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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-05-24
(54)【発明の名称】神経膠芽腫の処置のための化合物
(51)【国際特許分類】
A61K 31/506 20060101AFI20240517BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240517BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240517BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240517BHJP
【ＦＩ】
A61K31/506
A61P35/00
A61P43/00 111
A61P43/00 121
A61K45/00 ZNA
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023574605
(86)(22)【出願日】2022-06-02
(85)【翻訳文提出日】2024-02-02
(86)【国際出願番号】 EP2022064993
(87)【国際公開番号】W WO2022253935
(87)【国際公開日】2022-12-08
(31)【優先権主張番号】63/197,163
(32)【優先日】2021-06-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/251,945
(32)【優先日】2021-10-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/278,789
(32)【優先日】2021-11-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】591032596
【氏名又は名称】メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング
【氏名又は名称原語表記】Ｍｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｍｉｔ ｂｅｓｃｈｒａｅｎｋｔｅｒ Ｈａｆｔｕｎｇ
【住所又は居所原語表記】Ｆｒａｎｋｆｕｒｔｅｒ Ｓｔｒ． ２５０，Ｄ－６４２９３ Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｆｅｄｅｒａｌ Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｇｅｒｍａｎｙ
(74)【代理人】
【識別番号】110003971
【氏名又は名称】弁理士法人葛和国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ギャン，クラウディア―ナネッテ
(72)【発明者】
【氏名】セリク，イルハン
(72)【発明者】
【氏名】マジド，ナザニン
(72)【発明者】
【氏名】デ グルート，ジョン フレデリック
(72)【発明者】
【氏名】ウェラー，ミカエル
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C084AA19
4C084NA05
4C084ZB261
4C084ZB262
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC42
4C086GA07
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZB26
4C086ZC20
4C086ZC75
(57)【要約】
本発明は、ＭＥＴ増幅を保有する播種性神経膠芽腫を包含する、神経膠芽腫の処置に使用するｃＭＥＴインヒビターをふくむ。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
神経膠芽腫の長期処置のためのそれを必要とするヒト対象における方法であって、対象へ有効量のｃＭＥＴインヒビターを処置方針において少なくとも１０週間投与することを含み、ここでｃＭＥＴインヒビターは以下：【化1】
【請求項2】
ｃＭＥＴインヒビターが、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル塩酸塩水和物、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル塩酸塩一水和物、および３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル塩酸塩一水和物の結晶変態Ｈ２の群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
播種性神経膠芽腫、ＭＥＴ増幅を保有する神経膠芽腫、またはそれらの組み合わせが処置される、請求項１および２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項4】
７ｑ３１．２にてＩＤＨ野生型、ＭＧＭＴ非メチル化またはＭＥＴ増幅、あるいはそれらの組み合わせを保有する神経膠芽腫が処置される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
ｃＭＥＴインヒビターの投与が、完全奏効、完全奏効の可能性の増大、薬剤耐性発生の可能性の低減、腫瘍進行までの時間の延長、および腫瘍再発までの時間の延長の群から選択される、１以上の臨床的有用性；好ましくは完全奏効をもたらす、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
ｃＭＥＴインヒビターが、少なくとも約１１～５２週間投与される、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
同じ処置方針において放射線療法を施すことをさらに含み；ここで任意に、放射線療法が、単回照射用量として、またはｃＭＥＴインヒビターの初回投与後に、またはそれらの組み合わせで施される、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
放射線療法が、ｃＭＥＴインヒビターの初回投与後９６時間以内、好ましくは３６時間以内に施される、請求項７に記載の方法。
【請求項9】
ｃＭＥＴインヒビターが、神経膠芽腫の第二選択処置またはより高次の処置方針において投与される、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
ｃＭＥＴインヒビターの初回投与前に、手術、放射線療法、化学療法、およびそれらの組み合わせの群から選択される処置を施すことをさらに含み；ここで任意に、ｃＭＥＴインヒビターの初回投与前に、手術または放射線療法、もしくはそれらの組み合わせが最初に施され、続いて化学療法が施される、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
ｃＭＥＴインヒビターが、神経膠芽腫の第一選択処置において投与される、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
ｃＭＥＴインヒビターの初回投与の後に、手術、放射線療法、化学療法、およびそれらの組み合わせの群から選択される処置を施すことをさらに含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項13】
放射線療法が施され；ここで任意に、放射線療法が陽子照射である、請求項７～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
放射線療法が、約３０００～４０００ｃＧｙを含み、任意で続いて、２０００～３０００ｃＧｙにて腫瘍床へのブーストを含む、請求項７～１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
ｃＭＥＴインヒビターが、単独療法として投与される、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明の技術分野
本発明は、ＭＥＴ増幅を保有する播種性神経膠芽腫を包含する神経膠芽腫の処置における、受容体チロシンキナーゼ（ＴＫＩ）間葉上皮移行因子（ｃＭＥＴ）のインヒビターの使用を提供する。
本発明は、ＭＥＴ増幅を保有する播種性神経膠芽腫を包含する神経膠芽腫の処置における、受容体チロシンキナーゼ（ＴＫＩ）間葉上皮移行因子（ｃＭＥＴ）のインヒビターの使用を提供する。
【背景技術】
【0002】
本発明の背景
ｃＭＥＴインヒビター
間葉上皮移行因子（ｃＭｅｔ）は、正常組織における発現のレベルが低いこと、および多くのヒトがんにおけるその特異な活性化ゆえに、抗がん治療法の開発において有望なターゲットとして浮上してきた。受容体チロシンキナーゼｃＭＥＴの下流の多数のシグナル伝達経路の異常な刺激は、細胞形質転換、腫瘍の運動性および浸潤を促進する。そのため、ｃＭＥＴは、非小細胞肺がんを包含する異なる腫瘍のタイプにおける予後および治療研究の焦点となっている。具体的には、いくつかのｃＭＥＴインヒビターが革新的な治療の候補として開発され、ならびに臨床試験において現在調査中となっている（例として、van der Stee et al., 2016, Thoracic Onc 11(9): 1423を参照）。選択性に関しては、キナーゼ上の結合部位によって、Ｉ型およびＩＩ型のクラスのｃ－Ｍｅｔインヒビターの間に特異性がある。Ｉ型インヒビターはさらにＩａ型とＩｂ型に分けられ得て、Ｉｂ型インヒビターはＩａ型インヒビターと比較される場合、ＭＥＴに対して特異性がより高く、オフターゲット効果がより少ない。ＩＩ型インヒビターは非活性化ＭＥＴを阻害し、ならびに一般的に他のプロテインキナーゼのオフターゲット効果をより多く示し、それが重篤な毒性効果を引き起こし得る。テポチニブは、高選択的な血液脳関門浸透性経口ｃ－ＭＥＴインヒビターであり、その塩酸塩水和物がＭＥＴ－エクソン１４変異非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）に対して最近ＦＤＡ承認された。３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル（テポチニブ）は、WO 2009/006959に記載された。
神経膠芽腫
ｃＭＥＴインヒビター
間葉上皮移行因子（ｃＭｅｔ）は、正常組織における発現のレベルが低いこと、および多くのヒトがんにおけるその特異な活性化ゆえに、抗がん治療法の開発において有望なターゲットとして浮上してきた。受容体チロシンキナーゼｃＭＥＴの下流の多数のシグナル伝達経路の異常な刺激は、細胞形質転換、腫瘍の運動性および浸潤を促進する。そのため、ｃＭＥＴは、非小細胞肺がんを包含する異なる腫瘍のタイプにおける予後および治療研究の焦点となっている。具体的には、いくつかのｃＭＥＴインヒビターが革新的な治療の候補として開発され、ならびに臨床試験において現在調査中となっている（例として、van der Stee et al., 2016, Thoracic Onc 11(9): 1423を参照）。選択性に関しては、キナーゼ上の結合部位によって、Ｉ型およびＩＩ型のクラスのｃ－Ｍｅｔインヒビターの間に特異性がある。Ｉ型インヒビターはさらにＩａ型とＩｂ型に分けられ得て、Ｉｂ型インヒビターはＩａ型インヒビターと比較される場合、ＭＥＴに対して特異性がより高く、オフターゲット効果がより少ない。ＩＩ型インヒビターは非活性化ＭＥＴを阻害し、ならびに一般的に他のプロテインキナーゼのオフターゲット効果をより多く示し、それが重篤な毒性効果を引き起こし得る。テポチニブは、高選択的な血液脳関門浸透性経口ｃ－ＭＥＴインヒビターであり、その塩酸塩水和物がＭＥＴ－エクソン１４変異非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）に対して最近ＦＤＡ承認された。３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル（テポチニブ）は、WO 2009/006959に記載された。
神経膠芽腫
【0003】
神経膠腫は、脳または脊髄のグリア細胞に始まる腫瘍の一種である。神経膠腫は、細胞のタイプ、グレード、および部位によって分類されている。高悪性度グリオーマ（すなわち、ＷＨＯグレードＩＩＩ～ＩＶ）は未分化(undifferentiated)または退形成性(anaplastic)、悪性であり、予後が悪い。このグループは、退形成性星状細胞腫および神経膠芽腫を含む。神経膠芽腫は、多形膠芽腫（ＧＢＭ）としても知られている。神経膠腫の等級区分は最近変化し、神経膠芽腫は現在、主にイソクエン酸脱水素酵素（ＩＤＨ）変異の状態（ＩＤＨ野生型またはＩＤＨ変異型）に従って分類されている。神経膠芽腫は、おそらく神経膠前駆細胞に由来する内在性の悪性脳腫瘍であり、形態学的に浸潤性増殖、巣状壊死、および血管新生を特徴とし、分子レベルでは、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）／ＲＡＳ／ホスファチジルイノシトール３キナーゼ(phosphatidylinositol 3-kinase)（ＰＩ３Ｋ）、ｐ５３、および網膜芽細胞腫（ＲＢ）経路に関与する頻繁な遺伝子変化を特徴とする。ＭＥＴ発がん遺伝子は、受容体チロシンキナーゼをコードし、神経膠芽腫を包含するいくつかの固形がんにおいて細胞増殖、浸潤、および血管新生を促進する。ＭＥＴ腫瘍の病理学的コピー数増幅および点突然変異は、神経膠芽腫におけるドライバーであり、ＭＥＴ増幅の発生率は２～５％である。ＭＥＴの活性化は、腫瘍の増殖、血管新生、および浸潤を促進し、処置に対する応答が乏しいこと、無増悪生存期間、および全生存期間が短くなることによる、神経膠腫における予後不良と関連している。リガンド非依存性Ｈｓ７４６ＴおよびＨＧＦ依存性Ｕ８７ＭＧ腫瘍をもつマウスにおいて、テポチニブによる腫瘍増殖阻害および腫瘍の退行が、腫瘍が抵抗性になり進行する前に一時的に観察された(Bladt et al., 2013, Clin Cancer Res 19(11): 2941)。マウスモデルにおける、がん、とりわけ神経膠芽腫を処置するための、テポチニブならびに４－［（Ｓ）－２－アゼチジン－１－イル－１－（４－クロロ－３－トリフルオロメチル－フェニル）－エチルアミノ］－キナゾリン－８－カルボン酸アミドの組み合わせが、WO 2016/091347に記載された。
【0004】
神経膠芽腫の処置において使用が考えられる治療法はあるが、臨床的応答は満足のいくものではない。神経膠芽腫は、最も致命的な固形がんのひとつに留まっている。テモゾロミドの導入以来、手術に続いて放射線療法という標準治療に加えて、生存期間を延長させるための薬理学的処置は他に示されていない。ＨＧＦ抗体ＡＭＧ－１０２(Wen et al., 2011, Neuro-oncology 13(4): 437)、またはＭＥＴ抗体オナルツズマブの有効性検査(Cloughesy et al., 2017, Journal of Clinical Oncology: Official Journal of the American Society of Clinical Oncology 35(3): 343)は、神経膠芽腫において否定的な結果を有した。このように、神経膠芽腫の処置には新規の治療選択肢を開発する必要性が残っている。さらに、既存の治療法よりも高い有効性を有する治療法の必要性がある。
【図面の簡単な説明】
【0005】
図面の簡単な記載
【0006】
