特表 2024-528029 メソテリンを特異的に標的とする操作された免疫細胞及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-07-26

(54)【発明の名称】メソテリンを特異的に標的とする操作された免疫細胞及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20240719BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20240719BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240719BHJP

   C12N 15/24 20060101ALI20240719BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240719BHJP

   C12N 15/86 20060101ALI20240719BHJP

   C12N 15/867 20060101ALI20240719BHJP

   C12N 15/861 20060101ALI20240719BHJP

   C12N 15/864 20060101ALI20240719BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240719BHJP

   C12N 5/078 20100101ALI20240719BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALI20240719BHJP

   C12N 5/0781 20100101ALI20240719BHJP

   C12N 5/0787 20100101ALI20240719BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240719BHJP

   C07K 14/705 20060101ALI20240719BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240719BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20240719BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240719BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240719BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240719BHJP

   C07K 16/18 20060101ALN20240719BHJP

   C07K 14/54 20060101ALN20240719BHJP

   C07K 14/52 20060101ALN20240719BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z

C12N15/12 ZNA

C12N15/13

C12N15/24

C12N15/63 Z

C12N15/86 Z

C12N15/867 Z

C12N15/861 Z

C12N15/864 100Z

C12N5/10

C12N5/078

C12N5/0783

C12N5/0781

C12N5/0787

C07K19/00

C07K14/705

A61K35/17

A61P35/00

A61P35/04

A61P43/00 121

A61K45/00

A61K39/395 N

C07K16/18

C07K14/54

C07K14/52

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024505205

(86)(22)【出願日】2022-07-28

(85)【翻訳文提出日】2024-01-26

(86)【国際出願番号】 IB2022057006

(87)【国際公開番号】W WO2023007431

(87)【国際公開日】2023-02-02

(31)【優先権主張番号】63/227,116

(32)【優先日】2021-07-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】000002934

【氏名又は名称】武田薬品工業株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】100136629

【弁理士】

【氏名又は名称】鎌田 光宜

(74)【代理人】

【識別番号】100080791

【弁理士】

【氏名又は名称】高島 一

(74)【代理人】

【識別番号】100125070

【弁理士】

【氏名又は名称】土井 京子

(74)【代理人】

【識別番号】100121212

【弁理士】

【氏名又は名称】田村 弥栄子

(74)【代理人】

【識別番号】100174296

【弁理士】

【氏名又は名称】當麻 博文

(74)【代理人】

【識別番号】100137729

【弁理士】

【氏名又は名称】赤井 厚子

(74)【代理人】

【識別番号】100152308

【弁理士】

【氏名又は名称】中 正道

(74)【代理人】

【識別番号】100201558

【弁理士】

【氏名又は名称】亀井 恵二郎

(72)【発明者】

【氏名】武 千央

(72)【発明者】

【氏名】山口 晶子

(72)【発明者】

【氏名】シャピロ、ゲイリー

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA94X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4C084AA19

4C084NA05

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZC751

4C085AA14

4C085BB11

4C085EE01

4C085EE03

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB65

4C087NA14

4C087ZB26

4C087ZC75

4H045BA10

4H045BA41

4H045DA01

4H045DA02

4H045DA50

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

ヒトメソテリンを特異的に認識する抗体、ＣＤ８ヒンジ領域、ＣＤ８膜貫通領域、４－１ＢＢ細胞内領域、及びＣＤ３ζ細胞内領域を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチド；ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド；ならびに、ＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを含む単離核酸分子が本明細書で開示される。ベクター、改変免疫細胞、及び核酸分子を含む医薬組成物、及び使用方法もまた、本明細書で開示される。
【選択図】図１Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

単離核酸分子であって、
ヒトメソテリンを特異的に認識する抗体、ＣＤ８ヒンジ領域、ＣＤ８膜貫通領域、４－１ＢＢ細胞内領域、及びＣＤ３ζ細胞内領域を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチド、
ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド、ならびに
ＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチド
を含む、前記単離核酸分子。

【請求項2】

前記ＩＬ－７が、ヒトＩＬ－７である、請求項１に記載の単離核酸分子。

【請求項3】

前記ＣＣＬ１９が、ヒトＣＣＬ１９である、請求項１または請求項２に記載の単離核酸分子。

【請求項4】

前記抗体が、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨが、配列番号１～３を含む３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、前記ＶＬが、配列番号４～６を含む３つのＣＤＲを含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の単離核酸分子。

【請求項5】

前記ＶＨが、配列番号７を含み、前記ＶＬが、配列番号８を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の単離核酸分子。

【請求項6】

前記抗体が、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）フォーマットを含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の単離核酸分子。

【請求項7】

前記抗体が、配列番号９を含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の単離核酸分子。

【請求項8】

前記４－１ＢＢ細胞内領域が、配列番号１３を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の単離核酸分子。

【請求項9】

前記ＣＤ３ζ細胞内領域が、配列番号１４を含む、請求項１～８に記載の単離核酸分子。

【請求項10】

前記４－１ＢＢ細胞内領域が、前記単離核酸分子中の前記ＣＤ３ζ細胞内領域の上流にある、請求項１～９のいずれか１項に記載の単離核酸分子。

【請求項11】

前記ＣＤ８ヒンジ領域が、配列番号１１を含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載の単離核酸分子。

【請求項12】

前記ＣＤ８膜貫通領域が、配列番号１２を含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の単離核酸分子。

【請求項13】

前記核酸が、さらに、前記抗体及び前記ＣＤ８ヒンジ領域を連結する３～１０アミノ酸残基長のペプチドリンカーを含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の単離核酸分子。

【請求項14】

前記ペプチドリンカーが、ＡＡＡを含む、請求項１３に記載の単離核酸分子。

【請求項15】

前記単離核酸分子が、さらに、シグナル伝達ペプチドを含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載の単離核酸分子。

【請求項16】

前記シグナル伝達ペプチドが、前記単離核酸分子中のヒトメソテリンを特異的に認識する前記抗体の上流に位置している、請求項１～１５のいずれか１項に記載の単離核酸分子。

【請求項17】

前記シグナル伝達ペプチドが、配列番号１５を含む、請求項１５または１６に記載の単離核酸分子。

【請求項18】

ＩＬ－７をコードする前記ポリヌクレオチド及びＣＣＬ１９をコードする前記ポリヌクレオチドが、自己切断性２Ａペプチド（２Ａペプチド）をコードするポリヌクレオチドを含むプロモーター下でそれぞれ独立して転写されている、請求項１～１７のいずれか１項に記載の単離核酸分子。

【請求項19】

前記２Ａペプチドが、Ｐ２Ａであり、任意に、ＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰを含む、請求項１８に記載の単離核酸分子。

【請求項20】

ペプチドリンカーが、さらに、前記２Ａペプチドの前記Ｎ末端に付加されており、前記ペプチドリンカーが、ＧＳＧを含む、請求項１８～１９のいずれか１項に記載の単離核酸分子。

【請求項21】

前記ＩＬ－７が、配列番号１８を含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載の単離核酸分子。

【請求項22】

前記ＣＣＬ１９が、配列番号１９を含む、請求項１～２１のいずれか１項に記載の単離核酸分子。

【請求項23】

前記ＣＡＲをコードする前記ポリヌクレオチド、ＩＬ－７をコードする前記ポリヌクレオチド、及びＣＣＬ１９をコードする前記ポリヌクレオチドが、前記核酸分子内で５’末端から３’末端に向かって、前記ＣＡＲをコードする前記ポリヌクレオチド－ＩＬ－７をコードする前記ポリヌクレオチド－ＣＣＬ１９をコードする前記ポリヌクレオチドのように配置されている、請求項１～２２のいずれか１項に記載の単離核酸分子。

【請求項24】

前記単離核酸分子が、配列番号１６を含むポリペプチドをコードする、請求項１～２３のいずれか１項に記載の単離核酸分子。

【請求項25】

前記単離核酸分子が、配列番号１７を含む、請求項１～２４のいずれか１項に記載の単離核酸分子。

【請求項26】

請求項１～２５のいずれか１項に記載の核酸分子を含む、ベクター。

【請求項27】

前記ベクターが、ウイルスベクター、任意に、発現ベクターである、請求項２６に記載のベクター。

【請求項28】

前記ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、及びアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターから選択される、請求項２７に記載のベクター。

【請求項29】

前記ウイルスベクターが、ｐＳＦＧベクター、ｐＭＳＧＶベクター、またはｐＭＳＣＶベクターである、請求項２７または２８に記載のベクター。

【請求項30】

前記ベクターが、プラスミドである、請求項２６に記載のベクター。

【請求項31】

哺乳動物に由来するか、または哺乳動物から分離され、請求項１～２５のいずれか１項に記載の核酸分子または請求項２６～３０のいずれか１項に記載のベクターを含む、免疫細胞。

【請求項32】

哺乳動物に由来するか、または哺乳動物から分離され、ａ）ヒトメソテリンを特異的に認識する抗体、ＣＤ８ヒンジ領域、ＣＤ８膜貫通領域、４－１ＢＢ細胞内領域、及びＣＤ３ζ細胞内領域を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ｂ）ＩＬ－７、及びｃ）ＣＣＬ１９、を発現する、免疫細胞。

【請求項33】

前記免疫細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、抗原提示細胞、または顆粒球、任意に、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である、請求項３１または３２に記載の免疫細胞。

【請求項34】

請求項３１～３３のいずれか１項に記載の免疫細胞及び薬学的に許容される添加剤を含む、医薬組成物。

【請求項35】

メソテリン発現がんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、請求項３１～３３のいずれか１項に記載の免疫細胞または請求項３４に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。

【請求項36】

前記メソテリン発現がんが、固形腫瘍であり、任意に、中皮腫、結腸直腸癌、膵癌、胸腺癌、胆管癌、肺癌、皮膚癌、乳癌、前立腺癌、膀胱癌、膣癌、頸部癌、子宮癌、肝臓癌、腎臓癌、脾臓癌、気管癌、気管支癌、胃癌、食道癌、胆嚢癌、精巣癌、卵巣癌、及び骨癌から選択される、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

前記メソテリン発現がんが、造血癌である、請求項３５に記載の方法。

【請求項38】

前記メソテリン発現がんが、肉腫であり、任意に、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性血管内皮腫、悪性神経鞘腫、骨肉腫、及び軟部組織肉腫から選択される、請求項３５に記載の方法。

【請求項39】

前記メソテリン発現がんが、転移性癌である、請求項３５～３８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項40】

前記メソテリン発現がんが、再発性癌または難治性癌である、請求項３５～３８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項41】

前記方法が、さらに、追加の治療薬または追加の治療レジメンを前記対象に投与することを含む、請求項３５～４０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項42】

前記追加の治療薬が、化学療法剤、免疫療法剤、標的療法、放射線療法、またはそれらの組み合わせを含む、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

前記追加の治療レジメンが、第１選択療法を含む、請求項４１に記載の方法。

【請求項44】

前記追加の治療レジメンが、手術を含む、請求項４１に記載の方法。

【請求項45】

請求項３１～３３のいずれか１項に記載の免疫細胞または請求項３４に記載の医薬組成物及び前記追加の治療薬が、同時投与される、請求項４１～４４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項46】

請求項３１～３３のいずれか１項に記載の免疫細胞または請求項３４に記載の医薬組成物及び前記追加の治療薬が、逐次投与される、請求項４１～４４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項47】

請求項３１～３３のいずれか１項に記載の免疫細胞または請求項３４に記載の医薬組成物が、前記追加の治療薬の投与前に、前記対象に投与される、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

請求項３１～３３のいずれか１項に記載の免疫細胞または請求項３４に記載の医薬組成物が、前記追加の治療薬の投与後に、前記対象に投与される、請求項４６に記載の方法。

【請求項49】

前記対象が、ヒトである、請求項３５～４８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項50】

腫瘍細胞の増殖を減少させる方法であって、前記腫瘍細胞を、請求項３１～３３のいずれか１項に記載の免疫細胞と接触させ、それにより、前記腫瘍細胞の増殖を減少させることを含む、前記方法。

【請求項51】

前記方法が、ｉｎ ｖｉｔｒｏ法である、請求項５０に記載の方法。

【請求項52】

前記方法が、ｉｎ ｖｉｖｏ法である、請求項５０に記載の方法。

【請求項53】

ヒトメソテリンを特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する免疫細胞を作製する方法であって、前記方法が、
請求項１～２５のいずれか１項に記載の核酸分子または請求項２６～３０のいずれか１項に記載のベクターを、免疫細胞に導入して、前記免疫細胞によるヒトメソテリンを特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９の発現を誘導すること
を含む、前記方法。

【請求項54】

前記免疫細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、抗原提示細胞、または顆粒球、任意に、Ｔ細胞またはＮＫ細胞である、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

請求項１～２５のいずれか１項に記載の核酸分子；請求項２６～３０のいずれか１項に記載のベクター；請求項３１～３３のいずれか１項に記載の免疫細胞；または請求項３４に記載の医薬組成物、及び使用説明書を含む、キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願との相互参照
本出願は、２０２１年７月２９日に出願された米国仮出願第６３／２２７，１１６号に対する米国特許法第１１９条に基づく優先権を主張し、これは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

本発明は、ヒトメソテリンを特異的に認識する細胞表面分子、インターロイキン７（ＩＬ－７）、及びケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド１９（ＣＣＬ１９）を発現する免疫細胞、免疫細胞を含む医薬組成物、メソテリンを特異的に認識する細胞表面分子をコードするポリヌクレオチド、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド、及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクター、使用方法、ならびにヒトメソテリンを特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する免疫細胞を作製する方法（ヒトメソテリンを特異的に認識する細胞表面分子をコードするポリヌクレオチド、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド、及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを免疫細胞に導入することを含む）に関する。

【背景技術】

【0003】

悪性腫瘍は、世界中の多くの人々に影響を与える疾患であり、一般に、化学療法、放射線療法、または外科療法で広く処置されている。しかし、様々な問題、例えば、有害反応の発生、いくつかの機能の喪失、及び処置することができない再発または転移、があった。そのようなものであるから、近年、患者のより高い生活の質（ＱＯＬ）を維持するために、免疫細胞療法の開発が進められている。免疫細胞療法は、患者から免疫細胞を収集すること、採取された免疫細胞の免疫機能を強化する手順を実施すること、細胞を増幅すること、及び細胞を患者に再投与すること、を含む。例えば、免疫細胞療法は、患者からＴ細胞を採取すること、キメラ抗原受容体（構成的アンドロスタン受容体：以下、「ＣＡＲ」とも呼ばれる）をコードする核酸をＴ細胞に導入すること、及びＴ細胞を患者に再投与すること、を含み得る。ＣＡＲ－Ｔ療法で、血液がんの早期成功が観察されているが、生命を脅かす毒性及び固形腫瘍の処置における実質的な有効性の欠如も観察されている。そのようなものであるから、改良されたＣＡＲ－Ｔ療法が必要とされている。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0004】

【特許文献1】ＷＯ２０１６／０５６２２８

【特許文献2】ＷＯ２０１９／１２４４６８

【特許文献3】ＷＯ２０１３／０６３４１９

【非特許文献】

【0005】

【非特許文献1】Ａｄａｃｈｉ，ｅｔ ａｌ．，“ＩＬ－７ ａｎｄ ＣＣＬ１９ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ＣＡＲ－Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｉｍｍｕｎｅ ｃｅｌｌ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ＣＡＲ－Ｔ ｃｅｌｌ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ，”Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ，３６（４）：３４６－３５３，２０１８。

【発明の概要】

【0006】

本発明で解決されるべき客観的な技術課題
Ｔ細胞を用いる免疫療法と共に存在する多くの課題、例えば、固形腫瘍への不十分な輸送、正常組織への高い毒性、免疫抑制性の腫瘍微小環境を克服できないこと、及び内因性免疫応答の不十分な活性化がある。さらに、メソテリンを特異的に認識するＣＡＲを発現するように改変された免疫細胞は、最小限の治療有効性しか示さないことが示されている。従って、解決されるべき客観的な技術的課題は、メソテリン発現がんを標的とするために最適化された改変免疫細胞を提供することである。

【0007】

客観的な技術的課題を解決する手段
本発明者らは、メソテリンを特異的に認識するＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現するように改変された免疫細胞が、免疫療法の治療有効性を向上させて、生存率を向上させ得ることを発見している。

【0008】

特定の実施形態では、本発明は、ヒトメソテリンを特異的に認識する抗体、ＣＤ８ヒンジ領域、ＣＤ８膜貫通領域、４－１ＢＢ細胞内領域、及びＣＤ３ζ細胞内領域を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチド；ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド；ならびに、ＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを含む単離核酸分子を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－７は、ヒトＩＬ－７である。いくつかの実施形態では、ＣＣＬ１９は、ヒトＣＣＬ１９である。いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、配列番号１～３を含む３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、ＶＬは、配列番号４～６を含む３つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号７を含み、ＶＬは、配列番号８を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）フォーマットを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９を含む。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ細胞内領域は、配列番号１３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζ細胞内領域は、配列番号１４を含む。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ細胞内領域は、単離核酸分子におけるＣＤ３ζ細胞内領域の上流にある。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ領域は、配列番号１１を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８膜貫通領域は、配列番号１２を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、さらに、抗体及びＣＤ８ヒンジ領域を連結する長さ３～１０アミノ酸残基のペプチドリンカーを含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ＡＡＡを含む。いくつかの実施形態では、単離核酸分子は、さらに、シグナル伝達ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ペプチドは、単離核酸分子中のヒトメソテリンを特異的に認識する抗体の上流に位置する。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ペプチドは、配列番号１５を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドは、自己切断性２Ａペプチド（２Ａペプチド）をコードするポリヌクレオチドを含むプロモーター下でそれぞれ独立して転写されている。いくつかの実施形態では、２Ａペプチドは、Ｐ２Ａであり、任意に、ＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰを含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、さらに、２ＡペプチドのＮ末端に付加されており、ペプチドリンカーは、ＧＳＧを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－７は、配列番号１８を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＬ１９は、配列番号１９を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド、及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドは、核酸分子内で５’末端から３’末端に向かって、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド－ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド－ＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドのように配置されている。いくつかの実施形態では、単離核酸分子は、配列番号１６を含むポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、単離核酸分子は、配列番号１７を含む。いくつかの実施形態では、単離核酸分子は、配列番号２５を含む。

【0009】

特定の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の核酸分子を含むベクターを含む。いくつかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクター、任意に、発現ベクターである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、及びアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターから選択される。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、ガンマレトロウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、ｐＳＦＧベクター、ｐＭＳＧＶベクター、またはｐＭＳＣＶベクターである。いくつかの実施形態では、ベクターは、プラスミドである。

【0010】

特定の実施形態では、本発明は、哺乳動物に由来するか、または哺乳動物から分離される免疫細胞を含み、これは、本明細書に記載の核酸分子または本明細書に記載のベクターを含む。いくつかの実施形態では、本発明は、哺乳動物に由来するか、または哺乳動物から分離され、ａ）ヒトメソテリンを特異的に認識する抗体、ＣＤ８ヒンジ領域、ＣＤ８膜貫通領域、４－１ＢＢ細胞内領域、及びＣＤ３ζ細胞内領域を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、ｂ）ＩＬ－７、及びｃ）ＣＣＬ１９、を発現する、免疫細胞を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、抗原提示細胞、または顆粒球、任意に、Ｔ細胞またはＮＫ細胞、である。

【0011】

特定の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の免疫細胞及び薬学的に許容される添加剤を含む医薬組成物を含む。

【0012】

特定の実施形態では、本発明は、メソテリン発現がんの処置方法を含み、方法は、本明細書に記載の免疫細胞または本明細書に記載の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、メソテリン発現がんは、固形腫瘍であり、任意に、中皮腫、結腸直腸癌、膵癌、胸腺癌、胆管癌、肺癌、皮膚癌、乳癌、前立腺癌、膀胱癌、膣癌、頸部癌、子宮癌、肝臓癌、腎臓癌、脾臓癌、気管癌、気管支癌、胃癌、食道癌、胆嚢癌、精巣癌、卵巣癌、及び骨癌である。いくつかの実施形態では、メソテリン発現がんは、造血癌である。いくつかの実施形態では、メソテリン発現がんは、肉腫であり、任意に、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性血管内皮腫、悪性神経鞘腫、骨肉腫、及び軟部組織肉腫から選択される。いくつかの実施形態では、メソテリン発現がんは、転移性癌である。いくつかの実施形態では、メソテリン発現がんは、再発性癌または難治性癌である。いくつかの実施形態では、方法は、さらに、追加の治療薬または追加の治療レジメンを対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、化学療法剤、免疫療法剤、標的療法、放射線療法、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、追加の治療レジメンは、第１選択療法を含む。いくつかの実施形態では、追加の治療レジメンは、手術を含む。いくつかの実施形態では、上記の免疫細胞または上記の医薬組成物及び追加の治療薬は、同時投与される。いくつかの実施形態では、上記の免疫細胞または上記の医薬組成物及び追加の治療薬は、逐次投与される。いくつかの実施形態では、上記の免疫細胞または上記の医薬組成物は、追加の治療薬の投与前に、対象に投与される。いくつかの実施形態では、上記の免疫細胞または上記の医薬組成物は、追加の治療薬の投与後に、対象に投与される。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。

【0013】

特定の実施形態では、本発明は、腫瘍細胞を本明細書に記載の免疫細胞と接触させ、それにより、腫瘍細胞の増殖を減少させることを含む、腫瘍細胞の増殖を減少させる方法を含む。いくつかの実施形態では、方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ法である。いくつかの実施形態では、方法は、ｉｎ ｖｉｖｏ法である。

【0014】

特定の実施形態では、本発明は、免疫細胞による、ヒトメソテリンを特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９の発現を誘導するために、ヒトメソテリンを特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する免疫細胞を生成するための方法を含み、方法が、本明細書に記載の核酸分子または本明細書に記載のベクターを、免疫細胞に導入することを含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、抗原提示細胞、または顆粒球、任意に、Ｔ細胞またはＮＫ細胞、である。

【0015】

特定の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の核酸分子；本明細書に記載のベクター、本明細書に記載の免疫細胞、または本明細書に記載の医薬組成物、及び使用説明書を含むキットを含む。

【0016】

発明の効果
本発明の免疫細胞は、メソテリン（例えば、ヒトメソテリン）を発現するがん細胞に対して細胞傷害活性を有し、メソテリン（例えば、ヒトメソテリン）を発現する腫瘍の形成を抑制することが可能である。また、本発明の免疫細胞は、がん細胞の再発を抑制する効果を有する。また、本発明の免疫細胞は、優れた安全性プロフィールを有する。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1A】メソテリンを特異的に認識するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチド、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド、及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを含む例示的なベクターの図表現を示す。

【図1B】メソテリンを特異的に認識するＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する改変免疫細胞の図表現を示す。

【図2】本明細書に記載の改変免疫細胞によるＭＳＬＮ陽性腫瘍細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ死滅を示す。

【図3】例示的な第２及び第３世代ＣＡＲ－Ｔシステムを発現する改変免疫細胞を使用したＣａｐａｎ－２異種移植マウスモデルにおけるｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。

【図4A】非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞と比較した例示的な第２世代ＣＡＲ－Ｔシステムで処置されたマウス由来のＣａｐａｎ－２異種移植腫瘍組織の組織病理学的検査を示す。

【図4B】Ｃａｐａｎ－２異種移植マウスモデルを使用した例示的な第２世代ＣＡＲ－Ｔシステムのｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。

【図5A】本明細書に記載の改変免疫細胞の存在下でのＳＫＯＶ３－ｌｕｃ異種移植マウスモデルにおける腫瘍細胞の位置の生物発光イメージング（ＢＬＩ）を示す。

【図5B】ＳＫＯＶ３－ｌｕｃ ＢＬＩモデルを使用した例示的な第２世代ＣＡＲ－Ｔシステムのｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。

