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特表2024-517270メラノコルチン受容体アゴニスト化合物の硫酸塩の結晶形およびその製造方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-04-19
(54)【発明の名称】メラノコルチン受容体アゴニスト化合物の硫酸塩の結晶形およびその製造方法
(51)【国際特許分類】
C07D 207/16 20060101AFI20240412BHJP
A61K 31/5377 20060101ALI20240412BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20240412BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20240412BHJP
A61P 15/10 20060101ALI20240412BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240412BHJP
【ＦＩ】
C07D207/16 CSP
A61K31/5377
A61P3/04
A61P3/10
A61P15/10
A61P29/00
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023568379
(86)(22)【出願日】2022-05-06
(85)【翻訳文提出日】2023-11-06
(86)【国際出願番号】 KR2022006475
(87)【国際公開番号】W WO2022235103
(87)【国際公開日】2022-11-10
(31)【優先権主張番号】10-2021-0059132
(32)【優先日】2021-05-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】500239823
【氏名又は名称】エルジー・ケム・リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100110364
【弁理士】
【氏名又は名称】実広 信哉
(74)【代理人】
【識別番号】100122161
【弁理士】
【氏名又は名称】渡部 崇
(72)【発明者】
【氏名】ジ・ユン・キム
(72)【発明者】
【氏名】スル・ア・チュン
(72)【発明者】
【氏名】スン・ウォン・キム
【テーマコード（参考）】
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086AA04
4C086BC73
4C086GA07
4C086GA12
4C086GA13
4C086GA15
4C086GA16
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA03
4C086ZA70
4C086ZA81
4C086ZB11
4C086ZC35
4C086ZC41
(57)【要約】
本発明は、化学式１で表される化合物の硫酸塩の結晶形、その製造方法、およびそれを含む医薬組成物に関する。本発明の化学式１で表される化合物の硫酸塩の結晶形は、ＸＲＰＤパターン、ＤＳＣプロファイル、および／またはＴＧＡプロファイルによって特性化されることができる。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記化学式１の化合物の硫酸塩の結晶形であって、Ｘ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）で、下記ｉ）またはｉｉ）に記載の回折角（２θ値）の特徴的なピークを有する、結晶形。
ｉ）３．２７±０．２°、５．７３±０．２°、６．６２±０．２°、９．５８±０．２°、１０．６８±０．２°、１４．５２±０．２°、１７．１１±０．２°、１７．７３±０．２°、１８．０８±０．２°、１８．３７±０．２°、１８．６１±０．２°、１８．９６±０．２°、１９．２８±０．２°、１９．５８±０．２°、１９．８５±０．２°、２０．１３±０．２°、２０．６９±０．２°、２１．３８±０．２°、２１．９４±０．２°、および２２．５３±０．２°から選択される５個以上の特徴的なピーク
ｉｉ）３．４２±０．２°、６．０５±０．２°、６．６９±０．２°、７．０１±０．２°、９．２９±０．２°、９．６７±０．２°、１０．０７±０．２°、１０．４０±０．２°、１２．６９±０．２°、１５．３１±０．２°、１６．４０±０．２°、１８．１５±０．２°、１８．５６±０．２°、１９．５０±０．２°、１９．６４±０．２°、１９．９３±０．２°、２０．１３±０．２°、２０．３３±０．２°、２０．８８±０．２°、および２８．１５±０．２°から選択される５個以上の特徴的なピーク
【化1】
Ｒ１は、Ｃ２－Ｃ５アルキルである。）
【請求項2】
前記Ｒ１は、Ｃ２～Ｃ４アルキルである、請求項１に記載の結晶形。
【請求項3】
前記化学式１の化合物が、N－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－N－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドである、請求項２に記載の結晶形。
【請求項4】
前記結晶形は、化学式１の化合物のアセテート溶媒和物の硫酸塩の結晶形である、請求項１に記載の結晶形。
【請求項5】
請求項１から４の何れか一項に記載の結晶形の製造方法であって、前記化学式１の化合物および硫酸が混合された混合溶液を製造するステップと、
前記混合溶液から結晶を得るステップと、を含む、結晶形の製造方法。
【請求項6】
上記で得られた結晶を乾燥して再結晶化するステップをさらに含む、請求項５に記載の結晶形の製造方法。
【請求項7】
前記混合溶液中の前記化学式１の化合物と前記硫酸のモル比が１：１～１：２である、請求項５に記載の結晶形の製造方法。
【請求項8】
前記混合溶液がアセテート系溶媒を含む、請求項５に記載の結晶形の製造方法。
【請求項9】
請求項１から４の何れか一項に記載の結晶形と、薬学的に許容可能な担体と、を含む医薬組成物。
【請求項10】
請求項１から４の何れか一項に記載の結晶形と、薬学的に許容可能な担体と、を含む、メラノコルチン－４受容体機能亢進用医薬組成物。
【請求項11】
前記組成物は、肥満、糖尿、炎症、または勃起不全の予防または治療用である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、２０２１年５月７日に出願された韓国特許出願第１０－２０２１－００５９１３２号に基づく優先権の利益を主張し、当該韓国特許出願の文献に開示された全ての内容は、本明細書の一部として組み込まれる。
本発明は、メラノコルチン受容体に対する優れた亢進活性を示す新規化合物の結晶形、その製造方法、およびそれを含む医薬組成物に関する。
本発明は、メラノコルチン受容体に対する優れた亢進活性を示す新規化合物の結晶形、その製造方法、およびそれを含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
レプチン（ｌｅｐｔｉｎ）タンパク質は、脂肪細胞（ａｄｉｐｏｃｙｔｅ）により分泌されるホルモンであり、体内脂肪の含量の増加に伴ってその分泌量が増加し、視床下部（ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ）で生成される様々な神経ペプチド（ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ）の機能を調節することで、食欲、体脂肪含量およびエネルギー代謝をはじめ、多様な生体内機能を調節する（Ｓｃｈｗａｒｔｚ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４０４，６６１－６７１（２０００））。レプチンタンパク質による食欲と体重調節のシグナル伝逹は、その下流（ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ）における多くの要因の調節により行われるが、その最も代表的なものが、メラノコルチン（ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ）、ＡｇＲＰ（ａｇｏｕｔｉｒｅｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ）、および神経ペプチドＹ（ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ Ｙ、ＮＰＹ）ホルモンである。
【0003】
生体内のカロリー過多による結果として、血液中のレプチンの濃度が増加すると、脳下垂体（ｐｉｔｕｉｔａｒｙ ｇｌａｎｄ）でのプロオピオメラノコルチン（ｐｒｏｏｐｉｏｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ；ＰＯＭＣ）タンパク質ホルモンの分泌は増加し、ＡｇＲＰとＮＰＹの生成は減少する。ＰＯＭＣ神経細胞から小さなペプチドホルモンであるａｌｐｈａ－ＭＳＨ（ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ）が生成され、このホルモンは、二次神経細胞のメラノコルチン－４受容体（Ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ－４ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＭＣ４Ｒ）アゴニスト（ａｇｏｎｉｓｔ）として食欲減少を究極的に誘導する。これに対し、カロリー不足による結果として、レプチンの濃度が減少すると、ＭＣ４Ｒ拮抗剤（ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）であるＡｇＲＰの発現が増加し、ＮＰＹの発現も増加して、究極的に食欲を増進させることになる。つまり、レプチンの変化によって、ａｌｐｈａ－ＭＳＨホルモンとＡｇＲＰホルモンは、ＭＣ４Ｒに対して亢進と拮抗の役割を行うことで、食欲調節に関与する。
【0004】
Ａｌｐｈａ－ＭＳＨホルモンは、ＭＣ４Ｒの他に、３つのＭＣＲ ｓｕｂｔｙｐｅにも結合し、多様な生理反応を誘導する。現在まで５種のＭＣＲ ｓｕｂｔｙｐｅが究明されており、そのうち、ＭＣ１Ｒは、主に皮膚細胞で発現してメラニン色素調節（ｓｋｉｎｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ）に関与し、ＭＣ２Ｒは、副腎（ａｄｒｅｎａｌ ｇｌａｎｄ）で主に発現し、グルココルチコイドホルモン（ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ ｈｏｒｍｏｎｅ）の生成に関与すると知られており、ＰＯＭＣに由来のＡＣＴＨ（ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｉｃ ｈｏｒｍｏｎｅ）のみがそのリガンドである。中枢神経系で主に発現するＭＣ３ＲとＭＣ４Ｒは、食欲、エネルギー代謝、および体内脂肪貯蔵効率の調節などに関与し、種々の組織で発現するＭＣ５Ｒは、外分泌機能（ｅｘｏｃｒｉｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ）を調節すると知られている（Ｗｉｋｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ ４２（５）３９３－４２０（２０００））。特に、ＭＣ４Ｒ受容体の活性化は、食欲の減少とエネルギー代謝の増加を誘導することで、体重を効率的に減少させる効果を示すことから、肥満治療剤の開発の主な作用点として立証されている（Ｒｅｖｉｅｗ：Ｗｉｋｂｅｒｇ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ３７５，２９５－３１０（１９９９））；Ｗｉｋｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ ４２（５）３９３－４２０（２０００）；Ｄｏｕｇｌａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍ ４５０，９３－１０９（２００２）；Ｏ’Ｒａｈｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ １０，３５１－３５２（２００４））。
【0005】
食欲と体重調節において、ＭＣ４Ｒの役割は、アグーチ（ａｇｏｕｔｉ）タンパク質の異常発現動物モデル（ａｇｏｕｔｉ ｍｏｕｓｅ）実験により、一次的に立証されている。アグーチマウス（Ａｇｏｕｔｉ ｍｏｕｓｅ）では、遺伝的変異によりアグーチタンパク質が中枢神経系でも高い濃度で発現し、視床下部でＭＣ４Ｒの拮抗剤（ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）の役割を行うことで、肥満を誘導することが明らかになっている（Ｙｅｎ，ＴＴ ｅｔ ａｌ．，ＦＡＳＥＢ Ｊ．８，４７９－４８８（１９９４）；Ｌｕ Ｄ．，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３７１，７９９－８０２（１９９４））。以後の研究結果では、視床下部神経で実際にアグーチタンパク質と類似のＡｇＲＰ（ａｇｏｕｔｉ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ）が発現することが観察され、これらも、ＭＣ４Ｒに対する拮抗剤として食欲調節に関与すると知られている（Ｓｈｕｔｔｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．，１１，５９３－６０２（１９９７）；Ｏｌｌｍａｎ，ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７８，１３５－１３８（１９９７））。
【0006】
生体内のＭＣ４Ｒアゴニストであるａｌｐｈａ－ＭＳＨを動物に対して大脳投与すると、食欲を減少させる効果が示され、これにＭＣ４Ｒ拮抗剤（ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）であるＳＨＵ９１１９（ｐｅｐｔｉｄｅ）またはＨＳ０１４（ｐｅｐｔｉｄｅ）を処理すると、食欲を再び増加させる現象が観察されている（Ｋａｓｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．２４５，９０－９３（１９９８））。それだけでなく、Ｍｅｌａｎｏｔａｎ ＩＩ（ＭＴＩＩ、Ａｃ－Ｎｌｅ－ｃ［Ａｓｐ－Ｈｉｓ－ＤＰｈｅ－Ａｒｇ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ］－ＮＨ２）と、その類似のアゴニストであるＨＰ２２８を用いた動物試験において、大脳、腹腔、または皮下投与の後に、食欲抑制、体重減少、エネルギー代謝の増加の効能などが確認されている（Ｔｈｉｅｌｅ Ｔ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２７４（１ Ｐｔ ２），Ｒ２４８－５４（１９９８）；Ｌｅｅ Ｍ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．ＦＡＳＥＢ Ｊ １２，Ａ５５２（１９９８）；Ｍｕｒｐｈｙ Ｂ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ａｐｐｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ ８９，２７３－８２（２０００））。これと逆に、代表的なＳＨＵ９１１９を動物に投与すると、顕著且つ持続的な飼料摂取および体重増加を示し、ＭＣＲアゴニストが肥満治療剤となることができるという薬理学的な証拠を提供する。ＭＴＩＩの投与時に著しく現れる食欲減少の効果が、ＭＣ４Ｒ ＫＯ（ｋｎｏｃｋ－ｏｕｔ）マウスでは現れないが、この実験結果は、食欲減少の効果が、主にＭＣ４Ｒの活性化により行われていることをさらに証明する（Ｍａｒｓｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ ２１，１１９－１２２（１９９９））。
【0007】
現在まで開発されている肥満治療剤は、中枢神経系に作用する食欲阻害剤が主な種類であり、中でも、神経シグナル伝達物質（ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ）の作用を調節する薬物がほとんどであった。その例としては、ｎｏｒａｄｒｅｎａｌｉｎ ａｇｅｎｔ（フェンテルミン（ｐｈｅｎｔｅｒｍｉｎｅ）とマジンドール（ｍａｚｉｎｄｏｌ））、ｓｅｒｏｔｏｎｅｒｇｉｃ ａｇｅｎｔであるフルオキセチン（ｆｌｕｏｘｅｔｉｎｅ）およびシブトラミン（ｓｉｂｕｔｒａｍｉｎｅ）などがある。しかしながら、前記神経シグナル伝達物質調節剤は、数多いサブタイプ受容体により、食欲阻害の他に、様々な生理作用にも広範囲な影響を及ぼす。したがって、前記調節剤は、各サブタイプ毎の選択性に欠けており、長期間投与した際に、様々な副作用が伴われるという大きい欠点がある。
【0008】
一方、メラノコルチンアゴニストは、神経シグナル伝達物質ではなく神経ペプチド（ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ）であり、ＭＣ４Ｒ遺伝子ＫＯマウスにおいてエネルギー代謝以外の他の機能は何れも正常である点からみて、他の生理機能への影響なしに、食欲阻害による体重減少のみを誘導することができるという点から、作用点としての利点を有する。特に、その受容体が、現在まで開発されている新薬作用点の中で最も成功的な範疇に属するＧ－タンパク質結合受容体（Ｇ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＧＰＣＲ）であって、サブタイプ受容体に対する選択性の確保が相対的に容易であるという点から、既存の作用点とは大きく区別される。
【0009】
かかるメラノコルチン受容体を作用点として活用した例として、国際公開ＷＯ２００８／００７９３０号およびＷＯ２０１０／０５６０２２号では、メラノコルチン受容体のアゴニストとしての化合物が開示されている。
【0010】
また、本発明の発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、メラノコルチン受容体、特に、メラノコルチン－４受容体（ＭＣ４Ｒ）に対する選択的な亢進活性に優れた下記化学式１の新規な化合物およびその製造方法を発明している（韓国特許出願第１０－２０１９－０１４１６４９号（２０１９．１１．０７．出願））。
【0011】
【化1】
【0012】
一方、薬学的に活性である成分の結晶構造は、その薬物の化学的安定性に影響を及ぼすことがある。異なる結晶化条件および貯蔵条件は、その化合物の結晶構造を変化させる可能性があり、時には、異なる形態の結晶形が伴われる生産を引き起こすことがある。一般に、無定形薬物生成物は、規則的な結晶構造を有しておらず、不良な生成物安定性、さらに小さい粒子サイズ、難しい濾過、凝集しやすさ、および不良な流動性といった、その他の欠陥を有することがある。したがって、生成物の多様な物性を改善させる必要がある。しかし、一般に、通常の技術者は、化合物がどのような条件で効果的に結晶化されるか、さらには、どのような結晶形が、再現性、安定性、生体利用率の点から有利であるかを予測することが困難であるため、一つの化合物に対して、種々の多様な結晶構造を研究する必要がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0013】
【特許文献1】国際特許出願公開ＷＯ２００８／００７９３０号