【図2】図２は、ｉｎ ｖｉｖｏのＳＭＡ－５６０神経膠腫モデルにおいて、放射線照射およびテポチニブを介したＭＥＴ阻害による相乗的な生存期間の延長を示す。図２Ａ～２Ｄ．同系のマウスに、ＳＭＡ－５６０神経膠腫細胞を頭蓋内に移植し、６日目から毎日１００ｍｇ／ｋｇのテポチニブで、または溶媒で、または７日目に１２Ｇｙの単回量で、または組み合わせで処置した。症状を持つ最初のマウスが出たときに安楽死させた動物の脳を、ＡおよびＣにおいて研究した。図２Ａ．１グループにつき２匹の事前に無作為化した動物からプールされた腫瘍溶解物を、標的阻害（ｐ－ＭＥＴ）についてイムノブロット法によって分析した。図２Ｂ．カプラン－マイヤー生存曲線。図２Ｃ．１グループにつき３匹の事前に無作為化した動物の腫瘍切片を、Ｈ＆Ｅ（上段）、Ｋｉ－６７（中段）、またはＣＤ３１（下段）で染色した。切片を、ヘマトキシリン（青）で対比染色した。免疫反応性の定量化（右枠）（ｎ＝３、＊ｐ＜０．０５、ｔ－検定）。
【0007】
【0008】
【図4】図４は、適応免疫の消失による、テポチニブ、および放射線照射のみ、または組み合わせに対する応答の変化を示す。図４Ａ．Ｒａｇ１欠損マウスに、ＳＭＡ－５６０神経膠腫細胞を頭蓋内に移植し、６日目から毎日１００ｍｇ／ｋｇのテポチニブで、または溶媒で、または７日目に１０Ｇｙの単回量で、または組み合わせで処置した。カプラン－マイヤー生存曲線を示す。図４Ｂ～４Ｃ．同系のマウスに、ＧＬ－２６１神経膠腫細胞を頭蓋内に移植し、６日目から毎日１００ｍｇ／ｋｇのテポチニブで、または溶媒で、または７日目に１０Ｇｙの単回量で、または組み合わせで処置した。図４Ｂ．カプラン－マイヤー生存曲線は、ログランク検定を経て分析した。図４Ｃ．（Ｂ）において生存しているマウスを、最初の腫瘍細胞注入から１３週間後に、対側半球内にＧＬ－２６１細胞を移植して再誘発させた。ＧＬ－２６１細胞を移植したナイーブマウスが、対照として使用された。カプラン－マイヤー生存曲線を示す。図４Ｄ～４ＥＧＬ－２６１ ｍｅｔノックアウト細胞を、野生型Ｃ５７／Ｂｌ６マウスに頭蓋内移植（Ｄ）、またはＧＬ－２６１野生型細胞をＣ５７／Ｂｌ６ Ｒａｇ１欠損マウスに頭蓋内移植（Ｅ）した。マウスは、６日目から毎日１００ｍｇ／ｋｇのテポチニブ、または溶媒で、または７日目に１０Ｇｙの単回量で、またはそれらの組み合わせで処置し、カプラン－マイヤー生存曲線を示す。図４Ｆ．処置グループ間の生存期間中央値の分析。
【0009】
【0010】
【0011】
【発明の概要】
【0012】
本発明の概要
以下に記載される態様の各々は、それが組み合わされる態様と矛盾しない本明細書に記載の任意の他の態様と組み合わされ得る。さらに、本明細書に記載の態様の各々は、本明細書に記載の化合物の薬学的に許容し得る塩、溶媒和物、および／または水和物を、その範囲内に想定する。したがって、「またはその薬学的に許容し得る塩、溶媒和物、および／または水和物」という成句は、本明細書に記載のすべての化合物の記載に暗に含まれる。以下に記載する側面内の態様は、同じ側面内または異なる側面内で矛盾しない他の態様と組み合わされ得る。
以下に記載される態様の各々は、それが組み合わされる態様と矛盾しない本明細書に記載の任意の他の態様と組み合わされ得る。さらに、本明細書に記載の態様の各々は、本明細書に記載の化合物の薬学的に許容し得る塩、溶媒和物、および／または水和物を、その範囲内に想定する。したがって、「またはその薬学的に許容し得る塩、溶媒和物、および／または水和物」という成句は、本明細書に記載のすべての化合物の記載に暗に含まれる。以下に記載する側面内の態様は、同じ側面内または異なる側面内で矛盾しない他の態様と組み合わされ得る。
【0013】
第１の側面において、本発明は、神経膠芽腫の処置において使用するためのこれを必要とする対象におけるｃＭＥＴインヒビターを提供する。ｃＭＥＴインヒビターは、神経膠芽腫の処置において有効な量で投与される。この態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、ヒト対象の処置において使用される。この態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、長期処置のために使用され、少なくとも１０週間投与される。この態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、長期処置のために使用され、１の処置方針において少なくとも１０週間投与される。この態様の一側面において、神経膠芽腫の処置において使用するためのｃＭＥＴインヒビターは、同じ処置方針において化学療法と組み合わせて投与されない。この態様の一側面において、神経膠芽腫の処置において使用するためのｃＭＥＴインヒビターは、同じ処置方針において放射線療法と組み合わせて投与される。一態様において、放射線療法は、単回照射量として、またはｃＭＥＴインヒビターの初回投与後に、またはそれらの組み合わせで施される。この態様の一側面において、神経膠芽腫は、播種性神経膠芽腫である。この態様の別の側面において、神経膠芽腫は、ＭＥＴ増幅を保有する。この態様のさらなる側面において、神経膠芽腫は、７ｑ３１．２にてＩＤＨ野生型、ＭＧＭＴ非メチル化および／またはＭＥＴ増幅を保有する。この態様の最後の側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、テポチニブ、またはその薬学的に許容し得る塩、溶媒和物および／もしくは水和物である。
【0014】
第２の側面は神経膠芽腫の処置を、これを必要とする対象においてする方法であって、有効量のｃＭＥＴインヒビター、またはその薬学的に許容し得る塩、溶媒和物および／もしくは水和物を対象へ投与することを含む。この態様の一側面において、処置される対象はヒトである。この態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、長期処置のために好適であり、少なくとも１０週間投与される。この態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、長期処置のために使用され、１の処置方針において少なくとも１０週間投与される。この態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、同じ処置方針において化学療法と組み合わせて投与されない。この態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターの投与は、対象において、完全奏効をもたらし、完全奏効の可能性を増大させ、薬剤耐性の発生の可能性を低減させ、腫瘍進行までの時間を延長し、および／または腫瘍再発までの時間を延長する。また、悪性細胞を有する対象における腫瘍の増殖または進行を阻害する方法も提供される。また、対象における悪性細胞の転移を阻害する方法も提供される。また、悪性細胞を有する対象における腫瘍の退行を誘発する方法も提供される。処置は、対象における客観的応答、好ましくは完全奏効または部分奏効をもたらす。この態様の一側面において、方法は、任意に、単回放射線照射用量として、またはｃＭＥＴインヒビターの初回投与後に、またはそれらの組み合わせで、同じ処置方針において放射線療法を施すことをさらに含む。この態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、神経膠芽腫の第一選択処置において投与される。この態様の別の側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、神経膠芽腫の第二選択処置またはより高次の処置方針において投与される。本発明の治療は、以前に１以上の化学療法または免疫療法を用いて処置されたか、または放射線療法を受けたが、かかる以前の処置で失敗した対象の神経膠芽腫処置において使用され得る。この態様のさらなる側面において、対象は、ｃＭＥＴインヒビターの初回投与前に、手術、放射線療法、化学療法、およびそれらの組み合わせの群から選択される処置を施される。この態様のさらなる側面において、対象は、ｃＭＥＴインヒビターの初回投与前に、手術、放射線療法、またはそれらの組み合わせからなる群から選択され、任意で化学療法が続く処置を施される。放射線療法は、電子、光子、陽子、アルファエミッター、その他のイオン、放射性ヌクレオチド、ホウ素捕獲中性子、およびそれらの組み合わせで行われる処置であり得る。この態様の追加の側面において、対象は、テポチニブ、またはその薬学的に許容し得る塩、溶媒和物および／もしくは水和物を投与される。この態様の最後の側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、単独療法として投与される。
【0015】
第３の側面は、神経膠芽腫の処置用医薬品の製造のためのｃＭＥＴインヒビターの使用に関する。この態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、長期処置用であり、かつ少なくとも１０週間投与される医薬品の製造のために使用される。この態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、長期処置用であり、かつ１の処置方針において少なくとも１０週間投与される医薬品の製造のために使用される。この態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、長期処置用であり、かつ同じ処置方針において化学療法と組み合わせて投与されない医薬品の製造のために使用される。この態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、長期処置用であり、かつ同じ処置方針において放射線療法と組み合わせて投与されない医薬品の製造のために使用される。この態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、ヒトの長期処置用医薬品の製造のために使用される。
詳細な記載
詳細な記載
【0016】
本発明に従った使用のための化合物は、神経膠芽腫を抑制するためにｃ－Ｍｅｔを有利に標的とする。ｃＭＥＴインヒビターは、例として血液脳関門を通過することによって、神経膠芽腫を処置するための潜在的な戦略であることもある。本発明の化合物の投与の結果はまた、腫瘍負荷を軽減することになることもあり、それが次に、疾患の重症度を低減するであろう。本発明のｃＭＥＴインヒビターの抗がん特性について正確な作用機序が何であれ、その投与が本明細書にさらに記載されるとおり１以上の臨床的有用性を有するであろうことが提案される。具体的に、本出願は、対象における神経膠芽腫を処置するためのｃＭＥＴ単独療法を記載し、実証する。
【0017】
本発明の方法を使用する神経膠芽腫の処置は、神経膠芽腫のいずれかのステージで有効量の本発明のｃＭＥＴインヒビターを投与し、それに関連する症状を予防または低減することを包含する。典型的には、対象は、最も信頼の置ける診断および神経膠芽腫と一致する症状の提示後に有効量の本発明のｃＭＥＴインヒビターを投与され、および投与が、腫瘍の重症度を低減する、および／またはより重度の状態への腫瘍の進行を予防するであろう。かかる投与の際の臨床的有用性は、以下のセクションにてより詳細に記載される。
定義
定義
【0018】
「１つ(a)」、「１つ(an)」、および「その(the)」は、文脈が明確に別段に指示しない限り、複数形の参照対象を包含する。したがって、例えば、１つの化合物(a compound)への参照は、１つ以上の化合物、または少なくとも１つの化合物を指す。そのため、用語「１つ(a)」（または「１つ(an)」）、「１つ以上」、および「少なくとも１つ」は、本明細書では互換的に使用される。
【0019】
数値的に定義されたパラメータ（例として、ｃＭＥＴインヒビターの投与量、または本明細書に記載の治療を用いた処置期間の長さ）を修飾するために使用される場合の「約(about)」は、そのパラメータが、そのパラメータについて述べられた数値の下または上で１０％程度変動することもあることを意味する。
【0020】
患者へ薬剤を「投与すること」または「投与」（およびこの表現の文法的同意義のもの）とは、医療専門家による患者への投与でも、または自己投与でもよい直接投与、および／または薬剤を処方する行為でもよい間接投与を指す。例として、患者に薬剤の自己投与を指示したり、または患者に薬剤の処方箋を提供する医師は、患者へ薬剤を投与していることになる。
【0021】
「バイオマーカー」とは、一般的に、疾患状態を指し示す生体分子、ならびにその定量的および定性的測定値を指す。「予後バイオマーカー」は、治療とは無関係に疾患の転帰と相関する。例として、腫瘍の低酸素症は負の予後マーカーであり、腫瘍の低酸素症が高ければ高いほど、疾患の転帰が負であろう可能性が高い。「予測バイオマーカー」は、患者が特定の治療へ明確に応答しそうかどうかを指し示すものである。例として、ＨＥＲ２プロファイリングは、乳がん患者において、患者がハーセプチン(trastuzumab, Genentech)に応答しそうかどうかを判断するために一般的に使用される。「応答バイオマーカー」は、治療に対する応答の程度を提供し、治療が機能しているかどうかの指標を提供する。例として、前立腺特異抗原のレベルが低下することは、一般的に前立腺がん患者に対する抗がん治療が機能していることを指し示すものである。マーカーが、本明細書に記載される処置のために患者を識別または選択するための基準として使用され得る場合、マーカーは、治療前および／または治療中に測定され得て、および／または得られた値は、臨床医が以下のいずれかを査定する際に使用される：（ａ）個体が最初に処置（単数または複数）を受けるのに大いに適している、または適していそう；（ｂ）個体が最初に処置（単数または複数）を受けるのに大いに不適である、または不適そう；（ｃ）処置に対する応答性；（ｄ）個体が処置（単数または複数）を受け続けるのに大いに適している、または適していそう；（ｅ）個体が処置（単数または複数）を受け続けるのに大いに不適である、または不適そう；（ｆ）投薬量の調整；（ｇ）臨床的有用性の可能性の予測；または（ｈ）毒性。当業者によってよく理解されるように、臨床環境におけるバイオマーカーの測定は、本明細書に記載の処置を施すことを開始、継続、調整、および／または中止するための根拠として、このパラメータが使用されたことを明確に指し示すものである。
【0022】
「化学療法」とは、がんの処置に有用な化学的化合物である化学療法剤を伴う治療である。
【0023】
「臨床結果」、「臨床パラメータ」、「臨床応答」、または「臨床エンドポイント」とは、治療に対する患者の応答に関係するいずれかの臨床的観察または測定を指す。臨床転帰の非限定的な例は、腫瘍応答（ＴＲ）、全生存期間（ＯＳ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間、腫瘍再発までの期間（ＴＴＲ）、腫瘍進行までの期間（ＴＴＰ）、相対リスク（ＲＲ）、毒性、または副作用を包含する。
【0024】
「ｃＭＥＴインヒビター」は、ｃＭＥＴをコードする遺伝子の発現、および／またはｃＭＥＴの発現、および／またはｃＭＥＴの生物学的活性を、阻害、または有意に低減、またはダウンレギュレートする生物学的効果を有する化合物を指す。一態様において、ｃＭＥＴインヒビターは、ｃＭＥＴキナーゼと特異的に結合する。受容体チロシンキナーゼに対して臨床活性を持つ薬品には２種類があり：受容体の細胞外ドメインを標的とする抗体、およびＡＴＰと競合することによって細胞内部分を標的とし、かくして受容体の自己リン酸化を阻害し、かつ下流のシグナル伝達を防止する低分子ＴＫＩである。ｃＭＥＴ ＴＫＩの例は、テポチニブ、クリゾチニブ、カプマチニブ、サボリチニブ、カボザンチニブ、ＭＧＣＤ２６５、メレスチニブ、および
（ＧＳＴ－ＨＧ１６１）
を包含し、一方でオナルツズマブおよびＡＲＧＸ－１１１は、ｃＭＥＴ標的抗体の例である。
【化1】
を包含し、一方でオナルツズマブおよびＡＲＧＸ－１１１は、ｃＭＥＴ標的抗体の例である。
【0025】
「組み合わせ」は、別の有効な様式に加えて、第一の有効な様式を提供することを指す。本明細書に記載の組み合わせという範囲で意図するのは、単一または多数の組成物にふくまれる、組み合わせ様式または相手（例として、活性化合物、成分、または薬品）のいずれかの方式である。単一の組成物、製剤、または単位剤形（すなわち、固定用量の組み合わせ）の中のいずれの様式も、同一の用量方式および送達経路を有している必要があると理解される。複数の様式が一緒に送達されるように製剤化される必要がある（例として、同じ組成物、製剤、または単位剤形において）と暗示することを意図するものではない。組み合わされた様式は、同じか、または異なる製造者によって、製造および／または製剤化され得る。したがって、組み合わせ相手は、例として、互いに独立して販売される完全に別々の医薬剤形または医薬組成物であってもよい。
