特表 2024-539506 ＢＣＭＡを標的とする組成物及びその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-28

(54)【発明の名称】ＢＣＭＡを標的とする組成物及びその使用方法

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20241018BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20241018BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20241018BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20241018BHJP

   C12N 15/85 20060101ALI20241018BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20241018BHJP

   C07K 14/705 20060101ALI20241018BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20241018BHJP

   C12N 5/078 20100101ALI20241018BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALI20241018BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241018BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20241018BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20241018BHJP

   A61K 38/17 20060101ALI20241018BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20241018BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20241018BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28 ZNA

C12N15/12

C12N15/13

C12N15/62 Z

C12N15/85 Z

C07K19/00

C07K14/705

C12N5/10

C12N5/078

C12N5/0783

A61P35/00

A61K39/395 E

A61K39/395 T

A61P35/02

A61K38/17

A61K35/17

A61K35/76

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024548066

(86)(22)【出願日】2022-10-19

(85)【翻訳文提出日】2024-06-11

(86)【国際出願番号】 JP2022040573

(87)【国際公開番号】W WO2023068382

(87)【国際公開日】2023-04-27

(31)【優先権主張番号】63/257,822

(32)【優先日】2021-10-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/257,846

(32)【優先日】2021-10-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】000002934

【氏名又は名称】武田薬品工業株式会社

(74)【代理人】

【識別番号】230104019

【弁護士】

【氏名又は名称】大野 聖二

(74)【代理人】

【識別番号】100119183

【弁理士】

【氏名又は名称】松任谷 優子

(74)【代理人】

【識別番号】100149076

【弁理士】

【氏名又は名称】梅田 慎介

(74)【代理人】

【識別番号】100162503

【弁理士】

【氏名又は名称】今野 智介

(74)【代理人】

【識別番号】100144794

【弁理士】

【氏名又は名称】大木 信人

(72)【発明者】

【氏名】カーリー，マイケル

(72)【発明者】

【氏名】エリルマズ，エルタン

(72)【発明者】

【氏名】ジェニングス，ショーン

(72)【発明者】

【氏名】タラリコ，リーアン

(72)【発明者】

【氏名】ヒックマン，テイラー

(72)【発明者】

【氏名】ウォン，クリスティーナ シュー フェン

(72)【発明者】

【氏名】フレイサー，キャスリン

(72)【発明者】

【氏名】ワン，ハイキン

(72)【発明者】

【氏名】ピアシギッリ，アレサンドラ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA94X

4B065AB01

4B065AC14

4B065AC20

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4B065CA46

4C084AA02

4C084AA07

4C084BA01

4C084MA17

4C084MA56

4C084MA63

4C084MA65

4C084MA66

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZB26

4C084ZB27

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB33

4C085BB35

4C085BB36

4C085BB37

4C085BB41

4C085BB43

4C085GG01

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB37

4C087BB65

4C087BC83

4C087MA02

4C087MA17

4C087MA56

4C087MA63

4C087MA65

4C087MA66

4C087NA05

4C087NA14

4C087ZB26

4C087ZB27

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA50

4H045DA76

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、ＢＣＭＡ結合因子（例えば、抗体）及びＢＣＭＡ抗原結合分子を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物に関する。ＢＣＭＡ結合因子はＢＣＭＡに特異的に結合する。本発明のＢＣＭＡ ＣＡＲは、ヒンジ領域（例えば、ＣＤ２８ヒンジ）、膜貫通ドメイン、及び１つ以上の細胞内ＮＫ細胞シグナル伝達ドメインをさらに含む。ＢＣＭＡ ＣＡＲを発現するＮＫ細胞は、がん細胞を殺傷する際の有効性が増加している。本明細書において提供されるのは、ＢＣＭＡ結合因子及びＢＣＭＡ ＣＡＲの治療的使用も含む。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）抗体またはその抗原結合断片であって、
３つの重鎖相補性領域（ＨＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含み、ＨＣＤＲ１がＳＹＡＩＨ（配列番号２）を含み、ＨＣＤＲ２がＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧ（配列番号３）を含み、ＨＣＤＲ３がＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨ（配列番号４）を含む、前記ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片。

【請求項2】

前記ＢＣＭＡ抗体またはその断片が、０より大きく１５０ｎＭ未満のＫ_ＤでＢＣＭＡに結合する、請求項１に記載のＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片。

【請求項3】

前記ＢＣＭＡ抗体またはその断片が、１ｐＭより大きく１０ｎＭ未満のＫ_ＤでＢＣＭＡに結合する、請求項１または２に記載のＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片。

【請求項4】

前記ＢＣＭＡ抗体またはその断片が、０．０５～０．５μｇ／ｍｌのＥＣ５０でヒト細胞上に存在するＢＣＭＡに結合する、先行請求項のいずれか１項に記載のＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片。

【請求項5】

前記ＢＣＭＡ抗体またはその断片が３つの軽鎖可変領域（ＬＣＤＲ）を含み、ＬＣＤＲ２がＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）を含む、先行請求項のいずれか１項に記載のＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片。

【請求項6】

前記ＢＣＭＡ抗体またはその断片が３つの軽鎖可変領域（ＬＣＤＲ）を含み、ＬＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ（配列番号１１）を含み、ＬＣＤＲ２がＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）を含み、ＬＣＤＲ３がＱＱＬＮＳＹＰＷＴ（配列番号１４）を含む、先行請求項のいずれか１項に記載のＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片。

【請求項7】

前記ＢＣＭＡ抗体またはその断片が３つの軽鎖可変領域（ＬＣＤＲ）を含み、ＬＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＮＮＹＬＡ（配列番号６）を含み、ＬＣＤＲ２が、ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）を含み、ＬＣＤＲ３が、ＱＱＬＫＳＹＰＦＴ（配列番号８）を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載のＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片。

【請求項8】

前記ＢＣＭＡ抗体またはその断片が３つの軽鎖可変領域（ＬＣＤＲ）を含み、ＬＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ（配列番号１１）を含み、ＬＣＤＲ２が、ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）を含み、ＬＣＤＲ３が、ＱＱＬＮＳＹＰＦＴ（配列番号１２）を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載のＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片。

【請求項9】

前記ＢＣＭＡ抗体またはその断片が、ＩｇＧ定常領域を含む抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載のＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片。

【請求項10】

Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）抗体またはその抗原結合断片であって、３つのＬＣＤＲを含み、
ＬＣＤＲ１が、ＲＡＳＱＧＩＸ_１Ｘ_２ＹＬＡ（配列番号７９）を含み、
ＬＣＤＲ２が、ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）を含み、及び／または、
ＬＣＤＲ３が、ＱＱＬＸ_３ＳＹＰＸ_４Ｔ（配列番号８０）を含み、
式中、Ｘ_１が、ＳまたはＮから選択され、
Ｘ_２が、ＳまたはＮから選択され、
Ｘ_３が、ＮまたはＫから選択され、及び／または
Ｘ_４が、ＦまたはＷから選択される、前記ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片。

【請求項11】

前記抗体または前記抗原結合断片が、配列番号９を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、先行請求項のいずれか１項に記載のＢＣＭＡ抗体。

【請求項12】

前記抗体または前記抗原結合断片が、配列番号９に対して少なくとも９５％同一であるＶＨ配列を含む、先行請求項のいずれか１項に記載のＢＣＭＡ抗体。

【請求項13】

前記抗体または前記抗原結合断片が、配列番号１を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、先行請求項のいずれか１項に記載のＢＣＭＡ抗体。

【請求項14】

前記抗体または前記抗原結合断片が、配列番号１に対して少なくとも９５％同一であるＶＨ配列を含む、先行請求項のいずれか１項に記載のＢＣＭＡ抗体。

【請求項15】

前記抗体または前記抗原結合断片が、配列番号５、１０、または１３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、先行請求項のいずれか１項に記載のＢＣＭＡ抗体。

【請求項16】

前記抗体または前記抗原結合断片が、配列番号５、１０、または１３に対して少なくとも９０％同一であるＶＬ配列を含む、先行請求項のいずれか１項に記載のＢＣＭＡ抗体。

【請求項17】

前記ＢＣＭＡ抗体またはその断片が、ＩｇＡ抗体、ＩｇＧ抗体、ＩｇＥ抗体、ＩｇＭ抗体、二重特異性抗体または多重特異性抗体、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ’断片、Ｆｄ断片、単離されたＣＤＲまたはそれらのセット；単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ポリペプチド－Ｆｃ融合、単一ドメイン抗体、ラクダ科動物抗体、マスク抗体、小モジュラー免疫薬（「ＳＭＩＰ（商標）」）、単鎖、タンデムダイアボディ、ＶＨＨ、Ａｎｔｉｃａｌｉｎ、ナノボディ、ミニボディ、ＢｉＴＥ、アンキリンリピートタンパク質、ＤＡＲＰＩＮ、Ａｖｉｍｅｒ、ＤＡＲＴ、ＴＣＲ様抗体、アドネクチン、アフィリン、トランスボディ、アフィボディ、ＴｒｉｍｅｒＸ、ＭｉｃｒｏＰｒｏｔｅｉｎ、Ｆｙｎｏｍｅｒ、Ｃｅｎｔｙｒｉｎ、及びＫＡＬＢＩＴＯＲからなる群から選択される、先行請求項のいずれか１項に記載のＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片。

【請求項18】

前記ＢＣＭＡ抗体またはその断片が、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、先行請求項のいずれか１項に記載のＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片。

【請求項19】

前記ＢＣＭＡ結合ｓｃＦｖがリンカー配列を含む、請求項１８に記載のＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片。

【請求項20】

前記ＢＣＭＡ結合ｓｃＦｖが配列番号１５～１８から選択されるリンカーを含む、請求項１９に記載のＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片。

【請求項21】

前記ＢＣＭＡ結合ｓｃＦｖがシグナルペプチドを含む、請求項１８に記載のＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片。

【請求項22】

前記ＢＣＭＡ結合ｓｃＦｖが配列番号８５～８７からなる群から選択される配列を含む、請求項１８に記載のＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片。

【請求項23】

前記ＢＣＭＡ結合ｓｃＦｖが、配列番号８５、８６、または８７に対して少なくとも８０％同一の配列を含む、請求項２２に記載のＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片。

【請求項24】

ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片であって、
３つの重鎖相補性領域（ＨＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含み、ＨＣＤＲ１がＳＹＡＩＨ（配列番号２）を含み、ＨＣＤＲ２がＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧ（配列番号３）を含み、ＨＣＤＲ３がＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨ（配列番号４）を含む、抗体または抗原結合断片と競合する前記ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片。

【請求項25】

ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片であって、３つのＬＣＤＲを含み、
ＬＣＤＲ１が、ＲＡＳＱＧＩＸ_１Ｘ_２ＹＬＡ（配列番号７９）を含み、
ＬＣＤＲ２が、ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）を含み、及び／または、
ＬＣＤＲ３が、ＱＱＬＸ_３ＳＹＰＸ_４Ｔ（配列番号８０）を含み、
式中、Ｘ_１が、ＳまたはＮから選択され、
Ｘ_２が、ＳまたはＮから選択され、
Ｘ_３が、ＮまたはＫから選択され、及び／または
Ｘ_４が、ＦまたはＷから選択される、抗体または抗原結合断片と競合する前記ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片。

【請求項26】

がんを治療する方法であって、治療を必要とする対象に先行請求項のいずれか１項に記載のＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片を投与することを含む、前記方法。

【請求項27】

前記がんが、免疫細胞の悪性腫瘍、例えば白血病、リンパ腫、または骨髄腫である、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物であって前記ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片が：
３つの重鎖相補性領域（ＨＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含み、ＨＣＤＲ１がＳＹＡＩＨ（配列番号２）を含み、ＨＣＤＲ２がＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧ（配列番号３）を含み、ＨＣＤＲ３がＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨ（配列番号４）を含む、前記医薬組成物。

【請求項29】

ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物であって前記ＢＣＭＡ抗体またはその断片が：
ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）を含む軽鎖可変相補性決定領域（ＬＣＤＲ）２を含む、前記医薬組成物。

【請求項30】

Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）に特異的に結合する抗原結合分子、ＣＤ２８ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、及び１つ以上の細胞内細胞シグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチド。

【請求項31】

前記ＢＣＭＡに特異的に結合する抗原結合分子が：
（ａ）配列番号２を含む重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、
（ｂ）配列番号３を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び
（ｃ）配列番号４を含むＶＨ ＣＤＲ３、
を含む、請求項３０に記載のポリヌクレオチド。

【請求項32】

前記ＢＣＭＡに特異的に結合する抗原結合分子が：
（ａ）配列番号６を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、
（ｂ）配列番号７を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び
（ｃ）配列番号８を含むＶＬ ＣＤＲ３、
を含む、請求項３１に記載のポリヌクレオチド。

【請求項33】

前記ＢＣＭＡに特異的に結合する抗原結合分子が：
（ａ）配列番号１１を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、
（ｂ）配列番号７を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び
（ｃ）配列番号１２を含むＶＬ ＣＤＲ３、
を含む、請求項３２に記載のポリヌクレオチド。

【請求項34】

前記ＢＣＭＡに特異的に結合する抗原結合分子が：
（ａ）配列番号１１を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、
（ｂ）配列番号７を含むＶＬ ＣＤＲ２、及び
（ｃ）配列番号１４を含むＶＬ ＣＤＲ３、
を含む、請求項３１に記載のポリヌクレオチド。

【請求項35】

前記ＢＣＭＡに特異的に結合する抗原結合分子が、配列番号１または９に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項３０～３４のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。

【請求項36】

前記ＢＣＭＡに特異的に結合する抗原結合分子が、配列番号５、１０、または１３のいずれかに対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項３０～３５のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。

【請求項37】

前記抗原結合断片が、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、または単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される、先行請求項のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。

【請求項38】

前記抗原結合分子がｓｃＦｖを含む、請求項３０～３７のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。

【請求項39】

前記ＶＨ及び前記ＶＬがリンカーによって接続されている、請求項３０～３８のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。

【請求項40】

前記リンカーが約５０アミノ酸～約２アミノ酸を含む、請求項３９に記載のポリヌクレオチド。

【請求項41】

前記リンカーが、配列番号１５～１８と、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項３９に記載のポリヌクレオチド。

【請求項42】

前記抗原結合分子が、約１×１０^－６Ｍ未満、約１×１０^－７Ｍ未満、約１×１０^－８Ｍ未満、または約１×１０^－９Ｍ未満のＫ_ＤでＢＣＭＡに結合する、請求項３０～４１のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。

【請求項43】

前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＧＩＴＲ／ＣＤ３５７、ＮＫＧ２Ｄ、またはそれらの任意の組み合わせの膜貫通ドメインである、請求項３０～４２のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。

【請求項44】

前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８膜貫通ドメインである、請求項４３に記載のポリヌクレオチド。

【請求項45】

前記ヒンジ領域が、配列番号５６に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項３０～４４のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。

【請求項46】

共刺激領域をさらに含む、請求項３０～４５のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。

【請求項47】

前記共刺激領域が、ＣＤ２８、ＯＸ－４０、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、プログラム細胞死－１（ＰＤ－１）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＣＤ８γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ（腫瘍壊死因子スーパーファミリーのメンバー１４；ＴＮＦＳＦ１．４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇα（ＣＤ７９ａ）、Ｆｃγ受容体、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ－１、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、１１．２β、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬｌ、ＣＤＩＯＯ（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、またはそれらの任意の組み合わせのシグナル伝達領域である、請求項４６に記載のポリヌクレオチド。

【請求項48】

前記共刺激領域が、配列番号２８に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項３０～４７のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。

【請求項49】

活性化ドメインをさらに含む、請求項３０～４８のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。

【請求項50】

前記活性化ドメインがＣＤ３ζドメインである、請求項４９に記載のポリヌクレオチド。

【請求項51】

前記活性化ドメインが、配列番号３０と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約７、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項４９または５０に記載のポリヌクレオチド。

【請求項52】

自殺遺伝子をさらに含む、請求項３０～５１のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。

【請求項53】

前記自殺遺伝子が、リツキシマブ、ｉＣａｓｐａｓｅ９、単純ヘルペスウイルス－チミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ｔｋ）、及びガンシクロビル、アシクロビルまたはＦＩＡＵ；オキシドレダクターゼ及びシクロヘキシミド；シトシンデアミナーゼ及び５－フルオロシトシン；チミジンキナーゼチミジル酸キナーゼ（Ｔｄｋ：Ｔｍｋ）から選択される、請求項５２に記載のポリヌクレオチド。

【請求項54】

前記自殺遺伝子がｉＣａｓｐａｓｅ９である、請求項５２～５３のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。

【請求項55】

サイトカインをさらに含む、請求項３０～５４のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。

【請求項56】

前記サイトカインが、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、またはＩＬ－２１から選択される、請求項５５に記載のポリヌクレオチド。

【請求項57】

前記サイトカインがＩＬ－１５である、請求項５５～５６のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。

【請求項58】

ＩＬ－１５のアミノ酸配列が配列番号２３を含む、請求項５７に記載のポリヌクレオチド。

【請求項59】

前記ＣＡＲが、配列番号１９～２１に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約７、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項３０～５８のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。

【請求項60】

請求項５９に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。

【請求項61】

前記ベクターが、レトロウイルスベクター、ＤＮＡベクター、プラスミド、ＲＮＡベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルス随伴ベクター、レンチウイルスベクター、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項６０に記載のベクター。

【請求項62】

請求項３０～５９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドによってコードされるＣＡＲ。

【請求項63】

請求項３０～５９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、請求項６０～６１のいずれか１項に記載のベクター、請求項６２に記載のＣＡＲ、またはそれらの任意の組み合わせを含む細胞。

【請求項64】

前記細胞が免疫細胞である、請求項６３に記載の細胞。

【請求項65】

前記細胞が、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、または腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ｉＮＫＴ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、樹状細胞、またはそれらの混合物である、請求項６３～６４のいずれか１項に記載の細胞。

【請求項66】

請求項３０～５９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、請求項６０～６１のいずれか１項に記載のベクター、請求項６２に記載のＣＡＲ、または請求項６３～６５のいずれか１項に記載の細胞を含む組成物。

【請求項67】

請求項６３～６６のいずれか１項に記載の細胞を含む免疫細胞の集団。

【請求項68】

個体におけるがんを治療する方法であって、前記個体に、治療有効量の請求項６６に記載の組成物を投与するステップを含む、前記方法。

【請求項69】

前記個体に有効量の追加の療法を提供するステップをさらに含む、請求項６８に記載の方法。

【請求項70】

前記追加の療法が、外科手術、放射線、遺伝子療法、免疫療法、またはホルモン療法を含む、請求項６８に記載の方法。

【請求項71】

前記ポリヌクレオチドを有する前記細胞または前記ベクターを有する前記細胞が、注入、注射、静脈内、動脈内、腹腔内、気管内、腫瘍内、筋肉内、内視鏡内、傷害内、頭蓋内、経皮的、皮下、局所的に、灌流によって、腫瘍微小環境内、またはそれらの組み合わせによって前記個体に投与される、請求項６８～７０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項72】

前記がんが、多発性骨髄腫、リンパ腫、及び／または白血病から選択される、請求項６８～７１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項73】

ＮＫ細胞であって、
（ａ）配列番号１または９に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である重鎖可変領域（ＶＨ）、及び
配列番号５、１０、または１３に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一である軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、ＢＣＭＡに特異的に結合する抗原結合分子、
（ｂ）ＣＤ２８ヒンジ領域、
（ｃ）膜貫通ドメイン、及び
（ｄ）１つ以上の細胞内細胞シグナル伝達ドメイン、を含むＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む、前記ＮＫ細胞。

【請求項74】

ポリヌクレオチドであって、
（ａ）ＣＤ２８ヒンジ、
（ｂ）膜貫通ドメイン、
（ｃ）共刺激ドメイン、及び
（ｄ）ＩＬ－１５サイトカイン
を含む、ＢＣＭＡ結合ＣＡＲをコードする、前記ポリヌクレオチド。

【請求項75】

請求項７４に記載のポリヌクレオチドを含むＮＫ細胞。

【請求項76】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチドを有する免疫細胞であって、前記ＣＡＲが、
（ａ）抗原結合ドメイン、
（ｂ）ＣＤ２８ヒンジ、及び
（ｃ）ＣＤ２８膜貫通ドメイン
を含む、前記免疫細胞。

【請求項77】

前記細胞が、腫瘍細胞上で発現するＢＣＭＡに結合するＣＡＲを含む、請求項７６に記載の免疫細胞。

【請求項78】

請求項１～２５のいずれか１項に記載の抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド。

【請求項79】

少なくとも１つの化学修飾を含む、請求項７８に記載のポリヌクレオチド。

【請求項80】

前記ポリヌクレオチドが、配列番号５５～５６、５８～５９、６３、６７、７１、及び７６～７８からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項７８に記載のポリヌクレオチド。

【請求項81】

請求項６２に記載のＢＣＭＡ結合ＣＡＲを発現するＮＫ細胞。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１０月２０日に出願された米国仮出願第６３／２５７，８２２号、及び２０２１年１０月２０日に出願された米国仮出願第６３／２５７，８４６号に対する優先権及びその権益を主張し、これらのそれぞれの内容は、その全体が参照により組み込まれる。

【0002】

配列表への参照
本出願は、電子的に提出されたＸＭＬフォーマットでの配列表と共に出願される。ＭＩＬ－０１９ＷＯ１＿ＳＬ．ＸＭＬという名称の配列表ファイルは、２０２２年１０月１２日に作成され、１０２，３２６バイトのサイズである；配列表の電子フォーマットの情報は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0003】

非グリコシル化Ｉ型膜貫通タンパク質であるＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ、ＣＤ２６９、ＴＮＦＲＳＦ１７としても知られる）は、分化した形質細胞において優先的に発現される腫瘍壊死受容体スーパーファミリーのメンバーである。ＢＣＭＡは、種々の癌、特に、他のがんの中でもとりわけ、リンパ腫、多発性骨髄腫を含む種々のＢ細胞関連がんにおいて過剰発現することが示されている。ＢＣＭＡの標的化は、リンパ腫、多発性骨髄腫及び他のがんを含むＢＣＭＡ陽性がんを治療するための有望なアプローチとして出現した。ＢＣＭＡを標的化するための最も一般的な治療モダリティとしては、ＢＣＭＡ特異的抗体（例えば、ＢｉＴＥ（登録商標）（二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー）免疫がん療法を含む二重特異性抗体構築物）、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、及びキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変免疫細胞療法が挙げられる。

【0004】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）技術は、一般的な免疫抑制性腫瘍微小環境を緩和するだけでなく、免疫エフェクター細胞を細胞表面腫瘍特異的抗原に再度誘導するようにも設計されている。ＣＡＲは、腫瘍細胞表面抗原を同定するために、膜貫通受容体として免疫エフェクター細胞上での発現のために人工的に生成される。

【0005】

ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、腫瘍細胞に対する効果的な細胞毒性を媒介し、Ｔ細胞とは異なり、同種異系の環境において移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を引き起こす可能性が欠如しているので、ＣＡＲ操作のための魅力的な候補である。したがって、ＮＫ細胞は、即時臨床使用のための既製の細胞療法製品として利用可能にされ得る。ＣＡＲ－ＮＫ細胞はまた、それらの天然の受容体を介して腫瘍細胞を認識し標的とするその固有の能力を保持し、したがって、原則として、ＣＡＲ標的抗原の下方制御を介する疾患逃避の可能性を、ＣＡＲ－Ｔ細胞で観察される可能性よりも低くする。

【0006】

本開示は、最適化されたＣＡＲ構成を介してがん細胞上のＢＣＭＡ抗原を標的とすることができる新規の抗ＢＣＭＡ抗体及びＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）標的化ＣＡＲ－ＮＫ細胞を提供する。

【発明の概要】

【0007】

本発明は、新規ヒト抗ＢＣＭＡ抗体、その抗原結合断片、及びとりわけ、新規ＢＣＭＡ結合剤を含む新規ＢＣＭＡ ＣＡＲ構築物、及びＢＣＭＡ－ＣＡＲ発現ＮＫ細胞を提供する。また、本発明において、ＢＣＭＡ異常に関連するがんの治療のための、新規ＢＣＭＡ結合剤、ＢＣＭＡ ＣＡＲ及び／またはＢＣＭＡ－ＣＡＲ発現ＮＫ細胞の使用方法が提供される。本発明は、ＢＣＭＡに特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片、及びヒト抗ＢＣＭＡ抗体をコードするポリヌクレオチド、及び本発明の抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に関する。特に、本発明は、ＣＤ２８ヒンジドメインを含むＣＡＲを含むＢＣＭＡを標的とするＣＡＲ－ＮＫ細胞が、異なる（例えば、ＩｇＧ１）ヒンジドメインを除いて同等のＣＡＲ構築物を発現するＣＡＲ－ＮＫ細胞と比較して、マウス多発性骨髄腫モデルにおける腫瘍抑制において予想外により効果的であるという観察に基づく。したがって、本発明は、ＮＫ細胞におけるシグナル伝達のための改善されたＢＣＭＡ－ＣＡＲ構築物を提供し、ＢＣＭＡ陽性腫瘍に対するより有効な免疫療法をもたらす。

【0008】

本発明の一態様において、本明細書に提供されるのは、ヒト抗ＢＣＭＡ抗体及びその抗原結合断片を含み；そのようなヒト抗ＢＣＭＡ抗体及びその断片は、高い特異性及び親和性でヒトＢＣＭＡに結合する。

【0009】

いくつかの実施形態では、本発明の抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片は、３つの重鎖相補性領域（ＨＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含み、ＨＣＤＲ１はＳＹＡＩＨ（配列番号２）を含み、ＨＣＤＲ２はＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧ（配列番号３）を含み、ＨＣＤＲ３はＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨ（配列番号４）を含む。

【0010】

いくつかの実施形態では、本発明の抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片は、０より大きく１５０ｎＭ未満のＫ_ＤでＢＣＭＡに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片は、１ｐＭより大きく１０ｎＭ未満のＫ_ＤでＢＣＭＡに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片は、０．０５～０．５μｇ／ｍｌのＥＣ５０でヒト細胞上に提示されるＢＣＭＡに結合する。

【0011】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片は、３つの軽鎖可変領域（ＬＣＤＲ）を含み、ＬＣＤＲ２は、ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）を含む。

【0012】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片は、３つの軽鎖可変領域（ＬＣＤＲ）を含み、ＬＣＤＲ１はＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ（配列番号１１）を含み、ＬＣＤＲ２はＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）を含み、ＬＣＤＲ３はＱＱＬＮＳＹＰＷＴ（配列番号１４）を含む。

【0013】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片は、３つの軽鎖可変領域（ＬＣＤＲ）を含み、ＬＣＤＲ１は、ＲＡＳＱＧＩＮＮＹＬＡ（配列番号６）を含み、ＬＣＤＲ２は、ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）を含み、ＬＣＤＲ３は、ＱＱＬＫＳＹＰＦＴ（配列番号８）を含む。

【0014】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片は、３つの軽鎖可変領域（ＬＣＤＲ）を含み、ＬＣＤＲ１は、ＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ（配列番号１１）を含み、ＬＣＤＲ２は、ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）を含み、ＬＣＤＲ３は、ＱＱＬＮＳＹＰＦＴ（配列番号１２）を含む。

【0015】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＧ定常領域を含む抗体である。

【0016】

一実施形態では、本開示は、３つのＬＣＤＲを含む抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片を包含し、
ＬＣＤＲ１は、ＲＡＳＱＧＩＸ_１Ｘ_２ＹＬＡ（配列番号７９）を含み、
ＬＣＤＲ２は、ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）を含み、及び／または、
ＬＣＤＲ３は、ＱＱＬＸ_３ＳＹＰＸ_４Ｔ（配列番号８０）を含み、
式中、Ｘ_１は、ＳまたはＮから選択され、
Ｘ_２は、ＳまたはＮから選択され、
Ｘ_３は、ＮまたはＫから選択され、及び／または
Ｘ_４は、ＦまたはＷから選択される。

【0017】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１を含む可変重鎖領域（ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のＶＨを含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号９に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のＶＨを含む。

【0018】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５、１０、または１３を含む可変軽鎖領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５、１０、または１３に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のＶＬを含む。

【0019】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ抗原結合断片は、ＩｇＡ抗体、ＩｇＧ抗体、ＩｇＥ抗体、ＩｇＭ抗体、二重特異性抗体または多重特異性抗体、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ’断片、Ｆｄ断片、単離されたＣＤＲまたはそれらのセット；単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ポリペプチド－Ｆｃ融合、単一ドメイン抗体、ラクダ科動物抗体、マスク抗体、小モジュラー免疫薬（「ＳＭＩＰ（商標）」）、単鎖、タンデムダイアボディ、ＶＨＨ、Ａｎｔｉｃａｌｉｎ、ナノボディ、ミニボディ、ＢｉＴＥ、アンキリンリピートタンパク質、ＤＡＲＰＩＮ、Ａｖｉｍｅｒ、ＤＡＲＴ、ＴＣＲ様抗体、アドネクチン、アフィリン、トランスボディ、アフィボディ、ＴｒｉｍｅｒＸ、ＭｉｃｒｏＰｒｏｔｅｉｎ、Ｆｙｎｏｍｅｒ、Ｃｅｎｔｙｒｉｎ、及びＫＡＬＢＩＴＯＲからなる群から選択される。

【0020】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片は、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体または抗原結合断片は、リンカー配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体または抗原結合断片は、配列番号１５～１８から選択されるリンカーを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体または抗原結合断片はシグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８５～８７のｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８５～８７に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一のｓｃＦｖを含む。

【0021】

いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を包含する。非限定的な例として、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片は、
３つの重鎖相補性領域（ＨＣＤＲ）を含む重鎖可変領域を含み、ＨＣＤＲ１はＳＹＡＩＨ（配列番号２）を含み、ＨＣＤＲ２はＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧ（配列番号３）を含み、ＨＣＤＲ３はＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨ（配列番号４）を含む。他の例において、抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）を含む軽鎖可変相補性決定領域（ＬＣＤＲ）２を含み得る。

【0022】

非限定的な例として、本発明の抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片は、ＳＹＡＩＨ（配列番号２）を含むＨＣＤＲ１、ＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧ（配列番号３）を含むＨＣＤＲ２、及びＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨ（配列番号４）を含むＨＣＤＲ３を含む３つのＨＣＤＲ、ならびにＲＡＳＱＧＩＮＮＹＬＡ（配列番号６）を含むＬＣＤＲ１、ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）を含むＬＣＤＲ２、及びＱＱＬＫＳＹＰＦＴ（配列番号８）を含むＬＣＤＲ３を含む３つのＬＣＤＲを含む。

【0023】

一実施形態では、本発明の抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片は、ＳＹＡＩＨ（配列番号２）を含むＨＣＤＲ１、ＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧ（配列番号３）を含むＨＣＤＲ２、及びＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨ（配列番号４）を含むＨＣＤＲ３を含む３つのＨＣＤＲ、ならびに、ＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ（配列番号１１）を含むＬＣＤＲ１、ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）を含むＬＣＤＲ２、及びＱＱＬＮＳＹＰＷＴ（配列番号１４）を含むＬＣＤＲ３を含む３つのＬＣＤＲを含む。

【0024】

別の実施形態では、本発明の抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片は、ＳＹＡＩＨ（配列番号２）を含むＨＣＤＲ１、ＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧ（配列番号３）を含むＨＣＤＲ２、及びＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨ（配列番号４）を含むＨＣＤＲ３を含む３つのＨＣＤＲ、ならびに、ＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ（配列番号１１）を含むＬＣＤＲ１、ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）を含むＬＣＤＲ２、及びＱＱＬＮＳＹＰＦＴ（配列番号１２）を含むＬＣＤＲ３を含む３つのＬＣＤＲを含む。

【0025】

本発明の別の態様では、細胞外ＢＣＭＡ結合ドメイン、ＣＤ２８ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、及び１つ以上の細胞内細胞シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が提供され、ＢＣＭＡ結合ドメインは、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片を含む。したがって、本明細書に記載のＢＣＭＡ結合ＣＡＲは、ＢＣＭＡ抗原を特異的に認識し、それに結合する。

【0026】

いくつかの実施形態では、本発明は、ＢＣＭＡ抗原結合ドメイン、ＣＤ２８ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、及び１つ以上の細胞内細胞シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、少なくとも１つの改変を含み得る。

【0027】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、（ａ）配列番号２を含む重鎖可変領域の相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、（ｂ）配列番号３を含むＨＣＤＲ２、及び（ｃ）配列番号４を含むＨＣＤＲ３を含むＢＣＭＡ抗原結合ドメインをコードする配列を含む。

【0028】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、（ａ）配列番号６を含む軽鎖可変領域の相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、（ｂ）配列番号７を含むＬＣＤＲ２、及び（ｃ）配列番号８を含むＬＣＤＲ３を含むＢＣＭＡ抗原結合ドメインをコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、（ａ）配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、（ｂ）配列番号７を含むＬＣＤＲ２、及び（ｃ）配列番号１２を含むＬＣＤＲ３を含むＢＣＭＡ抗原結合ドメインをコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、（ａ）配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、（ｂ）配列番号７を含むＬＣＤＲ２、及び（ｃ）配列番号１４を含むＬＣＤＲ３を含むＢＣＭＡ抗原結合ドメインをコードする配列を含む。

【0029】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号１または９に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含むＢＣＭＡ抗原結合ドメインをコードする。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号５、１０、または１３のいずれかに対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含むＢＣＭＡ抗原結合ドメインをコードする。

【0030】

いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、または単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬは、リンカーによって連結されている。いくつかの実施形態では、リンカーは、約５０アミノ酸～約２アミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号１５～１８と、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0031】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、約１×１０^－６Ｍ未満、約１×１０^－７Ｍ未満、約１×１０^－８Ｍ未満、または約１×１０^－９Ｍ未満のＫ_ＤでＢＣＭＡに結合するＢＣＭＡ結合ＣＡＲをコードする。

【0032】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、膜貫通ドメインをコードする配列を含む。本発明のＢＣＭＡ結合ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ３ζ、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＧＩＴＲ／ＣＤ３５７、ＮＫＧ２Ｄ、またはそれらの任意の組み合わせの膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインである。

【0033】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ヒンジ領域をコードする配列を含む。本発明のＢＣＭＡ結合ＣＡＲのヒンジ領域は、ＣＤ２８ヒンジドメインである。非限定的な例として、ヒンジ領域は、配列番号３６に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。

【0034】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、共刺激領域をコードする配列を含む。いくつかの実施形態では、共刺激領域は、ＣＤ２８、ＯＸ－４０、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、プログラム細胞死－１（ＰＤ－１）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、ＣＤ８γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ（腫瘍壊死因子スーパーファミリーのメンバー１４；ＴＮＦＳＦ１．４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇα（ＣＤ７９ａ）、Ｆｃγ受容体、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ－１、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、１１．２β、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬｌ、ＣＤＩＯＯ（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、またはそれらの任意の組み合わせのシグナル伝達領域である。いくつかの実施形態では、共刺激領域は、配列番号２８と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0035】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、活性化ドメインをコードする配列を含む。非限定的な例として、活性化ドメインはＣＤ３ζドメインである。いくつかの実施形態では、活性化ドメインは、配列番号３０と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約７、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0036】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、自殺遺伝子をコードする配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、リツキシマブ、ｉＣａｓｐａｓｅ９、単純ヘルペスウイルス－チミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ｔｋ）、及びガンシクロビル、アシクロビルまたはＦＩＡＵ；オキシドレダクターゼ及びシクロヘキシミド；シトシンデアミナーゼ及び５－フルオロシトシン；チミジンキナーゼチミジル酸キナーゼ（Ｔｄｋ：Ｔｍｋ）から選択される自殺遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、自殺遺伝子はｉＣａｓｐａｓｅ９である。

【0037】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、サイトカインをコードする配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、またはＩＬ－２１から選択される。いくつかの実施形態では、サイトカインはＩＬ－１５である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１５のアミノ酸配列は、配列番号２３を含む。

【0038】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＢＣＭＡ結合ＣＡＲは、配列番号１９～２１と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0039】

いくつかの実施形態では、本開示は、前述の実施形態のいずれかのポリヌクレオチドを含むベクターを含む。

【0040】

いくつかの実施形態では、ベクターは、レトロウイルスベクター、ＤＮＡベクター、プラスミド、ＲＮＡベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルス随伴ベクター、レンチウイルスベクター、またはそれらの任意の組み合わせである。

【0041】

いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載のＢＣＭＡ結合ＣＡＲを発現する細胞を提供する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に記載のＢＣＭＡ結合ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、ＣＡＲ発現細胞は、本明細書に記載のベクターを含む。

【0042】

いくつかの実施形態では、細胞は免疫細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＮＫ細胞、Ｔ細胞または腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ｉＮＫＴ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、樹状細胞、またはそれらの混合物である。いくつかの実施形態では、本開示は、上記実施形態のいずれか１つの免疫細胞を含む免疫細胞の集団に関する。

【0043】

いくつかの実施形態では、本開示は、上記の実施形態のいずれかのポリヌクレオチド、上記の実施形態のいずれかのベクター、上記の実施形態のいずれかのＣＡＲ、または上記の実施形態のいずれかの細胞を含む組成物に関する。

【0044】

非限定的な例として、本開示は、（ａ）配列番号１または９に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一の重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号５、１０、または１３のいずれかに対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一の軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む、ＢＣＭＡに特異的に結合する抗原結合分子、（ｂ）ＣＤ２８ヒンジ領域、（ｃ）膜貫通ドメイン、及び（ｄ）１つ以上の細胞内細胞シグナル伝達ドメイン、を含む、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含むＮＫ細胞に関する。

【0045】

いくつかの態様では、本開示は、（ａ）ＣＤ２８ヒンジ、（ｂ）膜貫通ドメイン、（ｃ）共刺激ドメイン、及び（ｄ）ＩＬ－１５サイトカインを含む、ＢＣＭＡ結合ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを包含する。

【0046】

一態様では、本開示は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチドを有する免疫細胞を包含し、ＣＡＲは、（ａ）抗原結合ドメイン；（ｂ）ＣＤ２８ヒンジ；及び（ｃ）ＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、腫瘍細胞上に発現するＢＣＭＡに結合するＣＡＲを含む。

【0047】

本発明のさらに別の態様では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体、その抗原結合断片、ＢＣＭＡ結合ＣＡＲ、ベクター、細胞、及び組成物の使用方法が提供される。

【0048】

いくつかの実施形態では、本開示は、抗ＢＣＭＡ抗体、その抗原結合断片、ＢＣＭＡ結合ＣＡＲ、ポリヌクレオチド、ベクター及び／またはＢＣＭＡ結合ＣＡＲを発現する細胞を使用して個体におけるがんを治療する方法であって、該方法は、個体に、治療有効量の、本開示で考察される抗体、ＣＡＲ、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、及び組成物のいずれか１つを投与するステップを含む、方法を提供する。

【0049】

いくつかの実施形態では、本方法は、個体に有効量の追加の治療を提供するステップをさらに含む。

【0050】

いくつかの実施形態では、追加の治療は、外科手術、放射線、遺伝子治療、免疫療法、またはホルモン治療を含む。

【0051】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドを有する細胞またはベクターを有する細胞は、注入、注射、静脈内、動脈内、腹腔内、気管内、腫瘍内、筋肉内、内視鏡内、傷害内、頭蓋内、経皮的、皮下、局所的に、灌流によって、腫瘍微小環境内、またはそれらの組み合わせによって個体に投与される。

【0052】

いくつかの実施形態では、がんは、免疫細胞の悪性腫瘍、例えば、白血病、リンパ腫、または骨髄腫である。いくつかの実施形態では、がんは、多発性骨髄腫、リンパ腫、及び／または白血病から選択される。

【0053】

これらの図及び他の図に示される種々の構成要素は、単に例示の目的のためのものであり、特許請求の範囲に明示的に記載されない限り、特許請求の範囲へと解釈されるべきではないことに留意されたい。

【図面の簡単な説明】

【0054】

【図1】ＩＬ－１５サイトカイン（例えば、可溶性ＩＬ－１５）及びＣＤ２８由来のヒンジ領域を有する例示的なＢＣＭＡ－ＣＡＲの構築物の図である。

【図2】非形質導入（ＮＴ）細胞と比較した、ＩｇＧヒンジ及びＣＤ２８ヒンジを有するＢＣＭＡ ＣＡＲを形質導入したＮＫ細胞のインビトロ細胞傷害性アッセイのグラフである。

【図3】ＩｇＧヒンジまたはＣＤ２８ヒンジドメインを有するＢＣＭＡ－ＣＡＲを発現する共投与ＮＫ細胞における腫瘍進行の絵図である。

【図4】ＣＤ２８ヒンジドメインを有するＢＣＭＡ－ＣＡＲ（１Ｍまたは３Ｍ）を発現する異なる共投与ＮＫ細胞による腫瘍進行の絵図である。

【図5】ＣＤ２８ヒンジドメインを有するＢＣＭＡ－ＣＡＲ（１Ｍ）を発現する異なる共投与ＮＫ細胞の絵図である。

【図6】ＭＭ１Ｓ腫瘍細胞接種の１日後（「１日遅延投与」）、１Ｍまたは３Ｍの濃度で投与されたＢＣＭＡ－ＣＡＲを発現するＮＫ細胞、対照としての非形質導入ＮＫ細胞（ＮＴ－ＮＫ）の絵図である。

【図7】ＭＭ１ｓ腫瘍細胞接種の１日後（「１日遅延投与」）に、百万または３百万の投与量で投与されたＢＣＭＡ ＣＡＲを含むＮＫ細胞を投与されたマウスのカプランマイヤー生存曲線である。

【図8】ＢＣＭＡ－ＣＡＲを含む１千万個のＮＫ細胞によるインビボ処理後に収集した、マウス肺の組織病理学的分析のスライド図である。

【図9A】１日遅延投与でのマウスにおける血漿中のＩＬ－１５分泌を示すグラフである。

【図9B】９日遅延投与でのマウスにおける血漿中のＩＬ－１５分泌を示すグラフである。

【図9C】９日遅延投与でのマウスにおける血中ＣＡＲ－ＮＫ細胞の増殖を示すグラフである。

【図9D】１日遅延投与でのマウスにおける血中ＣＡＲ－ＮＫ細胞の増殖を示すグラフである。

【図10A】Ｃ１１Ｄ５．３ＶＬＶＨ－Ｆｃと比較した、ＣＤ２８ヒンジまたはＩｇＧヒンジを含むＢＣＭＡ－ＣＡＲＴ細胞を用いた異なるエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比での処理後の腫瘍細胞株の殺傷を示すグラフである。

【図10B】ＣＤ２８ヒンジまたはＩｇＧヒンジを含むＢＣＭＡ－ＣＡＲＴ細胞を用いた異なるＥ：Ｔ比での処理後の、アポトーシスのマーカーとしてのカスパーゼ＋ＭＭ１ｓ標的細胞％を示すグラフである。

【図10C】ＣＤ２８ヒンジまたはＩｇＧヒンジを含むＢＣＭＡ－ＣＡＲＴ細胞を用いた異なるＥ：Ｔ比での処理後のＢＣＭＡ発現ＭＭ１ｓ腫瘍細胞のミトコンドリア損傷％を示すグラフである。

【図11A】８００ｎｇ／ｍＬの可溶性ＢＣＭＡの存在下または非存在下での、ＢＣＭＡ２８－１ ＣＡＲ含有ＮＫ細胞によるインビトロ細胞傷害性のグラフ表示である。

【図11B】８００ｎｇ／ｍＬの可溶性ＢＣＭＡの存在下または非存在下での、ＢＣＭＡ２８－２ ＣＡＲ含有ＮＫ細胞によるインビトロ細胞傷害性のグラフ表示である。

【図11C】８００ｎｇ／ｍＬの可溶性ＢＣＭＡの存在下または非存在下での、Ｃ１１Ｄ５．３Ｆｃ陽性対照によるインビトロ細胞傷害性のグラフ表示である

【図12A】腫瘍細胞接種の９日後（「９日遅延投与」）に投与された１０Ｍ用量のＢＣＭＡ ＣＡＲ ＮＫで処理したマウスにおける、体重変動を示すグラフである。

【図12B】腫瘍細胞接種の１日後（「１日遅延投与」）に投与された１０Ｍ用量のＢＣＭＡ ＣＡＲ ＮＫで処理したマウスにおける、体重変動を示すグラフである。

【図13】ルシフェラーゼ発現ＭＭ腫瘍細胞を接種し、次いで、１回（１０Ｍ×１）または２回（１０Ｍ×２）のいずれかのＢＣＭＡ２８－２発現ＣＡＲ－ＮＫ細胞を投与したマウスの生存の代表的な画像を示す。

