特表 2024-533119 ＡＭＬの治療のための抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-12

(54)【発明の名称】ＡＭＬの治療のための抗体

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20240905BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240905BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240905BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240905BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20240905BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240905BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240905BHJP

   A61K 31/496 20060101ALI20240905BHJP

   A61K 31/706 20060101ALI20240905BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20240905BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28 ZNA

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61P35/02

A61P35/00

A61P7/00

A61P43/00 121

A61K45/00

A61K39/395 U

A61K31/496

A61K31/706

C12N15/13

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024513740

(86)(22)【出願日】2022-09-02

(85)【翻訳文提出日】2024-04-11

(86)【国際出願番号】 EP2022074455

(87)【国際公開番号】W WO2023031403

(87)【国際公開日】2023-03-09

(31)【優先権主張番号】63/240,342

(32)【優先日】2021-09-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】514099673

【氏名又は名称】エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト

(71)【出願人】

【識別番号】509012625

【氏名又は名称】ジェネンテック， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110000796

【氏名又は名称】弁理士法人三枝国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】アマン マリア

(72)【発明者】

【氏名】プース ローレーヌ

(72)【発明者】

【氏名】ボッシュ クリストフ

(72)【発明者】

【氏名】ヴァイサー マルティン

(72)【発明者】

【氏名】コルベン テレーザ

(72)【発明者】

【氏名】カラニカス ヴァイオス

(72)【発明者】

【氏名】エックマン ヤン

(72)【発明者】

【氏名】カルネイロ デ メデイロス ブルーノ

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA19

4C084MA02

4C084NA05

4C084ZA511

4C084ZA512

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZB272

4C084ZC412

4C084ZC75

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB11

4C085BB36

4C085CC01

4C085DD62

4C085EE01

4C085EE03

4C086AA01

4C086CB05

4C086EA16

4C086MA02

4C086MA04

4C086NA05

4C086ZA51

4C086ZB26

4C086ZB27

4C086ZC41

4C086ZC75

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及びびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）の治療に使用される抗ＣＤ２５抗体に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

被験体における急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）の治療に使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項2】

前記抗体の非存在下でのＩＬ－２シグナル伝達と比較して、ＣＤ２５を介するＩＬ－２のシグナル伝達の５０％未満を阻害する、請求項１に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項3】

前記抗体の非存在下でのＩＬ－２シグナル伝達と比較して、ＣＤ２５を介するＩＬ－２のシグナル伝達の２５％未満を阻害する、請求項２に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項4】

前記抗体が、
（ａ）
配列番号２～５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６～１１のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、
配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域と、
を含む抗体、
（ｂ）
配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、
配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域と、
を含む抗体、及び、
（ｃ）
配列番号３１～３３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３４～３８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、
配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域と、
を含む抗体、
からなる群から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項5】

ＲＧ６２９２である、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項6】

配列番号１のアミノ酸１５０～１５８、配列番号１のアミノ酸１７６～１８０、配列番号１のアミノ酸４２～５６、及び配列番号１のアミノ酸７４～８４から選択される少なくとも１つの配列を含むエピトープに結合する、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項7】

配列番号１のアミノ酸７０～８４を含むエピトープに結合する、請求項６に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項8】

癌細胞、Ｔｒｅｇ細胞、ＡＭＬ芽細胞及び／又はＰＭＢＣ細胞を死滅させる、請求項１～７のいずれか一項に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項9】

１細胞当たりＣＤ２５分子約９００個を超えるＣＤ２５発現レベルを有するＴｒｅｇ細胞及び芽細胞を死滅させる、請求項８に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項10】

１細胞当たりＣＤ２５分子約１０００個を超えるＣＤ２５発現レベルを有するＴｒｅｇ細胞及び芽細胞を死滅させる、請求項９に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項11】

１細胞当たりＣＤ２５分子約１０００個～約４００００個の範囲のＣＤ２５発現レベルを有するＴｒｅｇ細胞及び芽細胞を死滅させる、請求項１０に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項12】

１細胞当たりＣＤ２５分子約１０００個～約５０００個の範囲のＣＤ２５発現レベルを有するＴｒｅｇ細胞及び芽細胞を死滅させる、請求項１１に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項13】

ＡＤＣＣ活性を誘起する、請求項１～１２のいずれか一項に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項14】

モノクローナル抗体である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項15】

ＩｇＧ抗体である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項16】

ＩｇＧ１抗体である、請求項１５に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項17】

単一特異性抗体である、請求項１～１６のいずれか一項に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項18】

二価の単一特異性抗体である、請求項１７に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項19】

脱フコシル化されている、請求項１～１８のいずれか一項に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項20】

ヒト抗体又はヒト化抗体である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項21】

前記抗体及びＮＫ細胞を、細胞当たりＣＤ２５分子９００個～５０００個を発現する細胞と共インキュベートする場合、前記抗体が、ＮＫ細胞におけるＣＤ１６発現の減少を最大２５％誘起する、請求項１～２０のいずれか一項に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項22】

前記ＮＫ細胞がＣＤ５６ｄｉｍ ＮＫ細胞である、請求項２１に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項23】

更なる治療薬とコンジュゲートしない、請求項１～２２のいずれか一項に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項24】

１つ以上の更なる治療薬と組み合わせて投与される、請求項１～２３のいずれか一項に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項25】

前記１つ以上の更なる治療薬が、免疫チェックポイント阻害剤、癌ワクチン、ＦＬＴ３阻害剤、ＢＣＬ－２阻害剤、ＩＤＨ阻害剤、低メチル化剤、アントラサイクリン及びそれらの組合せから選択される、請求項２４に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項26】

前記免疫チェックポイント阻害剤がＰＤ－１アンタゴニストである、請求項２５に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項27】

前記ＰＤ－１アンタゴニストが抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、請求項２６に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項28】

ＢＣＬ－２阻害剤と組み合わせて使用される、請求項２５に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項29】

前記ＢＣＬ－２阻害剤がベネトクラクスである、請求項２８に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項30】

前記低メチル化剤がアザシチジンである、請求項２５に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項31】

前記１つ以上の更なる治療薬がＦＬＴ３阻害剤である、請求項２５に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項32】

ＢＣＬ－２阻害剤及び低メチル化剤と組み合わせて使用される、請求項２５に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項33】

単剤療法として使用される、請求項１～２３のいずれか一項に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項34】

前記被験体由来の腫瘍細胞におけるＣＤ２５発現レベルが、１細胞当たりＣＤ２５分子少なくとも約９００個である、請求項１～３３のいずれか一項に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項35】

前記被験体由来の腫瘍細胞におけるＣＤ２５発現レベルが、１細胞当たりＣＤ２５分子約９００個～約５０００個の範囲である、請求項１～３５のいずれか一項に記載の使用される抗ＣＤ２５抗体。

【請求項36】

急性骨髄性白血病又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の治療に使用される、請求項１～２３のいずれか一項に規定される抗ＣＤ２５抗体と１つ以上の更なる治療薬との組合せであって、該抗ＣＤ２５抗体及び該更なる治療薬が、個別の投与、同時投与又は逐次投与用のものである、組合せ。

【請求項37】

前記１つ以上の更なる治療薬が、請求項２５～３２のいずれか一項に規定される通りである、請求項３６に記載の使用される組合せ。

【請求項38】

被験体において急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を治療する方法であって、該被験体に有効量の抗ＣＤ２５抗体を投与することを含む、方法。

【請求項39】

請求項１～２３のいずれか一項に規定される通りである、請求項３８に記載の方法。

【請求項40】

前記抗ＣＤ２５抗体が単剤療法として投与される、請求項３８又は３９に記載の方法。

【請求項41】

１つ以上の更なる治療薬、例えば請求項２５～３２のいずれか一項に規定される治療薬を投与することを更に含む、請求項３８又は３９に記載の方法。

【請求項42】

前記被験体由来の腫瘍細胞におけるＣＤ２５発現レベルが、１細胞当たりＣＤ２５分子少なくとも約９００個である、請求項３８～４１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項43】

前記被験体由来の腫瘍細胞におけるＣＤ２５発現レベルが、１細胞当たりＣＤ２５分子約９００個～約５０００個の範囲である、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

急性骨髄性白血病又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の治療用の薬剤の製造における抗ＣＤ２５抗体の使用。

【請求項45】

前記抗体が請求項１～２３のいずれか一項に規定される通りである、請求項４４に記載の使用。

【請求項46】

前記抗ＣＤ２５抗体が単剤療法として使用される、請求項４４又は４５に記載の使用。

【請求項47】

１つ以上の更なる治療薬、例えば請求項２５～３２のいずれか一項に規定される治療薬と組み合わされる、請求項４４又は４５に記載の使用。

【請求項48】

急性骨髄性白血病又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の治療用の薬剤の製造における抗ＣＤ２５抗体と更なる治療薬との組合せの使用。

【請求項49】

前記抗体が請求項１～２３のいずれか一項に規定される通りである、請求項４８に記載の使用。

【請求項50】

前記更なる治療薬が請求項２５～３２のいずれか一項に規定される通りである、請求項４８又は４９に記載の使用。

【請求項51】

抗ＣＤ２５抗体で治療する急性骨髄性白血病を患う患者を選択する方法であって、該患者からの試料中の標的細胞におけるＣＤ２５発現レベルを決定することを含み、該細胞が１細胞当たりＣＤ２５分子約９００個を超える発現レベルを有する場合、該患者が前記抗体による治療に適している、方法。

【請求項52】

前記試料が前記患者からの骨髄試料である、請求項５１に記載の方法。

【請求項53】

前記標的細胞が芽細胞及び／又はＴｒｅｇ細胞である、請求項５１又は５２に記載の方法。

【請求項54】

前記ＣＤ２５発現レベルがフローサイトメトリーによって測定される、請求項５１～５３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項55】

１細胞当たりＣＤ２５分子９００個を超える発現レベルを有すると判定される場合、前記患者に前記抗ＣＤ２５抗体を投与することを更に含む、請求項５１～５４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項56】

前記抗ＣＤ２５抗体が請求項１～２３のいずれか一項に規定される通りである、請求項５５に記載の方法。

【請求項57】

抗ＣＤ２５抗体で治療するＡＭＬを患う患者を選択する方法であって、該患者からの試料中のＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異の有無を判定することを含み、該突然変異が該試料中に存在する場合、該患者が前記抗体による治療に適している、方法。

【請求項58】

ＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異を有すると判定される場合、前記抗ＣＤ２５抗体を前記患者に投与することを更に含む、請求項５７に記載の方法。

【請求項59】

抗ＣＤ２５抗体による治療に対するＡＭＬ患者の応答を予測する方法であって、該患者からの試料中のＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異の有無を判定することを含み、該試料中の該突然変異の存在が、前記抗ＣＤ２５抗体による治療に応答するとされる患者であることを指し示す、方法。

【請求項60】

被験体における急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を治療する方法であって、該被験体に有効量の抗ＣＤ２５抗体を投与することを含み、前記被験体がＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異の存在を含む、方法。

【請求項61】

ＡＭＬを患う患者からの試料中のＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異の存在を判定することを更に含む、請求項６０に記載の方法。

【請求項62】

前記試料が前記患者からの血液試料又は骨髄試料である、請求項５７～５９又は６１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項63】

前記突然変異の有無が、ＤＮＡシークエンシング及び突然変異スクリーニング技術の群から選択される方法によって判定される、請求項５７～５９、６１又は６２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項64】

ＡＭＬ患者における再発を予防する又はそのリスクを軽減する方法であって、抗ＣＤ２５抗体を該患者に投与することを含む、方法。

【請求項65】

１つ以上の更なる治療薬を投与することを更に含む、請求項６４に記載の方法。

【請求項66】

前記１つ以上の治療薬が請求項２５～３２のいずれか一項に規定される通りである、請求項６５に記載の方法。

【請求項67】

ＢＣＬ－２阻害剤と低メチル化剤との併用治療を受けた患者におけるＡＭＬを治療する方法であって、抗ＣＤ２５抗体を該患者に投与することを含む、方法。

【請求項68】

前記抗ＣＤ２５抗体が請求項１～２３のいずれか一項に規定される通りである、請求項５７～６７のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及びびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）の治療に使用される抗ＣＤ２５抗体に関する。

【背景技術】

【0002】

インターロイキン－２受容体のαサブユニット（ＩＬ２ＲＡ）としても知られているＣＤ２５は、高い親和性を伴うＩＬ－２の結合及び続くシグナル伝達カスケードを可能にする表面抗原である。ＣＤ２５は、増殖のためにＩＬ－２の消費に依拠する制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）上に構成的に発現して、直近で活性化されたＴ細胞上で過渡的にアップレギュレートする。ＩＬ－２は、抗原特異的Ｔ細胞のクローンの増大及びそれらのエフェクター機能の獲得において重要な役割を果たす主要なサイトカインである。腫瘍内Ｔｒｅｇの存在量、特にエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）に対するＴｒｅｇの比率が、ヒトの多くの固形腫瘍における臨床転帰を予測することが示されている（非特許文献１、非特許文献２）。事実、Ｔｒｅｇは免疫抑制腫瘍微小環境に寄与しており、それらを枯渇させるための幾つかの戦略が評価されている。

【0003】

ＣＤ２５ Ｍａｂ（ＲＧ６２９２）は、非ＩＬ－２阻害脱フコシル化ＩｇＧ１抗体であり、ヒト腫瘍外植片及び癌の前臨床マウスモデルにおいてＴｒｅｇを効率的に枯渇させると同時に、ＩＬ－２のＴｅｆｆへの再分布及び抗腫瘍適応免疫応答の形成を可能にすることが示されている（非特許文献３）。ＣＤ２５ ＭａｂはＣＤ２５＋標的細胞に結合し、その結晶性断片（Ｆｃ）は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球及びマクロファージ等のエフェクター細胞の表面上に発現するＦｃ受容体に結合する。ＣＤ２５ Ｍａｂは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）を通じて標的細胞の死滅を媒介する。ＣＤ２５ Ｍａｂは現在、第Ｉ相単剤療法研究、及びアテゾリズマブ（抗ＰＤ－Ｌ１抗体）と組み合わせた第Ｉｂ相臨床試験において調査されている。

【0004】

健康なＴ細胞における役割に加えて、ＣＤ２５の発現は、Ｔ細胞リンパ腫及びＢ細胞リンパ腫、並びに急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）等の多くの血液悪性腫瘍にも記載されている（非特許文献４）。特に、ＣＤ２５は、ＡＭＬ及びびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）における腫瘍細胞のサブセット上に発現するとみられ、その発現は生存率の低下と関連するものであった（非特許文献５、非特許文献６）。