【図6A】非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞と比較した例示的な第２世代ＣＡＲ－Ｔシステムを投与されたＣａｐａｎ－２異種移植マウスモデルの体重変化を示す。

【図6B】非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞と比較した例示的な第２世代ＣＡＲ－Ｔシステムを投与された非担腫瘍マウスの体重変化を示す。

【図7A】非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞を投与されたマウスモデル由来の肺組織の組織病理学的画像を示す。ＵＴＤ細胞は、肺及び脾臓における最小の推定ＣＡＲ－Ｔ浸潤／炎症を有していた。

【図7B】ＣＡＲ＃３６４（第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９）を投与されたマウスモデル由来の肺組織の組織病理学的画像を示す。ＵＴＤ細胞を投与された動物と比較して、肺、脾臓、及び肝臓における推定ＣＡＲ－Ｔ浸潤／炎症のより高い発生率が動物で観察された。

【図7C】ＣＡＲ＃３６５（第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９）を投与されたマウスモデル由来の肺組織の組織病理学的画像を示す。動物では、肺単核浸潤または混合細胞炎症の発生率が低く、脾臓及び骨髄に移植される推定ＣＡＲ－Ｔ細胞の発生率が高いことが観察された。

【図8A】例示的な第２世代ＣＡＲ－Ｔシステムを投与されたＣａｐａｎ－２異種移植マウスの血液中の投与されたＴ細胞のフローサイトメトリー分析を示す。

【図8B】例示的な第２世代ＣＡＲ－Ｔシステムを投与されたＣａｐａｎ－２異種移植マウスの腫瘍中の投与されたＴ細胞のフローサイトメトリー分析を示す。

【図8C】例示的な第２世代ＣＡＲ－Ｔシステムを投与されたＣａｐａｎ－２異種移植マウスの脾臓中の投与されたＴ細胞のフローサイトメトリー分析を示す。

【図9】Ｃａｐａｎ－２腫瘍細胞と、可溶性ｈＭＳＬＮとプレインキュベートされた例示的な第２世代ＣＡＲ－Ｔシステムとの共培養上清由来のヒトＩＦＮ－γレベルを示す。

【図10A】第３の８－２８ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４８）及び第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３６５）の成分を示す。

【図10B】ＨｅｐＧ２－ＲｅｄＦｌｕｃ異種移植モデルを使用した、第３の８－２８ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４８）及び第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３６５）のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。

【図10C】８－２８ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４８）及び第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３６５）を有するＨｅｐＧ２－ＲｅｄＦｌｕｃ異種移植マウスモデルの体重変化を示す。

【図11】第３の８－２８ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４８）及び第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３６５）の存在下でのＨｅｐＧ２－ＲｅｄＦｌｕｃ異種移植マウスモデルにおける腫瘍細胞の位置の生物発光イメージング（ＢＬＩ）を示す。

【図12A】ＨｅｐＧ２－ＲｅｄＦｌｕｃ異種移植マウス群１（Ｇ１）におけるＰＢＳ対照のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。

【図12B】ＨｅｐＧ２－ＲｅｄＦｌｕｃ異種移植マウス群２（Ｇ２）における３Ｍの用量での対照非形質導入（ＵＴＤ）の等価総Ｔ細胞数のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。

【図12C】ＨｅｐＧ２－ＲｅｄＦｌｕｃ異種移植マウス群３（Ｇ３）における、０．３Ｍの用量での第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３６５）のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。

【図12D】ＨｅｐＧ２－ＲｅｄＦｌｕｃ異種移植マウス群３（Ｇ４）における１Ｍの用量での第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３６５）のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。

【図12E】ＨｅｐＧ２－ＲｅｄＦｌｕｃ異種移植マウス群３（Ｇ５）における３Ｍの用量での第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３６５）のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。

【図12F】ＨｅｐＧ２－ＲｅｄＦｌｕｃ異種移植マウス群３（Ｇ６）における０．３Ｍの用量での第３の８－２８ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４８）のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。

【図12G】ＨｅｐＧ２－ＲｅｄＦｌｕｃ異種移植マウス群３（Ｇ７）における１Ｍの用量での第３の８－２８ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４８）のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。

【図12H】ＨｅｐＧ２－ＲｅｄＦｌｕｃ異種移植マウス群３（Ｇ８）における３Ｍの用量での第３の８－２８ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４８）のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。

【発明を実施するための形態】

【0018】

改変免疫細胞
特定の実施形態では、メソテリンに特異的に結合する操作された細胞表面分子、インターロイキン７（ＩＬ－７）、及びケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド１９（ＣＣＬ１９）を発現する操作された免疫細胞が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、操作された細胞表面分子は、メソテリンを特異的に認識するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、またはメソテリンに特異的に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む。

【0019】

いくつかの実施形態では、操作された免疫細胞は、操作された細胞表面分子をコードする外因性核酸、ＩＬ－７をコードする外因性核酸、及びＣＣＬ１９をコードする外因性核酸を含む。いくつかの実施形態では、操作された免疫細胞は、メソテリンを特異的に認識する表面分子、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する。

【0020】

メソテリン（ＭＳＬＮ）は、細胞表面に結合したグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカータンパク質であり、通常の発現は、例えば、胸膜、心膜、腹膜、膣膜、卵巣、または卵管由来の中皮細胞に限定されている。しかし、ＭＳＬＮは、また、大量の癌、例えば、悪性中皮腫、卵巣癌、乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳癌、ＴＮＢＣ）、膵臓癌、肺癌、胃癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、胆道癌、子宮漿液癌、胆管癌、及び小児急性骨髄性白血病で過剰発現されることが示されている。さらに、ＭＳＬＮ発現の増加は、ＴＮＢＣ、卵巣癌、肺腺癌、胆管癌、及び膵腺癌の患者の予後不良に関連している。

【0021】

ＭＳＬＮの生理学的及び生物学的機能は、完全には解明されていない。しかし、ＭＳＬＮは、がんの発症のいくつかの機序に関与していることが示されている。例えば、上皮性卵巣癌では、手術で切除した卵巣癌組織においてより高いレベルのＭＳＬＮ ｍＲＮＡ発現を示した患者は、より低いＭＳＬＮレベルを発現した化学感受性患者と比較して、白金及びシクロホスファミドによる化学療法に対する耐性を示した（Ｔａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ，”Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ａｇｅｎｔｓ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．１３（２）：２７６－２８０（２０１３））。ＭＳＬＮは、表面ムチンＭＵＣ１６（またはＣＡ１２５）に高い親和性で結合することも判明しており、この結合は、卵巣癌細胞の中皮細胞への接着を媒介し、転移を促進することが示唆されている（Ｒｕｍｐ，ｅｔ ａｌ．，“Ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ ａｎｔｉｇｅｎ ＣＡ１２５／ＭＵＣ１６ ｔｏ ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ，”Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７９（１０）：９１９０－９１９８，２００４；Ｇｕｂｂｅｌｓ，ｅｔ ａｌ．，“Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ－ＭＵＣ１６ ｂｉｎｄｉｎｇ ｉｓ ａ ｈｉｇｈ ａｆｆｉｎｉｔｙ，Ｎ－ｇｌｙｃａｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｔｈａｔ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓ ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｏｆ ｏｖａｒｉａｎ ｔｕｍｏｒｓ，”Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ ５（１）：５０，２００６）。さらに、ＭＳＬＮは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの両方で膵癌における腫瘍の進行、細胞の生存、及び増殖に関与していることが示されている（Ｌｉ，ｅｔ ａｌ．，“Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ ｉｓ ａ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｖａｃｃｉｎｅ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ，”Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．７（２）：２８６－２９６，２００８）。

【0022】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
Ａ．抗メソテリン抗体
いくつかの実施形態では、操作された細胞表面分子は、メソテリンを特異的に認識する抗体を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、哺乳動物メソテリン、例えば、齧歯動物メソテリン、非ヒト霊長類メソテリン、またはヒトメソテリンを特異的に認識する。

【0023】

４０ｋＤａのタンパク質であるヒトメソテリンは、ＭＳＬＮ遺伝子にコードされる。ヒトメソテリンの配列情報は、公知の文献またはデータベース、例えば、ＮＣＢＩ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｕｉｄｅ／）の検索により適宜取得することができる。ヒトメソテリンのアミノ酸配列情報の例としては、ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＮｏ．ＮＰ＿０３７５３６．２、ＡＡＶ８７５３０．１、及びそれらのアイソフォームを挙げられ得る。

【0024】

いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、配列番号１に記載のＣＤＲＨ１、配列番号２に記載のＣＤＲＨ２、及び配列番号３に記載のＣＤＲＨ３を含むか、またはそれらからなる重鎖可変領域（ＶＨ）と；配列番号４に記載のＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のＣＤＲＬ３を含むか、またはそれらからなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。表１を参照のこと。

【0025】

【表1】

【0026】

いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、配列番号７と約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；及び、配列番号８と約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、配列番号７と約８０％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；及び、配列番号８と約８０％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、配列番号７と約８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；及び、配列番号８と約８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、配列番号７と約９０％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；及び、配列番号８と約９０％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、配列番号７と約９５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；及び、配列番号８と約９５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、配列番号７と約９６％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；及び、配列番号８と約９６％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、配列番号７と約９７％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；及び、配列番号８と約９７％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、配列番号７と約９８％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；及び、配列番号８と約９８％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、配列番号７と約９９％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；及び、配列番号８と約９９％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。抗メソテリン抗体は、配列番号７を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号８を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み得る。抗メソテリン抗体は、配列番号７からなる重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号８からなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み得る。

【0027】

いくつかの実施形態では、フレームワーク領域内の１つ以上の残基が、抗メソテリン抗体において改変され、ＶＨ領域またはＶＬ領域のいずれかと、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性が生成される。「フレームワーク領域」という用語は、相補性決定領域（ＣＤＲ）を除外する抗体の領域を指す。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、フレームワーク領域内に１つ以上の改変を含み、配列番号７と、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を含む配列を有する。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、フレームワーク領域内に１つ以上の改変を含み、配列番号７と８５％の配列同一性を含む配列を有する。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、フレームワーク領域内に１つ以上の改変を含み、配列番号７と９０％の配列同一性を含む配列を有する。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、フレームワーク領域内に１つ以上の改変を含み、配列番号７と９５％の配列同一性を含む配列を有する。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、フレームワーク領域内に１つ以上の改変を含み、配列番号７と９６％の配列同一性を含む配列を有する。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、フレームワーク領域内に１つ以上の改変を含み、配列番号７と９７％の配列同一性を含む配列を有する。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、フレームワーク領域内に１つ以上の改変を含み、配列番号７と９８％の配列同一性を含む配列を有する。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、フレームワーク領域内に１つ以上の改変を含み、配列番号７と９９％の配列同一性を含む配列を有する。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、フレームワーク領域内に１つ以上の改変を含み、配列番号８と、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を含む配列を有する。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、フレームワーク領域内に１つ以上の改変を含み、配列番号８と８５％の配列同一性を含む配列を有する。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、フレームワーク領域内に１つ以上の改変を含み、配列番号８と９０％の配列同一性を含む配列を有する。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、フレームワーク領域内に１つ以上の改変を含み、配列番号８と９５％の配列同一性を含む配列を有する。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、フレームワーク領域内に１つ以上の改変を含み、配列番号８と９６％の配列同一性を含む配列を有する。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、フレームワーク領域内に１つ以上の改変を含み、配列番号８と９７％の配列同一性を含む配列を有する。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、フレームワーク領域内に１つ以上の改変を含み、配列番号８と９８％の配列同一性を含む配列を有する。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、フレームワーク領域内に１つ以上の改変を含み、配列番号８と９９％の配列同一性を含む配列を有する。

【0028】

いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）フォーマットを含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリンｓｃＦｖ抗体は、配列番号１に記載のＣＤＲＨ１；配列番号２に記載のＣＤＲＨ２；及び配列番号３に記載のＣＤＲＨ３を含むか、またはそれらからなるＶＨ；ならびに、配列番号４に記載のＣＤＲＬ１、配列番号５に記載のＣＤＲＬ２、及び配列番号６に記載のＣＤＲＬ３を含むか、またはそれらからなるＶＬ、を含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリンｓｃＦｖ抗体は、配列番号７と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含むＶＨ；及び、配列番号８と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含むＶＬを含む。

【0029】

いくつかの実施形態では、抗メソテリンｓｃＦｖ抗体のＶＨ及びＶＬは、ペプチドリンカーを介して連結されている。ペプチドリンカーは、３つ以上、例えば、約３～約３０、約３～約２０、３～約１０、約５～約３０、約５～約２０、または約５～約１０のアミノ酸残基を含み得る。ペプチドリンカーは、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、または３０つのアミノ酸残基を含み得る。

【0030】

ペプチドリンカーは、複数のポリアラニン、ポリグリシン、またはアラニン残基とグリシン残基の混合物を含み得る。ペプチドリンカーは、（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）ｎリンカーを含み得、ｎは、１～１０、好ましくは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０、さらに好ましくは、２、３、４、または５の整数である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０）を含む。いくつかの例では、ペプチドリンカーは、ＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＬＱ（配列番号２０）を含む。いくつかの場合では、ペプチドリンカーは、ＳＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＱ（配列番号２１）を含む。いくつかの例では、ペプチドリンカーは、ＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）を含む。

【0031】

いくつかの実施形態では、抗メソテリンｓｃＦｖ抗体は、ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＴＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＳＳＮＳＡＴＷＮＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＹＮＤＹＡＶＳＶＫＳＲＭＳＩＮＰＤＴＳＫＮＱＦＳＬＱＬＮＳＶＴＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＭＭＴＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＩＬＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＰＶＬＴＱＳＳＳＬＳＡＳＰＧＡＳＡＳＬＴＣＴＬＲＳＧＩＮＶＧＰＹＲＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＰＰＱＹＬＬＮＹＫＳＤＳＤＫＱＱＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＫＤＡＳＡＮＡＧＶＬＬＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＭＩＷＨＳＳＡＡＶＦＧＧＧＴＱＬＴＶＬＳ（配列番号９）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリンｓｃＦｖ抗体は、配列番号９と約８５％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリンｓｃＦｖ抗体は、配列番号９と約９０％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリンｓｃＦｖ抗体は、配列番号９と約９５％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリンｓｃＦｖ抗体は、配列番号９と約９６％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリンｓｃＦｖ抗体は、配列番号９と約９７％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリンｓｃＦｖ抗体は、配列番号９と約９８％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリンｓｃＦｖ抗体は、配列番号９と約９９％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリンｓｃＦｖ抗体は、配列番号９を含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリンｓｃＦｖ抗体は、配列番号９からなる。

【0032】

Ｂ．シグナル伝達ペプチド
いくつかの実施形態では、本明細書に開示のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、シグナル伝達ペプチドを（例えば、リーダー配列として）含む。シグナル伝達ペプチドは、ＣＡＲを細胞の表面に局在化させ得る。シグナル伝達ペプチドは、免疫グロブリン重鎖、免疫グロブリン軽鎖、ＣＤ８、Ｔ細胞受容体α鎖及びβ鎖、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、ＣＤ１５４、またはＧＩＴＲ由来シグナルペプチド（リーダー配列）のポリペプチドを含み得る。

【0033】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達ペプチドは、ＭＤＷＴＷＲＩＬＦＬＶＡＡＡＴＧＡＨＳ（配列番号１５）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ペプチドは、配列番号１５と約８５％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ペプチドは、配列番号１５と約９０％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ペプチドは、配列番号１５と約９５％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ペプチドは、配列番号１５と約９６％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ペプチドは、配列番号１５と約９７％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ペプチドは、配列番号１５と約９８％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ペプチドは、配列番号１５と約９９％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ペプチドは、配列番号１５を含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ペプチドは、配列番号１５からなる。

【0034】

Ｃ．膜貫通領域
いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、１つ以上の膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインに連結されている。膜貫通領域は、天然源または合成源のいずれかに由来し得る。例示的な膜貫通領域としては、ＣＤ８、Ｔ細胞受容体α鎖及びβ鎖、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ３Ｅ（ＣＤ３イプシロン）、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、ＣＤ１５４、及びＧＩＴＲに由来する膜貫通領域のポリペプチドが挙げられ得る。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、ＣＤ８膜貫通領域（例えば、ヒトＣＤ８膜貫通領域）を含む。

【0035】

いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ（配列番号１２）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、配列番号１２と約８５％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、配列番号１２と約９０％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、配列番号１２と約９５％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、配列番号１２と約９６％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、配列番号１２と約９７％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、配列番号１２と約９８％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、配列番号１２と約９９％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、配列番号１２を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、配列番号１２からなる。

【0036】

いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮ（配列番号２８）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、配列番号２８と約８５％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、配列番号２８と約９０％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、配列番号２８と約９５％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、配列番号２８と約９６％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、配列番号２８と約９７％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、配列番号２８と約９８％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、配列番号２８と約９９％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、配列番号２８を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、配列番号２８からなる。

【0037】

Ｄ．細胞外ヒンジ領域
メソテリンを認識する細胞表面分子及び膜貫通領域間に、任意のオリゴペプチドまたはポリペプチドを含むか、またはそれらからなる細胞外ヒンジ領域が位置し得る。細胞外ヒンジ領域の長さの例としては、１～１００アミノ酸残基、好ましくは、１０～７０、１０～５０、または１０～３０アミノ酸残基が挙げられ得る。例示的な細胞外ヒンジ領域は、ＣＤ８、ＣＤ２８、及びＣＤ４に由来するヒンジ領域、ならびに免疫グロブリンヒンジ領域が含まれ得る。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ヒトＣＤ８のヒンジ領域を含む。

【0038】

いくつかの実施形態では、細胞外ヒンジ領域は、ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ（配列番号１１）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含むＣＤ８ヒンジ領域である。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ領域は、配列番号１１と約８５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ領域は、配列番号１１と約９０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ領域は、配列番号１１と約９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ領域は、配列番号１１と約９６％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ領域は、配列番号１１と約９７％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ領域は、配列番号１１と約９８％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ領域は、配列番号１１と約９９％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ領域は、配列番号１１を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ領域は、配列番号１１からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ領域は、ＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ（配列番号２９）を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ領域は、配列番号２９と約８５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ領域は、配列番号２９と約９０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ領域は、配列番号２９と約９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ領域は、配列番号２９と約９６％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ領域は、配列番号２９と約９７％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ領域は、配列番号２９と約９８％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ領域は、配列番号２９と約９９％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ領域は、配列番号２９を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ領域は、配列番号２９からなる。

【0039】

いくつかの実施形態では、抗メソテリンｓｃＦｖ抗体は、ペプチドリンカーを介してヒンジ領域に結合している。ペプチドリンカーは、３つ以上、例えば、約３～約３０、約３～約２０、３～約１０、約５～約３０、約５～約２０、または約５～約１０のアミノ酸残基を含み得る。ペプチドリンカーは、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、または３０つのアミノ酸残基を含み得る。

【0040】

ペプチドリンカーは、複数のポリアラニン、ポリグリシン、またはアラニン残基とグリシン残基の混合物、またはアラニンもしくはグリシンのいずれかと１つ以上の追加アミノ酸の混合物を含み得る。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ＡｌａＡｌａＡｌａ（「ＡＡＡ」）を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、三重アラニンリンカーまたはＡｌａＡｌａＡｌａ（「ＡＡＡ」）である。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ＡｒｇＡｌａＡｌａＡｌａ（「ＲＡＡＡ」）（配列番号３０）を含む。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ＡｒｇＡｌａＡｌａＡｌａ（「ＲＡＡＡ」）（配列番号３０）である。

【0041】

いくつかの実施形態では、抗メソテリンｓｃＦｖ抗体は、リンカーなしでヒンジ領域に結合している。

【0042】

Ｅ．免疫細胞活性化シグナル伝達領域
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、１つ以上の細胞内シグナル伝達領域を含む。細胞内シグナル伝達領域は、細胞表面分子がメソテリンを認識する場合に、細胞内にシグナルを伝達することが可能な領域を含み得る。細胞内シグナル伝達領域は、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＨＶＥＭ、ＣＤ３ζ、またはＦｃ受容体関連γ鎖のポリペプチドの細胞内領域から選択される少なくとも１つ以上のメンバーを含み得る。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達領域は、ＣＤ２８細胞内領域のポリペプチド、４－１ＢＢ細胞内領域のポリペプチド、ＣＤ３細胞内領域のポリペプチド、またはそれらの組み合わせを含む。

【0043】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、４－１ＢＢ細胞内領域を含む。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ細胞内領域は、ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ（配列番号１３）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ細胞内領域は、配列番号１３と約８５％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ細胞内領域は、配列番号１３と約９０％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ細胞内領域は、配列番号１３と約９５％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ細胞内領域は、配列番号１３と約９６％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ細胞内領域は、配列番号１３と約９７％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ細胞内領域は、配列番号１３と約９８％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ細胞内領域は、配列番号１３と約９９％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ細胞内領域は、配列番号１３を含む。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ細胞内領域は、配列番号１３からなる。

【0044】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、さらに、ＣＤ３ζ細胞内領域を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζ細胞内領域は、ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号１４）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζ細胞内領域は、配列番号１４と約８５％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζ細胞内領域は、配列番号１４と約９０％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζ細胞内領域は、配列番号１４と約９５％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζ細胞内領域は、配列番号１４と約９６％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζ細胞内領域は、配列番号１４と約９７％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζ細胞内領域は、配列番号１４と約９８％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζ細胞内領域は、配列番号１４と約９９％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζ細胞内領域は、配列番号１４を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζ細胞内領域は、配列番号１４からなる。

【0045】

ＩＬ－７及びＣＣＬ１９
インターロイキン７（ＩＬ－７）は、多分化能（多能性）造血幹細胞のリンパ系前駆細胞への分化、及びリンパ系細胞（Ｂ細胞、Ｔ細胞、及びＮＫ細胞など）の増殖に関与する。ＩＬ－７は、骨髄、胸腺、またはリンパ器官もしくは組織の間質細胞などの非造血細胞で産生される。がんの環境では、ＩＬ－７の投与は、ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞の両方の恒常性が一時的に破壊され、ＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋Ｆｏｘｐ３^＋Ｔ調節細胞の割合が減少することを示している。

【0046】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫細胞は、ＩＬ－７を発現する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－７は、ＭＦＨＶＳＦＲＹＩＦＧＬＰＰＬＩＬＶＬＬＰＶＡＳＳＤＣＤＩＥＧＫＤＧＫＱＹＥＳＶＬＭＶＳＩＤＱＬＬＤＳＭＫＥＩＧＳＮＣＬＮＮＥＦＮＦＦＫＲＨＩＣＤＡＮＫＥＧＭＦＬＦＲＡＡＲＫＬＲＱＦＬＫＭＮＳＴＧＤＦＤＬＨＬＬＫＶＳＥＧＴＴＩＬＬＮＣＴＧＱＶＫＧＲＫＰＡＡＬＧＥＡＱＰＴＫＳＬＥＥＮＫＳＬＫＥＱＫＫＬＮＤＬＣＦＬＫＲＬＬＱＥＩＫＴＣＷＮＫＩＬＭＧＴＫＥＨ（配列番号１８）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－７は、配列番号１８と約８５％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－７は、配列番号１８と約９０％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－７は、配列番号１８と約９５％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－７は、配列番号１８と約９６％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－７は、配列番号１８と約９７％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－７は、配列番号１８と約９８％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－７は、配列番号１８と約９９％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－７は、配列番号１８を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－７は、配列番号１８からなる。

