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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-02-27
(54)【発明の名称】メラノコルチン－４受容体アゴニスト
(51)【国際特許分類】
C07D 207/16 20060101AFI20240219BHJP
A61K 31/5377 20060101ALI20240219BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20240219BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20240219BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240219BHJP
A61P 15/10 20060101ALI20240219BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240219BHJP
【ＦＩ】
C07D207/16 CSP
A61K31/5377
A61P3/04
A61P3/10
A61P29/00
A61P15/10
A61P43/00 111
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023552100
(86)(22)【出願日】2022-02-25
(85)【翻訳文提出日】2023-10-24
(86)【国際出願番号】 KR2022002782
(87)【国際公開番号】W WO2022182194
(87)【国際公開日】2022-09-01
(31)【優先権主張番号】10-2021-0026468
(32)【優先日】2021-02-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】500239823
【氏名又は名称】エルジー・ケム・リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100110364
【弁理士】
【氏名又は名称】実広 信哉
(74)【代理人】
【識別番号】100122161
【弁理士】
【氏名又は名称】渡部 崇
(72)【発明者】
【氏名】ウン・シル・チェ
(72)【発明者】
【氏名】ヒ・ドン・パク
(72)【発明者】
【氏名】スン・ワン・カン
(72)【発明者】
【氏名】ヘ・ウォン・アン
(72)【発明者】
【氏名】ドク・ソン・パク
【テーマコード（参考）】
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086BC73
4C086GA07
4C086GA12
4C086GA13
4C086GA16
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZA70
4C086ZA81
4C086ZB11
4C086ZC35
4C086ZC41
(57)【要約】
本発明は、メラノコルチン受容体に対して優れたアゴニスト活性を示す化合物に関し、より具体的には、式（１）の化合物、それを有効成分として含む医薬組成物及びその使用に関するものである。詳しくは、本発明の化合物は、メラノコルチン－４受容体に対して優れたアゴニスト活性を示すので、特に肥満、糖尿病、炎症及び勃起不全の予防又は治療に有利に使用することができる
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記式（１）【化1】
Ｒ2は、ハロであり、
Ｒ3は、水素又はハロであり、
Ｒ4は、Ｃ1－Ｃ3アルキルであり、
ｎは、１又は２の整数であり、ただし、Ｒ2が塩素であり、Ｒ3が水素である場合、ｎは２である。）で示される化合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは異性体。
【請求項2】
Ｒ1が、Ｃ2－Ｃ4アルキルである請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは異性体。
【請求項3】
前記式（１）の化合物が、以下の群から選択される請求項２に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは異性体：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミド；
Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド；
Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド；
Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミド；
Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）イソブチルアミド；及び
Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）ピバルアミド。
【請求項4】
前記薬学的に許容される塩が、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、臭化水素酸及びヨウ化水素酸からなる群から選択される請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは異性体。
【請求項5】
前記薬学的に許容される塩が、塩酸塩である請求項４に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは異性体。
【請求項6】
請求項１～５のいずれか１項に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは異性体、及び薬学的に許容される担体を含むメラノコルチン－４受容体アゴニスト医薬組成物。
【請求項7】
肥満の予防又は治療用である請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項8】
糖尿の予防又は治療用である請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項9】
炎症の予防又は治療用である請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項10】
勃起不全の予防又は治療用である請求項６に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、メラノコルチン受容体に対して優れたアゴニスト活性を示す化合物に関する。より具体的には、下記式（１）
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4及びｎは、本明細書で定義したものと同義である。）で示される化合物、それを有効成分として含む医薬組成物及びその使用に関し、本発明の化合物は、メラノコルチン－４受容体に対して優れたアゴニスト活性を示し、特に肥満、糖尿病、炎症及び勃起不全の予防又は治療に特に有用である。
【化1】
【背景技術】
【0002】
レプチンタンパク質は、体脂肪細胞（脂肪細胞）により分泌されるホルモンであり、体脂肪率が増加するにつれて分泌量も増加する。レプチンタンパク質は、視床下部で生成される様々な神経ペプチドの機能を調節することにより、食欲、体脂肪量及びエネルギー代謝をはじめとする様々な生体内機能を調節する（非特許文献１）。レプチンタンパク質による食欲と体重制御のシグナル伝達は、下流にある多くの因子の生後を通じて行われ、その最も代表的な因子はメラノコルチン、ＡｇＲＰ（アグーチ関連タンパク質）及び神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）ホルモンである。
【0003】
生体内での過剰のカロリー摂取により血中のレプチンの濃度が上昇すると、下垂体におけるプロオピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）タンパク質ホルモンの分泌が増加し、ＡｇＲＰとＮＰＹの産生は減少される。小さなペプチドホルモンであるα－ＭＳＨ（メラノサイト刺激ホルモン）は、ＰＯＭＣニューロンから産生され、このホルモンは、２次ニューロンのメラノコルチン－４受容体（ＭＣ４Ｒ）アゴニストであり、最終的に食欲減退を誘導する。一方、カロリー不足によりレプチンの濃度が低下すると、ＭＣ４ＲアンタゴニストであるＡｇＲＰの発現が増加し、ＮＰＹの発現も増加するため、最終的に食欲を増進する。つまり、レプチンの変化に応じて、α－ＭＳＨホルモンとＡｇＲＰホルモンは、ＭＣ４Ｒのアゴニストとアンタゴニストとして食欲調節に関与している。
【0004】
α－ＭＳＨホルモンは、ＭＣ４Ｒに加えて、３つのＭＣＲサブタイプと結合することにより、様々な生理反応を誘導する。現在までに５つのＭＣＲサブタイプが特定されている。サブタイプのうち、ＭＣ１Ｒは主に皮膚細胞で発現しメラニン色素沈着に関与すること、ＭＣ２Ｒは主に副腎で発現して糖質コルチコイドホルモンの産生に関与すること、ＰＯＭＣ由来のＡＣＴＨ（副腎皮質刺激ホルモン）のみがそのリガンドであることが知られている。中枢神経系で主に発現するＭＣ３ＲとＭＣ４Ｒは、食欲、エネルギー代謝及び体内脂肪蓄積効率の調節などに関与し、様々な組織で発現するＭＣ５Ｒは外分泌機能を調節することが知られている（非特許文献２）。具体的には、ＭＣ４Ｒ受容体の活性化は、食欲の低下とエネルギー代謝の増加を誘導することにより、効果的に体重を減少させる効果があり、肥満治療薬の開発における主な作用点であることが証明されている（非特許文献２、３、４、５）。
【0005】
食欲と体重制御におけるＭＣ４Ｒの役割は、アグーチタンパク質の異常発現動物モデル（アグーチマウス）での実験を通じて主に立証された。アグーチマウスの場合、遺伝子変異によりアグーチタンパク質が中枢神経系で高濃度に発現し、視床下部でＭＣ４Ｒのアゴニストとして作用し、肥満を誘導することが明らかになった（非特許文献６、７）。その後の研究の結果、視床下部神経に実際のアグーチタンパク質に類似したＡｇＲＰ（アグーチ関連タンパク質）が発現していることが観察され、ＡｇＲＰはＭＣ４Ｒに対するアンタゴニストとして食欲調節に関与することも知られている（非特許文献８、９）。
【0006】
生体内でＭＣ４Ｒアゴニストであるα－ＭＳＨを動物に脳内投与すると食欲を減少させる効果があり、これにＭＣ４ＲアンタゴニストのＳＨＵ９１１９（ペプチド）又はＨＳ０１４（ペプチド）を投与すると、再び食欲を増進させる効果が観察された（非特許文献１０）。また、メラノタンＩＩ（ＭＴＩＩ、Ａｃ－Ｎｌｅ－ｃ［Ａｓｐ－Ｈｉｓ－ＤＰｈｅ－Ａｒｇ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ］－ＮＨ２）とこれに類似したアゴニストであるＨＰ２２８を用いた動物試験では、脳内投与、腹腔内投与又は皮下投与により、食欲抑制、体重減少、エネルギー代謝の増加効能などが確認された。（非特許文献１１、１２、１３）。一方、代表的なＳＨＵ９１１９を動物に投与すると、有意かつ持続的な飼料摂取及び体重増加が示され、ＭＣＲアゴニストが肥満の治療に使用できるという薬理学的な証拠を得られた。ＭＴＩＩ投与時に明らかに現れる食欲減少効果は、ＭＣ４ＲＫＯ（ノックアウト）マウスでは示されず、この実験結果は、食欲減少効果が主にＭＣ４Ｒの活性化によって達成されることが改めて証明された（非特許文献１４）。
【0007】
現在までに開発された肥満治療剤としては、中枢神経系に作用する食欲阻害剤が主流であり、その多くは神経伝達物質の作用を調節する薬物である。例えば、ノルアドレナリン剤（フェンテルミンとマジンドール）、セロトニン作用薬であるフルオキセチン及びシブトラミンなどが挙げられる。しかし、前記神経伝達物質モジュレータは、多数のサブタイプ受容体による食欲阻害に加えて、様々な生理学的作用に広範囲の影響を及ぼす。従って、前記モジュレータは、各酢豚イプに対する選択性に乏しく、長期間投与の場合には様々な副作用を伴うことになる大きな欠点がある。
【0008】
一方、メラノコルチンは、神経伝達物質ではなく神経ペプチドであり、ＭＣ４Ｒ遺伝子ＫＯマウスはでエネルギー代謝以外の他の機能は正常であることを考慮すると、メラノコルチンアゴニストは、他の生理学的機能に影響を与えることなく、食欲阻害による体重減少のみを誘導できるという作用点としての長所を有する。特に、その受容体は、Ｇ－タンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）であり、サブタイプ受容体に対する選択性を比較的容易に確保できるという点で、従来技術の作用点とは大きく区別される。
【0009】
このようなメラノコルチン受容体を作用点として活用した例として、特許文献１及び特許文献２では、メラノコルチン受容体のアゴニストとしての化合物を開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0010】
【特許文献1】ＷＯ ２００８／００７９３０号
【特許文献2】ＷＯ ２０１０／０５６０２２号
【非特許文献】
【0011】
【非特許文献1】Schwartz, et al., Nature 404, 661-671 (2000)
【非特許文献2】Wikberg, et al., Pharm Res 42 (5) 393-420 (2000)
【非特許文献3】Wikberg, Eur. J. Pharmacol 375, 295-310 (1999)
【非特許文献4】Douglas et al., Eur J Pharm 450, 93-109 (2002)
【非特許文献5】O’Rahilly et al., Nature Med 10, 351-352 (2004)
【非特許文献6】Yen, TT et al., FASEB J. 8, 479-488 (1994)
【非特許文献7】Lu D., et al. Nature 371, 799-802 (1994)
【非特許文献8】Shutter, et al., Genes Dev., 11, 593-602 (1997)
【非特許文献9】Ollman, et al. Science 278, 135-138 (1997)
【非特許文献10】Kask et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 245, 90-93 (1998)
【非特許文献11】Thiele T. E., et al. Am J Physiol 274 (1 Pt 2), R248-54 (1998)