【0005】

その上、ＣＤ２５が、白血病幹細胞、又はＡＭＬにおける前駆表現型を有する細胞に制限される可能性があるという幾つかの証拠が存在する（非特許文献７、非特許文献８）。これらの細胞は、近年のＡＭＬの治療の進歩にもかかわらず疾患の伝播及び高い再発率に関与していると考えられる（非特許文献９）。ＡＭＬ患者の骨髄では健康なボランティアのものと比較して高頻度でＴｒｅｇが観察され、Ｔｒｅｇの存在量がＡＭＬ患者の転帰不良と相関関係にあった（非特許文献１０）。このため、ＡＭＬ及びＤＬＢＣＬに対する更なる治療の選択肢が求められている。

【0006】

ＡＭＬに対する現行の治療の選択肢としては、アントラサイクリン－シタラビンレジメン（ダウノルビシンとシタラビンとのレジメン等）、ＦＬＴ３阻害剤（例えば、ギルテリチニブ、ミドスタウリン、ソラフェニブ）、ＢＣＬ－２阻害剤（例えば、ベネトクラクス）、ＩＤＨ阻害剤（例えば、エナシデニブ、イボシデニブ）、低メチル化剤（例えば、アザシチジン、デシタビン）及び抗体療法（例えば、ＣＤ３３抗体ゲムツズマブオゾガマイシン）、並びにそれらの併用療法が挙げられる。

【0007】

本発明者らはここで、ＣＤ２５ Ｍａｂ（ＲＧ６２９２）等の抗ＣＤ２５抗体が、抑制性Ｔｒｅｇを枯渇させるとともに、ＣＤ２５＋悪性細胞に対する直接的な細胞傷害性効果を有する二重の作用機序を潜在的に有し、ＡＭＬ及びＤＬＢＬＣに対する効果的な治療となり得る抗体をもたらすことを見出した。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0008】

【非特許文献1】Nishikawa and Sakaguchi, 2014, Curr Opin Immunol 27, 1-7

【非特許文献2】Wing et al., 2019, Immunity 50, 302-316

【非特許文献3】Solomon et al., 2020, Nature Cancer, 1(12):1153-1166

【非特許文献4】Flynn and Hartley, 2017, Br J Haematol 179, 20-35

【非特許文献5】Fujiwara et al., 2013, Hematology 18, 14-19

【非特許文献6】Gonen et al., 2012, Blood 120, 2297-2306

【非特許文献7】Aref et al., 2020, Leuk Res Rep 13, 100203

【非特許文献8】Kageyama Y et al., 2018, PLOS One 13(12) e.0209295

【非特許文献9】Kantarjian et al., 2021, Blood Cancer J 11, 41

【非特許文献10】Dong et al., 2020, Front Immunol 11, 1710

【発明の概要】

【0009】

本発明は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及びびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）の治療に使用される抗ＣＤ２５抗体を提供する。

【0010】

本発明の第１の態様において、急性骨髄性白血病又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の治療に使用される抗ＣＤ２５抗体が提供される。

【0011】

本発明の第２の態様は、急性骨髄性白血病又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の治療に使用される抗ＣＤ２５抗体であって、単独で又は１つ以上の更なる治療薬と組み合わせて投与される、抗ＣＤ２５抗体を提供する。抗ＣＤ２５抗体及び更なる治療薬は、個別の投与、同時投与又は逐次投与用のものである。

【0012】

本発明の第３の態様は、急性骨髄性白血病又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の治療に使用される、抗ＣＤ２５抗体と更なる治療薬との組合せであって、該抗ＣＤ２５抗体及び該更なる治療薬が、個別の投与、同時投与又は逐次投与用のものである、組合せを提供する。

【0013】

本発明の第４の態様は、被験体において急性骨髄性白血病又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫を治療する方法であって、該被験体に有効量の抗ＣＤ２５抗体を投与することを含む、方法を提供する。

【0014】

本発明の第５の態様は、急性骨髄性白血病又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の治療用の薬剤の製造における抗ＣＤ２５抗体の使用を提供する。

【0015】

本発明の第６の態様は、急性骨髄性白血病又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の治療用の薬剤の製造における抗ＣＤ２５抗体及び更なる治療薬の使用を提供する。

【0016】

本発明の第７の態様は、抗ＣＤ２５抗体で治療する急性骨髄性白血病を患う患者を選択する方法であって、該患者からの試料中の標的細胞におけるＣＤ２５発現レベルを測定することを含み、該細胞が１細胞当たりＣＤ２５分子約９００個を超える発現レベルを有する場合、該患者が抗体による治療に適している、方法を提供する。

【0017】

本発明の第８の態様は、抗ＣＤ２５抗体で治療するＡＭＬを患う患者を選択する方法であって、該患者からの試料中のＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異の有無を判定することを含み、該突然変異が該試料中に存在する場合、該患者が抗体による治療に適している、方法を提供する。

【0018】

本発明の第９の態様は、抗ＣＤ２５抗体による治療に対するＡＭＬ患者の応答を予測する方法であって、該患者からの試料中のＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異の有無を判定することを含み、該試料中の該突然変異の存在が、抗ＣＤ２５抗体による治療に応答するとされる患者であることを指し示す、方法を提供する。

【0019】

本発明の第１０の態様は、被験体におけるＡＭＬを治療する方法であって、該被験体に有効量の抗ＣＤ２５抗体を投与することを含み、被験体がＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異の存在を含む、方法を提供する。

【0020】

本発明の第１１の態様は、ＡＭＬ患者における再発を予防する又はそのリスクを軽減する方法であって、抗ＣＤ２５抗体を該患者に投与することを含む、方法を提供する。

【0021】

本発明の第１２の態様は、ＢＣＬ－２阻害剤と低メチル化剤との併用治療を受けた患者におけるＡＭＬを治療する方法であって、抗ＣＤ２５抗体を該患者に投与することを含む、方法を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0022】

【図1】標的細胞におけるＣＤ２５の発現を示す図である。４つの標的細胞（ｉＴｒｅｇ、Ｐｆｅｉｆｆｅｒ、ＥＯＬ－１及びＡＭＬ－２２）の表面上のＣＤ２５分子の密度は、ＡＤＣＣアッセイ培地中で１７時間インキュベートした後にＢＤ ｑｕａｎｔｉｂｒｉｔｅ（商標）ビーズを用いて求めた。ｉＴｒｅｇ及びＰｆｅｉｆｆｅｒ細胞のＣＤ２５密度は左Ｙ軸に示し、ＥＯＬ－１及びＡＭＬ－２２のＣＤ２５密度は右Ｙ軸に示す。検出限界（Ｌ．Ｏ．Ｄ）は、ＢＤ ｑｕａｎｔｉｂｒｉｔｅ（商標）ビーズ上に存在するＰＥ分子の最低数を表すため、１細胞当たりのＰＥ分子数と蛍光強度中央値（ＭＦＩ）との直線関係はこの値未満では保証されない。

【図2】ＣＤ２５ Ｍａｂ処理によって誘起される標的細胞におけるＡＤＣＣ潜在性及びＣＤ２５密度を示す図である。（Ａ）試験した化合物（ＣＤ２５ Ｍａｂ又はアイソタイプ対照抗体）のＡＤＣＣ活性を死滅の度数として示す。計算値は、エフェクターＮＫ細胞及び化合物の非存在下における標的細胞の数に対して正規化した標的細胞の事象数に基づくものである。フローサイトメトリー解析は、ＡＤＣＣアッセイの開始１７時間後に実施した。（Ｂ）ＢＤ ｑｕａｎｔｉｂｒｉｔｅ（商標）ビーズを用いてＡＤＣＣアッセイの開始１７時間後に求められる、残りの生存する標的細胞（ＥＯＬ－１及びＡＭＬ－２２）の表面上のＣＤ２５分子の密度を示す。検出限界（Ｌ．Ｏ．Ｄ）は、ＢＤ ｑｕａｎｔｉｂｒｉｔｅ（商標）ビーズ上に存在するＰＥ分子の最低数を表すため、１細胞当たりのＰＥ分子数と蛍光強度中央値（ＭＦＩ）との直線関係はこの値未満では保証されない。

【図3】ＮＫ細胞におけるＣＤ１６発現を示す図である。（Ａ）ＥＯＬ－１又はＡＭＬ－２２細胞及びＣＤ２５ Ｍａｂ又はアイソタイプ対照抗体と１７時間共インキュベートした後の、ＣＤ１６を発現するＮＫ細胞の割合を示す。（Ｂ）Ｐｆｅｉｆｆｅｒ細胞又はｉＴｒｅｇ及びＣＤ２５ Ｍａｂ又はアイソタイプ対照抗体と１７時間共インキュベートした後の、ＣＤ１６を発現するＮＫ細胞の割合を示す。

【図4】ＮＫ細胞におけるＣＤ６９発現を示す図である。（Ａ）ＥＯＬ－１又はＡＭＬ－２２細胞及びＣＤ２５ Ｍａｂ又はアイソタイプ対照抗体と１７時間共インキュベートした後の、ＣＤ６９を発現するＮＫ細胞の割合を示す。（Ｂ）Ｐｆｅｉｆｆｅｒ細胞又はｉＴｒｅｇ及びＣＤ２５ Ｍａｂ又はアイソタイプ対照抗体と１７時間共インキュベートした後の、ＣＤ６９を発現するＮＫ細胞の割合を示す。

【図5】ＮＫ細胞におけるＣＤ２５発現を示す図である。（Ａ）ＥＯＬ－１又はＡＭＬ－２２細胞及びＣＤ２５ Ｍａｂ又はアイソタイプ対照抗体と１７時間共インキュベートした後の、ＣＤ２５を発現するＮＫ細胞の割合を示す。（Ｂ）Ｐｆｅｉｆｆｅｒ細胞又はｉＴｒｅｇ及びＣＤ２５ Ｍａｂ又はアイソタイプ対照抗体と１７時間共インキュベートした後の、ＣＤ２５を発現するＮＫ細胞の割合を示す。

【図6】ＡＤＣＣ活性とＣＤ２５密度との相関関係を示す図である。（Ａ）試験した化合物（ＣＤ２５ Ｍａｂ又はアイソタイプ対照抗体）のＡＤＣＣ活性を、各細胞株及びＮＫ細胞ドナー対について得られる最大シグナルに対して正規化した相対発光量の度数として示す。結果は、合計４人の供血者から分離したＮＫ細胞による２つの独立する実験から得られた。細胞傷害性評価は、ＡＤＣＣアッセイの開始１６時間～２０時間後にＣｙｔｏＴｏｘ－Ｇｌｏ（商標）の発光の読み取りによって実施した。（Ｂ）ＣｙｔｏＴｏｘ－Ｇｌｏ（商標）又はフローサイトメトリーを読み取りとして用いて、ＣＤ２５ Ｍａｂの滴定によりＡＤＣＣアッセイから導かれるＥＣ５０値を示す（各々２人のＮＫ細胞ドナーによる３つの独立する実験）。ＥＣ５０値は、Ｐｒｉｓｍ ８（GraphPad software）及びその内蔵非線形回帰曲線フィット（ｌｏｇ（アゴニスト）対応答、可変勾配、４パラメーター）を用いて算出した。（Ｃ）ＡＤＣＣアッセイの開始１６時間～２０時間後にＢＤ ｑｕａｎｔｉｂｒｉｔｅ（商標）ビーズを用いて求めた、生存する標的細胞（Ｐｆｅｉｆｆｅｒ、ＥＯＬ－１及びＡＭＬ－２２）の表面上のＣＤ２５分子の密度を示す。検出限界（Ｌ．Ｏ．Ｄ）は、ＢＤ ｑｕａｎｔｉｂｒｉｔｅ（商標）ビーズ上に存在するＰＥ分子の最低数を表すため、１細胞当たりのＰＥ分子数と蛍光強度中央値（ＭＦＩ）との直線関係はこの値未満では保証されない。結果は３つの独立する実験から得られた。

【図7】ＣＤ２５＋ＡＭＬ細胞及びＴｒｅｇの死滅活性を示す図である。（Ａ）１０μｇ／ｍｌで試験した化合物（ＣＤ２５ Ｍａｂ又はアイソタイプ対照抗体）の死滅活性を、ＣＤ２５＋ＡＭＬ細胞の死滅の度数として示す。陽性対照ＥＯＬ－１細胞株及び４つのＡＭＬ患者試料を標的細胞として使用した。フローサイトメトリー解析は、ＡＤＣＣアッセイの開始２０時間後に実施した。平均±ＳＥＭは、２人のＮＫ細胞ドナー及び技術的反復で得られた結果を表す。多重ｔ検定、多重比較のためのＨｏｌｍ－Ｓｉｄａｋ補正。（Ｂ）：（Ａ）に関する上記のＴｒｅｇの死滅活性を示す。平均±ＳＥＭは、ＡＭＬ Ｔｒｅｇ（ｎ＝２）又は健康なＢＭ Ｔｒｅｇ（ｎ＝２）で得られた結果を表す。多重ｔ検定、多重比較のためのＨｏｌｍ－Ｓｉｄａｋ補正。有意レベルは次のように示す：ｎｓ、有意でない＝Ｐ＞０．０５；^＊、Ｐ≦０．０５；^＊＊、Ｐ≦０．０１；^＊＊＊、Ｐ≦０．００１;^＊＊＊＊、Ｐ≦０．０００１。

【発明を実施するための形態】

【0023】

本発明は、被験体における急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）の治療に使用される抗ＣＤ２５抗体、及び抗ＣＤ２５抗体を用いて被験体において急性骨髄性白血病又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫を治療する方法を提供する。

【0024】

本発明者らは、抗ＣＤ２５抗体が、広範囲のＣＤ２５発現レベルを有するＣＤ２５＋悪性細胞を枯渇させることができることを見出した。本発明者らは、抗ＣＤ２５抗体によるＣＤ２５＋ＡＭＬ及びＤＬＢＣＬ細胞、特にＣＤ２５＋ＡＭＬ芽細胞の直接的な死滅を示した。特に、本発明者らは、ＡＭＬに関連する腫瘍細胞におけるＣＤ２５発現レベルが低いにもかかわらず、抗ＣＤ２５抗体がこれらの腫瘍細胞の死滅に有効であることを見出した。本発明者らは、抗ＣＤ２５抗体は、ＣＤ２５の発現が低い癌細胞を標的とするのに使用することができ、それゆえ、芽細胞におけるＣＤ２５発現レベルが低いことがあるＡＭＬ等の癌の治療の使用にも適していることを見出した。