【0047】

ＥＢ１１リガンドケモカイン（ＥＬＣ）及びマクロファージ炎症性タンパク質３β（ＭＩＰ－３β）としても既知のケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド１９（ＣＣＬ１９）は、リンパ球の再循環及びホーミングに役割を果たす。ＣＣＬ１９は、リンパ節の樹状細胞またはマクロファージにより発現され、その受容体ＣＣＲ７を介してＴ細胞、Ｂ細胞、または成熟樹状細胞の遊走を開始する機能を有する。

【0048】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫細胞は、さらに、ＣＣＬ１９を発現する。いくつかの実施形態では、ＣＣＬ１９は、ＭＡＬＬＬＡＬＳＬＬＶＬＷＴＳＰＡＰＴＬＳＧＴＮＤＡＥＤＣＣＬＳＶＴＱＫＰＩＰＧＹＩＶＲＮＦＨＹＬＬＩＫＤＧＣＲＶＰＡＶＶＦＴＴＬＲＧＲＱＬＣＡＰＰＤＱＰＷＶＥＲＩＩＱＲＬＱＲＴＳＡＫＭＫＲＲＳＳ（配列番号１９）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＬ１９は、配列番号１９と約８５％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＬ１９は、配列番号１９と約９０％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＬ１９は、配列番号１９と約９５％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＬ１９は、配列番号１９と約９６％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＬ１９は、配列番号１９と約９７％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＬ１９は、配列番号１９と約９８％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＬ１９は、配列番号１９と約９９％の配列同一性を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＬ１９は、配列番号１９を含む。いくつかの実施形態では、ＣＣＬ１９は、配列番号１９からなる。

【0049】

追加の免疫機能制御因子
本発明の免疫細胞は、さらに、追加の免疫機能制御因子、例えば、ＩＬ－１５、ＣＣＬ２１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＰ－１０、インターフェロン－γ、ＭＩＰ－１α、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＴＧＦ－β、またはＴＮＦ－αを発現し得る。いくつかの実施形態では、追加の免疫機能制御因子は、ＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、追加の免疫機能制御因子は、ＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、追加の免疫機能制御因子は、インターフェロン－γを含む。いくつかの実施形態では、追加の免疫機能制御因子は、ＧＭ－ＣＳＦを含む。いくつかの実施形態では、追加の免疫機能制御因子は、ＴＧＦ－βを含む。いくつかの実施形態では、追加の免疫機能制御因子は、ＴＮＦ－αを含む。いくつかの実施形態では、追加の免疫機能制御因子は、好ましくは、ＩＬ－１２以外の免疫機能制御因子である。

【0050】

各領域の配置
特定の実施形態では、メソテリンに特異的に結合する操作された細胞表面分子（例えば、メソテリンに特異的に結合するＣＡＲ）、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む単離核酸分子が本明細書に開示されている。いくつかの実施形態では、単離核酸分子は、ヒトメソテリンを特異的に認識する抗体、ＣＤ８ヒンジ領域、ＣＤ８膜貫通領域、４－１ＢＢ細胞内領域、及びＣＤ３ζ細胞内領域を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチド；ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド；ならびにＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドは、核酸分子中の２つ以上の異なるポリヌクレオチドに位置する。他の実施形態では、単離核酸分子は、ＣＡＲ及びＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド、ＣＡＲ及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチド、またはＣＡＲ、ＩＬ－７もしくはＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを含む。

【0051】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドは、ヒトメソテリンを特異的に認識する抗体の上流にシグナル伝達ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ペプチドリンカー（例えば、ＡｌａＡｌａＡｌａ）でＣＤ８ヒンジ領域に連結されている。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ細胞内領域は、ポリヌクレオチド中のＣＤ３ζ細胞内領域の上流に位置する。

【0052】

ポリヌクレオチドは、ＭＤＷＴＷＲＩＬＦＬＶＡＡＡＴＧＡＨＳＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＴＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＳＳＮＳＡＴＷＮＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＹＮＤＹＡＶＳＶＫＳＲＭＳＩＮＰＤＴＳＫＮＱＦＳＬＱＬＮＳＶＴＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＭＭＴＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＩＬＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＰＶＬＴＱＳＳＳＬＳＡＳＰＧＡＳＡＳＬＴＣＴＬＲＳＧＩＮＶＧＰＹＲＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＰＰＱＹＬＬＮＹＫＳＤＳＤＫＱＱＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＫＤＡＳＡＮＡＧＶＬＬＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＭＩＷＨＳＳＡＡＶＦＧＧＧＴＱＬＴＶＬＳＡＡＡＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号１６）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含むＣＡＲをコードし得る。ＣＡＲは、配列番号１６と約８５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号１６と約９０％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号１６と約９５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号１６と約９６％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号１６と約９７％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号１６と約９８％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号１６と約９９％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号１６を含み得る。ＣＡＲは、配列番号１６からなり得る。

【0053】

ポリヌクレオチドは、ＭＤＷＴＷＲＩＬＦＬＶＡＡＡＴＧＡＨＳＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＴＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＳＳＮＳＡＴＷＮＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＹＮＤＹＡＶＳＶＫＳＲＭＳＩＮＰＤＴＳＫＮＱＦＳＬＱＬＮＳＶＴＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＭＭＴＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＩＬＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＰＶＬＴＱＳＳＳＬＳＡＳＰＧＡＳＡＳＬＴＣＴＬＲＳＧＩＮＶＧＰＹＲＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＰＰＱＹＬＬＮＹＫＳＤＳＤＫＱＱＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＫＤＡＳＡＮＡＧＶＬＬＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＭＩＷＨＳＳＡＡＶＦＧＧＧＴＱＬＴＶＬＳＲＡＡＡＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号３１）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含むＣＡＲをコードし得る。ＣＡＲは、配列番号３１と約８５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３１と約９０％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３１と約９５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３１と約９６％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３１と約９７％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３１と約９８％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３１と約９９％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３１を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３１からなり得る。

【0054】

ポリヌクレオチドは、ＭＤＷＴＷＲＩＬＦＬＶＡＡＡＴＧＡＨＳＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＴＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＳＳＮＳＡＴＷＮＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＹＮＤＹＡＶＳＶＫＳＲＭＳＩＮＰＤＴＳＫＮＱＦＳＬＱＬＮＳＶＴＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＭＭＴＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＩＬＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＰＶＬＴＱＳＳＳＬＳＡＳＰＧＡＳＡＳＬＴＣＴＬＲＳＧＩＮＶＧＰＹＲＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＰＰＱＹＬＬＮＹＫＳＤＳＤＫＱＱＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＫＤＡＳＡＮＡＧＶＬＬＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＭＩＷＨＳＳＡＡＶＦＧＧＧＴＱＬＴＶＬＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号３２）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含むＣＡＲをコードし得る。ＣＡＲは、配列番号３２と約８５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３２と約９０％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３２と約９５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３２と約９６％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３２と約９７％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３２と約９８％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３２と約９９％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３２を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３２からなり得る。

【0055】

ポリヌクレオチドは、ＭＤＷＴＷＲＩＬＦＬＶＡＡＡＴＧＡＨＳＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＴＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＳＳＮＳＡＴＷＮＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＹＮＤＹＡＶＳＶＫＳＲＭＳＩＮＰＤＴＳＫＮＱＦＳＬＱＬＮＳＶＴＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＭＭＴＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＩＬＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＰＶＬＴＱＳＳＳＬＳＡＳＰＧＡＳＡＳＬＴＣＴＬＲＳＧＩＮＶＧＰＹＲＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＰＰＱＹＬＬＮＹＫＳＤＳＤＫＱＱＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＫＤＡＳＡＮＡＧＶＬＬＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＭＩＷＨＳＳＡＡＶＦＧＧＧＴＱＬＴＶＬＳＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号３３）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含むＣＡＲをコードし得る。ＣＡＲは、配列番号３３と約８５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３３と約９０％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３３と約９５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３３と約９６％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３３と約９７％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３３と約９８％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３３と約９９％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３３を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３３からなり得る。

【0056】

ポリヌクレオチドは、ＭＤＷＴＷＲＩＬＦＬＶＡＡＡＴＧＡＨＳＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＴＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＳＳＮＳＡＴＷＮＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＹＮＤＹＡＶＳＶＫＳＲＭＳＩＮＰＤＴＳＫＮＱＦＳＬＱＬＮＳＶＴＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＭＭＴＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＩＬＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＰＶＬＴＱＳＳＳＬＳＡＳＰＧＡＳＡＳＬＴＣＴＬＲＳＧＩＮＶＧＰＹＲＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＰＰＱＹＬＬＮＹＫＳＤＳＤＫＱＱＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＫＤＡＳＡＮＡＧＶＬＬＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＭＩＷＨＳＳＡＡＶＦＧＧＧＴＱＬＴＶＬＳＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号３４）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含むＣＡＲをコードし得る。ＣＡＲは、配列番号３４と約８５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３４と約９０％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３４と約９５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３４と約９６％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３４と約９７％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３４と約９８％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３４と約９９％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３４を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３４からなり得る。

【0057】

ポリヌクレオチドは、ＭＤＷＴＷＲＩＬＦＬＶＡＡＡＴＧＡＨＳＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＴＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＳＳＮＳＡＴＷＮＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＹＮＤＹＡＶＳＶＫＳＲＭＳＩＮＰＤＴＳＫＮＱＦＳＬＱＬＮＳＶＴＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＭＭＴＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＩＬＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＰＶＬＴＱＳＳＳＬＳＡＳＰＧＡＳＡＳＬＴＣＴＬＲＳＧＩＮＶＧＰＹＲＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＰＰＱＹＬＬＮＹＫＳＤＳＤＫＱＱＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＫＤＡＳＡＮＡＧＶＬＬＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＭＩＷＨＳＳＡＡＶＦＧＧＧＴＱＬＴＶＬＳＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号３５）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含むＣＡＲをコードし得る。ＣＡＲは、配列番号３５と約８５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３５と約９０％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３５と約９５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３５と約９６％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３５と約９７％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３５と約９８％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３５と約９９％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３５を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３５からなり得る。

【0058】

ポリヌクレオチドは、ＭＤＷＴＷＲＩＬＦＬＶＡＡＡＴＧＡＨＳＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＴＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＳＳＮＳＡＴＷＮＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＹＮＤＹＡＶＳＶＫＳＲＭＳＩＮＰＤＴＳＫＮＱＦＳＬＱＬＮＳＶＴＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＭＭＴＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＩＬＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＰＶＬＴＱＳＳＳＬＳＡＳＰＧＡＳＡＳＬＴＣＴＬＲＳＧＩＮＶＧＰＹＲＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＰＰＱＹＬＬＮＹＫＳＤＳＤＫＱＱＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＫＤＡＳＡＮＡＧＶＬＬＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＭＩＷＨＳＳＡＡＶＦＧＧＧＴＱＬＴＶＬＳＡＡＡＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号３６）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含むＣＡＲをコードし得る。ＣＡＲは、配列番号３６と約８５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３６と約９０％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３６と約９５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３６と約９６％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３６と約９７％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３６と約９８％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３６と約９９％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３６を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３６からなり得る。

【0059】

ポリヌクレオチドは、ＭＤＷＴＷＲＩＬＦＬＶＡＡＡＴＧＡＨＳＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＴＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＳＳＮＳＡＴＷＮＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＹＮＤＹＡＶＳＶＫＳＲＭＳＩＮＰＤＴＳＫＮＱＦＳＬＱＬＮＳＶＴＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＭＭＴＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＩＬＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＰＶＬＴＱＳＳＳＬＳＡＳＰＧＡＳＡＳＬＴＣＴＬＲＳＧＩＮＶＧＰＹＲＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＰＰＱＹＬＬＮＹＫＳＤＳＤＫＱＱＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＫＤＡＳＡＮＡＧＶＬＬＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＭＩＷＨＳＳＡＡＶＦＧＧＧＴＱＬＴＶＬＳＡＡＡＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号３７）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含むＣＡＲをコードし得る。ＣＡＲは、配列番号３７と約８５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３７と約９０％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３７と約９５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３７と約９６％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３７と約９７％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３７と約９８％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３７と約９９％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３７を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３７からなり得る。

【0060】

ポリヌクレオチドは、ＭＤＷＴＷＲＩＬＦＬＶＡＡＡＴＧＡＨＳＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＴＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＳＳＮＳＡＴＷＮＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＹＮＤＹＡＶＳＶＫＳＲＭＳＩＮＰＤＴＳＫＮＱＦＳＬＱＬＮＳＶＴＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＭＭＴＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＩＬＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＰＶＬＴＱＳＳＳＬＳＡＳＰＧＡＳＡＳＬＴＣＴＬＲＳＧＩＮＶＧＰＹＲＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＰＰＱＹＬＬＮＹＫＳＤＳＤＫＱＱＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＫＤＡＳＡＮＡＧＶＬＬＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＭＩＷＨＳＳＡＡＶＦＧＧＧＴＱＬＴＶＬＳＡＡＡＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号３８）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含むＣＡＲをコードし得る。ＣＡＲは、配列番号３８と約８５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３８と約９０％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３８と約９５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３８と約９６％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３８と約９７％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３８と約９８％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３８と約９９％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３８を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３８からなり得る。

【0061】

ポリヌクレオチドは、ＭＤＷＴＷＲＩＬＦＬＶＡＡＡＴＧＡＨＳＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＴＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＳＳＮＳＡＴＷＮＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＹＮＤＹＡＶＳＶＫＳＲＭＳＩＮＰＤＴＳＫＮＱＦＳＬＱＬＮＳＶＴＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＭＭＴＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＩＬＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＰＶＬＴＱＳＳＳＬＳＡＳＰＧＡＳＡＳＬＴＣＴＬＲＳＧＩＮＶＧＰＹＲＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＰＰＱＹＬＬＮＹＫＳＤＳＤＫＱＱＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＫＤＡＳＡＮＡＧＶＬＬＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＭＩＷＨＳＳＡＡＶＦＧＧＧＴＱＬＴＶＬＳＲＡＡＡＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号３９）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含むＣＡＲをコードし得る。ＣＡＲは、配列番号３９と約８５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３９と約９０％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３９と約９５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３９と約９６％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３９と約９７％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３９と約９８％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３９と約９９％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３９を含み得る。ＣＡＲは、配列番号３９からなり得る。

【0062】

ポリヌクレオチドは、ＭＤＷＴＷＲＩＬＦＬＶＡＡＡＴＧＡＨＳＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＴＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＳＳＮＳＡＴＷＮＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＹＮＤＹＡＶＳＶＫＳＲＭＳＩＮＰＤＴＳＫＮＱＦＳＬＱＬＮＳＶＴＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＭＭＴＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＩＬＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＰＶＬＴＱＳＳＳＬＳＡＳＰＧＡＳＡＳＬＴＣＴＬＲＳＧＩＮＶＧＰＹＲＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＰＰＱＹＬＬＮＹＫＳＤＳＤＫＱＱＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＫＤＡＳＡＮＡＧＶＬＬＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＭＩＷＨＳＳＡＡＶＦＧＧＧＴＱＬＴＶＬＳＲＡＡＡＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号４０）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含むＣＡＲをコードし得る。ＣＡＲは、配列番号４０と約８５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号４０と約９０％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号４０と約９５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号４０と約９６％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号４０と約９７％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号４０と約９８％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号４０と約９９％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号４０を含み得る。ＣＡＲは、配列番号４０からなり得る。

【0063】

ポリヌクレオチドは、ＭＤＷＴＷＲＩＬＦＬＶＡＡＡＴＧＡＨＳＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＴＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＳＳＮＳＡＴＷＮＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＹＮＤＹＡＶＳＶＫＳＲＭＳＩＮＰＤＴＳＫＮＱＦＳＬＱＬＮＳＶＴＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＭＭＴＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＩＬＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＰＶＬＴＱＳＳＳＬＳＡＳＰＧＡＳＡＳＬＴＣＴＬＲＳＧＩＮＶＧＰＹＲＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＰＰＱＹＬＬＮＹＫＳＤＳＤＫＱＱＧＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＫＤＡＳＡＮＡＧＶＬＬＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＭＩＷＨＳＳＡＡＶＦＧＧＧＴＱＬＴＶＬＳＲＡＡＡＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号４１）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含むＣＡＲをコードし得る。ＣＡＲは、配列番号４１と約８５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号４１と約９０％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号４１と約９５％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号４１と約９６％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号４１と約９７％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号４１と約９８％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号４１と約９９％の配列同一性を有する配列を含み得る。ＣＡＲは、配列番号４１を含み得る。ＣＡＲは、配列番号４１からなり得る。

【0064】

本明細書に記載のＣＡＲをコードするポリヌクレオチドは、ＡＴＧＧＡＣＴＧＧＡＣＣＴＧＧＡＧＧＡＴＣＣＴＧＴＴＴＣＴＧＧＴＧＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＡＧＧＡＧＣＣＣＡＣＡＧＣＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＧＡＣＡＣＣＣＡＧＣＣＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＴＧＣＣＡＴＣＴＣＣＧＧＣＧＡＴＡＧＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＣＡＧＣＧＣＣＡＣＣＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＡＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＣＡＧＧＡＣＣＴＡＣＴＡＣＡＧＧＡＧＣＡＡＧＴＧＧＴＡＣＡＡＣＧＡＣＴＡＣＧＣＣＧＴＧＡＧＣＧＴＧＡＡＧＡＧＣＡＧＧＡＴＧＡＧＣＡＴＣＡＡＣＣＣＣＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＣＴＣＣＧＴＧＡＣＣＣＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＧＧＧＧＣＡＴＧＡＴＧＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＡＣＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＧＣＡＴＣＣＴＧＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧＡＡＧＣＣＡＧＣＣＴＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＧＣＴＡＧＣＣＣＴＧＧＡＧＣＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＡＣＣＣＴＧＡＧＡＡＧＣＧＧＣＡＴＣＡＡＣＧＴＧＧＧＣＣＣＣＴＡＣＡＧＧＡＴＣＴＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＡＧＣＣＣＣＣＣＣＣＡＧＴＡＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＧＣＧＡＣＡＧＣＧＡＣＡＡＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＴＡＧＣＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＡＡＧＧＡＴＧＣＣＡＧＣＧＣＣＡＡＣＧＣＣＧＧＡＧＴＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＡＧＧＡＧＣＧＡＧＧＡＴＧＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＴＧＡＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＡＧＣＧＣＣＧＣＣＧＴＧＴＴＴＧＧＡＧＧＣＧＧＡＡＣＣＣＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＧＣＡＡＣＣＡＣＣＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＣＴＡＧＡＣＣＴＣＣＴＡＣＡＣＣＣＧＣＴＣＣＣＡＣＡＡＴＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＴＴＴＡＡＧＡＣＣＣＧＡＧＧＣＴＴＧＴＡＧＡＣＣＣＧＣＴＧＣＴＧＧＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＣＡＴＡＣＣＡＧＡＧＧＡＣＴＧＧＡＣＴＴＣＧＣＴＴＧＴＧＡＣＡＴＣＴＡＣＡＴＣＴＧＧＧＣＴＣＣＴＴＴＡＧＣＣＧＧＣＡＣＡＴＧＴＧＧＡＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＣＴＴＴＡＧＴＧＡＴＣＡＣＴＴＴＡＴＡＣＴＧＣＡＡＧＡＧＧＧＧＴＣＧＴＡＡＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＴＡＣＡＴＣＴＴＣＡＡＧＣＡＧＣＣＣＴＴＣＡＴＧＡＧＧＣＣＣＧＴＧＣＡＧＡＣＣＡＣＣＣＡＡＧＡＡＧＡＧＧＡＣＧＧＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＣＧＴＴＴＴＣＣＣＧＡＡＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＧＣＧＧＣＴＧＣＧＡＧＣＴＧＡＧＧＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＧＣＣＧＡＴＧＣＣＣＣＣＧＣＴＴＡＣＣＡＧＣＡＡＧＧＴＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＡＡＴＴＴＡＧＧＴＣＧＴＡＧＧＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＧＡＧＧＧＧＣＡＧＡＧＡＣＣＣＣＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＣＡＡＧＣＣＴＣＧＴＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＣＣＡＡＧＡＡＧＧＴＴＴＡＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＣＡＧＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＴＧＧＣＣＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＣＧＡＧＡＴＣＧＧＣＡＴＧＡＡＧＧＧＣＧＡＧＡＧＧＡＧＧＡＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＣＡＣＧＡＣＧＧＴＴＴＡＴＡＣＣＡＡＧＧＴＣＴＧＡＧＣＡＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＴＧＣＴＴＴＡＣＡＣＡＴＧＣＡＡＧＣＴＴＴＡＣＣＴＣＣＴＣＧＴ（配列番号１７）と、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含み得る。ポリヌクレオチドは、配列番号１７と約８５％の配列同一性を有する核酸配列を含み得る。ポリヌクレオチドは、配列番号１７と約９０％の配列同一性を有する核酸配列を含み得る。ポリヌクレオチドは、配列番号１７と約９５％の配列同一性を有する核酸配列を含み得る。ポリヌクレオチドは、配列番号１７と約９６％の配列同一性を有する核酸配列を含み得る。ポリヌクレオチドは、配列番号１７と約９７％の配列同一性を有する核酸配列を含み得る。ポリヌクレオチドは、配列番号１７と約９８％の配列同一性を有する核酸配列を含み得る。ポリヌクレオチドは、配列番号１７と約９９％の配列同一性を有する核酸配列を含み得る。ポリヌクレオチドは、配列番号１７を含み得る。ポリヌクレオチドは、配列番号１７からなり得る。

【0065】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド、及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドは、それぞれ独立して、自己切断性２Ａペプチド（２Ａペプチド）または内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）をコードするポリヌクレオチドを含むプロモーター下で転写されている。いくつかの実施形態では、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドは、２ＡペプチドまたはＩＲＥＳをコードするポリヌクレオチドを含むプロモーター下でそれぞれ独立して転写されている。

【0066】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド、及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドは、それぞれ独立して、２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むプロモーターの下で転写されている。２Ａペプチドファミリーに、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ、Ｆ２Ａ、及びＴ２Ａの４つのメンバーがある。Ｐ２Ａは、ブタテスコウイルス－１ ２Ａに由来する。Ｅ２Ａは、ウマＡ型鼻炎ウイルスに由来する。Ｆ２Ａは、口蹄疫ウイルス１８に由来する。Ｔ２Ａは、それらのアシグナウイルス２Ａに由来する。２Ａペプチドメンバーの例示的な配列としては、以下が挙げられる：
Ｐ２Ａ－ＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ；
Ｅ２Ａ－ＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ；
Ｆ２Ａ－ＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ；及び
Ｔ２Ａ－ＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ。

【0067】

いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、さらに、２Ａペプチドの末端、例えば、Ｎ末端、に付加されている。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、ＧＳＧを含む。