【非特許文献12】Lee M. D., et al. FASEB J 12, A552 (1998)
【非特許文献13】Murphy B., et al. J Appl Physiol 89, 273-82 (2000)
【非特許文献14】Marsh, et al., Nat Genet 21, 119-122 (1999)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0012】
本発明の目的は、メラノコルチン受容体、特にメラノコルチン－４受容体（ＭＣ４Ｒ）に対して優れた選択的なアゴニスト活性を有する式（１）で示される新規の化合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは異性体を提供することである。
【0013】
本発明の別の目的は、前記式（１）で示される化合物を製造する方法を提供することである。
【0014】
本発明のさらに別の目的は、有効成分として前記式（１）で示される化合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは異性体を含むメラノコルチン受容体アゴニスト医薬組成物を提供することである。
【0015】
本発明のさらに別の目的は、肥満、糖尿病、炎症及び勃起不全の予防又は治療における前記式（１）で示される化合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは異性体の使用を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0016】
前記目的を達成するために、本発明では、下記式（１）
（式中、Ｒ1は、Ｃ2－Ｃ5アルキルであり、
Ｒ2は、ハロであり、
Ｒ3は、水素又はハロであり、
Ｒ4は、Ｃ1－Ｃ3アルキルであり、
ｎは、１又は２の整数であり、ただし、Ｒ2が塩素であり、Ｒ3が水素である場合、ｎは２である。）で示される化合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは異性体を提供する。
【化2】
Ｒ2は、ハロであり、
Ｒ3は、水素又はハロであり、
Ｒ4は、Ｃ1－Ｃ3アルキルであり、
ｎは、１又は２の整数であり、ただし、Ｒ2が塩素であり、Ｒ3が水素である場合、ｎは２である。）で示される化合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは異性体を提供する。
【0017】
本発明による式（１）の化合物は薬学的に許容される塩を形成することができる。
【0018】
また、本発明による化合物は、不斉炭素中心と不斉軸又は不斉平面を有し得るため、シス又はトランス異性体、Ｒ又はＳ異性体、ラセミ体、ジアステレオマー混合物、及び個々のジアステレオマーとして存在してよく、これらの異性体及び混合物はすべて本発明の範囲内に含まれる。
【0019】
本明細書において、特に指示がない限り、式（１）の化合物は、式（１）の化合物、その薬学的に許容される塩及び異性体のすべてを含む意味で使用される。
【0020】
本明細書で使用される用語「ハロ」又は「ハロゲン」は、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、臭素（Ｂｒ）又はヨード（Ｉ）のラジカルを意味する。
【0021】
本明細書で使用される用語「アルキル」は、直鎖状又は分岐状の炭化水素基を意味する。
【0022】
本発明による一実施形態において、前記式（１）のＲ1は、Ｃ2－Ｃ4アルキルである。本発明による別の実施形態において、前記式（１）のＲ1は、直鎖又は分岐状Ｃ2－Ｃ4アルキル、例えば、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル又はｔｅｒｔ－ブチルである。
【0023】
本発明による別の実施形態において、前記式（１）のＲ1は、Ｃ3又はＣ4アルキルである。本発明による別の実施形態において、前記式（１）のＲ1は、分岐状Ｃ3又はＣ4アルキル、例えば、イソプロピル又はｔｅｒｔ－ブチルである。
【0024】
本発明による別の実施形態において、前記式（１）の化合物は、下記式（２）
で示されるＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミドである。
【化3】
【0025】
本発明の別の実施形態において、前記式（１）の化合物は、下記式（３）
で示されるＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドである。
【化4】
【0026】
本発明の別の実施形態において、前記式（１）の化合物は、下記式（４）
で示されるＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドである。
【化5】
【0027】
本発明の別の実施形態において、前記式（１）の化合物は、下記式（５）
で示されるＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミドである。
【化6】
【0028】
本発明の別の実施形態において、前記式（１）の化合物は、下記式（６）
で示されるＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）イソブチルアミドである。
【化7】
【0029】
本発明の別の実施形態において、前記式（１）の化合物は、下記式（７）
で示されるＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）ピバルアミドである。
【化8】
【0030】
本発明による別の実施形態において、前記薬学的に許容される塩は、例えば塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸などの無機酸、酒石酸、ギ酸、クエン酸、酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、グルコン酸、安息香酸、乳酸、フマル酸、マレイン酸などの有機カルボン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、p－トルエンスルホン酸又はナフタレンスルホン酸などのスルホン酸などによって形成された酸付加塩が挙げられるが、これらに制限されるものではない。
【0031】
本発明による別の実施形態において、前記薬学的に許容される塩は、塩酸塩である。
【0032】
本発明による別の実施形態において、前記式（１）の化合物は、下記式（８）
で示されるＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミド塩酸塩である。
【化9】
【0033】
本発明による別の実施形態において、前記式（１）の化合物は、下記式（９）
で示されるＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド塩酸塩である。
【化10】
【0034】
本発明による別の実施形態において、前記式（１）の化合物は、下記式（１０）
で示されるＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド塩酸塩である。
【化11】
【0035】
本発明による別の実施形態において、前記式（１）の化合物は、下記式（１１）
で示されるＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミド塩酸塩である。
【化12】
【0036】
本発明による別の実施形態において、前記式（１）の化合物は、下記式（１２）
で示されるＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）イソブチルアミド塩酸塩である。
【化13】
【0037】
本発明による別の実施形態において、前記式（１）の化合物は、下記式（１３）
で示されるＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）ピバルアミド塩酸塩である。
【化14】
【0038】
本発明による別の実施形態において、前記式（８）のＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミド塩酸塩、
【0039】
前記式（９）のＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド塩酸塩、
【0040】
前記式（１）０のＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド塩酸塩及び
【0041】
前記式（１１）のＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミド塩酸塩は、下記の反応スキーム１に従って製造することができる。
＜反応スキーム１＞
（式中、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は、前記で定義したものと同義である。）
本発明による別の実施形態において、前記式（１２）のＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）イソブチルアミド塩酸塩及び
＜反応スキーム１＞
【化15】
本発明による別の実施形態において、前記式（１２）のＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）イソブチルアミド塩酸塩及び
【0042】
前記式（１３）のＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）ピバルアミド塩酸塩は、下記の反応スキーム２に従って製造することができる。
＜反応スキーム２＞
（Ｒ1は、前記で定義したものと同義である。）
＜反応スキーム２＞
【化16】
【0043】
本発明による式（１）の化合物は、メラノコルチン受容体、特にメラノコルチン－４受容体（ＭＣ４Ｒ）に対して優れたアゴニスト活性を示すので、本発明はまた、有効成分として式（１）の化合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは異性越を薬学的に許容される担体とともに含むことを特徴とするメラノコルチン受容体のアゴニスト医薬組成物を提供する。特に、本発明による組成物は、肥満、糖尿病、炎症及び勃起不全の予防又は治療に優れた効果を示すが、これらに限定されるものではない。
【0044】
本明細書において、「担体（carrier）」とは、細胞又は組織への化合物注入を容易にする化合物を意味する。
【0045】
本発明の化合物を臨床目的で投与する場合、宿主に単回又は分割投与する１日の総投与量は、好ましくは体重１ｋｇ当たり０．０１～１０ｍｇの範囲であるが、個々の患者に対する具体的な投与量は、使用する特定の化合物、患者の体重、性別、健康状態、ダイエット、薬剤の投与時間、投与方法、排泄率、薬剤混合及び疾患の重症度などによって異なる。
【0046】
本発明の化合物は、目的に応じて任意の経路で投与することができる。例えば、本発明の化合物は、注射又は経口投与により投与することができる。
【0047】
注射用製剤は、公知技術に従って、適当な分散剤、湿潤剤又は懸濁剤を使用することによって製造することができる。
【0048】
経口投与のための固体剤形の例には、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤及び顆粒剤が挙げられ、固体剤形は、本発明による式（１）の活性化合物を、不活性希釈剤、滑沢剤、崩壊剤、結合剤などの１つ以上の担体と混合することにより製造することができる。
【発明の効果】
【0049】
本発明による式（１）の化合物は、メラノコルチン受容体、特にメラノコルチン－４受容体（ＭＣ４Ｒ）に対して優れたアゴニスト活性を示すので、肥満、糖尿病、炎症及び勃起不全の予防又は治療に便利に有用に使用することができる。
【0050】
本発明による式（１）の化合物は、メラノコルチン－４受容体に対してオンターゲット効果を示し、体重減少及びダイエット効果を示しながら、不安及びうつ病に影響を及ぼさず、ヒトエーテル－ａ－ｇｏ－ｇｏ関連遺伝子（ｈＥＲＧ）阻害の副作用や突然変異誘発などの安全性の問題もなく投与することができる。また、本発明による式（１）の化合物は、細胞毒性及び肝毒性がないため、安全に投与することができる。
【発明を実施するための形態】
【0051】
以下、本発明を以下の実施例によりさらい詳細に説明する。しかしながら、本発明の保護範囲はこれらの実施例に限定されるものでないことを理解されたい。
【0052】
製造例１：Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）－Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）ピバルアミド塩酸塩の製造
【化17】
【0053】
以下の工程Ａ、Ｂ及びＣを経て表題化合物を得た。
工程Ａ：（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミド）ピロリジン－２－カルボン酸の製造
工程Ａ：（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミド）ピロリジン－２－カルボン酸の製造
【化18】
【0054】
表題化合物は、国際公開番号ＷＯ ２００８／００７９３０号に開示された方法により得た。
MS [M+Na] = 433.4 (M+23)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.25 (m, 1H), 3.86 (m, 2H), 3.42 (m, 2H), 2.80 (m, 1H), 2.27 (m, 1H), 2.00-1.80 (m, 3H), 1.66 (m, 4H), 1.43 (m, 11H), 1.26 (m, 9H), 1.05 (d, 3H)
MS [M+Na] = 433.4 (M+23)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.25 (m, 1H), 3.86 (m, 2H), 3.42 (m, 2H), 2.80 (m, 1H), 2.27 (m, 1H), 2.00-1.80 (m, 3H), 1.66 (m, 4H), 1.43 (m, 11H), 1.26 (m, 9H), 1.05 (d, 3H)
【0055】