【特許文献2】国際特許出願公開ＷＯ２０１０／０５６０２２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0014】
本発明の目的は、メラノコルチン受容体、特に、メラノコルチン－４受容体（ＭＣ４Ｒ）に対する選択的な亢進活性に優れた新規な化合物の安定な結晶形、およびその製造方法を提供することにある。
【0015】
本発明の他の目的は、前記新規な化合物の安定な結晶形を含む医薬組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0016】
上記の目的を達成するために、
一側面において、本発明は、下記化学式１の化合物の硫酸塩の結晶形であって、Ｘ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）で、下記ｉ）またはｉｉ）に記載の回折角（２θ値）の特徴的なピークを有する結晶形を提供する：
ｉ）３．２７±０．２°、５．７３±０．２°、６．６２±０．２°、９．５８±０．２°、１０．６８±０．２°、１４．５２±０．２°、１７．１１±０．２°、１７．７３±０．２°、１８．０８±０．２°、１８．３７±０．２°、１８．６１±０．２°、１８．９６±０．２°、１９．２８±０．２°、１９．５８±０．２°、１９．８５±０．２°、２０．１３±０．２°、２０．６９±０．２°、２１．３８±０．２°、２１．９４±０．２°、および２２．５３±０．２°から選択される５個以上の特徴的なピーク；
ｉｉ）３．４２±０．２°、６．０５±０．２°、６．６９±０．２°、７．０１±０．２°、９．２９±０．２°、９．６７±０．２°、１０．０７±０．２°、１０．４０±０．２°、１２．６９±０．２°、１５．３１±０．２°、１６．４０±０．２°、１８．１５±０．２°、１８．５６±０．２°、１９．５０±０．２°、１９．６４±０．２°、１９．９３±０．２°、２０．１３±０．２°、２０．３３±０．２°、２０．８８±０．２°、および２８．１５±０．２°から選択される５個以上の特徴的なピーク。
一側面において、本発明は、下記化学式１の化合物の硫酸塩の結晶形であって、Ｘ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）で、下記ｉ）またはｉｉ）に記載の回折角（２θ値）の特徴的なピークを有する結晶形を提供する：
ｉ）３．２７±０．２°、５．７３±０．２°、６．６２±０．２°、９．５８±０．２°、１０．６８±０．２°、１４．５２±０．２°、１７．１１±０．２°、１７．７３±０．２°、１８．０８±０．２°、１８．３７±０．２°、１８．６１±０．２°、１８．９６±０．２°、１９．２８±０．２°、１９．５８±０．２°、１９．８５±０．２°、２０．１３±０．２°、２０．６９±０．２°、２１．３８±０．２°、２１．９４±０．２°、および２２．５３±０．２°から選択される５個以上の特徴的なピーク；
ｉｉ）３．４２±０．２°、６．０５±０．２°、６．６９±０．２°、７．０１±０．２°、９．２９±０．２°、９．６７±０．２°、１０．０７±０．２°、１０．４０±０．２°、１２．６９±０．２°、１５．３１±０．２°、１６．４０±０．２°、１８．１５±０．２°、１８．５６±０．２°、１９．５０±０．２°、１９．６４±０．２°、１９．９３±０．２°、２０．１３±０．２°、２０．３３±０．２°、２０．８８±０．２°、および２８．１５±０．２°から選択される５個以上の特徴的なピーク。
【0017】
【化2】
【0018】
前記化学式１中、
Ｒ１は、Ｃ２－Ｃ５アルキルである。
Ｒ１は、Ｃ２－Ｃ５アルキルである。
【0019】
前記化学式１の化合物は、不斉炭素中心と不斉軸または不斉平面を有し得るため、ｃｉｓまたはｔｒａｎｓ異性体、ＲまたはＳ異性体、ラセミ体、ジアステレオ異性体混合物および個々のジアステレオ異性体として存在することができ、これらの異性体および混合物は、何れも前記化学式１の化合物の範囲に含まれる。
【0020】
本明細書において、便宜上、他に断らない限り、化学式１の化合物は、化学式１の化合物、その異性体およびその溶媒和物を何れも含む意味で用いられる。
【0021】
本発明に係る一具体例において、前記化学式１のＲ１は、Ｃ２～Ｃ５アルキルである。本発明に係る他の具体例において、前記化学式１のＲ１は、直鎖状または分岐状のＣ２～Ｃ５アルキル、例えば、エチル、ｎ－プロピル、ｉｓｏ－プロピル、ｎ－ブチル、ｉｓｏ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、またはｔｅｒｔ－ブチルである。
【0022】
本発明に係る他の具体例において、前記化学式１のＲ１は、Ｃ２～Ｃ４アルキルである。本発明に係る他の具体例において、前記化学式１のＲ１は、直鎖状または分岐状のＣ２～Ｃ４アルキル、例えば、エチル、ｎ－プロピル、ｉｓｏ－プロピル、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチルである。具体的に、前記Ｒ１はｉｓｏ－プロピルであってもよい。
【0023】
本発明に係る一具体例において、前記溶媒和物（ｓｏｌｖａｔｅ）は、水和物；メタノール、エタノール、２－プロパノール、１，２－プロパンジオール、１，３－プロパンジオール、ｎ－ブタノール、１，４－ブタンジオール、ｔｅｒｔ－ブタノール、酢酸、アセトン、メチルアセテート、エチルアセテート、プロピルアセテート、ｎ－ブチルアセテート、ｔ－ブチルアセテート、イソブチルアセテート、メチルエチルケトン、２－ペンタノン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、クロロホルム、トルエン、およびこれらの混合物などの有機溶媒との溶媒和物を含んでもよい。
【0024】
本発明に係る一具体例において、前記化学式１の化合物の硫酸塩の結晶形は、Ｘ線粉末回折パターンで、３．２７±０．２°、５．７３±０．２°、６．６２±０．２°、９．５８±０．２°、１０．６８±０．２°、１４．５２±０．２°、１７．１１±０．２°、１７．７３±０．２°、１８．０８±０．２°、１８．３７±０．２°、１８．６１±０．２°、１８．９６±０．２°、１９．２８±０．２°、１９．５８±０．２°、１９．８５±０．２°、２０．１３±０．２°、２０．６９±０．２°、２１．３８±０．２°、２１．９４±０．２°、および２２．５３±０．２°から選択される５個以上、７個以上、９個以上、１０個以上、１３個以上、１５個以上、１７個以上、または２０個の特徴的なピークを有する、化学式１の化合物の硫酸塩の結晶形Ａであってもよい。
【0025】
本発明に係る一具体例の結晶形Ａは、Ｘ線粉末回折パターンで、３．２７±０．２°、５．７３±０．２°、６．６２±０．２°、９．５８±０．２°、１０．６８±０．２°、１４．５２±０．２°、１７．１１±０．２°、１７．７３±０．２°、１８．０８±０．２°、１８．３７±０．２°、１８．６１±０．２°、１８．９６±０．２°、１９．２８±０．２°、１９．５８±０．２°、１９．８５±０．２°、２０．１３±０．２°、２０．６９±０．２°、２１．３８±０．２°、２１．９４±０．２°、および２２．５３±０．２°の特徴的なピークを有してもよい。
【0026】
本発明に係る一具体例において、前記結晶形Ａは、図１に示したＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを有するものであってもよい。
【0027】
本発明に係る一具体例の結晶形Ａにおいて、前記化学式１の化合物は、溶媒和物、例えば、アセテート溶媒和物であってもよい。これにより、前記硫酸塩の結晶形Ａは、化学式１の化合物の溶媒和物であってもよい。これは、前記結晶形Ａの乾燥後、ＸＲＰＤパターンの変化が観察されることから確認されることができる。
【0028】
本発明に係る一具体例において、前記化学式１の化合物はアセテート溶媒和物であってもよい。この際、前記アセテート溶媒和物において、前記「アセテート」は、例えば、メチルアセテート、エチルアセテート、プロピルアセテート、ｎ－ブチルアセテート、ｔ－ブチルアセテート、およびイソブチルアセテートからなる群から選択される少なくとも一つを含んでもよいが、これに制限されるものではない。
【0029】
本発明に係る一具体例において、前記化学式１の化合物は、イソブチルアセテート（ｉＢｕＯＡｃ）溶媒和物であってもよい。
【0030】
本発明に係る他の具体例において、前記化学式１の化合物の硫酸塩の結晶形は、Ｘ線粉末回折パターンで、３．４２±０．２°、６．０５±０．２°、６．６９±０．２°、７．０１±０．２°、９．２９±０．２°、９．６７±０．２°、１０．０７±０．２°、１０．４０±０．２°、１２．６９±０．２°、１５．３１±０．２°、１６．４０±０．２°、１８．１５±０．２°、１８．５６±０．２°、１９．５０±０．２°、１９．６４±０．２°、１９．９３±０．２°、２０．１３±０．２°、２０．３３±０．２°、２０．８８±０．２°、および２８．１５±０．２°から選択される５個以上、７個以上、９個以上、１０個以上、１３個以上、１５個以上、１７個以上、または２０個の特徴的なピークを有する、化学式１の化合物の硫酸塩の結晶形Ｂであってもよい。
【0031】
本発明に係る他の具体例において、前記化学式１の化合物の硫酸塩の結晶形は、Ｘ線粉末回折パターンで、３．４２±０．２°、６．０５±０．２°、６．６９±０．２°、７．０１±０．２°、９．２９±０．２°、９．６７±０．２°、１０．０７±０．２°、１０．４０±０．２°、１２．６９±０．２°、１５．３１±０．２°、１６．４０±０．２°、１８．１５±０．２°、１８．５６±０．２°、１９．５０±０．２°、１９．６４±０．２°、１９．９３±０．２°、２０．１３±０．２°、２０．３３±０．２°、２０．８８±０．２°、および２８．１５±０．２°から選択される５個以上、７個以上、９個以上、１０個以上、１３個以上、１５個以上、１７個以上、または２０個の特徴的なピークを有する、化学式１の化合物の硫酸塩の結晶形Ｂであってもよい。
【0032】
本発明に係る他の具体例において、前記結晶形Ｂは、Ｘ線粉末回折パターンで、８．４７±０．２°、１０．８６±０．２°、１１．９９±０．２°、１２．２１±０．２°、１３．４７±０．２°、１５．０８±０．２°、１５．１９±０．２°、１６．８０±０．２°、１７．２５±０．２°、１７．４５±０．２°、１７．８６±０．２°、１８．７７±０．２°、２０．２６±０．２°、２０．４４±０．２°、２１．５１±０．２°、２１．８１±０．２°、２２．００±０．２°、２２．６６±０．２°、２４．９７±０．２°、および２５．３６±０．２°の特徴的なピークを有してもよい。
【0033】
本発明に係る他の具体例において、前記結晶形Ｂは、図２に示したＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを有するものであってもよい。
【0034】
本発明に係る他の具体例において、前記結晶形Ｂは、熱重量分析（ＴＧＡ）プロファイルで、約４０℃～１５０℃の温度範囲で１５％以下、１０％以下、９％以下、または８．９％の重量損失を有するものであってもよく、および／または、約２４８℃以後からは分解されるものであってもよい。
【0035】
本発明に係る他の具体例において、前記結晶形Ｂは、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）プロファイルで、前記ＴＧＡプロファイルで重量損失が現れる温度範囲内である約１００℃～１５０℃で吸熱ピークが示されるものであってもよい。また、約１４５℃で発熱ピークが示されるものであってもよい。
【0036】
本発明に係る他の具体例において、前記結晶形Ｂは、図３に示したＴＧＡ（上）および／またはＤＳＣ（下）プロファイルを有するものであってもよい。
【0037】
本発明に係る他の具体例において、前記結晶形Ｂは、ホットステージ顕微鏡検査（ＨＳＭ）の結果、約１３７℃～１６０℃、具体的に、１３７．７℃～１５５．１℃で溶融されるものであってもよい。
【0038】
【0039】
本発明に係る他の具体例において、前記結晶形Ｂは、水溶液で５６ｍｇ／ｍＬ超の溶解度を有するものであってもよい。
【0040】
本明細書において、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）分析は、ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ Ｘ’Ｐｅｒｔ Ｐｒｏ ＭＰＤ ｓｙｓｔｅｍ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｌｔｄ）を用いて行った結果を示す。
【0041】
熱重量分析（ＴＧＡ）および示差走査熱量（ＤＳＣ）分析は、ＴＧＡ／ＤＳＣ ３（Ｍｅｔｔｌｅｒ－Ｔｏｌｅｄｏ ＡＧ）を用いて行った結果を示す。
【0042】
ホットステージ顕微鏡検査（ＨＳＭ）は、Ｌｅｉｃａ ＤＭ ＬＰ顕微鏡にて、ＴＭＳ ９３コントローラーとともにＬｉｎｋｍａｎホットステージ（モデルＦＴＩＲ ６００）を用いて行った結果を示す。
【0043】
溶解度は、試料に水を添加し、完全に溶解されることを目視で確認した時に、試料に加えた水の最終体積を基準として測定した結果を示し、実際の試料の溶解度は、測定された溶解度より高い値を示し得る。
【0044】
１Ｈ ＮＭＲは、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｄｖａｎｃｅ ６００ ＭＨｚ ＮＭＲ分光器を用いて測定した結果を示す。
【0045】
本明細書において、温度値は±５℃の誤差を有し得る。
【0046】
本発明の結晶形は、粗製の化学式１の化合物、無定形の化学式１の化合物、化学式１の化合物の他の薬学的に許容可能な塩、または化学式１の化合物の他の結晶形と比べて、より高い純度を有することができ、物理的および化学的にさらに安定していることができる。
【0047】
さらに、前記化学式１の化合物の硫酸塩の結晶形は、公知のメラノコルチン－４－受容体アゴニストと比べて、メラノコルチン－４受容体に対する亢進能力、肥満、糖尿、炎症、勃起不全などの疾病の予防または治療効果がさらに優れるが、本発明の効果がこれに制限されるものではない。
【0048】
他の側面において、本発明は、前記化学式１の化合物および硫酸（Ｈ２ＳＯ４）が混合された混合溶液を製造するステップと、前記混合溶液から結晶を得るステップと、を含む、結晶形の製造方法を提供する。
【0049】
前記結晶形の製造のための、前記化学式１の化合物は、化学式１の化合物、その塩、その異性体、またはこれらの溶媒和物であってもよい。
【0050】
前記化学式１の化合物は、韓国特許出願第１０－２０１９－０１４１６４９号（２０１９．１１．０７．出願）の明細書に記載の製造方法により得られるものであってもよい。
【0051】
先ず、前記化学式１の化合物と硫酸、例えば、硫酸水溶液を混合して混合溶液を製造する。
【0052】
前記硫酸水溶液は、例えば、硫酸が９０ｗｔ％～９９ｗｔ％の含量、具体的に、９５ｗｔ％～９７ｗｔ％の含量で含まれているものであってもよいが、本発明がこれに制限されるものではない。
【0053】
本発明に係る一具体例において、前記混合溶液中に、前記化学式１の化合物に比べて硫酸がさらに過量のモル比で含まれてもよい。例えば、前記混合溶液中の、前記化学式１の化合物と前記硫酸のモル比は１：１～１：２であってもよい。
【0054】
前記化学式１の粗製の化合物と硫酸の混合は、常温、例えば、１５～３０℃、具体的に、２３～２８℃の温度で、攪拌なしにまたは攪拌下で行われてもよい。
【0055】
前記硫酸と混合する前に、前記化学式１の化合物は、好適な溶媒中に溶解されている状態で提供されてもよく、これにより、前記混合溶液は、化学式１の化合物が溶解されていた溶媒を含むものであってもよい。
【0056】
前記化学式１の化合物とともに提供される溶媒は、例えば、アセテート系溶媒であってもよい。前記アセテート系溶媒は、例えば、メチルアセテート、エチルアセテート、プロピルアセテート、ｎ－ブチルアセテート、ｔ－ブチルアセテート、およびイソブチルアセテートからなる群から選択される少なくとも一つを含んでもよいが、これに制限されるものではない。
【0057】
本発明に係る一具体例において、前記化学式１の化合物は、イソブチルアセテート溶媒に溶解されて存在してもよく、これにより、前記混合溶液はイソブチルアセテートを含むものであってもよい。
【0058】
次に、前記化学式１の化合物および硫酸が溶解された混合溶液から結晶を得る。
【0059】
前記結晶を得るステップは、例えば、溶液を冷却させるか、溶媒を蒸発させるか、逆溶媒を添加して過飽和させるか、スラリー転換などの方法を用いることで行われてもよい。
【0060】
本発明に係る一具体例において、前記結晶を得るステップは、混合溶液をスラリー化することを含んでもよい。
【0061】
前記混合溶液を攪拌することでスラリー化して固体を生成させ、生成された固体を濾過して化学式１の化合物の結晶を得ることができる。
【0062】
本発明に係る一具体例において、前記攪拌は、例えば、常温で１日～３日、例えば、１日間攪拌して行ってもよい。
【0063】
本発明に係る一具体例において、上記のように得られる結晶形は、前記化学式１の化合物の硫酸塩の結晶形であってもよい。
【0064】
本発明に係る他の具体例において、上記のように得られる結晶形は、前記硫酸と混合する前に化学式１の化合物が溶解されていた溶媒を含有することから、化学式１の化合物の溶媒和物の硫酸塩の結晶形であってもよい。
【0065】
本発明に係るさらに他の具体例において、上記のように得られる結晶形は、化学式１の化合物のイソブチルアセテート溶媒和物の硫酸塩の結晶形（本明細書において、「結晶形Ａ」ともいう）であってもよい。
【0066】
さらに他の側面において、本発明は、上記で得られた結晶を乾燥して再結晶化するステップをさらに含んでもよい。
【0067】
本発明に係る一具体例において、上記で得られた結晶形Ａを乾燥し、化学式１の化合物の新しい結晶形（本明細書において、「結晶形Ｂ」ともいう）を得ることができる。
【0068】
本発明に係る一具体例において、前記乾燥は、４０～６０℃、例えば、４５℃で真空乾燥することであってもよい。
【0069】
本発明に係る一具体例において、上記で得られた結晶形Ａを４５℃で真空乾燥し、化学式１の化合物の硫酸塩の新しい結晶形が製造されることができる。
【0070】
本発明に係る一具体例において、前記結晶形Ａと前記結晶形ＢのＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）の特徴ピークが異なることから、結晶形Ａから新しい結晶形Ｂが製造されることを確認することができる。
【0071】
上記のように得られた結晶形は、粗製の化学式１の化合物、化学式１の無定形化合物、化学式１の化合物の他の薬学的に許容可能な塩、または化学式１の任意の結晶形と比べて、より高い純度を有することができ、分解と吸湿が抑制され、物理的および化学的にさらに安定しているため、医薬組成物の製造に容易に適用することができ、溶解度が改善され、医薬品における崩壊および溶出速度を向上させ、医薬原料として好ましく用いることができる。
【0072】
さらに他の側面において、本発明は、（ｉ）前記結晶形と、（ｉｉ）薬学的に許容可能な担体と、を含む医薬組成物を提供する。
【0073】
本発明に係る結晶形は、メラノコルチン受容体、特に、メラノコルチン－４受容体（ＭＣ４Ｒ）に対して優れた亢進作用を示すため、本発明は、また、上述の結晶形を有効成分として含むメラノコルチン受容体の機能亢進用医薬組成物を提供することができる。具体的に、前記医薬組成物は、メラノコルチン－４受容体機能亢進用組成物であってもよい。
【0074】
また、前記医薬組成物は、肥満、糖尿、炎症、および勃起不全の予防または治療において優れた効果を奏することができるため、肥満の予防または治療用、糖尿の予防または治療用、炎症の予防または治療用、または勃起不全の予防または治療用組成物であってもよいが、本発明の用途がこれらの疾病のみに制限されるものではない。
