特表 2023-542212 Ｔ細胞二重特異性抗体に関連する有害作用の予防又は緩和

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2023-10-05

(54)【発明の名称】Ｔ細胞二重特異性抗体に関連する有害作用の予防又は緩和

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20230928BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20230928BHJP

   A61K 31/506 20060101ALI20230928BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20230928BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20230928BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20230928BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20230928BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20230928BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20230928BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20230928BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20230928BHJP

   C07K 16/30 20060101ALI20230928BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 N

A61K45/00

A61K31/506

A61P43/00 121

A61K39/395 D

A61P35/00

A61P35/02

A61P7/00

A61P13/12

A61P37/06

C07K16/46 ZNA

C07K16/28

C07K16/30

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023518392

(86)(22)【出願日】2021-09-22

(85)【翻訳文提出日】2023-05-10

(86)【国際出願番号】 EP2021075995

(87)【国際公開番号】W WO2022063803

(87)【国際公開日】2022-03-31

(31)【優先権主張番号】20198050.5

(32)【優先日】2020-09-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】20201583.0

(32)【優先日】2020-10-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】21172627.8

(32)【優先日】2021-05-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】514099673

【氏名又は名称】エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】ヘーゲル， エレーヌ セシル

(72)【発明者】

【氏名】クライン， クリスティアン

(72)【発明者】

【氏名】ルクレア， ガブリエル

(72)【発明者】

【氏名】トーソ， アルベルト

(72)【発明者】

【氏名】ジマーマン， ティナ

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA19

4C084MA02

4C084MA52

4C084NA06

4C084ZA511

4C084ZA512

4C084ZA811

4C084ZA812

4C084ZB081

4C084ZB082

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZB272

4C084ZC202

4C084ZC412

4C084ZC75

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB01

4C085BB11

4C085BB41

4C085CC01

4C085DD62

4C085EE03

4C085GG02

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC82

4C086GA07

4C086GA10

4C086GA12

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA52

4C086NA06

4C086ZA51

4C086ZA81

4C086ZB08

4C086ZB26

4C086ZB27

4C086ZC20

4C086ZC41

4C086ZC75

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA75

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、サイトカイン放出症候群などのＴ細胞二重特異性抗体に関連する有害作用の予防又は緩和に関する。具体的には、本発明は、ダサチニブなどのチロシンキナーゼ阻害剤を使用するそのような副作用の予防又は緩和に関する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

個体における疾患の治療に使用するためのＴ細胞二重特異性抗体であって、前記治療が、
（ａ）前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記個体への投与、及び
（ｂ）前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記投与に関連する有害作用を予防又は緩和するためのチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）の前記個体への投与
を含む、Ｔ細胞二重特異性抗体。

【請求項2】

個体における疾患を治療するための医薬の製造におけるＴ細胞二重特異性抗体の使用であって、前記治療が、
（ａ）前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記個体への投与、及び
（ｂ）前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記投与に関連する有害作用を予防又は緩和するためのチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）の前記個体への投与
を含む、使用。

【請求項3】

個体における疾患を治療するための方法であって、前記方法が、
（ａ）Ｔ細胞二重特異性抗体の前記個体への投与、及び
（ｂ）前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記投与に関連する有害作用を予防又は緩和するためのチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）の前記個体への投与
を含む、方法。

【請求項4】

Ｔ細胞二重特異性抗体の個体への投与に関連する有害作用の予防又は緩和に使用するためのチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）。

【請求項5】

Ｔ細胞二重特異性抗体の個体への投与に関連する有害作用を予防又は緩和するための医薬の製造におけるチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）の使用。

【請求項6】

Ｔ細胞二重特異性抗体の個体への投与に関連する有害作用を予防又は緩和するための方法であって、チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）の前記個体への投与を含む、方法。

【請求項7】

前記ＴＫＩが、Ｌｃｋ及び／又はＳｒｃキナーゼ阻害剤、特にダサチニブである、請求項１～６のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項8】

前記ＴＫＩ（の投与）が、
（ｉ）前記Ｔ細胞二重特異性抗体の活性の阻害、
（ｉｉ）（前記Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導される）Ｔ細胞の活性化の阻害、
（ｉｉｉ）（前記Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導される）Ｔ細胞の増殖の阻害、
（ｉｖ）（前記Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導される）Ｔ細胞の細胞傷害活性の阻害、
（ｖ）（前記Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導される）Ｔ細胞におけるＴ細胞受容体シグナル伝達の阻害、並びに／又は
（ｖｉ）（前記Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導される）Ｔ細胞によるサイトカイン分泌の阻害であって、特に、前記サイトカインが、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６及びＩＬ－１βからなる群から選択される１つ若しくは複数のサイトカインである、サイトカイン分泌の阻害
を引き起こし、
任意に、前記Ｔ細胞が、ＣＤ８＋Ｔ細胞又はＣＤ４＋細胞である、請求項１～７のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項9】

前記阻害が可逆的である、請求項８に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項10】

前記ＴＫＩ（の投与）が、前記個体における１つ又は複数のサイトカインの血清レベルの低下を引き起こし、特に、前記１つ又は複数のサイトカインが、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６及びＩＬ－１βからなる群から選択される、請求項１～９のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項11】

前記有害作用が、（ｉ）サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、（ｉｉ）発熱、低血圧及び／若しくは低酸素症、並びに／又は（ｉｉｉ）１つ若しくは複数のサイトカインの上昇した血清レベルであり、特に、前記１つ若しくは複数のサイトカインが、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６及びＩＬ－１βからなる群から選択される、請求項１～１０のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項12】

前記有害作用が、前記Ｔ細胞二重特異性抗体の標的細胞抗原を発現する非がん細胞への前記Ｔ細胞二重特異性抗体の結合に関連する有害作用（すなわち、オンターゲット／オフ腫瘍効果）、及び／又は、前記Ｔ細胞二重特異性抗体のその標的細胞抗原への結合に関連しない有害作用（すなわち、オフターゲット効果）である、請求項１～１１のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項13】

前記ＴＫＩの投与が、（前記個体における）前記有害作用の（臨床的な）発現時である、請求項１～１２のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項14】

前記ＴＫＩの投与が、（ｉ）前記Ｔ細胞二重特異性抗体の投与の前、投与と同時、若しくは投与後、（ｉｉ）断続的若しくは連続的、及び／又は（ｉｉｉ）経口である、請求項１～１３のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項15】

前記ＴＫＩの投与が、
（ｉ）前記Ｔ細胞二重特異性抗体の活性の阻害、
（ｉｉ）（前記Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導される）Ｔ細胞の活性化の阻害、
（ｉｉｉ）（前記Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導される）Ｔ細胞の増殖の阻害、
（ｉｖ）（前記Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導される）Ｔ細胞の細胞傷害活性の阻害、
（ｖ）（前記Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導される）Ｔ細胞におけるＴ細胞受容体シグナル伝達の阻害、並びに／又は
（ｖｉ）（前記Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導される）Ｔ細胞によるサイトカイン分泌の阻害であって、特に、前記サイトカインが、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６及びＩＬ－１βからなる群から選択される１つ若しくは複数のサイトカインである、サイトカイン分泌の阻害
を引き起こすのに十分な用量であり、
任意に、前記Ｔ細胞が、ＣＤ８＋Ｔ細胞又はＣＤ４＋細胞である、請求項１～１４のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項16】

前記ＴＫＩの投与が、前記個体における１つ又は複数のサイトカインの前記血清レベルの低下を引き起こすのに十分な用量であり、任意に、前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記活性の阻害を引き起こすのに不十分である、請求項１～１５のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項17】

前記ＴＫＩの投与が、前記個体における免疫細胞による１つ又は複数のサイトカインの分泌の減少を引き起こすのに十分な用量であるが、前記Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導されるＴ細胞の活性化及び／又はＴ細胞の細胞傷害活性の阻害を引き起こすには不十分である、請求項１～１６のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項18】

前記ＴＫＩの投与が有効用量でのものである、請求項１～１７のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項19】

前記ＴＫＩの投与が、約１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、又は２００ｍｇの用量、特に約１００ｍｇ以下の用量である、請求項１～１８のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項20】

前記ＴＫＩの投与が、前記有害作用が持続する期間にわたるものであり、及び／又は、前記有害作用が防止若しくは緩和された後で停止される、請求項１～１９のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項21】

前記ＴＫＩの投与が、前記Ｔ細胞二重特異性抗体の第１の投与に付随し、任意に、前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記第１の投与の前、投与と同時、又は投与の後である、請求項１～２０のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項22】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記投与が、
（ｉ）有効用量、
（ｉｉ）非経口、特に静脈内、及び／又は
（ｉｉｉ）前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記個体への前記第１の投与
である、請求項１～２１のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項23】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体（の投与）が、
（ｉ）Ｔ細胞の活性化、
（ｉｉ）Ｔ細胞の増殖、
（ｉｉｉ）Ｔ細胞の細胞傷害活性、
（ｉｖ）Ｔ細胞におけるＴ細胞受容体シグナル伝達、
（ｖ）Ｔ細胞によるサイトカイン分泌であって、特に、前記サイトカインが、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６及びＩＬ－１βからなる群から選択される１つ又は複数のサイトカインである、サイトカイン分泌
を誘導し、
任意に、前記Ｔ細胞が、ＣＤ８＋Ｔ細胞又はＣＤ４＋細胞である、請求項１～２２のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項24】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体が、ＣＤ３及び標的細胞抗原に結合する、請求項１～２３のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項25】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体が、ＣＤ３に結合する抗原結合部分及び標的細胞抗原に結合する抗原結合部分を含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項26】

前記標的細胞抗原が癌胎児性抗原（ＣＥＡ）である、請求項２４又は２５に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項27】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体が、
（ｉ）ＣＤ３に結合し、配列番号２８の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２９のＨＣＤＲ２、及び配列番号３０のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号３１の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号３２のＬＣＤＲ２、及び配列番号３３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第１の抗原結合部分と、
（ｉｉ）ＣＥＡに結合し、配列番号３６の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号３７のＨＣＤＲ２、及び配列番号３８のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号３９の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号４０のＬＣＤＲ２、及び配列番号４１のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第２の抗原結合部分と
を含む、請求項２６に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項28】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体が、ＣＥＡ並びに／又は第１のサブユニット及び第２のサブユニットで構成されるＦｃドメインに結合する第３の抗原結合部分を含む、請求項２６又は２７に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項29】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体が、
（ｉ）ＣＤ３に結合し、配列番号２８の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２９のＨＣＤＲ２、及び配列番号３０のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号３１の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号３２のＬＣＤＲ２、及び配列番号３３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第１の抗原結合部分であって、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖の可変領域又は定常領域のいずれかが交換されているクロスオーバーＦａｂ分子である、第１の抗原結合部分と、
（ｉｉ）ＣＥＡに結合し、配列番号３６の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号３７のＨＣＤＲ２、及び配列番号３８のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号３９の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号４０のＬＣＤＲ２、及び配列番号４１のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第２の抗原結合部分及び第３の抗原結合部分であって、それぞれＦａｂ分子、特に従来のＦａｂ分子である、第２の抗原結合部分及び第３の抗原結合部分と、
（ｉｉｉ）第１のサブユニット及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインと
を含み、
前記第２の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において前記第１の抗原結合部分の前記Ｆａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、前記第１の抗原結合部分が、前記Ｆａｂ重鎖のＣ末端において前記Ｆｃドメインの前記第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、前記第３の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において前記Ｆｃドメインの前記第２のサブユニットのＮ末端に融合している、請求項２６～２８のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項30】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記第１の抗原結合部分が、配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含み、及び／又は、前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記第２の抗原結合部分及び（存在する場合）第３の抗原結合部分が、配列番号４２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号４３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む、請求項２６～２９のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項31】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記Ｆｃドメインが、前記Ｆｃドメインの前記第１のサブユニットと前記第２のサブユニットの会合を促進する修飾を含み、並びに／又は、前記Ｆｃドメインが、Ｆｃ受容体への結合及び／若しくはエフェクター機能を低下させる１つ若しくは複数のアミノ酸置換を含む、請求項２８～３０のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項32】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体がシビサタマブである、請求項１～３１のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項33】

前記標的細胞抗原がＨＬＡ－２／ＷＴ１である、請求項２４又は２５に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項34】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体が、
（ｉ）ＣＤ３に結合し、配列番号１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号４の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２、及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第１の抗原結合部分と、
（ｉｉ）ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１に結合し、配列番号９の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１０のＨＣＤＲ２、及び配列番号１１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１３のＬＣＤＲ２、及び配列番号１４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第２の抗原結合部分と
を含む、請求項３３に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項35】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体が、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１並びに／又は第１のサブユニット及び第２のサブユニットで構成されるＦｃドメインに結合する第３の抗原結合部分を含む、請求項３３又は３４に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項36】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体が、
（ｉ）ＣＤ３に結合し、配列番号１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号４の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２、及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第１の抗原結合部分であって、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖の可変領域又は定常領域のいずれかが交換されているクロスオーバーＦａｂ分子である、第１の抗原結合部分と、
（ｉｉ）ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１に結合し、配列番号９の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１０のＨＣＤＲ２、及び配列番号１１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１３のＬＣＤＲ２、及び配列番号１４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第２の抗原結合部分及び第３の抗原結合部分であって、それぞれＦａｂ分子、特に従来のＦａｂ分子である、第２の抗原結合部分及び第３の抗原結合部分と、
（ｉｉｉ）第１のサブユニット及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインと
を含み、
前記第２の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において前記第１の抗原結合部分の前記Ｆａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、前記第１の抗原結合部分が、前記Ｆａｂ重鎖のＣ末端において前記Ｆｃドメインの前記第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、前記第３の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において前記Ｆｃドメインの前記第２のサブユニットのＮ末端に融合している、請求項３３～３５のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項37】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記第１の抗原結合部分が、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含み、及び／又は、前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記第２の抗原結合部分及び（存在する場合）第３の抗原結合部分が、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む、請求項３３～３６のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項38】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記第１の抗原結合部分が、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖の可変領域が交換されているクロスオーバーＦａｂ分子であり、前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記第２の抗原結合部分及び（存在する場合）第３の抗原結合部分が、定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、又はヒスチジン（Ｈ）で置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、１２３位のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、又はヒスチジン（Ｈ）で置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸が、独立して、グルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、２１３位のアミノ酸が、独立して、グルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）従来のＦａｂ分子である、請求項３３～３７のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項39】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記Ｆｃドメインが、前記Ｆｃドメインの前記第１のサブユニットと前記第２のサブユニットの会合を促進する修飾を含み、並びに／又は、前記Ｆｃドメインが、Ｆｃ受容体への結合及び／若しくはエフェクター機能を低下させる１つ若しくは複数のアミノ酸置換を含む、請求項３５～３８のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項40】

前記標的細胞抗原がＣＤ２０である、請求項２４又は２５に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項41】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体が、
（ｉ）ＣＤ３に結合し、配列番号２８の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２９のＨＣＤＲ２、及び配列番号３０のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号３１の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号３２のＬＣＤＲ２、及び配列番号３３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第１の抗原結合部分と、
（ｉｉ）ＣＤ２０に結合し、配列番号４８の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号４９のＨＣＤＲ２、及び配列番号５０のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号５１の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５２のＬＣＤＲ２、及び配列番号５３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第２の抗原結合部分と
を含む、請求項４０に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項42】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体が、ＣＤ２０並びに／又は第１のサブユニット及び第２のサブユニットで構成されるＦｃドメインに結合する第３の抗原結合部分を含む、請求項４０又は４１に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項43】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体が、
（ｉ）ＣＤ３に結合し、配列番号２８の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２９のＨＣＤＲ２、及び配列番号３０のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号３１の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号３２のＬＣＤＲ２、及び配列番号３３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第１の抗原結合部分であって、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖の可変領域又は定常領域のいずれかが交換されているクロスオーバーＦａｂ分子である、第１の抗原結合部分と、
（ｉｉ）ＣＤ２０に結合し、配列番号４８の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号４９のＨＣＤＲ２、及び配列番号５０のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号５１の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５２のＬＣＤＲ２、及び配列番号５３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第２の抗原結合部分及び第３の抗原結合部分であって、それぞれＦａｂ分子、特に従来のＦａｂ分子である、第２の抗原結合部分及び第３の抗原結合部分と、
（ｉｉｉ）第１のサブユニット及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインと
を含み、
前記第２の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において前記第１の抗原結合部分の前記Ｆａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、前記第１の抗原結合部分が、前記Ｆａｂ重鎖のＣ末端において前記Ｆｃドメインの前記第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、前記第３の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において前記Ｆｃドメインの前記第２のサブユニットのＮ末端に融合している、請求項４０～４２のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項44】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記第１の抗原結合部分が、配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含み、及び／又は、前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記第２の抗原結合部分及び（存在する場合）第３の抗原結合部分が、配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号５５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む、請求項４０～４３のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項45】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記第１の抗原結合部分が、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖の可変領域が交換されているクロスオーバーＦａｂ分子であり、前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記第２の抗原結合部分及び（存在する場合）第３の抗原結合部分が、定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、又はヒスチジン（Ｈ）で置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、１２３位のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、又はヒスチジン（Ｈ）で置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸が、独立して、グルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、２１３位のアミノ酸が、独立して、グルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）従来のＦａｂ分子である、請求項４０～４４のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項46】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記Ｆｃドメインが、前記Ｆｃドメインの前記第１のサブユニットと前記第２のサブユニットの会合を促進する修飾を含み、並びに／又は、前記Ｆｃドメインが、Ｆｃ受容体への結合及び／若しくはエフェクター機能を低下させる１つ若しくは複数のアミノ酸置換を含む、請求項４２～４５のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項47】

前記標的細胞抗原がＣＤ１９である、請求項２４又は２５に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項48】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体が、
（ｉ）ＣＤ３に結合し、配列番号６１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２９のＨＣＤＲ２、及び配列番号６２のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、又は配列番号６４のＨＣＤＲ１、配列番号２９のＨＣＤＲ２、及び配列番号６５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号３１の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号３２のＬＣＤＲ２、及び配列番号３３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第１の抗原結合部分と、
（ｉｉ）ＣＤ１９に結合し、配列番号６７の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号６８のＨＣＤＲ２、及び配列番号６９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号７０の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号７１のＬＣＤＲ２、及び配列番号７２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第２の抗原結合部分と
を含む、請求項４７に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項49】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体が、ＣＤ１９並びに／又は第１のサブユニット及び第２のサブユニットで構成されるＦｃドメインに結合する第３の抗原結合部分を含む、請求項４７又は４８に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項50】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体が、
（ｉ）ＣＤ３に結合し、配列番号６１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２９のＨＣＤＲ２、及び配列番号６２のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、又は配列番号６４のＨＣＤＲ１、配列番号２９のＨＣＤＲ２、及び配列番号６５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号３１の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号３２のＬＣＤＲ２、及び配列番号３３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第１の抗原結合部分であって、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖の可変領域又は定常領域のいずれかが交換されているクロスオーバーＦａｂ分子である、第１の抗原結合部分と、
（ｉｉ）ＣＤ１９に結合し、配列番号６７の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号６８のＨＣＤＲ２、及び配列番号６９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号７０の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号７１のＬＣＤＲ２、及び配列番号７２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第２の抗原結合部分及び第３の抗原結合部分であって、それぞれＦａｂ分子、特に従来のＦａｂ分子である、第２の抗原結合部分及び第３の抗原結合部分と、
（ｉｉｉ）第１のサブユニット及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインと
を含み、
前記第２の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において前記第１の抗原結合部分の前記Ｆａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、前記第１の抗原結合部分が、前記Ｆａｂ重鎖のＣ末端において前記Ｆｃドメインの前記第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、前記第３の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において前記Ｆｃドメインの前記第２のサブユニットのＮ末端に融合している、請求項４７～４９のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項51】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記第１の抗原結合部分が、配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である重鎖可変領域配列、又は配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含み、及び／又は、前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記第２の抗原結合部分及び（存在する場合）第３の抗原結合部分が、配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む、請求項４７～５０のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項52】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記第１の抗原結合部分が、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖の可変領域が交換されているクロスオーバーＦａｂ分子であり、前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記第２の抗原結合部分及び（存在する場合）第３の抗原結合部分が、定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、又はヒスチジン（Ｈ）で置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、１２３位のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、又はヒスチジン（Ｈ）で置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸が、独立して、グルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、２１３位のアミノ酸が、独立して、グルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）従来のＦａｂ分子である、請求項４７～５１のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項53】

前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記Ｆｃドメインが、前記Ｆｃドメインの前記第１のサブユニットと前記第２のサブユニットの会合を促進する修飾を含み、並びに／又は、前記Ｆｃドメインが、Ｆｃ受容体への結合及び／若しくはエフェクター機能を低下させる１つ若しくは複数のアミノ酸置換を含む、請求項４９～５２のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項54】

（前記Ｔ細胞二重特異性抗体によって治療される）前記疾患が、がん、特に前記Ｔ細胞二重特異性抗体の前記標的細胞抗原を発現するがんである、請求項１～５３のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項55】

前記がんが、
（ｉ）癌胎児性抗原（ＣＥＡ）発現がん、並びに／又は
（ｉｉ）結腸直腸がん、肺がん、膵臓がん、乳がん、及び胃がんからなる群から選択される、
請求項５４に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項56】

前記がんが、
（ｉ）ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）発現がん、及び／又は
（ｉｉ）血液がん、具体的には白血病、最も具体的には急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）若しくは急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、
請求項５４に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項57】

前記がんが、
（ｉ）ＣＤ２０発現がん、
（ｉｉ）Ｂ細胞がん、並びに／又は
（ｉｉ）非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）及び辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）からなる群から選択される、
請求項５４に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項58】

前記がんが、
（ｉ）ＣＤ１９発現がん、
（ｉｉ）Ｂ細胞がん、並びに／又は
（ｉｉ）非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）からなる群から選択される、
請求項５４に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項59】

（前記Ｔ細胞二重特異性抗体によって治療される）前記疾患が、自己免疫疾患、具体的にはループス、より具体的には全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）又はループス腎炎（ＬＮ）である、請求項４７～５３のいずれか一項に記載のＴ細胞二重特異性抗体、ＴＫＩ、使用又は方法。

