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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-04-10
(54)【発明の名称】組換え抗原提示細胞
(51)【国際特許分類】
C12N 15/24 20060101AFI20240403BHJP
C12N 5/0783 20100101ALI20240403BHJP
C12N 5/0784 20100101ALI20240403BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240403BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20240403BHJP
C07K 14/54 20060101ALI20240403BHJP
C07K 14/705 20060101ALI20240403BHJP
C07K 16/00 20060101ALI20240403BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20240403BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20240403BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20240403BHJP
C12N 5/0781 20100101ALI20240403BHJP
C12N 5/078 20100101ALI20240403BHJP
C07K 14/725 20060101ALI20240403BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20240403BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240403BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20240403BHJP
A61K 35/17 20150101ALI20240403BHJP
【ＦＩ】
C12N15/24
C12N5/0783 ZNA
C12N5/0784
C12N5/10
C12N15/62 Z
C07K14/54
C07K14/705
C07K16/00
C12N15/12
C12N15/13
C07K19/00
C12N5/0781
C12N5/078
C07K14/725
C07K16/28
A61P35/00
A61P35/02
A61K35/17
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023566023
(86)(22)【出願日】2022-04-27
(85)【翻訳文提出日】2023-10-26
(86)【国際出願番号】 IB2022053925
(87)【国際公開番号】W WO2022229884
(87)【国際公開日】2022-11-03
(31)【優先権主張番号】63/180,530
(32)【優先日】2021-04-27
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】000002934
【氏名又は名称】武田薬品工業株式会社
(74)【代理人】
【識別番号】100136629
【弁理士】
【氏名又は名称】鎌田 光宜
(74)【代理人】
【識別番号】100080791
【弁理士】
【氏名又は名称】高島 一
(74)【代理人】
【識別番号】100125070
【弁理士】
【氏名又は名称】土井 京子
(74)【代理人】
【識別番号】100121212
【弁理士】
【氏名又は名称】田村 弥栄子
(74)【代理人】
【識別番号】100174296
【弁理士】
【氏名又は名称】當麻 博文
(74)【代理人】
【識別番号】100137729
【弁理士】
【氏名又は名称】赤井 厚子
(74)【代理人】
【識別番号】100152308
【弁理士】
【氏名又は名称】中 正道
(74)【代理人】
【識別番号】100201558
【弁理士】
【氏名又は名称】亀井 恵二郎
(72)【発明者】
【氏名】ソバナ、ナンドゥ
(72)【発明者】
【氏名】ボトゥン、アリシャ
(72)【発明者】
【氏名】ベネザー、ギル
(72)【発明者】
【氏名】バドゥカール、シュルティ
(72)【発明者】
【氏名】ミシュラ、ラビ
(72)【発明者】
【氏名】チャン、フイ－シン
(72)【発明者】
【氏名】リ、ワンウェン
(72)【発明者】
【氏名】ソニ、マンシ
(72)【発明者】
【氏名】ツァオ、ラン
(72)【発明者】
【氏名】シ、シ
(72)【発明者】
【氏名】イェ、ジェーン
(72)【発明者】
【氏名】ルオ、メンヤオ
(72)【発明者】
【氏名】グプタ、マノイ
(72)【発明者】
【氏名】中村 鑑斗
(72)【発明者】
【氏名】マイ、ドアン
(72)【発明者】
【氏名】ウン、メイ ローザ
【テーマコード（参考）】
4B065
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA93X
4B065AA94X
4B065AA99
4B065AB06
4B065BA02
4B065BD39
4B065CA24
4B065CA44
4C087AA01
4C087AA02
4C087AA03
4C087BB37
4C087BB65
4C087CA05
4C087DA32
4C087NA14
4C087ZB26
4C087ZB27
4H045AA10
4H045AA11
4H045AA20
4H045BA09
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA02
4H045DA50
4H045DA75
4H045EA22
4H045FA72
4H045FA74
(57)【要約】
本開示は、組換え抗原提示細胞、及び免疫細胞のｅｘ ｖｉｖｏでの培養及び拡大におけるその使用方法を提供する。いくつかの態様において、本明細書で開示する組換え抗原提示細胞の共培養を通じて拡大された免疫細胞は、対象の疾患または状態の治療（例えば、がんの治療）のために対象に投与される。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子とを含む、組換え抗原提示細胞（ＲＡＰＣ）。
【請求項2】
（ｉｉｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子をさらに含む、請求項１に記載のＲＡＰＣ。
【請求項3】
（ｉｖ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子をさらに含む、請求項１または２に記載のＲＡＰＣ。
【請求項4】
（ｉ）ＩＬ－２１及び（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌを発現する、請求項１～３のいずれか１項に記載のＲＡＰＣ。
【請求項5】
（ｉｉｉ）４－１ＢＢＬを発現する、請求項１～４のいずれか１項に記載のＲＡＰＣ。
【請求項6】
（ｉｖ）ＩＬ－１５を発現する、請求項１～５のいずれか１項に記載のＲＡＰＣ。
【請求項7】
前記ＩＬ－２１が膜結合ＩＬ－２１である、請求項１～６のいずれか１項に記載のＲＡＰＣ。
【請求項8】
前記膜結合ＩＬ－２１が、ヒトＩＬ－２１ポリペプチドと免疫グロブリンのＦｃ領域とを含む融合タンパク質である、請求項７に記載のＲＡＰＣ。
【請求項9】
前記膜結合ＩＬ－２１が、（ｉ）前記ヒトＩＬ－２１ポリペプチドと、（ｉｉ）ヒンジ領域と、（ｉｉｉ）前記免疫グロブリンのＦｃ領域と、（ｉｖ）膜貫通ドメインとを含む、請求項７または８に記載のＲＡＰＣ。
【請求項10】
前記ＩＬ－１５が膜結合ＩＬ－１５である、請求項６～９のいずれか１項に記載のＲＡＰＣ。
【請求項11】
前記膜結合ＩＬ－１５が、ヒトＩＬ－１５ポリペプチドと免疫グロブリンのＦｃ領域とを含む融合タンパク質である、請求項１０に記載のＲＡＰＣ。
【請求項12】
前記膜結合ＩＬ－１５が、（ｉ）前記ヒトＩＬ－１５ポリペプチドと、（ｉｉ）ヒンジ領域と、（ｉｉｉ）前記免疫グロブリンのＦｃ領域と、（ｉｖ）膜貫通ドメインとを含む、請求項１０または１１に記載のＲＡＰＣ。
【請求項13】
前記Ｆｃ領域がＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域である、請求項８～１２のいずれか１項に記載のＲＡＰＣ。
【請求項14】
前記Ｆｃ領域がＩｇＧ４ Ｆｃ領域である、請求項８～１３のいずれか１項に記載のＲＡＰＣ。
【請求項15】
前記ヒンジ領域が免疫グロブリンヒンジ領域または修飾免疫グロブリンヒンジ領域を含む、請求項１２～１４のいずれか１項に記載のＲＡＰＣ。
【請求項16】
前記ヒンジ領域がＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、またはＣＤ８ヒンジ領域を含む、請求項１２～１５のいずれか１項に記載のＲＡＰＣ。
【請求項17】
前記膜貫通ドメインがＣＤ４またはＣＤ８膜貫通ドメインを含む、請求項１２～１６のいずれか１項に記載のＲＡＰＣ。
【請求項18】
樹状細胞、操作クローン細胞株、天然由来のがん細胞株、ビーズベースの人工抗原提示細胞、人工脂質小胞もしくは他の脂質二重層含有系、エクソソーム、またはＩＬ－２１、ＩＬ－１５、ＯＸ－４０Ｌ、及び４－１ＢＢＬのうちの１つ以上が付着した固体支持体を含む、請求項１２～１７のいずれか１項に記載のＲＡＰＣ。
【請求項19】
前記固体支持体が、ビーズ、球状もしくは非球状のナノ粒子支持体、カーボンナノチューブ支持体、磁性粒子支持体、糸状ポリマー支持体、二次元支持体、またはこれらの任意の組合せから選択される、請求項１８に記載のＲＡＰＣ。
【請求項20】
Ｋ５６２細胞である、請求項１～１９のいずれか１項に記載のＲＡＰＣ。
【請求項21】
遺伝子修飾Ｋ５６２細胞である、請求項１～２０のいずれか１項に記載のＲＡＰＣ。
【請求項22】
請求項１～２１のいずれか１項に記載のＲＡＰＣを含む、ＲＡＰＣの集団。
【請求項23】
第１のＲＡＰＣ及び第２のＲＡＰＣを含むＲＡＰＣの集団であって、（ａ）前記第１のＲＡＰＣ及び前記第２のＲＡＰＣが、ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子及びＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子を含む、または
（ｂ）前記第１のＲＡＰＣが、ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子を含み、前記第２のＲＡＰＣが、ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子を発現する、前記ＲＡＰＣの集団。
【請求項24】
前記第１のＲＡＰＣ、前記第２のＲＡＰＣ、またはその両方が、４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子をさらに含む、請求項２３に記載のＲＡＰＣの集団。
【請求項25】
前記第１のＲＡＰＣ、前記第２のＲＡＰＣ、またはその両方が、ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子をさらに含む、請求項２３または２１に記載のＲＡＰＣの集団。
【請求項26】
第３のＲＡＰＣをさらに含む、請求項２３～２５のいずれか１項に記載のＲＡＰＣの集団。
【請求項27】
前記第３のＲＡＰＣが、４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子を含む、請求項２６に記載のＲＡＰＣの集団。
【請求項28】
前記第３のＲＡＰＣが、ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子を含む、請求項２６または２７に記載のＲＡＰＣの集団。
【請求項29】
第４のＲＡＰＣをさらに含む、請求項２３～２８のいずれか１項に記載のＲＡＰＣの集団。
【請求項30】
前記第４のＲＡＰＣが、ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子を含む、請求項２９に記載のＲＡＰＣの集団。
【請求項31】
前記第１のＲＡＰＣ、前記第２のＲＡＰＣ、前記第３のＲＡＰＣ、前記第４のＲＡＰＣ、またはこれらの任意の組合せが、樹状細胞、操作クローン細胞株、天然由来のがん細胞株、ビーズベースの人工抗原提示細胞、人工脂質小胞もしくは他の脂質二重層含有系、エクソソーム、固体支持体、またはこれらの任意の組合せを含む、請求項２９または３０に記載のＲＡＰＣの集団。
【請求項32】
前記固体支持体が、ビーズ、球状もしくは非球状のナノ粒子支持体、カーボンナノチューブ支持体、磁性粒子支持体、糸状ポリマー支持体、二次元支持体、またはこれらの任意の組合せを含む、請求項３１に記載のＲＡＰＣの集団。
【請求項33】
前記第１のＲＡＰＣ、前記第２のＲＡＰＣ、前記第３のＲＡＰＣ、前記第４のＲＡＰＣ、またはこれらの任意の組合せがＫ５６２細胞である、請求項２９～３２のいずれか１項に記載のＲＡＰＣの集団。
【請求項34】
前記第１のＲＡＰＣ、前記第２のＲＡＰＣ、前記第３のＲＡＰＣ、前記第４のＲＡＰＣ、またはこれらの任意の組合せが遺伝子修飾Ｋ５６２細胞である、請求項２９～３３のいずれか１項に記載のＲＡＰＣの集団。
【請求項35】
免疫細胞の集団をｅｘ ｖｉｖｏで拡大する方法であって、前記免疫細胞の集団を、請求項１～２１のいずれか１項に記載のＲＡＰＣまたは請求項２２～３４のいずれか１項に記載のＲＡＰＣの集団に接触させることを含む、前記方法。
【請求項36】
免疫細胞の集団をｅｘ ｖｉｖｏで拡大する方法であって、前記免疫細胞の集団をＲＡＰＣに接触させることを含み、前記ＲＡＰＣがＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１５を発現する、前記方法。
【請求項37】
前記免疫細胞が、αβＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、パンγδＴ細胞、Ｖδ１ γδＴ細胞、Ｖδ２ γδＴ細胞、Ｖδ３ γδＴ細胞、またはこれらの任意の組合せを含む、請求項３５または３６に記載の方法。
【請求項38】
前記免疫細胞が、ナイーブＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞（Ｔｓｃｍ）、セントラルメモリーＴ細胞（Ｔｃｍ）、エフェクターＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞（Ｔｅｍ）、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項39】
前記免疫細胞の集団が１つ以上の遺伝子修飾免疫細胞を含む、請求項３５～３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項40】
前記免疫細胞の集団が前記ＲＡＰＣに接触される前に、前記免疫細胞の集団が遺伝子修飾される、請求項３５～３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項41】
前記免疫細胞の集団が前記ＲＡＰＣに接触された後に、前記免疫細胞の集団が遺伝子修飾される、請求項３５～４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項42】
前記免疫細胞の集団が、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）由来の１つ以上の免疫細胞を含む、請求項３５～４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項43】
前記遺伝子修飾免疫細胞が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作遺伝子Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、またはこれらの組合せを含む、請求項３９～４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項44】
前記ＣＡＲまたは前記ＴＣＲが、腫瘍細胞上に存在する１つ以上の抗原に結合可能である、請求項４３に記載の方法。
【請求項45】
前記ＣＡＲまたは前記ＴＣＲが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＲＯＲ１、ＣＤ２２、がん胎児性抗原、アルファフェトプロテイン、ＣＡ－１２５、５Ｔ４、ＭＵＣ－１、上皮性腫瘍抗原、前立腺特異性抗原、黒色腫関連抗原、変異ｐ５３、変異ｒａｓ、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、葉酸結合タンパク質、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐｌ２０、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１、ＧＤ２、ＣＤ１２３、ＣＤ３３、ＣＤ１３８、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ５６、ｃ－Ｍｅｔ、メソテリン、ＧＤ３、ＨＥＲＶ－Ｋ、ＩＬ－ｌｌＲアルファ、カッパ鎖、ラムダ鎖、ＣＳＰＧ４、ＥＲＢＢ２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＶＥＧＦＲ２、ＨＥＲ２－ＨＥＲ３の組合せ、ＨＥＲ１－ＨＥＲ２の組合せ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、滑膜肉腫Ｘブレイクポイント２（ＳＳＸ２）、黒色腫抗原（ＭＡＧＥ）、Ｔ細胞により認識される黒色腫抗原１（ＭＡＲＴ－１）、ｇｐ１００、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異性膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される抗原に結合可能である、請求項４３または４４に記載の方法。
【請求項46】
前記免疫細胞の集団中の免疫細胞の総数が、少なくとも約１×１０７～少なくとも約１×１０１２、少なくとも約１×１０８～少なくとも約１×１０１２、少なくとも約１×１０９～少なくとも約１×１０１２、少なくとも約１×１０８～少なくとも約１×１０１１、少なくとも約１×１０９～少なくとも約１×１０１１、少なくとも約１×１０１０～少なくとも約１×１０１１、少なくとも約１×１０７～少なくとも約１×１０１０、少なくとも約１×１０８～少なくとも約１×１０１０、または少なくとも約１×１０９～少なくとも約１×１０１０個の免疫細胞になるまで、前記免疫細胞の集団が拡大される、請求項３５～４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項47】
前記免疫細胞の集団中の免疫細胞の総数が、少なくとも約１×１０７、少なくとも約５×１０７、少なくとも約１×１０８、少なくとも約５×１０８、少なくとも約１×１０９、少なくとも約２×１０９、少なくとも約３×１０９、少なくとも約４×１０９、少なくとも約５×１０９、少なくとも約６×１０９、少なくとも約７×１０９、少なくとも約８×１０９、少なくとも約９×１０９、少なくとも約１×１０１０、少なくとも約２×１０１０、少なくとも約３×１０１０、少なくとも約４×１０１０、少なくとも約５×１０１０、少なくとも約６×１０１０、少なくとも約７×１０１０、少なくとも約８×１０１０、少なくとも約９×１０１０、少なくとも約１×１０１１、少なくとも約２×１０１１、少なくとも約３×１０１１、少なくとも約４×１０１１、少なくとも約５×１０１１、少なくとも約６×１０１１、少なくとも約７×１０１１、少なくとも約８×１０１１、少なくとも約９×１０１１、または少なくとも約１×１０１２個の免疫細胞になるまで、前記免疫細胞の集団が拡大される、請求項３５～４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項48】
前記免疫細胞の集団がドナー対象から単離される、請求項３５～４７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項49】
前記ドナー対象がヒトである、請求項４８に記載の方法。
【請求項50】
前記ドナー対象ががんに罹患している、請求項４８または４９に記載の方法。
【請求項51】
拡大された免疫細胞の集団を精製することをさらに含む、請求項３５～５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項52】
前記拡大された免疫細胞の集団が、アルファ／ベータＴ細胞、ガンマ／デルタＴ細胞、ＮＫ細胞、またはこれらの組合せの集団を含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項53】
前記拡大された免疫細胞の集団を、それを必要とする対象に投与することをさらに含む、請求項５１または５２に記載の方法。
【請求項54】
疾患または状態の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、（ｉ）免疫細胞の集団を、請求項１～２１のいずれか１項に記載のＲＡＰＣまたは請求項２２～３４のいずれか１項に記載のＲＡＰＣの集団に接触させることにより、前記免疫細胞の集団をｅｘ ｖｉｖｏで拡大することと、（ｉｉ）拡大された免疫細胞の集団を精製することと、（ｉｉｉ）前記拡大された免疫細胞の集団を前記対象に投与することとを含む、方法。
【請求項55】
前記対象ががんに罹患している、請求項５３または５４に記載の方法。
【請求項56】
前記がんが、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚もしくは眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸部癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組肉腫、尿道癌、陰茎癌、慢性もしくは急性の白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、小児期の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓もしくは尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮細胞癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境誘導性癌（アスベストにより誘導されたものを含む）、またはこれらの任意の組合せを含む、請求項５０または５５に記載の方法。
【請求項57】
前記がんがリンパ腫または白血病を含む、請求項５０、５５、及び５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項58】
免疫細胞の集団をｅｘ ｖｉｖｏで拡大する方法であって、前記免疫細胞の集団をインターロイキン－２１（ＩＬ－２１）及びＯＸ４０Ｌに接触させることを含む、前記方法。
【請求項59】
前記免疫細胞の集団を組換え抗原提示細胞（ＲＡＰＣ）に接触させることをさらに含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項60】
免疫細胞の集団をｅｘ ｖｉｖｏで拡大する方法であって、Ｔ細胞の集団をＲＡＰＣ、ＩＬ－２１及びＯＸ４０Ｌに接触させることを含む、前記方法。
【請求項61】
前記免疫細胞の集団を４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）に接触させることをさらに含む、請求項５８～６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項62】
前記免疫細胞の集団をインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）に接触させることをさらに含む、請求項５８～６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項63】
前記ＲＡＰＣがＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＩＬ－１５、またはこれらの任意の組合せを発現する、請求項５９～６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項64】
前記ＲＡＰＣがＩＬ－２１を発現する、請求項５９～６３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項65】
前記ＲＡＰＣがＯＸ４０Ｌを発現する、請求項５９～６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項66】
前記ＲＡＰＣが４－１ＢＢＬを発現する、請求項５９～６５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項67】
前記ＲＡＰＣがＩＬ－１５を発現する、請求項５９～６６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項68】
前記ＲＡＰＣがＩＬ－２１及びＯＸ４０Ｌを発現し、前記免疫細胞の集団が培地中で培養され、前記培地が４－１ＢＢＬ及びＩＬ－１５を含む、請求項５９～６７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項69】
前記ＲＡＰＣがＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、及び４－１ＢＢＬを発現し、前記免疫細胞の集団が培地中で培養され、前記培地がＩＬ－１５を含む、請求項５９～６８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項70】
前記ＲＡＰＣがＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、及びＩＬ－１５を発現し、前記免疫細胞の集団が培地中で培養され、前記培地が４－１ＢＢＬを含む、請求項５９～６８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項71】
前記ＲＡＰＣが、樹状細胞、操作クローン細胞株、天然由来のがん細胞株、ビーズベースの人工抗原提示細胞、人工脂質小胞もしくは他の脂質二重層含有系、エクソソーム、固体支持体、またはこれらの任意の組合せを含む、請求項５９～７０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項72】
前記固体支持体が、ビーズ、球状もしくは非球状のナノ粒子支持体、カーボンナノチューブ支持体、磁性粒子支持体、糸状ポリマー支持体、二次元支持体、またはこれらの任意の組合せを含む、請求項７１に記載の方法。
【請求項73】
前記ＲＡＰＣが遺伝子修飾Ｋ５６２細胞である、請求項５９～７１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項74】
免疫細胞の集団をｅｘ ｖｉｖｏで拡大する方法であって、Ｔ細胞の集団をＩＬ－２１及び第１のＲＡＰＣに接触させることを含み、前記第１のＲＡＰＣがＯＸ４０Ｌを発現する、前記方法。
【請求項75】