【図14A】４人の独立した臍帯血単位（ＣＢＵ）ドナーにおいて生成された、ＢＣＭＡ２８－２ ＣＡＲ構築物含有ＮＫ細胞の、複数の腫瘍細胞株に対するインビトロ殺傷活性を示す。４人の独立したＣＢＵドナーにわたるＭＭ１ｓ（ＢＣＭＡ^ｌｏｗ）細胞におけるＢＣＭＡ２８－２構築物含有ＣＡＲ－ＮＫ細胞対同等の非形質導入（ＵＴＤ）ＮＫ細胞のインビトロ殺傷活性を示す。

【図14B】４人の独立した臍帯血単位（ＣＢＵ）ドナーにおいて生成された、ＢＣＭＡ２８－２ ＣＡＲ構築物含有ＮＫ細胞の、複数の腫瘍細胞株に対するインビトロ殺傷活性を示す。４人の独立したドナーにわたるＪＪＮ３（ＢＣＭＡ ＫＯ）細胞におけるＢＣＭＡ２８－２構築物含有ＣＡＲ－ＮＫ細胞対同等の非形質導入（ＵＴＤ）ＮＫ細胞のインビトロ殺傷活性を示す。

【図14C】４人の独立した臍帯血単位（ＣＢＵ）ドナーにおいて生成された、ＢＣＭＡ２８－２ ＣＡＲ構築物含有ＮＫ細胞の、複数の腫瘍細胞株に対するインビトロ殺傷活性を示す。４人の独立したＣＢＵドナーにわたるＲＰＭＩ－８２２６（ＢＣＭＡ^ｈｉｇｈ）細胞におけるＢＣＭＡ２８－２構築物含有ＣＡＲ－ＮＫ細胞対同等の非形質導入（ＵＴＤ）ＮＫ細胞のインビトロ殺傷活性を示す。

【図14D】４人の独立した臍帯血単位（ＣＢＵ）ドナーにおいて生成された、ＢＣＭＡ２８－２ ＣＡＲ構築物含有ＮＫ細胞の、複数の腫瘍細胞株に対するインビトロ殺傷活性を示す。４人の独立したＣＢＵドナーにわたるＪＩＮ親（ＢＣＭＡ^ｍｅｄ）細胞におけるＢＣＭＡ２８－２構築物含有ＣＡＲ－ＮＫ細胞対同等の非形質導入（ＵＴＤ）ＮＫ細胞のインビトロ殺傷活性を示す。

【図15A】複数回の腫瘍細胞添加後の、インビトロでのＭＭ１Ｓ腫瘍モデルにおけるＢＣＭＡ２８－２発現ＣＡＲ ＮＫ細胞の反復殺傷抗腫瘍活性を示す。

【図15B】複数回の腫瘍細胞添加後の、インビトロでのＭＭ１Ｓ腫瘍モデルにおけるＢＣＭＡ２８－２発現ＣＡＲ ＮＫ細胞の反復殺傷抗腫瘍活性を示す。

【図16】ＲＰＭＩ－８２２６腫瘍に対するＢＣＭＡ２８－２構築物のインビボ有効性を示す。

【発明を実施するための形態】

【0055】

定義
長期的な特許法規約に従って、「ａ」及び「ａｎ」という単語は、特許請求の範囲を含む、含むという単語と共に本明細書で使用される場合、該冠詞の文法的オブジェクトの１つまたは１つを超える（すなわち、少なくとも１つ）ことを示す。例として、「要素」は、１つの要素または１つを超える要素を意味する。本開示のいくつかの実施形態は、本開示の１つ以上の要素、方法のステップ、及び／または方法からなり得るか、またはそれらから本質的になり得る。本明細書に記載の任意の方法または組成物は、本明細書に記載の任意の他の方法または組成物に関して実施することができ、異なる実施形態を組み合わせることができると考えられる。

【0056】

本明細書全体を通して、文脈がそうでないことを必要としない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、及び「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、述べられたステップ、もしくは要素、またはステップもしくは要素の群を含むことを意味するが、任意の他のステップ、もしくは要素、またはステップもしくは要素の群を排除することを意味しないことが理解されるだろう。「～からなる」とは、「～からなる」という語句に続くものを含み、これらに限定される。したがって、「～からなる」という語句は、挙げられる要素が必要または必須であり、かつ他の要素は存在し得ないことを示す。「～から本質的になる」とは、語句の後に列挙された任意の要素を含むことを意味し、列挙された要素の開示で指定された活性または動作を妨害しないか、またはそれらに寄与しない他の要素に限定される。したがって、「～から本質的になる」という語句は、列挙された要素が必要または必須であることを示すが、他の要素は必要に応じたものではなく、列挙された要素の活性または動作に影響するか否かに応じて存在し得るか、または存在し得ないことを示す。

【0057】

本明細書全体を通して、「一実施形態」、「実施形態」、「特定の実施形態」、「関連する実施形態」、「特定の実施形態」、「追加の実施形態」、もしくは「さらなる実施形態」またはそれらの組み合わせへの言及は、実施形態に関連して記載された特定の特徴、構造、または特性が、本発明の少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味する。したがって、本明細書全体にわたるさまざまな箇所での前述の語句の出現は、必ずしもすべてが同一の実施形態を参照しているとは限らない。さらに、特定の特徴、構造、または特性は、１つ以上の実施形態において任意の適切な方法で組み合わせることができる。

【0058】

本明細書で使用される場合、「または」及び「及び／または」という用語は、複数の構成要素を組み合わせて、または互いを除いて記述するために利用される。例えば、「ｘ、ｙ、及び／またはｚ」は、「ｘ」単独、「ｙ」単独、「ｚ」単独、「ｘ、ｙ、及びｚ」、「（ｘ及びｙ）またはｚ」、「ｘまたは（ｙ及びｚ）」、または「ｘまたはｙまたはｚ」を指すことができる。ｘ、ｙ、またはｚは、実施形態から特に除外され得ることが特に企図される。

【0059】

本出願全体にわたって、「約」という用語は、値が、細胞生物学及び分子生物学の領域におけるその普遍的かつ通常の意味に従って、値を決定するために使用される装置または方法についての誤差の標準偏差を含むことを示すのに使用される。

【0060】

親和性：本明細書で使用される場合、「親和性」という用語は、結合部分（例えば、抗原結合部分（例えば、本明細書に記載の可変ドメイン）及び／またはＦｃ受容体結合部分（例えば、本明細書に記載のＦｃＲｎ結合部分））と標的（例えば、抗原（例えば、ＢＣＭＡ）及び／またはＦｃＲ（例えば、ＦｃＲｎ））との間の結合相互作用の特徴を指し、それは結合相互作用の強さを示す。いくつかの実施形態では、親和性の尺度は、解離定数（Ｋ_Ｄ）として表される。いくつかの実施形態では、結合部分は、標的に対して高い親和性（例えば、約１０^－７Ｍ未満、約１０^－８Ｍ未満、または約１０^－９Ｍ未満、約１０^－１０未満、約１０^－１０未満、約１０^－１１未満、約１０^－１２未満のＫ_Ｄ）を有する。いくつかの実施形態では、結合部分は、標的に対して低い親和性を有する（例えば、約１０^－７Ｍよりも高い、約１０^－６Ｍよりも高い、約１０^－５Ｍより高い、または約１０^－４Ｍより高いＫ_Ｄ）。いくつかの実施形態では、結合部分は、第１のｐＨで標的に対して高い親和性を有し、第２のｐＨで標的に対して低い親和性を有し、第１のｐＨと第２のｐＨとの間のｐＨレベルで標的に対して中間の親和性を有する。

【0061】

およそまたは約：本明細書で使用される場合、１つ以上の目的の値に適用されるとき、「およそ」または「約」という用語は、言及された参照値に類似する値を指す。特定の実施形態では、「およそ」または「約」という用語は、特に明記されていない限り、または文脈から明らかでない限り（そのような数が可能な値の１００％を超える場合を除いて）、言及された参照値の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％またはそれ以下のいずれかの方向（より大きいまたはより小さい）の範囲内の値の範囲を指す。

【0062】

抗体：本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変領域、例えば、免疫グロブリン可変ドメインまたは免疫グロブリン可変ドメイン配列を提供するアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。例えば、抗体は、重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略す）及び軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略す）を含み得る。別の例では、抗体は、２つの重（Ｈ）鎖可変領域及び２つの軽（Ｌ）鎖可変領域を含む。「抗体」という用語は、抗体の抗原結合断片（例えば、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖ、及びｄＡｂ断片）、ならびに完全な抗体、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭのタイプ（及びそのサブタイプ）の無傷の免疫グロブリンを包含する。免疫グロブリンの軽鎖は、カッパまたはラムダのタイプであってもよい。

【0063】

抗原結合断片またはその抗体断片とは、無傷の抗体の一部を指す。抗原結合断片またはその抗体断片とは、抗原（例えば、ＢＣＭＡ）に結合する無傷の抗体の一部を指す。抗原結合断片は、無傷の抗体の抗原決定可変領域を含み得る。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、直鎖状抗体、抗体模倣体、ｓｃＦｖ、及び単鎖抗体が挙げられるが、これらに限定されない。

【0064】

結合部分：本明細書で使用される場合、「結合部分」は、標的、例えば目的の標的（例えば、抗原（例えば、ＢＣＭＡ）及び／またはＦｃＲ（例えば、ＦｃＲｎ））に特異的に結合することができる任意の分子または分子の一部である。結合部分としては、例えば、抗体、その抗原結合断片、Ｆｃ領域またはそのＦｃ断片、抗体模倣体、ペプチド、及びアプタマーが挙げられる。

【0065】

ＢＣＭＡ：本明細書で使用される場合、「ＢＣＭＡ」という用語は、Ｂ細胞成熟抗原を指す。ヒトＢＣＭＡタンパク質は、１８４アミノ酸：１－５４：細胞外ドメイン；５５－７７：膜貫通ドメイン；７８－１８４：細胞質ドメインからなる。ＢＣＭＡのアミノ酸配列は、以下を含む：

【化1】

ＢＣＭＡはシグナル伝達ペプチドを欠き、ＢＡＦＦ受容体、膜貫通活性化因子、シクロフィリンリガンド相互作用因子、及びカルシウム調節因子（ＴＡＣＩ）のような他の受容体に類似している。これらの受容体は、Ｂ細胞の成熟及び形質細胞への分化において主要な役割を果たす。これらのリガンドは、ＭＭ患者において発現が増加するＢＡＦＦ及びＡＰＲＩＬを含む。ＢＣＭＡは、細胞表面受容体であり、ＣＤ２６９及び、ＴＮＦＲＳＦ１７遺伝子によってコードされる腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１７（ＴＮＦＲＳＦ１７）としても知られる。この受容体は、主に成熟Ｂリンパ球において、及び多くの場合に多発性骨髄腫（ＭＭ）において発現する。

【0066】

相補性決定領域（ＣＤＲ）：可変ドメインの「ＣＤＲ」は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの両方の蓄積、すなわちＡｂＭ、接触及び／または立体配座の定義、または当該技術分野で周知のＣＤＲ決定の任意の方法に従って同定される可変領域内のアミノ酸残基である。抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔらによって最初に定義された超可変領域として識別される場合がある。例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，ＮＩＨ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．を参照されたい。ＣＤＲの位置は、Ｃｈｏｔｈｉａ他によって最初に説明された構造的ループ構造としてまた識別され得る。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３，１９８９を参照されたい。ＣＤＲ同定のための他のアプローチとしては、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの間の妥協案であり、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（現在のＡｃｃｅｌｒｙｓ（登録商標））を使用して導出される「ＡｂＭ定義」、またはＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６２：７３２－７４５，１９９６に記載される、観察された抗原接触に基づくＣＤＲの「接触定義」が挙げられる。本明細書でＣＤＲの「立体配座定義」と呼ばれる別のアプローチでは、ＣＤＲの位置は、抗原結合にエンタルピーの寄与をする残基として同定することができる。例えば、Ｍａｋａｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８３：１ １５６－１１６６，２００８を参照されたい。さらに他のＣＤＲ境界定義は、上記のアプローチの１つに厳密に従わない場合があるが、特定の残基もしくは残基の群またはＣＤＲ全体でさえ、抗原結合に大きな影響を与えないという予測または実験的発見に照らして短縮または延長される可能性があるが、それでもＫａｂａｔのＣＤＲの少なくとも一部と重複する。本明細書で使用される場合、ＣＤＲは、アプローチの組み合わせを含む、当該技術分野で知られている任意のアプローチによって定義されるＣＤＲを指し得る。本明細書で使用される方法は、これらのアプローチのいずれかに従って定義されたＣＤＲを利用することができる。１つを超えるＣＤＲを含む任意の所与の実施形態について、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、拡張、ＡｂＭ、接触、及び／または立体配座の定義に従って定義され得る。

【0067】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）：抗原結合部分（例えば、ＢＣＭＡ抗体）及びシグナル伝達ドメイン（例えば、Ｔ細胞受容体からのシグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζ））を含むキメラ分子。典型的には、ＣＡＲは、抗原結合部分、膜貫通ドメイン、及びエンドドメインを含む。エンドドメインは、典型的には、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴ ＡＭ）、例えばＣＤ３ζまたはＦｃｅＲＩｙを有するシグナル伝達鎖を含む。いくつかの例において、エンドドメインは、少なくとも１つのさらなる共刺激ドメイン（例えば、ＣＤ２８及び／またはＣＤ１３７）の細胞内部分をさらに含む。

【0068】

定常領域：本明細書で使用される場合、「定常領域」という用語は、抗体の１つ以上の定常領域免疫グロブリンドメインに対応する、またはそれに由来するポリペプチドを指す。定常領域は、以下の免疫グロブリンドメインのうちのいずれかまたはすべてを含むことができる：ＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、またはＩｇＭに由来する）、及びＣＨ４ドメイン（ＩｇＥまたはＩｇＭに由来する）。

【0069】

操作された：本明細書で使用される場合、「操作された」という用語は、本明細書で使用される場合、細胞、核酸、ポリペプチド、ベクターなどを含む、ヒトの手によって生成される実体を指す。少なくともいくつかの場合において、操作された実体は合成であり、天然に存在しない、または本開示において利用される様式で構成される要素を含む。

【0070】

エピトープ：本明細書で使用される場合、「エピトープ」は当該技術分野の用語であり、抗体が特異的に結合できる抗原の局在領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの連続アミノ酸（線状もしくは連続のエピトープ）であり得、またはエピトープは、例えば、ポリペプチド（複数可）の２つ以上の非連続領域（立体配座、非線状、不連続、もしくは不連続のエピトープ）から一緒になり得る。特定の実施形態では、抗体が結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析と組み合わせた水素／重水素交換（例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）、アレイベースのオリゴペプチドスキャンアッセイ、及び／または変異導入マッピング（例えば、部位特異的変異導入マッピング）によって決定され得る。Ｘ線結晶学の場合、結晶化は、当該技術分野で知られている方法のいずれかを使用して達成することができる（例えば、Ｇｉｅｇｅ Ｒ ｅｔ ａｌ，（１９９４）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５０（Ｐｔ ４）：３３９－３５０；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９９０）Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １８９：１－２３；Ｃｈａｙｅｎ ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５ ：１２６９－１２７４；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（ １９７６）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５１：６３００－６３０３）。抗体：抗原結晶は、周知のＸ線回折技術を使用して研究することができ、例えばＲｅｆｍａｃ及びＰｈｅｎｉｘなどの当該技術分野で周知のコンピュータソフトウェアを使用して精密化することができる。変異導入マッピング研究は、当業者に知られている任意の方法を使用して達成することができる。例えば、アラニンスキャニング変異導入技術を含む変異導入技術の説明について、Ｃｈａｍｐｅ Ｍ ｅｔ ａｌ，（１９９５）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７０：１３８８－ １３９４及びＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＢＣ ＆ Ｗｅｌｌｓ ＪＡ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１－１０８５を参照されたい。

【0071】

Ｆｃ領域：本明細書で使用される場合、「Ｆｃ領域」という用語は、２つの「Ｆｃポリペプチド」の二量体を指し、それぞれの「Ｆｃポリペプチド」は、第１の定常領域免疫グロブリンドメインを除く抗体の定常領域を含む。いくつかの実施形態では、「Ｆｃ領域」は、１つ以上のジスルフィド結合、化学リンカー、またはペプチドリンカーによって連結された２つのＦｃポリペプチドを含む。「Ｆｃポリペプチド」は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにＩｇＥ及びＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメインを指し、これらのドメインに対してＮ末端のフレキシブルなヒンジの一部またはすべてを含み得る。ＩｇＧの場合、「Ｆｃポリペプチド」は、免疫グロブリンドメインＣガンマ２（Ｃγ２）及びＣガンマ３（Ｃγ３）、ならびにＣガンマ１（Ｃγ１）とＣγ２の間のヒンジの下部を含む。Ｆｃポリペプチドの境界は変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃポリペプチドは、通常、Ｔ２２３またはＣ２２６またはＰ２３０からそのカルボキシル末端までの残基を含むと定義され、ナンバリングは、Ｋａｂａｔら（１９９１，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，ＶＡ）のＥＵインデックスに従う。ＩｇＡの場合、Ｆｃポリペプチドは、免疫グロブリンドメインＣアルファ２（Ｃα２）及びＣアルファ３（Ｃα３）、ならびにＣアルファ１（Ｃα１）とＣα２の間のヒンジの下部を含む。Ｆｃ領域は、合成、組換え、またはＩＶＩＧなどの天然源から生成されたものであり得る。

【0072】

単離された：本明細書で使用される場合、「単離された」という用語とは、他の物質を実質的に含まない分子、生物学的物質、または細胞物質を指す。一態様では、「単離された」という用語とは、天然の供給源に存在するような、他のＤＮＡもしくはＲＮＡ、またはタンパク質もしくはポリペプチド、または細胞もしくは細胞小器官、または組織もしくは器官からそれぞれ分離された核酸、例えばＤＮＡもしくはＲＮＡ、またはタンパク質もしくはポリペプチド、または細胞もしくは細胞小器官、または組織もしくは器官を指す。「単離された」という用語はまた、組み換えＤＮＡ技術によって製造されるときには細胞物質、ウイルス物質、もしくは培地を、または化学的に合成されるときには化学前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まない核酸またはペプチドを指す。さらに、「単離された核酸」は、断片として天然には存在せず、そして天然の状態では見出されないであろう核酸断片を含むことを意味する。「単離された」という用語はまた、他の細胞タンパク質から単離され、精製されたポリペプチドと組換えポリペプチドの両方を包含することを意味するポリペプチドを指すために本明細書で使用される。「単離された」という用語は、本明細書において、他の細胞または組織から単離される細胞または組織も指すよう使用され、培養及び操作された細胞及び組織の両方を包含することを意味する。

【0073】

Ｋ_ａ：本明細書で使用される場合、「Ｋ_ａ」は、結合部分／標的複合体を形成するための特定の結合部分と標的の会合速度を指す。

【0074】

Ｋ_ｄ：本明細書で使用される場合、「Ｋ_ｄ」は、特定の結合部分／標的複合体の解離速度を指す。

【0075】

Ｋ_Ｄ：本明細書で使用される場合、「Ｋ_Ｄ」は解離定数を指し、これはＫ_ｄのＫ_ａに対する比（すなわち、Ｋ_ｄ／Ｋ_ａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される。Ｋ_Ｄ値は、当該技術分野で十分に確立された方法を使用して、例えば、表面プラズモン共鳴を使用するか、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを使用して決定することができる。

【0076】

ナチュラルキラー細胞：ナチュラルキラー細胞、またはＮＫ細胞は、自然免疫系に重要な細胞傷害性リンパ球の一種である。ＮＫ細胞の役割は、脊椎動物の適応免疫応答における細胞傷害性Ｔ細胞の役割と類似している。ＮＫ細胞は、ウイルス感染細胞に対する迅速な応答を提供し、感染後約３日で作用し、腫瘍形成に応答する。

【0077】

同一性パーセント：本明細書で使用される場合、２つの配列間の「同一性パーセント」及び類似の語句は、２つの配列の最適なアライメントのために導入する必要のあるギャップの数とそれぞれのギャップの長さを考慮して、配列によって共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、

【数1】

また、２つのアミノ酸配列間の配列同一性の程度を決定する際に、当業者は、いわゆる「保存的」アミノ酸置換を考慮してもよく、これは、一般に、アミノ酸残基が類似の化学構造の別のアミノ酸残基で置換され、ポリペプチドの機能、活性、または他の生物学的特性にほとんど、または本質的に影響を及ぼさないアミノ酸置換として記載され得る。そのような保存的アミノ酸置換は、当該技術分野で周知であり、例えば、ＷＯ ０４／０３７９９９、ＧＢ－Ａ－２ ３５７ ７６８、ＷＯ ９８／４９１８５、ＷＯ ００／４６３８３、及びＷＯ ０１／０９３００から引用され、そのような置換の（好ましい）型及び／または組み合わせは、ＷＯ ０４／０３７９９９及びＷＯ ９８／４９１８５から、ならびに、それらに引用されるさらなる参照からの関連する教示に基づいて選択され得る。

【0078】

予防する：本明細書で使用される場合、「予防する」、及び「予防される」、「予防すること」などの類似の語は、疾患または状態、例えば、がんの発生または再発を予防、阻害、またはその可能性を低減するためのアプローチを示す。また、疾患または状態の発症または再発を遅延させること、または疾患または状態の症状の発症または再発を遅延させることも指す。本明細書で使用される場合、「予防」及び同様の語は、疾患または状態の発症または再発の前に、疾患または状態の強度、影響、症状、及び／または負荷を低減することも含む。

【0079】

試料：「試料」という用語は、本明細書で使用される場合、一般に、生体試料を指す。試料は、個体からの組織または細胞から採取され得る。場合によっては、試料は、組織生検、血液（例えば、全血）、血漿、細胞外液、乾燥血液スポット、培養細胞、廃棄組織を含み得るか、またはそれらに由来し得る。試料は、収集前に供給源から単離されていてもよい。非限定的な例としては、血液、脳脊髄液、胸膜液、羊水、リンパ液、唾液、尿、便、涙、汗、または粘膜排泄物、及び収集前に一次供給源から単離された他の体液が挙げられる。いくつかの例では、試料は、試料調製中に、その一次供給源（細胞、組織、血液などの体液、環境試料など）から単離される。試料は、その一次供給源から精製または他の方法で濃縮されていてもされていなくてもよい。場合によっては、一次供給源は、さらなる処理の前にホモジナイズされる。試料を濾過または遠心分離して、バフィーコート、脂質、または粒子状物質を除去することができる。試料はまた、核酸について精製または濃縮され得るか、またはＲＮａｓｅで処理され得る。試料は、無傷、断片化、または部分的に分解された組織または細胞を含み得る。

【0080】

単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）：本明細書で使用される場合、「単鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」という用語は、Ｖ_Ｈ：：Ｖ_Ｌヘテロ二量体を形成するために共有結合された、免疫グロブリン（例えば、マウスまたはヒト）の重鎖（Ｖ_Ｈ）及び軽鎖（Ｖ_Ｌ）の可変領域の融合タンパク質を指す。重鎖（Ｖ_Ｈ）と軽鎖（Ｖ_Ｌ）は、直接結合されるか、またはＶ_ＨのＮ末端をＶ_ＬのＣ末端に、もしくはＶ_ＨのＣ末端をＶ_ＬのＮ末端に接続する、ペプチドコードリンカー（例えば、１０、１５、２０、２５個のアミノ酸）によって結合される。リンカーは通常、柔軟性のためにグリシンが豊富で、溶解性のためにセリンまたはトレオニンが豊富である。リンカーは、細胞外抗原結合ドメインの重鎖可変領域と軽鎖可変領域を連結することができる。リンカーの非限定的な例は、Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．８０（６）：１９１０－１９１７（２００８）及びＷＯ２０１４／０８７０１０に開示され、それらの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0081】

対象：「対象」という用語は、本明細書で使用される場合、概して、処理または分析を受けている生体試料を有する個体を指し、特定の場合、がんを有するか、またはがんを有することが疑われる。対象は、哺乳動物、例えば、ヒト、実験動物（例えば、霊長類（類人猿、サル、オランウータン、またはチンパンジーなど）、ラット、マウス、ウサギ）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、シチメンチョウ、及びニワトリ）、家庭用ペット（例えば、イヌ、ネコ、及び齧歯類）、ウマ、及びトランスジェニック非ヒト動物を含む、方法または材料の対象である任意の生物または動物の対象であり得る。対象は、患者、例えば、良性または悪性の新生物、またはがんなどの疾患（医学的状態と呼ばれ得る）を有するか、または有することが疑われる患者であり得る。対象は、治療を受けている、または受けていたものであり得る。対象は、無症候性であってもよい。対象は健康な個体であるが、癌の予防が望ましいものであり得る。「個体」という用語は、少なくともいくつかの場合において、交換可能に使用され得る。本明細書で使用される場合、「対象」または「個体」は、医療施設に収容されていても、されていなくてもよく、医療施設の外来患者として治療され得る。個体は、インターネットを介して１つ以上の医療組成物を受け取っていてもよい。個体は、ヒトまたは非ヒト動物の任意の年齢を含み得、したがって、成体及び若年者（すなわち、小児）ならびに幼児の両方を含み、子宮内個体を含む。この用語は、医学的治療の必要性を意味し、したがって、個体は、臨床的または基本的な科学研究の支援に関わらず、自発的または非自発的に実験の一部であり得ることを意図していない。

【0082】

標的：本明細書で使用される場合、「標的」は、抗体の結合部分またはその抗原結合断片によって特異的に結合される任意の分子である。いくつかの実施形態では、標的は、本明細書に記載の抗原（例えば、ＢＣＭＡ）である。いくつかの実施形態では、標的はＦｃＲ（例えば、ＦｃＲｎ）である。「第１の標的」及び「第２の標的」という用語は、本明細書では、同じ分子種の２つの分子ではなく、２つの異なる分子種の分子を指すために使用される。例えば、いくつかの実施形態では、第１の標的は血清タンパク質であり、第２の標的はＦｃＲｎである。

【0083】

治療有効量：本明細書で使用される場合、「治療有効量」という用語は、任意の医学的処理に適用可能な妥当な利益／リスク比で、処理される対象に治療効果を与える治療用分子（例えば、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体）の量を指す。治療効果は、客観的（すなわち、いくつかの試験またはマーカーによって測定可能である）または主観的（すなわち、対象が効果の徴候を示すか、または効果を感じる）であり得る。特に、「治療有効量」は、特定の疾患または状態を処理、改善、または予防するのに有効な、あるいは例えば、疾患に関連する症状を改善すること、疾患の発症を予防もしくは遅延させること、及び／または疾患の症状の重症度もしくは頻度をも軽減することによって検出可能な治療効果または予防効果を示すのに有効な、治療用分子または組成物の量を指す。治療有効量は、複数の単位用量から構成され得る投与レジメンで投与され得る。任意の特定の治療用分子について、治療有効量（及び／または有効な投与レジメン内での適切な単位用量）は、例えば、投与経路、他の医薬品との組み合わせに応じて変動し得る。また、任意の特定の対象に対する具体的な治療有効量（及び／または単位用量）は、処理されている障害及び障害の重症度；使用される特定の医薬品の活性；使用される特定の組成物；対象の年齢、体重、全体的な健康状態、性別、及び食事；使用される特定の治療用分子の投与時間、投与経路、及び／または排出もしくは代謝の速度；処理期間；ならびに医学分野において周知の類似の因子を含む種々の因子に依存し得る。

【0084】

治療：本明細書で使用される場合、用語「治療」または「治療すること」は、疾患または病理学的状態の症状または病理に対する任意の有益なまたは望ましい効果を含み、治療される疾患または状態、例えば、がんの１つ以上の測定可能なマーカーの最小限の減少さえも含み得る。治療は、任意選択で、疾患または状態の症状の低減または改善、または疾患または状態の進行の遅延のいずれかを含み得る。「治療」は、必ずしも、疾患もしくは状態またはその関連する症状の完全な根絶または治癒を示さない。非限定的な例として、治療は、特定の疾患、障害、及び／または状態、例えばＢＣＭＡ陽性がんの１つ以上の症状または特徴を、部分的または完全に、軽減し、改善し、緩和し、阻害し、それらの発症を遅延させ、それらの重症度を低減し、及び／またはそれらの発生率を低減する治療用分子（例えば、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体及びＢＣＭＡ結合ＣＡＲ）の任意の投与を指す。場合によっては、治療は、関連する疾患、障害、及び／または状態の徴候を示さない対象のもの、及び／または疾患、障害、及び／または状態の初期徴候のみを示す対象のものであり得る。代替的にまたは追加的に、そのような治療は、関連する疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の確立された徴候を示す対象のものであり得る。

【0085】

腫瘍抗原：本明細書で使用される場合、「腫瘍抗原」は、その発現ががんを引き起こす抗原性を有する生物学的分子を意味する。

【0086】

治療、診断、または生理学的な目的または効果に関連する任意の方法はまた、記載される治療、診断、または生理学的な目的または効果を達成または実施するための、本明細書に記載される任意の化合物、組成物、または薬剤の「使用」などの「使用」請求項の言語で記載され得る。

【0087】

Ｉ．抗体
本開示は、部分的に、ＢＣＭＡ（例えば、ヒトＢＣＭＡ）への結合を示す操作された抗体及びその抗原結合断片の発見に基づく。ＢＣＭＡは、単一の膜貫通ドメイン、細胞質Ｃ末端、及び細胞外Ｎ末端を有するタンパク質である。ＢＣＭＡは、成熟Ｂリンパ球によって優先的に発現され、その過剰発現及び活性化は、生存、増殖、接着、破骨細胞活性化、血管新生、転移、及び免疫抑制に重要な遺伝子の発現の増強に関連する。種々の血液悪性腫瘍におけるＢＣＭＡ発現の証拠があり、ＢＣＭＡがこれらの疾患においてバイオマーカーまたは治療標的として重要な役割を果たし得ることを示唆している。

【0088】

本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体は、ＢＣＭＡに結合するように設計される。特定の実施形態では、本開示の抗ＢＣＭＡ抗体及びその断片は、ヒトＢＣＭＡに結合する。特定の実施形態では、ヒトＢＣＭＡは、Ｕｎｉｐｒｏｔ参照番号Ｑ０２２２３（配列番号２２）を有するアミノ酸配列またはその断片を含むか、またはそれからなる。配列番号２２は以下に提供される：
ＭＬＱＭＡＧＱＣＳＱＮＥＹＦＤＳＬＬＨＡＣＩＰＣＱＬＲＣＳＳＮＴＰＰＬＴＣＱＲＹＣＮＡＳＶＴＮＳＶＫＧＴＮＡＩＬＷＴＣＬＧＬＳＬＩＩＳＬＡＶＦＶＬＭＦＬＬＲＫＩＮＳＥＰＬＫＤＥＦＫＮＴＧＳＧＬＬＧＭＡＮＩＤＬＥＫＳＲＴＧＤＥＩＩＬＰＲＧＬＥＹＴＶＥＥＣＴＣＥＤＣＩＫＳＫＰＫＶＤＳＤＨＣＦＰＬＰＡＭＥＥＧＡＴＩＬＶＴＴＫＴＮＤＹＣＫＳＬＰＡＡＬＳＡＴＥＩＥＫＳＩＳＡＲ（配列番号２２）

【0089】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体及びその抗原結合断片は、ＢＣＭＡの細胞外ドメインに結合する。特定の実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体及びその抗原結合断片は、ヒトＢＣＭＡの細胞外ドメインに結合する。特定の実施形態では、ヒトＢＣＭＡの細胞外ドメインは、配列番号２２のアミノ酸１～５４を含むか、またはそれからなる。

【0090】

特定の実施形態では、ＢＣＭＡタンパク質は、配列番号２２に示されるアミノ酸配列またはその断片と、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。

【0091】

本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体は、免疫グロブリン、重鎖抗体、軽鎖抗体、ＬＲＲベースの抗体、または抗体様特性を有する他のタンパク質足場、ならびに例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’２、Ｆａｂ_２、Ｆａｂ_３、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖ、Ｆｅｂ、ｓｃＦｖ、ＳＭＩＰ、抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、マキシボディ、タンダブ、ＤＶＤ、ＢｉＴｅ、ＴａｎｄＡｂなどを含む当該技術分野で公知のその他の免疫学的結合部分、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。抗体の異なるクラスのサブユニット構造及び三次元構成は、当該技術分野で知られている。

【0092】

抗体は、４つのポリペプチド鎖、例えば、２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖の免疫グロブリン分子であり得る。重鎖は、重鎖可変ドメイン及び重鎖定常ドメインを含むことができる。重鎖定常ドメインは、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、及び場合によってはＣＨ４領域を含むことができる。適切な重鎖定常領域は、任意の免疫グロブリン（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ、またはＩｇＥ）に由来し得る。いくつかの実施形態では、適切な重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４に由来し得る。特定の実施形態では、適切な重鎖定常領域はＩｇＧ１に由来する。軽鎖は、軽鎖可変ドメイン及び軽鎖定常ドメインを含むことができる。軽鎖定常ドメインは、カッパ軽鎖またはラムダ軽鎖のいずれかを含むことができる。重鎖の重鎖可変ドメイン及び軽鎖の軽鎖可変ドメインは、典型的には、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる可変性の領域にさらに分割され得る。そのような重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、アミノ末端からカルボキシル末端までＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配置された、３つのＣＤＲと４つのフレームワーク領域を含むことができる。これらのうちの１つ以上は、本明細書に記載されているように操作することができる。それぞれのドメインへのアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７ ａｎｄ １９９１））、またはＣｈｏｔｈｉａ ＆ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３（１９８９）の定義に従う。本明細書で使用される場合、ＣＤＲは、重鎖（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）及び軽鎖（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）のそれぞれについて言及される。

【0093】

本発明の実施形態は、ＩＭＧＴ、Ｋａｂａｔ、及びＣｈｏｔｈｉａナンバリングシステムなどの従来のナンバリングシステムを使用して識別される、本明細書に記載のｖＨ及びｖＬドメインに見出されるＣＤＲを含む抗体を含む。そのようなナンバリングシステムは、当該技術分野において周知である。

【0094】

重鎖可変領域
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、共通の重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、以下の重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含む：
ｖＨＣＤＲ１：ＳＹＡＩＨ（配列番号２）
ｖＨＣＤＲ２：ＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧ（配列番号３）
ｖＨＣＤＲ３：ＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨ（配列番号４）

【0095】

特定の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って識別される。

【0096】

いくつかの実施形態では、重鎖可変領域（ＶＨ）は、ＱＩＴＬＲＥＳＧＧＤＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＨＭＮＳＬＲＡＥＤＴＧＶＹＹＣＡＲＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含む。

【0097】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、
ＱＩＴＬＲＥＳＧＧＤＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＨＭＮＳＬＲＡＥＤＴＧＶＹＹＣＡＲＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号５４）に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する重鎖アミノ酸配列を含む。

【0098】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号５４に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有し、一方で本明細書に記載のｖＨ ＣＤＲ１、ｖＨＣＤＲ２、及び／またはｖＨＣＤＲ３の配列のうちの１つ以上をさらに含む重鎖アミノ酸配列を含む。

【0099】

いくつかの実施形態では、操作された抗体は、配列番号１と同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７０％、７５％、８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％）同一または相同であるアミノ酸配列を含む。例えば、ＶＨは、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％同一または相同であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号１と比べて、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、または２個以下のアミノ酸置換を含む。

【0100】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ可変重鎖領域は、以下の核酸配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる：
ｃａｇａｔｃａｃｔｔｔａａｇｇｇａｇａｇｃｇｇａｇｇｃｇａｔｇｔｇｇｔｇｃａｇｃｃｃｇｇｔｃｇｔｔｃｔｔｔａａｇａｃｔｇａｇｃｔｇｔｇｃｃｇｃｃａｇｃｇｇｃｔｔｃａｃｃｔｔｃａｇｃａｇｃｔａｃｇｃｃａｔｃｃａｃｔｇｇｇｔｇａｇａｃａａｇｃｔｃｃｃｇｇｔａａａｇｇｔｔｔａｇａｇｔｇｇｇｔｇｇｃｔｇｔｇａｃｔｔｇｇｃａｃｇａｃｇｇｃｔｃｃａａｃａａｇｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｇａｇｃｇｔｇａｔｇｇｇｔｃｇｔｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｔｃｇｔｇａｃａａｃａｇｃａａｇａａｃａｃｔｔｔａｔａｔｔｔａｃａｃａｔｇａａｃｔｃｔｔｔａａｇｇｇｃｃｇａｇｇａｃａｃｃｇｇｃｇｔｇｔａｃｔａｃｔｇｃｇｃｃａｇａｇｃｃａａｇｔｔｃｇｇｃｇａｇｃｃｃｃａｇｔａｃｔｔｃｃａｇｃａｃｔｇｇｇｇｃｃａａｇｇｔａｃａｃｔｇｇｔｇａｃｃｇｔｇｔｃｃａｇｃ（配列番号５５）

【0101】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体重鎖は、
ｃａｇａｔｃａｃｔｔｔａａｇｇｇａｇａｇｃｇｇａｇｇｃｇａｔｇｔｇｇｔｇｃａｇｃｃｃｇｇｔｃｇｔｔｃｔｔｔａａｇａｃｔｇａｇｃｔｇｔｇｃｃｇｃｃａｇｃｇｇｃｔｔｃａｃｃｔｔｃａｇｃａｇｃｔａｃｇｃｃａｔｃｃａｃｔｇｇｇｔｇａｇａｃａａｇｃｔｃｃｃｇｇｔａａａｇｇｔｔｔａｇａｇｔｇｇｇｔｇｇｃｔｇｔｇａｃｔｔｇｇｃａｃｇａｃｇｇｃｔｃｃａａｃａａｇｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｇａｇｃｇｔｇａｔｇｇｇｔｃｇｔｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｔｃｇｔｇａｃａａｃａｇｃａａｇａａｃａｃｔｔｔａｔａｔｔｔａｃａｃａｔｇａａｃｔｃｔｔｔａａｇｇｇｃｃｇａｇｇａｃａｃｃｇｇｃｇｔｇｔａｃｔａｃｔｇｃｇｃｃａｇａｇｃｃａａｇｔｔｃｇｇｃｇａｇｃｃｃｃａｇｔａｃｔｔｃｃａｇｃａｃｔｇｇｇｇｃｃａａｇｇｔａｃａｃｔｇｇｔｇａｃｃｇｔｇｔｃｃａｇｃｇｃｔａｇｃａｃｃａａｇｇｇｃｃｃａｔｃｇｇｔｃｔｔｃｃｃｃｃｔｇｇｃａｃｃｃｔｃｃｔｃｃａａｇａｇｃａｃｃｔｃｔｇｇｇｇｇｃａｃａｇｃｇｇｃｃｃｔｇｇｇｃｔｇｃｃｔｇｇｔｃａａｇｇａｃｔａｃｔｔｃｃｃｃｇａａｃｃｇｇｔｇａｃｇｇｔｇｔｃｇｔｇｇａａｃｔｃａｇｇｃｇｃｃｃｔｇａｃｃａｇｃｇｇｃｇｔｇｃａｃａｃｃｔｔｃｃｃｇｇｃｔｇｔｃｃｔａｃａｇｔｃｃｔｃａｇｇａｃｔｃｔａｃｔｃｃｃｔｃａｇｃａｇｃｇｔｇｇｔｇａｃｃｇｔｇｃｃｃｔｃｃａｇｃａｇｃｔｔｇｇｇｃａｃｃｃａｇａｃｃｔａｃａｔｃｔｇｃａａｃｇｔｇａａｔｃａｃａａｇｃｃｃａｇｃａａｃａｃｃａａｇｇｔｇｇａｃａａｇａｇａｇｔｔｇａｇｃｃｃａａａｔｃｔｔｇｔｇａｃａａａａｃｔｃａｃａｃａｔｇｃｃｃａｃｃｇｔｇｃｃｃａｇｃａｃｃｔｇａａｃｔｃｃｔｇｇｇｇｇｇａｃｃｇｔｃａｇｔｃｔｔｃｃｔｃｔｔｃｃｃｃｃｃａａａａｃｃｃａａｇｇａｃａｃｃｃｔｃａｔｇａｔｃｔｃｃｃｇｇａｃｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａｃａｔｇｃｇｔｇｇｔｇｇｔｇｇａｃｇｔｇａｇｃｃａｃｇａａｇａｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａａｇｔｔｃａａｃｔｇｇｔａｃｇｔｇｇａｃｇｇｃｇｔｇｇａｇｇｔｇｃａｔａａｔｇｃｃａａｇａｃａａａｇｃｃｇｃｇｇｇａｇｇａｇｃａｇｔａｃａａｃａｇｃａｃｇｔａｃｃｇｔｇｔｇｇｔｃａｇｃｇｔｃｃｔｃａｃｃｇｔｃｃｔｇｃａｃｃａｇｇａｃｔｇｇｃｔｇａａｔｇｇｃａａｇｇａｇｔａｃａａｇｔｇｃａａｇｇｔｃｔｃｃａａｃａａａｇｃｃｃｔｃｃｃａｇｃｃｃｃｃａｔｃｇａｇａａａａｃｃａｔｃｔｃｃａａａｇｃｃａａａｇｇｇｃａｇｃｃｃｃｇａｇａａｃｃａｃａｇｇｔｇｔａｔａｃｃｃｔｇｃｃｃｃｃａｔｃｃｃｇｇｇａｇｇａｇａｔｇａｃｃａａｇａａｃｃａｇｇｔｃａｇｃｃｔｇａｃｃｔｇｃｃｔｇｇｔｃａａａｇｇｃｔｔｃｔａｔｃｃｃａｇｃｇａｃａｔｃｇｃｃｇｔｇｇａｇｔｇｇｇａｇａｇｃａａｔｇｇｇｃａｇｃｃｇｇａｇａａｃａａｃｔａｃａａｇａｃｃａｃｇｃｃｔｃｃｃｇｔｇｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａｃｇｇｃｔｃｃｔｔｃｔｔｃｃｔｃｔａｔａｇｃａａｇｃｔｃａｃｃｇｔｇｇａｃａａｇａｇｃａｇｇｔｇｇｃａｇｃａｇｇｇｇａａｃｇｔｃｔｔｃｔｃａｔｇｃｔｃｃｇｔｇａｔｇｃａｔｇａｇｇｃｔｃｔｇｃａｃａａｃｃａｃｔａｃａｃｇｃａｇａａｇａｇｃｃｔｃｔｃｃｃｔｇｔｃｃｃｃｇｇｇｔ（配列番号５６）に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する核酸配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる。

【0102】

いくつかの実施形態では、操作された抗体は、配列番号５６と同一の核酸配列を有するポリヌクレオチドによってコードされる重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号５４と比べて、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、または２個以下のアミノ酸置換を含む抗体をコードする核酸配列を含む。

【0103】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号９に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドによってコードされ、一方で、本明細書に記載のｖＨＣＤＲ１、ｖＨＣＤＲ２、及び／またはｖＨＣＤＲ３配列のうちの１つ以上をも含む。

【0104】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、共通の重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、以下の重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含む：
ｖＨＣＤＲ１：ＳＹＡＩＨ（配列番号２）
ｖＨＣＤＲ２：ＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧ（配列番号３）
ｖＨＣＤＲ３：ＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨ（配列番号４）

【0105】

特定の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って識別される。

【0106】

いくつかの実施形態では、重鎖の可変領域は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＨＭＮＳＬＲＡＥＤＴＧＶＹＹＣＡＲＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含む。

【0107】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＨＭＮＳＬＲＡＥＤＴＧＶＹＹＣＡＲＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号５７）に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0108】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号５７に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する重鎖アミノ酸配列を含み、一方で、本明細書に記載のｖＨＣＤＲ１、ｖＨＣＤＲ２、及び／またはｖＨＣＤＲ３配列のうちの１つ以上をも含む。

【0109】

いくつかの実施形態では、操作された抗体は、配列番号５７と同一の重鎖アミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、配列番号９に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７０％（例えば、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％）同一または相同であるアミノ酸配列を含む。例えば、ＶＨは、配列番号９に示されるアミノ酸配列に対して約７０％、７５％、８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％同一または相同であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号９と比べて、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、または２個以下のアミノ酸置換を含む。