【0075】
本明細書において、「担体（ｃａｒｒｉｅｒ）」とは、細胞または組織内への化合物の投入を容易にする化合物を意味する。
【0076】
本発明の結晶形を臨床的な目的で投与する時に、単一用量または分離用量で宿主に投与される総一日用量は、体重１ｋｇ当たりに０．０１～１０ｍｇの範囲が好ましいが、個々の患者における特異的な用量水準は、使用される特定の化合物、患者の体重、性別、健康状態、食餌、薬剤の投与時間、投与方法、排泄率、薬剤混合、および疾患の重症度などによって変わり得る。
【0077】
本発明の結晶形は、目的に応じて、如何なる経路でも投与可能である。例えば、本発明の結晶形は、注射または経口投与することができる。
【0078】
本発明の医薬組成物は、錠剤、丸剤、散剤、カプセル剤、粒剤、シロップ、またはエマルジョンなどの多様な経口投与の形態であってもよく、または、筋肉内、静脈内、または皮下投与のための注射用製剤などの非経口投与の形態であってもよい。
【0079】
注射用製剤は、公知の技術によって、適した分散剤、湿潤剤、懸濁剤、または賦形剤を用いて製造することができる。
【0080】
本発明の薬学的製剤に使用可能な賦形剤としては、甘味剤、結合剤、溶解剤、溶解補助剤、湿潤剤、乳化剤、等張化剤、吸着剤、崩壊剤、酸化防止剤、防腐剤、滑沢剤、充填剤、芳香剤などが含まれてもよいが、これに制限されない。例えば、賦形剤として、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、グリシン、シリカ、マグネシウムアルミニウムケイ酸塩、デンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、アルギニン酸、ナトリウムアルギン酸塩、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシルメチルセルロース、水、エタノール、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、オレンジエッセンス、ストロベリーエッセンス、バニラ香などが使用できる。
【0081】
本発明の医薬組成物が経口投与の形態である場合、用いられる担体の例としては、セルロース、ケイ酸カルシウム、トウモロコシデンプン、ラクトース、スクロース、デキストロース、リン酸カルシウム、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ゼラチン、タルクなどが挙げられるが、これに制限されない。
【0082】
本発明の医薬組成物が注射用製剤の形態である場合、前記担体としては、水、食塩水、ブドウ糖水溶液、疑似糖水溶液、アルコール、グリコール、エーテル、オイル、脂肪酸、脂肪酸エステル、グリセリドなどが挙げられるが、これに制限されない。
【0083】
さらに他の側面において、メラノコルチン受容体、特に、メラノコルチン－４受容体（ＭＣ４Ｒ）の機能亢進用途に用いるための上述の結晶形を提供する。
【0084】
一実施形態において、肥満、糖尿、炎症、または勃起不全の治療または予防用途に用いるための、上述の結晶形を提供する。
【0085】
さらに他の側面において、上述の結晶形を対象体（ｓｕｂｊｅｃｔ）に投与するステップを含む、メラノコルチン受容体、特に、メラノコルチン－４受容体（ＭＣ４Ｒ）の機能亢進方法を提供する。
【0086】
さらに他の側面において、上述の結晶形を対象体（ｓｕｂｊｅｃｔ）に投与するステップを含む、肥満、糖尿、炎症、または勃起不全を治療する方法を提供する。
【発明の効果】
【0087】
本発明に係る結晶形は、メラノコルチン受容体、特に、メラノコルチン－４受容体（ＭＣ４Ｒ）に対して優れた亢進作用を示すため、肥満、糖尿、炎症、および勃起不全の予防または治療に有用に利用されることができる。
【0088】
本発明に係る結晶形は、メラノコルチン－４受容体に対するｏｎ－ｔａｒｇｅｔ効果を示し、体重減少および食餌減少の効果を奏するとともに、不安感および憂鬱に影響を与えることなく、ｈＥＲＧ（ｈｕｍａｎ ｅｔｈｅｒ－ａ－ｇｏ－ｇｏ ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅ）阻害に対する副作用や突然変異の誘発といった安全性の問題なしに投与可能である。
【0089】
また、本発明に係る結晶形は、粗製の化学式１の化合物、化学式１の無定形化合物、化学式１の化合物の他の薬学的に許容可能な塩、または化学式１の任意の他の結晶形と比べて、純度、収率、物理的および化学的安定性に優れる。
【0090】
具体的に、前記結晶形は、化学式１の化合物、化学式１の無定形化合物、化学式１の化合物の他の薬学的に許容可能な塩、または化学式１の任意の他の結晶形と比べて、溶解性、貯蔵安定性、生成安定性に優れる。
【図面の簡単な説明】
【0091】
【図1】実施例１のＸＲＰＤ結果を示したグラフである。
【図2】実施例２のＸＲＰＤ結果を示したグラフである。
【図3】実施例２のＴＧＡ（上）およびＤＳＣ（下）結果を示したグラフである。
【図4】実施例２のＨＳＭ写真である（２０ｘ０．４０倍率）。
【図5】実施例２のＨＳＭ写真である（２０ｘ０．４０倍率）。
【図6】実施例２のＨＳＭ写真である（２０ｘ０．４０倍率）。
【発明を実施するための形態】
【0092】
以下、製造例および実施例により本発明をさらに具体的に説明する。但し、これらの実施例は、本発明の例示にすぎず、本発明の範囲がこれらによって限定されるものではない。
【0093】
製造例１：メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート塩酸塩の製造
下記ステップＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥの過程を経て標題化合物を得た。
【化3】
【0094】
ステップＡ：１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アジドピロリジン－１，２－ジカルボキシレートの製造
窒素下で、１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｒ）－４－（（メチルスルホニル）オキシ）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（４８．５ｇ、１５０ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド（２５０ｍｌ）に溶かし、アジ化ナトリウム（１９．５ｇ、３００ｍｌ）を添加した。８０℃で１６時間攪拌し、反応溶媒を減圧濃縮させた後、水を添加し、エチルアセテートで２回抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液と水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、粗製（ｃｒｕｄｅ）の１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アジドピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（３９．５９ｇ、９８％）を得て、精製せずに次のステップで使用した。
MS [M+H] = 271 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.43-4.37 (m, 1H), 4.35-4.27 (br, 1H), 3.77 (s, 1.8H), 3.76 (s, 1.2H), 3.73-3.66 (m, 1H), 3.44-3.38 (m, 1H), 2.63-2.49 (m, 1H), 2.19-2.11 (m, 1H), 1.50 (s, 4.5H), 1.44 (s, 4.5H)
窒素下で、１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｒ）－４－（（メチルスルホニル）オキシ）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（４８．５ｇ、１５０ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド（２５０ｍｌ）に溶かし、アジ化ナトリウム（１９．５ｇ、３００ｍｌ）を添加した。８０℃で１６時間攪拌し、反応溶媒を減圧濃縮させた後、水を添加し、エチルアセテートで２回抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液と水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、粗製（ｃｒｕｄｅ）の１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アジドピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（３９．５９ｇ、９８％）を得て、精製せずに次のステップで使用した。
MS [M+H] = 271 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.43-4.37 (m, 1H), 4.35-4.27 (br, 1H), 3.77 (s, 1.8H), 3.76 (s, 1.2H), 3.73-3.66 (m, 1H), 3.44-3.38 (m, 1H), 2.63-2.49 (m, 1H), 2.19-2.11 (m, 1H), 1.50 (s, 4.5H), 1.44 (s, 4.5H)
【0095】
ステップＢ：１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アミノピロリジン－１，２－ジカルボキシレートの製造
上記のステップＡで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アジドピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（２４．５９ｇ、９１．０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１８０ｍｌ）に溶かした後、０℃で１Ｍのトリメチルホスフィンテトラヒドロ溶液（１０９．２ｍｌ、１０９．２ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。同一温度で１時間攪拌した後、常温で３時間攪拌した。反応溶媒を減圧濃縮させた後、ジクロロメタン（１００ｍｌ）と水（１５０ｍｌ）を入れて３０分程度攪拌した。層分離し、ジクロロメタンでさらに１回抽出した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、粗製の１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アミノピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（２０．６２ｇ、９３％）を得て、精製せずに次のステップで使用した。
MS [M+H] = 245 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.27 (m, 1H), 3.77 (s, 1.8H), 3.76 (s,1.2H), 3.75-3.67 (m, 1H), 3.50-3.42 (m, 1H), 3.22-3.17 (m, 1H), 2.58-2.47 (m,1H), 1.82-1.71 (m, 1H), 1.48 (s, 4.5H), 1.42 (s, 4.5H)
上記のステップＡで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アジドピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（２４．５９ｇ、９１．０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１８０ｍｌ）に溶かした後、０℃で１Ｍのトリメチルホスフィンテトラヒドロ溶液（１０９．２ｍｌ、１０９．２ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。同一温度で１時間攪拌した後、常温で３時間攪拌した。反応溶媒を減圧濃縮させた後、ジクロロメタン（１００ｍｌ）と水（１５０ｍｌ）を入れて３０分程度攪拌した。層分離し、ジクロロメタンでさらに１回抽出した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、粗製の１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アミノピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（２０．６２ｇ、９３％）を得て、精製せずに次のステップで使用した。
MS [M+H] = 245 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.27 (m, 1H), 3.77 (s, 1.8H), 3.76 (s,1.2H), 3.75-3.67 (m, 1H), 3.50-3.42 (m, 1H), 3.22-3.17 (m, 1H), 2.58-2.47 (m,1H), 1.82-1.71 (m, 1H), 1.48 (s, 4.5H), 1.42 (s, 4.5H)
【0096】
ステップＣ：１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）アミノ）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレートの製造
上記のステップＢで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アミノピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（２０．６２ｇ、８４．４ｍｍｏｌ）をジクロロエタン（１５０ｍｌ）に溶かし、４－メチルシクロヘキサノン（９．５ｍｌ、１０１．３ｍｍｏｌ）を添加した。０℃でナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（２６．８ｇ、１２６．６ｍｍｏｌ）を添加し、常温で１６時間攪拌した。反応溶媒を減圧濃縮させて水を添加し、エチルアセテートで２回抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製して１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）アミノ）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（２２．９ｇ、８０％）を得た。
MS [M+H] = 341 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.26 (m, 1H), 3.76 (s, 1.8H), 3.75 (s, 1.2H), 3.78-3.71 (m, 1H), 3.49-3.40 (m, 1H), 3.22-3.16 (m, 1H), 2.69-2.60(br, 1H), 2.58-2.46 (m, 1H), 1.87-1.77 (m, 1H), 1.73-1.63 (m, 1H), 1.62-1.35(m, 8H), 1.48 (s, 4.5H), 1.42 (s, 4.5H), 0.96 (d, 3H)
上記のステップＢで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アミノピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（２０．６２ｇ、８４．４ｍｍｏｌ）をジクロロエタン（１５０ｍｌ）に溶かし、４－メチルシクロヘキサノン（９．５ｍｌ、１０１．３ｍｍｏｌ）を添加した。０℃でナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（２６．８ｇ、１２６．６ｍｍｏｌ）を添加し、常温で１６時間攪拌した。反応溶媒を減圧濃縮させて水を添加し、エチルアセテートで２回抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製して１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）アミノ）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（２２．９ｇ、８０％）を得た。
MS [M+H] = 341 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.26 (m, 1H), 3.76 (s, 1.8H), 3.75 (s, 1.2H), 3.78-3.71 (m, 1H), 3.49-3.40 (m, 1H), 3.22-3.16 (m, 1H), 2.69-2.60(br, 1H), 2.58-2.46 (m, 1H), 1.87-1.77 (m, 1H), 1.73-1.63 (m, 1H), 1.62-1.35(m, 8H), 1.48 (s, 4.5H), 1.42 (s, 4.5H), 0.96 (d, 3H)
【0097】
ステップＤ：１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレートの製造
上記のステップＣで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）アミノ）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（３７．２９ｇ、１０９．５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５００ｍｌ）に溶かし、トリエチルアミン（６１．１ｍｌ、４３８．１ｍｍｏｌ）を入れた後、０℃でイソブチリルクロリド（１１．７ｍｌ、２１９ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。常温で１６時間攪拌した後、反応溶媒を減圧濃縮させてから炭酸水素ナトリウム水溶液を添加し、エチルアセテートで２回抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液と水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製して１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（３８．７９ｇ、８６％）を得た。
MS [M+H] = 411 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.27 (m, 1H), 3.76 (s, 1.8H), 3.75 (s, 1.2H), 3.78-3.72 (m, 1H), 3.50-3.41 (m, 1H), 3.33-3.14 (m, 1H), 2.69-2.60 (m, 2H), 2.57-2.43 (m, 1H), 1.87-1.79 (m, 1H), 1.70-1.61 (m, 1H), 1.60-1.32 (m, 8H), 1.47 (s, 4.5H), 1.41 (s, 4.5H), 1.10 (dd, 6H), 0.99 (d, 3H)