【請求項60】

先に記載されるとおりの発明。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

発明の分野
本発明は、サイトカイン放出症候群などのＴ細胞二重特異性抗体に関連する有害作用の予防又は緩和に関する。具体的には、本発明は、ダサチニブなどのチロシンキナーゼ阻害剤を使用するそのような副作用の予防又は緩和に関する。

【背景技術】

【0002】

背景
Ｔ細胞エンゲージャー又はＴ細胞二重特異性抗体（ＴＣＢ）は、一方の結合部分で標的細胞抗原、例えば腫瘍細胞上に発現される腫瘍抗原を認識し、他方の結合部分でＴ細胞受容体を認識する二重特異性抗体である。ＴＣＢは、がん免疫療法として非常に有望である。ＣＤ３と標的細胞抗原との架橋は、Ｔ細胞の活性化、増殖及びサイトカイン放出を誘因し、標的細胞の死滅をもたらす（Ｂａｃａｃ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ（２０１６）２２，３２８６－９７；Ｂａｃａｃ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１６）５，ｅ１２０３４９８）。しかし、ＴＣＢ治療は、オンターゲットオン腫瘍、オンターゲットオフ腫瘍の細胞傷害活性及びサイトカイン放出に起因する安全性の問題に関連することがある。ＴＣＢについて報告されている最も一般的な有害作用の１つはサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）である。この複雑な臨床症候群は、発熱、低血圧及び呼吸不全を特徴とし、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ及びＩＬ－１βなどの炎症促進性サイトカインの放出に関連する（例えば、Ｓｈｉｍａｂｕｋｕｒｏ－Ｖｏｒｎｈａｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ Ｃａｎｃｅｒ（２０１８）６，５６を参照のこと）。標的抗原が健康な細胞で発現される場合、オフ腫瘍の毒性が起こる可能性があり、これは潜在的に組織損傷をもたらし、患者の安全性を損なう可能性がある。これらの生命を脅かす毒性、例えばＴＣＢによって誘導されるＴ細胞活性化及び増殖の薬理学的遮断を緩和するためのアプローチが大いに必要とされている。チロシンキナーゼ阻害剤ダサチニブは、ＣＡＲ－Ｔ細胞の機能をオフにする強力な候補として同定された（Ｗｅｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ Ａｄｖａｎｃｅｓ（２０１９）３，７１１－７；Ｍｅｓｔｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ（２０１９）１１，ｅａａｕ５９０７）。一方、ダサチニブとＴ細胞エンゲージャーであるブリナツモマブとの同時投与は、後者の活性を損なわないようであった（Ｃｈｉａｒｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ（２０１９）１３４（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ １），７４０；Ｆｏａ ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ（２０２０）３８３，１６１３－１６２３）。

【発明を実施するための形態】

【0003】

発明の説明
本発明者らは、チロシンキナーゼ阻害剤、特にダサチニブが、Ｔ細胞エンゲージング療法によるオフ腫瘍毒性又はＣＲＳを緩和するための薬理学的オン／オフスイッチとして使用され得ることを見出した。

【0004】

ヒト末梢血単核細胞による標的細胞殺傷のインビトロモデルを使用して、本発明者らは、Ｔ細胞の活性化及び増殖、標的細胞殺傷及びサイトカイン放出に対する４つの例示的なＴＣＢ（ＴＣＢを標的とする腫瘍表面の例としてのＣＥＡ－ＴＣＢ、ＣＤ２０－ＴＣＢ及びＣＤ１９－ＴＣＢ、並びにＴＣＲ様ＴＣＢの例としてのＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢ）と組み合わせたダサチニブの可逆的効果を評価した。ダサチニブの用量応答を使用する殺傷アッセイを行って、ＴＣＢ誘導性Ｔ細胞活性化が完全に阻害される閾値を定義した。さらに、本発明者らは、この閾値未満のダサチニブ濃度が、ＴＣＢ誘導性サイトカイン放出を制御するために使用され得ることを提案する。これらの対抗効果は、臨床的に適切な用量であるダサチニブ濃度で得ることができ、ＣＲＳ症候が標準的な介入で管理できない場合にＴＣＢ誘導性Ｔ細胞活性化の遮断を誘導するため、又はＴＮＦ若しくはＩＬ－６Ｒ遮断の代替としてサイトカイン放出を減少させるためのいずれかに使用することができる。本実施例におけるデータは、ダサチニブが、ＣＲＳを含むＴＣＢ誘導性のオン及びオフ腫瘍毒性を緩和するために使用され得る、ＴＣＢ媒介性Ｔ細胞活性化のための可逆的オン／オフスイッチとして作用し得ることを示す。

【0005】

したがって、第１の態様では、本発明は、個体における疾患の治療に使用するためのＴ細胞二重特異性抗体であって、該治療は、
（ａ）Ｔ細胞二重特異性抗体の個体への投与、及び
（ｂ）Ｔ細胞二重特異性抗体の投与に関連する有害作用を予防又は緩和するためのチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）の個体への投与
を含む、Ｔ細胞二重特異性抗体を提供する。

【0006】

本発明はさらに、個体における疾患を治療するための医薬の製造におけるＴ細胞二重特異性抗体の使用であって、該治療は、
（ａ）Ｔ細胞二重特異性抗体の個体への投与、及び
（ｂ）Ｔ細胞二重特異性抗体の投与に関連する有害作用を予防又は緩和するためのチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）の個体への投与
を含む、使用を提供する。

【0007】

本発明はまた、個体における疾患を治療するための方法であって、該方法は、
（ａ）Ｔ細胞二重特異性抗体の個体への投与、及び
（ｂ）Ｔ細胞二重特異性抗体の投与に関連する有害作用を予防又は緩和するためのチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）の個体への投与
を含む、方法も提供する。

【0008】

別の態様では、本発明は、Ｔ細胞二重特異性抗体の個体への投与に関連する有害作用の予防又は緩和に使用するためのチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）を提供する。

【0009】

本発明はさらに、Ｔ細胞二重特異性抗体の個体への投与に関連する有害作用を予防又は緩和するための医薬の製造におけるチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）の使用を提供する。

【0010】

本発明はまた、Ｔ細胞二重特異性抗体の個体への投与に関連する有害作用を予防又は緩和するための方法であって、チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）の個体への投与を含む、方法も提供する。

【0011】

上記又は本明細書に記載の、使用のためのＴ細胞二重特異性抗体、使用のためのＴＫＩ、使用又は方法は、以下に記載する特徴のいずれかを、単独で又は組み合わせて組み込むことができる（文脈で別段の指示がない限り）。

【0012】

用語は、本明細書で特に定義されない限り、当技術分野で一般的に使用されるように本明細書で使用される。

【0013】

いくつかの態様では、ＴＫＩはＬｃｋ及び／又はＳｒｃキナーゼ阻害剤である。より具体的な態様では、ＴＫＩはダサチニブである。

【0014】

「ダサチニブ」は、チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）である。それは、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）及び急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の特定の症例の治療のために、（とりわけ）Ｓｐｒｙｃｅｌ（登録商標）の商品名で販売されている。そのＣＡＳ番号、ＩＵＰＡＣ名及び化学構造を以下に示す。
ＣＡＳ番号：３０２９６２－４９－８
ＩＵＰＡＣ名：Ｎ－（２－クロロ－６－メチルフェニル）－２－［［６－［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジニル］－２－メチル－４－ピリミジニル］アミノ］－５－チアゾールカルボキサミド一水和物
化学構造：

【0015】

いくつかの態様では、ＴＫＩ（の投与）は、Ｔ細胞二重特異性抗体の活性の阻害を引き起こす。

【0016】

Ｔ細胞二重特異性抗体の「活性」は、Ｔ細胞二重特異性抗体によって引き起こされる個体の体内の応答を指す。そのような活性には、Ｔ細胞、特にＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞の細胞応答（複数可）、例えば増殖、分化、サイトカイン分泌、細胞傷害性エフェクター分子放出、細胞傷害活性、及び活性化マーカーの発現、並びに／又は標的細胞、特にＴ細胞二重特異性抗体の標的細胞抗原を発現する標的細胞（例えば腫瘍細胞）に対する効果、例えば標的細胞の溶解が含まれ得る。

【0017】

いくつかの態様では、ＴＫＩ（の投与）は、（Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導される）Ｔ細胞の活性化の阻害を引き起こす。

【0018】

本明細書で使用する「Ｔ細胞の活性化」又は「Ｔ細胞活性化」は、増殖、分化、サイトカイン分泌、細胞傷害性エフェクター分子の放出、細胞傷害性活性、及び活性化マーカーの発現から選択される、Ｔリンパ球、特にＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の１つ又は複数の細胞応答を指す。Ｔ細胞活性化を測定するために適したアッセイは、本技術分野で既知であり、本明細書に記載されている。特定の態様では、Ｔ細胞活性化は、Ｔ細胞上のＣＤ２５及び／又はＣＤ６９の発現を、例えばフローサイトメトリーによって測定することによって決定される。

【0019】

いくつかの態様では、ＴＫＩ（の投与）は、（Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導される）Ｔ細胞の増殖の阻害を引き起こす。いくつかの態様では、ＴＫＩ（の投与）は、（Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導される）Ｔ細胞の細胞傷害活性の阻害を引き起こす。

【0020】

Ｔ細胞の「細胞傷害活性」とは、Ｔリンパ球、特にＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞による標的細胞の溶解（すなわち、死滅）の誘導を指す。細胞傷害活性は、典型的には、Ｔリンパ球からのグランザイムＢ及び／又はパーフォリンなどの細胞傷害性エフェクター分子の放出に関連するＴリンパ球の脱顆粒を含む。

【0021】

いくつかの態様では、ＴＫＩ（の投与）は、（Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導される）Ｔ細胞におけるＴ細胞受容体シグナル伝達の阻害を引き起こす。

【0022】

「Ｔ細胞受容体シグナル伝達」とは、Ｌｃｋキナーゼなどのチロシンキナーゼを含むシグナル伝達分子を含む、ＴＣＲの結合（Ｔ細胞二重特異性抗体によるＴＣＲのＣＤ３εサブユニットの結合など）後のＴリンパ球におけるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の下流のシグナル伝達経路の活性を意味する。

【0023】

いくつかの態様では、ＴＫＩ（の投与）は、（Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導される）Ｔ細胞によるサイトカイン分泌の阻害を引き起こす。いくつかの態様では、上記サイトカインは、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６及びＩＬ－１βからなる群から選択される１つ又は複数のサイトカインである。いくつかの態様では、上記Ｔ細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞又はＣＤ４＋細胞である。

【0024】

いくつかの態様では、上記阻害は可逆的である（すなわち、阻害されたパラメータのレベルが阻害前と同程度のレベルに戻るように、上記阻害を元に戻すことができる）。いくつかの態様では、上記阻害は、ＴＫＩが所与の期間（個体に）投与されなかった後（すなわち、ＴＫＩの投与を停止した後）、逆戻りする。いくつかの態様では、上記期間は、約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、１２時間、１６時間、２０時間、２４時間、３６時間、４８時間、７２時間、又は９６時間である。

【0025】

上記阻害は部分的又は完全であり得る。いくつかの態様では、上記阻害は、臨床的に有意であり、かつ／又は統計学的に有意である。

【0026】

いくつかの態様では、ＴＫＩ（の投与）は、個体における１つ又は複数のサイトカインの血清レベルの低下を引き起こす。いくつかの態様では、上記１つ又は複数のサイトカインは、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６及びＩＬ－１βからなる群から選択される。いくつかの態様では、上記低下は、ＴＫＩが所与の時間量（個体に）投与されなかった後、持続される。いくつかの態様では、上記時間量は、約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、１２時間、１６時間、２０時間、２４時間、３６時間、４８時間、７２時間、又は９６時間である。いくつかの態様では、上記低下は、Ｔ細胞二重特異性抗体のその後の投与後に持続される。特に、上記減少は、ＴＫＩの投与を停止した後／ＴＫＩのさらなる投与は行われない場合でさえ持続される。上記血清レベルの低下は、特に、ＴＫＩを投与していない個体（同じ個体を含む）の血清レベルと比較した場合である（すなわち、そのような場合、血清レベルは、ＴＫＩの投与なし／投与前の血清レベルと比較して低下する）。上記血清レベルの低下は、特に、Ｔ細胞二重特異性抗体を投与（特に第１の投与）したがＴＫＩを投与していない個体（同じ個体を含む）の血清レベルと比較した場合である（すなわち、そのような場合、血清レベルは、Ｔ細胞二重特異性抗体の投与あり／投与後であるがＴＫＩの投与なし／投与前の血清レベルと比較して低下する）。上記低下がなければ、血清レベル及び／又はサイトカイン分泌は特に、Ｔ細胞二重特異性抗体（の投与）との関連で上昇／増加し得る。いくつかの態様では、上記低下は、臨床的に有意であり、かつ／又は統計学的に有意である。

【0027】

いくつかの態様では、上記有害作用はサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）である。

【0028】

「有害作用」は、（特に臨床試験では）「副作用」又は「有害事象」と呼ばれることもあり、本明細書では特にＴ細胞二重特異性抗体による、個体の治療における投薬から生じる有害かつ望ましくない効果である。

【0029】

「サイトカイン放出症候群」（「ＣＲＳ」と略記される）は、治療剤（例えばＴ細胞二重特異性抗体）の投与中又は投与直後（例えば、１日以内）の対象の血液中のサイトカイン、例えば腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－α）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）などのレベルの上昇を指し、有害な症候をもたらす。ＣＲＳは、治療剤に対する有害反応であり、治療剤の投与に適時関連する。これは、典型的には、治療剤の投与中又は投与直後、すなわち典型的には投与（典型的には注入）後２４時間以内、主に最初の投与時に起こる。いくつかの例では、例えばＣＡＲ－Ｔ細胞の投与後、ＣＲＳは、ＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖時に、投与後、例えば数日後にのみ起こり得る。発生率及び重症度は、典型的には、その後の投与により低下する。症候は、症候性の不快感から致死的な事象までの範囲であり得、発熱、悪寒、めまい、高血圧、低血圧、低酸素症、呼吸困難、不穏状態、発汗、潮紅、皮膚発疹、頻脈、頻呼吸、頭痛、腫瘍疼痛、悪心、嘔吐及び／又は臓器不全を含み得る。

【0030】

いくつかの態様では、上記有害作用は、発熱、低血圧及び／又は低酸素症である。いくつかの態様では、上記有害作用は、１つ又は複数のサイトカインの血清レベルの上昇である。上記血清レベルの上昇は、特に、健康な個体の血清レベル、及び／又はＴ細胞二重特異性抗体を投与していない個体（同じ個体を含む）の血清レベルと比較した場合である（すなわち、そのような場合、血清レベルは、Ｔ細胞二重特異性抗体の投与なしの血清レベルと比較して上昇する）。いくつかの態様では、上記１つ又は複数のサイトカインは、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６及びＩＬ－１βからなる群から選択される。

【0031】

いくつかの態様では、上記有害作用は、Ｔ細胞二重特異性抗体の標的細胞抗原を発現する非がん細胞へのＴ細胞二重特異性抗体の結合に関連する有害作用である（すなわち、オンターゲット／オフ腫瘍効果）。非がん細胞は、正常（すなわち、がん性ではない）細胞及び／又は健康な組織中（すなわち、腫瘍の外側）の細胞であり得る。いくつかの態様では、上記有害作用は、Ｔ細胞二重特異性抗体のその標的細胞抗原への結合とは無関係の有害作用である（すなわち、オフターゲット効果）。

【0032】

いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、（個体における）有害作用の（臨床的）発現時である。上記投与は、例えば、有害作用（すなわち、発熱などの副作用の発生臨床症候）の発現後約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、１２時間、１６時間、２０時間又は２４時間以内であり得る。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、（個体における）有害作用の（臨床的）発現に応答したものである。

【0033】

いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、Ｔ細胞二重特異性抗体の投与の前である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、Ｔ細胞二重特異性抗体の投与と同時である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、Ｔ細胞二重特異性抗体の投与の後である。ＴＫＩの投与がＴ細胞二重特異性抗体の投与前又は投与後である場合、そのようなＴＫＩの投与は、例えば、Ｔ細胞二重特異性抗体の投与前又は投与後それぞれ約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、１２時間、１６時間、２０時間又は２４時間以内であり得る。ＴＫＩの投与は、断続的又は連続的であってもよい。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は経口である。

【0034】

いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、Ｔ細胞二重特異性抗体の活性の阻害を引き起こすのに十分な用量である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、（Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導される）Ｔ細胞の活性化の阻害を引き起こすのに十分な用量である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、（Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導される）Ｔ細胞の増殖の阻害を引き起こすのに十分な用量である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、（Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導される）Ｔ細胞の細胞傷害活性の阻害を引き起こすのに十分な用量である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、（Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導される）Ｔ細胞におけるＴ細胞受容体シグナル伝達の阻害を引き起こすのに十分な用量である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、（Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導される）Ｔ細胞によるサイトカイン分泌の阻害を引き起こすのに十分な用量である。いくつかの態様では、上記サイトカインは、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６及びＩＬ－１βからなる群から選択される１つ又は複数のサイトカインである。いくつかの態様では、上記Ｔ細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞又はＣＤ４＋細胞である。上記阻害は部分的又は完全であり得る。いくつかの態様では、上記阻害は、臨床的に有意であり、かつ／又は統計学的に有意である。

【0035】

いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、個体における１つ又は複数のサイトカインの血清レベルの低下を引き起こすのに十分な用量である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、個体における１つ又は複数のサイトカインの血清レベルの低下を引き起こすのに十分な用量であるが、Ｔ細胞二重特異性抗体の活性の阻害を引き起こすのに不十分である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、個体における免疫細胞による１つも若しくは複数のサイトカインの分泌の減少を引き起こすのに十分な用量であるが、Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導されるＴ細胞の活性化及び／又はＴ細胞の細胞傷害活性の阻害を引き起こすには不十分である。いくつかの態様では、上記１つ又は複数のサイトカインは、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６及びＩＬ－１βからなる群から選択される。いくつかの態様では、上記Ｔ細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞又はＣＤ４＋細胞である。免疫細胞は、Ｔ細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞などの様々な免疫細胞型を含み得る。

【0036】

血清レベル又はサイトカイン分泌の上記減少は、特に、ＴＫＩを投与していない個体（同じ個体を含む）の血清レベル又はサイトカイン分泌と比較した場合である（すなわち、そのような場合、血清レベルは、ＴＫＩの投与なし／投与前の血清レベルと比較して低下する）。血清レベル又はサイトカイン分泌の上記減少は、特に、Ｔ細胞二重特異性抗体を投与（特に第１の投与）したがＴＫＩを投与していない個体（同じ個体を含む）の血清レベル又はサイトカイン分泌と比較した場合である（すなわち、そのような場合、血清レベルは、Ｔ細胞二重特異性抗体の投与あり／投与後であるがＴＫＩの投与なし／投与前の血清レベルと比較して低下する）。上記低下がなければ、血清レベル及び／又はサイトカイン分泌は特に、Ｔ細胞二重特異性抗体（の投与）との関連で上昇／増加し得る。いくつかの態様では、上記低下は、臨床的に有意であり、かつ／又は統計学的に有意である。上記阻害は部分的又は完全であり得る。いくつかの態様では、上記阻害は、臨床的に有意であり、かつ／又は統計学的に有意である。

【0037】

いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は有効用量でのものである。

【0038】

薬剤、例えば、ＴＫＩ又はＴ細胞二重特異性抗体の「有効量」又は「有効用量」は、所望の治療結果又は予防結果を達成するために必要な薬用量及び所要期間で有効な量を指す。

【0039】

いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、約１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、又は２００ｍｇの用量である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は約２０ｍｇの用量である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は約７０ｍｇの用量である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は約８０ｍｇの用量である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は約１００ｍｇの用量である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は約１４０ｍｇの用量である。

【0040】

いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は約１００ｍｇ以下の用量である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は約２０ｍｇの用量である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は約７０ｍｇの用量である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は約８０ｍｇの用量である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は約１００ｍｇの用量である。そのような態様では、ＴＫＩの用量は、個体において１つ又は複数のサイトカインの血清レベルの低下を引き起こすのに十分であるが、Ｔ細胞二重特異性抗体の活性の阻害を引き起こすには不十分であり得るか、又は、個体における免疫細胞による１つ若しくは複数のサイトカインの分泌の減少を引き起こすのに十分であるが、Ｔ細胞二重特異性抗体によって誘導されるＴ細胞の活性化及び／又はＴ細胞の細胞傷害活性の阻害を引き起こすには不十分である。

【0041】

いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は毎日である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は１日１回である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、約１００ｍｇの用量で１日１回である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、有害作用が持続する期間（すなわち、ＴＫＩの投与は、有害作用の発現から有害作用の減少又は消失まで）にわたるものである。いくつかの態様では、有害作用が予防又は緩和された後に、ＴＫＩの投与を停止する。いくつかの態様では、有害作用の減少又は消失後にＴＫＩの投与を停止する。上記減少は特に、臨床的に有意であり、かつ／又は統計学的に有意である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回又は１０回、特に、Ｔ細胞二重特異性抗体による個体の治療の過程において１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回又は１０回である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間又は１０日間である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間又は１０日間で１日１回である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、Ｔ細胞二重特異性抗体の第１の投与に付随する。該第１の投与は、特に、Ｔ細胞二重特異性抗体による個体の治療の過程におけるＴ細胞二重特異性抗体の第１の投与である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、Ｔ細胞二重特異性抗体の第１の投与と同時である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、Ｔ細胞二重特異性抗体の第１の投与の前である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、Ｔ細胞二重特異性抗体の第１の投与の後である。いくつかの態様では、ＴＫＩの投与は、Ｔ細胞二重特異性抗体の第１の投与の後であり、かつ、Ｔ細胞二重特異性抗体の第２の投与の前である。ＴＫＩの投与がＴ細胞二重特異性抗体の（第１の）投与の前又は後である場合、そのようなＴＫＩの投与は、例えば、Ｔ細胞二重特異性抗体の投与前又は投与後それぞれ約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、１２時間、１６時間、２０時間又は２４時間以内であり得る。