【0110】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ可変重鎖は、以下の核酸配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる：
ｇａｇｇｔｇｃａｇｔｔａｇｔｇｇａｇａｇｃｇｇａｇｇｃｇａｔｇｔｇｇｔｇｃａｇｃｃｃｇｇｔｃｇｔｔｃｔｔｔａａｇａｃｔｇａｇｃｔｇｔｇｃｃｇｃｃａｇｃｇｇｃｔｔｃａｃｃｔｔｃａｇｃａｇｃｔａｃｇｃｃａｔｃｃａｃｔｇｇｇｔｇａｇａｃａａｇｃｔｃｃｃｇｇｔａａａｇｇｔｔｔａｇａｇｔｇｇｇｔｇｇｃｔｇｔｇａｃｔｔｇｇｃａｃｇａｃｇｇｃｔｃｃａａｃａａｇｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｇａｇｃｇｔｇａｔｇｇｇｔｃｇｔｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｔｃｇｔｇａｃａａｃａｇｃａａｇａａｃａｃｔｔｔａｔａｔｔｔａｃａｃａｔｇａａｃｔｃｔｔｔａａｇｇｇｃｃｇａｇｇａｃａｃｃｇｇｃｇｔｇｔａｃｔａｃｔｇｃｇｃｃａｇａｇｃｃａａｇｔｔｃｇｇｃｇａｇｃｃｃｃａｇｔａｃｔｔｃｃａｇｃａｃｔｇｇｇｇｃｃａａｇｇｔａｃａａｃｃｇｔｇａｃｃｇｔｇｔｃｃａｇｃ（配列番号５８）

【0111】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体をコードするポリヌクレオチドは、
ｇａｇｇｔｇｃａｇｔｔａｇｔｇｇａｇａｇｃｇｇａｇｇｃｇａｔｇｔｇｇｔｇｃａｇｃｃｃｇｇｔｃｇｔｔｃｔｔｔａａｇａｃｔｇａｇｃｔｇｔｇｃｃｇｃｃａｇｃｇｇｃｔｔｃａｃｃｔｔｃａｇｃａｇｃｔａｃｇｃｃａｔｃｃａｃｔｇｇｇｔｇａｇａｃａａｇｃｔｃｃｃｇｇｔａａａｇｇｔｔｔａｇａｇｔｇｇｇｔｇｇｃｔｇｔｇａｃｔｔｇｇｃａｃｇａｃｇｇｃｔｃｃａａｃａａｇｔａｃｔａｔｇｃｃｇａｇａｇｃｇｔｇａｔｇｇｇｔｃｇｔｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｔｃｇｔｇａｃａａｃａｇｃａａｇａａｃａｃｔｔｔａｔａｔｔｔａｃａｃａｔｇａａｃｔｃｔｔｔａａｇｇｇｃｃｇａｇｇａｃａｃｃｇｇｃｇｔｇｔａｃｔａｃｔｇｃｇｃｃａｇａｇｃｃａａｇｔｔｃｇｇｃｇａｇｃｃｃｃａｇｔａｃｔｔｃｃａｇｃａｃｔｇｇｇｇｃｃａａｇｇｔａｃａａｃｃｇｔｇａｃｃｇｔｇｔｃｃａｇｃｇｃｔａｇｃａｃｃａａｇｇｇｃｃｃａｔｃｇｇｔｃｔｔｃｃｃｃｃｔｇｇｃａｃｃｃｔｃｃｔｃｃａａｇａｇｃａｃｃｔｃｔｇｇｇｇｇｃａｃａｇｃｇｇｃｃｃｔｇｇｇｃｔｇｃｃｔｇｇｔｃａａｇｇａｃｔａｃｔｔｃｃｃｃｇａａｃｃｇｇｔｇａｃｇｇｔｇｔｃｇｔｇｇａａｃｔｃａｇｇｃｇｃｃｃｔｇａｃｃａｇｃｇｇｃｇｔｇｃａｃａｃｃｔｔｃｃｃｇｇｃｔｇｔｃｃｔａｃａｇｔｃｃｔｃａｇｇａｃｔｃｔａｃｔｃｃｃｔｃａｇｃａｇｃｇｔｇｇｔｇａｃｃｇｔｇｃｃｃｔｃｃａｇｃａｇｃｔｔｇｇｇｃａｃｃｃａｇａｃｃｔａｃａｔｃｔｇｃａａｃｇｔｇａａｔｃａｃａａｇｃｃｃａｇｃａａｃａｃｃａａｇｇｔｇｇａｃａａｇａｇａｇｔｔｇａｇｃｃｃａａａｔｃｔｔｇｔｇａｃａａａａｃｔｃａｃａｃａｔｇｃｃｃａｃｃｇｔｇｃｃｃａｇｃａｃｃｔｇａａｃｔｃｃｔｇｇｇｇｇｇａｃｃｇｔｃａｇｔｃｔｔｃｃｔｃｔｔｃｃｃｃｃｃａａａａｃｃｃａａｇｇａｃａｃｃｃｔｃａｔｇａｔｃｔｃｃｃｇｇａｃｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａｃａｔｇｃｇｔｇｇｔｇｇｔｇｇａｃｇｔｇａｇｃｃａｃｇａａｇａｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａａｇｔｔｃａａｃｔｇｇｔａｃｇｔｇｇａｃｇｇｃｇｔｇｇａｇｇｔｇｃａｔａａｔｇｃｃａａｇａｃａａａｇｃｃｇｃｇｇｇａｇｇａｇｃａｇｔａｃａａｃａｇｃａｃｇｔａｃｃｇｔｇｔｇｇｔｃａｇｃｇｔｃｃｔｃａｃｃｇｔｃｃｔｇｃａｃｃａｇｇａｃｔｇｇｃｔｇａａｔｇｇｃａａｇｇａｇｔａｃａａｇｔｇｃａａｇｇｔｃｔｃｃａａｃａａａｇｃｃｃｔｃｃｃａｇｃｃｃｃｃａｔｃｇａｇａａａａｃｃａｔｃｔｃｃａａａｇｃｃａａａｇｇｇｃａｇｃｃｃｃｇａｇａａｃｃａｃａｇｇｔｇｔａｔａｃｃｃｔｇｃｃｃｃｃａｔｃｃｃｇｇｇａｇｇａｇａｔｇａｃｃａａｇａａｃｃａｇｇｔｃａｇｃｃｔｇａｃｃｔｇｃｃｔｇｇｔｃａａａｇｇｃｔｔｃｔａｔｃｃｃａｇｃｇａｃａｔｃｇｃｃｇｔｇｇａｇｔｇｇｇａｇａｇｃａａｔｇｇｇｃａｇｃｃｇｇａｇａａｃａａｃｔａｃａａｇａｃｃａｃｇｃｃｔｃｃｃｇｔｇｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａｃｇｇｃｔｃｃｔｔｃｔｔｃｃｔｃｔａｔａｇｃａａｇｃｔｃａｃｃｇｔｇｇａｃａａｇａｇｃａｇｇｔｇｇｃａｇｃａｇｇｇｇａａｃｇｔｃｔｔｃｔｃａｔｇｃｔｃｃｇｔｇａｔｇｃａｔｇａｇｇｃｔｃｔｇｃａｃａａｃｃａｃｔａｃａｃｇｃａｇａａｇａｇｃｃｔｃｔｃｃｃｔｇｔｃｃｃｃｇｇｇｔ（配列番号５９）に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する重鎖核酸配列を含む。

【0112】

いくつかの実施形態では、操作された抗体は、配列番号５９と同一の重鎖核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号９と比べて、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、または２個以下のアミノ酸置換を含む抗体をコードする核酸配列を含む。

【0113】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号５９に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する重鎖アミノ酸配列をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドによってコードされ、一方で、本明細書に記載のｖＨＣＤＲ１、ｖＨＣＤＲ２、及び／またはｖＨＣＤＲ３配列のうちの１つ以上をも含む。

【表1】

【0114】

当業者によって理解されるように、任意のそのような重鎖ＣＤＲ配列は、例えば、分子生物学の技術によって、本明細書で開示されるまたは他に当該技術分野で知られる任意の形式の抗体またはその抗原結合断片に存在し得るような、本明細書で開示されるまたは他に当該技術分野で知られる任意のフレームワーク領域、ＣＤＲ、または定常ドメイン、またはその一部を含む、本明細書に提供されるか、そうでなければ当該技術分野で既知の任意の他の抗体配列またはドメインと容易に組み合わせることができる。

【0115】

本明細書に記載されるさまざまな操作された抗体において、重鎖定常ドメインは、任意のクラス（またはサブクラス）であり得る。本明細書に記載のさまざまな操作された抗体において、重鎖定常ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２などのサブクラスを含む、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥのうちの１つ以上のいずれかのアミノ酸配列を含み得る。さまざまな実施形態では、本明細書に記載の操作された抗体の定常ドメインは、免疫グロブリン重鎖定常ドメインの２つ以上のクラス（またはサブクラス）の混合物を含み得る。例えば、抗ＢＣＭＡ抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥクラスの定常ドメインから選択される免疫グロブリン定常ドメインの配列を有する定常ドメインの第１の部分と、第１のものとは異なる、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥクラスの定常ドメインから選択される免疫グロブリン定常ドメインの配列を有する定常ドメインの第２の部分とを含むことができる。場合によっては、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体の定常ドメインは、定常ドメインの特定のクラスの２つ以上のサブクラスの混合物、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブクラス定常ドメインから選択される免疫グロブリン定常ドメインの配列を有する定常ドメインの第１の部分と、第１とは異なる、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブクラス定常ドメインから選択される免疫グロブリン定常ドメインの配列を有する定常ドメインの第２の部分とを含むことができる。いくつかの特定の実施形態では、定常ドメインは、ＩｇＧ２定常ドメインの全部または一部と、ＩｇＧ４定常ドメインの全部または一部と、を含む。

【0116】

場合によっては、抗ＢＣＭＡ抗体は、１つ以上のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＢ、ＦｃγＲＩＶ、またはＦｃＲｎ受容体）に対する（参照定常領域と比べて）改変された結合を示す抗体定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、１つ以上のＦγｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＢ、またはＦｃγＲＩＶ）に対する（参照定常領域と比べて）減少した結合を示す抗体定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、血清ｐＨで、及び／または細胞内ｐＨで（参照定常領域と比較して）ＦｃＲｎ受容体への増加した結合を示す抗体定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片を含む。

【0117】

例えば、抗ＢＣＭＡ抗体は、アミノ酸残基２５１～２５６、２８５～２９０、３０８～３１４、３８５～３８９、及び４２８～４３６（Ｋａｂａｔナンバリング（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＮＩＨ））のうちの１つ以上の、アミノ酸付加、欠失、または置換を含むように操作されたＩｇＧ抗体の定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片を含み得る。理論に拘束されることは望まないが、これらの定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片アミノ酸のうちの１つ以上が、Ｆｃ受容体、例えばＦｃＲｎとの相互作用を媒介すると考えられている。いくつかの実施形態では、これらの開示されたアミノ酸の１つ以上が、ヒスチジン、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、アスパラギン、またはグルタミンで置換されている。いくつかの実施形態では、非ヒスチジン残基がヒスチジン残基で置換されている。いくつかの実施形態では、ヒスチジン残基が非ヒスチジン残基で置換されている。

【0118】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、位置３０８、３０９、３１１、３１２、及び３１４のうちの１つ以上にアミノ酸改変を有するＩｇＧ抗体の定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片を含む。いくつかの実施形態では、３０８位、３０９位、３１１位、３１２位、及び３１４位のうちの１つ以上での置換は、それぞれトレオニン、プロリン、セリン、アスパラギン酸、及びロイシンによるものである。いくつかの実施形態では、３０８位、３０９位、及び３１１位のうちの１つ以上の残基が、それぞれイソロイシン、プロリン、及びグルタミン酸で置換されている。さらに他の実施形態では、３０８位、３０９位、３１１位、３１２位、及び３１４位のうちの１つ以上の残基が、それぞれトレオニン、プロリン、セリン、アスパラギン酸、及びロイシンで置換されている。

【0119】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、位置２５１、２５２、２５４、２５５、及び２５６のうちの１つ以上にアミノ酸改変を有する、より具体的には、これらの位置のうちの１つ以上に置換を有する、ＩｇＧ抗体の定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片を含む。いくつかの実施形態では、残基２５１はロイシンまたはアルギニンで置換され、残基２５２はロイシン、チロシン、フェニルアラニン、セリン、トリプトファン、またはトレオニンで置換され、残基２５４はトレオニンまたはセリンで置換され、残基２５５はロイシン、グリシン、イソロイシン、またはアルギニンで置換され、及び／または残基２５６は、セリン、フェニルアラニン、アルギニン、グルタミン、グルタミン酸、アスパラギン酸、アラニン、アスパラギン、またはトレオニンで置換されている。いくつかの実施形態では、残基２５１はロイシンで置換され、残基２５２はチロシンまたはロイシンで置換され、残基２５４はトレオニンまたはセリンで置換され、及び／または残基２５５はアルギニンで置換されている。さらに他の実施形態では、残基２５２はフェニルアラニンで置換され、及び／または残基２５６はアスパラギン酸で置換されている。いくつかの実施形態では、残基２５１はロイシンで置換され、残基２５２はチロシンで置換され、残基２５４はトレオニンまたはセリンで置換され、及び／または残基２５５はアルギニンで置換されている。

【0120】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、位置４２８、４３３、４３４、４３５、及び４３６のうちの１つ以上にアミノ酸改変を有する、より具体的には、これらの位置のうちの１つ以上に置換を有する、ＩｇＧ抗体の定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片を含む。いくつかの実施形態では、残基４２８は、メチオニン、トレオニン、ロイシン、フェニルアラニン、またはセリンで置換され、残基４３３は、リジン、アルギニン、セリン、イソロイシン、プロリン、グルタミン、またはヒスチジンで置換され、残基４３４は、フェニルアラニン、チロシン、またはヒスチジンで置換され、残基４３５はチロシンで置換され、及び／または残基４３６は、ヒスチジン、アスパラギン、アルギニン、トレオニン、リジン、メチオニン、またはトレオニンで置換されている。いくつかの実施形態では、４３３位、４３４位、４３５位、及び４３６位のうちの１つ以上の残基は、それぞれリジン、フェニルアラニン、チロシン、及びヒスチジンで置換されている。いくつかの実施形態では、残基４２８はメチオニンで置換され、及び／または残基４３４はチロシンで置換されている。

【0121】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、位置３８５、３８６、３８７、及び３８９のうちの１つ以上にアミノ酸改変を有する、より具体的には、これらの位置のうちの１つ以上に置換を有する、ＩｇＧ抗体の定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片を含む。いくつかの実施形態では、残基３８５は、アルギニン、アスパラギン酸、セリン、トレオニン、ヒスチジン、リジン、またはアラニンで置換され、残基３８６は、トレオニン、プロリン、アスパラギン酸、セリン、リジン、アルギニン、イソロイシン、またはメチオニンで置換され、残基３８７は、アルギニン、ヒスチジン、セリン、トレオニン、アラニン、またはプロリンで置換され、及び／または残基３８９はプロリンまたはセリンで置換されている。いくつかの実施形態では、３８５位、３８６位、３８７位、及び３８９位のうちの１つ以上の残基は、アルギニン、トレオニン、アルギニン、及びプロリンでそれぞれ置換されている。いくつかの実施形態では、３８５位、３８６位、及び３８９位のうちの１つ以上の残基は、それぞれアスパラギン酸、プロリン、及びセリンで置換されている。

【0122】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、以下の置換のうちの１つ以上を有するＩｇＧ抗体の定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片を含む：残基２５１でのロイシン、残基２５２でのチロシンまたはロイシン、残基２５４でのトレオニンまたはセリン、残基２５５でのアルギニン、残基３０８でのトレオニン、残基３０９でのプロリン、残基３１１でのセリン、残基３１２でのアスパラギン酸、残基３１４でのロイシン、残基３８５でのアルギニン、残基３８６でのトレオニン、残基３８７でのアルギニン、残基３８９でのプロリン、残基４２８でのメチオニン、残基４３３でのリジン、残基４３４でのフェニルアラニンまたはチロシン、位置４３５でのチロシン、及び／または４３６位でのチロシン。定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片に含めることができる追加のアミノ酸置換としては、例えば、米国特許第６，２７７，３７５号；同第８，０１２，４７６号；及び同第８，１６３，８８１号に記載されるものが挙げられる。

【0123】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体は、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９４／２８０２７及びＷＯ９８／４７５３１；ならびにＸｕ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００：１６－２６に記載されたＡｌａ－Ａｌａ変異を含む重鎖定常ドメインを含む。したがって、いくつかの実施形態では、Ａｌａ－Ａｌａ変異を含む重鎖定常領域内に１つ以上の変異を有する抗ＢＣＭＡ抗体は、エフェクター機能が低下しているか、またはエフェクター機能を有していない。これらの実施形態によれば、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体の定常領域は、２３４位でアラニンへの置換、及び／または２３５位（ＥＵナンバリング）でのアラニンへの変異を含み得る。

【0124】

当業者によって理解されるように、任意のそのような重鎖定常ドメイン配列は、例えば、分子生物学の技術によって、本明細書で開示されるまたは他に当該技術分野で知られる任意の形式の抗体またはその抗原結合断片に存在し得るような、本明細書で開示されるまたは他に当該技術分野で知られる任意のフレームワーク領域、ＣＤＲ、または定常ドメイン、またはその一部を含む、本明細書に提供されるか、そうでなければ当該技術分野で既知の任意の他の抗体配列またはドメインと容易に組み合わせることができる。

【0125】

軽鎖可変領域
軽鎖相補性決定領域ＬＣＤＲ１～３を含む、１つ以上の軽鎖可変領域に種々の特定の配列を含むＢＣＭＡ抗体またはその断片も提供される。種々の実施形態では、指定された軽鎖可変領域を有する分子は、上で議論されたように重鎖配列と共に提供される。特定の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って識別される。

【0126】

したがって、いくつかの態様では、本発明は、ＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ（配列番号１１）（ＬＣＤＲ１）、ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＬＮＳＹＰＷＴ（配列番号１４）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域を含む、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片を提供する。

【0127】

いくつかの実施形態では、本発明は、ＲＡＳＱＧＩＮＮＹＬＡ（配列番号６）（ＬＣＤＲ１）、ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＬＫＳＹＰＦＴ（配列番号８）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域を含む、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片を提供する。

【0128】

いくつかの実施形態では、本発明は、ＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ（配列番号１１）（ＬＣＤＲ１）、ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＬＮＳＹＰＦＴ（配列番号１２）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域を含む、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片を提供する。

【0129】

いくつかの実施形態では、本発明は、配列番号５、１０、または１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片を提供する。

【0130】

いくつかの例では、本発明は、ＳＹＡＩＨ（配列番号２）（ＨＣＤＲ１）、ＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧ（配列番号３）（ＨＣＤＲ２）、及びＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨ（配列番号４）（ＨＣＤＲ３）の重鎖可変相補性決定領域（ＣＤＲ）配列と、ＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ（配列番号１１）（ＬＣＤＲ１）、ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＬＮＳＹＰＷＴ（配列番号１４）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域と、を含むＢＣＭＡ抗体またはその断片を提供する。

【0131】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、ＳＹＡＩＨ（配列番号２）（ＨＣＤＲ１）、ＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧ（配列番号３）（ＨＣＤＲ２）、及びＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨ（配列番号４）（ＨＣＤＲ３）の重鎖可変相補性決定領域（ＣＤＲ）配列と、ＲＡＳＱＧＩＮＮＹＬＡ（配列番号６）（ＬＣＤＲ１）、ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＬＫＳＹＰＦＴ（配列番号８）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域と、を含む。

【0132】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、ＳＹＡＩＨ（配列番号２）（ＨＣＤＲ１）、ＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧ（配列番号３）（ＨＣＤＲ２）、及びＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨ（配列番号４）（ＨＣＤＲ３）の重鎖可変相補性決定領域（ＣＤＲ）配列と、ＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ（配列番号１１）（ＬＣＤＲ１）、ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）（ＬＣＤＲ２）、及びＱＱＬＮＳＹＰＦＴ（配列番号１２）（ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を有する軽鎖可変領域と、を含む。

【0133】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、配列番号５に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖可変（ＶＬ）領域と、配列番号１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ）領域と、を含む。

【0134】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、配列番号１０に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％同一である核酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖可変（ＶＬ）領域と、配列番号９に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％同一である核酸配列を含む免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ）領域と、を含む。

【0135】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、配列番号１３に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン軽鎖可変（ＶＬ）領域と、配列番号１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン重鎖可変（ＶＨ）領域と、を含む。

【0136】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、表２に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）及び／またはＬＣＤＲを含む。

【表2】

【0137】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号５、１０、または１３に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する可変軽鎖アミノ酸配列を含む。

【0138】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号５、１０、または１３に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有する可変軽鎖アミノ酸配列を含み、一方で、本明細書に記載のｖＬＣＤＲ１、ｖＬＣＤＲ２、及び／またはｖＬＣＤＲ３配列のうちの１つ以上をも含む。

【0139】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号７３、７４、または７５に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含む。

【0140】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号７３：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＤＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号７３）対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含む。

【0141】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号７４：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＩＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＧＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＫＳＹＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号７４）に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含む。

【0142】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号７５：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号７５）に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含む。

【0143】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号７３、７４、または７５に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含み、一方で、本明細書に記載のｖＬ ＣＤＲ１、ｖＬＣＤＲ２、及び／またはｖＬＣＤＲ３配列のうちの１つ以上をも含む。

【0144】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、配列番号５、１０、及び１３と同一の可変軽鎖（ＶＬ）アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号５、１０、及び１３と比べて、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、または２個以下のアミノ酸置換を含む。

【0145】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号７６～７８に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する軽鎖核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、操作された抗体は、配列番号７６～７８と同一の軽鎖核酸配列を含む。

【0146】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号７６：
ｇａｃａｔｃｇｔｇａｔｇａｃｃｃａｇａｇｃｃｃｃａｇｃｔｔｔｃｔｇａｇｃｇｃｃａｇｃｇｔｇｇｇｃｇａｔｃｇｔｇｔｇａｃｃａｔｃａｃｔｔｇｔｃｇｔｇｃｃａｇｃｃａａｇｇｔａｔｃａｇｃａｇｃｔａｔｔｔａｇｃｔｔｇｇｔａｃｃａｇｃａｇａａｇｃｃｃｇｇｃａａｇｇｃｃｃｃｃａａｇｃｔｇｃｔｇａｔｃｔａｃｇｃｃｇｃｃａｇｃａｃｔｔｔａｃａｇａｇｃｇｇｃｇｔｇｃｃｔｔｃｔｃｇｔｔｔｔｔｃｔｇｇｃａｇｃｇｇｃｔｃｔｇｇｃａｃｃｇａｇｔｔｃａｃｔｔｔａａｃｃａｔｃａｇｃｔｃｔｔｔａｃａｇｃｃｃｇａｇｇａｃｔｔｃｇｃｃａｃｃｔａｔｔａｃｔｇｃｃａｇｃａｇｃｔｇａａｃｔｃｃｔａｃｃｃｔｔｇｇａｃｃｔｔｃｇｇｃｃａａｇｇｔａｃｃａａｇｇｔｇｇａｃａｔｃａａｇｃｇｔａｃｇｇｔｇｇｃｔｇｃａｃｃａｔｃｔｇｔｃｔｔｃａｔｃｔｔｃｃｃｇｃｃａｔｃｔｇａｔｇａｇｃａｇｔｔｇａａａｔｃｔｇｇａａｃｔｇｃｃｔｃｔｇｔｔｇｔｇｔｇｃｃｔｇｃｔｇａａｔａａｃｔｔｃｔａｔｃｃｃａｇａｇａｇｇｃｃａａａｇｔａｃａｇｔｇｇａａｇｇｔｇｇａｔａａｃｇｃｃｃｔｃｃａａｔｃｇｇｇｔａａｃｔｃｃｃａｇｇａｇａｇｔｇｔｃａｃａｇａｇｃａｇｇａｃａｇｃａａｇｇａｃａｇｃａｃｃｔａｃａｇｃｃｔｃａｇｃａｇｃａｃｃｃｔｇａｃｇｃｔｇａｇｃａａａｇｃａｇａｃｔａｃｇａｇａａａｃａｃａａａｇｔｃｔａｃｇｃｃｔｇｃｇａａｇｔｃａｃｃｃａｔｃａｇｇｇｃｃｔｇａｇｃｔｃｇｃｃｃｇｔｃａｃａａａｇａｇｃｔｔｃａａｃａｇｇｇｇａｇａｇｔｇｔ（配列番号７６）に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する軽鎖核酸配列を含む。

【0147】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号７７、
ｇａｃａｔｃｇｔｇａｔｇａｃｃｃａｇａｇｃｃｃｔａｇｃｔｔｔｔｔａａｇｃｇｃｃａｇｃｇｔｇｇｇｃｇａｃａｇａｇｔｇａｃｃａｔｃａｃｔｔｇｔｃｇｔｇｃｃａｇｃｃａａｇｇｔａｔｃａａｃａａｃｔａｔｔｔａｇｃｔｔｇｇｔａｃｃａｇｃａｇａａｇｃｃｃｇｇｔａｔｃｇｃｃｃｃｃａａｇｃｔｇｃｔｇａｔｃｔａｃｇｃｃｇｃｃａｇｃａｃａｃｔｇｃａｇａｇｃｇｇｃｇｔｇｃｃｔａｇｃａｇａｔｔｔｇｇｔｇｇｃａｇｃｇｇｃｔｃｔｇｇｃａｃａｇａｇｔｔｃａｃｔｔｔａａｃｃａｔｃａｇｃｔｃｔｔｔａｃａｇｃｃｃｇａｇｇａｃｔｔｃｇｃｃａｃｃｔａｃｔａｃｔｇｃｃａｇｃａｇｃｔｇａａｇａｇｃｔａｃｃｃｃｔｔｃａｃｃｔｔｃｇｇｃｃｃｃｇｇｃａｃｃａａｇｇｔｇｇａｇａｔｃａａｇｃｇｔａｃｇｇｔｇｇｃｔｇｃａｃｃａｔｃｔｇｔｃｔｔｃａｔｃｔｔｃｃｃｇｃｃａｔｃｔｇａｔｇａｇｃａｇｔｔｇａａａｔｃｔｇｇａａｃｔｇｃｃｔｃｔｇｔｔｇｔｇｔｇｃｃｔｇｃｔｇａａｔａａｃｔｔｃｔａｔｃｃｃａｇａｇａｇｇｃｃａａａｇｔａｃａｇｔｇｇａａｇｇｔｇｇａｔａａｃｇｃｃｃｔｃｃａａｔｃｇｇｇｔａａｃｔｃｃｃａｇｇａｇａｇｔｇｔｃａｃａｇａｇｃａｇｇａｃａｇｃａａｇｇａｃａｇｃａｃｃｔａｃａｇｃｃｔｃａｇｃａｇｃａｃｃｃｔｇａｃｇｃｔｇａｇｃａａａｇｃａｇａｃｔａｃｇａｇａａａｃａｃａａａｇｔｃｔａｃｇｃｃｔｇｃｇａａｇｔｃａｃｃｃａｔｃａｇｇｇｃｃｔｇａｇｃｔｃｇｃｃｃｇｔｃａｃａａａｇａｇｃｔｔｃａａｃａｇｇｇｇａｇａｇｔｇｔ（配列番号７７）に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する軽鎖核酸配列を含む。

【0148】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号７８：
ｇａｃａｔｃｇｔｇａｔｇａｃｃｃａｇａｇｃｃｃｔａｇｃｔｔｔｔｔａａｇｃｇｃｃａｇｃｇｔｇｇｇｃｇａｃａｇａｇｔｇａｃｃａｔｃａｃｔｔｇｔｃｇｔｇｃｃａｇｃｃａａｇｇｔａｔｃａｇｃａｇｃｔａｔｔｔａｇｃｔｔｇｇｔａｃｃａｇｃａｇａａｇｃｃｃｇｇｃａａｇｇｃｃｃｃｃａａｇｃｔｇｃｔｇａｔｃｔａｃｇｃｃｇｃｃａｇｃａｃｔｔｔａｃａｇａｇｃｇｇａｇｔｇｃｃｔａｇｃａｇａｔｔｃａｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃｔｃｃｇｇｃａｃｃｇａｇｔｔｃａｃｔｔｔａａｃｃａｔｃａｇｃｔｃｔｔｔａｃａｇｃｃｃｇａｇｇａｃｔｔｃｇｃｃａｃｃｔａｃｔａｃｔｇｃｃａｇｃａｇｃｔｇａａｃａｇｃｔａｃｃｃｃｔｔｃａｃｃｔｔｃｇｇｃｃｃｃｇｇｃａｃｃａａｇｇｔｇｇａｃａｔｃａａｇｃｇｔａｃｇｇｔｇｇｃｔｇｃａｃｃａｔｃｔｇｔｃｔｔｃａｔｃｔｔｃｃｃｇｃｃａｔｃｔｇａｔｇａｇｃａｇｔｔｇａａａｔｃｔｇｇａａｃｔｇｃｃｔｃｔｇｔｔｇｔｇｔｇｃｃｔｇｃｔｇａａｔａａｃｔｔｃｔａｔｃｃｃａｇａｇａｇｇｃｃａａａｇｔａｃａｇｔｇｇａａｇｇｔｇｇａｔａａｃｇｃｃｃｔｃｃａａｔｃｇｇｇｔａａｃｔｃｃｃａｇｇａｇａｇｔｇｔｃａｃａｇａｇｃａｇｇａｃａｇｃａａｇｇａｃａｇｃａｃｃｔａｃａｇｃｃｔｃａｇｃａｇｃａｃｃｃｔｇａｃｇｃｔｇａｇｃａａａｇｃａｇａｃｔａｃｇａｇａａａｃａｃａａａｇｔｃｔａｃｇｃｃｔｇｃｇａａｇｔｃａｃｃｃａｔｃａｇｇｇｃｃｔｇａｇｃｔｃｇｃｃｃｇｔｃａｃａａａｇａｇｃｔｔｃａａｃａｇｇｇｇａｇａｇｔｇｔ（配列番号７８）に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する軽鎖核酸配列を含む。

【0149】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号５、１０、及び１３と比べて、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、または２個以下のアミノ酸置換を含む抗体をコードする核酸配列を含む。

【0150】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片の軽鎖は、３つのＬＣＤＲを含み、
ＬＣＤＲ１は、ＲＡＳＱＧＩＸ_１Ｘ_２ＹＬＡ（配列番号７９）を含み、
ＬＣＤＲ２は、ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）を含み、及び／または、
ＬＣＤＲ３は、ＱＱＬＸ_３ＳＹＰＸ_４Ｔ（配列番号８０）を含み、
式中、Ｘ_１は、ＳまたはＮから選択され、
Ｘ_２は、ＳまたはＮから選択され、
Ｘ_３は、ＮまたはＫから選択される荷電アミノ酸であり、及び／または
Ｘ_４は、ＦまたはＷから選択される疎水性アミノ酸である。

【0151】

当業者によって理解されるように、任意のそのような軽鎖ＣＤＲ配列は、例えば、分子生物学の技術によって、本明細書で開示されるまたは他に当該技術分野で知られる任意の形式の抗体またはその抗原結合断片に存在し得るような、本明細書で開示されるまたは他に当該技術分野で知られる任意のフレームワーク領域、ＣＤＲ、または定常ドメイン、またはその一部を含む、本明細書に提供されるか、そうでなければ当該技術分野で既知の任意の他の抗体配列またはドメインと容易に組み合わせることができる。

【0152】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体は、任意の軽鎖定常ドメイン配列、例えば当業者に知られている軽鎖の定常配列を含む軽鎖を含む。当業者が認識するように、軽鎖定常ドメインは、カッパ軽鎖定常ドメインまたはラムダ軽鎖定常ドメインであり得る。特定の実施形態では、本明細書に開示される軽鎖の定常ドメインは、カッパ軽鎖定常ドメインである。種々の実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体は、軽鎖定常ドメインを含む。

【0153】

例示的な抗体
操作された抗体は、本明細書に記載のさまざまな重鎖及び軽鎖を含むことができる。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、２つの重鎖及び軽鎖を含み得る。さまざまな実施形態では、本開示は、少なくとも１つの本明細書に開示される重鎖及び／または軽鎖、少なくとも１つの本明細書に開示される重鎖フレームワークドメイン及び／または軽鎖フレームワークドメイン、少なくとも１つの本明細書に開示される重鎖ＣＤＲドメイン及び／または軽鎖ＣＤＲドメイン、及び／または本明細書に開示される任意の重鎖定常ドメイン及び／または軽鎖定常ドメインを含む抗体を包含する。

【0154】

いくつかの実施形態では、操作された抗体は、配列番号１と同一の免疫グロブリンＶＨアミノ酸配列と、配列番号１３と同一の免疫グロブリンＶＬアミノ酸配列と、を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、配列番号１３に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬ領域と；配列番号１に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨ領域と、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号１及び／または配列番号１３に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ及び／またはＶＬアミノ酸配列を含み、一方で、本明細書に記載のｖＨ ＣＤＲ１、ｖＨＣＤＲ２、ｖＨＣＤＲ３、ｖＬＣＤＲ１、ｖＬＣＤＲ２、及び／またはｖＬＣＤＲ３配列のうちの１つ以上をも含む。

【0155】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、共通の重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、以下のｖＨＣＤＲ配列及びｖＬＣＤＲ配列を含む：
ｖＨＣＤＲ１：ＳＹＡＩＨ（配列番号２）
ｖＨＣＤＲ２：ＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧ（配列番号３）
ｖＨＣＤＲ３：ＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨ（配列番号４）
ｖＬＣＤＲ１：ＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ（配列番号１１）
ｖＬＣＤＲ２：ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）
ｖＬＣＤＲ３：ＱＱＬＮＳＹＰＷＴ（配列番号１４）

【0156】

特定の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って識別される。

【0157】

いくつかの実施形態では、操作された抗体は、配列番号１と同一の免疫グロブリンＶＨアミノ酸配列と、配列番号５と同一の免疫グロブリンＶＬアミノ酸配列と、を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、配列番号５に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬ領域と、配列番号１に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨ領域と、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号５及び／または配列番号１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ及び／またはＶＬアミノ酸配列を含み、一方で、本明細書に記載のｖＨ ＣＤＲ１、ｖＨＣＤＲ２、ｖＨＣＤＲ３、ｖＬＣＤＲ１、ｖＬＣＤＲ２、及び／またはｖＬＣＤＲ３配列のうちの１つ以上をも含む。

【0158】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、共通の重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、以下のｖＨＣＤＲ配列及びｖＬＣＤＲ配列を含む：
ｖＨＣＤＲ１：ＳＹＡＩＨ（配列番号２）
ｖＨＣＤＲ２：ＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧ（配列番号３）
ｖＨＣＤＲ３：ＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨ（配列番号４）
ｖＬＣＤＲ１：ＲＡＳＱＧＩＮＮＹＬＡ（配列番号６）
ｖＬＣＤＲ２：ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）
ｖＬＣＤＲ３：ＱＱＬＫＳＹＰＦＴ（配列番号８）

【0159】

特定の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って識別される。

【0160】

いくつかの実施形態では、操作された抗体は、配列番号９と同一の免疫グロブリンＶＨアミノ酸配列と、配列番号１０と同一の免疫グロブリンＶＬアミノ酸配列と、を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、配列番号１０に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＬ領域と、配列番号９に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリンＶＨ領域と、を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、配列番号９及び／または配列番号１０に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するＶＨ及び／またはＶＬアミノ酸配列を含み、一方で、本明細書に記載のｖＨ ＣＤＲ１、ｖＨＣＤＲ２、ｖＨＣＤＲ３、ｖＬＣＤＲ１、ｖＬＣＤＲ２、及び／またはｖＬＣＤＲ３のうちの１つ以上をも含む。

【0161】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、共通の重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は、以下のｖＨＣＤＲ配列及びｖＬＣＤＲ配列を含む：
ｖＨＣＤＲ１：ＳＹＡＩＨ（配列番号２）
ｖＨＣＤＲ２：ＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧ（配列番号３）
ｖＨＣＤＲ３：ＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨ（配列番号４）
ｖＬＣＤＲ１：ＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ（配列番号１１）
ｖＬＣＤＲ２：ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）
ｖＬＣＤＲ３：ＱＱＬＮＳＹＰＦＴ（配列番号１２）

【0162】

特定の実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って識別される。

【0163】

例示的な単鎖可変断片
いくつかの実施形態では、本開示は、単鎖可変断片を提供する。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖはヒトｓｃＦｖである。「単鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」は、Ｖ_Ｈ：：ＶＬヘテロ二量体を形成するために共有結合された、免疫グロブリン（例えば、マウスまたはヒト）の重鎖（Ｖ_Ｈ）及び軽鎖（Ｖ_Ｌ）の可変領域の融合タンパク質を指す。重鎖（Ｖ_Ｈ）と軽鎖（Ｖ_Ｌ）は、直接結合されるか、またはＶ_ＨのＮ末端をＶ_ＬのＣ末端に、もしくはＶ_ＨのＣ末端をＶ_ＬのＮ末端に接続する、ペプチドコードリンカー（例えば、１０、１５、２０、２５個のアミノ酸）によって結合される。リンカーは通常、柔軟性のためにグリシンが豊富で、溶解性のためにセリンまたはトレオニンが豊富である。リンカーは、細胞外抗原結合ドメインの重鎖可変領域と軽鎖可変領域を連結することができる。リンカーの非限定的な例は、Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．８０（６）：１９１０－１９１７（２００８）及びＷＯ２０１４／０８７０１０に開示され、それらの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、リンカーは、Ｇ４Ｓリンカーである。

【0164】

代替的にまたは追加的に、ｓｃＦｖは、（例えば、Ｆａｂライブラリから得られた抗体からではなく）Ｆａｂ’に由来してもよい。特定の実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片はＦａｂである。特定の実施形態では、Ｆａｂは架橋されている。特定の実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片はＦ（ａｂ）_２である。前述の分子のいずれも、異種配列との融合タンパク質に含まれて、抗ＢＣＭＡ抗原抗体またはその抗原結合断片を形成することができる。

【0165】

特定の実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、少なくとも約１×１０^－１２Ｍ、少なくとも約１×１０^－７Ｍ、少なくとも約１×１０^－８Ｍ、少なくとも約１×１０^－９Ｍ、または少なくとも約１×１０^－１０Ｍの解離定数（Ｋ_ｄ）でＢＣＭＡ（例えば、ヒトＢＣＭＡ）に結合する。特定の実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、少なくとも約２×１０^－８Ｍの解離定数（Ｋ_Ｄ）でＢＣＭＡ（例えば、ヒトＢＣＭＡ）に結合する。特定の実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、約２×１０^－８Ｍ～約８×１０^－９Ｍの解離定数（Ｋ_Ｄ）でＢＣＭＡ（例えば、ヒトＢＣＭＡ）に結合する。

【0166】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、約１ｎＭ～５０ｎＭ、約５ｎＭ～３０ｎＭ、約５ｎＭ～２５ｎＭ、または約８ｎＭ～２０ｎＭの解離定数（Ｋ_Ｄ）でＢＣＭＡ（例えば、ヒトＢＣＭＡ）に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、少なくとも約５０ｎＭ、少なくとも約４０ｎＭ、少なくとも約３５ｎＭ、少なくとも約３０ｎＭ、少なくとも約２５ｎＭ、少なくとも約２０ｎＭ、少なくとも約１９ｎＭ、少なくとも約１８ｎＭ、少なくとも約１７ｎＭ、少なくとも約１６ｎＭ、少なくとも約１５ｎＭ、少なくとも約１４ｎＭ、少なくとも約１３ｎＭ、少なくとも約１２ｎＭ、少なくとも約１１ｎＭ、少なくとも約１０ｎＭ、少なくとも約９ｎＭ、少なくとも約８ｎＭ、少なくとも約７ｎＭ、少なくとも約６ｎＭ、少なくとも約５ｎＭの解離定数（Ｋ_Ｄ）でＢＣＭＡ（例えば、ヒトＢＣＭＡ）に結合する。

【0167】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖは、配列番号１～４を含む可変重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖは、表１に提供される１つ以上のＣＤＲ配列を含む可変重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖは、表２に提供される１つ以上の軽鎖配列を含む可変軽鎖を含む。

【0168】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖは、以下に提供される配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなるリンカーを含む：
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１５）。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖは、以下に提供される配列番号８１に示される核酸配列を含むか、またはそれからなるリンカーを含む：
ｇｇａｇｇｇｇｇｃｇｇｔａｇｃｇｇａｇｇｇｇｇａｇｇａｔｃｔｇｇｇｇｇｔｇｇｇｇｇｃｔｃｃ（配列番号８１）

【0169】

いくつかの実施形態では、リンカーは、以下に示されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる：
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１６）

【0170】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖは、以下に提供される配列番号８２に示される核酸配列を含むか、またはそれからなるリンカーを含む：
ｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇａｇｃｇｇａｇｇｇｇｇｇｇｇｇａｇｔｇｇｔｇｇｇｇｇｇｔｃａｇｇａｇｇｇｇｇａｇｇａａｇｔ（配列番号８２）

【0171】

いくつかの実施形態では、リンカーは、以下に示されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる：
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１７）

【0172】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖは、以下に提供される配列番号８３に示される核酸配列を含むか、またはそれからなるリンカーを含む：
ｇｇｇｇｇａｇｇｇｇｇａｔｃａｇｇａｇｇｃｇｇｔｇｇｇａｇｃｇｇｇｇｇａｇｇｔｇｇａｔｃｃｇｇｔｇｇａｇｇｇｔｃａｇｇａｇｇｔｇｇａｇｇｇｔｃｃ（配列番号８３）。

【0173】

いくつかの実施形態では、リンカーは、以下に示されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる：
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１８）

【0174】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖは、以下に提供される配列番号８４に示される核酸配列を含むか、またはそれからなるリンカーを含む：
ｇｇｔｇｇｔｇｇｃｇｇｃａｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｔａｇｃｇｇｔｇｇｃｇｇｃｇｇｔｔｃｔｇｇａｇｇａｇｇａｇｇｃａｇｃｇｇｔｇｇａｇｇａａｇｃｇｇａｇｇｔｇｇａｇｇｃｔｃｃ（配列番号８４）。

【0175】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、保存的配列改変を含む（例えば、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片）。いくつかの実施形態では、保存的配列改変は、アミノ酸配列を含む本開示の抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片（例えば、抗体またはその断片）の結合特性に有意な影響を及ぼさないか、またはそれらの結合特性を変更しないアミノ酸改変である。保存的改変としては、アミノ酸の置換、付加、及び欠失が含まれる。改変は、部位特異的変異導入及びＰＣＲ媒介変異導入などの当該技術分野で知られている標準的な技術によって、抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片に導入することができる。アミノ酸は、それらの電荷及び極性などの物理化学的性質に応じてグループに分類できる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同じグループ内のアミノ酸で置き換えられているものである。例えば、アミノ酸は電荷によって分類できる：正電荷のアミノ酸にはリジン、アルギニン、ヒスチジンが含まれ、負電荷のアミノ酸にはアスパラギン酸、グルタミン酸が含まれ、中性電荷のアミノ酸にはアラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリンが含まれる。さらに、アミノ酸は極性によって分類できる：極性アミノ酸には、アルギニン（塩基性極性）、アスパラギン、アスパラギン酸（酸性極性）、グルタミン酸（酸性極性）、グルタミン、ヒスチジン（塩基性極性）、リジン（塩基性極性）セリン、トレオニン、及びチロシンが含まれ；非極性アミノ酸には、アラニン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、及びバリンが含まれる。したがって、ＣＤＲ領域内の１つ以上のアミノ酸残基を同じグループからの他のアミノ酸残基で置換することができ、改変された抗体を保持された機能について試験することができる。特定の実施形態では、特定の配列またはＣＤＲ領域内の１つ以下、２つ以下、３つ以下、４つ以下、５つ以下の残基が改変される。

【0176】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖは、以下のアミノ酸配列を含む：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＨＭＮＳＬＲＡＥＤＴＧＶＹＹＣＡＲＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫ（配列番号８５）

【0177】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖは、以下のアミノ酸配列を含む：
ＱＩＴＬＲＥＳＧＧＤＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＨＭＮＳＬＲＡＥＤＴＧＶＹＹＣＡＲＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＩＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＧＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＫＳＹＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８６）

【0178】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖは、以下のアミノ酸配列を含む：
ＱＩＴＬＲＥＳＧＧＤＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＨＭＮＳＬＲＡＥＤＴＧＶＹＹＣＡＲＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＤＩＫ（配列番号８７）

【0179】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖは、配列番号５１～５３のいずれかに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖは、配列番号５１～５３のいずれかに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、一方で、それぞれの可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖは、配列番号５１～５３のいずれかに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、一方で、それぞれのＣＤＲ領域を含む。

【0180】

ヌクレオチド配列
本開示は、１つ以上の重鎖、重鎖可変ドメイン、重鎖フレームワーク領域、重鎖ＣＤＲ、重鎖定常ドメイン、軽鎖、軽鎖可変ドメイン、軽鎖フレームワーク領域、軽鎖ＣＤＲ、軽鎖定常ドメイン、または他の免疫グロブリン様配列、または本明細書に開示される抗体をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ヌクレオチド配列は、哺乳動物発現のためにコドン最適化されている。種々の実施形態では、そのようなヌクレオチド配列はベクター内に存在し得る。種々の実施形態では、そのようなヌクレオチドは、細胞、例えば、治療を必要とする対象の細胞、または抗体産生のための細胞、例えば、抗体産生のための哺乳動物細胞のゲノムに存在し得る。