【0068】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド、及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドは、それぞれ独立して、Ｐ２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むプロモーターの下で転写されている。Ｐ２Ａペプチドは、ＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰを含み得る。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカー（例えば、ＧＳＧ）は、さらに、Ｐ２ＡペプチドのＮ末端に付加されている。いくつかの場合では、Ｐ２Ａは、ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号２３）を含む。

【0069】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド、及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドは、核酸分子内で５’末端から３’末端に向けて、以下のように配置されている：

【0070】

ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド－ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド－ＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチド；

【0071】

ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド－ＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチド－ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド；

【0072】

ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド－ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド－ＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチド；

【0073】

ＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチド－ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド－ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド；

【0074】

ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド－ＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチド－ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド；または

【0075】

ＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチド－ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド－ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド。

【0076】

いくつかの実施形態では、第１の２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチド（第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチド間に位置している）と、第２の２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチド（第２のポリヌクレオチド及び第３のポリヌクレオチド間に位置している）は、予期せぬ組み換えを防ぐために、同一ではない（コドン最適化された）ポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、第１のＰ２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＣＴＡＣＴＡＡＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣ（配列番号２６）を含み、第２のＰ２Ａペプチドをコードするポリペプチドは、ＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＣＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＴＣＴＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＡＧＣＣＧＧＣＧＡＴＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＴＣＣＣＧＧＣＣＣＣ（配列番号２７）を含む。

【0077】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲをコードするポリヌクレオチド、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド、及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドは、ＡＴＧＧＡＣＴＧＧＡＣＣＴＧＧＡＧＧＡＴＣＣＴＧＴＴＴＣＴＧＧＴＧＧＣＣＧＣＣＧＣＣＡＣＡＧＧＡＧＣＣＣＡＣＡＧＣＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＴＧＧＣＣＴＧＧＴＧＡＣＡＣＣＣＡＧＣＣＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＴＧＣＣＡＴＣＴＣＣＧＧＣＧＡＴＡＧＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＣＡＧＣＧＣＣＡＣＣＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＡＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＣＡＧＧＡＣＣＴＡＣＴＡＣＡＧＧＡＧＣＡＡＧＴＧＧＴＡＣＡＡＣＧＡＣＴＡＣＧＣＣＧＴＧＡＧＣＧＴＧＡＡＧＡＧＣＡＧＧＡＴＧＡＧＣＡＴＣＡＡＣＣＣＣＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＣＴＣＣＧＴＧＡＣＣＣＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＧＧＧＧＣＡＴＧＡＴＧＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＡＣＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＧＣＡＴＣＣＴＧＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧＡＡＧＣＣＡＧＣＣＴＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＧＣＴＡＧＣＣＣＴＧＧＡＧＣＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＡＣＣＣＴＧＡＧＡＡＧＣＧＧＣＡＴＣＡＡＣＧＴＧＧＧＣＣＣＣＴＡＣＡＧＧＡＴＣＴＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＡＧＣＣＣＣＣＣＣＣＡＧＴＡＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＧＣＧＡＣＡＧＣＧＡＣＡＡＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＴＡＧＣＡＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＡＡＧＧＡＴＧＣＣＡＧＣＧＣＣＡＡＣＧＣＣＧＧＡＧＴＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＡＧＧＡＧＣＧＡＧＧＡＴＧＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＴＧＡＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＡＧＣＧＣＣＧＣＣＧＴＧＴＴＴＧＧＡＧＧＣＧＧＡＡＣＣＣＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＧＣＡＡＣＣＡＣＣＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＣＴＡＧＡＣＣＴＣＣＴＡＣＡＣＣＣＧＣＴＣＣＣＡＣＡＡＴＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＴＴＴＡＡＧＡＣＣＣＧＡＧＧＣＴＴＧＴＡＧＡＣＣＣＧＣＴＧＣＴＧＧＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＣＡＴＡＣＣＡＧＡＧＧＡＣＴＧＧＡＣＴＴＣＧＣＴＴＧＴＧＡＣＡＴＣＴＡＣＡＴＣＴＧＧＧＣＴＣＣＴＴＴＡＧＣＣＧＧＣＡＣＡＴＧＴＧＧＡＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＴＣＴＴＴＡＧＴＧＡＴＣＡＣＴＴＴＡＴＡＣＴＧＣＡＡＧＡＧＧＧＧＴＣＧＴＡＡＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＴＡＣＡＴＣＴＴＣＡＡＧＣＡＧＣＣＣＴＴＣＡＴＧＡＧＧＣＣＣＧＴＧＣＡＧＡＣＣＡＣＣＣＡＡＧＡＡＧＡＧＧＡＣＧＧＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＣＧＴＴＴＴＣＣＣＧＡＡＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＧＣＧＧＣＴＧＣＧＡＧＣＴＧＡＧＧＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＧＣＣＧＡＴＧＣＣＣＣＣＧＣＴＴＡＣＣＡＧＣＡＡＧＧＴＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＡＡＴＴＴＡＧＧＴＣＧＴＡＧＧＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＧＡＧＧＧＧＣＡＧＡＧＡＣＣＣＣＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＣＡＡＧＣＣＴＣＧＴＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＣＣＡＡＧＡＡＧＧＴＴＴＡＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＣＡＧＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＴＧＧＣＣＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＣＧＡＧＡＴＣＧＧＣＡＴＧＡＡＧＧＧＣＧＡＧＡＧＧＡＧＧＡＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＣＡＣＧＡＣＧＧＴＴＴＡＴＡＣＣＡＡＧＧＴＣＴＧＡＧＣＡＣＣＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＴＧＣＴＴＴＡＣＡＣＡＴＧＣＡＡＧＣＴＴＴＡＣＣＴＣＣＴＣＧＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＣＴＡＣＴＡＡＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣＴＧＣＡＴＧＴＴＣＣＡＴＧＴＧＡＧＣＴＴＣＡＧＧＴＡＣＡＴＣＴＴＣＧＧＡＣＴＧＣＣＴＣＣＴＣＴＣＡＴＣＣＴＧＧＴＣＣＴＣＣＴＣＣＣＣＧＴＧＧＣＣＡＧＣＴＣＣＧＡＣＴＧＴＧＡＣＡＴＣＧＡＡＧＧＡＡＡＧＧＡＴＧＧＣＡＡＧＣＡＧＴＡＣＧＡＡＡＧＣＧＴＧＣＴＧＡＴＧＧＴＧＡＧＣＡＴＣＧＡＴＣＡＧＣＴＣＣＴＧＧＡＴＴＣＣＡＴＧＡＡＧＧＡＡＡＴＣＧＧＣＴＣＣＡＡＣＴＧＣＣＴＣＡＡＣＡＡＴＧＡＧＴＴＣＡＡＣＴＴＴＴＴＴＡＡＧＡＧＧＣＡＴＡＴＣＴＧＣＧＡＣＧＣＣＡＡＣＡＡＧＧＡＧＧＧＣＡＴＧＴＴＴＣＴＧＴＴＣＡＧＧＧＣＣＧＣＣＡＧＧＡＡＧＣＴＧＡＧＡＣＡＧＴＴＣＣＴＣＡＡＧＡＴＧＡＡＴＡＧＣＡＣＣＧＧＣＧＡＣＴＴＣＧＡＣＣＴＣＣＡＴＣＴＧＣＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＣＧＡＧＧＧＡＡＣＣＡＣＣＡＴＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＴＧＣＡＣＣＧＧＣＣＡＡＧＴＧＡＡＧＧＧＡＡＧＡＡＡＡＣＣＴＧＣＴＧＣＣＣＴＧＧＧＣＧＡＧＧＣＴＣＡＧＣＣＴＡＣＣＡＡＧＡＧＣＣＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＣＡＡＡＡＧＣＣＴＧＡＡＧＧＡＧＣＡＧＡＡＧＡＡＧＣＴＧＡＡＣＧＡＣＣＴＧＴＧＣＴＴＣＣＴＣＡＡＧＡＧＧＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＴＴＡＡＧＡＣＣＴＧＴＴＧＧＡＡＣＡＡＧＡＴＣＣＴＧＡＴＧＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＡＧＣＡＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＣＣＡＣＣＡＡＣＴＴＣＴＣＴＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＡＧＣＣＧＧＣＧＡＴＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＴＣＣＣＧＧＣＣＣＣＡＴＧＧＣＴＣＴＧＣＴＧＣＴＣＧＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＣＴＣＧＴＣＣＴＣＴＧＧＡＣＣＴＣＣＣＣＴＧＣＴＣＣＴＡＣＣＣＴＧＡＧＣＧＧＣＡＣＣＡＡＴＧＡＣＧＣＴＧＡＡＧＡＣＴＧＣＴＧＣＣＴＧＴＣＣＧＴＧＡＣＣＣＡＧＡＡＧＣＣＴＡＴＣＣＣＣＧＧＡＴＡＴＡＴＣＧＴＧＡＧＧＡＡＴＴＴＴＣＡＴＴＡＣＣＴＣＣＴＧＡＴＣＡＡＧＧＡＣＧＧＣＴＧＴＡＧＡＧＴＧＣＣＣＧＣＣＧＴＣＧＴＧＴＴＣＡＣＡＡＣＡＣＴＣＡＧＡＧＧＣＡＧＧＣＡＧＣＴＧＴＧＴＧＣＴＣＣＣＣＣＣＧＡＣＣＡＧＣＣＴＴＧＧＧＴＧＧＡＧＡＧＡＡＴＣＡＴＴＣＡＧＡＧＡＣＴＧＣＡＡＡＧＧＡＣＣＴＣＣＧＣＴＡＡＧＡＴＧＡＡＧＡＧＧＡＧＧＴＣＣＡＧＣ（配列番号２５）と、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含み得る。

【0078】

ベクター
いくつかの実施形態では、１つ以上のベクターは、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド、及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを包含する。いくつかの実施形態では、ベクター（例えば、発現ベクター）は、ヒトメソテリンを特異的に認識する抗体、ＣＤ８ヒンジ領域、ＣＤ８膜貫通領域、４－１ＢＢ細胞内領域、及びＣＤ３ζ細胞内領域を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチド；ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド；ならびに、ＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子を含む。図１Ａを参照のこと。いくつかの実施形態では、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド、及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドは、ベクター（例えば、発現ベクター）内で、５’末端から３’末端まで、以下のように配置されている：

【0079】

ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド－ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド－ＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチド；

【0080】

ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド－ＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチド－ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド；

【0081】

ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド－ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド－ＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチド；

【0082】

ＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチド－ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド－ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド；

【0083】

ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド－ＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチド－ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド；または

【0084】

ＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチド－ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド－ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド。

【0085】

いくつかの実施形態では、第１のベクター（例えば、第１の発現ベクター）は、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクター（例えば、第２の発現ベクター）は、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを含み、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドは、任意に、第２のベクター（例えば、第２の発現ベクター）内に、５’末端から３’末端に向けて、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド－ＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドまたはＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチド－ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチドのように配置されている。

【0086】

さらなる実施形態では、第１のベクター（例えば、第１の発現ベクター）は、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドと、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチドまたはＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドのいずれかを含み、第２のベクター（例えば、第２の発現ベクター）は、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド、または第１のベクターには含まれないＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、第１のベクター（例えば、第１の発現ベクター）は、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド及びＩＬ－７をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクター（例えば、第２の発現ベクター）は、ＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、第１のベクター（例えば、第１の発現ベクター）は、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクター（例えば、第２の発現ベクター）は、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチドを含む。

【0087】

さらなる実施形態では、第１のベクター（例えば、第１の発現ベクター）は、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクター（例えば、第２の発現ベクター）は、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチドを含み、第３のベクター（例えば、第３の発現ベクター）は、ＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを含む。

【0088】

本発明のベクター（例えば、発現ベクター）は、１つ以上の天然由来の核酸または人工的に合成された核酸を含んでもよく、本発明のベクター（例えば、発現ベクター）が導入されるべき細胞の種類に従って適宜選択することができる。これらの配列情報は、公知の文献またはＮＣＢＩ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｕｉｄｅ／）等のデータベースを検索することにより適宜取得することができる。

【0089】

本発明のベクターは、本発明の改変免疫細胞を生成するために、コードされる所定のタンパク質（ポリペプチド）を免疫細胞で発現させることができるように、ベクターを細胞と接触させることにより、免疫細胞またはその前駆細胞に導入される発現ベクターであり得る。本発明の発現ベクターは、任意の実施形態により特に限定されない。当業者らは、免疫細胞における所望のタンパク質（ポリペプチド）の発現を可能にする発現ベクターを設計及び生産することが可能である。ヒトメソテリンを特異的に認識する細胞表面分子をコードするポリヌクレオチド、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド、及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを含む本発明の発現ベクターの例としては、本発明の免疫細胞を生成するための発現ベクターのいずれもが挙げられ得る。

【0090】

本発明の発現ベクターの種類は、直鎖形態でも環形態でもよく、プラスミドなどの非ウイルスベクターであってよく、ウイルスベクターであってよく、またはトランスポゾンに基づくベクターであってよい。そのようなベクターは、プロモーターもしくはターミネーターなどの制御配列、または、薬剤耐性遺伝子もしくはレポーター遺伝子などの選択マーカー配列を含有してもよい。ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド、及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドのそれぞれが効率的に転写され得るように、プロモーター配列の下流に作動可能に配置され得る。

【0091】

プロモーターの例としては、ウイルス由来プロモーター、例えば、レトロウイルスＬＴＲプロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、サイトメガロウイルスプロモーター、及び単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼプロモーター；ならびに哺乳動物由来のプロモーター、例えば、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、Ｘｉｓｔプロモーター、β－アクチンプロモーター、及びＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターが挙げられ得る。いくつかの実施形態では、プロモーターは、好ましくは、レトロウイルスＬＴＲプロモーターを含み得る。レトロウイルスＬＴＲプロモーターは、ＣＴＧＡＡＴＡＴＧＧＧＣＣＡＡＡＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＧＴＧＧＴＡＡＧＣＡＧＴＴＣＣＴＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧＡＴＧＧＡＡＣＡＧＣＴＧＡＡＴＡＴＧＧＧＣＣＡＡＡＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＧＴＧＧＴＡＡＧＣＡＧＴＴＣＣＴＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧＡＴＧＧＴＣＣＣＣＡＧＡＴＧＣＧＧＴＣＣＡＧＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＴＴＴＣＴＡＧＡＧＡＡＣＣＡＴＣＡＧＡＴＧＴＴＴＣＣＡＧＧＧＴＧＣＣＣＣＡＡＧＧＡＣＣＴＧＡＡＡＴＧＡＣＣＣＴＧＴＧＣＣＴＴＡＴＴＴＧＡＡＣＴＡＡＣＣＡＡＴＣＡＧＴＴＣＧＣＴＴＣＴＣＧＣＴＴＣＴＧＴＴＣＧＣＧＣＧＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＣＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＡＡＡＡＧＡＧＣＣＣＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＡＣＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＡＧＴＣＣＴＣＣＧＡＴＴＧＡＣＴＧＡＧＴＣＧＣＣＣＧＧＧＴＡＣＣＣＧＴＧＴＡＴＣＣＡＡＴＡＡＡＣＣＣＴＣＴＴＧＣＡＧＴＴＧＣＡＴＣＣＧＡＣＴＴＧＴＧＧＴＣＴＣＧＣＴＧＴＴＣＣＴＴＧＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＣＴＣＴＧＡＧＴＧＡＴＴＧＡＣＴＡＣＣＣＧＴＣＡＧＣＧＧＧＧＧＴＣＴＴＴＣＡ（配列番号２４）を含み得る。あるいは、テトラサイクリンにより誘導されるテトラサイクリン応答性プロモーター、インターフェロンにより誘導されるＭｘ１プロモーター等が使用され得る。本発明の発現ベクターにおいて、特定の物質により誘導されるプロモーターの使用は、がんの処置経過に応じて、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９発現の誘導を制御し、例えば、本発明のベクターを含有する免疫細胞が、がんの処置に使用される医薬組成物として使用される。

【0092】

ウイルスベクターの例としては、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、及びアデノ随伴ウイルスベクターが挙げられ得、好ましくは、レトロウイルスベクター、例えば、ガンマレトロウイルスベクター、より好ましくは、ｐＭＳＧＶベクター（Ｔａｍａｄａ ｋ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １８：６４３６－６４４５（２００２））、ｐＭＳＣＶベクター（Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ Ｉｎｃ．が製造）、またはｐＳＦＧベクターが挙げられ得る。レトロウイルスベクターの使用は、導入遺伝子が宿主細胞のゲノムに組み込まれるので、導入遺伝子の長期安定した発現が可能になる。

【0093】

１つ以上のアッセイは、免疫細胞内に本発明の発現ベクターが包含されることを確認するために使用することができる。例示的なアッセイとしては、操作された免疫細胞によるＣＡＲの発現をスクリーニングするためのフローサイトメトリー、ノーザンブロッティング、サザンブロッティング、ＲＴ－ＰＣＲなどのＰＣＲ、ＥＬＩＳＡ、またはウェスタンブロッティングが挙げられ得る。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、免疫細胞によるＣＡＲ、ＩＬ－７、及び／またはＣＣＬ１９の発現を検出するために、さらに、マーカー遺伝子（例えば、蛍光タンパク質、例えば、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）、または黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）をコードする）を含む。

【0094】

免疫細胞及び生成方法
特定の実施形態では、本明細書に記載の免疫細胞は、メソテリン（例えば、ヒトメソテリン）を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現するように改変される（図１Ｂ）。例示的な免疫細胞としては、リンパ系細胞、例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、及びＢ細胞；抗原提示細胞、例えば、単球、マクロファージ、樹状細胞、または顆粒球、例えば、好中球、好酸球、好塩基球、もしくは肥満細胞が挙げられ得る。免疫細胞としては、哺乳動物、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ブタ、またはマウス由来のＴ細胞、好ましくは、ヒト由来の、またはそれから分離されたＴ細胞が挙げられ得る。免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、培養、例えば、ｅｘ ｖｉｖｏ培養を通して得るか、または哺乳動物から直接採取することができる。免疫細胞は、細胞が免疫応答に関与し、メソテリン（例えば、ヒトメソテリン）を特異的に認識する細胞表面分子を発現し、ＩＬ－７を発現し、ＣＣＬ１９を発現し得る限り、限定されない。免疫細胞は、その後の処置のために、それを必要とする対象から採取された自己細胞であり得る。免疫細胞は、それを必要とする対象にとっても、同種異系細胞または同系細胞であり得る。免疫細胞は、幹細胞（例えば、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）、胚性幹細胞（ＥＳ細胞））または前駆細胞を、免疫細胞に誘導及び分化させるための適切な条件下で培養することにより得ることもできる。

【0095】

特定の実施形態では、メソテリンを特異的に認識するＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現するように改変された免疫細胞の集団が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、免疫細胞の集団は、メソテリンを特異的に認識するＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する改変Ｔ細胞（例えば、ｅｘ ｖｉｖｏで増殖させた、または哺乳動物から採取した）を含む。免疫細胞の集団は、約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上の割合の改変Ｔ細胞を含み得る。免疫細胞の集団は、約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％の改変Ｔ細胞を含み得る。免疫細胞の集団は、改変Ｔ細胞の実質的に純粋な集団を含み得る。例示的なＴ細胞としては、α－βＴ細胞、γ－δＴ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、ナイーブＴ細胞、及び天然キラーＴ（ＮＫＴ）細胞が挙げられ得る。

【0096】

いくつかの実施形態では、メソテリンを特異的に認識するＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現するように改変された免疫細胞の集団は、約３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、またはそれ未満の夾雑細胞を含む。本明細書で使用される場合、「夾雑細胞」という用語は、メソテリンを特異的に認識するＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現しない細胞を指す。夾雑細胞は、メソテリンを特異的に認識するＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現しないＴ細胞と、メソテリンを特異的に認識するＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現しない他の種類の免疫細胞を含み得る。夾雑細胞は、体液（例えば、血液もしくは骨髄液）由来の非免疫細胞、組織（例えば、脾臓組織、胸腺、もしくはリンパ節）に由来する非免疫細胞、またはがん組織（例えば、原発性腫瘍組織、転移性腫瘍組織、もしくは癌性腹水）に由来する非免疫細胞も指し得る。

【0097】

本発明の免疫細胞の製造方法としては、細胞表面分子をコードするポリヌクレオチド、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド、及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを、免疫細胞に導入する製造方法が挙げられ得る。製造方法としては、例えば、ＷＯ２０１６／０５６２２８、ＷＯ２０１７／１５９７３６、ＷＯ２０１３／１７６９１５、ＷＯ２０１５／１２００９６、ＷＯ２０１６／０１９３００、またはＶｏｒｍｉｔｔａｇ Ｐ ｅｔ ａｌ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２０１８；５３：１６４－８１に記載の製造方法を挙げられ得る。別の例としては、メソテリン（例えば、ヒトメソテリン）を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７、及び／またはＣＣＬ１９の発現用ベクターを受精卵に移植することにより作製されたトランスジェニック哺乳動物由来の免疫細胞を精製して取得する方法、ならびに、さらに、必要に応じて、メソテリン（例えば、ヒトメソテリン）を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７、及び／またはＣＣＬ１９の発現用ベクターを、トランスジェニック哺乳動物から精製して得られた免疫細胞に導入する製造方法が挙げられ得る。

【0098】

細胞表面分子をコードするポリヌクレオチド、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド、及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチド、または上掲のベクターを導入する場合、方法は、ポリヌクレオチドまたはベクターを免疫細胞に導入するための任意の方法であり得る。例としては、エレクトロポレーション法（Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３，１３３（１９９０））、リン酸カルシウム法（日本公開特許出願第２－２２７０７５号）、リポフェクション法（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ，８４，７４１３（１９８７））、及びウイルス感染法が挙げられ得る。例示的ウイルス感染法としては、パッケージング細胞（例えば、ＧＰ２－２９３細胞（タカラバイオ株式会社製）、Ｐｌａｔ－ＧＰ細胞（Ｃｏｓｍｏ Ｂｉｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）、ＰＧ１３細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１０６８６）、またはＰＡ３１７細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－９０７８））に、導入されるべきベクター及び組み換えウイルスを産生するパッケージングプラスミドをトランスフェクトし、免疫細胞に組み換えウイルスを感染させる方法が挙げられ得る（例えば、以下を参照：ＷＯ２０１７／１５９７３６）。

【0099】

いくつかの実施形態では、方法は、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド、及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを含む１つ以上のベクターを免疫細胞に導入することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、ヒトメソテリンを特異的に認識する抗体、ＣＤ８ヒンジ領域、ＣＤ８膜貫通領域、４－１ＢＢ細胞内領域、及びＣＤ３ζ細胞内領域を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）；ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド；ならびにＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドをコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子を含むベクター（例えば、発現ベクター）を、免疫細胞に導入することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクター（例えば、第１の発現ベクター）と、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクター（例えば、第２の発現ベクター）を、一緒に、または段階的に、免疫細胞に導入することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドと、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチドまたはＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドのいずれかを含む第１のベクター（例えば、第１の発現ベクター）と、第１のベクターに含まれないＩＬ－７をコードするポリヌクレオチドまたはＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクター（例えば、第２の発現ベクター）を、免疫細胞に一緒に、または段階的に導入することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド及びＩＬ－７をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクター（例えば、第１の発現ベクター）と、ＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクター（例えば、第２の発現ベクター）を、免疫細胞に一緒に、または段階的に導入することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクター（例えば、第１の発現ベクター）と、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクター（例えば、第２の発現ベクター）を、免疫細胞に一緒に、または段階的に導入することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクター（例えば、第１の発現ベクター）、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクター（例えば、第２の発現ベクター）、及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドを含む第３のベクター（例えば、第３の発現ベクター）を、一緒に、または段階的に、免疫細胞に導入することを含む。