工程Ｂ：ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミド）－２－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－１－カルボキシレートの製造
【化19】
【0056】
前記工程Ａで得られた（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミド）ピロリジン－２－カルボン酸（０．８１ｇ、１．９７ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのジメチルホルムアミドに溶解し、モルホリン（０．１９ｍＬ、２．１７ｍｍｏｌ）、１Ｈ－ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール－１－オール１水和物（０．３６ｇ、２．３６ｍｍｏｌ）、３－（（（エチルイミノ）メチレン）アミノ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパン－１－アミンの塩酸塩（０．４５ｇ、２．３６ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１．０ｍＬ、５．９２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。反応終了後、反応液を減圧下濃縮し、ろ液を炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、酢酸エチルで抽出した。有機層を集め、水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、固体をろ過した。ろ液を減圧下濃縮し、カラムクロマトグラフィーで精製して、表題化合物（０．６２ｇ、６６％）を得た。
MS [M+H] = 480.5 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.65 (m, 1H), 4.00-3.40 (m, 12H), 2.82 (m, 1H), 2.22 (m, 1H), 2.00-1.80 (m, 3H), 1.70-1.60 (m, 4H), 1.50-1.41 (m, 11H), 1.24 (s, 9H), 1.04 (d, 3H)
MS [M+H] = 480.5 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.65 (m, 1H), 4.00-3.40 (m, 12H), 2.82 (m, 1H), 2.22 (m, 1H), 2.00-1.80 (m, 3H), 1.70-1.60 (m, 4H), 1.50-1.41 (m, 11H), 1.24 (s, 9H), 1.04 (d, 3H)
【0057】
工程Ｃ：Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）－Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）ピバルアミド塩酸塩の製造
【化20】
【0058】
前記工程Ｂで得られたｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミド）－２－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－１－カルボキシレート（０．６２ｇ、１．３ｍｍｏｌ）を４ｍＬのジクロロメタンに溶解し、４Ｍ塩酸の１，４－ジオキサン溶液（１．３ｍＬ、５．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。反応液を減圧下濃縮し、生成された固体をジエチルエーテルで洗浄し、乾燥して、表題化合物（０．５５ｇ、９９％）を得た。
MS [M+H] = 380.6 (M+1)
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.00-8.00 (brs, 2H), 4.46 (m, 1H), 4.14 (m, 1H), 3.76 (m, 1H), 3.65-3.25 (m, 10H), 2.47 (m, 1H), 1.99 (m, 1H), 1.91 (m, 1H), 1.80-1.50 (m, 6H), 1.39 (m, 2H), 1.19 (s, 9H), 1.00 (d, 3H)
MS [M+H] = 380.6 (M+1)
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.00-8.00 (brs, 2H), 4.46 (m, 1H), 4.14 (m, 1H), 3.76 (m, 1H), 3.65-3.25 (m, 10H), 2.47 (m, 1H), 1.99 (m, 1H), 1.91 (m, 1H), 1.80-1.50 (m, 6H), 1.39 (m, 2H), 1.19 (s, 9H), 1.00 (d, 3H)
【0059】
製造例２：Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）－Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）イソブチルアミド塩酸塩の製造
【化21】
【0060】
以下の工程Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ及びＧを経て表題化合物を得た。
工程Ａ：１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アジドピロリジン－１，２－ジカルボキシレートの製造
工程Ａ：１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アジドピロリジン－１，２－ジカルボキシレートの製造
【化22】
【0061】
１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｒ）－４－（（メチルスルホニル）オキシ）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（４８．５ｇ、１５０ｍｍｏｌ）を２５０ｍＬのジメチルホルムアミドに溶解し、アジ化ナトリウム（１９．５ｇ、３００ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を８０℃で１６時間撹拌した後、溶液を減圧下濃縮した。そこに水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液と水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧下濃縮して、表題化合物（３９．５９ｇ、９８％）を得ており、これを精製せずに次の工程に使用した。
MS [M+H] = 271 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.43-4.37 (m, 1H), 4.35-4.27 (br, 1H), 3.77 (s, 1.8H), 3.76 (s, 1.2H), 3.73-3.66 (m, 1H), 3.44-3.38 (m, 1H), 2.63-2.49 (m, 1H), 2.19-2.11 (m, 1H), 1.50 (s, 4.5H), 1.44 (s, 4.5H)
MS [M+H] = 271 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.43-4.37 (m, 1H), 4.35-4.27 (br, 1H), 3.77 (s, 1.8H), 3.76 (s, 1.2H), 3.73-3.66 (m, 1H), 3.44-3.38 (m, 1H), 2.63-2.49 (m, 1H), 2.19-2.11 (m, 1H), 1.50 (s, 4.5H), 1.44 (s, 4.5H)
【0062】
工程Ｂ：１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アミノピロリジン－１，２－ジカルボキシレートの製造
【化23】
【0063】
前記工程Ａで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アジドピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（２４．６ｇ、９１．０ｍｍｏｌ）を１８０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解し、１Ｍトリメチルホスフィンテトラヒドロフラン溶液（１０９ｍＬ、１０９ｍｍｏｌ）を０℃でゆっくり加えた。同温度で１時間撹拌をした後、反応液を室温で３時間撹拌をした。反応溶媒を減圧下濃縮した後、１００ｍＬのジクロロメタンと１５０ｍＬの水を加え、反応液を３０分程度撹拌した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥して固体をろ過した。ろ液を減圧下濃縮して、題化合物（２０．６２ｇ、９３％）を得た。
MS [M+H] = 245 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.27 (m, 1H), 3.77 (s, 1.8H), 3.76 (s, 1.2H), 3.75-3.67 (m, 1H), 3.50-3.42 (m, 1H), 3.22-3.17 (m, 1H), 2.58-2.47 (m, 1H), 1.82-1.71 (m, 1H), 1.48 (s, 4.5H), 1.42 (s, 4.5H)
MS [M+H] = 245 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.27 (m, 1H), 3.77 (s, 1.8H), 3.76 (s, 1.2H), 3.75-3.67 (m, 1H), 3.50-3.42 (m, 1H), 3.22-3.17 (m, 1H), 2.58-2.47 (m, 1H), 1.82-1.71 (m, 1H), 1.48 (s, 4.5H), 1.42 (s, 4.5H)
【0064】
工程Ｃ：１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）アミノ）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレートの製造
【化24】
【0065】
前記工程Ｂで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アミノピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（２０．６ｇ、８４．４ｍｍｏｌ）を１５０ｍＬの１，２－ジクロロエタンに溶解し、４－メティルサイクルロヘクサノン（９．５０ｍＬ、１０１ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を０℃に冷却した後トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（２６．８ｇ、１２７ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌をした。反応液を減圧下濃縮した後、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧下濃縮して、カラムクロマトグラフィーで精製して表題化合物（２２．９ｇ、８０％）を得た。
MS [M+H] = 341 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.26 (m, 1H), 3.76 (s, 1.8H), 3.75 (s, 1.2H), 3.78-3.71 (m, 1H), 3.49-3.40 (m, 1H), 3.22-3.16 (m, 1H), 2.69-2.60 (br, 1H), 2.58-2.46 (m, 1H), 1.87-1.77 (m, 1H), 1.73-1.63 (m, 1H), 1.62-1.35 (m, 8H), 1.48 (s, 4.5H), 1.42 (s, 4.5H), 0.96 (d, 3H)
MS [M+H] = 341 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.26 (m, 1H), 3.76 (s, 1.8H), 3.75 (s, 1.2H), 3.78-3.71 (m, 1H), 3.49-3.40 (m, 1H), 3.22-3.16 (m, 1H), 2.69-2.60 (br, 1H), 2.58-2.46 (m, 1H), 1.87-1.77 (m, 1H), 1.73-1.63 (m, 1H), 1.62-1.35 (m, 8H), 1.48 (s, 4.5H), 1.42 (s, 4.5H), 0.96 (d, 3H)
【0066】
工程Ｄ：１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレートの製造
【化25】
【0067】
前記工程Ｃで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）アミノ）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（３７．２９ｇ、１０９．５ｍｍｏｌ）を５００ｍＬのジクロロメタンに溶解し、トリエチルアミン（６１．１ｍＬ、４３８ｍｍｏｌ）を加えた後、塩化イソブチル（１１．７ｍＬ、２１９ｍｍｏｌ）を０℃でゆっくり加えた。室温で１６時間撹拌した後、反応溶媒を減圧下濃縮した。濃縮液に炭酸水素ナトリウム水溶液と酢酸エチルを加えた後、有機層を分離した。有機層を塩化ナトリウム水溶液と水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧下濃縮し、カラムクロマトグラフィーで精製して、表題化合物（３８．７９ｇ、８６％）を得た。
MS [M+H] = 411 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.27 (m, 1H), 3.76 (s, 1.8H), 3.75 (s,1.2H), 3.78-3.72 (m, 1H), 3.50-3.41 (m, 1H), 3.33-3.14 (m, 1H), 2.69-2.60 (m, 2H), 2.57-2.43 (m, 1H), 1.87-1.79 (m, 1H), 1.70-1.61 (m, 1H), 1.60-1.32 (m, 8H), 1.47 (s, 4.5H), 1.41 (s, 4.5H), 1.10 (dd, 6H), 0.99 (d, 3H)
