／Ｄ成分のポリソルベート８０（ＰＳ８０、Ｃｒｉｌｅｔ ４ ＨＰ、Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ８０）及びトリ－ｎ－ブチルホスフェート（ＴｎＢＰ）を、実施例２ａで生成した洗剤４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートと、以下の比率で組み合わせた（表１参照）。

【表1】

混合液を少なくとも１５分間撹拌した。Ｓ／Ｄ試薬混合物は、１年以内に使用するために室温で保存した。使用前に、Ｓ／Ｄ試薬混合物を少なくとも１５分間再度撹拌して、均質性を確保した。

【0225】

それぞれのＳ／Ｄ試薬混合物をＩＶＩＧ含有液に添加して、それぞれのポリオキシエチレンエーテル洗剤の最終濃度である０．０５％ｗ／ｗを得た。

【0226】

ウイルスＰＲＶの不活化のみをテストした。

【0227】

結果
４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、ＰＳ８０及びＴｎＢＰの混合液を使用して、ＩＶＩＧ含有液をＳ／Ｄ処理したところ、ＰＲＶは、１～２分以内に約４のウイルスリダクション指数（ＲＦ）によって不活化された（図１Ａ）。同様の結果を反復実験で得た（図１Ｂ）。

【0228】

これらの実験は、トリトンＸ－１００を４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートに置き換えて生物薬剤学的薬物含有液のＳ／Ｄ処理を行うと、低濃度の洗剤でも脂質エンベロープウイルスが効率的に不活化されることを示している。

【0229】

実施例５：ヒト血清アルブミンを含む液体中での４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートを使用したＸ－ＭｕＬＶの不活化
材料及び方法
実験を、ＷＯ２０１９／０８６４６３の実施例３に記載されているように実施した。しかしながら、Ｓ／Ｄ処理については、４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートを含むＳ／Ｄ混合液を試験し、トリトンＸ－１００を含むＳ／Ｄ混合液と比較した。トリトンＸ－１００を含むＳ／Ｄ混合液の組成物は、ＷＯ２０１９／０８６４６３の実施例３に記載されているように調製した。４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートを含むＳ／Ｄ混合液の組成物を、次のように調製した。

【0230】

Ｓ／Ｄ成分のポリソルベート８０（ＰＳ８０、Ｃｒｉｌｅｔ ４ ＨＰ、Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ８０）及びトリ－ｎ－ブチルホスフェート（ＴｎＢＰ）を、洗剤４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートと、以下の比率で組み合わせた（表２参照）。

【表2】

混合液を少なくとも１５分間撹拌した。Ｓ／Ｄ試薬混合物は、１年以内に使用するために室温で保存した。使用前に、Ｓ／Ｄ試薬混合物を少なくとも１５分間再度撹拌して、均質性を確保した。

【0231】

それぞれのＳ／Ｄ試薬混合物をＨＳＡ含有液に添加して、それぞれのポリオキシエチレンエーテル洗剤の最終濃度である０．１％を得た。

【0232】

ウイルスＸ－ＭｕＬＶの不活化のみをテストした。

【0233】

結果
４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、ＰＳ８０及びＴｎＢＰの混合液を使用して、ＨＳＡ含有液を１℃±１℃でＳ／Ｄ処理したところ、Ｘ－ＭｕＬＶは、１０分以内に２を超えるウイルスリダクション指数（ＲＦ）によって不活化された（図２Ａ）。同様の結果を反復実験で得た（図２Ｂ）。

【0234】

追加の実験は、ＨＳＡ含有液のＳ／Ｄ処理を１℃±１℃の代わりに１９℃±１℃で行ったことのみを除いて、この実施例の材料及び方法のセクションに記載した通りに正確に行った。４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、ＰＳ８０及びＴｎＢＰの混合液を使用して、ＨＳＡ含有液を１９℃±１℃でＳ／Ｄ処理したところ、Ｘ－ＭｕＬＶは、１０分以内に２を超えるウイルスリダクション指数（ＲＦ）（図３Ａ）、及び３０分以内に約４のＲＦによって不活化された。同様の結果を反復実験で得た（図３Ｂ）。

