特表 2024-514281 ＮＫ細胞係合剤関連の有害作用の防止または軽減

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-04-01

(54)【発明の名称】ＮＫ細胞係合剤関連の有害作用の防止または軽減

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/06 20060101AFI20240325BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240325BHJP

   A61K 31/519 20060101ALI20240325BHJP

   A61K 31/436 20060101ALI20240325BHJP

   A61K 31/506 20060101ALI20240325BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240325BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240325BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20240325BHJP

【ＦＩ】

A61K45/06

A61K39/395 N

A61K31/519

A61K31/436

A61K31/506

A61P35/00

A61P43/00 121

C07K16/28 ZNA

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023552335

(86)(22)【出願日】2022-04-21

(85)【翻訳文提出日】2023-08-30

(86)【国際出願番号】 EP2022060469

(87)【国際公開番号】W WO2022223651

(87)【国際公開日】2022-10-27

(31)【優先権主張番号】21170037.2

(32)【優先日】2021-04-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】514099673

【氏名又は名称】エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】ヘーゲル， エレーヌ セシル

(72)【発明者】

【氏名】クライン， クリスティアン

(72)【発明者】

【氏名】ルクレール， ガブリエル

(72)【発明者】

【氏名】トーソ， アルベルト

(72)【発明者】

【氏名】ジマーマン， ティナ

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA20

4C084MA02

4C084NA06

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZC751

4C084ZC752

4C085AA14

4C085BB11

4C085CC23

4C085EE01

4C085GG02

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC82

4C086CB05

4C086CB22

4C086GA06

4C086GA10

4C086GA12

4C086MA02

4C086MA04

4C086NA06

4C086ZB26

4C086ZC75

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045DA76

(57)【要約】

本発明は、サイトカイン関連輸注反応などのＮＫ細胞係合剤に関連する有害作用の防止または軽減に関する。具体的には、本発明は、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲの阻害剤を使用した、そのような副作用の防止または軽減に関する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

個体における疾患の処置における使用のためのナチュラルキラー（ＮＫ）細胞係合剤であって、前記処置が、
（ａ）個体へのＮＫ細胞係合剤の投与、ならびに
（ｂ）個体へのＳｒｃキナーゼ（Ｓｒｃ）、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）および／または哺乳類ラパマイシン標的（ｍＴＯＲ）シグナル伝達の阻害剤の投与
を含む、ＮＫ細胞係合剤。

【請求項2】

個体における疾患の処置のための医薬の製造におけるＮＫ細胞係合剤の使用であって、前記処置が、
（ａ）個体へのＮＫ細胞係合剤の投与、ならびに
（ｂ）個体へのＳｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与
を含む、使用。

【請求項3】

個体における疾患の処置のための方法であって、前記方法が、
（ａ）個体へのＮＫ細胞係合剤の投与、ならびに
（ｂ）個体へのＳｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与
を含む、方法。

【請求項4】

Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与が、ＮＫ細胞係合剤の投与に関連する有害作用の防止または軽減のためである、請求項１から３のいずれか一項に記載のＮＫ細胞係合剤、使用または方法。

【請求項5】

個体へのＮＫ細胞係合剤の投与に関連する有害作用の防止または軽減における使用のための、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤。

【請求項6】

ＮＫ細胞係合剤の投与に関連する有害作用の防止または軽減のための医薬の製造における、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の使用。

【請求項7】

個体へのＮＫ細胞係合剤の投与に関連する有害作用を防止または軽減する方法であって、個体へのＳｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与を含む方法。

【請求項8】

Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤が、Ｓｒｃ阻害剤、任意にダサチニブである、請求項１から７のいずれか一項に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項9】

Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤が、任意にシロリムス、テムシロリムス、およびエベロリムスからなる群からｍＴＯＲ阻害剤選択される、ｍＴＯＲ阻害剤である、請求項１から８のいずれか一項に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項10】

Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤が、ＪＡＫ阻害剤、任意にＪＡＫ１および／またはＪＡＫ２阻害剤、任意にルキソリチニブである、請求項１から９のいずれか一項に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項11】

Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）が、ＮＫ細胞係合剤の投与に関連する有害作用の阻害を引き起こす、請求項１から１０のいずれか一項に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項12】

Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）が、ＮＫ細胞係合剤の投与に関連する所望の効果の阻害を引き起こさない、請求項１から１１のいずれか一項に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項13】

阻害が完全な阻害であるか、または臨床的に意味があり、かつ／または統計的に有意な阻害である、請求項１１または１２に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項14】

有害作用が、
（ｉ）サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）；
（ｉｉ）発熱、低血圧および／もしくは低酸素症；ならびに／または
（ｉｉｉ）１つ以上のサイトカイン、特に、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１β、ＭＣＰ－１およびＩＬ－１０からなる群、特にＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－８およびＴＮＦ－αからなる群から選択される１つ以上のサイトカインの上昇した血清レベル
である、請求項４から１３のいずれか一項に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項15】

Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与が、（個体における）有害作用の（臨床的）発現時に行われる、請求項４から１４のいずれか一項に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項16】

Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与が、
（ｉ）ＮＫ細胞係合剤の投与前、投与と同時、もしくは投与後；
（ｉｉ）断続的もしくは連続的；および／または
（ｉｉｉ）経口もしくは非経口、特に静脈内
である、請求項１から１５のいずれか一項に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項17】

Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与が、ＮＫ細胞係合剤の第１の投与に付随しており、任意に、ＮＫ細胞係合剤の第１の投与の前、投与と同時または投与の後である、請求項１から１６のいずれか一項に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項18】

ＮＫ細胞係合剤の投与が、
（ｉ）有効用量において；
（ｉｉ）非経口、特に静脈内；および／または
（ｉｉｉ）個体へのＮＫ細胞係合剤の第１の投与
である、請求項１から１７のいずれか一項に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項19】

ＮＫ細胞係合剤が、ＣＤ１６結合剤である、請求項１から１８のいずれか一項に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項20】

ＮＫ細胞係合剤が、Ｆｃ領域、特にＩｇＧ Ｆｃ領域、より詳細にはＩｇＧ_１ Ｆｃ領域を含む、請求項１から１９のいずれか一項に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項21】

ＮＫ細胞係合剤が、抗体、特にエフェクター増強抗体である、請求項１から２０のいずれか一項に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項22】

ＮＫ細胞係合剤が、標的細胞抗原に結合する、請求項１９または２０に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項23】

標的細胞抗原が、ＣＤ２０である、請求項２２に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項24】

ＮＫ細胞係合剤が、エフェクター増強抗ＣＤ２０抗体である、請求項１から２３のいずれか一項に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項25】

抗ＣＤ２０抗体が、配列番号２の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号３のＨＣＤＲ２、および配列番号４のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号５の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号６のＬＣＤＲ２、および配列番号７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項２４に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項26】

抗ＣＤ２０抗体が、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である重鎖可変領域配列、および／または配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である軽鎖可変領域配列を含む、請求項２４または２５に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項27】

抗ＣＤ２０抗体が、操作されていない抗体と比較して、Ｆｃ領域中の増加した割合の非フコシル化オリゴ糖を有するように操作されている、請求項２４から２６のいずれか一項に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項28】

抗ＣＤ２０抗体が、オビヌツズマブである、請求項２４から２７のいずれか一項に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項29】

（ＮＫ細胞係合剤によって処置される）疾患が、がんである、請求項１から２８のいずれか一項に記載のＮＫ細胞係合剤、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法。

【請求項30】

本明細書で上に記載するような発明。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、サイトカイン関連輸注反応などのナチュラルキラー（ＮＫ）細胞係合剤に関連する有害作用の防止または軽減に関する。具体的には、本発明は、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲの阻害剤を使用した、そのような副作用の防止または軽減に関する。

【背景技術】

【0002】

エフェクター増強抗体などのナチュラルキラー（ＮＫ）細胞係合剤は、がん免疫療法薬としてかなり有望である。しかしながら、エフェクター増強抗体などのナチュラルキラー（ＮＫ）細胞係合剤による処置は、サイトカイン放出のために安全性の責務と関連し得る。ＮＫ細胞係合剤、例えば、抗体オビヌツズマブについて報告される一般的な有害作用は、サイトカイン放出によって引き起こされ得る輸注関連反応（ＩＲＲ）である。ＩＲＲの症状は、多様であり、発熱、悪寒、頭痛、吐き気、低血圧、呼吸困難、倦怠感、および／または下痢が挙げられ、生命を脅かす場合もある（例えば、Ｓｎｏｗｄｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｒｓｉｎｇ Ｐｒａｃｔｉｃｅ （２０１５）２１（Ｓｕｐｐｌ．２），１５－２７を参照されたい）。これらの重度な毒性を軽減するためのアプローチが大いに必要とされている。

【0003】

Ｓｒｃキナーゼ阻害剤ダサチニブは、有害作用、特に、ＣＡＲ－Ｔ細胞などのＴ細胞係合剤（Ｗｅｂｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ Ａｄｖａｎｃｅｓ （２０１９） ３， ７１１－７； Ｍｅｓｔｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ （２０１９） １１， ｅａａｕ５９０７）ならびにＴ細胞二重特異性抗体（ＴＣＢ）（Ｌｅｃｌｅｒｃｑ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ Ｃａｎｃｅｒ （２０２０） ８ （Ｓｕｐｐｌ ３）： Ａ６９０ （ａｂｓｔｒａｃｔ ６５３））によって引き起こされるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の防止または軽減の有力な候補として同定された。これらの薬剤の望ましい活性と望ましくない活性を区別することなく、ダサチニブは、ＣＡＲ－Ｔ細胞の機能性とＴＣＢ誘導性Ｔ細胞の機能性を完全にオフにする。

【0004】

ＮＫ細胞係合剤の治療有効性を維持しながら、その有害作用を防止または軽減する方法が非常に望ましい。

【発明の概要】

【0005】

本発明者らは、Ｓｒｃキナーゼ（Ｓｒｃ）、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）および／または哺乳類ラパマイシン標的（ｍＴＯＲ）シグナル伝達の阻害剤が、ＮＫ細胞係合療法によるＣＲＳを軽減するために使用することができることを見出した。ダサチニブなどのＳｒｃ阻害剤、テムシロリムス、シロリムスおよびエベロリムスなどのｍＴＯＲ阻害剤、ならびにルキソリチニブなどのＪＡＫ阻害剤は、ＮＫ細胞係合抗体によって誘発されるサイトカイン放出を強力に防止し、同時にそのような抗体によって媒介される標的細胞の死滅を維持することが見出された。これらの結果は、ＮＫ細胞係合剤によって媒介されるＩＲＲの発症および標的細胞の死滅に関連するサイトカイン放出のメカニズムを引き離すことができる証拠を提供し、Ｓｒｃキナーゼ（Ｓｒｃ）、哺乳類ラパマイシン標的（ｍＴＯＲ）および／またはヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）の阻害剤の使用が、ＮＫ細胞係合治療に関連するＩＲＲの軽減のための魅力的な戦略として示唆している。

【0006】

したがって、第１の態様では、本発明は、個体における疾患の処置における使用のためのナチュラルキラー（ＮＫ）細胞係合剤を提供し、ここで前記処置は、
（ａ）個体へのＮＫ細胞係合剤の投与、ならびに
（ｂ）個体へのＳｒｃキナーゼ（Ｓｒｃ）、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）および／または哺乳類ラパマイシン標的（ｍＴＯＲ）シグナル伝達の阻害剤の投与
を含む。

【0007】

本発明はさらに、個体における疾患の処置のための医薬の製造におけるＮＫ細胞係合剤の使用を提供し、ここで、前記処置は、
（ａ）個体へのＮＫ細胞係合剤の投与、ならびに
（ｂ）個体へのＳｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与
を含む。

【0008】

本発明はまた、個体における疾患の処置のための方法を提供し、ここで、前記方法は、
（ａ）個体へのＮＫ細胞係合剤の投与、ならびに
（ｂ）個体へのＳｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与
を含む。

【0009】

上記態様のいずれかによれば、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、ＮＫ細胞係合剤の投与に関連する有害作用の防止または軽減のためであり得る。

【0010】

別の態様では、本発明は、個体へのＮＫ細胞係合剤の投与に関連する有害作用の防止または軽減における使用のための、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤を提供する。

【0011】

本発明はさらに、ＮＫ細胞係合剤の投与に関連する有害作用の防止または軽減のための医薬の製造における、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の使用を提供する。

【0012】

本発明はまた、個体へのＮＫ細胞係合剤の投与に関連する有害作用を防止または軽減する方法であって、個体へのＳｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与を含む、方法を提供する。

【0013】

上記および本明細書に記載の使用のためのＮＫ細胞係合剤、使用のための、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤、使用または方法は、単独でまたは組み合わせて、以下に記載される特徴のいずれかを組み込むことができる（文脈が別段の指示をしない限り）。