【0025】

ＣＤ２５はＩＬ－２受容体のα鎖であり、活性化Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、活性化Ｂ細胞、一部のＮＫ Ｔ細胞、一部の胸腺細胞、骨髄前駆細胞及び希突起膠細胞に存在する。低いＣＤ２５発現は、ＡＭＬ患者の芽細胞でも見られることがある。ＣＤ２５はＣＤ１２２及びＣＤ１３２に結合して、ＩＬ－２の高親和性受容体として作用するヘテロ三量体複合体を形成する。ヒトＣＤ２５のコンセンサス配列を以下に示し、配列番号１として同定する（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ０１５８９；アミノ酸２２～２４０に対応する成熟ヒトＣＤ２５の細胞外ドメインに下線を付す）。

【0026】

10 20 30 40 50
MDSYLLMWGL LTFIMVPGCQ AELCDDDPPE IPHATFKAMA YKEGTMLNCE
60 70 80 90 100
CKRGFRRIKS GSLYMLCTGN SSHSSWDNQC QCTSSATRNT TKQVTPQPEE
110 120 130 140 150
QKERKTTEMQ SPMQPVDQAS LPGHCREPPP WENEATERIY HFVVGQMVYY
160 170 180 190 200
QCVQGYRALH RGPAESVCKM THGKTRWTQP QLICTGEMET SQFPGEEKPQ
210 220 230 240 250
ASPEGRPESE TSCLVTTTDF QIQTEMAATM ETSIFTTEYQ VAVAGCVFLL
260 270
ISVLLLSGLT WQRRQRKSRR TI

【0027】

本明細書で使用される場合、「抗ＣＤ２５抗体」又は「ＣＤ２５に結合する抗体」とは、ＩＬ－２受容体のＣＤ２５サブユニットに結合することができる抗体を指す。このサブユニットはＩＬ－２受容体のαサブユニットとしても知られている。

【0028】

抗ＣＤ２５抗体は、ＩＬ－２受容体のＣＤ２５サブユニット（抗原）に特異的に結合することができる抗体である。「特異的結合」及び「特異的に結合する（"bind specifically", and "specifically bind"）」は、抗体が、対象の抗原に対して約１０^－６Ｍ、１０^－７Ｍ、１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍ、１０^－１０Ｍ、１０^－１１Ｍ、１０^－１２Ｍ又は１０^－１３Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）を有することを意味すると理解される。好ましい実施形態において、解離定数は、１０^－８Ｍ未満、例えば１０^－９Ｍ、１０^－１０Ｍ、１０^－１１Ｍ、１０^－１２Ｍ又は１０^－１３Ｍの範囲である。

【0029】

本発明における使用に好適な抗ＣＤ２５抗体としては例えば、国際公開第２０１７／１７４３３１号、国際公開第２０１８／１６７１０４号、国際公開第２０１９／００８３８６号、国際公開第２０１９／１７５２１５号、国際公開第２０１９／１７５２１６号、国際公開第２０１９／１７５２１７号、国際公開第２０１９／１７５２２０号、国際公開第２０１９／１７５２２号、国際公開第２０１９／１７５２２３号、国際公開第２０１９／１７５２２４号、国際公開第２０１９／１７５２２６号に記載されているものが挙げられ、その内容は引用することにより本明細書の一部をなす。

【0030】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、無傷の免疫グロブリン分子、及び抗原結合部位を含むその断片の両方を指し、ポリクローナル、モノクローナル、遺伝子操作された形態、そうでなければ修飾された形態の抗体を含み、これらには、限定するものではないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヘテロ接合体及び／又は多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ、トリボディ（tribodies）及びテトラボディ（tetrabodies））、並びに例えばＦａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｒＩｇＧを含む抗体の抗原結合断片、ポリペプチド－Ｆｃ融合体、単鎖バリアント（single chain variants）（ｓｃＦｖ断片、ＶＨＨ、Ｔｒａｎｓ－ｂｏｄｉｅｓ（商標）、Ａｆｆｉｂｏｄｉｅｓ（商標）、サメ単一ドメイン抗体、単鎖又はタンデムダイアボディ（ＴａｎｄＡｂ（商標））、ＶＨＨ、Ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ（商標）、Ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（商標）、ミニボディ、ＢｉＴＥ（商標）、二環式ペプチド、及び他の代替的な免疫グロブリンタンパク質足場）が挙げられる。幾つかの実施形態において、抗体は、天然に産生された場合に有するとされる共有結合修飾（例えば、グリカンの結合）を欠いていてもよい。幾つかの実施形態において、抗体は、共有結合修飾（例えば、グリカン、検出可能部分、治療部分、触媒部分、又はポリエチレングリコール等の、抗体の安定性又は投与を改善させる他の化学基の結合）を含有していてもよい。幾つかの実施形態において、抗体はマスクされた抗体（例えば、Ｐｒｏｂｏｄｉｅｓ（商標））の形態であってもよい。マスクされた抗体は、抗体の抗原結合表面に特異的に結合して、抗体の抗原結合を妨げるブロッキングペプチド又は「マスク」ペプチドを含み得る。マスクペプチドは、切断可能なリンカー（例えばプロテアーゼ）によって抗体に連結する。望ましい環境、すなわち腫瘍環境におけるリンカーの選択的切断により、マスキング／ブロッキングペプチドを解離することができ、腫瘍内での抗原結合が可能となり、それにより潜在的な毒性の問題が制限される。「抗体」は、ラクダ抗体（重鎖のみの抗体）、及びアンチカリン等の抗体様分子を指すこともある（Skerra (2008) FEBS J 275, 2677-83）。幾つかの実施形態において、抗体はポリクローナル又はオリゴクローナルであり、これらは抗体のパネルとして生成され、それぞれが単一の抗体配列と関連し、抗原内の多かれ少なかれ互いに異なるエピトープ（例えば、異なる参照の抗ヒトＣＤ２５抗体に関連するヒトＣＤ２５細胞外ドメイン内の異なるエピトープ）に結合する。ポリクローナル抗体又はオリゴクローナル抗体は、文献に記載されているように、医療用途のための単一の調剤として提供することができる（Kearns JD et al., 2015. Mol Cancer Ther. 14:1625-36）。

【0031】

本発明で使用される抗体は、単一特異性、二重特異性又は多重特異性であってもよい。「多重特異性抗体」は、１つの標的抗原又はポリペプチドの異なるエピトープに特異的なものであってもよく、又は２つ以上の標的抗原又はポリペプチドに特異的な抗原結合ドメインを含有するものであってもよい。本発明の幾つかの実施形態において、抗体は単一特異性である。幾つかの実施形態において、抗体は一価（すなわち、１つのＣＤ２５分子に対して１つの抗体の比率）でＣＤ２５に結合する。更なる実施形態において、抗体は単一特異性二価抗体であり、すなわち、抗体は２つのＣＤ２５分子に対して１つの抗体の比率でＣＤ２５に結合する。

【0032】

本発明の幾つかの実施形態において、抗体はモノクローナルである。抗体は、付加的に又は代替的にヒト化又はヒトであってもよい。更なる実施形態において、抗体はヒトであるか、又はいずれの場合も、ヒト被験体におけるその使用及び投与を可能にするフォーマット及び特徴を有する抗体である。

【0033】

本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ技術によって産生される抗体に限定されない。「モノクローナル抗体」という用語は、任意の真核生物、原核生物又はファージクローンを含む単一クローンに由来する抗体を指し、それが産生される方法を指すものではない。

【0034】

本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」とは、フレームワーク領域及びＣＤＲ領域が両方ともヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を指す。さらに、抗体が定常領域を含有する場合、その定常領域もヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのランダム若しくは部位特異的な突然変異誘発、又はｉｎ ｖｉｖｏでの体細胞突然変異によって導かれる突然変異）を含んでいてもよい。

【0035】

抗体（Ａｂ）及び免疫グロブリン（Ｉｇ）は、同じ構造的特徴を有する糖タンパク質である。免疫グロブリンは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥ又はＩｇＭ等の任意のクラス由来のものであってもよい。免疫グロブリンは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４等の任意のサブクラスのものであってもよい。本発明の好ましい実施形態において、抗ＣＤ２５抗体はＩｇＧクラス、好ましくはＩｇＧ１サブクラス由来のものである。一実施形態において、抗ＣＤ２５抗体はヒトＩｇＧ１サブクラス由来のものである。

【0036】

本発明の好ましい実施形態において、抗ＣＤ２５抗体は、高い親和性でＦｃγＲ、好ましくは高い親和性で活性化受容体に結合する。好ましくは、抗体は、高い親和性でＦｃγＲＩ及び／又はＦｃγＲＩＩａ及び／又はＦｃγＲＩＩＩａに結合する。特定の実施形態において、抗体は、約１０^－６Ｍ、１０^－７Ｍ、１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍ又は１０^－１０Ｍ未満の解離定数で少なくとも１つの活性化Ｆｃγ受容体に結合する。

【0037】

幾つかの実施形態において、抗体はＩｇＧ１抗体、好ましくはヒトＩｇＧ１抗体であり、これらは少なくとも１つのＦｃ活性化受容体に結合することができる。例えば、抗体は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩｂから選択される１つ以上の受容体に結合し得る。幾つかの実施形態において、抗体はＦｃγＲＩＩＩａに結合することができる。幾つかの実施形態において、抗体は、ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩａ及び任意にＦｃγＲＩに結合することができる。幾つかの実施形態において、抗体は、これらの受容体と高い親和性で、例えば約１０^－７Ｍ、１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍ又は１０^－１０Ｍ未満の解離定数で結合することができる。

【0038】

幾つかの実施形態において、抗体は、抑制性受容体であるＦｃγＲＩＩｂと低い親和性で結合する。幾つかの実施形態において、抗体は、約１０^－７Ｍより高い、約１０^－６Ｍより高い又は約１０^－５Ｍより高い解離定数でＦｃγＲＩＩｂに結合する。

【0039】

幾つかの実施形態において、抗体は脱フコシル化されていてもよい。抗体のＦｃ領域は、当該技術分野において既知の技法を用いてグリコシル化プロファイルを変化させるように修飾することができる。フコシル化プロファイルが存在しないか又はそれを減少させた抗体を産生する利用可能な技法としては、ＧｌｙＭＡＸＸ（ProBiogen）等の市販の技術及び国際公開第２０１１／０３５８８４号に開示されている方法等の方法が挙げられる。

【0040】

幾つかの実施形態において、抗ＣＤ２５抗体はＡＤＣＣ活性を誘起する。抗ＣＤ２５抗体は、ＣＤ２５＋標的細胞に対してＡＤＣＣ活性を示す。「抗体依存性細胞介在性細胞傷害」（ＡＤＣＣ）とは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球及びマクロファージ）が標的細胞上に結合した抗体を認識し、それによって標的細胞の溶解をもたらす細胞介在性反応を指す。幾つかの実施形態において、抗ＣＤ２５抗体はＡＤＣＰ活性を誘起する。「抗体依存性細胞介在性貪食」（ＡＤＣＰ）とは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する食細胞（マクロファージ等）が標的細胞上に結合した抗体を認識し、それによって標的細胞の貪食をもたらす細胞介在性反応を指す。

【0041】

本発明で使用される抗ＣＤ２５抗体は、ＡＤＣＣ活性及びＡＤＣＰ活性を通じて機能し得る。ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰは、当該技術分野において既知の利用可能なアッセイを用いて測定することができる。

【0042】

本発明の幾つかの実施形態において、抗ＣＤ２５抗体は、インターロイキン－２のＣＤ２５への結合を阻害しない。本明細書における「インターロイキン－２のＣＤ２５への結合を阻害しない」という記述（References）は、抗ＣＤ２５抗体が非ＩＬ－２ブロッキング抗体又は「非ブロッキング」抗体（抗ＣＤ２５抗体の存在下におけるＣＤ２５へのＩＬ－２の結合の非ブロッキングに関して）である、すなわち、該抗体がインターロイキン－２のＣＤ２５への結合をブロックしない、特にＣＤ２５発現細胞においてインターロイキン－２のシグナル伝達を阻害しないと代替的に表現され得る。本明細書における非ＩＬ－２ブロッキング抗体という記述は、「インターロイキン－２のＣＤ２５への結合を阻害しない」抗ＣＤ２５抗体、又は「ＩＬ－２のシグナル伝達を阻害しない」抗ＣＤ２５抗体と代替的に表現される場合もある。「非ブロッキング」、「非ＩＬ２ブロッキング」、「ブロックしない」、又は「ブロッキングなし」等（抗ＣＤ２５抗体の存在下におけるＣＤ２５へのＩＬ－２の結合の非ブロッキングに関して）の記述には、本発明の抗ＣＤ２５抗体が、ＣＤ２５を介するＩＬ－２のシグナル伝達をブロックしない実施形態が含まれる。すなわち、抗ＣＤ２５抗体がＩＬ－２シグナル伝達を阻害するのは、抗体の非存在下におけるＩＬ－２シグナル伝達と比較して５０％未満である。本明細書に記載される本発明の特定の実施形態において、抗ＣＤ２５抗体がＩＬ－２シグナル伝達を阻害するのは、抗体の非存在下におけるＩＬ－２シグナル伝達と比較して約５０％、４０％、３５％、３０％未満、好ましくは約２５％未満である。

【0043】

幾つかの抗ＣＤ２５抗体はＩＬ－２のＣＤ２５への結合を可能にするが、ＣＤ２５受容体を介するシグナル伝達は依然としてブロックし得る。非ＩＬ－２ブロッキング抗ＣＤ２５抗体は、ＩＬ－２のＣＤ２５への結合を可能にし、抗ＣＤ２５抗体の非存在下におけるシグナル伝達と比較してＣＤ２５受容体を介するシグナル伝達レベルを少なくとも５０％促す。

【0044】

ＣＤ２５を介するＩＬ－２シグナル伝達は、例えば国際公開第２０１８／１６７１０４号に論じられている方法及び当該技術分野において既知の方法によって測定し得る。抗ＣＤ２５抗体薬の存在及び非存在下におけるＩＬ－２シグナル伝達の比較は、同じ又は実質的に同じ条件下で行うことができる。

【0045】

幾つかの実施形態において、ＩＬ－２シグナル伝達は、標準的なＳｔａｔ－５リン酸化アッセイを用いて細胞内のリン酸化ＳＴＡＴ５タンパク質のレベルによる測定によって求めることができる。例えば、ＩＬ－２シグナル伝達を測定するＳｔａｔ－５リン酸化アッセイは、１０μｇ／ｍｌの濃度の抗ＣＤ２５抗体の存在下でＰＭＢＣ細胞を３０分間培養し、その後、様々な濃度のＩＬ－２（例えば、１０Ｕ／ｍｌ、又は０．２５Ｕ／ｍｌ、０．７４Ｕ／ｍｌ、２．２２Ｕ／ｍｌ、６．６６Ｕ／ｍｌ又は２０Ｕ／ｍｌの様々な濃度）を１０分間添加することを伴うものであってもよい。次いで細胞を透過処理してもよく、その後、フローサイトメトリーによって解析されるリン酸化ＳＴＡＴ５ペプチドに対する蛍光標識抗体を用いてＳＴＡＴ５タンパク質のレベルを測定することができる。ＩＬ－２シグナル伝達のブロッキング率は次のように算出することができる：ブロッキング％＝１００×［（抗体群なしのＳｔａｔ５＋細胞の％－１０μｇ／ｍｌ抗体群ありのＳｔａｔ５＋細胞の％）／（Ａｂ群なしのＳｔａｔ５＋細胞の％）。