【0235】

これらの実験は、トリトンＸ－１００を４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートに置き換えて生物薬剤学的薬物含有液のＳ／Ｄ処理を行うと、低濃度の洗剤でも、室温または室温付近、及び１℃±１℃という低い温度で、脂質エンベロープウイルスが効率的に不活化されることを示している。

【0236】

実施例６：ＨＳＡを含む緩衝液中での４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、還元型トリトンＸ－１００またはＢｒｉｊ Ｃ１０を使用したＢＶＤＶの不活化
４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート、還元型トリトンＸ－１００またはＢｒｉｊ Ｃ１０が、治療用抗体のモデルタンパク質としてヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含む緩衝液中の脂質エンベロープウイルスであるウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）を不活化する単一洗剤処理に適していることをテストし、トリトンＸ－１００と比較した。この目的のために、低濃度のそれぞれの洗剤を、ＨＳＡを含む緩衝液に添加し、次いで、その混合液にウイルスをスパイクした。さまざまな期間のインキュベーションの後、残っているウイルスの感染性を判定した。それぞれの洗剤は、ウイルス不活化の動態、すなわち経時的なウイルス不活化効率（ＲＦによって表される）を評価できるようにするために、低濃度で使用した。当業者には明らかであるように、生物薬剤学的製造などの商業的生産プロセスでは、本発明の洗剤を有意に高くした濃度で使用することができ、これによりウイルス不活化の動態が促進されるようになり、達成されるＲＦもまた増加し得る。

【0237】

材料
ＨＳＡを含む緩衝液
治療用抗体のモデルとしてヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含む緩衝液を使用した。


ウイルス

【表3】

ウイルスストックを、使用前に特徴付けた。この特徴付けには、少なくとも１０回の独立した力価測定によるウイルス力価の決定、及び陽性対照として使用するための許容ウイルス力価範囲の指定、ウイルスストックタンパク質含有量の決定、ウイルスの同一性及び他のウイルス及びマイコプラズマによる汚染のＰＣＲ検査、ならびに大型ウイルス凝集体を通過させないフィルタを使用するウイルスの凝集の検査が含まれる。著しい凝集がなく、ＰＣＲによる同一性／汚染試験に合格した（すなわち、ウイルスストックと濾過ストックとの間の感染力価の差が１．０ｌｏｇ未満であった）ウイルスストックのみを使用した。

【0238】

洗剤
それぞれの洗剤、またはその１：１０希釈液（つまり、それぞれの洗剤１ｇ±２％に蒸留水９ｇ±２％を加えたもの）を、使用する前に、少なくとも１５分間攪拌して、均質性を確保した。

【0239】

方法
単一洗剤処理のウイルス不活化能力と堅牢性とを、ウイルス不活化に不利な条件下で、つまり短いインキュベーション時間及び比較的低温で評価した。当業者には明らかなように、生物薬剤学的製造などの商業的生産プロセスでは、より長いインキュベーション時間、及びより高い温度を使用することができ、これによりウイルス不活化の動態が促進されるようになり、達成されるＬＲＶも増加する場合がある。さらに、すでに先に述べたように、それぞれの洗剤を低濃度で使用した。当業者には明らかなように、生物薬剤学的製造などの商業的生産プロセスでは、より高濃度のそれぞれの洗剤を使用することができ、これによりウイルス不活化の動態が促進されるようになり、達成されるＬＲＶも増加する場合がある。

【0240】

タンパク質濃度は、ウイルスの不活化に大きな影響を与えないので（Ｄｉｃｈｔｅｌｍｕｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２００９も参照されたい）、タンパク質含有量に関する堅牢性は調査しなかった。

【0241】

以下の全てのステップを、バイオセーフティクラスＩＩキャビネット内で行った。出発材料を、インキュベーションのためクライオスタットに接続された二重壁容器を使用して、＋１４℃±１℃の温度で攪拌しながらインキュベートした。