【0014】

本明細書で特に定義しない限り、用語は、当技術分野で一般的に使用されるものとして本明細書で使用される。

【0015】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤は、Ｓｒｃ阻害剤である。より具体的な態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤は、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤、特に小分子Ｓｒｃキナーゼ阻害剤である。特定の態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤は、ダサチニブである。

【0016】

ダサチニブは、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤であり、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）および急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の特定の症例の処置のために、（とりわけ）Ｓｐｒｙｃｅｌ（登録商標）の商品名で販売されている。そのＣＡＳ番号、ＩＵＰＡＣ名および化学構造を以下に示す。
ＣＡＳ番号：３０２９６２－４９－８
ＩＵＰＡＣ名：Ｎ－（２－クロロ－６－メチルフェニル）－２－［［６－［４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジニル］－２－メチル－４－ピリミジニル］アミノ］－５－チアゾールカルボキサミド一水和物
化学構造：

【0017】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤である。より具体的な態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤は、ｍＴＯＲキナーゼ阻害剤、特に小分子ｍＴＯＲキナーゼ阻害剤である。

【0018】

「ｍＴＯＲ」は、哺乳類ラパマイシン標的（ＦＫ５０６結合タンパク質１２－ラパマイシン複合体関連タンパク質１（ＦＲＡＰ１）としても知られる）を表し、ホスファチジルイノシトール３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）関連キナーゼのファミリーに属するセリン／スレオニン特異的プロテインキナーゼである。これは、異なる細胞プロセスを調節する２つの異なるタンパク質複合体、ｍＴＯＲ複合体１（ＴＯＲＣ１）とｍＴＯＲ複合体２（ＴＯＲＣ２）のコアコンポーネントとして機能する。ヒトｍＴＯＲは、ＵｎｉＰｒｏｔエントリーＰ４２３４５（バージョン２１８）に記載されている。ｍＴＯＲ阻害剤は、ｍＴＯＲを阻害する化合物である。ｍＴＯＲの最も確立された阻害剤は、ラパマイシンの誘導体であるいわゆるラパログである。ラパログには、シロリムス、テムシロリムス、エベロリムス、およびリダフォロリムスが含まれる。第２世代のｍＴＯＲ阻害剤は、ｍＴＯＲの触媒部位でＡＴＰと競合するように設計されたＡＴＰ競合的ｍＴＯＲキナーゼ阻害剤である。

【0019】

本発明において有用であると考えられる例示的なｍＴＯＲ阻害剤は、以下の表１に提供される。

【0020】

いくつかの態様では、ｍＴＯＲ阻害剤はラパマイシンの誘導体（ラパログとしても知られる）である。

【0021】

いくつかの態様では、ｍＴＯＲ阻害剤は、シロリムス、テムシロリムス、エベロリムスおよびリダフォロリムスからなる群、特にシロリムス、テムシロリムス、およびエベロリムスからなる群から選択される。

【0022】

特定の態様では、ｍＴＯＲ阻害剤はシロリムスである。さらなる特定の態様では、ｍＴＯＲ阻害剤はテムシロリムスである。さらなる特定の態様では、ｍＴＯＲ阻害剤はエベロリムスである。

【0023】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤は、ＪＡＫ阻害剤である。より具体的な態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤は、ＪＡＫキナーゼ阻害剤、特に小分子ＪＡＫキナーゼ阻害剤である。

【0024】

「ＪＡＫ」はヤヌスキナーゼを表し、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路を介してサイトカイン媒介シグナルを伝達する細胞内非受容体チロシンキナーゼのファミリーを指す。ＪＡＫは２つのほぼ同一のリン酸転移ドメインを持ち、１つはキナーゼ活性を示し、もう１つは最初のキナーゼ活性を負に制御する。４つのＪＡＫファミリーメンバーは、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、およびＴＹＫ２（チロシンキナーゼ２）である。本明細書の特定の態様では、ＪＡＫは、ＪＡＫ１および／またはＪＡＫ２（ＪＡＫ１／２）である。ヒトＪＡＫ１およびＪＡＫ２は、それぞれＵｎｉＰｒｏｔエントリーＰ２３４５８（バージョン２２１）およびＰ６０６７４（バージョン２２４）に記載されている。ＪＡＫ阻害剤（ジャキニブとも呼ばれる）は、ＪＡＫファミリーの酵素（ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＴＹＫ２）のうちの１つ以上の活性を阻害し、それによってＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路を妨害する化合物である。

【0025】

本発明において有用であると考えられる例示的なＪＡＫ阻害剤は、以下の表２に提供される。

【0026】

いくつかの態様では、ＪＡＫ阻害剤は、ＪＡＫ１および／またはＪＡＫ２（ＪＡＫ１／２）阻害剤である。いくつかの態様では、ＪＡＫ阻害剤は、ルキソリチニブ、バリシチニブ、モメロチニブ、ウパダシチニブ、フィルゴチニブ、アブロシチニブ、イタシチニブ、ソルシチニブ、オクラシチニブ、フェドラチニブ、ガンドチニブ、レスタウルチニブ、およびパクリチニブからなる群から選択される。

【0027】

特定の態様では、ＪＡＫ阻害剤は、ＪＡＫ１およびＪＡＫ２阻害剤である。特定のそのような態様では、ＪＡＫ阻害剤は、ルキソリチニブ、バリシチニブ、およびモメロチニブからなる群から選択される。

【0028】

いくつかの態様では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ１阻害剤である。特定のそのような態様では、ＪＡＫ阻害剤は、ウパダシチニブ、フィルゴチニブ、アブロシチニブ、イタシチニブ、ソルシチニブ、およびオクラシチニブからなる群から選択される。

【0029】

いくつかの態様では、ＪＡＫ阻害剤はＪＡＫ２阻害剤である。特定のそのような態様では、ＪＡＫ阻害剤は、フェドラチニブ、ガンドチニブ、レスタウルチニブ、およびパクリチニブからなる群から選択される。

【0030】

特定の態様では、ＪＡＫ阻害剤はルキソリチニブである。

【0031】

特定の態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤は、ダサチニブ、シロリムス、テムシロリムス、エベロリムス、およびルキソリチニブからなる群から選択される。さらなる特定の態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤は、ダサチニブ、シロリムス、およびルキソリチニブからなる群から選択される。

【0032】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）は、ＮＫ細胞係合剤の活性の阻害を引き起こす。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）は、ＮＫ細胞係合剤の別の活性の阻害を引き起こさない。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）は、ＮＫ細胞係合剤の第１の活性の阻害を引き起こすが、ＮＫ細胞係合剤の第２の活性の阻害を引き起こさない。これらの態様のいくつかでは、前記阻害は完全な阻害である。

【0033】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）は、ＮＫ細胞係合剤の第１の活性の阻害およびＮＫ細胞係合剤の第２の活性の阻害を引き起こし、ここで、第１の活性の前記阻害は、 第２の活性の前記阻害よりも強い。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）は、ＮＫ細胞係合剤の第１の活性の阻害およびＮＫ細胞係合剤の第２の活性の阻害を引き起こし、ここで、第１の活性の前記阻害は、 完全な阻害であり、第２の活性の前記阻害は部分的阻害である。

【0034】

ＮＫ細胞係合剤の「活性」は、ＮＫ細胞係合剤によって引き起こされる個体の身体における反応を指す。そのような活性には、ＮＫ細胞、特にＣＤ１６^＋ＮＫ細胞の細胞応答（複数可）、例えば、増殖、分化、サイトカイン分泌、細胞傷害性エフェクター分子の放出、細胞傷害活性、および活性化マーカーの発現など、ならびに／または標的細胞、特にＮＫ細胞係合剤の標的細胞抗原を発現する標的細胞（例えば、腫瘍細胞）に対する効果、例えば、標的細胞の溶解などが含まれ得る。

【0035】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）は、免疫細胞、特に（ＮＫ細胞係合剤によって誘導される）ＮＫ細胞によるサイトカイン分泌の阻害を引き起こす。いくつかの態様では、前記免疫細胞は、ＣＤ１６^＋免疫細胞である。いくつかの態様では、前記サイトカインは、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１β、ＭＣＰ－１およびＩＬ－１０からなる群、特にＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－８およびＴＮＦ－αからなる群から選択される１つ以上のサイトカインである。免疫細胞は、ＮＫ細胞、マクロファージ、単球、Ｔ細胞などの様々な免疫細胞型を含み得る。いくつかの態様では、前記Ｔ細胞は、γδ Ｔ細胞である。いくつかの態様では、前記阻害は完全な阻害である。

【0036】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）は、（ＮＫ細胞係合剤によって誘導される）ＮＫ細胞の活性化の阻害を引き起こさない。いくつかの態様では、前記阻害は完全な阻害である。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）は、（ＮＫ細胞係合剤によって誘導される）ＮＫ細胞の活性化の阻害を引き起こし、ここで前記阻害は部分的阻害である。

【0037】

本明細書で使用される「ＮＫ細胞の活性化」または「ＮＫ細胞活性化」は、ＮＫ細胞、特にＣＤ１６^＋ＮＫ細胞の、増殖、分化、細胞傷害性エフェクター分子の放出、細胞傷害活性、および活性化マーカーの発現から選択される１つ以上の細胞応答を指す。ＮＫ細胞活性化を測定するための適切なアッセイは、当技術分野で知られており、本明細書に記載されている。特定の態様では、ＮＫ細胞活性化は、活性化マーカーの発現、特に（場合によりフローサイトメトリーによって測定される）ＣＤ２５および／またはＣＤ６９の発現である。特定の態様では、ＮＫ細胞活性化は、ＮＫ細胞上のＣＤ２５および／またはＣＤ６９の発現を、例えばフローサイトメトリーにより測定することによって決定される。

【0038】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）は、（ＮＫ細胞係合剤によって誘導される）ＮＫ細胞の細胞傷害活性の阻害を引き起こさない。いくつかの態様では、前記阻害は完全な阻害である。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）は、（ＮＫ細胞係合剤によって誘導される）ＮＫ細胞の細胞傷害活性の阻害を引き起こし、ここで前記阻害は部分的阻害である。

【0039】

ＮＫ細胞の「細胞傷害活性」とは、ＮＫ細胞、特にＣＤ１６^＋ＮＫ細胞による標的細胞の溶解（すなわち死滅）の誘導を指す。細胞傷害活性は、典型的には、ＮＫ細胞からのグランザイムＢおよび／またはパーフォリンなどの細胞傷害性エフェクター分子の放出に関連するＮＫ細胞の脱顆粒を伴う。

【0040】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）は、（ＮＫ細胞係合剤によって誘導される）ＮＫ細胞によるサイトカイン分泌の阻害を引き起こすが、（ＮＫ細胞係合剤によって誘導される）ＮＫ細胞の活性化および／または細胞傷害活性の阻害を引き起こさない。これらの態様のいくつかでは、前記阻害は完全な阻害である。

【0041】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）は、（ＮＫ細胞係合剤によって誘導される）ＮＫ細胞によるサイトカイン分泌の阻害、ならびに（ＮＫ細胞係合剤によって誘導される）ＮＫ細胞の活性化および／または細胞傷害活性の阻害を引き起こし、ここで、サイトカイン分泌の前記阻害は、活性化および／または細胞傷害活性の前記阻害よりも強い。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）は、（ＮＫ細胞係合剤によって誘導される）ＮＫ細胞によるサイトカイン分泌の阻害、ならびに（ＮＫ細胞係合剤によって誘導される）ＮＫ細胞の活性化および／または細胞傷害活性の阻害を引き起こし、ここで、サイトカイン分泌の前記阻害は完全な阻害であり、活性化および／または細胞傷害活性の前記阻害は部分的阻害である。

【0042】

本明細書における阻害は、部分的阻害または完全な阻害であり得る。完全な阻害は、部分的な阻害よりも強い阻害である。いくつかの態様における部分的阻害は、３０％以下、４０％以下、５０％以下、６０％以下、または７０％以下の阻害である。いくつかの態様では、部分的阻害は、３０％以下の阻害である。いくつかの態様では、部分的阻害は、４０％以下の阻害である。いくつかの態様では、部分的阻害は、５０％以下の阻害である。いくつかの態様では、部分的阻害は、６０％以下の阻害である。いくつかの態様では、部分的阻害は、７０％以下の阻害である。いくつかの態様における完全な阻害は、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％の阻害である。いくつかの態様では、完全な阻害は、少なくとも８０％の阻害である。いくつかの態様では、完全な阻害は、少なくとも９０％の阻害である。いくつかの態様では、完全な阻害は、１００％の阻害である。いくつかの態様では、部分的阻害は、５０％以下の阻害であり、完全な阻害は、少なくとも８０％の阻害である。いくつかの態様では、完全な阻害は臨床的に意味があり、かつ／もしくは統計的に有意であり、ならびに／または部分的な阻害は臨床的に意味がなく、かつ／もしくは統計的に有意ではない。