【0181】

操作された抗体と融合タンパク質
いくつかの実施形態では、本開示は、（ｉ）本明細書に記載の１つ以上の抗原結合領域（例えば、免疫グロブリンの抗原結合領域、重鎖抗体、軽鎖抗体、ＬＲＲベースの抗体、または抗体様特性を有する他のタンパク質足場、ならびに例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’２、Ｆａｂ_２、Ｆａｂ_３、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖ、Ｆｅｂ、ｓｃＦｖ、ＳＭＩＰ、抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、マキシボディ、タンダブ、ＤＶＤ、ＢｉＴｅ、ＴａｎｄＡｂなど）、例えば、本明細書に記載の１つ以上の可変ドメイン、またはその一部（例えば、本明細書に記載の１つ以上のＣＤＲ）と、（ｉｉ）１つ以上の追加のポリペプチドと、を含む、融合タンパク質を提供する。例えば、アルブミンは豊富な血清タンパク質であり、ＦｃＲｎとの相互作用によって媒介されるｐＨ依存性のリサイクルによって分解から保護されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の可変ドメインまたは操作された抗体、またはその一部（例えば、本明細書に記載の１つ以上のＣＤＲ）は、アルブミン、その一部（ＦｃＲｎに結合するアルブミンの一部など）、及び／または改善された親和性でＦｃＲｎに結合するアルブミンの操作されたバリアントに融合されている。他の例では、本明細書に記載の１つ以上の可変ドメインまたは操作された抗体、またはその一部（例えば、本明細書に記載の１つ以上のＣＤＲ）は、アルブミンに結合して融合タンパク質－アルブミン複合体を形成するポリペプチドに融合され、結果としてＦｃＲｎに結合することができる。いくつかの実施形態では、アルブミンに結合するポリペプチドは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。アルブミンまたはその一部は、ＦｃＲｎへの結合を改変できる１つ以上のアミノ酸の変異を含むことができる。そのような変異は当該技術分野で知られている（例えば、Ａｎｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ３：６１０ ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｏｃｍｍｓ１６０７（２０１２）を参照されたい）。他の例では、本明細書に記載の１つ以上の可変ドメインまたは操作された抗体、またはその一部（例えば、本明細書に記載の１つ以上のＣＤＲ）がトランスフェリンに融合されている。トランスフェリンは、トランスフェリン受容体に結合することによってリサイクルされる（例えば、Ｗｉｄｅｒａ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ． Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ． Ｒｅｖ．５５：１４３９－６６（２００３）を参照されたい）。

【0182】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
いくつかの例では、ＢＣＭＡ抗体はまた、腫瘍抗原特異的ＣＡＲ（キメラ抗原受容体、人工Ｔ細胞受容体としても知られる）、またはキメラ免疫受容体などの抗原特異的ＣＡＲ及び／またはＣＡＲを発現するように操作された細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）と組み合わせて使用することができる。一般に、ＣＡＲは、結合部分、細胞外ヒンジ、及びスペーサー要素、膜貫通領域、及びシグナル伝達機能を果たすエンドドメインを含む（Ｃａｒｔｅｌｌｉｅｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍｅｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２０１０：９５６３０４，２０１０）。多くの場合、結合部分は、ｓｃＦｖなどのモノクローナル抗体の抗原結合断片であるか、または単一ドメイン抗体である。いくつかの異なるエンドドメインが、ＣＡＲを生成するために使用されている。例えば、エンドドメインは、ＣＤ３ζまたはＦｃＲΙγなどのＩＴ ＡＭを有するシグナル伝達鎖からなることができる。いくつかの例において、エンドドメインは、少なくとも１つのさらなる共刺激ドメイン（例えば、ＣＤ２８及び／またはＣＤ１３７）の細胞内部分をさらに含む。

【0183】

本開示によるＢＣＭＡ抗体及びその断片は、１つ以上の目的の標的に特異的に結合する１つ以上の結合部分を含むように操作される。ｓｃＦｖまたはＦａｂなどの細胞外抗原結合領域は、抗原特異性を決定するＣＡＲの一部であり得る。細胞外抗原結合領域は、任意の相補的な標的（例えば、ＢＣＭＡ）に結合し得る。本明細書に開示される任意の実施形態の特定の態様において、ｓｃＦｖなどの細胞外抗原結合領域は、抗原に特異的な軽鎖ＣＤＲを含み得る。軽鎖ＣＤＲは、ＣＡＲのｓｃＦｖ軽鎖などの抗原結合ユニットの相補性決定領域であり得る。ＢＣＭＡ抗体及びその断片には、核酸（例えば、ＲＮＡ及びＤＮＡ）、タンパク質（例えば、抗体）、及びそれらの組み合わせが含まれる。

【0184】

ＣＡＲを発現するＣＴＬを使用して、腫瘍細胞などの特定の細胞型を標的とすることができる。したがって、腫瘍抗原特異的モノクローナル抗体は、抗原特異的抗体の抗原結合断片を含むＣＡＲを発現するＣＴＬを操作するために使用され得、それによって、腫瘍抗原発現腫瘍細胞に対して操作されたＣＴＬを標的化する。操作されたＴ細胞は、いくつかのタイプのがんのための養子療法のために以前に使用されている（例えば、Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ １５（４）：８２５－８３３，２００７を参照されたい）。ＣＡＲを発現するＴ細胞の使用は、ＣＡＲを発現するＣＴＬがＨＬＡ非拘束性であり、したがって、標的抗原を発現する腫瘍を有する任意の患者に使用され得るので、標準的なＣＴＬベースの免疫療法よりも普遍的である。

【0185】

結合部分としての抗体またはその断片
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片は、抗ＢＣＭＡ抗体である。場合によっては、本明細書に記載の１つ以上の結合部分は、抗体、その抗原結合断片、及び／またはそのＦｃ領域（またはＦｃ断片）であるか、またはそれらを含む。ＩｇＧ抗体の基本構造は、ジスルフィド結合によって一緒に連結された、２つの同一の軽ポリペプチド鎖と２つの同一の重ポリペプチド鎖とからなる。それぞれの鎖のアミノ末端に位置する最初のドメインは、アミノ酸配列が可変であり、各個別の抗体に見られる抗体結合特異性を提供する。これらは、可変重（ＶＨ）領域及び可変軽（ＶＬ）領域として知られている。それぞれの鎖の他のドメインは、アミノ酸配列が比較的不変であり、定常重（ＣＨ）領域及び定常軽（ＣＬ）領域として知られている。ＩｇＧ抗体の場合、軽鎖には１つの可変領域（ＶＬ）と１つの定常領域（ＣＬ）が含まれる。ＩｇＧ重鎖は、可変領域（ＶＨ）、第１の定常領域（ＣＨ１）、ヒンジ領域、第２の定常領域（ＣＨ２）、及び第３の定常領域（ＣＨ３）を含む。ＩｇＥ及びＩｇＭ抗体では、重鎖に追加の定常領域（ＣＨ４）が含まれる。

【0186】

抗体としては、例えば、モノクローナル抗体、組換え産生抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体を含む）、ヒト抗体、操作された抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、免疫グロブリン、合成抗体、２つの重鎖及び２つの軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖単量体、抗体重鎖単量体、抗体軽鎖二量体、抗体重鎖二量体、抗体軽鎖－抗体重鎖対、細胞内抗体、抗体融合体（本明細書では「抗体コンジュゲート」と呼ばれることもある）、ヘテロコンジュゲート抗体、単一ドメイン抗体、一価抗体、単鎖抗体または単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ラクダ化抗体、アフィボディ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗抗Ｉｄ抗体を含む）、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（「抗体模倣体」と呼ばれることもある）、及び上記のいずれかの抗原結合断片が挙げられ得る。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ポリクローナル抗体集団を指す。

【0187】

本明細書で使用される場合、「Ｆｃ断片」という用語は、Ｆｃ機能及び／またはＦｃ受容体への結合など、本明細書に記載の活性を保持するＦｃ領域の１つ以上の断片を指す。本明細書で使用される場合、抗体の「抗原結合部分」という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する、抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の「抗原結合断片」という用語内に包含される結合断片の例としては、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）、及び単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来の技術を使用して得ることができ、断片は、無傷の抗体と同一の方法で有用性についてスクリーニングできる。

【0188】

いくつかの態様において、本発明は、ヒト重鎖及び／または軽定常領域を含み、ヒト重定常領域が、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、またはヒトＩｇＧ４のＦｃ領域を含むアイソタイプバリアントを含む、ヒトＢＣＭＡに結合する抗体またはその断片を提供する。

【0189】

さらなる態様において、本発明は、ヒトＢＣＭＡに結合するヒト化抗体またはその断片を提供し、抗体は、親抗体のアミノ酸３２４位のセリンをアスパラギンで置換するアミノ酸置換Ｓ３２４Ｎを含むバリアントヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を含み、一方、バリアントヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を含む抗体は、親抗体と比較して改善された補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を示す。

【0190】

抗体または断片は、抗体を合成するための当該技術分野で公知の任意の方法によって生成することができる（例えば、Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８）；Ｂｒｉｎｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１－５０；ＷＯ ９２／２２３２４；ＷＯ ９８／４６６４５を参照されたい）。キメラ抗体は、例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２に記載されている方法を使用して産生することができ、ヒト化抗体は、例えば、米国特許第６，１８０，３７０号に記載される方法による。

【0191】

本明細書に記載のさらなる組成物及び方法は、二重特異性抗体及び多価抗体であり、例えば、Ｓｅｇａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４８：１－６（２００１）；及びＴｕｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載される。

【0192】

操作された抗原結合領域
いくつかの実施形態では、結合部分は、抗体（例えば、ＩｇＧ抗体、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、もしくはＩｇＧ３抗体）、または抗原結合断片であるか、またはそれを含み、異なる親和性で１つ以上の標的（すなわち、抗原）に結合するように操作される。例えば、抗体は、１つ以上の抗体ＣＤＲ内及び／または抗体のＣＤＲ構造に関与する位置のアミノ酸を改変することによって（例えば、付加、削除、または置換することによって）操作することができる。改変され得る抗体の例示的な非限定的部位としては、以下が挙げられる（アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔナンバリング（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＮＩＨ）に基づいて示される）。

【0193】

いくつかの実施形態では、これらの開示されたアミノ酸の１つ以上が、ヒスチジン、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、アスパラギン、またはグルタミンで置換され得る。理論に縛られることは望まないが、これらの位置の１つ以上のアミノ酸をヒスチジンで置換すると、ｐＨ依存性抗原結合特性を有する抗体が得られると考えられる。いくつかの実施形態では、非ヒスチジン残基がヒスチジン残基で置換されている。いくつかの実施形態では、ヒスチジン残基が非ヒスチジン残基で置換されている。追加の操作された抗原結合領域としては、例えば、米国特許出願公開第２０１１０２２９４８９号に記載されるものが挙げられる。

【0194】

操作された定常領域
場合によっては、結合部分は、１つ以上のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＢ、ＦｃγＲＩＶ、またはＦｃＲｎ受容体）に結合する抗体定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片であるか、またはそれらを含む。

【0195】

いくつかの例では、結合部分は、本明細書に記載のアミノ酸残基（例えば、２５１～２５６、２８５～２９０、３０８～３１４、３８５～３８９、及び４２８～４３６（Ｋａｂａｔナンバリング（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＮＩＨ）））のうちの１つ以上の、アミノ酸付加、欠失、または置換を含むように操作されたＩｇＧ抗体の定常領域、Ｆｃ領域、またはＦｃ断片であり得るか、またはそれらを含み得る。

【0196】

ＢＣＭＡ抗体及びその断片の生成及び産生
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＢＣＭＡ抗体は、ヒト化マウスをヒトＢＣＭＡで免疫化することによって生成される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片は、１つ以上の結合部分を含むようにさらに操作される。例えば、参照ポリペプチド（例えば、治療用抗体または治療用融合タンパク質）の配列を得ることができ、１つ以上のアミノ酸残基を付加、欠失、または置換することができる。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸残基は、グリシン、アラニン、セリン、システイン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、プロリン、ヒスチジン、メチオニン、ロイシン、イソロイシン、アルギニン、バリン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、トレオニン、アスパラギン、またはグルタミンで置換される。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸を含む抗体は、ＢＣＭＡに対する抗体の結合を増強する置換である。

【0197】

抗体は、最初に宿主動物から抗体及び抗体産生細胞を単離し、遺伝子配列を得て、この遺伝子配列を使用して宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）において抗体を組換え発現させることによって、組換え的に作製され得る。使用され得る別の方法は、植物（例えば、タバコ）またはトランスジェニック乳において抗体配列を発現することである。植物または乳において抗体を組換え発現するための方法が開示されている。例えば、Ｐｅｅｔｅｒｓ，ｅｔ ａｌ．Ｖａｃｃｉｎｅ １９：２７５６，２００１；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ａｎｄ Ｄ．Ｈｕｓｚａｒ Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １３：６５，１９９５；及びＰｏｌｌｏｃｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１ ：１４７，１９９９を参照されたい。抗体の誘導体、例えばヒト化、一本鎖などを作製するための方法は、当該技術分野で公知である。

【0198】

結合部分と標的の相互作用の測定
本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体）の標的（例えば、ＢＣＭＡ及び／またはＦｃＲｎ）への結合特性は、当該技術分野で公知の方法、例えば、以下の方法のうちの１つによって測定することができる：ＢＩＡＣＯＲＥ分析、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、Ｘ線結晶学、配列分析及びスキャニング変異導入。抗体とＢＣＭＡ及び／またはＦｃＲｎとの結合相互作用は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して分析できる。ＳＰＲまたは生体分子相互作用分析（ＢＩＡ）は、相互作用物質のいずれをも標識することなく、生体特異的な相互作用をリアルタイムで検出する。ＢＩＡチップの結合表面における質量の変化（結合事象を示す）は、表面近くの光の屈折率の変化をもたらす。屈折率の変化は検出可能なシグナルを生成し、生体分子間のリアルタイム反応の指標として測定される。ＳＰＲを使用するための方法は、例えば、米国特許第５，６４１，６４０号；Ｒａｅｔｈｅｒ（１９８８）Ｓｕｒｆａｃｅ Ｐｌａｓｍｏｎｓ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ；Ｓｊｏｌａｎｄｅｒ ａｎｄ Ｕｒｂａｎｉｃｚｋｙ（１９９１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．６３：２３３８－２３４５；Ｓｚａｂｏ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ． Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ．５：６９９－７０５、及びＢＩＡｃｏｒｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）によって提供されるオンライン資料に記載されている。さらに、Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｂｏｉｓｅ，Ｉｄ．）から入手可能なＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（結合平衡除外法）アッセイも使用できる。

【0199】

ＳＰＲからの情報は、標的に対する結合部分（例えば、ＢＣＭＡ及び／またはＦｃＲｎに対する抗ＢＣＭＡ抗体）の結合について、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）、ならびにＫ_ｏｎとＫ_ｏｆｆを含む動力学パラメータの正確かつ定量的な測定を提供するために使用できる。このようなデータは、異なる分子を比較するために使用できる。ＳＰＲからの情報は、構造活性相関（ＳＡＲ）の開発にも使用できる。例えば、さまざまなｐＨレベルでの標的への特定の結合部分の動力学的及び平衡結合パラメータを評価することができる。特定のｐＨレベルで、特定の結合パラメータ、例えば、高親和性、低親和性、及び遅いＫ_ｏｆｆと相関する所与の位置のバリアントアミノ酸を同定することができる。

【0200】

ＩＩ．ＣＡＲの実施形態
さらに、本開示は、Ｔ細胞を含む他の免疫細胞に適する生物学とは対照的に、ＮＫ細胞により適切である１つ以上の成分を有するので、ＢＣＭＡ ＣＡＲ構築物がＮＫ細胞における使用により適している方法及び組成物に関する。

【0201】

いくつかの実施形態では、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向けて、（ｉ）ＢＣＭＡに対する単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）（すなわち、「ＢＣＭＡ結合因子」）、（ｉｉ）ヒンジ領域、（ｉｉｉ）膜貫通ドメイン、及び（ｉｖ）１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、少なくとも１つの共刺激ドメイン及び活性化ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）融合タンパク質に関する。

【0202】

特定の実施形態では、本開示は、ＢＣＭＡを発現するがん細胞を標的にするためのＮＫ細胞（例えば、臍帯血（ＣＢ）由来ＮＫ細胞）の再プログラミングに関する。本開示は、ヒンジ領域、特にＣＤ２８またはＩｇＧ１ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、ならびにＣＤ２４７（ＣＤ３ζとしても知られる）及びＣＤ２８の細胞質部分を含むシグナル伝達ドメインに融合された異なるＢＣＭＡ ｓｃＦｖを組み込む多くの新規ＣＡＲ構築物を提供する。代替的な実施形態では、ＣＤ２８以外の他の共刺激ドメイン（複数可）が利用される。

【0203】

ＢＣＭＡ結合因子
本発明による適切なＢＣＭＡ結合因子は、ＢＣＭＡに特異的に結合するｓｃＦｖであり得る。典型的には、ｓｃＦｖは、ＶＨ－リンカー－ＶＬまたはＶＬ－リンカー－ＶＨの形態であり得る。

【0204】

ＶＨ鎖及びＶＬ鎖を連結する特定のリンカーが利用され得る。リンカーアミノ酸配列の一例は以下の通りである：
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１５）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１６）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１７）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１８）、またはＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＣＣ（配列番号２４）。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号１５～１８及び２４と、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0205】

いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含む。

【0206】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲのＢＣＭＡ結合因子領域は、可変重鎖領域（ＶＨ）及び可変軽鎖領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合因子は、ＶＨ領域及びＶＬ領域にそれぞれ、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）すなわちＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）、すなわちＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３とを含む。

【0207】

いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１はＳＹＡＩＨ（配列番号２）のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２はＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧ（配列番号３）のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３はＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨ（配列番号４）のアミノ酸配列を含む。

【0208】

いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１はＲＡＳＱＧＩＮＮＹＬＡ（配列番号６）のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２はＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３はＱＱＬＫＳＹＰＦＴ（配列番号８）のアミノ酸配列を含む。

【0209】

いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１は、ＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、ＱＱＬＮＳＹＰＦＴ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含む。

【0210】

いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１は、ＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、ＡＡＳＴＬＱＳ（配列番号７）のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、ＱＱＬＮＳＹＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含む。

【0211】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合因子の重鎖可変領域（ＶＨ）は、以下のアミノ酸配列を含む：
ＱＩＴＬＲＥＳＧＧＤＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＨＭＮＳＬＲＡＥＤＴＧＶＹＹＣＡＲＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）。

【0212】

ＣＤＲ配列以外の任意の位置における任意のアミノ酸置換は、別のアミノ酸、例えば、保存的アミノ酸置換（本明細書に定義される）に変更され得ることが想定される。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１に対して７０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１に対して７５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１に対して８０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１に対して８５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１に対して９０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１に対して９５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１に対して９９％同一である配列を含む。

【0213】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合因子の重鎖可変領域（ＶＨ）は、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＨＭＮＳＬＲＡＥＤＴＧＶＹＹＣＡＲＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号９）を含む。

【0214】

ＣＤＲ配列以外の任意の位置における任意のアミノ酸置換は、別のアミノ酸、例えば、保存的アミノ酸置換（本明細書に定義される）に変更され得ることが想定される。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号９に対して７０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号９に対して７５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号９に対して８０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号９に対して８５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号９に対して９０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号９に対して９５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号９に対して９９％同一である配列を含む。

【0215】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ結合因子は、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、以下のアミノ酸配列を含む：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＩＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＧＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＫＳＹＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５）。

【0216】

ＣＤＲ配列以外の任意の位置における任意のアミノ酸置換は、別のアミノ酸、例えば、保存的アミノ酸置換（本明細書に定義される）に変更され得ることが想定される。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号５に対して７０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号５に対して７５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号５に対して８０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号５に対して８５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号５に対して９０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号５に対して９５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号５に対して９９％同一である配列を含む。

【0217】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲのＢＣＭＡ結合領域は、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、以下のアミノ酸配列を含む：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫ（配列番号１０）。

【0218】

ＣＤＲ配列以外の任意の位置における任意のアミノ酸置換は、別のアミノ酸、例えば、保存的アミノ酸置換（本明細書に定義される）に変更され得ることが想定される。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号１０に対して７０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号１０に対して７５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号１０に対して８０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号１０に対して８５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号１０に対して９０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号１０に対して９５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号１０に対して９９％同一である配列を含む。

【0219】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲのＢＣＭＡ結合領域は、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、以下のアミノ酸配列を含む：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＤＩＫ（配列番号１３）。

【0220】

ＣＤＲ配列以外の任意の位置における任意のアミノ酸置換は、別のアミノ酸、例えば、保存的アミノ酸置換（本明細書に定義される）に変更され得ることが想定される。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号１３に対して７０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号１３に対して７５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号１３に対して８０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号１３に対して８５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号１３に対して９０％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号１３に対して９５％同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬは、配列番号１３に対して９９％同一である配列を含む。

【0221】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体中のＢＣＭＡ結合因子は、配列番号１のＶＨ及び配列番号５のＶＬを含む。

【0222】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体中のＢＣＭＡ結合因子は、配列番号１に対して少なくとも７０％同一のＶＨ及び配列番号５に対して少なくとも７０％同一のＶＬを含む。

【0223】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体中のＢＣＭＡ結合因子は、配列番号１に対して少なくとも７５％同一のＶＨ及び配列番号５に対して少なくとも７５％同一のＶＬを含む。

【0224】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体中のＢＣＭＡ結合因子は、配列番号１に対して少なくとも８０％同一のＶＨ及び配列番号５に対して少なくとも８０％同一のＶＬを含む。

【0225】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体中のＢＣＭＡ結合因子は、配列番号１に対して少なくとも９０％同一のＶＨ及び配列番号５に対して少なくとも９０％同一のＶＬを含む。

【0226】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体中のＢＣＭＡ結合因子は、配列番号１に対して少なくとも９５％同一のＶＨ及び配列番号５に対して少なくとも９５％同一のＶＬを含む。

【0227】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体中のＢＣＭＡ結合因子は、配列番号１に対して少なくとも９７％同一のＶＨ及び配列番号５に対して少なくとも９７％同一のＶＬを含む。

【0228】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体中のＢＣＭＡ結合因子は、配列番号９に対して少なくとも７０％同一のＶＨ及び配列番号１０に対して少なくとも７０％同一のＶＬを含む。

【0229】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体中のＢＣＭＡ結合因子は、配列番号９に対して少なくとも７５％同一のＶＨ及び配列番号１０に対して少なくとも７５％同一のＶＬを含む。

【0230】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体中のＢＣＭＡ結合因子は、配列番号９に対して少なくとも８０％同一のＶＨ及び配列番号１０に対して少なくとも８０％同一のＶＬを含む。

【0231】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体中のＢＣＭＡ結合因子は、配列番号９に対して少なくとも９０％同一のＶＨ及び配列番号１０に対して少なくとも９０％同一のＶＬを含む。

【0232】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体中のＢＣＭＡ結合因子は、配列番号９に対して少なくとも９５％同一のＶＨ及び配列番号１０に対して少なくとも９５％同一のＶＬを含む。

【0233】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体中のＢＣＭＡ結合因子は、配列番号９に対して少なくとも９７％同一のＶＨ及び配列番号１０に対して少なくとも９７％同一のＶＬを含む。

【0234】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体中のＢＣＭＡ結合因子は、配列番号１のＶＨ及び配列番号１３のＶＬを含む。

【0235】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体中のＢＣＭＡ結合因子は、配列番号１に対して少なくとも７０％同一のＶＨ及び配列番号１３に対して少なくとも７０％同一のＶＬを含む。

【0236】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体中のＢＣＭＡ結合因子は、配列番号１に対して少なくとも７５％同一のＶＨ及び配列番号１３に対して少なくとも７５％同一のＶＬを含む。

【0237】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体中のＢＣＭＡ結合因子は、配列番号１に対して少なくとも８０％同一のＶＨ及び配列番号１３に対して少なくとも８０％同一のＶＬを含む。

【0238】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体中のＢＣＭＡ結合因子は、配列番号１に対して少なくとも９０％同一のＶＨ及び配列番号１３に対して少なくとも９０％同一のＶＬを含む。

【0239】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体中のＢＣＭＡ結合因子は、配列番号１に対して少なくとも９５％同一のＶＨ及び配列番号１３に対して少なくとも９５％同一のＶＬを含む。

【0240】

いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体中のＢＣＭＡ結合因子は、配列番号１に対して少なくとも９７％同一のＶＨ及び配列番号１３に対して少なくとも９７％同一のＶＬを含む。

【0241】

いくつかの実施形態、実施形態、具体的な実施形態において、抗原に特異的に結合する分子は、約１×１０^－７Ｍの解離定数（Ｋ_ｄ）で結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合分子は、Ｋ_ｄが約１×１０^－９Ｍ～約５×１０^－９Ｍである場合、「高親和性」で抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合分子は、Ｋ_ｄが１×１０^－１０Ｍ～約５×１０^－１０Ｍである場合、「非常に高い親和性」で抗原に特異的に結合する。一実施形態では、抗原結合分子は１０^－９ＭのＫ_ｄを有する。一実施形態では、オフレートは、約１×１０^－５未満である。他の実施形態では、抗原結合分子は、約１×１０^－７Ｍ～約１×１０^－１３ＭのＫ_ｄでヒトＢＣＭＡに結合する。さらに別の実施形態では、抗原結合分子は、約１×１０^－１０Ｍ～約５×１０^－１０ＭのＫ_ｄでヒトＢＣＭＡに結合する。

【0242】

別の特定の実施形態では、抗原に特異的に結合する分子は、同様の結合条件下で他のタンパク質と交差反応しない。別の特定の実施形態では、抗原に特異的に結合する分子は、他の非ＢＣＭＡタンパク質と交差反応しない。特定の実施形態では、別の無関係な抗原よりも高い親和性でＢＣＭＡに結合する抗体またはその断片が本明細書で提供される。特定の実施形態では、例えば、ラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴、または結合平衡除外法によって測定される場合、別の無関係な抗原よりも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上高い親和性でＢＣＭＡ（例えば、ヒトＢＣＭＡ）に結合する抗体またはその断片が、本明細書において提供される。特定の実施形態において、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片の無関係な非ＢＣＭＡタンパク質に対する結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイによって測定した場合、抗体のＢＣＭＡタンパク質に対する結合の１０％、１５％、または２０％未満である。

【0243】

特定の実施形態では、別の種のＢＣＭＡよりも高い親和性でヒトＢＣＭＡに結合する抗体またはその断片が本明細書で提供される。特定の実施形態では、例えば、ラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴、または結合平衡除外法によって測定される場合、別の種のＢＣＭＡよりも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、またはそれ以上高い親和性でヒトＢＣＭＡに結合する抗体またはその断片が、本明細書において提供される。特定の実施形態では、ヒトＢＣＭＡに結合する、本明細書に記載の抗体またはその断片は、例えば、ラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴、または結合平衡除外法によって測定した場合、ヒトＢＣＭＡタンパク質に対する抗体またはその断片の結合の１０％、１５％、または２０％未満で、別の種のＢＣＭＡタンパク質に結合する。

【0244】

ヒンジ領域
特定の実施形態では、ＣＡＲポリペプチドは、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとを連結する細胞外スペーサードメイン（ヒンジとも呼ばれ得る）を含む。ヒンジドメインは、細胞膜からのｓｃＦｖの分離を提供するスペーサー、及びＮＫ細胞の活性化またはＴ細胞の活性化を媒介する細胞内シグナル伝達モジュールである。細胞外スペーサードメインは、ヒトタンパク質由来のヒンジを含み得るが、これらに限定されない。例えば、一実施形態では、ヒンジは、ヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジ、例えば、ＩｇＧ４ヒンジ、またはＣＤ８ａヒンジ、Ｇｌｙ３などのポリペプチドから作製される人工スペーサー、またはＩｇＧ（ヒトＩｇＧｌもしくはＩｇＧ４など）のＣＨ１、ＣＨ２、及び／またはＣＨ３ドメインであり得る。

【0245】

特定の場合において、細胞外スペーサードメインは、（ｉ）ＩｇＧ４のヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３領域、（ｉｉ）ＩｇＧ４のヒンジ領域、（ｉｉｉ）ＩｇＧ４のヒンジ及びＣＨ２、（ｉｖ）ＣＤ８－αのヒンジ領域、（ｖ）ＣＤ２８のヒンジ領域、（ｖｉ）ＩｇＧｌのヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３領域、（ｖｉｉ）ＩｇＧｌのヒンジ領域を含み得る。

【0246】

本発明によれば、特に有用なヒンジは、ＣＤ２８に由来する。特定の実施形態では、ＣＡＲポリペプチドは、特定のＣＤ２８ヒンジアミノ酸配列を含むか、または特定のＣＤ２８ヒンジ核酸配列によってコードされる。例は以下の通りである：

【0247】

例示的な適切なＣＤ２８ヒンジは、以下のアミノ酸配列を含む：
ＲＡＡＡＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＫＤＰＫ（配列番号３６）

【0248】

例示的な適切なＣＤ２８ヒンジは、以下の核酸配列によってコードされる：
ｃｇｇｇｃｇｇｃｃｇｃａａｔｔｇａａｇｔｔａｔｇｔａｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｔａｃｃｔａｇａｃａａｔｇａｇａａｇａｇｃａａｔｇｇａａｃｃａｔｔａｔｃｃａｔｇｔｇａａａｇｇｇａａａｃａｃｃｔｔｔｇｔｃｃａａｇｔｃｃｃｃｔａｔｔｔｃｃｃｇｇａｃｃｔｔｃｔａａｇｃｃｃａａａｇａｔｃｃｃａａａ（配列番号３５）

【0249】

例示的な適切なＩｇＧヒンジは、以下のアミノ酸配列を含む：
ＲＴＶＴＶＳＳＱＤＰＡＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＫＤＰＫ（配列番号３７）

【0250】

例示的な好適なＩｇＧヒンジは、以下の核酸配列を含む：
ｃｇｔａｃｇｇｔｃａｃｔｇｔｃｔｃｔｔｃａｃａｇｇａｔｃｃｃｇｃｃｇａｇｃｃｃａａａｔｃｔｃｃｔｇａｃａａａａｃｔｃａｃａｃａｔｇｃｃｃａｃｃｇｔｇｃｃｃａｇｃａｃｃｔｇａａｃｔｃｃｔｇｇｇｇｇｇａｃｃｇｔｃａｇｔｃｔｔｃｃｔｃｔｔｃｃｃｃｃｃａａａａｃｃｃａａｇｇａｃａｃｃｃｔｃａｔｇａｔｃｔｃｃｃｇｇａｃｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａｃａｔｇｃｇｔｇｇｔｇｇｔｇｇａｃｇｔｇａｇｃｃａｃｇａａｇａｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａａｇｔｔｃａａｃｔｇｇｔａｃｇｔｇｇａｃｇｇｃｇｔｇｇａｇｇｔｇｃａｔａａｔｇｃｃａａｇａｃａａａｇｃｃｇｃｇｇｇａｇｇａｇｃａｇｔａｃａａｃａｇｃａｃｇｔａｃｃｇｔｇｔｇｇｔｃａｇｃｇｔｃｃｔｃａｃｃｇｔｃｃｔｇｃａｃｃａｇｇａｃｔｇｇｃｔｇａａｔｇｇｃａａｇｇａｇｔａｃａａｇｔｇｃａａｇｇｔｃｔｃｃａａｃａａａｇｃｃｃｔｃｃｃａｇｃｃｃｃｃａｔｃｇａｇａａａａｃｃａｔｃｔｃｃａａａｇｃｃａａａｇｇｇｃａｇｃｃｃｃｇａｇａａｃｃａｃａｇｇｔｇｔａｃａｃｃｃｔｇｃｃｃｃｃａｔｃｃｃｇｇｇａｔｇａｇｃｔｇａｃｃａａｇａａｃｃａｇｇｔｃａｇｃｃｔｇａｃｃｔｇｃｃｔｇｇｔｃａａａｇｇｃｔｔｃｔａｔｃｃｃａｇｃｇａｃａｔｃｇｃｃｇｔｇｇａｇｔｇｇｇａｇａｇｃａａｔｇｇｇｃａａｃｃｇｇａｇａａｃａａｃｔａｃａａｇａｃｃａｃｇｃｃｔｃｃｃｇｔｇｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａｃｇｇｃｔｃｃｔｔｃｔｔｃｃｔｃｔａｃａｇｃａａｇｃｔｃａｃｃｇｔｇｇａｃａａｇａｇｃａｇｇｔｇｇｃａｇｃａｇｇｇｇａａｃｇｔｃｔｔｃｔｃａｔｇｃｔｃｃｇｔｇａｔｇｃａｔｇａｇｇｃｔｃｔｇｃａｃａａｃｃａｃｔａｃａｃｇｃａｇａａｇａｇｃｃｔｃｔｃｃｃｔｇｔｃｔｃｃｇｇｇｔａａａａａａｇａｔｃｃｃａａａ（配列番号３８）

【0251】

膜貫通ドメイン
膜貫通は、細胞内シグナル伝達ドメインをＣＡＲのヒンジ領域に接続する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本発明による好適な膜貫通ドメインは、ＣＤ２８、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ８（例えば、ＣＤ８α）、ＣＤ４、ＣＤ１９、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－１、またはＣＤ１５４の膜貫通ドメインである。例示的な膜貫通ドメインは、ＷＯ２０２０２２７４４６（その全体が本明細書に組み込まれる）に開示されている。

【0252】

いくつかの実施形態では、膜貫通は、ＣＤ２８膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、以下のアミノ酸配列を含むＣＤ２８の膜貫通ドメインである：
ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号２６）

【0253】

いくつかの実施形態では、膜貫通は、以下の核酸配列によってコードされる：
ｔｔｔｔｇｇｇｔｇｃｔｇｇｔｇｇｔｇｇｔｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｃｔｇｇｃｔｔｇｃｔａｔａｇｃｔｔｇｃｔａｇｔａａｃａｇｔｇｇｃｃｔｔｔａｔｔａｔｔｔｔｃｔｇｇｇｔｇ（配列番号２７）

【0254】

共刺激ドメイン
ＣＡＲは、１つ以上の共刺激ドメインを含み得る。共刺激シグナルは、細胞拡大、機能、持続性、及び抗腫瘍活性を含む強固なキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を達成するために必要とされる。いくつかの実施形態では、本発明による共刺激領域は、ＣＤ２８、ＯＸ－４０、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、プログラム細胞死－１（ＰＤ－１）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＬＩＧＨＴ（腫瘍壊死因子スーパーファミリーのメンバー１４；ＴＮＦＳＦ１４）、ＮＫＧ２Ｃ、Ｉｇα（ＣＤ７９ａ）、Ｆｃγ受容体、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＩＣＡＭ－１、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、またはそれらの任意の組み合わせのシグナル伝達領域である。

【0255】

いくつかの実施形態では、共刺激ドメインは、
ＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ（配列番号２８）を含む。

【0256】

いくつかの実施形態では、共刺激ドメインは、
ａｇｇａｇｔａａｇａｇｇａｇｃａｇｇｃｔｃｃｔｇｃａｃａｇｔｇａｃｔａｃａｔｇａａｃａｔｇａｃｔｃｃｃｃｇｃｃｇｃｃｃｃｇｇｇｃｃｃａｃｃｃｇｃａａｇｃａｔｔａｃｃａｇｃｃｃｔａｔｇｃｃｃｃａｃｃａｃｇｃｇａｃｔｔｃｇｃａｇｃｃｔａｔｃｇｃｔｃａ（配列番号２９）によってコードされる。

【0257】

活性化ドメイン
本発明によれば、ＣＡＲ構築物は、活性化ドメインも含み得る。特定の実施形態では、ＣＡＲポリペプチドは、免疫細胞活性化部分を含む。活性化部分は、共刺激部分と共に、ＮＫ細胞の活性化、増殖、エフェクター機能の獲得、ならびに炎症性サイトカイン及びケモカインの分泌をもたらす下流のシグナル伝達カスケードを活性化するように作用する。いくつかの実施形態では、活性化部分はＣＤ３ζである。

【0258】

ＣＤ３ζアミノ酸配列の一例は以下の通りである：
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号３０）

【0259】

ＣＤ３ζ核酸配列の一例は以下の通りである：
ｃｇｃｇｔｇａａｇｔｔｃａｇｃａｇｇａｇｃｇｃａｇａｃｇｃｃｃｃｃｇｃｇｔａｃｃａｇｃａｇｇｇｃｃａｇａａｃｃａｇｃｔｃｔａｔａａｃｇａｇｃｔｃａａｔｃｔａｇｇａｃｇａａｇａｇａｇｇａｇｔａｃｇａｔｇｔｔｔｔｇｇａｃａａａａｇａｃｇｔｇｇｃｃｇｇｇａｃｃｃｔｇａｇａｔｇｇｇｇｇｇａａａｇｃｃｇａｇａａｇｇａａｇａａｃｃｃｔｃａｇｇａａｇｇｃｃｔｇｔａｃａａｔｇａａｃｔｇｃａｇａａａｇａｔａａｇａｔｇｇｃｇｇａｇｇｃｃｔａｃａｇｔｇａｇａｔｔｇｇｇａｔｇａａａｇｇｃｇａｇｃｇｃｃｇｇａｇｇｇｇｃａａｇｇｇｇｃａｃｇａｔｇｇｃｃｔｔｔａｃｃａｇｇｇｔｃｔｃａｇｔａｃａｇｃｃａｃｃａａｇｇａｃａｃｃｔａｃｇａｃｇｃｃｃｔｔｃａｃａｔｇｃａｇｇｃｃｃｔｇｃｃｃｃｃｔｃｇｃ（配列番号３１）

【0260】

シグナルペプチド
特定の実施形態では、ＣＡＲポリペプチドは、シグナルペプチドを含む。シグナルペプチドは、ＣＡＲポリペプチドの外部ドメインの一部である。いくつかの実施形態では、外部ドメインは、細胞質の外側にあり、細胞外空間に曝露されるＣＡＲタンパク質の一部である。シグナルペプチドの機能は、認識されたタンパク質シグナルを細胞小胞体に伝達することである。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、重鎖シグナルペプチド、ＩＬ－１５シグナルペプチド、ＣＤ８ａシグナルペプチド、ＧＭＣＳＦ－Ｒシグナルペプチドから選択することができる。

【0261】

シグナルペプチドアミノ酸配列の一例は以下の通りである：
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣ（配列番号５１）

【0262】

シグナルペプチド核酸配列の一例は以下の通りである：
ａｔｇｇａａｔｔｃｇｇａｔｔｇｔｃａｔｇｇｔｔｇｔｔｃｃｔｃｇｔｃｇｃａａｔｔｃｔｃａａｇｇｇｃｇｔｇｃａｇｔｇｃ（配列番号５２）。

【0263】

シグナルペプチドアミノ酸配列の一例は以下の通りである：
ＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡ（配列番号３２）

【0264】

シグナルペプチド核酸配列の一例は以下の通りである：
Ａｔｇｃｇｃａｔｔａｇｃａａｇｃｃｃｃａｃｃｔｇｃｇｇａｇｃａｔｃａｇｃａｔｃｃａｇｔｇｃｔａｃｃｔｇｔｇｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇａａｃａｇｃｃａｃｔｔｃｃｔｇａｃｃｇａｇｇｃｃ（配列番号３３）。

【0265】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲは切断部位を含む。切断部位の一例は以下の通りである：
ＧＰＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号３９）。

【0266】

いくつかの実施形態では、切断部位は、
ｇｇａｃｃｇｃａｇｔｇｔａｃｔａａｔｔａｔｇｃｔｃｔｃｔｔｇａａａｔｔｇｇｃｔｇｇａｇａｔｇｔｔｇａｇａｇｃａａｔｃｃｃｇｇｇｃｃｃ（配列番号４０）によってコードされる。

【0267】

サイトカイン
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ発現細胞におけるサイトカインの発現は、その抗腫瘍効果を改善する。一実施形態では、サイトカインは、ＣＡＲの一部として発現される。別の実施形態では、サイトカインは、別個の発現系で発現される。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせから選択され得る。一実施形態では、サイトカインは、ヒト成長ホルモン、Ｎ－メチオニルヒト成長ホルモン、及びウシ成長ホルモンなどの成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）などの糖タンパク質ホルモン；肝臓増殖因子（ＨＧＦ）；線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；ミュラー管抑制因子；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ－βなどの神経増殖因子（ＮＧＦ）；血小板増殖因子；ＴＧＦ－α及びＴＧＦ－βなどの形質転換増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様増殖因子Ｉ及びＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン－α、β、及びγなどのインターフェロン；マクロファージ－ＣＳＦ（Ｍ－ＣＳＦ）、顆粒球－マクロファージ－ＣＳＦ（ＧＭ－ＣＳＦ）、及び顆粒球－ＣＳＦ（Ｇ－ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；ＩＬ－１、ＩＬ－１α、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１５などのインターロイキン（ＩＬ）；ＴＮＦαまたはＴＮＦ－βなどの腫瘍壊死因子；ならびにＬＩＦ及びｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子から選択される。

【0268】

一実施形態では、サイトカインはＩＬ－１５である。一実施形態では、サイトカインＩＬ－１５領域は、以下のアミノ酸配列を含む：
ＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号２３）。

【0269】

ＩＬ－１５核酸配列の一例は以下のとおりである：
ｇｇｃａｔｃｃａｃｇｔｇｔｔｃａｔｃｃｔｇｇｇｃｔｇｃｔｔｃａｇｃｇｃｃｇｇａｃｔｇｃｃｃａａｇａｃｃｇａｇｇｃｃａａｃｔｇｇｇｔｇａａｃｇｔｇａｔｃａｇｃｇａｃｃｔｇａａｇａａｇａｔｃｇａｇｇａｃｃｔｇａｔｃｃａｇａｇｃａｔｇｃａｃａｔｃｇａｃｇｃｃａｃｃｃｔｇｔａｃａｃｃｇａｇａｇｃｇａｃｇｔｇｃａｃｃｃｃａｇｃｔｇｃａａｇｇｔｇａｃｃｇｃｃａｔｇａａｇｔｇｃｔｔｔｃｔｇｃｔｇｇａａｃｔｇｃａｇｇｔｇａｔｃａｇｃｃｔｇｇａａａｇｃｇｇｃｇａｃｇｃｃａｇｃａｔｃｃａｃｇａｃａｃｃｇｔｇｇａｇａａｃｃｔｇａｔｃａｔｃｃｔｇｇｃｃａａｃａａｃａｇｃｃｔｇａｇｃａｇｃａａｃｇｇｃａａｃｇｔｇａｃｃｇａｇａｇｃｇｇｃｔｇｃａａａｇａｇｔｇｃｇａｇｇａａｃｔｇｇａａｇａｇａａｇａａｃａｔｃａａａｇａｇｔｔｔｃｔｇｃａｇａｇｃｔｔｃｇｔｇｃａｃａｔｃｇｔｇｃａｇａｔｇｔｔｃａｔｃａａｃａｃｃａｇｃ（配列番号３４）

【0270】

いくつかの実施形態では、本開示に包含されるＩＬ－１５ポリペプチドは、配列番号２３、または配列番号２３に対して少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９％、もしくはそれ以上同一である配列を含み得る。

【0271】

自殺遺伝子
特定の実施形態では、自殺遺伝子は、その使用を制御し、所望の事象及び／または時間での細胞療法の終了を可能にするために、任意の種類の細胞療法と組み合わせて利用される。自殺遺伝子は、必要な場合に形質導入細胞の死を誘発する目的で、形質導入細胞に使用される。本開示に包含されるベクターを保有するように改変された本開示の抗原標的化細胞は、１つ以上の自殺遺伝子を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書で使用される場合、「自殺遺伝子」という用語は、プロドラッグまたは他の薬剤の投与の際に、その宿主細胞を殺傷する化合物への遺伝子産物の移行を生じさせる遺伝子として定義される。他の実施形態において、自殺遺伝子は、所望される場合、自殺遺伝子産物を標的とする薬剤（例えば、抗体）によって標的とされる遺伝子産物をコードする。「自殺遺伝子産物」は、自殺遺伝子によってコードされるタンパク質またはポリペプチドを記載する。