【0242】

ＨＳＡを含む緩衝液を、風袋重量が測定されているスクリューキャップフラスコに移した。添加すべき単一の洗剤の量を算出するために、ＨＳＡを含む（密閉フラスコ内の）緩衝液の重量を測定した。ＨＳＡを含む緩衝液１ｇあたり、洗剤の必要量（［ｍｇ］）、またはその１：１０希釈液のそれぞれの量を添加して、それぞれの洗剤の最終濃度：０．１％±０．０１％（ｗ／ｗ）または０．０３％±０．０１％（ｗ／ｗ）を得た。シリンジを使用して１分以内に洗剤を攪拌しながら添加し、実際に添加された量を、シリンジを逆秤量することによって求めた。洗剤の添加が完了した後、ＨＳＡを含む緩衝液を少なくとも１０分間さらに攪拌した。洗剤と混合したＨＳＡを含む緩衝液を、０．２μｍのＳｕｐｏｒシリンジ膜フィルタ（または同等品）によって濾過し、クライオスタットに接続された二重壁容器を使用して、１４℃±１℃の目標温度で濾液を収集した。濾液のための容器を冷却した。フィルタが目詰まりした場合、新しいフィルタを使用して、ＨＳＡを含む緩衝液の濾過を続けた。濾過後、温度（目標：１４℃±１℃）及び体積を測定した。

【0243】

クライオスタットに接続された二重壁容器を使用して、それぞれの洗剤を含むＨＳＡ含有の濾過済み緩衝液を攪拌しながら、１４℃±１℃に調整した。この温度範囲を、洗剤を含むＨＳＡ含有緩衝液のインキュベーションの最後まで撹拌下で維持し、継続的に記録した。洗剤を含むＨＳＡ含有緩衝液の測定した体積を１：３１の比率でスパイクし、例えば、ＨＳＡを含有する緩衝液４８ｍＬをウイルスストック溶液１．６ｍｌでスパイクした。ＨＳＡを含むスパイクした緩衝液を、１４℃±１℃で５９±１分間、継続的に攪拌しながらさらにインキュベートした。インキュベーション中、ウイルス力価測定用のサンプルを、１～２分、５±１分、２９±１分、及び５９±１分で採取した。サンプル採取後のウイルスの洗剤によるさらなる不活化を防ぐために、サンプルを、それぞれの冷却した（＋２℃～＋８℃）細胞培地で直ちに１：２０（つまり、１体積のサンプルと１９体積の細胞培地）に希釈した。

【0244】

スパイクコントロール及びホールドコントロールを同日に行った。ＨＳＡを含む緩衝液を上記のように濾過したが、事前に洗剤を添加しなかった。次に濾液を上記のように撹拌しながら１４℃±１℃に調整した。ＨＳＡを含む緩衝液を、上記のように、１：３１の比率でスパイクし、さらに１４℃±１℃で５９±１分間インキュベートした。スパイク後１～２分以内に、ウイルス力価測定用のサンプル（スパイクコントロール）を採取した。５９±１分間のインキュベーション後、ウイルス力価測定用のサンプル（すなわち、ホールドコントロールサンプル）を採取した（ＨＣ）。

【0245】

ＷＯ２０１９／０８６４６３の実施例１に記載されているように、サンプルの力価測定及びウイルス除去能力の算出を行った。

【0246】

結果
ＨＳＡを含む緩衝液の単一洗剤処理を、０．１％±０．０１％トリトンＸ－１００、Ｂｒｉｊ Ｃ１０、４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートまたは還元型トリトンＸ－１００を使用して、１４℃±１℃で行ったところ、ＢＶＤＶは、５分以内に約５のウイルスリダクション指数（ＲＦ）によって不活化された（図４Ａ）。ＨＳＡを含む緩衝液の単一洗剤処理を、０．０３％±０．０１％トリトンＸ－１００、４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートまたは還元型トリトンＸ－１００を使用して、１４℃±１℃で行ったところ、ＢＶＤＶは、５分以内に３を超え、２９分以内に４を超えるウイルスリダクション指数（ＲＦ）によって不活化された（図４Ｂ）。

【0247】

これらの実験は、トリトンＸ－１００、Ｂｒｉｊ Ｃ１０、４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートまたは還元型トリトンＸ－１００を使用した生物薬剤学的薬物含有液の単一洗剤処理により、低濃度の洗剤であっても脂質エンベロープウイルスが効率的に不活化されるようになることを示している。