【0046】

非ブロッキング抗ＣＤ２５抗体の例は、国際公開第２０１８／１６７１０４号、国際公開第２０１９／１７５２１５号、国際公開第２０１９／１７５２１６号、国際公開第２０１９／１７５２１７号、国際公開第２０１９／１７５２２０号、国際公開第２０１９／１７５２２号、国際公開第２０１９／１７５２２３号、国際公開第２０１９／１７５２４号、国際公開第２０１９／１７５２６号に記載されており、その全体は引用することにより本明細書の一部をなす。

【0047】

抗ＣＤ２５抗体は、ヒトＣＤ２５の細胞外領域内のエピトープに特異的に結合し得る。幾つかの実施形態において、抗体は、ＩＬ－２結合部位と異なるエピトープに結合し、ＩＬ－２のＣＤ２５への結合をブロックしない。

【0048】

本明細書で使用される場合、「エピトープ」とは、抗体又は抗原結合断片によって結合する抗原の一部を指す。当該技術分野においてよく知られているように、エピトープは、隣接するアミノ酸（線状エピトープ）又はタンパク質の三次フォールディングによって並列する隣接しないアミノ酸（立体構造エピトープ）の両方から形成することができる。隣接するアミノ酸から形成されるエピトープは典型的に変性溶媒に曝されても維持されるのに対し、三次フォールディングにより形成されるエピトープは典型的に変性溶媒による処理によって失われる。

【0049】

エピトープは、抗原が関連する立体構造にある場合、抗原内で共有結合的に隣接しているわけではないが、三次元空間内で互いに近接する抗原の一部分で構成されるという点で、立体構造である。例えば、ＣＤ２５の場合、立体構造エピトープは、ＣＤ２５細胞外ドメイン内で隣接しないアミノ酸残基で構成されるエピトープであり、線状エピトープは、ＣＤ２５細胞外ドメイン内で隣接するアミノ酸残基で構成されるエピトープである。抗ＣＤ２５抗体に関するエピトープの正確な配列及び／又は特にアミノ酸残基を決定する手段は、文献において知られており、抗原配列由来のペプチドとの競合、切断及び／又は突然変異誘発（例えば、アラニンスキャニング又は他の部位特異的突然変異誘発による）された様々な種由来のＣＤ２５配列への結合、ファージディスプレイベースのスクリーニング、酵素提示技術、又は（共）結晶構造解析技法が挙げられる。エピトープの空間的立体構造を決定する方法も当該技術分野においてよく知られており、例えば、ｘ線結晶構造解析及び２Ｄ核磁気共鳴が挙げられる。例えば、Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, Glenn E. Morris, Ed (1996)を参照されたい。したがって、幾つかの実施形態において、抗ＣＤ２５抗体は立体構造エピトープを認識し得る。

【0050】

幾つかの実施形態において、抗ＣＤ２５抗体は、配列番号１のアミノ酸１５０～１６３（ＹＱＣＶＱＧＹＲＡＬＨＲＧＰ）（配列番号５２）、配列番号１のアミノ酸１６６～１８６（ＳＶＣＫＭＴＨＧＫＴＲＷＴＱＰＱＬＩＣＴＧ）（配列番号５３）、配列番号１のアミノ酸４２～５６（ＫＥＧＴＭＬＮＣＥＣＫＲＧＦＲ）（配列番号５４）及び配列番号１のアミノ酸７０～８８（ＮＳＳＨＳＳＷＤＮＱＣＱＣＴＳＳＡＴＲ）（配列番号５５）から選択されるアミノ酸ストレッチ（stretches）の１つ以上に含まれる１つ以上のアミノ酸残基を含むエピトープに結合する。好ましくは、エピトープは、配列番号１のアミノ酸１５０～１６３（ＹＱＣＶＱＧＹＲＡＬＨＲＧＰ）（配列番号５２）、配列番号１のアミノ酸１６６～１８６（ＳＶＣＫＭＴＨＧＫＴＲＷＴＱＰＱＬＩＣＴＧ）（配列番号５３）、配列番号１のアミノ酸４２～５６（ＫＥＧＴＭＬＮＣＥＣＫＲＧＦＲ）（配列番号５４）及び／又は配列番号１のアミノ酸７０～８８（ＮＳＳＨＳＳＷＤＮＱＣＱＣＴＳＳＡＴＲ）（配列番号５５）から選択される１つ以上のアミノ酸ストレッチに含まれる少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８以上のアミノ酸残基を含む。

【0051】

幾つかの実施形態において、抗ＣＤ２５抗体はヒトＣＤ２５のエピトープに結合し、該エピトープは、配列番号１のアミノ酸１５０～１５８（ＹＱＣＶＱＧＹＲＡ）（配列番号５６）、配列番号１のアミノ酸１７６～１８０（ＲＷＴＱＰ）（配列番号５７）、配列番号１のアミノ酸４２～５６（ＫＥＧＴＭＬＮＣＥＣＫＲＧＦＲ）（配列番号５４）及び配列番号１のアミノ酸７４～８４（ＳＳＷＤＮＱＣＱＣＴＳ）（配列番号５８）から選択される少なくとも１つの配列を含む。かかる抗体はＩＬ－２のＣＤ２５への結合を阻害しない。

【0052】

一実施形態において、抗ＣＤ２５抗体は、配列番号１のアミノ酸７０～８４の配列（ＮＳＳＨＳＳＷＤＮＱＣＱＣＴＳ）（配列番号５９）を含むエピトープに結合する。

【0053】

自然抗体及び免疫グロブリンは通常、約１５００００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質であり、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖で構成される。各重鎖はアミノ末端に可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を有し、その後に多数の定常ドメインが続く。各軽鎖はアミノ末端に可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）及びカルボキシ末端に定常ドメインを有する。

【0054】

可変領域は、構造的に相補的な抗原標的と相互作用することができ、異なる抗原特異性を有する抗体とアミノ酸配列が異なることを特徴とする。重鎖又は軽鎖いずれかの可変領域は、抗原標的に特異的に結合することができるアミノ酸配列を含有する。これらの配列内には、特異性の異なる抗体間でのそれらの極端な可変性のため「超可変」と称されるより小さい配列がある。かかる超可変領域は「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」領域とも称される。

【0055】

これらのＣＤＲ領域は、特定の抗原決定構造に関する抗体の基本的な特異性の根拠である。ＣＤＲは、可変領域内のアミノ酸の隣接しないストレッチを表すが、種に関係なく、可変重鎖及び軽鎖領域内のこれらの重要なアミノ酸配列の位置配置（positional locations）は、可変鎖のアミノ酸配列内で同様の位置を有することが判明している。全ての抗体の可変重鎖及び軽鎖にはそれぞれ３つのＣＤＲ領域があり、それぞれの重（Ｈ）鎖及び軽（Ｌ）鎖に関する他のもの（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３と称する）とは各々隣接しない。本明細書に指定されるＣＤＲ領域は、Kabatによって定義される（Kabat et al., 1977. J Biol Chem 252, 6609-6616）。

【0056】

幾つかの実施形態において、抗ＣＤ２５抗体は、
（ａ）
配列番号２～５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６～１１のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、
配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域と、
を含む抗体又はその抗原結合断片、
（ｂ）
配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、
配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域と、
を含む抗体又はその抗原結合断片、及び、
（ｃ）
配列番号３１～３３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３４～３８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、
配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域と、
を含む抗体又はその抗原結合断片、
からなる群から選択される。

【0057】

幾つかの実施形態において、抗ＣＤ２５抗体は、
（ａ）
配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、
配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域と、
を含む抗体又はその抗原結合断片、
ｂ）
配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、
配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域と、
を含む抗体又はその抗原結合断片、
ｃ）
配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、
配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域と、
を含む抗体又はその抗原結合断片、
ｄ）
配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、
配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域と、
を含む抗体又はその抗原結合断片、
ｅ）
配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、
配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域と、
を含む抗体又はその抗原結合断片、及び、
ｆ）
配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、
配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域と、
を含む抗体又はその抗原結合断片、
からなる群から選択される。

【0058】

幾つかの実施形態において、抗ＣＤ２５抗体は、
ａ）配列番号１６～２１のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体、
ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体、及び、
ｃ）配列番号４３～４８のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号４９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体、
からなる群から選択される。

【0059】

幾つかの実施形態において、抗ＣＤ２５抗体は、
ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体、
ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体、
ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体、
ｄ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体、
ｅ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体、
ｆ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体、及び、
ｇ）配列番号１６～２１のいずれか１つに対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２２に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域とを含む抗体、
からなる群から選択される。

【0060】

例示した抗体の相補性決定領域（ＨＣＤＲ１～３及びＬＣＤＲ１～３）並びに重鎖可変領域及び軽鎖可変領域に関する配列番号を以下の表に提供する。

【0061】

【表1】

【0062】

かかる抗体は、国際公開第２０１９／１７５２１６号、国際公開第２０１９／１７５２１７号及び国際公開第２０１９／１１７５２２２号に更に記載されている。その内容は引用することにより本明細書の一部をなす。

【0063】

本明細書においてａＣＤ２５－ａ－６８６と称される抗体は、ＲＧ６２９２と称されることもある。好ましい実施形態において、抗ＣＤ２５抗体はＲＧ６２９２である。「ＲＧ６２９２」と称される抗ＣＤ２５抗体は、脱フコシル化ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体である。ＲＧ６２９２は、配列番号５０の配列を有する重鎖配列と、配列番号５１の配列を有する軽鎖配列とを有する。

【0064】

かかる抗体は「非ＩＬ－２ブロッキング」抗体として知られており、ＩＬ－２のＣＤ２５への結合を阻害しない。

【0065】

上記で定義した抗体の変異体も使用することができる。抗体の変異体は、各ＣＤＲ配列に関する配列が、
（ｉ）少なくとも８５％の同一性、及び／又は、
（ｉｉ）配列番号２～１５、２３～２８、又は３１～４２と比べた１つ、２つ又は３つのアミノ酸の置換、
を有するアミノ酸配列を含む抗体を含む。

【0066】

抗体の変異体は、軽鎖及び重鎖それぞれに関する配列が、
（ｉ）少なくとも８０％の同一性、及び／又は、
（ｉｉ）配列番号１６～２２、２９、３０又は４３～５１と比べた１つ、２つ、３つ、４つ又は５つのアミノ酸の置換、
を有するアミノ酸配列を含む抗体も含む。

【0067】

例えば、本発明の一実施形態は、ＡＭＬの治療に使用される抗ＣＤ２５抗体であって、
ａ）
配列番号２～５のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６～１１のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、
配列番号１３に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域と、
を含む抗体又はその抗原結合断片、
ｂ）
配列番号２～５のいずれか１つと比べて１つ、２つ又は３つのアミノ酸の置換を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６～１１のいずれか１つと比べて１つ、２つ又は３つのアミノ酸の置換を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１２と比べて１つ、２つ又は３つのアミノ酸の置換を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、
配列番号１３と比べて１つ、２つ又は３つのアミノ酸の置換を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１４と比べて１つ、２つ又は３つのアミノ酸の置換を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１５と比べて１つ、２つ又は３つのアミノ酸の置換を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域と、
を含む抗体又はその抗原結合断片、及び、
ｃ）
ｉ）配列番号１６～２１のいずれか１つに対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は、
ｉｉ）配列番号１６～２１と比較して１つ、２つ、３つ、４つ若しくは５つのアミノ酸の置換を有するアミノ酸配列、
を含む重鎖可変領域と、
ｉ）配列番号２２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、又は、
ｉｉ）配列番号２２と比較して１つ、２つ、３つ、４つ若しくは５つのアミノ酸の置換を有するアミノ酸配列、
を含む軽鎖可変領域と、
を含む抗体又はその抗原結合断片、
を含む群から選択される、抗ＣＤ２５抗体を提供する。

【0068】

当該技術分野において既知の同一性パーセント（％）は、配列を比較することによって決定される２つ以上のポリペプチド配列又は２つ以上のポリヌクレオチド配列間の関係である。当該技術分野において、同一性は場合によっては、かかる配列の文字列間の一致によって決定され得る、ポリペプチド又はポリヌクレオチド配列間の配列関連性の程度も意味する。２つのポリペプチド又は２つのポリヌクレオチド配列間の同一性を測定する多くの方法が存在するが、同一性を決定するのに通例使用される方法は、コンピュータープログラムで体系化されている。２つの配列間の同一性を決定する好ましいコンピュータープログラムとしてはＧＣＧプログラムパッケージ（Devereux, et al., Nucleic Acids Research, 12, 387 (1984)）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ及びＦＡＳＴＡ（Atschul et al., J. Molec. Biol. 215, 403 (1990)）が挙げられるが、これらに限定されない。２つのアミノ酸配列又は２つの核酸配列の同一性パーセントは、最適な比較目的で配列をアライメントすることによって（例えば、配列との最良のアライメントのために最初の配列にギャップを導入し得る）、及び対応する位置のアミノ酸残基又はヌクレオチドを比較することによって決定される。「最良のアライメント」とは、最大の同一性パーセントをもたらす２つの配列のアライメントである。同一性パーセントは、比較される配列における同一のアミノ酸残基又はヌクレオチドの数によって決定される（すなわち、同一性％＝同一位置の数／位置の総数×１００）。概して、本明細書における同一性％という記述は、文脈上別段の指定又は示唆のない限り、分子の全長に沿った同一性％を指す。

【0069】

幾つかの実施形態において、抗ＣＤ２５抗体は、癌細胞、Ｔｒｅｇ細胞、ＡＭＬ芽細胞及び／又はＰＭＢＣ細胞を死滅させる。幾つかの実施形態において、抗体は、１細胞当たりＣＤ２５分子約９００個を超えるＣＤ２５発現レベルを有するＴｒｅｇ細胞及び芽細胞を死滅させる。好ましくは、抗体は、１細胞当たりＣＤ２５分子約１０００個を超える、好ましくは１細胞当たりＣＤ２５分子約１０００個～４００００個、約１０００個～約５０００個又は約１０００個～約２５００個の範囲のＣＤ２５発現レベルを有するＴｒｅｇ細胞及び芽細胞を死滅させる。