上記のステップＣで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）アミノ）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（３７．２９ｇ、１０９．５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５００ｍｌ）に溶かし、トリエチルアミン（６１．１ｍｌ、４３８．１ｍｍｏｌ）を入れた後、０℃でイソブチリルクロリド（１１．７ｍｌ、２１９ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。常温で１６時間攪拌した後、反応溶媒を減圧濃縮させてから炭酸水素ナトリウム水溶液を添加し、エチルアセテートで２回抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液と水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製して１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（３８．７９ｇ、８６％）を得た。
MS [M+H] = 411 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.27 (m, 1H), 3.76 (s, 1.8H), 3.75 (s, 1.2H), 3.78-3.72 (m, 1H), 3.50-3.41 (m, 1H), 3.33-3.14 (m, 1H), 2.69-2.60 (m, 2H), 2.57-2.43 (m, 1H), 1.87-1.79 (m, 1H), 1.70-1.61 (m, 1H), 1.60-1.32 (m, 8H), 1.47 (s, 4.5H), 1.41 (s, 4.5H), 1.10 (dd, 6H), 0.99 (d, 3H)
【0098】
ステップＥ：メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート塩酸塩の製造
上記のステップＤで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（３４．０ｇ、８２．８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２００ｍｌ）に溶かした後、０℃で４Ｎの塩酸１，４－ジオキサン溶液（８２．８ｍｌ、３３１．３ｍｍｏｌ）を添加した。常温で６時間攪拌した後、反応溶媒を減圧濃縮して粗製の標題化合物（２８．７ｇ、９９％）を得て、精製せずに次のステップで使用した。
MS[M+H] = 311 (M+1)
上記のステップＤで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（３４．０ｇ、８２．８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２００ｍｌ）に溶かした後、０℃で４Ｎの塩酸１，４－ジオキサン溶液（８２．８ｍｌ、３３１．３ｍｍｏｌ）を添加した。常温で６時間攪拌した後、反応溶媒を減圧濃縮して粗製の標題化合物（２８．７ｇ、９９％）を得て、精製せずに次のステップで使用した。
MS[M+H] = 311 (M+1)
【0099】
製造例２：（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボン酸の製造
国際公開ＷＯ２００４／０９２１２６号に記載の方法により標題化合物を得た。
MS[ M+H] = 282 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.43-7.33 (m, 4H), 3.90-3.69 (m, 3H), 3.59 (dd, J = 11.2, 10.0 Hz, 1H), 3.29 (dd, J = 11.2, 11.2 Hz, 1H), 3.18-3.09 (m, 1H), 1.44 (s, 9H)
【化4】
MS[ M+H] = 282 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.43-7.33 (m, 4H), 3.90-3.69 (m, 3H), 3.59 (dd, J = 11.2, 10.0 Hz, 1H), 3.29 (dd, J = 11.2, 11.2 Hz, 1H), 3.18-3.09 (m, 1H), 1.44 (s, 9H)
【0100】
製造例３：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニルｌ）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドの製造（ＭＣ７０）
下記ステップＡ、Ｂ、およびＣの過程を経て標題化合物を得た。
【化5】
【0101】
ステップＡ：メチル（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレートの製造
製造例１で得られたメチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート塩酸塩（２８．７ｇ、８２．７３ｍｍｏｌ）、製造例２で得られた（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボン酸（２４．５ｇ、８６．８７ｍｍｏｌ）、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（２２．２ｇ、１１５．８３ｍｍｏｌ）、および１－ヒドロキシベンゾトリアゾールハイドレート（１５．７ｇ、１１５．８３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド（４００ｍｌ）に溶かし、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルエチルアミン（７２．０ｍｌ、４１３．６６ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。常温で１６時間攪拌し、反応溶媒を減圧濃縮させた後、０．５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を入れ、エチルアセテートで２回抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液と水で２回ずつ洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製してメチル（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート（４１．１９ｇ、８７％）を得た。
MS [M+H] = 575 (M+1)
製造例１で得られたメチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート塩酸塩（２８．７ｇ、８２．７３ｍｍｏｌ）、製造例２で得られた（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボン酸（２４．５ｇ、８６．８７ｍｍｏｌ）、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（２２．２ｇ、１１５．８３ｍｍｏｌ）、および１－ヒドロキシベンゾトリアゾールハイドレート（１５．７ｇ、１１５．８３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド（４００ｍｌ）に溶かし、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルエチルアミン（７２．０ｍｌ、４１３．６６ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。常温で１６時間攪拌し、反応溶媒を減圧濃縮させた後、０．５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を入れ、エチルアセテートで２回抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液と水で２回ずつ洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製してメチル（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート（４１．１９ｇ、８７％）を得た。
MS [M+H] = 575 (M+1)
【0102】
ステップＢ：（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボン酸の製造
上記のステップＡで得られたメチル（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート（３９．４ｇ、６８．６２ｍｍｏｌ）をメタノール（４５０ｍｌ）に溶かした後、６Ｎの水酸化ナトリウム水溶液（５７．２ｍｌ、３４３．０９ｍｍｏｌ）を添加した。常温で１６時間攪拌し、６Ｎの塩酸水溶液でｐＨ５程度に調整した後、反応溶液を減圧濃縮させた。濃縮液をジクロロメタンで溶かした後、溶解されていない固体は紙フィルターで濾過した。濾液を減圧濃縮し、粗製の標題化合物（３８．４ｇ、９９％）を得て、精製せずに次のステップで使用した。
MS [M+H] = 561 (M+1)
上記のステップＡで得られたメチル（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート（３９．４ｇ、６８．６２ｍｍｏｌ）をメタノール（４５０ｍｌ）に溶かした後、６Ｎの水酸化ナトリウム水溶液（５７．２ｍｌ、３４３．０９ｍｍｏｌ）を添加した。常温で１６時間攪拌し、６Ｎの塩酸水溶液でｐＨ５程度に調整した後、反応溶液を減圧濃縮させた。濃縮液をジクロロメタンで溶かした後、溶解されていない固体は紙フィルターで濾過した。濾液を減圧濃縮し、粗製の標題化合物（３８．４ｇ、９９％）を得て、精製せずに次のステップで使用した。
MS [M+H] = 561 (M+1)
【0103】
ステップＣ：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドの製造
上記のステップＢで得られた（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボン酸（３８．４ｇ、６８．６０ｍｍｏｌ）、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（１８．４ｇ、９６．０４ｍｍｏｌ）、および１－ヒドロキシベンゾトリアゾールハイドレート（１３．０ｇ、９６．０４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド（２００ｍｌ）に溶かした後、順にモルホリン（５．９ｍｌ、６８．８０ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ’－ジイソプロピルエチルアミン（５９．７ｍｌ、３４３．０２ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。常温で１６時間攪拌し、反応溶液を減圧濃縮させた後、０．５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を入れ、エチルアセテートで２回抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液と水で２回ずつ洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製してＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド（３７．０５ｇ、８６％、ＭＣ７０）を得た。
MS [M+H] = 630 (M+1)
上記のステップＢで得られた（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボン酸（３８．４ｇ、６８．６０ｍｍｏｌ）、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（１８．４ｇ、９６．０４ｍｍｏｌ）、および１－ヒドロキシベンゾトリアゾールハイドレート（１３．０ｇ、９６．０４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド（２００ｍｌ）に溶かした後、順にモルホリン（５．９ｍｌ、６８．８０ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ’－ジイソプロピルエチルアミン（５９．７ｍｌ、３４３．０２ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。常温で１６時間攪拌し、反応溶液を減圧濃縮させた後、０．５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を入れ、エチルアセテートで２回抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液と水で２回ずつ洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製してＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド（３７．０５ｇ、８６％、ＭＣ７０）を得た。
MS [M+H] = 630 (M+1)
【0104】
実施例１：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドの硫酸塩の結晶形Ａの製造
前記製造例３で製造した化合物（ＭＣ７０）をイソブチルアセテートに入れた溶液に、ＭＣ７０と硫酸が１：１の当量となるように９５ｗｔ％～９７ｗｔ％の硫酸水溶液を添加した。その後、常温で１日間攪拌し、標題化合物（ＭＣ７０の硫酸塩の結晶形Ａ）を得た。
前記製造例３で製造した化合物（ＭＣ７０）をイソブチルアセテートに入れた溶液に、ＭＣ７０と硫酸が１：１の当量となるように９５ｗｔ％～９７ｗｔ％の硫酸水溶液を添加した。その後、常温で１日間攪拌し、標題化合物（ＭＣ７０の硫酸塩の結晶形Ａ）を得た。
【0105】
実施例２：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドの硫酸塩の結晶形Ｂの製造
前記実施例１に係る結晶形Ａを４５℃で真空乾燥し、標題化合物（ＭＣ７０の硫酸塩の結晶形Ｂ）を得た。
前記実施例１に係る結晶形Ａを４５℃で真空乾燥し、標題化合物（ＭＣ７０の硫酸塩の結晶形Ｂ）を得た。
【0106】
比較例１：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドのリン酸塩の結晶形の製造
前記製造例３で製造した化合物（ＭＣ７０）を１－プロピルアルコールに溶解し、８５％リン酸水溶液をＭＣ７０：Ｈ３ＰＯ４のモル比が１：１となるように添加し、攪拌して混合溶液を製造した。混合溶液が清い（ｃｌｅａｒ）状態の溶液に維持され続けることが確認された。混合溶液にヘプタンを追加し、常温で４日間攪拌した。その後、攪拌温度をそれぞれ４０℃、５０℃、６０℃に高めながら、順に１日、１７日、および６日間追加攪拌したが、結晶が形成されなかった。
前記製造例３で製造した化合物（ＭＣ７０）を１－プロピルアルコールに溶解し、８５％リン酸水溶液をＭＣ７０：Ｈ３ＰＯ４のモル比が１：１となるように添加し、攪拌して混合溶液を製造した。混合溶液が清い（ｃｌｅａｒ）状態の溶液に維持され続けることが確認された。混合溶液にヘプタンを追加し、常温で４日間攪拌した。その後、攪拌温度をそれぞれ４０℃、５０℃、６０℃に高めながら、順に１日、１７日、および６日間追加攪拌したが、結晶が形成されなかった。
【0107】
比較例２：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドのリン酸塩の結晶形の製造
前記製造例３で製造した化合物（ＭＣ７０）をエタノールに溶解し、８５％リン酸水溶液をＭＣ７０：Ｈ３ＰＯ４のモル比が１：１となるようにリン酸水溶液を添加し、攪拌して混合溶液を製造した。混合溶液が清い（ｃｌｅａｒ）状態の溶液に維持され続けることが確認された。混合溶液にシクロヘキサンを追加し、常温で４日間攪拌した。その後、攪拌温度をそれぞれ３５℃、５０℃、６０℃に高めながら、順に４日、３日、および３日間追加攪拌したが、結晶が形成されなかった。
前記製造例３で製造した化合物（ＭＣ７０）をエタノールに溶解し、８５％リン酸水溶液をＭＣ７０：Ｈ３ＰＯ４のモル比が１：１となるようにリン酸水溶液を添加し、攪拌して混合溶液を製造した。混合溶液が清い（ｃｌｅａｒ）状態の溶液に維持され続けることが確認された。混合溶液にシクロヘキサンを追加し、常温で４日間攪拌した。その後、攪拌温度をそれぞれ３５℃、５０℃、６０℃に高めながら、順に４日、３日、および３日間追加攪拌したが、結晶が形成されなかった。
【0108】
比較例３：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドのリン酸塩の結晶形の製造
前記製造例３で製造した化合物（ＭＣ７０）をアセトンに溶解し、８５％リン酸水溶液をＭＣ７０：Ｈ３ＰＯ４のモル比が１：８となるようにリン酸水溶液を過量で添加し、攪拌して混合溶液を製造した。混合溶液が清い（ｃｌｅａｒ）状態の溶液に維持され続けることが確認された。混合溶液にヘキサンを追加し、常温で４日間攪拌した。その後、攪拌温度をそれぞれ４０℃、５０℃、６０℃に高めながら、順に３日、１日、および１日間追加攪拌したが、結晶が形成されなかった。
前記製造例３で製造した化合物（ＭＣ７０）をアセトンに溶解し、８５％リン酸水溶液をＭＣ７０：Ｈ３ＰＯ４のモル比が１：８となるようにリン酸水溶液を過量で添加し、攪拌して混合溶液を製造した。混合溶液が清い（ｃｌｅａｒ）状態の溶液に維持され続けることが確認された。混合溶液にヘキサンを追加し、常温で４日間攪拌した。その後、攪拌温度をそれぞれ４０℃、５０℃、６０℃に高めながら、順に３日、１日、および１日間追加攪拌したが、結晶が形成されなかった。
【0109】
実験例１．ＸＲＰＤ評価
粉末ＸＲＰＤ回折パターンは、Ｃｕ放射線入射ビームを用いるＰａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｘｐｅｒｔ Ｐｒｏ ＭＰＤ回折計を用いて行った。約２０－３０ｍｇの試料を、ガラスサンプルホルダーに平らな表面を有するように均して載せた後、機器のジェネレータを４５ｋＶ（ａｃｃｅｒａｔｉｏｎ ｖｏｌｔａｇｅ）、４０ｍＡ（ｆｉｌａｍｅｎｔ ｅｍｉｓｓｉｏｎ）に設定し、ｒｅｆｌｅｃｔｉｏｎ ｍｏｄｅ（ｎｏｔ－ｓｐｉｎ）で測定した。０．０２６°のステップサイズ（ｓｔｅｐ ｓｉｚｅ）および５１秒のＴｉｍｅ ｐｅｒ ｓｔｅｐの条件で、４～４０°の範囲のブラッグ角（２θ）を測定した。
粉末ＸＲＰＤ回折パターンは、Ｃｕ放射線入射ビームを用いるＰａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｘｐｅｒｔ Ｐｒｏ ＭＰＤ回折計を用いて行った。約２０－３０ｍｇの試料を、ガラスサンプルホルダーに平らな表面を有するように均して載せた後、機器のジェネレータを４５ｋＶ（ａｃｃｅｒａｔｉｏｎ ｖｏｌｔａｇｅ）、４０ｍＡ（ｆｉｌａｍｅｎｔ ｅｍｉｓｓｉｏｎ）に設定し、ｒｅｆｌｅｃｔｉｏｎ ｍｏｄｅ（ｎｏｔ－ｓｐｉｎ）で測定した。０．０２６°のステップサイズ（ｓｔｅｐ ｓｉｚｅ）および５１秒のＴｉｍｅ ｐｅｒ ｓｔｅｐの条件で、４～４０°の範囲のブラッグ角（２θ）を測定した。
【0110】
図１に示したスペクトルから確認されるように、実施例１に係る硫酸塩の結晶形Ａは結晶性物質であることが確認され、ＸＲＰＤの具体的な値は下記表１に示した。
【0111】
【表1-1】
【表1-2】
【0112】
図２に示したスペクトルから確認されるように、実施例２に係る硫酸塩の結晶形Ｂは結晶性物質であることが確認され、ＸＲＰＤの具体的な値は下記表２に示した。