【0026】
「組み合わせ療法」、「と組み合わせて」、または「と併せて」は、少なくとも２の別個の処置様式（例として、化合物、成分、または治療剤）を用いた、共同、並行、同時、逐次、または断続的な処置のいずれかの形態を表す。そのため、この用語は、対象へ他の処置様式を施す前、その最中、または後に、一方の処置様式を施すことを指す。組み合わせにおける様式は、いずれの順序でも施され得る。治療的に有効な様式は、一緒に（例として、同じまたは別々の組成物、製剤、または単位剤形において同時に）、または別々に（例として、別々の組成物、製剤、または単位剤形のための適切な投与プロトコールに従って、同じ日に、または異なる日に、ならびにいずれの順序でも）、医療従事者によって、または規制機関に従って処方されるやり方および投与方式で施される。一般的に、各処置様式は、その処置様式用に確定された投与量にて、および／または時間スケジュールで施されるであろう。任意に、３以上の様式が、組み合わせ療法において使用されてもよい。加えて、組み合わせ療法は、他のタイプの処置と併せて使用されてもよい。例えば、他の抗がん処置が、対象に対する現在の標準治療に関連する他の処置の中の、化学療法、手術、放射線療法（放射線）および／またはホルモン療法からなる群から選択されてもよい。
【0027】
「完全奏効」または「完全寛解」は、処置に応答して神経膠芽腫を包含するがんのすべての徴候の消失を指す。これは、必ずしも神経膠芽腫が治癒したことを意味するわけではない。
【0028】
「含む(comprising)」は、組成物および方法が記載された要素を包含するが、他の要素を除外するものではないことを意味することを意図する。組成物および方法を定義するために使用される場合、「本質的に～からなる(consisting essentially of)」は、組成物または方法にとっていずれかの本質的な意義を持つ他の要素を除外することを意味するものである。「～からなる(consisting of)」は、特許請求される組成物および実質的な方法ステップについて、他の成分の微量要素より多いものを除外することを意味するものである。これらの遷移語の各々によって定義される態様は、本発明の範囲内である。したがって、方法および組成物は、追加のステップおよび成分を包含し得て（含む）、または代替的に、意義のないステップおよび組成物を包含する（本質的に～からなる）、または代替的に、述べられた方法ステップまたは組成物のみを意図する（～からなる）ことを意図するものである。
【0029】
「用量」および「投与量」は、ｃＭＥＴインヒビターを包含する、投与用の活性剤または治療剤の具体的な量を指す。かかる量は「剤形」に包含され、この剤形は、ヒト対象および他の哺乳動物に対する単位投与量として好適な、物理的に分離した単位を指し、各単位は、所望の発現、忍容性および治療効果を生ずるように計算された所定量の活性剤を、担体などの１以上の好適な医薬賦形剤と関連付けて含有する。
【0030】
本発明の意味における「医薬品」とは、医薬分野におけるいずれかの薬品であり、１以上の本発明の化合物またはその調製物（例として、医薬組成物または医薬製剤）を含み、ならびに臨床症状および／または神経膠芽腫に対する既知のリスクをこうむる患者の予防、治療、経過観察またはアフターケアに使用され得る。
【0031】
「客観的応答」とは、完全奏効（ＣＲ）または部分奏効（ＰＲ）を包含する測定可能な応答を指す。
【0032】
「全生存期間」（ＯＳ）とは、患者の登録から、死亡または生存が最後に確認された日にて削除されるまでの時間を指す。ＯＳは、無処置または未処置の、個体または患者と比較した平均余命の延長分を包含する。全生存期間とは、例として、診断または処置の時点から１年、５年等などの、明確にされた期間、患者が生存している状態を指す。
【0033】
「部分奏効」は、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１ガイドラインに定義されているように、処置に応答して、１以上の腫瘍または病変のサイズ、または体内のがんの程度が減少することを指す。
【0034】
「患者」または「対象」は、動物、好ましくは人間を意味する。しかしながら、「対象」は、イヌおよびネコなどの伴侶動物を包含し得る。一態様において、対象は、成人ヒト患者である。別の態様において、対象は、小児の患者である。小児の患者は、処置の開始時で１８歳を下回るいずれかのヒトを包含する。成人患者は、処置の開始時で１８歳以上であるいずれかのヒトを包含する。一態様において、対象は、年齢６５歳以上、ＭＥＴ増幅を保有する、または他の併存疾を持つヒトなどの高リスクグループのメンバーである。
【0035】
「薬学的に許容し得る」とは、化合物、インヒビター、物質または組成物が、製剤中に含まれる他の成分、および／またはそれによって処置される対象と、化学的および／または毒物学的に適合している必要があることを指し示すものである。換言すれば、物質または組成物が、化学的および／または毒物学的に対象の処置に好適である必要がある。
【0036】
「薬学的に許容し得る担体」または「薬学的に許容し得る希釈剤」とは、医薬投与に適合するすべての溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌および抗真菌剤、等張化および吸収遅延剤を意味する。薬学的に許容し得る担体の例は、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、ブドウ糖、グリセロール、エタノール等の１以上、ならびにそれらの組み合わせを包含する。かかる媒体および剤を薬学的活性物質用に使用することは、当技術分野においてよく知られている。許容し得る担体、賦形剤または安定剤は、用いられる投薬量および濃度にてレシピエントに対して無毒であり、そして本発明の範囲を限定することなく、以下を含む：追加の緩衝剤；保存剤；共溶媒；アスコルビン酸およびメチオニンを包含する抗酸化剤；ＥＤＴＡなどのキレート剤；金属錯体（例として、亜鉛－タンパク質錯体）；ポリエステルなどの生分解性ポリマー；ナトリウムなどの塩形成性対イオン；多価糖アルコール；アラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、オルニチン、ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、およびスレオニンなどのアミノ酸；ラクチトール、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ミオイニシトース、ミオイニシトール、ガラクトース、ガラクチトール、グリセロール、シクリトール（例として、イノシトール）、およびポリエチレングリコールなどの有機糖または糖アルコール；尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、［アルファ］－モノチオグリセロール、およびチオ硫酸ナトリウムのような含硫黄還元剤；ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチン、または他の免疫グロブリンなどの低分子量タンパク質；ならびにポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー。他の薬学的に許容し得る担体、賦形剤、または安定剤もまた、それらが医薬組成物の所望の特徴に悪影響を及ぼさない場合には、本明細書に記載の医薬組成物中に包含されてもよい。
【0037】
「無増悪生存期間」（ＰＦＳ）は、登録から疾患進行または死亡までの時間を指す。ＰＦＳは一般的に、Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ法、および固形癌効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）１．１標準を使用して測定される。一般に、無増悪生存とは、神経膠芽腫を包含するがんが悪化することなく、患者が生存している状態を指す。
【0038】
「ＲＥＣＩＳＴ」とは、固形癌効果判定基準(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors)を意味する。ＲＥＣＩＳＴのガイドライン、基準、または標準は、成人および小児がん臨床試験において使用のための、腫瘍サイズの変化を客観的に評価するための固形腫瘍測定および定義への標準的なアプローチを記載している。ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１は、改訂ＲＥＣＩＳＴガイドラインのバージョン１．１を意味し、2009, European Journal of Cancers 45: 228に発表された。
【0039】
「再発性」神経膠芽腫を包含する「再発性」がんは、手術などの初期治療への応答後、初期の部位または遠隔部位にて再増殖したものである。局所的「再発性」がんは、以前処置したがんと同じ場所において治療後に再び起こるがんである。
【0040】
症状（単数または複数）の「低下」（およびこの表現の文法的同意義のもの）は、症状（単数または複数）の重症度または頻度を減少すること、あるいは症状（単数または複数）の消失を指す。
【0041】
「耐性のある」腫瘍またはがんは、抗がん剤を用いた処置をし得ない、またはこれ以上し得なくなった、神経膠芽腫を包含する腫瘍またはがんである。抗がん剤を用いた最初の処置を試みる前に、耐性がすでに存在することもある。耐性はまた、抗がん剤を用いた最初の処置後に、場合によっては処置の結果として、つけられることもある。
【0042】
「治療に好適」または「処置に好適」とは、同じがんを有し、同じ治療を受けるものの、比較の目的で考えられる異なる特徴を保有する患者と比較して、患者が１以上の望ましい臨床転帰を示しそうだということを意味するものとする。一側面において、考えられる特徴は、遺伝子多型または体細胞突然変異である。別の側面において、考えられる特徴は、遺伝子またはポリペプチドの発現レベルである。一側面において、より望ましい臨床転帰とは、腫瘍負荷低下などの腫瘍応答が、相対的に高い可能性、または相対的に良好であることである。別の側面において、より望ましい臨床転帰は、全生存期間が相対的に長いことである。なお別の側面において、より望ましい臨床転帰は、無増悪生存期間または腫瘍進行までの時間が相対的に長いことである。なお別の側面において、より望ましい臨床転帰は、無病生存期間が相対的に長いことである。別の側面において、より望ましい臨床転帰は、腫瘍再発が相対的に低下する、または遅れることである。別の側面において、より望ましい臨床転帰は、転移が相対的に減少することである。別の側面において、より望ましい臨床転帰は、相対リスクが相対的に低いことである。なお別の側面において、より望ましい臨床転帰は、毒性または副作用が相対的に低減することである。いくつかの態様において、１より多くの臨床転帰が同時に考えられる。かかる一側面において、遺伝子多型の遺伝子型などの特徴を保有する患者は、同じがんを有し、同じ治療を受けるものの、その特徴を有していない患者と比較して、１以上のより望ましい臨床転帰を示すこともある。本明細書で定義されるように、患者は治療に好適であると考えられる。かかる別の側面において、特徴を保有する患者は、１以上の望ましい臨床転帰を示すが、同時に、１より多くのあまり望ましくない臨床転帰を示すこともある。その後、臨床結果は全体的に考えられ、患者の特定の状況および臨床転帰の関連性を考えて、患者が治療に好適であるかどうかの決定がなされる。いくつかの態様において、無増悪生存期間または全生存期間は、全体的意思決定において腫瘍応答よりも重み付けされる。
【0043】
ｃＭＥＴインヒビターの「治療的に有効な量」とは、神経膠芽腫を包含するがんを持つ患者へ、ある方法、組み合わせまたは組み合わせ療法に従って投与された場合に、その方法、組み合わせまたは組み合わせ療法が意図した治療効果（例として、患者におけるがんの１以上の兆候の緩和、改善、軽減、または除去）、あるいはがん患者の処置過程におけるいずれかの他の臨床的結果を有するであろう、必要な投薬量および期間において有効な量を指す。治療効果は、必ずしも１投与量によって起こるとは限らず、一連の投与量の投与の後にのみ起こることもある。したがって、治療的に有効な量を１以上の投与において投与してもよい。かかる治療的に有効な量は、個体において所望の応答を引き出す、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびにｃＭＥＴインヒビターの技量などの因子によって変動することもある。治療的に有効な量はまた、ｃＭＥＴインヒビターのいずれかの毒性または有害な効果よりも、治療的に有益な効果が上回る量でもある。
【0044】
「処置(treatment)」、「処置する(treat)」、および「処置している(treating)」は、本明細書に記載の、神経膠芽腫、またはその１以上の症状を逆転させること、緩和すること、発症を遅らせること、または進行を阻害することを指す。いくつかの態様において、処置は、１以上の症状が発症した後に施される。他の態様において、処置は、症状の非存在下で施される。例えば、症状が発症する前に（例として、重度疾患に対する予測因子である併存疾、または他の感受性因子を考慮して）、感受性の高い個体へ処置が施される。
【0045】
がんと診断された、またはがんを有すると疑われる対象へ適用する場合、「腫瘍」は、いずれかのサイズの悪性または潜在的に悪性のある新生物または組織塊を指し、それは原発性腫瘍および続発性新生物を包含する。固形腫瘍は、嚢胞または液体領域を通常は含有しない異常な増殖または組織の塊である。異なるタイプの固形がんが、それらを形成する細胞のタイプに対して命名されている。
化合物
化合物
【0046】
一態様は、神経膠芽腫の処置のための、以下：
の式に従った化合物、あるいは、その薬学的に許容し得る塩、および／もしくは溶媒和物または水和物の使用である。
【化2】
【0047】
この化合物はまた、第１の化合物と称されてもよい。第１の化合物はまた、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル（ＩＮＮ：テポチニブ）として称されてもよい。それは、WO 2009/006959において、化合物「Ａ２５７」として開示され、かつさらに特徴づけられている。例示的な態様において、この第１の化合物の塩酸塩水和物形態が使用され、それは、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル塩酸塩水和物として称される。別の例示的な態様において、この第１の化合物の塩酸塩一水和物形態が使用され、それは３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル塩酸塩一水和物として称される。それは、WO 2009/007074において、化合物「Ａ７」として開示され、かつさらに特徴づけられている。例示的な態様において、この第１の化合物の塩酸塩一水和物の結晶形態Ｈ２が使用され、それは、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル塩酸塩一水和物の結晶変態Ｈ２として称される。それは、WO 2010/078897中の実施例１２において開示され、かつさらに特徴づけられている。
【0048】