【0042】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体の投与は、ＴＫＩの投与よりも長い期間にわたる。いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体の投与は、ＴＫＩの投与が停止された後も継続される。いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体の投与は、単回投与又は反復投与である。Ｔ細胞二重特異性抗体による個体の治療の過程において、Ｔ細胞二重特異性抗体は１回又は複数回投与され得る。例えば、Ｔ細胞二重特異性抗体による個体の治療は、それぞれがＴ細胞二重特異性抗体の１回又は複数回の投与を含む複数の治療サイクルを含み得る。いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体の投与は、第１の投与及び第２の投与を含む。

【0043】

本発明における使用のために、Ｔ細胞二重特異性抗体は、良好な医療慣行と一致する様式で製剤化され、投薬され、投与されるであろう。これに関連して考慮すべき要因としては、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床症状、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医療従事者に既知である他の要因が挙げられる。

【0044】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体の投与は有効用量でのものである。全身投与の場合、有効な用量は、インビトロアッセイ、例えば細胞培養アッセイから最初に概算することができる。次いで、細胞培養物で決定されるようなＩＣ_５０を含む血中濃度範囲を達成するために、用量を動物モデルで配合してもよい。かかる情報を使用し、ヒトにおける有用な用量を更に正確に決定することができる。初期投薬量も、インビボデータから、例えば、動物モデルから、当該技術分野で周知の技術を用いて概算することができる。治療効果を維持するのに十分なＴ細胞二重特異性抗体の血漿濃度を与えるように、投薬量及び投薬間隔は、個々に調節されてもよい。注射による投与のための通常の患者投薬量は、約０．１～５０ｍｇ／ｋｇ／日、典型的には約０．５～１ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。治療に有効な血漿濃度は、各日に複数回用量を投与することによって達成されてもよい。血漿中のレベルは、例えばＨＰＬＣによって測定することができる。

【0045】

有効量のＴ細胞二重特異性抗体が、疾患の予防又は治療のために投与され得る。治療される疾患の種類、Ｔ細胞二重特異性抗体の種類、疾患の重症度及び経過、個体の臨床症状、個体の病歴及び治療への応答、並びに主治医の裁量に基づいて、Ｔ細胞二重特異性抗体の適切な投与経路及び投与量が決定され得る。投薬は、投与が短時間であるか、又は慢性的であるかに部分的に応じて、任意の好適な経路によるもの、例えば、静脈内注射又は皮下注射等の注射によるものであり得る。単回又は様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス輸注を含むが、これらに限定されない様々な投薬スケジュールが、本明細書では企図される。

【0046】

Ｔ細胞二重特異性抗体及びＴＫＩは、任意の適切な経路で投与されてよく、同じ投与経路によって又は異なる投与経路によって投与されてもよい。いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体の投与は非経口的であり、特に静脈内投与である。

【0047】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体の投与は、個体へのＴ細胞二重特異性抗体の第１の投与、特に、Ｔ細胞二重特異性抗体による個体の治療の過程におけるＴ細胞二重特異性抗体の第１の投与である。

【0048】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体（の投与）は、Ｔ細胞の活性化を誘導する（すなわち、引き起こす、又は増加させる）。いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体（の投与）は、Ｔ細胞の増殖を誘導する。いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体（の投与）は、Ｔ細胞の細胞傷害活性を誘導する。いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体（の投与）は、Ｔ細胞におけるＴ細胞受容体シグナル伝達を誘導する。いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体（の投与）は、Ｔ細胞によるサイトカイン分泌を誘導する。いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６及びＩＬ－１βからなる群から選択される１つ又は複数のサイトカインである。いくつかの態様では、上記Ｔ細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞又はＣＤ４＋細胞である。

【0049】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体の投与は、特にがんの部位（例えば、固形腫瘍がん内）で、Ｔ細胞、特に細胞傷害性Ｔ細胞の活性化をもたらす。上記活性化は、Ｔ細胞の増殖、Ｔ細胞の分化、Ｔ細胞によるサイトカイン分泌、Ｔ細胞からの細胞傷害性エフェクター分子放出、Ｔ細胞の細胞傷害性活動、及びＴ細胞による活性化マーカーの発現を含み得る。いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体の投与は、がんの部位（例えば、固形腫瘍がん内）で、Ｔ細胞、特に細胞傷害性Ｔ細胞の数の増加をもたらす。

【0050】

以下、本発明において使用され得るＴ細胞二重特異性抗体について説明する。

【0051】

「Ｔ細胞二重特異性抗体」とは、（典型的には、Ｔ細胞上に発現される抗原決定基、例えばＣＤ３を介して）Ｔ細胞と、（典型的には、標的細胞上に発現される抗原決定基、例えばＣＥＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０又はＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１を介して）標的細胞とに同時に結合することを含めて、結合することができる抗体を意味する。

【0052】

本発明による好ましい態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、Ｔ細胞上の抗原決定基（すなわち、ＣＤ３などの第１の抗原）及び標的細胞上の抗原決定基（すなわち、第２の抗原、例えばＣＥＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０又はＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１）に同時に結合することができる。いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、ＣＤ３と標的細胞抗原に同時結合することにより、Ｔ細胞と標的細胞を架橋することができる。さらにより好ましい態様では、そのような同時結合は、標的細胞、特に標的細胞抗原（例えば、ＣＥＡ、ＣＤ１９、ＣＤ２０又はＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１）発現腫瘍細胞の溶解を生じる。いくつかの態様では、このような同時結合は、Ｔ細胞の活性化を引き起こす。いくつかの態様では、そのような同時結合は、増殖、分化、サイトカイン分泌、細胞傷害性エフェクター分子放出、細胞傷害活性、及び活性化マーカーの発現の群から選択されるＴ細胞の細胞応答をもたらす。いくつかの態様では、標的細胞抗原への同時結合を伴わないＴ細胞二重特異性抗体のＣＤ３への結合は、Ｔ細胞活性化を引き起こさない。いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、Ｔ細胞の細胞傷害活性を標的細胞に向け直すことができる。好ましい態様では、上記向け直しは、標的細胞によるＭＨＣ媒介性ペプチド抗原提示及び／又はＴ細胞の特異性とは無関係である。

【0053】

「二重特異性」との用語は、抗体が、少なくとも２つの別個の抗原決定基に結合することができることを意味する。典型的には、二重特異性抗体は、２つの抗原結合部位を含み、それぞれが異なる抗原決定基に対して特異的である。特定の態様では、二重特異性抗体は、２つの抗原決定基、特に、２つの別個の細胞で発現した２つの抗原決定基に同時に結合することができる。

【0054】

本明細書で使用される場合、「抗原決定基」との用語は、「抗原」及び「エピトープ」と同義であり、抗原結合部分－抗原複合体を形成する、抗原結合部分が結合するポリペプチド高分子上の部位（例えば、アミノ酸の連続伸長部又は異なる領域の非連続アミノ酸から構成される配座構成）を指す。有用な抗原決定基は、例えば、腫瘍細胞の表面上に、ウイルス感染した細胞の表面上に、他の罹患した細胞の表面上に、免疫細胞の表面上に、血清中で遊離して、及び／又は細胞外マトリックス（ＥＣＭ）内に認めることができる。

【0055】

本明細書で使用される場合、「抗原結合部分」との用語は、抗原決定基に結合する（特異的に結合することを含む）ポリペプチド分子を指す。いくつかの態様では、抗原結合部分は、標的部位に、例えば、抗原決定基を有する特定の種類の腫瘍細胞に結合する部分（例えば、第２の抗原結合部分）に指向することができる。さらなる態様では、抗原結合部分は、その標的抗原、例えばＴ細胞受容体複合抗原を通してシグナル伝達を活性化することができる。抗原結合部分は、本明細書にさらに定義される抗体及びその断片を含む。特定の抗原結合部分は、抗体重鎖可変領域と抗体軽鎖可変領域とを含む、抗体の抗原結合ドメインを含む。特定の態様では、抗原結合部分は、本明細書でさらに定義され、当該技術分野で知られているような抗体定常領域を含んでいてもよい。有用な重鎖定常領域は、α、δ、ε、γ又はμの５つのアイソタイプのいずれかを含む。有用な軽鎖定常領域は、κ及びλの２つのアイソタイプのいずれかを含む。

【0056】

「特異的に結合する」とは、その結合が抗原選択性であり、望ましくない相互作用又は非特異的な相互作用とは判別することができることを意味する。本明細書における「結合する（ｂｉｎｄ）」又は「結合する（ｂｉｎｄｉｎｇ）」という用語は、一般に「特異的結合」を指す。抗原結合部分が特定の抗原決定基に結合する能力は、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）又は当業者には知られている他の技術、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ機器で分析される）（Ｌｉｌｊｅｂｌａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏ Ｊ １７，３２３－３２９（２０００））、及び従来の結合アッセイ（Ｈｅｅｌｅｙ，Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｓ ２８，２１７－２２９（２００２））のいずれかによって測定することができる。いくつかの態様では、無関係なタンパク質に対する抗原結合部分の結合度は、例えばＳＰＲによって測定される抗原に対する抗原結合部分の結合の約１０％未満である。特定の態様では、抗原に結合する抗原結合部分、又はこの抗原結合部分を含む抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０^－８Ｍ以下、例えば、１０^－８Ｍ～１０^－１３Ｍ、例えば、１０^－９Ｍ～１０^－１３Ｍ）の解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。

【0057】

「親和性」は、分子の単一の結合部位（例えば、受容体）と、その結合対（例えば、リガンド）との間の非共有結合性相互作用の合計強度を指す。特に示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗原結合部分と抗原、又は受容体とそのリガンド）のメンバー間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子Ｘの結合対Ｙに対する分子Ｘの親和性は概して、解離定数（Ｋ_Ｄ）によって表すことができ、解離速度定数と結合速度定数（それぞれｋ_ｏｆｆ及びｋ_ｏｎ）の比である。したがって、速度定数の比率が同じままである限り、等価の親和性は、異なる速度定数を含み得る。アフィニティは、本明細書に記載するものを含め、当該技術分野で公知の十分に確立された方法によって測定することができる。親和性を測定するための特定の方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）である。

【0058】

「ＣＤ３」は、別途明記しない限り、霊長類（例えばヒト）、非ヒト霊長類（例えばカニクイザル）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）等の哺乳動物を含む任意の脊椎動物源由来の任意のネイティブＣＤ３を指す。この用語は、「完全長」の、未処理ＣＤ３、及び、細胞内での処理によりもたらされる任意の形態のＣＤ３を包含する。この用語は、ＣＤ３の天然に存在するバリアント、例えば、スプライス・バリアント又は対立遺伝子バリアントも包含する。いくつかの態様では、ＣＤ３は、ヒトＣＤ３、特にヒトＣＤ３のイプシロンサブユニット（ＣＤ３ε）である。ヒトＣＤ３εのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）受託番号Ｐ０７７６６（バージョン１４４）、又はＮＣＢＩ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）ＲｅｆＳｅｑ ＮＰ＿０００７２４．１に示されている。配列番号２５も参照のこと。カニクイザル［Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ］ＣＤ３εのアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋ番号ＢＡＢ７１８４９．１に示されている。配列番号２６も参照のこと。

【0059】

「標的細胞抗原」は、本明細書で使用される場合、標的細胞、例えば、がん細胞又は（「腫瘍細胞抗原」の場合）腫瘍間質細胞といった腫瘍内の細胞の表面に提示された抗原決定基を意味する。好ましくは、標的細胞抗原は、ＣＤ３ではない、及び／又は異なる細胞上に発現されたＣＤ３以外である。いくつかの態様では、標的細胞抗原はＣＥＡ、特にヒトＣＥＡである。他の態様では、標的細胞抗原はＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１、特にヒトＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１である。いくつかの態様では、標的細胞抗原はＣＤ２０、特にヒトＣＤ２０である。いくつかの態様では、標的細胞抗原はＣＤ１９、特にヒトＣＤ１９である。

【0060】

本明細書で使用される場合、抗原結合部分等に関する「第１」、「第２」又は「第３」という用語は、各タイプの部分が１つより多く存在するときに区別の便宜のために使用される。これらの用語の使用は、明示的に示されていない限り、二重特異性抗体の特定の順序又は配向を与えることを意図していない。

【0061】

本明細書で使用される「価数」という用語は、抗体内の特定数の抗原結合部位の存在を示す。したがって、「抗原に対する一価の結合」という用語は、抗体内の抗原に特異的な１つの（及び１つを超えない）抗原結合部位の存在を示す。

【0062】

「抗体」という用語は、本明細書では最も広い意味で使用され、限定されるものではないが、それらが所望の抗原結合活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及び抗体断片を含めた、様々な抗体構造を包含する。

【0063】

「完全長抗体」、「インタクト抗体」及び「全抗体」との用語は、ネイティブ抗体構造に実質的に類似した構造を有する抗体を指すために、本明細書で相互に置き換え可能に用いられる。

【0064】

「抗体断片」は、インタクト抗体が結合する抗原を結合するインタクト抗体の一部を含むインタクト抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２、ダイアボディ、直鎖抗体、一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）、及びシングルドメイン抗体が挙げられる。ある特定の抗体断片の総説としては、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ ９，１２９－１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の総説としては、例えば、Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。また、国際公開第９３／１６１８５号及び米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号を参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、インビボ半減期が長くなったＦａｂ及びＦ（ａｂ’）_２断片の説明については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照のこと。ダイアボディは、二価又は二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第１９９３／０１１６１号、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ ９，１２９－１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０，６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディも、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ ９，１２９－１３４（２００３）に説明されている。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部若しくは一部又は軽鎖可変ドメインの全部若しくは一部を含む抗体断片である。特定の態様では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号を参照のこと）。抗体断片は、限定されないが、本明細書に記載されるように、インタクト抗体のタンパク質分解による消化、及び組換え宿主細胞（例えば、大腸菌又はファージ）による産生を含め、種々の技術によって作られてもよい。

【0065】

「可変領域」又は「可変ドメイン」とは、抗体と抗原との結合に関与する、抗体の重鎖又は軽鎖のドメインである。天然の抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、一般に、類似の構造を有しており、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と、３つの超可変領域（ＨＶＲ）とを含む。例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６^ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．、９１頁（２００７）を参照されたい。単一のＶＨ又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するために充分であり得る。可変領域配列と組み合わせて本明細書で使用される場合、「Ｋａｂａｔナンバリング」は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）によって記載されるナンバリングシステムを指す。

【0066】

本明細書で使用される場合、重鎖及び軽鎖のすべての定常領域及びドメインのアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）に記載されるＫａｂａｔナンバリングシステムに従ってナンバリングされ、本明細書では「Ｋａｂａｔによるナンバリング」又は「Ｋａｂａｔナンバリング」と呼ばれる。特定的には、Ｋａｂａｔナンバリングシステム（Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５ｔｈ ｅｄ．、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１）の６４７～６６０頁を参照されたい）を、κ及びλアイソタイプの軽鎖定常ドメインＣＬに使用し、Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスナンバリングシステム（６６１～７２３頁を参照されたい）を、重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３）に使用し、この場合には、「Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング」と言及することによって更に明確にしている。

【0067】

本明細書で使用する場合、用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」とは、配列内で超可変であり、抗原結合特異性を決定する、抗体可変ドメインの領域、例えば「相補性決定領域」（ＣＤＲ）のそれぞれを意味する。一般的に、抗体は、６つのＣＤＲを含み、ＶＨに３つ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）、ＶＬに３つ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）含む。本明細書における例示的なＣＤＲとしては、
（ａ）アミノ酸残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）、９１～９６（Ｌ３）、２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）、及び９６～１０１（Ｈ３）で生じる超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））、
（ｂ）アミノ酸残基２４－３４（Ｌ１）、５０－５６（Ｌ２）、８９－９７（Ｌ３）、３１－３５ｂ（Ｈ１）、５０－６５（Ｈ２）及び９５－１０２（Ｈ３）に生じるＣＤＲ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））；並びに
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ－３６（Ｌ１）、４６－５５（Ｌ２）、８９－９６（Ｌ３）、３０－３５ｂ（Ｈ１）、４７－５８（Ｈ２）及び９３－１０１（Ｈ３）で生じる抗原接触（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６））が挙げられる。

【0068】

特に指示がない限り、ＣＤＲは、上記Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．に従い決定される。当業者は、ＣＤＲの表記は、上記Ｃｈｏｔｈｉａ、上記ＭｃＣａｌｌｕｍ、又は、任意の他の、科学的に認可された命名システムに従い決定することができることを理解するであろう。

【0069】

「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般的に、ＶＨ（又はＶＬ）中において以下の順序で現れる：ＦＲ１－Ｈ１（Ｌ１）－ＦＲ２－Ｈ２（Ｌ２）－ＦＲ３－Ｈ３（Ｌ３）－ＦＲ４。

【0070】

抗体又は免疫グロブリンの「クラス」は、抗体又は免疫グロブリンの重鎖が保有する定常ドメイン又は定常領域の種類を指す。抗体には５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、下位クラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、及びＩｇＡ_２に更に分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。

【0071】

「Ｆａｂ分子」は、免疫グロブリンの重鎖（「Ｆａｂ重鎖」）のＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインと、免疫グロブリンの軽鎖（「Ｆａｂ軽鎖」）のＶＬドメイン及びＣＬドメインとからなるタンパク質を指す。

【0072】

「クロスオーバー」Ｆａｂ分子（「Ｃｒｏｓｓｆａｂ」とも呼ばれる）は、Ｆａｂ重鎖と軽鎖の可変ドメイン又は定常ドメインが交換された（すなわち、互いに置き換わった）Ｆａｂ分子を意味し、すなわち、クロスオーバーＦａｂ分子は、軽鎖可変ドメインＶＬ及び重鎖定常ドメイン１ ＣＨ１（ＶＬ－ＣＨ１、Ｎ末端からＣ末端方向に）で構成されるペプチド鎖と、重鎖可変ドメインＶＨ及び軽鎖定常ドメインＣＬ（ＶＨ－ＣＬ、Ｎ末端からＣ末端方向に）で構成されるペプチド鎖とを含む。明確性のために、Ｆａｂ軽鎖とＦａｂ重鎖の可変ドメインが交換されているクロスオーバーＦａｂ分子において、重鎖定常ドメイン１ ＣＨ１を含むペプチド鎖は、本明細書では（クロスオーバー）Ｆａｂ分子の「重鎖」と呼ばれる。逆に、Ｆａｂ軽鎖とＦａｂ重鎖の定常ドメインが交換されているクロスオーバーＦａｂ分子において、重鎖可変ドメインＶＨを含むペプチド鎖は、本明細書では（クロスオーバー）Ｆａｂ分子の「重鎖」と呼ばれる。

【0073】

これとは対照的に、「従来の」Ｆａｂ分子は、その天然のフォーマットのＦａｂ分子、すなわち、重鎖可変ドメイン及び定常ドメインで構成される重鎖（ＶＨ－ＣＨ１、Ｎ末端からＣ末端方向に）と、軽鎖可変ドメイン及び定常ドメインで構成される軽鎖（ＶＬ－ＣＬ、Ｎ末端からＣ末端方向に）とを含むものを意味する。

【0074】

「免疫グロブリン分子」という用語は、天然に存在する抗体の構造を有するタンパク質を指す。例えば、ＩｇＧクラスの免疫グロブリンは、約１５０，０００ダルトンのヘテロテトラマー糖タンパク質であり、ジスルフィド結合した２つの軽鎖と２つの重鎖で構成される。Ｎ末端からＣ末端に向かって、それぞれの重鎖は、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変領域とも呼ばれる可変ドメイン（ＶＨ）と、その後に重鎖定常領域とも呼ばれる３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）と、を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端に向かって、それぞれの軽鎖は、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変領域とも呼ばれる可変ドメイン（ＶＬ）と、その後に軽鎖定常領域とも呼ばれる定常軽鎖（ＣＬ）ドメインと、を有する。免疫グロブリンの重鎖は、α（ＩｇＡ）、δ（ＩｇＤ）、ε（ＩｇＥ）、γ（ＩｇＧ）又はμ（ＩｇＭ）と呼ばれる５種類の１つに割り当てられてもよく、このいくつかは、例えば、γ_１（ＩｇＧ_１）、γ_２（ＩｇＧ_２）、γ_３（ＩｇＧ_３）、γ_４（ＩｇＧ_４）、α_１（ＩｇＡ_１）及びα_２（ＩｇＡ_２）等の更なるサブタイプに分けられてもよい。免疫グロブリンの軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２種類のうちの１つに割り当てられてもよい。免疫グロブリンは、免疫グロブリンヒンジ領域を介して接続する、２つのＦａｂ分子とＦｃドメインとから本質的になる。

【0075】

本明細書における「Ｆｃドメイン」又は「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及びバリアントＦｃ領域を含む。ＩｇＧ重鎖のＦｃ領域の境界は、わずかに変動してもよいが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６から、又はＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシ末端まで伸長するよう規定されている。しかしながら、宿主細胞によって産生される抗体は、重鎖のＣ末端から１つ又は複数、特に１つ又は２つのアミノ酸の翻訳後開裂を受けてもよい。したがって、完全長重鎖をコードする特定の核酸分子の発現によって、宿主細胞によって産生する抗体は、完全長重鎖を含んでいてもよく、又は完全長重鎖の開裂したバリアントを含んでいてもよい。これは、重鎖の最終的な２つのＣ末端アミノ酸がグリジン（Ｇ４４６）及びリジン（Ｋ４４７、Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）である場合であってもよい。したがって、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）、又はＣ末端グリジン（Ｇｌｙ４４６）及びリジン（Ｋ４４７）が存在してもよく、又は存在していなくてもよい。本明細書で特に明記されない限り、Ｆｃ領域又は定常領域におけるアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１（上も参照されたい）に記載されるような、ＥＵナンバリングシステム（ＥＵインデックスとも呼ばれる）に従う。本明細書で使用される場合、Ｆｃドメインの「サブユニット」とは、二量体のＦｃドメインを形成する２つのポリペプチドの１つ、すなわち、免疫グロブリン重鎖のＣ末端定常領域を含み、安定した自己会合が可能なポリペプチドを意味する。例えば、ＩｇＧ Ｆｃドメインのサブユニットは、ＩｇＧ ＣＨ２及びＩｇＧ ＣＨ３定常ドメインを含む。