前記免疫細胞の集団が培地中で培養され、前記培地がＩＬ－２１を含む、請求項７４に記載の方法。
【請求項76】
前記ＩＬ－２１がビーズに会合する、請求項７５に記載の方法。
【請求項77】
前記ＩＬ－２１が第２のＲＡＰＣによって発現される、請求項７４に記載の方法。
【請求項78】
前記第１のＲＡＰＣ及び前記第２のＲＡＰＣが異なる、請求項７７に記載の方法。
【請求項79】
前記第１のＲＡＰＣ及び前記第２のＲＡＰＣが同じである、請求項７７または７８に記載の方法。
【請求項80】
前記免疫細胞の集団をＯＸ４０Ｌに接触させることをさらに含む、請求項７４～７９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項81】
前記免疫細胞の集団が培地中で培養され、前記培地がＯＸ４０Ｌを含む、請求項８０に記載の方法。
【請求項82】
前記ＯＸ４０Ｌがビーズに会合する、請求項８１に記載の方法。
【請求項83】
前記ＯＸ４０Ｌが第３のＲＡＰＣによって発現される、請求項８０に記載の方法。
【請求項84】
前記第３のＲＡＰＣが前記第１のＲＡＰＣ及び前記第２のＲＡＰＣとは異なる、請求項８３に記載の方法。
【請求項85】
前記第３のＲＡＰＣが前記第１のＲＡＰＣと同じであり、前記第３のＲＡＰＣが前記第２のＲＡＰＣと同じであるか、または前記第３のＲＡＰＣが前記第１のＲＡＰＣ及び前記第２のＲＡＰＣと同じである、請求項８３に記載の方法。
【請求項86】
前記免疫細胞の集団をＩＬ－１５に接触させることをさらに含む、請求項７４～８５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項87】
前記免疫細胞の集団が培地中で培養され、前記培地がＩＬ－１５を含む、請求項８６に記載の方法。
【請求項88】
前記ＩＬ－１５がビーズと会合する、請求項８７に記載の方法。
【請求項89】
前記ＩＬ－１５が第４のＲＡＰＣによって発現される、請求項８６に記載の方法。
【請求項90】
前記第４のＡＰＣが前記第１のＲＡＰＣ、前記第２のＲＡＰＣ、及び前記第３のＲＡＰＣとは異なる、請求項８９に記載の方法。
【請求項91】
前記第４のＲＡＰＣが前記第１のＲＡＰＣと同じであり、前記第４のＲＡＰＣが前記第２のＲＡＰＣと同じであるか、前記第４のＲＡＰＣが前記第３のＲＡＰＣと同じであるか、前記第４のＲＡＰＣが前記第１のＲＡＰＣ及び前記第２のＲＡＰＣと同じであるか、前記第４のＲＡＰＣが前記第２のＲＡＰＣ及び前記第３のＲＡＰＣと同じであるか、前記第４のＲＡＰＣが前記第１のＲＡＰＣ及び前記第３のＲＡＰＣと同じであるか、または前記第４のＲＡＰＣが前記第１のＲＡＰＣ、前記第２のＲＡＰＣ、及び前記第３のＲＡＰＣと同じである、請求項８９に記載の方法。
【請求項92】
免疫細胞の集団をｅｘ ｖｉｖｏで拡大する方法であって、Ｔ細胞の集団をＲＡＰＣに接触させることを含み、前記ＲＡＰＣがＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１５を発現する、前記方法。
【請求項93】
前記第１のＲＡＰＣ、前記第２のＲＡＰＣ、前記第３のＲＡＰＣ、または前記第４のＲＡＰＣのうちの１つ以上が、樹状細胞、操作クローン細胞株、天然由来のがん細胞株、ビーズベースの人工抗原提示細胞、人工脂質小胞もしくは他の脂質二重層含有系、エクソソーム、固体支持体、またはこれらの任意の組合せを含む、請求項７４～９２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項94】
前記固体支持体が、ビーズ、球状もしくは非球状のナノ粒子支持体、カーボンナノチューブ支持体、磁性粒子支持体、糸状ポリマー支持体、二次元支持体、またはこれらの任意の組合せを含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項95】
前記ＲＡＰＣが遺伝子修飾Ｋ５６２細胞である、請求項７４～９４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項96】
前記ＩＬ－２１が、ヒトＩＬ－２１ポリペプチドと、免疫グロブリンのＦｃ領域とを含む融合タンパク質である、請求項５８～９５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項97】
前記ＩＬ－２１が、（ｉ）前記ヒトＩＬ－２１ポリペプチドと、（ｉｉ）ヒンジ領域と、（ｉｉｉ）前記免疫グロブリンのＦｃ領域と、（ｉｖ）膜貫通ドメインとを含む、請求項９６に記載の方法。
【請求項98】
前記ＩＬ－１５が、ヒトＩＬ－１５ポリペプチドと、免疫グロブリンのＦｃ領域とを含む融合タンパク質である、請求項６３～７３及び８６～９７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項99】
前記ＩＬ－１５が、（ｉ）前記ヒトＩＬ－１５ポリペプチドと、（ｉｉ）ヒンジ領域と、（ｉｉｉ）前記免疫グロブリンのＦｃ領域と、（ｉｖ）膜貫通ドメインとを含む、請求項９８に記載の方法。
【請求項100】
前記Ｆｃ領域がＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域である、請求項９６～９９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項101】
前記Ｆｃ領域がＩｇＧ４ Ｆｃ領域である、請求項９６～１００のいずれか１項に記載の方法。
【請求項102】
前記ヒンジ領域が免疫グロブリンヒンジ領域または修飾免疫グロブリンヒンジ領域を含む、請求項９７～１０１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項103】
前記ヒンジ領域がＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、またはＣＤ８ヒンジ領域を含む、請求項９７～１０２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項104】
前記膜貫通ドメインがＣＤ４またはＣＤ８膜貫通ドメインを含む、請求項９７～１０３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項105】
前記Ｔ細胞の集団中のＴ細胞の総数が、少なくとも約１×１０７～少なくとも約１×１０１２、少なくとも約１×１０８～少なくとも約１×１０１２、少なくとも約１×１０９～少なくとも約１×１０１２、少なくとも約１×１０８～少なくとも約１×１０１１、少なくとも約１×１０９～少なくとも約１×１０１１、少なくとも約１×１０１０～少なくとも約１×１０１１、少なくとも約１×１０７～少なくとも約１×１０１０、少なくとも約１×１０８～少なくとも約１×１０１０、または少なくとも約１×１０９～少なくとも約１×１０１０個のＴ細胞になるまで、前記免疫細胞の集団が拡大される、請求項５８～１０４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項106】
前記Ｔ細胞の集団中のＴ細胞の総数が、少なくとも約１×１０７、少なくとも約５×１０７、少なくとも約１×１０８、少なくとも約５×１０８、少なくとも約１×１０９、少なくとも約２×１０９、少なくとも約３×１０９、少なくとも約４×１０９、少なくとも約５×１０９、少なくとも約６×１０９、少なくとも約７×１０９、少なくとも約８×１０９、少なくとも約９×１０９、少なくとも約１×１０１０、少なくとも約２×１０１０、少なくとも約３×１０１０、少なくとも約４×１０１０、少なくとも約５×１０１０、少なくとも約６×１０１０、少なくとも約７×１０１０、少なくとも約８×１０１０、少なくとも約９×１０１０、少なくとも約１×１０１１、少なくとも約２×１０１１、少なくとも約３×１０１１、少なくとも約４×１０１１、少なくとも約５×１０１１、少なくとも約６×１０１１、少なくとも約７×１０１１、少なくとも約８×１０１１、少なくとも約９×１０１１、または少なくとも約１×１０１２個のＴ細胞になるまで、前記免疫細胞の集団が拡大される、請求項５８～１０４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項107】
前記免疫細胞の集団がドナー対象から得られる、請求項５８～１０６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項108】
前記ドナー対象がヒトである、請求項１０７に記載の方法。
【請求項109】
前記ドナー対象ががんに罹患している、請求項１０７または１０８に記載の方法。
【請求項110】
前記免疫細胞の集団を、それを必要とする対象に投与することをさらに含む、請求項５８～１０９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項111】
前記免疫細胞が、αβＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、パンγδＴ細胞、Ｖδ１ γδＴ細胞、Ｖδ２ γδＴ細胞、Ｖδ３ γδＴ細胞、またはこれらの任意の組合せを含む、請求項５８～１１０のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年４月２７日出願の米国仮出願第６３／１８０，５３０号の優先権の利益を主張し、当該仮出願は参照により全体として本明細書に援用される。
本出願は、２０２１年４月２７日出願の米国仮出願第６３／１８０，５３０号の優先権の利益を主張し、当該仮出願は参照により全体として本明細書に援用される。
【0002】
ＥＦＳ－Ｗｅｂ経由で電子提出した配列表の参照
本出願で電子提出した配列表（名称：３８１７＿０８５ＰＣ０１＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、サイズ：１１，０３１バイト、作成日：２０２２年４月２６日）の内容は、参照により全体として本明細書に援用される。
本出願で電子提出した配列表（名称：３８１７＿０８５ＰＣ０１＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、サイズ：１１，０３１バイト、作成日：２０２２年４月２６日）の内容は、参照により全体として本明細書に援用される。
【0003】
本開示は、免疫細胞のｅｘ ｖｉｖｏでの培養及び拡大における抗原提示細胞及びその使用に関する。
【背景技術】
【0004】
細胞ベースの免疫療法は急速に発展中の研究分野であり、がんを含む様々な疾患の新規かつ改善された治療方法の開発を目的とする。免疫療法のための免疫細胞を単離し拡大するには、細胞の生存、拡大、及び最終的な有効性を改善するために様々な因子を用いて細胞を補充する必要がある。抗原提示細胞は、ｅｘ ｖｉｖｏで培養した免疫細胞にこれらの因子を送達するためのビヒクルとしてしばしば使用される。しかし、対象から単離された免疫細胞の集団は、アルファ／ベータＴ細胞、ガンマ／デルタＴ細胞、ＮＫ細胞、及びＢ細胞を含む様々な細胞種からなる。ある特定の免疫細胞（例えば、ガンマ／デルタＴ細胞及びＮＫ細胞）は、免疫細胞の総集団のごく一部に相当するため、細胞ベースの免疫療法に適した細胞数に達することは困難である。
【0005】
そのため、当技術分野では、免疫細胞の集団を拡大する方法、詳細には、細胞集団全体のごく一部に相当する細胞、例えば、ＮＫ細胞及びガンマ／デルタＴ細胞を拡大する方法が依然として必要とされている。
【発明の概要】
【0006】
本開示は、部分的には、細胞ベースの免疫療法に適した免疫細胞、詳細には、全細胞集団のごく一部に相当する免疫細胞の単離及び／または拡大に有用な組換え抗原提示細胞を提供する。本開示のいくつかの態様は、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子とを含む組換え抗原提示細胞（ＲＡＰＣ）を対象とする。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉｉｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子をさらに含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉｖ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子をさらに含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１及び（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌを発現する。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉｉｉ）４－１ＢＢＬを発現する。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉｖ）ＩＬ－１５を発現する。
【0007】
いくつかの態様において、ＩＬ－２１は、ヒトＩＬ－２１ポリペプチドと、免疫グロブリンのＦｃ領域とを含む融合タンパク質である。いくつかの態様において、ＩＬ－２１は、（ｉ）ヒトＩＬ－２１ポリペプチドと、（ｉｉ）ヒンジ領域と、（ｉｉｉ）免疫グロブリンのＦｃ領域と、（ｉｖ）膜貫通ドメインとを含む。いくつかの態様において、ＩＬ－１５は、ヒトＩＬ－１５ポリペプチドと、免疫グロブリンのＦｃ領域とを含む融合タンパク質である。いくつかの態様において、ＩＬ－１５は、（ｉ）ヒトＩＬ－１５ポリペプチドと、（ｉｉ）ヒンジ領域と、（ｉｉｉ）免疫グロブリンのＦｃ領域と、（ｉｖ）膜貫通ドメインとを含む。いくつかの態様において、Ｆｃ領域はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。いくつかの態様において、Ｆｃ領域はＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。いくつかの態様において、ヒンジ領域は免疫グロブリンヒンジ領域または修飾免疫グロブリンヒンジ領域を含む。いくつかの態様において、ヒンジ領域はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、またはＣＤ８ヒンジ領域を含む。いくつかの態様において、膜貫通ドメインはＣＤ４またはＣＤ８膜貫通ドメインを含む。
【0008】
いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、樹状細胞、操作クローン細胞株、天然由来のがん細胞株、ビーズベースの人工抗原提示細胞、人工脂質小胞もしくは他の脂質二重層含有系、エクソソーム、固体支持体（例えば、限定されるものではないが、ビーズ、球状もしくは非球状ナノ粒子支持体、カーボンナノチューブ支持体、磁性粒子支持体、糸状ポリマー支持体、二次元支持体、またはこれらの任意の組合せを含む）を含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＫ５６２細胞である。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは遺伝子修飾Ｋ５６２細胞である。
【0009】
本開示のいくつかの態様は、本明細書で開示するＲＡＰＣを含むＲＡＰＣの集団を対象とする。
【0010】
本開示のいくつかの態様は、第１のＲＡＰＣ及び第２のＲＡＰＣを含むＲＡＰＣの集団を対象とし、（ａ）第１のＲＡＰＣ及び第２のＲＡＰＣは、ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子とを含む、または（ｂ）第１のＲＡＰＣは、ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子を含み、第２のＲＡＰＣは、ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子を発現する。いくつかの態様において、第１のＲＡＰＣ、第２のＲＡＰＣ、またはその両方は、４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子をさらに含む。いくつかの態様において、第１のＲＡＰＣ、第２のＲＡＰＣ、またはその両方は、ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子をさらに含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣの集団は第３のＲＡＰＣをさらに含む。いくつかの態様において、第３のＲＡＰＣは、４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子を含む。いくつかの態様において、第３のＲＡＰＣは、ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子を含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣの集団は第４のＲＡＰＣをさらに含む。いくつかの態様において、第４のＲＡＰＣは、ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子を含む。
【0011】
いくつかの態様において、第１のＲＡＰＣ、第２のＲＡＰＣ、第３のＲＡＰＣ、第４のＲＡＰＣ、またはこれらの任意の組合せは、樹状細胞、操作クローン細胞株、天然由来のがん細胞株、ビーズベースの人工抗原提示細胞、人工脂質小胞もしくは他の脂質二重層含有系、エクソソーム、固体支持体（例えば、限定されるものではないが、ビーズ、球状もしくは非球状ナノ粒子支持体、カーボンナノチューブ支持体、磁性粒子支持体、糸状ポリマー支持体、二次元支持体、またはこれらの任意の組合せを含む）を含む。いくつかの態様において、第１のＲＡＰＣ、第２のＲＡＰＣ、第３のＲＡＰＣ、第４のＲＡＰＣ、またはこれらの任意の組合せは、Ｋ５６２細胞である。いくつかの態様において、第１のＲＡＰＣ、第２のＲＡＰＣ、第３のＲＡＰＣ、第４のＲＡＰＣ、またはこれらの任意の組合せは、遺伝子修飾Ｋ５６２細胞である。
【0012】
本開示のいくつかの態様は、免疫細胞の集団をｅｘ ｖｉｖｏで拡大する方法であって、免疫細胞の集団を、本明細書で開示するＲＡＰＣまたは本明細書で開示するＲＡＰＣの集団に接触させることを含む方法を対象とする。
【0013】
本開示のいくつかの態様は、免疫細胞の集団をｅｘ ｖｉｖｏで拡大する方法であって、免疫細胞の集団をＲＡＰＣに接触させることを含み、ＲＡＰＣがＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１５を発現する、方法を対象とする。
【0014】
いくつかの態様において、免疫細胞は、αβＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、パンγδＴ細胞、Ｖδ１ γδＴ細胞、Ｖδ２ γδＴ細胞、Ｖδ３ γδＴ細胞、またはこれらの任意の組合せを含む。いくつかの態様において、Ｔ細胞は、ナイーブＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞（Ｔｓｃｍ）、セントラルメモリーＴ細胞（Ｔｃｍ）、エフェクターＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞（Ｔｅｍ）、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される。
【0015】
いくつかの態様において、免疫細胞の集団は１つ以上の遺伝子修飾免疫細胞を含む。いくつかの態様において、遺伝子修飾免疫細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、修飾Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、またはこれらの組合せを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲまたはＴＣＲは、腫瘍細胞上に存在する１つ以上の抗原に結合可能である。いくつかの態様において、ＣＡＲまたはＴＣＲは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＲＯＲ１、ＣＤ２２、がん胎児性抗原、アルファフェトプロテイン、ＣＡ－１２５、５Ｔ４、ＭＵＣ－１、上皮性腫瘍抗原、前立腺特異性抗原、黒色腫関連抗原、変異ｐ５３、変異ｒａｓ、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、葉酸結合タンパク質、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐｌ２０、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１、ＧＤ２、ＣＤ１２３、ＣＤ３３、ＣＤ１３８、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ５６、ｃ－Ｍｅｔ、メソテリン、ＧＤ３、ＨＥＲＶ－Ｋ、ＩＬ－ｌｌＲアルファ、カッパ鎖、ラムダ鎖、ＣＳＰＧ４、ＥＲＢＢ２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＶＥＧＦＲ２、ＨＥＲ２－ＨＥＲ３の組合せ、ＨＥＲ１－ＨＥＲ２の組合せ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、滑膜肉腫Ｘブレイクポイント２（ＳＳＸ２）、黒色腫抗原（ＭＡＧＥ）、Ｔ細胞により認識される黒色腫抗原１（ＭＡＲＴ－１）、ｇｐ１００、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異性膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される抗原に結合可能である。
【0016】
いくつかの態様において、免疫細胞の集団中の免疫細胞の総数が、少なくとも約１×１０７～少なくとも約１×１０１２、少なくとも約１×１０８～少なくとも約１×１０１２、少なくとも約１×１０９～少なくとも約１×１０１２、少なくとも約１×１０８～少なくとも約１×１０１１、少なくとも約１×１０９～少なくとも約１×１０１１、少なくとも約１×１０１０～少なくとも約１×１０１１、少なくとも約１×１０７～少なくとも約１×１０１０、少なくとも約１×１０８～少なくとも約１×１０１０、または少なくとも約１×１０９～少なくとも約１×１０１０個の免疫細胞になるまで、免疫細胞の集団が拡大される。いくつかの態様において、免疫細胞の集団中の免疫細胞の総数が、少なくとも約１×１０７、少なくとも約５×１０７、少なくとも約１×１０８、少なくとも約５×１０８、少なくとも約１×１０９、少なくとも約２×１０９、少なくとも約３×１０９、少なくとも約４×１０９、少なくとも約５×１０９、少なくとも約６×１０９、少なくとも約７×１０９、少なくとも約８×１０９、少なくとも約９×１０９、少なくとも約１×１０１０、少なくとも約２×１０１０、少なくとも約３×１０１０、少なくとも約４×１０１０、少なくとも約５×１０１０、少なくとも約６×１０１０、少なくとも約７×１０１０、少なくとも約８×１０１０、少なくとも約９×１０１０、少なくとも約１×１０１１、少なくとも約２×１０１１、少なくとも約３×１０１１、少なくとも約４×１０１１、少なくとも約５×１０１１、少なくとも約６×１０１１、少なくとも約７×１０１１、少なくとも約８×１０１１、少なくとも約９×１０１１、または少なくとも約１×１０１２個の免疫細胞になるまで、免疫細胞の集団が拡大される。
【0017】
いくつかの態様において、免疫細胞の集団はドナー対象から得られる。いくつかの態様において、ドナー対象はヒトである。いくつかの態様において、ドナー対象はがんに罹患している。
【0018】
いくつかの態様において、この方法は、例えば、ポジティブ選択もしくはネガティブ選択、または後で細胞療法に使用することができる実質的に純粋な拡大された免疫細胞集団を得るための任意の他の好適な手段を使用することにより、拡大された免疫細胞集団を精製することをさらに含む。いくつかの態様において、拡大された免疫細胞の集団は、アルファ／ベータＴ細胞、ガンマ／デルタＴ細胞、ＮＫ細胞、またはこれらの組合せの集団を含む。
【0019】
いくつかの態様において、この方法は、拡大された免疫細胞集団を、それを必要とする対象に投与することをさらに含む。
【0020】
本開示のいくつかの態様は、疾患または状態の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、（ｉ）免疫細胞の集団を、本明細書で開示するＲＡＰＣまたは本明細書で開示するＲＡＰＣの集団に接触させることにより、免疫細胞の集団をｅｘ ｖｉｖｏで拡大することと、（ｉｉ）拡大された免疫細胞の集団を精製することと、（ｉｉｉ）精製された免疫細胞の集団を対象に投与することとを含む方法を対象とする。
【0021】
いくつかの態様において、対象はがんに罹患している。いくつかの態様において、がんは、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸部癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組肉腫、尿道癌、陰茎癌、慢性もしくは急性の白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、小児期の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓もしくは尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮細胞癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境誘導性癌（アスベストにより誘導されたものを含む）、またはこれらの任意の組合せを含む。いくつかの態様において、がんはリンパ腫または白血病を含む。
【0022】
本開示のいくつかの態様は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の集団をｅｘ ｖｉｖｏで拡大する方法であって、免疫細胞の集団をインターロイキン－２１（ＩＬ－２１）及びＯＸ４０Ｌに接触させることを含む方法を対象とする。いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞の集団を、本明細書で開示する抗原提示細胞（ＡＰＣ）に接触させることをさらに含む。本開示のいくつかの態様は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の集団をｅｘ ｖｉｖｏで拡大する方法であって、免疫細胞の集団をＡＰＣ、ＩＬ－２１、及びＯＸ４０Ｌに接触させることを含む方法を対象とする。いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞の集団を４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）に接触させることをさらに含む。いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞の集団をインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）に接触させることをさらに含む。
【0023】