【0272】

使用され得る自殺遺伝子／プロドラッグの組み合わせの例は、単純ヘルペスウイルス－チミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ｔｋ）とガンシクロビル、アシクロビル、またはＦＩＡＵ；オキシドレダクターゼとシクロヘキシミド；シトシンデアミナーゼと５－フルオロシトシン；チミジンキナーゼチミジル酸キナーゼ（Ｔｄｋ：Ｔｍｋ）とＡＺＴ；ならびにデオキシシチジンキナーゼとシトシンアラビノシドである。プロドラッグ６－メチルプリンデオキシリボシドを毒性プリン６－メチルプリンに変換する、Ｅ．ｃｏｌｉプリンヌクレオシドホスホリラーゼ、いわゆる自殺遺伝子を使用することができる。プロドラッグ療法で使用される自殺遺伝子の他の例は、Ｅ．ｃｏｌｉシトシンデアミナーゼ遺伝子、及びＨＳＶチミジンキナーゼ遺伝子である。

【0273】

例示的な自殺遺伝子としてはまた、ＣＤ２０、ＣＤ５２、ＥＧＦＲｖ３、または誘導性カスパーゼ９が挙げられる。一実施形態では、ＥＧＦＲバリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖ３）の切り詰め型を、セツキシマブによって除去することができる自殺抗原として使用することができる。本開示において使用され得る当該技術分野において公知のさらなる自殺遺伝子としては、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ（ＰＮＰ）、チトクロムｐ４５０酵素（ＣＹＰ）、カルボキシペプチダーゼ（ＣＰ）、カルボキシルエステラーゼ（ＣＥ）、ニトロレダクターゼ（ＮＴＲ）、グアニンリボシルトランスフェラーゼ（ＸＧＲＴＰ）、グリコシダーゼ酵素、メチオニン－α，γ－リアーゼ（ＭＥＴ）、及びチミジンホスホリラーゼ（ＴＰ）が挙げられる。

【0274】

いくつかの実施形態では、誘導性カスパーゼ９（ｉＣ９）を例示的な自殺遺伝子として使用する。例となるｉＣ９は、例えば、Ｙａｇｙｕ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１５ Ｓｅｐ；２３（９）：１４７５－８５に記載されている（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、ｉＣａｓｐａｓｅ９は、以下のアミノ酸配列を含む：
ＭＳＴＥＳＭＩＲＤＶＥＬＡＥＥＡＬＰＫＫＴＧＧＰＱＧＳＲＲＣＬＦＬＳＬＦＳＦＬＩＶＡＧＡＴＴＬＦＣＬＬＨＦＧＶＩＧＰＱＲＥＥＦＰＲＤＬＳＬＩＳＰＬＡＱＡＶＲＳＳＳＲＴＰＳＤＫＰＶＡＨＶＶＡＮＰＱＡＥＧＱＬＱＷＬＮＲＲＡＮＡＬＬＡＮＧＶＥＬＲＤＮＱＬＶＶＰＳＥＧＬＹＬＩＹＳＱＶＬＦＫＧＱＧＣＰＳＴＨＶＬＬＴＨＴＩＳＲＩＡＶＳＹＱＴＫＶＮＬＬＳＡＩＫＳＰＣＱＲＥＴＰＥＧＡＥＡＫＰＷＹＥＰＩＹＬＧＧＶＦＱＬＥＫＧＤＲＬＳＡＥＩＮＲＰＤＹＬＤＦＡＥＳＧＱＶＹＦＧＩＩＡＬ（配列番号２５）。

【0275】

いくつかの実施形態では、本開示は、２６ｋｄのＴＮＦαの切断不可能な変異体を使用して細胞治療を終了させるために提供される方法及び組成物に関する。ＴＮＦα変異体は切断不可能であり、膜に結合した非分泌性のものとする。切断不可能なＴＮＦα変異体を発現する細胞は、例えば、エタネルセプト、インフリキシマブ、またはアダリルマブなどの現在臨床にあるＦＤＡに認可されたＴＮＦα抗体を使用することを含む選択的欠失を標的とすることができる。変異したＴＮＦαポリペプチドは、ＣＡＲをコードする遺伝子などの１つ以上の治療用導入遺伝子と共発現され得る。さらに、ＴＮＦ－α変異体発現細胞は、膜結合ＴＮＦαタンパク質の生物活性によって媒介される、腫瘍標的に対して優れた活性を有する。

【0276】

特定の実施形態では、自殺遺伝子は、ＴＮＦα－変換酵素（ＴＡＣＥとも呼ばれる）などの天然でＴＮＦを切断する標準的な酵素によって切断不可能な腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）α変異体である。この場合、ＴＮＦα変異体は、特定の実施形態において、膜結合及び非分泌性である。本開示において使用されるＴＮＦα変異体は、少なくとも抗体を含む、変異体に結合する１つ以上の薬剤によって標的化され得、その結果、細胞の表面上のＴＮＦα変異体への薬剤（複数可）の結合に続いて、細胞が死滅する。本開示の実施形態は、ＴＮＦα変異体を、それを発現する細胞のマーカーとして利用することを可能にする。

【0277】

切断不可能なＴＮＦα変異体を発現する細胞は、例えば、エタネルセプト、インフリキシマブ、またはアダリルマブなどの現在臨床にあるＦＤＡに認可されたＴＮＦα抗体を使用することを含む選択的欠失を標的とすることができる。変異したＴＮＦαポリペプチドは、ＢＣＭＡ標的化ＣＡＲを含むＣＡＲをコードする遺伝子などの、細胞における１つ以上の治療用導入遺伝子と共発現され得る。さらに、ＴＮＦ－α変異体発現細胞は、膜結合ＴＮＦαタンパク質の生物活性によって媒介される、腫瘍標的に対して優れた活性を有する。

【0278】

野生型ＴＮＦαは、２６ｋＤの膜貫通形態及び１７ｋＤの分泌成分を有する。いくつかの実施形態では、ＴＮＦα変異体は、Ｐｅｒｅｚ ｅｌ ａｌ（１９９０）に記載され、本開示において利用され得る。特定の実施形態では、ＴＮＦα変異体は、－３、－２、－１、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３位、またはそれらの組み合わせにおけるそれぞれのアミノ酸の欠失を含む。具体的な組み合わせとしては、－３位～１３位；－３位～１２位；－３位～１１位；－３位～１０位；－３位～９位；－３位～８位；－３位～７位；－３位～６位；－３位～５位；－３位～４位；－３位～３位；－３位～２位；－３位～１位；－３位～－１位；－３位～－２位；－２位～１３位；－２位～１２位；－２位～１１位；－２位～１０位；－２位～９位；－２位～８位；－２位～７位；－２位～６位；－２位～５位；－２位～４位；－２位～３位；－２位～２位；－２位～１位；－２位～－１位；－１位～１３位；－１位～１２位；－１位～１１位；－１位～１０位；－１位～９位；－１位～８位；－１位～７位；－１位～６位；－１位～５位；－１位～４位；－１位～３位；－１位～２位；－１位～１位；１位～１３位；１位～１２位；１位～１１位；１位～１０位；１位～９位；１位～８位；１位～７位；１位～６位；１位～５位；１位～４位；１位～３位；１位～２位；などの位置における欠失が挙げられる。特定の実施形態において、本開示のＴＮＦ－α変異体の例は、１７ｋＤのＴＮＦに関して少なくとも以下を含む：（１）Ｖａｌ１の欠失及びＰｒｏｌｌ２の欠失；（２）Ｖａｌ１３の欠失；（３）Ｖａｌ１の欠失及びＶａｌ１３の欠失；（４）Ｖａｌ１～Ｐｒｏ１２の欠失及びＶａｌ１３の欠失（１３アミノ酸の欠失）；（５）Ａｌａ－３～Ｖａｌ１３の欠失（１６アミノ酸の欠失）。

【0279】

ＴＮＦα変異体は、任意の適切な方法によって生成され得るが、特定の実施形態において、それらは、部位特異的変異導入によって生成される。場合によっては、ＴＮＦα変異体は、タンパク質を切断不能にする変異以外の変異を有し得る。特定の場合において、ＴＮＦα変異体は、Ｖａｌ、Ｐｒｏ１２、及び／またはＶａｌ１３、またはそれらの間の領域における欠失以外に、１、２、３、またはそれ以上の変異を有し得る。変異体を非分泌性にする変異以外の変異は、アミノ酸置換、欠失、付加、反転などのうちの１つ以上であってもよい。追加の変異がアミノ酸置換である場合、置換は、例えば、保存的アミノ酸に対してであってもなくてもよい。場合によっては、１、２、３、４、５、またはそれ以上の追加のアミノ酸が、タンパク質のＮ－末端及び／またはＣ－末端に存在し得る。いくつかの場合において、ＴＮＦα変異体は、（１）変異体を非分泌性にする１つ以上の変異；（２）変異体に対するアウトサイドインシグナル伝達を防止する１つ以上の変異；及び／または（３）ＴＮＦ受容体１及び／またはＴＮＦ受容体２への変異体の結合を妨害する１つ以上の変異を有する。

【0280】

特定の実施形態では、ＴＮＦα変異体ポリペプチドは、以下の配列番号２５に関する欠失を含む：アミノ酸残基１及びアミノ酸残基１２；アミノ酸残基１及びアミノ酸残基１３；アミノ酸残基１～１２；アミノ酸残基１～１３；またはアミノ酸残基－１～１３。

【0281】

例示的なＴＮＦα変異体ポリペプチド配列、変異体及びバリアントは、ＷＯ２０２０１０６６１９及びＷＯ２０２１０５５３４９に開示されており、これらは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0282】

例示的な全長ＢＣＭＡ－ＣＡＲ配列
いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＨＭＮＳＬＲＡＥＤＴＧＶＹＹＣＡＲＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫＲＡＡＡＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＫＤＰＫＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号１９）を含むアミノ酸配列を含む。

【0283】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号１９に対して少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号１９に対して少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号１９に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号１９に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号１９に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号１９に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号１９に対して少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号１９に対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0284】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、以下を含む核酸配列を含む：
ａｔｇｇａａｔｔｔｇｇａｃｔｇｔｃａｔｇｇｃｔｔｔｔｔｃｔｔｇｔｃｇｃｃａｔｃｃｔｇａａａｇｇｇｇｔａｃａｇｔｇｔｇａａｇｔｇｃａａｃｔｇｇｔｃｇａａｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｇｔｔｇｔｃｃａｇｃｃｃｇｇｇａｇｇｔｃｔｔｔｇｃｇｇｔｔｇｔｃａｔｇｃｇｃａｇｃｔｔｃａｇｇｔｔｔｔａｃｔｔｔｃｔｃｔｔｃａｔａｃｇｃｃａｔｃｃａｔｔｇｇｇｔｔｃｇｇｃａａｇｃｇｃｃｔｇｇｔａａｇｇｇａｃｔｃｇａａｔｇｇｇｔｔｇｃａｇｔｇａｃｃｔｇｇｃａｔｇａｃｇｇａｔｃａａａｃａａｇｔａｔｔａｔｇｃａｇａａｔｃａｇｔａａｔｇｇｇｃａｇｇｔｔｔａｃｃａｔｔｔｃａｃｇｃｇａｃａａｔａｇｃａａａａａｔａｃａｃｔｔｔａｔｔｔｇｃａｃａｔｇａａｔｔｃａｃｔｃａｇａｇｃｃｇａａｇａｔａｃｃｇｇｃｇｔｃｔａｔｔａｔｔｇｃｇｃｃａｇａｇｃａａａａｔｔｔｇｇｇｇａｇｃｃａｃａｇｔａｃｔｔｃｃａａｃａｔｔｇｇｇｇａｃａａｇｇｃａｃｔａｃｃｇｔｃａｃｃｇｔｇａｇｔｔｃａｇｇｃｇｇｇｇｇｇｇｇａｔｃａｇｇｃｇｇａｇｇａｇｇｔｔｃａｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃａｇｔｇａｃａｔａｇｔｇａｔｇａｃｔｃａｇａｇｔｃｃｔｔｃａｔｔｔｔｔｇａｇｃｇｃａａｇｔｇｔｔｇｇｇｇａｔａｇｇｇｔｃａｃｔａｔａａｃｇｔｇｔａｇａｇｃａｔｃｔｃａａｇｇｃａｔｔｔｃｔｔｃａｔａｔｔｔｇｇｃｃｔｇｇｔａｔｃａａｃａｇａａａｃｃｔｇｇａａａｇｇｃｃｃｃａａａｇｃｔｃｃｔｔａｔｔｔａｃｇｃｔｇｃａｔｃａａｃｃｃｔｇｃａａｔｃｔｇｇｃｇｔｃｃｃａａｇｃｃｇａｔｔｃｔｃｔｇｇｇｔｃｔｇｇａａｇｃｇｇｃａｃａｇａａｔｔｔａｃｃｃｔｇａｃｔａｔａｔｃａｔｃｔｃｔｃｃａａｃｃｔｇａａｇａｔｔｔｔｇｃｃａｃｃｔａｔｔａｔｔｇｔｃａｇｃａａｔｔｇａａｔｔｃａｔａｃｃｃｇｔｔｃａｃａｔｔｃｇｇｃｃｃｔｇｇａａｃｔａａａｇｔｃｇａｃａｔｃａａｇｃｇｇｇｃｇｇｃｃｇｃａａｔｔｇａａｇｔｔａｔｇｔａｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｔａｃｃｔａｇａｃａａｔｇａｇａａｇａｇｃａａｔｇｇａａｃｃａｔｔａｔｃｃａｔｇｔｇａａａｇｇｇａａａｃａｃｃｔｔｔｇｔｃｃａａｇｔｃｃｃｃｔａｔｔｔｃｃｃｇｇａｃｃｔｔｃｔａａｇｃｃｃａａａｇａｔｃｃｃａａａｔｔｔｔｇｇｇｔｇｃｔｇｇｔｇｇｔｇｇｔｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｃｔｇｇｃｔｔｇｃｔａｔａｇｃｔｔｇｃｔａｇｔａａｃａｇｔｇｇｃｃｔｔｔａｔｔａｔｔｔｔｃｔｇｇｇｔｇａｇｇａｇｔａａｇａｇｇａｇｃａｇｇｃｔｃｃｔｇｃａｃａｇｔｇａｃｔａｃａｔｇａａｃａｔｇａｃｔｃｃｃｃｇｃｃｇｃｃｃｃｇｇｇｃｃｃａｃｃｃｇｃａａｇｃａｔｔａｃｃａｇｃｃｃｔａｔｇｃｃｃｃａｃｃａｃｇｃｇａｃｔｔｃｇｃａｇｃｃｔａｔｃｇｃｔｃａｃｇｃｇｔｇａａｇｔｔｃａｇｃａｇｇａｇｃｇｃａｇａｃｇｃｃｃｃｃｇｃｇｔａｃｃａｇｃａｇｇｇｃｃａｇａａｃｃａｇｃｔｃｔａｔａａｃｇａｇｃｔｃａａｔｃｔａｇｇａｃｇａａｇａｇａｇｇａｇｔａｃｇａｔｇｔｔｔｔｇｇａｃａａａａｇａｃｇｔｇｇｃｃｇｇｇａｃｃｃｔｇａｇａｔｇｇｇｇｇｇａａａｇｃｃｇａｇａａｇｇａａｇａａｃｃｃｔｃａｇｇａａｇｇｃｃｔｇｔａｃａａｔｇａａｃｔｇｃａｇａａａｇａｔａａｇａｔｇｇｃｇｇａｇｇｃｃｔａｃａｇｔｇａｇａｔｔｇｇｇａｔｇａａａｇｇｃｇａｇｃｇｃｃｇｇａｇｇｇｇｃａａｇｇｇｇｃａｃｇａｔｇｇｃｃｔｔｔａｃｃａｇｇｇｔｃｔｃａｇｔａｃａｇｃｃａｃｃａａｇｇａｃａｃｃｔａｃｇａｃｇｃｃｃｔｔｃａｃａｔｇｃａｇｇｃｃｃｔｇｃｃｃｃｃｔｃｇｃｔｇａ（配列番号４２）。

【0285】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４２に対して少なくとも７０％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４２に対して少なくとも７５％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４２に対して少なくとも８０％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４２に対して少なくとも８５％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４２に対して少なくとも９０％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４２に対して少なくとも９５％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４２に対して少なくとも９７％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４２に対して少なくとも９９％同一である核酸配列を含む。

【0286】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、リンカー及び切断ペプチドを介してＩＬ－１５に連結され、これは配列番号４５：
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＨＭＮＳＬＲＡＥＤＴＧＶＹＹＣＡＲＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫＲＡＡＡＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＫＤＰＫＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＰＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号４５）を含む。

【0287】

配列番号４５によって表されるＩＬ－１５に連結されたＢＣＭＡ－ＣＡＲは、本明細書においてＢＣＭＡ２８－１と呼ばれることもある。ＣＤ２８ヒンジがＩｇＧ１ヒンジに置き換えられている、ＩＬ－１５に連結された別のＢＣＭＡ－ＣＡＲは、本明細書においてＢＣＭＡＩｇ１と呼ばれることもある。

【0288】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４５に対して少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４５に対して少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４５に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４５に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４５に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４５に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４５に対して少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４５に対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0289】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ－１５は、以下を含む：
ａｔｇｇａａｔｔｔｇｇａｃｔｇｔｃａｔｇｇｃｔｔｔｔｔｃｔｔｇｔｃｇｃｃａｔｃｃｔｇａａａｇｇｇｇｔａｃａｇｔｇｔｇａａｇｔｇｃａａｃｔｇｇｔｃｇａａｔｃｔｇｇｇｇｇａｇａｃｇｔｔｇｔｃｃａｇｃｃｃｇｇｇａｇｇｔｃｔｔｔｇｃｇｇｔｔｇｔｃａｔｇｃｇｃａｇｃｔｔｃａｇｇｔｔｔｔａｃｔｔｔｃｔｃｔｔｃａｔａｃｇｃｃａｔｃｃａｔｔｇｇｇｔｔｃｇｇｃａａｇｃｇｃｃｔｇｇｔａａｇｇｇａｃｔｃｇａａｔｇｇｇｔｔｇｃａｇｔｇａｃｃｔｇｇｃａｔｇａｃｇｇａｔｃａａａｃａａｇｔａｔｔａｔｇｃａｇａａｔｃａｇｔａａｔｇｇｇｃａｇｇｔｔｔａｃｃａｔｔｔｃａｃｇｃｇａｃａａｔａｇｃａａａａａｔａｃａｃｔｔｔａｔｔｔｇｃａｃａｔｇａａｔｔｃａｃｔｃａｇａｇｃｃｇａａｇａｔａｃｃｇｇｃｇｔｃｔａｔｔａｔｔｇｃｇｃｃａｇａｇｃａａａａｔｔｔｇｇｇｇａｇｃｃａｃａｇｔａｃｔｔｃｃａａｃａｔｔｇｇｇｇａｃａａｇｇｃａｃｔａｃｃｇｔｃａｃｃｇｔｇａｇｔｔｃａｇｇｃｇｇｇｇｇｇｇｇａｔｃａｇｇｃｇｇａｇｇａｇｇｔｔｃａｇｇｃｇｇｃｇｇｃｇｇｃａｇｔｇａｃａｔａｇｔｇａｔｇａｃｔｃａｇａｇｔｃｃｔｔｃａｔｔｔｔｔｇａｇｃｇｃａａｇｔｇｔｔｇｇｇｇａｔａｇｇｇｔｃａｃｔａｔａａｃｇｔｇｔａｇａｇｃａｔｃｔｃａａｇｇｃａｔｔｔｃｔｔｃａｔａｔｔｔｇｇｃｃｔｇｇｔａｔｃａａｃａｇａａａｃｃｔｇｇａａａｇｇｃｃｃｃａａａｇｃｔｃｃｔｔａｔｔｔａｃｇｃｔｇｃａｔｃａａｃｃｃｔｇｃａａｔｃｔｇｇｃｇｔｃｃｃａａｇｃｃｇａｔｔｃｔｃｔｇｇｇｔｃｔｇｇａａｇｃｇｇｃａｃａｇａａｔｔｔａｃｃｃｔｇａｃｔａｔａｔｃａｔｃｔｃｔｃｃａａｃｃｔｇａａｇａｔｔｔｔｇｃｃａｃｃｔａｔｔａｔｔｇｔｃａｇｃａａｔｔｇａａｔｔｃａｔａｃｃｃｇｔｔｃａｃａｔｔｃｇｇｃｃｃｔｇｇａａｃｔａａａｇｔｃｇａｃａｔｃａａｇｃｇｇｇｃｇｇｃｃｇｃａａｔｔｇａａｇｔｔａｔｇｔａｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｔａｃｃｔａｇａｃａａｔｇａｇａａｇａｇｃａａｔｇｇａａｃｃａｔｔａｔｃｃａｔｇｔｇａａａｇｇｇａａａｃａｃｃｔｔｔｇｔｃｃａａｇｔｃｃｃｃｔａｔｔｔｃｃｃｇｇａｃｃｔｔｃｔａａｇｃｃｃａａａｇａｔｃｃｃａａａｔｔｔｔｇｇｇｔｇｃｔｇｇｔｇｇｔｇｇｔｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｃｔｇｇｃｔｔｇｃｔａｔａｇｃｔｔｇｃｔａｇｔａａｃａｇｔｇｇｃｃｔｔｔａｔｔａｔｔｔｔｃｔｇｇｇｔｇａｇｇａｇｔａａｇａｇｇａｇｃａｇｇｃｔｃｃｔｇｃａｃａｇｔｇａｃｔａｃａｔｇａａｃａｔｇａｃｔｃｃｃｃｇｃｃｇｃｃｃｃｇｇｇｃｃｃａｃｃｃｇｃａａｇｃａｔｔａｃｃａｇｃｃｃｔａｔｇｃｃｃｃａｃｃａｃｇｃｇａｃｔｔｃｇｃａｇｃｃｔａｔｃｇｃｔｃａｃｇｃｇｔｇａａｇｔｔｃａｇｃａｇｇａｇｃｇｃａｇａｃｇｃｃｃｃｃｇｃｇｔａｃｃａｇｃａｇｇｇｃｃａｇａａｃｃａｇｃｔｃｔａｔａａｃｇａｇｃｔｃａａｔｃｔａｇｇａｃｇａａｇａｇａｇｇａｇｔａｃｇａｔｇｔｔｔｔｇｇａｃａａａａｇａｃｇｔｇｇｃｃｇｇｇａｃｃｃｔｇａｇａｔｇｇｇｇｇｇａａａｇｃｃｇａｇａａｇｇａａｇａａｃｃｃｔｃａｇｇａａｇｇｃｃｔｇｔａｃａａｔｇａａｃｔｇｃａｇａａａｇａｔａａｇａｔｇｇｃｇｇａｇｇｃｃｔａｃａｇｔｇａｇａｔｔｇｇｇａｔｇａａａｇｇｃｇａｇｃｇｃｃｇｇａｇｇｇｇｃａａｇｇｇｇｃａｃｇａｔｇｇｃｃｔｔｔａｃｃａｇｇｇｔｃｔｃａｇｔａｃａｇｃｃａｃｃａａｇｇａｃａｃｃｔａｃｇａｃｇｃｃｃｔｔｃａｃａｔｇｃａｇｇｃｃｃｔｇｃｃｃｃｃｔｃｇｃｇｇａｃｃｇｃａｇｔｇｔａｃｔａａｔｔａｔｇｃｔｃｔｃｔｔｇａａａｔｔｇｇｃｔｇｇａｇａｔｇｔｔｇａｇａｇｃａａｔｃｃｃｇｇｇｃｃｃａｔｇｃｇｃａｔｔａｇｃａａｇｃｃｃｃａｃｃｔｇｃｇｇａｇｃａｔｃａｇｃａｔｃｃａｇｔｇｃｔａｃｃｔｇｔｇｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇａａｃａｇｃｃａｃｔｔｃｃｔｇａｃｃｇａｇｇｃｃｇｇｃａｔｃｃａｃｇｔｇｔｔｃａｔｃｃｔｇｇｇｃｔｇｃｔｔｃａｇｃｇｃｃｇｇａｃｔｇｃｃｃａａｇａｃｃｇａｇｇｃｃａａｃｔｇｇｇｔｇａａｃｇｔｇａｔｃａｇｃｇａｃｃｔｇａａｇａａｇａｔｃｇａｇｇａｃｃｔｇａｔｃｃａｇａｇｃａｔｇｃａｃａｔｃｇａｃｇｃｃａｃｃｃｔｇｔａｃａｃｃｇａｇａｇｃｇａｃｇｔｇｃａｃｃｃｃａｇｃｔｇｃａａｇｇｔｇａｃｃｇｃｃａｔｇａａｇｔｇｃｔｔｔｃｔｇｃｔｇｇａａｃｔｇｃａｇｇｔｇａｔｃａｇｃｃｔｇｇａａａｇｃｇｇｃｇａｃｇｃｃａｇｃａｔｃｃａｃｇａｃａｃｃｇｔｇｇａｇａａｃｃｔｇａｔｃａｔｃｃｔｇｇｃｃａａｃａａｃａｇｃｃｔｇａｇｃａｇｃａａｃｇｇｃａａｃｇｔｇａｃｃｇａｇａｇｃｇｇｃｔｇｃａａａｇａｇｔｇｃｇａｇｇａａｃｔｇｇａａｇａｇａａｇａａｃａｔｃａａａｇａｇｔｔｔｃｔｇｃａｇａｇｃｔｔｃｇｔｇｃａｃａｔｃｇｔｇｃａｇａｔｇｔｔｃａｔｃａａｃａｃｃａｇｃｔｇａ（配列番号４６）。

【0290】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４６に対して少なくとも７０％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４６に対して少なくとも７５％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４６に対して少なくとも８０％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４６に対して少なくとも８５％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４６に対して少なくとも９０％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４６に対して少なくとも９５％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４６に対して少なくとも９７％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４６に対して少なくとも９９％同一である核酸配列を含む。

【0291】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、以下を含むアミノ酸配列を含む：ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＱＩＴＬＲＥＳＧＧＤＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＨＭＮＳＬＲＡＥＤＴＧＶＹＹＣＡＲＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＩＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＧＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＫＳＹＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＥＩＫＲＡＡＡＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＫＤＰＫＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号２０）

【0292】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号２０に対して少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号２０に対して少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号２０に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号２０に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号２０に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号２０に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号２０に対して少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号２０に対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0293】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、以下を含む核酸配列を含む：
ａｔｇｇａａｔｔｃｇｇｇｃｔｇｔｃｃｔｇｇｃｔｔｔｔｃｔｔｇｇｔｃｇｃａａｔｔｃｔｔａａｇｇｇｃｇｔｃｃａａｔｇｔｃａｇａｔａａｃｔｃｔｇｃｇｃｇａｇｔｃａｇｇａｇｇａｇａｃｇｔｇｇｔｇｃａａｃｃｇｇｇｃａｇａｔｃｔｃｔｃａｇｇｃｔｔｔｃａｔｇｔｇｃｃｇｃｃａｇｔｇｇｃｔｔｃａｃａｔｔｔａｇｃｔｃｔｔａｔｇｃａａｔａｃａｔｔｇｇｇｔｃａｇｇｃａｇｇｃｔｃｃｔｇｇｃａａｇｇｇｃｔｔｇｇａａｔｇｇｇｔａｇｃｇｇｔｔａｃｃｔｇｇｃａｔｇａｔｇｇａｔｃｔａａｃａａａｔａｃｔａｃｇｃｃｇａｇｔｃｔｇｔｔａｔｇｇｇｔｃｇａｔｔｃａｃａａｔｔｔｃｔｃｇａｇａｃａａｔｔｃａａａａａａｃａｃａｃｔｃｔａｃｃｔｇｃａｔａｔｇａａｃｔｃａｃｔｔａｇａｇｃａｇａｇｇａｃａｃｔｇｇｔｇｔｃｔａｔｔａｃｔｇｃｇｃｃａｇａｇｃａａａａｔｔｃｇｇｃｇａｇｃｃａｃａｇｔａｔｔｔｃｃａｇｃａｃｔｇｇｇｇａｃａａｇｇａａｃｃｃｔｃｇｔａａｃａｇｔａｔｃｔａｇｔｇｇｇｇｇｃｇｇａｇｇｇｔｃｔｇｇａｇｇａｇｇｇｇｇｇａｇｃｇｇｇｇｇａｇｇｃｇｇｃｔｃｔｇａｔａｔｔｇｔｔａｔｇａｃｃｃａａｔｃａｃｃａｔｃｔｔｔｔｃｔｇａｇｃｇｃｔａｇｔｇｔｃｇｇｃｇａｃａｇｇｇｔｔａｃａａｔｃａｃａｔｇｃｃｇａｇｃａａｇｃｃａａｇｇａａｔｃａａｃａａｔｔａｔｃｔｃｇｃａｔｇｇｔａｔｃａａｃａａａａａｃｃａｇｇｔａｔｃｇｃｃｃｃｇａａａｃｔｔｃｔｔａｔｔｔａｃｇｃａｇｃａｔｃａａｃｃｃｔｇｃａａａｇｃｇｇａｇｔｔｃｃｔｔｃｔａｇａｔｔｔｇｇｔｇｇｃａｇｃｇｇｃｔｃｃｇｇｇａｃｔｇａａｔｔｃａｃｔｃｔｔａｃｔａｔｔｔｃｃｔｃｃｃｔｔｃａａｃｃｃｇａａｇａｔｔｔｃｇｃｃａｃａｔａｔｔａｃｔｇｃｃａｇｃａｇｃｔｔａａｇｔｃａｔａｃｃｃｃｔｔｃａｃｔｔｔｔｇｇｃｃｃａｇｇａａｃｔａａａｇｔｔｇａａａｔｃａａａｃｇｇｇｃｇｇｃｃｇｃａａｔｔｇａａｇｔｔａｔｇｔａｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｔａｃｃｔａｇａｃａａｔｇａｇａａｇａｇｃａａｔｇｇａａｃｃａｔｔａｔｃｃａｔｇｔｇａａａｇｇｇａａａｃａｃｃｔｔｔｇｔｃｃａａｇｔｃｃｃｃｔａｔｔｔｃｃｃｇｇａｃｃｔｔｃｔａａｇｃｃｃａａａｇａｔｃｃｃａａａｔｔｔｔｇｇｇｔｇｃｔｇｇｔｇｇｔｇｇｔｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｃｔｇｇｃｔｔｇｃｔａｔａｇｃｔｔｇｃｔａｇｔａａｃａｇｔｇｇｃｃｔｔｔａｔｔａｔｔｔｔｃｔｇｇｇｔｇａｇｇａｇｔａａｇａｇｇａｇｃａｇｇｃｔｃｃｔｇｃａｃａｇｔｇａｃｔａｃａｔｇａａｃａｔｇａｃｔｃｃｃｃｇｃｃｇｃｃｃｃｇｇｇｃｃｃａｃｃｃｇｃａａｇｃａｔｔａｃｃａｇｃｃｃｔａｔｇｃｃｃｃａｃｃａｃｇｃｇａｃｔｔｃｇｃａｇｃｃｔａｔｃｇｃｔｃａｃｇｃｇｔｇａａｇｔｔｃａｇｃａｇｇａｇｃｇｃａｇａｃｇｃｃｃｃｃｇｃｇｔａｃｃａｇｃａｇｇｇｃｃａｇａａｃｃａｇｃｔｃｔａｔａａｃｇａｇｃｔｃａａｔｃｔａｇｇａｃｇａａｇａｇａｇｇａｇｔａｃｇａｔｇｔｔｔｔｇｇａｃａａａａｇａｃｇｔｇｇｃｃｇｇｇａｃｃｃｔｇａｇａｔｇｇｇｇｇｇａａａｇｃｃｇａｇａａｇｇａａｇａａｃｃｃｔｃａｇｇａａｇｇｃｃｔｇｔａｃａａｔｇａａｃｔｇｃａｇａａａｇａｔａａｇａｔｇｇｃｇｇａｇｇｃｃｔａｃａｇｔｇａｇａｔｔｇｇｇａｔｇａａａｇｇｃｇａｇｃｇｃｃｇｇａｇｇｇｇｃａａｇｇｇｇｃａｃｇａｔｇｇｃｃｔｔｔａｃｃａｇｇｇｔｃｔｃａｇｔａｃａｇｃｃａｃｃａａｇｇａｃａｃｃｔａｃｇａｃｇｃｃｃｔｔｃａｃａｔｇｃａｇｇｃｃｃｔｇｃｃｃｃｃｔｃｇｃｔｇａ（配列番号４３）

【0294】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４３に対して少なくとも７０％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４３に対して少なくとも７５％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４３に対して少なくとも８０％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４３に対して少なくとも８５％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４３に対して少なくとも９０％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４３に対して少なくとも９５％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４３に対して少なくとも９７％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４３に対して少なくとも９９％同一である核酸配列を含む。

【0295】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、リンカー及び切断ペプチドを介してＩＬ－１５に連結され、これは配列番号４７：
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＱＩＴＬＲＥＳＧＧＤＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＨＭＮＳＬＲＡＥＤＴＧＶＹＹＣＡＲＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＩＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＧＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＫＳＹＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＥＩＫＲＡＡＡＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＫＤＰＫＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＰＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号４７）を含む。

【0296】

ＩＬ－１５に連結されたＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４７によって表され、これは本明細書においてＢＣＭＡ２８－２と呼ばれることもある。ＣＤ２８ヒンジがＩｇＧ１ヒンジに置き換えられている、ＩＬ－１５に連結された別のＢＣＭＡ－ＣＡＲは、本明細書においてＢＣＭＡＩｇ２と呼ばれることもある。

【0297】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４７に対して少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４７に対して少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４７に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４７に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４７に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４７に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４７に対して少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４７に対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0298】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ－１５は、以下を含む：
ａｔｇｇａａｔｔｃｇｇｇｃｔｇｔｃｃｔｇｇｃｔｔｔｔｃｔｔｇｇｔｃｇｃａａｔｔｃｔｔａａｇｇｇｃｇｔｃｃａａｔｇｔｃａｇａｔａａｃｔｃｔｇｃｇｃｇａｇｔｃａｇｇａｇｇａｇａｃｇｔｇｇｔｇｃａａｃｃｇｇｇｃａｇａｔｃｔｃｔｃａｇｇｃｔｔｔｃａｔｇｔｇｃｃｇｃｃａｇｔｇｇｃｔｔｃａｃａｔｔｔａｇｃｔｃｔｔａｔｇｃａａｔａｃａｔｔｇｇｇｔｃａｇｇｃａｇｇｃｔｃｃｔｇｇｃａａｇｇｇｃｔｔｇｇａａｔｇｇｇｔａｇｃｇｇｔｔａｃｃｔｇｇｃａｔｇａｔｇｇａｔｃｔａａｃａａａｔａｃｔａｃｇｃｃｇａｇｔｃｔｇｔｔａｔｇｇｇｔｃｇａｔｔｃａｃａａｔｔｔｃｔｃｇａｇａｃａａｔｔｃａａａａａａｃａｃａｃｔｃｔａｃｃｔｇｃａｔａｔｇａａｃｔｃａｃｔｔａｇａｇｃａｇａｇｇａｃａｃｔｇｇｔｇｔｃｔａｔｔａｃｔｇｃｇｃｃａｇａｇｃａａａａｔｔｃｇｇｃｇａｇｃｃａｃａｇｔａｔｔｔｃｃａｇｃａｃｔｇｇｇｇａｃａａｇｇａａｃｃｃｔｃｇｔａａｃａｇｔａｔｃｔａｇｔｇｇｇｇｇｃｇｇａｇｇｇｔｃｔｇｇａｇｇａｇｇｇｇｇｇａｇｃｇｇｇｇｇａｇｇｃｇｇｃｔｃｔｇａｔａｔｔｇｔｔａｔｇａｃｃｃａａｔｃａｃｃａｔｃｔｔｔｔｃｔｇａｇｃｇｃｔａｇｔｇｔｃｇｇｃｇａｃａｇｇｇｔｔａｃａａｔｃａｃａｔｇｃｃｇａｇｃａａｇｃｃａａｇｇａａｔｃａａｃａａｔｔａｔｃｔｃｇｃａｔｇｇｔａｔｃａａｃａａａａａｃｃａｇｇｔａｔｃｇｃｃｃｃｇａａａｃｔｔｃｔｔａｔｔｔａｃｇｃａｇｃａｔｃａａｃｃｃｔｇｃａａａｇｃｇｇａｇｔｔｃｃｔｔｃｔａｇａｔｔｔｇｇｔｇｇｃａｇｃｇｇｃｔｃｃｇｇｇａｃｔｇａａｔｔｃａｃｔｃｔｔａｃｔａｔｔｔｃｃｔｃｃｃｔｔｃａａｃｃｃｇａａｇａｔｔｔｃｇｃｃａｃａｔａｔｔａｃｔｇｃｃａｇｃａｇｃｔｔａａｇｔｃａｔａｃｃｃｃｔｔｃａｃｔｔｔｔｇｇｃｃｃａｇｇａａｃｔａａａｇｔｔｇａａａｔｃａａａｃｇｇｇｃｇｇｃｃｇｃａａｔｔｇａａｇｔｔａｔｇｔａｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｔａｃｃｔａｇａｃａａｔｇａｇａａｇａｇｃａａｔｇｇａａｃｃａｔｔａｔｃｃａｔｇｔｇａａａｇｇｇａａａｃａｃｃｔｔｔｇｔｃｃａａｇｔｃｃｃｃｔａｔｔｔｃｃｃｇｇａｃｃｔｔｃｔａａｇｃｃｃａａａｇａｔｃｃｃａａａｔｔｔｔｇｇｇｔｇｃｔｇｇｔｇｇｔｇｇｔｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｃｔｇｇｃｔｔｇｃｔａｔａｇｃｔｔｇｃｔａｇｔａａｃａｇｔｇｇｃｃｔｔｔａｔｔａｔｔｔｔｃｔｇｇｇｔｇａｇｇａｇｔａａｇａｇｇａｇｃａｇｇｃｔｃｃｔｇｃａｃａｇｔｇａｃｔａｃａｔｇａａｃａｔｇａｃｔｃｃｃｃｇｃｃｇｃｃｃｃｇｇｇｃｃｃａｃｃｃｇｃａａｇｃａｔｔａｃｃａｇｃｃｃｔａｔｇｃｃｃｃａｃｃａｃｇｃｇａｃｔｔｃｇｃａｇｃｃｔａｔｃｇｃｔｃａｃｇｃｇｔｇａａｇｔｔｃａｇｃａｇｇａｇｃｇｃａｇａｃｇｃｃｃｃｃｇｃｇｔａｃｃａｇｃａｇｇｇｃｃａｇａａｃｃａｇｃｔｃｔａｔａａｃｇａｇｃｔｃａａｔｃｔａｇｇａｃｇａａｇａｇａｇｇａｇｔａｃｇａｔｇｔｔｔｔｇｇａｃａａａａｇａｃｇｔｇｇｃｃｇｇｇａｃｃｃｔｇａｇａｔｇｇｇｇｇｇａａａｇｃｃｇａｇａａｇｇａａｇａａｃｃｃｔｃａｇｇａａｇｇｃｃｔｇｔａｃａａｔｇａａｃｔｇｃａｇａａａｇａｔａａｇａｔｇｇｃｇｇａｇｇｃｃｔａｃａｇｔｇａｇａｔｔｇｇｇａｔｇａａａｇｇｃｇａｇｃｇｃｃｇｇａｇｇｇｇｃａａｇｇｇｇｃａｃｇａｔｇｇｃｃｔｔｔａｃｃａｇｇｇｔｃｔｃａｇｔａｃａｇｃｃａｃｃａａｇｇａｃａｃｃｔａｃｇａｃｇｃｃｃｔｔｃａｃａｔｇｃａｇｇｃｃｃｔｇｃｃｃｃｃｔｃｇｃｇｇａｃｃｇｃａｇｔｇｔａｃｔａａｔｔａｔｇｃｔｃｔｃｔｔｇａａａｔｔｇｇｃｔｇｇａｇａｔｇｔｔｇａｇａｇｃａａｔｃｃｃｇｇｇｃｃｃａｔｇｃｇｃａｔｔａｇｃａａｇｃｃｃｃａｃｃｔｇｃｇｇａｇｃａｔｃａｇｃａｔｃｃａｇｔｇｃｔａｃｃｔｇｔｇｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇａａｃａｇｃｃａｃｔｔｃｃｔｇａｃｃｇａｇｇｃｃｇｇｃａｔｃｃａｃｇｔｇｔｔｃａｔｃｃｔｇｇｇｃｔｇｃｔｔｃａｇｃｇｃｃｇｇａｃｔｇｃｃｃａａｇａｃｃｇａｇｇｃｃａａｃｔｇｇｇｔｇａａｃｇｔｇａｔｃａｇｃｇａｃｃｔｇａａｇａａｇａｔｃｇａｇｇａｃｃｔｇａｔｃｃａｇａｇｃａｔｇｃａｃａｔｃｇａｃｇｃｃａｃｃｃｔｇｔａｃａｃｃｇａｇａｇｃｇａｃｇｔｇｃａｃｃｃｃａｇｃｔｇｃａａｇｇｔｇａｃｃｇｃｃａｔｇａａｇｔｇｃｔｔｔｃｔｇｃｔｇｇａａｃｔｇｃａｇｇｔｇａｔｃａｇｃｃｔｇｇａａａｇｃｇｇｃｇａｃｇｃｃａｇｃａｔｃｃａｃｇａｃａｃｃｇｔｇｇａｇａａｃｃｔｇａｔｃａｔｃｃｔｇｇｃｃａａｃａａｃａｇｃｃｔｇａｇｃａｇｃａａｃｇｇｃａａｃｇｔｇａｃｃｇａｇａｇｃｇｇｃｔｇｃａａａｇａｇｔｇｃｇａｇｇａａｃｔｇｇａａｇａｇａａｇａａｃａｔｃａａａｇａｇｔｔｔｃｔｇｃａｇａｇｃｔｔｃｇｔｇｃａｃａｔｃｇｔｇｃａｇａｔｇｔｔｃａｔｃａａｃａｃｃａｇｃｔｇａ（配列番号４８）

【0299】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４８に対して少なくとも７０％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４８に対して少なくとも７５％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４８に対して少なくとも８０％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４８に対して少なくとも８５％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４８に対して少なくとも９０％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４８に対して少なくとも９５％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４８に対して少なくとも９７％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４８に対して少なくとも９９％同一である核酸配列を含む。

【0300】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、以下を含むアミノ酸配列を含む：
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＱＩＴＬＲＥＳＧＧＤＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＨＭＮＳＬＲＡＥＤＴＧＶＹＹＣＡＲＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＤＩＫＲＴＶＴＶＳＳＱＤＰＡＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＫＤＰＫＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号２１）