【0076】

「Ｆｃドメインの第１のサブユニット及び第２のサブユニットの会合を促進する修飾」は、ホモ二量体を形成するためのＦｃドメインサブユニットを含むペプチドと同一のポリペプチドとの会合を減らすか又は防ぐ、ペプチド骨格の操作又はＦｃドメインサブユニットの翻訳後修飾である。会合を促進する修飾は、本明細書で使用される場合、特に、会合することが望ましい２つのＦｃドメインサブユニット（すなわち、Ｆｃドメインの第１のサブユニット及び第２のサブユニット）それぞれに対し、別個の修飾を含み、修飾は、２つのＦｃドメインサブユニットの会合を促進するように、互いに相補性である。例えば、会合を促進する修飾は、それぞれ立体的又は静電的に望ましい会合を行うように、Ｆｃドメインサブユニットの片方又は両方の構造又は電荷を変えてもよい。したがって、（ヘテロ）二量化は、第１のＦｃドメインサブユニットを含むポリペプチドと、第２のＦｃドメインサブユニットを含むポリペプチドとの間で起こり、それぞれのサブユニットに融合する更なる構成要素（例えば、抗原結合部分）が同じではないという意味で、同一ではない場合がある。いくつかの態様では、会合を促進する修飾は、Ｆｃドメイン内のアミノ酸変異、具体的には、アミノ酸置換を含む。特定の態様では、会合を促進する修飾は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットのそれぞれに、別個のアミノ酸変異、具体的にはアミノ酸置換を含む。

【0077】

「エフェクター機能」という用語は、抗体のＦｃ領域に帰属可能な生体活性を指し、抗体アイソタイプによって変わる。抗体エフェクター機能の例としては：Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、サイトカイン分泌、抗原提示細胞によるイムノコンジュゲート媒介性抗原取り込み、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、及びＢ細胞活性化が挙げられる。

【0078】

参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列の同一性パーセント（％）」は、配列をアラインメントし、最大の配列同一性パーセントを達成するために、必要ならばギャップを導入した後、配列同一性の一部として任意の保存的置換を考慮せずに、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合であると定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、当該技術分野の技術の範囲内にある種々の様式で、例えば、公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア又はＦＡＳＴＡプログラムパッケージを用いて達成することができる。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列のアラインメントのための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本発明の目的のために、アミノ酸配列同一性％の値は、ＦＡＳＴＡパッケージバージョン３６．３．８ｃのｇｇｓｅａｒｃｈプログラム用い、又はその後のＢＬＯＳＵＭ５０比較マトリックスを用いて作成される。ＦＡＳＴＡプログラムパッケージは、Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｄ．Ｊ．Ｌｉｐｍａｎ（１９８８）、「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ」、ＰＮＡＳ ８５：２４４４－２４４８；Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９６）「Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ」Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：２２７－２５８；及びＰｅａｒｓｏｎ ｅｔ．ａｌ．（１９９７）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ４６：２４－３６）によるものであり、ｈｔｔｐ：／／ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｆａｓｔａ＿ｄｏｗｎ．ｓｈｔｍｌから公的に入手可能である。あるいは、ｈｔｔｐ：／／ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｉｎｄｅｘ．ｃｇｉでアクセス可能な公開サーバを使用して、ｇｇｓｅａｒｃｈ（グローバル・タンパク質：タンパク質）プログラム及びデフォルト・オプション（ＢＬＯＳＵＭ５０；ｏｐｅｎ：－１０；ｅｘｔ：－２；Ｋｔｕｐ＝２）を使用して配列を比較し、ローカルではなくグローバルなアライメントを確実に実行することができる。アミノ酸同一性パーセントは、アウトプットアラインメントヘッダーで与えられる。

【0079】

「活性化Ｆｃ受容体」は、抗体のＦｃドメインによる連結の後に、エフェクター機能を発揮するために受容体を含む細胞を刺激するシグナル伝達事象を誘発するＦｃ受容体である。ヒト活性化Ｆｃ受容体としては、ＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩａ（ＣＤ３２）及びＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）が挙げられる。

【0080】

「結合の低減」、例えば、Ｆｃ受容体に対する結合の低減は、例えば、ＳＰＲによって測定される場合、それぞれの相互作用についての親和性の低下を指す。明確性のために、この用語は、親和性がゼロまで低下する（又は分析方法の検出限界未満になる）こと、すなわち、相互作用が完全に失われることも含む。逆に、「結合上昇」は、個々の相互作用に対する結合親和性における上昇を指す。

【0081】

「融合した」が意味するのは、構成要素（例えばＦａｂ分子及びＦｃドメインサブユニット）が、ペプチド結合によって直接的に又は１つ若しくは複数のペプチドリンカーを介して連結されていることである。

【0082】

特定の態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体はＣＤ３及び標的細胞抗原に結合する。したがって、いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、ＣＤ３に結合する抗原結合部分及び標的細胞抗原に結合する抗原結合部分を含む。

【0083】

いくつかの態様では、第１の抗原結合部分及び／又は第２の抗原結合部分は、Ｆａｂ分子である。いくつかの態様では、第１の抗原結合部分は、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖の可変領域又は定常領域のいずれかが交換されているクロスオーバーＦａｂ分子である。そのような態様では、第２の抗原結合部分は、好ましくは、従来のＦａｂ分子である。

【0084】

Ｔ細胞二重特異性抗体の第１の抗原結合部分及び第２の抗原結合部分が両方ともＦａｂ分子であり、抗原結合部分の１つ（特に、第１の抗原結合部分）において、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖の可変ドメインＶＬ及びＶＨが互いに置き換わっているいくつかの態様では、
ｉ）第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸は、正に帯電したアミノ酸によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸又は位置２１３のアミノ酸は、負に帯電したアミノ酸によって置換されているか（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、又は
ｉｉ）第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸は、正に帯電したアミノ酸によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸又は位置２１３のアミノ酸は、負に帯電したアミノ酸によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。

【0085】

Ｔ細胞二重特異性抗体は、ｉ）及びｉｉ）に記述されている修飾を両方とも含むことはない。ＶＨ／ＶＬが置き換わっている抗原結合部分の定常ドメインＣＬ及びＣＨ１は、互いに置き換わっていない（すなわち、交換されていないままである）。

【0086】

より具体的な態様では、
ｉ）第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸は、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第１の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸又は位置２１３のアミノ酸は、独立して、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されているか（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、又は
ｉｉ）第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸は、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸又は位置２１３のアミノ酸は、独立して、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。

【0087】

いくつかの態様では、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸は、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）によって置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸又は位置２１３のアミノ酸は、独立して、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）によって置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。

【0088】

さらなる態様では、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸は、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）で置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸は、独立して、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。

【0089】

好ましい態様では、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸は、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）で置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、位置１２３のアミノ酸は、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）又はヒスチジン（Ｈ）で置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸は、独立して、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、位置２１３のアミノ酸は、独立して、グルタミン酸（Ｅ）又はアスパラギン酸（Ｄ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。

【0090】

いくつかの態様では、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸は、リジン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、位置１２３のアミノ酸は、リジン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、位置２１３のアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。

【0091】

いくつかの態様では、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸は、リジン（Ｋ）で置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、位置１２３のアミノ酸は、アルギニン（Ｒ）で置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、位置２１３のアミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。

【0092】

特定の態様では、上の態様に係るアミノ酸置換が、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬ及び定常ドメインＣＨ１でなされる場合、第２の抗原結合部分の定常ドメインＣＬは、カッパアイソタイプである。

【0093】

いくつかの態様では、第１の抗原結合部分及び第２の抗原結合部分は、任意にペプチドリンカーを介して、互いに融合されている。

【0094】

いくつかの態様では、第１の抗原結合部分及び第２の抗原結合部分は、それぞれＦａｂ分子であり、（ｉ）第２の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、第１の抗原結合部分のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合されているか、又は（ｉｉ）第１の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、第２の抗原結合部分のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合されているか、のいずれかである。

【0095】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、ＣＤ３に対する一価の結合を提供する。

【0096】

特定の態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、ＣＤ３に結合する単一の抗原結合部分と、標的細胞抗原に結合する２つの抗原結合部分とを含む。よって、いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、標的抗原に結合する、第３の抗原結合部分、特にＦａｂ分子、より具体的には従来のＦａｂ分子を含む。第３の抗原結合部分は、第２の抗原結合部分に関して本明細書に記載される特徴のすべて（例えば、ＣＤＲ配列、及び／又は可変領域配列）を、単独で又は組み合わせて組み込むことができる。いくつかの態様では、第３の抗原結合部分は、第１の抗原結合部分と同一である（例えば、従来のＦａｂ分子でもあり、同じアミノ酸配列を含む）。

【0097】

特定の態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、第１のサブユニット及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインをさらに含む。いくつかの態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ Ｆｃドメインである。特定の態様では、ＦｃドメインはＩｇＧ_１ Ｆｃドメインである。別の態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ_４ Ｆｃドメインである。より具体的な態様では、Ｆｃドメインは、Ｓ２２８位（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスナンバリング）にアミノ酸置換、特にアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むＩｇＧ_４ Ｆｃドメインである。このアミノ酸置換は、インビボでのＩｇＧ_４抗体のＦａｂアーム交換を低減する（Ｓｔｕｂｅｎｒａｕｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ ３８，８４－９１（２０１０）を参照されたい）。さらに具体的な態様では、Ｆｃドメインは、ヒトＦｃドメインである。特定の好ましい態様では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ_１ Ｆｃドメインである。ヒトＩｇＧ_１ Ｆｃ領域の例示的配列は、配列番号２７に提示されている。

【0098】

第１の抗原結合部分、第２の抗原結合部分、及び、存在する場合、第３の抗原結合部分が、それぞれＦａｂ分子であるいくつかの態様では、（ａ）（ｉ）第２の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、第１の抗原結合部分のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合され、第１の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合されているか、又は（ｉｉ）第１の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、第２の抗原結合部分のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合され、第２の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合されているかのいずれか一方であり、且つ、（ｂ）存在する場合、第３の抗原結合部分が、Ｆａｂ重鎖のＣ末端で、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合されている。

【0099】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、第１の抗原結合部分、第２の抗原結合部分及び第３の抗原結合部分（特にＦａｂ分子）、第１のサブユニット及び第２のサブユニットで構成されるＦｃドメイン、並びに任意に、１つ又は複数のペプチドリンカーから本質的になる。

【0100】

Ｔ細胞二重特異性抗体の構成要素は、直接的に、又は好ましくは１つ又は複数の適切なペプチドリンカーを介して、互いに融合していてもよい。Ｆａｂ分子の融合が、ＦｃドメインのサブユニットのＮ末端へのものである場合、それは典型的には免疫グロブリンヒンジ領域を介するものである。

【0101】

抗原結合部分は、Ｆｃドメインに又は互いに、直接的に又は１個又は複数個のアミノ酸、典型的には約２～２０個のアミノ酸を含むペプチドリンカーを介して融合していてもよい。ペプチドリンカーは、当該技術分野に知られており、本明細書に説明されている。適切な非免疫原性ペプチドリンカーには、例えば（Ｇ_４Ｓ）_ｎ、（ＳＧ_４）_ｎ、（Ｇ_４Ｓ）_ｎ、Ｇ_４（ＳＧ_４）_ｎ又は（Ｇ_４Ｓ）_ｎＧ_５ペプチドリンカーが含まれる。「ｎ」は、一般的に、１～１０、典型的には２～４の整数である。いくつかの態様では、上記ペプチドリンカーは、少なくとも５アミノ酸長、いくつかの態様では５～１００、更なる態様では１０～５０アミノ酸長を有する。いくつかの態様では、上記ペプチドリンカーは、（ＧｘＳ）_ｎ又は（ＧｘＳ）_ｎＧ_ｍであり、Ｇ＝グリジン、Ｓ＝セリン、及び（ｘ＝３、ｎ＝３、４、５又は６、及びｍ＝０、１、２又は３）又は（ｘ＝４、ｎ＝１、２、３、４又は５及びｍ＝０、１、２、３、４又は５）であり、いくつかの態様では、ｘ＝４及びｎ＝２又は３、さらなる態様では、ｘ＝４及びｎ＝２、なおさらなる態様では、ｘ＝４、ｎ＝１及びｍ＝５である。いくつかの態様では、上記ペプチドリンカーは（Ｇ_４Ｓ）_２である。他の態様では、上記ペプチドリンカーはＧ_４ＳＧ_５である。加えて、リンカーは、免疫グロブリンヒンジ領域（の一部）を含んでいてもよい。特に、Ｆａｂ分子がＦｃドメインサブユニットのＮ末端に融合する場合、免疫グロブリンヒンジ領域又はその一部を介して、さらなるペプチドリンカーを伴い又は伴うことなく融合していてもよい。

【0102】

特定の態様では、Ｆｃドメインは、Ｆｃドメインの第１のサブユニット及び第２のサブユニットの会合を促進する修飾を含む。ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインの２つのサブユニット間の最も長いタンパク質－タンパク質相互作用の部位は、ＣＨ３ドメインの中にある。したがって、いくつかの態様では、上記修飾はＦｃドメインのＣＨ３ドメイン内にある。

【0103】

具体的な態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットと第２のサブユニットとの会合を促進する上記修飾は、いわゆる「ノブ・イントゥ・ホール」修飾であり、Ｆｃドメインの２つのサブユニットの一方に「ノブ」修飾を、Ｆｃドメインの２つのサブユニットのもう一方に「ホール」修飾を含む。ノブ・イントゥ・ホール技術は、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号、米国特許第７，６９５，９３６号、Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔ Ｅｎｇ ９，６１７－６２１（１９９６）及びＣａｒｔｅｒ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ ２４８，７－１５（２００１）に記載される。一般的に、この方法は、第１のポリペプチドの界面にある突起（「ノブ」）と、第２のポリペプチドの界面にある対応する空洞（「ホール」）とを導入することを含み、その結果、突起が、ヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を妨害するように空洞内に位置することができる。突起は、第１のポリペプチドの界面からの小さなアミノ酸側鎖を、より大きな側鎖（例えば、チロシン又はトリプトファン）と交換することによって構築される。突起と同一又は同様の大きさの相補性空洞が、大きなアミノ酸側鎖を、より小さなアミノ酸側鎖（例えば、アラニン又はトレオニン）と置き換えることによって、第２のポリペプチドの界面に作られる。

【0104】

したがって、いくつかの態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸残基を、より大きな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置き換えることにより、第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内の空洞に位置可能な第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内に突起を生成し、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸残基を、より小さな側鎖体積を有するアミノ酸残基で置き換えることにより、第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内の突起が位置可能な第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内に空洞を生成する。好ましくは、より大きな側鎖体積を有する当該アミノ酸残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）及びトリプトファン（Ｗ）からなる群から選択される。好ましくは、より小さな側鎖体積を有する当該アミノ酸残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）及びバリン（Ｖ）からなる群から選択される。突起及び空洞は、ポリペプチドをコードする核酸を変えることによって、例えば、部位特異的突然変異誘発によって、又はペプチド合成によって作成することができる。

【0105】

具体的なこのような態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットにおいて、位置３６６のトレオニン残基がトリプトファン残基と置き換わっており（Ｔ３６６Ｗ）、Ｆｃドメインの第２のサブユニットにおいて、位置４０７のチロシン残基がバリン残基と置き換わっており（Ｙ４０７Ｖ）、任意に、位置３６６のトレオニン残基がセリン残基と置き換わっており（Ｔ３６６Ｓ）、位置３６８のロイシン残基がアラニン残基と置き換わっている（Ｌ３６８Ａ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。さらなる態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットにおいて、追加的に位置３５４のセリン残基がシステイン残基と置き換わっており（Ｓ３５４Ｃ）又は位置３５６のグルタミン酸残基がシステイン残基と置き換わっており（Ｅ３５６Ｃ）（特に、位置３５４のセリン残基がシステイン残基と置き換わっており）、Ｆｃドメインの第２のサブユニットにおいて、追加的に位置３４９のチロシン残基がシステイン残基と置き換わっている（Ｙ３４９Ｃ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。好ましい態様では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットはアミノ酸置換Ｓ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗを含み、Ｆｃドメインの第２のサブユニットはアミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）を含む。

【0106】

いくつかの態様では、Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体への結合を低下させる、且つ／又はエフェクター機能を低下させる１つ又は複数のアミノ酸置換を含む。

【0107】

特定の態様では、Ｆｃ受容体は、Ｆｃγ受容体である。いくつかの態様では、Ｆｃ受容体はヒトＦｃ受容体である。いくつかの態様では、Ｆｃ受容体は、活性化Ｆｃ受容体である。具体的な態様では、Ｆｃ受容体は、活性化ヒトＦｃγ受容体であり、より具体的には、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩ又はＦｃγＲＩＩａであり、最も具体的には、ヒトＦｃγＲＩＩＩａである。いくつかの態様では、エフェクター機能は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介細胞障害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、及びサイトカイン分泌の群から選択される１つ又は複数である。特定の態様では、エフェクター機能はＡＤＣＣである。

【0108】

典型的には、同じ１つ又は複数のアミノ酸置換が、Ｆｃドメインの２つのサブユニットのそれぞれに存在する。いくつかの態様では、１つ又は複数のアミノ酸置換は、Ｆｃ受容体へのＦｃドメインの結合親和性を低減する。いくつかの態様では、１つ又は複数のアミノ酸置換は、Ｆｃ受容体へのＦｃドメインの結合親和性を、少なくとも２分の１、少なくとも５分の１又は少なくとも１０分の１に低減する。

【0109】

いくつかの態様では、Ｆｃドメインは、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７、Ｐ３３１及びＰ３２９（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む。より具体的な態様では、Ｆｃドメインは、Ｌ２３４、Ｌ２３５及びＰ３２９（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの態様では、Ｆｃドメインは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。いくつかのこのような態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ_１ Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ_１ Ｆｃドメインである。いくつかの態様では、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９位にアミノ酸置換を含む。より具体的な態様では、アミノ酸置換は、Ｐ３２９Ａ又はＰ３２９Ｇ、特にＰ３２９Ｇ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）である。いくつかの態様では、Ｆｃドメインは、Ｐ３２９位にアミノ酸置換を含み、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７、及びＰ３３１（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）から選択される位置に更なるアミノ酸置換を含む。より具体的な態様では、更なるアミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ又はＰ３３１Ｓである。特定の態様において、Ｆｃドメインは、位置Ｐ３２９、Ｌ２３４及びＬ２３５にアミノ酸置換を含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。より具体的な態様において、Ｆｃドメインは、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇ（「Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ」、「ＰＧＬＡＬＡ」又は「ＬＡＬＡＰＧ」）を含む。具体的には、好ましい態様において、Ｆｃドメインのそれぞれのサブユニットは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇを含み（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスナンバリング）、すなわち、Ｆｃドメインの第１のサブユニット及び第２のサブユニットのそれぞれにおいて、位置２３４のロイシン残基はアラニン残基と置き換わっており（Ｌ２３４Ａ）、位置２３５のロイシン残基はアラニン残基と置き換わっており（Ｌ２３５Ａ）、位置３２９のプロリン残基はグリジン残基と置き換わっている（Ｐ３２９Ｇ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。いくつかのこのような態様では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ_１ Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ_１ Ｆｃドメインである。

【0110】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体の標的細胞抗原は癌胎児性抗原（ＣＥＡ）である。

【0111】

「癌胎児性抗原」又は「ＣＥＡ」（癌胎児性抗原関連細胞接着分子５（ＣＥＡＣＡＭ５）としても知られる）は、特に断りのない限り、霊長類（例えばヒト）、非ヒト霊長類（例えばカニクイザル）、並びに齧歯類（例えばマウス及びラット）等の哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源に由来する、任意の天然ＣＥＡを意味する。この用語は、「完全長」の、未処理ＣＥＡ、及び、細胞内での処理によりもたらされる任意の形態のＣＥＡを包含する。この用語は、ＣＥＡの天然に存在するバリアント、例えば、スプライス・バリアント又は対立遺伝子バリアントも包含する。いくつかの態様では、ＣＥＡはヒトＣＥＡである。ヒトＣＥＡのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）受託番号Ｐ０６７３１、又はＮＣＢＩ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）ＲｅｆＳｅｑ ＮＰ＿００４３５４．２に示されている。いくつかの態様では、ＣＥＡは膜結合ＣＥＡである。いくつかの態様では、ＣＥＡは、細胞、例えばがん細胞の表面に発現したＣＥＡである。

【0112】

ＣＥＡに結合する本発明に有用なＴ細胞二重特異性抗体は、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ ２０１４／１３１７１２（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。

【0113】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、ＣＤ３に結合する第１の抗原結合部分及びＣＥＡに結合する第２の抗原結合部分を含む。

【0114】

いくつかの態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号２８の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２９のＨＣＤＲ２、及び配列番号３０のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号３１の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号３２のＬＣＤＲ２、及び配列番号３３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む。

【0115】

いくつかの態様では、第２の抗原結合部分は、配列番号３６の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号３７のＨＣＤＲ２、及び配列番号３８のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号３９の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号４０のＬＣＤＲ２、及び配列番号４１のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む。

【0116】

いくつかの態様では、ＣＥＡ ＣＤ３二重特異性抗体は、
（ｉ）ＣＤ３に結合し、配列番号２８の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２９のＨＣＤＲ２、及び配列番号３０のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号３１の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号３２のＬＣＤＲ２、及び配列番号３３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第１の抗原結合部分と、
（ｉｉ）ＣＥＡに結合し、配列番号３６の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号３７のＨＣＤＲ２、及び配列番号３８のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号３９の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号４０のＬＣＤＲ２、及び配列番号４１のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第２の抗原結合部分と
を含む。

【0117】

いくつかの態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。いくつかの態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号３４の重鎖可変領域配列と、配列番号３５の軽鎖可変領域配列とを含む。

【0118】

いくつかの態様では、第２の抗原結合部分は、配列番号４２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号４３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。いくつかの態様では、第２の抗原結合部分は、配列番号４２の重鎖可変領域配列と、配列番号４３の軽鎖可変領域配列とを含む。

【0119】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、本明細書に記載されるように、ＣＥＡ並びに／又は第１のサブユニット及び第２のサブユニットで構成されるＦｃドメインに結合する第３の抗原結合部分を含む。