いくつかの態様において、ＡＰＣはＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＩＬ－１５、またはこれらの任意の組合せを発現する。いくつかの態様において、ＡＰＣはＩＬ－２１を発現する。いくつかの態様において、ＡＰＣはＯＸ４０Ｌを発現する。いくつかの態様において、ＡＰＣは４－１ＢＢＬを発現する。いくつかの態様において、ＡＰＣはＩＬ－１５を発現する。いくつかの態様において、ＡＰＣはＩＬ－２１及びＯＸ４０Ｌを発現し、免疫細胞の集団は培地中で培養され、培地は４－１ＢＢＬ及びＩＬ－１５を含む。いくつかの態様において、ＡＰＣはＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、及び４－１ＢＢＬを発現し、免疫細胞の集団は培地中で培養され、培地はＩＬ－１５を含む。いくつかの態様において、ＡＰＣはＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、及びＩＬ－１５を発現し、免疫細胞の集団は培地中で培養され、培地は４－１ＢＢＬを含む。
【0024】
いくつかの態様において、ＡＰＣは組換えＡＰＣ（ＲＡＰＣ）を含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、樹状細胞、操作クローン細胞株、天然由来のがん細胞株、ビーズベースの人工抗原提示細胞、人工脂質小胞もしくは他の脂質二重層含有系、エクソソーム、固体支持体（例えば、限定されるものではないが、ビーズ、球状もしくは非球状ナノ粒子支持体、カーボンナノチューブ支持体、磁性粒子支持体、糸状ポリマー支持体、二次元支持体、またはこれらの任意の組合せを含む）を含む。
【0025】
本開示のいくつかの態様は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の集団をｅｘ ｖｉｖｏで拡大する方法であって、免疫細胞の集団をＩＬ－２１及び第１のＡＰＣに接触させることを含み、第１のＡＰＣがＯＸ４０Ｌを発現する方法を対象とする。いくつかの態様において、免疫細胞の集団は培地中で培養され、培地はＩＬ－２１を含む。いくつかの態様において、ＩＬ－２１は固体支持体（例えば、ビーズ）と会合する。いくつかの態様において、ＩＬ－２１は第２のＡＰＣによって発現される。いくつかの態様において、第１のＲＡＰＣ及び第２のＡＰＣは異なる。いくつかの態様において、第１のＡＰＣ及び第２のＡＰＣは同じである。
【0026】
いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞の集団をＯＸ４０Ｌに接触させることをさらに含む。いくつかの態様において、免疫細胞の集団は培地中で培養され、培地はＯＸ４０Ｌを含む。いくつかの態様において、ＯＸ４０Ｌは固体支持体（例えば、ビーズ）と会合する。いくつかの態様において、ＯＸ４０Ｌは第３のＡＰＣによって発現される。いくつかの態様において、第３のＡＰＣは第１のＡＰＣ及び第２のＡＰＣとは異なる。いくつかの態様において、第３のＡＰＣは第１のＡＰＣと同じであり、第３のＡＰＣは第２のＡＰＣと同じであるか、または第３のＡＰＣは第１のＡＰＣ及び第２のＡＰＣと同じである。
【0027】
いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞の集団をＩＬ－１５に接触させることをさらに含む。いくつかの態様において、免疫細胞の集団は培地中で培養され、培地はＩＬ－１５を含む。いくつかの態様において、ＩＬ－１５は固体支持体（例えば、ビーズ）と会合する。いくつかの態様において、ＩＬ－１５は第４のＡＰＣによって発現される。いくつかの態様において、第４のＡＰＣは第１のＡＰＣ、第２のＡＰＣ、及び第３のＡＰＣとは異なる。いくつかの態様において、第４のＡＰＣは第１のＡＰＣと同じであり、第４のＡＰＣは第２のＡＰＣと同じであるか、第４のＡＰＣは第３のＡＰＣと同じであるか、第４のＡＰＣは第１のＡＰＣ及び第２のＡＰＣと同じであるか、第４のＡＰＣは第２のＡＰＣ及び第３のＡＰＣと同じであるか、第４のＡＰＣは第１のＡＰＣ及び第３のＡＰＣと同じであるか、または第４のＡＰＣは第１のＡＰＣ、第２のＡＰＣ、及び第３のＡＰＣと同じである。いくつかの態様において、第１のＡＰＣ、第２のＡＰＣ、第３のＡＰＣ、または第４のＡＰＣのうちの１つ以上は、樹状細胞、操作クローン細胞株、天然由来のがん細胞株、ビーズベースの人工抗原提示細胞、人工脂質小胞もしくは他の脂質二重層含有系、エクソソーム、固体支持体（例えば、限定されるものではないが、ビーズ、球状もしくは非球状ナノ粒子支持体、カーボンナノチューブ支持体、磁性粒子支持体、糸状ポリマー支持体、二次元支持体、またはこれらの任意の組合せを含む）を含む。
【0028】
本開示のいくつかの態様は、免疫細胞の集団をｅｘ ｖｉｖｏで拡大する方法であって、免疫細胞の集団をＡＰＣに接触させることを含み、ＡＰＣがＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１５を発現する、方法を対象とする。いくつかの態様において、ＡＰＣはＲＡＰＣである。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、樹状細胞、操作クローン細胞株、天然由来のがん細胞株、ビーズベースの人工抗原提示細胞、人工脂質小胞もしくは他の脂質二重層含有系、エクソソーム、固体支持体（例えば、限定されるものではないが、ビーズ、球状もしくは非球状ナノ粒子支持体、カーボンナノチューブ支持体、磁性粒子支持体、糸状ポリマー支持体、二次元支持体、またはこれらの任意の組合せを含む）を含む。
【0029】
いくつかの態様において、ＩＬ－２１は、ヒトＩＬ－２１ポリペプチドと、免疫グロブリンのＦｃ領域とを含む融合タンパク質である。いくつかの態様において、ＩＬ－２１は、（ｉ）ヒトＩＬ－２１ポリペプチドと、（ｉｉ）ヒンジ領域と、（ｉｉｉ）免疫グロブリンのＦｃ領域と、（ｉｖ）膜貫通ドメインとを含む。いくつかの態様において、ＩＬ－１５は、ヒトＩＬ－１５ポリペプチドと、免疫グロブリンのＦｃ領域とを含む融合タンパク質である。いくつかの態様において、ＩＬ－１５は、（ｉ）ヒトＩＬ－１５ポリペプチドと、（ｉｉ）ヒンジ領域と、（ｉｉｉ）免疫グロブリンのＦｃ領域と、（ｉｖ）膜貫通ドメインとを含む。いくつかの態様において、Ｆｃ領域はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。いくつかの態様において、Ｆｃ領域はＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。いくつかの態様において、ヒンジ領域は免疫グロブリンヒンジ領域または修飾免疫グロブリンヒンジ領域を含む。いくつかの態様において、ヒンジ領域はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、またはＣＤ８ヒンジ領域を含む。いくつかの態様において、膜貫通ドメインはＣＤ４またはＣＤ８膜貫通ドメインを含む。
【0030】
いくつかの態様において、免疫細胞の集団中の免疫細胞の総数が、少なくとも約１×１０７～少なくとも約１×１０１２、少なくとも約１×１０８～少なくとも約１×１０１２、少なくとも約１×１０９～少なくとも約１×１０１２、少なくとも約１×１０８～少なくとも約１×１０１１、少なくとも約１×１０９～少なくとも約１×１０１１、少なくとも約１×１０１０～少なくとも約１×１０１１、少なくとも約１×１０７～少なくとも約１×１０１０、少なくとも約１×１０８～少なくとも約１×１０１０、または少なくとも約１×１０９～少なくとも約１×１０１０個の免疫細胞になるまで、免疫細胞の集団が拡大される。いくつかの態様において、免疫細胞の集団中の免疫細胞の総数が、少なくとも約１×１０７、少なくとも約５×１０７、少なくとも約１×１０８、少なくとも約５×１０８、少なくとも約１×１０９、少なくとも約２×１０９、少なくとも約３×１０９、少なくとも約４×１０９、少なくとも約５×１０９、少なくとも約６×１０９、少なくとも約７×１０９、少なくとも約８×１０９、少なくとも約９×１０９、少なくとも約１×１０１０、少なくとも約２×１０１０、少なくとも約３×１０１０、少なくとも約４×１０１０、少なくとも約５×１０１０、少なくとも約６×１０１０、少なくとも約７×１０１０、少なくとも約８×１０１０、少なくとも約９×１０１０、少なくとも約１×１０１１、少なくとも約２×１０１１、少なくとも約３×１０１１、少なくとも約４×１０１１、少なくとも約５×１０１１、少なくとも約６×１０１１、少なくとも約７×１０１１、少なくとも約８×１０１１、少なくとも約９×１０１１、または少なくとも約１×１０１２個の免疫細胞になるまで、免疫細胞の集団が拡大される。
【0031】
いくつかの態様において、免疫細胞の集団はドナー対象から得られる。いくつかの態様において、ドナー対象はヒトである。いくつかの態様において、ドナー対象はがんに罹患している。いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞の集団を、それを必要とする対象に投与することをさらに含む。
【図面の簡単な説明】
【0032】
【図1】Ａ～Ｄは、４－１ＢＢＬ（Ａ）、ＯＸ４０Ｌ（Ｂ）、ＩＬ－１５－ＣＤ８融合タンパク質（Ｃ）、及びＩＬ－２１－ＣＤ８融合タンパク質（Ｄ）をコードする導入遺伝子を含むレンチウイルスを作成するためのコンストラクト設計の概略図である。Ｅは、組換えＡＰＣを作成するためのプロセスのフローチャート記載である。
【図2】Ａ～Ｂは、ＲＡＰＣ２及びＲＡＰＣ４が臍帯血（ＣＢ）及び末梢血（ＰＢ）由来ＮＫ細胞の細胞拡大、表現型、ならびにＮａｌｍ６及びＲａｊｉ腫瘍細胞に対する細胞傷害性に及ぼす共インキュベートの効果を示す棒グラフである。臍帯血または白血球アフェレーシスからの免疫磁性ビーズ分離によってＮＫ細胞をネガティブ選択し、ＩＬ－２（Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ）の存在下、１０％のＦＢＳ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を含むＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ）中で、マイトマイシンＣで前処理したＲＡＰＣ２細胞またはＲＡＰＣ４細胞と共インキュベートした。細胞培養物は、ＩＬ－２を補充した半分の体積の培地を２日ごとに交換することでリフレッシュした。細胞をＧ－Ｒｅｘ ６Ｍウェルプレート（Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ）で４週間培養した。細胞の成長及び生存率を、毎回の活性化ラウンド中にＮＣ－２００（ＣｈｅｍｏＭｅｔｅｃ）によりモニターした。Ａは、フローサイトメトリーにより分析した培養２８日目におけるＮＫ細胞の細胞表面表現型（ＣＤ３－ＣＤ５６＋）の比較を示している。Ｂは、Ｎａｌｍ６またはＲａｊｉ腫瘍細胞と２４時間共インキュベートしたＣＢ－ＮＫ細胞またはＰＢ－ＮＫ細胞について、複数のＥ：Ｔ比（５：１から開始して０．１５：１まで）における死滅標的細胞のパーセンテージの合計を示している。
【図3】ＲＡＰＣ２及びＲＡＰＣ４フィーダー細胞との共インキュベートによる、臍帯血（ＣＢ）及び末梢血（ＰＢ）由来のガンマ／デルタＴ（ｇｄＴ）細胞の細胞傷害性を示している。ｇｄＴ細胞は、臍帯血または白血球アフェレーシス採取からの免疫磁気ビーズを介してポジティブ選択した。ＩＬ－２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）及びＩＬ－２１（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）の存在下、１０％ＦＢＳ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を含むＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ）中で、細胞を、マイトマイシンＣで前処理したＲＡＰＣ２またはＲＡＰＣ４フィーダー細胞と共インキュベートした。細胞培養物は、ＩＬ－２及びＩＬ－２１を補充した半分の体積の培地を２日ごとに交換することでリフレッシュした。細胞をＧ－Ｒｅｘ ６Ｍウェルプレート（Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ）で４週間培養した。細胞の成長及び生存率を、７日ごとの活性化ラウンド中にＮＣ－２００（ＣｈｅｍｏＭｅｔｅｃ）によりモニターした。ＲＡＰＣ４により拡大したＣＢ－ｇｄＴは、固有の細胞溶解能を複数の腫瘍細胞株に対し示した。ＣＢ－ｇｄＴ細胞を、異なるＥ：Ｔ比（１０：１から開始して０．３：１まで）で腫瘍細胞と２４時間共インキュベートした。
【図4】ＲＡＰＣ１及びＲＡＰＣ４フィーダー細胞株がヒトＮＫ細胞の細胞拡大に及ぼす効果をグラフで表現したものである。ＲＡＰＣ１及びＲＡＰＣ４細胞をＸ線照射（１００Ｇｙ）し、その直後に１５％のＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を含むＩＭＤＭ（Ｇｉｂｃｏ）中でＮＫ細胞と共インキュベートした。ＲＡＰＣ１共培養物にＩＬ－２、ＩＬ－７、及びＩＬ－１５を補充し、ＲＡＰＣ４共培養物にＩＬ－２及びＩＬ－７を補充した。フィーダー細胞を２：１（フィーダー：ＮＫ）の比率で加えて３日間活性化し、次にＧ－Ｒｅｘ ２４ウェルプレートで４日間拡大し、５日目にサイトカインを補充した６０％培地交換を行った。７日ごとに活性化を繰り返した。細胞の成長及び生存率を、７日ごとの活性化ラウンド中にＮＣ－２００（ＣｈｅｍｏＭｅｔｅｃ）によりモニターした。
【図5】ＲＡＰＣ４と７日間及び１１日間共培養した後のＮＫ細胞表面マーカー発現を示す棒グラフである。ＲＡＰＣ４細胞をＸ線照射（１００Ｇｙ）し、その直後にＩＬ－２及びＩＬ－７を補充した１５％のＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を含むＩＭＤＭ（Ｇｉｂｃｏ）中でＮＫ細胞と共インキュベートした。フィーダー細胞を２：１（フィーダー：ＮＫ）の比率で加えて３日間活性化し、次に培養物をＧ－Ｒｅｘ ２４ウェルプレートに移して４日間拡大し、５日目にサイトカインを補充した６０％培地交換を行った。培養から７日後及び１１日後にＮＫ細胞を採取し、フローサイトメトリーによりＣＤ３、ＣＤ５６、ＣＤ３０、ＣＤ１６、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ｄ、及びＮＫｐ４６の表面発現を分析した。値は、それぞれのマーカーにおいて陽性に染色した全生細胞のパーセンテージを表す。
【図6】Ａ～Ｅは、ＲＡＰＣ４活性化ＮＫ細胞の拡大及び腫瘍細胞殺傷を示す折れ線グラフである。ＲＡＰＣ４細胞をＸ線照射（１００Ｇｙ）し、その直後にＮＫ細胞と２：１の比率で共インキュベートした。照射したＲＡＰＣ４で活性化されたＮＫ細胞を、次に７つの異なるＣＡＲレンチウイルスベクターで形質導入するか、または非形質導入（ＵＴＤ）のまま放置して、形質導入後の拡大を調べた。第２ラウンドの活性化の６日目に、ＮＫ細胞を採取し、４つの腫瘍細胞株（Ｃａｐａｎ２（Ａ）、ＧＳＵ（Ｂ）、ＨＣＴ１１６（Ｃ）、及びＲＡＪＩ（Ｅ）（ＡＴＣＣ））、ならびに１つの正常内皮細胞株対照（ＨＵＶＥＣ；Ｄ）と３：１、１：１、０．３：１、及び０．１：１のＥ：Ｔ比でインキュベートした。共インキュベートの２４時間後に、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて細胞溶解パーセントを評価した。
【発明を実施するための形態】
【0033】
本開示のいくつかの態様は、組換え抗原提示細胞（ＲＡＰＣ）を対象とする。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子とを含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子とを含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子とを含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｖ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子とを含む。
【0034】
本開示の他の態様は、ｅｘ ｖｉｖｏで免疫細胞の集団を拡大する方法であって、免疫細胞の集団を、本明細書で開示するＲＡＰＣまたはその集団に接触させることを含む方法を対象とする。いくつかの態様において、免疫細胞は、αβＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、パンγδＴ細胞、Ｖδ１ γδＴ細胞、Ｖδ２ γδＴ細胞、Ｖδ３ γδＴ細胞、またはこれらの任意の組合せを含む。いくつかの態様において、免疫細胞の集団は１つ以上の遺伝子修飾免疫細胞を含む。いくつかの態様において、遺伝子修飾免疫細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、修飾Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、またはこれらの組合せを含む。
【0035】
本開示をより詳細に説明する前に理解されたいのは、本開示が、記載されている特定の組成物またはプロセスステップに限定されないことである。本開示を読めば当業者には明らかであろうように、本明細書で説明及び例示がなされている個々の態様は別々の要素及び特徴を有し、これらは、本開示の範囲及び趣旨から逸脱することなく、他のいくつかの態様のいずれかの特徴から分離することもそれらと組み合わせることも容易にできる。任意の示された方法は、示された事象の順に実行することも、他の任意の論理的に可能な順に実行することもできる。
【0036】
本明細書に示す見出しは本開示の様々な態様の限定ではなく、これは本明細書全体を参照することにより規定され得る。また、本明細書で使用する用語は、特定の態様を説明するためのものに過ぎず、こうした用語が限定的であるようには意図されていないことも理解されたい。
【0037】
Ｉ．用語
本開示をより容易に理解するため、ある特定の用語を最初に定義する。本出願で使用する場合、以下の用語の各々は、本明細書で明示的に規定されている場合を除き、以下に記載の意味を有するものとする。追加の定義は、本出願全体に記載されている。
本開示をより容易に理解するため、ある特定の用語を最初に定義する。本出願で使用する場合、以下の用語の各々は、本明細書で明示的に規定されている場合を除き、以下に記載の意味を有するものとする。追加の定義は、本出願全体に記載されている。
【0038】
本明細書で記載のように、任意の濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲、または整数範囲は、別段の指示がない限り、記載範囲内の任意の整数の値、及び適切な場合はその端数（例えば、ある整数の１０分の１及び１００分の１）を含むものと理解されたい。
【0039】
本開示全体において、「ａ」または「ａｎ」という用語は、１つ以上の実体を指し、例えば、「（１つの）キメラポリペプチド」は、１つ以上のキメラポリペプチドを表すものと理解される。そのため、「ａ」（または「ａｎ」）、「１つ以上」、及び「少なくとも１つ」という用語は、本明細書では互換的に使用することができる。
【0040】
さらに、本明細書で使用する場合、「及び／または」は、他方を伴うまたは伴わない２つの指定された特徴または構成成分を具体的に開示するものとして解釈するものとする。したがって、「及び／または」という用語は、「Ａ及び／またはＢ」のような表現で使用される場合、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、ならびに「Ｂ」（単独）を含むように意図されている。同様に、「及び／または」という用語は、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」のような表現で使用される場合、以下の態様の各々を包含するように意図されている：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）。さらに、「または」は、リスト内の構成要素のオープンなリストを意味するように使用される。例えば、「ＸはＡまたはＢを含む」とは、ＸはＡを含む、ＸはＢを含む、ＸはＡ及びＢを含む、またはＸはＡまたはＢ及び他の任意の構成要素を含むことを意味する。
【0041】
「約」または「本質的に～からなる」という用語は、当業者による判定において特定の値または組成物に関し許容される誤差範囲内にある値または組成を指し、これは部分的には、値または組成の測定または判定方法、すなわち、測定システムの限界に依存する。例えば、「約」または「本質的に～からなる」は、当技術分野における慣行に従って１標準偏差以内または１標準偏差超を意味し得る。代替的に、「約」または「本質的に～からなる」は最大１０％の範囲を意味し得る。さらに、特に生物学的システムまたはプロセスに関しては、この用語は最大１桁分または最大５倍の値を意味することがある。本出願及び特許請求の範囲に特定の値または組成が示されている場合、別段の明記がない限り、「約」または「本質的に～からなる」の意味は、その特定の値または組成について許容される誤差範囲内であると想定するものとする。
【0042】
「活性化免疫細胞」、「活性化Ｔ細胞」、及び「活性化ＮＫ細胞」という用語は、とりわけ、細胞分裂を経ている免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を指す。
【0043】
「抗原」とは、免疫応答を誘発する、またはＴＣＲに結合可能な任意の分子（例えば、ペプチド）を指す。免疫応答は、抗体産生、特定の免疫適格細胞の活性化、またはこれらの組合せを伴う。当業者であれば、実質的に全てのタンパク質またはペプチドを含む任意の巨大分子が抗原として機能し得ることを容易に理解するであろう。抗原は、内在的に発現する（すなわちゲノムＤＮＡによって発現する）こともあれば、組換えにより発現することもある。抗原及び／またはエピトープは、がん細胞などのある特定の組織に特異的なこともあれば、広く発現することもある。さらに、より大きな分子のフラグメントが抗原として作用することもある。いくつかの態様において、抗原は腫瘍抗原である。
【0044】
本明細書で使用する場合、「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」とは、１つ以上の抗原を発現する細胞または細胞様抗原提示表面を指す。いくつかの態様において、抗原はＡＰＣの表面に提示される。ＡＰＣの非限定的な例としては、樹状細胞、操作クローン細胞株、天然由来のがん細胞株、またはこれらの任意の組合せが挙げられる。細胞様抗原提示表面の非限定的な例としては、ビーズベースの人工抗原提示細胞、人工脂質小胞もしくは他の脂質二重層含有系、エクソソーム、固体支持体（例えば、限定されるものではないが、ビーズ、球状もしくは非球状ナノ粒子支持体、カーボンナノチューブ支持体、磁性粒子支持体、糸状ポリマー支持体、二次元支持体、またはこれらの任意の組合せを含む）が挙げられる。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗原提示細胞はＫ５６２細胞である。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗原提示細胞はＫ５６２細胞であり、これは、ＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１５のうちの１つ以上を発現するように修飾されている。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗原提示細胞はＫ５６２細胞であり、ＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１５を発現するように修飾されている。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗原提示細胞は７２１．２２１細胞である。例えば、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．：Ｍｅｔｈｏｄｓ ＆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ １８：４２８（２０２０）を参照。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗原提示細胞は７２１．２２１細胞であり、ＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１５のうち１つ以上を発現するように修飾されている。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗原提示細胞は、ＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１５を発現するように修飾された７２１．２２１細胞である。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗原提示細胞はＨｕｔ７８細胞である。例えば、Ｍｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ＆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １９：２９６－９８（２０２２）を参照。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗原提示細胞はＨｕｔ７８細胞であり、これは、ＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１５のうちの１つ以上を発現するように修飾されている。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗原提示細胞はＨｕｔ７８細胞であり、ＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１５を発現するように修飾されている。
【0045】
本明細書で使用する場合、「抗腫瘍効果」とは、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞数の減少、腫瘍細胞増殖の減少、転移の数の減少、全生存期間もしくは無増悪生存期間の延長、余命の延長、または腫瘍に関連する様々な生理学的症状の改善として現れ得る生物学的効果を指す。抗腫瘍効果は、腫瘍の発生を防止（例えば、ワクチン）を指すこともある。
【0046】
本明細書で使用する場合、「およそ」という用語は、関心対象となる１つ以上の値に適用される場合、記述された参照値と同等の値を意味する。ある特定の態様において、「およそ」という用語は、別段の明記がない限り、または文脈から明らかでない限り、記載された基準値のいずれかの方向（より大きいまたはより小さい）に１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下に入る値の範囲（このような数字が可能な値の１００％を超える場合を除く）を指す。
【0047】
「自己由来」という用語は、後に再導入される個体と同じ個体に由来する任意の物質（例えば、免疫細胞）を指す。例えば、自己由来Ｔ細胞療法は、同じ対象から単離されたＴ細胞を対象に投与することを含む。「同種異系」という用語は、ある個体に由来する任意の物質であって、今度は同じ種の別の個体に導入される任意の物質を指す。例えば、同種異系Ｔ細胞移植は、対象以外のドナーから得られるＴ細胞を対象に投与することを含む。