【0100】

ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド、及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドのうちの１つ以上を、免疫細胞のゲノムに組み込むことができる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド、ＩＬ－７をコードするポリヌクレオチド、及びＣＣＬ１９をコードするポリヌクレオチドは、ゲノムに（例えば、エピソーム的に）組み込まれない。

【0101】

使用方法
特定の実施形態では、メソテリン発現がんを処置する方法が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、方法は、メソテリンに特異的に結合する操作された細胞表面分子、インターロイキン７（ＩＬ－７）、及びケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド１９（ＣＣＬ１９）を発現するように改変された本明細書に記載の免疫細胞を、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、メソテリンを特異的に認識するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、またはメソテリンに特異的に結合するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む操作された細胞表面分子を発現するように改変される。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ヒトメソテリンを特異的に認識する抗体、ＣＤ８ヒンジ領域、ＣＤ８膜貫通領域、４－１ＢＢ細胞内領域、及びＣＤ３ζ細胞内領域を含むＣＡＲ；ＩＬ－７；ならびにＣＣＬ１９を発現するように改変される。

【0102】

いくつかの実施形態では、メソテリン発現がんは、固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、固形腫瘍は、中皮腫、結腸直腸癌、膵癌、胸腺癌、胆管癌、肺癌、皮膚癌、乳癌、前立腺癌、膀胱癌、膣癌、頸部癌、子宮癌、肝臓癌、腎臓癌、胃癌、脾臓癌、気管癌、気管支癌、胃癌、食道癌、胆嚢癌、精巣癌、卵巣癌、または骨癌を含む。いくつかの実施形態では、メソテリン発現がんは、卵巣癌である。いくつかの実施形態では、メソテリン発現がんは、中皮腫である。いくつかの実施形態では、メソテリン発現がんは、胃癌である。いくつかの実施形態では、メソテリン発現がんは、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、肺カルチノイド腫瘍、肺腺扁平上皮癌、大細胞神経内分泌癌、または唾液腺型肺癌）である。いくつかの実施形態では、メソテリン発現がんは、ＮＳＣＬＣ（例えば、肺の腺癌、扁平上皮細胞癌、大細胞未分化癌、肉腫様癌、または腺扁平上皮癌）である。

【0103】

メソテリン発現がんは、造血癌であり得る。造血癌は、Ｂ細胞造血癌、Ｔ細胞造血癌、ホジキンリンパ腫、または非ホジキンリンパ腫であり得る。造血器癌は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁リンパ腫、バーキットリンパ腫、またはヴァルデンストロームマクログロブリン血症であり得る。

【0104】

造血癌は、肉腫であり得る。肉腫は、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性血管内皮腫、悪性神経鞘腫、骨肉腫、または軟部組織肉腫を含み得る。

【0105】

メソテリン発現がんは、転移性癌、例えば、転移性固形腫瘍または転移性造血癌であり得る。転移性メソテリン発現がんは、転移性卵巣癌、転移性中皮腫、転移性胃癌、または転移性肺癌（例えば、転移性ＮＳＣＬＣ）であり得る。

【0106】

メソテリン発現がんは、再発性または難治性癌、例えば、再発性もしくは難治性の固形腫瘍、または再発性もしくは難治性の造血癌であり得る。再発性または難治性のメソテリン発現がんは、再発性もしくは難治性の卵巣癌、再発性もしくは難治性の中皮腫、再発性もしくは難治性の胃癌、または再発性もしくは難治性の肺癌（例えば、再発性もしくは難治性のＮＳＣＬＣ）であり得る。

【0107】

いくつかの実施形態では、方法は、さらに、追加の治療薬または追加の治療レジメンを対象に投与することを含む。追加の治療薬は、化学療法剤、免疫療法剤、標的療法、放射線療法、またはそれらの組み合わせを含み得る。追加の治療薬の例としては、アルキル化剤、例えば、アルトレタミン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ロムスチン、メルファラン、オキサラプラチン、テモゾロミド、もしくはチオテパ；代謝拮抗剤、例えば、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、６－メルカプトプリン（６－ＭＰ）、カペシタビン、シタラビン、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、もしくはペメトレキセド；アントラサイクリン、例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、もしくはイダルビシン；トポイソメラーゼＩ阻害薬、例えば、トポテカンもしくはイリノテカン（ＣＰＴ－１１）；トポイソメラーゼＩＩ阻害薬、例えば、エトポシド（ＶＰ－１６）、テニポシド、もしくはミトキサントロン；有糸分裂阻害薬、例えば、ドセタキセル、エストラムスチン、イクサベピロン、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、もしくはビノレルビン；または、コルチコステロイド、例えば、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、もしくはデキサメタゾンが挙げられるが、これらに限定されない。

【0108】

いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、第１選択療法を含む。本明細書で使用される場合、「第１選択治療」は、がんを有する対象に対する１次処置を含む。いくつかの実施形態では、がんは、原発癌である。他の実施形態では、がんは、転移性または再発性癌である。いくつかの実施形態では、第１選択治療は、化学療法を含む。他の実施形態では、第１選択治療は、放射線療法を含む。当業者であれば、異なる第１選択治療が、異なる種類のがんに適用可能であり得ることを容易に理解するであろう。

【0109】

いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、酵素ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）の阻害薬を含む。例示的なＰＡＲＰ阻害薬としては、オラパリブ（ＡＺＤ－２２８１、Ｌｙｎｐａｒｚａ（登録商標）、Ａｓｔｒａ Ｚｅｎｅｃａ製）、ルカパリブ（ＰＦ－０１３６７３３８、Ｒｕｂｒａｃａ（登録商標）、Ｃｌｏｖｉｓ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ製）、ニラパリブ（ＭＫ－４８２７、Ｚｅｊｕｌａ（登録商標）、Ｔｅｓａｒｏ製）、タラゾパリブ（ＢＭＮ－６７３、ＢｉｏＭａｒｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｃ．製）、ベリパリブ（ＡＢＴ－８８８、ＡｂｂＶｉｅ製）、ＣＫ－１０２（旧ＣＥＰ ９７２２、Ｔｅｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｌｔｄ．製）、Ｅ７０１６（エーザイ製）、イニパリブ（ＢＳＩ ２０１、Ｓａｎｏｆｉ製）、及びパミパリブ（ＢＧＢ－２９０、ＢｅｉＧｅｎｅ製）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0110】

いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、免疫チェックポイント阻害薬を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害薬は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、トレメリムマブ、またはイピリムマブを含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害薬は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、Ｂ７－Ｈ３、ＫＩＲ、ＣＤ１３７、ＰＳ、ＴＦＭ３、ＣＤ５２、ＣＤ３０、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ（ＣＤ２７２）、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＬＡＩＲ１、ＴＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ、ＤＲ３、ＣＤ２２６、ＣＤ２、またはＳＬＡＭの阻害薬を含む。阻害薬は、抗体またはそのフラグメント（例えば、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体）、ＲＮＡｉ分子、または小分子であり得る。

【0111】

いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、抗体、例えば、アレムツズマブ、トラスツズマブ、イブリツモマブチウキセタン、ブレンツキシマブベドチン、アド－トラスツズマブエムタンシン、またはブリナツモマブを含む。

【0112】

いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、サイトカインを含む。例示的なサイトカインとしては、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはＴＮＦαが挙げられるが、これらに限定されない。

【0113】

いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、受容体アゴニストを含む。いくつかの実施形態では、受容体アゴニストは、トール様受容体（ＴＬＲ）リガンドを含む。いくつかの実施形態では、ＴＬＲリガンドは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、またはＴＬＲ９を含む。いくつかの実施形態では、ＴＬＲリガンドは、合成リガンド、例えば、Ｐａｍ３Ｃｙｓ、ＣＦＡ、ＭＡＬＰ２、Ｐａｍ２Ｃｙｓ、ＦＳＬ－１、Ｈｉｂ－ＯＭＰＣ、ポリＩ：Ｃ、ポリＡ：Ｕ、ＡＧＰ、ＭＰＬ Ａ、ＲＣ－５２９、ＭＤＦ２ｐ、ＣＦＡ、またはフラジェリンを含む。

【0114】

いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、フルダラビン及びシクロホスファミドを含む。

【0115】

いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、チサゲンレクリューセル（ＫＹＭＲＩＡＨ（登録商標））、アキシカブタゲン・シロロイセル（ＹＥＳＣＡＲＴＡ（登録商標））、またはブレクスカブタゲン・オートロイセル（ＴＥＣＡＲＴＵＳ（登録商標））を含む。

【0116】

いくつかの実施形態では、追加の治療レジメンは、手術を含む。

【0117】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫細胞または本明細書に記載の医薬組成物及び追加の治療薬は、同時投与される。

【0118】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫細胞または本明細書に記載の医薬組成物及び追加の治療薬は、逐次投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫細胞または本明細書に記載の医薬組成物は、追加の治療薬の投与前に、対象に投与される。他の実施形態では、本明細書に記載の免疫細胞または本明細書に記載の医薬組成物は、追加の治療薬の投与後に、対象に投与される。

【0119】

いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。

【0120】

いくつかの実施形態では、メソテリン（例えば、ヒトメソテリン）を特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する免疫細胞を生成する方法も本明細書に記載されている。方法は、本明細書に記載の核酸分子または核酸分子を含むベクターを、免疫細胞に導入して、免疫細胞によるヒトメソテリンを特異的に認識する細胞表面分子、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９の発現を誘導することを含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、抗原提示細胞、または顆粒球、任意に、Ｔ細胞またはＮＫ細胞、である。

【0121】

医薬組成物
特定の実施形態では、上記の免疫細胞は、医薬組成物として製剤化される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、限定されないが、非経口、経口、舌下、または経皮投与経路を含む複数の投与経路で対象に投与される。いくつかの実施形態では、非経口投与は、静脈内、皮下、筋肉内、鼻腔内、動脈内、関節内、皮内、骨内注入、腹腔内、くも膜下、頭蓋内、滑液嚢内、腫瘍内、皮内、髄内、心臓内、または髄腔内投与を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、局所投与用に製剤化される。他の実施形態では、医薬組成物は、全身投与用に製剤化される。

【0122】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される添加剤を含む。添加剤の例としては、生理食塩水、緩衝生理食塩水、細胞培地、ブドウ糖、注射用水、グリセロール、エタノール、安定化剤、可溶化剤、界面活性剤、緩衝剤、防腐剤、等張化剤、充填剤、滑沢剤、またはそれらの組み合わせが挙げられ得る。

【0123】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、さらに、ｐＨ調整剤または緩衝剤（酸、例えば、酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸、及び塩酸；塩基、例えば、水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、及びトリスヒドロキシメチルアミノメタン；ならびに、緩衝剤、例えば、クエン酸塩／ブドウ糖、重炭酸ナトリウム、及び塩化アンモニウムを含む）を含む。そのような酸、塩基及び緩衝剤は、組成物のｐＨを許容範囲に維持するのに必要な量で含まれる。

【0124】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、組成物の浸透圧を許容範囲にするのに必要な量の１つ以上の塩を含む。そのような塩としては、ナトリウム、カリウム、またはアンモニウムカチオンと、塩化物、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、ホウ酸塩、リン酸塩、重炭酸塩、硫酸塩、チオ硫酸塩、または重亜硫酸塩アニオンを有するものが挙げられ、好適な塩としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、チオ硫酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、及び硫酸アンモニウムが挙げられる。

【0125】

例示的な方法では、本発明の医薬組成物は、独立して、一度に、または、１日４回、１日３回、１日２回、もしくは１日１回、１日間隔、２日間隔、３日間隔、４日間隔、もしくは５日間隔、週１回、７日間隔、８日間隔、もしくは９日間隔、週２回、月１回、月２回、月３回以上、いくつかに分けて投与することができる。

【0126】

患者の状態が改善した場合では、医師の判断時に、組成物の投与が、連続的に与えられ、あるいは、投与される組成物の用量が一時的に低減するか、または特定の期間一時的に停止する（すなわち、「休薬期間」）。いくつかの実施形態では、休薬期間の長さは、ほんの一例として、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１２日、１５日、２０日、２８日、３５日、５０日、７０日、１００日、１２０日、１５０日、１８０日、２００日、２５０日、２８０日、３００日、３２０日、３５０日、または３６５日を含む、２日～１年で変動する。休薬期間中の用量減量は、ほんの一例として、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％を含む、１０％～１００％である。

【0127】

いくつかの実施形態では、そのような量に対応する所与の改変Ｔ細胞の量は、疾患の重症度、処置を必要とする対象または宿主の個性（例えば、体重）などの要因に応じて変動するが、それでもなお、日常的に、症例を取り巻く特定の状況に従って、当該技術分野で既知の方法で決定され、これは、例えば、投与される特定の薬剤、投与経路、及び処置される対象または宿主を含む。いくつかの実施形態では、所望の用量は、都合よく、単回用量で、または同時に（もしくは短期間にわたって）投与される分割用量として、または適切な間隔で、例えば、１日当たり２、３、４つ以上の分割用量として提示される。

【0128】

個々の処置レジメンに関する変数の数は、多く、これらの推奨値からの大幅な逸脱は珍しいことではないので、上述の範囲は、単なる示唆にすぎない。そのような投薬量は、多くの変数（限定されないが、使用される化合物の活性、処置されるべき疾患または状態、投与方法、個々の対象の要件、処置される疾患または状態の重症度、及び実践者の判断）に応じて変更される。

【0129】

いくつかの実施形態では、限定されないが、ＬＤ５０（集団の５０％を死に至らしめる用量）及びＥＤ５０（集団の５０％において治療上有効な用量）の決定を含む、そのような治療レジメンの毒性及び治療有効性は、細胞培養物または実験動物における標準的な薬学的手順で決定される。毒性効果及び治療効果間の用量比が治療指数であり、ＬＤ５０及びＥＤ５０の比として表される。高い治療指数を示す化合物が好ましい。細胞培養アッセイ及び動物研究から得られたデータは、ヒトに使用される投薬量の範囲の決定に使用される。そのような化合物の投薬量は、好ましくは、最小の毒性でＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。投薬量は、用いられる剤形及び利用される投与経路に応じて、この範囲内で変動する。

【0130】

キット／製造物品
特定の実施形態では、上記の核酸分子、上記の核酸分子を含むベクター、メソテリン（例えば、ヒトメソテリン）を特異的に認識するＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する免疫細胞、または医薬組成物を含むキットが本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、キットは、がんの処置に使用される使用方法などを記載する添付文書、ラベル、パッケージなどの１つ以上の包装材料を含有してもよい。本発明の医薬組成物中の免疫細胞が腫瘍再発に抑制作用を有するので、本発明の医薬組成物は、腫瘍再発の抑制に使用される医薬組成物として機能し得る。そのような腫瘍再発の抑制に使用される医薬組成物は、腫瘍再発の抑制に使用される使用方法について記載する１つ以上の包装材料、例えば、添付文書、ラベル、パッケージ等を含有し得る。

【0131】

「包装材料」という用語は、キットの構成要素を収容する物理的構造体を指す。材料は、構成要素を無菌的に維持し得、そのような目的に一般に使用される材料（例えば、紙、波形繊維、ガラス、プラスチック、ホイル、アンプル、バイアル、チューブなど）で作製することができる。

【0132】

本発明のキットは、ラベルまたは挿入物を含み得る。ラベルまたは挿入物は、「印刷物」、例えば、紙もしくは厚紙、または、構成要素、キット、もしくは包装材料（例えば、箱）とは別個のもの、もしくは添付されたもの、またはキットの構成要素を含有するアンプル、チューブ、もしくはバイアルに貼付けされたものを含む。ラベルまたは挿入物は、さらに、コンピュータ可読媒体、例えば、ディスク（例えば、フロッピーディスケット、ＺＩＰディスク）、光ディスク、例えば、ＣＤ－ＲＯＭ／ＲＡＭもしくはＤＶＤ－ＲＯＭ／ＲＡＭ、ＤＶＤ、ＭＰ３、磁気テープ、または電気記憶媒体、例えば、ＲＡＭ及びＲＯＭ、あるいはこれらのハイブリッド、例えば、磁気／光記憶媒体、ＦＬＡＳＨメディア、もしくはメモリタイプカードを含み得る。

【0133】

ラベルまたは挿入物は、その中の１つ以上の構成要素（例えば、結合剤または医薬組成物）、用量、作用機序を含む活性薬（複数可）の臨床薬理学、薬物動態及び薬力学の識別情報を含み得る。ラベルまたは挿入物は、製造元情報、ロット番号、ならびに製造の場所及び製造日を識別する情報を含み得る。

【0134】

ラベルまたは挿入物は、キットの構成要素が使用され得る疾患に関する情報を含み得る。ラベルまたは挿入物は、方法または治療プロトコールまたは治療レジメンにおいてキットの構成要素のうちの１つ以上を使用するための臨床医または対象に対する使用説明書を含み得る。使用説明書は、本明細書に記載の投薬量、頻度または期間、及び方法、処置プロトコール、または治療レジメンのいずれかを実施する使用説明書を含み得る。

【0135】

ラベルまたは挿入物は、構成要素が提供し得る、あらゆる利点、例えば、治療上の利点、に関する情報を含み得る。ラベルまたは挿入物は、潜在的な有害な副作用に関する情報、例えば、特定の組成物（例えば、本明細書に記載の改変免疫細胞）を使用することが適切ではない状況に関する対象または臨床医への警告を含み得る。例えば、有害な副作用は、一般に、活性薬の高用量、頻度、または期間で生じる可能性がより高く、従って、使用説明書は、高用量、頻度、または期間に対する推奨事項を含み得る。対象が、組成物と適合しない可能性のある１つ以上の他の薬剤を服用しているか、服用する予定があるか、もしくは現在服用しているか、または、対象が、組成物と適合しない別の処置プロトコールもしくは治療レジメンを服用しているか、服用する予定があるか、もしくは現在服用している場合、有害な副作用も生じ得、それ故、使用説明書が、そのような非互換性に関する情報を含み得る。

【0136】

定義
本明細書及び特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈に別途明示のない限り、複数の指示対象を含む。例えば、「細胞」という用語は、それらの混合物を含む、複数の細胞を含む。

【0137】

本明細書で使用される場合、「含む」という用語は、組成物及び方法が列挙された要素を含むが、他の要素を排除しないことを意味することが意図がされる。「から本質的になる」は、組成物及び方法を定義するために使用される場合、意図される用途のための組み合わせにとって任意の本質的な重要性のある他の要素を除外することを意味するものとする。例えば、本明細書で定義される要素から本質的になる組成物は、単離及び精製方法からの微量汚染物質と、薬学的に許容される担体、例えば、リン酸緩衝生理食塩水、保存料などのを除外しないであろう。「からなる」は、微量の要素を超える他の成分及び本明細書に開示の組成物を投与するための実質的な方法ステップを除外することを意味するものとする。これらの移行用語のそれぞれで定義される態様は、本開示の範囲内にある。

【0138】

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、値が、値を決定するために用いられるデバイスまたは方法の誤差の標準偏差を含むことを示すために使用される。「約」という用語は、範囲を含む数値（例えば、温度、時間、量、及び濃度）指定前に使用される場合、（＋）または（－）１５％、１０％、５％、３％、２％、または１％変動し得る近似値を示す。

【0139】

本明細書でも使用される場合、「及び／または」は、関連リスト項目の１つ以上のうちのありとあらゆる可能な組み合わせ、及び、代替案（「または」）で解釈される場合の組み合わせの欠如を指し、包含する。

【0140】

本明細書で使用される場合、「任意の」または「任意に」は、その後に説明された事象または状況が生じ得るか、または生じる可能性がないことを意味し、説明が、事象または状況が生じる実施形態及び生じない実施形態を含むことを意味する。

【0141】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメイン、それぞれ、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌを介して他の分子（抗原、例えば、メソテリン）に結合するタンパク質を指す。「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）は、一般に、同様の構造を融資、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つのＣＤＲを含む（例えば、以下を参照：Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７））。単一のＶＨまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、抗原に結合する抗体からＶＨまたはＶＬドメインを使用して単離され、それぞれ、相補的なＶＬまたはＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングし得る。例えば、以下を参照：Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０－８８７（１９９３）；Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）。

【0142】

本開示の抗体は、モノクローナル抗体を含む。「モノクローナル」という用語は、抗体に関して使用される場合、任意の真核生物、原核生物、またはファージクローンを含む単一のクローンに基づくか、単一のクローンから得られるか、またはそれに由来する抗体を指す。従って、「モノクローナル」抗体は、本明細書では構造的に定義され、それが産生される方法ではない。

【0143】

モノクローナル抗体は、当該技術分野で公知の方法により作製される（Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）；及びＨａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９９９）。要約すると、モノクローナル抗体は、マウスに抗原を注射することにより得ることができる。動物を免疫するために使用されるポリペプチドまたはペプチドは、翻訳されたＤＮＡに由来するものであっても、化学的に合成されてキャリアタンパク質にコンジュゲートされてもよい。免疫ペプチドに化学的に結合している一般に使用される担体は、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、サイログロブリン、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、及び破傷風トキソイドを含む。抗体産生は、血清試料を分析すること、脾臓を摘出してＢリンパ球を取得すること、Ｂリンパ球を骨髄腫細胞と融合してハイブリドーマを産生すること、ハイブリドーマをクローニングすること、抗原に対する抗体を産生する陽性クローンを選択すること、及びハイブリドーマ培養物から抗体を単離することにより検証される。モノクローナル抗体は、様々な確立された手法によりハイブリドーマ培養物から単離及び精製することができ、これは、例えば、プロテインＡセファロースを用いるアフィニティークロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、及びイオン交換クロマトグラフィーを含む（例えば、以下を参照：Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ｓｅｃｔｉｏｎｓ ２．７．１－２．７．１２ ａｎｄ ｓｅｃｔｉｏｎｓ ２．９．１－２．９．３；及びＢａｒｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，”１０：７９－１０４，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ （１９９２））。

【0144】

本開示の抗体は、任意の抗体クラス、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはサブクラスに属し得る。ＩｇＧの例示的なサブクラスは、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、及びＩｇＧ_４である。

【0145】

本開示の抗体は、ヒト化抗体であり得る。「ヒト化」という用語は、アクセプターヒト免疫グロブリン分子に、抗原に特異的に結合する１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）の非ヒトアミノ酸残基と、ＣＤＲに隣接するフレームワーク領域（ＦＲ）に１つ以上のヒトアミノ酸残基を有する抗体配列を指す。任意のマウス、ラット、モルモット、ヤギ、非ヒト霊長類（例えば、類人猿、チンパンジー、マカク、オランウータンなど）または他の動物抗体は、ヒト化抗体を産生するためのＣＤＲドナーとして使用され得る。ヒトフレームワーク領域残基は、対応する非ヒト残基（例えば、ドナー可変領域由来）と置換することができる。従って、ヒトフレームワーク領域残基は、非ヒトＣＤＲドナー抗体の対応する残基と置換することができる。ヒト化抗体は、ヒト抗体にもドナーＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見出されない残基が含まれ得る。ヒト化モノクローナル抗体に由来する抗体成分を使用すると、非ヒト領域の免疫原性に関連する問題が低減される。ヒト化抗体を産生する方法は、当該技術分野で既知である（例えば、米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５３０，１０１号、第５，５６５，３３２号、及び第５，５８５，０８９号；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３；ＥＰ２３９，４００；Ｗ０９１／０９９６７；ＥＰ５９２，１０６；ＥＰ５１９，５９６；Ｐａｄｌａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９１）２８：４８９；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（１９９４）７：８０５；Ｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９３）１５０：２８４４；及びＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９４）９１：９６９）。