【0043】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）は、個体において１つ以上のサイトカインの血清レベルの減少を引き起こす。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）は、個体において免疫細胞、特にＮＫ細胞による１つ以上のサイトカインの分泌の減少を引き起こす。いくつかの態様では、前記免疫細胞は、ＣＤ１６^＋免疫細胞である。いくつかの態様では、前記１つ以上のサイトカインは、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１β、ＭＣＰ－１およびＩＬ－１０からなる群、特にＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－８およびＴＮＦ－αからなる群から選択される。免疫細胞は、ＮＫ細胞、マクロファージ、単球、Ｔ細胞などの様々な免疫細胞型を含み得る。いくつかの態様では、前記Ｔ細胞は、γδ Ｔ細胞である。

【0044】

いくつかの態様では、前記減少は、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤が（個体に）所定の時間投与されなかった後も持続する。いくつかの態様では、前記時間量は、約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、１２時間、１６時間、２０時間、２４時間、３６時間、４８時間、７２時間、または９６時間である。いくつかの態様では、前記減少は、ＮＫ細胞係合剤のその後の投与後にも持続される。特に、前記減少は、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与が停止された後／Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤のさらなる投与がなされなかった後でも持続される。血清レベル／サイトカイン分泌の前記減少は、特に、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤を投与していない個体（同じ個体を含む）における血清レベル／サイトカイン分泌と比較したものである（すなわち、そのような場合、血清レベル／サイトカイン分泌は、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与なし／投与前の血清レベル／サイトカイン分泌と比較して減少している）。血清レベル／サイトカイン分泌の前記減少は、特に、ＮＫ細胞係合剤の投与（特に第１の投与）を伴うが、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与を伴わない個体（同じ個体を含む）における血清レベル／サイトカイン分泌と比較したものである（すなわち、そのような場合、血清レベル／サイトカイン分泌は、ＮＫ細胞係合剤の投与あり／投与後であるが、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与なし／投与前の血清レベル／サイトカイン分泌と比較して減少している）。前記減少がなければ、血清レベル／サイトカイン分泌は、ＮＫ細胞係合剤（の投与）に関連して特に上昇／増加し得る。いくつかの態様では、前記減少は臨床的に意味があり、かつ／または統計的に有意である。いくつかの態様では、前記減少は、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、または少なくとも７０％である。いくつかの態様では、前記減少は少なくとも３０％である。いくつかの態様では、前記減少は少なくとも４０％である。いくつかの態様では、前記減少は少なくとも５０％である。いくつかの態様では、前記減少は少なくとも６０％である。いくつかの態様では、前記減少は少なくとも７０％である。

【0045】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）は、ＮＫ細胞係合剤の投与に関連する有害作用の阻害を引き起こす。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）は、ＮＫ細胞係合剤の投与に関連する所望の効果の阻害を引き起こさない。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）は、ＮＫ細胞係合剤の投与に関連する有害作用の阻害を引き起こすが、ＮＫ細胞係合剤の投与に関連する所望の効果の阻害を引き起こさない。これらの態様のいくつかでは、前記阻害は完全な阻害である。これらの態様のいくつかでは、前記阻害は臨床的に意味があり、かつ／または統計的に有意である。

【0046】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）は、ＮＫ細胞係合剤の投与に関連する有害作用の阻害、およびＮＫ細胞係合剤の投与に関連する所望の効果の阻害を引き起こし、ここで、有害作用の前記阻害は、所望の効果の前記阻害よりも強い。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）は、ＮＫ細胞係合剤の投与に関連する有害作用の阻害、およびＮＫ細胞係合剤の投与に関連する所望の効果の阻害を引き起こし、ここで、有害作用の前記阻害は完全な阻害であり、有益な効果の前記阻害は部分的阻害である。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤（の投与）は、ＮＫ細胞係合剤の投与に関連する有害作用の阻害、およびＮＫ細胞係合剤の投与に関連する所望の効果の阻害を引き起こし、ここで、有害作用の前記阻害は、臨床的に意味があり、かつ／または統計的に有意な阻害であり、有益な効果の前記阻害は、臨床的に意味がなく、かつ／または統計的に有意な阻害ではない。

【0047】

「所望の効果」とは、本明細書では特にＮＫ細胞係合剤を用いた個体の処置における薬物療法から得られる有益かつ所望の効果であり、すなわち、例えば腫瘍細胞の死滅、腫瘍増殖の減少または遅延、腫瘍体積の減少、腫瘍転移の減少または防止、無増悪または全生存期間の増加、疾患症状の軽減などの治療効果または予防効果である。

【0048】

「有害作用」は、「副作用」または「有害事象」と表記されることもあり（特に臨床試験において）、本明細書では特にＮＫ細胞係合剤を用いた、個体の処置における薬物療法から得られる有害かつ望ましくない効果である。

【0049】

本発明によれば、有害作用は、ＮＫ細胞係合剤の投与に関するものである。いくつかの態様では、有害作用は、ＮＫ細胞係合剤の第１の投与に関連している。いくつかの態様では、有害作用は、ＮＫ細胞係合剤の第１の投与時に起こる。いくつかの態様では、有害作用は、主に、またはＮＫ細胞係合剤の第１の投与時にのみ起こる。いくつかの態様では、有害作用は、ＮＫ細胞係合剤の投与、特に第１の投与から１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、７２時間または９６時間以内に起こる。いくつかの態様では、特に、ＮＫ細胞係合体の単回投与のみが行われる場合（ＮＫ細胞係合剤による処置の過程で）、有害作用は、ＮＫ細胞係合剤の投与から３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１４日または２１日以内に起こる。

【0050】

いくつかの態様では、前記有害作用は、輸注関連反応（ＩＲＲ）、特にサイトカイン放出に関連するＩＲＲである。

【0051】

「輸注関連反応」（「ＩＲＲ」と略記される）は、治療剤（例えば、ＮＫ細胞係合剤）の（静脈内）投与に関連する有害作用を指す。ＩＲＲは、常に、免疫系に関与し、治療剤の投与にタイムリーに関連している。それらは、典型的には、治療剤の投与中または投与直後、すなわち、典型的には投与（典型的には静脈内注入）後２４時間以内に、主には第１の投与時に起こる。場合によっては、ＩＲＲはまた、後でのみ、例えば、治療剤の投与後数日で起こり得る。通常、その後の投与により発生率と重症度は減少する。症状は、症候性の不快感から致命的な事象まで多岐にわたり、発熱、悪寒、熱病（ｐｙｒｅｘｉａ）、低血圧、低酸素症、呼吸困難、潮紅、皮膚発疹、筋肉痛、頻脈、頭痛、めまい、吐き気、嘔吐および／または臓器不全を含み得る。ＩＲＲは、グレード１（軽症）からグレード４（生命を脅かす）に重症度に従って等級付けされ得る。例えば、Ｓｎｏｗｄｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｒｓｉｎｇ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（２０１５）２１（Ｓｕｐｐｌ．２），１５－２７；Ｖｏｇｅｌ， Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｎｕｒｓｉｎｇ（２０１０）１４，Ｅ１０－２１）を参照されたい。本明細書の特定の態様では、ＩＲＲは、治療剤（例えば、ＮＫ細胞係合剤）の投与中または投与直後（例えば、１日以内）の対象の血液中の腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－α）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－８（ＩＬ－８）などのサイトカインのレベルの増加によって引き起こされ、有害な症状をもたらす。

【0052】

いくつかの態様では、前記有害作用は、発熱、低血圧および／または呼吸困難である。

【0053】

いくつかの態様では、前記有害作用は、１つ以上のサイトカインの上昇した血清レベルである。前記上昇した血清レベルは、特に、健常個体の血清レベル、および／またはＮＫ細胞係合剤を投与していない個体（同じ個体を含む）の血清レベルと比較したものである（すなわち、そのような場合、血清レベルは、ＮＫ細胞係合剤を投与しない場合の血清レベルと比較して上昇している）。いくつかの態様では、前記１つ以上のサイトカインは、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１β、ＭＣＰ－１およびＩＬ－１０からなる群、特にＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－８およびＴＮＦ－αからなる群から選択される。

【0054】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、（個体における）有害作用の（臨床的）発現時に行われる。前記投与は、例えば、有害作用の発現（すなわち、発熱などの副作用の臨床症状の発生）後の約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、１２時間、１６時間、２０時間または２４時間以内であり得る。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、（個体における）有害作用の（臨床的）発現に応答する。

【0055】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、ＮＫ細胞係合剤の投与前である。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、ＮＫ細胞係合剤の投与と同時である。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、ＮＫ細胞係合剤の投与後である。Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与が、ＮＫ細胞係合剤の投与の前または後である場合、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤のそのような投与は、例えば、ＮＫ細胞係合剤の投与前または投与後のそれぞれ約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、１２時間、１６時間、２０時間または２４時間以内であり得る。Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、断続的または連続的であり得る。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、経口である。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、非経口、特に静脈内である。

【0056】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、ＮＫ細胞係合剤の活性の阻害を引き起こすのに十分な用量である。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、ＮＫ細胞係合剤の別の活性の阻害を引き起こすには不十分な用量である。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、ＮＫ細胞係合剤の第１の活性の阻害を引き起こすのに十分な用量であるが、ＮＫ細胞係合剤の第２の活性の阻害を引き起こすには不十分な用量である。これらの態様のいくつかでは、前記阻害は完全な阻害である。

【0057】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、免疫細胞、特に（ＮＫ細胞係合剤によって誘導される）ＮＫ細胞によるサイトカイン分泌の阻害を引き起こすのに十分な用量である。いくつかの態様では、前記免疫細胞は、ＣＤ１６^＋免疫細胞である。いくつかの態様では、前記サイトカインは、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１β、ＭＣＰ－１およびＩＬ－１０からなる群、特にＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－８およびＴＮＦ－αからなる群から選択される１つ以上のサイトカインである。免疫細胞は、ＮＫ細胞、マクロファージ、単球、Ｔ細胞などの様々な免疫細胞型を含み得る。いくつかの態様では、前記ＮＫ細胞はＣＤ１６^＋ＮＫ細胞である。いくつかの態様では、前記Ｔ細胞はγδＴ細胞である。いくつかの態様では、前記阻害は完全な阻害である。

【0058】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、（ＮＫ細胞係合剤によって誘導される）ＮＫ細胞の活性化の阻害を引き起こすには不十分な用量である。いくつかの態様では、前記阻害は完全な阻害である。

【0059】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、（ＮＫ細胞係合剤によって誘導される）ＮＫ細胞の細胞傷害活性の阻害を引き起こすには不十分な用量である。いくつかの態様では、前記阻害は完全な阻害である。

【0060】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、（ＮＫ細胞係合剤によって誘導される）ＮＫ細胞によるサイトカイン分泌の阻害を引き起こすのに十分な用量であるが、（ＮＫ細胞係合剤によって誘導される）ＮＫ細胞の活性化および／または細胞傷害活性の阻害を引き起こすには不十分な用量である。これらの態様のいくつかでは、前記阻害は完全な阻害である。

【0061】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、個体において１つ以上のサイトカインの血清レベルの減少を引き起こすのに十分な用量である。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、個体において免疫細胞、特にＮＫ細胞による１つ以上のサイトカインの分泌の減少を引き起こすのに十分な用量である。いくつかの態様では、前記免疫細胞は、ＣＤ１６^＋免疫細胞である。いくつかの態様では、前記１つ以上のサイトカインは、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１β、ＭＣＰ－１およびＩＬ－１０からなる群、特にＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－８およびＴＮＦ－αからなる群から選択される。免疫細胞は、ＮＫ細胞、マクロファージ、単球、Ｔ細胞などの様々な免疫細胞型を含み得る。いくつかの態様では、前記Ｔ細胞は、γδ Ｔ細胞である。

【0062】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、ＮＫ細胞係合剤の投与に関連する有害作用の阻害を引き起こすのに十分な用量である。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、ＮＫ細胞係合剤の投与に関連する所望の効果の阻害を引き起こすには不十分な用量である。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、ＮＫ細胞係合剤の投与に関連する有害作用の阻害を引き起こすのに十分な用量であるが、ＮＫ細胞係合剤の投与に関連する所望の効果の阻害を引き起こすには不十分な用量である。これらの態様のいくつかでは、前記阻害は完全な阻害である。これらの態様のいくつかでは、前記阻害は臨床的に意味があり、かつ／または統計的に有意である。

【0063】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、有効用量である。

【0064】

薬剤、例えば、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／もしくはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤またはＮＫ細胞係合剤の「有効量」または「有効用量」は、所望の治療または予防結果を達成するのに必要な投薬量および期間で有効な量を指す。