【0113】
【表2】
【0114】
【0115】
実験例２．熱重量分析（ＴＧＡ）および示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
ＴＧＡおよびＤＳＣのコンボ分析は、Ｍｅｔｔｌｅｒ－Ｔｏｌｅｄｏ ＴＧＡ／ＤＳＣ３＋分析器を用いて行った。試料を開放型アルミニウムパンに入れ、パンを密封した後、蓋を突き抜き、ＴＧ溶鉱炉に挿入した。窒素下、１０Ｋ／ｍｉｎの速度で、２５℃から最大３５０℃まで加熱して測定した。
ＴＧＡおよびＤＳＣのコンボ分析は、Ｍｅｔｔｌｅｒ－Ｔｏｌｅｄｏ ＴＧＡ／ＤＳＣ３＋分析器を用いて行った。試料を開放型アルミニウムパンに入れ、パンを密封した後、蓋を突き抜き、ＴＧ溶鉱炉に挿入した。窒素下、１０Ｋ／ｍｉｎの速度で、２５℃から最大３５０℃まで加熱して測定した。
【0116】
図３から確認されるように、ＴＧＡ分析の結果、実施例２に係る硫酸塩の結晶形Ｂは、約４０℃～１５０℃の温度範囲で約８．９ｗｔ％の重量損失が観察され、約２４８℃以後からは分解されることが確認された。
【0117】
また、ＤＳＣ分析の結果、実施例２に係る硫酸塩の結晶形Ｂは、約１０４℃（ｐｅａｋ）および１３６℃（ｐｅａｋ）で吸熱ピークが観察され、約１４５℃（ｐｅａｋ）で発熱ピークが観察された。
【0118】
実験例３．ホットステージ顕微鏡検査（ＨＳＭ）
Ｌｅｉｃａ ＤＭ ＬＰ顕微鏡にて、ＴＭＳ ９３コントローラーとともにＬｉｎｋｍａｎホットステージ（モデルＦＴＩＲ ６００）を用いてＨＳＭを測定した。サンプルは、１０ｘ０．２２または２０ｘ０．４０の倍率で、交差偏光板付きのラムダプレートを用いて観察した。サンプルはカバーガラス上に載置し、別のカバーガラスをサンプル上に載置した後、ステージが加熱されならが、サンプルを視覚的に観察した。ガスの放出を調べるために、場合によって、サンプルにミネラルオイルを一滴追加することができ、画像はＳＰＯＴソフトウェアｖ．４．５．９とともに、ＳＰＯ Ｉｎｓｉｇｈｔカラーデジタルカメラを用いて取り込んだ。
Ｌｅｉｃａ ＤＭ ＬＰ顕微鏡にて、ＴＭＳ ９３コントローラーとともにＬｉｎｋｍａｎホットステージ（モデルＦＴＩＲ ６００）を用いてＨＳＭを測定した。サンプルは、１０ｘ０．２２または２０ｘ０．４０の倍率で、交差偏光板付きのラムダプレートを用いて観察した。サンプルはカバーガラス上に載置し、別のカバーガラスをサンプル上に載置した後、ステージが加熱されならが、サンプルを視覚的に観察した。ガスの放出を調べるために、場合によって、サンプルにミネラルオイルを一滴追加することができ、画像はＳＰＯＴソフトウェアｖ．４．５．９とともに、ＳＰＯ Ｉｎｓｉｇｈｔカラーデジタルカメラを用いて取り込んだ。
【0119】
【0120】
実験例４．溶解度の評価
試料に水を添加し、完全に溶解されることを目視で確認した時に、試料に加えた水の最終体積を基準として溶解度を測定した。
試料に水を添加し、完全に溶解されることを目視で確認した時に、試料に加えた水の最終体積を基準として溶解度を測定した。
【0121】
評価結果、実施例２に係る硫酸塩の結晶形Ｂの溶解度は、５６ｍｇ／ｍＬを超えることが確認された。上述のように、実施例２に係る結晶形Ｂは、水に対する溶解性に優れていることが確認された。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【手続補正書】
【提出日】2023-11-06
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、２０２１年５月７日に出願された韓国特許出願第１０－２０２１－００５９１３２号に基づく優先権の利益を主張し、当該韓国特許出願の文献に開示された全ての内容は、本明細書の一部として組み込まれる。
本発明は、メラノコルチン受容体に対する優れた亢進活性を示す新規化合物の結晶形、その製造方法、およびそれを含む医薬組成物に関する。
本発明は、メラノコルチン受容体に対する優れた亢進活性を示す新規化合物の結晶形、その製造方法、およびそれを含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
レプチン（ｌｅｐｔｉｎ）タンパク質は、脂肪細胞（ａｄｉｐｏｃｙｔｅ）により分泌されるホルモンであり、体内脂肪の含量の増加に伴ってその分泌量が増加し、視床下部（ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ）で生成される様々な神経ペプチド（ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ）の機能を調節することで、食欲、体脂肪含量およびエネルギー代謝をはじめ、多様な生体内機能を調節する（Ｓｃｈｗａｒｔｚ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４０４，６６１－６７１（２０００））。レプチンタンパク質による食欲と体重調節のシグナル伝逹は、その下流（ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ）における多くの要因の調節により行われるが、その最も代表的なものが、メラノコルチン（ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ）、ＡｇＲＰ（ａｇｏｕｔｉｒｅｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ）、および神経ペプチドＹ（ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ Ｙ、ＮＰＹ）ホルモンである。
【0003】
生体内のカロリー過多による結果として、血液中のレプチンの濃度が増加すると、脳下垂体（ｐｉｔｕｉｔａｒｙ ｇｌａｎｄ）でのプロオピオメラノコルチン（ｐｒｏｏｐｉｏｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ；ＰＯＭＣ）タンパク質ホルモンの分泌は増加し、ＡｇＲＰとＮＰＹの生成は減少する。ＰＯＭＣ神経細胞から小さなペプチドホルモンであるａｌｐｈａ－ＭＳＨ（ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ）が生成され、このホルモンは、二次神経細胞のメラノコルチン－４受容体（Ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ－４ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＭＣ４Ｒ）アゴニスト（ａｇｏｎｉｓｔ）として食欲減少を究極的に誘導する。これに対し、カロリー不足による結果として、レプチンの濃度が減少すると、ＭＣ４Ｒ拮抗剤（ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）であるＡｇＲＰの発現が増加し、ＮＰＹの発現も増加して、究極的に食欲を増進させることになる。つまり、レプチンの変化によって、ａｌｐｈａ－ＭＳＨホルモンとＡｇＲＰホルモンは、ＭＣ４Ｒに対して亢進と拮抗の役割を行うことで、食欲調節に関与する。
【0004】
Ａｌｐｈａ－ＭＳＨホルモンは、ＭＣ４Ｒの他に、３つのＭＣＲ ｓｕｂｔｙｐｅにも結合し、多様な生理反応を誘導する。現在まで５種のＭＣＲ ｓｕｂｔｙｐｅが究明されており、そのうち、ＭＣ１Ｒは、主に皮膚細胞で発現してメラニン色素調節（ｓｋｉｎｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ）に関与し、ＭＣ２Ｒは、副腎（ａｄｒｅｎａｌ ｇｌａｎｄ）で主に発現し、グルココルチコイドホルモン（ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ ｈｏｒｍｏｎｅ）の生成に関与すると知られており、ＰＯＭＣに由来のＡＣＴＨ（ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｉｃ ｈｏｒｍｏｎｅ）のみがそのリガンドである。中枢神経系で主に発現するＭＣ３ＲとＭＣ４Ｒは、食欲、エネルギー代謝、および体内脂肪貯蔵効率の調節などに関与し、種々の組織で発現するＭＣ５Ｒは、外分泌機能（ｅｘｏｃｒｉｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ）を調節すると知られている（Ｗｉｋｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ ４２（５）３９３－４２０（２０００））。特に、ＭＣ４Ｒ受容体の活性化は、食欲の減少とエネルギー代謝の増加を誘導することで、体重を効率的に減少させる効果を示すことから、肥満治療剤の開発の主な作用点として立証されている（Ｒｅｖｉｅｗ：Ｗｉｋｂｅｒｇ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ３７５，２９５－３１０（１９９９））；Ｗｉｋｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ ４２（５）３９３－４２０（２０００）；Ｄｏｕｇｌａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍ ４５０，９３－１０９（２００２）；Ｏ’Ｒａｈｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ １０，３５１－３５２（２００４））。
【0005】
食欲と体重調節において、ＭＣ４Ｒの役割は、アグーチ（ａｇｏｕｔｉ）タンパク質の異常発現動物モデル（ａｇｏｕｔｉ ｍｏｕｓｅ）実験により、一次的に立証されている。アグーチマウス（Ａｇｏｕｔｉ ｍｏｕｓｅ）では、遺伝的変異によりアグーチタンパク質が中枢神経系でも高い濃度で発現し、視床下部でＭＣ４Ｒの拮抗剤（ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）の役割を行うことで、肥満を誘導することが明らかになっている（Ｙｅｎ，ＴＴ ｅｔ ａｌ．，ＦＡＳＥＢ Ｊ．８，４７９－４８８（１９９４）；Ｌｕ Ｄ．，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３７１，７９９－８０２（１９９４））。以後の研究結果では、視床下部神経で実際にアグーチタンパク質と類似のＡｇＲＰ（ａｇｏｕｔｉ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ）が発現することが観察され、これらも、ＭＣ４Ｒに対する拮抗剤として食欲調節に関与すると知られている（Ｓｈｕｔｔｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．，１１，５９３－６０２（１９９７）；Ｏｌｌｍａｎ，ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７８，１３５－１３８（１９９７））。
【0006】
生体内のＭＣ４Ｒアゴニストであるａｌｐｈａ－ＭＳＨを動物に対して大脳投与すると、食欲を減少させる効果が示され、これにＭＣ４Ｒ拮抗剤（ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）であるＳＨＵ９１１９（ｐｅｐｔｉｄｅ）またはＨＳ０１４（ｐｅｐｔｉｄｅ）を処理すると、食欲を再び増加させる現象が観察されている（Ｋａｓｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．２４５，９０－９３（１９９８））。それだけでなく、Ｍｅｌａｎｏｔａｎ ＩＩ（ＭＴＩＩ、Ａｃ－Ｎｌｅ－ｃ［Ａｓｐ－Ｈｉｓ－ＤＰｈｅ－Ａｒｇ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ］－ＮＨ２）と、その類似のアゴニストであるＨＰ２２８を用いた動物試験において、大脳、腹腔、または皮下投与の後に、食欲抑制、体重減少、エネルギー代謝の増加の効能などが確認されている（Ｔｈｉｅｌｅ Ｔ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２７４（１ Ｐｔ ２），Ｒ２４８－５４（１９９８）；Ｌｅｅ Ｍ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．ＦＡＳＥＢ Ｊ １２，Ａ５５２（１９９８）；Ｍｕｒｐｈｙ Ｂ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ａｐｐｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ ８９，２７３－８２（２０００））。これと逆に、代表的なＳＨＵ９１１９を動物に投与すると、顕著且つ持続的な飼料摂取および体重増加を示し、ＭＣＲアゴニストが肥満治療剤となることができるという薬理学的な証拠を提供する。ＭＴＩＩの投与時に著しく現れる食欲減少の効果が、ＭＣ４Ｒ ＫＯ（ｋｎｏｃｋ－ｏｕｔ）マウスでは現れないが、この実験結果は、食欲減少の効果が、主にＭＣ４Ｒの活性化により行われていることをさらに証明する（Ｍａｒｓｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ ２１，１１９－１２２（１９９９））。
【0007】
現在まで開発されている肥満治療剤は、中枢神経系に作用する食欲阻害剤が主な種類であり、中でも、神経シグナル伝達物質（ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ）の作用を調節する薬物がほとんどであった。その例としては、ｎｏｒａｄｒｅｎａｌｉｎ ａｇｅｎｔ（フェンテルミン（ｐｈｅｎｔｅｒｍｉｎｅ）とマジンドール（ｍａｚｉｎｄｏｌ））、ｓｅｒｏｔｏｎｅｒｇｉｃ ａｇｅｎｔであるフルオキセチン（ｆｌｕｏｘｅｔｉｎｅ）およびシブトラミン（ｓｉｂｕｔｒａｍｉｎｅ）などがある。しかしながら、前記神経シグナル伝達物質調節剤は、数多いサブタイプ受容体により、食欲阻害の他に、様々な生理作用にも広範囲な影響を及ぼす。したがって、前記調節剤は、各サブタイプ毎の選択性に欠けており、長期間投与した際に、様々な副作用が伴われるという大きい欠点がある。
【0008】
一方、メラノコルチン受容体アゴニストは、神経シグナル伝達物質ではなく神経ペプチド（ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ）であり、ＭＣ４Ｒ遺伝子ＫＯマウスにおいてエネルギー代謝以外の他の機能は何れも正常である点からみて、他の生理機能への影響なしに、食欲阻害による体重減少のみを誘導することができるという点から、作用点としての利点を有する。特に、その受容体が、現在まで開発されている新薬作用点の中で最も成功的な範疇に属するＧ－タンパク質結合受容体（Ｇ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＧＰＣＲ）であって、サブタイプ受容体に対する選択性の確保が相対的に容易であるという点から、既存の作用点とは大きく区別される。
【0009】
かかるメラノコルチン受容体を作用点として活用した例として、国際公開ＷＯ２００８／００７９３０号およびＷＯ２０１０／０５６０２２号では、メラノコルチン受容体のアゴニストとしての化合物が開示されている。
【0010】
また、本発明の発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、メラノコルチン受容体、特に、メラノコルチン－４受容体（ＭＣ４Ｒ）に対する選択的な亢進活性に優れた下記化学式１の新規な化合物およびその製造方法を発明している（韓国特許出願第１０－２０１９－０１４１６４９号（２０１９．１１．０７．出願））。
【0011】
【化1】
【0012】
一方、薬学的に活性である成分の結晶構造は、その薬物の化学的安定性に影響を及ぼすことがある。異なる結晶化条件および貯蔵条件は、その化合物の結晶構造を変化させる可能性があり、時には、異なる形態の結晶形が伴われる生産を引き起こすことがある。一般に、無定形薬物生成物は、規則的な結晶構造を有しておらず、不良な生成物安定性、さらに小さい粒子サイズ、難しい濾過、凝集しやすさ、および不良な流動性といった、その他の欠陥を有することがある。したがって、生成物の多様な物性を改善させる必要がある。しかし、一般に、通常の技術者は、化合物がどのような条件で効果的に結晶化されるか、さらには、どのような結晶形が、再現性、安定性、生体利用率の点から有利であるかを予測することが困難であるため、一つの化合物に対して、種々の多様な結晶構造を研究する必要がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0013】
【特許文献1】国際特許出願公開ＷＯ２００８／００７９３０号
【特許文献2】国際特許出願公開ＷＯ２０１０／０５６０２２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0014】
本発明の目的は、メラノコルチン受容体、特に、メラノコルチン－４受容体（ＭＣ４Ｒ）に対する選択的な亢進活性に優れた新規な化合物の安定な結晶形、およびその製造方法を提供することにある。
【0015】
本発明の他の目的は、前記新規な化合物の安定な結晶形を含む医薬組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0016】
上記の目的を達成するために、
一側面において、本発明は、下記化学式１の化合物の硫酸塩の結晶形であって、Ｘ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）で、下記ｉ）またはｉｉ）に記載の回折角（２θ値）の特徴的なピークを有する結晶形を提供する：
ｉ）３．２７±０．２°、５．７３±０．２°、６．６２±０．２°、９．５８±０．２°、１０．６８±０．２°、１４．５２±０．２°、１７．１１±０．２°、１７．７３±０．２°、１８．０８±０．２°、１８．３７±０．２°、１８．６１±０．２°、１８．９６±０．２°、１９．２８±０．２°、１９．５８±０．２°、１９．８５±０．２°、２０．１３±０．２°、２０．６９±０．２°、２１．３８±０．２°、２１．９４±０．２°、および２２．５３±０．２°から選択される５個以上の特徴的なピーク；
ｉｉ）３．４２±０．２°、６．０５±０．２°、６．６９±０．２°、７．０１±０．２°、９．２９±０．２°、９．６７±０．２°、１０．０７±０．２°、１０．４０±０．２°、１２．６９±０．２°、１５．３１±０．２°、１６．４０±０．２°、１８．１５±０．２°、１８．５６±０．２°、１９．５０±０．２°、１９．６４±０．２°、１９．９３±０．２°、２０．１３±０．２°、２０．３３±０．２°、２０．８８±０．２°、および２８．１５±０．２°から選択される５個以上の特徴的なピーク。
一側面において、本発明は、下記化学式１の化合物の硫酸塩の結晶形であって、Ｘ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）で、下記ｉ）またはｉｉ）に記載の回折角（２θ値）の特徴的なピークを有する結晶形を提供する：
ｉ）３．２７±０．２°、５．７３±０．２°、６．６２±０．２°、９．５８±０．２°、１０．６８±０．２°、１４．５２±０．２°、１７．１１±０．２°、１７．７３±０．２°、１８．０８±０．２°、１８．３７±０．２°、１８．６１±０．２°、１８．９６±０．２°、１９．２８±０．２°、１９．５８±０．２°、１９．８５±０．２°、２０．１３±０．２°、２０．６９±０．２°、２１．３８±０．２°、２１．９４±０．２°、および２２．５３±０．２°から選択される５個以上の特徴的なピーク；