【0248】

実施例７：ＩＶＩＧ含有液中での４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートまたは還元型トリトンＸ－１００を使用するＢＶＤＶ不活化
４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートまたは還元型トリトンＸ－１００が、静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）を含む液体中の脂質エンベロープウイルスであるウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）を不活化する単一洗剤処理に適していることをテストし、トリトンＸ－１００と比較した。この目的のために、ＩＶＩＧを含む液体にウイルスを添加した。次いで、ＩＶＩＧを含むウイルス含有液を、低濃度の還元型トリトンＸ－１００、４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートまたはトリトンＸ－１００と共に様々な期間インキュベートし、ウイルスの残存する感染性を判定した。ウイルス不活化の動態、すなわちウイルス不活化の効率（ＲＦで表される）を経時的に評価するために、還元型トリトンＸ－１００、４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート及びトリトンＸ－１００を低濃度で使用した。当業者には明らかであるように、生物薬剤学的製造などの商業的生産プロセスでは、還元型トリトンＸ－１００または４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートを含む本発明の洗剤を有意に高くした濃度で使用することができ、これによりウイルス不活化の動態が促進されるようになり、達成されるＬＲＶが増加することも期待される。

【0249】

材料
ＩＶＩＧを含む液体
ＩＶＩＧを含む液体（ＩＶＩＧ含有液）を、ドライアイス上で凍結させ、採取日から１年以内に使用するまで－６０℃以下で保存した。


ウイルス

【表4】

ウイルスストックを、使用前に特徴付けた。この特徴付けには、少なくとも１０回の独立した力価測定によるウイルス力価の決定、及び陽性対照として使用するための許容ウイルス力価範囲の指定、ウイルスストックタンパク質含有量の決定、ウイルスの同一性及び他のウイルス及びマイコプラズマによる汚染のＰＣＲ検査、ならびに大型ウイルス凝集体を通過させないフィルタを使用するウイルスの凝集の検査が含まれる。著しい凝集がなく、ＰＣＲによる同一性／汚染試験に合格した（すなわち、ウイルスストックと濾過ストックとの間の感染力価の差が１．０ｌｏｇ未満であった）ウイルスストックのみを使用した。

【0250】

洗剤
それぞれの洗剤、またはその１：１０希釈液（つまり、それぞれの洗剤１ｇ±２％に蒸留水９ｇ±２％を加えたもの）を、使用する前に、少なくとも１５分間攪拌して、均質性を確保した。

【0251】

方法
単一洗剤処理のウイルス不活化能力と堅牢性とを、ウイルス不活化に不利な条件下で、つまり短いインキュベーション時間及び比較的低温で評価した。当業者には明らかなように、生物薬剤学的製造などの商業的生産プロセスでは、より長いインキュベーション時間、及びより高い温度を使用することができ、これによりウイルス不活化の動態が促進されるようになり、達成されるＬＲＶも増加する可能性がある。さらに、すでに先に述べたように、それぞれの洗剤を低濃度で使用した。当業者には明らかなように、生物薬剤学的製造などの商業的生産プロセスでは、より高濃度のそれぞれの洗剤を使用することができ、これによりウイルス不活化の動態が促進されるようになり、達成されるＬＲＶも増加する場合がある。

【0252】

タンパク質濃度は、ウイルスの不活化に大きな影響を与えないので（Ｄｉｃｈｔｅｌｍｕｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２００９も参照されたい）、タンパク質含有量に関する堅牢性は調査しなかった。

【0253】

ＩＶＩＧ含有液を解凍し、それ以降の全てのステップをバイオセーフティクラスＩＩキャビネット内で行った。ＩＶＩＧ含有液を、インキュベーションのためクライオスタットに接続された二重壁容器を使用して、＋１７℃±１℃の温度で攪拌しながらインキュベートした。次に、ＩＶＩＧ含有液を、加圧窒素を使用して目標圧力０．９バール（制限：０．５バール～１．５バール）で、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ（ＳＭ１６２４９）ステンレス鋼フィルタホルダに接続された２５ｃｍ^２の有効フィルタ面積を持つ０．２μｍデプスフィルタ（Ｃｕｎｏ ＶＲ０６または同等品）を通して濾過した。調整のために、液体を濾過する前に、フィルタ材料を、５５Ｌ／ｍ^２のＨｙｆｌｏ Ｓｕｐｅｒｃｅｌ懸濁液（１Ｌあたり５．０ｇ±０．０５ｇのＨｙｆｌｏＳｕｐｅｒｃｅｌ；３ＭのＮａＣｌを使用して伝導率を３．５ｍＳ／ｃｍに調整（指定範囲：２．５～６．０ｍＳ／ｃｍ））（圧力≦０．５バールで）で予めコーティングした。濾過中、フィルタホルダを冷却し、クライオスタットに接続された二重壁容器を使用して、＋１７℃±１℃の目標温度で濾液を収集した。濾液のための容器を冷却した。フィルタが目詰まりした場合は、残留液体の濾過を継続するために、事前に調整された新しいフィルタを使用した。濾過後、体積を測定した。