【0065】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤に利用可能な用量強度に等しい用量である。通常、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の特定の阻害剤について、いくつかの用量強度（すなわち、特定量の有効成分を含む錠剤またはカプセルなどの剤形）が利用可能である。そのような（商業的に）利用可能な用量強度で、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤を投与することが最も好都合であろう。例えば、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤がダサチニブである場合、それは好ましくは２０ｍｇ、５０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、１００ｍｇまたは１４０ｍｇ、特に１００ｍｇの用量で投与され得る（投与は好ましくは経口投与である）。例えば、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤がエベロリムスである場合、それは好ましくは２．５ｍｇ、５ｍｇ、７．５ｍｇまたは１０ｍｇの用量で投与され得る（投与は好ましくは経口投与である）。例えば、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤がシロリムスである場合、それは好ましくは０．５ｍｇ、１ｍｇまたは２ｍｇの用量で投与され得る（投与は好ましくは経口投与である）。例えば、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤がルキソリチニブである場合、好ましくは５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇまたは２５ｍｇの用量で投与され得る（投与は好ましくは経口投与である）。Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤がテムシロリムスである場合、例えば１２．５ｍｇまたは２５ｍｇの用量で投与され得る（投与は好ましくは静脈内投与であり、特に２５ｍｇ／ｍｌ活性成分の溶液を使用する）。

【0066】

いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は毎日である。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、１日１回である。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、本明細書で言及したような用量で１日１回である。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、有害作用が持続する期間である（すなわち、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、有害作用の発現から、有害作用の減少または消失までである）。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、有害作用が防止または軽減された後に中止される。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、有害作用の減少または消失後に停止される。前記減少は、特に臨床的に意味があり、かつ／または統計的に有意である。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回または１０回、特に、ＮＫ細胞係合剤による個体の処置の過程において、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回または１０回である。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日または１０日間である。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、１日１回で、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日または１０日間である。Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、一般に、ＮＫ細胞係合剤の投与に付随している。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、ＮＫ細胞係合剤の第１の投与に付随している。前記第１の投与は、特に、ＮＫ細胞係合剤による個体の処置の過程におけるＮＫ細胞係合剤の第１の投与である。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、ＮＫ細胞係合剤の第１の投与と同時である。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、ＮＫ細胞係合剤の第１の投与の前に行われる。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、ＮＫ細胞係合剤の第１の投与の後である。いくつかの態様では、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与は、ＮＫ細胞係合剤の第１の投与の後であり、ＮＫ細胞係合剤の第２の投与の前である。Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与が、ＮＫ細胞係合剤の（第１の）投与の前または後である場合、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤のそのような投与は、例えば、ＮＫ細胞係合剤の投与前または投与後のそれぞれ約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、１２時間、１６時間、２０時間、２４時間、４８時間または７２時間以内であり得る。

【0067】

いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤の投与は、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与よりも長期間である。いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤の投与は、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の投与が停止された後も継続する。いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤の投与は単回投与または反復投与である。ＮＫ細胞係合剤による個体の処置の過程において、ＮＫ細胞係合剤は１回または数回投与され得る。例えば、ＮＫ細胞係合剤による個体の処置は、ＮＫ細胞係合剤の１つ以上の投与をそれぞれが含む複数の処置サイクルを含むことができる。いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤の投与は、第１および第２の投与を含む。

【0068】

本発明における使用のために、ＮＫ細胞係合剤は、良好な医療行為と一致する様式で調製され、投薬され、投与されるであろう。この文脈において考慮すべき要因には、処置される特定の障害、処置される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床的症状、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジューリング、および医師に公知な他の要因が含まれる。

【0069】

いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤の投与は有効用量においてである。全身投与の場合、有効用量は、細胞培養アッセイなどのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイから最初に推定することができる。次いで、細胞培養物で決定されるＩＣ_５０を含む血中濃度範囲を達成するために、用量を動物モデルで配合してもよい。そのような情報を使用し、ヒトにおける有用な用量をさらに正確に決定することができる。また、初期投薬量を、ｉｎ ｖｉｖｏデータから、例えば、動物モデルから、当技術分野で周知の技術を使用して概算することができる。投与量および投与間隔は、治療効果を維持するのに十分なＮＫ細胞係合剤の血漿レベルを提供するために個別に調整され得る。注射による投与のための通常の患者投薬量は、約０．１～５０ｍｇ／ｋｇ／日、典型的には約０．５～１ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。治療に有効な血漿レベルは、各日に複数回用量を投与することによって達成されてもよい。血漿中のレベルは、例えば、ＨＰＬＣによって測定されてもよい。特に、ＮＫ細胞係合剤がエフェクター増強抗ＣＤ２０抗体（例えば、オビヌツズマブ）である具体的な態様では、ＮＫ細胞係合剤の投与は、約１００ｍｇ～約１０００ｍｇの用量である。いくつかの態様では、用量は１００ｍｇである。特定のそのような態様では、用量は１０００ｍｇである。

【0070】

疾患の予防または処置のために、有効量のＮＫ細胞係合剤を投与することができる。ＮＫ細胞係合剤の適切な投与経路および投与量は、処置すべき疾患の種類、ＮＫ細胞係合剤の種類、疾患の重症度および経過、個体の臨床状態、個体の臨床歴および処置に対する応答、ならびに主治医の裁量に基づいて決定することができる。投薬は、その投与が短期かまたは長期かに部分的に依存して、任意の好適な経路、例えば、静脈内または皮下注射等の注射により行うことができる。本明細書では、単回投与または様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、パルス注入を含むがこれらに限定されない様々な投薬スケジュールが企図される。

【0071】

ＮＫ細胞係合剤ならびに、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤は、任意の適切な経路で投与することができ、同じ投与経路で投与しても、異なる投与経路で投与してもよい。いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤の投与は非経口、特に静脈内である。

【0072】

いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤の投与は、個体へのＮＫ細胞係合剤の第１の投与であり、特に、ＮＫ細胞係合剤による個体の処置の過程におけるＮＫ細胞係合剤の第１の投与である。

【0073】

いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤（の投与）は、ＮＫ細胞の活性化を誘導する（すなわち、引き起こすまたは増加させる）。いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤（の投与）は、ＮＫ細胞の細胞傷害活性を誘導する。いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤（の投与）は、ＮＫ細胞によるサイトカイン分泌を誘導する。いくつかの態様では、前記サイトカインは、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１β、ＭＣＰ－１およびＩＬ－１０からなる群、特にＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－８およびＴＮＦ－αからなる群から選択される１つ以上のサイトカインである。いくつかの態様では、前記ＮＫ細胞は、ＣＤ１６^＋ＮＫ細胞である。

【0074】

いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤の投与は、特にがんの部位（例えば、固形腫瘍がん内）におけるＮＫ細胞の活性化をもたらす。前記活性化は、ＮＫ細胞の増殖、ＮＫ細胞の分化、ＮＫ細胞によるサイトカイン分泌、ＮＫ細胞からの細胞傷害性エフェクター分子の放出、ＮＫ細胞の細胞傷害活性、およびＮＫ細胞による活性化マーカーの発現を含み得る。いくつかの態様ではＮＫ細胞係合剤の投与は、がんの部位（例えば、固形腫瘍がん内）におけるＮＫ細胞の数の増加をもたらす。

【0075】

「ＮＫ細胞係合剤」とは、ＮＫ細胞、特にＣＤ１６^＋ＮＫ細胞の活性を通じてその効果を発揮する免疫療法剤を意味する。ＮＫ細胞のそのような活性は、増殖、分化、活性化マーカーの発現、サイトカイン分泌、細胞傷害性エフェクター分子の放出および／または細胞傷害活性などの、ＮＫ細胞、特にＣＤ１６^＋ＮＫ細胞の細胞応答（複数可）を含み得る。

【0076】

ＮＫ細胞係合剤は、ＮＫ細胞上のＣＤ１６の刺激、特にＣＤ１６ａの刺激を通じてＮＫ細胞の活性を誘導または増強させてもよい。したがって、いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤は、ＣＤ１６結合剤である。そのような態様では、ＮＫ細胞係合剤は、ＣＤ１６、特にＣＤ１６ａに結合する抗原結合部分、例えば、Ｆｃ領域またはＣＤ１６に結合する抗体の抗原結合ドメインを含む。

【0077】

ＣＤ１６（Ｆｃγ受容体ＩＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩとしても知られる）は、ある特定の免疫細胞上で発現される細胞表面抗原である。それは、例えば、ＮＫ細胞および活性化マクロファージ上で発現される膜貫通型（ＣＤ１６ａ、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａ）として、ならびに好中球上で発現されるグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー型（ＣＤ１６ｂ、ＦｃγＲＩＩＩｂ）としての両方で存在する。本明細書で使用される「ＣＤ１６」は、特に、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａとして知られるＣＤ１６ａを指す（ヒトタンパク質に関するＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ０８６３７［エントリーバージョン２１５］および配列番号１１を参照されたい）。したがって、用語「ＣＤ１６陽性細胞」または「ＣＤ１６^＋細胞」とは、ＣＤ１６、特にＣＤ１６ａを発現する細胞を指す。

【0078】

特定の態様では、ＮＫ細胞係合剤は、Ｆｃ領域を含む。いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤は、Ｆｃ領域を含む抗体、特にＦｃ領域を含むＩｇＧ抗体、最も特にＦｃ領域を含むＩｇＧ_１抗体である。いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤中に含まれるＦｃ領域は、ＩｇＧ Ｆｃ領域、特にヒトＩｇＧ Ｆｃ領域である。いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤中に含まれるＦｃ領域は、ＩｇＧ_１ Ｆｃ領域、特にヒトＩｇＧ_１ Ｆｃ領域である。

【0079】

ＮＫ細胞係合剤中に含まれるＦｃ領域は、ＣＤ１６に結合することができ、すなわち、Ｆｃ領域は、ＣＤ１６に結合する（ＣＤ１６結合Ｆｃ領域とも称される）。そのようなＦｃ領域はまた、エフェクターコンピテントＦｃ領域でもあり、すなわち、エフェクター機能、特に抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することができるＦｃ領域である。

【0080】

「エフェクター機能」という用語は、抗体のアイソタイプによって異なる、抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては：Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）；サイトカイン分泌；抗原提示細胞による免疫複合体媒介抗原取り込み；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；およびＢ細胞の活性化が含まれる。

【0081】

抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）は、免疫エフェクター細胞、特にＮＫ細胞による抗体でコーティングされた標的細胞の溶解につながる免疫メカニズムである。本明細書で使用される場合、「増加されたＡＤＣＣ」または「増強されたＡＤＣＣ」と言う用語は、上で定義されたＡＤＣＣのメカニズムによって、標的細胞を取り囲む培地中の抗体の所定の濃度において、所定の時間中に溶解される標的細胞の数における増加、および／またはＡＤＣＣのメカニズムによって、所定の時間中に所定の数の標的細胞の溶解を達成するのに必要な、標的細胞を取り囲む培地中の抗体の濃度における減少のいずれかとして定義される。ＡＤＣＣにおける増加は、（当業者に既知である）同じ標準的な産生、精製、配合組成および貯蔵方法を使用するが、操作されていない同じ種類の宿主細胞によって産生される同じ抗体により媒介されるＡＤＣＣに対する増加である。例えば、本明細書に記載の方法によって、変更されたグリコシル化パターンを有するように（例えば、グリコシルトランスフェラーゼ、ＧｎＴＩＩＩ、または他のグリコシルトランスフェラーゼを発現するように）操作された宿主細胞によって産生された抗体により媒介されるＡＤＣＣにおける増加は、同じ種類の操作されていない宿主細胞によって産生される同じ抗体によって媒介されたＡＤＣＣに対する増加である。

【0082】

抗体のＡＤＣＣ活性を評価するためのアッセイは、当該技術分野において既知である。抗体のＡＤＣＣ活性を評価するためのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイの例は、米国特許第５，５００，３６２号；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８３， ７０５９－７０６３ （１９８６）、およびＨｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８２， １４９９－１５０２ （１９８５）；米国特許第５，８２１，３３７号；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １６６，１３５１－１３６１ （１９８７）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ方法を用いてもよい（例えば、フローサイトメトリー（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）のためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ、およびＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい）。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。これに代えて、またはこれに加えて、抗体のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９５，６５２－６５６（１９９８）に開示されるものなどの動物モデルにおいて評価されてもよい。

【0083】

本明細書で企図されるＮＫ細胞係合剤は、典型的には、腫瘍細胞などの標的細胞上の標的細胞抗原への結合を可能にする抗原結合部分をさらに含む。したがって、いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤は、標的細胞抗原に結合する。そのようなＮＫ細胞係合剤は、ＮＫ細胞の活性を通じて標的細胞の溶解など、それらの標的細胞への効果を発揮する。

【0084】

本明細書で使用される「標的細胞抗原」は、標的細胞、例えば、がん細胞または腫瘍間質の細胞などの腫瘍中の細胞の表面に提示される抗原決定基を指す（その場合、「腫瘍細胞抗原」）。好ましくは、標的細胞抗原はＣＤ１６ではなく、かつ／またはＣＤ１６とは異なる細胞で発現される。いくつかの態様では、標的細胞抗原はＣＤ２０、特にヒトＣＤ２０である。