以下における第１の化合物への参照は、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル塩酸塩水和物、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル塩酸塩一水和物、および３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル塩酸塩一水和物の結晶変態Ｈ２への参照を包含するものとして読まれるものとする。好ましい態様において、本発明の方法において使用するためのｃＭＥＴインヒビターは、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル塩酸塩水和物、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル塩酸塩一水和物、および３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル塩酸塩一水和物の結晶変態Ｈ２の群から選択される。上述の化合物はすべて、高選択性かつ強力なｃＭＥＴインヒビターである。
【0049】
一態様は、神経膠芽腫の処置において使用のための、以下：
（ＧＳＴ－ＨＧ１６１）
の式に従った化合物、あるいは、その薬学的に許容し得る塩、および／もしくは溶媒和物または水和物である。ｃＭＥＴインヒビターＧＳＴ－ＨＧ１６１は、EP 3 533 787中に「態様１－２」として開示され、かつさらに特徴付けられている。
【化3】
の式に従った化合物、あるいは、その薬学的に許容し得る塩、および／もしくは溶媒和物または水和物である。ｃＭＥＴインヒビターＧＳＴ－ＨＧ１６１は、EP 3 533 787中に「態様１－２」として開示され、かつさらに特徴付けられている。
【0050】
上記の化合物は、それらの遊離形態で、または薬学的に許容し得る塩としてのいずれかで使用されてもよい。遊離化合物は、酸との反応によって、例えば、等価な量の塩基および酸を、例えば、エタノールなどの不活性溶媒中で反応させ、およびこれに続いて蒸発させることによって、関連する酸付加塩に変換されてもよい。この反応のための好適な酸は、とりわけ、例えば、ハロゲン化水素（例えば、塩化水素、臭化水素、またはヨウ化水素）、他の鉱酸およびその対応する塩（例えば、スルファート、ニトラート、またはホスファート等）、スルホン酸アルキル－およびモノアリールスルホナート（例えば、エタンジスルホナート（エジシレート）、トルエンスルホナート、ナフタレン－２－スルホナート（ナプシレート）、ベンゼンスルホナート）ならびに他の有機酸およびその対応する塩（例えば、フマラート、オキサラート、アセタート、トリフルオロアセタート、タートラート、マレアート、スクシナート、シトラート、ベンゾアート、サリチラート、アスコルバート）等の生理学的に許容し得る塩を与える塩である。
【0051】
第１の化合物の薬学的に許容し得る塩の例示的な態様は、上述のように塩酸塩を含む。
【0052】
別段の記載がない限り、本明細書で描かれる構造はまた、構造のすべての異性体（例として、エナンチオマー、ジアステレオマー、および幾何学上の（またはコンフォメーションの））形態（例えば、各不斉中心のＲおよびＳ配置、ＺおよびＥの二重結合異性体、ならびにＺおよびＥのコンフォメーション異性体）を包含することも意味される。したがって、本化合物の単一立体化学異性体、ならびにエナンチオマー、ジアステレオマー、および幾何学上の（またはコンフォメーションの）混合物は、本発明の範囲内である。
【0053】
加えて、別段の記載がない限り、本明細書に描かれる構造はまた、１以上の同位体が濃縮された原子が存在していることのみ異なる化合物を包含することも意味する。例えば、重水素またはトリチウムによる水素の置き換え、または１３Ｃまたは１４Ｃが濃縮された炭素による炭素の置き換えを包含する本構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。いくつかの態様において、基は、１以上の重水素原子を含む。
【0054】
具体的に、ｃＭＥＴインヒビターは、同じ処置方針において化学療法と組み合わせて投与されない。一態様において、ｃＭＥＴインヒビターの投与は、いずれかの他の治療剤との組み合わせ、特に別の化学療法剤との組み合わせは、いずれの処置方針（例として、ｃＭＥＴインヒビターの投与の前、それと同時、またはその後）においても除外される。一態様において、ｃＭＥＴインヒビターの投与は、ｐ７０Ｓ６ｋインヒビターとの組み合わせ、特に４－［（Ｓ）－２－アゼチジン－１－イル－１－（４－クロロ－３－トリフルオロメチル－フェニル）－エチルアミノ］－キナゾリン－８－カルボン酸アミドとの組み合わせにおいては除外される。一態様において、ｃＭＥＴインヒビターは、組み合わせ療法においては投与されない。一態様において、ｃＭＥＴインヒビターは、特に同じ処置方針において放射線療法と組み合わせて投与される。
使用、製剤、および投与
使用、製剤、および投与
【0055】
本発明の組成物は、経口的に、非経口的に、吸入スプレーによって、局所的に、経直腸的に、経鼻的に、口腔内に、経膣的に、または移植されたリザーバを介して投与される。好ましくは、組成物は、経口的に投与される。より好ましくは、ｃＭＥＴインヒビターは、経口投与を介して投与される。一態様において、本発明の化合物の経口製剤は、錠剤またはカプセル形態である。別の態様において、経口製剤は、口または経鼻胃管を介してこれを必要とする対象に与えられるであろう溶液または懸濁液である。本発明のいずれの経口製剤も、食品の有無にかかわらず投与されてよい。いくつかの態様において、この発明の薬学的に許容し得る組成物は、食品とは別に投与される。他の態様において、この発明の薬学的に許容し得る組成物は、食品と共に投与される。
【0056】
この発明の薬学的に許容し得る組成物は、いずれかの経口的に許容し得る剤形で経口的に投与される。例示の経口剤形は、カプセル、錠剤、水性懸濁液または溶液である。経口使用のための錠剤のケースにおいて、一般的に使用される担体は、ラクトースおよびコーンスターチを包含する。ステアリン酸マグネシウムなどの平滑剤もまた、典型的に添加される。カプセル形態での経口投与について、有用な希釈剤は、ラクトースおよび乾燥コーンスターチを包含する。水性懸濁液が経口使用に要求されるとき、活性成分は、乳化剤および懸濁化剤と組み合わせられる。所望される場合、ある甘味料、フレーバー剤または着色剤もまた、任意に添加される。
【0057】
任意に担体材料と組み合わせて単一の剤形で組成物を産生する本発明の化合物の量は、処置される宿主、具体的な投与のモードに応じて変化するであろう。好ましくは、提供される組成物は、０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の化合物の投薬量が、これらの組成物を受ける患者に投与され得るように処方されるべきである。
【0058】
医薬組成物は、１以上の投与単位の形態であり、それは１日１回の投与量として、または１日の総投与量が１日１回の投与量と同じになるように１日２回以上の連続した投与量として提供される。特定の態様において、ｃＭＥＴインヒビターは、約１５ｍｇ、２５ｍｇ、１００ｍｇ、２１５ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇまたは１０００ｍｇ、好ましくは約１５ｍｇ、２５ｍｇ、１００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、４５０ｍｇまたは５００ｍｇ、より好ましくは約２２５ｍｇまたは２５０ｍｇの投薬量強度において投与される。
【0059】
特定の態様において、それを必要とする対象へ投与されるｃＭＥＴインヒビターの総量は、１日当たり約０．５ｍｇ～約１４００ｍｇの間、好ましくは１日当たり約３００ｍｇ～約１４００ｍｇの間、より好ましくは１日当たり約２２５ｍｇと約１０００ｍｇとの間である。特定の態様において、それを必要とする対象に投与されるｃＭＥＴインヒビターの総量は、１日当たり約１ｍｇと１０００ｍｇとの間、より好ましくは１日当たり約１ｍｇと７００ｍｇとの間、最も好ましくは１日当たり約１００ｍｇと５００ｍｇとの間、非常に好ましくは１日当たり約２２５ｍｇと５００ｍｇとの間である。一態様において、それを必要とする対象に投与されるｃＭＥＴインヒビターの総量は、１日当たり約２２５ｍｇと約９００ｍｇとの間、好ましくは１日当たり２２５ｍｇおよび約４５０ｍｇ、より好ましくは４５０ｍｇである。一態様において、それを必要とする対象に投与されるｃＭＥＴインヒビターの総量は、１日当たり約９００ｍｇである。一態様において、それを必要とする対象に投与されるｃＭＥＴインヒビターの総量は、１日当たり約２５０ｍｇと１０００ｍｇとの間、好ましくは１日当たり２５０ｍｇおよび５００ｍｇ、より好ましくは５００ｍｇである。一態様において、それを必要とする対象に投与されるｃＭＥＴインヒビターの総量は、１日当たり約１０００ｍｇである。特定の態様において、それを必要とする対象に投与されるｃＭＥＴインヒビターの総量は、１日当たり約３０ｍｇと４００ｍｇとの間であり、より好ましくは１日当たり約３０ｍｇ～２３０ｍｇの間である。一態様において、それを必要とする対象に投与されるｃＭＥＴインヒビターの総量は、１日当たり約６０ｍｇ～３１５ｍｇである。
【0060】
上述の態様のいずれにおいても、ｃＭＥＴインヒビターは、毎日投与される。上述の態様のいずれにおいても、ｃＭＥＴインヒビターは、１日１回投与される。一態様において、ｃＭＥＴインヒビターは約４５０ｍｇ～５００ｍｇの投薬量強度において１日１回投与される。一態様において、テポチニブの投薬量は、経口で１日１回、４５０ｍｇ（テポチニブ塩酸塩水和物５００ｍｇと等価）である。一態様において、テポチニブの投薬量は、経口で１日１回、２２５ｍｇである。２２５ｍｇのテポチニブは、２５０Ｍｇのテポチニブ塩酸塩水和物と等価である。一態様において、テポチニブの投薬量は、経口で１日１回、９００ｍｇである。９００ｍｇのテポチニブは、１０００Ｍｇのテポチニブ塩酸塩水和物と等価である。
【0061】
上述の態様のいずれにおいても、ｃＭＥＴインヒビターは、１日２回投与される。一態様において、ｃＭＥＴインヒビターは２５０ｍｇの投薬量強度において１日２回投与される。一態様において、ｃＭＥＴインヒビターは５００ｍｇの投薬量強度において１日２回投与される。一態様において、テポチニブの投薬量は、経口で１日２回、４５０ｍｇである。
【0062】
上述の態様のいずれにおいても、ｃＭＥＴインヒビターは、１日３回投与される。一態様において、ｃＭＥＴインヒビターは約１００ｍｇの投薬量強度において１日３回投与される。
【0063】
上述の態様のいずれにおいても、ｃＭＥＴインヒビターは、１日４回投与される。一態様において、ｃＭＥＴインヒビターは２５０ｍｇの投薬量強度において１日４回投与される。一態様において、テポチニブの投薬量は、経口で１日４回、２２５ｍｇである。
【0064】
上述の態様のいずれにおいても、ｃＭＥＴインヒビターは、週に３回投与される。一態様において、ｃＭＥＴインヒビターは約６０ｍｇと３１５ｍｇとの間の投薬量強度において週に３回投与される。
【0065】
上述の態様のいずれにおいても、ｃＭＥＴインヒビターは、少なくとも１０週の期間投与される。上述の態様のいずれかの一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、少なくとも約１１週、１２週、１３週、１４週、１５週、１６週、１７週、１８週、１９週、２０週、２１週、２２週、２３週、２４週、２５週、２６週、２７週、２８週、２９週、３０週、３１週、３２週、３３週、３４週、３５週、３６週、３７週、３８週、３９週、４０週、４１週、４２週、４３週、４４週、４５週、４６週、４７週、４８週、４９週、５０週、５１週、または５２週の期間投与される。上述の態様のいずれかの一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、少なくとも約１１週～約５２週、好ましくは少なくとも約１１～２５週、より好ましくは少なくとも約１５～２１週、最も好ましくは少なくとも約１８～２０週、非常に好ましくは少なくとも約１９週の期間投与される。
【0066】
上述の態様のいずれかの別の側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、少なくとも約１０～５２週間、特に少なくとも約１０～１９週間投与される。一態様において、ｃＭＥＴインヒビターは、１日１回約３００ｍｇ～１４００ｍｇの投薬量強度において、少なくとも約１０～５２週間、特に少なくとも約１０～１９週間投与される。一態様において、ｃＭＥＴインヒビターは、１日２回約４５０ｍｇ～５００ｍｇの投薬量強度において、少なくとも約１０～５２週間、特に少なくとも約１０～１９週間投与される。一態様において、テポチニブ塩酸塩水和物は、１日２回約５００ｍｇの投薬量強度において、少なくとも約１０～５２週間、特に少なくとも約１０～１９週間投与される。
【0067】
本発明の一態様において、対象は、播種性神経膠芽腫に罹患している。本発明の一態様において、播種性神経膠芽腫は処置される。この発明の一態様において、対象は、特に７ｑ３１．２にてＭＥＴ増幅を保有する神経膠芽腫に罹患している。本発明の一態様において、ＭＥＴ増幅を保有する神経膠芽腫は処置される。本発明の一態様において、対象は、播種性神経膠芽腫、および／またはＭＥＴ増幅を保有する神経膠芽腫に罹患している。本発明の一態様において、播種性神経膠芽腫、ＭＥＴ増幅を保有する神経膠芽腫、またはそれらの組み合わせは処置される。ＭＥＴ増幅は、ＭＥＴ遺伝子のコピー数の増大によってもたらされ、ＥＧＦＲ遺伝子変異陽性ＮＳＣＬＣにおける耐性メカニズムとして識別されている(Socinski et al., 2021, JCO Precision Oncology 5: 653)。この発明の一態様において、対象は、７ｑ３１．２にてＩＤＨ野生型、ＭＧＭＴ非メチル化および／またはＭＥＴ増幅を保有する神経膠芽腫に罹患している。この発明の一態様において、７ｑ３１．２にてＩＤＨ野生型、ＭＧＭＴ非メチル化またはＭＥＴ増幅、あるいはそれらの組み合わせを保有する神経膠芽腫は処置される。この態様の別の側面において、神経膠芽腫は、ＭＥＴ－エクソン１４スキッピングを保有する
【0068】
これらのバイオマーカーは、標準的な方法によって確定され得る。さまざまな態様において、バイオマーカータンパク質レベルは、定量的ウェスタンブロット、多数のイムノアッセイフォーマット、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学、組織化学、または腫瘍溶解物のＦＡＣＳ分析の使用、蛍光免疫染色、ビードベースの懸濁液イムノアッセイ、ルミネックス技術、または近接ライゲーションアッセイを含む方法によって確定される。別の態様において、バイオマーカーＲＮＡレベルは、マイクロアレイチップ、ＲＴ－ＰＣＲ、ｑＲＴ－ＰＣＲ、マルチプレックスｑＰＣＲ、またはｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションを含む方法によって確定される。別の態様において、マーカーは次世代シーケンシング、リキッドバイオプシー、および／または組織生検によって検出される。例えば、ＭＥＴエクソン１４スキッピングは、ＤＮＡベースの方法（例として、次世代シーケンシングまたはサンガーシーケンシング）、ならびにＲＮＡベースの方法（例として、次世代シーケンシングまたは定量的ＰＣＲアッセイ）によって検出され得て、各事例において、液体生検（例として、Ｇｕａｒｄａｎｔ３６０ ＣＤｘ Ｔｅｓｔ Ｖｅｒｓｉｏｎ ２．１０（７３遺伝子）アッセイを使用）または組織生検からのサンプルを使用する。
【0069】
この方法には、いずれの好適なサンプルが使用され得る。かかるものの非限定的な例は、血清サンプル、血漿サンプル、全血、すい液サンプル、組織サンプル、腫瘍溶解物、または腫瘍サンプルの１以上を包含し、これらは、例として、針生検、コア生検、または針穿刺吸引から単離され得る。例えば、組織、血漿、または血清サンプルは、本発明のｃＭＥＴインヒビターを用いた処置前、および任意で処置中に患者から採取する。得られた情報は、患者が、がん治療に対して有利に応答するであろうか、または不利に応答するであろうかを示すこともある。
【0070】