【0254】

ＩＶＩＧ含有液の体積を測定した後、それを冷却した（＋２℃～＋８℃）希釈緩衝液（目標伝導率３．５ｍＳ／ｃｍ（範囲：２．５ｍＳ／ｃｍ～６．０ｍＳ／ｃｍ）のＮａＣｌ溶液）と共に、撹拌下で、算出した目標吸光度の２８．９ＡＵ_{２８０～３２０}／ｃｍ（範囲：１４．５～７２．３ＡＵ_{２８０～３２０}／ｃｍ）に調整した。後の１：３１ウイルススパイクを考慮に入れると、これにより、濾過後の洗剤とのインキュベーションについて、算出した目標吸光度の値が２８ＡＵ_{２８０～３２０}／ｃｍ（範囲：１４～７０ＡＵ_{２８０～３２０}／ｃｍ）となる。

【0255】

濾過され、タンパク質が調整されたＩＶＩＧ含有液を、クライオスタットに接続された二重壁容器を使用して、攪拌下で＋１７℃±１℃に再度調整した。この温度範囲を、洗剤を含む濾過したＩＶＩＧ含有液のインキュベーションの最後まで撹拌下で維持し、継続的に記録した。風袋重量が測定されているスクリューキャップフラスコに移した、濾過したＩＶＩＧ含有液の測定した体積を、１：３１の比率でウイルスでスパイクし、例えば、３０ｍＬのＩＶＩＧ含有液を、ウイルスストック溶液１ｍＬでスパイクした。スパイクしたＩＶＩＧ含有液を、１７℃±１℃で継続的に攪拌しながら、さらにインキュベートした。スパイク後１～２分以内に、ウイルス力価測定用のサンプル（スパイクコントロールＳＣ、及びホールドコントロールＨＣ）を採取した。

【0256】

採取後、ホールドコントロール（ＨＣ）を、洗剤の添加後にスパイクしたＩＶＩＧ含有液と同じ温度、つまり＋１７℃±１℃に維持し、つまり、洗剤処理が終了するまで、ＩＶＩＧ含有液を入れた容器と同じ冷却サークルに保存した。冷却液の温度を、ホールドコントロールサンプルを挿入する前に測定し、洗剤処理後の力価測定のためにホールドコントロールを取り外す直前に、再度測定した。

【0257】

添加すべき洗剤の量を算出するために、スパイクしたＩＶＩＧ含有液の重量を測定した。必要に応じて、秤量した材料を攪拌しながら、＋１７℃±１℃に再調整した。ＩＶＩＧ含有液１ｇあたり、洗剤の必要量（［ｍｇ］）、またはその１：１０希釈液のそれぞれの量を添加して、それぞれの洗剤の最終濃度：０．１％±０．０１％（ｗ／ｗ）または０．０３％±０．０１％（ｗ／ｗ）を得た。シリンジを使用して１分以内に洗剤を攪拌しながら添加し、添加した洗剤の実際の量を、シリンジを逆秤量することによって求めた。スパイクしたＩＶＩＧ含有液を、＋１７℃±１℃で５９±１分間、継続的に攪拌しながら、それぞれの洗剤と共にさらにインキュベートした。インキュベーション中、ウイルス力価測定用のサンプル１ｍＬを、１～２分後、１０±１分後、３０±１分後、及び５９±１分後に採取した。サンプル採取後のウイルスのＳ／Ｄ試薬によるさらなる不活化を防ぐために、サンプルを、冷却した（＋２℃～＋８℃）細胞培地で直ちに１：２０（つまり、１体積のサンプルと１９体積の細胞培地）に希釈した。