【0301】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号２１に対して少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号２１に対して少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号２１に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号２１に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号２１に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号２１に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号２１に対して少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号２１に対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0302】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、以下を含む核酸配列を含む：
ａｔｇｇａａｔｔｃｇｇａｔｔｇｔｃａｔｇｇｔｔｇｔｔｃｃｔｃｇｔｃｇｃａａｔｔｃｔｃａａｇｇｇｃｇｔｇｃａｇｔｇｃｃａａａｔｔａｃｔｃｔｔｃｇａｇａｇｔｃｃｇｇｃｇｇａｇａｔｇｔｇｇｔａｃａｇｃｃａｇｇｇａｇａａｇｃｃｔｇａｇａｃｔｃｔｃｃｔｇｔｇｃａｇｃａａｇｃｇｇａｔｔｔａｃｃｔｔｔｔｃｔｔｃｔｔａｃｇｃｔａｔｃｃａｃｔｇｇｇｔｔａｇａｃａｇｇｃｔｃｃｃｇｇｔａａｇｇｇａｃｔｇｇａａｔｇｇｇｔｃｇｃａｇｔａａｃａｔｇｇｃａｃｇａｃｇｇｔｔｃａａａｔａａｇｔａｃｔａｃｇｃａｇａｇｔｃａｇｔｃａｔｇｇｇａａｇｇｔｔｔａｃｔａｔｔｔｃａｃｇｇｇａｃａａｔｔｃｔａａｇａａｃａｃａｃｔｃｔａｃｃｔｇｃａｔａｔｇａａｃｔｃｃｃｔｃａｇａｇｃｔｇａａｇａｃａｃｃｇｇｃｇｔａｔａｔｔａｔｔｇｔｇｃｔａｇａｇｃｔａａａｔｔｔｇｇａｇａａｃｃａｃａｇｔａｔｔｔｔｃａａｃａｃｔｇｇｇｇｃｃａａｇｇｃａｃａｃｔｔｇｔａａｃｇｇｔｔｔｃａａｇｃｇｇｔｇｇｔｇｇｇｇｇｇｔｃｔｇｇｃｇｇａｇｇａｇｇｔａｇｔｇｇａｇｇｔｇｇａｇｇｃｔｃｃｇａｔａｔｃｇｔｔａｔｇａｃａｃａａｔｃａｃｃｃａｇｃｔｔｃｔｔｇｔｃａｇｃｔｔｃｔｇｔｔｇｇｔｇａｔｃｇｇｇｔａａｃａａｔｔａｃｔｔｇｔｃｇｃｇｃａｔｃｔｃａｇｇｇｔａｔｃａｇｔｔｃａｔａｔｃｔｇｇｃａｔｇｇｔａｔｃａｇｃａａａａｇｃｃｔｇｇａａａａｇｃｃｃｃｔａａａｃｔｔｃｔｇａｔｔｔａｃｇｃｃｇｃｇａｇｃａｃａｃｔｇｃａａａｇｔｇｇａｇｔｔｃｃｇｔｃａａｇａｔｔｃｔｃｔｇｇｃｔｃｔｇｇｇｔｃｃｇｇｔａｃｃｇａａｔｔｔａｃｔｔｔｇａｃｔａｔｃａｇｃｔｃａｃｔｃｃａａｃｃｔｇａｇｇａｔｔｔｃｇｃｃａｃｇｔａｃｔａｔｔｇｃｃａａｃａｇｃｔｔａａｃｔｃｃｔａｔｃｃｔｔｇｇａｃａｔｔｔｇｇｔｃａｇｇｇｃａｃｔａａａｇｔｔｇａｔａｔｔａａａｃｇｔａｃｇｇｔｃａｃｔｇｔｃｔｃｔｔｃａｃａｇｇａｔｃｃｃｇｃｃｇａｇｃｃｃａａａｔｃｔｃｃｔｇａｃａａａａｃｔｃａｃａｃａｔｇｃｃｃａｃｃｇｔｇｃｃｃａｇｃａｃｃｔｇａａｃｔｃｃｔｇｇｇｇｇｇａｃｃｇｔｃａｇｔｃｔｔｃｃｔｃｔｔｃｃｃｃｃｃａａａａｃｃｃａａｇｇａｃａｃｃｃｔｃａｔｇａｔｃｔｃｃｃｇｇａｃｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａｃａｔｇｃｇｔｇｇｔｇｇｔｇｇａｃｇｔｇａｇｃｃａｃｇａａｇａｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａａｇｔｔｃａａｃｔｇｇｔａｃｇｔｇｇａｃｇｇｃｇｔｇｇａｇｇｔｇｃａｔａａｔｇｃｃａａｇａｃａａａｇｃｃｇｃｇｇｇａｇｇａｇｃａｇｔａｃａａｃａｇｃａｃｇｔａｃｃｇｔｇｔｇｇｔｃａｇｃｇｔｃｃｔｃａｃｃｇｔｃｃｔｇｃａｃｃａｇｇａｃｔｇｇｃｔｇａａｔｇｇｃａａｇｇａｇｔａｃａａｇｔｇｃａａｇｇｔｃｔｃｃａａｃａａａｇｃｃｃｔｃｃｃａｇｃｃｃｃｃａｔｃｇａｇａａａａｃｃａｔｃｔｃｃａａａｇｃｃａａａｇｇｇｃａｇｃｃｃｃｇａｇａａｃｃａｃａｇｇｔｇｔａｃａｃｃｃｔｇｃｃｃｃｃａｔｃｃｃｇｇｇａｔｇａｇｃｔｇａｃｃａａｇａａｃｃａｇｇｔｃａｇｃｃｔｇａｃｃｔｇｃｃｔｇｇｔｃａａａｇｇｃｔｔｃｔａｔｃｃｃａｇｃｇａｃａｔｃｇｃｃｇｔｇｇａｇｔｇｇｇａｇａｇｃａａｔｇｇｇｃａａｃｃｇｇａｇａａｃａａｃｔａｃａａｇａｃｃａｃｇｃｃｔｃｃｃｇｔｇｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａｃｇｇｃｔｃｃｔｔｃｔｔｃｃｔｃｔａｃａｇｃａａｇｃｔｃａｃｃｇｔｇｇａｃａａｇａｇｃａｇｇｔｇｇｃａｇｃａｇｇｇｇａａｃｇｔｃｔｔｃｔｃａｔｇｃｔｃｃｇｔｇａｔｇｃａｔｇａｇｇｃｔｃｔｇｃａｃａａｃｃａｃｔａｃａｃｇｃａｇａａｇａｇｃｃｔｃｔｃｃｃｔｇｔｃｔｃｃｇｇｇｔａａａａａａｇａｔｃｃｃａａａｔｔｔｔｇｇｇｔｇｃｔｇｇｔｇｇｔｇｇｔｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｃｔｇｇｃｔｔｇｃｔａｔａｇｃｔｔｇｃｔａｇｔａａｃａｇｔｇｇｃｃｔｔｔａｔｔａｔｔｔｔｃｔｇｇｇｔｇａｇｇａｇｔａａｇａｇｇａｇｃａｇｇｃｔｃｃｔｇｃａｃａｇｔｇａｃｔａｃａｔｇａａｃａｔｇａｃｔｃｃｃｃｇｃｃｇｃｃｃｃｇｇｇｃｃｃａｃｃｃｇｃａａｇｃａｔｔａｃｃａｇｃｃｃｔａｔｇｃｃｃｃａｃｃａｃｇｃｇａｃｔｔｃｇｃａｇｃｃｔａｔｃｇｃｔｃａｃｇｃｇｔｇａａｇｔｔｃａｇｃａｇｇａｇｃｇｃａｇａｃｇｃｃｃｃｃｇｃｇｔａｃｃａｇｃａｇｇｇｃｃａｇａａｃｃａｇｃｔｃｔａｔａａｃｇａｇｃｔｃａａｔｃｔａｇｇａｃｇａａｇａｇａｇｇａｇｔａｃｇａｔｇｔｔｔｔｇｇａｃａａａａｇａｃｇｔｇｇｃｃｇｇｇａｃｃｃｔｇａｇａｔｇｇｇｇｇｇａａａｇｃｃｇａｇａａｇｇａａｇａａｃｃｃｔｃａｇｇａａｇｇｃｃｔｇｔａｃａａｔｇａａｃｔｇｃａｇａａａｇａｔａａｇａｔｇｇｃｇｇａｇｇｃｃｔａｃａｇｔｇａｇａｔｔｇｇｇａｔｇａａａｇｇｃｇａｇｃｇｃｃｇｇａｇｇｇｇｃａａｇｇｇｇｃａｃｇａｔｇｇｃｃｔｔｔａｃｃａｇｇｇｔｃｔｃａｇｔａｃａｇｃｃａｃｃａａｇｇａｃａｃｃｔａｃｇａｃｇｃｃｃｔｔｃａｃａｔｇｃａｇｇｃｃｃｔｇｃｃｃｃｃｔｃｇｃｔｇａ（配列番号４４）

【0303】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４４に対して少なくとも７０％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４４に対して少なくとも７５％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４４に対して少なくとも８０％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４４に対して少なくとも８５％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４４に対して少なくとも９０％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４４に対して少なくとも９５％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４４に対して少なくとも９７％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号４４に対して少なくとも９９％同一である核酸配列を含む。

【0304】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、リンカー及び切断ペプチドを介してＩＬ－１５に連結され、これは配列番号４９：
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＱＩＴＬＲＥＳＧＧＤＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＴＷＨＤＧＳＮＫＹＹＡＥＳＶＭＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＨＭＮＳＬＲＡＥＤＴＧＶＹＹＣＡＲＡＫＦＧＥＰＱＹＦＱＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＤＩＫＲＴＶＴＶＳＳＱＤＰＡＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＫＤＰＫＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＰＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ（配列番号４９）を含む。

【0305】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４９に対して少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４９に対して少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４９に対して少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４９に対して少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４９に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４９に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４９に対して少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号４９に対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0306】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ－１５は、以下を含む：
ａｔｇｇａａｔｔｃｇｇａｔｔｇｔｃａｔｇｇｔｔｇｔｔｃｃｔｃｇｔｃｇｃａａｔｔｃｔｃａａｇｇｇｃｇｔｇｃａｇｔｇｃｃａａａｔｔａｃｔｃｔｔｃｇａｇａｇｔｃｃｇｇｃｇｇａｇａｔｇｔｇｇｔａｃａｇｃｃａｇｇｇａｇａａｇｃｃｔｇａｇａｃｔｃｔｃｃｔｇｔｇｃａｇｃａａｇｃｇｇａｔｔｔａｃｃｔｔｔｔｃｔｔｃｔｔａｃｇｃｔａｔｃｃａｃｔｇｇｇｔｔａｇａｃａｇｇｃｔｃｃｃｇｇｔａａｇｇｇａｃｔｇｇａａｔｇｇｇｔｃｇｃａｇｔａａｃａｔｇｇｃａｃｇａｃｇｇｔｔｃａａａｔａａｇｔａｃｔａｃｇｃａｇａｇｔｃａｇｔｃａｔｇｇｇａａｇｇｔｔｔａｃｔａｔｔｔｃａｃｇｇｇａｃａａｔｔｃｔａａｇａａｃａｃａｃｔｃｔａｃｃｔｇｃａｔａｔｇａａｃｔｃｃｃｔｃａｇａｇｃｔｇａａｇａｃａｃｃｇｇｃｇｔａｔａｔｔａｔｔｇｔｇｃｔａｇａｇｃｔａａａｔｔｔｇｇａｇａａｃｃａｃａｇｔａｔｔｔｔｃａａｃａｃｔｇｇｇｇｃｃａａｇｇｃａｃａｃｔｔｇｔａａｃｇｇｔｔｔｃａａｇｃｇｇｔｇｇｔｇｇｇｇｇｇｔｃｔｇｇｃｇｇａｇｇａｇｇｔａｇｔｇｇａｇｇｔｇｇａｇｇｃｔｃｃｇａｔａｔｃｇｔｔａｔｇａｃａｃａａｔｃａｃｃｃａｇｃｔｔｃｔｔｇｔｃａｇｃｔｔｃｔｇｔｔｇｇｔｇａｔｃｇｇｇｔａａｃａａｔｔａｃｔｔｇｔｃｇｃｇｃａｔｃｔｃａｇｇｇｔａｔｃａｇｔｔｃａｔａｔｃｔｇｇｃａｔｇｇｔａｔｃａｇｃａａａａｇｃｃｔｇｇａａａａｇｃｃｃｃｔａａａｃｔｔｃｔｇａｔｔｔａｃｇｃｃｇｃｇａｇｃａｃａｃｔｇｃａａａｇｔｇｇａｇｔｔｃｃｇｔｃａａｇａｔｔｃｔｃｔｇｇｃｔｃｔｇｇｇｔｃｃｇｇｔａｃｃｇａａｔｔｔａｃｔｔｔｇａｃｔａｔｃａｇｃｔｃａｃｔｃｃａａｃｃｔｇａｇｇａｔｔｔｃｇｃｃａｃｇｔａｃｔａｔｔｇｃｃａａｃａｇｃｔｔａａｃｔｃｃｔａｔｃｃｔｔｇｇａｃａｔｔｔｇｇｔｃａｇｇｇｃａｃｔａａａｇｔｔｇａｔａｔｔａａａｃｇｔａｃｇｇｔｃａｃｔｇｔｃｔｃｔｔｃａｃａｇｇａｔｃｃｃｇｃｃｇａｇｃｃｃａａａｔｃｔｃｃｔｇａｃａａａａｃｔｃａｃａｃａｔｇｃｃｃａｃｃｇｔｇｃｃｃａｇｃａｃｃｔｇａａｃｔｃｃｔｇｇｇｇｇｇａｃｃｇｔｃａｇｔｃｔｔｃｃｔｃｔｔｃｃｃｃｃｃａａａａｃｃｃａａｇｇａｃａｃｃｃｔｃａｔｇａｔｃｔｃｃｃｇｇａｃｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａｃａｔｇｃｇｔｇｇｔｇｇｔｇｇａｃｇｔｇａｇｃｃａｃｇａａｇａｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａａｇｔｔｃａａｃｔｇｇｔａｃｇｔｇｇａｃｇｇｃｇｔｇｇａｇｇｔｇｃａｔａａｔｇｃｃａａｇａｃａａａｇｃｃｇｃｇｇｇａｇｇａｇｃａｇｔａｃａａｃａｇｃａｃｇｔａｃｃｇｔｇｔｇｇｔｃａｇｃｇｔｃｃｔｃａｃｃｇｔｃｃｔｇｃａｃｃａｇｇａｃｔｇｇｃｔｇａａｔｇｇｃａａｇｇａｇｔａｃａａｇｔｇｃａａｇｇｔｃｔｃｃａａｃａａａｇｃｃｃｔｃｃｃａｇｃｃｃｃｃａｔｃｇａｇａａａａｃｃａｔｃｔｃｃａａａｇｃｃａａａｇｇｇｃａｇｃｃｃｃｇａｇａａｃｃａｃａｇｇｔｇｔａｃａｃｃｃｔｇｃｃｃｃｃａｔｃｃｃｇｇｇａｔｇａｇｃｔｇａｃｃａａｇａａｃｃａｇｇｔｃａｇｃｃｔｇａｃｃｔｇｃｃｔｇｇｔｃａａａｇｇｃｔｔｃｔａｔｃｃｃａｇｃｇａｃａｔｃｇｃｃｇｔｇｇａｇｔｇｇｇａｇａｇｃａａｔｇｇｇｃａａｃｃｇｇａｇａａｃａａｃｔａｃａａｇａｃｃａｃｇｃｃｔｃｃｃｇｔｇｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａｃｇｇｃｔｃｃｔｔｃｔｔｃｃｔｃｔａｃａｇｃａａｇｃｔｃａｃｃｇｔｇｇａｃａａｇａｇｃａｇｇｔｇｇｃａｇｃａｇｇｇｇａａｃｇｔｃｔｔｃｔｃａｔｇｃｔｃｃｇｔｇａｔｇｃａｔｇａｇｇｃｔｃｔｇｃａｃａａｃｃａｃｔａｃａｃｇｃａｇａａｇａｇｃｃｔｃｔｃｃｃｔｇｔｃｔｃｃｇｇｇｔａａａａａａｇａｔｃｃｃａａａｔｔｔｔｇｇｇｔｇｃｔｇｇｔｇｇｔｇｇｔｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｃｔｇｇｃｔｔｇｃｔａｔａｇｃｔｔｇｃｔａｇｔａａｃａｇｔｇｇｃｃｔｔｔａｔｔａｔｔｔｔｃｔｇｇｇｔｇａｇｇａｇｔａａｇａｇｇａｇｃａｇｇｃｔｃｃｔｇｃａｃａｇｔｇａｃｔａｃａｔｇａａｃａｔｇａｃｔｃｃｃｃｇｃｃｇｃｃｃｃｇｇｇｃｃｃａｃｃｃｇｃａａｇｃａｔｔａｃｃａｇｃｃｃｔａｔｇｃｃｃｃａｃｃａｃｇｃｇａｃｔｔｃｇｃａｇｃｃｔａｔｃｇｃｔｃａｃｇｃｇｔｇａａｇｔｔｃａｇｃａｇｇａｇｃｇｃａｇａｃｇｃｃｃｃｃｇｃｇｔａｃｃａｇｃａｇｇｇｃｃａｇａａｃｃａｇｃｔｃｔａｔａａｃｇａｇｃｔｃａａｔｃｔａｇｇａｃｇａａｇａｇａｇｇａｇｔａｃｇａｔｇｔｔｔｔｇｇａｃａａａａｇａｃｇｔｇｇｃｃｇｇｇａｃｃｃｔｇａｇａｔｇｇｇｇｇｇａａａｇｃｃｇａｇａａｇｇａａｇａａｃｃｃｔｃａｇｇａａｇｇｃｃｔｇｔａｃａａｔｇａａｃｔｇｃａｇａａａｇａｔａａｇａｔｇｇｃｇｇａｇｇｃｃｔａｃａｇｔｇａｇａｔｔｇｇｇａｔｇａａａｇｇｃｇａｇｃｇｃｃｇｇａｇｇｇｇｃａａｇｇｇｇｃａｃｇａｔｇｇｃｃｔｔｔａｃｃａｇｇｇｔｃｔｃａｇｔａｃａｇｃｃａｃｃａａｇｇａｃａｃｃｔａｃｇａｃｇｃｃｃｔｔｃａｃａｔｇｃａｇｇｃｃｃｔｇｃｃｃｃｃｔｃｇｃｇｇａｃｃｇｃａｇｔｇｔａｃｔａａｔｔａｔｇｃｔｃｔｃｔｔｇａａａｔｔｇｇｃｔｇｇａｇａｔｇｔｔｇａｇａｇｃａａｔｃｃｃｇｇｇｃｃｃａｔｇｃｇｃａｔｔａｇｃａａｇｃｃｃｃａｃｃｔｇｃｇｇａｇｃａｔｃａｇｃａｔｃｃａｇｔｇｃｔａｃｃｔｇｔｇｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇａａｃａｇｃｃａｃｔｔｃｃｔｇａｃｃｇａｇｇｃｃｇｇｃａｔｃｃａｃｇｔｇｔｔｃａｔｃｃｔｇｇｇｃｔｇｃｔｔｃａｇｃｇｃｃｇｇａｃｔｇｃｃｃａａｇａｃｃｇａｇｇｃｃａａｃｔｇｇｇｔｇａａｃｇｔｇａｔｃａｇｃｇａｃｃｔｇａａｇａａｇａｔｃｇａｇｇａｃｃｔｇａｔｃｃａｇａｇｃａｔｇｃａｃａｔｃｇａｃｇｃｃａｃｃｃｔｇｔａｃａｃｃｇａｇａｇｃｇａｃｇｔｇｃａｃｃｃｃａｇｃｔｇｃａａｇｇｔｇａｃｃｇｃｃａｔｇａａｇｔｇｃｔｔｔｃｔｇｃｔｇｇａａｃｔｇｃａｇｇｔｇａｔｃａｇｃｃｔｇｇａａａｇｃｇｇｃｇａｃｇｃｃａｇｃａｔｃｃａｃｇａｃａｃｃｇｔｇｇａｇａａｃｃｔｇａｔｃａｔｃｃｔｇｇｃｃａａｃａａｃａｇｃｃｔｇａｇｃａｇｃａａｃｇｇｃａａｃｇｔｇａｃｃｇａｇａｇｃｇｇｃｔｇｃａａａｇａｇｔｇｃｇａｇｇａａｃｔｇｇａａｇａｇａａｇａａｃａｔｃａａａｇａｇｔｔｔｃｔｇｃａｇａｇｃｔｔｃｇｔｇｃａｃａｔｃｇｔｇｃａｇａｔｇｔｔｃａｔｃａａｃａｃｃａｇｃｔｇａ（配列番号５０）

【0307】

いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号５０に対して少なくとも７０％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号５０に対して少なくとも７５％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲは、配列番号５０に対して少なくとも８０％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号５０に対して少なくとも８５％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号５０に対して少なくとも９０％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号５０に対して少なくとも９５％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号５０に対して少なくとも９７％同一である核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ１５は、配列番号５０に対して少なくとも９９％同一である核酸配列を含む。

【0308】

本開示の実施形態は、本明細書に包含される、１つ以上のＣＡＲ及び１つ以上の自殺遺伝子を発現する細胞を包含する。ＮＫ細胞は、特定の実施形態において、１つ以上のＣＡＲと、１つ以上の操作された非分泌性の膜結合ＴＮＦ－α変異体ポリペプチドとをコードする組換え核酸を含む。特定の実施形態では、１つ以上のＣＡＲ及びＴＮＦ－α変異体ポリペプチドを発現することに加えて、細胞はまた、１つ以上の治療用遺伝子産物をコードする核酸を含む。

【0309】

ベクター
特定の態様において、本発明のポリヌクレオチドを含むベクターが本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ベクターは、ＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ＡＡＶベクター、またはレトロウイルスベクターから選択される。いくつかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターであり得る。ウイルスベクターの例としては、少なくともレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、またはアデノ随伴ウイルスベクターが挙げられる。非ウイルスベクターの例としては、少なくともプラスミド、トランスポゾン、脂質、ナノ粒子などが挙げられる。

【0310】

免疫細胞が、遺伝子操作された受容体をコードするベクターで形質導入され、また、自殺遺伝子及び／またはサイトカイン及び／または任意の治療用遺伝子産物などの細胞への別の遺伝子または複数の遺伝子の形質導入を必要とする場合、抗原標的化受容体、自殺遺伝子、サイトカイン、及び任意の治療用遺伝子は、同じベクター上に、または同じベクターと共に含まれても、含まれなくてもよい。場合によっては、ＣＡＲ、自殺遺伝子、サイトカイン、及び任意の治療用遺伝子は、同じベクター分子（例えば、同じウイルスベクター分子）から発現する。そのような場合、ＣＡＲ、自殺遺伝子、サイトカイン、及び任意の治療用遺伝子の発現は、同じ調節エレメント（複数可）によって調節されても、調節されなくてもよい。ＣＡＲ、自殺遺伝子、サイトカイン、及び任意の治療用遺伝子が同じベクター上にある場合、それらは別個のポリペプチドとして発現されても、発現されなくてもよい。別個のポリペプチドとして発現される場合、それらは、例えば、２Ａ要素またはＩＲＥＳエレメントによってベクター上で分離され得る（または両方の種類が、１回または２回以上同じベクター上で使用され得る）。

【0311】

いくつかの実施形態では、サイトカイン及び自殺遺伝子は、同じポリペプチドから発現され、２Ａエレメントによって分離される。いくつかの実施形態では、２Ａエレメントは、細胞中のタンパク質の翻訳中にリボソームスキッピングを誘導することができる。

【0312】

いくつかの実施形態では、２Ａエレメントは、ＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ（配列番号５３）のアミノ酸配列を含む。

【0313】

細胞
本開示は、ＣＤ２８ヒンジドメインを含むＢＣＭＡ ＣＡＲを含む遺伝子操作された受容体をコードする少なくとも１つのベクターを有する任意の種類の免疫細胞または幹細胞を包含する。場合によっては、異なるベクターがＣＡＲをコードするｖｓ．自殺遺伝子及び／またはサイトカインをコードする。ＮＫ細胞を含む免疫細胞は、臍帯血（複数の供給源由来のプールされた臍帯血を含む）、末梢血、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、造血幹細胞（ＨＳＣ）、骨髄、またはそれらの混合物に由来し得る。ＮＫ細胞は、例えば、非限定的に、ＮＫ－９２細胞などの細胞株に由来し得る。ＮＫ細胞は、臍帯血単核細胞、例えばＣＤ５６^＋ＮＫ細胞であり得る。

【0314】

本開示は、免疫細胞または任意の種類の他の細胞を包含し、通常型Ｔ細胞、γ－δＴ細胞、ＮＫＴ及びインバリアントＮＫ Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、樹状細胞、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、またはそれらの混合物を含む。

【0315】

ＮＫ細胞は、先天性免疫応答の重要な成分であり、悪性細胞に対する防御の第１の系統における重要な役割を果たす。前感作なしで悪性細胞を殺傷するＮＫ細胞の能力は、ＨＬＡ分子との関連で提示される腫瘍抗原の認識を必要とするＴ細胞とは異なり、その迅速な作用に寄与する。

【0316】

場合によっては、ＮＫ細胞は、任意の適切な比率を含む、有効量の普遍的抗原提示細胞（ＵＡＰＣ）の存在下で拡大されている。細胞は、例えば、１：２の比を含む、１０：１～１：１０；９：１～１：９；８：１～１：８；７：１～１：７；６：１～１：６；５：１～１：５；４：１～１：４；３：１～１：３；２：１～１：２；または１：１の比でＵＡＰＣと共に培養され得る。場合によっては、ＮＫ細胞を、例えば１０～５００、１０～４００、１０～３００、１０～２００、１０～１００、１０～５０、１００～５００、１００～４００、１００～３００、１００～２００、２００～５００、２００～４００、２００～３００、３００～５００、３００～４００、または４００～５００Ｕ／ｍＬの濃度のＩＬ－２の存在下で増殖させた。

【0317】

ベクター（複数可）による遺伝子改変後、ＮＫ細胞を直ちに注入するか、または保存することができる。特定の態様では、遺伝子改変後、細胞は、細胞への遺伝子導入後約１、２、３、４、５日またはそれ以上の範囲内で、バルク集団としてエクスビボで、数日、数週間または数ヶ月にわたって増殖され得る。さらなる態様では、トランスフェクトした細胞をクローニングし、単一の組み込まれたまたはエピソームで維持された発現カセットまたはプラスミドの存在を実証するクローンをクローニングし、ＣＡＲの発現をエクスビボで拡大させる。

【0318】

本開示の実施形態は、本明細書に包含される、１つ以上のＣＡＲ及び１つ以上の自殺遺伝子を発現する細胞を包含する。ＮＫ細胞は、特定の実施形態において、１つ以上のＣＡＲと、１つ以上の操作された非分泌性の膜結合ＴＮＦ－α変異体ポリペプチドとをコードする組換え核酸を含む。特定の実施形態では、１つ以上のＣＡＲ及びＴＮＦ－α変異体ポリペプチドを発現することに加えて、細胞はまた、１つ以上の治療用遺伝子産物をコードする核酸を含む。

【0319】

細胞は、個体から直接得てもよいし、保管場所または他の保管施設から得てもよい。治療としての細胞は、細胞が治療として提供される個体に対して自家または同種異系であってもよい。

【0320】

細胞は、医学的状態のための治療を必要とする個体からのものであってよく、ＣＡＲ、任意選択での自殺遺伝子、任意選択でのサイトカイン（複数可）、及び任意選択での治療用遺伝子産物（複数可）を発現するようにそれらの操作に続いて（例えば、養子細胞治療のための形質導入及び拡大のための標準的な技術を使用して）、それらは、元々起源であった個体に戻して提供され得る。場合によっては、細胞は、後で個体または別の個体に使用するために保存される。

【0321】

免疫細胞は、細胞の集団に含まれてもよく、その集団は、１つ以上の受容体及び／または１つ以上の自殺遺伝子及び／または１つ以上のサイトカインで形質導入される大部分を有してもよい。細胞の集団は、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％の、１つ以上のＣＡＲ及び／または１つ以上の自殺遺伝子及び／または１つ以上のサイトカインで形質導入された免疫細胞を含み得る。１つ以上のＣＡＲ及び／または１つ以上の自殺遺伝子及び／または１つ以上のサイトカインは、別個のポリペプチドであり得る。

【0322】

免疫細胞は、特定の目的に関してモジュール化することを意図して、１つ以上のＣＡＲ及び／または１つ以上の自殺遺伝子及び／または１つ以上のサイトカインを用いて産生され得る。例えば、ＣＡＲ及び／または１つ以上の自殺遺伝子及び／または１つ以上のサイトカインを発現する商業的分配（または、その後の形質導入のために変異体をコードする核酸と共に分配される）を含む細胞を生成することができ、ユーザーは、それらの意図された目的（複数可）に応じて１つ以上の他の目的の遺伝子（治療用遺伝子を含む）を発現するように、それらを改変することができる。例えば、抗原陽性のがんまたは感染因子に感染した細胞を含む抗原陽性細胞の治療に関心のある個体は、自殺遺伝子発現細胞（または異種サイトカイン発現細胞）を得るかまたは生成し、それらを改変して、抗原特異的ｓｃＦｖを含む受容体を発現し得るか、またはその逆である。

【0323】

特定の実施形態では、ＮＫ細胞が利用され、１つ以上のＣＡＲ及び／または１つ以上の自殺遺伝子及び／または１つ以上のサイトカインを発現する形質導入されたＮＫ細胞のゲノムが改変され得る。ゲノムは、任意の様式で改変され得るが、特定の実施形態において、ゲノムは、例えば、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集によって改変される。細胞のゲノムは、任意の目的で細胞の有効性を高めるように改変され得る。

【0324】

非限定的な例として、ＮＫ細胞は、配列番号１９～２１、４５、４７、及び４９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＢＣＭＡ結合ＣＡＲを発現し得る。いくつかの例において、ＮＫ細胞は、配列番号４２～４４、４６、４８、及び５０からなる群から選択される核酸配列を含むポリヌクレオチドを含み得る。

【0325】

ＩＩＩ．治療方法
種々の実施形態では、その表面上に所望の標的を発現する罹患した細胞または他の細胞は、医学的状態を有する個体における医学的状態を改善する目的で、または個体における医学的状態のリスクを低減する目的で、または医学的状態の重症度及び／または発症を遅延させる目的で、標的化される。特定の場合において、内因性抗原を発現するがん細胞は、がん細胞を殺傷する目的で標的化される。他の場合には、感染因子に感染した細胞は、感染細胞を殺傷する目的で標的化される。

【0326】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体）は、１つ以上のＢＣＭＡ関連状態を治療する方法で使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体）は、医薬として使用するためのものである。ＢＣＭＡ関連状態は、非限定的に、ＢＣＭＡ発現によって引き起こされる状態、ＢＣＭＡ発現に関与する状態、全体的にまたは部分的にＢＣＭＡ発現に起因する症状に関与する状態、またはＢＣＭＡ発現に関連して起こることが知られている状態を含み得る。

【0327】

本開示によれば、本明細書に記載の抗体、その断片、ならびにＣＡＲ、及び組成物を、ＢＣＭＡ関連がんを治療するために使用することができる。がんは、体内の異常な細胞の制御不能の増殖を特徴とするさまざまな疾患の広いグループである。制御不能の細胞分裂と増殖により、悪性腫瘍が形成され、隣接する組織に侵入し、リンパ系または血流を介して体の離れた部分に転移し得る。いくつかの実施形態では、「がん」または「がん組織」は固形腫瘍を含む。本発明の方法によって治療できるがんの例としては、リンパ腫、白血病、骨髄腫、及び他の白血球悪性腫瘍を含む免疫系のがんが挙げられるが、これらに限定されない。

【0328】

いくつかの態様において、本発明は、ＢＣＭＡに結合する薬剤（例えば、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片）を投与することを含む、がんを治療する方法を提供する。

【0329】

さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片）の投与は、有病率、頻度、レベル、及び／または本明細書に記載の、または当該技術分野で知られているＢＣＭＡ関連状態の１つ以上の症状またはバイオマーカーの量の減少、例えば、対象における以前の測定値または参照値と比較した、１つ以上の症状またはバイオマーカーの少なくとも３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、または１００％の減少をもたらす。

【0330】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体）をがんを有する対象に投与すると、がんの１つ以上の症状またはバイオマーカーが、参照抗体、例えば、同等の条件下でのＢＣＭＡ結合を交差競合する抗体がするよりも大幅に減少または改善される。

【0331】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体）は、抗ＢＣＭＡ抗体が参照（例えば、ＢＣＭＡ結合について交差競合する抗体）と同一、同等、または実質的に同等の製剤で、及び／または参照と同一、同等、または実質的に同等の投与経路によって投与される場合、参照タンパク質、例えば、ＢＣＭＡ結合について交差競合する抗体と比較して少ない用量で投与して、同等、同等に有効、同等に有効、または実質的に有効な転帰を達成することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体は、抗ＢＣＭＡ抗体が参照と同一、同等、または実質的に同等の製剤で、及び／または参照と同一、同等、または実質的に同等の投与経路によって投与される場合、参照抗体（例えば、ＢＣＭＡ結合について交差競合する抗体）と比較して広げられた間隔で投与して、同等、同等に有効、同等に有効、または実質的に有効な転帰を達成することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体は、抗ＢＣＭＡ抗体が参照（例えば、ＢＣＭＡ結合について交差競合する抗体）と同一、同等、または実質的に同等の製剤で、及び／または参照と同一、同等、または実質的に同等の投与経路によって投与される場合、参照抗体と比較して、減少した単位用量の数で、及び／または短縮された治療期間で投与して、同等、同等に有効、同等に有効、または実質的に有効な転帰を達成することができる。

【0332】

いくつかのそのような実施形態によれば、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体の投与用量は、参照抗体、例えば、例えば、ＢＣＭＡ結合について交差競合する抗体の有効用量よりも、対象に投与されたときに有害反応、例えば、有害免疫反応を誘発する可能性が低い可能性がある。したがって、さまざまな実施形態では、本明細書に開示される抗ＢＣＭＡ抗体は、投与される活性単位あたりで、参照抗体よりも有害反応または副作用を誘発する可能性が低くあり得る。さまざまな実施形態では、本明細書に開示される抗ＢＣＭＡ抗体は、投与される活性単位あたりで、参照抗体よりも、特定の重症度を有する有害反応または副作用を誘発する可能性が低くあり得る。さまざまな実施形態では、本明細書に開示される抗ＢＣＭＡ抗体は、投与される活性単位当たり、参照抗体よりも低い程度で、またはより少ない患者において、１つ以上の有害反応または副作用を誘発する可能性がある。ＢＣＭＡに結合できる抗体の投与に関連する可能性のある有害反応または副作用の例としては、頭痛、鼻咽頭炎、背中の疼痛、悪心、下痢、高血圧、上気道感染症、腹痛、嘔吐、貧血、咳、末梢浮腫、及び／または尿路感染が挙げられ得る。

【0333】

いくつかの実施形態では、対象への投与時に（例えば、単回用量で）、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体）は、投与後の定義された時間（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４日、またはそれ以上）に、同じ定義された時間での対照（例えばＢＣＭＡ結合に対して交差競合する抗体）のレベルと比べて血漿中の増加したレベルで測定される。例えば、単回用量の投与後の所定の時点で、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体のレベルは、参照抗体の対応するレベルよりも、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、４００％、または５００％高い。

【0334】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体）は、（例えば単回用量の）投与後の定義された時間（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４日、またはそれ以上）に、同じ定義された時間での対照のレベルと比べて血漿中の増加したレベルで測定される。例えば、投与後の所定の時点で、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体のレベルは、参照抗体の対応するレベルよりも、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％、４００％、または５００％高い。

【0335】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体は、（例えば、対照、例えば、参照抗体、例えば、ＢＣＭＡ結合について交差競合する抗体と比べて）増加した半減期を有し、したがって、抗ＢＣＭＡ抗体は、投与間隔を広げて対象に投与することができる。例えば、抗ＢＣＭＡ抗体は、毎週１回、２週間ごと、３週間ごと、４週間ごと、６週間ごと、８週間ごと、またはそれ以上の期間で投与することができる。

【0336】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片の治療有効量は、参照治療用タンパク質、例えば、ＢＣＭＡ結合について交差競合する抗体の有効量の約９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、または５％である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体の単回用量は、参照抗体の２回以上の用量と同等の治療効果を達成する。

【0337】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、対象における標的抗原（例えば、ＢＣＭＡ）の濃度の約９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、また５％である用量で投与される。

【0338】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、当業者に知られているさまざまな方法及び送達システムのいずれかを使用して、対象に物理的に導入することができる。本明細書に開示される製剤の例示的な投与経路としては、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、脊髄または他の非経口投与経路、例えば注射または注入によるものが挙げられる。本明細書で使用される場合、「非経口投与」という語句は、経腸投与と局所投与以外の、通常は注射による投与方法を意味し、非限定的に、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、及び胸骨内の注射及び注入、ならびにインビボエレクトロポレーションが含まれる。いくつかの実施形態では、製剤は、局所、表皮または粘膜の投与経路を含む非経口経路によって、例えば、鼻腔内、膣内、直腸内、舌下、または局所で投与される。また、投与することは、例えば１回、複数回、及び／または１つ以上の長い期間にわたって行うことができる。

【0339】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体またはその断片は、多くの診断用途及び治療用途に使用することができる。例えば、本明細書に記載の操作された抗体の検出可能に標識されたバージョンをアッセイで使用して、試料（例えば、生体試料）中のＢＣＭＡの存在または量を検出することができる。本明細書に記載の操作された抗体は、ＢＣＭＡへの結合を研究するためのインビトロアッセイで使用することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体は、そうでなければＢＣＭＡ関連障害を治療するのに有用である追加の新規化合物を同定するために設計されたアッセイにおける陽性対照として使用することができる。例えば、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体は、ＢＣＭＡに結合する追加の化合物（例えば、小分子、アプタマー、または抗体）を同定するためのアッセイにおいて陽性対照として使用することができる。

【0340】

本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、対象、例えば、１つ以上のＢＣＭＡ関連状態を有する、有する疑いがある、発症するリスクがある、または治療中である、対象をモニタリングするのに使用することができる。モニタリングは、対象、例えば、対象の血清中のＢＣＭＡの量または活性を決定することを含み得る。いくつかの実施形態では、評価は、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体の投与後、少なくとも１時間、例えば、少なくとも２、４、６、８、１２、２４、または４８時間、または少なくとも１日間、２日間、４日間、１０日間、１３日間、２０日間、もしくはそれ以上、または少なくとも１週間、２週間、４週間、１０週間、１３週間、２０週間、もしくはそれ以上行われる。対象は、以下の期間の１つ以上で評価することができる：治療の開始前；治療中；または治療の１つ以上の要素が投与された後。評価は、さらなる治療の必要性を評価すること、例えば、投与量、投与頻度、または治療期間を変更すべきかどうかを評価することを含むことができる。また、選択された治療法を追加または中断する必要性を評価すること、例えば、本明細書に記載のＢＣＭＡ関連障害の任意の治療を追加または中断することも含み得る。本発明の一実施形態では、多発性骨髄腫を含む種々の血液学的悪性腫瘍の治療のための、ＢＣＭＡ結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が開示される。ＢＣＭＡタンパク質はがん細胞上で発現する。ＣＡＲのＢＣＭＡ抗原結合部分は、そのＢＣＭＡ断片の細胞外ドメイン内のエピトープと相互作用する。

【0341】

特定の実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲ構築物、核酸配列、ベクター、免疫細胞など、及び／またはそれを含む医薬組成物は、がん性疾患などの疾患の予防、治療、または改善のために使用される。特定の実施形態では、本開示の医薬組成物は、例えば、特定の抗原を発現し、固形腫瘍であってもなくてもよいがんを含むがんを予防、改善、及び／または治療するのに特に有用であり得る。

【0342】

受容体が利用される免疫細胞は、特定の実施形態において、哺乳動物の細胞療法のために操作されたＮＫ細胞、Ｔ細胞、γδＴ細胞、αβＴ細胞、またはＮＫＴもしくはインバリアントＮＫＴ（ｉＮＫＴ）、またはインバリアントＮＫＴ細胞であり得る。細胞がＮＫ細胞である場合、ＮＫ細胞療法は任意の種類であってよく、ＮＫ細胞は任意の種類であってよい。特定の実施形態では、細胞は、１つ以上のＣＡＲ及び／または１つ以上の自殺遺伝子及び／または１つ以上のサイトカインを発現するように操作されたＮＫ細胞である。特定の実施形態では、細胞は、ＣＡＲを形質導入されたＮＫ細胞である。

【0343】

特定の実施形態では、本開示は、一部には、単独で、または標準的なベクター及び／または遺伝子送達系を使用する任意の組み合わせで、少なくともいくつかの態様では、薬学的に許容される担体または賦形剤と一緒に投与することができる、ＣＡＲ発現細胞、ＣＡＲ構築物、ＣＡＲ核酸分子、及びＣＡＲベクターを企図する。特定の実施形態では、投与後、核酸分子またはベクターは、対象のゲノムに安定に組み込まれ得る。

【0344】

特定の実施形態では、特定の細胞または組織に特異的であり、ＮＫ細胞に存続するウイルスベクターを使用することができる。適切な薬学的担体及び賦形剤は、当該技術分野において周知である。本開示に従って調製された組成物は、上記で同定された疾患の予防または治療または遅延のために使用され得る。

【0345】

さらに、本開示は、腫瘍疾患の予防、治療、または改善のための方法であって、それを必要とする対象に、本明細書で企図されるＣＡＲ、核酸配列、ベクターを発現する、及び／または本明細書で企図されるプロセスによって産生される細胞の有効量を投与するステップを含む方法に関する。

【0346】

例示的なＣＡＲ細胞の組成物（複数可）の投与に対する可能な適応症は、例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍、多発性骨髄腫、乳癌、膠芽腫、腎癌、膵臓癌、または肺癌を含む腫瘍性疾患を含むがん性疾患である。抗原標的化ＣＡＲ細胞の組成物（複数可）の投与の例示的な適応症は、抗原を発現する任意の悪性腫瘍を含むがん性疾患である。本開示の組成物（複数可）の投与は、例えば、最小残留疾患、初期がん、進行がん、及び／または転移性がん及び／または難治性がんを含む、すべてのステージ（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶ）及びすべてのタイプのがんに有用である。

【0347】

本開示は、免疫細胞を介して作用する他の化合物、例えば、二重特異性抗体構築物、標的化毒素、または他の化合物との共投与プロトコールをさらに包含する。本発明の化合物（複数可）の共投与のための臨床レジメンは、他の成分の投与と同時、その前または後の共投与を包含し得る。特定の併用療法は、化学療法、放射線、外科手術、ホルモン療法、または他のタイプの免疫療法を含む。

【0348】

特定の態様では、本発明は、ＢＣＭＡ発現がん細胞の集団の増殖を阻害するか、またはＢＣＭＡ発現がん細胞の集団を減少させる方法であって、該方法は、ＢＣＭＡ発現がん細胞の集団を、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本発明の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）と接触させることを含む、方法を提供する。一態様では、本発明は、ＢＣＭＡ発現がん細胞の集団の増殖を阻害するか、またはＢＭＣＡ発現がん細胞の集団を減少させる方法であって、ＢＣＭＡ発現がん細胞の集団を、ＢＣＭＡ発現細胞に結合する本発明の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）と接触させることを含む、方法を提供する。特定の態様では、本発明の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ発現細胞（例えば、ＢＣＭＡ ＣＡＲ発現ＮＫ細胞）は、骨髄性白血病またはＢＣＭＡ発現細胞に関連する別のがんの対象または動物モデルにおける細胞及び／またはがん細胞の数、量、または割合を、陰性対照と比較して少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６５％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％低減する。一態様では、対象はヒトである。

【0349】

いくつかの実施形態では、本発明の治療方法が有用ながんは、任意の悪性細胞型、例えば固形腫瘍または血液学的腫瘍に見出されるものを含む。例示的な固形腫瘍は、膵臓、結腸、盲腸、胃、脳、頭部、頸部、卵巣、腎臓、喉頭、肉腫、肺、膀胱、黒色腫、前立腺、及び乳房からなる群から選択される器官の腫瘍を含むことができるが、これらに限定されない。例示的な血液学的腫瘍は、骨髄、ＴまたはＢ細胞悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、芽細胞腫、骨髄腫などの腫瘍を含む。本明細書に提供される方法を使用して治療できるがんのさらなる例としては、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌を含む）、腹膜癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）（消化管癌及び消化管間質癌を含む）、膵臓癌、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜または子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ ｃａｎｃｅｒ）または腎臓癌（ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、種々のタイプの頭頸部癌、及び黒色腫が挙げられるが、これらに限定されない。