MS [M+H] = 411 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.27 (m, 1H), 3.76 (s, 1.8H), 3.75 (s,1.2H), 3.78-3.72 (m, 1H), 3.50-3.41 (m, 1H), 3.33-3.14 (m, 1H), 2.69-2.60 (m, 2H), 2.57-2.43 (m, 1H), 1.87-1.79 (m, 1H), 1.70-1.61 (m, 1H), 1.60-1.32 (m, 8H), 1.47 (s, 4.5H), 1.41 (s, 4.5H), 1.10 (dd, 6H), 0.99 (d, 3H)
【0068】
工程Ｅ：（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボン酸の製造
【化26】
【0069】
前記工程Ｄで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（３．６３ｇ、８．８５ｍｍｏｌ）を３０ｍＬのエタノールで溶解し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２６．５ｍＬ、２６．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液を水で希釈した後、１Ｎ塩酸水溶液でｐＨ４に調整した。反応液を酢酸エチルで抽出し、有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。固体をろ過して、ろ液を減圧下濃縮して、表題化合物（２．４０ｇ、６９％）を得た。
MS [M+Na] = 419.4 (M+23)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.27 (m, 1H), 4.00-3.85 (m, 2H), 3.66 (m, 1H), 3.44 (m, 1H), 2.86 (m, 1H), 1.95-1.80 (m, 3H), 1.76-1.53 (m, 5H), 1.50-1.42 (m, 11H), 1.10-1.05 (m, 9H)
MS [M+Na] = 419.4 (M+23)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.27 (m, 1H), 4.00-3.85 (m, 2H), 3.66 (m, 1H), 3.44 (m, 1H), 2.86 (m, 1H), 1.95-1.80 (m, 3H), 1.76-1.53 (m, 5H), 1.50-1.42 (m, 11H), 1.10-1.05 (m, 9H)
【0070】
工程Ｆ：ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）－２－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－１－カルボキシレートの製造
【化27】
【0071】
前記工程Ｅで得られた（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボン酸（２．４０ｇ、６．０５ｍｍｏｌ）、１Ｈ－ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール－１－オール１水和物（１．１１ｇ、７．２６ｍｍｏｌ）及び３－（（（エチルイミノ）メチレン）アミノ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパン－１－アミンの塩酸塩（１．３９ｇ、７．２６ｍｍｏｌ）を３０ｍＬのジメチルホルムアミドに溶解した。前記の混合物にモルホリン（０．５５ｍＬ、６．６６ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（３．１０ｍＬ、１８．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。反応終了後に、反応液を減圧下濃縮し、ろ液を炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、酢酸エチルで抽出した。有機層を集め、水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、固体をろ過した。ろ液を減圧下濃縮し、カラムクロマトグラフィーで精製して、表題化合物（１．８７ｇ、６６％）を得た。
MS [M+H] = 466.5 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.66 (m, 1H), 3.94 (m, 1H), 3.75-3.55 (m, 10H), 3.45 (m, 1H), 2.86 (m, 1H), 2.24 (m, 1H), 1.95-1.80 (m, 3H), 1.77-1.60 (m, 5H), 1.59-1.45 (m, 2H), 1.46-1.41 (m, 9H), 1.05 (m, 9H)
MS [M+H] = 466.5 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.66 (m, 1H), 3.94 (m, 1H), 3.75-3.55 (m, 10H), 3.45 (m, 1H), 2.86 (m, 1H), 2.24 (m, 1H), 1.95-1.80 (m, 3H), 1.77-1.60 (m, 5H), 1.59-1.45 (m, 2H), 1.46-1.41 (m, 9H), 1.05 (m, 9H)
【0072】
工程Ｇ：Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）－Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）イソブチルアミド塩酸塩の製造
【化28】
【0073】
前記工程Ｆで得られたｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）－２－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－１－カルボキシレート（１．８７ｇ、４．００ｍｍｏｌ）を３０ｍＬのジクロロメタンに溶解し、０℃に冷却し、４Ｍ塩酸１，４－ジオキサン（２．１５ｍＬ、８．５９ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を室温で１６時間撹拌した後、反応液を減圧下濃縮した。生成された固体をエチルエーテルで洗浄し、乾燥して、表題化合物（１．２２ｇ、７６％）を得た。
MS [M+H] = 366.4 (M+1)
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.88 (brs, 1H), 8.12 (m, 1H), 4.51 (m, 1H), 4.20 (m, 1H), 3.63-3.35 (m, 10H), 3.30 (m, 1H), 2.85 (m, 1H), 2.51 (m, 1H), 2.01 (m, 1H), 1.91 (m, 1H), 1.76-1.60 (m, 4H), 1.53 (m, 2H), 1.40 (m, 2H), 0.99 (m, 9H)
MS [M+H] = 366.4 (M+1)
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.88 (brs, 1H), 8.12 (m, 1H), 4.51 (m, 1H), 4.20 (m, 1H), 3.63-3.35 (m, 10H), 3.30 (m, 1H), 2.85 (m, 1H), 2.51 (m, 1H), 2.01 (m, 1H), 1.91 (m, 1H), 1.76-1.60 (m, 4H), 1.53 (m, 2H), 1.40 (m, 2H), 0.99 (m, 9H)
【0074】
製造例３：メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）ピバルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート塩酸塩の製造
以下の工程ＡとＢを経て表題化合物を得た。
【化29】
【0075】
工程Ａ：１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）ピバルアミド）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレートの製造
【化30】
【0076】
国際公開番号ＷＯ ２００８／００７９３０号に開示された方法により表題化合物を得た。
MS [M+Na] = 461.4 (M+23)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.34 (t, 1H), 3.90-3.70 (m, 2H), 3.73 (m, 3H), 3.45 (m, 2H), 2.74-2.61 (m, 1H), 2.30 (m, 1H), 1.83 (m, 2H), 1.53 (m, 4H), 1.45-1.40 (m, 9H), 1.40-1.30 (m, 2H), 1.24 (s, 9H), 0.99 (s, 3H), 0.94 (s, 3H)
MS [M+Na] = 461.4 (M+23)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.34 (t, 1H), 3.90-3.70 (m, 2H), 3.73 (m, 3H), 3.45 (m, 2H), 2.74-2.61 (m, 1H), 2.30 (m, 1H), 1.83 (m, 2H), 1.53 (m, 4H), 1.45-1.40 (m, 9H), 1.40-1.30 (m, 2H), 1.24 (s, 9H), 0.99 (s, 3H), 0.94 (s, 3H)
【0077】
工程Ｂ：メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）ピバルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート塩酸塩の製造
【化31】
【0078】
前記工程Ａで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）ピバルアミド）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（１．６７ｇ、３．８１ｍｍｏｌ）を４ｍＬの酢酸エチルに溶解し、４Ｍ塩酸酢酸エチル溶液（３．８１ｍＬ、１５．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。反応液を減圧下濃縮して、表題化合物（１．４３ｇ、９９％）を得た。
MS [M+H] = 339.4 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.41 (t, 1H), 4.24 (m, 1H), 3.86 (m, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.42 (m, 2H), 2.66 (m, 1H), 2.22 (m, 1H), 1.77 (m, 2H), 1.51 (m, 4H), 1.34 (m, 2H), 1.23 (s, 9H), 0.99 (s, 3H), 0.93 (s, 3H)
MS [M+H] = 339.4 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.41 (t, 1H), 4.24 (m, 1H), 3.86 (m, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.42 (m, 2H), 2.66 (m, 1H), 2.22 (m, 1H), 1.77 (m, 2H), 1.51 (m, 4H), 1.34 (m, 2H), 1.23 (s, 9H), 0.99 (s, 3H), 0.93 (s, 3H)
【0079】
製造例４：メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート塩酸塩の製造
以下の工程ＡとＢを経て表題化合物を得た。
【化32】
【0080】
工程Ａ：１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレートの製造
【化33】
【0081】
国際公開番号ＷＯ ２００８／００７９３０号に開示された方法により表題化合物を得た。
MS [M+Na] = 447.4 (M+23)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.31 (t, 1H), 3.93 (m, 1H), 3.83 (m, 1H), 3.75-3.68 (m, 3H), 3.62 (m, 1H), 3.45 (m, 1H), 2.81 (m, 1H), 2.26 (m, 1H), 1.80 (m, 2H), 1.50-1.35 (m, 14H), 1.21 (m, 2H), 1.04 (m, 6H), 0.96 (s, 3H), 0.92 (s, 3H)
MS [M+Na] = 447.4 (M+23)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.31 (t, 1H), 3.93 (m, 1H), 3.83 (m, 1H), 3.75-3.68 (m, 3H), 3.62 (m, 1H), 3.45 (m, 1H), 2.81 (m, 1H), 2.26 (m, 1H), 1.80 (m, 2H), 1.50-1.35 (m, 14H), 1.21 (m, 2H), 1.04 (m, 6H), 0.96 (s, 3H), 0.92 (s, 3H)
【0082】
工程Ｂ：メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート塩酸塩の製造
【化34】
【0083】
前記工程Ａで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（１．１ｇ、２．６ｍｍｏｌ）を２．５ｍＬの酢酸エチルに溶解し、４Ｍ塩酸酢酸エチル溶液（２．５ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で１６時間撹拌した後、減圧下濃縮して、表題化合物（０．９３ｇ、９９％）を得た。