【0070】

特定の細胞におけるＣＤ２５発現レベルはＣＤ２５密度とも称され、１細胞当たりのＣＤ２５分子数の尺度である。細胞におけるＣＤ２５発現レベル又は密度は、実施例に論じられるように、及び当該技術分野において知られているように、例えばフローサイトメトリーによって求めることができる。細胞当たりＣＤ２５分子約１０００個のＣＤ２５を有する細胞は、高いＣＤ２５発現を有するＴｒｅｇ細胞等の細胞と比較して、低発現ＣＤ２５細胞であると考えられる。かかる低発現ＣＤ２５細胞としてはＡＭＬ芽球が挙げられる。

【0071】

本発明の幾つかの実施形態において、抗ＣＤ２５抗体は、ＣＤ２５＋ＡＭＬ芽細胞等の低発現ＣＤ２５細胞を死滅させるのに使用される。

【0072】

幾つかの実施形態において、抗体及びＮＫ細胞を、細胞当たりＣＤ２５分子９００個～５０００個を発現する細胞と共インキュベートする場合、抗ＣＤ２５抗体は、ＮＫ細胞におけるＣＤ１６発現の減少を最大２５％誘起する。好ましくは、ＮＫ細胞はＣＤ５６ｄｉｍ ＮＫ細胞である。ＣＤ１６発現の減少は、例えば実施例に論じられる方法及び当該技術分野において知られている方法によって測定することができる。

【0073】

本発明は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）又はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）の治療に関する。好ましくは、本発明は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療に関する。急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、骨髄芽球、赤血球細胞及び血小板等の骨髄系集団の異常細胞が増殖し、これらが骨髄内で増殖して蓄積し、血液に広がる血液の癌である。ＡＭＬに関する分類スキームは、当該技術分野において知られており、例えばＡＭＬのＷＨＯ分類（２００８年）及びフランス－アメリカ－イギリスによる（ＦＡＢ）分類である。びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）はアグレッシブタイプの非ホジキンリンパ腫である。

【0074】

抗ＣＤ２５抗体は患者のＡＭＬ芽細胞を標的とするのに使用することができる。幾つかの実施形態において、治療される被験体由来の腫瘍細胞におけるＣＤ２５発現レベルは、１細胞当たりＣＤ２５分子少なくとも約９００個である。幾つかの実施形態において、治療される被験体由来の腫瘍細胞におけるＣＤ２５発現レベルは、１細胞当たりＣＤ２５分子約９００個～約５０００個の範囲である。

【0075】

本明細書で使用される場合、ＡＭＬ又はＤＬＢＣＬの「治療」、「治療する」又は「治療すること」という記述は、部分的に又は完全に、１つ以上の症状を軽減し、緩和し、回復させ、阻害し、その発生を遅延させ、その重症度を低減させ、及び／又はその発生率を低減させる物質（例えば抗ＣＤ２５抗体）の任意の投与を指す。プラスの治療効果は、例えば癌細胞の数の減少、すなわちＡＭＬ芽細胞の減少とされ得る。

【0076】

本明細書に記載される本発明の実施形態のいずれかの被験体は、好ましくは哺乳類、好ましくは、ネコ、イヌ、ウマ、ロバ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシ、ハムスター、マウス、ラット、ウサギ又はモルモットであるが、最も好ましくは、被験体はヒトである。このため、本明細書に記載される本発明の全ての態様において、被験体は好ましくはヒトである。被験体は本明細書で患者と称することもある。

【0077】

癌患者を治療するのに有効な本明細書に記載される療法の投薬レジメンは、患者の病態、年齢、及び体重、並びに被験体における抗癌応答を誘発する療法の性能等の因子に応じて変わり得る。抗ＣＤ２５抗体は治療有効量で使用され得る。本明細書で使用される場合、「治療有効量」という用語は、治療投与レジメンに従って疾患及び／又は病状に罹患しているか又はかかりやすい集団に投与される場合に、かかる疾患及び／又は病状を治療するのに十分な量（例えば、作用物質又は医薬組成物の量）を意味する。治療有効量は、疾患、障害及び／又は病状の１つ以上の症状の発生率及び／又は重症度を低減させ、その症状を安定させ及び／又はその発生を遅延させる量である。当業者は、「治療有効量」が実際には、特定の被験体において達成される治療成功を必要としないことを理解するであろう。

【0078】

適切な投薬量の選択は当業者の能力の範囲内にあるとされる。例えば、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０又は５０ｍｇ／ｋｇ。幾つかの実施形態において、かかる量は、関連する集団に投与した場合に所望又は有益な結果と相関関係にあるように決定された投与レジメン（すなわち、治療投与レジメン）に従って投与するのに適切な単位投薬量（又はその全ての部分（whole fraction thereof））である。投薬量はまた、投与経路、治療サイクル、又はその結果として、用量を増やす抗体の投与に関係する最大耐量及び用量制限毒性（もしあれば）を決定するのに使用することができる用量漸増プロトコルに対して変更してもよい。

【0079】

幾つかの実施形態において、投与レジメンは、それぞれが同じ長さの期間だけ互いに間をおく複数の用量を含む。代替的に、投与レジメンは、複数の用量、及び個々の用量の間をとる少なくとも２つの異なる期間を含む。幾つかの実施形態において、投与レジメン内の全ての用量は同じ単位投与量である。代替的に、投与レジメン内の種々の用量は異なる量のものとする。幾つかの実施形態において、投与レジメンは、第１の投与量での第１の用量、それに続く第１の投与量と異なる第２の投与量での１回以上の追加用量を含む。投与レジメンは、第１の投与量での第１の用量、それに続く第１の投与量と同じ第２の投与量での１回以上の追加用量を含んでいてもよい。幾つかの実施形態において、投与レジメンは、関連する集団にわたって投与した場合に所望又は有益な結果と相関関係にある（すなわち、治療投与レジメンである）。

【0080】

本明細書に記載される本発明の任意の態様による抗ＣＤ２５抗体は、薬学的に許容可能な担体、希釈剤又は賦形剤を付加的に含む医薬組成物の形態であってもよい。これらの組成物としては例えば、液体、半固体及び固体の投与製剤、例えば、液体溶液（例えば、注射用及び注入用溶液）、分散液若しくは懸濁液、錠剤、丸剤、又はリポソームが挙げられる。幾つかの実施形態において、好ましい形態は、意図される投与様式及び／又は治療用途に依存し得る。抗体を含有する医薬組成物は、限定するものではないが、経口、粘膜、吸入、局所、バッカル、鼻腔、直腸、又は非経口（例えば、静脈内、注入、腫瘍内、節内、皮下、腹腔内、筋肉内、皮内、経皮、又は被験体の組織の物理的な破壊を伴う他の種類の投与、及び組織の破壊を介する医薬組成物の投与）を含む当該技術分野で既知の適切な方法によって投与することができる。このような製剤は例えば、皮内、腫瘍内若しくは皮下投与、又は静脈内注入に適した注射用又は注入用溶液の形態であってもよい。投与は断続的な投与を伴うことがある。代替的に、投与は、他の化合物の投与と同時に又は他の化合物の投与の間に、少なくとも選択された期間にわたる連続投与（例えば灌流）を伴い得る。幾つかの実施形態において、抗体は、急速な放出及び／又は分解から保護する担体、例えば制御放出製剤、例えば、留置用剤（implants）、経皮パッチ、及びマイクロカプセル化送達システムを用いて調製することができる。生分解性の生体適合性ポリマーを使用することができる。

【0081】

当業者は、例えば、送達経路（例えば、経口、静脈内、皮下等）が投与量に影響を与える可能性があること、及び／又は必要な投与量が送達経路に影響を与える可能性があることを理解するであろう。例えば、特定の部位又は場所内の特に高濃度の作用物質が対象である場合、集中送達が望まれ及び／又は有用であり得る。所与の治療レジメンに関する経路及び／又は投与スケジュールを最適化する際に考慮される他の因子としては、例えば、治療される特定の癌（例えば、種類、ステージ、場所等）、被験体の臨床状態（例えば、年齢、全体的な健康状態等）、併用療法の有無、及び医療従事者に既知の他の因子が挙げられる。医薬組成物は典型的に、製造条件及び保存条件下で無菌かつ安定である必要がある。組成物は、溶液、マイクロエマルション、分散液、リポソーム、又は高い薬物濃度に適した他の規則構造として製剤化することができる。無菌の注射用溶液は、必要に応じて、必要な量の抗体を、上に列挙した成分の１つ又は組合せを含む適切な溶媒に組み込み、続いて濾過滅菌することによって調製することができる。非経口投与用の製剤としては、本明細書で論じる、懸濁液、溶液、油性又水性ビヒクル中のエマルション、ペースト、及び移植可能な徐放性又は生分解性製剤が挙げられるが、これらに限定されない。無菌の注射製剤は、非経口的に許容される非毒性の希釈剤又は溶媒を用いて調製してもよい。本発明に従って使用される各医薬組成物は、薬学的に許容可能な分散剤、湿潤剤、懸濁剤、等張剤、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、担体、賦形剤、塩又は安定化剤を含んでいてもよく、これらは、使用される投薬量及び濃度で被験体に対して非毒性である。好ましくは、このような組成物は、所与の投与方法及び／又は投与部位、例えば非経口（例えば、皮下、皮内、又は静脈内注射）、腫瘍内又は腫瘍周囲投与に適合する、癌の治療に使用される薬学的に許容可能な担体又は賦形剤を更に含み得る。本明細書で使用される場合、本明細書に開示される組成物を製剤化するのに使用される担体、希釈剤又は賦形剤に適用される「薬学的に許容可能な」という用語は、担体、希釈剤又は賦形剤が、組成物の他の成分と適合性でなければならないこと、及びそのレシピエントに対して有害でないことを意味する。

【0082】

幾つかの実施形態において、抗ＣＤ２５抗体は、他の治療薬との併用療法の一部となり得る。したがって、本発明の第２の態様は、ＡＭＬ又はＤＬＢＣＬの治療に使用される抗ＣＤ２５抗体であって、１つ以上の更なる治療薬と組み合わせて投与される、抗ＣＤ２５抗体を提供する。本発明の第３の態様は、ＡＭＬ又はＤＬＢＣＬの治療に使用される抗ＣＤ２５抗体と１つ以上の更なる治療薬との組合せを提供する。抗ＣＤ２５抗体及び更なる治療薬は、個別の投与、同時投与又は逐次投与用のものである。

【0083】

抗ＣＤ２５抗体は、共刺激抗体、化学療法及び／又は放射線療法（体の外側から照射することによる、又は放射線コンジュゲート化合物を投与することによる）、サイトカインベースの療法、標的療法、ワクチン若しくはアジュバント、又はそれらの任意の組合せと組み合わせて投与され得る。「組み合わせて」とは、抗ＣＤ２５抗体の投与前、投与と同時又は投与後の追加療法の施与を指し得る。抗ＣＤ２５抗体及び更なる治療薬は、個別の投与、同時投与又は逐次投与用のものであり得る。

【0084】

抗ＣＤ２５抗体及び他の治療薬は、同じ又は異なる送達経路を介して、及び／又は種々のスケジュールに従って投与され得る。代替的に又は付加的に、幾つかの実施形態においては、１回以上の用量の第１の活性剤が、１つ以上の他の活性剤と実質的に同時に、並びに幾つかの実施形態においては共通の経路を介して及び／又は単一組成物の一部として投与される。

【0085】

幾つかの実施形態において、他の治療薬は、１つ以上のＦＬＴ３阻害剤（例えば、ギルテリチニブ、ミドスタウリン、ソラフェニブ、キザルチニブ、クレノラニブ）、ＢＣＬ－２阻害剤（例えばベネトクラクス）、ＩＤＨ阻害剤（例えば、エナシデニブ、イボシデニブ）、低メチル化剤（例えば、アザシチジン、デシタビン）、更なる抗体（例えば、ゲムツズマブオゾガマイシン等のＣＤ３３抗体）、及びそれらの組合せから選択され得る。幾つかの実施形態において、抗ＣＤ２５抗体は、アントラサイクリン－シタラビンレジメン（ダウノルビシンとシタラビンとのレジメン等）と組み合わせて、任意に更なる治療薬と組み合わせて使用され得る。幾つかの実施形態において、抗体は、ＢＣＬ－２阻害剤及び低メチル化剤と組み合わせて使用されるものとする。幾つかの実施形態において、抗ＣＤ２５抗体は、ベネトクラクスと組み合わせて、任意にアザシチジン等の更なる治療薬と組み合わせて使用される。

【0086】

他の治療薬としては、細胞傷害性薬剤等の他の化学療法薬が挙げられるが、これらに限定されない。化学療法薬としては、アルキル化剤、アントラサイクリン、エポチロン、ニトロソウレア、エチレンイミン／メチルメラミン、スルホン酸アルキル、アルキル化剤、代謝拮抗剤、ピリミジンアナログ、エピポドフィロキシン、Ｌ－アスパラギナーゼ等の酵素；ＩＦＮα、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、Ｇ－ＣＳＦ及びＧＭ－ＣＳＦ等の生物学的反応修飾物質；シスプラチン、オキサリプラチン及びカルボプラチン等の白金配位錯体、アントラセンジオン、ヒドロキシ尿素等の置換尿素、Ｎ－メチルヒドラジン（ＭＩＨ）及びプロカルバジンを含むメチルヒドラジン誘導体、ミトタン（ｏ，ｐ’－ＤＤＤ）及びアミノグルテチミド等の副腎皮質抑制剤；副腎皮質ステロイドアンタゴニスト、例えばプレドニゾン及び等価物、デキサメタゾン及びアミノグルテチミドを含む、ホルモン及びアンタゴニスト；カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロン及び酢酸メゲストロール等のプロゲスチン；ジエチルスチルベストロール及びエチニルエストラジオール等価物等のエストロゲン；タモキシフェン等の抗エストロゲン；プロピオン酸テストステロン及びフルオキシメステロン／等価物を含むアンドロゲン；フルタミド、性腺刺激ホルモン放出ホルモンアナログ及びリュープロリド等の抗アンドロゲン；並びに、フルタミド等の非ステロイド性抗アンドロゲンが挙げられるが、これらに限定されない。

【0087】

幾つかの実施形態において、他の治療薬は免疫チェックポイント阻害剤であってもよい。幾つかの実施形態において本発明はまた、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて抗ＣＤ２５抗体によりＡＭＬを治療することを提供する。本明細書で使用される場合、「免疫チェックポイント」又は「免疫チェックポイントタンパク質」とは、免疫系における、特にＴ細胞応答の調節のための、抑制性経路に属するタンパク質を指す。正常な生理的条件下で、免疫チェックポイントは、特に病原体に対する応答中の自己免疫を防ぐために非常に重要である。癌細胞は、免疫監視を回避するために、免疫チェックポイントタンパク質の発現制御を変える可能性がある。