本発明の一態様において、対象は、処置中の入院中の患者である。別の態様において、対象は、処置中の外来診療の患者である。先行する態様の一側面において、対象は、入院中の患者に処置されるものから外来診療の患者に処置されるものまで推移した後に、ｃＭＥＴインヒビターの投与を継続してもよい。
【0071】
一態様において、ｃＭＥＴインヒビターの投与は、１以上の臨床的有用性をもたらす。この態様の一側面において、１以上の臨床的有用性は、対象における、完全奏効、完全奏効の可能性の増大、薬剤耐性発生の可能性の低減、腫瘍進行までの時間の延長、および腫瘍再発までの時間の延長を含む群から選択され；好ましくは完全奏効である。
【0072】
本発明はまた、神経膠芽腫の処置を、これを必要とする対象においてする方法を提供し、それは有効量の本発明の化合物を対象に投与することを含む。神経膠芽腫を処置または阻害する有効量は、非処置のコントロール対象と比較して、腫瘍負荷および死亡率などの神経膠芽腫の兆候の１以上の低減を引き起こすであろう量である。
【0073】
本発明の一態様は、神経膠芽腫の処置を、これを必要とする対象においてする方法であって、有効量のｃＭＥＴインヒビター、またはその薬学的に許容し得る塩、および／または溶媒和物または水和物を対象に投与することを含む。この態様の一側面において、対象はヒトである。この態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、少なくとも１０週間対象へ投与される。この態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、テポチニブ、またはその薬学的に許容し得る塩、溶媒和物および／もしくは水和物である。この態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、４－［（Ｓ）－２－アゼチジン－１－イル－１－（４－クロロ－３－トリフルオロメチル－フェニル）－エチルアミノ］－キナゾリン－８－カルボン酸アミドとの組み合わせにおいて投与されない。この態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、単一の処置方針において少なくとも１０週間投与される。この態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、同じ処置方針において化学療法と組み合わせて投与されない。
【0074】
本発明の好ましい一態様は、それを必要とするヒトにおいて神経膠芽腫を処置する方法であって、有効量のテポチニブ、またはその薬学的に許容し得る塩、溶媒和物および／もしくは水和物を、ヒトへ少なくとも１０週間投与することを含み、ここでテポチニブは、１の処置方針において化学療法と組み合わせて投与されない。より具体的には、本発明の好ましい一態様は、それを必要とするヒト対象における神経膠芽腫の長期処置のための方法であって、対象へ有効量のｃＭＥＴインヒビターを１の処置方針において少なくとも１０週間投与することを含み、ｃＭＥＴインヒビターは以下：
または、その薬学的に許容し得る塩、溶媒和物および／または水和物であって、ならびにｃＭＥＴインヒビターが、同じ処置方針において化学療法と組み合わせて投与されない。
【化4】
【0075】
この態様の別の側面において、ｃＭＥＴインヒビターの投与は、長期的に対象において抗腫瘍活性をもたらす。
【0076】
用語「同じ処置方針」、「１のおよび同じ処置方針」、「特定の処置方針」、および「単一の処置方針」は、文脈が別段の指示をしない限り、本明細書において互換的に使用され、定義された処置方針、すなわち、第一選択処置方針、第二選択処置方針、またはより高次の処置方針を指すが、それらの組合せを指すものではない。
【0077】
さまざまな態様において、本発明の方法は、第一選択、第二選択、第三選択、またはそれ以降の処置方針として用いられる。処置方針とは、患者が受ける異なる薬物またはその他の治療を用いた処置の順序における順番を指す。第一選択治療方式とは、最初に行われる処置のことであり、第二選択治療、または第三選択治療は、それぞれ第一選択治療の後、または第二選択治療の後に行われる。したがって、第一選択治療は、疾患または疾病に対する最初の処置である。神経膠芽腫を包含するがんを持つ患者において、時には一次治療または一次処置と呼ばれる第一選択治療は、手術、化学療法、放射線療法、またはこれらの治療の組み合わせであり得る。典型的に、患者がその後の化学療法方式（第二選択または第三選択治療）を受けるのは、患者が、第一選択または第二選択治療に対して肯定的な臨床転帰を示さなかったか、あるいは亜臨床的な応答しか示さなかったか、あるいは肯定的な臨床的応答を示したが後に後戻りを経験し、場合によっては以前の肯定的な応答を引き出した以前の治療に対して抵抗性を示す疾患を持つようになったためである。
【0078】
この態様の別の側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、神経膠芽腫の第一選択処置において投与される。この態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、神経膠芽腫の第一選択処置において投与され、本方法は、ｃＭＥＴインヒビターの初回投与の後に、手術、放射線療法、化学療法、およびそれらの組み合わせの群から選択される処置または処置方針を施すことをさらに含む。本発明のｃＭＥＴインヒビターによって提案される安全性および臨床的有用性は、神経膠芽腫患者における第一選択設定となることを保証するものである。特に、テポチニブは神経膠芽腫に罹患している患者にとって、新たな標準処置になることもある。この態様の別の側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、神経膠芽腫の第二選択処置またはより高次の処置方針において投与される。
【0079】
この態様の別の側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、神経膠芽腫の第二選択処置またはより高次の処置方針において投与され、本方法は、ｃＭＥＴインヒビターの初回投与前に、手術、放射線療法、化学療法、およびそれらの組み合わせの群から選択される処置または処置方針を施すことをさらに含む。対象が少なくとも１巡の以前のがん治療を受けた限り、治療の以前の回数に制限はない。以前のがん治療の巡は、例として、化学療法剤（本発明によるｃＭＥＴインヒビターを除く）、放射線療法または化学放射線療法を用いて対象を処置するための定められた予定／段階を指し、対象はかかる以前の処置に失敗し、予定よりも早く完了または中止された。その理由のひとつは、がんが以前の治療に対して抵抗性であった、あるいは抵抗性になったことであり得る。ｃＭＥＴインヒビターの使用は、この耐性機序を抑制し、治療の効果を回復させる。耐性を持つ患者の集団は処置可能となり、改善された応答を示す。一側面において、対象は、少なくとも１巡または１方針の以前の神経膠芽腫処置を受け；ここで、任意に、神経膠芽腫は以前の処置に対して抵抗性であったか、または抵抗性になった。１巡の以前の神経膠芽腫治療と１方針の以前の神経膠芽腫処置とは、本明細書では互換的に使用される。この態様の一側面において、対象は、手術、放射線療法および／または化学療法を用いて以前処置されている。
【0080】
上記の態様のいずれかにおいて、ｃＭＥＴインヒビターの投与は、１以上の臨床的有用性を対象へもたらす。この態様の一側面において、１以上の臨床的有用性は、完全奏効、完全奏効の可能性の増大、薬剤耐性発生の可能性の低減、腫瘍進行までの時間の延長、および腫瘍再発までの時間の延長である。
【0081】
本発明の化合物は、神経膠芽腫の発病前もしくはそれに続いて、または対象において神経膠芽腫が診断された後に投与され得る。本発明の使用の先述の化合物および医薬産物は、具体的には治療処置のために使用される。治療的に関係のある効果は、障害の１以上の症状をある程度和らげるか、または疾患または病態に関連するかまたはそれを引き起こす１以上の生理学的または生化学的パラメータを部分的または完全のいずれかで常態に戻す。モニタリングは、化合物が、例として、応答をブーストし、および疾患の症状を根絶するために、別個の間隔で投与される場合は、処置の一種として考えられる。本発明の方法はまた、障害を発症する可能性の低減する、または軽度から中程度の疾患の兆候に先立って神経膠芽腫に関連する障害の開始を予防までもする、または神経膠芽腫の発生した、およびそれの継続する症状を処置するためにも使用され得る。
【0082】
本発明はさらにまた、本発明に従う少なくとも１の使用のための化合物、またはその薬学的に許容し得る塩、溶媒和物および／または水和物を含む医薬に関する。
単独療法
単独療法
【0083】
本発明は、対象における成功した神経膠芽腫の長期治療に関する。さまざまな態様において、ｃＭＥＴインヒビターは単独で、すなわち単独療法として投与される。一態様において、ｃＭＥＴインヒビターは、特定の処置方針において単独療法として投与される。それは、ｃＭＥＴインヒビターを用いた単独療法の前または後に、別の処置方針において他の処置を施すことを除外するものではない。一態様において、ｃＭＥＴインヒビターは、全体的に単独療法として投与される。それは単一の有効成分処置であり、唯一の処置方針（すなわち、第一選択処置）である。
【0084】
さまざまな態様において、ｃＭＥＴインヒビターは、４－［（Ｓ）－２－アゼチジン－１－イル－１－（４－クロロ－３－トリフルオロメチル－フェニル）－エチルアミノ］－キナゾリン－８－カルボン酸アミドとの組み合わせにおいて投与されない。好ましくは、ｃＭＥＴインヒビターは、いずれのｐ７０Ｓ６ｋインヒビターなしで、より好ましくは、いずれの化学療法剤なしで、最も好ましくは、いずれの化学療法または放射線療法なしで、非常に好ましくは、いずれの他の治療剤なしで投与される（以下、一体的に限定組み合わせ療法と呼ぶ）。
【0085】
本発明者らは、ｃＭＥＴインヒビターが、単独療法（または限定組み合わせ療法）として少なくとも１０週間以上、好ましくは１９週間以上まで、より好ましくは５２週間以上まで投与される場合、耐性のない長期処置が成功することを、驚くべきことに見出した。先行技術は、ｃＭＥＴインヒビター、特にテポチニブが、薬剤耐性および腫瘍進行の発生なしに、単独療法（または限定組み合わせ療法）として、神経膠芽腫を成功裏に処置するために使用され得るということを教示も示唆もしていない。
組み合わせ処置
組み合わせ処置
【0086】
さまざまな態様において、ｃＭＥＴインヒビターは、手術、放射線療法、化学療法、およびそれらの組み合わせと組み合わせて投与される。それらは、同時に、別々に、または順番に、ならびにいずれの順序でも施され得る。本発明の組み合わせ療法の個々の組み合わせ相手は、治療中の異なる時期に別々に、あるいは分割または単一の組み合わせ形態において同時に施されてよい。組み合わせにおける処置方式は、異なるが重複する送達方式（例として、毎日、１日２回、それに対して、単回または週１回の投与）を有してもよい。これらの態様の一側面において、方法は、ｃＭＥＴインヒビターの初回投与前に、手術、放射線療法、化学療法、およびそれらの組み合わせの群から選択される処置または処置方針を施すことをさらに含む。任意で、ｃＭＥＴインヒビターの初回投与前に、手術または放射線療法、もしくはそれらの組み合わせが最初に、化学療法が続いて施される。これらの態様の一側面において、方法は、ｃＭＥＴインヒビターの初回投与前に、手術、放射線療法、およびそれらの組み合わせからなる群から選択され、任意で化学療法が続く処置を施すことを含む。
【0087】
一態様において、ｃＭＥＴインヒビターは、手術と組み合わせて投与される。この態様の一側面において、手術は葉切除および／または切除である。
【0088】
一態様において、ｃＭＥＴインヒビターは、放射線療法と組み合わせて投与される。ｃＭＥＴインヒビターと放射線療法とは、１のかつ同じ処置方針においてか、または異なる処置方針においてかのどちらかの、いずれの処置方針においても施され得る。これらの態様の一側面において、放射線療法は、神経膠芽腫の先行する処置方針において、すなわち、神経膠芽腫のより高次の処置方針におけるｃＭＥＴインヒビターの初回投与前に、施される。これらの態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターと放射線療法とは、同じ処置方針において施される。同一選択処置の好ましい態様において、放射線療法は、単回照射量として、またはｃＭＥＴインヒビターの初回投与後に、またはそれらの組み合わせで施される。同一選択処置のより好ましい態様において、放射線療法は、ｃＭＥＴインヒビターの初回投与後９６時間以内、好ましくは７２時間以内、より好ましくは４８時間以内、最も好ましくは３６時間以内、非常に好ましくは２４時間以内に施される。一態様において、放射線療法は、同一の処置方針において、ｃＭＥＴインヒビターの初回投与後３６時間以内に施される。
【0089】
放射線療法の例は、陽子線治療、ガンマ線照射、中性子線放射線療法、電子線放射線療法、小線源治療、低線量放射線療法、全身放射性同位元素、および強度変調放射線療法（ＩＭＲＴ）である。一態様において、放射線療法は陽子線照射である。
【0090】
いくつかの態様において、放射線療法は、標準的な分割（例として、１日に１．８～２Ｇｙ、週５日）、毎日１回に総線量５０～７０Ｇｙまでのいずれかで行われる。他の分割スケジュールもまた想定され得て、例えば、１回あたりの線量は少ないが１日２回で、ｃＭＥＴインヒビターもまた１日２回とする。より短い期間にわたり、より高い毎日の線量を与えることもまた可能である。一態様において、放射線治療は、１０００～６０００ｃＧｙ、好ましくは２０００～５０００ｃＧｙ、より好ましくは３０００～４０００ｃＧｙ、最も好ましくは３５００～３７００ｃＧｙを含む。この態様の一側面において、放射線治療の後に、１０００～４０００ｃＧｙ、好ましくは２０００～３０００ｃＧｙ、より好ましくは２３００～２５００ｃＧｙにて腫瘍床へのブーストが続く。好ましい態様において、陽子線放射線療法などの放射線療法が、約３０００～４０００ｃＧｙを含み、任意で続いて、２０００～３０００ｃＧｙの腫瘍床へのブーストを含む。
【0091】
一態様において、ｃＭＥＴインヒビターが同じ処置方針において化学療法剤と組み合わせて投与されないという条件で、ｃＭＥＴインヒビターは、１以上の追加の治療剤と組み合わせて投与される。相乗的または増加した効果は、医薬組成物中の２種以上の化合物を使用して達成されてもよい。活性成分は、同時にかまたは連続してのいずれかで使用され得る。一態様において、ｃＭＥＴインヒビターと抗がん剤とは異なる処置方針において投与されるという条件で、ｃＭＥＴインヒビターは、抗がん剤と組み合わせて投与される。この態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、神経膠芽腫の第二選択処置またはより高次の処置方針において投与され、ならびに化学療法は、ｃＭＥＴインヒビターの初回投与前に施される。この態様の一側面において、ｃＭＥＴインヒビターは、神経膠芽腫の第一選択処置において投与され、ならびに化学療法はｃＭＥＴインヒビターの初回投与後に施される。この態様の一側面において、化学療法または抗がん剤は、テモゾロミドである。
【0092】
いくつかの態様において、ｃＭＥＴインヒビターと１以上の追加の治療剤との組み合わせは、ｃＭＥＴインヒビターまたは追加の治療剤が、単独で投与されるときの投与される有効量と比較して、同じ結果を達成する投与されるｃＭＥＴインヒビターおよび／または１以上の追加の治療剤の有効量（これらに限定されないが、投薬量の体積、投薬量の濃度、および／または投与される合計薬物用量を包含する）を低減する。いくつかの態様において、ｃＭＥＴインヒビターと追加の治療剤との組み合わせは、追加の治療剤単独での投与と比較して合計処置期間を低減する。いくつかの態様において、ｃＭＥＴインヒビターと追加の治療剤との組み合わせは、追加の治療剤単独での投与に関連する副作用を低減する。いくつかの態様において、有効量のｃＭＥＴインヒビターと追加の治療剤との組み合わせは、有効量のｃＭＥＴインヒビターまたは追加の治療剤単独と比較して、より効果的である。一態様において、有効量のｃＭＥＴインヒビターと１以上の追加の治療剤との組み合わせは、いずれかの剤の単独での投与よりも、１以上の追加の臨床的有用性をもたらす