【0350】

がんは、特に以下の組織学的型のものであってよいが、これらに限定されない：新生物、悪性；癌腫；癌、未分化；巨細胞癌及び紡錘細胞癌；小細胞癌；乳頭癌；扁平上皮癌；リンパ上皮癌；基底細胞癌；毛孔腫癌；移行上皮癌；乳頭状移行上皮癌；腺癌；ガストリノーマ、悪性；胆管癌；肝細胞癌；肝細胞癌と胆管癌の合併；小柱癌；腺嚢胞癌；腺腫ポリープにおける腺癌；腺癌、家族性大腸ポリポーシス；固形癌；カルチノイド腫瘍、悪性；細気管支肺胞腺癌；乳頭癌；嫌色素性癌；好酸性癌；好酸性腺癌；塩基好性癌；明細胞腺癌；顆粒細胞癌；濾胞性腺癌；乳頭及び濾胞の腺癌；非被包性硬化性癌；副腎皮質癌；類内膜癌；皮膚付属器癌；アポクリン腺癌；皮脂腺癌；耳垢腺癌；粘表皮癌；嚢胞腺癌；乳頭状嚢胞腺癌；乳頭状漿液嚢胞腺癌；粘液性嚢胞腺癌；粘液性腺癌；印環細胞癌；浸潤性導管癌；髄様癌；小葉癌；炎症性癌；パジェット病、乳房；腺房細胞癌；腺扁平上皮癌；扁平上皮化生随伴腺癌；胸腺腫、悪性；卵巣間質腫、悪性；莢膜細胞腫、悪性；顆粒膜細胞腫、悪性；アンドロブラストーマ、悪性；セルトリ細胞腫；ライディッヒ細胞腫、悪性；脂質細胞腫瘍、悪性；パラガングリオーマ、悪性；乳房外パラガングリオーマ、悪性；クロム親和細胞腫；血管球血管肉腫；悪性黒色腫；無色素性黒色腫；表在拡大型黒色腫；黒子悪性黒色腫；末端黒子黒色腫；結節性黒色腫；巨大色素性母斑中の悪性黒色腫；類上皮細胞黒色腫；青色母斑、悪性；肉腫；線維肉腫；線維性組織球腫、悪性；粘液肉腫；脂肪肉腫；平滑筋肉腫；横紋筋肉腫；胎児性横紋筋肉腫；胞巣型横紋筋肉腫；間質性肉腫；混合腫瘍、悪性；ミューラー混合腫瘍；腎芽腫；肝芽腫；癌肉腫；間葉腫、悪性；ブレンナー腫瘍、悪性；葉状腫瘍、悪性；滑膜肉腫；中皮腫、悪性；未分化胚細胞腫；胚性がん腫；テラトーマ、悪性；卵巣甲状腺腫、悪性；絨毛癌；中腎腫、悪性；血管肉腫；血管内皮腫、悪性；カポジ肉腫；血管周囲細胞腫、悪性；リンパ管肉腫；骨肉腫；傍骨骨肉腫；軟骨肉腫；軟骨芽細胞腫、悪性；間葉性軟骨肉腫；骨巨細胞腫；ユーイング肉腫；歯原性腫瘍、悪性；エナメル上皮歯牙肉腫；エナメル上皮腫、悪性；エナメル上皮線維肉腫；松果体腫、悪性；脊索腫；神経膠腫、悪性；上衣腫；星状細胞腫；原形質性星状細胞腫；線維性星状細胞腫；星状芽細胞腫；膠芽細胞腫；乏突起神経膠腫；乏突起神経膠芽細胞腫；原始神経外胚葉性；小脳肉腫；神経節芽細胞腫；神経芽細胞腫；網膜芽細胞腫；嗅神経腫瘍；髄膜腫、悪性；神経線維肉腫；神経鞘腫、悪性；顆粒細胞腫瘍、悪性；悪性リンパ腫；ホジキン病；ホジキン側肉芽腫；悪性リンパ腫、小リンパ球性；悪性リンパ腫、びまん性大細胞性；悪性リンパ腫、濾胞性；菌状息肉腫；特定された他の非ホジキンリンパ腫；Ｂ細胞リンパ腫；低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中間悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中間悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み細胞ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；ワルデンシュトレームマクログロブリン血症；悪性組織球腫；多発性骨髄腫；肥満細胞肉腫；免疫増殖性小腸疾患；白血病；リンパ性白血病；血漿細胞白血病；赤白血病；リンパ肉腫細胞白血病；骨髄性白血病；好塩基球性白血病；好酸球性白血病；単球性白血病；マスト細胞白血病；巨核芽球性白血病；骨髄肉腫；有毛細胞白血病；慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；及び慢性骨髄芽球性白血病。

【0351】

非限定的な例として、本発明の抗ＢＣＭＡ抗体、ＣＡＲ、細胞、及び組成物は、Ｂ細胞関連疾患を治療するために使用される。いくつかの実施形態では、がんはＢ細胞関連疾患である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞関連疾患は、形質細胞腫、ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、小型非切れ込み核細胞性リンパ腫、地域性バーキットリンパ腫、散発性バーキットリンパ腫、辺縁帯リンパ腫、節外性粘膜関連リンパ組織リンパ腫、結節性単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、大細胞リンパ腫、びまん性混合細胞型リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、肺Ｂ細胞血管中心性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、悪性度未知のＢ細胞、リンパ腫様肉芽腫症、移植後リンパ増殖性障害、免疫調節疾患、関節リウマチ、重症筋無力症、特発性血小板減少性紫斑病、抗リン脂質症候群、シャーガス病、グレーブス病、ウェゲナー肉芽腫症、結節性多発動脈炎、シェーグレン症候群、尋常性天疱瘡、強皮症、多発性硬化症、抗リン脂質症候群、ＡＮＣＡ関連血管炎、グッドパスチャー病、川崎病、自己免疫性溶血性貧血、急速進行性糸球体腎炎、重鎖病、及び原発性または免疫細胞関連性アミロイドーシスからなる群から選択される。

【0352】

医薬組成物
本開示の医薬組成物は、有効量の、薬学的に許容される担体中に分散されたＮＫ細胞を含む組成物を含む。いくつかの実施形態では、本組成物は、薬学的に許容される担体、希釈剤、可溶化剤、乳化剤、保存剤、及び／またはアジュバントを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、賦形剤を含む。組成物を含む医薬組成物の調製は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５によって例示されるように、本開示に照らして当業者に公知である。さらに、動物（例えばヒト）投与の場合、製剤は、ＦＤＡ Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄｓによって要求される、無菌性、発熱性、一般的な安全性、及び純度の基準を満たすべきであることが理解されよう。

【0353】

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」としは、当業者に公知であるような、任意の及びすべての溶媒、分散媒、コーティング、界面活性剤、酸化防止剤、保存剤（例えば、抗菌剤、抗真菌剤）、等張剤、吸収遅延剤、塩、保存剤、薬物、薬物安定剤、ゲル、結合剤、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤、染料、同様の材料及びそれらの組み合わせが挙げられる（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄ．Ｍａｃｋ Ｐｒｉｎｔｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０，ｐｐ．１２８９－１３２９を参照されたい）。任意の従来の担体が活性成分と適合しない場合を除いて、医薬組成物におけるその使用が企図される。

【0354】

医薬組成物は、固体、液体またはエアロゾル形態で投与されるかどうか、及び注射のような投与経路に対して無菌である必要があるかどうかに応じて、異なる種類の担体を含み得る。本開示の組成物は、当業者に公知である、静脈内、皮内、経皮的、髄腔内、動脈内、内視鏡的、腹腔内、鼻腔内、膣内、直腸内、局所、筋肉内、経皮的、皮下、粘膜内、経口、局所、吸入（例えば、エアロゾル吸入）、注射、注入、持続注入、標的細胞を直接浸す局所灌流、カテーテルを介して、洗浄を介して、クリーム中、脂質組成物（例えば、リポソーム）中、灌流による局所的、腫瘍微小環境内で、または他の方法もしくは前述の任意の組み合わせによって投与することができる（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄ．Ｍａｃｋ Ｐｒｉｎｔｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０を参照されたい）。

【0355】

製剤化及び投与
種々の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片（例えば、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体）を医薬組成物に組み込むことができる。そのような医薬組成物は、例えば、疾患、例えばＢＣＭＡ関連障害の予防及び／または治療のために有用であり得る。医薬組成物は、当業者に知られている方法によって製剤化することができる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ｅｄ．Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９８５）に記載されているように）。

【0356】

投与の適切な手段は、対象の年齢及び状態に基づいて選択することができる。本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体）を含む医薬組成物の単回用量は、体重１ｋｇあたり０．００１～１０００ｍｇの範囲から選択することができる。一方、用量は体重あたり０．００１～１０００００ｍｇの範囲で選択できるが、本開示はそのような範囲に限定されない。用量及び投与方法は、患者の体重、年齢、状態などに応じて変動し、当業者であれば必要に応じて適宜選択することができる。

【0357】

種々の実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体または賦形剤を含むように製剤化することができる。薬学的に許容される担体の例としては、非限定的に、生理学的に適合性のある任意の及びすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを含む。本発明の組成物は、薬学的に許容される塩、例えば酸付加塩または塩基付加塩を含むことができる。

【0358】

種々の実施形態では、本明細書に記載の抗体を含む組成物、例えば注射用無菌製剤は、ビヒクルとして注射用蒸留水を使用して、従来の薬務に従って製剤化することができる。例えば、生理食塩水またはブドウ糖と、Ｄ－ソルビトール、Ｄ－マンノース、Ｄ－マンニトール、及び塩化ナトリウムなどの他の補充成分を含む等張液を、任意選択で適切な可溶化剤、例えば、エタノールなどのアルコール、及びプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどの多価アルコール、ポリソルベート８０（商標）、ＨＣＯ－５０などの非イオン性界面活性剤などと組み合わせて、注射用水溶液として使用することができる。

【0359】

本明細書に開示される場合、医薬組成物は当該技術分野で知られている任意の形態であってよい。そのような形態としては、例えば、液体、半固体、及び固体の剤形、例えば、液体の液剤（例えば、注射剤及び点滴剤）、分散剤または懸濁剤、錠剤、丸剤、散剤、リポソーム、及び坐剤が挙げられる。

【0360】

任意の特定の形態の選択または使用は、部分的には、意図する投与様式及び治療への適用に依存し得る。例えば、全身または局所送達を目的とする組成物を含む組成物は、注射剤または点滴剤の形態であり得る。したがって、組成物は非経口様式（例えば静脈内、皮下、腹腔内、または筋肉内注射）による投与用に製剤化され得る。本明細書中で使用される場合、非経口投与は、通常は注射による、経腸投与及び局所投与以外の投与様式を指し、非限定的に、静脈内、鼻腔内、眼内、肺内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、肺内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、脳内、頭蓋内、頸動脈内及び胸骨内の注射及び注入が含まれる。

【0361】

投与経路は、非経口、例えば、注射による投与、経鼻投与、経肺投与、または経皮投与であり得る。投与は、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射による全身または局所であり得る。

【0362】

種々の実施形態では、本発明の医薬組成物は、液剤、マイクロエマルション、分散剤、リポソーム、または高い濃度での安定した保存に適した他の規則構造として製剤化することができる。滅菌注射剤は、必要量の本明細書に記載の組成物を上に挙げた成分の１つまたは組み合わせと共に適正な溶媒に組み込み、必要により、続いて濾過滅菌を行うことによって調製することができる。一般的に、分散剤は、本明細書に記載の組成物を、基礎的な分散媒及び上に列挙されるものからの必要とされる他の成分を含む滅菌ビヒクルへと混合することによって調製される。滅菌注射剤を調製するための滅菌粉末の場合、調製方法は、事前に滅菌濾過された本明細書の組成物の溶液から、本明細書の組成物と任意の所望の追加成分（下記参照）との粉末を生じる、真空乾燥及び凍結乾燥を含む。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用によって、分散剤の場合には必要とされる粒子サイズの維持によって、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。注射用組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩及びゼラチンを組成物中に含めることによってもたらすことができる。

【0363】

医薬組成物は、水または別の薬学的に許容される液体中の滅菌の溶液または懸濁液を含む注射可能な製剤の形態で非経口的に投与することができる。例えば、医薬組成物は、治療用分子を、薬学的に許容されるビヒクルまたは媒体、例えば、滅菌水及び生理食塩水、植物油、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、香味賦形剤、希釈剤、ビヒクル、防腐剤、結合剤と好適に組み合わせ、続いて、一般的に受け入れられている薬務に必要な単位用量形態で混合することによって製剤化することができる。医薬製剤に含まれる活性成分の量は、指定された範囲内の適切な用量が提供されるような量である。油性液体の非限定的な例としては、ゴマ油及び大豆油が挙げられ、可溶化剤として安息香酸ベンジルまたはベンジルアルコールと組み合わせることができる。含まれ得る他の品目は、リン酸緩衝液または酢酸ナトリウム緩衝液などの緩衝剤、塩酸プロカインなどの無痛化剤、ベンジルアルコールまたはフェノールなどの安定剤、及び抗酸化剤である。処方された注射剤は、適切なアンプルに包装することができる。

【0364】

いくつかの実施形態では、組成物は、０℃未満の温度（例えば、－２０℃または－８０℃）で保存するために凍結製剤化することができる。凍結保存した細胞を解凍し、対象に注射した。凍結製剤化に使用される培地として、以下の凍結保存の培地が例示される；

【化1】

【0365】

凍結製剤化に使用されるそれぞれの成分は、任意の市販の供給源から得ることができる。非限定的な例として、上述のそれぞれの成分は、以下のベンダーから得ることができる：

【化2】

【0366】

いくつかの実施形態では、組成物は、最大２年間（例えば、１か月間、２か月間、３か月間、４か月間、５か月間、６か月間、７か月間、８か月間、９か月間、１０か月間、１１か月間、１年間、１．５年間、または２年間）、２～８℃（例えば４℃）での保存のために製剤化することができる。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、２～８℃（例えば、４℃）で少なくとも１年間保存安定である。

【0367】

特定の例では、医薬組成物は、溶液として製剤化することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、例えば、適切な濃度で、２～８℃（例えば、４℃）での保存に適した緩衝された溶液として製剤化することができる。

【0368】

本明細書に記載の１つ以上の操作された抗体を含む組成物は、イムノリポソーム組成物に製剤化することができる。そのような製剤は、当該技術分野で知られている方法によって調製することができる。循環時間が強化されたリポソームは、例えば、米国特許第５，０１３，５５６号に開示される。

【0369】

特定の実施形態では、組成物は、インプラント及びマイクロカプセル化の送達系を含む制御放出製剤など、化合物を急速な放出から保護する担体と共に製剤化することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性の生体適合性ポリマーを使用できる。そのような製剤の調製のための多くの方法は、当該技術分野で知られている。例えば、Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ（１９７８）“Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，” Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい。

【0370】

いくつかの実施形態では、組成物は、ヒトなどの哺乳動物への肺内投与（例えば、吸入器またはネブライザーによる投与）に適した組成物に製剤化することができる。そのような組成物を製剤化する方法は、当該技術分野で周知である。乾燥粉末吸入製剤及び製剤の投与に適したシステムも当該技術分野で知られている。経肺投与は経口及び／または鼻投与であってよい。肺送達用の薬学的デバイスの例としては、定量吸入器、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）、及びネブライザーが挙げられる。例えば、本明細書に記載の組成物は、乾燥粉末吸入器によって対象の肺に投与することができる。これらの吸入器は、分散性で安定した乾燥粉末製剤を肺に送達する噴射剤を使用しないデバイスである。乾燥粉末吸入器は医学の技術分野でよく知られており、非限定的に、ＴＵＲＢＯＨＡＬＥＲ（登録商標）（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；Ｌｏｎｄｏｎ，Ｅｎｇｌａｎｄ）、ＡＩＲ（登録商標）吸入器（ＡＬＫＥＲＭＥＳ（登録商標）；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）；ＲＯＴＡＨＡＬＥＲ（登録商標）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ；Ｌｏｎｄｏｎ，Ｅｎｇｌａｎｄ）；及びＥＣＬＩＰＳＥ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ；Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）が含まれる。例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ０４／０２６３８０、ＷＯ０４／０２４１５６、及びＷＯ０１／７８６９３を参照されたい。ＤＰＩデバイスは、インスリン及び成長ホルモンなどのポリペプチドの肺投与に使用されてきた。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、定量吸入器によって肺内投与することができる。これらの吸入器は、噴射剤に依存して、個別の用量の化合物を肺に送達する。追加のデバイス及び肺内投与方法は、例えば、米国特許出願公開第２００５０２７１６６０号及び同第２００９０１１０６７９号に記載されており、これらのそれぞれの開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0371】

いくつかの実施形態では、組成物は、例えば、薬学的に許容される溶液、懸濁液、または軟膏の形態で、眼への送達のために製剤化することができる。眼の治療に使用する製剤は、例えば、非限定的に、防腐剤、緩衝剤、等張化剤、抗酸化剤及び安定剤、非イオン性湿潤剤または清澄化剤、ならびに増粘剤などの追加の成分を含む、滅菌水性溶液の形態であり得る。本明細書に記載の製剤は、治療を必要とする対象（例えば、ＡＭＤに罹患している対象）の眼に、従来の方法、例えば点滴薬の形態で、または眼を１つ以上の組成物を含む治療溶液に浸すことによって、局所的に投与することができる。

【0372】

特定の実施形態では、眼の硝子体腔に薬物を導入するためのさまざまなデバイスが、本明細書に記載の組成物の投与に適切であり得る。例えば、米国特許出願公開第２００２／００２６１７６号は、硝子体腔内に突出して医薬品を硝子体腔内に送達するように、強膜を通して挿入することができる薬剤含有プラグを記載している。別の例では、米国特許第５，４４３，５０５号は、眼の内部への薬物の徐放のために、脈絡膜上腔または無血管領域への導入のための移植可能なデバイスを記載している。米国特許第５，７７３，０１９号及び同第６，００１，３８６号はそれぞれ、眼の強膜表面に取り付け可能な移植可能な薬物送達デバイスを開示している。治療薬を眼に送達するための追加の方法及びデバイス（例えば、経強膜パッチ及びコンタクトレンズを介した送達）は、例えば、Ａｍｂａｔｉ ａｎｄ Ａｄａｍｉｓ（２００２）Ｐｒｏｇ Ｒｅｔｉｎ Ｅｙｅ Ｒｅｓ ２１（２）：１４５－１５１；Ｒａｎｔａ ａｎｄ Ｕｒｔｔｉ（２００６）Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ ５８（１１）：１１６４－１１８１；Ｂａｒｏｃａｓ ａｎｄ Ｂａｌａｃｈａｎｄｒａｎ（２００８）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ５（１）：１－１０（１０）；Ｇｕｌｓｅｎ ａｎｄ Ｃｈａｕｈａｎ（２００４）Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ ４５：２３４２－２３４７；Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ Ｒｅｓ ３９：２４４－２５４；及びＰＣＴ公開番号ＷＯ０４／０７３５５１に記載され、これらの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0373】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体の投与は、抗体をコードする核酸を対象に投与することによって達成される。本明細書に記載の治療用抗体をコードする核酸は、細胞内で抗体を発現及び産生するために使用できる核酸を送達するための遺伝子治療プロトコールの一部として使用される遺伝子構築物に組み込むことができる。そのような成分の発現構築物は、任意の治療上有効な担体、例えば、成分遺伝子をインビボで細胞に効果的に送達できる任意の製剤または組成物中で投与することができる。アプローチとしては、組換えのレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス、及び単純ヘルペスウイルス－１（ＨＳＶ－１）を含むウイルスベクター、または組換え細菌または真核生物のプラスミドへの対象遺伝子の挿入が挙げられる。ウイルスベクターは細胞に直接トランスフェクトできる。プラスミドＤＮＡは、例えば、カチオン性リポソーム（リポフェクチン）または誘導体化されたポリリジンコンジュゲート、グラミシジンＳ、人工ウイルスエンベロープ、または他のそのような細胞内担体の助けを借りて送達することができ、さらに遺伝子構築物の直接注入またはＣａＰＯ_４沈殿によって送達することができる（例えば、ＷＯ０４／０６０４０７を参照されたい）。適切なレトロウイルスの例としては、当業者に知られているｐＬＪ、ｐＺＩＰ、ｐＷＥ、及びｐＥＭが挙げられる（例えば、Ｅｇｌｉｔｉｓ ｅｔ ａｌ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１３９５－１３９８；Ｄａｎｏｓ ａｎｄ Ｍｕｌｌｉｇａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８５：６４６０－６４６４；Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８５：３０１４－３０１８；Ａｒｍｅｎｔａｎｏ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８７：６１４１－６１４５；Ｈｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８８：８０３９－８０４３；Ｆｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８８：８３７７－８３８１；Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４：１８０２－１８０５；ｖａｎ Ｂｅｕｓｅｃｈｅｍ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８９：７６４０－７６４４；Ｋａｙ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ３：６４１－６４７；Ｄａｉ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８９：１０８９２－１０８９５；Ｈｗｕ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５０：４１０４－４１１５；米国特許第４，８６８，１１６号、及び同第４，９８０，２８６号；ならびにＰＣＴ公開番号ＷＯ８９／０７１３６、ＷＯ８９／０２４６８、ＷＯ８９／０５３４５、及びＷＯ９２／０７５７３を参照されたい）。別のウイルス遺伝子送達システムは、アデノウイルス由来のベクターを利用する（例えば、Ｂｅｒｋｎｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８８）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６：６１６；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：４３１－４３４；及びＲｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｃｅｌｌ ６８：１４３－１５５を参照されたい）。アデノウイルス株Ａｄ５型ｄｌ３２４またはアデノウイルスの他の株（例えば、Ａｄ２、Ａｄ３、Ａｄ７など）に由来する適切なアデノウイルスベクターは、当業者に知られている。対象遺伝子の送達に有用なさらに別のウイルスベクター系は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）である。例えば、Ｆｌｏｔｔｅ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ７：３４９－３５６；Ｓａｍｕｌｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｊ Ｖｉｒｏｌ ６３：３８２２－３８２８；及びＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｊ Ｖｉｒｏｌ ６２：１９６３－１９７３を参照されたい。

【0374】

さまざまな実施形態では、皮下投与は、注射器、充填済み注射器、自動注射器（例えば、使い捨てまたは再使用可能）、ペン型注射器、パッチ注射器、ウェアラブル注射器、皮下注入セットを備えた携帯用注射器注入ポンプ、または皮下注射用の抗体薬と組み合わせるための他のデバイスなどのデバイスによって達成され得る。

【0375】

本開示の注射システムは、米国特許第５，３０８，３４１号に記載されているように送達ペンを使用することができる。糖尿病患者へのインスリンの自己送達に最も一般的に使用されるペンデバイスは、当該技術分野で周知である。このようなデバイスは、少なくとも１本の注射針（例えば、長さ約５～８ｍｍの３１ゲージの針）を含むことができ、通常、１回または複数回の治療単位用量の治療溶液が事前に充填されており、可能な限り疼痛が少なく、対象への溶液の迅速な送達に有用である。１つの薬物送達ペンは、治療薬または他の薬物のバイアルを受け取ることができるバイアルホルダーを含む。ペンは完全に機械的なデバイスである場合もあれば、電子回路と組み合わせてユーザーに注射される医薬の投与量を正確に設定及び／または示す場合もある。例えば、米国特許第６，１９２，８９１号を参照されたい。いくつかの実施形態では、ペンデバイスの針は使い捨てであり、キットは、１つ以上の使い捨て交換針を含む。現在特徴付けられている組成物のいずれか１つの送達に適したペンデバイスはまた、例えば、米国特許第６，２７７，０９９号；同第６，２００，２９６号；及び同第第６，１４６，３６１号に記載されている。これらのそれぞれの開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。マイクロニードルベースのペンデバイスは、例えば、米国特許第７，５５６，６１５号に記載されている。この開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ Ｈｅａｌｔｈ Ｌｔｄ．製のＰｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｐｅｎ Ｉｎｊｅｃｔｏｒ（ＰＰＩ）デバイス、ＭＯＬＬＹ（商標）も参照されたい。

【0376】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、局所投与によって対象に治療的に送達することができる。本明細書で使用される場合、「局所投与」または「局所送達」は、組成物または薬剤の、血管系を介したその意図する標的組織または部位への輸送に依存しない送達を指すことができる。例えば、組成物は、組成物もしくは薬剤の注射もしくは移植によって、または組成物もしくは薬剤を含有する装置の注射もしくは移植によって送達され得る。特定の実施形態では、標的組織または部位の近くで局所投与した後、組成物もしくは薬剤、またはそれらの１つ以上の成分は、投与部位ではない意図された標的組織または部位に拡散し得る。

【0377】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物は、自己投与に適し得る単位剤形で存在し得る。このような単位剤形は、典型的には例えばバイアル、カートリッジ、充填済みシリンジ、または使い捨てペンなどの容器内で提供され得る。米国特許第６，３０２，８５５号に記載された投与装置のような投与装置も、例えば、本明細書に記載の注射システムと共に使用することができる。

【0378】

対象の障害を治療または予防することができる本明細書に記載の組成物の適切な用量は、例えば、治療対象の年齢、性別、及び体重、ならびに使用される特定の阻害剤化合物を含む、さまざまな因子に依存し得る。例えば、本明細書に記載の抗体を含むある組成物の異なる用量は、その抗体の異なる製剤の用量と比較して、ＢＣＭＡ関連障害を有する対象を治療するために必要とされ得る。対象に投与される用量に影響を及ぼす他の因子としては、例えば、障害の種類または重症度が挙げられる。例えば、あるＢＣＭＡ関連障害を有する対象は、別のＢＣＭＡ関連障害を有する対象とは異なる投与量の投与を必要とし得る。他の因子としては、例えば、同時にまたは以前に対象に影響を及ぼした他の医学的障害、対象の全体的な健康状態、対象の遺伝的素因、食事、投与期間、排泄速度、薬物の組み合わせ、及び対象に投与される任意の他の追加の治療法が挙げられ得る。任意の特定の対象に対する具体的な投与量及び治療レジメンもまた、治療する医師の判断に基づいて調整され得ることも理解されるべきである。

【0379】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、固定用量として、またはキログラムあたりのミリグラム（ｍｇ／ｋｇ）の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組成物中の抗体またはその抗原結合断片の１つ以上に対する抗体の生成または他の宿主免疫応答を低減または回避するように用量が選択される。限定することを決して意図するものではないが、本明細書に記載の組成物などの抗体の例示的な投与量としては、例えば、１～１０００ｍｇ／ｋｇ、１～１００ｍｇ／ｋｇ、０．５～５０ｍｇ／ｋｇ、０．１～１００ｍｇ／ｋｇ、０．５～２５ｍｇ／ｋｇ、１～２０ｍｇ／ｋｇ、及び１～１０ｍｇ／ｋｇが挙げられる。本明細書に記載の組成物の例示的な投与量としては、非限定的に、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、または２０ｍｇ／ｋｇが挙げられる。

【0380】

いくつかの実施形態では、組成物は、異常なＢＣＭＡ発現に関連する疾患の１つ以上の症状を低減または治療するのに十分な用量及び投与間隔で投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、毎日、１日２回、１週間に１回、１週間に２回、１週間に３回、２週間に１回、１か月間に１回、２か月間に１回、６か月間に１回、または１年間に１回投与される。いくつかの実施形態では、治療は、抗体の単回投与を含む。

【0381】

いくつかの実施形態では、本組成物は、１つ以上の賦形剤を含む医薬組成物である。

【0382】

医薬組成物は、治療有効量の本明細書で記載の組成物を含むことができる。このような有効量は、当業者であれば、投与された組成物の効果、または複数の薬剤が使用される場合には組成物と１つ以上の追加の活性剤との組合せ効果に部分的に基づいて容易に決定することができる。本明細書に記載の組成物の治療有効量は、個体の病状、年齢、性別、及び体重、ならびに、組成物（及び１つ以上の追加の活性剤）が個体における所望の応答、例えば、少なくとも１つの状態パラメータの改善、例えば、少なくとも１つのＢＣＭＡ関連障害の症状の改善を誘発する能力などの因子によってもまた変動し得る。例えば、本明細書に記載の組成物の治療有効量は、特定の障害、及び／または当該技術分野で知られている、もしくは本明細書に記載されている特定の障害の症状のうちのいずれか１つを阻害する（重症度を軽減する、もしくは発生を排除する）、及び／または予防することができる。治療有効量はまた、組成物の任意の毒作用または有害作用よりも治療的に有益な効果が上回る量である。

【0383】

本明細書に記載の組成物のうちのいずれかの適切なヒト用量は、例えば第Ｉ相用量漸増試験でさらに評価することができる。例えば、ｖａｎ Ｇｕｒｐ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ａｍ Ｊ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ８（８）：１７１１－１７１８；Ｈａｎｏｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １３（２，ｐａｒｔ １）：５２３－５３１；及びＨｅｔｈｅｒｉｎｇｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ５０（１０）：３４９９－３５００を参照されたい。

【0384】

組成物の毒性及び治療効果は、細胞培養または実験動物（例えば、ＢＣＭＡ関連障害のいずれかの動物モデル）における既知の薬学的手順によって決定することができる。これらの手順は、例えば、ＬＤ_５０（集団の５０％に対する致死量）及びＥＤ_５０（集団の５０％における治療有効用量）を決定するために使用することができる。毒性と治療効果と間の用量比は、治療指数であり、それはＬＤ_５０／ＥＤ_５０の比率として表すことができる。高い治療指数を示す本明細書に記載の組成物が好ましい。有毒な副作用を示す組成物が使用される場合があるが、そのような化合物を影響を受ける組織の部位に標的化する送達システムを設計し、正常細胞への潜在的な損傷を最小限に抑え、それによって副作用を軽減するように注意する必要がある。

【0385】

当業者は、細胞培養アッセイ及び動物研究から得られたデータを、ヒトで使用するための投与量範囲を製剤化する際に使用できることを理解するであろう。本明細書に記載の組成物の適切な投与量は、一般に、毒性がほとんどまたは全くないＥＤ_５０を含む組成物の循環濃度の範囲内にある。投与量は、採用された剤形及び使用される投与経路に依存して、この範囲内で変動する可能性がある。本明細書に記載の組成物に関して、治療有効量は、最初に細胞培養分析から推定することができる。用量は、細胞培養で決定されるＩ_０（すなわち、症状の最大阻害の半分を達成する抗体の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するように動物モデルにおいて製剤化することができる。そのような情報は、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定するために使用できる。血漿中のレベルは、例えば高速液体クロマトグラフィーによって測定することができる。いくつかの実施形態では、例えば、局所投与（例えば、眼または関節への）が望まれる場合、細胞培養または動物モデルを使用して、局所部位内で治療有効濃度を達成するのに必要な用量を決定することができる。

【0386】

併用療法
本開示によれば、本明細書に記載の、抗体、抗原結合断片、ＣＡＲ、ＣＡＲを発現するベクター及び細胞、ならびに組成物を、がん治療のための他の療法と組み合わせて使用することができる。

【0387】

さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体は、対象への少なくとも１つの追加の薬剤の投与をさらに含む一連の治療に含まれ得る。種々の実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体と組み合わせて投与される追加の薬剤は、化学療法薬であり得る。

【0388】

いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体、その断片は、がん細胞に結合し、がん細胞に治療剤を送達し、ヒトＢＣＭＡを発現するがん細胞を殺傷するために、治療剤（例えば、化学療法剤及び放射性原子）にコンジュゲート（例えば、連結）することができる。いくつかの実施形態では、抗ＢＣＭＡ抗体は治療剤に連結される。いくつかの実施形態では、治療剤は、化学療法剤、サイトカイン、放射性原子、ｓｉＲＮＡ、または毒素である。いくつかの実施形態では、治療薬は化学療法薬である。いくつかの実施形態では、薬剤は放射性原子である。

【0389】

いくつかの実施形態では、方法は、ＢＣＭＡ関連障害の他の治療法と併せて実施することができる。例えば、組成物は、化学療法と同時に、その前に、またはその後に対象に投与することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、養子療法の方法と同時に、その前に、またはその後に対象に投与することができる。

【0390】

さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体と組み合わせて投与される追加の薬剤は、抗ＢＣＭＡ抗体と同時に、抗ＢＣＭＡ抗体と同じ日に、または抗ＢＣＭＡ抗体と同じ週に投与され得る。さまざまな実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体と組み合わせて投与される追加の薬剤は、抗ＢＣＭＡ抗体と共に単一製剤で投与され得る。特定の実施形態では、追加の薬剤は、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体の投与から時間的に離れた様式で、例えば、抗ＢＣＭＡ抗体の投与の１時間以上前または後に、１日以上前または後に、１週間以上前または後に、または１か月以上前または後に投与される。さまざまな実施形態では、１つ以上の追加の薬剤の投与頻度は、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体の投与頻度と同じ、同様、または異なり得る。

【0391】

併用療法に包含されるのは、本明細書に記載の２つの異なる抗体の投与を含む治療レジメン、及び／または複数の製剤及び／または投与経路による本明細書に記載の抗体の投与を含む治療レジメンである。

【0392】

いくつかの実施形態では、組成物は、１つ以上の追加の治療薬、例えば、対象におけるＢＣＭＡ関連障害（例えば、がんまたは自己免疫障害）を治療または予防するための追加の治療と共に製剤化することができる。対象におけるＢＣＭＡ関連障害を治療するための追加の薬剤は、治療される特定の障害に応じて変化するが、非限定的に、リツキシマブ、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン、オスファミド、カルボプラチン、エトポシド、デキサメタゾン、シタラビン、シスプラチン、シクロホスファミド、またはフルダラビンを含むことができる。

【0393】

本明細書に記載の組成物は、以前に、または現在投与されている治療を置き換えるかまたは増強することができる。例えば、本明細書に記載の組成物で治療すると、１つ以上の追加の活性剤の投与は、本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体の投与に続いて、停止または減少することができ、例えば、より低いレベルで、例えば、ＢＣＭＡ結合について交差競合する参照抗体のより低いレベルで投与される。いくつかの実施形態では、以前の治療の投与を維持することができる。いくつかの実施形態では、組成物のレベルが治療効果を提供するのに十分なレベルに達するまで、以前の治療が維持される。２つの治療法は組み合わせて投与することができる。

【0394】

特定の実施形態では、本発明の実施形態の組成物及び方法は、少なくとも１つの追加の療法と組み合わせた免疫細胞集団（ＮＫ細胞集団を含む）を含む。追加の療法は、放射線療法、外科手術（例えば、腫瘍切除術及び乳房切除術）、化学療法、遺伝子療法、ＤＮＡ療法、ウイルス療法、ＲＮＡ療法、免疫療法、骨髄移植、ナノ療法、モノクローナル抗体療法、ホルモン療法、腫瘍溶解性ウイルス、またはこれらの組み合わせであり得る。追加の療法は、補助療法または術前補助療法の形態であり得る。

【0395】

いくつかの実施形態では、追加の療法は、小分子酵素阻害剤または抗転移薬の投与である。いくつかの実施形態において、追加の療法は副作用制限剤（例えば、抗悪心剤などの治療の副作用の発生及び／または重篤度を軽減することを意図した剤）の投与である。いくつかの実施形態において、追加の療法は放射線療法である。いくつかの実施形態において、追加の治療は外科手術である。いくつかの実施形態において、追加の療法は放射線療法と外科手術の組み合わせである。いくつかの実施形態において、追加の療法はガンマ線照射である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、ＰＢＫ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路を標的とする療法、ＨＳＰ９０阻害剤、チューブリン阻害剤、アポトーシス阻害剤、及び／または化学予防剤である。追加の療法は、当該技術分野で公知の化学療法薬のうちの１つ以上であり得る。

【0396】

特定の実施形態では、本開示の本発明の細胞療法に加えて、個体は、外科手術、放射線、免疫療法（本開示の細胞療法以外）、ホルモン療法、遺伝子療法、化学療法などのうちの１つ以上を含む、がんに対する特定の追加の療法が提供されている、提供され得る、及び／または提供される。

【0397】

免疫細胞療法は、追加のがん療法に対して、その前、中、後、または種々の組み合わせで投与され得る。投与は、同時的から数分間、数日間、数週間に至る範囲の間隔で行われてもよい。免疫細胞療法が追加の治療薬と別個に患者に提供される実施形態では、それぞれの送達の間にかなりの期間が過ぎないようにして、２つの化合物が、患者に対する組み合わせた効果を有益に発揮することがまだできるようにすることが、一般的に確保されている。このような例では、抗体療法と抗がん療法を互いに対して約１２～２４時間または７２時間以内に、より具体的には互いに対して約６～１２時間以内に患者に提供し得ることが企図される。いくつかの状況において、治療のための期間を十分に延長することが望ましく、それぞれの投与の間に、数日（２、３、４、５、６、または７日）から数週間（１、２、３、４、５、６、７、または８週間）経過する。

【0398】

種々の組み合わせが使用され得る。例えば、以下で、免疫細胞療法は「Ａ」であり、抗がん療法は「Ｂ」である。
Ａ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ａ／Ｂ Ｂ／Ｂ／Ａ Ａ／Ａ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ａ Ａ／Ｂ／Ｂ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ｂ／Ｂ
Ｂ／Ｂ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ｂ／Ａ／Ｂ Ａ／Ａ／Ｂ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ａ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ｂ／Ａ／Ａ
Ｂ／Ａ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ａ／Ａ／Ｂ Ａ／Ａ／Ａ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ａ／Ａ Ａ／Ｂ／Ａ／Ａ Ａ／Ａ／Ｂ／Ａ

【0399】

本発明の実施形態の任意の化合物または細胞療法の患者への投与は、もしあるなら、薬剤の毒性を考慮して、そのような化合物の投与のための一般的なプロトコールに従うであろう。したがって、いくつかの実施形態では、併用療法に寄与する毒性をモニタリングするステップがある。

【0400】

Ａ．化学療法
本発明の実施形態に従って、多種多様な化学療法剤を使用することができる。「化学療法」という用語は、がんを治療するための薬物の使用を指す。「化学療法薬」は、がんの治療において投与される化合物または組成物を考慮するために使用される。これらの薬剤または薬物は、細胞内の活性の様式、例えば、それらが細胞周期に影響を及ぼすかどうかか、及びどの段階で細胞周期に影響を及ぼすか、によって分類される。代替的に、薬剤は、核酸合成に影響を及ぼすことによって、ＤＮＡを直接的に架橋する、ＤＮＡにインターカレートする、または染色体及び有糸分裂の異常を誘導するその能力に基づいて特徴付けられ得る。

【0401】

化学療法剤の例としては、チオテパ及びシクロホスファミドなどのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファンなどのアルキルスルホン酸塩；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパなどのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、及びトリメチロールメラミンを含むエチレンイミン及びメチルアメラミン；アセトゲニン（特に、ブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（アドゼレシン、カルゼレシン、及びビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ－２１８９及びＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エリューセロビン；パンクラチスタチン；サルコディクチン；スポンギスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、及びウラシルマスタードなどの窒素マスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチンなどのニトロウレア；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンγ１Ｉ及びカリケアマイシンω１Ｉ）；ダイネマイシンＡを含むダイネマイシン；クロドロネートなどのビスホスホネート；エスペラマイシン；ならびにネオカルチノスタチン発色団及び関連する色素タンパクエンジイン抗生物質発色団、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アウトラナイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、及びデオキシドキソルビシン）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラナイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、及びゾルビシンなどの抗生物質；メトトレキサート及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの代謝拮抗剤；デノプテリン、プテロプテリン、及びトリメトレキサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、及びチオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、及びフロクスウリジンなどのピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、及びテストラクトンなどのアンドロゲン；ミトタン及びトリロスタンなどの抗副腎剤；フロリン酸などの葉酸補給剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビスアントレン；エダトラキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エルホルミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシン及びアンサマイトシンなどのメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖複合体；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ－２トキシン、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、及びアンギジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；タキソイド、例えば、パクリタキセル及びドキセタキセルゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；シスプラチン、オキサリプラチン、及びカルボプラチンなどの白金配位錯体；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（例えば、ＣＰＴ－１１）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；カペシタビン；カルボプラチン、プロカルバジン、プリコマイシン、ゲムシタビエン、ナベルビン、ファルネシルタンパク質タンスフェラーゼ阻害剤、トランス白金、ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体が挙げられる。

【0402】

Ｂ．放射線療法
ＤＮＡに損傷を引き起こし、広範に使用されている他の因子は、γ線、Ｘ線、及び／または放射性同位体の腫瘍細胞への直接的な送達として知られているものを含む。マイクロ波、陽子線照射（米国特許第５，７６０，３９５号及び第４，８７０，２８７号）及びＵＶ照射などの他の形態のＤＮＡ損傷因子も考慮される。これらの因子のすべては、ＤＮＡ、ＤＮＡの前駆体、ＤＮＡの複製及び修復、ならびに、染色体の会合と維持に対し広範囲の損傷を与える可能性が最も高い。Ｘ線の線量範囲は、長期間（３～４週間）に対して５０～２００レントゲンの１日用量から２０００～６０００レントゲンの単回用量までの範囲までである。放射性同位体の線量範囲は、広範囲に変動し、同位体の半減期、放出された放射線の強さと型、及び新生物細胞による取り込みに依存する。

【0403】

Ｃ．免疫療法
当業者は、さらなる免疫療法が、実施形態の方法と組み合わせて（ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）、または組み合わせて（ｉｎ ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｏｎ）使用され得ることを理解する。がん治療の文脈では、免疫療法は、一般に、がん細胞を標的にして破壊させるために、免疫エフェクター細胞及び分子を使用することに依存する。リツキシマブ（リツキサン（登録商標））は、そのような例である。免疫エフェクターは、例えば、腫瘍細胞の表面上にあるいくつかのマーカーに特異的な抗体であり得る。抗体のみが治療のエフェクターとして作用し得る、または他の細胞を動員させて、実際に細胞を死滅させ得る。抗体はまた、薬物または毒素（化学療法剤、放射性核種、リシンＡ鎖、コレラ毒素、百日咳毒素など）に結合させて、標的化剤として作用し得る。代替的に、エフェクターは、腫瘍細胞標的と直接的または間接的に相互作用する表面分子を担持するリンパ球であり得る。種々のエフェクター細胞としては、細胞傷害性Ｔ細胞及びＮＫ細胞が挙げられる。

【0404】

抗体薬物コンジュゲートは、がん治療薬の開発に対するブレークスルーアプローチとして出現した。がんは、世界中で死の主要な原因の１つである。抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、細胞殺傷薬に共有結合しているモノクローナル抗体（ＭＡｂ）を含む。このアプローチは、それらの抗原標的に対するＭＡｂの高い特異性を非常に強力な細胞毒性薬物と組み合わせ、その結果、抗原の濃縮レベルを有する腫瘍細胞にペイロード（薬物）を送達する「武装された」ＭＡｂが得られる。薬物の標的化送達はまた、正常組織におけるその曝露を最小限にし、毒性の減少及び治療指数の改善をもたらす。ＦＤＡによる２種のＡＤＣ薬物、２０１１年のＡＤＣＥＴＲＩＳ（登録商標）（ブレンツキシマブベドチン）及び２０１３年のＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）（トラスツズマブエムタンシンまたはＴ－ＤＭ１）の承認により、このアプローチが確認された。現在、がん治療のための臨床試験の種々の段階において、３０を超えるＡＤＣ薬物候補が存在する（Ｌｅａｌ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。抗体工学及びリンカー－ペイロード最適化がより多く、より成熟するようになると、新しいＡＤＣの発見及び開発は、このアプローチ及び標的化ＭＡｂの生成に適した新しい標的の同定及び検証にますます依存する。ＡＤＣ標的に対する２つの基準は、腫瘍細胞における発現の上方制御／高レベル及び強固な内在化である。

【0405】

免疫療法の一態様では、腫瘍細胞は、標的化に対応する、すなわち他の細胞の大部分には存在しない多少のマーカーを保持している必要がある。多くの腫瘍マーカーが存在し、これらのいずれも、本発明の実施形態の文脈において、標的化に好適であり得る。一般的な腫瘍マーカーとしては、ＣＤ２０、癌胎児性抗原、チロシナーゼ（ｐ９７）、ｇｐ６８、ＴＡＧ－７２、ＨＭＦＧ、シアリルルイス抗原、ＭｕｃＡ、ＭｕｃＢ、ＰＬＡＰ、ラミニン受容体、ｅｒｂ Ｂ、及びｐ１５５が挙げられる。免疫療法の代替態様は、抗がん効果を免疫刺激効果と組み合わせることである。ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＧＭ－ＣＳＦ、γ－ＩＦＮなどのサイトカイン、ＭＩＰ－１、ＭＣＰ－１、ＩＬ－８などのケモカイン、及びＦＬＴ３リガンドなどの増殖因子を含む免疫刺激分子も存在する。

【0406】

現在調査中または使用中の免疫療法の例は、免疫アジュバント、例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、ジニトロクロロベンゼン、及び芳香族化合物（米国特許第５，８０１，００５号及び同第５，７３９，１６９号；Ｈｕｉ ａｎｄ Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，１９９８；Ｃｈｒｉｓｔｏｄｏｕｌｉｄｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９８）；サイトカイン療法、例えば、インターフェロンα、β、及びγ、ＩＬ－１、ＧＭ－ＣＳＦ、及びＴＮＦ（Ｂｕｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９９８；Ｄａｖｉｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９８；Ｈｅｌｌｓｔｒａｎｄ ｅｔ ａｌ．，１９９８）；遺伝子療法、例えば、ＴＮＦ、ＩＬ－１、ＩＬ－２、及びｐ５３（Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９８；Ａｕｓｔｉｎ－Ｗａｒｄ ａｎｄ Ｖｉｌｌａｓｅｃａ，１９９８；米国特許第５，８３０，８８０号及び同第５，８４６，９４５号）；ならびにモノクローナル抗体、例えば、抗ＣＤ２０、抗ガングリオシドＧＭ２、及び抗ｐ１８５（Ｈｏｌｌａｎｄｅｒ，２０１２；Ｈａｎｉｂｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，１９９８；米国第５，８２４，３１１号）である。１つ以上の抗がん療法が、本明細書に記載される抗体療法と共に使用され得ることが企図される。

【0407】

いくつかの実施形態では、免疫療法は、免疫チェックポイント阻害剤であり得る。免疫チェックポイントは、シグナル（例えば、共刺激分子）を上げるか、またはシグナルを下げる。免疫チェックポイント遮断によって標的化され得る阻害性免疫チェックポイントとしては、アデノシンＡ２Ａ受容体（Ａ２ＡＲ）、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６としても知られる）、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４、ＣＤ１５２としても知られる）、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、キラー細胞免疫グロブリン（ＫＩＲ）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、プログラム死１（ＰＤ－１）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメイン３（ＴＩＭ－３）、ならびにＴ細胞活性化のＶドメインＩｇ抑制因子（ＶＩＳＴＡ）が挙げられる。特に、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１軸及び／またはＣＴＬＡ－４を標的とする。