【0120】

好ましい態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、
（ｉ）ＣＤ３に結合し、配列番号２８の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２９のＨＣＤＲ２、及び配列番号３０のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号３１の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号３２のＬＣＤＲ２、及び配列番号３３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む、第１の抗原結合部分であって、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖の可変領域又は定常領域のいずれか、特に定常領域が交換されているクロスオーバーＦａｂ分子である、第１の抗原結合部分と、
（ｉｉ）ＣＥＡに結合し、配列番号３６の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号３７のＨＣＤＲ２、及び配列番号３８のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号３９の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号４０のＬＣＤＲ２、及び配列番号４１のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む、第２の抗原結合部分及び第３の抗原結合部分であって、それぞれＦａｂ分子、特に従来のＦａｂ分子である、第２の抗原結合部分及び第３の抗原結合部分と、
（ｉｉｉ）第１のサブユニット及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインと
を含み、
第２の抗原結合部分は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１の抗原結合部分のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第１の抗原結合部分は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、第３の抗原結合部分は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している。

【0121】

いくつかの態様では、（ＣＥＡ及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体の第１の抗原結合部分は、配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。いくつかの態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号３４の重鎖可変領域配列と、配列番号３５の軽鎖可変領域配列とを含む。

【0122】

いくつかの態様では、（ＣＥＡ及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体の第２の抗原結合部分及び（存在する場合は）第３の抗原結合部分は、配列番号４２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号４３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。いくつかの態様では、第２の抗原結合部分及び（存在する場合は）第３の抗原結合部分は、配列番号４２の重鎖可変領域と、配列番号４３の軽鎖可変領域とを含む。

【0123】

上記の態様によるＦｃドメインは、Ｆｃドメインに関して上に記載される特徴のすべてを単独で又は組み合わせて組み込んでもよい。

【0124】

いくつかの態様では、（ＣＥＡ及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体のＦｃドメインは、Ｆｃドメインの第１のサブユニットと第２のサブユニットの会合を促進する修飾を含み、並びに／又は、Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体への結合及び／若しくはエフェクター機能を低下させる１つ又は複数のアミノ酸置換を含む。

【0125】

いくつかの態様では、抗原結合部分及びＦｃ領域は、ペプチドリンカー、特に、配列番号４５及び配列番号４７にあるようなペプチドリンカーによって、互いに融合している。

【0126】

いくつかの態様では、（ＣＥＡ及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体は、配列番号４４の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含むポリペプチド（特に２つのポリペプチド）と、配列番号４５の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含むポリペプチドと、配列番号４６の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含むポリペプチドと、配列番号４７の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含むポリペプチドとを含む。いくつかの態様では、（ＣＥＡ及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体は、配列番号４４の配列を含むポリペプチド（特に２つのポリペプチド）と、配列番号４５の配列を含むポリペプチドと、配列番号４６の配列を含むポリペプチドと、配列番号４７の配列を含むポリペプチドとを含む。

【0127】

好ましい態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体はシビサタマブ（ＷＨＯ Ｄｒｕｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ Ｎａｍｅｓ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）、Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ ＩＮＮ：Ｌｉｓｔ ８０，２０１８，ｖｏｌ．３２，ｎｏ．３，ｐ．４３８）である。

【0128】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体の標的細胞抗原はＨＬＡ－２／ＷＴ１である。

【0129】

「ウィルムス腫瘍１」又は「ウィルムス腫瘍タンパク質」としても知られる「ＷＴ１」は、別途明記しない限り、霊長類（例えばヒト）、非ヒト霊長類（例えばカニクイザル）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）等の哺乳動物を含む任意の脊椎動物源由来の任意のネイティブＷＴ１を指す。この用語は、「完全長」の、未処理ＷＴ１、及び、細胞内での処理によりもたらされる任意の形態のＷＴ１を包含する。この用語は、ＷＴ１の天然に存在するバリアント、例えば、スプライス・バリアント又は対立遺伝子バリアントも包含する。いくつかの態様では、ＷＴ１は、ヒトＷＴ１、特に配列番号２１のタンパク質である。ヒトＷＴ１は、ＵｎｉＰｒｏｔ（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）寄託番号Ｐ１９５４４（入力バージョン２１５）に記載されており，ヒトＷＴ１のアミノ酸配列は配列番号２１にも示されている。

【0130】

「ＶＬＤ」、「ＶＬＤペプチド」、又は「ＷＴ１_ＶＬＤ」が意味するのは、アミノ酸配列ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号２２；配列番号２１のＷＴ１タンパク質の位置３７－４５）を有するＷＴ１由来のペプチドである。

【0131】

「ＲＭＦ」、「ＲＭＦペプチド」、又は「ＷＴ１_ＲＭＦ」が意味するのは、アミノ酸配列ＲＭＦＲＮＡＰＹＬ（配列番号２３；配列番号２１のＷＴ１タンパク質の位置１２６－１３４）を有するＷＴ１由来のペプチドである。

【0132】

「ＨＬＡ－Ａ２」、「ＨＬＡ－Ａ^＊０２」、「ＨＬＡ－Ａ０２」、又は「ＨＬＡ－Ａ^＊２」（互換可能に使用される）は、ＨＬＡ－Ａセロタイプ群のヒト白血球抗原セロタイプを指す。ＨＬＡ－Ａ２タンパク質（それぞれのＨＬＡ遺伝子によりコードされた）は、それぞれのクラスＩ ＭＨＣ（主要組織適合複合体）タンパク質のα鎖を構成し、これはβ２ミクログロブリンサブユニットをさらに含む。特異的なＨＬＡ－Ａ２タンパク質は、ＨＬＡ－Ａ２０１（ＨＬＡ－Ａ０２０１，ＨＬＡ－Ａ０２．０１，又はＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１とも呼ばれる）である。特定の態様では、本明細書に記載のＨＬＡ－Ａ２タンパク質はＨＬＡ－Ａ２０１である。ヒトＨＬＡ－Ａ２の例示的な配列は、配列番号２４において与えられる。

【0133】

「ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１」は、ＨＬＡ－Ａ２分子と、ＷＴ１由来のペプチド（本明細書では「ＷＴ１ペプチド」とも呼ぶ）、具体的には、ＲＭＦ又はＶＬＤペプチド（それぞれ「ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１_ＲＭＦ」及び「ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１_ＶＬＤ」）の複合体を指す。本発明で使用される二重特異性抗体は、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１_ＲＭＦ複合体又はＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１_ＶＬＤ複合体のいずれかに特異的に結合し得る。

【0134】

ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１に結合する本発明に有用なＴ細胞二重特異性抗体は、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ ２０１９／１２２０５２（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。

【0135】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、ＣＤ３に結合する第１の抗原結合部分と、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１、特にＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１_ＲＭＦに結合する第２の抗原結合部分とを含む。

【0136】

いくつかの態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号４の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２、及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む。

【0137】

いくつかの態様では、第２の抗原結合部分は、配列番号９の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１０のＨＣＤＲ２、及び配列番号１１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１３のＬＣＤＲ２、及び配列番号１４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む。

【0138】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、
（ｉ）ＣＤ３に結合し、配列番号１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号４の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２、及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第１の抗原結合部分と、
（ｉｉ）ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１に結合し、配列番号９の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１０のＨＣＤＲ２、及び配列番号１１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１３のＬＣＤＲ２、及び配列番号１４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第２の抗原結合部分と
を含む。

【0139】

いくつかの態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。いくつかの態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号７の重鎖可変領域配列と、配列番号８の軽鎖可変領域配列とを含む。

【0140】

いくつかの態様では、第２の抗原結合部分は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。いくつかの態様では、第２の抗原結合部分は、配列番号１５の重鎖可変領域配列と、配列番号１６の軽鎖可変領域配列とを含む。

【0141】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、本明細書に記載されるように、ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１並びに／又は第１のサブユニット及び第２のサブユニットで構成されるＦｃドメインに結合する第３の抗原結合部分を含む。

【0142】

好ましい態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、
（ｉ）ＣＤ３に結合し、配列番号１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２のＨＣＤＲ２、及び配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号４の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２、及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第１の抗原結合部分であって、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖の可変領域又は定常領域のいずれか、特に可変領域が交換されているクロスオーバーＦａｂ分子である、第１の抗原結合部分と、
（ｉｉ）ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１に結合し、配列番号９の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号１０のＨＣＤＲ２、及び配列番号１１のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号１３のＬＣＤＲ２、及び配列番号１４のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む、第２の抗原結合部分及び第３の抗原結合部分であって、それぞれＦａｂ分子、特に従来のＦａｂ分子である、第２の抗原結合部分及び第３の抗原結合部分と、
（ｉｉｉ）第１のサブユニット及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインと
を含み、
第２の抗原結合部分は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１の抗原結合部分のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第１の抗原結合部分は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、第３の抗原結合部分は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している。

【0143】

いくつかの態様では、（ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体の第１の抗原結合部分は、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖の可変領域が交換されているクロスオーバーＦａｂ分子であり、Ｔ細胞二重特異性抗体の第２の抗原結合部分及び（存在する場合）第３の抗原結合部分は、定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、又はヒスチジン（Ｈ）で置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、１２３位のアミノ酸は、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、又はヒスチジン（Ｈ）で置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸は、独立して、グルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、２１３位のアミノ酸は、独立して、グルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）従来のＦａｂ分子である。

【0144】

特に、上記態様では、（ｉｉ）の第２の抗原結合部分及び第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸はリジン（Ｋ）で置換されてもよく（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、位置１２３のアミノ酸はリジン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）で、特にアルギニン（Ｒ）で置換されてもよく（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、（ｉｉ）の第２のＦａｂ分子及び第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸はグルタミン酸（Ｅ）で置換されてもよく（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、位置２１３のアミノ酸はグルタミン酸（Ｅ）で置換されてもよい（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。

【0145】

いくつかの態様では、（ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体の第１の抗原結合部分は、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。いくつかの態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号７の重鎖可変領域配列と、配列番号８の軽鎖可変領域配列とを含む。

【0146】

いくつかの態様では、（ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体の第２の抗原結合部分及び（存在する場合は）第３の抗原結合部分は、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。いくつかの態様では、第２の抗原結合部分及び（存在する場合は）第３の抗原結合部分は、配列番号１５の重鎖可変領域と、配列番号１６の軽鎖可変領域とを含む。

【0147】

上記の態様によるＦｃドメインは、Ｆｃドメインに関して上に記載される特徴のすべてを単独で又は組み合わせて組み込んでもよい。

【0148】

いくつかの態様では、（ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体のＦｃドメインは、Ｆｃドメインの第１のサブユニットと第２のサブユニットの会合を促進する修飾を含み、並びに／又は、Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体への結合及び／若しくはエフェクター機能を低下させる１つ又は複数のアミノ酸置換を含む。

【0149】

いくつかの態様では、抗原結合部分及びＦｃ領域は、ペプチドリンカー、特に、配列番号１８及び配列番号２０にあるようなペプチドリンカーによって、互いに融合している。

【0150】

いくつかの態様では、（ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体は、配列番号１７の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含むポリペプチド（特に２つのポリペプチド）と、配列番号１８の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含むポリペプチドと、配列番号１９の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含むポリペプチドと、配列番号２０の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含むポリペプチドとを含む。いくつかの態様では、（ＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体は、配列番号１７の配列を含むポリペプチド（特に２つのポリペプチド）と、配列番号１８の配列を含むポリペプチドと、配列番号１９の配列を含むポリペプチドと、配列番号２０の配列を含むポリペプチドとを含む。

【0151】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体の標的細胞抗原はＣＤ２０である。

【0152】

「Ｂリンパ球抗原Ｂ１」としても知られる「ＣＤ２０」は、別途明記しない限り、霊長類（例えばヒト）、非ヒト霊長類（例えばカニクイザル）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）等の哺乳動物を含む任意の脊椎動物源由来の任意のネイティブＣＤ２０を指す。この用語は、「完全長」の、未処理ＣＤ２０、及び、細胞内での処理によりもたらされる任意の形態のＣＤ２０を包含する。この用語は、ＣＤ２０の天然に存在するバリアント、例えば、スプライス・バリアント又は対立遺伝子バリアントも包含する。いくつかの態様では、ＣＤ２０はヒトＣＤ２０である。ヒトＣＤ２０は、ＵｎｉＰｒｏｔ（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）寄託番号Ｐ１１８３６（入力バージョン２００）に記載されており，ヒトＣＤ２０のアミノ酸配列は配列番号６０にも示されている。

【0153】

ＣＤ２０に結合する本発明に有用なＴ細胞二重特異性抗体は、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ ２０１６／０２０３０９（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。

【0154】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、ＣＤ３に結合する第１の抗原結合部分及びＣＤ２０に結合する第２の抗原結合部分を含む。

【0155】

いくつかの態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号２８の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２９のＨＣＤＲ２、及び配列番号３０のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号３１の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号３２のＬＣＤＲ２、及び配列番号３３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む。

【0156】

いくつかの態様では、第２の抗原結合部分は、配列番号４８の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号４９のＨＣＤＲ２、及び配列番号５０のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号５１の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５２のＬＣＤＲ２、及び配列番号５３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む。

【0157】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、
（ｉ）ＣＤ３に結合し、配列番号２８の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２９のＨＣＤＲ２、及び配列番号３０のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号３１の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号３２のＬＣＤＲ２、及び配列番号３３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第１の抗原結合部分と、
（ｉｉ）ＣＤ２０に結合し、配列番号４８の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号４９のＨＣＤＲ２、及び配列番号５０のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号５１の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５２のＬＣＤＲ２、及び配列番号５３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第２の抗原結合部分と
を含む。

【0158】

いくつかの態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。いくつかの態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号３４の重鎖可変領域配列と、配列番号３５の軽鎖可変領域配列とを含む。

【0159】

いくつかの態様では、第２の抗原結合部分は、配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号５５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。いくつかの態様では、第２の抗原結合部分は、配列番号５４の重鎖可変領域配列と、配列番号５５の軽鎖可変領域配列とを含む。

【0160】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、本明細書に記載されるように、ＣＤ２０並びに／又は第１のサブユニット及び第２のサブユニットで構成されるＦｃドメインに結合する第３の抗原結合部分を含む。

【0161】

好ましい態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、
（ｉ）ＣＤ３に結合し、配列番号２８の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２９のＨＣＤＲ２、及び配列番号３０のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号３１の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号３２のＬＣＤＲ２、及び配列番号３３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む、第１の抗原結合部分であって、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖の可変領域又は定常領域のいずれか、特に可変領域が交換されているクロスオーバーＦａｂ分子である、第１の抗原結合部分と、
（ｉｉ）ＣＤ２０に結合し、配列番号４８の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号４９のＨＣＤＲ２、及び配列番号５０のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号５１の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号５２のＬＣＤＲ２、及び配列番号５３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む、第２の抗原結合部分及び第３の抗原結合部分であって、それぞれＦａｂ分子、特に従来のＦａｂ分子である、第２の抗原結合部分及び第３の抗原結合部分と、
（ｉｉｉ）第１のサブユニット及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインと
を含み、
第２の抗原結合部分は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１の抗原結合部分のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第１の抗原結合部分は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、第３の抗原結合部分は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している。

【0162】

いくつかの態様では、（ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体の第１の抗原結合部分は、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖の可変領域が交換されているクロスオーバーＦａｂ分子であり、Ｔ細胞二重特異性抗体の第２の抗原結合部分及び（存在する場合）第３の抗原結合部分は、定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、又はヒスチジン（Ｈ）で置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、１２３位のアミノ酸は、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、又はヒスチジン（Ｈ）で置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸は、独立して、グルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、２１３位のアミノ酸は、独立して、グルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）従来のＦａｂ分子である。

【0163】

特に、上記態様では、（ｉｉ）の第２の抗原結合部分及び第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸はリジン（Ｋ）で置換されてもよく（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、位置１２３のアミノ酸はリジン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）で、特にアルギニン（Ｒ）で置換されてもよく（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、（ｉｉ）の第２の抗原結合部分及び第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸はグルタミン酸（Ｅ）で置換されてもよく（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、位置２１３のアミノ酸はグルタミン酸（Ｅ）で置換されてもよい（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。

【0164】

いくつかの態様では、（ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体の第１の抗原結合部分は、配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。いくつかの態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号３４の重鎖可変領域配列と、配列番号３５の軽鎖可変領域配列とを含む。

【0165】

いくつかの態様では、（ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体の第２の抗原結合部分及び（存在する場合は）第３の抗原結合部分は、配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号５５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。いくつかの態様では、第２の抗原結合部分及び（存在する場合は）第３の抗原結合部分は、配列番号５４の重鎖可変領域と、配列番号５５の軽鎖可変領域とを含む。

【0166】

上記の態様によるＦｃドメインは、Ｆｃドメインに関して上に記載される特徴のすべてを単独で又は組み合わせて組み込んでもよい。

【0167】

いくつかの態様では、（ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体のＦｃドメインは、Ｆｃドメインの第１のサブユニットと第２のサブユニットの会合を促進する修飾を含み、並びに／又は、Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体への結合及び／若しくはエフェクター機能を低下させる１つ又は複数のアミノ酸置換を含む。

【0168】

いくつかの態様では、抗原結合部分及びＦｃ領域は、ペプチドリンカー、特に、配列番号５７及び配列番号５９にあるようなペプチドリンカーによって、互いに融合している。

【0169】

いくつかの態様では、（ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体は、配列番号５６の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含むポリペプチド（特に２つのポリペプチド）と、配列番号５７の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含むポリペプチドと、配列番号５８の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含むポリペプチドと、配列番号５９の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含むポリペプチドとを含む。いくつかの態様では、（ＣＤ２０及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体は、配列番号５６の配列を含むポリペプチド（特に２つのポリペプチド）と、配列番号５７の配列を含むポリペプチドと、配列番号５８の配列を含むポリペプチドと、配列番号５９の配列を含むポリペプチドとを含む。

【0170】

好ましい態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体はグロフィタマブ（ＷＨＯ Ｄｒｕｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｎｏｎｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ Ｎａｍｅｓ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）、Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ ＩＮＮ：Ｌｉｓｔ ８３，２０２０，ｖｏｌ．３４，ｎｏ．１，ｐ．３９）である。

【0171】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体の標的細胞抗原はＣＤ１９である。

【0172】

「ＣＤ１９」は表面抗原分類１９を表し（Ｂリンパ球抗原ＣＤ１９又はＢリンパ球表面抗原Ｂ４としても知られる）、特に明記しない限り、霊長類（例えばヒト）、非ヒト霊長類（例えばカニクイザル）及び齧歯類（例えばマウスやラット）などの哺乳動物を含む脊椎動物源からの天然ＣＤ１９を指す。この用語は、「完全長」の、未処理ＣＤ１９、及び、細胞内での処理によりもたらされる任意の形態のＣＤ１９を包含する。この用語は、ＣＤ１９の天然に存在するバリアント、例えば、スプライス・バリアント又は対立遺伝子バリアントも包含する。いくつかの態様では、ＣＤ１９はヒトＣＤ１９である。ヒトタンパク質ＵｎｉＰｒｏｔ（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）アクセッション番号Ｐ１５３９１（バージョン２１１）又はＮＣＢＩ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）ＲｅｆＳｅｑ ＮＰ＿００１７６１．３を参照のこと。ヒトＣＤ１９の例示的な配列は、配列番号８１において与えられる。

【0173】

ＣＤ１９に結合する本発明に有用なＴ細胞二重特異性抗体は、例えば欧州特許出願第２０１８１０５６．１号及び第２０１８０９６８．８号（それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。

【0174】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、ＣＤ３に結合する第１の抗原結合部分及びＣＤ１９に結合する第２の抗原結合部分を含む。

【0175】

いくつかの態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号６１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２９のＨＣＤＲ２、及び配列番号６２のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号３１の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号３２のＬＣＤＲ２、及び配列番号３３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む。

【0176】

他の態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号６４の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２９のＨＣＤＲ２、及び配列番号６５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号３１の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号３２のＬＣＤＲ２、及び配列番号３３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む。

【0177】

いくつかの態様では、第２の抗原結合部分は、配列番号６７の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号６８のＨＣＤＲ２、及び配列番号６９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号７０の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号７１のＬＣＤＲ２、及び配列番号７２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む。

【0178】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、
（ｉ）ＣＤ３に結合し、配列番号６１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２９のＨＣＤＲ２、及び配列番号６２のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、又は配列番号６４のＨＣＤＲ１、配列番号２９のＨＣＤＲ２、及び配列番号６５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号３１の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号３２のＬＣＤＲ２、及び配列番号３３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第１の抗原結合部分と、
（ｉｉ）ＣＤ１９に結合し、配列番号６７の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号６８のＨＣＤＲ２、及び配列番号６９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号７０の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号７１のＬＣＤＲ２、及び配列番号７２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第２の抗原結合部分と
を含む。

【0179】

いくつかの態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である重鎖可変領域配列又は配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。いくつかの態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号６３の重鎖可変領域配列又は配列番号６６の重鎖可変領域配列と、配列番号３５の軽鎖可変領域配列とを含む。

【0180】

いくつかの態様では、第２の抗原結合部分は、配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。いくつかの態様では、第２の抗原結合部分は、配列番号７３の重鎖可変領域配列と、配列番号７４の軽鎖可変領域配列とを含む。

【0181】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、本明細書に記載されるように、ＣＤ１９並びに／又は第１及び第２のサブユニットで構成されるＦｃドメインに結合する第３の抗原結合部分を含む。

【0182】

好ましい態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、
（ｉ）ＣＤ３に結合し、配列番号６１の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号２９のＨＣＤＲ２、及び配列番号６２のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、又は配列番号６４のＨＣＤＲ１、配列番号２９のＨＣＤＲ２、及び配列番号６５のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号３１の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号３２のＬＣＤＲ２、及び配列番号３３のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、第１の抗原結合部分であって、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖の可変領域又は定常領域のいずれか、特に可変領域が交換されているクロスオーバーＦａｂ分子である、第１の抗原結合部分と、
（ｉｉ）ＣＤ１９に結合し、配列番号６７の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号６８のＨＣＤＲ２、及び配列番号６９のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号７０の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号７１のＬＣＤＲ２、及び配列番号７２のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む、第２の抗原結合部分及び第３の抗原結合部分であって、それぞれＦａｂ分子、特に従来のＦａｂ分子である、第２の抗原結合部分及び第３の抗原結合部分と、
（ｉｉｉ）第１のサブユニット及び第２のサブユニットから構成されるＦｃドメインと
を含み、
第２の抗原結合部分は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端において第１の抗原結合部分のＦａｂ重鎖のＮ末端に融合しており、第１の抗原結合部分は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第１のサブユニットのＮ末端に融合しており、第３の抗原結合部分は、Ｆａｂ重鎖のＣ末端においてＦｃドメインの第２のサブユニットのＮ末端に融合している。