発明の項目
発明の項目
【0093】
本発明はまた、以下の項目を含む：
１ 神経膠芽腫の長期処置のためのそれを必要とするヒト対象における方法であって、対象へ有効量のｃＭＥＴインヒビターを少なくとも１０週間投与することを含み、ここでｃＭＥＴインヒビターは以下：
またはその薬学的に許容し得る塩、溶媒和物および／または水和物であり、それは４－［（Ｓ）－２－アゼチジン－１－イル－１－（４－クロロ－３－トリフルオロメチル－フェニル）－エチルアミノ］－キナゾリン－８－カルボン酸アミドとの組み合わせにおいて投与されない、前記方法。
２ ｃＭＥＴインヒビターが、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル塩酸塩水和物、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル塩酸塩一水和物、および３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル塩酸塩一水和物の結晶変態Ｈ２の群から選択される、項目１に記載の方法。
３ 播種性神経膠芽腫が処置される、項目１および２のいずれか一項目に記載の方法。
４ ＭＥＴ増幅を保有する神経膠芽腫が処置される、項目１～３のいずれか一項目に記載の方法。
５ ７ｑ３１．２にてＩＤＨ野生型、ＭＧＭＴ非メチル化および／またはＭＥＴ増幅を保有する神経膠芽腫が処置される、項目１～４のいずれか一項目に記載の方法。
６ ｃＭＥＴインヒビターの投与が、完全奏効の可能性の増大、薬剤耐性発生の可能性の低減、腫瘍進行までの時間の延長、および腫瘍再発までの時間の延長の群から選択される、１以上の臨床的有用性をもたらす、項目１～５のいずれか一項目に記載の方法。
７ ｃＭＥＴインヒビターが、少なくとも約１１～２５週間投与される、項目１～６のいずれか一項目に記載の方法。
８ ｃＭＥＴインヒビターが、毎日投与される、項目１～７のいずれか一項目に記載の方法。
９ 投与されるｃＭＥＴインヒビターの総量が、１日当たり約２２５ｍｇ～約１０００ｍｇの間である、項目１～８のいずれか一項目に記載の方法。
１０ ｃＭＥＴインヒビターが、経口投与を介して投与される、項目１～９のいずれか一項目に記載の方法。
１１ 手術、放射線療法、化学療法、およびそれらの組み合わせの群から選択される処置を施すことをさらに含む、項目１～１０のいずれか一項目に記載の方法。
１２ 放射線療法が施され；ここで任意に、放射線療法が陽子照射である、項目１１に記載の方法。
１３ 放射線療法が、約３０００～４０００ｃＧｙを含み、任意で続いて、２０００～３０００ｃＧｙにて腫瘍床へのブーストを含む、項目１１または１２に記載の方法。
１４ 化学療法が施され；ここで任意に、化学療法がテモゾロミドである、項目１１に記載の方法。
１５ 対象が、少なくとも１巡の以前の神経膠芽腫処置を受け；ここで任意に、神経膠芽腫は以前の処置に対して抵抗性であったか、または抵抗性になった、項目１～１４のいずれか一項目に記載の方法。
１６ ｃＭＥＴインヒビターが、神経膠芽腫の第二選択処置またはより高次の処置方針において投与される、項目１～１５のいずれか一項目に記載の方法。
１７ ｃＭＥＴインヒビターの初回投与前に、手術、放射線療法、およびそれらの組み合わせからなる群から選択され、任意で化学療法が続く処置を施すことをさらに含む、項目１～１６のいずれか一項目に記載の方法。
１８ ｃＭＥＴインヒビターが、神経膠芽腫の第一選択処置において投与される、項目１～１４のいずれか一項目に記載の方法。
１９ ｃＭＥＴインヒビターが、放射線療法または化学療法と組み合わせて投与されない、項目１～１０のいずれか一項目に記載の方法。
２０ ｃＭＥＴインヒビターが、単独療法として投与される、項目１～１０のいずれか一項目に記載の方法。
１ 神経膠芽腫の長期処置のためのそれを必要とするヒト対象における方法であって、対象へ有効量のｃＭＥＴインヒビターを少なくとも１０週間投与することを含み、ここでｃＭＥＴインヒビターは以下：
【化5】
２ ｃＭＥＴインヒビターが、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル塩酸塩水和物、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル塩酸塩一水和物、および３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル塩酸塩一水和物の結晶変態Ｈ２の群から選択される、項目１に記載の方法。
３ 播種性神経膠芽腫が処置される、項目１および２のいずれか一項目に記載の方法。
４ ＭＥＴ増幅を保有する神経膠芽腫が処置される、項目１～３のいずれか一項目に記載の方法。
５ ７ｑ３１．２にてＩＤＨ野生型、ＭＧＭＴ非メチル化および／またはＭＥＴ増幅を保有する神経膠芽腫が処置される、項目１～４のいずれか一項目に記載の方法。
６ ｃＭＥＴインヒビターの投与が、完全奏効の可能性の増大、薬剤耐性発生の可能性の低減、腫瘍進行までの時間の延長、および腫瘍再発までの時間の延長の群から選択される、１以上の臨床的有用性をもたらす、項目１～５のいずれか一項目に記載の方法。
７ ｃＭＥＴインヒビターが、少なくとも約１１～２５週間投与される、項目１～６のいずれか一項目に記載の方法。
８ ｃＭＥＴインヒビターが、毎日投与される、項目１～７のいずれか一項目に記載の方法。
９ 投与されるｃＭＥＴインヒビターの総量が、１日当たり約２２５ｍｇ～約１０００ｍｇの間である、項目１～８のいずれか一項目に記載の方法。
１０ ｃＭＥＴインヒビターが、経口投与を介して投与される、項目１～９のいずれか一項目に記載の方法。
１１ 手術、放射線療法、化学療法、およびそれらの組み合わせの群から選択される処置を施すことをさらに含む、項目１～１０のいずれか一項目に記載の方法。
１２ 放射線療法が施され；ここで任意に、放射線療法が陽子照射である、項目１１に記載の方法。
１３ 放射線療法が、約３０００～４０００ｃＧｙを含み、任意で続いて、２０００～３０００ｃＧｙにて腫瘍床へのブーストを含む、項目１１または１２に記載の方法。
１４ 化学療法が施され；ここで任意に、化学療法がテモゾロミドである、項目１１に記載の方法。
１５ 対象が、少なくとも１巡の以前の神経膠芽腫処置を受け；ここで任意に、神経膠芽腫は以前の処置に対して抵抗性であったか、または抵抗性になった、項目１～１４のいずれか一項目に記載の方法。
１６ ｃＭＥＴインヒビターが、神経膠芽腫の第二選択処置またはより高次の処置方針において投与される、項目１～１５のいずれか一項目に記載の方法。
１７ ｃＭＥＴインヒビターの初回投与前に、手術、放射線療法、およびそれらの組み合わせからなる群から選択され、任意で化学療法が続く処置を施すことをさらに含む、項目１～１６のいずれか一項目に記載の方法。
１８ ｃＭＥＴインヒビターが、神経膠芽腫の第一選択処置において投与される、項目１～１４のいずれか一項目に記載の方法。
１９ ｃＭＥＴインヒビターが、放射線療法または化学療法と組み合わせて投与されない、項目１～１０のいずれか一項目に記載の方法。
２０ ｃＭＥＴインヒビターが、単独療法として投与される、項目１～１０のいずれか一項目に記載の方法。
【0094】
本発明は、本明細書に記載の特定の化合物、医薬組成物、使用および方法に限定されるものではない（かかる事柄は当然変動し得るので）ことを理解されたい。本明細書で使用される専門用語は、特定の態様を記載する目的だけのものであり、添付の特許請求の範囲によってのみ定義される本発明の範囲を限定することを意図するものではないことを理解されたい。本発明に従って不可欠な技術は、明細書に詳細に記載されている。詳細に記載されていない他の技術は、当業者によく知られている既知の標準的な方法に対応するか、またはその技術は、引用文献、特許出願、または標準文献においてより詳細に記載されている。本出願中の他の暗示が与えられない限り、それらは例としてのみ使用され、本発明に従って不可欠であるとは考えられないが、それらは他の好適なツールおよび生物学的材料によって置き換えられ得る。
【発明を実施するための形態】
【0095】
例証
以下の例に描かれるとおり、ある例示の態様において、化合物は、以下の一般的な手順に従って調製される。
以下の例に描かれるとおり、ある例示の態様において、化合物は、以下の一般的な手順に従って調製される。
【実施例1】
【0096】
合成
化合物「Ａ２５７」と称される、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル（遊離塩基）は、WO2009/006959の実施例４０、およびWO2009/007074の実施例３に記載されるように、以下の通り合成され得る：
化合物「Ａ２５７」と称される、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル（遊離塩基）は、WO2009/006959の実施例４０、およびWO2009/007074の実施例３に記載されるように、以下の通り合成され得る：
【化6】
【0097】
１１５ｍｌのＴＨＦ中の１３．０ｇ（５６．５ｍｍｏｌ）の３－（５－ヒドロキシ－ピリミジン－２－イル）－安息香酸メチルエステルと１３．４ｇ（６２．１ｍｍｏｌ）のＮ－Ｂｏｃ－ピペリジンメタノールの懸濁液へ、１７．７ｇ（６７．８ｍｍｏｌ）のトリフェニル－ホスフィンを入れた。懸濁液を５℃まで冷却した。この温度にて保管した懸濁液へ、１３．３ｍｌ（６７．８ｍｍｏｌ）のジイソプロピルアゾジカルボキシレートを４５分以内で攪拌下で滴下して入れた。反応混合物を、室温にて１時間撹拌した。その後、さらに２２．２ｇ（８４．７ｍｍｏｌ）のトリフェニルホスフィン、および１６．６ｍｌ（８４．７ｍｍｏｌ）のジイソプロピルアゾジカルボキシレートを添加した。反応混合物を、室温にて１８時間撹拌し、真空中で濃縮した。結果として得られた４－［２－（３－メトキシカルボニル－フェニル）－ピリミジン－５－イルオキシメチル］－ピペリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステルの固体を吸い上げ、ジエチルエーテルで洗浄し、クロマトグラフィー（シリカゲルカラム、ならびに溶離／移動相としてジクロロメタン／メタノール）を行った。
【0098】
２０ｍｌのＴＨＦ中の１．７１ｇ（３．９９ｍｍｏｌ）の４－［２－（３－メトキシカルボニル－フェニル）－ピリミジン－５－イルオキシメチル］－ピペリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステルの懸濁液へ、ＴＨＦ中の２５ｍｌ（２５ｍｍｏｌ）の１Ｍのジイソブチルアルミニウムハイドライド溶液を窒素下で滴下して入れた。反応混合物を室温にて１時間撹拌し、硫酸ナトリウムの飽和溶液と混合した。結果として得られた沈殿物を吸い上げ、ＴＨＦおよび温かい２－プロパノールで洗浄した。濾液を濃縮し、ｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテルから再結晶し、｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－フェニル｝－メタノールがベージュの結晶として結果としてできた。
【0099】
２ｍｌのＴＨＦ中の３１３ｍｇ（１．００ｍｍｏｌ）の｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－フェニル｝－メタノール溶液へ、２６４ｍｇ（１．３０ｍｍｏｌ）の３－（６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル、および３９７ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）のトリフェニルホスフィンを順に添加した。反応混合物を氷浴中で冷却し、２９４μｌ（１．５ｍｍｏｌ）のジイソプロピルアゾジカルボキシレートを滴下して添加する。反応混合物を、室温にて１８時間撹拌し、その後濃縮した。残渣でクロマトグラフィー（シリカゲルカラム、ならびに溶離／移動相としてジクロロメタン／メタノール）を行った。画分を含む生成物をプールし、濃縮し、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリルの残渣をｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテルで煮出し、吸い上げ、真空中で乾燥した。
【0100】
塩形成によって、化合物「Ａ２５７」からヘミ硫酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、硫酸塩、コハク酸塩、および塩酸塩を得ることができる。
【0101】
代替的に、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル（遊離塩基）を、WO 2009/006959の実施例４３に記載の通り、以下のように合成し得る：
【化7】
【0102】
４０ｍｌの１－メチル－２－ピロリドン中の４．１５ｇ（２０ｍｍｏｌ）の３－（６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリルの懸濁液へ、６．００ｇ（２１ｍｍｏｌ）の５－ブロモ－２－（３－クロロメチル－フェニル）－ピリミジン、および２．７６ｇ（３４１ｍｍｏｌ）の炭酸カリウムを入れた。反応混合物を、８０℃にて１８時間撹拌した。その後、反応混合物を２００ｍｌの水に入れた。結果として得られた沈殿物、３－｛１－［３－（５－ブロモピリミジン－２－イル）－ベンジル］－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル｝－ベンゾニトリルを吸い上げ、水で洗浄し、真空中で乾燥させた。
【0103】
８５ｍｌのＤＭＦ中の１８．０ｇ（４１．０ｍｍｏｌ）の３－｛１－［３－（５－ブロモピリミジン－２－イル）－ベンジル］－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル｝－ベンゾニトリル溶液へ、１１．８ｇ（４７ｍｍｏｌ）のビス（ピナコラート）ジボロン、および１１．９ｇ（１２２ｍｍｏｌ）の酢酸カリウムを入れた。反応混合物を、窒素下で８０℃まで加熱した。この温度にて１５分間撹拌した後、２７３ｍｇ（１．２２ｍｍｏｌ）の酢酸パラジウム（ＩＩ）を添加し、反応混合物を窒素下で８０℃にて２時間撹拌した。その後、反応混合物を室温まで冷却した後、水とジクロロメタンとを添加し、珪藻土(diatomite)／珪藻土(kieselguhr)上で濾過し、有機相を分離した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮して３－（６－オキソ－１－｛３－［５－（４，４，５，５－テトラメチル－［１，３，２］ジオキサボロラン－２－イル）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリルを灰色固体として産出し、これは精製せずにその後の反応に使用することができた。
【0104】
３５ｍｌのＴＨＦおよび３５ｍｌの水中の５．３３ｇ（１０．９ｍｍｏｌ）の３－（６－オキソ－１－｛３－［５－（４，４，５，５－テトラメチル－［１，３，２］ジオキサボロラン－２－イル）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル懸濁液へ、４．９３ｇ（４９．４ｍｍｏｌ）の過ホウ酸ナトリウムを氷冷下で分けて入れた後、室温にて２時間撹拌した。反応混合物を、３００ｍｌのジクロロメタンおよび１００ｍｌの飽和塩化アンモニウム水溶液と混合した。有機相を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、ならびに濃縮した。３－｛１－［３－（５－ヒドロキシ－ピリミジン－２－イル）－ベンジル］－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル｝－ベンゾニトリルの残渣を、メタノールから再結晶した。