【0085】

本明細書で使用される場合、「抗原決定基」という用語は、「抗原」および「エピトープ」と同義であり、抗原結合部分－抗原複合体を形成する、抗原結合部分が結合するポリペプチド巨大分子上の部位（例えば、アミノ酸の連続伸長部または非連続アミノ酸の異なる領域から構成される配座構成）を指す。有用な抗原決定基は、例えば、腫瘍細胞の表面上に、ウイルス感染した細胞の表面上に、他の疾患細胞の表面上に、免疫細胞の表面上に、血清中で遊離して、および／または細胞外マトリックス（ＥＣＭ）中に認めることができる。

【0086】

本明細書で使用される場合、「抗原結合部分」という用語は、抗原決定基に結合する（特異的に結合することを含む）ポリペプチド分子を指す。いくつかの態様では、抗原結合部分は、それが付着している実体（例えば、第２の抗原結合部分）を、標的部位、例えば、抗原決定基を有する特定のタイプの腫瘍細胞に向かわせることができる。抗原結合部分は、本明細書にさらに定義される抗体およびその断片を含む。特定の抗原結合部分は、抗体重鎖可変領域と抗体軽鎖可変領域とを含む、抗体の抗原結合ドメインを含む。特定の態様では、抗原結合部分は、本明細書でさらに定義され、当技術分野で知られている抗体定常領域を含み得る。有用な重鎖定常領域は、α、δ、ε、γまたはμの５つのアイソタイプのいずれかを含む。有用な軽鎖定常領域は、κおよびλの２つのアイソタイプのいずれかを含む。

【0087】

「特異結合」とは、結合が抗原について選択的であり、望ましくないまたは非特異的な相互作用とは区別可能であることを意味する。本明細書において、「結合（ｂｉｎｄ）」または「結合（ｂｉｎｄｉｎｇ）」という用語は、一般に「特異的結合」を指す。抗原結合部分が特定の抗原決定基に結合する能力は、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）または当業者には知られている他の技術、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ機器で分析される）（Ｌｉｌｊｅｂｌａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏ Ｊ １７，３２３－３２９（２０００））、および従来の結合アッセイ（Ｈｅｅｌｅｙ，Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｓ ２８，２１７－２２９（２００２））のいずれかによって測定することができる。いくつかの態様では、無関係なタンパク質に対する抗原結合部分の結合度は、例えばＳＰＲによって測定される抗原に対する抗原結合部分の結合の約１０％未満である。ある特定の態様では、抗原に結合する抗原結合部分、またはその抗原結合部分を含む抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０^－８Ｍ以下、例えば１０^－８Ｍから１０^－１３Ｍまで、例えば１０^－９Ｍから１０^－１３Ｍまで）の解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。

【0088】

特定の態様では、ＮＫ細胞係合剤は、ＮＫ細胞上の抗原決定基（例えば、ＣＤ１６、特にＣＤ１６ａ）および標的細胞上の抗原決定基（例えば、ＣＤ２０などの標的細胞抗原）に同時に結合することができる。いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤は、ＣＤ１６および標的細胞抗原への同時結合によってＮＫ細胞および標的細胞を架橋することができる。いくつかの態様では、そのような同時結合は、標的細胞、特に標的細胞抗原（例えば、ＣＤ２０）発現腫瘍細胞の溶解をもたらす。いくつかの態様では、そのような同時結合は、ＮＫ細胞の活性化をもたらす。いくつかの態様では、このような同時結合は、増殖、分化、サイトカイン分泌、細胞傷害性エフェクター分子放出、細胞傷害活性、および活性化マーカーの発現の群から選択される、ＮＫ細胞の細胞応答をもたらす。いくつかの態様では、標的細胞抗原への同時の結合なしでのＣＤ１６へのＮＫ細胞係合剤の結合は、ＮＫ細胞活性化をもたらさない。いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤は、ＮＫ細胞の細胞傷害活性を標的細胞へ向けることができる。

【0089】

例示的なＮＫ細胞係合剤には、抗体、特にオビヌツズマブ、イムガツズマブ、マルゲツキシマブ、モガムリズマブなどのエフェクター増強抗体が挙げられる。これらの例示的なＮＫ細胞係合剤は、（操作された）Ｆｃドメインを通してＣＤ１６（特にＣＤ１６Ａ）に結合する。さらなる例示的なＮＫ細胞係合剤には、抗体の抗原結合ドメインを通してＣＤ１６（特にＣＤ１６Ａ）に結合する抗体、特にＣＤ１６および標的細胞抗原に結合する二重／多重特異性抗体（例えば、抗原結合ドメインを通してＣＤ１６Ａおよび標的細胞抗原に結合する、ＲＯＣＫ（登録商標）（リダイレクトされた最適化細胞殺傷；Ａｆｆｉｍｅｄ）プラットフォームに基づく四価の二重特異性抗体）が挙げられる。ＮＫ細胞係合剤はまた、ＣＤ１６（特にＣＤ１６Ａ）および第２のＮＫ細胞抗原、ならびに標的細胞抗原に結合する三重特異性／三官能性抗体（例えば、ＣＤ１６Ａ（Ｆｃドメインを通して）、ＮＫＧ２Ｄおよび標的細胞抗原（抗原結合ドメインを通して）に結合するＴｒｉＮＫＥＴ（商標）（三重特異性ＮＫ細胞エンゲージャー治療薬；Ｄｒａｇｏｎｆｌｙ）プラットフォームに基づく抗体、またはＣＤ１６Ａ（Ｆｃドメインを通して）、ＮＫｐ４６および標的細胞抗原（抗原結合ドメインを通して）に結合する三官能性ＮＫ細胞エンゲージャー（ＮＫＣＥ；Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ）に基づく抗体）であってもよい。

【0090】

本明細書の「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、種々の抗体構造を包含し、所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体断片を含むが、これらに限定されない。

【0091】

「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、および「全抗体」という用語は、本明細書では交換可能に使用され、天然抗体構造と実質的に類似した構造を有する抗体を指す。

【0092】

「抗体断片」とは、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含む、インタクトな抗体以外の分子である。抗体断片の例には、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２、ダイアボディ、直鎖状抗体、単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）、および単一ドメイン抗体が含まれる。特定の抗体断片の総説としては、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ ９，１２９－１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の総説としては、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。また、国際公開第９３／１６１８５号および米国特許第５，５７１，８９４号および同第５，５８７，４５８号を参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期が長くなったＦａｂおよびＦ（ａｂ’）_２断片の説明については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第１９９３／０１１６１号、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ ９，１２９－１３４（２００３）、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０，６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディおよびテトラボディも、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ ９，１２９－１３４（２００３）に説明されている。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てまたは一部または軽鎖可変ドメインの全てまたは一部を含む抗体断片である。特定の態様では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、米国特許第６，２４８，５１６号Ｂ１を参照）。抗体断片は、限定されないが、本明細書に記載されるように、インタクトな抗体のタンパク質分解による消化、および組換え宿主細胞（例えば、大腸菌またはファージ）による産生を含め、種々の技術によって作られてもよい。

【0093】

「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗原に対する抗体の結合に関与する抗体重鎖または抗体軽鎖のドメインを指す。天然の抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨおよびＶＬ）は、一般に、類似の構造を有しており、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と、３つの超可変領域（ＨＶＲ）とを含む。例えば、Ｋｉｎｄｔら、Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ９１（２００７）を参照されたい。単一のＶＨドメインまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するために十分であり得る。可変領域配列に関して本明細書で使用される「Ｋａｂａｔ番号付け」は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）によって記載された番号付けシステムを指す。

【0094】

本明細書で使用される場合、重鎖および軽鎖の全ての定常領域およびドメインのアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）に記載される、本明細書では「Ｋａｂａｔによる番号付け」または「Ｋａｂａｔ番号付け」と呼ばれるＫａｂａｔ番号付けシステムに従って番号付けされる。特定的には、Ｋａｂａｔ番号付けシステム（Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５ｔｈ ｅｄ．、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１）の６４７～６６０頁を参照されたい）を、κおよびλアイソタイプの軽鎖定常ドメインＣＬに使用し、Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス番号付けシステム（６６１～７２３頁を参照されたい）を、重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３）に使用し、この場合には、「Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け」と言及することによって本明細書でさらに明確にしている。

【0095】

本明細書で使用される「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、配列が超可変であり、抗原結合特異性を決定する抗体可変ドメインの各領域、例えば「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）を指す。通常、抗体は、６つのＣＤＲ；ＶＨに３つ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）、およびＶＬに３つ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）を含む。本明細書の例示的なＣＤＲには、以下が含まれる：
（ａ）アミノ酸残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）、９１～９６（Ｌ３）、２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）、および９６～１０１（Ｈ３）に存在する超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））；
（ｂ）アミノ酸残基２４～３４（Ｌ１）、５０～５６（Ｌ２）、８９～９７（Ｌ３）、３１～３５ｂ（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）、および９５～１０２（Ｈ３）に存在するＣＤＲ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））；
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ～３６（Ｌ１）、４６～５５（Ｌ２）、８９～９６（Ｌ３）、３０～３５ｂ（Ｈ１）、４７～５８（Ｈ２）、および９３～１０１（Ｈ３）に存在する抗原接触部（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２；７３２－７４５（１９９６））。

【0096】

特に指示がない限り、ＣＤＲは、上記Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．に従い決定される。当業者は、ＣＤＲの表記は、上記Ｃｈｏｔｈｉａ、上記ＭｃＣａｌｌｕｍ、または、任意の他の、科学的に受容された命名システムに従い決定することもできることを理解するであろう。

【0097】

「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲおよびＦＲ配列は、概して、ＶＨ（またはＶＬ）で次の順序で表示される：ＦＲ１－Ｈ１（Ｌ１）－ＦＲ２－Ｈ２（Ｌ２）－ＦＲ３－Ｈ３（Ｌ３）－ＦＲ４。

【0098】

抗体または免疫グロブリンの「クラス」は、抗体または免疫グロブリンの重鎖が保有する定常ドメインまたは定常領域の種類を指す。抗体には、次の５種類の主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭがあり、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、およびＩｇＡ_２にさらに分けることができる。免疫グロブリンの様々なクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。

【0099】

「免疫グロブリン分子」という用語は、天然に存在する抗体の構造を有するタンパク質を指す。例えば、ＩｇＧクラスの免疫グロブリンは、約１５０，０００ダルトンのヘテロテトラマー糖タンパク質であり、ジスルフィド結合した２つの軽鎖と２つの重鎖で構成される。Ｎ末端からＣ末端に、各重鎖は可変重鎖ドメインまたは重鎖可変領域とも呼ばれる可変ドメイン（ＶＨ）を有し、それに続いて重鎖定常領域とも呼ばれる３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端に、各軽鎖は可変軽鎖ドメインまたは軽鎖可変領域とも呼ばれる可変ドメイン（ＶＬ）を有し、それに続いて軽鎖定常領域とも呼ばれる定常軽鎖（ＣＬ）ドメインを有する。免疫グロブリンの重鎖は、α （ＩｇＡ）、δ （ＩｇＤ）、ε （ＩｇＥ）、γ （ＩｇＧ）またはμ （ＩｇＭ）と呼ばれる５種類のうちの１つに割り当てることができ、そのうちのいくつかはサブタイプ、例えばγ_１ （ＩｇＧ_１）、γ_２ （ＩｇＧ_２）、γ_３ （ＩｇＧ_３）、γ_４ （ＩｇＧ_４）、α_１ （ＩｇＡ_１） およびα_２ （ＩｇＡ_２）にさらに分類することできる。免疫グロブリンの軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２種類のうちの１つに割り当てられてもよい。免疫グロブリンは、本質的に、免疫グロブリンヒンジ領域を介して接続する２つのＦａｂ分子と１つのＦｃドメインからなる。

【0100】

「Ｆｃドメイン」または「Ｆｃ領域」という用語は、本明細書において、定常領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語には、天然配列Ｆｃ領域および変異Ｆｃ領域が含まれる。ＩｇＧ重鎖のＦｃ領域の境界は、わずかに変動してもよいが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシ末端まで延びるよう規定されている。しかしながら、宿主細胞によって産生される抗体は、重鎖のＣ末端から１つ以上の、特に１つまたは２つのアミノ酸の翻訳後切断を受け得る。したがって、完全長重鎖をコードする特定の核酸分子の発現によって、宿主細胞によって産生される抗体は、完全長重鎖を含み得るか、または完全長重鎖の切断されたバリアントを含み得る。これは、重鎖の最後の２つのＣ末端アミノ酸がグリシン （Ｇ４４６） およびリジン （Ｋ４４７、Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け） である場合に当てはまる。したがって、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）、またはＣ末端グリシン（Ｇｌｙ４４６）およびリジン（Ｋ４４７）が存在してもよく、または存在していなくてもよい。本明細書に別途指定のない限り、Ｆｃ領域または定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１（上記も参照されたい）に記載されている、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。