MS [M+H] = 325.4 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.41 (t, 1H), 4.30 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.66 (m, 1H), 3.47 (m, 3H), 2.85 (m, 1H), 2.72 (m, 1H), 2.24 (m, 1H), 1.75 (m, 2H), 1.51 (m, 4H), 1.38 (m, 2H), 1.06 (m, 6H), 0.98 (s, 3H), 0.93 (s, 3H)
MS [M+H] = 325.4 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.41 (t, 1H), 4.30 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.66 (m, 1H), 3.47 (m, 3H), 2.85 (m, 1H), 2.72 (m, 1H), 2.24 (m, 1H), 1.75 (m, 2H), 1.51 (m, 4H), 1.38 (m, 2H), 1.06 (m, 6H), 0.98 (s, 3H), 0.93 (s, 3H)
【0084】
製造例５：（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボン酸の製造
【化35】
【0085】
国際公開番号ＷＯ ２００４／０９２１２６号に開示された方法により表題化合物を得た。
MS [M+H] = 282 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.43-7.33 (m, 4H), 3.90-3.69 (m, 3H), 3.59 (m, 1H), 3.29 (m, 1H), 3.18-3.09 (m, 1H), 1.44 (s, 9H)
MS [M+H] = 282 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.43-7.33 (m, 4H), 3.90-3.69 (m, 3H), 3.59 (m, 1H), 3.29 (m, 1H), 3.18-3.09 (m, 1H), 1.44 (s, 9H)
【0086】
製造例６：（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボン酸の製造
【化36】
【0087】
国際公開番号ＷＯ ２００４／０９２１２６号に開示された方法により表題化合物を得た。
MS [M+H] = 284.2 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.50 (m, 1H), 6.97 (m, 2H), 3.93-3.75 (m, 3H), 3.60 (m, 1H), 3.26 (m, 2H), 1.43 (s, 9H)
MS [M+H] = 284.2 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.50 (m, 1H), 6.97 (m, 2H), 3.93-3.75 (m, 3H), 3.60 (m, 1H), 3.26 (m, 2H), 1.43 (s, 9H)
【0088】
製造例７：（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボン酸の製造
【化37】
【0089】
国際公開番号ＷＯ ２００４／０９２１２６号に開示された方法により表題化合物を得た。
MS [M+H] = 300.3 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.47 (t, 1H), 7.22 (m, 2H), 3.93-3.75 (m, 3H), 3.60 (m, 1H), 3.26 (m, 2H), 1.43 (s, 9H)
MS [M+H] = 300.3 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.47 (t, 1H), 7.22 (m, 2H), 3.93-3.75 (m, 3H), 3.60 (m, 1H), 3.26 (m, 2H), 1.43 (s, 9H)
【0090】
実施例１：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミド塩酸塩の製造
【化38】
【0091】
以下の工程ＡとＢの過程を経て表題化合物を得た。
工程Ａ：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミドの製造
工程Ａ：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミドの製造
【化39】
【0092】
製造例１で得られたＮ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）－Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）ピバルアミド塩酸塩（０．５０ｇ、１．２ｍｍｏｌ）と製造例６で得られた（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボン酸（０．３４ｇ、１．２ｍｍｏｌ）に、ジメチルホルムアミド（１２ｍＬ）、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（０．２８ｇ、１．５ｍｍｏｌ）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（０．２２ｇ、１．５ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．６４ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。反応液を減圧下濃縮した後、酢酸エチルを加えた。反応混合物を塩化アンモニウム水溶液と１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。固体をろ過し、ろ液を減圧下濃縮し、クロマトグラフィーで精製して、表題化合物（０．３２ｇ、４０％）を得た。
MS [M+H] = 645.6 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.58 (m, 1H), 6.95 (m, 2H), 4.76 (m, 1H), 4.18 (m, 1H), 3.84-3.40 (m, 15H), 3.11 (m, 1H), 2.89 (m, 1H), 2.12 (m, 1H), 1.95 (m, 1H), 1.79 (m, 1H), 1.65 (m, 4H), 1.44 (m, 2H), 1.28 (m, 2H), 1.19 (s, 9H), 1.17 (s, 9H), 1.03 (m, 3H)
MS [M+H] = 645.6 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.58 (m, 1H), 6.95 (m, 2H), 4.76 (m, 1H), 4.18 (m, 1H), 3.84-3.40 (m, 15H), 3.11 (m, 1H), 2.89 (m, 1H), 2.12 (m, 1H), 1.95 (m, 1H), 1.79 (m, 1H), 1.65 (m, 4H), 1.44 (m, 2H), 1.28 (m, 2H), 1.19 (s, 9H), 1.17 (s, 9H), 1.03 (m, 3H)
【0093】
工程Ｂ：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミド塩酸塩の製造
【化40】
【0094】
前記工程Ａで得られたＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミド（０．３２ｇ、０．５０ｍｍｏｌ）に５ｍＬのジクロロメタンと４Ｍ塩酸酢酸エチル溶液（０．２５ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で２０分の間撹拌した。反応液を減圧下濃縮し、ジエチルエーテルを加えた。得られた固体をろ過し、乾燥して、表題化合物（０．２３ｇ、６８％）を得た。
MS [M+H] = 645.6 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.63 (m, 1H), 7.07 (m, 2H), 4.82 (m, 1H), 4.19 (m, 1H), 4.00-3.50 (m, 15H), 3.03 (m, 1H), 2.69 (m, 1H), 2.17 (m, 1H), 1.95 (m, 1H), 1.79 (m, 1H), 1.64 (m, 4H), 1.47 (s, 9H), 1.45-1.25 (m, 4H), 1.19 (s, 9H), 1.00 (m, 3H)
MS [M+H] = 645.6 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.63 (m, 1H), 7.07 (m, 2H), 4.82 (m, 1H), 4.19 (m, 1H), 4.00-3.50 (m, 15H), 3.03 (m, 1H), 2.69 (m, 1H), 2.17 (m, 1H), 1.95 (m, 1H), 1.79 (m, 1H), 1.64 (m, 4H), 1.47 (s, 9H), 1.45-1.25 (m, 4H), 1.19 (s, 9H), 1.00 (m, 3H)
【0095】
実施例２：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド塩酸塩の製造
【化41】
【0096】
以下の工程ＡとＢを経て表題化合物を得た。
工程Ａ：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドの製造
工程Ａ：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドの製造
【化42】
【0097】
製造例６で得られた（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボン酸（０．５０ｇ、１．７６ｍｍｏｌ）と製造例２で得られたＮ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）－Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）イソブチルアミド塩酸塩（０．７１ｇ、１．７６ｍｍｏｌ）を用い、実施例１の工程Ａと同様の方法で表題化合物（０．１０ｇ、９％）を得た。
MS [M+H] = 631.5 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.56 (m, 1H), 7.00 (m, 2H), 4.79 (m, 1H), 4.56 (m, 1H), 4.17 (m, 1H), 3.84 (m, 1H), 3.70-3.50 (m, 13H), 3.09 (m, 1H), 2.80 (m, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.12 (m, 1H), 1.93 (m, 1H), 1.75-1.50 (m, 5H), 1.40 (m, 2H), 1.29 (s, 9H), 1.24 (m, 2H), 1.00 (m, 9H)
MS [M+H] = 631.5 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.56 (m, 1H), 7.00 (m, 2H), 4.79 (m, 1H), 4.56 (m, 1H), 4.17 (m, 1H), 3.84 (m, 1H), 3.70-3.50 (m, 13H), 3.09 (m, 1H), 2.80 (m, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.12 (m, 1H), 1.93 (m, 1H), 1.75-1.50 (m, 5H), 1.40 (m, 2H), 1.29 (s, 9H), 1.24 (m, 2H), 1.00 (m, 9H)
【0098】
工程Ｂ：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドの塩酸塩の製造
【化43】
【0099】
前記工程Ａで得られたＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド（０．１０ｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を用い、実施例１の工程Ｂと同様の方法で表題化合物（０．０８３ｇ、７８％）を得た。
MS [M+H] = 631.5 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.63 (m, 1H), 7.07 (m, 2H), 4.80 (t, 1H), 4.21 (m, 1H), 3.94 (m, 2H), 3.85-3.50 (m, 13H), 3.03 (m, 1H), 2.82 (m, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.15 (m, 1H), 1.95 (m, 1H), 1.80-1.59 (m, 5H), 1.47 (s, 9H), 1.40-1.20 (m, 4H), 1.01 (m, 9H)
MS [M+H] = 631.5 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.63 (m, 1H), 7.07 (m, 2H), 4.80 (t, 1H), 4.21 (m, 1H), 3.94 (m, 2H), 3.85-3.50 (m, 13H), 3.03 (m, 1H), 2.82 (m, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.15 (m, 1H), 1.95 (m, 1H), 1.80-1.59 (m, 5H), 1.47 (s, 9H), 1.40-1.20 (m, 4H), 1.01 (m, 9H)