【0048】
「がん」とは、体内における異常な細胞の制御不能な成長を特徴とする、様々な疾患の広範な群を指す。制御されていない細胞の分裂及び成長によって悪性腫瘍が形成され、悪性腫瘍は隣接組織に侵入し、さらにリンパ系または血流を介し身体の離れた部位に転移する恐れもある。「がん」または「がん組織」には腫瘍も含まれ得る。本発明の方法によって治療することができるがんの例としては、限定されるものではないが、リンパ腫、白血病、及び他の白血球悪性腫瘍を含む免疫系のがんが挙げられる。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、例えば、がんに由来する腫瘍の腫瘍サイズを低減するために使用することができ、がんは、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸部癌、膣癌、外陰癌、乳癌、前立腺癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）もしくは小細胞肺癌（ＳＣＬＣ））、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組肉腫、尿道癌、陰茎癌、慢性もしくは急性の白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、小児期の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓もしくは尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮細胞癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境誘導性癌（アスベストにより誘導されたものを含む）、またはこれらの任意の組合せを含む。特定のがんは、化学療法または放射線療法に応答性である場合も、難治性である場合もある。難治性がんとは、外科的介入が適用できないがんを指し、このようながんは、化学療法または放射線療法に最初から応答しないか、または経時的に応答しなくなる。
【0049】
態様が「～を含む」という語を用いて本明細書で説明されている場合は常に、「～からなる」及び／または「本質的に～からなる」という用語で説明されている別の形で類似する態様も提供されるものと理解されたい。
【0050】
「共刺激リガンド」とは、本明細書でこの用語を使用する場合、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）上の同族共刺激分子に特異的に結合することにより、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体がペプチドとともに装填されたＭＨＣ分子に結合することによってもたらされる一次シグナルに加えて、Ｔ細胞応答（限定されるものではないが、増殖、活性化、分化などを含む）を媒介するシグナルをもたらす、抗原提示細胞（例えば、ａＡＰＣ、樹状細胞、Ｂ細胞など）上の分子を含む。共刺激リガンドとしては、限定されるものではないが、ＣＤ７、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、誘導性共刺激リガンド（ＩＣＯＳ－Ｌ）、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ＨＬＡ－Ｇ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＨＶＥＭ、リンパトキシンベータ受容体、３／ＴＲ６、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、ＨＶＥＭ、トールリガンド受容体に結合するアゴニストまたは抗体、及びＢ７－Ｈ３に特異的に結合するリガンドを挙げることができる。また、共刺激リガンドは、とりわけ、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）上に存在する共刺激分子に特異的に結合する抗体（例えば、限定されるものではないが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、及びＣＤ８３）に特異的に結合するリガンドも包含する。いくつかの実施形態において、共刺激分子は、ＩＬ－２１（例えば、膜結合ＩＬ－２１）、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、及びＩＬ－１５（例えば、膜結合ＩＬ－１５）のうちの１つ以上、またはこれらの任意の組合せを含む。特定の実施形態において、本明細書に記載のＲＡＰＣは、膜結合ＩＬ－２１、膜結合ＩＬ－１５、ＯＸ４０Ｌ、及び４－１ＢＢＬの各々を含む。
【0051】
「共刺激分子」とは、共刺激リガンドと特異的に結合し、それにより、免疫細胞による共刺激応答（例えば、限定されるものではないが、増殖）を媒介する、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）上にある同族の結合パートナーを指す。共刺激分子としては、限定されるものではないが、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡ、及びＴｏｌｌリガンド受容体が挙げられる。
【0052】
本明細書で使用する場合、「サイトカイン」とは、特異的抗原との接触に応答して細胞により放出される非抗体タンパク質を指し、サイトカインは第２の細胞と相互作用して第２の細胞における応答を媒介する。サイトカインは、細胞が内在的に発現する場合もあれば、培養中の細胞に加える場合もあれば、対象に投与する場合もあれば、これらの任意の組合せの場合もある。サイトカインは、免疫細胞（マクロファージ、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及びマスト細胞を含む）から放出されて免疫応答を伝播する。サイトカインは、レシピエント細胞において様々な応答を誘導することができる。サイトカインとしては、恒常性サイトカイン、ケモカイン、炎症性サイトカイン、エフェクター、及び急性期タンパク質を挙げることができる。例えば、恒常性サイトカイン（インターロイキン（ＩＬ）７及びＩＬ－１５を含む）は免疫細胞の生存及び増殖を促進し、炎症性サイトカインは炎症応答を促進し得る。恒常性サイトカインの例としては、限定されるものではないが、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１２ｐ７０、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びインターフェロン（ＩＦＮ）ガンマが挙げられる。炎症性サイトカインの例としては、限定されるものではないが、ＩＬ－ｌａ、ＩＬ－ｌｂ、ＩＬ－６、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７ａ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－アルファ、ＴＮＦ－ベータ、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）２、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、可溶性細胞間接着分子１（ｓＩＣＡＭ－１）、可溶性血管接着分子１（ｓＶＣＡＭ－１）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、及び胎盤成長因子（ＰＬＧＦ）が挙げられる。エフェクターの例としては、限定されるものではないが、グランザイムＡ、グランザイムＢ、可溶性Ｆａｓリガンド（ｓＦａｓＬ）、及びパーフォリンが挙げられる。急性期タンパク質の例としては、限定されるものではないが、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）及び血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）が挙げられる。
【0053】
「ケモカイン」は、細胞の走化性、すなわち方向性運動を媒介するサイトカインのタイプである。ケモカインの例としては、限定されるものではないが、ＩＬ－８、ＩＬ－１６、エオタキシン、エオタキシン－３、マクロファージ由来ケモカイン（ＭＤＣまたはＣＣＬ２２）、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ－１またはＣＣＬ２）、ＭＣＰ－４、マクロファージ炎症性タンパク質ｌａ（ＭＩＰ－ｌａ、ＭＩＰ－ｌａ）、ＭＩＰ－Ｉｂ（ＭＩＰ－ｌｂ）、ガンマ誘導性タンパク質１０（ＩＰ－１０）、ならびに胸腺及び活性化制御ケモカイン（ＴＡＲＣ及びＣＣＬ１７）が挙げられる。
【0054】
サイトカインの他の例としては、限定されるものではないが、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド（ＣＣＬ）１、ＣＣＬ５、単球特異的ケモカイン３（ＭＣＰ３もしくはＣＣＬ７）、単球走化性タンパク質２（ＭＣＰ－２もしくはＣＣＬ８）、ＣＣＬ１３、ＩＬ－１、ＩＬ－３、ＩＬ－９、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１４、ＩＬ－１７、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、白血病阻害因子（ＬＩＦ）、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）、ＣＤ１５４、リンパ毒素（ＬＴ）ベータ、４－ＩＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）、増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）、ＣＤ７０、ＣＤ１５３、ＣＤ１７８、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連リガンド（ＧＩＴＲＬ）、腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＳＦ１４）、ＯＸ４０Ｌ、ＴＮＦ及びＡｐｏＬ関連白血球発現リガンド１（ＴＡＬＬ－１）、またはＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）が挙げられる。
【0055】
「操作自己由来細胞療法」という用語は、「ｅＡＣＴ（商標）」と略されることがあり、また養子細胞移植としても知られており、患者自身の免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）を採取し、次に遺伝子的に改変して、１つ以上の特定の腫瘍細胞または悪性腫瘍の細胞表面に発現する１つ以上の抗原を認識し標的とするプロセスである。免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）は、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように操作することができる。ＣＡＲ陽性（＋）免疫細胞、例えば、Ｔ細胞または免疫細胞は、共刺激ドメイン及び活性化ドメインを含む細胞内シグナル伝達部分に結合した特定の腫瘍抗原に特異的な細胞外一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を発現するように操作される。共刺激ドメインは、例えばＣＤ２８に由来し得、活性化ドメインは、例えばＣＤ３－ゼータに由来し得る（図１）。ある特定の実施形態において、ＣＡＲは、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上の共刺激ドメインを有するように設計されている。ＣＡＲ ｓｃＦｖは、例えばＣＤ１９を標的とするように設計することができ、これは、全ての正常なＢ細胞及びＢ細胞悪性腫瘍（限定されるものではないが、ＮＨＬ、ＣＬＬ、及び非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）を含むＢ細胞系列内の細胞によって発現する膜貫通タンパク質である。例示的なＣＡＲ－Ｔ細胞療法及びコンストラクトは、米国特許公開第２０１３／０２８７７４８号、同第２０１４／０２２７２３７号、同第２０１４／００９９３０９号、及び同第２０１４／００５０７０８号に記載されており、これらは参照により全体として本明細書に援用される。
【0056】
「免疫応答」とは、当技術分野で理解されている通りであり、概して、外来の媒介物または異常なもの（例えば、がん性細胞）に対する脊椎動物内の生物学的応答を指し、この応答は、このような媒介物及びこれらによって引き起こされる疾患から生物を保護する。免疫応答は、免疫系の１つ以上の細胞（例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、樹状細胞、または好中球）と、これらの細胞または肝臓により産生される可溶性の巨大分子（抗体、サイトカイン、及び補体を含む）との作用によって媒介され、この作用は、侵入病原体、病原体に感染した細胞もしくは組織、がん性細胞もしくは他の異常細胞、または自己免疫もしくは病的炎症の場合には正常なヒト細胞もしくは組織の選択的標的化、結合、損傷、破壊、及び／または脊椎動物の体内からの排除をもたらす。免疫反応としては、例えば、Ｔ細胞（例えば、エフェクターＴ細胞、Ｔｈ細胞、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、もしくはＴｒｅｇ細胞）の活性化もしくは阻害、または免疫系の任意の他の細胞（例えば、ＮＫ細胞）の活性化もしくは阻害が挙げられる。
【0057】
「免疫調節剤」または「免疫制御剤」とは、例えば、免疫応答の調節、制御、または修飾に関与し得るシグナル伝達経路の構成要素を標的とする薬剤を指す。免疫応答を「調節する」、「制御する」、または「修飾する」とは、免疫系の細胞またはこのような細胞の活性（例えば、Ｔｈ１細胞などのエフェクターＴ細胞）における任意の改変を指す。このような調節には、免疫系の刺激または抑制が含まれ、これは、様々な種類の細胞タイプの数の増減、これらの細胞の活性の増減、または免疫系内で生じ得る任意の他の変化によって現れる。阻害性及び刺激性両方の免疫調節剤が特定されており、その一部は腫瘍微小環境で機能が強化され得る。いくつかの実施形態において、免疫調節剤は免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の表面にある分子を標的とする。「免疫調節標的」または「免疫制御標的」とは、物質、薬剤、部分、化合物、または分子の結合を標的とし、それらの結合によって活性が改変される分子（例えば、細胞表面分子）のことである。免疫調節標的としては、例えば、細胞の表面にある受容体（「免疫調節受容体」）及び受容体リガンド（「免疫調節リガンド」）が含まれる。
【0058】
「免疫療法」とは、免疫系または免疫応答を誘導、強化、抑制、または他の方法による修飾を含む方法により、疾患に罹患している、またはかかったり患ったり再発したりするリスクがある対象を治療することを指す。
【0059】
「免疫刺激療法」または「免疫刺激性療法」とは、例えばがんの治療のために、対象における免疫応答を増加させる（誘導または強化する）療法を指す。
【0060】
本明細書で使用する場合、ペプチドで「装填される」とは、ＭＨＣ分子の文脈における抗原の提示を指す。本明細書で使用する場合、「装填される」とは、抗体がＣＤ３２及び／またはＣＤ６４などの細胞上のＦｃ結合受容体に結合することも意味する。
【0061】
本明細書で使用する場合、「リンパ球」という用語はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔ細胞、またはＢ細胞を含む。ＮＫ細胞は、先天免疫系の主要な構成要素に相当する細胞傷害性（細胞毒性）リンパ球の１つのタイプである。ＮＫ細胞は、標的細胞におけるアポトーシス（プログラム細胞死）を誘導することにより、腫瘍及びウイルスに感染した細胞を拒絶する。ＮＫ細胞は、標的細胞の殺滅に活性化を必要としないため、「ナチュラルキラー」と称されるようになった。Ｔ細胞は、細胞媒介性免疫において主要な役割を担う。Ｔ細胞の表面に発現するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、Ｔ細胞を他のリンパ球タイプから識別する。胸腺は、免疫系の特殊な器官であり、主にＴ細胞成熟に関与する。Ｔ細胞には６つのタイプがあり、すなわち、ヘルパーＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋細胞）；細胞傷害性Ｔ細胞（別名ＴＣ、細胞傷害性Ｔリンパ球、ＣＴＬ、Ｔキラー細胞、細胞溶解性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはキラーＴ細胞）；メモリーＴ細胞（（ｉ）幹メモリーＴＳＣＭ細胞は、ナイーブ細胞と同様、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＣＲ７＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋（Ｌ－セレクチン）、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、及びＩＬ－７Ｒａ＋であるが、大量のＣＤ９５、ＩＬ－２Ｒ．ｐ、ＣＸＣＲ３、及びＬＦＡ－１を発現し、メモリー細胞に特徴的な多くの機能的属性を示す）；（ｉｉ）セントラルメモリーＴＣＭ細胞はＬ－セレクチン及びＣＣＲ７を発現し、ＩＬ－２を分泌するが、ＩＦＮｙもＩＬ－４も分泌しない；（ｉｉｉ）ただし、エフェクターメモリーＴＥＭ細胞はＬ－セレクチンもＣＣＲ７も発現しないが、ＩＦＮｙ及びＩＬ－４のようなエフェクターサイトカインを産生する）；制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ、サプレッサーＴ細胞、またはＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞）；ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）；ならびにガンマデルタＴ細胞である。
【0062】
Ｂ細胞は、（抗体の関与を伴って）液性免疫の主要な役割を担う。Ｂ細胞は抗体及び抗原を作製し、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の役割を担い、抗原の相互作用による活性化の後、メモリーＢ細胞となる。哺乳類の場合、未熟Ｂ細胞は、その名称が由来するところの骨髄で形成される。
【0063】
本明細書で使用する場合、「医薬的に許容される担体」には、当業者に知られているであろうように、あらゆる水性溶媒（例えば、水、アルコール／水溶液、食塩水、非経口ビヒクル（例えば、塩化ナトリウム、リンゲルデキストロースなど））、非水性溶媒（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、及び注射用有機エステル（例えば、オレイン酸エチル））、分散媒体、コーティング、界面活性剤、抗酸化剤、防腐剤（例えば、抗細菌剤または抗真菌剤、抗酸化剤、キレート剤、及び不活性ガス）、等張剤、吸収遅延剤、塩、薬物、薬物安定化剤、ゲル、結合剤、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤、色素、体液及び栄養補充液、このような材料及びこれらの組合せが含まれる。医薬組成物中の様々な構成要素のｐＨ及び正確な濃度は、周知されたパラメーターに従って調整される。
【0064】
「内在性免疫応答の増強」とは、対象における既存の免疫応答の有効性または効力を増加させることを意味する。この有効性及び効力の増加は、例えば、内在性の宿主免疫応答を抑制する機序を克服することにより、または内在性の宿主免疫応答を強化する機序を刺激することにより、達成することができる。
【0065】
本明細書で使用する場合、「組換え」細胞（例えば、組換え抗原提示細胞（または「ＲＡＰＣ」））という用語は、細胞内に天然には存在しない核酸を含む細胞（例えば、抗原提示細胞）を指すことが意図されており、これは、組換え発現ベクターが導入された細胞であり得る。このような用語は、特定の対象細胞だけでなく、このような細胞の後代も指すように意図されていることを理解されたい。変異または環境的影響のいずれかにより、ある特定の修飾が後代に生じることがあるものの、このような後代も依然として、本明細書で使用する「組換え体」という用語の範囲に含まれる。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、ビーズベースの人工抗原提示細胞、人工脂質小胞もしくは他の脂質二重層含有系、エクソソーム、固体支持体、またはこれらの任意の組合せである。固体支持体の非限定的な例としては、ビーズ、球状もしくは非球状のナノ粒子支持体、カーボンナノチューブ支持体、磁性粒子支持体、糸状ポリマー支持体、二次元支持体、またはこれらの任意の組合せが挙げられる。ＲＡＰＣが、ビーズベースの人工抗原提示細胞、人工脂質小胞もしくは他の脂質二重層含有系、エクソソーム、固体支持体、またはこれらの任意の組合せを含む場合、ＲＡＰＣは、ＲＡＰＣの表面に会合する１つ以上の組換えタンパク質（例えば、本明細書で開示するＩＬ－２１、ＩＬ－１５、４－１ＢＢＬ、及び／またはＯＸ４０Ｌのうちの１つ以上）を含み得る。
【0066】
本明細書で使用する場合、「刺激性リガンド」とは、抗原提示細胞（例えば、ａＡＰＣ、樹状細胞、Ｂ細胞など）上に存在すると、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）上の同族の結合パートナー（本明細書では「刺激性分子」と称する）に特異的に結合し、それにより、免疫細胞による一次応答（限定されるものではないが、活性化、免疫応答の開始、増殖などを含む）を媒介することができるリガンドを意味する。刺激性リガンドは当技術分野で周知されており、とりわけ、ペプチドで装填されたＭＨＣクラスＩ分子、抗ＣＤ３抗体、スーパーアゴニスト抗ＣＤ２８抗体、及びスーパーアゴニスト抗ＣＤ２抗体を包含する。
【0067】
「刺激分子」とは、本明細書でこの用語を使用する場合、抗原提示細胞（例えば、とりわけ本発明のａＡＰＣ）上に存在する同族刺激リガンドに特異的に結合する、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）上にある分子を意味する。
【0068】
本明細書で使用する場合、「対象」及び「患者」という用語は互換的に使用され、ヒトまたは非ヒト（例えば、霊長類、哺乳類、及び脊椎動物）のいずれかを指す。特定の態様において、対象はヒトである。
【0069】
本明細書で使用する場合、「Ｔ細胞受容体」（ＴＣＲ）という用語は、標的抗原と特異的に相互作用可能なヘテロマー細胞表面受容体を指す。本明細書で使用する場合、「ＴＣＲ」には、限定されるものではないが、天然に存在するＴＣＲ及び天然に存在しないＴＣＲ、完全長ＴＣＲ及びその抗原結合部分、キメラＴＣＲ、ＴＣＲ融合コンストラクト、ならびに合成ＴＣＲが含まれる。ヒトの場合、ＴＣＲはＴ細胞の表面に発現し、Ｔ細胞の認識及び抗原提示細胞の標的化に関与する。抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、主要組織適合複合体（ＭＨＣ；本明細書ではＨＬＡ分子、例えばＨＬＡクラス１分子との複合体とも称される）と複合体化した外来タンパク質（抗原）のフラグメントを提示する。ＴＣＲは、抗原－ＨＬＡ複合体を認識しそれに結合し、ＣＤ３（Ｔ細胞により発現する）を動員してＴＣＲを活性化する。活性化されたＴＣＲは、下流のシグナル伝達及び免疫応答（抗原提示細胞の破壊を含む）を開始する。
【0070】
概して、ＴＣＲは２つの鎖、すなわち（ｉ）アルファ－ベータＴ細胞の場合はアルファ鎖及びベータ鎖、（ｉｉ）ガンマ－デルタＴ細胞の場合はガンマ鎖及びデルタ鎖を含むことができ、これらはジスルフィド結合により相互接続している。各鎖は、可変ドメイン（アルファ鎖可変ドメイン、ベータ鎖可変ドメイン、ガンマ鎖可変ドメイン、及びデルタ鎖可変ドメイン）と、定常領域（アルファ鎖定常領域、ベータ鎖定常領域、ガンマ鎖定常領域、及びデルタ鎖定常領域）とを含む。可変ドメインは細胞膜の遠位に位置し、可変ドメインは抗原と相互作用する。定常領域は細胞膜の近位に位置する。ＴＣＲはさらに、膜貫通領域及び短い細胞質尾部を含むことができる。本明細書で使用する場合、「定常領域」という用語は、従来の「定常領域」に加えて、存在する場合は膜貫通領域及び細胞質尾部を包含する。
【0071】
可変ドメインは、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変領域にさらに細分することができ、この領域の間にはフレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存的な領域が散在する。各アルファ鎖可変ドメイン及びベータ鎖可変ドメインは、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲ、すなわちＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４を含む。各可変ドメインは、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。各鎖の３つのＣＤＲ全てが抗原結合に関与するが、ＣＤＲ３が主要な抗原結合領域であると考えられている。ＣＤＲ１も抗原と相互作用するが、ＣＤ２は主にＥＬＬＡ複合体を認識すると考えられている。
【0072】
明示的な記載がない場合、そして文脈による別段の指示がない限り、「ＴＣＲ」という用語は、本明細書で開示する任意のＴＣＲの抗原結合フラグメントまたは抗原結合部分も含み、一価及び二価のフラグメントまたは部分及び一本鎖ＴＣＲも含む。「ＴＣＲ」という用語は、Ｔ細胞の表面に結合する天然に存在するＴＣＲに限定されない。本明細書で使用する場合、「ＴＣＲ」という用語はさらに、Ｔ細胞以外の細胞（例えば、本明細書に記載のように、ＣＤ３を天然に発現する、もしくは発現するように修飾された細胞）の表面に発現する本明細書に記載のＴＣＲ、または細胞膜から遊離している本明細書に記載のＴＣＲ（例えば、単離ＴＣＲまたは可溶性ＴＣＲ）を指す。
【0073】
「ＴＣＲフラグメント」、「抗原結合分子」、または「ＴＣＲの部分」とは、ＴＣＲ全体より少ない任意の部分を指す。抗原結合分子は抗原相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むことができる。
【0074】
本明細書で使用する場合、「治療上の利益」または「治療上有効な」という用語は、この状態の医学的治療に関して対象の健康を促進または強化する任意のものを指す。これには、限定されるものではないが、疾患の徴候または症状の頻度または重症度の低減が含まれる。
【0075】
本明細書で使用する場合、疾患または状態についての「治療すること」または「治療」という用語は、疾患の徴候または症状の緩和を図るべくプロトコル（これは、患者に１つ以上の療法を投与することを含み得る）を実行することを指す。いくつかの態様において、治療は、疾患進行の速度を減少させ、疾患状態を改善もしくは軽減し、及び／または寛解もしくは予後の向上を促進する。緩和は、疾患または状態の徴候または症状が現れる前にも、それらが現れた後にも生じ得る。したがって、いくつかの態様において、「治療すること」または「治療」は、疾患または望ましくない状態の「予防すること」または「予防」を含む。ただし、「治療すること」または「治療」は、全ての徴候及び／または症状の完全な緩和を必要とせず、また治癒を必要とせず、患者にわずかな効果をもたらすに過ぎないプロトコルを明確に含む。