【0101】

特に好ましい態様では、本明細書のＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ_１Ｆｃドメインである。ヒトＩｇＧ_１Ｆｃ領域の例示的な配列は、配列番号１で与えられる。

【0102】

本発明の特定の態様では、ＮＫ細胞係合剤は、抗体、特にエフェクター増強抗体である。

【0103】

増強されたエフェクター機能、特に増強されたＡＤＣＣ能力を有する抗体は、がん治療の分野における新興種である。抗体のそのＦｃ領域によって媒介されるエフェクター機能が、抗体ベースのがん治療における重要な作用機序であることが認識されている。これに関して特に重要なのは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、すなわち、ＮＫ細胞（ナチュラルキラー細胞）および他の免疫エフェクター細胞による抗体でコートされた標的細胞（例えば、腫瘍細胞）の破壊であり、これは、細胞の表面に結合した抗体がエフェクター細胞上の活性化Ｆｃ受容体と相互作用すると引き起こされる。

【0104】

したがって、治療用抗体のＡＤＣＣ活性を増強させることは、強い関心を引くものとなり、ＡＤＣＣ増強に関する様々な方法が記載されている。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓら（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ９（２），６５９１－６６０４（２００１））は、Ｆｃ領域（残基のＥＵ番号付け）の２９８位、３３３位、および／または３３４位でのアミノ酸置換がＡＤＣＣを改善することを示した。あるいは、抗体のグリコシル化を変更することによって、Ｆｃ受容体結合およびエフェクター機能の増加を得ることができる。がん免疫療法において最も一般的に使用される抗体であるＩｇＧ１型抗体は、Ｆｃ領域の各ＣＨ２ドメイン中のＡｓｎ２９７に保存されたＮ結合型グリコシル化部位を有する。Ａｓｎ２９７に結合した２つの複合二分岐オリゴ糖はＣＨ２ドメインの間に埋め込まれ、ポリペプチド骨格と広範な接触を形成し、それらの存在は、抗体がＡＤＣＣを含むエフェクター機能を媒介するために不可欠である（Ｌｉｆｅｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ５，８１３－８２２（１９９５）；Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ１６３，５９－７６（１９９８）；Ｗｒｉｇｈｔ ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１５，２６－３２（１９９７））。その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｕｍａｎａら（Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１７，１７６－１８０（１９９９）および米国特許第６，６０２，６８４号（国際公開第９９／５４３４２号）は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞における二分されたオリゴ糖の形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼであるβ（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）の過剰発現が、それらの細胞で産生される抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣ活性を大幅に増加させることを示した。産生細胞株におけるＧｎＴＩＩＩの過剰発現は、一般に、非フコシル化であり、ハイブリッド型である、二分されたオリゴ糖が豊富な抗体をもたらす。ＧｎＴＩＩＩに加えて、マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）が産生細胞株で過剰発現される場合、複合型の二分された、非フコシル化オリゴ糖に富む抗体が得られる（Ｆｅｒｒａｒａら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎ Ｂｉｏｅｎｇ９３，８５１－８６１（２００６））。両方のタイプの抗体は、非修飾のグリカンを含む抗体と比較して、ＡＤＣＣの大幅な増加を示すが、Ｎ－グリカンの大部分が複合型である抗体のみが、顕著な補体依存性細胞傷害を誘導することができる（Ｆｅｒｒａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎ Ｂｉｏｅｎｇ９３，８５１－８６１（２００６））。オリゴ糖コアの最も内側のＮ－アセチルグルコサミン残基からのフコースの除去は、ＡＤＣＣ活性の増加にとって重要な因子であると考えられる（Ｓｈｉｎｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ２７８，３４６６－３４７３（２００３））。したがって、α（１，６）－フコシルトランスフェラーゼ欠損宿主細胞での発現を含む、フコシル化が減少した抗体を産生するさらなる方法が開発された（Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｂｉｏｅｎｇ ８７，６１４－６２２（２００４）；Ｎｉｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ３０６，１５１－１６０（２００６））。

【0105】

糖操作された抗ＥＧＦＲ抗体イムガツズマブ、ならびに糖操作された抗ＣＤ２０抗体オビヌツズマブが含まれるいくつかのエフェクター増強抗体は、臨床において有望な結果を示している。オビヌツズマブは、特定の形態の濾胞性リンパ腫（ＦＬ）および慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）の処置用に、商品名Ｇａｚｙｖａ（登録商標）／Ｇａｚｙｖａｒｏ（登録商標）で販売されている。

【0106】

本発明の様々な態様に関して本明細書で定義される「エフェクター増強抗体」は、対応する操作されていない抗体と比較して、エフェクター機能の増加、特にＡＤＣＣ活性の増加および／またはＣＤ１６（特にＣＤ１６ａ）結合の増加を有するように操作された抗体である。いくつかの態様では、エフェクター増強抗体は、対応する操作されていない抗体と比較して、少なくとも２倍、少なくとも１０倍、またはさらには少なくとも１００倍増加したエフェクター機能を有する。特定の態様では、増加したエフェクター機能は、ＣＤ１６、特にＣＤ１６ａ、最も特にヒトＣＤ１６ａへの結合の増加である。いくつかのそのような態様では、ＣＤ１６に対する結合親和性は、対応する操作されていない抗体の結合親和性と比較して、少なくとも２倍、特に少なくとも１０倍増加する。いくつかの態様では、エフェクター機能の増加は、ＡＤＣＣの増加である。いくつかのそのような態様では、ＡＤＣＣは、対応する操作されていない抗体によって媒介されるＡＤＣＣと比較して、少なくとも２倍、特に少なくとも１０倍増加する。いくつかの態様では、エフェクター機能の増加は、活性化Ｆｃ受容体への結合の増加およびＡＤＣＣの増加である。

【0107】

エフェクター機能の増加は、例えば、Ｆｃ領域の糖操作または抗体のＦｃ領域へのアミノ酸突然変異の導入から生じ得る。いくつかの態様では、エフェクター増強抗体は、Ｆｃ領域における１つ以上のアミノ酸突然変異の導入によって操作される。いくつかのそのような態様では、アミノ酸突然変異はアミノ酸置換である。特定のそのような態様では、アミノ酸置換は、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、および／または３３４位（残基のＥＵ番号付け）にある。さらなる好適なアミノ酸突然変異は、例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ９（２），６５９１－６６０４（２００１）；米国特許第６，７３７，０５６号；国際公開第２００４／０６３３５１号および同第２００４／０９９２４９号に記載されている。変異体Ｆｃ領域は、当技術分野で周知の遺伝学的または化学的方法を用いるアミノ酸の欠失、置換、挿入または修飾により調製することができる。遺伝的方法には、コード化ＤＮＡ配列の部位特異的突然変異誘発、ＰＣＲ、遺伝子合成などを含んでいてもよい。正確なヌクレオチド変化は、例えば配列決定によって確認することができる。

【0108】

いくつかの態様では、エフェクター増強抗体は、Ｆｃ領域におけるグリコシル化の修飾によって操作される。特定の態様では、エフェクター増強抗体は、操作されていない抗体と比較して、Ｆｃ領域における非フコシル化オリゴ糖の割合が増加するように操作される。抗体のＦｃ領域中の非フコシル化オリゴ糖の割合の増加は、エフェクター機能の増加、特にＡＤＣＣの増加を有する抗体をもたらす。

【0109】

特定の態様では、エフェクター増強抗体は、糖操作されていない抗体と比較して、Ｆｃ領域において増加した割合の非フコシル化オリゴ糖を含む糖操作された抗体である。いくつかのそのような態様では、抗体は、操作されていない宿主細胞と比較して増加したβ（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）活性を有するように操作された宿主細胞において産生される。より具体的な態様では、宿主細胞は、操作されていない宿主細胞と比較して増加したα－マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）活性を有するようにさらに操作される。宿主細胞は、β（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）活性を有する１つ以上のポリペプチドの過剰発現によって、β（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）活性が増加するように操作され得る。同様に、宿主細胞は、α－マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）活性を有する１つ以上のポリペプチドの過剰発現によって、増加したα－マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）活性を有するように操作され得る。この糖操作方法論は、Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ１７，１７６－１８０（１９９９）；Ｆｅｒｒａｒａら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎ Ｂｉｏｅｎｇ９３、８５１－８６１（２００６）；国際公開第９９／５４３４２号； 同第２００４／０６５５４０号、同第０３／０１１８７８号により詳細に記載されており、これらの各々の全内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0110】

代替的な態様では、エフェクター増強抗体は、糖操作されていない抗体と比較して、Ｆｃ領域において増加した割合の非フコシル化オリゴ糖を含む糖操作された抗体であり、抗体は、減少したα（１，６）－フコシルトランスフェラーゼ活性を有する宿主細胞において産生される。減少したα（１，６）－フコシルトランスフェラーゼ活性を有する宿主細胞は、α（１，６）－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子が破壊されているか、またはそれ以外の場合は不活性化している、例えば、ノックアウトされている細胞であり得る（ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｂｉｏｅｎｇ ８７，６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ，９４（４），６８０－６８８（２００６）；Ｎｉｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ３０６，１５１－１６０（２００６）を参照されたい）。

【0111】

脱フコシル化抗体を産生可能な細胞株の他の例には、タンパク質のフコシル化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞が挙げられる（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ ２４９、５３３～５４５（１９８６）；米国特許出願第２００３／０１５７１０８号；および国際公開第２００４／０５６３１２号、特に実施例１１）。あるいは、本発明において有用な抗体は、欧州特許第１ １７６ １９５ Ａ１号、国際公開第０３／０８４５７０号、国際公開第０３／０８５１１９号、および米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号、同第２００４／０９３６２１号、同第２００４／１１０２８２号、同第２００４／１１０７０４号、同第２００４／１３２１４０号、米国特許第６，９４６，２９２号（Ｋｙｏｗａ）に開示されている技術に従って、例えば、抗体産生に使用される宿主細胞におけるＧＤＰ－フコース輸送体タンパク質の活性を低減または廃止することによって、Ｆｃ領域のフコース残基が減少するように糖操作することもできる。

【0112】

本発明において有用な糖操作された抗体は、国際公開第０３／０５６９１４号（ＧｌｙｃｏＦｉ，Ｉｎｃ．）または国際公開第２００４／０５７００２号および国際公開第２００４／０２４９２７号（Ｇｒｅｅｎｏｖａｔｉｏｎ）で教示されるものなどの、修飾糖タンパク質を産生する発現系でも産生され得る。

【0113】

いくつかの態様では、エフェクター増強抗体は、操作されていない抗体と比較して、Ｆｃ領域において増加した割合の非フコシル化オリゴ糖を有するように操作される。いくつかの態様では、エフェクター増強抗体のＦｃ領域中のＮ結合型オリゴ糖の少なくとも約２０％、約４０％、約６０％または約８０％、好ましくは少なくとも約４０％が非フコシル化である。いくつかの態様では、エフェクター増強抗体のＦｃ領域中のＮ結合型オリゴ糖の約４０％から約８０％が非フコシル化である。非フコシル化オリゴ糖は、ハイブリッド型または複合型であり得る。

【0114】

いくつかの態様では、エフェクター増強抗体は、操作されていない抗体と比較して、Ｆｃ領域において増加した割合の二分されたオリゴ糖を有するように操作される。いくつかの態様では、エフェクター増強抗体のＦｃ領域中のＮ結合型オリゴ糖の少なくとも約２０％、約４０％、約６０％または約８０％、好ましくは少なくとも約４０％が二分されている。いくつかの態様では、エフェクター増強抗体のＦｃ領域中のＮ結合型オリゴ糖の約４０％～約８０％が二分されている。二分されたオリゴ糖は、ハイブリッド型または複合型であり得る。

【0115】

いくつかの態様では、エフェクター増強抗体は、操作されていない抗体と比較して、Ｆｃ領域において増加した割合の二分された、非フコシル化オリゴ糖を有するように操作される。いくつかの態様では、エフェクター増強抗体のＦｃ領域中のＮ結合型オリゴ糖の少なくとも約２０％、約４０％、約６０％または約８０％、好ましくは少なくとも約４０％が二分され、非フコシル化である。いくつかの態様では、エフェクター増強抗体のＦｃ領域中のＮ結合型オリゴ糖の約４０％～約８０％が二分され、非フコシル化である。二分された、非フコシル化オリゴ糖は、ハイブリッド型または複合型であり得る。