【0100】
実施例３：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド塩酸塩の製造
【化44】
【0101】
以下の工程ＡとＢの過程を経て表題化合物を得た。
工程Ａ：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドの製造
工程Ａ：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドの製造
【化45】
【0102】
製造例７で得られた（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボン酸（０．５０ｇ、１．６７ｍｍｏｌ）と製造例２で得られたＮ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）－Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）イソブチルアミド塩酸塩（０．６７ｇ、１．６７ｍｍｏｌ）を用い、実施例１の工程Ａと同様の方法で表題化合物（０．１３ｇ、１２％）を得た。
MS [M+H] = 647.5 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.54 (t, 1H), 7.20 (m, 2H), 4.79 (m, 1H), 4.18 (m, 1H), 3.85 (m, 1H), 3.50-3.50 (m, 13H), 3.40 (m, 1H), 3.02 (m, 1H), 2.78 (m, 1H), 2.68 (m, 1H), 2.14 (m, 1H), 1.92 (m, 1H), 1.80-1.39 (m, 7H), 1.29-1.17 (m, 11H), 1.01 (m, 9H)
MS [M+H] = 647.5 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.54 (t, 1H), 7.20 (m, 2H), 4.79 (m, 1H), 4.18 (m, 1H), 3.85 (m, 1H), 3.50-3.50 (m, 13H), 3.40 (m, 1H), 3.02 (m, 1H), 2.78 (m, 1H), 2.68 (m, 1H), 2.14 (m, 1H), 1.92 (m, 1H), 1.80-1.39 (m, 7H), 1.29-1.17 (m, 11H), 1.01 (m, 9H)
【0103】
工程Ｂ：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド塩酸塩の製造
前記工程Ａで得られたＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド（０．１３ｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を用い、実施例１の工程Ｂと同様の方法で表題化合物（０．１ｇ、８０％）を得た。
MS [M+H] = 647.5 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.60 (m, 1H), 7.30 (m, 2H), 4.81 (m, 1H), 4.22 (m, 1H), 4.04-3.90 (m, 2H), 3.86-3.41 (m, 13H), 3.12 (m, 1H), 2.83 (m, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.20 (m, 1H), 1.95 (m, 1H), 1.80-1.55 (m, 5H), 1.45-1.27 (m, 4H), 1.47 (s, 9H), 1.02 (m, 9H)
【化46】
MS [M+H] = 647.5 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.60 (m, 1H), 7.30 (m, 2H), 4.81 (m, 1H), 4.22 (m, 1H), 4.04-3.90 (m, 2H), 3.86-3.41 (m, 13H), 3.12 (m, 1H), 2.83 (m, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.20 (m, 1H), 1.95 (m, 1H), 1.80-1.55 (m, 5H), 1.45-1.27 (m, 4H), 1.47 (s, 9H), 1.02 (m, 9H)
【0104】
実施例４：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミド塩酸塩の製造
【化47】
【0105】
以下の工程ＡとＢを経て表題化合物を得た。
工程Ａ：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミドの製造
工程Ａ：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミドの製造
【化48】
【0106】
製造例７で得られた（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボン酸（０．３６ｇ、１．２１ｍｍｏｌ）と製造例１で得られたＮ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）－Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）ピバルアミド塩酸塩（０．５０ｇ、１．２１ｍｍｏｌ）を用い、実施例１の工程Ａと同様の方法で表題化合物（０．４５ｇ、５６％）を得た。
MS [M+H] = 661.6 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.55 (m, 1H), 7.18 (m, 2H), 4.79 (m, 1H), 4.18 (m, 1H), 3.90-3.20 (m, 15H), 3.08 (m, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.12 (m, 1H), 1.93 (m, 1H), 1.81-1.60 (m, 5H), 1.47 (m, 2H), 1.30-1.10 (m, 2H), 1.20 (s, 9H), 1.15 (s, 9H), 1.03 (m, 3H)
MS [M+H] = 661.6 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.55 (m, 1H), 7.18 (m, 2H), 4.79 (m, 1H), 4.18 (m, 1H), 3.90-3.20 (m, 15H), 3.08 (m, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.12 (m, 1H), 1.93 (m, 1H), 1.81-1.60 (m, 5H), 1.47 (m, 2H), 1.30-1.10 (m, 2H), 1.20 (s, 9H), 1.15 (s, 9H), 1.03 (m, 3H)
【0107】
工程Ｂ：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミド塩酸塩の製造
【化49】
【0108】
工程Ａで得られたＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロ－２－フルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）ピバルアミド（０．２５ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を用い、実施例１の工程Ｂと同様の方法で表題化合物（０．１８ｇ、６８％）を得た。
MS [M+H] = 661.6 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.60 (t, 1H), 7.30 (m, 2H), 4.80 (m, 1H), 4.20 (m, 1H), 4.04-3.90 (m, 2H), 3.86-3.40 (m, 13H), 3.12 (m, 1H), 2.67 (m, 1H), 2.16 (m, 1H), 1.94 (m, 1H), 1.82-1.60 (m, 5H), 1.47 (s, 9H), 1.45-1.20 (m, 4H), 1.20 (s, 9H), 1.03 (m, 3H)
MS [M+H] = 661.6 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.60 (t, 1H), 7.30 (m, 2H), 4.80 (m, 1H), 4.20 (m, 1H), 4.04-3.90 (m, 2H), 3.86-3.40 (m, 13H), 3.12 (m, 1H), 2.67 (m, 1H), 2.16 (m, 1H), 1.94 (m, 1H), 1.82-1.60 (m, 5H), 1.47 (s, 9H), 1.45-1.20 (m, 4H), 1.20 (s, 9H), 1.03 (m, 3H)
【0109】
実施例５：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）イソブチルアミド塩酸塩の製造
【化50】
【0110】
以下の工程Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤを経て表題化合物を得た。
工程Ａ：メチル（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレートの製造
工程Ａ：メチル（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレートの製造
【化51】
【0111】
製造例５で得られた（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボン酸（０．７３ｇ、２．５８ｍｍｏｌ）と製造例４で得られたメチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート塩酸塩（０．９３ｇ、２．５８ｍｍｏｌ）を用い、実施例１の工程Ａと同様の方法で表題化合物（０．４９ｇ、３２％）を得た。
MS [M+H] = 588.5 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.30 (m, 4H), 4.42 (t, 1H), 4.01 (t, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.65-3.50 (m, 3H), 3.34-3.20 (m, 2H), 3.13-3.04 (m, 2H), 2.87 (m, 1H), 2.79 (m, 1H), 2.67 (m, 1H), 2.15 (m, 1H), 1.69 (m, 1H), 1.56 (m, 1H), 1.50-1.26 (m, 7H), 1.16 (s, 9H), 1.00 (m, 6H), 0.93 (m, 6H)
MS [M+H] = 588.5 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.30 (m, 4H), 4.42 (t, 1H), 4.01 (t, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.65-3.50 (m, 3H), 3.34-3.20 (m, 2H), 3.13-3.04 (m, 2H), 2.87 (m, 1H), 2.79 (m, 1H), 2.67 (m, 1H), 2.15 (m, 1H), 1.69 (m, 1H), 1.56 (m, 1H), 1.50-1.26 (m, 7H), 1.16 (s, 9H), 1.00 (m, 6H), 0.93 (m, 6H)
【0112】
工程Ｂ：（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボン酸の製造
【化52】
【0113】
前記工程Ａで得られたメチル（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート（０．４９ｇ、０．８３ｍｍｏｌ）をメタノール（２．８ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、６Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（０．７ｍＬ、４．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を室温で１６時間撹拌した後、減圧下濃縮した。そこに水を加え、ｐＨを４に調整し、減圧下濃縮した。混合物をジクロロメタンに溶解し、固体をろ過して除去した。ろ液を減圧下濃縮して表題化合物（０．４７ｇ、９８％）を得た。
MS [M+H] = 574.4 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.40 (m, 4H), 4.41 (m, 1H), 4.13-3.65 (m, 5H), 3.60-3.35 (m, 3H), 2.96 (m, 1H), 2.82-2.69 (m, 2H), 2.18 (m, 1H), 1.73-1.55 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.42-1.20 (m, 7H), 1.00 (m, 6H), 0.94 (m, 6H)
MS [M+H] = 574.4 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.40 (m, 4H), 4.41 (m, 1H), 4.13-3.65 (m, 5H), 3.60-3.35 (m, 3H), 2.96 (m, 1H), 2.82-2.69 (m, 2H), 2.18 (m, 1H), 1.73-1.55 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.42-1.20 (m, 7H), 1.00 (m, 6H), 0.94 (m, 6H)
【0114】
工程Ｃ：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）イソブチルアミドの製造
【化53】
【0115】