ｉｉ）３．４２±０．２°、６．０５±０．２°、６．６９±０．２°、７．０１±０．２°、９．２９±０．２°、９．６７±０．２°、１０．０７±０．２°、１０．４０±０．２°、１２．６９±０．２°、１５．３１±０．２°、１６．４０±０．２°、１８．１５±０．２°、１８．５６±０．２°、１９．５０±０．２°、１９．６４±０．２°、１９．９３±０．２°、２０．１３±０．２°、２０．３３±０．２°、２０．８８±０．２°、および２８．１５±０．２°から選択される５個以上の特徴的なピーク。
【0017】
【化2】
【0018】
前記化学式１中、
Ｒ１は、Ｃ２－Ｃ５アルキルである。
Ｒ１は、Ｃ２－Ｃ５アルキルである。
【0019】
前記化学式１の化合物は、不斉炭素中心と不斉軸または不斉平面を有し得るため、ｃｉｓまたはｔｒａｎｓ異性体、ＲまたはＳ異性体、ラセミ体、ジアステレオ異性体混合物および個々のジアステレオ異性体として存在することができ、これらの異性体および混合物は、何れも前記化学式１の化合物の範囲に含まれる。
【0020】
本明細書において、便宜上、他に断らない限り、化学式１の化合物は、化学式１の化合物、その異性体およびその溶媒和物を何れも含む意味で用いられる。
【0021】
本発明に係る一具体例において、前記化学式１のＲ１は、Ｃ２～Ｃ５アルキルである。本発明に係る他の具体例において、前記化学式１のＲ１は、直鎖状または分岐状のＣ２～Ｃ５アルキル、例えば、エチル、ｎ－プロピル、ｉｓｏ－プロピル、ｎ－ブチル、ｉｓｏ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、またはｔｅｒｔ－ブチルである。
【0022】
本発明に係る他の具体例において、前記化学式１のＲ１は、Ｃ２～Ｃ４アルキルである。本発明に係る他の具体例において、前記化学式１のＲ１は、直鎖状または分岐状のＣ２～Ｃ４アルキル、例えば、エチル、ｎ－プロピル、ｉｓｏ－プロピル、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチルである。具体的に、前記Ｒ１はｉｓｏ－プロピルであってもよい。
【0023】
本発明に係る一具体例において、前記溶媒和物（ｓｏｌｖａｔｅ）は、水和物；メタノール、エタノール、２－プロパノール、１，２－プロパンジオール、１，３－プロパンジオール、ｎ－ブタノール、１，４－ブタンジオール、ｔｅｒｔ－ブタノール、酢酸、アセトン、メチルアセテート、エチルアセテート、プロピルアセテート、ｎ－ブチルアセテート、ｔ－ブチルアセテート、イソブチルアセテート、メチルエチルケトン、２－ペンタノン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、クロロホルム、トルエン、およびこれらの混合物などの有機溶媒との溶媒和物を含んでもよい。
【0024】
本発明に係る一具体例において、前記化学式１の化合物の硫酸塩の結晶形は、Ｘ線粉末回折パターンで、３．２７±０．２°、５．７３±０．２°、６．６２±０．２°、９．５８±０．２°、１０．６８±０．２°、１４．５２±０．２°、１７．１１±０．２°、１７．７３±０．２°、１８．０８±０．２°、１８．３７±０．２°、１８．６１±０．２°、１８．９６±０．２°、１９．２８±０．２°、１９．５８±０．２°、１９．８５±０．２°、２０．１３±０．２°、２０．６９±０．２°、２１．３８±０．２°、２１．９４±０．２°、および２２．５３±０．２°から選択される５個以上、７個以上、９個以上、１０個以上、１３個以上、１５個以上、１７個以上、または２０個の特徴的なピークを有する、化学式１の化合物の硫酸塩の結晶形Ａであってもよい。
【0025】
本発明に係る一具体例の結晶形Ａは、Ｘ線粉末回折パターンで、３．２７±０．２°、５．７３±０．２°、６．６２±０．２°、９．５８±０．２°、１０．６８±０．２°、１４．５２±０．２°、１７．１１±０．２°、１７．７３±０．２°、１８．０８±０．２°、１８．３７±０．２°、１８．６１±０．２°、１８．９６±０．２°、１９．２８±０．２°、１９．５８±０．２°、１９．８５±０．２°、２０．１３±０．２°、２０．６９±０．２°、２１．３８±０．２°、２１．９４±０．２°、および２２．５３±０．２°の特徴的なピークを有してもよい。
【0026】
本発明に係る一具体例において、前記結晶形Ａは、図１に示したＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを有するものであってもよい。
【0027】
本発明に係る一具体例の結晶形Ａにおいて、前記化学式１の化合物は、溶媒和物、例えば、アセテート溶媒和物であってもよい。これにより、前記硫酸塩の結晶形Ａは、化学式１の化合物の溶媒和物であってもよい。これは、前記結晶形Ａの乾燥後、ＸＲＰＤパターンの変化が観察されることから確認されることができる。
【0028】
本発明に係る一具体例において、前記化学式１の化合物はアセテート溶媒和物であってもよい。この際、前記アセテート溶媒和物において、前記「アセテート」は、例えば、メチルアセテート、エチルアセテート、プロピルアセテート、ｎ－ブチルアセテート、ｔ－ブチルアセテート、およびイソブチルアセテートからなる群から選択される少なくとも一つを含んでもよいが、これに制限されるものではない。
【0029】
本発明に係る一具体例において、前記化学式１の化合物は、イソブチルアセテート（ｉＢｕＯＡｃ）溶媒和物であってもよい。
【0030】
本発明に係る他の具体例において、前記化学式１の化合物の硫酸塩の結晶形は、Ｘ線粉末回折パターンで、３．４２±０．２°、６．０５±０．２°、６．６９±０．２°、７．０１±０．２°、９．２９±０．２°、９．６７±０．２°、１０．０７±０．２°、１０．４０±０．２°、１２．６９±０．２°、１５．３１±０．２°、１６．４０±０．２°、１８．１５±０．２°、１８．５６±０．２°、１９．５０±０．２°、１９．６４±０．２°、１９．９３±０．２°、２０．１３±０．２°、２０．３３±０．２°、２０．８８±０．２°、および２８．１５±０．２°から選択される５個以上、７個以上、９個以上、１０個以上、１３個以上、１５個以上、１７個以上、または２０個の特徴的なピークを有する、化学式１の化合物の硫酸塩の結晶形Ｂであってもよい。
【0031】
本発明に係る他の具体例において、前記結晶形Ｂは、Ｘ線粉末回折パターンで、３．４２±０．２°、６．０５±０．２°、６．６９±０．２°、７．０１±０．２°、９．２９±０．２°、９．６７±０．２°、１０．０７±０．２°、１０．４０±０．２°、１２．６９±０．２°、１５．３１±０．２°、１６．４０±０．２°、１８．１５±０．２°、１８．５６±０．２°、１９．５０±０．２°、１９．６４±０．２°、１９．９３±０．２°、２０．１３±０．２°、２０．３３±０．２°、２０．８８±０．２°、および２８．１５±０．２°の特徴的なピークを有してもよい。
【0032】
本発明に係る他の具体例において、前記結晶形Ｂは、図２に示したＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを有するものであってもよい。
【0033】
本発明に係る他の具体例において、前記結晶形Ｂは、熱重量分析（ＴＧＡ）プロファイルで、約４０℃～１５０℃の温度範囲で１５％以下、１０％以下、９％以下、または８．９％の重量損失を有するものであってもよく、および／または、約２４８℃以後からは分解されるものであってもよい。
【0034】
本発明に係る他の具体例において、前記結晶形Ｂは、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）プロファイルで、前記ＴＧＡプロファイルで重量損失が現れる温度範囲内である約１００℃～１５０℃で吸熱ピークが示されるものであってもよい。また、約１４５℃で発熱ピークが示されるものであってもよい。
【0035】
本発明に係る他の具体例において、前記結晶形Ｂは、図３に示したＴＧＡ（上）および／またはＤＳＣ（下）プロファイルを有するものであってもよい。
【0036】
本発明に係る他の具体例において、前記結晶形Ｂは、ホットステージ顕微鏡検査（ＨＳＭ）の結果、約１３７℃～１６０℃、具体的に、１３７．７℃～１５５．１℃で溶融されるものであってもよい。
【0037】
【0038】
本発明に係る他の具体例において、前記結晶形Ｂは、水溶液で５６ｍｇ／ｍＬ超の溶解度を有するものであってもよい。
【0039】
本明細書において、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）分析は、ＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌ Ｘ’Ｐｅｒｔ Ｐｒｏ ＭＰＤ ｓｙｓｔｅｍ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｌｔｄ）を用いて行った結果を示す。
【0040】
熱重量分析（ＴＧＡ）および示差走査熱量（ＤＳＣ）分析は、ＴＧＡ／ＤＳＣ ３（Ｍｅｔｔｌｅｒ－Ｔｏｌｅｄｏ ＡＧ）を用いて行った結果を示す。
【0041】
ホットステージ顕微鏡検査（ＨＳＭ）は、Ｌｅｉｃａ ＤＭ ＬＰ顕微鏡にて、ＴＭＳ ９３コントローラーとともにＬｉｎｋｍａｎホットステージ（モデルＦＴＩＲ ６００）を用いて行った結果を示す。
【0042】
溶解度は、試料に水を添加し、完全に溶解されることを目視で確認した時に、試料に加えた水の最終体積を基準として測定した結果を示し、実際の試料の溶解度は、測定された溶解度より高い値を示し得る。
【0043】
１Ｈ ＮＭＲは、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｄｖａｎｃｅ ６００ ＭＨｚ ＮＭＲ分光器を用いて測定した結果を示す。
【0044】
本明細書において、温度値は±５℃の誤差を有し得る。
【0045】
本発明の結晶形は、粗製の化学式１の化合物、無定形の化学式１の化合物、化学式１の化合物の他の薬学的に許容可能な塩、または化学式１の化合物の他の結晶形と比べて、より高い純度を有することができ、物理的および化学的にさらに安定していることができる。
【0046】
さらに、前記化学式１の化合物の硫酸塩の結晶形は、公知のメラノコルチン－４－受容体アゴニストと比べて、メラノコルチン－４受容体に対する亢進能力、肥満、糖尿、炎症、勃起不全などの疾病の予防または治療効果がさらに優れるが、本発明の効果がこれに制限されるものではない。
【0047】
他の側面において、本発明は、前記化学式１の化合物および硫酸（Ｈ２ＳＯ４）が混合された混合溶液を製造するステップと、前記混合溶液から結晶を得るステップと、を含む、結晶形の製造方法を提供する。
【0048】
前記結晶形の製造のための、前記化学式１の化合物は、化学式１の化合物、その塩、その異性体、またはこれらの溶媒和物であってもよい。
【0049】
前記化学式１の化合物は、韓国特許出願第１０－２０１９－０１４１６４９号（２０１９．１１．０７．出願）の明細書に記載の製造方法により得られるものであってもよい。
【0050】
先ず、前記化学式１の化合物と硫酸、例えば、硫酸水溶液を混合して混合溶液を製造する。
【0051】
前記硫酸水溶液は、例えば、硫酸が９０ｗｔ％～９９ｗｔ％の含量、具体的に、９５ｗｔ％～９７ｗｔ％の含量で含まれているものであってもよいが、本発明がこれに制限されるものではない。
【0052】
本発明に係る一具体例において、前記混合溶液中に、前記化学式１の化合物に比べて硫酸がさらに過量のモル比で含まれてもよい。例えば、前記混合溶液中の、前記化学式１の化合物と前記硫酸のモル比は１：１～１：２であってもよい。
【0053】
前記化学式１の粗製の化合物と硫酸の混合は、常温、例えば、１５～３０℃、具体的に、２３～２８℃の温度で、攪拌なしにまたは攪拌下で行われてもよい。
【0054】
前記硫酸と混合する前に、前記化学式１の化合物は、好適な溶媒中に溶解されている状態で提供されてもよく、これにより、前記混合溶液は、化学式１の化合物が溶解されていた溶媒を含むものであってもよい。
【0055】
前記化学式１の化合物とともに提供される溶媒は、例えば、アセテート系溶媒であってもよい。前記アセテート系溶媒は、例えば、メチルアセテート、エチルアセテート、プロピルアセテート、ｎ－ブチルアセテート、ｔ－ブチルアセテート、およびイソブチルアセテートからなる群から選択される少なくとも一つを含んでもよいが、これに制限されるものではない。
【0056】
本発明に係る一具体例において、前記化学式１の化合物は、イソブチルアセテート溶媒に溶解されて存在してもよく、これにより、前記混合溶液はイソブチルアセテートを含むものであってもよい。
【0057】
次に、前記化学式１の化合物および硫酸が溶解された混合溶液から結晶を得る。
【0058】
前記結晶を得るステップは、例えば、溶液を冷却させるか、溶媒を蒸発させるか、逆溶媒を添加して過飽和させるか、スラリー転換などの方法を用いることで行われてもよい。
【0059】
本発明に係る一具体例において、前記結晶を得るステップは、混合溶液をスラリー化することを含んでもよい。
【0060】
前記混合溶液を攪拌することでスラリー化して固体を生成させ、生成された固体を濾過して化学式１の化合物の結晶を得ることができる。
【0061】
本発明に係る一具体例において、前記攪拌は、例えば、常温で１日～３日、例えば、１日間攪拌して行ってもよい。
【0062】
本発明に係る一具体例において、上記のように得られる結晶形は、前記化学式１の化合物の硫酸塩の結晶形であってもよい。
【0063】
本発明に係る他の具体例において、上記のように得られる結晶形は、前記硫酸と混合する前に化学式１の化合物が溶解されていた溶媒を含有することから、化学式１の化合物の溶媒和物の硫酸塩の結晶形であってもよい。
【0064】
本発明に係るさらに他の具体例において、上記のように得られる結晶形は、化学式１の化合物のイソブチルアセテート溶媒和物の硫酸塩の結晶形（本明細書において、「結晶形Ａ」ともいう）であってもよい。
【0065】
さらに他の側面において、本発明は、上記で得られた結晶を乾燥して再結晶化するステップをさらに含んでもよい。
【0066】
本発明に係る一具体例において、上記で得られた結晶形Ａを乾燥し、化学式１の化合物の新しい結晶形（本明細書において、「結晶形Ｂ」ともいう）を得ることができる。
【0067】
本発明に係る一具体例において、前記乾燥は、４０～６０℃、例えば、４５℃で真空乾燥することであってもよい。
【0068】
本発明に係る一具体例において、上記で得られた結晶形Ａを４５℃で真空乾燥し、化学式１の化合物の硫酸塩の新しい結晶形が製造されることができる。
【0069】
本発明に係る一具体例において、前記結晶形Ａと前記結晶形ＢのＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）の特徴ピークが異なることから、結晶形Ａから新しい結晶形Ｂが製造されることを確認することができる。
【0070】
上記のように得られた結晶形は、粗製の化学式１の化合物、化学式１の無定形化合物、化学式１の化合物の他の薬学的に許容可能な塩、または化学式１の任意の結晶形と比べて、より高い純度を有することができ、分解と吸湿が抑制され、物理的および化学的にさらに安定しているため、医薬組成物の製造に容易に適用することができ、溶解度が改善され、医薬品における崩壊および溶出速度を向上させ、医薬原料として好ましく用いることができる。
【0071】
さらに他の側面において、本発明は、（ｉ）前記結晶形と、（ｉｉ）薬学的に許容可能な担体と、を含む医薬組成物を提供する。
【0072】
本発明に係る結晶形は、メラノコルチン受容体、特に、メラノコルチン－４受容体（ＭＣ４Ｒ）に対して優れた亢進作用を示すため、本発明は、また、上述の結晶形を有効成分として含むメラノコルチン受容体の機能亢進用医薬組成物を提供することができる。具体的に、前記医薬組成物は、メラノコルチン－４受容体機能亢進用組成物であってもよい。
【0073】
また、前記医薬組成物は、肥満、糖尿、炎症、および勃起不全の予防または治療において優れた効果を奏することができるため、肥満の予防または治療用、糖尿の予防または治療用、炎症の予防または治療用、または勃起不全の予防または治療用組成物であってもよいが、本発明の用途がこれらの疾病のみに制限されるものではない。
【0074】
本明細書において、「担体（ｃａｒｒｉｅｒ）」とは、細胞または組織内への化合物の投入を容易にする化合物を意味する。
【0075】
本発明の結晶形を臨床的な目的で投与する時に、単一用量または分離用量で宿主に投与される総一日用量は、体重１ｋｇ当たりに０．０１～１０ｍｇの範囲が好ましいが、個々の患者における特異的な用量水準は、使用される特定の化合物、患者の体重、性別、健康状態、食餌、薬剤の投与時間、投与方法、排泄率、薬剤混合、および疾患の重症度などによって変わり得る。
【0076】
本発明の結晶形は、目的に応じて、如何なる経路でも投与可能である。例えば、本発明の結晶形は、注射または経口投与することができる。
【0077】
本発明の医薬組成物は、錠剤、丸剤、散剤、カプセル剤、粒剤、シロップ、またはエマルジョンなどの多様な経口投与の形態であってもよく、または、筋肉内、静脈内、または皮下投与のための注射用製剤などの非経口投与の形態であってもよい。
【0078】
注射用製剤は、公知の技術によって、適した分散剤、湿潤剤、懸濁剤、または賦形剤を用いて製造することができる。
【0079】
本発明の薬学的製剤に使用可能な賦形剤としては、甘味剤、結合剤、溶解剤、溶解補助剤、湿潤剤、乳化剤、等張化剤、吸着剤、崩壊剤、酸化防止剤、防腐剤、滑沢剤、充填剤、芳香剤などが含まれてもよいが、これに制限されない。例えば、賦形剤として、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、グリシン、シリカ、マグネシウムアルミニウムケイ酸塩、デンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、アルギニン酸、ナトリウムアルギン酸塩、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシルメチルセルロース、水、エタノール、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、オレンジエッセンス、ストロベリーエッセンス、バニラ香などが使用できる。
【0080】
本発明の医薬組成物が経口投与の形態である場合、用いられる担体の例としては、セルロース、ケイ酸カルシウム、トウモロコシデンプン、ラクトース、スクロース、デキストロース、リン酸カルシウム、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ゼラチン、タルクなどが挙げられるが、これに制限されない。
【0081】
本発明の医薬組成物が注射用製剤の形態である場合、前記担体としては、水、食塩水、ブドウ糖水溶液、疑似糖水溶液、アルコール、グリコール、エーテル、オイル、脂肪酸、脂肪酸エステル、グリセリドなどが挙げられるが、これに制限されない。
【0082】
さらに他の側面において、メラノコルチン受容体、特に、メラノコルチン－４受容体（ＭＣ４Ｒ）の機能亢進用途に用いるための上述の結晶形を提供する。
【0083】
一実施形態において、肥満、糖尿、炎症、または勃起不全の治療または予防用途に用いるための、上述の結晶形を提供する。
【0084】
さらに他の側面において、上述の結晶形を対象体（ｓｕｂｊｅｃｔ）に投与するステップを含む、メラノコルチン受容体、特に、メラノコルチン－４受容体（ＭＣ４Ｒ）の機能亢進方法を提供する。
【0085】
さらに他の側面において、上述の結晶形を対象体（ｓｕｂｊｅｃｔ）に投与するステップを含む、肥満、糖尿、炎症、または勃起不全を治療する方法を提供する。
【発明の効果】
【0086】
本発明に係る結晶形は、メラノコルチン受容体、特に、メラノコルチン－４受容体（ＭＣ４Ｒ）に対して優れた亢進作用を示すため、肥満、糖尿、炎症、および勃起不全の予防または治療に有用に利用されることができる。