【0116】

いくつかの態様では、エフェクター増強抗体は、そのＦｃ領域中に、少なくとも約２０％、約４０％、約６０％または約８０％の非フコシル化オリゴ糖を有する抗体である。いくつかの態様では、エフェクター増強抗体は、そのＦｃ領域中に、少なくとも約４０％の非フコシル化オリゴ糖を有する抗体である。いくつかの態様では、エフェクター増強抗体は、そのＦｃ領域中に、少なくとも約２０％、約４０％、約６０％または約８０％の二分されたオリゴ糖を有する抗体である。いくつかの態様では、エフェクター増強抗体は、そのＦｃ領域中に、少なくとも約４０％の二分された、非フコシル化オリゴ糖を有する抗体である。

【0117】

抗体Ｆｃ領域のオリゴ糖構造は、当該技術分野において周知の方法、例えば、Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １７，１７６－１８０（１９９９）またはＦｅｒｒａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎ Ｂｉｏｅｎｇ９３，８５１－８６１（２００６）に記載されるＭＡＬＤＩ ＴＯＦ質量分析法により分析することができる。非フコシル化オリゴ糖の割合は、Ａｓｎ２９７に結合した全てのオリゴ糖（例えば、複合体、ハイブリッド、高マンノース構造）に対する、フコース残基を欠くオリゴ糖の量であり、ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ ＭＳによってＮ－グリコシダーゼＦ処理試料で同定された量である。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域の約２９７位に位置するアスパラギン残基を指す（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）；ただし、Ａｓｎ２９７はまた、抗体のマイナーな配列変化のために、位置２９７の上流または下流、すなわち位置２９４と３００の間の約±３個のアミノ酸に位置していてもよい。二分された、または二分された非フコシル化オリゴ糖の割合は、同様に決定される。

【0118】

本明細書で使用される場合、用語「操作する、操作された、操作」は、ペプチド骨格の任意の操作、または天然に存在するポリペプチドもしくは組換えポリペプチドまたはその断片の翻訳後修飾を含むと考えられる。操作には、アミノ酸配列、グリコシル化パターン、または個々のアミノ酸の側鎖基の修飾、およびこれらの手法の組み合わせが含まれる。特に接頭辞「ｇｌｙｃｏ－」が付いた「操作」、ならびに用語「グリコシル化操作」には、細胞内で発現される糖タンパク質のグリコシル化の変化を達成するためのオリゴ糖合成経路の遺伝子操作を含む、細胞のグリコシル化機構の代謝操作が含まれる。さらに、グリコシル化操作には、グリコシル化に対する突然変異および細胞環境の影響が含まれる。いくつかの態様では、グリコシル化操作は、グリコシルトランスフェラーゼ活性における変化である。グリコシルトランスフェラーゼとしては、β（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）、β（１，４）－ガラクトシルトランスフェラーゼ （ＧａｌＴ）、β（１，２）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩ（ＧｎＴＩ）、β（１，２）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩ（ＧｎＴＩＩ）およびα（１，６）－フコシルトランスフェラーゼが挙げられる。特定の態様では、操作は、変更されたグルコサミニルトランスフェラーゼ活性および／またはフコシルトランスフェラーゼ活性の変化（例えば、上で述べたような）をもたらす。

【0119】

「結合の増加」、例えばＣＤ１６への結合の増加は、例えばＳＰＲによって測定される、それぞれの相互作用に対する親和性の増加を指す。

【0120】

「親和性」は、分子の単一の結合部位（例えば、受容体）と、その結合パートナー（例えば、リガンド）との間の非共有結合的相互作用の合計強度を指す。本明細書で使用される場合、特に断らない限り、「結合親和性」は、結合対 （例えば、抗原結合部分と抗原、または受容体とそのリガンド）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、概して、解離定数（Ｋ_Ｄ）によって表すことができ、解離速度定数と会合速度定数（それぞれｋ_ｏｆｆおよびｋ_ｏｎ）の比である。したがって、速度定数の比が同じである限り、同等の親和性が異なる速度定数を含み得る。親和性は、ここに記載するものを含め、当技術分野で既知の十分に確立された方法によって測定することができる。親和性を測定するための特定の方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）である。

【0121】

ＣＤ１６への結合親和性は、例えば、標準的な機器、例えばＢＩＡｃｏｒｅ機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって容易に決定することができ、そのようなＣＤ１６は、組換え発現によって得られてもよい。いくつかの態様では、ＣＤ１６（特にＣＤ１６ａ）への結合親和性は、２５℃で表面プラズモン共鳴によって測定される。

【0122】

いくつかの態様では、エフェクター増強抗体は、完全長抗体である。いくつかの態様では、エフェクター増強抗体は、ＩｇＧ抗体である。いくつかの態様では、エフェクター増強抗体は、ＩｇＧ_１抗体である。エフェクター増強抗体は、Ｆｃ領域、特にＩｇＧ Ｆｃ領域、より詳細にはＩｇＧ_１ Ｆｃ領域を含む。いくつかの態様では、Ｆｃ領域は、ヒトＦｃ領域、特にヒトＩｇＧ Ｆｃ領域、より詳細にはヒトＩｇＧ_１ Ｆｃ領域である。

【0123】

エフェクター増強抗体は、腫瘍細胞などの標的細胞上の標的細胞抗原に結合する。

【0124】

いくつかの態様では、エフェクター増強抗体は、ＣＤ２０、特にヒトＣＤ２０に結合する（すなわち、エフェクター増強抗体は、抗ＣＤ２０抗体、特に抗ヒトＣＤ２０抗体である）。

【0125】

「Ｂリンパ球抗原Ｂ１」としても知られる「ＣＤ２０」は、特に断らない限り、霊長類（例えば、ヒト）、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）およびげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来の任意の天然ＣＤ２０を指す。この用語は、「完全長」の未処理のＣＤ２０ならびに細胞の処理から生じるＣＤ２０の任意の形態を包含する。この用語は、ＣＤ２０の天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアントまたは対立遺伝子バリアントも包含する。いくつかの態様では、ＣＤ２０はヒトＣＤ２０である。ヒトＣＤ２０は、ＵｎｉＰｒｏｔ（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）アクセッション番号Ｐ１１８３６（エントリーバージョン２０２）に記載されており、ヒトＣＤ２０のアミノ酸配列も配列番号１０に示される。

【0126】

いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤は、エフェクター増強抗ＣＤ２０抗体である。いくつかの態様では、抗ＣＤ２０抗体はＩｇＧ抗体、特にＩｇＧ_１抗体である。いくつかの態様では、抗ＣＤ２０抗体は、完全長抗体である。いくつかの態様では、抗ＣＤ２０抗体は、Ｆｃ領域、特にＩｇＧ Ｆｃ領域、より詳細にはＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。いくつかの態様では、抗ＣＤ２０抗体は、ヒトＦｃ領域、特にヒトＩｇＧ Ｆｃ領域、より詳細にはヒトＩｇＧ_１ Ｆｃ領域を含む。いくつかの態様では、抗ＣＤ２０抗体は、操作されていない抗体と比較して、Ｆｃ領域において増加した割合の非フコシル化オリゴ糖を有するように操作される。いくつかの態様では、抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域中のＮ結合型オリゴ糖の少なくとも約４０％は非フコシル化である。

【0127】

いくつかの態様では、抗ＣＤ２０抗体は、配列番号２の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ）１、配列番号３のＨＣＤＲ２、および配列番号４のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、配列番号５の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ）１、配列番号６のＬＣＤＲ２、および配列番号７のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域とを含む。いくつかの態様では、抗ＣＤ２０抗体は、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である重鎖可変領域配列、および／または配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一である軽鎖可変領域配列を含む。いくつかの態様では、抗ＣＤ２０抗体は、配列番号８の重鎖可変領域配列および／または配列番号９の軽鎖可変領域配列を含む。

【0128】

特定の態様では、抗ＣＤ２０抗体はオビヌツズマブ（推奨ＩＮＮ，ＷＨＯ Ｄｒｕｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ． ２６，Ｎｏ． ４，２０１２，ｐ． ４５３）である。本明細書で使用される場合、オビヌツズマブはＧＡ１０１と同義である。商品名は、ＧＡＺＹＶＡ（登録商標）またはＧＡＺＹＶＡＲＯ（登録商標）である。

【0129】

参照ポリペプチド配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入した後、いかなる保存的置換も配列同一性の一部と考えないとした場合の、参照ポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定するためのアラインメントは、当分野の技術の範囲内にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ， Ｍｅｇａｌｉｇｎ （ＤＮＡＳＴＡＲ） ソフトウェアまたはＦＡＳＴＡプログラムパッケージのような公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含め、配列を整列させるための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、ここでの目的のために、％アミノ酸配列同一性の値は、ＦＡＳＴＡパッケージバージョン３６．３．８ｃのｇｇｓｅａｒｃｈプログラムを用いてまたはその後ＢＬＯＳＵＭ５０比較行列を用いて生成される。ＦＡＳＴＡプログラムパッケージは、Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｄ．Ｊ．Ｌｉｐｍａｎ（１９８８），「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ」，ＰＮＡＳ ８５：２４４４－２４４８；Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ （１９９６）「Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ」Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ． ２６６：２２７ー２５８；およびＰｅａｒｓｏｎ ｅｔ．ａｌ．（１９９７）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ４６：２４－３６によって著され、ｈｔｔｐ：／／ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｆａｓｔａ＿ｄｏｗｎ．ｓｈｔｍｌから公的に入手可能である。または、ｈｔｔｐ：／／ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｉｎｄｅｘ．ｃｇｉでアクセス可能な公的なサーバーを使用し、ｇｇｓｅａｒｃｈ（ｇｌｏｂａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ：ｐｒｏｔｅｉｎ）プログラムおよびデフォルトオプション（ＢＬＯＳＵＭ５０；オープン：－１０；ｅｘｔ：－２；Ｋｔｕｐ＝２）を用い、ローカルではなくグローバルのアラインメントを確実に行い、配列を比較することができる。パーセントアミノ酸同一性は、出力アラインメントヘッダ中に与えられる。

【0130】

いくつかの態様では、（ＮＫ細胞係合剤によって処置される）疾患はがんである。

【0131】

本明細書で使用される場合、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」（およびその文法的な変化形、例えば、「処置する（ｔｒｅａｔ）」または「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」）は、処置される個体において疾患の本来の経過を変えようとする試行における臨床的介入を指し、予防のためにまたは臨床病理の経過の間に実施することができる。処置の所望の効果としては、疾患の発症または再発の予防、症状の軽減、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の減弱、転移の予防、疾患進行率を低下させること、症状の寛解または緩和、および回復または改善された予後が挙げられるが、これらに限定されない。

【0132】

「がん」という用語は、制御されていない細胞増殖を典型的に特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指す。がんの例には、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病が含まれるが、これらに限定されない。がんの非限定的な例には、白血病などの血液がん、膀胱がん、脳がん、頭頸部がん、膵臓がん、胆管がん、甲状腺がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、子宮がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、食道がん、結腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、胃がん、前立腺がん、皮膚がん、扁平上皮癌、肉腫、骨がん、および腎臓がんが含まれる。他の細胞増殖障害には、限定されないが、腹部、骨、乳房、消化器系、肝臓、膵臓、腹膜、内分泌腺（副腎、副甲状腺、下垂体、睾丸、卵巣、胸腺、甲状腺）、眼、頭頸部、（中枢および末梢）神経系 、リンパ系、骨盤、皮膚、軟組織、脾臓、胸部、および泌尿生殖器系に位置する腫瘍が含まれる。前がんの状態または病変およびがん転移も含まれる。

【0133】

いくつかの態様では、がんは、ＮＫ細胞係合剤（例えば、エフェクター増強抗体）の標的細胞抗原を発現するがんである。

【0134】

いくつかの態様では、がんは、ＣＤ２０発現がんである（ＮＫ細胞係合剤、例えばエフェクター増強抗体の標的細胞抗原がＣＤ２０である特定の態様において）。「ＣＤ２０陽性がん」または「ＣＤ２０発現がん」とは、がん細胞におけるＣＤ２０の発現または過剰発現を特徴とするがんを意味する。ＣＤ２０の発現は、例えば、定量的リアルタイムＰＣＲ（ＣＤ２０ ｍＲＮＡレベルを測定する）、免疫組織化学（ＩＨＣ）、またはウエスタンブロットアッセイによって決定され得る。いくつかの態様では、がんはＣＤ２０を発現する。いくつかの態様では、がんは、ＣＤ２０に特異的な抗体を使用する免疫組織化学（ＩＨＣ）によって決定されるように、腫瘍細胞の少なくとも２０％、好ましくは少なくとも５０％または少なくとも８０％でＣＤ２０を発現する。

【0135】

いくつかの態様では、がんはＢ細胞がん、特にＣＤ２０陽性Ｂ細胞がんである。いくつかの態様では、がんは、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）またはホジキンリンパ腫（ＨＬ）からなる群から選択される。特定の態様では、がんは、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、および辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）からなる群から選択される。より詳細な態様では、がんはＦＬである。いくつかの態様では、がんはＣＬＬである。

【0136】

いくつかの態様では、がんは、ＮＫ細胞係合剤によって処置可能である。いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤は、がんの処置に適応される。