【0076】
本明細書で使用する場合、「ｕｇ」及び「ｕＭ」という用語は、それぞれ「μｇ」及び「μΜ」と互換的に使用される。
【0077】
別段の定義がない限り、本明細書で使用する全ての技術的用語及び科学的用語は、本開示が関連する技術分野の当業者によって一般的に理解されている意味と同じ意味を有する。例えば、ｔｈｅ Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；及びｔｈｅ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用する多くの用語についての全般的辞書を当業者に提供する。
【0078】
単位、接頭語、及び記号は、国際単位系（ＳＩ）で承認された形態で示される。数値範囲は、その範囲を規定する数字を含む。本明細書で記載のように、任意の濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲、または整数範囲は、別段の指示がない限り、記載範囲内の任意の整数の値、及び適切な場合はその端数（例えば、ある整数の１０分の１及び１００分の１）を含むものと理解されたい。
【0079】
本明細書で使用する略語は、本開示全体で定義されている。本開示の様々な態様については、以下のサブセクションでさらに詳細に説明する。
【0080】
本明細書に記載の様々な態様について、以下のサブセクションでさらに詳細に説明する。
【0081】
ＩＩ．本開示の組成物
本開示のいくつかの態様は、組換え抗原提示細胞（ＲＡＰＣ）を対象とする。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子とを含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子とを含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子とを含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｖ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子とを含む。
本開示のいくつかの態様は、組換え抗原提示細胞（ＲＡＰＣ）を対象とする。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子とを含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子とを含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子とを含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｖ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子とを含む。
【0082】
本開示のいくつかの態様は、第１のＲＡＰＣ及び第２のＲＡＰＣを含むＲＡＰＣの集団を対象とする。いくつかの態様において、第１のＲＡＰＣ及び第２のＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子とを含む。いくつかの態様において、第１のＲＡＰＣ及び第２のＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子とを含む。いくつかの態様において、第１のＲＡＰＣ及び第２のＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子とを含む。いくつかの態様において、第１のＲＡＰＣ及び第２のＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｖ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子とを含む。
【0083】
いくつかの態様において、（ａ）第１のＲＡＰＣは、ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子を含み、（ｂ）第２のＲＡＰＣは、ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子を含む。
【0084】
いくつかの態様において、（ａ）第１のＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子とを含み、（ｂ）第２のＲＡＰＣは、４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子を含む。いくつかの態様において、（ａ）第１のＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子とを含み、（ｂ）第２のＲＡＰＣは、ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子を含む。いくつかの態様において、（ａ）第１のＲＡＰＣは、（ｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子とを含み、（ｂ）第２のＲＡＰＣは、ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子を含む。
【0085】
いくつかの態様において、（ａ）第１のＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子とを含み、（ｂ）第２のＲＡＰＣは、ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子を含む。いくつかの態様において、（ａ）第１のＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子とを含み、（ｂ）第２のＲＡＰＣは、ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子を含む。いくつかの態様において、（ａ）第１のＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子とを含み、（ｂ）第２のＲＡＰＣは、ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子を含む。
【0086】
いくつかの態様において、（ａ）第１のＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子とを含み、（ｂ）第２のＲＡＰＣは、（ｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子とを含む。いくつかの態様において、（ａ）第１のＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子とを含み、（ｂ）第２のＲＡＰＣは、（ｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子とを含む。いくつかの態様において、（ａ）第１のＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子とを含み、（ｂ）第２のＲＡＰＣは、（ｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子とを含む。
【0087】
いくつかの態様において、（ａ）第１のＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子とを含み、（ｂ）第２のＲＡＰＣは、ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子を含む。いくつかの態様において、（ａ）第１のＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子とを含み、（ｂ）第２のＲＡＰＣは、４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子を含む。いくつかの態様において、（ａ）第１のＲＡＰＣは、（ｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子とを含み、（ｂ）第２のＲＡＰＣは、ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子を含む。いくつかの態様において、（ａ）第１のＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子とを含み、（ｂ）第２のＲＡＰＣは、ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子を含む。
【0088】
いくつかの態様において、ＲＡＰＣの集団は第３のＲＡＰＣを含み、第３のＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子、（ｉｉｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子、（ｉｖ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子、または（ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣの集団は第４のＲＡＰＣを含み、第４のＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子、（ｉｉｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子、（ｉｖ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子、または（ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）の任意の組合せを含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣの集団は、第１のＲＡＰＣと、第２のＲＡＰＣと、第３のＲＡＰＣと、第４のＲＡＰＣとを含み、（ａ）第１のＲＡＰＣは、ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子を含み、（ｂ）第２のＲＡＰＣは、ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子を発現し、（ｃ）第３のＲＡＰＣは、４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子を含み、（ｄ）第４のＲＡＰＣは、ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子を含む。
【0089】
いくつかの態様において、第１のＲＡＰＣ及び第２のＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子とを含む。いくつかの態様において、第１のＲＡＰＣ及び第２のＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子とを含む。いくつかの態様において、第１のＲＡＰＣ及び第２のＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｖ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子とを含む。
【0090】
いくつかの態様において、ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子は細胞に対し異種である。いくつかの態様において、ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子は細胞に対し異種である。いくつかの態様において、４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子は細胞に対し異種である。いくつかの態様において、ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子は細胞に対し異種である。
【0091】
いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１５のうちの１つ以上を発現する。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＩＬ－２１及びＯＸ４０Ｌを発現する。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、及び４－１ＢＢＬを発現する。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、及びＩＬ－１５を発現する。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１５を発現する。
【0092】
いくつかの態様において、ＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１５のうちの１つ以上がＲＡＰＣの表面に発現する。いくつかの態様において、ＩＬ－２１及びＯＸ４０ＬがＲＡＰＣの表面に発現する。いくつかの態様において、ＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、及び４－１ＢＢＬがＲＡＰＣの表面に発現する。いくつかの態様において、ＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、及びＩＬ－１５がＲＡＰＣの表面に発現する。いくつかの態様において、ＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１５がＲＡＰＣの表面に発現する。
【0093】
ＩＩ．Ａ．組換え抗原提示細胞
本開示のある特定の態様は、組換え抗原提示細胞（ＲＡＰＣ）を対象とする。任意の抗原提示細胞（ＡＰＣ）を、本明細書で開示する組成物及び方法に使用することができる。いくつかの態様において、ＡＰＣは細胞、例えば哺乳類細胞、例えばヒト細胞を含む。いくつかの態様において、細胞は腫瘍細胞である。いくつかの態様において、細胞は腫瘍細胞に由来する。いくつかの態様において、細胞はＫ５６２細胞である。いくつかの態様において、細胞は遺伝子修飾Ｋ５６２細胞である。Ｋ５６２細胞株は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）に罹患したヒト患者から得られる骨髄試料に由来する安定した細胞株である。Ｋ５６２細胞は浮遊状態で培養され、リンパ芽細胞の形態を有する。
本開示のある特定の態様は、組換え抗原提示細胞（ＲＡＰＣ）を対象とする。任意の抗原提示細胞（ＡＰＣ）を、本明細書で開示する組成物及び方法に使用することができる。いくつかの態様において、ＡＰＣは細胞、例えば哺乳類細胞、例えばヒト細胞を含む。いくつかの態様において、細胞は腫瘍細胞である。いくつかの態様において、細胞は腫瘍細胞に由来する。いくつかの態様において、細胞はＫ５６２細胞である。いくつかの態様において、細胞は遺伝子修飾Ｋ５６２細胞である。Ｋ５６２細胞株は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）に罹患したヒト患者から得られる骨髄試料に由来する安定した細胞株である。Ｋ５６２細胞は浮遊状態で培養され、リンパ芽細胞の形態を有する。
【0094】
ある特定の態様において、ＲＡＰＣはＫ５６２細胞を含み、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子とを含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子とを含むＫ５６２細胞を含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子とを含むＫ５６２細胞を含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉｉ）４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｖ）ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子とを含むＫ５６２細胞を含む。
【0095】
いくつかの態様において、本明細書で開示するＲＡＰＣの集団は、第１のＲＡＰＣ、第２のＲＡＰＣ、第３のＲＡＰＣ、及び第４のＲＡＰＣを含み、第１のＲＡＰＣ、第２のＲＡＰＣ、第３のＲＡＰＣ、第４のＲＡＰＣ、またはこれらの任意の組合せはＫ５６２細胞である。いくつかの態様において、本明細書で開示するＲＡＰＣの集団は、第１のＲＡＰＣ、第２のＲＡＰＣ、第３のＲＡＰＣ、及び第４のＲＡＰＣを含み、第１のＲＡＰＣ、第２のＲＡＰＣ、第３のＲＡＰＣ、第４のＲＡＰＣ、またはこれらの任意の組合せは修飾Ｋ５６２細胞である。
【0096】
いくつかの態様において、ＡＰＣは免疫細胞、例えば哺乳類免疫細胞、例えばヒト免疫細胞を含む。抗原を提示可能な任意の免疫細胞を、本明細書で開示する組成物及び方法に使用することができる。いくつかの態様において、免疫細胞は樹状細胞を含む。いくつかの態様において、細胞は操作クローン細胞である。
【0097】
いくつかの態様において、ＡＰＣは、１つ以上の抗原を発現する細胞様抗原提示表面である。いくつかの態様において、ＡＰＣはビーズベースの人工抗原提示細胞を含む。いくつかの態様において、ＡＰＣは、ＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１５のうちの１つ以上を表面に含むラテックスビーズを含む。いくつかの態様において、ＡＰＣは、ＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１５のうちの１つ以上を表面に含むポリスチレンビーズを含む。いくつかの態様において、ＡＰＣは、ＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１５のうちの１つ以上を表面に含む金属ビーズを含む。
【0098】
いくつかの態様において、ＡＰＣは人工脂質小胞または他の脂質二重層含有系を含む。いくつかの態様において、ＡＰＣはエンドソームを含む。いくつかの態様において、ＡＰＣはエクソソームを含む。いくつかの態様において、ＡＰＣはマイクロベシクルを含む。いくつかの態様において、ＡＰＣはナノベシクルを含む。いくつかの態様において、ＡＰＣはリポソームを含む。いくつかの態様において、ＡＰＣは固体支持体を含む。いくつかの態様において、ＡＰＣはビーズを含む。いくつかの態様において、ＡＰＣは球状または非球状のナノ粒子支持体を含む。いくつかの態様において、ＡＰＣはカーボンナノチューブ支持体を含む。いくつかの態様において、ＡＰＣは磁性粒子支持体を含む。いくつかの態様において、ＡＰＣは糸状ポリマー支持体を含む。いくつかの態様において、ＡＰＣは二次元支持体を含む。
【0099】
本明細書で開示するＲＡＰＣは、任意の方法を用いて作成することができる。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、本明細書で開示する核酸分子（例えば、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５、４－１ＢＢＬ、及び／またはＯＸ４０Ｌをコードする核酸分子）のうちの１つ以上を含むようにＡＰＣを遺伝子操作することによって作成される。いくつかの態様において、Ｋ５６２細胞はレンチウイルス形質導入によって操作され、例えば、ＩＬ－２１（例えば、本明細書で開示するＩＬ－２１－ＦｃまたはＩＬ－２１－ＣＤ８融合コンストラクト）、ＩＬ－１５（例えば、本明細書で開示するＩＬ－１５－ＦｃまたはＩＬ－１５－ＣＤ８融合コンストラクト）、４－１ＢＢＬ、及び／またはＯＸ４０Ｌをコードする核酸分子を含むレンチウイルスベクターを用いて行われる。
【0100】
いくつかの態様において、ＡＰＣは照射される。ＡＰＣを照射することで、照射したＡＰＣ上で培養した免疫細胞の特性が改善する（ＡＰＣにおけるＣＤ７０の発現の増加を含む）ことが示されており、これが免疫細胞の活性化及び／または拡大を促進すると考えられている。例えば、Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３４（４）：３２７（２０１１）（参照により全体として本明細書に援用される）を参照。いくつかの態様において、照射されたＡＰＣ（例えば、ＲＡＰＣ）の存在下で培養された免疫細胞は、照射されていないＡＰＣ（例えば、ＲＡＰＣ）の存在下で培養された免疫細胞よりも、増殖の増大及び／またはＩＦＮｇ産生の増加が得られる。いくつかの態様において、ＡＰＣ（例えば、ＲＡＰＣ）は、成長または分裂が不可能になるように照射される。いくつかの態様において、ＡＰＣ（例えば、ＲＡＰＣ）は、少なくとも約１０Ｇｙ、少なくとも約２０Ｇｙ、少なくとも約３０Ｇｙ、少なくとも約４０Ｇｙ、少なくとも約５０Ｇｙ、少なくとも約６０Ｇｙ、少なくとも約７０Ｇｙ、少なくとも約８０Ｇｙ、少なくとも約９０Ｇｙ、少なくとも約１００Ｇｙ、少なくとも約１２５Ｇｙ、少なくとも約１５０Ｇｙ、少なくとも約１７５Ｇｙ、または少なくとも約２００Ｇｙ照射される。いくつかの態様において、ＡＰＣ（例えば、ＲＡＰＣ）は約１００Ｇｙで照射される。いくつかの態様において、ＡＰＣ（例えば、ＲＡＰＣ）をマイトマイシンＣに接触させる。いくつかの態様において、ＡＰＣ（例えば、ＲＡＰＣ）を少なくとも約２５μｇ／ｍＬのマイトマイシンＣに接触させる。
【0101】
いくつかの態様において、本明細書に記載の抗原提示細胞は７２１．２２１細胞である。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗原提示細胞は７２１．２２１細胞であり、ＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１５のうち１つ以上を発現するように修飾されている。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗原提示細胞は、ＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１５を発現するように修飾された７２１．２２１細胞である。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗原提示細胞はＨｕｔ７８細胞である。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗原提示細胞はＨｕｔ７８細胞であり、これは、ＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１５のうちの１つ以上を発現するように修飾されている。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗原提示細胞はＨｕｔ７８細胞であり、ＩＬ－２１、ＯＸ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－１５を発現するように修飾されている。
【0102】
ＩＩ．Ｂ．ＩＬ－２１
本開示のいくつかの態様は、ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子を含むＲＡＰＣを対象とする。本明細書で使用する場合、ＩＬ－２１とは、インターロイキン－２１、その機能的フラグメント、その機能的バリアント、あるいはＩＬ－２１またはその機能的フラグメントもしくは機能的バリアントを含む融合ポリペプチドを指す。いくつかの態様において、ＩＬ－２１は、野生型ＩＬ－２１の少なくとも１つの機能を有する任意のポリペプチドである。いくつかの態様において、ＩＬ－２１は哺乳類ＩＬ－２１を含む。いくつかの態様において、ＩＬ－２１はヒトＩＬ－２１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ９ＨＢＥ４）を含む。
本開示のいくつかの態様は、ＩＬ－２１をコードする１つ以上の核酸分子を含むＲＡＰＣを対象とする。本明細書で使用する場合、ＩＬ－２１とは、インターロイキン－２１、その機能的フラグメント、その機能的バリアント、あるいはＩＬ－２１またはその機能的フラグメントもしくは機能的バリアントを含む融合ポリペプチドを指す。いくつかの態様において、ＩＬ－２１は、野生型ＩＬ－２１の少なくとも１つの機能を有する任意のポリペプチドである。いくつかの態様において、ＩＬ－２１は哺乳類ＩＬ－２１を含む。いくつかの態様において、ＩＬ－２１はヒトＩＬ－２１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｑ９ＨＢＥ４）を含む。
【0103】
ヒトＩＬ－２１は免疫制御活性を有するサイトカインであり、これは自然免疫と適応免疫との間の移行を促進すると考えられている。ＩＬ－２１はＢ細胞においてＩｇＧ１及びＩｇＧ３の産生を誘導し、Ｔ濾胞ヘルパー（Ｔｆｈ）細胞の生成及び維持、ならびに胚中心の形成に関与する。ＩＬ－２１は、ＩＬ－６と一緒にＴｆｈ細胞の初期生成を制御し、急性ウイルス感染に対する有効な抗体応答にとって不可欠である。また、ＩＬ－２１は、ＩＬ－１５との相乗作用においてナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖及び成熟でも役割を担っており、活性化刺激に応答して成熟Ｂ細胞及びＴ細胞の増殖を制御することができる。ＩＬ－２１は、ＩＬ－１５及びＩＬ－１８との相乗作用において、Ｔ細胞及びＮＫ細胞におけるインターフェロンガンマ産生を刺激する。またＩＬ－２１は、Ｔ細胞媒介性免疫応答中に樹状細胞（ＤＣ）の活性化及び成熟を阻害することもできる。カノニカルな配列を表１Ａに示す。
【0104】
【表1A】
【0105】
いくつかの態様において、ＩＬ－２１をコードする核酸分子は、配列番号１に記載のアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、ＩＬ－２１活性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様において、ＩＬ－２１をコードする核酸分子は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。
【0106】
いくつかの態様において、ＩＬ－２１をコードする核酸分子は、配列番号５に記載の核酸配列に対し少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する核酸配列を含み、この核酸分子は、ＩＬ－２１活性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様において、ＩＬ－２１をコードする核酸分子は配列番号５に記載の核酸配列を含む。
【0107】