【0087】
本発明に係る結晶形は、メラノコルチン－４受容体に対するｏｎ－ｔａｒｇｅｔ効果を示し、体重減少および食餌減少の効果を奏するとともに、不安感および憂鬱に影響を与えることなく、ｈＥＲＧ（ｈｕｍａｎ ｅｔｈｅｒ－ａ－ｇｏ－ｇｏ ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅ）阻害に対する副作用や突然変異の誘発といった安全性の問題なしに投与可能である。
【0088】
また、本発明に係る結晶形は、粗製の化学式１の化合物、化学式１の無定形化合物、化学式１の化合物の他の薬学的に許容可能な塩、または化学式１の任意の他の結晶形と比べて、純度、収率、物理的および化学的安定性に優れる。
【0089】
具体的に、前記結晶形は、化学式１の化合物、化学式１の無定形化合物、化学式１の化合物の他の薬学的に許容可能な塩、または化学式１の任意の他の結晶形と比べて、溶解性、貯蔵安定性、生成安定性に優れる。
【図面の簡単な説明】
【0090】
【図1】実施例１のＸＲＰＤ結果を示したグラフである。
【図2】実施例２のＸＲＰＤ結果を示したグラフである。
【図3】実施例２のＴＧＡ（上）およびＤＳＣ（下）結果を示したグラフである。
【図4】実施例２のＨＳＭ写真である（２０ｘ０．４０倍率）。
【図5】実施例２のＨＳＭ写真である（２０ｘ０．４０倍率）。
【図6】実施例２のＨＳＭ写真である（２０ｘ０．４０倍率）。
【発明を実施するための形態】
【0091】
以下、製造例および実施例により本発明をさらに具体的に説明する。但し、これらの実施例は、本発明の例示にすぎず、本発明の範囲がこれらによって限定されるものではない。
【0092】
製造例１：メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート塩酸塩の製造
下記ステップＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥの過程を経て標題化合物を得た。
【化3】
【0093】
ステップＡ：１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アジドピロリジン－１，２－ジカルボキシレートの製造
窒素下で、１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｒ）－４－（（メチルスルホニル）オキシ）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（４８．５ｇ、１５０ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド（２５０ｍｌ）に溶かし、アジ化ナトリウム（１９．５ｇ、３００ｍｌ）を添加した。８０℃で１６時間攪拌し、反応溶媒を減圧濃縮させた後、水を添加し、エチルアセテートで２回抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液と水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、粗製（ｃｒｕｄｅ）の１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アジドピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（３９．５９ｇ、９８％）を得て、精製せずに次のステップで使用した。
MS [M+H] = 271 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.43-4.37 (m, 1H), 4.35-4.27 (br, 1H), 3.77 (s, 1.8H), 3.76 (s, 1.2H), 3.73-3.66 (m, 1H), 3.44-3.38 (m, 1H), 2.63-2.49 (m, 1H), 2.19-2.11 (m, 1H), 1.50 (s, 4.5H), 1.44 (s, 4.5H)
窒素下で、１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｒ）－４－（（メチルスルホニル）オキシ）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（４８．５ｇ、１５０ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド（２５０ｍｌ）に溶かし、アジ化ナトリウム（１９．５ｇ、３００ｍｌ）を添加した。８０℃で１６時間攪拌し、反応溶媒を減圧濃縮させた後、水を添加し、エチルアセテートで２回抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液と水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、粗製（ｃｒｕｄｅ）の１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アジドピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（３９．５９ｇ、９８％）を得て、精製せずに次のステップで使用した。
MS [M+H] = 271 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.43-4.37 (m, 1H), 4.35-4.27 (br, 1H), 3.77 (s, 1.8H), 3.76 (s, 1.2H), 3.73-3.66 (m, 1H), 3.44-3.38 (m, 1H), 2.63-2.49 (m, 1H), 2.19-2.11 (m, 1H), 1.50 (s, 4.5H), 1.44 (s, 4.5H)
【0094】
ステップＢ：１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アミノピロリジン－１，２－ジカルボキシレートの製造
上記のステップＡで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アジドピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（２４．５９ｇ、９１．０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１８０ｍｌ）に溶かした後、０℃で１Ｍのトリメチルホスフィンテトラヒドロフラン溶液（１０９．２ｍｌ、１０９．２ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。同一温度で１時間攪拌した後、常温で３時間攪拌した。反応溶媒を減圧濃縮させた後、ジクロロメタン（１００ｍｌ）と水（１５０ｍｌ）を入れて３０分程度攪拌した。層分離し、ジクロロメタンでさらに１回抽出した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、粗製の１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アミノピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（２０．６２ｇ、９３％）を得て、精製せずに次のステップで使用した。
MS [M+H] = 245 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.27 (m, 1H), 3.77 (s, 1.8H), 3.76 (s,1.2H), 3.75-3.67 (m, 1H), 3.50-3.42 (m, 1H), 3.22-3.17 (m, 1H), 2.58-2.47 (m,1H), 1.82-1.71 (m, 1H), 1.48 (s, 4.5H), 1.42 (s, 4.5H)
上記のステップＡで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アジドピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（２４．５９ｇ、９１．０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１８０ｍｌ）に溶かした後、０℃で１Ｍのトリメチルホスフィンテトラヒドロフラン溶液（１０９．２ｍｌ、１０９．２ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。同一温度で１時間攪拌した後、常温で３時間攪拌した。反応溶媒を減圧濃縮させた後、ジクロロメタン（１００ｍｌ）と水（１５０ｍｌ）を入れて３０分程度攪拌した。層分離し、ジクロロメタンでさらに１回抽出した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、粗製の１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アミノピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（２０．６２ｇ、９３％）を得て、精製せずに次のステップで使用した。
MS [M+H] = 245 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.27 (m, 1H), 3.77 (s, 1.8H), 3.76 (s,1.2H), 3.75-3.67 (m, 1H), 3.50-3.42 (m, 1H), 3.22-3.17 (m, 1H), 2.58-2.47 (m,1H), 1.82-1.71 (m, 1H), 1.48 (s, 4.5H), 1.42 (s, 4.5H)
【0095】
ステップＣ：１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）アミノ）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレートの製造
上記のステップＢで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アミノピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（２０．６２ｇ、８４．４ｍｍｏｌ）をジクロロエタン（１５０ｍｌ）に溶かし、４－メチルシクロヘキサノン（９．５ｍｌ、１０１．３ｍｍｏｌ）を添加した。０℃でナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（２６．８ｇ、１２６．６ｍｍｏｌ）を添加し、常温で１６時間攪拌した。反応溶媒を減圧濃縮させて水を添加し、エチルアセテートで２回抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製して１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）アミノ）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（２２．９ｇ、８０％）を得た。
MS [M+H] = 341 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.26 (m, 1H), 3.76 (s, 1.8H), 3.75 (s, 1.2H), 3.78-3.71 (m, 1H), 3.49-3.40 (m, 1H), 3.22-3.16 (m, 1H), 2.69-2.60(br, 1H), 2.58-2.46 (m, 1H), 1.87-1.77 (m, 1H), 1.73-1.63 (m, 1H), 1.62-1.35(m, 8H), 1.48 (s, 4.5H), 1.42 (s, 4.5H), 0.96 (d, 3H)
上記のステップＢで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アミノピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（２０．６２ｇ、８４．４ｍｍｏｌ）をジクロロエタン（１５０ｍｌ）に溶かし、４－メチルシクロヘキサノン（９．５ｍｌ、１０１．３ｍｍｏｌ）を添加した。０℃でナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（２６．８ｇ、１２６．６ｍｍｏｌ）を添加し、常温で１６時間攪拌した。反応溶媒を減圧濃縮させて水を添加し、エチルアセテートで２回抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製して１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）アミノ）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（２２．９ｇ、８０％）を得た。
MS [M+H] = 341 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.26 (m, 1H), 3.76 (s, 1.8H), 3.75 (s, 1.2H), 3.78-3.71 (m, 1H), 3.49-3.40 (m, 1H), 3.22-3.16 (m, 1H), 2.69-2.60(br, 1H), 2.58-2.46 (m, 1H), 1.87-1.77 (m, 1H), 1.73-1.63 (m, 1H), 1.62-1.35(m, 8H), 1.48 (s, 4.5H), 1.42 (s, 4.5H), 0.96 (d, 3H)
【0096】
ステップＤ：１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレートの製造
上記のステップＣで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）アミノ）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（３７．２９ｇ、１０９．５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５００ｍｌ）に溶かし、トリエチルアミン（６１．１ｍｌ、４３８．１ｍｍｏｌ）を入れた後、０℃でイソブチリルクロリド（１１．７ｍｌ、２１９ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。常温で１６時間攪拌した後、反応溶媒を減圧濃縮させてから炭酸水素ナトリウム水溶液を添加し、エチルアセテートで２回抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液と水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製して１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（３８．７９ｇ、８６％）を得た。
MS [M+H] = 411 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.27 (m, 1H), 3.76 (s, 1.8H), 3.75 (s, 1.2H), 3.78-3.72 (m, 1H), 3.50-3.41 (m, 1H), 3.33-3.14 (m, 1H), 2.69-2.60 (m, 2H), 2.57-2.43 (m, 1H), 1.87-1.79 (m, 1H), 1.70-1.61 (m, 1H), 1.60-1.32 (m, 8H), 1.47 (s, 4.5H), 1.41 (s, 4.5H), 1.10 (dd, 6H), 0.99 (d, 3H)
上記のステップＣで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）アミノ）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（３７．２９ｇ、１０９．５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５００ｍｌ）に溶かし、トリエチルアミン（６１．１ｍｌ、４３８．１ｍｍｏｌ）を入れた後、０℃でイソブチリルクロリド（１１．７ｍｌ、２１９ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。常温で１６時間攪拌した後、反応溶媒を減圧濃縮させてから炭酸水素ナトリウム水溶液を添加し、エチルアセテートで２回抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液と水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製して１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（３８．７９ｇ、８６％）を得た。
MS [M+H] = 411 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.27 (m, 1H), 3.76 (s, 1.8H), 3.75 (s, 1.2H), 3.78-3.72 (m, 1H), 3.50-3.41 (m, 1H), 3.33-3.14 (m, 1H), 2.69-2.60 (m, 2H), 2.57-2.43 (m, 1H), 1.87-1.79 (m, 1H), 1.70-1.61 (m, 1H), 1.60-1.32 (m, 8H), 1.47 (s, 4.5H), 1.41 (s, 4.5H), 1.10 (dd, 6H), 0.99 (d, 3H)
【0097】
ステップＥ：メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート塩酸塩の製造
上記のステップＤで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（３４．０ｇ、８２．８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２００ｍｌ）に溶かした後、０℃で４Ｎの塩酸１，４－ジオキサン溶液（８２．８ｍｌ、３３１．３ｍｍｏｌ）を添加した。常温で６時間攪拌した後、反応溶媒を減圧濃縮して粗製の標題化合物（２８．７ｇ、９９％）を得て、精製せずに次のステップで使用した。
MS[M+H] = 311 (M+1)
上記のステップＤで得られた１－（ｔｅｒｔ－ブチル）２－メチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（３４．０ｇ、８２．８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２００ｍｌ）に溶かした後、０℃で４Ｎの塩酸１，４－ジオキサン溶液（８２．８ｍｌ、３３１．３ｍｍｏｌ）を添加した。常温で６時間攪拌した後、反応溶媒を減圧濃縮して粗製の標題化合物（２８．７ｇ、９９％）を得て、精製せずに次のステップで使用した。
MS[M+H] = 311 (M+1)
【0098】
製造例２：（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボン酸の製造
国際公開ＷＯ２００４／０９２１２６号に記載の方法により標題化合物を得た。
MS[ M+H] = 282 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.43-7.33 (m, 4H), 3.90-3.69 (m, 3H), 3.59 (dd, J = 11.2, 10.0 Hz, 1H), 3.29 (dd, J = 11.2, 11.2 Hz, 1H), 3.18-3.09 (m, 1H), 1.44 (s, 9H)