【0258】

ＷＯ２０１９／０８６４６３の実施例１に記載されているように、サンプルの力価測定及びウイルス除去能力の算出を行った。

【0259】

結果
ＩＶＩＧ含有液の単一洗剤処理を、０．１％±０．０１％トリトンＸ－１００、４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートまたは還元型トリトンＸ－１００を使用して、１７℃±１℃で行ったところ、ＢＶＤＶは、１０分以内に約５のウイルスリダクション指数（ＲＦ）によって不活化された（図５Ａ）。ＩＶＩＧ含有液の単一洗剤処理を、０．０３％±０．０１％トリトンＸ－１００、４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートまたは還元型トリトンＸ－１００を使用して、１７℃±１℃で行ったところ、ＢＶＤＶは、１０分以内に３を超え、３０分以内に４を超えるウイルスリダクション指数（ＲＦ）によって不活化された（図５Ｂ）。

【0260】

これらの実験は、トリトンＸ－１００、４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートまたは還元型トリトンＸ－１００を使用した生物薬剤学的薬物含有液の単一洗剤処理により、低濃度の洗剤であっても脂質エンベロープウイルスが効率的に不活化されるようになることを裏付けている。

【0261】

実施例８：ＦＶＩＩＩ含有液中での４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートまたは還元型トリトンＸ－１００を使用するＢＶＤＶ不活化
４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートまたは還元型トリトンＸ－１００が、血漿由来第ＶＩＩＩ因子（ｐｄＦＶＩＩＩ）を含む液体中の脂質エンベロープウイルスであるウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）を不活化する単一洗剤処理に適していることをテストし、トリトンＸ－１００と比較した。この目的のために、ｐｄＦＶＩＩＩを含む液体にウイルスを添加した。次いで、ｐｄＦＶＩＩＩを含むウイルス含有液を、低濃度の還元型トリトンＸ－１００、４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートまたはトリトンＸ－１００と共に様々な期間インキュベートし、ウイルスの残存する感染性を判定した。ウイルス不活化の動態、すなわちウイルス不活化の効率（ＲＦで表される）を経時的に評価するために、還元型トリトンＸ－１００、４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレート及びトリトンＸ－１００を低濃度で使用した。当業者には明らかであるように、生物薬剤学的製造などの商業的生産プロセスでは、還元型トリトンＸ－１００または４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートを含む本発明の洗剤を有意に高くした濃度で使用することができ、これによりウイルス不活化の動態が促進されるようになり、達成されるＬＲＶが増加することも期待される。

【0262】

材料
ｐｄＦＶＩＩＩを含む液体
ｐｄＦＶＩＩＩを含む液体（ｐｄＦＶＩＩＩ含有液）を、ドライアイス上で凍結させ、採取日から１年以内に使用するまで－６０℃以下で保存した。
ウイルス

【表5】

ウイルスストックを、使用前に特徴付けた。この特徴付けには、少なくとも１０回の独立した力価測定によるウイルス力価の決定、及び陽性対照として使用するための許容ウイルス力価範囲の指定、ウイルスストックタンパク質含有量の決定、ウイルスの同一性及び他のウイルス及びマイコプラズマによる汚染のＰＣＲ検査、ならびに大型ウイルス凝集体を通過させないフィルタを使用するウイルスの凝集の検査が含まれる。著しい凝集がなく、ＰＣＲによる同一性／汚染試験に合格した（すなわち、ウイルスストックと濾過ストックとの間の感染力価の差が１．０ｌｏｇ未満であった）ウイルスストックのみを使用した。

【0263】

洗剤
それぞれの洗剤、またはその１：１０希釈液（つまり、それぞれの洗剤１ｇ±２％に蒸留水９ｇ±２％を加えたもの）を、使用する前に、少なくとも１５分間攪拌して、均質性を確保した。

【0264】

方法
単一洗剤処理のウイルス不活化能力と堅牢性とを、ウイルス不活化に不利な条件下で、つまり短いインキュベーション時間で評価した。当業者には明らかなように、生物薬剤学的製造などの商業的生産プロセスでは、より長いインキュベーション時間を使用することができ、これによりウイルス不活化の動態が促進されるようになり、達成されるＬＲＶも増加する場合がある。さらに、すでに先に述べたように、それぞれの洗剤を低濃度で使用した。当業者には明らかなように、生物薬剤学的製造などの商業的生産プロセスでは、より高濃度のそれぞれの洗剤を使用することができ、これによりウイルス不活化の動態が促進されるようになり、達成されるＬＲＶも増加する場合がある。