【0105】
２５０ｍｌのＴＨＦ中の２５ｇ（６５．６ｍｍｏｌ）の３－｛１－［３－（５－ヒドロキシ－ピリミジン－２－イル）－ベンジル］－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル｝－ベンゾニトリル懸濁液へ、１５．６ｇ（６８．８ｍｍｏｌ）のＮ－Ｂｏｃ－４－ピペリジン－メタノールおよび１９．１ｇ（７２．１ｍｍｏｌ）のトリフェニルホスフィンを順に添加した。次に、１４．９ｍｌ（７２．１ｍｍｏｌ）のジイソプロピルアゾジカルボキシレートを氷冷下に滴下添加した。その結果の溶液を、室温にて２時間撹拌した。反応混合物を、さらに７５０ｍｌの２－プロパノールおよび１３．１ｍｌのエタノール中水酸化カリウムの０．５Ｍ溶液と、エタノール中で混合した。結果として得られた４－（２－｛３－［３－（３－シアノ－フェニル）－６－オキソ－６Ｈ－ピリダジン－１－イルメチル］－フェニル｝－ピリミジン－５－イルオキシメチル）－ピペリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステルの沈殿物を吸い上げ、ジエチルエーテルで洗浄し、真空中で乾燥させた。
【0106】
８０ｍｌのギ酸中の１６．０ｇ（２８．０ｍｍｏｌ）の４－（２－｛３－［３－（３－シアノ－フェニル）－６－オキソ－６Ｈ－ピリダジン－１－イルメチル］－フェニル｝－ピリミジン－５－イルオキシメチル）－ピペリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチルエステルの水溶液へ、６．６０ｍｌの３５％ホルムアルデヒド水溶液を入れた。反応混合物を、１１０℃の温度にて２時間撹拌した後、３００ｍｌの水を添加した。反応混合物を、１５０ｍｌの容積まで真空中で濃縮し、その後２００ｍｌのジクロロメタンを用いて抽出した。有機相を炭酸水素水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、ならびに濃縮した。３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリルの残渣を、２－プロパノールから再結晶した。
【0107】
３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル塩酸塩一水和物の結晶変態Ｈ２を、WO 2010/078897の実施例１２に記載の通り、以下のように調製し得る：
【0108】
おおよそ５１１ｍｇの３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリルを、７５ｍＬのアセトンに分散させ、１．１２ｍＬの１Ｎ ＨＣｌ水溶液を添加した。澄んだ溶液を得なかった。しかしながら、残った固体状態の残渣を濾過によって除去し、その後澄んだ溶液を得た。結果として得られた済んだ溶液をその後一晩インキュベートし、結晶を得た。結晶を濾過によって分離し、６５℃にて真空乾燥キャビネット内で１ｈ乾燥させるか（精製オプション１）、または結晶を濾過によって分離し、アセトンを用いて洗浄し、真空乾燥キャビネット内で乾燥させた（精製オプション２）。
【0109】
化合物「Ａ７」の粉末Ｘ線回折パターンを、European Pharmacopeia 6th Edition chapter 2.9.33（Ｃｕ－Ｋα１輻射、λ＝１．５４０６Å、Ｓｔｏｅ ＳｔａｄｉＰ ６１１ ＫＬ回折計）に記載されている標準的な技術によって得た。化合物「Ａ７」は、以下のＸＲＤデータによって特徴付けられる：
【0110】
粉末Ｘ線ディフラクトグラムピークリスト（精製オプション１）：
【表1-1】
【表1-2】
【0111】
粉末Ｘ線ディフラクトグラムピークリスト（精製オプション２）：
【表2】
【0112】
粉末Ｘ線回折パターンと対応するＸ線回折データにより、化合物「Ａ７」は、３－（１－｛３－［５－（１－メチル－ピペリジン－４－イルメトキシ）－ピリミジン－２－イル］－ベンジル｝－６－オキソ－１，６－ジヒドロ－ピリダジン－３－イル）－ベンゾニトリル塩酸塩一水和物の結晶変態Ｈ２であることを確認した。
【実施例2】
【0113】
化合物の抗がん検査
ＭＥＴ増幅を保有する新たに診断された播種性神経膠芽腫（ＧＢＭ）を持つ患者におけるアジュバントテポチニブ塩酸塩水和物に対する完全奏効
ＭＥＴ増幅を保有する新たに診断された播種性神経膠芽腫（ＧＢＭ）を持つ患者におけるアジュバントテポチニブ塩酸塩水和物に対する完全奏効
【0114】
ここに、ＭＥＴ増幅を保有する新たに診断された播種性ＧＢＭを持つ患者におけるテポチニブ塩酸塩水和物に対する完全なＸ線検査の応答を報告する。２９歳の男性が進行性の頭痛を呈した。脳ＭＲＩは、右側脳室三角部において震源を持つ大きな不均一に亢進する脳室内腫瘤、および両側小脳における亢進する小結節を示した。脊椎ＭＲＩは、軟膜の疾患が懸念される、頚胸髄および馬尾の末梢に沿った多病巣性亢進を示した。彼は、右側頭葉切除術および腫瘤の部分切除術を受けた。めまいにより、彼のＫＰＳは手術後９０であった。病態は、７ｑ３１．２でのＧＢＭ、ＩＤＨ野生型、ＭＧＭＴ非メチル化、およびＭＥＴ増幅と一致していた。彼は、３６００ｃＧｙにて陽子線頭蓋脊髄照射（ＣＳＩ）、続いて２４００ｃＧｙにて強度変調放射線療法（ＩＭＲＴ）で腫瘍床へのブーストを完了したが、大きな照射野のためテモゾロミド（ＴＭＺ）を併用しなかった。彼は、アジュバントＴＭＺを２サイクル完了したが、骨髄抑制により保留した。その後彼は、人道的ＩＮＤで得られたテポチニブ塩酸塩水和物単剤治療を１日１０００ｍｇにて開始した。治療１月後のＭＲＩは、脳および脊椎における亢進の領域の分解を示した。具体的には、脳、頚椎、胸椎、および腰椎のＭＲＩは、１サイクル（＝４週間）のテポチニブ後、造影剤増強病変(contrast enhancing lesions)およびＬＭＤが完全分解に近いものを示した。彼は、グレード１のクレアチニン上昇および腹部不快感を有しており、投与量は、２サイクル後に１日５００ｍｇに低減した。テポチニブ塩酸塩水和物の開始後１９週間、彼の完全奏効は持続しており、軽度の慢性めまいを持ちながらも臨床的安定に留まっている。アジュバントテポチニブ単独療法は、耐容性に優れ、１１サイクル後の最新のＭＲＩで播種性、ＭＥＴ増幅性のＧＢＭを持つ患者において完全かつ恒久的なコントロールをもたらした（図５）。分子的に未選択のＧＢＭにおける標的治療の試験は、大部分は期待外れとなっているが、この症例は、ＧＢＭにおいてテポチニブ、またはその薬学的に許容し得る塩、溶媒和物および／または水和物を使用して、ＭＥＴを標的とすることが有望であることを実証している。
【実施例3】
【0115】
同系のマウスモデルにおけるＭＥＴ経路阻害および放射線照射の効果
材料および方法
試薬および細胞株
材料および方法
試薬および細胞株
【0116】
テポチニブをＤＭＳＯ中に溶解し、さらに細胞培養液に希釈した。ｉｎ ｖｉｖｏ研究用に、テポチニブを、２０％ソルトールおよび８０％酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）を用いて調製した。組換えヒトＨＧＦ(GeneTex, Lucerne, Switzerland)を、ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に溶解した。マウス神経膠腫細胞株ＳＭＡ－４９７、ＳＭＡ－５４０、およびＳＭＡ－５６０を、デューク大学メディカルセンター(Durham, NC)から、ならびにＧＬ－２６１を、全米がん研究所(Frederick, MD)から得た。細胞は、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）および１％グルタミンとともにダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）において培養した。これらの細胞株の遺伝子発現プロファイルはあらかじめ作成されている(Ahmad et al., 2014)。
【0117】
リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）
【0118】
１μｇの全ＲＮＡから逆転写によって作成したｃＤＮＡにＲＴ－ＰＣＲを行った。相対的遺伝子発現を、２Δ（デルタデルタＣＴ）法のバリエーション(Livak and Schmittgen, 2001)を使用して記載(Papa et al., 2017)の通りに測定した。ヒポキサンチン－グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ１(Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase 1)（Ｈｐｒｔ１）を参照遺伝子とした。マウス特異的プライマー配列は以下の通りであった：
Hprt1 fw：5'- CCT AAG ATG AGC GCA AGT TGA A -3'、
rev：5'- CCA CAG GAC TAG AAC ACC TGC TAA-3'；
Hgf fw：5'- TCA AAA TGT CAC CTA AAA CAA TCC -3'、
rev：5'- ACA AAC AAT ACA ACA GAA AAC ACC -3'；
Met fw：5'- TTT GGG GAA GTC TCA TTT TTG -3'、
rev：5'- CGA TTT TCA GTT GGC TTT TG -3'。
Hprt1 fw：5'- CCT AAG ATG AGC GCA AGT TGA A -3'、
rev：5'- CCA CAG GAC TAG AAC ACC TGC TAA-3'；
Hgf fw：5'- TCA AAA TGT CAC CTA AAA CAA TCC -3'、
rev：5'- ACA AAC AAT ACA ACA GAA AAC ACC -3'；
Met fw：5'- TTT GGG GAA GTC TCA TTT TTG -3'、
rev：5'- CGA TTT TCA GTT GGC TTT TG -3'。
【0119】
イムノブロット分析
【0120】
２５ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ、１２０ｍＭのＮａＣｌ、フッ化フェニルメチルスルホニル(phenylmethylsulfonyl fluoride)（Sigma Aldrich, St. Louis, MO）を補充した５ｍＭのＥＤＴＡと０．５％のＮＰ－４０、２００ｍＭのオルソバナジン酸ナトリウム、０．５Ｍのフッ化ナトリウム、プロテアーゼインヒビターカクテル、ならびにホスファターゼインヒビターカクテル２および３(Sigma Aldrich)を含有する放射性免疫沈降法（ＲＩＰＡ）溶解バッファー（ｐＨ７．８）を使用して、細胞または腫瘍検体の溶解液を調製した。一次抗体は以下の通りであった：ウサギ抗ｐ－ＭＥＴ（Ｔｙｒ１２３４／１２３５）（Ｄ２６）、マウス抗ＭＥＴ（クローン２５Ｈ２；いずれもCell Signaling Technology, Denvers, MA）、またはヤギ抗アクチン(sc-47778; Santa Cruz Biotechnology, SC, Santa Cruz, CA)。膜は、ＨＲＰ標識二次種特異抗体へさらした。
【0121】
プロテオームプロファイラーアレイ(Proteome profiler array)
【0122】
ｉｎ ｖｉｖｏでのマウスサイトカインの相対レベルの同時決定法用に、R&D SystemsのMouse XL Cytokine Array Kit(ARY028, Minneapolis, MN)を使用した。組織溶解液は、氷冷した溶解バッファー中で電気ホモジナイザーによって調製し、プロテアーゼインヒビターカクテルを補充した後、遠心分離して細胞の残骸を除去し；各腫瘍サンプルおよびニトロセルロース膜（対照、単独療法、組み合わせ療法）には、１５０μｇのタンパク質を使用した。各腫瘍検体におけるタンパク質レベルの割合を比較するために、アレイの各スポットのピクセル密度の定量を、Ｉｍａｇｅ Ｊ（バージョン１．３２ｊ）ソフトウェア(National Institutes of Health, Bethesda, MD, http://rsb.info.nih.gov/ij/)を使用して行った。
【0123】
酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）
【0124】
３６ｈ後に採取した４×１０６細胞の無血清上清を使用して、Ｍｏｕｓｅ ＨＧＦ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ(#EMHGF, Thermo Scientific, Frederick, MD)を用いて、マウスＨＧＦを定量した。
【0125】
ＭＥＴのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ノックアウト
【0126】
ノックアウトクローンを、記載の通りに作成した(Ran et al., 2013; Machado et al., 2019)。簡単に説明すると、２のＭＥＴ特異的ガイドＲＮＡ（5'-GAGAGCACGACAAATACGTA-3'、および5'-GTATCGGACAGAGTTTACCA-3'）をpSpCas9(BB)-2A-GFPにクローニングし、リポフェクタミン（Thermo）を使用して両方のプラスミドを共導入した。ピューロマイシンセレクションの後、単一細胞をＢＤ ＦＡＣＳＡｒｉａ ＩＩＩを使用して９６ウェルプレートに選別した。ＲＴ－ＰＣＲおよびクローン拡大後のサンガーシーケンスで、ノックアウトを確認した。
【0127】
動物研究
【0128】
すべての実験は、動物保護に関するスイス連邦法のガイドラインに従い、動物ライセンス許可番号ＺＨ－０３８およびＺＨ－０９８の下、スイスの州獣医局に従って実行した。ｍＲＮＡは、マウスに症状を呈し始めた未治療の神経膠腫、または腫瘍を持たないマウスの脳から調製した。処置研究のために、５，０００個の腫瘍細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドで、６～１２週齢の免疫担当性ＶＭ／Ｄｋマウス、免疫担当性Ｃ５７ＢＬ／６マウス、または成熟ＢおよびＴ細胞を持たない「非漏出性」免疫不全Ｒａｇ１欠損マウス(B6.129S7-Rag1tm1Mom/J)の右線条体に定位移植した。テポチニブを、経管栄養を使用して１００ｍｇ／ｋｇにて経口投与した。局所頭蓋放射線療法を、腫瘍移植後１０日目に、Gulmayの２００ｋＶ Ｘ線装置を使用して、室温にて１Ｇｙ／分にて行った(Schneider et al., 2017)。神経学的症状を、チューリヒ州獣医局のガイドラインに従って、毎日査定した（グレード０：目に見える欠陥なし、グレード１：活動性低減、わずかなバランスおよび整合の欠陥、グレード２：活動性低減、ピーク体重と比較して１５％の体重減少、疑わしい脚のわずかな麻痺、中等度の痛みの徴候）。初期の組織学的変化を評定するため、最初の動物が神経学的症状を包含する疾患進行のグレード２の兆候を示したときに、動物を安楽死させた。屠殺時にて左右半球および腫瘍から採取した２０～２５ｍｇの脳組織から、全ｍＲＮＡまたはタンパク質溶解液を調製した。
【0129】
組織学的検査および免疫組織化学的検査
【0130】