【化4】
MS[ M+H] = 282 (M+1)
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.43-7.33 (m, 4H), 3.90-3.69 (m, 3H), 3.59 (dd, J = 11.2, 10.0 Hz, 1H), 3.29 (dd, J = 11.2, 11.2 Hz, 1H), 3.18-3.09 (m, 1H), 1.44 (s, 9H)
【0099】
製造例３：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドの製造（ＭＣ７０）
下記ステップＡ、Ｂ、およびＣの過程を経て標題化合物を得た。
【化5】
【0100】
ステップＡ：メチル（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレートの製造
製造例１で得られたメチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート塩酸塩（２８．７ｇ、８２．７３ｍｍｏｌ）、製造例２で得られた（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボン酸（２４．５ｇ、８６．８７ｍｍｏｌ）、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（２２．２ｇ、１１５．８３ｍｍｏｌ）、および１－ヒドロキシベンゾトリアゾールハイドレート（１５．７ｇ、１１５．８３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド（４００ｍｌ）に溶かし、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルエチルアミン（７２．０ｍｌ、４１３．６６ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。常温で１６時間攪拌し、反応溶媒を減圧濃縮させた後、０．５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を入れ、エチルアセテートで２回抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液と水で２回ずつ洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製してメチル（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート（４１．１９ｇ、８７％）を得た。
MS [M+H] = 575 (M+1)
製造例１で得られたメチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート塩酸塩（２８．７ｇ、８２．７３ｍｍｏｌ）、製造例２で得られた（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボン酸（２４．５ｇ、８６．８７ｍｍｏｌ）、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（２２．２ｇ、１１５．８３ｍｍｏｌ）、および１－ヒドロキシベンゾトリアゾールハイドレート（１５．７ｇ、１１５．８３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド（４００ｍｌ）に溶かし、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルエチルアミン（７２．０ｍｌ、４１３．６６ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。常温で１６時間攪拌し、反応溶媒を減圧濃縮させた後、０．５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を入れ、エチルアセテートで２回抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液と水で２回ずつ洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製してメチル（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート（４１．１９ｇ、８７％）を得た。
MS [M+H] = 575 (M+1)
【0101】
ステップＢ：（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボン酸の製造
上記のステップＡで得られたメチル（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート（３９．４ｇ、６８．６２ｍｍｏｌ）をメタノール（４５０ｍｌ）に溶かした後、６Ｎの水酸化ナトリウム水溶液（５７．２ｍｌ、３４３．０９ｍｍｏｌ）を添加した。常温で１６時間攪拌し、６Ｎの塩酸水溶液でｐＨ５程度に調整した後、反応溶液を減圧濃縮させた。濃縮液をジクロロメタンで溶かした後、溶解されていない固体は紙フィルターで濾過した。濾液を減圧濃縮し、粗製の標題化合物（３８．４ｇ、９９％）を得て、精製せずに次のステップで使用した。
MS [M+H] = 561 (M+1)
上記のステップＡで得られたメチル（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボキシレート（３９．４ｇ、６８．６２ｍｍｏｌ）をメタノール（４５０ｍｌ）に溶かした後、６Ｎの水酸化ナトリウム水溶液（５７．２ｍｌ、３４３．０９ｍｍｏｌ）を添加した。常温で１６時間攪拌し、６Ｎの塩酸水溶液でｐＨ５程度に調整した後、反応溶液を減圧濃縮させた。濃縮液をジクロロメタンで溶かした後、溶解されていない固体は紙フィルターで濾過した。濾液を減圧濃縮し、粗製の標題化合物（３８．４ｇ、９９％）を得て、精製せずに次のステップで使用した。
MS [M+H] = 561 (M+1)
【0102】
ステップＣ：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドの製造
上記のステップＢで得られた（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボン酸（３８．４ｇ、６８．６０ｍｍｏｌ）、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（１８．４ｇ、９６．０４ｍｍｏｌ）、および１－ヒドロキシベンゾトリアゾールハイドレート（１３．０ｇ、９６．０４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド（２００ｍｌ）に溶かした後、順にモルホリン（５．９ｍｌ、６８．８０ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ’－ジイソプロピルエチルアミン（５９．７ｍｌ、３４３．０２ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。常温で１６時間攪拌し、反応溶液を減圧濃縮させた後、０．５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を入れ、エチルアセテートで２回抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液と水で２回ずつ洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製してＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド（３７．０５ｇ、８６％、ＭＣ７０）を得た。
MS [M+H] = 630 (M+1)
上記のステップＢで得られた（２Ｓ，４Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－４－（Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド）ピロリジン－２－カルボン酸（３８．４ｇ、６８．６０ｍｍｏｌ）、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（１８．４ｇ、９６．０４ｍｍｏｌ）、および１－ヒドロキシベンゾトリアゾールハイドレート（１３．０ｇ、９６．０４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド（２００ｍｌ）に溶かした後、順にモルホリン（５．９ｍｌ、６８．８０ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ’－ジイソプロピルエチルアミン（５９．７ｍｌ、３４３．０２ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。常温で１６時間攪拌し、反応溶液を減圧濃縮させた後、０．５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を入れ、エチルアセテートで２回抽出した。有機層を塩化ナトリウム水溶液と水で２回ずつ洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥濾過した。濾液を減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製してＮ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミド（３７．０５ｇ、８６％、ＭＣ７０）を得た。
MS [M+H] = 630 (M+1)
【0103】
実施例１：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドの硫酸塩の結晶形Ａの製造
前記製造例３で製造した化合物（ＭＣ７０）をイソブチルアセテートに入れた溶液に、ＭＣ７０と硫酸が１：１の当量となるように９５ｗｔ％～９７ｗｔ％の硫酸水溶液を添加した。その後、常温で１日間攪拌し、標題化合物（ＭＣ７０の硫酸塩の結晶形Ａ）を得た。
前記製造例３で製造した化合物（ＭＣ７０）をイソブチルアセテートに入れた溶液に、ＭＣ７０と硫酸が１：１の当量となるように９５ｗｔ％～９７ｗｔ％の硫酸水溶液を添加した。その後、常温で１日間攪拌し、標題化合物（ＭＣ７０の硫酸塩の結晶形Ａ）を得た。
【0104】
実施例２：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドの硫酸塩の結晶形Ｂの製造
前記実施例１に係る結晶形Ａを４５℃で真空乾燥し、標題化合物（ＭＣ７０の硫酸塩の結晶形Ｂ）を得た。
前記実施例１に係る結晶形Ａを４５℃で真空乾燥し、標題化合物（ＭＣ７０の硫酸塩の結晶形Ｂ）を得た。
【0105】
比較例１：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドのリン酸塩の結晶形の製造
前記製造例３で製造した化合物（ＭＣ７０）を１－プロピルアルコールに溶解し、８５％リン酸水溶液をＭＣ７０：Ｈ３ＰＯ４のモル比が１：１となるように添加し、攪拌して混合溶液を製造した。混合溶液が清い（ｃｌｅａｒ）状態の溶液に維持され続けることが確認された。混合溶液にヘプタンを追加し、常温で４日間攪拌した。その後、攪拌温度をそれぞれ４０℃、５０℃、６０℃に高めながら、順に１日、１７日、および６日間追加攪拌したが、結晶が形成されなかった。
前記製造例３で製造した化合物（ＭＣ７０）を１－プロピルアルコールに溶解し、８５％リン酸水溶液をＭＣ７０：Ｈ３ＰＯ４のモル比が１：１となるように添加し、攪拌して混合溶液を製造した。混合溶液が清い（ｃｌｅａｒ）状態の溶液に維持され続けることが確認された。混合溶液にヘプタンを追加し、常温で４日間攪拌した。その後、攪拌温度をそれぞれ４０℃、５０℃、６０℃に高めながら、順に１日、１７日、および６日間追加攪拌したが、結晶が形成されなかった。
【0106】
比較例２：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドのリン酸塩の結晶形の製造
前記製造例３で製造した化合物（ＭＣ７０）をエタノールに溶解し、８５％リン酸水溶液をＭＣ７０：Ｈ３ＰＯ４のモル比が１：１となるようにリン酸水溶液を添加し、攪拌して混合溶液を製造した。混合溶液が清い（ｃｌｅａｒ）状態の溶液に維持され続けることが確認された。混合溶液にシクロヘキサンを追加し、常温で４日間攪拌した。その後、攪拌温度をそれぞれ３５℃、５０℃、６０℃に高めながら、順に４日、３日、および３日間追加攪拌したが、結晶が形成されなかった。
前記製造例３で製造した化合物（ＭＣ７０）をエタノールに溶解し、８５％リン酸水溶液をＭＣ７０：Ｈ３ＰＯ４のモル比が１：１となるようにリン酸水溶液を添加し、攪拌して混合溶液を製造した。混合溶液が清い（ｃｌｅａｒ）状態の溶液に維持され続けることが確認された。混合溶液にシクロヘキサンを追加し、常温で４日間攪拌した。その後、攪拌温度をそれぞれ３５℃、５０℃、６０℃に高めながら、順に４日、３日、および３日間追加攪拌したが、結晶が形成されなかった。
【0107】
比較例３：Ｎ－（（３Ｓ，５Ｓ）－１－（（３Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブチル）－４－（４－クロロフェニル）ピロリジン－３－カルボニル）－５－（モルホリン－４－カルボニル）ピロリジン－３－イル）－Ｎ－（（１ｓ，４Ｒ）－４－メチルシクロヘキシル）イソブチルアミドのリン酸塩の結晶形の製造
前記製造例３で製造した化合物（ＭＣ７０）をアセトンに溶解し、８５％リン酸水溶液をＭＣ７０：Ｈ３ＰＯ４のモル比が１：８となるようにリン酸水溶液を過量で添加し、攪拌して混合溶液を製造した。混合溶液が清い（ｃｌｅａｒ）状態の溶液に維持され続けることが確認された。混合溶液にヘキサンを追加し、常温で４日間攪拌した。その後、攪拌温度をそれぞれ４０℃、５０℃、６０℃に高めながら、順に３日、１日、および１日間追加攪拌したが、結晶が形成されなかった。
前記製造例３で製造した化合物（ＭＣ７０）をアセトンに溶解し、８５％リン酸水溶液をＭＣ７０：Ｈ３ＰＯ４のモル比が１：８となるようにリン酸水溶液を過量で添加し、攪拌して混合溶液を製造した。混合溶液が清い（ｃｌｅａｒ）状態の溶液に維持され続けることが確認された。混合溶液にヘキサンを追加し、常温で４日間攪拌した。その後、攪拌温度をそれぞれ４０℃、５０℃、６０℃に高めながら、順に３日、１日、および１日間追加攪拌したが、結晶が形成されなかった。
【0108】
実験例１．ＸＲＰＤ評価
粉末ＸＲＰＤ回折パターンは、Ｃｕ放射線入射ビームを用いるＰａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｘｐｅｒｔ Ｐｒｏ ＭＰＤ回折計を用いて行った。約２０－３０ｍｇの試料を、ガラスサンプルホルダーに平らな表面を有するように均して載せた後、機器のジェネレータを４５ｋＶ（ａｃｃｅｒａｔｉｏｎ ｖｏｌｔａｇｅ）、４０ｍＡ（ｆｉｌａｍｅｎｔ ｅｍｉｓｓｉｏｎ）に設定し、ｒｅｆｌｅｃｔｉｏｎ ｍｏｄｅ（ｎｏｔ－ｓｐｉｎ）で測定した。０．０２６°のステップサイズ（ｓｔｅｐ ｓｉｚｅ）および５１秒のＴｉｍｅ ｐｅｒ ｓｔｅｐの条件で、４～４０°の範囲のブラッグ角（２θ）を測定した。
粉末ＸＲＰＤ回折パターンは、Ｃｕ放射線入射ビームを用いるＰａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｘｐｅｒｔ Ｐｒｏ ＭＰＤ回折計を用いて行った。約２０－３０ｍｇの試料を、ガラスサンプルホルダーに平らな表面を有するように均して載せた後、機器のジェネレータを４５ｋＶ（ａｃｃｅｒａｔｉｏｎ ｖｏｌｔａｇｅ）、４０ｍＡ（ｆｉｌａｍｅｎｔ ｅｍｉｓｓｉｏｎ）に設定し、ｒｅｆｌｅｃｔｉｏｎ ｍｏｄｅ（ｎｏｔ－ｓｐｉｎ）で測定した。０．０２６°のステップサイズ（ｓｔｅｐ ｓｉｚｅ）および５１秒のＴｉｍｅ ｐｅｒ ｓｔｅｐの条件で、４～４０°の範囲のブラッグ角（２θ）を測定した。
【0109】
図１に示したスペクトルから確認されるように、実施例１に係る硫酸塩の結晶形Ａは結晶性物質であることが確認され、ＸＲＰＤの具体的な値は下記表１に示した。
【0110】
【表1-1】
【表1-2】
【0111】
図２に示したスペクトルから確認されるように、実施例２に係る硫酸塩の結晶形Ｂは結晶性物質であることが確認され、ＸＲＰＤの具体的な値は下記表２に示した。
【0112】
【表2】
【0113】
【0114】
実験例２．熱重量分析（ＴＧＡ）および示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
ＴＧＡおよびＤＳＣのコンボ分析は、Ｍｅｔｔｌｅｒ－Ｔｏｌｅｄｏ ＴＧＡ／ＤＳＣ３＋分析器を用いて行った。試料を開放型アルミニウムパンに入れ、パンを密封した後、蓋を突き抜き、ＴＧ溶鉱炉に挿入した。窒素下、１０Ｋ／ｍｉｎの速度で、２５℃から最大３５０℃まで加熱して測定した。
ＴＧＡおよびＤＳＣのコンボ分析は、Ｍｅｔｔｌｅｒ－Ｔｏｌｅｄｏ ＴＧＡ／ＤＳＣ３＋分析器を用いて行った。試料を開放型アルミニウムパンに入れ、パンを密封した後、蓋を突き抜き、ＴＧ溶鉱炉に挿入した。窒素下、１０Ｋ／ｍｉｎの速度で、２５℃から最大３５０℃まで加熱して測定した。
【0115】
図３から確認されるように、ＴＧＡ分析の結果、実施例２に係る硫酸塩の結晶形Ｂは、約４０℃～１５０℃の温度範囲で約８．９ｗｔ％の重量損失が観察され、約２４８℃以後からは分解されることが確認された。
【0116】
また、ＤＳＣ分析の結果、実施例２に係る硫酸塩の結晶形Ｂは、約１０４℃（ｐｅａｋ）および１３６℃（ｐｅａｋ）で吸熱ピークが観察され、約１４５℃（ｐｅａｋ）で発熱ピークが観察された。
【0117】
実験例３．ホットステージ顕微鏡検査（ＨＳＭ）
Ｌｅｉｃａ ＤＭ ＬＰ顕微鏡にて、ＴＭＳ ９３コントローラーとともにＬｉｎｋｍａｎホットステージ（モデルＦＴＩＲ ６００）を用いてＨＳＭを測定した。サンプルは、１０ｘ０．２２または２０ｘ０．４０の倍率で、交差偏光板付きのラムダプレートを用いて観察した。サンプルはカバーガラス上に載置し、別のカバーガラスをサンプル上に載置した後、ステージが加熱されならが、サンプルを視覚的に観察した。ガスの放出を調べるために、場合によって、サンプルにミネラルオイルを一滴追加することができ、画像はＳＰＯＴソフトウェアｖ．４．５．９とともに、ＳＰＯ Ｉｎｓｉｇｈｔカラーデジタルカメラを用いて取り込んだ。
Ｌｅｉｃａ ＤＭ ＬＰ顕微鏡にて、ＴＭＳ ９３コントローラーとともにＬｉｎｋｍａｎホットステージ（モデルＦＴＩＲ ６００）を用いてＨＳＭを測定した。サンプルは、１０ｘ０．２２または２０ｘ０．４０の倍率で、交差偏光板付きのラムダプレートを用いて観察した。サンプルはカバーガラス上に載置し、別のカバーガラスをサンプル上に載置した後、ステージが加熱されならが、サンプルを視覚的に観察した。ガスの放出を調べるために、場合によって、サンプルにミネラルオイルを一滴追加することができ、画像はＳＰＯＴソフトウェアｖ．４．５．９とともに、ＳＰＯ Ｉｎｓｉｇｈｔカラーデジタルカメラを用いて取り込んだ。
【0118】
【0119】
実験例４．溶解度の評価
試料に水を添加し、完全に溶解されることを目視で確認した時に、試料に加えた水の最終体積を基準として溶解度を測定した。
試料に水を添加し、完全に溶解されることを目視で確認した時に、試料に加えた水の最終体積を基準として溶解度を測定した。
【0120】
評価結果、実施例２に係る硫酸塩の結晶形Ｂの溶解度は、５６ｍｇ／ｍＬを超えることが確認された。上述のように、実施例２に係る結晶形Ｂは、水に対する溶解性に優れていることが確認された。
【国際調査報告】