【0137】

本明細書の「個体」または「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物としては、限定されないが、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌおよびウマ）、霊長類（例えば、ヒトおよびサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、齧歯類（例えば、マウスおよびラット）が挙げられる。ある特定の態様では、個体または対象は、ヒトである。いくつかの態様では、個体は、疾患、特に、ＮＫ細胞係合剤によって処置可能なまたは処置されるべき疾患を有する。いくつかの態様では、個体は、がん、特に、ＮＫ細胞係合剤によって処置可能なまたは処置されるべきがんを有する。特に、本明細書における個体は、がんの１以上の徴候、症状、または他の指標を経験しているかまたは経験したことのある、処置に適格な任意の単一のヒト対象である。いくつかの態様では、個体は、がんを有するか、またはがん、特に上記のがんのいずれかと診断されている。いくつかの態様では、個体は、局所進行性がんもしくは転移性がんを有するか、または局所進行性がんもしくは転移性がんと診断されている。個体は、ＮＫ細胞係合剤（例えば、エフェクター増強抗体）もしくは別の薬物で以前に処置されていてもよく、またはそのような処置を受けていなくてもよい。特定の態様では、患者はＮＫ細胞係合剤（例えばエフェクター増強抗体）で以前に処置されていない。患者は、ＮＫ細胞係合剤療法が開始される前に、ＮＫ細胞係合剤以外の（例えば、エフェクター増強抗体以外の）１つ以上の薬物を含む療法で処置されていてもよい。

【0138】

いくつかの態様では、個体は、１つ以上のサイトカインの上昇した血清レベルを有する。いくつかの態様では、前記上昇した血清レベルは、個体に対するＮＫ細胞係合剤の投与に関連する。前記上昇した血清レベルは、特に、健常個体の血清レベル、および／またはＮＫ細胞係合剤を投与していない個体（同じ個体を含む）の血清レベルと比較したものである（すなわち、そのような場合、血清レベルは、ＮＫ細胞係合剤を投与しない場合の血清レベルと比較して上昇している）。いくつかの態様では、前記１つ以上のサイトカインは、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１β、ＭＣＰ－１およびＩＬ－１０からなる群、特にＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－８およびＴＮＦ－αからなる群から選択される。

【0139】

本発明の態様のいずれかによるサイトカインは、インターロイキン（ＩＬ）－６、インターフェロン（ＩＦＮ）－γ、ＩＬ－８、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－α、 ＩＬ－２、単球走化性タンパク質（ＭＣＰ）－１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１βおよびＩＬ－１０からなる群から選択される１つ以上のサイトカインであり得る。いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－８およびＴＮＦ－α、ＩＬ－２ならびにＭＣＰ－１からなる群から選択される１つ以上のサイトカインである。いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、およびＭＣＰ－１からなる群から選択される１つ以上のサイトカインである。いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－８およびＴＮＦ－αからなる群から選択される１つ以上のサイトカインである。いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ－６である。いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＦＮ－γである。いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ－８である。いくつかの態様では、サイトカインは、ＴＮＦ－αである。いくつかの態様では、サイトカインは、ＭＣＰ－１である。いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ－１βである。いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ－１０である。いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ－１２である。いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ－２である。

【0140】

好ましくは、本発明の態様のいずれかによるＮＫ細胞は、ＣＤ１６^＋ＮＫ細胞である。

【0141】

いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤による処置またはＮＫ細胞係合剤の投与は、個体における応答をもたらし得る。いくつかの態様では、応答は完全な応答であり得る。いくつかの態様では、応答は、処置の中止後に持続する応答であり得る。いくつかの態様では、応答は、処置の中止後に持続する完全な応答であり得る。いくつかの態様では、応答は部分応答であり得る。いくつかの態様では、応答は、処置の中止後に持続する部分応答であり得る。いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤ならびに、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤による処置または投与は、ＮＫ細胞係合剤単独で（すなわち、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤なしで）の処置または投与と比較して、応答を改善し得る。いくつかの態様では、ＮＫ細胞係合剤ならびに、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤の処置または投与は、ＮＫ細胞係合剤単独で（すなわち、Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤なしで）処置された対応する患者集団と比較して、患者集団における奏効率を増加させ得る。

【0142】

ＮＫ細胞係合剤は、治療において単独で、または他の薬剤と一緒に使用され得る。例えば、ＮＫ細胞係合剤は、少なくとも１つの追加の治療剤と共投与され得る。特定の態様では、追加の治療剤は、抗がん剤、例えば、化学療法剤、腫瘍細胞増殖の阻害剤、または腫瘍細胞アポトーシスの活性化剤である。特に、ＮＫ細胞係合剤がエフェクター増強抗ＣＤ２０抗体（例えば、オビヌツズマブ）である具体的な態様では、追加の治療剤は、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾンもしくはプレドニゾロン、クロラムブシルまたはベンダムスチンから選択される。いくつかのそのような態様では、追加の治療剤は、化学療法剤の組み合わせ、特に、 シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾンもしくはプレドニゾロンの組み合わせ（ＣＨＯＰ）、またはシクロホスファミド、ビンクリスチン、およびプレドニゾンもしくはプレドニゾロンの組み合わせ（ＣＶＰ）である。

【0143】

Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤は、ＮＫ細胞係合剤の投与に関連する有害作用、特にＣＲＳの防止または軽減のために、単独で、または１つ以上の他の薬剤と一緒に使用することができる。Ｓｒｃ、ＪＡＫおよび／またはｍＴＯＲシグナル伝達の阻害剤は、例えば、ＩＬ－６Ｒアンタゴニスト（例えば、トシリズマブ）、ステロイド（例えば、メチルプレドニゾロンまたはデキサメタゾンなどのコルチコステロイド）またはＴＮＦ－αアンタゴニスト（例えば、エタネルセプト）と一緒に使用することができる。

【0144】

【図面の簡単な説明】

【0145】

【図1】全血アッセイにおけるオビヌツズマブ誘発性ＣＤ１９^＋Ｂ細胞枯渇に対する１００ｎＭのルキソリチニブ（ｒｕｘｏ）、１００ｎＭのシロリムス（ｓｉｒｏ）、１００ｎＭのダサチニブ（ｄａｓａ）の効果である。新鮮な全血を、１００ｎＭのルキソリチニブ、１００ｎＭのシロリムス、および１００ｎＭのダサチニブの存在下および非存在下で、１００、１０、１および０．１μｇ／ｍＬのオビヌツズマブまたはＰＧＬＡＬＡ ＩｇＧと共に４８時間インキュベートした。ＰＧＬＡＬＡ ＩｇＧは、サイレントＦｃ領域を有し、陰性対照である。４８時間の時点で、血液を採集し、溶解させて、フローサイトメトリーによって、生細胞中のＣＤ１９^＋Ｂ細胞の割合を測定した。ｎ＝２人のドナーの平均値。

【図2A-C】全血アッセイにおける１００、１０、１および０．１μｇ／ｍＬのオビヌツズマブについての、オビヌツズマブ誘発性ＩＦＮ－γ（Ａ）、ＩＬ－２（Ｂ）、およびＴＮＦ－α（Ｃ）に対する１００ｎＭのルキソリチニブ（ｒｕｘｏ）、１００ｎＭのシロリムス（ｓｉｒｏ）、１００ｎＭのダサチニブ（ｄａｓａ）の効果である。新鮮な全血を、１００ｎＭのルキソリチニブ、１００ｎＭのシロリムス、および１００ｎＭのダサチニブの存在下および非存在下で、１００、１０、１および０．１μｇ／ｍＬのオビヌツズマブまたはＰＧＬＡＬＡ ＩｇＧと共に４８時間インキュベートした。ＰＧＬＡＬＡ ＩｇＧは、サイレントＦｃ領域を有し、陰性対照である。２４時間の時点で、血清を採集し、Ｌｕｍｉｎｅｘによってサイトカインを分析した。ｎ＝２人のドナーの平均値。

【図2D-F】全血アッセイにおける１００、１０、１および０．１μｇ／ｍＬのオビヌツズマブについての、オビヌツズマブ誘発性ＩＬ－６（Ｄ），ＩＬ－８（Ｅ）およびＭＣＰ－１（Ｆ）に対する１００ｎＭのルキソリチニブ（ｒｕｘｏ）、１００ｎＭのシロリムス（ｓｉｒｏ）、１００ｎＭのダサチニブ（ｄａｓａ）の効果である。新鮮な全血を、１００ｎＭのルキソリチニブ、１００ｎＭのシロリムス、および１００ｎＭのダサチニブの存在下および非存在下で、１００、１０、１および０．１μｇ／ｍＬのオビヌツズマブまたはＰＧＬＡＬＡ ＩｇＧと共に４８時間インキュベートした。ＰＧＬＡＬＡ ＩｇＧは、サイレントＦｃ領域を有し、陰性対照である。２４時間の時点で、血清を採集し、Ｌｕｍｉｎｅｘによってサイトカインを分析した。ｎ＝２人のドナーの平均値。

【実施例】

【0146】

以下は、本発明の方法および組成物の実施例である。上に提供された一般的な説明が与えられると、様々な他の態様が実施され得ることが理解される。

【0147】

実施例１．ＪＡＫ１／２阻害剤のルキソリチニブ、ｍＴＯＲ阻害剤のシロリムス、およびＳｒｃ阻害剤のダサチニブは、ＦｃγＲ媒介の輸注反応を防止することができる。
ＣＤ２０標的化エフェクター増強抗体のオビヌツズマブ（Ｇａｚｙｖａ（登録商標））は、ＦｃγＲシグナル伝達を介してＢ細胞を枯渇させるため、ＦｃγＲシグナル伝達を介して誘導されるサイトカイン放出によって特徴付けられる輸注反応のリスクと関連する可能性がある。ｍＴＯＲ阻害剤のシロリムス、ＪＡＫ１／２阻害剤のルキソリチニブおよびＳｒｃ阻害剤のダサチニブがＦｃγＲシグナル伝達を介して誘導されるサイトカイン放出を予防することができるかどうかを評価するために、シロリムス、ルキソリチニブおよびダサチニブの存在下および非存在下でオビヌツズマブの漸増用量を使用する全血アッセイを実施した。サイレントＦｃ部分を有する対応する抗ＣＤ２０ ＩｇＧ（「ＰＧＬＡＬＡ」突然変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ（Ｋａｂａｔ ＥＵ番号付け）を含む）を陰性対照として使用した（「ＰＧＬＡＬＡ ＩｇＧ」）。このアッセイでは、新鮮な全血を、１００ｎＭのシロリムス、１００ｎＭのルキソリチニブおよび１００ｎＭのダサチニブの存在下および非存在下で、１００μｇ／ｍＬ～０．１μｇ／ｍＬの範囲の濃度のオビヌツズマブと一緒にインキュベートする。サイトカイン放出に対する異なるキナーゼ阻害剤の影響を評価するために、２４時間後に血清を採集し、サイトカインをＬｕｍｉｎｅｘで分析した。Ｂ細胞枯渇に対する異なるキナーゼ阻害剤の影響を評価するために、４８時間後に血液を溶解し、Ｂ細胞枯渇をフローサイトメトリーで測定した。

【0148】

その結果、１００ｎＭのシロリムス、１００ｎＭのルキソリチニブおよび１００ｎＭのダサチニブによる処置は、４８時間の時点でオビヌツズマブによって誘発されるＢ細胞枯渇を防止しなかった（図１）。しかしながら、１００ｎＭのダサチニブによる処置は、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６、ＩＬ－６、およびＭＣＰ－１のレベルを大幅に低下させた（図２Ａ～Ｆ）。１００ｎＭのシロリムスおよび１００ｎＭのルキソリチニブによる処置は、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６、ＩＬ－６およびＭＣＰ－１のレベルも低下させ、ＩＬ－２のレベルもより低い程度に低下させた（図１９Ａ～Ｆ）。

【0149】

ｍＴＯＲ阻害剤のシロリムス、ＪＡＫ１／２阻害剤のルキソリチニブ、およびＳｒｃ阻害剤のダサチニブはサイトカイン放出を低減させ、Ｓｒｃ阻害剤は３つのクラスのキナーゼ阻害剤の中でサイトカイン放出の低減において最も強力であった。しかしながら、驚くべきことに、キナーゼ阻害剤（ダサチニブを含む）は、オビヌツズマブ誘発性Ｂ細胞枯渇を妨害しなかった。したがって、本発明者らは、これらのキナーゼ阻害剤は、ＦｃγＲを介する抗体シグナル伝達による処置後の輸注反応を軽減するために使用できる可能性があることを提案する。

【0150】

上述の発明は、理解を明確にする目的のために説明および実施例によってある程度詳細に記載されているが、これらの説明および実施例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。ここに引用される全ての特許および科学文献の開示は、参照によりその全体が明示的に援用される。

【図1】

【図2A-C】

【図2D-F】

【配列表】

2024514281000001.app

【国際調査報告】