前記工程Ｂで得られた（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボン酸（０．４７ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）とモルホリン（０．０７１ｍＬ、０．８２ｍｍｏｌ）を用い、実施例１の工程Ａと同様の方法で表題化合物（０．４１ｇ、７８％）を得た。
MS [M+H] = 643.4 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.34 (m, 2H), 7.30 (m, 2H), 4.77 (m, 1H), 4.12 (m, 1H), 3.80-3.30 (m, 15H), 3.05 (m, 1H), 2.77 (m, 1H), 2.64 (m, 1H), 2.09 (m, 1H), 1.80-1.58 (m, 2H), 1.50-1.24 (m, 7H), 1.14 (s, 9H), 0.99 (m, 6H), 0.95 (m, 6H)
MS [M+H] = 643.4 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.34 (m, 2H), 7.30 (m, 2H), 4.77 (m, 1H), 4.12 (m, 1H), 3.80-3.30 (m, 15H), 3.05 (m, 1H), 2.77 (m, 1H), 2.64 (m, 1H), 2.09 (m, 1H), 1.80-1.58 (m, 2H), 1.50-1.24 (m, 7H), 1.14 (s, 9H), 0.99 (m, 6H), 0.95 (m, 6H)
【0116】
工程Ｄ：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）イソブチルアミド塩酸塩の製造
【化54】
【0117】
前記工程Ｃで得られたＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）イソブチルアミド（０．４２ｇ、０．６５ｍｍｏｌ））を用い、実施例１の工程Ｂと同様の方法で表題化合物（０．３７ｇ、８３％）を得た。
MS [M+H] = 643.4 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.44 (m, 4H), 4.81 (m, 1H), 4.22 (m, 1H), 3.90 (m, 1H), 3.80-3.40 (m, 14H), 2.99 (m, 1H), 2.82 (m, 1H), 2.68 (m, 1H), 2.16 (m, 1H), 1.80-1.60 (m, 2H), 1.40-1.20 (m, 7H), 1.47 (s, 9H), 1.05 (m, 6H), 0.96 (m, 6H)
MS [M+H] = 643.4 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.44 (m, 4H), 4.81 (m, 1H), 4.22 (m, 1H), 3.90 (m, 1H), 3.80-3.40 (m, 14H), 2.99 (m, 1H), 2.82 (m, 1H), 2.68 (m, 1H), 2.16 (m, 1H), 1.80-1.60 (m, 2H), 1.40-1.20 (m, 7H), 1.47 (s, 9H), 1.05 (m, 6H), 0.96 (m, 6H)
【0118】
実施例６：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）ピバルアミド塩酸塩の製造
【化55】
【0119】
以下の工程Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤを経て表題化合物を得た。
工程Ａ：メチル（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）ピバルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレートの製造
工程Ａ：メチル（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）ピバルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレートの製造
【化56】
【0120】
製造例５で得られた（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボン酸（０．６０ｇ、２．１３ｍｍｏｌ）と製造例３で得られたメチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）ピバルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート塩酸塩（０．８０ｇ、２．１３ｍｍｏｌ）を用い、実施例１の工程Ａと同様の方法で表題化合物（０．６３ｇ、４９％）を得た。
MS [M+H] = 602.5 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.34 (m, 4H), 4.47 (t, 1H), 3.98 (m, 1H), 3.80 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.60 (m, 2H), 3.48-3.34 (m, 3H), 3.17 (m, 1H), 3.10 (m, 1H), 2.63 (m, 1H), 2.16 (m, 1H), 1.73 (m, 1H), 1.58 (m, 1H), 1.52-1.38 (m, 3H), 1.36-1.20 (m, 4H), 1.23 (s, 9H), 1.17 (s, 9H), 0.97 (s, 3H), 0.94 (s, 3H)
MS [M+H] = 602.5 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.34 (m, 4H), 4.47 (t, 1H), 3.98 (m, 1H), 3.80 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.60 (m, 2H), 3.48-3.34 (m, 3H), 3.17 (m, 1H), 3.10 (m, 1H), 2.63 (m, 1H), 2.16 (m, 1H), 1.73 (m, 1H), 1.58 (m, 1H), 1.52-1.38 (m, 3H), 1.36-1.20 (m, 4H), 1.23 (s, 9H), 1.17 (s, 9H), 0.97 (s, 3H), 0.94 (s, 3H)
【0121】
工程Ｂ：（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）ピバルアミド）ピロリジン－２－カルボン酸の製造
【化57】
【0122】
工程Ａで得られたメチル（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）ピバルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート（０．６３ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を用い、実施例５の工程Ｂと同様の方法で表題化合物（０．５１ｇ、８３％）を得た。
MS [M+H] = 588.5 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.42 (m, 4H), 4.41 (m, 1H), 4.06 (m, 1H), 3.90 (m, 2H), 3.80-3.60 (m, 3H), 3.47 (m, 2H), 2.94 (m, 1H), 2.72 (m, 1H), 2.18 (m, 1H), 1.71 (m, 1H), 1.61 (m, 1H), 1.50-1.20 (m, 7H), 1.47 (s, 9H), 1.19 (s, 9H), 0.98 (s, 3H), 0.94 (s, 3H)
MS [M+H] = 588.5 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.42 (m, 4H), 4.41 (m, 1H), 4.06 (m, 1H), 3.90 (m, 2H), 3.80-3.60 (m, 3H), 3.47 (m, 2H), 2.94 (m, 1H), 2.72 (m, 1H), 2.18 (m, 1H), 1.71 (m, 1H), 1.61 (m, 1H), 1.50-1.20 (m, 7H), 1.47 (s, 9H), 1.19 (s, 9H), 0.98 (s, 3H), 0.94 (s, 3H)
【0123】
工程Ｃ：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）ピバルアミドの製造
【化58】
【0124】
工程Ｂで得られた（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）ピバルアミド）ピロリジン－２－カルボン酸（０．５１ｇ、０．８７ｍｍｏｌ）とモルホリン（０．０７６ｍＬ、０．８７ｍｍｏｌ）を用い、実施例１の工程Ａと同様の方法で表題化合物（０．４４ｇ、７７％）を得た。
MS [M+H] = 657.6 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.36 (m, 2H), 7.30 (m, 2H), 4.77 (m, 1H), 4.14 (m, 1H), 3.80-3.20 (m, 15H), 3.05 (m, 1H), 2.68 (m, 1H), 2.09 (m, 1H), 1.75 (m, 1H), 1.61 (m, 1H), 1.51-1.24 (m, 7H), 1.15 (m, 18H), 0.97 (m, 6H)
MS [M+H] = 657.6 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.36 (m, 2H), 7.30 (m, 2H), 4.77 (m, 1H), 4.14 (m, 1H), 3.80-3.20 (m, 15H), 3.05 (m, 1H), 2.68 (m, 1H), 2.09 (m, 1H), 1.75 (m, 1H), 1.61 (m, 1H), 1.51-1.24 (m, 7H), 1.15 (m, 18H), 0.97 (m, 6H)
【0125】
工程Ｄ：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）ピバルアミド塩酸塩の製造
【化59】
【0126】
前記工程Ｃで得られたＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）ピバルアミド（０．４４ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を用い、実施例１の工程Ｂと同様の方法で表題化合物（０．３９ｇ、８４％）を得た。
MS [M+H] = 657.6 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.45 (m, 4H), 4.81 (m, 1H), 4.16 (m, 1H), 4.06-3.85 (m, 2H), 3.84-3.40 (m, 13H), 2.98 (m, 1H), 2.67 (m, 1H), 2.13 (m, 1H), 1.75 (m, 1H), 1.63 (m, 1H), 1.47 (s, 9H), 1.50-1.20 (m, 7H), 1.18 (s, 9H), 0.96 (m, 6H)
MS [M+H] = 657.6 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.45 (m, 4H), 4.81 (m, 1H), 4.16 (m, 1H), 4.06-3.85 (m, 2H), 3.84-3.40 (m, 13H), 2.98 (m, 1H), 2.67 (m, 1H), 2.13 (m, 1H), 1.75 (m, 1H), 1.63 (m, 1H), 1.47 (s, 9H), 1.50-1.20 (m, 7H), 1.18 (s, 9H), 0.96 (m, 6H)
【0127】
比較例１：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（２，４－ジフルオロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）アセトアミド塩酸塩（Ａ９５）の製造
【化60】
【0128】
国際公開番号ＷＯ ２００８／００７９３０号のＡ９５化合物は、そこに開示されているものと同じ方法で得られた。
【0129】
比較例２：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（４，４－ジメチルシクロヘキシル）アセトアミド塩酸塩（Ａ９６）の製造
【化61】
【0130】
国際公開番号ＷＯ ２００８／００７９３０号のＡ９６化合物、そこに開示されているものと同じ方法で得られた。
【0131】
実験例１：ルシフェラーゼアッセイ
ＭＣ４Ｒ（メラノコルチン－４受容体）に対するアゴニスト能を測定するために、ＭＣ４ＲとＣＲＥ（ｃＡＭＰ応答エレメント）の制御下でルシフェラーゼ遺伝子（ＣＲＥ－ＬＵＣ）を恒常的に発現する細胞株を樹立した。ＭＣ４Ｒ遺伝子を含む哺乳動物細胞発現ベクター（ｐＣＤＮＡ３（Ｎｅｏ））（Invitrogen社製）を製造した後、ＣＲＥ（ｃＡＭＰ 応答エレメント）の制御下で、ルシフェラーゼ遺伝子（ＣＲＥ－ＬＵＣ）を発現させるベクター（ｐＣＲＥ－Ｌｕｃ）（Stratagen社製）とともにＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Invitrogen社製）を用いて、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞株を形質転換させた。形質転換細胞株（ＨＥＫ ＭＣ４Ｒ－Ｌｕｃ）を２４時間、５％ＣＯ2が存下、３７℃の恒温培養器で１０％加熱不活性化したウシ胎仔血清（GIBCO/BRL社製）を含むダルベッコ変法イーグルス培地（ＤＭＥＭ）を使用して培養した。前記細胞株を１０ｍＬの選択培地（１０％加熱不活性化ウシ胎仔血清（GIBCO/BRL社製）、１００単位／ｍＬのペニシリン（GIBCO/BRL社製）、１００単位／ｍＬのストレプトマイシン（GIBCO/BRL社製）、８００μｇ／ｍＬのジェネティシン（Ｇ４１８）（GIBCO/BRL社製）を含むダルベッコ変法イーグルス培地（ＤＭＥＭ））存在下、４日間培養した。培地を１０ｍＬの新しい選択培地と交換することによって選択培地によって死滅した細胞除去する過程を４日ごとに１回、３回繰り返した。最終的に選択され、増殖されたクローンによって形成された個々のコロニーを、顕微鏡下で、ウェル当たり１ｍＬの選択培地を含む２４ウェル細胞培養プレートに移し、４日間培養した。フォルスコリン（SIGMA社製）を最終濃度１０μＭになるように処理し、５％ＣＯ2存在下、３７℃の恒温培養器で５時間培養した。各ウェルに５０μＬのＢｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏルシフェラーゼ試薬（Promega社製）を処理し、室温で１５分間放置した後、ルミノメーター（Victor社製）を使用して各ウェルの発光を測定した。フォルスコリンの処理により基本値の１００倍以上の発光を示すクローンを選択し、各化合物のＭＣ４Ｒアゴニスト能を測定するために使用した。