【0265】

タンパク質濃度は、ウイルスの不活化に大きな影響を与えないので（Ｄｉｃｈｔｅｌｍｕｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２００９も参照されたい）、タンパク質含有量に関する堅牢性は調査しなかった。

【0266】

ｐｄＦＶＩＩＩ含有液を解凍し、それ以降の全てのステップをバイオセーフティクラスＩＩキャビネット内で行った。大規模な凝集体の可能性を除去するために、ｐｄＦＶＩＩＩ含有液を０．４５μｍの膜フィルタ（例えばＳａｒｔｏｒｉｕｓ ＳａｒｔｏＳｃａｌｅ Ｓａｒｔｏｂｒａｎまたは同等品）によって濾過した。ｐｄＦＶＩＩＩ含有液を、風袋重量が測定されているスクリューキャップフラスコに移し、クライオスタットに接続された二重壁容器を使用して、攪拌しながら目標温度＋２３℃±１℃に調整した。ｐｄＦＶＩＩＩ含有液の測定した体積を、１：３１の比率でスパイクし、例えば、４８ｍＬのｐｄＦＶＩＩＩ含有液を、１．６ｍＬのウイルスストック溶液でスパイクした。その後、ウイルス力価測定用（スパイクコントロールＳＣ）及びホールドコントロール（ＨＣ）用のサンプルをそれぞれ採取した。

【0267】

ホールドコントロールを、洗剤の添加後にスパイクしたｐｄＦＶＩＩＩ含有液と同じ温度、つまり＋２３℃±１℃に維持し、つまり、洗剤処理が終了するまで、ｐｄＦＶＩＩＩ含有液を入れた容器と同じ冷却サークルに保存した。冷却液の温度を、ホールドコントロールサンプルを挿入する前に測定し、洗剤処理後の力価測定のためにホールドコントロールを取り外す直前に、再度測定した。

【0268】

添加すべき洗剤の量を算出するために、スパイクしたｐｄＦＶＩＩＩ含有液の重量を測定した。秤量した材料を、クライオスタットに接続された二重壁容器を使用して、攪拌しながら＋２３℃±１℃に調整した。この温度範囲を、洗剤を含むスパイクしたｐｄＦＶＩＩＩ含有液のインキュベーションの最後まで撹拌下で維持し、継続的に記録した。ｐｄＦＶＩＩＩ含有液１ｇあたり、洗剤の必要量（［ｍｇ］）、またはその１：１０希釈液のそれぞれの量を添加して、洗剤の最終濃度０．１％±０．０１％（ｗ／ｗ）を得た。シリンジを使用して１分以内に洗剤を攪拌しながら添加し、添加した洗剤の実際の量を、シリンジを逆秤量することによって求めた。洗剤の添加が完了した後、スパイクしたｐｄＦＶＩＩＩ含有液を、＋２３℃±１℃で５９±１分間、攪拌を続けながら、さらにインキュベートした。

【0269】

インキュベーション中、ウイルス力価測定用のサンプル１ｍＬを、１～２分後、５±１分後、３０±１分後、及び５９±１分後に採取した。

【0270】

サンプル採取後のウイルスの洗剤によるさらなる不活化を防ぐために、サンプルを、それぞれの冷却した（＋２～＋８℃）細胞培地で直ちに１：２０（つまり、１体積のサンプルと１９体積の細胞培地）に希釈した。

【0271】

ＷＯ２０１９／０８６４６３の実施例１に記載されているように、サンプルの力価測定及びウイルス除去能力の算出を行った。

【0272】

結果
ｐｄＦＶＩＩＩ含有液の単一洗剤処理を、０．１％±０．０１％トリトンＸ－１００、４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートまたは還元型トリトンＸ－１００を使用して、２３℃±１℃で行ったところ、ＢＶＤＶは、５分以内に約５のウイルスリダクション指数（ＲＦ）によって不活化された（図６）。