【0183】

いくつかの態様では、（ＣＤ１９及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体の第１の抗原結合部分は、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖の可変領域が交換されているクロスオーバーＦａｂ分子であり、Ｔ細胞二重特異性抗体の第２の抗原結合部分及び（存在する場合）第３の抗原結合部分は、定常ドメインＣＬにおいて、１２４位のアミノ酸が、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、又はヒスチジン（Ｈ）で置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、１２３位のアミノ酸は、独立して、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、又はヒスチジン（Ｈ）で置換されており（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、定常ドメインＣＨ１において、１４７位のアミノ酸は、独立して、グルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）で置換されており（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、２１３位のアミノ酸は、独立して、グルタミン酸（Ｅ）、又はアスパラギン酸（Ｄ）で置換されている（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）従来のＦａｂ分子である。

【0184】

特に、上記態様では、（ｉｉ）の第２の抗原結合部分及び第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＬにおいて、位置１２４のアミノ酸はリジン（Ｋ）で置換されてもよく（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、位置１２３のアミノ酸はリジン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）で、特にアルギニン（Ｒ）で置換されてもよく（Ｋａｂａｔによるナンバリング）、（ｉｉ）の第２の抗原結合部分及び第３のＦａｂ分子の定常ドメインＣＨ１において、位置１４７のアミノ酸はグルタミン酸（Ｅ）で置換されてもよく（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）、位置２１３のアミノ酸はグルタミン酸（Ｅ）で置換されてもよい（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）。

【0185】

いくつかの態様では、（ＣＤ１９及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体の第１の抗原結合部分は、配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である重鎖可変領域配列又は配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。いくつかの態様では、第１の抗原結合部分は、配列番号６３の重鎖可変領域配列又は配列番号６６の重鎖可変領域配列と、配列番号３５の軽鎖可変領域配列とを含む。

【0186】

いくつかの態様では、（ＣＤ１９及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体の第２の抗原結合部分及び（存在する場合は）第３の抗原結合部分は、配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列と、配列番号７４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列とを含む。いくつかの態様では、第２の抗原結合部分及び（存在する場合は）第３の抗原結合部分は、配列番号７３の重鎖可変領域と、配列番号７４の軽鎖可変領域とを含む。

【0187】

上記の態様によるＦｃドメインは、Ｆｃドメインに関して上に記載される特徴のすべてを単独で又は組み合わせて組み込んでもよい。

【0188】

いくつかの態様では、（ＣＤ１９及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体のＦｃドメインは、Ｆｃドメインの第１のサブユニットと第２のサブユニットの会合を促進する修飾を含み、並びに／又は、Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体への結合及び／若しくはエフェクター機能を低下させる１つ又は複数のアミノ酸置換を含む。

【0189】

いくつかの態様では、抗原結合部分及びＦｃ領域は、ペプチドリンカー、特に、配列番号７５、配列番号７６及び配列番号７７にあるようなペプチドリンカーによって、互いに融合している。

【0190】

いくつかの態様では、（ＣＤ１９及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体は、配列番号７８の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含むポリペプチド（特に２つのポリペプチド）と、配列番号７５の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含むポリペプチドと、配列番号７７の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含むポリペプチドと、配列番号７９の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含むポリペプチドとを含む。いくつかの態様では、（ＣＤ１９及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体は、配列番号７８の配列を含むポリペプチド（特に２つのポリペプチド）と、配列番号７５の配列を含むポリペプチドと、配列番号７７の配列を含むポリペプチドと、配列番号７９の配列を含むポリペプチドとを含む。

【0191】

他の態様では、（ＣＤ１９及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体は、配列番号７８の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含むポリペプチド（特に２つのポリペプチド）と、配列番号７６の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含むポリペプチドと、配列番号７７の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含むポリペプチドと、配列番号８０の配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一の配列を含むポリペプチドとを含む。いくつかの態様では、（ＣＤ１９及びＣＤ３に結合する）Ｔ細胞二重特異性抗体は、配列番号７８の配列を含むポリペプチド（特に２つのポリペプチド）と、配列番号７６の配列を含むポリペプチドと、配列番号７７の配列を含むポリペプチドと、配列番号８０の配列を含むポリペプチドとを含む。

【0192】

いくつかの態様では、（Ｔ細胞二重特異性抗体によって治療される）疾患はがんである。

【0193】

本明細書で使用される場合、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」（及びその文法的な変化形、例えば、「治療（ｔｒｅａｔ）する」又は「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」）は、治療される個体において疾患の本来の経過を変える試行における臨床的介入を指し、予防のために、又は臨床病理の経過の間に行うことができる。治療の所望の効果としては、疾患の発症又は再発を予防すること、症候の軽減、疾患の任意の直接的又は間接的な病理学的結果の減弱、転移を予防すること、疾患進行率を低下させること、病状の寛解又は緩和、及び回復又は改良された予後が挙げられる。

【0194】

「がん」という用語は、制御されていない細胞増殖を典型的に特徴とする哺乳動物における生理学的症状を指す。がんの例には、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が含まれるが、これらに限定されない。がんの非限定的な例には、白血病などの血液がん、膀胱がん、脳がん、頭頸部がん、膵臓がん、胆管がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、子宮がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、食道がん、結腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、胃がん、前立腺がん、皮膚がん、扁平細胞癌腫、肉腫、骨がん、及び腎臓がんが含まれる。他の細胞増殖障害には、限定されないが、腹部、骨、乳房、消化系、肝臓、膵臓、腹膜、内分泌腺（副腎、副甲状腺、脳下垂体、睾丸、卵巣、胸腺、甲状腺）、眼、頭頸部、神経系（中枢及び末梢）、リンパ系、骨盤、皮膚、軟組織、脾臓、胸部領域、及び泌尿生殖器系に位置する新生物が含まれる。前がんの症状又は病変及びがん転移も含まれる。

【0195】

いくつかの態様では、がんは、Ｔ細胞二重特異性抗体の標的細胞抗原を発現するがんである。

【0196】

いくつかの態様では、がんは癌胎児性抗原（ＣＥＡ）発現がんである（特に、Ｔ細胞二重特異性抗体の標的細胞抗原がＣＥＡである態様において）。「ＣＥＡ陽性がん」又は「ＣＥＡ発現がん」とは、がん細胞でのＣＥＡの発現又は過剰発現により特徴づけられるがんを意味する。ＣＥＡの発現は、例えば、免疫組織化学（ＩＨＣ）又はフローサイトメトリー法によって決定され得る。いくつかの態様では、がんはＣＥＡを発現する。いくつかの態様では、がんは、ＣＥＡに特異的な抗体を使用する免疫組織化学（ＩＨＣ）によって決定されるように、腫瘍細胞の少なくとも２０％、好ましくは少なくとも５０％又は少なくとも８０％でＣＥＡを発現する。

【0197】

いくつかの態様では、がんは、結腸がん、肺がん、卵巣がん、胃がん、膀胱がん、膵臓がん、子宮内膜がん、乳がん、腎臓がん、食道がん、前立腺がん、又は本明細書に記載の他のがんである。

【0198】

特定の態様では、がんは、結腸直腸がん、肺がん、膵臓がん、乳がん、及び胃がんからなる群から選択されるがんである。好ましい態様では、がんは結腸直腸がん（ＣＲＣ）である。いくつかの態様では、結腸直腸がんは転移性結腸直腸がん（ｍＣＲＣ）である。いくつかの態様では、結腸直腸がんは、マイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）結腸直腸がんである。いくつかの態様では、結腸直腸がんは、マイクロサテライト安定性転移性結腸直腸がん（ＭＳＳ ｍＣＲＣ）である。

【0199】

いくつかの態様では、がんはウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）発現がんである（特に、Ｔ細胞二重特異性抗体の標的細胞抗原がＨＬＡ－Ａ２／ＷＴ１である態様において）。「ＷＴ１陽性がん」又は「ＷＴ１発現がん」とは、がん細胞でのＷＴ１の発現又は過剰発現により特徴づけられるがんを意味する。ＷＴ１の発現は、例えば、定量的リアルタイムＰＣＲ（ＷＴ１ ｍＲＮＡレベルを測定する）、フローサイトメトリー、免疫組織化学（ＩＨＣ）、又はウエスタンブロットアッセイによって決定され得る。いくつかの態様では、がんはＷＴ１を発現する。いくつかの態様では、がんは、ＷＴ１に特異的な抗体を使用する免疫組織化学（ＩＨＣ）によって決定されるように、腫瘍細胞の少なくとも２０％、好ましくは少なくとも５０％又は少なくとも８０％でＷＴ１を発現する。

【0200】

いくつかの態様では、がんは血液がんである。血液がんの非限定的な例には、白血病（例えば、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ））、リンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫）、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫（ＭＭ））、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、及び骨髄増殖性疾患が含まれる。

【0201】

特定の態様では、がんは、血液がん（白血病など）、腎臓がん、膀胱がん、皮膚がん、肺がん、結腸直腸がん、乳がん、脳がん、頭頸部がん、及び前立腺がんからなる群より選択される。

【0202】

特定の態様では、がんは血液がん、特に白血病、最も具体的には急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）又は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。好ましい態様では、がんは急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。さらなる特定の態様では、がんは骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。

【0203】

いくつかの態様では、がんはＣＤ２０発現がんである（特に、Ｔ細胞二重特異性抗体の標的細胞抗原がＣＤ２０である態様において）。「ＣＤ２０陽性がん」又は「ＣＤ２０発現がん」とは、がん細胞でのＣＤ２０の発現又は過剰発現により特徴づけられるがんを意味する。ＣＤ２０の発現は、例えば、定量的リアルタイムＰＣＲ（ＣＤ２０ ｍＲＮＡレベルを測定する）、フローサイトメトリー、免疫組織化学（ＩＨＣ）、又はウエスタンブロットアッセイによって決定され得る。いくつかの態様では、がんはＣＤ２０を発現する。いくつかの態様では、がんは、ＣＤ２０に特異的な抗体を使用する免疫組織化学（ＩＨＣ）によって決定されるように、腫瘍細胞の少なくとも２０％、好ましくは少なくとも５０％又は少なくとも８０％でＣＤ２０を発現する。

【0204】

いくつかの態様では、がんはＢ細胞がん、特にＣＤ２０陽性Ｂ細胞がんである。いくつかの態様では、がんは、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、又はホジキンリンパ腫（ＨＬ）からなる群から選択される。特定の態様では、がんは、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）及び辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）からなる群から選択される。より特定の態様では、がんはＮＨＬ、特に再発性／難治性（ｒ／ｒ）ＮＨＬである。いくつかの態様では、がんはＤＬＢＣＬである。いくつかの態様では、がんはＦＬである。いくつかの態様では、がんはＭＣＬである。いくつかの態様では、がんはＭＺＬである。

【0205】

いくつかの態様では、がんはＣＤ１９発現がんである（特に、Ｔ細胞二重特異性抗体の標的細胞抗原がＣＤ１９である態様において）。「ＣＤ１９陽性がん」又は「ＣＤ１９発現がん」とは、がん細胞でのＣＤ１９の発現又は過剰発現により特徴づけられるがんを意味する。ＣＤ１９の発現は、例えば、定量的リアルタイムＰＣＲ（ＣＤ１９ ｍＲＮＡレベルを測定する）、フローサイトメトリー、免疫組織化学（ＩＨＣ）、又はウエスタンブロットアッセイによって決定され得る。いくつかの態様では、がんはＣＤ１９を発現する。いくつかの態様では、がんは、ＣＤ１９に特異的な抗体を使用する免疫組織化学（ＩＨＣ）によって決定されるように、腫瘍細胞の少なくとも２０％、好ましくは少なくとも５０％又は少なくとも８０％でＣＤ１９を発現する。

【0206】

いくつかの態様では、がんはＢ細胞がん、特にＣＤ１９陽性Ｂ細胞がんである。いくつかの態様、がんは、Ｂ細胞リンパ腫又はＢ細胞白血病である。いくつかの態様では、がんは、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）又は慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である。

【0207】

いくつかの態様では、がんはＴ細胞二重特異性抗体によって治療可能である。いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体は、がんの治療のために示される。

【0208】

いくつかの態様では、がんは固形腫瘍がんである。「固形腫瘍がん」とは、（例えば、一般的には固形腫瘍を形成しない白血病などの血液がんとは対照的に）肉腫又は癌腫などの患者の体の特定の位置に位置する別個の腫瘍塊（腫瘍転移も含む）を形成する悪性腫瘍を意味する。がんの非限定的な例には、膀胱がん、脳がん、頭頸部がん、膵臓がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、子宮がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、食道がん、結腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、胃がん、前立腺がん、皮膚がん、扁平細胞癌腫、骨がん、肝臓がん及び腎臓がんが含まれる。本発明の文脈で企図される他の固形腫瘍がんには、限定されないが、腹部、骨、乳房、消化器系、肝臓、膵臓、腹膜、内分泌腺（副腎、副甲状腺、脳下垂体、睾丸、卵巣、胸腺、甲状腺）、眼、頭頸部、神経系（中枢及び末梢）、リンパ系、骨盤、皮膚、軟組織、筋肉、脾臓、胸部領域及び泌尿生殖器系に位置する新生物が含まれる。前がんの症状又は病変及びがん転移も含まれる。

【0209】

Ｔ細胞二重特異性抗体の標的細胞抗原がＣＤ１９であるいくつかの態様では、（Ｔ細胞二重特異性抗体によって治療される）疾患は自己免疫疾患である。特定の態様では、自己免疫疾患はループス、特に全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）又はループス腎炎（ＬＮ）である。

【0210】

本明細書における「個体」又は「対象」は哺乳動物である。哺乳動物としては、限定されないが、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及びサル等の非ヒト霊長類）、ウサギ、齧歯（例えば、マウス及びラット）が挙げられる。特定の態様では、個体又は対象は、ヒトである。いくつかの態様では、個体は、疾患、特にＴ細胞二重特異性抗体によって治療可能又は治療される疾患を有する。いくつかの態様では、個体は、がん、特にＴ細胞二重特異性抗体によって治療可能又は治療されるがんを有する。特に、本明細書の個体は、がんの１つ又は複数の徴候、症候、又は他の指標を経験しているか又は経験したことのある、治療に適格な任意の単一のヒト対象である。いくつかの態様では、個体は、がんを有するか、又はがん、特に本明細書において上記で記載されるがんのいずれかと診断されている。いくつかの態様では、個体は、局所進行若しくは転移性がんを有するか、又は局所進行若しくは転移性がんを有すると診断されている。個体は、Ｔ細胞二重特異性抗体又は別の薬物で以前に治療されていても、治療されていなくてもよい。特定の態様では、患者は、Ｔ細胞二重特異性抗体で以前に治療されていない。患者は、Ｔ細胞二重特異性抗体療法が開始される前に、Ｔ細胞二重特異性抗体以外の一又は複数の薬物を含む療法で治療されていてもよい。

【0211】

いくつかの態様では、個体は、１つ又は複数のサイトカインの血清レベルが上昇しているいくつかの態様では、上記血清レベルの上昇は、個体へのＴ細胞二重特異性抗体の投与に関連する。上記血清レベルの上昇は、特に、健康な個体の血清レベル、及び／又はＴ細胞二重特異性抗体を投与していない個体（同じ個体を含む）の血清レベルと比較した場合である（すなわち、そのような場合、血清レベルは、Ｔ細胞二重特異性抗体の投与なしの血清レベルと比較して上昇する）。いくつかの態様では、上記１つ又は複数のサイトカインは、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６及びＩＬ－１βからなる群から選択される。

【0212】

本発明の態様のいずれかによるサイトカインは、好ましくは炎症促進性サイトカイン、特にＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６及びＩＬ－１βからなる群から選択される１つ又は複数のサイトカインである。いくつかの態様では、サイトカインはＩＬ－２である。いくつかの態様では、サイトカインはＴＮＦ－αである。いくつかの態様では、サイトカインはＩＦＮ－γである。いくつかの態様では、サイトカインはＩＬ－６である。いくつかの態様では、サイトカインはＩＬ－１βである。

【0213】

好ましくは、本発明のいずれかの態様によるＴ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ４^＋又はＣＤ８^＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ４^＋Ｔ細胞である。

【0214】

いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体による治療又はその投与は、個体において応答をもたらし得る。いくつかの態様では、応答は、完全奏功であり得る。いくつかの態様では、応答は、治療の中止後の持続的応答であり得る。いくつかの態様では、応答は、治療の中止後に持続される完全奏功であり得る。他の態様では、応答は、部分奏功であり得る。いくつかの態様では、応答は、治療の中止後に持続される部分奏功であり得る。いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体及びＴＫＩでの治療又はそれらの投与は、Ｔ細胞二重特異性抗体単独（すなわち、ＴＫＩ不使用）での治療又はそれらの投与と比較して、応答を改善し得る。いくつかの態様では、Ｔ細胞二重特異性抗体及びＴＫＩの治療及び投与は、Ｔ細胞二重特異性抗体単独（すなわち、ＴＫＩ伝達阻害剤不使用）で治療された対応する患者集団と比較して、患者集団の奏効率を増加させ得る。

【0215】

Ｔ細胞二重特異性抗体は、単独で、又は他の薬剤と組み合わせて治療に用いることができる。例えば、Ｔ細胞二重特異性抗体は、少なくとも１つの追加の治療剤と共投与されてもよい。ある態様では、追加の治療剤は、抗がん剤、例えば、化学療法剤、腫瘍細胞増殖の阻害剤、又は腫瘍細胞アポトーシスのアクチベーターである。

【図面の簡単な説明】

【0216】

【図1】１００ｎＭ～０ｎＭの範囲の異なるダサチニブ濃度の存在下でのリアルタイム死滅化：１０ｎＭのＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢによる、ＲＭＦペプチドを負荷した赤色蛍光Ａ３７５細胞（Ａ）、及び、１ｎＭのＣＥＡ－ＴＣＢによる、赤色蛍光ＭＫＮ４５細胞（Ｂ）。（Ａ）Ａ３７５ ＮｕｃＬｉｇｈｔ Ｒｅｄ（ＮＬＲ）標的細胞にＲＭＦペプチドをパルスし（死滅化アッセイの２時間前）、ＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ１－ＴＣＢ、ダサチニブ（ｄａｓａ）及びＰＢＭＣと共培養し、エフェクター対標的比（Ｅ：Ｔ）＝１０：１（Ｅ：Ｔ＝５０ ０００個のＰＢＭＣ：５０００個の標的細胞）であった。死滅化を、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）によって追跡した（３時間ごとに１スキャン、ズーム１０倍、位相及び赤４００ｍｓの取得時間）。％死滅は、各時点について、全赤色領域をｔ＝０時間の値及び標的細胞＋ＰＢＭＣ＋ダサチニブ（ＴＣＢなし）対照ウェルで正規化することによって測定した。１ドナーについて、技術的反復実験の平均＋／－ＳＥＭ。（Ｂ）ＭＫＮ４５ ＮＬＲ標的細胞をＣＥＡ ＴＣＢ、ダサチニブ及びＰＢＭＣと共培養した。Ｅ：Ｔ＝１０：１（Ｅ：Ｔ＝５０ ０００個のＰＢＭＣ：５０００個の標的細胞）。死滅化を、Ｉｎｃｕｃｙｔｅによって追跡した（３時間ごとに１スキャン、ズーム１０倍、位相及び赤４００ｍｓの取得時間）。％死滅は、各時点について、全赤色領域をｔ＝０時間の値及び標的細胞＋ＰＢＭＣ＋ダサチニブ対照ウェルで正規化することによって測定した。１ドナーについて、技術的反復実験の平均＋／－ＳＥＭ。

【図2】サイトカイン放出。図１のアッセイの終点（９６時間）で上清を回収し、サイトカイン（（Ａ）ＩＦＮγ、（Ｂ）ＩＬ－２、（Ｃ）ＴＮＦ－α）をマルチプレックスサイトカイン分析（Ｌｕｍｉｎｅｘ）によって測定した。１ｎＭ ＣＥＡ－ＴＣＢ、１ドナー。

【図3】インビトロ死滅化アッセイの設定及びタイムライン。ＰＢＭＣをＳＫＭ－１標的細胞（Ｅ：Ｔ＝１０：１）及び１０ｎＭのＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢと共培養した。ダサチニブ（１００ｎＭ）を活性化の２４時間後に添加した。ＰＢＭＣをＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識して、Ｔ細胞増殖評価を可能にした。

【図4】Ｔ細胞活性化。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ２５及びＣＤ６９の発現を、図３のアッセイに従って、ダサチニブの存在下及び非存在下での活性化の２４時間後及び４８時間後にＦＡＣＳによって測定した。（Ａ）ＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ２５発現、（Ｂ）ＣＤ４＋Ｔ細胞上のＣＤ２５発現、（Ｃ）ＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ６９発現、（Ｄ）ＣＤ４＋Ｔ細胞上のＣＤ６９発現。

【図5】サイトカイン放出。２４時間及び４８時間で図３のアッセイから上清を回収し、マルチプレックスキット（Ｌｕｍｉｎｅｘ）を使用してサイトカイン（ＩＦＮ－γ（Ａ）、ＴＮＦ－α（Ｂ）及びＩＬ－２（Ｃ））を測定した。３ドナーの、平均＋／－ＳＤ。

【図6】Ｔ細胞増殖。図３のアッセイにおいて、ＣＤ４＋（Ａ）及びＣＤ８＋（Ｂ）Ｔ細胞の増殖を、ＣＴＶ色素希釈の分析によって、ＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１ ＴＣＢによる刺激の１４４時間後にＦＡＣＳによって測定した。

【図7】ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞のカウント。図３のアッセイでは、ＣＤ４＋（Ａ）及びＣＤ８＋（Ｂ）Ｔ細胞のカウントを、ＦＡＣＳによって測定した。３ドナーの平均＋／－ＳＤ。対応のあるｔ検定、片側ｐ値：０．１２３４（ｎｓ）、０．０３３２（^＊）、０．００２１（^＊＊）、０．０００２（^＊＊＊）、＜０．０００１（^＊＊＊＊）。