ＭＣ４Ｒ（メラノコルチン－４受容体）に対するアゴニスト能を測定するために、ＭＣ４ＲとＣＲＥ（ｃＡＭＰ応答エレメント）の制御下でルシフェラーゼ遺伝子（ＣＲＥ－ＬＵＣ）を恒常的に発現する細胞株を樹立した。ＭＣ４Ｒ遺伝子を含む哺乳動物細胞発現ベクター（ｐＣＤＮＡ３（Ｎｅｏ））（Invitrogen社製）を製造した後、ＣＲＥ（ｃＡＭＰ 応答エレメント）の制御下で、ルシフェラーゼ遺伝子（ＣＲＥ－ＬＵＣ）を発現させるベクター（ｐＣＲＥ－Ｌｕｃ）（Stratagen社製）とともにＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（Invitrogen社製）を用いて、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞株を形質転換させた。形質転換細胞株（ＨＥＫ ＭＣ４Ｒ－Ｌｕｃ）を２４時間、５％ＣＯ2が存下、３７℃の恒温培養器で１０％加熱不活性化したウシ胎仔血清（GIBCO/BRL社製）を含むダルベッコ変法イーグルス培地（ＤＭＥＭ）を使用して培養した。前記細胞株を１０ｍＬの選択培地（１０％加熱不活性化ウシ胎仔血清（GIBCO/BRL社製）、１００単位／ｍＬのペニシリン（GIBCO/BRL社製）、１００単位／ｍＬのストレプトマイシン（GIBCO/BRL社製）、８００μｇ／ｍＬのジェネティシン（Ｇ４１８）（GIBCO/BRL社製）を含むダルベッコ変法イーグルス培地（ＤＭＥＭ））存在下、４日間培養した。培地を１０ｍＬの新しい選択培地と交換することによって選択培地によって死滅した細胞除去する過程を４日ごとに１回、３回繰り返した。最終的に選択され、増殖されたクローンによって形成された個々のコロニーを、顕微鏡下で、ウェル当たり１ｍＬの選択培地を含む２４ウェル細胞培養プレートに移し、４日間培養した。フォルスコリン（SIGMA社製）を最終濃度１０μＭになるように処理し、５％ＣＯ2存在下、３７℃の恒温培養器で５時間培養した。各ウェルに５０μＬのＢｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏルシフェラーゼ試薬（Promega社製）を処理し、室温で１５分間放置した後、ルミノメーター（Victor社製）を使用して各ウェルの発光を測定した。フォルスコリンの処理により基本値の１００倍以上の発光を示すクローンを選択し、各化合物のＭＣ４Ｒアゴニスト能を測定するために使用した。
【0132】
ＨＥＫ ＭＣ４Ｒ－Ｌｕｃ細胞を９６ウェルルミノメーター細胞培養プレート（Costar社製）の各ウェルに、１００μＬの培地中に２．５×１０4細胞となるように加え、６％ＣＯ2存在下、３７℃恒温培養器で１８時間培養した。前記培地を使用して各段階の濃度に希釈したＭＣＲアゴニストを、最終ＤＭＳＯ濃度が１％を越えないように処理し、６％ＣＯ2存在下、３７℃恒温培養器で５時間培養した。各ウェルを５０μＬのＢｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏルシフェラーゼ試薬（Promega社製）で処理し、室温で５分間放置した後、ルミノメーター（Victor社製）を使用して各ウェルの発光を測定した。各段階濃度で希釈したアゴニストによって誘導される発光量を、０μＭのＮＤＰ－α－ＭＳＨ処理によって示される量に対する相対％値に換算した。ＥＣ0.5 ＭＳＨは、ＮＤＰ－α－ＭＳＨによって誘導できる最大発光量の５０％を誘導する濃度、ＥＣ50は、各アゴニストによって誘導できる最大発光量の５０％を誘導する濃度で表した。前記測定値は、統計ソフトウェア（Prizm社製）を使用して測定した。
【0133】
前記実験により得られた各化合物のＭＣ４Ｒアゴニスト能を測定結果をＥＣ50（ｎＭ）単位で表１に示した。
【表1】
【0134】
前記表１に示すように、生体内でよく知られているメラノコルチン受容体のうち、生体内でのエネルギー代謝と体重制御に関与するメラノコルチン－４受容体（ＭＣ４Ｒ）に関して、実施例の化合物は、比較例（Ａ９５及びＡ９６）の化合物よりも優れたＭＣ４Ｒアゴニスト能を有することが確認された。
【0135】
実験例２：ｃＡＭＰアッセイ
メラノコルチン受容体は、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）の一種であり、Ｇタンパク質の主な役割は、シグナル伝達を通じて多くの生理学的刺激に対する細胞応答を制御する二次的伝達物質を活性化することである。ＭＣ４ＲはＧｓ共役受容体であり、ＭＣ４Ｒがアゴニストと相互作用すると、アデニル酸シクラーゼ（ＡＣ）が活性化され、細胞内の二次伝達物質の１つであるサイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）濃度が上昇することが知られている。従って、ｃＡＭＰシグナルの発生を測定することによってメラノコルチン受容体の活性を評価することができる。
メラノコルチン受容体は、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）の一種であり、Ｇタンパク質の主な役割は、シグナル伝達を通じて多くの生理学的刺激に対する細胞応答を制御する二次的伝達物質を活性化することである。ＭＣ４ＲはＧｓ共役受容体であり、ＭＣ４Ｒがアゴニストと相互作用すると、アデニル酸シクラーゼ（ＡＣ）が活性化され、細胞内の二次伝達物質の１つであるサイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）濃度が上昇することが知られている。従って、ｃＡＭＰシグナルの発生を測定することによってメラノコルチン受容体の活性を評価することができる。
【0136】
アゴニスト反応による細胞内ｃＡＭＰレベルの上昇が測定できるように、ＭＣ１Ｒ、ＭＣ３Ｒ、ＭＣ４Ｒ及びＭＣ５Ｒのそれぞれを過剰発現させたｃＡＭＰハンターＧｓ共役受容体細胞株（ＣＨＯ－Ｋ１細胞株）を樹立した後、細胞を白色の細胞培養プレートの各ウェルに接種し、５％ＣＯ2存在下、３７℃恒温培養器で２４時間培養した。培養後、培地を除去し、２：１ＨＢＢＳ／１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ：ｃＡＭＰ ＸＳ＋Ａｂ試薬１５μＬを加えた。バッファーで４倍に希釈されたサンプルを５μＬ加えた後、ビヒクル濃度は１％に設定し、各段階濃度で希釈したＭＣ４Ｒアゴニスト化合物を加え、３７℃で３０分間反応させた。各アゴニスト化合物の活性（％）は、１００％×（サンプルの平均ＲＬＵ値－ビヒクル対照の平均ＲＬＵ値）／（最大対照の平均ＲＬＵ値－ビヒクル対照の平均ＲＬＵ値）で表され、前記値は、ＣＢＩＳデータ分析スイート（ChemInnovation社製、ＣＡ）で分析された。
【0137】
前記実験により得られた各化合物のメラノコルチン受容体のアゴニスト能をＥＣ50（ｎＭ）単位で測定した結果を下記表２に示した。
【表2】
【0138】
前記表２に示すように、生体内でよく知られているメラノコルチン受容体のうち、生体内でのエネルギー代謝と体重制御に関与するメラノコルチン－４受容体（ＭＣ４Ｒ）に関して、実施例の化合物は、比較例（Ａ９５及びＡ９６）の加藤物よりも優れた受容体アゴニスト能を有することが確認された。
【0139】
実験例３：β－アレスチンアッセイ
メラノコルチン受容体は、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）の一種であり、多くの神経伝達物質からのシグナルを伝達することにより、様々な生理的反応を制御している。ＧＰＣＲがリン酸化されると、β－アレスチンは受容体のリン酸化部分に結合し、他のタンパク質との相互作用を通じて細胞内の様々なシグナル伝達経路を活性化させる重要な役割を果たす。メラノコルチン受容体がアゴニストと相互作用すると、β－アレスチンが動員され、β－アレスチン媒介シグナル伝達経路に関与することが知られている。従って、β－アレスチンを測定することで、メラノコルチン受容体の活性を評価することができる。
メラノコルチン受容体は、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）の一種であり、多くの神経伝達物質からのシグナルを伝達することにより、様々な生理的反応を制御している。ＧＰＣＲがリン酸化されると、β－アレスチンは受容体のリン酸化部分に結合し、他のタンパク質との相互作用を通じて細胞内の様々なシグナル伝達経路を活性化させる重要な役割を果たす。メラノコルチン受容体がアゴニストと相互作用すると、β－アレスチンが動員され、β－アレスチン媒介シグナル伝達経路に関与することが知られている。従って、β－アレスチンを測定することで、メラノコルチン受容体の活性を評価することができる。
【0140】
Ｐｒｏｌｉｎｋ（ＰＫ）－タグ付きＭＣ１Ｒ、ＭＣ３Ｒ、ＭＣ４Ｒ、ＭＣ５Ｒと酵素受容体（ＥＡ）－タグ付きβ－アレスチンを一緒に発現させたＰａｔｈｈｕｎｔｅｒ ｅＸｐｒｅｓｓβ－アレスチン細胞株（Ｕ２ＯＳ細胞株）を樹立した。この細胞株のＭＣＲ－ＰＫ部分が活性化されると、β－アレスチン－ＥＡが動員され、β－ガラクトシダーゼ酵素断片である酸素アクセプター（ＥＡ）とＰｒｏｌｉｎｋ（ＰＫ）が相互作用する。活性化された酵素は、β－ガラクトシダーゼ活性により基質を加水分解して化学発光シグナルを生成し、その活性を測定することができる。Ｐａｔｈｈｕｎｔｅｒ ｅＸｐｒｅｓｓβ－アレスチン細胞株（Ｕ２ＯＳ細胞株）を培養した後、細胞を細胞培養プレートの各ウェルに接種し、５％ＣＯ2存在下、３７℃の恒温培養器で４８時間培養した。培養後、バッファーで５倍ｎ希釈したサンプルを５μＬ加え、ビヒクル濃度を１％に設定し、各段階濃度で希釈したＭＣ４Ｒアゴニスト化合物を加えた後、３７℃で９０分間反応させた。各アゴニスト化合物の活性（％）は、１００％×（サンプルの平均ＲＬＵ値－ビヒクル対照の平均ＲＬＵ値）／（対照リガンドの平均最大値－ビヒクル対照の平均ＲＬＵ値）で表され、前記値は、ＣＢＩＳデータ分析スイート（ChemInnovation社製、ＣＡ）で分析された。
【0141】
前記実験により得られた各化合物のメラノコルチン受容体のアゴニスト能をＥＣ50（ｎＭ）単位で測定した結果を下記表３に示した。
【表3】
【0142】
前記表３に示すように、生体内でよく知られているメラノコルチン受容体のうち、生体内でのエネルギー代謝と体重制御に関与するメラノコルチン－４受容体（ＭＣ４Ｒ）に関して、実施例の化合物は、比較例（Ａ９５及びＡ９６）の化合物よりも優れた受容体活性能を有することが確認された。
【0143】
実験例４：結合親和性
生体内のメラノコルチン受容体（ＭＣＲ）には５つのサブタイプが知られており、サブタイプ４であるＭＣ４Ｒは、エネルギー代謝と体重制御に関与していることが知られている。他のＭＣＲサブタイプの場合、皮膚の色素沈着、エネルギー恒常性、外分泌機能など、生体内の様々な機能の調節に関与しているため、ＭＣ４Ｒアゴニスト化合物のＭＣ４Ｒに対する選択性を確保することは、将来起こり得る副作用を防ぐ上で非常に重要である。従って、各ＭＣＲサブタイプに対するＭＣ４Ｒアゴニストとの受容体結合能を測定した。
生体内のメラノコルチン受容体（ＭＣＲ）には５つのサブタイプが知られており、サブタイプ４であるＭＣ４Ｒは、エネルギー代謝と体重制御に関与していることが知られている。他のＭＣＲサブタイプの場合、皮膚の色素沈着、エネルギー恒常性、外分泌機能など、生体内の様々な機能の調節に関与しているため、ＭＣ４Ｒアゴニスト化合物のＭＣ４Ｒに対する選択性を確保することは、将来起こり得る副作用を防ぐ上で非常に重要である。従って、各ＭＣＲサブタイプに対するＭＣ４Ｒアゴニストとの受容体結合能を測定した。
【0144】
ヒト組換えＭＣ１Ｒを発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞株、ＭＣ３Ｒ、ＭＣ４Ｒ及びＭＣ５Ｒを発現するＨＥＫ－２９３細胞株を確立した後、各細胞株から膜を回収した。９６ウェル細胞培養プレートに、１ウェル当たり３μｇのＭＣ１膜と０．０４ｎＭの125Ｉ－ＮＤＰ－α－ＭＳＨを加え、３７℃で２時間反応させた。３μｇのＭＣ３Ｒ、ＭＣ５膜と０．０３５ｎＭの125Ｉ－ＮＤＰ－α－ＭＳＨを３７℃で１時間反応させ、３．１２μｇのＭＣ４Ｒ膜と０．０２ｎＭ 125Ｉ－ＮＤＰ－α－ＭＳＨを３７℃で２時間反応させた。このとき、各段階濃度で希釈したＭＣＲアゴニストを含む２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ－ＫＯＨ吸着バッファー（ｐＨ７．０）を各ウェルに加え、反応させた。反応した溶液をフィルターに移し、吸着バッファーで洗浄した後、放射能を測定した。各総結合量から１μＭ（ＭＣ１Ｒ）、３μＭ（ＭＣ３Ｒ、ＭＣ４Ｒ、ＭＣ５Ｒ）ＮＤＰ－α－ＭＳＨ存在下での非特異的結合量を除いた値を125Ｉ－ＮＤＰ－α－ＭＳＨの特異的結合量とした。各段階濃度で希釈したアゴニストによって前記125Ｉ－ＮＤＰ－α－ＭＳＨ特異結合が阻害される程度を測定した。ＩＣ50は、125Ｉ－ＮＤＰ－α－ＭＳＨの５０％の特異結合を阻害する各アゴニストの濃度として表した。
【0145】
前記実験により得られた各化合物のメラノコルチン受容体への結合をＫｉ（ｎＭ）単位で測定した結果を表４、表５に示した。
【表4】
【表5】
【0146】
前記表４及び５に示すように、生体内でよく知られているメラノコルチン受容体のうち、生体内でのエネルギー代謝と体重制御に関与するメラノコルチン－４受容体（ＭＣ４Ｒ）に関して、実施例の化合物は、比較例（Ａ９５及びＡ９６）の化合物よりも優れた受容体結合能を有することが確認された。
【国際調査報告】