いくつかの態様において、ＩＬ－２１は融合タンパク質である。いくつかの態様において、ＩＬ－２１は、ヒトＩＬ－２１ポリペプチドと、免疫グロブリンのＦｃ領域とを含む融合タンパク質である。いくつかの態様において、ＩＬ－２１は、（ｉ）ヒトＩＬ－２１ポリペプチドと、（ｉｉ）免疫グロブリンのＦｃ領域と、（ｉｉｉ）膜貫通ドメインとを含む。いくつかの態様において、ＩＬ－２１は、（ｉ）ヒトＩＬ－２１ポリペプチドと、（ｉｉ）ヒンジ領域、（ｉｉｉ）免疫グロブリンのＦｃ領域と、（ｉｖ）膜貫通ドメインとを含む。いくつかの態様において、ＩＬ－２１は、（ｉ）ヒトＩＬ－２１ポリペプチドと、（ｉｉ）ヒンジ領域、（ｉｉｉ）免疫グロブリンのＦｃ領域と、（ｉｖ）膜貫通ドメインと、（ｖ）シグナル伝達ペプチドとを含む。
【0108】
任意のＦｃ領域を、本明細書で開示するＩＬ－２１融合ポリペプチドに使用することができる。いくつかの態様において、Ｆｃ領域はＩｇＧ Ｆｃ領域、ＩｇＡ Ｆｃ領域、またはＩｇＤ Ｆｃ領域である。いくつかの態様において、Ｆｃ領域はＩｇＧ１ Ｆｃ領域、ＩｇＧ２ Ｆｃ領域、及びＩｇＧ３ Ｆｃ領域、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域、またはこれらの組合せである。いくつかの態様において、ＩＬ－２１融合タンパク質はＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。いくつかの態様において、ＩＬ－２１融合タンパク質はＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む。
【0109】
任意のヒンジ領域を、本明細書で開示するＩＬ－２１融合ポリペプチドに使用することができる。いくつかの態様において、ヒンジ領域はＦｃヒンジ領域を含む。いくつかの態様において、ヒンジ領域はＩｇＧ Ｆｃヒンジ領域、ＩｇＡ Ｆｃヒンジ領域、またはＩｇＤ Ｆｃヒンジ領域を含む。いくつかの態様において、ヒンジ領域はＩｇＧ１ Ｆｃヒンジ領域、ＩｇＧ２ Ｆｃヒンジ領域、及びＩｇＧ３ Ｆｃヒンジ領域、ＩｇＧ４ヒンジＦｃ領域、またはこれらの組合せを含む。いくつかの態様において、ＩＬ－２１融合タンパク質はＩｇＧ１ Ｆｃヒンジ領域を含む。いくつかの態様において、ＩＬ－２１融合タンパク質はＩｇＧ４ Ｆｃヒンジ領域を含む。いくつかの態様において、ＩＬ－２１融合タンパク質は修飾ＩｇＧ４ Ｆｃヒンジ領域を含む。いくつかの態様において、ヒンジ領域はＣＤ８ヒンジ領域を含む。
【0110】
任意の膜貫通ドメインを、本明細書に開示するＩＬ－２１融合ポリペプチドに使用することができる。いくつかの態様において、膜貫通ドメインはＣＤ４膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様において、膜貫通ドメインはＣＤ８膜貫通ドメインを含む。
【0111】
任意のシグナル伝達ペプチドを、本明細書で開示するＩＬ－２１融合ポリペプチドに使用することができる。いくつかの態様において、シグナル伝達ペプチドはＧＭＳＣＦシグナル伝達ペプチドを含む。いくつかの態様において、シグナル伝達ペプチドはＧＭＳＣＦＲシグナル伝達ペプチドを含む。いくつかの態様において、シグナル伝達ペプチドはＣＤ８シグナル伝達ペプチドを含む。
【0112】
いくつかの態様において、ＩＬ－２１は、（ｉ）ＣＤ８シグナル伝達ペプチドと、（ｉｉ）ヒトＩＬ－２１ポリペプチドと、（ｉｉｉ）ＣＤ８ヒンジ領域と、（ｉｉｉ）ＣＤ８膜貫通ドメインとを含む。
【0113】
ＩＩ．Ｃ．ＩＬ－１５
本開示のいくつかの態様は、ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子を含むＲＡＰＣを対象とする。本明細書で使用する場合、ＩＬ－１５とは、インターロイキン－１５、その機能的フラグメント、その機能的バリアント、あるいはＩＬ－１５またはその機能的フラグメントもしくは機能的バリアントを含む融合ポリペプチドを指す。いくつかの態様において、ＩＬ－１５は、野生型ＩＬ－１５の少なくとも１つの機能を有する任意のポリペプチドである。いくつかの態様において、ＩＬ－１５は哺乳類ＩＬ－１５を含む。いくつかの態様において、ＩＬ－１５はヒトＩＬ－１５（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ４０９３３）を含む。
本開示のいくつかの態様は、ＩＬ－１５をコードする１つ以上の核酸分子を含むＲＡＰＣを対象とする。本明細書で使用する場合、ＩＬ－１５とは、インターロイキン－１５、その機能的フラグメント、その機能的バリアント、あるいはＩＬ－１５またはその機能的フラグメントもしくは機能的バリアントを含む融合ポリペプチドを指す。いくつかの態様において、ＩＬ－１５は、野生型ＩＬ－１５の少なくとも１つの機能を有する任意のポリペプチドである。いくつかの態様において、ＩＬ－１５は哺乳類ＩＬ－１５を含む。いくつかの態様において、ＩＬ－１５はヒトＩＬ－１５（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ４０９３３）を含む。
【0114】
ヒトＩＬ－１５は、Ｔリンパ球の増殖を刺激するサイトカインである。ＩＬ－１５による刺激は、ＩＬ－１５と、ＩＬ－２受容体の構成要素（ＩＬ－２ＲＢ及びおそらくはＩＬ－２ＲＧを含むがＩＬ－２ＲＡは含まない）との相互作用を必要とする。好中球においては、ＩＬ－１５は、おそらくはＩＬ－１５受容体（ＩＬ－１５ＲＡ、ＩＬ－２ＲＢ、及びＩＬ－２ＲＧのサブユニットから構成される）を通じたシグナル伝達によって食作用を刺激し、その結果キナーゼＳＹＫが活性化される。カノニカルな配列を表１Ｂに示す。
【0115】
【表1B】
【0116】
いくつかの態様において、ＩＬ－１５をコードする核酸分子は、配列番号２に記載のアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、ＩＬ－１５活性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様において、ＩＬ－１５をコードする核酸分子は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。
【0117】
いくつかの態様において、ＩＬ－１５をコードする核酸分子は、配列番号６に記載の核酸配列に対し少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する核酸配列を含み、この核酸分子は、ＩＬ－１５活性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様において、ＩＬ－１５をコードする核酸分子は配列番号６に記載の核酸配列を含む。
【0118】
いくつかの態様において、ＩＬ－１５は融合タンパク質である。いくつかの態様において、ＩＬ－１５は、ヒトＩＬ－１５ポリペプチドと、免疫グロブリンのＦｃ領域とを含む融合タンパク質である。いくつかの態様において、ＩＬ－１５は、（ｉ）ヒトＩＬ－１５ポリペプチドと、（ｉｉ）免疫グロブリンのＦｃ領域と、（ｉｉｉ）膜貫通ドメインとを含む。いくつかの態様において、ＩＬ－１５は、（ｉ）ヒトＩＬ－１５ポリペプチドと、（ｉｉ）ヒンジ領域、（ｉｉｉ）免疫グロブリンのＦｃ領域と、（ｉｖ）膜貫通ドメインとを含む。いくつかの態様において、ＩＬ－１５は、（ｉ）ヒトＩＬ－１５ポリペプチドと、（ｉｉ）ヒンジ領域と、（ｉｉｉ）免疫グロブリンのＦｃ領域と、（ｉｖ）膜貫通ドメインと、（ｖ）シグナル伝達ペプチドとを含む。
【0119】
任意のＦｃ領域を、本明細書で開示するＩＬ－１５融合ポリペプチドに使用することができる。いくつかの態様において、Ｆｃ領域はＩｇＧ Ｆｃ領域、ＩｇＡ Ｆｃ領域、またはＩｇＤ Ｆｃ領域である。いくつかの態様において、Ｆｃ領域はＩｇＧ１ Ｆｃ領域、ＩｇＧ２ Ｆｃ領域、及びＩｇＧ３ Ｆｃ領域、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域、またはこれらの組合せである。いくつかの態様において、ＩＬ－１５融合タンパク質はＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。いくつかの態様において、ＩＬ－１５融合タンパク質はＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む。
【0120】
任意のヒンジ領域を、本明細書で開示するＩＬ－１５融合ポリペプチドに使用することができる。いくつかの態様において、ヒンジ領域はＦｃヒンジ領域を含む。いくつかの態様において、ヒンジ領域はＩｇＧ Ｆｃヒンジ領域、ＩｇＡ Ｆｃヒンジ領域、またはＩｇＤ Ｆｃヒンジ領域を含む。いくつかの態様において、ヒンジ領域はＩｇＧ１ Ｆｃヒンジ領域、ＩｇＧ２ Ｆｃヒンジ領域、及びＩｇＧ３ Ｆｃヒンジ領域、ＩｇＧ４ヒンジＦｃ領域、またはこれらの組合せを含む。いくつかの態様において、ＩＬ－１５融合タンパク質はＩｇＧ１ Ｆｃヒンジ領域を含む。いくつかの態様において、ＩＬ－１５融合タンパク質はＩｇＧ４ Ｆｃヒンジ領域を含む。いくつかの態様において、ＩＬ－１５融合タンパク質は修飾ＩｇＧ４ Ｆｃヒンジ領域を含む。いくつかの態様において、ヒンジ領域はＣＤ８ヒンジ領域を含む。
【0121】
任意の膜貫通ドメインを、本明細書に開示するＩＬ－１５融合ポリペプチドに使用することができる。いくつかの態様において、膜貫通ドメインはＣＤ４膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様において、膜貫通ドメインはＣＤ８膜貫通ドメインを含む。
【0122】
任意のシグナル伝達ペプチドを、本明細書で開示するＩＬ－１５融合ポリペプチドに使用することができる。いくつかの態様において、シグナル伝達ペプチドはＧＭＳＣＦシグナル伝達ペプチドを含む。いくつかの態様において、シグナル伝達ペプチドはＧＭＳＣＦＲシグナル伝達ペプチドを含む。いくつかの態様において、シグナル伝達ペプチドはＣＤ８シグナル伝達ペプチドを含む。
【0123】
いくつかの態様において、ＩＬ－１５は、（ｉ）ＣＤ８シグナル伝達ペプチドと、（ｉｉ）ヒトＩＬ－１５ポリペプチドと、（ｉｉｉ）ＣＤ８ヒンジ領域と、（ｉｉｉ）ＣＤ８膜貫通ドメインとを含む。
【0124】
ＩＩ．Ｄ．４－１ＢＢＬ
本開示のいくつかの態様は、４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子を含むＲＡＰＣを対象とする。４－１ＢＢＬは、腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー９（またはＴＮＦＳＦ９）としても知られている。本明細書で使用する場合、４－１ＢＢＬとは、全長４－１ＢＢＬ、その機能的フラグメント、その機能的バリアント、あるいは４－１ＢＢＬまたはその機能的フラグメントもしくは機能的バリアントを含む融合ポリペプチドを指す。いくつかの態様において、４－１ＢＢＬは、野生型４－１ＢＢＬの少なくとも１つの機能を有する任意のポリペプチドである。いくつかの態様において、４－１ＢＢＬは哺乳類４－１ＢＢＬを含む。いくつかの態様において、４－１ＢＢＬはヒト４－１ＢＢＬ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ４１２７３）を含む。
本開示のいくつかの態様は、４－１ＢＢＬをコードする１つ以上の核酸分子を含むＲＡＰＣを対象とする。４－１ＢＢＬは、腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー９（またはＴＮＦＳＦ９）としても知られている。本明細書で使用する場合、４－１ＢＢＬとは、全長４－１ＢＢＬ、その機能的フラグメント、その機能的バリアント、あるいは４－１ＢＢＬまたはその機能的フラグメントもしくは機能的バリアントを含む融合ポリペプチドを指す。いくつかの態様において、４－１ＢＢＬは、野生型４－１ＢＢＬの少なくとも１つの機能を有する任意のポリペプチドである。いくつかの態様において、４－１ＢＢＬは哺乳類４－１ＢＢＬを含む。いくつかの態様において、４－１ＢＢＬはヒト４－１ＢＢＬ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ４１２７３）を含む。
【0125】
ヒト４－１ＢＢは、ＴＮＦＲＳＦ９（４－１ＢＢＬ）受容体に結合するリガンドである。この相互作用は、活性化末梢血Ｔ細胞の増殖を誘導する。４－１ＢＢＬはさらに、活性化誘導性細胞死（ＡＩＣＤ）及びＴ細胞とＢ細胞／マクロファージ間の同族間相互作用でも役割を果たしている。カノニカルな配列を表１Ｃに示す。
【0126】
【表1C】
【0127】
いくつかの態様において、４－１ＢＢＬをコードする核酸分子は、配列番号３に記載のアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、４－１ＢＢＬ活性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様において、４－１ＢＢＬをコードする核酸分子は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。
【0128】
いくつかの態様において、４－１ＢＢＬをコードする核酸分子は、配列番号７に記載の核酸配列に対し少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する核酸配列を含み、この核酸分子は、４－１ＢＢＬ活性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様において、４－１ＢＢＬをコードする核酸分子は配列番号７に記載の核酸配列を含む。
【0129】
ＩＩ．Ｅ．ＯＸ４０Ｌ
本開示のいくつかの態様は、ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子を含むＲＡＰＣを対象とする。ＯＸ４０Ｌは腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー４（ＴＮＦＳＦ４）としても知られている。本明細書で使用する場合、ＯＸ４０Ｌとは、全長ＯＸ４０Ｌ、その機能的フラグメント、その機能的バリアント、あるいはＯＸ４０Ｌまたはその機能的フラグメントもしくは機能的バリアントを含む融合ポリペプチドを指す。いくつかの態様において、ＯＸ４０Ｌは、野生型ＯＸ４０Ｌの少なくとも１つの機能を有する任意のポリペプチドである。いくつかの態様において、ＯＸ４０Ｌは哺乳類ＯＸ４０Ｌを含む。いくつかの態様において、ＯＸ４０ＬはヒトＯＸ４０Ｌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ２３５１０）を含む。
本開示のいくつかの態様は、ＯＸ４０Ｌをコードする１つ以上の核酸分子を含むＲＡＰＣを対象とする。ＯＸ４０Ｌは腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー４（ＴＮＦＳＦ４）としても知られている。本明細書で使用する場合、ＯＸ４０Ｌとは、全長ＯＸ４０Ｌ、その機能的フラグメント、その機能的バリアント、あるいはＯＸ４０Ｌまたはその機能的フラグメントもしくは機能的バリアントを含む融合ポリペプチドを指す。いくつかの態様において、ＯＸ４０Ｌは、野生型ＯＸ４０Ｌの少なくとも１つの機能を有する任意のポリペプチドである。いくつかの態様において、ＯＸ４０Ｌは哺乳類ＯＸ４０Ｌを含む。いくつかの態様において、ＯＸ４０ＬはヒトＯＸ４０Ｌ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ２３５１０）を含む。
【0130】
ヒトＯＸ４０は、ＴＮＦＲＳＦ４（ＯＸ４０Ｌ）受容体に結合するリガンドである。ＯＸ４０Ｌは、Ｔ細胞増殖及びサイトカイン産生を共刺激する。カノニカルな配列を表１Ｄに示す。
【0131】
【表1D】
【0132】
いくつかの態様において、ＯＸ４０Ｌをコードする核酸分子は、配列番号４に記載のアミノ酸配列に対し少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、ＯＸ－４０Ｌ活性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様において、ＯＸ４０Ｌをコードする核酸分子は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。
【0133】
いくつかの態様において、ＯＸ４０Ｌをコードする核酸分子は、配列番号８に記載の核酸配列に対し少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する核酸配列を含み、この核酸分子は、ＯＸ４０Ｌ活性を有するポリペプチドをコードする。いくつかの態様において、ＯＸ４０Ｌをコードする核酸分子は配列番号８に記載の核酸配列を含む。
【0134】
ＩＩ．Ｆ．その他の核酸分子
いくつかの態様において、ＲＡＰＣは１つ以上のさらなる核酸分子を含み、この１つ以上のさらなる核酸分子はＩＬ－２をコードする。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＩＬ－２をさらに発現する。
いくつかの態様において、ＲＡＰＣは１つ以上のさらなる核酸分子を含み、この１つ以上のさらなる核酸分子はＩＬ－２をコードする。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＩＬ－２をさらに発現する。
【0135】
いくつかの態様において、ＲＡＰＣは１つ以上の共刺激分子を発現する。いくつかの態様において、共刺激分子はＣＤ８６、Ｂ７．１、またはそのフラグメントもしくはバリアントを含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、ＣＤ８６をコードする１つ以上の核酸分子を含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＣＤ８６をさらに発現する。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＢ７．１をコードする１つ以上の核酸分子を含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＢ７．１をさらに発現する。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉ）ＣＤ８６をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）Ｂ７．１をコードする１つ以上の核酸分子とを含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＣＤ８６及びＢ７．１を発現する。
【0136】
いくつかの態様において、ＲＡＰＣは１つ以上のＳＬＡＭファミリー抗原を発現する。いくつかの態様において、ＳＬＡＭファミリー抗原は、ＣＤ２、ＣＤ４８、ＣＤ５８（ＬＦＡ－３）、ＣＤ２４４（２Ｂ４）、ＣＤ２２９（Ｌｙ９）、ＣＤ３１９（ＣＳ１（ＣＤ２サブセット１）；ＣＲＡＣＣ（ＣＤ２様受容体活性化細胞傷害性細胞））、及びＣＤ３５２（ＮＴＢ－Ａ（ＮＫ－Ｔ－Ｂ抗原））から選択される。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、ＣＤ４８をコードする１つ以上の核酸分子を含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＣＤ４８をさらに発現する。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、ＣＳ１（ＣＤ３１９）をコードする１つ以上の核酸分子を含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＣＳ１（ＣＤ３１９）をさらに発現する。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＣＤ４８及びＣＳ１（ＣＤ３１９）をさらに発現する。
【0137】
いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、接着ポリペプチドをコードする１つ以上の核酸分子を含む。いくつかの態様において、接着ポリペプチドはＩＣＡＭ－１（ＣＤ５４）、ＬＦＡ－３、またはそのフラグメントもしくはバリアントを含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、ＩＣＡＭ－１（ＣＤ５４）をコードする１つ以上の核酸分子を含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＩＣＡＭ－１（ＣＤ５４）をさらに発現する。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、ＬＦＡ－３（ＣＤ５８）をコードする１つ以上の核酸分子を含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＬＦＡ－３（ＣＤ５８）をさらに発現する。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは、（ｉ）ＩＣＡＭ－１（ＣＤ５４）をコードする１つ以上の核酸分子と、（ｉｉ）ＬＦＡ－３（ＣＤ５８）をコードする１つ以上の核酸分子とを含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＩＣＡＭ－１（ＣＤ５４）及びＬＦＡ－３（ＣＤ５８）を発現する。
【0138】
いくつかの態様において、ＲＡＰＣは内在性ＨＬＡクラスＩ分子を発現しない。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは内在性ＨＬＡクラスＩＩ分子を発現しない。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは内在性ＭＨＣ ＣＤ１ｄ分子を発現しない。いくつかの態様において、ＲＡＰＣは内在性ＨＬＡクラスＩ、ＩＩ、及び／またはＣＤ１ｄ分子を発現しない。
【0139】
ＩＩＩ．本開示の方法
本開示のいくつかの態様は、免疫細胞の集団をｅｘ ｖｉｖｏで拡大する方法を対象とする。いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞の集団を本明細書で開示するＲＡＰＣに接触させることを含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＩＬ－２１（例えば、本明細書で開示するＩＬ－２１－ＦｃまたはＩＬ－２１－ＣＤ８融合コンストラクト）及びＯＸ４０Ｌを発現する。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＩＬ－２１（例えば、ＩＬ－２１－ＦｃまたはＩＬ－２１－ＣＤ８）、ＯＸ４０Ｌ、及びＩＬ－１５（例えば、本明細書で開示するＩＬ－１５－ＦｃまたはＩＬ－１５－ＣＤ８融合コンストラクト）を発現する。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＩＬ－２１（例えば、ＩＬ－２１－ＦｃまたはＩＬ－２１－ＣＤ８）、ＯＸ４０Ｌ、及び４－１ＢＢＬを発現する。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＩＬ－２１（例えば、ＩＬ－２１－ＦｃまたはＩＬ－２１－ＣＤ８）、ＯＸ４０Ｌ、ＩＬ－１５（例えば、ＩＬ－１５－ＦｃまたはＩＬ－１５－ＣＤ８）、及び４－１ＢＢＬを発現する。
本開示のいくつかの態様は、免疫細胞の集団をｅｘ ｖｉｖｏで拡大する方法を対象とする。いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞の集団を本明細書で開示するＲＡＰＣに接触させることを含む。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＩＬ－２１（例えば、本明細書で開示するＩＬ－２１－ＦｃまたはＩＬ－２１－ＣＤ８融合コンストラクト）及びＯＸ４０Ｌを発現する。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＩＬ－２１（例えば、ＩＬ－２１－ＦｃまたはＩＬ－２１－ＣＤ８）、ＯＸ４０Ｌ、及びＩＬ－１５（例えば、本明細書で開示するＩＬ－１５－ＦｃまたはＩＬ－１５－ＣＤ８融合コンストラクト）を発現する。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＩＬ－２１（例えば、ＩＬ－２１－ＦｃまたはＩＬ－２１－ＣＤ８）、ＯＸ４０Ｌ、及び４－１ＢＢＬを発現する。いくつかの態様において、ＲＡＰＣはＩＬ－２１（例えば、ＩＬ－２１－ＦｃまたはＩＬ－２１－ＣＤ８）、ＯＸ４０Ｌ、ＩＬ－１５（例えば、ＩＬ－１５－ＦｃまたはＩＬ－１５－ＣＤ８）、及び４－１ＢＢＬを発現する。
【0140】
いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞を（ｉ）ＩＬ－２１（例えば、ＩＬ－２１－ＦｃまたはＩＬ－２１－ＣＤ８）及びＯＸ４０Ｌを発現するＲＡＰＣ、ならびに（ｉｉ）ＩＬ－１５に接触させることを含み、ＲＡＰＣはＩＬ－１５を発現しない。いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞を（ｉ）ＩＬ－２１（例えば、ＩＬ－２１－ＦｃまたはＩＬ－２１－ＣＤ８）及びＯＸ４０Ｌを発現するＲＡＰＣ、ならびに（ｉｉ）４－１ＢＢＬに接触させることを含み、ＲＡＰＣは４－１ＢＢＬを発現しない。いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞を（ｉ）ＩＬ－２１（例えば、ＩＬ－２１－ＦｃまたはＩＬ－２１－ＣＤ８）及びＯＸ４０Ｌを発現するＲＡＰＣ、（ｉｉ）ＩＬ－１５、ならびに（ｉｉｉ）４－１ＢＢＬに接触させることを含み、ＲＡＰＣはＩＬ－１５または４－１ＢＢＬを発現しない。
【0141】
いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞を（ｉ）ＩＬ－２１及びＩＬ－１５（例えば、ＩＬ－１５－ＦｃまたはＩＬ－１５－ＣＤ８）を発現するＲＡＰＣ、ならびに（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌに接触させることを含み、ＲＡＰＣはＯＸ４０Ｌを発現しない。いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞を（ｉ）ＩＬ－２１及びＩＬ－１５（例えば、ＩＬ－１５－ＦｃまたはＩＬ－１５－ＣＤ８）を発現するＲＡＰＣ、ならびに（ｉｉ）４－１ＢＢＬに接触させることを含み、ＲＡＰＣは４－１ＢＢＬを発現しない。いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞を（ｉ）ＩＬ－２１及びＩＬ－１５（例えば、ＩＬ－１５－ＦｃまたはＩＬ－１５－ＣＤ８）を発現するＲＡＰＣ、（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌ、ならびに（ｉｉｉ）４－１ＢＢＬに接触させることを含み、ＲＡＰＣはＯＸ４０Ｌまたは４－１ＢＢＬを発現しない。
【0142】
いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞を（ｉ）ＩＬ－２１（例えば、ＩＬ－２１－ＦｃまたはＩＬ－２１－ＣＤ８）及び４－１ＢＢＬを発現するＲＡＰＣ、ならびに（ｉｉ）ＩＬ－１５に接触させることを含み、ＲＡＰＣはＩＬ－１５を発現しない。いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞を（ｉ）ＩＬ－２１（例えば、ＩＬ－２１－ＦｃまたはＩＬ－２１－ＣＤ８）及び４－１ＢＢＬを発現するＲＡＰＣ、ならびに（ｉｉ）ＯＸ４０Ｌに接触させることを含み、ＲＡＰＣはＯＣ－４０Ｌを発現しない。いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞を（ｉ）ＩＬ－２１（例えば、ＩＬ－２１－ＦｃまたはＩＬ－２１－ＣＤ８）及び４－１ＢＢＬを発現するＲＡＰＣ、（ｉｉ）ＩＬ－１５、ならびに（ｉｉｉ）ＯＸ４０Ｌに接触させることを含み、ＲＡＰＣはＩＬ－１５またはＯＸ４０Ｌを発現しない。