【0146】

本開示の抗体は、キメラ抗体であり得る。「キメラ抗体」という用語は、異なる部分が異なる動物種に由来する抗体、例えば、マウスモノクローナル抗体由来の可変領域及びヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体、例えば、ヒト化抗体を指す。いくつかの実施形態では、適切な抗原特異性のマウス抗体分子由来の遺伝子、及び、適切な生物学的活性のヒト抗体分子由来の遺伝子をスプライシングすることによる「キメラ抗体」の産生のために開発された手法（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：８５１－８５５；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６０４－６０８；Ｔａｋｅｄａ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４５２－４５４）が使用される。

【0147】

本開示の抗体は、その結合フラグメントを含む。例示的な抗体フラグメントとしては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、Ｆｄ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、軽鎖可変領域Ｖ_Ｌ、重鎖可変領域Ｖ_Ｈ、三重特異性（Ｆａｂ_３）、二重特異性（Ｆａｂ_２）、ダイアボディ（（Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ）_２または（Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ）_２）、トリアボディ（３価）、テトラボディ（４価）、ミニボディ（（ｓｃＦ_Ｖ－Ｃ_Ｈ））_２）、二重特異性単鎖Ｆｖ（Ｂｉｓ－ｓｃＦｖ）、ＩｇＧδＣＨ２、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、（ｓｃＦｖ）_２－Ｆｃ、及びＩｇＧ４ＰＥが挙げられる。そのようなフラグメントは、全長抗体としての結合親和性、全長抗体としての結合特異性、または全長抗体としての１つ以上の活性もしくは機能、例えば、メソテリン結合抗体の機能もしくは活性を有し得る。

【0148】

抗体フラグメントを組み合わせることができる。例えば、Ｖ_ＬまたはＶ_Ｈ部分配列は、リンカー配列で結合され、それにより、Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈキメラを形成し得る。単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）配列の組み合わせは、リンカー配列で結合され、それにより、ｓｃＦｖ－ｓｃＦｖキメラを形成し得る。抗体フラグメントは、一本鎖抗体または可変領域（複数可）を単独で、または他の配列の全てもしくは一部と組み合わせて含む。

【0149】

抗体フラグメントは、限定されないが、インタクト抗体のタンパク質分解消化及び組み換え宿主細胞による産生を含む様々な手法で作製することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、組み換えにより産生されたフラグメント、例えば、（合成リンカー、例えば、ペプチドリンカーにより結合された２つ以上の抗体領域または鎖を有するような）天然には存在しない、及び／または天然に存在するインタクト抗体の酵素消化により生成されない可能性がある配置を含むフラグメントである。いくつかの態様では、抗体フラグメントは、ｓｃＦｖである。

【0150】

抗体フラグメントは、抗体のタンパク質加水分解で、例えば、全抗体のペプシンまたはパパイン消化で、調製することもできる。ペプシンを用いる酵素的切断で生成された抗体フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）_２で示される５Ｓフラグメントを提供する。さらに、このフラグメントは、３．５Ｓ Ｆａｂ’一価フラグメントを生成するために、チオール還元剤を使用して切断することができる。あるいは、ペプシンを使用する酵素切断は、２つの一価のＦａｂ’フラグメント及びＦｃフラグメントが直接生成する（例えば、以下を参照：米国特許第４，０３６，９４５号及び同第４，３３１，６４７号；ならびにＥｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｙｍｏｌ．１：４２２（１９６７））。抗体を切断する他の方法、例えば、重鎖の分離して一価の軽鎖－重鎖フラグメントを形成すること、フラグメントをさらに切断すること、または他の酵素的もしくは化学的方法も使用され得る。

【0151】

いくつかの実施形態では、一本鎖抗体の産生について記載されている手法（米国特許第４，６９４，７７８号；Ｂｉｒｄ，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３；及びＷａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５４４－５４）は、一本鎖抗体を産生するように適合されている。一本鎖抗体は、アミノ酸架橋を介してＦｖ領域の重鎖フラグメント及び軽鎖フラグメントを連結することにより形成され、一本鎖ポリペプチドが得られる。Ｅ．ｃｏｌｉにおける機能的Ｆｖフラグメントのアセンブリのための手法も任意に使用される（Ｓｋｅｒｒａ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：１０３８－１０４１）。

【0152】

本明細書で使用される場合、「同一」、「配列同一性」、またはパーセント「同一性」は、２つ以上の核酸またはポリペプチド配列との関連で使用される場合、同じか、または、指定された領域にわたって、特定のパーセンテージ（同じ、例えば、少なくとも６０％の同一性、好ましくは、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性）のヌクレオチドまたはアミノ酸残基を有する２つ以上の配列を指す。アラインメント及び配列同一性は、当該技術分野で既知のソフトウェアプログラム、例えば、以下に記載のものを使用して決定することができる：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．１９８７）Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ ３０，ｓｅｃｔｉｏｎ ７．７．１８，Ｔａｂｌｅ ７．７．１。好ましくは、デフォルトのパラメーターをアラインメントに使用される。好ましい位置合わせプログラムは、デフォルトのパラメーターを使用するＢＬＡＳＴである。特に、好ましいプログラムは、以下のデフォルトパラメーターを使用するＢＬＡＳＴＮ及びＢＬＡＳＴＰである：遺伝コード＝標準；フィルター＝なし；ストランド＝両方；カットオフ＝６０；期待＝１０；マトリックス＝ＢＬＯＳＵＭ６２；記述＝５０配列；ソート＝ハイスコア；データベース＝非冗長、ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋ ＣＤＳ翻訳＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔｅｉｎ＋ＳＰｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲ。これらのプログラムの詳細は、以下のインターネットアドレスｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｃｇｉ－ｂｉｎ／ＢＬＡＳＴに見出すことができる。「同一」、「配列同一性」、またはパーセント「同一性」という用語は、試験配列の相補体も指すか、またはそれに適用することができる。用語は、欠失及び／または付加を有する配列、ならびに置換を有する配列も含む。本明細書に記載されるように、好ましいアルゴリズムは、ギャップなどを考慮し得る。好ましくは、同一性は、長さが少なくとも約２５アミノ酸もしくはヌクレオチドである領域にわたって存在し、または、より好ましくは、長さが少なくとも５０～１００アミノ酸またはヌクレオチドである領域にわたって存在する。「無関係」または「非相同」配列は、本明細書に開示の配列の１つと４０％未満の同一性、または２５％未満の同一性を共有する。

【0153】

「タンパク質」、「ペプチド」、及び「ポリペプチド」という用語は、互換的に使用され、最も広い意味で、２つ以上のサブユニットアミノ酸、アミノ酸アナログ、またはペプチド模倣物の化合物を指す。サブユニットは、ペプチド結合で連結され得る。別の態様では、サブユニットは、他の結合、例えば、エステル、エーテルなどで連結され得る。タンパク質またはペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含有しなければならないが、タンパク質またはペプチドの配列を含み得るアミノ酸の最大数には制限はない。ポリペプチドは、全長の天然ポリペプチドと、「改変」形態、例えば、部分配列、バリアント配列、融合／キメラ配列、及びドミナントネガティブ配列を含む。本明細書で使用される場合、「アミノ酸」という用語は、グリシン、ならびに、Ｄ及びＬ両方の光学異性体、アミノ酸アナログ、及びペプチド模倣物を含む、天然及び／または非天然または合成アミノ酸のいずれかを指す。

【0154】

ペプチドは、Ｌ異性体及びＤ異性体、ならびにそれらの組み合わせを含む。ペプチドは、通常、タンパク質の翻訳後プロセシング、例えば、環化（例えば、ジスルフィド結合またはアミド結合）、リン酸化、グリコシル化、カルボキシル化、ユビキチン化、ミリスチル化、または脂質化に関連する修飾が含まれ得る。修飾ペプチドは、別の残基で置換された、配列に追加された、または配列から欠失した１つ以上のアミノ酸残基を有し得る。特定の例は、１つ以上のアミノ酸の置換、付加、または欠失（例えば、１～３、３～５、５～１０、１０～２０、またはそれ以上）を含む。

【0155】

本明細書で使用される場合、「修飾」及び「修飾された」という用語は、参照抗体、タンパク質、またはポリペプチドと比較した、抗体、タンパク質、またはポリペプチドの１つ以上のアミノ酸残基の変異、置換、付加、または欠失を指し、これは、修飾なしの抗体、タンパク質、またはポリペプチドと同等である。いくつかの実施形態では、修飾は、保存的置換を含む。

【0156】

「保存的置換」とは、生物学的、化学的、または構造的に類似した残基による１つのアミノ酸の置換である。生物学的に類似は、置換が非置換配列の活性または機能と適合することを意味する。構造的に類似は、アミノ酸が、アラニン、グリシン、及びセリンなどの同様の長さの側鎖、または同様のサイズの側鎖を有することを意味する。化学的類似性は、残基が同じ電荷を有するか、または親水性もしくは疎水性の両方であることを意味する。特定の例としては、イソロイシン、バリン、ロイシン、もしくはメチオニンなどの疎水性残基を別のものへの置換、または、ある極性残基を別のものへの置換（例えば、アルギニンのリジンへの置換、グルタミン酸のアスパラギン酸への置換、もしくはグルタミンのアスパラギンへの置換、セリンのスレオニンへの置換など）が挙げられる。

【0157】

本明細書で使用される場合、「核酸」という用語は、天然、合成、または人工のヌクレオチドアナログまたは塩基を含むＤＮＡまたはＲＮＡを指す。いくつかの実施形態では、ヌクレオチドアナログまたは人工ヌクレオチド塩基は、リボース部分の２’ヒドロキシル基に修飾を有する核酸を含む。いくつかの実施形態では、修飾は、Ｈ、ＯＲ、Ｒ、ハロ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ_２、ＮＨＲ、ＮＲ_２、またはＣＮを含み、Ｒは、アルキル部分である。例示的なアルキル部分として、ハロゲン、硫黄、チオール、チオエーテル、チオエステル、アミン（１級、２級、または３級）、アミド、エーテル、エステル、アルコール、及び酸素が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、アルキル部分は、さらに、修飾を含む。いくつかの実施形態では、修飾は、アゾ基、ケト基、アルデヒド基、カルボキシル基、ニトロ基、ニトロソ基、ニトリル基、複素環（例えば、イミダゾール、ヒドラジノ、もしくはヒドロキシルアミノ）基、イソシアナート基もしくはシアナート基、または硫黄含有基（例えば、スルホキシド、スルホン、スルフィド、もしくはジスルフィド）を含む。いくつかの実施形態では、アルキル部分は、さらに、ヘテロ置換を含む。いくつかの実施形態では、複素環基の炭素は、窒素、酸素、または硫黄で置換されている。いくつかの実施形態では、複素環置換は、モルホリノ、イミダゾール、及びピロリジノを含むが、これらに限定されない。

【0158】

いくつかの実施形態では、ヌクレオチドアナログは、修飾塩基、例えば、限定されないが、５－プロピニルウリジン、５－プロピニルシチジン、６－メチルアデニン、６－メチルグアニン、Ｎ，Ｎ，－ジメチルアデニン、２－プロピルアデニン、２プロピルグアニン、２－アミノアデニン、１－メチルイノシン、３－メチルウリジン、５－メチルシチジン、５－メチルウリジン及び５位に修飾を有する他のヌクレオチド、５－（２－アミノ）プロピルウリジン、５－ハロシチジン、５－ハロウリジン、４－アセチルシチジン、１－メチルアデノシン、２－メチルアデノシン、３－メチルシチジン、６－メチルウリジン、２－メチルグアノシン、７－メチルグアノシン、２，２－ジメチルグアノシン、５－メチルアミノエチルウリジン、５－メチルオキシウリジン、デアザヌクレオチド（例えば、７－デアザ－アデノシン、６－アゾウリジン、６－アゾシチジン、または６－アゾチミジン）、５－メチル－２－チオウリジン、他のチオ塩基（例えば、２－チオウリジン、４－チオウリジン、及び２－チオシチジン）、ジヒドロウリジン、プソイドウリジン、クエオシン、アルケオシン、ナフチル及び置換ナフチル基、任意のＯ－アルキル化及びＮ－アルキル化プリン及びピリミジン（例えば、Ｎ６－メチルアデノシン、５－メチルカルボニルメチルウリジン、ウリジン５－オキシ酢酸、ピリジン－４－オン、またはピリジン－２－オン）、フェニル及び修飾フェニル基、例えば、アミノフェノールまたは２，４，６－トリメトキシベンゼン、Ｇクランプヌクレオチドとして機能する修飾シトシン、８－置換アデニン及びグアニン、５－置換ウラシル及びチミン、アザピリミジン、カルボキシヒドロキシアルキルヌクレオチド、カルボキシアルキルアミノアルキルヌクレオチド、ならびにアルキルカルボニルアルキル化ヌクレオチドを含む。修飾ヌクレオチドは、糖部分に関して修飾されているヌクレオチド、及びリボシルではない糖またはそのアナログを有するヌクレオチドも含む。例えば、いくつかの実施形態では、糖部分は、マンノース、アラビノース、グルコピラノース、ガラクトピラノース、４’－チオリボース、及び他の糖、複素環、または炭素環であるか、またはそれらに基づいている。ヌクレオチドという用語は、当該技術分野でユニバーサル塩基として知られているものも含む。例として、ユニバーサル塩基は、３－ニトロピロール、５－ニトロインドール、またはネブラリンを含むが、これらに限定されない。

【0159】

本発明の核酸分子は、各核酸の塩基配列情報に基づいて、公知の手法、例えば、化学合成法またはＰＣＲ増幅法で製造することができる。アミノ酸をコードするために選択されたコドンは、目的の宿主細胞における核酸発現を最適化するために操作され得る。

【0160】

本明細書で使用される場合、Ｔ細胞の集団を説明する時の「実質的に」という用語は、約３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、またはそれ未満の夾雑細胞を含む集団を指す。いくつかの実施形態では、夾雑細胞は、Ｔ細胞集団中の約２０％未満である。いくつかの実施形態では、夾雑細胞は、Ｔ細胞集団中の約１５％未満である。いくつかの実施形態では、夾雑細胞は、Ｔ細胞集団中の約１０％未満である。

【0161】

本明細書で使用される場合、「処置する」、「処置」などの用語は、所望の薬理学的及び／または生理学的効果を得ることを意味する。効果は、疾患の症状の改善、または疾患及び／または疾患に起因する有害反応の部分的または完全な治癒という点で治療的であり得る。一態様では、「処置」という用語は、予防を含まない。

【0162】

本明細書で使用される場合、「処置する」ことは、さらに、病理に関連する症状の全身的な改善及び／または症状の発症の遅延を含む。「処置」の臨床的及び潜在的証拠は、病状、個体、及び処置と共に変化する。一態様では、処置は、予防を含まない。

【0163】

「改善する」という用語は、対象の状態の検出可能な改善を意味する。検出可能な改善は、疾患により引き起こされるか、もしくはそれに関連する症状（例えば、１つ以上の有害な症状）、障害、病気、病状、疾患、または疾患により引き起こされるか、もしくはそれに関連する合併症の発生、頻度、重症度、進行、または期間における主観的または客観的な減少、低減、阻害、抑制、制限、または制御、あるいは根本的な原因または疾患の影響または疾患の反転の改善を含む。

【0164】

従って、処置は、疾患、または関連症状もしくは結果、または根本的な原因の減少、低減、阻害、抑制、制限、制御、または予防；疾患、状態、症状もしくは影響、または根本的な原因の進行もしくは悪化の減少、低減、阻害、抑制、制限、制御、または悪化；あるいは、病状の１つ以上の追加の症状、または症状のさらなる悪化または発生をもたらし得る。従って、処置結果の成功は、対象の１つ以上の症状あるいは状態、疾患、または症状の根本的な原因または影響、例えば、１つ以上の有害症状、障害、病気、病状、疾患、または疾患もしくは状態により引き起こされたか、もしくはそれと関連する合併症の発生、頻度、重症度、進行、または期間を減少、低減、阻害、抑制、制限、制御、または予防する「治療効果」または「利益」をもたらす。従って、状態、疾患、または症状の１つ以上の根本的な原因に影響を与える処置法は、有益であると考えられる。障害または状態を安定させることも良好な処置結果である。

【0165】

従って、治療上の利益または改善は、状態または疾患に関連する症状、合併症、影響、または根本的な原因のいずれか１つ、ほとんど、または全てを完全に除去する必要はない。従って、満足のいくエンドポイントは、対象の状態における漸進的な改善；あるいは、１つ以上の関連する有害な症状または合併症または影響または根本的な原因の発生、頻度、重症度、進行、もしくは期間、または阻害もしくは反転における部分的減少、低減、阻害、抑制、制限、制御、または防止；短期間または長期間（数時間、数日、数週、数月など）にわたる、障害または疾患（例えば、１つ以上の有害症状、障害、病気、病変、疾患、または疾患もしくは状態により引き起こされるか、またはそれと関連する合併症）の生理学的、生化学的、または細胞性徴候もしくは特性のうちの１つ以上の悪化または進行（例えば、状態、障害、または疾患の１つ以上の症状または合併症の安定化）がある場合、達成される。

【0166】

「許容可能な」、「有効な」、または「十分な」という用語は、本明細書に開示の任意の構成成分、範囲、用量形態などの選択を説明するために使用される場合、該構成成分、範囲、投与形態などが開示の目的に適していることを意図する。

【0167】

「対象」、「宿主」、「個体」、及び「患者」という用語は、動物、通常は、哺乳動物を指すために、本明細書で互換的に使用される。任意の好適な哺乳動物は、本明細書に記載の方法、細胞、または組成物で処置することができる。哺乳動物の非限定例としては、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、類人猿、テナガザル、チンパンジー、オランウータン、サル、マカクなど）、飼育動物（例えば、イヌ及びネコ）、家畜（例えば、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタ）、ならびに実験動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモット）が挙げられる。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。哺乳動物は、任意の年齢または任意の発達段階（例えば、成人、十代、子供、乳児、または子宮内の哺乳動物）であり得る。哺乳動物は、雄でも雌であり得る。哺乳動物は、妊娠中の雌であり得る。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。

【実施例】

【0168】

これらの例は、例示のみを目的として提供され、本明細書で提供される特許請求の範囲を限定するものではない。

【0169】

実施例１
ＣＡＲ－Ｔ細胞の調製
ＭＳＧＶ γ－レトロウイルスベクターの形質導入のために、ｐＡｍｐｈｏベクターと共にリポフェクタミン３０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＭＡ、ＵＳＡ）を使用して、プラスミドをＧＰ２－２９３パッケージング細胞株にトランスフェクトし、ウイルス上清を生成した。トランスフェクションの４８時間後に、上清を収集し、レトロネクチン（Ｔａｋａｒａｂｉｏ、Ｓｈｉｇａ、Ｊａｐａｎ）でコーティングされたプレート上で遠心分離することにより、ウイルス結合プレートを調製した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を固化抗ヒトＣＤ３ Ａｂ（ＯＫＴ３、５μｇ／ｍＬ）で活性化し、組み換えヒトＩＬ－２（４００ＩＵ／ｍＬ）を含有する培地で３日間培養した。ＰＢＭＣをウイルス結合プレートに添加し、１回目の感染のために２４時間培養した。次に、培養ＰＢＭＣを、２回目の感染のために別のウイルス結合プレートに移し、４時間のインキュベーション後、感染細胞を、４００ＩＵ／ｍＬの組み換えヒトＩＬ－２を含有する新鮮な培地で３日間増殖させた。ＳＦＧγ－レトロウイルスベクターの形質導入では、ｇａｇ／ｐｏｌ遺伝子（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ Ｉｎｃ．、ＣＡ、ＵＳ）及びＶＳＶ－Ｇベクター（Ｔａｋａｒａｂｉｏ、Ｓｈｉｇａ、Ｊａｐａｎ）と共に、ＦｕＧＥＮＥ（登録商標）ＨＤトランスフェクション試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．、ＷＩ、ＵＳＡ）を使用して、プラスミドをＰｈｏｅｎｉｘＡｍｐｈｏパッケージング細胞株にトランスフェクトした。ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＴ細胞分離キット（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＢＣ、Ｃａｎａｄａ）を使用して、Ｔ細胞をＰＢＭＣから分離し、Ｔ細胞ＴｒａｎｓＡｃｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）及び１０ｎｇ／ｍＬの組み換えヒトＩＬ－２（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）と共に２日間培養した。Ｔ細胞を、１０ｎｇ／ｍＬの組み換えヒトＩＬ－２含有培地で培養し、単離から３日後、２０ｕｇ／ｍＬのレトロネクチンでコーティングされたプレート上で、Ｔ細胞にウイルス上清を５時間形質導入した。Ｇ－Ｒｅｘ（ＷｉｌｓｏｎＷｏｌｆ、ＭＮ、ＵＳＡ）を使用して、形質導入されたＴ細胞を４日間増殖させた。形質導入効率をフローサイトメトリーで測定した。Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｌｏｎｚａ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）またはＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ細胞増殖ＳＦＭ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＭＡ、ＵＳＡ）のいずれかを培地として使用した。

【0170】

ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ腫瘍細胞傷害活性の評価
ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ標的腫瘍細胞の殺傷活性を、ヒトＭＳＬＮ発現細胞に対して評価した。非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞を、対照物質として並行して評価した。この研究で使用された標的細胞は、ヒトＭＳＬＮを内因的に発現するＣａｐａｎ－２細胞及びＭＳＴＯ－２１１Ｈ－Ｌｕｃ細胞であった。標的細胞を播種し、その後、希釈したＣＡＲ－Ｔ細胞またはＵＴＤ Ｔ細胞を添加して、６点の一連のエフェクター（ＣＡＲ陽性）：標的細胞（Ｅ：Ｔ）比：３：１、１：１、０．３：１、０．１：１、０．０３：１、及び、０．０１：１を得た。共培養の４８時間後に、Ｔ細胞を洗い流した後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．、ＷＩ、ＵＳＡ）を用いて、標的細胞株の生存率を測定した。Ｔ細胞共培養条件における標的細胞の細胞生存率を非Ｔ細胞共培養条件における細胞生存率を比較することにより、相対的殺傷活性を計算した。

【0171】

Ｃａｐａｎ－２及びＭＳＴＯ－２１１Ｈ－Ｌｕｃ細胞に対するＣＡＲ－Ｔ細胞及びＵＴＤ Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ標的細胞殺傷活性を図２に示す。試験された全てのＣＡＲ－Ｔ細胞は、Ｃａｐａｎ－２及びＭＳＴＯ－２１１Ｈ－Ｌｕｃ細胞に対する標的細胞殺傷活性の用量依存的な増加を示した。対照的に、ＵＴＤ Ｔ細胞は、Ｅ：Ｔ比が最も高くても、Ｃａｐａｎ－２及びＭＳＴＯ－２１１Ｈ－Ｌｕｃ細胞を殺傷する能力が限られていることを示す。第２の８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３０５）、第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３０９）、及び第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３１１）細胞は、第３の８－２８ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＃３０１）と比較して、より高い標的細胞殺傷活性と同様の活性を示した。

【0172】

実験で使用された抗ＭＳＬＮ ＣＡＲ－ＩＬ－７－ＣＣＬ１９コンストラクトの説明を以下に示す。

【0173】

ＣＡＲ＃３０１（Ｆ２Ａを含む第３の８－２８ＢＢｚ＿７ｘ１９、ｐＭＳＧＶ）
抗ＭＳＬＮ ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ８のヒンジ及び膜貫通領域、ヒトＣＤ８、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、及びＣＤ３ｚの細胞内シグナルドメインをコードする抗ＭＳＬＮ ＣＡＲ ＤＮＡフラグメント