腫瘍を持つ凍結保存脳の切片（８μｍ厚）を調製した。平均腫瘍サイズは、低倍率（２．５倍）画像からの最長の直角をなす直径を乗じることによる、ヘマトキシリン－エオジン（Ｈ＆Ｅ）染色切片上の水平面における最大腫瘍面積によって確定した。Ｋｉ－６７抗体(clone SP6, Epitomics, Burlingame, CA)、抗マウスＣＤ３１抗体(clone MEC 13.3, BD Pharmingen, Franklin Lakes, NJ)、抗ＣＤ４５抗体(clone 30-F11; BioLegend)、抗ＣＤ３（clone 17A2; BD Biosciences, San Jose, CA）または抗ＣＤ１１ｂ(clone M1/70; BD Biosciences)、およびヒストファインシンプルステインマウスＭＡＸ－ＰＲＯ抗ウサギ第二抗体（ニチレイバイオサイエンス、東京、日本）を用いて、脳切片を免疫染色し、増殖を確定した。抗ラットＮ－ヒストファインシンプルステインマウスＭＡＸ－ＰＯ（ニチレイバイオサイエンス）およびＤＡＢ発色体を使用して、血管を染色した。Ｋｉ－６７陽性腫瘍核のパーセンテージ、および高倍率視野（４０倍対物）でのＣＤ３１陽性腫瘍内血管の平均数は、グループあたり３匹のマウスの３の無作為に選んだ異なる顕微鏡視野を使用して計算した。代替的に、ＤＡＢ陽性シグナルは、ＩｍａｇｅＪソフトウェア(https://imagej.nih.gov/)を使用して定量化した(Crowe and Yue, 2019)。
【0131】
統計分析
【0132】
ここで報告するすべてのｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏの実験は、生物学的複製、すなわち独立した実験において、異なる細胞株の継代数で行った。統計的有意性は、両側独立ｔ検定、またはボンフェローニの事後検定を伴う二元配置分散分析(GraphPad Prism)によって査定した。腫瘍サイズは、マン－ホイットニー検定のＵノンパラメトリック検定を使用して分析した。生存期間は、カプラン－マイヤー生存プロット、続いてログランク(Mantel-Cox)検定を使用して分析した。ｐ値が０．０５未満の場合、差異が統計的に有意であると考えた。
結果
結果
【0133】
マウス神経膠腫細胞は、ＨＧＦおよびＭＥＴを発現し、外因性ＨＧＦに対してＭＥＴリン酸化（ｐ－ＭＥＴ）で応答した。神経膠腫細胞の生存能力または増殖は、テポチニブまたはｍｅｔ遺伝子ノックアウトを使用した遺伝的または薬理学的ＭＥＴ阻害に抵抗性であった。ＭＥＴ阻害は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで神経膠腫細胞の放射線照射に対する感受性を高めることはできなかった。対照的に、テポチニブと放射線療法の組み合わせは、放射線療法またはテポチニブ処置単独と比較して、同所性ＳＭＡ－５６０またはＧＬ－２６１神経膠腫を持つマウスの生存期間を延長し、神経膠腫細胞増殖の抑制および腫瘍増殖の遅延に関連した。ＳＭＡ－５６０モデルにおいて、組み合わせ治療は、放射線単独によってアップレギュレートし、神経膠芽腫における転帰不良に関連していた一連の炎症促進性サイトカインを抑制した。免疫不全ＲＡＧ欠損マウスにおいて、ＳＭＡ－５６０神経膠腫が形成され、処置された場合、相乗効果は失われた。ＧＬ－２６１モデルにおいては、相乗効果はＲａｇ１欠損マウスにおいても失われたが、重要なことに、腫瘍においてＭＥＴ遺伝子の発現が妨害された場合にも同様であった。詳細に：
【0134】
ｉｎ ｖｉｔｒｏでのマウス神経膠腫モデルにおけるＨＧＦ／ＭＥＴ軸の特性評価
【0135】
われわれは第１に、ＧＬ－２６１、ＳＭＡ－４９７、ＳＭＡ－５４０、またはＳＭＡ－５６０マウス神経膠腫モデルにおいて、ＨＧＦおよびＭＥＴの発現レベル、ならびに構成的なＭＥＴ活性化を考察した。すべての細胞株は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｅｘ ｖｉｖｏでＨｇｆおよびＭｅｔ ｍＲＮＡを発現した。４種のモデル全てからのｅｘ ｖｉｖｏ腫瘍サンプルは、Ｈｇｆ ｍＲＮＡの同程度のレベルを示し、それは正常な脳組織におけるレベルに類似していた。対照的に、Ｍｅｔ ｍＲＮＡの発現は、脳組織と比較して腫瘍組織において有意にアップレギュレートした（図１Ａ、１Ｂ）。４種のマウス細胞株の中で、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＨｇｆ ｍＲＮＡ発現およびＨＧＦタンパク質遊離は、高い相関関係（ｒ＝０．９９８、ｐ＝０．００２）を示し、ＳＭＡ－５４０が最も高いＨＧＦ発現を実証した（図１Ｃ）。構成的なＭＥＴリン酸化は、ＳＭＡ－４９７およびＳＭＡ－５６０細胞において検出された。全ての細胞株は、外因性ＨＧＦに応答してｐ－ＭＥＴを蓄積した（図１Ｄ）。ＧＬ－２６１が、ＭＥＴ促進遺伝子のマイクロアレイベースの転写プロファイリングに基づき、最も低い基底ＭＥＴ活性状態を示した。次に、ＳＭＡ－４９７およびＳＭＡ－５６０細胞をＭＥＴインヒビターのテポチニブにさらすと、時間および濃度に依存するやり方においてＭＥＴのリン酸化が抑制されることを確認した（図Ｓ１Ａ）。けれども、神経膠腫細胞株は、急性増殖阻害またはクローン形成アッセイにおいて、１μＭまでの濃度にてテポチニブの阻害効果に対して耐性であった（図Ｓ１Ｂ、Ｓ１Ｃ）。
【0136】
放射線照射はＨＧＦ／ＭＥＴシグナル伝達を誘導したが、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＨＧＦ／ＭＥＴシグナル伝達の阻害によって放射線感受性の誘導はない
【0137】
ＧＬ－２６１、ＳＭＡ－４９７、またはＳＭＡ－５４０細胞においては、放射線照射でのＨｇｆまたはＭｅｔ ｍＲＮＡ発現において大きな変化はなかった。対照的に、ＳＭＡ－５６０細胞においては、照射量依存的なＨｇｆおよびＭｅｔ ｍＲＮＡ発現の誘導があり（図Ｓ２Ａ）、これがテポチニブ感受性のＭＥＴリン酸化に変換された（図Ｓ２Ｂ）。けれども、ＭＥＴリン酸化を特異的に阻害することが知られている濃度にては（図Ｓ１Ａ）、テポチニブはｉｎ ｖｉｔｒｏで神経膠腫細胞の放射線照射の抑制効果に対しての感受性を高めることはできなかった。この負の効果が単に培養中のＨＧＦの有効性が低い結果であるということを除外するために、外因性ＨＧＦの存在下で同様の実験を実行したものの、またテポチニブによる放射線照射に対する感受性は明白にならなかった（図Ｓ２Ｃ）。
【0138】
テポチニブは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのマウス神経膠腫細胞の浸潤性の、基底および放射線誘導性の活性化を阻害する
【0139】
次に、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの放射線照射に対する応答におけるＨＧＦ／ＭＥＴの運動源性活性(motogenic activity)を評価した。低線量照射（２Ｇｙ）はＳＭＡ－５４０およびＳＭＡ－５６０細胞における浸潤性を増大させた一方、高線量照射（８Ｇｙ）はＳＭＡ－４９７およびＳＭＡ－５６０細胞における浸潤性を低減した。テポチニブは、低線量照射したＳＭＡ－５４０細胞を除き、照射の有無にかかわらずすべての細胞株において浸潤性を抑制した。同様の傾向が、ＳＭＡ－５６０細胞を使用したスフェロイド浸潤アッセイ(Szabo et al., 2016)においても観察された。
【0140】
ｉｎ ｖｉｖｏでの放射線療法およびテポチニブによるマウスＳＭＡ－５６０神経膠腫の相乗的増殖阻害
【0141】
腫瘍組織における高いＭｅｔ遺伝子発現および構成的なＭＥＴリン酸化に基づき（図１Ｂ）、ＳＭＡ－５６０モデルを選択し、ｉｎ ｖｉｖｏで、テポチニブによるＭＥＴの薬理学的阻害と組み合わせた放射線療法の効果を査定した。われわれはまず、ｅｘ ｖｉｖｏで免疫ブロットによってｐ－ＭＥＴレベルを測定することにより、テポチニブによる標的阻害を確認した：ｐ－ＭＥＴを、腫瘍内および腫瘍を持つ右半球内で検出した。それは放射線照射によって誘導されたが、テポチニブを用いて処置した動物においてｐ－ＭＥＴは検出されなかった（図２Ａ）。テポチニブ単独も放射線療法単独も、生存期間について有意な効果を有しなかったが、これらの組み合わせは、単独療法の有無にかかわらずおよそ２０日であったものから、組み合わせを用いておよそ６０日までという強力な相乗的生存期間の延長に帰結した。対照グループにおいて、ならびに放射線療法グループにおいて、腫瘍増殖に関連した症状ゆえに、すべてのマウスを安楽死させた。対照的に、テポチニブグループ内の１匹、および組み合わせグループ内の３匹のマウスは、８０日目にて生存し、かつ腫瘍がなかった（図２Ｂ）。ｉｎ ｖｉｖｏでの相乗効果を媒介する作用機序の知識を得るために、いずれかのグループにおいて症状を持つ最初のマウスが出たときに、無作為化リストに従ってマウスの形態学的および免疫組織化学的評定を使用して組織分析を行った。すべての処置グループ内の動物は、未処置の対照グループに比べて腫瘍体積において３０～４０％の低下を示した。けれども、Ｋｉ－６７染色核の割合は両方の単独療法グループにおいて影響無しに留まったものの、組み合わせグループにおいては、Ｋｉ－６７陽性細胞の顕著な減少があった（図２Ｃ）。ｉｎ ｖｉｔｒｏで同じ処置を急性に施した場合、かかる組み合わせの効果は観察されなかった。ＳＭＡ－５６０細胞は、ＣＤ３１陽性血管の高密度を反映した、高度に血管化した腫瘍を生じる(Ahmad et al., 2014)。ここで、両方の単独療法部門において（１．８倍）、ならびに組み合わせ部門においてはよりそのようである（２．８倍）ＣＤ３１免疫反応性の低下を観察した（図２Ｄ）。
【0142】
放射線照射およびテポチニブによる実験的神経膠腫の相乗的増殖抑制を媒介する細胞および分子の機序
【0143】
ｉｎ ｖｉｖｏでは増殖抑制の相乗効果を観察したが、ｉｎ ｖｉｔｒｏでは観察しなかったので、微小環境が治療効果に寄与していることもあると結論づけた。したがって、４の処置グループからの腫瘍における宿主細胞浸潤の差異を査定したが、初期の時点にては、すなわち症状を持つ最初のマウスが出たとき、一貫した差異は観察されなかった。次に、４の処置グループの中で、ｅｘ ｖｉｖｏの腫瘍組織溶解液中のサイトカインプロファイルを比較した。まず、ほとんどすべてのサイトカインが、いずれの治療手段によっても低減するよりむしろ誘導されることに注目した；テポチニブ単独療法だけがいくつかのサイトカインのレベルを低減させた一方で、放射線照射単独はサイトカインの最も目立った誘導を生じた（図３）。組み合わせによって誘導されたが、いずれかの単独療法だけによっては誘導されなかった唯一のサイトカインは、ＷＮＴ１誘導性シグナル伝達経路タンパク質（ＷＩＳＰ／ＣＣＮ４）であった。最も関連性が高そうなパターンは、テポチニブによって弱められた放射線照射による誘導であった。この分子のグループは、ＶＥＧＦ、細胞間接着分子１（ＩＣＡＭ－１／ＣＤ５４）、セルピンＥ１／ＰＡＩ－１、Ｐ－セレクチンおよびマトリックスメタロプロテアーゼ(matrix metalloproteinase、ＭＭＰ）－２と－９、抗血管新生および抗腫瘍性因子であるセルピンＦ１／ＰＥＤＦ、リポカリン－２、コロニー刺激因子１ Ｍ－ＣＳＦ、および生得的パターン認識分子ペントラキシン２／３およびＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ、ペントラキシン１）、炎症促進性サイトカインＩＬ－１ａ／ＩＬ－１Ｆ１およびＣＸＣＬ１０などの自然免疫応答のメディエーター；抗炎症性サイトカインＩＬ－１０およびＩＬ－１１、ノッチ／デルタ／セレートタンパク質ファミリーのメンバーであるｐｒｅｆ－１／ＤＬＫ－１／ＦＡ１、および低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬ－Ｒ）を包含する、血管新生のメディエーターならびに炎症性細胞接着分子を包含していた。これらの作動的に調整される因子の中で、ＩＬ１Ａ遺伝子の発現は神経膠芽腫患者における予後不良と関連している。
【0144】
放射線照射およびテポチニブによる神経膠腫増殖の相乗的抑制は、適応免疫および腫瘍におけるＭＥＴ発現を必要とする
【0145】
放射線療法とテポチニブとの組み合わせに対する実験的神経膠腫の相乗応答を媒介することにおいて、腫瘍微小環境対腫瘍自律的機序を分離して考えるために、われわれは二重のアプローチを選択し、第二のモデルを研究した：免疫不全動物において組み合わせ療法を探求し、ＧＬ－２６１神経膠腫細胞内のＭＥＴ遺伝子を破壊した。野生型細胞とは対照的に、ＭＥＴ欠損ＧＬ－２６１は、外因性ＨＧＦにさらしたときにＭＥＴリン酸化に応答しなかったが、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞倍加時間、細胞周期進行、または生存能力の測定によって確定されるように、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの増殖に不利な点はなかった。ｅｘ ｖｉｖｏ分析は、ＭＥＴ欠損腫瘍が免疫担当性同系マウスにおける同様の増殖の特性、および同等の免疫細胞浸潤を示したことを実証した。ＭＥＴ欠損腫瘍においては、血管密度が有意に低減し、これはテポチニブ処置で見られたパターンに相当した（図２Ｃ）。まず、ＳＭＡ－５６０細胞がＲＡＧ欠損マウス内で増殖したとき、組み合わせ治療の相乗効果が強く弱まることに注目した（図４Ａ）。ＧＬ－２６１モデルにおいては、野生型マウス内に腫瘍が生成し処置した場合に、組み合わせ治療は目立った生存期間の延長をもたらした。併処置グループにおいては、約５０％の長期生き残りがいた（図４Ｂ）。長期生き残りマウスは、９０日目にてＧＬ－２６１細胞で再誘発させ、４匹の動物すべてが、さらに５０日後に実験が終了するまで無症状のままであった（図４Ｃ）。同じ実験をＲＡＧ欠損マウスにおいて実行したときは、放射線治療はその活性を保持したが、テポチニブとの相乗効果は失われた（図４Ｄ）。最後に、ＭＥＴが破壊された場合、放射線治療は対野生型腫瘍と同様に有効であったが、このモデルにおいてもまた相乗効果は失われた（図４Ｅ）。比較生存期間データを図４Ｆにまとめた。
検討
検討
【0146】
ＭＥＴ阻害と放射線治療との相乗効果は、ヒト神経膠腫、胃腺癌、および肺癌細胞におけるＤＮＡ修復の文脈におけるＭＥＴ経路の細胞保護的役割を妨害することによって媒介されると以前に提言されている(Welsh et al., 2009; De Bacco et al., 2011; Medova et al., 2012)が、ｉｎ ｖｉｔｒｏでは放射線治療と薬理学的ＭＥＴ阻害との間に相乗効果はなかったので、われわれのモデルにおいては、かかる機序が働いている可能性は低い（図Ｓ２）。逆に、ｉｎ ｖｉｖｏでの２種の同系免疫担当性神経膠腫モデルにおいて、放射線治療とテポチニブとの強い相乗効果を観察し（図２、４）、これはｉｎ ｖｉｔｒｏのデータによって予測されるものではなかった。どちらかの処置単独と比較して、組み合わせ処置は、ＳＭＡ－５６０モデルにおいて増殖および血管新生の早期抑制を誘導した（図２）。血管新生の阻害は、テポチニブとの併処置時の、ＶＥＧＦ、ＭＣＳＦ、ＭＭＰ２、またはＭＭＰ９などの血管新生分子の、放射線治療が誘発する増大が抑制された結果であることもある（図３）。神経膠芽腫は、多数の適応性分子戦略によって放射線耐性を形成する(Bao et al., 2006; De Bacco et al., 2011; Squatrito and Holland, 2011)。まとめると、放射線療法と組み合わせたときのテポチニブによって腫瘍増殖が遅延する潜在的な機序として、いくつかの放射線治療が誘発するがん関連炎症および免疫調節性サイトカインの発現が、テポチニブによって弱めらることを報告する。免疫不全マウスにおける、またはＭＥＴ遺伝子の発現が破壊された腫瘍をもっているマウスにおけるいずれかで組み合わせ療法の効能を探求する相補的研究により、相乗効果には、第一に腫瘍におけるＭＥＴの発現、第二に機能的免疫系という少なくとも２種の機序が必要であることが確認された（図４）。したがって、われわれの前臨床データは、ヒト神経膠芽腫におけるＭＥＴ経路阻害は、放射線療法との組み合わせにおいて有利に探求し得ることを示唆しているであろう。
参考文献
参考文献
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【図3】
【図4】
【図5】
【図S1】
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【国際調査報告】