【0143】
本開示のいくつかの態様は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の集団をｅｘ ｖｉｖｏで拡大する方法であって、免疫細胞の集団をＩＬ－２１（例えば、可溶性ＩＬ－２１、ＩＬ－２１－Ｆｃ、またはＩＬ－２１－ＣＤ８）及びＯＸ４０Ｌに接触させることを含む方法を対象とする。いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞の集団をＡＰＣ（例えば、本明細書で開示するＲＡＰＣ）に接触させることをさらに含む。いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の集団を４－１ＢＢＬに接触させることをさらに含む。いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の集団をＩＬ－１５（例えば、可溶性ＩＬ－１５、ＩＬ－１５－Ｆｃ、またはＩＬ－１５－ＣＤ８）に接触させることをさらに含む。いくつかの態様において、ＡＰＣ（例えば、ＲＡＰＣ）は、ＩＬ－２１（例えば、ＩＬ－２１－ＦｃまたはＩＬ－２１－ＣＤ８）、ＯＸ４０Ｌ、及び４－１ＢＢＬを発現し、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の集団は、ＩＬ－１５（例えば、可溶性ＩＬ－１５、ＩＬ－１５－Ｆｃ、またはＩＬ－１５－ＣＤ８）を含む培地中で培養される。いくつかの態様において、ＡＰＣ（例えば、ＲＡＰＣ）は、ＩＬ－２１（例えば、ＩＬ－２１－ＦｃまたはＩＬ－２１－ＣＤ８）、ＯＸ４０Ｌ、及びＩＬ－１５（例えば、ＩＬ－１５－ＦｃまたはＩＬ－１５－ＣＤ８）を発現し、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の集団は、４－１ＢＢＬを含む培地中で培養される。
【0144】
本開示のいくつかの態様は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の集団をｅｘ ｖｉｖｏで拡大する方法であって、免疫細胞の集団をＩＬ－２１（例えば、ＩＬ－２１、ＩＬ－２１－Ｆｃ、またはＩＬ－２１－ＣＤ８）及び第１のＡＰＣに接触させることを含み、第１のＡＰＣがＯＸ４０Ｌを発現する方法を対象とする。いくつかの態様において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の集団は培地中で培養され、培地はＩＬ－２１（例えば、可溶性ＩＬ－２１）を含む。いくつかの態様において、ＩＬ－２１はビーズに会合する。いくつかの態様において、ＩＬ－２１（例えば、可溶性ＩＬ－２１、ＩＬ－２１－Ｆｃ、及び／またはＩＬ－２１－ＣＤ８）は第２のＡＰＣによって発現される。いくつかの態様において、第１のＲＡＰＣ及び第２のＡＰＣは異なる。いくつかの態様において、第１のＡＰＣ及び第２のＡＰＣは同じである。
【0145】
いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の集団をＯＸ４０Ｌに接触させることをさらに含む。いくつかの態様において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の集団は培地中で培養され、培地はＯＸ４０Ｌを含む。いくつかの態様において、ＯＸ４０Ｌはビーズに会合する。いくつかの態様において、ＯＸ４０Ｌは第３のＡＰＣによって発現される。いくつかの態様において、第３のＡＰＣは第１のＡＰＣ及び第２のＡＰＣとは異なる。いくつかの態様において、第３のＡＰＣは第１のＡＰＣと同じであり、第３のＡＰＣは第２のＡＰＣと同じであるか、または第３のＡＰＣは第１のＡＰＣ及び第２のＡＰＣと同じである。
【0146】
いくつかの態様において、この方法は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の集団をＩＬ－１５（例えば、可溶性ＩＬ－１５、ＩＬ－１５－Ｆｃ、またはＩＬ－１５－ＣＤ８）に接触させることをさらに含む。いくつかの態様において、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の集団は培地中で培養され、培地はＩＬ－１５（例えば、可溶性ＩＬ－１５）を含む。いくつかの態様において、ＩＬ－１５はビーズに会合する。いくつかの態様において、ＩＬ－１５は第４のＡＰＣによって発現される。いくつかの態様において、第４のＡＰＣは第１のＡＰＣ、第２のＡＰＣ、及び第３のＡＰＣとは異なる。いくつかの態様において、第４のＡＰＣは第１のＡＰＣと同じであり、第４のＡＰＣは第２のＡＰＣと同じであるか、第４のＡＰＣは第３のＡＰＣと同じであるか、第４のＡＰＣは第１のＡＰＣ及び第２のＡＰＣと同じであるか、第４のＡＰＣは第２のＡＰＣ及び第３のＡＰＣと同じであるか、第４のＡＰＣは第１のＡＰＣ及び第３のＡＰＣと同じであるか、または第４のＡＰＣは第１のＡＰＣ、第２のＡＰＣ、及び第３のＡＰＣと同じである。
【0147】
いくつかの態様において、免疫細胞の集団は、免疫細胞をＲＡＰＣに接触させた後に拡大する。いくつかの態様において、免疫細胞の集団を（ｉ）ＩＬ－２１（例えば、ＩＬ－２１－ＦｃまたはＩＬ－２１－ＣＤ８）及び４－１ＢＢＬ、ならびに（ｉｉ）ＩＬ－１５（例えば、ＩＬ－１５－ＦｃまたはＩＬ－１５－ＣＤ８）及び／またはＯＸ４０Ｌを発現するＲＡＰＣに接触させると、（ｉ）ＩＬ－２１（例えば、ＩＬ－２１－ＦｃまたはＩＬ－２１－ＣＤ８）及び４－１ＢＢＬ、ならびに（ｉｉ）ＩＬ－１５（例えば、ＩＬ－１５－ＦｃまたはＩＬ－１５－ＣＤ８）及び／またはＯＸ４０Ｌを発現するＲＡＰＣに接触させない場合、またはこれらを発現しないＡＰＣに接触させた場合の免疫細胞集団の拡大と比較して、免疫細胞集団の拡大の増大がもたらされる。いくつかの態様において、免疫細胞の集団中の免疫細胞の総数が、少なくとも約１×１０７～少なくとも約１×１０１２、少なくとも約１×１０８～少なくとも約１×１０１２、少なくとも約１×１０９～少なくとも約１×１０１２、少なくとも約１×１０８～少なくとも約１×１０１１、少なくとも約１×１０９～少なくとも約１×１０１１、少なくとも約１×１０１０～少なくとも約１×１０１１、少なくとも約１×１０７～少なくとも約１×１０１０、少なくとも約１×１０８～少なくとも約１×１０１０、または少なくとも約１×１０９～少なくとも約１×１０１０個の免疫細胞になるまで、免疫細胞の集団が拡大される。いくつかの態様において、免疫細胞の集団中の免疫細胞の総数が、少なくとも約１×１０７、少なくとも約５×１０７、少なくとも約１×１０８、少なくとも約５×１０８、少なくとも約１×１０９、少なくとも約２×１０９、少なくとも約３×１０９、少なくとも約４×１０９、少なくとも約５×１０９、少なくとも約６×１０９、少なくとも約７×１０９、少なくとも約８×１０９、少なくとも約９×１０９、少なくとも約１×１０１０、少なくとも約２×１０１０、少なくとも約３×１０１０、少なくとも約４×１０１０、少なくとも約５×１０１０、少なくとも約６×１０１０、少なくとも約７×１０１０、少なくとも約８×１０１０、少なくとも約９×１０１０、少なくとも約１×１０１１、少なくとも約２×１０１１、少なくとも約３×１０１１、少なくとも約４×１０１１、少なくとも約５×１０１１、少なくとも約６×１０１１、少なくとも約７×１０１１、少なくとも約８×１０１１、少なくとも約９×１０１１、または少なくとも約１×１０１２個の免疫細胞になるまで、免疫細胞の集団が拡大される。
【0148】
いくつかの態様において、この方法は、拡大された免疫細胞の集団を精製することをさらに含む。いくつかの態様において、拡大後の免疫細胞の精製集団が凍結保存される。免疫細胞を凍結保存する任意の方法を、本明細書で開示する方法に使用することができる。いくつかの態様において、免疫細胞は、ＤＭＳＯ（例えば、５－１０％のＤＭＳＯ）を含む溶液（例えば、培地）中で凍結保存される。いくつかの態様において、免疫細胞は解凍され、それを必要とする対象に投与される。
【0149】
ＩＩＩ．Ａ．免疫細胞
本明細書で開示する方法は、任意の免疫細胞の集団の培養（例えば、拡大）に使用することができる。そのため、本開示のいくつかの態様は、ｅｘ ｖｉｖｏで免疫細胞の集団を拡大する方法であって、免疫細胞の集団を、本明細書で開示するＲＡＰＣに接触させることを含む方法を対象とする。本明細書で開示する方法に従って任意の免疫細胞を培養することができる。いくつかの態様において、免疫細胞の集団は、αβＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、パンγδＴ細胞、Ｖδ１ γδＴ細胞、Ｖδ２ γδＴ細胞、Ｖδ３ γδＴ細胞、及びこれらの任意の組合せから選択される１つ以上の免疫細胞を含む。いくつかの態様において、Ｔ細胞は、ナイーブＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞（Ｔｓｃｍ）、セントラルメモリーＴ細胞（Ｔｃｍ）、エフェクターＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞（Ｔｅｍ）、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される。
本明細書で開示する方法は、任意の免疫細胞の集団の培養（例えば、拡大）に使用することができる。そのため、本開示のいくつかの態様は、ｅｘ ｖｉｖｏで免疫細胞の集団を拡大する方法であって、免疫細胞の集団を、本明細書で開示するＲＡＰＣに接触させることを含む方法を対象とする。本明細書で開示する方法に従って任意の免疫細胞を培養することができる。いくつかの態様において、免疫細胞の集団は、αβＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、パンγδＴ細胞、Ｖδ１ γδＴ細胞、Ｖδ２ γδＴ細胞、Ｖδ３ γδＴ細胞、及びこれらの任意の組合せから選択される１つ以上の免疫細胞を含む。いくつかの態様において、Ｔ細胞は、ナイーブＴ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞（Ｔｓｃｍ）、セントラルメモリーＴ細胞（Ｔｃｍ）、エフェクターＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞（Ｔｅｍ）、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される。
【0150】
いくつかの態様において、免疫細胞の集団は、ドナー対象から得られる１つ以上の免疫細胞を含む。いくつかの態様において、免疫細胞の集団は、ドナーのヒト対象から得られる１つ以上の免疫細胞を含む。いくつかの態様において、ドナー対象は疾患または状態に罹患している。いくつかの態様において、ドナー対象はがんに罹患している。いくつかの態様において、ドナー対象は、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸部癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組肉腫、尿道癌、陰茎癌、慢性もしくは急性の白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、小児期の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓もしくは尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮細胞癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境誘導性癌（アスベストにより誘導されたものを含む）、及びこれらの任意の組合せから選択されるがんに罹患している。ある特定の態様において、がんはリンパ腫を含む。ある特定の態様において、がんは白血病を含む。
【0151】
いくつかの態様において、免疫細胞は、対象から得られる臍帯血から単離される。いくつかの態様において、免疫細胞は、対象から得られる末梢血から単離される。いくつかの態様において、免疫細胞の集団は、対象の臍帯血から得られる１つ以上のガンマ／デルタＴ細胞を含む。いくつかの態様において、免疫細胞の集団は、対象の臍帯血から得られる１つ以上のＮＫ細胞を含む。いくつかの態様において、免疫細胞の集団は、対象の臍帯血から得られる１つ以上のガンマ／デルタＴ細胞及び１つ以上のＮＫ細胞を含む。いくつかの態様において、免疫細胞の集団は、対象の末梢血から得られる１つ以上のガンマ／デルタＴ細胞を含む。いくつかの態様において、免疫細胞の集団は、対象の末梢血から得られる１つ以上のＮＫ細胞を含む。いくつかの態様において、免疫細胞の集団は、対象の末梢血から得られる１つ以上のガンマ／デルタＴ細胞及び１つ以上のＮＫ細胞を含む。
【0152】
いくつかの態様において、免疫細胞は、対象から得られる腫瘍試料から単離される。腫瘍生検は、しばしば免疫細胞の集団（腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）及び／または腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）を含む）を含む。任意の方法を腫瘍試料からＴＩＬ及び／またはＴＡＭを得るため使用することができ、このような方法には、例えば、米国特許第１０，１６６，２５７号（参照により全体として本明細書に援用される）に開示されている方法が含まれる。
【0153】
いくつかの態様において、ドナー対象は健康なドナーである。ある特定の態様において、ドナー対象はがんに罹患していない。
【0154】
いくつかの態様において、免疫細胞の集団は１つ以上のＴ細胞を含む。いくつかの態様において、免疫細胞の集団は、１つ以上のアルファ／ベータＴ細胞、ガンマ／デルタＴ細胞、ＮＫ細胞、またはこれらの組合せを含む。
【0155】
いくつかの態様において、免疫細胞の集団は、幹細胞に由来する１つ以上の免疫細胞を含む。いくつかの態様において、免疫細胞の集団は、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）由来の１つ以上の免疫細胞を含む。いくつかの態様において、免疫細胞の集団は、造血幹細胞に由来する１つ以上の免疫細胞を含む。いくつかの態様において、免疫細胞の集団は、胚性幹細胞に由来する１つ以上の免疫細胞を含む。
【0156】
いくつかの態様において、本明細書で開示する方法は、免疫細胞集団中の免疫細胞の数を拡大する。いくつかの態様において、本明細書で開示する方法は、少なくとも共培養の約８日目までに、免疫細胞の集団中の免疫細胞の数を少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、または少なくとも約１５倍拡大する。いくつかの態様において、本明細書で開示する方法は、少なくとも共培養の約１５日目までに、免疫細胞の集団中の免疫細胞の数を少なくとも約５０倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約１００倍少なくとも約１２５倍、少なくとも約１５０倍、少なくとも約１７５倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約２２５倍、少なくとも約２５０倍、少なくとも約２７５倍、少なくとも約３００倍、または少なくとも約３２５倍拡大する。いくつかの態様において、本明細書で開示する方法は、少なくとも共培養の約２３日目までに、免疫細胞の集団中の免疫細胞の数を少なくとも約２００倍、少なくとも約２２５倍、少なくとも約２５０倍、少なくとも約２７５倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約３２５倍、少なくとも約３５０倍、少なくとも約３７５倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約４５０倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約５５０倍、少なくとも約６００倍、少なくとも約６５０倍、少なくとも約７００倍、少なくとも約７５０倍、少なくとも約８００倍、少なくとも約８５０倍、少なくとも約９００倍、少なくとも約９５０倍、少なくとも約１０００倍、少なくとも約１０５０倍、少なくとも約１１００倍、または少なくとも約１１５０倍拡大する。いくつかの態様において、本明細書で開示する方法は、少なくとも共培養の約２７日目までに、免疫細胞の集団中の免疫細胞の数を少なくとも約９００倍、少なくとも約１０００倍、少なくとも約１５００倍、少なくとも約２０００倍、少なくとも約２５００倍、少なくとも約３０００倍、少なくとも約３５００倍、少なくとも約４０００倍、少なくとも約４５００倍、少なくとも約５０００倍、少なくとも約５５００倍、少なくとも約６０００倍、少なくとも約６５００倍、または少なくとも約７０００倍拡大する。
【0157】
いくつかの態様において、本明細書で開示する方法は、対象から得られる免疫細胞の混合集団中のガンマ／デルタＴ細胞の数を拡大する。いくつかの態様において、拡大された免疫細胞の集団におけるガンマ／デルタＴ細胞のパーセントは、拡大された免疫細胞の集団の総集団の少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８５％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％である。いくつかの態様において、本明細書で開示する方法は、対象から得られる免疫細胞の混合集団中のＮＫ細胞の数を拡大する。いくつかの態様において、拡大された免疫細胞の集団におけるＮＫ細胞のパーセントは、拡大された免疫細胞の集団の総集団の少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８５％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％である。
【0158】
いくつかの態様において、本明細書で開示する方法に従って拡大された細胞は、増加したパーセンテージのＮＫ細胞表面表現型を有する免疫細胞を含む細胞集団をもたらす。いくつかの態様において、ＮＫ細胞表面表現型は、ＣＤ５６、ＣＤ１６、ＣＤ３０、ＣＤ９４、及びＮＫＧ２Ｄのうちの１つ以上の発現を含む。いくつかの態様において、ＮＫ細胞表面表現型は、拡大されたＮＫ細胞によるＣＤ３－及びＣＤ５６＋発現を含む。いくつかの態様において、（ｉ）ＩＬ－２１（例えば、ＩＬ－２１－ＦｃまたはＩＬ－２１－ＣＤ８）及び４－１ＢＢＬ、ならびに（ｉｉ）ＩＬ－１５（例えば、ＩＬ－１５－ＦｃまたはＩＬ－１５－ＣＤ８）及び／またはＯＸ４０Ｌを発現する１つ以上のＲＡＰＣと共インキュベートした後のＮＫ細胞表現型（例えば、ＣＤ３－ＣＤ５６＋）を有する拡大された細胞のパーセンテージは、（ｉ）ＩＬ－２１（例えば、ＩＬ－２１－ＦｃまたはＩＬ－２１－ＣＤ８）及び４－１ＢＢＬ、ならびに（ｉｉ）ＩＬ－１５（例えば、ＩＬ－１５－ＦｃまたはＩＬ－１５－ＣＤ８）及び／またはＯＸ４０Ｌを発現しないＡＰＣと共インキュベートした後のＮＫ細胞表現型を有する拡大された細胞のパーセンテージよりも高い。いくつかの態様において、共インキュベートした後のＮＫ細胞表面表現型（例えば、ＣＤ３－ＣＤ５６＋）を発現する拡大された細胞の合計パーセントは、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％である。いくつかの態様において、共インキュベートした後のＮＫ細胞表面表現型（例えば、ＣＤ３－ＣＤ５６＋）を発現する拡大された細胞の合計パーセントは、少なくとも約５０％である。いくつかの態様において、共インキュベートした後のＮＫ細胞表面表現型（例えば、ＣＤ３－ＣＤ５６＋）を発現する拡大された細胞の合計パーセントは、少なくとも約６０％である。いくつかの態様において、共インキュベートした後のＮＫ細胞表面表現型（例えば、ＣＤ３－ＣＤ５６＋）を発現する拡大された細胞の合計パーセントは、少なくとも約７０％である。いくつかの態様において、共インキュベートした後のＮＫ細胞表面表現型（例えば、ＣＤ３－ＣＤ５６＋）を発現する拡大された細胞の合計パーセントは、少なくとも約７５％である。いくつかの態様において、共インキュベートした後のＮＫ細胞表面表現型（例えば、ＣＤ３－ＣＤ５６＋）を発現する拡大された細胞の合計パーセントは、少なくとも約８０％である。いくつかの態様において、共インキュベートした後のＮＫ細胞表面表現型（例えば、ＣＤ３－ＣＤ５６＋）を発現する拡大された細胞の合計パーセントは、少なくとも約８５％である。
【0159】
いくつかの態様において、共インキュベートした後のガンマ／デルタＴ細胞表面表現型（例えば、ＣＤ３＋ＣＤ５６－）を発現する拡大された細胞の合計パーセントは、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％である。いくつかの態様において、共インキュベートした後のガンマ／デルタＴ細胞表面表現型（例えば、ＣＤ３＋ＣＤ５６－）を発現する拡大された細胞の合計パーセントは、少なくとも約５０％である。いくつかの態様において、共インキュベートした後のガンマ／デルタＴ細胞表面表現型（例えば、ＣＤ３＋ＣＤ５６－）を発現する拡大された細胞の合計パーセントは、少なくとも約６０％である。いくつかの態様において、共インキュベートした後のガンマ／デルタＴ細胞表現型（例えば、ＣＤ３＋ＣＤ５６－）を発現する拡大された細胞の合計パーセントは、少なくとも約７０％である。いくつかの態様において、共インキュベートした後のガンマ／デルタＴ細胞表面表現型（例えば、ＣＤ３－ＣＤ５６＋）を発現する拡大された細胞の合計パーセントは、少なくとも約７５％である。いくつかの態様において、共インキュベートした後のガンマ／デルタＴ細胞表面表現型（例えば、ＣＤ３＋ＣＤ５６－）を発現する拡大された細胞の合計パーセントは、少なくとも約８０％である。いくつかの態様において、共インキュベートした後のガンマ／デルタＴ細胞表面表現型（例えば、ＣＤ３＋ＣＤ５６－）を発現する拡大された細胞の合計パーセントは、少なくとも約８５％である。
【0160】
いくつかの態様において、免疫細胞は遺伝子修飾されている。いくつかの態様において、免疫細胞は、（例えば、初代免疫細胞の場合に）本明細書に記載のＲＡＰＣを用いて拡大する前に、（例えば、ＣＡＲを導入するために）遺伝子修飾される。他の態様において、免疫細胞は、（例えば、ｉＰＳＣ由来免疫細胞の場合に）本明細書に記載のＲＡＰＣを用いて拡大した後に、（例えば、ＣＡＲを導入するために）遺伝子修飾される。そのため、本開示のいくつかの態様は、遺伝子修飾免疫細胞の集団を拡大する方法であって、免疫細胞を遺伝子修飾することと、遺伝子修飾免疫細胞を本明細書で開示するＲＡＰＣに接触させて、それにより細胞を拡大することとを含む方法を対象とする。本開示の他の態様は、免疫細胞の集団を拡大する方法であって、（ｉ）免疫細胞の集団を本明細書で開示するＲＡＰＣに接触させて、拡大された免疫細胞の集団を生成することと、（ｉｉ）拡大された免疫細胞の集団の１つ以上の細胞を遺伝子修飾することとを含む方法を対象とする。
【0161】
任意の遺伝子修飾の手段を、本明細書で開示する組成物及び方法に使用することができる。いくつかの態様において、免疫細胞、例えば、拡大された免疫細胞（例えば、拡大されたガンマ／デルタＴ細胞及び／または拡大ＮＫ細胞）は、キメラ抗原受容体を含むように遺伝子修飾される。キメラ抗原受容体、すなわちＣＡＲは、特定の抗原を標的とする能力を宿主細胞（例えば、免疫細胞）に付与することができる異種の組換え受容体である。ＣＡＲには、限定されるものではないが、人工Ｔ細胞受容体、Ｔボディ、一本鎖免疫受容体、キメラＴ細胞受容体、キメラ免疫受容体、またはこれらの任意の組合せが含まれる。いくつかの態様において、ＣＡＲは、細胞内活性化ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞外ドメインとを含み、細胞外ドメインは抗原結合ドメインを含む。
【0162】
いくつかの態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは抗体または抗体の抗原結合部分を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインはｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）２、ｄＡｂ、またはこれらの任意のフラグメントもしくは組合せを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは抗原に特異的に結合する。いくつかの態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、腫瘍細胞上の１つ以上の抗原に特異的に結合する。いくつかの態様において、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＲＯＲ１、ＣＤ２２、がん胎児性抗原、アルファフェトプロテイン、ＣＡ－１２５、５Ｔ４、ＭＵＣ－１、上皮性腫瘍抗原、前立腺特異性抗原、黒色腫関連抗原、変異ｐ５３、変異ｒａｓ、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、葉酸結合タンパク質、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐｌ２０、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１、ＧＤ２、ＣＤ１２３、ＣＤ３３、ＣＤ１３８、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ５６、ｃ－Ｍｅｔ、メソテリン、ＧＤ３、ＨＥＲＶ－Ｋ、ＩＬ－ｌｌＲアルファ、カッパ鎖、ラムダ鎖、ＣＳＰＧ４、ＥＲＢＢ２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＶＥＧＦＲ２、ＨＥＲ２－ＨＥＲ３の組合せ、ＨＥＲ１－ＨＥＲ２の組合せ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、滑膜肉腫Ｘブレイクポイント２（ＳＳＸ２）、黒色腫抗原（ＭＡＧＥ）、Ｔ細胞により認識される黒色腫抗原１（ＭＡＲＴ－１）、ｇｐ１００、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異性膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、及びこれらの任意の組合せから選択される１つ以上の抗原に特異的に結合する。
【0163】
いくつかの態様において、ＣＡＲは膜貫通ドメインを含む。任意の膜貫通ドメインを、本明細書で開示する方法及び組成物に使用することができる。いくつかの態様において、ＣＡＲは、免疫細胞上の共受容体である膜貫通分子に由来する膜貫通ドメインまたは免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーの膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲは、ＣＤ２８、ＣＤ８アルファ、ＣＤ４、またはＣＤ１９の膜貫通ドメインに由来する膜貫通ドメインを含む。