【図8】インビトロ死滅化アッセイの設定及びタイムライン。ＰＢＭＣを、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）標識ＳＫＭ－１標的細胞（Ｅ：Ｔ＝５：１）及び１０ｎＭのＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢと２０時間共培養した。活性化ＰＢＭＣを洗浄し、１００ｎＭダサチニブの存在下又は非存在下で、新鮮なＣＴＶ標識ＳＫＭ－１標的細胞（Ｅ：Ｔ＝５：１）上で１０ｎＭのＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢにより再刺激した。

【図9】ＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１ ＴＣＢで刺激した後かつ図８のアッセイに従ってダサチニブを含む又は含まないＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢで再刺激する前の２０時間でのＴ細胞活性化。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ６９及びＣＤ２５発現をＦＡＣＳによって測定した。データは、３ドナーの平均＋／－ＳＥＭとして示される。（Ａ）ＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ６９発現、（Ｂ）ＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ２５発現、（Ｃ）ＣＤ４＋Ｔ細胞上のＣＤ６９発現、（Ｄ）ＣＤ４＋Ｔ細胞上のＣＤ２５発現。

【図10】ダサチニブ非存在下で１０ｎＭのＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢを用いた１回目の刺激時（左）と、１００ｎＭダサチニブ存在下で１０ｎＭのＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢを用いた２回目の刺激時（右）のＳＫＭ－１標的細胞生存率。標的細胞生存率を、図８のアッセイにおいて４４時間後にＦＡＣＳによって測定した。死滅ＣＦＳＥ標識ＳＫＭ－１細胞を、陽性近赤外（ＮＩＲ）細胞（左側）でゲーティングした。死滅ＣＴＶ標識ＳＫＭ－１細胞を陽性ＮＩＲ細胞でゲーティングした（右側）。

【図11】図８のアッセイにおけるダサチニブの存在下及び非存在下での１回目の刺激及び２回目の刺激のために使用された死んだＣＦＳＥ及びＣＴＶ ＳＫＭ－１細胞に対するＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢ用量応答。３ドナーの平均＋／－ＳＥＭ、両側対応のｔ検定（各濃度について）、両側ｐ値：０．１２３４（ｎｓ）、０．０３３２（＊）、０．００２１（^＊＊）、０．０００２（^＊＊＊）、＜０．０００１（^＊＊＊＊）。

【図12】ダサチニブを含む又は含まないＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢによる二次刺激後のサイトカイン放出。図８の死滅化アッセイからの上清を、二次刺激の２４時間後に収集し、ＩＦＮ－γ（Ａ）、ＴＮＦ－α（Ｂ）及びＩＬ－２（Ｃ）をマルチプレックスサイトカイン（ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ｃｙｔｏｋｉｎｅ）キット（Ｌｕｍｉｎｅｘ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて測定した。ｎ＝３ドナー。

【図13】Ｔ細胞脱顆粒を評価するためのインビトロ死滅化アッセイの設定及びタイムライン。ＰＢＭＣを、１００ｎＭダサチニブの存在下及び非存在下において、ＳＫＭ－１標的細胞（Ｅ：Ｔ＝５：１）及び１０ｎＭのＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢと共培養した。Ｇｏｌｇｉｓｔｏｐ及びＧｏｌｇｉｐｌｕｇ（両方ともＢＤ）並びにＣＤ１０７ａ抗体を、サイトカインの外在化を防止するためにＴＣＢによる活性化の３時間後に添加した。

【図14】図１３のアッセイにおける、ある代表的なドナーについてのダサチニブの存在下及び非存在下でのＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の中のＣＤ１０７ａ＋集団。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ１０７ａの発現を２４時間でＦＡＣＳによって測定した。

【図15】図１３のアッセイにおけるダサチニブの存在下及び非存在下でのＣＤ４＋（Ａ）Ｔ細胞及びＣＤ８＋（Ｂ）Ｔ細胞の中のＣＤ１０７ａ＋細胞のパーセンテージ。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ１０７ａの発現を２４時間でＦＡＣＳによって測定した。３ドナーの平均＋／－ＳＤ。

【図16】インビトロ死滅化アッセイの設定及びタイムライン。ＰＢＭＣを、ＭＫＮ４５ ＮＬＲ（Ｅ：Ｔ＝１０：１）標的細胞上で１ｎＭのＣＥＡ－ＴＣＢにより９６時間刺激した。活性化ＰＢＭＣを洗浄し、２５ｎＭダサチニブの存在下で７２時間、新しいＭＫＮ４５ ＮＬＲ標的細胞（Ｅ：Ｔ＝１０：１）上で１ｎＭのＣＥＡ－ＴＣＢにより再刺激した。活性化ＰＢＭＣを洗浄してダサチニブを除去し、１ｎＭのＣＥＡ－ＴＣＢ（「オン／オフ／オン」、表の上段参照）により新しいＭＫＮ４５ ＮＬＲ標的細胞（Ｅ：Ｔ＝１０：１）上で再刺激し、又はその逆を行なった（「オフ／オン／オフ」、表の下段参照）。死滅化をＩｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）によって追跡した。

【図17】図１６のアッセイにおける、１回目の刺激時には２５ｎＭのダサチニブの存在下（０～７２時間）、及び再刺激時には２５ｎＭのダサチニブの非存在下（９６～１７０時間）でのＣＥＡ－ＴＣＢによるＭＫＮ４５ ＮＬＲ標的細胞のリアルタイム死滅化（「オフ／オン」）。

【図18】図１６のアッセイにおける、２５ｎＭダサチニブの存在下での１回目の刺激後及びダサチニブの非存在下での２回目の刺激後のアッセイの上清中のサイトカインレベル（「オフ／オン」）。サイトカイン（（Ａ）ＩＦＮ－γ、（Ｂ）ＩＬ－２、（Ｃ）ＴＮＦ－α）は、マルチプレックスサイトカインキット（Ｌｕｍｉｎｅｘ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて測定した。１ドナー。

【図19】図１６のアッセイにおけるＣＥＡ－ＴＣＢによるＭＫＮ４５ ＮＬＲ標的細胞のリアルタイム死滅化（「オン／オフ／オン」）。

【図20】図１６のアッセイにおける、２５ｎＭダサチニブの非存在下での１回目の刺激後及び２５ｎＭダサチニブの存在下での２回目の刺激後のアッセイの上清中のサイトカインレベル（「オン／オフ」）。サイトカイン（（Ａ）ＩＦＮ－γ、（Ｂ）ＩＬ－２、（Ｃ）ＴＮＦ－α）は、マルチプレックスサイトカインキット（Ｌｕｍｉｎｅｘ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて測定した。１ドナー。

【図21】ＣＥＡ－ＴＣＢ媒介性の標的細胞死滅化。（Ａ）ＰＢＭＣを、ダサチニブの存在下及び非存在下において、ＭＫＮ４５ ＮＬＲ（Ｅ：Ｔ＝１０：１）標的細胞上で１ｎＭのＣＥＡ－ＴＣＢにより９６時間刺激した。（Ｂ）活性化ＰＢＭＣを洗浄してダサチニブを除去し、新しいＭＫＮ４５ ＮＬＲ標的細胞（Ｅ：Ｔ＝１０：１）上で１ｎＭのＣＥＡ－ＴＣＢにより再刺激した。死滅化をＩｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）によって追跡した。

【図22】サイトカイン放出。図１６のアッセイにおいて１回目の刺激後及び２回目の刺激後に上清を回収し、マルチプレックスサイトカインキット（Ｌｕｍｉｎｅｘ）を使用してサイトカイン（（Ａ）ＴＮＦ－α、（Ｂ）ＩＦＮ－γ、（Ｃ）ＩＬ－２）を測定した。

【図23】インビトロ死滅化アッセイの設定及びタイムライン。ＰＢＭＣを、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）標識Ｚ１３８標的細胞（Ｅ：Ｔ＝５：１）及び１０ｎＭ １ｎＭ ＣＤ２０－ＴＣＢと２０時間共培養した。活性化ＰＢＭＣを洗浄し、１００ｎＭダサチニブの存在下又は非存在下で、新鮮なＣＴＶ標識Ｚ１３８標的細胞（Ｅ：Ｔ＝５：１）上で１ｎＭのＣＤ２０－ＴＣＢにより再刺激した。

【図24】フローサイトメトリーによって測定した、図２３のアッセイにおける１００ｎＭダサチニブの存在下及び非存在下での１ｎＭのＣＤ２０－ＴＣＢによる１回目の刺激時及び２回目の刺激時の死滅化Ｚ１３８細胞。１回目の刺激の２０時間後及び２回目の刺激の２４時間後に細胞を回収し、生死ＮＩＲ色素で染色した。技術的反復実験の平均＋／－ＳＤ。Ｎ＝３ドナー。

【図25】フローサイトメトリーによって測定した、図２３のアッセイにおける１００ｎＭダサチニブの存在下及び非存在下での１ｎＭのＣＤ２０－ＴＣＢによる二次刺激時の死滅化Ｚ１３８細胞。二次刺激の２４時間後に細胞を回収し、生死ＮＩＲ色素で染色した。技術的反復実験の平均＋／－ＳＤ。３ドナーＤ１～Ｄ３（Ａ～Ｃ）。

【図26】インビトロ死滅化アッセイの設定。ＰＢＭＣを、１００ｎＭダサチニブの存在下及び非存在下においてＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）標識ＳＵＤＬＨ－８腫瘍細胞（Ｅ：Ｔ＝１０：１）及び漸増濃度のＣＤ１９－ＴＣＢと共培養した。

【図27】１００ｎＭダサチニブは、ＣＤ１９－ＴＣＢによるＣＴＶ標識ＳＵＤＬＨ－８細胞の死滅化を防止する。ＳＵＤＬＨ－８腫瘍細胞の死滅を、図２６に記載されるアッセイにおいて死細胞（２４時間）の排除を可能にするＬｉｖｅ Ｄｅａｄ Ｎｅａｒ ＩｎｆｒａＲｅｄ（ＮＩＲ）色素を使用するフローサイトメトリーによって測定した。ｎ＝３ドナーの平均＋ＳＤ。一元配置分散分析、フリードマン検定、ｐ値：０．１２３４（ｎｓ）、０．０３３２（^＊）、０．００２１（^＊＊）、０．０００１（^＊＊＊）、＜０．０００１（^＊＊＊＊）。

【図28】１００ｎＭのダサチニブは、ＣＤ１９－ＴＣＢ誘導性ＣＤ４＋Ｔ細胞活性化を妨げる。ＣＤ４＋Ｔ細胞上のＣＤ６９（Ａ）及びＣＤ２５（Ｂ）の発現を、図２６に記載のアッセイにおいて２４時間にフローサイトメトリーによって測定した。ｎ＝３ドナーの平均＋ＳＤ。一元配置分散分析、フリードマン検定、ｐ値：０．１２３４（ｎｓ）、０．０３３２（^＊）、０．００２１（^＊＊）、０．０００１（^＊＊＊）、＜０．０００１（^＊＊＊＊）。

【図29】１００ｎＭのダサチニブは、ＣＤ１９－ＴＣＢ誘導性ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を妨げる。ＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ６９（Ａ）及びＣＤ２５（Ｂ）の発現を、図２６に記載のアッセイにおいて２４時間にフローサイトメトリーによって測定した。ｎ＝３ドナーの平均＋ＳＤ。一元配置分散分析、フリードマン検定、ｐ値：０．１２３４（ｎｓ）、０．０３３２（^＊）、０．００２１（^＊＊）、０．０００１（^＊＊＊）、＜０．０００１（^＊＊＊＊）。

【図30】１００ｎＭのダサチニブは、ＣＤ１９－ＴＣＢ誘導性サイトカイン放出を妨げる。ＩＬ－２（Ａ）、ＩＦＮ－γ（Ｂ）、ＴＮＦ－α（Ｃ）、ＩＬ－６（Ｄ）、ＧＭ－ＣＳＦ（Ｅ）及びＩＬ－８（Ｆ）のレベルを、図２６に記載のアッセイの上清中でＬｕｍｉｎｅｘによって測定した。３つのうち１つの代表的なドナー。

【図31】１００ｎＭのダサチニブは、１ｎＭのＣＤ１９－ＴＣＢによって誘導されるサイトカイン放出を妨げる。ＩＦＮ－γ（Ａ）、ＴＮＦ－α（Ｂ）、ＩＬ－２（Ｃ）、ＩＬ－６（Ｄ）、ＧＭ－ＣＳＦ（Ｅ）及びＩＬ－８（Ｆ）のレベルを、図２６に記載のアッセイの上清中でＬｕｍｉｎｅｘによって測定した。ｎ＝３のドナーの平均＋／－ＳＥＭ。

【図32】ヒト化ＮＳＧマウスにおけるＣＤ１９－ＴＣＢ誘導性サイトカイン放出及びＢ細胞枯渇に対するダサチニブ（５０ｍｇ／ｋｇ）の効果を評価するインビボ実験のタイムライン及び投与スケジュール。ヒト化ＮＳＧマウスを、０．５ｍｇ／ｋｇのＣＤ１９－ＴＣＢ（ｉ．ｖ．）及び５０ｍｇ／ｋｇのダサチニブ（ｐ．ｏ．）で１日２回共治療した。ＣＤ１９－ＴＣＢによる治療の１．５時間後、６時間後及び４８時間後に、尾静脈出血によって血液を採取した。７２時間後、実験終了前に、血液を後眼窩的に採取した。１群あたりＮ＝４のマウス。

【図33】ダサチニブは、図３２に記載される実験からのマウスの血液におけるＣＤ１９－ＴＣＢ依存性Ｂ細胞枯渇を防止する。ビヒクル（Ａ）、０．５ｍｇ／ｋｇ ＣＤ１９－ＴＣＢ（Ｂ）、又は０．５ｍｇ／ｋｇ ＣＤ１９－ＴＣＢ及び５０ｍｇ／ｋｇダサチニブ（Ｃ）で治療した動物の血液（４８時間）中のヒトＣＤ４５＋細胞間でゲーティングしたＣＤ２０＋Ｂ細胞の代表的なフローサイトメトリードットプロット。

【図34】ダサチニブは、インビボでの治療の４８時間後までＣＤ１９－ＴＣＢ依存性Ｂ細胞枯渇を防止する。ＣＤ２０＋Ｂ細胞のカウントを、４８時間後（Ａ）及び７２時間後（Ｂ）に図３２に記載される実験の動物の血液においてフローサイトメトリーによって測定した。ｎ＝４マウスの平均＋／－ＳＥＭ。一元配置分散分析、Ｋｒｕｓｋａｌ Ｗａｌｌｉｓ検定、ｐ値：０．１２３４（ｎｓ）、０．０３３２（^＊）、０．００２１（^＊＊）、０．０００１（^＊＊＊）、＜０．０００１（^＊＊＊＊）。

【図35】ダサチニブは、インビボでＣＤ１９－ＴＣＢ誘導性サイトカイン放出を妨げる。図３２に記載の実験において、ＣＤ１９－ＴＣＢによる治療の１．５時間後に採取した血液試料から血清が回収された。ＩＬ－２（Ａ）、ＴＮＦ－α（Ｂ）、ＩＦＮ－γ（Ｃ）及びＩＬ－６（Ｄ）のレベルをＬｕｍｉｎｅｘによって測定する。ｎ＝４マウスの平均＋／－ＳＥＭ。一元配置分散分析、Ｋｒｕｓｋａｌ Ｗａｌｌｉｓ検定、ｐ値：０．１２３４（ｎｓ）、０．０３３２（^＊）、０．００２１（^＊＊）、０．０００１（^＊＊＊）、＜０．０００１（^＊＊＊＊）。

【図36】ダサチニブは、インビボでＣＤ１９－ＴＣＢ誘導性サイトカイン放出を妨げる。図３２に記載の実験において、ＣＤ１９－ＴＣＢによる治療の６時間後に採取した血液試料から血清を回収する。ＩＬ－２（Ａ）、ＴＮＦ－α（Ｂ）、ＩＦＮ－γ（Ｃ）及びＩＬ－６（Ｄ）のレベルをＬｕｍｉｎｅｘによって測定する。ｎ＝４マウスの平均＋／－ＳＥＭ。一元配置分散分析、Ｋｒｕｓｋａｌ Ｗａｌｌｉｓ検定、ｐ値：０．１２３４（ｎｓ）、０．０３３２（^＊）、０．００２１（^＊＊）、０．０００１（^＊＊＊）、＜０．０００１（^＊＊＊＊）。

【図37】ヒト化ＮＳＧマウスにリンパ腫ＰＤＸ（５００万細胞、皮下）を移植した。腫瘍が２００ｍｍ^３に達したとき、腫瘍サイズに基づいてマウスを８頭又は７頭の群にランダム化した。それらをビヒクル（ｉ．ｖ．）、単剤療法としての０．５ｍｇ／ｋｇ ＣＤ１９－ＴＣＢ（ｉ．ｖ．）、２０ｍｇ／ｋｇダサチニブ（ｐ．ｏ．）で、単独又は０．５ｍｇ／ｋｇのＣＤ１９－ＴＣＢ（ｉ．ｖ．）と組み合わせて治療した。ビヒクル、ＣＤ１９－ＴＣＢ、及びＣＤ１９－ＴＣＢ＋ダサチニブ群の各マウス並びにダサチニブ群のｎ＝４マウスの血清を、ＣＤ１９－ＴＣＢによる最初の治療の６時間後に尾静脈出血によって回収した。

【図38】図３７に記載の実験からの各個々のマウスにおけるサイトカインレベル。Ｌｕｍｉｎｅｘを用いたマルチプレックスサイトカイン分析により、血清中のＩＦＮ－γ（Ａ）、ＴＮＦ－α（Ｂ）、ＩＬ－２（Ｃ）及びＩＬ－６（Ｄ）のレベルを測定した。ｎ＝６～８マウスの平均＋／－ＳＥＭ（一元配置分散分析により^＊ｐ≦０．０５、^＊＊ｐ≦０．０１、^＊＊＊ ｐ≦０．００１）（Ｋｒｕｓｋａｌ Ｗａｌｌｉｓ検定）。

【図39】図３７に記載の実験からの各個々のマウスの体重減少。体重の変化［％］は、各マウスについてＣＤ１９－ＴＣＢによる最初の治療前の体重のパーセンテージとして測定される。ボックス及びウィスカは、群あたりｎ＝６～８マウスの最小値～最大値を示す。

【図40】図３７に記載される実験の腫瘍成長曲線。腫瘍成長曲線を、Ｃａｌｉｐｅｒを用いて測定した腫瘍体積からプロットした（ｎ＝６～８マウスの平均＋ＳＤ、一元配置分散分析により^＊＊ｐ≦０．０１（Ｋｒｕｓｋａｌ Ｗａｌｌｉｓ検定））。

【実施例】

【0217】

実施例
以下は、本発明の方法及び組成物の例である。上に提供された一般的な説明を考慮すると、種々の他の態様が実施されてもよいことが理解される。

【0218】

実施例１．ダサチニブは、薬理学的に適切な用量でのＴＣＢ媒介性標的細胞死滅化の強力な阻害剤である
ＴＣＢ媒介性標的細胞死滅化に対するダサチニブの阻害効果を評価するために、漸増濃度のダサチニブを補充した培地中で末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ＮｕｃＬｉｇｈｔ Ｒｅｄ（ＮＬＲ）標的細胞及びそれぞれのＴＣＢを使用して死滅化アッセイを行った。標的細胞死滅化の読み出しとして、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）システム（Ｅｓｓｅｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して、赤色蛍光タンパク質シグナルの損失を経時的に捕捉した。１００ｎＭ（４８．８ｎｇ／ｍＬ）及び５０ｎＭ（２４．４ｎｇ／ｍＬ）の濃度のダサチニブは、１ｎＭのＣＥＡ－ＴＣＢ（配列番号２８～４７）について標的細胞死滅化のそれぞれ９０．４％及び８８．２％の阻害、並びに１０ｎＭのＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ１－ＴＣＢ（配列番号１～２０）について標的細胞死滅化のそれぞれ８６．５％及び８９．０％の阻害をもたらした（図１）。１２．５ｎＭの濃度のダサチニブは、１ｎＭのＣＥＡ－ＴＣＢについて標的細胞死滅化の６９％の阻害及び１０ｎＭのＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢについて標的細胞死滅化の７８．２％の阻害をもたらした。１２．５ｎＭ未満の濃度では、１ｎＭのＣＥＡ－ＴＣＢ及び１０ｎＭのＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢと組み合わせたダサチニブは、死滅化を部分的にのみ阻害した（図１）。さらに、１ｎＭのＣＥＡ－ＴＣＢにおいて、１２．５ｎＭを超える濃度のダサチニブによる治療は、より低い濃度のダサチニブ及びダサチニブを添加しなかった場合の陽性対照とは対照的に、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２及びＴＮＦ－αの放出を妨げた（図２）。全体として、このデータは、ダサチニブが、１２．５ｎＭのインビトロ濃度の閾値を超える両方のＴＣＢで刺激されたＰＢＭＣによって引き起こされるＴ細胞媒介性標的細胞溶解を効率的に防止することができることを示唆している。

【0219】

次いで、標的細胞死滅化の阻害をもたらすダサチニブのインビトロ用量が、ダサチニブについて承認された用量スケジュールを使用して得られる薬理学的に活性な用量の１つに変換されるかどうかを検証した。したがって、本発明者らは、インビトロ用量を、ダサチニブの異なる標識薬理学的用量に曝露された患者におけるＰＫパラメータＣ_ｍｉｎ、Ｃ_ｍａｘ及び定常状態濃度と比較した。Ｗａｎｇらは、１００ｍｇダサチニブＱＤで治療された１４６人の患者に由来するＰＫパラメータが、２．６１ｎｇ／ｍＬのＣ_ｍｉｎ値及び５４．６ｎｇ／ｍＬのＣ_ｍａｘ値に関連することを報告した（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ：ａｄｖａｎｃｅｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（２０１３）５，８５－９７）。したがって、１２．５ｎＭ（６ｎｇ／ｍＬ）のインビトロ用量は、ダサチニブが望ましくないＴＣＢ媒介性標的細胞死滅化を防ぐための薬理学的標識用量で有効であるように、患者において１日１回（ＱＤ）の１００ｍｇのダサチニブ投薬レジメンに変換可能であると思われる。