【0088】

免疫チェックポイントタンパク質の例は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５５、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ及びＴＩＭ３、並びにまたＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、４－１ＢＢ及びＨＶＥＭを含むが、これらに限定されない。免疫チェックポイントタンパク質は、他の免疫チェックポイントタンパク質に結合するタンパク質を指すこともある。かかるタンパク質としては、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＨＶＥＭ、ＬＬＴ１、及びＧＡＬ９が挙げられる。免疫チェックポイント阻害剤は、免疫チェックポイントタンパク質を阻害し得る。例えば、該免疫チェックポイント阻害剤は、免疫チェックポイント阻害剤に特異的に結合する抗体であってもよく、又は該免疫チェックポイントタンパク質の他のアンタゴニストであってもよい。

【0089】

本発明の幾つかの実施形態において、免疫チェックポイントタンパク質はＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１であり、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１の阻害剤、すなわちＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１のアンタゴニストであってもよい。更なる実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体を介してＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用を妨害する。当該技術分野で既知の抗ＰＤ－１抗体としては、ニボルマブ及びペムブロリズマブが挙げられる。抗ＰＤ－Ｌ１抗体としては、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）等の抗体が挙げられる。

【0090】

幾つかの実施形態において、他の治療薬は癌ワクチンであってもよい。本発明の更なる実施形態は、癌ワクチンと組み合わせて抗ＣＤ２５抗体によりＡＭＬを治療することを提供する。本明細書で使用される「癌ワクチン」とは、癌患者に投与され、患者自身の免疫応答を強化することによって癌細胞を根絶するように設計された治療用癌ワクチンを指す。癌ワクチンとしては、腫瘍細胞ワクチン（自家及び同種）、樹状細胞ワクチン（ｅｘ ｖｉｖｏで生成及びペプチド活性化）、タンパク質／ペプチドベースの癌ワクチン及び遺伝子ワクチン（ＤＮＡ、ＲＮＡ及びウイルスベースのワクチン）が挙げられる。したがって、治療用癌ワクチンは原則として、手術、放射線療法及び化学療法等の従来の治療法に抵抗性である進行癌及び／又は再発腫瘍の更なる増殖を阻害するのに利用され得る。腫瘍細胞ベースのワクチン（自家及び同種）としては、可溶性免疫刺激剤、例えば、サイトカイン（ＩＬ－２、ＩＦＮ－ｇ、ＩＬ１２、ＧＭＣＳＦ、ＦＬＴ３Ｌ）、免疫調節受容体（ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、４－１ＢＢ）に対する単鎖Ｆｖ抗体を分泌するように、及び／又は、免疫刺激受容体のリガンド、例えばとりわけＩＣＯＳ－リガンド、４－１ＢＢリガンド、ＧＩＴＲ－リガンド及び／又はＯＸ４０リガンドを細胞膜上に発現させるように、遺伝子改変されたワクチンが挙げられる。幾つかの実施形態において、癌ワクチンはＧＶＡＸ抗腫瘍ワクチンであってもよい。

【0091】

幾つかの実施形態において、併用療法は、抗ＣＤ２５抗体と組み合わせた癌ワクチンの投与を含まない。

【0092】

幾つかの実施形態において、抗ＣＤ２５抗体は別の治療薬にコンジュゲートしない、例えば抗ＣＤ２５抗体は、抗体－薬物コンジュゲートの形態をとらない。幾つかの実施形態において、抗ＣＤ２５抗体はカミダンルマブテシリン（ＡＤＣＴ－３０１）でない。カミダンルマブテシリンは、ジペプチド切断可能なリンカーを介してピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）二量体にコンジュゲートした、ＨｕＭａｘ（商標）－ＴＡＣとして知られる抗ＣＤ２５抗体である。

【0093】

本発明の幾つかの実施形態において、抗ＣＤ２５抗体は単剤療法として投与される。例えば、抗ＣＤ２５抗体が単剤療法として投与される場合、抗ＣＤ２５抗体は投与される唯一の治療活性剤であり、例えばＡＭＬ又はＤＬＢＣＬを治療するために投与される唯一の治療活性剤である。

【0094】

本発明の第４の態様は、被験体においてＡＭＬ又はＤＬＢＣＬを治療する方法であって、該被験体に有効量の抗ＣＤ２５抗体を投与することを含む、方法を提供する。

【0095】

本発明の第５の態様は、ＡＭＬ又はＤＬＢＣＬの治療用の薬剤の製造における抗ＣＤ２５抗体の使用を提供する。本発明のこれらの更なる態様にかかる抗ＣＤ２５抗体は、第１の態様について記載した抗ＣＤ２５抗体とすることができる。

【0096】

ＡＭＬを治療する方法は、１つ以上の更なる治療薬の投与を更に含み得る。幾つかの実施形態において、方法は、上記のように、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤、癌ワクチン、ＦＬＴ３阻害剤、ＢＣＬ－２阻害剤、ＩＤＨ阻害剤、低メチル化剤、更なる抗体、及びそれらの組合せを投与すること、又はアントラサイクリン－シタラビンレジメンと組み合わせて投与することを更に含む。更なる治療薬は、個別に、同時に又は逐次的に投与され得る。

【0097】

本発明の第６の態様は、ＡＭＬ又はＤＬＢＣＬの治療用の薬剤の製造における抗ＣＤ２５抗体と更なる治療薬との使用を提供し、抗ＣＤ２５抗体及び更なる治療薬は、個別の投与、同時投与又は逐次投与用のものである。

【0098】

本発明の第４、第５及び第６の態様にかかる更なる治療薬は、本発明の第１、第２及び第３の態様について定義することができる。

【0099】

本発明はまた、抗ＣＤ２５抗体による治療のために急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を患う患者を選択することに関する。本発明の第７の態様は、抗ＣＤ２５抗体で治療するＡＭＬを患う患者を選択する方法であって、該患者からの試料中の標的細胞におけるＣＤ２５発現レベルを測定することを含み、該細胞が１細胞当たりＣＤ２５分子約９００個を超える発現レベルを有する場合、該患者が抗体による治療に適している、方法を提供する。

【0100】

方法は、患者が抗ＣＤ２５抗体による治療に適しているかどうかを確認するのに使用することができる。患者由来の標的細胞が、１細胞当たりＣＤ２５分子約９００個を超える、好ましくは１０００個を超える発現レベルを有する場合、その患者は抗ＣＤ２５抗体による治療に適しているとされる。次いで、方法は、抗ＣＤ２５抗体を患者に投与する工程を更に含み得る。

【0101】

方法は、機能的なＦｃＲ＋エフェクター細胞が試料中に存在するかどうかを確認する工程を更に含み得る。

【0102】

方法は、被験体から試料を採取することを更に含み得る。試料は、被験体からの生体組織又は体液試料であってもよい。幾つかの実施形態において、試料は患者からの骨髄試料である。

【0103】

標的細胞におけるＣＤ２５発現レベルは、例えば実施例で論じるフローサイトメトリーを含む、当該技術分野で既知の方法によって測定することができる。

【0104】

ＦＬＴ３遺伝子内縦列重複（ＦＬＴ３－ＩＴＤ）突然変異を有するＡＭＬ患者は、予後不良、及び再発リスクの増加に関連する（Dohner et al, 2017, Blood 129(4) 424-447）。ＦＬＴ－ＩＴＤ突然変異は、ＦＬＴ３の膜近傍ドメイン内の少なくとも３～１０００より多いヌクレオチドの縦列重複を伴う。本発明者らは驚くべきことに、野生型のＦＬＴ３と比較してＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異を有するＡＭＬ患者は、高い有病率のＣＤ２５発現ＡＭＬ細胞を示すことを更に見出した。したがって、ＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異を有する患者は、抗ＣＤ２５抗体療法の対象となり得る。また、ＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異の存在をバイオマーカーとして使用することで、ＡＭＬ患者が抗ＣＤ２５抗体療法単独で、又はＡＭＬを治療する他の治療薬と組み合わせて利益を受けるかどうかを特定、診断及び／又は予測することができる。

【0105】

したがって、本発明の第８の態様は、抗ＣＤ２５抗体で治療する急性骨髄性白血病を患う患者を選択する方法であって、該患者からの試料中のＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異の有無を判定することを含み、該突然変異が該試料中に存在する場合、該患者が抗体による治療に適している、方法を含む。方法は、患者が抗ＣＤ２５抗体療法に特に適しているかどうかを特定するのに使用することができる。

【0106】

患者がＦＬＴ３－ＩＲＤ突然変異を有すると判定される場合、方法は、抗ＣＤ２５抗体を患者に投与することを更に含み得る。抗ＣＤ２５抗体は、本発明の他の態様について上記で定義した通りとし得る。

【0107】

本発明の第９の態様は、抗ＣＤ２５抗体による治療に対するＡＭＬ患者の応答を予測する方法であって、該患者からの試料中のＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異の有無を判定することを含み、該試料中の該突然変異の存在が、抗ＣＤ２５抗体による治療に応答するとされる患者であることを指し示す、方法を提供する。

【0108】

本発明の第１０の態様は、被験体における急性骨髄性白血病を治療する方法であって、該被験体に有効量の抗ＣＤ２５抗体を投与することを含み、被験体がＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異の存在を含む、方法を提供する。方法は、ＡＭＬを患う患者からの試料中のＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異の存在を判定することを更に含むことができる。

【0109】

患者がＡＭＬと診断される場合、患者は、ＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異を有することを特徴とするＡＭＬと診断され得る。Dohner et al, 2017, Blood 129(4) 424-447。患者がＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異の存在を特徴とするＡＭＬと診断される場合、本明細書に記載の抗ＣＤ２５抗体はＡＭＬの治療に特に有用とされ得る。

【0110】

ＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異の有無は、当該技術分野で既知の方法によって判定することができる。例えば、Spencer DH et al, 2013 Journal Molecular Diagnostics, vol. 15(1), 81-83、Engen C et al, 2021, Molecular Oncology, vol. 15, 2300-2317を参照されたい。例えば、突然変異の有無は、ＤＮＡシークエンシング及び突然変異スクリーニング技術の群から選択される方法によって判定され得る。

【0111】

試料は、患者からの血液試料又は骨髄試料であり得る。幾つかの実施形態において、予測又は選択する方法はｉｎ ｖｉｔｒｏ法である。

【0112】

本発明の第１１の態様は、ＡＭＬ患者における再発を予防する又はそのリスクを軽減する方法であって、抗ＣＤ２５抗体を該患者に投与することを含む、方法を提供する。抗ＣＤ２５抗体は、本発明の他の態様について上記で定義した通りとし得る。

【0113】

抗ＣＤ２５抗体は、ＬＳＣ（白血病幹細胞）及び／又は未熟なＡＭＬ芽球、又は前駆表現型を有する細胞を標的として、再発の予防又はそのリスクの軽減を助けることができる。

【0114】

方法は、１つ以上の更なる治療薬を投与することを更に含むことができる。１つ以上の更なる治療薬は、本発明の第１、第２及び第３の態様について定義した通りとし得る。一実施形態において、更なる治療薬はＦＬＴ３阻害剤である。更なる実施形態において、１つ以上の更なる治療薬は、ＢＣＬ－２阻害剤と低メチル化剤との組合せ、例えばベネトクラクスとアザシチジンとの組合せである。抗ＣＤ２５抗体及び更なる治療薬は、個別の投与、同時投与又は逐次投与用のものとし得る。

【0115】

本発明の第１２の態様は、ＢＣＬ－２阻害剤と低メチル化剤との併用治療を受けた患者におけるＡＭＬを治療する方法であって、抗ＣＤ２５抗体を該患者に投与することを含む、方法を含む。抗ＣＤ２５抗体は上記の通りとし得る。一実施形態において、ＢＣＬ－２阻害剤と低メチル化剤との併用治療は、ベネトクラクス－アザシチジンの組合せを含む。

【0116】

本発明者らは、ＢＣＬ－２阻害剤及び低メチル化剤、例えばベネトクラクスとアザシチジンとの組合せで治療したＡＭＬ患者が依然として、検出可能なレベルのＣＤ２５＋ＡＭＬ細胞を示すことを見出した。したがって、個別の投与、同時投与又は逐次投与により抗ＣＤ２５抗体でＡＭＬ患者を更に治療することによって、再発及び疾患の進行を防ぐのに役立ち得る。

【0117】

本発明はまた、本発明の上記の更なる態様の方法に使用される抗ＣＤ２５抗体を提供する。

【0118】

「含む（comprising）」という用語を用いて本明細書において記載される態様及び実施形態は、その範囲内の他の特徴又は工程を含み得る。「含む（comprising）」と記載された態様及び実施形態は、「含む（comprising）」という用語が「～から本質的になる（consisting essentially of）」又は「～からなる（consisting of）」という用語に置き換えられた態様及び実施形態も記載していることも理解される。

【0119】

「～を含む群から選択される（selected from the group comprising）」という語句は、これらが本明細書において存在する場合は、「～からなる群から選択される（selected from the group consisting of）」という語句で置き換えることができ、その逆もまた同様である。

【0120】

また、本願は、文脈上別段の要求がない限り、上記の態様及び上記の実施形態のいずれかの全ての互いの組合せを開示していることも理解される。同様に、本願は、文脈上別段の要求がない限り、好ましい特徴及び／又は任意の特徴の全ての組合せを単独で又は他の態様のいずれかと一緒に開示している。

【0121】

ここで、本発明を、以下の実施例によって、図面を参照して更に説明するが、これらの実施例は、当業者が本発明を実施するのを助けることに役立てることを意図しており、本発明の範囲を限定することを意図するものでは決してない。

【実施例】

【0122】

実施例１
細胞及び抗体
樹立された大細胞型Ｂ細胞リンパ腫浮遊細胞株であるＰｆｅｉｆｆｅｒ腫瘍細胞（ＡＴＣＣ）を、２０％ＦＢＳ（Gibco）、１×Ｇｌｕｔａｍａｘ（Gibco）、１×非必須アミノ酸（Gibco）及び１％ピルビン酸ナトリウム（Gibco）を含有するＲＰＭＩ １６４０培地（Gibco）中で培養した。樹立された急性骨髄性白血病浮遊細胞株であるＥＯＬ－１腫瘍細胞（DSMZ）は、１０％ＦＢＳ（Gibco）、１×Ｇｌｕｔａｍａｘ（Gibco）、１×非必須アミノ酸（Gibco）及び１％ピルビン酸ナトリウム（Gibco）を含有するＲＰＭＩ １６４０培地（Gibco）中で培養した。