【0164】
いくつかの態様において、ＣＡＲは１つ以上の共刺激シグナル伝達領域を含む。いくつかの態様において、共刺激シグナル伝達領域は、ＣＤ２８、ＯＸ－４０、４１ＢＢ、ＣＤ２７、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ２４７、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、Ｆｃガンマ受容体、ＦｃＲ、ＣＤ１３７、ＤＡＰ１０、またはこれらの任意の組合せのシグナル伝達領域を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲは、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインをさらに含む。
【0165】
いくつかの態様において、ＣＡＲはヒンジ領域をさらに含む。いくつかの態様において、ＣＡＲは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＣＤ２８、ＣＤ８アルファ、またはこれらの任意の組合せのヒンジ領域に由来するヒンジ領域を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲはＩｇＧ４ヒンジ領域を含む。
【0166】
いくつかの態様において、免疫細胞、例えば、拡大された免疫細胞（例えば、拡大されたガンマ／デルタＴ細胞及び／または拡大ＮＫ細胞）は、異種のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように遺伝子修飾される。いくつかの態様において、異種ＴＣＲは、腫瘍細胞上に存在する１つ以上の抗原に結合可能である。いくつかの態様において、異種ＴＣＲは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＲＯＲ１、ＣＤ２２、がん胎児性抗原、アルファフェトプロテイン、ＣＡ－１２５、５Ｔ４、ＭＵＣ－１、上皮性腫瘍抗原、前立腺特異性抗原、黒色腫関連抗原、変異ｐ５３、変異ｒａｓ、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、葉酸結合タンパク質、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐｌ２０、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１、ＧＤ２、ＣＤ１２３、ＣＤ３３、ＣＤ１３８、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ５６、ｃ－Ｍｅｔ、メソテリン、ＧＤ３、ＨＥＲＶ－Ｋ、ＩＬ－ｌｌＲアルファ、カッパ鎖、ラムダ鎖、ＣＳＰＧ４、ＥＲＢＢ２、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＶＥＧＦＲ２、ＨＥＲ２－ＨＥＲ３の組合せ、ＨＥＲ１－ＨＥＲ２の組合せ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、滑膜肉腫Ｘブレイクポイント２（ＳＳＸ２）、黒色腫抗原（ＭＡＧＥ）、Ｔ細胞により認識される黒色腫抗原１（ＭＡＲＴ－１）、ｇｐ１００、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異性膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、及びこれらの任意の組合せからなる群より選択される抗原に結合可能である。
【0167】
いくつかの態様において、拡大された免疫細胞は、細胞培養から採取（例えば、単離及び／または精製）される。拡大された免疫細胞は、任意の方法を用いて採取することができる。いくつかの態様において、拡大された免疫細胞は、（限定されるものではないが、抗体の使用を含む）ポジティブまたはネガティブ選択によって採取される。いくつかの態様において、拡大されたＴ細胞は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１９、及び／またはＣＤ２５を対象とする抗体を用いて採取される。いくつかの態様において、拡大された免疫細胞は、細胞選別（例えば、フローサイトメトリー）を用いて採取される。いくつかの態様において、拡大された免疫細胞は、照射されたＲＡＰＣとともに採取される。
【0168】
ＩＩＩ．Ｂ．治療方法
本開示のいくつかの態様は、疾患または状態の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、免疫細胞の集団を、本明細書で開示するＲＡＰＣまたはＲＡＰＣの集団に接触させることにより、免疫細胞の集団をｅｘ ｖｉｖｏで拡大することと、拡大された免疫細胞の集団を対象に投与することとを含む方法を対象とする。いくつかの態様において、この方法は、拡大された細胞集団を、対象に細胞を投与する前に単離することをさらに含む。いくつかの態様において、拡大された細胞集団は、本明細書で開示するように、対象に投与する前に凍結保存される。
本開示のいくつかの態様は、疾患または状態の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、免疫細胞の集団を、本明細書で開示するＲＡＰＣまたはＲＡＰＣの集団に接触させることにより、免疫細胞の集団をｅｘ ｖｉｖｏで拡大することと、拡大された免疫細胞の集団を対象に投与することとを含む方法を対象とする。いくつかの態様において、この方法は、拡大された細胞集団を、対象に細胞を投与する前に単離することをさらに含む。いくつかの態様において、拡大された細胞集団は、本明細書で開示するように、対象に投与する前に凍結保存される。
【0169】
いくつかの態様において、疾患または状態はがんを含む。いくつかの態様において、がんは、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸部癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組肉腫、尿道癌、陰茎癌、慢性もしくは急性の白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、小児期の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓もしくは尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮細胞癌、Ｔ細胞リンパ腫、環境誘導性癌（アスベストにより誘導されたものを含む）、またはこれらの任意の組合せを含む。いくつかの態様において、がんはリンパ腫を含む。いくつかの態様において、がんは白血病を含む。
【0170】
いくつかの態様において、この方法は、対象に免疫細胞の集団を投与する前に前治療することをさらに含む。いくつかの態様において、対象は、免疫細胞の集団の投与前に、化学療法が投与される。いくつかの態様において、対象は、免疫細胞の集団の投与前に、免疫枯渇化学療法が投与される。いくつかの態様において、免疫枯渇化学療法はシクロホスファミド、フルダラビン、またはその両方を含む。
【0171】
いくつかの態様において、この方法は、（ｉ）拡大された細胞の集団及び（ｉｉ）サイトカインを対象に投与することを含む。いくつかの態様において、サイトカインはＩＬ－２、そのアナログ、そのバリアント、またはそのフラグメントを含む。
【0172】
本開示の実施は、別段の指示がない限り、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡ、及び免疫学の従来的技法を用い、このような技法は当業者の技能範囲内である。このような技法は、文献内で十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ ｅｄ．；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．（１９９２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮＹ）；Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ ｅｄ．，（１９８５）ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩ；Ｇａｉｔ，ｅｄ．（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．米国特許第４，６８３，１９５号；Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（１９８７）Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ）（１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ（１９８４）Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ；ｔｈｅ ｔｒｅａｔｉｓｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）；Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｃａｌｏｓ ｅｄｓ．（１９８７）Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１５４ ａｎｄ １５５；Ｍａｙｅｒ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ，ｅｄｓ．（１９８７）Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ）；Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，（１９８６）Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＶ；Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，（１９８６））；Ｃｒｏｏｋｅ，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，２ｎｄ Ｅｄ．ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（２００７）；及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．）を参照。
【0173】
上記で引用された全ての参考文献、及び本明細書で引用された全ての参考文献は、その全体が参照により本明細書に援用される。
【0174】
以下の実施例は、限定としてではなく、例として提供するものである。
【実施例】
【0175】
実施例１．組換え抗原提示細胞の作成
Ｋ５６２細胞（ＡＴＣＣ）を、１０％のＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を含むＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ）で培養した。ヒト４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）、ＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０Ｌ）、膜結合ＩＬ－１５（ｍＩＬ－１５）、及び膜結合ＩＬ－２１（ｍＩＬ－２１）配列を新規に合成し、ＥＦ１Ａプロモーターを有するレンチウイルスプラスミドにクローニングしてＬｅｎｔｉＯｎｅレンチウイルスベクター（ＧｅｇＴｅｃｈ）にパッケージングした（図１Ａ～１Ｄ）。４－１ＢＢＬをＫ５６２細胞に形質導入することによってＲＡＰＣ１を作成し、４－１ＢＢＬ及びｍＩＬ－１５をＫ５６２細胞に形質導入することによってＲＡＰＣ２を作成し、４－１ＢＢＬ及びｍＩＬ－２１をＫ５６２細胞に形質導入することによってＲＡＰＣ３を作成し、４－１ＢＢＬ、ｍＩＬ－１５、ｍＩＬ－２１、及びＯＸ４０ＬをＫ５６２細胞に形質導入することによってＲＡＰＣ４を作成した。次に、ＭＡＣＳ磁気ビーズベースの細胞選別をメーカーの推奨に従って用いて、ＡＰＣ結合体化抗体及び抗ＡＰＣマイクロビーズで標識することにより、細胞を精製した（図１Ｅ）。４つ全ての株に対し、抗４－１ＢＢＬ抗体を用いて４－１ＢＢＬ発現細胞を選択した。回復培養を行った後、続いてＲＡＰＣ２及びＲＡＰＣ４に対し、抗ＩＬ－１５抗体を用いてＩＬ－１５発現細胞を選択し、ＲＡＰＣ３及びＲＡＰＣ４に対し、抗ＩＬ－２１抗体を用いてＩＬ－２１発現細胞を選択した。最後に、ＲＡＰＣ４に対し、抗ＯＸ４０Ｌ抗体を用いてＯＸ４０Ｌ発現細胞を選択した。各連続ラウンドの選択の後、ＲＡＰＣ細胞を培養下で回復させた。最初に、ＲＡＰＣを１５μｇ／ｍＬのマイトマイシンＣで４時間処理し、２回洗浄してから、末梢血（ＰＢ）由来及び臍帯血（ＣＢ）由来のガンマデルタＴ（ｇｄＴ）細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞と共インキュベートした。代替的に、いくつかの実験では、ＲＡＰＣを、ＮＫ細胞と共インキュベートする前にＸＲＡＤ－ｉＲ１６０（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ）で１００ＧｙのＸ線照射を行い、２５Ｇｙ／サイクルを４サイクル投与した。
Ｋ５６２細胞（ＡＴＣＣ）を、１０％のＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を含むＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ）で培養した。ヒト４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）、ＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０Ｌ）、膜結合ＩＬ－１５（ｍＩＬ－１５）、及び膜結合ＩＬ－２１（ｍＩＬ－２１）配列を新規に合成し、ＥＦ１Ａプロモーターを有するレンチウイルスプラスミドにクローニングしてＬｅｎｔｉＯｎｅレンチウイルスベクター（ＧｅｇＴｅｃｈ）にパッケージングした（図１Ａ～１Ｄ）。４－１ＢＢＬをＫ５６２細胞に形質導入することによってＲＡＰＣ１を作成し、４－１ＢＢＬ及びｍＩＬ－１５をＫ５６２細胞に形質導入することによってＲＡＰＣ２を作成し、４－１ＢＢＬ及びｍＩＬ－２１をＫ５６２細胞に形質導入することによってＲＡＰＣ３を作成し、４－１ＢＢＬ、ｍＩＬ－１５、ｍＩＬ－２１、及びＯＸ４０ＬをＫ５６２細胞に形質導入することによってＲＡＰＣ４を作成した。次に、ＭＡＣＳ磁気ビーズベースの細胞選別をメーカーの推奨に従って用いて、ＡＰＣ結合体化抗体及び抗ＡＰＣマイクロビーズで標識することにより、細胞を精製した（図１Ｅ）。４つ全ての株に対し、抗４－１ＢＢＬ抗体を用いて４－１ＢＢＬ発現細胞を選択した。回復培養を行った後、続いてＲＡＰＣ２及びＲＡＰＣ４に対し、抗ＩＬ－１５抗体を用いてＩＬ－１５発現細胞を選択し、ＲＡＰＣ３及びＲＡＰＣ４に対し、抗ＩＬ－２１抗体を用いてＩＬ－２１発現細胞を選択した。最後に、ＲＡＰＣ４に対し、抗ＯＸ４０Ｌ抗体を用いてＯＸ４０Ｌ発現細胞を選択した。各連続ラウンドの選択の後、ＲＡＰＣ細胞を培養下で回復させた。最初に、ＲＡＰＣを１５μｇ／ｍＬのマイトマイシンＣで４時間処理し、２回洗浄してから、末梢血（ＰＢ）由来及び臍帯血（ＣＢ）由来のガンマデルタＴ（ｇｄＴ）細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞と共インキュベートした。代替的に、いくつかの実験では、ＲＡＰＣを、ＮＫ細胞と共インキュベートする前にＸＲＡＤ－ｉＲ１６０（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ）で１００ＧｙのＸ線照射を行い、２５Ｇｙ／サイクルを４サイクル投与した。
【0176】
末梢血及び臍帯血由来のｇｄＴ細胞及びＮＫ細胞の分離及び拡大
【0177】
凍結末梢血（ＰＢ）または臍帯血（ＣＢ）（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）からの免疫磁性ビーズ分離を介してガンマデルタ（ｇｄ）Ｔ細胞をポジティブ選択し、ＮＫ細胞をネガティブ選択した。選択したｇｄＴ細胞及びＮＫ細胞を、１０％のＦＢＳ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を含むＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ）中で、マイトマイシンＣで前処理したＲＡＰＣ２またはＲＡＰＣ４フィーダー細胞と共インキュベートした。ｇｄＴ培養物にＩＬ－２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、１００ＩＵ／ｍＬ）及びＩＬ－２１（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、３０ｎｇ／ｍＬ）を補充し、ＮＫ培養物にＩＬ－２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、１００ＩＵ／ｍＬ）を補充した。細胞培養物は、ＩＬ－２及び／またはＩＬ－２１を補充した半分の体積の培地を２日ごとに交換することでリフレッシュした。細胞をＧ－Ｒｅｘ ６Ｍウェルプレート（Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ社）で４週間培養し、共インキュベートによるフィーダー細胞の活性化を７日ごとに繰り返した。
【0178】
追加実験におけるＮＫ細胞の拡大
【0179】
ＮＫ細胞を、照射したＲＡＰＣ１またはＲＡＰＣ４フィーダーと２：１の比率（ＲＡＰＣ：ＮＫ）で、１５％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を含むＩＭＤＭ（Ｇｉｂｃｏ）中で共インキュベートすることにより活性化した。ＲＡＰＣ１フィーダー用の培養基にＩＬ－２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、１０ｎｇ／ｍｌ）、ＩＬ－７（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、１０ｎｇ／ｍｌ）、及びＩＬ－１５（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、１０ｎｇ／ｍｌ）を補充し、ＲＡＰＣ４共インキュベート用の培養基にＩＬ－２（１０ｎｇ／ｍｌ）及びＩＬ－７（１０ｎｇ／ｍｌ）を補充した。細胞を３日間培養した、次いでＧ－Ｒｅｘ２４ウェルプレートでさらに４日間拡大し、培養の５日目に６０％の培地交換を行った。この活性化及び拡大のサイクルを３回繰り返し、最大で合計４ラウンドの活性化を行った。
【0180】
フローサイトメトリー
【0181】
マイトマイシンＣ処理ＲＡＰＣで活性化したＣＢ由来及びＰＢ由来のＮＫ細胞を抗ＣＤ３及び抗ＣＤ５６で染色し、ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ（ＢＤ）にかけた。追加実験のＮＫ細胞を、抗ＣＤ３、抗ＣＤ５６、抗ＣＤ１６、抗ＣＤ３０、抗ＣＤ９４、抗ＮＫＧ２Ｄ、または抗ＮＫｐ４６で染色し、フローサイトメトリーにより分析して、全てのマーカーの細胞表面発現を決定した。
【0182】
ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイ
【0183】
ＲＡＰＣで活性化したＣＢ由来及びＰＢ由来のｇｄＴ細胞及びＮＫ細胞を、Ｃａｐａｎ２（膵臓腺癌細胞）、ＧＳＵ（胃癌細胞）、ＨＣＴ１１６（大腸癌細胞）、ＨＴ５５（大腸癌細胞）、Ｋ５６２（慢性骨髄性白血病細胞）、Ｍｉａ Ｐａｃａ２（膵臓癌細胞）、Ｎａｌｍ６（急性リンパ芽球性白血病細胞）、ＯｖＣａｒ３（卵巣腺癌細胞）、Ｒａｊｉ（バーキットリンパ腫細胞）、またはＨＴ２９ＶＥＣ（大腸癌細胞）（ＡＴＣＣ）と１０：１、３：１、１：１、または０．３：１のエフェクター：標的比で２４時間共インキュベートした。殺滅パーセントを、フローサイトメトリーベースのアッセイによって各細胞株ごとに定量した。追加のＮＫ細胞実験では、ＲＡＰＣ４による第２ラウンドの活性化の６日目にＮＫ細胞を採取し、エフェクター：標的比を３：１、１：１、０．３：１、または０．１：１にしてＣａｐａｎ２、ＧＳＵ、ＨＣＴ１１６、Ｒａｊｉ、またはＨＵＶＥＣ細胞（ＡＴＣＣ）と２４時間共インキュベートした。殺滅パーセントをＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）により定量した。
【0184】
実施例２．ＲＡＰＣと共インキュベートした免疫細胞は特性が改善した
上述のアプローチを用いて、Ｋ５６２細胞をレンチウイルスベクターで形質導入し、４１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ｍＩＬ－１５、及び／またはｍＩＬ－２１について順次精製して、首尾よくＲＡＰＣ株のＲＡＰＣ１、ＲＡＰＣ２、ＲＡＰＣ３、及びＲＡＰＣ４を作成した（図１Ａ～１Ｅ）。ＰＢ由来またはＣＢ由来のＮＫ細胞をマイトマイシンＣ処理ＲＡＰＣ２またはＲＡＰＣ４細胞と共インキュベートした結果、連続４ラウンドの活性化及び拡大から細胞が１００倍超に拡大した（表２）。ＲＡＰＣ４と共インキュベートしたＣＢ由来ＮＫ細胞は、試験した全ての細胞の中で累積拡大が最も高く、６８３０倍であった。全体の細胞拡大がより高いことに加えて、ＲＡＰＣ４と共インキュベートしたＣＢ由来及びＰＢ由来のＮＫ細胞はいずれも、ＲＡＰＣ２細胞と共インキュベートした細胞よりも、ＮＫ細胞表面表現型（ＣＤ３－ＣＤ５６＋）を有する細胞のパーセンテージが高く（図２Ａ）、２４時間後のＮａｌｍ６及びＲａｊｉに対する平均細胞殺滅有効性も高かった（図２Ｂ）。
上述のアプローチを用いて、Ｋ５６２細胞をレンチウイルスベクターで形質導入し、４１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ｍＩＬ－１５、及び／またはｍＩＬ－２１について順次精製して、首尾よくＲＡＰＣ株のＲＡＰＣ１、ＲＡＰＣ２、ＲＡＰＣ３、及びＲＡＰＣ４を作成した（図１Ａ～１Ｅ）。ＰＢ由来またはＣＢ由来のＮＫ細胞をマイトマイシンＣ処理ＲＡＰＣ２またはＲＡＰＣ４細胞と共インキュベートした結果、連続４ラウンドの活性化及び拡大から細胞が１００倍超に拡大した（表２）。ＲＡＰＣ４と共インキュベートしたＣＢ由来ＮＫ細胞は、試験した全ての細胞の中で累積拡大が最も高く、６８３０倍であった。全体の細胞拡大がより高いことに加えて、ＲＡＰＣ４と共インキュベートしたＣＢ由来及びＰＢ由来のＮＫ細胞はいずれも、ＲＡＰＣ２細胞と共インキュベートした細胞よりも、ＮＫ細胞表面表現型（ＣＤ３－ＣＤ５６＋）を有する細胞のパーセンテージが高く（図２Ａ）、２４時間後のＮａｌｍ６及びＲａｊｉに対する平均細胞殺滅有効性も高かった（図２Ｂ）。
【0185】
【表2】
【0186】
ＰＢ由来またはＣＢ由来のｇｄＴ細胞をマイトマイシンＣ処理ＲＡＰＣ２またはＲＡＰＣ４細胞と共インキュベートした結果、連続４ラウンドの活性化及び拡大から細胞が１，０００倍以上に拡大し、４ラウンドの活性化及び拡大を通じて拡大が継続した（表３）。マイトマイシンＣ処理ＲＡＰＣ４で活性化したＣＢ由来のｇｄＴ細胞は、固有の細胞溶解活性を複数の細胞株に対し示した（図３）。
【0187】
【表3】
【0188】
追加実験では、ＮＫ細胞をＲＡＰＣ１細胞及びＲＡＰＣ４細胞と共インキュベートし、２５Ｇｙの照射を４サイクル投与して合計１００Ｇｙの被曝線量において照射した。これらの培養条件下では、２：１のＲＡＰＣ４：ＮＫ細胞比で共インキュベートしたＮＫ細胞は、連続４ラウンドの活性化及び拡大で１５，０００倍超に拡大し、ＲＡＰＣ１フィーダー細胞とともに共インキュベートしたＮＫ細胞により達成された拡大率よりも高かった（図４）。照射したＲＡＰＣ４細胞との共インキュベートによって活性化されたＮＫ細胞において細胞表面マーカーを評価した。活性化から７日後及び１１日後に評価したところ、この集団はＣＤ３及びＮＫｐ４６の発現は低く、ＮＫ細胞マーカーＣＤ５６、ＣＤ１６、ＣＤ３０、ＣＤ９４、及びＮＫＧ２Ｄの発現は高かった（図５）。次に、ＲＡＰＣ４フィーダーで活性化したＮＫ細胞を７つの異なるＣＡＲレンチウイルスベクターで形質導入した。細胞拡大は、形質導入細胞と非形質導入細胞（ＵＴＤ）との間でほぼ同じであった（表４）。さらに、照射したＲＡＰＣ４と共インキュベートしたＮＫ細胞は、含まれたＣＡＲに応じて、Ｃａｐａｎ２細胞（図６Ａ）、ＧＳＵ細胞（図６Ｂ）、及びＨＣＴ１１６細胞（図６Ｃ）を含む複数のがん細胞株のＣＡＲ媒介性殺滅を示した。
【0189】
【表4】
【0190】
ＲＡＰＣフィーダー細胞は、複数の供給源から単離したｇｄＴ細胞及びＮＫ細胞の両方を活性化し、そのロバストな拡大を支持した。ＲＡＰＣは、細胞増殖の遮断のためのマイトマイシンＣ処理またはＸ線照射を使用した後に、複数の培養条件下で使用したときに有効であった。ｇｄＴ細胞及びＮＫ細胞の両方が、予想された細胞表面表現型を示し、細胞殺滅アッセイにおいて有効であった。
【0191】
特許請求の範囲の解釈には、発明の概要及び要約のセクションではなく、発明を実施するための形態セクションを使用するように意図されていることを理解されたい。発明の概要及び要約のセクションは、本発明者（複数可）が企図する本開示の１つ以上の、ただし全てではない例示的な実施形態を記載している可能性があり、したがって、いかなる形においても本開示及び添付の特許請求の範囲を限定するようには意図されていない。
【0192】
上記の具体的な実施形態についての説明は、本開示の全般的な性質を十分に明らかにするものであるため、他者は、当技術分野の技量内の知識を適用することにより、過度な実験を伴わずに、本開示の全般的な概念から逸脱することなく、このような具体的な実施形態を様々な用途のために容易に変更及び／または適合させることができる。そのため、このような適合及び変更は、本明細書に提示する教示及び指針に基づき、本開示の実施形態の等価物の意味及び範囲内にあることが意図されている。本明細書の語法または用語法は、教示及び指導に鑑み、当業者により理解されるべきものであるように、本明細書での語法または用語法は、説明目的であり、かつ制限する目的ではないことを理解されたい。
【0193】
本開示の幅及び範囲は、上述の例示的な実施形態のいずれかによって限定されるべきではなく、以下の特許請求の範囲及びその等価物に従ってのみ定義されるべきである。
【0194】
本出願全体で引用されている全ての引用文献（参考文献、米国または外国の特許または特許出願、及びウェブサイトを含む）の内容は、あらゆる目的において、そこに引用されている文献と同じように、それらの全体が本明細書に記載されているかのように、参照により本明細書に明示的に援用される。任意の矛盾が生じた場合は、本明細書で文字通り開示する内容が優先される。
【0195】
様々な具体的な態様を例示し説明してきたが、上記の明細書は限定的なものではない。本発明（複数可）の趣旨及び範囲から逸脱することなく様々な変更が行われ得ることが理解されよう。本明細書を検討することで、当業者には多くの変形形態が明らかになるであろう。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【配列表】
【国際調査報告】