【0174】

ＣＡＲ＃３０５（Ｆ２Ａを含む第２の８－２８ｚ＿７ｘ１９、ｐＭＳＧＶ）
抗ＭＳＬＮ ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ８のヒンジ及び膜貫通領域、ヒトＣＤ２８及びＣＤ３ｚの細胞内シグナルドメインをコードする抗ＭＳＬＮ ＣＡＲ ＤＮＡフラグメント

【0175】

ＣＡＲ＃３０９（Ｆ２Ａを含む第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９、ｐＭＳＧＶ）
抗ＭＳＬＮ ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ８のヒンジ及び膜貫通領域、ヒト４－１ＢＢ及びＣＤ３ｚの細胞内シグナルドメインをコードする抗ＭＳＬＮ ＣＡＲ ＤＮＡフラグメント

【0176】

ＣＡＲ＃３１１（Ｆ２Ａを含む第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９、ｐＭＳＧＶ）
抗ＭＳＬＮ ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ２８のヒンジ及び膜貫通領域、ヒトＣＤ２８及びＣＤ３ｚの細胞内シグナルドメインをコードする抗ＭＳＬＮ ＣＡＲ ＤＮＡフラグメント

【0177】

ＣＡＲ＃３３４（Ｆ２Ａを含む第３の８－２８ＢＢｚ＿７ｘ１９、ｐＳＦＧ）
抗ＭＳＬＮ ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ８のヒンジ及び膜貫通領域、ヒトＣＤ８、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、及びＣＤ３ｚの細胞内シグナルドメインをコードする抗ＭＳＬＮ ＣＡＲ ＤＮＡフラグメント

【0178】

ＣＡＲ＃３１４（Ｆ２Ａを含む第２の８－２８ｚ＿７ｘ１９、ｐＳＦＧ）
抗ＭＳＬＮ ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ８のヒンジ及び膜貫通領域、ヒトＣＤ２８及びＣＤ３ｚの細胞内シグナルドメインをコードする抗ＭＳＬＮ ＣＡＲ ＤＮＡフラグメント

【0179】

ＣＡＲ＃３１８（Ｆ２Ａを含む第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９、ｐＳＦＧ）
抗ＭＳＬＮ ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ８のヒンジ及び膜貫通領域、ヒト４－１ＢＢ及びＣＤ３ｚの細胞内シグナルドメインをコードする抗ＭＳＬＮ ＣＡＲ ＤＮＡフラグメント

【0180】

ＣＡＲ＃３２３（Ｆ２Ａを含む第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９、ｐＳＦＧ）
抗ＭＳＬＮ ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ２８のヒンジ及び膜貫通領域、ヒトＣＤ２８及びＣＤ３ｚの細胞内シグナルドメインをコードする抗ＭＳＬＮ ＣＡＲ ＤＮＡフラグメント

【0181】

ＣＡＲ＃３４５（Ｐ２Ａを含む第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９、ｐＳＦＧ）
抗ＭＳＬＮ ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ２８のヒンジ及び膜貫通領域、ヒトＣＤ２８及びＣＤ３ｚの細胞内シグナルドメインをコードする抗ＭＳＬＮ ＣＡＲ ＤＮＡフラグメント

【0182】

ＣＡＲ＃３４７（Ｐ２Ａを含む第２の８－２８ｚ＿７ｘ１９、ｐＳＦＧ）
抗ＭＳＬＮ ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ８のヒンジ及び膜貫通領域、ヒトＣＤ２８及びＣＤ３ｚの細胞内シグナルドメインをコードする抗ＭＳＬＮ ＣＡＲ ＤＮＡフラグメント

【0183】

ＣＡＲ＃３４８（Ｐ２Ａを含む第３の８－２８ＢＢｚ＿７ｘ１９、ｐＳＦＧ）
抗ＭＳＬＮ ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ８のヒンジ及び膜貫通領域、ヒトＣＤ８、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、及びＣＤ３ｚの細胞内シグナルドメインをコードする抗ＭＳＬＮ ＣＡＲ ＤＮＡフラグメント

【0184】

ＣＡＲ＃３４９（Ｐ２Ａを含む第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９、ｐＳＦＧ）
抗ＭＳＬＮ ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ８のヒンジ及び膜貫通領域、ヒト４－１ＢＢ及びＣＤ３ｚの細胞内シグナルドメインをコードする抗ＭＳＬＮ ＣＡＲ ＤＮＡフラグメント

【0185】

ＣＡＲ＃３５７（Ｆ２Ａを含む第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９、ｐＳＦＧ）
抗ＭＳＬＮ ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ８のヒンジ及び膜貫通領域、ヒト４－１ＢＢ及びＣＤ３ｚの細胞内シグナルドメインをコードする抗ＭＳＬＮ ＣＡＲ ＤＮＡフラグメント

【0186】

ＣＡＲ＃３５８（Ｔ２Ａを含む第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９、ｐＳＦＧ）
抗ＭＳＬＮ ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ８のヒンジ及び膜貫通領域、ヒト４－１ＢＢ及びＣＤ３ｚの細胞内シグナルドメインをコードする抗ＭＳＬＮ ＣＡＲ ＤＮＡフラグメント

【0187】

ＣＡＲ＃３６４（非同一ヌクレオチドＰ２Ａ配列を含む第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９、ｐＳＦＧ）
抗ＭＳＬＮ ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ２８のヒンジ及び膜貫通領域、ヒトＣＤ２８及びＣＤ３ｚの細胞内シグナルドメインをコードする抗ＭＳＬＮ ＣＡＲ ＤＮＡフラグメント

【0188】

ＣＡＲ＃３６５（非同一ヌクレオチドＰ２Ａ配列を有する第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９、ｐＳＦＧ）
抗ＭＳＬＮ ｓｃＦｖ、ヒトＣＤ８のヒンジ及び膜貫通領域、ヒト４－１ＢＢ及びＣＤ３ｚの細胞内シグナルドメインをコードする抗ＭＳＬＮ ＣＡＲ ＤＮＡフラグメント

【0189】

上記実験で使用されたコンストラクトでは、ＧＳＧ（ペプチドリンカー）を、Ｐ２Ａ配列、Ｆ２Ａ配列、Ｔ２Ａ配列のそれぞれのＮ末端に付加した。

【0190】

ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性の評価
雌ＮＳＧマウスに、２００万（Ｍ）個のＭＳＬＮ陽性Ｃａｐａｎ－２腫瘍細胞を皮下接種させた。接種後７日目に、ＣＡＲ－Ｔ細胞を、いくつかの用量（ＣＡＲ陽性細胞数として、第３の８－２８ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３３４）は０．８Ｍ、２Ｍ、及び５Ｍ、第２の８－２８ｚ＿７ｘ１９（ＣＡＲ＃３１４）及び第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３１８）は３．２Ｍ、第２の８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＃３２３）は５Ｍ）で単回静脈内投与した。対照群として、ビヒクル対照リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）または対照ＵＴＤ Ｔ細胞を投与した。各マウスの腫瘍体積（ＴＶ）を週２回測定した。

【0191】

各処置群（１群当たり５匹のマウス）のマウスの腫瘍体積（ＴＶ）が図３で提示される。５Ｍの第３の８－２８ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３３４）群及び３．２Ｍの第２の８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ群（ＣＡＲ＃３１４）では、ＴＶは、投与後最初の３週間で徐々に増加する傾向があり、ＴＶの軽度の減少の傾向が観察された。一方、５Ｍの第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ群（ＣＡＲ＃３２３）及び３．２Ｍの第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３１８）群では、ＣＡＲ－Ｔ処置後２週間以内に腫瘍縮小が観察され、各群のマウス５匹中３匹で腫瘍組織の消滅が実証され、完全応答（ＣＲ）が示唆された。これらの結果は、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９で強化された第２世代ＣＡＲ－Ｔが、第３世代８－２８ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔコンストラクトと比較して、より高い抗腫瘍有効性を有することを示した。

【0192】

異種移植された腫瘍組織の組織病理学的評価を使用したＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍活性の評価
雌ＮＳＧマウスに、２００万（Ｍ）個のメソテリン陽性Ｃａｐａｎ－２腫瘍細胞を皮下接種させた。接種後７日目に、５ＭのＣＡＲ陽性細胞のＣＡＲ－Ｔ細胞を単回静脈内投与した。試験されたコンストラクトは、第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４９）及び第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＃３４５）であった。対照群として、ビヒクル対照リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、または同等の総Ｔ細胞数の対照ＵＴＤ Ｔ細胞を投与した。各マウスの腫瘍体積（ＴＶ）を週２回測定した。各群のエンドポイント（第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４５）群は１８日目、及び、ＵＴＤまたは第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４９）群は３２日目）で、腫瘍異種移植片を収集し、組織スライドの顕微鏡検査を実施した。図４Ａを参照のこと。

【0193】

図４Ｂで、各群の平均腫瘍体積（ＴＶ）をプロットした。第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４５）処置群は、ＣＡＲ－Ｔ投与後８日目から平均ＴＶの急激な増加を示し、全てのマウスを、人道的エンドポイントとして評価されたＧｖＨＤ様症状により１８日目に死亡させた。一方、第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４９）処置群では、平均ＴＶの増加が１５日目～２２日目に観察され、これらの大きくなった腫瘍異種移植片は、３２日目までに急速に減少した。３２日目に、マウス５匹中３匹が腫瘍の消滅を示し、第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＃３４９）の完全な応答を示唆した。ＵＴＤ Ｔ細胞で処置された腫瘍異種移植片は、腫瘍細胞の腺パターンを残し、ヒトＣＤ３陽性Ｔ細胞の軽度の浸潤が観察された。ヒトＣＤ３陽性Ｔ細胞の顕著な浸潤は、第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４５）処置群の腫瘍異種移植片で観察された。第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４９）処置マウスから採取された腫瘍異種移植片は、腫瘍がエンドポイントで縮小していることが示されたが、残りの異種移植片では、ヒトＣＤ３陽性Ｔ細胞の中程度の浸潤が確認された。ＣＡＲ－Ｔ処置マウスのこれらの異種移植組織では、腫瘍細胞の腺成長パターンが失われ、組織は、浸潤ヒトＴ細胞で満たされ、これは、ＵＴＤ Ｔ細胞処置マウスのものとは全く異なった。これらの結果は、ＣＡＲ－Ｔ処置マウスで観察された腫瘍量の増加が、異種移植された腫瘍微小環境における投与されたヒトＴ細胞の蓄積の結果であり、これは、腫瘍の偽進行と考えることができることを示した。これは、Ｔ細胞のＩＬ－７依存性Ｔ細胞増殖及びＣＣＬ１９依存性蓄積からもたらされた有効性のＭＯＡにより引き起こされる徴候を示唆する。

【0194】

腫瘍細胞の生物発光イメージング（ＢＬＩ）を使用したＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍活性の評価
平均腫瘍体積は、ＣＡＲ－Ｔまたは他の類似の被験物質の使用で予想されるように、腫瘍量を評価する一般的な手段であるが、腫瘍体積（ＴＶ）で測定された効果は、被験物質が免疫細胞の蓄積を刺激する場合、複雑であり得る。炎症による腫瘍体積の観察された変化または増加がないにもかかわらず、腫瘍細胞の減少を特異的に測定することができるので、ルシフェラーゼ発現腫瘍細胞株を使用した腫瘍体積のｉｎ ｖｉｖｏ評価は、これらのモデルにおける抗腫瘍有効性のより具体的な尺度であり得る。雌ＮＳＧマウスに、５００万（Ｍ）個のＭＳＬＮ陽性ＳＫＯＶ３－ｌｕｃ腫瘍細胞を腹腔内接種させた。接種後４日目に、ＣＡＲ－Ｔ細胞をいくつかの用量（ＣＡＲ陽性細胞数として、第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３６５）及び第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＃３６４）が０．１Ｍ、０．３Ｍ、及び１Ｍ）で単回静脈内投与した。対照群として、ビヒクル対照リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、または同等の総Ｔ細胞数の対照ＵＴＤ Ｔ細胞を、０．３Ｍ及び１ＭのＵＴＤ群に対して投与した。マウスは、２８日間監視された。ＳＫＯＶ３－ｌｕｃ細胞の発光の尺度である全光束（ＴＦ）は、動物に存在するＳＫＯＶ３－ｌｕｃ腫瘍細胞の数に比例し、抗腫瘍有効性の評価に使用することができ、週１回測定された。図５Ａを参照のこと。

【0195】

この研究の期間は、２８日間であったが、０．１Ｍ、０．３Ｍ、及び１Ｍの用量で、第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３６４）処置群は全て、人道的なエンドポイントのためにＣＡＲ－Ｔ注射後１４日目に死亡させた。１ＭのＣＡＲ－Ｔ細胞の用量での両方のＣＡＲ－Ｔ処置群（ＣＡＲ＃３６４及びＣＡＲ＃３６５）は、１４日目に平均全光束の低減を示し、これは、ＣＡＲ－Ｔ注射後７日目の最初の測定で最初に観察された。平均ＴＦの低減は、０．３Ｍ及び１Ｍの用量で第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３６５）処置群において研究期間中持続した。第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９（ＣＡＲ＃３６５）ＣＡＲ－Ｔの０．１Ｍの用量群では、腫瘍細胞は、研究期間を通じて存在したままであった。ビヒクル対照群及びＵＴＤ Ｔ細胞の両方の用量群のＴＦは、７日目からエンドポイントまで継続的に増加した。これらの結果は、ＳＫＯＶ３－ｌｕｃ異種移植片を担持するＮＳＧマウスにおける第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３６５）細胞及び第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３６４）細胞の両方の用量依存的な抗腫瘍活性（発光の尺度である平均ＴＦの大幅な低減で測定）の証拠を示す。図５Ｂを参照のこと。

【0196】

ＣＡＲ－Ｔ細胞の抗原非依存性ｉｎ ｖｉｖｏ細胞増殖能を評価するために、抗原発現腫瘍の有無にかかわらず、ＣＡＲ－Ｔ投与後のマウスの体重（ＢＷ）変化を調査した。ＢＷの減少は、通常、マウスへのヒトＴ細胞注射後の移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）症状として観察された。

【0197】

雌ＮＳＧマウスに、２００万（Ｍ）個のＭＳＬＮ陽性Ｃａｐａｎ－２腫瘍細胞を皮下接種させた。接種後７日目に、３ＭのＣＡＲ陽性細胞のＣＡＲ－Ｔ細胞を単回静脈内投与した。試験されたＣＡＲ－Ｔコンストラクトは、第２の８－２８ｚ＿７ｘ１９（ＣＡＲ＃３４７）、第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４９）、及び第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＃３４５）であった。対照群として、同等の総細胞数のＵＴＤ Ｔ細胞（４．４Ｍの細胞）を投与した。これらのＴ細胞を、同日に非担腫瘍マウスに投与した。各マウスの体重（ＢＷ）を週２回測定した。

【0198】

５匹の動物からなる各マウス群の平均体重変化（％）を図６Ａ及び図６Ｂにプロットした。

【0199】

Ｃａｐａｎ－２腫瘍異種移植モデルでは、第２の８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＃３４７）の投与の１１日後に急性のＢＷ減少が観察された。第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＃３４５）投与の１４日後にも、ＢＷ減少が観察されたが、ＵＴＤ Ｔ細胞処置群においても、第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４９）処置群においても有意なＢＷ減少は観察されなかった。非担腫瘍状態では、１１日目に、平均ＢＷの有意な減少が第２の８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４７）処置群でのみ観察され、他のＣＡＲ－Ｔ処置群及びＵＴＤ群では観察されなかった。これは、オフターゲット毒性のリスクと考えられ得る抗原刺激のない第２の８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４７）の高いｉｎ ｖｉｖｏ増殖能力を示唆する。

【0200】

ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ安全性評価
担腫瘍雌ＮＳＧマウスにおいて、７．５×１０^６個の総細胞（３ＭのＣＡＲ＋細胞に相当）の単回投与後に、コンストラクトＣＡＲ＃３６５（第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９）、ＣＡＲ＃３６４（第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９）、及び非形質導入（ＵＴＤ）細胞の安全性を評価した。この研究では、ＣＡＲ－Ｔ投与の１７日後に、動物を人道的に安楽死させ、血清化学、臓器重量、ならびに肉眼的及び顕微鏡的病理の変化について評価した。

【0201】

３つの群間で血清化学または臓器重量に大きな変化はなく、全ての動物が、最終解剖まで生存した。巨視的な所見は、ＣＡＲ＃３６４を投与された動物に存在し、肺の変色及び脾臓の肥大からなり、これらの両方は、臓器重量の最小限の増加に関連し、これらの組織のＣＡＲ－Ｔ細胞、すなわち、混合細胞炎症（肺）の存在と、白髄（脾臓）の細胞密度の増加に微視的に関連していた。

【0202】

ＵＴＤ細胞は、肺及び脾臓における最小の推定ＣＡＲ－Ｔ浸潤／炎症を有していた。肺のパターンが典型的であったので、この所見は、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）に関連している可能性があると考えられている。ＣＡＲ＃３６５を投与された動物は、ＵＴＤ細胞を投与された動物と同様であり、肺単核浸潤または混合細胞炎症の発生率が低く、脾臓及びさらに骨髄に生着する推定ＣＡＲ－Ｔ細胞の発生率が高かった。追加の所見は、１匹の動物の肝臓にそれぞれ存在した（おそらく、ＧｖＨＤと一致する最小限の推定ＣＡＲ－Ｔ浸潤）。

【0203】

ＣＡＲ＃３６４を投与された動物は、ＵＴＤ細胞を投与された動物よりも重篤な所見があり、さらに肝臓に所見が見られた。これらの所見は、ＧｖＨＤの効果及び／またはサイトカイン防御に関連するＣＡＲ－Ｔ活性化の他の機序の悪化をもたらす持続性シグナル伝達を示唆している。

【0204】

全体として、非担腫瘍雌ＮＳＧマウスにおいて、コンストラクトＣＡＲ＃３６５は、良好な忍容性を示し、ＵＴＤ細胞と同様の所見は、最小限であり、これは、所見がＧｖＨＤに関連し得ることを示す。正常組織において、コンストラクトＣＡＲ＃３６５は、制御されない細胞増殖の徴候があったコンストラクトＣＡＲ＃３６４と比較して、優れた安全性プロフィールも示した。図７Ａ～７Ｃを参照のこと。

【0205】

Ｃａｐａｎ－２異種移植ＮＳＧマウスに投与されたＴ細胞のフローサイトメトリー分析
雌ＮＯＧ ＭＨＣクラスＩ／ＩＩ ＫＯマウスに、２００万（Ｍ）個のメソテリン陽性Ｃａｐａｎ－２腫瘍細胞を皮下接種させた。腫瘍接種後７日目に、５ＭのＣＡＲ陽性細胞のＣＡＲ－Ｔ細胞を単回静脈内投与した。試験されたＣＡＲ－Ｔコンストラクトは、第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３６４）及び第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＃３６５）であった。対照群として、同等の総細胞数のＵＴＤ Ｔ細胞（１２．５Ｍの細胞）を投与した。血液、脾臓、及び異種移植腫瘍組織を、第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３６５）投与群についてＣＡＲ－Ｔ注射後１３、２７、及び４１日目に収集した。同様に、ＣＡＲ－Ｔ注射後１３日目に、第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３６４）細胞用量群で血液及び組織を収集した。この群の全ての動物が、人道的なエンドポイントのためにＣＡＲ－Ｔ注射後１３日目に死亡させた。腫瘍試料の場合、腫瘍組織解離試薬キット（ＴＴＤＲ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して細胞を収集した。脾臓試料を分離し、濾過して、細胞懸濁液を得た。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液（５００ｍＬのＤＰＢＳ－／５ｍＬのＮａＮ３／１０ｍＬのＦＢＳ）中、ｈｉｓタグ付きメソテリンと共に、暗所、室温で３０分間インキュベートした。細胞を洗浄し、遠心分離し、続いて、ＰＢＳ中のゾンビＮＩＲと共に、暗所、室温で１５分間インキュベートした。細胞を抗体混合物（ＣＤ３／ＦＩＴＣ、ＣＤ８／ＢＶ５１０、ＣＴＬＡ４／ＰＥ－Ｃｙ７、ＬＡＧ－３／Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、ＰＤ－１／ＢＶ４２１、ＴＩＭ－３／ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５、抗ｈｉｓＡｂ／ＰＥ）と共にインキュベートした。洗浄された細胞を、ＤＷ中、ＢＤ ＦＡＣＳ溶解緩衝液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）と共にインキュベートした。洗浄ステップ後、細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液（５００ｍＬのＤＰＢＳ－／５ｍｌ ＮａＮ３／１０ｍＬ ＦＢＳ）に再懸濁し、ＢＤ ＦＡＣＳＬｙｒｉｃ（商標）フローサイトメーターで分析した。データ分析には、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用した。

【0206】

血液、腫瘍、及び脾臓のＣＤ３＋細胞における消耗マーカー（ＣＴＬＡ４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、及びＴＩＭ３）の発現が図８Ａ～８Ｃに示される。末梢（血液及び脾臓）では、ＣＡＲ＃３６５は、ＣＡＲ＃３６４よりも少ない疲弊マーカーの発現を示した。腫瘍では、＃３６４及び＃３６５の両方でＬＡＧ－３及びＴＩＭ－３の発現が低かった。ＣＴＬＡ－４及びＰＤ－１では、ＣＡＲ＃３６５は、ＣＡＲ＃３６４よりも遅い発現を示した。

【0207】

可溶性ヒトメソテリンのＣＡＲ－Ｔ活性化に対する評価
ＣＡＲ－Ｔ機能に対する可溶型ＭＳＬＮの遮断活性を評価するために、第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４９）及び第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＃３４５）を、いくつかの用量（０．０１、０．０３、０．１、０．３、及び１μｇ／ｍＬ）で、可溶型ＭＳＬＮ（ｓＭＳＬＮ）と共にそれぞれ２４時間プレインキュベートし、洗浄されたＣＡＲ－Ｔ細胞を、ＭＳＬＮ陽性Ｃａｐａｎ－２腫瘍細胞と共にインキュベートした。腫瘍及びＣＡＲ－Ｔ細胞の共培養の４８時間後、共培養上清を収集し、ヒトＩＦＮγ分泌レベルをＥＬＩＳＡで測定した。

【0208】

図９に示されるように、約１０，０００ｐｇ／ｍＬのヒトＩＦＮγが、ビヒクルＰＢＳでプレインキュベートされたＣａｐａｎ－２細胞及び第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４５）細胞の共培養上清から分泌された。第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＃３４９）からのＩＦＮγ分泌は、同じ条件で約７，０００ｐｇ／ｍＬであった。抗原刺激された第２の２８－２８ｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＃３４５）からのＩＦＮγ分泌は、ｓＭＳＬＮとのプレインキュベーションにより用量依存的に減少したが、抗原刺激された第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＃３４９）からのＩＦＮγ分泌における用量依存的阻害は、ｓＭＳＬＮにより誘導されなかった。

【0209】

ＣＡＲ－Ｔ細胞からのＩＬ－７及びＣＣＬ１９の分泌レベルの比較
培養された第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（Ｐ２Ａを含む、ＣＡＲ＃３４９）細胞、第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（Ｆ２Ａを含む、ＣＡＲ＃３５７）細胞、及び第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（Ｔ２Ａを含む、ＣＡＲ＃３５８）細胞から収集された培養上清を使用して、ＩＬ－７及びＣＣＬ１９の分泌レベルをＥＬＩＳＡで評価した。ＭＳＤシステムを使用して、各ＣＡＲ－Ｔ細胞から分泌されたＩＬ－７－ＣＣＬ１９融合タンパク質の定量を実施した。