【0408】

免疫チェックポイント阻害剤は、小分子、リガンドまたは受容体の組換え型などの薬物であってよく、または特に、ヒト抗体などの抗体であってよい（例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１５０１６７１８号；Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ，１２（４）：２５２－６４，２０１２；両方とも参照により本明細書に組み込まれる）。免疫チェックポイントタンパク質またはその類似体の公知の阻害剤を使用することができ、特に、キメラ化、ヒト化、またはヒト型の抗体を使用することができる。当業者が知るように、代替名及び／または等価名が、本開示に記載の特定の抗体に使用され得る。そのような代替名及び／または等価名は、本開示の文脈において交換可能である。例えば、ランブロリズマブも代替名及び等価名ＭＫ－３４７５及びペンブロリズマブの下で公知であることが知られている。

【0409】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１の、そのリガンド結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的な態様では、ＰＤ－１リガンド結合パートナーは、ＰＤＬ１及び／またはＰＤＬ２である。別の実施形態では、ＰＤＬ１結合アンタゴニストは、ＰＤＬ１のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的な一態様では、ＰＤＬ１結合パートナーは、ＰＤ－１及び／またはＢ７－１である。別の実施形態では、ＰＤＬ２結合アンタゴニストは、ＰＤＬ２のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的な一態様では、ＰＤＬ２結合パートナーは、ＰＤ－１である。アンタゴニストは、抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、またはオリゴペプチドであり得る。例示的な抗体は、米国特許第８７３５５５３号、同第８３５４５０９号、及び同第８００８４４９号に記載されており、すべて参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に提供される方法で使用するための他のＰＤ－１軸アンタゴニストは、米国特許出願第ＵＳ２０１４０２９４８９８号、同第ＵＳ２０１４０２２０２１号、及び同第ＵＳ２０１１０００８３６９号に記載されるように当該技術分野で公知であり、すべて参照により本明細書に組み込まれる。

【0410】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ－１抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、及びＣＴ－０１１からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、イムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合したＰＤＬ１またはＰＤＬ２の細胞外またはＰＤ－１結合部分を含むイムノアドヘシン）である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＡＭＰ－２２４である。ＭＤＸ－１１０６－０４、ＭＤＸ－１１０６、ＯＮＯ－４５３８、ＢＭＳ－９３６５５８、及びオプジーボ（登録商標）としても知られるニボルマブは、ＷＯ２００６／１２１１６８に記載されている抗ＰＤ－１抗体である。ＭＫ－３４７５、Ｍｅｒｃｋ ３４７５、ランブロリズマブ、キイトルーダ（登録商標）、及びＳＣＨ－９００４７５としても知られるペムブロリズマブは、ＷＯ２００９／１１４３３５に記載の抗ＰＤ－１抗体である。ｈＢＡＴまたはｈＢＡＴ－１としても知られるＣＴ－０１１は、ＷＯ２００９／１０１６１１に記載される抗ＰＤ－１抗体である。Ｂ７－ＤＣＩｇとしても知られるＡＭＰ－２２４は、ＷＯ２０１０／０２７８２７及びＷＯ２０１１／０６６３４２に記載のＰＤＬ２－Ｆｃ融合可溶性受容体である。

【0411】

本明細書に提供される方法において標的化され得る別の免疫チェックポイントは、ＣＤ１５２としても知られる細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）である。ヒトＣＴＬＡ－４の完全なｃＤＮＡ配列は、Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｌ１５００６を有する。ＣＴＬＡ－４は、Ｔ細胞の表面上に見出され、抗原提示細胞の表面上のＣＤ８０またはＣＤ８６に結合した場合、「オフ」スイッチとして作用する。ＣＴＬＡ４は、ヘルパーＴ細胞の表面上に発現され、Ｔ細胞に阻害性シグナルを伝達する免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである。ＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞共刺激タンパク質ＣＤ２８に類似し、両方の分子は、抗原提示細胞上のＣＤ８０及びＣＤ８６（それぞれＢ７－１及びＢ７－２とも呼ばれる）に結合する。ＣＴＬＡ４はＴ細胞に阻害性シグナルを伝達し、ＣＤ２８は刺激性シグナルを伝達する。細胞内ＣＴＬＡ４も制御性Ｔ細胞に見られ、その機能に重要であり得る。Ｔ細胞受容体及びＣＤ２８を介したＴ細胞活性化は、Ｂ７分子に対する阻害性受容体であるＣＴＬＡ－４の発現の増加をもたらす。

【0412】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ－４抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体）、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、またはオリゴペプチドである。

【0413】

本発明での方法における使用に適した抗ヒト－ＣＴＬＡ－４抗体（またはそれに由来するＶＨ及び／またはＶＬドメイン）は、当該技術分野で周知の方法を使用して生成され得る。代替的に、当該技術分野で認識されている抗ＣＴＬＡ－４抗体を使用することができる。例えば、ＵＳ ８，１１９，１２９、ＷＯ ０１／１４４２４、ＷＯ ９８／４２７５２；ＷＯ ００／３７５０４（ＣＰ６７５，２０６、トレメリムマブ、以前はチシリムマブとしても知られている）、米国特許第６，２０７，１５６号；Ｈｕｒｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９５（１７）：１００６７－１００７１；Ｃａｍａｃｈｏ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２２（１４５）：Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．２５０５（ａｎｔｉｂｏｄｙ ＣＰ－６７５２０６）；及びＭｏｋｙｒ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５８：５３０１－５３０４に開示される抗ＣＴＬＡ－４抗体は、本明細書に開示された方法において使用することができる。前述の刊行物のそれぞれの教示は、参照により本明細書に組み込まれる。ＣＴＬＡ－４への結合に関するこれらの当該技術分野で認識される抗体のいずれかと競合する抗体もまた、使用され得る。例えば、ヒト化ＣＴＬＡ－４抗体は、国際特許出願第ＷＯ２００１０１４４２４号、同第ＷＯ２００００３７５０４号、及び米国特許出願第８，０１７，１１４号に記載され、そのすべては参照により本明細書に組み込まれる。

【0414】

例示的な抗ＣＴＬＡ－４抗体は、イピリムマブ（１０Ｄ１、ＭＤＸ－０１０、ＭＤＸ－１０１、及びヤーボイ（登録商標）としても知られる）またはその抗原結合断片及びバリアント（例えば、ＷＯ ０１／１４４２４を参照されたい）である。他の実施形態では、抗体は、イピリムマブの重鎖及び軽鎖のＣＤＲまたはＶＲを含む。したがって、一実施形態では、抗体は、イピリムマブのＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびにイピリムマブのＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施形態において、抗体は、上記の抗体と同じＣＴＬＡ－４上のエピトープとの結合及び／またはそれへの結合について競合する。別の実施形態では、抗体は、上記の抗体に対して少なくとも約９０％の可変領域アミノ酸配列同一性（例えば、イピリムマブに対して少なくとも約９０％、９５％、または９９％の可変領域同一性）を有する。

【0415】

ＣＴＬＡ－４を調節するための他の分子は、すべて参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５８４４９０５号、同第５８８５７９６号、及び国際特許出願第ＷＯ１９９５００１９９４号及び同第ＷＯ１９９８０４２７５２号に記載されるようなＣＴＬＡ－４リガンド及び受容体、ならびに参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８３２９８６７号に記載されるようなイムノアドヘシンを含む。

【0416】

Ｄ．外科手術
がんを有する個人の約６０％は、予防、診断、または病期分類、治癒的及び緩和的な手術を含むいくつかの型の手術を経験する。治癒手術には、がん性組織の全部または一部が物理的に除去、切除、及び／または破壊される切除が含まれ、本実施形態の治療、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、遺伝子療法、免疫療法、及び／または代替療法などの他の療法と併用されてもよい。腫瘍切除は、腫瘍の少なくとも一部の物理的な除去を指す。腫瘍切除に加えて、手術による治療は、レーザー手術、凍結手術、電気手術、及び顕微鏡的に制御された手術（モース手術）を含む。

【0417】

がん性細胞、組織、または腫瘍の一部または全部の切除の際、生体内に空洞を形成することができる。治療は、灌流、直接注入、またはさらなる抗がん治療の領域への局所適用によって達成し得る。そのような治療は、例えば、１、２、３、４、５、６、もしくは７日ごと、または１、２、３、４、及び５週間ごと、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、もしくは１２ヶ月ごとに繰り返し得る。同様に、これらの治療は変動する用量であり得る。

【0418】

Ｅ．組換え遺伝子技術
本開示に従って、当業者の技能範囲内の従来の分子生物学、微生物学、及び組換えＤＮＡ技術を使用することができる。そのような技術は文献（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ ＆ Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩ（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ ｅｄ．１９８５）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ ｅｄ．１９８４）；Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ ｅｄｓ．（１９８５））；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４））；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．（１９８６））；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，（１９８６））；Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（１９９４）を参照されたい）に記載されている。

【0419】

本明細書に記載の抗ＢＣＭＡ抗体などのポリペプチドをコードする核酸などの遺伝子の組換え発現は、ポリペプチドをコードする核酸を含む発現ベクターの構築を含み得る。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ核酸配列は、哺乳動物細胞発現のためのコドン最適化配列であり得る。ポリヌクレオチドが得られると、ポリペプチドの産生のためのベクターは、当該技術分野で知られている技術を使用する組換えＤＮＡ技術によって産生することができる。既知の方法を使用して、ポリペプチドコード配列と適切な転写及び翻訳制御シグナルとを含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法としては、例えば、インビトロ組換えＤＮＡ技術、合成技術、及びインビボ遺伝子組換えが挙げられる。

【0420】

発現ベクターを従来の技術によって宿主細胞に導入し、次いでトランスフェクトした細胞を従来の技術によって培養して、ポリペプチドを産生する。本明細書において言及されるすべての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、参照によりその全体が組み込まれる。さらに、物質、方法、及び例は、例示にすぎず、限定を意図しない。別途定義されない限り、本明細書において使用される技術用語及び科学用語は、本発明の所属する技術分野における当業者によって一般に理解されるものと同一の意味を有する。本明細書において記載されているものと類似または同等の方法及び物質を本発明の実施または試験において使用することができるが、適切な方法及び物質を本明細書に記載する。

【0421】

Ｆ．他の薬剤
治療の治療効果を改善するために、他の薬剤を本発明の実施形態の特定の態様と組み合わせて使用し得ることが企図される。これらのさらなる剤は、細胞表面受容体及びギャップジャンクションの上方制御に影響を及ぼす剤、細胞分裂停止剤及び分化剤、細胞接着の阻害剤、過剰増殖細胞のアポトーシス誘導因子に対する感受性を増加する剤、または他の生物学的製剤を含む。ギャップジャンクションの数を上昇させることによって細胞内シグナル伝達を増加することは、隣接する過剰増殖細胞集団に対する抗過剰増殖効果を増大させる。他の実施形態において、細胞分裂停止剤または分化剤は、治療の抗過剰増殖効果を向上するために、本発明の実施形態の特定の態様と組み合わせて使用できる。細胞接着の阻害剤は、本発明の実施形態の有効性を向上するために企図される。細胞接着の阻害剤の例は、接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤及びロバスタチンである。抗体ｃ２２５等の過剰増殖細胞のアポトーシスに対する感受性を向上する他の剤を、治療の有効性を向上するために、本発明の実施形態の特定の態様と組み合わせて使用できることもさらに企図される。

【0422】

本開示のキット
本明細書に記載の組成物のいずれも、キットに含まれ得る。非限定的な例では、細胞、細胞を産生するための試薬、ベクター、及びベクター及び／またはその成分を産生するための試薬は、キットに含まれ得る。特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、キットに含まれてもよく、それらは、（ａ）ＣＤ２８ヒンジ、任意選択でのサイトカイン、または任意選択での自殺遺伝子を含むＢＣＭＡ－ＣＡＲを発現してもしなくてもよい。そのようなキットは、細胞の操作のための１つ以上の試薬を有しても有しなくてもよい。そのような試薬は、例えば、小分子、タンパク質、核酸、抗体、緩衝液、プライマー、ヌクレオチド、塩、及び／またはそれらの組み合わせを含む。１つ以上のＣＡＲ、自殺遺伝子産物、及び／またはサイトカインをコードするヌクレオチドをキットに含めてもよい。サイトカインまたは抗体などのタンパク質（モノクローナル抗体を含む）は、キットに含まれ得る。操作されたＣＡＲ受容体の成分をコードするヌクレオチドは、それを生成するための試薬を含むキットに含まれ得る。

【実施例】

【0423】

以下の実施例は、本発明の特定の実施形態を実証するために含まれる。以下の実施例に開示される技術は、本発明の実施において十分に機能することが本発明者によって発見された技術を表し、したがってその実施のための特定の様式を構成すると考えることができることを当業者は理解されたい。しかしながら、当業者は、本開示に照らして、開示された特定の実施形態に多くの変更を加えることができ、それでも本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく同様または類似の結果を得ることができる。

【0424】

実施例１：抗ＢＣＭＡモノクローナル抗体の生成及び結合
本実施例は、抗ＢＣＭＡ抗体の特性評価を示す。マウス（ヒトトランスジェニック重鎖遺伝子座及びκ遺伝子座を有するＴｒｉａｎｎｉマウス、８～１０週齢）を、文献に記載の方法に従って免疫化した。一次免疫化のために、動物に、５μｇの組換えＢＣＭＡ－マウスＦｃを、等量のＧｅｒｂＵＭＭを含むエマルジョンとしてホック注射した。マウスを、３～４日毎に同じ方法で免疫化し、合計１０回の追加免疫を行った。高い抗原特異的抗体力価を有する動物に、ＲＮＡ抽出またはハイブリドーマ融合のためのさらなる処理のための脾臓及びリンパ節採取の４日前に、同じ免疫原による融合前追加免疫を与えた。

【0425】

マウス由来の脾臓を単離し、１０ｍｌのＲＰＭＩ、１０％ＦＢＳ（０．２ｕｍ濾過）を含む５０ｍｌチューブに移し、リンパ球を単離するために物理的に分離した。リンパ球を、１２００ｒｐｍで１０分間遠心分離することによって回収した。リンパ球をＥａｓｙＳｅｐ緩衝液（２ｍｌ；０．２ｕｍ濾過）に懸濁した。

【0426】

免疫化されたｓｃＦｖファージディスプレイライブラリの生成及び選択によって、抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖを同定した。最初に、全ＲＮＡを、ＢＣＭＡ発現ＣＨＯ細胞で予め免疫化した１匹の個々のマウス由来の脾細胞の単細胞懸濁液から精製した。次いで、マウスから、マウス抗体遺伝子からの可変領域を増幅するためのテンプレートとして全ＲＮＡを使用して、ランダムにプライミングしたｃＤＮＡによってｓｃＦｖライブラリを作製した。重鎖及びκ鎖アンプリコンを組み合わせ、ファージミドベクターにクローニングした。ＢＣＭＡ特異的ｓｃＦｖファージクローンを同定するために、組換えＢＣＭＡタンパク質（ヒトＢＣＭＡ－Ｆｃ、ヒトＢＣＭＡ－６Ｈｉｓ）及び／またはカニクイザルＢＣＭＡを発現する細胞に対して３回の選択を行った。次いで、選択されたｓｃＦｖクローンのペリプラズム抽出物を、ＥＬＩＳＡまたはフローサイトメトリーによってスクリーニングした。配列決定のためにクローンを選択し、ペリプラズム抽出物を用いてＯｃｔｅｔにより結合を確認した。全体で、ファージディスプレイを通して１９個のクローンを同定した。１９個のクローンに加えて、ＢＣＭＡ抗体の他の４２個の新たに同定されたクローンを抗体選択に適用した。表２は、ヒトＢＣＭＡ ｓｃＦｖのヒトＢＣＭＡに対する結合親和性を示す。

【0427】

Ｏｃｔｅｔ分析
Ｏｃｔｅｔ結合分析を行って、ＢＣＭＡとの結合の動態を評価した。

【0428】

結合の特徴付けのために、抗ＢＣＭＡクローンのパネルを有するヒトＢＣＭＡタンパク質を用いてＯｃｔｅｔ結合アッセイを実施した。ヒトＢＣＭＡを適切にコーティングされたＯｃｔｅｔセンサーチップ上に捕捉し、次いで結合のために抗ＢＣＭＡクローンを含むウェル内に配置した。センサーチップを解離ウェルに入れた後、相互作用の応答をそれぞれの抗ＢＣＭＡクローンと対応するヒトＢＣＭＡタンパク質について計算した。

【0429】

ＦＡＣＳ分析
抗ＢＣＭＡクローンを、ＢＣＭＡ過剰発現ＣＨＯ細胞を用いてＦＡＣＳにより細胞上結合について試験した。細胞を抗ＢＣＭＡクローンと共にインキュベートし、続いて抗ＢＣＭＡクローンに結合できる二次抗体と共にインキュベートした。これらの試料を適切に洗浄し、Ａｔｔｕｎｅ ＮｘＴ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で評価した。ＦｌｏｗＪｏ中でＦＡＣＳ分析を行った。

【0430】

表３は、例示的な抗ＢＣＭＡ抗体とヒトＢＣＭＡに対する、例示的な抗ＢＣＭＡクローンのＯｃｔｅｔ及びＦＡＣＳ分析を示す。例示的なＦａｂ（ＩｇＧ）は、高いｋ_ｏｎ速度及び低いｋ_ｏｆｆ速度を有し、Ｋ_Ｄ値は低いピコモル範囲であることが観察された。

【表3】

【表4】

【0431】

実施例２：キメラ抗原受容体の構築物
本実施例は、腫瘍量を低減するための例示的なＣＡＲ構築物を示す。図１は、ＢＣＭＡ結合剤領域含むＣＡＲ構築物を示す。

【0432】

ＢＣＭＡ ＣＡＲは、抗ＢＣＭＡ特異的結合因子、ＩｇＧ１ヒンジまたはＣＤ２８ヒンジ、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１５サイトカイン（例えば、可溶性ＩＬ－１５）を含む。そのようなＣＡＲは、配列番号４５、配列番号４７、または配列番号４９のアミノ酸を含み得る。

【0433】

実施例３：ＢＣＭＡ ＩｇＧヒンジ及びＢＣＭＡ ＣＤ２８ヒンジＣＡＲ構築物のインビトロ有効性
本実施例は、ＣＢ－ＮＫ細胞におけるＩｇＧヒンジドメインと比較した、ＣＤ２８ヒンジドメインを配列番号４５として含むＢＣＭＡ ＣＡＲの有効性を示す。

【0434】

ＣＢ－ＮＫ細胞の細胞傷害性を、標準的な４時間の５１クロム（５１Ｃｒ）放出アッセイで評価した。簡潔に述べると、標的細胞に５１Ｃｒを負荷し、洗浄し、異なるＢＣＭＡ特異的ｓｃＦｖ結合因子を有する異なるＣＡＲ構築物を形質導入したＣＢ－ＮＫ細胞と４時間共培養し、その後、上清を回収し、５１Ｃｒレベルをガンマカウンターを用いて測定した。

【0435】

ＢＣＭＡ結合因子を、ＩｇＧ１ヒンジまたはＣＤ２８ヒンジのいずれかを含むＣＡＲ骨格中で試験した。次いで、これらのＣＡＲをＣＢ－ＮＫに形質導入し、インビトロ殺傷効果をクロム放出殺傷アッセイで試験した。

【0436】

図２に見られるように、すべての構築物は、形質導入されていないＣＢ－ＮＫよりも高い殺傷を示し、特に低いＥ：Ｔ比で、ＣＤ２８ヒンジを含む構築物によって示される殺傷がわずかに増強された。

【0437】

実施例４：インビボでの腫瘍量の低減におけるＣＤ２８ヒンジドメインとＩｇＧ１ヒンジドメインの比較。
本実施例は、マウスにおける腫瘍量を低減するための、ＣＤ２８ヒンジを有するＢＣＭＡ－ＣＡＲ構築物の使用の利点を例示する。

【0438】

ＢＣＭＡＩｇ１、ＢＣＭＡＩｇ２、ＢＣＭＡ２８－１、またはＢＣＭＡ２８－２を含む１０百万個のＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞（約７０％ＣＡＲ＋ｖｅ）をこの実験に使用した。１０～１２週齢の雌ＮＳＧマウスを、腫瘍接種の２４時間前に１５０ｃＧｙで全身に照射した。ＭＭ．１Ｓ－ｆｆｌｕｃ－ＭＤＡ細胞を、０．５×１０＾６／動物での細胞の静脈内接種のために、２．５×１０^６細胞／ｍｌの濃度でＰＢＳ懸濁液中で調製した。生物発光画像を、投与の１日前、腫瘍接種の６日後に撮影し、動物を、１群あたり４匹または５匹の動物の群への全流束に基づいて無作為化した。腫瘍接種の０、１、または９日後に動物に投与した。適切な濃度のＣＡＲ ＮＫ細胞をＰＢＳに再懸濁し、ＣＡＲ ＮＫ細胞の生存度を維持しながら動物への適時な注入を確実にするために、小さなバッチで氷上で飼育施設に移した。腫瘍の進行をモニターするために、Ｘｅｎｏｇｅｎ ＩＶＩＳで生物発光画像を毎週行った。体重を週に３回測定し、臨床観察と共に、毒性の任意の徴候をモニターした。マイクロサンプリング（血液の顎下採取を介して）を、ｄｄＰＣＲまたはフローサイトメトリー分析のいずれかによって、インビボでのＣＡＲ ＮＫ拡大を定量するための細胞動態分析のために週１回実施した。人道的評価項目または研究評価項目において、目的の研究からの動物の剖検を行って、病理学的評価のための種々の組織を得た。

【0439】

ｑＰＣＲ ＣＫの場合、マウス全血試料（５０μＬ）からのゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）を抽出し、ＲＮアーゼＡの存在下でＭａｇＭＡＸ（商標）ＤＮＡ Ｍｕｌｔｉ－Ｓａｍｐｌｅ Ｕｌｔｒａ ２．０ Ｋｉｔで精製した。精製されたｇＤＮＡは、次いで、ＣＡＲ構築物のコピー数及び参照ａ－アクチン１（ＡＣＴＡ１）遺伝子（ヒトとマウスのゲノムの両方における単一コピー遺伝子）を同時に決定するように設計された最適化されたデジタル液滴ＰＣＲ（ｄｄＰＣＲ）に基づく二重鎖アッセイ法を用いて分析された。腫瘍の進行をモニターし、７日の間隔で画像化した。図３は、ＣＤ２８ヒンジドメインを有するＢＣＭＡ ＣＡＲと比較した、ＩｇＧヒンジを有するＢＣＭＡ－ＣＡＲを形質導入した臍帯血由来ＮＫ細胞による処理後のマウスにおける腫瘍の増殖を、未処理のマウス（腫瘍単独）及び形質導入していないＮＫ細胞を用いて処理したマウス（ＮＴ ＮＫ）の増殖と比較して表す。

【0440】

ＢＣＭＡ－ＣＤ２８を受けたマウスは、腫瘍単独またはＮＴ ＮＫと比較した場合、より低い腫瘍量を有することが観察された。ＢＣＭＡ ＣＤ２８を受けたマウスは、非腫瘍量関連死まで死亡する前の最初の２週間以内に、ＢＣＭＡ ＩｇＧと比較して優れた腫瘍制御を有した。肺、肝臓、及び脾臓をリンパ球浸潤について調べた。図８は、正常マウスの肺をＢＣＭＡ２８－２ ＣＡＲ－ＮＫ細胞で処理したマウスの肺と比較する例示的な組織病理学的スライドを示す。すべての組織を、１０％緩衝ホルマリン中で、浸漬及び肺の気管点滴注入によって固定した。完全な固定の際に（２４～４８時間）、器官を切り取り、パラフィン包埋のために処理した。パラフィンブロックを４～６ミクロンで薄切し、組織切片をスライドガラスに載せ、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色し、カバースリップした。

【0441】

体重の変動を図１２に要約する。

【0442】

病理学的評価は、委員会認可の（ＥＣＶＰ）獣医学者によって行った。腫瘍性病変を、検査した器官におけるそれらの存在に従ってスコア化した。非腫瘍性病変を、その重症度及び分布に基づいてスコア付けした。組織病理学的所見は、Ｐｒｉｓｔｉｍａ（登録商標）Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｓｙｓｔｅｍで取得した。

【0443】

図８に見られるように、肺、肝臓、及び脾臓へのリンパ球の浸潤が観察され、非腫瘍量関連死の原因であると考えられる。しかしながら、図４に見られるように、百万個及び３百万個の全ＮＫ細胞への用量減少は、非腫瘍量関連死を有意に改善し、生存率を増強した。

【0444】

実施例５：ＭＭ１ｓ－腫瘍マウスにおける共投与ＢＣＭＡ－ＣＡＲの抗腫瘍活性の比較
本実施例は、例示的な共投与ＢＣＭＡ－ＣＡＲ ＮＫ細胞の抗腫瘍活性を比較した。

【0445】

マウスにおいて、配列番号１９または２０を含む百万個のＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞（約７０％ＣＡＲ＋ｖｅ）をＭＭ１ｓ腫瘍と共投与した。腫瘍の進行をモニターし、６～７日の間隔で画像化した。図５は、ＢＣＭＡ２８－１またはＢＣＭＡ２８－２を含む１ＭのＢＣＭＡ－ＮＫ細胞で処理したマウスの生存の絵図を示す。ＢＣＭＡ２８－１を含むＣＡＲ－ＮＫ細胞を共投与したマウスと比較した場合、ＢＣＭＡ２８－２を含むＢＣＭＡ－ＣＡＲを投与したマウスは、腫瘍関連死に対して７７日目に５０％を超えるマウスが生存して最も良好に機能したことが観察された。

【0446】

実施例６：ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＮＫ及びＢＣＭＡ－ＣＡＲ－Ｔの遅延投与レジメン
本実施例は、ＢＣＭＡ２８－１が試験した他のＢＣＭＡ－ＣＡＲと比較して最も良好に機能することを実証したが、すべてのＣＡＲ構築物が強い抗腫瘍活性を提供した。

【0447】

ＣＡＲ－Ｔ細胞産生：
ＣＡＲ－Ｔの産生のために、ヒト白血球アフェレーシス製品（ｌｅｕｋｏｐａｋ）をＳｔｅｍ ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから購入した。Ｆｉｃｏｌｌ密度勾配を用いて新鮮なｌｅｕｋｏｐａｋからＰＢＭＣを単離した。Ｓｔｅｍｃｅｌｌ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製のＥａｓｙＳｅｐ Ｈｕｍａｎ Ｔ ｃｅｌｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔを用いてＴ細胞を精製し、次いでＴ細胞ＴｒａｎｓＡｃｔビーズ及びＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ製の研究等級ＩＬ－２を用いて活性化／拡大した。Ｔ細胞活性化の２日目に、細胞をＶＳＶＧウイルスでスピノキュレーションにより形質導入し、次いで７日目にインビトロアッセイに使用した。

【0448】

ＣＡＲ－ＮＫ細胞産生：
ＣＡＲ－ＮＫ産生のために、研究のための臍帯血（ＣＢ）単位をＭＤ Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ Ｃｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｂａｎｋから得た。Ｆｉｃｏｌｌ密度勾配遠心分離により、凍結ＣＢ単位からＣＢ単核細胞を単離した。臍帯血由来ＮＫ細胞（ＣＢ－ＮＫ細胞）のエクスビボ拡大は、２日毎にＩＬ－２を供給することに加えて、０日目にｕＡＰＣ刺激を使用した。６日目に、細胞をＲＤ１１４ウイルスでスピノキュレーションにより形質導入した。細胞を、８または９日目に第２ラウンドのｕＡＰＣ添加で刺激し、１５日目にインビボまたはインビトロ試験に使用するまで２日毎にＩＬ－２を供給した。

【0449】

ＢＣＭＡ２８－２を含む百万個または３百万個のＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞（約７０％ＣＡＲ＋ｖｅ）を、ＭＭ１ｓ腫瘍細胞接種の１日後にマウスＩＶに投与した（「１日遅延投与」）。

【0450】

腫瘍の進行をモニターし、７日の間隔で画像化した。図６は、非形質導入ＮＫ細胞またはＣＤ２８ヒンジドメインを有するＢＣＭＡ－ＣＡＲを形質導入したＮＫ細胞で処理したマウスにおける腫瘍の増殖を、１日遅延投与レジメンにおける日数の関数として表す。図７は、ＢＣＭＡ２８－２を発現するＮＫ細胞の１日遅延投与のカプランマイヤー生存曲線を示す。同様の実験を、ＢＣＭＡ２８－２ ＣＡＲを発現するＮＫ細胞を９日遅延投与して繰り返した。ＢＣＭＡ２８－２ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、腫瘍のみまたは非トランスフェクトＮＫ細胞と比較して延長された生存を生じることが観察された。

【0451】

共投与から遅延投与条件（１日遅延投与及び９日遅延投与）への切り替えが、ＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ治療の陽性抗腫瘍影響を示し続けたことが観察された。

【0452】

実施例７：ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＮＫ細胞におけるＩＬ－１５の分泌
本実施例は、１０００個の細胞あたりのＣＡＲのコピー数及びＩＬ－１５の分泌をモニタリングすることによって測定した場合、例示的なＢＣＭＡ－ＣＡＲ－ＩＬ－１５構築物を形質導入したＮＫ細胞がインビボで存続したことを示す。

【0453】

ＮＳＧマウス血漿サンプル中のヒトＩＬ－１５の生体分析を、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ（登録商標））プラットフォーム及びＵ－ＰＬＥＸヒトＩＬ１５アッセイキット（カタログ番号Ｋ１５１ＵＲＫ／（ＢＲＳ ２０－７３５）、Ｖｅｎｄｏｒ ＭＳＤ）上の電気化学発光イムノアッセイを用いて行った。Ｕ－ＰＬＥＸ（登録商標）アッセイでは、ビオチン化捕捉抗体を最初にＵ－ＰＬＥＸ（登録商標）プレート表面上のストレプトアビジンに結合させる。キャリブレーター、対照、及び試料をプレートに添加し、室温で振盪しながらインキュベートする。キャリブレーター、対照、及びサンプル中のヒトＩＬ－１５は、次いで、捕捉抗体に結合した。洗浄後、電気化学発光標識（ＭＳＤ ＧＯＬＤ ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ）と結合した検出抗体を含む溶液をプレートに添加し、次いで別のインキュベーション期間を続けた。検出抗体とのインキュベーション後、プレートを洗浄し、２×読み取り緩衝液をウェルに添加した。プレートをＭＳＤ Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ Ｓ６００で直ちに読み取った。図９に見られるように、配列番号２０のＢＣＭＡ－ＣＡＲを発現するＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の強い用量依存的拡大及びＩＬ－１５産生の増加が、遅延投与条件において観察された。

【0454】

実施例８：とりわけＴ細胞の環境において腫瘍細胞殺傷を改善するためのＢＣＭＡ ＣＡＲ構築物の使用
本実施例は、腫瘍細胞殺傷活性におけるＢＣＭＡ ＣＡＲ構築物（例えば、ＢＣＭＡＩｇ１、ＢＣＭＡＩｇ２、ＢＣＭＡ２８－１、ＢＣＭＡ２８－２）の使用を実証した。

【0455】

Ｔ細胞環境における細胞傷害性を、ＰｒｏｍｅｇａのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏｗ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙを用いて、製造業者のプロトコールに従って評価した。アポトーシス及びミトコンドリア損傷の分析のために、ＭＭ．１Ｓ－ｆｆｌｕｃ－ＭＤＡ標的細胞をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製のＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒ Ｄｅｅｐ Ｒｅｄ色素で標識し、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ製のＭｕｌｔｉＣｙｔ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ Ｋｉｔを使用して、製造業者のプロトコールに従ってカスパーゼ陽性及びミトコンドリア損傷を測定した。簡潔に述べると、カスパーゼ３及びカスパーゼ７の活性化は、切断の際に蛍光を発するＮｕｃＶｉｅｗ ４８８ Ｃａｓｐａｓｅ－３／７基質の使用によって検出される。ミトコンドリア膜電位は、ミトコンドリア脱分極の際、活性膜電位が細胞質中に漏れ、細胞が蛍光の減少を示す、無傷のミトコンドリアの管腔内の蛍光小分子の隔離によって決定された。Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔｅ製のｉＱｕｅフローサイトメーターを用いて、フローサイトメトリー読み出しを得た。

【0456】

ＢＣＭＡ ＣＡＲ構築物（例えば、ＢＣＭＡＩｇ１、ＢＣＭＡＩｇ２、ＢＣＭＡ２８－１、ＢＣＭＡ２８－２）を、ＢＣＭＡ陽性細胞株ＭＭ．１Ｓ－ｆｆｌｕｃ－ＭＤＡに対して、ヒト初代Ｔ細胞において同じＣＡＲ骨格で試験した。

【0457】

ＢＣＭＡ ＣＡＲ構築物のすべては、ＣＤ１９ ＣＡＲ発現Ｔ細胞（陰性対照）の殺傷を上回る殺傷を示した。さらに、ＣＤ２８ヒンジを利用する構築物は、ＩｇＧ１ヒンジを含むＣＡＲ骨格中の同じ結合因子と比較した場合、細胞傷害性、アポトーシス、及びミトコンドリア損傷のレベルの増強を示した。３つの異なるアッセイ読み取りに基づく腫瘍細胞の特異的殺傷は、図１０（Ａ～Ｃ）に見られる。

【0458】

実施例９：トランスフェクトされたＣＡＲ－ＮＫ細胞におけるアポトーシスの分析
この実験は、可溶性ＢＣＭＡの存在下または非存在下でＢＣＭＡ２８－１またはＢＣＭＡ２８－２を形質導入したＣＡＲ－ＮＫにおけるアポトーシスを分析するように設計された。

【0459】

アポトーシスの分析のために、ＭＭ．１Ｓ－ｆｆｌｕｃ－ＭＤＡ標的細胞をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製のＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒ Ｄｅｅｐ Ｒｅｄ色素で標識し、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ製のＭｕｌｔｉＣｙｔ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ Ｋｉｔを使用して、製造業者のプロトコールに従ってカスパーゼ陽性を測定した。エフェクター細胞を、ＡＣＲＯ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから入手した８００ｎｇ／ｍＬの可溶性組換えＢＣＭＡの存在下または非存在下で標的細胞と共培養した。簡潔に述べると、カスパーゼ３及びカスパーゼ７の活性化は、切断の際に蛍光を発するＮｕｃＶｉｅｗ ４８８ Ｃａｓｐａｓｅ－３／７基質の使用によって検出される。Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔｅ製のｉＱｕｅフローサイトメーターを用いて、フローサイトメトリー読み出しを得た。

【0460】

図１１に見られるように、ＣＡＲ－ＮＫは、８００ｎｇ／ｍＬの可溶性ＢＣＭＡの存在下で、特に高いＥ：Ｔ比で、標的細胞におけるより低いレベルのアポトーシスを誘導することが観察された。

【0461】

実施例１０：ＭＭ１Ｓ腫瘍に対するＢＣＭＡ ＣＡＲ構築物のインビボ有効性
本実施例は、ＭＭ１Ｓ腫瘍に対する、ＣＢ－ＮＫ細胞において発現されたＢＣＭＡ２８－２含有ＣＡＲの有効性を示す。

【0462】

１０～１２週齢のメスＮＳＧマウスを、腫瘍接種の２４時間前に１５０ ｃＧｙで全身照射した。ＭＭ． １Ｓ－ｆｆｌｕｃ－ＭＤＡ細胞を、０．５×１０^６／動物での細胞の静脈内接種のために、２．５×１０^６細胞／ｍｌの濃度でＰＢＳ懸濁液中で調製した。生物発光画像を、投与の１日前、腫瘍接種の６日後に撮影し、動物を、１群あたり４匹の動物の群への全流束に基づいて無作為化した。腫瘍接種の７日後に動物に投与した。凍結製剤（例えば、３８．６％血漿－ＬＹＴＥ Ａ＋５０％ＣＳ１０＋１０％ＨＳＡ＋０．８％ＡＡ＋ビタミン＋３０ｍＭのトレハロース）中で凍結保存されたＣＡＲ発現ＮＫ（すなわち、ＣＡＲ ＮＫ）細胞を解凍し、洗浄せずにＰＢＳ緩衝液でマウスに直接注射した。腫瘍の進行をモニターするために、Ｘｅｎｏｇｅｎ ＩＶＩＳで生物発光画像を毎週行った。体重を週に３回取得し、臨床観察と共に、毒性の任意の徴候をモニターした。マイクロサンプリング（血液の顎下採取を介して）を、ｄｄＰＣＲまたはフローサイトメトリー分析のいずれかによって、インビボでのＣＡＲ ＮＫ拡大を定量するための細胞動態分析のために週１回実施した。人道的評価項目または研究評価項目において、目的の研究からの動物の剖検を行って、毒性／病理学的評価のための種々の組織を得た。

【0463】

すべてのＣＡＲ形質導入ＮＫ細胞は、腫瘍単独と比較した場合、生存利益を示した（図１３）。

【0464】

ＣＡＲ－ＮＫ細胞製造
ＣＡＲ－ＮＫ産生のために、研究のための臍帯血（ＣＢ）単位をＭＤ Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ Ｃｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｂａｎｋから得た。Ｆｉｃｏｌｌ密度勾配遠心分離により、凍結ＣＢ単位からＣＢ単核細胞を単離した。臍帯血由来ＮＫ細胞（ＣＢ－ＮＫ細胞）のエクスビボ拡大は、２日毎にＩＬ－２を供給することに加えて、０日目にｕＡＰＣ刺激を使用した。６日目に、細胞をＲＤ１１４ウイルスでスピノキュレーションにより形質導入した。細胞を、８または９日目に第２ラウンドのｕＡＰＣ添加で刺激し、１５日目にインビボまたはインビトロ試験に使用するまで２日毎にＩＬ－２を供給したか、または後の使用のために２１日目に凍結保存した。

【0465】

実施例１１：複数の腫瘍株に対するＢＣＭＡ ＣＡＲ構築物のインビトロ有効性
本実施例は、異なる腫瘍細胞に対するＣＢ－ＮＫ細胞において発現されたＢＣＭＡ２８－２ ＣＡＲの有効性を示す。

【0466】

ＭＭ１Ｓ－Ｌｕｃ、ＲＰＭＩ－８２２６－Ｌｕｃ、ＪＪＮ３－Ｌｕｃ、及びＪＪＮ３－Ｌｕｃ ＢＣＭＡ ＫＯ細胞を、ＰＢＳで１回洗浄し、２５０万個／ｍｌの細胞密度で、３７℃でＰＢＳ中１：１０，０００希釈で、細胞トレーサーｄｅｅｐ ｒｅｄ色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃Ｃ３４５６５）と共に２０分間インキュベートした。インキュベーションの最後に、２０ｍｌの細胞培養培地を細胞に添加し、細胞を５００ｇで５分間遠心沈殿させ、上清を除去し、対応する細胞培養培地を用いてもう１回洗浄した。次いで、細胞を２５万個／ｍｌで培養培地中に再懸濁し、３０μμｌの細胞をｖ底３８４ウェルアッセイプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ、カタログ：７８１２８０）のそれぞれのウェルに添加した。細胞を３７℃の細胞培養インキュベーターで５％のＣＯ_２で１～２時間インキュベートした。新鮮なエフェクター細胞を１５日目に回収し、細胞をサイトカインを含まないＮＫ細胞培地（１０％ＨＩ－ＦＢＳ及び２ｍＭグルタミンを含むＣｅｌｌＧｅｎｉｘ ＧＭＰ ＳＣＧＭ）中で１回洗浄し、次いで１０μｌのエフェクター細胞を異なるＥ：Ｔ比でアッセイプレートに添加した。標的細胞及びエフェクターウェルを２０時間共培養し、次いで細胞を遠心沈殿させ、上清をサイトカイン放出アッセイのために回収した。細胞を、対応する標的細胞培地中で１時間、３７℃の細胞培養インキュベーター中で１：５００に希釈した１０μｌのカスパーゼ３／７試薬（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ、カタログ：９１０３５）と共にインキュベートし、次いで、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ｉＱｕｅ３またはＳａｒｔｏｒｉｕｓ ｉＱｕｅスクリーナーＰｌｕｓのいずれかを用いたＦＡＣＳ分析に供した。陽性カスパーゼ３／７染色を有する標的細胞のパーセンテージを用いて、エフェクター細胞の細胞傷害性を報告した。

【0467】

インビトロ殺傷活性は、複数の腫瘍細胞株に対する異なるＣＢＵドナー由来ＢＣＭＡ２８－２ ＣＡＲ構築物含有ＮＫ細胞によって実証された（図１４Ａ～Ｄに示すように）。

【0468】

実施例１２．ＢＣＭＡ ＣＡＲ ＮＫ細胞が複数回の再刺激でインビトロで腫瘍細胞を殺傷する能力
本実施例は、ＣＢ－ＮＫ細胞において発現されたＢＣＭＡ２８－２ ＣＡＲの有効性を示す。

【0469】

エフェクター細胞を回収し、１０％熱不活性化ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号：Ｆ４１３５－５００ｍＬ）、１％Ｌ－グルタミン（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号：２５０３０－０８１）、１％Ｐｅｎｎ Ｓｔｒｅｐ（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号：１５１４０－１２２）及び１００ＩＵ／ｍＬヒトＩＬ－２（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、カタログ番号：１３０－０９７－７４８）を補充したＳＣＧＭ（ＣｅｌｌＧｅｎｉｘ、カタログ番号：２０８０２－０５００）に再懸濁した。エフェクター細胞を、２ｅ５細胞／ウェルの密度で、４８ウェル平底非組織培養処理プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号３５４８）に三重で播種した（ＭＭ１Ｓモデル）。ＮｕｃＬｉｇｈｔ Ｒｅｄレンチウイルス（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、カタログ番号：４４７６）を予め形質導入し、１μｇ／ｍＬピューロマイシン（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号：Ｐ８８３３－１０ＭＧ）を用いて選択した標的細胞を回収し、上記の完全培地に再懸濁し、５ｅ４細胞／ウェルの密度で播種した。プレートをＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｓ３（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｉｎｃ．）に入れ、ウェル当たり４通りの読み取り値を、３０分毎に１０倍対物レンズを用いて明視野と赤色チャネルの両方で測定した。標的細胞を上記のように調製し、４８～７２時間ごとに５ｅ４細胞／ウェルの密度で再播種して（ＭＭ１Ｓモデル）、合計９回の腫瘍刺激／再抗原刺激を行った。標的細胞の細胞溶解は、画像当たりの平均赤色物体カウント（図１５Ａ）及び赤色物体カウントの曲線下総平均面積（図１５Ｂ）として表される。

【0470】

実施例１３：ＲＰＭＩ－８２２６腫瘍に対するＢＣＭＡ ＣＡＲ構築物のインビボ有効性
１０～１２週齢のメスＮＳＧマウスを、腫瘍接種の２４時間前に１５０ ｃＧｙで全身照射した。ＲＰＭＩ－８２２６－ｌｕｃ細胞を、０．５×１０^６／動物での細胞の静脈内接種のために、２．５×１０^６細胞／ｍｌの濃度でＰＢＳ懸濁液中で調製した。生物発光画像を、投与の１日前、腫瘍接種の６日後に撮影し、動物を、１群あたり４匹の動物の群への全流束に基づいて無作為化した。腫瘍接種の７日後に動物に投与した。適切な濃度のＣＡＲ発現ＮＫ細胞をＰＢＳに再懸濁し、ＣＡＲ発現ＮＫ細胞の生存度を維持しながら動物への適時な注入を確実にするために、小さなバッチで氷上で飼育施設に移した。腫瘍の進行をモニターするために、Ｘｅｎｏｇｅｎ ＩＶＩＳで生物発光画像を毎週行った。体重を週に３回取得し、臨床観察と共に、毒性の任意の徴候をモニターした。マイクロサンプリング（血液の顎下採取を介して）を、ｄｄＰＣＲまたはフローサイトメトリー分析のいずれかによって、インビボでのＣＡＲ ＮＫ拡大を定量するための細胞動態分析のために週１回実施した。

【0471】

ＢＣＭＡ２８－２（ＣＤ２８共刺激ドメインを有する）－ＣＡＲ ＮＫ処理群は、ＵＴＤ ＮＫと比較して、抗腫瘍活性を示した（図１６）。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図9D】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図12A】

【図12B】

【図13】

【図14A】

【図14B】

【図14C】

【図14D】

【図15A】

【図15B】

【図16】

【配列表】

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【国際調査報告】