【0123】

ＡＭＬ２２細胞はＡＭＬ患者に由来し、ＮＳＧマウスへの移植によって増殖させた。これらの患者由来の細胞はｉｎ ｖｉｔｒｏで培養することができないため、解凍して、アッセイ当日に直接使用した。

【0124】

ｉｎ ｖｉｔｒｏ誘導Ｔｒｅｇ（ｉＴｒｅｇ）細胞は、ｉＴｒｅｇ培地中、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ Ｈｕｍａｎ Ｔ－Ａｃｔｉｖａｔｏｒ ＣＤ３／ＣＤ２８（１×１０^６ビーズ／ｍＬ、ビーズ対細胞比１：１、Gibco）で１０日間活性化することによってナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞から分化し、該ｉＴｒｅｇ培地は、１０％熱不活化ヒトＡＢ血清（Sigma）、１×Ｇｌｕｔａｍａｘ（Gibco）、Ｎ－アセチルシステイン（２ｍｇ／ｍＬ、Sigma）、１％ピルビン酸ナトリウム（Gibco）、１×ＨＥＰＥＳ（Gibco）、１×非必須アミノ酸（Gibco）、５０μＭ ２－メルカプトエタノール（Thermo Fisher Scientific）、プロロイキン／アルデスロイキン（３００Ｕ／ｍＬ、Novartis）、１０ｎｇ／ｍＬ組換えヒト形質転換増殖因子－β１（R&D Systems）及び１００ｎｇ／ｍＬラパマイシン（Sigma）を添加したＸ－Ｖｉｖｏ １５（Lonza）からなるものとした。ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞は、ヒトナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞分離キットＩＩ（Miltenyi Biotec）を用いてヒトＰＢＭＣから分離した。ｉＴｒｅｇの純度は、ヒトＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ２５及びＦｏｘＰ３共発現（９０％超）のフローサイトメトリー解析によって確認した。凍結保存したｉＴｒｅｇを解凍し、アッセイ当日に直接使用した。

【0125】

ＲＧ６２９２とも称されるＣＤ２５ Ｍａｂは、ＧｌｙｍａｘＸ技術を用いて産生された脱フコシル化ヒトＩｇＧ１ ｍＡｂであり、ＣＤ２５発現標的細胞のＡＤＣＣの能力を強化する。ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体はBiolegendから購入した。

【0126】

ヒトＰＢＭＣ及びＮＫ細胞の分離
健康なドナー由来のヒトＰＢＭＣを、Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ－１０７７（Sigma-Aldrich）上で標準的な密度勾配分離を用いて、バフィーコート（ヘルシンキ宣言に従ってチューリッヒ献血センター）から分離した。ＮＫ細胞は、ヒトＮＫ細胞分離キット（Miltenyi Biotec）を用いて分離し、１０％ＦｃＳ（Gibco）、１×Ｇｌｕｔａｍａｘ（Gibco）及びプロロイキン／アルデスロイキン（１００Ｕ／ｍＬ、Novartis）を含有するＲＰＭＩ １６４０培地（Gibco）中で一晩活性化した。

【0127】

フローサイトメトリーの読み取りによるＡＤＣＣアッセイ
標的細胞（Ｐｆｅｉｆｆｅｒ、ＥＯＬ－１、ＡＭＬ２２、ｉＴｒｅｇ）を、アッセイ培地（２％ＦＢＳ（Gibco）及び１×Ｇｌｕｔａｍａｘ（Gibco）を含有するＲＰＭＩ １６４０（Gibco））中、２：１のエフェクター対標的細胞比（１ウェル当たりＮＫ細胞８００００個及び標的細胞４００００個）で活性化初代ＮＫ細胞と混合させた。化合物（ＣＤ２５ Ｍａｂ又はアイソタイプ対照抗体）を、開始最終濃度２１μｇ／ｍＬの７倍希釈系列でＵ底９６ウェルプレート（ＴＰＰ）に添加した。アッセイプレートをオービタルシェーカー上に３００ｒｐｍで５分間置き、細胞と抗体とを混合させた。室温で１５分間プレインキュベートした後、プレートを３７℃／５％ＣＯ_２で１７時間インキュベートした。

【0128】

細胞を、ＰＢＳ（BD）で希釈したＦＳＶ４４０ＵＶ生存率色素で室温において１０分間染色した。細胞をＦＡＣＳバッファー（０．１％ＢＳＡを含有するＰＢＳ）で洗浄し、ヒトＣＤ１６（３Ｇ８）、ＣＤ４５（ＨＩ３０）、ＣＤ３４（８Ｇ１２）、ＣＤ５６（５．１Ｈ１１）、ＣＤ３（ＵＣＨＴ１）、ＣＤ２０（２Ｈ７）、ＣＤ１１７（ＹＢ５．Ｂ８）、ＣＤ２５（２４２１２）、ＣＤ１２３（９Ｆ５）、ＣＤ６９（ＦＮ５０）、ＣＤ４（Ａ１６１Ａ１）、ＣＤ１２７（Ａ０１９Ｄ５）に対する蛍光色素コンジュゲート抗体で、ＦＡＣＳバッファー中、４℃で３０分間染色した。ＦＡＣＳバッファーによる２回の洗浄工程を行った後、ＦｏｘＰ３転写因子染色セット（eBioscience）を用いて室温で６０分間、細胞を固定して透過処理を行った。核内染色については、続いて細胞を、ヒトＦｏｘＰ３（２５９Ｄ）、Ｂｃｌ－２（Ｂｃｌ－２／１００）及びＫｉ－６７（Ｋｉ６７）に対して１×ＰＥＲＭバッファー中、室温で４５分間染色した。試料を１×ＰＥＲＭバッファーで２回洗浄し、取得のためにＦＡＣＳバッファーに再懸濁した。フローサイトメトリーに使用した抗体は全て、Biolegend、BD又はR&D Systemsからのものとした。

【0129】

サンプルは５レーザーＡ５ Ｓｙｍｐｈｏｎｙ機器（BD）で取得した。データ解析はＦｌｏｗＪｏ ｖ１０．６．２及びＰｒｉｓｍ ８（GraphPad software）により実施した。

【0130】

発光の読み取りによるＡＤＣＣアッセイ
標的細胞（Ｐｆｅｉｆｆｅｒ、ＥＯＬ－１、ＡＭＬ２２）を、アッセイ培地（２％ＦＢＳ（Gibco）及び１×Ｇｌｕｔａｍａｘ（Gibco）を含有するＲＰＭＩ １６４０（Gibco））中、２：１のエフェクター対標的細胞比（１ウェル当たりＮＫ細胞２００００個及び標的細胞１００００個）で活性化初代ＮＫ細胞と混合させた。化合物（ＣＤ２５ Ｍａｂ又はアイソタイプ対照抗体）を、開始最終濃度２１μｇ／ｍＬの７倍希釈系列で白色３８４ウェル平底組織培養プレート（Falcon）に添加した。アッセイプレートをオービタルシェーカー上に３００ｒｐｍで５分間置き、細胞と抗体とを混合させた。室温で１５分間プレインキュベートした後、プレートを３７℃／５％ＣＯ_２で１６～２０時間インキュベートした。

【0131】

アッセイプレートは、蓋をせずに室温でおよそ１５分間平衡化した。細胞傷害性は、ＣｙｔｏＴｏｘ－Ｇｌｏ（商標）細胞傷害アッセイ（Promega）を製造業者の指示通りに用いて測定した。簡潔に言うと、再構成したＡＡＦ－Ｇｌｏ（商標）試薬を１倍～４倍希釈で各ウェルに添加した（最終容量４０μｌ／ウェル）。アッセイプレートは室温で１５分～６０分間インキュベートし、続いてTecanのＳｐａｒｋ １０Ｍ発光プレートリーダーを用いて発光測定を行った（５００ｍｓの積分時間）。データ解析はＰｒｉｓｍ ８（GraphPad software）により実施した。

【0132】

フローサイトメトリーによるＣＤ２５密度の定量化
ＢＤ ｑｕａｎｔｉｂｒｉｔｅ（商標）ビーズを使用して、ＰＥ：ｍＡｂ比が１：１であれば、１細胞当たりのＰＥ分子数に相当する、１細胞当たりに結合する抗体（ＡＢＣ）を推定した。ＰＥコンジュゲート抗ヒトＣＤ２５抗体の一価結合が想定される場合、ＣＤ２５分子数は細胞表面上のＰＥ分子数と等価である。

【0133】

細胞アッセイ試料及びビーズは、５レーザーＳｙｍｐｈｏｎｙ機器（BD）の同様の機器設定により取得した。フローサイトメトリーデータの解析は、ＦｌｏｗＪｏ ｖ１０．６（Tree Star）及びＰｒｉｓｍ ８（GraphPad software）において実施した。Ｌｏｇ１０ 蛍光に対する１ビーズ当たりのＬｏｇ１０ ＰＥ分子の線形回帰、及び１細胞当たりのＰＥ分子数の内挿は、製造業者の指示通りに求めた。

【0134】

ＣＤ２５密度は４つのＣＤ２５発現標的細胞で定量化した。

【0135】

結果
ＣＤ２５発現レベルが低いＡＭＬ細胞を死滅させるＣＤ２５ Ｍａｂの能力を評価するために、様々なＣＤ２５発現レベルを有する標的細胞と比較する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）アッセイを実施した。ＣＤ２５密度（１細胞当たりの分子数）は、ＢＤ ｑｕａｎｔｉｂｒｉｔｅ（商標）ビーズを用いて定量化した。抗体の一価結合が想定される場合、ＣＤ２５分子数は細胞表面上のＰＥ分子数と等価である。

【0136】

図１に示すように、ｉＴｒｅｇ及びＤＬＢＣＬ細胞株Ｐｆｅｉｆｆｅｒは、比較的高いレベルのＣＤ２５を発現するが、ＡＭＬ細胞株ＥＯＬ－１及び患者由来のＡＭＬ２２細胞は、それらの表面上に少数のＣＤ２５受容体しか保持しない。これらの結果は、ＡＤＣＣアッセイ培地中、標的細胞単独でインキュベートして１７時間後に得られた。

【0137】

ＣＤ２５ Ｍａｂは、結合活性によりＣＤ２５に結合するという特徴があり、その結果、ＣＤ２５発現レベルが高い細胞の死滅を優先的に引き起こすという事実にもかかわらず（非特許文献３）、ＥＯＬ－１及びＡＭＬ－２２を標的細胞とするＣＤ２５ ＭａｂのＡＤＣＣ能力は、ＣＤ２５高標的細胞のものと同等であった。ＣＤ２５ Ｍａｂと共インキュベートして１７時間後に、８０％より多くの標的細胞がＮＫ細胞によって死滅した（図２のＡ）のに対し、アイソタイプ対照抗体では特異的な死滅が観察されなかった。最も高いアイソタイプ対照抗体濃度（２１μｇ／ｍＬ）で観察されたＥＯＬ－１細胞株の死滅の増加は、おそらく非特異的活性に起因すると考えられる。試験した２つの細胞株に関するＥＣ５０値は類似していたが（約０．０３μｇ／ｍＬ）、化合物の非存在下でのベースラインの死滅は異なっていた。事実、ＥＯＬ－１細胞の２０％と比較して、ＡＭＬ－２２の４０％～５０％が活性化ＮＫ細胞によって死滅した。ＡＭＬ－２２細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで培養すると生存率が急激に低下する初代細胞であり、本発明者らは、ＡＭＬ－２２細胞が、ＮＫ細胞を介した死滅を受けやすくする分子を発現し得ると仮定している。

【0138】

１７時間のＡＤＣＣアッセイ終了時に生存していた標的細胞上のＣＤ２５密度（図２のＢ）も評価した。０．４μｇ／ｍＬを超えるＣＤ２５ Ｍａｂ濃度では、標的細胞が、１細胞当たりＣＤ２５分子１０００個～１５００個を発現することが見出された。その上、１細胞当たりそれぞれ受容体約８００個及び４００個のＣＤ２５発現レベルを有する末梢及び腫瘍内のヒトにおける従来のＣＤ４及びＣＤ８ Ｔ細胞は、ＣＤ２５ Ｍａｂによる枯渇の標的ではないようである（データは示さず）。したがって、これは、ＣＤ２５ Ｍａｂによる死滅を引き起こすのに必要とされる、標的細胞におけるＣＤ２５の発現の閾値が、１細胞当たり受容体およそ１０００個である可能性が高いことを指し示している。初代ヒトＡＭＬ骨髄試料（ＣＤ２５＋ＡＭＬ芽球及びＴｒｅｇ）中のＣＤ２５密度は１０００～４０００であるため（データは示さず）、これらの細胞の枯渇が見られると予想される。

【0139】

ＣＤ５６ｄｉｍ ＮＫ細胞上に発現するＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６）受容体への抗体Ｆｃ部分の結合によるターゲットエンゲージメント（target engagement）後のＮＫ細胞における機能性マーカーの発現を調査した。ＮＫ細胞のこのサブセットは、ヒト末梢血中で最も一般的な集団（ＮＫ細胞の９０％）を表し、ＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔＣＤ１６ｎｅｇ ＮＫ細胞サブセットとは対照的に、強力なＡＤＣＣメディエーターである。

【0140】

低ＣＤ２５密度のＥＯＬ－１及びＡＭＬ－２２標的細胞との結合後のＮＫ細胞では、ＣＤ１６の適度なダウンレギュレーションが観察された（図３のＡ）。対照的に、ＣＤ１６発現は、エフェクター細胞を高ＣＤ２５密度のＰｆｅｉｆｆｅｒ及びｉＴｒｅｇ標的細胞と共インキュベートした後、ＣＤ２５ Ｍａｂ用量依存的に大きく減少した（図３のＢ）。したがって、結果は、ＣＤ１６のダウンレギュレーションの強さが、標的細胞上のＣＤ２５密度と相関関係にあることを指し示している。

【0141】

加えて、ＮＫ細胞の機能性は、活性化マーカーＣＤ６９及びＣＤ２５のアップレギュレーションによって測定することができる。ＣＤ６９の発現は、試験した全ての標的細胞においてＣＤ２５ Ｍａｂによる処理後に用量依存性的に増加した。ＡＭＬ２２標的細胞の高いベースラインの死滅の観察と同様に、ＣＤ６９のベースライン発現も増加した。事実、薬物化合物の非存在下でＡＭＬ２２と共インキュベートした場合、ＮＫ細胞の４５％～６０％がＣＤ６９を発現した（図４のＡ）。まとめると、これらの結果は、ＡＭＬ２２標的細胞が受容体を発現するか、又は強いＮＫ細胞ベースライン活性化レベルを誘導する因子を分泌することを示唆している。他方、他の３つの標的細胞と接触させた場合、ベースラインでＮＫ細胞の２０％のみがＣＤ６９を発現し、ＣＤ２５ Ｍａｂによる処理後、発現は最大８０％まで増加した（図４のＢ）。