【0220】

実施例２．ダサチニブはＴＣＢ誘導性Ｔ細胞機能を急速にオフにする
ダサチニブが活性化Ｔ細胞の迅速かつ強力な阻害剤として作用し得るかどうかを評価するために、本発明者らはまず、ＳＫＭ－１腫瘍細胞上のＰＢＭＣをＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢで２４時間刺激した。次いで、本発明者らは、これらの活性化エフェクター細胞に１００ｎＭダサチニブを補充した（図３）。２４時間でのＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞上のＣＤ６９及びＣＤ２５の発現は、１０ｎＭのＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１ ＴＣＢで刺激されたＴ細胞について部分的に活性化された表現型を示した（図４）。ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α及びＩＬ－２もまた、１０ｎＭのＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢによる活性化の２４時間後にこれらの死滅化アッセイの上清中に見出され、Ｔ細胞活性化を明らかにした（図５）。

【0221】

２４時間で１００ｎＭのダサチニブを添加すると、４８時間でのＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞上の初期活性化マーカーＣＤ６９及び後期活性化マーカーＣＤ２５の発現は、ダサチニブ治療を受けていない試料において２４時間で測定された発現と４８時間で測定された発現との間の中間レベルで見出された（図４）。ダサチニブで処理しなかった試料と比較して４８時間で測定したＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ２５及びＣＤ６９発現は、１００ｎＭダサチニブの添加が表現型活性化マーカーの発現を迅速にブロックしたことを強調している。

【0222】

本発明者らはまた、Ｔ細胞媒介性サイトカイン放出に対するダサチニブの影響を評価するために、４８時間で死滅化アッセイの上清に見られるサイトカインレベルを調べた。興味深いことに、４８時間でダサチニブを受けなかった陽性対照とは対照的に、２４時間（０ｎＭダサチニブ）及び４８時間（１００ｎＭダサチニブ）で測定されたＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α及びＩＬ－２レベルについて差は観察されなかった（図５）。これは、２４時間での１００ｎＭダサチニブの添加が、活性化Ｔ細胞からのサイトカインの放出を迅速に防止したことを示す。

【0223】

さらに、本発明者らは、フローサイトメトリーによってＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）バイオレット（ＣＴＶ）色素の希釈ピークを測定することによって、死滅化アッセイにおいて１００ｎＭダサチニブを添加した１２０時間後にＴ細胞増殖を評価した。図６に示されるように、１０ｎＭのＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢ及び１００ｎＭダサチニブによる治療は、１０ｎＭのＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢのみで治療された陽性対照と比較して、ＣＤ４＋Ｔ細胞に対してより強い効果でＣＤ４＋及びＣＤ８＋の増殖ピークを遅延させた。２４時間でのダサチニブの系への添加は、増殖ピークが観察されなかった陰性対照ＳＫＭ－１標的細胞及びＰＢＭＣ（図６の上のトレース）と比較した場合、Ｔ細胞の部分的増殖をもたらした。これらの初期増殖ピークは、１００ｎＭダサチニブの非存在下での活性化の最初の２４時間にわたって誘導された。さらに、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞のカウントは、１００ｎＭダサチニブで処理しなかった陽性対照試料では、１００ｎＭダサチニブで処理した試料よりも有意に高かった（図７）。ＣＤ８＋Ｔ細胞のカウントは、ＳＫＭ－１細胞及びＰＢＭＣ陰性対照試料よりも１００ｎＭダサチニブで処理した試料において高かった（図７Ｂ）。ＣＤ４＋Ｔ細胞のカウントは、ＳＫＭ－１細胞及びＰＢＭＣ陰性対照試料よりも１００ｎＭダサチニブで処理した試料において高くなかった（図７Ａ）。全体として、これは、１００ｎＭのダサチニブが、ＣＤ８＋Ｔ細胞よりもＣＤ４＋Ｔ細胞に対して強い影響でＴＣＢ誘導性Ｔ細胞増殖を阻害したことを示している。

【0224】

全体として、ダサチニブ治療は、Ｔ細胞活性化、サイトカイン放出及び増殖の下方制御を迅速にもたらし、Ｔ細胞機能性の喪失を誘導することを示唆した。しかしながら、ＳＫＭ－１腫瘍細胞のほとんどが２４時間後及びダサチニブの添加前に死滅したので、このアッセイは、ＴＣＢ媒介性標的細胞死滅化に対するダサチニブの効果の評価を可能にしなかった。

【0225】

実施例３．ダサチニブは活性化Ｔ細胞のＴＣＢ誘導性細胞傷害を防止する
ダサチニブが活性化Ｔ細胞によるＴＣＢ媒介性標的細胞死滅化を効率的に防止できるかどうかを評価するために、本発明者らは、ＯＮ／ＯＦＦスイッチを模倣した２つの刺激ステップを用いてインビトロ死滅化アッセイを設定した。１回目の刺激中、ダサチニブの非存在下で、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）標識ＳＫＭ－１腫瘍細胞上のＰＢＭＣをＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢで活性化した（オン）。２回目の刺激中、活性化ＰＢＭＣを死滅化ＣＦＳＥ標識ＳＫＭ－１腫瘍細胞と共に洗浄し、１００ｎＭダサチニブの存在下で、新鮮ＣＴＶ標識ＳＫＭ－１腫瘍細胞上でＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢにより再刺激した（オフ）。ＣＦＳＥ及びＣＴＶ標識ＳＫＭ－１腫瘍の使用により、１回目及の刺激び２回目の刺激に使用された腫瘍細胞をフローサイトメトリーにより区別することができた（図８）。１回目の刺激中のＨＬＡ－Ａ２－ＷＴ－１－ＴＣＢによる処理は、ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞上の初期及び後期Ｔ細胞活性化マーカーＣＤ６９及びＣＤ２５の上方制御（図９）並びにＣＦＳＥ標識ＳＫＭ－１標的細胞の死滅を誘導した（図１０及び図１１）。一貫して、Ｔ細胞は、ダサチニブを系に添加する前に活性化され、機能的であった。ＣＴＶ標識ＳＫＭ－１細胞の８７．６％は、１００ｎＭダサチニブの存在下での１０ｎＭのＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１ ＴＣＢによる２回目の刺激時に生存していたが、ＣＴＶ標識ＳＫＭ－１腫瘍細胞の２．０４％のみが、ダサチニブの非存在下での１０ｎＭのＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢによる再刺激時に生存していた（図１０）。活性化Ｔ細胞及び死滅化ＣＦＳＥ標識ＳＫＭ－１腫瘍細胞を新鮮なＣＴＶ標識ＳＫＭ－１腫瘍細胞上でＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢにより再刺激する際に１００ｎＭダサチニブを添加すると、陽性対照（オン／オン）とは対照的に、ＣＴＶ標識ＳＫＭ－１細胞の死滅化が効果的に防止された（オン／オフ）（図１０及び図１１）。さらに、Ｔ細胞由来のＩＦＮ－γ及びＩＬ－２並びにＴ細胞及び単球由来のＴＮＦ－α放出は、陽性対照（オン／オン）と比較して、１００ｎＭのダサチニブの存在下での再刺激時に完全に阻害された（図１２）。この結果は、ダサチニブが、活性化されたＴ細胞に対する薬理学的なオン／オフスイッチとして作用し、Ｔ細胞機能性並びにＴ細胞媒介性の標的細胞死滅化を迅速にオフにすることを強調している。ダサチニブがＴ細胞の細胞傷害をどのように防止し得るかを調べるために、本発明者らは、１００ｎＭダサチニブの存在下及び非存在下において１０ｎＭのＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢで刺激した後のＴ細胞脱顆粒の読み出しとしての細胞内染色によって、脱顆粒マーカーＣＤ１０７ａの発現を測定した（図１３）。培地に１００ｎＭダサチニブを補充した場合、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞のうち、細胞のそれぞれ１６．６％及び７．５３％がＣＤ１０７ａに対して陽性であり、それぞれたった１．２２％及び２．０８％のみがＣＤ１０７ａに対して陽性であった（図１４）。１０ｎＭのＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１－ＴＣＢによる処理は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞上のＣＤ１０７ａ発現を誘導し、これは、アッセイにおいて１００ｎＭダサチニブの添加によって防止された（図１５）。Ｔ細胞脱顆粒を防止することによって、ダサチニブは、腫瘍細胞の死滅化を担うパーフォリン及びグランザイムＢのような細胞傷害性顆粒の放出を抑制することができる。概して、２回目の刺激時の１００ｎＭダサチニブの添加は、ＴＣＢ誘導性のＴ細胞の細胞毒性をブロックした。

【0226】

ＣＤ２０を標的とする異なるＴＣＢ（ＣＤ２０－ＴＣＢ（配列番号２８～３５、４８～５９）、１ｎＭ）を用いて同様の再刺激実験を行い、１回目の刺激及び２回目の刺激後のＺ１３８標的細胞の死滅を測定した（図２３）。ＨＬＡ－Ａ２ ＷＴ－１ ＴＣＢで見られるように、この実験では、活性化Ｔ細胞及び死滅化ＣＦＳＥ標識標的細胞を新鮮なＣＴＶ標識標的細胞上でＣＤ２０－ＴＣＢにより再刺激する際に１００ｎＭダサチニブを添加すると、陽性対照（オン／オン）とは対照的に、ＣＴＶ標識標的細胞の死滅化が効果的に防止された（オン／オフ）（図２４及び図２５）。

【0227】

実施例４．ダサチニブはＴＣＢ誘導性Ｔ細胞活性化を可逆的に停止させる
次に、ダサチニブの効果がその除去時に可逆的であるかどうかを検証した。したがって、本発明者らは、ダサチニブの存在下及び非存在下での２回及び３回の刺激による死滅化アッセイを設定し、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）システムを使用して死滅化動態を追跡した（図１６）。各刺激後、エフェクター細胞を洗浄し、ダサチニブの存在下及び非存在下で、新鮮なＭＫＮ４５ ＮＬＲ標的細胞上で１ｎＭのＣＥＡ ＴＣＢにより再刺激して、オフ／オンスイッチ及びオン／オフ／オンスイッチを模倣した。２５ｎＭのダサチニブを１回目の刺激中に添加すると死滅阻害をもたらし、その後、２回目の刺激のためのダサチニブ除去時に逆戻りした（オフ／オン）（図１７）。ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２及びＴＮＦ－αは、２５ｎＭダサチニブの存在下で１ｎＭのＣＥＡ－ＴＣＢで１回目に刺激した後の上清には見られず、ダサチニブの存在下でのＴ細胞由来サイトカイン放出の完全な阻害を示した。しかしながら、２５ｎＭのダサチニブの除去及び１ｎＭのＣＥＡ－ＴＣＢによる再刺激は、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２及びＴＮＦ－αの放出をもたらし、Ｔ細胞機能性がダサチニブ除去時に回復することを示した（図１８）。

【0228】

最後に、ダサチニブの効果が活性化Ｔ細胞に対して可逆的であるかどうかを評価した。その結果、本発明者らは、活性化Ｔ細胞による死滅化を防ぐために、１ｎＭのＣＥＡ－ＴＣＢによる２回目の刺激時に２５ｎＭのダサチニブを培地に補充し、次いで、死滅化が回復するかどうかを検証するために、１ｎＭのＣＥＡ－ＴＣＢによる３回目の刺激時にダサチニブを除去した。１回目の刺激の後、１ｎＭのＣＥＡ－ＴＣＢはＭＫＮ４５細胞の死滅を誘因し、これはその後、２回目の刺激時に２５ｎＭの添加によって阻害され、３回目の刺激時にダサチニブの除去によって回復した（図１９）。死滅化アッセイにおける２５ ｎＭダサチニブの添加はまた、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２及びＴＮＦ－αの放出を妨げた（図２０）。本発明者らは、Ｔ細胞活性化及び細胞傷害性の予防におけるダサチニブの効果は可逆的であると結論付けた。

【0229】

実施例５．低用量のダサチニブは、ＴＣＢによる１回目の刺激及び２回目の刺激時のサイトカイン放出を平衡化する
図２１に示されるように、１２．５ｎＭ及び６．２５ｎＭのダサチニブ濃度は、完全な死滅化阻害をもたらさなかったが、ＴＣＢ誘導性サイトカイン放出を減少させた。Ｔ細胞エンゲージング抗体の場合、サイトカイン放出ピークは、１回目の治療時の方がその後の治療後よりも高い。本発明者らは、１回目の刺激時にＴＣＢ有効性に最小限の影響しか及ぼさずに低用量のダサチニブがサイトカイン放出を妨げることができるかどうか興味があった。図１６に記載されるような死滅化アッセイにおいて、６．２５ｎＭ及び１２．５ｎＭのダサチニブの存在下での１ｎＭのＣＥＡ－ＴＣＢによる１回目の治療時、及びダサチニブの非存在下での１ｎＭのＣＥＡ－ＴＣＢによる２回目の治療時のサイトカインレベルを上清において測定した。１回目の刺激中の６．２５ｎＭ及び１２．５ｎＭのダサチニブの存在は、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２及びＴＮＦ－αの放出を低下させ（図２２）、一方、１ｎＭのＣＥＡ－ＴＣＢによって誘導される死滅化を部分的にしか阻害しなかった（図２１Ａ）。ダサチニブの可逆特性と一致して、２回目の刺激中にダサチニブを除去すると死滅化が回復したが（図２１Ｂ）、ＴＮＦ－α、ＩＬ－２及びＩＦＮ－γのレベルは低いままであった（図２２）。このデータは、低用量のダサチニブが、ＴＣＢによる１回目の治療時に引き起こされるＴＣＢ誘導性サイトカイン放出を防止し得ることを示唆している。また、２回目の刺激時に除去すると、サイトカイン放出が平衡化され、ダサチニブの可逆特性によりＴＣＢ誘導性の細胞傷害性が回復し得る。

【0230】

実施例６．ダサチニブは、ＣＤ１９－ＴＣＢ誘導性のＴ細胞の細胞傷害性、Ｔ細胞活性化及びサイトカイン放出をインビトロで防止する
ダサチニブが別のＴＣＢ、ＣＤ１９－ＴＣＢ（配列番号２９、３１～３３、３５、６４～７４、７６～７８、８０）によって誘導されるＴ細胞の細胞傷害性、Ｔ細胞活性化及びサイトカイン放出を防ぐことができるかどうかを評価するために、ＰＢＭＣをＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔ（登録商標）（ＣＴＶ）標識ＳＵＤＬＨ－８細胞及び漸増用量のＣＤ１９－ＴＣＢと共に、１００ｎＭのダサチニブの非存在下及び存在下で共培養した（図２６）。

【0231】

ＣＴＶ標識ＳＵＤＬＨ－８細胞の死滅化を、Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ Ｎｅａｒ Ｉｎｆｒａ Ｒｅｄ（ＮＩＲ）色素を使用してフローサイトメトリーによって測定した。結果として、１００ｎＭダサチニブの添加は、ＣＤ１９－ＴＣＢによるＳＵＤＬＨ－８腫瘍細胞の死滅化を防止した（図２７）。ＣＤ６９及びＣＤ２５の発現を、Ｔ細胞活性化の読み出しとしてフローサイトメトリーによってＣＤ４＋Ｔ細胞（図２８）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図２９）で測定した。１００ｎＭダサチニブの添加は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を妨げた。最後に、ＣＤ１９－ＴＣＢ誘導性サイトカイン放出に対するダサチニブの効果を評価するために、Ｌｕｍｉｎｅｘによるアッセイの上清中のサイトカインレベルを分析した（図３０及び３１）。死滅化及びＴ細胞活性化データと一致して、ダサチニブは、ＩＬ－２（図３０Ａ、３１Ｃ）、ＩＦＮ－γ（図３０Ｂ、３１Ａ）、ＴＮＦ－α（図３０Ｃ、３１Ｂ）、ＩＬ－６（図３０Ｄ、３１Ｄ）、ＧＭ－ＣＳＦ（図３０Ｅ、３１Ｅ）及びＩＬ－８（図３０Ｆ、３１Ｆ）の放出を妨げた。

【0232】

まとめると、これらのインビトロデータは、ダサチニブがＣＤ１９－ＴＣＢ誘導性のＴ細胞の細胞傷害性、Ｔ細胞活性化及びサイトカイン放出を効率的に防止することを示唆している。

【0233】

実施例７．ダサチニブは、ＣＤ１９－ＴＣＢ誘導性のＴ細胞の細胞傷害性、Ｔ細胞活性化及びサイトカイン放出をインビボで防止する
ダサチニブがインビボでＣＤ１９－ＴＣＢ誘導性Ｂ細胞枯渇及びサイトカイン放出を防ぐことができるかどうかを検証するために、ヒト化ＮＳＧマウスを、図３２に示すように、０．５ｍｇ／ｋｇのＣＤ１９－ＴＣＢで治療するか、又は０．５ｍｇ／ｋｇのＣＤ１９－ＴＣＢ及び５０ｍｇ／ｋｇのダサチニブで同時治療した。臨床におけるダサチニブの薬力学的プロファイルを最もよく模倣し、得られた曝露がＣＤ１９－ＴＣＢ誘導性のＴ細胞の細胞傷害性及びサイトカイン放出を防ぐのに十分であるかどうかを検証するために、ダサチニブを１日２回経口投与した。

【0234】

４８時間及び７２時間において、マウスから採血し、ＣＤ２０＋Ｂ細胞のカウントをフローサイトメトリーによって測定した（図３３）。結果として、ダサチニブは、４８時間でＣＤ１９－ＴＣＢによるＣＤ２０＋Ｂ細胞の死滅化を防止したが（図３４）、死滅化は７２時間で部分的に回復した（図３４）。マウスの血液におけるダサチニブの半減期は約６時間であり、ダサチニブの曝露はおそらく、ＣＤ１９－ＴＣＢ誘導性のＴ細胞の細胞傷害性を持続的に防止するのに十分ではなく、ＣＤ１９－ＴＣＢの部分的活性をもたらした。インビトロ観察と一致して、これらのデータは、インビボでのダサチニブの阻害効果が可逆的であることを示唆している。

【0235】

最後に、ＣＤ１９－ＴＣＢ及びダサチニブによる治療の１．５時間後及び６時間後にマウスから採血して、Ｌｕｍｉｎｅｘによるサイトカイン測定のために血清を採取した（図３５及び３６）。両方の時点で、ダサチニブは、ＣＤ１９－ＴＣＢ誘導性ＩＬ－２（図３５Ａ、３６Ａ）、ＴＮＦ－α（図３５Ｂ、３６Ｂ）、ＩＦＮ－γ（図３５Ｃ、３６Ｃ）及びＩＬ－６（図３５Ｄ、３６Ｄ）を阻害し、ダサチニブがＣＤ１９－ＴＣＢによるＴ細胞由来サイトカイン放出を急速にオフにすることを示した。

【0236】

インビトロでの所見と一致して、ダサチニブの活性の迅速な開始は、ヒト化ＮＳＧマウスにおけるＣＤ１９－ＴＣＢの１回目の注入によって誘導されるＢ細胞枯渇及びサイトカイン放出を防ぐことを可能にする。まとめると、これらのデータは、１日に２回投与した場合に最大４８時間にわたってＣＤ１９－ＴＣＢ誘導性のＴ細胞の細胞傷害性及びサイトカイン放出を防ぐダサチニブの好ましい薬力学的プロファイル、並びにダサチニブの阻害効果の可逆性を実証している。

【0237】

実施例８．ダサチニブの予防的使用は、抗腫瘍効果を維持しながら、ＴＣＢ媒介性サイトカイン放出を強く防止する。
本発明者らは、リンパ腫患者由来異種移植片（ＰＤＸ）が移植されたヒト化ＮＳＧマウスにおけるＣＤ１９－ＴＣＢ抗腫瘍活性に対するダサチニブを用いた一過性介入の影響を評価した。したがって、マウスをビヒクル、単剤療法としての０．５ｍｇ／ｋｇ ＣＤ１９－ＴＣＢ、又は２０ｍｇ／ｋｇダサチニブで、単独又は０．５ｍｇ／ｋｇのＣＤ１９－ＴＣＢと組み合わせて治療した（図３７）。ダサチニブを、ＣＤ１９－ＴＣＢによる１回目の治療の１時間前及び６時間後に投与し、次いで、サイトカイン放出（主に１回目の注入時に起こる）を防止するために次の２日間にわたって１日２回投与した。さらに、ダサチニブもまた、最終的な残存サイトカイン分泌を防止するために、各後続治療の１時間前に投与された（図３７）。

【0238】

図３８におけるＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－２及びＩＬ－６のレベルによって示されるように、ダサチニブは、１回目の注入時にＣＤ１９－ＴＣＢ媒介性サイトカイン放出を強く低下させた。サイトカインレベルの低下は、１回目のＣＤ１９－ＴＣＢ治療の２４時間後のより軽度の体重変化に関連し（図３９）、ダサチニブがＣＲＳ症候を効率的に防止し得ることを示唆した。さらに、ダサチニブの一過性使用は、図４０の腫瘍成長曲線によって示されるように、抗腫瘍効果を最小限に妨いだ（しかし有意ではない）。

【0239】

ダサチニブの短いＰＫ／ＰＤ特性とＣＤ１９－ＴＣＢのより長いＰＫ／ＰＤ特性との組み合わせにより、その可逆的阻害特性と一致して、ダサチニブは、ＣＤ１９－ＴＣＢ抗腫瘍効果を維持しながら、１回目の注入後のサイトカイン放出を強く減少させた。結果として、ＣＤ１９－ＴＣＢはより良好に忍容され、有効性を維持したことから、臨床でのダサチニブの一時的な予防的使用が、ＴＣＢの１回目の注入時のＣＲＳの発生を防止し得ることが示唆される。

【0240】

上述の発明を、理解を明確にする目的で、説明及び実施例によって、ある程度詳細に説明してきたが、説明及び実施例は、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。本明細書に引用されるすべての特許及び科学文献の開示は、参照によりその全体が明示的に組み込まれる。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図3】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図8】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図9D】

【図10】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18A】

【図18B】

【図18C】

【図19】

【図20A】

【図20B】

【図20C】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28】

【図29】

【図30】

【図31A】

【図31B】

【図31C】

【図31D】

【図31E】

【図31F】

【図32】

【図33】

【図34A】

【図34B】

【図35A】

【図35B】

【図35C】

【図35D】

【図36A】

【図36B】

【図36C】

【図36D】

【図37】

【図38A】

【図38B】

【図38C】

【図38D】

【図39】

【図40】

【配列表】

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【国際調査報告】