【0210】

ＭＳＤ ＧＯＬＤ ９６ウェルのストレプトアビジンＳＥＣＴＯＲプレート（ＭＳＤカタログ番号：Ｌ１５ＳＡ－５）を、３％のＢＳＡを含有する２５０μＬ／ウェルの１×ＰＢＳＴと共に３０分間超インキュベートした。プレートを１×ＰＢＳＴで３回洗浄し、ブロットして過剰な緩衝液を除去した（以下、洗浄ステップと呼ばれる）。Ｕ－ＰＬＥＸヒトＭＩＰ－３β抗体セット（ＭＳＤ、カタログ番号：Ｂ２１ＶＡ－３）のビオチン抗ヒトＭＩＰ－３β抗体を捕捉試薬として使用した。２５μＬ／ウェルの１×捕捉抗体を添加し、室温で１時間インキュベートした。洗浄ステップの後、試料を等量のアッセイ緩衝液（３％のＢＳＡを含有する１×ＰＢＳＴ）で希釈した。５０μＬ／ウェルの２×希釈試料をプレートに添加し、シェーカー上で穏やかに振盪しながら室温で１．５時間インキュベートした。洗浄ステップに続いて、Ｕ－ＰＬＥＸヒトＩＬ－７抗体セット（ＭＳＤカタログ番号：Ｂ２１ＵＰ－３）の検出抗体を、アッセイ緩衝液（３％のＢＳＡを含有する１×ＰＢＳＴ）で１００倍に希釈することにより、１×検出抗体溶液を調製した。５０μＬ／ウェルの１×検出抗体溶液を添加し、シェーカー上で穏やかに振盪しながら室温で１．５時間インキュベートした。洗浄ステップ後、１５０μＬの２×ＭＳＤリーディング緩衝液を添加し、プレートをすぐにＭＳＤプレートリーダーで読み取った。

【0211】

各ＣＡＲ－Ｔ細胞の培養上清からのＩＬ－７、ＣＣＬ１９、及びＩＬ－７／ＣＣＬ１９融合タンパク質の分泌レベルは表２に示された。第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ＣＡＲ－Ｔ（Ｐ２Ａを含む、ＣＡＲ＃３４９）細胞は、同量の培養上清からのＩＬ－７及びＣＣＬ１９の最も高い発現レベルを示した。第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（Ｐ２Ａ、＃３４９）は、最も高い切断されたＩＬ－７及びＣＣＬ１９濃度を示した。ＩＬ－７／ＣＣＬ１９融合タンパク質の場合、Ｐ２Ａコンストラクトの切断／非切断融合タンパク質の比は、第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（Ｔ２Ａを含む、＃３５８）のものと同等、及び第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（Ｆ２Ａを含む、＃３５７）のものよりも小さい。

【0212】

【表2】

【0213】

腫瘍細胞の生物発光イメージングを使用した第２世代及び第３世代ＣＡＲ－Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性の評価
第３世代７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ及び第２世代７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔの有効性を公平に比較するために、図１０Ａに示すように、Ｐ２Ａペプチド配列を含む同じレトロウイルスベクター成分を使用して、第３の８－２８ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４８）及び第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３６５）細胞を生成した。雌ＮＳＧマウスに、５００万（Ｍ）個のメソテリン陽性ＨｅｐＧ２－ＲｅｄＦｌｕｃ細胞を皮下接種させた。接種後７日目に、第３の８－２８ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４８）細胞及び第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３６５）細胞をいくつかの用量（ＣＡＲ陽性細胞数として０．３Ｍ、１Ｍ、及び３Ｍ）で単回静脈内投与した。対照群として、ビヒクル対照リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、または３ＭのＣＡＲ陽性細胞に対して同等の総Ｔ細胞数の対照非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞を、ＵＴＤ ３Ｍ群に投与した。ＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍有効性を評価するために、動物に存在する腫瘍細胞の数に比例するＨｅｐＧ２－ＲｅｄＦｌｕｃ細胞の発光の尺度である全光束（ＴＦ）を週１回測定した。

【0214】

第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３６５）及び第３の８－２８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４８）は、双方ともに、用量依存的に平均全光束の低減を示した。３ＭのＣＡＲ－Ｔ群では、両群が同等の有効性を示したが、第３の８－２８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４８）群のマウス５匹中３匹を、人道的なエンドポイントのために研究終了までに死亡させた。エンドポイントまでに両方の１ＭのＣＡＲ－Ｔ群でも、ＴＦの有意な減少が観察されたが、第３の８－２８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４８）のマウス５匹中１匹では、１４日目後に腫瘍が再増殖した。０．３ＭのＣＡＲ－Ｔ群では、エンドポイントで両方のＣＡＲ－Ｔ群で同等レベルのＴＦ減少が観察されたが、第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３６５）は、試験された全てのマウスで良好な腫瘍制御を示したが、第３の８－２８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲ＃３４８）群の試験マウス５匹中１匹は、研究期間を通じて腫瘍の退縮を示さなかった。これらの結果は、第２の８－ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲＴ（ＣＡＲ＃３６５）が、第３の８－２８ＢＢｚ＿７ｘ１９ ＣＡＲＴ（ＣＡＲ＃３４８）と比較して、より高く、長期にわたる抗腫瘍活性を有することを示す。図１０Ａ～Ｂ、図１１、及び図１２Ａ～Ｈを参照のこと。

【0215】

実施例２
メソテリン発現進行性または転移性固形腫瘍を有する成人患者における、本明細書に記載のＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する改変免疫細胞の非盲検、用量漸増、第１相、ファースト・イン・ヒト研究
研究設計：
これは、臨床上の利点が確立された標準的な代替治療法がないメソテリン発現進行性または転移性の固形腫瘍を有する患者に静脈内（ＩＶ）投与された本明細書に記載のＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する改変免疫細胞の安全性及び忍容性を評価する非盲検、非無作為化、第１相、ファースト・イン・ヒト研究である。卵巣癌、中皮腫、胃癌、及び非小肺細胞癌（ＮＳＣＬＣ）は、本明細書に記載のＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する改変免疫細胞の優先度の高い標的集団である。他のがんの種類を有する患者は、研究者（複数可）及びスポンサー間の検討に基づいて登録されるであろう。最大２１人のＤＬＴ評価可能な患者が、提案された５つの用量コホートのうちの１つにおいて、本明細書に記載のＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する改変免疫細胞で処置されるであろう。用量漸増は、各用量レベルで観察されたＤＬＴ率に基づくベイズ最適間隔（ＢＯＩＮ）設計で導かれるであろう。用量漸増／漸減の決定は、ＤＬＴ以外の安全性、有効性、及び細胞動態（ＣＫ）を考慮して、ＢＯＩＮが推奨する用量の範囲内で決定され、コホートの終了の会議を含む会議で、スポンサー及び研究者が共同で行われるであろう。実行可能な場合、所定の用量レベルで追加の患者に投与する意思決定を支援するために、追加の新たな翻訳データ（例えば、可溶性メソテリン、がん抗原１２５［ＣＡ１２５］）も使用され得る。推奨される第２相の用量（ＲＰ２Ｄ）は、各用量レベルでの安全性、有効性、ＣＫ、及びバイオマーカー評価の統合された観察に基づいて決定されるであろう。いずれの用量コホートでは、本明細書に記載のＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する改変免疫細胞の第１及び第２の患者への注入は、１４日（またはそれ以上）の間隔を置くことになる。２人目以降の患者は、同時投与され得る。用量コホートは、少なくとも２８日までに分離されるであろう（前のコホートの最後の注入から、後続のコホートの最初の注入まで）。毒性は、国立がん研究所の有害事象に関する共通用語基準（ＮＣＩ ＣＴＣＡＥ）バージョン５．０に従って評価されるであろう。サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）及び免疫エフェクター細胞関連神経毒性症候群（ＩＣＡＮＳ）は、米国移植細胞治療学会（ＡＳＴＣＴ）のコンセンサスに従って評価されるであろう。免疫エフェクター細胞療法に関連する毒性の監視、等級付け、及び管理には、ＣＡＲＴＯＸ（ＣＡＲ－Ｔ細胞療法関連毒性）の推奨事項が使用されるであろう。

【0216】

この研究は、事前スクリーニング、スクリーニング、前処置、処置及び１次追跡、及び２次追跡の段階で構成される。プレスクリーニング段階は、腫瘍細胞におけるメソテリン発現の評価について、施設内審査委員会／独立倫理委員会（ＩＲＢ／ＩＥＣ）が承認したインフォームドコンセントフォーム（ＩＣＦ）に患者が署名した日に開始し得る。スクリーニング段階は、スクリーニング段階のいずれかの手順のうちの１つが実行された日付で始まる。患者は、事前スクリーニングＩＣＦの日付または主要なＩＣＦの日付のいずれか早い方に、研究固有の患者数が提供される。スクリーニング段階は、適格性の確認及び研究への登録を含み、白血球除去輸血手順の開始で終了する。処置前段階は、白血球除去輸血手順の開始から、コンディショニング化学療法を通して、注入の開始までの期間として定義される。前処置段階中に、白血球除去輸血、ブリッジング療法、及びコンディショニング化学療法が実施されるであろう。処置及び１次追跡段階は、本明細書に記載のＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する改変免疫細胞の投与で始まり、１３ヶ月目まで継続する。２次追跡段階は、処置及び１次追跡期間の終了時に始まり、３７ヶ月目まで続く。処置前、処置、ならびに１次追跡及び２次追跡段階では、患者は、死亡、同意の撤回、または他の事前に定められた状況により研究への参加を完了することがある。

【0217】

患者は、適切なデータが研究の主要目的及び副次目的を適切に評価について収集されることを保証するために、来院スケジュールに従って追跡されるであろう。患者は、研究者の判断でいつでも、処置及び１次追跡段階から自発的に撤退しても、それから除外されてもよい。以下を含む理由により、患者が１次追跡を離れて２次追跡に移行し得ることが予想される：
－疾患進行
－患者の１次追跡からの自発的撤退

【0218】

１３ヶ月前に処置及び１次追跡段階を中止した患者は、本明細書に記載のＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する改変免疫細胞の注入後３年までに、保健当局から要求されたデータ（例えば、プロトコールで定義されたＡＥ）を収集するために、２次追跡段階での追跡されることが継続されるであろう。

【0219】

２次追跡段階での最初の来院は、患者が処置及び１次追跡段階で中止された時間に応じて決定される。例えば、患者が７ヶ月目に処置及び１次追跡段階を中止する場合、２次追跡段階の最初の来院は、１０ヶ月目になるであろう。

【0220】

主要目的：
－本明細書に記載のＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する改変免疫細胞の安全性及び忍容性を評価すること。
－本明細書に記載のＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する改変免疫細胞のＲＰ２Ｄを決定すること。

【0221】

副次目的：
－本明細書に記載のＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する改変免疫細胞の抗腫瘍活性を評価すること。
－本明細書に記載のＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する改変免疫細胞のＣＫを特性決定すること。
－複製コンピテントレトロウイルス（ＲＣＲ）陽性検査結果を伴う実施形態の数及びパーセントを決定すること。

【0222】

対象集団：
メソテリンを発現する進行性または転移性固形腫瘍を有する患者。研究は、最大２１人のＤＬＴ評価可能患者を含む。

【0223】

用量レベル：
用量レベルが上昇する以下のコホートが試験されるべきである：
コホート（－１）：０．３×１０^７個のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）（＋）細胞／個体。（コホート１が忍容性がない場合）
コホート１：１×１０^７個のＣＡＲ（＋）細胞／個体［開始用量］。
コホート２：１×１０^８個のＣＡＲ（＋）細胞／個体。
コホート３：５×１０^８個のＣＡＲ（＋）細胞／個体。
コホート４：１×１０^９個のＣＡＲ（＋）細胞／個体。

【0224】

投与経路：静脈内

【0225】

処置期間：
単回ＩＶ注入。コンディショニング化学療法が処置に先行する。（コンディショニング化学療法が投与されていないコホートが試験され得る。）

【0226】

受け入れの主な基準：
１．インフォームドコンセント署名時の年齢が２０歳以上の男性または女性患者。
２．臨床的利点が証明されている標準治療の選択肢がない、または耐えられない組織学的または細胞学的に確認された進行性または転移性固形腫瘍。
３．メソテリン発現（強度２＋及び／または３＋の生存可能な腫瘍細胞で５０％以上陽性）は、スポンサーが確認した検証済みのアッセイ、スコアリング、及び染色を使用した免疫組織化学により腫瘍で局所的に決定されなければならない。白血球除去輸血手順前６ヶ月以内に取得された保存済みの生検試料が入手可能でない限り、適格性評価には新鮮な生検試料が使用されなければならない。
４．平均余命が１２週間以上。
５．米国東海岸がん臨床試験グループのパフォーマンスステータスが０または１。
６．以下に明記される臨床検査値により確認された適切な臓器機能：
ａ）総ビリルビン≦１．５×正常範囲（ＵＬＮ）の上限（ギルバート症候群患者を除く）。ギルバート症候群患者は、直接型ビリルビン≦３×直接型ビリルビンのＵＬＮで登録され得る。輸血後の溶血による間接ビリルビンの上昇は許容される。
ｂ）アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）は、３×ＵＬＮ未満でなければならない。ＡＳＴ及びＡＬＴは、上昇が肝臓の転移性疾患の存在によるものと合理的に帰すことができる場合、５×ＵＬＮまで上昇し得る。
ｃ）計算されたクレアチニンクリアランス＞５０ｍＬ／分（Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ－Ｇａｕｌｔ式）。
ｄ）ヘモグロビンは、９ｇ／ｄＬ以上でなければならない。
ｅ）好中球数は、１０００／ｍｍ^３超でなければならない。
ｆ）絶対リンパ球数は、５００／ｍｍ^３超でなければならない。
ｇ）血小板数は、７５，０００／ｍｍ^３超でなければならない。
７．患者は、固形腫瘍における反応評価基準、バージョン１．１（ＲＥＣＩＳＴ１．１）で定義されたＸ線撮影で測定可能な疾患を有さなければならない。
８．以下のような女性患者：
ａ）スクリーニング来院前に閉経後少なくとも１年間（自然無月経）であるか、または
ｂ）外科的に無菌であるか、または
ｃ）妊娠の可能性がある場合は、インフォームドコンセントへの署名時から、本明細書に記載のＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する改変免疫細胞の注入後少なくとも１２ヶ月を通して、１つの非常に効果的な非ホルモン避妊法及び１つの追加の効果的な（バリア）避妊法を同時に実施することに同意するか、または
ｄ）対象の好み及び通常のライフスタイルと一致する場合、真の禁欲を実践することに同意する。注記：定期的な禁欲（例えば、カレンダー、排卵、対症療法、排卵後の方法）、離脱、殺精子剤のみ、及び授乳期の無月経は、許容できる避妊方法ではない。
９．以下の男性患者（たとえ外科的に不妊手術（すなわち精管切除術後）されたとしても）：
ａ）インフォームドコンセントに署名した時から、本明細書に記載のＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する改変免疫細胞の注入後少なくとも１２ヶ月を通して、効果的なバリア避妊を実施することに同意するか、または
ｂ）対象の好み及び通常のライフスタイルと一致する場合、真の禁欲を実践することに同意する。注記：定期的な禁欲（例えば、カレンダー、排卵、対症療法、排卵後の方法）、離脱、殺精子剤のみ、及び授乳期の無月経は、許容できる避妊方法ではない。
１０．自発的な書面による同意は、標準医療の一部ではない任意の研究関連手順を実施する前に与えられなければならない。但し、同意は、将来の医療に影響を与えることなく、いつでも患者が撤回し得る。
１１．予定された来院及び研究手順に応じる意欲及び能力。

【0227】

除外の主な基準：
１．活動性全身感染症。
２．既知のＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）陽性、または既知もしくは疑わしい活動性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症。Ｂ型肝炎コア抗体（ＨＢｃＡｂ）またはＢ型肝炎表面抗体（ＨＢｓＡｂ）が陽性の患者も登録することができるが、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）ウイルス量が検出不能でなければならない。Ｃ型肝炎ウイルス抗体（ＨＣＶＡｂ）が陽性の患者は、検出不可能なＨＣＶウイルス量でなければならない。
３．凝固障害、または他の主要な内科的疾患、例えば、呼吸器系もしくは免疫系、及び閉塞性／拘束性肺疾患。
４．不安定狭心症、臨床的に重大な不整脈、心筋梗塞、うっ血性心不全、左心室駆出率（ＬＶＥＦ）＜４５％、室内気の開始時酸素飽和度＜９３％として定義される既知の心血管疾患及び心肺疾患患者。十分に制御された心房細動は、除外されないが、制御されていない心房細動は除外されることになる。
５．研究者の意見では、このプロトコールに従った処置の完了を妨げ得る任意の重篤な医学的または精神医学的疾患。
６．３年以上無病でない限り、非メラノーマ皮膚癌または上皮内癌（例えば、子宮頸部、膀胱、乳房）以外の悪性腫瘍の病歴。
７．全身ステロイド処置を必要とする疾患。
８．細胞療法及び遺伝子療法の任意の事前使用。
９．白血球除去輸血手順前１４日以内、またはコンディショニング化学療法もしくは本明細書に記載のＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する改変免疫細胞を用いる処置の２８日前の、任意の治験製品を用いる処置（細胞療法または遺伝子治療を除く）。
１０．白血球除去輸血手順またはコンディショニング化学療法もしくは本明細書に記載のＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する改変免疫細胞を用いる処置前１４日以内の全身性抗がん療法（免疫腫瘍学療法を含む）及び放射線療法を用いる処置。
１１．白血球除去輸血手順またはコンディショニング化学療法もしくは本明細書に記載のＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する改変免疫細胞を用いる処置前２８日以内の大手術を用いる処置（カテーテル留置などの軽度の外科手術は、除外基準ではない）。
１２．任意のメソテリン標的療法を用いる事前処置。
１３．事前の抗がん療法によるグレード３以上の任意の非分解の毒性。
１４．研究者が判断した出血のリスクがある患者。
１５．中枢神経系転移または他の重大な神経学的状態の存在（必要に応じて、効果的に処置され、安定している中枢神経系転移を有する患者を登録することができる）。
１６．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）血清陽性及び／またはヒトＴ細胞リンパ向性ウイルス（ＨＴＬＶ）血清陽性の患者。
１７．臓器移植の既往歴があるか、または臓器移植を待っている患者。
１８．シクロホスファミド、フルダラビン、またはストレプトマイシンを含む薬剤のいずれかに対して重度の即時型過敏症を有する患者。
１９．違法薬物使用、薬物乱用、またはアルコール乱用の承認または証拠。
２０．コンディショニングレジメンの開始前６週間以内の生ワクチン。
２１．授乳中及び授乳中または血清妊娠検査が陽性である女性患者（コンディショニング化学療法ならびに本明細書に記載のＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する改変免疫細胞を用いる処置前に尿妊娠検査が許可される）。

【0228】

注記：授乳中の女性患者は、本明細書に記載のＣＡＲ、ＩＬ－７、及びＣＣＬ１９を発現する改変免疫細胞を用いる処置前に授乳を中止した場合に適格となるであろう。

【0229】

評価及び分析の主な基準：
主要エンドポイント：
用量制限毒性（ＤＬＴ）の発生率。
処置中に発生した有害事象（ＴＥＡＥ）の発生率。
重度のＩＣＡＮＳ、ＣＲＳ、血球貪食性リンパ組織球症、マクロファージ活性化症候群、及び腫瘍溶解症候群を含む臨床的に重要な有害事象（ＡＥ）の発生率。

【0230】

副次エンドポイント：
ＲＥＣＩＳＴ１．１及びｉＲＥＣＩＳＴに従って研究者が評価した、全奏効率（ＯＲＲ）、疾患制御率（ＤＣＲ）、奏効期間（ＤＯＲ）、無増悪期間（ＴＴＰ）、及び無増悪生存期間（ＰＦＳ）。

【0231】

全生存期間（ＯＳ）。

【0232】

ＣＡＲベクターのコピー数により評価されるＣＫ関連パラメーター（Ｃ_ｍａｘ［単回投与後に末梢血薬物濃度で観察された最大（ピーク）］、ｔ_ｍａｘ［観察された最大末梢血濃度が最初に発生した時間］、Ｃ_ｌａｓｔ［末梢血中の最後に観察された定量可能な濃度］、ｔ_ｌａｓｔ［持続性：末梢血中の最後に観察された定量可能な濃度の時間（日）］、ＡＵＣ［血中濃度－時間曲線の下面積］）。

【0233】

ＲＣＲ陽性の検査結果を有する実施形態の数及び割合。

【0234】

統計的考慮事項：
ＤＬＴ及びＴＥＡＥの発生率及び割合は、医薬品規制調和国際会議（ＩＣＨ）国際医薬用語集（ＭｅｄＤＲＡ）の器官別大分類及び基本語により、及びグレード毎にまとめられるであろう。加えて、以下のイベントは、同じ方法でまとめられるであろう。
－処置関連ＴＥＡＥ。
－グレード３以上のＴＥＡＥ。
－グレード３以上の処置関連ＴＥＡＥ。
－重篤な有害事象（関連するもの及び関係にかかわらず）。

【0235】

臨床目的のＡＥ及びＲＣＲは、数及び割合より要約されるであろう。

【0236】

第２の有効性エンドポイントでは、点推定値及び両側９５％の正確な二項信頼区間がバイナリエンドポイントに対して計算され、イベント発生までの時間のエンドポイントは、カプランマイヤー法を使用して記述的に分析されるであろう。

【0237】

ＣＫパラメーターは、記述統計を使用して要約される。個々の濃度－時間データ及び個々のＣＫパラメーターは、リストに提示され、用量コホート毎の要約統計を使用して表にまとめられるであろう。個々の平均濃度－時間プロファイルが、用量コホート毎にプロットされるであろう。

【0238】

別途定義のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、この技術が属する当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。

【0239】

本明細書に例示的に記載される本技術は、本明細書に具体的に開示されていない任意の要素（複数可）、制限（複数可）の不存在下で適切に実施され得る。従って、例えば、「含むこと」、「含むこと」、「含有すること」などの用語は、拡大的に制限なく解釈されるものとする。さらに、本明細書で用いられる用語及び表現は、限定ではなく説明の用語として使用されており、そのような用語及び表現の使用において、図示及び説明された特徴またはその一部と同等の任意のものを除外する意図はないが、特許請求される本技術の範囲内で様々な変更が可能であることが認識される。

【0240】

従って、本明細書で提供される材料、方法、及び実施例は、好ましい態様の態様であり、例示であり、本技術の範囲を限定するものではないと理解すべきである。

【0241】

本技術は、本明細書で広範且つ一般に説明されている。一般的な開示の範囲内にあるより狭い種及び亜属群のそれぞれは、本技術の一部も形成する。これは、切除された材料が本明細書に具体的に記載されているかどうかに関係なく、条件付きで本技術の一般的説明、または属から任意の主題を除去する負の制限を含む。

【0242】

加えて、本技術の特徴または態様が、マーカッシュ群に関して説明される場合、当業者は、本技術がマーカッシュ群の任意の個々のメンバーまたはメンバーのサブグループに関しても説明されることを認識するであろう。

【0243】

本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、あたかもそれぞれが個別に参照により組み込まれるのと同じ程度に、全体が参照により明示的に組み込まれる。矛盾が生じた場合では、定義を含む本明細書が優先されるであろう。

【0244】

他の態様は、以下の特許請求の範囲内に記載される。

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図12D】

【図12E】

【図12F】

【図12G】

【図12H】

【国際調査報告】