【0142】

ＮＫ細胞におけるＣＤ２５のアップレギュレーションも観察したところ、アップレギュレーションの強さは、標的細胞上のＣＤ２５密度に比例した。図５のＡに示すように、低密度のＣＤ２５＋標的細胞（ＡＭＬ２２及びＥＯＬ－１）と共インキュベートしたＮＫ細胞のＣＤ２５の発現は、緩やかな２０％の増大を示した。対照的に、ＣＤ２５ Ｍａｂで処理したＮＫ細胞の最大６０％が、高ＣＤ２５密度の標的細胞に曝した場合にＣＤ２５を発現した（図５のＢ）。注目すべきことに、ＣＤ２５の発現の増加にもかかわらず、ＮＫ細胞は影響を受けず、フラトリサイド（fratricide）の兆候がないことを指し示している（データは示さず）。

【0143】

フローサイトメトリーによって得られた結果の信頼性を高めるために、４人のＮＫ細胞ドナー及び発光の読み取り値を使用してＡＤＣＣアッセイを実施した（ＣｙｔｏＴｏｘ－Ｇｌｏ（商標）細胞傷害アッセイ）。図６のＡに示すように、３つの標的細胞（ＡＭＬ２２、Ｐｆｅｉｆｆｅｒ、ＥＯＬ－１）で一貫した同等の死滅活性が観察された。用量－応答曲線から算出したＥＣ５０値は、フローサイトメトリーベースのＡＤＣＣ読み取り値と発光ベースのＡＤＣＣ読み取り値との間で同様の結果が得られたことを実証した。例えば、ＥＯＬ－１標的細胞のＥＣ５０値は、ＣｙｔｏＴｏｘ－Ｇｌｏ（商標）を使用すると０．０３５μｇ／ｍＬ（±０．０１１ ＳＥＭ）、フローサイトメトリーによれば０．０３０（±０．００７ ＳＥＭ）μｇ／ｍＬであった（図６のＢ）。ＣＤ２５ Ｍａｂは、１ウェル当たり受容体１５００個～３８０００個の範囲をとるＣＤ２５密度で標的細胞全体にわたって強力な死滅活性を実証した（図６のＣ）。ヒト試料中のＣＤ２５密度はこの発現範囲内にあるため（データは示さず）、本発明者らは、機能的なＦｃＲ＋エフェクター細胞が存在する限り、ヒトＰＢＭＣ並びにＡＭＬ患者及びＤＬＢＣＬ患者の腫瘍における標的細胞の効率的な死滅を期待している。

【0144】

これらの実験は、ＣＤ２５＋ＡＭＬ細胞及びＤＬＢＣＬ細胞の直接的な死滅を示している。抗体は、広範囲のＣＤ２５発現レベルでＣＤ２５＋悪性細胞を枯渇させることができた。ヒト試料中における発現レベルはこの範囲内にあり、Ｔｒｅｇの枯渇によるＣＤ２５ Ｍａｂの間接的な効果が既に実証されているため、本発明者らは、ＣＤ２５ Ｍａｂの二重の作用機序がＡＭＬ及びＤＬＢＣＬの治療に関与すると予想している。ＣＤ２５ Ｍａｂは抑制性Ｔｒｅｇを枯渇させ、ＡＭＬ及びＤＬＢＣＬのＣＤ２５＋悪性細胞に対して直接的な細胞傷害性効果を有し得る。

【0145】

実施例２
一次ヒト試料
ＡＭＬ患者のヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及び骨髄単核細胞（ＢＭＭＣ）は、Discovery Life Sciencesから購入した。試料は、適切な治験審査委員会（ＩＲＢ）又は倫理委員会の承認の下で収集した。標準的な密度勾配遠心分離を使用して、健康なドナー（ＨＤ）のＰＢＭＣをバフィーコート（チューリッヒ献血センター）から分離した。全てのヒト試料は、ヘルシンキ宣言に従って、ＨＤ又は書面によるインフォームドコンセントを提供した患者から収集した。

【0146】

ＮＫ細胞の分離
ＮＫ細胞は、ヒトＮＫ細胞分離キット（Miltenyi Biotec）を用いて分離し、１０％ＦｃＳ（Gibco）、１×Ｇｌｕｔａｍａｘ（Gibco）及びプロロイキン／アルデスロイキン（１００Ｕ／ｍＬ、Novartis）を含有するＲＰＭＩ １６４０培地（Gibco）中で一晩活性化した。

【0147】

ＡＤＣＣアッセイ
ＣＤ２５発現標的細胞を含有するＥＯＬ－１陽性対照細胞株又はＡＭＬ患者試料を、活性化初代ＮＫ細胞と、アッセイ培地（２％ＦＢＳ（Gibco）及び１×Ｇｌｕｔａｍａｘ（Gibco）を含有するＲＰＭＩ １６４０（Gibco））中、２対１のエフェクター対標的細胞比（１ウェル当たりＮＫ細胞８００００個及び標的細胞４００００個）で混合させた。化合物（ＣＤ２５ Ｍａｂ（ＲＧ６２９２）又はアイソタイプ対照抗体（ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体、Biolegend、ＱＡ１６Ａ１２））を、１０μｇ／ｍＬの濃度でＵ底９６ウェルプレート（ＴＰＰ）に添加した。アッセイプレートをオービタルシェーカー上に３００ｒｐｍで５分間置き、細胞と抗体とを混合させた。室温で１５分間プレインキュベートした後、試料を３７℃／５％ＣＯ_２で２０時間インキュベートした。フローサイトメトリーの読み取りは、以下のセクションで記載するように実施した。Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｃｏｕｎｔ Ｂｅａｄｓ（商標）（Biolegend）をサンプルの取得前に添加し、同種異系エフェクターＮＫ細胞及び化合物の非存在下における標的細胞の数に対して正規化した絶対数（細胞数／μｌ）に基づいて死滅活性を算出した。

【0148】

結果
ＥＯＬ－１細胞株及びＡＭＬ２２細胞に対するＣＤ２５ Ｍａｂの細胞傷害性を実証したので（実施例１）、本発明者らは、ＡＭＬ患者材料を用いたその機能活性を評価しようと努めた。この目的のために、本発明者らは、ＣＤ２５＋ＡＭＬ細胞の度数が最も高い４人の患者を選択し、ｅｘ ｖｉｖｏ ＡＤＣＣアッセイを実施した。本発明者らは、飽和抗体濃度で全ての試料においてＣＤ２５＋ＡＭＬ細胞を特異的に死滅させることを示した（図７の（Ａ））。その上、本発明者らは、同じ実験構成でＴｒｅｇの死滅を評価したところ、ＡＭＬ及びＨＤ Ｔｒｅｇの両方がＣＤ２５ Ｍａｂ処理により効率的に枯渇することを見出した（図７の（Ｂ））。まとめると、これらの結果は、ＨＤ ＮＫ細胞を使用したＡＭＬ患者試料におけるＣＤ２５ Ｍａｂの二重の作用機序の概念実証を提示している。

【0149】

実施例３
フローサイトメトリーパネルの設計、染色及び取得
本発明者らは、パネル設計及び最適な検証について最近のガイドライン（Liechti et al., 2021, Nat Immunol 22, 1190-1197）に従って進行した。注目すべきことに、全ての抗体を滴定し、蛍光マイナスワン（ＦＭＯ）対照及び生体対照（１つ又は一連のマーカーを欠く細胞集団）の組合せを利用してパネルを検証した。

【0150】

凍結保存したＡＭＬ患者及びＨＤ試料を、１０％ＦＢＳ（Gibco）を含有するＤＭＥＭ／Ｆ－１２培地（Gibco）中で解凍した。細胞をＨｕｍａｎ ＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（Biolegend）とともにインキュベートし、ＰＢＳで希釈したＺｏｍｂｉｅ ＮＩＲ（Biolegend）生存率色素で染色した。次に、ＦＡＣＳバッファー（０．１％ＢＳＡを含有するＰＢＳ）及びＢｒｉｌｌｉａｎｔ Ｓｔａｉｎバッファー（BD）を含有する染色バッファー中、表面抗原（ＨＬＡ－ＤＲ（Ｇ４６－６）、ＣＤ１６（３Ｇ８）、ＣＤ４５（ＨＩ３０）、ＣＤ３３（Ｐ６７．６）、ＣＤ４５ＲＡ（ＨＩ１００）、ＣＤ３４（８Ｇ１２）、ＣＤ５６（５．１Ｈ１１）、ＣＤ３（ＵＣＨＴ１）、ＣＤ１９（ＨＩＢ１９）、ＣＤ１１７（ＹＢ５．Ｂ８）、ＣＤ２５（２４２１２）、ＣＤ１２３（９Ｆ５）、ＣＤ６９（ＦＮ５０）、ＣＤ４（Ａ１６１Ａ１）、ＣＤ８ａ（ＲＰＡ－Ｔ８）、ＣＤ７１（Ｍ－Ａ７１２）、ＣＤ１２７（Ａ０１９Ｄ５）、ＣＤ１４、ＣＤ３８（ＨＩＴ２）、ＣＤ２３５Ａ（ＨＩＲ２）、ＣＬＥＣ１２Ａ（５０Ｃ１）、ＰＤ－１（ＥＨ１２．１）、ＴＩＭ３（７Ｄ３））に対する蛍光色素コンジュゲート抗体で細胞を染色した。ＦｏｘＰ３転写因子染色セット（eBioscience）を使用して細胞を固定及び透過処理し、続いて１×ＰＥＲＭバッファー中、細胞内抗原（ＦｏｘＰ３（２５９Ｄ）、Ｂｃｌ－２（Ｂｃｌ－２／１００）及びＫｉ－６７（Ｋｉ６７））に対して染色した。サンプルは５レーザーＡｕｒｏｒａスペクトルサイトメーター（Cytek）で取得した。

【0151】

前処理工程（コンペンセーションマトリックスの適用、各単一生細胞（live single cells）に対するゲーティング）は、ＳｐｅｃｔｒｏＦｌｏ（商標）ソフトウェアを使用して実施した。ミックスされていないファイルは個別にチェックし、必要に応じて統合ソフトウェアを使用して手動の漏れ込み（spillover）補正を調整した。注目すべきことに、わずかな修正しか必要なかった。全ての品質管理工程を通過したＦＣＳファイルのイベントを、Ｒによる更なる計算分析のためにエクスポートした。

【0152】

コンピューターフローサイトメトリーデータ解析
本発明者らは、患者中心のアプローチを使用して、ＣＤ２５＋ＡＭＬクラスター及びＴｒｅｇを特定し、以下に記載するコンピューター解析ワークフローを各患者に個別に適用した。ＦＣＳファイルをＲにロードし、ｆｌｏｗＣｏｒｅ Ｒパッケージのビネットの記載通りに処理した。Ｌｏｇｉｃｌｅ変換を発現マトリックスに適用した。各マーカーの密度プロットを視覚的に検査し、従来の手動ゲーティングによって割り当てられた陽性カットオフ値と同様に、陽性及び陰性の発現の定量化を可能にする閾値を規定した。

【0153】

次元削減は、ｕｗｏｔ Ｒパッケージの一部として均一多様体近似及び射影（ＵＭＡＰ）アルゴリズムを使用して実施した。教師なし（Unsupervised）クラスタリングを高次元空間でＰｈｅｎｏＧｒａｐｈを使用して実施し（Levine et al., 2015, Cell 162, 184-197）、その結果はＵＭＡＰプロット上でカラーオーバーレイとして視覚化した。生物学的に意味のある細胞集団に達するために、アルゴリズムによって生成されたクラスターをマージし、マーカー発現に基づいて手動でアノテーションを行った。下流の分析では、細胞存在量、マーカー発現、及び適切な場合には陽性細胞の割合が報告された。ＣＤ４５発現陰性の細胞及びパネル内に存在する他の全てのマーカー（非免疫細胞）、並びに非常に小さいクラスター（０．０５％未満）をフィルタリングして除去した。

【0154】

コンピューター解析によって特定されたＣＤ２５＋細胞集団は、手動ゲーティングによって検証した。図はＰｒｉｓｍ ｖ８．４．２（GraphPad Software）を用いて作成した。

【0155】

結果
ＦＬＴ３遺伝子における遺伝子内縦列重複（ＩＴＤ）はＡＭＬ患者の約２５％に存在し、予後不良及び再発リスクの増加に関連する（Dohner et al., 2010, Blood 115, 453-474）。

【0156】

以前に他の人によって報告されているように（Angelini et al., 2015, Clin Cancer Res 21, 3977-3985、非特許文献７）、ＡＭＬ患者試料の高次元フローサイトメトリー解析を使用して、本発明者らは、ＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異の存在が、ＣＤ２５＋ＡＭＬ細胞の有病率の強力な増加をもたらすことを実証した（データは示さず）。

【0157】

その上、本発明者らは、ＢＣＬ－２が未熟な表現型を有するＣＤ２５＋ＡＭＬクラスターで高度に発現されることを観察した（データは示さず）。この所見は、白血病幹細胞コンパートメントにおいて高いＢＣＬ－２発現を示した先の報告と一致する（Lagadinou et al., 2013、Cell Stem Cell 12, 329-341、Renders et al., 2021, Blood 138, 3469-3469）。興味深いことに、低メチル化剤とベネトクラクスとを組み合わせた（ＨＭＡ－ＶＥＮ）治療を受けた４人の患者全員においてＣＤ２５＋ＡＭＬクラスターが検出された。

【0158】

したがって、これらの結果は、抗ＣＤ２５抗体によるＦＬＴ３－ＩＴＤ突然変異を有するＡＭＬ患者の治療を裏付けるものである。これらの結果はまた、ＡＭＬの治療において、特に再発リスクを軽減するために、例えばＦＬＴ３阻害剤又はＢＣＬ－２阻害剤、例えばベネトクラクスとの併用治療として、抗ＣＤ２５抗体を使用することも裏付ける。

【0159】

上記の明細書において挙げられる全ての出版物は、引用することにより本明細書の一部をなす。本発明の範囲及び趣旨から逸脱することなく、本発明の記載された方法及びシステムに様々な変更及び変動を加えられることは、当業者には明らかであろう。本発明を、特定の好ましい実施形態に関連して記載してきたが、特許請求の範囲に記載される本発明は、そのような特定の実施形態に過度に限定されるべきではないことを理解されたい。実際、分子生物学、細胞免疫学、又は関連分野における当業者に明らかである本発明の実施について記載された様式の様々な変更は、添付の特許請求の範囲内にあることが意図される。

【0160】

本願において参照される配列の概要を以下の表に提示する。

【0161】

【表2】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【配列表】

2024533119000001.xml

【国際調査報告】