【0273】

これらの実験は、トリトンＸ－１００、４－ｔｅｒｔ－オクチルベンジルアルコールポリエトキシレートまたは還元型トリトンＸ－１００を使用した生物薬剤学的薬物含有液の単一洗剤処理により、低濃度の洗剤であっても脂質エンベロープウイルスが効率的に不活化されるようになることを裏付けている。

【0274】

実施例９：毒性試験
インシリコデータに基づくと、本発明による洗剤のいずれについても、内分泌攪乱物質として活性であるという証拠は何も発見されていない。

【0275】

産業上の利用可能性：
本発明の方法及び製品は、商業的に有用であり、例えば、工業的製造プロセスにおける脂質エンベロープウイルスの環境に適合した不活化に有用である。例えば、本発明の方法によって得られる洗剤は、生物学的製剤の工業生産に使用することができる。したがって、本発明は、産業上利用可能である。

【0276】

参考文献
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ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｂｍｃ．２００８．０３．
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ － Ａ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ， ２３（６０）， １５１３３－１５１４２；２０１７： Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｓｔｅｐｗｉｓｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｇｌｙｃｏｌｓ；Ｋｈａｎａｌ， Ａｓｈｏｋ；Ｆａｎｇ， Ｓｈｉｙｕｅ．ＤＯＩ：１０．１００２／ｃｈｅｍ．２０１７０３００４
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ４８（１０）， ３５８６－３６０４；２００５： Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｏｆ Ｎｏｖｅｌ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｆａｃｔｏｒ Ｘａ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｗｉｔｈ ａ Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｉｓｏｑｕｉｎｏｌｉｎｅ Ｒｉｎｇ；Ｕｅｎｏ， Ｈｉｒｏｓｈｉ；Ｙｏｋｏｔａ， Ｋａｔｓｕｙｕｋｉ；Ｈｏｓｈｉ， Ｊｕｎ－Ｉｃｈｉ；Ｙａｓｕｅ， Ｋａｔｓｕｔａｋａ；Ｈａｙａｓｈｉ， Ｍｉｋｉｏ；Ｈａｓｅ， Ｙａｓｕｎｏｒｉ；Ｕｃｈｉｄａ， Ｉｔｓｕｏ；Ａｉｓａｋａ， Ｋａｚｕｏ；Ｋａｔｏｈ， Ｓｕｓｕｍｕ；Ｃｈｏ， Ｈｉｄｅｔｓｕｒａ．ＤＯＩ：１０．１０２１／ｊｍ０５８１６０ｅ
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， １５（１１）， ２０２５／１－２０２５／１２， １２ ｐｐ．；２０１３： Ｍａｇｎｅｔｉｃ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｔｏ ｃｈｉｒａｌ ｉｍｉｄａｚｏｌｉｄｉｎｏｎｅ ａｓ ｒｅｃｏｖｅｒａｂｌｅ ｃａｔａｌｙｓｔ；Ｍｏｎｄｉｎｉ， Ｓａｒａ；Ｐｕｇｌｉｓｉ， Ａｌｅｓｓａｎｄｒａ；Ｂｅｎａｇｌｉａ， Ｍａｕｒｉｚｉｏ；Ｒａｍｅｌｌａ， Ｄａｎｉｅｌａ；Ｄｒａｇｏ， Ｃａｒｍｅｌｏ；Ｆｅｒｒｅｔｔｉ， Ａｎｎａ Ｍ．；Ｐｏｎｔｉ， Ａｌｅｓｓａｎｄｒｏ．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ１１０５１－０１３－２０２５－３
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Ｒｕｓｓｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ８２（６）， １０２９－１０３２；２００９： Ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａｌｋｅｎｙｌ－ｇｅｍ－ｄｉｃｈｌｏｒｏｃｙｃｌｏｐｒｏｐａｎｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｌｋｙｌａｔｉｏｎ；Ｂｒｕｓｅｎｔｓｏｖａ， Ｅ． Ａ．；Ｚｌｏｔｓｋｉｉ， Ｓ． Ｓ．；Ｋｕｔｅｐｏｖ， Ｂ． Ｉ．；Ｋｈａｚｉｐｏｖａ， Ａ． Ｎ． ＤＯＩ：１０．１１３４／Ｓ１０７０４２７２０９０６０１９６
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【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7-1】

【図7-2】

【図8】

【図9】

【国際調査報告】